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MXPA06011136A - Composicion y metodo para inhibir la agregacion plaquetaria. - Google Patents

Composicion y metodo para inhibir la agregacion plaquetaria.

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MXPA06011136A
MXPA06011136A MXPA06011136A MXPA06011136A MXPA06011136A MX PA06011136 A MXPA06011136 A MX PA06011136A MX PA06011136 A MXPA06011136 A MX PA06011136A MX PA06011136 A MXPA06011136 A MX PA06011136A MX PA06011136 A MXPA06011136 A MX PA06011136A
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MX
Mexico
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acetal
compound
formula
ethylurea
substituted
Prior art date
Application number
MXPA06011136A
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English (en)
Inventor
Sammy Ray Shaver
Jose Boyer
James G Douglass Iii
Paul S Watson
Ramesh Krishnamoorthy
Original Assignee
Inspire Pharmaceuticals Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
Application filed by Inspire Pharmaceuticals Inc filed Critical Inspire Pharmaceuticals Inc
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Abstract

Esta invencion se dirige a un a un metodo para la prevencion o tratamiento de enfermedades o estados asociados con la agregacion de las plaquetas. El metodo tambien se dirige a un metodo de tratamiento de trombosis. El metodo comprende la administracion a un individuo de una composicion farmaceutica que contiene una cantidad terapeutica eficaz del compuesto antagonista del receptor P2Y12, en donde la cantidad es eficaz para unirse a los receptores P2Y12 en las plaquetas e inhibir la agregacion plaquetaria inducida por ADP. Los compuestos antagonistas de los receptores P2Y12 utiles para esta invencion incluyen mononucleosido 5'-monofosfatos, mononucleosido polifosfatos y binucleosido polifosfatos de formula general I, o sales de estos. La presente invencion tambien propone los compuestos novedosos de los mononucleosidos 5'-monofosfatos y binucleosido difosfatos. La por ejemplo ademas proporciona las formulaciones farmaceuticas que contienen un portador farmaceutico y mononucleosidos 5'-monofosfatos o dinucleosido difosfatos.

Description

COMPOSICIÓN Y MÉTODO PARA INHIBIR LA AGREGACIÓN PLAQUETARIA CAMPO TÉCNICO Esta invención se refiere a los compuestos de los mono y dinucleósido polifosfatos, y al método para utilizar estos compuestos para la prevención o tratamiento de enfermedades o estados asociados con la agregación plaquetaria, incluida la trombosis en humanos y otros mamíferos.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La hemostasia es el proceso espontáneo de interrupción del sangrado de los vasos sanguíneos dañados. Los vasos precapilares se contraen de inmediato cuando se cortan; en el transcurso de algunos segundos, los trombocitos, o plaquetas sanguíneas, se unen a la matriz expuesta del vaso lesionado mediante un proceso conocido como adhesión plaquetaria. Las plaquetas también se adhieren entre sí, en un fenómeno conocido como agregación plaquetaria, para formar un coágulo de plaquetas para interrumpir con rapidez el sangrado.
De un trastorno patológico de la hemostasia se origina un trombo intravascular. La adhesión y agregación plaquetaria son sucesos cruciales en la trombosis intravascular. Activadas en condiciones de flujo sanguíneo turbulento en los vasos enfermos o por la liberación de mediadores de otras células circulantes y las células endoteliales dañadas que revisten los vasos, las plaquetas se acumulan en un sitio lesionado de los vasos y reclutan más plaquetas durante el desarrollo de un trombo. Los trombos pueden crecer hasta un tamaño suficiente para bloquear los vasos sanguíneos arteriales, también se pueden formar en áreas de extasía, o flujo sanguíneo lento, en las venas. Porciones de trombos venosos pueden desprenderse fácilmente, lo que se conoce como embolia, y viajar a través del sistema circulatorio, y pueden originar bloqueo de otros vasos, como en las arterias pulmonares. Así pues, los trombos arterial s causan serias enfermedades por bloqueo local, mientras que los trombos venosos lo hacen principalmente por bloqueo distante, o embolización. Estas condiciones incluyen trombosis venosa, tromboflebitis, embolia arterial, trombosis arterial coronaria y cerebral, angina inestable, infarto de miocardio, accidente cerebro vascular, embolia cerebral, embolias renales y embolias pulmonares .
Diversas vias convergentes dan origen a la agregación plaquetaria. Cuando hay un estimulo inicial, el episodio final común es la reticulación de las plaquetas por unión del fibrinógeno en un sitio de unión a la membrana, la glucoproteina Ilb/IIIa (GPIIb/IIIa) . Los compuestos que son antagonistas para el complejo de los receptores para GPIIb/IIIa, según se ha mostrado, inhiben la agregación plaquetaria (Patentes US Nos. 6,037,343 y 6,040,317). También se ha demostrado . que los anticuerpos contra GPIIb/IIIa tienen alta eficacia antiplaquetaria (los investigadores de EPIC, New Engl . J. Med. (1994) 330: 956-951). No obstante, esta clase de agentes antiplaquetarios suele ocasionar problemas de hemorragia.
La trombina puede producir agregación plaquetaria en un modo muy independiente de otras vías, pero es muy poco probable que cantidades substanciales de trombina estén presentes sin activación previa de las plaquetas por otros mecanismos. Los inhibidores de trombina, como hirudina, son agentes antitrombóticos altamente eficaces. No obstante, al funcionar como agentes antiplaquetarios y anticoagulantes, los inhibidores de la trombina de nuevo pueden producir hemorragia excesiva. (The TIMI 9a investigators, The GUSTO lia Investigators, Circula tion, 90: 1624-1630 (1994); Circulation, 90: 1631-1637 (1994); Neuhaus, K.L. y col., Circulation, 90: 1638-1642 (1994)).
Durante muchos años se han estudiado algunos agentes antiplaquetarios como objetivos potenciales para inhibir la formación de trombos. Algunos agentes como la aspirina y el dipiridamol se han estado utilizando como agentes antitrombóticos profilácticos, y otros han sido objeto de investigaciones clínicas. A la fecha, poderosos agentes como las desintegrinas, y las tienopiridinas ticlopidina y clopidogrel han mostrado tener efectos colaterales substanciales, mientras que agentes como la aspirina tienen eficacia útil, pero limitada (Hass, y col., N. Engl . J. Med. 321: 501-507 (1989); Weber, y col., Am . J. Cardiol . 66: 1461-1468 (1990); Lekstrom ánd Bell, Medicine 70: 161-177 (1991)). En particular, el uso de las tienopiridinas en terapia antiplaquetaria ha mostrado que aumenta la incidencia de púrpura trombocitopénica trombótica que puede poner en riesgo la vida (Bennett, C. L. y col., N. Engl . J. Med. (2000) 342: 1771-1777). La aspirina, que tienen un efecto benéfico sobre la agregación plaquetaria {Br. Med. J. (1994) 308: 81-106; 159-168), actúa induciendo el bloqueo de la síntesis de las prostaglandinas . La aspirina no tiene efectos sobre la agregación plaquetaria inducida por ADP, y de este modo tiene eficacia limitada sobre la agregación plaquetaria. Además, está bien documentada la alta incidencia de efectos colaterales gástricos que limita su utilidad en múltiples pacientes . Es sorprendente la eficacia clínica de algunos fármacos más nuevos, como el ReoPro (7E3) , pero estudios recientes han demostrado que estos enfoques están asociados con un aumento en el riesgo de sangrado importante, en ocasiones siendo necesaria la transfusión sanguínea (New Engl . J. Med. (1994) 330: 9556-961). Así pues, parece ser que no se ha alcanzado la relación "riesgo/beneficio" ideal.
Estudios recientes han sugerido que 5' -difosfato de adenosina (ADP) , un agonista común, desempeña una función importante en la iniciación y progreso de la formación de trombos arteriales (Bernat, y col., Thromb . Haemostas . (1993) 70: 812-826); Maffrand, y col., Thromb . Haemostas . (1988) 59: 225-230; Herbert, y col., Arterioscl . Thormb. (1993) 13: 1171-1179). El ADP induce la agregación plaquetaria, el cambio de la forma, la secreción, el +2 influjo y la movilización mtracelular de los iones Ca , y la inhibición de la adenilil ciclasa. Se requiere de la unión del ADP a los receptores para plaquetas a fin de elucidar las respuestas de las plaquetas inducidas por ADP. Existen cuando menos tres receptores P2 expresados en plaquetas humanas: un receptor P2XX del canal de cationes, un receptor P2Y acoplado a la proteína G y un receptor P2Y?2 acoplado a la proteína G (también conocido como P2Yac y P2 ) . El receptor P2X? es responsable de la rápida afluencia del calcio y se activa por el ATP. La función de los receptores P2X? en el proceso de agregación plaquetaria no está bien comprendido. No obstante, se ha sugerido que el receptor P2X? participa en el cambio de forma de las plaquetas (Rolf, y col., Thromb Haemost . 85: 303-308, 2001), y en la formación de trombos plaquetarios con elevadas fueras cortantes (Hechler, y col., J. Exp Med. 198: 661-667, 2003). El receptor P2Y es responsable de la movilización del calcio, el cambio de forma y el inicio de la agregación. El receptor P2Y2 es responsable de la inhibición de la adenililciclasa y se necesita para una agregación completa (Hourani, y col., The Platelet ADP Receptors Meeting, La Thuile, Italy, marzo 29-31 2000) .
Ingall y col., (J. Med. Chem. 42: 213-220, (1999)) describen una inhibición relacionada con la dosis de la agregación plaquetaria conocida por ADP por análogos de la trifosfato de adenosina (ATP) , que es un agonista de los receptores P2Y?2 débil, no selectivo pero competitivo. Zamecnik (Patente US No. 5,049,550) describe un método para inhibir la agregación plaquetaria en un mamífero mediante la administración al mamífero de un compuesto tetrafosfato de diadenosina de App(CH2)ppA o sus análogos. Kim y col., (Patente US No. 5,681,823) describen P , P -ditio P , P -monoclorometileno 5', 5"' diadenosina P , P -tetrafostato como un agente antitrombótico. Las tienopiridinas ticlopidina y clopidogrel, que se metabolizan a los antagonistas del receptor P2Y12 de plaquetas, han mostrado inhibir la función plaquetaria in vivo (Quinn y Fitzgerald, Circula tion 100: 1667-1672 (1999); Geiger, " y col., Arteroscler. Thromb. Vasc . Biol . 19: 2007-2011 (1999)). Sin embargo, estas tienopiridinas presentan algunas desventajas terapéuticas: • Lento inicio de la acción (Gurbel, y col., Am J. Cardiol . 90: 312-315, 2002) • Debido a la naturaleza irreversible de estos inhibidores sobre los receptores P2Y?2 personas tratadas con tienopiridinas están en un alto riesgo de hemorragia si necesitan un procedimiento quirúrgico. Para cirugías optativas es necesaria la interrupción del fármaco durante por lo menos 5 a 10 dias puesto que se necesita producción de nuevas plaquetas para reestablecer la hemostasia,. exponiendo la persona a un alto de riesgo de episodios trombóticos durante este tiempo (Kapetanakis y col., Eur Heart J 26: 576-583, 2005). • Las personas tratadas con el esquema de dosificación normal de estos compuestos presentan una gran variabilidad inter-individuos en el efecto farmacológico del fármaco, con una proporción significativa de pacientes desprotegidos de la incidencia de episodios sistémicos (Gurbel y col., Circulation 107: 2908-2913, 2003; Aleil, y col., J. Thromb Haemost 3: 85-92, 2005).
Existe la necesidad en el área de la terapéutica cardiovascular y cerebral de un inhibidor de los receptores P2Y?2 reversible, directo que no necesite metabolismo y que tenga un rápido inicio y desplazamiento de la acción, que pueda utilizarse en la prevención y tratamiento de trombosis, con efectos secundarios mínimos, como puede ser la prolongación no deseada excesiva de la hemorragia, evitando al mismo tiempo o tratando trombos diana.
COMPENDIO DE LA INVENCIÓN La invención se dirige a un método para la prevención o tratamiento de enfermedades o estados asociados con la agregación plaquetaria y/o activación de las plaquetas; estas enfermedades incluyen trombosis venosa, trombo flebitis, embolia arterial, trombosis arterial coronaria y cerebral, angina inestable, infarto de miocardio, accidente cerebro vascular, embolia cerebral, embolia renal y embolia pulmonar. El método también se dirige a un método para prevenir, tratar o reducir la incidencia de: trombosis, episodios trombóticos, episodios embólicos o estados patológicos asociados con estos episodios, donde la trombosis, episodio trombótico o episodio embólico se presenta durante o después de la cirugía.
Los compuestos antagonistas de los receptores P2Y12 para esta invención incluyen los compuestos de 'la fórmula general I, o las sales de estos: Fórmula I en donde : xi x2 y ^3 son independientemente oxigeno, metileno, monoclorometileno, diclorometileno, monofluorometileno, difluorometileno o imido; Ti T2, W y V son independientemente oxigeno o azufre; m = 0, 1 ó 2; n = 0 ó 1; p = 0, 1 ó 2; donde la suma de m + n + p es desde 1 hasta 5; (monofosfato o hexafosfato) M = H o un contraión orgánico o inorgánico aceptable para uso farmacéutico; Di = O ó CH2; B' es un residuo purina o pirimidina de conformidad con las fórmulas generales IV y V que se unen en la posición 1' de la furanosa o carbociclo a través de la posición 9 ó 1 de la base, respectivamente; Y'= H, OH u ORi; Z'= H, OH u OR2; con la condición de que cuando A = M, al menos uno y 1 ' sean igual a OR? ó OR2, respectivamente; A = M, ó A es un residuo nucleósido que se define como: y que estén unidos a la cadena fosfato por la posición 5' de la furanosa o carbociclo; en donde : D2 = 0 ó CH2; Z = H, OH, u 0R3; Y = H, OH u 0R4; con la condición de que al menos uno de Y' , Z' , Y y Z sea igual a ORi, 0R2, 0R3 ó OR4, respectivamente; B es un residuo purina o pirimidina conforme con las fórmulas generales IV y V que esté unido a la posición 1' de la furanosa carbociclo por la posición 9 ó 1 de la base, respectivamente; Rl, R2, R3 y/o R4 son residuos que están unidos directamente a los hidroxilos 2 ' y/o 3' de la furanosa o carbociclo por un átomo de carbono conforme con la fórmula II o unidos directamente a los dos hidroxilos (2 ' y 3' ) de la furanosa o carbociclo por un átomo de carbono común conforme con la fórmula III, de modo que estén presentes de 1 a 4 residuos independientes de Ri, R2/ R3 y R4 que entren en la definición de la fórmula II o que estén presentes de 1 a 2 residuos independientes constituidos de Ri + R2 y/o R3 + R4.
La invención también proporciona los compuestos novedosos de nucleósido 5' -monofosfato y 5' -dinucleósido difosfato. La presente invención además proporciona las formulaciones farmacéuticas que contienen el compuesto de Fórmula I y un portador aceptado para uso farmacéutico.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 muestra el efecto de la inhibición de la agregación inducida por ADP por los diferentes compuestos .
La Figura 2 muestra la cinética de inhibición de la agregación inducida por ADP después de la administración intravenosa de INS50589 en ratones.
La Figura 3 muestra la protección contra mortalidad inducida por tromboembolia en ratones • mediante el tratamiento con INS 50589.
La Figura 4 muestra la inhibición dependiente de la dosis de la agregación plaquetaria por infusión IV continua de INS50589 en perros.
La Figura 5A muestra la agregación plaquetaria en los tiempos indicados durante y después de la administración de INS50589 a una concentración de 0.3 mg/kg/h en perros. La figura 5B muestra las concentraciones plasmáticas de INS'50589 en los tiempos indicados durante y después de la infusión de INS50589.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Definiciones Cuando estén presentes, a menos que se indique de otro modo, los siguientes términos se definen en general como, pero no se limitan a, los siguientes: Los grupos alquilo son desde 1 hasta 12 carbonos inclusive, de cadena lineal o ramificados, con o sin instauración con o sin heteroátomos, y más preferentemente desde 2 hasta 8 átomos de carbono inclusive, y más preferentemente de 2 a 6 carbonos inclusive.
Los grupos cicloalquilo desde 3 hasta 12 carbonos inclusive,' más preferentemente desde 3 hasta 10 carbonos inclusive, y más preferentemente de 3 a 6 carbonos inclusive, con o sin instauración y con o sin heteroátomos .
Los grupos alquilo tienen desde 1 hasta 8 átomos de carbono inclusive en la parte alquilo, son más preferentemente desde 1 hasta 6 carbonos inclusive en la porción alquilo, y más preferentemente tienen de 1 a 4 carbonos inclusive en la porción alquilo; como se incluye en la definición de alquilo anterior, la parte alquilo de un grupo aralguilo pude incluir una o más posiciones de instauración, como enlaces dobles o un enlace triple en la cadena cuando la cadena incluye dos o más átomos de carbono; la porción alquilo de un grupo aralquilo también puede tener uno o más heteroátomos y/o sustituyentes; la porción arilo de un grupo aralquilo puede ser una porción monociclica o policiclica desde 3 a 8 carbonos inclusive por anillo en la porción arilo, más preferentemente desde 4 hasta 6 carbono inclusive por anillo, y más preferentemente de 5 a 6 carbonos inclusive por anillo; la porción arilo de un grupo aralquilo también pude llevar uno o más sustituyentes y/o heteroátomos.
Los grupos arilo son monocíclicos o políciclicos, tienen desde 3 hasta 8 carbonos inclusive por anillo, más preferentemente tienen desde 4 hasta 6 carbonos inclusive por anillo, y más preferentemente tienen 5 a 6 carbonos inclusive por anillo; los grupos arilo también pueden llevar sustituyentes y/o heteroátomos.
Los grupos heteroalquilo tienen desde 1 hasta 8 carbonos inclusive en la porción alquilo, más preferentemente tienen desde 1 hasta 6 carbonos inclusive en la porción alquilo, y más preferentemente tienen de 1 a 4 carbonos inclusive en la porción alquilo; como se incluye en la definición alquilo anterior, la porción alquilo de un grupo heteroalquilo puede tener una o más posiciones de instauración como un enlace doble o un enlace triple en la cadena cuando la cadena tenga 2 o más átomos de carbono; la porción alquilo de un grupo heteroalquilo también puede tener uno o más heteroátomos y/o sustituyentes; la porción heteroarilo de un grupo heteroalquilo puede ser una porción monociclica o policíclica que tenga desde 3 a 8 carbonos inclusive por anillo en la porción heteroarilo y que contenga desde 1 hasta 4 heteroátomos inclusive por anillo, más preferentemente desde 4 a 6 carbonos inclusive por anillo, y más preferentemente 54 a 6 carbonos inclusive por anillo; la porción heteroarilo de un grupo heteroaralquilo también puede portar uno o más sustituyentes y/o heteroátomos.
Los grupos heteroarilo son monocíclicos o policíclicos, contienen desde 1 a 4 heteroátomos inclusive por anillo, tienen desde 3 hasta 8 átomos inclusive por anillo, más preferentemente tienen desde 4 hasta 6 átomos inclusive por anillo y más preferentemente 5 a 6 átomos inclusive por anillo; los grupos heteroarilo también pueden llevar sustituyentes y/o heteroátomos .
Los sustituyentes en los grupos anteriores pueden ser, pero no se limitan a, hidroxilo, nitro, metoxi, flúor, cloro, bromo, yodo, metilo, hetilo, propilo, butilo, tioalquilo, alcoxi, carboxilo, carboxamido, alquilsulfonilo, alquilsulfonilamino, sulfonamido, ciano, amino, amino sustituido, trifluorometilo, trifluorometoxi, fenilo, piridilo, imidazolilo, ciclopropilo, ciclopentilo y ciciohexilo; y los heteroátomos preferidos son oxígeno, nitrógeno y azufre.
Los diasterómeros son estereoisómeros (isómeros de constitución idéntica pero arquitectura tridimensional diferente) , que no llevan relación en imagen especular entre sí.
Las sales aceptadas para uso farmacéutico son sales que conservan la actividad biológica deseada del compuesto precursor y no imparten los efectos toxicológicos no deseados. Las formas salinas aceptadas para uso farmacéutico pueden ser los diferentes polimorfoso asi como la forma amorfa de las diferentes sales obtenidas de las adiciones acidas o básicas. Las sales de adición acida pueden formarse con ácidos inorgánicos u orgánicos. Los ejemplos ilustrativos pero no restrictivos de estos ácidos pueden ser ácido clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, fosfórico, cítrico, acético, propiónico, benzoico, naftóico, oxálico, succinico, maléico, málico, adipico, láctico, tartárico, salisilico, metansulfónico, 2-hidroxietansulfónico, toluensulfónico, bencensulfónico, canforsulfónico y etansulfónico. Las sales de adición básica aceptadas para uso farmacéutico se pueden formar con contrapones metálicos u orgánicos e incluyen, pero no se limitan a, sales de metales alcalinos como sodio o potasio; sales de metales alcalino térreos como magnesio o calcio; y sales de amonio o tetraalquilamonio, es decir, NX4 (en donde X es C1-.4) . En el caso de mono- o difosfatos de nucleósidos de la presente invención, las formas salinas normalmente son sales de metales alcalino térreos como sodio, potasio, litio o básicas como de amonio.
Los solvatos son complejos de adición en los que un compuesto se combina con un co-solvente aceptado" para uso farmacéutico en alguna proporción determinada'. Los cosolventes pueden ser, pero no se limitan a, agua, metanol, etanol, 1-propanol, isopropanol, 1-butanol, isobutanol, ter-butanol, acetona, metiletilcetona, acetonitrilo, cacetato de etilo, benceno, tolueno, xileno (s), etilenglicol, diclorometano, 1, 2-dicloroetano, N-metilformamida, N, N-dimetilformamida, N-metilacetamida, piridina, dioxano y dietiléter. Los hidratos son solvatos en los cuales el cosolvente es agua. Se entiende que la definición del compuesto de la presente invención comprende todos los hidratos y solvatos posibles, en cualquier proporción, que posean la actividad mencionada.
Compuestos antagonistas del receptor P2Y12 Los compuestos antagonistas de los receptores P2Y?2 utilizados para la prevención o tratamiento de enfermedades o estados asociados con la agregación plaquetaria y/o la activación plaquetaria, incluyen los compuestos de la fórmula general I, o una sal, solvato ó hidrato de éste, aceptado para uso farmacéutico: Fórmula I en donde : Xl ^2 y X3 son independientemente oxigeno, metileno, monoclorometileno, diclorometileno, monofluorometileno, difluorometileno o imido; Ti, T2, W y V son independientemente oxígeno o azufre; m = 0, 1 6 2; n = 0 ó 1; p = 0, 1 ó 2; donde la suma de m + n + p es desde 1 hasta 5; (monofosfato o hexafosfato) M = H o un contraión orgánico o inorgánico aceptable para uso farmacéutico; Di = O ó CH2; B' es un residuo purina o pirimidina de conformidad con las fórmulas generales IV y V que se unen en la posición 1' de la furanosa o carbociclo a través de la posición 9 ó 1 de la base, respectivamente; Y'= H, OH u ORi; Z' = H, OH, u OR2, con la condición de que cuando A = M, al menos uno de Y' y Z' sea ORi u OR2; A = M, ó A es un residuo nucleósido que se define como: y que estén unidos a la cadena fosfato por la posición 5' de la furanosa o carbociclo; en donde : D2 = O ó CHJ ; Z = H, OH, u OR3; Y = H, OH u OR4; con la condición de que al menos uno de Y' , Z' , Y y Z sea igual a ORi, OR2, OR3 ó OR4, respectivamente; B es un residuo purina o pirimidina conforme con las fórmulas generales IV y V que esté unido a la posición 1' de la furanosa ó carbociclo por la posición 9 ó 1 de la base, respectivamente; R , R2, R3 y/o R4 son residuos que están unidos directamente a los hidroxilos 2' y/o 3' de la furanosa o carbociclo por un átomo de carbono conforme con la fórmula II o unidos directamente a los dos hidroxilos (2' y 3' ) de la furanosa o carbociclo por un átomo de carbono común conforme con la fórmula III, de modo que estén presentes de 1 a 4 residuos independientes de Rl r R2, R3 y R4 que entren en la definición de la fórmula II o que estén presentes de 1 a 2 residuos independientes constituidos de Ri + R2 y/o R3 + R4; Fórmula II en donde : O es el oxígeno 2 ' y/o 3' correspondiente de la furanosa o carbociclo; C es el átomo de carbono; R5, Rß y R7 son H, alquilo, cicloalquilo, aralquilo, arilo, aralquilo sustituido o arilo sustituido, de modo que la fracción definida conforme a la fórmula II sea un éter; o R5 y R6 son H, un alquilo, cicloalquilo, aralquilo, arilo, aralquilo sustituido o arilo sustituido, y R7 es alcoxi, cicloalcoxi, aralquiloxi, ariloxi, aralquiloxi sustituido o ariloxi sustituido de modo que la fracción definida conforme con la fórmula II sea un acetal o cetal acíclico; o R5 y Rg se toman juntos como oxigeno o azufre con doble enlace a C, y R7 es alquilo, cicloalquilo, aralquilo, arilo, aralquilo sustituido o arilo sustituido, de modo que la fracción definida conforme con la fórmula II sea un éter o tioéster; o R5 y R6 se toman juntos como oxigeno o azufre doblemente unido a C, y R7 es amino o amino mono- o disustituido, donde los sustituyentes son alquilo, cicloalquilo, aralquilo, arilo, aralquilo sustituido o arilo sustituido, de modo que la porción conforme con la fórmula II sea un carbamato o tiocarbamato; o R5 y R5 se toman juntos como oxigeno o azufre doblemente unido a C, y R7 es alcoxi, cicloalcoxi, aralquiloxi, ariloxi, aralquiloxi sustituido, o ariloxi sustituido, de modo que la porción conforme con la fórmula II sea un carbonato o tiocarbonato; o R7 no esta presente y R5 y Rg se toman juntos como oxígeno o azufre doblemente unidos a C y los oxígenos 2 ' y 3' de la furanosa están directamente unidos a C para formar un carbonato o tiocarbonato cíclico; Fórmula III en donde : los átomos O son los oxígenos 2 ' y 3' de la furanosa o carbociclo; y los oxígenos 2 ' y 3' de la furanosa o carbociclo están unidos por un átomo de carbono común (C) para formar un acetal cíclico; cetal cíclico u ortoéster cíclico; para los acétales y cetales cíclicos, R8 y Rg son independientemente hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, aralquilo, arilo, aralquilo sustituido, arilo sustituido, o pueden estar unidos entre sí para formar un anillo homocíclico o heterocíclico compuesto de 3 a 8 átomos, preferentemente 3 a 6 átomos; para los ortoésteres cíclicos, Rß es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, aralquilo, arilo, aralquilo sustituido, o arilo sustituido, Rg es alquiloxi, cicloalquiloxi, aralquiloxi, ariloxi, aralquiloxi sustituido, o ariloxi sustituido.
Donde R5, Rg y R7 no son los mismos, y cuando Rg y R9 no son los mismos, puede existir un compuesto de acuerdo con la fórmula I en las diferentes formas diasterométicas . La estructura general de la fórmula I incluye todas las formas diasteroméricas de estos materiales, cuando no se especifica de otro modo. La fórmula I también incluye mezclas de compuestos de la fórmula I, así como mezclas de enantiómeros, diasteroméros y/u otros isómeros en cualquier proporción.
Una modalidad de la invención es aquella en la que A = M, en donde M = H o un contraión inorgánico u orgánico aceptable para uso farmacéutico. En tal modalidad, el compuesto puede ser monofosfato del nucleósido, difosfato del nucleósido, trifosfato del nucleósido, tetrafosfato del nucleósido, pentafosfato del nucleósido ó hexafosfato del nucleósido con una o ambas posición 2 ' y/o 3' de la furanosa y carbociclo modificadas. Más preferidos son los nucleótido monofosfatos, nucleótido difosfatos, nucleótido trifosfatos y nucleótido tetrafosfatos . Cuando T2/ W, V ó Ti son azufre, la posición preferida para este átomo es en el fósforo terminal de la cadena polifosfato (es decir, el fósforo más alejado del residuo nucleósido) .
Para monofosfatos, donde m, n, y p son todos igual a cero, preferentemente Rg es hidrógeno y Rg es arilo o aralquilo, con 1, 2, 3 ó 4 carbonos inclusive en la posición alquilo de un grupo aralquilo, y 6 carbonos inclusive porción arilo de un grupo aralguilo o arilo; cuando el número de carbonos en la porción alquilo de un grupo aralquilo es 2, los átomos de carbono más preferentemente están conectados por un enlace doble o triple .
Otra modalidad de la invención es aquella en la que A es un residuo nucleósido definido como: y unido a la cadena fosfato a través de la posición 5' de la furanosa o carbociclo (para dar un polifosfato de dinucleósido con cuando menos una de las posiciones 2', 3' , 2" y 3" de las porciones furanosa o carbociclo modificada para que sea ORi, 0R2, 0R4 u 0R2, respectivamente) .
Cuando T2, , V y/o i son azufre, las posiciones preferidas (para el azufre) son Ti y T2.
Otra condiciones son que cuando Di y D2 son oxígeno, la furanosa correspondiente está preferentemente en la configuración ß; y que la furanosa correspondiente esta preferentemente en la configuración ß-D.
En una modalidad, los compuestos de la fórmula general I son moléculas cuyas estructuras están dentro de las definiciones de la fórmula la y la fórmula Ib: Fórmula la en donde: Di = 0 ó CH2; D2 = 0 o CH2; B y B' son independientemente residuos de purina o pirimidina conforme con la fórmula general IV ó V; m y p = 0, 1 ó 2; n = 0 ó 1; de modo que la suma de m + n + p sea de 0 a 5, preferentemente 0 a 4, y más preferentemente 0 a 3; Xi, X2 y X3 = son independientemente O, NH, CH2, CHF, CHC1, CF2, CC12; tl/ T2, V y son independientemente O ó S; M = H , NH4 , Na+ u otro contraión inorgánico u orgánico aceptable para uso farmacéutico; Y' = H, OH, u 0RX; " Z' = OH u 0R2; Z = OH u OR3; . ' ' - "' Y = H, OH, u OR4, donde Ri, R2, R3 y R4 entran en la definición de la fórmula general II ó III, a condición de que cuando menos Y', Z' , Z y Y sea ORi, OR2, OR3 u OR4.
Los compuestos preferidos de la fórmula la incluyen: Di = 0 ó CH2; D2 = 0 ó CH2; Xi, X2 y = 0; ó Ti, T2, V y W = 0; ó Dx = 0 ó CH2; D2 = 0 ó CH2; Xl y X3 = 0; X2 = metileno, monoclorometileno, diclorometileno, monofluorometileno, difluorometileno o imido; T, Ti, T2, V y = 0; ó Di = 0 ó CH2; D2 = 0 ó CH2; m, n, y p = 1; ó Xl y X3 = 0; X2 = metileno monoclorometileno, diclorometileno, monofluorometileno, difluorometileno o imido; Ti y T2 = S; V y W = 0.
Fórmula Ib Di = O ó CH2; n y p = 0, 1 ó 2 de modo que la suma de n + p sea de 0 a 3; A = M; en donde M = H , NH4 , Na u otro contraión orgánico e inorgánico aceptable para uso farmacéutico; B' es residuo de purina o pirimidina conforme con las fórmulas generales IV y V; Xi y X2 son independientemente O, NH, CH2, CHF, CHC1, CF2, CC12; i, V y W son independientemente O ó S; Y' = H, OH u ORi, Z' = H, OH u OR2, donde R y R2 entran en las definiciones de las fórmulas generales II ó III; con la condición de que cuando menos Y' o Z' sea OR? u OR2, respectivamente .
Los compuestos preferidos de la fórmula Ib incluyen: Di = O ó CH2; n y p = 0, 1 ó 2 de modo que la suma de n + p sea de 0 a 3, preferentemente 1 a 2; Xi y X2 = 0; Ti y W = 0; ó Di = 0 ó CH2; Xl y X2 = 0; Ti y V = 0; W = S; ó Di = 0; n y p = 0 de modo que la suma de n + p sea de 0 V = 0; B = un residuo purina de la fórmula general IV; Y' y Z' entran en la definición de la fórmula general III; ó Di = 0 ó CH2; p = 0, 1, Ó 2, n = l, de modo que la suma de n + p sea 1 a 3; Xl = 0; X = metileno, monoclorometileno, diclorometileno, monofluorometileno, difluorometileno o imido; T1( V y W = 0; Y' = H, OH u ORi; Z' = H, OH u OR2 donde Rx y R2 entran en la definición de la fórmula general II ó III; con la condición que cuando menos Y' o Z' sea ORi u OR2, respectivamente .
Algunos compuestos preferidos también se describen por las fórmulas Ia-1 y Ib-1: Fórmula Ia-1 Fórmula Ib-1 Para los compuestos de la fórmula I, B y B' son independientemente un residuo purina, como en la fórmula IV, unida a través de la posición 9, o un residuo de pirimidina, como en la fórmula V, unida por la posición 1. Las fracciones ribosilo en las fórmulas la, Ib, Ia-1 y Ib-1 están en la configuración D como se muestra, pero pueden ser L- ó D- y L- . Para las fracciones ribosilo se prefiere la configuración D.
Fórmula IV Fórmula V en donde: Rio y Ri4 son independientemente hidroxi, oxo, amino, mercapto, alquiltio, alquiloxi, ariloxi, alquilamino, cicloalquilamino, aralquilamino, arilamino, diaralquilamino, diarilamino o dialquilamino, donde los grupos alquilo se unen opcionalmente para formar un heterociclo; o Rio y R14 son independientemente acilamino, a condición que éstos incorporen un residuo amino de la posición C6 de la purina o la posición C4 de la pirimidina; o cuando Rio en la purina o R4 en la pirimidina tienen como su primer átomo nitrógeno, R?0 y Rn ó R14 y R15 se toman juntos para formar un anillo imidazol fusionado de cinco miembros (para dar un compuesto eteno) , opcionalmente sustituido en el anillo eteno con una o más fracciones alquilo, cicloalquilo, aralquilo o arilo, como esta descrito para Rs~Rg en lo anterior; J es carbono o nitrógeno, con la condición que cuando J sea nitrógeno, R?2 no esté presente; Rn es hidrógeno, O (derivados 1-óxido de adenina) o esta ausente (derivados de adenina) ; R15 es hidrógeno, o acilo (acetilo, benzoilo, fenilacilo, con o sin sustituyentes) ; R12 es hidrógeno, alquilo, bromo, azido, alquilamino, arilamino o aralquilamino, alcoxi, ariloxi o aralquiloxi, alquiltio, ariltio o aralquiltio, o ú-A (alquilo de C?_g,)B-, en donde A y B son independientemente amino, mercapto, hidroxi o carboxilo; R13 es hidrógeno, cloro, amino, amino monosustituido, amino disustituido, alquiltio, ariltio o aralquiltio, donde el sustituyente en el azufre contiene hasta un máximo de 20 átomos de carbono, con o sin insaturación y con o sin sustituyentes en la cadena; Ri6 es hidrógeno, metilo, alquilo, halógeno, alquilo, alquenilo, alquenilo sustituido, alquinilo o alquinilo sustituido.
Los compuestos conforme con la fórmula IV y V donde Rio ó R14 es acilamino para la mayor parte entran dentro del alcance de la fórmula VI: Fórmula VI en donde : NH es el residuo amino en la posición C-6 en una purina o el residuo amino en la posición C-4 en una pirimidina; C es un átomo de carbono; Wi es oxígeno o azufre; R17 es amino o amino mono- o disustituido siendo los sustituyentes del amino: alquilo, cicloalquilo, aralquilo ó arilo, con o sin otros sustituyentes, instauración o heteroátomos, para que la porción de acuerdo con la Fórmula VI sea urea o tiourea; o Ri7 es alcoxi, aralquiloxi, ariloxi, aralquiloxi sustituido o ariloxi sustituido, de modo que la porción conforme con la fórmula VI sea un carbamato o tiocarbamato; o R17 es alquilo, cicloalquilo, aralquilo o arilo, con o sin sustituyentes o heteroátomos, de modo que la porción conforme con la fórmula VI es una amida; con las definiciones de los grupos alquilo, cicloalquilo, aralquilo o arilo como ya se definió para los grupos comparables en R5 a Rg.
Compuestos novedosos Los compuestos novedosos de la presente invención incluyen los compuestos de la Fórmula la, en donde B y B' son, independientes entre si, pirimidina (dinucleótido pirimidina/pirimidina) a condición de que cuando m + n + p= 1, R6 = CH3, y R5 y Rg se toman juntos como oxigeno doblemente unido a C, entonces R7 no es igual a CH (Z' no es igual a acetato) ; también a condición de que cuando m + n + p = 3, B y B'= uridina, y R5 y R6 se toman juntos como oxigeno doblemente unido a C, entonces R7 no es igual a fenilo para Y' - ORi y/o Y= OR4 (Y y Y' no es igual a benzoilo) ; además a condición de que cuando m + n + p = 1, entonces Rs y Rg no sean CH3 (Z' y Y' tomadas juntas no son igual a isopropilidina) .
Los compuestos novedosos de la presente invención también incluyen los compuestos de Fórmula la, en donde B es purina o un residuo de acuerdo con la fórmula general IV, B' es in residuo pirimidina de acuerdo con la fórmula general V, (dinucleótido purina/pirimidina) ; a condición de que Y' no sea igual a OCH cuando Z' , Y o Y' = H u OH; además a condición de que Rg no sea igual a o CH2CH3 cuando Rg = H (Z' y Y' ó Z y Y, tomadas juntas, no sean igual a un ortoetiléster) .
Los compuestos novedosos de la presente invención también incluyen compuestos de fórmula la, en donde B y B' son, independientes entre si, un residuo purina de acuerdo con la fórmula general IV, (diriucleótido purina/purina) ; a condición de que (a) Y o Y' no sean igual a OCH , cuando R10 = NH2 u 0; (b) R8 no sea igual a OCH3 u OCH CH3 cuando Rg = H; (c) Rg y R9 no sean igual a CH3; (d) cuando + n + p = 1, entonces Rg y Rg no sean igual a OCH2CH3; (e) cuando Rio = NH2, y cuando R5 y R6 se tomen junto como oxigeno doblemente unido a C, entonces R7 no sea igual a orto-metilaminofenilo; (f) cuando m + n + p = 1, y R5 y Rg se tomen junto como oxigeno doblemente unido a C, entonces R7 no sea igual aCH (CH2CH2SCH3) NHS (o-N02-Ph) o CH/CH2Ph)NHS(o-N02-Ph) .
Los compuestos novedosos de la presente invención pueden ser los compuestos de la fórmula Ib (mononucleótido) , a condición de que cuando n = 1, Xi y X2 no sean 0; y cuando n= 0, Xi no sea 0; y a condición de que cuando Y' = H, que X2 sea independientemente 0, CH2, CHF, CHCl, CF2, CCl2; también a condición de que cuando R?o= NH2UO, y cuando R5 y Rg se tomen juntos como oxígeno doblemente unido a C, entonces R7 no sea igual a ortometilaminofenilo; además a condición de que cuando n = p = 1, X2 = CH y B' = adenosina, entonces Ri y R2 no sean igual a naftilenilmetilo, naftilenilmetileno o fenilmetileno .
Los compuestos 5' -dinucleósido difosfato novedosos pueden ser los compuestos de fórmula la-I: Fórmula Ia-1 en donde V = O; M = H o un contraión orgánico 'o inorgánico aceptable para uso farmacéutico; Di y D2 = O; Y' = H, OH, u ORi; Z' = OH u 0R2; Z = OH u 0R3; Y = H, OH, u OR4, donde Ri, R , R3 y R4 entran en la definición de la fórmula general II ó III, a condición de que cuando menos Y', Z', Z o Y sea OR , 0R2, OR3 u 0R4. R y R2 son residuos que están unidos directamente a los hidroxilos 2' y/o 3' de la furanosa o carbociclo por un átomo de carbono conforme con la fórmula II, o de preferencia contiene una porción unida a los hidroxilos 2' y/o 3' de la furanosa o carbociclo mediante un átomo de carbono común de acuerdo con la fórmula III: Fórmula III en donde : los átomos 0 son los oxígenos 2' y 3' de la furanosa; y los oxígenos 2 ' y 3' de la furanosa están unidos por un átomo de carbono común para formar un acetal ciclico; y Rg es hidrógeno; y Rg se selecciona del grupo que consiste en aralquilo, arilo, aralquilo sustituido, arilo sustituido; en la cual los grupos aralquilo son de cadena lineal y tienen desde 1 hasta 5 carbonos, con o sin instauración y sin heteroátomos en la porción alquilo, y son porciones monociclicas de 5 a 6 carbonos en la posición arilo; y los grupos arilo son porciones monocíclicas de 4 a 6 carbonos, con o sin heteroátomos; B' es un residuo purina de acuerdo con la fórmula general IV. en donde: Rio es acilamino, de acuerdo con la fórmula VI; y R17 es amino o amino mono- o disustituido de modo que la porción de acuerdo con la fórmula VI sea una urea; J = carbono; Rn = esta ausente; R12 = es hidrógeno; y R13 = es hidrógeno.
Los compuestos nucleósido 5' -monofosfato novedosos pueden ser los compuestos de la fórmula Ib-1: Fórmula Ib-1 en donde: V= O; M = H o un contraión inorgánico u orgánico aceptado para uso farmacéutico; D2= O; Y' = H, OH, u ORi; Z ' = H, OH u OR2; con la condición que por lo menos uno de Y' y Z' sea ORi u OR2; Ri y R2 son residuos que están unidos directamente a los hidroxilos 2 ' y 3' de la furanosa por un átomo de carbono de acuerdo con la fórmula II, o Ri y R2 están unidos a los hidroxilos 2' y 3' de la furanosa por un átomo de carbono común de acuerdo con la fórmula III, Fórmula III en donde: los átomos O son los oxígenos 2 ' y 3' de la furanosa; y los oxígenos 2 ' y 3 ' de la furanosa están unidos por un átomo de carbono común para formar un acetalciclico; y R8 es hidrógeno; y Rg se selecciona del grupo que consiste en aralquilo, arilo, aralquilo sustituido y arilo sustituido; en la cual los grupos aralquilo son de cadena lineal que tienen desde 1 hasta 5 carbonos, con o sin instauración y sin heteroátomos en la porción alquilo, y son porciones monociclicas que tienen de 5 a 6 carbonos en la porción arilo; y los grupos arilo son porciones monociclicas que tienen desde 4 hasta 6 carbonos, con o sin heteroátomos; B' es un residuo purina de acuerdo con la fórmula general IV en donde: Rio es acilamino, de acuerdo con la fórmula VI; R7 es amino o amino mono o disustituido para que la porción de acuerdo con la fórmula VI sea una urea; J = carbono; Rn esta ausente; R?2 es hidrógeno; y R13 es hidrógeno.
Los compuestos de la presente invención entran en la definición de la fórmula general I, la cual además se divide en las fórmulas generales la (dinucleótidos) , IB (mononucleótidos) la-1 (dinucleósido difosfato) y lb-1 (mononucleósido monofosfato) . Aunque potentes y selectivos, los antagonistas de P2Y?2 pueden encontrarse dentro de cualquiera de estas subdivisiones, los mononucleótidos tienen una ventaja sobre los dinucleótidos en términos de facilidad de síntesis y costo. En general, los mononucleósido difosfatos y mononucleósido trifosfatos que entran en la fórmula general Ib son antagonistas más potentes en P2Y?2 en comparación con los mononucleósido monofosfatos correspondientes de fórmula Ib-1. No obstante, los nucleósido 5' -monofosfatos y sus análogos se preparan con mayor facilidad y tienen mayor estabilidad química y biológica en comparación con los mononucleósido difosfatos y mononucleósido trifosfatos. Asi pues, por razones sintéticas, un nucleósido 5' -monofosfato con propiedades tipo fármaco apropiadas es muchas veces más ventajoso que otros mononucleótidos portando más de un fosfato, o dinucleótidos relacionados. Para los dinucleótidos que entran en la fórmula general la, son más deseables aquellos que tienen solo dos fosfatos como se describe por la fórmula Ia-1, en vista de que se pueden preparar en condiciones de reacción sencillas con buen rendimiento a partir de los nucleósido 5'-monofosfato correspondientes que entran en la fórmula Ib-1. Cuando es atacado por enzimas en el " torrente sanguíneo, el nucleósido 5' -monofosfato solo da un subproducto de la pérdida del fosfato.
Los dinucleósido difosfato se preparan con más facilidad que los dinucleótidos; son estables y dan un número limitado de productos de degradación, contrario a los dinucleótidos con longitudes de cadena fosfato más largas. Para la inhibición de la agregación de las plaquetas se prefieren los compuestos dinucleósido 5'-monofosfato y dinucleósido difosfato.
Es posible hacer dos modificaciones de las fórmulas generales Ia-1 y Ib-1 para convertir los antagonistas potentes del receptor P2Y?2 de plaquetas. En general, un material inicial preferido del dinucleósido 5'-monofosfato es adenosina 5' -monofosfato (AMP), o un derivado de AMP, puesto que contiene los grupos funcionales apropiados para las modificaciones deseadas y dan origen a antagonistas más potentes y selectivos en comparación con modificaciones semejantes de otros nucleótido monofosfatos comúnmente disponibles. La primera modificación es instalar un aril o aralquilacetal que forme puente con los hidroxilos 2' y 3 ' de la ribosa, con el tipo de grupo arilo o aralquilo antes descrito. De estos grupos descritos, son más preferidos fenilo, bencilo, y estirilo, que son los acétales que surgen de la reacción entre los grupos hidroxilo 2' y 3' de la ribosa y benzaldehido, fenilacetaldehido y cinamaldehído, respectivamente. Estas porciones proporcionan algunas ventajas importantes sobre muchas modificaciones semejantes. En primer lugar, se obtienen a partir de aldehidos o equivalentes aldehidos de bajo costo, fácilmente disponibles (por ejemplo aldehido, dialquilacetales) . En segundo lugar, estas porciones permiten la síntesis de cualquiera de los dos diasterómeros posibles que surgen de la adición del acetal con el residuo ribosa quiral, a través de estrategias sintéticas diversas. Por último, las moléculas que portan estas porciones acétales dan origen a potente análogos de la presente invención.
La segunda modificación es adicionar un grupo aminocarbonilo o amino carbonilo sustituido a la posición 6 amino de la base de adenina, dando como resultado una porción urea en esa posición. Los sustituyentes sobre la porción urea entran en la definición de los sustituyentes amino de R17, es decir, alquilo, cicloalquilo, aralquilo o arilo, con o sin sustituyentes, instauración o heteroátomos. Estos sustituyentes urea pueden clasificarse ampliamente como de naturaleza aromática o alifática. Un sustituyente preferido elegido de los grupos arilo es fenilo. Cuando el grupo urea es una urea alifática, un sustituyente preferido sobre el nitrógeno es un alquilo de C?~Cg, lineal, ramificado o cíclico; con o sin instauración. Las porciones urea preferidas son alquilureas' lineales que tengan desde 2 hasta 6 carbonos inclusive, o alquil ureas cíclicas que tengan de 3 a 6 carbonos en el anillo. Las porciones urea más preferidas son alquilureas lineales que contengan desde 2 hasta 4 carbonos inclusive en la cadena, o cicloalquilureas que tengan desde 3 hasta 5 carbonos inclusive en el anillo.
Los compuestos novedosos que tengan las modificaciones anteriores se pueden mostrar en general como las fórmulas Ia-2 y lb-2.
Fórmula la-2 donde: R?8 y Ri ' son, independientes entre si, fenilo, bencilo o estirilo; y Ri9 y Ri9' son, independientes entre sí, alquilo de C2o a C6; cicloalquilo de C3 a C6; alquilcicloalquilo con 1 a 2 átomos de carbono en la porción alquilo, y 3 a .6 carbonos en la porción cicloalquilo; fenilo; sustituidos o no sustituidos .
Por ejemplo, R19 y R19/ , son independientes entre si, etilo propilo, butilo, ciclopropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo, ciclopentilo o fenilo.
Si bien R18 y R18/ y R19 y R19/ pueden ser independientemente un grupo determinado, estos preferentemente son pares idénticos por razones prácticas de la síntesis.
Fórmula lb-2 en donde : Ra es fenilo (benzaldehído acetal) , bencilo (fenilacetaldehído acetal) o estirilo (cinamil acetal) ; Rig es alquilo de C2 a C6, cicloalquilo de C3 a C6, alquilcicloalquilo con 1 a 2 átomos de carbono en la porción alquilo y 3 a 6 carbonos en la porción cicloalquilo, fenilo, sustituidos o no sustituidos. Por ejemplo, Ri9 es etilo, propilo, butilo, ciclopropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo, ciclopentilo o fenilo.
Un aspecto de la presente invención es que, sí bien cualquiera de los compuestos de la fórmula I es capaz de antagonizar la agregación de las plaquetas inducida por ADP, es la combustión de ambas modificaciones 2'/3' y 6-N en la misma molécula que las convierte en un compuesto antagonista de P2Yi2 altamente potente y selectivo.
Otro aspecto de la presente invención es el efecto de la estructura del compuesto sobre la potencia obtenida en las plaquetas lavadas contra la potencia en la sangre entera. En general, la potencia de un compuesto determinado es menor en sangre entera contra plaquetas lavadas, aparentemente el resultado de la unión aumentada del compuesto a los niveles superiores de las proteínas de la sangre en el primero. Esta propiedad es particularmente aguda para nucleósido 5' -monofosfatos en comparación con los di y trifosfatos correspondientes, puesto que hay menos grupos ionizables disponibles en el primero para desplazar los grupos acetal y urea lipofílicos, lo cual tal vez aumenta la unión a la proteina en la sangre entera. Inesperadamente, encontramos gue los compuestos que tienen ureas alifáticas dan resultados comparables si se analiza en ensayos en sangre entera y plaquetas lavadas. Además, encontramos que los compuestos con ureas alifáticas fueron más potentes que sus contrapartes aromáticas en las plaquetas lavadas.
Las composiciones novedosas de la presente invención incluyen: 2 ' - ó 3' -fenilcarbamato UTP, 2',3'di-fenilcarbamato UTP, 2' 3' fenilacetaldehído acetal ADP, di [3' (fenilcarbamato) dUp2dU] , 2 ' 3' -fenilacetaldehído acetal Up3U, di 2' 3' -fenilacetaldehído acetal Up3U, 2'3'-fenilacetaldehído acetal Up4A, 2 ' 3' -fenilacetaldehído acetal A?4U, di 2' 3' -fenilacetaldehído acetal Ap4U, 2'3'-fenilacetaldehido acetal Ip4U, 2' 3' -fenilacetaldehído acetal Up4U, 2 ' 3 ' -fenilacetaldehído acetal Ip4U, 2'3'-fenilacetaldehído acetal Up4dC, tetrafenilcarbamato Up4U, di 2 ' 3 ' -benzaldehido acetal Ip4U, di 2' 3' -benzaldehido acetal Up4U, 2' 3' -benzaldehído acetal Up4U, di 2'3'-fenilacetaldehido acetal Cp4U, 2' 3' -fenilacetaldehido acetal Cp4U, 2 ' 3 ' -fenilacetaldehido acetal Up4C, 2' 3'-fenilacetaldehido acetal Up4T, di 2 ' 3 ' -benzaldehido acetal Cp4U, 2' 3' -benzaldehído acetal Ip4U, 2' 3' benzaldehído acetal Up4U, 2 ' 3 ' -benzaldehído acetal Up4dC, 2 ' 3 ' -benzaldehído acetal Cp4U, 2' 3' -benzaldehído acetal Up4C, 2'3'-fenilpropionaldehído acetal Up4U, di 2'3'-fenilpropionaldehído acetal Up4U, 2 ' 3 ' -benzaldehído acetal Cp4C, Bis MANT Up4U, Mant Up4U, di 2', 3'-bencilacetal Up4U, mono 2 ' 3' -bencilacetal Up4U, trifenilcarbamato Up4U, 2' 3' -fenilcarbamato Up4U, y monofenilcarbamato Up4U.
Los compuestos dinucleósído 5' -difosfato incluyen P 1,P2, -di- (2' , 3' -cmamil acetal-6-N-etilurea adenosma 5'-) difosfato (compuesto 44), P1, P2, -di- (2' , 3' -fenilpropargil acetal-6-N-etilurea adenosina 5'-) difosfato (compuesto 45), P 1,P2, -di- (2' , 3' -fenilacetaldehído acetal-6-N-etilurea adenosina 5' -) difosfato (compuesto 46) y P 1,P2, -di- (2' , 3'-fenilacetal-6-N-etilurea adenosina 5'-) difosfato (compuesto 47).
• Los compuestos mononucleósido 5' -monofosfato novedosos pueden ser 2 ' , 3' -fenilacetaldehido acetal-6-N-fenilurea AMP (compuesto 22), 2 ' , 3' -fenilacetaldehído acetal-6-n-exilurea AMP (compuesto 23), 2', 3'-fenilacetaldehído acetal-6-N-etilurea AMP (compuesto 24), 2 ' , 3' -fenilacetaldehido acetal-6-N-ciclopentilurea AMP (compuesto 25), 2 ', 3' -fenilacetaldehido acetal-6-N-exilurea AMP (compuesto 26), 2 ' , ' -cinamilacetal-6-N-fenilurea AMP (compuesto 27) 2 ', 3 ' -cinamil acetal-6-N-fenilurea AMP (compuesto 28), 2 ', 3 ' -cinamil acetal-6-N-n-propilurea AMP (compuesto 29), 2 ', 3 ' -cinamil acetal-6-N-n-butilurea AMP (compuesto 30), ' 2', 3'-fenilpropargil acetal-6-N-fenilurea AMP (compuesto 31) , 2 '•, 3 ' -fenilpropargil acetal-6-N-n-hexilurea AMP (compuesto 32), 2 ', 3 ' -fenilpropargil acetal-6-N-n-butilurea AMP (compuesto 33), 2 ', 3 ' -fenilpropargil acetal-6-N-n-propilurea AMP (compuesto 34), 2 ',3'-fenilpropargil acetal-6-N-etilurea AMP (compuesto 35), 2 ', 3 ' -benzaldehido acetal-6-N-etilurea AMP (compuesto 36), 2 ', 3 '-benzaldehido acetal-6-N-n-propilurea AMP (compuesto 37), 2 ', 3 ' -benzaldehido acetal-6-N-n-butilurea AMP (compuesto 38), 2 ', 3 ' -benzaldehido acetal-6-N-n-hexilurea AMP (compuesto 39), 2 ',3'-benzaldehído acetal-6-N-ciclopentilurea AMP (compuesto 40), 2 ' 3 '- (trans) cinamil acetal-6-N-etilurea AMP (compuesto 41), 2 ' 3 '- (trans ) fenil acetal-ß-N-etilurea AMP (compuesto 42), y 2 ' 3 '- (cis) fenil etilurea AMP (compuesto 43) . En los compuestos 41-43, cis o trans se refiere a la posición relativa de los átomos de hidrógeno sobre el anillo dioxol.
Las estructuras de los compuestos novedosos 1-47 se muestran como sigue. En las siguientes estructuras, los hidrógenos que se entiende están presentes han sido omitidos para propósitos de claridad. Los tautómeros dibujados representan todos los tautómeros posibles. En vista de que los diasterómeros se generan con la introducción del grupo acetal, las estructuras que contienen esta porción sin la estereoquímica explícitamente definida (compuestos 1-20 y 23-26) se toman para entender cualquiera de los diasterómeros posibles solos o una mezcla de diasterómeros en cualquier proporción.
Compuesto 1 Compuesto 2 Compuesto 3 2 (3-trifluofometilpropil) tio-6- (2-metiltio) etilamina-2 ' , 3' - (bencil)metilendioxi purina ribósido 5'-a,ß-difluorometileno difosfato Compuesto 4 Compuesto 5 25 Compuesto 6 Compuesto 7 25 Compuesto 8 Compuesto 9 Compuesto 10 Compuesto 11 25 Compuesto 12 Compuesto 13 Compuesto 14 i P - [2- (3-trifluorometilpropil) t?o-6- (2-metiltio) etilamina 4 2' , 3' - (bencil )metilendioxipurina ribósido]-P -(2',3 -(bencil) metilendioxiuridina) tetrafosfato Compuesto 15 10 Compuesto 16 20 Compuesto 17 25 Compuesto 18 Compuesto 19 Compuesto 20 Compuesto 21 Compuesto 22 Compuesto 23 Compuesto 25 25 Compuesto 26 Compuesto 27 Compuesto 28 25 Compuesto 29 Compuesto 31 Compuesto 33 Compuesto Compuesto 35 25 Compuesto 37 Compuesto 40 Compuesto 41 25 Compuesto 42 Compuesto 43 25 Compuesto 44 Compuesto 45 Formulaciones farmacéuticas La presente invención además proporciona las í formulaciones farmacéuticas novedosas que contienen los compuestos que tienen la fórmula I, la, Ib, Ia-1, Ib-1, Ia-2 ó Ib-2 y un portador aceptado para uso farmacéutico. Los portadores aceptados para uso pueden ser seleccionados por los expertos en la técnica utilizando el criterio convencional. Los portadores aceptados para uso farmacéutico pueden ser, pero no se limitan a, solución salina, soluciones acuosas de electrolitos, modificadores de la isotonicidad, poliéteres acuosos como polietilenglicol, polivinilos como alcohol polivinilico y povidona, derivados de celulosa como metilcelulosa e hidroxipropilmetilcelulosa, polímeros de ácido acrilico como gel de carboxipolimetileno, polisacáridos como dextranos y glucosaminoglucanos como ialuronato de sodio y sales como cloruro de sodio y cloruro de potasio.
La formulación farmacéutica de la presente invención propone una solución acuosa que contiene agua, modificadores de la tonicidad iónicos o no iónicos adecuados, agentes amortiguadores adecuados, agente quelante, ajustadores del pH y un compuesto de la fórmula I, la, Ib, Ia-1, Ib-1, Ia-2 ó Ib-2 en una concentración de 0.005 a 3% p/v, en donde la solución acuosa tiene una tonicidad de 200-400 mOsm/kG y un pH de 4-9. En una modalidad preferida, la formulación farmacéutica contiene 0.025-3, 0.05 a 2.5% ó 0.01 a 1.5% p/v de un compuesto de la fórmula I, la, Ib, Ia-1, Ib-1, Ia-2 ó Ib-2. En otra modalidad preferida, la formulación farmacéutica tiene la tonicidad de 220-360 ó 250-350 mOsm/kG. En otra modalidad preferida, la formulación farmacéutica tiene un pH de 4.5-8.5 ó 5.5-7-5. En todavía otra modalidad preferida, el agente quelante en la cantidad de 0.005-0.01% p/v; preferentemente 0.008-0.01% p/v.
La formulación farmacéutica puede ser esterilizada filtrando la formulación a través de filtro grado esterilizante, preferentemente de un tamaño de poro nominal de 0.22 mieras. La formulación farmacéutica también se puede esterilizar por esterilización terminal utilizando una o más técnicas de esterilización que incluyen, pero no se limitan a, un proceso térmico, como el proceso de autoclave, o un proceso de esterilización por radiación, o utilizando luz pulsada para producir una formulación estéril. En otra modalidad, la formulación farmacéutica es una solución concentrada del ingrediente activo; la formulación puede diluirse en serie utilizando diluyentes estériles aceptados y apropiados antes de la administración intravenosa.
En una modalidad, el modificador de la tonicidad es iónico como NaCl, por ejemplo, en la cantidad de 0.5-0.9% p/v, preferentemente 0.6-0.9% p/v.
En otra modalidad, el modificador de la tonicidad es no iónico como manitol, dextrosa, en una cantidad de por lo menos 2%, o por lo menos 2.5%, o por lo menos 3% y no más de 7.5%; por ejemplo, en el intervalo de 3-5%, preferentemente 3.5-5% y más preferentemente 4.2-5% p/v. El manitol y dextrosa son preferidos sobre otros modificadores de la tonicidad no iónicos, posibles como pueden ser polietilenglicol y los glicoles relacionados, polietilenglicol de diferentes intervalos moleculares, sorbitol, polímeros como alcohol polivinilico, PVP, sorbitol, sacarosa, y trealosa, por que la mayor parte de estos modificadores de la tonicidad no iónicos no son convenientes para la administración de largo plazo por la via intravenosa. Por ejemplo, sacarosa y trealosa no se metabolizan cuando se dan por la via intravenosa y se excretan sin cambio, asi pues, estos no son candidatos para una forma de dosificación intravenosa. Además, la formulación que contiene manitol tiene las ventajas de ser adaptable para secado por congelación o liofilización.
En una modalidad, la formulación farmacéutica contiene 0.5-0.9% del modificador de la tonicidad iónico como cloruro de sodio; la formulación opcionalmente contiene otros agentes amortiguadores (como fosfatos de sodio y/o citrato de sodio) dentro de un intervalo de 0.01-0.2% p/v, un agente quelante en un intervalo de 0.005-0.01% p/v y ajustadores del pH. Una composición acuosa como esta tiene una tonicidad de 250-350 mOsm/kG y se formula en un pH aceptado para el medio fisiológico. Sin embargo, dependiendo del tipo de compuesto y la concentración, esta formulación de NaCl tiende a formar un precipitado en concentraciones mayores (>0.1% p/v) de algunos compuestos.
Los compuestos nucleósidos, incluidos los mono-, di-y trifosfatos, generalmente son solubles en soluciones acuosas. No obstante, dependiendo del grado y tipo de grupos sustituyentes asi como de las formas salinas, se puede alterar la solubilidad acuosa relativa.
Para preparar formulaciones en solución acuosa para administración intravenosa, se prefiere que la solución sea clara (es decir, sin precipitantes) , isotónica y a un pH aceptado para el medio fisiológico. La solubilidad acuosa de los compuestos de la presente invención varia en función de la sustitución y la forma salina; teniendo este último mayor efecto sobre la solubilidad en agua. Las formas salinas de algunos compuestos, incluso en una baja concentración (como <0.05% p/v), tienden a formar precipitados o tienen solubilidad limitante en una solución salina acuosa normal (NaCl al 0.9%), la cual es un vehiculo común para la administración intravenosa.
Los solicitantes han descubierto que las formulaciones farmacéuticas preparadas utilizando los compuestos de la presente invención en un vehiculo de base no iónica, iso-osmótica proporcionan preparados claros, isotónicos a pH fisiológico. La concentración de los modificadores de la tonicidad no isotónicos como manitol o dextrosa en las formulaciones farmacéuticas varian en función de la concentración diana deseada de los compuestos (puesto que los compuestos tienen un impacto sobre la tonicidad y contribuyen a la tonicidad total de los preparados) . las formulaciones farmacéuticas preparadas en vehículos no iónicos se pueden ajustar para un pH elegido sobre un amplio intervalo sin comprometer la solubilidad del compuesto precursor.
En una modalidad, la presente invención propone una formulación farmacéutica que contiene un compuesto de fórmula I, la, Ib, Ia-1, Ib-1, Ia-2 ó Ib-2, o una sal, solvato o hidrato aceptado para uso farmacéutico de este, en una cantidad de 0.0005-0.3% p/v, un agente amortiguador, un agente quelante (como EDTA) , un modificador de la tonicidad no iónico, en donde la formulación farmacéutica tiene una tonicidad de 250-350 mOsm/kG y pH de 4-9. ün modificador de la tonicidad no iónico, preferido es dextrosa o manitol, en una cantidad de por lo menos 2% o por lo menos 2.5% o por lo menos 3% y no más de 7.5%; por ejemplo, en el intervalo de 3-5, preferentemente 3.5-5, y más preferentemente 4.2-5% p/v. Formulaciones farmacéuticas como estas pueden o no contener algún modificador de la tonicidad iónico como NaCl. Por ejemplo, la formulación farmacéutica contiene un compuesto de (2' , 3' -fenilacetaldehido acetal-6-N-etilurea AMP (compuesto 24), 2 ' , 3 ' -cinamilacetal-6-N-fenilurea AMP (compuesto 27) P1, P2, -di- (2' , 3' -benzaldehido acetal-6-N-etilurea AMP (compuesto 36) , P 1,P4 , -di- (2' , 3' -cinamil acetal-6-N-etilurea adenosina 5'-) difosfato (compuesto 46) ó P1, P2, -di- (2' , 3' -fenilacetal-6-N-etilurea adenosina 5' -) difosfato (compuesto 47) .
Preparación de los compuestos Los compuestos de la presente invención pueden ser sintetizados convenientemente por los expertos en la técnica utilizando los procedimientos químicos bien conocidos. Los mononucleósido mono-, di- y difosfato pueden obtenerse de fuentes comerciales o pueden ser sintetizados a partir del nucleósido utilizando una serie de reacciones de fosforilación que pueden encontrarse en la literatura química. Los dinucleótido polifosfatos simétricos y no simétricos pueden prepararse por activación de un nucleósido mono-, di- o trifosfato con un agente copulante como puede ser, pero no se limita a, diciciohexilcarbodiimida o 1, 1' -carbonildimidazol, seguido por la condensación con otro nucleósido mono-, di- o trifosfato, que puede ser el mismo o diferente como la fracción activada. La activación de los nucleósidos trifosfatos con diciciohexilcarbodiimida produce un trimetafosfato cíclico como la especie activada, que puede reaccionar ventajosamente con una variedad de nucleófilos para introducir sustituyentes únicos en el fosfato terminal de un trifosfato.
Los compuestos de la presente invención se pueden preparar por derivación o sustitución del nivel del nucleósido, seguido por la fosforilación y condensación como ya se describió, o las reacciones se pueden efectuar directamente en los mono- o dinucleótidos preformados. En las fórmulas generales la y Ib, los sustituyentes en Y' , Z ' , Y y Z pueden ser esteres, carbamatos o carbonatos, los cuales generalmente se describen por la fórmula II. Los esteres pueden prepararse fácilmente mediante la reacción de un grupo hidroxilo de la furanosa en un nucleósido o nucleótido con una forma activada de un ácido orgánico apropiado, como puede ser un haluro ácido o anhídrido ácido en presencia de una base orgánica o inorgánica. De otro modo, para obtener el mismo resultado es posible utilizar un reactivo copulante adecuado como diciciohexilcarbodiimida, 1, 1' -carbonildiimidazol y similares para activar el ácido orgánico.
Los carbamatos y tiocarbamatos pueden prepararse además convenientemente mediante la reacción de un grupo hidroxilo de la furanosa en un nucleósido o nucleótido con cualquiera de los diferentes isocianatos o isotiocianatos disponibles en el comercio, respectivamente, en un solvente inerte. De otro modo, cuando el isocianato o isotiocianato deseado no se puede obtener de fuentes comerciales, es posible prepararlos de la amina correspondiente por el uso de fosgeno o tiofosgeno, respectivamente, o sus equivalentes químicos. Los carbonatos o tiocarbonatos pueden ser" sintetizados haciendo reaccionar los grupos hidroxilo de una furanosa en un nucleósido o nucleótido con un haloformato adecuado en presencia de una base orgánica o inorgánica.
En las fórmulas generales la y Ib los sustituyentes en Y' y ZY y Y y Z cuando se toman juntos, se pueden tomar con el significado de acétales, cetales u ortoésteres, como esta descrito en la fórmula III.
Los acétales y cetales se pueden preparar fácilmente mediante la reacción de los grupos hidroxilo 2 ' y 3' adyacentes de la furanosa en un nucleósido o nucleótido adecuado con un aldehido o cetona, respectivamente, o sus equivalentes químicos, en presencia de un catalizador ácido. Es particularmente ventajoso el uso de un ácido orgánico, el cual puede efectuar la transformación sin afectar la integridad del resto de la molécula. De otro modo, es posible emplear ácidos fuertes como el ácido tricloroacético, p-toluensulfónico o metansulfónico y similares en cantidades catalíticas, junto con solventes inertes. El más preferido es el ácido fórmico que en teoría es conveniente puesto que puede servir como solvente y catalizador para estas reacciones. En otra versión, el ácido trifluoroacético puede estar sustituido por ácido fórmico en la reacción; a condición de que la reacción se lleve a cabo a temperaturas bajas y el aldehido o aldehido equivalente utilizado para -preparar el acetal sea estable a las condiciones acidas fuertes.
Cualquiera de los dos diasterómeros posibles que surjan de la adición del acetal al residuo ribosa quiral pude ser sintetizado por diferentes procedimientos. En un ejemplo para preparar 2 Y 3' -fenil acetal-6-N-etilurea AMP, uno de los diasterómeros del acetal sustituido con fenilo (isómero cis, compuesto 43) se prepara por la reacción entre benzaldehido y los grupos hidroxilo 2' y 3' de la ribosa a temperatura baja, como puede ser -10 a 0°C. El otro isómero trans (compuesto 42) se prepara primero realizando la misma reacción formadora del acetal a temperatura ambiente para producir una mezcla en equilibrio de los diasterómeros cis y trans, luego seguido por la degradación selectiva en condiciones acidas acuosas del isómero cis. En otro ejemplo para preparar 2 ', 3' -cinamilacetal-6-N-etilurea AMP (compuesto 27), una mezcla de isómeros cis y trans del acetal sustituido con estirilo se prepara por la reacción entre cinamaldehído y los grupos hidroxilo 2 ' y 3' de la ribosa a temperatura como 20°C. El isómero trans (compuesto 41) se prepara a partir de la mezcla por degradación selectiva en condiciones acidas acuosas del isómero cis.
Los ortoésteres cíclicos se pueden preparar por la reacción de los grupos hidroxilo 2 ' - y 3 ' - adyacentes de una furanosa con un ortoéster acíclico, en presencia de un ácido. Cuando el nucleósido o nucleótido que ha de ser derivado es una purina que contiene una funcionalidad 6-amino o es una pirimidina que contiene una funcionalidad 4-amino, este se puede convertir en la urea o tiourea respectiva mediante el tratamiento con isocianatos o isotiocianatos, respectivamente, como ya se describió para los carbamatos o tiocarbamatos de los hidroxilos 2 ' ó 3' de la furanosa. Se encontró que las reacciones del grupo amino con los isocianatos o isotiocianatos se podria efectuar en presencia de los grupos hidroxilo de la furanosa por manipulación adecuada de la estequiometría de la reacción.
Todas las reacciones de derivación se pueden realizar en los dinucleótido polifosfatos preformados, lo cual da origen a múltiples productos dependientes de la estequiometría de la reacción y si están presentes múltiples grupos reactivos. Cuando se obtienen múltiples productos, estos pueden ser separados convenientemente mediante el uso de cromatografía líquida de alto rendimiento en fase inversa, preparativa (HPLC) . Es particularmente conveniente el uso de columnas de fase inversa C18 o fenilo, junto con gradientes que comiencen con solución amortiguadora de acetato de amonio y terminen con metanol. El uso de una solución amortiguadora proporciona estabilidad al nucleótido y mejora la forma del pico de los productos eluyentes y el uso de metanol permite la desorción eficaz de estos compuestos lipofílicos de la columna. Es particularmente conveniente el uso de soluciones amortiguadoras de acetato de amonio junto con metanol, ya que estos solventes son miscibles en todas las proporciones y se pueden separar fácilmente de los productos sometidos a cromatografía por evaporación, seguido por liofilización.
Aunque se puede realizar la separación de múltiples productos por HPLC, otra estrategia es utilizar nucleósidos o nucleótidos que contengan solo una funcionalidad reactiva, bien sea porque solo una esté presente, o por el uso de grupos protectores para bloquear reacciones laterales en otras porciones de la molécula. Esto se puede realizar a nivel de los dinucleótido polifosfatos preformados o de otro modo se puede efectuar en los nucleósido mono-, di- o trifosfatos, dando origen a productos novedosos por sí mismos, o se pueden acoplar a otros nucleósido mono- di-o trifosfatos por los métodos que ya han sido descritos.
Las reacciones anteriores y las técnicas de purificación también se aplican a los análogos carba-ribosa (por ejemplo Di = CH2) de los nucleósidos, nucleótidos y sus derivados, y los términos como "mononucleótido" y "dinucleótido" también aplica a los análogos carba-ribosa y otros derivados definidos por las fórmulas I-IV.
Los expertos en la técnica se darán cuenta de las diferentes metodologías sintéticas que se pueden emplear para preparar las sales no tóxicas, aceptadas para uso farmacéuticos y los profármacos asilados de los compuestos .
Uso de los compuestos antagonistas del receptor P2Y12 Esta invención propone un método para la prevención o tratamiento de enfermedades o estados asociados con la agregación de las plaquetas y/o la activación de las plaquetas. El método también proporciona un método para tratar trombosis. El método consiste en administrar a una persona una composición farmacéutica que contenga una cantidad eficaz terapéutica de un compuesto antagonista de los receptores P2Y12, en donde la cantidad es eficaz para unirse a los receptores P2Y12 para las plaquetas e inhibir la agregación plaquetaria inducida por ADP.
Los compuestos de la fórmula general I son antagonistas del efecto de ADP sobre su receptor en la membrana plaquetaria, el receptor P2Y12. Los compuestos de la fórmula general I son útiles en tratamientos, en particular en la prevención o tratamiento de la agregación plaquetaria. Los compuestos proporcionan eficacia como agentes antitrombóticos por su capacidad para bloquear la activación de ADP en su sitio receptor de plaquetas y asi prevenir la agregación plaquetaria. Los compuestos proporcionan un efecto antitrombótico más eficaz que aspirina, pero con menos efectos intensos sobre la hemorragia en comparación con los antagonistas del receptor del fibrinógeno.
Los antagonistas del receptor 2Y?2 de esta invención, contrario con los productos comercializados actualmente clopidogrel (Plavix®) y ticlopidina (Ticlid®) se unen al receptor P2Yi2 en un modo reversible y por tanto los efectos del tratamiento con los compuestos descritos en esta invención se invierten por la simple interrupción del tratamiento, reestableciendo la funcionalidad hemostática de las plaquetas cuando es necesaria.' Puesto que las plaquetas son partículas regulares no nucleadas que carecen de la habilidad para sintetizar nuevas proteínas, el tratamiento de personas con antagonistas de P2Y12 irreversibles dan Origen al deterioro de la función de las plaquetas que duran a lo largo de la vida de la plaqueta (aproximadamente 8 a 10 dias) . El uso de antagonistas de P2Y?2 irreversibles como clopidogrel han sido asociados con aumentos en la pérdida de sangre, requisitos de transfusión y velocidad de reoperación después de cirugía cardiaca (Kapetanakis y col . , Eur Herat J. 26: 576-83, 2005). Para evitar estas complicaciones, a los individuos que se someten a cirugías electivas se les solicita que interrumpan el tratamiento con antagonistas irreversibles durante al menos 5 días antes de la cirugía, lo cual aumenta el riesgo de episodios trombóticos durante este periodo. Por tanto, los compuestos descritos en esta invención representan una ventaja sobre los compuestos actualmente comercializados .
La agregación de las plaquetas inducida por ADP es mediada por la activación simultánea de los receptores P2Yj.2 y P2Y?, de este modo la administración combinada de los compuestos de la fórmula I con los antagonistas de los receptores P2Y]_ de plaquetas pueden proporcionar un efecto antitrombótico más eficaz en concentraciones de cada antagonista por debajo de las concentraciones eficaces para bloquear cada subtipo de receptor en otros sistemas, dando como resultado una disminución de la manifestación potencial de efectos adversos. Además, estos compuestos se pueden utilizar junto con dosis menores de otros inhibidores de la agregación pláquetaria que funciona por diferentes mecanismos, para reducir los posibles efectos secundarios de estos agentes.
Los compuestos de la presente invención son útiles como agentes antitrombóticos, y también son útiles en el tratamiento o prevención de angina inestable, angioplastia coronaria (PTCA) e infarto de miocardio.
Los compuestos de la presente invención también son útiles en el tratamiento o prevención de complicaciones trombóticas arteriales primarias de aterosclerosis como el accidente cerebro vascular trombótico, enfermedad vascular periférica, infarto de miocardio sin trombólisis .
Los compuestos de la presente invención también son útiles para el tratamiento o prevención de complicaciones trombóticas arteriales debidas a las intervenciones en enfermedades ateroscleróticas como angioplastia, endarterectomia, colocación de stent, cirugía de injerto coronario y otros vasculares.
Los compuestos de la presente invención también son útiles para el tratamiento o prevención de complicaciones trombóticas de daño quirúrgico o mecánico como recuperación de tejido después de trauma quirúrgico o accidental, cirugía reconstructiva incluidos los colgajos de la piel, y cirugía "reductiva" como la reducción de la mama.
Los compuestos de la presente invención son útiles para la prevención de la activación plaquetaria inducida mecánicamente in vivo, por ejemplo, causada por derivación cardiopulmonar, la cual da origen a la disfución plaquetaria temporal (prevención de microtromboembolia) . Los compuestos de la presente invención son útiles para la prevención de la activación plaquetaria inducida mecánicamente ín vitro . Por ejemplo, los compuestos son útiles en la preservación de productos sanguíneos, por ejemplo concentrados plaquetarios, la prevención de oclusión por desviación como en la diálisis renal y plasmaferesis y trombosis secundaria al daño/inflamación vascular como vasculitis, arteritis, glomérulo nefritis y rechazo de órgano injertado.
Los compuestos de la presente invención también son útiles en alteraciones con un componente de consumo difuso trombótico/plaquetario como la coagulación intravascular diseminada, púrpura trombocitopénica trombótica, síndrome hemolítico urémico, trombocitopenia inducida por heparina y pre-eclampsia/eclampsia.
Los compuestos de la presente invención también son útiles para el tratamiento o prevención de trombosis venosa como trombosis de vena profunda, enfermedad veno-oclusiva, estados hematológicos como trombocitemia y policitemia, y migraña.
Los compuestos de la presente invención son útiles en el tratamiento a un mamífero para aliviar los efectos patológicos de aterosclerosis y arteriosclerosis, IM agudo, angina estable crónica, angina inestable, ataques isquémicos transitorios y accidentes cerebro vasculares, enfermedad vascular periférica, trombosis arterial, pre-eclampsia, embolia, restenosis o cierre repentino luego de angioplastia, endarterectomia carótida y anastomosis de injertos vasculares.
Los compuestos de la presente invención son útiles en el tratamiento de estados agudos o crónicos de hiperagregabilidad, como coagulación intravascular diseminada (DIC) , septicemia, choque quirúrgico o infeccioso, trauma post operatorio y postparto, cirugía de derivación cardiopulmonar, transfusión sanguínea incompatible, desprendimiento previo de la placenta, púrpura trombocítopénica trombótica (TTP) , veneno de víboras y enfermedades inmunitarias, son probablemente las más sensibles a un tratamiento como este.
Los compuestos de la presente invención son útiles en el tratamiento de enfermedades o estados asociadas con la activación y agregación de las plaquetas producidas por el contacto de la sangre con un dispositivo artificial. En una modalidad, el dispositivo artificial es un pulmón artificial para corporal y un dispositivo de oxigenación de membrana extra corporal. En otra modalidad, el dispositivo artificial es un corazón artificial implantable, interno. En otra modalidad, el dispositivo artificial es un instrumento de aféresis que se utiliza para separar o aislar un componente específico de la sangre, y regresar los componentes sanguíneos restantes al donador. En todavía otra modalidad, el dispositivo artificial es un instrumento para hemodiálisis.
Los compuestos de la presente invención son útiles in vitro para inhibir la agregación de las plaquetas en sangre y producto de la sangre, por ejemplo para el almacenamiento, o para manipulaciones ex vivo como durante el uso diagnostico o para investigación. En estas aplicaciones, los compuestos se administran a la sangre o producto sanguíneo.
Por último, si los compuestos de la presente invención tienen suficiente afinidad de unión y llevan una por ejemplo fluorescente, son útiles como sondas bioquímicas para el receptor P2Y2.
En una modalidad particularmente preferida, los compuestos se utilizan en el tratamiento de angina inestable, angioplastia coronaria e infarto de miocardio.
En otra modalidad particularmente preferida de la presente invención, los compuestos son útiles como terapia auxiliar en la prevención de trombosis arterial coronaria durante el manejo de angina inestable, angioplastia coronaria e infarto agudo de miocardio, es decir, peritrombólisis . Los compuestos se administran en combinación con otros fármacos antiplaquetarios y/o anticoagulantes como heparina, aspirina, antagonistas de GP Ilb/IIIa o inhibidores de trombina.
Esta invención también proporciona un método para inhibir agregación plaquetaria y la formación de coágulos en un mamífero, especialmente un humano, el cual consiste en la administración a un individuo de un compuesto de la fórmula (I) y un portador aceptable para uso farmacéutico .
Esta invención además proporciona un método para inhibir la reoclusión de una arteria o vena después de terapia fribrinolítica, el cual consiste en la administración interna de un compuesto de la fórmula (I) y un compuesto fibrinolítico. Cuando se utiliza en el contexto de esta invención, el término compuesto fibrinolítico se propone para entender cualquier compuesto, bien sea un producto natural o sintético, que cause directa o indirectamente la lisis de un coágulo de fibrina. Los activadores del plasminógeno son un grupo bien conocido de compuestos fibrinoliticos . Los activadores del plasminógeno útiles incluyen, por ejemplo anistreplasa, urocinasa (ÜK) , pro-urocinasa (pUK) , estreptocinasa (SK) , activador del plasminógeno de tejido (tPA) y mutantes o variantes de estos, que conservan la actividad activadora del plasminógeno, como pueden ser las variantes que han sido químicamente modificadas o en las cuales se han adicionado, delecionado o sustituido uno o más aminoácidos, o en los cuales se han adicionado, delecionado o alterado uno o más dominios funcionales como puede ser por la combinación del sitio activo de un activador de plasminógeno o dominio de unión a fibrina de otro activador de plasminógeno o molécula de unión a fibrina.
La circulación extracorpórea se utiliza habitualmente para cirugía cardiovascular con el fin de oxigenar la sangre. Las plaquetas se adhieren a la superficie del circuito extracorpóreo. Las plaquetas liberadas de las superficies artificiales muestran función hemostática dañada. Los compuestos de la invención pueden ser administrados para prevenir adhesión.
Otras aplicaciones de estos compuestos incluyen la prevención de la trombosis plaquetaria, trombo embolia y reoclusión durante y después de terapia trombolítica y la prevención de trombosis plaquetaria, trombo embolia y reoclusión después de angioplastia de arterias coronarias y otras y después de procedimientos de bypass de arterias coronarias .
Los compuestos activos se pueden administrar por vía sistémica a los sitios elegidos a un individuo en necesidad de modo que la concentración extracelular de un agonista de P2Yi2 se eleve para bloquear la unión del ADP al receptor P2Y12, para inhibir así la agregación plaquetaria. El término sistémico cuando se utiliza en la presente incluye inyección subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraesternal, inyección intravítrea, infusión, inhalación, administración transdérmica, administración oral, administración rectal o instilación intraoperatoria .
Para administración sistémica como inyección e infusión, la formulación farmacéutica se prepara en un medio estéril. El ingrediente activo, dependiendo del vehículo y la concentración que se utilice, puede estar suspendido o disuelto en el vehiculo. También es posible disolver en el vehículo adyuvantes como anestésicos locales, preservadores y agentes amortiguadores. La preparación inyectable, estéril, puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente no tóxico, aceptable. Entre los vehículos y disolventes aceptables que se pueden emplear agua estéril, solución salina o solución de Ringer.
Otro método de administración sistémica del compuesto activo incluye la administración oral, en la cual las composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos activos están en forma de tabletas, pastillas, suspensiones acuosas u oleosas, geles viscosos, gomas masticables, polvos o granulos dispersables, emulsión, cápsulas duras o blandas, o jarabes o elixires." Para uso oral, una suspensión acuosa se prepara mediante la administración de agua a polvos y granulos dispersables con un agente dispersante o humectante, agente para suspensión, uno o más preservadores y otros excipientes. Los agentes de suspensión, incluyen, por ejemplo, carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa y alginato de sodio. Los agentes dispersantes o humectantes incluyen los fosfátidos que se encuentran ' en la naturaleza, los productos de la condensación de un óxido de alileno con ácidos grasos, los productos de la condensación de óxido de etileno con alcoholes alifáticos de cadena larga, productos de condensación de óxido de etileno con esteres parciales de ácidos grasos y un exitol, y los productos de la condensación de óxido de etileno con esteres parciales provenientes de ácidos grasos y anhídridos de exitol. Los preservadores incluyen, por ejemplo, p-hidroxibenzoato de etilo y de N-propilo. Otros excipientes incluyen agentes edulcorantes (por ejemplo sacarosa, sacarina), agentes saborizantes y agentes colorantes. Los expertos en la técnica reconocerán los múltiples excipientes específicos y agentes humectantes comprendidos por la descripción general anterior.
Para aplicación oral, se preparan tabletas mezclando el compuesto activo con excipientes no tóxicos aceptables para uso farmacéutico convenientes para la fabricación de tabletas. Estos excipientes pueden ser, por' ejemplo, diluyentes inertes como carbonato de calcio, carbonato de sodio, lactosa, fosfato de calcio o fosfato de sodio; agentes granuladores y desintegradores, por ejemplo, almidón de maíz o ácido algínico; agentes aglutinantes, por ejemplo, almidón, gelatina o acacia; y agentes lubricantes, por ejemplo estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Las tabletas pueden ser no cubiertas o pueden ser cubiertas por las técnicas conocidas para desintegración retardada y absorción el tracto gastrointestinal y por este medio proporcionar una acción prolongada durante un tiempo más largo. Por ejemplo, es posible emplear un material para retrazo en el tiempo como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo. Las formulaciones para uso oral también pueden estar presentes como cápsulas de gelatina dura en donde el ingrediente activo se mezcla con un diluyente sólido inerte, por ejemplo, carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolín, o como cápsulas de gelatina blanda en donde el ingrediente activo se mezcla con agua o un medio oleoso, por ejemplo aceite de cacahuate, parafiña liquida o aceite de olivo. La fórmula para uso oral "también se puede presentar como gomas masticables incorporando el ingrediente activo en gomas de modo que el ingrediente activo se libere lentamente al masticarla.
Otros medios para la administración sistémica del compuesto activo a las plaquetas elegidas del individuo incluirían una forma de supositorio del compuesto activo, de modo que una cantidad terapéutica eficaz del compuesto llegue a los sitios elegidos por absorción sistémica y circulación.
Para administración rectal, las composiciones en forma de supositorios se pueden preparar mezclando el ingrediente activo con un excipiente no irritante conveniente que sea sólido a las temperaturas ordinarias pero liquido a la temperatura rectal y por tanto se funda en el recto para liberar el compuesto. Tales excipientes incluyen manteca de cacao y polietilen glicoles.
Los compuestos activos también pueden administrarse por vía sistémica a los sitios de agregación plaquetaria a través de absorción por la piel utilizando parches o almohadillas transdérmicas. Los compuestos activos se absorben hacia el torrente sanguíneo a través de la piel. La concentración plasmática de los compuestos activos se puede controlar utilizando parches que contengan diferentes concentraciones de los compuestos activos.
Un método sistémico incluye una suspensión en aerosol de partículas respirables que contienen el compuesto activo, el cual inhala el individuo. El compuesto activo sería absorbido hacia el torrente sanguíneo por los pulmones, y después haría contacto con las plaquetas elegidas en una cantidad farmacéutica eficaz. Las partículas respirables pueden ser líquidas o sólidas, con un tamaño de partícula suficientemente pequeño para pasar a través de la boca y la laringe con la inhalación; en general, se consideran respirables partículas en el intervalo desde aproximadamente 1 a 10 mieras, pero más preferentemente 1-5 mieras de tamaño.
Otro método para la administración sistémica de los compuestos activos a los sitios de agregación plaquetaria del individuo incluye la administración de una suspensión liquido/liquido en forma de gotas oftálmicas o lavado oftálmico o gotas nasales de una formulación liquida, o un rocío nasal de partículas respirables que el individuo inhala. Las composiciones farmacéuticas liquidas del compuesto activo para producir un rocío nasal o gotas nasales oftálmicas se pueden preparar combinando un compuesto activo con un vehículo conveniente como agua estéril libre de pirógenos o salina estéril por las técnicas conocidas para los expertos.
El suministro intravítreo puede incluir inyecciones intravítreas individuales o múltiples, por un dispositivo intravítreo implantable que libere los antagonistas de P2Yi2 en una capacidad prolongada. El suministro intravítreo también puede incluir el suministro durante manipulaciones quirúrgicas como auxiliar a la solución de irrigación intraocular o aplicado directamente al humor vitreo durante el procedimiento quirúrgico.
Para administración sistémica, las concentraciones plasmáticas de los compuestos activos suministrados puede variar conforme con los compuestos; pero por lo regular son 1 x 10 - 1 x 10+ moles/litro; y preferentemente 1 x 10" -1 x 10" moles/litro.
La utilidad farmacéutica de los compuestos antagonistas de P2Y?2 de esta invención esta indicada por su inhibición de la agregación plaquetaria inducida por ADP. Este ensayo ampliamente utilizado, como esta descrito en S. M. O. Hourani y col., Br. J. Pharmacol. 105, 453-457 (1992) se basa en la medición de la agregación de la suspensión plaquetaria con la adición de un agente de agregación como el ADP.
La invención además se ilustra mediante los siguientes ejemplos que no deben ser considerados como limitantes del alcance de la invención a los procedimientos específicos descritos en estos.
EJEMPLOS Ejemplo 1 2' (3' ) -O- ( (fenilaminocarbonil) -uridinad' -) trifosfato La sal ditributilamonio de 5' -trifosfato de uridina (100 mg, 0.176 mmol; preparada a partir de la sal trisodio por tratamiento con Dowex 50Wx4H en agua, seguido por el mezclado de las especies protonadas con un exceso de tributilamina, centrifugación y liofilización) se disolvió en DMF anhidro (1 mL) y se adicionó fenilisocianato (19 µl, 0.176 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 45°C durante 15 minutos, en cuyo momento se adicionó otra porción de fenil isocianato (19 µl, 0.176 mmol). La solución se calentó a 45°C durante la noche y se eliminó DMF en un evaporador rotatorio. El aceite residual se separó entre agua (2 mL) y acetato de etilo (2 mL) y se separaron las capas. La capa acuosa se extrajo dos veces más con acetato de etilo (2 mL cada una) y el agua se eliminó en el evaporador rotatorio. El residuo se disolvió en agua (1.5 mL) y el producto se aisló por inyecciones repetidas en una columna HPLC preparativa (Alltech Nucleotide/Nucleoside C18, 7 um, lOx 250 mm, gradiente de acetato de amonio 0.1 M a metanol durante 30 minutos, 5 mL/min, supervisión a 260 nm) . El rendimiento del carbamato fue de 26 mg (22% del calculado para la sal tetraamonio) . La ÍH NMR mostró el producto como una mezcla de carbamatos 2 ' y 3'. El producto así obtenido se puede utilizar para los propósitos de esta invención por si mismo o se puede activar con un agente copulante conveniente (por ejemplo una carbodiimida) y reaccionar con una variedad de nucleótidos para generar los polifosfatos de dinucleósido novedosos. 1H NMR (D20, 300 MHz): d 4.10-4.47 (m, 4H) , 5.17 (m, ÍH) , 5.83 (dd, 1H) , 5.96 (m, ÍH) , 7.04 (t, ÍH) , 7.25 (m, 4H) , 7.79 (m, ÍH) . 31P NMR (D20, 121.47 MHz): 8 -9.54 (m, 1P) , - 10.20 (m, 1P), -21.87 ( , 1P) .
Ejemplo 2 2' (3' ) -O- (fenilaminocarbonil)-P1,P4-di (uridina 5'-) tetrafosfato ["Monofenilcarbamato Up4U"] , Di-2'(3')-0- (fenilamino carbonil) -P 1,P4-di (uridina 5'-) tetrafosfato ["difenilcarbamato Up4U"] , tri-2' (3' ) -O-(fenilaminocarbonil) (uridina 5'-) tetrafosfato ["trifenilcarbamato Up4U"] La sal ditributila onio de P 1, P4-di (updma 5' -) tetrafosfato (211 mg, 0.182 mmol); preparada a partir de la sal tetrasodio por tratamiento con Dowex 50 x4H en agua, seguido por el mezclado de las especies protonadas con un exceso de tributilamina, centrifugado y liofilización) se disolvió en DMF anhidro (2 mL) y fenilisocianato (40 µl, 3.64 mmol) adicionado en una sola porción. La mezcla de reacción homogénea se calentó durante la noche a 45 °C, con lo cual la TLC (gel de silice, 50% isopropanol/50% hidróxido de amonio) indicó una conversión substancial en dos productos. El solvente se eliminó en evaporador rotatorio y el residuo se separó entre agua (7 mL) y acetato de etilo (10 mL) . Se separaron las capas y la acuosa se extrajo dos veces más con acetato de etilo. (10 mL cada una) . El agua se eliminó del extracto acuoso y el aceite residual se liofilizó durante la noche. El sólido obtenido se reconstituyó en agua (3 mL) y los dos productos se separaron por inyecciones repetidas en una columna HPLC semipreparativa (Alltech Nucleotide/Nucleoside C18, 7um, 10 x 250 mm, gradiente de acetato de amonio 0.1 M a metanol durante 30 minutos, 5 mL/min, supervisión a 260 nm) . La centrifugación y liofilización dieron el raono-fenilcarbamato (48 mg, 27% de rendimiento) , di-fenilcarbamato (16 mg, 8% de rendimiento) y una cantidad en trazas del trifenilcarbamato, como las sales tetraamonio. Los tres productos fueron mezclas de los regioisómeros 2'/3' correspondientes.
Monofenilcarbamato: XH NMR (D20, 300 MHz): d 4.08-4.65 ( , 9H) , 5.14 (d, 1H) , 5.75- 5.94 (m,4H), 7.01 (t, 1H) , 7.22 (m, 4H) , 7.76 (m, 2H) . 31P NMR (D20, 121.47 MHz): d - 10.17 ( , 2P) , -21.81 (m, 2P) . Difenilcarbamato: aH NMR (D20, 300 MHz): d 4.13-4.43 ( , 8H) , 5.12 (m, 2H) , 5.84 (m, 4H) , 7.01 (m, 2H) , 7.21 (m, 8H) , 7.75 (dd, 2H) . P NMR (D20, 121.47MHz): d -10.19 ( , 2P) , -21.65 (m, 2P) . Trifenilcarbamato: 2H NMR(D20, 300 MHz): d 4.29 (m, 7H) , 4.5.10 (m, ÍH) , 5.27 (m, 2H) , 5.87 (m, 4H) , 7.09 (m, 15H) , 7.76 (d, 2H) . 31P NMR (D20, 121.47 MHz") : "d -10.30 (m, 2P) , -21.73 (m, 2P) .
Ejemplo 3 (2' (3' ) -O- (fenilaminocarbonil) di (uridina-5' -) tetrafosfato ["tetrafenilcarbamato Up4U"] Se preparó este derivado de conformidad con el método del Ejemplo 2. La sal ditpbutilamonio de P 1,P4-di (uridina 5' -) tetrafosfato, (200 mg, 0.172 mmol) se trató con 16 equivalentes de fenilisocianato" (300 uL, 2.76 mmol) en DMF y agitación durante la noche a 35°C. El solvente .se evaporó y los reactivos en exceso se eliminaron por extracción en una solución acuosa del producto con acetato de etilo. Después de HPLC preparativa como ya se describió se obtuvieron 93 mg (rendimiento de 30%) del tetraf enilcarbamato . Tetraf enilcarbamato: 1H NMR (D20, 300 MHz) : d 7.75 (d, 2H) , 7.11 (m, 16H) , 6.94 ( , 4H) , 5.95 (d, 2H) , 5.80 (d, 2H) , 5.32 ( , 2H) , 5.23 (m, 2H) , 4.42 (m, 2H) , 4.25 (m, 2H) , 4.16 (m, 2H) . 31P NMR (D20, 121.47 MHz) : d -10.30 (m, 2P) ,-22.32 (m, 2P) .
Ejemplo 4 2' ,3'- (bensil)metilendioxi-P1, P4-di (uridina 5'-) tetrafosfato ["mono 2' /3'bencilacetal Up4U"] y P^P4-Di (2' ,3' -) ( (bencil)metilendioxi) di (uridina 5'-) tetrafosfato ["Di 2' /3'bencilacetal Up4U"] La sal tetrasodio de P ,P -di (uridina 5'-) tetrafosfato (290 mg, 0.332 mmol) se disolvió en ácido fórmico al 98% y se adicionó fenilacetaldehído dimetilacetal (110 uL, 0.662 mmol). Se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 3 días, en cuyo momento la TLC (gel de sílice, 50% isopropanol/50% hidróxido de amonio) y HPLC (C18) mostraron buena conversión a 2 productos menos polares. El ácido fórmico se eliminó en un evaporador rotatorio y se separó el residuo entre bicarbonato de amonio 0.7 M (15 mL) y acetato de butilo (15 mL) . Las capas se separaron y se lavó la acuosa con otra porción de acetato de butilo (10 mL) . Se destiló la capa acuosa y el residuo se liofilizó durante la noche. El producto crudo se disolvió en agua (5 mL) y los componentes se separaron por HPLC preparativa (Waters NOvapak C18, 6 um, 25 x 100 mm, gradiente desde acetato de amonio 0.1 M hasta metanol durante 30 minutos, 30 mL/min, supervisión a 260 nm) . El rendimiento del monoacetal fue de 88 mg (28%) y del diacetal 60 mg (17%) ambos como sales tetraamonio. Monoacetal: XH NMR (D20, 300 MHz): d 2.99 (d, 2H) , 4.01-4.32 (m, 8H) , 4.77 (m, 2H) , 5.33 (m, 2H) , 5.74 (d, ÍH) , 5.81 (m, 2H) , 7.21 (m, 5H) , 7.64 (d, ÍH) , 7.79 (d, 1H) . 31P NMR (D20, 121.47 MHz): d -10.18 (m, 1P),-10.78 (m, 1P) ,-22.00 (m, 2P) . Diacetal: aH NMR (D20, 300 MHz) : d 2.98 (d, 4H) , 3.99 (m, 4H) , 4.27 (m, 2H) , 5.27 (m, 2H) , 5.36 (m, 2H) , 5.73 (d, J = 8.1 Hz, 2H) , 7.21 (m, 10H) , 7.61 (d, J= 8.1 Hz, 2H) . 31P NMR (D20, 121.47 MHz) : d -10.57 (m, 2P) ,-21.81 (m, 2P) .
Ejemplo 5 2' , 3' - (bencil)metilendioxi P , P -di (uridina 5'-) trifosfato ["2' 3'bencilacetaldehído acetal Up3U"] y P1, 3 P -di (2' , 3' -) ( (bensil) etilendioxi) (uridina 5'-) trifosfato ["di 2' 3' fenilacetaldehído acetal Up3U"] La sal tpsodio de P 1,P3-di (uridina 5'-) (trifosfato (100 mg, 0.129 mmol) se disolvió en ácido fórmico al 98% y se fenilacetaldehído, se adicionó dimetilacetal (64 uL, 0.386 mmol). Después de agitación durante la noche a temperatura ambiente, se eliminó el ácido fórmico y el residuo se separó entre bicarbonato de sodio 1 M y acetato de etilo. Después de la eliminación de la capa orgánica, el producto se purificó en HPLC preparativa, como ya se describió. Después de la liofilización se obtuvieron 40 mg (36%9 del monoacetal y 24 m g (19%) del diacetal. Monoacetal: XH NMR (D20, 300 MHz): d 7.7s (d, 2H) , 7.54 (d, 2H) , 7.16 (s, 5H) , 5.70 (m, 3H) , 5.31 (s, 1H) , 5.23 (s, ÍH) , 4.66 (m, 2H) , 4.10 (m, 8H) , 2.93 (d, 2H) . 31P NMR (D20, 121.47 MHz): d -10.30 (m, 1P) , 10.81 (m, 1P),-21.99 (m, 1P) . Diacetal: XH NMR (D20, 300 MHz): d 7.51 (d, 2H) , 7.15 (m, 10H) , 5.65 (d, 2H) , 5.31 (d, 2H) , 5.20 (t, 2H) , 4.63 (m, 2H) , 4.13 (m, 2H) , 3.88 ( , 4H) , 2.90 (d, 4H) . 1P NMR (D20, 121.47 MHz): 8 -10.75 (m, 2P) , -21.97 (m, IR).
Ejemplo 6 P1-2' ,3' -( (bensil) etilendioxi) (uridina 5'-) P4- (deoxicitidina 5'-) tetrafosfato ["2' 3' fenilacetaldehído acetal Up4dC"] La sal tetrasodio de P 1,P (updma - 5'-) P4- (deoxicitidina 5'-) tetrafosfato (100 mg, 0.16 mmol) se disolvió en ácido fórmico al 98% (1 mL) , y se adicionó fenilacetaldehído, dimetilacetal (57 uL, 0.384 mmol). Después de agitar durante la noche, se eliminó el ácido fórmico y el residuo se separó entre bicarbonato de sodio 1 M y acetato de etilo (después de la separación de las capas, el producto se purificó en HPLC preparativa, como ya se describió. Rendimiento 40 mg (36%) . Este .producto se pudo manejar para modificación posterior de la base deoxicitidina por los procedimientos descritos en los Ejemplos 9-13, dando origen a moléculas bifuncionales lipofílicas que entran dentro del alcance de esta invención. Monoacetal: XH NMR (D20, 300MHz) : d 7.98 (d, 1H) , 7.62 (d, ÍH) , 7.21 (m, 5H) , 6.11 (m, 2H) , 5.74 (d, 1H) , 5.39 (d, ÍH), 5.31 (t, 1H), 4.77 (m, 2H) , 4.45 (m, ÍH) , 4.32 (m, ÍH), 4.03 (m, 5H) , 2.99 (d, 2H) , 2.29 y 2.21 (M, 2H) . 31P NMR (D20, 121.47 MHz): d -10.15 (m, 1P) , -10.68 (m, 1P) , -21.98 (m, 2P) .
Ejemplo 7 3' -O- (fenilaminocarbonil) -2' -deoxi (uridina 5')-monofosfato La sal tetrabutilamonio de deoxiuridina 5'-monofosfato (135 mg, 0.274 mmol; preparada a partir de la sal disodio por tratamiento con Dowex 50 Wx4H , seguido por agitación de las especies neutras resultantes con tributilamina en exceso, destilación y liofilización) se disolvió en DMF anhidro (1 mL) . Se adicionó fenilisocianato (60 uL, 0.547 mmol) y la mezcla se calentó durante la noche a 45 °C, en cuyo momento la TLC (gel de sílice, 50% isopropanol/50% hidróxido de amonio) y HPLC (C18) indicaron una conversión substancial a un producto menos polar. La DMF se destiló en un evaporador rotatorio y el residuo oleoso se separó entre agua (10 mL) y acetato de etilo (10 mL) . Las capas se separaron y la capa acuosa se volvió a lavar con acetato de etilo (2 x 10 mL) . El agua se eliminó y el residuo se disolvió en agua (2 mL) . El producto se aisló por inyecciones repetidas en HPLC semipreparativa (Alltech Nucleotide/Nucleoside C18, / um, 10 x 250 mm, gradiente a partir de acetato de amonio 0.1 M a metanol durante 30 minutos, 5 mL/min, supervisión a 260 nm) . El rendimiento fue de 67 mg como la sal diamonio (53%) .
Yi NMR (D20, 300 MHz): d 2.21 (m, 2H) , 3.84 (s, 2H) , 4.13 (s, ÍH) , 5.08 (d, ÍH) , 5.63 (d, 1H) , 6.06 (t, ÍH) , 6.89 (br. t, 1H) , 7.10 (m, 4H) , 7.72 (d, ÍH) . 31P NMR (D20, 121.47 MHz): d -2.31 (s) .
P - (3' -O- (fenilaminocarbonil) -2' -deoxiuridina 5'-) 4 P (uridina 5'-) tetrafosfato La sal ditributilamonio de 5' -trifosfato (preparada a partir de la sal trisodio por tratamiento con Dowex 50 Wx4H , seguido por agitación de las especies neutras resultantes con tributilamino en exceso, la destilación y liofilización) se trata con 1.5 equivalentes de diciclohexil carbodiimida en DMF durante 2 horas temperatura ambiente. La diciclohexilurea se filtra, y el trifosfato de uridina 5' cíclica resultante se trata con 3' -O- (fenilaminocarbonil) -2 ' -deoxi (uridina 5')-monofosfato, que está en la forma de la sal monotributilamonio. La mezcla de reacción se agita durante varios días a 45 °C y se elimina el solvente. Los productos se separan en HPLC preparativa, como ya se ha descrito.
Ejemplo 8 2' (3' ) -(2-metilamino) benzoil-P1,P4-di (uridina 5') tetrafosfato ("MANT Up4U") y P1,P-di(2' (3')-(2- etilamino) benzoil uridina 5'-) tetrafosfato ("Bis MANT Up4U") La sal tetrasodio de P ,P -di (uridina 5'-) tetrafosfato (800 mg, 0.93 mmol) se disolvió en agua (5 L) y se ajustó el pH a 7.6 por la adición de bicarbonato de sodio sólido. Se adicionó N, N-dimetilformamida (DMF, 5 mL) , seguido por anhídrido N-metilisatóico (231 mg, 1.3 mmol) y la suspensión se calentó a 50 °C durante 2.5 horas. La TLC (gel de silice, 50% 'isopropanol, 50% hidróxido de amonio) indicó que la reacción no se realizó hasta este momento, de modo que se adicionó otra porción de anhídrido N-metilisatóico (100 mg, 0.56 mmol) y la reacción se calentó durante otra hora. La DMF se eliminó en un evaporador rotatorio y el residuo se disolvió en un minimo de agua y se aplicó a una columna DEAE Sephadex A-25 (3 x 60 cm) . La columna fue eluída con un gradiente paso a paso de agua a bicarbonato de amonio 1 M y el eluyente se supervisó con un detector UV establecido a 254 mm. Los dos productos que eluyeron fueron recolectados por separado y se eliminó el solvente de cada uno y el residuo se liofilizó durante la noche. La i H NMR indico que el primer producto eluido. fue el compuesto monoacilado, mientras que el último fue el derivado diacilado, y que ambos fueron mezclas con la acilación en los hidroxilos 2 ' ó 3Y pero sin dos carbamatos en el mismo azúcar. El rendimiento del producto monoamino benzoilado fue 150 mg (16%) ; el rendimiento del compuesto diaminobenzoilado fue 91 mg (8.7%) . Derivado monoaminobenzoilado: 1H NMR (D20, 300 MHz) : d 2.70 (s, 3H) , 4.09-4.55 (m, 9H) , 5.34 (m, 1H) , 5.71 (m, 2H) , 5.83 (dd, ÍH) , 6.01 (m, ÍH) , 6.57 (m, ÍH) , 6.65 (m, 1H) , 7.25 (t, ÍH) , 7.72 (d, 2H) , 7.81 (m, 2H) . 31P NMR (D20, 121.47 MHz): d -10.20 (m, 2P) , - 21.83 (m, 2P) . Derivado diaminobenzoilado: 1H NMR (D20, 300 MHz): d 2.69 (s, 6H) , 4.15-4.51 (m, 8H) , 5.27 ( , 2H) , 5.86 (m, 4H) , 6.60 (m, 4H) , 7.30 (m, 2H) , 7.79 (m, 4H) . 31P NMR (D20, 121.47 MHz): 8 -10.16 (m, 2P),-21.76 (m, 2P) .
Ejemplo 9 P 1- (4-N- (4-metoxifenil) aminocarbonilcitidina 5'-) -P4- (uridina 5' -) tetrafosfato La sal ditributilamonio de P 1- (histidma 5'-)P4- (uridina 5'-) tetrafosfato (50 mg, 0.043 mmol; preparada a partir de la sal tetraamonio por tratamiento con Dowex 50 Wx4H en agua, seguida por mezclado de las . especies protonadas con un exceso de tributilamina en etanol, la destilación y liofilización) se disolvió en DMF anhidra (1 mL) y se adicionaron tributilamina (10 uL, 0.43 mmol) y p-metoxifenilisocianato (8.4 uL, 0.648 mmol) en una sola porción. La mezcla de reacción homogénea se calentó durante la noche a 35°C, con lo cual la TLC (gel de sílice, 50% isopropanol/50% hidróxido de amonio) y la HPLC (C18) indicaron una conversión substancial de un sólo producto. El solvente se eliminó en evaporador rotatorio y el residuo se disolvió en agua (1 L) . El producto se aisló por inyecciones repetidas en una columna HPLC semipreparativa (Alltech Nucleotide/Nucleoside C18, 7 um, 10 x 250 mm, gradientes desde acetato de amonio 0.1 M a metanol durante 30 minutos, 5 mM/min, supervisión a 260 nm) . La destilación y liofilización proporcionaron la p-metoxifenilurea (24 mg, 55% rendimiento) como la sal tetraamonio.
El producto asi obtenido se puedo derivar en los grupos hidroxilo 2 ' y/o 3' conforme con los métodos anteriores (como los Ejemplos 2-6). Yí NMR (D20, 300 MHz): d 3.59 (s, 3H) , 4.01-4.20 (m, 10H) , 5.68 ( , 3H), 6.19 (d, 1H) , 6.71 (d, 2H) , 7.18 (d, 2H) , 7.67 (d, 1H) , 8.06 (d, ÍH) . 31P NMR (D20, 121.47 MHz): d -10.13 (m, 2P) , -21.76 (m, 2P) .
Ejemplo 10 P - ( (4-bromometil) etenocitidina 5' -) -P4- (uridina 5' -) tetrafosfato La sal tetrasodio de P -(cistidina 5'-)-P -(uridina 5' -) tetrafosfato (100 mg, 0.57 mmol) se disolvió en agua (5 mL) y se adicionó una solución de 2,4'-dibromoacetofenona (792 mg, 2.85 mmol) en DMF(15 L) . La mezcla se calentó durante la noche a 40°C y se adicionó otra porción de la dibromocetona (400 mg, 1.44 mmol) en DMF (5 mL) . La reacción se calentó otras 5 horas y los solventes se eliminaron por evaporación. El residuo se separó entre agua (10 mL) y acetato de etilo (25 mL) y se separaron las capas. La capa acuosa se lavó con más acetato de etilo (2 x 15 mL) y la acuosa se evaporó a sequedad. El residuo se disolvió en agua (5 ' mL) y el producto se aisló por inyecciones repetidas en una columna HPLC semipreparativa (véase el Ejemplo 6 para las condiciones) . El rendimiento del compuesto eteno puro fue 80 mg (13.5%) . ?R NMR (D20, 300 MHz) : d 4.06 (m, 8H) , 4.36 (m, 2H) , 5.64 (dd, 2H) , 6.07 (d, 1H) , 6.74 (d, ÍH) , 7.45 (d, 2H) , 7.54 (d, 2H) , 7.59 (d, ÍH) , 7.63 (d, 1H) , 7.93 (s, ÍH) . 31P NMR (D20, 121.47 MHz) : d -10.09 m, 2P),-21.59 (m, 2P) Ejemplo 11 P - ( (4-bromofenil) eteno 2' -deoxicitidina 5' -) -P - (uridina 5' -) tetrafosfato Se preparó el producto del Ejemplo 11 a partir de lOOg de la sal tetrasodio de P - (2' -deoxicitidina 5'-)-P -(uridina 5'-) tetrafosfato y 2, 4' -dibromoacetofenona, conforme con el método general del Ejemplo 10. Rendimiento = 35 mg (30%) . 1H NMR (D20, 300 MHz): d 2.31 (m, 2H) , 4.03 (m, 8H) , 5.60 (dd, 2H) , 6.41 (t, ÍH) , 6.73 (d, ÍH) , 7.53 (m, 5H) , 7.65 (d, ÍH) , 7.93 (s, 1H) . 31P NMR (D20, 121.47 MHz):"d -10.11 (m, 2P) , -21.58 (m, 2P) .
Ejemplo 12 P 1 ,P4-di ( (4-bromofenil)etenocitidina 5' -) -tetrafosfato El producto del Ejemplo 12 se preparó a partir de 50 mg de la sal tetrasodio de P -P -di (citidina 5'-)-tetrafosfato y 2, 4' -dibromoacetofenona, conforme con el método general del Ejemplo 10. Rendimiento = 20 mg (29%). Yi NMR (D20, 300 MHz): d 4.24 (m, 10H) , 5.98 (d, -2H) , 6.39 (d, 2H) , 7.14 (m, 8H) , 7.45 (m,4H).). 31P NMR (D20, 121.47 MHz): d -10.13 (m, 2P) , -21.68 (m, 2P) .
Ejemplo 13 P - ( (4-fenilfenil) etenocitidina 5' ) -P - (citidina 5' -) -tetrafosfato El producto del Ejemplo 13 se preparó a partir de 50 mg de la sal tetrasodio de P ,P -di- (citidina 5'-) tetrafosfato y 2-dibromo-4' -fenilacetofenona, conforme con el método general del Ejemplo 10. Rendimiento = 15 mg (13%) . XH NMR (D20, 300 MHz): d 4.10 (m, 10H) , 5.48 (d, 1H) , 5.87 (m, 2H) , 6.68 (d, ÍH) , 7.20 (m, 3H) , 7.36 (m, 6H) , 7.68 (m, 3H) . 31P NMR (D20, 121.47 MHz): d -10.08 '(m, 2P) , -21.78 ( , 2P) .
Los productos de los Ejemplos 11-13 además pueden ser derivados de acuerdo con los métodos de los Ejemplos 1-8 para obtener moléculas bifuncionales que entran dentro del alcance de la invención.
Ejemplo 14 2' ,3' -fenilacetaldehído acetal adenosina 5' -monofosfato Adenosna 5' -monofosfato, ácido libre (10.0 g, 28.8 mmol) se disolvió en ácido trifluoroacético (50 mL) y se adicionó fenilacetaldehído dimetilacetal (18.50 mL, 121 mmol) . La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas, después de lo cual se evaporó el ácido trifluoroacético y el residuo se repartió entre bicarbonato de sodio 1 M (80 mL) y acetato de etilo (40 mL) . Se separaron las capas y se separó el producto de la capa acuosa a través de HPLC preparativa de Cis. Rendimiento = 7.50 g (59%). La sal amonio así obtenida se convirtió en la sal mono-tributilamonio por tratamiento con un leve exceso de tributilamina en N,N-dimetilformamida acuosa, seguido por la evaporación y secado. 2H NMR (D20, 300 MHz): d 3.06 (d, 2H) , 3.86 (m, 2H) , 4.39 (m, ÍH), 4.91 (m, 1H) , 5.18 (m, ÍH) , 5.36 (t, "ÍH) , 5.63 (d, ÍH) , 7.23 ( , 5H) , 8.09 (s, 1H) , 8.20 (s, 1H) . 31P NMR (D20, 121.47 MHz): d 2.17 (s) .
Ejemplo 15 2 ' , 3' -cinamilacetal adenosina 5' -monofosfato Adenosina 5' -monofosfato, ácido libre (1.0 g, 2.88 mmol) se disolvió en ácido fórmico en 98% (5 mL) y cinamaldehído (1.14 g, 1.65 mmol) adicionado. La reacción se agito a temperatura ambiente durante 3 horas, después de lo cual se evaporó el ácido fórmico y se repartió el residuo entre bicarbonato de sodio 1 M (25 mL) y acetato de etilo (20 mL) . Se separaron las capas y se separó el producto de la capa acuosa por HPLC preparativa. Rendimiento = 0.202 g (15%). aH NMR (D20, 300 MHz): d 3.97 (m, 2H) , 4.50 (m, 1H) , 5.04 (m, 1H) , 5.29 (m, ÍH) , 5.65 (d, 0.4H), 5.86 (d, 0.6H), 6.24 (m, 2H) , 6.87 (dd, 1H) , 7.27 (m, 3H) , 7.43 (m, 2H) , 8.12 (d, ÍH) , 8.28 (d, 1H) . 31P NMR (D20, 121.47 MHz): d 1.42 (d) .
Ejemplo 16 2 ' ,3' -fenilacetaldehído asetal-6-N-fenilurea adenosina 5' -monofosfato (compuesto 22) 2 Y 3' -fenilacetaldehído acetal adenosina 5'-monofosfato, sal tributilamonio (preparada de acuerdo con el Ejemplo 14, 1.0 g, 2.15 mmol) se disolvió en N,N-dimetilformamida (10 mL) y fenilisocianato (1.17 g, 10.72 mmol) adicionado. La reacción se calentó a 35°C durante 4 horas, después de lo cual se eliminó el disolvente y el residuo se repartió entre bicarbonato de sodio 1 M (30 mL) y acetato de etilo (25 mL) . Se separaron las capas y se aisló el producto de la capa acuosa por HPLC preparativa. Rendimiento = 0.85 g (68%). aH NMR (D20, 300 MHz): d 2.97 (d, 2H) , 3.81 (m, 2H) , 4.31 (m, 1H) , 4.78 (m, ÍH) , 4.98 (m, ÍH) , 5.23 (t, 1H) , 5.63 (d, ÍH) , 6.74 (m, ÍH) , 6.96 (m, 4H) , 7.19 (m, 5), 8.12 (s, 1H) , 8.30 (s, ÍH) . 31P NMR (D20, 121.47 MHz): d 1.19 (s) .
Ejemplo 17 2Y 3' -cinamilacetal-6N-etilurea adenosina 5' -monofosfato (compuesto 27) Se preparó el compuesto 27 de acuerdo con el Ejemplo 16, comenzando con 2 3' -cinamilacetal adenosina 5'-monofosfato (Ejemplo 15) y sustituyendo isocianato de etilo por fenilisocianato . Rendimiento = 65%. XH NMR (D20, 300 MHz): d 1.07 (t, 3H) , 3.21 (q, 2H) , 3.93 (m, 2H) , 4.45 (m, 1H) , 4.99 (m, ÍH) , 5.28 (m, 1H) , 5.54 (d, 0.3H), 5.70 (d, 0.7H), 5.95 (m, ÍH) , 6.14 (m, ÍH) , 6.61 (dd, ÍH) , 7.14 (m, 5H) , 8.29 (m, 2H) . 31P NMR (D20, 121.47 MHz) : d 1.93 (d) .
Ejemplo 18 Trans-2' , 3' -cinamilacetal-6N-etilurea adenosina 5'-monofosfato (compuesto 41) El compuesto 41 (Trans-2 3' -cinamilacetal-6N-etilurea adenosina 5' -monofosfato) se obtuvo por separación de dos diasterómeros contenidos en el compuesto 27 (Ejemplo 17) por HPLC. El compuesto 41 normalmente se convierte en la forma de sal bis-sodio para mejorar su separación de la solución y aumentar la estabilidad del polvo seco que se obtiene.
Método HPLC: columna: Phenomenex Synergi Polar RP, 4 µM, 80 ángstrom, 150 x 3.0 mm; fase móvil: búfer de acetato de amonio 0.1 M, pH =5: acetonitrilo (70:30); detección: UV, 254 nm; temperatura de la columna: TA; velocidad de flujo: 1.5 mL/min; tiempo de retención del compuesto 41= 6.4 min.
Ejemplo 19 Datos de la RMN de trans-2Y 3' -cinamilacetal-6N-etilurea adenosina 5' -monofosfato (compuesto 41) Nombre químico: sal bisodio del mono -{6-[6- (3-etil-ureido) -purin-9-il]-2-estiril-tetrahidro-furo[3, 4-d][l, 3]dioxol-4-ilmetil} éster del ácido fosfórico. Fórmula molecular: C22H23NgNa2?gP Peso molecular: 576.41 XH NMR (D20, 300 MHz) : d 1.11 (t, 3H, J = 7.3 Hz) , 3.24 (q, 2H, J = 3.27 Hz) , 3.90 (d, 2H) , 4.49 (m, 1H) , 4.99 (m, 1H) , 5.07 (dd, ÍH, J = 3.3 Hz) , 5.32 (dd, ÍH, J = 6.4 Hz), 5.79 (d, 1H, J = 6.6 Hz) , 6.02 (dd, 1H, J = 6.6 y 16.0 Hz), 6.18 (d, ÍH, J = 3 .7 Hz) , 6.62 (d, 1H,J = 16.0 Hz), 7.14-7.23 (m, 5H) , 8.33 (s, ÍH) , 8.47 (s, ÍH) . 13C NMR (D20, 121 MHz): d 14.2, 63.9, 80.24, 83.54, 83.9, 87.83, 119.23, 142.11, 149.27, 149.34; 150.87 31P NMR (D20, 75 MHz): d 5.168 (s) . Rotación óptica = -0.201° a una concentración de 5 mg/ml en agua (rotación específica = -50.4°) .
Ejemplo 20 Compuestos 31-40 Se preparó 2 3' -fenilacetaldenosina 5' -monofosfato a partir de la reacción entre adenosina 5' -monofosfato, ácido libre, y benzaldehído en ácido trifluoroacético de acuerdo con el Ejemplo 15; el rendimiento fue 82%.
Además se preparó 2 3' -fenilacetaldenosina 5'-monofosfato en los compuestos 36-40. El compuesto 36 se preparó por acilación de la posición 6 de adenina con el isocianato de etilo de acuerdo con el método general del Ejemplo 16. Los compuestos 37-40 del mismo modo se obtuvieron de la reacción entre 2', 3'-fenilacetaladenosina 5' -monofosfato y un isocianato apropiado (propilo, butilo, hexilo y ciclopentilo, respectivamente) .
Del mismo modo, se prepararon los compuestos 31, 32, 33 y 35 haciendo reaccionar primero adenosina 5'-monofosfato, ácido libre y fenilpropargil aldehido en ácido fórmico (rendimiento 35%) , seguido por la acilación de la posición 6 de adenina con el isocianato apropiado (fenilo, hexilo, butilo o etilo, respectivamente) . De la misma forma se preparó el compuesto 34 a partir de 2',3'-fenilpropargil acetal adenosina 5' -monofosfato e isocianato de propilo.
Ejemplo 21 Ensayos de agregación plaquetaria Se recolectó sangre de voluntarios sanos en jeringas que contenían una sexta parte del volumen final de sangre de anticoagulante ACD (ácido cítrico 65 mM, citrato de sodio 85 mM, dextrosa 110 mM) para la preparación de plaquetas lavadas ( P) o en una jeringa que contenía una concentración de 10 unidades/mL de heparina ó PPACK 300 µm para los ensayos de sangre entera (WB) . La sangre recolectada para los ensayos de sangre entera se mantuvo a temperatura ambiente e inmediatamente se analizó como se describe más adelante. La sangre recolectada para WP se centrifugó a 180 g durante 15 minutos y se separó el sobrenadante (plasma rico en plaquetas) . El plasma rico en plaquetas se centrifugó y se sedimentaron las plaquetas y se resuspendieron en búfer que contenía: NaCl 137 mM, KCl 2.7 mM, CaCl2 2 mM, MgCl2 1 mM, NaH2P04 3 mM, glucosa 5 mM, HEPES 10 mM, pH 7.4, 0.2% de albúmina sérica de bovino. Estas centrifugaciones y lavados se repitieron dos veces seguidos por la resuspensión en el medio antes descrito que contenía 0.25 U de apirase/mL. Se midió la agregación plaquetaria utilizando el modo óptico de un agregómetro Chrono-Log (Havertown, " PA) . 500 µL de la suspensión de plaquetas que contenían 1 mg/mL de fibrinógeno se calentaron a 37 °C y se agitaron a 1000 i rpm. Las concentraciones indicadas de ADP fueron adicionadas a la muestra y se monitorizó la agregación durante 8 minutos. El efecto de los compuestos descritos en esta invención fue estudiado siguiendo el mismo protocolo con la excepción de que el inhibidor se incubó durante 2-5 minutos antes de la adición de una concentración máxima eficaz de ADP. Para la agregación de la sangre entera, la sangre se diluyó 1:1- con salina y luego se hizo la agregación en la misma forma a la antes descrita utilizando el modo del agregómetro de impedancia. La potencia de los agonistas y los inhibidores de la agregación plaquetaria se calculó a partir de la velocidad de agregación y del grado máximo de agregación obtenido de cada determinación ajustando los datos a una ecuación logística de 4 parámetros, utilizando el paquete de software GraphPad (GraphPad Corp. San Diego CA) .
En esta aplicación, la capacidad de los antagonistas de P2Y 2 para inhibir la agregación plaquetaria se presenta como el porcentaje de inhibición de la agregación inducida por una concentración máxima eficaz de ADP. Cuando se probó un amplio intervalo de concentraciones de los antagonistas de P2Yi2 (por lo regular desde 1 mM a 100 µm) , también se obtuvo un valor IC50. Los valores IC50 representan la concentración de antagonista necesaria para inhibir en 50% la agregación producida por una concentración determinada del ADP.
Ejemplo 22 Efecto de diferentes compuestos sobre la agregación inducida por ADP Se analizaron diferentes compuestos para su inhibición de la agregación inducida por ADP y su CI5o de acuerdo con los protocolos del Ejemplo 21; los resultados se muestran en la Figura 1. Las gráficas de barras de la figura muestran el ejemplo de la concentración 100 µM del compuesto sobre la agregación de las plaquetas inducida por ADP, y los datos se expresan como por ciento de inhibición de la respuesta de ADP.
La Figura 1 muestra la estructura y el nombre abreviado de cada compuesto y su actividad. Cuando se entiende que los hidrógenos están presentes, éstos han sido omitidos para propósitos de claridad. Por ejemplo, para la primera estructura de la figura, es evidente que hay hidrógenos en la posición 3 del anillo pirimidina, en la posición 3' de la ribosa en el oxígeno y en el nitrógeno del carbamato en la posición 2' de la ribosa. Además, como se describe dentro del alcance de la presente invención, es evidente que los oxígenos que no están doblemente unidos a los átomos de fósforo están presentes en forma ionizada como sales con un contraión o están unidos a un átomo de hidrógeno. Por simplicidad, algunas de las estructuras de la figura están representadas en forma de sal, pero no se debe interpretar que se excluye la posibilidad de que los hidrógenos puedan estar presentes en su lugar.
Algunos compuestos precursores, Up4U, Ip4U, Up3U, y Cp4U, sin modificaciones en los grupos hidroxilo de la furanosa, han sido incluidos al final de la figura para mostrar la utilidad de la presente invención. Sin embargo, estos compuestos precursores no modificados no inhiben la agregación inducida por ADP y no están dentro del alcance de la presente invención.
Ejemplo 23 Ensayo de movilización de calcio Para los ensayos de movilización del calcio, las células que expresan P2Y?, P2Y2 y P2Yg fueron sembradas en placas de cultivo de células de pared negra y fondo claro (Corning, Inc., Corning, NY) y se hicieron los ensayos 48 horas después del plaqueo. Durante el día de ensayo, el medio de crecimiento fue aspirado y se sustituyó con una solución de Fluo-3-AM (concentración final 2.5 µM) en un búfer de ensayo consistente en (mM) : KCl (10.0), NaCl (118), CaCl2 ((2.5), MgCl2 (1.0), HEPES (20), glucosa (10), pH 7.4. Después de un tiempo de incubación de 60 minutos con Fluo-3-AM a 25°C, las células fueron lavadas y libres de colorante. Las células se trataron con diferentes concentraciones del compuesto de prueba seguido por 1-2 minutos después con la adición de una concentración máxima eficaz del agonista del receptor cognado. Las concentraciones intracelulares de calcio en respuesta al tratamiento de las células con el compuesto de prueba y el agonista del receptor se supervisaron continuamente en cada pozo al mismo tiempo midiendo los cambios de la intensidad de la fluorescencia utilizando un lector de placas por imágenes de fluorescencia (FLIPR, Molecular Devices Corp., Sunnyvale, CA) . Los resultados de este ensayo se presentan en la tabla I.
Ejemplo 24 Efecto de diferentes compuestos sobre la agregación inducida por ADP y sobre la activación de los receptores P2Y Se analizaron algunos compuestos para sus efectos sobre la inhibición de la agregación plaquetaria inducida por ADP utilizando la preparación de plaquetas lavadas como se describe en el Ejemplo 21. Además, se evaluaron los efectos de estos compuestos sobre la activación de los receptores P2Y2, P2Y2 P2Y4, y P2Y6 de acuerdo con la movilización de calcio descrito en el Ejemplo '23. Los resultados se muestran en la Tabla 1. Todos los compuestos analizados no mostraron respuesta (NR) en los receptores P2Y , P2Y2 P2Y4 y P2Y6. Los datos que se presentan son el promedio de por lo menos dos experimentos .
Ejemplo 25 Efectos de los compuestos sobre la agregación plaquetaria in vivo Para evaluar la capacidad de estos compuestos para inhibir la agregación plaquetaria in vivo, se realizó un protocolo experimental similar al método de R. G.
Humphries y col., (Br. J. Pharmacol. 115: 1110-1116, 1995) .
Preparación quirúrgica e instrumentación : Se anestesian ratas Sprague-Dawley macho. La temperatura corporal se mantiene a 37 ± 0.5°C con una lámpara de calentamiento. Los animales respiran espontáneamente y se realiza la traqueotomía para garantizar una vía permeable. Una cánula que contenga salina heparinizada se introduce en la arteria femoral izquierda y se conecta a un transductor para registrar la presión sanguínea y la frecuencia cardiaca. Una cánula que no contenga salina heparinizada se introduce en la arteria carótida común izquierda y la vena yugular izquierda para retirar muestras de sangre arterial y para la administración IV de compuestos, respectivamente.
Protocolo experimental : El compuesto o vehículo se administra a cada animal como infusión. Las muestras de sangre se toman inmediatamente antes de la primera infusión, al término de cada infusión, y 20 minutos después de interrumpir la infusión final para la medición de la agregación plaquetaria ex vivo . Independientemente después del muestreo, se mide la agregación plaquetaria inducida por ADP por duplicado en 0.5 mL de muestras de sangre diluidas 1:1 con salina y se incuban a 37 °C durante 4 minutos. Durante el minuto final de este periodo, las celdas se transfieren a un agregómetro y la muestra se agita a 900 rpm. Se adiciona ADP (3 µM) en un volumen de 20 µl y se registra la respuesta de la agregación.
Ejemplo 26 Inhibición de la formación de trombos en ratas anestesiadas Para evaluar el efecto de estos compuestos en la formación de trombos in vivo, se realizará el siguiente protocolo experimental.
Ratas (CD-1; macho; de aproximadamente 350 gramos; Charles River, Raleigh, NC) , se anestesian con pentobarbital sódico (70 mg/kg i.p.). Los abdómenes se afeitan y se inserta un catéter intravenoso calibre 22 en una vena lateral de la cola. Se hace una incisión en la línea media y los intestinos se envuelven en una gasa remojada en salina y se colocan de modo que la aorta abdominal sea accesible. La vena cava inferior y la aorta abdominal se aislan cuidadosamente y se diseca una sección (aproximadamente 1 cm) de la aorta abdominal (distante a las arterias venales próximas a la bifurcación) . Todas las ramificaciones de la aorta en esta sección se ligan con una sutura de seda 4-0. En la arteria se coloca una sonda de flujo de 2.5 mm de diámetro conectada a un medidor de flujo Transonic y se registra el flujo en la línea inicial (pre-estenosis) . Se colocan dos sujetadores alrededor de la arteria que disminuyen el diámetro del paso en aproximadamente 80%. Se toma una segunda medición de flujo en la linea base (post-estenosis) y se prueba la respuesta hiperémica. Luego los animales se tratan con el compuesto o salina i.v. por el catéter de la vena de la cola. Se induce trombosis cinco minutos después del tratamiento por compresiones externas repetidas del paso con fórceps hemostáticos. Dos minutos posteriores a la lesión, se repiten las compresiones de los vasos y se comienza un periodo de supervisión del flujo de 10 minutos. Los animales son supervisados continuamente durante un mínimo de los primeros 30 minutos después de la lesión. Después de 20 minutos (posteriores a la lesión) se repite una medición del flujo y se sacrifica a los animales. Se cosecha la sección de la aorta que incluye la sección lesionada y se coloca en formalina al 10% para posible evaluación histológica.
Ejemplo 27 Inhibición de la formación de trombos en perros anestesiados Para evaluar el efecto de estos compuestos sobre la formación dinámica de trombos in vivo, se realizará el siguiente protocolo experimental similar al método de J. L. Romson y col. { Thromb . Res . 17: 841-853, 1980).
Preparación quirúrgica e instrumentación : En resumen, perros criados para el propósito se anestesian, se intuban y ventilan con aire ambiente. El corazón se expone mediante una toracotomía izquierda en el quinto espacio intercostal y se suspende en una cuna pericárdica. Por disección roma se aisla un segmento de 2-3 cm de la arteria coronaria circunfleja izquierda (LCCA) . La arteria se instrumenta desde el extremo próximo al distante con una sonda de flujo, un electrodo para la estimulación y una pinza Goldblatt. La sonda de flujo supervisa las velocidades del flujo sanguíneo LCCA medio y fásico. El electrodo de estimulación y su colocación en la LCCA y el método para inducir un trombo coronario oclusivo han sido descritos anteriormente (J. K. Mickelson y col., Circulation 81: 617-627, 1990; R. J. Shebuski y col., Circulation 82: 169-177, 1990; J. F. Tschopp y col., Coron. Artery Dis. 4: 809-817, 1993).
Protocolo experimental : Los perros se eligen al azar para uno de cuatro protocolos de tratamiento (n = 6 por grupo de tratamiento) en los cuales el grupo control recibe salina i.v. y los tres grupos tratados con medicamento se administran con un compuesto i.v. Después de la estabilización a partir de las intervenciones quirúrgicas, los perros reciben salina o compuesto. Después de aproximadamente 30 minutos se aplica una corriente anodal a la LCCA durante 180 minutos. Se registran el número y secuencia de las variaciones de flujo cíclicas (CFV) que preceden la formación de un trombo oclusivo. Estos fenómenos cíclicos son causados por los trombos plaquetarios que se forman en la luz estrecha como resultado de la agregación plaquetaria. (J. D. Folts y col., Circulation 54: 365-370, 1976; Bush y col., Circulation 69: 1161-1170, 1984). El flujo cero en la LCCA durante un mínimo de 30 minutos indica una falta de eficacia antitrombótica (L. G. Frederick y col., Circula tion 93: 129-134, 1996).
Ejemplo 28 Inhibición, dependiente de la dosis, de la agregación de las plaquetas en ratones Para evaluar los efectos de la inhibición de la agregación de las plaquetas in vivo por los compuestos descritos en esta invención, se hicieron protocolos experimentales semejantes a los descritos por León y col., { Circulation 103: 718-723, 2001).
Ratones anestesiados son inyectados por vía intravenosa con salina o con diferentes dosis de la sal bis sodio de trans-2 3' -cinamil acetal-6N-etilurea adenosina 5' -monofosfato (compuesto 41, también conocido como INS50589) , normalmente entre 1 y 100 µg/kg. Cinco minutos después de la administración del compuesto se obtuvieron 700 µL de sangre de cada animal. La sangre de 2 animales se combinó y de inmediato se procesó para obtener plasma rico en plaquetas para la evaluación de la agregación plaquetaria estimulada por ADP1 y 5 µM. Se midió la agregación plaquetaria utilizando el método de agregometria óptica como se describe en el Ejemplo 21. Los antagonistas de los receptores P2Y2 descritos en la presente y analizados en este modo ex vivo produjeron una inhibición dependiente de la dosis de la agregación de las plaquetas.
Ejemplo 29 Inhibición reversible de la agregación de las plaquetas por los agonistas de los receptores P2Y12 en ratones Una característica importante de los compuestos descritos en esta invención es la naturaleza reversible de la inhibición de la agregación de las plaquetas. El sistema modelo descrito en el Ejemplo 28 también se utilizó para estudiar la cinética de la inhibición in vivo de la agregación plaquetaria con los compuestos elegidos. En resumen, una concentración eficaz máxima del compuesto a prueba se administró por vía intravenosa, y se obtuvieron muestras de sangre antes y en diferentes tiempos (por lo regular a los 0, 1, 5, 15 y 30 minutos) después de la administración de la sal bis sodio de trans2 3' -cinalmil acetal 6N-etilurea adenosina 5' -monofosfato (compuesto 41, también conocido como INS50589) . Las muestras de sangre fueron procesadas de inmediato y se indujo la agregación por ADP 1 µiM y 5 µM se evaluó como se describe en el Ejemplo 28. La inhibición completa de la agregación de las plaquetas inducida por ADP se observó 5 minutos después de la administración del compuesto a prueba y a los 30 minutos la respuesta de agregación a ADP regresó los valores semejantes a los observados en los animales testigo, sugiriendo que el efecto del compuesto de prueba en ratones es reversible (Figura 2) .
Ejemplo 30 Prevención de la mortalidad inducida por tromboembolia en ratones mediante el tratamiento con los antagonistas del receptor P2Yi2 10 ratones anestesiados fueron tratados con vehículo (testigo) administración intravenosa en bolo del compuesto de prueba (normalmente entre 10 y 25 mg/kg) . Cinco minutos después del tratamiento los animales fueron inyectados con una mezcla de 0.3 mg/kg de colágeno y 60 µg/kg de epinefrina. El tiempo de supervivencia después de la administración de colágeno y epinefrina en los animales previamente tratados con salida o 25 µg/kg del compuesto de prueba (INS50589) se demostró utilizando la gráfica de Kaplan-Meier en la Figura 3. 90% de los animales previamente tratados con vehículo murieron en el transcurso de 6 minutos después de la inyección IV de colágeno y epinefrina. Por el contrario, la mortalidad resultante de la tromboembolia intravascular sistémica se observo en solo 20% de los animales previamente tratados con el compuesto de prueba (Figura 3) . Estos resultados demuestran un efecto antitrombótico significativo de la administración in vivo de los compuestos descritos en esta invención.
Ejemplo 31 Inhibición de la agregación de las plaquetas por administración de los antagonistas de P2Y12 en perros Dos semanas antes del estudio, a los perros beagle se les implanto catéteres yugulares y portales de acceso vascular. A los grupos de 4 perros (dos de cada sexo) se les ajustaron chalecos y se conectaron a bombas de infusión ambulatoria para la administración del fármaco.
El día del estudio los perros fueron tratados con una infusión continua de diferentes concentraciones del compuesto de prueba (normalmente entre 0.1 y 1.5 mg/kg/h) durante 90 minutos a una velocidad de 3 ml/kg/h. aproximadamente 30 minutos y 15 minutos antes de comenzar la infusión (muestras previas a la dosis) , en diferentes tiempos durante cada periodo de infusión (por lo regular 10, 30, 60, y 90 minutos) y después de terminar la infusión (normalmente 5, 10, 20, 30, 40, 60, 120 y 240 minutos y 18, 20, 22 y 24 horas) se retiró sangre de un catéter de la vena cefálica para la evaluación de los ensayos de la agregación plaquetaria de sangre entera ex vivo y/o para la determinación bioanalítica de las concentraciones plasmáticas del compuesto de prueba. Se estimo la agregación plaquetaria utilizando el modo de agregómetro CronoLog de impedancia como se describe en el Ejemplo 21 y se analizaron las concentraciones plasmáticas del compuesto de prueba en un sistema API 4000 LC/MS/MS acoplado con un aparato de cromatografía líquida Agilent serie 1100.
Como se muestra en la Figura 4, la administración intravenosa continua del compuesto 41 (INS50589) produjo una inhibición, dependiente de la dosis, de la agregación de las plaquetas. El efecto inhibidor máximo se observó con la administración de 0.3 mg/kg/h.
La cinética y reversibilidad de la inhibición de las plaquetas producida por el compuesto de prueba también se estudió. Como se muestra en la Figura 5A, el efecto farmacodinámico del compuesto de prueba llegó al estado estable a los 30 minutos y la inhibición de la agregación de las plaquetas se invirtió rápidamente cuando se termina la infusión. Estos resultados demuestran la capacidad del compuesto de prueba para inhibir con rapidez la agregación plaquetaria en el transcurso de minutos de haber iniciado la infusión IV continua, y permitir el reestablecimiento prácticamente completo de la agregación de las plaquetas en el transcurso de 1 hora después de terminar la infusión.
El efecto farmacológico de la administración del compuesto de prueba se correlaciona estrechamente con las concentraciones plasmáticas del compuesto. Las concentraciones totales en plasma del compuesto de prueba llegaron al estado estable entre 30 y 60 minutos y disminuyó con rapidez después de interrumpir la administración del compuesto. El análisis con el modelo de un compartimiento de las concentraciones plasmáticas del compuesto de prueba después de terminar la infusión indicó que el compuesto fue aclarado del plasma con una vida media estimada de aproximadamente 7 minutos, como se muestra en la Figura 5B.
En conclusión, el perfil farmacocinética y farmacodinámico del compuesto 41 (INS50589) es congruente con un inicio rápido y desplazamiento de la acción que da como resultado un control rápido y fácilmente reversible de la función de las plaquetas .
Aunque la invención se ha descrito con referencia a las modalidades actualmente preferidas, debe entenderse que es posible hacer algunas modificaciones sin apartarse del alcance de la invención.

Claims (29)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de fórmula Ib-2, una sal, solvato o hidrato aceptado para uso farmacéutico de este: Fórmula lb-2 en donde : R?8 es fenilo, bencilo o estirilo) ; R19 es alquilo de C a C6, cicloalquilo de C3 a C6, alquilcicloalquilo con 1 a 2 átomos de carbono en la porción alquilo y 3 a 6 carbonos en la porción cicloalquilo; fenilo; sustituidos o no sustituidos. en donde M es H o un contraión inorgánico u orgánico aceptado para uso farmacéutico.
2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque Rig es etilo, propilo, butilo, ciclopropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo, ciclopentilo o fenilo.
3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, el cual es: 2 3' -fenilacetaldehído acetal-6-N-fenilurea AMP, 2 3' -fenilacetaldehído acetal-6-N-n-hexilurea AMP, 2 3' -fenilacetaldehído acetal-6-N-etilurea AMP, 2 3' -fenilacetaldehído acetal-6-N-ciclopentilurea AMP, 2 3' -cinamil acetal-6-N-hexilurea AMP, 2 3'-cinamilacetal-6-N-etilurea AMP',* 2',3'-cinamil acetal-6-N-fenilurea AMP, 2 3 ' -cinamil acetal-6-N-n-propilurea AMP, 2 3 ' -cinamil acetal-6-N-n-butilurea AMP, 2 3 ' -fenilpropargil acetal-6-N-fenilurea AMP, 2 3 ' -fenilpropargil acetal-6-N-n-hexilurea AMP, 2 3 ' -fenilpropargil acetal-6-N-n-butilurea AMP, 2 3 ' -fenilpropargil acetal-6-N-n-propilurea AMP, 2 3 ' -fenilpropargil acetal-6-N-etilurea AMP, 2 3 ' -benzaldehído acetal-6-N-étilurea AMP, 2 3 '-benzaldehído acetal-6-N-n-propilufea AMP, 2 3' -benzaldehído acetal-6-N-n-butilurea AMP, 2 3'-benzaldehido acetal-6-N-n-hexilurea AMP, 2',3'-benzaldehído acetal-6-N-ciclopentilurea AMP, 2'3'- (trans) cinamil acetal-6-N-etilurea AMP, 2'3'- (trans) fenil acetal-6-N-etilurea AMP, y 2 ' 3 '- (cis) fenil etilurea AMP.
4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 3, el cual es 2 3' - (trans) cinamil acetal-6-N-etilurea AMP, 2 3' -(trans) fenil acetal-6-N-etilurea AMP; 2',3'- (cis) fenil acetal-6-N-etilurea AMP.
5. Un compuesto de fórmula la-2, o una sal, solvato o hidrato aceptado para uso farmacéutico de este: Fórmula la-2 en donde: R18 y Ri8' son, independientes entre sí, fenilo, bencilo o estirilo; y R-19 y R19' son, independientes entre sí, alquilo de C2 a Cg; alquilo de C3 a Cg; alquilo cicloalquilo con 1 a 2 átomos de carbono en la porción alquilo y de 3 a 6 carbonos en la porción cicloalquilo; fenilo; sustituidos o no sustituidos. en donde M es H o un contraión inorgánico u orgánico aceptado para uso farmacéutico.
6. El compuesto de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque R19 y R19' son independientes entre sí, etilo, propilo, butilo, ciclopropilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilo, ciclopentilo o fenilo.
7. El compuesto de conformidad con la reivindicación 5 ó 6, caracterizado porque R18 y R18' y R19 y R19' son pares idénticos .
8. El compuesto de conformidad con la reivindicación 5, el cual es: P1, P2, -di- (2 3' -cinamil acetal-6-N-etilurea adenosina 5' -) difosfato; P ,P , -di- (2 3' -fenilpropargil acetal-6-N-etilurea adenosina 5' -) difosfato; P 1,P2,-d?-(2 3' -fenilacetaldehído acetal-6-N-etilurea adenosina 5'-) difosfato; ó P1, P2, -di- (2', 3' -fenilacetal-6-N-etilurea adenosina 5' -) difosfato.
9. Una formulación farmacéutica que contiene un portador aceptado para uso farmacéutico y el compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, o una sal, solvato o hidrato aceptado para uso farmacéutico de este.
10. La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque el compuesto es: 2 3'- (trans) cinamil acetal-6-N-etilurea AMP, 2',3'- (trans) fenil acetal-6-N-etilurea AMP; 2 3' - (cis) fenil acetal-6-N-etilurea AMP.
11. Un método de prevención o tratamiento de enfermedades o estados asociados con la agregación plaquetaria y/o activación de las plaquetas, que consiste en: administrar a un individuo el compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-8 caracterizado porque el compuesto es eficaz para unir los receptores P2Y2 en las plaquetas e inhibir la agregación plaquetaria inducida por ADP.
12. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque el compuesto inhibe de manera reversible la agregación plaquetaria inducida por ADP.
13. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque la composición farmacéutica se administra en combinación con otros fármacos antiplaquetas y/o anticoagulantes.
14. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque las enfermedades o estados asociados con la agregación plaquetaria y/o activación de las plaquetas son alteraciones y procedimientos caracterizados por trombosis, complicaciones trombóticas arteriales primarias de enfermedades ateroscleróticas, complicaciones trombóticas de intervenciones de enfermedad aterosclerótica, complicaciones trombóticas de cirugía o daño mecánico, activación plaquetaria inducida mecánicamente, oclusión por derivación, trombosis secundaria a daño vascular e inflamación, indicaciones con un componente de consumo difuso de trombótico/plaquetas, trombosis venosa, trombosis arterial coronaria, efectos patológicos de aterosclerosis y arterieesclerosis, agregación plaquetaria y formación de coágulos en sangre y productos de la sangre durante el almacenamiento, estados crónicos o agudos de hiperagregabilidad, reoclusión de una arteria o vena luego de terapia fibrinolítica, activación de plaquetas asociada con circulación extracorporal, complicaciones trombóticas asociadas con terapia trombolítica, complicaciones trombóticas asociadas con angioplastia coronaria y otras o complicaciones trombóticas asociadas con procedimientos de derivación de arteria coronaria.
15. El método de aconfor idad con la reivindicación 14, caracterizado porque las alteraciones o procedimientos asociados con trombosis son angina inestable, angioplastia coronaria o infarto de miocardio; las complicaciones trombóticas arteriales primarias de aterosclerosis son accidente cerebro vascular trombótico, enfermedad vascular periférica o infarto de miocardio sin trombólisis; las complicaciones trombóticas de intervenciones de enfermedad aterosclerótica son angioplastia, endarterectomía, colocación de stent, cirugía de injerto coronario y otros vasculares, complicaciones trombóticas de cirugía o daño mecánico se asocian con rescate de tejido luego de trauma quirúrgico o accidental, cirugía reconstructiva que incluye colgajos de la piel o cirugía reconstructiva; activación plaquetaria mecánicamente inducida es causada por derivación cardiopulmonar o almacenamiento de productos de la sangre; oclusión por derivación es diálisis renal y plasmaféresis; las trombosis secundarias al daño vascular e inflamación son vasculitis, arteritis, glomerulonefritis, o rechazo de órgano injertado; las indicaciones con un componente de consumo difuso trombótico/de plaquetas son coagulación intravascular diseminada, púrpura trombocitopénica trombótica, síndrome urémico hemolítico, trombositopenia inducida por heparina o preeclamsia/eclamsia; la trombosis venosa son trombosis de vena profunda, enfermedad veno-oclusiva, estados hematológicos o migraña; y la trombosis arterial coronaria está asociada con angina inestable, angioplastia coronaria o infarto agudo de miocardio.
16. El método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque los efectos patológicos de arterosclerosis y arterieesclerosis son arterieesclerosis, infarto agudo de miocardio, angina estable crónica, engina inestable, ataques isquémicos transitorios, accidentes cerebrovasculares, enfermedad vascular periférica, trombosis arterial, pre-eclampsia, embolia, reestenosis o cierre repentino luego de angiplastia, endarterectomia carótida, o anastomosis de injertos vasculares; los estados crónicos o agudos de hiperagregabilidad son causados por DIC, septicemia, choque quirúgico o infeccioso, trauma post operatorio, trauma post parto, cirugía de derivación cardiopulmonar, transfusión de sangre incompatible, desprendimiento precoz de la placenta, púrpura trombocitopénica trombótica, veneno de víbora o enfermedades inmunitarias.
17. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque las enfermedades o estados asociados con agregación plaquetaria y/o activación de las plaquetas se producen por el contacto de la sangre con un dispositivo artificial.
18. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque el dispositivo artificial es un instrumento para hemodiálisis, un pulmón artificial paracorporal y un dispositivo de oxigenación de membrana extracorporal, un corazón artificial implantable interno un instrumento para aféresis utilizado para separar o aislar un componente específico de la sangre y regresar los componentes sanguíneos resntantes a un donador.
19. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque la administración es administración sistémica del compuesto a un individuo.
20. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque la administración sistémica es administración oral.
21. Un método para inhibir in vitro la agregación de las plaquetas en la sangre o los productos de la sangre, que comprende el paso de administrar a la sangre o el producto de la sangre el compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, o una sal solvato o hidrato de este.
22. Una formulación farmacéutica que contiene un compuesto de fórmula I, o una sal, solvato o hidrato aceptado para uso farmacéutico de éste, en una cantidad de 0.0005-3% p/v, un agente amortiguador, un agente quelante y un modificador de tonicidad no iónico, en donde la formulación farmacéutica tiene una tonicidad de 250-350 mOsm/kG y pH de 4-9: Fórmula I en donde : %-i r ^2 y X3 son independientemente oxígeno, metileno, monoclorometileno, diclorometileno, monofluorometileno, difluorometileno o imido; Ti, T2, y V son independientemente oxígeno o azufre; m = 0, 1 ó 2; n = 0 ó 1; p = 0 , 1 ó 2 ; donde la suma de m + n + p es desde 1 hasta 5; (monofosfato o hexafosfato) M = H o un contraión orgánico o inorgánico aceptable para uso farmacéutico; Dx = O ó CH2; B' es un residuo purina o pirimidina de conformidad con las fórmulas generales IV y V que se unen en la posición 1 ' de la furanosa o carbociclo a través de la posición 9 ó 1 de la base, respectivamente; Y'= H, OH u ORi; Z'= H, OH u OR2; con la condición de que cuando A = M, al menos uno de Y' y Z' sean igual a OR? ó OR2, respectivamente; A = M, ó A es un residuo nucleósido que se define como: y que estén unidos a la cadena fosfato por la posición 5' de la furanosa o carbociclo; en donde : D2 = 0 ó CH2; Z = H, OH, u 0R3; Y = H, OH u 0R4; con la condición de que al menos uno de Y Z Y y Z sea igual a ORi, OR2, OR4 u OR3, respectivamente; B es un residuo purina o pirimidina conforme con las fórmulas generales IV y V que esté unido a la posición 1' de la furanosa carbociclo por la posición 9 ó 1 de la base, respectivamente; Rl/ R2A R3 y/o R4 son residuos que están unidos directamente a los hidroxilos 2' y/o 3' de la furanosa o carbociclo por un átomo de carbono conforme con la fórmula II o unidos directamente a los dos hidroxilos (2' y 3') de la furanosa o carbociclo por un átomo de carbono común conforme con la fórmula III, de modo que estén presentes de 1 a 4 residuos independientes de Ri, R2, R3 y R4 que entren en la definición de la fórmula II o que estén presentes de 1 a 2 residuos independientes constituidos de Ri + R2 y/o R3 + R4; Fórmula II en donde : 0 es el oxígeno 2 ' y/o 3' correspondiente de la furanosa o carbociclo; C es el átomo de carbono; R5/ R-6 y R7 son H, alquilo, cicloalquilo, aralquilo, arilo, aralquilo sustituido o arilo sustituido, de modo que la fracción definida conforme a la fórmula II sea un éter; o R5 y Rg son H, un alquilo, cicloalquilo, aralquilo, arilo, aralquilo sustituido o arilo sustituido, y R7 es alcoxi, cicloalcoxi, aralquiloxi, ariloxi, aralquiloxi sustituido o ariloxi sustituido de modo que la fracción definida conforme con la fórmula II sea un acetal o cetal acíclico; o R5 y Rg se toman juntos como oxígeno o azufre con doble enlace a C, y R7 es alquilo, cicloalquilo, aralquilo, arilo, aralquilo sustituido o arilo sustituido, de modo que la fracción definida conforme con la fórmula II sea un éter o tioéster; o R5 y R6 se toman juntos como oxígeno o azufre doblemente unido a C, y R es amino o amino mono- o disustituido, donde los sustituyentes son alquilo, cicloalquilo, aralquilo, arilo, aralquilo sustituido o arilo sustituido, de modo que la porción conforme con la fórmula II sea un carbamato o tiocarbamato; o R5 y Rg se toman juntos como oxígeno o azufre doblemente unido a C, y R7 es alcoxi, cicloalcoxi, aralquiloxi, ariloxi, aralquiloxi sustituido, o ariloxi sustituido, de modo que la porción conforme con la fórmula II sea un carbonato o tiocarbonato; o R7 no esta presente y R5 y R6 se toman juntos como oxígeno o azufre doblemente unidos a C y los oxígenos 2' y 3' de la furanosa están directamente unidos a C para formar un carbonato o tiocarbonato cíclico; Fórmula III en donde : los átomos O son los oxígenos 2' y 3' de la furanosa o carbociclo; y los oxígenos 2' y 3' de la furanosa o carbociclo están unidos por un átomo de carbono común (C) para formar un acetal cíclico; cetal cíclico u ortoéster cíclico; para los acétales y cetales cíclicos, Rg y R9 son independientemente hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, aralquilo, arilo, aralquilo sustituido, arilo sustituido, o pueden estar unidos entre si para formar un anillo homocíclico o heterocíclico compuesto de 3 a 8 átomos, preferentemente 3 a 6 átomos; para los ortoésteres cíclicos, Rg es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, aralquilo, arilo, aralquilo sustituido, o arilo sustituido, Rg es alquiloxi, cicloalquiloxi, aralquiloxi, ariloxi, aralquiloxi sustituido, o ariloxi sustituido.
23. La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 22, caracterizada porque el modificador de la tonicidad no isotónico es manitol o dextrosa.
24. La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 23, caracterizada porque el modificador de la tonicidad no isotónico esta presente en la cantidad de 3-5%.
25. La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 9, que contiene un compuesto de en una cantidad de 0.0005-3% p/v, un agente amortiguador, un agente quelante y un modificador de la tonicidad no iónico, en donde la formulación farmacéutica tiene una tonicidad de 250-350 mOsm/kG y pH de 4-9:
26. La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 25, caracterizada porque el modificador de la tonicidad no isotónico es manitol o dextrosa.
27. La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 25, caracterizada porque el modificador de la tonicidad no isotónico esta presente en una cantidad de 3-5%.
28. 2 3' - (trans) -cinamilacetal-6-N-etilurea AMP.
29. bis sodio de 2 3 ' - (trans) -cinamilacetal-6-N-etilurea AMP.
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