MXPA02010275A - Usos de citocina; composiciones; metodos. - Google Patents

Abstract

Se proveen agonistas o antagonistas de citocinas designadas IL- 174, y vanos metodos para su uso; particular, los metodos hacen uso de los hechos de que se describen muchas actividades de la citocina de IL-174.

Description

USOS DE CITOCINA: COMPOSICIONES: MÉTODOS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a composiciones relacionadas con proteínas las cuales funcionan en el control de fisiología, desarrollo y diferenciación de células de mamíferos, por ejemplo, células de un sistema inmune de mamífero. En particular, provee ácidos nucleicos, proteínas, anticuerpos, e imitadores los cuales regulan la fisiología celular, desarrollo, diferenciación, o función de varios tipos de células, incluyendo células hematopoyéticas.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El sistema inmune de los vertebrados consta de un número de órganos y varios tipos de células diferentes. Dos principales tipos de células incluyen los linajes mieloides y linfoides. Entre el linaje de células linfoides se encuentran las células B, las cuales originalmente estaban caracterizadas por diferenciarse en hígado de feto o médula ósea de adulto, y células T, las cuales originalmente estaban caracterizadas por diferenciarse en el timo. Véase por ejemplo Paul (ed. 1998) Fundamental Immunoloqy (4a ed.) Raven Press, New York.

En muchos aspectos del desarrollo de una respuesta inmune o diferenciación celular, las proteínas solubles conocidas como citocinas desempeñan un papel crítico en la regulación de interacciones celulares. Estas citocinas aparentemente median las actividades celulares de muchas formas. En muchos casos, han mostrado modular la proliferación, crecimiento y diferenciación de células madre hematopoyéticas en el vasto número de progenitores que comprenden los linajes responsables de una respuesta inmune. Sin embargo, las moléculas celulares las cuales son expresadas por diferentes etapas de desarrollo de células en estas vías de maduración, todavía no están completamente identificadas. Además, los papeles y mecanismos de acción de moléculas de señalización la cuales inducen, sostienen, o modulan los diferentes estados fisiológicos, de desarrollo o de proliferación de estas células son escasamente entendidos. Claramente, el sistema inmune y su respuesta a varias tensiones tuvo relevancia con la medicina, por ejemplo, enfermedades infecciosas, respuestas y tratamiento relacionados con cáncer, respuestas alérgicas y de rechazo de transplante. Véase por ejemplo Thorn, et al. Harrison's Principies of Interna! Medicine McGraw/Hill, New York. La ciencia médica reside, en gran medida, en el reclutamiento o supresión adecuados del sistema inmune para efectuar curas para respuestas fisiológicas insuficientes o inadecuadas a factores ambientales. Sin embargo, la falta de entendimiento de cómo el sistema inmune es regulado o diferenciado ha bloqueado la capacidad para modular de manera ventajosa los mecanismos de defensa normales a retos biológicos. Las condiciones médicas caracterizadas por regulación anormal o inadecuada del desarrollo o fisiología de células relevantes permanecen todavía incontrolables. El descubrimiento y caracterización de citocinas específicas contribuirá al desarrollo de terapias para una amplia escala de condiciones degenerativas o de otro tipo, las cuales afectan el sistema inmune, células hematopoyéticas, así como otros tipos de células. La presente invención provee soluciones a algunos de estos y muchos otros problemas.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se basa en parte, en actividades biológicas de la citocina conocida como IL-174. En particular, un número de pruebas indican que estas citocinas tiene funciones para regular el establecimiento de respuestas inmunes del tipo Th2, inmunidad innata, respuestas inflamatorias, crecimiento de mucosa y fibroblasto, ciertas actividades hematopoyéticas, y formación de granulomas. La presente invención provee métodos: dirigir una respuesta inmune de mamífero hacia una respuesta de tipo Th2, el método comprende administrar un agonista de IL-174 a células inmunes del mamífero; estimular una respuesta inmune innata de mamífero, el método comprende administrar un agonista de IL-174 a células inmune del mamífero; aumentar una respuesta inflamatoria de mamífero a partir de células epiteliales o de fibroblasto, el método comprende además administrar un agonista de IL-174 al mamífero; inducir crecimiento de célula del intestino, el método comprende suministrar un agonista de IL-174 a la célula; promover la hematopoyesis extramedular de mamífero, el método comprende administrar un agonista de IL-174 al mamífero; o aumentar respuestas de anticuerpo en suero y materia fecal, que comprende administrar un agonista de IL-174 a la célula. En diferentes modalidades, el método implica administrar un agonista, en donde la administración: induce producción de citocinas mediante un célula hematopoyética, de fibroblasto, epitelial o endotelial; subregula una respuesta inflamatoria la cual acompaña una infección, estimula crecimiento de una célula epitelial; o induce crecimiento de células epiteliales de intestino, de fibroblasto, o en forma de copa. En algunas modalidades, el método implica administrar un agonista en donde el mamífero presenta, o ha experimentado condiciones a estimular: una condición autoinmune; una respuesta inmune a enfermedad infecciosa; una respuesta de cicatrización de herida; o una condición mediada por Th1. En modalidades adicionales, la condición autoinmune se selecciona de: esclerosis múltiple, eritematosis de lupus sistémica, artritis reumatoide, diabetes, o psoriasis; la respuesta infecciosa es sintomática de: una infección por Aspergillis, una infección micótica (que incluye Candidaisis, Blastomicosis, o Aspergillosis), una infección parásita (que incluye esquistosomiasis, gusano plano, helminto, o filariasis); o una infección viral (que incluye hepatitis); o la condición mediada por Th1 es una condición inflamatoria (que incluye enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, pancreatitis, o hepatitis). Además, la ¡nvención provee métodos que tratan una respuesta infecciosa, que comprende adicionalmente administrar otra entidad terapéutica para tratar la infección. La invención también provee otros métodos, por ejemplo, dirigir una respuesta inmune de mamífero lejos de una respuesta de tipo Th2, el método comprende administrar un antagonista de IL-174 a células inmunes del mamífero; o evitar inflamación o fopnación de granulomas en mamíferos, que comprende administrar un antagonista de IL-174 a las células del sistema inmune. Con frecuencia, el antagonista es un anticuefo monoclonal o policlonal contra IL-174. El método puede involucrar administrar un antagonista en donde: la administración bloquea la atracción de eosinófilos, remodelación de tejido, o fibrosis; o el mamífero presenta, o ha experimentado condiciones a estimular: una condición alérgica; una condición inflamatoria; o una condición mediada por Th2. En modalidades adicionales, los eosinófilos son atraídos al pulmón (es decir, asma), hígado o intestino (es decir, gastritis eosinofílica); la fibrosis es fibrosis de ducto pancreático o fibrosis peribiliar; el antagonista suprime la producción de IL-174, IL-175, y/o IL-13; el antagonista disminuye eotaxina, CCR4, y/o expresión de CCR4 en BAL; los síntomas de la condición alérgica están en el pulmón; la condición alérgica es una respuesta a nafi láctica sistémica, respuesta de hipersensibilidad de la piel, o una alergia al alimento; o la condición inflamatoria o mediada por Th2 es una dermatitis o inflamación asmática. Incluso en otras modalidades, el mamífero presenta o ha experimentado condiciones a estimular: una condición alérgica; una condición inflamatoria; o una condición mediada por Th2. La invención también provee una composición que comprende: un agonista de IL-174 y: un antimicrobiano (que incluye un compuesto antibiótico, antiviral, o antimicótico) o un agente de quimioterapia; o un antagonista de IL-174 y; un medicamento para alergia, un medicamento para asma, un medicamento para dermatitis, un medicamento para fibrosis, o un medicamento para gastritis eosinofílica.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Esquema I. General II. Agonistas y antagonistas de citocina A. IL-174 y variantes B. Anticuefos C. Otras moléculas III. Inmunoensayos IV. Usos General La invención se basa en parte, en el sofrendente descubrimiento de que la citocina designada IL-174 tiene funciones en varios aspectos de respuestas inmunes. La IL-174 es una de una familia de genes que codifica para proteínas las cuales presentan características estructurales distintivas de citocinas, particularmente relacionadas con la citocina designada CTLA-8 (también referida como IL-17). Las formas de rata, ratón, y humano y un homólogo viral de CTLA-8 han sido descritos y sus secuencias están disponibles en GenBank. Véase Rouvier, et al. (1993) J. Immunol. 150:5445-5456; Yao, et al. (1995) Immunitv 3:811-821 ; Yao, et al. (1995) J.lmmunol. 155:5483-5486; y Kennedy, et al. (1996) J. Interferon and Cvtokine Res. 16:611-617. La CTLA-8 tiene actividades implicadas en artritis, rechazo de injerto de riñon, tumoringenicidad, interacciones de virus-hospedero e inmunidad innata; y parece presentar ciertas funciones reguladoras similares a IL-6. Véase PubMed (buscar IL-17); Chabaud, et al. (1998) J. Immunol. 63:139-148; Amin, et al. (1998) Curr. Opin. Rheumatol. 10:263-268; Van Kooten, et al. (1998) J. Am. Soc. Nephrol. 9:1526-1534; Fossiez, et al. (1998) Int. Rev. Immunol. 16:541-551 ; Knappe, et al. (1998) J. Virol. 72:5797-5801 ; Seow (1998) Vet. Immuno. Immunopathol. 63:139-48; y Teunissen, et al. (1998) J. Invest. Dermatol. 111 :645-649. Un reporte sobre la señalización a través del factor de transcripción NFKB implica una vía de señal la cual se utiliza en inmunidad innata. Shalom-Barak, et al. (1998) J. Biol. Chem. 273:27467-27473. La secuencias de ADNc de IL-174 presentan diferentes características las cuales son distintivas de ARNm que codifican para citocinas, factores de crecimiento, y oncogenes. La IL-17 es el primer miembro de esta familia recién reconocida de citocinas relacionada con TGF-ß, y se ha identificado un número de miembros de esta familia designado "IL-170". Se predice que el doblamiento para esta familia es aquel de la familia TGF-ß de citocinas. La familia TGF-ß de citocinas, y la familia IL-170 comparten la característica común de un motivo de nudo de cistina, caracterizado por una separación particular de residuos de cisteína. Véase por ejemplo Sun y Davies (1995) Ann. Rev. Biophvs. Biomolec. Struct. 24:269-291 : McDonald, et al. (1993) CeH 73:421-424; e Issacs (1995) Curr. OP. Struct. Biol. 5:391-395. En particular, las estructuras sugieren un número de cisteínas conservadas. Los enlaces disulfuro debe ser cisteínas 2 con 5; y 3 con 6; y 1 con 4. El significado funcional de la similitud de doblamientos sugiere la formación de dímeros para familia IL-170. Como consecuencia, los dimeros de IL-70 reunirían dos receptores de superficie celular, a través de los cuales ocurrirá la transducción de señal. Esta nuevas proteínas están designadas como proteínas relacionadas con CTLA-8 o de manera general IL-170. Las proteínas naturales deben ser capaces de mediar diferentes respuestas fisiológicas las cuales conducirían a respuestas biológicas o fisiológicas en células objetivo, por ejemplo, aquellas respuestas características de señalización de citocina. CTLA-8 purificado, cuando se cultiva con sinoviocitos, es capaz de inducir la secreción de IL-6 a partir de estas células. Esta inducción es invertida con la adición de un anticuefo de neutralización expuesto ante CTLA-8 humano. Las células endoteliales, epiteliales, de fibroblasto y carcinoma también presentan respuestas al tratamiento con CTLA-8. Estos datos sugieren que CTLA-8 puede estar implicado en fibrosis inflamatoria, por ejemplo, psoriasis, esclerodermia, fibrosis de pulmón, o cirrosis. CTLA-8 también puede ocasionar proliferación de carcinomas u otras células cancerígenas, ya que IL-6 con frecuencia actúa como un factor de crecimiento para dichas células. Como tales, es probable que los otros miembros de familia relacionados recién descubiertos tengan actividades biológicas similares o relacionadas. La citocina IL-174, de ratón y humano, ha sido descrita previamente en PCT/US00/00006, la cual se incorpora en la presente como referencia para cualquier propósito. La secuencia de ácido nucleico y la secuencia de aminoácidos correspondiente que codifica para IL-174 de humano se exponen como SEQ ID Nos. 1 y 2 respectivamente. Los motivos estructurales predichos importantes ¡ncluyen, por ejemplo sitios de cAMP PK en 21-24, 53-56, y 95-98; sitios de fosforilación de Ca en 15-17, 16-18, y 45-47; sitios miristoilo en 12-16, 115-119, y 118-122; sitios de N-glicosilo en 104-107; sitios de fosforilación en 21 , 23, 43, 53, 56, 95, 98 y 131; sitios de fosforilación de PKC en 41-43 y 119-121; y sitio de tirosin cinasa en 95-102. El ácido nucleico de ratón y secuencia de aminoácidos correspondiente que codifica para IL-174 se exponen como SEQ ID Nos. 3 y 4 respectivamente. Los motivos predichos importantes ¡ncluyen, por ejemplo, sitios de PK de AMPc en 29-32 y 61-64; sitios de fosforilación de Ca en 18-20, 53-55 y 67-69; sitio de miristoilo en 123-127; sitio de N-glicosilación en 112-114; y sitios de fosforilación en 29, 31 , 51 , 53, 61 , 64, 139 y 141 ; y sitios de fosforilación de PKC en 2-4, 49-51 , y 127-129.

II. Agonistas y antagonistas de citocina Las citocinas IL-174 de mamífero se describieron previamente en PCT/US00/00006. Se pueden producir diferentes agonistas y antagonistas de los ligandos naturales.

A. IL-174 v variantes Los agonistas de IL-174 presentarán algunas o todas las funciones de señalización de la citocina. Se pueden evaluar diferentes secuencias de IL-174 de mamífero para determinar qué residuos están conservados a través de especies, sugiriendo qué residuos se pueden cambiar sin efectos dramáticos en actividad biológica. Alternativamente, es probable que las sustituciones conservativas retengan actividad biológica, conduciendo así a formas variantes de la citocina, las cuales retendrán la actividad agonista. Los métodos estándares para analizar polipéptidos de IL-174 mutantes o variantes determinarán qué secuencias serán agonistas terapéuticos útiles. Además, se pueden aplicar ciertos métodos de expresión de ácido nucleico. Diferentes promotores pueden estar operablemente enlazados al gen, permitiendo así expresión regulada.

De manera alternativa, se puede probar la actividad antagonista. Las pruebas para la capacidad de antago iizar la actividad de citocina se pueden desarrollar utilizando pruebas com<¡) se describe más adelante. Se pueden crear diferentes homólogos de ¡gando los cuales retienen la capacidad de unión a receptor, pero se pueden preparar carentes de capacidad de señalización. También se pueden analizar pequeñas moléculas para la capacidad de antagonizar la fundón de IL-174. Véase de manera general Gilman, et al. (eds. 1990) Goodman and Gilman's: The Pharmacoloqical Bases of Therapeutics 8a Ed., Pergamon Press; Reminqton's Pharmaceutical Sciences. 17a ed. (1990), Marek Publishing Co., Easton, Penn, cada una de las cuales sf incofora a la presente como referencia.

B. Anticuefos La presente invención prove el uso de un anticuefo o composición de unión que se une específicamente a IL-174, de preferencia mamífero, por ejemplo, primate, humano, gato , perro, rata, o ratón y neutraliza la capacidad de la citocina para mediar su señal. Anticuerpos pueden exponerse a varias proteínas de IL-174 incluyend o individuales, polimórficas, alélicas, de cepa, o variantes de especie, y ragmentos de las mismas, tanto en sus formas naturales (de longitud cóm pleta) como en sus fonnas recombinantes. Además, anticuefos puederj exponerse a polipéptidos de IL-174 en sus formas puras (o activas) o en sus formas inactivas, es decir desnaturalizadas, las cuales pueden neutralizar la capacidad de ligando para mediar su señal. Los anticuerpos pueden bloquear la interacción de ligando con su receptor. Se puede seleccionar un número de inmunogenes para producir anticuefos específicamente reactivos, o selectivos para unión, con proteínas de IL-174. La proteína recombinante es un inmunogen preferido para la producción de anticuerpos monoclonales o policlonales. La proteína natural, de fuentes adecuadas, por ejemplo, primate, roedor, etc, se puede utilizar también ya sea en forma pura o impura. Los péptidos sintéticos, hechos utilizando las secuencia de proteína IL-174 descritos en la presente, también se pueden utilizar como un inmunogen para la producción de anticuefos para proteínas IL-174. La proteína recombinante se puede expresar y purificar en células eucarióticas o procarióticas según se describe, por ejemplo, en Coligan, et al. (ed. 1995 y suplementos periódicos) Current Protocols in Protein Science John Wiley & Sons, New York, NY; y Ausubel, et al (ed. 1987 y suplementos periódicos) Current Protocols in Molecular Bioloqy. Greene/Wiley, New York, NY. Se puede utilizar material naturalmente doblado o desnaturalizado, según sea adecuado, para producir anticuerpos. Se pueden generar ya sea anticuerpos monoclonales o policlonales, por ejemplo, para uso posterior en inmunoensayos para medir la proteína, o métodos de inmunopurificación. Los métodos para producir anticuefos policlonales son conocidos para los expertos en la técnica. Por lo regular, un inmunogen, de preferencia una proteína purificada, se mezcla con un adyuvante y se inmunizan animales con la mezcla. La respuesta inmune del animal a la preparación de inmunogen es monitoreada al tomar muestras de sangre de prueba y determinar el título de reactividad para la proteína IL-174 o péptido de interés. Por ejemplo, cuando se obtienen títulos de anticuerpo para el inmunogen debidamente elevados, normalmente después de inmunizaciones repetidas, la sangre se recolecta del animal y se preparan antisueros. Si se desea, se puede realizar fraccionamiento adicional de los antisueros para enriquecer anticuerpos reactivos a la proteína. Véase por ejemplo,. Harlow y Lañe Antibodies. A. Laboratorv Manual CSH Press, NY; o Coligan (ed.) Current Protocols in Immunoloqy. La inmunización también se puede realizar a través de otros métodos, por ejemplo, inmunización del vector de ADN. Véase por ejemplo, Wang, et al. (1997) Viroloqy 228:278-284. Se pueden obtener anticuerpos monoclonales a través de diferentes técnicas conocidas para los expertos. Por lo regular, después de inmunizaciones, se inmortalizan células del bazo del animal, comúnmente mediante fusión con una célula de mieloma. Véase, Kohier y Milstein (1976) Eur, J. Immunol. 6:511-519. Los métodos alternativos de inmortalización incluyen transformación con virus Epstein Barr, oncogenes, o retrovirus, u otros métodos conocidos en la técnica. Véase por ejemplo, Doyle, et al (ed. 1994 y suplementos periódicos) Cell and Tissue Culture: Laboratorv Procedures. Wiley, NY, NY. Las colonias que surgen de células inmortalizadas individuales se analizan para producción de anticuefos de la especificidad y afinidad deseadas para el antígeno, y el rendimiento de los anticuefos monoclonales producidos por dichas células se puede incrementar a través de diferentes técnicas, que incluyen inyección en la cavidad peritoneal de un hospedero vertebrado. Alternativamente, se pueden aislar secuencias de ADN las cuales codifican para un anticuerpo monoclonal o un fragmento de unión del mismo al analizar una genoteca de ADN a partir de células B humanas de acuerdo, por ejemplo, con el protocolo general señalado por Huse, et al. (1989) Sdence 246:1275-1281. Anticuefos y composiciones de unión, que incluyen fragmentos de unión y versiones de cadena sencilla, contra fragmentos predeterminados de polipéptidos de IL-174, se pueden producir mediante inmunización de animales con conjugados de los fragmentos con proteínas portadoras como se describe anteriormente. Los anticuerpos monoclonales se preparan a partir de células que secretan el anticuerpo deseado. Estos anticuerpos se pueden analizar para unión a proteína IL-174 normal o defectuosa. Estos anticuerpos monoclonales normalmente se unirán con por lo menos un KD de aproximadamente 1 mM, generalmente por lo menos aproximadamente 300 µM, por lo regular por lo menos aproximadamente 10 µM, especialmente por lo menos aproximadamente 30 µM, de preferencia por lo menos aproximadamentelO µMy preferiblemente al menos aproximadamente 3 µM o más. En algunos casos, es aconsejable preparar anticuefos monoclonales (mAb) a partir de varios hospederos mamíferos, tales como ratones, roedores, primates, humanos, etc. La descripción de técnicas para preparar los anticuerpos monoclonales se puede encontrar, por ejemplo, en Stites, et al. (eds.) Basic and Clinical Immunoloqy (4a ed.) Lange Medical Publications, Los Altos, CA, y referencias ahí citadas; Harlow y Lañe (1988) Antibodies: A Laboratorv Manual CSH Press; Goding (1986) Monoclonal Antibodies: Principies and Practice (2a ed.) Academic Press, New York, NY; y particularmente en Kohier y Milstein (1975) Nature 256:495-497, que discute un método para generar anticuerpos monoclonales. En resumen, este método implica inyectar un animal con un inmunogen. El animal es entonces sacrificado y las células se toman de su bazo, las cuales luego son fusionadas con células de mieloma. El resultado es una célula híbrida o "hibridoma" que es capaz de reproducirse in vitro. La población de hibridomas es entonces analizada para aislar clones individuales, cada uno de los cuales secreta una especie de anticuerpo sencilla para el inmunogen. De esta manera, las especies de anticuerpo individuales obtenidas son los productos de células B sencillas inmortalizadas y clonadas del animal inmune generado en respuesta a un sitio especifico reconocido en la sustancia inmunogénica. Otras técnicas adecuadas involucran la selección de genotecas de anticuefos en vectores de fago o similares. Véase por ejemplo, Huse, et al. (1989) "Generation of Large Combinatorial Library of the Immunoglobulin Repertoire in Phage Lambda, "Science 246:1275-1281 ; y Ward, et al. (1989) Nature 341 :544-546. Los polipéptidos y anticuefos de la presente invención se pueden utilizar con o sin modificación, incluyendo anticuefos quiméricos o humanizados. Con frecuencia, los polipéptidos y anticuefos serán marcados mediante unión ya sea covalente o no covalente, con una sustancia que provee una señal detectable. Una amplia variedad de marcas y técnicas de conjugación se conocen y se reportan de manera extensa en literatura científica y de patente. Las marcas adecuadas incluyen radionúclidos, enzimas, sustratos, cofactores, inhibidores, porciones fluorescentes, porciones quimioluminiscentes, partículas magnéticas, y similares. Las patentes que enseñan el uso de dichas marcas incluyen las patentes de E.U.A. Nos. 3,817,837; 3,850,752; 3,939,350; 3,996,345; 4,277,437; 4,275,149; y 3,666,241. También se pueden producir inmunoglobulinas recombinantes, véase, Cabilly, patente de E.U.A. No. 4,816,567; y Queen, et al. (1989) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033; o se pueden hacer en ratones transgénicos, véase Méndez, et al. (1997) Nature Genetics 15:146-156; Abgenix and Medarex technologies. Los compuestos de unión a anticuefo, que ¡ncluyen fragmentos de unión, de esta invención pueden tener un valor de diagnóstico o terapéutico importante. También pueden ser útiles como compuestos de unión no neutralizadores y se pueden acoplar a toxinas o radionúclidos, de modo que cuando el compuesto de unión se une al antígeno, una célula que los expresa, por ejemplo, en su superficie, es eliminada. Además, estos compuestos de unión se pueden conjugar con fármacos u otros agentes terapéuticos, ya sea directa o indirectamente por medio de un enlazador, y pueden realizar direccionamiento de fármaco.

C. Otras moléculas Los anticuefos son simplemente una forma de composiciones de unión específicas. Otras composiciones de unión, las cuales con frecuencia tendrán usos similares, incluyen moléculas que se unen con especificidad a IL-174, por ejemplo, en una manera de proteína-miembro de unión, una interacción de anticuerpo-antígeno, o en una interacción de proteína natural fisiológicamente relevante-proteína, ya sea covalente o no covalente, por ejemplo, proteínas que se asocian específicamente con la proteína IL-174. La molécula puede ser un polímero, o reactivo químico. Un análogo funcional puede ser una proteína con modificaciones estructurales, o puede ser una molécula estructuralmente no relacionada, por ejemplo, la cual tenga una forma molecular que interactúe con las determinantes de unión adecuadas. El análisis de fármaco utilizando anticuerpos o IL-174 o fragmentos del mismo se puede realizar para identificar compuestos que tienen afinidad de unión a IL-174, o pueden bloquear o simular la interacción natural con ligando. Se pueden utilizar entonces pruebas biológicas posteriores para determinar si el compuesto tiene actividad de bloqueo intrínseca y si es, por lo tanto, un antagonista. Asimismo, un compuesto que tiene actividad estimulante intrínseca puede señalar las células a través de la vía de IL-174 y es por lo tanto un agonista, ya que simula la actividad de un ligando. Se pueden desarrollar antagonistas de muteína los cuales mantienen la unión a receptor pero carecen de señalización.

Los estudios estructurales de los ligandos conducirán al diseño de nuevas variantes, particularmente análogos que presentan propiedades agonistas o antagonistas en el receptor. Esto se puede combinar con métodos de análisis previamente descritos para aislar muteínas que presentan espectros deseados de actividades. Debido a que se proveen moléculas de unión específica a receptor, también se incluyen pequeñas moléculas identificadas a través de procedimientos de análisis. En particular, es sabido en la técnica cómo analizar pequeñas moléculas las cuales interfieren, por ejemplo, con ligando que se une al receptor, con frecuencia mediante unión específica al receptor y bloque de unión mediante ligando natural. Véase por ejemplo, reuniones sobre High Throughput Screening, International Business Communications, Southborough, MA 01772-1749. Dichas moléculas pueden competir con ligandos naturales y unirse de manera selectiva a IL-174.

III. Inmunoensavos Los inmunoensayos son valiosos para diagnosticar una enfermedad o trastorno asociado con desequilibrio o patología de IL-174. La medición cualitativa o cuantitativa de una proteína particular se puede realizar a través de una variedad de métodos de inmunoensayo. Para una revisión de procedimientos inmunológicos y de ¡nmunoensayo en general, véase Stites y Terr (eds.) (1991 ) Basic and Clinical Immunoloav (7a ed.). Además, los inmunoensayos de la presente invención se pueden realizar en muchas configuraciones, las cuales son revisadas de manera extensa en Maggio (ed. 1980) Enzyme Immunoassay CRC Press, Boca Ratón, Florida; Tijan (1985) "Practice and Theory of Enzyme Immunoassays," Laboratorv Techniques in Biochemistrv and Molecular Bioloqy. Elservier Science Publisher B.V., Amsterdam; y Harlow y Lañe Antibiodies: A. Laboratorv Manual, supra. Véase también Chan (ed. 1987) Immunoassav: A Practical Guide Academic Press, Orlando, FL; Price y Newman (eds.1991) Principies and Practice of Immunoassavs Stockton Press, NY; y Ngo (ed. 1988) Non-isotopic Immunoassavs Plenum Press, NY. Los ¡nmunoensayos para medición de proteínas IL-174 o péptidos, se pueden realizar a través de una variedad de métodos conocidos para los expertos en la técnica. En resumen, los inmunoensayos para medir la proteína pueden ser ya sea pruebas de unión competitiva o no competitiva. En pruebas de unión competitiva, la muestra que será analizada compite con un analito marcado para sitios de unión específicos en un agente de captura unido a una superficie sólida. De preferencia, el agente de captura es un anticuerpo específicamente reactivo con proteínas IL-174 producidas como se describió anteriormente. La concentración de analito marcado unido al agente de captura es inversamente proporcional a la cantidad de analito libre presente en la muestra. En un immunoensayo de unión competitiva, la proteína IL-174 presente en la muestra compite con proteína marcada para unión a un agente de unión específico, por ejemplo, un anticuefo específicamente reactivo con proteína IL-174. El agente de unión se puede unir a una superficie sólida para realizar la separación de proteína marcada unida de la proteína marcada no unida. Alternativamente, la prueba de unión competitiva se puede realizar en fase líquida y se puede utilizar una variedad de técnicas conocidas para separar la proteína marcada unida de la proteína marcada no unida. Después de separación, se determina la cantidad de proteína marcada unida. La cantidad de proteína presente en la muestra es inversamente proporcional a la cantidad de unión a proteína marcada. Alternativamente, se puede realizar un inmunoensayo homogéneo en el cual no es necesario un paso de separación. En estos inmunoensayos, la marca en la proteína es alterada por la unión de la proteína a su agente de unión específico. Esta alteración en la proteína marcada da como resultado una disminución o incremento en la señal emitida por la marca, de modo que la medición de la marca al final del inmunoensayo permite la detección o cuantificación de la proteína. Las proteínas IL-174 también se pueden determinar a través de una variedad de métodos de inmunoensayo no competitivo. Por ejemplo, se puede utilizar un inmunoensayo de intercalado de fase sólida de dos sitios. En este tipo de prueba, un agente de unión para la proteína, por ejemplo un anticuefo, se une a un soporte sólido. Se marca un segundo agente de unión a proteína, que también puede ser un anticuefo, y el cual se une a la proteína en un sitio diferente. Después de que ha ocurrido la unión en ambos sitios en la proteína, el agente de unión marcado no unido se remueve y se mide la cantidad de agente de unión marcado unido a la fase sólida. La cantidad de agente de unión marcado unido es directamente proporcional a la cantidad de proteína en la muestra. Se puede utilizar el análisis de Western blot para determinar la presencia de proteínas IL-174 en una muestra. Se realiza electroforesis, por ejemplo, en una muestra de tejido de la que se sospecha contiene la proteína. Después de electroforesis para separar las proteínas, y transferencia de las proteínas a un soporte sólido adecuado, por ejemplo, un filtro de nitrocelulosa, el soporte sólido se incuba con un anticuerpo reactivo con la proteína. Este anticuerpo puede ser marcado, o alternativamente puede ser detectado por incubación posterior con un segundo anticuerpo marcado que se une al anticuerpo primario. Los formatos de inmunoensayos descritos anteriormente pueden emplear componentes de prueba marcados. La marca se puede acoplar directa o indirectamente al componente deseado de la prueba de acuerdo con métodos conocidos en la técnica. Se puede utilizar una amplia variedad de marcas y métodos. Tradicionalmente, se utilizó una marca radioactiva que incofora 3H, 125l, 35S, 1 C, o 32P. Las marcas no radioactivas incluyen ligandos los cuales se unen a anticuefos marcados, fluoróforos, agentes quimioluminiscentes, enzimas y anticuefos, los cuales pueden servir como miembros de par de unión específico para un ligando marcado. La selección de marca depende de la sensibilidad requerida, facilidad de conjugación con el compuesto, requisitos de estabilidad, e instrumentación disponible. Para una revisión de diferentes sistemas productores de señal o marcación los cuales se pueden utilizar, véase la patente de E.U.A. No. 4,391 ,904. Los anticuefos reactivos con una proteína particular también se pueden medir a través de una variedad de métodos de inmunoensayo. De esta forma, las modificaciones de los procedimientos anteriores se pueden utilizar para determinar las cantidades o afinidades de varios anticuerpos de IL-174 o preparaciones de anticuerpo. Para una revisión de procedimientos inmunológicos y de inmunoensayos aplicables a la medición de anticuerpos mediante de técnica de ¡nmunoensayo, véase Stites y Terr (eds.) Basic and Clinical Immunoloqy (7a ed.) supra; Maggio (ed.) Enzyme Immunoassay. supra; y Harlow y Lañe Antibodies. A. Laboratorv Manual, supra. Los análisis para evaluar la unión y actividad de mAb y composiciones de unión abarcan una variedad de métodos. La unión se pueden analizar al marcar de manera detectable el anticuerpo o composición de unión como se describió anteriormente. Las células que responden a IL-174 se pueden utilizar para analizar el anticuerpo o composición de unión. La evaluación de anticuerpo se puede realizar en otros animales, por ejemplo, humanos utilizando diferentes métodos. Por ejemplo, se retiran muestras de sangre de pacientes que sufren de una enfermedad o trastorno indicado antes y después de tratamiento, por ejemplo con un mAb candidato.

IV. Usos IL-174 ha demostrado ahora efectos en varias células, efectos los cuales pueden ser indirectos, así como directos. Un cambio estadísticamente importante en los números o efectos en células, normalmente será de aproximadamente 10%, preferiblemente 20%, 30%, 50%, 70%, 90%, o más. Los efectos mayores a 100%, por ejemplo 130%, 150%, 2X, 3X, 5X, etc., con frecuencia serán convenientes. Los efectos pueden ser específicos para reducir síntomas o signos de las condiciones indicadas. La presente invención es útil en el tratamiento de condiciones o trastornos médicos asociados con condiciones inmunológicas descritas. Véase por ejemplo, Frank, et al. (eds 1995 Samter's Immunoloqic Diseases. 5a Ed., vols. I-II, Little, Brown and Co., Boston, MA. Los agonistas o antagonistas descritos se pueden combinar con otros tratamientos de las condiciones medicas descritas en la presente, por ejemplo, otra citocina involucrada en balance de Th1/Th2 (tales como IL-1? y/o IL-12 para Th1 ; o IL-4 para TH2), un antibiótico, un terapéutico inmunosupresor, adyuvante inmune, analgésico, fármaco antiinflamatorio, factor de crecimiento, vasodilatador, o vasoconstrictor. Las terapias de combinación preferidas incluyen agonistas de IL- 174 con diversos terapéuticos que promueven las respuestas inmunes de tipo Th2 (por ejemplo, IL-4,antagonistas de IL-1?, antagonistas de IL-12), agentes inflamatorios, tales como irritantes tópicos, transdérmicos, o sistémicos, diversos factores de crecimiento, y factores hematopoyéticos. Los antagonistas de IL-174, por ejemplo, muteínas de ligandos o anticuerpos, se pueden combinar con terapéuticos que promueven respuestas inmune de tipo Th1 (por ejemplo, antagonistas de IL-4, IL-1? y/o IL-2), o antiinflamatorios (por ejemplo, esteroides, esteroides glucocorticales). Las técnicas inmunológicas estándares se describen por ejemplo en Hertzenberg, et al. (eds. 1996) Weir's Handbook of Experimental Immunoloqy vols. 1-4, Blackwell Science; Coligan (1991 ) Current Protocols in Immunoloqy Wiley/Greene, NY; y Methds in Enzymoloqy volúmenes 70, 73, 74, 84, 92, 93, 108, 116, 121 , 132, 150, 162 y 163. Estas permitirán los usos de los reactivos para purificar subpoblaciones de células, etc. Para preparar composiciones farmacéuticas o estériles que incluyen IL-174, antagonistas, o combinaciones, el reactivo se combina con un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable, el cual de preferencia es inerte. La preparación de dichas composiciones farmacéuticas se conoce en la técnica, véase por ejemplo, Reminqton's Pharmaceutical Sciences y U.S. Pharmacopeia: National Formularv. Mack Publishing Company, Easton, PA (1984). Los agonistas, por ejemplo, ligando natural o antagonistas, por ejemplo, anticuefos o composiciones de unión, normalmente se administran parenteralmente, de preferencia, intravenosamente. Debido a que dichos antagonistas de péptido o proteína pueden ser inmunogénicos, de preferencia se administran lentamente, ya sea mediante un equipo de administración IV convencional o a partir de un depósito subcutáneo, por ejemplo, como lo enseña Tomasi, et al, patente de E.U.A. 4,732,863. Cuando se administran parenteralmente, los terapéuticos, con frecuencia estarán formulados en una forma inyectable de dosificación unitaria (solución, suspensión, emulsión) en asociación con un vehículo parenteral farmacéuticamente aceptable. Dichos vehículos típicamente son inherentemente no tóxicos y no terapéuticos. Los agonistas, los cuales normalmente serán biológicos más pequeños, serán típicamente administrados en dosis más pequeñas que los biológicos de anticuerpo. El antagonista puede ser administrado en vehículos acuosos tales como agua, solución salina, o vehículos regulados de pH, con o sin diferentes adhesivos y/o agentes de dilución. Alternativamente, se puede preparar una suspensión, tal como una suspensión de zinc para incluir el péptido. Dicha suspensión puede ser útil para inyección subcutánea (SQ), intradérmica (ID), o intramuscular (IM). La proporción de entidad terapéutica y aditivo se puede variar sobre una amplia gama en tanto que ambos estén presentes en cantidades efectivas. El terapéutico se formula preferiblemente en forma purificada sustancialmente libre de agregados, otras proteínas, endotoxinas, y similares, a concentraciones de aproximadamente 5 a 30 mg/ml, preferiblemente de 10 a 20 mg/ml. Preferiblemente los niveles de endotoxina son de menos de 2.5 EU/ml. Véase, por ejemplo, Avis, et al. (eds. 1993) Pharmaceutical Dosaqe Forms: Parenteral Medications 2a ed., Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds. 1990) Pharmaceutical Dosaqe Forms: Tablets 2a ed., Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds. 1990) Pharmaceutical Dosaqe Forms: Disperse Svstems Dekker, NY; Fodor, et al. (1991 ) Science 251 : 767-773; Coligan (ed.) Current Protocols in Immunoloqy; Hood. et al. Immunoloqy Benjamin/Cummings; Paul (ed. 1997) Fundamental Immunoloqy 4a ed., Academic Press; Parce, et al. (1989) Science 246:243-247; Owicki, et al. (1990) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 87:4007-4011 ; y Blundell y Johnson (1976) Protein Crvstalloqraphv. Academic Press, New York. La selección de un régimen de administración para un agonista o antagonista terapéutico depende de varios factores, incluyendo la velocidad de producción de suero o tejido del terapéutico, la inmunogenicidad del terapéutico, o la capacidad de acceso de las células objetivo. Preferiblemente, un régimen de administración maximiza la cantidad de terapéutico suministrado al paciente consistente con un nivel aceptable de efectos secundarios. De acuerdo con esto, la cantidad de terapéutico suministrado depende en parte del agonista o antagonista particular y la severidad de la condición que se está tratando. La guía para seleccionar dosis adecuadas de anticuefos se encuentra en la literatura sobre usos terapéuticos, por ejemplo Bach et al., capítulo 22, en Ferrone, et al. (eds. 1985) Handbook of Monoclonal Antibodies Noqes Publications, Park Ridge, NJ; y Russell, pgs. 303-357, y Smith et al., pgs. 365-389, en Haber, et al. (eds. 1977) Antibodies in Human Diagnosis and Therapy Raven Press, New York, NY. La determinación de la dosis adecuada se hace por el médico, por ejemplo, utilizando parámetros o factores conocidos en la técnica para afectar el tratamiento o predichos para afectar el tratamiento. En general, la dosis empieza con una cantidad de alguna manera menor que la dosis óptima y se incrementa mediante incrementos pequeños de ahí en adelante hasta que el efecto deseado u óptimo se logra con relación a cualquier efecto secundario negativo. Preferiblemente, una composición de anticuerpo o de unión del mismo que se utilizará se suministra a partir de la misma especie como el animal objetivo para tratamiento, reduciendo al mínimo por lo tanto la respuesta humoral al reactivo. Las escalas de dosis semanal total para anticuerpos o fragmentos de los mismos, los cuales específicamente se unen a IL-174, están generalmente en la escala de aproximadamente 1 ng, más en general de aproximadamente 10 ng, típicamente de aproximadamente 100 ng; más típicamente de aproximadamente 1 µg, más típicamente de aproximadamente 10 µg, preferiblemente de aproximadamente 100 µg, y más preferiblemente de aproximadamente 1 mg por kilogramo de peso coforal. Aunque cantidades más elevadas pueden ser más eficaces, las dosis más bajas típicamente tendrán menos efectos adversos. Generalmente la escala será de menos de 100 mg, preferiblemente menos de aproximadamente 50 mg, y más preferiblemente menos de aproximadamente 25 mg por kilogramo de peso coforal. Las escalas de dosis semanal para antagonistas, por ejemplo, anticuerpos, fragmentos de unión, están en la escala de aproximadamente 10 µg, preferiblemente al menos aproximadamente 50 µg, y más preferiblemente al menos aproximadamente 100 µg por kilogramo de peso coforal. Generalmente, la escala será de menos de aproximadamente 1000 µg, preferiblemente menos de aproximadamente 500 µg, y más preferiblemente menos de aproximadamente 100 µg por kilogramo de peso corporal. Las dosis están en un programa que efectúa el tratamiento deseado y pueden ser periódicas durante un término más corto o más largo. En general, las escalas serán de al menos aproximadamente 10 µg a aproximadamente 50 mg, preferiblemente de aproximadamente 100 µg a aproximadamente 10 mg por kilogramo de peso corporal. Agonistas, u otros antagonistas de los ligandos, por ejemplo, muteínas, también están contempladas. Las escalas de dosificación por hora para citocina o muteínas están en la escala de al menos aproximadamente 10 µg, generalmente al menos aproximadamente 50 µg, típicamente al menos aproximadamente 100 µg, y preferiblemente al menos 500 µg por hora. Generalmente la dosis será de menos de aproximadamente 100 mg, típicamente menos de aproximadamente 30 mg, preferiblemente menos de aproximadamente 10 mg, y más preferiblemente menos de aproximadamente 6 mg por hora. En general las escalas serán de al menos aproximadamente 1 µg a aproximadamente 1000 µg, preferiblemente de aproximadamente 10 µg a aproximadamente 500 µg por hora. La presente invención también se encarga de la administración de anticuefos IL-174 o composiciones de unión en combinación con terapias conocidas, por ejemplo, terapéuticos que alivian los síntomas relacionados con respuestas inflamatorias excesivas, tales como esteroides, particularmente glucocorticoides. Las dosis diarias para glucocorticoides oscilará de al menos alrededor de 1 mg, generalmente al menos de alrededor de 2 mg, y preferiblemente al menos de alrededor de 5 mg por día. Generalmente, la dosis será menor a alrededor de 100 mg, típicamente menor a 50 mg, preferiblemente menor a alrededor de 20 mg, y más preferiblemente al menos alrededor de 10 mg por día. En general, las escalas serán de alrededor de al menos 1 mg a aproximadamente 100 mg, preferiblemente de alrededor de 2 mg a 50 mg por día. La frase "cantidad efectiva" quiere decir una cantidad suficiente para efectuar una respuesta deseada, o para aliviar un síntoma o señal, de la condición indicada. Los hospederos mamíferos típicos incluirán ratones, ratas, gatos, perros, y primates, incluyendo humanos. Una cantidad efectiva para un paciente particular puede variar dependiendo de factores tales como la condición que se está tratando, la salud total del paciente, el método, ruta, y dosis de administración y la severidad de efectos secundarios. Preferiblemente, el efecto resultará en un cambio en la cuantificación de al menos aproximadamente 10%, preferiblemente al menos 20%, 30%, 50%, 70%, o incluso 90% o más. Cuando en combinación, una cantidad efectiva se encuentra en relación a una combinación de componentes y el efecto no está limitado a componentes individuales solos. Una cantidad efectiva de terapéutico modulará los síntomas típicamente por al menos aproximadamente 10%, normalmente por al menos aproximadamente 20%, preferiblemente al menos aproximadamente 30% o más preferiblemente al menos aproximadamente 50%. De manera alternativa, la modulación de movimiento quiere decir que el movimiento o tráfico de varios tipos de células es afectada. Esto resultará en, por ejemplo, cambios estadísticamente significantes y cuantificables en los números de células que están afectadas. Esto puede ser un incremento o una disminución en los números de células objetivo siendo atraídas dentro de un periodo de tiempo o área objetivo. La presente invención provee reactivos que encontrarán uso en aplicaciones terapéuticas como se describe en otra parte en la presente, por ejemplo, en la descripción general, para el tratamiento de trastornos relacionados con las condiciones indicadas. Véase, por ejemplo, Berkow (ed.) The Merck Manual of Diagnosis and Therapy. Merck & Co., Rahway, N.J.; Thorn, et al. Harrison's Principies of Intemal Medicine. McGraw-Hill, NY; Gilman, et al. (eds. 1990) Goodman and Gilman's: The Pharmacoloqical Bases of Therapeutics. 8a ed., Pergamon Press; Reminqton's Phapnaceutical Sciences. 17a ed. (1990), Mack Publishing Co. Easton, Penn; Langer (1990) Science 249:1527-1533; y Merck Index. Merck & Co., Rahway, New Jersey. Los anticuefos para proteínas IL-174 pueden utilizarse para la identificación o selección de poblaciones celulares que expresan la proteína IL-174. Métodos para clasificar dichas poblaciones son bien conocidos en la técnica, véase, por ejemplo, Melamed, et al. (1990) Flow Cvtometry and Sortinq Wiley-Liss, Inc., New York, NY; Shapiro (1988) Practical Flow Cvtometrv Liss, New York, NY; y Robinson, et al. (1993) Handbook of Flow Cytometry Methods Wilev-Liss. New York, NY. Las poblaciones de células que expresan el receptor IL-174 también pueden purificarse utilizando esferas magnéticas como se describe, por ejemplo, en Bieva, et al. (1989) EXP. Hematol. 17:914-920; Hernebtub, et al. (1990) Bioconi. Chem. 1:411-418; Vaccaro (1990) Am. Biotechnol. Lab. 3:30. Además, los ácidos nucleicos antisentido pueden utilizarse. Por ejemplo, las construcciones antisentido específicas de ácidos nucleicos que codifican, por ejemplo, para el ligando, pueden funcionar en una manera similar a los antagonistas de ligando, y las construcciones antísentido específicas a aquellas que codifican el receptor pueden funcionar igual que los antagonistas del receptor. Véase, por ejemplo, Stepkowski, et al. (1998) Transplantation 66:699-707; e ISIS Pharmaceuticals technology. De este modo, puede ser posible bloquear la señalización a través de estas vías con ácidos nucleicos antisentido. Utilizando los métodos para análisis descritos anteriormente, los anticuefos o composiciones de unión son útiles para diagnosticar estados de enfermedad que resultan en los trastomos indicados. Los anticuefos que se exponen ante una proteína IL-174 también serán útiles para exponer anticuefos anti-idiotípicos. Estos serán útiles para detectar o diagnosticar varias condiciones inmunológicas relacionadas con la expresión de los antígenos respectivos. Las combinaciones de estas señales también pueden continuarse.

El amplio alcance de esta invención se entiende mejor con referencia a los siguientes ejemplos, los cuales no están diseñados para limitar las invenciones a las modalidades específicas.

EJEMPLOS I.- Métodos qenerales La citocina IL-174, de ratón y humano, se describió anteriormente en PCT/US00/00006, que se incofora a la presente por referencia para todos los propósitos. Algunos de los métodos estándar se describen o son referidos en Maniatis, et al. (1982) Molecular Cloninq. A Laboratorv Manual. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Press; Sambrook, et al. (1989) Molecular Cloninq: A Laboratory Manual. (2a ed.), vols. 1-3, CSH Press, NY; Ausubél, et al., Bioloqy. Greene Publishing Associates, Brookiyn, NY; o Ausubel, et al. (1987 y Suplementos) Current Protocols in Molecular Bioloqy. Greene/Wiley, New York; Innis, et al. (eds.) (1990) PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications Academic Press, N.Y. Los métodos para purificación de proteína incluyen tales métodos como precipitación de sulfato de amonio, cromatografía de columna, electroforesis, centrifugación, recristalización, y otros. Véase, por ejemplo, Ausubel, et al. (1987 y suplementos periódicos); Deutscher (1990) "Guide to Protein Purification" in Methods in Enzymoloqy. vol. 182, y otros volúmenes en estas series; la literatura de los fabricantes sobre el uso de productos de purificación de proteína, por ejemplo, Pharmacia, Piscataway, N.J., o Bio-Rad, Richmond, CA; y Coligan, et al. (eds.) (1995 y suplementos periódicos) Current Protocols in Protein Science. John Wiley & Sons, New York, NY. La combinación con técnicas recombinantes permite la fusión a segmentos adecuados, por ejemplo, a una secuencia FLAG o una equivalente que se puede fusionar por medio de una secuencia removible mediante proteasa. Véase, por ejemplo Hochuli (1989) Chemische Industrie 12:69-70; Hochuli (1990) "Purification of Recombinant Proteins with Metal Chelate Absorbent" ¡n Setlow (ed.) Genetic Enqineerinq. Principie and Methods 12:87-98, Plenum Press, N.Y.; y Crowe, et al. (1992) QIAexpress: The Hiqh Level Expression & Protein Purification Svstem QUIAGEN, Inc., Chatsworth, CA. Las técnicas inmunológicas estándar se describen, por ejemplo en Hertzenberg, et al. (eds, 1996) Weir*s Handbook of Experimental Immunoloqy vols. 1-4, Blackwell Science; Coligan (1991 ) Current Protocols in Immunology Wiley/Greene, NY; y Methods in Enzymoloqy volúmenes. 70, 73, 74, 84, 92, 93, 108, 116, 121 , 132, 150, 162 y 163. Los análisis de FACS se describen en Melamed, et al. (1990) Flow Cvtometv and Sortinq Wiley-Liss, Inc., New York, NY; Shapiro (1988) Practical Flow Cvtometrv Liss, New York, NY; y Robinson, et al. (1993) Handbook of Flow Cvtometrv Methods Wiley-Liss, New York, NY.

II. Producción de anticuerpo Los mamíferos adecuados se inmunizan con cantidades adecuadas, de células transfectadas con gen IL-174, por ejemplo de manera intraperitoneal cada 2 semanas durante 8 semanas. Típicamente, se utilizan roedores, aunque otras especies se deben acomodar a la producción de anticuerpos selectivos y específicos. La inmunización final se da de manera intravenosa (IV) a través de la vena de cola. Se pueden recolectar anticuerpos policlonales genéricos. De manera alternativa, se pueden producir anticuefos monoclonales. Por ejemplo, cuatro días después de la inyección IV, el bazo se remueve y se fusiona a células SP2/0 y NS1. Los hibridomas resistentes a HAT se seleccionan, por ejemplo, utilizando un protocolo diseñado por Stem Cell Technologies (Vancouver, BC). Después de 10 días de selección de HAT, los focos resistentes se transfieren a placas de 96 pozos y se expanden durante 3 días. Los sobre flotantes que contienen anticuerpos se analizan, por ejemplo, mediante FACS para unión a NIH3T3/transfectantes de superficie IL-174. Muchos mAbs IL-174 diferentes se producen típicamente. Aquellos anticuefos se pueden aislar y modificar, por ejemplo, mediante marcación u otros medios como es estándar en la técnica. Véase, por ejemplo Harlow y Lañe (1988) Antibodies: A Laboratorv Manual CSH Press; Goding (1986) Monoclonal Antibodies: Principies and Practice (2d ed). Academic Press, New York, NY. Los métodos para conjugar reactivos magnéticos, entidades tóxicas, marcas, adhesión de anticuerpos a substratos sólidos, a filtro estéril, etc., se conocen en la técnica.

III.- Antagonistas de IL-174 Varios antagonistas de IL-174 se encuentran disponibles. Por ejemplo, los anticuerpos contra ia quimiocina en sí pueden bloquear la unión de ligando a su receptor, sirviendo por lo tanto como un antagonista de receptor directo. Otros antagonistas pueden funcionar bloqueando la unión de ligando a receptor, por ejemplo, mediante unión al ligando en una manera para evitar la posibilidad de unión a receptor. Otros antagonistas, por ejemplo, antagonistas de muteína, se pueden unir al receptor sin señalización, bloqueando por lo tanto un agonista real contra unión. Muchos de estos pueden servir para bloquear la señal transmitida a células objetivo, específicamente células que responden a IL-174. La información sobre la criticalidad de residuos particulares se determina, utilizando procedimientos y análisis estándar. Los análisis de mutagénesis estándar se realizan, por ejemplo, generando muchas variantes diferentes en posiciones determinadas, por ejemplo, en las posiciones identificadas anteriormente y evaluando las actividades biológicas de las variantes. Esto se puede realizar al grado de determinar posiciones que modifican la actividad, o para enfocar sobre posiciones específicas para determinar los residuos que se pueden sustituir para retener, bloquear, o modular la actividad biológica.

De manera alternativa, los análisis de variantes naturales pueden indicar cuáles posiciones toleran mutaciones naturales. Esto puede resultar a partir de análisis de población de variación entre individuos, o a través de cepas o especies. Las muestras de individuos seleccionados se analizan, por ejemplo, mediante análisis de PCR y formación de secuencias. Esto permite la evaluación de polimorfismos de población.

IV.- Infección adenoviral Se prepararon construcciones de adenovirus. Los ratones se infectaron con adenovirus-IL-74 por medio de la vía intranasal o la vía intravenosa. Véase, por ejemplo, Hitt, et al. (1997) Adv. Pharmacol. 40:137-195. Las dosis de adenovirus-IL-74 dadas oscilaron de 5 x 109 a 5 x 1010 partículas. Los ratones se valuaron 7, 14, 21 y 35 días después de la infección utilizando métodos histológicos, inmunológicos y hematológicos estándar.

V.- Análisis histológico Los tejidos de ratones se fijaron en formalina, se procesaron de manera acostumbrada, se dividieron, y se tiñeron con hematoxilina y eosina para análisis microscópico. Los órganos examinados incluyeron el pulmón, corazón, hígado, riñon, bazo, médula ósea y tracto gastrointestinal. Véase, por ejemplo, Kerr (1999) Atlas of Functional Histoloqy. Stemberg (ed. 1998) Histoloqv for Patholoqists: and Stevens and Lowe (1996) Human Histoloqv.

VI.- Prueba de formación de colonias hematopovéticas Los progenitores hematopoyéticos en los bazos de los ratones se enumeraron en pruebas de formación de colonias habituales. Las células del bazo se evacuaron de eritrocitos mediante lisis hipotónica. Las células del bazo se incubaron con anticuerpos monoclonales de rata no modificados específicos para CD2 (RM2.2; véase Yagata, et al. (1989) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:645-649), CD8 (53.6.7; véase Ledbetter, et al. Immunol. Rev. 47:63-90), B220 (RA3-6B2; véase Coffman, et al. (1981 ) Nature 289:681-683), Mad (M1/70; véase Springer, et al. (1979) Eur. J. Immunol. 9:301-306), GR1 (RB6-8C5; véase Julia, et al. (1988) Eur. J. Immunol. 19:1819-1826), y eritrocitos (Ter-119; véase Spangrude, et al. (1990) Exp. Hemat. 18:920-926). Las células positivas de linaje extraídas mediante selección negativa utilizando esferas BioMagR revestidas de cabra anti-rata (PerSeptive Biosystems, Framingham, MA) en dos ciclos de tratamiento sucesivos. Las células del bazo negativas de linaje restantes se sembraron en placas de cultivo de 35 mm que contenían 1 ml de medio Iscove modificado (JRH, Kansas City, KS), suero de ternera fetal 20% (FCS)(JRH) 50 mM 2-mercaptoetanol, y 0.8% (p/vol) de metilcelulosa. Todos los cultivos se complementaron con concentraciones saturadas de varios factores de crecimiento. Los cultivos se incubaron a 37°C en una atmósfera húmeda nivelada con 5% de C02. Después de 10 días de incubación, las colonias se analizaron por número y tamaño. Las morfologías celulares se determinaron después de aplicar a las colonias a porta objetos de vidrio y teñirse con Wright's Giemsa para análisis microscópico. Véase Metcalf (1984) The Hemopoietic Colonv Stimulatinq Factors Elsevier, Amsterdam.

Vil.- Análisis de células de la sangre Se recolectó sangre de los ratones en diluyente regulado isotónicamente (Bio Chem ImmunoSystems, Allentown, PA) y hemoglobina, hematocrito, glóbulos blancos, glóbulos rojos, y las cuentas de plaquetas se determinaron mediante el contador de células automático (Serano 9010, Serono-Baker Diagnostics, Inc., Allentown, PA). El extendido sanguíneo se tiñó con Wright Giemsa y las cuentas diferenciales se realizaron con la ayuda de un microscopio. Véase, por ejemplo, Dainiak (1990) The Bioloov of Hematopoiesis. Wiley-Liss Inc., New York; Testa y Molineux (1993) Haemopoiesis. Oxford University Press, New York.

VIII Determinación de isótopos de anticuerpo Se diluyó en serie suero de ratones en regulador isotónico en pozos de microtitulación revestidos con anticuefos de clase específica de cadena pesada de rata anti-ratón (anti-a, -?1 , -?2a, y -e). Un anticuefo secundario biotinilado (específico para clases de cadena pesada) se añadió y posteriormente se hizo reaccionar con streptavidin-HRP (Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc., West Grove, PA). El producto teñido producido mediante el sistema de substrato de peroxidasa TMB (Kirkegaard & Perry Laboratories, Gaithersburg, MD) se detectó bajo una lámpara UV de longitud de onda larga (450 nanómetros). Véase, por ejemplo, Coligan, et al. (eds. 1991 and supplements) Current Protocols in Immunoloqy. Greene/Wiley.

IX Análisis de fluido de lavado bronquio-alveolar El fluido de lavado bronquio-alveolar (BAL, por sus siglas en inglés) se recolectó de ratones sacrificados al insertar una aguja en la traquea y suministrar 1 ml de medio DMEM. 200 µl de la muestra recuperada se examinaron para composición celular mediante citospina seguido por tinción con Wright-Giemsa. Las cuentas diferenciales se realizaron con la ayuda de un microscopio.

X. Cuantificación de la expresión del gen mediante RT-PCR de tiempo real Los tejidos muestra se extirparon del ratón después del tratamiento y se congelaron por presión en nitrógeno líquido. ARN total se extrajo utilizando RNAstatßO (Molecular Research Center) de conformidad con las instrucciones del fabricante y se almacenaron a -80°C en nucleasa-libre. Para la síntesis de ADNc ARN se incubó con 10 unidades de DNasa I (Boehringer Mannheim) en presencia de RNasina (Promega) durante 30 minutos a 37°C. Las muestras entonces se calentaron ¡nactivadas a 95°C durante 10 minutos, se enfriaron, y se transcribieron inversamente con transcriptasa inversa Superscript II (Gibco/BRL) con hexámeros aleatorios de conformidad con el protocolo del fabricante. Los iniciadores fueron obtenidos a partir de Perkin Elmer o generados con el software Primer Express (Perkin Elmer) y se sintetizaron en la instalación del núcleo del iniciador DNAX. Siempre que fue posible, los pares de iniciadores se diseñaron para abarcar bordes de intron/exon. Las muestras entonces se sometieron a 40 ciclos de amplificación de 95°C durante 15 segundos seguido por 60°C durante 1 minuto utilizando un sistema de detección de secuencia ABl GeneAmp 5700 y un regulador SYBR verde de conformidad con el fabricante (Perkin Elmer). La amplificación de PCR de la ubiquitina del gen de mantenimiento se realizó para cada muestra para controlar la carga de la muestra y para permitir la normalización entre las muestras de conformidad con las instrucciones del fabricante (Perkin Elmer). Tanto el agua como los controles de ADN genómico se incluyeron para asegurar la especificidad. Cada punto de datos se examinó para integridad mediante análisis de la gráfica de amplificación y curvas de disasociación. Todas las referencias en la presente están incoforadas a la presente por referencia al mismo grado como si cada publicación individual o solicitud de patente se indicase de manera específica e individual para estar incoforada por referencia. Muchas modificaciones y variaciones de esta invención se pueden hacer sin apartarse de su espíritu y alcance, como será evidente para los expertos en la técnica. Las modalidades específicas que se describen en la presente se ofrecen únicamente a manera de ejemplo, y la invención está limitada mediante los términos de las reivindicaciones que se anexan, junto con el alcance completo de equivalentes a los cuales tales reivindicaciones están autorizadas; y la invención no debe estar limitada por las modalidades específicas que se han presentado en la presente a manera de ejemplo.

LISTADO DE SECUENCIAS SEQ ID NO 1 provee una secuencia de polinucleótidos de IL-174 de primate.

SEQ ID NO 2 provee una secuencia de polipéptidos de IL-174 de primate.

SEQ ID NO 3 provee una secuencia de polinucleótidos de IL-174 de murino SEQ ID NO 4 provee una secuencia de polipéptidos de IL-174 de murino. <110> Schering Corporation <120> USOS DE CITOCINA; COMPOSICIONES; MÉTODOS <130> DX01088K PCT <140> <141> <150> US 60/198,488 <151> 2000-04-18 <160> 4 <170> Patentln Ver. 2.0 <210> 1 <211> 504 <212> ADN <213> primate <220> <221> CDS <222> (19) (501) <220> <221> mat_péptido <222> (67) .. (501) <400> 1 tgagtgtgca gtgccagc atg tac cag gtg gtt gca ttc ttg gca atg gtc 51 Met Tyr Gln Val Val Ala Phe Leu Ala Met Val -15 -10 atg gga acc cac acc tac age cac tgg ccc age tgc tgc ccc age aaa 99 Met Gly Thr His Thr Tyr- Ser His Trp Pro Ser Cys Cys Pro Ser Lys -5 -1 1 5 10 ggg cag gac acc tct gag gag ctg ctg agg tgg age act gtg ect gtg 147 Gly Gln Asp Thr Ser Glu Glu Leu Leu Arg Trp Ser Thr Val Pro Val 15 20 25 ect ccc cta gag ect gct agg ccc aac cgc cac cca gag tcc tgt agg 195 Pro Pro Leu Glu Pro Ala Arg Pro Asn Arg His Pro Glu Ser Cys Arg 30 35 40 gcc agt gaa gat gga ccc ctc aac age agg gcc atc tcc ccc tgg aga 243 Ala Ser Glu Asp Gly Pro Leu Asn Ser Arg Ala lie Ser Pro Trp Arg 45 50 55 tat gag ttg gac aga gac ttg aac cgg ctc ccc cag gac ctg tac cac 291 Tyr Glu Leu Asp Arg Asp Leu Asn Arg Leu Pro Gln Asp Leu Tyr His 60 65 70 75 gcc cgt tgc ctg tgc ccg cac tgc gtc age cta cag aca ggc tcc cac 339 Ala Arg Cys Leu Cys Pro His Cys Val Ser Leu Gln Thr Gly Ser His 80 85 90 atg gac ccc cgg ggc aac tcg gag ctg ctc tac cac aac cag act gtc 387 Met Asp Pro Arg Gly Asn Ser Glu Leu Leu Tyr His Asn Gln Thr Val 95 100 105 ttc tac cgg cgg cca tgc cat ggc gag aag ggc acc cac aag ggc tac 435 Phe Tyr Arg Arg Pro Cys His Gly Glu Lys Gly Thr His Lys Gly Tyr 110 115 120 tgc ctg gag cgc agg ctg tac cgt gtt tcc tta gct tgt gtg tgt gtg 483 Cys Leu Glu Arg Arg Leu Tyr Arg Val Ser Leu Ala Cys Val Cys Val 125 130 135 cgg ccc cgt gtg atg ggc tag 504 Arg Pro Arg Val Met Gly 140 145 <210> 2 <211> 161 <212> PRT <213> primate <400> 2 Met Tyr Gln Val Val Ala Phe Leu Ala Met Val Met Gly Thr His Thr -15 -10 -5 -1 Tyr Ser His Trp Pro Ser Cys Cys Pro Ser Lys Gly Gln Asp Thr Ser 1 5 10 15 Glu Glu Leu Leu Arg Trp Ser Thr Val Pro Val Pro Pro Leu Glu Pro 20 25 30 Ala Arg Pro Asn Arg His Pro Glu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Asp Gly 35 40 45 Pro Leu Asn Ser Arg Ala lie Ser Pro Trp Arg Tyr Glu Leu Asp Arg 50 55 60 Asp Leu Asn Arg Leu Pro Gln Asp Leu Tyr His Ala Arg Cys Leu Cys 65 70 75 80 Pro His Cys Val Ser Leu Gln Thr Gly Ser His Met Asp Pro Arg Gly 85 90 95 Asn Ser Glu Leu Leu Tyr His Asn Gln Thr Val Phe Tyr Arg Arg Pro 100 105 110 Cys His Gly Glu Lys Gly Thr His Lys Gly Tyr Cys Leu Glu Arg Arg 115 120 125 Leu Tyr Arg Val Ser Leu Ala Cys Val Cys Val Arg Pro Arg Val Met 130 135 140 Gly 145 <210> 3 <211> 985 <212> ADN <213> roedor <220> <221> CDS <222> (1) .. (507) <220> 5 <221> mat_péptido <222> (49) .. (507) <400> 3 atg tac cag gct gtt gca ttc ttg gca atg atc gtg gga acc cac acc 48 Met Tyr Gln Ala Val Ala Phe Leu Ala Met He Val Gly Thr His Thr -15 -10 -5 -1 gtc age ttg cgg atc cag gag ggc tgc agt cac ttg ccc age tgc tgc 96 Val Ser Leu Arg He Gln Glu Gly Cys Ser His Leu Pro Ser Cys Cys 1 5 10 15 ccc age aaa gag caa gaa ccc ccg gag gag tgg ctg aag tgg age tct 144 Q Pro Ser Lys Glu Gln Glu Pro Pro Glu Glu Trp Leu Lys Trp Ser Ser 20 25 30 gca tct gtg tcc ccc cca gag ect ctg age cac acc cac cac gca gaa 192 Ala Ser Val Ser Pro Pro Glu Pro Leu Ser His Thr His His Ala Glu 35 40 45 tcc tgc agg gcc age aag gat ggc ccc ctc aac age agg gcc atc tct 240 Ser Cys Arg Ala Ser Lys Asp Gly Pro Leu Asn Ser Arg Ala He Ser 50 55 60 ect tgg age tat gag ttg gac agg gac ttg aat cgg gtc ccc cag gac 288 Pro Trp Ser Tyr Glu Leu Asp Arg Asp Leu Asn Arg Val Pro Gln Asp 65 70 75 80 5 ctg tac cac gct cga tgc ctg tgc cca cac tgc gtc age cta cag aca 336 Leu Tyr His Ala Arg Cys Leu Cys Pro His Cys Val Ser Leu Gln Thr 85 90 95 ggc tcc cac atg gac ccg ctg ggc aac tcc gtc cca ctt tac cac aac 384 Gly Ser His Met Asp Pro Leu Gly Asn Ser Val Pro Leu Tyr His Asn 100 105 110 cag acg gtc ttc tac cgg cgg cca tgc cat ggt gag gaa ggt acc cat 432 Gln Thr Val Phe Tyr Arg Arg Pro Cys His Gly Glu Glu Gly Thr His 115 120 125 cgc cgc tac tgc ttg gag cgc agg ctc tac cga gtc tcc ttg gct tgt 480 Arg Arg Tyr Cys Leu Glu Arg Arg Leu Tyr Arg Val Ser Leu Ala Cys 130 135 140 gtg tgt gtg cgg ccc cgg gtc atg gct tagtcatget caccacctgc 527 Val Cys Val Arg Pro Arg Val Met Ala 145 150 ctgaggctga tgcccggttg ggagagaggg ccaggtgtac aatcaccttg ccaatgcggg 587 ccgggttcaa gccctccaaa gccctacctg aagcagcagg ctcccgggac aagatggagg 647 acttggggag aaactctgac ttttgcactt tttggaagca cttttgggaa ggagcaggtt 707 ccgcttgtgc tgctagagga tgctgttgtg gcatttctac tcaggaacgg actccaaagg 767 cctgctgacc ctggaagcca tactcctggc tcctttcccc tgaatccccc aactcctggc 827 acaggcactt tctccacctc tccccctttg ccttttgttg tgtttgtttg tgcatgccaa 887 ctctgcgtgc agccaggtgt aattgccttg aaggatggtt ctgaggtgaa agetgttate 947 gaaagtgaag agatttatec aaataaacat ctgtgttt 985 <210> 4 <211> 169 <212> PRT <213> roedor <400> 4 Met Tyr Gln Ala Val Ala Phe Leu Ala Met He Val Gly Thr His Thr -15 -10 -5 -1 Val Ser Leu Arg He Gln Glu Gly Cys Ser His Leu Pro Ser Cys Cys 1 5 10 15 Pro Ser Lys Glu Gln Glu Pro Pro Glu Glu Trp Leu Lys Trp Ser Ser 20 25 30 Ala Ser Val Ser Pro Pro Glu Pro Leu Ser His Thr His His Ala Glu 35 40 45 Ser Cys Arg Ala Ser Lys Asp Gly Pro Leu Asn Ser Arg Ala He Ser 50 55 60 Pro Trp Ser Tyr Glu Leu Asp Arg Asp Leu Asn Arg Val Pro Gln Asp 65 70 75 80 Leu Tyr His Ala Arg Cys Leu Cys Pro His Cys Val Ser Leu Gln Thr 85 90 95 Gly Ser His Met Asp Pro Leu Gly Asn Ser Val Pro Leu Tyr His Asn 100 105 110 Gln Thr Val Phe Tyr Arg Arg Pro Cys His Gly Glu Glu Gly Thr His 115 120 125 Arg Arg Tyr Cys Leu Glu Arg Arg Leu Tyr Arg Val Ser Leu Ala Cys 130 135 140 Val Cys Val Arg Pro Arg Val Met Ala

Claims (1)

1. NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES 1.- El uso de un agonista de IL-174, para la fabricación de un medicamento para dirigir una respuesta inmune hacia una respuesta de tipo Th2 en un mamífero. 2.- El uso de un agonista de IL-174, para la fabricación de un medicamento para estimular una respuesta inmune innata en un mamífero. 3.- El uso de un agonista de IL-174, para la fabricación de un medicamento para aumentar una respuesta inflamatoria a partir de células epiteliales o de fibroblasto en un mamífero. 4.- El uso de un agonista de IL-174, para la fabricación de un medicamento para inducir crecimiento de célula del intestino en un mamífero. 5.- El uso de un agonista de IL-174, para la fabricación de un medicamento para promover la hematopoyesis extramedular en un mamífero. 6.- El uso de un antagonista de IL-174, para la fabricación de un medicamento para dirigir una respuesta inmune lejos de una respuesta de tipo Th2 en un mamífero. 7.- El uso de un antagonista de IL-174, para la fabricación de un medicamento para evitar la inflamación o formación de granulomas en un mamífero. 8.- El uso de un antagonista de IL-174, para la fabricación de un medicamento para aumentar respuestas de anticuerpo en suero y materia fecal en un mamífero. 9.- El uso como el que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde dicho medicamento: a) induce producción de citocinas mediante una célula de fibroblasto, epitelial o endotelial; b) subregula una respuesta inflamatoria la cual acompaña una infección; c) estimula crecimiento de una célula epitelial; o d) induce crecimiento de células epiteliales de intestino, de fibroblasto, o en forma de copa. 10.- El uso como el que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde dicho mamífero presenta o experimenta condiciones a estimular: a) una condición autoinmune; b) una respuesta inmune a enfermedad infecciosa; c) una respuesta de cicatrización de herida; o d) una condición mediada por Th1. 1 - El uso como el que se reclama en la reivindicación 10, en donde: a) la condición autoinmune se selecciona de; i) esclerosis múltiple; ii) eritematosis de lupus sistémica; iii) artritis reumatoide, iv) diabetes; o v) psoriasis; b) la respuesta infecciosa es sintomática de: i) una infección por Aspergillis; ii) una infección micótica que incluye Candidaisis, Blastomicosis, o Aspergillosis; iii) una infección parásita que incluye esquistosomiasis, gusano plano, helminto, o filariasis); o iv) una infección viral que incluye hepatitis; o c) la condición mediada por Th1 es una condición inflamatoria que incluye enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, pancreatitis, hepatitis o gastritis eosinofílica. 12.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 11 subpárrafo b), en donde otra entidad terapéutica es administrable para tratar dicha infección. 13.- El uso como el que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, en donde dicho antagonista es un anticuerpo monoclonal contra IL-174. 14.- El uso como el que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, en donde a) dicho medicamento que comprende dicho antagonista bloquea la atracción de eosinófilos, remodelación de tejido, o fibrosis; o b) el mamífero presenta, o ha experimentado condiciones a estimular: i) una condición alérgica; ii) una condición inflamatoria; o iii) una condición mediada por Th2. 15.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 14, en donde: a) los eosinófilos son atraídos al pulmón, hígado o intestino; b) la fibrosis es fibrosis de ducto pancreático o fibrosis peribiliar; c) el antagonista suprime la producción de IL-174, IL-175, y/o IL-13; d) el antagonista disminuye eotaxina, CCR4, y/o expresión de CCR4 en BAL; e) los síntomas de la condición alérgica están en el pulmón; f) la condición alérgica es una respuesta anafiláctica sistémica, respuesta de hipersensibilidad de la piel, o una alergia al alimento; o g) la condición inflamatoria o mediada por Th2 es una dermatitis o inflamación asmática. 16.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 14, en donde el mamífero presenta, o ha experimentado condiciones a estimular: i) una condición alérgica; ii) una condición inflamatoria; o iii) una condición mediada por Th2. 17.- Una composición que comprende: a) un agonista de IL-174 y: i) un antimicrobiano que incluye un compuesto antibiótico, antiviral, o antimicótico o ii) un agente de quimioterapia; o b) un antagonista de IL-174 y; i) un medicamento para alergia; ii) un medicamento para asma; iii) un medicamento para dermatitis; iv) un medicamento para fibrosis, o v) un medicamento para gastritis eosinofílica.