MXPA06011029A - Formulacion liquida de hormona del crecimiento. - Google Patents

Abstract

La invencion se relaciona con una formulacion liquida que comprende una hormona del crecimiento o una sustancia la cual estimula la liberacion o potencia en actividad de hGH endogena; un polietileno-polipropilenglicol; un amortiguador citrato/fosfato, una sal de metal alcalino y una sal de metal alcalinoterreo o una pseudosal de metal alcalinoterreo, y un procedimiento para la preparacion de la misma.

Description

polipeptldica única de 191 aminoácidos (Bewly et al, 1972) que tiene dos enlaces disulfuro, uno entre Cys-53 y Cys-165, que forma un bucle grande en la molécula, y el otro entre Cys-182 y Cys-189, que forma un bucle pequeño, cerca de la parte C terminal . La secuencia de ADN que confirma la secuencia de aminoácidos fue reportada por Martial et al (1979) . La hGH purificada es un polvo amorfo blanco en su forma liofilizada. Es fácilmente soluble (concentraciones >10 mg/1) en amortiguadores acuosos a pH en el intervalo de 6.5 a 8.5. En solución, hGH existe predominantemente como un monómero, con una fracción pequeña como dimeros y oligomeros de peso molecular superior. Bajo ciertas condiciones, se puede inducir a hGH para que forme cantidades más grandes de dimeros, trímeros u oligomeros superiores. Se conocen varios derivados de hGH, derivados que se encuentran en la naturaleza, variantes y productos metabólicos, productos de degradación principalmente de la biosíntesis de hGH y derivados manufacturados de hGH producidos por métodos genéticos. Un ejemplo de un derivado de hGH como se encuentra en la naturaleza es GH-V, una variante de hormona del crecimiento que se encuentra en placenta. Otros miembros de los locus del gen se describen en Chen et al (1989) . La metionil hGH fue la primera forma de hGH en ser producida a través de tecnología de ADN recombinante . Este compuesto en realidad es un derivado de hGH que tiene un residuo metionina adicional en su parte N terminal (Goeddel et al, 1979) . Se ha informado que se encuentra en la hipófisis una variante de hGH que se encuentra en la naturaleza, denominada 20-K-hGH así como en la corriente sanguínea (Lewis et al, 1978; Lewis et al, 1980) . Este compuesto, el cual carece de los 15 residuos aminoácidos desde Glu-32 hasta Gln-46, surge de un empalme alternativo del ácido ribonucleico mensajero (DeNoto et al, 1981) . Este compuesto comparte muchas, aunque no todas las propiedades biológicas de hGH. Se produce en la hipófisis y se secreta a la sangre 20-K-hGH. Constituye aproximadamente 5% de la cantidad de hormona del crecimiento de los adultos y aproximadamente 20% de la cantidad de hormona de crecimiento de los niños. Tiene la misma actividad de promoción del crecimiento que la hormona del · crecimiento de 22 kD, y se ha informado que tiene una cantidad igual o mayor de actividad lipolítíca que la forma de 22 kD. Se une a receptores de hormona del crecimiento con igual afinidad que la hormona del crecimiento de 22 kD y tiene un décimo de la bioactividad lactogénica (similar a prolactina) que la hormona de 22 kD. A diferencia de 22 kD, 20-K-hGH tiene una débil actividad anti-insulínica. Surgen numerosos derivados de hGH a partir de modificaciones proteolíticas de la molécula. La vía principal para el metabolismo de hGH involucra proteolísis. La región de hGH alrededor de los residuos 130-150 es extremadamente susceptible a proteolísis y se han descrito (Thorlacius- Ussing, 1987) varios derivados de hGH que presentan muescas o supresiones en esta región. Esta región se encuentra en el bucle grande de hGH y la separación de un enlace peptídico aguí resulta en la generación de dos cadenas que están conectadas a través de un enlace disulfuro en Cys-53 y Cys- 165. Muchas de estas formas de dos cadenas se ha informado que tienen actividad biológica aumentada (Singh et al, 1974). Muchos derivados de la hormona del crecimiento humano se han generado artificialmente mediante el uso de enzimas. Se han utilizado las enzimas tripsina y subtilisina, así como otras, para modificar hGH en diversos puntos en la molécula (Lewis et al, 1977; Graff et al, 1982) . Uno de tales derivados, denominado la proteína anabólica de dos cadenas (2-CAP, por • sus siglas en inglés) se forma mediante la proteolísis controlada de hGH utilizando tripsina (Becker et al, 1989) . Se ha encontrado que 2-CAP tiene propiedades biológicas muy distintas de aquellas de la molécula hGH intacta. En lo que respecta a la actividad promotora del crecimiento de hGH es retenida en gran medida y la mayor parte de los efectos en el metabolismo de carbohidratos se han suprimido. Los residuos asparagina y glutamina en las proteínas son susceptibles a reacciones de desamidación bajo condiciones apropiadas. Se ha demostrado que la hGH de la hipófisis experimenta ese tipo de reacción lo que resulta en conversión de Asn-152 a ácido aspártico y también, en menor grado, la conversión de Gln-137 a ácido glutámíco (Lewis et al, 1981) . Se ha demostrado que hGH desamidada tiene una susceptibilidad alterada a proteolísis con la enzima subtilisina, lo que sugiere que la desamidación puede tener importancia fisiológica en dirigir la separación proteolítica de hGH. Se sabe que hGH biosintética se degrada bajo ciertas condiciones de almacenamiento, lo que resulta en la desamidación en una asparagina diferente (Asn-149) . Este es el sitio primario de desamidación, pero también se ha observado la desamidación en Asn-152 (Becker et al, 1988) . No se ha informado de desamidación en Gln-137 en la hGH biosintética. Los residuos metionina en las proteínas son susceptibles a oxidación principalmente a sulfóxido. Tanto la hGH derivada de hipófisis como la biosintética experimentan sulfoxidaciones en Met-14 y Met-125 (Becker et al, 1988). También se ha informado de la oxidación en Met-170 en hGH de hipófisis pero no en la biosintética. Tanto la desamida hGH como Met-14 sulfóxido hGH se ha encontrado que presentan actividad biológica completa (Becker et al, 1988) . Se han producido formas truncadas de hGH, ya sea mediante acciones de las enzimas o por métodos genéticos. 2- CAP, generada por las acciones controladas de tripsina tienen los primeros ocho residuos en la parte N terminal de hGH separados. Se han producido otras versiones truncadas de hGH al modificar el gen antes de su expresión en un hospedador adecuado. Se han eliminado los primeros 13 residuos para proporcionar un derivado que tiene propiedades biológicas distintivas (Gertler ' et al, 1986) en las cuales la cadena polipeptídica no se ha roto. Aunque la hormona del crecimiento humana originalmente se obtuvo de glándulas de hipófisis de cadáveres, estas preparaciones no eran electroforéticamente homogéneas y aparecían anticuerpos en el suero de pacientes tratados con preparaciones del orden de 50% de pureza, la inmunogenicidad se atribuye a componentes inactivos. La tecnología de ADN recombínante permitió a la producción de un suministro ilimitado de hGH en muchos sistemas diferentes. La purificación de hGH del medio de cultivo se facilita por la presencia de cantidades solo menores de proteínas contaminantes. De hecho, se ha demostrado que se puede purificar hGH a escala de laboratorio en una etapa de purificación única en una columna de CLAR en fase inversa (Hsiung et al (1989) . La hormona del crecimiento humana recombínante, rhGH (por sus siglas en inglés) se produce por Serono International S.A. como SEROSTIM , producto el cual ha recibido una aprobación muy rápida de la FDA para tratar la pérdida de peso y el desgaste en pacientes con SIDA. SAIZE ™ es hormona del crecimiento humana recombinante indicada para deficiencia GH en niños, para síndrome de Turner en niñas asi como insuficiencia renal crónica en niños. PROTROPINMR producida por Genentech, Inc. (South San Francisco, CA) , difiere ligeramente la estructura de la secuencia natural de hGH que tiene un residuo metionina adicional en la parte N terminal. Generalmente hGH recombinante se comercializa como frascos que contienen hGH más excipientes adicionales, por ejemplo glicina y manitol, en una forma liofilizada. Se proporciona un frasco de diluyente anexo lo que permite que el paciente diluya o reconstituya el producto hasta la concentración deseada antes de la administración de la dosis. La hGH recombinante también se puede comercializar de otras maneras bien conocidas tales como jeringas llenadas previamente . Con el fin de que hGH esté disponible comercialmente deben .prepararse formulaciones estables terapéuticas . Tales formulaciones deben ser capaces de mantener la actividad para tiempos de almacenamiento apropiados y aceptables para administración por pacientes. Se ha formulado hGH humana en una diversidad de formas. A modo de ejemplo, el documento de E.U.A. 5.096.885 describe una formulación farmacéuticamente aceptable, estable, de hGH que comprende, además de hGH, glicina, manitol, un amortiguador y opcionalmente un tensioactivo no iónico, la proporción molar de hGH: glicina es 1:50. El documento WO 93/19776 describe formulaciones inyectables de GH que comprenden citrato como sustancia amortiguadora y opcionalmente factores de crecimiento tales como factores de crecimiento similares a insulina o factor de crecimiento epidérmico, aminoácidos tales como glicina o alanina, manitol u otros alcoholes de azúcar, glicerol y/o conservadores tales como alcohol bencílico. El documento WO 94/101398· describe una formulación de GH que contiene hGH, un amortiguador, un tensioactivo no iónico y opcionalmente manitol, una sal neutra y/o un conservador . El documento EP-0131864 describe una solución acuosa de proteínas con- peso molecular superior a 8500 daltons, la cual ha sido protegida de adsorción en interfases, contra la desnaturalización y contra la precipitación de la proteína por adición de una sustancia tensioactiva que contiene una cadena de polioxialquileno lineal como un agente estabilizante. El documento EP-0211601 describe una formulación que promueve el crecimiento que comprende una mezcla acuosa de hormona que promueve el crecimiento y un copolímero de bloque que contiene unidades de polioxietileno-polioxipropileno y que tienen un peso molecular promedio de aproximadamente 1,100 a aproximadamente 40,000 el cual mantiene la fluidez de la hormona promotora del crecimiento y su actividad biológica cuando se administra. El documento O 97/29767 describe una formulación líquida que comprende una hormona del crecimiento, citrato trisódico dihidratado, cloruro de sodio, hidróxido de sodio, alcohol bencílico, Pluronic F-68, la formulación tiene un pH de 5.6 El documento US-5,567,677 describe formulaciones liquidas que comprenden hormonas del crecimiento humana, citrato de sodio, fosfato de sodio, glicina, manitol y opcionalmente alcohol bencílico. Las preparaciones farmacéuticas de hGH tienden a ser inestables, particularmente en solución. Se encuentran especies químicamente degradadas tales como formas desamidada o sulfoxilada de hGH y las especies diméricas o agregadas de peso molecular superior pueden resultar de inestabilidad física (Becker et al (1988); Becker et al., 1987; Pearlman and Nguyen (1989) ) . Como una consecuencia de la inestabilidad de hGH en solución, las formulaciones farmacéuticas de hGH generalmente están en forma liofilizada la cual después debe ser reconstituida antes de su uso. La reconstitución habitualmente se lleva a cabo por la adición de un diluyente farmacéuticamente aceptable tal como agua estéril para inyección, solución salina fisiológica estéril o un diluyente fisiológicamente aceptable estéril apropiado. Las soluciones reconstituidas de GH preferiblemente se almacenan a 4°C para minimizar las reacciones químicas y físicas de degradación, no obstante cierta degradación se producirá durante el almacenamiento el cual puede ser por un período de hasta 14 días. Una formulación farmacéutica de hGH proporcionada en una forma líquida, particularmente una se mantiene en estabilidad de hGH sin formación de precipitación o agregación o algún otro material particulado por un período de tiempo prolongado, puede ser particularmente ventajoso. Por lo tanto, un objeto de la presente invención es proporcionar formulaciones líquidas de hormonas del crecimiento que no resultan en la formación de material particulado indeseable y que tienen un tiempo de almacenamiento prolongado .

SUMARIO DE LA INVENCION Un primer aspecto de la invención se relaciona con una formulación líquida que comprende: a) una hormona del crecimiento o una sustancia la cual estimula la liberación o potencia la actividad de hGH endógena; b) una sal de metal alcalino; c) una sal de metal alcalinotérreo o una pseudosal de metal alcalinotérreo; y d) un amortiguador citrato/fosfato . Un segundo aspecto de la invención se relaciona con un procedimiento para preparar la formulación líquida de acuerdo con la presente invención. En un tercer aspecto, la invención se relaciona con una formulación liofilizada la cual es reconstituida de manera tal que proporciona la formulación líquida nueva mencionada antes . En un tercer aspecto, la invención se relaciona con el uso de una formulación de acuerdo con la invención para administración de una sola dosis o de dosis múltiples de una hormona del crecimiento. Un cuarto aspecto de la invención se relaciona con una forma de presentación de la formulación líquida de acuerdo con la invención.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION De acuerdo con la presente invención se ha encontrado que la estabilidad química y física de una hormona de crecimiento en una formulación líquida se puede aumentar or una selección específica de sales minerales. De esta manera, las soluciones que se obtienen se pueden almacenar por un período de tiempo prolongado, por ejemplo de aproximadamente 1 a 52 semanas, o l a 16, o l a 4 semanas, preferiblemente a temperatura ambiente. Se ha encontrado además que la estabilidad mejorada de la hormona del crecimiento en formulación líquida durante un período de tiempo prolongado se puede obtener con una composición de acuerdo con la reivindicación 1. Por lo tanto, la invención se relaciona con una formulación líquida que comprende: a) una hormona del crecimiento o una sustancia la cual estimula la liberación o potencia la actividad de hGH endógena; b) una sal de metal alcalino; c) una sal de metal alcalinotérreo o una pseudosal de metal alcalinotérreo; y d) un amortiguador citrato/fosfato . En una modalidad, las formulaciones líquidas de la presente invención se pueden utilizar para administración de dosis múltiples por lo que la formulación se puede almacenar a temperatura ambiente por un período de 1 semana o más. La hormona del crecimiento que se puede formular de acuerdo con la presente invención se puede derivar de cualquier especie tal como bovina, porcina, canina o felina, dependiendo del uso propuesto de la formulación. Una sustancia la cual estimula la liberación o potencia la actividad de hGH endógena es, por ejemplo, la hormona liberadora de hormona del crecimiento. Preferiblemente, las siguientes sustancias se pueden formular de acuerdo con la presente invención: a) hormona del crecimiento humana; b) un fragmento del inciso (a) el cual tiene actividad agonista sobre el receptor hGH; c) una variante de los incisos (a) o (b) el cual tiene por lo menos 70% de identidad de secuencia con los incisos (a) o (b) y el cual tiene una actividad agonista sobre el receptor hGH; d) una variante de (a) o (b) la cual es codificada por una secuencia de ADN la cual hibridiza con el complemento de la secuencia de ADN nativa que codifica para los incisos (a) o (b) bajo condiciones de rigurosidad moderada y la cual tiene actividad agonista sobre el receptor hGH; o e) una sal o derivado funcional de los incisos (a) , (b) , (c) o (d) el cual tiene una actividad agonista sobre el receptor hGH. Se prefiere de acuerdo con la presente invención una formulación que comprende hormona del crecimiento humana. Los términos "hormona del crecimiento humana" o "hGH", como se utilizan en la presente invención, se pretende que incluyan los derivados como se encuentran en la naturaleza y sintéticos, como se indica en lo anterior, que incluyen, sin limitación, las hormonas del crecimiento humanas de 20 kD y de 22 kD, GH-V y otros miembros del locus del gen de hormona del crecimiento, como se describe con detalle en los "antecedentes de la invención" . La hGH puede ser hormona del crecimiento humana como se encuentra en la naturaleza o preferiblemente puede ser hGH recombinante . La hGH recombinante se puede expresar en cualquier hospedador adecuado, ya sea un hospedador procariótico o uno eucariótico. E. coli es un hospedador particularmente adecuado para la expresión de hGH, por ejemplo. Las células de levadura, insecto o mamífero son adecuadas adicionalmente para la expresión de hormona del crecimiento recombinante. Preferiblemente, la hGH se expresa en células humanas o animales, por ejemplo en células de ovario de hámster chino (CHO) . El término "hGH" o "hormona del crecimiento", como se utiliza en la presente también incluye derivados funcionales, fragmentos, variantes, análogos o sales las cuales retienen la actividad biológica de la hormona del crecimiento, es decir, las cuales actúan como agonistas del receptor de hormona del crecimiento. En otras palabras, son capaces de unirse al receptor de hormonas del crecimiento para iniciar la actividad de señalización del receptor.

El término "derivados funcionales" o "derivados químicos", como se utilizan en la presente, cubren derivados los- cuales se pueden preparar a partir de los grupos funcionales los cuales se presentan como cadenas laterales sobre los residuos de los grupos N o C terminales, por medios conocidos en la técnica y se incluyen en la invención en la medida en que permanezcan farmacéuticamente aceptables y no destruyan la actividad biológica de hGH como se describe en la presente, es decir, la capacidad de unirse al receptor de hGH e iniciar la señalización del receptor, . y que no confieran propiedades tóxicas sobre composiciones que las contienen. Los derivados pueden tener porciones químicas tales como residuos carbohidrato o fosfato con la condición de que tal derivado retenga la actividad biológica de hGH y permanezca farmacéuticamente aceptable. Por ejemplo, los derivados pueden incluir esteres alifáticos de los grupos carboxilo, amidas de los grupos carboxilo por reacción con amoníaco o con aminas primarias o secundarias, derivados de N-acilo de grupos amino libres de los residuos aminoácidos que se forman con porciones acilo (por ejemplo grupos alcanoilo o aroilo carbocíclicos) o derivados O-acilo de grupo hidroxilo libre (por ejemplo de los residuos serilo o treonilo) formados con porciones acilo. Tales derivados pueden incluir, por ejemplo, cadenas laterales de polietilenglicol , las cuales pueden enmascarar sitios antigénicos y extienden la residencia de la molécula en fluidos corporales . Una hormona del crecimiento de la cual se ha formado derivados o se ha combinado con un agente formador de complejos puede tener una duración prolongada. Por lo tanto, una modalidad preferida de la invención se relaciona con versiones pegiladas (que forman derivados con polietilenglicol) de hormonas del crecimiento humana. Las hormonas del crecimiento sometidas a ingeniería genética presentan una actividad de larga duración en el cuerpo, y también son ej emplos de derivados de hGH dentro del alcance de la presente invención. Se ha aislado e identificado (Lewis et al, 1979) hGH que está acetilada en la parte N terminal. No está claro si la acilación sirve con un papel regulador o simplemente es un artefacto de la purificación. No obstante, se espera que esta molécula presenta actividad de GH de una manera similar a otros derivados de GH. Por lo tanto, en una modalidad preferida, la invención se relaciona con la hormona del crecimiento humana la cual está acetilada en su parte N terminal . Preferiblemente, la formulación de acuerdo con la invención comprende un dímero de hormona del crecimiento humana que se selecciona del grupo que consiste de un dímero disulfuro conectado a través de enlaces disulfuro entre cadenas, un dímero no disulfuro irreversible covalente, un dímero no covalente y mezclas de los mismos. El término "sales" en la presente se refiere tanto a sales de grupos carboxilo como a sales de adición de ácido de grupos amino de la molécula hGH o análogos de los mismos. Las sales de un grupo carboxilo se pueden formar por medios conocidos en la técnica e incluyen sales inorgánicas, por ejemplo sales de sodio, calcio, amonio, sales férricas o de zinc y similares y sales con bases orgánicas como las formadas, por ejemplo con aminas tales como trietanolamina, arginina o lisina, piperidina, procaína y similares. Las sales de adición de ácido incluyen, por ejemplo, sales con ácidos minerales tales como, por ejemplo, ácido clorhídrico o ácido sulfúrico y sales con ácidos orgánicos tales como, por ejemplo, ácido acético o ácido oxálico. Por supuesto, cualquiera de dichas sales debe retener la actividad biológica de hGH pertinente para la presente invención, es decir, la capacidad de unirse al receptor hGH e iniciar la señalización del receptor. En una modalidad preferida adicional, la invención se relaciona con un fragmento de hormona del crecimiento humana . Un "fragmento" de la hormona del crecimiento de acuerdo con la presente invención se refiere a cualquier subconjunto de la molécula que es un péptido más corto el cual retiene la actividad biológica deseada. Los fragmentos se pueden preparar fácilmente al separar aminoácidos de cualquiera de los extremos de la molécula de hGH y al probar lo que se obtenga para determinar sus propiedades como un agonista de receptor de hGH. Se conocen las proteasas para separar un aminoácido a la vez ya sea de la parte N terminal o la parte C terminal de un polipéptido, y de esta manera determinar fragmentos los cuales detengan la actividad biológica deseada involucra únicamente experimentación sistemática . Preferiblemente, los fragmentos de hGH de acuerdo con la presente invención pueden tener supresiones internas en la medida en que la supresión no altere la actividad biológica de hGH, es decir, unirse . e iniciar la señalización a través de un receptor hGH. Un fragmento que se prefiere de acuerdo con la invención carece de 15 aminoácidos desde el ácido glutámi.co (Glu) 32 al ácido glutámico (46) . Los fragmentos de hGH se pueden truncar adicionalmente en la parte C o N terminal . Las formas de hGH truncadas que carecen de los primeros ocho residuos en la parte N terminal de los primeros 13 residuos de la parte N terminal de la hormona del crecimiento humana también se prefieren de acuerdo con la presente invención. Se. ha descrito un fragmento de hGH en la parte C terminal, corto, que retiene una actividad biológica de hGH, véase el documento de E.U.A. 5,869,452. Por lo tanto, de acuerdo con .la presente invención se prefiere el uso de un fragmento C terminal de hGH. Se prefiere particularmente de acuerdo con la presente invención el fragmento hGH 177-191 que comprende por lo menos los residuos aminoácidos 177 a 191 de hGH (LRIVQCRSVEGSCGF) . Se prefieren adicionalmente los derivados de este peptido tales como las variantes peptídicas descritas en los documentos US 6,335,319 o O 99/12969, por ejemplo péptidos cíclicos. De manera adicional, el polipéptido el cual tiene dicha actividad agonista del receptor de hGH puede ser hGH, un análogo o variante, sal, derivado funcional o fragmento del mismo, el cual también puede contener residuos aminoácidos adicionales que flanqueen al polipéptido hGH. En la medida en que la molécula resultante retenga la capacidad agonista de receptor de hGH del péptido del núcleo, uno puede determinar si dichos residuos flanqueantes alteran las características básicas y novedosas del péptido de núcleo, es decir, sus características agonistas de receptor mediante experimentación sistemática. Un ejemplo de dicha variante de GH las cuales se prefieren de acuerdo con la presente invención es la metionil hormona del crecimiento humana (Met-hGH) la cual tiene un residuo metionina adicional en la parte N terminal de la hormona del crecimiento humana.

Las variantes de hGH las cuales se prefieren de acuerdo con la invención comprenden metionil hGH, la cual es una hormona del crecimiento humana que tiene un residuo metionina adicional en su parte N terminal . Una variante preferida adicional es hormona del crecimiento humana que carece de 15 residuos aminoácidos desde Glu32 a Glu46. Una "variante" de la hormona del crecimiento humana de acuerdo con la presente invención se refiere a una molécula la cual es sustancialmente similar ya sea a la proteína completa o a un fragmento de la misma. Una variante también se le puede denominar una "muteína" . Una variante puede, por ejemplo, ser una isoforma de hGH tal como una variante generada por empalme alternativo. Los (poli) péptidos variantes también pueden prepararse convenientemente por síntesis química directa del péptido variante utilizando métodos bien conocidos en la técnica. Por supuesto, una hormona del crecimiento humana variante debe tener por lo menos actividades de unión e inicio de señalización de receptor de hGH similares a hGH y el cual por lo tanto se puede esperar que tenga una actividad similar a hGH. Las variantes en la secuencia de aminoácidos de la hormona del crecimiento humana se pueden preparar por mutaciones en los ADN los cuales codifican para los derivados de la hormona del crecimiento humana sintetizada. Dichas variantes incluyen, por ejemplo, supresiones, inserciones o sustituciones de los residuos dentro de la secuencia de aminoácidos. Cualquier combinación de supresión, inserción y sustitución también se puede realizar para llevar a la construcción final con la condición de que la construcción final presente la actividad deseada. Evidentemente, las mutaciones que se realizarán en el ADN que codifique para el péptido variante no deben alterar el marco de lectura. A nivel genético, estas variantes se pueden preparar por mutagénesis dirigida al sitio (como se ejemplifica por Adelman et al, 1983) de nucleótidos en el ADN que codifica para la molécula péptido y de esta manera se produce ADN que codifica para la variante y posteriormente expresa el ADN en un cultivo de células recombinantes . Las variantes típicamente presentan por lo menos la misma actividad biológica cualitativa que el péptido no variante. Un "análogo" de hormona del crecimiento humana de acuerdo con la presente invención se refiere a una molécula no natural la cual es sustancialmente similar ya sea a la molécula completa o a un fragmento activo de la misma. Un análogo de la hormona del crecimiento humana útil en la presente invención debe presentar actividad de GH. Los tipos de sustituciones los cuales se pueden realizar en la hormona del crecimiento humana de acuerdo con la presente invención se pueden basar en el análisis de las frecuencias de cambios de aminoácidos entre una proteína homologa de especies diferentes. En base en dicho análisis se pueden definir en la presente las sustituciones conservadoras como cambios dentro de uno de los siguientes cinco grupos: I. Residuos pequeños, alifático, no polares o ligeramente polares: Ala, Ser, Thr, Pro, Gly II. Residuos polares, con carga negativa y sus amidas : Asp, Asn, Glu, Gln III. Residuos polares cargados positivamente: His, Arg, Lys IV: Residuos no polares alifáticos grandes: Met, Leu, lie, Val, Cys V: Residuos aromáticos grandes: Phe, Try, Trp. Dentro de los siguientes grupos se consideran las siguientes sustituciones como "altamente conservadoras" : Asp/Glu His/Arg/Lys Phe/Tyr/Trp Met/Leu/Ile/Val Las sustituciones semiconservadoras se definen para que sean cambios entre dos grupos (I) - (IV) encima de los cuales están limitados al supergrupo (A) que comprende a los incisos (I) , (II) y (III) anteriores o el supergrupo (B) que comprende a los incisos (IV) y (V) anteriores. Las sustituciones no están limitadas a aminoácidos codificados genéticamente o incluso como se encuentran de manera natural . Cuando se prepara el epítopo por síntesis peptidica el aminoácido deseado puede ser utilizado directamente. De manera alternativa, el aminoácido codificado genéticamente se puede modificar al hacerlo reaccionar con un agente orgánico formador de derivados que sea capaz de reaccionar con las cadenas laterales seleccionadas o los residuos terminales. Los residuos cisteinilo más comúnmente se hacen reaccionar con a-haloacetatos (y las aminas correspondientes) tal como ácido cloroacético o cloroacetamida, para proporcionar derivados carboximetilo o carboxiamidometilo . Los residuos cisteinilo también están formando derivados por reacción con bromotrifluoroacetona, ácido -bromo-ß- (5-imidazol) ropiónico, fosfato de cloroacetilo, N-alquilmaleimidas , disulfuro de 3 -nitro-2-piridilo, disulfuro de metil-2-piridilo, benzoato de p-cloromercurio, 2-cloromercurio-3 -nitrofenol o cloro-7-nitrobenzo-2 -oxa-1 , 2-diazol . Se forman derivados con los residuos histídilo por reacción con procarbonato de dietilo a pH 5.5-7.0 debido a que este agente es relativamente específico para la cadena lateral histidilo. También es útil el bromuro de parabromofenacilo; la reacción preferiblemente se realiza en cacodilato de sodio 0.1M a pH 6.0. Los residuos lisinilo y amino terminal se hacen reaccionar con anhídridos de ácido succinico u otro anhídrido de ácido carboxílico . La formación de derivados con estos agentes tiene el efecto de revertir el cambio de los residuos lisinilo. Otros reactivos adecuados para formar derivados de residuos que contienen a-aminoácido incluyen imidoésteres tales como picolinimidato de metilo; fosfato de piridoxal; piridoxal; cloroborohidruro; ácido trinitrobencensulfónico; O-metiliosurea; 2 , 4 -pentanodiona; y reacción catalizada por transaminasa con glioxilato. Los residuos arginilo son modificados por reacción con uno o varios reactivos convencionales, entre ellos fenilglioxal ; 2 , 3 -butanodiona y ninhidrina. La formación de derivados de los residuos arginina requiere que la reacción se realice en condiciones alcalinas debido a la elevada pKa del grupo funcional guanidina. Además, estos reactivos pueden reaccionar con los grupos de lisina asi como el grupo e-amino de arginina . La modificación específica de los residuos tirosilo por si misma se ha estudiado extensamente, con interés particular en introducción de etiquetas espectrales dentro de los residuos tirosilo por reacción con compuestos diazonio aromáticos o tetranitrometano . De manera más común, el N-acetilimidazol y el tetranitrometano se utilizan para formar especies O-acetiltirosilo y derivados e-nitro, respectivamente . Los grupos laterales carboxilo (aspartilo o glutamilo) son modificados selectivamente por reacción con carbodiimidas (R'N-C-N-R1) tal como l-ciclohexil-3- [2-morfolinil- (4-etil) carbodiimida o l-etil-3- (4-azonia-4 , 4-dimetilpentil) carbodiimida . Además, los residuos aspartilo y glutamilo se convierten a los residuos asparaginilo y glutaminilo por reacción con iones amonio. Los residuos glutaminilo y asparaginilo se desaminan frecuentemente a los residuos glutamilo y aspartilo correspondientes. De manera alternativa, estos residuos se desamidan bajo condiciones moderadamente ácidas . Cualquier forma de estos residuos se encuentra dentro del alcance de esta invención. Los ejemplos de producción de sustituciones de aminoácidos en proteínas las cuales pueden ser utilizadas para obtener análogos de hGH para el uso en la presente invención incluyen cualquier etapa de método conocida, tal como las que se presentan en las patentes de E.U.A. RE 33,653; 4,959,314; 4,588,585 y 4,737,462 para Mark et al; 5,116,943 para Koths et al; 4,965,195 para Ñamen et al; y 5,017,691 para Lee, et al., y proteínas sustituidas con lisina presentadas en la patente de E.U.A. 4,904,584 (Shaw et al) . Se han descrito variantes de hormona del crecimiento adicionales, por ejemplo, en el documento de E.U.A. 6,143,523 (Cunningham et al . ) . Entre las sustancias las cuales se unen e inician la señalización del receptor de hormona del crecimiento humana las cuales se pueden utilizar de acuerdo con la presente invención están todas aquellas análogos de hormona del crecimiento y miméticos conocidos ¦ de antemano en la literatura tales como, por ejemplo, aquellos descritos en las patentes de E.U.A. números 5,851,992; 5,849,704; 5,849,700; 5,849,535; 5,843,453; 5,834,598; 5,688,666; 5,654,010; 5,635,604; 5,633,352; 5,597,709 y 5,534,617. Preferiblemente, la variante o el análogo' de hGH tendrá una secuencia de núcleo, la cual es la misma que para la secuencia nativa o el fragmento biológicamente activo del mismo, el cual tiene una secuencia de aminoácidos que tiene por lo menos 70% de identidad con la secuencia de aminoácidos nativa y retiene la actividad biológica del mismo. De manera más preferible, dicha secuencia tiene por lo menos 80% de identidad, por lo menos 90% de identidad, o de manera más preferible por lo menos 95% de identidad con la secuencia nativa . El término "identidad" refleja una relación entre dos o más secuencias polipeptidicas o dos o más secuencias polinucleotidicas , determinadas al comparar las secuencias. En general, la identidad se refiere a una correspondencia exacta entre nucleótido respecto a nucleótido o aminoácido respecto a aminoácido de las dos secuencias polinucleotídicas o de las dos secuencias polipeptídicas respectivamente, sobre la longitud de las secuencias que se comparan. Para secuencias en donde no existe una correspondencia exacta se puede determinar un "porcentaje de identidad". En general, las dos secuencias que se van a comparar se alinean para proporcionar una correlación máxima entre las secuencias. Esto puede incluir inserción de "separaciones" ya sea en una o ambas secuencias para mejorar el grado de alineación. Se puede determinar un porcentaje de identidad sobre toda la longitud de cada una de las secuencias que se comparan (la denominada alineación global) , que es particularmente adecuada para secuencias de la misma longitud o de una longitud muy similar, o sobre longitudes definidas más cortas (denominada alineación local) que es más adecuada para secuencias de longitudes diferentes . Los métodos para comparar la identidad y homología de dos o más secuencias son bien conocidos en la técnica. Así, por ejemplo, se pueden utilizar los programas disponibles en el Wisconsin Sequence Analysis Package, versión 9.1 (Devereux J et al., 1984), por ejemplo los programas BESTFIT y GAP, para determinar el porcentaje de identidad entre dos polinucleótidos y el porcentaje de identidad y el porcentaje de homología entre dos secuencias polipeptldicas . El programa BESTFIT utiliza el algoritmo de "homología local" de Smith y Waterman (1981) y encuentra la mejor región de similitud única entre dos secuencias. Otros programas para determinar identidad y/o similitud en tres secuencias también se conocen en la técnica, por ejemplo la familia BLAST de programas (Altschul S F et al, 1990; Altschul S F et al, 1997, accesible a través de la página de inicio de NCBI en www.ncbi.nim.nih.gov) y FASTA (Pearson W , 1990; Pearson 1988) . Los cambios preferidos para variantes o muteínas de acuerdo con la presente invención son los que se conocen como sustituciones "conservadoras". Las sustituciones conservadoras de aminoácidos de polipéptidos o proteínas de hormona del crecimiento pueden incluir aminoácidos sinónimos dentro de un grupo el cual tenga propiedades fisicoquímicas suficientemente similares de manera que la sustitución entre los miembros del grupo conservará la función biológica de la molécula (Grantham, 1974) . Es evidente que las inserciones y supresiones de aminoácidos también se pueden realizar en las secuencias definidas en lo anterior sin alterar su función, particularmente si las inserciones o supresiones involucran únicamente algunos aminoácidos, por ejemplo menores de 30, y preferiblemente menores de 10, y no retiran ni' desplazan aminoácidos que sean críticos para una conformación funcional, por ejemplo residuos cisteína. Las proteínas y mutelnas producidas por dichas supresiones y/o inserciones se encuentran dentro del alcance de la presente invención. Los análogos o variantes de acuerdo con la presente invención también se pueden determinar de acuerdo con el siguiente procedimiento. Se conoce de la técnica anterior el ADN de la secuencia nativa y se encuentra en la literatura (Martial et al, 1979). Los polipéptidos codificados por cualquier ácido nucleico tal como ADN o ARN el cual hibridice con el complemento de ADN o ARN nativo bajo condiciones de alta rigurosidad o rigurosidad moderada, en la medida en que el polipéptido mantenga la actividad biológica de la secuencia nativa, también se considera que están dentro del alcance de la presente invención. Las condiciones de rigurosidad son una función de la temperatura utilizada en el experimento de hibridación, la polaridad de los cationes monovalentes y el porcentaje de formamida en la solución de hibridación. Para determinar el grado de rigurosidad involucrado con cualquier conjunto dado de condiciones, primero se utiliza la ecuación de Meinkoth et al. (1984) para determinar la estabilidad de híbridos de 100% de identidad expresada como la temperatura de fusión, Tm del híbrido ADN-ADN : Tm = 81.5°C + 16.6 (IogM) + 0.41 (%GC) - 0.61 (% form) - 500/L en donde M es la molaridad de cationes monovalentes, %GC es el porcentaje de nucleotidos G y C en el ADN, % form es el porcentaje de formamida en la solución de hibridación y L es la longitud del híbrido en pares de bases. Por cada 1°C que se reduzca la Tm para el calculado para un 100% de identidad de híbrido, la cantidad de malpareamiento permitida se incrementa en aproximadamente 1%. De esta manera, si la Tm utilizada para cualquier experimento de hibridación dado en las concentraciones de sal y de formamida especificadas es 10°C inferior a la Tm calculada para un híbrido 100% de acuerdo con la ecuación de Meinkoth, la hibridación se producirá incluso si existe -hasta · un malpareamiento de aproximadamente 10%. Como se utiliza en la presente, las condiciones de alta rigurosidad son aquellas las cuales son tolerantes hasta aproximadamente 15% de divergencia en la secuencia, mientras que las condiciones de rigurosidad moderadas son aquellas en las cuales existe tolerancia de hasta aproximadamente 20% de divergencia en la secuencia. Sin limitación, los ejemplos de condiciones altamente rigurosas (12-15°C por debajo de la Tm calculada del híbrido) y moderadamente rigurosas (15-20°C por debajo de la Tm calculada del híbrido) utiliza una solución de lavado de 2 X SSC (citrato de solución salina estándar) y SDS 0.5% a la temperatura apropiada por debajo de la Tm calculada del híbrido. La rigurosidad final de las condiciones se debe principalmente a las condiciones de lavado, particularmente si las condiciones de hibridación utilizadas son aquellas las cuales permiten que se formen híbridos menos estables junto con híbridos estables. Las condiciones de lavado a rigurosidad mayor de esta manera eliminan a los híbridos menos estables . Una condición de hibridación común que puede ser utilizada con condiciones de lavado de alta rigurosidad a rigurosidad moderada descritas en lo anterior es la hibridación en una solución de 6 X SSC (o 6 S SSPE) , reactivo de Denhardt 5 X, SDS 0.5%, 100 µ9/p?1 de ADN de esperma de salmón fragmentado y desnaturalizado a una temperatura de aproximadamente 20° a 25 °C por debajo de la Tm. Si se utilizan sondas mixtas, es preferible utilizar cloruro de tetrameti1amonio (TMAC, por sus siglas en inglés) en lugar de SSC (Ausubel , 1987-1998) . Aunque la presente invención proporciona métodos recombinantes para producir los derivados de hormona del crecimiento humana, estos derivados también se pueden elaborar por métodos convencionales de síntesis de proteínas los cuales son bien conocidos por aquellos expertos en la técnica . La formulación de la invención comprende un polietilen-polipropilenglicol . Este polímero es un tensioactivo no iónico. Un surfactante en la presente también se denomina como "tensioactivo" o "agente tensioactivo". En una modalidad preferida adicional, la formulación comprende el polietilen-polipropilenglicol en una concentración que varía de 0.5 a 5 mg/ml o 1 a 2 mg/ml o 1.5 mg/ml . En una formulación preferida, el tensioactivo es un poliol de Pluronic tal como, por ejemplo, F68. Pluronic F68 es altamente preferido de acuerdo con la presente invención. Al formular la GH con el tensioactivo PluronicMR F68 (BASF, también conocido como Poloxamer 188) se obtiene una formulación estable que evita el problema de precipitación, agregación o generación de material particulado de cualquier clase . Pluronic F68 es un copolimero de bloque de óxido de etileno (EO, por sus siglas en inglés) y óxido de propileno (PO, por sus siglas en inglés) . El bloque de óxido de propileno (PO) se encuentra interpuesto entre 'los dos bloques de óxido de etileno (EO) . CH3 HO—(CH2C¾0) x-(CH2C IHO) y-(CH2CH2CHO) X-H 1. Se genera un hidrófobo del peso molecular deseado por la adición controlada de óxido de propileno a los dos grupos hidroxilo de propilenglicol ; y 2. Se agrega óxido de etileno para la interposición del hidrófobo entre grupos hidrofilicos . En Pluronic F68, el porcentaje de polioxietileno (hidrófilo) es 80% y el peso molecular del hidrófobo (polioxipropileno) es de aproximadamente 1967 Da. Las propiedades típicas de Pluronic F68 se indican a continuación: Peso molecular promedio: 8400; Punto de fusión/vertido : 52 °C; Forma física aproximadamente 20°C: sólido; Viscosidad (Brookfield) cps : 1000 (líquidos a 25°C, pastas a 60°C y sólidos a 77°C) ; Tensión superficial, en dinas/cm a 25 °C; 0.1% de concentración: 50.3 0.01% de concentración: 51.2 0.001% de concentración: 53.6 Tensión interfacial, en dinas/cm a 25°C versus Nuj ol : 0.1% de concentración: 19.8 0.01% de concentración: 24.0 0.01% de concentración: 26.0 Humedecimiento de Draves, segundos a 25°C 1.0% de concentración: >360 0.1% de concentración: >360 Altura de la espuma Ross Miles, 0.1%, mm a 50°C: 35 Ross Miles, 0.1%, mm a 26°C: 40 Dinámica: 0.1%, mm a 400 ml/min: >600 Punto de enturbamiento en solución acuosa, °C 1% de concentración: >100 10% de concentración: >100 HLB (balance hidrofílico-lipofilico) : 29 También se pueden utilizar en las formulaciones de la invención otros polímeros que tienen propiedades similares a Pluronic F68. El polietilen-polipropilenglicol se puede utilizar en una concentración que varía de 0.5 a 5 mg/ml o 1 a 2 mg/ml o 1.5 mg/ml. Una persona experta en la técnica apreciará que se pueden utilizar uno o más tensioactivos adicionales además de polietilen-polipropilenglicol . La formulación de la invención comprende además un agente estabilizante. Un agente estabilizante también puede actuar como un agente de isotonicidad . Un "agente de isotonicidad" es un compuesto que es fisiológicamente tolerado y que imparte una tonicidad adecuada a una formulación para evitar el flujo neto de agua a través de las membranas de la célula que no están en contacto con la formulación. Los compuestos tales como glicerina se utiliza comúnmente para dichos propósitos en concentraciones conocidas. Otros agentes estabilizantes adecuados incluyen, pero no se limitan a aminoácidos o proteínas (por ejemplo glicina o albúmina), sales (por ejemplo cloruro de sodio) y azúcares (por ejemplo dextrosa, sacarosa y lactosa) . Los agentes estabilizantes (estabilizadores) o agentes de isotonicidad que preferiblemente se pueden utilizar de acuerdo con la presente invención incluyen azúcares no reductores que incluyen sacarosa, trehalosa, sorbosa, melecitosa y rafinosa. Manitol, xilitol, eritritol, treitol, sorbitol y glicerol . En una modalidad preferida, el estabilizante o agente de isotonicidad es sacarosa. En una modalidad preferida adicional la formulación tiene sacarosa y una concentración que varía de 10 mg/ml a 100 mg/ml o 20 mg/ml a 80 mg/ml, o aproximadamente 60 mg/ml. Las formulaciones de acuerdo con la presente invención contienen una sal de metal alcalino, que incluye NaCl, KC1, Na2S04, Na2C03. En una modalidad preferida, la sal de metal alcalino es NaCl o Na2S04. Las formulaciones de acuerdo con la presente invención contienen además una sal de metal alcalinotérreo que incluyen CaCl2, MgCl2, MgS04, NH4CO3. En una modalidad preferida, la sal de metal alcalinotérreo es MgCl2. Las formulaciones de la invención comprenden además un amortiguador citrato/fosfato . Un amortiguador citrato/fosfato que puede ser utilizado dentro de la presente invención puede ser, por ejemplo, un amortiguador de citrato de sodio/fosfato de sodio. El término "amortiguador" o "amortiguador fisiológicamente aceptable" se refiere a soluciones de compuestos que se sabe son seguras para uso farmacéutico o veterinario en formulaciones y que tienen el efecto de mantener o regular el pH de la formulación en el intervalo de pH deseado para la formulación. Se prefiere que las formulaciones de la presente invención comprendan citrato/fosfato en una concentración que varia de 1 a 100 mM o de 5 a 50 mM o de 10 a 20 mM. De acuerdo con la presente invención, se prefiere que el pH de la formulación esté en el intervalo de 5 a 7 o 5.5 a 6.5 o en aproximadamente 6. De manera más preferible, el pH es de 5.5 a 5.9. Las formulaciones de la invención son líquidas y comprende por lo tanto un diluyente acuoso. El término "diluyente acuoso" se refiere a un solvente líquido que contiene agua. Los sistemas de solventes acuosos pueden consistir únicamente de agua o pueden consistir de agua así como uno o más solventes miscibles y pueden contener solutos disueltos tales como azúcares, amortiguadores, sales y otros excipientes. La formulación también puede comprender uno o más solventes no acuosos. Los solventes no acuosos utilizados comúnmente son alcoholes orgánicos de cadena corta tales como metanol, etanol, propanol, cetonas de cadena corta, tales como acetona y polialcoholes tales como glicerol . La formulación de la invención preferiblemente comprende un conservador. La adición de un conservador se prefiere especialmente si la hormona del crecimiento está diseñada para administración de dosis múltiples. Un "conservador" es un compuesto el cual se puede incluir en la formulación para reducir esencialmente la acción bacteriana en el mismo y de esta manera facilitar la producción de una formulación de uso múltiple, por ejemplo. Los ejemplos de conservadores potenciales incluyen cloruro de octadecildimetilbencilamonio, cloruro de hexametonio, cloruro de benzalconio (una mezcla de cloruros de alquilbencildimetilamonio en los cuales los grupos alquilo son compuestos de cadena larga) y cloruro de bencetonio . Otros tipos de conservadores incluyen alcoholes aromáticos tales como fenol, alcohol butilico y bencílico, alquilparabeno tal como metil o propilparabeno, ' catecol, resorcinol, ciclohexanol , 3-pentanol y m-cresol. Un conservador también puede ser un bacteriostático en la presente. El término "bacteriostático" se refiere a un compuesto o composiciones agregadas a una formulación para actuar como un agente antibacteriano . Una formulación que contiene GH preservada de la presente invención preferiblemente satisface las líneas de guía estatutarias o reguladoras para eficacia de conservadores para que sea un producto de uso múltiple (dosis múltiples) viable comercialmente . Los ejemplos de bacteriostáticos incluyen fenol, m-cresol, p-cresol, o-cresol, clorocresol , alcohol bencílico, alquilparabeno (metil, etil, propil, butil y similares) , cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio, deshidroacetato de sodio y timerosal . De manera preferible, el conservador está presente en una concentración que varía de 1 a 10 mg/ml o 2 a 5 mg/ml o 3 mg/ml . El conservador preferido de la invención es fenol . En un segundo aspecto, la invención se relaciona con un procedimiento para la producción de la formulación líquida que comprende la etapa de preparar una solución acuosa de los componentes de la formulación de acuerdo con la presente invención. La invención se relaciona adicionalmente con un procedimiento para la producción de la formulación líquida que comprende la etapa de colocar una cantidad predeterminada de la formulación en un recipiente estéril. Típicamente, tal cantidad está en el intervalo de mililitros. Las formulaciones líquidas de hGH para administración terapéutica también se pueden preparar al combinar hGH y agentes estabilizantes que tengan el grado de pureza deseado, con excipientes, amortiguadores o conservadores fisiológicamente aceptables (Remington's Pharmaceutical Sciences, décima sexta edición, Osoll A. Ed (1989) . Los excipientes aceptables son aquellos los cuales son no tóxicos para el paciente a las concentraciones y dosificaciones utilizadas e incluyen, por ejemplo, amortiguadores, conservadores, antioxidantes, modificadores de pH y de tonicidad. La formulación líquida de hormona del crecimiento también puede incluir uno o más excipientes estabilizantes adicionales si se desea. Los excipientes estabilizantes adicionales pueden incluir, por ejemplo, aminoácidos tales como glicina o alanina, manitol u otros alcoholes de azúcar o glicerol. Además, la formulación líquida puede incluir otros factores de crecimiento tales como factores de crecimiento similares a insulina o proteínas de unión IGF. La estabilidad aumentada de hGH proporcionada por la formulación preparada de acuerdo con la presente invención permite un uso más amplio de formulaciones de hGH que se pueden estar más concentradas que aquellas comúnmente en uso. El término "estabilidad" se refiere a la estabilidad física, química y conformacional de las formulaciones de hormona del crecimiento de la presente invención (que incluye el mantenimiento de la potencia biológica) . La inestabilidad de una formulación de proteína puede ser causada por degradación química o agregación de las moléculas de proteína para formar estructuras de orden superior, por desglucosilación, modificación de la glucosilación, desamidación, oxidación o cualquier otra modificación estructural que reduzca por lo menos una actividad biológica de un polipéptido GH incluido en la presente invención. Se conocen en la técnica autoinyectores tales como el denominado EasyjetMR, el cual es particularmente útil para administración de hGH. También se puede utilizar la administración sin agujas en relación con la presente invención, utilizando dispositivos especiales que son conocidos en la técnica. Un aspecto adicional de la invención se relaciona con una composición farmacéutica que comprende la formulación de la invención. Las composiciones dentro del alcance de esta invención incluyen todas las composiciones que comprenden por lo menos una hormona del crecimiento humana o un derivado, análogo o variante del mismo de acuerdo con la presente invención en una cantidad eficaz para obtener su uso propuesto. Aunque las necesidades individuales varían, la determinación de los intervalos óptimos de cantidades eficaces de cada compuesto están dentro de la habilidad de la técnica. Las dosificaciones típicas comprenden aproximadamente 0.001 a aproximadamente 0.1 mg/kg de peso corporal al día. Cuando se administra a pacientes, el tratamiento con hGH se puede administrar de manera concomitante con otros tratamientos los cuales pueden estar indicados en esta enfermedad. La formulación líquida de la presente invención se puede obtener por reconstitución (dilución) de una muestra liofilizada de hormona del crecimiento en un diluyente adecuado (por ejemplo agua para inyección) de manera tal que la formulación contenga los excipientes identificados en lo anterior . El término "administrar" o "administración" significa introducir una formulación de la presente invención en el cuerpo de un paciente en necesidad del mismo para tratar una enfermedad o condición. En una modalidad preferida de la invención, se administra hGH en una dosificación diaria de aproximadamente 0.1 a 10 mg o aproximadamente 0.5 a 6 mg. En una modalidad la dosificación diaria es de aproximadamente 0.15-0.3 mg de hGH al día, preferiblemente por inyección subcutánea. En una modalidad adicional se administra al día una dosificación de aproximadamente 1 mg de hormona del crecimiento humana a un paciente en necesidad de la misma. En una modalidad adicional, se administra hGH en dosificaciones alternantes, la primera dosificación es mayor que la segunda dosificación. Preferiblemente, la primera dosificación es de aproximadamente 1 mg y la segunda dosificación es de aproximadamente 0.5 mg. Las dosificaciones semanales preferiblemente son de aproximadamente 6 mg o aproximadamente 5 mg o aproximadamente 4.5 mg, dependiendo de las necesidades del paciente. El término "paciente" significa un mamífero que es tratado por una enfermedad o condición. Los pacientes son de los siguientes orígenes, sin limitarse, humanos, ovinos, porcinos, equinos, bovinos, conejos y similares. La formulación de la presente invención es adecuada para muchos regímenes de administración diferentes. Por ejemplo, la administración puede ser por vía parenteral, tal como las vías subcutánea, intravenosa, intramuscular, oral, intraperitoneal , en aerosol, transdérmica, intratecal o rectal . La dosificación administrada depende de la edad, salud y peso del receptor, el tipo de tratamiento previo o concurrente, si lo hay, la frecuencia del tratamiento y la naturaleza del efecto que se desea. De acuerdo con la presente invención, las vías de administración preferidas son las vías subcutánea e intramuscular. Se entiende que la dosis adecuada de una composición o formulación de acuerdo con la presente invención dependerá de la edad, salud y peso del receptor, la clase de tratamiento concurrente, si lo hay, la frecuencia de tratamiento y la naturaleza del efecto que se desea. No obstante, la dosificación más preferida se puede adecuar al sujeto individual, como se entiende y es determinable por una persona experta en la técnica, sin experimentación indebida. Esto típicamente involucra el ajuste de una dosis estándar, por ejemplo reducción de la dosis si el paciente tiene un peso corporal bajo. La dosis total requerida para cada tratamiento se puede administrar en dosis múltiples (multidosis) o en una dosis única ( "monodosis" ) . La expresión "uso de dosis múltiples" se pretende que incluya el uso de un frasco, ampolleta o cartucho único de formulación de GH por más de una inyección, por ejemplo 2, 3, 4, 5, 6 o más inyecciones. Las inyecciones pueden estar separadas en el tiempo, por ejemplo por un período de 6, 12, 24, 48 ó 72 horas. La invención se relaciona adicionalmente con el uso de una formulación de acuerdo con la presente invención para administración de monodosis. En un aspecto alternativo, la invención se relaciona con el uso de una formulación de acuerdo con la presente invención para administración de dosis múltiples. Las formulaciones típicas de dosis múltiples de hGH de serono (Saizen) contienen 1.33, 3.33 u 8 mg de hGH. Las formulaciones típicas de dosis múltiples de hGH de Lilly (Humatrope) contienen 6, 12 ó 24 mg de hGH.' Las formulaciones típicas de dosis múltiples de hGH de Pfizer (Genotropin) contienen 5 ó 12 mg de hGH. Las formulaciones típicas de dosis múltiples de hGH de Novo Nordisk (Genotropin) contienen 5, 10 ó 15 mg de hGH. De esta manera, en las formulaciones típicas la cantidad de hGH proporcionada en un frasco es de 1.33, 3.33, 5, 6, 8, 10, 12, 15 ó 24 mg. Las composiciones se pueden administrar solas o junto con otras sustancias terapéuticas dirigidas a la enfermedad o dirigidas a otros síntomas de las mismas. Las formulaciones hGH de la presente invención se pueden suministrar en frascos. El término "frasco" se refiere de manera general a un depósito adecuado para retener GH en forma sólida o líquida en un estado estéril contenido. Los ejemplos de un frasco, como se utiliza en la presente, incluyen ampolletas, cartuchos, empaques tipo ampolla u otro depósito similar adecuado para el suministro de GH al paciente por medio de jeringa, bomba (que incluye osmótica) , catéter, parche transdérmico , aspersión pulmonar o transmucosal . Los frascos adecuados para el empacado de productos para la administración parenteral, pulmonar, por intramucosa o transdérmica son bien conocidos y reconocidos en la técnica. La estabilidad aumentada de las formulaciones de hGH permite el almacenamiento a largo plazo a una temperatura apropiada, por ejemplo debajo de la temperatura de congelamiento (por ejemplo, a -20°C) o por encima de la temperatura de congelamiento, preferiblemente a 2-8°C, de manera más preferible a +5°C o incluso a temperatura ambiente, ~por ejemplo a +25°C. Las formulaciones de hGH para ser utilizadas para administración in vivo deben ser estériles. Esto se puede llevar a cabo fácilmente, por ejemplo, por filtración a través de membranas de filtración estéril . Las formulaciones líquidas terapéuticas de hGH generalmente se colocan en un recipiente que tiene un punto de acceso estéril, por ejemplo una- bolsa de solución intravenosa o un frasco que tenga un tope el cual puede ser perforado por una aguja de inyección hipodérmica. Por lo tanto, un aspecto adicional de la invención se relaciona con una forma de presentación de la formulación líquida de la invención cerrada herméticamente en una condición estéril dentro de un recipiente adecuado para almacenamiento antes de su uso. Las formulaciones de la presente invención se pueden utilizar para el tratamiento de deficiencia de GH en niños, pérdida de peso y desgaste en pacientes con SIDA, para síndrome de Turner en niñas así como insuficiencia renal crónica en niños . Aunque esta invención se ha descrito en relación con modalidades especificas de la misma, se comprenderá que es susceptible de modificaciones adicionales. Se pretende que esta solicitud abarque cualquiera de las variaciones, usos o adaptaciones de la invención siguiendo, en general, los principios de la invención e incluyendo dichas desviaciones de la presente descripción conforme se encuentren dentro de la práctica conocida o habitual dentro de la técnica a la cual pertenece la invención y que puede ser aplicada a las características esenciales establecidas en lo anterior como sigue, en cuanto al alcance de las reivindicaciones anexas. Todas las referencias que se incluyen en la presente, incluyendo artículos de revistas o extractos, solicitudes de patentes tanto de Estados Unidos como extranjeras publicadas o no publicadas, patentes de E.U.A. o extranjeras expedidas o cualquier otra referencia se incorporan por completo como referencia a la presente incluyendo todos los datos, tablas, figuras y texto presentado en las referencias mencionadas. De manera adicional, la totalidad del contenido de las referencias mencionadas dentro de dichas referencias que se mencionan en la presente también se incorporan por completo como referencia . Habiéndose descrito la invención ahora, se comprenderá con mayor facilidad con referencia al siguiente ejemplo de un contorno de estudio clínico ejemplar que se proporciona a modo de ilustración y que no se pretende que sea limitante de la presente invención.

EJEMPLO Se determinaron JLas siguientes 2 formulaciones en términos de su estabilidad: Formulación A Formulación B Ingredientes Formulación A r-hGH (mg/ml) 8.0 Fosfato de citrato de sodio pH 5.57 (mM) 5.0 Cloruro de sodio (mM) 171.0 Cloruro de magnesio (mM) 5 Fenol (mg/ml) 3.0 Pluronic F68 (mg/ml) 0.2 Se determinó la estabilidad química de las formulaciones A y B después de almacenamiento de las muestras a una temperatura de 40°C por un período de tiempo prolongado, es decir, después de 3 semanas. Se determinó la estabilidad de hGH por FI-CLAR (CLAR en fase inversa) . De esta manera, la cantidad de hormona del crecimiento intacto sin cambio se deriva del grado de cambio del pico principal de la hormona del crecimiento humana. En otras palabras, se infiere el grado de cambio a partir del cambio del pico principal de la hormona del crecimiento humana y se calcula como porcentaje de r-hGH sin cambio versus el pico correspondiente en tiempo cero.

Resultados : Formulación A • Después de almacenar la muestra durante 1 mes a 40 °C, el pico principal medido para r-hGH representa 62% del pico correspondiente en tiempo cero (es decir, se encontró 62% de r-hGH sin cambio después de 1 mes de almacenamiento a 40°C) . • Después de 1 mes de almacenamiento a temperatura ambiente (25°C) , el pico principal medido para r-hGH representa 91% del pico correspondiente en el tiempo cero (es decir, se encuentra 91% de r-hGH sin cambio después de 1 mes de almacenamiento a 25°C) .

Formulación B : Después de 3 semanas de almacenamiento a 40°C; el pico principal medido para r-hGH representa 69% del pico correspondiente en tiempo cero (es decir, se encuentra 69% de · .r-hGH sin cambio después de un almacenamiento de 3 semanas a 40°C) .

REFERENCIAS 1. Altschul S F et al, J Mol Biol, 215, 403-410, 1990 2. Altschul S F et al, Nucleic Acids Res., 25:389-3402 , 1997 3. Ausubel et al, . Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publications and Wiley Interscience (New York, 1987-1998) 4. Becker et al, Biotechnol . Appl . Biochem. 10:326 (1988) 5. Be ly et al, Int. J.' Peptide and Protein Res. 4:281-287 (1972) 6. Chen et al, Genomics 4:479-497 (1989) 7. Devereux J et al, Nucleic Acids Res, 12, 387-395, 1984. 8. Gertler el al, Endocrinology 11 8:720 (1986) 9. Goeddel et al Nature, 281:544 (1979) - so ¬ 10. Graff el al, J. Biol . Chem. 257:2365 (1982) 11. Grant am, Science, Vol . 185, pp. 862-864 (1974). 12. Hsiung et al, Biotechnology 7:267 (1989) 13. Lewis et al, Endocrinology 101:1587 (1977) 14. Lewis et al, J. Biol. Chem. 253:2679 (1978) 15. Lewis et al, Endocrinology 104:1256 (1979) 16. Lewis et al, Biochem. Biophys . Res. Comm. 92:511 (1980) 17. Lewis et al, J. Biol. Chem. 256:11645 (1981) 18. Martial el al, Science 205:602-607 (1979) 19. Meinkoth J, Wahl G. Hybridization of nucleic acids immobilized on solid supports .Anal Biochem. 1984 May 1;138 (2) : 267-84. 20. Pearson W R, Methods in Enzymology, 183, 63-99, 1990 21. Pearson W R and Lipman D J, Proc Nat Acad Sci USA, 85, 2444-2448,1988 22. Pearlman and Nguyen (1989), In D. Marshak and D. Liu (eds) , Therapeutic Peptídes and Proteins, Formulations, Delivery and Targeting, Current Communications in Molecular Biology, Cold-Spring Harbour Laboratory, Cold Spring Harbour, New York, pp 23-30 23. Singh et al, Endocrinology 94:883 (1974) ' 24. Smith et al, Science 260:1640-1643 (1998) 25. Smith and Waterman J Mol Biol, 147,195-197, 1981, Advances in Applied Mathematics, 2, 482-489, 1981 26. Thorlacius-Ussing, Neuroendocrinology 43:233 (1987) 27. WO 93/19776 28. WO 94/101398 29. EP-0131864 30. EP-0211601 31.. WO 97/29767 32. US-5,567,677 Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (28)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Una formulación líquida, caracterizada porque comprende : a) una hormona del crecimiento o una sustancia la cual estimula la liberación o potencia la actividad de hGH endógena; b) una sal de metal alcalino; c) una sal de metal alcalinotérreo o una pseudosal de metal alcalinotérreo; y d) un amortiguador citrato/fosfato .

2. La formulación de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la hormona del crecimiento es hormona del crecimiento humana.

3. La formulación de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la sustancia la cual estimula la liberación o potencia la actividad de hGH endógeno es hormona liberadora de hormona del crecimiento (GHRH) .

4. La formulación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque la sal de metal alcalino se selecciona del grupo que consiste de NaCl, KC1, Na2S04, Na2C03.

5. La formulación de conformidad con la reivindicación 4, caracterizada porque la sal de metal alcalino es NaCl o Na2S04.

6. La formulación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque la sal de metal alcalinotérreo se selecciona del grupo que consiste de CaCl2/ MgCl2/ MgS04, H,C03.

7. La formulación de conformidad con la reivindicación 6, caracterizada porque la sal de metal alcalinotérreo es MgCl2.

8. La formulación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque el amortiguador es un amortiguador de citrato de sodio/fosfato de sodio.

9. La formulación de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada porque el amortiguador está en una concentración que varía de 1 a 100 mM o de 5 a 50 mM o de 10 a 20 mM.

10. La formulación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque comprende además un tensioactivo.

11. La formulación de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada porque el tensioactivo es polietileno-polipropilenglicol .

12. La formulación de conformidad con la reivindicación 11, caracterizada porque el tensioactivo es Pluronic F68.

13. La formulación de conformidad con la reivindicación 10 u 11, caracterizada porque comprende el polietileno-polipropilenglicol en una concentración que varía de 0.5 a 5 mg/ml o 1 a 2 mg/ml o 1.5 mg/ml .

14. La formulación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque comprende además un estabilizante.

15. La formulación de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada porque el estabilizante es sacarosa .

16. La formulación de conformidad con la reivindicación 15, caracterizada porque comprende sacarosa en una concentración que varía de 10 mg/ml a 100 mg/ml o 20 mg/ml a 80 mg/ml o aproximadamente 60 mg/ml.

17. La formulación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque tiene un pH en el intervalo de 5 a 7 o 5.5 a 6.5 o aproximadamente 6.

18. La formulación de conformidad con la reivindicación 17, caracterizada porque el pH está en el intervalo de 5.5-5.8.

19. La formulación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque comprende además un conservador.

20. La formulación de conformidad con la reivindicación 19, caracterizada porque comprende el conservador en una concentración que varía de 1 a 10 mg/ml o 2 a 5 mg/ml o 3 mg/ml .

21. La formulación de conformidad con la reivindicación 19 ó 20, caracterizada porque el conservador es fenol .

22. La formulación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque la formulación tiene un pH de 5.8 y consiste de r-hGH, citrato de sodio/fosfato de sodio, Na2S04, MgCl2, fenol, Pluronic F68, y opcionalmente agua para inyección.

23. La formulación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque la formulación tiene un pH de 5.8 y consiste de r-hGH, citrato de sodio/fosfato de sodio, NaCl, MgCl2, fenol, Pluronic F68 y opcionalmente agua para inyección.

24. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende la formulación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23.

25. Una forma de presentación de la formulación líquida de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23, caracterizada porque está cerrada herméticamente en una condición estéril dentro de un recipiente adecuado para almacenamiento antes de su uso.

26. El uso de una formulación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23 para la preparación de un medicamento por el tratamiento de deficiencia de GH en niños, pérdida de peso y desgaste en pacientes con SIDA, para síndrome de Turner en niñas así como insuficiencia renal crónica en niños .

27. El uso de una formulación de conformidad con la reivindicación 26, en donde el medicamento es para administración de una sola dosis (monodosis) .

28. El uso de una formulación de conformidad con la reivindicación 26, en donde el medicamento es para administración de dosis múltiples (multidosis) .