MXPA01004814A - Composiciones y metodos para controlar plagas de plantas - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a una nueva cepa de Bacillus subttilis que produce metabolito y que produce antibiótico que presenta actividad insecticida, anti-fúngica y anti- bacteriana. El sobrenadante de esta nueva cepa contiene agentes insecticidas, anti-fúngicos y anti-bacterianos efectivos. También estáincluido en la invención un metabolito activo para el gusano de la raíz del maíz de peso molecular pequeño (?10,000 daltons) extraíble en solvente, producido en el sobrenadante. También se incluyen en la invención los métodos para proteger o tratar plantas de infestaciones de hongos y bacterias y de infestaciones de gusano de la raíz del maíz que comprende la etapa de aplicar a la planta una cantidad efectiva de la nueva cepa de subtilis, que produce antibiótico/metabolito, el antibiótico/metabolito producido por la nueva cepa de Bacillus subtilis o una combinación de los mismos, que comprende opcionalmente, en forma adicional otra cepa bacteriana que produce antibiótico y/o un pesticida químico. La invención también incluye métodos para prevenir o tratar infecciones de hongos y bacterias usando caldo completo de cultivos o sobrenadantes obtenidos a partir de cultivos en la nueva cepa de Bacillus subtilis sola o en combinación con pesticidas químicos y/u otros agentes de biocontrol. La invención también incluye nuevos compuestos anti-fúngicos y anti-bacterianos designados agrastatinas y una nueva combinación que comprende una iturina tipo A, una plipastatina, una surfactina y una agrastatina. Los métodos la para tratar o proteger plantas de infecciones de hongos y bacterias e infestaciones de gusano de la raíz del maíz, comprende administrar las nuevas agrastatinas y la nueva combinación que comprende una iturina tipo A, una plipastatina, una surfactina y una agrastatina se proporcionan. Se proporciona adicionalmente un extracto lipopeptídico aislado de la cepa AQ713 con actividad insecticida y una surfactína lipopeptídica aislada de la cepa AQ713 con actividad-insectici

Description

COMPOSICIONES Y MÉTODOS PARA CONTROLAR PLAGAS DE PLANTAS DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN F La presente invención está en el campo dß bioplaguicidas . Más particularmente, esta invención se 5 refiere al descubrimiento de que una nueva cepa de Bacill us subtil is , AQ713, puede inhibir un amplio rango de enfermedades de plantas de hongos y bacterias y también tiene actividad en contra de insectos . La invención también se refiere a composiciones fungicidas, bactericidas e 10 insecticidas, que comprenden esta nueva cepa de Bacill us y dos antibióticos y metabolitos producidos por esta cepa sola, o en combinación con otros plaguicidas químicos y biológicos. Durante un cierto número de años, se ha sabido que diversos microorganismos presentan actividad biológica para 15 ser útiles para controlar enfermedades de plantas. Aunque se ha hecho progreso en el campo de identificar y desarrollar plaguicidas biológicos para controlar diversas enfermedades de plantas de importancia agronómica y hortícola, la mayoria de los plaguicidas en uso aún son compuestos sintéticos . 20 Muchos de estos fungicidas químicos se clasifican como carcinógenos por la EPA, son tóxicos a la vida silvestre y otras especies no objetivo. Además, los patógenos pueden desarrollar resistencia a los plaguicidas químicos (véase, por ejemplo, Sch inn et al . , p. 244, ADVANCES IN PLANT 25 PATHOLOGY: PHYTOPTHORA INFESTANS THE CAUSE OF LATE BLIGHT OF POTATO (Academic Press, San Diego 1991) . Cada año, $250-300 millones de dólares de plaguicidas químicos se usan para controlar infestaciones del -W gusano de la raiz del maiz. Muchos de estos plaguicidas 5 químicos son tóxicos a los humanos, la vida silvestre y otras especies no objetivo. También algunos se han encontrado en el agua de pozos. Los nuevos insecticidas químicos cuestan $100 millones para desarrollarse. El control biológico ofrece una alternativa 10 atractiva para los fungicidas químicos sintéticos. Los bioplaguicidas (organismos vivos y los compuestos producidos naturalmente producidos por estos organismos) pueden ser más seguros, más biodegradables, y menos caros para desarrollarse. 15 Los bioplaguicidas desarrollados a partir de microorganismos son altamente deseados para programas integrados de administración de plagas en ambientes de agricultura, salud pública y urbano. Un bioplaguicida comúnmente usado es la bacteria gram positiva Bacill us 20 thupngiensis . Las cepas de B . thuringiensis plaguicidas se conocen que producen proteínas cristal durante la esporulación, que son específicamente tóxicas para algunos órdenes y especies de insectos y nemátodos (véase, por ejemplo, Patente Norteamericana No. 4,999,192 y la Patente 25 Norteamericana No. 5,208,017) . Las endotoxinas proteináceas y*itíSfÍ -. ''»zX producidas por B . thuringiensis también actúan como agentes insecticidas en contra del gusano de la raiz del maiz y otros coleópteros (véase, por ejemplo, la Patente Norteamericana No. 5,187,091; Johnson, T.J. et al. (1993), J. Economic 5 En tomology, 86:330-333). Las endotoxinas de B . thuringiensis han mostrado ser efectivas como cristales purificados, pellas de células lavada, y proteínas expresadas. Warren et al. (WO 96/10083), describen proteínas sin endotoxina producidas durante la etapa vegetativa de Ba cillus cereus y B . 10 thuringiensis . Estas proteínas vegetativas, llamadas Vipl y V?p2 tienen potente actividad en contra del gusano de la raiz ' del maiz (del norte y del oeste) . Estruch et al. (1997) Na ture Biotechnology 15:137-141 y Mullins et al. (1997), Appl . Environ . Microbiol . 63. 15 Un metabolito termoestable de B. thurmgiensis denominado beta-exotoxina también ha mostrado tener propiedades plaguicidas. Burg^eron and Biache (1979), Entomophaga 11:279- 284 reportan una beta exotoxina que es activa en contra del coleóptero de la papa Colorado ( Leptinotarsa decemlinea ta) . 20 Además, las beta-exotoxinas de B . thuringiensis presentan actividad plaguicida no especifica, destruyendo no solamente nemátodos, sino también moscas, gusano guerrero, acaro y gusano de la raiz del maiz. La exotoxma Sigma tiene estructura similar a la beta-exotoxina, y es activa en contra del 25 coleóptero de la papa Colorado (Argauer et al. (1991) J. ?r Entomol. Sci. 26:206-213). La alfa-exotoxina es tóxica en contra de la larva de la Musca domestica (Cluthy (1980) FEMS Microbiol. Lett. 8:1-7). Las gamma-exotoxinas son diversas enzimas proteoliticas, quitmasas y proteasas. Los efectos 5 tóxicos de la gamma exotoxinas se expresan solamente en combinación con beta-exotoxma o delta-endotoxma . Forsberg ett- al. (1976) "Bacillus thupngiensis: Its effects m Environmental Quality, " National Research Council of Canadá. Stonard et al. (1994) ACS Symposium Series 551:25 reportan un 10 metabolito secundario soluble en agua activo en contra del gusano de la raiz del maiz en el sobrenadante de una cepa de Bacillus cereus. No existen cepas documentadas de Bacillus subtilie con amplio espectro de actividad insecticida. 15 Los programas de selección han identificado algunas cepas de Bacillus spp. (Bacillus spp. incluyen B. subtilis, B. cereus, B. mycoides , B. thurmgiensis) que presentan actividad antifúngica (Véase, por ejemplo, Stabb et al. (1990) Applied Environ. Microbiol. 60:4404-4412). Estas cepas 20 han mostrado producir z itermicma-A y o kanosamma (Milner et al. (1996) Appl. Environ. Microb. 62:3061-3066), dos agentes antibióticos que son efectivos en contra de la enfermedad que pudre por el pie transportada por el suelo, causada por Phytophthora medicaginis , P. nicotianae, P. 25 aphamdermatum o Sclerotinia minor (véase, Stabb et al., S??!/t-ii >f - cepas de B . cereus en semillas de soya o al suelo que rodea a las semillas ha mostrado mejorar el rendimiento de la soya en los sitios de campo. (Véase, Osburne et al (1995) Am. Phytopa thol . Soc . 79 ( 6) : 551-556) . Los métodos para aplicar bioplaguicidas son bien conocidos en la técnica e incluyen :? por ejemplo, polvos humedecibles, descargables en seco, microencapsulación de agentes efectivos, formulaciones liquidas o sólidas de fracciones antibióticas de cultivos adecuados (Véase, por ejemplo, la Patente Norteamericana No. 5,061,495 para Rosall o Patente Norteamericana No. 5,049,379. ara Handelsman) . Smith et al . (1993) Plan t Disease 77 (2 ): 139-142 reporta que la actividad del hongo transportado por el suelo, Pythium aphaniderma tum, que causa escurrimiento del pepino Bacteriol . 78:97-108 reporta que la producción de antibióticos anti-Botrytis y anti-Alternapa por dos cepas de f Bacillus, B. subtilis CL27 y B. pumilus CL45. El caldo completo y los filtrados libres de células fueron activos en 5 contra de Botrytis y Alternaria en pruebas m vitro y fueron activos en contra de Botrytis en pruebas de plantas pequeñas in vivo sobre Astilbe. Leifert et al (1997) Patente Norteamericana No. 5,597,565 describe B. subtilis , B. pumilus y B. polymyxa que son particularmente efectivos para inhibir f 10 hongos que causan enfermedades pos-cosecha. También describen la presencia de antibióticos producidos en el filtrado de cultivo libre de células y su actividad a diferentes valores de pH, pero no identifican estos compuestos. Rosall (1994) Patente Norteamericana No. 5,344,647 15 describe cepas de Bacillus subtilis con amplia actividad antifúngica. Sholberg et al. (1995) Can J Microbiol. 41:247- 252, Swinburne et al. (1975) Trans. Brit. Mycol. Soc. 65:211- 217, Smgh and Deverall (1984) Trans. Br . Mycol. Soc. 83:487- 490, Ferreira et al. (1991) Phytopathology 81:283-287, y 20 Baker et al. (1983) Phytophatology 73:1148-1152 describen el uso de Bacillus spp. y Bacillus subtilis como agentes de biocontrol de hongos patógenos de planta. Baker et al. (1983) Phytopathology 73:1148-1152 también reporta sobre un Bacillus subtilis antifúngico para uso sobre patógenos de planta. 25 Pusey et al. (1988) Plant Dis. 72:622-626, Pusey and Robins (Patente Norteamericana No. 5,047,239) y McKeen et al . (1986) Phytophatology 76:136-139 describe el control de la pudrición de la fruta pos-cosecha utilizando B. subtilis. McKeen et al . , supra , ha mostrado que los antibióticos similares a los 5 polipéptidos cíclicos de iturina de bajo peso molecular contribuyen a esta actividad fungicida de B . subtilis . Liu et ai. (1995) Patente Norteamericana No» 5,403,583 describe un Bacill us mega terium, ATCC 55000 y un método para controlar el hongo patógeno de planta, 10 Rhizoctonia solani . Islam and Nandi (1985) J. Plan t Diseases « and Protection 92 (3) : 241-246 describe un Bacill us mega terium con antagonismo para Drechslera oryzae, el agente causante de la mancha café del arroz. Los mismos autores Islam and Nandi (1985) J. Plan t Diseases and Protection 92(3) 233-240 también 15 describen antagonismo in vitro de B. mega terium contra Drechslera oryzae, Al ternaria al terna ta y Fusarium roseum . Se discuten tres componentes en el filtrado de cultivo. El antibiótico más activo fue altamente soluble en agua y metanol con un pico UV a 255 nm y una saliente a 260 nm, que 20 probó ser un lipopéptido parecido a polioxina. Cook ((1987) Proceedmgs Bel twide Cotton Production - Mechaniza tion - Research Conference, Cotton Council, Memphis, pp . 43-45) describe el uso de una suspensión de Bacill us mega teri um para reducir el número de plantas de algodón destruidas por 25 Phyma totrichum omnivorum, una causa de la pudrición de la raíz del algodón. La producción de antibióticos de B. mega terium ha sido registrada por Berdy (CRC Handbook of Antibiotic Compounds, Vols. I-XIV, (CRC Press, Inc., Boca Ratón, FL 5 1980-87) quien reporta la producción de antibióticos peptidicos de baja toxicidad a mamíferos, tales como ansam?tocma-PDM-0, bacimetpna, megacina, pentapéptidos y homopéptidos . Se conoce que los bacilos producen metabolitos 10 secundarios antifúngico y antibactepa . Los investigadores de la Universidad de Wisconsm y la Universidad de Cornell han identificado un nuevo compuesto fungicida, zwitermicina A, producida por Bacill us sp . (He et al . (1994) Tetra . Lett . 35 ( 16) : 2499-2502 ) . Un segundo metabolito fungicida producido 15 por la misma cepa se identifico recientemente como la conocida amino-azúcar, kanosamma (Milner et al . (1996) Appl . Environ . Microb . 62:3061-3065) . Otro grupo de metabolitos de Ba cill us descritos previamente son los lipopéptidos cíclicos de la clase 20 ítunna, algunos de los cuales son potentes agentes fungicidas. Estos agentes consisten de un octapéptido cíclico con siete a-aminoácidos, y un ß-ammoacido con una cadena secundaria alifática. Existen diversos grupos de ítunnas que difieren en orden y contenido de la secuencia de aminoácido. 25 Esto se muestra en la Tabla 1 posteriormente. Generalmente, se produce una serie de moléculas relacionadas con diferencias en la longitud y ramificación del residuo del aminoácido alifático. Cuando se probó en contra de Saccharomyces cerevisiae, se encontró que la micosubtilma es el agente más activo (LC50 = 10 µg/mL) seguido por iturina-A y bacilomicina L (teniendo ambos una LC50 = 30 µ/mL) (Beeson et al . (1979) J. Antibiotics 32 ( 8 ): 828-833) . Se ha reportado que el modo de acción de estos lipopéptidos cíclicos se debe a la interacción con membranas de hongos que crean canales 10 transmembrana que permiten la liberación de iones vitales F (Latoud et al . (1986) Biochem . Biophys . Acta 856:526-535). La íturina C es inactiva en contra de hongos que incluyen Penicillium chrysogenum (Peypoux et al . (1978) Tetrahedron Let t . 34:1147-1152) . 15 Tabla 1 Estructuras de la familia iturina de antibióticos 9w R ( CH2 ) 8-?2CHCH2CO-?X??D-Tyr?D-Asn I i NH^X7^X6-X5- 4 R=CH3- CH ( CH3 ) 2- CH3CH2CH CH3 Un grupo de investigación en la USDA ha investigado la relación de estructura/actividad de las iturinas sintetizando un número de análogos que difieren en la 10 longitud de la cadena de aminoácido. Los investigadores • reportaron que la actividad de la iturina se incrementa con la longitud de la cadena secundaria de ácido graso y la ramificación terminal en el orden iso>normal>antiiso (Bland et al . (1995) Proc . Plant Growth Regula tion Soc . Am . 15 22nd: 105-107 ) . También establecen que las "cantidades de iturinas obtenidas de la producción natural son inadecuadas para ser comercialmente viables" con base en su trabajo con • un número de cepas de Bacill us que producen iturina. Otros grupos de lipopéptidos cíclicos aislados de 20 B. cereus son las plipastatinas . Estos compuestos son una familia de decapéptidos acilados, las estructuras de los cuales se muestran en la Figura 1 (Nishikiori et al . (1986) J. An tibiotics 39 ( 6) : 755-761) . Estos compuestos se aislaron originalmente como inhibidores de fosfolipasa A2 pancreática 25 de porcino (Umeza a et al . (1986) J. Antibiotics 39(6) :737- ~- 744), pero se encontró después que inhiben algunos hongos patógenos de plantas que incluyen Botrytis , Pyricularia y -9 Al ternaria (Yamada et al . (1990) Nippon Noyaku Gakkaishí 15 (1) : 95-96) . Yamada también reportó un efecto sinergistico 5 observado entre íturina A y las plipastatmas, producidas ambas por la misma cepa de B . subtilis . Se ha llevado a cabo un trabajo sobre las mejoras? de fermentación para incrementar la producción de las itunnas en fermentaciones de estados liquido (Phae and Shoda 10 (1991) J Ferment . Bioeng. 71:118-121); Ohno et al . (1993) J. Ferment . Bioeng 75:463-465) y sólido(Ohno et al . (1992) . Biotech . Let t . 14 ( 9) : 817-822; Ohno et al . (1995) J. Ferment . Bioeng. 5:517-519). Existe un reporte de sinergia entre las surfactinas cercanamente relacionadas que son en si mismas 15 inactivas, y las íturinas producidas por la misma cepa de B . subtil is (Hiraoka et al . (1992) J. Gen . Appl . Microbiol . 38:635-640). La secuencia de nucleótidos para el gen que co- regula biosintesis de iturina A y surfactina ha sido publicada (Huang et al . (1993) J. Fermen t . Bioeng. 76(6) :445- 20 450) . El trabajo de campo sobre las cepas que producen íturina se ha concentrado en el tratamiento del suelo para control de Rhizoctonia (Asaka and Shoda (1996) Appl . Envíron . Microbiol . 62:4081-4085) y no se han reportado las aplicaciones de iturinas en el campo foliar. 25 Otro compuesto lipopéptido cíclico producido por B. ?i subtilis es surfactina, que posee una excepcional actividad tensioactiva (Kaninuma et al . (1969) Agrie . Biol . Chem . 33 : 913-916) . La surfactina contiene un ß-hidroxi ácido graso de C14 o C15 enlazado por un anillo de lactona a una porción 5 heptapeptidica con una secuencia LLDLLDL (SEC. DE IDENT N0:1) (Arima et al . (1968) Biochem . Biophys . Res . Commun 31 : 488- 494 . Sandrin et al . ((1990) Biotechnol . Appl . Biochem . •** 12:370-375) encontraron cepas de B. subtilis que producen surfactina e iturina A, las bacilomicinas F y L y 10 micosubtilina. • El nuevo microorganismo AQ713 que se ha descubierto, previamente se pensó que era una cepa de Bacillus mega terium y ahora identificado como una cepa de Bac ll us subtilis, produce iturinas A, plipastatinas y 15 surfactinas. La producción de esta combinación de lipopéptidos por un microorganismo no ha sido previamente reportada. Además, se han descubierto que AQ713 también • produce un grupo recientemente descrito de compuestos designados como "agrostatinas" . La combinación de los tres 20 compuestos conocidos anteriores con las nuevas agrastatinas también es novedosa. Se proporciona una nueva cepa de Ba cill us subtil is que produce metabolitos y que produce antibióticos, previamente identificada como Bacill us mega teri um que 25 presenta amplia actividad fungicida y bactericida y también presenta actividad insecticida. También se proporciona un nuevo metabolito del nuevo B. subtilis con actividad en contra de insectos subterráneos y foliares. También se • proporciona un método para tratar o proteger plantas de 5 infecciones de hongos, bacterias e insectos que comprenden la etapa de aplicar una cantidad efectiva del Bacillus subtilis que produce antibiótico. El Bacill us subtilis que produce antibiótico puede proporcionarse como una suspensión en un caldo completo de cultivo o como un sobrenandante que 10 contiene antibiótico obtenido de un caldo completo de cultivo • de la cepa que produce antibiótico de Ba cill us . También se proporciona un método para tratar o proteger raices de plantas de infestaciones subterráneas (por ejemplo, gusano de la raiz del maiz), que comprende la etapa de aplicar una 15 cantidad efectiva del nuevo Bacill us subtil is que produce metabolito, caldo completo de cultivo o sobrenadante de cultivo. El nuevo Bacillus subtilis que produce metabolito puede proporcionarse como una suspensión en un caldo completo • de cultivo o como un sobrenadante que contiene metabolito o 20 un metabolito purificado obtenido de un caldo completo de cultivo del microorganismo. También se proporcionan compuestos novedosos, agrastatinas, producidas por la nueva cepa AQ713, y una combinación de compuestos novedosos que comprende íturina A, una plipastatina, una surfactina y una 25 agrastatina.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 muestra la estructura de los antibióticos de plipastatma (SEC. DE IDENT NO:2) . F-W La Figura 2 muestra el cromatograma de HPLC de los 5 metabolitos de AQ713. La presente invención proporciona una cepa novedosa, AQ713, de Bacill us subtilis, previamente identificada como un Ba cill us mega terium, o mutantes del mismo, con la amplia actividad antifúngica, insecticida y 10 antibactepana . Esta nueva cepa se designa AQ713 y se depositó con el NRRL el 7 de marzo de 1997 bajo las disposiciones del Tratado de Budapest sobre el Reconocimiento Internacional del Depósito de Microorganismos para el Propósito de Procedimiento de Patente ba o el Número de 15 Acceso B-21661. Se identificó subsecuentemente como Bacillus subtilis por la American Type Culture Collection (ATCC) . La invención también incluye métodos para tratar 9 raices de plantas o suelo para controlar infestaciones de insectos con una suspensión bacteriana de AQ713, o un 20 sobrenadante que contiene metabolitos del cultivo AQ713 o metabolitos purificados de la cepa AQ713. La invención también incluye métodos para prevenir y tratar enfermedad de hongos, bacterias e insectos de plantas que usan tales cepas bacterianas o sobrenadantes que 25 contienen antibióticos o antibióticos puros obtenidos de ~- 15 tales cepas bacterianas. La invención también incluye métodos para tratar follaje de plantas, raices o el suelo que rodea F la planta para controlar insectos y larvas de insectos con una suspensión bacteriana de AQ713 o un sobrenadante que 5 contiene metabolitos de un cultivo de AQ713 o metabolitos purificados de la cepa AQ713. La invención también incluye un metabolito extraible en solvente con actividad sobre insectos con un peso molecular de menos de 10,000 daltons. La invención incluye adicionalmente nuevos compuestos, F 10 agrastatinas, producidos por el nuevo microorganismo. También se incluye una nueva combinación que comprende una iturina tipo A, una plipastatina, una surfactina y una agrastatma. Definiciones Como se usa en la presente, "control biológico" se 15 define como control de un patógeno o insecto por el uso de un segundo organismo. Mecanismos conocidos de control biológico incluyen bacterias entéricas que controlan la pudpción de ^ raiz compitiendo con los hongos por espacio sobre la superficie de la raiz. Las toxinas bacterianas, tales como 20 antibióticos, han sido utilizadas para controlar patógenos. La toxina puede aislarse y aplicarse directamente a la planta o la especie bacteriana puede administrarse de manera que produce la toxina in si tu . El término "bacteria" incluye cualquier organismo 25 procariótico, que no tenga un núcleo distinto.

El término "hongo" o "hongos" incluye una amplia variedad de organismos nucleados que llevan esporas que están desprovistos de clorofila. Ejemplos de hongos incluyen -^kW levaduras, humus, mohos, tizones y hongos. 5 "Fungicidas" significa la capacidad de una sustancia para incrementar la mortalidad o inhibir la relación del crecimiento de los hongos. Un "mutante" es un organismo que lleva un gen mutante que se expresa en si mismo en el fenotipo del 10 organismo. F "Antibiótico" incluye cualquier sustancia que sea capaz de destruir o inhibir un microorganismo. Los antibióticos pueden producirse por un microorganismo o por un proceso sintético o proceso semisintético . El término, por lo 15 tanto, incluye una sustancia que inhibe o destruye hongos, por ejemplo, z itermicina-A o kanosamina. "Anti-hongo" incluye cualquier sustancia que sea F capaz de destruir o inhibir el crecimiento de hongos . El término "cultivo" se refiere a la propagación de 20 organismos sobre o en medios de diversos tipos. "Caldo completo de cultivo" se refiere a un liquido de cultivo que contiene células y medios. "Sobrenadante" se refiere al caldo liquido que permanece cuando las células crecidas en el caldo se retiran por centrifugación, filtración, sedimentación, u 25 otros medios bien conocidos en la técnica.

Una "cantidad efectiva" es una cantidad suficiente para efectuar resultados benéficos o deseados. Una cantidad efectiva puede administrarse en una o más administraciones.

• En términos de tratamiento y protección, una "cantidad efectiva" es aquella cantidad suficiente para mejorar, estabilizar, invertir, disminuir o retrasar la progresión de los estados afectivos de hongos o bacterias. Como se usa en la presente, el término "insectos" incluye todos los organismos en la clase de "Insectos". Los 10 insectos "pre-adultos" se refieren a cualquier forma de un organismo antes de la etapa adulta, que incluye, por ejemplo, huevos, larvas y ninfas. "Insecticida" se refiere a la capacidad de una sustancia para incrementar la mortalidad o inhibir la velocidad de crecimiento de los insectos. 15 "Nematicidas" se refiere a la capacidad de una sustancia para incrementar la mortalidad o inhibir la velocidad de crecimiento de los nemátodos. "Plaguicidas" se refiere a la capacidad de una sustancia para incrementar la mortalidad o inhibir la velocidad de crecimiento de insectos, nemátodos y 20 ácaros . "Control positivo" significa un compuesto que se conoce tiene actividad plaguicida. "Controles positivos" incluyen, pero no se limitan a plaguicidas químicos comercialmente disponibles. El término "control negativo" 25 significa un compuesto que se conoce no tiene actividad plaguicida. Ejemplos de controles negativos son agua o acetato de etilo. El término "solvente" incluye cualquier liquido que • retiene otra sustancia en solución. "Extraible en solvente." se refiere a cualquier compuesto que se disuelve en un solvente y el cual después puede aislarse a partir del solvente. Ejemplos de solventes incluyen, pero no se limitan a, solventes orgánicos, tales como acetato de etilo. El término "metabolito" se refiere a cualquier 10 compuesto, sustancia o subproducto de una fermentación de un • microorganismo que tiene actividad plaguicida. Antibiótico como se definió anteriormente es un metabolito específicamente activo en contra de un microorganismo. El término "agrastatinas" se refiere a un grupo de 15 compuestos novedosos que tienen las siguientes estructuras (SEC. DE IDENT NO:3) . R?-CH-CH2-CO-Glx-Orn-Tyr-Thr-Glx—X—Pro-Glx-Tyr-Val 20 en donde Ri es una cadena secundaria alifática ramificada o lineal, C8-C20; X es Ala o Val; R2 es un derivado acetato o un éster; y Glx es Gln o Glu. Estos compuestos tienen amplio rango de actividad antibacteriana anti insecticida y antifúngica. 25 Se describe un nuevo metabolito y cepa de Bacillus subtilis, que produce antibiótico, previamente identificada como Bacill us mega terium, que tiene amplia actividad antifúngica y antibacteriana y también destruye o impide el • crecimiento de insectos y sus larvas. En otro aspecto, la 5 presente invención proporciona un método para tratar o proteger plantas de infecciones de hongos, insectos y bacterias, que comprende aplicar una cantidad efectiva de un sobrenadante obtenido a partir de un caldo completo de cultivo de Ba cill us subtilis AQ713 dentro de la presente 10 invención. El sobrenadante puede obtenerse bien conocido en F la técnica que incluye centrifugación, filtración, sedimentación y similares. En otro aspecto, la invención abarca un método para tratar o proteger plantas de infecciones de hongos, insectos 15 y bacterias que comprende aplicar una cantidad efectiva del caldo completo de la nueva cepa de Ba cill us subtil is . En un aspecto adicional, la invención abarca un F método para tratar o proteger plantas de enfermedades de hongos, insectos y bacterias que comprende aplicar una 20 cantidad efectiva del antibiótico producido por la nueva cepa de Bacillus subtilis . En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para tratar o proteger plantas y raices de plantas de infestaciones de insectos y larvas que comprende aplicar 25 una cantidad efectiva de un sobrenadante obtenido a partir de un caldo completo de cultivo de Bacillus subtilis AQ713 dentro de la presente invención. El sobrenadante puede* obtenerse bien conocido en la técnica, que incluye centrifugación, filtración, sedimentación y similares. 5 En otro aspecto, la invención abarca un método para tratar o proteger plantas y raices de plantas de, infestaciones de insectos y larvas que comprende aplicar una cantidad efectiva del caldo completo de la cepa novedosa de^ Bacillus subtilis . 10 En un aspecto adicional, la invención abarca un # método para tratar o proteger raices de plantas y raices de infestaciones de insectos que comprende aplicar una cantidad efectiva del metabolito producido por la nueva cepa de Bacillus subtilis . 15 Para lograr buena dispersión y adhesión de las composiciones dentro de la presente invención, puede ser ventajoso formular el caldo completo de cultivo, sobrenadante y/o metabolito/antibiótico con componentes que auxilien la • dispersión y adhesión. Las formulaciones adecuadas serán 20 conocidas por aquellos expertos en la técnica. Las composiciones dentro de la presente invención pueden formularse como polvos humedecibles, granulos y similares, o pueden microencapsularse en un medio adecuado y similares. Ejemplos de otras formulaciones incluyen, pero no 25 se limitan a polvos solubles, granulos humedecibles, descargables en seco, descargables acuosos, granulos dispersables humedecibles, concentrados emulsificables y suspensiones acuosas. Otras formulaciones adecuadas serán conocidas por aquellos expertos en la técnica. ^^W 5 En aún un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un nuevo grupo de compuestos designados "agrastatinas" . Estos compuestos presentan actividad antibacteriana y antifúngica además de la actividad anti-insectos . 10 En aún un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona una nueva combinación que comprende F una ítunna tipo A, una plipastatina, una surfactina y una agrastatma . En otro aspecto de la presente invención, se 15 proporcionan métodos para tratar o proteger plantas de enfermedades de insectos, hongos y bacterias que comprende aplicar una cantidad efectiva de una nueva combinación de compuestos que comprende una iturina tipo A, una F plipastatina, una surfactina y una agrastatina. 20 Se proporciona además en la presente un extracto lipopeptidico aislado de la cepa AQ713 con actividad insecticida y un lipopéptido de surfactina aislado de la cepa , AQ713 con actividad insecticida. Asi, esta invención también proporciona un método para tratar o proteger plantas y/o 25 frutos de infestaciones de insectos al aplicar una cantidad efectiva de la lipofectina aislada o surfactina aislada al follaje, raices o el suelo que rodea las plantas o raices. Estas composiciones aisladas pueden combinarse con otros 9 pesticidas o insecticidas conocidos y pueden formularse como- 5 se describió anteriormente para AQ713 y aplicarse como granulos, polvos humedecibles, descargables o microencapsulados . Todas las patentes y publicaciones citadas en la presente se incorporan por este medio para referencia en su 10 totalidad. Los siguientes ejemplos se proporcionan para F ilustrar la invención. Estos ejemplos no deben interpretarse como limitantes . EJEMPLOS Ejemplo 1 15 Caracterización de la Cepa AQ713 El aislado se identificó con base en la utilización del panel microplaca Biolog (Biolog, Inc., Hay ard, CA) como se describe en Bochner (1989) Na ture 339:157-158. La f microplaca Biolog está comprendida de pozos de panel pre- 20 rellenos y secos con 95 diferentes placas de sustrato de carbono disponibles para bacterias gram positivas y grara negativas. El aislado se cultivó en un medio liquido a 28°C y después de 24 horas se inoculó una suspensión de células lavadas (0.85% de solución salina) dentro de cada pozo de 25 panel de una GP Microplate (Biolog, Inc.). Después de 24 horas a 28°C, se valoraron las reacciones de utilización de carbono. Los perfiles de utilización de sustratos se? compararon después con la Biolog Gram-Positive Data Base (liberación 3.50) y se aislaron con las especies más 5 cercanamente similares. Los resultados de Biolog dieron un Índice de similaridad de 0.883 para Bacill us mega terium . Una caracterización más extensa de AQ713 se condujo por la American Type Culture Collection, (ATCC) 10801 University Blvd., Manassas, VA, 20110-2209. 10 Aislado presentado como: Desconocido: Cepa AQ713 Aislado identificado como: Usando los datos fisiológicos y bioquímicos disponibles, esta cepa se parece más cercanamente a Bacillus subtilis . Morfología celular: Las células móviles se 15 encuentran individualmente con una endospora formada en la región central o subterminal. Las células se tiñeron uniformemente gram positivas. Morfología de colonias: Las colonias son opacas e irregulares con elevación convexa, una superficie áspera, roma y un borde 20 erosionado. Datos de Caracterización de la Cepa AQ713: » > *•*.' " F F Comentarios: Usando los datos fisiológicos y bioquímicos disponibles, esta cepa se parece más cercanamente a Bacillus subtilis . Resultados de Caracterización Claves Referencia : Gordon, R.E. W.C. Haynes and C.H.N. Pang. 1973. The Genus Bacillus . Handbook No. 427. U.S. Department of • Agriculture, Washington, D.C. Ejemplo 2 Actividad de AQ713 Contra el Gusano de la Raiz del Maiz Se cultivaron muestras de Ba cill us en un medio de cultivo de Bacill us . El medio 2 contiene 5% de peptona, 5% de dextrosa, 3% de extracto de levadura, 3% de extracto de 10 malta, 1.5% de extracto de semilla de algodón proflo (59% de proteina, 4.26% de grasa, 6.73% de ceniza, 3.19% de fibra y cantidades traza de gossipol; el equilibrio es agua) , 10% de soya, y 0.5% de MgS04 x 7H20. El medio 3 contiene los mismos ingredientes, excepto con 20% de peptona y 3.4% de KH2P0 y 15 4.3% de K2HP? . Un día los cultivos se usaron para inocular matraces agitados con deflectores de 250 ml . Los matraces se agitaron a 200 rpm a 29°C durante 5 días. Para probar la actividad insecticida, s centrifugaron 35 mL de caldo de cultivo a 5,200 rpm durante 20 minutos y el sobrenadante usado en la microprueba descrita posteriormente. • Las pruebas se realizaron en microplacas de 96 pozos. Cada pozo contiene un sustrato de agar sólido, un organismo de prueba y ya sea un control positivo, un control negativo o sobrenadante obtenido como se describe en el Ejemplo 1 de la nueva cepa de Ba cill us . 10 Para probar la actividad insecticida, se preparó un sustrato de agar para los pozos de la microplaca conforme a Marrone et al . (1985) J. Econ . En tomol . 78:290-293. Para probar la actividad nematicida, en lugar de eso se usó en los pozos de agar (1.5%) simple. 15 Se usó una solución de 1 ppm de Avid® (avermectina) como un control positivo. Se usó agua desionizada como un control negativo. Se usaron dos réplicas de cada muestra de prueba o control para cada prueba. Se dispensaron 40 µL de muestra de sobrenadante o caldo completo crecido en un medio 20 1, 2 ó 3 dentro de cada pozo de muestra. Las placas se colocaron después en una campana para secar por aproximadamente 2-3 horas hasta que la solución de agar se secó . Los organismos de prueba fueron ya sea gusano de la 25 raiz del maiz pre-adulto ( Diabrotica undecimpuncta ta) , JA »1t^ -. .„ JMt^t^^,^^^^1^^i, ál^ti^ i^iÉÍ>^ de larva. Los pozos de muestra que contienen todas las larvas muertas o impedidas de crecimiento se les dio una cuenta de 1, los pozos que contienen alguna larva muerta y otr severamente impedidas de crecimiento se les dio una cuenta de 2, a las larvas vivas pero impedidas de crecimiento se les dio una cuenta de 3 y a los pozos de muestra que no contienen larvas muertas se les dio una cuenta de 4. Las cuentas se promediaron entre las réplicas dentro de cada muestra. Los resultados se resumen en las Tablas 2 y 3. Tabla 2 : Clasificación de Puntuación de AQ713 en Contra de Plagas de Insectos de Caldo Completo C efegaps Gusano de la raíz Gusano guepero Mosca de la Control Positivo Control d maíz delaremolacha fruta Negativo Medio 2 NT 1.0 4.0 4.0 1 0 4.0 Medio 3 NT 2.0 4.0 4.0 1 0 4.0 NT = no probada TABLA 3A: Clasificación de Puntuación de A 713 en Contra de Plagas de Insectos Prueba 1 de Sobrenadante C. elegans Gusano de la Gusano guerrero Moscadela Cucaracha Control Control raízdelmaíz de la remolacha fruta Alemana Positivo Negativo Me o2 4.0 3.0 4.0 4.0 4.0 1.0 40 ^ Medo3 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 1.0 4.0 Estas pruebas muestran que AQ713 fue activo en ambos medios como un caldo completo de cultivo, con la mejor actividad en el medio 2. El sobrenadante fue solamente activo cuando AQ713 se cultivó en el medio 2. Prueba Número 2. Se probó AQ713 de nuevo en contra del gusano F 10 guerrero de la remolacha y el gusano de la raíz del maíz ea un tercer medio en frasco agitado o un fermentador de 10 litros, llamado medio 4. Contiene los mismos ingredientes que el medio 3 sin el extracto de semilla de algodón proflo. Todos los otros procedimientos fueron los mismos como 15 anteriormente. La prueba se repitió dos o tres veces.

Tabla 3B: Clasificación de Puntuación de A 713 en Contra dß Plagas de Insectos Prueba de Sobrenadante hSí£" F Gusano de la raíz Gusano Guerrero de Control Positivo Control Negativo del maíz la Remolacha Sobrenadante .0, 1.0, 1.0 1.0, 2.0 1.0,1.0, 1.0 4.0, 4.0, 4.0 Medio 4 Caldo Completo 1.0,1.0 2.0,1.0 1.0,1.0 4.0, 4.0 Medio 4 El sobrenadante de AQ713 y el caldo completo fueron altamente activos en contra del gusano de la raiz del maíz y 5 el gusano guerrero en el medio 4. Ejemplo 3 Actividad de AQ713 en contra del pulgón verde del melocotonero Se probó AQ713 en un medio 4 usando lotes de AQ713 10 crecido dos veces en dos diferentes fermentadores de 10 litros y dos veces en un fermentador de 400 litros durante 48 F horas. El pulgón verde del melocotonero, Myzus persicae se probó además del gusano de la raíz del maíz y el gusano guerrero. El caldo completo (WB) y el sobrenadante (S) se 15 probaron en uno de los lotes de 400 litros. Para probar el pulgón verde del melocotonero, se pipetearon 40 microlitros de la muestra de AQ713 sobre un pequeño disco de papel filtro en el fondo de cada uno de los 8 pozos en una placa de 96 pozos. Las placas se secaron después bajo una campana por 1-2 horas. Los pulgones se agregaron a cada pozo golpeando suavemente los pulgones fuera de las hojas de col. El fondo del pozo se cubrió con pulgones. Cuando una columna de pozos • se llena, la placa se tapa con una cinta de tapa para mantener los pulgones en el lugar. Las placas de prueba se incubaron a 20-22°C. La prueba se evalúa en 48 horas, usando un microscopio para contar el número de pulgones vivos y muertos . A los pozos se les da después una cuenta sobre una escala de 1 a 4 como con los otros insectos (4 es sin 10 insectos muertos, 1 es 100% de destrucción) . Tabla 4: Clasificación de Puntuación de AQ713 en Contra del - Pulgón Verde del Melocotonero, Prueba de Sobrenadante (S) y Caldo Completo (WB) Pulgón Verde del Control Positivo Control Negativo Melocotonero 10 litros (1) S 2.0 1.0 4.0 10 litros (2) S 2.0 10 4.0 400 litros (1) S 1.0 1.0 40 400 litros (2) WB 1.0 1.0 40 400 litros (2) S 1.0 10 40 Esta prueba en contra de fermentaciones pequeñas y 15 grandes de AQ713 muestran que el caldo completo y el sobrenadante son altamente efectivos en la destrucción del pulgón verde del melocotonero.

Ejemplo 4 Prueba de Planta de AQ713 en Contra del Pulgón Verde del Melocotonero 9 Se cultivaron plantas de pimienta de seis pulgada^ ¡v y 5 de alto (Yolo Wonder) en seis paquetes en un invernadero! Los pimientos se dejaron infestar naturalmente de poblaciones de pulgones verdes del melocotonero residentes en el invernadero. Los pimientos se rociaron hasta derramarse con un rociador manual. Las muestras de AQ713 probadas fueron 10 caldo completo y polvo secado por aspersión del caldo completo cultivado en un fermentador de 400 litros en un medio 4. Después de tres días, se destruyeron 75% de los pulgones sobre los pimientos tratados con AQ713. No hubo pulgones muertos en los pimientos sin tratar o tratados con 15 agua. Ejemplo 5 Propiedades Químicas del Metabolito de AQ713 Activo en Contra del Gusano de la Raiz del Maiz Se cultivaron 50 mL de AQ713 en un medio 2. A cada 20 cultivo se agregaron 50 mL de acetato de etilo y la mezcla se agitó en un embudo de separación durante 2 minutos. La capa acuosa se retiró y la capa orgánica se recolectó en una botella que contiene sulfato de magnesio. El filtrado orgánico se filtró después en un matraz de fondo redondo y el 25 solvente se retiró en el rotavapor.

Para la bioprueba, el extracto orgánico seco se re- disolvió en 2-5 mL de acetona. Una alícuota de 40 µL sf retiró y se diluyó a 800 µL con 70% de acetona/agua. Esta e& • una concentración 10X del extracto orgánico. Se llevaron a cabo diluciones en serie para obtener muestras sobre gusano de la raíz del maíz neonato con porcentaje de mortalidad de larvas neonato registradas (1 por pozo en una placa de' microtítulo como se preparó anteriormente) después de 7 días. Los resultados se registran en la Tabla 5. 10 Tabla 5: Actividad de Extractos de Acetato de Etilo de AQ713 en Contra del Gusano de la Raiz del Maiz Muestra Porcentaje de Mortalidad AQ713. Extracto orgánico 10X 89 Extracto orgánico 5X 93 Extracto orgánico 1X 65 Caldo completo 100 70% de acetona/agua 27 Agua 59 9 Los resultados muestran que AQ713 produce un metabolito extraible en solvente, que destruye el gusano de la raíz del maíz. 15 Para determinar el rango de peso molecular del metabolito activo, se cultivaron 50-mL de cultivo de AQ713 en un medio 2. Un mL se colocó en un tubo de microcentrífuga y se giró a 12,000 rpm durante 15 minutos. El sobrenadante se retiró. 500 microlitrós^ del sobrenadante se colocaron en lo alto de un filtro centricon de 10,000 daltons de peso molecular. Estos se centrifugaron conforme a las instrucciones del fabricante (12,000 rpm durante 35 minutos). ¿. El filtrado se recolectó y los retenidos se recuperaron por centrifugación y lavado del filtro. Las muestras del sobrenadante, filtrado y lo retenido se probaron en contra de larvas del gusano de la raíz del maíz neonato (placa de 96 pozos con dieta de insectos, Marrone et al . , supra como 10 anteriormente; 40 µL de muestra por pozo y 8 pozos por cada # muestra, 1 larva/pozo) . Los resultados de la prueba se muestran en la Tabla 6. Tabla 6: Corte de Peso Molecular de AQ713 Por Ciento de Mortalidad 15 En contra del Gusano de la Raíz del Maíz AQ713: sobrenadante 43 filtrado 63 lo retenido 17 Los resultados muestran que el sobrenadante y el filtrado fueron activos, asi el peso molecular del metabolito es menor de 10,000 daltons. Ejemplo 6 20 Propiedades Químicas del Metabolito de AQ713 Activo en Contra de Patógenos de Plantas Se cultivaron 50 mL de AQ713 en un medio 2. A cada cultivo se agregó 50 mL de acetato de etilo y la mezcla se agitó en un embudo de separación durante 2 minutos . La cap^ acuosa se retiró y la capa orgánica se recolectó en una .*,. • botella que contiene sulfato de magnesio. El filtrado *. 5 orgánico se filtró después en un matraz de fondo redondo y el solvente se retiró en el rotavapor. Para la bioprueba, el extracto orgánico seco s redisolvió en 2.5 mL de acetona. Una alícuota de 40 µL se retiró y se diluyó a 800 µL con 70% de acetona/agua. Esto es 10 una concentración 10X del extracto orgánico. Una prueba de • placa de 96 pozos (descrita posteriormente) prueba de patógeno de planta con Phythium ul timum y Botryti ts ciñere . se condujo para determinar la actividad del extracto orgánico. El caldo completo dio 100% de control (cuenta de 15 1), pero el extracto orgánico 10X no dio control de los dos patógenos de planta (cuenta de 4) . Esto indica que los * antibióticos activos, a diferencia de los metabolitos activos para el gusano de la raiz del maíz producidos por AQ713 no • son extraíbles en un solvente orgánico tal como acetato de 20 etilo. Para extraer la fracción antibiótica activa y aislar un nuevo compuesto agrastatina A, se hizo un extracto de butanol del caldo de fermentación extrayendo primero el caldo dos veces con un volumen igual de acetato de etilo y 25 separando las capas. La fracción acuosa se extrajo después dos veces con un volumen igual de butanol. Los extractos d ¡-- butanol se combinaron y el solvente se retiró con evaporador giratorio. Se obtuvo un polvo liofilizando extracto resultante. 5 El polvo se disolvió en 80% de acetonitrilo/agua y se rompió por sonido. La solución se aplicó a un cartucho de extracción de fase sólida C-18 (SPE) que habia sido activado con metanol y equilibrado con 80% de acetonitrilo/agua . El cartucho SPE se eluyó con 80% de ACN/agua y este eluyente s@ 10 recolectó y los solventes se retiraron. El eluyente se # purificó adicionalmente por HPLC. Se usó una columna de HPLC C-18 (1 cm X 25 cm) (detección UV a 210 nm) con un acetonitrilo + gradiente de solventes 0.05% de TFA/agua + 0.05% de mezcla TFA como sigue: 0-20 minutos, 33% de ACN; 20- 15 30 minutos, 40% de ACN; 30-45 minutos, 45-55% de ACN; y 45-63 minutos, 55% de ACN. Un cromatograma HPLC de AQ713 muestra la presencia de las iturinas, compuestos parecidos a iturma w (plipastatinas y agrastatinas) y surfactinas, véase Figura 1. 20 Las iturinas A2, A3, A4 , A7 y A6 se identificaron por una combinación de datos de NMR y datos de espectrometría de masa LC y comparación con los valores de la literatura. Las surfactinas se identificaron por comparación con estándares adquiridos de surfactina por HPLC y por espectrometría de 25 masas LC .

Los compuestos parecidos a iturina se determinaron t. ser una mezcla de plipastatinas y las nuevas agrastatinas por -*"* una combinación de análisis de aminoácidos y espectrometría • de masas LC . Los datos de NMR extensivos también ses. ¿ recolectaron para uno de los nuevos compuestos (pico 20 de HPLC) , designado agrastatina A. La agrastatina A se encontró- contener los siguientes aminoácidos. Thr; 3 Glu; Pro; Ala| * Val; 2 Tyr; y Orn. Este conjunto difiere de la plipastatma A por la presencia de Val y la pérdida de lie. El peso 10 molecular de la agrastatina A se determinó que es 1448 que ^kw corresponde a la siguiente estructura (SEC. DE IDENT NO:4). CH3 (CH2) ?2-CH-CH2-CO-Glu-Orn-Tyr-Thr-Glu-Ala-Pro-Gln-Tyr-Val 15 La naturaleza de cadena lineal de la porción de ácido graso se confirmó por 1H NMR. La posición de los aminoácidos en el péptido cíclico se determinó por análisis ^P detallado de los conjuntos de datos TOCSY y ROESY. La espectrometría de masa y el análisis de 20 aminoácidos de agrastatina B (pico 26 de HPLC) sugiere que su estructura es similar a plipastatma B2 con la sustitución del residuo Ala con Val. La estructura se muestra posteriormente (SEC. DE IDENT NO:5): 25 CH3CH2CH(CH2)10-CH-CH2-CO-Glu-Orn-Tyr-Thr-Glu-Val-Pro-Gln-Tyr-Val • Ejemplo 7 5 Actividad de AQ713 en Contra de Patógenos de Planta en Cultivo in vitro (placa de 96 pozos) Para determinar si AQ713 es efectivo en contra de los hongos, Phytoph thora infestans , Pythium ul timum, Botrytis cinérea , Rhizoctonia solani , Al ternaria solani , se realizaron 10 los siguientes experimentos. Se llenaron placas de 96 pozos • (de fondo plano, 400 microlitros por pozo, marca Nunc) con un medio de agar (agar dextrosa de papa) (PDA, Difco) . Los cultivos de Phytophthora infes tans se cultivaron por tres días en un medio YPG-1 liquido (0.4 g de levadura, 0.1% de 15 KH2PO, 0.5% de MgS04 X 7 H20, 1.5% de glucosa). Para los otros hongos, se rasparon las esporas de la superficie de las placas de petri y se rociaron alícuotas de 0.1-0.2 mL de agua desionizada y suspensión de esporas (concentración aproximada • de 2 X 106 esporas/mL) de patógeno sobre el agar. 20 El AQ713 se cultivó durante 72 horas en el medio 2 ó 3 como se describió en el Ejemplo 2. Para obtener sobrenadantes, el cultivo de caldo completo se centrifugó a 5,200 rpm durante 20 minutos. Los patógenos de plantas de hongos se pipetearon sobre las placas de 96 pozos 25 (8 pozos/patógeno). La presencia o ausencia de crecimiento de hongo se registró para cada uno de los 8 pozos. Aproximadamente 40 µL de sobrenadante de AQ713 o 20 µL de caldo completo se agregaron a cada pozo. Una cuenta de "1" significa completa inhibición de crecimiento de hongos. Una cuenta de "4" significa sin inhibición de crecimiento de hongos. Los resultados se muestran en la Tabla 7. Tabla 7: Inhibición In vitro de Crecimiento de Hongo (placa de 96 pozos) Sobrenadante de AQ713 Medio 2 Medio 3 Cuenta Cuenta Phytophtora infestans 1 Phythium ultimum 1 Botrytis cinérea 1 Rhizoctonia solani 4 Alternaria solani 1 Caldo Completo AQ713 Colletotríchum cocodes NT Alternaria brassicicola NT Botrytis cinérea .NT Cladosporium cucumerinum NT Monilinia fructicola NT Venturia pyrina NT Rhizoctonia solani NT Alternaria solani NT NT : No probado , Los resultados muésU,ran que AQ713 tiene amplio espectro fungicida m vi tro ? que el caldo completo y el sobrenadante son altamente activos. El sobrenadante fue activo sobre Thizoctonia solam en un medio 3 pero no en un • 5 medio 2. Ejemplo 8 Actividad de AQ713 en Contra de Patógenos de Plantas en un Cultivo in vitro (prueba de zona) Para determinar la actividad de AQ713 en una prueba 10 de difusión de agar (zona), se rociaron esporas de patógenos de plantas sobre la superficie de agar dextrosa de papa en 9 cajas de petri de 10 cm. Se retiraron pozos de 7.0 mm del agar y una muestra de 100 µL del sobrenadante de AQ713 cultivado en un medio 2 se colocó en el pozo. El sobrenadante 15 se preparó centrifugando a 4200 rpm durante 40 minutos. El sobrenadante se giró después de nuevo a 4200 rpm durante otros 40 minutos. Los resultados típicos consistieron de una zona de no crecimiento y/o crecimiento reducido del patógeno alrededor del pozo. El tamaño de la zona en milímetros se 20 midió y se registró. Los resultados se muestran en la Tabla Tabla 8 : Inhibición In Vitro del Crecimiento de Hongos Patógenos de Plantas (Prueba de Zona) Alternaría Botrytis cinérea Monilinia fructicola brassicicola Tamaño de la zona del 16 23 14 sobrenadante AQ713 (mm) Caldo completo de AQ713 22 15 18 Ejemplo 9 Actividad de AQ713 en Contra de Patógenos de Plantas Bacterianos Se fijó una prueba de difusión en agar estándar como en el Ejemplo 6. Un prado de cada patógeno bacteriano se roció sobre la superficie de una caja de petri. Se colocaron 100 µL de caldo completo de AQ713 cultivado en un medio 2 en cada pozo. El tamaño de la zona se midió en milímetros. Tabla 9: Inhibición Jn Vitro de Patógenos de Plantas Bacterianos (Prueba de Zona) Caldo Completo de AQ713 Zona de Inhibición (mm) Acidovorax avenae subsp. citrulli 18 Pseudomonas syringae py. Tomato 11 Xanthomonas campestris pv. Campestris 18 Erwinia carotovora subsp. carotovora 1 1 Clavibacter michiganense subsp. Michiganense 22 AQ713 fue activo en contra de todas las especies de patógenos de plantas bacterianos probados in vi tro . Ejemplo 10 Actividad de AQ713 en Contra de Patógenos de Plantas en Pruebas de Plantas La actividad de AQ713 se probó en contra de moho gris, Botrytis cinérea , sobre hojas de frijoles y geranios, Al ternaria solani sobre retoños de tomate, y mildiu de lechuga, Bremia lactucae . Para A . solani , retoños de tomate en la etapa de 2- 3 hojas plantados en 6 paquetes se rociaron hasta derramarse con caldo completo de AQ713 (medio 2). Después de rociar, los retoños se dejaron secar (aproximadamente 1.5 horas). Los retoños se rociaron después 5.0 X 104 esporas/ml. Los retoños se cubrieron con un domo de plástico y se mantuvieron a 28°C 10 en un incubador Percival. Agua sin AQ713, con y sin esporas del patógeno se usó como un control negativo y un control de • patógeno positivo. Cuadro dias después la prueba se leyó. Para el control de A . solani en agua, hubo lesiones uniformes sobre todas las hojas y los cotiledones se desprendieron e 15 infectaron severamente (clasificación de 5 infección completa, sin control) . Las plantas tratadas con AQ713 tuvieron una cuantas lesiones ligeras diseminadas sobre las hojas verdaderas. Los cotiledones estaban unidos pero con algunas lesiones pequeñas (clasificación de 1) . El control • 20 negativo no fue infectado. Se dispuso una segunda prueba usando brotes de tomate desprendidos (tallos rotos al nivel del suelo) colocados en jarras de albañil llenas con agua puestas bajo domos y almacenadas como anteriormente. Las plantas se 25 rociaron como anteriormente, y los síntomas de A . solani se registraron cuatro días después. No hubo síntomas sobre el control negativo. Sobre el control positivo, hubo lesiones uniformes sobre los brotes. El tratamiento de AQ713 se evaluó 1 (pocas o ninguna lesiones) . Dos días después, las plantas en el control positivo se destruyeron, pero los retoños tratados con AQ713 estuvieron virtualmente limpios y parecían los mismos como los controles negativos (plantas rociadas con agua) . Para la prueba sobre Botrytis cinérea , las primeras 10 hojas verdaderas de una planta de frijol se hirieron presionando la boca de un tubo de cultivo de 13 X 100 sobre cada hoja. Cada hoja recibió dos heridas/hoja. Las hojas se rociaron con caldo completo de AQ713 (medio 2) o agua sola o el patógeno solo. Cuando se secaron, se rociaron de nuevo con 15 esporas de B. cinérea (0-8 X 106 esporas/raL) . Las hojas se colocaron en planas cubiertas con domos de plástico y almacenadas a 18-20°C en un incubador Percival . Cinco días después, el control positivo (patógeno solo) se pudrió en an área de aproximadamente 25 mm de diámetro. El control 20 negativo (agua sola) no tuvo pudrición. AQ713 no mostró infecciones sobre 7 de 8 circuios cuando las hojas se hirieron. El único que se infectó tuvo infección ligera en dos ubicaciones alrededor del circulo. Para la prueba de Bremia , semillas de lechuga se 25 plantaron en una capa de mezcla de encapsulamiento esterilizada que contiene turba, perlita y vermiculita en condominios de plantas de plástico transparente pequeños dé aproximadamente 8 centímetros de alto y ancho. Después de qu® germinó la lechuga (una semana) , los brotes de lechuga se rociaron con la muestra de caldo sobrenadante de AQ713. Las plantas se dejaron secar y después la suspensión de esporas de mildiu de los brotes de lechuga infectados se rociaron sobre los brotes. Las cubiertas de plástico se colocaron sobre las plantas y se incubaron a 18-20°C en un incubador 10 Percival . Una semana después, la prueba se evaluó. AQ713 no previno el mildiu de Bremia sobre los brotes de lechuga. Ejemplo 11 Eficiencia de AQ713 en Contra de las Enfermedades de Plantas (Prueba de Invernadero) 15 Mildiu de la Vid Se cultivó AQ713 en un medio basado en soya en un fermentador de 400 litros durante 48 horas. Las plantas de la vid (cultivar Chardonnay) se rociaron con un rociador manual • para derramar con caldo completo de la corrida de 20 fermentación de 400 litros diluida con agua estéril hasta concentraciones de 0.5X y 0.25X. Cuando el follaje secó las plantas se rociaron una segunda vez. Después de secar, las plantas se inocularon con el patógeno que causa mildiu de la vid, Plasmopara vi tícola . Se probaron tres plantas para cada 25 dosis. Cada planta se evaluó estimando el por ciento de control. 100% de control es una planta sin lesiones visibles, Un fungicida químico, metalaxyl, se usó para comparación. Los resultados fueron como sigue: Caldo completo 0.5X de AQ713 97.7% de control Caldo completo 0.25X de AQ713 100% de control 30 ppm de Metalaxyl 100% de control 10 ppm de Metalaxyl 98.3% de control 1 ppm de Metalaxyl 80% de control 10 Los resultados demuestran que el AQ713 efectuó control del mildiu de la vid igual que el fungicida químico. Ejemplo 12 Eficiencia de AQ713 en Contra del Mildiu Pulverulento de la Calabaza 15 Se cultivo AQ713 en un medio basado en soya en un fermentador de 400 litros durante 48 horas. Las plantas de calabaza (Crooknec y Acorn) se rociaron con un rociador manual hasta derramar con un caldo completo de la corrida de fermentación de 400 litros y una muestra diluida con agua 20 estéril a concentración de 0.5X. Después de secar, las plantas se inocularon con el patógeno mildiu pulverulento de la calabaza, Sphaerotheca fuliginea . Dos plantas se trataron por cada dosis. El polvo seco rociado del caldo completo también se probó. El caldo de fermentación de 400 litros se 25 secó por aspersión para remover el agua. Las soluciones al ?in ?i iif iii il.li r lipiiti i?¡ ¡i iiriii T" --•-"--- - irai 11.iiiilini ih i iiiiiii iiiiliittili illa li É 10% y 2.5% de polvo secado por aspersión se rociaron sobre las plantas hasta derramar como anteriormente. La incidencia de enfermedad de mildiu pulverulento se evaluó en una cuenta de 0 a 5. La clasificación de 5 es 100% de enfermedad mientras que la clasificación 0 es sin enfermedad. Los resultados se muestran posteriormente en la Tabla 10. Tabla 10 • El polvo secado por aspersión y el caldo completo de AQ713 proporcionaron control casi completo del mildiu pulverulento 10 de la calabaza. Ejemplo 13 Eficiencia de AQ713 sobre Añublo Tardio, Moho Gris, Mildiu Pulverulento de la Vid, Mildiu Pulverulento del Cereal, Añublo de la Vaina y Atizonado de Arroz en el Invernadero Se cultivo AQ713 en un medio basado en soya durante 72 horas en un matraz agitado de 250 mL . La enfermedad, eft ¡a? patógeno causativo y el huésped se enlistan en la Tabla l? Z - posterior. Este cultivo de caldo completo se probo sobre laS plantas como se muestra en la Tabla 11 posterior. Tabla 11 1 • Cada caldo se roció hasta derramar a concentración de IX sobre las plantas de prueba con un rociador manual, se 10 dejó secar y después se roció una segunda vez. Tres plantas se trataron por cada enfermedad y tratamiento. Después de • secar, las plantas se inocularon con los patógenos. Cada planta se evaluó estimando el por ciento de control de enfermedad con base en una escala de 0 a 100% de control. 15 100% de control se refiere a una planta sin lesiones visibles. Se usaron fungicidas químicos para comparación. El índice de Enfermedad es la severidad de la enfermedad sobre el control no tratado .

AQ713 mostró actividad que fue equivalente a los fungicidas químicos, sobre todos los patógenos probados. Ejemplo 14 Eficiencia de AQ713 en Contra de Mildiu Brassica La cepa de Bacillus AQ713 se cultivó en un fermentador de diez litros en un medio basado en soya durante 48 horas. El caldo completo de cultivo a concentración de IX • se roció sobre plantas de coliflor y coles de Bruselas ct® tres semanas de edad en la etapa de cotiledón completo con ua cepillo de aire de artista impulsado por aire comprimi?dj?» Tres réplicas de 15-25 brotes/olla se rociaron por 5 tratamiento. Quadris™, un fungicida de azoxistrobina de Zeneca, se roció también sobre plantas (tres por tratamiento) en proporciones de 250 ppm y 125 ppm. Una suspensión de esporas de mildiu, Peronospora parasí tica , a 1-5X 104 esporas/mL se rociaron sobre plantas de Brassica después que 10 los roclos de AQ713 y Quadris se secaron. Las plantas se f mantuvieron a 15-17°C durante 24 horas para infección/ después los brotes se incubaron a 20-24°C durante seis días. Las ollas se regresaron a 15-17°C durante la noche para permitir la esporulación del patógeno hasta que la prueba se 15 evaluó. Cada planta se evaluó estimando el por ciento de control de enfermedad con base en una escala de 0 a 100% de control. 100% de control es una planta sin lesiones de f esporulación. Los resultados promediados a través de l$ts réplicas de ollas se muestran en lo siguiente en la Tabla 1 . 20 Tabla 14 NT = No Probada El AQ713 controló el mildiu efectivamente por tres semanas de duración . Ejemplo 15 Sinergismo de AQ713 y un Fungicida Comercial AQ713 se cultivó en un fermentador de diez litros en un medio basado en soya durante 72 horas. El cultivo de bacterias se diluyó con agua estéril a concentraciones de 0.5X y 0.25X. El cultivo a concentraciones de IX, 0.5X y 0.25X se rocío sobre plantas de pimienta de tres semanas de edad con un cepillo de aire de artista impulsado por aire comprimido. Tres plantas se rociaron por tratamiento. Quadris™, un fungicida azoxistrobm de Zeneca, también se roció sobre plantas (tres por tratamiento) a concentraciones de 500 ppm, 250 ppm, y 125 ppm. Además, combinaciones de Quadris ademas del caldo completo de cultivo AQ713 en una proporción 1:1 se rociaron sobre plantas de pimienta (tres por tratamiento) . Los tratamientos con y sin Quadps se delinean en la Tabla 15 posterior. Una suspensión de esporas de Botrytis cinérea , moho gris, a 1 X 106 esporas/mL se roci sobre las plantas de pimienta después de que los rocíos de AQ713 y Quadris se secaron. Las plantas se mantuvieron a 20- 22°C durante 3 días, hasta que la prueba se evaluó. La incidencia de enfermedad de moho gris se evaluó sobre una _. cuenta de 0 a 5. La clasificación 5 indica 100% df ** enfermedad, mientras que las clasificación 0 indica si i ,- t enfermedad. Los resultados se muestran en la Tabla 15 * posterior. Tabla 15 Los resultados muestran claramente que las combinaciones de Quadps y AQ713 controlan la enfermedad de moho gris significativamente mejor que Quadris o AQ713 solo. Ejemplo 16 Determinación de los Componentes Insecticidas de la Cepa 5 AQ713 La extracción de la fracción lipopeptídica (íturinas, plipastatinas, agrastatmas y surfactma) para pruebas sobre insectos se llevo a cabo como sigue: El caldo completo se agitó formando torbellino, y 10 el pH se ajustó a 1.5 con HCl, se agitó formando torbellino de nuevo, luego se centrifugó por 15 minutos a 10,500 rpm. El sobrenadante se vació y se desechó. La pella se suspendió en 80% de acetonitrilo/agua (ACN/H20) y luego se rompió por sonido durante 30 minutos. La muestra se centrifugó de nuevo 15 por 15 minutos y después la pella se suspendió de nuevo en 80% de ACN/H20 agitando y formando torbellino. Se centrifugó de nuevo durante 15 minutos y luego se secó en un vacío de velocidad durante la noche. La muestra se redisolvió después • en 80% de ACN/H20. 20 La surfactma, uno de los lipopeptidos, se probo sola. La surfactina se adquirió de Sigma Chemicals (St. Louis MO) y es idéntica a la surfactina en AQ713 como se verificó por HPLC. Por lo tanto, la surfactina de Sigma se uso en pruebas en contra de insectos. 25 NT = No probado F El extracto lipopeptídico de la cepa AQ713 es insecticida. La surfactina sola muestra actividad en contra de pulgones y el gusano de la raíz del maíz, pero no del gusano guerrero. Por lo tanto, la actividad insecticida de la cepa AQ713 puede explicarse parcialmente por los lipopéptidos en la cepa AQ713. 10 Mientras que la invención ha sido descrita en detalle en la presente y con referencia a las modalidades F específicas de la misma, será aparente para un experto en la técnica que pueden hacerse diversos cambios y modificaciones a la invención como se describió anteriormente, sin apartarse 15 del espíritu y alcance de la invención.

LISTA DE SECUENCIA <110> AgraQuesc, Inc Heins, Sherry D. Man er, Denise C. Jiménez, Desmond . McCoy, Randy J. Marrone, Pamela G. Orjala, Ji my E. <120> COMPOSICIONES Y MÉTODOS PARA CONTROLAR PLAGAS DE PLANTAS <130> 127384200966 <140> unassigned <141> herewich <150> 09/223,587 <151> 1998-12-30 <150> 09/074,870 <151> 1998-05-08 <150> 08/853,753 <151> 1997-05-09 <150> 60/108,266 <151> 1998-11-12 <160> 5 <170> Patentln Ver. 2.0 <210> 1 <211> 7 <212> PRT <213> Bacillus subtilis <400> 1 Leu Leu Asp Leu Leu Asp Leu 1 5 <210> 2 <211> 10 <212> PRT <213> Bacillus subtilis <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> Glu has a fatty acid side cham. <220> <221> VARIANT <221> MOD RES <222> (2) <223> Orn < .00> 2 Glu Xaa Tyr Thr Clu Xaa Pro Glr Tyr He 1 5 10 <210> 3 <211> 10 <212> PRT <213> Bacillus subtilis <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> Gln or Glu <220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> Orr <220> <221> VARIANT <222> (5) <223> Gln or Glu <220> <221> VARIANT <222> (6) <223> Ala or Val <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> Fatty acid attached <400> 3 Xaa Xaa Tyr Thr Xaa Xaa Pro Xaa Tyr Val 1 5 10 <210> 4 <211> 10 <212> PRT <213> Bacillus subtxlis <220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> Orn <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> Fatty ac.d attached. <400> 4 Glu Xaa Tyr Thr Glu Ala Pro Glr. Tyr Vai 1 5 10 • <210> 5 <211> 10 <212> PRT <213> Bacillus subt lis <220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> Orn <220> <221> VARIANT <222> (1) • <223> Fatty acia attached. <400> 5 Glu Xaa Tyr Thr Glu Val Pro Gln Tyr Val 1 5 10 F

Claims (25)

1. REIVINDICACIONES 1. Un método para proteger o tratar plantas y frutas de infestaciones de insectos, caracterizado porfSM&?" comprende aplicar una cantidad efectiva de la cepa AQ713 de 5 Bacill us subtilis Número de Acceso NRRL B-21661 o mutantes de los mismos, que tienen todas las características de identificación de la cepa a las plantas y frutos.
2. 2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque las infestaciones de insectos son 10 infestaciones de insectos foliares o infestaciones de • insectos subterráneos.
3. 3. El método para proteger o tratar plantas y frutas de infestaciones de insectos caracterizado porque comprende aplicar una cantidad efectiva de un metabolito 15 producido por la cepa Bacillus subtilis de conformidad con la reivindicación 1, que presenta actividad en contra de insectos, es extraible en solvente y tiene un peso molecular de menos de 10,000 daltons, a las plantas y frutas.
4. 4. El método de conformidad con la reivindicación 20 3, caracterizado porque las infestaciones de insectos son infestaciones de insectos foliares.
5. 5. El método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque las infestaciones de insectos son infestaciones de insectos subterráneos. 25
6. 6. Un método para proteger o tratar plantas y 56 frutas de infestaciones de insectos caracterizado porque' y comprende aplicar una cantidad efectiva de un sobrenadante* . obtenido a partir de un cultivo de la cepa AQ713 de Ba cillus-,. subtilis que presenta actividad en contra de insectos.
7. 7. El método de conformidad con la reivindicación, 6, caracterizado porque las infestaciones de insectos son infestaciones de insectos foliares.
8. 8. El método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque las infestaciones de insectos son 10 infestaciones de insectos subterráneos. F
9. 9. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque comprende adicionalmente aplicar una cantidad efectiva de un plaguicida biológico o químico. 15
10. 10. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la cepa AQ713 de Ba cill us subtilis se aplica como un caldo completo de cultivo. F
11. 11. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la cepa AQ713 de Bacill us subtil is se 20 aplica como un sobrenadante.
12. 12. El método de conformidad con la reivindicación ß, caracterizado porque la cepa AQ713 de Bacill us subtilis se aplica como polvos humedecibles, granulos, descargables o microencapsulados 25 57
13. 13. El método de conformidad con cualquiera de las y reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque las raíces de plantas o el suelo alrededor de las raíces se tratan.
14. 14. El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque se tratan las raices de plantas o el suelo alrededor de las raíces.
15. 15. Un extracto lipopeptídico aislado de la cepa AQ713 con actividad insecticida.
16. 16. Una surfactina lipopeptídica aislada de la cepa 10 AQ713 con actividad insecticida. •
17. 17. Un método para proteger o tratar plantas y frutas de infestaciones de insectos caracterizado porque comprende aplicar una cantidad efectiva de un compuesto que tiene la fórmula 15 R?-CH-CH2-CO-Glx-Orn-Tyr-Thr-Glx—X—Pro-Glx-Tyr-Val en donde Ri es una cadena secundaria alifática • ramificada o lineal de C8-C20; X es Ala o Val, R2 es un 20 derivado acetato o uno éster y Glx es Gln o Glu.
18. 18. Un método para proteger o tratar plantas y frutas de infestaciones de insectos caracterizado porque comprende aplicar una cantidad efectiva de un compuesto que tiene la fórmula (SEC. DE IDENT. NO.:4): 25 **£ --f v CH3 ( CH2) ?2-CH-CH2-CO-Glu-Orn-Tyr-Thr-Glu-Ala-Pro-Gln-Tyr-Val F~ o ( SEC . DE I DENT . N0 : 5 ) 5 CH3CH2CH (CHo ) 10-CH-CH2-CO-Glu-Orn-Tyr-Thr-Glu-Val-Pro-Gln-Tyr-Val
19. 19. Un método para proteger o tratar plantas y frutas de infestaciones de insectos que comprende aplicar una 10 cantidad efectiva de una composición caracterizado porque F comprende ítunna tipo A, una plipastatma, y un tensioactivo .
20. 20. El método de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque comprende adicionalmente aplicar una 15 cantidad efectiva de agrastatina.
21. 21. Un extracto lipopeptidico aislado de la cepa AQ713 con actividad insecticida.
22. 22. Una surfactina lipopeptidica aislada de la cepa AQ713 con actividad insecticida. 20
23. 23. El método para tratar o proteger plantas o frutas de infestaciones de insectos caracterizado porque comprende administrar una cantidad efectiva de una composición que comprende el extracto de conformidad con la reivindicación 22. 25
24. 24. El método para tratar o proteger plantas o ...JLÍ¿-tía-i. frutas de infestaciones de insectos caracterizado porque comprende administrar una cantidad efectiva de uaa„; fí* composición que comprende la surfactina de conformidad con l -a f**l *. reivindicación 23.
25. 25. El método de conformidad con las reivindicaciones 24 ó 25, caracterizado porque las composiciones se aplican al suelo alrededor de las raíces de la planta o se tratan las raíces. • F RESUMEN La presente invención se refiere a una nueva cepa de Bacill us subtilis que produce metabolito y que produce _ * antibiótico que presenta actividad insecticida, anti-fúngic ?^,?'' , y anti-bacteriana . El sobrenadante de esta nueva cepa . contiene agentes insecticidas, anti-fúngicos y antibacterianos efectivos. También está incluido en la invención un metabolito activo para el gusano de la raíz del maíz de peso molecular pequeño (<10,000 daltons) extraíble en 10 solvente, producido en el sobrenadante. También se incluyen f en la invención los métodos para proteger o tratar plantas de infestaciones de hongos y bacterias y de infestaciones de gusano de la raíz del maíz que comprende la etapa de aplicar a la planta una cantidad efectiva de la nueva cepa de 15 subtil is, que produce antibiótico/metabolito, el- antibiótico/metabolito producido por la nueva cepa de Bacill us subtilis o una combinación de los mismos, que comprende opcionalmente, en forma adicional otra cepa f bacteriana que produce antibiótico y/o un pesticida químico. 20 La invención también incluye métodos para prevenir o tratar infecciones de hongos y bacterias usando caldo completo de cultivos o sobrenadantes obtenidos a partir de cultivos en la nueva cepa de Bacill us subtilis sola o en combinación con pesticidas químicos y/u otros agentes de biocontrol. La 25 invención también incluye nuevos compuestos anti-fúngicos y -Sv' ítfjV* anti-bactepanos designados agrastatinas y una nueva combinación que comprende una itunna tipo A, una plipastatma, una surfactina y una agrastatma. Los métodos para tratar o proteger plantas de infecciones de hongos, y? - • bacterias e infestaciones de gusano de la raíz del maíz, comprende administrar las nuevas agrastatmas y la nueva combinación que comprende una íturina tipo A, una z plipastatma, una surfactina y una agrastatma se proporcionan. Se proporciona adicionalmente un extracto 10 lipopeptídico aislado de la cepa AQ713 con actividad insecticida y una surfactina lipopeptídica aislada de la cepa • AQ713 con actividad insecticida. - •