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MXPA06003455A - Inhibidores macrociclicos de la serina proteasa ns3 del virus de la hepatitis c. - Google Patents

Inhibidores macrociclicos de la serina proteasa ns3 del virus de la hepatitis c.

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Publication number
MXPA06003455A
MXPA06003455A MXPA06003455A MXPA06003455A MXPA06003455A MX PA06003455 A MXPA06003455 A MX PA06003455A MX PA06003455 A MXPA06003455 A MX PA06003455A MX PA06003455 A MXPA06003455 A MX PA06003455A MX PA06003455 A MXPA06003455 A MX PA06003455A
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MX
Mexico
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alkyl
solution
mmol
further characterized
group
Prior art date
Application number
MXPA06003455A
Other languages
English (en)
Inventor
Patrick A Pinto
Original Assignee
Schering Corp
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Filing date
Publication date
Application filed by Schering Corp filed Critical Schering Corp
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Abstract

La presente invencion revela compuestos novedosos que poseen actividad inhibidora de la proteasa del VHC al igual que composiciones farmaceuticas que comprenden dichos compuestos y metodos para usarlos para tratar trastornos asociados con la proteasa del VHC; los compuestos novedosos tipicamente incluyen un macrociclo de 15-20 miembros y poseen la estructura general de la Formula estructural 1: (ver Formula 1) en la cual Z', L', M', R1, X y D se definen en la presente.

Description

INHIBIDORES MACROCICLICOS DE LA SERINA PROTEASA NS3 DEL VIRUS DE LA HEPATITIS C CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se refiere a inhibidores novedosos de proteasas del virus de la hepatitis C ("VHC"), a composiciones farmacéuticas que contienen uno o más de tales inhibidores, a métodos para preparar dichos inhibidores y a métodos para usar dichos inhibidores para tratar la hepatitis C y trastornos relacionados. La presente invención revela adicionalmente compuestos macrocíclicos novedosos como inhibidores de la serina proteasa NS3/NS4a del VHC. Esta solicitud reclama el beneficio de prioridad de la solicitud de patente de E.U.A. provisional No. de Serie 60/506,637, presentada el 26 de Septiembre de 2003.
ANTECEDENTES DE LA INVENCION El virus de la hepatitis C (VHC) es un virus de ARN de una sola hebra de sentido (+) al que se ha vinculado como el mayor agente causal de la hepatitis no A no B (NANBH), en especial la NANBH asociada con sangre (BB-NANBH) (ver Publicación de Solicitud de Patente Internacional No. WO 89/04669, igual a US 2003162167). La NANBH se debe distinguir de otros tipos de enfermedad hepática inducida por virus, tal como el virus de la hepatitis A (VHA), el virus de la hepatitis B (VHB), el virus de la hepatitis delta (VHD), el citomegalovirus (CMV) y el virus de Epstein-Barr (VEB), al igual que otras formas de enfermedad hepática tales como el alcoholismo y la cirrosis biliar primaria. Recientemente, se ha identificado, clonado y expresado una proteasa de VHC necesaria para el procesamiento de polipéptidos y la replicación viral; (ver, por ejemplo, patente de E.U.A. No. 5,712,145). Esta poliproteína de aproximadamente 3000 aminoácidos contiene, desde el extremo amino terminal hasta el carboxilo terminal, una proteína nucleocápside (C), proteínas de envoltura (E1 y E2) y varias proteínas no estructurales (NS1, 2, 3, 4a, 5a y 5b). NS3 es una proteína de aproximadamente 68 kda, codificada por aproximadamente 1893 nucleótidos del genoma del VHC y posee dos dominios diferentes: (a) un dominio de serina proteasa que consiste en aproximadamente 200 de los aminoácidos N-terminales; y (b) un dominio de ATPasa dependiente de ARN en el extremo C-terminal de la proteína. La proteasa NS3 es considerada un miembro de la familia de las quimiotripsinas debido a las similitudes en la secuencia proteica, la estructura global tridimensional y el mecanismo de catálisis. Otras enzimas similares a las quimiotripsinas son la elastasa, el factor Xa, la trombina, la tripsina, la plasmina, la urocinasa, la tPA y la PSA. La serina proteasa NS3 del VHC es responsable de la proteólisis del polipéptido (poliproteína) en las uniones NS3/NS4a, NS4a/NS4b, NS4b/NS5a y NS5a/NS5b y es de este modo responsable de la generación de cuatro proteínas virales durante la replicación viral. Esto ha convertido a la serina proteasa NS3 del VHC en un blanco atractivo para la quimioterapia antiviral. Los compuestos novedosos pueden inhibir dicha proteasa. También pueden modular el procesamiento del polipéptido del virus de la hepatitis C (VHC). Se ha determinado que la proteína NS4a, un polipéptido de aproximadamente 6 kda, es un cofactor para la actividad de serina proteasa de NS3. La autoescisión de la unión NS3/NS4a por la serina proteasa NS3/NS4a ocurre intramolecularmente (es decir, en forma cis) mientras que los otros sitios de escisión se procesan de manera interrriolecular (es decir, en forma trans). El análisis de los sitios de escisión natural para la proteasa del VHC reveló la presencia de cisterna en P1 y serina en P1' y que estos residuos se conservan estrictamente en las uniones NS4a/NS4b, NS4b/NS5a y NS5a/NS5b. La unión NS3/NS4a contiene una treonina en P1 y una serina en P1 '. La sustitución Cys?Thr en NS3/NS4a se postula para explicar el requerimiento del procesamiento en cis en lugar de trans en esta unión. Ver, por ejemplo, Pizzi et al. (1994) Proc. Nati. Acad. Sci (USA) 91 :888-892, Failla et al. (1996) Folding & Design 1 :35-42. El sitio de escisión de NS3/NS4a es también más tolerante a la mutagénesis que los otros sitios. Ver, por ejemplo, Kollykhalov et al. (1994) J. Viral. 68:7525-7533. También se descubrió que se requieren residuos ácidos en la región corriente arriba del sitio de ruptura para una ruptura eficiente. Ver, por ejemplo, Komoda et al. (1994) J. Virol. 68:7351- Los inhibidores de proteása de VHC que se han informado incluyen antioxidantes (ver Publicación de Solicitud de Patente Internacional No. WO 98/14181), ciertos péptidos y análogos de péptidos (ver Publicación de Solicitud de Patente Internacional No. WO 98/17679 (igual a US2002032 75), Landro et al. (1997) Biochem. 36:9340-9348, Ingallinella et al. (1998) Biochem. 37:8906-8914, Llinás-Brunet et al. (1998) Bioorg. Med. Chem. Lett. 8:1713-1718), inhibidores basados en el polipéptido eglina c de 70 aminoácidos (Martin et al. (1998) Biochem. 37:11459- 1468, afinidad de inhibidores seleccionados de inhibidores humanos de tripsina secretora pancreática (hPSTI-C3) y repertorios de minicuerpos (MBip) (Dimasi et al. (1997) J. Viral. 71 :7461-7469), cVHE2 (un fragmento "camelizado" de anticuerpo de dominio variable) (Martin et al.(1997) Protein Eng. 10:607-614), y a1-antiquimiotripsina (ACT) (Elzouki et al.) (1997) J. Hepat. 27:42-28). Se reveló recientemente una ribozima diseñada para destruir selectivamente el ARN del virus de la hepatitis C (ver, BioWorId Today 9(217): 4 (10 de noviembre de 1998)). También se hace referencia a las Publicaciones de PCT No. WO 98/17679, publicada el 30 de Abril de 1998 (Vértex Pharmaceuticals Incorporated); WO 98/22496, publicada el 28 de mayo de 1998 (igual a U.S. 6.018.020 y U.S. 5.866.684; F. Hoffmann-La Roche AG); y WO 99/07734, publicada el 18 de febrero de 1999 (igual a U.S. 6.143.715; Boehringer Ingelheim Canadá Ltd.).
Se ha vinculado al VHC con la cirrosis hepática y la Inducción del carcinoma hepatocelular. El pronóstico para pacientes que padecen la infección por VHC, actualmente, es pobre. La infección por VHC es más difícil de tratar que otras formas de hepatitis debido a la falta de inmunidad o remisión asociada con la infección por VHC. Datos actuales indican una tasa de supervivencia de menos del 50% a los cuatro años posteriores al diagnóstico de cirrosis. A los pacientes que se les diagnosticó carcinoma localizado hepatocelular resecable poseen una tasa de supervivencia del 10-30%, mientras que aquéllos con carcinoma localizable hepatocelular no resecable poseen una tasa de supervivencia de cinco años menor del 1%. Se hace referencia a WO 00/59929 (igual a US2004002448 y U.S. 6,608,027; Apoderado: Boehringer Ingelheim (Ganada) Ltd.; publicada el 12 de octubre de 2000) que revela derivados peptídicos de fórmula: Se hace referencia a A. Marchetti et al, Synlett S1 , 1000-1002 (1999), que describe la síntesis de análogos blcíclicos de un inhibidor de la proteasa NS3 del VHC. Un compuesto que se revela en la misma posee la fórmula: También se hace referencia a W. Han et al, Bioorganic & Medicinal Chem. Lett, (2000) 10, 711-713, que describe la preparación de ciertas a-cetoamidas, -cetoésteres y -dicetonas que contienen grupos funcionales alilo y etilo. También se hace referencia a WO 00/09558 (Apoderado: Boehringer Ingelheim Limited; publicada el 24 de febrero de 2000) que revela derivados peptídicos de fórmula: donde los diversos elementos se definen en la misma. Un compuesto ilustrativo de esa serie es: También se hace referencia a WO 00/09543 (igual a US2002016442 y US 2002037998; Apoderado: Boehringer Ingelheim Limited; publicada el 24 de febrero de 2000) que revela derivados peptídicos de fórmula: A ?. donde los diversos elementos se definen en la misma. Un compuesto ilustrativo de esa serie es: Las terapias actuales para la hepatitis C incluyen interferón-(INFa) y terapia de combinación con ribavirin e ¡nterferón. Ver, por ejemplo, Beremguer et al. (1998) Proc. Assoc. Am. Physicians 110(2):98-112. Estas terapias adolecen de una baja tasa de respuesta sostenida y efectos secundarios frecuentes. Ver, por ejemplo, Hoofnagle et al. ( 997) N. Engl. J. Med. 336:347. Actualmente, no hay vacuna disponible para la infección por VHG. También se hace referencia a WO 01/74768 (igual a US 2003236242; Apoderado: Vértex Pharmaceuticais Inc) publicada el 11 de octubre de 2001, que revela ciertos compuestos de la siguiente fórmula general (R se define en la misma) como inhibidores de la serina proteasa NS3 del virus de la Hepatitis C: Un compuesto específico revelado en la patente mencionada anteriormente WO 01/74768 posee la siguiente fórmula: Las Publicaciones de PCT WO 01/77113; WO 01/081325; WO 02/08198; WO 02/08256; WO 02/08187; WO 02/08244; WO 02/48172; WO 02/08251 ; y la solicitud de patente de E.U.A. pendiente, No. de Serie 10/052,386, presentada el 18 de enero de 2002, revelan varios tipos de péptidos y/u otros compuestos como inhibidores de la serina proteasa NS-3 del virus de la hepatitis C. Las revelaciones de aquellas solicitudes se incorporan a la presente a modo de referencia a las mismas. Existe la necesidad de nuevos tratamientos y terapias para la infección por VHC. Existe la necesidad de compuestos útiles en el tratamiento o prevención o alivio de uno o más síntomas de la hepatitis C. Existe la necesidad de métodos para el tratamiento o prevención o alivio de uno o más síntomas de la hepatitis C. Existe la necesidad de métodos para modular la actividad de serina proteasas, en especial la serina proteasa NS3/NS4a del VHC, usando los compuestos que se proveen en la presente. Existe la necesidad de métodos para modular el procesamiento del polipéptido de VHC usando los compuestos que se proveen en la presente; BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION En sus muchas modalidades, la presente invención provee una clase novedosa de inhibidores de la proteasa de VHC, composiciones farmacéuticas que contienen uno o más de los compuestos, métodos para preparar formulaciones farmacéuticas que comprenden uno o más de dichos compuestos, y métodos para el tratamiento y prevención de VHC o el alivio de los síntomas de la hepatitis C usando uno o más de dichos compuestos o una o más de dichas formulaciones. También se proveen métodos para modular la interacción de un polipéptido de VHC con la proteasa del VHC. Entre los compuestos que se proveen en la presente, se prefieren los compuestos que inhiben la actividad de la serina proteasa NS3/NS4a del VHC. La presente invención revela compuestos que poseen la estructura general que se muestra en la Fórmula estructural 1 : Fórmula 1 o sales aceptables para uso farmacéutico o solvatos de dichos compuestos, en la cual: (1 ) R1 es -C(0)R5 o -B(OR)2; (2) R5 es H, -OH, -OR8, -NR9R10, -C(0)OR8, -C(0)NR9R10, -CF3, -C2F5, -C3F7, -CF2R6, -R6, -C(0)R7 o NR7S02R8; (3) R7 es H, -OH, -OR8 o -CHR9R10; (4) R6, R8, R9 y R10 pueden ser iguales o diferentes, seleccionándose cada uno independientemente del grupo que consiste en H, alquilo, alquenilo, arilo, heteroalqullo, heteroarilo, cicloaiquilo, arilalquilo, heteroarilalquilo, R14, -CH(R1')CH(R ')C(0)OR11, -[CH(R )]pC(0)OR11, -[CH(R )]pC(0)NR12R13, -[CH(R1')]pC(0)R11, -[CH(Rr)]pS(02)NR12R13, -CH(R1 )C(0)N(H)CH(R2')(R'), -CH(R1 )CH(R1')C(0)NR12R13, -CH(R1 )CH(R1')S(02)NR12R13, -CH(Rr)CH(R )C(0)R11, -[CH(R1')]pCH(OH)R11, -CH(R1' )C(0)N(H)CH(R2' )C(0)OR11, -C(0)N(H)CH(R2')C(0)OR11, -C(0)N(H)CH(R2')C(0) R11, -CH(R1 )C(0)N(H)CH(R2')C(0)NR 2R13, -CH(R1 )C(0)N(H)CH(R2' )R\ -CH(R1 )C(0)N(H)CH(R2')C(0)N(H)CH(R3')C(0)OR11, -CH(R1 )C(0)N(H)CH(R2')C(0)CH(R3')NR 2R13, -CH(R1 )C(0)N(H)CH(R2')C(0)N(H)CH(R3')C(0)NR 2R13, -CH(R1 )C(0)N(H)CH(R2')C(0)N(H)CH(R3')C(0)N(H)CH(R4')- C(0)OR11, -CH(Rn )C(0)N(H)CH(R )C(0)N(H)CH(Ra )C(0)N(H)CH(R4') -CH(R1')C(0)N(H)CH(R2')C(0)N(H)CH(R3')C(0)N(H)CH(R4')-C(0)N(H)CH(R5')-C(0)OR11 y -CH(R )C(0)N(H)CH(R2')C(0)N(H)CH(R3')C(0)N(H)CH(R4')-C(0)N(H)CH(R5')- C(0)NR 2R13; donde R , R2, R3', R4, R5, R11, R12 y R13 pueden ser iguales o diferentes, seleccionándose cada uno independientemente del grupo conformado por: H, halógeno, alquilo, arilo, heteroalquilo, heteroarilo, cicloalquilo, alcoxi, ariloxi, alquenllo, alquinilo, alquil-arilo, alquil-heteroarilo, heterocicloalquilo, aril-alquilo y heteroaralquilo; o R12 y R 3 están unidos de manera que la combinación sea cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo o heteroarilo; R 4 se encuentra presente o no y si se encuentra presente se selecciona del grupo conformado por: H, alquilo, arilo, heteroalquilo, heteroarilo, cicloalquilo, alquil-arilo, alilo, alquil-heteroarilo, alcoxi, aril-alquilo, alquenilo, alquinilo y heteroaralquilo; (5) R y R' se encuentran presentes o no y si se encuentran presentes pueden ser iguales o diferentes, seleccionándose cada uno independientemente del grupo conformado por: H, OH, alquilo de Ci-C10, alquenilo C2-Cio, cicloalquilo de C3-C8, heterocicloalquilo de C-3-Cs, alcoxi, ariloxi, alquiltio, ariltio, alquilamino, arilamino, amino, amido, ariltioamino, arilcarbonilamino, arilaminocarboxi, alquilaminocarboxi, heteroalquilo, alquenilo, alquinilo, (arií)alquilo, heteroarilalquilo, éster, ácido carboxílico, carbamato, urea, cetona, aldehido, ciano, nitro, halógeno, (cicloalquil)alquilo, arilo, heteroarilo, (alquil)arilo, alquilheteroarilo, alquil-heterociclilo y (heterocicloalquil)alquilo, donde cicloalquilo está compuesto por tres a ocho átomos de carbono, y de cero a seis átomos de oxígeno, nitrógeno, azufre o fósforo y dicho alquilo es de uno a seis átomos de carbono; (6) L' es H, OH, alquilo, heteroalquilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, o heterociclilo; (7) M' es H, alquilo, heteroalquilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, arilalquilo, heterociclilo o una cadena lateral de aminoácidos; o L' y M' se unen para formar una estructura anular de manera que la parte de la Fórmula estructural 1 representada por (los números 1 y 2 agregados para mostrar la ubicación de cierto átomo de carbono y de cierto átomo de nitrógeno respectivamente) se representa mediante la Fórmula estructural 2: órmula 2 donde en la Fórmula 2: E está presente o ausente y si se encuentra presente es C, CH, N o C(R); J está presente o ausente, y cuando J se encuentra presente, J es (CH2)P> (CHR-CHR')p, (CHR)P, (CRR')P> S(O2), N(H), N(R) o O; cuando J está ausente y G se encuentra presente, L se une directamente al átomo de nitrógeno marcado como posición 2; p es un número de 0 a 6; L está presente o ausente, y cuando L se encuentra presente, L es C(H) o C(R); cuando L está ausente, M está presente o ausente; si M se encuentra presente estando L ausente, entonces M se une está directa e independientemente a E, y J se une directa e independientemente a E; G está presente o ausente, y cuando G se encuentra presente, G es (CH2)P, (CHR)p, (CHR-CHR')p o (CRR')P; cuando G está ausente, J se encuentra presente y E se une directamente al átomo de carbono marcado como posición 1 ; Q está presente o ausente, y cuando Q se encuentra presente, Q es NR, PR, (CR=CR), (CH2)P, (CHR)P , (CRR')P , (CHR-CHR')P, O, NR, S, SO, o SO2; cuando Q se encuentra ausente, M está (i) ya sea directamente unido a A o (ii) a un sustituyente independiente sobre L, seleccionándose dicho sustituyente independiente de -OR, -CH(R)(R'), S(O)0-2R o -NRR' o (iii) ausente; cuando ambos Q y M están ausentes, A está ya sea unido directamente a L, o A es un sustituyente independiente sobre E, seleccionándose dicho sustituyente independiente de -OR, -CH(R)(R'), S(O)0-2R o -NRR' o A se encuentra ausente; A está presente o ausente y si se encuentra presente A es O, O(R), (CH2)P, (CHR)P, (CHR-CHR')p, (CRR')P, N(R), NRR', S, S(02), -OR, CH(R)(R') o NRR'; o A está unido a M para formar un puente cicloalquilo, alifático o heterocíclico; M está presente o ausente, y cuando M se encuentra presente, M es halógeno, O, OR, N(R), S, S(O2), (CH2)P, (CHR)P (CHR-CHR')P, o (CRR')P; o M está unido a A para formar un puente cicloalquilo, alifático o heterocicloalquilo; (8) Z' está representado por cualquiera de (i), (ii), (iii), (iv) o (v) que se muestran a continuación: (0 H H Rm 0 Fórmula A en la cual: R44 se selecciona del grupo conformado y R se selecciona del grupo conformado por: i i o ' donde R'B se selecciona de metilo, etilo, isopropilo, ter-butilo fenilo; Fórmula B donde R79 se selecciona del grupo conformado por: (iii) Fórmula C en la cual el anillo de sulfona está sustituido opcionalmente con alquilo y cicloalquiio; (iv) el resto: (v) el resto: ZesOoN; e Y se selecciona del grupo conformado por: COOH HspOOC y COOH GHs HOOC. donde: Y11 se selecciona del grupo conformado por: H, -C(0)OH, -C(0)OEt, -OMe, -Ph, -OPh, -NHMe, -NHAc, -NHPh, -CH(Me)2, -triazolilo, 1-imidazolilo y -NHCH2COOH; Y12 se selecciona del grupo conformado por: H, -C(0)OH, -C(0)OMe, -OMe, F, Cl y Br; Y13 se selecciona del grupo que consiste en los siguientes restos: Y es MeS(02)- -Ac, -Boc, -iBoc, -Cbz, o -Alloc; Y15 e Y16 pueden ser ¡guales o diferentes y se seleccionan independientemente del grupo conformado por: alquilo, arilo, heteroalquilo y heteroarilo; Y17 es -CF3, -N02, -C(0)NH2, -OH, -C(0)OCH3, -OCH3, -OC6H5, -C6H5, -C(O)C6H5l -NH2 o -C(O)OH; e Y18 es -C(O)OCH3, -NO2, -N(CH3)2j F, -OCH3, -C(H2)C(0)OH, -C(0)OH, -S(02)NH2 o -N(H)C(0)CH3; (9) X está representado por la Fórmula estructural 4: II ¿30^ 0 ] "'" Fórmula 4 donde en la Fórmula 4, a es 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ó 9; b, c, d, e y f pueden ser ¡guales o diferentes, siendo cada una independientemente 0, 1 , 2, 3, 4 ó 5; A es C, N, S u O; R29 y R29' se encuentran independientemente presentes o ausentes y si se encuentran presentes pueden ser iguales o diferentes, siendo cada uno, uno o dos sustituyentes seleccionados del grupo conformado por: H, halo, alquilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquílamino, cicloalquilaminocarbonilo, ciano, hidroxi, alcoxi, alquiltio, amino, -NH(alquilo), -NH(cicloalquilo), -N(alquilo)2, carboxilo, -C(0)0alqui!o, heteroarilo, aralquilo, alquiladlo, aralquenilo, heteroaralquilo, alquilheteroarilo, heteroaraiquenilo, hidroxialquilo, ariloxi, aralcoxi, acilo, aroilo, nitro, ariloxicarbonilo, aralcoxicarbonilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, alquilsulfinilo, arilsulfinilo, heteroarilsulfinilo, ariltio, heteroariltio, aralquiltio, heteroaralquiltio, cicloalquenilo, heterociclilo, heterociclenilo, YiY2N-alquilo-, YiY2NC(0)- e YTY2NS02-, en los cuales Y-i e Y2 pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, arilo y aralquilo; o R29 y R29 están unidos de manera que la combinación es una cadena alifática o heteroalifática de 0 a 6 carbonos; R está presente o ausente y si se encuentra presente es uno o dos sustituyentes seleccionados independientemente del grupo conformado por: H, alquilo, arilo, heteroarilo y cicloalquilo; (10) D en la Fórmula 1 está representado por la Fórmula estructural 5: — CCHjg— (C) - (N¾-— (A)k~(C ¡)l — (CH)m — Fórmula 5 donde en la Fórmula 5, R32, R33 y R34 se encuentran presentes o ausentes y si se encuentran presentes son uno o dos sustituyentes seleccionados independientemente del grupo conformado por: H, halo, alquilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilamino, espiroalquilo, cicloalquilaminocarbonilo, ciano, hidroxi, alcoxi, alquiltio, amino, -NH(alquilo), -NH(cicloalquilo), -N(alquilo)2, carboxilo, -C(0)0-aIquilo, heteroarilo, aralquilo, alquilarilo, aralquenilo, heteroaralquilo, alquilheteroarilo, heteroaralquenilo, hidroxialquilo, ariloxi, aralcoxi, acilo, aroilo, nitro, ariloxicarbonilo, aralcoxicarbonilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, alquilsulfinilo, arilsulfinilo, heteroarilsulfinilo, ariltio, heteroariltio, aralquiltio, heteroaralquiltio, cicloalquenilo, heterociclilo, heterociclenilo, YiY2N-alquilo-, YiY2NC(0)- e Y1Y2NSO2-, en los cuales Y1 e Y2 pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, arilo y aralquilo; R32 y R están unidos de manera que la combinación forma una porción de un grupo cicloalquilo; g es 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 0 9; h, i, j, k, I y m pueden ser iguales o diferentes, siendo cada uno independientemente 0, 1 , 2, 3, 4 ó 5; y A es C, N, S u O, (11) siempre que en la Fórmula 1 cuando la Fórmula estructural 2: Fórmula 2 es W es CH o N, se aplican ambas exclusiones condicionales siguientes (i) y (ii): exclusión condicional (i): Z' no es -NH-R , donde R3 es H, arilo de Cs, arilo de C10, heteroarilo, -C(0)-R37, -C(0)-OR37 o -C(0)-NHR37, donde R37 es alquilo de C- S O cicloalquilo de C3_6; y exclusión condicional (¡i): R1 no es -C(0)OH, una sal aceptable para uso farmacéutico de -C(0)OH, un éster de -C(0)OH o -C(0)NHR38, en el cual R38 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de Ci_8, cicloalquilo de C3-6, arilo de C6, arilo de Cío, o aralquilo de C7_i6. Otra característica de la invención es la de las composiciones farmacéuticas que contienen como componente activo al menos un compuesto de Fórmula I (o sus sales, ésteres, solvatos o isómeros) junto con un vehículo o excipiente aceptable para uso farmacéutico. La invención también provee métodos para preparar compuestos de Fórmula I, al igual que métodos para el tratamiento de enfermedades tales como, por ejemplo, VHC, SIDA (Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida), y trastornos relacionados. Los métodos para llevar a cabo los tratamientos comprenden administrar a un paciente que padece una o más de las enfermedades anteriores o una o más enfermedades relacionadas una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos un compuesto de Fórmula 1 , o una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de Fórmula 1.
También se revela el uso de al menos un compuesto de Fórmula 1 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de VHC, SIDA y trastornos relacionados. También se revela un método para el tratamiento de un trastorno relacionado con el virus de la hepatitis C, que comprende administrar una cantidad efectiva de uno o más de los compuestos de la invención. En aún otras modalidades, se provee un método para modular la actividad de la proteasa del virus de la hepatitis C (VHC), que comprende poner en contacto la proteasa del VHC con uno o más compuestos de la invención, al igual que métodos para tratar o prevenir el VHC, o para aliviar uno o más síntomas de la hepatitis C, que comprende administrar una cantidad efectiva de uno o más de los compuestos de la invención. Dicha modulación, tratamiento, prevención o alivio también se puede llevar a cabo con las composiciones o formulaciones farmacéuticas de la invención. Sin pretender que la teoría sea limitativa, se considera que la proteasa del VHC puede ser la proteasa NS3 o NS4. Los compuestos de la invención pueden inhibir dicha proteasa. También pueden modular el procesamiento del polipéptido del virus de la hepatitis C (VHC).
DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION Según se empleó anteriormente, y a lo largo de la presente . revelación, se entenderá que los siguientes términos, salvo que se indique de otra manera, poseen los siguientes significados: "Paciente" incluye tanto seres humanos como animales. "Mamífero" significa seres humanos y otros animales mamíferos. "Alquilo" significa un grupo alifático hidrocarbonado que puede ser recto o ramificado y que comprende alrededor de 1 a alrededor de 20 átomos de carbono en la cadena. Los grupos alquilo preferidos contienen alrededor de 1 a alrededor de 12 átomos de carbono en la cadena. Los grupos alquilo más preferidos contienen alrededor de 1 a alrededor de 6 átomos de carbono en la cadena. Ramificado significa que uno o más grupos alquilo inferior tales como metilo, etilo o propilo, están unidos a una cadena de alquilo lineal. "Alquilo inferior" significa un grupo que posee alrededor de 1 a alrededor de 6 átomos de carbono en la cadena que puede ser recta o ramificada. El grupo alquilo puede estar sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes que pueden ser iguales o diferentes, seleccionándose cada sustituyente independientemente del grupo que consiste en H, halo, alquilo, arilo, cicloalquilo, ciano, hidroxi, alcoxi, alquiltio, amino, -NH(alquilo), -NH(cicloalquilo), -N(alquilo)2l carboxi y -C(0)0-alquilo. Ejemplos no limitativos de grupos alquilo adecuados incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo y t-butilo.
"Alquinilo" significa un grupo alifático hidrocarbonado que contiene al menos un enlace triple carbono-carbono y que puede ser recto o ramificado y que comprende alrededor de 2 a alrededor de 15 átomos de carbono en la cadena. Los grupos alquinilo preferidos poseen alrededor de 2 a alrededor de 12 átomos de carbono en la cadena; y con mayor preferencia alrededor de 2 a alrededor de 4 átomos de carbono en la cadena. Ramificado significa que uno o más grupos alquilo inferior tales como metilo, etilo o propilo, están unidos a la cadena lineal de alquinilo. "Alquinilo inferior" significa alrededor de 2 a alrededor de 6 átomos de carbono en la cadena que puede ser recta o ramificada. Ejemplos no limitativos de grupos alquinilo adecuados incluyen etinilo, propinilo, 2-butinilo y 3-metilbutinilo. El término "alquinilo sustituido " significa que el grupo alquinilo puede estar sustituido con uno o más sustituyentes que pueden ser iguales o diferentes, seleccionándose cada sustituyente independientemente del grupo que consiste en alquilo, arilo y cicloalquilo. "Alifático" significa e incluye cadenas rectas o ramificadas de átomos de carbono parafínicos, olefínicos o acetilénicos. El grupo alifático puede estar sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes que pueden ser iguales o diferentes, seleccionándose cada sustituyente independientemente del grupo que consiste en H, halo, halógeno, alquilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilamino, alquenilo, heterocíclico, alquinilo, cicloalquilaminocarbonilo, hidroxilo, tio, ciano, hidroxi, alcoxi, aiquilíio, amino, . -NH(alquilo), -NH(cicloalquilo), -N(alquilo)2, carboxilo, -C(0)0-alquilo, heteroarilo, aralquilo, alquilarilo, aralquenilo, heteroaralquilo, alquilheteroarilo, heteroaralquenilo, heteroalquilo, carbonilo, hidroxialquilo, ariloxi, aralcoxi, acilo, aroilo, nitro, amino, amido, éster, ácido carboxílico, ariloxicarbonilo, aralcoxicarbonilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, alquilsulfinilo, arilsulfinilo, heteroarilsulfinilo, alquiltio, ariltio, heteroariltio, aralquiltio, heteroaralquiltio, cicloalquenilo, heterociclilo, heterociclenílo, carbamato, urea, cetona, aldehido, ciano, sulfonamida, sulfóxido, sulfona, sulfonilurea, sulfonilo, hidrazida, hidroxamato, S(alquil)Y-|Y2N-alquilo-, YiY2N-alquilo-, Y^NCÍO)- y Y1Y2NSO2-, en los cuales Y1 e Y2 pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, arilo y aralquilo. "Heteroalifático" significa un grupo de todas maneras alifático que contiene al menos un heteroátomo (tal como oxígeno, nitrógeno o azufre). El término heteroalifático incluye heteroalifático sustituido. "Arilo" significa un sistema anular aromático monocíclico o multicíclico que comprende de alrededor de 6 a alrededor de 14 átomos de carbono, con preferencia de alrededor de 6 a alrededor de 10 átomos de carbono. El grupo arilo se puede sustituir opcionalmente con uno o más "sustituyentes del sistema anular" que pueden ser ¡guales o diferentes, y son según se definió en la presente. Ejemplos no limitativos de grupos arilo adecuados incluyen fenilo y naftilo.
"Heteroalquilo" significa un alquilo según se definió anteriormente, en el cual uno o más átomos de hidrógeno están sustituidos con un heteroátomo seleccionado de N, S u O. "Heteroarllo" significa un sistema anular aromático monocíclico o multicíclico que comprende alrededor de 5 a alrededor de 14 átomos en el anillo, con preferencia de alrededor de 5 a alrededor de 10 átomos en el anillo, en el cual uno o más de los átomos del anillo es un elemento que no es carbono, por ejemplo nitrógeno, oxígeno o azufre, solo o en combinación. Los heteroarilos preferidos contienen de alrededor de 5 a alrededor de 6 átomos en el anillo. El "heteroarilo" puede estar sustituido opcionalmente con uno o más "sustituyeníes del sistema anular" que pueden ser iguales o diferentes, y son según se definió en la presente. El prefijo aza, oxa o tia antes de la denominación de la raíz del heteroarilo significa que al menos un átomo de nitrógeno, oxígeno o azufre respectivamente, se encuentra presente como un átomo del anillo. Un átomo de nitrógeno de un heteroarilo puede estar opcionalmente oxidado al N-óxido correspondiente. Ejemplos no limitativos de heteroarilos adecuados incluyen piridilo, plrazinilo, furanilo, tienilo, pirimidinilo, piridona (incluyendo piridonas N-sustituidas), isoxazolilo, isotiazolilo, oxazolilo, tiazolilo, pirazolilo, furazanilo, pirrolilo, plrazolilo, triazolilo, 1 ,2,4-tiadiazolilo, pirazinilo, piridazinilo, quinoxalinilo, ftalazinllo, oxindolilo, imidazo[1,2-ajpiridinilo, imidazo[2,1-b]tiazolilo, benzofurazanilo, indolilo, azaindolilo, benzoimidazolilo, benzotienilo, quinilinilo, imidazoiilo, tienopiridilo, quinazolinilo, tienopirimidilo, pirrolopiridilo, imidazopiridilo, isoquinilinilo, benzoazaindolilo, 1 ,2,4-triazinilo, benzotiazolilo y similares. El término "heteroarilo" también se refiere a restos heteroarilo parcialmente saturados, por ejemplo, íetrahidroisoquinolilo, tetrahidroquinolilo y similares. "Aralquilo" o "arilalquilo" significa un grupo aril-alquilo- en el cual el arilo y el alquilo son según se describieron anteriormente. Los aralquilos preferidos comprenden un grupo alquilo inferior. Ejemplos no limitativos de grupos aralquilo adecuados incluyen bencilo, 2-fenetilo y naftalenilmetilo. El enlace al resto progenitor es a través del alquilo. "Alquilarilo" significa un grupo alquil-arilo- en el cual el alquilo y arilo son según se describió anteriormente. Los alquilarnos preferidos comprenden un grupo alquilo Inferior. Ejemplo no limitativo de un grupo alquilarilo adecuado es tolilo. El enlace al resto progenitor es a través del arilo. "Cicloalquilo" significa un sistema anular no aromático monocícllco o multicíclico que comprende de alrededor de 3 a alrededor de 10 átomos de carbono, con preferencia de alrededor de 5 a alrededor de 10 átomos de carbono. Los anillos cicloalquilo preferidos contienen de alrededor de 5 a alrededor de 7 átomos anulares. El cicloalquilo puede estar sustituido opcionalmente con uno o más "sustituyentes del sistema anular" que pueden ser iguales o diferentes, y son según se definió anteriormente. Ejemplos no limitativos de cicloalquilos monocíclicos adecuados incluyen ciclopropilo, clclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo y similares. Ejemplos no limitativos de cicloalquilos multicíclicos adecuados incluyen 1 -decalina, norbornilo, adamantilo y similares, al igual que especies saturadas tales como, por ejemplo, ¡ndanilo, tetrahidronaftilo y similares. "Halógeno'' significa flúor, cloro, bromo o yodo. Se prefiere flúor, cloro y bromo. "Sustituyente del sistema anular" significa un sustituyente unido a un sistema anular aromático o no aromático que, por ejemplo, reemplaza un hidrógeno disponible en el sistema anular. Los sustituyentes del sistema anular pueden ser iguales o diferentes, seleccionándose cada uno independientemente del grupo que consiste en alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, heteroarilo, aralquilo, alquilarilo, heteroaralquilo, heteroarilalquenilo, heteroarilalquinilo, alquilheteroarilo, hidroxi, hidroxialquilo, alcoxi, ariloxi, aralcoxi, acilo, aroilo, halo, nitro, ciano, carboxi, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, aralcoxicarbonilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, alquiltio, ariltio, heteroariltio, aralquiltio, heteroaralquiltío, cicloalquilo, heterociclilo, -C(=N-CN)-NH2, -C(=NH)-NH2, -C(=NH)-NH(alquiIo), Y1Y2N-, Y^N-alquil-, YiY2NC(0)-, Y^NSOs- y -SOzNY^, en los cuales Y-, e Y2 pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, arilo, cicloalquilo y aralquilo. "Sustituyente dei sistema anular" también puede significar un resto simple que reemplaza simultáneamente dos hidrógenos disponibles en dos átomos de carbono adyacentes (un H en cada carbono) en un sistema anular. Ejemplos de dicho resto son metilendioxi, etilendioxi, -C(CH3)2- y similares que forman restos tales como, por ejemplo: "Heterociclilo" o "heterocicloalquilo" o "heterocíclico" significa un sistema anular no aromático monocíciico o multicíclico saturado que comprende de alrededor de 3 a alrededor de 10 átomos en el anillo, con preferencia alrededor de 5 a alrededor de 10 átomos en el anillo, en el cual uno o más de los átomos del sistema anular es un elemento que no es carbono, por ejemplo nitrógeno, oxígeno, fósforo o azufre, solo o en combinación. No hay presentes átomos adyacentes de oxígeno y/o azufre en el sistema anular. Heterociclilos preferidos contienen alrededor de 5 a alrededor de 6 átomos en el anillo. El prefijo aza, oxa o tia antes del nombre de la raíz del heterociclilo significa que al menos un átomo de nitrógeno, oxígeno o azufre respectivamente se encuentra presente como un átomo del anillo. Cualquier -NH en un anillo heterociclilo puede existir protegido tal como, por ejemplo, un grupo -N(Boc), -N(CBz), -N(Tos) y similares; dichas protecciones también son consideradas parte de la presente invención. El heterociclilo se puede sustituir opcionalmente con uno o más "sustituyentes del sistema anular" que pueden ser ¡guales o diferentes, y son según se definió en la presente. El átomo de nitrógeno o azufre del heterociclilo se puede oxidar opcionalmente al N-óxido, S-óxido o S,S-dióxido correspondientes. Ejemplos no limitativos de anillos monocíclicos de heterociclilo incluyen piperidilo, pirrolidinilo, piperazinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, tiazolidinilo, 1 ,4-dioxanilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotiofenilo, lactama, lactona y similares. Se debe observar que en sistemas anulares que contienen heteroátomos de la presente invención no hay grupos hidroxilo en los átomos de carbono adyacentes a N, O o S, al igual que no hay grupos N o S en el átomo de carbono adyacente a otro heteroátomo. Por lo tanto, por ejemplo, en el anillo: no hay -OHs unidos directamente a los carbonos marcados 2 y 5. También se debe observar que las formas tautoméricas tales como, por ejemplo, los restos: se consideran equivalentes en ciertas modalidades de la presente invención. "Alquinilalquilo" significa un grupo alquinil-alquilo- en el cual el alquinilo y al alquilo son según se describió anteriormente. Los alquinilalquilos preferidos contienen un alquinilo inferior y un grupo alquilo inferior. El enlace al resto progenitor es a través del aiquilo. Ejemplos no iimiíativos de grupos adecuados alquinilalquilo incluyen propargilmetilo.
"Heteroaralquilo" significa un grupo heteroaril-aiquilo- en el cual el heteroarilo y alquilo son según se describieron anteriormente. Los heteroaralquilos preferidos contienen un grupo alquilo inferior. Ejemplos no limitativos de grupos aralquilo adecuados incluyen piridilmetilo, y quinolin-3-ilmetilo. El enlace al resto progenitor es a través del alquilo. "Hidroxialquilo" significa un grupo HO-alquilo- en el cual el alquilo es según se definió anteriormente. Hidroxialquilos preferidos contienen alquilo inferior. Ejemplos no limitativos de grupos hidroxialquilo adecuados incluyen hidroximetilo y 2-hidroxietilo. "Acilo" significa un grupo H-C(O)-, alquil-C(O)- o cicloalquil-C(O)-, en los cuales los diversos grupos son según se describieron anteriormente. El enlace al resto progenitor se realiza a través del carbonilo. Los acilos preferidos contienen un alquilo inferior. Ejemplos no limitativos de grupos acilo adecuados incluyen formilo, acetllo y propanoilo. "Aroilo" significa un grupo aril-C(O)- en el cual el grupo arilo es según se describió anteriormente. El enlace al resto progenitor es a través del carbonilo. Ejemplos no limitativos de grupos adecuados incluyen benzoilo y 1-y 2-naftoilo. "Alcoxi" significa un grupo alquil-O- en el cual el grupo alquilo es según se describió anteriormente. Ejemplos no limitativos de grupos alcoxi adecuados incluyen metoxi, etoxi, n-propox¡, isopropoxi y n-butox¡. El enlace al resto progenitor es a través del oxígeno del éter.
"Ariloxi" significa un grupo aril-O- en el cual el grupo arilo es según se describió anteriormente. Ejemplos no limitativos de grupos ariloxi adecuados incluyen fenoxi y naftoxi. El enlace al resto progenitor es a través del oxígeno del éter. "Aralquiloxi" significa un grupo aralquil-O- en el cual el grupo aralquilo es según se describió anteriormente. Ejemplos no limitativos de grupos aralquiloxi adecuados incluyen benciloxi y 1- o 2-naftaIenmetoxi. El enlace al resto progenitor es a través de del oxígeno del éter. "Alquiltio" significa un grupo alquil-S- en el cual el grupo alquilo es según se describió anteriormente. Ejemplos no limitativos de grupos alquiltio adecuados incluyen metiltio y etiltio. El enlace al resto progenitor es a través del azufre. "Ariltio" significa un grupo aril-S- en el cual el grupo arilo es según se describió anteriormente. Ejemplos no limitativos de grupos ariltio adecuados incluyen feniltio y naftiltio. El enlace al resto progenitor es a través del azufre. "Aralquiltio" significa un grupo aralquil-S- en el cual el grupo aralquilo es según se describió anteriormente. Un ejemplo no limitativo de un grupo aralquiltio adecuado es benciltio. El enlace al resto progenitor es a través del azufre. "Alcoxicarbonilo" significa un grupo alquil-O-CO-. Ejemplos no limitativos de grupos alcoxicarbonilo adecuados incluyen metoxicarbonilo y etoxicarbonilo. El enlace al resto progenitor es a través del carbonilo.
"Ariioxicarbonilo" significa un grupo aril-O-C(O)-. Ejemplos no limitativos de grupos ariioxicarbonilo adecuados incluyen fenoxicarbonilo y naftoxicarbonilo. El enlace al resto progenitor es a través del carbonita. "Aralcoxicarbonilo" significa un grupo aralquiI-O-C(O)-. Un ejemplo no limitativo de un grupo aralcoxicarbonilo adecuado es benciloxicarboniio. El enlace al resto progenitor es a través del carbonilo. "Alquilsulfonilo" significa un grupo alquil-S(02)-. Los grupos preferidos son aquéllos en los cuales el grupo alquilo es alquilo inferior. El enlace al resto progenitor es a través del sulfonilo. "Arilsulfonilo" significa un grupo aril-S(02)-. El enlace al resto progenitor es a través del sulfonilo. El término "sustituido" significa que uno o más hidrógenos en el átomo indicado se reemplaza con una selección del grupo indicado, siempre que no se exceda la valencia normal del átomo designado bajo las circunstancias existentes, y que la sustitución genere un compuesto estable. Se permiten combinaciones de sustituyentes y/o variables solamente si dichas combinaciones producen compuestos estables. Se entiende por "compuesto estable" o "estructura estable" un compuesto que es lo suficientemente resistente como para sobrevivir el aislamiento a un grado útil de pureza de una mezcla de reacción, y formulación en un agente terapéutico eficaz. El término "sustituido opcionalmente" significa una sustitución opcional con los grupos, radicales o ésteres especificados.
El término "aislado" o "forma aislada" para un compuesto se refiere al estado físico de dicho compuesto después de que se aisla de un proceso sintético o fuente natural o combinación de los mismos. El término "purificado" o "en forma purificada" para un compuesto se refiere al estado físico de dicho compuesto después de que se obtuvo de un proceso o procesos de purificación que se describieron en la presente o conocidos para los expertos en la técnica, en una pureza suficiente para que puedan ser caracterizados mediante técnicas analíticas estándar descritas en la presente o conocidas para los expertos. También se debe observar que se asume que cualquier carbono, al igual que heteroátomo con valencias no satisfechas en el texto, esquemas, ejemplos y Cuadros en la presente posee la cantidad suficiente de átomos de hidrógeno para satisfacer las valencias. Cuando un grupo funcional en un compuesto se denomina "protegido", esto significa que el grupo se encuentra en forma modificada para evitar las reacciones secundarias no deseadas en el sitio protegido cuando se somete el compuesto a una reacción. Aquellos de experiencia ordinaria en la técnica reconocerán los grupos protectores adecuados, al igual que mediante la referencia a libros de texto estándar, tales como por ejemplo, T. W. Greene et al, Protective Groups in Organic Synthesis (1991 ), Wiley, New York. Cuando se presenta cualquier variable (por ejemplo, arilo, heterociclo, R2) más de una vez en cada constituyente o en Fórmula I, su definición en cada aparición es independiente de su definición en cada otra aparición. Según se emplea en la presente, el término "composición" pretende incluir un producto que comprende los componentes específicos en las cantidades específicas, al igual que cualquier producto que surja, directa o indirectamente, de la combinación de los componentes especificados en las cantidades especificadas. También se consideran en la presente profármacos, ásteres y solvatos de los compuestos de la invención. El término "profármaco", según se emplea en la presente, denota un compuesto que es un precursor de fármaco que, al administrarlo a un sujeto, sufre una conversión química mediante procesos metabólicos o químicos para dar un compuesto de Fórmula I o una sal y/o solvato del mismo. Se provee una discusión de profármacos en T. Higuchi y V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems (1987) Volumen 14 de la A.C.S. Symposium Series, y en Bioreversible Carriers In Drug Design, (1987) Edward B. Roche, ed., American Pharmaceutical Association y Pergamon Press, las cuales se incorporan, ambas, a la presente a modo de referencia. "Solvato" significa una asociación física de un compuesto de la presente invención con una o más moléculas de solvente. Esta asociación física comprende grados variables de unión iónica y covalente, incluyendo la unión por puente de hidrógeno. En ciertas instancias, se podrá aislar el solvato, por ejemplo cuando una o más moléculas del solvente se incorporan en el reticulado del cristal del sólido cristalino. "Solvato" comprende tanto fase solución como solvatos aislables. Ejemplos no limitativos de solvatos adecuados incluyen etanolatos, metanolatos y similares. "Hidrato" es un solvato en el cual la molécula de solvente es H20. "Cantidad efectiva" o "cantidad terapéuticamente efectiva" pretenden describir una cantidad de compuesto o una composición de la presente invención efectiva para inhibir las enfermedades deseadas y así producir el efecto terapéutico, de alivio, inhibidor o preventivo deseado. Los compuestos de Fórmula I pueden formar sales que también se encuentran dentro del alcance de la presente invención. Se entiende que la referencia a un compuesto de Fórmula I en la presente incluye la referencia a sus sales, salvo que se indique lo contrario. El término "sal(es)", según se emplea en la presente, denota sales de ácidos formadas con ácidos inorgánicos y/u orgánicos, al igual que sales de bases formadas con bases inorgánicas y/u orgánicas. Además, cuando un compuesto de Fórmula I contiene tanto un resto básico, tal como, pero sin limitación, piridina o imidazol, como un resto ácido, tal como, pero sin limitación, un ácido carboxílico, se pueden formar zwiteriones ("sales internas") y se incluyen dentro del término "sal(es)" según se emplea en la presente. Se prefieren las sales aceptables para uso farmacéutico (es decir, no tóxicas, aceptables fisiológicamente), aunque también sean útiles otras sales. Se pueden formar sales de los compuestos de Fórmula I, por ejemplo, haciendo reaccionar un compuesto de Fórmula I con una cantidad de ácido o base, tal como una cantidad equivalente, en un medio, tal como uno en el cual la sal se precipita o en un medio acuoso seguido de liofilización. Sales de adición con ácidos que sin en de ejemplo incluyen acetatos, ascorbatos, benzoatos, bencensulfonatos, bisulfatos, boratos, butiratos, citratos, canforatos, canforsulfonatos, fumaratos, clorhidratos, bromhidratos, yodhidratos, lactatos, maléalos, metansulfonatos, naftalensulfonatos, nitratos, oxalatos, fosfatos, propionatos, salicilatos, succinatos, sulfates, tartratos, tiocianatos, toluensulfonatos (también conocidos como tosilatos) y similares. Adicionalmente, se tratan ácidos que en general son considerados adecuados para la formación de sales útiles para uso farmacéutico de compuestos farmacéuticos básicos, por ejemplo, por P. Stahl et al, Camille G. (eds.) Handbook of Pharmaceutlcal Salts. Properties, Selection and Use. (2002) Zurich: Wiley-VCH; S. Berge et al, Journal of Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1) 1-19; P. Gould, International J. of Pharmaceutics (1986) 33 201-217; Anderson et al, The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, New York; y en The Orange Book (Food & Drug Administration, Washington, D.C. en su sitio en Internet). Estas revelaciones se incorporan a modo de referencia a la misma. Sales de bases que sirven de ejemplo incluyen sales de amonio, sales de metales alcalinos tales como sales de sodio, litio y de potasio, sales de metales alcalinotérreos tales como sales de calcio y magnesio, sales con bases orgánicas (por ejemplo, aminas orgánicas) . tales como diciclohexilaminas, t-butil aminas, y sales con aminoácidos tales como arginina, lisina y similares. Grupos básicos que contienen nitrógeno se pueden cuaternizar con agentes tales como haluros de alquilo inferior (por ejemplo cloruros, bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo y butilo), dialquil sulfatos (por ejemplo, sulfatos de dimetilo, dietilo y dibutilo), haluros de cadena larga (por ejemplo cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo y estearilo), haluros de aralquilo (por ejemplo bromuros de bencilo y fenetilo), y otros. Todas las mencionadas sales de ácidos y sales de bases deben ser sales aceptables para uso farmacéutico dentro del alcance de la invención y todas las sales de ácidos y bases se consideran equivalentes a las formas libres de los compuestos correspondientes a los fines de la invención. Uno o más compuestos de la invención también pueden existir como, o convertirse opcionalmente en, un solvato. La preparación de los solvatos es generalmente conocida. Así, por ejemplo, M. Caira et al, J. Pharmaceutical Sci., 93(3), 601-611 (2004) describe la preparación de los solvatos del antifúngico fluconazol en acetato de etilo, al igual que de agua. Preparaciones similares de solvatos, hemisolvatos, hidratos y similares son descriptas por E. C. van Tonder et al, AAPS PharmSciTech., 5(1), artículo 12 (2004); y A. L. Bingham et al, Chem. Commun., 603-604 (2001 ). Un proceso típico, no limitativo, comprende disolver el compuesto de la invención en cantidades deseadas del solvente deseado (orgánicos o de agua o mezclas de los mismos) a una temperatura mayor que la ambiente, y enfriar la solución a una velocidad suficiente como para formar cristales que luego se aislan por métodos estándar. Técnicas analíticas tales como, por ejemplo, espectroscopia I.R., muestran la presencia del solvente (o agua) en los cristales como un solvato (o hidrato). Compuestos de Fórmula I, y sales, solvatos, ésteres y pro-fármacos de los mismos, pueden existir en su forma tautomérica (por ejemplo, como una amida o imino éter). En la presente, se consideran todas dichas formas tautoméricas como parte de la presente invención. Todos los estereoisómeros (por ejemplo isómeros geométricos, isómeros ópticos y similares) de los presentes compuestos (incluyendo aquéllos de las sales, solvatos y profármacos de los compuestos, al igual que las sales y solvatos de los profármacos), tales como aquéllos que pueden existir debido a los carbonos asimétricos en varios sustituyentes, incluyendo formas enantioméricas (que pueden existir aún en ausencia de carbonos asimétricos), formas rotaméricas, atropoisómeros y formas diastereoméricas, se consideran dentro del alcance de la presente invención, como lo son los isómeros de posición (tales como, por ejemplo, 4-piridilo y 3-piridilo). Los esteroisómeros individuales de los compuestos de la invención pueden, por ejemplo, no poseer en esencia otros isómeros, o pueden estar combinados, por ejemplo, como racematos con todos los demás, u otros estereoisómeros seleccionados. Los centros quirales de la presente invención pueden poseer la configuración S o R, según lo definido por las Recomendaciones de IUPAC 1974. Se pretende que el uso de los términos "sal", "solvato" "profármaco" y similares, se aplique igualmente a la sal, solvato y profármaco de enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautomeros, isómeros de posición, racematos o profármacos de los compuestos de la invención. Se pretende incluir las formas polimórficas de los compuestos de Fórmula 1 y de las sales, solvatos y profármacos de los compuestos de Fórmula 1 en ía presente invención. En general, las flechas — y — — de las Fórmulas estructurales de la presente solicitud se refieren a los respectivos puntos de conexión de la Fórmula relacionada con los puntos que se muestran en la estructura de su Fórmula progenitora. En una modalidad, la presente invención revela compuestos de Fórmula 1 como inhibidores de proteasa de VHC, en especial la serina proteasa NS3/NS4a de VHC, o un derivado aceptable para uso farmacéutico del mismo, donde las diversas definiciones se dieron anteriormente. En otra modalidad, R1 es cetoamida, ácido, cetoácido, cetoéster, cetoaldehído, dicetona, ácido borónico o trifluorocetona. En otra modalidad, la presente invención revela compuestos de Fórmula 1 en los cuales la porción de la Fórmula estructural 1 representada por la Fórmula estructural 2: Fórmula 2 es donde las flechas — y — se refieren a puntos de conexión de la Fórmula 2 con los puntos que se muestran en la Fórmula 1 , y G y J pueden o no encontrarse presentes inmediatamente y si se encuentran presentes pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan independientemente del grupo que consiste en (CH2)P, (CHR)P, (CHR-CHR')P Y (CRR ; A y M pueden o no encontrarse presentes inmediatamente y si se encuentran presentes pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan independientemente del grupo que consiste en O, S, S(02), N(R), (CH2)P, (CHR)p, (CHR-CHR')p, y (CRR')P; o A y M están unidos para formar un puente cicloalquilo o heterocíclico; y Q puede o no encontrarse presente y si se encuentra presente es (CH2)P, N(R), O, S, S(02), (CHR)P o (CRR . Cuando Q se encuentra ausente, y cualquiera de M o A se encuentra ausente, el A o M restante (presente) puede formar opcionalmente una estructura de cicloalquilo o heterociclilo con el carbono C(R) o C(R') de la Fórmula I. Algunos ejemplos representativos se muestran en algunas de las siguientes estructuras.
En una modalidad de la presente invención, la porción representada por la Fórmula estructural 2 se selecciona de las siguientes estructuras: en las cuales n= 0-4.
En otra modalidad de la presente invención, la porción de la Fórmula estructural 1 representada por la Fórmula estructural 2 se selecciona de las siguientes estructuras: En otra modalidad de la presente invención, la porción de la Fórmula estructural 1 representada por la Fórmula estructural 2 se selecciona de las siguientes estructuras: en las cuales X' es H, F, Cl o Br. En aún otra modalidad de la presente invención, la porción de la Fórmula estructural 1 representada por la Fórmula estructural 2: Fórmula 2 Q puede estar presente o ausente, y si Q se encuentra ausente, M está unida directamente a A. En aún otra modalidad de la presente invención, la porción de la Fórmula estructural 1 representada por la Fórmula estructural 2 se selecciona de las siguientes estructuras: En otro aspecto de la presente invención, la porción de la Fórmula estructural 1 representada por la Fórmula estructural 2: Fórmula 2 En aún otro aspecto de la presente invención, la porción de la Fórmula estructural 1 representada por la Fórmula estructural 2 se selecciona de las siguientes estructuras: En otro aspecto más de la presente invención, la porción de la Fórmula estructural 1 representada por la Fórmula estructural 2 se selecciona de las siguientes estructuras: En aún otro aspecto de la presente invención, la porción de la Fórmula estructural 1 representada por la Fórmula estructural 2: Fórmula 2 es R20 se selecciona de las siguientes estructuras: En otro aspecto de la presente invención, la porción de la Fórmula estructural 1 representada por la Fórmula estructural 2: Fórmula 2 es R21 y R pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan independientemente del grupo que consiste en las siguientes estructuras: En otro aspecto de la presente invención, L y M se encuentran ausentes, y J está unido directamente a E. En otro aspecto de la presente invención, L, J y M se encuentran ausentes y E está unido directamente a N. En otro aspecto de la presente invención, G y M se encuentran ausentes.
En aún otro aspecto de la presente invención, M' En aún otro aspecto de la presente invención, X se selecciona del grupo que consiste en las siguientes estructuras: y R es alquilo, cicloalquilo, carbamato o urea; y n= 0-5. En aún otro aspecto de la presente invención, X se selecciona del grupo que consiste en las siguientes estructuras: En aún otro aspecto de la presente invención, R1 es una cetoamida, cetoaldehído, dicetona, cetoácido o cetoéster. En otra modalidad de la presente invención, R1 es -C(0)C(0)NR9R10; R9 es H; y R10 es H, -R14, -[CH(R1')]pC(0)OR11, -[CH(R1')] pC(0)NR 2R13, -[CH(R1')]pS(02)R11, -[CH(R1')]pS(02)NR12R13, -[CH(R ')]pC(0)R11, -CH(Rr)C(0)N(H)C(H)(R2')C(0)OR11, -CH(R1')C(0)N(H)CH(R2')C(0)NR12R13, o -CH(Rr)C{0)N(H)CH(R2')(R'). En otra modalidad de la presente invención, R10 es H, -R 4, -CH(R ')C(0)OR11, -CH(R1')CH(R ')C(0)OR11, -CH(R1')C(0)NR 2R13, -CH(R1')CH(R )C(0)NR12R13, -CH(R1')CH(R1')S(02)R11, -CH(R1')CH(R1')S(02)NR 2R13, -CH(R1')CH(R1')C(0)R11, -CH(R )C(0)N(H)CH(R2')C(0)OR11, -CH(R )C(0)N(H)CH(R2')C(0)NR 2R13J o -CH(R ')C(0)N(H)CH(R2')(R') ; Rr es H o alquilo; y R2' es fenilo, fenilo sustituido, fenilo sustituido con heteroátomos, cicloalquid lo, heterocicloalquilo, piperidilo o piridilo. En otra modalidad de la presente invención, R es H. En aún otra modalidad de la presente invención, R1 es H, metilo, etilo, alilo, fer-butilo, bencilo, a-metilbencilo, a,a-d¡metilbencilo, metilciclopropilo o 1-metilciclopentilo; es hidroximetilo o -CH2C(0)NR 2R13; R2 se selecciona independientemente del grupo que consiste las siguientes estructuras: ?? las cuales U1 y U2 pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan independientemente del grupo conformado por: H, F, -CH2C(0)OH, -CH2C(0)OMe, -CH2C(0)NH2> -CH2C(0)NHMe, -CH2C(0)NMe2, azido, amino, hidroxilo, amino sustituido e hidroxilo sustituido; U3 y U4 son iguales o diferentes y son independientemente O o S; U5 es alquil sulfonilo, aril sulfonilo, heteroalqull sulfonilo, heteroaril sulfonilo, alquil carbonilo, aril carbonilo, heteroalqull carbonilo, heteroaril carbonilo, alcoxlcarbonilo, ariloxicarbonilo, heteroariloxicarbonilo, alquilaminocarbonilo, arilaminocarbonilo, o heteroarilaminocarbonilo o una combinación de los mismos; NR12R13 se selecciona del grupo conformado por: /-NH2( |— NHMe. _¾_"l2-CH3 -N(Me)O e.
U6 es H, OH, o CH2OH, y R14 se selecciona del grupo conformado por: H, -CH3, Et, n-propilo, metoxi, ciclopropilo, p-butilo, 1-but-3-inilo, bencilo, cc-metilbencilo, fenetilo, alilo, 1-but-3-enilo, -OCH3 y ciclopropilmetilo. En aún otra modalidad de la presente invención, R1 se selecciona de las siguientes estructuras: En otro aspecto de ia presente invención, D y X tomados juntos forman una cadena conectora parafínica no ramificada de C7-C12 divalente que forma una porción de un macrociclo de 14-19 miembros. En otro aspecto de la presente invención, D y X tomados juntos forman una cadena conectora parafínica no ramificada de C8 o C9 que forma una porción de un heterociclo de 15 ó 16 miembros. En otro aspecto de la presente invención, D y X tomados juntos forman una cadena conectora olefínica no ramificada de C7-C12 divalente que forma una porción de un macrociclo de 14- 9 miembros que posee un grado simple de insaturación. En otro aspecto de la presente invención, D y X tomados juntos forman una cadena conectora olefínica de C8 o C9 no ramificada que forma una porción de un heterociclo de 15 ó 16 miembros que posee un grado simple de insaturación. En otro aspecto de la presente invención, D y X tomados juntos forman una cadena alifática no ramificada C2-C 2 divalente que forma una porción de un heterociclo de 9-19 miembros.
En otro aspecto de la presente invención, D se selecciona de las siguientes estructuras: En aún otro aspecto de la presente invención, la porción de la Fórmula 1 representada por se selecciona de las siguientes estructuras: En otra modalidad de la presente invención, Z' se selecciona del grupo conformado por: En otra modalidad de la presente invención, W es C=0. En otra modalidad de la presente invención, Z es N. En otra modalidad de la presente invención, Y se selecciona de restos: en los cuales Y es CF3, N02> C(0)NH2, OH, NH2 o C(0)OH; e Y18 es F o C(0)OH. En aún otra modalidad de la presente invención, Y se selecciona del grupo que consiste en las siguientes estructuras: en las cuales Y es CF3, N02, C(0)NH2, OH, NH2 o C(0)OH; e Y18 es F o C(0)OH. En aún otra modalidad de la presente invención, Y se selecciona del grupo que consiste en las siguientes estructuras: En aún otra modalidad de la presente invención, Y se selecciona del grupo que consiste en las siguientes estructuras: W es N o O; R23 es H, alquilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilo o heterocicloalquilo, donde cada uno de dichos arilo, heteroarilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo puede estar sustituido con un resto alquilo; R24 es H, alquilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilo o heterocicloalquilo, donde cada uno de dichos arilo, heteroarilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo puede estar sustituido con un resto alquilo; o R23 y R24 tomados juntos forman un anillo cíclico que contiene un carbociclo o heterociclo; R25 es H, alquilo, heteroalquilo, arilo, heteroarilo, alquilamino, arilamino, heteroalquilamino o cicloalquilo, R26 se selecciona del grupo conformado por: H, carbamato, sulfonamidas, alquilcarbonilo, alquiisulfonilo, ariisulfonilo, heteroarilo, sulfonilo, heteroalquilsulfonilo, ariloxicarbonilo, heteroalcoxicarbonilo, heteroariloxicarbonilo, alquilaminocarbonilo, arilaminocarbonilo y urea; R27 es H, alquilo, cicloalquilo, arilo o heteroariio; R28 es H, alquilo, heteroalquilo, arilo o heteroariio; y X'-O- es un éter, éster o carbamato. En aún otra modalidad de la presente invención: (a) la porción de la Fórmula 1 representada por la Fórmula estructural 2: (c) Z' está representado por cualquiera de (i), (ii) o (iii) que se muestran a continuación: (i) Fórmula A en la cual: R44 se selecciona del grupo conformado por: donde R se selecciona de metilo, etilo, isopropilo, ter-butilo y fenilo; Fórmula B donde R se selecciona del grupo conformado por: Fórmula C en la cual el anillo sulfona está sustituido opcionalmente con alquilo y cicloalquilo; y la porción de la Fórmula 1 representada por selecciona de las siguientes estructuras: n= O a 3. Además, los siguientes compuestos son representativos limitativos de modalidades de la presente invención: En aún otro aspecto más de la Invención, se provee una composición farmacéutica que comprende como componente activo un compuesto de Fórmula 1 que es para emplear en el tratamiento de trastornos asociados con el VHC. La composición en general incluiría un vehículo aceptable para uso farmacéutico. La composición puede contener uno o más agentes adicionales, tales como por ejemplo, un agente antiviral, un interferón o un interferón pegilado y similares. Un agente antiviral preferido es ribavirin y un interferón preferido es a-interferón. Un método para tratar trastornos relacionados con la proteasa del VHC comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento cantidades terapéuticamente efectivas de un compuesto de Fórmula 1 , o una composición farmacéutica que comprende cantidades terapéuticamente efectivas de un compuesto de Fórmula 1. La administración puede ser oral o subcutánea. Los compuestos de Fórmula 1 se pueden emplear para la fabricación de un medicamento para tratar trastornos asociados con la proteasa del VHC, comprendiendo el método, por ejemplo, poner en contacto íntimo un compuesto de Fórmula 1 con un vehículo aceptable para uso farmacéutico. Este y otros aspectos de la invención, se describen en mayor detalle a continuación. En modalidades descritas anteriormente, la presente invención revela compuestos de Fórmula 1 como inhibidores de la proteasa del VHC, en especial la serlna proteasa NS3/NS4a del VHC, o un derivado aceptable para uso farmacéutico de la misma, donde las diversas definiciones se dieron anteriormente. En otra modalidad, la presente invención provee composiciones farmacéuticas que comprenden péptidos de la invención como componente activo. Las composiciones farmacéuticas, en general, comprenden adicionalmente un diluyente del vehículo, excipiente o vehículo (denominado colectivamente en la presente como materiales vehículo). Debido a su actividad inhibidora del VHC, dichas composiciones farmacéuticas poseen utilidad en el tratamiento de la hepatitis C y trastornos relacionados. La actividad inhibidora del VHC también puede conducir al uso de los compuestos y/o composiciones de la invención para tratar enfermedades (por ejemplo, SIDA, etc.) que están asociadas o conectadas con el HVC. En aún otra modalidad, la presente invención revela métodos para preparar composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos de la invención como componente activo. En las composiciones farmacéuticas y métodos de la presente invención, los componentes activos se administrarán de manera típica en combinación con materiales vehículo adecuados seleccionados adecuadamente con relación a la forma en que se pretenden administrar, es decir comprimidos orales, cápsulas (ya sea rellenas con sólido, rellenas con semisólido o rellenas con líquido), polvos para reconstitución, geles orales, elíxires, gránulos dispersables, jarabes, suspensiones y similares y de manera consistente con las prácticas farmacéuticas convencionales. Por ejemplo, para la administración oral en forma de comprimidos o cápsulas, el componente fármaco activo se puede combinar con cualquier vehículo inerte no tóxico, oral, aceptable para uso farmacéutico, tal como lactosa, almidón, sacarosa, celulosa, estearato de magnesio, fosfato dicálcico, sulfato de calcio, talco, manitol, alcohol etílico (formas líquidas) y similares. Además, también se puede incorporar en la mezcla aglutinantes, lubricantes, agentes desintegrantes y agentes colorantes adecuados, cuando se desee o sea necesario. Los polvos y comprimidos pueden estar compuestos por alrededor de 5 a alrededor de 95 por ciento de la composición de la invención. Los aglutinantes adecuados incluyen almidón, gelatina, azúcares naturales, edulcorantes de maíz, gomas naturales y sintéticas, tales como acacia, alginato de sodio, carboximetilcelulosa, polietilenglicol y ceras. Entre los lubricantes, se pueden mencionar para el uso en estas formas de dosificación, el ácido bórico, benzoato sódico, acetato de sodio, cloruro de sodio y similares. Los desintegrantes incluyen almidón, metilcelulosa, goma guar y similares. También se pueden incluir agentes edulcorantes y saborizantes y conservantes, cuando sea adecuado. A continuación se tratan en mayor detalle algunos de los términos que se indicaron anteriormente, a saber desintegrantes, diluyentes, lubricantes, aglutinantes y similares. Además, las composiciones de la presente invención se pueden formular en forma de liberación sostenida para proveer la velocidad de liberación controlada de cualquiera o más de los componentes o componentes activos para optimizar los efectos terapéuticos, es decir la actividad inhibitoria de VHC, y similares. Las formas de dosificación adecuadas para la liberación sostenida incluyen comprimidos en capas que contienen capas de velocidades variables de desintegración o matrices poliméricas de liberación controlada impregnadas con los componentes activos y en forma de comprimido o cápsulas que contienen dichas matrices poliméricas impregnadas o porosas encapsuladas. Las preparaciones en forma líquida incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones. Como ejemplo, se puede mencionar agua o soluciones de agua-propilenglicol para inyecciones parenterales o el agregado de edulcorantes y opacantes para soluciones, suspensiones y emulsiones orales. Las preparaciones en forma líquida también pueden incluir soluciones para administración intranasal. Las preparaciones en aerosol adecuadas para inhalación pueden incluir soluciones y sólidos en polvo, que pueden estar combinados con un vehículo aceptable para uso farmacéutico tal como gas comprimido inerte, por ejemplo nitrógeno. Para la preparación de supositorios, en primer lugar se funde una cera de bajo punto de fusión tal como una mezcla de glicéridos de ácidos grasos tales como manteca de cacao y se dispersa el componente activo de manera homogénea en la misma mediante agitación o mezclado similar. Luego, la mezcla homogénea fundida se vierte en moldes de tamaño conveniente, se deja enfriar y por consiguiente solidificar.
También se incluyen preparaciones en forma sólida destinadas a transformarse, poco antes del uso, en preparaciones en forma líquida, ya sea para administración oral o parenteral. Tales formas líquidas incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones. Los compuestos de la invención se pueden administrar de manera transdérmica. Las composiciones transdérmicas pueden adoptar la forma de cremas, lociones, aerosoles y/o emulsiones y se pueden incluir en un parche transdérmico de tipo matriz o reservorio, según es convencional en la técnica con estos fines. Los compuestos de la invención también se pueden administrar por vía oral, intravenosa, intranasal o subcutánea. Los compuestos de la invención también pueden comprender preparaciones que se encuentran en una forma de dosificación unitaria. En tal forma, la preparación se subdivide en dosis unitarias de tamaño adecuado que contiene cantidades adecuadas de los componentes activos, por ejemplo una cantidad efectiva para lograr el propósito deseado. La cantidad de la composición activa de la invención en una dosis unitaria de preparación, en general, se puede variar o regular de alrededor de 1.0 miligramo a alrededor de 1,000 miligramos, con preferencia de alrededor de 1.0 a alrededor de 950 miligramos, con mayor preferencia de alrededor de 1.0 a alrededor de 500 miligramos, y típicamente de alrededor de 1 a alrededor de 250 miligramos, de acuerdo con la aplicación en particular. La dosis real empleada se puede variar dependiendo de la edad del paciente, sexo, peso y gravedad de la afección que se somete a tratamiento. Tales técnicas son conocidas para aquellos expertos en la técnica. En general, la forma de dosificación oral de seres humanos que contiene los componentes activos se puede administrar 1 o 2 veces por día. La cantidad y frecuencia de administración se regulará de acuerdo con el criterio del médico que asiste. Un régimen de dosificación diario que se recomienda, en general, para administración oral puede oscilar de alrededor de 1.0 miligramo a alrededor de 1,000 miligramos por día, en dosis únicas o divididas. A continuación, se describen algunos términos útiles: Cápsula - se refiere a un envase especial o envoltura hecho de metilcelulosa, alcoholes polivinílicos o gelatinas o almidón desnaturalizados para retener o contener composiciones que comprenden los componentes activos. Las cápsulas de cobertura dura se preparan típicamente de mezclas de gelatinas de piel y hueso porcino con resistencia de gel relativamente alta. La cápsula misma puede contener pequeñas cantidades de colorantes, agentes opacantes, plastificantes y conservantes. Comprimido - se refiere a una forma de dosificación sólida comprimida o moldeada que contiene componentes activos con diluyentes adecuados. El comprimido se puede preparar mediante la compresión de mezclas o granulaciones que se obtienen mediante granulación húmeda, granulación seca o mediante compactación. Gel oral - se refiere a componentes activos dispersos o solubilizados en una matriz hidrofílica semisólida.
El polvo para reconstitución se refiere a mezclas de polvo que contienen los componentes activos y diluyeníes adecuados que se pueden suspender en agua o jugos. Diluyente - se refiere a sustancias que usualmente componen la mayor parte de la composición o forma de dosificación. Los diluyentes adecuados incluyen azúcares, tales como lactosa, sacarosa, manitol y sorbitol; almidones derivados de trigo, maíz, arroz y papa; y celulosas tales como celulosa microcristalina. La proporción de diluyente en la composición puede oscilar de alrededor de 10 a alrededor de 90% en peso de la composición total, con preferencia de alrededor de 25 a alrededor de 75%, con mayor preferencia de alrededor de 30 a alrededor de 60% en peso, aún con mayor preferencia de alrededor de 12 a alrededor de 60%. Desintegrante - se refiere a materiales agregados a la composición para ayudar a separarla (desintegrarla) y liberar los medicamentos. Los desintegrantes adecuados incluyen almidones; almidones modificados "solubles en agua fría" tales como carboximetilalmidón sódico; gomas naturales y sintéticas tales como algarroba, karaya, guar, tragacanto y agar; derivados de celulosa tales como metilcelulosa y carboximetilcelulosa sódica; celulosas microcristalinas y celulosas reticuladas microcristalinas tales como croscarmelosa sódica; alginatos tales como ácido algínico y alginato sódico; arcillas tales como bentonitas; y mezclas efervescentes. La proporción de desintegrante en la composición puede variar de alrededor de 2 a alrededor de 15% en peso de la composición, con mayor preferencia de alrededor de 4 a alrededor de 10% en peso. Aglutinante - se refiere a sustancias que aglutinan o "adhieren" polvos entre sí y los hacen cohesivos mediante la formación de gránulos, sirviendo por consiguiente como "adhesivo" de la formulación. Los aglutinantes agregan fuerza de cohesión que ya se encuentra disponible en el diluyente o ei agente de relleno. Los aglutinantes adecuados incluyen azúcares tales como sacarosa; almidones derivados de trigo, arroz y papa; gomas naturales tales como acacia, gelatina y tragacanto; derivados de algas marinas tales como ácido algínico, alginato sódico y alginato de calcio y amonio; materiales celulósicos, tales como metilcelulosa y carboximetilcelulosa sódica e hidroxipropilmetilcelulosa; polivinilpirrolidona; e inorgánicos tales como silicato de magnesio y aluminio. La proporción de aglutinante en la composición puede variar de alrededor de 2 a alrededor de 20% en peso de la composición, con mayor preferencia de alrededor de 3 a alrededor de 10% en peso, aún más preferentemente de alrededor de 3 a alrededor de 6% en peso. Lubricante - se refiere a una sustancia agregada a la forma de dosificación para permitir que el comprimido, gránulos, etc. después de comprimidos se liberen del molde o matriz reduciendo la fricción o el desgaste. Los lubricantes adecuados incluyen estearatos metálicos tales como estearato de magnesio, estearato de calcio o estearato de potasio; ácido esteárico; ceras de punto de fusión elevado; y lubricantes solubles en agua tales como cloruro de sodio, benzoato de sodio, acetato de sodio, oleato de sodio, polietilenglicoles y d'l-leucina. En general, los lubricantes se agregan en el último paso antes de la compresión, ya que deben encontrarse presentes en las superficies de los gránulos y entre estos y las partes de la prensa de comprimidos. La proporción de lubricante en la composición puede oscilar de alrededor de 0.2 a alrededor de 5% en peso de la composición, con preferencia de alrededor de 0.5 a alrededor de 2%, con mayor preferencia de alrededor de 0.3 a alrededor de 1.5% en peso. Deslizante - material que previene la aglomeración y mejora las características de fluencia de las granulaciones, de manera que el flujo sea fluido y uniforme. Los deslizantes adecuados incluyen dióxido de silicio y talco. La proporción de deslizante en la composición puede variar de alrededor de 0.1% a alrededor de 5% en peso de la composición total, con preferencia de alrededor de 0.5 a alrededor de 2% en peso. Agentes colorantes - excipientes que proveen coloración a la composición o a la forma de dosificación. Tales excipientes incluyen colorantes de grado alimenticio y colorantes de grado alimenticio absorbidos en un absorbente adecuado tales como arcilla u óxido de aluminio. La proporción de agente colorante puede variar de alrededor de 0.1 a alrededor de 5% en peso de la composición, con preferencia de alrededor de 0.1 a alrededor de 1%. Biodisponibilidad - se refiere a la velocidad y medida en que el componente activo del fármaco o resto terapéutico es absorbido en la circulación sistémica a partir de una forma de dosificación administrada en comparación con un patrón o control. Se conocen métodos convencionales para preparar comprimidos. Tales métodos incluyen métodos secos tales como compresión directa y compresión de granulación producida mediante compactación, o métodos húmedos u otros procedimientos especiales. También son conocidos métodos convencionales para preparar otras formas de administración tales como, por ejemplo, cápsulas, supositorios y similares. Otra modalidad de la invención revela el uso de las composiciones farmacéuticas reveladas anteriormente para tratar enfermedades tales como, por ejemplo, hepatitis C y similares. El método comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de la composición farmacéutica de la invención a un paciente que padece tal enfermedad o enfermedades y que necesita tal tratamiento. En aún otra modalidad, los compuestos de la invención se pueden emplear para el tratamiento del VHC en seres humanos a modo de monoterapia o a modo de terapia combinada (por ejemplo combinación doble, combinación triple, etc.) tal como, por ejemplo, en combinación con agentes antivirales y/o inmunomoduladores. Ejemplos de tales agentes antivirales y/o inmunomoduladores incluyen Ribavirin (de Schering-Plough Corporation, adison, New Jersey) y Levovirin™ (de ICN Pharmaceuticaís, Costa Mesa, California), VP 50406™ (de Viropharma, Incorporated, Exton, Pensilvania), ISIS 14803™ (de ISIS Pharmaceuticaís, Carlsbad, California), Heptazyme™ (de Ribozyme Pharmaceuticals, Boulder, Colorado), VX 497 I M (de Vértex Pharmaceuticals, Cambridge, Massachusetts), Thymosin™ (de SciClone Pharmaceuticals, San Mateo, California), Maxamine™ (Maxim Pharmaceuticals, San Diego, California), micofenolato mofetil (de Hoffman-LaRoche, Nutley, New Jersey), interferon (tales como, por ejemplo, interferón-alfa, conjugados PEG-interferón alfa) y similares. Los "conjugados PEG-interferón alfa" son moléculas de interferon alfa unidas covalentemente a una molécula de PEG. Conjugados ilustrativos PEG-interferón alfa incluyen el interferon alfa-2a (Roferon™, de Hoffman La-Roche, Nutley, New Jersey) en forma de interferon alfa-2a pegilado (por ejemplo, según se comercializa bajo la denominación comercial Pegasys™), interferon alfa-2b (Intron™, de Schering-Plough Corporation) en forma de interferon alfa-2b pegilado (por ejemplo, según se comercializa bajo la denominación comercial PEG-Intron™), interferon alfa-2c (Berofor Alfa™, de Boehringer Ingelheim, Ingelheim, Alemania) o interferon de consenso definido por determinación de una secuencia de consenso de interferones alfa naturales (Infergen™, de Amgen, Thousand Oaks, California). Según se expuso anteriormente, la invención incluye tautómeros, rotámeros, enantiómeros y también otros estereoisómeros de los compuestos de la invención. Por consiguiente, como podrá apreciar un experto en la técnica, algunos de los compuestos de la invención pueden existir en formas isoméricas adecuadas. Tales variaciones se consideran dentro del alcance de la invención.
Otra modalidad de la invención revela un método para preparar los compuestos que se revelan en la presente. Los compuestos se pueden preparar mediante varias técnicas conocidas en la técnica. Procedimientos ilustrativos que son representativos se destacan en los siguientes esquemas de reacción. La invención que se revela en la presente, se ejemplifica además mediante ejemplos preparativos y compuestos de ejemplo que no se deben considerar limitantes del alcance de la invención que se define en las reivindicaciones que se adjuntan. Serán evidentes rutas mecanísticas alternativas y estructuras análogas para aquellos expertos en la técnica. Se debe entender que mientras que aunque los siguientes esquemas ilustrativos describen la preparación de unos pocos compuestos representativos de la invención, la sustitución adecuada de cualquiera de los aminoácidos naturales o no naturales dará lugar a la formación de los compuestos deseados basados en dicha sustitución. Tales variaciones se consideran dentro del alcance de la invención. Para los procedimientos descriptos a continuación, se emplean las siguientes abreviaturas: AcOH: ácido acético ADDP: 1,r-(azodicarbobil)dipiperidina Boc significa t-butiloxi o ter-butiloxicarbonilo 'Bu, TBu o Bu1: ter-butilo Cbz: Benciloxicarbonilo Bop: Benzotriazol-1-il-oxi-tris(dimetilamino)hexafluorofosfato Bn o Bzl: Benci!o Bz: Benzoilo Chg: Ciclohexilglicina Cp: Ciclopentildienilo DC significa diclorometano; DCC: 1 ,3-diciclohexilcarbodiimida DEAD: Azodicarboxilato de dietilo DMAP: 4-N,N-dimetilaminopiridina DMF significa /V,A/-dimetilformamida; DMSO significa sulfóxido de dimetilo; EDCi: clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida; Et: Etilo; EtOAc significa acetato de etilo; Et20: Eter dietílico; HATU significa O-(7-azabenzotriazol-1-iI)-1, 1 ,3,3-tetrametiluronio; HOOBt: 3-hidroxi- ,2,3-benzotriazin-4(3r/)-ona; HOBt: N-hidroxibenzotriazol; iBoc: isobutoxicarbonilo; iPr: isopropilo; KHMDS significa hexametil disililamida de potasio; LiHMDS significa hexametildisilazida; Me: Metilo; MS significa espectrometría de masas; nBuLi significa n-butil litio; NMM significa N-metil morfolina; RMN significa resonancia magnética nuclear; Phg: Fenilglicina; Ph: Fenilo; Pd/C significa catalizador de paladio sobre carbón mineral; PyBrOP: hexafluorofosfato de bromo-ír/s-pirrolidinfosfonio; TBuNCO significa isocianato de t-butilo; TEMPO: 2,2,6, 6-tetrametil-1 -piperidiniloxi; THF significa tetrahidrofurano; THP significa tetrahidrofurano; TMSI significa yoduro de trimetil siiilo; T3N significa trietilamina; Ts: p-toluensulfonilo. Muchos de los intermediarios y/o ejemplos preparativos empleados en los siguientes procedimientos sintéticos han sido revelados en WO 01/77113; WO 01/081325; WO 02/08198; WO 02/08256; WO 02/08187; WO 02/08244; WO 02/48172; WO 02/08251 ; y solicitud pendiente de patente de E.U.A. No. de Serie 10/052.386, presentada el 18 de enero de 2002. Las revelaciones de aquellas solicitudes se incorporan en la presente a modo de referencia a las mismas.
Esquemas Preparativos Generales v Procedimientos para Ejemplos Preparativos ESQUEMA DE REACCION 1 ESQUEMA DE REACCION 2 ESQUEMA DE REACCION 3 Procedimientos para Ejemplos Preparativos EJEMPLO PREPARATIVO 1 Paso A 1 a 1b La síntesis de 1b se puede lograr mediante el uso del procedimiento de (1) Myers, A. G.; Gleason, J. L.; Yoon, T.; Kung, D. W.; J. Am. Chem. Soc 997, 119 , 656; (2) Myers, A. G.; Schnider, P.; Kwon, S.; Kung, D. W.; J. Org. Chem., 1999, 64, 3322; o (3) Myers, A. G.; Gleason, J. L.; Org. Synth. 998, 76, 57, Se trató una solución de amina 1a (24 g, 120 mmoles) en THF (300 ml) con LiCI anhidro (16.80 g, 400 mmoles) durante 0.5 h y se agitó hasta que la mezcla de reacción se homogeneizo. La mezcla de reacción se enfrió a 0°C y se trató con una solución de THF de LiHMDS (66.80 g, 400 mmoles en 300 ml de THF) durante 20 minutos. La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 0.5 h y se trató con 6-bromohexeno (19.44 g, 120 mmoles) y se agitó a t.a. durante 24 h. La mezcla de reacción se disolvió en HC1 1 M acuoso y se concentró in vacuo para eliminar el THF. La mayor parte de la capa acuosa se diluyó también con HCI 3M acuoso (300 mi) y se extrajo con éter (2x200 mi). La capa acuosa se alcalinízó a un pH 14 usando NaOH acuoso (50%) y se extrajo con CH2CI2 (3x 300 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron con MgSO4 se filtraron y se concentraron in vacuo para dar 1b bruto (15.1 g) que se empleó en el siguiente paso sin otra purificación.
Paso B 1 b 1c Una solución de 1b (12.5 g, 41.2 mmoles) se disolvió en NaOH acuoso (1 M, 88.0 mi, 88 mmoles) y se calentó a reflujo durante 3 h. La mezcla de reacción se enfrió a ta. y se extrajo con CH2CI2 (3x100 mi). La capa acuosa se trató con 100 mi de dioxano seguido por NaHCO3 (8.00 g, 95.2 mmoles) y dicarbonato de di-terbutilo (8.95 g, 41 mmoles) y se agitó a t.a. durante 5 h. La mezcla de reacción se extrajo con éter (2x250 mi) y la capa acuosa se acidificó a un pH~2 con HCI acuoso y se extrajo con CH2CI2 (2x200 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron con MgSO4, se filtraron, se concentraron in vacuo para dar el ácido 1 c (10.8 g) como un sólido incoloro.
Paso C Una solución de ácido 1c (5g, 19.44 mmoles) y amina 1d (3.98 g, 19.44 mmoles) en CH2CI2 (30 ml), DMF (30 ml) a 0°C se trató con HATU (8.87 g, 23.31 mmoles) y NMM (4.91 g, 5.33 ml) y se agitó hasta el día siguiente a 0°C. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y se diluyó con 650 ml de CH2CI2, La capa acuosa se lavó con HCI acuoso (1M, 2x300 ml), NaHC03 acuoso (1 M, 2x300 ml). Las capas orgánicas se secaron con MgS04, se filtraron y se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (Si02, Acetona/Hexanos 5:1) para dar 1e como un aceite incoloro (5.5 g). H RMN: (CD3OD, 300 MHz) d 5.87-5.76 (m, 1 H), 4.97-4.92 (dd, 2H), 4.26 (t amplio, 1H, J=7.8 Hz), 3.98 (d, 1H, J= 10.2 Hz), 3.61 (dd, 2H, J=5.1 , 5.1 Hz), 3.73 (s, 3H), 2.14-2.07 (m, 2H), 1.74-1.42 (m, 9H), 1.41 (s, 9H), 1.12 (s, 3H), 0.92 (s, 3 H). 13, C RMN: (CD3OD, 75 MHz), d 173.8, 173.2, 158.0, 139.8, 5.0, 80.4, 60.91 , 53.42, 52.80, 34.7, 33.5, 32.3, 31.4, 29.8, 28.7, 26.4, 26.1 20.6, 12.9.
Paso D 1e 19 Una solución del éster 1e (4g, 9.79 mmoles) en THF (20 mi), H20 (20 mi) y MeOH (10 mi) se trató con LiOH- H2O (575 mg, 14 mmoles) y se agitó a t.a. durante 4h. La mezcla de reacción se concentró in vacuo para eliminar THF y MeOH. La capa preponderantemente acuosa se acidificó con HCI acuoso y se extrajo en CH2CI2 (3x100 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron con MgSO4, se filtraron, se concentraron in vacuo y se utilizaron como se encontraban. Una solución del ácido que se obtuvo de hidrólisis de 1e, segmento de amina 1f (2.02 g, 9.79 mmoles) en DMF (40 mi), CH2CI2 (40 mi) a 0°C se trató con HATU (4.46 g, 1 .84 mmoles) y NMM (3.5 g, 35 mmoles) y se agitó a 0o C durante 24 h. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y se diluyó con HCI acuoso (100 mi). La capa acuosa se extrajo con CH2CI2 (3x75 mi). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHC03 acuoso saturado (3x100 mi), salmuera, se secaron con MgSO , se filtraron y se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía de gel de sílice (EtOAc/Hex 1 :3) para dar g (4.5 g) como una espuma incolora. 1b Una solución del dieno 1g (1.1 g, 2.0 mmoles) en CH2CI2 seco (20 mi) se trató con catalizador de Grubbs [(Cy)3RuCI2=CHC6H5, 83.8 mg, 0.1 mmoles) y se agitó a t.a. durante 24 h. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y se purificó mediante cromatografía (Si02, EtOAc/Hex 1 :3) para dar 1 h (501 mg) como un sólido incoloro y una mezcla de isómeros E Z. 1H RMN (CDCI3l 300 MHz) d, 7.38 (d, H, J=8.1 Hz), 5.30-5.18 (m, 2H), 4.55 (dt, 1 H, J= 2.4, 9.6 Hz), 3.92 (s amplio, H), 3.77 (s, 3H), 3.79-3.77 (m amplio, 1H), 2.06-2.1 (m amplio, 3H), 1.95-1.81 (m, 2H), 1.79-1.77 (m, 13H), 1.31 (s, 9H), 1.05 (s, 3 H), 0.85 (s, 3H). MS (ESI), m/z, intensidad relativa 542 [(M+Na)+ 45], 464 (20), 448 (25) 420 (100).
Paso F 1h Una solución del éster h (100 mg, 0.19 mmoles) en THF seco (1 mi) se trató con LiBH4 (2M de solución en THF, 0.2 mi) y se agitó a t.a. durante 16 h. La mezcla de reacción se desactivó con HCI acuoso (1 , 30 mi) y se extrajo con CH2CI2 (3x30 mi). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHCCb acuoso (100 mi) salmuera, se secaron con MgS04 se filtraron y se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (S1O2, acetona/hexanos 1 :3) para dar 1i (70 mg) como un sólido amorfo. H RMN (CDCI3> 300 MHz) d 6.96 (d, 1 H, J=8.1 Hz), 5.32-5.21 (m, 2H), 4.43-4.37 (m, 2H) 4.01-3.93 (m, 1 H), 3.77 (dd, 1 H, J=5.7, 4.8 Hz), 3.65 (dd, 1 H, J= 3.9, 6.6 Hz), 3.53 (dd, H, J= 6.0, 10.8 Hz), 2.1 -1.77 (m, 6H), 1.55-1.31 (m, 12H), 1.45 (s, 9H), 1.05 (s, 3H), 0.87 (s, 3H). MS (ESI), m/z, intensidad relativa 530 [(M+K)+, 10], 514 [(M+Na)+, 70], 492 [(M+1 f, 20], 392 (100).
Paso H Una solución del alcohol i (70 mg, 0.15 mmoles), en CH2CI2 (3 mi) se trató con reactivo de Dess- artin (85 mg, 0.2 mmoles) y se agitó a t.a. durante 2 h. La mezcla de reacción se desactivó con solución de a2S203 ( 0%, 10 mi) y solución saturada de NaHC03 (10 mi) y se agitó a t.a. durante 0.5 h. La mezcla de reacción se extrajo con CH2CI2 (50 mi). La capa orgánica se secó con MgS04, se filtró y se concentró in vacuo y se purificó mediante cromatografía (Si02, acetona/hexanos 4:1) para dar 1j (50 mg) como un sólido incoloro esponjoso. H RMN (CDCI l;3, 300 MHz) d 9.54 (s, 1H), 7.43 (d, 1 H, J = 7.8 Hz), 5.30-5.19 (m, 2H), 4.55-4.40 (m, 2H), 3.93 (d, 1H, J=10.2 Hz), 3.77 (dd, 1H, J=5.4, 5.1 Hz), 2.04-1.78 (m, 4H), 1.55-1.27 (m, 14), 1.31 (s, 9H), 1.02 (s, 3H), 0.95 (s, 3H). MS (ESI), m/z, intensidad relativa 512 [(M+Na)+, 80], 490 [(M+1 )+, 0], 434 (20), 390 ( 00).
Paso I Una solución del aldehido 1j (50 mg, 0.11 mmoles) en CH2CI2 seco (2 mi) se trató con CH3COOH (19 mg, 0.31 mmoles) e ¡socianoacetato de metilo (31 mg, 0.31 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a ta. durante 48 h y se concentró in vacuo. El residuo se purificó mediante cromatografía (Si02l acetona/hexanos 1:2) para dar 1k (50 mg) como una mezcla de diastereómeros. MS (ESI), m/z, intensidad relativa 671 [(M+Na)+, 45], 649 [(M+1 )+, 30], 549 (100).
Paso J tu 11 Una solución del éster metílico 1 k (50 mg, 0.078 mmoles) en THF (2 mi), H20 (2 mi) y CH3OH (2 mi) se trató con LiOH- H20 (20 mg, 0.5 mmoles) y se agitó a t.a. durante 2 h. Después de completada, la reacción se acidificó con HCI acuoso (2 mi) y se concentró in vacuo. El residuo se secó in vacuo y se usó como tal sin otra purificación. El ácido se disolvió en CH2CI2 (2 mi), D F (2 mi) y se trató con H-P g-N(CH)2 · HCI (26 mg, 0. 2 mmoles), NMM ( 32 mg, 0.32 mmoles) HATU ( 45 mg, 0.12 mmoles) y se agitó a 0°C durante 24 h. La solución de color amarillo se concentró in vacuo y se diluyó con CH2CI2 (70 mi). Las capas orgánicas se lavaron con NaHC03 acuoso saturado, HCI acuoso y salmuera. La mezcla de reacción se secó (MgSC^) se filtró, se concentró in vacuo y se usó tal cual en el siguiente paso (47 mg).
Una solución del alcohol 11 (50 mg, 0.066 mmoles) en CH2CI2 (2 mi) se trató con Reactivo de Dess-Martin (60 mg, 0.14 mmoles) y se agitó a t.a. durante 2 h. La reacción se diluyó con solución acuosa de Na2S203 y solución acuosa de NaHC03 (20 mi cada una) y se extrajo con CH2CI2 (50 mi). La capa orgánica se lavó con NaHC03 saturado, salmuera, se secó con MgS04l se filtró, se concentró in vacuo y se purificó mediante cromatografía (acetona/hexanos 2:3) para dar 1 (22 mg) como un sólido incoloro.
MS (ESI), m/z, intensidad relativa 773 [(M+Na)+, 80], 751 [(M+1 )+, 60], 651 (100).
EJEMPLO PREPARATIVO 2 Paso A 1? 3B Una solución del alcohol 1i (1.1g, 2.25 mmoles) en metanol (30 mi) se trató con Pd/C (10% p/p, 100 mg) y se hidrogenó a 4,14 x 105 Pa (60 psi) durante 3 h. La mezcla de reacción se filtró a través de un tapón de celite, se concentró in vacuo para dar 2a, que se usó en el siguiente paso sin otra purificación.
Paso B Sil 2i_ Se oxidó 2a del paso A usando reactivo de Dess-Martin (1.14 g, 2.68 mmoles) siguiendo el procedimiento similar al paso H (ejemplo Preparativo 1) para dar 2b (760 mg) como una espuma incolora. MS (ESI), m/z, intensidad relativa 1005 [(2M+Na)+, 10], 530 [(M+K)+, 20], 514 [(M+Naf, 90], 492 [(M+1)+, 30], 436 (40), 392 (100).
Paso C 2b Se convirtió el compuesto 2b (200 mg, 0.41 mmoles) del paso B en 2c (250 mg) usando CH3COOH (60 mg) e isocianoacetato de metilo (99 mg, 1 mmoles) siguiendo el procedimiento similar al paso I (ejemplo Preparativo 1) como una mezcla de diastereómeros. 1H RMN (CDCI3l 300 MHz, mezcla de diastereómeros) 8.05, 7.93 (d, 1H), 6.60 (d, 1 H, J=7.8 Hz), 5.20, 5.09 (d, 1 H), 4.58-4.49 (t amplio, H), 4.34 (s, 1 H), 4.34-4.31 (t amplio, 1 H), 4.11-4.06 (m, 1H), 3.95-3.86 (m, 3H), 3.73, 3.71 (s, 3H), 2.2 , 2.19 (s, 3H), 1.99-1.06 (m, 31 H), 0.99-0.94 (6H). MS (ESI), miz, intensidad relativa 689 [( +K)+, 5], 673 [(M+Na)+, 30], 651 [(M+1)+, 35], 551 (100).
Paso D ??e?? Zc Zd Se hidrolizó el éster metílico 2c (250 mg, 0.39 mmoles) al ácido usando LiOH- H20 (42 mg, 1 mmoles) y se acopló a H-Phg-N(CH)2 · HCI (90 mg, 0.42 mmoles) usando NMM (126 mg, 1.26 mmoles) y HATU (160 mg, 0.42 mmoles) según se señaló en el Ejemplo Preparativo 1, paso J para dar 2d bruto usado directamente para oxidación.
Paso E Se oxidó la hidroxi amida 2d usando reactivo de Dess-Martin (200 mg, 0.48 mmoles) purificándose mediante cromatografía (S1O2, acetona/CH2CI2 1 :4) para dar 2 (110 mg) como un sólido incoloro. MS (ESI), m/z, intensidad relativa 775 [(M+Na)+, 60], 753 [(M+1)+, 50], 653 (100), 277 (80), 232 (60), 162 (30), 162 (40), 148 (80), 217 (95).
EJEMPLO PREPARATIVO 3 Paso A 2 3 Una solución de 2 (40 mg, 0.0053 mmoles) en HCOOH (2 mi) se agitó a ta. durante 2 h y se concentró in vacuo. El residuo se disolvió repetidamente en tolueno y se secó in vacuo para eliminar el ácido fórmico residual. El residuo se disolvió en CH2CI2/DMF (1 mi de cada uno) y se trató con 'BuNCO (10 µ?) y NMM (15 µ?) a 0°C y se dejó en refrigerador durante 12 h. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y se purificó mediante cromatografía (Si02, acetona/hexanos 1 :2) para dar 3 (21 mg) como un sólido incoloro. MS (ESI), m/z, intensidad relativa 774 [(M+Na)+, 50], 752 [(M+1 )+, 70], 653 (90), 420 (30), 297 (30), 148 (100), 134 (40).
EJEMPLO PREPARATIVO 4 Paso A Se trató una solución del aldehido 2b (100 mg, 0.2 mmoles) en CH2CI2 (2 mi) con E†.3lM (50 mg, 0.5 mmoles) y cianhidrina de la acetona (43 mg, 0.5 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a ta. durante 2 h y se concentró in vacuo. El residuo se purificó mediante cromatografía (S¡02, acetona/hexanos 1 :4) para dar 4a (100 mg) como un sólido incoloro. MS (ESI), m/z, intensidad relativa 541 [(M+Na)+, 60], 519 [(M+1)+, 0], 463 (30), 419 (100).
Se trató una solución de la cianhidrina 4a (100 mg, 0.2 mmoles) en DIVISO (3 mi) con H2O2 (35%, 0.3 mi) y K2CO3 (43 mg, 0.3 mi) y se agitó a t.a. durante 4 h. La mezcla de reacción se diluyó con CH2CI2 (150 mi) y se lavó con solución de Na2S203 acuoso (10%, 30 mi) y salmuera (30 mi). La mezcla de reacción se secó (MgS04) se filtró, se concentró in vacuo y se usó directamente en el paso C sin otra purificación.
Paso C Se trató una solución de la hidroxi amida 4b (100 mg, 0.18 mmoles) en tolueno/DMSO (1:1, 5 mi) a 0°C con EDCI (356 mg, 1.86 mmoles) y CfeCHCOOH (120 mg, 0.93 mmoles) y se agitó a 0°C durante 3 h. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc ( 50 mi) y se lavó con NaHC03 acuoso saturado (100 mi) y salmuera (100 mi). La capa de acetato de etilo se secó (MgS04), se concentró y se purificó mediante cromatografía (Si02, acetona/hexanos 2:3) para dar 4 (20 mg) como un sólido incoloro. MS (ESI), m/z, intensidad relativa 435 [(M+1)+, 85], 390 (100).
EJEMPLO PREPARATIVO 5 Paso A 4 Se convirtió el carbamato 4 (40 mg, 0.1 mmoles) en la urea 5 (7.5 mg) siguiendo el procedimiento similar al ejemplo Preparativo 3, Paso A.
EJEMPLO PREPARATIVO 6 Paso A Se logró la síntesis de 6 usando el procedimiento similar síntesis de 5. Se agitó una solución de 4 (180 mg 0.34 mmoles) en HCOOH (3.0 mi) a ta. durante 3 h y se concentró in vacuo. El residuo se secó in vacuo y se tomó en CH2CI2 (4 mi) y se trató con ciciohexilisocianato de metilo (72 mg, 0.52 mmoles) y E¾N (52 mg, 0.52 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 16 h y se concentró in vacuo. El residuo se purificó mediante cromatografía (SiO2, acetona/hexanos 1 :3) para dar 6 (10 mg) como un sólido incoloro. MS (ESI), m/z, intensidad relativa 574 [(M+1)+, 20], 435 (100), 390 (50).
EJEMPLO PREPARATIVO 7 Paso A La síntesis de 7 se logró usando el procedimiento similar a la síntesis de 5. Se agitó una solución de 4 (180 mg 0.34 mmoles) en HCOOH (3.0 mi) a ta. durante 3 h y se concentró in vacuo. Se secaron 50 mg (0.12 mmoles) de este residuo in vacuo y se tomaron en CH2CI2 (4 mi) y se trataron con éster ter-butílico del isocianato del íer-butil glicina (74mg, 0.0.35 mmoles) y Et3N (35 mg, 0.0.35 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 16 h y se concentró in vacuo. El residuo se diluyó con CH2CI2 y se lavó con HCi acuoso, NaHC03 acuoso saturado y salmuera. Las capas orgánicas se secaron ( gS04) y se purificaron mediante cromatografía (S1O2, acetona/hexanos 1:3) para dar 7 (15 mg) como un sólido incoloro. MS (ESI), m/z, intensidad relativa 648 [(M+1)+, 45], 592 (25), 435 (100).
EJEMPLO PREPARATIVO 8 Paso A 3 IR Se trató una solución del éster metílico 2c (100 mg, 0.15 mmoles) en THF (2 mi), H20 (2 mi) y CH3OH (2 mi) con LiOH- H2O (41 mg, 1.0 mmoles) y se agitó a t.a. durante 2 h. Una vez completada la reacción, ésta se acidificó con HCI acuoso (2 mi) y se concentró in vacuo. El residuo se secó in vacuo y se usó como tal sin otra purificación. El ácido se disolvió en CH2CI2 (2 mi), DMF (2 mi) y se trató con bencil amina (107 mg, 0.22 mmoles), NMM (42 mg, 0,42 mmoles) HATU (53 mg, 0.14 mmoles) y se agitó a 0°C durante 24 h. La solución de color amarillo se concentró in vacuo y se diluyó con CH2CI2 (100 mi). Las capas orgánicas se lavaron con NaHCO3 acuoso saturado, HCI acuoso y salmuera. La mezcla de reacción se secó (MgS04) se filtró, se concentró in vacuo y se usó como tal en el siguiente paso (63 mg).
Paso B Se trató la hidroxiamida 8a (62 mg) en CH2CI2 (3 mi) con reactivo de Dess-Martin (62 mg, 0.15 mmoles) y se agitó a t.a. durante 1.5 h. La mezcla de reacción se diluyó con CH2CI2 (20 mi) y se trató con solución acuosa de Na2S203 (10%, 25 mi) y NaHC03 saturado (25 mi) y se agitó durante 20 min. La capa acuosa se separó y se extrajo una vez más con CH2CI2. Las capas orgánicas combinadas se secaron ( gS04), se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (Si02, acetona/hexanos 1 :2) para dar 8 como un sólido incoloro (21 mg). MS (ESI), m/z, intensidad relativa 704 [(M+Na)+, 40], 682 [(M+1 )+, 20], 582 ( 00), 150 (70), 117 (30).
EJEMPLO PREPARATIVO 9 Paso A Una solución del ácido 9a (3.6 g, 18.1 minóles), la amina 9b (5.53 g, 18.1 mmoles) HATU (8.59 mmol, 22.62 mmoles) y NMM en CH2CI2 (50 mi), DMF (50 mi) se agitó a 0°C hasta el día siguiente. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y se diluyó con HCI acuoso (1 M, 500 mi) y se extrajo con CH2CI2 (3x250 mi). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con HCI acuoso (500 mi), NaHC03 acuoso saturado (500 mi), salmuera (300 mi) y se purificaron mediante cromatografía (Si02, acetona/hexanos 1:4) para dar 9c (6.7 g) como un sólido incoloro. MS (ESI), m/z, Intensidad relativa 495 (M+Na)+, 90], 473 [(M+1)+, 60], 429 (70), 391 (40), 200 (100), 140 (30).
Paso B Una solución del éster metílico 9c (5.5 g, 1 1.59 mmoles) en CH3OH/THF/H20 (300 mi) se trató con L¡OH.H20 (700 mg, 16.7 mmoles) y se agitó a t.a. durante 1.5 h. La mezcla de reacción se diluyó con HCI acuoso y se extrajo en CH2CI2 (700 mi). La capa orgánica se secó con MgSC¼ se filtró, se concentró in vacuo y se usó como tal en pasos posteriores. Se trató una solución del ácido bruto en CH2CI2 (50 ml), DMF (50 ml) con HATU (5.5 g, 1 .35 mmoles), NMM (4.07 g, 40.32 mmoles) y se agitó a 0°C durante 24 h. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y se tomó en HCI acuoso (300 ml). Las capas ácidas se extrajeron en CH2CI2 (2x200 ml) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con aHC03 saturado, salmuera y se purificaron mediante cromatografía (Si02, acetona/hexanos 4:1) para dar 9d (7.1 g ) como un sólido incoloro.
Paso C Se trató una solución del dieno 9d (2.0 g, 3.2 mmoles) en CH2CI2 (64 mi) con catalizador de Grubbs 404 mg, 0.48 mmoles) y se agitó a t.a. durante 24 h. La mezcla de reacción se concentró ¡n vacuo y se purificó mediante cromatografía (Si02, EtOAc/Hex 1 :3) para dar 9e ( .1 g) como un sólido marrón y mezcla de isómeros E/Z. H RMN (CDCI3l 300 MHz) d 7.36 (m amplio, 5H), 7.13 (d, 1H, 4.5 Hz), 5.73 (d, 1 H, J=8.1 Hz), 5.28 (m, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.75 (m, 1 H), 4.65 (m, 2H), 4.52- 4.46 (m, 1 H), 3.90 (d amplio, 1 H), 3.74 (s, 3H), 3.61 (dd, 1 H, J= 15.6, 11.1 Hz), 3.44 (dd, 1 H, J=6.9, 7.2 Hz), 2.12-2.01 (m, 5H), 1.79-1.67 (m, 3H), 1.49-1.43 (m, 3H), 1.36-1.34 (m, 4H), 1.26 (s amplio, 5H), 1.16 (s amplio, 3H). MS (ESI), m/z, intensidad relativa 606 [(M+Na)+ 70], 584 (100), 540 (30).
Paso D Se trató una solución del éster 9e (200 mg, 0.32 mmoles) THF seco (5 mi) con LiBH (solución de 2M en THF, 0.32 mi) y se agitó a t.a. durante 3 h. La mezcla de reacción se desactivó con HCI acuoso (1 M, 100 mi) y se extrajo con CH2CI2 (3x50 mi). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHC03 acuoso (100 mi), salmuera, se secaron con MgS04l se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (Si02, acetona/hexanos 1 :3) para dar 9f (2.1 g). H RMN (CDCI3, 300 MHz) 6. MS (ESI), m/z, intensidad relativa 578 [(M+Naf, 40], 556 [(M+1 )+, 80], 512, (30), 295 (100).
Paso E Se trató una solución del alcohol 9f (100 mg, 0.19 mmoles) en CH2CI2 (3 mi) con reactivo de Dess-Martin (106 mg, 0.25 mmoles) y se agitó a t.a. durante 2 h. La mezcla de reacción se desactivó con solución de Na2S203 (10%, 10 mi) y solución saturada de NaHC03 (10 mi) y se agitó a t.a. durante 0.2 h. La mezcla de reacción se extrajo con CH2CI2, La capa orgánica se secó con MgS04, se filtró, se concentró in vacuo y se purificó mediante cromatografía (Si02, acetona/hexanos 3:1) para dar 9g (80 mg). 1H RMN (CDCI3l 300 Hz) d 9.52 (s, 1H), 7.36 (s amplio, 5H), 7.1 (d, H, J=7.2 Hz), 5.67 (d, 1 H, J=7.8 Hz), 5.24-5.11 (m, 2H), 5. 1 (s, 2H), 4.77-4.45 (m, 5H), 3.92 (d, 1 H, J=12 Hz), 3.58 (dd, 1 H, J=6.6, 5.5 Hz), 3.51-3.46 (m, H), 2.17-1.00 (m, 25H). MS (ESI), m/z, intensidad relativa 576 [(M+Na)+, 15], 554 [(M+1 )+, 1003, 510 (40).
Paso F Se trató una solución del aldehido 9g (80 mg, 0.15 mmoles) en CH2CI2 seco (2 mi) con CH3COOH (30 mg, 0.50 mmoles) e isocianoacetato de metilo (50 mg, 0.50 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a ta. durante 24 h y se concentró in vacuo. El residuo se purificó mediante cromatografía (Si02, acetona/hexanos 1 :3) para dar 9h como una mezcla de diastereómeros. MS (ESI), m/z, intensidad relativa 735 [(M+Na)+, 70], 713 [(M+1)\ 100].
Paso F Si Se hidrolizó el éster metílico 9h (600 mg, 0.92 mmoles) al ácido usando LiOH H20 y se acopló a H-Phg-N(CH)2- HCi (235 mg, 1.09 mmoles) usando N M (303 mg, 3.0 mmoles) y HATU (437 mg, 1.15 mmoles) según se indicó en el ejemplo Preparativo 1, paso J, para dar 9i, que se empleó directamente para la oxidación.
Paso G se oxidó 9j bruto (470 mg, 0.58 mmoles) del paso F usando reactivo de Dess-Martin (424 mg, 1.00 mmoles) siguiendo el procedimiento similar al paso H (ejemplo Preparativo 1) para dar 9j (310 mg) como un sólido incoloro. MS (ESI), m/z, intensidad relativa 869 [(M+CH3OH+Na)+, 100], 815 [(M+1)+, 40], 770 (30).
EJEMPLO PREPARATIVO 10 Paso A Se trató una solución de 9h (200 mg, 0.3 mmoles) en metanol (5 mi) con Pd(OH)2/C (húmedo, 10%) y se hidrogenó durante 3h. La mezcla de reacción se filtró a través de un tapón de Celite y el filtrado se concentró in vacuo. El residuo se disolvió en cloruro de metiieno y se trató con bicarbonato de diterbutilo (200 mg, 0.92 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a ta. durante 24 h y se purificó mediante cromatografía (Si02, acetona/Hexanos 1:2) para dar 10a (85 mg) como un sólido incoloro.
Paso B l e 10b Se hidrolizó el éster metílico 10a (80 mg, 0.15 mmoles) al ácido usando LiOH- H20 (41 mg, 1 mmol) y se acopló a H-Phg-N(CH)2 · HCI (32 mg, 0.15 mmoles) usando NMM (40 mg, 0.40 mmoles) y HATU (64.6 mg, 0.17 mmoles) según se indicó en el ejemplo Preparativo 1 , paso J, para dar 10b, que se empleó directamente para la oxidación.
Paso C 10b 10c Se hidroiizó la hidroxi amida 10b (60 mg, 0.08 mmoles) usando reactivo de Dess-Martin (60 mg, 0.14 mmoles) purificándose mediante cromatografía (Si02, acetona/CH2CI2 1:2) para dar 10c (21 mg) como un sólido incoloro. MS (ESI), m/z, intensidad relativa 805 [(M+Na)+, 20], 783 [(M+1)+, 20], 683 (30), 369 (40), 210 (70), 116 (100).
EJEMPLO PREPARATIVO 11 Paso A Sg ?? Se trató una solución del aldehido 9g (400 mg, 0.73 mmoles) en CH2CI2 con EtaN (150 mg, 1.5 mmoles) y cianhidrina de acetona (170 mg, 1.5 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a ta. durante 3 h y se concentró in vacuo. El residuo se purificó mediante cromatografía (Si02, acetona/hexanos 1 :4) para dar 4a (286 mg) como un sólido incoloro. MS (ESI), m/z, intensidad relativa 603 [(M+Na)+, 60], 581 [(M+1)+, 70], 464 (50), 420 (100).
Paso B Ita 11b Se trató una solución de la cianhidrina 11a (600 mg, 1.1 mmoles) en DMSO (12 mi) con H202 (35%, 1.0 mi) y K2C03 (43 mg, 0.3 mi) y se agitó a t.a. durante 8 h. La mezcla de reacción se diluyó con CH2CI2 (150 mi) y se lavó con solución de a2S203 acuoso (10%) y salmuera (30 mi). La mezcla de reacción se secó (MgS04), se filtró, se concentró in vacuo y se empleó directamente en el paso C sin otra purificación. MS (ESI), m/z, intensidad relativa 621 [(M+Naf, 70], 599 [(M+1 )+, 100], 554 (40).
Paso C un 11 Se trató una solución de la hidroxi amida 11 b (320 mg, 0.54 mmoles) en tolueno/DMSO (1 :1 , 10 ml) a 0°C con EDCI (1.1 g, 5.40 mmoles) y CI2CHCOOH (350 mg, 2.7 mmoles) y se agitó a t.a. durante 4 h. La mezcla de reacción se diluyó con CH2CI2 (150 ml) y se lavó con NaHC03 acuoso saturado y salmuera. La capa orgánica se secó (MgS04), se concentró y se purificó mediante cromatografía (Si02, acetona/hexanos 1 :2) para dar 1 (173 mg) como un sólido incoloro. MS (ESI), m/z, intensidad relativa 619 [(M+1 )+, 20], 597 (100).
EJEMPLO PREPARATIVO 12 Se hidrogenó una solución de 11a usando Pd/C y la amina obtenida se disolvió en CH2CI2 y se trató con isocianuro de ter-butilo a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a ta. durante 12 h y se diluyó con agua. La mezcla de reacción se extrajo con CH2CI2 (30 mi) y las capas orgánicas combinadas se secaron ( gS04), se filtraron, se concentraron in vacuo para obtener 11 b, que se empleó en la oxidación sin otra purificación.
Paso B 11 Se trató una solución de la hidroxi amida 11b (320 mg, 0.54 mmoles) en tolueno/DMSO (1:1, 10 mi) a 0°C con EDCI (1.1 g, 5.40 mmoles) y CI2CHCOOH (350 mg, 2.7 mmoles) y se agitó a t.a. durante 4 h. La mezcla de reacción se diluyó con CH2CI2 (150 mi) y se lavó con NaHC03 acuoso saturado y salmuera. La capa orgánica se secó (MgS04), se concentró y se purificó mediante cromatografía (S¡O2, acetona/hexanos 1:2) para dar 11 (173 mg) como un sólido incoloro. MS (ESI), m/z, intensidad relativa 619 [(M+1)+, 20], 597 (100).
EJEMPLO PREPARATIVO 13 Paso A Se trató una solución del aldehido 2b (50 mg, 0.1 mmoles) en CH2CI2 seco (5 mi) con CH3COOH (21 mg, 0.3 mmoles) y TOSMIC (59 mg, 0.3 mmol, 3.0 eq.). La mezcla de reacción se agitó a ta. durante 40 h y se concentró in vacuo . El residuo se purificó mediante cromatografía (S1O2, EtOAc/hexanos 2:3) para dar 1k (60 mg) como una mezcla de diastereómeros. MS (ESI), m/z, intensidad relativa 769 [(M+Naf, 30], 747 [(M+1)+, 20], 647 (100).
Paso B 13 13a Se trató una solución de 13a (60mg, 0.08 mmoles) en metanol con 8 gotas de HCI concentrado y se agitó a t.a. durante 12 h. El éster acetato se hidroiizó con la desprotección parcial del grupo Boc, que se desprotegió con dicarbonato de diterbutilo (16 mg, 0.073 mmoles).
Se trató la hidroxiamida (46 mg, 0.07 mmoles) en CH2CI2 con reactivo de Dess- artin (55 mg, 0. 3 mmoles) y se agitó a t.a. durante 10 min. Se agregó Na2S203 acuoso saturado y la mezcla de reacción se extrajo en CH2CI2. La mezcla de reacción se secó (MgS04), se filtró, se concentró in vacuo y se purificó mediante cromatografía para dar 13 (61 mg). MS (ESI), m/z, intensidad relativa 703 [(M+1)+, 11], 603 (100).
EJEMPLO PREPARATIVO 14 Se agregó una solución de isobutirato de metilo (2.0g, 19.5 mmoles) gota a gota en THF a una solución de KH DS en THF (4.65 g, 23.5 mmoles) a -78°C y se agitó durante 0.5 h. La mezcla de reacción se trató con 5-bromo-1-penteno (3.5 g, 23.5 mmoles) y se agitó a t.a. durante 1 h. La mezcla de reacción se desactivó con HCI acuoso y se extrajo en éter (150 mi). La capa orgánica se secó (MgS04), se filtró, se concentró in vacuo y se purificó mediante cromatografía (EtOAc/Hexano 1 :19) para dar 2.1 g de 14b como líquido incoloro. H RMN: (CDCI3, 300 MHz) d 5.83-5.70 (m, 1 H), 5.00-4.91 (dd, 2H), 3.65 (s, 3H), 2.01 (dt, 2H), 1.53-1.48 (m, 2H), 1.35-1.30 (m, 2H), 1.1 (s, 9H).
Paso B idH 14c Se trató una solución del éster (2.6 g, 16 mmoles) en éter (30 mi) con L1AIH4 (solución 1 M en THF, 20 mi) a -78°C y se calentó hasta ta. La mezcla de reacción se desactivó con una solución de KHS04 y se filtró a través de un tapón de Celite y MgS04, El filtrado se concentró in vacuo y se usó tal cual en el siguiente paso.
Paso C Se trató una solución de cloruro de oxalilo (1.48 g, 11.7 mmoles) en CH2CI2 seco con DMSO ( .53 g, 9.5 mmoles) a -78°C y se agitó durante 15 min. A esta mezcla se agregó el alcohol 14c (1.1 g, 7.8 mmoles) y se agitó a -78°C durante 15 min. Se agregó trietilamina (5.0 mi, 35.5 mmoles) y la mezcla de reacción se calentó a ta. La mezcla de reacción se acidificó y se extrajo con EtOAc (200 mi). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con HCI acuoso, se secaron ( gS04), se filtraron y se concentraron in vacuo y se usaron en la siguiente reacción. 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) d 9.42 (s, 1 H), 5.82-5.68 (m, 1 H), 5.00-4.91 (m, 2H), 2.03 (dt, 2H), 1.48-1.23 (m, 4H), 1.03 (s, 3H).
Se trató una solución del aldehido 14d (18g, 129 mmoles) en CH2CI2 (150 mi) con (R)-feniglicinol (20.33 g, 148.3 mmoles) y se agitó a 0°C durante 1 h. La mezcla de reacción se trató con TMS-CN (25.6g, 258 mmoles) y se agitó a t.a. durante 12 h. La mezcla de reacción se desactivó con NaHCOa acuoso saturado y se extrajo con EtOAc (3x150 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO4), se filtraron, se concentraron in vacuo y el residuo se disolvió en THF ( 00 mi) y se trató con HCI acuoso (100 mi). La capa acuosa se alcalinizó con NaOH acuoso (1 M) y se extrajo con (EtOAc, 450 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron, se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron por cromatografía (S1O2, EtOAc/Hexanos 6:1 ) para dar 14e 21 g como un aceite incoloro.
Paso E Se trató una solución de 4e (20 g) en CH3OH (200 mi) con H202 (60 mi) y LiOH.H20 (5.88 g, 209.6 mmoles) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a ta. durante 12 h y se enfrió hasta 0°C y se desactivó cuidadosamente con solución de Na2S203 acuoso (10%). La mezcla de reacción se concentró ¡n vacuo y se extrajo la capa acuosa con EtOAc (600 mi). Las capas orgánicas combinadas se lavaron intensamente con Na2S203 acuoso, se secaron (MgS04), se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cristalización (EtOAc/Hexanos) para dar el diastereómero usado directamente puro en la siguiente reacción. 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) d 7.30 (s amplio, 5H), 6.25 (s,1 H), 6.17 (s, 1 H), 5.79-5.66 (m, 2H), 4.98-4.89 (m, 2H), 3,71-3.60 (m, 3H), 2.68 (s amplio, H), 1.98- .90 (3H), 1.03 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), .03-0.99 (m, 1 H).
Paso F Se trató una solución de la amida 14f (8.00g, 26.3 mmoles) en CH2CI2 (160 mi), CH3OH (80 mi) a 0°C con Pb(OAc)4 (13.45 mmol, 30.3 mmoles), a 0°C durante 1 h. La solución amarilla se trató con NaHC03 acuoso (250 mi, y se agitó durante 15 min. La mezcla de reacción se filtró y se concentró in vacuo. La capa preponderantemente acuosa se extrajo en CH2CI2 (3x300 mi), se concentró irí vacuo y se usó directamente en otra reacción. Una solución de la ¡mina bruta se tomó en THF (200 mi) y se trató con HCI acuoso (1 M, 200 mi) y se agitó a t.a. durante 1 h. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y se extrajo con éter (2x250 mi). La capa acuosa se alcalinizó con NaOH acuoso (50%) a 0°C y se extrajo con CH2CI2 (600 mi). Las capas orgánicas combinadas se extrajeron con salmuera, se secaron (MgSC^), se filtraron, se concentraron in vacuo y se usó directamente en la siguiente reacción. El residuo se disolvió en CH2CI2 (200 mi) y se enfrió a -78°C y se trató con N (4.2 g, 40 mmoles) y Cbz-CI (5.4g, 31.58 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a ta. durante 12 h y se lavó con HCI acuoso. La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con CH2CI2 (200 mi) Las capas orgánicas combinadas se extrajeron con salmuera, se secaron y se purificaron mediante cromatografía (Si02, EtOAc/Hexanos 2:3) para dar 14g (6.8 g) como un sólido incoloro. 1H RMN (CDCI3; 300 MHz) d 7.37-7.30 (m, 5H), 6.23 (s amplio, H), 5.86 (s amplio, 1 H), 5.82-5.64 (m, 1 H), 5.63 (d, 1 H, J= 9.3Hz), 5.12-4.93 (m, 4H), 4.07 (d, 1 H, J=9 Hz), 2.0-1.9(m, 2H), 1.42-1.30 (m, 4H), 0.96 (s, 6H). MS (ESI), m/z, intensidad relativa 341 [M+Na)+, 100], 319 [(M+1)+, 30], 274 (50), 230 (70), 213 (30), 140 (30).
Paso G Se trató una solución de amida 14 g (6.8 g, 21.4 mmoles) en CH2CI2 (200 mi) con Me3OE3F (10.36 g, 69.9 mmoles) y K3P04 (12. 1 g, 69.52 mmoles) y se agitó a t.a. durante 12 h. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y se disolvió en CH3OH (280 mi) y HCI acuoso (140 mi, 1 M) y se calentó a reflujo durante 1 h. La mezcla de reacción se concentró y la capa acuosa se extrajo además con CH2CI2 (3x150 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgS04), se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (Si02, EtOAc/hexanos 1 :19) para dar 14h (5.6g) como aceite incoloro.
H RMN (CDCI3, 300 MHz) d 7.36 (s amplio, 5H), 5.85-5.71 (m, 1H), 5.32 (d, 1 H, J=9.9 Hz), 5.10 (dd, 2H, J=12, 3.9 Hz), 5.03-4.93 (m, 2H), 4.27 (d, 1 H, J=9.9 Hz), 3.72 (s, 3H), 2.05—1.98 (m, 2H), 1.47-1.24 (m, 4H), 0.93 (s, 9H). MS (ESI), m/z, intensidad relativa 356 [M+Na)+, 95], 334 [(M+1 )+, 10], 290 ( 00), 230 (60), 2 3 (20).
Paso H Se trató una solución del ácido 14i (4.5g, 17.64 mmoles) y la amina 1f (3.66 g, 17.64 mmoles) en CH2CI2 (50 mi), DMF (50 mi) a 0°C con HATU (8.39 g, 22.05 mmoles) y NMM (5.35 g, 52.92 mmoles) y se agitó hasta el día siguiente a 0°C. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y se diluyó con 450 mi de CH2CI2. La capa acuosa se lavó con HCI acuoso ( M, 2x300 mi), NaHC03 acuoso (1M, 2x300 mi). Las capas orgánicas se secaron con MgS04, se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (Si02, Acetona/Hexanos 5:1) para dar 14j como un aceite incoloro (5.8 g). 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) d 7.03, 6.39 (d, 1 H, J = 7.5 Hz), 5.8-5.7 (m, 1 H), 4.99-4.90 (m, 2H), 4.66 -4.54 (m, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.62-3.42 (m, 2H), 2.01 (s amplio, 2H), 1.88-1.63 (m, 4H), 1.61 , 1.43 (s, 9.H), 1.6-1.3 (m, 4H), 1.02 (s, 3H), 0.90 (s, 3H). MS (ESI), m/z, intensidad relativa 431 [(M+Na)+, 60], 409 [(M+1 )+, 40], 353 (40), 309 (100), 110 (80).
Paso Una solución del éster 14h (5.4g, 16.2 mmoles) en H20 (30 mi), THF (30 mi) y CH3OH (30 mi) se agitó con LiOH- H20 (1.36 g, 32.42 mmoles) durante 24 h y se concentró in vacuo. La capa acuosa se acidificó con HCI acuoso (1 M) y se extrajo en CH2CI2 (400 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgS04), se filtraron, se concentraron in vacuo y se usaron tal cual en reacciones posteriores. Se trató una solución de ácido (4.0 g, 12.5 mmoles) y de amina desprotegida* en CH2CI2 (30 mi), DMF (30 mi) a 0°C con HATU (7.15 g, 18.79 mmoles) y NMM (4.5 g, 45.0 mmoles) y se agitó a 0°C durante 48 h, y 25°C durante 24 h. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y se diluyó con 300 mi de CH2CI2. La capa acuosa se lavó con HCI acuoso (1 M, 3x100 mi), NaHC03 acuoso (saturado, 3x100 mi). Las capas orgánicas se secaron con MgS04, se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (Si02, EtOAc/Hexanos 3:1) para dar 14k como un aceite incoloro (4 g de 14k puro y 2 g de 14k parcialmente impuro). 1H RMN (CDC!3! 300 MHz) d 7.34-7.32 (s amplio, 5H), 6.92 (d, 1 H, J=7.5Hz), 5.48-5.69 (m, 2H), 5.37 (d, 1 H, J=9.9 Hz), 5.08-4.92 (m, 6H), 4.56-4.33 (M, H), 3.97-3.93 (m, 2H), 3.84-3.80 (m, 2H), 3.74 (s, 3H), 2.03-1.97 (m, 4H), 1.86-1.87-1.39 (m, 12H), 1.12 (s, 3H), 0.98 (s, 6H), 0.84 (s, 3H). S (ESI), m/z, intensidad relativa 632 [( +Na)+, 20], 610 [(M+1)+, 100], 309 (60). * La amina se obtuvo por degradación de 14j con HCI 4 M en dioxano.
Paso J Se saturó una solución del dieno 14k (4,00 g, 6.57 mmoies) en CH2CI2 (65.0 mi) a ta. con N2 y se trató con catalizador de Grubbs (551 mg, 0.657 mmoies) y se agitó durante 24 h. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y se purificó mediante cromatografía (Si02, EtOAc/hexanos :3) para dar 141 (1.7 g) como un sólido de color canela. 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) d 7.34-7.31 (s amplio, 5H), 7.08 (d, 1 H, J = 7.8 Hz), 5.43 (d, 1 H, J = 10.2 Hz), 5.28 (m, 2H), 5.13-5.02 (m, 2H), 4.56-4.32 (m, 1 H), 4.49-4.28 (m, 2H), 3.96-3.79 (m, 2H), 3.74 (s, 9H), 2.05-1.29 (m, 16H), 1.0 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.94 (s, 3H), 0.86 (s, 3H). MS (ESI), m/z, intensidad relativa 550 [( +1 )+, 50], 450 (100).
Paso K Se trató una solución del alqueno 141 (200 mg, 0.35 mmoles) en CH30H (20 mi) con Pd/C (5%, 200 mg), bicarbonato diterbutilo (200 mg, 0.92 mmoles) y se hidrogenó a t.a. durante 12 h. La mezcla de reacción se filtró a través de un tapón de Celite y se concentró ¡n vacuo. La mezcla de reacción se purificó mediante cromatografía (Si02, acetona/hexanos 1 :5) para dar 14m (81 mg). 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) d 6.84 (d, 1 H, J=7.8 Hz), 5.14 (d, 1 H), 4.61-4.55 (m, 1 H), 4.31 (s, 1 H), 4.22 (d, 1 H, J=10 Hz), 4.03 (d, 1 H, J= 0.5 Hz), 3.88-3.85 (m, H), 3.75 (s, 3H), 1.89-1.76 (m, 1 H), 1.59-1.76 (m, 28H), 1.02 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.94 (s: 3H), 0.86 (s, 3H).
MS (ESI), m/z, intensidad relativa 610 [(M+AcOH+1 )+, 40], 550 [(M+1 )+, 50], 450 (100), 309 (20).
Paso L Una solución del éster 14m (80 mg, 0.15 mmoles) en THF seco (2 mi) se trató con LiBH (solución 2 en THF, 0.1 mi) y se agitó a t.a. durante 4 h. La mezcla de reacción se desactivó con HCI acuoso (1 M, gotas) y se extrajo con CH2CI2 (3x30 mi). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHC03 acuoso (100 mi), salmuera, se secaron con gS04, se filtraron, se concentraron ¡n vacuo y se purificaron mediante cromatografía (Si02, acetona/hexanos 1 :3) para dar 14n (70 mg) como un sólido amorfo. MS (ESI), m/z, intensidad relativa 544 [(M+Na)+, 30], 522 [(M+1)+, 40], 422 (100).
Paso M Se trató una solución del alcohol 14n (30 mg, 0.05 mmoles), en CH2CI2 (2 mi) con reactivo de Dess-Martin (30 mg, 0.07 mmoles) y se agitó a t.a. durante 2 h. La mezcla de reacción se desactivó con solución de Na2S2Ü3 (10%, 10 mi) y solución saturada de NaHC03 (10 mi) y se agitó a t.a. durante 0.5 h. La mezcla de reacción se extrajo con CH2CI2 (3x10 mi). La capa orgánica se secó con gS04) se filtró, se concentró in vacuo y se usó tal cual en la siguiente reacción. MS (ESI), m/z, intensidad relativa 552 [(M+1 )+, 100], 248 (40). Paso N El compuesto 14o del paso M se convirtió en 14p (40 mg) usando CH3COOH (20 µ?) e isocianoacetato de metilo (20 µ?) siguiendo el procedimiento similar al paso I (ejemplo Preparativo 1 ) dando una mezcla de diastereómeros. MS (ESI), m/z, intensidad relativa 711 [(M+1 )+, 100], 240 (20).
Se trató una solución del éster metílico 14p (80 mg, 0.12 mmoles) en THF (3 mi), H20 (3 mi) y CH3OH (3 mi) con LiOH- H20 (41 mg, 1 mmoles) y se agitó a t.a. durante 2 h. Una vez completada la reacción, la reacción se acidificó con HCI acuoso (15 mi) y se extrajo con CH2CI2 (3x30 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron ( gS04), se filtraron y se concentraron in vacuo . El residuo se secó in vacuo y se usó tal cual sin otra purificación. El ácido se disolvió en CH2CI2 (2 mi), DMF (2 mi) y se trató con H-Phg-N(CH)2- HCI (40 mg, 0.2 mmoles), NMM (40 mg, 0.4 mmoles) HATU (68 mg, 0.16 mmoles) y se agitó a 0°C durante 24 h. La solución de color amarillo se concentró in vacuo y se diluyó con CH2CI2 (75 mi). Las capas orgánicas se lavaron con NaHC03 acuoso saturado, HCI acuoso y salmuera. La mezcla de reacción se secó (MgS04), se filtró, se concentró in vacuo y se usó tal cual en el paso siguiente (90 mg).
Se trató una solución del alcohol 14q (90 mg, 0.11 mmoles) en CH2CI2 (2 mi) con reactivo de Dess- artin ( 00 mg, 0.24 mmoles) y se agitó a t.a. durante 2 h. La reacción se diluyó con solución acuosa de a2S2O3 (30 mi) y solución acuosa de NaHC03 (30 mi cada una) y se extrajo con CH2CI2 (50 ml). La capa orgánica se lavó con NaHC03 saturado, salmuera, se secó con MgS04, se filtró, se concentró in vacuo y se purificó mediante cromatografía (acetona/hexanos 2:3) para dar 14 (22 mg) como un sólido incoloro. MS (ESI), m/z, intensidad relativa 813 [(M+1 )+, 00], 768 (20).
EJEMPLO PREPARATIVO 15 Paso A la A 45 mi de THF, diisopropilamina (4.70 mi, 33.51 mmol, 2 eq.) y LiCI (4.26 g, 6 eq) a -78°C se agregó nBuLi (20.4ml, 1.95 eq) bajo atmósfera de nitrógeno. 10 min. más tarde, la solución de 1a/30 mi de THF se transfirió a la solución anterior durante 10 min. Después de 20 min, la mezcla amarilla amarronada se calentó hasta 0°C. Otros 20 min. más tarde, la solución se tornó de color amarillo brillante opaco y se agregó 4-yodo-1-buteno (3.35 g, 1.1 eq) gota a gota. La solución se tornó aún más brillante y 60 min. más tarde se agregaron 115 mi de HCI 1 M para desactivar la reacción. Se eliminó el THF y se agregaron 150 mi de EtOAc para extracción. La capa orgánica también se lavó con 115 mi de HCI 1 M. Las capas acuosas se combinaron y se ajustaron a pH 14 con NaOH 6M a 0°C. La extracción se realizó con 110 mi x 4 de diclorometano. La capa orgánica se secó sobre carbonato de sodio. La filtración a través de Celite y la eliminación del solvente dieron 4 g del aceite que, tras el reposo, se tornó sólido. La cromatografía flash con Et3N/MeOH/DCM 5:5:90 dio 2.63 g de 15a puro con 57% de rendimiento. (Rf = 0,64, Et3N/MeOH/DCIvl 5:5:90) 1H RMN (relación de rotámeros 4:1. * indica picos del rotámero menor. CDCI3): d 0.96* (d, 3H, J = 6.7 Hz) 1.15 (d, 3H, J = 6.9 Hz) 1.45-1.55 (m, 2H) 2.05-2.20 (m, 2H) 2.80 (s, 3H) 2.92* (s, 3H) 3.55-3.60 (m, 2H) 4.00* (m, 1H) 4.35-4.45* (m, 1H) 4.60-4.65 (m, 2H) 4.92-5.02 (m, 2H) 5.68-5.80 (m, 1 H) 7.20-7.40 (m, 5H). 3C RMN (CDC!3): d 11.26 15.68 31.11 35.67 47.17 52.22 76.92 116.46 127.50 128.67 129.34 138.60 143.19 178.08. S: Ci6H24N202: 277 ( +H)+ ; HRMS: calculado: 277.1916; experimental: 277.1917.
Paso B Se trataron 1.9 g de 15a (6.88 mmol, 1 eq) con NaOH 2-N (7.0 mi, 2 eq), 7 mi de agua y se sometió a reflujo a 100°C durante 3 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente. Se agregaron 20 mi de DCM, 10 mi de agua y se separó la capa orgánica. La capa acuosa se lavó con 20 mi de DCM. Las capas orgánicas combinadas también se lavaron con 10 mi de agua. La capa acuosa combinada se trató con 1.3 mi de HCI 12 N. Se agregaron 20 mi de dioxano y se ajustó la solución a un pH 8-9 mediante el agregado de NaHC03 saturado. Se agregaron 1.48 g de iBOC-OSU (1 eq) y se agitó la mezcla hasta el día siguiente. Después de disminuir el volumen del solvente a la mitad, se agregaron 10 mi de agua y 10 mi de DCM para la extracción. La capa acuosa se trató entonces con HCI 12 N gota a gota hasta que precipitó (pH 2). La extracción con 40 mi x 2 de EtOAc seguida de secado sobre MgS04 y filtración por Celite dio 1.52 g de aceite incoloro 15b con 90% de rendimiento. 1H RMN (CDCI3): d 0.88 (d, 6 H, J = 6.6 Hz) 1.78-2.00 (m, 3H) 2.10-2.20 (m, 2H) 3.80-3.82 (m, 2H) 4.40 (m, 1 H) 5.00-5.06 (m, 2H) 5.10 (m, 1 H) 5.80 (m, 1H). 13C RMN (CDCI3): d 20.0 26.2 29.0 32.8 54.2 72.8 117.0 138.0 157.8 177.6. MS para CnH19N04: 230 (M+H)+.
Paso C Se mezcló la ¡mina 15c (9.42 g, 31.88 mmol, 1 eq) con catalizador de Corey (J. Am. Chem. Soc, 1997, 119, 12414) (1.93 g, 0.1 eq), monohidrato de hidróxido de cesio (53.55 g, 10 eq) en 50 mi de DCM. La solución se enfrió hasta -60°C seguido del agregado de 5-yodo-1-penteno (25 g, 4 eq) bajo nitrógeno. El producto bruto se agitó durante 60 h cuando se agregaron 100 mi de éter etílico. Después de lavar con agua 100 mi x 2 y salmuera 70 mi x 1 , la capa orgánica se secó sobre MgS04. La filtración por Celite y la eliminación del solvente dio 28.56 g de producto bruto. Se sometieron a cromatografía 5.1 g del bruto con hexano puro en primer lugar y luego EtOAc/hexano 1 :40 a 1 :20. Se obtuvo una mezcla de 2.56 g de 15d, 5- yodo-1-penteno y benzofenona (1:2.5:0.8). (15d: Rf = 0.39, EtOAc/hexano1:20) Paso D lie Se trataron 0.5 g del producto 15d bruto anterior (2.56 g) con 4 mi de HOAc/THF/agua 1:1 :1 durante 90 min. cuando la TLC muestra la desaparición del material de partida. Se agregaron dos pipetas llenas de NaHC03 saturado. Se agregaron 10 mi de agua y 20 mi de hexano para extracción. Luego, la capa acuosa también se alcalinizó a pH 9-10. Se agregaron (Boc^O (0.15 g) y 4 mi de dioxano y después de 2.5 h, se eliminó el solvente y el pH de la solución se ajustó a 3-4. La extracción con éter seguida de cromatografía con EtOAc/hexano 1 :10 dio 0.16 g de 15e con 48% de rendimiento total a partir de 15c. (Rf = 0.44, EtOAc/hexano 1:10).
Paso E 15 c. 1Se Se disolvieron 4.88 g de 15e (13.87 mmoles) en 20 mi de tolueno a -78°C y se trataron con 21 mi de LiAIH4 (1 M en Et20, 1.6 eq) durante 40 min. La mezcla se calentó hasta 0°C y se desactivó mediante EtOAc y 20 mi de NaHS04 5%. La extracción con éter, la filtración a través de Celite y la eliminación del solvente dieron el residuo que se sometió a cromatografía con EtOAc/hexano 1/5. Se obtuvieron 2.8 g del aldehido deseado 15f (Rf = 0,4) junto con el alcohol (1.43 g, Rf = 0.04). Este último se pudo convertir en el aldehido mediante la reacción de Dess-Martin.
Paso F } 1IT 1fg Se mezclaron 1.26 g de 15f (5.55 mmoles, 1 eq), isocianoacetato de metilo (0.50 mi, 1 eq), ácido acético (0.32 mi, 1 eq) en 20 mi de DCM y se agitó durante 80 h. La eliminación del solvente y la cromatografía instantánea dieron 1.0 g de 15g con 51% de rendimiento. (Rf = 0.29, EtOAc/hexano 1 :1). 1H RMN (CDCI3): 5 1.42 (s, 9H) 1.50-1.60 (m, 2H) 1.99-2.20 (m, 4H) 2.18 (s, 3H) 3.76 y 3.78 (dos singuletes, 3H, diastereómeros 1 :1 ) 3.90-4.20 (m, 4 H) 4.90-5.00 (m, 2H) 5.20 (s amplio, 1H) 5.70 (m, 1 H) 6.62 (s amplio, 1H). 13C RMN (CDCI3): d 21,93 26.26 29.46 31.25 34.41 41.99 52.53 53.50 75.57 80.41 15.74 139.14 156.28 168.91 169.38 170.79. HRMS para C18H30N2O7: calculado: 387.2131 (M+H)+; experimental 387.2133.
Paso G 1Sg iSh Se agitó el compuesto 15g (1.08 g, 2.8 inmoles, 1 eq), 60 mg K2C03 (0.15 eq) en 6 ml de MeOH a temperatura ambiente durante 1 y luego otras 2 h a 40°C. La remoción del sólido seguido de cromatografía instantánea dio el producto deseado 15h como sólido blanco (0.65 g, 68% de rendimiento). 1H RMN (CDCI3): d 1.40 (s, 9H) 1.40-1.70 (m, 4H) 1.99-2.10 (m, 2H) 3.70 (s, 3H) 3.80 (amplio, 1H) 4.00-4.25 (m, 4H) 4.90-5.00 (m, 2H) 5.10 (s amplio, 1H) 5.30 (m, 1H) 5.78 (m, 1H) 7.40 (s amplio, 1 H). 3C RMN (CDCI3): d 26.83 29.48 30.76 34.53 42.03 53.51 54.95 75.05 81.07 115.76 139.30 157.92 170.84 174.16. Ci6H28N206: 345 (M+H)+. HRMS: calculado: 345.2026; experimental: 345.2033.
Paso H 15h 1 Si El compuesto 5h (0.39 g, 1.13 mmoles) se agitó con HCI 4 M en dioxano (4 mi) a temperatura ambiente durante 2 h cuando se formaron precipitados sólidos. El solvente se eliminó y se agregaron 20 mi de DCM. El pH se ajustó a 7 usando la base de Hunig. Luego, el solvente se eliminó y el residuo se trató con 10 mi de THF, Boc-Pro-OH (0.73 g, 3 eq), HATU (1.29 g, 3 eq), base de Hunig (1.18 mi, 6 eq) y 1 mi de DMF. Después de agitar a temperatura ambiente durante 7 h, el solvente se eliminó in vacuo. El residuo se disolvió en 20 mi de EtOAc y se lavó con 10 mi de NaHC03 saturado, 10 mi de HCI 0.5 M dos veces, 20 mi de agua y 5 mi de salmuera. La cromatografía dio 0.68 g de 15¡ (Rf = 0.31 , 5% MeOH en DCM).
Paso I Se trató 15i con 2 mi de DCM, 3 mi de HCI 4 M en dioxano durante 1 h. Se agregaron 30 mi de DCM seguido de neutralización con base de Hunig a 0°C. El solvente se eliminó y se disolvió ei producto bruto en 5 mi de DCM, 10 mi de THF. Después de la adición de 15b (0.26 g, 1 eq), HATU (0.43 g, 1 eq) y base de Hunig (0.41 mi, 2.1 eq) y agitación durante 4 h, el solvente se eliminó y se agregaron 30 mi de EtOAc. Luego, la solución se lavó con 0 mi de NaHC03 saturado, 10 mi de HC1 M, 10 mi de HCI 0,5 M, 20 mi de agua, 5 mi de salmuera. La cromatografía dio el producto deseado 15j (0.3 g, 48% a partir de 15h). 13C RMN (CDCb): d 20.20 26.26 26.72 29.18 29.55 30.58 33.25 34.60 41.95 48.57 52.90 53.00 53.40 54.68 61.56 72.34 75.68 115.64 116.73 138.07 139.33 157.47 171.04 171.15 173.06 174.23. C27H44N406: 553 (M+H)+. HRMS: calculado: 553.3237; experimental: 553.3259.
Paso J Se trató el compuesto 15j (0.37 g, 0.67 mmoles) con 0. 38 g de catalizador de Grubbs (0.25 eq) en 223 mi de DCM bajo argón. Después de agitar a temperatura ambiente durante 65 h, la RMN muestra que la mezcla contiene material de partida 5j, el producto deseado 5k (alrededor de 20% de rendimiento) y ??(06???)3. Los Rf para estos tres compuestos son 0.34, 0.24, 0.74, respectivamente en 5% HOAc/EtOAc. La cromatografía instantánea reiterada pudo dar la muestra pura de 5k. H RMN (CDCI3): d 0.90 (d, 6H, J = 6.6 Hz) 1.40-2.00 (m, 14H) 2.05-2.50 (m, 3H) 3.60 (m, 1H) 3.70 (s, 3H) 3.75-4.00 (m, 3H) 4.00-4.20 (m, 2H) 4.50 (m, 1 H) 4.70 (d, 1H, J = 7.5 Hz, diastereómero) 4.81 (d, 1H, J = 7.9 Hz, otro diastereómero) 5.38 (m, 1 H) 5.58 (m, 1H) 5.65 (s amplio, 1H) 7.20 (d, 1 H J = 7.0 Hz) 7.38 (d, 1 H, J = 7.1 Hz). 3C RMN (CDCI3): d 20.26 23.05 26.54 27.02 27.67 27.73 29.21 31.06 34.03 41.97 48.71 52.40 52.80 53.53 60.54 72.43 75.08 130.44 130.56 157.02 171.13 172.01 173.13 173.38. LC/MS: Tr = 5.11 min. (gradiente A (acetonitrilo)/B (agua con 0.1 % de TFA): de A/B 5% a A/B 95% en 10 min.) C25H4o 408: 525 (M+1)+ HRMS: calculado: 525.2924; experimental: 525.2908.
Paso K 15k S Se agitaron el compuesto 15k (92 mg, 0.18 mmol, 1 eq), 60 mg de K2C03 (2.5 eq) en 5 mi de MeOH a 40°C durante 2 h cuando la TLC muestra la desaparición completa del material de partida. Después de la eliminación del solvente, se agregaron 44 mi de HCI 0.01 M en DCM (2.5 eq) para neutralizar la solución. El solvente se eliminó seguido del agregado de 10 mi de THF, 1 mi de DMF, PhG-O-tBu (sal de HCI, 51 mg, 1.2 eq), 80 mg de HATU ( .2 eq), 0, 1 mi de base de Hunig (3.5 eq). La mezcla se agitó durante 12 h. Después de la eliminación del solvente, la cromatografía directa dio el producto 151 (97 mg, 79% de rendimiento a partir de 15j. Rf = 0.32, 5% de MeOH/DCM). 1H RMN (CDCI3): d 0.90 (d, 6H, J = 6.6 Hz) 1.30 (s, 9H) 1.40-2.00 (m, 14H) 2.15-2.20 (m, 1H) 3.60 (m, 1H) 3.75-3.90 (m, 3H) 4.00-4.09 (m, 1H) 4.10-4.35 (m, 2H) 4.50 (m, 1 H) 4.62 (d, 1 H, J = 7.5 Hz, diastereómero) 4.72 (d, 1H, J = 7.9 Hz, otro diastereómero) 5.20-5.38 (m, 1 H) 5.44 (d, 1 H, J = 6.6 Hz) 5.50 (m, 1H) 5.98 (m, 1H) 7.30 (m, 5H) 7.45 (d, H, J = 7.0 Hz) 7.55 (d, 1 H, J = 7.1 Hz) 7.70 (s amplio, 1 H). 13C RMN (CDCI3): d 20.30 23.35 26.38 26.78 27.29 28.02 29.18 31.42 34.89 43.97 48.70 51.90 52.93 58.22 60.40 72.44 74.96 75.93 83.80 120.88 128.10 128.12 129.63 129.70 130.33 137.74 157.20 169.32 170.69 173.70 174.47. LC/MS: Tr = 6.61 min. (gradiente A (acetonitrilo)/B (agua con 0.1% de TFA): de A/B 5% a A B 95% en 10 min.) MS: C36H53N509: 700 ( +H)+.
Paso L Se trató el compuesto 151 (90 mg, 0.13 mmoles) con 109 mg del reactivo de Dess-Martin (2 eq) en 10 mi de DCM a temperatura ambiente durante 12 h. Después de la eliminación del solvente, la cromatografía directa con EtOAc/hexano 7:3 dio 15m (40%) como sólido blanco. 1H RMN (CDCI3): d 0.95 (d, 6H, J = 6.6 Hz) 1.40 (s, 9H) 1.50-2.10 (m, 14H) 2.20-2.30 (m, 1 H) 3.60 (m, 1H) 3.75-3.90 (m, 3H) 3.93 (dd, 1H, J = 5.9, 16.8 Hz) 4.10 (m, 1H) 4.50 (dd, 1 H, J = 8.0, 13.9 Hz) 4.80 (d, 1H, J = 6.6 Hz) 5.20-5.40 (m, 3H) 5.41 (d, 1 H, J = 6.6 Hz) 5.60 (dd, 1H, J = 7.3, 10 Hz) 6.82 (d, 1H, J = 7.3Hz) 7.30 (m, 5H) 7.50 (m, 1H) 7.80 (d, 1H, J = 6.7 Hz). 13C RMN (CDCI3): d 20.29 23.65 26.34 26.75 29.02 29.20 30.37 30.95 31.56 35.07 43.71 48.83 52.95 54.20 58.14 60.23 72.54 84.15 128.03 129.41 129.68 129.87 130.62 137.60 156.99 160.33 167.41 171.37 173.84 187.26 196.36. LC/MS: Tr = 6.81 min. (gradiente A (acetonitrilo)/B (agua con 0.1 % de TFA): de A/B 5% a A/B 95% en 10 min.) MS: C36H51N509: 698 (M+H)+ HRMS: calculado 698.3765 experimental 698.3762.
Paso M Se trató el compuesto 5m (4 mg) con 5 mi de eOH, 2 mg de Pd-C bajo globo de hidrógeno durante 1.5 h. La solución se filtró a través de Celite. El filtrado se secó in vacuo y la RMN muestra la formación exclusiva de 15. H RMN (CDCIs): d 0.95 (d, 6H, J = 6.6 Hz) 1.40 (s, 9H) 1.50-2.10 (m, 16 H) 2.20-2.30 (m, 1 H) 3.60(m, 1 H) 3.75-3.90 (m, 3H) 3.93 (dd, 1 H, J = 5.9, 16.8 Hz) 4.10 (m, H) 4.50 (dd, 1 H, J = 8.0, 13.9 Hz) 4.80 (d, 1 H, J = 6.6 Hz) 5.30 (m, 1 H) 5.41 (d, H, J = 6.6 Hz) 5.55 (d, 1 H, J = 7.0 Hz) 6.82 (d, 1H, J = 7.3Hz) 7.30 (m, 5H) 7.50 (m, 1 H) 7.80 (d, 1H, J = 6.7 Hz).
LC/MS: Tr = 5,26 min. (gradiente A (acetonitriio)/B (ag 0,1% de TFA): de A/B 5% a A/B 95% en 10 min.) MS: C36H53N509: 700 (M+H)+. HR S: calculado: 700,3922; experimental: 700.3925.
EJEMPLO PREPARATIVO 16 Paso A Se trató una solución del aldehido 14o (590 mg, .15 mmoles) en CH2CI2 (10 mi) con Et3N (240 mg, 2.4 mmoles) y cianhidrina de acetona (240 mg, 2.82 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a t.a. durante 2 h y se concentró in vacuo. El residuo se purificó mediante cromatografía (S1O2, acetona/hexanos 1 :4) para dar 16a (600 mg) como un sólido incoloro.
S (ESI), m/z, intensidad relativa 569 [(M+Na)+, 20], 547 [(M+1 )+, 40], 447 (100).
Paso B Se trató una solución de la cianhidrina 16a (600 mg, 1.1 mmoles) en DMSO (10 mi) con H2O2 (35%, 1.5 mi) y K2CO3 (252 mg, 1.83 mmoles) y se agitó a t.a. durante 15 h. La mezcla de reacción se diluyó con CH2CI2 (200 mi) y se lavó con solución acuosa de Na2S203 (10%, 50 ml) y salmuera (30 mi). La mezcla de reacción se secó (MgS04), se filtró, se concentró in vacuo y se usó directamente en la oxidación sin otra purificación. Se trató una solución de hidroxi amida en tolueno/DMSO (2:1 , 15 ml) con EDCI (1.9 g, 10.00 mmoles) y CI2CHCOOH (317 mg, 2.49 mmoles) y se agitó a 0°C durante 3 h. La mezcla de reacción se diluyó con CH2CI2 (300 ml) y se lavó con NaHCO3 acuoso saturado (2x100 ml) y salmuera (100 ml). La capa orgánica se secó (MgSO4), se concentró y se purificó mediante cromatografía (S1O2, acetona/hexanos 1 :5) para dar 16 como un sólido incoloro.
MS (ESI), m/z, Intensidad relativa 617 [(M+CH3OH+Na)+, 20], 595 [(M+CH3OH+1 )+, 40], 507 [(M+1 )+, 20], 463 (100).
EJEMPLO PREPARATIVO 17 Paso A Se agitó una solución dé 16 (300 mg 0.54 mmoles) en HCOOH (10.0 mi) a t.a. durante 2 h y se concentró in vacuo. El residuo se secó in vacuo y se usó en reacciones posteriores sin otra purificación.
Paso B Se trató una solución de 7a ( 00 mg) en D F/CH2C!2 (1:1 , 3 mi) con '"BuNCO (50 µ? y NMM (52 mg, 0.52 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a t.a. durante 16 h y se concentró in vacuo y se diluyó con CH2CI2 (60 mi) y se lavó con HCI acuoso (1 M, 2x30 mi), se secó, se concentró in vacuo. El residuo se purificó mediante cromatografía (Si02, acetona/hexanos 1 :2) para dar 17 (34 mg) como un sólido incoloro. MS (ESI), m/z, intensidad relativa 584 [(M+1 )+, 30], 463 (100).
EJEMPLO PREPARATIVO 18 Paso A Se trató una solución de 17a (100 mg) en DMF/CH2CI2 (1 :1 , 3 mi) con éster ter-butílico del isocianato de ter-butilglicina (100 mg, 0.46 mmoles) y NMM (52 mg, 0.52 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a ta. durante 16 h y se concentró in vacuo, se diluyó con CH2CI2 (60 mi) y se lavó con HCI acuoso (1 M, 2x30 mi), se secó, se concentró in vacuo. El residuo se purificó mediante cromatografía (Si02, acetona/hexanos 1 :2) para dar 18 (42 mg) como un sólido incoloro. MS (ESI), m/z, intensidad relativa 698 [(M+Na)+, 40], 676 [(M+1)+, 100], 463 (20).
EJEMPLO PREPARATIVO 19 0 Me 15 Paso A Se trató una solución de 17a (100 mg) en DMF/CH2CI2 (1 :1 , 3 mi) con isocianato de a-metil-ciclohexilamina (100 µ?) y NMM (52 mg, 0.52 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a t.a. durante 16 h y se concentró in vacuo, se diluyó con CH2CI2 (60 mi) y se lavó con HCI acuoso (1 M, 2x30 mi), se secó y se concentró in vacuo. El residuo se purificó mediante cromatografía (S1O2, acetona/hexanos 1 :2) para dar 20 (21 mg) como un sólido incoloro. S (ESI), m/z, intensidad relativa 624 [(M+Naf, 30], 602 [(M+1)+, 15], 463 (100), 449 (20), 129 (30).
EJEMPLO PREPARATIVO 20 20 Paso A 20a 20b Se trató una solución del dieno acíclico 20a (6.00 g, 10.954 mmoles) en tolueno seco (500 mi), se desgasificó con argón durante 0.5 h, se trató con catalizador de Grubbs (1.35 g, 1.643 mmoles) y se calentó a 60°C durante 12 h. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y se purificó mediante cromatografía (Si02, EtOAc/hexanos 1 :3) para dar 20b como una espuma marrón.
Paso B 20b 20c Se trató una solución del alqueno 20b (5.00g mg, 0.865 mmoles) en metanol ( 00 mi) con Pd/C (1.2g, 5% p/p) y se hidrogenó a 3.45 x 105 Pa (50 psi) durante 3 h. La reacción se filtró a través de un tapón de Celite y se concentró in vacuo. El residuo se purificó mediante cromatografía usando THF/hexanos con un gradiente de 10-40% para dar 20c aislado (3.00 g) como un sólido incoloro.
Paso C 20c 20d Se trató una solución del éster 20c (3.00 g, 5.75 mmoles) en THF seco (50 mi) con L1BH4 (solución 2M en THF, 3.5 mi, 6.90 mmoles) y se agitó a t.a. durante 3 h. La reacción se monitoreó por TLC (EtOAc/Hexanos 1 :2). La reacción se desactivó con metanol (2 mi) y se diluyó con HCI acuoso (1 M, 30 mi) y se extrajo en CH2CI2 (3x100 mi). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHCC>3 acuoso saturado (30 mi), salmuera, se secaron (MgS04), se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (S1O2, Acetona/Hexanos 1 :2) para dar 20d (2.21 g) como un sólido incoloro. MS (m/z, intensidad relativa) 518 [(M+K)+, 15], 480 [(M+H)+, 75], 380(100).
Paso D OocliH 20d 20e Se trató una solución del alcohol 20d (2.2 g, 4.58 mmoles) CH2CI2 seco (50 mi) con reactivo de Dess-Martin (2.91 g, 6.880 mmoles) y se agitó a t.a. durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con Na2S2Ü3 acuoso (5%, 50 mi) y NaHC03 acuoso saturado (50 mi) y se agitó a t.a. durante 15 min. La mezcla de reacción se extrajo con CH2CI2 (500 mi) y las capas orgánicas combinadas se secaron (MgS04), se filtraron, se concentraron in vacuo para dar 20e bruto (1.9 g), que se usó en la siguiente reacción sin otra purificación.
Paso E 20e 20f Se enfrió una solución de 20e bruto (1.00 g, 2.094 mmoles) en CH2CI2 (15 mi) a 0°C y se trató con la cíanhidrina de la acetona (356 mg, 4.187 mmoles) y trietilamina (424 mg, 4.187 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 12 h y se concentró in vacuo. El residuo se purificó mediante cromatografía (S1O2, EtOAc/Hexanos 1 :5-->1 :1) para dar 20f (500 mg) como un aceite incoloro.
Paso F 20f 20g Se trató una solución de la cianhidrina 20f (500 mg, -1.00 mmol) en DMSO (5 mi) con H2O2 (5 mi), K2CO3 (276 mg, 2.00 mmoles) y se agitó a t.a. durante 12 h. La mezcla de reacción se diluyó con Na2S2O3 acuoso (5%, 100 mi) y se extrajo con CH2CI2 (2x100 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO4), se filtraron, se concentraron in vacuo para dar 20g que se usó tal cual para la posterior oxidación sin purificación.
Paso G 20g 20h Se trató una solución de la hidroxilamina 20g (850 mg, 1.626 mmoles) en tolueno (5 mi) y DMSO (5 mi) con EDCI (3.1 17 g, 6.26 mmoles), y ácido dicloroacetico (1.048 g, 8.13 mmol, 698 µ?) y se agitó a ta. durante 3 h. La mezcla de reacción se diluyó con CH2CI2 (200 mi) y se lavó con NaHC03 acuoso saturado (200 mi), HCI acuoso (1 , 200 mi), salmuera (30 mi), se secó (MgS04), se filtró, se concentró in vacuo y se purificó mediante cromatografía (S1O2, acetona/Hexanos 1 :2) para dar 20h (300 mg) como un sólido incoloro.
Paso H BccHÍI 20h 20¡ Se agitó una solución de la cetoamida protegida por Boc 20h en ácido fórmico (5 mi) a t.a. durante 3 h y se concentró in vacuo y se usó tal cual en el siguiente paso sin otra purificación. 20i 20 Se trató una solución de la amina 20i (40 mg, 0.1 mmoles) en cloruro de metileno (3.0 mi) con NMM (30 mg, 0.3 mmoles) y se enfrió a 0°C. Se agregó una solución de isocianato en CH2CI2 y la mezcla de reacción se agitó a ta. durante 1.5 h. La mezcla de reacción se diluyó con cloruro de metileno (60 mi) y se lavó con HCI acuoso (1 M, 30 mi). Las capas orgánicas se secaron (MgS04), se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (Si02, acetona/hexanos 20-?50%) para dar 20 como un sólido incoloro.
S {m/z, intensidad relativa) 588 [(M+Hf, 100], 421 (40). HRMS (ESI) Calculado, para C31 H50N5O6: 588.3761 (M+H)+; Experimental: 588.3751.
EJEMPLO PREPARATIVO 2 : 21 20i 21 Se trató una solución de la amina 20i (40 mg, 0.1 mmoles) en cloruro de metileno (3.0 mi) con NMM (30 mg, 0.3 mmoles) y se enfrió a 0°C.
Se agregó una solución de 2-ciclohexil-1-cicloprop¡l-2-isocianato etanona (0.15 mmoles) en CH2CI2 y la mezcla de reacción se agitó a ta. durante 1.5 h.
La mezcla de reacción se diluyó con cloruro de metileno (60 mi) y se lavó con HCI acuoso (1 M, 30 mi). Las capas orgánicas se secaron con (MgS04) se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (Si02, acetona/hexanos 20 ? 50%) para dar 21 como un sólido incoloro.
EJEMPLO PREPARATIVO 22 22 Paso A 20e 22a Se trató una solución del aldehido 20e (100 mg, 0.210 mmoles) en cloruro de metileno (4 mi) con isocianuro de alilo (28.01 mg, 0.411 mmoles) y ácido acético y se agitó a t.a. durante 12 h. La reacción se concentró in vacuo y se purificó mediante cromatografía (Si02, acetona/hexanos 1 :4?1 :1) para obtener 22a (75 mg) como un sólido incoloro. MS (m/z, intensidad relativa) 605 [(M+H)+, 100], 505 (98).
Paso B 22a 22b Se trató una solución de 22b (275 mg, 0.454 mmoles) en metanol (4 mi), THF (4.0 mi) y agua (4.0 mi) con LiOH«H20 (22 mg, 0.55 mmoles) y se agitó a t.a. durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con HCI acuoso (1 , 30 mi) y se extrajo en CH2CI2 (2x40 mi). La capa orgánica combinada se secó (MgS04), se filtró, se concentró in vacuo, y se usó tal cual en el siguiente paso sin otra purificación.
Paso C 22b 22 Se trató una solución del alcohol 22b (300 mg, 0.534 mmoles) en CH2CI2 seco (15 mi) con reactivo de Dess-Martin (453 mg, 1.06 mmoles) y se agitó a t.a. durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con a2S2Ü3 acuoso (5%, 30 mi) y NaHCÜ3 acuoso saturado (30 mi) y se agitó a t.a. durante 15 min. La mezcla de reacción ,se extrajo con CH2CI2 (3x50 mi) y las J capas orgánicas combinadas se secaron (MgS04), se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (Si02, acetona/hexanos 0:1—»1 :1) para dar 22 como un sólido incoloro. MS (m/z, intensidad relativa) 561 [(M+H)+, 100], 461 (99). HRMS (ESI) Calculado, para C31 H50N5O6: 588.3761 (M+H)+; Experimental: 588.3751.
EJEMPLO PREPARATIVO 23 23 Paso A 23a 23b Se trató una solución de amina 23a (900 mg, 3.40 mmoles) en CH2CI2 a 0°C con NMM (511 mg, 5.10 mmoles) y cloruro metansulfonilo (585 mg, 5.10 mmoles) y se agitó a 0°C durante 12 h. La mezcla de reacción se diluyó con CH2CI2 (300 mi) y se lavó con exceso de HCI acuoso (1M, 500 mi). La capa orgánica se secó (MgS04), se filtró, se concentró in vacuo y se purificó mediante cromatografía (Si02, Hex/EtOAc 1 :9?1 :1) para dar la metilsulfonamida 23b (1.00 g).
Paso B 23b 23c Se trató una solución de metansulfonamida 23b (1.0 g, 2.9 mmoles) en metanol (30 mi) con paladio (200 mg, 10% en peso/C) y se hidrogenó a 4.14 x 105 Pa (60 psi) durante 3 h. La mezcla de reacción se filtró a través de un tapón de Celite y el filtrado se concentró in vacuo. El residuo se usó directamente en otra reacción sin otra purificación.
Se trató una solución de la amina desprotegida en CH2CI2 (10 mi) y NaHC03 acuoso saturado (10 mi) a 0°C con fosgeno (5 mi, solución 15% en tolueno) y se agitó a 0°C durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con CH2CI2 (50 mi) y la capa orgánica se lavó con NaHCÜ3 acuoso frío. La capa orgánica se secó (MgS04), se filtró y además se diluyó con 0 mi de tolueno, se concentró la capa de cloruro de metileno y se usó como una solución de 23c.
Paso C 20¡ 23 Se trató una solución de la amina 20i (40 mg, 0.1 mmoles) en cloruro de metileno (3.0 mi) con NMM (30 mg, 0.3 mmoles) y se enfrió a 0°C. Se agregó una solución de isocianato 23 en CH2CI2 y la mezcla de reacción se agitó a ta. durante 1.5 . La mezcla de reacción se diluyó con cloruro de metileno (60 mi) y se lavó con HCI acuoso (1 M, 30 mi). Las capas orgánicas se secaron (MgS04), se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (Si02, acetona/hexanos 20?50%) para dar 23. MS (m/z, intensidad relativa) 693 [(M+K)+, 10], 677 [(M+Na)+, 20], 655 [(M+Hf, 100], 449 (30), 421 (30); HRMS (ESI) Calculado, para C3iH54 607SNa 677.3672 (M+Na)+; Experimental: 677.3685.
EJEMPLO PREPARATIVO 24 24 Paso A Scsfi» 22 24a Se agitó una solución de la cetoamida protegida por Boc 22 (220 mg, 0.39 mmoles) en ácido fórmico (5 mi) a ta. durante 3 h y se concentró in vacuo y se usó tal cual en el siguiente paso sin otra purificación.
Paso B 24a 24 Se trató una solución de la amina 24a (40 mg, 0.1 mmoles) cloruro de metileno (3.0 mi) con NMM (30 mg, 0.3 mmoles) y se enfrió a 0°C. Se agregó una solución de isocianato en CH2CI2 y la mezcla de reacción se agitó a ta. durante 1.5 h. La mezcla de reacción se diluyó con cloruro de metileno (60 mi) y se lavó con HCI acuoso (1 M, 30 mi). Las capas orgánicas se secaron (MgS04), se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (SÍÜ2, acetona/hexanos 20?50%) para dar 24 (27 mg). MS (m/z, intensidad relativa) 734 [(M+K)+, 10], 695 [(M+H)+, 100], 461 (20), 443 (20); HRMS (FAB) Calculado para C34H59N6O7S 695.4166 (M+H)+; Experimental: 695.4161.
EJEMPLO PREPARATIVO 25 Paso A 23a 25a Se trató una solución de la amina 23a (900 mg, 3.40 mmoles) en CH2CI2 a 0°C con NMM (51 mg, 5.10 mmoles) y cloruro de tiofensulfonilo (928 mg, 5.10 mmoles) y se agitó a 0°C durante 12 h. La mezcla de" reacción se diluyó con CH2CI2 (300 mi) y se lavó con HCI acuoso en exceso (1 , 500 mi). La capa orgánica se secó (MgS04), se filtró, se concentró in vacuo y se purificó mediante cromatografía (Si02, Hex/EtOAc 1 :9-?1 :1) para dar la sulfonamida 25a (1.00 g), sólido incoloro. 25a 25b Se trató una solución de compuesto protegido por Cbz 25a (1.00 g, 2.118 mmoles) con TFA (30 mi) y sulfuro de dimetilo (7.78 mi) a 0°C y se agitó a t.a. durante 3 h. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y se diluyó con NaOH acuoso (100 mi). La amina se extrajo con cloruro de metileno (2x100 mi) y las capas orgánicas combinadas se secaron con (MgS04) se filtraron, se concentraron in vacuo y para dar 25b (800 mg) que se usó en otra reacción sin otra purificación. MS (m/z, intensidad relativa) 277 [(M+H)+, 100], 190 (50). 25b 25c Se trató una solución de amina desprotegida 25b (800 mg, 2.9 mmoles) en CH2CI2 (10 mi) y NaHC03 acuoso saturado (10 mi) a 0°C con fosgeno (5 mi, solución15% en tolueno) y se agitó a 0°C durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con CH2CI2 (50 mi) y la capa orgánica se lavó con NaHCO3 acuoso frío. La capa orgánica se secó (MgS04), se filtró y también se diluyó con 10 mi de tolueno, se concentró la capa de cloruro de metileno y se usó como una solución de 25c. 24a 25 Se trató una solución de la amina 24a (40 mg, 0.1 mmoles) en cloruro de metileno (3.0 mi) con NMM (30 mg, 0.3 mmoles) y se enfrió a 0°C. Se agregó una solución de isocianato en CH2CI2 y la mezcla de reacción se agitó a ta. durante 1.5 h. La mezcla de reacción se diluyó con cloruro de metileno (60 mi) y se lavó con HCI acuoso (1 M, 30 mi). Las capas orgánicas se secaron (MgS04), se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (S1O2, acetona/hexanos 20? 50%) para dar 25 (39 mg) como un sólido incoloro. MS (m/z, intensidad relativa) 801 [(M+K)+, 10], 763 [(M+H)+, 100], 461 (15), 277 (20); HRMS (ESI) Calculado para C37H58N607S2Na 785.3706 (M+Na)+; Experimental: 785.3706.
EJEMPLO PREPARATIVO 26 26 Paso A Se trató una solución de la amina 20i (40 mg, 0,1 mmoles) en cloruro de metileno (3.0 mi) con NMM (30 mg, 0.3 mmoles) y se enfrió a 0°C. Se agregó una solución de isocianato en CH2CI2 y la mezcla de reacción se agitó a ta. durante 1.5 h. La mezcla de reacción se diluyó con cloruro de metileno (60 mi) y se lavó con HCI acuoso (1 M, 30 mi). Las capas orgánicas se secaron (MgS04), se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (Si02, acetona/hexanos 20? 50%) para dar 26 como un sólido incoloro (31 mg). MS (m/z, intensidad relativa) 761 [(M+K)+, 0], 720 [(M+H)+, 100], 421 (20); HRMS (ESI) Calculado para C34H54 607S2Na 745.3393 (M+Na)+; Experimental: 745.3396.
EJEMPLO PREPARATIVO 27 27 Paso A 27a 27b Se trató una solución del ácido 27a (100 mg, 0.385 mmoles) en tolueno (5 mi) con DPPA (116.5 mg, 0.425 mmoles) y Et3N (42.5 mg, 0.425 mmoles) y se agitó a reflujo durante 1.5 h. La mezcla de reacción se diluyó con NaHCOe saturado (30 mi) y se extrajo en CH2CI2 (2x20 mi). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHC03 acuoso (30 mi), salmuera (30 mi), se secaron (MgS04), se filtraron, se concentraron in vacuo, y se usaron como una solución de isocianato en tolueno.
Paso B 24a 27 Se trató una solución de la amina 24a (40 mg, 0.1 mmoles) en cloruro de metileno (3.0 mi) con NMM (30 mg, 0.3 mmoles) y se enfrió a 0°C. Se agregó una solución del isocianato 27b (3 equiv) en CH2CI2 y la mezcla de reacción se agitó a ta. durante 1.5 h. La mezcla de reacción se diluyó con cloruro de metileno (60 mi) y se lavó con HCI acuoso (1 , 30 mi). Las capas orgánicas se secaron (MgSC^), se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (S1O2, acetona/hexanos 20?50%) para dar 27 como un sólido incoloro. S (m/z, intensidad relativa) 720 [(M+H)+, 85], 461(100); HRMS (ESI) Calculado para C37H6l N50ySNa 742.4189 (M+Na)+; Experimental: 742.4200.
EJEMPLO PREPARATIVO 28 28 Paso A 20i 28 Se trató una solución de la amina 20i (40 mg, 0.1 mmoles) en cloruro de metileno (3.0 mi) con NM (30 mg, 0.3 mmoles) y se enfrió a 0°C. Se agregó una solución del isocianato 27b (3.00 equiv) en CH2CI2 y la mezcla de reacción se agitó a ta. durante 1.5 h. La mezcla de reacción se diluyó con cloruro de metileno (60 mi) y se lavó con HCI acuoso (1 M, 30 mi). Las capas orgánicas se secaron (MgS04), se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (Si02, acetona/hexanos 20? 60%) para dar 28 (29 mg) como un sólido incoloro.
MS (m/z, intensidad relativa) 718 [(M+K)+, 10], 702 [(M+Na)+, 20], 680 [(M+H)+, 80], 421 (100); HRMS (ESI) Calculado para C34H57Ns07SNa 702.3876 (M+Na)+; Experimental: 702.3889.
EJEMPLO PREPARATIVO 29 29 Paso A 24a 29 Se trató una solución de la amina 24a (50 mg, 0.1 mmoles) en cloruro de metileno (3.0 mi) con NMM (30 mg, 0.3 mmoles) y se enfrió a 0°C. Se agregó una solución de isocianato en CH2CI2 y la mezcla de reacción se agitó a ta. durante 1.5 h. La mezcla de reacción se diluyó con cloruro de metileno (60 mi) y se lavó con HCI acuoso (1 M, 30 mi). Las capas orgánicas se secaron (MgS04), se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (Si02, acetona/hexanos 20 ? 50%) para dar 29 un sólido incoloro (41 mg). MS (m/z, intensidad relativa) 628 [(M+H)+, 100], 129 (35).
EJEMPLO PREPARATIVO 30 30 Paso A 24a 30 Se trató una solución de la amina 24a (50 mg, 0.1 mmoles) en cloruro de metileno (3.0 mi) con NMM (30 mg, 0.3 mmoles) y se enfrió a 0°C. Se agregó una solución de ¡socianato (3.0 equiv.) en CH2CI2 y la mezcla de reacción se agitó a ta. durante .5 h. La mezcla de reacción se diluyó con cloruro de metileno (60 mi) y se lavó con HCI acuoso (1 , 30 mi). Las capas orgánicas se secaron (MgS04), se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (Si02, acetona/hexanos 20 — ? 50%) para dar 30 como un sólido incoloro. MS (m/z, intensidad relativa) 668 [(M+H)+, 100], 169 (50), 128 (80).
EJEMPLO PREPARATIVO 31 Preparación de: 0 Paso A •31a Jií> Se hizo reaccionar una solución de Boc-Glu-OBn 31a (1.8 g, 5.36 mmoles) y la amina 1d (1 g, 4.87 mmoles) como en el Ejemplo Preparativo 1 , paso C, y se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (EtOAc/hexanos 10% a 25%) para dar 31b (1.28 g).
Paso B Se trató una solución del éster bencílico 31b (1.25 g, 2.56 mmoles) con Pd/C 10% en EtOH y se hidrogenó [1.01 x 105 Pa (1 atm), ta.] durante 12 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de un tapón de Celite y se concentró al vacío para dar 31c (997 mg) que se usó en la siguiente reacción sin otra purificación.
Paso C Se enfrió una solución del ácido 31c (20.4 g, 48.7 mmoles) en THF (300 mi) a 0°C y se trató con Et3N (7.47 mi, 53.6 mmoles) y cloroformiato de etilo (4.89 mi, 51.2 mmoles) y se agitó durante 2 horas. El precipitado blanco formado se filtró y se lavó con THF frío. El filtrado se enfrió a 0°C y se agregó NaBH4 (2.39 g, 63.4 mmoles). Se agregó MeOH (20 mi) gota a gota durante 1 hora y se agitó durante un adicional de 2.5 horas. El solvente se eliminó al vacío, se agregó CH2CI2 y se lavó con agua, salmuera y se secó sobre Na2S04. Se filtró el Na2S04 y se eliminó el solvente hasta sequedad. El residuo se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc/hexanos 50% a 90%) para dar 31 d (8.15 g).
Paso D Se trató una solución del éster 31 d (8 g, 20.8 mmoles) en MeOH (120 mi) y H20 (24 ml) con L¡OH«H20 (2,62 g, 62.5 mmoles) a temperatura ambiente durante 12 horas. Se eliminó el solvente al vacío hasta sequedad. Se agregó CH2CI2 y se agitó durante 5 minutos con HCI (72.9 mmoles). Se separó la capa de CH2CI2, se lavó con salmuera y se secó sobre Na2S04. Se filtró el Na2S04 y se eliminó el solvente hasta sequedad para dar el sólido blanco 31 e (7.65 g).
Paso E Se enfrió una solución del ácido 31 e en DMF anhidra (75 mi) y CH2CI2 anhidro (75 mi) a 0°C y se agitó con HOOBt (3.68 g, 22.5 mmoles), NMM (6.77 mi, 61.6 mmoles) y EDCI (5.11 g, 26.7 mmoles) durante 5 minutos. Se agregó H-Lys(Z)-OMe«HCI (7.13 g, 21.5 mmoles) y se agitó durante 3.5 horas a 0°C. La reacción se mantuvo 12 horas a 5°C, después de las cuales se eliminó el CH2CI2, se agregó EtOAc y se lavó con NaHCO3 sai, H3PO4 5%, salmuera, y se filtró a través de Na2SO4. Se eliminó el solvente al vacío hasta sequedad para dar 31f (12.7g).
Paso F Se trató una solución de 31 f (5.5 g, 8.51 mmoles) con Pd/C al 10% en EtOH (100 mi) y se hidrogenó [1.01 x 105 Pa (1atm), ta.] durante 12 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de un tapón de Celite y se concentró al vacío para dar 31 g (4.25 g).
Paso G Se agitó una solución de la amina 31 g (4.25 g, 8.3 mmoles) en CH2CI2 anhidro (750 mi) con trietilamina (1.5 mi, 10.7 mmoles) y cloroformiato de 4-nitrofenilo (2.0 g, 9.96 mmoles) a temperatura ambiente durante 5 horas. Se eliminó el solvente al vacío hasta -200 mi, luego se lavó con NaHC03 sat., agua, H3P045%, salmuera y se filtró a través de Na2S04. El Na2S04 se filtró y se eliminó el solvente para dar 31 h (5.82 g).
Paso H Se trató una solución de 31 h (5.8 g, 8.3 mmoles) en THF anhidro (600 mi) con NaH 60% (996 mg, 24.9 mmoles) a temperatura ¡_ ambiente durante 22 horas. La reacción se desactivó mediante la adición de H20 (5 mi), luego HCI N (50 mi) durante 3 minutos. Se eliminó el solvente al vacío, se agregó CH2CI2 y se lavó con H3P04 5%, salmuera, y se filtró a través de Na2S04. Se filtró el Na2S04, se eliminó el solvente y el residuo se sometió a cromatografía en columna sobre gel de sílice con eOH/CH2CI2 desde 0.25% hasta 3% para dar 31 i (2.86 g, 64% de rendimiento).
Paso I Se hizo reaccionar una solución de 31 i (613 mg, 1.13 mmoles) como en el Ejemplo Preparativo 1, paso F, y se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice ( eOH/ChkCb 3% a 6%) para dar el alcohol 31j (500 mg).
Paso J Se hizo reaccionar una solución del alcohol 31j (480 mg, 0.94 mmoles) como en el Ejemplo Preparativo 1, paso H, y se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (acetona/hexanos 30% a 60%) para dar el aldehido 31 k (383 mg).
Paso K Se hizo reaccionar una solución del aldehido 31 j (365 mg, 0.71 mmoles) como en el Ejemplo Preparativo 22, paso A, y se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (acetona/hexanos 30% a 50%) para dar 31 k (426 mg).
Paso L Se hizo reaccionar una solución de 311 (357 mg, 0.56 mmoles) como en el Ejemplo Preparativo 22, paso B, para dar 31 m (426 mg).
Paso M Se hizo reaccionar una solución de 31 m (350 mg, 0.59 mmoles) como en el Ejemplo Preparativo 22, paso C, y se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (acetona/hexanos 30% a 50%) para dar 31 (335 mg). MS (ES) m/z intensidad relativa 492 [(M-BOC+1 )+, 80]; 592 [(M+1 )+, 100]. Calculado para C29H46N5O8 [M+1 : 592.3346; Experimental 592.3359.
EJEMPLO PREPARATIVO 32 Preparación de: Paso A 20 e 32¾ Se trató una solución del aldehido 20e (200 mg, 0.42 mmoles) en cloruro de metileno (10 mi) con isocianuro de ciclopropilmetllo (66.5 mg, 4.11 mmoles) y ácido acético (50 mg, 0.82 mmoles) y se agitó a t.a. durante 12 h. La reacción se concentró in vacuo y el residuo se purificó mediante cromatografía (SÍO2, acetona/hexanos 1 :9— 1 :1) para obtener 32a (230 mg). MS (ES) m/z intensidad relativa 641 [(M+Na)+, 70]; 619 [(M+1)+, 100], 519 (50).
Paso B Se trató una solución del acetato 32a (230 mg, 0.371 mmoles) en metanol (5.0 mi), THF (5.0 mi) y agua (5.0 mi) con UOH«H20 (25 mg, 0.55 mmoles) y se agitó a t.a. durante 1 h. La mezcla de reacción se diluyó con HCI acuoso (1 , 30 mi) y se extrajo en CH2CI2 (2 x 50 mi). La capa orgánica combinada se secó (MgS04), se filtró, se concentró in vacuo y se usó tal cual en el siguiente paso sin otra purificación. Se trató una solución del alcohol en CH2CI2 seco (15 mi) con reactivo de Dess-Martin (237 mg, 0.558 mmoles) y se agitó a t.a. durante.2 h. La mezcla de reacción se diluyó con Na2S2Ü3 acuoso (5%, 30 mi) y NaHC03 acuoso saturado (30 mi) y se agitó a t.a. durante 15 min. La mezcla de reacción se extrajo con CH2CI2 (3x50 mi) y las capas orgánicas combinadas se secaron (MgS04), se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (Si02, acetona/hexanos 0:1?1 :1) para dar 32 como un sólido incoloro (275 mg). MS (ES) m/z intensidad relativa 629 [(M+isobuteno)+, 40], 575 [(M+1 )+, 100], 475 (90).
Se emplearon procedimientos similares para sintetizar los compuestos: 33 y 34 usando isocianuro de ciclopropilo y etilo para el Paso A del Ejemplo Preparativo 32: EJEMPLO PREPARATIVO 35 Preparación de: Paso A 32 35a Se desprotegió 32 (200 mg, 0.39 mmoles) por disolución en 20 mi de ácido fórmico y reposo durante 2 h. La mezcla de reacción se concentró in vacuo para dar 35a y se usó en posteriores reacciones sin purificación.
Paso B Se trató una solución de la amina 35a (70 mg, 0.13 mmoles) en cloruro de metiieno (3.0 mi) con NMM (50 mg, 0.5 mmoles) y se enfrió a 0°C.
Se agregó una solución del isocianato 25c (1 mi, 0.25 mmoles) en CH2CI2 y la mezcla de reacción se agitó a ta. durante 1.5 h. La mezcla de reacción se diluyó con cloruro de metiieno (150 mi) y se lavó con HCI acuoso (1 M, 30 mi).
Las capas orgánicas se secaron con (MgS04) se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (S¡C>2, EtOAc/CI^Ck 50? 100%) para dar 35 como un sólido incoloro. MS (ES) m/z intensidad relativa 799 [(M+Na)+, 60]; 777 [(M+1 )+, 100].
EJEMPLO PREPARATIVO 36 Preparación de: Paso A Se desprotegió 33 (200 mg, 0.39 mmoles) por disolución en 20 mi de ácido fórmico y reposo durante 2 h. La mezcla de reacción se concentró in vacuo para dar 36a y se usó en posteriores reacciones sin purificación.
Paso B 36a ¾ Se trató una solución de la amina 36a (70 mg, 0.13 mmoles) en cloruro de metileno (3.0 mi) con NMM (50 mg, 0.5 mmoles) y se enfrió a 0°C. Se agregó una solución del isocianato 25c (1 mi, 0.25 mmoles) en CH2CI2 y la mezcla de reacción se agitó a ta. durante 1.5 h. La mezcla de reacción se diluyó con cloruro de metileno (150 ml) y se lavó con HCI acuoso (1 M, 30 mi). Las capas orgánicas se secaron (MgS04), se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (Si02, EtOAc/CH2C!2 0?100%) para dar 36 como un sólido incoloro. MS (ES) m/z intensidad relativa 785 [(M+Na)+, 50]; 763 [(M+1)+, 100]; 593 (60).
EJEMPLO PREPARATIVO 37 Preparación de: Paso A 34 37a- Se desprotegió 34 (200 mg, 0.39 mmoles) por disolución en 20 mi de ácido fórmico y reposo durante 2 h. La mezcla de reacción se concentró in vacuo para dar 37a y se usó en posteriores reacciones sin purificación.
Paso B 37 Se trató una solución de la amina desprotegida 37a (70 mg, 0.13 mmoles) en cloruro de metileno (3.0 mi) con NMM (50 mg, 0.5 mmoles) y se enfrió a 0°C. Se agregó una solución del isocianato 25c (1 mi, 0.25 mmoles) en CH2CI2 y la mezcla de reacción se agitó a ta. durante 1.5 h. La mezcla de reacción se diluyó con cloruro de metileno (150 mi) y se lavó con HCI acuoso (1 , 30 mi). Las capas orgánicas se secaron (MgS04), se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (S1 2, EtOAc/CH2CI2 50? 100%) para dar 37. MS (ES) m/z intensidad relativa 773 [(M+Na)+, 100]; 751 [(M+1 )+, 70].
EJEMPLO PREPARATIVO 38 Preparación de: Paso A: Se trató una solución de la amina desprotegida 37a (70 mg, 0. 3 mmoles) en cloruro de metileno (3.0 mi) con NMM (50 mg, 0.5 mmoles) y se enfrió a 0°C. Se agregó una solución del isocianato 27b (1.5 mi, 0.25 mmoles) en CH2CI2 y la mezcla de reacción se agitó a ta. durante 1.5 h. La mezcla de reacción se diluyó con cloruro de metileno (150 mi) y se lavó con HCI acuoso (1 M, 30 mi). Las capas orgánicas se secaron (MgS04), se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (S¡02, EtOAc/CH2Cl2 50?100%) para dar 38 como un sólido incoloro. MS (ES) m/z intensidad relativa 730 [(M+Na)+, 30]; 708 [(M+ )+, 100]; 409 (30).
EJEMPLO PREPARATIVO 39 Preparación de: Paso A: Se trató una solución de la amina 36a (70 mg, 0.13 mmoles) en cloruro de metileno (3.0 mi) con NM (50 mg, 0.5 mmoles) y se enfrió a 0°C. Se agregó una solución del isocianato 27b (1 mi, 0.25 mmoles) en CH2CI2 y la mezcla de reacción se agitó a ta. durante 1.5 h. La mezcla de reacción se diluyó con cloruro de metileno (150 mi) y se lavó con HCI acuoso (1 M, 30 mi). Las capas orgánicas se secaron (MgSC ), se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (Si02, EtOAc/CH2CI2 50?100%) para dar 39, MS (ES) m/z intensidad relativa 742 [(M+Na)+, 70]; 720 [(M+1)+, 100]; 461 (40). HRMS Calculado para C37H62N5O7S [M+1]+: 720, 4370; Experimental 720, 4350.
EJEMPLO PREPARATIVO 40 Preparación de: o H N Paso A: Se trató una solución de la amina 32a (70 mg, 0.13 mmoles) en cloruro de metileno (3.0 mi) con NMM (50 mg, 0.5 mmoles) y se enfrió a 0°C. Se agregó una solución del isocianato 27b (1 mi, 0.25 mmoles) en CH2CI2 y la mezcla de reacción se agitó a ta. durante 1.5 h. La mezcla de reacción se diluyó con cloruro de metileno ( 50 mi) y se lavó con HCI acuoso (1 M, 30 mi). Las capas orgánicas se secaron (MgS04), se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (Si02, EtOAc/CHaC 50?100%) para dar 40. 1H RMN (DMSO, 500 MHz), d 8.80 (t, 1H, J = 6.0 Hz), 8.37 (d, 1 H, J = 9.5 Hz), 6.22 (d, 1 H, J = 8.8 Hz), 5.88 (s, 1 H), 5.31 (dt, 1 H, J = 2.8 y 9.5 Hz), 4.35 (s, 1H), 4.28-4.22 (m, 1 H), 3.85 (d, 1 H, J = 10 Hz), 3.76 (c, 1 H, J = 5.4 Hz), 3.59 (t, 1 H, J = 13.5 Hz), 3.41 (d, 1 H, J = 13.9 Hz), 3.07-2.95 (m, 2H), 2.22-2.15 (m, 2H), 1.69-1.00 (amplio, 23H), 1.25 (s, 9H), 0.99 (s, 3H), 0.99-0.70 (m, 1 H), 0.88 (s, 3H), 0.42-0.38 (m, 2H), 0.21 -0.18 (m, 2H). 13 !,C RMN (dmso, 125 MHz) d 198.5, 172.1 , 171.3, 162.0, 157.3, 60.5, 60.1 , 54.4, 52.8, 51.5, 47.6, 43.8, 35.4, 35.1, 34.8, 32.3, 31.6, 31.4, 28.3, 28.0, 27.9, 27.3, 26.9, 26.6, 25.8, 25.6, 24.6, 23.4, 22.4, 21.5, 19.5, 13.7, 11.5.
MS (ES) miz intensidad relativa 756 [(M+Na)+, 45]; 734 [(M+1)+, 100]; 475 (20). HRMS calculado para Caal^NaOrS [M+1f: 734.4526 ; Experimental 734.4535.
EJEMPLO PREPARATIVO 41 Preparación de: 41 Paso A: Una solución del intermediario 22b (300 mg, 0.54 mmoles) se tomó en metanol (25 mi) y se trató con 0% de catalizador de Pearlman y se hidrogenó a 3.4 X 105 Pa (50 psi) durante 4 h. La mezcla de reacción se filtró a través de un tapón de Celite® y se concentró in vacuo para dar el producto reducido que se usó en una reacción posterior sin purificación. Se trató una solución del alcohol reducido en CH2CI2 seco (5 mi) con reactivo de Dess-Martin (350 mg, 0.82 mmoles) y se agitó a t.a. durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con Na2S2Ü3 acuoso (5%, 30 mi) y NaHC03 acuoso saturado (30 mi) y se agitó a t.a. durante 15 min. La mezcla de reacción se extrajo con CH2CI2 (3 x 75 mi) y las capas orgánicas combinadas se secaron (MgS04), se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (S¡02, acetona/hexanos 0:1?1 :1 ) para dar 41 (270 mg) como un sólido incoloro.
EJEMPLO PREPARATIVO 42 Preparación de: CH3 .CH3 Paso: 41 42a Se desproíegió 41 por disolución en 20 mi de ácido fórmico y reposo durante 2 h. La mezcla de reacción se concentró in vacuo para dar 42a y se usó en posteriores reacciones sin purificación.
Paso B: 42a 42 Se trató una solución de la amina 42a ( 00 mg, 0.196 mmoles) en cloruro de metileno (3.0 mi) con NMM (60 mg, 0.6 mmoles) y se enfrió a 0°C. Se agregó una solución del isocianato 25c (1.5 mi, 0.25 mmoles, 0.38 mmoles) en tolueno y la mezcla de reacción se agitó a ta. durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con cloruro de metileno (100 mi) y se lavó con HCI acuoso (1 M, 50 mi). Las capas orgánicas se secaron (MgS04), se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (Si02, Acetato de etilo/hexanos 1 :1-»1 :0) para dar 42 (65 mg) como un sólido incoloro. 1H RMN (dmso, 500 Hz), d 8.71 (t, 1 H, J = 6.3 Hz), 8.36 (d, 1 H, J = 9 Hz), 8.00 (dd, 1 H, J = 1.3 y 5.0 Hz), 7.65 (dd, 1H, J = 1.3 y 2.5 Hz), 7.25 (dd, 1 H, J = 3.8 y 1.3 Hz), 6.15 (d, 1 H, J = 9.0 Hz), 5.88 (d, 1 H, J = 10 Hz), 5.31 (m, 1 H), 4.34 (s, 1 H), 4.30 (m, 1 H), 3.93 (d, 1 H, J = 10.5 Hz), 3.79-3.75 (c, 1 H, J = 5.0 Hz), 3.67-3.62 (dt, 1 H, J = 4.1 y 5.6 Hz), 3.12-3.05 (m, 2H), * 2.95-2.91 (m, 2H), 2.67 (s, 3H), 1.70-1.61 (m, 2H) 1.40-1.00 (amplio, 20H), 0.99 (s, 3H), 0.85 (s, 3H), 0.83 (s, 9H), 0.83 (t, 3H). 3C RMN (dmso, 125 MHz) d 198.5, 172.0, 171.7, 162.2, 158.3, 137.7, 133.9, 133.1 , 129.0, 60.5, 55.8, 55.7, 52.7, 51.6, 51.5, 47.6, 36.0, 35.0, 32.2, 31.6, 31.3, 28.5, 27.9, 27.4, 27.1 , 26.9, 26.7, 26.3, 24.4, 22.8, 22.3, 19.5, 13.7, 12.1. MS (ES) rn/z intensidad relativa 788 [(M+Na)+, 50]; 765 [(M+1)+, 100].
EJEMPLO PREPARATIVO 43 Preparación de: CH3v H3 Paso A: Se trató una solución de la amina 42a (100 mg, 0,196 mmoles) en cloruro de metileno (3.0 mi) con NMM (60 mg, 0.6 mmoles) y se enfrió a 0°C. Se agregó una solución del isocianato 27b (3 mi, solución de 0.1 M, 0.3 mmoles) en tolueno y la mezcla de reacción se agitó a ta. durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con cloruro de metileno (100 mi) y se lavó con HCI acuoso (1 M, 50 mi). Las capas orgánicas se secaron con (MgS04) se filtraron, se concentraron ¡n vacuo y se purificaron mediante cromatografía (Si02, EtOAc/Hexanos 1:1 ?1 :0) para dar 43 (42 mg) como un sólido incoloro. 1H RMN (dmso, 500 MHz) d 8.71 (t, 1 H, J = 6.0 Hz), 8.36 (d, 1 H, J = 9.0 Hz), 6.22 (d, 1 H, J = 8.5 Hz), 5.88 (s, 1 H), 5.29 (dt 1 H, J = 9.5 y 2.5 Hz), 4.34 (s, 1 H), 4.23 (t, 1H, J = 9.0 Hz), 3.86 (d, H, J = 10.5 Hz), 3.76 (dd, 1 H, J = 5.0 y 5.5 Hz), 3.60 (d, 1 H, J = 13.5 Hz), 3.41 (d, 1 H, J = 13.5 Hz), 3.13-3.04 (m, 2H), 2.23-2.15 (m, 2H), 1.67-0.9 (m amplio, 30H), 1.25 (s, 9H), 0.99 (s, 3H), 0.88 (s, 3H), 0.83 (t, 3H, J = 7.0 Hz). 13C RMN (dmso, 125 MHz) d 198.5, 172.1 , 171.3, 162.1 , 157.3, 60.5, 60.1 , 55.8, 54.3, 52.8, 51.0, 47.6, 35.4, 35.1 , 32.3, 31.7, 31.3, 28.3, 28.0, 27.9, 27.3, 26.9, 26.6, 26.2, 25.8, 24.6, 23.3, 22.8, 21.5, 19.5, 13.7, 12.2. MS (ES) m/z intensidad relativa 744 [(M+Naf, 40]; 722 [(M+1 )+, 100].
EJEMPLO PREPARATIVO 44 Preparación de: Se trató una solución de la amina desprotegida 44a (Busacca, C. A.; Grossbach, D.; Spinelli, E. Tetrahedron: Asymmetry; 2000, 9, 1907) en CH2CI2 (10 mi) y NaHC03 acuoso saturado (10 mi) a 0°C con fosgeno (5 mi, solución al 15% en tolueno) y se agitó a 0°C durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con CH2CI2 (50 mi) y la capa orgánica se lavó con NaHC03 acuoso frío. La capa orgánica se secó (MgS04), se filtró y también se diluyó con 10 mi de tolueno, se concentró la capa de cloruro de metileno y se usó como solución.
Paso B: Se trató una solución de la amina 24a (100 mg, 0,196 mmoies) en cloruro de meíileno (3.0 mi) con NMM (60 mg, 0.6 mmoies) y se enfrió a 0°C. Se agregó una solución del isocianato 44b (2.5 mi, 0.25 mmoies) en tolueno y la mezcla de reacción se agitó a ta. durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con cloruro de metileno (100 mi) y se lavó con HCI acuoso (1 M, 50 mi). Las capas orgánicas se secaron (MgS04), se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (Si02, acetato de etilo/hexanos 1 :1?1:0) dando 44 (31 mg) como un sólido incoloro. MS (ES) m/z intensidad relativa 755 [(M+Na)+, 40]; 733 [(M+1 )+, 100].
EJEMPLO PREPARATIVO 45 Preparación de: Se trató una solución de la amina 45a* (2.00 g, 9.20 mmoles) en CH2CI2 a 0°C con (C2H5)3N (3.7 g, 37 mmoles) y cloruro de 2-piridinsulfonilo (2.4 g, 1 .2 y se agitó a ta. durante 12 h. La mezcla de reacción se diluyó con CH2CI2 (300 mi) y se lavó con NaHC03 acuoso en exceso (1 M, 500 mi). La capa orgánica se secó (MgS04), se filtró, se concentró in vacuo y se purificó mediante cromatografía (Si02, Acetona/Hexanos 0:1?1 :1 ) para dar la suifonamida (2.3 g). Se desprotegió una solución de amina protegida con Boc por disolución (2.1 g, 5.7 mmoles) en solución 4M de HCI en dioxano y se agitó a ta. durante 2 h. La mezcla de reacción se concentró ¡n vacuo y se usó tal cual en el siguiente paso sin otra purificación. * obtenida por protección de fer-leucin-N-metilamida (TCI-Jpn) con diterbutildicarbonato y reducción posterior con BH3'DMS en THF (reflujo, 2 h).
Paso B: Se trató una solución de la amina 45b (300 mg, 1 mmol) en CH2CI2 (3 mi) y NaHC03 acuoso saturado (3 mi) a 0°C con fosgeno (2.5 mi, solución 15% en tolueno) y se agitó a 0°C durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con CH2CI2 (30 mi) y la capa orgánica se lavó con NaHC03 acuoso frío. La capa orgánica se secó (MgS04), se filtró y también se diluyó con 3 mi de tolueno, se concentró la capa de cloruro de metileno y se usó como una solución.
Paso C: Se trató una solución de la amina 24a (100 mg, 0.197 mmoles) en cloruro de metileno (3.0 mi) con NMM (60 mg, 0.6 mmoles) y se enfrió a 0°C. Se agregó una solución del isocianato 45c (2.5 mi, 0.25 mmoles) en tolueno y la mezcla de reacción se agitó a ta. durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con cloruro de metileno (100 mi) y se lavó con HCI acuoso (1 M, 50 mi). Las capas orgánicas se secaron con (MgS04), se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (S1O2, acetato de etilo/hexanos 1 :1 — 1 :0) para dar el producto 45 como un sólido incoloro. La mezcla bruta también se purificó usando HPLC para dar el producto puro 45 (27 mg). 1H RMN (dmso, 500 MHz) d 8.89 (t, 1 H, J = 7.0 Hz), 8.72 (d, H, J = 6.0 Hz), 8.37 (d, 1 H, J = 10.5 Hz), 8.07 (t, H, J = 9.0 Hz), 7.88 (d, H, J = 9.0 Hz), 7.66 (dd, 1 H, J = 6.5 y 3.5 Hz), 6.12 (d, H, J = 11 Hz), 5.84-5.75 (m, 2H), 4.27 (s, 1 H), 4.22 (t amplio, 1 H, J = 11.5 Hz), 3.92 (d, 1 H, J = 13 Hz), 3.77-3.60 (m, 4H), 3.33 (d amplio, 1 H), 3.06 (t amplio, 1 H, J = 12.5 Hz), 2.75 (s, 3H), 1.68-1.59 (m, 2H), 1.44-1.12 (m, 18H), 0.98 (s, 3H), 0.83 (s, 3H), 0.78 (s, 9H). 13C RMN (dmso, 125 MHz) d 198.3, 172.1 , 171.7, 162.1 , 158.3, 157.1 , 151.0, 139.6, 135.0, 127.9, 123.3, 116.4, 60.5, 55.8, 52.8, 52.2, 51.5, 36.4, 35.0, 28.0, 27.1 , 26.9, 26.3, 19.5, 13.7. MS (ES) m/z intensidad relativa 780 [(M+Naf, 50]; 758 [(M+1)+, 100].
EJEMPLO PREPARATIVO 46 Preparación de: Se trató una solución de (S)-ter-leucinol (5.0 g, 42.7 mmoles, Aldrich) 46a a 0°C en CH2CI2 (100,0 mi) con cloroformiato de bencilo (6.7 mi, 47.0 mmoles), seguido de base de Hunig (9.3 mi, 53.3 mmoles). Se permitió que la mezcla de reacción se entibiara hasta la temperatura ambiente y se agitó hasta el día siguiente. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (500 mi), se lavó con KH2P0 al 10%, seguido de NaHC03 saturado y salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgS04 y se concentró para dar leucinol protegido (10.7 g, 100%) que se usó en una reacción posterior sin ninguna purificación. A una solución de leucinol protegido (bruto) (10.7 g, 42.7 mmoles) en CH2CI2 (100,0 mi) se agregó a 0°C piridina (20.0 mi) y cloruro de metansulfonilo (3.63 mi, 47.0 mmoies). Se permitió que la mezcla de reacción se entibiara a temperatura ambiente y se agitó hasta el día siguiente, se concentró, se redisolvió en acetato de etilo (500 mi), se lavó con NaHC03 saturado y salmuera. La capa orgánica se secó (MgS04), se concentró y se purificó mediante cromatografía instantánea sobre Si02 usando acetato de etilo/hexano (1 :4) para dar 46b (14.0 g, 100 %).
Paso B: 46b 46c Se trató una solución de 46b (3.1g, 9.9 mmoies) en tolueno (72 mi) que contenía agua (400 µ?) con (582 mg, 1.8 mmoies), K2CO3 (2.72 g, 1.97 mmoies) y 2-hidroxipiridina (937 mg, 9.85 mmoies). La mezcla de reacción se reflujo hasta el día siguiente con agitación, se filtró y el filtrado se concentró in vacuo. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea sobre SÍO2 usando acetato de etilo/CH2CI2 (1 :9 a 1 :1 ) para dar 46c (1. 5 g, 35%) como un aceite incoloro.
Paso C: 46c 6d Se trató una solución de la piridona 46c (1 .15 g) en- MeOH (50 mi) con Pd/C (10% p/p, 450 mg) y se colocó en un agitador Parr® y se hidrogenó a 2.76 x 105 Pa (40 psi) durante 4 h. La mezcla de reacción se filtró a través de un tapón de Celite® y se concentró in vacuo para dar 46d, que se usó en el siguiente paso sin otra purificación.
Paso D: Se trató una solución de la amina 46d (600 mg, 3.03 mmoles) en CH2CI2 (10 mi) y NaHC03 acuoso saturado (10 mi) a 0°C con fosgeno (5 mi, solución 15% en tolueno) y se agitó a 0°C durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con CH2CI2 (50 mi) y la capa orgánica se lavó con NaHC03 acuoso frío. La capa orgánica se secó (MgS04) se filtró y además se diluyó con 3 mi de tolueno, se concentró la capa de cloruro de metileno y se usó como una solución en tolueno.
Paso E: Se trató una solución de la amina 24a (100 mg, 0.197 mmoles) en cloruro de metileno (3.0 mi) con NMM (60 mg, 0.6 mmoles) y se enfrió a 0°C. Se agregó una solución del isocianato 46e (1.5 mi, 0.25 mmoles) en tolueno y la mezcla de reacción se agitó a ta. durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con cloruro de metileno (100 mi) y se lavó con HCI acuoso (1 M, 50 mi). Las capas orgánicas se secaron (MgS0 ), se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (Si02, acetato de etilo/hexanos 1 :1?1:0) y 100% de acetato de etilo para dar 46 (30 mg) como un sólido incoloro. 1H RMN (dmso, 500 Hz) d 8.92 (t, 1 H, J = 6.5 Hz), 8.39 (d, 1 H, J = 9.0 Hz), 6.17 (d, 1H, J = 9.0 Hz), 5.81 (m, 1 H), 5.69 (d, H, J = 10.5 Hz), 5.29 (t amplio, 1 H, J = 10.0 Hz), 5.13-5.10 (m, 2H), 4.33 (s, 1 H), 4.30-4.26 (m, H), 3.86-3.65 (m, 6H), 3.50 (t amplio, 1 H, J = 12 Hz), 3. 5-3.08 (m, 2H), 2.21-2.05 (m, 2H), 1.74-1.54 (m amplio, 6H), 1.46-1.11 (m amplio, 18H), 0.99 (s, 3H), 0.84 (s, 3H), 0.82 (s, 9H). 3C RMN (dmso, 125 MHz) d 198.2, 172.1 , 171.3, 169.3, 162.1, 158.2, 135.0, 116.4, 60.5, 55.8, 55.1 , 52.8, 51.5, 48.3, 47.6, 47.0, 41.7. 34.6, 33.0, 32.4, 31.5, 28.3, 28.0, 27.8, 27.2, 26.9, 26.2, 24.5, 23.7, 22.4, 19.5, 13.7.
EJEMPLO PREPARATIVO 47 Preparación de: La amina 47a (C. A. Busacca et al, Tetrahedron: Asymmetry; (2000) 9 1907) (1.5 g, 6.9 mmoles, 1 equiv.) se disolvió en diclorometano seco (20 mi) y se enfrió a -78°C. Se agregaron 3 mi (3 equiv.) de Et3N seguido del agregado lento de cloruro de dimetiisulfamilo (1.5 eq., Sigma-Aldrich) disuelto en DCM. La temperatura se mantuvo a -78°C hasta que se completó el agregado y luego se agitó hasta el día siguiente permitiendo que se eleve hasta temperatura ambiente. Se diluyó con cloruro de metileno y se lavó con agua, HCI 1 N acuoso y por último salmuera. Las capas orgánicas se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron in vacuo. El producto bruto aislado se purificó mediante columna flash (EtOAc-Hexano 10?30%) para dar 1.27g (58%) de 47b. 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) d 4.6 (d, 1 H), 3.45 (m, 1 H,), 3.25 (d, 1 H), 2.89 (s, 6H), 1.89 (s amplio, NH), 1.22 (s, 9H), 0.98 (s, 9H). MS (ESI), m/z, intensidad relativa 324 [(M+1 ) 85], 268 ( 00), 224 (50).
Paso B: A la sulfonilurea protegida con Boc 47b (440 mg, 1.25 mmoles, 1 equiv.) en DMF (10 mi) a 0°C se agregó Cs2C03 (613 mg, 1.5 equiv, 1.88 mmoles) y Mel (6.36 mmoles, 5 equiv., 0.601 mi) bajo atmósfera inerte. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 90 min. y se desactivó con agua. Se extrajeron las capas acuosas con EtOAc, se lavaron 4 veces con agua y salmuera. Las capas orgánicas se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se evaporó el solvente para dar 420 mg (91 %) de 47c, que se usó en la siguiente reacción sin otra purificación. 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) d 4.59 (d, 1 H), 3.62-3.58 (m, 1 H), 3.29-3.22 (m, H), 2.80 (s, 3H), 2.79 (s, 6H), 1.89 (s amplio, NH), 1.22 (s, 9H), 0.98 (s, 9H). MS (ESI), m/z, intensidad relativa 338 [(M+1 ) 60], 282 ( 00), 238 (90).
Paso C: A la sulfonilurea protegida con Boc 47c (890 mg, 1 equiv.) se agregó solución 4 M de HCI en dioxano (25 mi) a temperatura ambiente y se agitó durante 1 hr. Después de la desaparición del material de partida (TLC), la mezcla de reacción se concentró y se destiló azeotropicamente con hexanos y éter. El residuo se trituró con éter y el sólido que se separó se filtró y se secó al vacío para dar un sólido amarillo pálido (720 mg, -100%). Se usó en la reacción posterior sin purificación.
Paso D: Al clorhidrato de amina 47d (720 mg, 2.63 mmoles) en diclorometano (15 mi) se agregaron 15 mi de NaHC03 acuoso saturado y se agitó vigorosamente a 0°C durante 5 min. Una solución de fosgeno (2 equiv. 20% en tolueno) se extrajo con jeringa de la capa inferior y se reanudó la agitación vigorosa inmediatamente. Se verificó por TLC algunas veces y después de 2 h se demostró el consumo total del material de partida. Se separó la capa de cloruro de metileno y la capa acuosa se extrajo con diclorometano (30 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron usando evaporador rotativo a presión reducida a ta. hasta la mitad del volumen y luego se saturó con N2 durante 15 minutos. La solución se diluyó a 130 mi con diclorometano y se usó como solución 0.02 M en posteriores reacciones.
Paso E: Se trató una solución de la amina 24a (100 mg, 0.197 mmoles) en cloruro de metileno (3.0 mi) con NM (60 mg, 0.6 mmoles) y se enfrió a 0°C. Se agregó una solución del isocianato 47e (1 ,5 mi, 0.25 mmoles) en tolueno y la mezcla de reacción se agitó a ta. durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con cloruro de metileno (100 mi) y se lavó con HCI acuoso (1 M, 50 mi). Las capas orgánicas se secaron ( gS0 ), se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (Si02, acetato de etilo/hexanos 1 :1->1 :0) y 100% de acetato de etilo para dar 47 (49 mg) como un sólido incoloro. H RMN (dmso, 500 MHz) d 8.89 (t, 1 H, J = 6 Hz), 8.37 (d, 1 H, J = 9.0 Hz), 6.15 (d, 1 H, J = 9. 0 Hz) 5.83-5.76 (m, 2H), 5.31-5.27 (m, 2H), 4.33 (s, 1 H), 4. 30-4.28 (m, 1 H), 3.91 (d, H, J = 10.5 Hz), 3.80-3.70 (m, 4H), 3.63-3.59 (m, 1 H), 2.93 (dd, 1 H), 2.7 (s, 3H), 2.69 (s, 6H), 1.73-1.65 (m, 2H), 1.51-1.02 (m, 18H), 0.99 (s, 3H), 0.84 (s, 3H), 0.81 (m, 9H). 3C RMN (dmso, 125 MHz) d 198.3, 172.1 , 171.7, 162.1 , 158.2, 135.0, 116.5, 60.5, 55.8, 52.8, 51.7, 1.3, 47.6, 41.1 , 38.5, 36.0, 34.9, 32.3, 31.6, 31.3, 28.5, 28.4, 27.9, 27.4, 27.4, 27.1. MS (ES) m/z intensidad relativa 746 [(M+Na)\ 40]; 724 [(M+1)+, 100].
EJEMPLO PREPARATIVO 48 Preparación de: CH3 ??3 Se preparó el compuesto 48b a partir de 48a y cloruro de 2-carbometoxi-3-tiofensulfonilo de acuerdo con los procedimientos descritos para la preparación del compuesto 45b.
Paso B: 48b 4Sc A la solución del éster 48b (4.65 g, 11.1 mmoles) en tolueno anhidro (40 mi) a -78°C se agregó una solución de DIBAL-H en tolueno (23.0 mi, 34.5 mmoles). La mezcla se agitó a -78°C durante 20 min. y a ta. durante 2 h. Se agregó metanol (20 mi) seguido de solución acuosa de ácido cítrico 10% (100 mi). Después se agitó durante 5 min, se agregó EtOAc (200 mi) y se separaron las capas. La solución acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 100 mi). Las soluciones orgánicas se combinaron, se secaron (MgS04), se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea en columna usando acetona/hexanos 10-50% para dar 4.6 g (cuant.) de 48c.
Paso C: A una solución de 48c (1.04 g, 2.65 mmoles) en CH2CI2 1 (50 mi) a 0°C, se agregó cloruro de metansulfonilo (0.23 mi, 2.97 mmoles) y trietilamina (0.80 mi, 5.74 mmoles). La mezcla se entibió hasta t.a. junto con el baño de hielo y se agitó durante 18 h. Se agregó EtOAc (200 mi) y solución de H3P04 al 5% (100 mi) y las capas se separaron. Las soluciones orgánicas se lavaron con solución de carbonato de sodio 1 N (100 mi) antes de secarse ( gS04), se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea en columna usando 10-50% de acetona/hexanos para dar 0.80 g (73%) de 48d.
Paso D: Se agitó una suspensión de 48d (1.17 g, 2.85 mmoles) y carbonato de cesio (1.40 g, 4.30 mmoles) en DMF anhidro (100 mi) a ta. durante 18 h. Se agregó agua (50 mi), salmuera (50 mi) y EtOAc (300 mi) y las capas se separaron. Se lavó la solución orgánica con agua (3 x 150 mi) antes de secar, se filtró y se concentró para dar 0.99 g del producto deseado 48e (93%).
Paso E: Se preparó el compuesto 48f a partir de 48e de acuerdo con los procedimientos descritos para la preparación de los compuestos 45b y 45c.
Paso F: Se trató una solución de la amina 24a (100 mg, 0.197 mmoles) en cloruro de metileno (3.0 mi) con NMM (60 mg, 0.6 mmoles) y se enfrió a 0°C. Se agregó una solución del isocianato 48f (2 mi, 0.25 mmoles) en tolueno y la mezcla de reacción se agitó a ta. durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con cloruro de metileno (100 mi) y se lavó con HCI acuoso (1 M, 50 mi). Las capas orgánicas se secaron (MgS04), se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (Si02, acetato de etilo/hexanos 1 :1-*1 :0) y 100% de acetato de etilo para dar 48 como un sólido incoloro.
EJEMPLO PREPARATIVO 49 Preparación de: 49a 49b Se enfrió una solución de LDA/THF-heptano 2 M (Acras Chemical Co.) en 50 mi de THF a -70°C, se agregó ciciohexancarboxilato de metilo 49a gota a gota a < -60°C. Después de agitar durante 0.5 hr adicionales a -70°C, se agregó cloruro de 2-picolilo en 40 mi de éter gota a gota a < -60°C. Luego se permitió que se eleve la temperatura lentamente a temperatura ambiente durante 2 hr, y se agitó 2 hr adicionales. La reacción se desactivó en una mezcla fría de 200 mi de KH2PO4 acuoso 20% y 5 mi de HC1 12 N, la mezcla se extrajo con EtOAc, el extracto se lavó con salmuera, y luego se secó con MgS04. La mezcla se filtró, el filtrado se evaporó, el residuo se evaporó dos veces de xileno, y el residuo final se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (Et20-CH2Cl2 1 :3 a acetona-CH2Cl2 1 :1 ) para obtener 49b.
Paso B: 49b 49c Se trató una solución del éster 49b en 20 mi de dioxano con 30 mi de LiOH 1 N acuoso, y la mezcla se agitó a 100°C durante 6 hr. La mezcla se desactivó en hielo-agua, se extrajo con éter, y la fase acuosa fría se acidificó lentamente hasta pH ~4 con HCI 3 N. El precipitado se filtró, se lavó con agua, y se secó para dejar ácido el producto, que se usó en el siguiente paso sin otra purificación. La conversión del ácido al isocianato 49c fue idéntica a la síntesis de 27b en el Ejemplo Preparativo 27.
Paso C: Se trató una solución de la amina 24a (100 mg, 0.197 mmoles) en cloruro de metileno (3.0 mi) con N M (60 mg, 0.6 mmoles) y se enfrió a 0°C. Se agregó una solución del isocianato 49c (2.9 mi, 0.25 mmoles) en tolueno y la mezcla de reacción se agitó a ta. durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con cloruro de metileno (100 mi) y se lavó con HCI acuoso (1 M, 50 ml). Las capas orgánicas se secaron (MgS04), se filtraron, se concentraron ¡n vacuo y se purificaron mediante cromatografía (Si02, acetato de etilo/hexanos 1 :1— 1 :0) y 100% de acetato de etilo para dar 49 como un sólido incoloro.
EJEMPLO PREPARATIVO 50 Preparación de: CH3 CH3 Paso A: 50b Se agitó una solución de ácido pirazincarboxílico 50a (Aldrich, 3 g) en 150 mi de diclorometano seco y 150 mi de DMF seco a 0°C y se trató con HATU (1.4 eq, 6.03 g). Se agregó clorhidrato del éster L-c¡clohexilgl¡cin- metílico (1.2 eq, 6.03 g) en pequeñas cantidades. Luego, se agregó N- metilmorfolina (4 eq, 10 mi, d 0.920) gota a gota. La mezcla de reacción se calentó gradualmente hasta temperatura ambiente y se agitó durante 20 h. Se eliminaron todos los volátiles al vacío y el residuo se disolvió en 500 -mi de acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua (100 mi), HCI acuoso 1 (100 mi), solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (100 ml), y salmuera (100 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 5:95 a 3:7) para dar el producto 50b (6.5 g, 95%) como un sólido blanco.
Paso B: Se enfrió una solución del éster metílico 50b (6.5 g) en 270 mi de una mezcla 1:1 :1 de THF/MeOH/H20 a 0°C y se trató con mono idrato de hidróxido de litio (2.5 eq, 2.45 g). La mezcla se agitó y se verificó mediante TLC (acetona/hexanos; 2:8). Una vez que se consumió todo el material de partida, la mezcla de reacción se trató con 100 mi de HCI acuoso 1 N y la mezcla se concentró in vacuo. Se agregó diclorometano (250 mi) y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con diclorometano (3 x 80 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron para dar el ácido 50c.
Paso C: Se enfrió una solución del ácido 24a (100 mg, 0.197 mmoles) en CH2CI2 seco (2 mi) y DMF (2 mi) a 0°C y se trató con el ácido 50c (51.8 mg, 0.197 mmoles), HATU (94 mg, 0.25 mmoles) y NMM (45 mg, 0.45 mmoles). La reacción se agitó a 0°C durante 12 h y se concentró in vacuo. El residuo se disolvió en CH2CI2 (100 mi) y se lavó con HCI acuoso (1 , 2x30 mi), NaHC03 acuoso saturado (2x30 mi), salmuera (30 mi), se secó (MgS04), se filtró, se concentró ¡n vacuo. El dipéptido crudo se purificó mediante cromatografía (S1O2, acetona/Hexanos 0:1-» 1 :1) para dar 50. H RMN (dmso, 400 MHz) d 9.16 (d, 1H, J = 12 Hz), 8.89 (d, 1 H, J = 2.4 Hz), 8.74 (s, H), 8.59 (d, H, J = 7.4 Hz), 8.43-8.38 (m, 2H), 5.81 -5.75 (m, 1H), 5.28 (tf 1H, J = 10.8 Hz), 5.11-5.03 (m, 2H), 4.45-4.31 (m, 3H), 3.88-3.70 (m, 5H), 1.65-1.22 (m, 31 H), 0.97 (s, 3H), 0.83 (s, 3H). MS (ES) m/z intensidad relativa 728 [( +Na)+, 4]; 706 [(M+1)+, 80].
EJEMPLO PREPARATIVO 51 Preparación de: CH3 H3 Paso A: 51a 51b Se trató una solución del alcohol 51 a (1.00 g, 4.6 mmoles) en CH2CI2 anhídrido (30 mi) en una atmósfera inerte con trifenilfosfina (1.52 g, 5.75 mmoles) y dimetilglutarimida (780 mg, 5.52 mmoles). La mezcla de reacción se enfrió a 0°C y se trató con DIAD (930 mg, 4.60 mmoles, en 4 mi de CH2CI2) gota a gota y se calentó hasta ta. Esta se agitó a ta. durante 5 h y se concentró in vacuo. El residuo se purificó mediante cromatografía (S1O2, Hexanos/acetona 1 :0- 1 :1 ) para obtener 51 b (600 mg) como un sólido incoloro.
Paso B: 5lb su Se agitó una solución de 51b (500 mg, 1.5 mmoles) en HCI (15 mi, solución 4M en dioxano) a ta. durante 1 h y se concentró in vacuo. El residuo se usó en la siguiente reacción sin purificación. Se trató una solución de la amina desprotegida en CH2CI2 (10 mi) y NaHC03 acuoso saturado (10 mi) a 0°C con fosgeno (5 mi, solución 15% en tolueno) y se agitó a 0°C durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con CH2CI2 (50 mi) y la capa orgánica se lavó con NaHC03 acuoso frío. La capa orgánica se secó (MgS04), se filtró y se diluyó también con 3 mi de tolueno, se concentró la capa de cloruro de metileno y se usó como una solución.
Paso C: Una solución de la amina 24a (100 mg, 0.196 mmoles) en cloruro de metileno (3.0 mi) se trató con NMM (60 mg, 0.6 mmoles) y se enfrió a 0°C. Una solución del isocianato 51c (2 mi, 0.5 mmoles) en tolueno se agregó y la mezcla de reacción se agitó a ta. durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con cloruro de metileno (100 mi) y se lavó con HCI acuoso (1 M, 50 mi). Las capas orgánicas se secaron (MgSO_j), se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (Si02 Acetona/hexanos 0:1?1 :1 ), dando 51 como un sólido incoloro. 1H R N (dmso, 500 MHz) d 8.91 (d, 1 H), 6.19 (d, 1 H, J = 8.5 Hz), 5.84-5.57 (m, 1 H), 5.58 (d, 1 H, J = 10.5 Hz), 5.28 (t, 1 H, J = 7.0 Hz), 5.10-5.05 (m, 2H), 4.31 (s, 1H), 4.18 (t, 1 H, J = 8.5 Hz), 3.83-3.57 (m, 7H), 2.44- 2.38 (AB, 4H), 1.66-1.62 (m, 2H), 1.44-1.03 (m, 18H), 0.98 y 0.96 (2s, 9H), 0.84 y 0.81 (2s, 12H). 13C RMN (dmso, 125 MHz) d 198.2, 172.7, 172.1 , 171.3, 162.1 , 158.1 , 135.0, 116.4, 60.5, 55.5, 52.9, 51.3, 47.5, 46.4, 41.7, 39.6, 35.0, 32.4, 31.5, 31.3, 29.3, 28.3, 27.9, 27.0, 26.9, 26.6, 26.1, 24.5, 22.4, 19.5, 13.7, MS (ES) m/z intensidad relativa 749 [(M+Na)+, 20]; 727 [( +1 )+, 00].
EJEMPLO PREPARATIVO 52 Preparación de: Se desgasificó una solución de N-Boc-L-Ser-OMe (3.6 g, Aldrich) en 150 mi de THF seco (vacío/N2-saturación) y se trató con carbonato de alilmetilo (1.4 eq, 2.6 mi, d 1.022). Se agregó una cantidad catalítica de tetracis(trifenilfosfin)paladio (0.02% mol, 379 mg). La mezcla levemente amarilla se desgasificó nuevamente y se calentó a 60°C durante alrededor de 3 h hasta que el análisis por TLC (acetona/hexanos; 2:8) mostró que ya no quedaba material de partida (la mezcla de reacción se tornó marrón). El THF se eliminó a presión reducida y el residuo se diluyó con 300 mi de acetato de etilo y se lavó con 80 mi de solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y 80 mi de salmuera. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 5:95 a 2:8) para dar el producto 52b como un aceite claro (2.7 g, 64%).
Paso B Se trató una solución del éster metílico 52b (1.5 g) en 90 mi de una mezcla de THF/MeOH/H20 (1:1:1) con monohidrato de hidróxido de litio (2.5 eq, 630 mg). La reacción se agitó a temperatura ambiente y se verificó mediante TLC (acetona/hexanos; 1 :9). Después de 45 min, se eliminaron todos los volátiles a presión reducida. El residuo se dividió entre 80 mi de HCI acuoso 1 N y 200 mi de diclorometano. La capa acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 80 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el producto 52c como un aceite claro (1.4 g, 95%).
Paso C Se agitó una solución del ácido 52c (6 mmoles) en 40 mi de diclorometano seco y 40 mi de DMF seco a 0°C y se trató con HATU (1.4 eq, 3.2 g). Se agregaron sucesivamente clorhidrato de amina 1d (1.3 eq, 1.6 g) y N-metilmorfolina (4 eq, 2.6 mi, d 0.920). La mezcla de reacción se calentó gradualmente hasta temperatura ambiente y se agitó hasta e) día siguiente. Se eliminaron todos los volátiles al vacío y el residuo se tomó en 300 mi de acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con HCI acuoso 1 N (50 mi), bicarbonato de sodio acuoso saturado (50 mi), y salmuera (50 mi). La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 5:95 a 2:8) para dar el producto deseado 52d (2.23 g, 93%) como un aceite claro.
Paso D Una solución del éster metílico 52d (2.23 g) en 45 mi de una mezcla de THF/MeOH/H20 (1:1 :1) se trató con monohidrato de hidróxido de litio (2.5 eq, 300 mg) a 0°C. El baño de enfriamiento se retiró y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente y se monitoreó mediante TLC (acetona/hexanos; 2:8). Después de 1 h, se agregaron 10 mi de HCI acuoso 1 N y se eliminaron todos los volátiles a presión reducida. El residuo se dividió entre 30 mi de HCI acuoso 1N y 100 mi de diclorometano. La capa acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 50 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el producto 52e (1.88 g, 88%) como un aceite claro.
Paso E Una solución del ácido 52e (830 mg) en 20 mi de diclorometano seco y 20 mi de DMF seco se agitó a 0°C y se trató con HATU (1.4 eq, 1.15 g). Se agregó clorhidrato de amina 1f (1.1 eq, 227 mg) en 10 mi de diclorometano seguido de N-metilmorfolina (4 eq, 0.95 mi, d 0.920). La mezcla de reacción se mantuvo en el congelador (-20°C) durante 48 h. Se eliminaron todos los volátiles al vacío y el residuo se disolvió en 200 mi de acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua (50 mi), HCI acuoso 1N (50 mi), solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (50 mi) y salmuera (50 mi). La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 5:95 a 3:7) para dar el producto 52f (680 mg) como un sólido blanco junto con un producto diastereomérico menor (130 mg) para un rendimiento combinado del 70%.
Paso F Se desgasificó una solución 0.01 M del dieno 52f (670 mg) en tolueno durante 30 min. (burbujeo bajo argón) y se trató con catalizador de Grubb (0.2 eq, 205 mg). La solución rosada se calentó a 60°C durante 16 h (la solución se volvió oscura después de calentar durante 10 min). El solvente se eliminó a presión reducida y el residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetato de etilo/hexanos; 2:8 a 1:1) para dar el producto alqueno 52g (570 mg, 90%) como una mezcla de isómeros E Z (aprox 4:1).
Paso G Se trató una solución del alqueno 52g (570 mg) en 20 mi de metanol con dihidróxido de paladio sobre carbono (0.1% mol, 78 mg de Pd(OH)2/C 20%). La mezcla se hidrogenó a 3.45 x 105 Pa (50 psi) hasta que se consumió todo el material de partida. La mezcla de reacción se diluyó con 100 mi de diclorometano y se filtró a través de un taco corto de Celite. El filtrado se concentró y el residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice para dar el producto 52h (590 mg, 70%) como un aceite claro.
Paso H Una solución del áster metílico 52h (580 mg) en 20 mi de THF seco se trató con borohidruro de litio (2.1 eq, 1.2 mi de una solución 2 en THF). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente y se monitoreó mediante TLC (acetona/hexanos; 3:7) para verificar la desaparición del material de partida. Después de 5 h, el borohidruro de litio en exceso se desactivó por agregado de solución de cloruro de amonio acuoso saturado (3 mi). La mezcla se dividió entre acetato de etilo (100 mi) y solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (50 mi). La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 30 mi) y diclorometano (2 x 30 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 1:9 a 5:5) para dar el producto 52i (360 mg, 68%) como un sólido blanco.
Paso I Una solución del alcohol 52i (350 mg) en 20 mi de diclorometano seco se trató con peryodinano de Dess-Martin (3 eq, 925 mg). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 45 min. La mezcla se trató con solución de tiosulfato de sodio acuoso 1M (15 mi) y solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (15 mi) y se agitó durante 15 min. La mezcla se extrajo con diclorometano (3 x 50 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 1:9 a 4:6) para dar el producto 52j (285 mg, 83%) como un sólido incoloro.
Paso J Una solución del aldehido 52j (270 mg) en 10 mi de diclorometano seco se trató con isocianuro de alilo (2 eq, 77 mg) y ácido acético (2 eq, 0.064 mi, d 1.049). La mezcla se agitó durante alrededor de 5 h. Se eliminaron todos los volátiles al vacío y el residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 1:9 a 1 :1) para dar el producto 52k (303 mg, 90%) como un sólido blanco.
Paso K El acetato 52k (300 mg) se disolvió en 15 mi de una mezcla 1 :1 :1 de THF/MeOH/H20 y se trató con monohidrato de hidróxido de litio (2.5 eq, 51 mg). El avance de la reacción se siguió mediante TLC (acetona/hexanos; 4:6). Después de 15 min. la mezcla de reacción se concentró en el evaporador rotativo y el residuo se dividió entre diclorometano (80 mi) y solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (20 mi). La capa acuosa se extrajo con diclorometano (3 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron. El producto bruto 521 (276 mg, 98%) se usó sin otra purificación.
Se trató una solución de la hidroxiamida 52I (276 mg) en 20 ml de diclorometano seco con peryodinano de Dess-Martin (3 eq, 424 mg). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. La mezcla se trató con solución de tiosulfato de sodio acuoso 1 M (20 ml) y solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (10 ml) y se agitó durante 10 min. La mezcla se extrajo con diclorometano (3 x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 1 :9 a 4:6) para dar el producto 52 (236 mg, 86%) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CDCI3): d 7.47 (d, 1H, J = 7.56 Hz), 7.03 (dd, 1 H, J = 5.68, 5.99 Hz), 5.88 (ddt, 1 H, J = 5.6, 10.0, 17.0 Hz), 5.50 (d, 1 H, J = 8.83 Hz), 5.46 (m, 1 H), 5.28 (dd, 1H, J = 0.9, 17.0 Hz), 5.25 (dd, 1H, J = 0.9, ,10.0 Hz), 4.61 (m, 1 H), 4.51 (s, H), 3.99 (dt, 2H, J = 1.2, 5.6 Hz), 3.88 (dd, 1 H, J = 5.0, 10.8 Hz), 3.83 (d, 1 H, J = 11.0 Hz), 3.66 (m, 2H), 3.48 (dd, 2H, J = 4.7, 5.6 Hz), 1 .95 (m, 1 H), 1.81 (d, 1 H, J = 7.56 Hz), 1 .47 (s, 9H), 1.27-1.63 (m, 12H), 1.09 (s, 3H), 0.93 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3l 125 MHz): d 196.7, 170.9, 170.7, 159.3, 155.6, 133.2, 117.9, 80.4, 71.0, 70.8, 61.2, 54.5, 52.9, 48.2, 42.1 , 31.4, 29.3, 28.7, 27.8, 26.8, 26.6, 26.4, 23.6, 23.4, 19.2, 13.2 ppm; HRMS calculado para C2gH47N407 [M+H]+: 563.3445, experimental 563.3457.
EJEMPLO PREPARATIVO 53 Preparación de: Paso A La amina protegida N-Boc 52 (60 mg) se disolvió en 10 \ de solución de HCI 4 en dioxanos y se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Se eliminaron todos los volátiles a presión reducida y el producto se colocó en alto vacío durante 3 h. No se realizó otra purificación para el producto 53a (99%).
Paso B La sal de amina 53a (31 mg) se disolvió en 5 mi de diclorometano seco y se enfrió a 0°C. Luego, se agregaron 10 gotas de solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. Después de 10 min, se agregó una solución del isocianaío 27b (2.5 eq, 0.8 mi de una solución 0.2 en tolueno) y se continuó agitando durante 10 min. El baño de enfriamiento se retiró y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 1 :9 a 4:6) para dar el producto 53 (25 mg, 58%) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CDCI3): d 7.90 (d, 1 H, J = 8.5 Hz), 7.38 (s amplio, 1H), 5.9 (ddt, 1 H, J = 5.6, 10.4, 17.0 Hz), 5.61 (ddd, 1H, J = 1.6, 8.8, 10.4 Hz), 5.27 (dd, 1 H, J = 1.26, 17.3 Hz), 5.24 (dd, 1H, J = 1.26, 10.0 Hz), 4.9 (dd, 1H, J = 3.4, 8.8 Hz), 4.53 (s, 1H), 3.94-4.08 (m, 4H), 3.62 (dd, 1H, J = 8.5, 8.8 Hz), 3.56 (m, 1H), 3.47 (dd, 1H, J = 4.0, 7.9 Hz), 3.37 (ddd, 1H, J = 2.2, 7.2, 9.4), 3.15 (d, 1 H, J = 13.5 Hz), 2.4 (m, 1H), 2.24 (m, 1H), 1.95 (m, 1H), 1.85 (m, 1 H), 1.27-1.70 (m, 20H), 1.4 (s, 9H), 1.2 (m, 1 H), 1.07 (s, 3H), 0.94 (s, 3H), 0.92 (m, 1H); 3C RMN (CDC!3) 125 MHz): d 198.0, 172.1 , 171.0, 159.5, 157.0, 133.3, 117.7, 70.8, 70.5, 61.0, 60.8, 54.9, 53.8, 51.0, 48.4, 42.2, 36.2, 32.0, 30.5, 28.7, 27.9, 27.2, 27.0, 26.8, 25.9, 24.1, 23.9, 23.5, 21.9, 21.8, 19.3, 13.4 ppm; HRMS calculado para C^HeoNsOsS [M+H]+: 722.4163, experimental 722.4193.
EJEMPLO PREPARATIVO 54 Preparación de: Una solución de la sal de amina 53a (17 mg) en 2 mi de diclorometano seco se trató con bicarbonato de sodio sólido (3 eq, 8 mg) seguido del agregado del isocianato 54a (2.5 eq, 0.26 mi de una solución 0.307 en tolueno). La mezcla heterogénea resultante se agitó a temperatura ambiente durante aproximadamente 3 h. La mezcla se diluyó con 50 mi de acetato de etilo y se lavó con HCI acuoso 1 M (10 mi) y salmuera (10 mi). La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 2:8 a 1 :1) para dar el producto 54 (8 mg, 34%) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CDCI3): d 7.91 (s amplio, 1H), 7.40 (m, 1H), 6.37 (s amplio, 1H), 5.91 (ddt, 1H, J = 5.6, 10.4, 17.3 Hz), 5.88 (s amplio, 1H), 5.62 (dt, H, J = 1.26, 9.45 Hz), 5.28 (dd, 1 H, J = 1.26, 17.3 Hz), 5.23 (dd, 1 H, J = 1.26, 10.4 Hz), 4.92 (ddd, 1 H, J = 3.46, 8.5, 8.5 Hz), 4.77 (dd, 1H, J = 4.7, 8.8 Hz), 4.55 (s, 1 H), 3.94-4.06 (m, 4H), 3.63 (t, 1 H, J = 8.2 Hz), 3.54 (ddd, 1 H, J = 3.4, 6.6, 9.7 Hz), 3.47 (m, 1 H), 3.38 (m, 1H), 2.09 (ddd, 1 H, J = 4.4, 7.8, 12.3 Hz), 1.91 (m, 2H), 0.91-1.83 (m, 27H), 1.07 (s, 3H), 0.94 (s, 3H); HR S calculado para C36H56N5O7 [M+Hf: 670.4180, experimental 670.4177, EJEMPLO PREPARATIVO 55 Preparación de: Paso A Se trató una solución de la sal de amina 53a (17 mg) en 2 mi de diclorometano seco con bicarbonato de sodio sólido (3 eq, 8 mg) seguido del agregado del isocianato 25c (2.5 eq, 0.45 mi de una solución 0.18M en tolueno). La mezcla heterogénea resultante se agitó a temperatura ambiente durante aproximadamente 3 h. La mezcla se diluyó con 50 mi de acetato de etilo y se lavó con HCI acuoso 1M (10 mi) y salmuera (10 mi). La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 2:8 a 1 :1) para dar el producto 55 (8 mg, 30%) como un sólido blanco.
HRMS calculado para C36H57 608S2 [M+Hf: 765.3679, experimental 765.3687.
EJEMPLO PREPARATIVO 56 Preparación de: Se enfrió una solución de 4,4-dimetilglutarimida 56a (Aldrich, 1.5 eq, 4.86 g) en 200 mi de THF seco a 0°C y se trató con trifenilfosfina (3 eq, 8.07 g) y S-Boc-ter-butilglicinol 56b (Aldrich, 5 g). Se agregó diisopropilazodicarboxilato (2.5 eq, 11.3 mi, d 1.027) gota a gota y la solución resultante se agitó a 0°C. Después de 10 min, la mezcla se tornó una suspensión y se continuó agitando hasta el día siguiente (0 a 25°C). La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se disolvió en 80 mi de éter. Se agregaron hexanos (100 mi) y los sólidos precipitados se filtraron. El filtrado se concentró a la mitad de su volumen y se agregaron hexanos (100 mi) nuevamente. Los sólidos se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (acetato de etilo/hexanos; 2:8) para dar el producto 56c (4.0 g, 51%) como un sólido blanco.
Paso B La amina protegida N-Boc 56c (4.0 g) se disolvió en 200 mi de solución HCI 4M en dioxanos. La mezcla se agitó a temperatura ambiente y precipitó un sólido blanco después de 10 min. La mezcla también se agitó durante 2 h. Se eliminaron todos los volátiles a presión reducida para dar el producto 56d (3.24 g, 98%) como un sólido blanco.
Paso C Se trató una solución del clorhidrato de amina 56d (1.5 g) en 60 mi de diclorometano con 50 mi de solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y se agitó vigorosamente durante 10 min. a 0°C. La agitación se detuvo y se permitió que las capas se separaran. Se agregó fosgeno (15 mi de solución 20% en tolueno) a través de una aguja a la capa orgánica (capa inferior) en una porción. La mezcla se agitó vigorosamente inmediatamente después de la adición durante 10 min. a 0°C y se agitó además a temperatura ambiente durante 2.5 h. La mezcla se diluyó con 100 mi de diclorometano y las capas se separaron. La capa orgánica se lavó con 40 mi de solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio fría y se secó sobre sulfato de magnesio. La capa orgánica se filtró y se diluyó con 50 mi de tolueno. El producto 56e (1.44 g, 98%) se mantuvo como una solución 0.216M en tolueno.
Paso C La N-Boc amina 52 (200 mg) se disolvió en 20 mi de solución de HCI 4M en dioxanos. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se eliminaron todos los volátiles a presión reducida y el residuo se colocó en alto vacío durante 3 h. La sal de amina resultante se disolvió en 5 mi de diclorometano seco y se enfrió a 0°C. Luego, se agregaron 10 gotas de solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. Después de 10 min, se agregó una solución del isocianato 56e gota a gota (1.2 eq, 1.97 mi de una solución 0.216M en tolueno) y la agitación se continuó durante 10 min.
El baño de enfriamiento se retiró y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (70 mi) y se lavó con solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (20 mi). La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 15:85 a 55:45) para dar el producto 56 (172 mg, 66%) como un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d 7.95 (d, 1 H, J = 8.8 Hz), 7.59 (s amplio, 1H), 5.91 (s amplio, 1H), 5.84 (ddt, 1H, J = 5.8, 10.2, 16.8 Hz), 5.61 (ddd, 1 H, J = 1.5, 8.7, 10.2 Hz), 5.21 (dd, 1 H, J = 1.4, 17.5 Hz), 5.17 (dd, 1 H, J = 1.4, 10.2 Hz), 5.13 (s amplio, 1H), 4.86 (s amplio, 1H), 4.52 (s, 1H), 4.05 (d, 1 H, J = 10.2 Hz), 3.80-3.99 (m, 6H), 3.50 (m, 2H), 3.27 (m, 2H), 2.51 (d, 2H, J = 16.8 Hz), 2.43 (d, 2H, = 16.8 Hz), 1.88 (m, 1H), 1.77 (m, 1H), 0.84-1.58 (m, 12H), 1.05 (s, 6H), 0.97 (s, 3H), 0.92 (s, 9H), 0.81 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 125 Hz): d 98.6, 172.8, 172.0, 171.2, 159.3, 157.8, 133.4, 117.7, 71.4, 70.8, 60.7, 57.0, 53.5, 48.5, 46.8, 42.2, 40.0, 34.9, 32.1, 30.9, 29.4, 28.7, 28.1, 27.7, 27.4, 26.9, 24.3, 19.3, 13.5 ppm; HRMS calculado para C38H6iN608 [M+H]+: 729.4551 , experimental 729.4529.
EJEMPLO PREPARATIVO 57 Preparación de La amina protegida con N-Boc 52 (101 mg) se disolvió en 10 mi de ácido fórmico y se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Se eliminaron todos los volátiles en evaporador rotativo y el residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 2:8 a 6:4) para dar el producto formilado 57 (35 mg, 40%) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CDCI3) d 8.24 (s, 1 H), 7.35 (d, 1H, J = 7.8 Hz), 7.07 (s amplio, 1H), 6.83 (d, 1 H, J = 6.9 Hz), 5.89 (ddt, 1 H, J = 5.6, 10.0, 17.0 Hz), 5.47 (m, 1 H), 5.28 (dd, 1 H, J = 1.2, 17.3 Hz), 5.25 (dd, 1H, J = 1.2, 10.4 Hz), 4.95 (ddd, 1 H, J = 3.1 , 5.9, 8.5 Hz), 4.51 (s, 1 H), 3.99 (m, 2H), 3.92 (dd, 1H, J = 5.3, 11.0 Hz), 3.75 (d, 1H, J = 11.0 Hz), 3.74 (m, 1 H), 3.70 (dd, 1 H, J = 5.6, 9.1 Hz), 3.48 (m, 2H), 1.96 (m, 1H), 1.77 (d, 1 H, J = 7.8 Hz), 1.76 (m, 1H), 1.27-1.63 (m, 11 H), 1.10 (s, 3H), 0.92 (s, 3H); 3C R N (CDCI3l 125 MHz) d 196.8, 170.5, 169.4, 160.8, 159.3, 133.1 , 117.9, 71.3, 70.0, 61.5, 54.4, 50.8, 48.2, 42.1, 32.0, 31.5, 29.4, 28.6, 27.8, 26.7, 26.6, 23.6, 23.5, 19.3, 14.5, 13.2 ppm; HRMS calculado para C25H39N406 [M+Hf: 491.2870, experimental 491.2882.
EJEMPLO PREPARATIVO 58 Preparación de Paso A La amina protegida con N-Boc 52 (80 mg) se disolvió en 5 mi de solución de HCI 4M en dioxanos y se agitó a temperatura ambiente durante 45 min. Se eliminaron todos los volátiles a presión reducida y el residuo se colocó en alto vacío durante 3 h. La sal de amina resultante se disolvió en 3 mi de diclorometano seco y se trató con N-metilmorfolina (3 eq, 0.05 mi, d 0.920). Se agregó el isocianato 58a en solución (2 eq, 3.8 mi de una solución 0.075M en tolueno). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante alrededor de 3 h. La mezcla se diluyó con acetato de etilo (50 mi) y se lavó con HCl acuoso 1M (10 mi), bicarbonato de sodio acuoso saturado (10 mi) y salmuera (10 mi). La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 3:7 a 7:3) para dar el producto 58 (16 mg, 16%) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CDCI3) d 8.19-8.39 (s amplio, 1H), 8.05 (d, 1 H, J = 8.5 Hz), 6.22 (s amplio, 1 H), 5.91 (ddt, 1H, J = 5.6, 10.0, 17.0 Hz), 5.71 (dd, 1 H, J = 9.4, 10.0 Hz), 5.33 (d, 1H, J = 9.4 Hz), 5.28 (m, 1H), 5.26 (dd, 1H, J = 1.2, 17.0 Hz), 5.20 (dd, 1 H, J = 1.2, 10.4 Hz), 4.96 (ddd, 1H, J = 4.0, 9.4, 9.4 Hz), 4.60 (s, H), 4.32 (t, 1 H, J = 12.6 Hz), 4.12 (d, 1 H, J = 10.7 Hz), 3.86-4.07 (m, 4H), 3.49-3.63 (m, 3H), 3.38 (dd, 1H, J = 4.1 , 7.9 Hz), 3.31 (m, 1 H), 3.16 (m, 1H), 2.66 (dd, 1H, J = 2.8, 13.8 Hz), 2.39 (dt, 1H, J = 5.6, 17.3 Hz), 2.27 (dt, 1H, J = 6.6, 17.3 Hz), 1.89-2.04 (m, 2H), 1.71-1.87 (m, 4H), 0.88-1.64 (m, 11 H), 1.03 (s, 3H), 0.93 (s, 9H), 0.90 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 125 Hz) d 196.2, 171.8, 171.3, 159.5, 158.2, 133.7, 117.3, 71.4, 70.8, 60.6, 55.7, 53.5, 51.0, 48.3, 48.1 , 46.5, 42.2, 34.3, 32.7, 31.8, 31.0, 28.7, 27.8, 27.6, 27.0, 26.9, 24.6, 24.4, 23.5, 21.7, 19.2, 13.5 ppm; HRMS calculado para C36H5gN607 [M+H]+: 687.4445, experimental 687.4434.
EJEMPLO PREPARATIVO 59 Preparación de La N-Boc amina 52 (56 mg) se disolvió en 10 mi de solución de HCI 4M en dioxanos. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se eliminaron todos los volátiles a presión reducida y el residuo se colocó bajo alto vacío durante 3 h. La sal de amina resultante se disolvió en 5 mi de diclorometano seco y se enfrió a 0°C. Luego, se agregaron 15 gotas de solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. Después de 10 min, se agregó una solución del isocianato 59a gota a gota (1.0 eq) y la agitación se continuó durante 10 min. El baño de enfriamiento se retiró y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (50 mi) y se lavó con HCI acuoso 1 M (10 mi) y salmuera (10 mi). La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 2:8 a 6:4) para dar el producto 59 (35 mg, 50%) como un sólido blanco. HRMS calculado para CssHesNsOr [M+H]+: 715.4758, experimental 715.4739, EJEMPLO PREPARATIVO 60 Preparación de Paso A Una solución del aldehido 52j (405 mg) en 15 mi de diclorometano seco se trató con isocianuro de ciclopropilo (Oakwood Prod., 2 eq, 117 mg) y ácido acético (2 eq, 0.1 mi, d 1.049). La mezcla se agitó a temperatura ambiente hasta el día siguiente. Se eliminaron todos los volátiles a presión reducida y el residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 1:9 a 1 :1) para dar el producto 60a (500 mg, 98%) como un sólido blanco.
Paso B Se trató una solución del acetato 60a (500 mg) en 15 mi de una mezcla 1:1 :1 de THF/ eOH/agua con monohidrato de hidróxido de litio (2.5 eq, 86 mg) y se agitó durante aprox. 30 min. hasta que el material de partida se había consumido según lo determinado mediante análisis por TLC (acetato de etilo/hexanos; 6:4). La mezcla de reacción se diluyó con 30 mi de solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y se extrajo con diclorometano (3 x 50 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron para dar el producto bruto 60b (464 mg, 98%) como un semisólido incoloro que se usó sin otra purificación.
Paso C Se trató una solución de la hidroxiamida 60b (0.824 mmoles) en 20 mi de diclorometano seco con peryodinano de Dess- artin (2.0 eq, 698 mg). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. La mezcla se trató con solución de tiosulfato de sodio acuoso 1 M (15 mi) y se agitó durante 5 min. También se agregó solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (20 mi) y la agitación se continuó durante otros 10 min. La mezcla se extrajo con diclorometano (3 x 50 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 5:95 a 35:65) para dar el producto 60c (333 mg, 72%) como sólido blanco.
Paso D La N-Boc amina 60c (70 mg) se disolvió en 10 mi de solución de HCI 4M en dioxanos. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se eliminaron todos los volátiles a presión reducida y el residuo se colocó en alto vacío hasta el día siguiente. La sal de amina resultante se disolvió en 5 mi de diclorometano seco y se enfrió a 0°C. Luego, se agregaron 20 gotas de solución del bicarbonato de sodio acuoso saturado seguido de una solución del isocianato 56e (1.3 eq, 0.7 mi de una solución 0.241 M en tolueno) y la agitación se continuó durante 10 min. El baño de enfriamiento se retiró y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (50 mi) y se lavó con solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (10 mi). La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 2:8 a 55:45) para dar el producto 60 (70 mg, 77%) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CDCI3): d 7.95 (s amplio, 1H), 7.56 (s amplio, 1H), 5.86 (s amplio, 1H), 5.65 (t, 1H, J = 8.8 Hz), 5.09 (s amplio, 1H), 4.91 (s amplio, 1 H), 4.56 (s, 1H), 4.07 (d, 1 H, J = 10.4 Hz), 3.98 (dd, 1 H, J = 5.0, 10.7 Hz), 3.91 (m, 3H), 3.54 (m, 2H), 3.34 (m, 2H), 2.88 (ddd, 1 H, J = 3.7, 7.5, 15.1 Hz), 2.56 (d, 2H, J = 16.7 Hz), 2.50 (d, 2H, J = 16.7 Hz), 1.94 (m, 1 H), 0.87-1.76 (m, 15H), 1.11 (s, 6H), 1.03 (s, 3H), 0.97 (s, 9H), 0.86 (s, 3H), 0.70 (m, 2H); 13C RMN (CDCI3, 125 MHz) d 198.0, 172.9, 172.0, 171.2, 160.8, 157.7, 71.5, 70.8, 60.7, 56.9, 53.4, 51.1 , 48.4, 46.8, 39.9, 34.9, 32.1 , 30.8, 29.4, 28.7, 28.1 , 27.7, 27.5, 26.9, 26.8, 24.4, 23.0, 19.2, 13.5, 6.8, 6.7 ppm. HRMS calculado para C38H6iN608 [M+H]+: 729.4551 , experimental 729.4558.
EJEMPLO PREPARATIVO 61 Preparación de Paso A La N-Boc amina 60c (56 mg) se disolvió en 10 mi de solución de HCI 4M en dioxanos. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se eliminaron todos los volátiles a presión reducida y el residuo se colocó en alto vacío durante 3 h. La sal de amina resultante se disolvió en 5 mi de diclorometano seco y se enfrió a 0°C. Luego, se agregaron 20 gotas de solución del bicarbonato de sodio acuoso saturado seguido de una solución del isocianato 59a en tolueno (1.3 eq) y la agitación se continuó durante 10 min. El baño de enfriamiento se retiró y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (60 mi) y se lavó con solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (20 mi). La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 2:8 a 6:4) para dar el producto 61 (52 mg, 73%) como un sólido blanco. 1H RMN (500 Hz, CDCI3): d 8.30-8.53 (s amplio, 1 H), 8.15 (d, 1 H, J = 8.8 Hz), 6.13 (s amplio, 1 H), 5.74 (dd, 1 H, J = 8.8, 9.7 Hz), 5.38 (d, 1 H, J = 9.1 Hz), 4.96 (s amplio, H), 4.59 (s, 1H), 4.35 (dd, 1H, J = 12.9, 12.9 Hz), 4.10 (d, 1 H, J = 10.4 Hz), 4.01 (dd, 1H, J = 5.0, 10.4 Hz), 3.94 (m, 1H), 3.56 (m, 2H), 3.50 (dd, 1H, J = 8.5, 8.8 Hz), 3.31 (m, 2H), 3.17 (ddd, 1H, J = 5.6, 6.0, 12.3 Hz), 2.91 (ddd, 1H, J = 4.0, 7.8, 15.4 Hz), 2.67 (dd, 1H, J = 3.4, 13.5 Hz), 2.17 (d, 1H, J= 17.0 Hz), 2.10 (d, 1H, J= 17.0 Hz), 1.94 (m, 3H), 1.24-1.70 (m, 12H), 1.14 (m, 1H), 1.04 (s, 3H), 1.02 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.91 (s, 9H), 0.89 (s, 3H), 0.84 (m, 2H), 0.73 (m, 2H); 13C R N (CDCI3, 125 MHz) d 199.9, 171.9, 171.3, 171.0, 160.9, 158.0, 71.4, 70.9, 60.4, 55.4, 53.2, 48.2, 46.3, 45.0, 35.8, 34.6, 31.7, 30.3, 28.8, 28.7, 27.8, 27.7, 27.6, 27.1, 26.9, 26.8, 24.8, 24.7, 23.2, 19.1, 13.4, 6.4 ppm. HRMS calculado para C3BH63N607 [M+H]+: 715.4758, experimental 715.4768.
EJEMPLO PREPARATIVO 62 Preparación de La N-Boc amina 60c (60 mg) se disolvió en 10 mi de solución de HCI 4M en dioxanos. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se eliminaron todos los volátiles a presión reducida y el residuo se colocó en alto vacío durante 3 h. La sal de amina resultante se disolvió en 5 mi de diclorometano seco y se enfrió a 0°C. Luego, se agregaron 20 gotas de solución del bicarbonato de sodio acuoso saturado seguido de una solución del isocianato 27b en tolueno (1.2 eq) y la agitación se continuó durante 10 min. El baño de enfriamiento se retiró y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (60 mi) y se lavó con solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (20 mi). La capa orgánica se secó sobre sulfato, de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 2:8 a 6:4) para dar el producto 62 (65 mg, 85%) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CDCI3): S 7.84 (d, 1H, J = 8.2 Hz), 7.28 (s amplio, 1H), 5.73-6.02 (s amplio, 1H), 5.57 (ddd, 1 H, J = 1.9, 8.2, 8.5 Hz), 5.22 (s amplio, 1 H), 4.88 (dd, 1 H, J = 3.4, 8.5 Hz), 4.51 (s, 1H), 4.01 (m, 3H), 3.62 (dd, 1H, J = 8.5, 8.5 Hz), 3.55 (ddd, 1H, J = 3.7, 6.3, 9.7 Hz), 3.48 (dd, 1H, J = 4.0, 8.1 Hz), 3.38 (m, 1H), 3.18 (d, 1H, J = 13.5 Hz), 2.86 (ddd, 1H, J = 3.8, 7.2, 14.8 Hz), 2.41 (d, 1 H, J = 1 .6 Hz), 2.24 (d, 1 H, J = 11.6 Hz), 1.93 (m, 1 H), 1.72- .89 (m, 4H), 1.40 (s, 9H), .28-1.70 (m, 16H), 1.21 (m, 1 H), 1.06 (s, 3H), 0.93 (s, 3H), 0.91 (m, 2H), 0.70 (m, 2H); 13C RMN (CDCI3, 125 MHz) d 197.9, 172.0, 171.0, 160.9, 157.0, 70.8, 70.6, 61.0, 60.8, 54.9, 53.7, 51.1 , 48.4, 36.2, 32.0, 30.5, 28.7, 27.9, 27.2, 26.9, 26.8, 25.9, 24.1 , 23.8, 23.5, 23.0, 21.9, 21.8, 19.3, 13.4, 6.9, 6.8 ppm.
EJEMPLO PREPARATIVO 63 Preparación de Paso A Se enfrió una solución de la amina 63a (2.0 g) en 100 mi de diclorometano seco a 0°C y se trató con piridina (3.0 eq, 2.24 mi, d 0.978) y cloruro de etansulfonilo (1.2 eq, 1.05 mi, d 1.357). La solución homogénea amarilla resultante se agitó hasta el día siguiente (temperatura de 0 a 25°C). La mezcla se diluyó con 200 mi de éter y se lavó con HCI acuoso 1M (100 mi) y salmuera (100 mi). La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: diclorometano a acetato de etilo/diclorometano 3:7) para dar el producto 63b (850 mg, 30%) como un sólido blanco.
Paso B Se trató una solución de la etilsulfonamida 63b (850 mg) en DMF seco (30 mi) con carbonato de cesio (3.0 eq, 2.74 g) y yodometano (3.0 eq, 0.51 mi, d 2.280). La mezcla de reacción se agitó durante aproximadamente 4 h. El análisis por TLC (acetona/hexanos; 2:8) demostró que todo el material de partida se había consumido. La mezcla se diluyó con acetato de etilo (300 mi) y se lavó con agua (3 x 50 mi) y salmuera (1 x 50 mi). La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida para dar el producto 63c (860 mg, 97%) como un sólido blanco. No se realizó otra purificación para el producto.
Paso C La amina protegida con N-Boc 63c (850 mg) se disolvió en 100 mi de solución de HCI 4M en dioxanos. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente hasta que todo el material se había consumido según lo determinado mediante TLC (acetona/hexanos 2:8). Se eliminaron todos los volátiles a presión reducida y el residuo se colocó en alto vacío para dar el producto 63d (680 mg, 98%).
Paso D Se trató una solución del clorhidrato de amina 63d (2.636 mmoles) en 40 mi de diclorometano con 40 mi de solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y se agitó vigorosamente durante 10 min. a 0°C. Se detuvo la agitación y se permitió que las capas se separen. Se agregó fosgeno (10 mi de solución de 20% en tolueno) por medio de una aguja a la capa orgánica (capa inferior) en una porción. La mezcla se agitó vigorosamenté inmediatamente después de la adición durante 10 mín. a 0°C y también se agitó a temperatura ambiente durante 2.5 h. La mezcla se diluyó con 100 mi de diclorometano y las capas se separaron. La capa orgánica se lavó con 30 mi de solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio frío y se secó sobre sulfato de magnesio. La capa orgánica se filtró y el filtrado se diluyó con 50 mi de tolueno. El producto 63e (654 mg, 98%) se concentró y se mantuvo como una solución 0. 31 M en tolueno (la solución contiene alrededor de 2 mi de diclorometano).
Paso E La N-Boc amina 52 (60 mg) se disolvió en 10 mi de solución de HCI 4M en dioxanos. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se eliminaron todos los volátiles a presión reducida y el residuo se colocó en alto vacío durante 3 h. La sal de amina resultante se disolvió en 5 mi de diclorometano seco y se enfrió a 0°C. Luego, se agregaron 10 gotas de solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. Después de 10 min, se agregó una solución del isocianato 63e gota a gota (1.2 eq, 0.97 mi de una solución 0.131 M en tolueno) y la agitación se continuó durante 10 min. El baño de enfriamiento se retiró y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (70 mi) y se lavó con solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (20 mi). La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 2:8 a 6:4) para dar el producto 63 (49 mg, 65%) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CDCI3): d 8.04 (d, 1H, J = 8.5 Hz), 7.52 (s amplio, 1H), 6.04 (s amplio, 1H), 5.89 (ddt, 1 H, J = 5.6, 10.4, 17.0 Hz), 5.65 (dd, 1H, J = 8.8, 10.4 Hz), 5.26 (dd, 1H, J = 1.2, 17.0 Hz), 5.22 (dd, 1H, J = 1.2, 10.0 Hz), 5.17 (d, 1H, J = 10.0 Hz), 4.99 (s amplio, 1H), 4.61 (s, 1 H), 4.19 (d, 1 H, J = 10.7 Hz), 4.02 (m, 2H), 3.95 (m, 2H), 3.60 (dd, 1 H, J = 8.1 , 9.1 Hz), 3.54 (m, 1 H), 3.49 (d, 1H, 1.9 Hz), 3.44 (m, 1 H), 3.32 (m, 1 H), 3.07 (m, 3H), 2.94 (s, 3H), 1.93 (m, 1H), 1.35 (t, 3H, J = 7.5 Hz), 1.27-1.62 (m, 15H), 1.16 (m, 1 H), 1.03 (s, 3H), 0.92 (s, 9H), 0.91 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 125 MHz) d 198.6, 172.3, 171.3, 159.4, 158.0, 133.4, 117.6, 71.1, 70.6, 60.7, 54.7, 53.5, 51.0, 50.6, 48.4, 45.8, 42.2, 34.8, 34.5, 32.0, 30.9, 28.7, 27.8, 27.3, 27.0, 26.9, 24.3, 24.2, 19.2, 13.5, 8.6 ppm; HRMS calculado para C34H59N608S [M+H]+: 711.4115, experimental 711.4133.
EJEMPLO PREPARATIVO 64 Preparación de La N-Boc amina 60c (60 mg) se disolvió en 10 mi de solución de HCI 4M en dioxanos. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se eliminaron todos los volátiles a presión reducida y el residuo se colocó en alto vacío durante 3 h. La sal de amina resultante se disolvió en 5 mi de diclorometano seco y se enfrió a 0°C. Luego, se agregaron 10 gotas de solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. Después de 10 min, se agregó una solución del isocianato 63e gota a gota (1.2 eq, 0.97 mi de una solución 0.131 M en tolueno) y la agitación se continuó durante 10 min. El baño de enfriamiento se retiró y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 . La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (70 mi) y se lavó con solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (20 mi). La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 2:8 a 6:4) para dar el producto 64 (62 mg, 82%) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CDCI3): d 8.10 (s amplio, 1H), 7.47 (s amplio, 1 H), 5.94-6.19 (s amplio, 1 H), 5.65 (dd, 1 H, J = 8.8, 10.7 Hz), 5.21 (d, 1 H, J = 7.8 Hz), 5.00 (dd, 1H, J = 3.7, 9.4 Hz), 4.59 (s, 1 H), 4.21 (d, 1 H, J = 10.7 Hz), 4.02 (dd, 1H, J = 5.0, 10.7 Hz), 3.93 (dd, 1H, J = 9.1 , 9.7 Hz), 3.55 (m, 2H), 3.48 (d, 1 H, J = 12.6 Hz), 3.40 (m, H), 3.29 (m, 1 H), 3.07 (q, 2H, J = 7.2 Hz), 3.06 (m, 1 H), 2.93 (s, 3H), 2.85 (dddd, 1H, J = 1.8, 4.0, 7.5, 15.1 Hz), 1.91 (m, 1H), 1.34 (t, 3H, J = 7.2 Hz), 1.25-1.61 (m, 12H), 1.13 (m, 1 H), 1.01 (s, 3H), 0.90 (s, 9H), 0.89 (s, 3H), 0.87 (m, 2H), 0.69 (m, 2H); 13C RMN (CDCI3, 125 Hz) d 198.9, 172.3, 171.4, 160.9, 158.0, 71.0, 70.6, 60.6, 53.2, 50.9, 50.6, 48.4, 45.9, 34.8, 34.5, 32.1 , 31.1 , 28.7, 27.8, 27.5, 27.0, 26.9, 24.4, 23.0, 19.2, 3.6, 8.6, 6.7 ppm; HRMS calculado para C34H59N608S [M+1]+: 711.4115, experimental 711.4133.
EJEMPLO PREPARATIVO 65 Preparación de Paso A 65b Una solución del clorhidrato de (S)-alo-treonina-OMe 65a (Chem- Impex, 5 g) en diclorometano seco (150 mi) se enfrió a 0°C y se trató con di-ter-butildicarbonato (1.1 eq, 7.0 g) en 50 mi de diclorometano seco. Se agregó N-metilmorfolina (2.5 eq, 8.1 mi, d 0.920) gota a gota y la mezcla se agitó durante 30 min. El baño de enfriamiento se retiró y la mezcla se agitó durante otras 3 h. La mezcla se concentró a un tercio de su volumen y luego se diluyó con acetato de etilo (300 mi) y se lavó con HCI acuoso 1M (100 mi), bicarbonato de sodio acuoso saturado (80 mi) y salmuera (80 mi). La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida para dar el producto 65b (6.78 g, 98%) como un aceite incoloro.
Paso B Se desgasificó una solución de Boc-L-alo-Thr-OMe 65b (6.8 g) en 250 mi de THF seco (vacío/N2-saturación) y se trató con carbonato de alilmetilo (1.3 eq, 4.3 mi, d 1.022). Se agregó una cantidad catalítica de tetracis(trifenilfosfina)-paladio (0.02 % en mol, 673 mg). La mezcla levemente amarilla se desgasificó nuevamente y se calentó a 60°C durante alrededor de 3 h hasta que el análisis por TLC (acetona/hexanos; 2:8) demostró que no quedaba material de partida (la mezcla de reacción se tornó marrón). La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (acetato de etilo/hexanos; 1 :9) para dar el producto 65c (5,72 g, 72%) como un aceite incoloro.
Paso C Se enfrió una solución del éster metílico 65c (1.45 g) en 250 mi de una mezcla 4:2:1 de THF/agua/MeOH a 0°C y se trató con monohidrato de hidróxido de litio (2.5 eq, 2.19 mg). El baño de enfriamiento se retiró después de 30 min. y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante otras 4 h hasta que todo el material se había consumido según lo determinado mediante análisis por TLC (acetona/hexanos 15:85). La mezcla de reacción se trató con 200 mi de HCI acuoso 1 M (pH de mezcla = 1) y el producto se tomó en diclorometano (4 x 100 mi). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el producto. No se realizó otra purificación para el producto 65d (5.42 g, 98%).
Paso D Se agitó una solución del ácido 65d (20.92 mmoles) en 200 mi de diclorometano seco y 100 mi de DMF seco a 0°C y se trató con HATU (1.4 eq, 11.16 g). La sal de amina 1d (1.2 eq, 5.16 g) se agregó seguida de N-metilmorfolina (4 eq, 9.19 mi, d 0.920). La mezcla de reacción se agitó hasta el día siguiente. Se eliminaron todos los volátiles al vacío y el residuo se disolvió en 500 mi de acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua (200 mi), HCI acuoso 1M (100 mi), solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (100 mi), y salmuera (100 mi). La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (acetato de etilo/hexanos; 2:8) para dar el producto 65e (7.6 g, 88%) como un aceite incoloro junto con una pequeña cantidad de su producto diastereomérico correspondiente.
Paso E Se enfrió una solución del éster metílico 65e (7.6 g) en 300 mi de una mezcla 2. de THF/agua a 0°C y se trató con monohidrato de hidróxido de litio (2.5 eq, 1.93 mg). El baño de enfriamiento se retiró después de 30 min. y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante otras 4 h hasta que todo el material se había consumido según lo determinado mediante análisis por TLC (acetato de etilo/hexanos 25:75). La mezcla de reacción se trató con 200 mi de HCI acuoso 1M (pH de mezcla = 1) y el producto se tomó en diclorometano (4 x 100 mi). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el producto 65f (6.86 g, 93%) como un sólido incoloro.
Paso F diclorometano seco y 100 mi de DMF seco a 0°C y se trató con HATU (1.4 eq, 9.23 g). La sal de amina 1 f (1.1 eq, 4.21 g) se agregó en 100 mi de diclorometano seguido del agregado de N-metilmorfolina (4 eq, 7.6 mi, d 0.920). La mezcla de reacción se agitó a 0°C hasta el día siguiente. Se eliminaron todos los volátiles al vacío y el residuo se disolvió en 500 mi de acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua (2 x 100 mi), HCI acuoso 1 M (100 mi), solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (100 mi), y salmuera (100 mi). La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (acetato de etilo/hexanos; 3:7) para dar el producto 65g (8.17 g, 84%) como un aceite incoloro.
Paso G Se desgasificó una solución del dieno 65g (8.17 g) en 1.5 I de tolueno durante 30 min. (burbujeo de argón) y se trató con catalizador de Grubb (0.2 eq, 2.38 g). La solución rosada se calentó a 60°C durante 18 h (la solución se tornó oscura después de 10 min. de calentamiento). El solvente se eliminó a presión reducida y el residuo se sometió a cromatografía sobre gei de sílice (acetato de etilo/hexanos 3:7) para dar el producto alqueno 65h (7.0 g, 90%) como una mezcla de isómeros E y Z (aproximadamente 4:1 ).
Paso H Se trató una solución del alqueno 65h (7.0 g) en 300 mi de metanol con paladio sobre carbono (0.1% mol, 1.37 g de Pd/C 10%). La mezcla se hidrogenó a 2.4 x Í0b Pa (35 psi) hasta que todo el material de partida se había consumido (aproximadamente 3 h). La mezcla de reacción se diluyó con 300 mi de diclorometano y se filtró a través de un taco de Celite. El filtrado se concentró y el residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (acetato de etilo/hexanos; 3:7) para dar el producto 65i (5.33 g, 76%) como un sólido blanco.
Se trató una solución del áster metílico 65i (5.33 g) en 100 mi de THF seco con borohidruro de litio (2.1 eq, 10.4 mi de una solución de 2M en THF). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente y se monitoreó mediante TLC (acetona/hexanos; 3:7) para verificar la desaparición del material de partida. Después de 2 h, se agregó más solución de borohidruro de litio (1 eq) y la agitación se continuó durante 1h. El borohidruro de litio en exceso se desactivó mediante la adición de solución de cloruro de amonio acuoso saturado. La mezcla se dividió entre acetato de etilo (300 mi) y solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (100 mi). La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 100 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (acetona/hexanos; 3:7) para dar el producto 65j (3.93 g, 80%) como un sólido blanco.
Paso J Se trató una solución del alcohol 65j (1.0 g) en 40 mi de diclorometano seco con peryodinano de Dess-Martin (1.5 eq, 1.28 g). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla se trató con solución de tiosulfato de sodio acuoso 1 M (10 mi) y se agitó durante 5 min. También se agregó solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (30 mi) y la agitación se continuó durante otros 0 min. La mezcla se extrajo con diclorometano (3 x 80 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron. El residuo-se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetato de etilo/hexanos; 4:6 a 8:2) para dar el producto 65k (750 mg, 75%) como un sólido incoloro.
Paso K Se trató una solución del aldehido 65k (750 mg) en 20 mi de diclorometano seco con isocianuro de alilo (2 eq, 0.26 mi, d 0.8) y ácido acético (2 eq, 0.17 mi, d 1.049). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante alrededor de 5 h. Se eliminaron todos los volátiles al vacío y el residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 1:9 a 45:55) para dar el producto 65I (700 mg, 74%) como un sólido blanco.
Se trató una solución del acetato 65I (700 mg) en 20 mi de una mezcla 2:1 de THF/agua con monohidrato de hidróxido de litio (2.5 eq, 118 mg) y se agitó durante aproximadamente 30 min. hasta que todo el material se había consumido según lo determinado mediante análisis por TLC (acetato de etilo/hexanos 8:2). La mezcla de reacción se diluyó con 50 mi de solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y se extrajo con diclorometano (3 x 80 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron para dar el producto 65m (651 mg, 98%) como un semisólido incoloro que se usó sin otra purificación.
Paso M Se trató una solución de la hídroxiamida 65m (1.127 mmol) en 25 mi de diclorometano seco con peryodinano de Dess-Martin (2.0 eq, 956 mg). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. La mezcla se trató con solución de tiosulfato de sodio acuoso M (20 mi) y se agitó durante 5 min. También se agregó solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (30 mi) y la agitación se continuó durante otros 10 min. La mezcla se extrajo con diclorometano (3 x 80 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 1 :9 a 45:55) para dar el producto 65n (585 mg, 90%) como sólido blanco.
Paso N La N-Boc amina 65n (60 mg) se disolvió en 10 mi de solución de HCI 4M en dioxanos. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se eliminaron todos los volátiles a presión reducida y el residuo se colocó en alto vacío durante 3 h. La sal de amina resultante se disolvió en 5 mi de diclorometano seco y se enfrió a 0°C. Luego, se agregaron 10 gotas de solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. Después de 10 min, se agregó una solución del isocianato 56e gota a gota (1.2 eq, 0.57 mi de una solución de 0.216M en tolueno) y la agitación se continuó durante 10 min. El baño de enfriamiento se retiró y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (70 mi) y se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 15:85 a 5:5) para dar el producto 65 (50 mg, 65%) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CDCI3): d 8.13 (s amplio, 1 H), 7.42-7.82 (s amplio, 1H), 6.30 (s amplio, 1H), 5.90 (ddt, 1H, J = 5.6, 10.4, 17.0 Hz), 5.71 (s amplio, 1H), 5.38 (s amplio, 1H), 5.27 (dd, 1H, J = 1.2, 17.0 Hz), 5.23 (dd, 1H, J = 1.2, 10.4 Hz), 4.63 (dd, 1H, J = 7.8, 8.1 Hz), 4.50 (s amplio, 1H), 4.23 (d, H, J = 10.4 Hz), 4.05 (m, 2H), 3.98 (dd, 1 H, J = 5.6, 5.9 Hz), 3.95 (d, H, J = I I .0 Hz), 3.88 (dd, 1H, J = 10.7, 10.8 Hz), 3.82 (c, 1 H, J = 11.6 Hz), 3.71 (m, 1H), 3.62 (ddd, 1 H, J = 5.0, 5.3, 9.4 Hz), 3.20 (m, 1H), 2.55 (d, 2H, J = 16.7 Hz), 2.47 (d, 2H, J = 6.7 Hz), 1.73-1.97 (m, 4H), 1.14 (d, 3H, J = 6.0 Hz), 1. 0 (s, 6H), 1.00 (s, 3H), 0.99 (s, 9H), 0.83 (s, 3H); 13C R N (CDCIs, 125 Hz) d 198.0, 172.8, 171.5, 159.4, 157.8, 117.7, 75.5, 68.1 , 60.8, 57.2, 55.9, 48.7, 46.8, 42.3, 35.2, 29.3, 28.7, 28.3, 27.8, 27.6, 26.9, 26.8, 24.7, 24.4, 19.4, 16.3, 13.6 ppm; HRMS calculado para C39H63Ne08 [M+H]+: 743.4707, experimental 743.4717.
EJEMPLO PREPARATIVO 66 Preparación de Paso A Se disolvió la N-Boc amina 65n (60 mg) en 10 mi de solución de HCI 4M en dioxanos. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se eliminaron todos los volátiles a presión reducida y el residuo se colocó en alto vacío hasta el día siguiente. La sal de amina resultante se disolvió en 5 mi de diclorometano y se enfrió a 0°C. Luego, se agregaron 10 gotas de solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. Después de 10 min, se agregó una solución del isocianato 63e gota a gota (1.2 eq, 0.95 mi de una solución 0.13 en tolueno) y la agitación se continuó durante 10 min. El baño de enfriamiento se retiró y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (70 mi) y se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 2:8 a 6:4) para dar el producto 66 (55 mg, 73%) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CDCI3): d 8.20 (d, H, J = 6.6 Hz), 7.58-7.77 (s amplio, 1H), 6.13 (s amplio, 1H), 5.90 (ddt, 1H, J = 5.6, 10.0, 17.0 Hz), 5.76 (s amplio, 1 H), 5.27 (dd, 1 H, J = 1.2, 17.0 Hz), 5.22 (dd, 1H, J = 1.2, 10.0 Hz), 5.15 (d, 1H, J = 9.1 Hz), 4.69 (dd, 1H, J = 8.8, 8.8 Hz), 4.57 (s, 1H), 4.29 (d, 1H, J = 10.7 Hz), 3.91-4.09 (m, 4H), 3.61 (m, 2H), 3.47 (dd, H, J = .9, 13.5 Hz), 3.19 (m, 1H), 3.07 (m, 3H), 2.94 (s, 3H), 1.95 (m, 1 H), 1.35 (t, 3H, J = 7.5 Hz), 1.27-1.69 (m, 12H), 1.22 (d, 3H, J = 6.3 Hz), 1.14 (m, 1H), 1.02 (s, 3H), 0.93 (s, 9H), 0.89 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 125 Hz) d 199.0, 172,8, 171.5, 159.3, 158.1, 133.5, 117.5, 75.8, 68.4, 60.7, 56.2, 50.4, 48.6, 45.6, 42.2, 34.7, 34.5, 32.0, 31.6, 28.6, 27.7, 27.0, 26.9, 26.7, 24.8,^ 24.6, 19.3, 16.2, 14.5, 13.5, 8.5 ppm; HR S calculado para CssHeiNeOsS [M+H]+: 725.4272, experimental 725.4285.
EJEMPLO PREPARATIVO 67 Preparación de Paso A La N-Boc amina 33 (60 mg) se disolvió en 10 mi de solución de HCI 4M en dioxanos. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se eliminaron todos los volátiles a presión reducida y el residuo se colocó en alto vacío hasta el día siguiente. La sal de amina resultante se disolvió en 5 mi de diclorometano seco y se enfrió a 0°C. Luego, se agregó N-metilmorfolina (2 eq, 0.03 mi, d 0.920). Después de 10 min, se agregó una solución del isocianato 56e gota a gota (1.5 eq, 0.8 mi de una solución 0.2M en tolueno) y la agitación se continuó durante 0 min. El baño de enfriamiento se retiró y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (50 mi) y se lavó con HCI acuoso M (10 mi) y salmuera ( 0 mi). La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 2:8 a 1:1) para dar el producto 67 (50 mg, 64%) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CDCI3): d 8.14 (d, 1 H, J = 6.9 Hz), 7.66-7.82 (s amplio, 1H), 6. 1 (s amplio, 1 H), 5.70 (s amplio, 1 H), 5.32 (s amplio, 1H), 4.63 (s amplio, 1H), 4.60 (s, 1 H), 4.19 (d, 1 H, J = 10.0 Hz), 3.96 (dd, 1H, J 5.0, 10.0 Hz), 3.91 (m, 3H), 2.91 (ddd, 1H, J = 3.7, 7.8, 15.1 Hz), 2.57 (d, 2H, J = 16.7 Hz), 2.50 (d, 2H, J = 16.7 Hz), 1.86 (m, 3H), 1 .69 (m, 1 H), 1.18-1 .61 (m, 16H), 1.10 (s, 6H), 1.01 (s, 3H), 0.95 (s, 9H), 0.89 (m, 2H), 0.87 (s, 3H), 0.71 (m, 2H); 13C RMN (CDCI3, 125 MHz) d 199.2, 173.5, 172.9, 171.9, 160.7, 158.0, 60.5, 56.6, 51.5, 48.5, 46.8, 39.9, 35.0, 34.2, 31.4, 29.4, 28.1 , 27.8, 27.6, 27.4, 27.3, 27.0, 26.9, 26.5, 26.1 , 23.4, 23.1 , 19.4, 13.6, 6.8, 6.7 ppm.
EJEMPLO PREPARATIVO 68 Preparación de Paso A La N-Boc amina 34 (60 mg) se disolvió en 10 ml de solución de HCI 4M en dioxanos. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se eliminaron todos los volátiles a presión reducida y el residuo se colocó en alto vacío durante 3 h. La sal de amina resultante se disolvió en 5 ml de diclorometano seco y se enfrió a 0°C. Luego, se agregó N-metilmorfolina (2 eq, 0.02 ml, d 0.920). Después de 10 min, se agregó una solución del isocianato 56e gota a gota ( .4 eq, 0.6 ml de una solución 0.241 M en tolueno) y la agitación se continuó durante 10 min. El baño de enfriamiento se retiró y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (50 ml) y se lavó con HCI 1 acuoso ( 0 ml) y salmuera (10 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos 1 :9 a 45:55) para dar el producto 68 (44 mg, 56%) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CDCI3): d 8.08 (s amplio, 1 H), 7.52-7.77 (s amplio, H), 6.06 (s amplio, 1H), 5.70 (s amplio, 1H), 5.26 (s amplio, H), 4.63 (m, 2H), 4.20 (d, H, J = 10.0 Hz), 3.97 (dd, 1H, J = 5.0, 10.0 Hz), 3.92 (m, 3H), 3.43 (m, 2H), 2.57 (d, 2H, J = 16.7 Hz), 2.50 (d, 2H, J = 6.7 Hz), 1.90 (m, 1 H), 1.74 (m, 2H), 1.27 (t, 3H, J = 7,2 Hz), 1.20-1.62 (m, 17H), 1.11 (s, 6H), 1.02 (s, 3H), 0.96 (s, 9H), 0.88 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 125 MHz) d 199.1 , 173.5, 172.9, 171.8, 159.3, 157.9, 60.6, 56.6, 51 .5, 48.5, 46.8, 40.0, 34.9, 34.8, 34.1 , 32.8, 29.4, 28.1 , 27.8, 27.5, 27.4, 27.3, 27.0, 26.9, 26.5, 26.0, 25.1 , 23.4, 19.4, 14.8, 13.6 ppm; HRMS calculado para CasHesNeOy [ +H]+: 715.4758, experimental 715.4751.
EJEMPLO PREPARATIVO 69 Preparación de La N-Boc amina XX (93 mg) se disolvió en 10 mi de solución de HCI 4M en dioxanos. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se eliminaron todos los volátiles a presión reducida y el residuo se colocó en alto vacío durante 3 h. La sal de amina resultante se disolvió en 5 mi de diclorometano seco y se enfrió a 0°C. Luego, se agregó N-metilmorfolina (2 eq, 0.04 mi, d 0.920). Después de 10 min, se agregó una solución del isocianato 59a en tolueno gota a gota (1,2 eq) y la agitación se continuó durante 10 min. El baño de enfriamiento se retiró y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (50 mi) y se lavó con HCI acuoso M (10 mi) y salmuera (10 mi). La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 1:9 a 45:55) para dar el producto 69 (45 mg, 38%) como un sólido blanco. H RMN (500 MHz, CDCI3): d 8.26-8.67 (s amplio, H), 8.17 (s amplio, 1 H), 6.19 (s amplio, 1 H), 5.92 (ddt, 1H, J = 5.6, 10.4, 17.3 Hz), 5.74 (dd, 1 H, J = 8.8, 9.1 Hz), 5.41 (s amplio, 1H), 5.26 (dd, 1H, J = 1.2, 7.3 Hz), 5.20 (d, 1H, J = 10.0 Hz), 4.67 (s amplio, 1H), 4.62 (s, 1 H), 4.35 (dd, 1 H, J = 1.9, 12.9 Hz), 4.20 (d, 1 H, J = 9.8 Hz), 3.99 (m, 4H), 3.58 (ddd, 1H, J = 5.9, 6.9, 12.6 Hz), 3.18 (ddd, 1H, J = 5.9, 5.9, 11.9 Hz), 2.69 (d, 1H, J = 10.7 Hz), 2.18 (d, 1H, J = 17.0 Hz), 2.12 (d, 1H, J = 17.0 Hz), 1.96 (m, 1H), 1.18-1.89 (m, 20H), 1.12 (m, 1H), 1.04 (s, 3H), 1.03 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.92 (s, 9H), 0.91 (s, 3H); 3C RMN (CDCI3, 125 MHz) d 199.3, 173.3, 171.8, 171.1, 159.4, 158.2, 133.7, 117.3, 60.4, 55.3, 51.5, 48.3, 46.3, 45.0, 42.3, 35.8, 34.6, 34.0, 31.2, 30.3, 28.6, 27.8, 27.7, 27.6, 27.3, 27,2, 27.0, 26.3, 25.9, 25.4, 23.2, 19.3, 13.5 ppm.
EJEMPLO PREPARATIVO 70 Preparación de Paso A La N-Boc amina 34 (73 mg) se disolvió en 10 mi de solución de HCI 4M en dioxanos. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se eliminaron todos los volátiles a presión reducida y el residuo se colocó en alto vacío durante 3 h. La sal de amina resultante se disolvió en 5 mi de diclorometano seco y se enfrió a 0°C. Luego, se agregó N-metilmorfolina (2 eq, 0.03 mi, d 0.920). Después de 10 min, se agregó, una solución del isocianato 59a en tolueno gota a gota (1.2 eq) y la agitación se continuó durante 10 min. El baño de enfriamiento se retiró y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (50 mi) y se lavó con HCI acuoso 1 M (10 mi) y salmuera (10 mi). La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 1 :9 a 45:55) para dar el producto 70 (63 mg, 69%) como un sólido blanco. H RMN (500 MHz, CDC½): d 8.20-8.43 (s amplio, 1 H), 8.17 (s amplio, 1 H), 6.20 (s amplio, 1 H), 5.75 (dd, H, J = 8.2, 9.4 Hz), 5.41 (s amplio, 1 H), 4.66 (d, 1 H, J = 9.1 Hz), 4.63 (s, 1 H), 4.36 (dd, 1 H, J = 12.6, 13.2 Hz), 4.18 (d, 1 H, J = 10.4 Hz), 3.96 (m, 2H), 3.57 (m, 1 H), 3.41 (m, 2H), 3.18 (ddd, 1 H, J = 5.9, 11.9 Hz), 2.69 (d, 1 H, J = 13.2 Hz), 2.19 (d, 1 H, J = 17.0 Hz), 2.14 (d, 1 H, 17.0 Hz), 1.76-1.99 (m, 4H), 1.25 (t, 3H, J = 7.2 Hz), 1.18-1.75 (m. 17H), 1.12 (m, 1 H), 1.04 (s, 3H), 1.02 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.92 (s, 9H), 0.91 (s, 3H); 13 ',C RMN (CDCI l3, 125 MHz) d 199.9, 173.3, 171.8, 171.1 , 159.4, 158.2, 60.4, 55.2, 53.5, 51.5, 48.3, 46.3, 35.8, 34.8, 34.6, 31.3, 30.3, 28.7, 27.8, 27.7, 27.6, 27.3, 27.0, 26.4, 26.0, 23.2, 19.3, 14.8, 13.5 ppm; HRMS calculado para C^^NeOe [M+H]+: 701.4966, experimental 701.4960.
EJEMPLO PREPARATIVO 71 Preparación de Paso A Se agitó una solución de 31 (100 mg, 0.169 mmol) en HCI 4 N en dioxano (5 mi) a temperatura ambiente durante 1 hora. Se eliminó el solvente hasta sequedad para dar 71a (120 mg), que se usó sin otra purificación Paso B Se trató una solución de 71a (89 mg, 0.169 mmol) en CH2CI2 (10 mi) con el isocianato 27b (3 equiv), NaHC03 saturado (3 mi) y se agitó vigorosamente durante 2 horas. Se dejó reposar la solución a 5°C durante 12 horas. La capa de CH2CI2 se separó, se lavó con agua, salmuera y se filtró a través de Na2S04. Se eliminó el solvente hasta sequedad y el residuo se purificó sobre columna de gel de sílice (acetona/hexanos 40% a 60%) para dar 71 (73 mg). MS (ES) m/z intensidad relativa 773 [(M+Na)+, 20]; 751 [(M+1)+, 100]. Calculado para CaeHsgNgOgS [M+1]+: 751,4064; Experimental 751,4075.
EJEMPLO PREPARATIVO 72 Preparación de Paso A Se trató una solución de 71a (89 mg, 0.169 mmol) en CH2CI2 (10 mi) con el isocianato 51c (1.5 equiv), NaHC03 saturado (4 mi) y se agitó vigorosamente durante 30 minutos. Se dejó reposar la solución a 5°C durante 2 horas. Se separó la capa de CH2CI2, se lavó con agua, salmuera y se filtró a través de Na2S04. Se eliminó el solvente hasta sequedad y el residuo se purificó sobre columna de gel de sílice (acetona/hexanos 40% a 50%) para dar 72 (95 mg). MS (ES) m/z intensidad relativa 790 [(M+CH3OH+1)+, 40]; 758 [(M+1 )+, 100]. Calculado para C38H59N7O9 [M+1]+: 758.4453; Experimental 758.4449.
EJEMPLO PREPARATIVO 73 Preparación de 73 Paso A 73a La N-(ter-butoxicarbonil)-L-serin-beta-lactona 73a se preparará de acuerdo con el procedimiento descrito por Vederas y colaboradores (Arnold, L. D.; Kalantar, T. H.; Vederas, J. C. J. Am. Chem. Soc. 1985, 107, 7105-7109), comenzando por N-Boc-L-Ser-OH comercial.
Paso B Se agregará una solución de N-(ter-butoxilcarboni'!)-L-serin-beta-lactona 73a (1 mmol) en 20 mi de acetonitriio seco gota a gota a temperatura ambiente durante 1 h, a una solución agitada de aliiamina (25 mmoies) en 30 mi de acetonitriio seco. Después de 2 h, la solución se concentrará a presión reducida. El residuo se suspenderá con acetonitriio y el producto ácido 73b se recuperará mediante filtración.
Paso C Se tratará una solución del ácido 2 (1 mmoies) en solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (4 mi) y agua (1 mi) a temperatura ambiente con cloroformiato de bencilo (1.12 mmoies) en acetona (1 mi). La mezcla de reacción se agitará durante 2 h. La mezcla se dividirá entre éter (20 mi) y agua (20 mi). La capa acuosa se enfriará en un baño de hielo-agua, se llevará a pH 2 usando HCI acuoso 5% y se extraerá con diclorometano (3 x 30 mi). Las capas orgánicas combinadas se secarán sobre sulfato de magnesio, se filtrarán y se concentrarán para dar el producto ácido 73c.
Paso D Una solución del ácido 73c (1 mmol) en 10 mi de diclorometano seco y 10 mi de DMF seco se agitará a 0°C y se tratará con HATU (1.4 mmoles). Sucesivamente se agregará el clorhidrato de amina (1.3 mmoles) y N-metilmorfolina (4 mmoles). La mezcla de reacción se calentará gradualmente hasta temperatura ambiente y se agitará hasta el día siguiente. Se eliminarán todos los volátiles al vacío y el residuo se tomará en 100 mi de acetato de etilo. La capa orgánica se lavará con agua (20 mi), HCI acuoso N (20 mi), solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (20 mi), y salmuera (20 mi). La capa orgánica se secará sobre sulfato de magnesio, se filtrará y se concentrará a presión reducida. El producto 73d se purificará mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice.
Paso E Una solución del éster metílico 73d (1 mmol) en 15 mi de una mezcla de THF/MeOH/H20 (1:1:1) se tratará con monohídrato de hidróxido de litio (2.5 mmoles) a 0°C. El baño de enfriamiento se retirará y la mezcla de reacción se agitará a temperatura ambiente y se monitoreará mediante TLC (acetona/hexanos; 2:8). Después de 1 h, se agregarán 10 mi de HCl acuoso 1N y todos lo volátiles se eliminarán a presión reducida. El residuo se dividirá entre 30 mi de HCl acuoso N y 100 mi de diclorometano. La capa acuosa se extraerá con diclorometano (2 x 50 mi). Las capas orgánicas combinadas se secarán sobre sulfato de magnesio, se filtrarán y se concentrarán a presión reducida para dar el producto ácido 73e.
Una solución del ácido 73e (1 mmoi) en 10 mi de diclorometano seco y 10 mi de DMF seco se agitarán a 0°C y se tratarán con HATU (1 A eq, 1.15 g). El clorhidrato de amina 7 (1.2 mmoles) se agregará en 10 mi de diclorometano seguido de N-metilmorfolina (4 mmoles). La mezcla de reacción se agitará hasta el día siguiente (temperatura de 0 a 25°C). Todos los volátiles se eliminarán al vacío y el residuo se disolverá en 100 mi de acetato de etilo. La capa se lavará con agua (20 mi), HCI acuoso N (20 mi), solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (20 mi) y salmuera (20 mi). La capa orgánica se secará sobre sulfato de magnesio, se filtrará y se concentrará a presión reducida. El producto 73f se purificará mediante cromatografía en columna de gel de sílice.
Paso G Una solución 0.01 M del dieno 73f (1 mmol) en tolueno se desgasificará durante 30 min. (burbujeo de argón) y se tratará con catalizador de Grubb (0.2 mmoles). La solución rosada se calentará a 60°C durante 16 h. El solvente se eliminará a presión reducida y el residuo se someterá a cromatografía sobre gel de sílice para dar el producto alqueno 73g como una mezcla de isómeros E y Z.
Paso H Se tratará una solución del alqueno 73g (1 mmol) en 20 mi de metanol con paladio al 5% sobre carbono (0.1 % en mol). La mezcla se hidrogenará a 3.45 x 105 Pa (50 psi) hasta que se haya consumido todo el material de partida. La mezcla de reacción se diluirá con 100 mi de diclorometano y se filtrará a través de un lecho de Celite. El filtrado se concentrará y el producto 73h se purificará mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice.
Paso Se tratará una solución de la amina macrocíclica 73h (1 mmol) en 10 mi de dícloromeíano con carbonato de potasio (2 mmoles) y cloruro de (trimetilsilil)-etansulfonilo (1 mmol). La mezcla se agita durante 1 día y el solvente se evaporará. El producto 73i se purificará mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice.
Paso J Se tratará una solución del éster metílico 73i (1 mmol) en 10 mi de THF seco con borohídruro de litio (2.1 mmoles). La mezcla de reacción se agitará a temperatura ambiente. Después de 5 h, el borohidruro de litio en exceso se desactivará por agregado de solución de cloruro de amonio acuoso saturado (3 mi). La mezcla se dividirá entre acetato de etilo (50 mi) y solución de bicarbonato de sodio acuoso saturado (30 mi). La capa acuosa se extraerá nuevamente con acetato de etilo (2 x 30 mi) y diclorometano (2 x 30 mi). Las capas orgánicas combinadas se secarán sobre sulfato de magnesio, se filtrarán y se concentrarán a presión reducida. El residuo se someterá a cromatografía sobre gel de sílice para dar el producto 73j.
Paso K Se tratará una solución del alcohol 73] (1 mmol) en 20 mi de diclorometano seco con peryodinano de Dess-Martin (1.5 mmoles). La mezcla de reacción se agitará a temperatura ambiente durante 45 min. La mezcla se tratará con solución de tiosulfato de sodio acuoso 1 M (10 mi) y solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (20 mi) y se agitará durante 5 min. La mezcla se extraerá con diclorometano (3 x 40 mi). Las capas orgánicas combinadas se secarán sobre sulfato de magnesio, se filtrarán y se concentrarán. El residuo se someterá a cromatografía sobre gel de sílice para dar el producto aldehido 73k.
Paso L Una solución del aldehido 73k (1 mmol) en 10 mi de diclorometano seco se tratará con isocianuro de alilo (2 mmoles) y ácido acético (2 mmoles). La mezcla se agitará durante alrededor de 5 h. Todos lo volátiles se eliminarán en vacío y el residuo se someterá a cromatografía sobre gel de sílice para dar el producto del acetato 73I.
Paso M El acetato 73I (1 mmoles) se disolverá en 16 mi de una mezcla 1 :1 de THF/agua y se tratará con monohidrato de hidróxido de litio (2.5 mmoles). Después de 30 min., la mezcla se dividirá entre diclorometano (50 mi) y solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (20 mi). La capa acuosa se extraerá nuevamente con diclorometano (3 x 30 mi). Las capas orgánicas combinadas se secarán sobre sulfato de magnesio, se filtrarán y se concentrarán. El producto, la hidroxiamida 73m, se usará sin otra purificación.
Paso N Una solución de la hidroxiamida 73m (1 mmol) en 20 mi de diclorometano seco se tratará con peryodinano de Dess-Martin (2.5 mmoles). La mezcla de reacción se agitará a temperatura ambiente durante 30 min. La mezcla se tratará con solución de tiosulfato de sodio acuoso 1M (20 mi) y solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (10 mi) y se agitó durante 15 min. La mezcla se extraerá con diclorometano (3 x 30 mi). Las capas orgánicas combinadas se secarán sobre sulfato de magnesio, se filtrarán y se concentrarán. El producto, la cetoamida 73n, se purificará mediante cromatografía en columna.
Paso O La amina protegida con N-Boc 73n (0.1 mmoles) se disolverá en 5 mi de solución 4 de HCI en dioxanos. La solución resultante se agitará durante 30 min. y luego se evaporará a presión reducida para dar el producto, el clorhidrato de amina 73o.
Paso P El clorhidrato de amina 73o (0.1 mmol) se disolverá en 5 mi de diclorometano y se tratará con 20 gotas de solución de bicarbonato de sodio acuoso saturado seguido de una solución del isocianato 51c (0.12 mmoles) en tolueno. La mezcla se agitará durante 5 h y luego se diluirá con 50 mi de diclorometano y se secará sobre sulfato de magnesio. La mezcla se filtrará y se concentrará a presión reducida. El producto 73p se purificará mediante cromatografía en columna de gel de sílice.
Paso Q La amina protegida con SES 73p (0.1 mmol) se disolverá en 2 mi de DMF y se tratará con fluoruro de cesio (0.4 mmoles). La mezcla de reacción se agitará a temperatura ambiente durante 4 h y se verterá en agua (10 mi). La mezcla se extraerá con acetato de etilo (3 x 20 mi). Las capas orgánicas combinadas se secarán sobre sulfato de magnesio, se filtrarán y se concentrarán a presión reducida. La amina macrocíclica 73 se purificará mediante cromatografía en columna de gel de sílice.
Paso A La N-Boc amina 65n (60 mg) se disolvió en 10 mi de solución de HCI 4M en dioxanos. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se eliminaron todos los volátiles a presión reducida y el residuo se colocó en alto vacío durante 3 h. La sal de amina resultante se disolvió en 5 mi de diclorometano seco y se enfrió a 0°C. Luego, se agregaron 20 gotas de solución del bicarbonato de sodio acuoso saturado seguido de una solución del isocianato 27b en tolueno ( .2 eq, 0.6 mi de una solución 0.2M en tolueno) y la agitación se continuó durante 10 mín. El baño de enfriamiento se retiró y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (60 mi) y se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos 1 :9 a 1 :1) para dar el producto 74 (45 mg, 59%) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CDCI3): d 8.11 (s amplio, 1 H), 7.40-7.69 (s amplio, 1H), 6.08-6.43 (s amplio, 1H), 5.91 (ddt, 1 H, J = 5.6, 10.4, 17.3 Hz), 5.70 (s amplio, 1 H), 5.29 (dd, 1 H, J = 1.2, 7.3 Hz), 5.24 (dd, 1 H, J = 1.2, 10.4 Hz), 4.66 (d, 1H, J = 9.4 Hz), 4.46 (s amplio, 1 H), 4.38 (m, 1 H), 4.25 (d, 1H, J = 10.7 Hz), 4.06 (m, 2H), 3.98 (m, 1H), 3.71 (de, 5,6, 1.6 Hz), 3.64 (ddd, 1H, J = 5.0, 5.3, 9.7 Hz), 3.25 (m, 1 H), 2.88 (d, 1 H, J = 13.5 Hz), 2.47 (s amplio, 1 H), 2.19 (d, 1 H, J = 11.6 Hz), 1.39 (s, 9H), 1.28-1.99 (m, 22H), 1.21 (d, 3H, J = 5.6 Hz), 1.13 (m, 1 H), 1.04 (s, 3H), 0.91 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 125 MHz) d 198.7, 173.0, 171.3, 59.4, 157.0, 133.4, 117.7, 75.2, 67.7, 61.2, 60.8, 55.6, 54.6, 48.7, 42.2, 36.3, 31.6, 28.9, 27.9, 27.8, 27.1 , 26.8, 25.9, 24.8, 24.0, 23.6, 21.9, 21.5, 19.4, 15.8, 13.4 ppm; HRMS calculado para C37H62N5O8S [M+H]+: 736.4319, experimental 736.4325.
EJEMPLO PREPARATIVO 75 Preparación de V Paso A Se trató una solución del aldehido 65k (710 mg) en 30 mi de diclorometano seco con isocianuro de ciclopropilo (Oakwood Prod., 2.0 eq, 0.25 mi, d 0.8) y ácido acético (2 eq, 0.16 mi, d 1.049). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 h. Se eliminaron todos los volátiles a presión reducida y el residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 15:85 a 55:45) para dar el producto 75a (740 mg, 83%) como un sólido blanco.
Paso B Se trató una solución del acetato 75a (740 mg) en 20 mi de una mezcla 2:1 de THF/agua con monohidrato de hidróxido de litio (2.5 eq, 125 mg) y se agitó durante aproximadamente 30 min. hasta que todo el material se había consumido según lo determinado mediante análisis por TLC (acetato de etilo/hexanos 8:2). La mezcla de reacción se diluyó con 50 mi de solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y se extrajo con diclorometano (3 x 80 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron para dar el producto 75b (688 mg, 98%) como un semisólido incoloro que se usó sin otra purificación.
Paso C Una solución de la hidroxiamida 75b (1.192 mmoles) en 25 mi de diclorometano seco se trató con peryodinano de Dess-Martin (2.0 eq, 1.01 g). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. La mezcla se trató con solución de tiosulfato de sodio acuoso M (30 mi) y se agitó durante 5 min. También se agregó solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (30 mi) y la agitación se continuó durante otros 10 min. La mezcla se extrajo con diclorometano (3 x 80 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 5:95 a 4:6) para dar el producto 75c (476 mg, 69%) como sólido blanco.
Paso D La N-Boc amina 75c (60 mg) se disolvió en 10 mi de solución de HCI 4M en dioxanos. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se eliminaron todos los volátiles a presión reducida y el residuo se colocó en alto vacío durante 3 h. La sal de amina resultante se disolvió en 5 mi de diclorometano seco y se enfrió a 0°C. Luego, se agregaron 10 gotas de solución de bicarbonato de sodio acuoso saturado. Después de 10 min, se agregó una solución del isocianato 56e gota a gota (1.2 eq, 0.59 mi de una solución de 0.216M en tolueno) y la agitación se continuó durante 10 min. El baño de enfriamiento se retiró y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (70 mi) y se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos 1 :9 a 1:1) para dar el producto 75 (41 mg, 53%) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CDCI3): d 8.12 (s amplio, 1H), 7.40-7.70 (s amplio, 1 H), 6.28 (s amplio, 1 H), 5.68 (s amplio, 1 H), 5.37 (s amplio, 1 H), 4.62 (s, 1 H), 4.49 (s amplio, 1 H), 4.22 (d, 1 H, J = 10.7 Hz), 4.05 (dd, 1 H, J = 5.0, 10.4 Hz), 3.94 (d, 1 H, J = 1.6 Hz), 3.88 (dd, 1 H, J = 10.4, 10.7 Hz), 3.82 (c, 1 H, J = 11.0 Hz), 3.69 (m, H), 3.62 (ddd, 1 H, J = 5.0, 5.6, 9.4 Hz), 3.20 (m, 1 H), 2.89 (ddd, 1H, J = 3.4, 7.2, 14.8 Hz), 2.55 (d, 2H, J = 17.0 Hz), 2.48 (d, 2H, J = 17.0 Hz), 1.79-1.99 (m, 4H), 1.28-1.69 (m, 10H), 1.14 (d, 3H, J = 6.0 Hz), 1.10 (s, 6H), 1.00 (s, 3H), 0.99 (s, 9H), 0.90 (m, 2H), 0.83 (s, 3H), 0.71 (m, 2H); 13C RMN (CDCI3, 125 MHz) d 198.8, 172.8, 171.5, 160.9, 157.8, 75.5, 68.1 , 60.8, 57.2, 55.9, 48.7, 46.8, 35.2, 29.3, 28.6, 28.3, 27.7, 26.9, 26.8, 24.8, 24.4, 23.1 , 19.3, 16.3, 13.6, 6.8 ppm; HRMS calculado para CsgHesNsOs [M+H]+: 743.4707, experimental 743.4686.
EJEMPLO PREPARATIVO 76 Preparación de Paso A La N-Boc amina 75c (60 mg) se disolvió en 10 mi de solución de HCl 4M en dioxanos. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se eliminaron todos los volátiles a presión reducida y el residuo se colocó en alto vacío hasta el día siguiente. La sal de amina resultante se disolvió en 5 mi de diclorometano y se enfrió a 0°C. Luego, se agregaron 10 gotas de solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. Después de 10 min., se agregó gota a gota una solución del isocianato 63e (1.2 eq, 0.95 mi de una solución 0.131 M en tolueno) y la agitación se continuó durante 10 min. El baño de enfriamiento se retiró y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (70 mi) y se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 2:8 a 6:4) para dar el producto 76 (54 mg, 72%) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CDCI3): d 8.22 (s amplio, 1H), 7.58 (s amplio, 1H), 6.13 (s amplio, 1H), 5.75 (s amplio, 1H), 5.15 (d, 1 H, J = 8.5 Hz), 4.68 (s amplio, 1 H), 4.56 (s, 1H), 4.28 (d, H, J = 10.7 Hz), 4.06 (dd, 1H, J = 4.7, 10.4 Hz), 3.99 (dd, 1H, J = 9.1, 9.7 Hz), 3.60 (m, 2H), 3.47 (dd., 1H, J 12.2, 13.2 Hz), 3.19 (m, 1H), 3.07 (m, 3H), 2.94 (s, 3H), 2.87 (ddd, 1 H, J = 4.0, 7.8, 15.1 Hz), 1.72-1.99 (m, 4H), 1.37 (t, 3H, J = 7.5 Hz), 1.27-1.68 (m, 9H), 1.21 (d, 3H, J = 6.0 Hz), 1.13 (m, 1H), 1.01 (s, 3H), 0.92 (s, 9H), 0.89 (s, 3H), 0.87 (m, 2H), 0.71 (m, 2H); 3C RMN (CDCI3, 125 MHz) d 199.5, 172.8, 171.6, 160.8, 158.1, 75.8, 68.4, 60.6, 56.2, 54.4, 50.4, 48.5, 45.7, 34.7, 34.5, 32.1, 31.6, 28.6, 27.8, 27.7, 27.0, 26.9, 26.7, 24.9, 24.6, 23.0, 19.2, 16.2, 13.5, 8.5, 6.7 ppm; HRMS calculado para C^HeiNeOeS [M+H]+: 725.4272, experimental 725.4292.
EJEMPLO PREPARATIVO 77 Preparación de Paso A La N-Boc amina 75c (60 mg) se disolvió en 10 mi de solución de HCI 4 en dioxanos. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se eliminaron todos los volátiles a presión reducida y el residuo se colocó en alto vacío durante 3 h. La sal de amina resultante se disolvió en 5 mi de diclorometano seco y se enfrió a 0°C. Luego, se agregaron 20 gotas de solución del bicarbonato de sodio acuoso saturado seguido de una solución del isocianato 27b en tolueno (1.2 eq, 0.6 mi de una solución 0.2M en tolueno) y la agitación se continuó durante 10 min. El baño de enfriamiento se retiró y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (60 mi) y se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 2:8 a 6:4) para dar el producto 77 (50 mg, 65%) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CDCI3): d 8.12 (s amplio, 1 H), 7.33-7.63 (s amplio, 1H), 6.07-6.47 (s amplio, 1H), 5.67 (s amplio, 1H), 4.65 (d, 1H, J = 9.7 Hz), 4.45 (s amplio, 1 H), 4.37 (m, 1H), 4.24 (d, 1 H, J = 10.7 Hz), 4.07 (dd, 1 H, J =5.0, 10.7 Hz), 3.70 (de, 1H, 5.9, 9.7 Hz), 3.64 (ddd, H, J = 5.0, 5.6, 9.7 Hz), 3.24 (m, 1H), 2.89 (ddd, 1 H, J = 3.7, 7.5, 14.5 Hz), 2.88 (m, 1H), 2.47 (s amplio, 1 H), 2.18 (d, 1H, J = 12.6 Hz), 1.74-1.97 (m, 5H), 1.39 (s, 9H), 1.27- 1.73 (m, 17H), 1.20 (d, 3H, J = 6.3 Hz), 1.11 (m, 1H), 1.04 (s, 3H), 0.91 (s, 3H), 0.90 (m, 2H), 0.73 (m, 2H); 13C R N (CDCI3, 125 Hz) d 198.7, 173.0, 171.3, 161.0, 157.0, 75.2, 67.8, 61.1 , 60.8, 55.5, 54.6, 50.1 , 48.6, 36.3, 31.6, 28.8, 27.9, 27.0, 26.9, 25.9, 24.8, 24.0, 23.6, 23.1 , 21.9, 21.5, 19.4, 15.8, 13.4, 6.9, 6.8 ppm. HRMS calculado para CsrHtaNsOsS [M+1]+: 736.4319, experimental 736.4329, La N-Boc amina 65n (60 mg) se disolvió en 10 mi de solución de HCI 4M en dioxanos. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se eliminaron todos los volátiles a presión reducida y el residuo se colocó en alto vacío durante 3 h. La sal de amina resultante se disolvió en 5 mi de diclorometano seco y se enfrió a 0°C. Luego, se agregaron 20 gotas de solución del bicarbonato de sodio acuoso saturado seguido de una solución del isocianato 59a en tolueno (1.2 eq, 0.6 mi de una solución 0.2 en tolueno) y la agitación se continuó durante 10 min. El baño de enfriamiento se retiró y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (60 mi) y se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/(hexanos-diclorometano 1 :1), 1 :9 a 1 :1) para dar el producto 78 (51 mg, 67%) como un sólido blanco. H RMN (CDCI3, 500 MHz) d 8.17 (s amplio, 1 H), 6.42-6.79 (s amplio, 1 H), 5.90 (ddt, 1 H, J = 5.6, 10.7, 17.0 Hz), 5.73 (s amplio, 1 H), 5.57 (s amplio, 1 H), 5.27 (d, 1 H, J = 17.0 Hz), 5.22 (d, 1 H, J = 10.0 Hz), 4.62 (dd, 1H, J = 9.1 , 9.7 Hz), 4.52 (s amplio, 1 H), 4.29 (m, 2H), 3.86-4.11 (m, 4H), 3.64 (m, 3H), 3.17 (m, 2H), 2.74 (d, 1 H, J = 11.9 Hz), 2.24 (d, 1 H, J = 17.3 Hz), 2.10 (d, 1H, J = 17.0 Hz), 1.95 (m, 4H), 1.24-1.68 (m, 11 H), 1.16 (d, 3H, J = 5.9 Hz), 1.11 (m, 1H), 1.02 (s, 3H), 1.01 (s, 6H), 0.95 (s, 9H), 0.87 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 125 MHz) d 196.8, 172.9, 171.6, 170.7, 159.4, 158.2, 133.6, 117.5, 75.7, 68.2, 60.8, 56.0, 55.3, 48.5, 46.8, 46.2, 44.9, 42.3, 35.7, 34.8, 32.3, 31.6, 30.2, 28.6, 28.4, 27.8, 27.7, 27.1, 27.0, 26.8, 24.8, 24.5, 19.3, 16.5, 13.6 ppm. HRMS calculado para 039?65 6?7 [?+1]+: 729.4915, experimental 729.4917.
EJEMPLO PREPARATIVO 79 La N-Boc amina 75c (60 mg) se disolvió en 10 mi de solución de HCI 4 en dioxanos. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se eliminaron todos los volátiles a presión reducida y el residuo se colocó en alto vacío durante 3 h. La sal de amina resultante se disolvió en 5 mi de diclorometano seco y se enfrió a 0°C. Luego, se agregaron 20 gotas de solución del bicarbonato de sodio acuoso saturado seguido de una solución del isocianato 59a en tolueno (1.2 eq, 0.6 mi de una solución 0.2M en tolueno) y la agitación se continuó durante 0 min. El baño de enfriamiento se retiró y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (60 mi) y se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/(hexanos-diclorometano 1:1), 1:9 a 1 :1 ) para dar el producto 79 (36 mg, 48%) como un sólido blanco. H RMN (CDCI3, 500 MHz) d 8.19 (s amplio, 1 H), 6.38-6.70 (s amplio, 1 H), 5.73 (s amplio, 1 H), 5.55 (d, 1H, J = 7.8 Hz), 4.61 (t, 1H, J = 9.7 Hz), 4.51 (s amplio, 1 H), 4,27 (m, 2H), 4.05 (dd, 1 H, J = 5.0, 10.4 Hz), 3.95 (dd, 1 H, J = 9.4, 9.7 Hz); 3.62 (m, 3H), 3.18 (m, 2H), 2.90 (ddd, 1 H, J = 3.7, 7.2, 14.8 Hz), 2.73 (d, 1 H, J = 12.6 Hz), 2.21 (d, 1 H, J = 17.0 Hz), 2.09 (d, 1 H, J = 17.3 Hz), 1.93 (s amplio, 4H), .27- .68 (m, 11 H), 1.15 (d, 3H, J = 5.9 Hz), 1.1 (m, 1 H), 1.02 (s, 3H), 1.00 (s, 6H), 0.94 (s, 9H), 0.87 (m, 2H), 0.86 (s, 3H), 0.73 (m, 2H); 13C RMN (CDCI3, 125 MHz) d 197.1 , 172.9, 171.6, 170.6, 160.9, 158.2, 75.6, 68.3, 60.7, 56.0, 55.3, 48.5, 46.7, 46.3, 44.9, 35.7, 34.8, 32.4, 31.6, 30.2, 29.7, 28.6, 28.5, 27.8, 27.7, 27.0, 26.7, 24.8, 24.7, 23.1 , 19.3, 16.5, 13.6, 6.7, 6.6 ppm. HRMS calculado para CagHes eOr [M+1f: 729.4915, experimental 729.4926.
EJEMPLO PREPARATIVO 80 Paso A La N-Boc amina 52 (60 mg) se disolvió en 10 mi de solución de HCI 4M en dioxanos. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se eliminaron todos los volátiles a presión reducida y el residuo se colocó en alto vacío durante 3 h. La sal de amina resultante se disolvió en 5 mi de diclorometano seco y se enfrió a 0°C. Luego, se agregaron 20 gotas de solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio seguido de una solución del isocianato 80a en tolueno (1.2 eq, 0.8 mi de una solución 0.155M en tolueno) y la agitación se continuó durante 10 min. El baño de enfriamiento se retiró y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (60 mi) y se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos, 2:8 a 6:4) para dar el producto 80 (41 mg, 61%) como un sólido blanco. H RMN (CDCI3, 500 MHz) d 8.01 (d, 1 H, J = 8.2 Hz), 7.65 (s amplio, H), 6.01 (s amplio, 1 H), 5.91 (ddt, 1H, J = 5.6, 10.0, 17.0 Hz), 5.68 (dd, 1H, J - 9.1 , 9.4 Hz), 5.27 (dd, 1H, J = 1.2, 17.0 Hz), 5.23 (dd, 1 H, J = 1.2, 10.0 Hz), 5.20 (m, 1 H), 4.98 (s amplio, 1 H); 4.59 (s, 1H), 4.13 (d, 1H, J = 10.7 Hz), 4.01 (m, 3H), 3.89 (ddd, 1H, J = 2.2, 10.4, 10.7 Hz), 3.79 (dd, 1 H, J = 3.4, 12.9 Hz), 3.76 (m, 1 H), 3.56 (m, 2H), 3.36 (dd, 1H, J = 4.1 , 7.5 Hz), 3.31 (m, 1H), 3.18 (s amplio, 1H), 3.14 (s amplio, 1H), 2.22 (d, 1H, J = 10.7 Hz), 2.07 (s amplio, 2H), 1.73-2.00 (m, 5H), 1.25-1.70 (m, 11 H), 1.16 (m, 1 H), 1.02 (s, 3H), 0.96 (s, 9H), 0.86 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 125 MHz) d 198.8, 177.4, 172.1, 171.3, 159.3, 157.9, 133.4, 117.7, 71.4, 70.7, 60.7, 56.7, 53.4, 50.8, 48.6, 45.4, 45.2, 42.2, 39.4, 34.7, 33.1 , 32.2, 31.0, 28.7, 27.7, 27.5, 27.3, 26.9, 24.3, 19.3, 13.5 ppm. HRMS calculado para CasHagNeOg [M+1]+: 727.4394, experimental 727.4387.
EJEMPLO PREPARATIVO 81 La N-Boc amina 65n (60 mg) se disolvió en 10 mi de solución de HCI 4M en dioxanos. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se eliminaron todos los volátiles a presión reducida y el residuo se colocó en alto vacío durante 3 h. La sal de amina resultante se disolvió en 5 mi de diclorometano seco y se enfrió a 0°C. Luego, se agregaron 20 gotas de solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio seguido de una solución del isocianato 80a en tolueno (1.2 eq, 0.8 mi de una solución 0.155M en tolueno) y la agitación se continuó durante 10 min. El baño de enfriamiento se removió y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (60 mi) y se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 2:8 a 6:4) para dar el producto 81 (54 mg, 70%) como un sólido blanco. H RMN (CDCI3, 500 Hz) d 8.12 (s amplio, 1 H), 7.39-7.79 (s amplio, 1H), 6.29 (s amplio, 1 H), 5.91 (ddt, 1H, J = 5.9, 10.4, 17.0 Hz), 5.71 (s amplio, H), 5.40 (s amplio, 1H), 5.27 (dd, 1H, J = 1.2, 17.0 Hz), 5.23 (dd, 1H, J = 1.2, 10.4 Hz), 4.67 (dd, 1 H, J = 7.8, 8.1 Hz); 4.50 (s amplio, 1 H), 4.24 (d, 1H, J = 10.7 Hz), 4.07 (dd, 1H, J = 5.3, 10.4 Hz), 4.03 (m, H), 3.97 (ddd, 1H, J = 5.6, 5.9, 15.7 Hz), 3.81 (m, 2H), 3.73 (m, 1H), 3.67 (d, 1 H, J = 12.2 Hz), 3.62 (m, 1 H), 3.20 (s, 2H), 3.07 (s, 1 H), 2.29 (d, 1 H, J = 1 .0 Hz), 2.07 (s amplio, 3H), 1.93 (s amplio, 2H), 1.83 (s amplio, 3H), 1.28-1.68 (m, 10H), 1.17 (d, 3H, J = 5.9 Hz), 1.11 (m, 1H), 1.01 (s, 3H), 0.99 (s, 9H), 0.83 (s, 3H); 3C RMN (CDCI3, 125 MHz) d 198.5, 177.1 , 172.8, 171.5, 159.4, 158.0, 133.4, 1 7.7, 75.5, 68.1, 60.8, 57.4, 55.9, 48.7, 45.4, 42.3, 40.4, 34.8, 32.8, 31.7, 28.6, 27.8, 27.6, 27.4, 26.9, 26.8, 24.7, 24.4, 19.4, 16.2, 13.5 ppm. HRMS calculado para C39H61N608 [M+1]+: 741.4551 , experimental 741.4543.
Paso A La N-Boc amina 75c (60 mg) se disolvió en 10 mi de solución de HCI 4M en dioxanos. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se eliminaron todos los volátiles a presión reducida y el residuo se colocó en alto vacío durante 3 h. La sal de amina resultante se disolvió en 5 mi de diclorometano seco y se enfrió a 0°C. Luego, se agregaron 20 gotas de solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio seguido de una solución del isocianato 80a en tolueno (1.2 eq, 0.8 mi de una solución 0. 55 en tolueno) y la agitación se continuó durante 10 min. El baño de enfriamiento se retiró y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (60 mi) y se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos; 2:8 a 6:4) para dar el producto 82 (50 mg, 65%) como un sólido blanco. 1H RMN (CDCIs, 500 MHz) d 8.12 (s amplio, 1H), 7.38-7.68 (s amplio, 1 H), 6.28 (s amplio, 1 H), 5.68 (s amplio, H), 5.39 (s amplio, H), 4.66 (dd, 1H, J = 7.5, 7.5 Hz), 4.49 (s amplio, 1H), 4.23 (d, H, J = 10.4 Hz), 4.06 (dd, 1 H, J = 5.0, 10.4 Hz); 3.81 (m, 2H), 3.71 (m, 1H), 3.67 (d, 1H, J = 12.2 Hz), 3.61 (m, 1 H), 3.19 (s amplio, 2H), 3.07 (s, H), 2.89 (ddd, 1H, J = 3.7, 7.5, 14.8 Hz), 2.29 (d, 1H, J = 11.0 Hz), 1.98-2.13 (m, 3H), 1.75-1.96 (m, 6H), 1.26-1.67 (m, 9H), 1.17 (d, 3H, J = 5.9 Hz), 1.10 (m, 1H), 1.00 (s, 3H), 0.98 (s, 9H), 0.90 (m, 2H), 0.83 (s, 3H), 0.72 (m, 2H); 13C R N (CDCI3l 125 MHz) d 198.9, 178.8, 172.8, 171.5, 160.9, 158.0, 75.5, 68.1, 60.8, 57.4, 55.9, 48.7, 45.4, 40.2, 34.8, 32.8, 31.7, 28.6, 27.8, 27.7, 27.4, 26.9, 26.8, 24.8, 24.4, 23.1, 19.3, 16.2, 13.5, 6.9, 6.8 ppm.
EJEMPLO PREPARATIVO 83 La N-Boc amina 33 (60 mg) se disolvió en 10 mi de solución de HCI 4M en dioxanos. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se eliminaron todos los volátiles a presión reducida y el residuo se colocó en alto vacío durante 3 h. La sal de amina resultante se disolvió en 5 mi de diclorometano seco y se enfrió a 0°C. Luego, se agregaron 20 gotas de solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio seguido de una solución del isocianato 80a en tolueno (1.2 eq, 0.8 mi de una solución 0.155 en tolueno) y la agitación se continuó durante 0 min. El baño de enfriamiento se retiró y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (60 mi) y se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: acetona/hexanos, 1 :9 a 1 :1) para dar el producto 83 (63 mg, 81%) como un sólido blanco. En las siguientes Tablas 1 y 2 se muestran compuestos que sirven de ejemplo. Los valores de K¡ para los compuestos se clasifican de la siguiente manera: "A" para valores de K¡ menores que 100 n , "B" para valores de Ki mayores o iguales que 100 nM pero menores que 1 ? y "C" para valores de Ki mayores o iguales que 1µ?.
CUADRO 1 Ejemplo Estructura Actividad de unión 1 A 2 A 3 A 4 A 5 A 6 A A continuación se enumeran compuestos representativos adicionales de la invención que muestran excelente actividad inhibidora de la proteasa del VHC en el Cuadro 2.
CUADRO 2 También se muestran compuestos adicionales en el Cuadro 2A: CUADRO 2A Ejemplo Estructura Actividad de unión 78 C 79 0 Y C El Cuadro 3 muestra las actividades (Ki*) de ciertos compuestos representativos de la invención: CUADRO 3 Compuestos Representativos con actividad inhibidora En general, siguiendo los procedimientos descritos anteriormente, también se pueden preparar los siguientes compuestos y usarse como inhibidores de proteasa del VHC: La presente invención se refiere a inhibidores novedosos de proteasas del VHC. Esta utilidad se manifiesta en su capacidad para inhibir la serina proteasa NS2/NS4a del VHC según se demuestra en los siguientes ensayos in vitro.
Ensayo para determinar la Actividad Inhibidora de la proteasa del VHC Ensayo Espectrofotométrico: Se realizaron ensayos epectrofotométricos para la serina proteasa del VHC sobre los compuestos de la invención siguiendo el procedimiento descrito por R. Zhang et al., Analytícal Biochemistry, 270 (1999) 268-275, cuya revelación se incorpora a la presente a modo de referencia. El ensayo basado en la proteólisis de los sustratos con grupos éster cromogénicos es adecuado para el monitoreo continuo de la actividad de proteasa NS3 del VHC. Los sustratos derivaron del lado P de la secuencia de unión NS5A-NS5B (Ac-DTEDWX(Nva), en la cual X = A o P) cuyos grupos carboxilo C-terminales se esterificaron con uno de cuatro alcoholes cromóforos diferentes (3 o 4-nitrofenol, 7-hidroxi-4-metil-cumarina o 4-fenilazofenol). A continuación se presenta la síntesis, caracterización y aplicación de estos ésteres sustratos espectrofotométricos a la exploración de alta definición y la evaluación cinética detallada de los inhibidores de la proteasa NS3 del VHC.
Materiales y Métodos Materiales: Se obtuvieron reactivos químicos para los amortiguadores relacionados con los ensayos de Sigma Chemical Company (St. Louis, Missouri). Los reactivos para la síntesis de péptidos fueron de Aldrich Chemicals, Novabiochem (San Diego, California), Applied Biosystems (Foster City, California) y Perseptive Biosystems (Framingham, Massachusetts). Los péptidos se sintetizaron manualmente o en un sintetizador modelo 431A automatizado ABI (de Applied Biosystems). El espectrómetro UVA/IS Spectrometer modelo LAMBDA 12 fue de Perkin Elmer (Norwalk, Connecticut) y se obtuvieron placas UV de 96 pocilios de Corning (Corning, New York). El bloque de precalentamiento fue de USA Scientific (Ocala, Florida) y el agitador de placas de 96 pocilios fue de Labline Instruments (Melrose Park, Illinois). Se obtuvo un lector de placas de microtitulación Spectramax Plus con monocromador de Molecular Devices (Sunnyvale, California). Preparación de la enzima: la proteasa heterodimérica recombinante NS3/NS4A del VHC (hebra 1a) se preparó utilizando los procedimientos publicados previamente (D. L. Sali et al, Biochemistry, 37 (1998) 3392-3401). Las concentraciones de proteína se determinaron por el método del colorante Biorad empleando patrones de proteasa de VHC recombinante cuantificados previamente por análisis de aminoácidos. Antes de comenzar el ensayo, el amortiguador de conservación de enzima (fosfato de sodio 50 mM, pH 8.0, NaCI 300 mM, 10% de glicerol, 0.05% de maltósido de laurilo y DTT 10 mM) se intercambió por el amortiguador de ensayo (MOPS 25 mM, pH 6.5, NaCI 300 mM, 10% de glicerol, 0.05% de maltósido de laurilo, EDTA 5 µ? y DTT5 µ?), empleando una columna preempacada Biorad Bio-Spin P-6. Síntesis y Purificación del Sustrato: La síntesis de los sustratos se realizó según lo informado por R. Zhang et al., (ibid.) y se inició mediante anclaje de Fmoc-Nva-OH a una resina de cloruro de 2-clorotritilo usando un protocolo estándar (K. Barios et al., Int. J. Pept. Protein Res., 37 (1991), 513-520). Posteriormente los péptidos se ensamblaron, empleando química de Fmoc, ya sea manualmente o en un sintetizador automático de péptidos ABI modelo 431. Los fragmentos de péptido N-acetilados y totalmente protegidos se escindieron de la resina ya sea con ácido acético al 10% (HOAc) y trifluoroetanol al 10% (TFE) en diclorometano (DC ) durante 30 min, o mediante ácido trifluoroacético (TFA) al 2% en DCM durante 10 min. El filtrado combinado y el lavado de DCM se evaporaron azeotrópicamente (o se extrajo repetidamente mediante solución acuosa de a2C03) para eliminar el ácido empleado en la ruptura. La fase de DCM se secó sobre a2S04 y se evaporó. Los sustratos con grupo éster se ensamblaron usando procedimientos de acoplamiento ácido-alcohol estándar (K. Holmber et al., Acta Chem. Scand., B33 (1979) 410-412). Los fragmentos de péptido se disolvieron en piridina anhidra (30-60 mg/ml) a lo cual se agregó 10 equivalentes molares de cromóforo y una cantidad catalítica (0.1 eq.) de ácido para-toluensulfónico (pTSA). Se agregó diciclohexilcarbodiimida (DCC, 3 eq.) para iniciar las reacciones de acoplamiento. La formación de producto se monitoreó mediante HPLC y se descubrió que se completaba después de 12-72 horas de reacción a temperatura ambiente. La piridina usada como solvente se evaporó al vacío y además se eliminó mediante evaporación azeotrópica con tolueno. El péptido éster se desprotegió con TFA 95% en DCM durante dos horas y se extrajo tres veces con etil éter anhidro para eliminar el exceso de cromóforo. El sustrato desprotegido se purificó mediante HPLC de fase reversa sobre una columna C3 o C8 con un gradiente de acetonitrilo de 30% a 60% (usando seis volúmenes de columna). El rendimiento global a continuación de la purificación con HPLC fue de aproximadamente el 20-30%. La masa molecular se confirmó mediante espectroscopia de masa de ionización por electroaspersión. Los sustratos se conservaron en forma de polvo seco bajo desecación. Espectros de Sustratos y Productos: Los espectros de los sustratos y los correspondientes productos cromóforos se obtuvieron en el amortiguador de ensayo de pH 6.5. Los coeficientes de extinción se determinaron a la longitud de onda de los picos óptimos en cubetas de 1 cm (340 nm para 3-Np y HMC, 370 nm para PAP y 400 nm para 4-Np) usando múltiples diluciones. La longitud de onda de pico óptimo se definió como aquella longitud de onda que produce la máxima diferencia de fraccionamiento en absorbancia entre sustrato y producto (DO del producto - DO del sustrato )/DO del sustrato). Ensayo de Proteasa: se realizaron ensayos de proteasa de VHC a 30°C usando 200 µ? de mezcla de reacción en una placa de microtitulación de 96 pocilios. Se optimizaron las condiciones del amortiguador de ensayo (MOPS 25 mM, pH 6.5, NaCI 300 m , glicerol al 10%, maltósido de laurilo 0.05%, EDTA 5 µ? y DTT 5 µ?) para el heterodímero NS3/NS4A (D. L. Sali et al, ibid.)). Típicamente, se colocaron en pocilios 150 µ? de mezclas de amortiguador, sustrato e inhibitor (concentración final de DMSO =4% v/v) y se dejó preincubar a 30°C durante aproximadamente 3 minutos. Luego se usaron cincuenta pls de proteasa precalentada (12 nM, 30°C) en amortiguador de ensayo para iniciar la reacción (200 µ? de volumen final). Se monitorearon las placas durante la extensión del ensayo (60 minutos) para detectar el cambio de absorbancia a la longitud de onda adecuada (340 nm para 3-Np y HMC, 370 nm para PAP y 400 nm para 4-Np) usando un lector de placas de microtitulación Spectromax Plus equipado con un monocromador (se pueden obtener resultados aceptables con lectores que utilizan filtros de corte). La ruptura proteolítica de la unión éster entre el Nva y el cromóforo se monitoreó a la longitud de onda adecuada contra un blanco sin enzima como control de hidrólisis no enzimática. La evaluación de los parámetros cinéticos del sustrato se realizó en un rango de concentración de sustrato de 30 veces (~6-200 pm). Las velocidades iniciales se determinaron usando una regresión lineal y se obtuvieron las constantes cinéticas ajusfando los datos a la ecuación de Michaelis-Menten usando un análisis de regresión no lineal (Mac Curve Fit 1.1, K. Raner). Las cantidades de producción (/ cat) se calcularon suponiendo que le enzima se encontraba totalmente activa.
Evaluación de Inhibidores e Inactivadores: Se determinaron experimentalmente las constantes de inhibición (K¡*) para los inhibidores competitivos Ac-D-(D-Gla)-L-l-(Cha)-C-OH (27), Ac-DTEDWA(Nva)-OH y Ac-DTEDVVP(Nva)-OH a concentraciones fijas de enzima y sustrato graficando v0/v¡ vs. concentración del inhibidor ([l]o) de acuerdo con la ecuación reordenada de Michaelis-Menten para la cinética de inhibición competitiva: o ¡ = 1 + [l]o/(K¡ (1 + [S]o/Km)), donde vo es la velocidad inicial no inhibida, v¡ es la velocidad inicial en presencia de un inhibidor a cualquier concentración dada del inhibidor ([l]o), y [S]o es la concentración del sustrato usada. Los datos resultantes se ajustaron usando regresión lineal y la pendiente resultante, 1/(K¡(1+[S]o/Km), se empleó para calcular el valor de K¡*. Los valores obtenidos de K¡ para los diversos macrociclos de la presente invención se dan en los Cuadros 1, 2 y 2A, en las cuales los compuestos se han organizado en el orden de intervalos de valores de Kj* al igual que en el Cuadro 3. A partir de estos resultados de ensayos, sería evidente para un experto en la técnica que los compuestos de la invención poseen una utilidad excelente como inhibidores de la serina proteasa NS3.

Claims (54)

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES
1.- Un compuesto que posee la estructura general que muestra en la Fórmula 1 : Fórmula 1 o sales, solvatos o ésteres aceptables para uso farmacéutico de dicho compuesto en el cual: (1) R1 es -C(0)R5 o -B(OR)2; (2) R5 es H, -OH, -OR8, -NR9R10, -C(O)OR8, -C(0)NR9R10 , -CF3, -C2F5, -C3F7, -CF2R6, -R6, -C(O)R7 o NR7SO2R8; (3) R7 es H, -OH, -OR8 o -CHR9R10; (4) R6, R8, R9 y R10 pueden ser iguales o diferentes, seleccionándose cada uno independientemente del grupo que consiste en H, alquilo, alquenilo, arilo, heteroalquilo, heteroarilo, cicloalquilo, arilalquilo, heteroarilalquilo, R14, -CH(R )CH(R1')C(O)OR1\ -[CH(R )]pC(O)OR11, -[CH(R1')]pC(O)NR12R13, -[CH(R1')]pS(O2)R11, -[CH(Rr)]pC(0)R11, -[CH(Rr)]pS(O2)NR12R13, -CH(R1')C(O)N(H)CH(R2')(R'), -CH(R1')CH(R1')C(0)NR12R13, -CH(R1')CH(R1')S(02)R11, -CH(R1')CH(Rr)S(02)NR12R 3J -CH(R ')CH(R )C(0)R11 ) -[CH(R1')]pCH(OH)R11, -CH(R ')C(0)N(H)CH(R2' )C(0)OR11, -C(0)N(H)CH(R2')C(0)OR11, -C(0)N(H)CH(R2')C(O) R11, -CH(R1')C(0)N(H)CH(R2')C(0)NR 2R13, -CH(R1')C(0)N(H)CH(R2')R\ -CH(R1')C(0)N(H)CH(R2')C(0)-N(H)CH(R3')C(0)OR11, -CH(R1')C(0)N(H)CH(R ')C(0)CH(R3')NR 2R13) -CHC^^CÍOJNÍH^HtR^JCÍOJ ÍH HÍR^^OJNR^R13, -CH(Rr)C(0)N(H)-CH(R2')C(0)N(H)CH(R3')C(0)N(H)CH(R4')C(0)OR11 ( -CH(R ')C(0)N(H)-CH(R ')C(0)N(H)CH(R3')C(0)N(H)CH(R4')C(0)NR12R13, -CH(R1')C(0)N-(H)CH(R ')C(0)N(H)CH(R3')C(0)N(H)CH(R4')C(0)N(H)-CH(R5')-C(0)OR11 y -CH(R )C(0)N(H)CH(R2')C(0)N(H)CH(R3')C(0)N(H)CH(R ')C(0)N(H)CH(R5')-C(0)NR 2R13; en los cuales R1', R2', R3 , R4, R5, R11, R12 y R13 pueden ser iguales o diferentes, seleccionándose cada uno independientemente del grupo conformado por: H, halógeno, alquilo, arilo, heteroalquilo, heteroarilo, cicloalquilo, alcoxi, ariloxi, alquenilo, aiquinilo, alquil-arilo, alquil-heteroarilo, heterocicloalquilo, aril-alquilo y heteroaralquilo; O R12 y R 3 se juntan de forma tal que la combinación es cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo o heteroarilo; R14 se encuentra presente o no y si se encuentra presente se selecciona del grupo conformado por: H, alquilo, arilo, heteroalquilo, heteroarilo, cicloalquilo, alquil-arilo, alilo, alquil-heteroarilo, alcoxi, aril-alquilo, alquenilo, aiquinilo y heteroaralquilo; (5) R y R' se encuentran presentes o no y si se encuentran presentes pueden ser iguales o diferentes, seleccionándose cada uno independientemente del grupo conformado por: H, OH, alquilo de C Ci0, alquenilo de C2-C10, cicloalquilo de C3-C8, heterocicloalquilo de C3-C8, alcoxi, ariloxi, alquiltio, ariltio, alquilamino, arilamino, amino, amido, ariltioamino, arilcarbonilamino, arilaminocarboxi, alquilaminocarboxi, heteroalquilo, alquenilo, alquinilo, (aril)alquilo, heteroarilalquilo, éster, ácido carboxílico, carbamato, urea, cetona, aldehido, ciano, nitro, halógeno, (cicloalquil)alquilo, arilo, heteroarilo, (alquil)arilo, alquilheteroarilo, alquil-heterociclilo y (heterocicloalquil)alquilo, donde dicho cicloalquilo está compuesto por tres a ocho átomos de carbono, y cero a seis átomos de oxígeno, nitrógeno, azufre o fósforo y dicho alquilo es dé uno a seis átomos de carbono; (6) L' es H, OH, alquilo, heteroalquilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilo o heterociclilo; (7) M' es H, alquilo, heteroalquilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, arilalquilo, heterociclilo o una cadena lateral de aminoácido; o L' y ' se unen para formar una estructura anular tal que la porción de la Fórmula estructural 1 representada por (habiéndose agregado los números 1 y 2 para mostrar la ubicación de cierto átomo de carbono y de cierto átomo de nitrógeno, respectivamente) representa mediante la Fórmula estructural 2: Fórmula 2 donde en la Fórmula 2: E está presente o ausente y si se encuentra presente es C, CH, N o C(R); J está presente o ausente, y cuando J se encuentra presente, J es (CH2)P, (CHR-CHR')P, (CHR)P, (CRR')P, S(02), N(H), N(R) u O; cuando J está ausente y G se encuentra presente, L está unido directamente al átomo de nitrógeno marcado como posición 2; p es un número de 0 a 6; L está presente o ausente, y cuando L se encuentra presente, L es C(H) o C(R); cuando L está ausente, M está presente o ausente; si M se encuentra presente estando L ausente, entonces M está directa e independientemente unido a E, y J está directa e independientemente unido a E; G está presente o ausente, y cuando G se encuentra presente, G es (CH2)P, (CHR)P, (CHR-CHR')P o (CRR')P; cuando G está ausente, J se encuentra presente y E está conectado directamente al átomo de carbono marcado como posición 1 ; Q está presente o ausente, y cuando Q se encuentra presente, Q es NR, PR, (CR=CR), (CH2)P, (CHR)p , (CRR')P , (CHR-CHR')p, O, NR, S, SO, o SO2; cuando Q se encuentra ausente, M está (i) ya sea directamente unido a A o (i¡) a un sustituyente independiente sobre L, seleccionándose dicho sustituyente independiente de -OR, -CH(R)(R'), S(O)0-2R o -NRR' o (iii) ausente; cuando ambos Q y M están ausentes, A está ya sea unido directamente a L, o A es un sustituyente independiente sobre E, seleccionándose dicho sustituyente independiente de -OR, -CH(R)(R'), S(0)o-2R o -NRR' o A se encuentra ausente; A está presente o ausente y si se encuentra presente A es O, O(R), (CH2)P, (CHR)P , (CHR-CHR')P , (CRR')P, N(R), NRR', S, S(02), -OR, CH(R)(R') o NRR'; o A está unido a M para formar un puente cicloalquilo, alifático o heterocíclico; está presente o ausente, y cuando M se encuentra presente, M es halógeno, O, OR, N(R), S, S(O2), (CH2)P, (CHR)p (CHR-CHR')p o (CRR')P; o M está unido a A para formar un puente cicloalquilo, alifático o heterocicloalquilo; (8) Z está representado por cualquiera de (i), (ii), (iii), (iv) o (v) que se muestran a continuación: (¡) Fórmula A en la cual: R se selecciona del grupo que consiste en: y R se selecciona del grupo que consiste en: ?75 ?76 en los cuales R78 se selecciona de metilo, etilo, isopropilo, ter-butilo y fenilo; C'¡) Fórmula B donde R79 se selecciona del grupo que consiste en: Fórmula C en la cual el anillo de sulfona está sustituido opcionalmente con alquilo y cicloalquilo; (iv) el resto: ??? (v) el resto: ? w, 7 <~ en el cual W es -C(=0)- o -S(02)- ; es O o N; e Y se selecciona del grupo que consiste en: 382 383 donde: Y11 se selecciona del grupo que consiste en: H, -C(0)OH, -C(0)OEt, -O e, -Ph, -OPh, -NHMe, -NHAc, -NHPh, -CH(Me)2, 1-triazolilo, 1-imidazolilo y -NHCH2COOH; Y12 se selecciona del grupo que consiste en: H, -C(0)OH, -C(0)OMe, -OMe, F, Cl y Br; Y13 se selecciona del grupo que consiste en los siguientes restos: Y14 es MeS(02)-, -Ac, -Boc, -iBoc, -Cbz o -Alloc; Y15 e Y16 pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan independientemente del grupo que consiste en: alquilo, arilo, heteroalquilo y heteroarilo; Y17 es -CF3, -N02, -C(0)NH2, -OH, -C(0)OCH3, -OCH3l -OC6H5, -C6H5, -C(0)C6H5, -NH2 o -C(O)OH; y Y18 es -C(0)OCH3, -NO2, -N(CH3)2, F, -OCH3, -C(H2)C(O)OH, -C(O)OH, -S(O2)NH2) o -N(H)C(O)CH3; (9) X se representa por la Fórmula estructural 4: Fórmula 4 donde en la Fórmula 4, a es 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ó 9; b, c, d, e y f pueden ser ¡guales o diferentes, siendo cada uno independientemente 0, 1 , 2, 3, 4 ó 5; A es C, N, S u O; R29 y R29' se encuentran independientemente presentes o ausentes y si se encuentran presentes pueden ser ¡guales o diferentes, siendo cada uno independientemente uno o dos sustituyentes seleccionados del grupo conformado por: H, halo, alquilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilamino, cicloalquilaminocarbonilo, ciano, hidroxi, alcoxi, alquiltio, amino, -NH(alquilo), -NH(cicloalquilo), -N(alqu¡lo)2, carboxilo, -C(0)0-alquilo, heteroarilo, aralquilo, alquiladlo, aralquenilo, heteroaralquilo, alquilheteroarilo, heteroaralquenilo, hidroxialquilo, ariloxi, aralcoxi, acilo, aroilo, nitro, ariloxicarbonilo, aralcoxicarbonilo, alquilsulfonllo, arilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, alquilsulfinilo, arilsuifinilo, heteroarilsulfinilo, ariltio, heteroariltio, aralquiltio, heteroaralquiltio, cicloalquenilo, heterociclilo, heterociclenilo, YiY2N-alquil-, Y Y2NC(0)- e YiY2NS02-, en los cuales Yi e Y2 pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, arilo, y aralquilo; o R29 y R29' están unidos de manera que la combinación es una cadena alifática o heteroalifática de 0 a 6 carbonos; R30 está presente o ausente y si se encuentra presente es uno o dos sustituyentes seleccionados independientemente del grupo conformado por: H, alquilo, arilo, heteroarilo y cicloalquilo; (10) D en la Fórmula 1 se representa por la Fórmula estructural 5: (0)í Fórmula 5 donde en la Fórmula 5, R32, R33 y R34 Se encuentran presentes o ausentes y si se encuentran presentes son independientemente uno o dos sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste en: H, halo, alquilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilamino, espiroalquilo, cicloalquilaminocarbonilo, ciano, hidroxi, alcoxi, alquiltio, amino, -NH(alquilo), -NH(cicloalquilo), -N(alquilo)2, carboxilo, -C(0)0-alquilo, heteroarilo, aralquilo, alquilarilo, aralquenilo, heteroaralquilo, alquilheteroarilo, heteroaralquenilo, hidroxialquilo, ariloxi, aralcoxi, acilo, aroilo, nitro, ariloxicarbonilo, aralcoxicarbonilo, alquilsulfonilo; arilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, alquilsulfinilo, arilsulfinilo, heteroarilsulfinilo, ariltio, heteroariltio, aralquiltio, heteroaralquiltio, cicloalquenilo, heterociclilo, heterociclenilo, Y-|Y2N-alquil-, Y-iY2NC(0)- e YiY2NS02-, en los cuales Y-i e Y2 pueden ser ¡guales o diferentes y se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, arilo y aralquilo; o R32 y R34 están unidos de manera que la combinación forma una porción de un grupo cicloalquilo; g es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ó 9; h, i, j, k, I y m pueden ser iguales o diferentes, siendo cada uno independientemente 0, 1 , 2, 3, 4 ó 5; y A es C, , S u O, (11) siempre que en la Fórmula 1 cuando la Fórmula estructural 2: Fórmula 2 es Y W es CH o N, se aplican ambas exclusiones condicionales (i) y (ii) siguientes: exclusión condicional (i): Z' no es -NH-R36, en el cual R36 es H, arilo de C6, arilo de Cío, heteroarilo, -C(0)-R37, -C(0)-OR37 o -C(0)-NHR37, donde R37 es alquilo de o cicloalquilo de C3_6; y exclusión condicional (ii): R1 no es-C(0)OH, una sal aceptable para uso farmacéutico de -C(0)OH, un éster de -C(0)OH o -C(0)NHR38, donde R38 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de Ci_8, cicloalquilo de C3_6, arilo de C6, arilo de C10 ó aralquilo de C7_16.
2.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque la porción de la Fórmula estructural 1 representada por la Fórmula estructural 2: Fórmula 2 G y J pueden o no encontrarse presentes independientemente y si se encuentran presentes pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan independientemente del grupo que consiste en (CH2)P, (CHR)P, (CHR-CHR')P y (CRR')P; A y M independientemente pueden o no encontrarse presentes y si se encuentran presentes pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan independientemente del grupo que consiste en O, S, S(02), N(R), (CH2)P, (CHR)P, (CHR-CHR')p y (CRR')P ; o A y M están unidos para formar un puente cicloalquilo o heterocíclico; y Q puede o no encontrarse presente y si se encuentra presente es (CH2)P, N(R), O, S, S(02), (CHR)P o (CRR')P.
3.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque la porción representada por la Fórmula estructural 2 se selecciona de las siguientes estructuras: en las cuales n= 0-4.
4.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado además porque la porción de la Fórmula estructural 1 representada por la Fórmula estructural 2 se selecciona de las siguientes estructuras:
5.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado además porque la porción de la Fórmula estructural 1 representada por la Fórmula estructural 2 se selecciona de las siguientes estructuras: en las cuales X' es H, F, Cl o Br. 6.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque la porción de la Fórmula estructural 1 representada por la Fórmula estructural 2:
Fórmula 2 ; y Q puede encontrarse presente o ausente, y sí Q se encuentra ausente, M está unido directamente a A.
7.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado además porque la porción de la Fórmula estructural 1 representada por la Fórmula estructural 2 se selecciona de las siguientes estructuras:
8.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque la porción de la Fórmula estructural 1 representada por la Fórmula estructural 2:
9.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado además porque la porción de la Fórmula estructural 1 representada por la Fórmula estructural 2 se selecciona de las siguientes estructuras:
10.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado además porque la porción de la Fórmula estructural 1 representada por la Fórmula estructural 2 se selecciona de las siguientes estructuras:
11.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque la porción de la Fórmula estructural 1 representada por la Fórmula estructural 2: Fórmula 2 ; y R se selecciona de las siguientes estructuras:
12.- ?? compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque la porción de la Fórmula estructural 1 representada por la Fórmula estructural 2: Fórmula 2 ; y R y R pueden ser ¡guales o diferentes y se seleccionan independientemente del grupo que consiste en las siguientes estructuras:
13.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque L y M se encuentran ausentes y J está unido directamente a E.
14. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque L, J y M se encuentran ausentes y E está unido directamente a N.
15. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque G y M se encuentran ausentes.
16. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque en el cual I es
17.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque X se selecciona del grupo que consiste en las siguientes estructuras: cicloalquilo, carbamato o urea; y n= 0-5.
18.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado además porque X se selecciona del grupo que consiste en las siguientes estructuras:
19. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R1 es una cetoamida, cetoaldehído, dicetona, cetoácido o cetoéster. 20. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado además porque R1 es -C(0)C(0)NR9R10; R9 es H; y R 0 es H,
-R14, -[CH(R )3PC(0)OR11, -[CH(R1')] pC(0)NR12R13, -[CH(R1')]pS(02)R11, -[CH(R )]pS(02)NR12R13, -[CH(R ')]pC(0)R11, -CH(R1')C(0)N(H)C(H)-(R2')C(0)OR11, -CH(R )C(0)N(H)CH(R2')C(0)NR 2R13l o -CH(Rr)C(0)-N(H)CH(R2')(R).
21.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado además porque: R 0 es H, -R 4, -CH(R1')C(0)OR1\ -CH(R1')CH(R1')C(0)OR11, -CH(R1')C(0)NR12R13, -CH(R )CH(R ')C(0)-NR12R13, -CH(Rr)CH(Rr)S(02)R11, -CH(R1')CH(R1')S(02)NR12R13, -CH(R1')CH(R1')C(0)R11, -CH(Rr)C(0)N(H)CH(R2')C(0)OR11, -CH(R1')C(0)N(H)CH(R2')C(0)NR12R13, o -CH(R1')C(0)N(H)CH(R2')(R'); R1' es H o alquilo; y R2' es fenilo, fenilo sustituido, fenilo sustituido con heteroátomo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, piperidilo o piridilo.
22.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 21 , caracterizado además porque R1 es H.
23.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado además porque R 1 es H, metilo, etilo, alilo, fer-butilo, bencilo, a-metilbencilo, a,a-dimetilbencilo, 1-metilciclopropilo o 1-metilciclopentílo; R I es hidroximetilo o -CH2C(0)NR12R13; R2' se selecciona independientemente del grupo que consiste en las siguientes estructuras: en las cuales U1 y U2 pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan independientemente del grupo que consiste en: H, F, -CH2C(0)OH, -CH2C(0)OMe, -CH2C(0)NH2, -CH2C(0)NHMe, -CH2C(0)NMe2, azido, amino, hidroxilo, amino sustituido e hidroxilo sustituido; U3 y U4 son iguales o diferentes y son independientemente O o S; U5 es alquilsulfonilo, ariisulfonilo, heteroalquilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, heteroalquilcarbonilo, heteroarilcarboniló, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, heteroariloxicarbonilo, alquilaminocarbonilo, arilaminocarbonilo, o heteroarilaminocarbonilo o una combinación de los mismos; NR 2R13 se selecciona del grupo que consiste en: U0 es ?, OH, o CH2OH, y R se selecciona del grupo que consiste en: H -CH3, Et, n-propilo, metoxi, ciclopropilo, n-butilo, 1-but-3-inilo, bencilo, a metilbencilo, fenetilo, allilo, 1-but-3-enilo, -OCH3 y ciclopropilmetilo.
24.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 caracterizado además porque R1 se selecciona de las siguientes estructuras:
25. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque D y X tomados juntos forman una cadena conectora no ramificada parafínica divalente de C7-C12 que forma una porción de un macrociclo de 14-19 miembros.
26. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado además porque D y X tomados juntos forman una una cadena conectora no ramificada parafínica de C8 o C9 que forma una porción de un heterociclo de 5 o 16 miembros.
27. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque D y X tomados juntos forman una cadena conectora no ramificada olefínica divalente de C7-C12 que forma una porción de un macrociclo de 14-19 miembros que posee un grado simple de insaturación.
28. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 27, caracterizada además porque D y X tomados juntos forman una cadena conectora no ramificada olefínica de C8 o C9 que forma una poción de un heterociclo de 15 o 16 miembros que posee un grado simple de insaturación.
29.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque D y X tomados juntos forman una cadena aiifática no ramificada divalente de C2-C12 que forma una porción de un heterociclo de 9-19 miembros.
30.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque D se selecciona de las siguientes estructuras:
31.- El compuesto de conformidad con la reivindicación caracterizado además porque la porción representada por la parte
32.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque Z' se selecciona del grupo que consiste en: 409
33. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque W es C=0.
34. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque Z es N.
35.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque Y se selecciona del grupo que consiste en las siguientes estructuras: 411 en las cuales Y es CF3l N02, C(0)NH2> OH, NH2 o C(O)OH; e Ylü es F o C(0)OH.
36.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 37, caracterizado además porque Y se selecciona del grupo que consiste en las siguientes estructuras:
37.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque Y se selecciona del grupo que consiste en las siguientes estructuras: W es N o O; R23 es H, alquilo, arilo, heteroariio, cicloalquilo o heterocicloalquilo, donde cada uno de dichos arilo, heteroariio, cicloalquilo, heterocicloalquilo puede estar sustituido con un resto alquilo; R24 es H, alquilo, arilo, heteroariio, cicloalquilo o heterocicloalquilo, donde cada uno de dichos arilo, heteroariio, cicloalquilo, heterocicloalquilo puede estar sustituido con un resto alquilo; o R23 y R24 tomados juntos forman un anillo cíclico que contiene un carbociclo o heterociclo; R25 es H, alquilo, heteroalquilo, arilo, heteroariio, alquilamino, arilamino, heteroalquilamino o cicloalquilo, R26 se selecciona del grupo que consiste en: H, carbamato, sulfonamidas, alquilcarbonilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, heteroariio, sulfonilo, heteroalquilsulfonilo, ariloxicarbonilo, heteroalcoxicarbonilo, heteroariloxicarbonilo, alquilaminoarbonilo, arilaminocarbonilo y urea; R27 es H, alquilo, cicloalquilo, arilo o heteroarilo;R 8 es H, alquilo, heteroalquilo, arilo o heteroarilo; y X'-O- es un éter, éster o carbamato.
38.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque: (a) el resto: Fórmula 2 es 415 (c) Z' se representa por cualquiera de (i), (ii) o (¡ii) que se muestran a continuación: (i) Fórmula A en la cual: R44 se selecciona del grupo que consiste en: 417 418 donde R78 se selecciona de metilo, etilo, isopropilo, ter-butilo y fenilo; (¡i) Fórmula B donde R79 se selecciona del grupo que consiste en: (iii) Fórmula C en la cual el anillo sulfona está sustituido opcionalmente con alquilo y cicloalquilo; y (d) la porción de la Fórmula 1 representada por se selecciona de las siguientes estructuras:
39. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque es seleccionado del grupo que consiste en: 422 424 425 ? 427 428 o sales, solvatos o ésteres aceptables para uso farmacéutico de dicho compuesto
40.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado además porque es seleccionado del grupo conformado por: o sales, solvatos o ésteres aceptables para uso farmacéutico de dicho compuesto.
41. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R1 es cetoamida, ácido, cetoácido, cetoéster, cetoaldehído, dicetona, ácido bórico o trifluorocetona.
42. - Una composición farmacéutica que comprende como ingrediente activo un compuesto de conformidad con la reivindicación 1.
43. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 42, caracterizada además porque es adecuada para el uso en el tratamiento de trastornos relacionados con el VHC.
44. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 42, caracterizada además porque comprende un vehículo aceptable para uso farmacéutico.
45. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 46, caracterizada además porque contiene un agente antiviral.
46. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 45, caracterizada además porque contiene un interferón o un interferón pegilado.
47. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 46, caracterizada además porque dicho egente antiviral es ribavirin y dicho interferón es oo-interferón.
48.- El uso de una composición farmacéutica que comprende cantidades terapéuticamente efectivas de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , para preparar un medicamento para el tratamiento de trastornos relacionados con la proteasa del VHC en un paciente.
49. - El uso que se reclama en la reivindicación 48, en donde dicho medicamento se formula para administración subcutánea.
50. - El uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , para la fabricación de un medicamento para tratar trastornos asociados con la proteasa del VHC.
51. - Una composición farmacéutica para tratar trastornos asociados con la proteasa del VHC, dicha composición comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más compuestos de conformidad con la reivindicación 40 y un vehículo aceptable para uso farmacéutico.
52. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 51 , caracterizada además porque contiene un agente antiviral.
53. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 52, caracterizada además porque contiene incluso un interferón o un interferón pegilado.
54. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 53, caracterizada además porque dicho agente antiviral es ribavirin y dicho interferón es a-interferón.
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