MXPA06009331A

MXPA06009331A - Composiciones y metodos para mejorar el suministro mucosal de peptidos que se unen al receptor y2 y metodos para tratar y prevenir la obesidad

Info

Publication number: MXPA06009331A
Application number: MXPA/A/2006/009331A
Authority: MX
Inventors: C Quay Steven; Brandt Gordon; J Macevilly Conor; S Kleppe Mary
Original assignee: Nastech Pharmaceutical Company Inc
Priority date: 2004-02-17
Filing date: 2006-08-16
Publication date: 2006-12-13

Abstract

Se describen composiciones farmacéuticas y métodos que comprenden al menos un péptido de enlace al receptor Y2, tal como el péptido YY(PYY), Neuropéptido Y (NPY) o Péptido Pancreático (PP) y uno o más agentes mejoradores del suministro mucosal para mejorar el suministro mucosal nasal del péptido YY, para tratar una variedad de enfermedades y condiciones en sujetos mamíferos, incluyendo la obesidad.

Description

COMPOSICIONES Y MÉTODOS PARA MEJORAR EL SUMINISTRO MUCOSAL DE PÉPTIDOS QUE SE UNEN AL RECEPTOR Y2 Y MÉTODOS PARA TRATAR Y PREVENIR LA OBESIDAD La obesidad y sus trastornos asociados son problemas de salud pública comunes y muy serios en los Estados Unidos y a través del mundo. La obesidad de la parte superior del cuerpo es el factor de riesgo más fuerte conocido para la diabetes mellitus tipo-2 y es un fuerte factor de riesgo para enfermedades cardiovasculares. La obesidad es un factor de riesgo reconocido para la hipertensión, arteriosclerosis, falla cardiaca congestiva, choque, enfermedad de vesícula biliar, ostioartritis, apnea del sueño, trastornos reproductivos tal como síndrome de ovario poliquístico, cánceres de mama, próstata y colón, e incidencias incrementadas de complicaciones de anestesia general. Se reduce la duración de vida y lleva un serio riesgo de las co-morbilidades anteriores, así como trastornos tales como infecciones, venas varicosas, acantosis nigricans, exema, intolerancia al ejercicio, resistencia a la insulina, hipertensión, hipercolesterolemia, colelitiasis, daño ortopédico y enfermedad tromboembólica. La obesidad es también un factor de riesgo para el grupo de condiciones llamadas síndrome de resistencia a la insulina o "Síndrome X'X Se ha mostrado que cuando se administran periféricamente ciertos péptidos que se unen al receptor Y2 en mamíferos inducen pérdida de peso. Los péptidos que se unen al receptor Y2 son neuropéptidos que se unen al receptor Y2. Los neuropéptidos son pequeños péptidos originados de grandes precursores de proteínas sintetizados por neuronas peptidergicas y células endocrina/paracrinas. Frecuentemente los precursores contienen péptidos biológicamente multiactivos . Existe gran diversidad de neuropéptidos en el cerebro causados por la sobreposición alterna de la transcripción genética primaria y procesamiento diferencial del precursor. Los receptores del neuropéptido sirven para discriminar entre ligandos y para activar las señales apropiadas. Estos péptidos que se unen al receptor Y2 pertenecen a la familia de péptidos incluyendo el péptido YY (PYY) , el neuropéptido Y (NPY) y el péptido pancreático (PP) . El NPY es un péptido de 36 aminoácidos y es el neuropéptido más abundante para identificarse en el cerebro de mamíferos. El NPY es un regulador importante en ambos sistemas nerviosos centrol y periférico e influye un diverso rango de parámetros fisiológicos, incluyendo efectos en la actividad psicomotora, ingesta de alimento, secreción endocrina central y vasoactividad en el sistema cardiovascular. En los nervios simpáticos se encuentran altas concentraciones de NPY suministrando la vasculatura coronaria, cerebral y renal y ha contribuido a la - - vasoconstricción. Se han identificado los sitios de unión de NPY en una variedad de tejidos, incluyendo bazo, membranas intestinales, cerebro, músculo liso aórtico, riñon, testículo y placenta. El receptor farmacológico del neuropéptido Y (NPY) se define actualmente por la relación de la actividad estructural dentro de la familia de polipéptidos pancreáticos. Esta familia incluye el NPY, el cual es sintetizada principalmente en neuronas; el PYY, el cual se sintetiza principalmente por células endocrinas en el páncreas. Estos péptidos de aproximadamente 36 aminoácidos tienen una estructura helicoidal compacta que involucra un "pliegue-PP" en la mitad del péptido. Las características específicas incluyen una hélice de poliprolina en los residuos 1 a 8, un giro-ß en residuos 9 a 14, una a-hélice en los residuos 15 a 30, una C-terminal que se proyecta hacia afuera en los residuos 30 a 36 y una amida en la terminal carboxilo, la cual parece ser crítica para la actividad biológica. Los péptidos han sido utilizados para definir al menos cinco subtipos de receptor conocidos como Yl y2 y3 y4 y Y5. El reconocimiento del receptor Yl por NPY involucra las regiones tanto N- como C-terminal del péptido; un intercambio de Gln34 con Pro34 se tolera razonablemente. El reconocimiento del receptor Y2 por NPY depende principalmente hasta de cuatro residuos C-terminal del péptido (Arg33 - Gln34 -Arg35 - - - Tyr36 -NH2) precedidos por un amfipático una a-hélice ; el intercambio de Gln34 con Pro34 no se tolera bien. Una de las características farmacológicas claves que distingue Yl y Y2 es el hecho de que el receptor Y2 (y no el receptor Yl) tiene una alta afinidad por el fragmento de la terminal carboxilo del péptido NPY- (13-36) NPY y el fragmento PYY, PYY (22-36). Se ha mostrado que cuando se administra periféricamente por inyección un péptido de 36 amino ácidos llamado péptido YY(l-36) [PYY(l-36)] [YPIKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY, SEC ID NO.: 1] a un individuo, produce pérdida de peso y así puede utilizarse como una droga para tratar obesidad y enfermedades relacionadas, Morley, J. Neuropsychobiology 21 :22-30 (1989). Posteriormente se encontró que para producir este efecto PYY se une a un receptor Y2 y la unión de un agonista Y2 a un receptor Y2 causa un decremento en la ingestión de carbohidratos, proteínas y cantidad de alimento, Leibowitz, S.F. et al . Peptides, 12 : 1251-1260 (1991). Una molécula alterna de PYY es PYY (3-36) IKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY [SEQ ID NO.: 2], Eberlein, Eysselein et al . Peptides 10: 797-803, 1989). Este fragmento constituye aproximadamente el 40% de la inmunoactividad total similar a PYY con en extractos intestinales humanos y caninos y aproximadamente 36% de la inmunoreactividad total de PYY con en plasma en un estado de ayuno a ligeramente sobre el 50% después de comer. La dipeptidil peptidasa-IV (DPP4) aparentemente es un producto de desdoblamiento de PYY. El PYY3-36 es según los reportes recibidos un ligando selectivo a los receptores Y2 y Y5, el cual parece ser farmacológicamente único en análogos truncados de la N- terminación NPY prefiriendos, (i.e. fragmentos de la C- terminal) . También se ha mostrado que un fragmento de PYY que tiene únicamente residuos 22-36 permanecerá unido al receptor Y2. Sin embargo si alguna de las terminales carbonilo del péptido es desdoblada, el perdido pierde su capacidad para unirse al receptor Y2. En consecuencia un agonista PYY es un péptido, que tiene una secuencia parcial de la longitud total de PYY y puede unirse al receptor Y2 en el núcleo arqueado del hipotalamo. De aquí en adelante el término PYY se refiere a la longitud total de PYY y cualquier fragmento de PYY que se una a un receptor Y2. Se sabe que el PYY y el PYY3-36 pueden ser administrados por infusión intravenosa o por inyección para tratar hipotensión que amenaza la vida como la que se enfrenta en shock, especialmente aquel causado por endotoxinas (Patente de E.U. 4,839,343), para inhibir la proliferación de tumores pancreáticos en mamíferos, mediante la administración por perfusión, parenteral, intravenosa o subcutánea y por implantación (Patente de E.U. 5,574,010) y para tratar la obesidad (Morley, J. Neuropsychobiology 21 :22- - - (1989) y la Solicitud de Patente 20020141985) . También se reivindica gue PYY puede administrarse por las rutas parenteral, oral, nasal, rectal y típica a animales domésticos o humanos en una cantidad efectiva para incrementar la ganancia de peso de dicho sujeto mejorando la absorción gastrointestinal de un nutriente co-transportado dependiente de sodio (Patente de E.U. 5,912,227). Sin embargo, para el tratamiento de la obesidad 'y enfermedades relativas, incluyendo diabetes, la forma de administración debe limitarse a infusión intravenosa IV sin formulaciones optimizadas en efectividad para administración alternativa de PYY3-36. Ninguna de estas técnicas anteriores proporcionan formulaciones que contengan PYY o PYY (3-36) combinadas con excipientes diseñados para mejorar el suministro mucoso (i.e. nasal, bucal, oral) ni enseñan el valor de las formulaciones de péptido que se une al receptor de Y2 libres de endotoxina para administración no infundida. De este modo, es necesario desarrollar formulaciones y métodos para administrar PYY3-36. La generación de formulaciones en aerosol puede mejorar la absorción de formulaciones en superficies mucosas (nasal, bucal, oral, vaginal y rectal) así como en la superficie de la piel. Revisión: O'Riordan TG. Formulations and Nebulizer performance (Desempeño de Formulaciones y Nebulizador). Respir Care 2002 Nov; 47(11): 1305-12; discussion 1312-3.

Sin embargo, las fuerzas físicas asociadas con la formación de gotitas frecuentemente destruye o desnaturaliza las proteínas y péptidos. Por ejemplo, la deoxiribonucleasa humana recombinante (rhDNasa) se desnaturalizó sustancialmente durante el procesamiento como se muestra mediante el contenido de monómeros significativamente reducido. De manera similar, la albúmina se afectó por el procesamiento y únicamente se retuvo del 50-75% del monómero comparado con el 86% del material original. Bustami RT, Chan HK, Dehghani F, Foster NR. Generación de micro-partículas de proteínas por suministro de aerosol usando dioxido de carbón modificado a alta presión. Pharm Res. 2000 Nov; 17 (11) : 1360-6. Se ha investigado • la estabilidad física de una formulación de hormona de crecimiento humana (hGH) hormona peptídica a la sobre exposición a interfases de aire/agua (agitación por mezcla) . Se ha estudiado el efecto de esta tensión sobre la formación de agregados solubles e insolubles. Los agregados fueron caracterizados y cuantificados por HPLC de exclusión de tamaño y espectofotometría UV. El mezclado con agitación de soluciones hGH (0.5 mg/mL) en amortiguador fosfato, pH 7.4, por sólo 1 min, causó la precipitación del 67% de la droga como agregados insolubles. Estos agregados fueron no covalentes por naturaleza Katakam M, Bell LN, Banga AK. J Pharm Sci. 1995 Jun;84 (6) :713-6. SUMARIO DE LA INVENNCIÓN La presente invención llena las necesidades anteriormente mencionadas y satisface objetivos adicionales y ventajasal proporcionar métodos y composiciones novedosos, efectivos para suministro mucoso especialmente nasal de un péptido que se une al receptor Y2 como PYY, péptido Pancreático (PP) y NPY para tratar la obesidad, inducir saciedad en un individuo y promover la pérdida de peso en un individuo y previene o cura la diabetes. En ciertos aspectos de la invención, el péptido que se une al receptor Y2 se suministra en formulaciones a la mucosa intranasal para que pueda incrementar la concentración del péptido que se une al receptor Y2 por al menos 5 pmol, preferentemente por al menos 10 pmol, en el plasma sanguíneo de un mamífero cuando se administra intranasalmente una dosis de la formulación del agonistra del receptor de Y2. Más aún, formulaciones preferidas podrán alcanzar la concentración en plasma del péptido que se une al receptor Y2 de un mamífero mediante lOpmol, preferentemente 20 pmol, cuando se administra intranasalmente el péptido que se une al receptor Y2. Cuando se administran intranasalmente 150 µg la formulación preferida podrá alcanzar en el plasma del mamífero la concentración del agonista del receptor Y2 por al menos 40 pmol por litro de plasma. Cuando se administra intranasalmente 200 µg del péptido que se une al receptor Y2, las formulacines de la presente invención inducen al menos 80 pmol, por litro de plasma de incremento del péptido que se une al receptor Y2. En las modalidades preferidas, las concentraciones elevadas del péptido que se une al receptor Y2 permanecen elevadas en el plasma del mamífero por al menos 30 minutos, preferentemente al menos los siguientes 60 minutos de una única dosis intranasal del péptido que se une al receptor Y2. De manera preferente el péptido que se une al receptor Y2 es un péptido PP, PYY o NPY y el mamífero es un humano. En una modalidad más preferida el péptido que se une al receptor Y2 es un péptido PYY, preferentemente PYY (3-36) y el mamífero es humano. La presente invención también se refiere a la formulación de un péptido que se une al receptor Y2 que puede alcanzar la concentración del péptido que se une al receptor Y2 en plasma sanguíneo de un mamífero de al menos 5 pM cuando se administra a un mamífero una dosis que contenga al menos 50 µg del péptido que se une al receptor Y2. En modalidades preferidas, las concentraciones elevadas del péptido que se une al receptor Y2 permanecen elevadas en el plasma del mamífero por al menos 30 minutos, preferentemente al menos los 60 minutos siguientes a la dosis única intranasal del péptido que se une al receptor Y2.

La presente invención también se refiere a la formulación de un péptido que se une al receptor Y2 que puede alcanzar la concentración del péptido que se une al receptor Y2 en el plasma sanguíneo de un mamífero por al menos 20 pM cuando se administra al mamífero una dosis conteniendo al menos 100 µg del péptido que se une al receptor Y2. En modalidades preferidas, las concentraciones elevadas del péptido que se une al receptor Y2 permanecen elevadas en el plasma de un mamífero por al menos 30 minutos, preferentemente por al menos los siguientes 60 minutos a una dosis única intranasal del péptido que se une al receptor Y2. La presente invención también se refiere a la formulación de un péptido que se une al receptor Y2 administrada intranasalmente a un mamífero que puede alcanzar la concentración del péptido que se une al receptor Y2 en el plasma sanguíneo del mamífero por al menos 30 pM cuando se administra una dosis conteniendo al menos 150 µg del péptido que se une al receptor Y2. En modalidades preferidas, las concentraciones elevadas del péptido que se une al receptor Y2 permanecen elevadas en el plasma del mamífero por al menos 30 minutos, preferentemente por al menos los siguientes 60 minutos a una dosis única intranasal del péptido que se une al receptor Y2. Preferentemente el mamífero es un humano La presente invención también se refiere a la formulación de un péptido que se une al receptor Y2 - - administrada intranasalmente a un mamífero que puede alcanzar la concentración del péptido que se une al receptor Y2 de al menos 60 pM cuando se administra al mamífero una dosis conteniendo al menos 200 µg. En modalidades preferidas, las concentraciones elevadas del péptido que se une al receptor Y2 permanecen elevadas en el plasma del mamífero por al menos 30 minutos, preferentemente por al menos los siguientes 60 minutos a una dosis única intranasal del péptido que se une al receptor Y2. Preferentemente el mamífero es un humano. La presente invención también se dirige a una formulación intranasal de un agonista del receptor Y2 que esta substancialmente libre de proteínas o polipéptidos que estabilizan la formulación. En particular, la formulación preferida esta libre de proteínas como albúmina y proteínas derivadas de colágeno como la gelatina. En otros aspectos de la presente invención la formulación transmucosal del péptido que se une al receptor Y2 comprende un péptido que se une al receptor Y2, agua y un agente solubilizante que tiene un pH de 3-6.5. En una modalidad preferida, el agente solubilizante es un ciclodextrina . En otra modalidad de la presente invención la formulación transmucosal del péptido que se une al receptor Y2 comprende un péptido que se une al receptor Y2, agua, un agente solubilizante, preferentemente una ciclodextrina y al menos un poliol, preferentemente 2 polioles. En modalidades alternas la formulación puede contener una o todo de lo siguiente: un agente quelante, un agente de acción en superficie y un agente amortiguante. En otra modalidad de la presente invención la formulación comprende un péptido que se une al receptor Y2, agua, agente quelante y un agente de solubilización. En otra modalidad de la presente invención la formulación comprende un péptido que se une al receptor Y2, agua y un agente quelante que tiene un pH de 3-6.5. En otra modalidad de la presente invención la formulación comprende un péptido que se une al receptor Y2, agua, agente quelante y al menos un poliol, preferentemente dos polioles. Modalidades adicionales pueden incluir uno o mas de lo siguiente: un agente de acción en superficie, un agente solubilizante y un agente amortiguante. En otra modalidad de la presente invención la formulación comprende un péptido que se une al receptor Y2, agua y al menos dos polioles, tal como lactosa y sorbitol. Agentes adicionales que pueden ser adicionados a la formulación incluyen, sin limitarse, un agente de solubilización, un agente quelante, uno o mas agentes amortiguantes y un agente de acción en superficie. La mejora del suministro intranasal de un agonista del péptido que se une al receptor Y2 de acuerdo con los métodos y composiciones de la invención toma en cuenta el uso farmacéutico efectivo de esos agentes para tratar una variedad de enfermedades y condiciones en sujetos mamíferos. La presente invención llena esta necesidad provista por un líquido o formulación deshidratada del péptido que se une al receptor Y2 en donde la formulación esta substancialmente libre de un estabilizador que es un polipéptido o una proteína. La formulación líquida PYY comprende agua, PYY y al menos uno de los siguientes aditivos seleccionados de un grupo consistente de polioles, agentes de acción en superficie, agentes solubilizantes y agentes quelantes. El pH de la formulación esta preferentemente de 3 a aproximadamente 7.0, preferentemente de 4.5 a aproximadamente 6.0, más preferentemente cerca de 5.0±.03. Otra modalidad de la presente invención es una formulación acuosa de unión al receptor Y2 de la presente invención que comprende agua, un péptido que se une al receptor Y2, un poliol y un agente de acción en superficie en donde la formulación tiene un pH de aproximadamente 3.0 a aproximadamente 6.5 y la formulación esta substancialmente libre de un estabilizador gue es una proteína o un polipéptido. Otra modalidad de la presente invención es una formulación acuosa de unión al receptor Y2 que comprende agua, un péptido de unión al receptor Y2, un poliol y un agente solubilizante en donde la formulación tiene un pH de aproximadamente 3.0 a aproximadamente 6.5 y la formulación esta subtancialmente libre de un estabilizador que es una proteína o polipéptido. Otra modalidad de la presente invención es una formulación acuosa de péptido que se une al receptor Y2 que comprende agua, péptido que se une al receptor Y2, un agente solubilizante y un agente de acción en superficie en donde la formulación tiene un pH de aproximadamente 3.0 a aproximadamente 6.5 y la formulación esta substancialmente libre de un estabilizador que es una proteína o polipéptido. Otra modalidad de la invención es una formulación acuosa de péptido que se une al receptor Y2 que comprende agua, péptido que se une al receptor Y2, un agente solubilizante, un poliol y un agente de acción en superficie en donde la formulación tiene un pH de aproximadamente 3.0 a aproximadamente 6.5 y la formulación esta substancialmente libre de un estabilizador que es una proteína o polipéptido. En otro aspecto de la presente invención, la formulación acuosa estable se deshidrata para producir una formulación deshidratada del péptido que se une al receptor Y2 que comprende péptido que se une al receptor Y2 y al menos uno de los siguientes aditivos seleccionados de un grupo consistente de polioles, agentes de acción en superficie, agentes solubilizantes y agentes quelantes, en donde dicha formulación deshidratada del péptido que se une al receptor Y2 esta substancialmente libre de un estabilizador que es una proteína o polipéptido tal como albúmina, colágeno o proteína derivada de colágeno tal como gelatina. La deshidratación puede ser llevada a cabo por varios medios tal como liofilización, deshidratación por aspersión, precipitación inducida de sal y deshidratación, secado al vacío, evaporación rotativa o precipitación supercritica de C02. En una modalidad, el péptido que se une al receptor Y2 deshidratado comprende un péptido que se une al receptor Y2, un poliol y un agente solubilizante, en donde la formulación esta substancialmente libre de un estabilizador que es una proteína. En otra modalidad, la formulación deshidratada del péptido que se une al receptor Y2 comprende un péptido que se une al receptor Y2, un poliol y un agente de acción en superficie en donde la formulación del péptido que se une al receptor Y2 esta substancialmente libre de un estabilizador que es una proteína o polipéptido. En otra modalidad, la formulación deshidratada del péptido que se une al receptor Y2 comprende un péptido que se une al receptor Y2, un agente de acción en superficie y un agente solubilizante en donde la formulación del péptido que se une al receptor Y2 esta substancialmente libre de un estabilizador que es una proteína o polipéptido.

En otra modalidad de la presente invención, la formulación deshidratada del péptido que se une al receptor Y2 comprende un péptido que se une al receptor Y2, un poliol, un agente de acción en superficie y un agente solubilizante en donde la formulación del péptido que se une al receptor Y2 esta substancialmente libre de un estabilizador que es una proteína o polipéptido. Cualquier agente solubilizante puede ser usado pero se prefiere uno seleccionado del grupo consistente de hidroxipropil-ß-ciclodextran, sulfobutileter-ß-ciclodextran, metil-ß-ciclodextrina y quitosan. Generalmente un poliol se selecciona del grupo consistente de lactosa, sorbitol, trehalosa, sucrosa, mañosa y maltosa y derivados y homólogos de los mismos. Un agente de acción en superficie satisfactorio se selecciona de un grupo consistente de L-a-fosfatidilcolina didecanoil (DDPC) , polisorbato 20 (Tween 20) , polisorbato 80 (Tween 80) , polietilen glicol (PEG) , cetil alcohol, polivinilpirrolidona (PVP) , polivinil alcohol (PVA) , lanolina alcohol y sorbitan monooleato. En una formulación preferida, la formulación del péptido que se une al receptor Y2 comprende un agente quelante tal como ácido etilen diamina tetraacético (EDTA) o ácido etilen glicol tetraacético (EGTA) . También puede adicionarse a la formulación un conservador tal como - clorobutanol o cloruro de benzalconio para inhibir el crecimiento microbiano. El pH se regula generalmente usando un amortiguador tal como citrato sódico y ácido cítrico y acetato de sodio y ácido acético. Un amortiguador alterno puede ser el ácido acético y el acetato de sodio o ácido succínico e hidróxido de sodio. El péptido preferido que se une al receptor Y2 es un péptido PYY, PP o NPY, preferentemente un péptdo PYY (3-36) . La presente invención también comprende una formulación en donde la concentración del péptido que se une al receptor Y2 es 0.1 - 15.0 mg/ml, preferentemente 1.0 - 2 mg/ml y el pH de la solución acuosa es 3.0 - 6.5 y preferentemente de aproximadamente 5.0 ± 0.3. La presente invención además incluye la formulación de péptido que se une al receptor Y2 en donde la concentración del poliol esta entre aproximadamente 0.1% y 10% (p/v) y adicionalmente en donde la concentración del poliol esta en el rango de aproximadamente 0.1% a aproximadamente 3% (p/v) . La presente invención también incluye una formulación en donde la concentración del agente de acción en superficie esta entre aproximadamente 0.00001% y aproximadamente 5% (p/v) y en donde la concentración del - - agente de acción en superficie esta entre aproximadamente 0.0002% y aproximadamente 0.1% (p/v). La presente invención también incluye una formulación, en donde la concentración del agente de solubilización es de 1% - 10% (p/v) y en donde la concentración del agente de solubilización es de 2% a 5% (p/v) . La solución final puede ser filtrada y secada por congelación, liofilizada, usando métodos bien conocidos por expertos en la materia y siguiendo las instrucciones del fabricante de equipo de liofilización. Esto produce una formulación deshidratada del péptido que se une al receptor Y2 substancialmente libre de un estabilizador que es una proteína. En otra modalidad de la presente invención, la formulación del péptido que se une al receptor Y2 comprende, un péptido que se une al receptor Y2 y un vehículo farmacéuticamente aceptable en donde la formulación del péptido que se une al receptor Y2 tiene al menos 1%, preferentemente 3% y más preferentemente al menos 6% mayor permeabilidad en tejido in Vitro en un ensayo de permeabilidad en comparación con la formulación control consistente de agua, cloruro de sodio, un amortiguador y el péptido que se une al receptor Y2, como se determinó por el ensayo de resistencia eléctrica transepitelial mostrado en - los Ejemplos 2 y 7. En una modalidad preferida, la formulación que se une al receptor Y2 además comprende al menos un excipiente seleccionado de un grupo consistente de un agente activo de superficie, un agente de solubilización, un poliol y un agente quelante. Preferentemente el péptido que se une al receptor Y2 es un péptido PYY, un péptido NPY o un péptido PP. En otra modalidad de la presente invención la formulación de un péptido que e une al receptor Y2 provee la capacidad de alcanzar la concentración en plasma de un mamífero del péptido que se une al receptor Y2 por al menos 5 preferentemente 10, 20, 40, 60, 80 o más pmoles por litro de plasma cuando se administra intranasalmente 100 µl de la formulación a dicho mamífero. En modalidades ejemplificativas, los métodos y composiciones de suministro mejorado de la presente invención proven efectivo suministro mucoso terapéutico del agonista del péptido que se une al receptor Y2 para la prevención o tratamiento de obesidad y transtornos alimenticios en sujetos mamíferos. En un aspecto de la invención se prove formulaciones farmacéuticas adecuadas para la administración intranasal que comprenden una cantidad terapéuticamente efectiva del péptido que se une al receptor Y2 y como se ha descrito aquí, uno o más agentes que mejoran el suministro intranasal, cuyas formulaciones son efectivas por el método de la invención de suministro por mucosa nasal para prevenir el principio o progreso de la obesidad o transtornos alimenticios en sujetos mamíferos. El suministro en la mucosa nasal de una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista del péptido que se une al receptor Y2 y uno o más agentes que mejoran el suministro intranasal producen niveles terapéuticos elevados del agonista del péptido que se une al receptor Y2 en el sujeto e inhibe la ingesta de alimento en el sujeto mamífero, reduciendo síntomas de obesidad o un desorden alimenticio. Los métodos y composiciones de suministro mejorados de la presente invención proporcionan un suministrro mucosal terapéuticamente efectivo de un péptido de enlace al receptor Y2 para la prevención y tratamiento de una variedad de enferedades y condiciones en suejtos mamíferos. El péptido de enlace al receptor Y2 puede administrse a través de una variedad de rutas mucosales, por ejemplo al poner en contacto el péptido de enlace al receptor Y2 con un epiteio mucosal nasal, un epitelio mucosal bronquial opulmonar, la superficie bucal oral o la superficeie mucosal oral y del intestino delgado. En modalidades ejemplares, los métodos y composiciones se dirigen o formulan para el suministro intranasal (e.g., suministro mucosal nasal o suministro mucosal intranasal) .

En un aspecto de la invención, las formulaciones farmacéuticas adecuadas para la administración intranasal se proporcionan que comprendan una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista del péptido de enlace al receptor Y2 y uno o más agentes que mejoran el el suministro intranasal como se describe en la presente, cuyas formulaciones son efectivas en un método de la invención de suministro mucosal nasal para prevenir el inicio o progresión de la obesidad, diabetes, cáncer, o malnutrición o agotamiento relacionado con el cáncer en un sujeto mamífero, opara aliviar uno o más síntomas clínicamente muy reconocidos de obesidad, así como tratar la enfermedad de Alzheimer, carcinoma de colon, adenocarcinoma de colon, carcinoma pancriático, adenocarcinoma pancriático, carcinoma de mama. En otro aspecto de la invención, las formulaciones farmacéuticas y los métodos se dirigen a la administración de un agonista del péptido de enlace al receptor Y2 en combinación con succinato de vitamina E. Un agonista del péptido de enlace al receptor Y2 en combinación con succinato de vitamina E puede administrarse para aliviar los síntomas o evitar el inicio o disminuir la incidencia o severidad del cáncer, por ejemplo, adenocarcinoma de colon, adenocarcinoma pancreático, o cáncer de mama. En otro aspecto de esta invención, sorprendentemente se encontró que el uso de péptidos de unión al receptor Y2 libres de endotoxinas, por ejemplo PYY (3-36), produce el suministro mucosal incrementado en comparación un péptidos en los cuales no se retira la endotoxina. El uso de péptidos del receptor Y2 libres de endotoxinas en formulaciones farmacéuticas se permite así para la administración mediante rutas no de infusión, incluyendo suministro mucosal, nasal, oral, pulmonar, vaginal, rectal y lo similar. Las anteriores formulaciones y preparaciones y métodos de suministro de la invención del péptido de unión al receptor Y2 mucosal proporcionan el suministro mucosal mejorado de un péptido de enlace al receptor Y2 a sujetos mamíferos. Estas composiciones y métodos pueden involucrar la formulación combinatorial o la administración coordinada de uno o más péptidos de enlace al receptor Y2 con uno o más agentes mejoradores del suministro mucosal. Entre los agentes mejoradores del suministro mucosal a seleccionarse para lograr estas formulaciones y métodos se encuentran (A) agentes de solubilización; (B) agentes que modifican la carga; (C) agentes de control del pH; (D) inhibidores de enzimas degrantes; (E) agentes mucolíticos o limpiadores de moco; (F) agentes ciliostáticos; (G) agentes mejoradores de la penetrtación de membrana (e.g., (i) un surfactantee, (ii) una sal biliar, (iii) un aditivo de fosfolípido o de ácido graso, micelas mezclada, liposoma, o vehículo, (iv) un alcohol, (v) una enamina, (iv) un compuesto NO donador, (vii) - - una molécula antipática de cadena larga (viii) un pequeño mejorador de la penetración hidrofóbica; (ix) sodio o un derivado de ácido salicílico; (x) un glicerol éster de ácido acetoacético (xi) una ciclodextrina o deribado de beta- ciclodextrina, (xii) un ácido graso de cadena media, (xiii) un agente de quelación, (xiv) un aminoácido o sal del mismo, (xv) un ácido N-acetilamino o sal del mismo, (xvi) una enzima degradativa para un componente de membrana seleccionado, (xvii) un inhibidor de la síntesis de ácido graso, (xviii) un inhibidor de la síntesis de colesterol; o (xiv) cualquier membrana de (i) - (xviii) ) ; (H) agentes moduladores de la fisiología de unión epitelial, tal como estimuladores de óxido nítrico (NO) , quitosan, y derivados de quitosan; (I) agentes vasodilatadores; (J) agentes mejoradores del transporte selectivo; y (K) vehículos de suministro estabilizantes, portadores, soportes o especies que forman complejos con los cuales el péptido de enlace al receptor (s) Y2 de manera efectiva se combina (n), asocia (n), contiene (n), encapsula (n) o une (n) para estabilizar al agente activo para suministro mucosal mejorado. En varias modalidades de la invención, el péptido de enlace al receptor Y2 se combina con uno, dos, tres, cuatro o más de los agentes mejoradores del suministro mucosales citados en (A)-(K), anterior. Estose agentes mejoradores del suministro mucosal pueden mezclarse, solos o juntos, con el péptido de enlace al receptor Y2, o de otra forma combinarse con el mismo en una formulación farmacéuticamente aceptable o vehículo de suministro. La formulación de un péptido de enlace al receptor Y2 con uno o más de los agentes mejoradores del suministro mucosal de acuerdo con las enseñanzas en la presente (incluyendo opcionalmente cualquier combinación de dos o más agentes mejoradores del suministro mucosal seleccinados de (A) - (K) anterior) proporciona biodisponibilidad incrementada del péptido de enlace al receptor Y2 después del suministro del mismo a una superficie mucosal de un sujeto mamífero. Así, la presente invención es un método para suprimir el apetito, que promueve la pérdida de peso, disminuye la absorción de alimento, o trata la obesidad y/o diabetes en un mamífero que comprende administrar transmucosalmente una formulación comprendida de un péptido de enlace al receptor Y2, de tal manera que cuando 50 µg del receptor Y2 se administra transmucosalmente al mamífero la concentración del péptido de enlace al receptor Y2 en el plasma del mamífero se incrementa por al menos 5 pmol, preferentemente al menos 10 pmol por litro de plasma. Ejemplos de tales formulaciones se describen en lo anterior.

La presente invención proporciona además el uso de un péptido de enlace al receptor Y2 para la producción de un medicamento para la administración transmucosal, . de un péptido de enlace al receptor Y2 para suprimir el apetito, promover la pérdida de peso, disminuir la absorción de alimento, o tratar la obesidad en un mamífero de tal manera que cuando aproximadamente 50 µg del receptor Y2 se administra transmucosalmente al mamífero la concentración del péptido de enlace al receptor Y2 en el plasma del mamífero se incrementa por al menos 5 pmol por litro de plasma. Cuando 100 µg del péptido de enlace al receptor Y2 se administra intranasalmente al mamífero, la concentración del agonista del receptor Y2 se incrementa por al menos 20 pmol por litro de plasma en el mamífero. Cuando 150 µg se administra intranasalmente, la concentración del péptido de enlace al receptor Y2 en plasma en sangre del mamífero se incrementa por al menos 30 pM. Cuando 200 µg se administra intranasalmente, la concentración del péptido de enlace al receptor Y2 en plasma en sangre del mamífero se incrementa por al menos 60 pM. En modalidades preferidas, las elevadas concentraciones del péptido de enlace al receptor Y2 permanece elevada en el plasma del mamífero durante al menos 30 minutos, preferentemente al menos 60 minutos después de una sola dosis intranasal del péptido de enlace al receptor Y2. Preferentemente el mamífero es un humano. Una dosis mucosalmente efectiva del péptido YY dentro de las formulaciones farmacéuticas de la presente - invención comprende, por ejemplo, entre aproximadamente 0.001 pmol hasta aproximadamente 100 pmol por kg de peso corporal, entre aproximadamente 0.01 pmol hasta aproximadamente 10 pmol por kg de peso corporal, o entre aproximadamente 0.1 pmol hasta aproximadamente 5 pmol por kg de peso corporal. En modalidades ejemplares adicionales, la dosis de péptido YY es entre aproximadamente 0.5 pmol hasta aproximadamente 1.0 pmol por kg de peso corporal. En una modalidad preferida una dosis intranasal variará desde 50 µg hasta 400 µg, preferentemente 100 µg hasta 200 µg, más preferentemente apoximadamente 100 µg hasta 150 µg. Las formulaciones farmacéuticas de la presente invención puede administrarse una o más veces por día (por ejemplo, antes de un alimento) , o 3 veces por semana o una vez por semana durante entre una semana y al menos 96 semanas o aún durante la vida del paciente o sujeto individual. En ciertas modalidades, las formulaciones farmacéuticas de la invención se -administran una o más veces al día, dos veces al día, cuatro veces al día, seis veces al día, u ocho veces al día. Los agentes que mejoran el el suministro intranasal se emplean para que mejoren el suministro del péptido YY en o a través de una superficie mucosal nasal. Para absorber pasivamente drogas, la contribución relativa de trayectorias paracelulares y transcelulares para transporte de droga depende de el pKa, coeficiente de división, radio molecular y - - carga de la droga, el pH del ambiente luminal en el cual se suministra la droga, y el área de la superficie de absoción. El agente que mejora el el suministro intranasal de la presente invención puede ser un agente de control del pH. El pH de la formulación farmacéutica de la presente invención es un factor que afecta la absorción del péptido YY a través de trayectorias paracelulares y transcelulares para transporte de droga. En una modalidad, la formulación farmacéutica de la presente invención se ajusta del pH a entre aproximadamente pH 3.0 hasta 6.5. En una modalidad adicional, la formulación farmacéutica de la presente invención se ajusta del pH a entre aproximadamente pH 3.0 a 5.0. En una modalidad adicional, la formulación farmacéutica de la presente invención se ajusta del pH a entre aproximadamente pH 4.0 a 5.0. Generalmente, el pH es 5.0+0.3. La presente invención también describe la sorprendente capacidad para aerolizar exitosamente el compuesto de enlace al receptor Y2, PYY(3-36), a partir de una formulación acuosa.

Breve Descripción de los Dibujos La Figura 1 muestra la estabilidad de PYY3-36 a alta temperatura (40° C) a varios pHs desde 3.0 hasta 7.4. La Figura 2 muestra los datos para TEER de los - mejoradores de la permeabilidad. La Figura 3 muestra las viabilidades celulares de formulaciones PYY candidato. La Figura 4 muestra los efectos citotóxicos de formulaciones candidato. En las figuras 2-4 ENl = PBS pH 5.0 EN2 = L-Arginina (10% w/v) EN3 = Poli-L-Arginina (0.5% w/v) EN4 = Gama-Ciclodextrina (1% w/v) EN5 = Alfa-Ciclodextrina (5% w/v) EN6 = Metil-Beta-Ciclodextrina (3% w/v) EN7 = n-Ácido Cáprico Sódico (0.075% w/v) EN8 = Quitosan (0.5% w/v) EN9 = L-Alfa-fosfatidilcolina didecanilo (3.5% w/v) EN10 = S-Nitroso-N-acetilpenicilamina, (0.02% w/v) EN11 = Pal otoil-DL-Carnitina (0.5% w/v) EN12 = Pluronico-127 (0.3% w/v) EN13 = Nitroprusida de Sodio (0.3% w/v) EN14 = Glicocolato de Sodio (1% w/v) La Figura 5 muestra las contribuciones sinergisticas de los diversos componentes sobre la permeación de la droga. En figure 5 ENl es DDPC, EN2 es metil-ß-ciclodextrina, y EXl es EDTA.

- La Figura 6 muestra el PYY3-36 en el plasma de ratas, el cuadro representa una dosis de 4.1 µg/kg, el triángulo representa una dosis de 41 µg/kg, y el círculo representa una dosis de 205 µg/kg. La Figura 7 muestra la linealidad de la dosis después de administración intranasal de PYY3-36 en ratas como Cmax-Cbas pg/mL v. dosis como µg/kg. La Figura 8 muestra la linealidad de la dosis después de la administración intranasal de PYY3-36 en ratas como AUC v. dosis como µg/kg. La Figura 9 muestra la concentración de plasma promedio de PYY v. tiempo en minutos en tres humanos voluntarios a quienes se les administró a cada uno 20 µg de PYY (3-36) de manera intranasal. La Figura 10 muestra la concentración de plasma promedio de PYY v. tiempo en minutos en tres humanos voluntarios a quienes se les administró a cada uno 50 µg de PYY (3-36) de manera intranasal. La Figura 11 muestra la concentración de plasma promedio de PYY v. tiempo en minutos en tres humanos voluntarios a quienes se les administró a cada uno 100 µg de PYY (3-36) de manera intranasal. La Figura 12 muestra la concentración de plasma promedio de PYY v. tiempo en minutos en tres humanos voluntarios a quienes se les administró a cada uno 150 µg de PYY3-36 de manera intranasal. La Figura 13 muestra la concentración de plasma promedio de PYY v. tiempo en minutos en tres humanos voluntarios a quienes se les administró a cada uno 200 µg de PYY (3-36) de manera intranasal. La Figura 14 muestra La concentration en plasma de PYY como pmol/L v. tiempo para cinco grupos de voluntarios humanos saludables quienes recibieron PYY (3-36) intranasal.

Las dosis fueron 200 µg, 150 µg, 100 µg, 50 µg y 20 µg de PYY3-36. La Figura 15 muestra la linealidad de la dosis Cmax de PYY en pg/mL vs . dosis de PYY (3-36) administrada a voluntarios humanos. La Figura 16 muestra la linealidad de la dosis de PYY media AUC en pg/mL vs . dosis de PYY (3-36) administrada a voluntarios humanos. La Figura 17 muestra la escala análoga visual (VAS) vs . dosis de PYY (3-36) administrada a los voluntraios humanos. La cuestión fue: "Que tan hambriento esta usted?" Entre más baja la puntuación, menos hambriento estuvo el individuo en una escala de 100 puntos. La Figura 18 muestra la escala análoga visual (VAS) vs. dosis de PYY (3-36) administrada a los voluntraios humanos. La cuestión fue: "Cuanto pudiera usted comer?" Entre menor la puntuación, menor fue el hambre de un - individuo en una escala de 100 puntos. La Figura 19 muestra la escala análoga visual (VAS) vs. dosis de PYY (3-36) administrada a los voluntraios humanos. La cuestión fue: "Que tan satisfecho se siente usted?" Entre menor la puntuación, menor la satisfacción de un individuo en una escala de 100 puntos. La Figura 20 muestra el porcentaje de permeación de PYY (3-36) conteniendo endotoxina vs . PYY (3-36) libre de endotoxina) . La Figura 21A muestra una bomba/impulsor de asperción nasal gue no se encuentra embragada. La Figura 21B muestra la bomba/impulsor de asperción nasal gue se encuentra embragada y que expele un penacho de rocío. La Figura 22 muestra un ejemplo de un patrón de rocío de a rocío nasal PYY de la presente invención.

Descripción Detallada de la Invención Como se anotó arriba, la presente invención proporciona métodos y composiciones mejorados para el suministro mucosal del péptido de enlace al receptor Y2 a sujetos mamíferos para tratamiento o prevención de una variedad de enfermedades y condiciones. Ejemplos de sujetos mamíferos apropiados para el tratamiento y profilaxis de acuerdo con los métodos de la invención incluyen, pero no se - - restringen a, primates humanos y no humanos, especies de ganado, tal como caballos, ganado vacuno, obejas, y cabras, y especies de investigación y domésticas, incluyendo perros, gatos, ratones, ratas, cobayos, y conejos. A fin de proporcionar un mejor entendimiento de la presente invención, se proporcionan las siguientes definiciones : PÉPTIDOS DE ENLACE AL RECEPTOR Y2 Los péptidos de enlace al receptor Y2 utilizados en las formulaciones mucosales de la presente invención incluyen la familia de popipéptidos pancriáticos . " como se utiliza en la presente, se encuentra comprendida de tres familias de péptidos bioactivos que se presentan de manera natural, PP, NPY, y PYY. Ejemplos de los péptidos de enlace al receptor Y2 y sus usos se describen en Patente de E.U. No. 5,026,685; Patente de E.U. No. 5,574,010; Patente de E.U. No. 5,604,203; Patente de E.U. No. 5,696,093; Patente de E.U. No. 6,046,167; Gehlert et.al., Proc Soc Exp Biol Med 218:7-22 (1998); Sheikh et al. Am J Physiol, 261:701-15(1991); Fournier et al., Mol Pharmacol 45:93-101 (1994); Kirby et al . , J Med Chem 38:4579-4586 (1995); Rist et al., Eur J Biochem 247: 1019-1028 (1997); Kirby et al., J Med Chem 36:3802-3808 (1993); Grundemar et al., Regulatory Péptidos 62: 131-136 (1996); Patente de E.U. No. 5,696,093 (ejemplos de agonistas de PYY), Patente de E.U. No. 6,046,167. De acuerdo con la presente invención el péptido de enlace al receptor Y2 incluye las bases libres, sales de adición de ácido o sales de metal, tal como potasio o sales de sodio o los péptidos, los péptidos de enlace al receptor Y2 que han sido modificados por tales procesos como amidación, glicosilación, acilación, sulfatación, fosforilación, acetilación y ciclización, (Patente de E.U. No. 6,093,692; y Patente de E.U. No. 6,225,445 y pegilación. AGONISTAS DEL PÉPTIDO Como se utiliza en la presente, "PYY" se refiere a PYY (1-36) en secuencia nativa o en forma variante, así como derivados, fragmentos, y análogos de PYY de cualquier fuente, ya sea natural, sintética o recombinante. El PYY debe estar comprendido al menos de los últimos 15 residuos de aminoácido o análogos del mismo de la secuencia PYY, PYY (22- 36) (SEQ ID NO: 3). Otros péptidos PYY, que pueden utilizarse son PYY(1-36) (SEQ ID NO: 1) PYY(3-36) SEQ ID NO: 2) PYY(4-36 ) (SEQ ID NO:4) PYY(5-36) (SEQ ID NO: 5), PYY(6-36) (SEQ ID NO: 6), PYY(7-36) (SEQ ID NO:7) PYY(8-36) (SEQ ID NO: 8), PYY9-36 (SEQ ID NO: 9) PYY(10-36) (SEQ ID NO: 10), PYY (11-36) (SEQ ID NO: 11), PYY(12-36) (SEQ ID NO: 12), PYY(13-36) (SEQ ID NO:13), PYY(14-36) (SEQ ID NO: 14), PYY(15-36) (SEQ ID NO: 15), PYY(16-36) (SEQ ID NO: 16), PYY(17-36) (SEQ ID NO: 17), PYY(18-36) (SEQ ID NO: 18), PYY(19-36) (SEQ ID NO: 19), PYY(20-36) (SEQ ID NO: 20) y PYY(21-36) (SEQ ID NO: 21).

- Estos péptidos típicamente se enlazan a los receptores Y en el cerebro y en otra parte, especialmente el Y2 y/o los receptores Y5. Típicamente estos péptidos se sintetizan en formas libres de endotoxina o libres de pirógeno aunque esto no siempre es necesario. Otros péptidos PYY incluyen los péptidos PYY en los cuales se han hecho cambios del residuo de aminoácido conservador, por ejemplo, mutación de sitio específico de un péptido PYY incluyendo [Aspl5] PYY(15-36) (SEQ ID NO: 90), [Thrl3] PYY (13-36) (SEQ ID NO: 91), [Vall2] PYY (12-36) (SEQ ID NO: 92), [Glull] PYY(ll-36) (SEQ ID NO: 93), [AsplO] PYY(10-36) (SEQ ID NO: 94), [Val7] PYY(7-36) (SEQ ID NO: 95), [Asp6] PYY(6-36) (SEQ ID NO: 96), [Gln4] PYY(4-36) (SEQ ID NO: 97), [Arg4] PYY(4-36) (SEQ ID NO: 98), [Asn4] PYY(4-36) (SEQ ID NO: 99), [Val3] PYY(3-36) (SEQ ID NO: 100) y [Leu3] PYY(3-36) (SEQ ID NO: 101) . Otros péptidos PYY incluyen los péptidos en los cuales se han hecho al menos dos cambios de residuos de aminoácido conservadores incluyendo [AsplO, Aspl5] PYY (10-36) (SEQ ID NO: 102), [Asp6, Thrl3] PYY(6-36) (SEQ ID NO: 103), [Asn4, Aspl5] PYY(4-36) (SEQ ID NO: 104) y [Leu3, AsplO] PYY (3-36) (SEQ ID NO: 105. También incluidos se encuentran los análogos de un PYY por ejemplo los descritos en las Patentes de E.U. 5, 604,203 y 5,574,010; Balasubramaniam, et al., Péptido Research 1: 32 (1988); Solicitud de Patente Japonesa 2,225,497 (1990); - Balasubramaniam, et al., Péptidos 14: 1011, 1993; Grandt, et at., Reg. Péptidos 51: 151, (1994 );' Solicitud Internacional del PCT 94/03380, Patentes de E.U. 5, 604,203 y 5,574,010. Estos péptidos típicamente se enlazan a los receptores Y en el cerebro y en otra parte, especialmente el Y2 y/o los receptores Y5. Típicamente estos péptidos se sintetizan en formas libres de endotoxina o libres de pirógeno aunque esto no siempre es necesario. Los agonistas de PYY incluyen PYY de rata (SEQ ID NO: 72) y las formas truncadas de la terminal amino que corresponden al humano, el PYY de cerdo (SEQ ID NO: 73) y las formas truncadas de la terminal amino que corresponden al humano y el PYY de cobayo (SEQ ID NO: 74) y las formas truncadas de la terminal amino que corresponden al humano. De acuerdo con la presente invención un péptido PYY también incluye las bases libres, sales de adición de ácido o sales de metal, tal como potasio o sales de sodio de los péptidos, y péptidos PYY que han sido por tales procesos como amidación, glicosilación modificados, acilación, sulfatación, fosforilación, acetilación, ciclización y otros métodos de modificación covalente muy conocidos. Estos péptidos típicamente se enlazan a los receptores Y en el cerebro y en otra parte, especialmente el Y2 y/o los receptores Y5. Típicamente estos péptidos se sintetizan en formas libres de endotoxina o libres de pirógeno aunque esto no siempre es - necesario. AGONISTAS DEL NEUROPÉPTIDO Y NPY es otro péptido de enlace al reeptor Y2. Los péptidos NPY incluyen NPY (1-36) de longitud total (SEQ ID NO: 22) así como fragmentos de NPY(l-36), que se han truncado en la terminal amino. Para ser efectivo en el enlace al receptor Y2, el agonista de NPY debe tener al menos los últimos 11 residuos de aminoácido en la terminal carboxilo, i.e., estar comprendido de NPY(26-36) (SEQ ID NO: 23). Otros ejemplos de agonistas de NPY que se enlazan al receptor Y2 son NPY(3-36) (SEQ ID NO: 24), NPY(4-36) (SEQ ID NO: 25), NPY(5-36) (SEQ ID NO: 26), NPY(6-36) (SEQ ID NO: 27), NPY(7-36) (SEQ ID NO: 28), NPY(8-36) (SEQ ID NO: 29), NPY(9-36) (SEQ ID NO: 30), NPY(10-36) (SEQ ID NO: 31), NPY(ll-36) (SEQ ID NO: 32), NPY(12-36) (SEQ ID NO: 33), NPY(13-36) (SEQ ID NO: 34), NPY(14-36) (SEQ ID NO: 35), NPY(15-36) (SEQ ID NO: 36), NPY(16-36) (SEQ ID NO: 37), NPY(17-36) (SEQ ID NO: 38), NPY (18-36) (SEQ ID NO 39), NPY(19-36) (SEQ ID NO: 40), NPY(20-36) (SEQ ID NO 41), NPY(21-36) (SEQ ID NO: 42), NPY (22-36) (SEQ ID NO 43), NPY(23-36) (SEQ ID NO: 44), NPY(24-36) (SEQ ID NO: 45) y NPY(25-36) (SEQ ID NO: 46). Otros agonistas de NPY incluyen NPY de rata (SEQ ID NO: 75) y las formas truncadas de la terminal amino de NPY (3-36) hasta NPY (26-36) como en la forma humana, NPY de conejo (SEQ ID NO: 76) y las formas truncadas de la terminal amino - - de NPY (3-36) hasta NPY (26-36) como en la forma humana, NPY de perro (SEQ ID NO: 77) y las formas truncadas de la terminal amino NPY (3-36) hasta NPY (26-36) como en la forma humana, NPY de cerdo (SEQ ID NO: 78) y las formas truncadas de la terminal amino de NPY (3-36) hasta NPY (26-36) como en la forma humana, NPY de vaca (SEQ ID NO: 79) y las formas truncadas de la terminal amino de NPY (3-36) hasta NPY26-36 como en la forma humana, NPY de oveja (SEQ ID NO: 80) y las formas truncadas de la terminal amino de NPY (3-36) hasta NPY (26-36) como en la forma humana y cobayo (SEQ 81) y las formas truncadas de la terminal amino de NPY (3-36) hasta NPY (26-36) como en la forma humana. De acuerdo con la presente invención un péptido NPY también incluye las bases libres, sales de adición de ácido o sales de metal, tal como potasio o sales de sodio de los péptidos, y los péptidos NPY que han sido modificados por tales procesos como amidación, glicosilación, acilación, sulfatación, fosforilación, acetilación, ciclización y otros métodos de modificación covalente conocidos. Estos péptidos típicamente se enlazan a los receptores Y en el cerebro y en otra parte, especialmente el Y2 y/o los receptores Y5. Típicamente estos péptidos se sintetizan en formas libres de endotoxina o libres de pirógeno aunque esto no siempre es necesario. Péptido Pancriático - - El péptido pancriático (PP) y agonista de PP también se enlazan al receptor Y2. Ejemplos del agonistas de PP son los PP(l-36) de longitud total (SEQ ID NO: 47) y una variedad de fragmentos de PP, que se truncan en la terminal amino. Para enlazar al receptor Y2 el agonista de PP debe tener los últimos 11 residuos de aminoácido en la terminal carboxilo, PP (26-36), (SEQ ID NO: 48). Ejemplos del otro PP, que se enlaza al receptor Y2, son PP(3-36) (SEQ ID NO: 49), PP(4-36) (SEQ ID NO: 50), PP(5-36) (SEQ ID NO: 51), PP(6-36) (SEQ ID NO: 52), PP(7-36) (SEQ ID NO: 53), PP(8-36) (SEQ ID NO: 54), PP(9-36) (SEQ ID NO: 55), PP(10-36) (SEQ ID NO: 56), PP(11- 36) (SEQ ID NO: 57), PP(12-36) (SEQ ID NO: 58), PP(13-36) (SEQ ID NO: 59), PP(14-36) (SEQ ID NO: 60), PP(15-36) (SEQ ID NO: 61), PP(16-36) (SEQ ID NO: 62), PP(17-36) (SEQ ID NO: 63), PP(18-36) (SEQ ID NO: 64), PP(19-36) (SEQ ID NO: 65), PP(20-36) (SEQ ID NO: 66), PP(21-36) (SEQ ID NO: 67), PP(22-36) (SEQ ID NO: 68), PP(23-36) (SEQ ID NO: 69), PP(24-36) (SEQ ID NO: 70) y PP(25-36) (SEQ ID NO: 71). Otros agonistas de PP incluyen PP de oveja (SEQ ID NO: 82) y las formas truncadas de la terminal amino de PP(3-36) hasta PP (26-36) como en la forma humana, PP de cerdo (SEQ ID NO: 83) y las formas truncadas de la terminal amino de PP(3-36) hasta PP (26-36) como en la forma humana, PP de perro (SEQ ID NO: 84) y las formas truncadas de la terminal amino PP(3-36) hasta PP (26-36) como en la forma humana, PP de gato - - (SEQ ID NO: 85) y las formas truncadas de la terminal amino de PP(3-36) hasta PP (26-36) como en la forma humana, PP de vaca (SEQ ID NO: 86) y las formas truncadas de la terminal amino de PP(3-36) hasta PP (26-36) como en la forma humana, PP de rata (SEQ ID NO: 87) y las formas truncadas de la terminal amino de PP(3-36) hasta PP (26-36) como en la forma humana, (SEQ 88) de ratón y las formas truncadas de la terminal amino de PP(3-36) hasta PP (26-36) como en la forma humana, y PP de cobayo (SEQ ID NO: 89) . De acuerdo con la presente invención un péptido PP también incluye las bases libres, sales de adición de ácido o sales de metal, tal como potasio o sales de sodio de los péptidos, y péptidos PP que han sido modificados por tales procesos como amidación, glicosilación, acilación, sulfatación, fosforilación, acetilación, ciclización, y otros métodos de modificación covalente conocidos. Estos péptidos típicamente se enlazan a los receptores Y en el cerebro y en otra parte, especialmente el Y2 y/o los receptores Y5. Típicamente estos péptidos se sintetizan en formas libres de endotoxina o libres de pirógeno aungue esto no siempre es necesario. Agentes que Mejoran el Suministro Mucosal Los "agentes que mejoran el suministro mucosal" se definen como químicos y otros excipientes que, cuando se agregan a una formulación que comprende agua, sales y/o - - amortiguadores comunes y el péptido de enlace al receptor Y2 (la formulación de control) produce una formulación que produce un incremento significativo en el transporte del péptido de enlace al receptor Y2 a través de ununa mucosa según se midió por el máximo de concentración en sangre, suero, o fluido cerebro espinal (Cmax) o mediante el área bajo la curva, AUC, en una gráfica de concentración versus tiempo. Una mucosa incluye las superficies mucosales nasales, orales, intestinal, bucales, broncopulmonares, vaginales, y rectales y de hecho incluye todas las membranas gue secretan moco que revisten todas las cavidades o pasajes del cuerpo que se comunican con el exterior. Los agentes que mejoran el suministro mucosal algunas veces se llaman vehículos . Formulación libre de endotoxina "Formulación libre de endotoxina" significa una formulación que contiene un péptido de enlace al receptor Y2 y uno o más agentes que mejoran el suministro mucosal es decir sustancialmente libres de endotoxinas y/o sustancias pirogénicas relacionadas. Las endotoxinas incluyen toxinas que se confinan dentro de un microorganismo y se liberan solamente cuando los microorganismos se descomponen o mueren. Las sustancias pirogénicas incluyen sustancias termoestables que inducen fiebre (glicoproteínas) de la membrana exterior de bacterias y otros microorganismos. Ambas de estas - - sustancias pueden causar fiebre, hipotensión y choque si se administra a humanos. Producir formulaciones que se encuentran libres de endotoxina puede requerir equipo especial, técnicos expertos, y puede ser significativamente más costoso que elaborar formulaciones que no se encuentran libres de endotoxina. Debido a la administración intravenosa de NPY o PYY simultáneamente con la infusión de endotoxina en roedores se ha demostrado que previene la hipotensión e incluso la muerte asociada con la administration de endotoxina sola (Patente de E.U. 4,839,343), producir formulaciones libres de endotoxina de estos agentes terapéuticos no se esperaría ser necesario para la administración non-parenteral (no inyectada) . Administración no infundida "Administración no infundida" significa cualguier método de suministro que no implica una inyección directamente en una arteria o vena, un método que fuerza o conduce (típicamente un fluido) en algo y especialmente introduce en una parte del cuerpo por medio de una aguja, jeringa u otro método invasivo. Administración no infundida incluye inyección subcutánea, inyección intramuscular, inyección intraperitoneal y los métodos no de inyección de suministro a una mucosa. Tratamiento y Prevención de la Obesidad Como se anotó arriba, la presente invención - - proporciona métodos y composiciones mejorados y útiles para suministro mucosal nasal de un péptido de enlace al receptor Y2 para prevenir y tratar la obesidad en suejtos mamíferos. Como se utiliza en la presente, prevención y tratamiento de la obesidad significa la prevention del inicio o disminución de la incidencia o severidad de la obesidad clínica al reducir la absorción de alimento durante las comidas y/o reducir el peso corporal durante la administration o mantener a peso corporal reducido después de la pérdida de peso o antes de que ocurra la ganancia de peso. La presente invención proporciona métodos y composiciones mejorados y útiles para suministro mucosal nasal del péptido de enlace al receptor Y2 a regiones del cerebro, por ejemplo, el hipotálamo o las neuronas arqueadas de propiomelanocortina (POMC) y NPY, para prevenir y tratar la obesidad en suejtos mamíferos. El péptido de enlace al receptor Y2 también puede administrarse en conjunto con un antagonista del receptor Yl tal como dihiropiridina. Métodos y Composiciones de Suministro Los métodos y composiciones mejorados para la administración mucosal del péptido de enlace al receptor Y2 a sujetos mamíferos optimizan los programas de dosificación del péptido de enlace al receptor Y2. La presente invención proporciona el suministro mucosal del péptido de enlace al receptor Y2 formulado con uno o más agentes mejoradores del - - suministro mucosal en donde la liberación de dosificación del péptido de enlace al receptor Y2 se normaliza y/o sostiene sustancialmente durante un periodo de suministro efectivo de los rangos de liberación del péptido de enlace al receptor Y2 desde aproximadamente 0.1 hasta 2.0 horas; 0.4 a 1.5 horas; 0.7 a 1.5 horas; o 0.8 a 1.0 horas; después de la administración mucosal. La liberación sostenida del péptido de enlace al receptor Y2 lograda puede facilitarse mediante la administración repetida del péptido de enlace al receptor Y2 exógeno utilizando los métodos y composiciones de la presente invención. Composiciones y Métodos de Liberación Sostenida Las composiciones y métodos mejorados para la administración mucosal del péptido de enlace al receptor Y2 a sujetos mamíferos optimizan los programas de dosificación del péptido de enlace al receptor Y2. La presente invención proporciona el suministro mucosal mejorado (e.g., nasal) de una formulación que comprende el péptido de enlace al receptor Y2. en combinación con uno o más agentes mejoradores del suministro mucosal y un agente o agentes opcionales que mejoran la liberación sostenida. Los agentes mejoradores del suministro mucosal de la presente invención producen un incremento efectivo en el suministro, e.g., un incremento en la concentración máxima de plasma (Cmax) para mejorar la actividad terapéutica del péptido de enlace al receptor Y2 administrado mucosalmente. Un segundo factor que afecta la actividad terapéutica del péptido de enlace al receptor Y2 en el plasma en sangre y CNS es el tiempo de residencia (RT) . Los agentes que mejoran la liberación sostenida, en combinación con agentes que mejoran el el suministro intranasal, incrementan Cmax e incrementan el tiempo de residencia (RT) del péptido de enlace al receptor Y2. Los vehículos de suministro polimérico y otros agentes y métodos de la presente invención que producen formulaciones que mejoran la liberación sostenida, por ejemplo, polietilén glicol (PEG), se describen en la presente. La presente invención proporciona un método de suministro y forma de dosis mejorados del péptido de enlace al receptor Y2 para el tratamiento de síntomas relacionados a la obesidad, cáncer de colon, cáncer pancreático, o cáncer de mama en suejtos mamíferos . Dentro de las formulaciones mucosales de suministro y métodos de la invención, el péptido de enlace al receptor Y2. frecuentemente se combina o administra coordinadamente con un vehículo o portador adecuado para el suministro mucosal. Como se utiliza en la presente, el término "vehículo" significa un sólido o carga líquida, diluyente o material de encapsulación farmacéuticamente aceptable. Un vehículo líquido que contiene agua puede contener aditivos farmacéuticamente aceptables tales como agentes - acidificantes, agentes alcalizantes, conservadores antimicrobiales, antioxidantes, agentes amortiguadores, agentes quelantes, agentes acomplej antes, agentes solubilizadores, humectantes, solventes, agentes de suspensión y/o que incrementan la viscosidad, agentes de tonicidad, agentes humectantes u otros materiales biocompatibles . Una tabulación de ingredientes listados por las categories anteriores, puede encontrarse en U.S. Pharmacopeia National Formulary, 1857-1859, (1990) . Algunos ejemplos de los materiales que pueden servir como vehículos farmacéuticamente aceptables son los azúcares, tal como lactosa, glucosa y sacarosa; almidones tales como almidón de maíz y almidón de papa; celulosa y sus derivados tales como celulosa de carboximetilo de sodio, etil celulosa y acetato de celulosa; tragacanto en polvo; malta; gelatina; talco; excipientes tales como manteca de cacao y ceras para supositorios; aceites tales como aceite de cacahuate, aceite de semilla de algodón, aceite de girasol, aceite de ajonjolí, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de soya; glicoles, tales como propilen glicol; polioles tales como glicerina, sorbitol, manitol y polietilén glicol; esteres tales como etil oleato y etil laureato; agar; agentes amortiguadores tales como hidróxido de magnesio e hidróxido de aluminio; ácido algínico; agua libre de pirógenos; salina isotónica; Solución de Ringer, etil alcohol y soluciones amotiguadoras - de fosfato, así como otras sustancias compatibles no tóxicas utilizadas en formulaciones farmacéuticas. Los agentes humectantes, emulsionantes y lubricantes tales como sulfato de laurilo de sodio y estearato de magnesio, así como agentes colorantes, agnetes de liberación, agnetes recubridores, endulzantes, saborizantes y agentes perfumantes, conservadores y antioxidantes también pueden estar presentes en las composiciones, de acuerdo con el deseo del formulador. Ejemplos de antioxidantes farmacéuticamente aceptables incluyen antioxidantes solubles en agua tales como ácido ascórbico, hidrocloruro de cisteína, bisulfito de sodio, metabisulfito de sodio, sulfito de sodio y lo similar; antioxidantes solubles en aceite tales como palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado (BHA) , hidroxitolueno butilado (BHT) , lecitina, propil galato, alfa-tocoferol y lo similar; y agentes quelantes metálicos tales como ácido cítrico, ácido etilendiamina tetraacético (EDTA) , sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico y lo similar. La cantidad de ingrediente activo que puede combinarse con los materiales de vehículo para producir una forma de dosis única variará dependiendo del modo de administración particular. Dentro de las composiciones y métodos de suministro mucosal de la invención, se emplean varios agentes que mejoran el suministro que mejoran el suministro del péptido de enlace al receptor Y2 en o a través de una superficie - mucosal. A este respecto, el suministro del péptido de enlace al receptor Y2 a través del epitelio mucosal puede ocurrir "transcelularmente" o "paracelularmente". El grado al cual estas trayectorias contribuyen al flujo total y biodisponibilidad del péptido de enlace al receptor Y2 depende del ambiente de la mucosa, las propiedades físico-químicas, el agente activo, y de las propiedades del epitelio mucosal. El transporte paracelular implica solamente la difusión pasiva, mientras el transporte transcelular ouede ocurrir mediante procesos pasivo, facilitado o activo. Generalmente, los solutos polares, pasivamente transportados, hidrofílicos se difunden a través de la ruta paracelular, mientras los solutos más lipofílicos utilizan la ruta transcelular. Puede evaluarse fácilmente la absorción y biodisponibilidad (e.g., según se refleja por un coeficiente de permeabilidad o ensayo fisiológico) , para diversos, solutos pasiva y activamente absorbidos, en términos tanto de componentes de suministro paracelular como transcelular, para cualquier péptido de enlace al receptor Y2 seleccionado dentro de la invención. Para drogas pasivamente absorbidas, la contribución relativa de trayectorias paracelulares y transcelulares para transporte de droga depende del pKa, el coeficiente de partición, el radio molecular y la carga de la droga, el pH del ambiente luminal en el cual se suministra la droga, y el área de la superficie de absoción. La ruta - - paracelular representa una fracción relativamente pequeña de área de superficie accesible del epiteio mucosal nasal. En términos generales, se han reportado membranas celulares ocupan una área de superficie mucosal es decir mil veces mayor que el área ocupada por loe espacios paracelulares. Así, el área de superficie más pequeña, y la discriminación en base al tamaño y la carga contra la permeación macromolecular sugeriría que la ruta paracelular sería una ruta generalmente menos favorable que el suministro transcelular para transporte de droga. Sorprendentemente, los métodos y composiciones de la invención proporcionan transporte significativamente mejorado de bioterapéuticos hacia y a través de los epitelios mucosales a través de la ruta paracelular. Por lo tanto, los métodos y composiciones de la invención se dirigen exitosamente tanto por rutas paracelulares como transcelulares, alternativamente o dentro de un solo método o composición. Como se utiliza en la presente, "agentes mejoradores del suministro mucosal" incluyen agentes que mejoran la liberación o solubilidad (e.g., a partir de un vehículo de suministro de formulación) , tasa de difusión, capacidad y temporización de penetración, absorción, tiempo de residencia, estabilidad, vida media efectiva, pico o niveles de concentración sostenida, aclaramiento y otras características de suministro mucosal deseadas (e.g., según - - se mida en el sitio de suministro, o en un sitio de actividad objetivo seleccionado tal como la corriente sanguínea o el sistema nervioso central) del péptido de enlace al receptor Y2 u otro(s) compuesto (s) biológicamente activo (s). El mejoramiento del suministro mucosal puede ocurrir así por cualquiera de una variedad de mecanismos, por ejemplo al incrementar la difusión, el transporte, la persistencia o estabilidad del péptido de enlace al receptor Y2, incrementando la la fluidez de la membrana, modulando la disponibilidad o acción del calcio y otros iones que regulan la permeación intracelular o paracelular, solubilizando los componentes de la membrana mucosal (e . g. , lípidos), cambiando los niveles de sulfidrilo de proteína y sin proteína en tejidos mucosales, incrementando el flujo de agua a través de la superficie mucosal, modulando la fisiología de la unión epitelial, reduciendo la viscosidad del moco que se sobrepone al epitelio mucosal, reduciendo las tasas de aclaramiento mucociliar, y otros mecanismos. Como se utiliza en la presente, una "cantidad mucosalmente efectiva del péptido de enlace al receptor Y2" contempla el suministro mucosal efectivo del péptido de enlace al receptor Y2 en un sitio efectivo para la actividad de la droga en el sujeto que puede involucrar una variedad de rutas de suministro o transferencia. Por ejemplo, un agente activo dado puede encofrar su vía a través de aclaramientos - entre células de la mucosa y alcanzar una pared vascular adyacente, mientras por otra ruta el agente puede, ya sea pasiva o activamente, absorberse en células mucosales para actuar dentro de las células o descargarse o transportarse fuera de las células para alcanzar un sitio objetivo secundario, tal como la circulación sistémica. Los métodos y composiciones de la invención pueden promover la translocación de agentes activos a lo largo de una o más de tales rutas alternas, o puede actuar directamente sobre el tejido mucosal o tejido vascular proximal para promover la absorción o penetration del agente activo (s). La promoción de la absorción o penetration en este contexto no se limita a estos mecanismos. Como se utiliza en la presente "concentración pico (Cmax) del péptido de enlace al receptor Y2 en el plasma sanguíneo", "área bajo concentración vs . curva de tiempo (AUC) del péptido de enlace al receptor Y2 en el plasma sanguíneo", "tiempo a concentración máxima en plasma (tmax) del péptido de enlace al receptor Y2 en el plasma sanguíneo" son parámetros farmacocinéticos conocidos para alguien de experiencia en la técnica. Laursen et al., Eur. J. Endocrinology, 135: 309-315, 1996. La "concentration vs. curva de tiempo" mide la concentración del péptido de enlace al receptor Y2 en un suero sanguíneo de un sujeto vs . tiempo después de la administración de una dosis del péptido de enlace al receptor Y2 al sujeto ya sea mediante ruta intranasal, intramuscular, subcutánea u otra parenteral. "Cmax" es la concentración máxima del péptido de enlace al receptor Y2 en el suero sanguíneo de un sujeto después de una dosis única del péptido de enlace al receptor Y2 al sujeto, "tmax" es el tiempo para alcanzar la concentración máxima del péptido de enlace al receptor Y2 en un suero sanguíneo de un sujeto después de la administración de una dosis única del péptido de enlace al receptor Y2 al sujeto. Como se utiliza en la presente, "área bajo concentración vs . curva de tiempo (AUC) del péptido de enlace al receptor Y2 en el plasma sanguineo" se calcula de acuerdo con la regla trapezoidal lineal y con la adición de áreas residuales. Una disminución de 23% o un incremento de 30% entre dos dosis se detectaría con una probabilidad de 90% (error tipo II ß = 10%) . La "tasa de suministro" o "tasa de absorción" se estima mediante la comparación del tiempo (tmax) para alcanzar la concentración máxima (Cmax) . Ambos Cmax y tmax se analizan utilizando métodos no paramétricos . Se realizaron comparaciones de los farmacocinéticos de administraciones intramusculares, subcutáneas, intravenosas e intranasales del péptido de enlace al receptor Y2 mediante análisis de la variancia (ANOVA) . Para comparaciones por pares se utilizó un procedimiento secuencial Bonferroni-Hol es sequential utilizado para evaluar el significado. La relación dosis-respuesta entre las tres dosis nasales se estimó mediante el análisis de regresión. P <0.05 fue el significado considerado. Los resultados se dan como valores medios +/- SEM. Aunque el mecanismo de promoción de la absorción puede variar con diferentes agentes mejoradores del suministro mucosal de la invención, los reactivos útiles en este contexto no afecvtarán sustancialmente de manera adversa el tejido mucosal y se seleccionarán de acuerdo con las características fisicoquímicas del péptido de enlace al receptor Y2 particular o otro agente activo o que mejora el suministro. En este contexto, los agentes que mejoran el suministro que incrementan la penetración o permeabilidad de tejidos mucosales con frecuencia darán como resultado alguna alteración de la barrera protectora de permeabilidad de la mucosa. Para que tales agentes que mejoran el suministro sean de valor dentro de la invención, se desea generalmente que cualquier cambio significativo en la permeabilidad de la mucosa será "reversible dentro de un marco de tiempo apropriado a la duración deseada del suministro de droga. Además, no debe haber toxicidad sustancial acumulativa, ni cambios de deterioro permanente inducidos en las properties de barrera de la mucosa con uso a largo plazo. Dentro de ciertos aspectos de la invención, los agentes que promueven la absorción para la administración - - coordinada o la formulación combinatoria con el péptido de enlace al receptor Y2 de la invención se seleccionan de moléculas hidrofíilicas pequeñas, incluyendo pero sin limitarse a, dimetil sulfóxido (DMSO) , dimetilformamida, etanol, propilen glicol, y las 2-pirrolidonas. Alternativamente, las moléculas anfipáticas de cadena larga, por ejemplo, deacilmetil sulfóxido, azona, laurilsulfato de sodio, ácido oléico, y sales biliares, pueden emplearse para mejorar la penetración mucosal del péptido de enlace al receptor Y2. En aspectos adicionales, los 'surfactantes (e.g., polisorbatos) se emplean como compuestos auxiliares, agentes de procesamiento, o aditivos de la formulación para mejorar el suministro intranasal del péptido de enlace al receptor Y2. Agentes tales como DMSO, polietilén glicol, y etanol pueden, si se encuentran presentes en concentraciones suficientemente elevadas en el ambiente de suministro (e.g., mediante pre-administración o incorporación en una formulación terapéutica) , entrar en la fase acuosa de la mucosa y alterar sus propiedades de solubilización, mejorando mediante esto la divisióndel péptido de enlace al receptor Y2 desde el vehículo hasta la mucosa. Agentes mejoradores adicionales del suministro mucosal que son útiles dentro de la administración coordinada y métodos de prcesamiento y las formulaciones combinatoriales de la invención incluyen, pero no se limitan a, micelas mezcladas; ena ines; donadores de óxido nítrico (e.g., S-nitroso-N-acetil-DL-penicillamina, N0R1, N0R4—que se coadministran preferentemente con un Depurador de NO tal como carboxi-PITO o doclofenac sódico) ; salicilato de sodio; glicerol esteres de ácido acetoacético (e.g., gliceril-1, 3-diacetoacetato o 1, 2-isopropílídenglicerina-3-acetoacetato) ; y otros agentes que promueven la liberación-difusión o penetración intra- o trans-epitelial que son fisiológicamente compatibles para el suministro mucosal. Otros agentes que promueven la absorción se seleccionan de una variedad de vehículos, bases y excipientes que mejoran el suministro mucosal, estabilidad, actividad o penetración trans-epitelial del péptido de enlace al receptor Y2. Estos incluyen, inter alia, ciclodextrinas y derivados de ß-ciclodextrina (e.g., 2-hidroxipropil-ß-ciclodextrina y heptakis (2, 6-di-O-metil-ß-ciclodextrina) . Estos compuestos, opcionalmente conjugados con uno o más de los ingredientes activos y además formulado opcionalmente en una base oleaginosa, mejoran la biodisponibilidad en las formulaciones mucosales de la invención. Aún agentes adionales que mejoran la absorción adaptados para el suministro mucosal incluyen ácidos grasos de cadena media, incluyendo mono- y diglicéridos (e.g., extractos de caprato de sodio— de aceite de coco, Capmul) , y triglicéridos (e.g., amilodextrina, Estaram 299, Miglyol 810) .

- - Las composiciones terapéuticas y profilácticas mucosales de la presente invención pueden complementarse con cualquier agente que promueve la penetración adecuada que facilita la absorción, difusión, o penetration del péptido de enlace al receptor Y2 a través de barreras mucosales. El promotor de penetración puede ser cualquier promotor que sea farmacéuticamente aceptable. Así, en aspectos más detallados de las composiciones de la invención se proporcionan que incorporen uno o más agentes que promueven la penetración seleccinados de salicilato de sodio y derivados de ácido salicílico (acetil salicilato, colin salicilato, salicilamida, etc.); aminoácidos y sales de los mismos (e.g. ácidos monoaminocarboxlicos tales como glicina, alanina, fenilalaninafenilalanina, prolina, hidroxiprolina, etc.; hidroxiaminoácidos tales como serina; ácidos aminoácidos tales como ácido aspártico, ácido glutámico, etc; y aminoácidos básicos tales como lisina etc (incluyendo sus sales de metal alcalino o metal alcalinoterreo) ; y N-acetilaminoácidos (N-acetilalanine, N-acetilfenilalanina, N-acetilserina, N-acetilglycina, N-acetillisina, N-acetil ácido glutámico, N-acetilprolina, N-acetilhidroxiprolina, etc.) y sus sales (sales de metal alcalino y sales de metal alcalinoterreo) . Hay sustancias también provistas como agentes que promueven la penetración dentro de los métodos y composiciones de la invención, las cuales generalmente se - utilizan como emulsionantes (e.g. fosfato oleil- sódico, fosfato de laurel sódco, sulfato de lauril sódico, sulfato de miristil sódico, alquil éteres de polioxietileno, alquil esteres de polioxietileno, etc.), ácido caproico, ácido láctico, ácido málico y ácido cítrico y sales de metal alcalino de los mismo, ácidos pirrolidoncarboxílicos, esteres de ácido alquilpirrolidoncarboxílico, N-alquilpirrolidonas, esteres de prolin acilo, y lo similar. Dentro de varios aspectos de la invención, las formulaciones y métodos de suministro mucosal nasal mejorados se proporcionan que permitan el suministro del péptido de enlace al receptor Y2 y otros agentes terapéutics dentro de la invención a través de barreras mucosales entre sitios objetivos de administración y seleccionados. Ciertas formulaciones se adaptan específicamente para una célula objetivo seleccionada, tejido u órgano, o aún un estado de enfermedad particular. En otros aspectos, las formulaciones y métodos proporcionan la endo-o transitosis eficiente, selectiva del péptido de enlace al receptor Y2, específicamente dirigido a lo largo de una trayectoria intracelular o intercellular definida. Típicamente, el péptido de enlace al receptor Y2 se carga específicamente a niveles de concentración efectiva en un portadr u otro vehículo de suministro, y se suministra y mantiene en una forma estabilizada, e.g., en la mucosa nasal y/o durante el - paso a través de los componentes y membranas intracelulares hacia un sitio objetivo remoto para la acción de la droga (e.g., la corriente sanguínea o un tejido definido, órgano o compartimiento extracelular) . El péptido de enlace al receptor Y2 puede proveerse en un vehículo de suministro o de modificado de alguna otra forma (e.g., en la forma de una prodroga) , en donde la liberación o activación del péptido de enlace al receptor Y2 se activa mediante un estímulo fisiológico (e.g. cambio de pH, enzimas lisosomales, etc.) Con frecuencia, el péptido de enlace al receptor Y2 se inactiva farmacológicamente hasta gue alcanza su sitio objetivo para la actividad. En la mayoría de los casos, el péptido de enlace al receptor Y2 y otros componentes de la formulación son no tóxicos y no inmunogénicos. En este contexto, vehículos y otros componentes de la formulación se seleccionan generalmente por su capacidad para degradarse y excretarse rápidamente bajo condiciones fisiológicas. Al mismo tiempo, las formulaciones son química y físicamente estables en forma de dosis para su almacenamiento efectivo. Análogos Miméticos de Péptidos y Proteínas Incluidos dentro de la definición de péptidos y proteínas biológicamente activos para utilizarse dentro de la invención se encuentran los péptidos (comprendidos de dos o mas aminoácidos covalentemente enlazados) , proteínas fragmentos de péptidos o proteínas, análogos de péptidos o - - proteínas y derivados químicamente modificados o sales de péptidos o proteínas activos, naturales o sintéticos, terapéutica o profilácticamente activos. Una amplia variedad de análogos y mimeticos útiles del péptido de enlace al receptor Y2 se contemplan para utilizarse dentro de la invención y puede producirse y probarse por su actividad biológica de acuerdo a métodos conocidos. Con frecuencia, los péptidos o proteínas del péptido de enlace al receptor Y2 u otros péptidos o proteínas biológicamente activos para utilizarse dentro de la invención son muteínas que se obtienen fácilmente mediante substitución, adición, o supresión parcial de aminoácidos dentro de un péptido o secuencia de proteínas que se presentan de manera natural o nativo (e.g'., mutante o variante alelica que se presenta de manera natural, tipo silvestre) . Adicionalmente se incluyen, los fragmentos biológicamente activos de péptidos o proteínas nativos. Tales derivados y fragmentos de mutantes retienen substancialmente la actividad biológica deseada del péptido o proteínas nativos. En el caso de péptidos o proteínas que tengan cadenas de carbohidrato, las variantes biológicamente activas marcadas por alteraciones en estas especies de carbohidrato también se incluyen dentro de la invención. Como se utiliza en la presente, el término "substitución conservadora de aminoácidos" se refiere a la intercambiabilidad general de los residuos de aminoácido que - - tengan cadenas laterales similares. Por ejemplo, un grupo comunmente intercambiable de aminoácidos que tenga cadenas laterales alifáticas es alanina, valina, leucina, e isoleucina; un grupo de aminoácidos que tenga cadenas laterales alifáticas-de hidroxilo es serina y trionina; un grupo de aminoácidos que tenga cadenas laterales que contengan amida, es asparagina y glutamina; un grupo de aminoácidos que tenga cadenas laterales aromáticas es fenilalanina, tirosina, y triptofano; un grupo de aminoácidos que tenga cadenas laterales básicas es lisina, arginina, e histidina; y un grupo de aminoácidos que tenga cadenas laterales gue contienen azufre es cisterna y metionina. Ejemplos de sustituciones conservadoras incluyen la substitución de un residuo no-polar (hidrofóbico) tal como isoleucina, valina, leucina o metionina por otro. De igual modo, la presente invención contempla la substitución de a residuo polar (hidrofílico) tal como entre arginina y lisina, entre glutamina y asparagina, y entre treonina y serina. Adicionalmente, la substitución de un residuo básico tal como lisina, arginina o histidina por otro o la substitución de un residuo acídico tal como ácido aspártico o ácido glutámico por otro también se contempla. Los grupos de sustitución de aminoácidos conservadores ejemplares son: valina-leucina-isoleucina, fenilalanina-tirosina, lisina-arginina, alanine-valina, y asparagina-glutamina. Al alinear un análogo de - péptido o proteína de manera óptima con un péptido o proteína nativo correspondiente, y al utilizar los ensayos apropiados, e.g., ensayos de proteína de adhesión o de enlace de receptor para determinar una actividad biológica seleccionada, se puede identificar fácilmente los análogos de péptido y proteínas operables para utilizarse dentro de los métodos y composiciones de la invención. Los análogos de péptidos y proteínas operables típicamente son inmunoreactivos de manera específica con los anticuerpos originados en el péptido o proteína nativo correspondiente. Un procedimiento para estabilizar las formulaciones de proteínas sólidas de la invención es incrementar la estabilidad física de la proteína purificada, e.g., liofilizada. Esto inhibirá la agregacón a través de interacciones hidrofógicas así como a través de trayectorias covalentes que pueden incrementarse a medida que las proteínas se desdoblan. La estabilización de las formulaciones en este contexto con frecuencia incluyen formulaciones a base de polímeros, por ejemplo un sistema de formulación/suministro de hidrogel biodegradable. Como se anotó arriba, el rol crítico del agua en la estructura de la proteína, función y estabilidad son muy conocidos. Típicamente, las proteínas son relativamente estables en el estado sólido con agua en volumen retirada. Sin embargo, las formulaciones de proteína terapéuticas sólicas pueden - - hidratarse al almacenarse en humedades elevadas o durante el suministro a partir de _ una composición o dispositivo de liberación sostenida. La estabilidad de las proteínas generalmente cae con incremento de la hidratación. El agua también puede jugar un papel significativo en la agregación de proteína sólida, por ejemplo, al incrementar la flexibilidad de la proteína dando como resultado la accesibilidad mejorada de los grupos reactivos, al proporcionar una fase móvil para los reactivos, y al servir como un reactivo en varios procesos nocivos tales como la beta-eliminación e hidrólisis. Las preparaciones de proteína que contienen entre aproximadamente 6% a 28% de agua son las más inestables. Por debajo de este nivel, la mobilidad del agua enlazada y los movimientos internos de la proteína son bajos. Por arriba de este nivel, la mobilidad del agua y los movimientos de la proteína se apoximan a los de la hidratación total. Hasta un punto se ha observado en varios sistemas, la susceptibilidad incrementada hacia la agregación de fase sólida con el incremento de la hidratación. Sin embargo, a mayores contenios de agua, se observa menor agregación debido al efecto de dilución. De acuerdo con estos principios, un método efectivo para estabilizar péptidos y proteínas contra la agregación en estado sólido para el suministro mucosal es controlar el - - contenido de agua en una formulación sólida y mantener la actividad del agua en la formulación a niveles óptimos. Estos niveles dependen de la naturaleza de la proteína, pero en general, las proteínas mantenidas por debajo de su cobertura de agua de "monocapa" exhibirán estabilidad en estado sólido superior. Una variedad de additivos, diluyentes, bases y vehículos de suministro se proporcionan dentro de la invención que controlan de manera efectiva el contenido de agua para mejorar la estabilidad de la proteína. Estos reactivos y materiales de vehículo efectivos como agentes anti-agregación en este sentido incluyen, por ejemplo, polímeros de varias funcionalidades, tales como polietilén glicol, dextrano, dietilaminoetil dextrano, y carboximetil celulosa, que incrementan significativamente la estabilidad y reducen la agregación en fase sólida de péptidos y proteínas mezclados con los mismos o enlazados a estos. En algunos casos, la actividad o estabilidad física de proteínas también puede mejorarse mediante diversos ditivos a las soluciones acuosas de las drogas de péptido o proteína. Por ejemplo, los aditivos, tales como polioles (incluyendo azúcares) , aminoácidos, proteínas tales como colágeno y gelatina, y diversas sales pueden utilizarse. Ciertos aditivos, en particular azúcares y otros polioles, también imparten estabilidad física significativa - - para secar, e.g., proteínas liofilizadas. Estos aditivos también pueden utilizarse dentro de la invención para roteger a las proteínas contra la agregación no sólo durante la liofilización sino también durante el almacenamiento en el estado seco. Por ejemplo la sacarosa y Ficoll 70 (un polímero con unidades de sacarosa) exhiben protección significativa contra la agregación en el péptido o proteína durante la incubación de fase sólida bajo diversas condiciones. Estos aditivos también pueden mejorar la estabilidad de las proteínas sólidas incluidas dentro de las matrices poliméricas. Aún aditivos adicionales, por ejemplo la sacarosa, estabilizan las proteínas contra la agregación de estado sólido en atmósferas de humedad a temperaturas elevadas, como puede ocurrir en ciertas formulaciones de liberación sostenida de la invención. Las proteínas tales como gelatina y colágeno también sirven para como agentes estabilizantes o de volumen para reducir la desnaturalización y agregación de proteínas inestables en este contexto. Estos aditivos también pueden incorporarse en procesos y composiciones poliméricos de fusión dentro de la invención. Por ejemplo, las micropartículas de polipéptidos pueden prepararse al liofilizar simplemente o secar por rocío una solución que contenga varios aditivos de estabilización antes descritos. La liberación sostenida de los péptidos y proteínas no agregados puede obtenerse mediante esto durante un periodo de tiempo prolongado Varios componentes y método de preparación adicionales, así como aditivos de formulación específicos, se proporcionan en la presente, los cuales produce formulaciones para el suministro mucosal de péptidos y proteínas propensos a la agregación, en donde el péptido o proteína se estabiliza en una forma substancialmente pura, no agregada utilizando un agente de solubilización. Se contempla un rango de componentes y aditivos para utilizarse dentro de estos métodos y formulaciones. Ejemplos estos agentes de solubilización son las ciclodextrinas (CDs), que se enlazan selectivamente a las cadenas laterales hidrofóbicas de polipéptidos. Se ha encontrado que estas CDs se enlazan a parches hidrofóbicos de proteínas en una manera que inhibe significativamente la agregación. Esta inhibición es selectiva con respecto tanto a la CD como a la proteína involucrada. Tal inhibición selectiva de la agregación de la proteína proporciona ventajas adicioinales dentro de los métodos y composiciones de suministro intranasal de la invención. Agentes adicioinales para utilizarse en este contexto incluyen dímeros, trímeros y tetrámeros de CD con variadas geometrías controladas por los enlazadores que bloquean específicamente la agregación de los péptidos y proteínas. Aún agentes de solubilización y métodos para la - incorporación dentro de la invención involucran el uso de péptidos y miméticos de péptidos para bloquear selectivamente las interacciones proteína-proteína. En un aspecto, el enlace específico de cadenas laterales hidrofóbicas reportado para multímeros de CD se extiende a proteínas a través del uso de péptidos y miméticos de péptido que bloquean de manera similar la agregación de la proteína. Un amplio rango de métodos y agentes anti-agregación adecuados se encuentran disponibles para su incorporación dentro de las composiciones y procedimientos de la invención. Agentes y Métodos que Modifican la Carga y Controlan el pH Para mejorar las características de transporte de los agentes biológicamente activos (incluyendo el péptido de enlace al receptor Y2, otros péptidos y proteínas activos, y drogas macromoleculares y de molécula pequeña) para el suministro mejorado a través de barreras de membranas mucosales hidrofóbicas, la invención también proporciona las técnicas y reactivos para la modificación de la carga de agentes biológicamente activos seleccionados o agentes que mejoran el suministro descritos en la presente. A este respecto, las permeabilidades relativas de las macromoléculas generalmente se relacionan a su coeficiente de división. El grado de ionización de las moléculas, que depende del pKa de la molécula y el pH en la superficie de la membrana mucosal, también afecta la permeabilidad de las moléculas . La permeación y la división de los agentes biológicamente activos, incluyendo el péptído de enlace al receptor Y2 y análogos de la invención, para el suministro mucosal puede facilitarse mediante la alteración de la carga o la difusión de la carga del agente activo o el agente de per eabilización, lo cual se logra, por ejemplo, mediante la alteración de los grupos funcionales cargados, al modificar el pH del vehiculo o solución de suministro en el cual se suministra el agente activo o mediante la administración coordinada de un reactivo que altera la carga o el pH-con el agente activo. Consistente con estas enseñanzas generales, el, suministro mucosal de las especies macromoleculares cargadas incluyendo el péptido de enlace al receptor Y2 y otros péptidos y proteínas péptidos y proteínas biológicamente activos, dentro de los métodos y composiciones de la invención se mejora substancialmente cuando el agente activo se suministra a la superficie mucosal en un estado de carga eléctrica substancialmente no-ionizado o neutro. Cierto péptido de enlace al receptor Y2 y otros componentes de péptidos y proteínas biológicamente activos de las formulaciones mucosales para utilizarse dentro de la invención se modificarán de la carga para producir un incremento en la densidad de la carga positiva del péptido o proteína. Estas modificaciones se extienden también a la - cationización de los conjugados de péptidos y proteínas, vehículos y otras formas de suministro descritas en la presente. La cationización ofrece un medio conveniente para alterar las propiedades de biodistribución y transporte de las proteínas y macromoléculas dentro de la invención. La cationización se asume en una manera que conserva substancialmente la actividad biológica del agente activo y limita los efectos colaterales potencialmente adversos, , incluyendo el daño al tejido y la toxicidad. Agentes y Métodos Inhibidores de la Enzima Degradativa Otro excipiente que puede incluirse en una preparation transmucosal es un inhibidor de la enzima degradativa. Complejos del inhibidor polímero-enzima mucoadhesive ejemplares que son útiles dentro de las formulaciones y métodos de suministro mucosal de la invención incluyen, pero no se limitan a: Carboximetilcelulosa-pepstatina (con actividad anti-pepsina) ; Poli (ácido acrílico) -inhibidor de Bowman-Birk (anti-quimotripsina); Poli (ácido acrilico) -quimostatina (anti-quimotripsina) ; Poli (ácido acrílico) -elastatinal (anti-elastasa); Carboximetilcelulosa-elastatinal (anti-elastasa) ; Policarbofil—elastatinal (anti-elastasa) ; Quitosan—antipaina (anti-tripsina) ; Poli (ácido acrílico)—bacitracina (anti-aminopeptidasa N) ; Quitosan—EDTA (anti-aminopeptidasa N, anti-carboxipeptidasa A) ; Quitosan—EDTA—antipaina (anti- tripsina, anti-quimotripsina, anti-elastasa) . Como se describe detalle adicional más adelante, ciertas modalidades de la invención incorporarán opcionalmente un nuevo derivado de quitosan o una forma químicamente modificada de quitosan. Para utilizarse dentro de la invención uno de dichos nuevos derivados se denota como un polímero ß- [1—»4] -2-guanidino-2- deoxi-D-glucosa (poly-GuD) . Cualquier inhibidor que inhiba la activida de una enzima para proteger el (los) agente (s) biológicamente activo (s) puede emplearse de manera útil en las composiciones y métodos de la invención. Los inhibidores de enzima útiles para la protección de las proteínas y péptidos biológicamente activos incluyen, por ejemplo, el inhibidor de tripsina de soya, el inhibidor de tripsina pancreática, el el inhibidor de quimotripsina y el inhibidor de tripsina y quimiotripsina aislada de tubérculos de papa (solanum tuberosum L.). Puede emplearse una combinación de mezclas de inhibidores. Inhibidores adicionales de las enzimas proteolíticas para utilizarse dentro de la invención incluyen la enzima ovomucoide, mesilato de gabaxato, alfa 1-antitripsina, aprotinina, amastatina, bestatina, puromicina, bacitracina, leupepsina, alfa 2-macroglobulina, pepstatina y el inhibidor de tripsina de huevo blanco o de soya. Estos y otros inhibidores pueden utilizarse solos o en combinación. El (los) inhibidor (es) pueden incorporarse o enlazarse a un vehículo, e.g., un polímero hidrofílico, recubierto sobre la superficie de la forma de dosis que es para hacer contacto con la mucosa nasal, o incorporado en la fase superficial de la superficie, en combinación con el agente biológicamente activo o en una formulación administrada de manera separada (e.g., pre-administrada) . La cantidad del inhibidor, e.g., de un inhibidor de enzima proteolítica que se incorpora opcionalemnte en las composiciones de la invención variará dependiendo de (a) las propiedades del inhibidor específico, (b) el número de grupos funcionales presentes en la molécula (que puedan hacerse reaccionar para introducir la instauración etilénica necesaria para la copolimerización con los monómeros que forman hidrogel) , y (c) el número de grupos de lectina, tales como glicósidos, los cuales están presentes en la molécula del inhibidor. También puede depender del agente terapéutico específico que se proponga para administrarse. Hablando de manera general una cantidad útil de un inhibidor de enzima es desde apoximadamente 0.1 mg/ml hasta aproximadamente 50 mg/ml, con frecuencia desde apoximadamente 0.2 mg/ml hasta aproximadamente 25 mg/ml, y más comúnmente desde apoximadamente 0.5 mg/ml hasta 5 mg/ml de la formulación (i.e., una formulación del inhibidor de proteasa separado o una formulación combinada con el inhibidor y el agente biológicamente activo) .

En el caso de la inhibición de tripsina, pueden seleccionarse los inhibidores adecuados a partir de, e.g., aprotinina, BBI, inhibidor de tripsina de soya, ovomucoide de pollo, ovoinhibidor de pollo, inhibidor de tripsina pancreática humana, mesilato de camostato, inhibidores de flavonoides, antipaina, leupeptina , p-aminobenzamidina, AEBSF, TLCK (tosilisina clorometilcetona) , APMSF, DFP, PMSF, y derivados de poli (acrilato) . En el caso de la inhibición de quimotripsina, pueden seleccionarse inhibidores adecuados a partir de, e.g., aprotinina, BBI, inhibidor de tripsina de soya, quimostatina, benziloxicarbonil-Pro-Fe-CHO, FK-448, ovoinhibidor de pollo, complejos de ácidos bifenilborónicos de azúcar, DFP, PMSF, ß-fenilpropionato, y derivados de poli (acrilato) derivados. En el caso de la inhibición de elastasa, puede seleccionarse inhibidores adecuados a partir de, e.g., elastatinal, metoxisuccinil-Ala-Ala-Pro-Val-clorometilcetona (MPCMK) , BBI, inhibidor de tripsina de soya, ovoinhibidor de pollo, DFP, y PMSF. Inhibidores de enzima adicionales para utilizarse dentro de la invención se seleccionan a partir de un amplio rango de inhibidores no de proteína que varían en su grado de potencia y toxicidad. Como se describe en detalles adicionales más adelante, la inmovilización de estos agentes auxiliares a matrices u otros vehículos de suministro, o el desarrollo de análogos químicamente modificados, puede - - implementarse fácilmente para reducir o aún eliminar los efectos tóxicos, cuando se encuentran. Entre este amplio grupo de candidatos de inhibidores de enzima para utilizarse dentro de la invención se encuentran los inhibidores organofosforosos, tales como diisopropilfluorofosfate (DFP) y fenilmetilsulfonil fluoruro (PMSF) , que son potentes inhibidores irreversibles de proteasas de serina (e.g., tripsina y quimotripsina) . La adicional inhibición de acetilcolinesterasa mediantes estos compuestos los hace altamente tóxicos en entornos de suministro no controlado. Otro inhibidor candidato, 4- (2-Aminoetil) -bencenosulfonil fluoruro (AEBSF) , tiene una actividad inhibidora comparable a DFP y PMSF, pero es notablemente mens tóxico. El hidrocloruro (4-Aminofenil) -metanosulfonil fluoruro (APMSF) es otro potente inhibidor de tripsina, pero es tóxico en entornos no controlados. En contraste a estos inhibidores, el 4- (4-isopropilpiperadinocarbonil) fenil 1, 2,3,4,-tetrahidro-1-naftoato metanosulfonato (FK-448) es una substancia de baja toxicidad, que representa un inhibidor potente y específico de quimotripsina. Los representantes adicionales de este grupo no proteico de candidatos inhibidores, y que también exhiben bajo riesgo tóxico, son mesilato de camostato (N,N' -dimetil carbamoilmetil-p- (p -guanidino-benzoiloxi) fenilacetato metano-sulfonato) . Aún otro tipo de agente inhibidor de enzima para - utilizarse dentro los métodos y composiciones de la invención son los aminoácidos y aminoácidos modificados que interfieren con la degradación enzimática de compuestos terapéuticos específicos. Para utilizarse en este contexto, los aminoácidos y los aminoácidos modificados no son substancialmente tóxicos y pueden producirse a bajo costo. Sin embargo, debido a su bajo tamaño molecular y buena solubilidad, se diluyen fácilmente y se absorven en los ambientes mucosales. Sin embargo, bajo condiciones apropiadas, los aminoácidos pueden actuar como inhibidores reversibles, competitivos de enzimas de proteasa. Ciertos aminoácidos modificados pueden desplegar una actividad inhibidora mucho más fuerte. Un aminoácido modificado deseado en este contexto se conoce como un inhibidor Me estado de transición' . La fuerte actividad inhibidora de estos compuestos se base en su similitude structural a un substrato en su' geometría de estado de transición, aunque se seleccionan generalmente para tener una mucho mayor afinidad para el sitio activo de una enzima que el sustrato en sí mismo. Los inhibidores de estado de transición son inhibidores reversibles competitivos. Ejemplos de este tipo de inhibidor son derivados de ácido a-aminoborónico, tales como boro-leucina, boro-valina y boro-alanina. El átomo de boro en estos derivados puede formar un ion de boronato tetraédrico que se considera se asemeja al estado de - transición de los péptidos durante su hidrólisis mediante aminopeptidasas . Los derivados de aminoácido son inhibidores potentes y reversibles de aminopeptidasas y se reporta que la boro-leucina es más de 100 veces más efectiva en la inhibición de enzima que la bestatina y más de 1000 veces más efectiva que la puromicina. Otro aminoácido modificado oara el cual se ha reportado una fuerte actividad inhibidora de proteasa es N-acetilcisteína, que inhibe la actividad enzimática de la aminopeptidasa N. El agent auxiliary también despliega propiedades mucolíticas que pueden emplearse dentro los métodos y composiciones de la invención para reducir los efectos de la barrera de difusión de moco. Aún otros inhibidores de enzima útiles para utilizarse dentro de los métodos de administración coordinada y formulaciones combinatoriales de la invención pueden seleccinarse de inhibidores de péptidos y enzimas de péptidos modificados. Un representante importante de esta clase de inhibidores es el dodecapéptido cíclico, bacitracina, obtenida de Bacillus licheniformis. Además de éstos tipos de péptidos, ciertos dipéptidos y tripéptidos despliegan débil actividad inhibidora no específica hacia algunas proteasas. Por analogía con los aminoácidos, su actividad inhibidora puede modificarse mediante modificaciones químicas. Por ejemplo, los análogos de dipéptido de ácido fosfinico son también inhibidores de ?estado de transición' con una fuerte - actividad inhibidora hacia las aminopeptidasas. Se ha reportado que se han utilizado para estabilizar la enquefaliña de leucina nasalmente administrada. Otro ejemplo de un análogo de estado de transición es la pepstatina de pentapéptido modificada, que es un inhibidor muy potente de pepsina. El análisis estructural de la pepstatina, al probar la actividad inhibidora de varios análogos sintéticos, demostró las principales características de estrctura-función de la molécula responsable de la actividad inhibidora. Otro tipo especial de péptido modificado incluye inhibidores con una función de aldehido terminal localizada en su estructura. Por ejemplo, la secuencia benziloxicarbonil-Pro-Fe-CHO, que cumple los requerimientos de especificidad primarios y secundarios de la quimotripsina, se ha encontrado ser un potente inhibidor reversible de esta proteínasa objetivo. Las estructuras químicas de inhibidores adicionales con una función de aldehido terminalmente localizada, e.g. antipaina, leupeptina, quimostatina y elastatinal, se conocen en la técnica, ya que son las estructuras de otros inhibidores de péptido modificado, reversibles conocidos, tales como, fosforamidon, bestatina, puromicina y amastatina. Debido a su masa molecular comparablemente alta, los inhibidores de proteasa de polipéptido son más manejables que los compuestos más pequeños para el suministro concentrado en una matriz de droga-vehículo. Los agentes adicoinales para la inhibición de la proteasa dentro las formulaciones y métodos de la invención involucran el uso de agentes acomplejantes. Estos agentes median la inhibición de la enzima al desproteger el ambiente intranasal (o composición preparativ o terapéutica) de cationes divalentes cations, que son co-factores para muchas proteasas. Por ejemplo, los agentes acomplejantes EDTA y DTPA como agents auxiliares coordinadamente administrados o combinatoriamente formulados, en concentración adecuada, serán suficientes para inhibir proteasas seleccionadas para mejorar mediante esto el suministro intranasal de agentes biológicamente activos de acuerdo con la invención. Representantes adicionales de esta clase de agentes inhibidores son EGTA, 1, 10-fenantrolina y hidroxiquinolina. Además, debido a su propensión para kelar cationes divalentes, estos y otros agentes acomplejantes son útiles dentro de la invención según se dirige a agentes que promueven la absorción. Como se notó en más detalle en otra parte en la presente, también se contempla utilizar varios polímeros, particularmente polímeros mucoadhesivos, como agentes que inhiben las enzimas dentro de los métodos y composiciones de administración coordinada, de multi-procesamiento y/o formulación combinatorial de la invención. Por ejemplo, los derivados de poli (acrilato) , tales como poli (ácido acrílico) y policarbofil, pueden afectar la actividad de - - varias proteasas, incluyendo tripsina, quimotripsina. El efecto inhividor de estos polímeros también puede basarse en el acomplej amiento de cationes divalentes tales como Ca2+. y Zn2+.. Se contempla además que estos polímeros puedan servir como socios de conjugado o vehículos para agentes inhibidores de enzima adicionales, como se describió antes. Por ejemplo, un conjugado de quitosan-EDTA que se ha desarrollado y es útil dentro de la invención eshibe un fuerte efecto inhibidor hacia la actividad enzimática de las proteasas dependiente de zinc. Las propiedades mucoadhesivas de los polímeros después de la unión covalente de otros inhibidores de enzima en este contexto no se espera ser substancialmente comprometida, ni se espera que se disminuya la utilidad general de tales polímeros como un vehículo de suministro para agentes biológicamente activos dentro de la invención. Por el contrario, la distancia reducida entre el vehículo de suministro y la superficie mucosal producida por el mecanismo -mucoadhesivo minimizará el etabolismo presistémico del agente activo, mientras los inhibidores de enzima covalentemente enlazados permanezcan concentrados en el sitio de suministro de droga, minimizando los efectos de dilución no deseados de los inhibidores así como los efectos tóxicos y de otro tipo causados por el mismo. De esta manera, la cantidad efectiva de un inhibidor de enzima coordinadamente administrado puede reducirse debido a la exclusión de los efectos de dilución.

- - Los complejos de inhibidor de polímero-enzima mucoadhesivos ejemplares que son útils dentro de las formulaciones y métodos de la invención incluyen, pero no se limitan a: Carboximetilcelulosa-pepstatina (con actividad anti-pepsina) ; Poli (ácido acrílico) -inhibidor de Bowman-Birk (anti-quimotripsina); Poli (ácido acrílico) -quimostatina (anti-quimotripsina); Poli (ácido acrílico) -elastatinal (anti- elastasa) ; Carboximetilcelulosa-elastatinal (anti-elastasa) ; Policarbofil—elastatinal (anti-elastasa) ; Quitosan—antipaina (anti-tripsina) ; Poli (ácido acrílico)—bacitracina (anti-aminopeptidasa N) ; Quitosan—EDTA (anti-aminopeptidasa N, anti-carboxipeptidasa A) ; Quitosan—EDTA—antipaina (antitripsina, anti-quimotripsina, anti-elastasa) . Agentes y Métodos Mucolíticos y de Despeje de Moco El suministro efectivo de agents bioterapéuticos a a través de la administración intranasal debe tomar en cuenta la tasa de transporte de droga disminuida a través del revestimiento de moco protector de la mucosa nasal, además de la pérdida de droga debida al enlace a las glicoproteínas de la capa de moco. El moco normal es una substancia similar a gel viscoelástica que consiste de agua, electrolitos, mucinas, macromoléculas, y células epiteliales desechadas. Sirve principalmente como covertura citoprotectora y lubricante para los tejidos mucosales subyacentes. El moco se secreta por células secretoras aleatoriamente distribuidas - localizadas en el epitelio nasal y en otros epitelios mucosales. La unidad estructural del moco es mucina. Esta glicoproteína es principalmente responsable de la naturaleza viscoelástica del moco, aunque otras macromoléculas también pueden contribuir a esta propiedad. En el moco de vías aéreas, tales macromoléculas incluyen IgA, IgM, IgE, lisozime, y broncotransferrina secretoras localmente producidos, que también juegan un papel importante en el mecanismo de defensa del huésped. Los métodos de administración coordinada de la presente invención opcionalmente incorporan agentes efectivos mucolíticos o que despejan el moco, que sirven para degradar, adelgazar o despejar el moco de las superficies mucosales intranasales para facilitar la absorción de los agentes bioterapéuticos administrados de manera intranasal. Dentro de éstos métodos, un agente mucolítico o que despeja el moco se administra coordinadamente como un compuesto auxiliar para mejorar el suministro intranasal del agente biológicamente activo. Alternativamente, una cantidad efectiva 'de un agente mucolítico o que despeja el moco se incorpora como un agente de procesamiento dentro de un método de multi-procesamiento de la invención, o como un aditivo dentro de una formulación combinatorial de la invención, para proporcionar una formulación mejorada gue mejora el suministro intranasal de compuestos bioterapéuticos al reducir los efectos de barrera del moco intranasal. Una variedad de agentes mucolíticos o que despejan el moco se encuentran disponibles para su incorporación dentro los métodos y composiciones de la invención. En base a sus mecanismos de acción, los agents múcolíticos y que despejan el moco pueden con frecuencia clasificarse en los siguients grupos: proteasas (e.g., pronasa, papaina) que divide el núcleo de la proteína de las glicoproteínas de mucina; compuestos de sulfhidrilo que dividen los enlaces de disulfuro de mucoproteína, y detergentes (e.g., Tritón X-100, Tween 20) que descomponen los enlaces no-covalentes dentro del moco. Los compuestos adicionales en este contexto incluyen, pero no se limitan a, sales biliares y surfactantes, por ejemplo, deoxicolato de sodio, tauro deoxicolato de socio, glicocolato de Sodio, y lisofosfatidilcolina. La efectividad de las sales biliares para ocasionar la descomposición estructural del moco se encuentra en el orden de desoxicolato > taurocolato > glicocolato. Otros agentes efectivos que reducen la viscosidad o adhesión del moco para mejorar el suministro intranasal de acuerdo con los métodos de la invención incluyen, e.g., ácidos grasos de cadena corta, y agentes mucolíticos que funcionan por quelación, tal como péptidos de N-acilcolágeno, ácidos viliares, y saponinas (las últimas funcionan en parte por quelación de Ca2+ y/o Mg2+ que juega un papel importante en mantener la estrtuctura de la capa de moco) . Agentes adicionales mucolíticos para utilizarse dentro de los métodos y composiciones de la invención incluyen N-acetil-L-cisteína (ACS) , un potente agente mucolítico que reduce tanto la viscosidad como la adherencia del moco broncopulmonar y se reporta para incrementar modestamente la biodisponibilidad nasal de la hormona del crecimiento humana en ratas anestesiadas (desde 7.5 hasta 12.2%). Estos y otros agentes mucolíticos o que despejan el moco hacen contacto con la mucosa nasal, típicamente en un rango de concentración de apoximadamente 0.2 hasta 20 mM, coordinadamente con la administration del agente biológicamente activo, para reducir la viscosidad polar y/o elasticidad del moco intranasal. Aún otros agentes mucolíticos o que despejan el moco pueden seleccionarse de un rango de enzimas de glicosidasa, que son capaces de desdoblar los enlaces glicosídicos dentro de la glicoproteína de moco. La a-amilasa y ß-amilasa son representativas de esta clase de enzimas, aunque su efecto mucolítico puede ser limitado. En contraste, las glicosidasas bacterianas permiten que estos microorganismos permeen las capas de moco de sus huéspedes. Para uso combinatorial con la mayoría de los agentes biológicamente activos dentro de la invención, incluyendo - - terapéuticos de péptidos y proteínas, también son generalmente útiles los detergentes no-inorgánicos como agentes mucolíticos o gue despejan el moco. Estos agentes típicamente no modificarán o substancialmente deteriorarán la actividad de los polipéptidos terapéuticos. Agentes y Métodos Ciliostáticos Debido a gue la capacidad de auto-limpieza de ciertos tejidos mucosales (e.g., tejidos mucosales nasales) mediante el despeje mucociliar es necesaria como function protectora (e.g., para retirar el polvo, alérgenos y bacterias) , se ha considerado generalmente que esta función no debe deteriorarse substancialmente por medicaciones mucosales. El transporte mucociliary en el tracto respiratorio es un mcanismo de defensa particularmente importante contra las infecciones. Para lograr esta function, la pulsación ciliar en los pasa de vías nasales y de vías aéreas mueve una capa de moco a lo largo de la mucosa para remover partículas inhaladas y microorganismos. Los agentes ciliostáticos encuentran uso dentro los métodos y composiciones de la invención para incrementar el tiempo de residencia del péptido de enlace al receptor Y2, análogos y miméticos mucosalmente administrados (e.g., de manera intranasal) y otros agentes biológicamente activos descritos en la presente. En particular, el suministro de estos agentes dentro los métodos y composiciones de la - - invención se mejora significativamente en ciertos aspectos mediante la administración coordinada o la formulación combinatorial de uno o más agentes ciliostáticos que funcionan para inhibir de manera reversible la actividad ciliar de las células mucosales, para proporcionar un incremento temporal, reversible en el tiempo de residencia del agente (s) mucosalmente administrados. Para utilizarse dentro de estos aspectos de la invención, los factores ciliostáticos anteriores, ya sea específicos o indirectos en su actividad, son todos candidatos para el empleo exitoso como agentes ciliostáticos en cantidades apropiadas (dependiendo de la concentración, duración y modo de suministro) de tal manera gue produzcan la reducción o cesantía transitoria (i.e., reversible) del despeje mucociliar en un sitio mucosal de administración para mejorar el suministro del péptido de enlace al receptor Y2, análogos y miméticos, y otros agentes biológicamente activos descritos en la presente, sin efectos colaterales adversos inaceptables . Dentro de más aspectos detallados, se emplea un factor ciliostático específico en una formulación combinada o protocolo de administración coordinada con una o más proteínas del péptido de enlace al receptor Y2, análogos y miméticos, y/o otros agentes biológicamente activos descritos en la presente. Varios factores ciliostáticos bacterianos - aislados y caracterizados en la literatura pueden emplearse dentro de estas modalidades de la invención. Los factores ciliostáticos de la bacteria Pseudomonas aeruginosa incluyen un derivado de fenazina, un compuesto pió (2-alquil-4-hidroxiquinolinas) , y un ramnolipido (también conocido como hemolisina) . El compuesto pió produce ciliostasis a concentraciones de 50 µg/ml y sin lesiones ultraestructurales obvias. El derivado de fenazina también inhibe la motilidad ciliar pero causa alguna interrupción de la membrana, aunque a concentraciones substancialmente mayores de 400 µg/ml. La exposición limitada de explantes traqueales al ramnolipido da como resultado la ciliostasis, que fue asociada con membranas ciliares alteradas. Exposiciones más extensas al ramnolipido se asociaron con la remoción de brazos de dineina de los axonemas. Agente y Métodos activos de superficie Dentro de aspectos más detallados de la invención, pueden emplearse uno o más agentes mejoradores de la penetrtación de membrana dentro de un método de suministro mucosal o formulación de la invención para mejorar el suministro mucosal de la proteína del péptido de enlace al receptor Y2, análogos y miméticos, y otros agentes biológicamente activos descritos en la presente. Los agentes que mejoran la penetración de la membrana en este contexto pueden seleccionarse de: (i) un surfactantee, (ii) una sal biliar, (iii) un aditivo de fosfolípido, micela mezclada, liposoma, o vehículo, (iv) un alcohol, (v) una enamina, (vi) un compuesto donador NO, (vii) una molécula anfipática de cadena larga (viii) un pequeño mejorador de la penetración hidrofóbica; (ix) sodio o un derivado de ácido salicílico; (x) un glicerol éster de ácido acetoacético (xi) una ciclodextrina o derivado de beta-ciclodextrina, (xii) un ácido graso de cadena media, (xiii) un agente de quelación, (xiv) un aminoácido o sal del mismo, (xv) un ácido N-acetilamino o sal del mismo, (xvi) una enzima degradativa para un componente de membrana seleccionado, (xvii) un inhibidor de la síntesis de ácido graso, o (xviii) un inhibidor de la síntesis de colesterol; o (xix) cualquier combinación de los agentes que mejoran la penetración de membrana citados en (i) -(xix). Ciertos agentes activos de superficie se incorporan fácilmente dentro de las formulaciones y métodos de suministro mucosal de la invención como agentes que mejoran la absorción mucosal. Estos agentes, que pueden administrarse coordinadamente o formularse de manera combinatoria con proteínas del péptido de enlace al receptor Y2 análogos y miméticos, y otros agentes biológicamente activos descritos en la presente, pueden seleccionarse de un amplio ensamblaje de surfactantes conocidos. Los surfactantes, gue generalmente caen en tres clases: (1) éteres de poliooxietileno nonionico; (2) sales biliares tales como Glicocolato de Sodio (SGC) y desoxicolato (DOC) ; y (3) derivados de ácido fusidico tal como taurodihidrofusidato de Sodio (STDHF) . El mecanismo de acción de estas diversas clases de estos agentes activos de superficie típicamente incluye la solubilización del agente biológicamente activo. Para proteínas y péptidos que con frecuencia forman agregados, las propiedades activas de superficie de estos promotores de la absorción pueden permitir las interacciones con proteínas de tal manera que las unidades más pequeñas tales como monomeros recubiertos de surfactante puedan mantenerse fácilmente en solución. Ejemplos de otros agents activos de superfdicie son L-a-Fosfatidilcolina Didecanoilo (DDPC) polisorbato 80 y polisorbato 20. Estos monómeros son presumiblemente unidades más transportables que los agregados. Un segundo mecanismo potencial es la protección del péptido o proteína de la degradación proteolítica por proteasas en el ambiente mucosal. Tanto las sales biliares como algunos derivados de ácido fusídico han reportado inhibir la degradación proteolítica de proteínas mediante homogenatos nasales a concentraciones menores o equivalentes a las requeridas para mejorar la absorción de proteína. Esta inhibición de proteasa puede ser especialmente importante para los péptidos con cortas vidas medias biológicas. Enzimas e Inhibidores de Degradación de Acido Graso y - - Síntesis de Colesterol En aspectos relacionados de la invención, las proteínas del péptido de enlace al receptor Y2, análogos y miméticos, y otros agentes biológicamente activos para la administración mucosal se formula o administran coordinadamente con un agente que mejora la penetración seleccionado de una enzima de degradación o un agente estimulador metabólico o un inhibidor de la síntesis de ácidos grasos, esteróles u otros componentes de barrera epitelial seleccionados, Patente de E.U. No. 6,190,894. Por ejemplo, las enzimas degradativas tales como fosfolipasa, hialunidasa, neuraminidasa y condroitinasa pueden emplearse para mejorar la penetración mucosal de la proteína del péptido de enlace al receptor Y2, análogos y miméticos, y otros agente biológicamente activos sin causar daño irreversible a la barrera mucosal. En una modalidad, se emplea condroitinasa dentro de un método o composición como se prevé en la presente para alterar los constituyentes de glicoproteína o glicolipido de la barrera de permeabilidad de la mucosa, , mejorando así la absorción mucosal de las proteínas del péptido de enlace al receptor Y2, análogos y miméticos, y otros agentes biológicamente activos descritos en la presente. Con respecto a los inhibidores y a la síntesis de los constituyentes de barrera mucosal, se anota gue los - ácidos grasos libres responden del 20-25% de los lipidos epiteliales por peso. Dos enzimas gue limitan la tasa en la biosíntesis de ácidos grasos libres son acetil CoA carboxilasa y sintetasa de ácido graso. A través de una serie de etapas, los ácidos grasos libres se etabolizan en fosfolípidos. As, los inhibidores de la síntesis de ácidos grasos libres y el metabolismo para utilizarse dentro los métodos y composiciones de la invención incluyen, pero no se limitan a, inhibidores de acetil CoA carboxilasa tal como ácido 5-tetradeciloxi-2-furancarboxilico (TOFA) ; inhibidores de la sintetasa de ácido graso; inhibidores de fosfolipase A tal como gomisina A, ácido 2- (p-amilcinnamil) amino-4-clorobenzoico, bromuro de bro ofenacilo, monoaluro, ácido 7, 7-dimetil-5, 8-eicosadienoico, nicergolina, cefarantina, nicardipina, quercetina, dibutiril-ciclico 7AMP, R-24571, N-oleoiletanolamina, N- (7-nitro-2, 1, 3-benzoxadiazol-4-il) fosfostidil serina, ciclosporina A, anestésicos tópicos, incluyendo dibucaina, prenilamina, retinoides, tales como todos los ácidos trans y 13-cis-retinoicos, W-7, trifluoperazina, R-24571 (calmidazolio) , l-hexadocil-3-trifluoroetil glicero-sn-2-fosfomentol (MJ33) ; bloqueadores del canal de calcio incluyendo nicardipina, verapamil, diltiazem, nifedipina, y nimodipina; antimalariales que incluyen quinacrina, epacrina, cloroquina e hidroxicloroquina; bloqueadores beta que incluyen propanalol y labetalol; antagonistas de calmodulina; EGTA; timersol; glucocorticosteroides incluyendo dexametasona y prednisolona; y agentes antiinflamatorios no esteroides incluyendo indometacina y naproxen. Los esteróles libres, principalmente colesterol responden del 20-25% de los lípidos epiteliales por peso. La tasa que limita la enzima en la biosíntesis de colesterol es 3-hidroxi-3-metilglutaril (HMG) CoA reductasa. Los inhibidores de la síntesis de colesterol para utilizarse dentro los métodos y composiciones de la invención incluyen, pero no se limitan a, inhibidores competitivos de (HMG) CoA reductasa, tales , como simvastatina, lovastatina, fluindostatina (fluvastatina) , pravastatina, mevastatina, así como otros inhibdores HMG CoA reductasa, tales como oleato de colesterol, sulfato y fosfato de colesterol, y esteróles oxigenados, tales como 25-OH— y 26-OH— colesterol; inhibidores de squaleno sintetasa; inhibidores de squaleno epoxidasa; inhibidores de DELTA7 o DELTA24 reductasas tales como 22, 25-diazacolesterol, 20, 25-diazacolestenol, AY9944, y triparanol. Cada uno de los inhibidores de la síntesis de ácido graso o los inhibidores de la síntesis de sterol pueden administrarse coordinadamente o formularse de manera combinatoria con una o más proteínas del péptido de enlace al receptor Y2, análogos y miméticos, y otros agentes - - biológicamente activos descritos en la presente para lograr la penetración epitelial mejorada del agente (s) activo (s). Un rango de concentración efectivo para el inhibidor de esterol en una formulación terapéutica o auxiliar para el suministro mucosal es generalmente desde apoximadamente 0.0001% hasta aproximadamente 20% por peso del total, más típicamente desde apoximadamente 0.01% hasta aproximadamente De- . Agentes y Métodos donadores de Oxido Nítrico Dentro de otros aspectos relacionados de la invención, un donador de óxido nítrico (NO) se selecciona como un agente que mejora la penetración de la membrana para mejorar el suministro mucosal de una o más proteínas del péptido de enlace al receptor Y2, análogos y miméticos, y otros agentes biológicamente activos descritos en la presente. Varios donadores NO se conocen en la técnica y son útiles en concentraciones efectivas dentro de los métodos y formulaciones de la invención. Los donadores NO ejemplares incluyen, pero no se limitan a, nitroglicerina, nitroprusida, NOC5 [3-(2-hidroxi-l-(metil-etil)-2-nitrosohidrazino)-l-propanamina] , N0C12 [N-etil-2- (l-etil-hidroxi-2-nitrosohidrazino) -etanamina] , SNAP [S-nitroso-N-acetil-DL-penicilamina] , NORI y NOR4. Dentro los métodos y composiciones de la invención, una cantidad efectiva de un donador NO seleccionado se administra coordinadamente o se - formula de manera combinatoria con una o más proteínas del péptido de enlace al receptor Y2, análogos y miméticos, y/o otros agentes biológicamente activos descritos en la presente, en o a través del epitelio mucosal. Agentes para Modular la Estructura de Unión Epitelial y/o la Fisiología La presente invención proporciona composiciones farmacéuticas gue contienenen una o más proteínas del péptido de enlace al receptor Y2, análogos o miméticos, y/o otros agentes biológicamente activos en combinación con agentes que mejoran el suministro mucosal descritos en la presente formulados en una preparación farmacéutica para el suministro mucosal. El agente de permeabilización mejora de manera reversible el transporte paracelular epitelial mucosal, típicamente al modular la estructura de unión epitelial y/o la fisiología en la superficie . epitelial mucosal en el sujeto. Este efecto típicamente involucra la inhibición mediante el agente de permeabilización de enlace homotípico o herotípico entre las proteínas adhesivas a la membrana epitelial de las células epiteliales circundantes. Las proteínas objetivo para este bloqueo de enlace homotípico o heterotípico puden seleccionarse de varias moléculas de adhesión conjuntiva relacionadas (JAMs) , ocludinas, o claudinas. Ejemplos de esto son los anticuerpos, los fragmentos de anticuerpo o los anticuerpos de cadena simple que se enlazan a los dominios extracelulares de estas proteínas . En aún modalidades adicionales detalladas, la invención proporciona los péptidos de permeabilización y análogos de péptidos y miméticos para mejorar el transporte parecelular epitelial mucosal. Los péptidos y análogos de péptidos y miméticos objetivo típicamente funcionan dentro de las composiciones y métodos de la invención al modular la estructura de unión epitelial y/o la fisología en un sujeto mamífero. En ciertas modalidades, los péptidos y análogos de péptidos y miméticos inhiben de manera efectiva el enlace homotípico y/o heterotípico de una proteína adhesiva de membrana epitelial seleccionada de una molécula de adhesión conjuntiva (JAM) , ocludina, o claudina. Uno de tales agentes que ha sido ampliamente estudiado es la toxina bacteriana de Vibrio cholerae conocida como la "toxina zonula occludens" (ZOT) . Esta toxina media la permeabilidad mucosal intestinal incrementada y ocasiona síntomas de enfermedad incluyendo diarrea en sujetos infectados. Fasano et al, Proc. Nat. Acad. Sci., U.S.A., 8:5242-5246 (1991). Cuando se probó en mucosa ileal de conejo, ZOT incrementó la permeabilidad intestinal al modular la estructura de las uniones herméticas intercelulares. Mas recientemente se ha encontrado que ZOT es capaz de abrir de - - manera reversible las uniones herméticas en la mucosa intestinal. También se ha reportado que ZOT es capaz de abrir de manera reversible las uniones herméticas en la mucosa nasal. Pat de E.U. No. 5,908,825. Dentro de los métodos y composiciones de la invención, ZOT, así como varios análogos y miméticos de ZOT que funcionan como agonistas o antagonistas de la actividad de ZOT, son útiles para mejorar el suministro intranasal de agentes biológicamente activos—al incrementar la absorción paracelular en y a través de la mucosa nasal. En este contexto, ZOT típicamente actúa al ocasionar una reorganización estructural de las uniones herméticas marcadas por la localización alterada de la proteína de unión ZOl. Dentro de estos aspectos de la invención, ZOT se administra coordinadamente o se formula de manera combinatorial con el agente biológicamente activo en una cantidad efectiva para producir la absorción significativamente mejorada del agente activo, al incrementar de manera reversible la permeabilidad mucosal nasal sin efectos colaterales adversos sustanciales. Agentes y Métodos Vasodilatadores Aún otra clase de agentes que promueven la absorción que muestran utilidad benéfica dentro de los métodos y composiciones de la administración coordinada y la formulación combinatorial de la invención son compuestos vasoactivos, más específicamente vasodilatadores. Estos compuestos funcionan dentro de la invención para modular la estructura y fisiología de la vasculatura submocosal, incrementando la tasa de transporte del péptido de enlace al receptor Y2, análogos y miméticos, y otros agentes biológicamente activos hacia o a través del epitelio mucosal y/o tejidos o compartimientos objetivos específicos (e.g., la circulación sistémica o sitema nervioso central) . Los agentes vasodilatadores para utilizarse dentro de la invención típicamente causan una relajación vascular sanguínea submucosal ya sea por una disminución en el calcio citoplasmático, un incremento en el óxico nítrico (NO) o inhibiendo la cinasa de cadenas ligeras de miosina. Estos generalmente se dividen en 9 clases: antagonistas de calcio, abridores del canal de potacio, inhibidores ACE, antagonistas del receptor de angiotensina-II, antagonistas del receptor a-adrenergico e imidazol, agonista adrenérgico ßl, inhibidores de fosfodiesterasa, eicosanoides y donadores de NO. A pesar de las diferencias químicas, las propiedades farmacocinéticas de los antagonistas de calcio son similares. La absorción en la circuición sistémica es alta y por tanto estos agentes sufren un considerable metabolismo de primer paso por el hígado, dando como resultado una variación individual en las farmacocinéticos. La vida media de los antagonistas de calcio es corta excepto por las nuevas drogas del tipo dihidropiridina (amlodipina, felodipina, isradipina, nilvadipina, nisoldipina y nitrendipina) . Por lo tanto, para mantener la concentración efectiva de la droga para muchos de estos, puede requerirse el suministro de múltiples dosis, o formulaciones de liberación controlada, como se describe en otra parte en la presente. El tratamiento con minoxidilo de abridor del canal de potacio puede también limitarse en la forma y nivel de administración debido a sus potenciales efectos colaterales adversos. Los inhibidores ACE previenen la conversión de la angiotensina-I a antiotensina-II, y son más efectivos cuando se incrementa la producción de renina. Ya gue ACE es idéntica a cininasa-II gue inactiva al potente vasodilatador endógeno de bradiquinina, la inhibición de ACE causa una reducción en la degradación de la bradiquinina. Los inhibidores ACE proporcinan la ventaja agregada de los efectos cardioprotectores y cardioreparadores, al prevenir y revertir la fibrosis cardiaca y la hipertrofia ventricular en modelos animales. La trayectoria de eliminación predominante de la mayoría de los inhibidores ACE es a través de la excreción renal. Por tanto el deterioro renal se asocia con la eliminación reducida y se recomienda una reducción del 25 al 50% en la dosificación en pacientes con moderado o severo deterioro renal. Respecto a los donadores de NO, estos compuestos son particularmente útiles dentro de la invención por sus efectos adicionales en la permeabilidad de la mucosa. Además de los donadores de NO antes anotados, los complejos de NO con nucleófilos llamados NO/nucleófilos, o NONOatos, de manera espontánea y no enzimaticamente liberan NO al disolverse en solución acuosa a PH fisiológico. En contraste, los nitro vasodilatadores tales como la nitroglicerina reguiere de la actividad enzimática específica para la liberación de NO. Los NONOatos liberan NO con una definida estoquiometría y a tasas predecibles que varían desde <3 minutos para la dietilamina/NO hasta aproximadamente 20 horas para la dietilenetriamina/NO (DETANO) . Dentro de ciertos métodos y composiciones de la invención, un agente vasodilatador seleccionado se administra de manera coordinada o formulada de manera combinatoria (e.g., de manera sistémica o intranasal, simultáneamente o en asociación temporal combinatorialmente efectiva) con uno o más péptidos de enlace al receptor Y2, análogos y miméticos, y otro(s) agente (s) biológicamente activo (s) para mejorar la absorción mucosal de el (los) agente (s) activo (s) para alcanzar el tejido o compartimiento objetivo en el sujeto (e.g., el hígado, vena hepática porta, tejido o fluido del CNS, o plasma sanguíneo) . Agentes y Métodos que Mejoran el transporte selectivo Las composiciones y métodos de suministro de la invención de manera opcional incorporan un agente mejorador - del transporte selectivo que facilita el transporte de uno o más agentes activos biológicamente. Estos agentes mejoradoes del transporte pueden emplearse en formulación combinatorial o protocolo de administración coordinada con una o más proteínas del péptido de enlace al receptor Y2, análogos y miméticos descritos en la presente, para mejorar el suministro de manera coordinada de uno o más agente (s) biológicamente activo (s) a través de las barreras de transporte mucosal, para mejorar el suministro mucosal de el (los) agente (s) activo (s) para alcanzar el tejido o compartimiento objetivo en el sujeto (e.g., el epitelio mucosal, hígado, tejido o fluido del CNS, o plasma sanguíneo). Alternativamente, los agentes mejoradotes del transporte pueden emplearse en una formulación combinatorial o protocolo de administración coordinada para directamente mejorar el suministro mucosal de uno o más de las proteínas del péptido de enlace al receptor Y2, análogos y miméticos, con o sin el suministro mejorado de un agente biológicamente activo adicional. Los agentes mejoradores del transporte selectivo ejemplares para utilizarse dentro de este aspecto de la invención incluyen, pero no se limitan a, glicósidos, moléculas que contienen azúcar, y agentes de enlace tales como agentes de enlace de lectina, los cuales se conoce por interactúar específicamente con los componentes de la barrera de transporte epitelial. Por ejemplo, los ligandos específicos "bioadhesivos", que incluyen varias lecitinas de planta y bacteria que se enlazan a los residuos de azúcar de la superficie celular mediante interacciones mediadas por receptor, pueden emplearse como portadores o mediadores de transporte conjugados para mejoramiento mucosal, e.g., el suministro nasal de agentes biológicamente activos dentro de la invención. Ciertos ligandos bioadhesivos para utilizarse dentro de la invención mediarán la transmisión de señales giológicas a las células epiteliales objetivo que activan la absorción selectiva del ligando adhesivo mediante procesos especializados de transporte celular (endocitosis o transcitosis) . Por lo tanto, estos mediadores del transporte pueden emplearse como un "sistema portador" para estimular o dirigir la absorción selectiva de una o más proteínas del péptido de enlace al receptor Y2, análogos y miméticos, y otro(s) agente (s) biológicamente activo (s) hacia y/o a través del epitelio mucosal. Estos y otros agentes mejoradores del transporte mejoran significativamente el suministro mucosal de biofarmacéuticos macromoleculares (de manera particular péptidos, proteínas, vectores de oligonucleotidos y polinucleotidos) dentro de la invención. Las lectinas son proteínas de plantas que se enlazan a azúcares específicos encontrados en la superficie de las glicoproteínas y los glicolípidos de células eucarióticas. Las soluciones - - concentradas de lecitinas tienen un efecto "mucotractor" y varios estudios han demostrado la rápida endocitosis mediada por receptor (RME) de lecitinas y conjugados de lecitina (e.g., concanavalina A conjugada con partículas de oro coloidal) a través de las superficies mucosales. Estudios adicionales han reportado que pueden utilizarse los mecanismos de absorción para lecitinas para drogas de objetivo intestinal in vivo. En algunos de estos estudios, se acoplaron de manera covalente nanopartículas de poliestireno (500nm) con lecitina de tomate y se reportó un rendimiento de absorción sistémica mejorada después de la administración oral a ratas. Además de las lecitinas de plantas, los factores de adhesión microbiana e invasión proporcionan una rica fuente de candidatos para utilizarse como portadores de transporte adhesivos/selectivos dentro de los métodos y composiciones de suministro nucosal de la invención. Dos componentes son necesarios para los procesos de adherencia bacteriana, una "adhesina" bacteriana (factor de adherencia o colonización) y un receptor en la superficie celular del huésped. Las bacterias causantes de infecciones mucosales necesitan penetrar la capa de moco antes de adherirse por ellas mismas a la superficie epitelial. Esta adhesión es mediada usualmente por fimbria bacteriana o estructuras piliares, sin embargo otros componentes de la superficie celular también pueden tomar parte en este proceso. Las bacterias adherentes colonizan los epitelios mucosos mediante la multiplicación e inicio de una serie de reacciones bioquímicas dentro de la célula objetivo a través de mecanismos de transducción de señal (con o sin la ayuda de toxinas) . Se conoce una amplia diversidad de proteínas bioadhesivas (e.g., invasina, internalina) asociadas con estos mecanismos invasivos, originalmente producidas por varias bacterias y virus. Estas permiten la adhesión extracelular de dichos microorganismos con una impresionante selectividad para las especies huéspedes y aún para tejidos objetivos en particular. Las señales transmitidas por tales interacciones receptor-ligando dirigen el transporte de microorganismos vivos intactos hacia y eventualmente a través de células epiteliales por medio de procesos endo y transcitoticos . Tal fenómeno que ocurre de manera naturalmente puede aprovecharse (e.g., acomplej ando agentes biológicamente activos tales como el péptido de enlace al receptor Y2 con una adhesina) de acuerdo con las enseñanzas en la presente para mejorar el suministro de compuestos biológicamente activos hacia o a través de los epitelios mucosales y/o para otros sitios designados como objetivo para la acción de droga. Varias toxinas de bacterias y plantas que se enlazan a superficies epiteliales en una manera específica similar a lectina también son útiles dentro los métodos y composiciones - de la invención. Por ejemplo, la toxina de difteria (DT) entra a las células huésped rápidamente mediante RME. De igual modo, la subunidad B de la toxina lábil al calor de E. coli se enlaza al borde de cepillo de las célula epiteliales intestinales en una manera similar a lectina altamente específica. La absorción de esta toxina y la transitosis hacia el lado basolateral de los enterocitos se ha reportado in vivo e in vitro. Otras investigaciones han expresado el dominio de transmembrana de la toxina de difteria en E. coli como una proteína de fusión de enlace a maltosa- y acoplada químicamente a poli-L-lisina de alto-Mp. Los complejos resultantes se utilizaron exitosamente para mediar la internalización de de un gen informador in vitro. Además de estos ejemplos, el Staphylococcus aureus produce un conjunto de proteínas (e.g., enterotoxina A estafilococal (SEA), SEB, toxina del síndrome de choque tóxico 1 (TSST- 1) que actúa tanto como superantígenos como toxinas. Los estudios relativos a estas proteínas han reportado transitosis facilitada dependiente de la dosis-, de SEB y TSST- I in células Caco-2. Las hemaglutininas virales comprenden otro tipo de agente de transporte para facilitar el suministro mucosal de agentes biológicamente activos dentro de los métodos y composiciones de la invención. La etapa inicial en muchas infecciones virales es el enlace de las proteínas de - superficie (hemaglutininas) a las células mucosales. Estas proteínas de enlace se han identificado para la mayoría de los virus, incluyendo rotaviruses, varicella zoster virus, virus semliki forest, adenoviruses, virus leafroll de la papa, y reovirus. Estas y otras hemaglutininas virales ejemplares pueden emplearse en una formulación combinatorial (e.g., una mezcla o formulación de conjugado) o un protocol de administración coordinada con uno o más del péptido de enlace al receptor Y2, análogos y miméticos descritos en .la presente, para mejorar coordinadamente el suministro mucosal de uno o más agente (s) biológicamente activos (s) adicionales. Alternativamente, las hemaglutininas virales pueden emplearse en una formulación combinatorial o protocolo de administración coordinada para directamente mejorar el suministro mucosal de uno o más de la proteína del péptido de enlace al receptor Y2, análogos y miméticos, con o sin el suministro mejorado de un agente biológicamente activo adicional . Una variedad de factores endógenos, selectivos que median el transrte se encuentran también disponibles para utilizarse dentro de la invención. Las células de mamífero han desarrollado una variedad de mecanismos para facilitar la internalización de sustratos específicos y dirigir estos a compartimentos definidos. Colectivamente, estos procesos de deformaciones de membrana se llaman ?endocitosis' y comprenden fagocitosis, pinocitosis, endocitosis mediada por receptor (RME mediada por clatrina-) , y potocitosis (RME no mediada por clatrina-) . RME es un proceso biológico cellular altamente específico por el cual, como su nombre implica, varios ligandos se enlazan a los receptores de la superficie celular y se internalizan subsecuentemente y transitan dentro de la célula. En muchas células el proceso de endocitosis es tan activo que la superficie de la membrane completa se internaliza y recoloca enmenos de una hora. Se han propuesto dos clases de receptres en base a su orientación en la membrane celular; la terminal amino de los receptores Tipo I que se localizan en el lado extracelular de la membrana, mientras que los receptores Tipo II que tienen esta misma parte final de proteína en el medio intracelular. Aún otras modalidades de la invención utilizan transferrina como un vehículo o estimulante de RME de agentes biológicamente activos mucosalmente suministrados. La transferrina, una glicoproteína que transporta hierro de 80 kDa, se absorbe eficientemente en las células mediante RME. Los receptores de transferrina se encuentran en la superficie de la mayoría de las células proliferantes, en números elevados en eritroblastos y en muchas clases de tumores. La transitosis de transferrina (Tf) y los conjugados de transferrina se han reportado mejorados en la presencia de Brefeldina A (BFA) , un metabolito fungal. En otros estudios, - - el tratamiento BFA se ha reportado que incrementa rápidamente la endocitosis apical tanto de ricina como HRP en células MDCK. Así, BFA y otros agentes que estimulan el transporte mediado por receptor pueden emplearse dentro de los métodos de la invención como agentes - formulados de manera combinatorial (e.g., conjugados) y/o coordinadamente administrados para mejorar el transporte mediado por receptor de agentes biológicamente activos, incluyendo el péptido de enlace al receptor Y2 proteínas, análogos y miméticos. Vehículos y Métodos de Suministro Polimérico Dentro de ciertos aspectos de la invención, el péptido de enlace al receptor Y2 proteínas, análogos y miméticos, otros agentes biológicamente activos descritos en la presente, y agentes que mejoran el suministro como se describió anteriormente, se encuentran individual o de manera combinatorial dentro de una formulación mucosalmente administrada (e.g., nasalmente) que incluye un polímero compatible que funciona como un vehículo o base. Tales vehículos de polímero incluyen polvos poliméricos, matrices o vehículos de suministro de microparticulado, entre otras formas de polímero. El polímero puede ser de origen de plant, animal, o sintético. Frecuentemente el polímero es reticulado. Adicionalmente, en estos sistemas de suministro el péptido de enlace al receptor Y2, análogos o miméticos, puedn funcionalizarse enana manera en donde pueda enlazarse - - covalentemente al polímero y volverse inseparable del polímero por simple lavado. En otras modalidades, el polímero se modifica químicamente con un inhibidor de enzimas u otros agentes que pueden degradar o inactivar a el (los) agente (s) biológicamente activo (s) y/o agente (s) que mej ora (n) el suministro. En ciertas formulaciones, el polímero es un polímero partial o completetamente insoluble en agua pero que es hidrofílico, e.g., un hidrogel. Los polímeros útiles en este aspecto de la invención son deseablemente de naturaleza interactivos y/o hidrofílicos en agua para absorber cantidades significativas de agua, y frecuentemente forman hidrogels cuando se colocan en contacto con el agua o medio acuoso durante un periodo de tiempo suficiente para alcanzar el equilibrio con el agua. En modalidades más detalladas, el polímero es un hidrogel que, cuando se coloca en contacto con un exceso de water, absorbe al menos dos veces su peso de agua en equilibrio cuando se expone al agua a temperatura ambiente, Patente de E.U. No. 6,004,583. Los sistemas de suministro de drogas basados en polímeros biodegradables se prefieren en muchas aplicaciones biomédicas debido a que tales sistemas se degradan ya sea mediante hidrólisis o mediante reacción enzimática en moléculas no tóxicas. La tasa de degradation se controla al manipular la composición de la matriz de polímero - biodegradable. Estos tipos de systems pueden por lo tanto emplearse en ciertos entornos para liberación a largo plazo de agentes biológicamente activos. Los polímeros biodegradables tales como poli (ácido glicólico) (PGA) , poli- (ácido láctico) (PLA), y poli (D,L-ácido lactic-co-glicólico) (PLGA) , han recibido considerable atención como posibles vehículos de suministro de droga, ya que los products de degradación de estos polímeros se han encontrado tener baja toxicidad. Durante la función metabólica normal del cuerpo, estos polímeros se degradan en dióxido de carbono y agua. Estos polímeros también han exhibido excelente biocompatibility. Para prolongar la actividad biológica del péptido de enlace al receptor Y2, análogos y miméticos, y otros agentes biológicamente activos descritos en la presente, así como agentes opcionales que mejoran el suministro, estos agentes pueden incorporarse en matrices poliméricas, e.g., poliortoésteres, polianhidridos, o poliésteres. Esto produce actividad y liberación sostenida de el (los) agente (s) activo (s), e.g., según se determina por la degradación de la matriz de polímero. Aunque la encapsulación de moléculas bioterapéuticas dentro de polímeros sintéticos puede estabilizarlos durante el almacenamiento y el suministro, el obstáculo más grande de la tecnología de liberación a base de polímero es la pérdida de actividad de las moléculas - terapéuticas durante los procesos de formación que frecuentemente involucran calor, sonicación o solventes orgánicos . Los polímeros que promueven la absorción contemplados para utilizarse dentro de la invención pueden incluir derivados y versiones químicamente o físicamente modificadas de los tipos anteriores de polímeros, además de otros polímeros que se presentan de manera natural o sintéticos, gomas, resinas, y otros agentes, así como mezclas de estos materiales entre sí u otros polímeros, mientras las alteraciones, modificaciones o mezclas no afecten adversamente las propiedades deseadas, tal como absorción de agua, formación de hidrogel, y/o estabilidad química para la aplicación útil. En aspectos más detallados de la invención, los polímeros tales como nylon, acrilan y otros polímeros sintéticos normalmente hidrofóbicos pueden modificarse suficientemente mediante reacción para volverse hidrófilo y/o formar gels estables en un medio acuoso. Los polímeros de la invención que promueven la absorción pueden incluir polímeros del grupo de homo- y copolímeros en base a varias combinaciones de los siguientes monómeros de vinilo: ácidos acrílicos y metacrílicos, acrilamida, metacrilamida, hidroxietilacrilato o metacrilato, vinilpirrolidonas, así como polivilalcoholes y sus co- y terpolímeros, polivinilacetate, sus co- y terpolímeros con los monómero arriba listados y ácido 2-acrilamido-2-metil-propanosulfónico (AMPS®) . Muy útil son los copolímeros del los monómeros arriba listados con monómeros funcionales copolimerizables tales como acril o metacril amida acrilato o metacrilato esteres en donde los grupos éster se derivan de alquilo de cadena recta o ramificada, arilo que tenga hasta cuatro anillos aromáticos que pueden contener sustituyentes de alquilo de 1 a 6 carbonos; esteroides, sulfatos, fosfatos o monómeros catiónicos tales como N,N-dimetilaminoalquil (met) acrilamida, dimetilaminoalquil (met ) acrilato, cloruro de (met) acriloxialquiltrimetilammonio, cloruro de (met) acriloxialquildimetilbencil ammonio . Los polímeros adicionales que promueven la absorción para utilizarse dentro de la invención son los clasificados como dextranos, dextrinas, y de la clase de materiales clasificados como gomas y resinas naturales, o de la clase de polímeros naturales tales como colágeno procesado, quitina, quitosan, pullalan, zooglan, alginatos y alginatos modificados tales como "Kelcoloid" (a polipropilen glicol alginato modificado) gomas gellan tales como "Kelocogel", gomas Xanatano tales como "Keltrol", estastina, alfa hidroxi butirato y sus copolímeros, ácido hialurónico y sus derivados, ácidos poliláctico y glicólico. Una clase muy útil de polímeros aplicable dentro de la presente invención son los ácidos carboxílicos olefínicamente insaturados que contienen al menos un doble enlace olefínico carbono a carbono activado, y al menos un grupo carboxilo; es decir, un ácido o grupo funcional fácilmente convertido a un ácido que contiene un doble enlace olefínico que funciona fácilmente en la polimerización debido a su presencia en la molécula de monómero, ya sea en la posición alfa-beta con respecto a un grupo carboxilo, o como parte de una agrupacióna de metileno terminal. Los ácidos olefínicamente insaturados de esta clase incluyen tales materiales como los ácidos acrílicos tipificados por el ácido acrílico en sí mismo, ácido acrílico alfa-ciano, ácido beta metilacrílico (ácido crotónico) , ácido alfa-fenil acrílico, ácido beta-acriloxi propiónico, ácido cinámico, ácido p-cloro cinámic, ácido l-carboxi-4-fenil butadieno-1, 3, ácido itacónico, ácido citracónico, ácido mesacónico, ácido glutacónico, ácido aconítico, ácido maléico, ácido fumárico, y tricarboxi etileno. Como se utiliza en la presente, el término "ácido carboxílico" incluye los ácidos policarboxílicos y los ácidos anhídridos, tales como anhídrido maléico, en donde el grupo anhídrido se forma mediante la eliminación de una molécula de agua de dos grupos carboxilo localizados en la misma molécula de ácido carboxílico. Acrilatos representativos útiles como agentes que - promueven la absorción dentro de la invención incluyen metil acrilato, etil acrilato, propil acrilato, isopropil acrilato, butil acrilato, isobutil acrilato, metil metacrilato, metil etacrilato, etil metacrilato, octil acrilato, heptil acrilato, octil metacrilato, isopropil metacrilato, 2- etilhexil metacrilato, nonil acrilato, hexil acrilato, n-hexil metacrilato, y lo similar. Esteres alquil acrílicos mayores son decil acrilato, isodecil metacrilato, lauril acrilato, estearil acrilato, behenil acrilato y melisil acrilato y versiones de metacrilato de los mismos. Las mezclas de dos o trees o más esteres acrílicos de cadena larga pueden polimerizarse de manera exitosa con uno de los monómeros carboxílicos. Otros comonómeros incluyen olefinas, incluyendo alfa olefinas, vinil éteres, vinil esteres, y mezclas de los mismos. Otros monómeros de vinilideno, que incluyen los nitrilos acrílicos, también pueden utilizarse como los agentes que promueven la absorción dentro de los métodos y composiciones de la invención para mejorar el suministro y la absorción de uno o más de las proteínas del péptido de enlace al receptor Y2, análogos y miméticos, y otro(s) agente (s) biológicamente activo (s), incluyendo para mejorar el suministro de el (los) agente (s) activo (s) a un tejido o compartimento objetivo en el sujeto (e.g., el hígado, vena porta hepática, tejido o fluido CNS, o plasma sanguíneo) .

- - Los nitrilos alfa, beta-olefínicamente insaturados útiles son nitrilos preferentemente monoolefínicamente insaturados que tengan desde 3 hasta 10 átomos de carbono tales como acrilonitrilo, metacrilonitrilo, y lo similar. Los más preferidos son acrilonitrilo y metacrilonitrilo. Las amidas acrílicas que contienen desde 3 hasta 35 átomos de carbono incluyendo amidas monoolefínicamente insaturadas también pueden utilizarse. Las amidas representativas incluyen acrilamida, metacrilamida, N-t-butil acrilamida, N-ciclohexil acrilamida, alquil amides mayores, en donde el grupo alquilo en el nitrógeno contiene desde 8 hasta 32 átomos de carbono, amidas acrílicas incluyendo N-alquilol amidas de ácidos carboxílicos alfa, beta-olefínicamente insaturados incluyendo los que tengan desde 4 hasta 10 átomos de carbono tales como N-metilol acrilamida, N-propanol acrilamida, N-metilol metacrilamida, N-metilol maleimide, esteres de ácido N-metilol maleámico, N-metilol-p-vinil benzamida, y lo similar. Aún materiales que promueven la absorción adicionales útiles son las alfa-olefinas que contienen desde 2 hasta 18 átomos de carbono, más preferentemente desde 2 hasta 8 átomos de carbono; dienos que contienen desde 4 hasta 10 átomos de carbono; vinil esteres y alil esteres tales como vinil acétate; vinil aromáticos tales como estireno, metil estireno y cloro-estireno; vinil y alil éteres y cetonas tales como vinil metil éter y metil vinil cetona; - cloroacrilatos; cianoalquil acrilatos tales como alfa- cianometil acrilato, y los alfa-, beta-, y gama-cianopropil acrilatos; alcoxiacrilatos tales como metoxi etil acrilato; haloacrilatos como cloroetil acrilato; vinil haluros y vinil cloruro, viniliden cloruro y lo similar; divinilos, diacrilatos y otros monómeros polifuncionales tales como divinil éter, dietilen glycol diacrilato, etilen glycol dimetacrilato, metilene-bis-acrilamida, alilpentaeritritol, y lo similar; y bis (beta-haloalquil) alquenil fosfonatos tales como bis (beta-cloroetil) vinil fosfonato y lo similar como se conoce por los expertos en la técnica. Los copolímeros en donde el monómero que contiene carboxi es un constituyente de espejo, y los otros monómeros de vinilideno presentes como componentes principales se preparan fácilmente de acuerdo con los métodos descritos en la presente. Cuando los hidrogeles se emplean como agentes que promueven la absorción dentro de la invención, estos pueden estar compuetsos de copolímeros sintéticos del grupo de ácidos acrílicos y metacrílicos, acrilamida, metacrilamida, hidroxietilacrilato (HEA) o metacrilato (HEMA) , y vinilpirrolidonas que son interactivas con el agua e hidrófilas. Ejemplos específics ilustrativos de polímeros útiles, especialmente para el suministro de péptidos o proteínas, son los siguientes tipos de polímeros: (met) acrilamida y de 0.1 a 99 wt. % de ácido (met) acrílico; - - (met) acrilamidas y 0.1-75 % por peso de cloruro de (met) acriloxietil trimetilammonio; (met ) acrilamida y 0.1-75 % por peso de (met) acrilamida; ácido acrílico y 0.1-75 % por peso de alquil (met) acrilatos; (met) acrilamida y 0.1-75 % por peso de 7?MPS.RTM. (marca comercial de Lubrizol Corp.); (met) acrilamida y de 0 hasta 30 % por peso de alquil (met) acrilamidas y 0.1-75 % por peso de AMPS. TM.; (met) acrilamida y 0.1-99 wt . % de HEMA; (metb) acrilamida y de 0.1 a 75 % por peso de HEMA y de 0.1 a 99% de ácido (met) acrílico; ácido (met) acrílico y 0.1-99 % por peso HEMA; 50 moles % de vinil éter y 50 moles % de anhídrido maléico; (met) acrilamida y de 0.1 a 75 % por peso de cloruro de (met) acriloxialquil dimetil bencilammonio; (met) acrilamida y de 0.1 a 99 % por peso de vinil pirrolidona; (met) acrilamida y 50 % por peso de vinil pirrolidona y 0.1-99.9 % por peso de ácido (met) acrílico; ácido (met ) acrílico y 0.1 to 75 % por peso de AMPS. RTM. y 0.1-75 % por peso de alquil (met) acrilamida. En los ejemplos anteriores, alquilo significa Cl a C30, preferentemente Cl a C22, lineal y ramificado y de C4 a C16 cíclico; en donde (met) se utiliza, significa que los monómeros con y sin el grupo metilo se encuentran incluidos. Otros polímeros de hidrogel muy útiles son hidrófilos, pero versiones insolubles de poli (vinil pirrolidona) almidón, carboximetil celulosa y polivinil alcohol.

Los materiales de hidrogel polimérico adicionales útiles dentro de la invención incluyen hidrogeles (poli) hidroxialquil (met) acrilato: aniónico y catiónico: complejos de poli (electrolito) ; poli (vinil alcoholes) que tenga un residual de acetato bajo: una mezcla esponjable de agar reticulado y carboximetil celulosa reticulada: una composition esponjable que comprrende metil celulosa mezclada con un agar económicamente reticulado; un copolímero hidrófilico producido por una dispersión del copolímero finamente dividido de anhídrido maléico con estireno, etileno, propileno, o isobutileno; un polímero hidrófilo de N-vinil lactamos; sales de sodio esponjables de carboximetil celulosa; y lo similar. Otros fluidos gelificables, que inhiben y retienen los polímeros útiles para formar el hidrogel hidrofílico para el suministro mucosal de agentes biológicamente activos dentro de la invención incluyen pectina; polisácaridos tales como agar, acacia, Baraya, tragacanto, alginas y guar y sus versiones reticuladas; polímeros de ácido acrílico, derivados de copolímeros y sales, poliacrilamidas; polímeros de anhídrido maléico de indeno hidrófilo; copolímeros de injerto de almidón; polímeros y copolímeros tipo acrilato con absorbencia de agua de apoximadamente 2 a 400 veces su peso original; diésteres de poliglucano; una mezcla de poli (vinil alcohol reticulado) y poli (N-vinil-2-pirrolidona) ; geles de - copolímero de bloque polioxibutileno-polietileno; goma carob; geles de poliéster; geles de poli urea; geles poliéter; geles de poliamide; geles de poliimide; geles de polipéptido; geles de ácido poliamino; geles poli celulósicos; polímeros de indene-acrilato de anhídrido maléico reticulados; y polisacáridos . Los polímeros de hidrogel sintéticos para utilizarse dentro de la invención pueden elaborarse mediante una combination infinita de varios monómeros en varias proporciones. El hidrogel puede reticularse y generalmente posee la capacidad de inhibir y absorber fluido y aumentar de volumen o expandirse a un estado de equilibrio agrandado. El hidrogel típicamente aumenta de volumen o se expande al suministrarse a la superficie mucosal nasal, aborbiendo apoximadamente 2-5, 5-10, 10-50, hasta 50-100 o más veces su peso de agua. El grado óptimo de capacidad de aumento de volumen para un hidrogel dado se determinará por diferentes agentes biológicamente activos dependiendo de factores tales como peso molecular, tamaño, solubilidad y características de difusión del agente activo portado o atrapado o encapsulado dentro del polímero, y el espacio específico y movimiento de la cadena cooperativa asociada con cada polímero individual. Los polímeros hidrófilos dentro de la invención son insolubles en agua pero hidrófilos. Tales polímeros aumentados de volumen por el agua típicamente se refieren - - como hidrogeles o geles. Tales geles pueden producirse convenientemente a partir del polímero soluble en agua por el proceso de reticular el polímeros por un agente de reticulación adecuado. Sin embargo, los hidrogeles estables también pueden formarse de polímeros específicos bajo condiciones de definición de pH, temperatura y/o concentración iónica, de acuerdo con métodos conocidos en la técnica. Típicamente los polímeros se retícula, es decir, se retícula hasta el grado que los polímeros poseen buenas propiedades hidrofílicas, tienen integridad física mejorada (en comparación a los polímeros no reticulados del mismo o similar tipo) y exhiben capacidad mejorada para retener dentro de la red de gel tanto el agente biológicamente activo de interés como los compuestos adicionales para la co-administración con el mismo tal como una citosina o el inhibidor de enzima, mientras retiene la capacidad para liberar el (los) agente (s) activo (s), en la ubicación y tiempo apropiados . Generalmente los polímeros de hidrogel para utilizarse dentro de la invención se reticulan con una reticulación difuncionak en la cantidad de desd 0.01 hasta .25 porciento por peso, en base al peso de los monómeros que forman el copolímero, y más preferentemente desde 0.1 hasta 20 porciento por peso y con más frecuencia desde 0.1 hasta 15 porciento por peso del agente de reticulación. Otra cantidad - útil de un agente de reticulación es 0.1 a 10 porciento por peso. Los agentes de reticulación tri, tetra o multifuncionales mayores también pueden emplearse. Cuando se utilizan tales reactivos, pueden requerirse cantidades menores para lograr la densidad de reticulación equivalente, i.e., el grado de reticulación, o propiedades de red que sean suficientes para contener de manera efectiva el (los) agente (s) biológicamente activo (s). Las reticulaciones pueden ser covalentes, iónicas o de enlaces de hidrógeno con el polímero que posee la capacidad para aumentar de volumen en la presencia de agua que contiene fluidos. Tales reticuladores y reacciones de reticulación se conocen por los de experiencia en la técnica y en muchos casos dependen del sistema polimérico. Así una red de reticulación puede formarse por la copolimerización del radical libre de monómeros insaturados. Los hidrogeles polimeric también pueden formarse mediante reticulación realizada por polímeros al hacer reaccionar grupos funcionáis encontrados en los polímeros tales como alcohols, ácidos, aminas con tales grupos como glioxal, formaldehido o glutaraldehído, bis anhídridos y lo similar. El polímeros también pueden reticularse con cualquier polieno, e.g. decadieno o trivinil ciciohexano; acrilamidas, tal como N, N-metilen-bis (acrilamida); acrilatos polifuncionales, tal como trimetilol propano triacrilato; o - - monómero de vinilideno polifuncional que contiene al menos 2 grupos terminal CH2 <, que incluyen, por ejemplo, divinil benceno, divinil naftleno, alil acrilatos y lo similar. En ciertas modalidades, los monómeros de reticulación para utilizarse en la preparación de los copolímeros son polialquenil poliéteres que tienen más de una agrupación de alquenil éter por molécula, que pueden poseer opcionalmente grupos alquenil en los cuales se presenta un doble enlace olefínico unido a una agrupación de metileno terminal (e.g., hechos por la éterificación de a alcohol polihídrico gue contiene al menos 2 átomos de carbono y al menos 2 grupos hidroxilo) . Los compuestos de esta clase pueden producirse al reaccionar un haluro de alquenilo, tal como alil cloruro o alil bromuro, con una solución acuosa fuertemente alcalina de uno o más alcohols polihídricos. El producto puede ser una mezcla compleja de poliéteres con un número variante de grupos de éter. La eficiencia del agente de reticulación de poliéter se incrementa con el número de grupos potencialmente polimerizables en la molécula. Típicamente, se utilizan los poliéteres que contiene un promedio de dos o más agupaciones de alquenil éter por molécula. Otros monómeros de reticulación incluyen por ejemplo, dialil esteres, dimetalil éteres, alil o metalil acrilatos y acrilamidas, tetravinil silano, polialquenil metanos, diacrilatos, y dimetacrilatos, compuestos de divinio tales como divinil benceno, polialil - fosfato, compuestos de dialiloxi y esteres de fosfito y lo similar. Los agentes típicos son alil pentaeritritol, alil sacarosa, trimetilolpropano triacrilato, 1, 6-hexanediol diacrilato, trimetilolpropano dialil éter, pentaeritritol triacrilato, tetrametilen dimetacrílato, etilen díacrilato, etilen dimetacrilato, trietilen glycol dimetacrilato, y lo similar. El alil pentaeritritol, trimetilolpropano dialiléter y alil sacarosa proporcionan polímeros adecuados. Cuando el agente de reticulación se encuentra presente, las mezclas poliméricas comúnmente contienen entre aproximadamente 0.01 a 20 porciento por peso, e.g., 1%, 5%, o % o más por peso de monómero de reticulación en base al totall de monómero de ácido carboxílico, mas otros monómeros. En aspectos más detallados de la invención, el suministro mucosal del péptido de enlace al receptor Y2, análogos y miméticos y otros agentes biológicamente activos descritos en la presente, se mejoran al retener el agente activo (s) en un portador o vehículo de liberación lenta o enzimáticamente o fisológicamente protector, por ejemplo un hidrogel que protege al agente activo de la acción de las enzimas degradantes. En ciertas modalidades, el agente activo se enlaza por medios químicos al portador o vehículo, al cual también pueden mezclarse o unirse agentes adicionales tales como inhibidores de enzima, citocinas, etc. El agente activo puede inmovilizarse alternativamente a través de - suficente atropamiento físico dentro del portadr o vehículo, e.g., una matriz de polímero. Polímeros tales como hidrogeles útiles dentro de la invención pueden incorporar agentes funcionales enlazados tales como glicósidos químicamente incorporados en el polímero para mejorar la biodisponibilidad intranasal de agentes activos formulados con el mismo. Ejemplos de tales glicósidos son glucósidos, fructósidos, galactósidos, arabinósidos, manósidos y sus derivados sustituidos de alquilo y glicósidos naturales tales como arbutina, florizina, amigdalina, digitonina, saponina e indican. Existen varias formas en las cuales puede unirse un glicósido típico a un polímero. Por ejemplo, el hidrógeno de los grupos hidroxilo de un glicósido o otro carbohidrato similar puede reemplazarse por el grupo alquilo de un polímero de hidrogel para formar un éter. También, los grupos hidroxilo del glicósidos pueden hacerse reaccionar para esterificar los grupos carboxilo de un hidrogel polimérico para formar esteres poliméricos in situ. Otro procedimiento es emplear la condensación de acetobromoglucosa con colest-5-en-3beta-ol en un copolímero de ácido maléico. Las poliacrilamidas N-substituídas pueden sintetizarse mediante la reacción de polímeros activados con omega-aminoalquilglicósidos : (1) (espaciador de carbohidrato) (n) -poliacrilamida, "pseudopolisacáridos N; (2) (espaciador de carbohidrato) n) - fosfatidiletanolamina (m) -poliacrilamida, neoglicolípidos, derivados de fosfatidiletanolamina; (3) (espaciador de carbohidrato) (n) -biotina (m) -poliacrilamida. Estos derivados biotinilidados pueden unirse a lectinas en la superficie mucosal para facilitar absorción de(l) agente (s) biológicamente activo (s), e.g., un péptido de enlace al receptor Y2 encapsulado en polímero. Dentro de aspectos más detallados de la invención, uno o más péptidos de enlace al receptor Y2, análogos y miméticos y/o otros agentes biológicamente activos, descritos en la presente, que incluyen opcionalmente agentes activos secundarios tales como inhibidor (es) de proteasa, citocina (s), modulator (es) adicional (es) de la fisiología de unión intercelular, etc., se modifican y enlazan a un vehículo o matriz poliméricos. Por ejemplo, esto puede llevarse a cabo al enlazar químicamente un agente activo de péptido o proteína y otro(s) agente (s) optional (es) dentro de una red polimérica reticulada. También es posible modificar químicamente el polímero por separado con un agente interactivo tal como una molécula que contiene glicosidal. En ciertos aspectos, el agente (s) biológicamente activo (s) y el agente (s) activo (s) secundarios opcionales, pueden funcionalizarse, i.e., en donde se identifica un grupo reactivo apropiado o se agrega químicamente a el (los) agente (s) activo (s) . Más frecuentemente se agrega un grupo polimerizable etilénico y el agente activo funcionalizado se copolimeriza entonces con monómeros y un agente de reticulación utilizando un método de polimerización estándar tal como polimerización por solución (comúnmente en agua) , emulsión, suspensión o polimerización por dispersión. Frecuentemente, se proporciona el agente de funcionalización con una alta concentración suficiente de grupos funcionales o polimerizábles para asegurar que varios sitiois en el (los) agente (s) activo (s) se funcionalizan. Por ejemplo, en un polipéptido que comprende 16 sitios de amina, se desea generalmente funcioalizar al menos 2, 4, 5, 7, y hasta 8 o más de los sitios. Después de la funcionalización, el (los) agente (s) activo (s) funcionarizado (s) se mezclan con monómeros y un agente de reticulación que comprende los reactivos de los cuales se forma el polímero de interest. La polimerización se induce entonces en este medio para crear un polímero que contiene el (los) agente (s) activo (s) de enlace. El polímero se lava entonces con agua o otros solventes apropiados y purificados para retirar las trazas de impurezas no reactivas y, si es necesario, moler o triturar por medios físicos tal como por medios físicos tal como mediante agitación, forzarlo a través de una malla, ultrasonido u otros medios adecuados para un tamaño de partícula deseado. El solvente, normalmente agua, se retira entonces en tal forma gue no se - desnaturaliza o se degrada de otro modo el (los) agente (s) activo (s). Un método deseado es la liofilización (secado por congelación) pero también están disponibles y pueden utilizarse otros métodos (e.g., secado al vacío, secado por aire, secado por aspersión, etc.). Para inducir grupos polimerizables en péptidos, proteínas y otros agente activos dentro de la invención, es posible hacer reaccionar el amino, hidroxilo, tiol y otros grupos reactivos disponibles con electrófilos que contienen grupos insaturados. Por ejemplo, los monómeros insaturados que contienen grupos N-hidroxi succinimidilo, carbonatos activos tales como carbonato de p-nitrofenilo, carbonatos de triclorofenilo, tresilato, oxicarbonilimidazoles, epóxido, isocianatos y aldehido y carboximetil azidas insaturadas y disulfuro de ortopiridilo insaturado pertenecen a esta categoría de reactivos. Ejemplos ilustrativos de reactvos insaturados son alil glicidil éter, alil cloruro, alilbromuro, alil yoduro, acriloil cloruro, alil isocianato, alilsulfonil cloruro, anhídrido maléico, copolímeros de anhídrido maléico y alil éter, y lo similar. Todos los derivados activos de lisina, excepto aldehido, pueden reaccionar generalmente con otros aminoácidos tales como grupos imidazol de histidina y grupos hidroxilo de tirosina y los grupos tiol de cisteína si el ambiente local mejora la nucleofilicidad de estos grupos.

Los reactivos funcionalizdos que contienen aldehido son específicos para lisina. Estos tipos de reacciones con grupos disponibles de usinas, cisteínas, tirosina se han documentado extensamente en la literatura y se conocen por los de experiencia en la materia. En el caso de agentes biológicamente activos que contienen grupos amina, es conveniente hacer reaccionar tales grupos con un aciloil cloruro, tal como acriloil cloruro e introduce el grupo acrílico polimerizable en el agente reaccionado. Entonces durante la preparación del polímero, tal como durante la reticulación del copolímero de acrilamida y ácido acrílico, el agente activo funcionalizado, a través de los grupos acrílicos, se une al polímero y se queda unido a este. En aspectos adicionales de la invención, los agentes biológicamente activos, incluyendo péptidos, proteínas, nucleísidos y otras moléculas que son bioactivas in vivo, se estabilizan mediante conjugación al unir covalentemente uno o más agente (s) activo (s) a un polímero que se incorpora como parte integral del mismo tanto un residuo hidrofílico, e.g., un polialquilen glicol lineal, un residuo lipofílico (ver, e.g., la Patente de E.U. No. 5,681,811). En un aspecto, un agente biológicamente activo se acopla covalentemente con un polímero que comprende (i) un residuo de polialquilen glicol lineal y (ii) un residuo lipofílico, en donde el agente - - activo, el residuo de polialquilen glicol lineal y el residuo lipofílico se instalan conformacionalmente con relación entre sí de manera que el agente terapéuticamente activo tieen una resistencia mejoradain vivo a la degradación enzimática (i.e., con relación a su estabilidad bajo condiciones similares en una forma no conjugada nula del polímero acoplado al mismo) . En otro aspecto, la formulación estabilizada por conjugación tiene una conformación tridimensional que comprende el agente biológicamente activo acoplado covalentemente con un complejo de polisorbato que (i) un residuo de poli alquilen glicol lineal y (ii) un residuo lipofílico, en donde el agente activo, el residuo de polialquilen glicol lineal y el residuo lipofílico se instalan conformacionalmente con relación entre sí de manera que (a) el residuo lipofílico se encuentra disponible exteriormente en la conformación tri-dimensional y (b) el agente activo en la composición tiene una resistencia mejorada in vivo a la degradación enzimática. En un aspecto adicional relacionado, se proporciona un complejo de multiligando conjugado que comprende un agente biológicamente activo covalentemenmte acoplado con aun residuo de estructura de triglicérido a través de un grupo de separación de polialquolen glicol unido a un átomo de carbono del residuo de estructura de tri-glicérido y al menos un residuo de ácido graso covalentemente unido ya sea - directamente a un átomo de carbono del residuo de estructura de triglicérido o covalentemente unido a través de un residuo espaciador de polialquilen glicol (ver, e.g., la Patente de E.'U. No. 5,681,811). En tal complejo de agente terapéutico de multiligando conjugado, los átomos de carbono alfa y beta del residuo bioactivo de triglicérido puede tener residuos de ácido graso unidos y unirse covalentemente ya sea directamente en el mismo o unido covalentemente de manera indirecta en el mismo a través de los residuos espaciadores de polialquilen glicol. Alternativamente, un residuo de ácido graso puede unirse covalentemente ya sea directamente o a través de un residuo espaciador de polialquilen glicol a loa carbonos alfa y beta de los residuos de la estructura de triglicérido, con el agente terapéuticamente bioactivo acoplado covalentemente con el carbomo gama del residuo de estructura de triglicérido, ya sea unido covalentemente de manera directa al mismo o unido indirectamente al msmo a través de un residuo de espaciador de polialquileno. Se reconocer 'que son posibles una amplia variedad de formas estructurales, composicionales y conformacionales para el complejo de agente terapéutico de multiligando conjugado que comprende el residuo de estructura de triglicérido, dentro del alcance de la invención. Debe notarse además que en tal complejo de agente terapéutico de multiligando conjugado, el (los) agente (s) biológicamente activo (s) pueden acoplarse - covalentemente de manera ventajosa con el residuo de estructura de triglicérido modificado a través de grupos espaciadores de alquilo o alternativamente otros grupos espaciadores aceptables, dentro del alcance de la invención. Como se utilize en tal contexto, la acceptabilidad del grupo espaciador se refiere a composicional esférica y al final el uso de las características de aceptabilidad específica de aplicación. En aún aspectos adicionales de la invención, se proporciona un complejo estabilizado por conjugación que comprende un complejo de polisorbato que comprende un residuo de polisorbato que incluye una estructura de triglicérido acoplado covalentemente a los átomos de carbono alfa, alfa' y beta de los mismos grupos de funcionalización incluyendo (i) un grupo de ácido graso; y (ii) un grupo de polietilén glicol que tenga un agente biológicamente activo o residuo covalentemente unido al mismo, e.g., unido a una funcionalidad apropiada del grupo de polietilén glicol. Tal unión covalente puede ser ya sea directa, e.g., a una funcioalidad de terminal hidroxi del grupo de polietilén glicol o alternativamente, la unión covalente puede ser inidrecto, e.g., mediante tapar de manera reactiva la teminal hidroxi del grupo de polietilén glicol con un grupo espaciador de funcionalidad carboxi terminal, demanera que el grupo resultante de polietilén glicol tapado tenga una funcionalidad de terminal carboxi a la cual el agente biológicamente activo o residuo pueda unirse covalentemente. En aún aspectos adcionales de la invención, se proporciona un complejo de conjugación estabilizada estable, acuosamente soluble gue comprende una o más proteínas del péptido de enlace al receptor Y2, análogos y miméticos y/u otro(s) agente (s) biológicamente activo (s)+ descritos en la presente acoplados de manera covalente a un residuo de glicolípido modificado de un polietilen glicol fisiológicamente compatible (PEG) . En tal complejo, el agente (s) biológicamente activo (s) puede (n) acoplarse covalentemente al residuo de glicolípido modificado de PEG fisiológicamente compatible mediante un enlace covalente lábil a un grupo de ácido amino libre del agente activo, en donde la unión covalente lábil es separable in vivo mediante hidrólisis bioquímica y/o proteólisis. El residuo de glicolípido modificado de PEG fisiológicamente compatible puede comprender ventajosamente un polímero de polisorbato, e.g., un polímero de polisorbato que comprende grupos de ester de ácid graso seleccinados del grupo que consiste de monopalmitato, dipalmitato, monolaurato, dilaurato, trilaurato, monoleato, dioleato, trioleato, monoestearato, diestearato, y triestearato. En tal complejo, el residuo de glicolípido modificado de PEG fisiológicamente compatible puede adecuadamente comprender un polímero seleccinado del grupo que consiste de éteres de polietilén glicol de ácidos grasos, y esteres de polietilén glicol de ácidos grasos, en donde los ácidos grasos por ejemplo comprenden un ácido graso seleccinado del grupo gue consiste de ácidos láurico, palmítico, oléico, y esteárico. Almacenamiento de Material En ciertos aspectos de la invención, las formulaciones combinatoriales y/o los métodos de administración coordinada en la presente incorporan una cantidad efectiva de péptidos y proteínas que pueden adherirse a vidrio cargado reduciendo así la concentración efectiva en el contenedor. Los contenedores silanizados, por ejemplo, los contnedore de vidrio silanizado se utilizan para almacenar el producto terminado para reducir la absorción del polipéptido o proteína en un contenedor de vidrio. En aún aspectos adicionales de la invención, un equipo para tratamiento de un sujeto mamífero comprende una composición farmacéuticamente estable de uno o más compuesto (s) del péptido de enlace al receptor Y2 formulado (s) para el suministro mucosal al sujeto mamífero en donde la composición es efectiva para aliviar uno o más síntomas de obesidad, cáncer o desnutrición o agotamiento relacionado al cáncer en dicho sujeto sin efectos colaterales adversos inaceptables. El equipo comprende además un frasco de reactivofarmacéutico para contener el uno o más compuestos - del péptido de enlace al receptor Y2. El frasco de reactivo farmacéutico se encuentra compuesto de polímero de grado farmacéutico, vidrio u otro material adecuado. El frasco de reactivo farmacéutico es, por ejemplo, un frasco de vidrioi silanizado. El equipo comprende además una abertura para el suministro de la composición a una superficie mucosal nasal del sujeto. La abertura de suministro se compone de un polímero de grado farmacéutico, vidrio u otro amterial adecuado. La abertura de suministro es, por ejemplo, un vidrio silanizado. Una técnica de silanización combina una técnica de limpieza especial para las superficies a silanizarse con un proceso de silanización a baja presión. El silano se encuentra en la fase gaseosa y a una temperatura superior a la de las superficies a silanizarse. El método proporciona superficies reproducibles con capas estables homogéneas y funcionales de silano que tienen características de una monocapa. Las superficies silanizadas evitan la unión al vidrio de los polipéptidos o agentes gue mejoran el suministro mucosal de la presente invención. El procedimiento es útil para preparar frascos de reactivo farmacéutico silanizados para contener las composiciones de péptido de enlace al receptor Y2 de la presente invención. Las charolas de vidrio se limpian al enjuagarse con agua doblemente destilada (ddH20) antes de - utilizarse. La charola de silano se enjuaga entonces con 95% de EtOH y la charola de acetona se enjuaga con acetona. Los frascos de reactivo farmacéutico se sónica en acetona durante 10 minutos. Después de la sonicación de la acetona, los frascos de reactivo se lavan en charolas de ddH20 al menos dos veces. Los frascos de reactivo se sonicran en 0.1M NaOH durante 10 minutos. Mientras que los frascos de reactivo se sonican en NaOH, la solución de silano se elaboran bajo una cubierta. (Solución de silano: 800 ml de 95% de etanol; 96 1 de ácido acético glacial; 25 ml de glicidoxipropiltrimetoxi silano) . Después de la sonicación con NaOH, los frascos de reactivo se lavan en la charola de ddH20 al menos dos veces. Los frascos de reactivo se sonican en solución de silano durante 3 a 5 minutos. Los frascos de reactivo se lavna en una charola de 100% de EtOH. Los frascos de reactivo se secan con gas N2 purificado gas y se almacenan en un horno a 100 °C durante al menos 2 horas antes de utilizarse. Vehículos y Métodos de Suministro Bioadhesivo En ciertos aspectos de la invención, las formulaciones combinatoriales y/o los métodos de administración coordinada en la presente incorporan una cantidad efectiva de un bioadhesivo no tóxico como un compuesto o portador auxiliar para mejorar el suministro mucosal de uno o más agente (s) biológicamente activo (s). Los agentes bioadhesivos en este contexto exhiben adhesión - general o específica a uno o más componentes o superficies de la mucosa objetivo. El bioadhesivo mantiene un gradiente de concentración deseado del agente biológicamente activo en o a través de la mucosa para asegurar la penetración de aún moléculas mayores (e.g., péptidos y proteínas) en o a través del epitelio mucosal. Típicamente, el empleo de un bioadhesivo dentro los métodos y composiciones de la invención produce un incremento de veces de dos a ciño, frecuentemente de cinco a diez en permeabilidad para los péptidos y proteínas hacia o a través el epitelio mucosal. Esta mejora de la penetración epitelial frecuentemente permite el suministro transmucosal efectivo de grandes macromoléculas, por ejemplo a la porción basal del epitelio del nasal o en los compartimentos extracelulares adyacentes o el plasma sanguíneo o tejido o fluido CNS. Este suministro mejorado proporciona efectividad grandemente mejorada del suministro de péptidos, proteínas y otras especies terapéuticas macromoleculares bioactivos. Estos resultados dependerán enparte de la hidrofilicidad del compuesto, mediante la cual se logrará mayor penetración con las especies hidrofílicas en comparación a los compuestos insolubles en agua. Además de estos efectos, el empleo de bioadhesivos para mejorar la persistencia de la droga en la superficie mucosal puede elicitarse un mecanismos de reserva para el suministro de droga protegido, mediante lo cual los - compuestos no solo penetran a través del tejido mucosal sino también se difunden hacia atrás hacia la superficie mucosal una vez que el material en la superficie se agota. Se describe una variedad de bioadhesivos adecuados en la técnica para administración oral, Patente de E.U. Nos. 3,972,995; 4,259,314; 4,680,323; 4,740,365; 4,573,996; 4,292,299; 4,715,369; 4,876,092; 4,855,142; 4,250,163; 4,226,848; 4,948,580; Patente de E.U. Re-expedida 33,093, la cual encuentra uso dentro los nuevos métodos y composiciones de la invención. El potencial de diversos polímeros bioadhesivos como un mucosal, e.g., la plataforma de suministro nasal dentro de los métodos y composiciones de la invención pueden valorarse fácilmente al determinar su capacidad para retener y liberar el péptdio de enlace al receptor Y2, así como por su capacidad para interactuar con las superficies mucosales después de la incorporación del agente activo en las mismas. Además, se aplicarán métodos muy conocidos para determiner la biocompatibilidad de los polímeros seleccionados con el tejido en el Sitio de administración mucosal. Cuando la mucosa objetivo se cubre por moco (i.e., en la ausencia de tratamiento mucolítico o limpieza de moco) , puede servir como un enlace de conexión al epitelio mucosal subyacente. Por lo tanto, el término "bioadhesivo" como se utiliza en la presente también cubre compuestos mucoadhesivos útiles para mejorar el suministro - mucosal de agentes biológicamente activos dentro de la invención. Sin embargo, el contacto adhesivo al tejido mucosal mediado a través de la adhesión a una capa de gel de moco puede limitarse por unión imconpleta o transitoria entre la capa de moco y el tejido subyacente, particularmente en superficies nasales en donde ocurre el rápido despeje de moco. A este respecto, las glicoproteínas de mucina se secretan continuamente e inmediatamente después de su liberación de las células o glándulas forman un gel viscoelástico. Sin embargo, la sperficie luminal del capa de gel adherente, se desgasta continuamente mediante ación mecánica, anzimática y/o ciliar. En donde tales actividades son más prominentes o en donde se desea tiempos de mayor adhesión, los métodos de administración coordinada y los métodos de formulación combinatorial de la invención pueden incorporar además métodos mucolíticos y/o ciliostáticos o agentes como se describió anteriormente en la presente. Típicamente, los polímeros mucoadhesivos para utilizarse dentro de la invención son macromoléculas naturales o sintéticas que se adhieren a las superficies de tejido mucosal húmedo mediante mecanismos complejos, pero no específicos. Además de estos polímeros mucoadhesivos la invención también proporciona métodos y composiciones que incorporan bioadhesivos que se adhieren directamente a una superficie celular, en lugar de al moco, por medio de - - interacciones específicas, incluyendo la mediada por receptor. Un ejemplo de bioadhesivos que funcionan en esta forma específica es el grupo de csmopuestos conocidos como lectinas. Estos son glicoproteínas con una capacidad para reconocer específicamente y unirse a moléculas de azúcar, e.g. glicoproteínas o glicolípidos, que forman parte de membranas celulares epiteliales intranasales y pueden considerarse como "receptores de lectina". En ciertos aspectos de la invención, materiales bioadhesivos para mejorar el suministro intranasal de agentes biológicamente activos comprenden una matriz de un hidrofílico, e.g., polímero o una mezcla de polímeros solubles en agua o que absorben agua, que pueden adherirse a una superficie de moco húmedo. Estos adhesivos pueden formularse como ungüentos, hidrogeles (ver arriba) películas delgadas y otras formas de aplicación. Frecuentemente, estos adhesivos tienen el agente biológicamente activo mezclado con los mismos para efectuar la lenta liberación o suministro local del agente activo. Algunos se formulan con ingredientes adicionales para facilitar la penetración del agente activo a través de la mucosa nasal, e.g., en el sistema circulatorio del individuo. Varios polímeros, tanto naturales como y sintéticos, muestran unión significativa a las superficies epiteliales de moco y/o superficies mucosales bajo condiciones fisiológicas.

- La Resistencia de esta interacción puede medirse fácilmente mediante pruebas de desprendimiento o corte mecánicas . Cuando se aplican a una superficie mucosal húmeda, muchos materiales secos se adherirán espontáneamente, al menos ligeramente. Después de tal contacto inicial, algunos materiales hidrofílicos inician a atraer agua mediante absorción, fuerzas de aumeto de volumen o capilares y si esta agua se absorbe desde el sustrato subyacente o desde la interfaz polímero-tejido, la adhesión puede ser suficiente para lograr el objetivo de mejorar la absorción mucosal de agentes biológicamente activos. Tal ?adhesión mediante hidratación' puede ser bastante fuerte, pero las formulaciones adaptadas para emplear este mecanismo deben responder del aumento de volumen el cual continúa según la dosis se transforma en un mucílago hidratado. Esto se protege por muchos hidrocoloides útiles dentro de la invención, especialmente algunos derivados de celulosa, que generalmente son no-adhesivos cuando se aplican en estadopre-hidratado. No obstante, los sistemas de suministro de drogas bioadhesivos para la administración mucosal son efectivos dentro de la invención cuando tales materiales se aplican en la forma de unpolvo seco, microesfera, o forma de suministro tipo película. Otros polímeros se adiheren a superficies mucosales no solo cuando se aplican en seco, sino también en estado - completamente hidratado y en la presencia de cantidades excesivas de agua. La selección de un mucoadhesivo require así consideración debida de las condiciones, fisiológicas así como fisio-químicas bajo las cuales se formará y mantendrá el contacto con el tejido. En particular, la cantidad de agua o humedad comúnmente presente en los sitios propuestos de adhesión y el pH prevalente, se conoce por afectar grandemente la resistencia de unión mucoadhesiva de diferentes polímeros.' Varios sistemas de suministro de droga bioadhesivos poliméricos se han fabricado y estudiado en los pasados 20 años, no siempre con éxito. Sin embargo una variedad de tales portadores se utilizan actualmente en aplicaciones clínicas gue implican usos dentales, ortopédicos, oftalmológicos y quirúrgicos. Por ejemplo, los hidrogeles a base de acrílico se han utilizado extnsamente para dispositivos bioadhesivos. Los hidrogeles de base acrílica son muy adecuados para la bioadhesión debido a sus caracaterísticas de flexibilidad y no abrasivas en el estado parcialmente aumentado de volumen, que reduce la fricción que causa daño a los tejidos en contacto. Además, su alta permeabilidad en el estado de aumento de volumen permite que el monómero sin reaccionar, las cadenas de polímero no reticuladas y el iniciador se laven de la atriz después de la polimerización, lo cual es una característica importante para - la selección de materiales bioadhesivos para utilizarse dentro de la invención. Los dispositivos poliméricos a base de acrílico exhiben resistencia de unión adhesiva muy alta. Para el suministro mucosal controlado de dorgas de péptidoa y proteínas, los métodos y composiciones de la invención opcionalmente incluyen el uso de vehículos, e.g., vehículos de suministro polimérico, que funcioan en parte para proteger al agente biológicamente activo de la descomposición proteolítica, mientras al mismo tiempo proporcionan penetración mejorada del péptido o proteína hacia o a través de la mucosa nasal. En este contexto, los polímeros bioadhesivos han demostrado considerable potential para mejorar el suministro de droga oral. Como un ejemplo, la biodisponibilidad de 9-desglicinamida, 8-arginina vasopresina (DGAVP) administrada de manera intraduódenal a ratas junto con una dispersión salina al 1% (p/v) del policarbofil derivado de poli (ácido acrílico) mucoadhesivo, se incrementó de 3-5-veces en comparación con una solución acuosa de la droga de péptido sin este polímero. Los polímeros mucoadhesivos del tipo poli (ácido acrílico) son potentes inhibidores de algunas proteasas intestinales. El mecanismo de inhibición enzimática se explica por la fuerte afinidad de esta clase de polímeros para los cationes divalentes, tales como calcio o zinc, que son cofactores esenciales de las metalo-proteínasas, tales - - como tripsina y quimotripsina. Desproveyendo a las proteasas de sus cofactores mediante el poli (ácido acrílico) se reportó que inducen cambios estructurales irreversibles de las proteínas enz'imáticas que se acompañaron por una pérdida de la actividad enzimática. Al mismo tiempo, otros polímeros mucoadhesivos (e.g., algunos derivados de celulosa y quitosan) no pueden inhibir las enzimas proteolíticas bajo ciertas condiciones. En contraste a otros inhibidores de enzima contemplados para utilizarse dentro de la invención (e.g. aprotinina, bestatina) , que son moléculas relativamente pequeñas, la absorción trans-nasal de polímeros inhibidores es probablemente mínima a la luz del tamaño de estas moléculas y se elimina mediante esto los posibles efectos colaterales adversos. Así, los polímeros mucoadhesivos, particularmente del tipo poli (ácido acrílico) pueden servir tanto como un adhesivo que promueve la absorción y un agente protector de la enzima para mejorar el suministro controlado de drogas de péptido y proteína, especialmente cuando se consideran problemas de seguridad. Además de proteger contra la degradación enzimática, los bioadhesivos y otros agentes que promueven la absorción poliméricos o no poliméricos para utilizarse dentro de la invención pueden incrementar directamente la permeabilidad mucosal a los agentes biológicamente activos. Para facilitar el transporte de moléculas grandes e hiudrofílicas, tales - como péptidos y proteínas, a través de la barrera epitelial nasal, los polímeros mucoadhesivos y otros agentes se han postulado para producir efectos de permeación mejorados mas allá de lo que se considera por el tiempo de residencia premucosal prolongado del sistema de suministro. El curso del tiempo de las concentraciones de plasma con droga han reportado sugiriendo que las microesferas bioadhesivas causan un incremento agudo pero transitorio de permeabilidad de insulina a través de la mucosa nasal. Otros polímeros mucoadhesivos para utilizarse dentro de la invención, por ejemplo guitosan, han reportado mejorar la permeabilidad de ciertos epitelios mucosales aún cuando se aplicaron como una solución o gel acuoso. Otro polímero mucoadhesivo reportado para afectar directamente la permeabilidad epitelial es el ácido hialurónico ácido y derivados de éster de los mismos. Un agente bioadhesivo particularmente útil dentro de la administración coordinada, y/o los métodos de formulación combinatorial y composiciones de la invención es quitosan, así como sus análogos y derivados. El quitosan es un polímero no tóxico, biocompatible y biodegradable que se utiliza ampliamente para aplicaciones farmacéuticas y médicas debido a sus favorables propedades de baja toxicidad y buena biocompatibilidad. Es un poliaminosacárido natural preparado de quitina mediante N-desacetilación con álcali. Como se utiliza dentro de los métodos y composiciones de la invención, el quitosan incrementa la retención de las proteínas del péptído de enlace al receptor Y2, análogos y miméticos, y otros agentes biológicamente activos descritos en la presente en un sitio mucosal de application. Este modo de administration tmbién puede mejorar la conformidad y aceptación del paciente. Como se proporciona además en la presente, los métodos y composiciones de la invención opcionalmente incluirán un nuevo derivado de quitosan o forma químicamente modificada de quitosan. Uno de tales nuevos derivados para utilizarse dentro de la invención se denota como un polímero de ß- [1—4] -2-guanidino-2-deoxi-D-glucosa (poli-GuD) . El qosan es el producto N-desacetilado de quitina, un polímero que se presenta de manera natural que se ha utilizado de manera extensa para preparar microesferas para formulaciones orales e intra-nasaless . El polímero de quitosan también se ha propuesto como un vehículo soluble para el suministro de droga parenteral. Dentro de un aspecto de la invención se utiliza, o-metilisourea para convertir una aamina de quitosan a su residuo de guanidinio. El compuesto de guanidinio se prepara, por ejemplo, mediante la reacción entre soluciones equi-normales de quitosan y o-metilisourea a pH por arriba de 8.0. El producto de guanidinio es polímero de -[14]-guanidino-2-deoxi-D-glucosa. Este se abrevia como Poli-GuD en este contexto (Monomer F. . de Amina en Quitosan = 161; Monomer F.W. de Guanidinio en Poli-GuD = 203) . Un método de preparación de Poli-GuD ejemplar para utilizarse dentro de la invención implica el siguiente protocolo. Soluciones : Preparación de 0.5% de Solución de Ácido Acético (0.088N) Pipeta de 2.5 ml de ácido acético glacial en un matraz volumétrico de 500 ml, diluido a volumen con agua purificada. Preparación de Solución de NaOH 2N: Transferir pellets de aproximadamente 20 g de NaOH a un vaso de precipitación con aproximadamente 150 ml de agua purificada. Se disuelve y enfría a temperatura ambiente, la solución se transfiere a un matraz volumétrico de.250 ml, se diluye a volumen con agua purificada. Preparación de Sulfado O-metilsourea (equivalen-te al grupo de urea 0.4N) : Se transfiere aproximadamente 493 mg de sulfato de O-metilsourea en un matraz volumétrico de 10 ml, se disuelve y se diluye a volumen con agua purificada. El pH de la solución es 4.2 Preparación de Solución de Cloruro de Bario (0.1M) : Se transfiere aproximadamente 2.086 g de Cloruro de Bario en un matraz volumétrico de 50 ml, se disuelve y diluye a volumen con agua purificada - Preparación de Solución de Quitosan (equivalente a amina 0.06N) : Se transfiere aproximadamente 100 mg de Quitosan en un vaso de precipitación de 50 ml, se agregan 10 ml de Ácido Acético al 0.5% (0.088N). Se agita para retirar completamente El pH de la solución es 4.5 Preparación de Solución de Cloruro de O-metilsourea (equivalente al grupo urea 0.2N) : Pipetear 5.0 ml de solución de sulfato de 0-metilsourea (equivalente al grupo urea 0.4 N) y 5 ml de una solución de cloruro de bario en un vaso de precipitación. Se forma un precipitado. Se continua mezclando la solución durante 5 minutos. Se filtra la solución a través de un filtro de 0.45m y se descarta el precipitado. La concentración de cloruro de O-metilsourea en la solución sobrenadante es equivalente al grupo urea 0.2 N. El pH de la solución es- 4.2 Procedimiento : Agregar 1.5 ml de NaOH 2N a 10 ml de la solución de quitosan (equivalente a amina 0.06 N) preparado como se describe en la Sección 2.5. Se ajusta el pH a la solución con NaOH 2N de aproximadamente 8.2 a 8.4. Se agita la solución durante 10 minutos adicionales. Se agrega 3.0 ml de solución de cloruro de metilsourea (equivalente al grupo urea - 0.2 N) preparado como se describe arriba. Se agita la solución durante la noche. Se ajusta el pH de la solución a 5.5 com 0.5% de Ácido Acético (0.088 N) . Se diluye la solución a un volumen final de 25 ml utilizando agua purificada. La concentración de Poli-GuD en la solución es de 5 mg/ml, equivalente a 0.024 N (grupo guanidio) . Los compuestos adicionales clasificados como agentes bioadhesivos para utilizarse dentro de la presente invención. actúan al mediar las interacciones específicas, típicamente se clasifican como "interacciones ligando-receptor" entre estructuras complementarias del compuesto bioadhesivo y un componente de la superficie epitelial mucosa. Muchos ejemplos naturales ilustran esta forma de adhesión de unión especpífica, como se ejemplifica por las interacciones lecitina-azúcar . Las lecitinas son proteínas (glico) de origen no inmune que se unen al los polisacáridos o glicoconjugados . Se han investigado varias lecitinas de plantas como agentes promotores de la absorción farmacológica. Una lecitina de planta Phaseolus vulgaris hemagglutinina (PHA) , exhibe alta biodisponibilidad oral de más del 10% despu's de alimentar a ratas. La lecitina de tomate (TL) (Lycopersicon esculeutum) parece segura para varios modelos de - administración . En resumen, los agentes bioahesivos anteriores son útiles en las formulaciones combinbacionales y métodos de administración coordinada de la presente invención, que incorporan opcionalmente una cantidad efectiva de la forma de un agente bioadhesivo para prolongar la persistencia o de otro modo incrementar la absorción mucosal de uno de proteínas, análogos y miméticos del péptido de enlace al receptor Y2 y otros agentes biológicamente activos. Los agentes bioadhesivos pueden administrarse coordinadamente como compuestos adjuntos o como aditivos dentro de las formulaciones combinacionales de la invención. En ciertas modalidades, el agente bioadhesivo actúa como un "pegamento farmacéutico", considerando que en otras modalidades el suministro adjunto o formulación combinacional del agente bioadhesivo sirve para identificar contactos del agente biológicamente activo con la mucosa nasal, en algunos casos al promover las interacciones del ligando específico del receptor con células epiteliales "receptoras", y en otros al incrementar la permeabilidad del epitelio para incrementar significativamente el gradiente de la concentración de la droga medido en un sitio objetivo de suministro ( e . g. , hígado, plasma sanguíneo, o tejido del SNC o fluido). Los agentes bioadhesivos aún adicionales para el uso dentro de la invención actúan como mejoradores de la enzima ( e . g. , - - proteasa) para mejorar la estabilidad de los agentes bioterapéuticos administrado a la mucosa coordinademente suministrados o en formulación combinacional con el agente bioadhesivo. Vehículos de Suministro de Liposomas y Micellar Los métodos de administración coordinada y las formulaciones combinatoriales de la presente invención incorporan opcionalmente vehículos a base de lípidos o ácidos grasos, agentes de procesamiento, o vehiculos de suministro, para proporcionar formulaciones mejoradas para el suministro mucosal de la proteína del péptido de enlace al receptor Y2, análogos y miméticos, y otros agentes biológicamente activos. Por ejemplo, una variedad de formulaciones y métodos se proporcionan para el suministro mucosal que comprende uno o más de estos agentes activos, tal como un péptido o proteína, mezclado o encapsulado, o administrado coordinadamente con, un vehículo de liposoma, micelar mezclado, o emulsión, para mejorar la estabilidad química y física e incrementar la vida media de los agentes biológicamente activos (e.g., al reducir susceptiblemente a proteolisis, modificación química y/o desnaturalización) al suministro mucosal. Dentro de ciertos aspectos de la invención, los sistemas de suministro especializado para los agentes biológicamente activos comprende vesículas pequeñas de lípidos conocidos como liposomas. Estos se elaboran típicamente de moléculas de lípidos naturales, biodegradables, no tóxicos y no-immunogenicos, y pueden atraparse o unirse eficientemente a las moléculas de la droga, incluyendo péptidos y proteínas, en o, o sobre, sus membranes. Este atractivo de los liposomas como un sistema de suministro de péptidos y proteínas dentro de la invención se incrementa por el hecho de que las proteínas encapsuladas pueden permanecer en su ambiente acuoso preferido dentro de las vesículas, mientras que la membrana de liposoma los protege de la proteolisis y otros factores de desestabilización. Aunque cunado no son factibles todos los métodos de preparación de liposomas conocidos para la encapsulación de péptidos y proteínas debido a sus propiedades físicas y químicas únicas varios métodos permiten la encapsulación de estas macromoléculas sin la deactivación sustencial. Una variedad de métodos se encuentran disponibles para preparar liposomas para utilizarse dentro de la invención, Patente de E.U. No. 4,235,871, 4,501,728, y 4,837,028. Para utilizarse con el suministro de liposomas el agente biológicamente activo se atrapa típicamente dentro de la vesícula de liposoma o lípido, o se une al exterior de la vesícula. De manera similar a los liposomas, los ácidos grasos insaturados de cadena larga, que también han mejorado la actividad para la absorción mucosal, pueden formar vesículas con estructuras similares a biestratificados (así llamados "ufasomas") . Estos pueden formarse, por ejemplo, utilizando ácido oleico para tratar péptidos y proteínas para el suministro mucosal, e.g., intranasal, dentro de la invención. Otros sistemas de suministro para utilizarse dentro de la invención combinan el uso de polímeros y liposomas para aliar las propiedades ventajosa de ambos vehículos tales como encapsulación dentro de la fibrina del polímero natural. Además, la liberación de compuestos bioterapéuticos de este sistema de suministro se controlan a través del uso de agentes de reticulación covalente y la adición de antifibrinoliticos al polímetro de fibrina. Más específicamente los sistemas de suministro para utilizarse dentro de la invención incluyen el uso de lípidos catiónicos como vehículos sopórtadores de suministro, que pueden emplearse de manera efectiva para proporcionar una inteacción electrostática entre el vehículo lípido y tales agentes biológicamente activos como proteínas y ácidos nucleicos polianiónicos . Esto permite el empaque eficiente de las drogas en una forma adecuada para la administración mocosal y/o el suministro subsecuente alos compartimentos sistémicos . Los vehiculos de suministro adicional para utilizarse dentro de la invención incluyen ácidos grasos de cadena larga y media, así como micelas mezcladas con surfactante con los ácidos grasos. Los lípidos naturals en la forma de esteres tienen implicaciones importantes con respecto a su propio transporte a través de las superficies mucosas. Los ácidos grasos libres y sus monoglicéridos que tienen grupos polares unidos se han demostrado en la forma de micelas mezcladas para actuar sobre la barrera intestinal como mejoradores de la penetración. Este descubrimiento de la función de los ácidos grasos libres que modifica la barrera (ácidos carboxílicos con una cadena larga que varía de 12 a 20 átomos de carbono) y sus derivados polares han estimulado la investigación extensa en la aplicación de estos agentes como mejoradores de la absorción mucosal. Para utilizarse dentro de los métodos de la invención, los ácidos grasos de cadena larga, especialmente lípidos fusogénicos (ácidos grasos insaturados y monoglicéridos tales como ácido oléico, ácido linoléico, ácido linoléico monooleína, etc.) proporcionan vehículos útiles para mejorar el suministro mucosal del péptido de enlace al receptor Y2, análogos y miméticos, y otros agentes biológicamente activos descritos en la presente. Ácidos grasos de cadena media (C6 a C12) y monoglicéridos también han mostrado tener actividad mejorada en la absorción intestinal de la droga y pueden adaptarse para utilizarse dentro de las formulaciones y métodos de suministro mucosal de la - - invención. Además, las sales de sodio de ácidos grasos de cadena media y larga son vehiculos de suministro efectivo y agentes que mejoran la absorción para el suministro mucosal de agentes biológicamente activos dentro de la invención. Así, los ácidos grasos pueden emplearse en formas solubles de sales de sodio o mediante la adición de surfactantes no tóxicos, e.g., aceite de ricino polioxietilado hidrogenado aceite castor, taurocolato de sodio, etc. Otros ácidos grasos y preparaciones micelares mezcladas que son útiles dentro de la invención incluyen, pero no se limitan a, caprilato de Na (C8), caprato de Na (CIO), laurato de Na (C12) o oleato de Na (C18), combinado opcionalmente con sales biliares, tal como glicocolato y taurocolato. Pegilación Métodos adicionales y composiciones proporcionads dentro de la invención incluyen modificación química de péptidos y proteínas biológicamente activos mediante unión cavalente de materiales polimérico, por ejemplo dextranos, polivinil pirrolidonas, glicopéptidos, polietilén glicol y ácidos poliamino. Los péptidos y proteínas conjugados resultantes retiene sus actividades biológicas y solubilidad para la administración mocosal. En modalidades alternativas, las proteínas análogos y miméticos del péptido de enlace al receptor Y2, y otros péptidos y proteínas biológicamente activos, se conjugan a polímeros de óxido de polialquileno, - particularmente polietilen glicoles (PEG). Patente de E.U. No. 4,179,337. Los polímeros PEG que reaccionan con amina para utilizarse dentro de la invención incluyen SC-PEG con masas moleculares de 2000, 5000, 10000, 12000, y 20 000; U-PEG- 10000; NHS-PEG-3400-biotina; T-PEG-5000; T-PEG-12000; y TPC- PEG-5000. La pegilación de los péptidos y proteínas biológicamente activos puede lograrse mediante la modificación de los sitios carboxilo (e.g., grupos de ácido aspártico o ácido glutámico además de las terminales carboxilo) . Se ha descrito la utilidad de PEG-hidrazida en la modificación selectiva de los grupos carboxilo de proteína activada por carbodiimida bajo condiciones acídicas. Alternativamente, puede emplearse la modificación bifuncional de PEG de los péptidos y proteínas biológicamente activos. En algunos procedimientos, los residuos de aminoácido cargados que incluyen lisina, ácido aspártico, y ácido glutámico, tiene una marcada tendencia a ser accesibles a solventes o superficies de proteína. Otras Modificaciones de Estabilización de los Agentes Activos Además de la PEGilación, los agentes biológicamente activos tales como péptidos y proteínas para utilizarse dentro de la invención puede modificarse para mejorar la vida media circulante al proteger el agente activo a través de conjugación a otros compuestos protectores o estabilizantes conocidos, por ejemplo mediante la creación de proteínas de fusión con un péptido, proteína, análogos o miméticos activo enlazado a una o más proteínas vehículo, tales como una o más cadenas de inmuglobina. Formulación y Administración Las formulaciones de suministro mucosal de la presente invención comprenden análogos y miméticos del péptido de enlace al receptor Y2, típicamente combinados junto con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables y, opcionalmente, otros ingredientes terapéuticos. Erl vehículo (s) debe ser "farmacéuticamente aceptable" en el sentido de ser compatible con otros ingredientes de la formulación y no producir un efecto nocivo inaceptable en el sujeto. Tales vehículos se describen anteriormente en la presente o se conocen bien de otro modo por aquellos de experiencia en la técnica de la farmoacología. Deseablemente, la formulación no debe incluir sustancias tales como enzimas o agentes oxidantes con lo cual el agente biológicamente activo administrado se conoce por ser incompatible. Las formulaciones pueden prepararse por cualquiera de los métodos muy conocidos en la materia de la farmacioa . Dentro de las composiciones y métodos de la invención, las proteínas, análogos y miméticos del péptido de enlace al receptor Y2, y otros agentes biológicamente activos descritos en la presente pueden administrarse a sujetos a través de una variedad de modos de administración, incluyendo suministro oral, rectal, vaginal, intranasal, intrapulmonar, o transdermal, o por suministro tópico alos ojos, piel u otras superficies mucosas. Opcionalmente, las proteínas, análogos y miméticos del péptido de enlace al receptor Y2 , y otros agentes biológicamente activos descritos en la presente administrarse coordinada o adjuntamente por rutas no mucosas, incluyendo por rutas intramuscular, subcutánea, intravenosa, intra-atrial, intra-articular, intraperitoneal, o parenteral. En otras modalidades alternativas, los agentes (s) biológicamente activo (s) pueden administrarse ex vivo por exposición directa a las células, tejidos u órganos de un sujeto mamífero, por ejemplo como un componente de una formulación de tratamiento de un tejido u órgano ex vivo que contiene el agente biológicamente activo en un vehículo líquido o sólido adecuado. Las composiciones de acuerdo con la presente invención con frecuencia se administran en una solución acuosacomo una asperción nasal o pulmonar y pueden administrarse en forma de rocío por una variedad de métodos conocidos por aquellos de experiencia en la materia. Los sistemas preferidos para administrar líquidos como una asperción nasal se describen en la Patente de E.U. No. 4,511,069. Las formulaciones pueden presentarse en - - contenedores de múltiples dosis, por ejemplo en el sistema de suministro sellado descrito en la Patente de E.U. No. 4,511,069. Las formas adicionales de suministro en aerosol pueden incluir, e.g., nebulizadores de aire comprimido-, a chorro-, ultrasónico-, y piezoelectricos, que suministran el agente biológicamente activo o suspendido en un solvente farmacéutico, e.g., agua, etanol, o una mezcla de los mismos. Las soluciones de aspersión nasal o pulmonar de la presente invención típicamente comprenden la droga o droga a administrarse, opcionalmente formulada con un agente tensoactivo, tal como a surfactante noniónico (e.g., polisorbato-80) , y uno o más amortiguadores. En algunas modalidades de la presente invención, la solución de aspersión nasal comprende además un propelente. El pH de la solución de aspersión nasal se encuentra opcionalmente entre aproximadamente pH 3.0 y 6.0, preferentemente 5.0+0.3. Los amortiguadores adecuados para utilizarse dentro de estas composiciones son como se describió anteriormente o como de de otro modo se conocen en la técnica. Otros componentes pueden agregarse para mejorar o mantener la estabilidad guímica, incluyendo conservadores, surfactantes, dispersantes, o gases. Los conservadores adecuados incluyen, pero no se limitan a, fenol, metil parabeno, parabeno, m-cresol, tiomersal, clorobutanol, bencilalconio cloruro, y lo similar. Los surfactantes adecuados incluyen, pero no se - - limitan a, ácido oléico, sorbitan trioleato, polisorbatos, lecitina, fosfotidil colinas, y varios diglicéridos y fosfolípidos de cadena larga. Los dispersantes adecuados incluyen, pero no se limitan a, ácido etilendiaminatetraacético, y lo similar. Los gases adecuados incluyen, pero no se limitan a, nitrógeno, helio, clorofluorocarbonos (CFCs) , hidrofluorocarbonos (HFCs) , dióxido de carbono, aire, y lo similar. Dentro de las modalidades alternativas, las formulaciones mucosas se administran como polvo seco formulaciones que comprenden el agente biológicamente activo en una forma seca, normalmente liofilizada, de un tamaño de partícula apropiado, o dentro de un rango de tamaño de partícula apropiado, para el suministro intranasal. El tamaño de partícula mínimo apropiado para la deposición dentro del pasaje nasal o pulmonar es frecuentemente de apoximadamente 0.5 µ de diámetro aerodinámico equivalente de la masa media (MMEAD) , comúnmente de apoximadamente 1 µ MMEAD, y más típicamente de apoximadamente 2 µ MMEAD. El tamaño de partícula máximo apropiado para la deposición dentro del pasaje nasal frecuentemente es de apoximadamente 10 µ MMEAD, comúnmente de apoximadamente 8 µ MMEAD, y más típicamente de apoximadamente 4 µ MMEAD. De manera intranasal los polvos respirables dentro de estos rangos de tamaño puedenm producirse por una variedad de técnicas - convencionales, tales como triturado a chorro, secado por aspersión, precipitación de solvente, condensación de fuído supercrítico y lo similar. Estos polvos secos MMEAD apropiados pueden administrarse a un paciente a través de un inhalador de polvo seco convencional (DPI) , que se encuentra en la respiración del paciente, a la inalación pulmonar o nasal, para dispersar el polvo en una cantidad en aspersión. Alternativamente, el polvo seco puede administrarse a través de dispositivos ayudados por aire que utilizan fuentes de polvo externo para dispersar el polvo en una cantidad en aerosol, e.g., una bomba de pistón Los dispositivos de polvo seco típicamente requiren una masa d e polvo en el rango de apoximadamente 1 mg a 20 mg para producir una sola dosis en aerosol ("soplido") . Si se requiere o desea dosis o reyuiere que la dosis del un agente biológicamente activo sea menor que esta cantidad el agente activo en polvo se comvínará típicamente con un polvo en volumen seco farmacéutico para proporcionar la masa de polco total requerido. Los polvos en volumen seco preferidos incluyen sacarosa, lactosa, dextrosa, manitol, glicina, trehalosa, albumin de suero humana (HSA) , y almidón. Otros polvos en volumen secos adecuados incluyen celobiose, dextranos, maltotriosa, pectina, citrato de sodio, ascorbato sódico, y lo similar. Para formular composiciones para el suministro - mucosal dentro la presente invención, el agente biológicamente activo puede combinarse con varios aditivos farmacéuticamente aceptables, así como una base o vehículo para la dispersión del agente (s) activo (s). Los aditivos deseados incluyen, pero no se limitan a agentes de control del pH, tal como arginina, hidróxido de sodio, glicina, ácido clorhídico, ácido cítrico, etc. Además, pueden incluirse anestésiscos locales (e.g., bencil alcohol), agentes de isotonización (e.g., cloruro de sodio, manitol, sorbitol), inhibidores de la absorción (e.g., Tween 80), agentesmejoradores de solubilidad (e.g., ciclodextrinas y derivados de las mismas), estabilizadores (e.g., albúmina de suero), y agentes de reducción (e.g., glutation) . Cuando la composición para el suministro mucosal es un líquido, la tonicidad de la formulación, según se mide con referencia a la tonicidad de 0.9% (p/v) la solución salina fisiológica tomada como unidad, se ajusta típicamente a un valor en el que no se inducirá daño a los tejido sustancial, irreversible en la mucosa nasal en el sitio de administración. Generalmente, la tonicidad de la solución se ajusta a un valor de apoximadamente 1/3 a 3, más típicamente 1/2 a 2, y con más frecuencia 3/4 a 1.7. The agente biológicamente activo puede dispersarse en una base o vehículo que puede comprender un compuesto hidrofílico que tiene una capacvidad para dispersar el agente activo y cualquier aditivo deseado. La base puede seleccionarse de un amplio rango de vehículos adecuados, incluyendo pero sin limitarse a copolímeros de ácidos policarboxílicos o sales de los mismos, anhídridos carboxílicos (e.g. anhídrido maleico) con otros monómeros (e.g. metil (met) acrilato, ácido acrílico, etc.), polímeros de vinilo hidrofílico tal como polivinil acetato, polivinil alcohol, polivinilpirrolidona, derivados de celulosa tal como hidroximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, etc., y polímeros naturales tal como quitosan, colágeno, alginato de sodio, gelatina, ácido hialuronico, y sales de metales no tóxico de los mismos. Frecuentemente, un polímero biodegradable se selecciona como un base o vehículo, por ejemplo, ácido poliláctico, poli (ácido láctico-ácido glicólico) copolimero, ácido polihidroxibutirico, poli (ácido hidroxibutírico -ácido glicólico) copolímero y mezclas de los mismos. Alternativa o adicionalmente, los esteres de ácido graso sintéticos tales como esteres de ácido graso de poliglicerina, esteres de ácido graso de sacarosa, etc. pueden emplearse como vehículos. Polímeros hidrofílicos y otros vehículos pueden utilizarse solos o en combinación, y pueden impartirse integridad estructural mejorada al vehículo mediante cristalización parcial, unión iónica, reticulación y lo similar. El vehículo pueden estar proveído en una variedad de formas, incluyendo, soluciones de fluido o viscosa, geles, pastas, polvos, microesferas y películas para la aplicación directa a la mucosa nasal. El uso de un vehículo seleccionado en este contexto puede dar como resultado la promoción de la absorción del agente biológicamente activo. El agente biológicamente activo puede combinarse con la base o vehículo de acuerdo con una variedad de métodos, y la liberación del agente activo puede ser por difusión, disintegración del vehículo, o formulación asociada de los canañales de agua. En algunas circunatancias el agente activo se dispersa en microcápsulas (microesferas) o nanocápsulas (nanoesferas) preparadas de un polímero adecuado, e.g., isobutil 2-cianoacrilato y se dispersa en un medio de dispersión biocompatible aplicado a la mucosa nasal, que produce suministro sostenido y actividad biológica a través de un tiempo prolongado Para el suministro mucosal mejorado adicional de agentes farmacéuticos dentro de la invención, las formulaciones que comprenden el agente activo también contiene un compuesto de baj peso molecular hidrofílico como una base o excipiente. Tal compuesto de bajo peso molecular hidrofílico proporciona un medio de pasaje a travpes del cual un agente agente activo solubre en agua, tal como un péptido o proteína fisiologicamante activo, puede difundirse a través de la base de la superficie corporal en donde se absorve el agente activo. El compuesto de bajo peso molecular hidrofílico absorve opcionalmente la humedad de la mucosa o la atmósfera de la administración y disuelve el péptido activo soluble en agua. El peso molecular de compuesto de bajo peso molecular hidrofílico generalmente no es de más de 10000 y preferentemente no más de 3000. El compuesto de bajo peso molecular hidrofílico ejemplificativo incluye compuesto de poliol, tal como oligo-, di- y monosacaridos tales como sacarosa, manitol, sorbitol, lactosa, L-arabinosa, D-eritrosa, D-ribosa, D-xilosa, D-manosa, trehalosa, D-galactosa, lactulosa, celobiosa, gentibiosa, glicerina y polietilén glicol. Otros ejemplos de los compuesto de bajo peso molecular hidrofílicod útiles como vehículos dentro de la invención incluyen N-metilpirrolidona, y alcoholes (e.g. oligovinil alcohol, etanol, etilen glicol, propilen glicol, etc.) Estos compuesto de bajo peso molecular hidrofílico peden utilizarse solos o en combinación con un diferente o con otros componente activo o inactivo de la formulación intranasal . La composición de la invención puede contener alternativamente como vehículos farmacéuticamente aceptables sustancias que se requieren para condiciones fisiológicas aproximadas, tal como agentes de ajuste de pH y amortiguadores, agentes de ajuste de tonicidad, agentes humectantes y lo similar, por ejemplo, sodio acétate, lactato - - de sodio, cloruro de sodio, cloruro de potasio, cloruro de calcio, sorbitan monolaurato, oleato de trietanolamina, etc. Para composiciones sólidas, los vehículos farmacéuticamente aceptables no tóxicos convencionales pueden utilizarse los cuales incluyen, por ejemplo, grados farmacéuticos de manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, sacarina de sodio, talco, celulosa, glucosa, sacarosa, carbonate de magnesio, y lo similar. Las composiciones terapéuticas para administrar el agente biológicamente activo también pueden formularse como un solutión, microemulsión, o otras estructuras ordenadas adecuadas para alta concentración de los ingredientes activos. El vehículo puede ser un solvente o medio de dispersión que contiene, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilen glicol, y polietilén glicol líquido, y lo similar), y mezclas adecuadas de los mismos. La fluidez apropiada para las soluciones puede mantenerse, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento tal como lecitina, mediante el mantenimiento de un tamaño de partícula deseado en el caso de las formulaciones dispersibles, y mediante el uso de surfactantes. En muchos casos, será desirable incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, polialcoholes tales como manitol, sorbitol, o cloruro de sodio in la composición. La absorción prolongada del agente biológicamente activo puede llevarse apoximadamente al - incluir en la composición un agente que retarse la absorción, por ejemplo, sales de monostearate y gelatina. En ciertas modalidades de la invención, el agente biológicamente activo se administra en una formulación de liberación a través del tiempo, por ejemplo en una composición que incluye un polímero de liberación lenta. El agente activo puede prepararse con vehículos que protegerán contra la liberación rápida, por ejemplo un vehicle de liberación controlada tal como un polimer, sistema de suministro microencapsulado o gel bioadhesivo. El agente activo de suministro controlado, en varias composiciones de la invención puede llevarse cerca al by incluir en la composición agentes que retarden la absorción, por ejemplo, hidrogeles de monosterato de aluminio y gelatina. Cuando se desean formulaciones de liberación controlada del agente biológicamente activo, los aglutinantes de liberación controlada adecuados para utilizarse de acuerdo con la invención incluyen cualquier material de liberación controlada biocompatible el cual se inserta en el agente activo y el cual es capaz de incorporar el agente biológicamente activo. Tales numerosos materials se conocen en la técnica. Los aglutinantes útiles de liberación controalda son materiales que se metabolizan lentamente bajo condiciones fisiológicas después de su suministro intranasal (e.g., en la superficie mucosal nasal, o en la presencia de - - fluidos corporales después del suministro transmucosal) . Los aglutinantes apropiados incluyen pero no se limitan polímeros biocompatibles y copolímeros previamente utilizados en la técnica en formulaciones de liberación sostenida. Tales compuestos biocompatible no son tóxicos y se insertan para rodear los tejidos, y no causan significativos efectos colaterales adversos tales como irritation nasal, respuesta inmune, inflaminación, o lo similar. No se metabolizan en productos metabólicos que tampoco sean compatibles y se eliminan fácilmente del cuerpo. Los materiales poliméricos ejemplares para el uso en este contexto incluyen, pero no se limitan a, matrices poliméricas deriovadas de poliésteres copoliméicos y homopoliméricos gue tenga enlaces de éster hidrosolubles. Varios de estos se conocen en la técnica por ser biodegradables y por conducir a productos de degradación que tienen baja toxicidad o no tienen. LOs polímeros ejemplificativos incluyen ácidos poliglicólicos (PGA) y ácidos polilácticos (PLA), poli (DL-ácido láctico-ácido co-glicólico) (DL PLGA), poli(D-ácido láctico-ácido coglicólico) (D PLGA) y poli (L-ácido láctico-ácido co-glicólico) (L PLGA) . Otros polímeros biodegradable o bioerodables útiles incluyen pero no se limitan a tales polímeros como poli (epsilon-caprolactona) , poli (epsilon-aprolactona-CO-ácido láctico), poli (e-aprolactona-CO-ácido - glicólico), poli (ácido beta-hidroxi butíricp) , poli (alquil-2- cianoacrilato) , hidrogels tales como poli (hidroxietil metacrilato), poliamides, poli (aminoácidos) (i.e., L-leucina, ácido glutámico, ácido L-aspártico y lo similar) , poli (éster urea), poli (2-hidroxietil DL-aspartamida) , polímeros de poliacetalo, poliortoésteres, policarbonato, polimaleamidas, polisacárides y copolímeros de los mismos. Generalmente se conocen muchos métodos para prparar tales formulaciones por aqullos de experiencia en la materia. Otras formulaciones útiles incluyen composiciones de liberación controlada e.g., microcápsules, Patente de E.U. No. 4,652,441 y 4,917,893, copolímeros de ácido láctico- ácido glicólico útiles para elaborar microcapsules y otras formulaciones, Patente de E.U. No. 4,677,191 y 4,728,721, y composiciones de liberación sostenida para péptidos solubles en agua, Patente de E.U. No. 4,675,189. Pueden prepararse soluciones estériles al incorporar el compuesto activo en la cantidad requerida en un solvente apropiado con uno o una combinación de ingredientes anteriormente ennumerados, según se requiera, seguido pr la esterilización filtrada. Generalmente, las dispersions se preparan al incorporar el compuesto activo en un vehículo estéril que contiene un medio de dispersión básico y los otros ingredientes requeridos a partir de los ennumerados anteriormente. En el caso de polvos estériles, los métodos - - de preparación incluyen secado al vacío y secado por congelación lo cual produce un polvo del ingrediente activo más que cualquier ingrediente adicional deseado de una solución filtrada previamente estéril de los mismos. La prevención de la acción de los microorganismos puede realizarse por varios agentes antibacterianos y antifungales, por ejejmpo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, timerosal, y lo similar. La administración mucosa de acuerdo con la invención permite la auto-administración del tratamiento por los pacientes, siempre que se coloque la seguridad suficiente para controlar y monitorear la dosis y los efectos colaterales .La administración en mucosas también supera ciertas desventajas de otras formas de administración, tal como inyecciones, que son muy dolorosas y exponen al paciente a posibles infecciones y puede presentar problemas de biodisponivilidad de la droga. Para el suministro nasal y pulmonar, se conocen bien los sistemas de aerosol controlado que se administran de líquidos terapéuticos como un rocío. En una modalidad, las dosis mdidas del ingrediente activo se suministran por medio de una válvula de bomba mecánica especialmente construida. Patente de E.U. No. 4,511,069. Dosis Para propósitos profilácticos y de tratamiento, el (los) agente (s) biológicamente activo (s) descritos en la - - presente puede administrarse al sujeto en siministro de un solo bolo, a través de suministros continuous (e.g., suministro continuo transdermal, mucosal, o intravenoso) a través de un peiodo de tiempo o en un protocolo de administración repetida (e.g., protocol de administración de repetición por horas, diariamente o semanalmente) . En este contexto, una dosis terapéuticamente efectiva del péptido de enlace al receptor Y2 pueden incluir dosis repetidas dentro de un régimen de profilaxis o tratamiento que producirá resultados clínicamente significativos para aliviar uno o más síntomas o condiciones detectables asociadas con una enfermedad o condición objetivo como see stablece arriba. La determinación de las dosis efectivas en este contexto se basa típicamente en estudios de un modelo animal seguidos por pruebas clínicas en humanos y se guía al determinar los protocolos de dosis efectivas y administración que reducen significativamente la ocurrencia o severidad de los síntomas o condición de la enfermedad objetivo en el sujeto. Los modelos adecuados a este respecto incluyen, por ejemplo, murino, rata, porcino, felino, primate no humano, y otros sujetos de modelo de animal aceptados conocidos en la técnica. Alternativamente, la dosis efectiva puede determinarse utilizando modelos in vitro (e.g., ensayos inmunológicos e histopatológicos) . Utilizando tales modelos, sólo se requieren típicamente cálculos y ajustes ordinarios - para determinar una concentración apropiada y dosis para administrar una cantidad terapéuticamente efectiva del agente biológicamente activo (s) (e.g., cantidades que son efectivas de manera intranasal, efectivas de manera transdérmica, efectivas de manera intravenosa o efectivas de manera intramuscular para producir una respuesta deseada) . La dosis real de los agentes biológicamente activos variará de curso de acurerdo con los factores tales como la indicación de la enfermedad y el estado particular del sujeto (e.g., edad, tamaño, buena salud, grado de los síntomas, factores de susceptibilidad del sujeto, etc) , tiempo y ruta de administración, otros drogas o tratamientos que se estén administrando concurrentemente, así como la farmacología especpifica del agente biológicamente activo (s) para producir la actividad deseada o respuesta biológica en el sujeto. Los regimens de dosis pueden ajustarse para proporcionar una respuesta profiláctica o terapéutica óptima. Una cantidad terapéuticamente efectiva es también en lo cual cualquier efecto collateral tóxico o nocivo del agente biológicamente activo se pondera en los términos clínicos mediante los efectos benéfics terapéuticos. Un rango no lineal para una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista de Y2 dentro de los métodos y formulaciones de la invención es 0.7µg/kg hasta aproximadamente 25 µg/kg. Para promover la pérdida de peso, se administra una dosis intranasal del - péptido de enlace al receptor Y2 a una dosis suficientemente mayor para promover la saciedad pero lo suficientemente baja para no inducir ningún efecto colateral no deseado tales como nauseas. Una dosis intranasal preferida de PYY3-36 es apoximadamente 1 µg - 10 µg/kg por peso del paciente, más preferentemente de apoximadamente 1.5 µg/kg hasta aproximadamente 3 µg/kg por peso del paciente. En una dosis estándar un paciente recibirá de 50 µg hasta 1600 µg, más preferentemente entre apoximadamente 75 µg a 800 µg, más preferentemente 100 µg, 150 µg, 200 µg hasta aproximadamente 400 µg. Alternativamente, un rango no lineal para una cantidad terapéuticamente efectiva de un agente biológicamente activo dentro de los métodos y formulaciones de la invención se encuentra entre aproximadamente 0.001 pmol hasta aproximadamente 100 pmol por kg de peso corporal, entre aproximadamente 0.01 pmol hasta aproximadamente 10 pmol por kg de peso corporal, entre aproximadamente 0.1 pmol hasta aproximadamente 5 pmol por kg de peso corporal, o entre aproximadamente 0.5 pmol hasta aproximadamente 1.0 pmol por kg de peso corporal. Las dosis dentro' de este rango puede lograrse mediante administraciones múltiples o única, incluyendo, e.g., administraciones múltiples por día, administraciones diariamente o semanalmente. Para la administración, es deseable administrar al menos un microgramo del agente biológicamente activo (e.g., uno o más proteínas, análogos y miméticos del péptido de enlace al receptor Y2 , y otros agentes biológicamente activos) , más típicamente entre aproximadamente 10 µg y 5.0 mg, y en ciertas modalidades entre aproximadamente 100 µg y 1.0 o 2.0 mg a un sujeto humano promedio. Para ciertas aplicaciones orales, dosis tal altas como 0.5 mg por kg de peso corporal pueden ser necesarias para lograr los niveles en plasma adecuados. Se nota además que para cada sujeto particular, los regímenes de dosis específicas deben evaluarse y ajustarse a través del tiempo de acuerdo con las necesidades individuales y del juicio profesional de la persona gue administra o supervisa la administración del péptido (s) de perbeabilización y otros agente biológicamente activo (s). Una dosis intranasal de a PYY variará desde 50 µg hasta 1600 µg de PYY, preferentemente de 75 µg a 800 µg, más preferentemente 100 µg a 400 µg siendo una sosis más preferida entre 100 µg a 200µg siendo 150 µg la dosis que se considera ser altamente efectiva. La dosificación intranasal repetida con las formulaciones de la invención, en un programa que varía de apoximadamente 0.1 a 24 horas entre dosis, preferentemente entre 0.5 y 24.0 horas entre dosis, mantendrá normalizados, los niveles terapéuticos sostenidos del péptido de enlace al receptor Y2 para maximizar los beneficios clínicos mientras se minimizan los riesgos de la exposición excesiva a los efectos colaterales. Esta dosis puede administrarse varias veces al día para promover la saciedad, preferentemente media hora antes de un alimento o cuando se siente hambre. El objetivo es administrar en la mucosa una cantidad del péptido de enlace al receptor Y2 suficiente para elevar la concentración del péptido de enlace al receptor Y2 en el plasma de un individuo que imita la concentración que debe ocurrir normalmente después de la comida, i.e., después que el individuo ha terminado de comer. La dosis de los agonistas de Y2 tales como PYY puede variar por el medico o el paciente que se atiende, si se auto-administra una forma de dosis superior a la cantidad, para mantener una concentración deseada en el sitio objetivo. En una modalidad alternativa, la invención proporciona composiciones y métodos para el suministro intranasal del péptido de enlace al receptor Y2, en donde el compuesto (s) del péptido de enlace al receptor Y2 se administra (n) de manera repetida a través del régimen de dosis efectiva intranasal que incluye múltiples administraciones del péptido de enlace al receptor Y2 al sujeto durante un programa diario o semanal para mantener un nivel pulsátil elevado y menor a terapéuticamente efectivo del péptido de enlace al receptor Y2, durante un periodo de dosis extendido. Las composiciones y métodos proporcionan el (los) compound (s) de péptido de enlace al receptor Y2 que se auto-administran por el sujeto en una formulación nasal - entre una y seis veces al día para mantener un nivel pusaatil elevado y menor terapéuticamente efectivo del péptido de enlace al receptor Y2durante un period de dosificación extendido de 8 horas a 24 horas extended dosing period. Equipos La presente invención también incluye eguipos, empaques y unidades multi-contenedoras que contienen las composiciones, ingredientes activos, y/o medios farmacéuticos descritos arriba, para la administración de los mismos para utilizarse en la prevención y tratamiento de enfermedades y otros condiciones en suejtos mamíferos. En resumen, estos equipos incluyen un contenedor o formulación que contiene uno o más de proteínas, análogos o miméticos del péptido de enlace al receptor Y2, y/u otros agentes biológicamente activos en combinación con agentes que mejoran el suministro mucosal descritos en la presente formulado en una preparación farmacéutica para el suministro mucosal. Las formulaciones intranasales de la presente invención pueden administrarse utilizando cualquier botella de aspersión o jeringa. Un ejemplo de una botella de aspersión nasal se encuentra en, "Nasal Spray Pump w/ Safety Clip, Pfeiffer SAP # 60548, que suministra una dosis de 0. lml por aspersión y tiene una longitud de profundidad del tubo de 36.05 mm. Se puede adquirir de Pfeiffer of America of Princeton, NJ. La dosis intranasal de un péptido de enlace al receptor Y2 tal como PYY puede variar de O.lµg/kg hasta aproximadamente 1500 µg/kg. Cuando se administra como un rocío nasal, es preferible que el tamaño de la partícula del rocío se encuentre entre 10 - 100 µm (mieras) de tamaño, preferentemente 20 - 100 µm de tamaño. Para promover la pérdida de peso, se administra una dosis intranasal de un péptido de enlace al receptor Y2 PYY a dosis suficientemente altas para promover la saciedad pero suficientemente bajas a fin de no inducir ningún efecto colateral no deseado tal como nausea. Una dosis intranasal preferida de un péptido de enlace al receptor Y2 tal como PYY (3-36) es de aproximadamente 3 µg - 10 µg/kg por peso del paciente, más preferentemente apoximadamente 6 µg/kg por peso del paciente. En una dosis estándar, el paciente recibirá de 50 µg a 800 µg, más preferentemente entre apoximadamente 100 µg a 400 µg, más preferentemente 150 µg hasta aproximadamente 200 µg. Un péptido de enlace al receptor Y2 tal como PYY (3-36) se administra preferentemente al menos diez minutos a una hora antes de comer para evitar nausea pero no más de aproximadamente doce a veinticuatro horas antes de comer . El paciente se dosifica al menos una vez al día preferentemente antes de cada alimento hasta que el paciente ha perdido una cantidad deseada de peso. El paciente recibe entonces dosis de mantenimiento al menos una vez a la semana preferentemente diariamente para mantener la pérdida de peso." - 72 Como se muestra por los datos de los siguientes ejemplos, cuando se administra de manera intranasal a humanos utilizando la formulación del péptido de enlace al receptor Y2 de la presente invención, PYY (3-36) se encontró que reduce el apetito. Los ejemplos también muestran que para un primer tiempo los niveles fisiológicos post-comida de un péptido PYY pueden lograrse a través de una ruta intranasal utilizando las formulaciones del péptido de enlace al receptor Y2 de la presente invención en la cual PYY (3-36) fue el péptido de enlace al receptor Y2. Administración Nasal en Aerosol de PYY Hemos descubierto que los péptidos de enlace . al receptor Y2 pueden administrarse de manera intranasal utilizando una aspersión nasal o aerosol. Esto es sorprendente debido a que muchas proteínas y péptidos han mostrado compartirse o desnaturalizarse debido a las fuerzas mecánicas generadas por el actuador al producir la aspersión o aerosol. En esta área son útiles las siguientes definiciones . IX Aerosol - Un producto que se empaca bajo presión y contiene ingredientes terapéuticamente activos que se liberan a la activación de un sistema de válvula apropiado. Aerosol medido - Una forma de dosis presurizada comprende una válvulas medidoras de dosis, que permiten el - 17 - suministro de una cantidad uniforme de la aspersión en cada activación. Aerosol en Polvo - Un producto que se empaca bajo presión y contiene ingredientes terapéuticamente activos en la forma de un polvo, gue se libera a la activación de un sistema de válvulas apropiado. Aerosol en rocío - Un producto en aerosol que utiliza un gas comprimido como el propelente para proporcionar la fuerza necesaria para expeler el producto como un rocío húmedo; generalmente se aplica a soluciones de agentes medicinales en solventes acuosos. Rocío - Un líquido diminutamente dividido como por una corriente de chorro o aire. Los productos de droga de aspersión nasal contienen ingredientes terapéuticamente activos disueltos o suspendidos en soluciones o mezclas de excipientes en suministradores no presurizados. Rocío medido - Una forma de dosis no presurizada que consiste de válvulas que permiten el suministro de una cantidad específica de rocío en cada activación. Rocío en suspensión - Una preparación líquida que contiene partículas sólidas dispersas en un vehículo líquido y en la forma de gotas en dirección o como sólidos finamente divididos . La caracterización dinámica del fluido del rocío en aerosol se emite por las bombas de aspersión nasal medida - como un dispositivo de suministro de droga ("DDD") . La caracterización del rocío es una parte integral de la submisión reguladora necesaria para la aprobación por el Food and Drug Administración ("FDA") de los procedimientos de investigación y desarrollo, compromiso de calidad y pruebas de estabilidad para bombas de aspersión nuevas y existentes. A través de la caracterización, se ha econtrado que la geometría de la aspersión es el mejor indicador del desempeño total de las bombas de aspersión nasal. En particular, las mediciones del ángulo de divergencia del rocío (geometría de pluma) a medida que sale del dispositivo; la elipticidad transversal del rocío, la uniformidad y distribución de las partículas/gotas (patrón deaspersión) ; y la evolución del tiempo del rocío que se desarrolla se ha encontrado ser las mejores cantidades de desempeño representativas en la caracterización de una bomba de aspersión nasal. Durante el compromiso de calidad y la prueba de estabilidad, las mediciones de la geometría de pluma y y el patrón de aspersión son identificadores clave para verificar la consistencia y conformación con el criterio de los datos aprobados para las bombas de aspersión nasal. Definiciones Altura de la pluma - las mediciones de la punta del actuador hasta el punto en el cual el ángulo de la pluma se vuelve no lineal debido al rompimiento del flujo lineal. Con - - base en el examen visual de imágenes digitales, y para establecer un punto de medición para el ancho es decir consistente con el punto de medición más lejano del patrón de aspersión, se define una altura de 30 mm para este estudio. Eje Mayor - la cuerda más larga que puede extraerse dentro del patrón de aspersión adaptado que cruza el COMw en unidades base (mm) . Proporción de Elipticidad - la cuerda más pequeña que pueden extraerse dentro del patrón de aspersión adaptado que cruza el COMw en unidades base (mm) . Proporción de Elipticidad - la proporción del eje mayor al eje menor. Dio - el diámetro de las gotas para el cual el 10% del volumen de líquido total de muestras consistentes de gotitas de un diámetro más pequeño (µm) . D5n - el diámetro de las gotas para el cual el 50% del volumen de líquido total de muestras consistentes de gotitas de un diámetro más pequeño (µm) , también conocido como el diámetro medi -de masa. D90 - el diámetro de las gotas para el cual el 90% del volumen de líquido total de muestras consistentes de gotitas de un diámetro más pequeño (µm) .

Trayecto - medición del ancho de desviación, el valor más pequeño, la distribución más estrecha. El trayecto (D90-D10) se calcula como °50 % RSD - desviación estándar con relación al porcentaje, la desviación estándar dividida entre el promedio de las series y multiplicado por 100, también conocido como %CV. Las Figuras 21A y 21B muestran un dispositivo de aspersión nasal 10 antes del embrague (Figura 21A) y después del embrague (Figura 21B) . La botella de aspersión nasal 10 esta comprendida de una botella 12 en la cual se coloca la formulación del péptido de enlace al receptor Y2, y un actuador 14, que cuando las fuerzas actúan o embragan una pluma de aspersión, 16, del péptido de enlace al receptor Y2 sale de la botella de aspersión, 12, a través del actuador, 14. Un patrón de aspersión se determina al tomar una fotografía de la sección transversal de la pluna de aspersión 16 arriba de una altura predeterminada, 18, de la pluma. La pluma de aspersión también tiene un ángulo de ejección, 20, a medida que deja el actuador, 14. Un patrón de rocío de la pluma de aspersión 16 se muestra en la Figura 22. El patrón de aspersión 22, es elíptico y tiene un eje mayor, 24, y un eje menor 26. Los siguientes ejemplos se proporcionan a manera de ilustración, sin limitación - - EJEMPLO 1 Una formulación que ejemplifica el suministro mucosal nasal mejorado del péptido YY siguiendo las técnicas de la presente especificación se preparó y evaluó como sigue: Tabla 1: Composición de la formulación del péptido YY - - EJEMPLO 2 Suministro mucosal nasal - Cinéticas de permeación y Citotoxicidad 1. Modelo Organotipico Los siguientes métodos son generalmente útiles para evaluar los parámetros, cinéticas y efectos colaterales del suministro mucosal nasal para el péptido YY dentro de las formulaciones y método de la invención, así como para determinar la eficiencia y características de diversos agentes mejoradores el suministro intranasal descritos en la presente para la formulación combinacional o la administración coordinada con el péptido YY. Las cinéticas de permeación y citotoxicidad también son útiles para determinar la eficiencia y características del diversos agentes mejoradores del suministro mucosal descritos en la presente para la formulación combinacional o la. administración coordinada con agentes mejoradores del suministro mucosal. En un protocolo ejemplificativo, las cinéticas de permeación y carencia de inaceptable citotoxicidad se demuestran para un agente mejorador del suministro intranasal como se describe arriba en combinación con un agente terapéutico biológicamente activo, ejemplificado por el péptido YY.

El Sistema EpiAirway se desarrolló por MatTek Corp (Ashland, MA) como un modelo del epitelio pseudoestratificado que recubre el tracto respiratorio. Las células epiteliales se desarrollan en cultivos celulares apoyados en membrana porosa insertos en una interfaz aire-líquido, lo cual da como resultado la diferenciación celular para una morfología altamente polarizada. La superficie apical es ciliada con una ultraestructura microvellosa y el epitelio produce moco (la presencia de mucina se ha confirmado por inmunotransferencia) . Los insertos tienen un diámetro de 0.875 cm, proporcionando un área de superficie de 0.6 cm2. Las células se colocan en placas en los insertos en la fábrica aproximadamente tres semanas antes del embarque. Un "equipo" consiste de 24 unidades. A. Al llegar, las unidades se colocan sobre soportes estériles en microplacas de 6 pozos. Cada pozo recibe 5 ml de medio de cultivo patentado. Este medio basado en DMEM esta libre de suero pero se complementa con factor de crecimiento epidérmico y otros factores. El medio siempre se prueba para los niveles endógenos de cualquier citocina o factor de crecimiento, lo cual se esta considerando para el suministro intranasal, pero ha estado libre de todas las citocinas y factores estudiados hasta la fecha excepto la insulina. El volumen de 5 ml es justo lo suficiente para proporcionar el contacto con la parte inferior de las - - unidades o sus soportes, pero la superficie apical del epitelio se deja permanecer en contacto directo con el aire. Se utilizan tenacillas estériles en esta etapa y en todas las etapas subsecuentes que incluyen la transferencia de unidades a pozos conteniendo líquido para asegurar que el aire no se atrape entre la parte inferior de las unidades y el medio. B. Las unidades se mantienen en sus placas a 37 °C en un incubador en una atmósfera de 5% C02 en aire durante 24 horas. Al final de este tiempo se remplaza el medio con medio fresco y las unidades se regresan al incubador durante otras 24 horas. 2. Protocolo Experimental - Cinéticas de permeación A. Puede emplearse rutinariamente un "equipo" de 24 Unidades EpiAirway para evaluar cinco diferentes formulaciones, cada una de las cuales se aplica a pozos por cuadriplicado. Cada pozo se emplea para la determinación de cinéticas de permeación (4 puntos de tiempo) , resistencia transepitelial, actividad de reductasa mitocondrial según se mide por Reducción MTT, y citolisis según se mide por la liberación de LDH. Se emplea un conjunto adicional de pozos como controles, los cuales se tratan de manera simulada durante la determinación de cinéticas de permeación, pero de otro modo de manejan de manera idéntica a las unidades que contienen la muestra de prueba para las determinaciones de resistencia transepitelial y viabilidad. Las determinaciones sobre los controles también se hacen rutinariamente en unidades por cuadruplicado, pero ocasionalmente hemos empleado unidades por triplicado para los controles y hemos dedicado las cuatro unidades restantes en el equipo para mediciones de resistencia transepitelial y viabilidad sobre las unidades no tratadas o hemos congelado y descongelado las unidades para las determinaciones de los niveles de LDH total para servir como una referencia del 100% de citolisis. B. En todos los experimentos, la formulación de suministro mucosal nasal a estudiarse se aplica a la superficie apical de cada unidad en un volumen de 100 µl, lo cual es suficiente para cubrir la superficie apical completa. Un volumen apropiado de la formulación de prueba en la concentración aplicada a la superficie apical (generalmente se necesita no más de 100 µl) se establece aparte para la determinación subsecuente de concentración del material activo mediante ELISA u otros ensayos designado. C. Las unidades se colocan en placas de 6 pozos sin soporte para el experimento: cada pozo contiene 0.9 ml de medio lo cual es suficiente para poner en contacto la parte inferior de la membrana porosa de la unidad pero no genera ninguna presión hidrostática significativa ascendente sobre la unidad D. Para minimizar las fuentes de error potenciales y evitar cualquier formación de gradientes de - concentración, las unidades se transfieren desde un pozo que •contiene 0.9 ml a otro en cada punto de tiempo en el estudio. Estas transferencias se hacen en los siguientes puntos de tiempo, con base en un punto cero en el cual el volumen de 100 µl del material de prueba se aplicó a la superficie apical: 15 minutos, 30 minutos, 60 minutos, y 120 minutos. E. Entre los puntos de tiempo las unidades en sus placas se mantienen en el incubador a 37 °C. Las placas que contienen 0.9 ml de medio por pozo también se mantienen en el incubador a fin de que ocurra un cambio mínimo en la temperatura durante los breves periodos cuando las placas se retiran y las unidades se transfieren de un pozo a otro utilizando pinzas estériles F. A la terminación de cada punto de tiempo, el medio se retira del pozo desde el cual se transfirió cada unidad, y se hacen alícuotas en dos tubos (un tubo recibe 700 µl y el otro 200 µl) para la determinación de la concentración del material de prueba permeado y, para el caso que el material de prueba sea citotóxido, por la liberación de la enzima citosólica, la deshidrogenasa láctica, desde el epitelio. Estas muestras se mantienen en el refrigerador si los ensayos se conducirán dentro de 24 horas, o las muestras se harán subalícuotas y se mantendrán congeladas a -80°C hasta que se descongelen para el ensayo. Se evitan los ciclos de congelación-descongelación repetidos.

- G. A fin de minimizar los errores, todos los tubos, placas y pozos se pre-etiquetan antes de iniciar un experimento. H. Al final del punto de tiempo de 120 minutos, las unidades se transfieren desde el último de los pozos que contiene 0.9 ml hacia las microplacas de 24 pozos, conteniendo 0.3 ml de medio por pozo. Este volumen de nuevo es suficiente para poner en contacto la parte inferior de las unidades, pero no ejerce presión hidrostática ascendente sobre las unidades. Las unidades se regresan al incubador antes de la medición de la resistencia transepitelial. 3. Protocolo experimental - Resistencia transepitelial A. Las células epiteliales aéreas respiratorias forman uniones herméticas en vivo así como en vitro, restringiendo el flujo de solutos a través del tejido. Estas uniones confieren una resistencia transepitelial de varios cientos de ohmios x cm2 en tejidos aéreos extraídos; en las unidades EpiAirway MatTek, la resistencia transepitelial (TER) se reivindica por el fabricante por estar rutinariamente alrededor de 1000 ohmios x cm2. Hemos encontrado que la TER de las unidades EpiAirway de control que se han expuesto en simulación durante la secuencia de las etapas en el estudio de permeación algunas veces es inferior (700-800 ohmios x cm2) , pero, ya que la permeación de las moléculas pequeñas es proporcional a la inversa de TER, este valor aún es suficientemente alto para proporcionar una mayor barrer para la permeación. Las unidades de la parte inferior de la membrana porosa sin células, proporcionan de manera inversa sólo una resistencia mínima de transmembrana (5-20 ohmios x cm2) . B. Las determinaciones exactas de TER requieren que los electrodos del ohmetro se coloquen sobre un área de superficie significativa arriba y abajo de la membrana, y que la distancia de los electrodos desde la membrana se controle de manera reproducible. El método para la determinación de TER recomendada por MatTek y empleado para todos los experimentos, emplean en la presente un voltohmetro epitelial "EVOM"™ y una cámara de medición de resistencia de tejido "ENDOHM"™ de World Precisión Instruments, Inc., Sarasota, FL. C. La cámara se llena inicialmente con salina amortiguada con fosfato de Dulbecco (PBS) durante al menos 20 minutos antes de las determinaciones TER a fin de equilibrar los electrodos. D. Las determinaciones de TER se hacen con 1.5 ml de PBS en la cámara y 350 µl de PBS en la unidad -apoyada en la membrana que se esta midiendo. El electrodo superior se ajusta a una posición justo por arriba de la membrana de una unidad que no contienen células (pero que contienen 350 µl de PBS) y después se fija para asegurar la colocación reproducible. La resistencia de una unidad libre de células es típicamente de 5-20 ohmios x cm2 ("resistencia de fondo") . E. Una vez que la cámara se prepara y se registra la resistencia de fondo, las unidades en una placa de 24-pozos que sólo se han empleado en las determinaciones de permeación se retiran del incubador y se colocan individualmente en la cámara para las determinaciones de TER. F. Cada unidad se transfiere primer a una caja de Petri que contienen PBS para asegurar que el fondo de la membrana se humedezca. Se agrega una alícuota de 350 µl de PBS a la unidad y después de aspira cuidadosamente en un tubo etiquetado para elevar la superficie apical. Se aplica un segundo lavado de 350 µl de PBS a la unidad y se aspira en el mismo tubo de recolección. G. La unidad se inmuno-transfiere suavemente libre del exceso de PBS sobre su superficie exterior justo antes de colocarse en la cámara (que contienen una alícuota fresca de PBS de 1.5 ml) . Se agrega una alícuota de PBS de 350 µl a la unidad antes de que se coloque el electrodo superior sobre la cámara y se lee la TER en el medidor EVOM. H. Después de que se lee la TER de la unidad en la cámara ENDOHM, la unidad se retira, la PBS se aspira y se guarda, y la unidad se regresa con una interfaz de aire sobre la superficie apical a una placa de 24-pozos que contienen 0.3 ml de medio por pozo. I. Las unidades se leen en la siguiente secuencia: todos los controles tratados en simulación seguido por todas las muestras tratadas con la formulación, seguido por una segunda lectura de TER de cada uno de los controles tratados en falso. Después de que se completan todas las determinaciones TER, las unidades en la microplaca de 24 pozos se regresa al incubador para la determinación de vialidad mediante la reducción MTT. 4. Protocolo experimental - Viabilidad mediante Reducción MTT MTT es una sal de tetrazolio celularmente permeable que se reduce por la actividad de la deshidrogenasa mitocondrial a un for azan insoluble coloreado por las células viables con función mitocondrial intacta o por la actividad de la deshidrogenasa no mitocondrial NAD(P)H de las células capaces de generar una ráfaga respiratoria. La formación de formazan es un buen indicador de viabilidad de las células epiteliales ya que estas células no generan una ráfaga respiratoria significativa. Hemos empleado un reactivo MTT preparado por MatTek Corp para sus unidades a fin de valorar la viabilidad. A. El reactivo MTT se suministra como un concentrado y se diluye en un diluyente a base de DMEM patentado en el día de viabilidad para . analizarse (típicamente por la tarde del día en el que se determinó las cinéticas de permeación y TER en la mañana) . El reactivo insoluble se retira mediante una breve centrifugación después de utilizarse. La concentración final de MTT es de 1 mg/ml. B. La solución final de MTT se agrega a los pozos de una microplaca de 24-pozos a un volumen de 300 µl por pozo. Como se anotó arriba, este volumen es suficiente para poner en contacto las membranas del unidades EpiAirway pero no impone presión hidrostática positiva significativa sobre las células. C. Las unidades se retiran de la placa de 24 pozos en la que se colocaron después de las mediciones de TER y después de retirar cualquier liquido en exceso de la superficie exterior de las unidades, estas se transfieren a la placa que contiene el reactivo MTT. Las unidades en la placa se colocan entonces en un incubador a 37 °C en una atmósfera de aire con 5% de C02 durante 3 horas. D. Al final de 3 horas de incubación, las unidades que contienen las células viables se habrán vuelto visiblemente moradas. El formazan insoluble debe extraerse de las células en sus unidades para cuantivicar el grado de reducción de MTT. La extracción del formazan se lleva a cabo al transferir las unidades a una microplaca de 24-pozos que contiene 2 ml de solución de extracción por pozo, después de retirar el líquido en exceso de la superficie exterior de las unidades como antes. Este volumen es suficiente para cubrir completamente tanto la membrana como la superficie apical de las unidades. Se deja proceder la extracción - l í durante la noche a temperatura ambiente en una cámara hermética a la luz. Las extracciones de MTT tradicionalmente contienen altas concentraciones de detergente y destruyen las células . E. Al final de la extracción el fluido desde dentro de cada unidad y el fluido en sus pozos circundantes se combina y se transfiere a un tubo para hacer alícuotas subsecuentes en un microplaca de 96 pozos (las alícuotas de 200 µl son óptimas) y la determinación de la absorbencia a 570 nm en un espectofotómetro de microplaca de múltiples pozos VMax. Para asegurar que la turbidez de los detritus que provienen de las unidades extraídas no contribuya a la absorbencia, también se determina la absorbencia a 650 nm para cada pozo en el VMax y se sustrae automáticamente de la absorbencia a 570 nm. El "testigo" para las determinaciones de absorbencia de formazan es una alícuota de 200 µl del extracto al cual no se ha expuesto ninguna unidad. Este valor de absorbencia se asume para constituir la viabilidad cero. F. Se dejan sin tratar dos unidades de cada equipo de 24 Unidades EpiAirway durante la determinación de las cinéticas de permeación y TER. Estas unidades se emplean como el control positivo para la viabilidad célulaular al 100%. En todos los estudios que hemos conducido, no ha habido diferencias estadísticamente significativas en la - viabilidad de las células en estas unidades no tratadas vs las células en las unidades de control que se han tratado en simulación para las cinéticas de permeación y en las cuales se han realizado las determinaciones de TER. La absorbencia de todas las unidades tratadas con las formulaciones de prueba se suponen que son linealmente proporcionales al porciento de viabilidad de las células en las unidades en el momento de la incubación con MTT. Debe notarse que este ensayo se lleva a cabo típicamente en no menos de cuatro horas después de la introducción del material de prueba a la superficie apical, y subsecuente al lavado de la superficie apical en las unidades durante la determinación de TER. 5. Determinación de Viabilidad mediante la liberación de LDH Aunque las mediciones de la actividad de la reductasa mitocondrial mediante la reducción de MTT es una prueba sensible a la viabilidad celular, el ensayo destruye necesariamente las células y por lo tanto puede llevarse a cabo sólo al final de cada. Cuando las células experimentan lisis necrótica, sus contenidos citosólicos se vierten en el medio circundante, y las enzimas citosólicas tales como la deshidrrogenasa láctica (LDH) pueden detectarse en este medio. Un ensayo para LDH en el medio puede realizarse en muestras del medio retirado en cada punto de tiempo de la determinación de cada dos horas de las cinéticas de permeación. Así, pueden detectarse los efectos citotoxicos de las formulaciones que no se desarrollan hasta que ha pasado un tiempo significativo así como los efectos de las formulaciones que inducen la citolisis en los primeros minutos de exposición al epitelio aéreo. A. El ensayo de LDH recomendado para evaluar la citolisis de las Unidades EpiAirway se basa en la conversión del lactato a piruvato con la generación de NADH a partir de NAD. El ADH se re-oxida entonces junto con la re-oxidación simultánea de la sal con tetrazolio INT, catalizado por una preparación cruda de "diaforasa". El formazan formado de la reducción de 1NT es soluble, de manera que el análisis completo para la actividad de LDH puede llevarse a cabo en un medio acuoso homogéneo que contiene lactato, NAD, diaforasa, e INT. B. El análisis para la actividad de LDH se lleva a cabo en alícuotas de 50 µl de las muestras del medio "sobrenadante" que rodea una unidad EpiAirway y se recolecta en cada punto de tiempo. Estas muestras se almacenan ya sea por no mas de 24 h en el refrigerador o se descongelan después de haberse congelado dentro de pocas horas después de la recolección. Cada unidad EpiAirway genera muestras del medio sobrenadante recolectado a los 15 min, 30 min, 1 h, y 2 h después de la aplicación del material de prueba. Las alícuotas se transfieren todas a una microplaca de 96 pozos. C. Una alícuota de medio de 50 µl que no se ha expuesto a una unidad sirve como un "testigo" o control negativo de citotoxicidad al 0%. Hemos encontrado que el nivel aparente de .LDH "endógeno" presente después de la reacción de la mezcla del reactivo analizado con el medio no expuesto es el mismo dentro del error experimental que el nivel aparente de LDH liberada por las unidades de control tratadas en simulación en el curso de tiempo completo de 2 horas requerido para conducir un estudio de cinéticas de permeación. Así, dentro del error experimental, estas unidades tratadas en simulación no muestran citolisis de las células epiteliales en el curso de tiempo de las mediciones de las cinéticas de permeación. D. Para preparar una muestra de medio sobrenadante que refleje el nivel de LDH liberada después que el 100% de las células en una unidad se ha lisado, una unidad la cual no se ha sometido a alguna manipulación anterior se agrega a un pozo de una microplaca de 6 pozos gue contienen 0.9 ml de medio como en el protocolo para la determinación de cinéticas de permeación, la placa que contienen la unidad se congela a -80 °C, y los contenidos del pozo se dejan descongelarse entonces. Este ciclo de congelación-descongelación lisa de manera efectiva las células y libera sus contenidos citosólicos, incluyendo la LDH, en el medio sobrenadante. Una alícuota de 50 µl del medio de las células congeladas y descongeladas se agrega a la placa de 96 pozos - - como un control positivo que refleje el 100% de citotoxicidad. E. A cada pozo que contienen una alícuota del medio sobrenadante, se agrega una alícuota de 50 µl del reactivo del análisis de LDH. La placa se incuba entonces durante 30 minutos en la oscuridad. F. Las reacciones se terminan mediante ala dición de una solución de "detención" de ácido acético 1 M, y dentro de una hora de la adición de la solución de detención, se determina la absorbencia de la placa a 490 nm. G. La computación del porciento de citolisis se basa en la suposición de una relación linear entre la absorbencia y la citolisis, con la absorbencia obtenida del medio sólo que sirve como una referencia para el 0% de citolisis y la absorbencia obtenida del medio que rodea la unidad congelada y descongelada gue sirve como una referencia para el 100% de citolisis. 6. Determinaciones ELISA Los procedimientos para determinar las concentraciones de los agentes biológicamente activos como materiales de prueba para evaluar la permeación mejorada de agentes activos en conjunto con la administración coordinada de agentes mejoradores del suministro mucosal o la formulación combinacional de la invención son en general como se describe arriba y de acuerdo con métodos conocidos e - - instrucciones específicas del fabricante de los equipos ELISA equipos empleados para cada análisis particular. Las cinéticas de permeación del agente biológicamente activo se determina en general al tomar mediciones en múltiples puntos de tiempo (por ejemplo 15 min., 30 min., 60 min. y 120 min) después que el agente biológicamente activo se pone en contacto con la superficie celular del epitelio apical (lo cual puede ser simultáneo con, o subsecuente a, la exposición de la superficie celular apical al agente (s) que mejora el suministro mucosal) . Los procedimientos para determinar las concentraciones del péptido YY neuropéptido Y, y suero pancreático en suero sanguíneo, tejidos o fluidos del sistema nervioso central (CNS) , fluido cerebro espinal (CSF) , u otros tejidos o fluidos de un sujeto mamífero puede determinarse por el ensayo inmunológico para el péptido YY neuropéptido Y, y péptido pancreático. Los procedimientos para determinar las concentraciones de péptido YY neuropéptido Y, y suero pancreático como materiales de prueba para evaluar la permeación mejorada de agentes activos en conjunto con la administración coordinada de agentes mejoradores del suministro mucosal o la formulación combinacional de la invención son en general como se describe arriba y de acuerdo con métodos conocidos e instrucciones específicas del fabricante para reactivos de radioinmunoensayo (RÍA) , immunoensayo de enzima (EIA) , y anticuerpo para inmunohistoquímica o inmunofluorescencia para el péptido YY neuropéptido Y, y péptido pancreático. Bachem AG (King de Prussia, PA) . Las membranas de tejido EpiAirway™ se cultivan en medio libre de rojo de fenol e hidrocortisona (MatTek Corp., Ashland, MA) . Las membranas de tejido se cultivan a 37 °C durante 48 horas para permitir que el cultivo se equilibre. Cada membrana de tejido se coloca en un pozo individual de una placa de 6 pozos que contienen 0.9 ml de medio libre de suero. 100 µl de la formulación (muestra de prueba o control) se aplica a la superficie apical de la membrana. Las muestras por triplicado o cuadruplicado de cada muestra de prueba (agente que mejora el suministro mucosal en combinación con un agente biológicamente activo, péptido YY) y el control (agente biológicamente activo, péptido YY, solo) se evalúan en cada ensayo. En cada punto de tiempo (15, 30, 60 y 120 minutos) las membranas de tejido se mueven a nuevos pozos que contienen medio fresco. Las muestras del medio subyacente 0.9 ml se cosechan en cada punto de tiempo y se almacenan a 4°C para el uso en los análisis de ELISA y lactato deshidrogenasa (LDH) . Los equipos del ELISA son típicamente ELISAs estratificadas de dos etapas: primero se "captura" la forma inmunoreactiva del agente gue se esta estudiando por un anticuerpo inmovilizado en una microplaca de 96 pozos y después de lavar el material no unido de los pozos, un anticuerpo de "detección" se le permite reaccionar con el agente inmunoreactivo activo. Este anticuerpo de detección se conjuga típicamente a una enzima (más frecuentemente peroxidasa de rábano picante) y la cantidad de enzima unida a la placa en los complejos inmunes se mide entonces al analizar su actividad con un reactivo cromogénico. Además de las muestras del medio sobrenadante recolectadas en cada uno de los puntos de tiempo en los estudios de cinéticas de permeación, las muestras apropiadamente diluidas de la formulación (i.e., que contienen el agente de prueba biológicamente activo que se esta tratando) que se aplicó a la superficie apical de las unidades al inicio del estudio cinético también se analizan en la placa de ELISA, junto con un conjunto de estándares proporcionados por el fabricante. Cada muestra de medio sobrenadante se analiza en general en pozos por duplicado mediante ELISA (se recordará que las unidades se emplean para cada formulación en una determinación de cinéticas de permeación, que generan un total de dieciseis muestras de medio sobrenadante re colectado a través de los cuatro puntos de tiempo) . A. No es común para las concentraciones aparentes del agente de prueba activo en las muestras de medio sobrenadante o en las muestras diluidas del material aplicado - - a la superficie apical de las unidades que se encuentren fuera del rango de las concentraciones de los estándares después de la terminación de un ELISA. Ninguna concentración del material presente en las muestras experimentales se determina por extrapolación más allá de las concentraciones de los estándares; preferentemente, las muestras se rediluyen apropiadamente para generar concentraciones del material de prueba que puede determinarse más exactamente mediante interpolación entre los estándares en un ELISA repetido. B. El ELISA para un agente de prueba biológicamente activo, por ejemplo, péptido YY, es único en su diseño y protocolo recomendado. A diferencia de la mayoría de los equipos, el ELISA emplea dos anticuerpos monoclonales, una para captura y el otro directamente hacia un determinante no sobrepuesto al agente de prueba biológicamente activo, e.g., péptido YY, como el anticuerpo de detección (este anticuerpo se conjuga a la peroxidasa de rábano picante) . A medida que las concentraciones del péptido YY que se encuentran por abajo del límite superior del ensayo se encuentran presentes en las muestras experimentales, el protocolo de ensayo puede emplearse de acuerdo con las instrucciones del fabricante, las cuales permiten la incubación de las muestras en la placa de ELISA con ambos anticuerpos simultáneamente presentes. Cuando los niveles del péptido YY en una muestra son significativamente mayor que su limite superior, los niveles - - del péptido YY inmunoreactivo pueden exceder las cantidades de los anticuerpos en la mezcla de incubación, y algunos péptidos YY que no tienen unido anticuerpo de detección se capturarán en la placa, mientras algunos péptidos YY que tienen unido el anticuerpo de detección no pueden capturarse. Esto conduce a una seria sub-estimación de los niveles de péptido YY en la muestra (será aparente que los niveles de péptido YY en cada muestra se encuentran significativamente por abajo del límite superior del ensayo) . Para eliminar esta posibilidad, se ha modificado el protocolo de ensayo: B.l. Las muestras diluidas primero se incuban en la placa de ELISA que contienen el anticuerpo de captura inmovilizado durante una hora en la ausencia de cualquier anticuerpo de detección. Después de una hora de incubación, los pozos se lavan para liberar el material no unido. B.2. El anticuerpo de detección se incuba con la placa durante una hora para permitir la formación de complejos inmunes con todo el antígeno capturado. La concentración del anticuerpo de detección es suficiente para reaccionar con el nivel máximo de péptido YY que se ha unido por el anticuerpo de captura. Esta placa entonces se lava de Nuevo para retirar cualquier anticuerpo de detección no unido. B.3. El sustrato de peroxidasa se agrega a la placa y se incuba durante quince minutos para permitir que tenga 1 lugar el desarrollo del color. B.4. La solución de "alto" se agrega a la placa, y se lee la absorbencia a 450 nm así como a 490 nm en el espectofotómetro de microplaca VMax. La absorbencia del producto coloreado a 490 nm es mucho menor que a 450 nm, pero la absorbencia en cada longitud de onda es aún proporcional a la concentración del producto. Las dos lecturas aseguran que la absorbencia se relaciona de manera lineal a la cantidad de péptido YY unido a través del ranto trabajado del instrumentoo VMax (restringimos rutinariamente el rango de 0 a 2.5 OD, aunque el instrumento reporta ser exacto a través de un rango de 0 a 3.0 OD) . La cantidad de péptido YY en las muestras se determina por interpolación entre los valores de OD obtenidos de los diferentes estándares incluidos en el ELISA. Las muestras con lecturas OD fuera del rango obtenidas por los estándares redilidas y se corridas en un ELISA repetido. RESULTADOS Medición de la resistencia, transepitelial mediante ensayo TER: puntos de tiempo del ensayo, las membranas se colocaron en pozos individuales de una placa de cultivo de 24 pozos en 0.3 ml de medio limpio y se midió la resistencia eléctrica transepitelial (TER) utilizando el Voltómetro Epitelial EVOM y una cámara Endohm (World Precisión Instruments, Sarasota, FL) . El electrodo superior se ajustó - para estar más cerca pero no en contacto con la superficie superior de la membrana. Los tejidos se retiraron, uno a la vez, de sus respectivos pozos y las superficies básales se enjuagaron por inmersión en PBS LIMPIO. Las superficies apicales se enjuagaron suavemente dos veces con PBS. La unidad de tejido se colocó en la cámara Endohm, se agregaron 250 µl de PBS al inserto, se recolocó el electrodo superior y se midió y registró la resistencia. Después de la medición, se decantó la PBS y el inserto de tejido se regresó a la placa de cultivo. Todos los valores de TER se reportan como una función del área de superficie del tejido. Se calcularon los números finales como: TER de la membrana celular = (Resistencia (R) del Inserto con membrana - R de Inserto testigo) Área X de membrana (0.6 cm2) . La formulación P, ejemplifica la formulación de péptido YY, mostrando la mayor disminución en la resistencia de la membrana celular. (Tabla 2). Los resultados indican que la formulación ejemplificada (e.g., Formulación P) reduce la resistencia de la membrana a menos del 1% del control en las concentraciones probadas. Los valores muestran el promedio de tres replicas de cada formulación. Las formulaciones A y B son controles preparados al reconstituir el péptido YY (Bachem AG, King of Prussia, PA) que contienen 60 µg del péptido Y3-36 en 100 ml de salina amortiguada de - - fosfato (PBS) a H 7.4 o 5.0. El péptido YY sin mejoradores de suministro mucosal no disminuye la resistencia. Los resultados indican que una formulación ejemplificada para el suministro intranasal mejorado del péptido YY (e.g., Formulación P) disminuye la resistencia de la membrana celular y disminuye significativamente la permeabilidad celular del epitelio mucosal. Las formulaciones ejemplificadas mejorarán el suministro intranasal del péptido YY al suero sanguíneo o al tejido o fluido del sistema nervioso central. Los resultados indican que estas formulaciones ejemplificadas cuando están en contacto con un epitelio mucoso producen incrementos significativos en la permeabilidad celular del epitelio mucoso para el péptido YY. Tabla 2: Influencia de las Formulaciones Farmacéuticas que comprenden el Péptido YY y los Agentes que mejoran el suministro intranasal en la Resistencia transepitelial (TER) de la membrana celular EpiAirway - - Cinéticas de permeación según se mide por el ensayo ELISA: El efecto de las formulaciones farmacéuticas de la presente invención que comprende el péptido YY y los agentes mejoradores del suministro intranasal sobre la permeación del TM péptido YY a través de la Membrana Celular EpiAirway (capa de células epiteliales mucosas) se mide como se describió arriba. Los resultados e muestran en la Tabla 3. La permeación del péptido YY a través de la Membrana Celular , , T , EpiAirway se mide mediante el ensayo ELISA.

- Para las formulaciones intranasales ejemplificadas (e.g., Formulación P) de la presente invención, el mayor incremento en la permeación para el péptido YY ocurre en la Formulación P como se muestra en la Tabla 3. El procedimiento utiliza un ensayo ELISA para determinar la concentración del péptido YY biológicamente activo que ha permeado las células epiteliales en el medio circundante a través de los múltiples puntos de tiempo. Los resultados muestran la permeación incrementada del péptido YY en la Formulación P en comparación con la formulación A o B (formulación control de péptido YY; 60 µg de péptido YY3-36 en 100 ml de salina amortiguada con fosfato (PBS) a pH 7.4 o 5.0; Bachem AG, King of Prussia, PA) . El promedio acumulativo en la permeación a 120 minutos que utiliza la formulación intranasal ejemplificada Formulación P es de aproximadamente 1195 veces mayor que las Formulaciones de control A o B.

Tabla 3 : Influencia de las Formulaciones farmacéuticas que comprenden el Péptido YY y los Agentes Mejoradores del Suministro Intranasal en la Permeación del Péptido YY a través de la Membrana Celular EpiAirway mediante Ensayo ELISA.

Ensayo MTT: MTT se realizaron utilizando equipos MatTek MTT- 100. Se agregaron 300 ml de la solución de MTT a cada pozo. Los insertos de tejido se enjuagaron suavemente con PBS limpia y se colocaron en la solución de MTT. Las muestras se incubaron a 37 °C durante 3 horas. Después de la incubación los insertos de cultivos celulares se sumergieron entonces con 2.0 ml de la solución extraída por pozo para cumplir completamente cada inserto. La placa de extracción se cubrió y selló para reducir la evaporación. La extracción procedió durante la noche a temperatura ambiente en la oscuridad. Después que se complete el periodo de extracción, la solución extraída se mezcló y pipeteo en placas de microtitulación de 96 pozos. Se cargaron triplicados de cada muestra, así como los testigos extraídos. La densidad óptica de las muestras se midió entonces a 550 nm sobre un lector de placa (Molecular Devices) (dispositivos moleculares) . El ensayo de MTT en una formulación ejemplificada para el suministro mucosal nasal mejorado del péptido YY siguiendo las enseñanzas de la presente especificación (e.g., Formulación P) en comparación a la formulación de control (Formulaciones A o B) se muestra en la Tabla 4. Los resultados para las formulaciones que comprende el péptido YY y uno o más de los agentes mejoradores del suministro intransal, por ejemplo, Formulación P (experimento realizado en tres réplicas) indica que existe un efecto toxico mínimo de esta modalidad ejemplificada sobre la viabilidad del tejido epitelial mucoso. Tabla 4 Influencia de Formulaciones Farmacéuticas que Comprenden el Péptido YY y Agentes que mejoran el suministro intranasal on the Viabilidad de EpiAirway Célula Membrana as shown by % MTT Ensayo LDH: El ensayo de la LDH en una formulación ejemplificada para el suministro mucosal nasal mejorado del péptido YY siguiendo las enseñanzas de la presente especificación (e.g., Formulación P) se muestran en la Tabla 5. Los resultados de tres réplicas de la Formulación P indican que existe un mínimo efecto toxico de esta modalidad ejemplificada sobre la viabilidad del tejido epitelial mucoso. Tabla 5 Influencia de las Formulaciones Farmacéuticas que comprenden el Péptido YY y Agentes Mejoradores del Suministro Intranasal sobre la Viabilidad de la Membrana Celular EpiAirway como se muestra por el % de Células Lisadas (Ensayo LDH) .

H Ácido n-Cáprico Sódico 1.3 (0.075% p/v) Quitosan (0.5% p/v) 0.7 J Didecanil L-a- 1.2 fosfatidilcolina (3.5% p/v) K S-Nitroso-N-Acetil- 0.7 Penicilamina (0.5% p/v) Palmotoil-DL-Carnitina (0.02% 0.8 p/v) M Pluronic-127 (0.3% p/v) 1.0 N Nitroprusiato Sódico (0.3% 0.6 p/v) O Glicocolato Sódico (1% p/v) 0.8 Fl: Gelatina, DDPC, MBCD, 2.0 EDTA EJEMPLO 3 Formulación P (Péptido YY) de la presente invención en combinación con Corticosteroide de Acetonida Triamcinolona que Mejora la Viabilidad Celular El presente ejemplo proporciona un estudio en vitro para determinar la permeabilidad y reducción en la inflamación de la mucosa epitelial de un péptido YY administrado de manera intranasal, por ejemplo, el péptido YY humano, en combinación con una composición esteroide, por ejemplo, acetonida triamcinolona, y además en combinación con uno o más agentes mejoradores del suministro intranasal. El - estudio incluye la determinación de la permeabilidad celular epitelial mediante el ensayo de TER y la reducción de la inflamación mucosal epitelial según se mide por la viabilidad celular en un ensayo MTT mediante la aplicación de una modalidad que comprende el péptido YY y la acetonida triamcinolona . La formulación P (ver Tabla 1 de arriba) se combina en una formulación con acetonida triamcinolona a una dosis de 0.5, 2.0, 5.0, o 50 µg. La dosis normal de acetonida triamcinolona, (Nasacort®, Aventis Pharmaceuticals) para rinitis alérgica estacional, es 55 µg por aspersión. La Formulación P en combinación con el corticosteroide acetonida triamcinolona mejora la viabilidad celular según se mide por el ensayo de MTT, mientras se mantiene la permeabilidad celular epitelial según se mide por los ensayos de TER y ELISA. De acuerdo con los métodos y formulaciones de la invención, la medición de la permeabilidad de la Formulación P en la presencia o ausencia de acetonida triamcinolona se lleva a cabo mediante ensayos de resistencia eléctrica transepitelial (TER) en una membrana celular EpiAirway™. Los ensayos de TER de la Formulación P más la acetonida triamcinolona a una concentración de 0.5, 2.0, 5.0, o 50 µg por aspersión indican que la permeabilidad del permeabilidad del péptido YY no disminuye y fue igual a la permeabilidad de la Formulación P sola. La Formulación P más la acetonida triamcinolona a una concentración de acetonida triamcinolona entre 0 y 50 µg por aspersión es típicamente, al menos de 10-veces a 100-veces mayor gue la permeabilidad de las Formulaciones A o B (péptido control YY) . De acuerdo con los métodos y formulaciones de la invención, la medición de la permeabilidad de la Formulación P en la presencia o ausencia de acetonida triamcinolona se lleva a cabo mediante el ensayo ELISA en una membrana celular EpiAirway™. Similar al ensayo TER anterior el ensayo ELISA de la Formulación P más acetonida triamcinolona a una concentración de 0.5, 2.0, 5.0, o 50 µg por aspersión indica que la permeabilidad del péptido YY no disminuye y fue igual a la permeabilidad de la Formulación P sola. La Formulación P más acetonida triamcinolona a una concentración de acetonida triamcinolona entre 0 y 50 µg por aspersión es típicamente mayor que la permeabilidad de las Formulaciones A o B (péptido control YY) . De acuerdo con los métodos y formulaciones de la invención, el ensayo MTT mide la viabilidad celular de Formulación P en la presencia o ausencia de acetonida triamcinolona. Típicamente, la adición de acetonida triamcinolona (a una concentración de 0.5, 2.0, 5.0, o 50 µg por aspersión) a la Formulación P mejora la viabilidad celular en comparación a la Formulación P en la ausencia de acetonida triamcinolona. La adición de acetonida triamcinolona a la Formulación P incrementa la viabilidad celular y mantiene la permeabilidad epitelial según se mide por el ensayo TER ensayo comparable a la Formulación P en la ausencia de acetonida triamcinolona. La reducción en la inflamación epitelial mucosal de un péptido YY administrado de manera intranasal se realiza con una formulación intranasal del péptido YY en combinación con uno o más compuesto (s) esteroides o corticosteroides, típicamente compuestos o formulaciones de alta potencia, pero también en ciertos casos compuestos o formulaciiones de potencia media, potencia baja. Se da la potencia total (dosis equivalentes) de esterioides de alta, media y baja potencia. Típicamente, una formulación intranasal del péptido YY en combinación con una combinación esteroide de alta potencia incluye, pero no se limita a, betametasona (dosis de 0.6 a 0.75 mg) , o dexametasona (dosis de 0.75 mg) . En una formulación alternativa, una formulación intranasal del péptido YY en combinación con una composición esteroide de potencia media incluye, pero no se limita a, metilprednisolona (dosis de 4 mg) , triamcinolona (dosis de 4 mg) , o prednisolona (dosis de 5 mg) . En una formulación alternativa adicional, una formulación formulación del péptido YY en combinación con una composición esteroide de - - potencia baja incluye, pero no se limita a, hidrocortisona (dosis de 20 mg) o cortisona (dosis de 25 mg) . EJEMPLO 4 Preparación de una Formulación PYY Libre de un Estabilizador que es una Proteina Una formulación PYY adecuada para la administración intranasal de PYY, que estaba sustancialmente libre de un estabilizador que es una proteína se preparó teniendo la formulación abajo listada. 1. Se agregó aproximadamente de agua a un vaso de precipitados y se agitó con una barra agitadora sobre una placa de agitación y se agregó the citrato de sodio hasta que se disolvió completamente. 2. Se agregó entonces el EDTA y se agitó hasta que se disolvió completamente. 3. Se agregó entonces ácido cítrico y se agitó hasta que se disolvió completamente. 4. Se agregó metil-ß-ciclodextrina y se agitó hasta que se disolvió completamente. 5. Se agregó entonces DDPC y se agitó hasta que se disolvió completamente. 6. Se agregó lactosa y se agitó hasta gue se disolvió completamente . 7. Se agregó entonces sorbitol y se agitó hasta que se disolvió completamente. - 8. Se agregó entonces clorobutanol y se agitó hasta que se disolvió completamente. 9. Se agregó PYY 3-36 y se agitó suavemente hasta que se disolvió 10. Se verificó el pH para asegurarse en 5.0 ± 0.25. Se agrega HCl diluido o NaOH diluido para ajustar el pH. Se agrega agua para el volumen final. Tabla 6 Formulación pH 5 +/- 0.25 Osmolaridad ~250 EJEMPLO 5 Se prepare una segunda formulación como arriba, excepto que la concentración de PYY 3-36 fue de 15 mg/ml como se muestra abajo en la Tabla 7 Tabla 7 - Formulación pH 5 +/- 0.25 EJEMPLO 6 Determinación del pH Óptimo de PYY Determinación de la estabilidad de PYY3_36 V s pH a 40° C durante 5 días A. Protocolo para formular PYY (3-36) /mustras de estudio de estabilidad de pH Osmolaridad: Objetivo 250mM Utilizando un Citrato / Citrate sódico, amortiguador tri-básico, lOmM Osmolaridad = No. partículas x molaridad = (1 + 4) X lOmM = 50mM Por lo tanto se lleva la osmolaridad a 250mM con NaCl lOOmM (2 partículas) B. Preparar muestras de estabilidad como sigue (3500pl) Concentración final Amortiguador de citrato 1400µl 25mM (del pH final requerido) lOmM PYY 700µl 1.5mg/ml 300ug/ml Clorobutanol 350µl 2.5% , 0.25% NaCl, 350µl l.OM, lOOmM Verificar el pH y ajusfarlo si se requiere Q.S. para 3500 µl con agua Procedimiento : Una muestra de 120µl en insertos sialanizados de 200 ul en viales automuestreadores 3 pulís / punto de tiempo Muestras incubadas a 40 °C durante 5 días C. Comparación del pH objetivo y actual de las mezclas de estabilidad pH objet; LVO pH actual 3.0 2.99 3.5 3.47 4.0 3.90 4.5 4.42 5.0 4.90 7.0 7.38 D. Procedimiento de HPLC Columna: Aguas C18 Bondapak lOµm 4.6 x 300mm Sistema HPLC: Aguas Alliance 2690 Detector Aguas 2487 Dual longitud de onda a 220nm Velocidad de flujo Iml/mim Volumen de inyección 30µl Temp. de columna 30°C Fases móviles: Amortiguador A: 0.1% TFA, 1% acetonitrilo en agua Amortiguador B: 0.11% TFA en acetonitrilo Gradiente: Tiempo (mins) %A %B 0 75 25 17 42 58 19 75 25 28 75 25 E. Resultados y Conclusiones Los resultados indican que bajo las condiciones particulares utilizadas en este estudio, que el pH óptimo para la estabilidad es 4.90 . Existe un incremento en la estabilidad de 76 a 87% incrementándose el pH de 2.99 a 4.90. A mayor pH, i.e. 7.38 existe una gran caida en la estabilidad de PYY (3-36) con sólo 15% de tiempo cero restante. EJEMPLO 7 Desarrollo de Formulación Intranasal Los péptidos y proteínas son moléculas relativamente frágiles en comparación a terapéuticos de bajo peso molecular. El objetivo de la fase de desarrollo de la formulación fue identificar una formulación candidato adecuada para el suministro intranasal. A fin de lograr esta meta, se probaron numerosos candidatos para identificar una formulación con estabilidad de droga, suministro a través de la mucosa nasal, toxicidad y efectividad de conservación aceptables . Inicialmente se examinó el efecto del pH. La Figura 1 muestra la estabilidad de PYY 3_36 a alta temperatura (40 °C) en diversos pHs de 3.0 a 7.4. A pH fisiológico, existieron pérdidas sustanciales de droga a temperatura elevada. La mejor estabilidad se logró a aproximadamente pH 5.0. Este pH se seleccionó para la optimización adicional de la formulación. Para optimizar la estabilidad adicional, se probaron diversos agentes estabilizantes por su capacidad para facilitar el paso de la droga a través de la mucos nasal. Los mejoradores probados se seleccionaron con base en su capacidad para abrir las uniones herméticas con toxididad celular limitada. Para realizar esto se empleó un primer modelo celular epitelial humano (EpiAirway, MatTek, Inc., Ashland MA) . Esta línea celular forma una capa celular columnar pseudo-estratificada con uniones herméticas similar - al epitelio respiratorio encontrado en la nariz. Las formulaciones de droga se colocaron en el lado apical de la capa de tejido, y la cuantificación de la droga se llevó a cabo por el medio basal. El grado de apertura de las uniones herméticas se midió por la disminución en la resistencia eléctrica transepitelial (TEER) . La viabilidad y citotoxicidad celular se monitorearon mediante los ensayos MTT y LDH, respectivamente. Los datos de un experimento de exploración representativo se muestran en las Figuras 2-5. La Figura 2 muestra los datos para TEER. En algunos casos existió poca o ninguna disminución en TEER en comparación al control, indicando uniones herméticas que permanecieron cerradas. En otros casos existió una substancial caída en TEER indicando la apertura en las uniones herméticas. Los resultados demuestran que el modelo celular en vitro es capaz de discriminar la capacidad de las diferentes formulaciones para abrir las uniones herméticas. En las formulaciones candidate probadas las viabilidades celulares (Figura 3; MTT) fueron buenas y las citotoxicidades (Figura 4; LDH) fueron bajas. En total, se probaron más de 200 diferentes formulaciones, reflejando la naturaleza de alta producción del modelo de detección sistemática en vitro. Utilizando todos los datos disponibles, se condujo un análisis multivariado para exclarecer el efecto de cada componente de la formulación empleados en cada una de las 7 variables producidas (permeabilidad de la droga, osmolaridad, estabilidad en condiciones refrigeradas y aceleradas, TEER, y ensayos MTT y LDH) . Los análisis multivariados consisten de un análisis inicial de cada componente de formulación para algún nivel de correlación con los parámetros de producción (p<0.1). con el subconjunto identificado, se utilizó ya sea una regresión lineal o selección logística en etapas. Los resultados sugieren que un excipiente correlaciona la osmolaridad y la toxicidad (r2 = 0.91 y 0.27, respectivamente) , dos se correlacionan a la permeación de PYY3_36 (r2 = 0.44), tres afecta la estabilidad (r2 = 0.24), y cinco impactan la resistencia paracélula (r2 = 0.55). Las mejores formulaciones determinadas por este proceso incrementan al menos 30-75 veces el transmporte de PYY 3-36 en comparación a las soluciones amortiguadas simples. Basado en estos análisis una formulación PYY 3_36 optimizada se seleccionó para desarrollo adicional. Esta formulación optimizada contuvo dos estabilizadores, dos mejoradores de la permeación, un agente quelante, y un conservador en un amortiguador de acetato de sodio, pH 5.0. Esta formulación pasó la prueba de efectividad de conservación USP. Las contribucioines sinérgicas de los diversos componentes sobre la permeación de la droga se presentan en la Figura 5. En comparación a las formulaciones simples de amorgiguador en la misma osmolaridad, la formulación optimizada exhibe más de 100-veces de incremento de la permeación de la droga. Finalmente, se preparon grupos pre-clínicos y clínicos de la formulación optimizada y se colocaron en estabilidad a 5 °C y 25 °C en el paquete del producto final. Los datos preliminares, representados en la Tabla 8 revelan que el almacenamiento por hasta dos meses ya sea en 5°C o 25 °C da como resultado 90% o mejor retención del péptido.

TABLA 8 En resumen, nuestro proceso de desarrollo de formulación ha producido una formulación PYY_36 con adecuadas estabilidad a ladroga, suministro a través de la mucosa nasal, toxicidad y efectividad de conservación, lo cual permite el suministro de un péptido de 4 kD.

Estudios Preclinicos A la fecha, se completó una serie de seis estudios preclínicos en ratas, conejos y perros. Se determinaron los niveles en plasma de PYY3-36 en todas las especies mediante un método de radioinmunoensayo patentado validado. La biodisponibilidad (la fracción molar de la droga identificada en plasma dividida entre la cantidad administrada nasalmente) en ratas se determinó ser de aproximadamente 6%, y en conejos de aproximadamente '8%. Estos valores pueden subestimar la verdadera biodisponibilidad, así como cualquier degradación del péptido en plasma antes del muestreo, o degradación después del muestreo a pesar de la presencia de un inhibidor de proteinasa, disminuirá la biodisponibilidad medida. Se ha calculado la toxicidad nasal en modelos de rata y conejo hasta por 14 días consecutivos a dosis de 50x la dosis clínica humana esperada en una base de mg/kg. No existieron hallazgos microscópicos o patológicos notorios relacionados al artículo de prueba. No existieron observaciones clínicas.

- La toxicidad Sistémica después de la administración intravenosa se evaluó en los modelos de rata y conejo. A dosis IV hasta de aproximadamente 160x la dosis humana esperada (400 ug/kg en la rata y 205 ug/kg en el conejo) no existió artículo de prueba relacionado a hallazgos microscópicos o macroscópicos. Se valoró la toxicidad cardiovascular en el modelo de perro anestesiado en una dosis que varió en el disño de estudio. La mayor dosis, una infusión de PYY3_36 de hasta 24ug/kg durante 60 minutos correspondió a 33x la dosis humana esperada sobre una base del área superficial corporal. Los niveles en plasma resultantes, 30 ng/ml, fueron aproximadamente 380x el nivel en plasma basal canino. A este nivel en plasma, no existió efecto sobre la presión sanguínea arterial, flujo sanguíneo femoral, o QTc y sólo se notaron cambios menores en la velocidad cardiaca (incremento promedio de 123 a 148 bpm) y tasa respiratoria (disminuida de 54 a 36) . Los datos farmacocinéticos se recolectaron en estos estudios preclínicos . A partir de un estudio en ratas, los niveles en plasma después de la administración intranasal a varias dosis se muestran en las Figuras 6, 7 y 8. La Figura 6 muestra que PYY3_36 se observa en el plasma dentro de 5 minutos, las concentraciones de plasma pico (Tmax) se alcanzan en 10-15 minutos, y la vida media de eliminación terminal es de aprox. 15 minutos. Ambos Cmax y AUCo-t son lineales con respecto a la dosis intranasal. Estudios Clínicos Se ha iniciado una prueba clínica variando la dosis con la meta de establecer la seguridad, PK, y biodisponibilidad de la formulación intranasal de PYY3_36. A la fecha, los pacientes se han inscrito en las primeras dos de las cinco dosis subsecuentes. Un paciente reportó un sabor en la parte posterior de su garganta; no habiendo existido otros eventos adversos a la fecha. Conclusión En la formulación, se iniciaron trabajos preclinicos, y clinicos iniciales en una formulación intranasal de PYY3_36. El procedimiento para la formlación tuvo resultado en mas de un ciento de veces de incremento en la permeabilidad de transmembrana de este péptido 4 kD un incremento en la toxicidad celular. Los estudios preclínicos han demostrado un considerable margen de seguridad para la toxicidad nasal, cardiovascular, y sistemica para PYY3_36. Sobre la base de los estudios clínicos que varían la dosis ongoing, se planean estudios de pérdida de peso por administración crónica. EJEMPLO 8A PROTOCOLO CLÍNICO ABSORCIÓN NASAL DEL PÉPTIDO YY3-36 INTRASAL (PYY3-36) EN SUJETOS - HUMANOS SANOS El objetivo del presente estudio fue evaluar la absorción del PYY3_36 administrado intranasalmente en la corriente sanguínea desde la nariz. Esta fue una fase uno, en studio clínico, de una sola dosis, de dosis escalonada incluyendo los voluntarios machos y hembras saludables, normales en ayuno. Se evaluaron dosis ascendentes de PYY3-36 intranasal entre 20 µg a 200 µg para evaluar la seguridad, tolerancia nasal y absorción del PYY3-36. También se evaluó la valoración de la sensación del apetito en cada individuo. Se administró PYY3_36 a 15 humanos sanos divididos en 5 grupos de 3 individuos cada uno. Grupo I . Al primer grupo se le administró por un rocío intranasal 20 µg de PYY3_36 en 0.1 ml de solución.

Grupo II El segundo grupo recibió 50µg de PYY3_36 intransalmente en 0.1 ml de solución. Grupo III El tercer grupo recibió lOOµg de PYY3_36 intransalmente en 0.1 ml de solución. Grupo IV El cuarto grupo recibió 150µg de PYY3_36 intransalmente en 0.1 ml de solución.

- - Grupo V El quinto grupo recibió 200µg de PYY3_36 intransalmente en 0.1 ml de solución. Se recolectaron muestras sanguíneas y se determinaron las concentraciones en plasma de PYY a 0 (i.e., pre-dosis), 5, 7.5, 10, 15, 20, 30, 45, 60 minutos postdosis. Los sujetos se alimentaron entonces y se tomó una muestra sanguínea y la concentración de PYY se determinó 30 minutos después de la comida. Se determinaron las concentraciones en plasma de PYY3-36 utilizando un procedimiento analítico validado. Para cada sujeto se calcularon los siguientes parámetros PK, siempre que fue posible, con base en las concentraciones de plasma de PYY3-36, de acuerdo con el procedimiento independiente del modelo: Cmax Concentración máxima observada. tmax Tiempo máximo de concentración. AUC0-t Área bajo la curva de concentración-tiempo a partir del tiempo 0 hasta el tiempo de la última concentración medible, calculada por la regla trapezoidal lineal. Se calcularon los siguientes parámetros cuando los datos permitieron la estimación exacta de estos parámetros: AUCo-8 Área bajo la curva de concentración-tiempo extrapolado hasta el infinito, calculada bajo la siguiente fórmula: Ct AUCo-8 = AUCo-t + Ke en donde Ct es la última concentración medible y Ke es la constante de la tasa de fase terminal aparente. Ke Constante de la tasa de fase terminal aparente, en donde Ke es la magnitud de la inclinación de la regresión lineal de la concentración logarítmica versus el perfil de tiempo durante la fase terminal. t?/2 Vida media de la fase terminal aparente (cuando sea posible), en donde t?/2 = (In2)/Ke. Se realizaron los cálulos de PK utilizando un software comercial tal como WinNonlin (Pharsight Corporation, Versión 3.3, o mayor). Los resultados se muestran en las gráficas de abajo. Discusión y Conclusión. Antecedentes : Cada grupo dosificado incluyó tres sujetos quienes se dosificaron intranasalmente una vez con una formulación de esta invención conteniendo una dosis específica del PYY3_36 sintético humano libre de pirógenos. Los cinco grupos dosificados se organizaron, con dosis escalonadas de PYY ~36 - en la formulación. Las muestras sanguíneas se extrajeron a intervalos específicos en tubos de recolección de sangre que contenían heparina de litio (para inhibir la coagulación) y aprotinina (para conservar el PYY 3_36) . El plasma de cada muestra sanguínea se recolectó por centrifugación y se almacenó en alícuotas congeladas. Una alícuota congelada de cada muestra sanguínea se envió a Nastech Analytical Services y llegó congelada. Cada muestra se almacenó congelada hasta que se analizó para la concentración de PYY mediante radioinmunoanálisis (RÍA) . Observacione : Grupo 1: A este grupo de sujetos se les dosificó con 20 microgramos de PYY 3_36. Las concentraciones de PYY en plasma para los sujetos varió de un mínimo de "menos de 20 pg/ml" (por abajo del límite inferior de la cuantificación del radioi munoensayo) hasta un máximo de 159 pg/ml. Las tendencias de las concentraciones observadas no son consistentes con la absorción significativa de la droga en la sangre de los sujetos estudiados. Grupo 2: A este grupo de sujetos se les dosificó con 50 microgramos de PYY 3-36- Las concentraciones de PYY en plasma para los sujetos varió de un mínimo de 50 pg/ml" hasta un máximo de 255 pg/ml. Las tendencias de las concentraciones observadas son consistentes con la absorción significativa de la droga en la sangre de los sujetos - estudiados Grupo 3: A este grupo de sujetos se les dosificó con 100 microgramos de PYY 3-36- Las concentraciones de PYY en plasma para los sujetos varió de un mínimo de 87 pg/ml" hasta un máximo de 785 pg/ml. Las tendencias de las concentraciones observadas son consistentes con la absorción significativa de la droga en la sangre de los sujetos estudiados Grupo 4: A este grupo de sujetos, se les dosificó con 150 microgramos de PYY 3-36- Las concentraciones de PYY en plasma para los sujetos varió de un mínimo de 45 pg/ml" hasta un máximo de 2022 pg/ml. Las tendencias de las concentraciones observadas son consistentes con la absorción significativa de la droga en la sangre de los sujetos estudiados Grupo 5: A este grupo de sujetos se les dosificó con 200 microgramos de PYY -3e- Las concentraciones de PYY en plasma para los sujetos varió de un mínimo de 48 pg/ml" hasta un máximo de 1279 pg/ml. Las tendencias de las concentraciones observadas son consistentes con la absorción significativa de la droga en la sangre de los sujetos estudiados. Estos resultados son consistentes con una absorción de PYY3_36 dependiente de la dosis. Observaciones y datos adicionales : Resumen de hallazgos : • En la dosis intranasal de 50 ug - 200 ug, existe una absorción de PYY en plasma dependiente de la dosis.

• La duración de las concentraciones elevadas en plasma es considerablemente mayor de lo que se había predicho, con una vida media de eliminación calculada a los 55 minutos. • Cmax y AUC 0-t muestran Buena linealidad con la dosis . • Existe considerable variabilidad entre los sujetos a una dosis dada. • Sorpresivamente, este studio falló para detectar la elevación postprandial de PYY a pesar de que el alimento previamente ingerido no se midió y si se comió demasiado poco esto podría explicar las observaciones. • A escala visual-análoga las cuestiones de hambre sugieren el hambre disminuida con dosis incrementadas de PYY. • Nauseas y mareos parecen estar relacionados a concentraciones muy altas de PYY. Notas : • En algunos casos pMol/1 se utilize como las unidades de medición de PYY; en otros análisis se utiliza pg/ml. El factora de conversión es pmol/l * 4.05 = pg/ml. • En algunos casos, el punto de tiempo de 150-minutos se despliega en las gráficas. Estrictamente hablando, este es un punto de los datos postprandial, y por lo tanto puede confundir la evaluación de PK. Sin embargo, .un hallazgo inesperado descrito en más detalle abajo es que el punto de tiempo postprandial de 30-minutos no es diferente del valor de la línea basal. Concentraciones de PYY en plasma: El ensayo PYY descrito en esta especifiacción se ha validado por su propio ensayo de concentración de PYY en plasma. Utilizando este ensayo, las muestras de cada punto de tiempo se ensayaron por triplicado. Nótese que fuera de los puntos de datos 180, 3 (1.6%) parece ser biológicamente improbable "valor atípico." Los datos a través de este análisis preliminary utiliza- un conjunto de datos en el cual se retiraron estos tres datos de puntos. Tabla 9 ParámetrosPK descriptivos : Los parámetros PK calculados incluyen: El examen de los promedios de PK graficados sugiere una respuesta de dosis de 50 - 200 ug por dosis, pero gue la dosis de 20 µg es en la nariz. Por lo tanto, muchos de los análisis subsecuentes se basarán sólo en datos de las dosis de 50-200 ug. También proponemos que, debido a que PYY es una molécula endógena, el AUC 0-t es más relevante que AUC 0- inf . Tmax y Tl/2 (vida media de eliminación) : El Tmax de 24 minutos es típicamente para un producto nasal. La vida media de eliminación de 55 minutos es considerablemente mayor que lo que se hubiera esperado. La referencias literiarias- indican un t?2 típicamente de 5-10 minutos. La vida media de eliminación también puede afectarse por alguna absorción continua de la mucosa nasal que ocurre después del Tmax y por los componentes de la formulación que efectúan el metabolismo de los péptidos. Alternativamente, debido a que el ensayo descrito en esta especifiacción emplea un procedimiento de extracción, el ensayo capturará tanto PYY libre como unido a la proteína, en tanto que un ensayo que no utiliza una extracción puede ensayar principalmente la fracción libre. A partir de este análisis del cambio de VAS promedio de la linea base (valores promedio de 10, 30, y 60 minutos menos la línea base) vs dosis, se observa: Para VAS Ql "Que tan hambriento se siente?" los sujetos estuvieron menos hambrientos después de recibir mayor dosis de PYY. Para VAS Q3, "Cuánto considera que puede comer?" los sujetos consideraron que podrían comer menos después de recibir mayor dosis de PYY. Sin embargo, para VAS Q2 "Que tan satisfecho se siente?" los sujetos se sintieron menos satisfechos después de recibir mayores dosis de PYY. Esto sugiere que la sensación después de la administración de PYY no incluye satisfacción, inflamacióno hipercontractilidad gástrica.

EJEMPLO 8B Administración a humanos de PYY y Pérdida de peso Se elaboró la siguiente formulación de PPY nasal - Formulación pH 5 +/- 0.25 Se administraron una o dos aspersions diarias a un sujeto humano a través de un periodo de 10 dias y se registró una pérdida de peso de 2.5 libras. Durante periods que variaron de 10 minutos a 12 horas después de la administración los sujetos registraron hambre reducida. EJEMPLO 9 Formulación bucal de PYY3-36 (Profética) Se prepararon tabletas biestratificadas de la siguiente manera. Se preparó una capa de adhesivo pesando 70 partes por el peso de óxido de polietileno (Poliox 301N; Union Carbide) , 20 partes por peso de ácido poliacrílico (Carbopol 934P; B.F. Goodrich), y 10 partes por peso de a carga de xylitol/celulosa de carboximetilo comprimible (Xylitab 200; Xyrofin) . Estos ingredientes se mezclaron girando en un tarro durante 3 minutos. La mezcla se transfirió entonces a un recipiente de evaporación y se granuló rápidamente en húmedo con etanol absoluto a una consistencia similar a semi-pasta. Esta masa se fuerza inmediata y rápidamente a través de una criba de acero inoxidable de 14 mallas (1.4 mm de apertura), a la cual se adhieren los granulos húmedos. La criba se cubrió con lamina de aluminio perforada, y los granulos húmesos se secaron durante la noche a 30 °C Los granulos secos se retiraron de la criba y después se pasaron a través de una criba de 20 mallas (0.85 mm de apertura) para reducir adicionalmente el tamaño de los granulos. Las partículas que no pasaron a través de la criba de 20 mallas se trituraron brevemente con un mortero y trituraron para minimizar la cantidad de finos y entonces se pasaron a través de la criba de 20 mallas. Los granulos restantes se colocaron entonces en un taro y se agregaron y se mezclaron con los granulos 0.25 partes por peso de acido esteárico y 0.06 partes por peso de sabor de menta (Universal Flavors) . Los porcentajes finales por peso de los ingredientes son así 69.78% de óxido de polietileno, 9.97% carga de xilitol/celulosa de carboximetilo, 19.94% ácido poliacrílico, 0.25% ácido esteárico, y 0.06% de sabor de menta. Se colocó una cantidad de 50 mg de la mezcla en un troquel de 0.375 pulgadas de diámetro y se pre-comprimió a un modelo C de Carver Press con compresión de 0.25 toneladas métricas durante un tiempo de residencia de 3 segundos para formar la capa adhesiva. Se preparó la capa activa al pesar 49.39 partes por peso de manitol, 34.33 partes por peso de hidroxipropil celulosa (Klucel 1 F; Aqualon, Wilmington, Del.) y 15.00 partes por peso de taurocolato de sodio (Aldrich, Milwaukee, Wis.), y se mezclo girando en un tarro durante 3 minutos. La mezcla se transfirió entonces a un recipiente de evaporación y se granuló rápidamente en húmedo con etanol absoluto hasta una consistencia similar a semi-pasta. Esta masa se forzó inmediata y rápidamente a través de una criba de acero inoxidable de 14 mallas a la cual se adhirieron los granos húmedos. La criba se cubrió con lamina de aluminio perforada y los granulos se secaron a 30 °C Los granulos secos se pasaron entonces secuencialmente a través de cribas de 20, 40 (0.425 mm de apertura), y 60 (0.25 mm de apertura) mallas para reducir adicionalmente el tamño de partícula. Las partículas que no pasaron a través de una criba se molieron brevemente con un mortero y se trituraron para minimizar los fines y después pasarlos a través de la criba. Las partículas cribadas se pesaron y después 0.91 partes por peso de PYY3-36 y 0.06 partes por peso de FD&C amarillo #6HT de tintura de lago de aluminio se mezclaron secuencialmente con - - la granulación seca mediante diluciones geométricas. La granulación seca se colocó entonces en un tarro de mezclado y se mezclaron con 0.25 partes por peso de estereato de magnesio (lubricante) y 0.06 partes por peso de sabor de menta al girarlos durante 3 minutos. Una muestra de 50 mg de este material se colocó en la parte superior de la capa adhesiva parcialmente comprimida y ambas capas se comprimieron entonces a 1.0 toneladas de presión durante un tiempo de residencia de 3 segundos para producir una tableta diestratificada adecuada para el suministro bucal. Este procedimiento dio como resultado una tableta gingival en donde la capa activa contiene 0.91% por peso de PYY3-36, 15% por peso de NaTC, y 84.09% por peso de carga, lubricante, colorante, auxiliares de la formulación, o agentes saborizantes. EJEMPLO 10 Se condujo un estudio comparando la capacidad de PYY (3-36) libre de endotoxina (SEQ ID NO: 2) vs PYY (3-36) no libre de endotoxina para permear el epitelio bronquial de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 1. Se determinó que aproximadamente dos veces la cantidad de PYY (3-36) libre de endotoxina permeó el epitelio bronquial según se compara a la formulación PYY (3-36) que contiene endotoxina. Ambas formulaciones contenían Clorobutanol 2.5mg/ml, 2.mg/ml de DDPC, 10 mg/ml de albúmina, Img/ml de EDTA (edetato disódico) y 45 mg/ml de M-B-CD. Una formulación contenía PYY (3-36) libre de endotoxina y la otra formulación contenía 70 EUs o mayor de endotoxina. El MTT promedio de la formulación de PYY (3-36) conteniendo endotoxina fue 91.72% mientras la formulación de PYY (3-36) libre de endotoxina tuvo un MTT promedio de 100.16%. La permeación promedio de la formulación de PYY (3-36) conteniendo endotoxina fue 5.36%, mientras la permeación promedio de la formulación de PYY (3-36) libre de endotoxina fue de 10.75%. Varios excipientes conocidos mejoradores del suministro mucosal pueden combinarse eficientemente con los péptidos que se unen al receptor Y2 libre de endotoxina, especialemente PYY3-36 libre de endotoxina, y puede utilizarse para mejorar las formulaciones sin infusión especialmente para suministro oral. Tales excipientes están contenidos en las siguientes solicitudes de patente gue se incorporan mediante la referencia: solicitudes de Patente de E.U. 20030225300, 20030198658, 20030133953, 20030078302, 20030045579, 20030012817, 20030012817, 20030008900, 20020155993, 20020127202, 20020120009, 20020119910, 20020065255, 20020052422, 20020040061, 20020028250, 20020013497, 20020001591, 20010039258, 20010003001.

- Formulación Oral de un Péptido de enlace al receptor Y2 Una formulación oral de un péptido de enlace al receptor Y2 puede prepararse de acuerdo con el siguiente procedimieto. Una formulación preferida para un suministro oral contiene aproximadamente 0.5 mg/kg PYY libre de endotoxina y entre 100 y aproximadamente 200 mg/kg de uno o más excipientes mejoradores del suministro mucosal.

(Profético) EJEMPLO 11 Preparación de Aldehido N-ciclohexanoilfenilalanina: Se disolvió éster de metil fenilalanina (1 g., 0.0046 moles) en piridina 5 ml . Se agregó cloruro de ciclohexanoilo (0.62 ml) y la mezcla se agitó durante 2 horas. La mezcla de reacción se vació en ácido clorhídrico (ÍN) y se tritura en hielo. La mezcla acuosa se extrajo dos veces con tolueno. Los extractos de toluene combinado se concentran al vacío para dar 1.1 g de ester de metil N-ciclohexanoilfenilalanina crudo. Se disolvió éster de metil N-ciclohexanoilfenilalanina (0.5 g) en éter de dimetil etilen glicol (20 ml) . La solución se enfrió a 70 °C y se agregó hidruro de diisobutilaluminio (2.04 ml de una solución en tolueno 1.5M) . La mezcla de reacción resultante se agitó a -70°C durante 2 horas. La reacción se templó mediante la adición gota a gota de ácido clorhídrigo 2N. La mezcla se extrajo con etil acetato frió. La solución de etil acetato se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato de sodio. La concentración al vaío se proveyó con un sólido blando, el cual se purificó mediante cromatografía de gel de sílice. aH NMR (300 MHz, DMSO-dd) : 9.5 (s, 1H) , 8.2 (d, 1H) , 7.2 (m, 5H) , 4.2 ( , 1H) , 3.2 (d, 1H) , 2.7 (d, 1H) , 2.1 ( , 1H) , 1.6 (br.m, 4H) , 1.2 (br.m, 6H) . R (KBr): 3300, 3050, 2900, 2850, 2800, 1700, 1600, 1500 cm-1. Espec. Masa: M+l m/e 261. EJEMPLO 12 Preparación de Aldehido de N-acetilfenilalanina Se disolvió ester de metil N-Acetilfenilalanina (4.2 g, 19 mmol) en éter de dimetil etilen glicol. La solución se enfrió a -70 °C y se agregó hiduro de diisobutilaluminio (25.3 ml de una solución en tolueno 1.5M, 39 mmol) . La mezcla de reacción resultante se agitó a -70°C durante 2 horas. La reacción se templó mediante la adición de Ácido clorhídrico 2n. La mezcla se extrajo 4 veces con etil acetato frío y 4 veces con tolueno. Los extractos de combinaro, se lavaron con salmuera y se secaron sobre sulfato de magnesio. La concentración in vacuo seguida por la cromatografía de gel de sílice proveyó 2.7 g de sólido blanco. El NMR es como se reportó en la literatura, Biochemistry, 18 : 921-926 (1979) . EJEMPLO 13 Preparación de 3-acetamido-4- (p-hidroxi) fenil-2-butanona (N- - acetiltirosinona) Una mezcla de tirosina (28.9 g, 16 mmol), anhídrido acético (97.9 g, 96 mmol) y piridina (35 g, 16 mmol) se calentó a 100 °C durante 1 hora. La mezcla de reacción se concentró in vacuo para proveer un aceite amarillo. El aceite se destió a presión reducida para proveer 29.9g o un aceite. 2H NMR (DMSO-d6) : NMR (d6-DMSO) ; 8.2 (d, 1H) , 7.3 (d, 2H) , 7.0 (d, 2H) , 4.4 (m, 1H) , 3.1 (dd, 1H) , 2.7 (dd, 1H), 2.3 (s, 3H) , 1.8 (s, 3H) EJEMPLO 14 Preparación de 3-acetamido-7-amino-2-butanona (N-acetillisinona) Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 3, la lisina se convirtió a N-acetillisinona. XH NMR (DMSO-d6) : 8.1 (d, 1H) , 7.8 (br.m. 1H) , 4.1 (m, 1H) , 3.0 ( , 2H) , 2.0 (s, 3H) , 1.9 (s, 3H) y 1.3 (br.m, 6H EJEMPLO 15 Preparación de 3-acetamido-5-metil-2-butanona (N-acetilleucinona) Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 3 la leucina se convirtió a N-acetilleucinona. 1H NMR (DMSO-d6) : 8.1 (d, 1H) , 4.2 (m, 1H) , 2.0 (s, 3H) , 1.8 (s, 3H) , 0.8 (d, 6H) .

EJEMPLO 16 Modificación de Ácido 4- (4aminofenil) Butírico utilizando Cloruro de Sulfonil Benceno Se disolvió ácido 4- (4-Aminofenil) butírico, (20 g 0.11 moles) en 110 ml de solución acuosa de hidróxido de sodio 2N. Después de agitarse durante aproximadamente 5 minutos a temperatura ambiente, se agregó gota a gota cloruro de sulfonil benceno (14.2 ml, 0.11 moles) en la solución de aminoácidos durante un periodo de 15 minutos. Después de agitarse durante aproximadamente 3 horas a temperatura ambiente la mezcla se acidificó a pH 2 mediante la adición de ácido clorhídrico. Esto proporcionó un precipitado café claro que se aisló mediente filtración. Este precipitado se lavó con agua tibia y se secó. El punto de fusión es 123-25°C Si es necesario, los aminoácidos purificados pueden purificarse mediante recristalización y/o cromatografía .

EJEMPLO 17 Modificación de Acido 4-aminobenzoico utilizando cloruro de sulfonil benceno Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 6, se convirtió el ácido 4-aminobenzoico a ácido 4-(fenilsulfonamida) benzoico.

EJEMPLO 18 - Modificación de Acido 4-Aminofenilacético, Acido 4-Aminohippurico y Acido 4-Aminometil Benzoico Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 6, se convirtió el ácido 4-aminofenil acético, ácido - 4- aminohippurico y ácido 4-aminometilbenzoico a ácido4- (fenilsulfonamida) fenilacético, ácido 4-fenilsulfonamida hipúrico y ácido 4- (fenilsulfonamida metil) benzoico.

EJEMPLO 19 Modificación de Aminoácidos con Cloruro de Sulfonil Benceno Se preparó una mezcla de dieciseis aminoácidos antes de la modificación química. Los constituyentes de la mezcla se resumen en la Tabla de abajo. Se disolvió 65 gramos de la mezcla de aminoácidos (concentración total de grupos [—NH2]=0.61 moles) en 760 ml de solución de hidróxido de sodio 1N (0.7625 eguivalentes) a temperatura ambientes. Después de agitarse durante 20 minutos, se agregó cloruro de sulfonil benceno (78 ml, 1 eq. ) durante un periodo de 20 minutos. La mezcla de reacción se agitó entonces durante 2.5 horas sin calentamiento. Como pueden ocurrir algunas precipitaciones, puede agregarse solución adicional de NaOH (2N) a la solución hasta alcanzar el pH 9.3. La mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente.

Después, la mezcla se acidificó utilizando ácido clorhídrico - - diluido (38%, 1:4) y se precipitó un material de color crema. El precipitado resultante se aisló mediante decantación y se disolvió en hidróxido de sodio (2N) . Esta solución se redujo entonces in vacuo para dar un sólido amarillo, que se secó en el liofilizador. Tabla 10 Composición de Aminoácidos No. de moles de NTo. d,e caca Moles de -Aminoácido Peso (g) % del Peso Aminoácido Total (xio"2) ["NH2] Thr 2.47 3.8 2.07 2.07 Ser 2.25 3.46 2.1 2.1 Ala 4.61 7.1 5.17 5.17 Val 4.39 6.76 3.75 3.75 Met 0.53 0.82 0.35 0.35 lie 2.47 3.8 0.36 0.36 Leu 3.86 5.94 2.95 2.95 Tyr 1.03 1.58 0.56 0.56 Phe 4.39 6.76 0.27 0.27 His 2.47 3.8 1.6 3.2 Lys 4.94 7.6 3.4 6.8 Arg 5.13 7.9 2.95 5.90 Glutamina 9.87 15.18 6.76 13.42 Ácido 9.87 15.18 .6.70 6.70 Glutámico Asparagina 3.32 5.11 2.51 5.02 Ácido 3.32 5.11 2.50 2.50 Aspártico EJEMPLO 20 Modificación de una mezcla de cinco Aminoácidos utilizando Cloruro de Sulfonil Benceno Se disolvió una mezcla de aminoácidos 86.1 g (0.85 moles de NH2) (ver Tabla de abajo) en 643 ml (1.5 eq. ) de solución acuosa de hidróxido de sodio 2N. Después de agitarse durante 30 minutos a temperatura ambiente, se agregó en porciones cloruro de sulfonil benceno (108 ml, 0.86 moles) a la solurición de aminoácidos durante un periodo del 15 minutos. Después de agitarse durante 2.5 horas a temperatura ambiente, el pH de la mezcla de reacción (pH 5) se ajustó a pH 9 con solución de hidróxido de sodio 2N adicional solución de hidróxido de sodio 2N. La mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Después, el pH de la mezcla de reacción se ajustó a pH 2.5 mediante la adición de solución acuosa de ácido clorhídrico diluido (4:1, H20: HCl) y se formó un precipitado de aminoácidos modificados. La capa superior se desechó y el precipitado Amarillo resultante se aisló mediante decantación, se lavó con agua y se disolvió en hidróxido de sodio 2N (2N) . La solución se redujo in vacuo para dar un sólido amarillo, que se leofilizó durante la noche. Tabla 11 Aminoácido Moles de Moles de [—NH2] Aminoácido xlO" ( 10^) Valina 7.5 7.5 Leucina 10.7 10.5 Fenilalanina 13.4 13.4 Lisina 21.0 42.0 Arginina 6.0 12.0 EJEMPLO 21 Modificación de una Mezcla de Cinco Aminoácidos utilizando Cloruro de Benzoílo Se disolvió una mezcla de aminoácidos de 86 g (0.85 moles de NH2) (ver Tabla en el Ejemplo 20) en 637 ml (1.5 eq.) de solución acuosa de hidróxido de sodio 2N. Después de agitarse durante 10 minutos a temperatura ambiente, se agregó en porciones cloruro de benzoílo (99 ml, 0.85 moles) en la solurición de aminoácidos durante un periodo de 10 minutos. Después de agitarse durante 2.5 horas a temperatura ambiente, el pH de la mezcla de reacción (pH 12) se ajustó a pH 2.5 utilizando ácido clorhídrico diluido (4:1, H20: HCl) y se formó un precipitado de aminoácidos modificados. Después de sentarse durnate 1 hora, el precipitado resultante se aisló mediante decantación, se lavó con agua y se disolvió en hidróxido de sodio (2N) . Esta soluciónse redujo entonces in vacuo para dar un aminoácido modificado crudo como un sólido blanco (rendimiento esperado 220.5 g) .

EJEMPLO 22 Modificación de L-valina Utilizando Cloruro de Sulfonil Benceno Se disolvió L-Valine (50 g, 0.43 mol) en 376 ml (0.75 eq. ) de hidróxido de socio acuoso 2N mediante agitación a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se agregó entonces cloruro de sulfonil benceno (68.7 ml, 0.38 mol, 1.25 eq.) a la solución de aminoácidos solución durante un periodo de 20 minutos a temperatura ambiente. Después de agitarse durante 2 horas a temperatura ambiente, a precipitado appears. The precipitado is dissolved by adding 200 ml de additional solución de hidróxido de sodio 2N. Después de agitarse durante un adicional de 30 minutos, se agrega la solución acuosa de ácido clorhídrico dluído (4:1, H20: HCl) hasta que el pH de la mezcla de reacción alcanzó 2.6. Se formó un precipitado de aminoácidos modificados y se recuperó por decantación. Este material se disolvió en hidróxido de sodio 2N y se secó in vacuo para dar un sólido blanco. El rendimiento esperado de los aminoácidos modificados crudos es 84.6 g, 77%) .

EJEMPLO 23 Modificación de Ester de Metil Fenilalanina Utilizando cloruro de Hippurilo Se disolvió hidrocloruro de ester de metil L-fenilalanina (15 g, 0.084 mole) en dimetilformamida (DMF) (100 ml) y a esto se agregó piridina (30 ml) . Se agregó inmediatamente una solución de cloruro de hippurilo cloruro (16.6 g, 0084 moles en 100 ml DMF) a la solución de ester de aminoácidos en dos porciones. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se redujo entonces in vacuo y se disolvió en hidróxido de sodio acuoso ÍN. La solución se calentó a 70 °C durante 3 horas a fin de hidrolizar el ester de metilo a un grupo carboxilo libre. Después, la solución se acidificó a pH 2.25 utilizando solución acuosa de ácido clorhídrico diluido (1:3 HC1/H20) . Un precipitado similar a goma se formó y este se recuperó y se disolvió en hidróxido de sodio 1N. La solución se redujo in vacuo para aforar un esperado de 18.6 g de producto de aminoácidos modificados crudos. Después de la recristalización a partir de acetonitrilo, se recuperó la fenilalanina modificada pura (rendimiento esperado 12 g) como un polvo blanco m.p. 223-225°C.

EJEMPLO 24 Preparación de Dosis de Soluciones de PYY (3-36) En un tubo de prueba de 568 mg se agregaron aldehido de acetil fenilalanina, 132 mg de carbometoxi fenilalanilleucina y 100 mg de aldehido de acetil-Phe-Leu-Leu-Arg a 2.9 ml de 15% etanol. La solución se agitó y se agregó NaOH (1.0 N) hasta elevar el pH a 7.2. Se agregó agua hasta llevar el volumen total a 4.0 ml . La muestra tuvo una concentración de vehículo de 200 mg/ml. Se agregó PYY (3-36) (800 µg) a la solución. La concentración de PYY3-36 es de 200 µg/ml. Siguiendo un procedimiento similar se preparó una segunda solución teniendo 668 mg de aldehido de acetil fenilalanina y 132 mg de carbometoxi fenilalanilleucina como la composición del vehículo y una tercerad solución teniendo como el vehículo aldehido acetil fenilalanina. Cada solución - tuvo una concentración de PYY (3-36) libre de endotoxina de 200 µg/ml. EJEMPLO 25 Preparación de Composiciones de Aminoácidos modificados/PYY (3-36) Preparación de Microesferas de Aminoácidos Modificados Conteniendo PYY3-36 Encapsulado Libre de Endotoxina La mezcla de aminoácidos modificados, preparados de acuerdo con el Ejemplo 9, se disolvió en 40 °C en agua destilada (pH 7.2) a una concentración de 100 mg/ml. La solución se filtró entonces con a 0.2 micro filtro y la temperatura se mantuvo a 40 °C. Se disolvió PYY3-36 (Bachem) en una solución acuosa de ácido cítrico (1.7N) y gelatina (5%) a una concentración de 150 mg/ml. Esta solución se calentó entonces a 40 C. Las dos soluciones caliente se mezclaron entonces 1:1 (v/v). La solución de microesferas resultante se filtró entonces con fibra de vidrio y se concentró durante 50 minutos a 1000 g. El pellet se resuspendió con ácido cítrico 0.85N a un volumen de 5 a 7 veces menor que el volumen original. La concentración de PYY3-36 del pellet resuspendido se determinó por HPLC. Se hicieron microesferas adicionales de acuerdo con el procediemiento anterior sin PYY3-36. Estas " microesferas vacías " se utilizaron para diluir la preparación en microesferas de PYY3-36 de salmón encapsulado hasta una suspensión de dosis final, si es necesario. (b) Preparación de un Vehículo de un Sistema de Aminoácidos Modificados Solubles/PYY3-36 Una preparación de dosis de aminoácidos solubles conteniendo PYY3-36 se preparó al disolver el material de aminoácidos naturales en agua destilada (pH 8) hasta una concentración apropiada. La solución se calentó a 40 °C y se filtró entonces con un filtro de 0.2 mieras. PYY3-36, también se disolvió en agua destilada, se agregó entonces a la solución de aminoácidos modificados anterior para administración oral. Administración Pulmonar de PYY3-36 (Profético) Los compuestos vehículo, praparados como se describe abajo pueden utilizarse directamente como un vehículo de administración al mezclar simplemente uno o más compuestos o sales, poli aminoácidos o péptidos con un péptido de enlace al receptor Y2 libre de endotoxina para administarción pulmonar. Las mezclas de administración se preparan al mezclar una solución acuosa del vehículo con una solución acuosa del ingrediente activo, justo antes de la administración. De manera alternativa, el vehículo y el ingrediente biológica o guímicamente activo pueden mezclarse - durante el proceso de fabriacción. Las soluciones pueden contener opcionalmente aditivos tal como sales de amortiguador de fosfato, ácido cítrico, ácido acético, gelatina, y goma acacia. Varios métodos conocidos de administración pulmonar pueden utilizar péptidos que se unen al receptor al receptor Y2 libres de endotoxina, especialmente PYY3-36, para mejorar la administración de PYY a los pulmones. Las siguientes solicitudes de patente no limitantes se incorporan en la presente mediante la referencia para la administración pulmonar: Solicitud de Patente de E.U. 20030223939, 20030215514, 20030215512, 20030209243, 20030203036, 20030198601, 20030183228, 200301885765, 20030150454, 20030124193, 20030094173. EJEMPLO 26 Preparación de Vehículos Preparación de Ácido 2- (4- (N-saliciloil) aminofenil) propiónico (Vehículo B) Una mezcla de 58.6 g (0.355 mol) de ácido 2- (4-aminofenil) propiónico y 500 ml de cloruro de metileno se trata con 90.11 ml (77.13 g. 0-710 mol) de cloruro de trimetilsililo y y se calienta a reflujo duarnte 120 min. La mezcla de reacción se enfría a 0°C. y se trata con 184.44 ml (107.77 g, 1.065 mol) de trietilamina. Después de agitarse durante 5 minutos, esta mezcla se trata con una solución de 70.45 g (0.355 mol) de cloruro de O-acetilsaliciloilo y 150 ml de cloruro de metileno. La mezcla de reacción se calienta a 25°C y se agita durante 64 horas. Se retiran los volátiles in vacuo . El residuo se agitó en hidróxido de sodio acuoso 2N durante una hora y se acidificó con ácido sulfúrico acuoso 2M. El sólido se recristalizó dos veces a partir de etanol/agua para dar un sólido café claro. El aislamiento por filtación dio como resultado un rendimiento esperado de 53.05 g (52% de rendimiento) de ácido 2-(4-(N-saliciloil) aminofenil) propiónico. Propiedades. Solubilidad: 200 mg/m: 200 mg+350 .µl 2N NaOH+650 .µl H20-pH-7.67. Análisis: C, 67.36; H, 5.3; N, 4.91. . Preparación de 2- (4- (N-saliciloil) aminofenil) propionato sódico (Sal de Sodio del Vehículo B) Una solución de 53.05 g ácido (0.186 mol) de 2- (4- (N-saliciloil) aminofenil-) propiónico y 300 ml de etanol se trató con 7.59 g (0.190 mol) de NaOH disuelto en 22 ml de agua. La mezcla de reacción se agitó durante 30 min a 25°C y durante 30 min a 0°C. El sólido amarillo pálido resultante se aisló mediante filtración para dar 52.61 g de 2-(4-(N-saliciloil) aminofenil) propionato sódico. Propiedades. Solubilidad: 200 mg/ml de solución clara; pH=6.85. Análisis C, 60.45; H, 5.45; N, 3.92; Na, 6.43. Punto de fusión 236-238°C. Preparación de la Sal de Sodio del Vehículo C Un matraz de fondo redondo de 2 1 equipado con un agitador y un condensador dereflujo se cargó con una suspensión de ácido 3- (4-aminofenil) propionico (15.0 g. 0.084 moles. 1.0 equiv.) en diclorometano (250 ml) . Se agregó clorotrimetilsilano (18.19 g, 0.856 moles, 2.0 equiv.) en una porción, y la mezcla se calentó a reflujo durante 1.5 h bajo argón. La reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se colocó en un baño de hielo (temperatura interna <10° C) . El condensador de reflujo se recolcó con un embudo de adición conteniendo trietilamina (25.41 g, 0.251 moles, 3.0 equiv.). Se agregó trietilamina gota a gota durante 15 min, y se formó un sólido amarillos durante la adición. El embudo se recolocó mediante otro embudo de adición conteniendo una solución de 2, 3-dimetoxibenzoilcloruro (I 8.31 g, 0.091 moles, 1.09 equiv.) en diclorometano (100 ml) . La solución se agregó gota a gota durante 30 min. La reacción se agitó en en el baño de hielo durante otros 30 min y a temperatura ambiente durante 3 h. El dicholorometano se evaporó in vacuo para dar a aceite café. El aceite café se enfrió en un baño de hielo, y se agregó una solución enfriada en hielo de bicarbonato de sodio saturada (250 ml) . El baño de hielo se retiró y la reacción se agitó 1 h para aforar una solución café claro. La solución se acidificó con HCl concentrado y se almacenó a ca SC durante 1 hora. La mezcla se extrajo con diclorometano (3. veces.100 ml) , se secó sobre sulfato de sodio, las sales se filtraron y el diclorometano se retiró in vacuo. El sólido resultante se recristalizó a partir 50% etil acetato/agua (v/v) para aforar el ácido del Vehículo C como agujas blanquecinas (25.92 g. 90%). Análisis para C?gH21N05: C, 66.46; H, 6.16; N, 4.08. mp=99-102°C. Se disolvieron 12 gramos del ácido del Vehículo C en etanol, 75 ml, con calentamiento. A esta solución se agregó solución de Hidróxido de sodio 8.5 M (1.02 molar equivalentes, 1.426 gramos en 4.5 ml de agua). La mezcla se agitó durante 15 minutos. Aproximadamente tres cuatos del etanol se retiró in vacuo y se agregaron 100 ml de n-heptano, al aceite resultante ocasionando que se formara un precipitado. Los sólidos se secaron in vacuo a 50 °C. Análisis: C?9H20NO5Na0.067H2O: C, 62.25; H, 5.54; N, 3.82; Na, 6.27. Preparación de ácido N- (4-metilsaliciloil) -8-aminocaprílico (Vehículo D) (a) Preparación de Oligo (4-metilsalicilato) Se agregó anhidruro acético (32 ml, 34.5 g, 0.338 mol, 1.03 eq) , ácido 4-metilsalicilico (50 g, 0.329 mmol, 1.00 eq) , y xilenos (100 ml) a un matraz de cuatro cuellos de 1 1, adaptado con una barra de agitación magnética, un termómetro y un condensador. El matraz se colocó en un baño de arena y se inició el calentamiento de la mezcla blanca turbia. La mezcla de reacción se clarificó a una solución amarilla alrededor de 90 °C. La mayoría de los orgánicos volátiles (xilenos y ácido acético) se destilaron en el separador Dean-Stark durante tres horas (135-146°C) . La destilación continuó durante otra hora (un total de 110 ml distilados) , durante lo cual la temperatura de la vasija se elevó lentamente a 204 °C y el destilado disminuyó a un goteo. El residuo se vació mientras aún estaba caliente en un recipiente de aluminio. Al enfriarse se formó un cristal amarillo guebradizo. El sólido se trituró a un polvo fino. El oligo (4-metilsalicilato) recíbodo se utilizó sin purificación adicional. (b) Preparación de ácido N- (4-metilsaliciloil) -8-aminocaprilico Se agregó una solución de carbonato de potasio (45 ml, 43.2 g, 0.313 mol, 0.95 eq) , ácido 8-aminocaprilico (41.8 g, 262 mol, 798 eq) , y agua (20 ml) a un matraz de fondo redondo de 1 1 equipado con una barra de agitación magnética, condensador y un embudo de adición. La mezcla blanca turbia se trató con una solución de oligo (4-metilsalicilato) (44.7 g, 0.329 mmol 1.0 eq) y se agregó dioxano (250 ml) , durante treinta minutos. La mezcla de reacción se calentó a 90 °C durante 3 horas (en cuyo tiempo la reacción se determinó para haver terminado, por HPLC) . La mezcla de reacción naranja claro se enfrió a 30°C. y se acidificó a pH=2 con 50% ácido sulfúrico acuoso (64 g) . El sólido resultante se aisló por filtración. El sólido blanco se recristalizó a partir de 1170 ml de 50% etanol-agua. El sólido se recuperó mediante filtratión y se secó durante 18 horas en un horno horno al vacío a 50°C. El ácido N- (4-metilsaliciloil) -8-aminocaprilico se aisló como un sólido blanco (30.88 g, 52%); mp=113-114°. Análisis: C6H23N04: C, 65.51; H, 7.90; N, 4.77. Se preparó entonces una solución acuosa de PYY (3-36) y se mezcló con uno o más de los vehículos para producir una composición de PYY (3-36), la cual se puede entonces atomizar en los pulmones. Una concentración adecuada de PYY3-36 para la composición resultante debe ser de aproximadamente 400 µg/ml. Ver la Solicitud de Patente de E.U. No. 20030072740. EJEMPLO 27 Radioimmunoensayo de Extracción Total para la Determinación de la Concentración de PYY en Plasma 1.0 Introducción: Se desarrolló un radioimmunoensayo para medir la concentración del Péptido Humano YY(3-36) (hPYY) en plasma humano. Se recolectaron muestras con anticuagulante (EDTA) e inhibidor de proteasa (aprotinina) y se congelaron. El ensayo es un proceso de cuatro dias. Muestras, controles, y estándares se extrajeron en alcohol y se secaron en el Día 1. Todas las muestras se reconstituyeron y se mezclaron con un antisuero policlonal de conejo dirigido contra hPYY en el Día 2. Se agergó hPYY yodinado en el Día 3. Se agregaron agents de precipitación específicos (IgG de Conejo anticabra y Suero Normadle Conejo) se agregaron el el Día 4. Se separaron las trazas unidas de las trazas libres mediante centrifugación, y se contaron las trazas unidas en el contador gamma. La concentración se calculó por interpolación de uan curva estándar y la realización del ensayo se controló con muestras de Control de Calidad.

Materiales: 2.1 Equipo PYY Peninsula (Península Laboratories, Cat. No. S-2043-0001) 2.2 Alcohol Reaactivo (Fisher Inc., Cat. No. A995-4) (o equivalente) 2.3 Plasma desnudo de humano (con Litio Heparina, sólido, aglomerado) Golden West Biologics Inc. (Cat. No., SD1020-H) (Analytical SOP # A-003) 2.4 Baños de hielo (Fisher, Cat No. 11-676-36) (o equivalente) 2.5 Pipetas desechables de 10 ml (Fisher Cat. No. 13- 678-11E) (o equivalente) 2.6 PYY Humano Sintético -Estándar de Nastech QC (3-36) (Bachem Cat. No. H8585) 2.7 Agua destilada (Mílli-Q Millipore, Cat. No. ZMQ56VFT1) (o equivalente) -25 - 2.8 Tritón X-100 (Sigma, Cat. No. T-9284) (o equivalente) 2.9 Lámina de Aluminio (Fisher, Cat. No. 01-213-3) (o equivalente) 2.10 Aprotinina (ICN Biomedicals Inc. Cat. No. 190779) (o equivalente) 2.11 Tubos de 12x75 mm (Evergreen Scientific, Cat. No. 214-2023-010) (o equivalente) 2.12 Tapas de Tubo 12x75 mm (Evergreen Scientific, Cat. No. 300-2912-G20) (o equivalente) 2.13 Tubos de microfuga 1.5 ml (Fisher, Cat. No. 05- 402-25) (o equivalente) 2.14 3.0 Instrumentos: 3.1 Wallac WIZARD 1470 Automatic Gamma Counter (Perkin Elmer, Modelo No. 1470-002) (o equivalente) 3.2 Congelador Básico Isotérmico, -70 °C (Kenµdro Laboratory Products, Modelo No. C90-3A31) (o equivalente) 3.3 Concentrador CentriVap (Labconco, Cat. No. 7810000) (o equivalente) 3.4 Agitador Multi-tube VX-2500 (VWR, Cat. No. 58816- 115) (o eguivalente) 2 3.5 Centrífuga Marathón 21000R (Fisher, Cat. No. 04- 977-21000R) (o equivalente) 3.6 Rotor de cubeta Swinging (Fisher, Cat. No. 04-976- 006) (o equivalente) 3.7 Auxiliar de pipeta motorizado (Fisher, Cat. No. 13-681-15E) (o equivalente) 3.8 Eppendorf Micropipette 3.8.1 2 µl - 20 µl (Fisher, Cat. No. 21-371-6) (o equivalente) 3.8.2 20 µl - 200 µl (Fisher, Cat. No. 21-371-10) (o equivalente) 3.8.3 100 µl - 1000 µl (Fisher, Cat. No. 21-371- 13) (o equivalente) 3.9 Pipeteador de Repetición Eppendorf (Fisher, Cat. No. 21-380-9) (o equivalente) 3.10 Pipeteador de repetición Eppendorf de Puntas combinables 3.10.1 2.5 ml (Fisher, Cat. No. 21-381-331) (o equivalente) 3.10.2 25 ml (Fisher, Cat. No. 21-381-115) (o equivalente) 3.11 Pipeta de desplazamiento positivo (Fisher, Cat. No. 21-169-10A) (o equivalente) 4.0 Procedimiento DÍA 1 4.1 Reactivos y muestras mecesarios para congelación para el ensayo. Preparar amortiguador RÍA a concentración IX (RIAB) si no esta disponible cantidad suficiente. 4.2 Preparar muestras de curvas estándar en plasma desnudo humano aglomerado. Preparar como sigue si se utiliza una concentración estándar de 12.8 µg/ml . 4.2.1 Adicionar 990 µl RIAB a tubo O. 4.2.2 Adicionar de 990 µl de plasma aglomerado para tubo A. 4.2.3 Adicionar 500 µl de plasma aglomerado a tubos B-H. 4.2.4 Adicionar 10 µl 12.8 µg/ml Estándar a tubo O. Agitar. 4.2.5 Adicionar 10 µl de solución del tubo O al tubo A. Agitar. 4.2.6 Adicionar 500 µl de solución del tube A al tubo B. Agitar. 4.2.7 Adicionar 500 µl de solución del tube B al tubo C. Agitar. 4.2.8 Repetir las diluciones como en 4.2.7 a través del tube H. (Ver Diagrama #1) 4.3 Diluir muestras de plasma humano conocido para probarse si es necesario. Las muestras deben diluirse en plasma desnudo human aglomerado. 4.4 Adicionar 1.2 ml de alcohol frío a los tubos vacíos para NSB, TB, todos los Estándares, muestras QC, y muestras de plasma human a probarse. - 4.5 Adicionar 400 µl de plasma desnudo humano aglomerado a tubos NSB y TB. Cap, Vortex. 4.6 Adicionar 400 µl de muestra estándar preparada de 4.2.5 a 4.2.8 a los tubos de curva estándar repsectivos H-A (Ver Diagrama #1) . Cap, Agitar. 4.7 Adicionar 400 µl de muestras QC a los tubos respectivos. Cap, Agitar. 4.8 Adicionar 400 µl de cada muestra a probarse a su tubo respectivo. Cap, Agitar. 4.9 Incubar todas las muestras en hielo por 30-60 minutos. 4.10 Voltear el conmutador del separador de frío en el Concentrador . 4.11 Centrifugar todos los tubos a 3000 rpm, 4°C durante 15 minutos. 4.12 Transferir 1.3 ml de sobrenadante de cada muestra a un nuevo conjunto de tubos vacíos. Almacenar en un baño de hielo o a 2-8°C si no se gira immediatamente . 4.13 Colocar las muestras en el Concentrador. 4.14 Las muestras girarse durante dos horas a 40°C, después a temperatura ambiente durante un total de 5 horas o hasta la sequedad. 4.15 Retirar las muestras secar, cubrirr y almacenar durante la noche a 2-8°C.

Día 2 4.16 Retirar los tubos secos del enfriador de 2-8°C. 4.17 Adicionar 100 µl de concentrado de amortiguador 4x RÍA a cada tubo. 4.18 Adicionar 100 µl de TX100 0.6% a cada tubo. (Anexo #1) Agitar durante un mínimo de 30 segundos para asegurar que todos los extractos se reconstituyan completamente. 4.19 Incubar todas muestras en hielo durante 30-60 minutos . 4.20 Adicionar 200 µl de agua destilada a cada tubo. Agitar. 4.21 Transferir 100 µl de cada extracto de muestra al tubo respectivo. Nota: Las muestras de Curva Estándar NSB, TB, TC, y QCs se corrieron típicamente por triplicado, requiriendo tres tubos por muestra. Se trataron muchas muestras de plasma humano en cualquier variación (hasta tres réplicas) dependiendo de la disponibilidad de la muestra. 4.22 Preparar anti-PYY de conejo como se describió en el inserto del equipo Península Laboratories. 4.23 Adicionar 100 µl RIAB a cada tubo NSB. 4.24 Adicionar 200 µl RIAB a cada tubo TC. 4.25 Adicionar 100 µl anti-PYY de conejo a todos los tubos restantes. Agitar. 4.26 Cubrir con lámina y almacenar durante la noche a 2-8°C.

Día 3 4.27 Retirar los tubos del enfriador a 2-8°C . 4.28 Preparar trazas 125I-Péptido YY (Anexo #2). 4.29 Adicionar 100 µl de las trazas preparadas a todos los tubos. Tapar y agitar. 4.30 Almacenar durante la noche a 2-8°C.

Día 4 4.31 Retirar los tubos del enfriador 2-8°C. 4.32 Preparar suero de IgG de Cabra anti-Conejo (GARGG) y suero normal de Conejo (NRS) como se describe en el inserto del equipo de Península Laboratories . 4.33 Adicionar 100 µl de GARGG a cada tubo (excepto los tubos TC) . 4.34 Adicionar 100 µl de NRS a cada tubo (excepto los tubos TC) . Agitar. 4.35 Incúbate 90-120 minutos a temperatura ambiente. 4.36 Adicionar 500 µl de RIAB a los tubos para centrifugarse inmedatamente (excepto los tubos TC) . Agitar Note: 500 µl de RIAB deben agregarse a los tubos justo antes de la centrifugación. Adicionar solo RIAB al número de tubos que ya esta listo para centrifugarse. Debe agregarse 500 µl de RIAB a los tubos adicionales cuando estén listos para centrifugarse. 4.37 Tubos de centrifuga (conteniendo 500 µl de RIAB) a 3000 rpm a 4°C, durante 15 minutos. No se centrifugan los tubos TC. 4.38 Aspirar el sobrenadante de los tubos centrifugados . 4.39 Colocar los tubos en los anaqueles negros designados para contar en el contador Gamma. El primer anaquel debe tener el número de Programa apropiado anexo. Todos los anaqueles que siguen no deben contener número de programa. Las muestras deben agregarse en el siguiente orden: 4.39.1 Tubos de NSB 4.39.2 Tubos de TB 4.39.3 Tubos de TC 4.39.4 Tubos estándar (concentración incrementada) 4.39.5 Muestras QC (3 concentraciones) 4.39.6 Muestras humanas desconocidas 4.39.7 Muestras QC (3 concentraciones) 4.40 Colocar un anaquel negro vacio con la etiqueta Alto unida después de haber contado todas las mustras 4.41 Presionar Inicio' en el teclado del Contador Gamma para iniciar el conteo. 4.42 Press E' para ingresar en el teclado del Contador Gamma para desplegar los resultados CPM. .0 Evaluación de resultados .1 Los siguientes lineamientos se aplican a los perfiles de identificación y rechazo en el ensayo.

A fin de que un resultado califique como un perfil y no se incluya en el cálculo final de resultados, deben cumplirse las siguientes condiciones 5.1.1 Los QCs y las muestras desconocidas: 5.1.1.1 Los %CV de todas las réplicas deben ser mayores de 20%. 5.1.1.2 Debe haber al menos tres resultados para evaluar. 5.1.1.3 La diferencia entre el perfil esperado y el resultado siguiente al valor más cercano debe ser mayor de 20%. 5.1.1.4 La diferencia entre los resultados restantes mayor y menor debe ser menor de 20%. 5.1.2 Muestras de la Curva Estándar: 5.1.2.1 Los %CV de todas las replicas deben ser mayores de 15%. 5.1.2.2 Debe haber al menos tres resultados para evaluar 5.1.2.3 La diferencia entre el perfil esperado y el resultado siguiente al valor más cercano debe ser mayor de 15%. 5.1.2.4 La diferencia entre los resultados - restantes mayor y menor debe ser menor de 15%. 6.0 Especificaciones del Ensayo 6.1 Se preparan las muestras QC a las siguientes concentraciones. Se prueban dos muestras QC en cada concentración en un ensayo. Cuatro de las seis muestras QC probadas deben estar dentro de los siguientes rangos (+30% de la concentración nominal) . Al menos una de las dos QCs probadas a cualquier concentración debe estar dentro del rango del ensayo para que los datos sean aceptables 6.1.1 QC1 (100 pg/ml) 70-130 pg/ml 6.1.2 QC2 (200 pg/ml) 140-260 pg/ml 6.1.3 QC3 (500 pg/ml) 350-650 pg/ml 6.2 Requerimientos TBD del parámetro de la curva estándar.

Estandard RÍA de PYY: Anexo # 1 0.6% TX-100 Reactivo: 0.6% TX-100 Materiales : Agua destilada Milli-Q TX-100 Preparación: 1) Medir 50 ml de Agua destilada Milli- Q 2) Adicionar 300 µl de TX-100 utilizando pipeta de desplazamiento positivo 3) Pozo de mezclado. Anexo #2 Trazas de 1l25O -Péptido PYY Reactivo: Trazas de 12A501 -Péptido PYY Materiales: Amortiguador lx RÍA 125I -Péptido PYY Preparación: 1) Reconstituir trazas con 1 ml de amortiguador Ix RÍA. 2) Medir la cantidad de las trazas en el Contador Gamma. Transferir 10 µl de trazas reconstituidas a un tubo. Colocarlas en un anaquel negro por el Contador Gamma con Programa #30 anexo. 3) Colocar el anaquel en el Contador Gamma con el anaquel Alto atrás de el. 4) Presionar Inicio" para iniciar el conteo, después ?E' para ver los resultados CPM. 5) Determinar la cantidad de trazas (X µl) por preparar y RIAB (Y ml) necesario como sigue : X µl= (5 µl) (valor cpm) (# tubos + 10] (cpm de la solución de anaquel) Y ml=(0.1) (# tubos + 10) - 6) Combinar X µl de 125I-Péptido YY con Y ml de RIAB. Pozo de mezclado.

EJEMPLO 28 Preparación de una Formulación NPY Libre de un Estabilizador que es una Proteína. Una formulación de PYY adecuada para la administración intranasal de NPY, que se encuentra sustancialmente libre de un estabilizador que es una proteína se prepara teniendo la formulación abajo listada. 1. Se agregan aproximadamente de agua a un vaso de precipitados y se agita con una barra de agitación sobre una placa de agitación y se agrega citrato de sodio hasta que se disuelve completamente. 2. Se agrega entonces EDTA y se agita hasta que se disulelve completamente. 3. Se agrega entonces el ácido cítrico y se agita hasta que se disuelve completamente. 4. Se agrega metil-ß-ciclodextrina y se agita hasta que se disuelve completamente. 5. Se agrega entonces DDPC y se agita hasta que se disuelve completamente. 6. Se agrega entonces lactosa y se agita hasta que se disuelve completamente. 7. Se agrega entonces sorbitol y se agita hasta que se disuelve completamente. 8. Se agrega entonces clorobutanol y se agita hasta que se disuelve completamente. 9. Se agrega NPY (3-36) y se agita suavemente hasta que se disuelve. 10. Se verifica el pH para hacerlo más seguro a 5.0 ± 0.25. Se adiciona HCl diluido o NaOH diluido para ajustar el pH. 11. - Se adicionar agua hasta el volumen final.

Tabla 12 - - Formulación pH 5 +/- 0.25 Osmolaridad ~250 EJEMPLO 29 Se preparó una segunda formulación como arriba, excepto que la concentración de NPY (3-36) es de 15 mg/ml como se muestra abajo en la Tabla 13.

Tabla 13 Formulación pH 5 +/- 0.25 EJEMPLO 30 Preparación de la Formulación de Péptido Pancreático (PP) Libre de Estabilizador que es una Proteína. Una formulación de PYY adecuada para la administración intranasal de PP, gue se encuentra sustancialmente libre de un estabilizador que es una proteína se prepara teniendo la formulación abajo listada.

Se agregan aproximadamente H de agua a un vaso de precipitados y se agita con una barra de agitación sobre una placa de agitación y se agrega citrato de sodio hasta que se disuelve completamente. Se agrega entonces EDTA y se agita hasta que se disulelve completamente. Se agrega entonces el ácido cítrico y se agita hasta que se disuelve completamente. Se agrega metil-ß-ciclodextrina y se agita hasta que se disuelve completamente.

- . Se agrega entonces DDPC y se agita hasta que se disuelve completamente. 6. Se agrega entonces lactosa y se agita hasta que se disuelve completamente. 7. Se agrega entonces sorbitol y se agita hasta que se disuelve completamente. 8. Se agrega entonces clorobutanol y se agita hasta que se disuelve completamente. 9. Se agrega NPY (3-36) y se agita suavemente hasta que se disuelve. 10. Se verifica el pH para hacerlo más seguro a 5.0 ± 0.25. Se adiciona HCl diluido o NaOH diluido para ajustar el pH. 11. Se adicionar agua hasta el volumen final.

Tabla 14 Formulación pH 5 +/- 0.25 Osmolaridad -250 EJEMPLO 31 Se preparó una segunda formulación como arriba, excepto que la concentración de PP (3-36) es de 15 mg/ml como se muestra abajo en la Tabla 15.

Tabla 15 - - Formulación pH 5 +/- 0.25 EJEMPLO 32 Este ejemplo describe un producto de composición farmacéutica que comprende una formulación de solución acuosa de un compuesto que se une al receptor Y2 a una concentración suficiente para producir concentraciones en plasma terapéuticamente efectivas y un actuador para producir un aerosol de dicha solución, en donde la proporción de elepticidad del patrón de aspersión de dicho aerosol se encuentra entre 1.00 y 1.40 cuando se mide a una altura de entre 0.5 cm y 10 cm de distancia desde la punta del actuador. Sorprendentemente una formulación de PYY (3-36) de la presente especificación puede hacerse en aerosol y aún ser terapéuticamente efectiva (como se muestra en el Ejemplo 8a) . El volumen del aerosol puede estar entre aproximadamente 5 microlitros y 1.0 ml, preferentemente entre 20 y 200 microlitros . Este método de prueba describe el procedimiento para caracterizar la geometría de pluma de las formulaciones de la solución nasal del compuesto gue se une al receptor Y2 utilizando el sistema SprayView NSP. La geometría de pluma se caracteriza utilizando un SprayView High Speed Optical Spray Caracterización Sistema (Sistema de caracterización de asperción óptica a alta velocidad de la vista de la asperción) (SprayView NSP) con la estación de actuación Integrated SprayView NSx (Image Ther Engineering, Inc., Sudbury, MA) de acuerdo con los métodos descritos en la Patente de E.U. No. 6,665,421 y la Publicación de Solicitud de Patente No. 20030018416 publicada el 23 de Enero de 2003. Utilizando la formulación de la Tabla 14 o placebo la caracterización de la asperción y el tamaño de las gotas de la formulación en ambas una botella de 1 ml y una de 3 ml teniendo ambas una Bomba de Asperción Nasal p/ Safety Clip, Pfeiffer SAP # 60548, gue suministra una dosis de 0.1 ml por chorro y tiene una longitud de profundidad del tubo de 36.05 mm.

Los datos del tamaño de gota se muestran en la - siguiente tabla.

Tamaño de la Gota para Botella de Asperción Nasal y Pfeiffer SAP # 60548 % < 10 microm Compuesto que se une 3ml al receptor Y2 (PYY) 23.26 92.31 610.46 6.60 0.59 Abajo se listan los resultados del patrón de asperción y la geometría de pluma Aunque se ha descrito en detalle la invención - - anterior a manera de ejemplo para propósitod de claridad del entendimiento será aparente para un técnico que cierto cambios y modificaciones son comprensivas mediante la exposición y puede practicarse sin la experimentación debida dentro del alcance de las reivindicaciones anexas, que se presentan a manera de ilustración no limitante.

Claims

-
REIVINDICACIONES 1. Un producto de composición farmacéutica que comprende : a. una formulación de composición acuosa que comprende un compuesto de PYY y un estabilizador libres de proteína a una concentración suficiente para producir concentraciones en plasma terapéuticamente efectivas del compuesto de PYY; y • b. un actuador capaz de producir un aerosol de dicha solución, en donde la proporción de elepticidad del patrón de aspersión de dicho aerosol se encuentra entre 1.00 y 1.40 cuando se miden a una altura de entren 0.5 cm y 10 cm de distancia desde la punta del actuador. 2. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 1 en donde el compuesto de PYY es una variante, derivado, análogo o fragmento de PYY.
3. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 1 en donde el compuesto PYY se selecciona del grupo que consiste de las SEQ ID Nos: 1-21, 72-74 y 90-105.
4. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 1 en donde el compuesto de PYY es PYY (3-36) .
5. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 1 en donde la cantidad del compuesto de PYY en el aerosol es de al menos 50 µg por actuación.
6. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 1 en donde la cantidad del compuesto de PYY en el aerosol es de al menos 200 µg por actuación.
7. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 1 en donde el actuador produce una elipcicidad de entre 1.00 y 1.30.
8. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 1 en donde el actuador produce una elipcicidad de entre 1.15 y 1.25.
9. Un producto de la composición farmacéutica que comprende : a. una formulación de solución acuosa que comprende un compuesto de PYY y un estabilizador libres de proteína a una concentración suficiente para producir concentraciones en plasma terapéuticamente efectivas del compuesto de PYY; y b. un actuador para producir un aerosol de dicha solución, en donde el principal patrón de aspersión y el eje mayor de dicho aerosol se encuentran entre 10 y 50 mm cuando se miden a una altura de entren 0.5 cm y 10 cm de distancia desde la punta del actuador.
10. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 9 en donde el compuesto de PYY es una variante, derivado, análogo o fragmento de PYY.
11. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 9 en donde el compuesto PYY se selecciona del grupo que consiste de las SEQ ID Nos: 1-21, 72-74 y 90- 105.
12. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 9 en donde el compuesto de PYY es PYY (3- 36) .
13. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 7 en donde la cantidad de dicho compuesto de PYY en el aerosol es de al menos 50 µg por actuación.
14. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 7 en donde la cantidad de dicho compuesto de PYY en el aerosol es de al menos 200 µg por actuación.
15. Un producto de la composición farmacéutica que comprende: a. una formulación de solución acuosa que comprende un compuesto de PYY y un estabilizador libres de proteína a una concentración suficiente para producir concentraciones en plasma terapéuticamente efectivas del compuesto de PYY; y b. un actuador para producir un aerosol de dicha solución, en donde menos del 10% de las gotitas son más pequeñas que 10 mieras de tamaño
16. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 15 en donde el compuesto de PYY es una variante, derivado, análogo o fragmento de PYY.
17. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 15 en donde el compuesto PYY se selecciona del grupo que consiste de las SEQ ID Nos: 1-21, 72-74 y 90- 105.
18. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 15 en donde el compuesto de PYY es PYY (3- 36) .
19. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 15 en donde la cantidad de dicho compuesto de PYY en el aerosol es de al menos 50 µg por actuación.
20. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 15 en donde la cantidad de dicho compuesto de PYY en el aerosol es de al menos 200 µg por actuación.
21. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 15 en donde menos del 5% de las gotitas son más pequeñas que 10 mieras de tamaño
22. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 15 en donde menos del 1% de las gotitas son más pequeñas que 10 mieras de tamaño.
23. Un producto de composición farmacéutica que comprende : a. una formulación de solución acuosa que comprende un compuesto de PYY y un estabilizador libres de proteína a una concentración suficiente para producir - concentraciones en plasma terapéuticamente efectivas del compuesto de PYY; y b. un actuador seleccionado para producir un aerosol de dicha solución, en donde se producen gotitas de entre 25 y 700 mieras.
24. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 23 en donde el compuesto de PYY es una variante, derivado, análogo o fragmento de PYY.
25. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 23 en donde el compuesto PYY se selecciona del grupo que consiste de las SEQ ID Nos: 1-21, 72-74 y 90-105.
26. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 23 en donde el compuesto de PYY es PYY (3-36) .
27. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 23 en donde la cantidad de dicho compuesto de PYY en el aerosol es de al menos 50 µg por actuación.
28. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 23 en donde la cantidad del compuesto de PYY en el aerosol es de al menos 200 µg por actuación
29. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 1 en donde el estabilizador libre de proteínas se selecciona del grupo que consiste de polioles, agentes de superficie activa, agentes solubilizantes y agentes quelantes.
30. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 29 en donde el agente tensoactivo es didecanoil fosfatidilcolina.
31. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 29 en donde el agente solubilizante es ciclodextrina .
32. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 29 en donde el estabilizador libre de proteínas se selecciona del grupo que consiste de ciclodextrinas, quitosans, DDPC, Tween 80, edetato disódico, ácido cítrico, lactosa y sorbitol.
33. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 9 en donde el estabilizador libre de proteínas se selecciona del grupo que consiste de polioles, agentes de superficie activa, agentes solubilizantes y agentes quelantes.
34. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 33 en donde el agente tensoactivo es didecanoil fosfatidilcolina.
35. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 33 en donde el agente solubilizante es ciclodextrina .
36. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 33 en donde el estabilizador libre de proteínas se selecciona del grupo que consiste de ciclodextrinas, quitosans, DDPC, Tween 80, edetato disódico, ácido cítrico, lactosa y sorbitol.
37. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 15 en donde el estabilizador libre de proteínas se selecciona del grupo que consiste de polioles, agentes de superficie activa, agentes solubilizantes y agentes quelantes.
38.- El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 37 en donde el agente tensoactivo es didecanoil fosfatidilcolina.
39. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 37 en donde el agente solubilizante es ciclodextrina .
40. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 37 en donde el estabilizador libre de proteínas se selecciona del grupo que consiste de ciclodextrinas, quitosans, DDPC, Tween 80, edetato disódico, ácido cítrico, lactosa y sorbitol.
41. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 23 en donde el estabilizador libre de proteínas se selecciona del grupo que consiste de polioles, agentes de superficie activa, agentes solubilizantes y agentes quelantes.
42. ' El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 41 en donde el agente tensoactivo es didecanoil fosfatidilcolina.
43. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 41 en donde el agente 'solubilizante es ciclodextrina.
44. El producto de la composición farmacéutica de la reivindicación 41 en donde el estabilizador libre de proteínas se selecciona del grupo que consiste de ciclodextrinas, quitosans, DDPC, Tween 80, edetato disódico, ácido cítrico, lactosa y sorbitol.
45. Un producto de composición farmacéutica que comprende : a. una formulación de composición acuosa que comprende un estabilizador libre de proteína y un Péptido Pancreático a una concentración suficiente para producir concentraciones en plasma terapéuticamente efectivas del Péptido Pancreático; y b. un actuador capaz de producir un aerosol de dicha solución, en donde la proporción de elipticidad del patrón de aspersión de dicho aerosol se encuentra entre 1.00 y 1.40 cuando se miden a una altura de entren 0.5 cm y 10 cm de distancia desde la punta del actuador.