MXPA02004244A - Reactivos y metodos para el diagnostico, la formacion de imagenes y el tratamiento del padecimiento de la ateroesclerosis.. - Google Patents
Reactivos y metodos para el diagnostico, la formacion de imagenes y el tratamiento del padecimiento de la ateroesclerosis..Info
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Abstract
La invencion proporciona un nuevo Fab de Mab humano, clonado mediante exhibicion de fago y su uso en metodo de diagnostico y terapeutico. En particular, la invencion proporciona un metodo para analizar los componentes de OxLDL de placas ateroescleroticas in vivo y un medio para determinar su patologia relativa. Ya que el metodo esta basado en Fab humano en lugar de un Mab de raton, el avance o inversion de la enfermedad se puede verificar con el paso del tiempo. El anticuerpo puede tambien ser usado para el analisis de muestras quirurgicas o de suero ex vivo en cuanto a la presencia de OxLDL. El anticuerpo puede tambien ser usado para apuntar agentes terapeuticos al sitio de las placas ateroescleroticas o puede tener uso como agente terapeutico mismo.
Description
REACTIVOS Y MÉTODOS PARA EL DIAGNOSTICO, LA FORMACIÓN DE IM GENES Y EL TRATAMIENTO DEL PADECIMIENTO DE LA
ATEROESCLEROSIS
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
CAMPO DE LA INVENCIÓN La invención es concerniente con un fragmento de anticuerpo monoclonal humano nuevo (Fab) , clonado mediante exhibición de fago que se enlaza específicamente a formas oxidadas de lipoproteinas de baja densidad (OxLDL) y LD no natural. Más en particular, es concerniente con el uso del anticuerpo por métodos mejorados de diagnosis y tratamiento de ateroesclerosis .
DESCRIPCIÓN J3E LA TÉCNICA PREVIA La ateroesclerosis es una enfermedad inflamatoria crónica que resulta de la hiperlipidemia y una interrelación compleja de una variedad de factores de riesgo ambientales, metabólicos y genéticos. La oxidación de lipoproteína de baja densidad (LDL) juega una función central, sino obligatoria, en el proceso aterogénico. Los primeros estudios mostraron que la acetilación de LDL mejora extensamente su captación por los macrófagos y que la captación ocurría vía "receptores de depurador ---que eran distintos del receptor de LD clásico. A diferencia de la mayoría de los receptores, estos receptores de depurador no fueron regulados hacia abajo enseguida de la captación ae OxLDL. Debido a la captación excesiva de OxLDL y su lirido asociado por los macrófagos, las células obtenían una apariencia semejante a espuma característica. La aparicicp de tales células es una de las marcas de la enfermedad Las células de espuma se acumulan dentrc C la intima (debajo del forro endotelial) de las parear-? acl vaso en donde se vuelven inestables y las placas, las marcas de enfermedad más avanzadas. Se desarrollan condiciones inflamatorias que conducen al desarrollo de lesiones complicadas. Hay mucha evidencia de que el OxLDL contribuye a la aterogénesis mediante una diversidad de mecanismos. La oxidación de ácidos grasos poli-insaturados en los fosfolípidos de lipoproteínas genera muchos productos de rompimiento tales como malondialdehido (MDA) , 4-hidroxinonenal (4-HLE) y otras porciones reactivas anexas a fosfolípidos oxidados. Muchos de estos productos intermediarios son altamente reactivos y pueden interactuar con residuos de lisina de proteína asociadas y fosfolípidos para generar varios aductos. Se sabe que estos aductos ocurren in vivo y son inmunogénicos. En modelos murinos de ateroesclerosis, tales como ratones deficientes de apo-e(ApoE), la ateroesclerosis está correlacionada con el desarrollo de altos títulos de auto-anticuerpos a varios epítopes específicos de oxidación de OxLDL. Las consecuencias de tales respuestas celulares y humorales están todavía comprendidas suficientemente, pero bajo ciertas condiciones pueden modificar claramente la historia natural de la enfermedad. Está aceptado en general que es la composición de las lesiones ateroescleróticas, en particular el contenido de lípidos, OxLDL, células de espuma y células de tejido liso, que determinan sus propiedades. Las células de espuma son frecuentemente encontradas en sitios de la lesión que son susceptibles a ruptura. Macrófagos activados reclutados para limpiar las células de espuma apoptoticas y necróticas, también como OxLDL se debe a factores que debilitan la placa. Los estudios de patología humana han demostrado que los ateromas que contienen un núcleo necrótico grande, tapa fibrosa delgada y grandes números de células de macrófago/espuma en el hombro son más expuestas a la ruptura de placa y trombosis. Estas lesiones, que frecuentemente aparecen como estenosis coronarias suaves y moderadas en estudios angiográficos, están caracterizadas patológicamente como ateroma grande con acumulaciones de lípido extensas que exceden 40% de las áreas de placa. La angiografía solamente proporciona una medida del lumen arterial, pero no detecta la patología de la pared del vaso. Los métodos de diagnósticos que proporcionan una medida de la extensión global de la lesión ateroesclerótica, con un énfasis sobre el OxLDL y contenido de lípido, serían por consiguiente deseables. r*. Además, se puede suponer que el núcleo de lípido de ateromas contiene lípidos oxidados extensos que se acumulan dentro de
___ las celdas de espuma y se liberan cuando las células sufren 5 necrosis y apoptosis. La detección no invasiva de lesiones ateroescleróticas no es actualmente factible clínicamente. El estándar dorado para la diagnosis de la ateroesclerosis es la angiografía que detecta los contornos de lumen de vaso 0 anormales provocados por el traspaso de la ateroesclerosis pero no identifica directamente las anormalidades de la pared del vaso. Las limitaciones ampliamente reconocidas de la angiografía incluyen una correlación deficiente con estenosis funcional, variabilidad inter-observador e intra-observador, 5 sub-estimación de la extensión de la enfermedad debido a los vasos difusamente ateroescleróticos y remodelado arterial. La ultra sonografía de modo B y ultra vascular puede detectar el espesamiento de la intima/medio y calcificación de las paredes vasculares, pero no puede determinar claramente las 0 características del tejido específicas. La tomografía computada por haz de electrones detecta solamente el calcio en las paredes del vaso. La formación de imagen de resonancia magnética, es todavía una herramienta de investigación para la detección de componentes de placa. 5 Estudios en humanos han sugerido que la ruptura de placa frecuentemente ocurre en lesiones no angiográficamente significativas que contienen macrófagos cargados de lípidos abundantes y acumulaciones de lipidos grandes dentro de los ateromas, por consiguiente, la formación de imagen de la ateroesclerosis dirigida a áreas ricas en lipidos sería de valor, no solamente en la detección de la exclusión de la carga de lesión, sino también en la detección de lesiones clínicamente silentes pero "activas". Los agentes de formación de imagen radioscintográficos previos han estado limitados por una especificidad deficiente, captación in vivo baja en la placa ateroesclerótica y eliminación lenta de la circulación, dando como resultado unas proporciones de lesiones/fondo deficientes. Varios agentes de formación de imagen han sido utilizados en los que se incluyen LDL radio-marcados, fragmentos de apolipoproteína B, anticuerpos plaqueta autólogos y antiplaqueta, anticuerpos no específicos y fragmentos Fc, derivados de hematoporfirina y anticuerpos monoclonales de ácido anti-malonico (Mabs) . Anticuerpos específicos de OxLDL han sido aislados de lesiones ateroescleróticas en humanos y conejos que contienen IgGs fuertemente enlazados que reconocen epítopes de OxLDL y in vitro y manchas de lesiones ateroescleróticas in vitro. Líneas celulares de hibridoma de ratón han sido generadas para la producción de Mabs contra OxLDL y se encontró que los anticuerpos se enlazan específicamente a fosfolípidos oxidados en lugar de naturales. Sin embargo, todos los anticuerpos previamente descritos fueron monoespecíficos, enlazándose solamente a una forma de OxLDL. La serie de EO de Mabs de ratón descritos por Palinski et al (1996) , fueron capaces de enlazarse ya sea a OxLDL o MDA-LDL, pero no ambos. Similarmente, los Mabs de ratones MDA2 y NA59, descritos en nuestros estudios, se enlazan a MDA-LDL y HNE-LDL respectivamente. Más importantemente, estos anticuerpos de ratón están limitados en su utilidad para aplicaciones humanas in vivo, ya que producen una respuesta inmune que prohibe su administración repetida. La tecnología de hibridoma, que es ampliamente utilizada en la generación de Mabs murinos, es menos exitosa en la producción de hibridomas humanos. Se pueden usar ya sea virus de Epstein Barr (EBV) para inmortalizar linfocitos humanos, sin embargo, debido a la amplia variedad de neo-epítopes en OxLDL, la adquisición de MABS a muchos epítopes diferentes sería ardua. Además, los clones derivados por esta técnicas son frecuentemente inestables y bajos secretores. Adicionalmente, los EBV-transformantes producen anticuerpos de IgM, en tanto que los anticuerpos de anti-OxLDL pueden ser ambos isotipos de IgG e IgM. de biblioteca de combinación de exhibición de fago proporciona un método útil para generar Mabs humanos (Barbas y Lerner, 1991; Huse, et al, 1989) . Las bibliotecas compuestas de AFN'm de linfocitos pueden consistir de hasta 108 recombinantes ae repertorio de Fab monoclonales. Al mostrar la biblioteca en una superficie de fago filamentosa y selección cent i a un epítope modelo, epitopes de Fab monoclonales pueden ser seleccionados y analizados en cuanto a sus propiedad*.-: inmunologicas y actividades biológicas. Los Fab son ; acales para uso en métodos terapéuticos y de diagnóstico ya que pueden ser producidos en grandes cantidades de manera no cara y son innatamente no inmunogénicos. Adicionalmente, no son moléculas de anticuerpos completas que puedan iniciar una cascada de respuestas inmunes después del enlace a su antígeno.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La invención en la presente es el descubrimiento de un anticuerpo que se enlaza a un nuevo epítope de OxLDL y MDA-LDL, pero no LDL natural y sus usos en la formación de imagen de placas ateroescleróticas, como medio de apuntamiento terapéutico y como terapéutico mismo o estructura modelo para el desarrollo de nuevos terapéuticos para el tratamiento de ateroesclerosis. La invención es el descubrimiento de un Fab monoclonal humano clonado aislado a partir de una biblioteca de exhibición de fago generada de ARNm de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) de un paciente que fue encontrado tener altos títulos de anticuerpo a MDA-LDL. Después de rondas en serie de selecciones, un anticuerpo de Fab IgG monoclonal fue aislado que se enlaza específicamente a ambos MDA-LDL y OxLDL inducido por cobre, pero no se enlaza al LDL natural, tal como se determina mediante análisis de enlace directo y de competencia. Se encontró que el Fab se enlaza específicamente a placas ateroescleróticas, tanto in vivo como in vitro en tejidos humanos, de ratón y conejo. Además, se encontró que inhibe la absorción de OxLDL por los macrófagos, sugiriendo que el epitope sobre OxLDL definido por el Fab puede ser un ligando importante para los receptores de operadores de macrófagos en la limpieza normal o aterogénesis . Se ha nombrado al Fab IK17. Adicionalmente, la invención supera las deficiencias de los métodos de detección de la técnica previa en cuando a lesiones ateroescleróticas mediante el uso de IK17. La invención describe un método para la formación de imagen no invasiva de lesiones ateroescleróticas mismas mediante el uso de un Fab conjugado a una molécula apropiada para la detección. Esto proporciona además un medio para la discriminación particular de componentes ricos en lípidos y componentes ricos en oxidación in vivo. La naturaleza no invasiva del método de formación de imagen que utiliza la invención reduce los costos y riesgos al paciente permitiendo que el método sea usado como medio para verificar los efectos de un régimen de tratamiento, también como un método de detección primario. El método de formación de imagen revelado en la presente es más sensible que los métodos previos permitiendo la detección de la ateroesclerosis, tanto coronaria como no coronaria, antes de la presencia de estenosis significativas, permitiendo una intervención prematura. También proporciona un medio para observar el vaso mismo y analizar la cantidad de lípido presente en la lesión, proporcionando un indicador de prognostico y un método para graduar la patología de la lesión. Es un método para verificar cuantitativamente los efectos de un régimen de tratamiento ya que los anticuerpos humanos no inducirán una respuesta inmune. Este tipo de observación no puede ser llevado a cabo con anticuerpos murinos debido a la respuesta inmune potencialmente amenazadora de la vida a la administración repetida de anticuerpos no humanos. La invención permite la mejora de los terapéuticos actuales y el desarrollo de nuevos para el tratamiento de ateroesclerosis. El Fab proporciona un medio para apuntar agentes terapéuticos al sitio de las placas al enlazar covalentemente un agente trombolítico, antioxidante, antimetalloproteinasa u otro agente terapéutico al anticuerpo. Alternativamente, el IK17 mismo o pequeñas moléculas análogas del IK17, podrían ser usados como medicamentos. Se sabe que el IK17 inhibe la absorción de OxLDL por los macrófagos, inhibiendo así la formación de células de espuma. La inhibición de la formación de células de espuma podría disminuir la deposición de lípidos sobre la pared del vaso y detener el avance de la enfermedad.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La invención en la presente es el descubrimiento de un Fab monoclonal humano que se ha nombrado IK17 que se enlaza específicamente tanto al OxLDL como al MDA-LDL pero no al LDL natural y usos del Fab en la detección mejorada y tratamiento de la ateroesclerosis. Este es el primer descubrimiento de un anticuerpo que reconoce dos formas de LDL modificado. El IK17 fue aislado a partir de una biblioteca de exhibición de fago preparada a partir de ARN de PMNC de un donador con enfermedad de corazón coronaria. Se encontró que es especifico al Cu-OxLDL y MDA-LDL mediante un número de ensayos de enlace directo y de competencia utilizando LDL purificado. También se encontró que es altamente efectivo en un análisis de absorción de macrófago, inhibiendo la fagocitosis tanto de células de OxLDL como las células apoptoticas. Adicionalmente, se encontró que el Fab es útil para marcar placas ateroescleróticas, tanto in vitro como in vivo. Se encontró que el IK17 marcado radiactivamente e inyectado a ratones co-localiza las placas ateroescleróticas tal como se determina mediante el teñido de Sudan. El IK17 fue clonado a partir de una biblioteca de Fab combinatorial mediante métodos conocidos para aquellos experimentados en la técnica. Brevemente, muestras de plasma humanos fueron seleccionadas en cuanto a la presencia de anticuerpos a OxLDL utilizando un análisis de quimioluminiscencia (Hórkkó et al., 1996). Se identificó que un paciente tiene un alto titulo de anticuerpos a MDA-LDL. PBMC fueron aislados del paciente y el ARN total fue extraído y utilizado como una plantilla para sintetizar ADNc. El ADNc fue utilizado como una plantilla para la amplificación de PCR de las cadenas ligeras y pesadas, como se describe previamente (Barbas y Lerner, 1991) . Subsecuentemente, 3 pare de cebadores de extensión fueron utilizados para una a amplificación secundaria para agregar sitios de restricción a cada una de las tres clases de fragmentos, V-kappa, V-lambda y VH. Productos de PCR de tamaño esperados, fueron clonados en el vector de exhibición de fabo pComb3H. El ADN de fagemido resultante fue transformado a células de E. coli azul XL-1 mediante electroporación. Los clones fueron seleccionados contra MDA-LDL recubiertos sobre placas de ELISA. Una" suspensión que contiene aproximadamente 109-1010 (100 µl) de fago recombinante fue aplicada a cada cavidad de cubierta e incubado a 37 °C durante 1 hora. Después de la incubación, las cavidado? fueron lavadas, una vez después de la primera ronda de selección o 10 veces después de rondas subsecuentes para separar el fago sin enlazar. El fago enlazado fue eluído y utilarcp para infectar bacterias para amplificación mediante rr,ftp s bien conocidos para el experimentado en la técnica. Después de la ronda final de selección, el ADN de fagerr.id fue preparado para separa el gen III que asegura el Fat sobre la superficie del fago mediante digestión y religación de endonucleasa. Los productos resultantes fueran transformados a células XL-1 azul para expresar Fab soluble mediante inducción con beta-D-tiogalactopiranósido isopropilo (IPTG). Lisatos celulares fueron preparados y se efectuaron análisis de ELISA para analizar la producción de Fab y la actividad de enlace de MDA-LDL. Para los experimentos subsecuentes, los Fab monoclonales seleccionados fueron purificados utilizando una columna de afinidad de IgG(Fab) mediante métodos conocidos para el experimentado en la técnica. ADN de plásmido que contiene los genes VH y VL del Fab fue aislado de células y sometido a secuencia utilizando un secuenciador automático. Las secuencias de nucleótido fueron analizadas utilizando la base de datos EMBL/GenBank. El análisis reveló que el repertorio de Fab de la cadena ligera de la invención utiliza un gen de familia v-kappa 3 (Vg/38?/L6) con el arreglo a J?2. El repertorio de cadenas pesadas utiliza un gen de familia VH3, 3-23/VH26c/DP47, con el re-arreglo a JH4b. La especificidad de enlace del Fab purificado por afinidad fue estudiada al analizar el enlace -la proteína purificada a MDA-LDL, Cu-OxLDL y LDL natural también como un panel de antígenos de proteína y ácido nucleico sin relacionar, utilizando tanto análisis de enlace directo como análisis de competencia. Se encontró que el enlace del Fab era específico a MDA-LDL y Cu-OxLDL con una preferencia por MDA-LDL con una afinidad de 37nM. El Fab no se enlazó significativamente al 4-HNE-LDL, ni se enlazó a proteínas modificadas por MDA no específicas. El Fab fue capaz de enlazarse tanto a las fracciones de lípido como de proteína del Cu-OxLDL pero no se enlazó al LDL natural, ya sea completo o fraccionado. La capacidad del Fab para localizar las placas ateroescleróticas,, lo hace ideal para uso en un método para detección de lesiones ateroescleróticas. El Fab puede ser producido de manera fácil y no cara en grandes cantidades, en contraposición con anticuerpos producidos a partir de lineas celulares de hibridoma. Adicionalmente, las líneas de hibridoma pueden ser inestables y disminuir los niveles de expresión de anticuerpos con el paso del tiempo. Ya que no hay moléculas tipo IgG en el E. coli en el cual el Fab es producido, la purificación puede ser llevada cabo en una sola etapa de purificación por afinidad. El anticuerpo puede ser enlazado a radioisótopos, etiquetas paramagnéticas, liposomas ecogénicos u otros agentes apropiados que pueden ser detectados mediante métodos de formación de imagen e inyectados al huésped intravenosamente. Después de un tiempo apropiado, se puede efectuar la formación de imagen, ya sea el cuerpo entero por propósitos de diagnóstico o localmente en sitios específicos, tales como arteria carótida, de una manera cuantitativa para determinar la respuesta del huésped a un régimen de tratamiento. Las células de LDL y apoptoticas se acumulan en el sitio de las lesiones ateroescleróticas y probablemente contribuyen a la patología de la enfermedad. Sin embargo, podrían ser aprovechadas como medios de apuntar medicamentos a lesiones. Los medicamentos para el tratamiento de ateroesclerosis podrían se apuntados al sitio apropiado al enlazarlos al IK17, que a su vez se enlaza a su único epítope especifico de la oxidación en la lesión. Tal método podría ser utilizado para reducir la dosis efectiva de medicamento actualmente utilizados para la ateroesclerosis al apuntarlos y retenerlos en el sitio de las lesiones. Adicionalmente, podrían ser utilizados para apuntar los agentes terapéuticos con actividades deseadas que se encuentra que son limpiados rápidamente para ser efectivos. Como se indica anteriormente, se demostró que en modelos de animales de ateroesclerosis, la inmunización con MDA-LDL podría aminorar el avance de la enfermedad. El IK17 podría ser administrado como una proteína o podría ser administrado utilizando un vector de terapia de gen como medio para aminorar el avance de la ateroesclerosis. Ya que la secuencia de IK17 es clonada podría ser fácilmente manipulada para una diversidad de propósitos. La secuencia de codificación de los aminoácidos enlazantes, tales como lisina o cisteína podría ser agregada para la modificación del IK17 con agentes de formación de imagen o terapéuticos. Las propiedades farmacodinámicas del anticuerpo podrían ser cambios para incrementar la estabilidad, limpieza de plasma y absorción de tejido. Las secuencias de la región de reconocimiento de antígeno podrían ser mutagenizados y sometidas a rondas adicionales de selección con exhibición de fago contra compuestos modelo diferentes para identificar otros anticuerpos de enlace de OxLDL.
MODALIDADES PREFERIDAS Las modalidades preferidas de la invención son descritas posteriormente en la presente. Todas las publicaciones mencionadas en la presente son incorporadas por referencia para ilustrar métodos y/o materiales conocidos que pueden ser de uso en, pero no esenciales a, la práctica de la invención.
Preparación de biblioteca de Fab de combinación y clonación de un Fa_b especifico de OxLDL Plasma de pacientes fue seleccionado en cuanto a la presencia de anticuerpos a epítopes de OxLDL utilizando una prueba inmunológica quimioluminiscente altamente sensible
(Horkkó et al., 1996). Antígenos utilizados para la selección incluían Cu-OxLDL y MDA-LDL como epítopes modelo y LDL natural como un control negativo. Estos antígenos fueron preparados como se describe (Palinski et al, 1996) . Un paciente que tenía enfermedad arterial coronaria seria fue identificado por tener un alto titulo de anticuerpo al MDA-LDL. Células mononucleares de sangre periférica fueron aislados del paciente y el ARN total fue aislado utilizando STAT-60 de ARN (Tel-Test) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. El ADNc fue sintetizado con cebador oligo d-T utilizando el Equipo de Síntesis de ADNc Superscript II (Gibco-BRL) . Reacciones de PCR fueron llevadas a cabo utilizando el ADNc como plantilla. Diez y siete pares de cebador, que incluyen 4 pares para la cadena ligera de inmunoglobulina de V-kappa y 5 pareas de genes V-lambda también cómo""5" 'pares de regiones variables de cadena pesada (genes VH) como se describe previamente (Barbas y Lerner, 1991) . Adicionalmente, 3 pares de cebadores de extensión fueron utilizados para la amplificación secundaria para agregar sitios de rest ncci c :. a V-kappa, V-lambda y VH. Productos de I "F ael tamaño esperado fueron clonados al vector de exr. - 1 :c r ,~. de fago pComb3H mediante dos etapas: los fragmentos V-narf i o V-lambda fueron clonados a los sitios Sacl y Xbal a< . primer vector, seguido por la clonación del producto VH a X s sitios Xhol y Spel. El ADN de fagemido resultante fue trar. í <~ rpado a células de E. coli XL-1 azul mediante electr pcr ación. Los clones fueron seleccionados contra MDA-LL recubiertos sobre una placa de ELISA. Una suspensión que contiene aproximadamente 109-1010 (100 µl)de fabo recombinante fue aplicada a cada cavidad recubierta e incubada a 3 °C durante 1 hora. Después de la incubación, las cavidades fueron lavadas, una después de la primera ronda de selección o 10 veces después de rondas subsecuentes, con solución salina de pH regulado bórica (BBS) con BSA al 1%. El fago enlazado fue eluido con ácido acético (pH 2.0) y neutralizado con solución reguladora del pH Tris 2 M (pH 8.5). El producto eluído de cada selección fue utilizado para infectar bacterias para amplificación mediante métodos bien conocidos para el experimentado en la técnica. Después de la ronda final de selección, el ADN fagemido fue preparado a partir de bacterias infectadas. El ADN fue digerido con Spel y Nhel, purificado por gel, auto-ligado y transformado a células XL-1 azul.
Los cultivos fueron cultivados y la expresión de Fab fue inducida con beta-D-tiogalactopiranosido de isopropilo (IPTG) . Lisatos celulares fueron preparados y se efectuaron análisis de ELISA para analizar la producción de Fab y la actividad de MDA-LDL. Para los experimentos subsecuentes, los Fab monoclonales seleccionados fueron purificados contra una columna de afinidad de IgG(Fab) mediante métodos conocidos para el experimentado en la técnica.
Análisis de secuencia de clones anti MDA-LDL Los cultivos fueron cultivados y el ADN de plásmido fue aislado para secuenciación utilizando un secuenciador automático (ABI Prism) . Las secuencias de nucleótidos fueron analizadas utilizando la base de datos EMBL/GenBank. El análisis reveló que el repertorio de Fab de la cadena ligera de la invención utiliza un gen de la familia v-kappa 3
(Vg/38?/L6) con el re-arreglo a J?2. El repertorio de cadena pesada utiliza un gen de familia VH3, 3-23/VH26c/DP47, con el re-arreglo a JH4b.
Análisis de enlace de OxLDL Macrófago Para confirmar la capacidad del Fab para inhibir el enlace de OxLDL a receptores depuradores de macrófago, se efectuó un análisis de enlace de macrófago. Macrófagos * •*. -perifonéales de ratón fueron producidos mediante inyección intraperitoneal de 2 ml de medio de tioglicolato (Disco Laboratorios) tres días antes de la cosecha de las células mediante lavado salino. Los macrófagos fueron depositados en discos agrupados en 24 cavidades a una densidad de lxlO6 células por cavidad en RPMI 1640 complementado con suero de becerro fetal al 5% (FCS). Las células no adherentes fueron retiradas después de tres horas y el medio fue reemplazado para incubación durante toda la noche. El enlace o degradación de 125I-Cu-OxLDL a los macrófagos fue determinado utilizando métodos de Goldstein et al. como se describe previamente (Hórkkó et al., 1996). Para el análisis de enlace, las células fueron mantenidas en hielo durante todo el procedimiento para impedir la internación de OxLDL. Las células fueron incubadas a 4°C durante 30 minutos en medio libre de suero antes de la adición de 125I-Cu-OxLDL en ausencia o presencia de competidores en los que se incluyen Cu-OxLDL no radiactivo, un monoclonal de ratón dirigido contra OxLDL, el Fab de la invención y Fab de IgG humano. Después de tres horas, las células fueron lavadas con PBS helado con BSA al 1% y luego solubilizadas en NaOH 0.2 N. Se separaron alícuotas para la cuantificación proteína y radioactividad. El IK17 fue capaz de inhibir el enlace del 125I-Cu-OxLDL a los macrófagos eficientemente (70-85%) de una manera dependiente de la dosis. El enlace del 125I-Cu-OxLDL no fue efectuado por la presencia del Fab de IgG humano no específico, demostrando que la inhibición era especifica y que el IK17 podría enmascarar efectivamente el epítope sobre el OxLDL que fue visto por los receptores de depurador.
Análisis de degradación de OxLDL de Macrófagos Macrófagos fueron cosechados y depositados mediante el mismo método como en el análisis de enlace anterior. Concentraciones específicas de 125I-Cu-OxLDL o 125I-MDA-LDL en medio libre de suero fueron agregadas a cada cavidad en la ausencia o presencia de competidores durante 5 horas a 37 °C. La cantidad de lipoproteína degradada fue determinada por la cantidad de material soluble (no yoduro) en ácido tricloroacético (TCA) marcado con 125I7 presente en el medio. El IK17 inhibió la degradación de 1 5I-Cu-OxLDL por macrófagos al 50-65% de una manera específica de la concentración. La degradación de 1 5I-Cu-OxLDL y 125I-MDA-LDL no fueron efectuadas por la presencia de Fab de IgG humano no específico, demostrando que la inhibición era especifica y que el IK17 podría enmascarar efectivamente el epítope sobre el OxLDL que fue visto por los receptores de depurador. Tanto en el análisis de enlace como en el análisis de degradación, la cantidad de lipoproteína enlazada o degradada fue calculada por mg de proteína celular y el resultado expresado como % de control en la ausencia de cualquier competidor.
Enlace de IK17 a células apoptoticas e inhibición de absorción de macrófagos FACScan: timocitos apoptopicos tratados con dexametasona fueron cosechados y lavados en PBS helado con BSA al 0.1%. lxlO6 células fueron incubadas con 50 µg/ml de IK17 o un IgG (Fab) humano de control apareado a isótopo en PBS con BSA al 0.1% a 4°C durante 20 minutos, lavado y luego incubado por otros 20 minutos con 10-20 µg/ml de yoduro de propidio (Pl) e inmediatamente analizado mediante análisis de clasificación de células activado por fluorescencia (FACS) . El teñido de Pl permite la separación de células apoptotícas y viables. Las células clasificadas fueron analizadas adicionalmente en cuanto a su capacidad para enlazarse al IK17. Se encontró que el IK17 se enlaza a células apoptoticas, pero no a las células viables, indicando que las células sufren epitopes de exhibición de apoptosis reconocidas por IK17. Análisis de Fagocitosis: La fagocitosis de timocitos apoptoticos fue determinada como se describe por Chang et.- • 0,1*-.- , 19999. Macrófagos fueron producidos y depositados como se describe anteriormente. Las células fueron tratadas con dexametasona y suspendidas en 0.5 ml de PBS con BSA al 0.1% y rrarca as con Calcein AMR de Molecular Probes durante 15 minutos a 3 °C. Las células fueron lavadas y re-suspendidas en DMEM com lementado. Para determinar la fagocitosis, timocitos aprpt v icos marcados fueron agregados a cavidades que contienen r-.cr' agos en ausencia o presencia de IK17 o Fab no humanos Z YT . competidor e incubados a 37 °C durante 90 minutos. Las cavidades fueron lavadas. Los macrófagos fueron cosechados y fijados. La fluorescencia fue analizada mediante FACS. La5 colulas fueron clasificadas por tamaño para seleccionar macr fagos y no células más pequeñas. La marcación fluorescente at necrófagos indicó la absorción de las células apoptoticas marcadas. Estos estudios revelaron que la absorción de células apoptoticas fue inhibida al 43% mediante IK17, indicando que el IK17 es capaz de enmascarar el epítope sobre células apoptoticas que es reconocido por los receptores de depurador de macrófago.
Inmunohistoquímica Se efectuó inmunohistoquímica sobre lesiones de varias etapas de arterias humanas y de conejo. Las secciones de la mayoría de estos tejidos han sido utilizadas previamente en una diversidad de estudios y caracterizadas en términos de la presente de macrófagos y epítopes específicos de la oxidación. Los tejidos fueron obtenidos durante la cirugía o autopsia y fijados, seccionados y manchados o teñidos mediante métodos conocidos para el experimentado en la técnica. El teñido de lesiones ateroescleróticas en arterias humanas y de conejo indicaron que los epítopes reconocidos por el IK17 ocurren en su mayor parte en el núcleo necrótico. Las lesiones prematuras ricas en macrófagos y áreas de reborde de lesiones de transición mostraron muy poco teñido de IK17. Solamente unas pocas lesiones coronarias humanas contenían cavidades de débil teñido celular. En contraste, se encontró un fuerte teñido de IK17 en áreas necróticas de lesiones avanzadas de arterias coronarias humanas y en el núcleo de ateromas clásicos en arterias de cerebro humanas. Similarmente, en aortas de un sistema modelo de conejo de ateroesclerosis, el IK17 tiñe áreas necróticas mientras que solamente se detecta un teñido débil de lesiones prematuras y macrófagos superficiales. Estos resultados están en contraste a patrones de teñido obtenidos con antisuero y Mabs contra epítopes específicos de la oxidación que habían sido inducidos mediante inmunización con LDL oxidado homologo con Mabs naturales clonados de ratones apo E+ aterioescleróticos. Todos estos anticuerpos mostraron consistentemente teñido asociado con macrófago más fuerte y extracelular difuso en lesiones prematuras en humanos, conejos y ratones con un teñido relativamente más débil en áreas necróticas.
Optimización de IK17 para uso El ADNc que codifica para el IK17 puede ser manipulado fácilmente de una manera aleatorizada o directa para utilizarlo para uso en formación de imagen y otras aplicaciones. Las secuencias de codificación para enlazadores para teñir reactivos marcadores, moléculas pequeñas o farmacéuticos pueden ser diseñadas al ADNc. Adicionalmente, el IK17 mismo puede ser modificado para mejorar la estabilidad, incrementar la velocidad de eliminación de plasma y disminuir la velocidad de absorción del fondo e incrementar la velocidad de absorción del tejido. La secuencia de codificación puede ser sometida a mutagénesis y seleccionado contra compuestos modelos diferentes a los MDA-LDL para obtener anticuerpos que tienen especificidades ligeramente diferentes. Se pueden efectuar modificaciones para optimizar los niveles de expresión en el sistema de elección.
Conversión del IK17 a scFv Después del análisis de la secuencia de ADNc del
IK17, cebadores de PCR fueron designados para crear un scFv de humano a partir del vector de pComb3H parenteral que hospeda el ADNc en cuanto a genes de VL y VH de IK17. Para amplificar los re-arreglos de gen variables, una amplificación de VH (400 pares base) y una amplificación de un Vk (350 bp) fue llevada a cabo. Los productos de cada reacción fueron acumulados separadamente y precipitados por etanol. Para efectuar una PCR de sobreposición, alícuotas del producto de Vk fueron mezcladas con cantidades iguales del producto de VH. Los cebadores fueron creados con secuencias idénticas en la porción corriente abajo de los productos de Vk y la porción corriente arriba de los productos VH para permitir la reacción en genes en-cuadro que codifican el scFv mediante PCR de superposición. Un producto de 750 bp para el producto Vk-enlazador-VH fue confirmado y fue fraccionado por tamaño en gel de azarosa. Luego la secuencia de Vk-enlazador-VH fue sub-clonada al sitio de sfi del vector de expresión prokariotico pARA, que tiene un promotor inducible de arabinosa para alto nivel de expresión y una etiqueta de polihistidina para purificación de afinidad utilizando una columna de níquel. La secuencia de IK17 scFV ha sido determinada y consiste de toda la región de Vk y la región de VH entera (125 aminoácidos cada una) unidas mediante un enlazador de siete aminoácidos que tiene un peso molecualr de aproximadamente 30 kD. Las pruebas de inmunología han demostrado que el IK17 scFv tiene propiedades, de enlace muy similares como Fab IK17. Además, el scFv IK17 muestra una actividad de enlace de 50 a 500 mayor a Cu-OxLDL y MDA-LDL que aquella de su Fab original tal como se determina mediante ELISA quimioluminiscente.
Técnica de marcación para formación de imagen no invasiva El IK17 puede ser diseñado genética o químicamente para contener sitios de enlace de 99mTc para la formación de imagen de scintigrafía nuclear. Se puede efectuar la formación de imagen SPECT in vivo en un número de ateroesclerosis huésped. Debido a que la scintigrafía nuclear no puede tener una resolución ideal para detectar pequeñas lesiones, el IK17 puede ser marcado con liposomas de gadolinio o ecogénicos para resonancia magnética y formación de imagen transvascular o intravascular de ultrasonido respectivamente .
Conjugación de Mabs humanos a liposomas ecogénicos para la mejora transvascular de lesiones ateroescleróticas Recientemente, liposomas ecogénicos conjugados anti-cuerpos han sido desarrollados para la mejora de imagen intravascular (30 MHz) y transvascular (15 MHz) especifica del sitio. Anticuerpos de molécula 1 de adhesión anti-fibrinógeno y anti-intracelular (anti-ICAM-1) han sido conjugados a liposomas acústicamente reflejantes y se han obtenido imágenes en modelos de animales de trombos y lesiones ater?escleróticas . Estos liposomas acústicos consisten de una mezcla molar de 60:8:2:30 de fosfatidilcolina : fosfatidil-etanolamina : fosfatidilgicerol : colesterol y son preparadas mediante una mezcla de deshidratación/rehidratacion. Son multilaminares con bicapas de ~lípido bien separadas y vesiculos internos que confiere ecogenicidad. Su tamaño prcr-eaio es de aproximadamente -800 nm tal como se mide mediante dispersión de luz cuasielástica. Estos liposomas son establ a en la circulación, no atrapan gas, pasan a través de los capilares pulmonares y retienen sus propiedades a 37 °C, aun después de conjugación con anticuerpos. Los anticuerpos son tiolados con N-succinimidil-3- (2-piridilditio) propionatc , reducidos y conjugados con los liposomas al crear un enlace de tioeter entre el anticuerpo y el fosfolípido. Los anticuerpos conjugados son estables y tienen una larga vida media de almacenamiento. Se sabe que las lesiones ateroescleróticas tienen permeabilidad incrementada, lo que mejora la penetración en las zonas más profundas de la placa. Las placas con "tapas" más delgadas -la barrera de células endoteliales/músculo liso que se superpone al ateroma -y las más vulnerables a la ruptura, son también las más permeables. La formación de imagen se lleva a cabo como se describe anteriormente.
Anticuerpos de scFv-marcados con Gadolinio (Gd3+) Un método de formación de imagen alternativo que proporciona resolución mejorada (<0.5 mm) , formación de imagen de resonancia magnética (MRl), es evaluado mediante IK17 marcado con Gd3+ como un agente de contraste. El MRl tiene las ventajas de rápida adquisición, resolución incrementada, ausencia de radioactividad y capacidad de formación de imagen de la pared del vaso sin interferencia de la señal en el lumen del vaso. Sin embargo, debido a que el Gd3+ libre como un agente de contraste es toxico, es utilizado en formación de imagen MRl clínica, enlazado al ácido dietilentriaminpentaacético (DTPA) . Existen precedentes para conjugar Gd3+ a MAbs para hacer reaccionar anhídrido de ácido diamintriaminpentaacético cíclico (c-DPTA) con los MAb. Los intentos iniciales utilizando estas técnicas fueron sub-óptimos pero estudios subsecuentes han demostrado que se pueden usar anticuerpos polilisina-DTPA-Gd3+-acoplados para la formación de imagen de tumor con hasta 30 iones de Gd3+ conjugados sin afectar significativamente la actividad antigen. Estudios previos utilizando MAb marcado con Gd3+ han ya sea enlazado directamente el Gd3+ a grupos NH2 disponibles o polilisinas químicamente conjugadas. El sitio natural para el acoplamiento del DTPA está limitado en las moléculas de scFv (anticuerpo de una sola cadena) . Por consiguiente, se fusionó genéticamente varios grupos de polilisina (6-30 de longitud) a la terminal N o terminal C del MAb de scFv y se hizo reaccionar este con c-DTPA. Aunque otros grupos amino puede reaccionar potencialmente, la disponibilidad de polilisina en la cola de la molécula debe permitir la marcación directa en el sitio preferencial. La bioingeniería del sitio de polilisina fue efectuada mediante PCR utilizando cebadores que codifican seis residuos de lisina y sitos de restricción para clonación en ambos extremos 5' y 3' .
Formación de imagen con Mab marcado con 99mTc La marcación con 99mTc de anticuerpos específicos de la oxidación se ha descrito previamente (Tsimikas et al., 1999) . 99mTc-IK17 inyectado intravenosamente a ratones y conejos ateroescleróticos y normales y es analizado en cuanto a la farmacocinética, distribución en los órganos y absorción en la placa aórtica. Para la formación de imagen in vivo, 1-5 mCi son inyectados intravenosamente en conejos propensos a hipercolesterolemia y se efectúa la formación de imagen con una cámara gama modelo ADAC vértex de doble detector ajustada a una ventaja de 20% para 99mTc (colimador VXUR) equipada con elementos de programación de computadora ADAC Pegasys. Las imágenes in vivo planas (anterior, posterior y posiciones oblicuas de 45°) y SPECT serán adquiridas en una matriz de 256x256x12 para un mínimo de lxlO6 conteos a 10 minutos después de la inyección. Una formación de imagen repetida se efectuará para 3-500,000 conteos a varios puntos en el tiempo en base a la proporción óptima de objetivo a fondo derivada de datos de absorción in vivo. Los estudios de formación de imagen utilizando MAb entero frecuentemente tenían una baja proporción de señal a ruido debido a la vida media prolongada del 99mTc-MAb en la circulación. Inyecciones del antígeno, antes de la formación de imagen acelera la separación de plasma del anticuerpo, reduciendo el fondo para la formación de imagen. El uso de Fab, scFv o fragmentos más pequeños puede abrogar este problema bajo ciertas condiciones de formación de imagen ya que los Fab y scFv tienen vidas medias muy cortas (<30 minutos) y la inyección de antígeno puede no ser requerida. Cuando la proporción de señal a ruido no es favorable, inyecciones de MDA-LDL , Cu-OxLDL y otro antígeno apropiado son inyectados para despejar la señal de fondo.
Formación de imagen con Mab marcado con Gd3+ » La marcación de Gd3+ al complejo de anticuerpo-DTPA se ha descrita previamente (Lister-James, et al, 1996; Wu et al, 1995) . Análisis de absorción in vivo se efectúan con 153Gd~IK17 en ratones y conejos y se determina la farmacocinética, biodistribución y absorción en placa aórtica del IK17. luego se efectuará la formación de imagen in vivo en conejos con un escáner MRl 1.5 T GE con una bobina superficial pequeña. .__., .
Mejora transvascular de lesiones ateroescleróticas con liposomas ecogénicos conjugados con MAb. IK17 natural o IK17 modificado por la adición de cisteínas a los términos C- o N- de la proteína son tiolados y conjugados a liposomas. Se utiliza un catéter de formación de imagen de 12 MHz (Acusón) para la formación de imagen (resolución <1 mm) . Los conejos pre-seleccionados en cuando a evidencia de lesión y son inyectados con 2-4 ml de liposomas de MAb-conjugados, liposomas sin conjugar y solución salina normal. Luego se llevan a cabo análisis Videodensitométricos de la brillantez de liposoma para determinar la absorción.
Análisis de absorción de placa in vivo para determinar la presencia o avance/inversión de las lesiones ateroescleróticas Para determinar las lesiones ateroescleróticas in vivo, IK17 marcado es inyectado a humanos o animales que tienen o se sospecha que tienen enfermedad ateroesclerótica . Después de una cantidad de tiempo predeterminada, dependiendo de la estabilidad del reactivo de marcación, el tipo de formación de imagen a ser efectuado (local o todo el cuerpo) y consideraciones farmacocinéticas, la formación de imagen se lleva a cabo. Para determinar la eficacia del régimen de tratamiento, se efectúa la formación de imagen cuantitativa localizada (por ejemplo, con SPECT) . Para determinar si la enfermedad" esf ' presente en cualquier parte en el cuerpo, se lleva a cabo una formación de imagen del todo el cuerpo. Mediante el uso de marcadores de reactivo sobre IK17, se puede verificar cuantita ivamente el avance o inversión de las placas en el curso de tratamiento con formación de imagen repetida a intervalos deseaars.
Formación de imagen intravascular de lesiones Los métodos disp r.it les actualmente de angiografía podrían ser combinados con el uso de IK17 marcado para una formación de imagen mejorada. Las limitaciones de la angiografía fueron discutidas anteriormente. La marcación de las p lacas antes de la formación de imagen permitiría la detección de placas más pequeñas y más difusas que todavía no obstruyen la arteria. IK17 marcado con 99mTc, radiación gama o liposomas ecogénicos podrían ser detectados intravascularmente mediante el uso de catéteres. Esto incrementaría el valor de prognostico del método al proporcionar un medio para determinar la composición de la lesión.
Análisis ±n vitro en cuanto a la presencia de ateroesclerosis Para determinar si formas de OxLDL reconocidas por
IK17 están presentes en el suero de huésped que sospecha que tiene enfermedad ateroesclerótica, se desarrollaron pruebas inmunológicas quimioluminiscentes de emparedado de doble capa sensibles. Por ejemplo, un antisuero que se enlaza al apo B, un componente de LDL, fue recubierto sobre el fondo de una placa de microtitulo. Una serie de diluciones de plasma se agrega para permitir el enlace de LDL, la parte media del emperedado. Después de un lavado extenso, una dilución apropiada de Fab de IK17 es agregada como la capa superior del emparedado. La presencia de Fav IK17 es detectada utilizando un anticuerpo anti-humano Fab específico fosfatasa alcalino enlazado que a su vez es detectado mediante un análisis colorimétrico, luminiscente o fluorescente. De una manera similar, se puede usar un antisuero a apoAl humano como la capa del fondo para capturar el HDL del plasma y permitir la determinación subsecuente de epítopes de IK17 en HDL. Finalmente, se puede utilizar IK17 como la parte superior y la parte inferior del emparedado para obtener una medida de los epítopes de IK17 totales.
Apuntamiento de medicamentos ateroescleróticos Uno de los aspectos más desafiantes de desarrollo de los farmacéuticos es la entrega de medicamentos. Mediante el uso del IK17, los medicamentos para el tratamiento de la ateroesclerosis pueden ser apuntados al sitio de acción requerido, la lesión ateroesclerótica. Un panel de medicamentos están disponibles actualmente para el tratamiento de la ateroesclerosis que trabajan en el sitio de la lesión que incluyen agentes trombolíticos, antioxidantes, antimetaloproteinasas e inmunomoduladores. Al apuntar estos medicamentos a su sitio de acción específico, la dosis activa y por consiguiente los efectos laterales pueden ser reducidos. Adicionalmente, los medicamentos activos con farmacocinética desfavorable pueden ser enlazados al IK17 para mejorar su apuntamiento a la placa.
Desarrollo de medicamentos ateroessleróticos La inmunización de ratones LDLR"1" con OxLDL redujo la severidad de la enfermedad sugiriendo que los anticuerpos de anticuerpos de anti-OxLDL podrían ser útiles como reactivos terapéuticos. El Fab puede ser entregado directamente o por medio de un vector de terapia de gen ya que el IK17 es expresado de un solo gen. Un mecanismo de acción posible para el anticuerpo es que al bloquear la absorción de OxLDL por los macrófagos, se inhibe la formación de células de espuma y se disminuye el avance de la enfermedad. El sitio de enlace del IK17 para el OxLDL puede ser determinado mediante determinación de estructura directa o modelado y utilizada como punto de partida para el desarrollo de moléculas pequeñas para inhibir la absorción de OxLDL por los macrófagos.
Terapia fotodinámica El IK17 puede ser marcado con compuestos fotodinámicos que emiten energía después de estimulación con una longitud de onda de luz apropiada que puede ser administrada mediante el uso de una fuente de luz cateterizada. La activación del compuesto puede ablasionar la placa ateroesclerótica o inhibir el crecimiento de la placa.
REFERENCIAS Barbas CFI, Lerner RA. Combinatorial immunoglobulin librarles on the surface of phage (phabs): Rapad selection of antigen-specific fates. Methods. 1991;2:119-12. Chang, M.-K., Bergmark, C, Laurila, A., et al.
Monoclonal antibodies against oxidized LDL bind to apoptotic cells and inhibit their phagocytosis by elicited macrophages: Evidence that oxidation specific epiptops mediante macrophaghe recognition. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1999;96:6353-6358. Hórkkó, S., Miller, E., Dudl, E., et al.
Antiphospholipid antibodies are directed against epitopes of oxidized phospholipids : recognition of cardiolipin by monoclonal antibodies to epitopes of oxidized LDL. J. Clin. Invest. 1996;98:815-825. Huse WD, Sastry L, Iverson SA, Klang AS, Alting- Mees M, Burton DR, Benkovics SJ, Lerner RA. Generation of a large combinatorial library of Immunoglobulin repertoire in phage lambda, Science. 1989;246:1275-1281. Lister-James J, Moyer BR, Dear T. Small peptides radiolabeled with 99mTc. Q J Nucí Med. 1996;40:221-233. Palinski, W., Horkko, S., Miller et al: Cloning of monoclonal autoantibodies to epitopes of oxidized lipoproteins from apo E-deficient mice. Demonstration of epitopes of oxidized LDL in human plasma. J. Clin. Invest.
1996;98:800-814. Tsimikas S, Palinski W, Halpern SE, Yeung DW, Curtiss LK, Witztum JL. Radiolabeled MDA2, an oxidation-specific, Mab, identifies native atherosclerotic lesions in vivo. J Nucí Cardiol. 1999;6:41-53. Wu CC, Chang SW7 Chen MS, Lee YT . Early change of vascular permeability in hypercholesterolemic rabbits. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 1995;15:529-533. Aunque se ha descrito una modalidad ejemplar de la invención anteriormente a manera de ejemplo solamente, se comprenderá por aquellos experimentados en el campo que se pueden efectuar modificaciones a la modalidad revelada sin desviarse del alcance de la invención, que es definido por las reivindicaciones adjuntas.
Claims (16)
- REIVINDICACIONES 1. Un método de formación de imagen de placas ateroescleróticas en ur, huésped, caracterizado porque comprende: introducir una cantidad diagnósticamente efectiva de Mab humano marcado de rabera detectable o humanizado o fragmento del mismo, Fab, scFv o análogo de molécula pequeña a la vasculatura del huésped, cada anticuerpo es específico para epítopes específicos de la oxidación presentes en el núcleo de las placas ateroescleróticas y enlace tales epítopes in vivo a una velocidad detectablemente más alta que la velocidad de enlace a la vasculatura normal y determinar si el anticuerpo se enlaza a la vasculatura, en donde el enlace de tal anticuerpo a la vasculatura es indicador de la presencia de placas ateroescleróticas y el enlace de tal anticuerpo al tejido vascular es indicador de placas patogénicas, inestables.
- 2. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque el Fab marcado detectablemente o scFv es IK17.
- 3. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el tamaño de la placa ateroesclerótica detectada en el tejido vascular es estimado como una correlación del por ciento de la dosis inyectada de anticuerpo marcado detectablemente a otro sitio en el cuerpo que no contiene placas ateroescleróticas.
- 4. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el método de formación de imagen es utilizado como medio para verificar el avance o inversión de la enfermedad ateroesclerótica y es utilizado como un indicador de prognostico de la patología relativa de una placa ateroesclerótica.
- 5. Un método para analizar la presencia de indicadores de ateroesclerosis en un huésped caracterizado porque comprende analizar el suero del paciente en cuanto al enlace a un Mab humano o humanizado o fragmento del mismo, Fab o scFv, en donde el anticuerpo es específico para epítopes específicos de la oxidación presentes en placas ateroescleróticas, que comprende: determinar si el suero contiene factores que compiten por el enlace del anticuerpo a su antígeno utilizando un análisis tipo ELISA en donde la inhibición del enlace del anticuerpo hacia antígeno indica la presencia de indicadores ateroescleróticos en el suero o la población total de HDL o LDL en el suero son probadas con el anticuerpo en un análisis tipo ELISA en donde el enlace del anticuerpo indica la presencia de indicadores ateroescleróticos en el suero.
- 6. El método de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque el Fav o scFv es IK1
- 7. 7. Un método para mejorar la administración de agentes terapéuticos al sitio de lesiones ateroescleróticas, caracterizado porque comprende enlazar agentes terapéuticos a Mab humano o humanizado o fragmentos del mismo, Fab, scFv o moléculas pequeñas en donde el anticuerpo es específico para epítopes específicos de la oxidación presentes en el núcleo de las placas ateroescleróticas.
- 8. El método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque el Fab o scFv es IK17.
- 9. El método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque el agente terapéutico es administrado por el propósito de terapia fotodinámica.
- 10. Un método para crear nuevos agentes terapéuticos caracterizado porque comprende agentes que bloquean la absorción de OxLDL con los macrófagos al enmascarar epítopes reconocidos por el IK17.
- 11. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el agente terapéutico es un anticuerpo Fab o scFv mismo, en donde: el anticuerpo es expresado recombinantemente y administrado al huésped o el anticuerpo es expresado por el huésped de un vector de terapia de gen que comprende la región de codificación del Fab o scFv.
- 12. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el agente terapéutico es una molécula pequeña que imita la interacción del IK17 con epítopes oxidados para impedir su absorción por los macrófagos.
- 13. Un método para la modificación del IK17, caracterizado porque comprende la modificación de las secuencias de codificación para las cadenas ligeras y pesadas del anticuerpo o la adición de secuencias de flanqueo.
- 14. El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque comprende además la adición de secuencias de flanqueo para crear un sitio o enlazador para modificación con formación de imagen o reactivos terapéuticos sobre el IK17 o modificar las propiedades farmacodinámicas o farmacocinéticas del IK17 que comprenden estabilidad alterada, eliminación de plasma incrementada para la reducción de manchado o teñido de fondo y absorción de tejido incrementada .
- 15. El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque comprende la modificación del IK17 para alterar la especificidad de enlace del Fab o scFv.
- 16. Un anticuerpo caracterizado porque contiene las cadenas ligeras y pesadas comprendidas por las^ secuencias de nucleótidos en el Apéndice A anexo a la presente.
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| JP2003279571A (ja) * | 2002-03-20 | 2003-10-02 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 炎症性疾患検出方法、検出薬、およびその予防治療薬探索方法 |
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