MXPA01012960A

MXPA01012960A - Metodos y reactivos que hacen agrupaciones multivalentes y librerias combinatorias de agrupaciones multivalentes.

Info

Publication number: MXPA01012960A
Application number: MXPA01012960A
Authority: MX
Inventors: Eva J Gordon
Original assignee: Wisconsin Alumni Res Found
Priority date: 1999-06-17
Filing date: 2000-06-19
Publication date: 2002-07-30
Also published as: JP2003502488A; IL147011A0; EP1200484B1; JP4727951B2; ATE527298T1; IL147011A; JP2010261051A; EP1200484A1; AU774036B2; KR100701012B1; CA2375248A1; CA2375248C; JP2004277752A; WO2000078821A1; AU6648400A; EP1200484A4; KR20020013585A

Abstract

Metodos de preparacion de librerias de agrupaciones multivalentes y librerias preparadas por estos metodos. Las agrupaciones multivalentes componentes de una libreria tienen longitud definida, funcionalidad terminal definida y grupos funcionales pendientes definidos. Los metodos incluyen la preparacion de una agrupacion multivalente que consiste en la etapas de polimerizacion de al menos un monomero que contiene al menos un grupo polimerizable y al menos un grupo reactivo latente, en presencia de un catalizador de metal y carbeno, para formar una plantilla polimerica que contiene al menos un grupo reactivo latante, y combinacion de la plantilla polimerica con al menos un reactivo funcionalizante que contiene al menos un grupo reactivo, en condiciones efectivas para la reaccion del grupo reactivo latente de la plantilla polimerica con el grupo reactivo del reactivo funcionalizante para formar una agrupacion multivalente. Los metodos incluyen ademas la preparacion de un polimero telequelico (mono- o bi-telequelico), la cual emplea un catalizador de rutenio u osmio y carbeno y un agente rematante, al menos uno de los cuales esta funcionalizado.

Description

MÉTODOS Y REACTIVOS QUE HACEN AGRUPACIONES MULTIVALENTES Y LIBRERÍAS COMBINATORIAS DE AGRUPACIONES MULTIVALENTES ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN 5 Nuevos materiales y métodos de síntesis están emergiendo como áreas significativas de investigación y fabricación. Tenemos aplicaciones en los campos de la biotecnología, la medicina, los productos farmacéuticos, los dispositivos médicos, los sensores, los materiales ópticos, etc. el método de polimerización por metátesis de apertura de anillo ("ROMP") ha emergido como potente método sintético para la creación de dichos materiales útiles. Muchos ejemplos en los que se ha utilizado ROMP para generar materiales funcionalizados han sido enfocados hacia la incorporación de funciona- 15 lidad pendiente en los monómeros, formando así una agrupación multivalente. Tal como se utiliza aquí, una agrupación multivalente se refiere a un polímero (incluido un copolímero aleatorio o de bloque) de longitudes variables, incluyendo oligómeros más cortos, que tienen grupos funcionales pendien- 20 tes que imparten diversas propiedades al polímero. Frecuentemente se hace también referencia a dichas disposiciones multivalentes como ligandos multivalentes, exhibiciones multivalentes, agrupaciones multidentadas, ligandos multidentados o exhibiciones multidentadas. 25 Dichas agrupaciones multivalentes son particularmente útiles en las áreas médica y biotecnológica . Por ejemplo, la unión de los receptores de la superficie celular a epitopos particulares de agrupaciones multivalentes puede disparar una amplia variedad de respuestas biológicas. Dichos sucesos de unión multivalente tienen consecuencias únicas, que son dramáticamente diferentes de las provocadas por las interacciones monovalentes. Por ejemplo, la señalización a través del factor de crecimiento epidérmico es promovida por la unión de ligandos divalentes, que aparentemente promueven la dimerización del receptor de transmembrana; no obstante, los ligandos monovalentes se unen también al receptor sin producir señal. Además, las agrupaciones multivalentes han mostrado inducir la liberación de una proteína de la superfi -cié celular, lo que sugiere un nuevo mecanismo para controlar la exhibición de proteínas. En los procesos de reconocimiento de proteínas-carbohidratos, las agrupaciones multivalentes substituidas con sacáridos pueden exhibir una mayor avidez, especificidad y potencias inhibitorias únicas bajo condicio-nes dinámicas de flujo cizallante. Por lo tanto, la capacidad para sintetizar agrupaciones multivalentes definidas de epi-topos de unión biológicamente relevantes proporciona un medio para explorar y manipular procesos fisiológicamente significativos . Dado que pueden extenderse por grandes distancias, las agrupaciones multivalentes lineales de longitud y densidad epitópica variables son particularmente útiles para sondar las relaciones estructura-función en sistemas biológicos. Se han desarrollado rutas químicas y quimioenzimáticas para la generación de ligandos di- y trivalentes, dendrímeros y polímeros de alto peso molecular, pero los oligómeros lineales bien definidos han demostrado ser más difíciles de sintetizar. Por lo tanto, se necesita una estrategia general para crear diversas agrupaciones de diferentes materiales multivalentes de longitud variable y controlada. Una forma en la que podría hacerse esto es a través del uso de la tecnología ROMP. Se ha utilizado la ROMP para generar polímeros definidos biológicamente activos (Gibson y col., Chem. Commun . , 1095-1096 (1997); Biagini y col., Chem. Commun . , 1097-1098 (1997); Biagini y col., Polymer, 39, 1007-1014 (1998), y Kiessling y col., Topics in Organometa -llic Chemistry, 1 , 199-231 (1998)), con actividades potentes y únicas que varían desde la inhibición de los fenómenos de reconocimiento proteína-carbohidrato hasta la promoción de la X ^^jj^j liberación proteolítica de proteínas de la superficie celular (Mortell y col., J. Am . Chem. Soc . , 118 , 2297-2298 (1996) Mortell y col., J. Am . Chem . Soc . , 116, 12053-12054 (1994) Kanai y col., J. Am. Chem . Soc . , 119, 9931-9932 (1997)) Kingsbury y col., J. Am. Chem. Soc . , 121 , 791-799 (1999) Schrock y col., J". Am. Chem. Soc . , 112, 3875-3886 (1990) Gordon y col., Nature, 392, 30-31 (1998), y Sanders y col., J". Biol . Chem. , 274 , 5271-5278 (1999). El montaje de materiales multivalentes por ROMP tiene varias ventajas sobre los métodos clásicos para la generación de exhibiciones multivalentes. Concretamente, la ROMP puede ser llevada a cabo en condiciones de polimerización viva y, si la velocidad de iniciación es mayor que la de propagación, la variación de la razón monómero a iniciador (M:I) puede generar materiales de longitud definida (Ivin, Olefin Metathesis and metathesis polymerization, Academic Press, San Diego, 1997) . Esta aproximación ha sido aplicada con éxito con el catalizador de metal rutenio y carbeno de Grubb ( [ (Cy) 3P] 2Cl2Ru=CHPh) para generar materiales con estrechas polidispersidades, lo que indica que las substancias resultantes son bastante homogéneas (Dias y col., ". Am. Chem. Soc. , 119, 3887-3897 (1997), y Lynn y col., J". Am. Chem . Soc . , 118 , 784-790 (1996)). Contrariamente a los catalizadores de la polimerización aniónicos y catiónicos, los iniciadores de metal rutenio y carbeno son toleran-tes de un amplio rango de grupos funcionales. Existen, sin embargo, inconvenientes inherentes en el uso de aproximaciones estándar que se basan en la ROMP para montar materiales biológicamente activos. Por ejemplo, se incorpora la funcionalidad pendiente deseada en los monó-meros. Así, se puede sintetizar un nuevo monómero de olefina cíclica funcionalizado, típicamente un monómero bicíclico funcionalizado, para cada nueva clase de polímero que ha de ser producida. Además, las propiedades físicas de cada monómero, tales como su solubilidad y la densidad de electrones y el tipo de olefina cíclica, dan lugar a diferentes velocidades de iniciación, propagación y finalización no productiva de la reacción (Kanai y col., J\ Am. Chem. Soc . , 119, 9931-9932 (1997)). Además, la purificación del producto deseado puede complicarse dependiendo de la estructura del monómero usado . Las síntesis práctica a gran escala de agrupaciones multivalentes están obstaculizadas por estas complicaciones técnicas. Por lo tanto, lo que se necesita es un método general para sintetizar agrupaciones multivalentes que se dirija a una o más de estas cuestiones. Finalmente, tanto la producción a gran escala como la generación de librerías de oligómeros deberían estar facilitadas por este método. Una estrategia adicional para la introducción de una mayor modificación en agrupaciones multivalentes es incorporar grupos funcionales seleccionados en los extremos de los polímeros ROMP. La unión de funcionalidad adicional en los extremos del polímero expande aún más el repertorio de usos para los materiales generados por ROMP. Este remate ter-minal selectivo ha sido usado previamente en las reacciones ROMP vivas iniciadas con titanio y molibdeno para sintetizar materiales para nuevas aplicaciones, tal como se demuestra en la síntesis de superficies portadoras de polímeros derivados por ROMP (Cannizzo y col., Macromolecules, 20, 1488-1490 (1987); Albagli y col., J. Phys . Chem. , 91, 10211-10216 (1993), y Albagli y col., J. Am. Chem. Soc . , 115, 7328-7334 (1993)) . A diferencia de los iniciadores de titanio y molibdeno, los iniciadores de ROMP de rutenio son tolerantes de una amplia variedad de grupos funcionales polares, permitien-do la generación de productos no accesibles usando otros catalizadores (Grubbs, J. M. S . Puré Appl . Chem. , A31 , 1829 (1994) ) . La unión de grupos terminales específicos a polímeros generados por la ROMP catalizada con rutenio y carbeno proporciona acceso a materiales que pueden ser llevados a una mayor funcionalización para aplicaciones tales como la inmovilización selectiva de polímeros para crear nuevas superficies (Weck y col., J". Am. Chem. Soc . , 121 , 4088-4089 (1999)) y el desarrollo de ligandos específicos que informan sobre fenómenos de unión, por ejemplo. Por lo tanto, lo que se necesita son métodos y reactivos para la incorporación de una funcionalidad seleccionada a los extremos de polímeros generados por ROMP catalizada con rutenio y carbeno. COMPENDIO DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona métodos para sintetizar agrupaciones multivalentes, tales como polímeros funcionalizados (se incluyen en este término oligómeros relativamente cortos) . De forma significativa, los métodos de la presente invención pueden facilitar el acceso a un rango más amplio de materiales con funciones significativas. Por ejemplo, pueden ser usados para generar librerías de substancias oligoméricas que difieren en la funcionalidad añadida o en la funcionalidad terminal, así como en la longitud. De forma significativa, los métodos de la presente invención propor-cionan la capacidad para controlar el número, tipo y posición de los grupos funcionales pendientes y proporcionan así mismo una funcionalidad seleccionada en los extremos del polímero. Dicho control del diseño es importante para elucidar las relaciones estructura/función en sistemas biológicos, por ejem-pío. Los métodos de la presente invención pueden ser usados para producir copolímeros aleatorios (es decir, polímeros derivados de dos o más monómeros diferentes) . Además, se pueden generar copolímeros de bloque en los que algunos bloques se mantienen invariables, mientras que otros se diversifican a través del método de la presente invención. Los bloques pueden variar en el esqueleto y/o en los grupos funcionales pendientes . En una realización, la presente invención proporciona un método de preparación de una agrupación multivalen-te. Este método incluye: la polimerización de al menos un monómero que contiene al menos un grupo polimerizable y al menos un grupo reactivo latente, en presencia de un catalizador de carbeno y metal, para formar una plantilla polimérica que contiene al menos un grupo reactivo latente; y la combinación de la plantilla polimérica con al menos un reactivo funciona-lizante que contiene al menos un grupo reactivo en condiciones efectivas para la reacción del grupo reactivo latente de la plantilla polimérica con el grupo reactivo del reactivo funcionalizante para formar una agrupación multivalente. El monómero puede eventualmente incluir grupos funcionales que no sean reactivos con el grupo reactivo del reactivo funcionalizante (a los que se hace aquí referencia como monómeros prefuncionalizados) . En una realización específica, el grupo reactivo latente del monómero incluye un grupo nucleofílico y el grupo reactivo del reactivo funcionalizante incluye un grupo electrofílico. En otra realización específica, el grupo reactivo latente del monómero incluye un grupo electrofílico y el grupo reactivo del reactivo funcionalizante incluye un grupo nucleofílico. En una realización particularmente preferida, el grupo electrofílico es un grupo éster activado y el grupo nucleofílico es un grupo amina primaria. En una realización relacionada, el método incluye: la polimerización de al menos dos monómeros, cada uno de los cuales incluye al menos un grupo polimerizable, donde el monómero contiene al menos un grupo reactivo latente, en presencia de un catalizador de metal y carbeno, para formar una plantilla polimérica que contiene al menos un grupo reactivo latente; y la combinación de la plantilla polimérica con al menos un reactivo funcionalizante que contiene al menos un grupo reactivo en condiciones efectivas para la reacción del grupo reactivo latente de la plantilla polimérica con el grupo reactivo del reactivo funcionalizante para formar una agrupación multivalente. El otro monómero o monómeros pueden ser prefuncionalizados con un grupo funcional reactivo o no reactivo deseado o no llevar ningún grupo funcional pendiente. La plantilla polimérica y, por lo tanto, la orde-nación multivalente, preparada por estos métodos puede ser un copolímero de bloque o un copolímero aleatorio. Un copolímero de bloque es formado por el método antes descrito, donde la polimerización de al menos un monómero consiste en polimerizar secuencialmente dos o más monómeros diferentes en présencia de un catalizador de metal y carbeno para formar una plantilla polimérica que contiene bloques alternantes de los diferentes monómeros. La longitud de cada bloque de monómeros puede ser controlada. Este método de formación de copolímeros de bloque puede ser también usado para generar polímeros con un espaciamiento seleccionado entre los grupos funcionales. Alternativamente, se forma un copolímero aleatorio por el método antes descrito, donde la polimerización de al menos un monómero consiste en la polimerización simultánea de dos o más monómeros diferentes. Cada monómero diferente puede in-cluir un grupo reactivo latente diferente para la posterior unión de grupos funcionales pendientes . Dichos grupos funcionales pendientes pueden derivar de reactivos funcionalizantes que reaccionen con el grupo reactivo latente de la plantilla polimérica, que contiene un carbohidrato o un péptido. La presente invención proporciona además métodos y reactivos para la unión terminal de grupos funcionales a materiales generados por ROMP. Estos métodos y reactivos pueden ser usados para sintetizar una variedad de polímeros funcionalizados (se incluyen aquí en este término oligómeros re-lativamente cortos) . De forma significativa, los métodos de la presente invención pueden proporcionar acceso a un amplio rango de materiales con funciones significativas. Por ejemplo, pueden ser usados para generar librerías de substancias oligoméricas que difieren en cuanto a funcionalidad terminal, tipo y número de grupos funcionales y longitud. Dichos materiales pueden incluir una funcionalidad que permita la inmovilización sobre una superficie substrato, por ejemplo. Alternativamente, dichos materiales pueden incluir grupos in-formadores, tales como funcionalidad capaz de fluorescencia, lo que permite la creación de una sonda molecular que puede ser usada para visualizar una interacción receptor-ligando sobre una superficie celular. Otra ventaja de la incorporación de funcionalidad terminal es que esto puede permitir una más fácil purificación de los polímeros. Dichos materiales diversos pueden ser preparados usando un agente rematante, preferiblemente un agente rematante bifuncional, y/o un catalizador de metátesis funcionalizado. El método para introducir funcionalidad terminal puede ser empleado con métodos convencionales de polimerización ROMP o con métodos mejorados aquí descritos para la síntesis de polímeros funcionalizados a partir de plantillas poliméricas. En una realización de la presente invención se facilita un método de preparación de un polímero telequélico (preferiblemente, un polímero monotelequélico) . Este método incluye: la polimerización de al menos un monómero que contiene al menos un grupo polimerizable en presencia de al menos un catalizador de rutenio u osmio y carbeno para formar un polímero; y la combinación del polímero con al menos un agente rematante funcionalizado en condiciones efectivas par la reacción del polímero con el agente rematante para formar un polímero funcionalizado terminalmente. El agente rematante funcionalizado puede incluir un grupo reactivo latente para la posterior reacción con un reactivo funcionalizante. Alternativamente, el agente rematante funcionalizado puede incluir un grupo funcional no reactivo (es decir, uno que tenga la funcionalidad deseada sin posterior reacción) . En otra realización, la presente invención pro-porciona un método de preparación de un polímero telequélico que implica: la polimerización de al menos un monómero que contiene al menos un grupo polimerizable en presencia de al menos un catalizador de rutenio u osmio y carbeno funcionali-zado para formar un polímero funcionalizado, y la combinación del polímero funcionalizado con al menos un agente rematante en condiciones efectivas para la reacción del polímero funcionalizado con el agente rematante para formar un polímero funcionalizado terminalmente. El catalizador de carbeno funcionalizado puede incluir un grupo reactivo latente para posterior reacción con un reactivo funcionalizante. Alternativamente, el catalizador de carbeno funcionalizado puede incluir un grupo funcional no reactivo (es decir, uno que tenga la funcionalidad deseada sin posterior reacción) . En otra realización, la presente invención proporciona un método de preparación de un polímero bitelequéli-co. El método incluye: la polimerización de al menos un monómero que contiene al menos un grupo polimerizable en presen-cia de al menos un catalizador de rutenio u osmio y carbeno funcionalizado para formar un polímero funcionalizado, y la combinación del polímero funcionalizado con al menos un agente rematante funcionalizado en condiciones efectivas para la reacción de la plantilla de polímero funcionalizado con el agente rematante para formar un polímero bitelequélico . El polímero funcionalizado terminalmente de esta invención que se sintetiza empleando un catalizador de ROMP funcionalizado puede, mediante elección del tipo y de la cantidad del monómero usado, ser sintetizado de manera que con-tenga grupos funcionales adicionales (no terminales) , incluyendo grupos reactivos latentes y grupos no reactivos. El polímero funcionalizado terminalmente que reacciona con un agente rematante funcionalizado de esta invención puede contener grupos funcionales adicionales (no terminales) , inclu- ^g ^^^ yendo grupos reactivos latentes y grupos no reactivos. Los polímeros que contienen grupos reactivos latentes son aquí denominados plantillas poliméricas, las cuales pueden ser selectivamente funcionalizadas después de la síntesis poliméri-ca por reacción con un reactivo funcionalizante. También se proporcionan agentes rematantes funcionalizados y catalizadores de ROMP de carbeno funcionalizados para uso en los métodos de esta invención. Los métodos de esta invención pueden ser empléados para generar librerías de agrupaciones multivalentes (polímeros portadores de grupos funcionales) . Esta invención proporciona métodos de preparación de dichas librerías y las propias librerías. Una librería es construida de manera que los miembros individuales de la librería abarquen un rango de características estructurales seleccionadas, por ejemplo, longitud, tipo y número de grupos funcionales, posición de los grupos funcionales y tipo y número (1 ó 2) de grupos funcionales terminales . Los métodos de esta invención permiten la síntesis de agrupaciones multivalentes de longitud definí-da, densidad definida de grupos funcionales, distancia definida entre grupos funcionales, combinaciones definidas de diferentes grupos funcionales (de número relativo y espaciamiento definidos) , posición definida de los mismos o de diferentes grupos funcionales y agrupamientos definidos de grupos funcionales. Las librerías de agrupaciones multivalentes de esta invención incluyen aquéllas en las que cada uno de los miembros de la librería tiene una longitud definida y cada uno de los miembros de la librería tiene una densidad de grupos funcionales definida. Las librerías de esta invención son útiles en el estudio y la selección de agrupaciones multivalentes que exhiben una función deseada. Las librerías de agrupaciones multivalentes para el estudio de varias actividades biológicas (unión a la superficie celular, efectos de señalización bio- lógica, etc.) son de particular interés. La presente invención proporciona también plantillas poliméricas y kits que incluyen al menos una plantilla polimérica. Los kits incluyen también instrucciones para la utilización de un reactivo funcionalizante para unir un grupo funcional pendiente a la plantilla polimérica. Los kits pueden también incluir al menos un reactivo funcionalizante y/o al menos un agente rematante. Los agentes rematantes proporcionados en los kits pueden ser funcionalizados y pueden in-cluir agentes rematantes que estén unidos, o puedan serlo, a un soporte sólido o superficie metálica. Los agentes rematantes funcionalizados pueden también contener un ligante escin-dible que esté entre el polímero y el grupo funcional unido (por ejemplo, un soporte sólido) . Un kit puede también pro-porcionar un reactivo o instrucciones para escindir el ligante escindible. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Figura 1: Esquema de dos rutas sintéticas para la formación de copolímeros aleatorios. Figura 2: Dos rutas sintéticas usadas para generar las mismas agrupaciones multivalentes de mañosa. (A) Un ejemplo del método de la presente invención que implica la polimerización de una plantilla monomérica 1 de éster activado no polar, seguido de modificación post-sintética de la plantilla polimérica 3 resultante con un elemento de reconocimiento de carbohidratos 4. (B) Un ejemplo de un método convencional que implica la polimerización de un monómero funcionalizado con carbohidrato 5 en condiciones de emulsión. Figura 3: Mecanismo e intermediarios en la poli-merización por metátesis de apertura de anillo (ROMP) que demuestran la incorporación de un grupo funcional en el catalizador de carbeno y la finalización con una olefina rica en electrones derivatizada . Figura 4: Mecanismo e intermediarios en la poli- "* ?í* ""^ ' "—< - " —- - ' :-*»* AA. merización por metátesis de apertura de anillo (ROMP) de polímeros monotelequélicos (si R o R' incluye funcionalidad) y bitelequélicos (si tanto R como R' incluyen funcionalidad) . Figura 5: Ejemplos de monómeros eventualmente substituidos adecuados para uso en la presente invención. Figura 6: Ejemplos de catalizadores de metal y carbeno adecuados para uso en la presente invención. Figura 7A: Ejemplos de agentes rematantes que contienen grupos funcionales reactivos. Figura 7B : Ejemplos de agentes rematantes que contienen grupos funcionales no reactivos. Figura 8A: Ilustración del uso de un agente rematante con un ligante escindible. Figura 8B : Ilustración de una síntesis ejemplar de un agente rematante con un ligante escindible. Figura 9: Ejemplos de plantillas poliméricas que pueden ser preparadas por los métodos de esta invención. Figura 10: Los datos de GPC (cromatografía de permeación por gel) muestran que, mientras que los resultados de cada polimerización son internamente consistentes, las condiciones de polimerización en emulsión (Ruta B en la Figura 2) dan polímeros de una longitud relativamente más corta que las condiciones de modificación post-sintética (Ruta A en la Figura 2) . Figura 11: Dependencia de la inhibición de la hemaglutinación con respecto a la longitud polimérica. Se dan los valores de la CI50 (en una base de por sacárido) . Se determinó la potencia en relación a la a-metilmanosa. Los resultados son la media de un mínimo de cinco experimentos y el error asociado a la determinación de la dosis es un factor de dos, según viene dictado por las diluciones dobles en el ensayo. PSM significa las condiciones de modificación post-sintética de la Ruta A en la Figura 2 y E representa las condiciones de emulsión de la ruta B en la Figura 2.

Figura 12 : Esquema de la síntesis de polímeros rematados en los extremos. Reactivos y condiciones: para 1 y 2 (a), 1,2 -dicloroetano (DCE) , 30 minutos; para 3 (b) bromuro de dodeciltrimetilamonio (DTAB) (1,6 equivalentes), tampón 2, 2-bis (hidroximetil) -2,2' , 2" -nitrilo-trietanol (bis-tris) (100 mM, pH 5,9), DCE, 45 C, 30 minutos; (c) se añadió un exceso de agente rematante 8 neto; (d) (2-aminoetil) -3 , 6-0-disulfo-ß-D-galactopiranósi-do, diisopropilcarbodiimida, Et3N, DMF, H20; (e) NaOH 50 mM, 60 C, 2 horas; (f) 5- ( (5-aminopentil) tioureidil) fluo-resceína, EDCI, N-hidroxisulfosuccinimida, H20, 24 horas. Figura 13: Esquema para la síntesis de un neogli-copolímero fluorescente por medio de un aldehido terminal . Figura 14: Unión de anticuerpo anti-L-selectina marcado con fluoresceína (A) , neoglicopolímero conjugado a fluoresceína 12 (B) y neoglicopolímero 17 conjugado a fluoresceína (C) a células Jurkat, observada por microscopía de fluorescencia. Cada imagen es una célula individual a 630x aumentos y es representativa de al menos cuatro experimentos independientes. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LAS REALIZACIONES PREFERIDAS La presente invención proporciona métodos para sintetizar agrupaciones multivalentes. Preferiblemente, la presente invención proporciona métodos generales que pueden ser usados tanto para la producción a gran escala como para la generación de librerías de oligómeros, por ejemplo. Las realizaciones preferidas de la presente invención son significativas, ya que tienen un rendimiento relativamente alto y son generales, convenientes y/o eficientes para la prepara-ción de polímeros de longitudes medias variables, densidad epitópica variable y funcionalidad variable, por ejemplo. Es de particular significación la capacidad de los métodos de la presente invención para controlar la formación de agrupaciones de longitud variable.

En un aspecto, los métodos de la presente invención se basan en la modificación post -polimerización de un esqueleto polimérico generado por un sistema ROMP catalizador con metal y carbeno. Contrariamente a los métodos convencio-nales que incorporan los grupos funcionales pendientes deseados en los monómeros, los métodos de la presente invención unen los grupos funcionales pendientes deseados a polímeros preformados. De forma significativa, la unión de la funcionalidad pendiente a polímeros preformados generados por la ROMP catalizada con metal y carbeno proporciona un mejor control y acceso a una variedad más amplia de materiales que lo que los métodos anteriores eran capaces de ofrecer. Dichos materiales proporcionan superficies o ligandos únicos para una amplia variedad de receptores naturales y sintéticos. En general, los métodos implican el uso de un monómero y un catalizador de la ROMP de metal y carbeno (al que también se hace referencia como catalizador de metal y carbeno) para formar un polímero intermediario (al que se hace aquí referencia como plantilla polimérica) . Preferiblemente, el monómero y el catalizador de la ROMP son suficientemente solubles en un solvente común, típicamente un solvente o mezcla de solventes orgánicos, para permitir la polimerización del monómero, aunque la reacción puede ser llevada a cabo en ausencia de un solvente (es decir, neta) . Alternativamente, se pueden usar más solventes polares, tales como agua, si el catalizador de metal y carbeno y el monómero son mutuamente solubles. El monómero incluye en su estructura al menos un grupo polimerizable y al menos un grupo reactivo latente para posterior unión de un grupo funcional pendiente (es decir, posterior funcionalización) . Por lo tanto, son grupos reactivos latentes adecuados aquéllos que no son reactivos durante la reacción ROMP inicial, pero que son reactivos durante la posterior funcionalización (de aquí, el término "latente"). Como ejemplos de grupos reactivos latentes se incluyen grupos . .*.*., t k.?.j salientes activados, tales como un éster activado, o grupos funcionales protegidos, tales como una amina protegida. Tal como se utiliza aquí, un grupo "protegido" es uno en el que la reactividad intrínseca del grupo está enmascarada tempo- raímente (es decir, que la "máscara" puede ser retirada) . Preferiblemente, el monómero es un monómero no polar (es decir, uno que es soluble en solventes orgánicos) , lo que puede simplificar el aislamiento del polímero resultante. El polímero intermediario resultante actúa como plantilla a la que se pueden unir uno o más grupos funcionales usando uno o más reactivos funcionalizantes que reaccionan con los grupos reactivos latentes. En una reacción típica, sólo se une un tipo de grupo funcional a una plantilla polimérica; sin embargo, usando cantidades inferiores a las estequiométricas de varios reactivos funcionalizantes, se pueden unir varios grupos funcionales diferentes a la plantilla polimérica. Estos grupos funcionales pueden proporcionar un elemento de reconocimiento (es decir, un sitio de unión) para una entidad biológica, tal como un receptor de la super- ficie celular. Alternativamente, pueden ser en general no reactivos (por ejemplo, que no se unen a un receptor de la superficie celular) . Por lo tanto, los polímeros resultantes pueden ser bioactivos o biocompatibles. En la reacción ROMP inicial, la variación de la razón de monómero a catalizador de la ROMP (es decir, iniciador) da como resultado la variación de la longitud del polímero resultante. También en la reacción ROMP inicial, se pueden usar diferentes monómeros. Cada uno de los monómeros puede tener diferentes grupos reactivos latentes para posterior unión de grupos funcionales pendientes. Ésta es una forma en la que diferentes grupos funcionales pendientes pueden unirse al esqueleto, además del método descrito anteriormente, que depende de la adición de cantidades inferiores a las estequiométricas de varios reactivos funcionalizantes. Alternati- t»-.- ,Aj- ..f -H n - ----- — - «..-...A..-. vamente, se puede hacer un copolímero de bloque polimerizando un primer monómero, añadiendo un segundo monómero una vez se ha consumido completamente el primer monómero, etc. Otra forma en la que se pueden incorporar diferentes grupos funciona- les pendientes es usar un monómero que ya incluya un grupo funcional pendiente deseado que no requiere mayor funcionalización, el cual no es reactivo durante la reacción ROMP, como se hace en los métodos ROMP convencionales (véase, por ejemplo, el Compuesto 5, Figura 2, Ruta B) . El uso de monómeros con y sin grupos funcionales pendientes da una ventaja adicional a los métodos de la presente invención. En la Figura 1, se muestra un esquema de estos diversos métodos de preparación de polímeros aleatorios. En la Figura ÍA, se usa un monómero simple para hacer una plan- tilla polimérica que tiene el mismo grupo reactivo latente (A) por unidad repetitiva, al que se añaden cantidades inferiores a las estequiométricas de tres reactivos funcionalizantes diferentes (uno que contiene el grupo funcional B, uno que contiene el grupo funcional C y uno que contiene el grupo funcional D) para formar un polímero que tiene la misma unidad repetitiva en el esqueleto con diferentes grupos funcionales pendientes (B, C, D) . Alternativamente, se podrían usar monómeros diferentes, cada uno con el mismo grupo reactivo latente, para formar una plantilla polimérica con diferentes unidades repetitivas en el esqueleto, pero los mismos grupos reactivos latentes. En la Figura IB, se polimerizan diferentes monómeros, algunos de los cuales tienen diferentes grupos reactivos latentes (U, V) y grupos funcionales estables (T) , para formar una plantilla polimérica que tiene diferentes unidades repetitivas y diferentes grupos reactivos latentes a la que se añaden dos reactivos funcionalizantes diferentes, ya sea secuencial o simultáneamente, para formar un polímero que tiene diferentes unidades repetitivas en el esqueleto con diferentes grupos funcionales pendientes (T, Y, Z) . i -,i.. í -i ?Ú.-L «. -ij A continuación de la reacción ROMP inicial y/o a continuación de la adición de grupos funcionales pendientes, el esqueleto del polímero puede ser eventualmente modificado para obtener una ventaja adicional. Por ejemplo, se puede re-ducir el esqueleto para eliminar los dobles enlaces (como mediante el uso de una diimida) u oxidarlo para formar grupos hidroxilo (como mediante el uso de 0s04) . También se puede incorporar otra funcionalización de alqueno al esqueleto para obtener materiales deseados. Un ejemplo de una ruta sintética según el método de la presente invención es mostrado en la Figura 2. En este ejemplo, se preparan agrupaciones multivalentes de mañosa. La Figura 2A muestra un ejemplo de un método de la presente invención que implica la polimerización de un monómero de éster activado no polar 1, seguido de modificación post-sintética de la plantilla polimérica resultante 3 con un reactivo funcionalizante que contiene carbohidrato 4. Con fines comparativos, la Figura 2B muestra un ejemplo de un método convencional, que implica la polimerización de un monómero funcio-nalizado con carbohidrato 5 en condiciones de emulsión. En otro aspecto, la presente invención proporciona métodos y reactivos para la unión terminal de nuevos grupos funcionales a materiales generados por ROMP. Las realizaciones preferidas de los métodos de la presente invención son significativas, ya que tienen un rendimiento relativamente alto y son generales, convenientes y/o eficientes para la preparación de polímeros de longitudes medias variables, tipo, número y distribución de grupos funcionales variables y funcionalidad variable, por ejemplo. De forma significativa, la unión de funcionalidad finalizadora de la cadena a los polímeros generados por ROMP catalizada con metal y carbeno proporciona acceso a una variedad más amplia de materiales que lo que los métodos previos de polimerización podían proporcionar. Dichos materiales ofrecen superficies o ligandos únicos para una amplia variedad de receptores naturales y sintéticos . En los métodos ROMP preferidos para esta invención, las velocidades de finalización y de transferencia de cadena son relativamente lentas en comparación con la propagación. Cuando la iniciación (ki) es rápida en relación a la propagación (kp) , de tal forma que k?>kp, se pueden generar materiales homogéneos de longitudes controladas y bajas poli- dispersidades (Figura 3) . En una polimerización viva, el cen- tro de metal carbeno activo está presente al final de cada cadena después de consumirse el monómero (Figura 3, III) . Esta especie puede reaccionar con alquenos ricos en electrones para dar un producto con un alqueno terminal (IV) , que puede ser funcionalizado, y un metal rutenio carbeno alcoxi - substituido no reactivo. Una ventaja significativa de esta estrategia es que sólo las cadenas vivas pueden adquirir la funcionalidad, lo que da lugar a una población más homogénea de materiales funcionalizados. Tal como se muestra en la Figura 4, esta estrate- gia genera polímeros telequélicos, es decir, un polímero que contiene uno o más grupos finales con funcionalidad única. Esta aproximación tiene una ventaja distintiva sobre los métodos anteriores, ya que la longitud de cada bloque polimérico puede ser controlada. Los polímeros telequélicos pueden tener uno o más grupos finales únicos y, en este método, éstos serían accesibles. Haciendo referencia a la Figura 4, los polímeros monotelequélicos son aquellos productos en los que o bien R o bien R' incluye funcionalidad, mientras que los polímeros bitelequélicos son aquellos productos en los que R y R' incluyen ambos funcionalidad. Por ejemplo, los polímeros monofuncionales pueden ser el resultado de la utilización de un agente rematante funcionalizado o un catalizador funcionalizado, según se describe con mayor detalle más adelante. A su vez, los polímeros bitelequélicos pueden ser creados cuan- i ,t . y 1, j.? -t-y t .Á.JL? do se usan tanto un catalizador funcionalizado como un agente rematante funcionalizado. Además de los ejemplos biológicos descritos, los polímeros telequélicos son usados con frecuencia en la síntesis de plásticos entrecruzados. La intensifi-cación de las propiedades deseadas, tales como la estabilidad térmica, puede ser el resultado de la capacidad para generar materiales homogéneos definidos. Los métodos de esta invención para la funcionalización terminal de polímeros implican metodología ROMP con-vencional o la metodología mejorada en la que se sintetiza la plantilla de polímero portadora de grupos reactivos latentes, que pueden ser selectivamente funcionalizados después de la síntesis del polímero (como se ha descrito anteriormente) . En el último método (mejorado) , se usa un monóme-ro que incluye en su estructura al menos un grupo polimerizable y al menos un grupo reactivo latente para posterior unión de un grupo funcional pendiente (es decir, posterior funcionalización) . Por lo tanto, son grupos reactivos latentes adecuados aquéllos que no son reactivos durante la reacción ROMP inicial. Como ejemplos de grupos reactivos latentes monoméricos se incluyen grupos salientes activados, tales como un éster activado, o grupos funcionales protegidos, tales como una amina protegida. Tal como se usa aquí, un grupo "protegido" es uno en el que la reactividad intrínseca del grupo está en-mascarada temporalmente (es decir, que se puede retirar la "máscara"). El polímero resultante actúa como plantilla a la que se pueden unir uno o más grupos funcionales usando uno o más reactivos funcionalizantes que reaccionen con los grupos reactivos latentes derivados de los monómeros (a los que se hace aquí referencia como grupos reactivos latentes monoméricos) . Estos grupos funcionales pueden tener una función biológica, por ejemplo pueden proporcionar un elemento de reconocimiento (es decir, sitio de unión) para una entidad biológica, tal como un receptor de la superficie celular. Alterna- tivamente, pueden ser generalmente no reactivos (por ejemplo, que no se unen a un receptor de la superficie celular) . Por lo tanto, los polímeros resultantes pueden ser bioactivos o biocompatibles . Los monómeros adecuados para uso en los métodos de la presente invención tienen al menos un grupo polimerizable (y a menudo sólo un grupo polimerizable) . Los monómeros pueden llevar un grupo funcional pendiente o no tener ningún grupo funcional pendiente. El grupo funcional puede ser uno grupo no reactivo o un grupo funcional latente según se ha discutido anteriormente. En una realización específica, se pueden usar monómeros que lleven al menos un grupo reactivo latente (usado para posterior funcionalización) para hacer una plantilla polimérica, según se ha descrito anteriormente. Son monómeros adecuados los que son estables a las condiciones de polimerización de la ROMP. Preferiblemente, son monómeros adecuados los que pueden ser polimerizados a través de ROMP en condiciones estándar. Más preferiblemente, los monómeros incluyen monoolefinas cíclicas (por ejem-pío, monocíclicas, bicíclicas, tricíclicas o de orden superior) substituidas. Como ejemplos se incluyen, aunque sin limitación, olefinas tensadas, tales como norborneno o ciclobu-teno, y olefinas menos tensadas, tales como cicloocteno. Dichas monoolefinas cíclicas substituidas puede incluir también heteroátomos y grupos funcionales dentro del anillo, incluyendo, por ejemplo, tioéteres (RSR' o R2S) , éteres (ROR' o R20) , aminas (primarias RNH2, secundarias RR"NH o R2NH, terciarias, RR'R"N o R2R'N o R3N) , amidas (es decir, RCONHR' ) y esteres (RC02R' ) . Como ejemplos de dichas olefinas se inclu-yen oxanorborneno, 7-tiabiciclo [2.2.1] hept-2-eno y 3,6,7,8-tetrahidro-lH-azocin-2-ona, cuyas estructuras son las siguientes : - •*-'*'- * ' ~* - Se describen ejemplos adicionales de monómeros adecuados para los métodos de la ROMP, por ejemplo, en diversos documentos citados en la Sección de Antecedentes, así como en las Pat. EE.UU. N° 5.831.108, 5.342.909, 5.710.298, 5.312.940, 5.750.815, 5.880.231, 5.894.851, 4.883.851 y 5.587.442, y en Wu y col., Macromolecules, 26, 4975-4977 (1993); Hillmyer y col., Macromolecules, 25, 3345-3350 (1992); Maughon y col., Macromolecules, 30, 3459-3469 (1997); Maynard y col., Macromolecules, 32, 6917-6924 (1999); Hillmyer y col., Macromolecules, 28, 6311-6316 (1995); Maughon y col., Macromolecules, 29, 5765-5769 (1996). La Figura 3 pro-porciona ejemplos específicos adicionales de varios monómeros útiles . Los monómeros contienen eventualmente grupos pendientes que pueden ser grupos funcionales, grupos no reactivos o grupos reactivos latentes. Los grupos reactivos laten-tes sobre los monómeros que pueden ser usados para la funcionalización selectiva tras la polimerización pueden incluir grupos electrofílicos o nucleofílicos . De manera análoga, los compuestos de los que derivan estos grupos funcionales añadidos posteriormente (es decir, los reactivos funcionalizantes) pueden incluir grupos electrofílicos o nucleofílicos . Estos dos conjuntos de grupos pueden ser iguales o diferentes, aunque para cualesquiera dos reactivos (monómero y reactivo funcionalizante) , los grupos reactivos latentes están empareja- .l-d! I Í??t-1. dos para permitir la reacción y unión del grupo funcional pendiente a la plantilla polimérica. Los reactivos funcionalizantes pueden incluir una amplia variedad de moléculas que confieren propiedades útiles al polímero resultante (por ejemplo, actividad biológica) , tal como un carbohidrato o un péptido, por ejemplo. Así, los grupos funcionales pendientes pueden proporcionar un elemento de reconocimiento (es decir, sitio de unión) para una entidad biológica, tal como receptor de la superficie celular. Alternativamente, pueden ser gene- raímente no reactivos (por ejemplo, no unirse a un receptor de la superficie celular) . El polímero puede incluir combinaciones de tales grupos. Por ejemplo, un polímero puede incluir bloques alternantes de un elemento de reconocimiento y un elemento no reactivo. Como ejemplos de grupos reactivos latentes electrofílicos se incluyen, aunque sin limitación, acilsulfonamidas (RCONHS02R' ) , acilazidas (RCON3) , epóxidos (RR'COCR"R' ' ' ) , anhídridos (RC02COR' ) , esteres (RC02R' , incluyendo esteres activados, tales como esteres pentafluorofenílieos y esteres N- hidroxisuccinimidíli-cos) , ácidos carboxílicos (RC02H, incluyendo ácidos activados tales como haluros de acilo RCOX, donde X = Br, I, F, Cl) , haluros (F, Br, Cl , I), ácidos y esteres borónicos (RB(OH)2, RB(OH)(OR"), RB(OR')2), cetonas (RCOR' ) , aldehidos (RCHO) , esteres del ácido fosfórico (mono- , di- y triésteres, tales como PO(OR)(OH)2, PO (OR) 2 (OH) , PO(OR)3), fosfitos (POR3) , acilnitrilos (RCOCN) , alquenos (RR'CCR"R' ' ' ) , alquinos (RCCR' ) y similares. Como ejemplos de grupos reactivos latentes nucleofílicos se incluyen, aunque sin limitación, aminas (primarias RNH2, secundarias, RR"NH o R2NH, terciarias RR'R"N o R2R'N o R3N) , azidas (RN3) , hidroxilos (ROH) , tioles (RSH) , sulfonas (R2S02 o RS02R' ) , acilhidra- zidas (RCONHNH2) , fosfitos (POR3) , hidrazinas (RHNNH2) , oximas (RHC?OH) , isocianatos (RNCO) , ácidos hidroxámicos (RCO?HOH) , tiocianatos (RSC?) y similares. La estereoquímica de estos J i i .. .-*,.. yy..... .ih-j-?.g - __. ..... .. . ...,»-!. _-....»,.. . ... _ . ... „_—--- r tr( r ^jj^moja i grupos puede ser definida o racémica. Si se desea, estos grupos pueden ser protegidos con grupos tales como carbamato (RNHC02R' ) , carbonato (ROC02R' ) , tioéteres (RSR' o R2S) , disulfuros (RSSR' o RSSR) , grupos nitro (RN02) y similares. Los monómeros adecuados pueden incluir también uno o más grupos unidos que no son usados para la funcionalización (es decir, que no son reactivos en las condiciones de funcionalización) . Dichos grupos incluyen hidroxilos (ROH) , alquilos, arilos, haluros (F, Br, Cl, I), amidas (RCO?HR' ) , tioles (RSH) y similares. La estereoquímica de estos grupos puede ser definida o racémica. Aunque algunos de estos grupos son los mismos que los grupos reactivos latentes, no son tan reactivos en las condiciones elegidas para la unión del grupo funcional pendiente y se hace referencia aquí a ellos como grupos funcionales estables. Por lo tanto, se usa estable en este contexto como un término relativo para hacer referencia a grupos que no son reactivos en las condiciones elegidas. Un ejemplo de una clase de monómeros adecuados basados en la estructura del anillo de norborneno tiene la siguiente estructura general: Fórmula I donde Y es CH2, O, S o ?-R3 (donde R3 es H o un grupo orgáni-co) , R1 y R2 pueden ser H o un grupo orgánico y R1 y R2 juntos pueden formar un anillo alicíclico o aromático. R1, R2 o ambos pueden contener un grupo funcional o un grupo reactivo latente. En una realización preferida, al menos uno de R1 o R2 incluye un grupo reactivo latente como se ha definido antes, ?. . tal como un éster activado. Un ejemplo específico es el éster N-hidroxisuccinimida de ácido biciclo [2.2.1] hept-5-en-exo-2 - carboxílico (Compuesto 1, Figura 4) . Los monómeros pueden ser preparados usando técni- 5 cas estándar de síntesis orgánica conocidas para un experto en la técnica. Por ejemplo, el monómero ácido biciclo [2.2.1] hept-5-en-exo-2-carboxílico puede ser sintetizado según el procedimiento de Ver Nooy y col., J. Am. Chem . Soc . , 77, 3583-3586 (1955) . 10 Se pueden emplear uno o más monómeros prefuncio- nalizados para sintetizar un polímero que está funcionalizado terminalmente mediante los métodos aquí descritos . Se pueden usar uno o más monómeros portadores de grupos reactivos latentes diferentes para sintetizar una plantilla polimérica que puede estar funcionalizada terminalmente mediante los métodos aquí descritos. Se pueden usar uno o más monómeros portadores de grupos reactivos latentes solos o en combinación con uno o más monómeros prefuncionalizados (es decir, los que tienen grupos pendientes que no requieren mayor funcionaliza- 20 ción) para formar una plantilla polimérica que está funciona- lizada terminalmente mediante los métodos aquí descritos. Así, los monómeros que pueden ser polimerizados para formar polímeros que son a continuación funcionalizados en sus extremos según los métodos de la presente invención pueden incluir una variedad de funcionalidad, tal como: (1) grupos reactivos latentes monoméricos que pueden ser funcionalizados para incluir grupos funcionales pendientes tras la polimerización; (2) funcionalidad no reactiva que no requiere de más funcionalización para producir los grupos funcionales pendientes deseados (que pueden ser simples o complejos) ; o (3) ningún grupo funcional pendiente (como en el norborneno) . Se pueden usar diversas combinaciones de tales monómeros en los métodos de la presente invención para obtener copolímeros de bloque o aleatorios. ** *>* -* - , 1 ? ¿y? ,.„. . . .,, .. , _ , __ ^ ^ - - y . y..-.^ A^ En cualquiera de las reacciones ROMP (convencional o la reacción mejorada aquí descrita) , la variación de la razón de monómero a catalizador de la ROMP (es decir, iniciador) da como resultado la variación de la longitud del polí-mero resultante. El polímero (o plantilla polimérica) es preferiblemente preparado por polimerización de uno o más monómeros utilizando un catalizador de metal y carbeno (es decir, un compuesto que contiene un enlace metal-carbeno (M=CR4R5) que cataliza las reacciones de metátesis, donde los grupos R4 y R5 son cada uno independientemente H o un grupo orgánico (que puede incluir funcionalidad, tal como los grupos reactivos latentes o los grupos funcionales no reactivos descritos a continuación) y "M" representa un metal (preferiblemente, rutenio u osmio) enlazado a uno o más ligandos en una esfera de ligando) . Como ejemplos específicos de catalizadores adecuados se incluyen, aunque sin limitación, el catalizador de metal rutenio y carbeno de Grubb (Compuesto 14, Figura 12) y los compuestos mostrados en la Figura 3 y descritos en Kings-bury y col., J. Amer. Chem. Soc . , 121 , 791-799 (1999); Schwab y col., J. Amer. Chem. Soc . , 118, 100-110 (1996); Dias y col. Organometallics, 11, 2758-2767 (1998); del Río y col., Tetra hedron Lett . , 40, 1401-1404 (1999); Furstner y col., Chem. Commun . , 95-96 (1999); Huang, J. y col., Organometallics, 18, 5375-5380 (1999); Weskamp y col., Angew. Chem . , Int . Ed. Engl . , 37, 2490-2493 (1998); Westkamp, T. y col., J". Organomet al . Chem. , 582, 362-365 (1999); Robson, D.A. y col., Macromolecules, 32, 6371-6373 (1999); Scholl y col., Organic Letters, 1, 953-956 (1999), y Scholl y col., Tetrahedron Lett . , 40, 2247-2250 (1999). Otros incluyen los descritos, por ejemplo, en las Pat. EE.UU. N° 5.831.108 (Grubbs y col.), 5.342.909 (Grubbs y col.), 5.710.298 (Grubbs y col.), 5.312.940 (Grubbs y col.), 5.750.815 (Grubbs y col.), 5.880.231 (Grubbs y col.), 5.849.851 (Grubbs y col.) y 4.883.851 (Grubbs y col.).

Un grupo preferido de catalizadores incluyen los que reaccionan con alquenos ricos en electrones (como se discute con mayor detalle a continuación) y tienen preferiblemente al menos un grupo reactivo latente (al que se hace aquí referencia como grupo latente catalizador) y/o al menos un grupo funcional no reactivo deseado. Los grupos funcionales no reactivos incluyen, por ejemplo, productos naturales o análogos de éstos, quelantes metálicos, metales, sondas fluorescentes, soportes sólidos y superficies metálicas. Los grupos reactivos latentes sobre el catalizador son análogos a los grupos reactivos latentes sobre los monómeros preferidos, en el sentido de que estos grupos reactivos no interfieren con la reacción ROMP, pero permiten la posterior funcionalización. Los grupos reactivos latentes catalizadores que se utilizan para la funcionalización incluyen grupos electro-fílicos o nucleofílicos . Como ejemplos de grupos reactivos latentes electrofílicos se incluyen, aunque sin limitación, acilsulfonamidas, acilazidas, epóxidos, anhídridos, esteres (incluyendo esteres activados, tales como esteres pentafluo-rofenílicos y esteres N-hidroxisuccini-midílicos) , ácidos carboxílicos (incluyendo ácidos activados, tales como haluros de acilo) , haluros, ácidos borónicos, cetonas, aldehidos, esteres del ácido fosfórico (mono-, di- y triésteres), fosfi-tos, acilnitrilos, alquenos y alquinos y similares. Como ejemplos de grupos reactivos latentes nucleofílicos se incluyen, aunque sin limitación, aminas, azidas, hidroxilos, tioles, sulfonas, acilhidrazidas, fosfitos, hidrazinas, oximas, isocianatos, tiocianatos y similares. La estereoquímica de estos grupos puede ser definida o racémica. Si se desea, estos grupos pueden ser protegidos con grupos tales como carbamatos, carbonatos, tioéteres, disulfuros, grupos nitro y similares. Preferiblemente, los catalizadores de metal y carbeno de fórmula M=CR4R5, donde M representa un metal en una es- -ÉMÉ^MMÉM^ ^ jg^^^jjjJ fera de ligando, R4 es un grupo orgánico que incluye un grupo reactivo latente, tal como una azida, un epóxido, un grupo ciano, un acetal, un cetal, un carbamato, un tiocianato, un éster activado, un ácido activado, una hidrazina o una hidra- zona, y R5 es H o un grupo orgánico, preferiblemente H. Los catalizadores particularmente preferidos tienen la siguiente fórmula general : Fórmula II donde M es Ru u Os, X y X' son independientemente un ligando aniónico (preferiblemente, haluros, alcóxidos, tiolatos, amidas, fosfuros y acilos) y X y X' juntos pueden representar un ligando bidentado, y L y L' son independientemente ligandos neutros (preferiblemente, árenos, cetonas, alquinos, carbenos, carbonilos, imidas, fosfinas, arsinas, aminas, iminas y nitrilos) y L y L' juntos pueden representar un ligando bidentado, y R4 es un grupo orgánico que incluye un grupo reactivo latente. R4 es un grupo orgánico que incluye una azida, un epóxido, un grupo ciano, un acetal, un cetal, un carbamato, un tiocianato, un éster activado, un ácido activado, una hidrazina o una hidrazona. Alternativamente, R4 es un grupo orgánico que incluye un grupo funcional no reactivo seleccionado entre productos naturales o análogos de los mismos, que- 25 lantes de metales, metales, sondas fluorescentes, soportes sólidos y superficies metálicas, En los casos en que R4 incluye un soporte sólido o una superficie metálica, el grupo R4 incluirá típicamente un grupo ligante LK, que permite un espaciamiento seleccionado desde el sólido o superficie metá- 30 lica y proporciona una funcionalidad que forma un enlace (co- valente o no covalente) con el sólido o la superficie metálica. LK es un grupo de unión que es un grupo orgánico que tiene una funcionalidad que permite la unión a un sólido o a una superficie metálica. LK puede unirse directamente a los grupos superficiales sobre el sólido. En algunos casos, el sólido puede ser funcionalizado y el grupo LK se une entonces a los grupos funcionales que han sido añadidos al sólido. El grupo LK puede contener unidades repetitivas adicio- nales que son alifáticas o aromáticas, para permitir un espaciamiento desde la superficie. LK puede tener, por ejemplo, la fórmula: - (M) m-LKx- (N) p-LK2, donde M y N son grupos orgánicos iguales o diferentes, m y p son números enteros en el rango de 0 a aproximadamente 20 y LKi y LK2 son grupos funcio- nales. M y N pueden ser, por ejemplo, grupos alifáticos o grupos aromáticos o combinaciones de éstos, que están eventualmente substituidos, preferiblemente con grupos no reactivos. (M) m y (N) p pueden ser grupos aromáticos, por ejemplo, anillos de fenilo, unidos por grupos alifáticos, por ejemplo olefinas o alquinos. LKi puede ser un grupo funcional que simplemente una las cadenas -M- y -N- , o puede ser un grupo reactivo latente, según se ha descrito antes, que puede reaccionar para introducir diferente funcionalidad, o que puede ser escindido para dar una escisión del grupo LK con respecto al sólido. LK2 contiene una funcionalidad que permite la unión (covalente o no covalente) al sólido. LK2 puede, por ejemplo, contener un grupo tiol, un grupo éster activado o un grupo amina . LKi puede ser cualquiera de una variedad de grupos funcionales, incluyen, entre otros, -O-, -S-, -CO-, -COO- , -CO-NR' - (donde R' es hidrógeno o un grupo orgánico, por ejemplo un grupo alquilo) . Además, los grupos CH2 no colindantes en M y N pueden ser substituidos con -O- o -S- . LKX puede también contener una funcionalidad en la que uno o más enlaces pueden romperse, química, enzimática o fotoquímica- ^-A^É A «? ^.-a-S ^^^^J^ mente, para escindir el grupo LK. Como LKi escindibles se incluyen, entre otros, esteres y amidas. Un catalizador de ROMP de metal y carbeno ejemplar que se une a un soporte sólido o a una superficie metá-lica tiene la fórmula: Fórmula III donde M, X, X' , L, L' y LK son como se ha definido antes en la Fórmula II; R' es hidrógeno o un grupo orgánico y es preferiblemente hidrógeno, y LK es un grupo ligante eventual. El catalizador puede estar directamente unido a un soporte sólido, según se ilustra en Barrett y col., Organic Letters, 1, 1083-1086 (1999) . Los catalizadores pueden ser usados para incorporar funcionalidad en un extremo del polímero, para permitir, por ejemplo, el acoplamiento de dos polímeros entre sí, el acoplamiento del polímero a un soporte sólido o la modificación del polímero con pequeñas moléculas, sondas fluorescen-tes, proteínas, metales, quelantes de metales, etc. Por lo tanto, los catalizadores útiles en los métodos de la presente invención pueden incluir una variedad de funcionalidad (en al menos uno de R4 o R5 en el catalizador M=CR4R5) , tal como: (1) grupos reactivos latentes catalizadores que pueden ser fun-cionalizados para incluir grupos funcionales terminales tras la olimerización; (2) funcionalidad no reactiva que no requiere de mayor funcionalización para producir los grupos funcionales terminales deseados; o (3) ningún grupo funcional. Se pueden usar diversas combinaciones de dichos catali- zadores en los métodos de la presente invención. La polimerización inicial es preferiblemente llevada a cabo en un solvente o mezcla de solventes, típicamente uno o más solventes orgánicos, en donde el monómero y el ca-talizador son mutuamente solubles, aunque, en determinadas realizaciones, no se requiere solvente. Como solventes adecuados se incluyen solventes hidrocarbonados alifáticos y aromáticos substituidos y no substituidos, tales como hidrocarburos clorados, éteres, hidrocarburos próticos, etc., que no son reactivos en las condiciones de la reacción. Como ejemplos ese incluyen 1 , 2-dicloroetano, benceno, tolueno, p-xileno, cloruro de metileno, diclorobenceno, tetrahidrofurano, éter dietílico, pentano, agua, metanol, etc. Las condiciones de la reacción de polimerización (por ejemplo, temperatura, tiempo, atmósfera) variarán dependiendo de la elección del monómero y del catalizador y serán seleccionadas por alguien con conocimientos ordinarios en la técnica sin una innecesaria experimentación. Preferiblemente, la reacción ROMP es llevada a cabo a una temperatura de aproximadamente 20 °C a aproximadamente 30 °C (es decir, a temperatura ambiente) o superior, en una atmósfera inerte (por ejemplo, nitrógeno o argón), aunque son posibles temperaturas en el rango de aproximadamente -20 °C a aproximadamente 125 °C. La presión no es crítica, pero puede variar para mantener una mezcla de reacción en fase líquida. Los tiempos de reacción pueden variar entre varios minutos y varios días. Típicamente, en las reacciones ROMP, el polímero es terminado por reacción del catalizador con un agente rematante. Este agente rematante es típicamente emparejado con el catalizador. Para los catalizadores de rutenio, por ejemplo, se ha usado etil vinil éter. Aunque dicho reactivo podría ser usado en la presente invención, preferiblemente se usa un alqueno rico en electrones para incorporar funcionalidad terminal en el polímero. Tal como se usa aquí, alqueno rico en electrones es uno que tiene una mayor densidad de electrones que la de del etileno. En los métodos de remate convencionales, el agente rematante es un éter vinílico, típicamente etil vinil éter, que da lugar a un material con un alqueno terminal y un metal rutenio carbeno alfa-substituido con oxígeno desactivado (Hillmeyer y col., Macromolecules, 28, 6311-6316 (1995) ) . Por el contrario, el agente rematante de la presente invención, preferiblemente un agente rematante bifun-cional, incorpora un grupo donador de electrones y, preferiblemente, un grupo reactivo latente para posterior funcionalización (por ejemplo, para incorporar funcionalidad en un extremo del polímero para permitir el acoplamiento de dos polímeros entre sí, el acoplamiento a un soporte sólido o su-perficie metálica, la modificación con pequeñas moléculas, tales como sondas fluorescentes, metales, quelantes de metales etc.); modificación con productos naturales (por ejemplo, moléculas biológicas típicamente grandes) , incluyendo péptidos, proteínas, carbohidratos, ácidos nucleicos, etc., o un grupo funcional no reactivo que no requiere mayor funcionalización (es decir, que es la funcionalidad que se desea incorporar en el polímero en un extremo, tal como grupos informadores para facilitar la detección, tal como grupos fluorescentes, grupos quimioluminiscentes, enzimas, anticuerpos, biotina, grupos radioactivos, etc.). Por lo tanto, de forma similar a la del catalizador, los agentes rematantes útiles en los métodos de la presente invención pueden incluir una variedad de funcionalidad (en la menos uno de R6 o R7 en el agente rematante D-C=CR6R7) , tal como: (1) grupos reactivos latentes de agente rematante que pueden ser funcionalizados para incluir grupos funcionales terminales después de la polimerización; (2) funcionalidad no reactiva que no requiere de mayor funcionalización para producir los grupos funcionales terminales deseados; o (3) ningún grupo funcional (como en el etil vinil éter) . Se pueden usar diversas combinaciones de dichos agentes rematantes en los métodos de la presente invención. De manera significativa, los catalizadores y agentes rematantes de la presente invención son de utilidad general para controlar la estructura de los extremos de las reacciones ROMP vivas iniciadas con metales (particularmente, osmio o rutenio) . La incorporación selectiva de grupos terminales simples a polímeros facilitará la creación de polímeros bifuncionales. que pueden unirse a otros oligómeros, ser inmovilizados selectivamente, usados para detección, usados para estudios de unión cuantitativa o usados para investigar la estructura polimérica. Los materiales resultantes pueden ser conjugados a cualquiera de un número de moléculas informado-ras, incluyendo una variedad de compuestos fluorescentes, biotina, anticuerpos, enzimas, lípidos y soportes sólidos. La tolerancia al grupo funcional del iniciador de metal -carbeno, la flexibilidad en la selección del catalizador, la generalidad del protocolo de funcionalización post-sintética y la versatilidad de la estrategia de remate amplían significativamente el alcance de materiales útiles que pueden ser generados por ROMP . El espaciamiento de los grupos funcionales en un polímero puede ser controlado en parte uniendo polímeros con diferentes grupos funcionales entre sí por reacción de extremos seleccionados. Un polímero compuesto constituido por dos o más polímeros puede ser sintetizado por incorporación apropiada de grupos terminales en los polímeros componentes, los cuales se unen entonces entre sí a través de la reacción de los grupos terminales incorporados. Se pueden sintetizar de esta forma polímeros compuestos que tienen una distribución o espaciamiento seleccionado de uno o más grupos funcionales. Típicamente, el agente rematante tiene la siguiente estructura general : _^l_d- -a-L-i-i Fórmula IV donde D es un grupo donador de electrones (es decir, uno que causa un aumento global en la densidad electrónica de la ole-fina en comparación con el etileno. D, que pude incluir SR9, OR9 o un halógeno, donde R9 es un hidrógeno o un grupo orgánico y, preferiblemente, es un grupo alquilo. R6, R7 y R8 son independientemente hidrógeno o un grupo orgánico y al menos uno de estos grupos incluye preferiblemente un grupo reactivo latente o un grupo funcional no reactivo que no requiere mayor funcionalización. R8 es preferiblemente hidrógeno. Aunque tanto R6 como R7 pueden incluir funcionalidad, preferiblemente sólo uno lo hace, y, más preferiblemente, el otro es H. en una realización preferida, R6 puede incluir un grupo reactivo latente seleccionado entre una azida, un grupo nitro, un di-sulfuro, una hidrazina, una hidrazida, una hidroxilamina, un aldehido, una cetona, un epóxido, un grupo ciano, un acetal, un cetal, un carbamato, un tiocianato, un éster activado o un ácido activado. Alternativamente, en otra realización preferida, RG puede ser un grupo funcional no reactivo seleccionado entre productos naturales o análogos de los mismos (por ejemplo, biotina) , quelantes de metales (tales como ácido ni-trilotriacético) , metales (tales como Zn) , sondas fluorescen-tes (tales como una amida derivada de BODIPY FL EDA, que es , 4-difluoro-5, 7-dimetil-4-bora-3a, 4a-diaza-s-indaceno-3-propioniletilendiamina) , soportes sólidos (tales como resinas de polietileno) y superficies metálicas (tales como las superficies de oro usadas para resonancia plasmónica superfi- cial ("SPR")). En la Figura 7A se ilustran ejemplos de agentes rematantes que contienen grupos funcionales reactivos y en la Figura 7B se ilustran ejemplos de agentes rematantes que contienen grupos funcionales no reactivos. En una realización específica, el agente rematante proporciona una unión covalente o no covalente a un sólido. Como ejemplos de agentes rematantes para unión a un sólido se incluyen los de la fórmula: Fórmula V donde D es un grupo donador de electrones según se ha definido antes; R8 y R7 son hidrógenos o un grupo orgánico y, preferiblemente, ambos son hidrógeno; n es un número entero en el rango de 1 a aproximadamente 20, y LK es un grupo ligante que es un grupo orgánico con una funcionalidad que permite la unión a un sólido. LK puede unirse directamente a los grupos superficiales sobre el sólido. En algunos casos, el sólido puede ser funcionalizado y el grupo LK se une entonces a los grupos funcionales que han sido añadidos al sólido. El grupo LK puede contener unidades repetitivas adicionales alifáticas o aromáticas para obtener un espaciamiento desde la superficie. LK puede tener, por ejemplo, la fórmula - (M) m-LKi- (N) p-LK2, donde M y N son grupos orgánicos iguales o diferentes, m y p son números enteros en el rango de 0 a aproximadamente 20 y LKi y LK2 son grupos funcionales. M y N pueden ser, por ejemplo, grupos alifáticos o grupos aromáticos o combinaciones de éstos, que están eventualmente substituidos, preferiblemente con grupos no reactivos. (M)m y (N) p pueden ser gru- «y^^^j^^ pos aromáticos, por ejemplo, anillos de fenilo, unidos por grupos alifáticos, por ejemplo olefinas o alquinos. LKX puede ser un grupo funcional que simplemente una las cadenas -M- y -N- , o puede ser un grupo reactivo latente, según se ha des-crito antes, que puede reaccionar para introducir diferente funcionalidad, o que puede ser escindido para dar una escisión del grupo LK con respecto al sólido. LK2 contiene una funcionalidad que permite la unión (covalente o no covalente) al sólido. LK puede, por ejemplo, contener un grupo tiol, un grupo éster activado o un grupo amina. LKi puede ser cualquiera de una variedad de grupos funcionales, incluyen, entre otros, -O-, -S-, -CO-, -COO-, -CO-NR'- (donde R' es hidrógeno o un grupo orgánico, por ejemplo un grupo alquilo) . Además, los grupos CH2 no colindantes en M y N pueden ser substitui-dos con -O- o -S- . LKi puede también contener una funcionalidad en la que uno o más enlaces pueden romperse, química, enzimática o fotoquímicamente, para escindir el grupo LK. Como LKX escindibles se incluyen, entre otros, esteres y amidas. En una realización específica, el reactivo rema-tante es un ligante escindible a una superficie o soporte sólido. El agente rematante ligante escindible es un grupo orgánico que tiene (I) una olefina rica en electrones para reacción con objeto de rematar el polímero; (2) funcionalidad covalente o no covalentemente unida (o un grupo reactivo la-tente que puede estar covalente o no covalentemente unido) al sólido, y (3) funcionalidad latente intermediaria entre (1) y (2) , que puede ser química, enzimática o fotoquímicamente escindida. La exposición del polímero rematado a condiciones químicas, enzimáticas o fotoquímicas apropiadas permite la escisión selectiva del polímero con respecto al sólido. Por ejemplo, el agente rematante ligante escindible puede reaccionar con el polímero para unir el polímero a una superficie sólida. El sólido puede ser entonces lavado para eliminar los materiales no específicamente unidos, por ejemplo para puri- ficar el polímero. A continuación, el polímero purificado puede ser tratado química, enzimática o fotoquímicamente para escindir la unión al soporte sólido y liberar los polímeros del sólido. Un agente rematante fotoquímicamente escindible específico preferido tiene la fórmula: Fórmula VI donde D se define como antes; R8, independiente de otros R8 en el agente rematante, es hidrogeno o un grupo orgánico; R7 es también un hidrógeno o un grupo orgánico; n es un número entero de 1 a aproximadamente 20; R9 puede ser H o un grupo orgánico; W es un grupo retirador de electrones y es un grupo donador de electrones, y LK2 es un grupo ligante para unión al soporte sólido (mostrado como una esfera en la fórmula) . El enlace que puede ser fotoquímicamente escindido está indicado mediante una línea discontinua en la fórmula. Uno o más grupos CH2 no colindantes en la cadena (CH2)n pueden estar substituidos con un -O- (para dar éteres) o un -S- (para dar tioéteres) . R8 es preferiblemente H. R9 es preferiblemente un grupo alquilo pequeño (es decir, de 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono) y es más preferiblemente un grupo metilo. W es un grupo retirador de electrones que puede ser, entre > - ».- 1-i —. otros, N02, CN, CF3 o un halógeno. Z es un grupo donador de electrones, que puede ser, entre otros, R, OR o SR, donde R es un grupo alquilo, NR'2/ donde R' es hidrógeno o un grupo alquilo. La Figura 8 ilustra esquemáticamente el uso de un agente rematante con un grupo ligante escindible. Un agente rematante de Fórmula VI en donde el ligante escindible está unido a una resina por medio de PEG (polietilenglicol) reacciona con una plantilla polimérica que contiene grupos reactivos latentes ejemplares (grupos activantes) para unir el polímero a la resina (soporte sólido) . El polímero soportado en sólido es entonces funcionalizado por reacción con un nucleófilo ejemplar, para generar un polímero funcionalizado soportado en sólido. La unión al soporte sólido puede facili-tar la funcionalización y purificación del polímero. El polímero funcionalizado puede ser escindido del soporte sólido por irradiación usando una longitud de onda de luz apropiada . La escisión fotoquímica de una variedad de grupos orgánicos, incluyendo la escisión de esteres según se ilustra en la Figura 8A, es un procedimiento bien conocido. Los expertos en la técnica pueden emplear fácilmente o adaptar métodos foto-químicos conocidos para uso con ligantes escindibles. Tal como se ha indicado antes, los ligantes pueden ser también escindidos usando reacciones químicas o enzimáticas. De nuevo, se puede usar o adaptar fácilmente una variedad de reacciones químicas o enzimáticas conocidas para uso con los ligantes escindibles de esta invención. Los agentes rematantes escindibles pueden ser sintetizados por métodos conocidos en la técnica, usando ma-teriales de partida de fácil adquisición. Por ejemplo, la síntesis del agente rematante de la Figura 8A está ilustrada en la FiguraB y en los Ejemplos se dan los detalles de la síntesis . Determinados agentes rematantes preferidos inclu- •• -*•-*-*-«*> yen grupos funcionales tanto latentes como no reactivos y grupos etilenglicol. Típicamente, éstos forman ambos parte de un R6 o R7. Un ejemplo particularmente preferido del agente rematante incluye un alquila vinil éter unido a un derivado ácido carboxílico protegido a través de una cadena de etilenglicol. Debido a su diseño, este ligante minimiza las interacciones no específicas con proteínas o moléculas hidrofóbicas . Los métodos de la presente invención implican técnicas de acoplamiento estándar entre agentes rematantes y cadenas poliméricas. Estas técnicas de acoplamiento dependerán de los agentes rematantes seleccionados y pueden implicar condiciones de reacción en solución o en estado sólido. Dichas técnicas y condiciones podrían ser fácilmente determina-das por un experto en la técnica y son similares, si no iguales, a las condiciones de polimerización. Alternativamente a un agente rematante, la plantilla polimérica puede ser funcionalizada terminalmente oxidando el catalizador con oxígeno u otros reactivos oxidantes y formando un aldehido en el extremo del esqueleto de la plantilla polimérica. Por ejemplo, la plantilla polimérica puede ser simplemente expuesta al aire o colocada bajo una atmósfera de oxígeno a temperatura y presión ambiente. Los reactivos funcionalizantes (es decir, el com-puesto del que deriva el grupo funcional terminal si el catalizador y/o el agente rematante incluyen un grupo reactivo latente, o si el polímero incluye un grupo aldehido terminal) pueden incluir una amplia variedad de moléculas que confieren propiedades útiles al polímero resultante (por ejemplo, fluo-rescencia) , según se ha discutido anteriormente para el grupo R6. Los métodos de la presente invención implican técnicas de acoplamiento estándar entre reactivos funcionalizantes y polímero (o plantillas poliméricas) . Estas técnicas acoplantes dependerán de los grupos reactivos latentes seleccionados y pueden implicar condiciones de reacción en solución o en estado sólido dependiendo de la solubilidad de la plantilla polimérica. Dichas técnicas y condiciones pueden ser fácilmente determinadas por un experto en la técnica. Los polímeros resultantes tienen la siguiente fórmula general : Fórmula VII donde "BB" representa la unidad repetitiva del esqueleto, que puede ser cíclica o acíclica y puede ser igual o diferente en una disposición aleatoria o de bloque; R1 y R2 son cada uno independientemente entre sí y de otros R1 y R2 en diferentes unidades repetitivas, hidrógeno o un grupo orgánico que contiene una funcionalidad pendiente deseada; R3 y R4 son cada uno independientemente hidrógeno o un grupo orgánico derivado del catalizador de metal y carbeno, y R6 y R7 son cada uno independientemente hidrógeno o un grupo orgánico derivado del agente rematante, y n es el número medio de unidades monoméricas repetitivas, que pude variar para controlar la razón de monómero a catalizador. R1 y R2 pueden ser iguales o diferentes a R1 y R2, respectivamente, en los mismos o en diferentes tipos de unidades repetitivas. Al menos uno de R4, R5, R6 o R7 incluye un grupo reactivo latente o un grupo funcional no reactivo, es decir, un grupo funcional terminal. Típicamente, n es al menos 2 y no más de aproximadamente 10.000, pero no existe prácticamente ningún límite. Los polímeros de esta invención incluyen aquéllos en los que n es menor o igual a aproximadamente 50, aquéllos en los que n varía entre aproxi-madamente 50 y aproximadamente 200, aquéllos en los que n varía entre aproximadamente 100 y aproximadamente 1.000. Tal como se ha discutido antes, la ROMP puede proporcionar polímeros de longitudes medias variables (es decir, de grado va-riable de polimerización, "DP" ) , dependiendo de las razones monómero a catalizador de la ROMP (es decir, iniciador) . Se hace referencia a la longitud de todos los polímeros aquí descritos como la longitud predicha por la razón monómero a iniciador usada en la reacción de polimerización. Preferiblemente, al menos uno de R1 y R2 incluye una amina protegida o un éster activado (es decir, uno que reacciona en condiciones suaves sin necesitar agentes acoplantes, tal como HATU (hexafluorofosfato de O- (7-azabenzotriazol-1-il) -1,1,3, 3 -tetrametiluronio) ) . Se ilustran ejemplos de plantillas poliméricas que tienen diferentes esqueletos en la Figura 9. Un ejemplo preferido de la plantilla polimérica basada en la plantilla de norborneno tiene la siguiente estructura general : Fórmula VIII donde Y, R1, R2, R4, R5, R6, R7 y n son como se ha definido antes. Preferiblemente, al menos uno de R1 y R2 incluye una amina protegida o un éster activado. Una plantilla polimérica preferida es mostrada en la Figura 2 como Compuesto 3. Preferiblemente, al menos uno de R4, R5, R6 y R7 incluye funcionalidad derivada de un agente rematante funcionalizado y/o un catalizador de metal y carbeno funcionalizado. Otro ejemplo preferido de la plantilla polimérica tiene la siguiente estructura general Fórmula IX donde BB, R1, R2, R4, R5, R6, R7 y n son como se ha definido antes y cada Z es independientemente H, OH, SH, X (un haluro tal como F, Br, I, Cl) o N(R8)2 (donde cada R8 es independientemente H o un grupo orgánico) . Al menos uno de R4, R5, R6 o R7 incluye un grupo reactivo latente o un grupo funcional no reactivo. En las definiciones de los grupos "R" tal como se utilizan aquí, el término "grupo orgánico" significa un grupo hidrocarbonado (con elementos eventuales distintos de carbono e hidrógeno, tales como oxígeno, nitrógeno, azufre, fósforo, germanio, estaño, boro y silicio, que pueden estar en forma de varios grupos funcionales) que se clasifica como un grupo alifático, un grupo cíclico o una combinación de grupos alifáticos y cíclicos (por ejemplo, grupos alcarilo y aralquilo) . En el contexto de la presente invención, los grupos or-gánicos son aquéllos que no interfieren con la formación de la plantilla polimérica o del polímero resultante, a menos que incluyan los grupos reactivos necesarios. El término "grupo alifático" significa un grupo hidrocarbonado lineal o ramificado saturado o insaturado. Este término es utilizado para incluir grupos alquilo, alquenilo y alquinilo, por ejemplo. El término "grupo alquilo" significa un grupo hidrocarbonado lineal o ramificado saturado, incluyendo, por ejemplo, metilo, etilo, isopropilo, t-butilo, heptilo, dodecilo, octadecilo, amilo, 2-etilhexilo y similares. El término "grupo alquenilo" significa un grupo hidrocarbonado lineal o ramificado insaturado con uno o más dobles enlaces carbono-carbono, tal como un grupo vinilo. El término "grupo alquinilo" significa un grupo hidrocarbonado lineal o ramificado insaturado con uno o más triples enlaces carbono-carbono . El término "grupo cíclico" significa un grupo hidrocarbonado de anillo cerrado, que se clasifica como un grupo alicíclico, un grupo aromático o un grupo heterocíclico (que puede ser aromático o alifático) . El término "grupo alicíclico" significa un grupo hidrocarbonado que tiene propiedades que se asemejan a las de los grupos alifáticos. El término "grupo aromático" o "grupo arilo" significa un grupo hidrocarbonado aromático mono- o polinuclear. El término "grupo heterocíclico" significa un hidrocarburo de anillo cerrado en donde uno o más de los áto-mos en el anillo son un elemento distinto del carbono (por ejemplo, nitrógeno, oxígeno, azufre, etc.). Se anticipa la substitución en los grupos orgánicos de los complejos de la presente invención. Como medio de simplificación de la discusión y recitación de cierta termi-nología usada en toda esta solicitud, los términos "grupo" y "resto" son usados para diferenciar entre especies químicas que permiten la substitución o que pueden estar substituidas y aquéllas que no lo permiten o no que no pueden estar así substituidas. Así, cuando se usa el término "grupo" para des-cribir un substituyente químico, el material químico descrito incluye el grupo no substituido y ese grupo con átomos de O, N, Si o S, por ejemplo, en la cadena (como en un grupo alcoxi) , así como grupos carbonilo u otra substitución convencional . Cuando se usa el término "resto" para describir un compuesto o substituyente químico, sólo se pretende incluir un material químico no substituido. Por ejemplo, la frase "grupo alquilo" pretende incluir no sólo substituyentes alquílicos hidrocarbonados saturados de cadena abierta puros, tales como metilo, etilo, propilo, t-butilo y similares, sino también substituyentes alquilo portadores de otros substituyentes conocidos en la técnica, tales como hidroxi, alcoxi, alquilsulfonilo, átomos de halógeno, ciano, nitro, amino, carboxilo, etc. Por lo tanto, "grupo alquilo" incluye grupos éter, haloalquilos, nitroalquilos, carboxialquilos, hidroxialquilos, sulfoalquilos, etc. Por otra parte, la frase "resto alquilo" se limita a la inclusión de substituyentes alquilo hidrocarbonados saturados de cadena abierta puros, tales como metilo, etilo, propilo, t-butilo y similares. Para las estructuras aquí ilustradas, para cada grupo R que puede incluir un grupo orgánico, que puede ser de un tamaño significativamente grande, por ejemplo del orden de 10.000 átomos de carbono, se aplica lo siguiente. Preferiblemente, los grupos orgánicos de R1 y R2 son cada uno indepen-dientemente un grupo orgánico C?-C50oo, más preferiblemente un grupo orgánico C!-C25oo, incluso más preferiblemente un grupo orgánico C?-C?0oo Y, más preferiblemente, un grupo orgánico Ci-Cíoo, que incluye péptidos, proteínas, carbohidratos, quelantes de metales, productos naturales, etc. Preferiblemente, los grupos orgánicos de R4, R5, R6 y R7 son cada uno independientemente un grupo orgánico Ci-Cioooo, más preferiblemente un grupo orgánico C?-C6ooo, incluso más preferiblemente un grupo orgánico C?-C?0oo y, más preferiblemente, un grupo orgánico Ci-C50o, incluyendo anticuerpos, ácidos nucleicos, péptidos, pro-teínas, carbohidratos, quelantes de metales, mareajes fluorescentes, enzimas, soportes sólidos, etc. Preferiblemente, los grupos orgánicos de R3, R8 y R9 son cada uno independientemente un grupo orgánico C?-C20, más preferiblemente un grupo alquilo C1-C10 y, más preferiblemente, un grupo alquilo C1-C3. Los métodos de esta invención pueden ser empleados para generar librerías de agrupaciones multivalentes, incluyendo librerías en las que las agrupaciones multivalentes tienen fórmulas VII, VIII y IX. En una librería dada, las agrupaciones componentes (miembros de la librería) abarcan un MJ S¿¡¿Mt'.. . rango seleccionado de variación estructural. Por ejemplo, en una librería dada todas las agrupaciones miembros podrían ser sintetizadas para tener aproximadamente la misma longitud y llevar diferentes grupos funcionales pendientes o terminales. En otro ejemplo, se podría construir una librería con miembros que tuvieran una variación seleccionada en longitud con los mismos grupos funcionales pendientes o terminales. En aún otro ejemplo, los miembros de la librería podrían ser diseñados para abarcar un rango de densidades de grupos funcionales y de distribuciones de grupos funcionales. La densidad de grupos funcionales es más generalmente el número de grupos funcionales/polímero, perro puede representar diferentes distribuciones de grupos funcionales, por ejemplo aleatoriamente distribuidos por el polímero, en bloques en los que un número definido de monómeros adyacentes están substituidos con el mismo grupo funcional, con los grupos funcionales espaciados a distancias seleccionadas los unos de los otros, o con diferente posicionamiento y espaciamiento relativos de los diferentes grupos funcionales. Los métodos de esta invención per-miten el control de toda la longitud del polímero de la funcionalidad terminal y del tipo de grupos funcionales, de la densidad y de la distribución. Las librerías están compuestas por una pluralidad de agrupaciones multivalentes que tienen diferentes estructu-ras que están definidas (es decir, no aleatorias) en al menos una característica estructural. Por ejemplo, una librería puede contener miembros con una densidad definida de grupos funcionales (grupos funcionales/monómeros, pero en donde los grupos funcionales están aleatoriamente distribuidos por los polímeros. Una librería está típicamente compuesta por 10 ó más agrupaciones multivalentes estructuralmente distinguibles. Las librerías preferidas están compuestas por aproximadamente 50 a aproximadamente 200 agrupaciones multivalentes estructuralmente distinguibles.

Las librerías de esta invención son útiles para estudiar, seleccionar e identificar agrupaciones multivalentes que tienen una funcionalidad deseada, que puede ser una funcionalidad biológica. La invención también proporciona kits para la síntesis de agrupaciones multivalentes. Un kit puede incluir plantillas poliméricas, con o sin reactivos funcionalizantes, pero preferiblemente con instrucciones para la unión de los grupos funcionales pendientes y, eventualmente, los reactivos necesarios para la unión. Las instrucciones dependerán de los grupos reactivos latentes presentes en las plantillas poliméricas. Los kits pueden también incluir agentes rematantes para funcionalizar un extremo de una cadena polimérica. Para demostrar la utilidad de la estrategia de modificación post-sintética del método de la presente invención, se preparó una serie de materiales NHS-substituidos que diferían en longitud media (grado de polimerización, "DP" ) , usando tres razones de monómero a iniciador (10:1, 25:1 y 50:1) (Ruta de Reacción A, Figura 2). Todas las reacciones de polimerización procedieron eficientemente, consumiendo todo el monómero. Los epitopos de mañosa fueron unidos por tratamiento de los esqueletos oligoméricos activados con amina para obtener una serie oligomérica. Se generaron materiales análogos por el método convencional en condiciones de polime-rización en emulsión, empleando las mismas razones de monómero a catalizador de ROMP (Ruta de Reacción B, Figura 2) . No se detectaron variaciones en las propiedades físicas macroscópicas de los oligómeros preparados por los dos métodos y no había diferencias observables por espectroscopia de ""?-RMN. Estos resultados indican que el procedimiento PSM es eficiente. Las longitudes relativas de los materiales generados por cada método fueron determinadas usando cromatografía de permeación por gel ("GPC"). Los polímeros carbohidratados 6 y 7 (Figura 2) fueron acetilados para convertirlos en derivados solubles orgánicos, que pueden ser más fácilmente evaluados por GPC. Los análisis de los materiales sugerían que los polímeros generados en condiciones de emulsión son ligeramente más cortos que los producidos por modificación post-polimerización (Figura 10) . Cada método, sin embargo, proporciona una correlación lineal entre la longitud polimérica y las razones de monómero a iniciador (M:I), una indicación de que las reacciones de polimerización son vivas. Así, el protocolo de PSM según la presente invención puede ser usado pa-ra preparar montajes multivalentes que varían en longitud. Los datos de la GPC sugieren también que los polímeros más cortos hechos mediante cada método están dentro de aproximadamente 3 unidades de longitud unos de otros, mientras que los polímeros más largos están dentro de aproximadamente 12 unidades. La discrepancia en las longitudes de los polímeros en emulsión y PSM destaca las diferencias en las propiedades físicas de los monómeros que dan lugar a variaciones en las reacción de polimerización. El nuevo procedimiento PSM de la presente invención es importante, ya que se puede unir un am-plio rango de diferentes elementos de reconocimiento a un solo andamio para dar lugar a materiales con idénticos esqueletos. Dichas substancias facilitarán la determinación de las relaciones estructura/función. El método de la presente invención fue además in-vestigado comparando la actividad biológica de los oligómeros derivados del nuevo procedimiento con la de los preparados por la aproximación convencional. Los polímeros substituidos con mañosa fueron diseñados para interaccionar con la bien estudiada lectina Concanavalina A (Con A) (Goldstein y col . , Carbohydrate Specificity of Concanavalin A; Bittiger, H. y Schnebli, H.P., Ed. ; John Wiley & Sons, Ltd.: Londres, 1976; Coll., pp . 55-65) . Con A es un homotetrámero a pH 7 que puede facilitar la aglutinación de las células rojas de la sangre por interacciones simultáneas con los residuos de mañosa que ..... JÍ,?¡ J.U. hay sobre las superficies de diferentes células. La capacidad de los ligandos carbohidratados solubles para inhibir la aglutinación celular puede ser medida. Las eficacias de los oligómeros derivados por ROMP en un ensayo de inhibición la Con A dependen de sus longitudes (Kanai y col., J". Am . Chem. Soc. , 119, 9931-9932 (1997), y Mann y col., J. Am. Chem . Soc . , 120, 10575-10582 (1998)). Los ensayos de hemaglutinación (Osawa y col., Methods Enzymol . , 28, 323-327 (1972)), por lo tanto, proporcionan un formato conveniente para deter-minar las actividades de los materiales generados por los dos métodos diferentes de preparación. Las potencias inhibitorias de la Con A de diferentes materiales generados por los protocolos convencional y PSM fueron comparadas sobre una base de residuos de sacáridos usando a-metilmanopiranósido monovalente como patrón. Dentro de una serie simple, cualquiera de los polímeros 6 ó 7, los oligómeros más potentes, eran los producidos usando una razón de monómero a iniciador de 50:1 (Figura 11) . Este resultado es consistente con los estudios previos, que revelaron que los inhibidores más potentes son los que pueden abarcar dos sitios de unión a sacárido sobre la Con A (Kanai y col., J". Am. Chem. Soc . , 119, 9931-9932 (1997), y Mann y col., J". Am. Chem. Soc , 120, 10575-10582 (1998)). A cada razón M:I, los oligómeros PSM eran ligeramente más activos que los prepara-dos en condiciones de emulsión. Por ejemplo, se vio un aumento de 400 veces sobre el a-metilmanopiranósido para el polímero derivado de la razón de monómero a iniciador de 50:1 en la polimerización en emulsión, pero se vio un aumento de 550 veces para el material relacionado preparado en condiciones de modificación post-polimerización. La magnitud de los efectos observados con los polímeros de norborneno imida mañosa previamente estudiados era mayor que la observada aquí . Los presentes resultados son similares a los observados para los polímeros de norborneno imida mañosa reducidos. Esto puede ser debido a un mayor coste entrópico en la orientación del esqueleto actual, que es menos rígido que la plantilla bicíclica de norborneno imida. Dado que oligómeros más largos son inhibidores más activos, este hallazgo es consistente con los datos de la GPC, que indican que la longitud media del oligómero PSM sobrepasa a la del material generado en las condiciones de polimerización en emulsión. En conjunto, estos datos indican que el protocolo PSM puede ser usado para sintetizar materiales biológicamente activos con potencias que se corresponden o sobrepasan a las resultantes de substancias generadas por las aproximaciones ROMP estándar. Para estudiar la estrategia de introducción de funcionalidad terminal, se diseñó el agente rematante bifuncional 18 (Figura 12) para que incorporar un ácido carboxíli-co enmascarado en el extremo de cadenas poliméricas vivas. La molécula blanco estaba constituida por un enol éter unido a un ácido carboxílico protegido a través de un ligante de etilenglicol. El grupo protector de ácido carboxílico ß-trimetilsilil (TMS) etilo sirve a dos fines. En primer lugar, la señal distintiva del grupo TMS en el espectro de ^?-RMN proporciona una estimación de la eficacia rematante y, en segundo lugar, el grupo ß-TMS-etilo puede ser eliminado en condiciones que no afectan a los epitopos de reconocimiento de carbohidratos sulfatados empleados en este estudio. Más aún, los ácidos carboxílicos pueden ser activados para mayor funcionalización con facilidad, selectivamente y con una elevada eficacia. El agente rematante blanco 18 podría ser fácilmente montado a partir de trietilenglicol en seis etapas. La capacidad del enol éter 18 para finalizar las reacciones ROMP fue evaluada en reacciones de tres monómeros con diferentes propiedades. Para determinar la reactividad de 18 en condiciones estándar, se sometió el monómero no polar 11 a ROMP y se introdujo un exceso del compuesto 18 para finalizar la reacción (Figura 12) . A partir de los datos de 1H- * i I ü^-f RMN, la comparación de la integración de los protones fenílicos incorporados a partir del catalizador con la de los protones del grupo TMS reveló que aproximadamente un 80% de las cadenas poliméricas resultantes estaban rematadas para dar 5 lugar al material 19. Los intentos iniciales para marcar terminalmente polímeros portadores de substituyentes altamente polares revelaron que la reacción rematante era menos efectiva para estos substratos. Concretamente, cuando se usaron las condiciones de emulsión requeridas para la oligomerización del compuesto polar 13, la finalización de la reacción con enol éter 18 dio como resultado 21a, el cual fue producido con una eficacia rematante útil, pero más modesta (30%) (Figura 12) . Para minimizar las complicaciones que surgen de los procedimientos de transferencia de fases, se usó una estrate- 15 gia alternativa para generar el polímero funcionalizado polar 21b. Se pueden montar polímeros que contengan esteres de N- hidroxisuccinimida, tales como 20, en solventes orgánicos usando ROMP. La posterior modificación post-polimerización mediante tratamiento de los materiales resultantes con un nu- 20 cleófilo genera un nuevo polímero substituido. Como con los productos de la reacción del éster metílico 11, el polímero 20 obtenido de la reacción de 13 puede ser terminado con el agente rematante 18 en eficacias de aproximadamente el 80%. El polímero 20 podría ser entonces acoplado a un resto de sa- 25 cárido que contiene amina para dar el derivado 3,6- disulfogalactosa 21b. Tras la purificación del material 21b, los datos espectroscópicos de RM? de los polímeros 21a y 21b eran virtualmente indistinguibles, excepto por las diferencias en las intensidades de las señales que surgían del agen- 30 te rematante. Se cree que las condiciones de reacción homogénea en fase simple dan lugar a mayores rendimientos de remate que las condiciones de polimerización en emulsión, ya que las solubilidades de los materiales de partida y de los productos tienen una fuerte influencia sobre las velocidades relativas yr?ilÍy?^^A?M¡ÍiL?ííaílá? de varias etapas en el montaje y terminación de polímeros. La importancia de los fenómenos de reconocimiento multivalente en biología y la utilidad de las agrupaciones multivalentes en la elucidación de las características de di-chos procesos han acelerado el desarrollo de métodos sintéticos para generar ligandos multidentados equipados con grupos informadores. Por ejemplo, la copolimerización de acrilamida puede incorporar elementos de reconocimiento de sacáridos y grupos informadores y se ha usado esta estrategia para des-arrollar materiales para el estudio de las interacciones proteína-carbohidrato. Alternativamente, se han generado polímeros que poseen grupos informadores acoplando un mareaje funcional deseado a un esqueleto polimérico preformado, bien usando un solo equivalente del mareaje, bien uniendo un grupo informador a cada monómero antes del acoplamiento al andamio multivalente. Ninguna de las rutas sintéticas descritas permite el control de la longitud de la cadena polimérica o del número de grupos informadores incorporados en la agrupación multivalente . Además de añadir un alqueno rico en electrones, la cadena polimérica puede ser rematada con un grupo funcional a través de la oxidación del metal-carbeno terminal. Por ejemplo, la exposición de polímeros en los que el centro de metal-carbeno activo está presente al final de la cadena en crecimiento al oxígeno da lugar a un aldehido terminal en la cadena del polímero. Esta estrategia fue explorada paralelamente al método que se acaba de describir con enol éter 11. Se sometió el monómero de galactosa sulfatada 23 al catalizador de ROMP 14 y, tras consumirse el monómero, se abrió la reacción al aire para obtener el polímero 25 (Figura 8) . Esta aproximación se basa en el remate eficaz co oxígeno y la posterior formación de hidrazona, hidrazida o hidroxilamina. Este método usa menos etapas para obtener el producto final; sin embargo, la eficacia rematante es más difícil de monito- _--» . .LA rizar que en el caso de los polímeros 19, 20 y 21a y 21b. Para demostrar la utilidad del esquema sintético de la presente invención para la incorporación selectiva de un solo informador, se acoplaron neoglicopolímeros marcados 5 en el extremo a un grupo informador fluorescente a través del mareaje terminal. Estos neoglicopolímeros fluorescentes fueron diseñados para permitir los estudios de las interacciones de los polímeros con la L-selectina de la superficie celular. La L-selectina, un miembro de la familia de las selectinas de las moléculas de adhesión celular, facilita el reclutamiento de las células blancas de la sangre a los sitios de lesión tisular. Determinados neoglicopolímeros sulfatados que contienen sacáridos relacionados con 21a son potentes inhibidores de la función de las selectinas. Se cree que estos neo- 15 glicopolímeros inhiben la función proteica uniéndose a la L- selectina sobre la superficie celular. Transformando 21a y 25 en ligandos informadores 22 y 27, respectivamente, se pudo investigar directamente la unión de los neoglicopolímeros a la L-selectina de la superficie celular. 20 La etapa inicial en la generación de 22 implicaba el desenmascaramiento del ácido carboxílico por saponificación del éster ß-trimetilsililetílico (Figura 12) . Se unió un derivado de fluoresceína (5- ( (5- aminopentil) tioureidil) fluoresceína o fluoresceína cadaveri- 25 na) a través de formación de enlaces amida. Se aisló el conjugado resultante por cromatografía de exclusión por tamaños y de intercambio catiónico para obtener el oligómero modificado con fluoresceína 22. El polímero 25 pudo ser directamente sometido a 5- ( ( (2- (carbohidrazino) - 30 metil) tio) acetil) aminofluoresceína, un derivado hidrazina de la fluoresceína, 26 para obtener el polímero 27 marcado fluorescentemente deseado (Figura 13) . Se examinó la capacidad de los polímeros 22 a 27 para unirse a células Jurkat (una línea humana de leucemia aguda de células T) que exhiben L-selectina usando microscopía fluorescente (Figura 12) . Con fines comparativos, se marcaron las células con anticuerpo conjugado con fluoresceína para la L-selectina. Tanto el anticuerpo como el polímero se 5 unieron a las células en sitios localizados, produciendo patrones de fluorescencia punteada similares. Los patrones observados eran consistentes con las observaciones de que la L- selectina no se distribuye aleatoriamente sobre la superficie del leucocito, sino que se localiza en regiones específicas de la célula denominadas microvellosidades. La unión dependía de la presencia de L-selectina en la superficie celular, ya que no se vio que el polímero fluorescente o el anticuerpo anti-L-selectina se unieran a células deficientes en L- selectina (una línea celular HL60, datos no mostrados) . Se vieron resultados similares usando el polímero rematado con aldehido 27 (Figura 14) . Estos resultados sugieren que los neoglicopolímeros se unen específicamente a la L-selectina sobre la superficie celular. Se esperaría una tinción general de la super- 20 ficie celular si el ligando 22 se uniera de manera no específica. Más aún, otros estudios de microscopía sugieren que las actividades biológicas significativas de estos imitadores de glicoproteínas están mediadas a través de contactos multivalentes. Estos datos destacan la utilidad de las sondas 22 y 27 para visualizar fenómenos de reconocimiento de la superficie celular. Los objetos y ventajas de esta invención son además ilustrados mediante los siguientes ejemplos, pero no se ha de considerar que los materiales particulares y las canti- 30 dades de los mismos que aparecen en estos ejemplos, así como otras condiciones y detalles, limitan indebidamente esta invención. EJEMPLOS Materiales : Se obtuvo el dicloruro de bis (triciclohexilfosfina) bencilideno-rutenio (IV) de Stre Chemicals, Inc. (Newburyport , MA) . Se compró la 5- ( (5-aminopentil) tioureidil) fluoresceína (fluoresceína cadaverina) a Molecular Probes (Eugene, OR) . El medio de cultivo celular RPMI 1640 y el suero de ternera fetal eran de Gibco BRL (Gaithersburg, MD) . La penicilina, la estreptomicina, la L-glutamina y el piruvato de sodio eran de Sigma (St. Louis, MO) . Se compró el anticuerpo anti-L-selectina marcado con fluoresceína (DREG-56) a Pharmingen (San Diego, CA) . VectaS-hield era de Vector Laboratories (Burlingame, CA) . Todos los demás reactivos fueron comprados a Aldrich Chemical Co., Milwaukee, Wl , a menos que se especifique algo diferente. Todos los solventes fueron comprados a Aldrich Chemical Co. o a Fisher Scientific, Pittsburgh, PA. Métodos generales : Todas las reacciones no acuosas fueron llevadas a cabo en material de vidrio secado en horno bajo una atmósfera de nitrógeno. Los solventes de reacción fueron destilados a partir de sodio/benzofenona (tetrahidrofurano) , hidruro de calcio (diclorometano, trietila-mina, dicloroetano) o bajo presión reducida sobre cribas moleculares de tipo 4Á (DMSO). Se usó 1 , 2 -dicloroetano (DCE) de grado ACS según se recibió de Aldrich Chemical Co., Milwaukee, Wl . Los solventes usados en las reacciones de polimerización fueron desoxigenados con un mínimo de tres ciclos de congelación-bomba-descongelación antes de su uso. Se usaron agua destilada desionizada (dd o MQ) y tubos de diálisis de 500 MWCO (corte de peso molecular) (Fisher Scientific, Pittsburgh, PA) para la purificación de los polímeros. Los solventes para la cromatografía eran de grado ACS; se destilaron diclorometano, acetona y hexanos. Se recristalizó bromuro de dodeciltrimetilamonio ("DTAB") a partir de acetona. Las reacciones fueron monitorizadas por cromatografía en capa fina ("TLC") en Gel de Sílice 60 prerrevestido de Merck F254 (VWR Scientific, So. Plainfield, NJ) , visualizando con luz ultra-violeta, tinción de p-anisaldehído (15 ml de p-anisaldehído, 10 ml de ácido acético, 10 ml de ácido sulfúrico, 350 ml de etanol) o tinción de permanganato de potasio (3 gramos de KMn04, 20 gramos de K2C03, 5 ml de NaOH acuoso al 5%, 200 ml de agua) . Se llevó a cabo la cromatografía en columna en Gel de Sílice 60 de Merck (230-400 mallas, Scientific Adsorbents Inc., Atlanta, GA) usando hexanos y diclorometano de grado de reactivo destilado y acetato de etilo, metanol y cloroformo de grado ACS. Al manipular compuestos sensibles a ácidos, se neutralizó el cloroformo y el diclorometano por filtración a través de alúmina básica inmediatamente antes de su uso. Se registraron los espectros de infrarrojos en un espectrómetro FTIR Mattson. Se obtuvieron los datos del espectro de masas por Espectrometría de Masas Iónica Secundaria Líquida ("LSIMS") en un Espectrómetro de Masas Micromass Autospec (matriz de ácido 3-nitrobenzoico con adición de yoduro de sodio (3-NBA + Nal)). Se registraron los espectros de 1H y 13C RMN en un espectrómetro Bruker AC-300 y se dan con respecto a picos de solvente residual (CDC13 : 1H: d 7,24, 13C : d 77,0; D20: 1?L : d 4,67) o a una referencia interna de tetrametilsila-no en CDC13 (XH: d 0,00) . Los solventes de RMN fueron obtenidos de Cambridge Isotope Laboratories, Inc., Andover, MA. Se supuso que los acoplamientos """H^H eran de primer orden y se da la multiplicidad de picos como s (singlete) , d (doblete) , t (triplete) , c (cuartete) , m (multiplete) o b (amplio) . Preparación de éster N-hidroxisuccinimida de ácido biciclo [2.2.1] hept-5-en-exo-2-carboxílico, Compuesto 1 en la Figura 2: Se agitaron ácido norborneno (151,8 mg, 1,1 mmol, preparado según el método de Ver ?ooy y col., J". Am . Chem. Soc. , 77, 3583-3586 (1955)), N-hidroxisuccinimida (172,5 mg, 1,49 mmol, obtenida de Aldrich) y EDCI (clorhidrato de 1- (3 -dimetilaminopropil) -3-etilcarbodiimida, 278,1 mg, 1,45 mmol, obtenido de Aldrich) en CH2C12 (3,6 ml, obtenido de . - ..fci.Uti Aldrich) durante la se agitó durante la noche bajo nitrógeno. Se eliminó el solvente a presión reducida y se sometió el residuo a cromatografía instantánea en gel de sílice con CH2C12 como solvente según el procedimiento de Still, J". Org. Chem. , 43 , 2923 (1978). Se aisló un sólido blanco (186,7 mg, 0,88 mmol). Rendimiento 80%. XH RMN (300 MHz, CDC13) : d 6,19 (dd, «7=5,7, 2,9 Hz, 1H) , 6,17 (dd, J= 5,7, 3,1 HZ, 1H) , 3,25 (s amplio, 1H) , 2,98 (s amplio, 1H) , 2,82 (d, J=l,65 Hz, 2H) , 2,49 (ddd, J=10,48, 4,78, 1,65 Hz, 1H) , 2,03 (ddd, J=ll,95, 4,23, 4,2 Hz, 1H) , 1,55-1,41 (m, 3H) . IE m/z 235,01847 (235,2395, cale, para C12H?3N04] . Polimerización de éster N-hidroxisuccinimida de ácido biciclo [2.2.1] hept-5-en-exo-2-carboxílico, Compuesto 3 en la Figura 2 (n = 10): Se disolvió el ?-hidroxiéster (98,3 mg, 0,425 mmol) 1 en 1, 2 -dicloroetano (DCE) (2,1 ml) . A esto se añadió una solución de [ (Cy) 3P] 2Cl2Ru=CHPh (Strem, ?ewbury-port, ?H) en DCE desoxigenado (35 mg en 2,1 ml) . Se agitó la reacción bajo nitrógeno a temperatura ambiente durante cuarenta y cinco minutos. La reacción apareció completa por TLC y se añadió un exceso de etil vinil éter para el remate. Se filtró la reacción a través de un pequeño tapón de gel de sílice usando CH2C12 como eluyente. Se eliminó el solvente a presión reducida para obtener un sólido marrón (96,8 mg) , el cual fue utilizado sin mayor purificación. Rendimiento 98%. ^-RM? (300 MHz, CDCl3) : d 7,3 (m) , 5,7-5,2 (m) , 3,5-0,90 (m amplio) . Preparación de aminoetil -a-D-manopiranósido, Compuesto 4, Figura 2: Se preparó el azidoetilmanósido según el procedimiento de Chernyak y col., Carbohyd . Res . , 223 , 303-309 (1992) con modificaciones menores. Se substituyó con azi-doetanol el alcohol alílico y se usaron condiciones de glico-sidación como las descritas por Lee y col., Carbohyd . Res . , 37, 193-201 (1974) . Se redujo el azidoetilmanósido con cata-lizador de Pearlmann (Aldrich) en una mezcla 1:1 de metanol: agua (una modificación de un procedimiento mencionado anteriormente) para dar 4. Preparación de aminoetil -a-D-manopiranosilbi-ciclo [2.2.1] hept-5-en- exo-2 -carboxamida, Compuesto 5, Figura 2 : Se preparó el monómero de mañosa 5 mediante el éster pentafluorofenílico y el Compuesto 4 por un procedimiento previamente descrito en Manning y col., Tetrahedron, 53 , 11937-11952 (1997). ^-RMN (300 MHz, D20) : d 6,19 (dd, J=5,7, 2,9 Hz, 1H) , 4,694 (d, J=l,65 Hz, 1H) , 3,76 (dd, .7=2,94, 1,83, 1H) , 3,70 (dt, J=12,32, 1,9 Hz, 1H) , 3,64-3,41 (m, 6H) , 3,29 (m amplio, 1H) , 2,76 (m amplio, 1H) , 2,03 (m, 1H) , 1,57 (m, 1H) , 1,35-1,17 (m, 3H) . IE m/z 343,1627 [343,377, cale, para C16H25N07] . Acoplamiento al producto de la polimerización del éster N-hidroxisuccinimida de ácido biciclo [2.2.1] hept-5-en-exo-2 -carboxílico, Compuesto 6 en la Figura 2 (n = 10) : Se agitaron aminoetilmanósido 4 (16,0 mg, 0,0788 mmol), N-metilmorfolina (7,7 µl , 0,0702 mmol, Aldrich) y polímero 3 (n = 10, 15,2 mg, 0,0647 mmol) en 0,35 ml de dimetilformamida (DMF) durante 24 horas. Se añadió diisopropilcarbodiimida (DIC, 11 µl, 0,0638 mmol, Aldrich) y se continuó agitando durante la noche. Se eliminó la DMF a presión reducida y se lavó el sólido resultante tres veces con 1-2 ml de CH2C12 y tres veces con 1-2 ml de etanol. Se secó el sólido y se añadieron (trimetilsilil) diazometano (TMSCH?2, 35 µl , 0,0702 mmol, Aldrich) y metanol (350 µl) y se agitó la reacción durante la noche. Se apagó la reacción por adición de agua y se eliminó el solvente a presión reducida. Se disolvió el sólido en agua MQ y se puso en un tubo de diálisis. Se dializó la muestra (48 horas, cuatro cambios de agua, 1 L cada vez) para eliminar las impurezas de la reacción de acoplamiento y el 4 no reaccionado. Se filtró la solución a través de un filtro de 0,25 mieras y se eliminó el solvente a presión reducida para obtener un sólido de color tostado (15,4 mg, 71%). ^?-RMN (300 MHz, D20) : d 7,3 (m amplio, 0,278H), 5,5-4,9 (amplio, 2H) , 4,0-3,0 (m amplio, 14H) , 2,5-2,15 (m amplio, 2H) , 1,9-1,4 (amplio, 2H) , 1,1-0,9 (amplio, 2H) . Polimerización de aminoetil-a-D-manopirano-silbiciclo [2.2.1] hept-5-en-exo-2 -carboxamida, Compuesto 7 en la Figura 2 (n = 10) : Se disolvieron el monómero de mañosa 5 (19,6 mg, 0,0571 mmol) y DTAB (bromuro de dodeciltrimetilamo-nio, 29 mg, 0,0933 mmol, Aldrich) en agua (182 µl) y se des-gasificó. Se añadió DCE (181 µl) al catalizador de rutenio 2 (6,1 mg) y se añadió esta solución (91 µl correspondientes a 4,7 mg, 0,00571 mmol de 2) a la solución de 5. Ser agitó la reacción a temperatura ambiente durante treinta minutos y se calentó después a 60 °C durante 4 horas. Una vez se hubo com-pletado la reacción por TLC, se añadió un exceso de etil vinil éter para apagar el carbeno activo. Se evaporó la mezcla de reacción a presión reducida y se lavó el sólido con diclorometano y etanol . Se disolvió el polímero en agua MQ y se dializó frente a 1 L de agua durante 2 días, cambiando el agua cada 12 horas. Se extrajo la solución del tubo de diálisis y se filtró a través de un filtro de 0,25 mieras, obteniéndose, tras la eliminación del solvente a presión reducida, un sólido de color tostado (18,2 mg) . Rendimiento 90%. XH-RMN (300 MHz, D20) : d 7,3 (m amplio, 0,238H); 5,5-4,9 (am-plio, 2H) , 4,0-3,0 (m amplio, 14H) , 2,5-2,15 (m amplio, 2H) , 1,9-1,4 (amplio, 2H) , 1,1-0,9 (amplio, 1H) . Síntesis del agente rematante sobre un soporte sólido (Figura 8B-I) Se combinaron ácido 4-pentenoico (1,0 ml , 9,8 mmol, 1 eq.), K2C03 (6,78 g, 49 mmol, 5 eq.), bromuro de bencilo (1,4 ml, 11,8 mmol, 1,2 eq.) y yoduro de tetrabutilamonio (0,254 g, 0,686 mmol, 0,07 eq.) en aproximadamente 50 ml de acetona seca. Se agitó la reacción bajo nitrógeno durante 3 horas. La TLC (hexanos/acetato de etilo 9:1) mostró que no ** JLJ quedaba más material de partida. Se filtró la reacción y se eliminó el solvente a presión reducida. Se disolvió el residuo en acetato de etilo y se lavó secuencialmente con HCl 1 M, NaHC03 saturado y salmuera. Se secó la capa orgánica con MgS04 y se concentró a presión reducida. Se empleó cromatografía instantánea usando un solvente de hexanos/acetato de etilo 30:1 (hasta eluir el bromuro de bencilo) a hexanos/acetato de etilo 1:1, para aislar el producto (1,8 g, 9,5 mmol, 97% de rendimiento). Se añadió 4-pentenoato de bencilo (1,86 g, 9,8 mmol, 1 eq.) a aproximadamente 50 ml de CH2C12 y se enfrió a -78 °C. Se burbujeó nitrógeno a través de la solución durante aproximadamente 20 minutos. Se burbujeó entonces ozono a través de ésta hasta que la solución se volvió de un color azul claro, lo que indicaba un exceso de ozono. Se burbujeó nitrógeno a través de la solución durante 5 minutos y se añadió luego al matraz trifenilfosfina (6 g, 22,5 mmol, 2,3 eq.). Se agitó la mezcla durante aproximadamente 30 minutos. Se retiró el baño refrigerante y la solución turbia se hizo transparen-te a medida que la reacción se calentaba hasta la temperatura ambiente. La TLC (hexanos/acetato de etilo 2:1) indicó que no quedaba material de partida. Se utilizó una columna en gradiente (hexanos hasta eluir la trifenilfosfina y luego un gradiente de hexanos/acetato de etilo 9:1 a hexanos/acetato de etilo 6:1) para aislar el producto (1,7 g, 9,1 mmol, 93% de rendimiento) . Se azeotropó Ph3PCH2OMeCl (6,24 g, 18,2 mmol, 2 eq.) con tolueno para eliminar el agua. Se añadió éter anhidro a un matraz con Ph3PCH2OMeCl y se enfrió la solución en un baño de hielo. Se añadió t-butóxido de potasio al 95% (1,94 g, 16,4 mmol, 1,8 eq.) y se agitó la solución durante 5 minutos, al tiempo que mantenía un color rojo. Se añadió por goteo una solución de éster ß-formilpropionsaeurebencílico (1,7 g, 9,1 mmol, 1 eq.) en éter a lo largo de aproximadamen-te 5 minutos. La solución de volvió de color naranja y se hizo la reacción por TLC (hexanos/acetato de etilo 9:1) después de 30 minutos de agitación en un baño de hielo. Se añadió salmuera y se agitó la reacción durante otros 5 minutos a temperatura ambiente. Se separaron las fases y se extrajo la capa acuosa tres veces con éter. Se combinaron las capas eté-ricas, se secaron con MgS0 y se concentraron a presión reducida. La cromatografía instantánea usando un gradiente de hexanos/acetato de etilo 30:1 a hexanos/acetato de etilo 20:1 dio el producto (0,65 g, 2,9 mmol, 32% de rendimiento). Se disolvió 5-metoxi-4-pentenoato de bencilo (70 mg, 0,318 mmol, 1 eq.) en THF. Se añadió una solución 0,5 mM de KOH acuoso (0,76 ml , 0,382 mmol, 1,2 eq.)) y se agitó la reacción durante 1 hora. La TLC (hexanos/acetato de etilo 9:1) indicó que no quedaba material de partida. Se obtuvo la sal potásica del producto (27,9 mg, 0,214 mmol, 67% de rendimiento) . Se disolvió la sal en metanol y se añadió resina fuertemente acida Amberlyst 15 para neutralizar la solución. Se filtró la reacción y se concentró el metanol a presión re-ducida para obtener el producto deseado (24,7 mg, 0,19 mmol, 89% de rendimiento) . Se preparó la resina fuertemente acida Amberlyst 15 lavando con cada uno de los siguientes solventes dos veces en el orden siguiente: metanol, agua, NaOH 1 M, agua, etanol, HCl 6 M, agua, etanol, metanol. Se mezclaron resina Hydroxyethyl -Photoliker Nova-Syn TG (0,26 mmol/g carga de resina, 30 mg, 0,0078 mmol, 1 eq.), ácido 5-metoxi-4-pentenoico (1,8 mg, 0,0135 mmol, 1,7 eq.), diisopropilcarbodiimida (2,5 µl , 0,0162 mmol, 2,1 eq.) y DMAP (0,5 mg, 0,0045 mmol, 0,6 eq.) en 0,5 ml de DMF libre de amina. Se protegió la reacción de la luz y se agitó durante 4 días. Se usó una prueba de manchas para grupos hidroxilo libres con objeto de determinar la eficacia de conjugación (Kuisle, 0., Lolo, M. , Quinoa, E., Riguera, R. , Tetrahedron, >1.ÍJ 55, 14807-14812 (1999)). Se retiró resina (aproximadamente 1 mg) de la reacción mediante pipeta y se puso en una placa de TLC. Se añadieron una solución 0,03 M de p-TsCl en tolueno (2 gotas) y una solución 0,075 M de 4-p-nitrobencilpiridina en tolueno (2 gotas) . Se calentó la placa hasta la completa desaparición del color naranja. Se añadió una solución al 10% de piperidina en CHC13 (2 gotas) y se secó la placa. No hubo aparición de color violeta o rosa, lo que indica que la reacción se había completado. Se lavó la resina y cloruro de me¬ tileno y etanol varias veces y se recuperó (27 mg) . Ensayo de hemaglutinación: Se llevó a cabo este ensayo como se ha descrito previamente en Kanai y col . , J\ Am. Chem . Soc . , 119, 9931-9932 (1997) y en las referencias allí dadas. Las concentraciones de las muestras de polímero usadas en el ensayo fueron determinadas por integración 1H- RMN del pico a 5,25 ppm con un a muestra externa de NaOAc de concentración conocida. Síntesis del agente rematante bifuncional 18 18 20 2 - (2- (2 -benci 1 oxi ) e toxi ) e toxi ) etanoi Se añadió bromuro de bencilo (7,9 ml, 66,6 mmol) a una solución de trietilenglicol (8,9 ml , 66,6 mmol) en NaOH acuoso al 50% (5,3 ml) y se agitó la mezcla a temperatura am- ••- »-— fr*- "*-- y.»- i a. biente durante 24 horas. Se diluyó la reacción con H20 (75 ml) y se extrajo con Et20 (4 x 100 ml) . Se secaron los extractos orgánicos combinados sobre Na2S04, se concentraron y se purificaron por cromatografía en columna instantánea (sí-lice, EtOAc), dando 2- (2- (2 -benciloxi) etoxi) etoxi) etanol (6,14 g, 38%). Rf=0,6 (EtOAc); IR (neto): 3500-3400, 2900-2700, 1751, 1633, 1613, 1453, 1349, 1246, 1100, 1069 cm"1; XH-RMN (300 MHz, CDC13) : d 7,35-7,26 (m, 5H) , 4,57 (s, 2H) , 3,73-3,59 (m, 12H) , 2,50 (amplio, 1H) ; 13C-RMN (75 MHz, CDC13) : d 138,1, 128,4, 127,8, 127,7, 73,3, 72,6, 70,7, 70,6, 70,4, 69,4, 61,7. Ácido 1 -f enil -3 , 6 , 9 - trioxadecanoico Se añadió trióxido de cromo (3,33 g, 33,30 mmol) a H2S04 1,5 M (4,4 ml) a 0°C. Se añadió una solución de 2- (2- (2-benciloxi) etoxi) etoxi) etanol (2,00 gramos, 8,32 mmol) en acetona (110 ml) y se agitó la reacción durante 5 horas a temperatura ambiente. Se extrajo la solución con Et20 (5 x 100 ml) y se lavaron los extractos combinados con NaCl saturado (3 x 50 ml) y se concentraron a un volumen de 20 ml . La extracción con NaHC03 al 5% (2 x 20 ml) fue seguida de acidificación de los extractos acuosos a pH = 2 con HCl concentrado y retroextracción de la solución acuosa con Et20 (3 x 50 ml) . Se lavaron los extractos orgánicos combinados con NaCl saturado (3 x 20 ml) . La concentración dio ácido 10-fenil-3, 6, -trioxadecanoico (1,71 g, 81%). Rf=0, 1-0,4 (MeOH 10%/CH2C12) ; IR (neto): 3500, 3453, 2900-2700, 1751, 1739, 1629, 1614, 1453, 1353, 1245, 1204, 1120, 1100, 1026 cm"1; XH-RMN (300 MHz, CDCl3) : d 10,06 (amplio, 1H) , 7,35-7,25 (m, 5H) , 4,57 (s, 2H) , 4,17 (s, 2H) , 3,77-3,60 (m, 8H) ; 13C-RMN (75 MHz, CDCI3) : d 138,1, 128,4, 127,8, 127,7, 73,3, 72,6, 70,7, 70,6, 70,4, 69,4, 61,7. Éster 2- (trimetilsilil) etílico del ácido 10-feni 1-3, 6, 9 -trioxadecanoico Se disolvió ácido 10-fenil-3 , 6, 9-trioxadeca-noico (1,71 g, 6,71 mmol) en CH2C12 (13,4 ml) y se enfrió la solu-ción a 0°C. Se añadieron clorhidrato de 1- (3-dimetilaminopropil) -3-etilcarbodiimida (EDCI) (1,41 g, 7,38 mmol) y N, N-dimetilaminopiridina (DMAP) (41,0 mg, 0,34 mmol) y se agitó la suspensión durante 10 minutos a 0°C. Se añadió 2- (trimetilsilil) etanol (872,4 mg, 7,38 mmol) por goteo me-diante una jeringa y se agitó la solución durante 20 minutos al tiempo que se calentaba a temperatura ambiente. Se apagó la reacción con H20 y se extrajo con Et20 (3 x 50 ml) . Se lavaron los extractos de Et20 combinados secuencialmente con HCl al 10% (1 x 50 ml) , ?aHC03 al 5% (1 x 50 ml) y ?aCl satu-rado (1 x 50 ml) y se secaron sobre ?a2S04. La concentración, seguida de cromatografía instantánea (sílice, hexanos/EtOAc 4:1) dieron éster 2- (trimetilsilil) etílico del ácido 10-fenil-3, 6, 9-trioxadecanoico (2,32 g, 97% de rendimiento). Rf=0,26 (hexanos/EtOAc 4:1); IR (neto): 3500-3400, 3000-2700, 1751, 1733, 1615, 1455, 1250, 1148, 1124 cm"1; XH-RM? (300 MHz, CDC13) : d 7,32-7,23 (m, 5H) , 4,54 (s, 2H) , 4,24-4,18 (m, 2H) , 4,10 (s, 2H) , 3,72-3,59 (m, 8H) , 1,01-0,95 (m, 2H) , 0,01 (s, 9H) ; 13C-RM? (75 MHz, CDC13) : d 170,5, 138,2, 128,3, 127,6, 127,5, 73,2, 70,8, 70,6, 69,4, 68,8, 63,0, 17,3, -1,6; LRMS (LSIMS, 3 -?BA) : m/z 377,2 [M+?a+, cale, para C?8H3o05?aSi 377,5] . Éster 2- (trimetilsilil) etílico del ácido 3, 6-di oxa - 8 -hi droxi octanol co Se añadió Pd(OH)2 20%/C (100 mg, Aldrich) a una solución de éster 2-trimetilsilil (etílico) del ácido 10-fenil-3, 6, 9-trioxadecanoico (500 mg, 1,4 mmol) en EtOH absoluto (14 ml, AAPER Alcohol and Chemical Co., Shelbyville, KY) . Se agitó la solución bajo 50 psi de H2 durante 6 horas, se filtró a través de una almohadilla de Celita (eluyente EtOH) y se concentró a presión reducida, para obtener éster 2-trimetilsilil (etílico) del ácido 3,6-dioxa-8-hidroxioctanoico (284,4 mg, 77%) . Rf=0,29 (EtOAc/hexanos 2:1); IR (neto): 3500-3400, 2952, 2894, 2872, 1750, 1629, 1615, 1456, 1428, 1250, 1200, 1148, 1124, 1064 cm"1; ^-RMN (300 MHz, CDC13) : d 4,26-4,19 (m, 2H) , 4,11 (s, 2H) , 3,75-3,59 (m, 8H) , 2,65 (amplio, 1H) , 1,02-0,95 (m, 2H) , 0,02 (s, 9H) ; 13C-RMN (75 MHz, CDCl3) : d 170,6, 72,4, 70,8, 70,2, 68,6, 63,2, 61,5, 17,3, -1,6; LRMS (LSIMS, 3-NBA): m/z 287,1 [M+Na+, cale, para CnH2405NaSi 287,4] . Éster 2- (trimetilsilil) etílico del ácido 3, 6-dioxa-8 -al -octanoico Se disolvió éster 2-trimetilsilil (etílico) del ácido 3 , 6-dioxa-8-hidroxioctanoico (250 mg, 0,95 mmol) en CH2C12 (4,7 ml) y se enfrió la solución a 0°C. Se añadió sulfóxido de dimetilo (135 µl , 1,9 mmol) con una jeringa, seguido de rápida adición de P205 sólido. Después de 30 minutos a o°c, s añadió Et3N (460 µl , 3,3 mmol) y se agitó la reacción durante 30 min. a 0°C. Se apagó la reacción con HCl 10% (10 ml) y se extrajo con CH2C12 (3 x 20 ml) . Se lavaron los extractos orgánicos combinados con H20 (1 x 25 ml) y NaCl satu-rado (1 x 25 ml) y se secaron sobre Na2S04. La purificación por cromatografía instantánea (sílice, hexanos/EtOAc 1:1) dio el producto (216,0 mg, 82%). Rf=0,29 (hexanos/EtOAc 1:1); IR (neto) : 3500-3400, 2957, 2922, 2854, 1749, 1734, 1646, 1456, 1260, 1098 cm"1; ^-RMN (300 MHz, CDC13) : d 9,71 (s, 1H) , 4,25-4,19 (m, 2H) , 4,16 (d, J=0,7 Hz, 2H) , 4,10 (s, 2H) , 3,75 (s, 4H) , 1,01-0,96 (m, 2H) , 0,02 (s, 9H) ; 13C-RMN (75 MHz, CDC13) : d 200,6, 170,4, 76,8, 71,2, 71,0, 68,8, 63,2, 17,4, -1,5; LRMS (LSIMS, 3-NBA): m/z 285,1 [M+Na+, cale. para CnH2205NaSi 285,4] . Éster 2- (trimetilsilil) etílico del ácido 3,6,10-trioxa-8, 9-en-undecanoico Se añadió terc-butóxido de potasio (36,3 mg, 0,30 mmol) a una suspensión de cloruro de (metoximetil) trifenilfosfonio (117,6 mg, 0,34 mmol) en THF (2,0 ml) a 0°C. Se agitó la solución de color rojo obscuro a 0°C durante 5 minutos. Se añadió éster 2-trimetilsilil (etílico) del ácido 3 , 6-dioxa-8-al-octanoico (42,5 mg, 0,16 mmol) por goteo como una solución 1 M en THF (160 µl) , durante lo cual la solución se volvió de rojo obscuro a amarillo claro. Se apagó la reacción con NaCl saturado (5 ml) y se extrajo con Et20 (3 x 15 ml) . Se lavaron los extractos de Et20 combinados con H20 (1 x 20 ml) y se secaron sobre Na2S04. La concentración, seguida de cromatografía instantánea (sílice, hexanos/EtOAc 9:2) dio éster 2-trimetilsilil (etílico) del ácido 3 , 6, 10-trioxa-8, 9-en-undecanoico 18 (27,9 mg, 59%). Rf=0,21 (hexanos/EtOAc 5:1); IR (neto) : 2952, 2932, 2898, 2860, 1752, 1732, 1660, 1457, 1251, 1214, 1197, 1176, 1147, 1102, 859, 838 cm"1; -RMN (500 MHz, CDC13) : d 6,52 (d, J=13,l Hz, 1H) , 6,00 (dt, J=6,5, 1,1 Hz, 1H) , 4,87 (dt, J=12,5, 7,5 Hz, 1H) , 4,53 (td, J=7,0, 6,5 Hz, 1H) , 4,24-4,17 (m, 4H) , 4,10 (s, 2H) , 4,09 (s, 2H) , 4,07 (dd, J=7,3, 1,2 Hz, 2H) , 3,92 (dd, J=7,4, 0,9 Hz, 2H) , 3,71- 3,54 (m, 8H) , 3,58 (s, 3H) , 3,53 (s, 3H) , 1,01-0,94 (m, 4H) , 0,01 (s, 18H) ; 13C-RMN (75 MHz, CDC13) : d 170,6, 170,5, 151,5, 149,1, 102,7, 98,7, 70,9, 70,9, 69,0, 68,8, 68,7, 68,5, 63,8, 63,0, 59,8, 55,9, 17,4, -1,6; LRMS (LSIMS, 3-NBA) : m/z 313,2 [M+Na+, cale, para C?3H2g05NaSi 313,4] . Síntesis del polímero 9 1 9 Se desoxigenó 1 , 2 -dicloroetano (DCE) mediante cuatro ciclos de congelación-bomba-descongelación ("FPT"). Se añadió una solución de catalizador de rutenio 14 en DCE (100 µl) a una solución de monómero de norborneno 11 (15 mg, 0,10 mmol) en DCE (400 µl) . Se agitó la mezcla roja durante 30 mi- 20 ñutos a temperatura ambiente. Se añadió el agente rematante 18 (30 µl) neto y se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 18 horas. Se concentró la mezcla, se disolvió en una pequeña cantidad de CH2C12 y se filtró a través de una corta almohadilla de gel de sílice para eliminar el exceso de agen- 25 te rematante 18. Se eluyó el resto del material del gel de sílice con EtOAc y se concentró y secó la solución. Se lavó el material sólido transparente con hexanos (3x) y se secó para obtener el polímero 19 (9,6 mg, 64%) . a^-a-«--a-i--í-á--i-»aJ-«-í-^ ..t ^ .....

Se desoxigenó DCE mediante cuatro ciclos de congelación-bomba-descongelación. Se añadió una solución de catalizador de rutenio 14 (3,3 mg, 0,004 mmol) en DCE (40 µl) a una solución de monómero de norborneno 12 (15 mg, 0,064 mmol) en DCE (280 µl) . Se agitó la mezcla durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se añadió el agente rematante 18 (13,5 µl) neto y se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 18 horas. Se concentró la mezcla, se disolvió en una pequeña cantidad de CH2C12 y se filtró a través de una corta almohadilla de gel de sílice para eliminar las impurezas derivadas del catalizador y el exceso de agente rematante. Se concentró la solución a presión reducida y se usó sin purificación en el acoplamiento a 3 , 6-disulfogalactosamina . Síntesis de polímero 21b Se añadió diisopropilcarbodiimida (DIC) (5 µl , 0,032 mmol) a una solución de polímero 20 (7,5 mg) en DMF (320 µl) . Se añadió (2-aminoetil) -3 , 6-O-disulfo-ß-D-galactopiranósido (16,7 mg, 0,048 mmol) como una solución 1 M en H20 (48 µl) y se añadió Et3N (8,9 µl 0,064 mmol). Se agitó -t.t .¿ tii -» í,M,¡¡ .i.J la reacción a temperatura ambiente durante aproximadamente 40 horas y se diluyó después con H20 (aproximadamente 1 ml) . Se extrajo la solución acuosa con CHC13 (3 x 2 ml) y se concentró a presión reducida. Se lavó el residuo con MeOH (3 x 2 ml) , obteniéndose el neoglicopolímero 21b. Síntesis del neoglicopolímero marcado con fluoresceína 22 Síntesis del polímero 21a Se desoxigenaron dicloroetano (DCE) y, en un recipiente de reacción aparte, una solución de la sal sódica del monómero de 3 , 6-disulfogalactosa 13 (15 mg, 0,027 mmol), bromuro de dodeciltrimetilamonio ( "DTAB" ) (13,5 mg, 0,044 mmol) y tampón 2 , 2-bis (hidroximetil) -2 , 2 ', 2" -nitrilotrietanol (bis-tris) (91 µl , 100 mM, pH 5,9) sometiendo cada solución a cuatro ciclos de congelación-bomba-descongelación ("FPT"). Se añadió el dicloroetano desoxigenado (45 µl) a un vial que contenía metal rutenio-carbeno 14 (1,5 mg, 0,0018 mmol) bajo nitrógeno y se añadió la solución púrpura al recipiente de reacción que contenía la solución tamponada de monómero y DTAB. Se calentó la reacción a 40-45 °C durante 20 minutos, se añadió el agente rematante 18 (10 µl) neto y se agitó la mezcla a 40-45°C durante 15 minutos. Se dejó enfriar a la reacción a temperatura ambiente y se agitó durante 6 horas. Se diluyó la mezcla bruta con H20 y MeOH hasta que la solución fue una fase y el volumen final fue de aproximadamente 1 ml .

{..», I ..Í.Á.? Se purificó el polímero por cromatografía de intercambio catiónico (SEPHADEX-SP C-25, Pharmacia, Piscataway, NJ; 0,75 x 4,0 cm; Na+, H20 eluyente), concentración a sequedad, suspensión del residuo en MeOH y centrifugación (3x) . Se disolvió el material insoluble en MeOH en H20 y la concentración a sequedad dio el polímero 21a rematado como un sólido escamoso de color marrón claro en rendimientos moderados (60-80%) . Desprotección del polímero 21a Se disolvió el polímero rematado 21a en H20 (95 µl) y se añadió NaOH 1 M (5 µl) . Se equipó el matraz con un dedo frío y se calentó la solución a 60 °C durante 2 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, se diluyó la solución con H20 a un volumen final de 1 ml y se neutralizó (resina macrorreticular fuertemente acida AMBERLYST 15, Aldrich) . Se filtró la mezcla a través de una pequeña almohadilla de lana de vidrio para eliminar la resina y se concentró después a sequedad, dando el polímero desprotegido.

Síntesis del conjugado 22 Se disolvió el polímero desprotegido (3,2 mg) en H20 (60 µl) . Se añadieron EDCI (0,8 mg, 0,004 mmol) y N-hidroxisulfosuccinimida (sulfo ?HS, Pierce, Roickford, IL) (0,9 mg, 0,004 mmol) y se incubó la mezcla a temperatura am-biente durante 5 minutos. Se añadió 5- ( (5-aminopentil) tioureidil) fluoresceína (fluoresceína cadaverina) (1,3 mg, 0,002 mmol) y se agitó la reacción a temperatura ambiente en obscuridad durante 24 horas. Se purificó el políme-ro acoplado a fluoresceína por cromatografía de intercambio catiónico (SEPHADEX-SP C-25, Pharmacia; 0,75 x 4,0 cm; Na+, H20 eluyente) y cromatografía de exclusión por tamaños (SEPHADEX G-25, Pharmacia, 0,75 x 22,0 cm, H20 eluyente), obteniéndose el polímero acoplado a fluoresceína 22 (2,2 mg, 69%) .

Síntesis y modificación del polímero terminado en oxígeno 27 Se desoxigenaron DCE y, en un recipiente de reacción aparte, una solución de la sal sódica del monómero de 3, 6-disulfogalactosa 23 (15 mg, 0,027 mmol) y DTAB (13,5 mg, 0,044 mmol) en tampón bis-tris (91 µl, 100 mM, pH 5,9) sometiendo cada solución a cuatro ciclos de congelación-bomba-descongelación. Se añadió el DCE des- oxigenado (45 µl) a un vial que contenía el rutenio-carbeno 14 (1,5 mg, 0,0018 mmol) bajo nitrógeno y se añadió la solución púrpura al recipiente de reacción que contenía la solución tamponada de monómero y DTAB. Se calentó la reacción a 60 °C durante 2,5 horas, se dejó enfriar a temperatura ambiente y se abrió después a la atmósfera y se agitó durante 12 horas. Se añadió 5-( ( (2- (carbohidrazino) metil) tio) acetil) aminofluoresceína 26 (Molecular Probes, Eugene, OR, 2,5 mg, 0,0051 mmol) y se agitó la reacción a temperatura ambiente en obscuridad durante 48 horas. Se purificó el polímero acoplado a fluoresceína por cromatografía de intercambio catiónico (SEPHADEX-SP C-25, ........ ij Pharmacia; 0,75 x 4,0 cm; Na+, H20 eluyente) y lavado con MeOH (3x) , obteniéndose el polímero acoplado a fluoresceína 17 (8,6 mg, 57%) . Microscopía de fluorescencia Se cultivaron células Jurkat a 37 °C y un 5% de C02 en RPMI 1640 con un 10% de suero de ternera fetal, 100 U/ml de penicilina, 100 µg/ml de estreptomicina, L-glutamina 2 mM y piruvato de sodio 1 mM. La viabilidad celular era mayor del 95%, según se determinó por tinción con Azul Tripán al 0,4%. Para cada experimento, se usaron 5 x 105 células vivas. Se centrifugaron las células Jurkat a 750 x g durante 1 minuto, se decantó el medio de cultivo sobrenadante y se re-suspendieron las células en 100 µl de PBS frío. Se añadieron anticuerpo anti-L-selectina marcado con FITC o polímero mar-cado con fluoresceína 22 o polímero de fluoresceína 17. La concentración final del polímero era 4 mM en residuos de galactosa. Se incubaron las células a 4°C durante 30 minutos y se lavaron dos veces con 2 ml de PBS frío. Se fijaron las células en 1 ml de paraformaldehído fresco tamponado con HEPES al 2% a 4°C durante 30 minutos y se lavaron dos veces con 2 ml de PBS frío. Se centrifugaron las células y se resuspendieron en 50 ml de PBS frío. Se aplicó entonces la solución celular a cubreobjetos y se montaron éstos sobre portaobjetos de vidrio limpios con 5 ml de agente anti-apagamiento VectaS-hield. Se incubaron las preparaciones durante la noche a 4°C y se visualizaron luego bajo una lente de inmersión en aceite (630x) en un microscopio Zeiss Axioskop (Zeiss, Alemania) equipado con un filtro selectivo para FITC y una cámara Mi-croMax de Princeton Instruments. Se adquirieron las imágenes usando el programa IPLab Spectrum (Signal Analytics Corporation (Viena, VA) ) . Las imágenes presentadas son representativas de los resultados obtenidos con un mínimo de 4 pruebas independientes . Las descripciones completas de las patentes, do-cumentos de patente y publicaciones aquí citados son incorporadas como referencia en su totalidad, como si cada una fuera incorporada individualmente.' Resultarán evidentes diversas modificaciones y alteraciones de esta invención para los ex-pertos en la técnica sin desviarse del alcance y espíritu de esta invención. Habría que entender que esta invención no pretende quedar indebidamente limitada por las realizaciones y ejemplos ilustrativos aquí expuestos y que dichos ejemplos y realizaciones son presentados sólo a modo de ejemplo, pre-tendiendo limitar únicamente el alcance de la invención mediante las reivindicaciones aquí expuestas a continuación.

Claims

REIVINDICACIONES 1. Un método de preparación de un polímero tele- quélico, cuyo método consiste en: polimerizar al menos un monómero consistente en al menos un grupo polimerizable en pre- sencia de al menos un catalizador de rutenio u osmio y carbeno para formar un polímero y combinar el polímero con al menos un agente rematante en condiciones efectivas para la reacción del polímero con el agente rematante, donde el catalizador de carbeno, el agente rematante o ambos están funciona- lizados y se forma un polímero funcionalizado en posición terminal .
2. El método de la reivindicación 1, donde el agente rematante funcionalizado contiene un grupo reactivo latente para posterior reacción con un reactivo funcionali- zante.
3. El método de la reivindicación 2, donde el agente rematante funcionalizado tiene la siguiente fórmula: donde D es un grupo donador de electrones y R6 es un grupo orgánico que incluye un grupo reactivo latente seleccionado entre una azida, un grupo nitro, un disulfuro, una hidrazina, una hidrazida, una hidroxilamina, un aldehido, una cetona, un epóxido, un grupo ciano, un acetal, un cetal, un carbamato, un tioisocianato, un éster activado y un ácido activado, y R7 y R8 son independientemente hidrógeno o un grupo orgánico.
4. El método de la reivindicación 1, donde el agente rematante funcionalizado contiene un grupo funcional e?*A M . *j rá.± A—**-. yJíl.-1-kl no reactivo.
5. El método de la reivindicación 4, donde el agente rematante funcionalizado tiene la siguiente fórmula: donde D es un grupo donador de electrones y R6 es un grupo orgánico que incluye un grupo funcional no reactivo seleccionado entre productos naturales o análogos de éstos, quelantes de metales, metales, sondas fluorescentes, soportes sólidos y superficies metálicas, y R7 es H o un grupo orgánico.
6. El método de la reivindicación 1, donde el polímero es un polímero monotelequélico.
7. Un método de la reivindicación 1, donde el catalizador de rutenio u osmio y carbeno está funcionalizado.
8. El método de la reivindicación 7, donde el catalizador de carbeno funcionalizado contiene un grupo reactivo latente para posterior reacción con un reactivo funcionalizante .
9. El método de la reivindicación 8, donde el carbeno funcionalizado está representado por M=CR4R5, donde R4 es un grupo orgánico que incluye un grupo reactivo latente, R5 es H o un grupo orgánico y M representa rutenio u osmio, en una esfera de ligando.
10. El método de la reivindicación 9, donde R4 es un grupo orgánico que incluye un reactivo latente seleccionado entre el grupo de una azida, un epóxido, un grupo ciano, un acetal, un cetal, un carbamato, un tiocianato, un éster activado, un ácido activado, una hidrazina y una hidrazona. -—I—B
11. El método de la reivindicación 9, donde el carbeno funcionalizado tiene la fórmula siguiente: donde M es Ru u Os, X y X' son cada uno independientemente un ligando aniónico, L y L' son cada uno independientemente un ligando neutro y R4 es un grupo orgánico que incluye un grupo reactivo latente seleccionado entre el grupo de una azida, un epóxido, un grupo ciano, un acetal, un cetal, un carbamato, un tiocianato, un éster activado, un ácido activado , una hidrazina y una hidrazona.
12. El método de la reivindicación 7, donde el catalizador de carbeno funcionalizado contiene un grupo funcional no reactivo.
13. El método de la reivindicación 12, donde el carbeno funcionalizado está representado por M=CR4R5, donde R4 es un grupo orgánico que incluye un grupo funcional no reactivo, R5 es H o un grupo orgánico y M representa rutenio u osmio, en una esfera de ligando.
14. El método de la reivindicación 13, donde R4 es un grupo orgánico que incluye un grupo funcional no reactivo seleccionado entre productos naturales o análogos de los mismos, quelantes de metales, metales, sondas fluorescentes, soportes sólidos y superficies metálicas.
15. El método de la reivindicación 14, donde el carbeno funcionalizado tiene la fórmula siguiente: L X-... I V donde M es Ru u Os, X y X' son independientemente un ligando aniónico, L y L' son independientemente un ligando neutro y R4 es un grupo orgánico que incluye un grupo funcional no re- activo seleccionado entre productos naturales o análogos de éstos, quelantes de metales, metales, sondas fluorescentes, soportes sólidos o superficies metálicas.
16. El método de la reivindicación 7, donde el polímero es un polímero monotelequélico.
17. El método de la reivindicación 1, donde el polímero es un polímero bitelequélico.
18. El método de la reivindicación 17, donde el agente rematante funcionalizado contiene un grupo reactivo latente para posterior reacción con reactivo funcionalizante.
19. El método de la reivindicación 17, donde el agente rematante funcionalizado contiene un grupo funcional no reactivo.
20. El método de la reivindicación 17, donde el catalizador de carbeno funcionalizado contiene un grupo reac- tivo latente para posterior reacción con un agente funcionalizante .
21. El método de la reivindicación 20, donde el carbeno funcionalizado está representado por M=CR4R5, donde R4 es un grupo orgánico que incluye un grupo reactivo latente, R5 es H o un grupo orgánico y M representa rutenio u osmio, en una esfera de ligando.
22. El método de la reivindicación 21, donde R4 es un grupo orgánico que incluye un reactivo latente seleccionado entre el grupo de una azida, un epóxido, un grupo ís r a.s¿ & . i k . ciano, un acetal, un cetal, un carbamato, un tiocianato, un éster activado, un ácido activado, una hidrazina y una hidra-zona.
23. El método de la reivindicación 21, donde R4 es un grupo orgánico que incluye un reactivo latente seleccionado entre el grupo de una azida, un epóxido, un grupo ciano, un acetal, un cetal, un carbamato, un tiocianato, un éster activado, un ácido activado, una hidrazina y una hidra-zona .
24. El método de la reivindicación 1, donde el agente rematante funcionalizado contiene un ligante escindible.
25. El método de la reivindicación 24, donde el agente rematante contiene un grupo funcional no reactivo.
26. El método de la reivindicación 25, donde el grupo funcional no reactivo es un soporte sólido.
27. El método de la reivindicación 26, donde el agente rematante tiene la fórmula: donde D es un grupo donador de electrones, R8, independiente de otros R8 en el agente rematante, es hidrogeno o un grupo orgánico; n es un número entero de 1 a aproximadamente 20; R9 es H o un grupo i l ¿ ,? ix,.1 i . ? orgánico; W es un grupo retirador de electrones y es un grupo donador de electrones, y LK2 es un grupo ligante para unión al soporte sólido.
28. El método de la reivindicación 27, donde W es un grupo N02 y Z es un grupo OR, donde R es un resto alquilo.
29. El método de la reivindicación 1, donde el catalizador de metal y carbeno funcionalizado contiene un grupo funcional no reactivo.
30. El método de la reivindicación 29, donde el grupo funcional no reactivo es un soporte sólido.
31. El método de la reivindicación 30, donde el catalizador de metal y carbeno funcionalizado tiene la fórmula: donde M es Ru u Os, X y X' son independientemente un ligando aniónico y juntos pueden formar un ligando aniónico bidentado, L y L' son independientemente un ligando neutro y juntos pueden formar un ligando bidentado neutro, R' es hidrógeno o un grupo orgánico y LK es un grupo ligante eventual, el cual es un grupo orgánico.
32. Un agente rematante funcionalizado que tiene la fórmula siguiente: donde D es un grupo donador de electrones y R6 es un grupo orgánico que incluye un grupo etilenglicol y un grupo reactivo latente seleccionado entre una azida, un grupo nitro, un disulfuro, una hidrazina, una hidrazida, una hidroxilamina, un aldehido, una cetona, un epóxido, un grupo ciano, un acetal, un cetal, un carbamato, un tio-isocianato, un éster activado y un ácido activado, y R7 es H o un grupo orgánico.
33. El agente rematante de la reivindicación 32, que tiene la fórmula: donde D es un grupo donador de electrones; R8, independientemente de otros R8 en el agente rematante, es hidrógeno o un grupo orgánico; n es un número entero en el rango de 1 a aproximadamente 20, y LK es un grupo ligante que es un grupo orgánico que tiene una funcionalidad que permite la unión a un soporte sólido.
34. El agente rematante de la reivindicación 33, donde LK tiene la fórmula: - (M) m-LKn.- (N) p-LK2, donde M y N son grupos orgánicos iguales o diferentes, m y p son números enteros en el rango de 0 a aproximadamente 20 y LKi y LK2 son grupos funcionales.
35. El agente rematante de la reivindicación 34, donde LKX es un grupo funcional escindible.
36. Un carbeno funcionalizado que tiene la siguiente fórmula: -.-..yj i- i. donde M es Ru u Os, X y X' son independientemente un ligando aniónico y juntos pueden formar un ligando aniónico bidentado, L y L' son independientemente un ligando neutro y juntos pueden formar un ligando bidentado neutro y R4 es un grupo orgánico que incluye un grupo reactivo latente seleccionado entre el grupo de una azida, un epóxido, un grupo ciano, un acetal, un cetal, un carbamato, un tiocianato, un éster activado, un ácido activado, una hidrazina y una hidrazona.
37. Un carbeno funcionalizado soportado en sólido que tiene la fórmula: donde M es Ru u Os, X y X' son independientemente un ligando aniónico y juntos pueden formar un ligando aniónico bidentado, L y L' son independientemente un ligando neutro y juntos pueden formar un ligando bidentado neutro, R' es hidrógeno o un grupo orgánico y LK es un grupo ligante escindible para unión a un soporte sólido.
38. Un método de preparación de una agrupación multivalente, cuyo método consiste en: polimerizar al menos un monómero que contiene al menos un grupo polimerizable y al menos un grupo reactivo latente en presencia de un catalizador de metal y carbeno, para formar una plantilla polimérica que contiene al menos un grupo reactivo latente, y combinar la plantilla polimérica con al menos un reactivo funcionalizante que contiene al menos un grupo reactivo en condiciones efectivas para la reacción del grupo reactivo latente de la plantilla polimérica con el grupo reactivo del reactivo funcionalizante para formar una agrupación multivalente.
39. El método de la reivindicación 38, donde el monómero contiene sólo un grupo polimerizable.
40. El método de la reivindicación 39, donde el monómero es una monoolefina cíclica.
41. El método de la reivindicación 40, donde la monoolefina cíclica es un compuesto bicíclico.
42. El método de la reivindicación 38, donde el monómero contiene además grupos funcionales no reactivos con el grupo reactivo del reactivo funcionalizante.
43. El método de la reivindicación 38, donde el grupo reactivo latente del monómero contiene un grupo nucleofílico y el grupo reactivo del reactivo funcionalizante contiene un grupo electrofílico.
44. El método de la reivindicación 38, donde el grupo reactivo latente del monómero contiene un grupo elec- trofílico y el grupo reactivo del reactivo funcionalizante contiene un grupo nucleofílico.
45. El método de la reivindicación 44, donde el grupo nucleofílico es seleccionado entre el grupo de aminas, azidas, hidroxilos, tioles, sulfonas, acilhidrazidas, grupos nitro, fosfitos, hidrazinas, oximas, isocianatos, ácidos hidroxámicos y tiocianatos.
46. El método de la reivindicación 44, donde el grupo electrofílico es seleccionado entre el grupo de acil- sulfonamidas, acilazidas, epóxidos, anhídridos, éteres, áci- I ri .Í Í, .-a. dos carboxílicos, haluros, ácidos y esteres borónicos, cetonas, aldehidos, esteres de ácidos fosfóricos, fosfitos, acil-nitrilos, alquenos y alquinos.
47. El método de la reivindicación 44, donde el grupo electrofílico es un grupo éster activado y el grupo nucleofílico es un grupo amina primaria.
48. El método de la reivindicación 38, donde el monómero tiene la siguiente estructura general : donde Y es CH2, O, S o N-R3 (donde R3 es H o un grupo orgánico) , R1 y R2 son cada uno independientemente H o un grupo orgánico, los cuales pueden estar conectados de tal forma que formen un anillo, con la condición de que al menos uno de R1 y R2 incluya un grupo reactivo latente.
49. El método de la reivindicación 48, donde el monómero es éster N-hidroxisuccinimida de ácido biciclo [2.2.1] hept-5-en-exo-2 -carboxílico.
50. El método de la reivindicación 38, donde la polimerización de al menos un monómero consiste en polimerizar secuencialmente dos o más monómeros diferentes en presencia de un catalizador de metal y carbeno para formar una plantilla polimérica que contiene bloques alternantes de los diferentes monómeros.
51. El método de la reivindicación 50, donde cada monómero diferente contiene un grupo reactivo latente diferente para posterior unión de grupos funcionales pendientes.
52. El método de la reivindicación 51, donde al menos uno de los monómeros incluye un grupo funcional pen-diente no reactivo que no requiere mayor funcionalización. -*--«*-*-- •
53. El método de la reivindicación 38, donde la polimerización de al menos un monómero consiste en polimerizar simultáneamente dos o más monómeros diferentes.
54. El método de la reivindicación 38, que además incluye la reacción de la agrupación multivalente con un reactivo para funcionalizar los enlaces de alqueno del esqueleto polimérico en la agrupación.
55. El método de la reivindicación 38, donde el reactivo funcionalizante que reacciona con el grupo reactivo latente de la plantilla polimérica contiene un carbohidrato o un péptido. 56.
56. El método de la reivindicación 38, donde la polimerización del monómero es llevada a cabo en un solvente orgánico a temperatura ambiente.
57. El método de la reivindicación 38, que además incluye la combinación de la plantilla polimérica con un agente rematante para que reaccione con un extremo de la plantilla polimérica antes de combinarla con el reactivo funcionalizante .
58. El método de la reivindicación 57, donde el agente rematante es un alqueno rico en electrones.
59. El método de la reivindicación 58, donde el alqueno rico en electrones contiene un grupo informador que facilita la detección.
60. El método de la reivindicación 59 donde el alqueno rico en electrones está ligado, o es capaz de estar ligado, a un soporte sólido o a una superficie metálica.
61. El método de la reivindicación 38, donde la combinación de la plantilla polimérica con al menos un reac- tivo funcionalizante consiste en combinar la plantilla polimérica con una cantidad inferior a la estequiométrica de un primer reactivo funcionalizante.
62. El método de la reivindicación 61, que además incluye la combinación de la plantilla polimérica con una ?Á^. ?.?.ái.?. .. y^. . *.^... ^.y . cantidad inferior a la estequiométrica de un segundo reactivo funcionalizante .
63. Una plantilla polimérica que tiene la siguiente estructura general : donde "BB" representa la unidad repetitiva del esqueleto, que puede ser cíclica o acíclica y puede ser igual o diferente en una disposición aleatoria o de bloque; R1 y R2 son cada uno independientemente H o un grupo orgánico, los cuales pueden estar conectados de tal manera que formen un anillo, con la condición de que al menos uno de R1 y R2 incluya una amina protegida o un éster activado; R4, R5, R6 y R7 son H o un grupo orgánico y n es el número medio de unidades monoméricas repetitivas.
64. La plantilla polimérica de la reivindicación 63, donde n es al menos 2.
65. La plantilla polimérica de la reivindicación 63, donde al menos uno de R5, R5, R6 y R7 incluye un grupo funcional.
66 . Una plantilla polimérica que tiene la siguiente estructura general : donde "BB" representa la unidad repetitiva del esqueleto, que puede ser cíclica o acíclica y puede ser igual o diferente en una disposición aleatoria o de bloque; R1 y R2 son cada uno independientemente H o un grupo orgánico, los cuales pueden estar conectados de tal manera que formen un anillo, con la condición de que al menos uno de R1 y R2 incluya una amina protegida o un éster activado; R4, R5, R6 y R7 son H o un grupo orgánico; Z es independientemente hidrógeno, un haluro, hidroxilo, un tiol o una amina, y n es el número medio de unidades monoméricas repetitivas.
67. La plantilla polimérica de la reivindicación 66, donde al menos uno de R5, R5, R6 y R7 incluye un grupo funcional .
68. Un kit consistente en la plantilla polimérica de la reivindicación 66 y medios de instrucción para usar un reactivo funcionalizante para unir un grupo funcional pendiente a la plantilla polimérica.
69. El kit de la reivindicación 68, que además incluye al menos un reactivo funcionalizante.
70. El kit de la reivindicación 69, que además incluye al menos un agente rematante.
71. El kit de la reivindicación 70, donde el agente rematante está funcionalizado.
72. El kit de la reivindicación 70, donde el agente rematante es un alqueno rico en electrones.
73. El kit de la reivindicación 72, donde el alqueno rico en electrones contiene un grupo informador que facilita la detección.
74. El kit de la reivindicación 73, que además incluye al menos un reactivo funcionalizante.
75. El kit de la reivindicación 74, que además incluye al menos un agente rematante.
76. Una librería que contiene una pluralidad de agrupaciones multivalentes, donde una agrupación multivalente es un polímero que contiene una pluralidad de unidades repe- **LJ J. ?...Í..Í.a^ ^^^^^ j ^a^BjW ¡MflÉ M titivas monoméricas, donde cada unidad repetitiva monomérica puede ser igual o diferente, donde una porción de los monómeros en el polímero contienen un grupo funcional y cada agrupación multivalente de la librería tiene una longitud definí- da y una densidad de grupos funcionales definida.
77. Una librería de la reivindicación 76, donde el polímero de la agrupación multivalente contiene dos o más monómeros diferentes.
78. Una librería de la reivindicación 77, donde diferentes monómeros llevan diferentes grupos funcionales.
79. Una librería de la reivindicación 76, donde la distancia entre los monómeros que llevan el mismo grupo funcional es definida.
80. Una librería de la reivindicación 76, donde el espaciamiento entre monómeros que llevan diferentes grupos funcionales es definido.
81. Una librería de la reivindicación 76, donde las agrupaciones multivalentes de la librería son sintetizadas para tener sustancialmente la misma longitud, pero dife- rir en la densidad de los grupos funcionales.
82. Una librería de la reivindicación 76, donde las agrupaciones multivalentes de la librería son sintetizadas para tener substancialmente longitudes diferentes, pero tener substancialmente la misma densidad de grupos funciona- les.
83. Una librería de la reivindicación 76, donde las agrupaciones multivalentes de la librería llevan los mismos grupos funcionales.
84. Una librería de la reivindicación 76, donde las agrupaciones multivalentes de la librería llevan diferentes grupos funcionales.
85. Una librería de la reivindicación 76, donde los grupos funcionales son grupos funcionales biológicamente activos . t^ " » -•"- - - -"-•
86. Una librería de la reivindicación 76, donde las agrupaciones multivalentes de la librería están ligadas a un sólido.
87. Una librería de la reivindicación 76, donde 5 las agrupaciones multivalentes son polímeros monotelequélicos .
88. Una librería de la reivindicación 76, donde las agrupaciones multivalentes son polímeros bitelequélicos.
89. Una libraría consistente en una pluralidad de 10 agrupaciones multivalentes, donde cada agrupación multivalente es preparada por el método de la reivindicación 1.
90. Una libraría consistente en una pluralidad de agrupaciones multivalentes, donde cada multivalente es preparada por el método de la reivindicación 38. 15
91. Un método para generar una librería consistente en una pluralidad de agrupaciones multivalentes, que consiste en las siguientes etapas: (a) sintetizar cada agrupación multivalente por el método de la reivindicación 1 y 20 (b) combinar las agrupaciones multivalentes para generar una librería. ^^^^ÉM^^ _-^-U-il-á-k-M-M-u--a-M-i-^E-i-Wil-k-U-Á Métodos de preparación de librerías de agrupaciones multivalentes y librerías preparadas por estos métodos. Las agrupaciones multivalentes componentes de una librería tienen longitud definida, funcionalidad terminal definida y grupos funcionales pendientes definidos. Los métodos incluyen la preparación de una agrupación multivalente que consiste en la etapas de polimerización de al menos un monómero que contiene al menos un grupo polimerizable y al menos un grupo re- activo latente, en presencia de un catalizador de metal y carbeno, para formar una plantilla polimérica que contiene al menos un grupo reactivo látante, y combinación de la plantilla polimérica con al menos un reactivo funcionalizante que contiene al menos un grupo reactivo, en condiciones efectivas para la reacción del grupo reactivo latente de la plantilla polimérica con el grupo reactivo del reactivo funcionalizante para formar una agrupación multivalente. Los métodos incluyen además la preparación de un polímero telequélico (mono- o bi- telequélico) , la cual emplea un catalizador de rutenio u os- mió y carbeno y un agente rematante, al menos uno de los cuales está funcionalizado.