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MXPA05008335A - Compuestos de isoxazol como inhibidores de las proteinas de choque por calor. - Google Patents

Compuestos de isoxazol como inhibidores de las proteinas de choque por calor.

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MXPA05008335A
MXPA05008335A MXPA05008335A MXPA05008335A MXPA05008335A MX PA05008335 A MXPA05008335 A MX PA05008335A MX PA05008335 A MXPA05008335 A MX PA05008335A MX PA05008335 A MXPA05008335 A MX PA05008335A MX PA05008335 A MXPA05008335 A MX PA05008335A
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MX
Mexico
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phenyl
isoxazole
carboxylic acid
dihydroxy
ethylamide
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Application number
MXPA05008335A
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Inventor
Thomas Peter Mathews
Original Assignee
Vernalis Cambridge Ltd
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Abstract

Se describen los isoxazoles de las formulas (A) o (B) como inhibidores de la actividad HSP90, y que son utiles para el tratamiento de, por ejemplo, canceres: (A) o (B) en donde R1 es un grupo de la formula (IA): -Ar1-(Alk1)p-(Z)r-(Alk2)s-Q en donde en cualquier combinacion compatible Ar1 es un radical arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido, Alk1 y Alk2 son radicales alquileno de 1 a 6 atomos de carbono o alquenileno de 2 a 6 atomos de carbono, divalentes, opcionalmente sustituidos, p, r y s son independientemente 0 o 1, Z es -O-, -S-, -(C=O)-, -(C=S)-, -SO2-, -C(=O)O-, -C(=O)NRA-, -C(=S)NRA-, -SO2NRA-, -NRAC(=O)-, -NRASO2- o -NRA- en donde RA es hidrogeno o alquilo de 1 a 6 atomos de carbono y Q es hidrogeno o un radical carbociclico o heterociclico opcionalmente sustituido; R2 es (i) un grupo de la formula (IA) como se define anteriormente o (ii) un radical carboxamida; o (iii) un anillo carbociclico o heterociclico no aromatico en donde un carbono del anillo esta opcionalmente sustituido, y/o un nitrogeno del anillo esta opcionalmente sustituido con un grupo de la formula -(Alk1)p-(Z)r-(Alk2)s-Q en donde Q, Alk1, Alk2, Z, p, r y s son como se definieron anteriormente en relacion al grupo (IA); y R3 es hidrogeno, cicloalquilo opcionalmente sustituido, cicloalquenilo, alquilo de 1 a 6 atomos de carbono, alquenilo de 1 a 6 atomos de carbono o alquinilo de 1 a 6 atomos de carbono; o un grupo carboxilo, carboxamida, o ester de carboxilo.

Description

COMPUESTOS DE ISOXAZOL COMO INHIBIDORES DE LAS PROTEINAS DE CHOQUE POR CALOR CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere a los isoxazoles sustituidos que tienen actividad inhibitoria de HSP90, al uso de tales compuestos en medicina, con relación a enfermedades que son responsables de la inhibición de la actividad de HSP90 tales como cánceres, y a las composiciones farmacéuticas que contienen tales compuestos. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Los chaperones moleculares mantienen el plegamiento y la conformación apropiados de las proteínas y son cruciales en la regulación del balance entre la síntesis y la degradación de las proteínas. Éstos han mostrado que son importantes en la regulación de muchas funciones celulares importantes, tales como la proliferación celular y la apoptósis (Jolly y Morimoto, 2000; Smith et al., 1998; Smith, 2001) . Proteínas de Choque Térmico (HSP) La exposición de las células a un número de tensiones ambientales, incluyendo el choque por calor, alcoholes, metales pesados y tensión oxidativa, da como resultado la acumulación celular de un número de chaperones (as) , comúnmente conocidos como proteínas de choque REF: 165448 térmico o de calor (HSP) . La inducción de las HSPs protege a la. célula contra el daño por tensión o estrés inicial, aumenta la recuperación y conduce al mantenimiento de un estado tolerante a la tensión o estrés. Se ha vuelto también claro, no obstante, que ciertas HSPs pueden también jugar un papel mayor de chaperón molecular bajo condiciones normales libres de estrés mediante la regulación del plegamiento correcto, la degradación, localización y función de una lista creciente de proteínas celulares importantes . Existen un número de familias multigénicas de HSPs , con productos de genes individuales que varían en expresión, función y localización celular. Éstas son clasificadas de acuerdo al peso molecular, por ejemplo, HSP70, HSP90 y HSP27. Diversas enfermedades en humanos pueden ser adquiridas como resultado del mal plegamiento de las proteínas (revisado en Tytell et al., 2001; Smith et al., 1998). Por lo tanto, el desarrollo de terapias que perturban la maquinaria de los chaperones moleculares puede probar ser benéfico . En algunas condiciones (por ejemplo, la enfermedad de Alzheimer, enfermedades por priones y enfermedad de Huntington) , las proteínas mal plegadas pueden provocar agregación de proteínas dando como resultado trastornos neurodegenerativos. También, las proteínas mal plegadas pueden dar como resultado pérdida de la función de la proteína de tipo silvestre, conduciendo a funciones moleculares y fisiológicas desreguladas en la célula . Las HSPs han estado también implicadas en el cáncer. Por ejemplo, existe evidencia de expresión diferencial de las HSPs que puede relacionarse a la etapa de la progresión tumoral (Martin et al., 2000; Conroy et al., 1996; a anishi et al., 1999; Jameel et al., 1992; Hoang et al., 2000; Lebeau et al., 1991). Como resultado del involucramiento de HSP90 en diversas vías oncogénicas clínicas y el descubrimiento de que ciertos productos naturales con actividad anticancerosa se están dirigiendo a este chaperón molecular, ha sido desarrollado el nuevo concepto fascinante de que la inhibición de la función de HSP puede ser útil en el tratamiento del cáncer. El primer inhibidor del chaperón molecular está actualmente sufriendo pruebas clínicas . HSP90 La HSP90 constituye aproximadamente 1 a 2% de la proteína celular total, y está usualmente presente en la célula como un dímero en asociación con un gran número de otras proteínas (ver, por ejemplo, Pratt, 1997). Ésta es esencial para la viabilidad celular y muestra funciones dobles de chaperón (Young et al., 2001). Esta juega un papel clave en la respuesta del estrés o tensión celular al interactuar con muchas proteínas después de que su conformación nativa ha sido alterada por diversos estreses ambientales, tales como choque por calor, asegurando el plegamiento adecuado de la proteína y previniendo la agregación no específica (Smith et al., 1998) . Además, resultados recientes sugieren que HSP90 puede también jugar un papel en el amortiguamiento contra los efectos de la mutación, presumiblemente al corregir el plegamiento inapropiado de las proteínas imitantes (Rutherford y Lindquist, 1998) . No obstante, la HSP90 también tiene un papel regulador importante. Bajo condiciones fisiológicas normales, junto con su homólogo del retículo endoplásmico GRP94, HSP90 juega un papel de mantenimiento doméstico en la célula, manteniendo la estabilidad y maduración conformacional de varias proteínas claves del hospedero. Éstas pueden ser divididas en tres grupos: (a) receptores de hormona esteroide, (b) Ser/Thr o tirosina-cinasas (por ejemplo, ERBB2, RAF-1, CDK4 y LC ) y (c) una colección de proteínas aparentemente no relacionadas, por ejemplo, p53 mutante y la subunidad catalítica de la telomerasa hTERT. Todas estas proteínas juegan papeles reguladores clave en muchos procesos fisiológicos y bioquímicos en la célula. Nuevas proteínas HSP90 del hospedero están siendo continuamente identificadas. La familia HSP90 altamente conservada en humanos consiste de cuatro genes, a saber las isoformas citosólicas HSP90OC y HSP90 (Hickey et al., 1989), GRP94 en el retículo endoplásmico (Argón et al., 1999) y HSP75/TRAP1 en la matriz mitocondrial (Felts et al., 2000). Se piensa que todos los miembros de la familia tienen un modo similar de acción, pero se enlazan a diferentes proteínas clientes dependiendo de su localización dentro de la célula. Por ejemplo, ERBB2 se sabe que es una proteína específica del hospedero de GRP9 (Argón et al., 1999) y el receptor del factor de necrosis tumoral tipo 1 (TNFRl) y RB han mostrado ambos que son clientes de TRAP1 (Song et al., 1995; Chen et al., 1996). HSP90 participa en una serie de interacciones complejas con una gama de proteínas clientes y reguladoras (Smith, 2001) . Aunque los detalles moleculares precisos quedan por ser elucidados, los estudios cristalográficos de rayos X y bioquímicos (Prodromou et al., 1997; Stebbins et al., 1997) llevados a cabo en los últimos años han proporcionado introspectivas cada vez más detalladas hacia la función de chaperón de HSP90. Después de la primera controversia sobre este asunto, es claro ahora que HSP90 es un chaperón molecular dependiente de ATP (Prodromou et al., 1997), con dimerización de los dominios de enlace a los nucleótidos que son esenciales para la hidrólisis de ATP, ue es a su vez esencial para la función de chaperón (Prodromou et al., 2000a). El enlace del ATP da como resultado la formación de una estructura dimérica toroidal en la cual los dominios N-terminales son puestos en estrecho contacto uno con el otro, dando como resultado un cambio conformacional conocido como el "mecanismo de abrazadera" (Prodromou y Pearl, 2000b) . Inhibidores de HSP90 Conocidos La primera clase de inhibidores de HSP90 en ser descubierta fue la clase de la benzoguinona ansamicina, la cual incluye los compuestos herbimicina A y geldanamicina. Éstos mostraron que revierten el fenotipo maligno de los fibroblastos transformados por el oncogen v-Src (Uehara et al., 1985), y subsecuentemente muestran actividad antitumoral potente in vitro (Schulte et al., 1998) y en modelos animales in vivo (Supko et al., 1995). La inmunoprecipitación y los estudios de matriz de afinidad han mostrado qüe el mecanismo mayor de acción de la geldanamicina involucra el enlace a HSP90 (Whitesell et al., 1994; Schulte y Neckers, 1998) . Además, los estudios cristalográficos de rayos X han mostrado que la geldanamicina compite en el sitio de enlace al ATP e inhibe la actividad intrínseca de ATPasa de HSP90 (Prodromou et al., 1997; Panaretou et al., 1998). Esto a su vez previene la formación de complejos multiméricos maduros de HSP90 capaces de hacer chaperonas a las proteínas clientes. Como resultado, las proteínas clientes están dirigidas para la degradación por medio de la vía de la ubiquitina proteasoma. La 17-alilamino, 17-desmetoxigeldanamicina (17AAG) conserva la propiedad de inhibición de HSP90, dando como resultado agotamiento de la proteína cliente y actividad antitumoral en el cultivo celular y modelos de xenoinjerto (Schulte et al., 1998; elland et al., 1999), pero tiene significativamente menos hepatotoxicidad que la geldanamicina (Page et al., 1997). 17AAG está siendo actualmente evaluada en pruebas clínicas de Fase I. El radicicol es un antibiótico macrocíclico que revierte el fenotipo maligno de los fibroblastos transformados con v-Src y v-Ha-Ras ( won et al., 1992; Zhao et al., 1995). Éste ha mostrado que degrada un número de proteínas de señalización como una consecuencia de la inhibición de HSP90 (Schulte et al., 1998). Los datos cristalográficos de rayos X confirmaron que el radicicol también se enlaza al dominio N-terminal de HSP90 e inhibe la actividad de ATPasa intrínseca (Roe et al., 1998). El radicicol carece de actividad antitumoral in vivo debido a la naturaleza química inestable del compuesto. Se sabe que los antibióticos de cumarina se enlazan a la ADN-girasa bacteriana en un sitio de enlace al ATP homólogo a aquel de la HSP90. La cumarina, novobiocina, mostró que se enlaza al extremo carboxilo de HSP90, por ejemplo, a un sitio diferente a aquel ocupado por las ansamicinas de benzoquinona y el radicicol, que se enlazan al extremo N (Marcu et al., 2000b) . No obstante, esto dio todavía como resultado la inhibición de la función de HSP90 y la degradación de un número de proteínas de señalización acompañadas por HSP90 como chaperona (Marcu et al., 2000a) . La geldanamicina no puede enlazarse a HSP90 subsecuente a la novobiocina; esto sugiere que debe existir alguna interacción entre los dominios N y C-terminales, y es consistente con el punto de vista de que ambos sitios son importantes para las propiedades de chaperona de HSP90. Un inhibidor de HSP90 basado en purina, PU3 , ha mostrado que da como resultado la degradación de las moléculas de señalización, incluyendo ERBB2, y que provoca la detención del ciclo celular y diferenciación en las células de cáncer de mama (Chiosis et al., 2001). H5P90 como un Objetivo Terapéutico Debido a su involucramiento en la regulación de un número de vías de señalización que son crucialmente importantes en dirigir el fenotipo de un tumor, y el descubrimiento de que ciertos productos naturales bioactivos ejercen sus efectos vía la actividad de HSP90, la chaperona molecular. HSP90 está siendo actualmente evaluada como un nuevo objetivo para el desarrollo de fármacos anticancerosos (Neckers et al., 1999). El mecanismo de acción predominante de la geldanamicina, 17AAG, y del radicicol, involucra el enlace a HSP90 en el sitio de enlace al ATP localizado en el dominio N-terminal de la proteína, conduciendo a la inhibición de la actividad intrínseca de ATPasa de HSP90 (ver, por ejemplo, Prodromou et al., 1997; Stebbins et al . , 1997; Panaretou et al. , 1998) . La inhibición de la actividad de ATPasa de HSP90 previene el reclutamiento de co-chaperonas y promueve la formación de un tipo de heterocomplejo de HSP90 a partir del cual son dirigidas estas proteínas clientes para la degradación por medio de la vía de proteasoma ubiquitina (ver, por ejemplo, Neckers et al., 1999; Kelland et al., 1999). El tratamiento con inhibidores de HSP90 conduce a la degradación selectiva de importantes proteínas involucradas en la proliferación celular, regulación del ciclo celular y apoptosis, procesos que son fundamentalmente importantes en el cáncer . La inhibición de la función de HSP90 ha mostrado que provoca degradación selectiva de importantes proteínas de señalización involucradas en la proliferación celular, la regulación del ciclo celular y la apoptosis, procesos que son fundamentalmente importantes y que están comúnmente desregulados en el cáncer (ver, por ejemplo, Hostein et al., 2001) . Una razón atractiva para desarrollar fármacos contra este objetivo para el uso en la clínica es que al agotar simultáneamente las proteínas asociadas con el fenotipo transformado, se puede obtener un efecto antitumoral fuerte y lograr una ventaja terapéutica contra las células cancerosas versus las normales. Se cree que estos eventos corriente abajo de la inhibición de HSP90, son responsables de la actividad antitumoral de los inhibidores de HSP90 en cultivo celular y en modelos animales (ver, p. e , Schulte et al., 1998; Kelland et al. , 1999) . BREATE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere al uso de una clase de compuestos de isoxazol sustituidos como inhibidores de HSP90, por ejemplo para la inhibición de la proliferación de células cancerosas . La invención también incluye los nuevos compuestos de isoxazol per se, y las composiciones farmacéuticas que los contienen. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN acuerdo a la presente invención, se proporciona el uso de un compuesto de la fórmula (A) o (B) o una sal, N óxido, hidrato o solvato del mismo, o un profármaco del mismo en la preparación de una composición para la inhibición de 1 actividad de HSP90.
(A) (B) en donde Ri es un grupo de la fórmula (IA) : -Ar1- (Alk1) p- (Z) r- (Alk2) s-Q (IA) en donde en cualquier combinación compatible Ar1 es un radical arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido, Alk1 o Alk2 son radicales al uileno de 1 a 6 átomos de carbono o alguenileno de 2 a 6 átomos de carbono, di alentes, opcionalmente sustituidos, p, r y s son independientemente 0 ó 1, Z es -0-, -S-, -{C=0)-, -(C=S)-, -S02-, -C(=0)0- , -C(=0)NRA-, -C(=S)NRA-, -S02NRA-, -NRAC(=0)-, -NRAS02- O -NRA- en donde RA es hidrógeno o alquilo de 1 a 6 átomos de carbono y Q es hidrógeno o un radical carbocíclico o heterocíclico opcionalmente sustituido; R2 es (i) un grupo de la fórmula (IA) como se define en relación a (ii) un radical carboxamida; o (iii) un anillo carbocíclico o heterocíclico no aromático en donde un carbono del anillo está opcionalmente sustituido, y/o un nitrógeno del anillo está opcionalmente sustituido con un grupo de la fórmula - (Alk1)p- (Z)r- (Alk2) B-Q en donde Q, Alk1, Alk2, Z, p, r y s son como se definieron anteriormente en relación al grupo (IA) ; y R3 es hidrógeno, cicloalquilo opcionalmente sustituido, cicloalguenilo, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, alquenilo de 1 a 6 átomos de carbono o alquinilo de 1 a 6 átomos de carbono; o un grupo carboxilo, carboxamida o éster de carboxilo . En general, se cree que la clase de compuestos definidos anteriormente en relación a la fórmula (I) es novedosa, y la invención incluye todos los nuevos miembros de esa clase y sus sales, hidratos y solvatos, y profármacos de los mismos . Como se utiliza en la presente: el término "grupo carboxilo" se refiere a un grupo de la fórmula -COOH el término "grupo éster de carboxilo" se refiere a un grupo de la fórmula -COOR, en donde R es un radical efectiva o especulativamente derivado del compuesto hidroxilo ROH; y el término "grupo carboxamida" se refiere a un grupo de la fórmula -CONRaRb, en donde -NRaRb es un grupo amino primario o secundario (incluyendo cíclico) efectiva o especulativamente derivado de amoniaco o la amina H RaRb. Como se utiliza en la presente, el término "alquilo de a a b átomos de carbono" en donde a y b son números enteros, se refiere a un radical alquilo de cadena lineal o ramificada que tiene de a a b átomos de carbono. De este modo, cuando a es 1 y b es 6, por ejemplo, el término incluye metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, t-butilo, n-pentilo y n-hexilo. Como se utiliza en la presente el término "radical alquilo divalente de a a b átomos de carbono" en donde a y b son números enteros, se refiere a una cadena de hidrocarburo saturada que tiene de a a b átomos de carbono, y dos valencias no satisfechas. Como se utiliza en la presente, el término "alquenilo de a a b átomos de carbono" en donde a y b son números enteros, se refiere a un radical alquenilo de cadena lineal o ramificada que tiene de a a b átomos de carbono, y que contiene al menos un doble enlace de configuración E o Z, incluyendo por ejemplo, etenilo y alilo. Como se utiliza en la presente, el término "radical alquenileno divalente de a a b átomos de carbono" en donde a y b son números enteros se refiere a una cadena de hidrocarburo que tiene de a a b átomos de carbono, al menos un doble enlace, y dos valencias no satisfechas. Como se utiliza en la presente, el término "alquinilo de a a b átomos de carbono" en donde a y b son números enteros se refiere a un radical alquenilo de cadena lineal o ramificada que tiene de a a b átomos de carbono y que contiene al menos un triple enlace, incluyendo por ejemplo, etinilo y prop-2-inilo . Como se utiliza en la presente, el término "radical alquinileno divalente de a a b átomos de carbono" en donde a y b son números enteros, se refiere a un radical alquinilo de cadena lineal o ramificada que tiene de a a b átomos de carbono y que contiene al menos un triple enlace, y dos valencias no satisfechas . Como se utiliza en la presente, el término "cicloalquilo" se refiere a un radical carboc clico saturado que tiene de 3 a 8 átomos de carbono e incluye, por ejemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo y ciclooctilo. Como se utiliza en la presente el término "cicloalquenilo" se refiere a un radical carbociclico que tiene de 3 a 8 átomos de carbono que contiene al menos un doble enlace, e incluye, por ejemplo, ciclopentenilo, ciclohexenilo, cicloheptenilo y ciclooctenilo . Como se utiliza en la presente el término ¾arilo" se refiere a un radical aromático mono-, bi- o tri-cíclico carbociclico. Ilustrativo de tales radicales son fenilo, bifenilo y naftilo. Como se utiliza en la presente el término "carbociclico" se refiere a un radical cíclico cuyos átomos del anillo son todos carbonos, e incluye los radicales arilo monocíclico, cicloalquilo y cicloalquenilo . Como se utiliza en la presente el término "heteroarilo" se refiere a un radical aromático mono-, di- o tri-cíclico que contiene uno o más heteroátomos seleccionados de azufre, nitrógeno y oxígeno. Ilustrativo de tales radicales son tienilo, benzotienilo, furilo, benzofurilo, pirrolilo, imidazolilo, bencimidazolilo , tiazolilo, benzotiazolilo, isotiazolilo, bencisotiazolilo, pirazolilo, oxazolilo, benzoxazolilo, isoxazolilo, bencisoxazolilo, isotiazolilo, triazolilo, benzotriazolilo, tiadiazolilo, oxadiazolilo, piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, triazinilo, indolilo e indazolilo. Como se utiliza en la presente el término no calificado "heterociclilo" o ¾heterocíclico" incluye "heteroarilo" como se definió anteriormente, y en particular significa un radical no aromático mono-, bi- o tri-cíclico que contiene uno o más heteroátomos seleccionados de azufre, nitrógeno y oxígeno, y a los grupos que consisten de un radical no aromático monocíclico que contiene uno o más de tales heteroátomos que está covalentemente enlazado a otro radical tal o a un radical carbocíclico monocíclico. Ilustrativos de tales radicales son los grupos pirrolilo, furanilo, tienilo, piperidinilo, imidazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo, pirazolilo, piridinilo, pirrolidinilo, pirimidinilo, morfolinilo, piperazinilo, indolilo, morfolinilo, benzofuranilo, piranilo, isoxazolilo, bencimidazolilo, metilendioxifenilo, etilendioxifenilo, maleimido y succinimido . A no ser que se especifique de otro modo en el contexto en el cual éste aparezca, el término "sustituido" como se aplica a cualquier porción en la presente, significa sustituido con hasta cuatro sustituyentes compatibles, cada uno de los cuales independientemente puede ser, por ejemplo, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 6 átomos de carbono, hidroxilo, hidroxi (alquilo de 1 a 6 átomos de carbono), mercapto, mercapto (alquilo de 1 a 6 átomos de carbono) , alquiltio de 1 a 6 átomos de carbono, halo (incluyendo fluoro, bromo y cloro) , trifluorometilo, trifluorometoxi, nitro, nitrilo (-CN) , oxo, fenilo, -COOH, -COOH, -CORA, -S02Ra, -CONH2-, -S02N¾, -CONHRA, -CO RARB, -S02NRARB, ' -NH2, -NHRA, -NRARB, -OCOH2, OCONHRA, -OCO RARB, -NHCORA, -NHCOORA, -NRBCOORA, -NHS02ORA, -NRBS02OH, -NRBS02ORA, -NHCOMH2, -NRACOH2, -NHCONHR3, -NRACONHRB, -NHCO RARB, o -NRACO RARB en donde RA y RB son independientemente un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono. Un "sustituyente opcional" puede ser uno de los grupos sustituyentes anteriores. De los sustituyentes anteriores, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, halo, trifluorometilo, trifluorometoxi , trifluorometilsulfonilo, y fenilo son aquellos más comúnmente considerados como lipofílicos . Otros sustituyentes listados que contienen grupos alquilo pueden ser lipofílicos, dependiendo de los grupos alquilo particulares presentes . Como se utiliza en la presente el término "sal" incluye las sales por adición de base, por adición de ácido y las sales cuaternarias. Los compuestos de la invención que son ácidos pueden formar sales, incluyendo sales farmacéuticamente o veterinariamente aceptables, con bases tales como hidróxidos de metal alcalino, por ejemplo hidróxidos de sodio y de potasio; hidróxidos de metal alcalinotérreo, por ejemplo hidróxidos de calcio, de bario y de magnesio; con bases orgánicas por ejemplo N-metil-D-glucamina, colina-tris (hidroximetil) amino-metano, L-arginina, L-lisina, N-etilpiperidina, dibencilamina y similares. Aquellos compuestos (I) que son básicos pueden formar sales, incluyendo sales farmacéuticamente o veterinariamente aceptables con ácidos inorgánicos, por ejemplo con ácidos halohídricos tales como los ácidos clorhídrico o bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico o ácido fosfórico y similares, y con ácidos orgánicos, por ejemplo con los ácidos acético, tartárico, succínico, fumárico, maleico, málico, salicílico, cítrico, metansulfónico, p-toluensulfónico , benzoico, bencensulfónico, glutámico, láctico y mandélico y similares. El término wlipofílico" como se utiliza en la presente, en relación a un sustituyente significa que éste tiene una constante de hidrofobicidad de sustituyente positivo (p) . (un valor positivo para p indica que el sustituyente es más lipofílico que el hidrógeno, mientras que un valor negativo indica que éste es menos lipofílico, por ejemplo, más hidrofílico, que el hidrógeno) . Algunos compuestos de la invención contienen uno o más centros quirales efectivos o potenciales debido a la presencia de átomos de carbono asimétricos. La presencia de varios átomos de carbono asimétricos da origen a un número de diastereoisomeros con estereoquímica R o S en cada centro quiral . La invención incluye todos los diastereoisomeros tales y mezclas de los mismos . Un aspecto de la invención incluye compuestos de la fórmula (A) o (B) anteriores y las sales, N-óxidos, hidratos o solvatos de los mismos y profármacos de los mismos, excepto los siguientes tres compuestos (X) , (Y) y (Z) que son comercialmente disponibles : Sujeta a esas exclusiones, la invención incluye particularmente aquellos en donde los sustituyentes Ri7 R2 y R3 son como se discuten y especifican en las siguientes secciones encabezadas ¾El radical Ri", "El radical R2" y "El radical R3". Otro aspecto más incluye el uso de tales compuestos para el tratamiento de enfermedades que responden a la inhibición de la actividad de HSP90. El radical Ri En géneral, se prefiere actualmente que el radical Ar1 presente en el grupo ¾ sea fenilo opcionalmente sustituido, preferentemente con uno de los sustituyentes opcionales que son un grupo hidroxilo en la posición 2 con relación al punto de enlace del anillo fenilo al anillo de isoxazol . En otras palabras , el grupo ¾ tiene preferentemente la fórmula (IB) en donde Alk1, Alk2, p, r, s, Z y Q son como se definieron anteriormente en relación a Ri, y R representa uno o más sustituyentes opcionales. En tales estructuras, se prefiere además que el átomo de carbono del anillo adyacente al grupo hidroxilo esté no sustituido. En la discusión adicional de Ri siguiente, esta preferencia aplica en adición a cualesquiera otras posibilidades mencionadas . En las estructuras más simples con las cuales está relacionada la invención, cada uno de p, r y s puede ser 0, y Q puede ser hidrógeno, de modo que Ri es arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido. En tales casos, Rx puede ser, por ejemplo, fenilo opcionalmente sustituido, preferentemente 2-hidroxifenilo el cual puede estar además sustituido, por ejemplo con uno o más grupos hidroxilo, metilo, etilo, metoxi, etoxi , cloro o bromo . Actualmente preferidos son los compuestos en donde i es 2 , 4-dihidroxifenilo, sustituido en la posición 5 por un sustituyente lipofílico pequeño, por ejemplo que tiene un volumen molecular igual a o menor que aquel del ter-butilo, tal como metilo, etilo, isopropilo, isobutilo, ter-butilo, cloro o bromo, especialmente etilo, isopropilo o cloro. En tales compuestos 2 , 4-di idroxifenilo 5-sustituidos de la invención, los grupos hidroxilo pueden estar protegidos por los grupos que son escindidos en el cuerpo para liberar los grupos hidroxilo. Los grupos tipo profármaco conocidos de este tipo que son escindidos a hidroxilos incluyen los grupos alquilcarboniloxi tal como metilcarboniloxi , y los grupos alquilaminocarboniloxi tales como dialquilamino- o isopropilamino-carboniloxi . En otras estructuras simples con las cuales está relacionada la invención, p, r y s pueden nuevamente cada uno ser 0, y Q puede ser un anillo carbocíclico o heterocíclico opcionalmente sustituido, por ejemplo un anillo de fenilo o piridilo. En tales casos, Q es un sustituyente directo en el anillo de Ar1 opcionalmente sustituido. En estructuras más complejas con las cuales la invención está relacionada, uno o más de p, r y s puede ser 1, y Q puede ser hidrógeno o un anillo carbocíclico o heterocíclico opcionalmente sustituido. Por ejemplo, p y/o s puede ser 1 y r puede ser 0, de modo que Q está enlazado a Ar1 por un radical alquileno o alquenileno, por ejemplo, un radical alquileno de 1 a 3 átomos de carbono, el cual está opcionalmente sustituido. En otros casos, cada uno de p, r y s pueden ser 1, en cuyos casos, Q está enlazado a Ar1 por un radical alquileno o alguenileno el cual está interrumpido por el radical Z que contiene el heteroátomo . En otros casos adicionales, p y s pueden ser 0 y r puede ser 1, en cuyo caso Q está enlazado a Ar1 vía el radical Z que contiene el heteroátomo . Los ejemplos específicos de grupos Ri de los tipos anteriores están presentes en los compuestos en los Ejemplos de la presente. El radical R2 Cuando R2 es del tipo (i) , por ej emplo un grupo de la fórmula (IA) , los ejemplos incluyen fenilo, 2-, 3- ó 4-piridilo, 2- ó 3-furanilo, 2- ó 3-tienilo, y tiazolilo en donde los sustituyentes opcionales incluyen cualquiera de aquellos listados anteriormente en la definición de "sustituido", por ejemplo metoxi, etoxi, metilendioxi, etilendioxi, fluoro, cloro, bromo y trifluorometilo . Por ejemplo R2 puede ser fenilo sustituido en la posición 4 por alcoxi de 1 a 6 átomos de carbono tal como metoxi o etoxi, o por flúor, cloro, bromo, piperazinilo, N-metilpiperazinilo o piperidinilo . Los sustituyentes R2 actualmente preferidos incluyen aquellos que tienen la estructural parcial : en donde el grupo amino sustituido -NR10R1:L es un grupo de solubilización. Muchos de tales grupos de solubilización son conocidos en la química medicinal. Los ejemplos incluyen morfolinilo, piperidinilo, piperazinilo, pirrolidinilo, etilamino, isopropilamino, dietilamino, ciclohexilamino, ciclopentilamino, metoxietilamino, piperidin-4-ilo, N-acetilpiperazinilo, metilsulfonilamino, tiomorfolinilo, tiomorfolinildióxido, 4-hidroxietilpiperidinilo, y 4-hidroxipiperidinilo. La solicitud de patente internacional copendiente No. PCT/GB2003/005275 describe los compuestos de pirazol que inhiben HSP90, análogos a los isoxazoles con los cuales está relacionada la invención, y que se cree se enlazan al objetivo HSP90 de una manera análoga. Esos compuestos de pirazol tienen un grupo carboxamida en la posición correspondiente a R2 de los presentes isoxazoles. Por lo tanto, cuando R2 en los presentes isoxazoles es un radical carboxamida del tipo (ii) anterior, los ejemplos incluyen aquéllos presentes en los compuestos de pirazol de la solicitud PCT/GB2003/05275, por ejemplo las carboxamidas de la fórmula -C0NRB (Alk)mRA en donde Alk es un radical alguileno, alquenileno o alquinileno divalentes, por ejemplo un radical -C¾-, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2- , -CH2CH=CH-, o -CH2CCC¾- y el radical Alk puede estar opcionalmente sustituido, n es 0 ó 1, B es hidrógeno o un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono o alquenilo de 2 a 6 átomos de carbono, por ejemplo metilo, etilo, n- o iso-propilo, o alilo, RA es hidroxi o carboc clico opcionalmente sustituido, por ejemplo fenilo sustituido con hidroxilo y/o con cloro, y 3 , 4-metilendioxifenilo; o heterociclilo, por ejemplo piridilo, furilo, tienilo, N-piperazinilo, o N-morfolinilo, cualquiera de cuyos anillos heterocíclicos puede estar sustituido, o RA y RB tomados con untamente con el nitrógeno al cual éstos están enlazados forman un anillo N-heterocíclico que puede contener opcionalmente uno o más heteroátomos adicionales seleccionados de oxigeno, azufre y nitrógeno, y los cuales pueden estar opcionalmente sustituidos sobre uno o más de los átomos de carbono o nitrógeno del anillo, los ejemplos de tales anillos N-heterocíclicos incluyen morfolino, piperidinilo, piperazinilo y N-fenilpiperazinilo . El radical R3 R3 puede ser, por ejemplo, hidrógeno, metilo, etilo, n- o iso-propilo, trifluorometilo, hidroxietilo, etilsulfonaminometilo o un grupo carboxamida -CONRB(Alk)nRA' como se discute anteriormente para R2. Un grupo carboxamida es actualmente preferido, especialmente etilaminocarbonilo e isopropilaminocarbonilo . Un subgrupo particular de los compuestos con los cuales está relacionada la invención, consiste de aquellos de la fórmula (ID) , y los regioisómeros de la fórmula B de los mismos, y sus sales, solvatos e hidratos, y profármacos de los mismos : (ID) en donde cada R independientemente representa un sustituyente opcional y R3 representa un grupo carboxamida. Un subgrupo preferido de los compuestos con los cuales está relacionada la invención, consiste de aquellos de la fórmula (IE) , y los regioisómeros de la fórmula (B) de los mismos, y sus sales, solvatos e hidratos, y los profármacos de los mismos : (IE) en donde R3 representa un grupo carboxamida (tal como etilaminocarbonilo CH3CH2NHC (=0) - o isopropi1aminocarboni1o (CH3)2CH HC(=0) -) ; R9 representa -CH2 R10R:L1 o -NR10RU en donde el grupo amino sustituido - R10R1:L es un grupo de solubilización (tal como morfolinilo, piperidinilo, piperazinilo, pirrolidinilo, etilamino, isopropil mino, dietilamino, ciclohexilamino, ciclopentilamino, metoxietilamino, piperidin-4-ilo, N-acetilpiperazinilo, N-metilpiperazinilo, metilsulfonilamino, tiomorfolinilo, tiomorfolinil-dióxido, 4-hidroxietilpiperidinilo y 4-hidroxipiperidinilo) ; y Rg representa un sustituyente opcional, especialmente un grupo lipofilico pequeño (tal como etilo, isopropilo, bromo o cloro) . Los compuestos específicos con los cuales está relacionada la invención incluyen aquellos de los Ejemplos, particularmente los siguientes, y sus sales, N-óxidos, hidratos y solvatos y profármacos de los mismos: etilamida del ácido 5- (2 , 4-dihidroxi-5-isopropil-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (2 , 4-dihidroxi-5~isopropil-fenil) -4- (4-piperidin-l-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 4- (4-dietilaminometil-fenil) -5- (2 , 4-dihidroxi-5-isopropil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (2 , 4-dihidroxi-5-isopropil-fenil) -4- [4- (4-metil-piperazin-l-ilmetil) -fenil] -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (2 , 4-dihidroxi-5-isopropil-fenil) -4- (4-etilaminometil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (2 , 4-dihidroxi-5-isopropil fenil) -4- [4- (isopropilamino-metil) -fenil] -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 4- (4-ciclohexilaminometil-fenil) 5- (2 , 4-dihidroxi-5-isopropil-fenil ) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 4- [4- (ter-b tilamino-metil) fenil] -5- (2 , 4-dihidroxi-5-isopropil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (2 , -dihidroxi-5-isopropil fenil) -4- {4- [ (2-metoxi-etilamino) -metil] -fenil} -isoxazol-3-carboxílico isopropilamida del ácido 5- (2 , 4-dihidroxi-5-isopropil fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico isopropilamida del ácido 5- (2 , -dihidroxi-5-isopropil fenil) -4- [4- (4-metil-piperazin-l-ilmetil) -fenil] -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (5-ter-butil-2 , 4-dihidroxi fenil) -4- [4- (4-metil-piperazin-l-ilmetil) -fenil] -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (5-ter-butil-2, -dihidroxi fenil) -4- (4-piperidin-l-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (2 , 4-dihidroxi-5-isobutil fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (2 , 4-dihidroxi-5-isobutil fenil) - (4-piperidin-l-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (5-ter-butil-2 , 4-dihidroxi fenil) - (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (5-ter-butil-2, 4-dihidroxi fenil) -4 (4-dietilaminometil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 3- (5-cloro-2 , -dihidroxi-fenil) -4 (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-5-carboxílico etilamida del ácido 4- (4-dietilaminometil-fenil) -5 (4, 6-dihidroxi-2 ' -metil-bifenil-3-il) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 4- (4-dietilaminometil-fenil ) -5 (4 ' -fluoro-4, 6-dihidroxi-bifenil-3-il) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 4- (4-dietilaminometil-fenil) -5 (4, 6-dihidroxi-bifenil-3-il) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (2 ' -fluoro-4, 6-dihidroxi bifenil-3-il) -4- (4-pirrolidin-l-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- ( , 6-dihidroxi-bifenil-3-il) -4 (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (2 , -dihidroxi-5-fenetil-fenil) 4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico isopropilamida del ácido 5- (5-cloro-2 , 4-dihidroxi fenil) -4- (4-piperidin-l-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 4- (4-dietilaminometil-fenil) -5- (5 etil-2 , 4-dihidroxi-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (5-etil-2, 4-dihidroxi-fenil) -4 [4- (4-metil-piperazin-l-ilmetil ) -fenil] -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (5~etil-2 , 4-dihidroxi-fenil ) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (5-cloro-2 , 4-dihidroxi-fenil) -4-(4-dietilaminometil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (5-cloro-2 , 4-dihidroxi-fenil ) -4- [4- (4-metil-piperazin-l-ilmetil) -fenil] -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (5-cloro-2, 4-dihidroxi-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico Los compuestos con los cuales está relacionada la invención pueden ser preparados mediante los métodos de la literatura, tales como aquellos de los Ejemplos preparativos de la presente, y los métodos análogos a éstos. Por ejemplo, algunos compuestos de la fórmula (IA) pueden ser preparados mediante reacción de la hidroxilamina y un compuesto de la fórmula (III) en donde el anillo A corresponde al grupo ¾ de los compuestos (IA) y R2 y R3 son como se definen en relación a la fórmula (I) . Los compuestos preparados de esta manera pueden entonces ser químicamente modificados para introducir sustituyentes deseados, para producir otros compuestos de la fórmula (A) . Por ejemplo donde í¾. es un anillo de fenilo, opcionalmente que posee ya sustituyentes , la introducción de un sustituyente bromo frecuentemente hará posible la introducción de otros sustituyentes en el sitio del bromo por enlace sp2. En otra ruta más para algunos compuestos de la fórmula (A) , el anillo de isoxazol es formado por la reacción de un compuesto (IV) con hidroxilamina en donde R'i y R'3 son miembros de las clases de sustituyentes Ri y R3 definidas anteriormente, para producir el isoxazol (V) seguido por la introducción del sustituyente adicional R2 (por ejemplo mediante bromación o yodación del carbono del anillo en (V) y acoplamiento sp2, y/o modificación de los sustituyentes 1!, R13 y R2 resultantes del isoxazol. Además, algunos regioisómeros de isoxazol (B) pueden ser preparados a partir de los isoxazoles (A) mediante reacción con trifluoruro de trimetiloxonio-boro, y nuevamente los compuestos preparados de esta manera pueden ser luego químicamente modificados para introducir sustituyentes deseados, para producir otros compuestos de la fórmula (IA) . Se entenderá que durante las ' síntesis anteriores, puede ser deseable proteger cualesquiera grupos reactivos tales como hidroxilos y posteriormente desprotegerlos . Detalles sintéticos adicionales son descritos en los ejemplos de la presente. Los compuestos de la invención son inhibidores de HSP90 y son de este modo útiles en el tratamiento de enfermedades que responden a la inhibición de la actividad de HSP90 tales como cánceres; enfermedades virales tales como Hepatitis C (HCV) (Waxman, 2002); inmunosupresión tal como trasplante (Bijlmakers, 2000 y Yorgin, 2000) ; enfermedades anti-inflamatorias (Bucci, 2000) tales como artritis reumatoide, asma, MS, diabetes tipo I, lupus, psoriasis y enfermedad inflamatoria del intestino; fibrosis quística (Fuller, 2000) ; enfermedades relacionadas a la angiogénesis (H r, 2002 y urebayashi, 2001) : retinopatía diabética, hemangiomas, psoriasis, endometriosis y angiogénesis tumoral . También, un inhibidor de HSP90 de la invención puede proteger a las células normales contra la toxicidad inducida por la quimioterapia, y ser útil en enfermedades donde la falla para sufrir apoptosis es un factor subyacente. Tal inhibidor de HSP90 puede ser también útil en enfermedades donde la inducción de un estrés celular o respuesta de prote na de choque por calor, podría ser benéfica, por ejemplo, la protección del daño isquémico por hipoxia debido a la elevación de HSP70 en el corazón (Hutter, 1996 y Trost, 1998) y en el cerebro (Plumier, 1997 y Rajder, 2000) . Un inhibidor de HSP 0 podría ser también útil en enfermedades donde el mal plegamiento o la agregación de las proteínas es un factor causal mayor, por ejemplo, incoherencia CJD, Huntington y Alzheimer (Sittler, 2001; Trazelt, 1995 y Winklhofer, 2001) . En consecuencia, la invención también proporciona: (i) un método de tratamiento de enfermedades o condiciones que responden a la inhibición de la actividad de HSP90 en mamíferos, particularmente humanos, cuyo método comprende administrarle al mamífero una cantidad de un compuesto de la fórmula (A) o (B) como se definió anteriormente, o una sal, hidrato o solvato del mismo, efectiva para inhibir la actividad de HSP90; y (ii) un compuesto de la fórmula (A) o (B) como se define anteriormente, o una sal, hidrato o solvato del mismo, para el uso en medicina humana o veterinaria, particularmente en el tratamiento de enfermedades o condiciones que responden a la inhibición de la actividad de HSP90; (iii) una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la fórmula (A) o (B) como se define y se especifica anteriormente, junto con un portador farmacéuticamente aceptable. En particular, la invención incluye una solución o suspensión de tal compuesto en un portador estéril, fisiológicamente aceptable, solución salina acuosa. Se entenderá que el nivel de dosis específico para cualquier paciente particular dependerá de una variedad de factores, incluyendo la actividad del compuesto específico empleado, la edad, el peso corporal, la salud general, el sexo, la dieta, la hora de administración, la ruta de administración, la velocidad de excreción, la combinación del fármaco y el mecanismo causal y la severidad de la enfermedad particular que sufre terapia. En general, una dosis adecuada para formulaciones oralmente administrables usualmente estará en el intervalo de 0.1 a 3000 mg una vez, dos veces o tres veces al día, o la cantidad diaria equivalente administrada por infusión u otras rutas. No obstante, los niveles de dosis óptimos y la frecuencia de dosificación serán determinados por pruebas clínicas como es convencional en la técnica. Los compuestos con los cuales está relacionada la invención pueden ser preparados para la administración mediante cualquier ruta consistente con sus propiedades farmacocinéticas . Las composiciones oralmente administrables pueden estar en la forma de tabletas, cápsulas, polvos, granulos, pastillas, preparaciones líquidas o de gel, tales como soluciones o suspensiones orales, tópicas, o parenterales estériles. Las tabletas y cápsulas para la administración oral pueden estar en forma de presentación de dosis unitaria, y pueden contener excipientes convencionales tales como agentes aglutinantes, por ejemplo jarabe, acacia, gelatina, sorbitol, tragacanto o polivinilpirrolidona; rellenadores por ejemplo lactosa, azúcar, almidón de maíz, fosfato de calcio, sorbitol o glicina; lubricantes de tableteo, por ejemplo estearato de magnesio, talco, polietilenglicol o sílice; desintegradores por ejemplo almidón de papa, o agentes humectantes aceptables tales como laurilsulfato de sodio. Las tabletas pueden ser recubiertas de acuerdo a los métodos bien conocidos en la práctica farmacéutica normal . Las preparaciones orales líquidas pueden estar en la forma de, por ejemplo, suspensiones, soluciones, emulsiones, jarabes o elíxires acuosos o aceitosos, o pueden presentarse como un producto anhidro para reconstitución con agua u otro vehículo adecuado antes del uso. Tales preparaciones líquidas pueden contener aditivos convencionales tales como agentes suspensores, por ejemplo sorbitol, jarabe, metilcelulosa, jarabe de glucosa, grasas comestibles hidrogenadas de gelatina; agentes emulsificantes , por ejemplo lecitina, molooleato de sorbítan o acacia; vehículos no acuosos (los cuales pueden incluir aceites comestibles) , por ejemplo aceite de almendras, aceite de coco fraccionado, esteres aceitosos tales como glicerina, propilenglicol o alcohol etílico; conservadores, por ejemplo p-hidroxibenzoato de metilo o propilo o ácido sórbico, y si se desea agentes saborizantes o colorantes convencionales. Para la aplicación tópica a la piel, el fármaco puede ser constituido en una crema, loción o ungüento. Las formulaciones en crema o ungüento que pueden ser utilizadas para el fármaco son formulaciones convencionales bien conocidas en la técnica, por ejemplo como se describe en los libros de texto estándares de farmacia tales como la Farmacopea Británica. El ingrediente activo puede también ser administrado parenteralmente en un medio estéril. Dependiendo del vehículo y la concentración utilizada, el fármaco puede ser ya sea suspendido o disuelto en el vehículo. Venta osamente, los adyuvantes, tales como agentes anestésicos locales, conservadores y amortiguadores, pueden ser disueltos en el vehículo . Los compuestos de la invención son también útiles en ensayos in vitro dependientes de la inhibición de la actividad de HSP90, por ejemplo, en la selección de clases alternativas de inhibidores de HSP90, en donde el compuesto de prueba compite con o desplaza un compuesto de esta invención. En consecuencia, en otro aspecto más, la invención incluye un método para inhibir la actividad de HSP90, que comprende poner en contacto, in vitro, una enzima HSP90 y un compuesto de la fórmula (A) o (B) como se definió y se especificó anteriormente. Los siguientes ejemplos ilustran la preparación y actividades de los compuestos específicos de la invención. Ejemplos 1-4 Esquema de Reacción 1 : preparación del intermediario de bromo y arilación subsecuente Ejemplo 1 4- [4- (4-metoxi-fenil)-3-metil-isoxazol-5-il] -bencen-1, 3-diol 1- (2,4-dihidroxi-fenil) -2- (4-metoxi-fenil) -etanona Se calentó resorcinol (4.4 g, 40 mmol) y ácido 4-metoxifenilacético (6.6 g, 40 mmol) en eterato de trifluoruro de boro (25 mi, 0.2 mol), bajo una atmósfera de nitrógeno, a 90°C por aproximadamente 90 minutos para dar una solución rojo pálido. La solución se dejó enfriar y se vació en 200 mi de acetato de sodio acuoso al 10%, y la mezcla se agitó para dar un precipitado amarillo pálido. Los sólidos se retiraron mediante filtración y se lavaron con 200 mi de agua. Los sólidos fueron recogidos en 250 mi de acetato de etilo y lavados con 200 mi de agua. La solución se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró para obtener un semisólido amarillo. La trituración con 100 mi de éter dietílico dio la 1- (2 , -dihidroxi-fenil) -2- (4-metoxi-fenil) -etanona como un sólido anaranjado pálido secado a vacío (2.2 g) tiempo de retención por LC 2.39 minutos [M+H]+ 259.2. (Tiempo de corrida 3.75 minutos) RMN (DMSO-D6) 7.95 (d J 8.9 Hz ArB) 7.2 (d J 8.7 Hz 2Arff) 6.9 (d J 8.7 Hz 2Arff) 6.4 (d J 9.9 ArJT) 6.25 (s AriT) 4.2 (s 2CH2) 3.75 (s 30CH3) Paso 2 7-hidroxi-3- (4-metoxi-fenil) -2-meti1-crornen-4-ona Se agregó anhídrido acético (3 mi, 30 mmol) a una suspensión de carbonato de potasio (4.0 g, 29 mmol) y l-(2,4-dihidroxi-fenil) -2- (4-metoxi-fenil) -etanona (1.95 g, 7.5 mmol) en 10 mi de DMF, y la suspensión resultante se calentó a 115°C por aproximadamente 90 minutos. La mezcla se dejó enfriar y se vació en 200 mi de agua, para dar un precipitado blanquecino.
Los sólidos se eliminaron mediante filtración y se lavaron con 100 mi de agua y 2 porciones de 40 mi de éter dietílico, para dar la 7-hidroxi-3- (4-metoxi-fenil) 2-metil-cromen-4-ona como un polvo blanquecino, secado a vacío (1.65 g) . Tiempo de retención por LC 2.26 minutos [M+H] 283.2. (Tiempo de corrida 3.75 minutos) RMN (DMSO-d6) 7.8 (d J 8.7 Hz ArJET) 7.2 ( d J 8.8 Hz 2ArJí) 7.0 ( d J 8.8 Hz 2Arff) 6.9 (d J 8.7 ArH) 6.8 (s ArfT) 3.8 (s 30Cff3) 2.2 (s 3CH3) Paso 3 4- [4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol-5-il] -bencen-1, 3-diol Se agregó clorhidrato de hidroxilamina (0.35 g, 5 mmol) a una suspensión de 7-hidroxi-3- (4-metoxi-fenil) -2-metil-cromen-4-ona (0.14 g, 0.5 mmol) en 3 mi de piridina y la mezcla se calentó a reflujo por aproximadamente 4 horas. La solución se dejó enfriar y se vació en 50 mi de agua y se extrajo con 50 mi de éter dietílico. Los extractos se lavaron con 3 porciones de 50 mi de agua y 30 mi de solución acuosa saturada de cloruro de sodio. La solución se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró para dar una goma café pálido.
El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna, sobre sílice, eluyendo con acetato de etilo/hexano (1:2), para dar una goma incolora. La trituración con hexano dio el 4- [4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol-5-il] -bencen-1,3-diol como un polvo blanco, secado a vacío (0.087 g) Tiempo de retención por LC 2.20 minutos [M+H]+ 298.2. (Tiempo de corrida 3.75 minutos) RMN (DMSO-d6) 7.1 (d J 8.8 Hz 2Arff) 6.85 (d J 8.6 Hz Arff) 6.8 (d J 8.8 Hz 2Arff) 6.25 (s Arff) 6.15 (d J 8.6 Hz Arff) 3.65 (s 30Cff3) 2.15 (s, 3Cff3) Ejemplo 2 -bromo-6- [4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol-5-il] -bencen- Se agregó tribromuro de benciltrimetilamonio (3.95 g, 10 mmol) en porciones a una suspensión enfriada con hielo de 4- [4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol-5-il] -bencen-1, 3-diol (Ejemplo 1) (2.95 g, 10 mmol) en 50 mi de diclorometano y la mezcla se agitó por aproximadamente 60 minutos a temperatura ambiente. Se agregaron 300 mi de acetato de etilo y la mezcla se lavó con 3 porciones de 200 mi de agua y 50 mi de una solución acuosa saturada de cloruro de sodio. La solución se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró para dar un sólido café pálido . El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna sobre sílice, eluyendo con acetato de etilo/hexano (1:2) para dar el 4-bromo-6- [4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol-5-il] -bencen-1, 3-diol como un sólido blanco, secado a vacío (3.42 g) . Tiempo de retención por LC 2.38 minutos [M+H]+ 378.2. (Tiempo de corrida 3.75 minutos) R N (acetona-de) 7.35 (Arff) 7.2 (d J 8.8 Hz 2Arff) 6.9 (d J 8.8 Hz 2ArH) 6.65 (s Arff) 3.8 (s 30CH3) 2.25 (s 3Cff3) Ejemplo 3 5- [4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol-5-il] -bifenil-2f 4-diol Paso 1 5- (2,4-bis-benciloxi-5-bromo-fenil) -4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol Se agregó bromuro de bencilo (0.36 mi, 3 mmol) a una suspensión de 4-bromo-6- [4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol-5-il] -bencen-1, 3-diol (Ejemplo 2) (0.55 g, 1.5 mmol) y carbonato de cesio (0.85 g, 2.6 mmol) en 5 mi de DMF y la mezcla se agitó por aproximadamente 18 horas a temperatura ambiente. Se agregaron 100 mi de agua y la mezcla se extrajo con 2 porciones de 30 mi de éter dietílico. Los extractos combinados se lavaron con 4 porciones de 75 mi de agua y 50 mi de solución acuosa saturada de cloruro de sodio. La solución se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró para dar una goma café pálido. La trituración con hexano dio 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-bromo-fenil) -4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol como un sólido blanquecino, secado a vacío (0.5 g) . Tiempo de retención por LC 3.08 minutos [M+H]+ 558.4. (Tiempo de corrida 3.75 minutos) (Cloroformo-d) 7.55 (s Arff) 7.35-7.25 (m 5Arff) 7.2 (m 3ArH) 6.95 (d J 8.8 Hz 2Ar£T) 6.85 (m 2ArH) 6.7 (d J 8.8 Hz 2ArH) 6.35 (s ArH) 4.95 (s 2CH2) 4.6 (s 2C¾) 3.75 (s 30CH3) 2.25 (s 3CH3) Paso 2 5- (4, 6-bis-benciloxi-bifenil-3-il) -4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol Se agregó fosfato de potasio (0.1 g, 0.5 mmol) a una solución de 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-bromo-fenil) -4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol (0.14 g, 0.25 mmol) y ácido fenilborónico (0.095 g, 0.75 mmol) en 4 mi de 1,4-dioxano bajo una atmósfera de nitrógeno. Se agregó tetrakis (trifenilfosfina) aladxo (0) (cat.) y la suspensión se calentó a 80°C por aproximadamente 18 horas. La suspensión se dejó enfriar y se agregaron 25 mi de acetato de etilo. La mezcla se lavó con 3 porciones de 25 mi de agua y con 25 mi de solución acuosa saturada de cloruro de sodio . La solución se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró para dar una goma café pálido. La trituración con hexano dio 5-(4,6-bis-benciloxi-bifenil-3-il) -4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol como un sólido blanquecino, secado a vacío. Tiempo de retención por LC 3.08 minutos [M+H]+ 554.4. (Tiempo de corrida 3.75 minutos) RMN (Cloroformo-d) 7.4 (m 2?t?) 7.35 (s Artf) 7.3-7.1 (m HArH) 6.95 (d J 8.8 Hz 2Arff) 6.9 (m 2ArJT) 6.7 (d J 8.8 Hz 2ArJT) 6.45 (s Arff) 4.9 (s 2CH2) 4.7 (s 2CJ¾) 3.75 (s 30CH3) 2.25 (s 3CJT3) Paso 3 7-hidroxi-3- (4-metoxi-fenil) -2-metil-6-fenil-cromen-4-ona Se agregó formiato de amonio (3.2 g, 50 mmol) a una solución de 5- (4, 6-bis-benciloxi-bifenil-3-il) -4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol (1.4 g, 2.5 mmol) en 20 mi de metanol/10 mi de acetato de etilo bajo una atmósfera de nitrógeno. Se agregó paladio sobre carbono al 10% catalítico y la suspensión se calentó a 60°C por aproximadamente 18 horas. La suspensión se dejó enfriar y se agregaron 150 mi de acetato de etilo, y la suspensión se filtró. El filtrado se lavó con 3 porciones de 100 mi de agua y con 50 mi de solución acuosa saturada de cloruro, de sodio. La solución se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró para dar una goma café pálido. La trituración con metanol dio 7-hidroxi-3- (4-metoxi-fenil) -2-metil-6-feni1-cromen-4-ona como un sólido blanquecino, secado a vacío. Tiempo de retención por LC 2.58 minutos [M+H]+ 359.2. (Tiempo de corrida 3.75 minutos) RM (D SO-de) 7.9 (s ArJT) 7.5-7.3 (m 5Arff) 7.25 (d J 8.8 Hz 2ArfT) 7.1 (s AriT) 7.05 (d J 8.8 Hz 2ArfT) 3.85 (s 30C¾) 2.2 (s 3CH3) Paso 4 5- [4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol-5-il] -bifenil-2,4-diol Se agregó clorhidrato de hidroxilamina (75 mg, 1.08 mmol) a una suspensión de 7-hidroxi-3- (4-metoxi-fenil) -2-metil-6-fenil-cromen-4-ona (105 mg, 0.29 mmol) en 2 mi de piridina y la mezcla se calentó a reflujo por aproximadamente 6 horas, para dar una solución amarillo pálido. La solución se dejó enfriar y se agregaron 20 mi de agua. La mezcla se extrajo con 2 porciones de 10 mi de éter dietílico. Los extractos combinados se lavaron con 2 porciones de 20 mi de agua y con 10 mi de solución acuosa saturada de cloruro de sodio . La solución se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró. Los productos crudos se purificaron mediante cromatografía en columna, sílice, eluyendo con acetato de etilo/hexano (1:1) para dar el compuesto del título como un polvo blanquecino (80 mg) . Tiempo de retención por LC 2.56 minutos [M+H]+ 374.3. (Tiempo de corrida 3.75 minutos) RMN (Acetona-de) 7.5-7.3 (m 5ArfT) 7.2 (d J 8.8 Hz 2ArH) 7.0 (d J" 8.8 JHz 2Arff) 6.9 (d J 8.6 Hz AxH) 6.35 (s Arff) 6.1 (d J 8.7 Hz ArJÍ) 3.85 (s 30Cff3) 2.25 (s 3Cff3) Ej emplo 4 -cloro-6- [4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol-5-il] -bencen- Se agregó clorhidrato de hidroxilamina (0.7 g, 10 mmol) a una suspensión de 6-cloro-7-hidroxi-3- (4-metoxi-fenil ) -2-metil-cromen-4-ona [preparada análogamente al Ejemplo 1, Paso 2] (0.32 g, 1.0 mmol) en 4 mi de piridina y la mezcla se calentó a reflujo por aproximadamente 6 horas, para dar una solución amarillo pálido. La solución se dejó enfriar y se agregaron 20 mi de agua. La mezcla se extrajo con 2 porciones de 10 mi de éter dietílico. Los extractos combinados se lavaron con 2 porciones de 20 mi de agua y con 10 mi de solución acuosa saturada de cloruro de sodio . La solución se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró. Los productos crudos se purificaron mediante cromatograf a en columna, sílice, eluyendo con acetato de etilo/hexano (1:1), para dar 4-cloro-6- [4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol-5-il] -bencen-1, 3-diol como un polvo blanquecino (0.103 g) Tiempo de retención por LC 2.37 minutos [ +H]+ 332.2. (Tiempo de corrida 3.75 minutos). RM (Acetona-d6) 7.2 (d J 8.8 Hz 2Arff) 7.15 (s Arff) 6.9 (d J 8.8 Hz 2ArH) 6.6 (s ArJT) 3.85 (s 30CJT3) 2.25 (s 3C2%) Los compuestos de los Ejemplos 1-4 tuvieron una IC50 de HSP90 en el intervalo A cuando se probaron en el ensayo de ATPasa de Verde de Malaquita descrito más adelante. En las siguientes tablas, la columna final da el resultado en la misma base para el compuesto en cuestión, excepto en el caso del Ejemplo 12b, donde la actividad citada es como se midió en el ensayo de polarización de fluorescencia descrito más adelante. Los Ejemplos 5-16 fueron preparados utilizando la reacción descrita por los Ejemplos 1-4. Otros detalles de los Ejemplos de preparación 6 y 7 son análogos a aquellos de los Ejemplos 86 y 87.
También disponible comercialmente de Interbioscreen § disponible comercialmente de Enamine ** preparado a partir del intermediario de bromo-resorcinol con cianuro de cobre (I) en dimetilformamida a 150°C *** Ensayo de Polarización de Fluorescencia: 'A' = <10uM; '?' = >10uM Ejemplo 14 4- [4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol-5-il] -6-fenetil-bencen-1,3-diol Fue preparado a partir del ácido estiril-borónico en acoplamiento con el compuesto bromo-isoxazol del Ejemplo 2 Paso 1, como se describe anteriormente, seguido por reducción y tratamiento con hidroxilamina, análogamente al Ejemplo 3. Tiempo de retención por LC 2.56 minutos [ +H]+ 402. (Tiempo de corrida 3.75 minutos) Ejemplo 15 4- [4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol-5-il] -2, 5-bis- (4-metil-piperazin-l-ilmetil) -bencen-1, 3-diol squema de Reacción 2 : Reacción de Mannich Se agregó N-metilpiperazina (0.125 mi, 1.1 mmol) a una suspensión de 4- [4-{ (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol-5- il] -bencen-1 , 3-diol (0.15 g, 0.5 mmol) y paraformaldehído (0.040 g) en 4 mi de 1,4-dioxano y la mezcla se calentó a reflujo por aproximadamente 18 horas, para dar una solución de color amarillo café. La solución se dejó enfriar y se agregaron 25 mi de acetato de etilo. La mezcla se lavó con 3 porciones de 25 mi de agua y con 25 mi de solución acuosa saturada de cloruro de sodio. La solución se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró para obtener una goma café pálido. La trituración con hexano dio 4- [4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol-5-il] -2 , 6-bis- (4-metil-piperazin-l-ilmetil) -bencen-1, 3-diol (0.121 g como un polvo café pálido. Tiempo de retención por LC 1.61 minutos [M+H]+ 522.6. (Tiempo de corrida 3.75 minutos) RMN (Acetona-de) 7.2 (d J 8.8 Hz 2Arff) 6.95 (s Arff) 6.8 (d <T 8.8 Hz 2ArH) 3.85 (s 30Cff3) 3.75 (S 2CH2) 3.65 s 2CH2) 2.9-2.0 (s amplio, 16 CH2) 2.3 (s 3CH3) 2.25 (s 3Ci¾) 2.2 (s 3CH3) E emplo 16 Ester metílico del ácido 2,4-dihidroxi-5- [4- (4-metoxi-fenil) - 3-metil-isoxazol-5-il] -benzoico Se agregaron 100 µ? de n-butil-litio a una solución de 5- (2, 4-bis-benciloxi-5-bromo-fenil) -4- (4-metoxi-fenil ) -3- metil-isoxazol (154 mg, 0.28 mmol) en 2.5 mi de tetrahidrofurano bajo una atmósfera de nitrógeno a -78°C. La solución se agitó a -70°C por 30 minutos para dar una solución anaranjada. El ion se apagó con cloroformiato de metilo (100 µ?, 3 eq. ) y se de ó calentar a temperatura ambiente por 30 minutos. La solución se apagó con 5 mi de solución acuosa saturada de cloruro de amonio. La mezcla se extrajo con 3 porciones de 5 mi de acetato de etilo. Los extractos combinados se lavaron con 2 porciones de 5 mi de agua y 5 mi de solución acuosa saturada de cloruro de sodio. La solución se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró. Los productos crudos se purificaron mediante cromatografía en columna, sílice, eluyendo con acetato de etilo en hexano (gradiente 20% a 60% de acetato de etilo) para dar 72 mg del éster metílico del ácido 2 , 4-bis-benciloxi-5- [4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol~5-il] -benzoico . Tiempo de retención por LC 4.95 minutos [M+H]+ 536.4. (Tiempo de corrida 7.5 minutos) RMN (DMSO-de) 7.8 (s ArfT) 7.55 (d J 7.1 Hz 2ArH) 7.4 (5 J 6.2 Hz 2Arff) 7.35 (d J 6.1 Hz ArH) 7.3 (m 3 ARff) 7.1 (m ArfT) 7.0 (s ArH) 6.9 (d 8.8 Hz 2 Arff) 5.3 (s 2C¾) 5.1 (s 2C¾) 3.78 (s OCH3) 3.76 (s OCH3) 2.28 (s CH3) Paso 2 Se agregó formiato de amonio (172 mg, 20 eq.) a una solución de éster metílico del ácido 2 , 4-bis-benciloxi-5- [4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol-5-il] -benzoico (72 mg, 0.13 mmol) en 2 mi de metanol/1 mi de acetato de etilo bajo una atmósfera de nitrógeno. Se agregó paladio sobre carbono al 10% (catalítico) y la suspensión se calentó a 60°C toda la noche. La solución se dejó enfriar. Se agregaron 5 mi de acetato de etilo, la solución se lavó con 2 porciones de 5 mi de agua y con 5 mi de solución acuosa saturada de cloruro de sodio. La solución se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró. Los productos crudos se purificaron mediante cromatografía en columna, sílice, eluyendo con acetato de etilo en hexano (gradiente de 25% a 45% de acetato de etilo) para dar 7 mg del éter metílico del ácido 2 , 4-dihidroxi-5- [4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol-5-il] -benzoico . Tiempo de retención por LC 2.49 minutos [M+H]+ 356.3. (Tiempo de corrida 3.75 minutos) RM (CDC13) d = 10.85 (s ArOH) 7.52 (s ArOff) 7.12 (d J 8 Hz 25-rH) 6.98 (s ArH) 6.91 (d J 8 Hz 2ArH) 6.45 (s ArH) 3.78 (s 3 OCi¾) 3.71 (s 3 OCJÍ3) 2.21 (s 3 C¾ ) Los compuestos de los Ejemplos 14-16 tuvieron una IC50 de HSP90 en los intervalos ??' , ??' y '?' , respectivamente cuando se probaron en el ensayo de ATPasa de Verde de Malaquita descrito más adelante. Similarmente, los Ejemplos 17-20 fueron preparados enfriando bruscamente con N-formil-piperidina, tioisocianato de fenilo, isocianato de 2-metoxi-fenilo y benzaldehído, respectivamente. La reacción de desprotección final fue llevada a cabo con tricloruro de boro como se describe para el Ejemplo 23 (última reacción en el Esquema 5) . El Ejemplo 21 fue un subproducto del Paso 1, Ejemplo 16. Las actividades citadas son aquellas obtenidas en el Ensayo de Verde de Malaquita descrito más adelante.
E emplo 22 4-bencil-6- [4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol-5-il] -bencen-1,3-diol Esquema 4 : Síntesis del bencil-resorcinol Ester etílico del éster 2-benzoil-5-etoxicarboniloxi-fenílico del ácido carbónico Se agregó trietilamina (10 mi, 72.2 mmol) a una solución de 2 , 4-dihidroxibenzofenona (1) (5.4 g, 23.3 mmol) en 50 mi de THF y la solución se enfrió a 0°C. Se agregó lentamente cloroformiato de etilo (6.9 mi, 72.2 mmol) y la suspensión se agitó por aproximadamente 30 minutos a 0°C, y por aproximadamente 3 horas a temperatura ambiente. Se agregaron 150 mi de agua y la mezcla se extrajo con 150 mi de éter dietílico. Los extractos se lavaron con 2 porciones de 150 mi de agua y con 100 mi de solución acuosa saturada de cloruro de sodio. La solución se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró para dar 4-bencil-bencen-l , 3-diol como una goma verde pálido, la cual solidificó con el reposo (8.2 g) . Tiempo de retención por LC 2.73 minutos [M+H]+ 359.2. (Tiempo de corrida 3.75 minutos) d (Cloroformo-d) 7.7 (m 2ArH) 7.5 (m 2Arff) 7.35 (m 2ArJT) 7.15 (m 2ArJT) 4.25 (q J 7.1 Hz 2CH2) 4.05 (q J 7.1 Hz 2 C¾) 1-35 (t J 7.1 Hz 3Ci¾) 1-15 (t J 7.1 Hz 3 C¾) 4-bencil-bencen-l, 3-diol Una solución de boro idruro de sodio (1.85 g, 49 mmol) en 30 mi de agua se agregó a una solución enfriada con hielo del éster etílico del éster 2-benzoil-5-etoxicarboniloxi-fenílico del ácido carbónico (3.6 g, 10 mmol) en 30 mi de THF. La mezcla se agitó por aproximadamente 60 minutos a 0°C, y por aproximadamente 60 horas a temperatura ambiente, para dar una suspensión rojo pálido. Se agregaron 150 mi de agua y la mezcla se extrajo con 150 mi de éter dietílico. Los extractos se lavaron con 2 porciones de 100 mi de agua y 50 mi de solución acuosa saturada de cloruro de sodio. La solución se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró para dar una goma amarillo pálido. La goma se recogió en 20 mi de hidróxido de sodio acuoso (20 mi, 10%), y la solución se calentó a reflujo por aproximadamente 60 minutos. La solución se dejó enfriar y se acidificó con 5 mi de ácido clorhídrico al 37%. La mezcla se extrajo con 50 mi de éter dietílico. Los extractos se lavaron con 3 porciones de 40 mi de agua, y con 30 mi de solución acuosa saturada de cloruro de sodio. La solución se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró para dar 4-bencil-bencen-l, 3-diol como una goma rojo oscuro (2.1 g) . Tiempo de retención por LC 2.28 minutos [M+H]+ no ion. (Tiempo de corrida 3.75 minutos) d (Cloroformo-d) 7.2 (m 3Arir) 7.1 (m 2ArJÍ) 6.85 (d J 8.1 Hz ArH) 6.3 (d J 8.1 Hz ArH) 6.2 (s ArH) 3.85 (s 2C¾) El 4-bencil-bencen-l , 3-diol se utilizó como el material inicial en una síntesis del Esquema 1 para proporcionar el Ejemplo 23. Ejemplo 23 Ácido 3-{2,4-dihidroxi-5- [4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol-5-il] -fenil}-acr£lico Esquema 5: Reacción de Heck y desprotección de tricloruro de boro Paso 1 Ester ter-butílico del ácido 3-{2,4-bis-benciloxi-5- [4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol-5-il] -fenil>-acrílico Se agregó diisopropiletilamina (1 mi, 5.7 mmol) a una suspensión de 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-bromo-fenil) -4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol (0.56 g, 1.0 imnol) en acrilato de ter-butilo (1 mi, 6.8 mmol) y 8 mi de 1-butanol bajo una atmósfera de nitrógeno . Se agregó diclorobis (tri-o-tolilfosfina)paladio(Il) (catalítico) y la suspensión se calentó a 140°C por aproximadamente 18 horas, para dar una solución amarillo/verde. La solución se dejó enfriar y se concentró para obtener una goma amarilio/verde. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna, sílice, eluyendo con acetato de etilo/hexano {1:9) para dar el éster ter-butílico del ácido 3-{2 , -bis-benciloxi-5- [4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol-5-il] -fenil}-acrílico como una goma amarillo/verde (315 mg) . Se recuperaron 170 mg de material inicial. Tiempo de retención por LC 3.23 minutos [M+H]+ 604.6. (Tiempo de corrida 3.75 minutos) RMN (Cloroformo-d) 7.85 (d J 16.1 Hz CH) 7.6 (s ArH) 7.4-7.25 (m 8ArH) 7.05 (d J8.8 Hz 2ArH) 6.9 (m 2ArH) 6.8 (d J 8.8 Hz 2ArH) 6.5 (s ArH) 6.35 (d J 16.1 Hz CH) 5.05 (s 2CH2) 4.75 (s 2CH2) 3.75 (s 30CH3) 2.25 (s 3CH3) 1.5 (s 9CCH3) Paso 2 ácido 3-{2, 4-dihidroxi-5- [4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol-5-il] -fenil}-acr£lico Se agregó lentamente una solución de tricloruro de boro (2 mi, 1.0 M en diclorometano) a una solución del éster ter-butílico del ácido 3- {2 , 4-bis-benciloxi-5- [4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol-5-il] -fenil} -acrílico (50 mg, 0.09 mmol) en 1 mi de diclorometano a -78°C (hielo seco/acetona) bajo una atmósfera de nitrógeno. La solución resultante se agitó por aproximadamente 1 hora a - 8°C, y por aproximadamente 90 minutos a temperatura ambiente. La solución se enfrió a -78°C y se agregaron 2 mi de agua y la mezcla se agitó por aproximadamente 30 minutos a temperatura ambiente. Se agregaron 30 mi de acetato de etilo y la solución se lavó con 2 porciones de 5 mi de agua y con 10 mi de solución acuosa saturada de cloruro de sodio. La solución se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró para obtener una goma amarillo pálido. La trituración con hexano dio un sólido amarillo, los sólidos fueron retirados mediante filtración y lavados con hexano y secados a vacío para dar 10 mg del ácido 3-{2, 4-dihidroxi-5- [4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol-5-il] -fenil} -acrílico como un polvo amarillo. Tiempo de retención por LC 2.08 minutos [M+H]+ 368.3. (Tiempo de corrida 3.75 minutos) RM (Acetona-d6) 7.85 (d J 16.1 Hz CH) 7.5 s ArJ?) 7.25 (d J 8.8 Hz 2Arff) 6.95 (d J 8.8 Hz 2ArH) 6.6 (s ArH) 6.35 (d J 16.1 Hz CH) 3.8 (s 30CH3) 2.25 (s 3CH3) . Similarmente, el 4- [4- (4-metoxi-fenil) -3-metil- isoxazol-5-il] -6-estiril-bencen-l,3-diol (Ejemplo 24) se preparó mediante desprotección con tricloruro de boro de 5-(2,4-bis- benciloxi-5-estiril-fenil) -4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol (preparado a partir del acoplamiento del ácido estiril-borónico del intermediario de bromo-isoxazol, Ejemplo 3)) Tiempo de retención por LC 2.08 minutos [M+H]+ 368.3. (Tiempo de corrida 3.75 minutos) Los compuestos de los Ejemplos 22-24 tuvieron una IC50 de HSP90 en los intervalos ??' , '?' y VC respectivamente cuando se probaron en el ensayo de ATPasa de Verde de Malaquita descrito más adelante. Esquema 6 : Síntesis de los 5-carboxamido-isoxazoles Ejemplo 25 Etilamida del ácido 5- (5-cloro-2,4-dihidroxifenil) metoxi-fenil) -isoxazol-3-carboxílico Paso 1 1- (5-cloro-2,4-dihidroxi-fenil) -etanona agregaron gota a gota 17.5 mi de ácido acético una suspensión de 4-cloro-resorcinol (42.5 g, 0.293 mmol) en 200 mi de eterato de trifluoruro de boro bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se calentó a 90°C por 3.5 horas y luego se dejó enfriar a temperatura ambiente. Se había formado un sólido después de alrededor de 1 hora de enfriamiento. La mezcla se vació en 700 mi de una solución acuosa al 10% p/v de acetato de sodio. Esta mezcla se agitó vigorosamente por 2.5 horas. Se formó un sólido café claro que se filtró, se lavó con agua y se secó al aire toda la noche para proporcionar la l-(5-cloro-2, 4-dihidroxi-fenil) -etanona (31.6 g, 58%). LCMS-. [M+H] } 185. Paso 2 1- (2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil) -etanona Se agregaron 30 mi de bromuro de bencilo a una mezcla de 1- (5-cloro-2, -dihidroxi-fenil) -etanona (20 g, 0.107 moles) y carbonato de potasio (37 g, 2.5 equivalentes) en 350 mi de acetonitrilo . La mezcla se calentó a reflujo por 6 horas y luego se dejó enfriar y se agitó toda la noche. La mezcla se filtró y los sólidos se lavaron con 3 porciones de 100 mi de diclorometano. Los extractos orgánicos combinados se evaporaron a vacio para dejar un sólido amarillo pálido el cual se trituró con una mezcla de 350 mi de hexano/15 mi de acetato de etilo y se filtró para dar un sólido blanquecino, la l-(2,4-bis-benciloxi) -5-cloro-fenil) -etanona (35.4 g, 90%). K N ¾ (400 MHz) consistente con la estructura. Paso 3 éster etílico del ácido 4- (2,4-bis-benciloxi-5-clorofenil) -2-hidroxi-4-oxo-but-2-enoico Se agregó sodio metálico (1.35 g, 0.058 mol) en pequeñas piezas en un periodo de 20 minutos a etanol anhidro agitado bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó luego por 10 minutos adicionales hasta que todo el sodio había reaccionado para dar una solución homogénea. Se agregó 1- (2 , 4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil) -etanona (10.0 g, 0.027 mol) en porciones en 2 ó 3 minutos y la suspensión resultante se agitó por 5 minutos antes de la adición de oxalato de dietilo (6 mi, 0.043 mol) lo cual proporciona un precipitado amarillo más espeso. La mezcla de reacción se calentó a reflujo (dando una solución café homogénea) por 4 horas, luego se dejó enfriar a temperatura ambiente y se agregaron 6 mi de ácido acético. El sólido resultante que se formó fue triturado, filtrado, lavado con etanol y secado para dar un sólido amarillo (12.0, 95%). KN ½ (400 Hz, CDC13) d 1.2 (t, 3H) , 4.19 (q, 2H) , 5.05 (S, 2H) , 5.10 (s, 2H) , 6.50 (s, 1H) , 7.22-7.41 (m, 10H) , 7.97 (s, 1H) . Paso 4 éster etílico del ácido 5- (2,4-bis-benciloxi-5-clorofenil) -isoxazol-3-carbox lico Se agregó clorhidrato de hidroxilamina (0.89 g, 12.8 mmol) a una suspensión de éster etílico del ácido 4-(2,4-bis-benciloxi-5-clorofenil) -2-hidroxi-4-oxo-but-2-enoico (5.00 g; 10.7 mmol) en 100 mi de etanol absoluto. La mezcla de reacción se calentó a reflujo por cuatro horas, luego se dejo enfriar a temperatura ambiente (durante este tiempo la mezcla permanece heterogénea pero se vuelve de color amarillo más claro) . La mezcla se filtró y el sólido filtrado se lavó con agua (2 x 20 mi), etanol (2 x 20 mi) y se secó a vacío a 45°C. Esto proporciona el éter etílico del ácido 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-clorofenil) -isoxazol-3-carboxílico como un sólido amarillo esponjoso, 4.49 g (91%) LCMS: [M+H]+ 466, 464 (37C1; 35C1) . RMM ¾ (400 MHz , CDC13) d 1.42 (t, 3H) , 4.42 (q, 2H) , 5.13 (s, 2H) , 5.14 (s, 2H) , 6.62 (s, 1H) , 7.01 (s, 1H) , 7.35-7.43 (m, 10H) , 8.00 (s, 1H) . Paso 5 etilamida del ácido 5- (2#4-bis-benciloxi-5-clorofenil) -isoxazol-3-carboxilico Una solución de etilamina en solución metanólica (2.0 M; 40 mi; 80 mmol) se agregó a una suspensión agitada de éster etílico del ácido 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5~clorofenil) -isoxazol-3-carboxílico (4.40 g; 9.51 mmol) en 50 mi de etanol absoluto. La mezcla de reacción se calentó a 80°C (temperatura del baño de aceite) por cinco horas. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se dejó reposar toda la noche. Se formó un producto sólido incoloro y la mezcla de reacción se enfrió adicionalmente en un baño de hielo-agua, se filtró y se lavó con 2 porciones de 20 mi de etanol frío. El producto incoloro se secó a vacío para proporcionar la etilamida del ácido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-clorofenil) -isoxazol-3-carboxílico 3.42 g (78%) LCMS: [M+H]+ 465 , 463 (37Cl; 35Cl) . RM ½ (400 MHz, CDCl3) d 1.25 (t, 3H) , 3.48 (m, 2H) , 5.10 (s, 2H) , 5.2 (s, 2H) , 6.59 (s, 1H) , 6.83 (t amplio, 1H) , 7.08 (s, 1H) , 7.30-7.41 (m, 10H) , 7.97 (s, 1H) .
Paso 6 etilamida del ácido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-clorofenil) -4-bromo-isoxazol-3-carboxílico Se agregó una solución de bromo en ácido acético M; 7.2 mi; 4.32 mmol) a una suspensión agitada de etilamida del ácido 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-clorofenil) -4-bromo-isoxazol-3-carboxílico (2.00 g; 4.32 mmol) y acetato de sodio (0.708 g, 8.64 mmol) en 30 mi de ácido acético a temperatura ambiente. La mezcla se calentó a 80°C y se volvió homogénea dentro de 5 a 10 minutos, para proporcionar una solución rojo oscuro. Después del calentamiento por 2.5 horas la solución fue de color amarillo . El análisis de TLC mostró material inicial y producto presente. Se agregó una porción adicional de 2.0 mi (1.2 mmol) de bromo en solución de ácido acético en las siguientes dos horas. La mezcla de reacción se dejó enfriar hasta la temperatura ambiente y el ácido acético se eliminó a vacio para proporcionar un residuo sólido, el cual se dividió entre 200 mi de éter y 200 mi de agua. Las fases se separaron y la fase orgánica se lavó con 3 porciones de 100 mi de agua, 2 porciones de 100 mi de solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y 200 mi de una solución saturada de cloruro de sodio. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y los solventes filtrados se retiraron a vacío para proporcionar un aceite amarillo el cual se purificó mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice, eluyendo con 1-20% de acetato de etilo en hexano. Esto proporcionó el producto como un sólido incoloro, 1.2 g (52%) LCMS: [M+H]+ 543, 541 (81Br, 79Br) . REN ½ (400 MHz , CDC13) d 1.26 (t, 1H) , 3.50 (m, 2H) , 5.01 (s, 2H) , 5.12 (s, 2H) , 6.62 (s, 1H) , 6.74 (t amplio, 1H) , 2.28-7.41 (m, 10H) , 7.53 (s, 1H) . Paso 7 etilamida del ácido 5- (2,4-bis-benciloxi-5-clorofenil) -4- (4-nietoxi-fenil) -isoxazol-3-carboxílico A una mezcla de ácido 4-metoxifenilborónico (0.178 g, 1.17 mol) y la etilamida del ácido 5- (2, 4-bis-benciloxi-5-clorofenil) -4-bromo-isoxazol-3-carboxílico (0.507 g, 0.94 mmol) se agregó carbonato ácido de sodio (237 mg, 2.82 mmol) seguido por 5 mi de DM y 1.0 mi de agua. La mezcla se desgasificó mediante evacuación y lavado a chorro con nitrógeno (tres veces) , seguido por burbujeo de gas nitrógeno a través de la mezcla por cinco minutos . Se agregó diclorobis (trifenilfosfina)paladio (II) (66 mg, 0.094 mmol) y la mezcla de reacción se calentó bajo una atmósfera de nitrógeno a 90°C por dos horas (la mezcla de reacción se vuelve de color café oscuro. Se agregaron otros 10 mg del diclorobis (trifenilfosfina)paladio (II) y la mezcla de reacción se calentó a 90°C por 15 horas y luego se dejó enfriar hasta la temperatura ambiente. La mayoría de los solventes se retiraron a vacío y el residuo se dividió entre 50 mi de acetato de etilo y 50 mi de agua. Esta mezcla se filtró a través de un lecho de celite para eliminar los residuos de paladio y luego las fases se separaron y la fase orgánica se lavó con 2 porciones de 30 mi de agua, 50 mi de solución acuosa saturada de cloruro de sodio y luego se secó sobre sulfato de sodio. La mezcla se filtró y los solventes filtrados se retiraron a vacío para proporcionar 598 mg de un aceite amarillo. El producto de reacción crudo se purificó mediante adsorción sobre gel de sílice y luego cromatografía instantánea sobre gel de sílice (20 g de IST) eluyendo con un gradiente de solvente de 1 a 20% de acetato de etilo en hexano. Esto proporcionó la etilamida del ácido 5- (2 , -bis-benciloxi-5-clorofenil) -4- (4-metoxi-fenil) -isoxazol-3-carboxílico como un sólido incoloro (0.223 g, 40%). LCMS: [M+H]+ 571, 569 (37Cl, 35Cl) . RM ¾ (400 MHz, CDC13) d 1.21 (t, 3H) , 3.44 (m, 2H) , 3.79 (s, 3H) , 4.73 (s, 2H) , 6.45 (s, 1H) , 6.65 (t, 1H), 6.80 (d, 2H) , 7.14 a 7.44 (m, 8H) , 6.95 (ra, 2H) .
Paso 8 etilamida del ácido 5- (5-cloro-2, 4-dihidroxifenil) -4- (4-metoxi-fenil) -isoxazol-3-carboxílico A una solución enfriada en baño de hielo de la etilamida del ácido 5- (2 , -bis-benciloxi-5-clorofenil) -4- (4-metoxi-fenil) -isoxazol-3-carboxílico (0.213 mg, 0.374 mmol) en 5 mi de diclorometano bajo una atmósfera de nitrógeno se agregó una solución 1 M de tricloruro de boro en diclorometano (1.12 mi; 1.12 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a 0°C por 15 minutos y luego a temperatura ambiente por 35 minutos. La mezcla de reacción se volvió a enfriar a 0°C y se apagó por la adición de 5 mi de una solución acuosa saturada de carbonato ácido de sodio. Después de agitar por 5 minutos el diclorometano fue eliminado a vacío y el residuo se dividió entre 30 mi de acetato de etilo y 30 mi de agua. Las fases se separaron y la fase orgánica se lavó con 30 mi de agua, con 30 mi de una solución acuosa saturada de cloruro de sodio y luego se secó sobre sulfato de sodio. La mezcla se filtró y los solventes filtrados se eliminaron a vacío para proporcionar un sólido incoloro similar a espuma el cual se purificó para adsorción sobre gel de sílice y luego sobre cromatografía instantánea sobre gel de sílice (10 g de IST) eluyendo con 50% de acetato de etilo en hexano. Esto proporcionó la etilamida del ácido 5- (5-cloro-2, 4-dihidroxifenil) -4- (4-metoxi-fenil) -isoxazol-3-carboxílico como un sólido incoloro (0.097 g; 67%). LCMS: [M+H]+ 391, 389 (37Cl; 35C1) . R N X (400 MHz, d6-D SO) 5 1.08 (t, 3H) , 3.22 (m, 2H) , 3.73 (s, 3H) , 6.59 (s, 1H) , 6.87 (d, 1H) , 7.13-7.17 (m, 3H) , 8.88 (t amplio, 1H) , 10.09 (s, 1H) , 10.62 ( s , 1H) . El Ejemplo 25 tuvo actividad ??' en el Ensayo de Polarización de Fluorescencia, como se describe más adelante. Similarmente, el Ejemplo 26 fue preparado mediante el acoplamiento del éster de boronato de 4-piperazinofenilo protegido con boc, como se describió anteriormente. Este éster de boronato fue elaborado a partir de la l-(4-bromofenil)piperazina mediante protección con boc seguido por la formación del éster de boronato por acoplamiento catalizado por paladio con bis (tetrametilpinacolato) diboro. El Ejemplo 27 fue realizado similarmente. El Ejemplo 27a fue realizado mediante la desprotección de la etilamida del ácido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-clorofenil) -4-bromo-isoxazol-3-carboxílico : * Ensayo de Polarización de Fluorescencia Esquema 7 : Preparación del intermediario 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil) -4-yodo-3-metil-isoxazol Ejemplo 28 4-cloro-6- [3-metil-4- (3-morfolin-4-ilmetil-£enil) -isoxazol-5-il] -heneen-1,3-diol Paso 1 1- (2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil) -3-hidroxi-but-2-en-l-ona: A una solución de 15 g de cetona en 200 mi de acetato de etilo se agregaron 3.0 g de sodio metálico en pequeñas piezas . La suspensión se agitó a temperatura ambiente por 15 minutos, luego se calentó a reflujo toda la noche. La reacción se apagó con ácido acético, y el precipitado amarillo se filtró. Este se trituró en hexanos para dar cristales amarillo brillante. La RMN indicó que éste era el producto requerido -principalmente en la forma de enol- pequeñas trazas de la forma ceto. Paso 2 5- (2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil) -3-metil-isoxazol: La dicetona (4.0 g) se suspendió en etanol acuoso al 80%. Se agregaron 3.4 g de clorhidrato de hidroxilamina y 4.0 g de acetato de sodio, y el pH se ajustó a 8/9 con hidróxido de sodio 2 M. La solución se calentó a reflujo por 24 horas (dificultad para monitorizar mediante TLC debido a valores de f muy similares) . Después de este tiempo la solución se acidificó a pH 5 con HC1 1 y se vació en agua. El precipitado blanco se filtró, se lavó con agua, y se trituró con hexano para dar un sólido blanco. Notas: el compuesto puede ser también lavado con éter si es necesario para eliminar las impurezas en trazas pero es usualmente requerido . La RMN indicó que éste era el producto requerido. Paso 3 5- (2/4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil) -4-yodo-3-.rietil-isoxa.-ol: Se colocaron 2 g de isoxazol en una mezcla de 24 mi de ácido acético y 30 mi de agua. Se agregó un exceso de 2 g de monocloruro de yodo y la solución se calentó a 80°C por 2 a 3 horas . Después de enfriar a la temperatura ambiente se agregaron 50 mi de sulfito de sodio al 10% en agua. El sólido/aceite anaranjado viscoso se separó de la mezcla y se lavó con agua. Esto se disolvió luego en acetona y se filtró. La eliminación de la acetona a vacío dio un aceite anaranjado espeso el cual solidificó a un sólido anaranjado toda la noche. La RMN y LCMS indicaron que éste era el producto requerido. Paso 4 3- [5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil) -3-metil-isoxazol-4-il] -benzaldehído Se disolvieron 5- (2, -bis-benciloxi-5-cloro-fenil) -4-yodo-3-metil-isoxazol (200 mg, 0.38 mmol) , y ácido 3-formilbencenborónico (85 mg, 1.5 equiv.) en 12 mi de DMF antes de que se agregara una solución de carbonato ácido de sodio 1 M (1.1 mi, 3.0 equivalentes) y Pd(Ph3P)2Cl2 (21 mg, 0.08 equiv.) con agitación. La mezcla de reacción se transfirió a tres tubos para microondas que se sellaron, y las mezclas dentro se desgasificaron antes de ser irradiadas por una potencia inicial de 200 W a una temperatura de 150 °C por 15 minutos en un aparato de microondas CEM. Después de enfriar las mezclas de reacción se combinaron y se dividieron entre 10 mi de acetato de etilo y 10 mi de agua. La capa acuosa se separó y se extrajo nuevamente con 10 mi de acetato de etilo. Los materiales orgánicos se combinaron luego y se lavaron con 2 porciones de 20 mi de agua, con 20 mi de salmuera, se secaron con sulfato de sodio antes de que se condensaran a vacío y se purificaran mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice, eluyendo con 25% de acetato de etilo en hexano. LC S tR=9.06, MS m/z 510.4 [M+H] + Paso 5 4- {3- [5- (2#4-bis- enciloxi-5-cloro-fenil)-3-metil-isoxazol-4-il] -bencil}-morfolina El 3-[5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-3-metil-isoxazol-4-il] -benzaldehído (25 mg, 0.05 mmol) y 0.3 mi de morfolina se mezclaron con 0.5 mi de DCE en un tubo para microondas . Se agregó triacetoxiborohidruro de sodio (15 mg, 1.4 equiv.), el tubo se selló, y se introdujo la atmósfera de nitrógeno. Después de 1 hora más se agregaron 15 mg de triacetoxiborohidruro de sodio y la reacción se dejó agitar toda la noche. El análisis de TLC mostró gue la reacción no había ido hasta la terminación de modo que se agregó una gota de ácido acético y la reacción nuevamente se dejó en agitación toda la noche después de lo cual la reacción se apagó con 7 mi de una solución de carbonato ácido de sodio 1 M y se extrajo dentro de 5 mi de acetato de etilo. Éste se secó sobre sulfato de magnesio y el solvente se eliminó a vacío para proporcionar 13 mg del producto crudo como un polvo blanquecino el cual se llevó al paso de desprotección.
Paso 6 4-cloro-6- [3-metil-4-(3-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-5-il] -heneen-1,3-diol La 4-{3- [5- (2, ~bis-benciloxi-5-cloro-fenil) -3-metil-isoxazol-4-il] -bencil}-morfolina se desprotegió como se mostró previamente y el producto crudo se purificó mediante TLC preparativa eluyendo con 10% de etanol en diclorometano para proporcionar 0.6 mg (7% de rendimiento) del producto como un polvo blanco. LCMS tR=5.46, MS m/z 399.3 [M+H] + Ejemplo 28 tuvo actividad 'A' en el Ensayo Polarización de Fluorescencia, como se describe más adelante. E emplo 29 amida del ácido l-{3-[5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil)-3 metil-isoxazól-4-il] -bencil}-piperidin-4-carboxxlico Preparado utilizando un procedimiento similar al 4-cloro-6- [3-metil-4- (3-morfolin-4-ilmetil-fenil] -isoxazol-5-il] -bencen-1 , 3-diol excepto que la isonipecotamida reemplazó a la morfolina y el triacetoxiborohidruro de sodio (3 equivalentes) y el ácido acético (1 gota) fueron agregados inicialmente. La reacción se completó después de 18 horas y el producto crudo obtenido después del tratamiento fue llevado al paso de desprotección. Amida del ácido l-{3- [5- (5-cloro-2,4-dihidroxi-fenil) -3-metil-isoxazol-4-il] -bencil}-piperidina-4-carboxílico La amida del ácido l-{3- [5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil) -3-metil-isoxazol-4-il] -bencil}-piperidin-4-carboxílico se desprotegió como se mostró previamente y el producto crudo se purificó mediante TLC preparativa eluyendo con 10% de etanol en dielorómetaño para proporcionar 0.7 mg (3% de rendimiento) del producto como un polvo blanco. LCMS tR=5.36, MS m/z 442.3 [M+H] + El Ejemplo 29 tuvo actividad 'A' en el Ensayo de Polarización de Fluorescencia, como se describe más adelante. De una manera similar, se preparó el Ejemplo 30: Ensayo de Polarización de Fluorescenci Ejemplo 31 Esquema de reacción 8 : Paso 1 Etilamida del ácido 5- (2, -bis-benciloxi-5-cloro-fen.il) -4-yodo-isoxazol-3-carboxilico La etilamida del ácido 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil) -isoxazol-3-carboxílico (0.90 g, 1.94 mmol) , N-yodosuccinimida (0.44 g, 1 equiv.) y nitrato de amonio-cerio (IV) (0.53 g, 0.5 equiv.) se suspendieron en 55 mi de acetonitrilo antes de calentar a reflujo (baño de aceite a 100°C) después de lo cual la mezcla se volvió homogénea. Después de 18 horas la solución se enfrió y el solvente se eliminó a vacío para dar un aceite anaranjado espeso. Éste se dividió entre 25 mi de DCM y 10 mi de agua, la capa orgánica se mantuvo y se lavó con 2 porciones de 25 mi de salmuera antes de secar sobre sulfato de sodio. El DCM se eliminó a vacío para proporcionar 0.88 g (77% de rendimiento) del producto como un polvo de color anaranjado/tostado. LCMS tR=8.75, MS m/z 589.1 [M+H] + Paso 2 1- (3-bromo-fenil) -4-metil-piperazina Se agregaron 1, 3-dibromobenceno (0.90 mi, 7.49 mmol) , N-metilpiperazina (0.28 mi, 2.50 mmol) y 7 mi de tolueno anhidro mediante una jeringa a un matraz relleno con argón, seco. La solución se mezcló perfectamente antes de que se agregaran 47 mg de BINAP y 23 mg de Pd2dba3, y el matraz se rellenó con Argón y DBU (0.93 g, 2.5 eguiv. ) agregado por medio de una jeringa. La mezcla de reacción se calentó a 60°C antes de que se agregara terbutóxido de sodio recién triturado en una porción para comenzar la reacción. La reacción se dejó agitar a 60°C toda la noche y el análisis de TLC pareció mostrar que algo de la piperazina está todavía presente, de modo que la reacción se calentó a 100°C y se agitó por otras 24 horas después de lo cual ésta se dividió entre 20 mi de acetato de etilo y 20 mi de agua. La capa acuosa se extrajo nuevamente con acetato de etilo y los materiales orgánicos combinados se lavaron con 2 porciones de 10 mi de solución de HC1 1.6 M. La solución ácida que contenía el producto se alcalinizó luego primeramente con un volumen similar de solución de hidróxido de sodio 1 M a la solución ácida, y luego cuidadosamente se agregó carbonato ácido de sodio para llevar el pH a 8.5 antes de la extracción en 2 porciones de 15 mi de acetato de etilo, el cual se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó hasta sequedad para proporcionar 0.50 g (78% de rendimiento) del producto puro como un aceite amarillo. LCMS tR =4.55, MS m/z 255.4/257.3 [M+H]+ Paso 3 l-metil-4- [3- (4,4,5,5-tetrametil- [l#3/2]dioxaborolan-2-il)-fenil] -piperazina A una solución de PdCl2 (dppf) .DCM (10 mg, 0.012 mmol) en 4 mi de tolueno anhidro en un tubo para microondas sellado, relleno con argón, se agregó la 1- (3-bromo-fenil) -4-metil-piperazina (100 mg, 0.39 mol) , Et3N (0.11 mi, 2 equiv.), y 4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioxaborolano (0.09 mi, 1.5 equiv.). El tubo de microondas fue evacuado y rellenado con Argón antes de ser irradiado en un reactor de Microondas CEM a 100°C por 1 hora, utilizando tina potencia inicial de 200 W. La mezcla de reacción se dividió entre 6 mi de tolueno y 10 mi de agua, la capa orgánica se separó, se lavó con 10 mi de agua, se secó sobre sulfato de magnesio y luego se evaporó a vacío para dejar un residuo púrpura/café el cual se utilizó para el acoplamiento de suzuki sin purificación adicional. LCMS t= 0.97, MS m/z 303.5 [M+H] + Paso 4 Etilamida del ácido 5- (2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil) -4- [3- (4-metil-piperazin-l-il) -fenil] -isoxazol-3-carboxílico La etilamida del ácido 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil) -4-bromo-isoxazol-3-carboxilico (38 mg, 0.07 mmol) y la 1-metil-4- [3- (4, , 5, 5-tetrametil- [1, 3 , 2 ] dioxaborolan-2-il) -fenil] -piperazina (31 mg, 2 equiv. ) se acoplaron entre sí utilizando el método de suzuki previamente descrito para proporcionar 37 mg (83% de rendimiento) del producto crudo como un aceite café el cual se llevó al paso de desprotección. Paso 5 Etilamida del ácido 5- (5-cloro-2,4-dihidroxi-£enil) -4-[3- (4-metil-piperaziii-l-il) -fenil] -isoxazol-3-carboxílico La etilamida del ácido 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil) -4- [3- (4-metil-piperazin-l-il) -fenil] -isoxazol-3-carboxílico se desprotegió como se mostró previamente. El precipitado formado durante la reacción se separó, se dividió entre acetato de etilo y agua. La capa acuosa se mantuvo, se alcalinizó utilizando carbonato ácido de sodio sólido y el producto se extrajo utilizando 2 porciones de 10 mi de acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con 10 mi de salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a vacío para proporcionar 5.2 mg (20% de rendimiento) del producto como un polvo de color tostado. LCMS tR = 5.58, MS m/z 457.3 [M+H] + 5n (d-MeOH) , 7.17 (1H, m, Ar-H), 7.09 (1H, s, Ar-HJ , 6.94 (1H, m, Ar-H), 6.80 (1H, m, Ar-H), 6.49 (1H, s, Ar-H), 3.13 (4H, t, NC¾CH2N-CH3) , 2.69 (2H, q, CONHCH2C¾) , 2.61 (4H, t, NC¾CH2N-CH3) , 2.37 (3H, s, NCH2CH2N-C¾) , 1.19 (3H, t, CONHO¾CH3) . El Ejemplo 31 tuvo actividad 'A' en el Ensayo de Polarización de Fluorescencia, como se describe más adelante. Los Ejemplos 32-38 en la Tabla siguiente fueron preparados similarmente, pero con las siguientes variaciones: 1. Para el Ejemplo 36, se preparó el intermediario de dioxaborolano como sigue: Esquema de reacción Paso 1 1- (4-bromo-fenil) -4-metil-piperazina La 1- (4-bromo-fenil) -piperazina (1 g, 4.1 mmol) y carbonato de potasio (1.8 g, 3 eq. ) en 15 mi de DMF tratado con yoduro de metilo (250 µ?, 1.1 equiv. ) , la solución se agitó a temperatura ambiente toda la noche. La reacción se apagó con 10 mi de agua desionizada, se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con carbonato ácido de sodio para eliminar cualquier impureza desmetilada, se secó y el solvente se eliminó para dar la 1- (4-bromo-fenil) -4-metil-piperazina con rendimiento de 73%. Tiempo de retención por LC 2.21 minutos [M+H] + 256. (Tiempo de corrida 3.75 minutos). Paso 2 l-metil-4- [4- (4, 4, 5, 5-tetrametil- [1, 3, 2]dioxaborolan-2-il) -fenil] -piperazina La 1- (4-bromo-fenil) -4-metil-piperazina (750 mg, 3 mmol) en 15 mi de DMSO con bis (pinacolato) diborano (1.1 g, 1.5 equivalente) y acetato de potasio (900 mg; 3 equivalentes) . La suspensión se desgasificó antes del tratamiento con PdCl2 (dppf) (catalítico), se agitó a 80°C. Se agregó bis (pinacolato) diborano adicional (1 eq. ) después de 3 horas, se agitó por 2 horas más . La suspensión se dividió entre acetato de etilo y agua. La purificación mediante cromatografía en columna con un gradiente de 0 a 8% de metanol en diclorometano dio la l-metil-4- [4- (4, 4, 5, 5-tetrametil-[1 , 3 , 2] dioxaborolan-2-il) -fenil] -piperazina con un rendimiento de 62%. Tiempo de retención por LC 1.83 minutos [M+]+ 303. (Tiempo de corrida 3.75 minutos) . 2. Para los Ejemplos 37 y 38, se utilizó un intermediario de ácido borónico en vez de un dioxaborolano, siendo el primero preparado como sigue : Ácido 4- [ (2-metilsulfonil) -etilaminometil] -fenil-borónico (Intermediario para el Ejemplo 37) El clorhidrato del ácido 4-aminometil-fenil-borónico (560 mg, 3 mmol) en 5 mi de etanol se trató con metilvinilsulfona (260 µ?, 1 equiv.) y trietilamina (1.2 mi, 3 equivalentes). La solución se agitó a 100°C por 2 horas. El etanol se eliminó a vacío, se dividió en agua y butanol para dar el ácido 4- [ (2-metilsulfonil) -etilaminometil] -fenil-borónico con un rendimiento de 94%. Tiempo de retención por LC 0.39 minutos [M+H]+ 258. (Tiempo de corrida 3.75 minutos).
Acido 4- [N-metil-S, S-dioxo-tiomorfolino] -fenil-borónico (Intermediario para el Ejemplo 38) El clorhidrato del ácido 4-aminometil-fenil-borónico (456 mg, 2.4 mmol) en 8 mi de etanol se trató con vinilsulfona (244 µ?, 1 equiv. ) y trietilamina (2 equivalentes), la solución se agitó a 100°C por' 3 horas. El etanol se eliminó a vacío, se dividió en agua y el butanol para dar el producto con un rendimiento de 88%. Tiempo de retención por LC 1.65 minutos [M+H] + 270. (Tiempo de corrido 8 minutos) .
Ejemplo 39 Esquema 9 : Paso 1 Etilamida del ácido 5- (2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil) -4- (3-cloro-fenil) -isoxazol-3-carboxílico La etilamida del ácido 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil) -4-bromo-isoxazol-3-carboxílico (60 mg, 0.11 mmol) , y ácido 3-clorobenceriborónico (23 mg, 1.3 e uiv.) se acoplaron entre sí utilizando el método de suzuki previamente descrito para proporcionar 35 mg (35% de rendimiento) del producto crudo como un polvo café el cual se llevó al siguiente paso. Paso [5- (2, 4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil) -4- (3-cloro-fenil) -isoxazol-3-ilmetil] -etil-amina A una solución de la etilamida del ácido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil) -4- (3-cloro-fenil) -isoxazol-3-carboxílico (36 mg, 0.06 mmol) en THF anhidro bajo atmósfera de argón se agregó 1 mi del complejo de borano de THF 1 M y la solución se calentó a reflujo toda la noche. Después del enfriamiento, la solución se vació sobre una columna Isolute® SPE Flash SCX-2, de 5 g, la cual se eluyó rápidamente con 2 porciones de 20 mi de metanol. El producto deseado se recuperó luego mediante elución con una mezcla de 10% de amoniaco en 2 porciones de 10 mi de metanol que se evaporó a vacío para proporcionar 23 mg (rendimiento de 65%) de un polvo amarillo claro. LCMS (LCT) tR = 8.18, MS m/z 558.8 [M+H]+ El Ejemplo 39 tuvo actividad 'A' en el Ensayo de Polarización de Fluorescencia como se describe más adelante. El Ejemplo 40 fue similarmente preparado: * Ensayo de Polarización de Fluorescencia Ejemplo 41 Esquema 10: Paso 1 Etilamida del ácido 5- (2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil) -4- (4-formil-fenil) -isoxazol-3-carboxxlico La etilamida del ácido 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil) -4-yodo-isoxazol-3-carboxílico (preparada como para el Ejemplo 31) (2 g, 3.4 mmol) , ácido 4-for ilborónico (0.612 g, 4.08 mmol), NaHC03 (10.2 mi, solución acuosa 1 M, 10.2 mmol), PdCl2 (??¾) 2 (119 mg, 0.17 mmol) y 50 mi de DMF se combinaron. La mezcla se desgasificó luego mediante burbujeo de nitrógeno a través de ésta por 5 minutos antes de ser calentada a 80°C por 1 hora. La mezcla se evaporó luego a vacío y se dividió entre 3 porciones de 50 mi de acetato de etilo y 50 mi de agua. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio y luego se evaporaron a vacío para dar un aceite crudo. Éste se disolvió en acetato de etilo y se hizo pasar a través de un tapón de sílice, lavando a través de éste con acetato de etilo. El filtrado se evaporó a vacío y el aceite resultante se trituró con éter dietílico para proporcionar la etilamida del ácido 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil) -4- (4-formil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico (1.577 g, 82%) como un sólido de color pálido, LC/MS: T = 2.908 minutos. 567.3 (MH+) . Paso 2 Etilamida del ácido 5- (2, 4-bis-benciloxi-5-cloro-fen.il) -4- (4- morfolin-4-ilmetil-fen.il) -isoxazol-3-carboxílico Se agregó gota a gota ácido acético (0.37 mi, 6.44 mmol) a una mezcla de etilamida del ácido 5-(2,4-bis- benciloxi-5-cloro-fenil) -4- (4-formil-fenil) -isoxazol-3- carboxílico (730 mg, 1.29 mmol), morfolina (0.225 mi, 2.58 mmol) , 730 mg de tamices moleculares en polvo de 3Á y 21 mi de metanol . Éste se dejó agitar toda la noche bajo atmósfera de nitrógeno. La mezcla se evaporó luego a vacío y el crudo resultante se dividió entre 3 porciones de 40 mi de cloruro de metileno y 40 mi de solución saturada de carbonato ácido de sodio. Extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio y se evaporaron a vacío para dar 810 mg de la etilamida del ácido 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil) -4- (4- morfolin-4-ilmetil-fenil ) -isoxazol-3-carboxílico como un sólido amarillo, LC/ S: RT = 2.365 minutos. 638.4 (MH+) .
Paso 3 Etilamida del ácido 5- (5-cloro-2,4-dihidroxi-fenil) -4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico Se agregó gota a gota BC13 (solución 1 en CH2C13, 3.87 mi, 3.87 mmol) a una solución de la etilamida del ácido 5- (2 , -bis-benciloxi-5-cloro-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico (810 mg, aproximadamente 1.29 mmol) en 30 mi de cloruro de metileno a 0°C. La reacción se dejó luego alcanzar la temperatura ambiente. Se agregaron luego lentamente 40 mi de carbonato ácido de sodio acuoso saturado y la mezcla resultante se concentró a vacío. Ésta se dividió luego entre 3 porciones de 50 mi de acetato de etilo y 50 mi de agua. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio y luego se evaporaron a vacío. La cromatografía instantánea eluyendo con cloruro de metileno-10% de metanol/1% de H3/cloruro de metileno proporcionó la etilamida del ácido 5- (5-cloro-2 , 4-dihidroxi-fenil ) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico (380 mg, 64% en 2 pasos) como una espuma amarilla, LC/MS: RT = 1.751 minutos. 458.2 (MH+) . El Ejemplo 41 tuvo actividad 'A' en el Ensayo de Polarización de Fluorescencia como se describe más adelante. En la siguiente Tabla, fueron preparados los Ejemplos 42-64 mediante los métodos análogos al Ejemplo 41, utilizando el aldehido o cetona apropiados .
• * Ensayo de Polarización de Fluorescencia • ** preparado a partir del material inicial de etilresorcinol Se prepararon los compuestos adicionales mediante métodos análogos al Ejemplo 41: preparado a partir del material inici etilresorcinol • *** preparado mediante reducción del intermediario aldehido • **** preparado mediante alguilación del fenol i termediario . ***** preparado a partir del naftil-aldehido Ejemplo 65 Esquema de Reacción: Paso 1 1- (2,4-bis-benciloxi-fenil) -etanona 35 g de 2 , 4-dihidroxiacetofenona (0.230 mol, 1 eq. ) se disolvieron en 500 mi de acetonitrilo . Se agregaron 79.5 g de carbonato de potasio (0.575 mol, 2.5 eq. ) y 86.6 g de bromuro de bencilo (0.506 mol, 2.2 eq.). La mezcla se calentó a reflujo por 64 horas, se enfrió y el acetonitrilo se eliminó bajo presión reducida. El residuo se separó entre agua y acetato de etilo. El residuo fue principalmente resorcinol monobencilado . 43 g del producto crudo se disolvieron luego en 250 mi de dimetilformamida . Se agregaron carbonato de potasio (29 g, 0.210 mol, 1.2 eq. ) y 25 mi de bromuro de bencilo (0.210 mol, 1.2 eq. ) y la mezcla se agitó toda la noche. El solvente se eliminó bajo presión reducida y el residuo se separó entre acetato de etilo y agua. Después de la eliminación del solvente, el residuo se trituró con hexano para eliminar el bromuro de bencilo en exceso . LC-MS [M+H]+ = 333 Rendimiento: 51.2 g (67%) Paso 2 1- (2 4-bis-benciloxi-5-bromo-fenil) -etanona 51.2 g de 1- (2 , 4-bis-benciloxi-fenil) -etanona (0.154 mol, 1 eq. ) se disolvieron en 250 mi de DMF. Se agregaron gota a gota 27.42 g de N-bromosuccinimida (0.154 mol, 1 eq. ) en 100 mi de DMF. La mezcla se agitó a temperatura ambiente toda la noche. La mezcla de reacción se vació sobre 700 mi de agua y el precipitado se filtró. La torta de filtro prensa se enjuagó con agua y el sólido incoloro se recristalizó a partir de 370 mi de acetonitrilo .. LC-MS [M+H]+ = 411 y 413 Rendimiento: 58.15 g (92%) Paso 3 Ester etílico del ácido 4- (2, -bis-benciloxi-5-bromo-fenil) -2 , 4-dioxo-butírico Se disolvieron 9.75 g de sodio (0.424 mol, 3 eq. ) en 500 mi de etanol absoluto (1.5 horas) . Se agregaron 58 g de 1-(2 , 4-bis-benciloxi-5-bromo-fenil) -etanona (0.141 mol, 1 eq. ) y 30.98 g de oxalato de dietilo (0.212 mol, 1.5 eq.) y la mezcla se calentó a reflujo por 2 horas. Después del enfriamiento, la mezcla se vació sobre 220 mi de HCl acuoso 2 N y el producto se extrajo en 700 mi de diclorometano . El solvente se eliminó bajo presión reducida y el residuo amarillo se trituró con 150 mi de éter dietilico. Rendimiento: 69.24 g (96%) RMN ¾ (400 MHz, CDC13) d 1.27 (t, 3H) , 4.27 (g, 2H) , 5.13 (d, 2H) , 6.54 (s, 1H) , 7.37 (m, 10H) , 8.17 (s, 1H) . Paso 4 Éster etílico del ácido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-bromo-fenil)-isoxazol-3-carboxílico 69.3 g del éster etílico del ácido 4-(2,4-bis-benciloxi-5-bromo-fenil)-2,4-dioxo-butírico (0.135 mol, 1 eq.) se disolvieron en 750 mi de etanol . Se agregaron 14.11 g de clorhidrato de hidroxilamina (0.203 mol, 1.5 eq. ) . La mezcla se calentó a reflujo por 2.5 horas y se enfrió. Ésta se vació luego sobre 1000 mi de agua, el precipitado se filtró. La torta de filtro prensa se lavó con 500 mi de agua seguido por 75 mi de éter dietilico y se secó. Rendimiento: 67.62 g (99%) RMN ½ (400 MHz, CDC13) d 1.39 (t, 3H) , 4.41 (q, 2H) , 5.11 (d, 2H) , 5.15 (d, 2H) , 6.58 (s, 1H) , 6.99 (s, 1H) , 7.35 (m, 10H) , 8.16 (s, 1H) . Paso 5 Etilamida del ácido 5- (2,4-bis-benciloxi-5-bromo-fenil) -isoxazol-3-carboxílico El éster etílico del ácido 5- (2 , -bis-benciloxi-5-bromo-fenil) -isoxazol-3-carboxílico se suspendió en etanol y etilamina (2 M en metanol, 3 eq. ) , la suspensión amarillo resultante se calentó a reflujo (80°C) bajo atmósfera de nitrógeno, punto en el cual los reactivos entraron en solución. Ésta se calentó por 14 horas, luego se dejó enfriar hasta la temperatura ambiente. Se formó un precipitado blanco, el cual se filtró y se lavó con etanol adicional antes de ser secado a vacío. Tiempo de retención por LC-MS 2.868 minutos [M+H]+ = 507 y 509 (tiempo de corrida 3.75 minutos) Paso 6 Etilamida del ácido 5- (2,4-bis-benciloxi-5-estirilfenil) -isoxazol-3-carboxílico A una mezcla de ácido trans-2-fenilvinilborónico (0.472 g, 3.2 mmol) y etilamida del ácido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-bromofenil) -isoxazol-3-carboxilico (1.079 g, 2.13 mmol) se agregó carbonato ácido de sodio (536 mg, 6.39 mmol) seguido por 25 mi de DMF y 5 mi de agua. La mezcla se desgasificó mediante evacuación e inundación con nitrógeno (tres veces) , seguido por burbujeo de gas nitrógeno a través de la mezcla por cinco minutos . Se agregó luego diclorobis (trifenilfosfina)paladio (II) (149 mg, 0.21 mmol) y la mezcla de reacción se calentó bajo una atmósfera de nitrógeno a 80°C por siete horas (la mezcla de reacción se vuelve café oscuro después de 10 minutos) . La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y la mayor parte de los solventes se eliminaron a vacio. El residuo resultante se dividió entre 100 mi de acetato de etilo y 100 mi de agua, y esta mezcla se filtró a través de un lecho de celite para eliminar los residuos de Paladio. Las fases se separaron y la fase orgánica se lavó con 2 porciones de 50 mi de agua, con 100 mi de solución acuosa saturada de cloruro de sodio y luego se secó sobre sulfato de sodio. La mezcla se filtró y los solventes del filtrado se eliminaron a vacío para proporcionar 800 mg de un sólido café. La torta de filtro prensa de celite se lavó con diclorometano y luego se secó sobre sulfato de sodio . La mezcla se filtró y los solventes filtrados se eliminaron a vacío para proporcionar 541 mg de un sólido café. Los lotes del producto combinados fueron purificados mediante trituración con una mezcla de acetato de etilo-hexano . Esto proporcionó la etilamida del ácido 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-estirilfenil ) -isoxazol-3-carboxilico como un sólido café claro (808 mg, 71%). LCMS: [m+H] + 531. R N XH (400 Hz, CDC13) d 1.12 (t, 3H) , 3.37' (m, 2H) , 4.95 (s, 2H) , 5.07 (s, 2H) , 6.46 (s, 1H) , 6.70 (t amplio, 1H) , 7.11 (s, 1H) , 7.17 (d, 1H) , 7.23 (d, 1H) , 7.32-7.44 (m, 15 H) , 8.09 (s, 1H) . Paso 7 Etilamida del ácido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-£enetilfenil)-isoxazol-3-carboxílico Se agregó catalizador de paladio sobre carbón mineral (10%; 50 mg) a una solución desgasificada de etilamida del ácido 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-estirilfenil) -isoxazol-3-carboxílico (690 mg, 1.30 mmol) en 50 mi de 1,4-dioxano bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se hidrogenó por un total de 4.75 horas con 50 mg adicionales de catalizador de paladio sobre carbón mineral, agregado a las 0.75 y 2.5 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de celite, el cual se lavó con 20 mi de 1,4-dioxano y 20 mi de diclorometano . Los solventes filtrados combinados se eliminaron a vacío para proporcionar un sólido de color crema, el cual se purificó mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (20 g, IST) , eluyendo con 10 a 50% de acetato de etilo en hexano. Esto proporcionó la etilamida del ácido 5-(2 , 4-bis-benciloxi-5-fenetiletil) -isoxazol-3-carboxílico como un sólido amarillo pálido (609 mg, 88%). LCMS: [M+H]+ 533. KMN ¾ (400 MHz , CDC13) d 1.26 (t, 3H) , 2.86-2.96 (m, 4H) , 3.49 (m, 2H) , 5.03 (s, 2H) , 5.18 (s, 2H) , 6.56 (s, 1H) , 6.81 (t, 1H) , 7.07 (s, 1H) , 7.15-7.20 (m, 3H) , 7.23-7.28 (m, 2H) , 7.31-7.42 (m, 10H) , 7.73 (s, 1H) . Paso 8 Etilamida del ácido 5- (2# 4-bis-benciloxi-5-fenetilfenil) -4-bromo-isoxazol-3-carboxílico Se agregó N-bromosuccinimida (207 mg, 1.16 mmol) a una suspensión de etilamida del ácido 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-fenetilfenil) -isoxazol-3-carboxílico (564 mg, 1.06 mmol) en 20 mi de acetonitrilo. Se agregó nitrato cérico de amonio (290 mg, 0.53 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a reflujo (proporcionando una solución anaranjada homogénea) y se agitó por 30 minutos. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y el acetonitrilo se eliminó a vacío. El residuo se dividió entre 50 mi de acetato de etilo y 50 mi de agua y las fases se separaron. La fase orgánica se lavó con 50 mi de solución acuosa saturada de cloruro de sodio y se secó sobre sulfato de sodio. La mezcla se filtró y los solventes del filtrado se eliminaron a vacío para proporcionar un aceite amarillo el cual se purificó mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (20 g, IST) eluyendo con 10 a 30% de acetato de etilo en hexano. Esto proporcionó la etilamida del ácido 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-fenetilfenil) -4-bromo-isoxazol-3-carboxílico como un aceite amarillo (326 mg, 53%). LCMS: [M+H] + 613, 611. Paso 9 Etilamida del ácido 5- (2,4-bis-benciloxi-5-fenetil-fenil) -4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxilico A una mezcla de 4-morfolin-4-ilmetil-fenil-pinacol-borano (0.215 g, 0.71 mmol) y la etilamida del ácido 5- (2, 4-bis-benciloxi-5-fenetilfenil) -4-bromo-isoxazol-3-carboxílico (0.347 g, 0.57 mmol) se agregó carbonato ácido de sodio (142 mg, 1.69 mmol) seguido por 10 mi de DMF y 2.0 mi de agua. La mezcla se desgasificó mediante evacuación e inundación con nitrógeno (tres veces) , seguido por burbu eo de gas nitrógeno a través de la mezcla por cinco minutos . Se agregó diclorobis (trifenilfosfina)paladio (II) (40 mg, 0.057 mmol) y la mezcla de reacción se calentó bajo una atmósfera de nitrógeno a 80°C por 5 horas (la mezcla de reacción se vuelve de color café oscuro). Se agregaron otros 20 mg (0.029 mmol) de diclorobis (trifenilfosfina)paladio (II) y la mezcla de reacción se calentó a 80°C por 15 horas, y luego se dejó enfriar hasta la temperatura ambiente. La mayor parte de los solventes se eliminaron a vacío y el residuo se dividió entre 50 mi de acetato de etilo y 50 mi de agua. Esta mezcla se filtró a través de un lecho de celite para eliminar los residuos de paladio y luego las fases se separaron y la fase orgánica se lavó con 2 porciones de 50 mi de agua, 50 mi de solución acuosa saturada de cloruro de sodio luego se secó sobre sulfato de sodio. La mezcla se filtró y los solventes del filtrado se eliminaron a vacío para proporcionar un aceite café. El producto de reacción crudo se purificó mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (20 g, ST) eluyendo con un gradiente de solvente de 30 a 70% de acetato de etilo en hexano . Esto proporcionó la etilamida del ácido 5- (2, -bis-benciloxi-5-fenetil-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico como un aceite amarillo (0.110 g, 27%). LCMS: [M+H] + 708.
Paso 10 Clorhidrato de la etilamida del ácido 5- (2#4-dihidroxi-5-fenetil-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico A una solución enfriada en un baño de hielo de la etilamida del ácido 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-fenetil-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico (0.109 g, 0.15 mmol) en 4 mi de diclorometano bajo una atmósfera de nitrógeno se agregó una solución 1.0 M de tricloruro de boro en diclorometano (0.45 mi; 0.45 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 0°C por 20 minutos y luego a temperatura ambiente por 3.5 horas. La mezcla de reacción se volvió a enfriar a 0°C y se apagó por la adición de 5 mi de una solución acuosa saturada de carbonato ácido de sodio. Después de agitar por 5 minutos el diclorometano se eliminó a vacío y el residuo se dividió entre 20 mi de acetato de etilo y 20 mi de agua. Las fases se separaron y la fase orgánica se lavó con 20 mi de agua, con 20 mi de una solución acuosa saturada de cloruro de sodio y luego se secó sobre sulfato de sodio. La mezcla se filtró y los solventes del filtrado se eliminaron a vacío para proporcionar un aceite café claro que se purificó mediante adsorción sobre gel de sílice y luego cromatografía instantánea sobre gel de sílice (10 g, IST) eluyendo con 0 a 5% de metanol en acetato de etilo. Esto proporcionó un aceite incoloro el cual se trituró con HC1 1.0 M en 5 mi de una solución de éter dietílico para proporcionar el clorhidrato de la etilamida del ácido 5- (2 , 4-dihidroxi-5-fenetil-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico (0.019 g; 24%). LCMS: [M+H] + 528. RMN ½ (400 MHz, d6-DMSO) d 1.08 (t, 3H) , 2 . 60 (m, 4H) , 2.90-3.30 (m, 6H) , 3.67 (m, 2H) , 3.87 (m, 2H) , 4.30 (s, 2H) , 6.46 (s, 1H) , 6.84 (s, 1H) , 7.05-7.49 (m, 5H) , 7.40-7.68 (m, 4H) , 8.90 (s amplio, 1), 9.67 (s, 1H) , 9.89 (s, 1H) , 10.75 (s amplio, 1H) . El Ejemplo 65 tuvo actividad 'A' en el Ensayo de Polarización de Fluorescencia, como se describe más adelante. Los ejemplos en la siguiente Tabla fueron preparados mediante métodos análogos al Ejemplo 64, y tuvieron las actividades mostradas en el Ensayo de Polarización de Fluorescencia como se describe más adelante.
Los Ejemplos adicionales 75a-v en la siguiente tabla fueron también preparados mediante métodos análogos al Ejemplo Hsp90 Ejemplo Estructura MH+ IC50 F 75r 504 A OH O-N 75s 527 A OH O-N H 75t 500 A OH O-N Ejemplo 76 Esquema de Reacción (2, 4-bis-benciloxi-5-bromo-fenil) -4- ( -ntetoxi-fenil) nteti1-isoxazol Se agregó trifluoruro de trimetiloxonio-boro (Aldrich; 70 mg, 0.47 mmol) a una solución agitada de 5-(2,4-bis-benciloxi-5-bromo-fenil) -4- (4-metoxi-fenil) -3-metil-isoxazol (Ejemplo 3, Paso 1) (120 mg, 0.22 mmol) en 3 mi de diclorometano y la agitación se continuó por 3 horas . La mezcla resultante se concentró a vacío para dejar un semisólido blanco, el cual se mezcló con clorhidrato de hidroxilamina (70 mg, 1.0 mmol), carbonato de potasio (120 mg, 0.87 mmol) y 2 mi de metanol, y se calentó a reflujo por 18 horas. La mezcla de reacción se dividió entre 20 mi de agua y 2 porciones de 10 mi de acetato de etilo, y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro y se evaporaron a vacío para dejar un aceite incoloro. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna, 10 g de sílice, eluyendo con hexano, seguido por éter dietílico/hexano (1:1), para dar el 3- (2 , 4-bis-benciloxi-5-bromo-fenil ) -4- (4-metoxi-fenil) -5-metil-isoxazol como un sólido blanco (44 mg, 37%) Tiempo de retención por LC 5.55 minutos [M+H]+ 556.0 y 558.0 (Tiempo de corrida 8.00 minutos) RM (Cloroformo-d) 7.64 (s ArJT) 7.356.76 (m 14 ArJT) 6.34 (sAríT) 4.90 (s 2C¾) 4.60 (s 2C¾) 3.79 (s 3C¾) 2.46 (s 3CH3) Paso 2 -bromo-6- [4- (4-metoxi-fenil) -5-metil-isoxazol-3-il] -bencen- Se agregó una solución de tricloruro de boro (1 M en diclorómetaño, 1 mi, 1 mmol) a una solución de 3-(2,4-bis-benciloxi-5-bromo-fenil) -4- (4-metoxi-fenil ) -5-metil-isozaxol (38 mg, 0.068 mmol) en 1 mi de diclorometano, y la agitación se continuó por 1 hora. La mezcla de reacción se dividió entre 20 mi de agua y 2 porciones de 20 mi de diclorometano y las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentraron a vacío para dejar un aceite café. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna, 10 g de sílice, eluyendo con hexano, seguido por hexano/éter dietílico (3:1 luego 1:1) para dar el 4-bromo-6- [4- (4-metoxi-fenil) -5-metil-isoxazol-3-il] -bencen-1,3-diol como un aceite incoloro (11 mg, 43%). Tiempo de retención por LC 2.52 minutos [M+H]+ 376.1 y 378.1 (Tiempo de corrida 3.75 minutos) RMN (DMSO-d6) 10.40 (s OH) 9.69 (s OH) 7.22 (ArH) 7.10-6.89 (m 4ArH) 6.5 (s ArH) 3.7 (s OCH3) 2.46 (s CH3) Este compuesto tuvo actividad ??' en el ensayo de polarización de fluorescencia de HSP90. Ejemplo 76A El siguiente compuesto es corriereialmente disponible (Interbioscreen) y tuvo actividad WB" en el ensayo de polarización de fluorescencia: Los siguientes compuestos fueron elaborados acuerdo al E emplo 76: Ejemplo 77 Preparación de la etilamida del ácido 5-(5-ter-butil-2 , -di idroxi-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxilico Esquema de Reacción: Paso 1 1- (5-ter-butil-2, 4-dihidroxi-fenil) -etanona Se agregó ácido sulfúrico (4 mi, 75 mol) a una suspensión de 2 , 4-dihidroxiacetofenona (22.8 g, 150 mmol) en una mezcla de 2-metil-2-propanol (35 g, 470 mmol) y 80 mi de ácido trifluoroacético, bajo una atmósfera de nitrógeno. La suspensión resultante se calentó, la temperatura del baño de aceite fue de 75 °C por aproximadamente 3 horas, para dar una solución rojo pálido. La solución resultante se dejó enfriar y se vació en 350 mi de hielo/agua, para dar un precipitado rosa pálido. Los sólidos se eliminaron mediante filtración y se lavaron con 600 mi de agua y 200 mi de hexano para dar un polvo rosa pálido. Se secó a vacio (40°C) , para dar l-(5-ter-butil-2 , 4-dihidroxi-fenil) -etanona como un polvo anaranjado pálido (28.8 g, 92%) . Tiempo de retención 2.74 minutos [M+H]+ 209.1. (Tiempo de corrida 3.75 minutos) RMN (Cloroformo-d) 7.35 (s, ArH) 6.05 (s ArH) 7.35 (m 2ArH) 2.35 (s 3CH3) 1.15 (s 9 C¾) Paso 2 1- (2,4-bis-benciloxi-5-ter-butil-fenil) -etanona Se agregó bromuro de bencilo (10 mi, 84 mmol) a una solución de la acetofenona (13.5 g, 65 mmol) en 50 mi de DMF, se agregó carbonato de potasio (20 g, 145 mmol) y la suspensión se agitó a temperatura ambiente por aproximadamente 4 horas. La suspensión resultante se vació en 200 mi de agua para dar un precipitado anaranjado pálido. Los sólidos se eliminaron mediante filtración y se lavaron con agua. Los sólidos se recogieron en 150 mi de diclorometano y la solución se lavó con 2 x 100 mi de agua y 100 mi de solución acuosa saturada de cloruro de sodio. La solución se agitó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró hasta obtener un aceite rojo pálido. El aceite se recogió en 100 mi de 2-metil-2-propanol y se agregó ter-butóxido de potasio (7.6 g, 67 mmol) , para dar un precipitado amarillo pálido, se agregó bromuro de bencilo (8 mi, 67 mmol) y la mezcla se calentó a reflujo por aproximadamente 1 hora. La suspensión resultante se dejó enfriar y se vació en 250 mi de agua, para dar un precipitado anaranjado pálido. Los sólidos se eliminaron mediante filtración y se lavaron con agua. Los sólidos se recogieron en 150 mi de acetato de etilo y se lavaron con 2 porciones de 200 mi de agua y 100 mi de solución acuosa saturada de cloruro de sodio . La solución se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró hasta obtener un semi-sólido anaranjado, la trituración con metanol dio un sólido rosa pálido. Los sólidos fueron removidos mediante filtración y secados a vacío a 40°C para dar la 1- (2 , 4-bis-benciloxi-5-ter-butil-fenil) -etanona como un polvo rosa pálido (9.1 g, 36%) . Tiempo de retención por LC 3.03 minutos [M+H]+ 389.3 (Tiempo de corrida 3.75 minutos) RMN (cloroformo-d) 7.65 (s ArH) 7.25-7.15 (m lOArH) 6.35 (s ArH) 4.95 (s 2CH2) 4.9 (s 2CH2) , 2.4 (s 3C¾) 1.2 (s 9CH3) .
Paso 3 Ester etílico del ácido 4- (2, 4-bis-benciloxi-5-ter-butil-fenil) -2-hidroxi-4-oxo-but-2-enoico agregó etóxido de sodio (2.8 g, 41 mmol) a una suspensión de la 1- (2 , 4-bis-benciloxi-5-ter-butil-fenil) -etanona (7.8 g, 20 mmol) en 40 mi de etanol . Se agregó oxalato de dietilo (4 mi, 29.5 mmol) y la suspensión resultante se calentó a reflujo por aproximadamente 2 horas para dar una solución rojo pálido. La solución se dejó enfriar y se vació en 200 mi de agua, la mezcla se acidificó con ácido clorhídrico (50 mi, 1M) y se extrajo con 150 mi de diclorometano . Los extractos se lavaron con 2 porciones de 200 mi de agua y 100 mi de solución acuosa saturada de cloruro de sodio. La solución se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró hasta obtener una goma amarilla. La trituración con hexano dio un sólido amarillo. Los sólidos se retiraron mediante filtración y se lavaron con hexano y se secaron a vacío a 40°C, para dar el áster etílico del ácido 4-(2,4-bis-benciloxi-5-ter-butil-fenil) -2-hidroxi-4-oxo-but-2-enoico como un polvo amarillo (9.1 g, 93%) . RM (cloroformo-d) 8.0 (s ArH) 7.5-7.35 (m HArH) 6.6 (s ArH) 5.2 (s 2CH2) 5.15 (s 2CH2) , 4.3 (q J 7.1Hz 2C¾) 1.4 (s 9CH3) 1.25 (t J 7.1Hz 3C¾) . Paso 4 Ester etílico del ácido 5- (2,4-bis-benciloxi-5-ter-butil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico Se agregó ciuruiuicitü ue nidroxilamina (3.6 g, 52 rnmol) a una solución del éster etílico del ácido 4-{2,4-bis-benciloxi-5-ter-butil-fenil) -2-hidroxi-4-oxo-but-2-enoico (9.0 g, 18.5 rnmol) en 75 mi de etanol y la suspensión se calentó a reflujo por aproximadamente 4 horas. La solución resultante se dejó enfriar y se vació en 200 mi de agua para dar un precipitado blanquecino. Los sólidos se eliminaron mediante filtración y se recogieron en 150 mi de diclorometano. La solución se lavó con 150 mi de agua y 50 mi de solución acuosa saturada de cloruro de sodio. La solución se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró para obtener un sólido blanquecino. Los sólidos se lavaron con hexano y se secaron a vacío a 40°C, para dar el éster etílico del ácido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-ter-butil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico como un polvo café pálido (8.0 g, 89%). Tiempo de retención por LC 3.13 minutos [M+H]+ 486.5 (Tiempo de corrida 3.75 minutos) RN (cloroformo-d) 7.85 (s ArH) 7.4-7.25 (m lOArH) 6.9 (s ArH) 6.5 (s ArH) 5.1 (s 2C¾) 5.0 (s 2C¾) , 4.35 (q J 7.1Hz 2C¾) 1.4 (s 9C¾) 1.35 (t J 7.1Hz 3C¾) . Paso 5 Etilamida del ácido 5- (2#4-bis-benciloxi-5-ter-butil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico El éster etílico del ácido 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-ter-butil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico (10.0 g, 20.6 mmol) se agregó a una solución de etilamina en metanol (60 mi, 2.0M) y la suspensión se calentó en un baño de aceite a temperatura de 75°C, por aproximadamente 2 horas. La solución resultante se dejó enfriar y se concentró hasta obtener un aceite café pálido, se agregaron 150 mi de diclorometano y la solución se lavó con 100 mi de agua y 75 mi de solución acuosa saturada de cloruro de sodio . La solución se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró hasta obtener un aceite café, el cual solidificó con el reposo (9.0 g, aproximadamente cuantitativo) . Tiempo de retención por LC 3.02 minutos [M+H]+ 485.3 (Tiempo de corrida 3.75 minutos) RM (cloroformo-d) 7.8 (s ArH) 7.4-7.2 (m 10ArH) 7.0 (s ArH) 6.75 (t amplio J 5.4Hz NH) , 6.5 (s ArH) 5.1 (s 2CH2) , 5.0 (s 2CH2) 3.4 (dq J 5.4Hz 7.1Hz 2CH2) 1.35 (s 9CH3) 1.15 (t J 7.1Hz 3CH3) . Paso 6 Etilamida del ácido 5- (2,4-bis-benciloxi-5-ter-butil-fenil) -4-yodo-isoxazol-3-carboxílicp Se agregó N-yodosuccinimida (9.0 g, 40 mmol) a una suspensión de la etilamida del ácido 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-ter-butil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico (9.9 g, 20.4 mmol) en 60 mi de acetonitrilo . Se agregó nitrato cérico de amonio (0.25 g, 0.46 mmol) y la suspensión se agitó por ~ 18 horas. La suspensión resultante se concentró y el residuo se recogió en 125 mi de diclorometano . La solución resultante se lavó con solución acuosa de metabisulfito de sodio (2 x 100 mi, 5%), 100 mi de agua y 100 mi de solución acuosa saturada de cloruro de sodio de solución acuosa saturada de cloruro de sodio. La solución se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró hasta obtener una goma rojo pálido. La trituración con 25 mi de etanol dio un sólido blanquecino, los sólidos se retiraron mediante filtración y se lavaron con etanol . Se secaron a vacio a 40°C, para dar la etilamida del ácido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-ter-butil-fenil) -4-yodo-isoxazol-3-carboxílico como un polvo blanquecino (7.75 g, 62%) . Tiempo de retención por LC 3.07 minutos [M+H]+ 611.2 (Tiempo de corrida 3.75 minutos) KM (cloroformo-d) 7.45-7.25 (m HArH) 6.8 (t amplio t J 5.4 Hz NH) 6.6 (s ArH) 5.05 (s 4CH2) 3.5 (dg J 5.4Hz, 7.1Hz CH2) 1.35 (s 9CH3) , 1.2 (t J 7.1Hz 3CH3) Paso 7 Etilamida del ácido 5- (2,4-bis-benciloxi-5-ter-butil-fenil) -4-(4-formil-fenil) -isoxazol-3-carboxxlico Se agregó una solución acuosa de fosfato de potasio (25 mi, 1.2M) a una solución de la etilamida del ácido 5- (2, 4-bis-benciloxi-5-ter-butil-fenil) -4-yodo-isoxazol-3-carboxílico (6.1 g, 10 mrrtol) y ácido 4-formilfenilborónico (2.35 g, 15.7 mmol) en 65 mi de 1,4-dioxano, bajo una atmósfera de nitrógeno. Se agregó dicloro-bis (tri-o-tolilfosfina)paladio (II) (cat.) y la mezcla se calentó en un baño de aceite a temperatura de 100°C por ~ 1 hora. La mezcla se dejó enfriar, y la capa acuosa se separó y se extrajo con 100 mi de- acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se concentraron para dar una goma café pálido.
El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna, 600 mi de sílice, eluyendo con acetato de etilo/hexano (1:3) para dar la etilamida del ácido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-ter-butil-fenil) -4- (4-formil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico como una espuma amarillo pálido (5.18 g, 88%) . Tiempo de retención por LC 3.01 minutos [M+H]+ 589.4 (Tiempo de corrida 3.75 minutos) RMN (cloroformo-d) 9.75 (s CHO) 7.5 (d J 6.9Hz 2ArH) 7.2 (d J 6.9Hz 2ArH) 7.15-7.0 (m 8ArH) 6.8 (m 2ArH) , 6.65 (t amplio J 5.4Hz NH) 6.2 (s ArH) 4.8 (s 2C¾) 4.5 (s 2CH2) 3.2 (dq J 5.4Hz, 7.1Hz 2CH2) 1.1 (s 9C¾) , 1.05 (t J 7.Hz 3C¾) Paso 8 Etilamida del ácido 5- (2,4-bis-benciloxi-5-ter-butil-fenil) -4- (4-morfolin- -ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico Se agregó cianoborohidruro de sodio (65 mi, 1.03 mmol) a una solución de la etilamida del ácido 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-ter-butil-fenil) -4- (4-formil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico (125 g, 0.21 mmol), morfolina (50 µ?, 0.57 mmol) y ácido acético (cat.) en 4 mi de metanol y la solución se agitó por ~ 72 horas. Se agregaron 50 mi de diclorometano y la solución se lavó con 2 porciones de 50 mi de agua y 50 mi de solución acuosa saturada de cloruro de sodio . La solución se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró hasta obtener una goma incolora. El producto crudo se purificó mediante cromatograf a en columna, 20 g de sílice, eluyendo con acetato de etilo/hexano (1:1) para dar la etilamida del ácido 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-ter-butil-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico como un aceite incoloro (35 mg, 25%) . Tiempo de retención por LC 2.56 minutos [M+H]+ 660.8 (Tiempo de corrida 3.75 minutos) R (cloroformo-d) 7.35-7.05 (m 15ArH) 6.7 (t amplio J 5.4Hz NH) 6.4 (S ArH) 4.9 (s 2C¾) 4.75 (s 2C¾) 3.6 (t J 4.5Hz 4C¾) 3.(S 2CH2) 3.35 (dg J 5.4Hz 7.1Hz 2C¾) 2.35 (s amplio 4CH2) 1.15 (t J 7.1Hz 3C¾) 1.1 (s 9CH3) Paso 9 Etilamida del ácido 5- (5-ter-butil-2, 4-dihidroxi-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-feni1) -isoxazol-3-carboxílico Una solución de tricloruro de boro (1 mi, 1.0M en dielorómetaño) se agregó a una solución de la etilamida del ácido 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-ter-butil-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico (35 mg, 0.05 mmol) en 1 mi de diclorometano a ~ 20°C (hielo/metanol) , bajo una atmósfera de nitrógeno. La solución resultante se agitó a 0°C (hielo/agua) por ~ 90 minutos. Se agregaron 2 mi de metanol y la solución se concentró hasta obtener una goma café. producto crudo se purificó mediante HPLC preparativa, para dar la etilamida del ácido 5- (5-ter-butil-2 , 4-dihidroxi-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico como un polvo blanco (sal de formiato) (21 mg, 75%) .
Tiempo de retención por LC 1.97 minutos [M+H]+ 480.5 (Tiempo de corrida 3.75 minutos) EMN (DMSO-ds) 8.8 (t J 5.6Hz NH) 7.25 (d J 7.2Hz 2ArH) 7.15 (d J 7.2Hz 2ArH) 6.7 (s ArH) 6.45 (s ArH) 3.45 (s amplio 4CH2) 3.2 (dq J 5.6Hz, 7.2Hz 2CH2) 2.3 (s amplio 4CH2) 1.1 (s 9 CH3) 1.05 (t J 7.2Hz 3CH3) Este compuesto tuvo actividad "A" en el ensayo de polarización de fluorescencia de Hsp90. De una manera similar a la preparación del compuesto del ejemplo 77, se prepararon los ejemplos 77a-f .
Hsp90 Ejemplo Estructura H+ 1C50 77a 480 A ?? Ejemplo 78 Preparación de la etilamida del ácido 5- (2, 4~di idroxi-5-isobutil-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico Esquema de Reacción Paso 1 1- (2, -bis-benciloxi-fenil) -etanona Se agregó 2.5 equivalente de carbonato de potasio a una solución de 1 equivalente de 2 ' , 4 ' -di idroxiacetofenona en 400 mi de acetonitrilo, y la suspensión se agitó a temperatura ambiente. Se agregaron 2.5 equivalente de bromuro de bencilo gota a gota 10 minutos y la mezcla se calentó a reflujo por 18 horas. La mezcla se enfrió y se evaporó a vacío para dar una suspensión. La suspensión se dividió entre agua y acetato de etilo, y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo adicionalmente con diclorometano y los extractos orgánicos se combinaron, se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a vacío. El producto se trituró con hexano, se filtró y se lavó con hexano frío y se secó a vacío a 45°C para dar 1- (2 , -bis-benciloxi-fenil) -etanona como un polvo blanco.
Tiempo de retención por LC 2.704 minutos [M+H]+ 333.3 Paso 2 2 , 4-bis-benciloxi-l-isopropenil-benceno 1.1 equivalente de bromuro de metiltrifenilfosfonio se suspendió en THF anhidro y se enfrió a 0°C bajo atmósfera de nitrógeno. Se agregó 1.1 equivalente de n-butil-litio 1.6M en hexanos gota a gota, y se agitó por 30 minutos. Se disolvió 1 equivalente de 1- (2 , 4-bis-benciloxi-fenil) -etanona en THF anhidro y se agregó gota a gota a la suspensión. Cuando se completó la adición, el baño de hielo se retiró y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente bajo atmósfera de nitrógeno toda la noche. El metanol se agregó a la mezcla de reacción y la solución resultante se evaporó a vacío. El hexano fue agregado al aceite resultante y se calentó a reflujo por 30 minutos, luego se filtró a través de Celite. El licor se evaporó a vacío para dar un aceite que se purificó mediante cromatografía en columna, eluyendo con acetato de etilo al 30% en hexano, para dar 2 , 4-bis-benciloxi-l- isopropenil-benceno . Tiempo de retención por Rf 0.722, hexano : acetato de etilo 3:1. Paso 3 -isopropil-heneen-1, 3-diol El 2 , 4-bis-benciloxi-l-isopropenil-benceno fue recogido en solución en etanol y agregado a 10% de paladio sobre carbono, que había sido pre-humedecido con agua. Se introdujo hidrógeno al matraz y la mezcla se dejó agitar por 16 horas. El catalizador fue filtrado de la mezcla de reacción, mediante un método adecuado, y el licor fue concentrado a vacío, para dar 4-isopropil-bencen-l, 3-diol como un sólido cristalino blanco.
Tiempo de retención por LC 2.088 minutos [M+H]+ 153.1 Paso 4 1- (2/4-dihidroxi-5-isopropil-fenil) -etanona 1 equivalente de 4-isopropil-bencen-l, 3-diol fue recogido en BF3«OEt2 (6 equivalentes) y se agregaron 2 equivalentes de ácido acético. La solución se calentó por 16 horas a 90°C y luego se dejó enfriar a temperatura ambiente. La solución se agregó gota a gota a acetato de sodio acuoso al 10% y se dejó reposar por 4 horas, antes de ser extraída en acetato de etilo. Las fases orgánicas se combinaron y se lavaron con carbonato ácido de sodio acuoso saturado y luego se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite residual se purificó mediante cromatografía en columna, eluyendo con diclorometano, para dar la l-(2,4-dihidroxi-5-isopropil-fenil) -etanona como un sólido blanco. Tiempo de retención por LC 2.633 minutos [M+H]+ 195.1 Paso 5 1- (2r4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil) -etanona equivalente de la 1- (2 , 4-dihidroxi-5-isopropil fenil) -etanona se disolvió en DMF y se agregaron 2.2 equivalentes de carbonato de potasio y luego 2.2 equivalentes de bromuro de bencilo. La suspensión se calentó, con agitación a 150°C, bajo atmósfera de nitrógeno por 16 horas. La solución se enfrió hasta la temperatura ambiente y la mezcla se vació en HCl 1M acuoso y luego se extrajo en acetato de etilo. Las fases orgánicas se combinaron y se lavaron nuevamente con HCl acuoso 1M y luego cinco veces con solución de salmuera. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a vacio para dar un sólido, el cual se purificó mediante trituración con éter dietílico :hexano (1:1) para dar la 1- (2 , 4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil) -etanona. Tiempo de retención por LC 3.575 minutos [M+H]+ 375.2 Paso 6 Ester etílico del ácido 4-(2,4-bis-benciloxi-5-isopropil-feni1) -2-hidroxi- -oxo-but-2-enoico Se agregó 2.8 equivalentes de sodio a etanol bajo atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente y se agitó por 25 minutos para generar etóxido de sodio. Se agregó 1 equivalente de 1- (2, -bis-benciloxi-5-isopropil-fenil) -etanona en etanol adicional y se agregó a la solución de etóxido de sodio. Se agregó 1.64 equivalentes de oxalato de dietilo y la mezcla de reacción se calentó a reflujo por 4 horas. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y se agregó suficiente HCl acuoso 1M para acidificar la mezcla de reacción, la cual fue luego concentrada a vacío. La goma resultante fue dividida entre diclorometano y salmuera, y la fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó a vacío para dar el éster etílico del ácido 4- (2 , 4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil) -2-hidroxi-4-oxo-but-2-enoico como goma amarilla. Tiempo de retención por LC 3.057 minutos [M+H]+ 475 Paso 7 Éster etílico del ácido 5- (2,4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico 1 equivalente del Éster etílico del ácido 4- (2, -bis-benciloxi-5-isopropil-fenil) -2-hidroxi-4-oxo-but-2-enoico se disolvió en etanol con agitación. Se agregó 1.2 equivalentes de clorhidrato de hidroxilamina y la solución se calentó a reflujo por 4 horas bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a vacío. El residuo se dividió entre salmuera y diclorometano. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a vacío para dar el éster etílico del ácido 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico como un sólido. Tiempo de retención por LC 3.059 minutos [M+H]+ 472 Paso 8 Etilamida del ácido 5- (2,4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico El éster etílico del ácido 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico se disolvió en etilamina 2M en exceso en metanol y se calentó en un horno de microondas Smith Synthesiser a 120°C por 600 segundos. La solución se concentró a vacío para dar un sólido que se purificó mediante trituración con hexano, para dar la etilamida del ácido 5- ( , 4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico . Tiempo de retención por LC 2.979 minutos [M+HT 471.3 Paso 9 Etilamida del ácido 5- (2,4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil) -4-yodo-isoxazol-3-carboxílieo BnO NHEt 1 equivalente de la etilamida del ácido 5-(2,4-bis- benciloxi-5-isopropil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico se disolvió en acetonitrilo anhidro y 2.0 equivalentes de N- yodosuccinimida, seguido por 0.05 equivalentes de nitrato cérico de amonio fueron agregados, y la solución se agitó a temperatura ambiente toda la noche. La mezcla de reacción se concentró a vacío y la goma resuLtante se dividió entre acetato de etilo y salmuera. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna, eluyendo con hexano : acetato de etilo 9:1, para dar etilamida del ácido 5- (2 , -bis-benciloxi-5-isopropil-fenil) -isoxazol-3- carboxílico como un aceite. Tiempo de retención por LC 2.975 minutos [ +H]+ 597.2 Paso 10 Etilamida del ácido 5- (2, 4-bis-bencilojci-5-isopropil-fenil) -4- yodo-isoxazol-3-carboxxlico 1 equivalente de la etilamida del ácido 5-(2,4-bis- benciloxi-5-isopropil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico se disolvió en DMF anhidro. Se agregó carbonato de sodio acuoso 1M, seguido por 2 equivalentes de ácido 4-formilfenilborónico y luego PdCl2 (PPh3)2 catalítico. Se burbujeó nitrógeno a través de la solución por diez minutos a temperatura ambiente, después de cuyo tiempo la temperatura fue elevada a 80°C bajo una atmósfera de nitrógeno, por 15 minutos. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura* ambiente y la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo. Esta solución se lavó con salmuera, luego se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a vacío para dar un aceite. Se purificó mediante cromatografía en columna eluyendo con acetato de etilo al 10% en hexano, para dar la etilamida del ácido 5- (2 , -bis-benciloxi-5-isopropil-fenil ) -4-yodo-isoxazol-3-carboxílico como un sólido blanco. Tiempo de retención por LC 2.981 minutos [M+H]+ 575.3 Paso 11 Etilamida del ácido 5- (2,4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil) -4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico 1 equivalente de la etilamida del ácido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil) -4~yodo-isoxazol-3-carboxílico se disolvió en metanol y se agregaron tamices moleculares en polvo de 3Á. Se agregaron 2 equivalentes de morfolina, seguido por 2 equivalentes de cianoborohidruro de sodio. Se agregaron 5 equivalentes de ácido acético gota a gota y la suspensión se agitó bajo atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente por 16 horas. La mezcla de reacción se diluyó con DCM y se lavó con carbonato ácido de sodio acuoso saturado. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a vacío. La goma resultante se purificó mediante cromatografía instantánea, eluyendo con metanol al 1% en DCM para dar la etilamida del ácido 5- (2,4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico como un aceite incoloro. Tiempo de retención por LC 4.42 minutos [M+H]+ 646.2 método B Paso 12 Etilamida del ácido 5- (2, 4-dihidroxi-5-isopropil-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico 1 equivalente de la etilamida del ácido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isopropil-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico se disolvió en DCM y bajo una atmósfera de nitrógeno, se enfrió a 0°C. Se agregó BC13 1M en DCM gota a gota y la solución se agitó bajo estas condiciones por 30 minutos . Se agregaron 2 mi de metanol y la mezcla de reacción se concentró a vacío. La purificación de la mezcla mediante LC/MS preparativa dio la etilamida del ácido 5- (2 , 4-dihidroxi-5-isopropil-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico como un sólido blanco. Tiempo de retención por LC 1.991 minutos [M+H]+ 466.3 Este compuesto tuvo actividad "A" en el ensayo de polarización de fluorescencia de Hsp90. De una manera similar a la preparación del compuesto del ejemplo 78, se prepararon los ejemplos 77a-u.
Ejemplo 78 Éster dietílico del éster 4-cloro-5-(dietoxi-fosforiloxi)-2-[3-etilcarbamoil-4- (4-metoxi-fenil) -isoxazol-5-il]-fenxlico del ácido fosfórico A una mezcla sólida de la etilamida del ácido 5-(5-cloro-2 , 4-dihidroxi-fenil) -4- (4-metoxi-fenil) -isoxazol-3-carboxílico (11 mg, 2.1 x 10"2 mol) y 25 mg de MgO en un frasco pequeño, se agregaron 10 gotas de clorofosfato de dietilo. La mezcla resultante se calentó y se agitó a 70°C por 1 hora, el progreso de la reacción se modificó mediante TLC. Cuando se enfrió, se agregaron 1 mi de metanol y 1 mi de DCM. Después de la filtración, los solventes se evaporaron y se obtuvo un aceite amarillo. El éster di-fosforílico fue separado mediante TLC preparativa, produciendo 4 mg. Rf = 0.35; RMN-1!. d = 7.95 (1H, s, amplio), 7.74 (1H, s) ; 7.55 (1H, s) ; 7.32 (2H, d, J = 9.0 Hz) ; 6.90 (2H, d, J = 9.0 Hz) , 4.30 (8H, g) ; 3.80 (3H, s) ; 3.40 (2H, q) ; 1.35 (12H, t) y 1.25 (3H, t) . LCMS: (M+l)+ = 661.1 (TA = 7.60 minutos).
Ejemplo 79 Preparación de la etilamida del ácido 5- (2 , 4-dihidroxi-5-isobutil-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico Esquema de Reacción Paso 1 l-(2,4-dihidroxi-feni1) -2-meti1-propan-1-ona 1 equivalente del resorcinol se recogió en BF3»OEt2 (6 equivalentes) y se agregó 1 equivalente de ácido isobutírico. La solución se calentó por 1.5 horas a 90°C y luego se dejó enfriar a temperatura ambiente. La solución se agregó gota a gota a acetato de sodio acuoso al 10% y se dejó reposar por 4 horas, antes de ser extraída en acetato de etilo . Las fases orgánicas se combinaron y se lavaron con carbonato ácido de sodio acuoso saturado, luego se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío para dar 1- (2 , -dihidroxi-fenil) -2-metil-propan-l-ona como un aceite rojo que se utilizó sin purificación adicional. Tiempo de retención por LC 2.279 minutos [M+H]+ 1.81 Paso 2 4-isobutil-bencen-l, 3-diol Se agregaron 3 equivalentes de cloroformiato de etilo lentamente a una solución enfriada a 0°C de un equivalente de 1- (2 , -dihidroxi-fenil) -2-metil-propan-l-ona y 3 equivalentes de trietilamina en THF. La mezcla se calentó a temperatura ambiente y se agitó por tres horas antes de ser filtrada, y los sólidos se lavaron con THF frío. Los filtrados combinados se enfriaron a 0°C y se agregaron lentamente 4 equivalentes de borohidruro de sodio en un volumen de agua igual a los filtrados de THF. La mezcla se calentó a la temperatura ambiente, se agitó por 3 horas, y se diluyó con agua. La mezcla se extrajo dos veces con éter dietílico, los extractos combinados se concentraron hasta sequedad y se resuspendieron en 4 equivalentes de solución acuosa al 10% de hidróxido de sodio. Después de calentar a reflujo por 90 minutos, la mezcla se enfrió, se acidificó con HCl 5M acuoso y se extrajo dos veces con éter dietílico. Los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron hasta sequedad para dar 4-isobutil-bencen-l, 3-diol como un aceite turbio, el cual se utilizó sin purificación adicional . RMN consistente con estructura. Ejemplo 3: 1- (2/4-dihidroxi-5-isob til-fenil)-etanona 1 equivalente del 4-isobutil-bencen-l , 3-diol se recogió en 6 equivalentes del BF3*OEt2 y se agregaron 2 equivalentes de ácido acético. La solución se calentó por 16 horas a 90°C y luego se dejó enfriar hasta la temperatura ambiente. La solución se agregó gota a gota a acetato de sodio acuoso al 10% y se dejó reposar por 4 horas, antes de ser extraído dos veces con éter dietílico. Las fases orgánicas se combinaron y se lavaron con carbonato ácido de sodio, acuoso saturado, luego se secaron con sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío para dar la l-(2,4-dihidroxi-5-isobutil-fenil ) -etanona la cual se utilizó sin purificación adicional . RM consistente con estructura. Paso 4 1- (2, 4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil) -etanona 1 equivalente de la 1- (2 , 4-dihidroxi-5-isobutil-fenil) -etanona se disolvió en DMF y se agregaron 4.4 equivalentes de- carbonato de potasio y luego 4.4 equivalentes de bromuro de bencilo. La suspensión se calentó, con agitación a 150°C, bajo atmósfera de nitrógeno por 16 horas. La solución se enfría a temperatura ambiente, se filtró y se concentró hasta sequedad. Este sólido se purificó por cromatografía en columna (sílice, hexanos : acetato de etilo 4:1), luego se recristalizó a partir de acetato de etilo :hexanos para dar la 1- (2, -bis-benciloxi-5-isobutil-fenil) -etanona como cristales incoloros . Tiempo de retención por LC 3.030 minutos [M+H]+ 389.3 Paso 5 Ester etílico del ácido 4- (2, 4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil) -2 , 4-dioxo-butírico 3 equivalentes de sodio fueron agregados al etanol bajo atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente y se agitó hasta que ocurrió la disolución completa. Se agregó 1 equivalente de 1- (2 , 4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil) -etanona, seguido por 1.5 equivalentes de oxalato de dietilo y la mezcla de reacción se calentó a reflujo por 4 horas. La mezcla se dejó enfriar hasta la temperatura ambiente y se acidificó con HC1 acuoso 2M para dar un precipitado amarillo del éster etílico del ácido 4- (2 , 4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil) -2 , 4-dioxo-butírico, el cual se obtuvo mediante filtración. Tiempo de retención por LC 3.254 minutos [M+H]+ 489.3 Paso 6 Éster etílico del ácido 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico 1 equivalente del éster etílico del ácido 4~(2,4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil ) -2 , -dioxo-butírico se disolvió en etanol con agitación. Se agregó 1.2 equivalentes de clorhidrato de hidroxilamina y la solución se calentó a reflujo por 2 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, para dar un precipitado. Este precipitado se obtuvo mediante filtración para dar el éster etílico del ácido 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil) -isozaxol-3-carboxílico como un sólido blanco. Tiempo de retención por LC 3.261 minutos [ +H]+ 486.3 Paso 7 Etilamida del ácido 5- (2, 4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico El éster etílico del ácido 5- (2 , 4~bis-benciloxi-5-isobutil-fenil) -isozaxol-3-carboxílico se disolvió en etilamina 2M en 10 equivalentes de metanol, y se calentó en un horno de microondas Smith Synthesiser a 120°C por 600 segundos . La solución se concentró a vacío para dar la etilamida del ácido 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico como un sólido blanco que se utilizó sin purificación adicional.
Tiempo de retención por LC 3.112 minutos [M+H]+ 485.3 Paso 8 Etilamida del ácido 5- (2#4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil) -4-yodo-isoxazol-3-carboxílico 1 equivalente de la etilamida del ácido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico y 2.0 equivalentes de N-yodosuccinimida, se disolvieron en acetonitrilo, se agregó 0.1 equivalentes de nitrato cérico de amonio y la solución se agitó a temperatura ambiente toda la noche. La mezcla de reacción se concentró a vacío y la goma resultante se dividió entre acetato de etilo y salmuera. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna, eluyendo con hexano : acetato de etilo 4:1, para dar la etilamida del ácido 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil) -4-yodo-isoxazol-3-carboxílico como un aceite. Tiempo de retención por LC 3.089 minutos [M+H]+ 611.2 Paso 9 Etilamida del ácido 5- (2,4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil) -4-(4-formil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico 1 equivalente de la etilamida del ácido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil) -4-yodo-isoxazol-3-carboxilico se disolvió en DMF y se agregaron 3 equivalentes de carbonato de sodio acuoso 1 , seguido de 2 equivalentes de ácido 4-formilfenilborónico y PdCl2(PPh3)2 catalítico. El nitrógeno fue burbujeado a través de la solución por diez minutos a temperatura ambiente, después de cuyo tiempo, la temperatura fue elevada a 80°C bajo atmósfera de nitrógeno, por 2 horas. La mezcla de reacción se dejó enfriar hasta la temperatura ambiente y la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo. Esta solución se lavó con salmuera, luego se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a vacío para dar un aceite que se purificó mediante cromatografía en columna, eluyendo con 10% de acetato de etilo hexano, para dar la etilamida del ácido 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil) -4- (4-formil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico como un sólido blanco. Tiempo de retención por LC 5.57 minutos [M+H]+ 589.1 método B Paso 10 Etilamida del ácido 5- (2,4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil) -4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico 1 equivalente de la etilamida del ácido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil) -4- (4-formil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico se disolvió en metanol y se agregaron tamices moleculares en polvo de 3Á. Se agregaron 2 equivalentes de morfolina, seguido por 5 equivalentes de ácido acético. Después de agitar por 30 minutos, se agregaron 2 equivalentes de cianoborohidruro de sodio en porciones y la suspensión se agitó bajo atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente por 16 horas. La mezcla de reacción se filtro a través de celite y se concentró hasta sequedad. La cromatografía en columna, eluyendo con 5% de metanol en DCM dio la etilamida del ácido 5- (2, -bis-benciloxi-5-isobutil-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico como un aceite incoloro. Tiempo de retención por LC 4.53 minutos [M+H]+ 660.2 método B Paso 11 Etilamida del ácido 5- (2,4-hidroxi-5-isobutil-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico 1 equivalente de la etilamida del ácido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-isobutil-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico se disolvió en DMC y bajo una atmósfera de nitrógeno, se enfrió a 0°C. Se agregó gota a gota BC13 1M en 9 equivalentes de DCM y la solución se agitó por 30 minutos . Se agregaron 2 mi de metanol y la mezcla de reacción se concentró a vacío . La purificación de la muestra mediante LC/MS preparativa dio la etilamida del ácido 5- (2 , -hidroxi-5-isobutil-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico como un sólido blanco. Tiempo de retención por LC 1.902 minutos [M+H]+ 480.3 Este compuesto tuvo actividad "A" en el ensayo de polarización de fluorescencia de Hsp90. De una manera similar a la preparación del compuesto del ejemplo 79, se preparó el ejemplo 80. La purificación de la muestra mediante LC/MS preparativa dio el compuesto como un sólido blanco.
Ejemplo 81 N-[5- (5-cloro-2, 4-dihidroxi-feni1) -4- (4-fluoro-feni1) -isoxazol 3-ilmeti1]-metansulfonamida Ejemplo 82 N-[5- (5-cloro-2 4-dihidroxi-fenil) -4- (4-fluoro-fenil) -isoxazol 3-ilmetil]-acetamida Amida del ácido 5- (2, 4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil) -4- (4 fluoro-feni1) -isoxazol-3-carboxí1ico amida del ácido 5- (2 , 4-bis-benciloxi-5-cloro fenil) -4-yodo-isoxazol-3-carboxílico (0.45 g, 0.80 mmol) fue acoplada cruzadamente al ácido 4-fluorofenilborónico (0.17 g, 1.5 equivalentes), utilizando las condiciones estándares descritas anteriormente. El producto crudo, 0.40 g de un sólido anaranjado fue llevado al siguiente paso sin purificación adicional . LCMS (LCQ) tR = 8.70, MS m/z 529 [M+H]+ C-[5- (2/4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil) -4- (4-fluoro-fenil) -isoxazol-3-il]-metilamina Una solución de la amida del ácido 5-(2,4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil) -4- (4-fluoro-fenil) -isoxazol-3-carboxílico (0.40 g, 0.76 mmol) en 20 mi de THF anhidro bajo atmósfera de argón se agregó 1 mi del complejo de borano 1 -THF y la solución se calentó a reflujo toda la noche. Después del enfriamiento la reacción se apagó con 10 mi de metanol y el producto se purificó utilizando Isolute® SPE Flash SCX-2 5 g para proporcionar 0.30 g (77% de rendimiento como un polvo. LCMS (LCQ) tu = 7.54, MS m/z 515.2 [M+H]+ N-[5- (5-cloro-2,4-dihidroxi-fenil) -4- (4-fluoro-fenil) -isoxazol-3-ilmetil]-metansulfonamida C-[5- (2, 4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil) -4- (4-fluoro-fenil) -isoxazol-3-il]-metilamina (100 mg, 0.19 mmol) se disolvió en 3 mi de DCM antes de la adición del cloruro de metansulfonilo (17 µ?, 1.1 equivalentes) y trietilamina (30 µ?, 1.1 equivalentes). La solución se agitó a temperatura ambiente toda la noche antes de que se evaporara hasta sequedad a vacío dejando un producto protegido con bencilo, crudo, como un residuo de color azul (90 mg) . Este se desprotegió utilizando el procedimiento estándar con tricloruro , de boro descrito anteriormente, y se purificó mediante TLC preparativa (10% de etanol en DCM) y extracción con soxhlet de la sílice por éter dio el compuesto puro como un sólido casi incoloro (8 mg, 10% de rendimiento) . LCMS (LCQ) tR = 6.65, MS m/z 411.2 [M-H]~ (d4-MeOH) , 7.19 (2H, m, Ar~H) , 7.04 (1H, s, Ar-H) , 7.03 (2H, Ar-H) , 6.34 (1H, s, Ar-H), 4.27 (2H, s, CH2 H) , 2.81 (3H, N-[5- (5-cloro-2/4-dihidroxi-fenil) -4- (4-fluoro-fenil) -isoxazol- lmetil]-acetamida A una solución de C-[5- (2, 4-bis-benciloxi-5-cloro-fenil) -4- (4-fluoro-fenil) -isoxazol-3-il]-metilamina (100 mg, 0.19 mmol) en DCM se agregó anhídrido acético (130 µ?, 7.0 equivalentes) ? trietilamina (81 µ?, 3.0 equivalentes). La solución se agitó a temperatura ambiente hasta que la amina se consumió. El solvente se eliminó a vacío para dar producto protegido con bencilo, crudo, aceitoso, amarillento. Este se desprotegió utilizando un procedimiento estándar con tricloruro de boro descrito anteriormente, y se purificó mediante TLC preparativa y la extracción con soxhlet de la sílice con éter dio el compuesto puro como un sólido incoloro (10 mg, 14% de rendimiento) . LCMS (LCQ) tR = 6.57, MS m/z 377.1 [M+H]+ d? (d4-MeOH) , 7.17 (2H, m, Ar-H) , 7.01 (1H, s, Ar-H) , 6.98 (2H, m, Ar-H) , 6.32 (1H, ,?s, Ar-H), 4.37 (2H, S, C¾NH) , 1.77 (3H, s, COC¾) . Ejemplos 83, 84 y 85 Etilamida del ácido 5^5-etil-4- idro!-d.-2-inetoxi-fenil)-4-(4-morfoli.n-4-ilmetil-fenil)-isc2^ol-3-caiboxílico (83); etilamida del ácido 5-[5-etil-2- droxi-4-metoxi-fenil)-4-(4-norfolin-4-i]jmetil-fenil)-isoxazol-3-carixari.lico (84); etilamida del ácido 5- (5-etil-2,4-aineta-ii-fenil)-4- (4-irorfolin-4-ilJtEtil-fenil)-isoxazol-3-carix^ (85) A un matraz cargado con argón que contenía la etilamida del ácido 5-[5-etil~2 , 4-dihidroxi-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico (25 mg, 0.055 mmol) y N,N- (diisopropil) aminoetilpoliestireno [PS-DIEA] (35 mg, 3.83 mmol/g, 2.4 equivalentes) se agregó 2.3 mi de DCM anhidro y 0.25ml de metanol anhidro. Durante la agitación suave, se agregó (trimetilsilil) diazometano 2M en hexanos (28 µ?, 1.0 equivalentes) y la solución se agitó toda la noche a temperatura ambiente. Se hizo burbujear argón a través de la solución por 10 minutos, la resina se filtró, y los materiales volátiles se eliminaron a vacío. El residuo crudo se purificó mediante HPLC semi-preparativa para producir la etilamida del ácido 5- (5-etil-4-hidroxi-2-metoxi-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico (83) (5.52 mg, 21%); etilamida del ácido 5- (5-etil-2-hidroxi-4-metoxi-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico (84) (1.14 mg, 4%); etilamida del ácido 5- (5-etil-2 , 4-dimetoxi-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico (85) (1.46 mg, 5%) y el material inicial no metilado. 83: LCMS (LCT) tR = 4.95, MS m/z 466.4 [M+H]+ 84: LCMS (LCT) tR = 5.14, MS m/z 466.4 [M+H]+ (85): LCMS (LCT) tR = 5.45, MS m/z 480.4 [M+H]+ Los datos de RMN confirmaron las asignaciones.
Ejemplo 86 5- (5-cloro-2-hidroxi-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) - isoxazol-3-carboxamida de etilo Paso 1 2-benzoiloxi-5-cloro-benzoato de metilo Una mezcla del 5-cloro-2-hidroxi-benzoato de metilo (2.5 g, 13.4 mmol) , carbonato de potasio (3.7 g, 26.8 mmol) y bromuro de bencilo (2.98 g, 17.4 mmol) en 30 mi de acetona se calentó a reflujo por 12 horas. Después del enfriamiento, la acetona se evaporó. Se agregaron 100 mi de acetato de etilo y se filtró. La capa orgánica se lavó luego con HCl 1M (1 x 80 mi) , 2 porciones de 80 mi de salmuera y se secó con sulfato de sodio. Después de la filtración y evaporación del solvente, se obtuvieron semi-sólidos amarillos (3.2 g) . RMN-1!! (d6-acetona) d = 7.73 (1H, d) , 7.60 - 7.30 (1H + 5H, m) , 7.28 (1H, d) ; 5.30 (2H, s) y 3.90 (3H, s) .
Paso 2 1- (2-benciloxi-5-cloro-fenil) -2- (trifenil) -X5-fosfaniliden) -etanona A una suspensión agitada de bromuro de trifenilfosfonio (2.14 g, 6.0 iranol) en 30 mi de THF anhidro a temperatura ambiente se agregó n-BuLi 1.6M en hexano (5.25 mi, 8.39 mmol) . La suspensión anaranjada se agitó por 3 horas. En seguida, se agregó lentamente una solución de 2-benzoiloxi-5-cloro-benzoato de metilo (0.83 g, 3.0 mmol) en 8 mi de THF. La mezcla resultante se agitó a 60°C por 2 horas, y se filtró y después se enfrió. Se agregaron 100 mi de DCM al filtrado y las capas orgánicas combinadas se lavaron con 2 porciones de 80 mi de salmuera. Después de la filtración y evaporación del solvente, se obtuvieron 2.0 g del aceite amarillo. Estos fueron luego purificados mediante cromatografía, y eluidos con acetato de etilo/hexano/1 :1, produciendo 0.97 g de sólidos. RE - 0.43. M -^ (d6-acetona) d = 7.80 - 7.52 (20H, m) , 7.40 -7.20 (1H + 1H + 1H, m) , 5.25 (2H, s) ; 4.72 (1H, s, trans-H) y 4.62 (1H, s, Cis-H) . LCMS: (M+l)* = 521.2 (TA = 5.4 minutos).
Paso 3 4- (2-benciloxi-5-cloro-fenil) -2,4-dioxo-3- (trifenil-?5-fosfaniliden) -butirato de etilo A una solución de la 1- (2-benciloxi-5-cloro-fenil ) -2- (trifenil) -Xs- fosfaniliden) -etanona (0.49 g, 0.94 mmol), Net3 (96 mg, 0.94 mmol) y DMAP (12 mg, 0.09 mmol) en 20 mi de tolueno anhidro a temperatura ambiente, se agregó clorooxoacetato de etilo (0.38 g, 2.78 mmol) en 5 mi de tolueno. La mezcla se agitó por 2 horas y se vacío en 50 mi de agua. La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con 2 porciones de 40 mi de acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron luego con 2 porciones de 40 mi de solución saturada de carbonato ácido de sodio, 40 mi de ácido cítrico saturado, 40 mi de salmuera y se secó. El aceite crudo (0.36 g) se purificó mediante cromatrografía, y se eluyó con acetato de etilo. Rf = 0.88. RM -1!! (d6-acetona) d = 7.75 -7.40 (15H, m) , 7.30 (1H dd) ; 7.15 (1H, d) , 7.05 (1H, d) ; 5.10 (2H, s); 3.60 (2H, q) y 1.10 (3H, s) .. LCMS: (M+l)+ = 621.2 (TA = 6.49 minutos ) .
Paso 4 3- (2-benzoiloxi-5-cloro-benzoil) -3-bromo-3H-azirin-2-carboxilato de etilo A una solución de 4- (2-benciloxi-5-cloro-fenil ) -2 , 4-dioxo-3- (trifenil-A5~fosfaniliden) -butirato de etilo (0.143 g, 0.23 mmol) en 8 mi de DCM a temperatura ambiente, se agregó una mezcla de TMSN3 (40 mg, 0.35 mmol) y NBS (62 mg, 0.35 mmol) en 6 mi de DCM. La solución resultante se agitó por 2 horas. Después de la evaporación del solvente, el producto crudo se purificó mediante TLC preparativa. Se obtuvieron 38 mg de sólidos amarillos. í¾ = 0.73 (acetato de etilo :hexano 1:2). RMN-^ (d6-acetona) d = 7.80 (1H, d) , 7.60 (1H dd) ; 7.40 (5H, m) , 7.30 (1H, d) ; 5.20 (2H, s) ; 4.10 (2H, q) y 1.00 (3H, t) . LCMS: (M+l)+ = 438.0 (TA = 7.32 minutos). Paso 5 5- (2-benzoiloxi-5-cloro-fenil) -4-bromo-isoxazol-3-carboxilato de etilo El 3- (2-benzoiloxi-5-cloro-benzoil) -3-bromo-3H-azirin-2-carboxilato de etilo (55 mg, 0.12 mmol) se calentó reflujo en tolueno anhidro por 2 horas. Después de la evaporación del solvente, se obtuvieron 34 mg de sólidos crudos y se purificaron mediante TLC preparativa (acetato de etilo:hexano/l:2) . Rf = 0.73 (fluorescente). ???-½ (d6-acetona) d = 7.60 (1H, d) , 7.50 (1H dd) ; 7.40 (1H, d) , 7.30 (5H, m) ; 5.25 (2H, s) ; 4.42 (2H, q) y 1.40 (3H, t) . LCMS : (M+l)+ = 438.0 (TA = 7.09 minutos) . Paso 6 5- (2-benciloxi-5-cloro-fenil) -4-bromo-isoxazol-3-carboxainida de etilo A una solución del 5- (2-benzoiloxi-5-cloro-fenil) -4-bromo-isoxazol-3-carboxilato de etilo (30 mg, 6.8 x 10"2 mmol) en 1 mi de etanol, se agregó etilamina (al 70% en agua, 1 mi) . La solución se calentó a 100°C en el reactor de microondas CEM® (200 Wats) por una hora. Después de eso, el solvente se evaporó y el compuesto se purificó mediante TLC preparativa para producir 20 mg de sólidos. Rf = 0.39 (acetato de etilo:hexano 1:4). RMN-^ (d6-acetona) d = 8.10 (1H, s, amplio), 7.50 (1H, d) ; 7.45 - 7.35 (1H + 1H, m) , 7.25 (5H, m) ; 5.20 (5H, m) ; 3.40 (2H, q) y 1.20 (3H, t) . LCMS: (M+l)+ = 437.1 (TA = 6.57 minutos).
Paso 7 5- (2-benciloxi-5-cloro-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxamida de etilo Una mezcla de 5- (2-benciloxi-5-cloro-fenil) -4-bromo-isoxazol-3-carboxairtida de etilo (30 mg, 5.6 x 10"2 mmol) , Pd(Ph3P)4 (4 mg, 3.5 x 10~2 mmol), 4[4- (4, 4, 5, 5-tetrametil-[1, 3 , 2]dioxaborolan-2-il) -bencil]morfolina (63 mg, 0.2 mmol) y 0.2 mi de una solución de carbonato ácido de sodio 1M en 1 mi de DME se agitó a 80°C bajo gas de argón por 16 horas. Después del enfriamiento, la solución se diluyó con 8 mi de agua y se extrajo con 2 porciones de 20 mi de acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con 20 mi de salmuera y se secaron. Después de la filtración y evaporación de los solventes, el producto crudo se purificó mediante TLC preparativa, produciendo 30 mg de sólidos. Rf = 0.44 (acetato de etilo). RMN-1!! (d6-acetona) d = 8.25 (1H, s, amplio), 7.60 (1H, d) ; 7.55 (1H, dd) , 7.45 (1H, d) ; 7.30 - 6.90 (9H, m) ; 5.00 (2H, s); 3.55 (4H, m) ; 3.45 (2H + 2H, s + q) ; 2.30 (4H, m) y 1.20 (3H, t) . LCMS : (M+l)+ = 532.2 (TA = 4.39 minutos).
Paso 8 5- (5-cloro-2-hidroxi-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxamida A una solución de la 5- (2-benciloxi-5-cloro-fenil ) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxamida de etilo (25 mg, 4.7 x 10"2) en 5 mi de DCM a 0°C, se agregó BC131M en 0.15 mi de DCM. La solución amarilla turbia resultante fue luego agitada a 0°C por 15 minutos y a temperatura ambiente de 3 a 4 horas hasta que se volvió clara. Después de eso, la solución se apagó con 1 mi de metanol . Se agregó luego 1 mi de carbonato ácido de sodio saturado y se extrajo con 2 porciones de 2 mi de acetato de etilo y se secó. Después el solvente se filtró y se evaporó, el aceite crudo se purificó mediante HPLC preparativa (acetato de etilo :metanol/50 : 1) , produciendo de 12 mg sólidos. RMN-1H (d4-MeOD) d = 7.60 (2H, d) , 7.50 - 7.30 (1H + 1H + 1H, m) ; 7.00 (2H, d) , 3.70 (4H, m) ; 3.60 (2H, s) ; 3.50 (2H, q) ; 2.60 (4H, m) y 1.25 (3H, t) . LCMS : (M+l)+ = 442.2 (TA = 3.54 minutos) . El 4-hidroxi-isomero fue preparado de una. manera similar a su contraparte 2-hidroxi como sigue: Ejemplo 87 5- (3-cloro-4-hidroxi-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) · isoxazol-3-carboxamida de etilo 4-benzoiloxi-3-cloro-benzoato de metilo El 3-cloro-4-hidroxi-benzoato de metilo (1.0 g, 5.36 mmol) dio 1.57 g de un sólido crudo. RMN-1!! (d6-acetona) d = 8.00 (1H, d) , 7.95 (1H dd) ; 7.60 - 7.40 (5H, m) , 7.35 (1H, d) ; 5.40 (2H, s) ; y 3.90 (2H, s) . Paso 2 1- (4-benciloxi-3-cloro-feii.il) -2- (trifenil-X5-fosfaniliden) -e anona El 4-benzoiloxi-3-cloro-benzoato de metilo (1.5 g, 5.40 mmol) dio 2.5 g de un sólido crudo. R£ = 0.31 (acetato de etilo :hexano/l :1) . RMN-^ (ds-acetona) d = 8.05 (1H, d) , 7.90 (1H dd) ; 7.85 - 7.35 (20H, m) , 7.20 (1H, d) ; 5.30 (2H, s) ; 4.60 (1H, s, trans-H) y 4.50 (1H, s, cis-H) . LCMS: (M+l)+ = 521.2 (TA = 5.29 minutos). Paso 3 4- (4-benciloxi-3-cloro-fenil)-2,4-dioxo-3-(trifenil-X5-fosfaniliden) -butirato de etilo La 1- (4-benciloxi-3-cloro-fenil) -2- (trifenil-?5-fosfaniliden) -etanona (1.84 g, 3.53 iranio1) dio 1.43 g de un sólido crudo. RMN-^H (d6-acetona) d = 8.00 - 7.35 (22H, m) , 7.20 (1H d) ; 7.35 (2H, s) , 3.55 (2H, q) ; y 1.14 (3H, s) . LCMS: (M+l)+ = 621.2 (TA = 7.29 minutos). Paso 4 3- (4-benzoiloxi-3-cloro-benzoil) -3-bromo-3H-azirin-2-carboxilato de etilc El 4- (4-benciloxi-3-cloro-fenil) -2 , -dioxo-3- (trifenil-A5-fosfaniliden) -butirato de etilo (0.74 g, 1.19 mmol) dio 0.168 g de un sólido después de la purificación en columna y TLC preparativa. Rf= 0.24 (acetato de etilo :hexano/l : 6) . RMN-1!! (de-acetona) d = 8.00 (1H, d) 7.90 (1H, dd) ; 7.50 (1H, d) ; 7.40 (5H, m) ; 5.40 (2H, s) ; 4.05 (2H, g) y 0.95 (3H, t) . LCMS: (M+l)+ = 438.1 (TA = 7.27 minutos). Paso 5 5- (4-benzoiloxi-3-cloro-£enil) -4-bromo-isoxazol-3-carboxilato de etilo El 3- (4-benzoiloxi-3-cloro-benzoil) -3-bromo-3H-azirin-2-carboxilato de etilo (68 mg, 0.16 mmol) dio 20 mg de un sólido después de la TLC y la cristalización a partir de etanol. Rf = 0.26 (fluorescente) (acetato de etilo:hexano/l:4) . RM -^ (d6-acetona) d = 8.00 (1H, d) ; 7.90 (1H; dd) ; 7.50 (1H, d) ; 7.40 (5H, m) ; 5.35 (2H, s) ; 4.45 (2H, q) y 1.40 (3H, t) . LCMS: (M+l)+ = 438.0 (TA = 7.39 min. ) Paso 6 5- (4-benciloxi-3-cloro-fenil) -4-bromo-isoxazol-3-carboxamida de etilo El 5- (4-benzoiloxi-3-cloro-fenil) -4-bromo-isoxazol- -carboxilato de etilo (10 mg, 2.3 x 10~2 mmol) dio 8 mg de un sólido crudo. Rf = 0.53 (acetato de etilo :hexano/l : 2 ) . RN^H (d6-acetona) d = 8.15 (1H, s, amplio); 8.00 (1H, d) ; 7.90 (1H, dd) ; 7.50 (1 H, d) ; 7.40 (5H, m) ; 5.32 (2H, s) ; 3.42 (2H, q) y 1.20 (3H, t) . Paso7 5- (4-benciloxi-3-cloro-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxamida de etilo La 5- (4-benciloxi-3-cloro-fenil) -4-bromo-isoxazol-3-carboxamida de etilo (10 mg, 2.3 x 10~2 mmol) dio 10 mg de un sólido crudo, el cual fue utilizado luego en el siguiente paso sin purificación adicional. Paso 8 5- (3-cloro-4-hidroxi-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxamida de etilo El 5- (4-benciloxi-3-cloro-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazoÍ-3-carboxamida de etilo (8 mg, 1.5 x 102 mmol) dio 2 mg de un sólido crudo después de que se purificó dos veces por TLC preparativa (acetato de etilo :metanol/50 : 1) . RMM-^ (d4-MeOD) d = 7.70 (2H, d) ; 7.60 (1H, d) ; 7.45 (1H + 1H, m) ; 7.00 (2Hf d) ; 3.80 (4H, m) ; 3.75 (2H, s) ; 3.50 (2H, q) ; 2.82 (4H, m) y 1.25 (3H, t) . LCMS : (M+l)+ = 442.2 (TA = 4.47 minutos} . Ejemplo 88 3- [4- (4-bromo-fenil) -isoKazol-5-il] -5-cloro-2 6-dihidroxi- 3- (4-Bromo-fenil) -6-cloro-7- idroxi-4-oxo-4H-cronien-carbaldehído La 3- (4-bromo-fenil) -6-cloro-7-hidroxi-cromen-4-ona (0.35 g, 1 mmol) y hexametilentetramina (0.14 g, 1 mmol) se disolvieron en 20 mi de ácido acético glacial y se calentaron toda la noche a 100°C. Se agregaron 10 mi de HCl 6 caliente y la mezcla se calentó por una hora adicional antes de ser vaciada en agua. El precipitado formado se filtró, se lavó y se secó para proporcionara el producto deseado puro como un sólido café pálido. LCMS (LCQ) tu = 8.27, MS m/z 377.3/379.2 [?-?G Paso 2 3- [4- (4-bronto-fenil) -isoxazol-5-il] -5-cloro-2, 6-dihidroxi-benzaldehido A una solución de 3- (4-bromo-fenil ) -6-cloro-7-hidroxi-4-oxo-4H-cromen-8-carbaldehído (53.5 mg, 0.14 mmol) en 6 mi de etanol, se agregó clorhidrato de hidroxilamina (100 mg, 1.4 mmol). La mezcla resultante se calentó a reflujo por 16 horas. El etanol se evaporó y se agregaron 20 mi de acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con carbonato ácido de sodio saturado y se secó. Se obtuvieron 33 mg de sólidos cuando el aceite resultante se trituró con éter. RN-1H (d6-DMSO) 5 = 9.83 (1H, S); 8.70 (1H, s) ; 8.21 (1H, s) ; 7.78 (2H, d) y 7.68 (2H, s) . LCMS: (M+l)+ = 394.1 (TA.= 8.60 minutos) Ejemplo 89 Hidroxiamida del ácido 5-(5-etil-2-hidroxi-4-metoxi-fenil)-4-(4-fluoro-fenil) -isoxazol-3-carboxílico Paso 1 1- (5-Etil-2,4-dihidroxi-fenil) -2- (4-fluoro-fenil) -etanona El etil-resorcinol (5.37 g, 39 mmol) y el ácido 4-fluorofenilacético (6.00 g, 39 mmol) se disolvieron en 40 mi de eterato de BF3. La solución se calentó a 80°C por 4 horas. Cuando se enfrió, se agregaron 100 mi de agua cuidadosamente y la solución se extrajo con 2 porciones de 80 mi de acetato de etilo. Las capas orgánicas se lavaron luego con carbonato ácido de sodio saturado (precaución) (2 x 100 mi) y salmuera (2 x 100 mi) y se secó con sulfato de sodio. Después de la purificación con carbón mineral de colorante, se obtuvieron 10.5 g de un jarabe verde oscuro. f = 0.4 (acetato de etilo:n-hexano/1 :3) . El compuesto se utilizó en el siguiente paso sin purificación adicional . R -1!! (ds-acetona) d = 7.80 (1H, s) ; 7.35 (2H, m) ; 7.00 (1H, m) ; 6.35 (1H, s) ; 4.35 (2H, s) ; 2.55 (2H, q) y 1.10 (3H, t) . Paso 2 Ester etílico del ácido 4- (5-etil-2,4-dihidroxi-fenil) -3- (4-fluoro-fenil) -2,4-dioxo-butírico A una solución de la 1- (5-etil-2 , 4-dihidroxi-fenil) -2- (4-fluoro-fenil) -etanona (10.3 g, 37.6 mmol) en 100 mi de piridina anhidra a 0°C, se agregó clorooxoacetato de etilo (15.4 g, 112.8 mmol) . La solución se agitó a 0°C por 4 horas y a temperatura ambiente por 16 horas. La capa acuosa se neutralizó con HCl 1M y se extrajo con 2 porciones de 100 mi de DCM. Las capas combinadas de DCM fueron luego lavadas con 2 porciones de 80 mi de HCl 2M, con 100 mi de carbonato ácido de sodio saturado, 100 mi de salmuera y se secaron con sulfato de sodio. Después de la filtración y evaporación del solvente, se obtuvieron 11.4 g de un aceite café oscuro. Rf = 0.22 (acetato de etilo :n-hexano/l ·.2 ) . La LCMS muestra que ésta es una mezcla del producto deseado [(?-1G = 373.1, TA = 7.27) y el carboxilato de cromeno ciclizado [(M-l)~ = 355.4, TA = 7.83) en una proporción de aproximadamente 6:1. Una pequeña cantidad de la muestra se purificó mediante TLC preparativa para el análisis espectroscóspico . RMN-1!. (d6-acetona) d = 7.75 (1H, s) ; 7.30 (2H, m) ; 7.00 (1H, m) ; 6.45 (1H, s) ; 4.65 (1H, s) ; 4.25 (2H, q) ; 2.55 (2H, q) y 1.10 (6H, t) . Paso 3 Ester etílico del ácido 6-etil-3- (4-fluoro-fenil) -7-hidroxi-4-oxo-4H-cromen.-2-carboxi.lico El éster etílico del ácido 4- (5-etil-2 , 4-dihidroxi-fenil)-3- (4-fluoro-fenil) -2, -dioxo-butírico (3.22 g, 8.6 mmol) se calentó a reflujo en una mezcla de HCl 0.8 y metanol (20 ml/20 mi) por 3 horas a 100°C. Después de eso, el metanol se evaporó y la capa acuosa se extrajo con 2 porciones de 60 mi de acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con 80 mi de carbonato ácido de sodio saturado, 2 porciones de 80 mi de salmuera, 80 mi de agua y se secaron con sulfato de sodio. Después de la purificación con el carbón mineral decolorante y evaporación del solvente, se obtuvieron sólidos pegajosos cafés. Estos son luego extraídos con éter caliente, y se obtuvieron sólidos de color amarillo oscuro (0.26 g) . Rf = 0.43 (acetato de etilo :n-hexano/l: 2) . LC S: ( + 1)+ = 357.3 (TA = 7.83). R N-½ (d6-acetona) d = 9.75 (1H, s); 7.80 (1H, s); 7.25 (2H, m) ; 7.10 (1H, m) ; 6.90 (1H, s); 4.05 (2H, q) ; 2.70 (2H, q) ; 1.20 (3H, t) y 0.95 (3H, t) . Paso 4 Éster etílico del ácido 6-etil-3- (4-fluoro-fenil) -7-metoxi—4-oxo-4H-cromen-2-carboxílico Se agregó yodometano (0.10 mi, 12 equivalentes) a una solución del éster etílico del ácido 6-etil-3- (4-fluoro-fenil) -7-hidroxi-4-oxo-4H-cromen-2-carboxílico (50 rag, 0.14 mmol) y carbonato de potasio (58 mg, 3.0 equivalentes) en acetona, y la mezcla se calentó a reflujo toda la noche. Los materiales volátiles se evaporaron luego a vacío y el residuo se dividió entre 15 mi de agua y 15 mi de acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó hasta sequedad a vacío para dar un producto cristalino blanco (45 mg, 87% de rendimiento) . ¾ (CDCI3), 7.96 (1H, s, Ar-H) , 7.27 (2H, m, Ar-H) , 7.12 (2H, m, Ar-H), 6.92 (1H, s, Ar-H), 4.16 (2H, q, C02CH2CH3 ), 3.95 (3H,s, OCH3), 2.71 (3H, q, CH2CH3) , 1.24 (3H, t, C02CH2CH3 ) , 1.04 (3H, t, CH2CH3) . Paso 5 Hidroxiamida del ácido 5- (5-etil-2-hidroxi-4-metoxi-feníl) -4- (4-fluoro-feni1) -isoxazol-3-c rboxí1ico Al éster etílico del ácido 6-etil-3- (4-fluoro-fenil) -7-metoxi-4-oxo-4H-cromen-2-carboxílico (25 mg, 0.068 mmol) en 2.6 mi de etanol se agregó hidroxilamina (al 50% en agua, 1 mi) y la solución se agitó por 48 horas. Los materiales volátiles se evaporaron a vacío y el residuo se purificó mediante TLC preparativa (10% de metanol en DCM) para dar el producto deseado como un sólido claro (3 mg, 12% de rendimiento) .
LCMS (LCT) tu = 6.54, S m/z 373.17 [M+H]+ ¾ (de-Acetona) , 10.73 (1H, s amplio), 8.59 (1H, s amplio) 7.39 (2H, m, Ar-H) , 7.07 (2H, m, Ar-H) , 7.00 (1H, s, Ar-H) 6.55 (1H, s, Ar-H) , 3.82 (3H, s, OCH3) , 2.48 (2H, q, CH2CH3) 1.30 (1H, s amplio), 1.01 (3H, t, CH2CH3) . Ejemplo 90 Hidroxiamida del ácido 5- (5-etil-2 4-dihidroxi-fenil) -4- (4 fl oro-feni1) -isoxazol-3-carboxí1ico Al éster etílico del ácido 6-etil-3- (4-fluoro-fenil) -7-hidroxi-4-oxo-4H-cromen-2-carboxílico (25 mg, 0.070 mmol) en 2.5 mi de etanol se agregó hidroxxlamina (al 50% en agua, 1 mi) y la solución se agitó por 48 horas. Los materiales volátiles se evaporaron a vacío y el residuo se purificó mediante TLC preparativa (15% de metanol en DCM) para dar el producto deseado como un sólido café (2 mg, 8% de rendimiento) . LCMS (LCT) tR - 5.63, MS m/z 359.13 [M+H]+ ¾ (de-Acetona), 10.72 (1H, s amplio, CONH) , 8.69 (1H, s amplio, Ar-OH) , 8.59 (1H, s amplio, Ar-OH) , 7.39 (2H, m, Ar-H), 7.06 (2H, m, Ar-H), 6.99 (1H, s, Ar-H), 6.52 (1H, s, Ar-H), 2.49 (2H, q, CH2CH3), 1.31 (1H, s amplio), 1.08 (3H, t, CH2CH3) .
Resultados Biológicos La actividad intrínseca de ATPasa de la HSP90 puede ser medida utilizando HPS90 de levadura como un sistema modelo. El ensayo, basado en el uso verde de malaquita para la medición del fosfato inorgánico, se utilizó para probar la actividad inhibitoria de HPS90 de algunos de los compuestos de los Ejemplos de la presente. Ensayo de ATPasa de Verde de Malaquita Materiales Los productos químicos son de la más alta pureza comercialmente disponibles y todas las soluciones acuosas son elaboradas en agua AR. Debido a la necesidad de reducir al mínimo la contaminación con fosfato inorgánico, deben ser tomadas precauciones con las soluciones y aparatos utilizados en los ensayos . El material de vidrio y los potenciómetros son enjuagados con agua bidestilada o desionizada antes del uso y, siempre que sea posible, debe ser utilizado material de plástico. Deben portarse guantes para todos los procedimientos . (1) Placas de pozos múltiples de poliestireno de fondo plano de 384 pozos Greiner (Greiner 781101) o de 384 pozos Costar (VWR) . (2) Amortiguador de ensayo (a) Tris-HCl 100 mM, pH 7.4, (b) cloruro de potasio 150 mM, (c) cloruro de magnesio 6 mM. Almacenados a temperatura ambiente. (3) Verde de malaquita al 0.0812% (p/v) (M 9636, Sigma Aldrich Ltd., Poole, Reino Unido). Almacenado a temperatura ambiente. (4) alcohol polivinilico al 2.32% (p/v) USP (P 1097, Sigma Aldrich Ltd, Poole, Reino Unido) en agua a ebullición (ver Comentario 1) , se dejó enfriar y se almacenó a temperatura ambiente. (5) molibdato de amonio al 5.72% (p/v) en ácido clorhídrico 6M. Almacenado a temperatura ambiente. (6) citrato de sodio al 34% (p/v) . Almacenado a temperatura ambiente . (7) sal disódica del ATP 100 m , de calidad especial (47699, Sigma Aldrich) . Almacenado a -20°C. (8) proteína HSP90 de levadura expresada en E. coli, purificada a > 95% (ver por ejemplo, Panaretou et al., 1998) y almacenada en alícuotas 50 µ? a -80°C. Método 1. Diluir los compuestos de prueba a 500 µ? en agua AR (la concentración DMSO será de 2.5%). Transferir 2.5 µ? de estos compuestos directamente de la placa hija a la placa de ensayo, dando una concentración final de ensayo de 100 µ?. Para obtener valores de IC50 de 12 puntos, realizar diluciones en serie 1:2 para producir un intervalo de concentraciones de ensayo desde 100 µ? hasta 97.6 nM (2.5% de DMSO), y transferir 2.5 µ? de cada concentración a la placa de ensayo . La columna 1 en la placa de ensayo no contiene compuesto, como un control negativo. Una hilera adicional sin compuesto está bien utilizada como un antecedente. Preparar ATP mediante la dilución la reserva de 100 mM a 925 |iM con el amortiguador de ensayo, y tomar alícuotas de 5 µ? del ATP diluido hacia cada pozo incluyendo los controles (concentración de ensayo final 370 UM) . Agregar 5 µ? de amortiguador a la hilera antecedente. Diluir la preparación enzimática a 1.05 µ? con el amortiguador de ensayo, y colocar la alícuota de 5 µ? dentro de cada pozo de compuesto y a la columna de control negativo. Recolectar los reactivos hacia el fondo del pozo, cubrir la placa con sello de placa e incubar toda la noche a 37°C. A primera hora en la mañana se prepara el Reactivo de Verde de Plaguita. Se agregan 2 partes de Solución de Verde de Malaquita, 1 parte de solución de Alcohol Polivinílico, 1 parte de Solución de Molibdato de Amonio, y 2 partes de agua AR. Se invierte para mezclar, y se deja aproximadamente a 1 hora hasta que el color se vuelve de café a amarillo dorado . Se agregan 40 µ? de Reactivo de Verde de Malaquita a cada pozo, se deja 5 minutos para gue se desarrolle el color. 9. Agregar 5 µ? de Reactivo de Citrato de Sodio a cada pozo (ver comentario 2). 10. Volver a cubrir con el sello de placa y agitar sobre el agitador de placas por al menos 15 minutos . 11. Medir la Absorbancia a 620 nM utilizando un lector de placas (por ejemplo, Victor, Perkin Elmer Life Sciences, Milton Keynes, Reino Unido) . Bajo estas condiciones, la absorbancia control es de 0.9 a 1.4, y el antecedente es de 0.2-0.35, dando una proporción de señal ~ 12. El factor Z' calculado a partir de los datos obtenidos utilizando estas condiciones está entre 0.6 y 0.9. Comentarios 1. El alcohol polivinílico se disuelve en agua a ebullición con dificultad y se requiere agitación por 2 a 3 horas. 2. El intervalo de tiempo entre la adición del reactivo de verde de malaquita y el citrato de sodio debe ser mantenido tan corto como sea posible, con el fin de reducir la hidrólisis no enzimática del ATP. Una vez que se agrega el citrato de sodio, el color es estable por hasta 4 horas a temperatura ambiente. 3. Pueden ser agregados compuestos a las placas de ensayos utilizando el Robot Biomek TFX (Beckman Coulter) . Un surtidor Multidrop 384 (Termo Labsystems, Basingstoke, Reino Unido) puede ser convenientemente utilizado para agregar los reactivos a la placa. 4. Las condiciones de ensayo fueron optimizadas con respecto al tiempo, a la concentración de proteína y de sustrato, con el fin de lograr la concentración mínima de proteína mientras que se conserva la diferencial de señal a ruido. 5. La proporción de señal a ruido (S/N) es calculada utilizando la siguiente ecuación: (S-B)/(SD) de S)2 + (SD de B) 2 6. Para determinar la actividad específica de HPS90, se preparan un intervalo de concentraciones de fosfato inorgánico (0-10 |iM) y se mide la absorbancia a 620 nm como se describe. La actividad específica es calculada a partir de la curva de calibración resultante.
Los compuestos probados en el ensayo anterior fueron asignados a uno de dos intervalos de actividad, a saber A = < 50 uM; B = > 50 jjM, y esas asignaciones son reportadas anteriormente . Se emplea también un ensayo de inhibición de crecimiento de evaluación para los inhibidores de HSP90 candidato: Evaluación de citotoxidad por el ensayo de sulforrodamina B (SRB) ; cálculo de la concentración inhibitoria al 50% (IC50) Día 1 1. Determinar el número de células por el hemocitómetro 2. Utilizar un pipeteador múltiple de 8 canales, agregar 160 µ? de la suspensión celular (3600 células/pozo ó 2 x 104 células/mi) a cada pozo de una placa de microtitulación de 96 pozos. 3. Incubar toda la noche a 37°C en una incubadora de CO2 Día 2 4. Se preparan las soluciones de reserva de los fármacos, y se realizan diluciones en serie de cada fármaco en medio para dar las concentraciones finales en los pozos . 5. Utilizando un pipeteador múltiple, se agregan 40 µ? del fármaco (a una concentración final de 5x) a los pozos por cuadriplicado. 6. Los pozos control están en cualquier lado de las placas de 96 pozos, donde se agregan 40 µ? del medio. 7. Incubar las placas de la incubadora de C02 por 4 días (48 horas) .
Día 6 8. Vaciar el medio al lavabo y sumergir la placa lentamente en ácido tricloroacético al 10% enfriado con hielo (TCA) . Dejar por aproximadamente 30 minutos sobre hielo. 9. Lavar las placas tres veces en agua de la llave al sumergir las placas en baño de agua de la llave y desechándola. 10. Secar en incubadora 11. Agregar 100 µ? de SRB al 0.4% en ácido acético al 1% a cada pozo (excepto la última hilera (a mano derecha) de la placa de 96 pozos, este es el control de 0%, por ejemplo sin fármaco, sin tinción. La primera hilera será el control del 100% sin fármaco, pero con tinción) . Dejar por 15 minutos . 12. Lavar la tinción de SRB no enlazada con cuatro lavados de ácido acético al 1% . 13. Secar las placas en la incubadora. 14. Solubilizar SRB utilizando 100 µ? de la base de Tris 10 mM y colocar las placas sobre el agitador de placas por 5 minutos . 15. Determinar la absorbancia a 540 nm utilizando un lector de placas . Calcular la absorbancia media para los pozos por cuadriplicado y expresar como un porcentaje del valor para el control, pozos no tratados. 16. Trazar gráficamente los valores de absorbancia en % versus la concentración logarítmica del fármaco y determinar la IC50. A manera de ilustración, el compuesto del Ejemplo 2 dio una IC50 en el intervalo nA" (< 50 uM) para el ensayo de detención del crecimiento de SRB. Un ensayo de polimerización de fluorescencia fue también empleado para la evaluación de algunos de los compuestos de los Ejemplos: Ensayo de Polarización de Fluorescencia La polarización de fluorescencia {también conocida como anisotropía de fluorescencia} mide la rotación de una especie fluorescente en solución, donde entre más grande la molécula más polarizada es la emisión de fluorescencia. Cuando el fluoróforo es excitado con luz polarizada, la luz emitida es también polarizada. El tamaño molecular es proporcional a la polarización de la emisión fluorescencia. La sonda marcada con fluoresceína-RBT0045864-FAM- se enlaza a HSP90 {humano de longitud completa, de levadura de longitud completa o HSP90} de dominio N-terminal} y la anisotropía {rotación del complejo sonda¡proteína} es medida. El compuesto de prueba es agregado a la placa de ensayo, dejada para equilibrarse y se mide nuevamente la anisotropía. Cualquier cambio en la anisotropía es debido al enlace competitivo del compuesto a HSP90, con lo cual se libera la sonda. Materiales Los productos químicos son de la más alta pureza comercialmente disponibles y todas las soluciones acuosas son aforadas en agua AR. 1) Placa de ensayo negra de 96 pozos Costar #3915. 2) Amortiguador de ensayo de (a) Tris 100 mM pH 7.4; (b) cloruro de potasio 20 iri ; (c) cloruro de magnesio 6 mM almacenado a temperatura ambiente. 3) BSA (albúmina sérica bovina) 10 mg/ml (New England Biolabs #9001S) . 4) sonda de 20 mM en concentración de reserva de DMSO al 100%. Almacenado en la oscuridad a temperatura ambiente. La concentración de trabajo es de 200 nM diluida en agua AR y almacenada a 4°C. La concentración final en el ensayo es de 80 nM. 5) Proteína HSP90 de longitud completa humana, expresada en E. coli, purificada >95% (ver por ejemplo, Panaretou et al., 1998) y almacenada en alícuotas de 50 L a -80°C Protocolo 1) Agregar 100 µ? de amortiguador lx a los pozos 11A y 12A (= FP BLNK) . 2) Preparar la mezcla de ensayo - todos los reactivos son mantenidos sobre hielo con una tapa sobre la cubeta ya que la sonda es sensible a la luz. i. Concentración final" • 1x amortiguador HSP90 FP 10 mi 1x • BSA 10 mg/ml (NEB) 5.0 µ? 5 µg ml • sonda 200 µ 4.0 µ? 80 nM • HSP90 humana de longitud completa 6.25 µ? 200 nM 3. Se colocan alícuotas de 100 µ? de la mezcla de ensayo en todos los otros pozos. 4. Se sella la placa y se deja en la oscuridad a temperatura ambiente por 20 minutos para equilibrar. Placa de Dilución del Compuesto - series de dilución 1 x 3 1) En una placa de fondo en v de 96 pozos clara -{# VWR 007/008/257} al agregar 10 µ? de D SO al 100% a los pozos Bl a Hll 2) A los pozos Al a All agregar 17.5 µ? de DMSO al 100%. 3) Agregar 2.5 µ? de cpd a Al. Esto da la reserva de 2.5 mM {50x} cpd - asumiendo cpds 20 mM. 4) Repetir para los pozos A2 a A10. El control en las columnas 11 y 12. 5) Transferir 5 µ? de la hilera A a la hilera B - no la columna 12. Mezclar perfectamente 6) Transferir 5 µ? de la hilera B a la hilera C. Mezclar perfectamente 7) Repetir a la hilera G. 8) No agregar ningún compuesto a la hilera H - ésta es la hilera 0. 9) Esto produce una serie de diluciones 1 x 3 de 50 µ? hasta 0.07 µ?. 10) En el pozo B12 preparar 20 µ? del compuesto estándar 100 UM. 11) Después de la primera incubación la placa de ensayo es leída sobre un lector de placas Fusión*1 a-FP (Packard BioScience, Pangbourne, Berkshire, Reino Unido) . 12) Después de la primera lectura, se agregan 2 µ? del compuesto diluido a cada pozo para las columnas 1 a la 10. En la columna 11 {proporciona la curva estándar} únicamente se agrega Bll - Hll . Se agregan 2 µ? del compuesto estándar 100 mM a los pozos B12 - H12 {es el control positivo} . 13) El factor Z' es calculado a partir de los controles cero y los pozos positivos. Esto da típicamente un valor de 0.7 - 0.9.
Los compuestos probados en el ensayo anterior fueron asignados a uno de dos intervalos de actividad, a saber A = < 10 µ?; B = > 10 |iM, y esas asignaciones son reportadas anteriormente. A manera de ilustración, el compuesto del Ejemplo 2 dio una IC50 en el intervalo "A". REFERENCIAS Son citadas un número de publicaciones anteriormente con el fin de describir más completamente y de describir la invención y el estado de la técnica al cual pertenece " la invención. Las citas completas para estas referencias son proporcionadas en seguida. Cada una de estas referencias es incorporada en la presente por referencia en su totalidad, en la presente descripción. Argón Y y Simen BB. 1999 "Grp94, an ER chaperone with protein and peptide binding properties", Seroin. Cell Dev. Biol .. Vol. 10, pp. 495-505. Bi lmakers M-JJE, Marsh M. 2000 "Hsp90 is essential for the synthesis and subseguent membrane association, but not the maintenance, of the Src-kinase p561ck", Molecular Bioloqy of the Cell. 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Claims (6)

  1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. El uso de un compuesto de la fórmula (A) o (B) o una sal, N-óxido, hidrato o solvato del mismo, o un profármaco del mismo, en la preparación de una composición para la inhibición de la actividad de HSP90. (A) (B) en donde Ri es un grupo de la fórmula (IB) en donde en cualquier combinación compatible R representa uno o más sustxtuyentes opcionales, Alk1 y Alk2 son radicales alquileno de 1 a 6 átomos de carbono o alquenileno de 2 a 6 átomos de carbono divalentes opcionalmente sustituidos, p, r y s son independientemente 0 ó 1, z es -O-, -S-, -(C=0)-, -(C=S)-, S02-, C(=0)0-, -C(=0)NRA, -C(=S)NRA, -S02NRA-, -NRAC(=0)-, NRAS02- O -NRa- en donde RA es hidrógeno o alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, y Q es hidrógeno o un radical carboxíclico o heterocíclico opcionalmente sustituido; R2 es (i) un grupo de la fórmula (IA) : en donde en cualquier combinación compatible Ar1 es un radical arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido, y Alk1, Alk2, p, r, s, Z, RA y Q son como se definieron en relación a Ri; (ii) un radical carboxamida; o (iii) un anillo carbocíclico o heterocíclico no aromático en donde un carbono del anillo está opcionalmente sustituido y/o un nitrógeno del anillo está opcionalmente sustituido con un grupo de la fórmula - (Alk1) p- (Z) r- (Alk2) S-Q en donde Q, Alk1, Alk2, %r P r y s son como se definieron anteriormente en relación al grupo (IA) ; y R3 es hidrógeno, cicloalquilo opcionalmente sustituido, cicloalquenilo, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, alquenilo de 1 a 6 átomos de carbono o alquinilo de 1 a 6 átomos de carbono; o un grupo carboxilo, carboxamida, o éster de carboxilo . 2. El uso de un compuesto de la fórmula (A) o (B) o una sal, N-óxido, hidrato o solvato del mismo, o un profármaco del mismo, en la preparación de una composición para la inhibición de la actividad de HSP90. (A) (B) en donde Ri es un grupo de la fórmula (IA) : -Ar1-(Alk1)p-(Z)r-(Alk2)s-Q (IA) en donde en cualquier combinación compatible Ar1 es un radical arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido, Alk1 o Alk2 son radicales alquileno de 1 a 6 átomos de carbono o alquenileno de 2 a 6 átomos de carbono, p, r y s son independientemente 0 ó 1, Z es -O-, -S-, -(C=0)-, -(C=S)-, -S02-, -C(=0)0-, - C(=0) RA-, -C(=S)NRA-, -S02NRA-, -NRAC (=0) -, -NRAS02- o - RA- en donde RA es hidrógeno o alquilo de 1 a 6 átomos de carbono y Q es hidrógeno o un radical carbocíclico o heterocíclico opcionalmente sustituido; R2 es (i) un grupo de la fórmula (IA) como se define en relación a Ri; (ii) un radical carboxamida; o (iii) un anillo carbocíclico o heterocíclico no aromático en donde un carbono del anillo está opcionalmente sustituido, y/o un nitrógeno del anillo está opcionalmente sustituido con un grupo de la fórmula - (Alk1^- (Z)r- (Alk2)s-Q en donde Q, Alk1, Alk2, Z, p, r y s son como se definieron anteriormente en relación al grupo (IA); y R3 es un grupo carboxamida. 3. El uso de conformidad con la reivindicación 1 ó la reivindicación 2 , en donde el compuesto es uno de la fórmula (A) , o una sal, N-óxido, hidrato o solvato del mismo, o un profármaco del mismo. 4. El uso de conformidad con la reivindicación 2 ó la reivindicación 3 , cuando es dependiente de la reivindicación 2, en donde ¾ tiene la fórmula (IB) en donde Alk1, Alk2, p, r, s y Q son como se definen en la reivindicación 1, y R representa uno o más sustituyentes opcionales . 5. El uso de conformidad con cualquier reivindicación precedente, en donde el átomo del carbono del anillo adyacente al grupo hidroxilo en el radical (IB) está no sustituido . 6. El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde, en Ri, cada uno de p, r y s es 0, y Q es hidrógeno. 7. El uso de conformidad con la reivindicación 2 o cualquiera de las reivindicaciones 3 a 6, cuando son dependientes de la reivindicación 2, en donde ¾. es fenilo opcionalmente sustituido. 8. El uso de conformidad con la reivindicación 6, en donde Ri es 2-hidroxifenilo, opcionalmente sustituido además con uno o más hidroxilo, metilo, etilo, etoxi, etoxi, cloro o bromo . 9. El uso de conformidad con la reivindicación 6, en donde Ri es 2 , 4-dihidroxifenilo, sustituido en la posición 5 por un sustituyente lipofílico pequeño. 10. El uso de conformidad con la reivindicación 9, en donde el sustituyente lipofílico pequeño es metilo, etilo, isopropilo, isobutilo, ter-butilo, cloro o bromo. 11. El uso de conformidad con la reivindicación 9 o la reivindicación 10, en donde los grupos hidroxilo en Rl están protegidos por grupos que son escindidos en el cuerpo para liberar los grupos hidroxilo. 12. El uso de conformidad con la reivindicación 11, en donde los grupos protectores son metilcarboniloxi , o isopropilamino-carboniloxi . 13. El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde, en Ri, p, r y s son cada uno 0, y Q es un anillo carbocíclico o heterocíclico opcionalmente sustituido . 1 . El uso de conformidad con la reivindicación 13 , en donde Q es un anillo fenilo o piridilo opcionalmente sustituidos . 15. El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde, en Ri, p y/o s son cada uno 1 y r es 0. 16. El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde, en ¾, cada uno de p, r y s es 1. 17. El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde, en ¾, p, y s son cada uno 0, y r es 1. 18. El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde, R2 es un grupo de la fórmula (IA) . 19. El uso de conformidad con la reivindicación 18, en donde R2 es 2-, 3-, ó 4-piridilo, 2- o 3-furanilo,
  2. 2- ó 3-tienilo o tiazolilo opcionalmente sustituidos. 20. El uso de conformidad con la reivindicación 19, en donde los sustituyentes opcionales presentes en R2 se seleccionan de metoxi, etoxi, metilendioxi , etilendioxi, fluoro, cloro, bromo, y trifluorometilo . 21. El uso de conformidad con la reivindicación 18, en donde R2 es fenilo sustituido en la posición 4 por metoxi, etoxi, fluoro, cloro, bromo, piperazinilo, N-metilpiperazinilo, o piperidinilo. 22. El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17 , en donde R2 tiene la estructura en donde el grupo amino sustituido -MR R es un grupo de solubilización. 23. El uso de conformidad con la reivindicación 22, en donde el grupo de solubilización es seleccionado de morfolinilo, piperidinilo, piperazinilo, pirrolidinilo, etilamino, isopropilamino, dietilamino, ciclohexilamino, ciclopentilamino, metoxietilamino, piperidin-4-ilo, N-acetilpiperazinilo, metilsulfonilamino, tiomorfolinilo, tiomorfolinildióxido, 4-hidroxietilpiperidinilo, y 4-hidroxipiperidinilo. 24. El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, en donde R2 es un grupo carboxamida de la fórmula -COMRB (Alk) nRA en donde Alk es un radical alquileno, alquenileno o alquinileno divalentes, por ejemplo un radical -CH2-, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2-, -CH2CH=CH-, o -CH2CCCH2- y el radical Alk puede estar opcionalmente sustituido, n es 0 ó 1, RB es hidrógeno o un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono o alquenilo de 2 a 6 átomos de carbono, por ejemplo metilo, etilo, n- o iso-propilo, o alilo, RA es hidroxilo o carbocíclico opcionalmente sustituido, por ejemplo fenilo sustituido con hidroxilo y/o con cloro, y 3 , 4-metilendioxifenilo; o heterociclilo, por ejemplo piridilo, furilo, tienilo, N-piperazinilo, o N-morfolinilo, cualquiera de cuyos anillos heterocíclicos puede estar sustituido, o RA y RB tomados conjuntamente con el nitrógeno al cual éstos están enlazados forman un anillo N-heterocíclico que puede contener opcionalmente uno o más heteroátomos adicionales seleccionados de oxígeno, azufre y nitrógeno, y los cuales pueden estar opcionalmente sustituidos sobre uno o más de los átomos de carbono o nitrógeno del anillo, los ejemplos de tales anillos N-heterocíclicos incluyen morfolino, piperidinilo, piperazinilo y N-fenilpiperazinilo . 25. El uso de conformidad con la reivindicación 1 o cualquiera de las reivindicaciones 3 a 24 cuando son dependientes de la reivindicación 1, en donde R3 es hidrógeno, metilo, etilo, n- o iso-propilo, trifluorometilo, hidroxietilo, metilsulfonaminometilo, o un grupo carboxamida -CONRB(Alk)nRA como se define de conformidad con la reivindicación 23. 26. El uso de conformidad con cualquier reivindicación precedente, en donde R3 es un grupo carboxamida -CONRB(Alk)nRA como se define en la reivindicación 24. 27. El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 24, en donde R3 es etilaminocarbonilo o isopropilaminocarbonilo . 28. El uso de conformidad con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde el compuesto tiene la fórmula (ID) o el regioisomero de la fórmula B del mismo. (ID) en donde cada R independientemente representa un sustituyente opcional y R3 representa un grupo carboxamida. 29. El uso de conformidad con la reivindicación 1 o la reivindicación 2 , en donde el compuesto tiene la fórmula (IE) o el regioisomero de la fórmula B del mismo. (IE) en donde R3 representa un grupo carboxamida; R9 representa -CH2ER10R1:L o NR10R1:L en donde el grupo amino sustituido -NR10R1:L es un grupo de solubilización; y R representa un sustituyente opcional . 30. El uso de conformidad con la reivindicación 29, en donde R3 es etilaminocarbonilo CH3CH2 HC (=0) -, o isopropilaminocarbonilo (CH3) 2CHNHC (=0) ; el grupo amino sustituido -NR10R1:L en R9 es morfolinilo, piperidinilo, piperazinilo , pirrolidinilo, etilaraino, isopropilamino, dietilamino, ciclohexilamino, ciclopentilamino, metoxietilamino, piperidin-4-ilo, N-acetilpiperazinilo, N-metilpiperazinilo, metilsulfonilamino, tiomorfolinilo, tiomorfolinil-dióxido, 4-hidroxietilpiperidinilo y 4-hidroxipiperidinilo) ; y Rg es etilo, isopropilo, bromo o cloro . 31. El uso de conformidad con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde el compuesto se selecciona de: etilamida del ácido 5- (2 , 4-di idroxi-5-isopropil-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (2 , 4-dihidroxi-5-isopropil-fenil) -4- (4-piperidin-l-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 4- (4-dietilaminometil-fenil) -5- (2, 4-dihidroxi-5-isopropil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (2 , 4-dihidroxi-5-isopropil-fenil) -4- [4- (4-metil-piperazin-l-ilmetil) -fenil] -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (2 , 4-dihidroxi-5-isopropil-fenil) -4- (4-etilaminometil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (2 , 4-dihidroxi-5-isopropil fenil) -4- [4- (isopropilamino-metil) -fenil] -isoxazol-
  3. 3-carboxílico etilamida del ácido 4- (
  4. 4-ciclohexilaminometil-fenil)
  5. 5- (2 , 4-dihidroxi-5-isopropil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 4- [4- (ter-butilamino-metil) · fenil] -5- (2 , 4-dihidroxi~5-isopropil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (2 , 4-dihidroxi-5-isopropil fenil) -4-{4- [ (2-metoxi-etilamino) -metil] -fenil}-isoxazol-3-carboxílico isopropilamida del ácido 5- (2 , 4-dihidroxi-5-isopropil fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico isopropilamida del ácido 5- (2 , 4-dihidroxi-5-isopropil fenil) -4- [4- (4-metil-piperazin-l-ilmetil) -fenil] -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (5-ter-butil-2, 4-dihidroxi fenil) -4- [4- (4-metil-piperazin-l-ilmetil) -fenil] -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (5-ter-butil-2 , -dihidroxi fenil) -4- (4-piperidin-l-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (2 , 4-dihidroxi-5-isobutil fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (2 , 4-dihidroxi-5-isobutil fenil) -4 (4-piperidin-l-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (5-ter-butil-2, 4-dihidroxi fenil) -4 (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (5-ter-butil-2 , 4-dihidroxi fenil) - (4-dietilaminometil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 3- (5-cloro-2 , 4-dihidroxi-fenil) -4 (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-5-carboxílico etilamida del ácido 4- (4-dietilaminometil-fenil) -5 (4,
  6. 6-dihidroxi-2 ' -metil-bifenil-3-il) -isoxazol-3-carboxilico etilamida del ácido 4- (4-dietilaminometil-fenil) -5 (4 ' -fluoro-4 , 6-dihidroxi-bifenil-3-il) -isoxazol-3-carboxilico etilamida del ácido 4- (4-dietilaminometil-fenil) -5 (4, 6-dihidroxi-bifenil-3-il) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (2 ' -fluoro-4, 6-dihidroxi bifenil-3-il) -4- (4-pirrolidin-l-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (4, 6-dihidroxi-bifenil-3-il) -4 (4-morfolin-4-ilmetil-fenil ) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (2 , 4-dihidroxi-5-fenetil-fenil) 4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico isopropilamida del ácido 5- (5-cloro-2 , 4-dihidroxi fenil) -4- (4-piperidin-l-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 4- (4-dietilaminometil-fenil) -5- (5 etil-2, 4-dihidroxi-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (5-etil-2 , -dihidroxi-fenil) -4 [4- (4-metil-piperazin-l-ilmetil) -fenil] -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (5-etil-2 , -dihidroxi-fenil) -4-(4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (5-cloro-2 , 4-dihidroxi-fenil) -4-(4-dietilaminometil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (5-cloro-2 , 4-dihidroxi-fenil) -4-[4- (4-metil-piperazin-l-ilmetil) -fenil] -isoxazol-3-carboxilico etilamida del ácido 5- (5-cloro-2 , 4-dihidroxi-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico y las sales, hidratos, solvatos y profármacos de los mismos. 32. Un método de tratamiento de enfermedades o condiciones que responden a la inhibición de la actividad de HSP90 en mamíferos, caracterizado el método porque comprende administrarle al mamífero una cantidad de un compuesto como se define de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 31, o una sal, hidrato o solvato del mismo, efectivo para inhibir la actividad de HSP90. 33. El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 31 o un método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque la enfermedad o condición es cáncer; enfermedad viral, artritis reumatoide, asma, esclerosis múltiple, diabetes tipo I, lupus, psoriasis y enfermedad inflamatoria del intestino; fibrosis quística, retinopatía diabética, hemangiomas o endometriosis , toxicidad inducida por quimioterapia; falla para sufrir apoptósis; daño por hipoxia-isquemia debido a la elevación de Hsp70 en el corazón y el cerebro; incoherencia/CJD, enfermedad de Huntington o enfermedad de Alzheimer. 34. Un compuesto de la fórmula (A) o (B) o una sal, N-óxido, hidrato o solvato del mismo, o un profármaco del mismo, en la preparación de una composición para la inhibición de la actividad de HPS90: (A) (B) caracterizado porque Ri es un grupo de la fórmula (IB) : en donde en cualquier combinación compatible R representa uno o más sustituyentes, Alk1 y Alk2 son radicales alquileno de 1 a 6 átomos de carbono o alquenileno de 2 a 6 átomos de carbono divalentes opcionalmente sustituidos, p, r y s son independientemente 0 ó 1, Z es -O-, -S-, -(C=0)-, -(C=S)-, S02-, C(=0)0-, -C(=0)NRA, -C(=S)NRA, -S02NRA-, - RAC(=0)-, RAS02- o -NRA- en donde RA es hidrógeno o alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, y Q es hidrógeno o un radical carboxíclico o heterociclico opcionalmente sustituido; R2 es (i) un grupo de la fórmula (IA) : en donde en cualquier combinación compatible Ar1 es un radical arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido, y Alk1, Alk2, p, r, s, Z, RA y Q son como se definieron en relación a ¾.; (ii) un radical carboxamida; o (iii) un anillo carbocíclico o heterocíclico no aromático en donde un carbono del anillo está opcionalmente sustituido y/o un nitrógeno del anillo está opcionalmente sustituido con un grupo de la fórmula -(Alka)p- (Z)r- (Alk2)s-Q en donde Q, Alk1, Alk2, Z, p, r y s son como se definieron anteriormente en relación al grupo (IA) ; y R3 es hidrógeno, cicloalquilo opcionalmente sustituido, cicloalquenilo, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, alquenilo de 1 a 6 átomos de carbono o alquinilo de 1 a 6 átomos de carbono; o un grupo carboxilo, carboxamida, o éster de carboxilo. con la condición de que el compuesto no sea de las fórmulas (X) (Y) (Z) y además con la condición de que el compuesto no sea uno de los compuestos descritos en la siguiente tabla: 5 10 15 20 25 35. Un compuesto de la fórmula (A) o (B) o una sal, N-óxido, hidrato o solvato del mismo, o un profármaco del mismo, en la preparación de una composición para la inhibición de la actividad de HSP90. (A) (B) caracterizado porque Ri es un grupo de la fórmula (IA) : -Ar1-(Alk1)p-(Z)r-(Alk2)s-Q (IA) en donde en cualquier combinación compatible Ar1 es un radical arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido, Alk1 o Alk2 son radicales alquileno de 1 a 6 átomos de carbono o alquenileno de 2 a 6 átomos de carbono, di alentes, opcionalmente sustituidos, p, r y s son independientemente 0 ó 1, Z es -O-, -S-, -(C=0)-, -(C=S)-, -S02-, -C(=0)0-, - C(=0)NRA-, -C (=S)NRA-, -S02NRA-, -NRAC(=0)-, -NRAS02- o - NRA- en donde RA es hidrógeno o alquilo de 1 a 6 átomos de carbono y Q es hidrógeno o un radical carbocíclico o heterocíclico opcionalmente sustituido; R2 es (i) un grupo de la fórmula (IA) como se define en relación a Ri; (ii) un radical carboxamida; o (iii) un anillo carbocíclico o heterocíclico no aromático en donde un carbono del anillo está opcionalmente sustituido, y/o un nitrógeno del anillo está opcionalmente sustituido con un grupo de la fórmula - (Z)r- (Alk2)s-Q en donde Q, Alk1, Alk2, Z, p, r y s son como se definieron anteriormente en relación al grupo (IA); y R3 es un grupo carboxamida. 36. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 34 ó la reivindicación 35, caracterizado porgue el compuesto es uno de la fórmula (A) , o una sal, N-óxido, hidrato o solvato del mismo, o un profármaco del mismo. 37. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 35 ó la reivindicación 36, cuando es dependiente de la reivindicación 35 caracterizado porque ¾ tiene la fórmula (IB) en donde Alk1, Alk2, p, r, s y Q son como se definen en la reivindicación 1, y R representa uno o más sustituyentes opcionales . 38. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 34 a 37, caracterizado porque el átomo del carbono del anillo adyacente al grupo hidroxilo en el radical (IB) está no sustituido. 39. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 34 a 36, caracterizado porque en Ri, cada uno de p, r y s es 0, y Q es hidrógeno. 40. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 35 o cualquiera de las reivindicaciones 36 a 39, cuando son dependientes, de la reivindicación 35, caracterizado porque Ri es fenilo opcionalmente sustituido. 41. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque Ri es 2-hidroxifenilo, opcionalmente sustituido además con uno o más de hidroxilo, metilo, etilo, metoxi, etoxi, cloro o bromo. 42. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque Ri es 2,4-dihidroxifenilo, sustituido en la posición 5 por un sustituyente lipofílico pequeño. 43. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado porque el sustituyente lipofílico pequeño es metilo, etilo, isopropilo, isobutilo, ter-butilo, cloro o bromo. 4 . Un compuesto de conformidad con la reivindicación 42 o la reivindicación 43, caracterizado porque los grupos hidroxilo en Rl están protegidos por grupos que son escindidos en el cuerpo para liberar los grupos hidroxilo. 45. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 44, caracterizado porque los grupos protectores son alquilcarboniloxi o alquilaminocarboniloxi . 46. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 44, caracterizado porque los grupos protectores son metilcarboniloxi, o isopropilamino-carboniloxi . 47. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 34 a 36, caracterizado porque en Rlt p, r y s son cada uno 0, y Q es un anillo carbocxclico o heterociclico opcionalmente sustituido. 48. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 47, caracterizado porque Q es un anillo fenilo o piridilo opcionalmente sustituidos . 49. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 34 a 36, caracterizado porque en R1( p y/o s son cada uno 1 y r es 0. 50. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 34 a 36, caracterizado porque en Ri, cada uno de p, r y s es 1. 51. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 34 a 36, caracterizado porque en Rl7 p, y s son cada uno 0 , y r es 1. 52. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 34 a 51, caracterizado porque en R2 es un grupo de la fórmula (IA) . 53. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque R2 es 2-, 3-, ó 4-piridilo, 2- o 3-furanilo, 2- ó 3-tienilo o tiazolilo opcionalmente sustituidos . 54. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 53, caracterizado porgue los sustituyentes opcionales presentes en R2 se seleccionan de metoxi, etoxi, metilendioxi , etilendioxi, fluoro, cloro, bromo, y trifluorometilo . 55. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque R2 es fenilo sustituido en la posición 4 por metoxi, etoxi, fluoro, cloro, bromo, piperazinilo, N-metilpiperazinilo, o piperidinilo . 56. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 34 a 52, caracterizado porque R2 tiene la estructura parcial: en donde el grupo amino sustituido -NR R es un grupo de solubilización. 57. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 56, caracterizado porque el grupo de solubilización es seleccionado de morfolinilo, piperidinilo, piperazinilo, pirrolidinilo, etilamino, isopropilamino, dietilamino, ciclohexilamino, ciclopentilamino, metoxietilamino, piperidin-4-ilo, N-acetilpiperazinilo, metilsulfonilamino, tiomorfolinilo, tiomorfolinildióxido, 4-hidroxietilpiperidinilo, y -hidroxipiperidin.ilo . 58. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 34 a 51, caracterizado porque R2 es un grupo carboxamida de la fórmula -CONRB(Alk)nRA en donde Alk es un radical alquileno, alquenileno o alquinileno di alentes, por ejemplo un radical -CH2-, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2-, -CH2CH=CH-, o -CH2CCCH2- y el radical Alk puede estar opcionalmente sustituido, n es 0 ó 1, RB es hidrógeno o un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono o alquenilo de 2 a 6 átomos de carbono, por ejemplo metilo, etilo, n- o iso-propilo, o alilo, RA es hidroxilo o carbocíclico opcionalmente sustituido, por ejemplo fenilo sustituido con hidroxilo y/o con cloro, y 3 , 4-metilendioxifenilo; o heterociclilo, por ejemplo piridilo, furilo, tienilo, N-piperazinilo, o N-morfolinilo, cualquiera de cuyos anillos heterocíclicos puede estar sustituido, o RA y RE tomados conjuntamente con el nitrógeno al cual éstos están enlazados forman un anillo N-heterocíclico que puede contener opcionalmente uno o más heteroátomos adicionales seleccionados de oxígeno, azufre y nitrógeno, y los cuales pueden estar opcionalmente sustituidos sobre uno o más de los átomos de carbono o nitrógeno del anillo, los ejemplos de tales anillos N-heterocíclicos incluyen morfolino, piperidinilo, piperazinilo y N-fenilpiperazinilo . 5 . Un compuesto de conformidad con la reivindicación 34 o cualquiera de las reivindicaciones 36 a 58 cuando son dependientes de la reivindicación 34, caracterizado porgue R3 es hidrógeno, metilo, etilo, n- o iso-propilo, trifluorometilo, hidroxietilo, metilsulfonaminometilo, o un grupo carboxamida -CONRB (Alk) nRA como se define de conformidad con la reivindicación 58. 60. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 34 a 59, caracterizado porque R3 es un grupo carboxamida -CO RB (Alk) nRA como se define en la reivindicación 58. 61. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 34 a 60, caracterizado porque R3 es etilaminocarbonilo o isopropilaminocarbonilo . 62. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 34 o la reivindicación 35, caracterizado porque el compuesto tiene la fórmula (ID) o el regioisómero de la fórmula B del mismo. (ID) en donde cada R independientemente representa un sustituyente opcional y R3 representa un grupo carboxamida. 63. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 34 o la reivindicación 35, caracterizado porque el compuesto tiene la fórmula (IE) o el regioisómero de la fórmula B del mismo. en donde R3 representa un grupo carboxamida; Rg representa -CH2NR10R1:L o NR10R1:L en donde el grupo amino sustituido -NR^R11 es un grupo de solubilización; y R8 representa un sustituyente opcional . 64. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 63, caracterizado porque R3 es etilaminocarbonilo CH3CH2NHC (=0) - , o isopropilaminocarbonilo (CH3)2CH HC (=0) ; el grupo amino sustituido -NR10R1:L en R9 es morfolinilo, piperidinilo, piperazinilo, pirrolidinilo, etilamino, isopropilamino, dietilamino, ciclohexilamino, ciclopentilaitd.no , metoxietilamino, piperidin-4-ilo, N-acetilpiperazinilo, N-metilpiperazinilo, metilsulfonilamino, tiomorfolinilo, tiomorfolinil-dióxido, 4-hidroxietilpiperidinilo o 4-hidroxipiperidinilo; y Rs es etilo, isopropilo, bromo o cloro. 65. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 34 o la reivindicación 35, caracterizado porgue se selecciona de: etilamida del ácido 5- (2 , 4-dihidroxi-5-isopropil-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil ) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (2 , 4-dihidroxi-5-isopropil-fenil) -4- (4-piperidin-l-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 4- (4-dietilaminometil-fenil) -5-(2 , 4-dihidroxi-5-isopropil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (2 , 4-dihidroxi-5-isopropil-fenil) -4- [4- (4-metil-piperazin-l-ilmetil) -fenil] -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (2 , 4~dihidroxi-5-isopropil-fenil) -4- (4-etilaminometil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (2 , 4-dihidroxi-5-isopropil-fenil) -4- [4- (isopropilamino-metil) -fenil] -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 4- (4-ciclohexilaminometil-fenil) -5- (2 , -dihidroxi-5-isopropil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 4- [4- (ter-butilamino-metil) -fenil] -5- (2 , 4-dihidroxi-5-isopropil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del "ácido 5- (2 , 4-di idroxi-5-isopropil-fenil) -4-{4- [ (2-metoxi-etilamino) -metil] -fenil}-isoxazol-3-carboxilico isopropilamida del ácido 5- (2 , 4-dihidroxi-5-isopropil fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico isopropilamida del ácido 5- (2 , 4-dihidroxi-5-isopropil fenil) -4- [4- ( 4-metil-piperazin-l-ilmetil ) -fenil] -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (5-ter-butil-2 , -di idroxi fenil) -4- [4- (4-metil-piperazin-l-ilmetil ) -fenil ] -isoxazol-3-carboxilico etilamida del ácido 5- (5-ter-butil-2 , 4-dihidroxi fenil) -4- (4-piperidin-l-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (2 , 4-dihidroxi-5-isobutil fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (2 , -dihidroxi-5-isobutil fenil) -4 (4-piperidin-l-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (5-ter-butil-2 , 4-dihidroxi fenil) -4 (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (5-ter-butil-2, 4-dihidroxi fenil) -4 (4-dietilaminometil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 3- (5-cloro-2 , -dihidroxi-fenil) -4 (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-5-carboxílico etilamida del ácido 4- (4-dietilaminometil-fenil) -5 (4, 6-dihidroxi-2 ' -metil-bifenil-3-il) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 4- (4-dietilaminometil-fenil) -5 ( ' -fluoro-4 , 6-dihidroxi-bifenil-3-il) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 4- (4-dietilaminometil-fenil) -5 ( , 6-dihidroxi-bifenil-3-il) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (2 ' -fluoro-4, 6-dihidroxi-bifenil-3-il) -4- (4-pirrolidin-l-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (4, 6-dihidroxi-bifenil-3-il) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (2 , 4-dihidroxi-5-fenetil-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico isopropilamida del ácido 5- (5-cloro-2, 4-dihidroxi-fenil) -4- (4-piperidin-l-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 4- (4-dietilaminometil-fenil) -5- (5-etil-2 , 4-dihidroxi-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (5-etil-2 , 4-dihidroxi-fenil) -4- [4- (4-metil-piperazin-l-ilmetil) -fenil] -isoxazol-3-carboxilico etilamida del ácido 5- (5-etil-2 , -dihidroxi-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (5-cloro-2 , -dihidroxi-fenil) -4- ( -dietilaminometil-fenil) -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (5-cloro-2, 4-dihidroxi-fenil) -4- [4- (4-metil-piperazin-l-ilmetil) -fenil] -isoxazol-3-carboxílico etilamida del ácido 5- (5-cloro-2 , 4-dihidroxi-fenil) -4- (4-morfolin-4-ilmetil-fenil) -isoxazol-3-carboxilico y sales, hidratos, solvatos y profármacos de los mismos. 66. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 34 a 65, caracterizado porgue es para el uso en medicina humana o veterinaria. 67. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 34 a 65, o una sal, hidrato o solvato del mismo, junto con un portador farmacéuticamente aceptable. 68. Una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 67 , caracterizada porque está en la forma de una solución o suspensión del compuesto en un portador estéril, fisiológicamente aceptable, por ejemplo solución salina acuosa. 69. Una composición f rmacéutica de conformidad con la reivindicación 67, caracterizada porque está en la forma de una solución o suspensión del compuesto en una solución salina acuosa estéril. 70. Un método para inhibir la actividad de HSP90, caracterizado porque comprende poner en contacto in vitro, una enzima de HSP90 y un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 34 a 65.
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