MXPA02004350A - Metodo y composiciones para tratar enfermedades pulmonares. - Google Patents

Abstract

La invencion se refiere al tratamiento de enfermedades pulmonares tales como enfermedad pulmonar obstructiva cronica o asma mediante la administracion de un inhibidor de fosfodiesterasa 4 en combinacion con corticosteroide anti-inflamatorio.

Description

MÉTODO Y COMPOSICIONES PARA TRATAR ENFERMEDADES PULMONARES CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere a composiciones y métodos para prevenir o reducir el inicio de los síntomas de enfermedades pulmonares, o tratar o reducir la severidad de enfermedades pulmonares. En particular se refiere a composiciones y métodos para tratar enfermedades pulmonares mediadas por fosfodiesterasa 4 (PDE4) mediante la administración de un inhibidor de PDE4 con un corticosteroide anti-inflamatorio.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La identificación de agentes terapéuticos novedosos para tratar enfermedades pulmonares se hace difícil por el hecho de que múltiples mediadores son responsables del desarrollo de la enfermedad Así, parece poco probable que eliminando los efectos de un mediador particular se pueda tener un efecto sustancial sobre los tres componentes del asma crónico. Una alternativa al "método de mediador" es regular la actividad de las células responsables de la patofisiología de la enfermedad. Uno de estos modos es al elevar los niveles de AMPc (adenosina cíclica 3',5'-monofosfato). El AMP cíclico se ha mostrado que es « .... -^ ^.^ «I . *. ~* * 1 , t mtfftÉfiMi iÉ ilÉi iÉi segundo mensajero que media las respuestas biológicas para un amplio intervalo de hormonas, neurotransmisores y fármacos; [Krebs Endocrinology Proceedings of the 4th International Congress Excerpta Medica, 17-29, 1973]. Cuando el agonista apropiado se une a los receptores específicos de superficie celular, la adenilato ciclasa se activa, la cual convierte Mg+2-ATP a AMPc a una velocidad acelerada. El AMP cíclico modula la actividad de la mayoría, sino es que de todas, las células que contribuyen a la patofisiología del asma extrínseco (alérgico). Como tal, una elevación del AMPc podría producir efectos benéficos incluyendo: 1) relajación del músculo liso de las vías aéreas, 2) inhibición de la liberación de mediadores de las células cebadas, 3) supresión de la degranulación de neutrófilo, 4) inhibición de la degranulación del basófilo, y 5) inhibición de la activación de monocito y del macrófago. Por lo tanto, los compuestos que activan la adenilato ciclasa o que inhiben la fosfodiesterasa podrían ser efectivos para suprimir la activación inapropiada del músculo liso de vías aéreas y de una amplia variedad de células inflamatorias. El mecanismo celular principal para la inactivación del AMPc es la hidrólisis del enlace 3'-fosfodiester por una o más de una familia de isozimas referidas como nucleótido cíclico fosfodiesterasas (PDE). Se ha mostrado que una distinta isozima nucleótido cíclico fosfodiesterasa (PDE), PDE4, es responsable del rompimiento de AMPc en el músculo liso de vías aéreas y en células inflamatorias. [Torphy, "Phosphodiesterasa Isozymes: Potential Targets for Novel Anti-asthmatic Agents " en New Drugs for Asthma, Barnes, ed. IBC Technical Services Ltd., 1989]. La investigación indica que la inhibición de esta enzima no solamente produce relajación del músculo liso de vías aéreas, sino que también suprime la degranulación de las células cebadas, basófilos y neutrófilos junto con la inhibición de la activación de los monocitos y neutrófilos. Además, los efectos benéficos de los inhibidores PDE 4 se potencian marcadamente cuando la actividad de la adenilato ciclasa de las células blanco se eleva por las hormonas apropiadas o autocoides, como podría ser el caso in vivo. Por lo tanto los inhibidores PDE 4 podrían ser efectivos en el pulmón, en donde los niveles de prostaglandina E2 y prostaciclina (activadores de adenilato ciclas») están elevados. Dichos compuestos podrían ofrecer un método único hacia la farmacoterapia del asma bronquial y poseen ventajas terapéuticas significativas sobre agentes actualmente en el mercado. Además, podría ser útil combinar terapias a la luz del hecho de que la etiología de muchas enfermedades pulmonares implica múltiples mediadores. En esta invención está presente la combinación de un inhibidor de PDE 4 y un corticosteroide anti-inflamatorio, particularmente uno administrado mediante inhalación, para tratar enfermedades pulmonares. Esta combinación es particularmente útil para tratar enfermedades pulmonares obstructivas crónicas (COPD) o asma.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN En un primer aspecto esta invención refiere a un método para tratar una enfermedad pulmonar en un mamífero mediante la administración a un paciente que lo necesite de una cantidad efectiva de un inhibidor específico de PDE 4 y una cantidad efectiva de un agente esteroidal anti-inflamatorio en donde los fármacos se administran concomitantemente juntos o separadamente y secuencialmente en donde la administración secuencial es cercana en tiempo o remota en tiempo. En un segundo aspecto esta invención se refiere a una composición para tratar una enfermedad pulmonar en un mamífero que comprende una cantidad efectiva de un inhibidor específico de PDE 4, una cantidad efectiva de un agente esteroidal anti-inflamatorio y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La terapia de combinación contemplada por esta invención comprende administrar un inhibidor de PDE 4 con un agente esteroidal anti- inflamatorio para prevenir el inicio de un evento de enfermedad pulmonar o para tratar una condición existente. Los compuestos pueden administrarse juntos en una forma de dosis única. O pueden administrarse como dos formulaciones diferentes las cuales pueden ser las mismas o diferentes. Para ilustrar, ambos fármacos pueden proveerse separadamente como formulaciones orales, o uno puede ser una preparación oral y el otro un inhalante, o ambos pueden proveerse en una forma de dosis inhalada. Estos pueden administrarse al mismo tiempo. O estos pueden administrarse ya sea cercanos en tiempo o remotamente en el tiempo, tal como cuando un fármaco se administra en la mañana y el segundo fármaco se administra en la tarde. La combinación puede utilizarse profilácticamente o después del inicio de los síntomas. En algunos casos la combinación(es) puede utilizarse para prevenir la progresión de una enfermedad pulmonar o para detener la decadencia de una función, tal como la función pulmonar. El inhibidor específico de PDE 4 útil en esta invención puede ser cualquier compuesto que se conoce que inhibe la enzima PDE 4 o el cual se descubre que actúa como un inhibidor de PDE 4 y los cuales son solamente inhibidores de PDE4, no compuestos que inhiben otros miembros de la familia PDE así como PDE4. Generalmente se prefiere utilizar antagonistas PDE 4 los cuales tienen una relación IC50 de aproximadamente 0.1 o mayor con respecto al IC50 para la forma catalítica de PDE 4 la cual se une a rolipram con una alta afinidad dividida por el IC50 para la forma que se une a rolipram con una baja afinidad. Los inhibidores de PDE utilizados para tratar inflamación y utilizados como broncodilatadores, fármacos similares a teofilina y pentoxifilina, inhiben isozimas de PDE indiscriminadamente en todos los tejidos. Estos compuestos exhiben efectos laterales, aparentemente debido a que estos inhiben de manera no selectiva todas las 5 clases de isozimas de PDE en todos los tejidos. El estado de enfermedad dirigido puede tratarse efectivamente por dichos compuestos, pero pueden exhibirse los efectos secundarios no deseados los cuales, si estos pudieran ser evitados o minimizados, podrían incrementar el efecto terapéutico general de este método para tratar ciertos estados de enfermedad. Por ejemplo, los estudios clínicos con el inhibidor selectivo de PDE 4 rolipram, el cual ha sido desarrollado como un antidepresivo, indican que éste tiene una actividad psicotrópica y produce efectos gastrointestinales, es decir, pirosis, náusea y emesis. Para propósito de esta descripción, el sitio catalítico del AMPc que se une a rolipram R y S con una baja afinidad se denomina el sitio de unión de "baja afinidad" (LPDE 4) y la otra forma de este sitio catalítico el cual se une a rolipram con una alta afinidad se denomina el sitio de unión de "alta afinidad" (HPDE 4). Este término "HPDE4" no debería confundirse con el término "hPDE4" el cual se utiliza para denotar PDE 4 de humano. Los experimentos iniciales se llevaron a cabo para establecer y validar un ensayo de unión a [3H]-rolipram. Los detalles de este trabajo se dan en el ejemplo 1 a continuación. Para determinar si tanto la actividad de unión de alta afinidad y la actividad de unión de baja afinidad residen en el mismo producto génico, las levaduras se transformaron mediante métodos conocidos y la expresión de PDE 4 recombinante se siguió durante un periodo de fermentación de 6 horas.

El análisis Western blot utilizando un anticuerpo dirigido en contra de PDE 4 indica que la cantidad de PDE 4 expresado se incrementó con el tiempo, alcanzando un máximo después de 3 horas de crecimiento. Además, más del 90% del producto inmunoreactivo estuvo en el sobrenadante de alta velocidad (100,000 x g) de los usados de levadura. La unión a [3H]R-(-)-Rolipram y la actividad de PDE se monitorearon junto con la expresión de la proteína. La actividad PDE 4 se co-expresó con la actividad de unión a rolipram, indicando que ambas funciones existen sobre el mismo producto génico. De manera similar a los resultados con el análisis de Western blot, más del 85% de la actividad PDE que se inhibe por rolipram y la actividad de unión a [3H]-rolipram se encontró que está presente en la fracción del sobrenadante de levadura. En general, la mayoría de los PDE 4 recombinantes expresados en este sistema existen como LPDE 4 y solamente una pequeña fracción como HPDE 4. Consecuentemente, la inhibición de PDE 4 recombinante catalítica primariamente activa refleja las acciones de los compuestos en LPDE 4. La inhibición de PDE 4 catalítica activa puede entonces utilizarse como un índice de la potencia de los compuestos en LPDE 4. La potencia de los compuestos en HPDE 4 puede evaluarse al examinar su capacidad para competir por [3H]R-rolipram. Para desarrollar SAR tanto para los sitios de unión a rolipam de baja afinidad como de alta afinidad, se determinaron las potencias de compuestos seleccionados en dos sistemas de ensayo. Se tabularon los resultados a partir de los experimentos que utilizan compuestos ^•r^. — ^ii^J ,.^^^^^ estándares. Como se esperaba, ciertos compuestos son claramente más potentes para competir con [3H]R-rolipram en el sitio en el cual rolipram demostró una unión de alta afinidad en comparación con el otro sitio, aquel al cual rolipram se une con baja afinidad. La correlación SAR entre la unión de alta afinidad y la unión de baja afinidad fue escasa y se concluyó que SAR para la inhibición de la unión de [3H]R-rolipram de alta afinidad era distinto a partir del SAR para la unión al sitio de unión a rolipram de baja afinidad. Actualmente se sabe que hay al menos dos formas de unión en PDE 4 (hPDE 4) de mocito humano recombinante con las que los inhibidores interactúan. Una explicación de estas observaciones es que hPDE 4 existe en dos formas distintas. Una une los elementos similares de rolipram y denbufilina con una alta afinidad mientras que la otra une estos compuestos con una baja afinidad. Los inhibidores preferidos de PDE 4 para uso en esta invención serán aquellos compuestos que tengan una relación terapéutica saludable, es decir, compuestos que preferiblemente inhiben la actividad catalítica de AMPc en donde la enzima está en la forma que se une a rolipram con una baja afinidad, por lo tanto reduciendo los efectos laterales los cuales aparentemente están relacionados con la inhibición de la forma que se une a rolipram con una alta afinidad. Otra manera de establecer esto es que los compuestos preferidos tendrán una relación IC50 de aproximadamente 0.1 o mayor con respecto al IC50 para la forma catalítica de PDE 4 la cual se une a rolipram con una alta afinidad dividida por el IC50 de la forma que se une a rolipram con una baja afinidad. ' -*^ *" -'^j?^^ fa^á?A. ^^^i.^M?^íi Un refinamiento adicional para este estándar es aquel en donde el inhibidor de PDE 4 tiene una relación IC50 de aproximadamente 0.1 o mayor; dicha relación es la relación del valor IC50 para competir con la unión de 1nM de [3H]R-rolipram a una forma de PDE 4 la cual se une a rolipram con una alta afinidad sobre el valor IC50 para inhibir la actividad catalítica de PDE 4 de una forma que se une a rolipram con una baja afinidad utilizando 1 microM[3H]R-AMPc como el sustrato. Una explicación adicional de evaluación crítica con esta prueba puede encontrarse en la solicitud copendiente de E.U.A. No. 08/456274 presentada el 31 de mayo de 1995, el texto de la cual se incorpora en la presente como referencia hasta al grado en que el texto es necesario para la practica de está invención. Los ejemplos de inhibidores útiles de PDE4 son: (R)-(+)-1-(4-bromobenzil)-4-[(3-ciclopentiloxi)-4-metoxifenil]-2-pirrolidona; (R)-(+)-1-(4-bromobenzil)-4-[(3-ciclopentiloxi)-4-metoxifenil]-2-pirrolidona, 3-(ciclopentiloxi-4-metoxifenil)-1-(4-N'-[N2-ciano-S-metil-isotioureido]bencil)-2-pirrolidona, ácido cis-[4-ciano-4-(3-ciclopentiloxi-4-metoxifenil)ciclohexano-1-carboxílico]; cis 4-ciano-4-(3-ciclopropilmetoxi-4-difluorometoxifenil)ciclohexano-1-ol]; (R)-(+)-etil -(3-ciclopentiloxi-4-metoxifenil)pirrolidona-2- ilidano]acetato; (S)-(-)-etil [4-(3-ciclopentiloxi-4-metoxifenil)pirrolidona-2- ilidano]acetato; Más preferidos son aquellos inhibidores de PDE 4 los cuales tiene una relación IC50 mayor que 0.5, y particularmente aquellos compuestos que tienen una relación mayor que 1.0. Los compuestos preferidos son ácido cis 4-ciano-4-(3-ciclopentiloxi-4-metoxifenil)ciclohexan-1 -carboxílico, carbometoxi-4-ciano-4-(3-ciclopropilmetoxi-4-difluorometoxifenil)ciclohexan-1- ona, y is-[4-ciano-4-(3-ciclopropilmetoxi-4-difluorometoxifenil)ciclohexan-1 -ol]; estos son ejemplos de compuestos que se unen preferiblemente al sitio de unión de baja afinidad y los cuales tienen una relación IC500.1 o mayor. Los compuestos se establecen en la Patente de E.U.A. No. 5,552,438 expedida el 3 de septiembre de 1996. Esta patente y los compuestos descritos que ésta describe se incorporan en la presente por completo como referencias. El compuesto de particular interés, el cual se describe en la Patente de E.U.A. No. 5,552,438 es ácido c/s-4-ciano-4-[3- ciclopentiloxi-4-metoxifenil)ciclohexano-1 -carboxílico y sus sales, esteres, profármacos o formas físicas. AWD-12-281 a partir de Astra (Hofgen, N. et al. 15th EFMC Int Symp Med Chem (Sept 6-10, Edinburgo) 1998, Abst P.98); un derivado 9- benziladenina nominado NCS-613 (INSERM); D-4418 a partir de Chiroscience y Schering-Plough; e inhibidor de benzodiazepina PDE4 identificado como Cl- 1018 (PD-168787; Parke-Davis/Warner-Lambert); un derivado de benzodioxol Kyowa Hakko descrito en WO 9916766; V-11294A a partir de Napp (Landells, L.J. et al. Eur Resp J [Annu Cong Eur Resp Soc (Sep 19-23, Ginebra) 1998] 1998, 12(Suppl. 28): Abst P2393); roflumilast (referencia CAS No 162401-32-3) y ftalazinona (WO 9947505) a partir de Byk-Gulden; o un compuesto identificado como T-440 (Tanabe Seiyaku; Fuji, K. et al. J Pharmacol Exp Ther, 1998, 284(1): 162). Cualesquiera o todos estos compuestos pueden o podrían beneficiarse a partir del procedimiento descrito en la presente. Varios compuestos específicos establecidos anteriormente que no tienen un nombre genérico o de marca pueden elaborarse mediante el procedimiento descrito en la solicitudes co-pendientes de patente de E.U.A. USSN 862,083 presentadas el 30 de octubre de 1992; USSN 862,111 presentada el 30 de octubre de 1992; USSN 862,030 presentada el 30 de octubre de 1992; presentada el 30 de octubre de 1992; y USSN 862,114 presentada el 30 de octubre de 1992 o su progenie o Patente(s) de E.U.A. que reclaman prioridad a partir de una o más de estas solicitudes. Cada una de estas solicitudes o patentes relacionadas se incorporan en la presente como referencia en su totalidad como si se establecieran en este documento. Los agentes esteriodales útiles en esta invención son corticosteroides orales e inhalados y sus pro-fármacos los cuales tienen actividad anti-inflamatopa. Los ejemplos de estos esteroides son metil prednisolona, prednisona, dexametasona, fluticasona, declometasona, budesonida, flunisolida, furoato de mometasona, y acetonido de triamcinolona. La metil prednisolona y la prednisona son formas orales e inyectables de . toi. M» ^^i ^ ?i^itÉt^?á?jm^l^A^^ ?.1 l *m—+*. ?¿ i corticosteroides anti-inflamatorios; estos están disponibles a partir de numerosas marcas y compañía farmacéuticas genéricas. El dipropionato de beclometasona se vende como un aerosol para la inhalación bajo los nombres de Beconase® y Beconase®AQ® por Glaxo Wellcome. El propionato de fluticasona también se vende bajo el nombre Flonase® por Glaxo Wellcome. El acetonido de triamcinolona se vende por Rhone-Poulenc Roher bajo el nombre Nasacort® como una aspersión nasal y aerosol. La flunisolida se vende como una solución nasal bajo el nombre Nasalide® y Nasarel™ por Roche Laboratories. La dexametasona se vende como la sal de fosfato sódica mediante Medeva Pharmaceuticals, Inc. bajo el nombre de fosfato de Dexacort™. El furoato de mometasona se vende como el monohidrato como una preparación nasal por Shering Corp bajo el nombre Nasonex® Budesonida es incluso otro corticosteroide inhalado utilizado para tratar enfermedades pulmonares. Este se comercializa por Astra Pharmaceuticafs, L.P. como un polvo en un dispositivo turboinhalador bajo el nombre Pulmicort Turbohaler®. Todos estos fármacos y preparaciones nasales o formulaciones orales o inyectables pueden encontrarse en la edición de 1999 del Physicians' Desk Reference® (PDR), publicado por Medical Economics Corporation, Inc de New Jersey, E.U.A. y está disponible en Internet en http://www.tomescps.com/fraMain.asp?Mnu=0 y páginas relacionadas. Los corticosteroides adicionales que actualmente están bajo desarrollo y los cuales pueden ser utilizados en esta invención se establecen en el cuadro 1.

CUADRO 1 Corticosteroides inhalados Una terapia de combinación preferida es aquella de una o más de dexametasona, fluticasona, declometasona, budesonida, flunisolida, furato de mometasona, y acetonido de tpamcinolona administrados con ácido c/S-4- ciano-4-(3-ciclopentiloxi-4-metoxifenil)ciclohexano-1 -carboxílico, cilomalast (Ariflo®). Una terapia preferida es la administración concomitante del esteroide como un inhalador y el ácido en una forma de dosis oral, en donde cada fármaco se administra una o dos veces al día. Con respecto al ácido, se prefiere más una tableta oral de liberación controlada. Se contempla que ambos agentes activos podrían administrarse al mismo tiempo, o muy cercanos en el tiempo. Alternativamente, un fármaco podría tomarse en la mañana $!«!* ofro posteriormente en el día. O en otro escenario, un fármaco podría tomarse dos veces al día y el otro una vez al día, ya sea al mismo tiempo como uno que ocurre en dosificación de dos veces al día, o separadamente. Preferiblemente ambos fármacos podrían tomarse juntos al mismo tiempo. Los presentes compuestos y sales farmacéuticamente aceptables las cuales están activos cuando se dan oralmente pueden formularse como jarabes, tabletas, cápsulas, preparaciones de liberación controlado o tabletas. Una formulación en jarabe generalmente consistirá de una suspención o solución del compuesto o sal en un vehículo líquido por ejemplo, etanol, aceite de cacahuate, aceite de olivo, glicerina o agua con un agente saborizante o colorante. En donde la composición está en la forma de una tableta, puede emplearse cualquier vehículo farmacéutico rutinariamente utilizado para preparar formulaciones sólidas. Los ejemplos de dichos vehículos incluyen estearato de magnesio, térra alba, talco, gelatina, acacia, ácido esteárico, almidón, lactosa y sucrosa. En donde la composición está en la fórmula de una cápsula, cualquier encapsulación rutinaria es adecuada, por ejemplo utilizando los vehículos anteriormente mencionados en cubiertas de cápsula de gelatina dura. En donde la composición está en la forma de una cápsula de cubierta de gelatina suave puede considerarse cualquier vehículo farmacéutico rutinariamente utilizado para preparar dispersiones o suspensiones, por ejemplo gomas acuosas, celulosas, silicatos o aceites, y se incorporan en una cubierta de cápsula de gelatina suave.

Las composiciones parentales típicas consisten de una solución o suspensión de un compuesto o sal en un vehículo acuoso o no acuoso estéril que opcionalmente contiene un aceite parenteralmente aceptable, por ejemplo polietilenglicol, polivinilpirrolidona, lecitina, aceite araquis o aceite de ajonjolí. Las composiciones típicas para inhalación están en la forma de una solución, suspensión o emulsión que puede estar preparada como un polvo seco o estar en la forma de una aerosol utilizando un propelente convencional tal como hidrocarburos fluorinados tales como triclorofluorometano. Preferiblemente la composición para los inhibidores de PDE4 es una forma de dosis unitaria tal como una tableta o cápsula. Para los esteroides se prefiere una dosis medida de aerosol, inhalador medido de polvo seco o aspersión nasal. El ingrediente activo puede administrarse de 1 a 6 veces al día, de manera suficiente para que exhiba la actividad deseada. Preferiblemente, el ingrediente activo se administra aproximadamente una o dos veces al día más preferiblemente dos veces al día. Los compuestos presentes son útiles para el tratamiento de asma inducido por el ejercicio (EIA), asma inducido por contaminación (PÍA) y asma inducido por frío (CÍA), tanto como condiciones crónicas así como intermitentemente, en anticipación del estímulo en cuestión. Preferiblemente, los presentes compuestos se utilizan para terapia a largo plazo.

Así como para la cantidad de fármaco administrado, se cree que los inhibidores de PDE4 se administraran en una cantidad de entre 1 y 200 microgramos por día por adulto humano. Los esteroides pueden administrarse de conformidad con marcado aprobado.

EJEMPLO 1 Ensayos de unión a fosfodiesterasa v Rolipram EJEMPLO 1A Las PDE 4 y hrPDE aisladas de monocitos humanos (PDE4 recombinante humano) se determinaron para que existieran principalmente en la forma de baja afinidad. Por lo tanto, la actividad de los compuestos prueba en contra de la forma de baja afinidad PDE 4 puede evaluarse utilizando métodos estándar para la actividad catalítica de PDE 4 empleando 1 microM [3H] AMPc como un substrato (Torphy et al., J. OfBiol. Chem., Vol. 267, No. 3 pp1798-1804, 1992). Los sobrenadantes a alta velocidad de cerebro de rata se utilizaron como una fuente de proteína y ambos enantiómeros de [3H]-rolipram se prepararon para una actividad específica de 25.6 Ci/mmol. Las condiciones de ensayo estándares se modificaron a partir del procedimiento publicado para que fueran idénticas a las condiciones del ensayo de PDE, excepto para el último de los AMPc: Tris HCl 50 mM (pH 7.5), MgCI2 5 mM, 5'-AMP 50 microM y 1 nM de [3H]-rolipram (Torphy et al., J. OfBiol. Chem., Vol. 267, No. 3 pp 1798-1804). Los ensayos se corrieron por una hora a 30°C La reacción se terminó y el ligando unido se separó a partir de los ligandos libres utilizando un cosechador de células Brandel. La competencia para los sitios de unión de alta afinidad se evaluó bajo condiciones que fueron idénticas a aquellas utilizadas para medir la actividad de PDE de baja afinidad, excepto que no estuvo presente [3H]- AMPc.

EJEMPLO 1B Medición de actividad fosfodiesterasa La actividad de PDE se ensayó utilizando un ensayo de enzima [3H] AMPc SPA o [3H] GMPc SPA como se describe por el abastecedor (Amersham Life Sciences). La reacciones se llevaron a cabo en placas de 96 pozos a temperatura ambiente, en 0.1 ml de amortiguador de reacción que contenía (concentraciones finales): Tris-HCl 50 mM, pH 7.5, MgCI 28.3 mM, EGTA 1 7 mM, [3H] AMPc o [3H] GMPc (aproximadamente 2000 dpm/pmol), enzima y varias concentraciones de los inhibidores. El ensayo se dejó proceder por una hora y se terminó al añadir 50 µl de glóbulos de silicato de itrio SPA en la presencia de sulfato de zinc. Las placas se agitaron y se dejaron reposar a temperatura ambiente por 20 minutos. La formación del producto radio marcado se evaluó mediante espectrometría de centelleo.

Ensayo de unión f3HlR-rolipram El ensayo de unión a [3H]R-rolipram se llevó a cabo mediante la modificación del método de Schneider y colaboradores. Véase Nicholson, et al., Trends Pharmacol. Sci., Vol. 12, pp. 19-27 (1991) y McHaie et al., Mol. Pharmacol., Vol. 39, 109-113 (1991). R-Rolipram se une al sitio catalítico de PDE4 véase Torphy et al., Mol. Pharmacol., Vol. 39, pp. 376-384 (1991). Consecuentemente, la competencia por el sitio de unión a [3H]R-rolipram provee una confirmación independiente de las potencias del inhibidor de PDE4 de competidores no marcados. El ensayo se llevó a cabo a 30°C por una hora en 0.5 µl de amortiguador que contenía (concentraciones finales): Tris- HCl 50 mM, pH 7.5, MgCI2 5 mM, albúmina de suero bovino al 0.05%, [3H]R-rolipram 2 nM (5.7x104 dpm/pmol) y varias concentraciones de inhibidores no radiomarcados. La reacción se detuvo mediante la adición de 2.5 ml de amortiguador de reacción enfriado con hielo (sin [3H]-R-rslipram) y filtración rápida al vacío (cosechador de células Brandel) a través de filtros Whatman GF/B que han sido empapados en polietilenimida al 0.3%. los filtros se lavaron con 7.5-ml adicionales de amortiguador frío, se secaron, y se contaron mediante espectrometría del centelleo líquido.

EJEMPLO 2 Estudio de intervalo de dosis de Cilomalast/corticosteroide inhalado a baja dosis ÍICS) Diseño del estudio: • Este fue un estudio de intervalo de dosis de fase IIB, aleatorizado, con placebo controlado, con una corrida de placebo a ciegas de una semana, una fase de tratamiento de doble ceguera de 6 semanas y una fase de seguimiento de una semana en pacientes con asma leve/moderado. • Población de estudios: Los pacientes fueron hombres o mujeres con edades entre 18 y 70 años, con asma leve a moderado, fueron elegibles los que no se controlaron adecuadamente con dos bajas de corticosteroides inhalados (no mayores que 500 mcg de dipropionato de declometasona/día o equivalente). Los pacientes se requirieron para que tuvieran una selección de FEVi de > 50% y < 80% pronosticada para la altura, edad, sexo y raza y un 12% o mayor de reversibilidad después de la administración del agonista de beta-2. Los pacientes tuvieron que tener una evaluación de síntomas totales de 6 o más a los 4 o 7 días que precedieron la línea basal de la visita a ser aleatorizada. El tamaño de muestra fue de 300 pacientes evaluables. • Cilomalast se dosificó a 5 mg, 10 mg, 15 mg dos veces al día por 6 semanas.

• Los sujetos estuvieron en una media de 500 mcg de beclometasona equivalente aunque la dosis media de ICS fue de 652 mcg. • Punto terminal principal: El cambio de línea basal a punto terminal es a través del volumen clínico expiratorio en un segundo (FEVi), cambios en FEVi clínico cada semana y durante un periodo de 4 horas después de la primera dosis de la medicación de doble ceguera. • Puntos terminales secundarios: Uso de medicinas de rescate y síntomas nocturnos. • Puntos terminales terciarios: Capacidad vital clínica forzada (FVC), velocidad pico de flujo expiratorio clínico (PEFR), flujo expiratorio forzado a 25-75% (FEF25-75) y 75% (FEF75), variabilidad domiciliar PEFR, PEFR domiciliario, evaluación de síntomas totales.

Criterios de evaluación La medición eficaz primaria se definió como el cambio a partir del punto terminal de la línea basal a través del cual el volumen expiratorio clínico forzado es de un segundo (FEVi). Los cambios en FEV1 clínico también se analizaron cada semana durante la fase de tratamiento de doble ceguera y durante un período de 4 horas inmediatamente después de la primera dosis de la medicación de doble ceguera. Las variables de eficiencias secundarias se utilizaron de agonistas beta-2 inhalados/nebulizados y de síntomas de asma nocturno. Las variables de eficiencia terciaria fueron capacidad vital forzada (FVC), velocidad pico de flujo expiratorio clínico (PEFR), flujo expiratorio forzado a 25-75% (FEF25-75) y 75% (FEF75), variabilidad domiciliar PEFR, PEFR domiciliar (mañana y tarde), evaluación de síntomas totales (una evaluación compuesta del asma nocturno, de la mañana y en general durante el día), asma matutino, asma general durante el día, uso de corticosteroides inhalados, tos, resuello, falta de aliento/tensión en el pecho, velocidad de exacerbación del asma y evaluación global por el médico y el paciente.

Resultados del estudio: • No hay mejoría estadística en FEV1 en el punto terminal del análisis ITT a 15 mg de cilomalast BID contra el placebo (0 16 L; p=0.062) • La respuesta se ordenó por la dosis para FEV1 en el análisis de punto terminal ITT • La mejoría significativa en FEV1 (0.21 L; p=0.033) se excluyó en pacientes con dosis ICS > 500 mcg de beclometasona mientras está en cilomalast 15 mg BID. • Se corroboró que el mantenimiento para cilomalast 15 mg BID incluyó 4 horas de FEV1, PEFR, FEF25-75 domiciliario y evaluaciones globales por el médico y el paciente.

'*J,LL,Ji^"">* - ^- ^~-^-^ t-l - ^^--****?****~*-+ ^¿ jL EJEMPLO 3 Estudio de cilomalast corticosteroide inhalado a alta dosis (ICS Diseño del estudio • R, DB, PC, DR en pacientes con asma leve/moderado sobre > 800 mcg de beclometasona • Las dosis de cilomalast ® fueron 5, 10 y 15 mg dos veces al día por 4 semanas. • Corrida de 2 semanas • Punto terminal principal- a través del FEVi clínico. • Puntos terminales secundarios: PEFR matutino, síntomas, variabilidad PEFR, PEFR vespertino, PEFR, FEF25-75, FEF75 clínico, utilización de medicación de rescate.

Resultados del estudio: • No hubo cambios estadísticamente significativos en el FEVi clínico en ningún grupo de dosis que se evidenció en el análisis ITT. • Ningún ordenamiento de la dosis se observó a partir del punto terminal principal. • A través de FEVÍ estadísticamente mejorado a 10 mg de cilomalast BID utilizando análisis repetidos de medición en pacientes excluidos sobre < 800 mcg de ICS (0.16 L; p=0.009).

• La dosis de ICS (beclo etasona) tuvo un intervalo de 100 a 4000 mcg y promedió 1136 mcg • Se corroboró el mantenimiento de 10 mg de cilomalast BID como la dosis efectiva que también obtuvo resultados numéricamente superiores en el FEVi clínico de 4 horas, FVC clínico, PEFR. • No pudo determinarse ninguna relación dosis respuesta, a través de las concentraciones en donde se utilizaron dosis proporcionales y similares a los estudios previos.

CUADRO 1 Comparación entre los compuestos en estudios seleccionados Estudios de prueba alérgica Datos comparativos: estudios de prueba alérgica Ariflo Singulair Ultair ICS B2 15 mg bd e 800 mcg de budesonida % Caída máxima de 1.3 12.3 10.7 22.9 +6.9 LAR (efecto del tratamiento) % de protección Ninguno 36.4 30.8 32 Sin máxima de caída de caída LAR % AUC de LAR (efecto 3.5 63.5 42.4 No realizado del tratamiento) % de protección AUC Ninguno 56.9 42.6 No realizado LAR Leyenda: los datos con cilomalast se tomaron a partir del análisis de protocolo en pacientes con asma en <652 mcg de ICS. Los datos en montelukast (MT), budesonida (BDP) y en ambos se tomaron a partir de µn estudio particular en el SBA Singulair que examinó el efecto de Singulair en relación a corticosteroides inhalados Hay diferencias significativas entre la conducta de los grupos placebo (Pbo) en ambos estudios. La conclusión es que cilomalast mejoró el desempeño de Singulair cuando se añadió en dosis bajas ICS, a pesar de que el hecho de que el grupo Pbo también se mejoró en el estudio con cilomalast. Se pretende que las evaluaciones anteriormente mencionadas' y los ejemplos ilustren la invención, no que la limiten. Se hace referencia a las reivindicaciones para lo que se reserva a los inventores a continuación.

Claims (1)

NOVEDAD PE tA tVENCION REIVINDICACIONES

1.- El uso de un inhibidor de PDE 4 y un corticosteroide antiinflamatorio para preparar un medicamento para tratar una enfermedad pulmonar en donde los componentes del medicamento se administran en una forma combinada, separadamente, o separadamente y secuencialmente en donde la administración secuencial es cercana en el tiempo o remota en el tiempo. 2 - El uso como el que se reclama en la reivindicación 1, en donde el inhibidor de PDE4 es ácido cis 4-ciano-4(3-ciclopentiloxi-4-metoxifenil)ciclohexan-1 -carboxílico y el esteroide se selecciona a partir del grupo que consiste de dexametasona, fluticasona, declometasona, budesonida, flunisolida, furoato de mometasona, y acetonido de triamcinolona.