MXPA00011170A - Composiciones que comprenden compuestos de 2-fenilindol y formulaciones de estrogeno - Google Patents

Abstract

La presente invención se relaciona con el uso de compuestos de 3-(4-(2-fenil-indol- 1-ilmetil)-fenil)acrilamida y compuestos de 2-fenil-1-(4-amino-1-il-alq-1-inil)bencil)- 1H-indol-5-ol los cuales sonútiles como agentes estrogénicos, asícomo composiciones farmacéuticas y métodos de tratamiento utilizando estos compuestos, los compuestos tienen la fórmula general (I) o (II).

Description

COMPOSICIONES QUE COMPRENDEN COMPUESTOS DE 2-FENILINDQL Y FORMULACIONES DE ESTRÓGENO DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con el uso de compuestos de 3- [4- ( -fenilindol-l-metil) -fenil] -acrilamida y compuestos de 2-fenil-l- [4- (amino-1-il-alq-l-inil) -bencil] -1H-indol-5-ol los cuales son útiles como agentes moduladores selectivos de receptor de estrógeno, junto con estrógenos, así como composiciones farmacéuticas y métodos de tratamiento q60 ue utilizan estos compuestos.

Antecedentes de la Invención El uso de terapias de sustitución de hormonas para la prevención de pérdida ósea en mujeres post-menopáusicas está bien fundamentado. El protocolo normal requiere la suplementación de estrógeno utilizando formulaciones tales que contengan estrona, estriol, etinilestradiol, 17ß-estradiol, estrógenos esterificados o estrógenos conjugados aislados de fuentes naturales (es decir, estrógenos conjugados Premarin" de yeth-Ayerst) o estrógenos sintéticos. En algunos pacientes, la terapia puede estar contraindicada debido a los efectos proliferativos de estrógenos no opuestos (los estrógenos no se ftf: 124426 proporcionan en combinación con progestinas) y se han encontrado sobre tejido interino. Esta proliferación se asocia con un riesgo aumentado de endometrosis o cáncer endometrial, o ambos. Los efectos de los estrógenos no opuestos sobretejido de mama es menos claro, pero es preocupante. La necesidad por estrógeno los cuales puedan mantener el efecto de ahorro óseo mientras minimizan los efectos proliferativos en el útero y en mama es evidente. Se ha demostrado que ciertos antiestrógenos no esteroidales mantiene la masa ósea en el modelo de rata ovariectomizada asi como en ensayos clínicos en humanos. Tamoxifeno (vendido como citrato de tamoxifeno marca Novadex™ por Zeneca Pharmaceuticals, Wilmington, Dela are) , por ejemplo, es un paliativo útil para el tratamiento de cáncer de mama y se ha demostrado que ejerce un efecto similar al agonista de estrógeno en el hueso en humanos. Sin embargo, también es un agonista parcial en el útero y en este caso es de cierta preocupación. El raloxifeno, un antiestrógeno de benzotiofeno, se ha demostrado que estimula el crecimiento uterino en la rata ovariectomizada en menor grado que el tamoxifeno y al mismo tiempo mantiene la capacidad de ahorra hueso. Una revisión adecuada de los estrógenos selectivos de tejido se encuentra en el artículo "Tissue-Selective Actions Of Estrogen Analogs", Bone Vol. 17, No. 4 de octubre de 1995, 181S-190S. El uso de Índoles, antagonistas de estrógeno ha sido reportado por Von Angerer, Chemical Abstracts, Vol. 99, No. 7 (1983) . Abstract No. 53886u. Véase también J. Med. Chem. 1990, 33, 2635-2640; J. Med. Chem. 1987, 30, 131-136. Véase también Ger. Offen., DE 3821148 Al 891228 y WO 96/03375. Estos compuestos de la técnica anterior comparten similitudes estructurales con los presenbtes compuestos, pero son funcionalmente diferentes. Para los compuestos que contienen una amina básica, no hay un grupo fenilo para rigidificar la cadena lateral . El documento WO A 95 17383 (Karo Bio AB) describe antiestrógenos de indol con cadenas lineales largas. Otra patente relacionada, WO A 93 10741 describe 5-hidroxiindoles con una gama amplia de cadenas laterales. El documento WO 93/23374 (Otsuka Pharmaceuticals, Japón) describe compuestos que comparten similitudes estructurales con los de la presente invención, excepto con la estructura a la que se denomina como R3 en las presentes fórmulas I y II abajo, que se define como tioalquilo y la referencia no describe tales compuestos que tengan cadenas desde el nitrógeno indol que tenga la misma estructura a las proporcionadas por la presente invención. En su artículo Postmenopausal Hormonal replacement theraphy wi th estrogen periodically supple ented wi th antíestrogen, Am. J. Obstet, Gynecol . , Vol. 140, No. 7, 1981, pp. 787-792, Kauppila et al. describe su estudio de terapia de estrógeno postmenopáusica de regímenes de estrógeno de 7 semanas seguido por tratamiento durante 10 días con el antiestrógeno citrato de clomifeno. Además, en su Artículo Comparaison of Megestrol Acétate and Clomiphene Ci trate as Suplemental Medication in Postmenopausal Oestrogen Replacement Therapy, Arch. Gynecol . (1983) 234:49-58, Kauppila et al., describe en mujeres postmenopáusicas terapias de combinación de estrógeno con suplementación aleatoria de acetato de megestrol o citrato de clomifeno. La patente de los Estados Unidos número 4,894,373 (Young) describe el uso de antiestrógenos, incluyendo clomifeno y sus isómeros, citratos y derivados, en ausencia de estrógeno para tratar síntomas menopáusicos y tratar o prevenir osteoporosis. La patente de los Estados Unidos, número 5,552,401 (Cullinan et al.) describe compuestos de benzotiofeno como útiles para el tratamiento de diversas indicaciones médicas asociadas con el síndrome postmenopáusico y la enfermedad fibroide uterina, endometriosis y proliferación de células de músculo liso en la aorta, los compuestos se utilizan en formulaciones farmacéuticas que opcionalmente contienen estrógeno o prostegina. Las patentes de los Estados Unidos 5,646,137 y 5,591,753 (ambas publicadas para Black et al.) describen métodos para tratar osteoporosis con formulaciones de compuestos de arilbenzotiofeno del tipo de raloxefina junto con una progestina que se selecciona de medroxiprogesterona, noretindrona o noretinodrel, o sales farmacéuticamente aceptables de las mismas. La patente de los Estados Unidos, número, 5,550,107 reivindica una invención que comprende el tratamiento de cáncer de mama o endometrial con un antiestrógeno junto con por lo menos un compuesto que se selecciona del grupo de un andrógeno, una progestina, por lo menos un inhibidor de la formación de esteroides sexuales, especialmente 17ß-hidroxiesteroide deshidrogenasa y actividad de aromatasa, por lo menos un inhibidor de secreción de prolactina, un inhibidor de _ la secreción de hormona del crecimiento y un inhibidor de la secreción de ACTH. La patente de los Estados Unidos No. 5,672,609 (Bryant et al.) describe compuestos de piridina útiles en tratar el síndrome postmenopáusico y formulaciones que por lo tanto contienen estrógeno o progestina. La patente de los Estados Unidos No. 5,534,527 (Black et al.) describe el uso de aroilbenzotiofenos y estrógenos en la inhibición de pérdida ósea.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona formulaciones farmacéuticas y métodos para utilizarlas, que comprende compuestos de fórmulas (I) y (II), en lo siguiente, junto con estrógenos, preferiblemente junto con uno o más portadores o excipientes farmacéuticamente aceptables. Entre los usos de las presentes formulaciones está aliviar los síntomas de síndrome postmenopáusico en mujeres, que incluyen síntomas perimenopáusicos y postmenopáusicos . Las presentes formulaciones y métodos de tratamiento se pueden utilizar para minimizar efectos colaterales indeseables del tratamiento o terapia con estrógenos y se pueden utilizar para minimizar las cantidades de estrógenos necesarias para un régimen particular. Los compuestos del tipo de estructura general mostrado en las fórmulas (I) y (II) son agonistas/antagonistas de estrógeno útiles para el tratamiento de enfermedades asociados con deficiencia de estrógeno y se describen en EP-A-0802184, cuyo contenido se incorpora en la presente como referencia en su totalidad. Los compuestos utilizados en la presente invención muestran una unión fuerte al receptor de estrógeno y son capaces de antagonizar los efectos de 17ß-estradiol y al mismo tiempo mostrar poca estimulación uterina cuando se dosifican solos. La presente invención incluye compuestos de fórmulas (I) o (II), en lo siguiente: en la que: R? se selecciona de H, OH o los esteres de alquilo de Ci-C,, de los mismos, o halógeno R2, R3, R4, R5 y R6 se seleccionan independientemente de H, OH o los esteres o éteres de alquilo de Cj-C, de los mismos, halógeno, ciano, alquilo de C1-C6 o trifluorometilo, con la condición de que cuando Rx es H, R2 no es OH. X se selecciona de H, alquilo de Cj-Ce, ciano, nitro, tpfluorometilo, halógeno; Z se selecciona de : -CH=CH- n es 2 ó 3 ; Y se selecciona de a) la porción: en donde R7 y R8 se seleccionan independientemente del grupo de H, alquilo de -Cj, fenilo o combinado con -(CH2)p-, en donde p es un número entero de 2 a 6 , de manera que forma un anillo, el anillo está opcionalmente sustituido por hasta tres sustituyentes que se seleccionan de idroxilo, halo, alquilo de Ci-Q,, trihalometilo, alcoxi de C^C,, trihalometoxi, alquiltio de C1-C4, alquilsulfinilo de C1-C, , alquilsulfonilo de C -C4 , hidroxialquilo de C^C,,, -C02H, CN, -CONH (alquilo de C -C4) , -NH2-, alquilamino de C^C,, dialquilamino de Cj-C,, -NHS02alquilo de Cj-C,, -NHCOalquilo de CL-C4 y -N02; b) un heterociclo saturado, insaturado o parcialmente insaturado de cinco, seis o siete miembros que contiene hasta dos heteroátomos que se seleccionan del grupo que consiste de -O-, -NH- , -N (alquilo de Cj-C,)-, -N= en cuyo caso el anillo se puede unir vía el nitrógeno) y -S(0)_-, en donde m es un número entero de 0-2, opcionalmente sustituido con 1-3 sustituyentes que se seleccionan independientemente de hidroxilo, halo, alquilo de Cj-C,, trihalometilo, alcoxi de Ci-d, trihalometoxi, aciloxi de C[-C4, alquiltio de d-C,,, alquilsulfinilo de Cj-Cj, alquilsulfonilo de Cj-C4, hidroxialquilo de Cj-C,, -C02H, -CN-, -CONHR!-, -NH2, alquilamino de Ci- , dialquil (d-Q) amino, -NHSORj, -NHCOR^ -N02 y fenilo opcionalmente sustituido con 1-3 grupos alquilo de C].-C4, en donde R es como se define en lo anterior, o alquilo de Cj-Cj,- c) un sistema de anillo biciclo que consiste de un anillo heterociclo de cinco o seis miembros fusionado a un anillo fenilo, el anillo heterocíclico contiene hasta dos heteroátomos que se selecciona de -O-, -NH-, -N (alquilo de C-L-d) , -N= y -S(0)m-, en donde m es un número entero de 0-2, opcionalmente sustituido con 1-3 sustituyentes que se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidroxilo, halo, alquilo de Cj-C4, trihalometilo, alcoxi de d-C,,, trihalometoxi, aciloxi de C1-Cí , alquiltio de C1-C4, alquilsulfinilo de C^C,, alquilsulfonilo de C1-C4, hidroxialquilo de Cj-C,, -C02H, -CN-, -CONHRi-, -NH2-, alquilamino de d-C,,, dialquil (C?.-C4) amino, -NHSOjRi-, -NHCORi-, -N02, y fenilo opcionalmente sustituido con 1-3 grupos alquilo de C1-C4; (por ejemplo Rx es como se define en lo anterior o alquilo de Cj-C,) ,- y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Las formulaciones y métodos de tratamiento más preferidos de esta invención son aquéllos que tienen o que utilizan, junto con uno o más portadores o excipientes farmacéuticos : a) uno o más estrógenos; y b) uno o más compuestos que se seleccionan de las estructuras generales I o II, anteriores, en las que: Rx se selecciona de H, OH o los esteres de Cj-Q, o éteres de alquilo de los mismos, halógeno; R2, R3, R4, R5 y R6 se seleccionan independientemente de H, OH o los esteres de Cj-C,, o éteres de alquilo de los mismos, halógeno, ciano, alquilo de o trifluorometilo, con la condición de que cuando R? es H, R2 no es OH; X se selecciona de H, alquilo de CJ-CJ, ciano, nitro, trifluorometilo, halógeno; Y es la porción R "° I R7 y R8 se seleccionan independientemente de H, alquilo de C -C6 o, combinado con -(CH2)p-, en donde p es un número entero de 2 a 6 , de manera que forman un anillo, el anillo está opcionalmente sustituido por hasta 3 sustituyentes que' se seleccionan de hidroxilo, halo, alquilo de Cj-C,, trihalometilo, alcoxi de Cj-C,, trihalometoxi, alquiltio de C1-C4, alquilsulfinilo de Cj-C,, alquilsulfonilo de C1-C4, hidroxialquilo de C^C,, -C02H, -CN, -CONH (alquilo de C^C,) , -NH2, alquilamino de d-Q, dialquilamino de C1-C1 , -NHS02 (alquilo de ^-0.) , -NHCO (alquilo de Cx-C4) y -N02. Los anillos formados por R7 y R8 concatenados, mencionados antes, pueden incluir, pero no se limitan a aziridina, azetidina, pirrolidina, piperidina o anillos de hexametilenamina . Se prefiere además que cuando R7 y R8 se concatenen juntos, el anillo formado de esta manera opcionalmente esté sustituido con 1-3 sustituyentes que se seleccionan de un grupo que contiene alquilo de Q-Cj, trifluorometilo, halógeno, hidrógeno, fenilo, nitro, -CN. Los compuestos de fórmulas (I) y (II) son agonistas parciales de estrógeno y muestran alta afinidad por el receptor de estrógeno. Sin embargo, a diferencia de muchos estrógenos, estos compuestos no provocan incrementos en el peso húmedo uterino. Estos compuestos son antiestrogénicos en el útero y pueden antagonizar completamente los efectos tróficos de los agonistas de estrógeno en tejido uterino. Estos compuestos son útiles para tratar o prevenir estados de enfermedad de mamíferos o síndromes los cuales son causados o asociados con una deficiencia de estrógeno. Esta selectividad de tejido permite su uso para actividad estrogénica deseable en ciertos tejidos, tales como hueso, y al mismo tiempo limitan su actividad en otros, por ejemplo en el tejido uterino.

Los estrógenos útiles en las formulaciones de esta invención incluyen estrona, estriol, equilina, estradieno, equilenina, etinilestradiol , 17ß-estradiol , 17o-dihidroequilenina, 17ß-dihidroequilenina (patente de los E.U. No. 2,834,712), 17a-dihidroequilina, 17ß-dihidroequilina, menstranol y hormonas estrogénicas conjugadas tales como los productos de Premarin™ de Wyeth-Ayerst Laboratories ' . También se pueden utilizar en las presentes formulaciones y métodos fitoestrógenos tales como equol o enterolactona. Una modalidad preferida de esta invención comprende composiciones farmacéuticas y métodos de tratamiento que utilizan hormonas estrogénicas conjugadas tales como las de los productos Premarin"" de Wyeth Ayerst Laboratories con 1 o más compuestos de fórmula (I) o (III) incluidos en la presente. Los estrógenos esterificados tales como los vendidos por Solvay Pharmaceuticals Inc. bajo el nombre comercial Estratab™ también se pueden utilizar para las siguientes composiciones. También se prefieren para el uso de la presente invención sales de los estrógenos aplicables, de manera más preferible sales de sodio. Los ejemplos de estas sales preferidas son estrona sulfato de sodio, equilina sulfato de sodio, 17alfa-dihidroequilina sulfato de sodio, 17alfa-estradiol sulfato de sodio, delta 8, 9-deshidroestrona sulfato de sodio, equilenina sulfato de sodio, 17beta dihidroequilina sulfato de sodio, 17alfa dihidroequilenina sulfato de sodio, 17beta-estradiol sulfato de sodio, 17beta-dihidroequilenina sulfato de sodio, estrona 3-sulfato de sodio, equilina 3-sulfato de sodio, 17alfa-dihidroequilina 3-sulfato de sodio, 3beta hidroxiestra 5 (10) , 7-dien-17-ona 3-sulfato de sodio, 5alfa-Pregnan-3beta-20R-diol 20-sulfato de sodio, 5alfa-Pregnan-3beta, 16alfa-diol-20 -ona 3 -sulfato de sodio, delta (8, 9) -deshidroestrona 3 -sulfato de sodio, estra-3beta, 17alfa-diol 3-sulfato de sodio, 3beta-hidroxiestr-5 (10) -en-17-ona-3-sulfato de sodio, o 5alfa-Pregnan-3beta, 16alfa, 20R-triol 3-sulfato de sodio. Las sales preferidas de estrona incluyen, pero no se limitan a las sales de sodio y piperato. Los presentes compuestos de fórmulas (I) y (II) son compuestos selectivos de tejido que tienen la capacidad de comportarse como agonistas de estrógeno, por ejemplo al disminuir el colesterol y evitar la pérdida ósea, o como antagonistas de estrógeno similares. Por lo tanto, estos compuestos en las presentes formulaciones son útiles para tratar muchos malestares que incluyen osteoporosis, hipertrofia prostática, infertilidad, cáncer de mama, hiperplasia endometrial, cáncer endometrial, endometriosis, hiperplasia glandular cística, hiperplasia uterina, hiperplasia cervical, hiperplasia prostática benigna, enfermedad cardiovascular, contracepción, enfermedad de Alzheimer y melanoma. Las formulaciones de esta invención también se pueden utilizar para tratar pérdida ósea que resulta de osteoporosis secundaria, incluida la categorizada como de naturaleza endocrina, incluyendo la que resulta de exceso de glucocorticoide, hiperparatiroidismo, hipertiroidismo, hipogonadismo, hiperprolactinemia y diabetes mellitus. La pérdida ósea también puede ser inducida por medicamentos por ejemplo la que resulta de tratamientos con heparina, consumo de alcohol o el uso de tabaco, barbituratos o corticosteroides. La pérdida de hueso inducida por medicamentos también puede ser el fundamento para el tratamiento con hormona de liberación de gonadotropina (GnRH o LHRH) o antagonistas o agonistas sintéticos de GnRH, tal como acetato de leuprolide inyectable y vendido TAP Pharmaceuticals Inc. por LUPRONMR, o el implante de acetato de goserelina vendido por Zeneca Pharmaceuticals bajo el nombre comercial Zoladex™*. Tal pérdida ósea también puede resultar de la inmovilización del fallo renal crónico individual, síndrome de mala absorción, enfermedad hepática, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, artritis reumatoide o sarcoidosis. Adicionalmente, estas formulaciones se pueden utilizar para terapia de sustitución de hormonas en mujeres postmenopáusicas o en otros estados de deficiencia de estrógeno en donde la suplementación de estrógeno puede ser benéfica. La actividad simbiótica de los compuestos y estrógeno o estrógenos de los presentes métodos de tratamiento son particularmente de interés en resolver las consecuencias no deseadas de la terapia de estrógeno, tal como hemorragia externa y/o estimulación excesiva endometrial, lo que puede llevar a hiperplasia endometrial o endometriosis. Por lo tanto, estas formulaciones se pueden utilizar en métodos para tratar o prevenir estimulación uterina estrogénica excesiva en un mamífero. Los estrógenos regulan muchos procesos fisiológicos.

Los tejidos objetivos principales para los estrógenos incluyen el tracto reproductor (ovario; útero; vagina), el tejido mamario, el sistema esquelético y cardiovascular así como el sistema nervioso central (SNC) . La reducción en los estrógenos circulantes produce numerosos cambios. Hay una suspensión en la función reproductiva con amenorrea asociada, atrofia uterina e incremento en la sequedad vaginal (carencia de queratinización) . El tejido mamario se vuelve relativamente quiescente. Existe un incremento en la velocidad de pérdida de masa ósea (2-7%) en comparación con el normal de 0.5-1.0%/año que se observa en todos los individuos con edad superior a 35 años. Se produce un cambio en el perfil lipídico el cual se incrementa en la lipoproteína de baja densidad (LDL) y disminuye en la lipoproteína de alta densidad (HDL) medida comúnmente como un riesgo asociado aumentado de un fenómeno cardiovascular (ataque cardíaco o ataque apopléjico) . Los cambios en el sistema nervioso central incluyen un incremento en los síntomas vasomotores (rubor caliente) y cambios potenciales en el aprendizaje y la memoria.

La terapia de sustitución de estrógenos (ERT) normaliza algunos de estos cambios, particularmente aquéllos asociados con el sistema cardiovascular (LDL reducido, HDL incrementado, riesgo reducido de ataque cardíaco) , el sistema esquelético (mantenimiento de la masa ósea, riesgo reducido de fracturas) y el sistema nervioso central (reducción en la frecuencia y gravedad de el rubor caliente) . Aunque el tracto reproductor responde, no todo es positivo. Por el lado positivo, se alivia la sequedad vaginal. Sin embargo, las respuestas uterinas negativas incluyen hipertrofia e hiperplasia junto con cierto sangrado similar al menstrual. Las mamas también son afectadas y existen datos que correlacionan la terapia de estrógenos exógenos con un riesgo aumentado de cáncer de mama. Actualmente, las mujeres con úteros intactos generalmente no se les prescriben estrógenos solos, sino estrógenos en combinación con una progestina para reducir la estimulación uterina. Aunque los riesgos de cáncer endometrial se reducen a niveles tratados sin hormona, los otros efectos colaterales de las progestinas reducen el cumplimiento en mujeres sobre la sustitución con hormonas. Los compuestos de estrógenos selectivos de tejido (TSE) de esta invención proporcionan alteraciones positivas esqueléticas y cardiovasculares similares a los de los estrógenos, sin los efectos negativos asociados con el útero y las mamas. Las combinaciones de TSE y estrógenos derivan los efectos positivos de los estrógenos sobre el SNC, hueso y sistema cardiovascular con la combinación que proporciona efectos complementarios o aditivos en los sistemas óseo y cardiovascular. La variable principal es la capacidad de los TSE de bloquear la influencia estrogénica en el útero y mamas, los cuales son los dos efectos negativos principales de los estrógenos no opuestos. Las formulaciones de esta invención también se pueden utilizar en métodos de tratamiento para pérdida ósea, lo que puede resultar de un desequilibrio de la formación individual de tejidos óseos nuevos y la resorción de tejidos más viejos, lo que lleva a una pérdida neta de hueso. Tal supresión ósea resulta en una gama de individuos, particularmente mujeres postmenopáusicas, mujeres quienes han experimentado histeroctomía/ooforectomía, aquellos que reciben o quienes han recibido terapias prolongadas de costicosteroides, aquellas que han experimentado disgenesis suprarrenal y aquellos que padecen del síndrome de Cushings's. Las necesidades especiales de sustitución ósea también se pueden resolver utilizando estas formulaciones en individuos con fracturas óseas, estructuras óseas defectuosas y aquellos que reciben cirugías relacionadas con los huesos o implantación de prótesis, o ambas cosas. Además de los problemas descritos antes, estas formulaciones se pueden usar en tratamientos para osteoartritis, enfermedad de Paget 's, osteomalasia, osteohalisteresis, cáncer endometrial, mieloma múltiple y otras formas de cáncer que tienen efectos dañinos sobre el tejido óseo. Los métodos para tratar los malestares incluidos en la presente se entiende que comprenden la administración a un individuo en necesidad de tal tratamiento de una cantidad farmacéuticamente efectiva de uno o más de los compuestos de las fórmulas (I) y (II) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con una cantidad terapéuticamente deseable de un estrógeno. Esta invención también incluye composiciones farmacéuticas que utilizan uno o más de los presentes compuestos, y/o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, junto con uno o más portadores, excipientes, etc., farmacéuticamente aceptables.

Se entiende que la dosificación, régimen y modo de administración de estos compuestos de fórmulas (I) y (II) variarán de acuerdo con el malestar y el individuo que esté siendo tratado y se someterán al juicio del médico practicante involucrado. Se prefiere que la administración de uno o más de los compuestos en la presente comience a una dosis baja y que se incremente hasta que se obtengan los efectos deseados. Similarmente, se comprenderá que la dosificación o dosificaciones del estrógeno o estrógenos utilizados en las presentes formulaciones se seleccionará de acuerdo con métodos convencionales. Se prefiere adicionalmente que la dosificación será monitoreada para obtener el resultado deseado con el mínimo de estrógeno o estrógenos necesarios. La administración efectiva de estos compuestos de fórmulas (I) y (II) se puede suministrar a una dosis de aproximadamente 0.01 mg/día hasta aproximadamente 1000 mg/día. Preferiblemente, la administración será desde aproximadamente 1 mg/día hasta aproximadamente 600 mg/día en una dosis única o en dos o más dosis divididas. De manera más preferible, se administrará una dosis diaria de entre aproximadamente 1 mg/día y aproximadamente 150 mg/día. Tales dosis se pueden administrar de cualquier manera útil en dirigir los compuestos activos en la presente al receptor incluyendo las vías oral, parenteral (que incluye intravenosa, intraperitoneal e inyecciones subcutáneas, implantes, etc.), intravaginal y transdérmica. Para los propósitos de esta descripción, se entiende que las administraciones transdérmicas incluyen todas las administraciones a través de la superficie del cuerpo y los revestimientos interiores de los pasajes corporales que incluyen tejidos epiteliales y de mucosa. Tales administraciones se pueden llevar a cabo utilizando los presentes compuestos o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos en lociones, cremas, espumas, parches, suspensiones, soluciones y supositorios (rectales y vaginales) . Las formulaciones orales que contienen los compuestos activos de las fórmulas (I) y (II) pueden comprender cualquier forma oral utilizada convencionalmente incluyendo tabletas, cápsulas, formas bucales, trociscos, grageas y líquidos, suspensiones o soluciones orales. Las cápsulas pueden contener mezclas del compuesto o compuestos activos con materiales de relleno inertes y/o diluyentes tales como los almidones farmacéuticamente aceptables (por ejemplo almidón de maíz, papa o tapioca), azúcares, agentes edulcorantes artificiales, celulosas pulverizadas tales como celulosas cristalina y microcristalina, harinas, gelatinas, gomas, etc. Las formulaciones útiles de tabletas se pueden elaborar por compresión convencional, granulación en húmedo o métodos de granulación en seco y se pueden utilizar diluyentes, agentes aglutinantes, lubricantes, desintegrantes, agentes que mejoran la suspensión o estabilizantes farmacéuticamente aceptables, los cuales incluyen, pero no se limitan a estearato de magnesio, ácido esteárico, talco, laurisulfato de sodio, celulosa microcristalina, carboximetilcelulosa de calcio, polivinilpirrolidona, gelatina, ácido argínico, goma acacia, goma de xantano, citrato de sodio, silicatos complejos, carbonato de calcio, glicina, dextrina, sacarosa, sorbitol, fosfato dicálcico, sulfato de calcio, lactosa, caolín, manitol, cloruro de sodio, talco, almidones secos y azúcar pulverizada. Las formulaciones orales en la presente pueden utilizar formulaciones estándar de retardo o de liberación con el tiempo para alterar la absorción del compuesto o compuestos activos.

Las formulaciones en supositorios se pueden elaborar a partir de materiales tradicionales que incluyen manteca de cacao con o sin la adición de ceras para alterar el punto de fusión del supositorio y glicerina. Las bases de supositorios solubles en agua tales como polietilenglicoles de diversos pesos moleculares también se pueden utilizar. Se comprenderá que el estrógeno de esta invención se administrará en las dosificaciones de regímenes convencionales, de acuerdo con la tolerancia del receptor y el tratamiento particular o el protocolo de mantenimiento que se desee. Los compuestos de fórmulas (I) y (II) en la presente, se administrarán en una cantidad necesaria para agonizar o antagonizar con el estrógeno o estrógenos de actividad de la formulación al nivel deseado. Cuando se utilizan estrógenos conjugados, USP, se prefiere que la dosificación diaria sea de 0.1 mg a 5.0 mg, de manera más preferible entre aproximadamente 0.3 mg y aproximadamente 2.5 mg, y de manera mucho más preferible entre aproximadamente 0.3 y aproximadamente 1.25 mg/día. Para mestranol o etinilestradiol, una dosificación diaria puede ser desde aproximadamente 1 µg hasta aproximadamente 0.15 mg/día, y se puede utilizar una dosificación de 1 µg a aproximadamente 0.3 mg/día para etinilestradiol, preferiblemente entre aproximadamente 0.2 µg a aproximadamente 0.15 mg/día de etinilestradiol.

Los compuestos de esta invención se pueden formular puros o con un portador farmacéutico para administración, cuya proporción se determina por la solubilidad y naturaleza química del compuesto, la ruta de administración elegida y la práctica farmacológica estándar. El portador farmacéutico puede ser sólido o líquido. Un portador sólido puede incluir una o más sustancias las cuales también accionan como agentes saborizantes, lubricantes, solubilizantes, agentes que mejoran la suspensión, materiales de relleno, agentes fluidizantes, auxiliares de compresión, aglutinantes o agentes desintegradores de tableta; también puede ser un material encapsulante. En polvos, el portador es un sólido finamente dividido el cual se mezcla con el ingrediente activo finamente dividido. En tabletas, el ingrediente activo se mezcla con un portador que tiene las propiedades de compresión necesarias en proporciones adecuadas y compactado en la forma y tamaño deseados . Los polvos y tabletas preferiblemente contienen hasta 99% del ingrediente activo. Los portadores sólidos adecuados incluyen, por ejemplo, fosfato de calcio, estearato de magnesio, talco, azúcares, lactosa, dextrina, almidón, gelatina, celulosa, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio, polivinilpirrolidina, ceras con punto de fusión bajo y resinas de intercambio iónico. Los portadores líquidos se utilizan para preparar soluciones, suspensiones, emulsiones, jarabes, elíxires y composiciones presurizadas . El ingrediente activo se puede disolver o suspender en un portador líquido farmacéuticamente aceptable tal como agua, un solvente orgánico o una mezcla de ambos, o aceites o grasas farmacéuticamente aceptables. El portador líquido puede contener otros aditivos farmacéuticos adecuados tales como solubilizantes, emulsificantes, amortiguadores, conservadores, edulcorantes, agentes saborizantes, agentes que mejoran la suspensión, agentes espesantes, colores, reguladores de viscosidad, estabilizantes u osmorreguladores . Los ejemplos adecuados de portadores líquidos para administración oral y parenteral incluyen agua (que contiene parcialmente aditivos como en lo anterior, por ejemplo derivados de celulosa, preferiblemente una solución de carboximetilcelulosa de sodio) , alcoholes (que incluye alcoholes monohídricos y alcoholes polihídricos, por ejemplo glicoles) y sus derivados, lecitinas y aceites (por ejemplo aceite de coco fraccionado y aceite de cacahuate) . Para administración parenteral, el portador también puede ser un éster oleoso tal como oleato de etilo y miristato de isopropilo. Los portadores líquidos estériles son útiles en composiciones en forma líquida estéril para administración parenteral. El portador líquido para composiciones presurizadas puede ser un hidrocarburo halogenado u otro propelente farmacéuticamente aceptable.

Las composiciones farmacéuticas líquidas las cuales son soluciones estériles o suspensiones se pueden utilizar, por ejemplo, para inyección intramuscular, intraperitoneal o subcutánea. Las soluciones estériles también se pueden administrar intravenosamente. Los compuestos de esta invención también se pueden administrar oralmente ya sea en forma de composición líquida o sólida. Los compuestos de esta invención se pueden administrar por vía rectal o vaginal en forma de un supositorio convencional, cremas, geles, etc. Para administración por inhalación intranasal o intrabronquial o por insuflación, los compuestos de esta invención se pueden formular en una solución acuosa o parcialmente acuosa la cual después se puede utilizar en forma de un aerosol. Los compuestos de esta invención también se pueden administrar transdérmicamente a través del uso de un parche transdérmico que contiene al compuesto activo y un portador que es inerte para el compuesto activo, no es tóxico para la piel y permite el suministro del agente para absorción sistémica en la corriente sanguínea vía la piel. El portador puede tomar muchas de las formas tales como cremas y ungüentos, pastas, geles y dispositivos oclusivos. Las cremas y ungüentos pueden ser un líquido viscoso o emisiones semisólidas ya sea del tipo aceite en agua o agua en aceite. También son adecuadas pastas constituidas de polvos absorbentes dispersadas en petróleo o petróleo hidrofílico que contienen el ingrediente activo. Se pueden utilizar diversos dispositivos oclusivos para liberar el ingrediente activo en la corriente sanguínea tal como una membrana semipermeable que cubre un depósito que contiene al ingrediente activo con y sin un portador, o una matriz que contiene al ingrediente activo. En la literatura se conocen otros dispositivos oclusivos. Los requerimientos de dosificación varían con las composiciones particulares utilizadas, la vía de administración, la gravedad de los síntomas presentados y el sujeto particular que esté siendo tratado. El tratamiento generalmente se iniciará con dosificaciones pequeñas menores que la dosis óptima del compuesto. Posteriormente la dosificación se incrementará hasta que se alcance el efecto óptimo bajo las circunstancias; las dosificaciones precisas para las administraciones oral, parenteral, transdérmica, rectal o supositorios vaginales, por administración nasal o intrabronquial y otras administraciones se determinarán por el médico quien realice la administración en base en la experiencia con el sujeto individual tratado. Preferiblemente, la composición farmacéutica está en forma de dosificación unitaria, por ejemplo como tabletas o cápsulas. En tal forma, la composición se subdivide en una dosis unitaria que contiene cantidades apropiadas del ingrediente activo; las formas de dosificación unitarias pueden ser composiciones empacadas, por ejemplo polvos empaquetados, frascos, ampolletas, jeringas llenadas previamente o saquitos que contengan líquidos. La forma de dosificación unitaria puede ser, por ejemplo, una cápsula o tableta misma, o puede ser la cantidad apropiada de cualquiera de tales composiciones en forma de empaque. El compuesto o compuestos de fórmula (I) y (II) y el estrógeno o estrógenos de las presentes formulaciones se pueden administrar en unidades de dosificación separadas tales como pildoras separadas, tabletas, polvos, etc. o se pueden combinar en una formulación. Cuando se han determinado las dosificaciones óptimas para los compuestos de fórmulas (I) y (II) y los estrógenos de estas formulaciones se han determinado, puede ser preferible incorporar tanto una formulación única para facilidad de administración. También se debe entender que las formulaciones en la presente pueden o no incluir otros componentes farmacéuticamente activos. El proceso para preparar un compuesto de fórmula (DM o (II) comprende uno o más de los siguientes: a) hacer reaccionar un compuesto de fórmula en donde R¡.-R6 y X son como se definen en lo anterior con una acrilamida de fórmula en donde Y es como se define antes, para proporcionar un compuesto de fórmula (I) en donde Z es -CH=CH-COY; o b) hacer reaccionar un compuesto de fórmula en donde RÍ-RÍ y X son como se definen en lo anterior, con un compuesto de fórmula == (CHa^-Y en donde n e Y son como se definen en lo anterior para proporcionar un compuesto correspondiente de fórmula I, en donde Z es Convenientemente, los compuestos de esta invención se pueden sintetizar en un sentido general de acuerdo con los Esquemas de Reacción 1 y 2, a continuación.

ESQUEMA DE REACCIÓN 1 La síntesis de indol inicial del Esquema de Reacción 1 se lleva a cabo al calentar una anilina (1) sustituida apropiadamente con una alfa-bromofenilpropiofenona (2) sustituida apropiadamente en un solvente con un punto de ebullición alto adecuado, tal como DMF. El producto después se alquila con bromuro de 4-bromobencilo para proporcionar el indol (3) sustituido. En este punto, se realiza la desprotección de los fenoles (si están presentes) . Normalmente, los fenoles están protegidos por éteres de bencilo y se pueden preparar convenientemente con TMSI. Las acrilamidas se acoplan utilizando las condiciones de reacción de Heck ya sea en Et3N o Et3N/CH3CN .

ESQUEMA DE REACCIÓN 2 La síntesis de indol inicial del Esquema de Reacción 2 se puede llevar a cabo al calentar una anilina (1) sustituida apropiadamente con una alfa-bromofenilalquil-fenona (2) sustituida apropiadamente en un solvente con un punto de ebullición alto adecuado, tal como DMF. El producto después se alquila con bromuro de 4-yodobencilo para proporcionar el indol (3) sustituido. En este punto, se realiza la desprotección de los fenoles (si están presentes) . Normalmente los fenoles están protegidos como éteres de bencilo y se pueden separar convenientemente con TMSI. Después las propargilamina se pueden acoplar al yoduro de fenilo. Las propargilaminas típicamente se preparan a partir de bromuro de alquilo o tosilato de alquinilo por sustitución con la amina apropiada. La reacción de sustitución se realiza in situ, sin aislar la propargilamina. Los compuestos sustituidos en la posición 3 con grupos diferentes a alquilo se pueden preparar al preparar primero el indol sustituido en la posición 3 con -H. El indol después se puede halogenar electrofílicamente, formilar, etc., para proporcionar otros compuestos sustituidos en la posición 3. Los solventes utilizados para las reacciones son Aldrich Sure Seal™ anhidro sin purificación adicional. Los reactivos típicamente eran de Aldrich y se utilizan sin purificación adicional. Todas las reacciones se llevaron a cabo bajo una atmósfera de nitrógeno. Se realizó la cromatografía utilizando gel de sílice de malla 230-400 (Merk Grade 60, y Aldrich Chemical Company) . Se realizó la cromatografía en capa delgada con placas de gel de sílice 60 F254 de EM Science. Los espectros de H RMN se obtuvieron en un instrumento Bruker AM-400 en DMSO, y los desplazamientos químicos se reportan en ppm. Los puntos de fusión se determinaron en un aparato Thomas-Hoover y están sin corregir. Los espectros IR se registran en un reticulado de difracción Perkin-Elmer o en espectrofotómetros Perkin-Elmer 784. Los espectros de masa se registraron en espectrómetros de masas Kratos MS 50 o Finnigan 8230. El análisis elemental se obtuvo con un analizador elemental Perkin-Elmer 2400. Los valores de análisis están dentro de 0.4% del teórico.

EJEMPLO 1 -Benciloxi -2- (4-benciloxi-fenil) -3-metil-lH-indol Se carga un matraz con 4-benciloxianilina (45 g, 0.23 moles), 4 ' -benciloxi-2-bromofenilpropiofenona (21 g, 0.066 moles) y 50 1 de DMF. La reacción se calienta a reflujo durante 30 minutos y después se enfría a rt y después se divide entre 250 ml de EtOAc y 100 ml de HCl ÍN acuoso. El EtOAc se lava con NaHC03 acuoso y salmuera, se seca sobre MgS04. La solución se concentra y el residuo se capta en CH2C12 y se agregan hexanos para separar por precipitación 25 g de un sólido crudo. El sólido se disuelve en CH2C12 y se evapora en gel de sílice y se somete a cromatografía utilizando CH2Cl2/hexano (1:5) para proporcionar 9.2 g de un sólido canela (33%): p.f. = 150-152°C; 'H RMH (DMSO) 10.88 (s, 1 H) , 7.56 (d, 2 H, J = 8.8 Hz) , 7.48 (d, 4 H, J = 7.9 Hz), 7.42-7.29 (m, 6 H) , 7.21 (d, 1 H, J = 7.0 Hz) , 7.13 (d, 2 H, J = 8.8 Hz), 7.08 (d, 1 H, J = 2.2 Hz) , 6.94 (dd, 1 H, J = 8.8, 2.4 Hz) , 5.16 (s, 2 H) , 5.11 (s, 2 H) , 2.33 (s, 3 H) ; IR(KBr) 3470, 2880, 2820, 1620 cm-1; EM el m/z 419.

EJEMPLO 2 -Benciloxi-2- (4-fluorofenil) -3-metil) -lH-indol Se prepara el compuesto del título de una manera similar a (3) : p.f . = 132°C; *H RMN (DMSO) 11.0 (s, 1 H) , 7.68-7.64 (m, 2 H) , 7.49-7.47 (m, 2 H) , 7.41-7.31 (m, 5 H) , 7.23 (d, 1 H, J = 8.8 Hz) , 7.10 (d, 1 H, J = 2.4 Hz), 6.82 (dd, 1 H, J = 8.8, 2.4 Hz), 5.11 (s, 2 H) , 2.34 (s, 3 H) ; EM m/z 331; CHN calculado para C22H18FNO.

EJEMPLO 3 -benciloxi-2- (4-benciloxi-fenil) -3-metil) -1-ilmetil- (4- fenilbromuro) -indol Una solución de NaH 60% (0.17 g, 7.1 mmoles) en 20 ml de DMF se enfría a 0°C y se trata por adición a gotas de benciloxiindol 1 (2.5 g, 5.94 mmoles) en 10 ml de DMF. Después de 15 min se agregan a gotas bromuro de 4 ' -bromobencilo (1.63 g, 6.53 mmoles) en 10 ml de DMF. La reacción se agita durante 5 min a 0°C y después a rt durante 20 min adicionales. La mezcla de reacción se diluye con 300 ml de éter y se lava con NH4C1 (2 x 25 ml) después con NaHC03 (1 x 25 ml) y 25 ml de salmuera. Los extractos orgánicos se secan sobre MgS04 y se concentran. El residuo se cristaliza a partir de THF/hexanos para proporcionar 2.7 g (77%) de 2: p.f. = 144-146°C; H RMN (CDC13) 7.51-7.36 (m, 8 H) , 7.34 (d, 4 H, J = 8.6 Hz), 7.20 (d, 2 H, J = 8.8 Hz) , 7.15 (d, 1 H, J = 2.4 Hz ) , 7.03-7.00 (m, 3 H) , 6.89 (dd, 1 H, J = 8.8, 2.4 Hz), 6.80 (d, 2 H, J = 8.6 Hz) , 5.14 (s, 2 H) , 5.12 (s, 2 H) , 5.09 (s, 2 H) , 2.25 (s, 3 H) ; IR (KBr) 3400, 3020, 1600 cm'1 , EM el m/z 587.

EJEMPLO 4 -Benciloxi-2- (4-fluoro-fenil) -3-metil) -1-ilmetil] - (4- fenilbromuro) -indol Se prepara el compuesto del título de una manera similar al compuesto 5. p.f. = 139-139.5°C; lU RMN (DMSO) 7.49-7.46 (m, 2 H) , 7.41-7.37 (m, 6 H) , 7.33-7.27 (m, 4 H) , 7.24 (d, 1 H, J = 8.8 Hz) , 7.16 (d, 1 H, J = 2.2 Hz), 6.84 (dd, 1 H, J = 8.8, 2.4 Hz) , 6.73 (d, 1 H, J = 8.6 Hz) , 5.2 (s, 2 H) , 5.12 (s, 2 H) , 2.15 (s, 3 H) - , IR (KBr) 2920, 1630 crn"1; EM el m/z (499/501, Br presente) ; CHN calculado para C2sH23BrFNO.

EJEMPLO 5 2- (4-hidroxifenil) -3-metil) -1-llmetil- (4-fenilbromuro) indol- 5-ol Una solución que consiste de 5 (0.5 g, 0.85 mmoles) en 10 ml de CH2C12 se trata por la adición a gotas de 3.5 equivalentes de TMSI (0.47 ml , 3.0 mmoles) a rt . Después de un par de horas, la reacción se detiene, de manera que se agregan 2.0 equivalentes adicionales de TMSI y la reacción se callenta a reflujo durante 5 h. La reacción se enfría a 0°C y se agrega lentamente metanol para suspender la reacción. La reacción se diluye con 25 ml de éter y se lava con 25 ml de NaHCO,, 25 ml de Na2S03 10% y salmuera. La capa etérea se seca sobre MgS04 y se concentra en gel de sílice. La cromatografía con EtOAc/hexanos (1:4 a 1:1) proporciona 0.25 g de 3 (71 %) : p.f. = 83-86°C; H RMN (CDC13) 2 H de fenoles amplio (> 10), s 7.35 (d, 2 H, J = 9.0 Hz) , 7.15 (d, 2 H, J = 8.8 Hz), 7.01 (dd, 1 H, J = 2.4, 0.4 Hz), 6.86 (d, 2 H, J = 8.8 Hz), 6.80 (d, 1 H, J = 8.6 Hz) , 6.72 (dd, 1 H, J = 8.6, 2.4 Hz), 5.10 (s, 2 H) , 4.88 (s, 1 H) , 4.50 (s, 1 H) , 2.21 (s, 3 H) ; EM el m/z 407/409 que contiene Br; IR 3390, 2900, 1600 cm- ' ; CHN calculado para C22H1BBrN02 + 0.25 EtOAc.

EJEMPLO 6 2- (4-fluoro-fenil) -3-metil) - (4-fenilbromuro) -indol-5-ol Se prepara el compuesto del título de una manera similar al compuesto 7 y se aisla como una espuma; *H RMN (DMSO) 8.79 (s, 1 H) , 7.39-7.34 (m, 4 H) , 7.32-7.30 (m, 3 H) , 7.11 (d, 1 H, J = 8.8 Hz) , 6.85 (d, 1 H, J = 2.2 Hz), 6.74 (d, 1 H, J = 2.4 Hz) , 6.63 (dd, 1 H, J = 8.6, 2.2 Hz), 5.16 (s, 2 H) , 2.11 (s, 3 H) ; IR (KBr) 3400, 2900, 1630 cm- EM el m/z 409/411 que contiene Br.

Procedimiento General para Indolacrilamidas Una solución del ejemplo 3 en Et3N se trata con tri-o-tolilfosfina (10 moles %) y acrilamida (1.25 equivalentes) se purga cuidadosamente con N2 y se agrega Pd(0Ac)2 (2.5 moles %) . La reacción se calienta a 100-110°C en un tubo sellado hasta que finaliza, determinado por análisis por CCD. El producto de reacción crudo se reduce por concentración y se cristaliza directamente o se somete a cromatografía en gel de sílice .

EJEMPLO 7 (E)-N. N-Dietil-3-{4-[5-hidroxi-2-(4-hidroxi-fenil)-3-metil^ ?ndol-1-ilmetil] -fenil] -acrilamida p.f. = 160-165°C; XH RMN 9.67 (s, 1 H) , 8.72 (s, 1 H) , 7.50 (d, 2 H, J = 8.1 Hz) , 7.37 (d, 1 H, J = 15.4 Hz) , 7.17 (d, 2 H, J = 8.3 Hz) , 7.06 (d, 1 H, J = 8.8 Hz), 6.97 (d, 2 H, J = 15.4 Hz) , 6.86-6.82 (m, 5 H) , 6.58 (dd, 1 H, J = 8.6, 2.2 Hz), 5.19 (s amplio, 2 H) , 3.47-3.42 (m, 2 H) , 3.34-3.30 (m, 2 H) , 2.09 (s, 3 H) , 1.10 (t, 3 H, J = 7.0 Hz), 1.03 (t, 3 H, J = 7.0 Hz) ; IR (KBr) 3300, 2950, 1660, 1580 crn"1; EM (el) m/z 454; CHN calculado para C29H30N2O3+0.15 CH2C12 + 0.30 H20.

EJEMPLO 8 1 (E) -N-ter-butil-3-{4- [5-hidroxi-2- (4-hidroxi-fenil) -3- metili-ndol-l-ilmetil-£enil] -acrilamida p.f. = 168-170°C; *H RMN 9.66 (s, 1 H) , 8.71 (s, 1 H) , 7.66 (S, 1 H) , 7.34 (d, 2 H, J = 8.3 Hz) , 7.24 (d, 1 H, J = 15.8 Hz) , 7.15 (d, 2 H, J = 8.3 Hz) , 7.05 (d, 1 H, J = 8.6 Hz) , 6.85-6.82 (m, 5 H) , 6.59-6.56 (m, 1 H) , 6.55 (d, 1 H, J = 16.0 Hz) , 5.18 (s, 2 H) , 2.11 (s, 3 H) , 1.28 (s, 9 H) ; IR (KBr) 3350, 2950, 1660, 1620; EM (el) m/z 454; CHN calculado para C29H30N203 + 0.4 H20 EJEMPLO 9 (E) -Pirrolidino-3-(4-[5-hidroxi-2- (4-hidroxi-fenil) -3-metil- indol-1-ilmetil] -fenil) -acrilamida P.f. = 170-175°C; lH RMN 9.67 (s, 1 H) , 8.71 (s, 1H) , 7.49 (d, 2 H, J = 8.1 Hz) , 7.35 (d, 1 H, J = 15.4 Hz), 7.16 (d, 2 H, J = 8.6 Hz) , 7.05 (d, 1 H, J = 8.8 Hz), 6.88-6.81 (m, 6 H), 6.57 (dd, 1 H, J = 8.6, 2.2 Hz), 5.19 (s amplio, 2 H) , 3.56 (t, 2H, J = 6.6 Hz) , 3.35 (m. 2 H) , 2.11 (s, 3 H) , 1.87 (p, 2 H, J = 7.0 Hz) , 1.77 (p, 2 H, J = 7.0 Hz) ; EM m/z 452; CHN calculado para C29H28N203 + 0.1 MeOH + 1.3 H20.

EJEMPLO 10 (E)-N, N-dimetil-3-{4— [5-hidroxi-fenil) -3-metil-indol-l- ilme il] -fenil ) -acrilamida p.f. = 278-280°C; 2H RMN (DMSO) 9.65 (s, 1 H) , 8.70 (s, 1 H) , 7.50 (d, 2 H, J = 8.1 Hz) , 7.33 (d, 1 H, J = 15.4 Hz) , 7.15 (d, 2 H, J = 8.6 Hz) , 7.07 (d, 1 H, J = 15.6 Hz) , 7.05 (d, 1 H, J = 8.8 Hz) , 6.85-6.80 (m, 5 H) , 6.57 (dd, 1 H, J = 8.6, 2.4 Hz) , 5.19 (s, 2 H) , 3.09 (s, 3 H) , 2.88 (s, 3 H) , 2.11 (s, 3 H) ; EM el m/z 426; IR (KBr) 3410, 3220, 1650, 1580 cm"1; CHN calculado para C27H26N203 + 0.5 H20.

EJEMPLO 11 (E) -N. N-dibutil-3-{4- [5-hidroxi-2- (4-hidroxi-2- (4-hidroxi- fenil) -3-metil-indol-l-ilmetil] -fenil } -acrilamida p.f. = 126-128°C, JH RMN (DMSO) 9.65 (s, 1 H) , 8.70 (s, 1 H) , 7.48 (d, 2 H, J = 8.3 Hz), 7.36 (d, 1 H, J = 15.2 Hz) , 7.16 (d, 2 H, J = 8.6 Hz), 7.05 (d, 1 H, J = 8.6 Hz), 6.97 (d, 1 H, J = 15.2 Hz) , 6.86-6.81 (m, 5 H) , 6.57 (dd, 1 H, J = 8.8, 2.4 Hz) , 5.19 (s, 2 H) , 3.39 (t, 2 H, J = 7.0 Hz), 3.29 2 H, J = 7.2 Hz), 2.11 (S, 3 H) , 1.48-1.43 (M, 4 H) , 1.29-1.20 (M, 4 H) , 0.87 (t, 6 H, J = 7.2 Hz); EM el m/z 510; IR (KBr) 3300, 2920, 2900, 2850, 1650, 1625, 1580 cm- ' ; CHN calculado para C33H38N203.

EJEMPLO 12 (E) -N-Butil N1 -metil-3- {4- [5-hidroxi-2- (4-hidroxi-fenil) -3- metil-indo -1-ilmetil}-fenil)-acrilamida p.f. = 240-242°C-, *H RMN (DMSO) 9.66 (s, 1 H) , 8.70 (s, 1 H) , 7.50 (d, 2 H, J = 8.1 Hz) , 7.38-7.32 (m, 1 H) , 7.16 (d, 2 H, J = 6.8 Hz) , 7.06-7.01 (m, 2 H) , 6.85-6.81 (m, 5 H) , 6.57 (dd, 1 H, J = 8.6, 2.2 Hz) , 5.19 (s, 2 H) , 3.44, 3.33 (2 t, 2 H, J = 7.2 Hz) , 3.06, 2.87 (2 s, 3 H) , 2.11 (s, 3 H) , 1.45 (M, 2 H) , 1.24 (p, 2 H, J = 7.5Hz) , 0.87 (t, 3 H, J = 7.2 Hz) ; EM el m/z 468; IR (KBr) 3300, 1660, 1590 cm"1,- CHN calculado para C30H32N203 + 0.2 H20.

EJEMPLO 13 (E) -Morfolino-3-{4- [5-hidroxi-2- (4-hidroxi-fenil) -3-metil- indol} -1 -ilmetil) -f nil) -acrilamida p.f. = 165-167°C, 2H RMN (DMSO) 9.66 (s, 1 H) , 8.71 (s, 1 H) , 7.52 (d, 2 H, J = 8.1 Hz) , 7.39 (d, 1 H, J = 15.4 Hz) , 7.15 (d, 2 14, J = 8.6 Hz) , 7.12 (d, 1 H, J = 15.4 Hz) , 7.06 (d, 1 H, J = 8.6 Hz) , 6.85-6.81 (m, 5 H) , 6.57 (dd, 1 H, J = 8.6, 2.2 Hz) , 5.19 (s, 2 H) , 3.65-3.64 ( , 2 H) , 3.59-3.53 (m, 6 H) , 2.11 (s, 3 H) ; IR (KBr) 3330, 1650, 1620, 1580 cm 1; EM (bar) M/Z 469 (M+H*) ; CHN calculado para C29H28N204 + 0.5 H20.

EJEMPLO 14 (E) -3-{4-[5-hidroxi-2-(4-hidroxi-fenil) -3-metil-indol-l- ilmetil] fenil) -acrilamida p.f.= 161-163DC, XH RMN (DMSO) 9.65 (s, 1 H) , 8.70 (s, 1 H) , 7.48 (s, 1 H) , 7.37 (d, 2 H, J = 8.35 Hz) , 7.30 (d, 1 H, J = 15.8 Hz) , 7.14 (d, 2 H, J = 8.35 Hz) , 7.04 (d, 2 H, J = 8.6 Hz) , 6.85-6.81 (m, 5 H) , 6.57 (dd, 1 H, J = 8.8, 2.4 Hz) , 6.48 (d, 1 H, J = 15.8 Hz) , 5.18 (s, 2 H) , 2. 1 0 (s, 3 H) ; IR (KBr) 3320, 3180, 1660, 1580 crn"1; EM (BAR) m/z 399 (M+H*) ; CHN calculado para C25H22N203 + 1.3 H20.

EJEMPLO 15 (E) -N. Metil-3- {4- [5-hidroxi-2- (4-hidroxi-fenil) -3-metil- indol-1-ilmet-.l] -fenil} -acrilamida p.f. = 155-158°C; aH RMN (DMSO) 9.64 (s, 1 H) , 8.70 (s, 1 H) , 7.99 (c, 1 H, J = 4. Hz) , 7.37 (d, 2 H, J = 8.1 Hz) , 7.30 (d, 1 H, J = 15.8 Hz) , 7.14 (d, 2 H, J = 8.6 Hz) , 7.03 (d, 1 H, J = 8.6 Hz) , 6.85-6.81 (m, 5 H) , 6.57 (dd, 1 H, J = 8.6, 2.4 Hz) , 6.48 (d, 1 H, J = 15.8 Hz) , 5.18 (s, 2 H) , 2.66 (d, 3 H, J = 4.6 Hz) , 2. 1 0 (S, 3 H) ; IR (KBr) 3400, 1660, 1620 cm"1; EM el m/z 412; CHN calculado para C26H24N203 + 0.4 H20.

EJEMPLO 16 (E) -N. N-dibutil-3- .4- [5-hidroxi-2- (4-fluoro-fen?l) -3-metil- indol-1-ilme il] -fenil) -acrilamida p.f. = 180°C; JH RMN (DMSO) 8.77 (s, 1 H) , 7.48 (d, 2 H, J = 8.4 Hz) , 7.4 1 7.38 (m, 3 H) , 7.38-7.29 (m, 3 H) , 7.13 (d, 1 H, J =-8.8 Hz) , 6.97 (d, 1 H, J = 15.4 Hz) , 6.85 (d, 1 H, J = 2.4 Hz) , 6.80 (d, 2 H, J = 8.1 Hz) , 5.2 (s, 2 H) , 3.40-3.36 (m, 2 H) , 3.30-3.27 (m, 2 H) , 2.10 (s, 3 H) , 1.50-1.40 (m, 4 H) , 1.29-1.21 (m, 4 H) , 0.86 (t, 6 H, J = 7.2 Hz) ; IR (KBr) 3180, 2950, 2900, 2850, 1650, 1590 cm- 7- EM el m/z 512; CHN calculado para C33H37N202.

EJEMPLO 17 (E) -N-Butil . N ' -Metil-3- { 4- [5-hidroxi-2- { 4-fluoro- enil) -3- metilindol-1-ilmetil] -fenil) -acrilamida- p.f. = 153-153.5°C; ? RMN (DMSO) 8.77 (s, 1 H) , 7.50 (d, 2 H, J = 8.1 Hz) , 7.42-7.36 (m, 2 H) , 7.35-7.28 (m, 3 H) , 7.13 (d, 1 H, J = 8.8 Hz) , 7.03 (dd, 1 H, J = 15.4, 2.6 Hz) , 6.84 (d, 1 H, J = 2.4 Hz) , 6.80 (d, 2 H, J = 8.1 Hz) , 6.62 (dd, 1 H, J = 8.8, 2.4 Hz) , 5.21 (s, 2 H) , 3.44, 3.41 (2 t, 2 H, J = 7.0 Hz) , 3.06, 2.87 (2 s, 3 H) , 2.10 (s, 3 H) , 1.49-1.42 (m, 2 H) , 1.27-1.20 (m, 2 H) , 0.86 (t, 3 H) ; IR (KBr) 3300,2950,2860,1645, 1580 cm- ' ; EM el M/z 470; CHN calculado para C30H31FN2O2.

EJEMPLO 18 -Benciloxi-2- (4-benciloxi-fenil) -3-metil-lH-?.ndol Se carga un matraz con 4-bencilox?anilina (45 g, 0.23 mmoles), 4 ' -bencilox?-2-bromofeniloproipofenona (21 g, 0.066 moles) y 50 ml de DMF. La reacción se calienta a reflujo durante 30 minutos y después se enfría a rt y después se divide entre 250 ml de EtOAc y 100 ml de HCl acuoso ÍN. El EtOAc se lava con NaHC03 acuoso y salmuera, se seca sobre MgS04. La solución se concentra y el residuo se capta en CH2C12 y se agregan hexanos para separar por precipitación 25 g de un sólido crudo. El sólido se disuelve en CH2C12 y se evapora en gel de sílice y se somete a cromatografía utilizando CH2Cl2/hexano (1:5) para proporcionar 9.2 g de un sólido canela (33%): p.f. = 150-152°C; 'H EMN (DMSO) 10.88 (s, 1 H) , 7.56 (d, 2 H, J = 8.8 Hz) , 7.48 (d, 4 H, J = 7.9 Hz), 7.42-7.29 (m, 6 H) , 7.21 (d, 1 H, J = 7.0 Hz) , 7.13 (d, 2 H, J = 8.8 Hz), 7.08 (d, 1 H, J = 2.2Hz), 6.94 (dd, 1 H, J = 8.8, 2.4 Hz) , 5.16 (s, 2 H) , 5.11 (s, 2 H) , 2.33 (s, 3 H) ; IR (KBr) 3470, 2880, 2820, 1620 cm"; EM el m/z 419.

EJEMPLO 19 -Benciloxi-2- (4-benciloxi-2- (4-benciloxi-fenil) -3-metil) -1- ilmetil- ( -fenilyoduro) -indol Una solución de 4 (3.0 g, 7.4 mmoles) en 25 ml de DMF se trata con NaH (dispersión al 60%, 0.21 g, 8.9 mmoles) y se agita a rt durante 15 minutos. Se agrega bromuro de 4-yodobromobencilo (2.2 g, 7.4 mmoles) y la mezcla de reacción se agita durante 1 hora. La mezcla de reacción se vierte en agua y se extrae con EtOAc, se seca sobre MgS04 y se concentra. La trituración del producto crudo con éter proporciona 2.2 g del producto como un sólido blanco: p.f. = 153-156°C; 1? RMN (DMSO) 7.54 (d, 2 H, J = 8.6 Hz) , 7.52-7.45 (m, 4 H) , 7.37-7.29 (m, 6 H) , 7.27 (d, 2 H, J = 8.8 Hz), 7.17 (d, 1 H, J = 9.0 Hz), 7.13 (d, 1 H, J = 2.2 Hz) , 7. 1 0 (d, 2 H, J = 8.8 Hz), 6.81 (dd, 1 H, J = 8.8, 2.4 Hz), 6.60 (d, 2 H, J = 8.3 Hz), 5.18 (s, 2 H) , 5.12 (s, 2 H) , 5.11 (s, 2 H) , 2.15 (s, 3 H) ; EM el m/z 635.

EJEMPLO 20 2- (4-hidroxifenil) -3-metil) -1-ilmetil- (4-feni yoduro) indol- 5-ol Una solución de 4 (2.2 g, 3.5 mmoles) en CHC13 se trata con yodotrimetilsilano (1.04 ml, 7.0 mmoles) y la reacción se calienta a reflujo. Después de 2 h adicionales, se agregan 3 equivalentes adicionales de yodotrimetilsilano y la reacción se agita a rt durante 18 h. La reacción se suspende al agregar 5 ml de MeOH. La capa orgánica se lava con una solución acuosa 10% de Na2S03, HCl ÍN y se seca sobre MgS04. La solución se concentra y se somete a cromatografía en gel de sílice con EtOAc/hexano (3:7) para proporcionar 1.2 g de 4a como una espuma: XH RMN 9.65 (s, 1 H) , 8.71 (s, 1 H) , 7.54 (d, H, J = 8.3 Hz) , 7.12 (d, 2 H, J = 8.3 Hz), 7.02 (d, 1 H, J = 8.6 Hz) , 6.84-6.80 (m, 3 H) , 6.61(d, 2 H, J = 8.3 Hz), 6.57 (dd, 1 H, J = 6.4 Hz) , 5.12 (s, 2 H) , 2.09 (s, 3 H) ; EM el m/z 455.

Procedimiento General para la Preparación de Indolpropargilamina Los compuestos del título de los ejemplos 21-23 se producen utilizando una solución que contiene un exceso molar de 10 veces de una amina secundaria en DMF enfriada a 0°C y tratada con bromuro de propargilo (3 equivalentes) , solución 80% en tolueno) . Después de 1 h a 0°C, se permite que las reacciones alcancen la rt durante 1 h. Se agrega yoduro de indol (4a, 1 equivalente) seguido por 0.1 equivalentes de Cu(I)I y 0.035 equivalentes de Pd (PPh3) 2C12. La mezcla de reacción después se agita durante 16-48 h y se trabaja por vertido en agua y se extrae en EtOAc. El EtOAc se concentra y se somete a cromatografía en gel de sílice utilizando EtOAC/hexano como sistema eluyente. + EJEMPLO 21 2- (4-hidroxi-fenil) -3-metil-l- [4- (3-N,N-dimetil-l-il-prop-l- inil) -bencil] -lH-indol-5-ol p.f.= 173-176°C; XH RMN (DMSO) 9.64 (s, 1 H) , 8.70 (s, 1 H) , 7.25 (d, 2 H, J = 8.1 Hz) , 7.12 (d, 2 H, J = 8.3 Hz), 7.03 (d, 1 H, J = 8.6 Hz), 6.83-6.78 (m, 5 H) , 6.57 (dd, 1 H, J = 8.8, 2.4 Hz) , 5.17 (s, 2 H) , 3.39 (s, 2 H) , 2.19 (s, 6 H) , 2.10 (s, 3 H) ; IR (KBr) 3390, 1490 cm"1; EM el 411 (M+H*).

EJEMPLO 22 2- (4-hidroxi-fenil) -3-metil-l- [4- (3-piperidin-l-il-prop-l- inil) -bencil] -lH-indol-5-ol p.f .= 1 18 - 123 °C; 4_ RMN (DMSO) 9.65 (s, 1 H), 8.71 (s, 1 H) , 7.24 (d, 2 H, J = 8.1 Hz), 7.12 (d, 2 H, J = 8.6 Hz), 7.02 (d, 1 H, J = 8.6 Hz), 6.83-6.80 (m, 5 H) , 6.57 (dd, 1 H, J = 8.6, 2.2 Hz), 5.17 (s, 2 H) , 3.39 (s, 2 H) , 2.41 (m, 4 H) , 2.10 (s, 3 H) , 1.48 (p, 4 H, J = 5.7 Hz), 1.36-1.33 (m, 2 H) ; IR (KBr) 3400, 2920, 1620, 1420 cm'1 EM el m/z 450; CHN calculado para C30H30N2O2 + 0.25 H20 EJEMPLO 23 2- (4-Hidroxi-fenil) -3-metil-l- [4- (3-pirrolidin-l-il-prop-l- inil)bencil-lH-indol-5-ol (5c) p.f .=174-176°C; ? RW (DMSO) 9.64 (s, 1 H) , 8.70 (s, 1 H) , 7.23 (d, 2 H, J = 8.3 Hz) , 7.11 (d, 2 H, J = 8.6 Hz) , 7.02 (d, 1 H, J = 8.8 Hz) , 6.84 (m, 5 H) , 6.57(dd, 1 H, J = 8.6, 2.2 Hz) , 5.17 (s, 2 H) , 3.53 (s, 2 H) , 2.53-2.51 (m, 4 H) , 2 . 09 ( s , 3 H) , 1 . 69 - 1 . 66 (m, 4 H) ; IR (KBr) 3400 , 2920 , 2900 , 1620 cm- - EM el m/z 436 ; CHN calculado para C29H28N202 + 0 . 7 H20 Métodos Biológicos Ensayo de unión de receptor de estrógeno in vi tro Preparación del receptor Se hacen crecer células CHO que sobreexpresan el receptor de estrógeno en recipientes de 150 mm2 en DMEM + suero bovino fetal depurado con carbón activado recubierto con dextrano 10%. Las placas se lavan dos veces con PBS y una vez con Tris-HCl 10 M, pH 7.4, EDTA 1 mM. Las células se cosechan por raspado de la superficie después la suspensión celular se coloca en hielo. Las células se rompen con un triturador de tejido motorizado portátil utilizando dos descargas de 10 segundos. La preparación cruda se centrifuga a 12,000 g durante 20 min seguido por centrifugación a 60 minutos a 100,000 g para producir un citosol libre de ribosoma. El citosol después se congela y almacena a -80°C. Se estima la concentración de proteína de citosol utilizando el ensayo BCA con proteína estándar de referencia.

Condiciones de Ensayo de Unión El ensayo de competencia se realiza en una placa de 96 pozos (poliestireno*) la cual une <2.0% de la entrada total de [3H] - 17 ß -estradiol y cada punto de dato se recupera por triplicado. Se colocan alícuotas de 100 mg/100 Ul de la preparación de receptor por pozo. Se agrega una dosis de saturación de [3H] 17ß-estradiol 2.5 nM + competidor (o amortiguador) en un volumen de 50 µl en la competición preliminar cuando se evalúan 100 x y 500 x de competidor, únicamente se utiliza [3H] 17ß-estradiol 0.8 nM. La placa se incuba a temperatura ambiente durante 2.5 h. Al final de este período de incubación se agregan 150 µl de carbón activado recubierto con dextrano enfriado con hielo (carbón activado 5% recubierto con dextrano 69K 0.05%) agregados a cada pozo y la placa se centrifuga inmediatamente a 99 g durante 5 minutos a 4°C. Después se remueven 200 µl de la solución de sobrenadante por conteo de centelleo. Las muestras se cuentan a 2% o 10 minutos, lo que ocurra primero. Debido a que el poliestireno absorbe una cantidad pequeña de [3H] 17ß-estradiol, los pozos que contienen radioactividad y citosol, pero que no son procesados con carbón activado se incluyen para cuantificar cantidades de isótopo disponible. Además, los pozos que contienen radioactividad pero no citosol son procesados con carbón activado para estimar la DPM no removible de [3H] 17ß-estradiol. Se utilizan placas de 96 pozos Corning #25880-96, debido a que han demostrado que unen por lo menos una cantidad de estradiol.

Análisis de los resultados Las cuentas por minuto (CPM) de radioactividad se convirtieron automáticamente a desintegraciones por minuto (DPM) por el contador de centelleo Beckman LS 7500 utilizando un conjunto de estándares suspendidos para generar una H No. para cada muestra. Para calcular el % de unión de estradiol en presencia de 100 o 500' veces de competidor, se aplicó la siguiente fórmula: ( (DPM de muestra-DPM no removido por carbón activado/ (DPM de estradiol-DPM no removido por carbón activado) ) x 100% = % de unión de estradiol Para la generación de las curvas de CI50, se gráfica el % de unión versus compuesto. Las CI50 se generan para compuestos que muestran >30% de competencia a una concentración de competidor de 500x. Para una descripción de estos métodos véase Hulme, E.C., ed. 1992. Receptor-Ligand Interactions : A Practical Approach. IRL Press, New York, (véase especialmente el capítulo 8) .

Ensayo de fosfatasa alcalina en células de Ishi awa Mantenimiento y tratamiento de las células : Las células de Ishikawa se mantienen en DMEM/F12 (50%: 50%) que contiene rojo de fenol + suero bovino fetal 10% y el medio se suplementa con Glutamax 2 mM, 1% Pen/Strap y piruvato de sodio 1 mM. Cinco días antes del inicio de cada experimento (tratamiento de células) el medio se cambia a rojo de fenol-libre de DMEM/F12 + suero depurado en carbón activado recubierto con dextrano 10%. En el día anterior al tratamiento, las células se cosechan utilizando tripsina 0.5%/EDTA y se colocan a una densidad de 5 x 10'' células/pozo en placas de cultivo de tejido de 96 pozos. Los compuestos de prueba se dosifican a 10'6, 10"' y 108 M además de 10'6 M (compuesto) + 109 M de 17ß-estradiol para evaluar la capacidad de los compuestos para funcionar como antiestrógenos . Las células se tratan durante 48 h antes del ensayo. Cada placa de 96 pozos contiene un control de 17ß-estrad?ol . La misma población para cada dosis es de n = 8.

Ensayo de fosfatasa alcalina: Al final de 48 h, el medio se aspira en las células y se lavan tres veces con solución salina amortiguada con fosfato (PBS) . Se agregan a cada pozo 50 µl de amortiguador de lisis (Tris-HCl 0.1 M, pH 9.8, Tritón X-100 0.2%). Las placas se colocan a -80 °C durante un mínimo de 15 minutos. Las placas se recalientan a 37°C seguido por la adición de 150 µl de Tris-HCl 0.1 M, pH 9.8, que contiene para-nitrofenilfosfato 4 mM (pNPP) a cada pozo (concentración final, pNPP 3 mM) . La absorbancia y los cálculos dependientes se realizan utilizando el programa de KineticCalc Application (Bio-Tek Instruments, Inc., Winooski, VT) . Los resultados se expresan como la media +/- S.D. (desviación estándar) de la tasa de reacción de enzima (pendiente) promediada sobre la porción lineal de la curva de cinética de reacción (lecturas de densidad óptica cada 5 minutos durante 30 minutos de lectura de absorbancia) . Los resultados para los compuestos se resumen como por ciento de la respuesta en relación a 17ß-estradiol 1 nM. Se ensayan varios compuestos para determinar la actividad estrogénica por el método de fosfatasa alcalina y los valores DE50 correspondientes (95% C.l.) se calculan. Los cuatro incluidos en lo siguiente se utilizan como estándares de referencia. 17ß-estradiol 0.03 nM 17a-estradiol 1.42 nM estriol 0.13 nM estrona 0.36 nM Una descripción de estos métodos se describe por Holinka, C.F., Hata, H., Kuramoto, H. y Gurpide, E. (1986) Effects of steroid hormones and antisteroids on alkaline phosphatase activity in human endometrial cáncer cells (Ishika a Line). Cáncer Research, 46:2771-2774, y por Littlefield, B.A., Gurpide, E., Markiewicz, L., McKinley, B. y Hochberg, R.B. (1990). A simple and sensitive microtiter píate estrogen bioassay based on stimulation alkaline phosphatase in Ishikawa cells; Estrogen action of D5 adrenal steroids. Endocrinology, 6:2757-2762.

Ensayo de infección 2X VIT ERE Mantenimiento _yi_ tratamiento de células Las células de ovario de hámster chino (CHO) las cuales se han transfectado establemente con el receptor de estrógeno humano se mantienen en DMEM + 10% suero bovino fetal (FBS) . A las 48 h antes del tratamiento, el medio de crecimiento se sustituye con DMEM que carece de rojo de fenol + 10% FBS depurado con carbón activado recubierto con dextrano (medio de tratamiento) . Las células se siembran en placas a una densidad de 5000 células/pozo en placas de 96 pozos que contienen 200 µl de medio/pozo.

Transfección de fosfato de calcio Se combina ADN indicador (plásmido pGL2 Promega que contiene dos copias en batería de ERE vitelogenina en la parte delantera del promotor de timidina cinasa mínimo que activa al gen de luciferasa) con el plásmido de expresión de ß-galactosidasa pCHUO (Pharmacia) y ADN portador (pTZ18U) en la siguiente relación: µG de ADN indicador 5 µG de ADN pCHUO 5 µG de pTZ18U 20 µG de ADN/l ml de solución de transfección El ADN 20 µg se disuelve en 500 µl de 250 mM de CaCl2 estéril y se agrega a gotas a 500 µl de 2 X HeBS (NaCl 0.28 M, HEPES 50 mM, Na2HP04 1.5 mM, pH 7.05) y se incuba a temperatura ambiente durante 20 minutos. A cada pozo se le agregan 20 µl de esta mezcla de células y permanecen sobre las células durante 16 h. Al final de esta incubación el precipitado se remueve, las células se lavan con medio, se sustituye medio de tratamiento fresco y las células se tratan ya sea con vehículo, 17ß-estradiol 1 uM, compuesto 1 µM o compuesto 1 µM + 17ß-estradiol 1 nM (pruebas para antagonismo de estrógeno) . Cada condición de tratamiento se realiza en 8 pozos (n = 8) los cuales se incuban durante 24 horas antes del ensayo de luciferasa.

Ensayo de luciferasa Después de exposición durante 24 h a los compuestos, se remueve el medio y cada pozo se lava 2 X con 125 µl de PBS que carece de Mg** y Ca**. Después de remover el PBS, se agregan a cada pozo 25 µl de amortiguador de lisis Promega y se permite que repose a temperatura ambiente durante 15 min, seguido por min a -80°C y 15 min a 37°C. Se transfieren 20 µl de lisado a una placa de 96 pozos opaca para evaluación de actividad de luciferasa y se utilizan 5 µl de lisado remanente para la evaluación de actividad de B-galactosidasa (normalización de transfección) . El sustrato de luciferano (Promega) se agrega en alícuotas de 100 µl a cada pozo automáticamente por el luminómetro y la luz producida (unidades de luz relativa) se lee 10 segundos después de la adición.

Ensayo de ß-galactosidasa A los 5 µl remanentes del lisado se le agregan 45 µl de PBS. Después se agregan 50 µl del amortiguador de ensayo Promega B-galactosidasa 2X, se mezclan bien y se incuban a 37°C durante 1 hora. Se instala una placa que contiene una curva estándar (0.1 a 1.5 miliunidades por triplicado) para cada corrida experimental. Las placas se analizan en un lector de placas espectrofotométrico Molecular Devices a 410 nm. Las densidades ópticas para la muestra desconocida se convierten a miliunidades de actividad por extrapolación matemática a partir de la curva estándar.

Análisis de los resultados Los datos de luciferasa se generan como unidades luz relativas (RLU) acumuladas durante una medición de 10 segundos y se transfieren a una medición de 10 segundos y se transfieren a un archivo JMP (SAS Inc) en donde se restan las RLU de fondo. Los valores de B-galactosidasa se importan automáticamente en el archivo y estos valores se dividen entre los RLU para normalizar los datos. Las desviaciones media y estándar se determinan para n = 8 para cada tratamiento. La actividad de los compuestos se compara con 17ß-estradiol para cada placa. El porcentaje de actividad en comparación con 17ß-estradiol se calcula utilizando la fórmula %= ( (Estradiol-control) / (valor del compuesto) X 100. Estas técnicas se describen en Tzukerman, M.T., Esty, A., Santiso-Mere, D., Danielian, P., Parker, M.G., Stein, R.B., Pike, J.W. y McDonnel, D.P. (1994). Se determinó la capacidad transactivacional del receptor estrógeno humano tanto en el contexto celular como de promotor y fue mediada por dos regiones intramoleculares funcionalmente distintas (véase Molecular Endocrinology, 8:21-30).

Bioensayo uterotrófico/antiterotrófico en rata Se determinaron las propiedades estrogénicas ya antiestrogénicas de los compuestos en un ensayo uterotrófico de rata inmadura (4 días) que (como se describe previamente por L.J. Black y R.L. Goode, Life Sciences, 26, 1453 (1980)). Se prueban en grupos de seis a ratas Sprague-Dawley inmaduras (hembras, de 18 días de edad) . Se trata a los animales por inyección ip diaria con 10 µg de compuesto, 100 µg de compuesto (100 µg de compuesto + 1 µg de 17ß-estradiol) para verificar antiestrogenicidad y 1 µg de 17ß-estradiol , con DMSO 50%/solución salina 50% como un vehículo de inyección. En el día 4, los animales son sacrificados por asfixia por C02 y sus úteros se remueven y se cortan para eliminar el exceso del lípido, se remueve cualquier fluido y se determina el peso húmedo. Una sección pequeña de un cuerno se envía para histología y el resto se utiliza para aislar ARN total con el fin de evaluar el componente del complemento de la expresión 3.

Resultados Biológicos Afinidad de Receptor de Estrógeno (reportado como RBA, 17 ß-estradiol=100) Compuesto RBA raloxifeno 200 tamoxifeno 1.8 Ejemplo 10 20 Ejemplo 7 42 Ejemplo 8 40 Ejemplo 9 40 Ejemplo 12 114 Ejemplo 11 80 Ejemplo 13 27 Ejemplo 14 32 Ejemplo 15 53 Ejemplo 21 53 Ejemplo 22 23 Ensayo de infección de luciferasa Compuesto de activación % de activación con 17ß-estradiol 1 nM 17ß-estradiol 100. N/A estriol 38% N/A tamoxifeno 0% 10% raloxifeno 0% 0% Ejemplo 10 1% 2% Ejemplo 7 4% Ejemplo 8 6% Ejemplo 9 6% Ejemplo 12 13% 24. Ejemplo 11 12. Ejemplo 13 171 Ejemplo 14 19% 57. Ejemplo 15 15% 31-Ejemplo 21 34% 341 Ejemplo 22 17% 19% Ensayo de fosfatasa alcalina en Ishikawa Compuesto de Activación % de activación (compuesto + 17ß-estradiol 1 nM) 17ß-estradiol 100% N/A tamoxifeno 0% 45% raloxifeno 5% 5% Ejemplo 10 6 19 Ejemplo 7 1% 9% Ejemplo 8 10% 22% Ejemplo 9 3% 11% Ejemplo 12 7% 16% Ejemplo 11 6% 11% Ejemplo 13 7% 9% Ejemplo 14 2% 14% Ejemplo 15 0% 5% Ejemplo 21 34% 34% Ejemplo 22 27% 23% Modelo de rata ovariectomizado de 3 días Compuesto 10 µg 10.0 µg Tamoxifeno 69.6 mg 71.4 mg Raloxifeno 47.5 mg 43.2 mg control = 42.7 mg 1 µg 17ß-estradiol = 98.2 Compuesto 10 µg 10.0 µg 100 µg más 1 µg de 17ß-estradiol Ejemplo 7 47.8 mg 64.8 mg 75.4 control = 202 mg 1 µg 17ß-estradiol = 80.2 mg Compuesto o µq 100 µq 100 µa más 1 µg de 17 ß- estradiol Ejemplo 12 36.9 mg 49.5 mg 63.1 control =314 mg 1 µg 17ß-estradiol = 89.0 mg Compuesto 10 µq 100 µq 100 µ más 1 ua de 17B-estradiol Ejemplo 11 39.3 mg 59.8 mg 81.0 control = 245 g 1 µg 17ß-estradiol = 90.8 mg Compuesto 10 u<3 100 µq 100 µq más 1 ua de 176 -estradiol Ejemplo 14 32.5 mg 56.4 mg 79.8 mg Ejemplo 15 40.4 mg 56.3 mg 69.3 mg control = 291 mg 1 µg 17ß-estradiol = 95.5 mg Compuesto o µq 100 µq 100 µq más 1 µq de 17 B-estradiol Ejemplo 21 56.0 mg 84.0 mg 77.6 mg control = 32.1 mg 1 µg 17ß-estradiol = 90.2 mg Compuesto 10 na 100 µq 100 ua más 1 ua de 17B-estradiol Ejemplo 22 55.6 mg 71.3 mg 66.8 mg control = 21.7 mg 1 µg 17ß-estradiol = 82.8 mg Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (30)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende uno o más estrógenos y un compuesto que tiene la estructura: en la que : Ri se selecciona de H, OH o los esteres de alquilo de C3-C4 de los mismos, o halógeno R2, R3, R4, R5 y R6 se seleccionan independientemente de H, OH o los esteres o éteres de alquilo de C3-C4 de los mismos, halógeno, ciano, alquilo de C^Cj o trifluorometilo, con la condición de que cuando R? es H, R2 no es OH. n es 2 ó 3 ,- X se selecciona de H, alquilo de C1-C3, ciano, nitro, trifluorometilo, halógeno; Z se selecciona de: -CH=CH—C—Y C=C (CH2)ñ-Y Y se selecciona de a) la porción: en donde R7 y R8 se seleccionan independientemente del grupo de H, alquilo de d-C6, fenilo o combinado con -(CH2)P-, en donde p es un número entero de 2 a 6, de manera que forma un anillo, el anillo está opcionalmente sustituido por hasta tres sustituyentes que se seleccionan de hidroxilo, halo, alquilo de Cj-C4, trihalometilo, alcoxi de -C4> trihalometoxi, alquiltio de d-C4, alquilsulfinilo de d-C4, alquilsulfonilo de d-d, hidroxialquilo de d-C4, -C02OH, CN, -CONH (alquilo de C3- C4) , -NH2-, alquilamino de d-C4, dialquilamino de C3-C4, -NHS02alquilo de d-C4, -NHCOalquilo de d-C4 y -N02; b) un heterociclo saturado, insaturado o parcialmente insaturado de cinco, seis o siete miembros que contiene hasta dos heteroátomos que se seleccionan del grupo que consiste de -O-, -NH-, -N(alquilo de C1-C )-, -N= y -S(0)m-, en donde m es un número entero de 0-2, opcionalmente sustituido con 1-3 sustituyentes que se seleccionan independientemente de hidroxilo, halo, alquilo de l'c4' trihalometilo, alcoxi de Cj-C^ trihalometoxi, aciloxi de C1-C4, alquiltio de ^- ^ , alquilsulfonilo de C^-C^ , hidroxialquilo de ^-C^ , -C02H, -CN-, -CONffi^-, -NH2, alquilamino de C^-C^ dialquil (0^-04) amino, -NHS02R?, NHCOR-L, -N02 y fenilo opcionalmente sustituido con 1-3 grupos alquilo de C1-C4, c) un sistema de anillo biciclo que consiste de un anillo heterociclo de cinco o seis miembros fusionado a un anillo fenilo, el anillo heterocíclico contiene hasta dos heteroátomos que se selecciona de -O-, -NH- , -N (alquilo de ?~C4) , y -S(0)m-, en donde m es un número entero de 0-2, opcionalmente sustituido con 1-3 sustituyentes que se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidroxilo, halo, alquilo de d-C4, trihalometilo, alcoxi de -d, trihalometoxi, aciloxi de C3-C4, alquiltio de C3-C4, alquilsulfinilo de d-C4, alquilsulfonilo de C1-Cí , hidroxialquilo de C3-C4, -C02H, -CN-, -CONHRi-, -NH2-, alquilamino de d-C4, dialquil (d-C4) amino, -ímSO^-, -NHCOR^, -N02, y fenilo opcionalmente sustituido con 1-3 grupos alquilo de d-C4,- y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

2. Una composición farmacéutica, de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque: Ri se selecciona de H, OH o los esteres de d-C4 ° éteres de alquilo de los mismos, halógeno; R2, R3, R4, R5 y R6 se seleccionan independientemente de H, OH o los esteres de C1-C1 o éteres de alquilo de los mismos, halógeno, ciano, alquilo de C3-C6 o trifluorometilo, con la condición de que cuando R es H, R2 no es OH; X se selecciona de H, alquilo de C3-C6, ciano, nitro, trifluorometilo, halógeno; Y es la porción R7 y RB se seleccionan independientemente de H, alquilo de d-C6 o, combinado con -(CH2)p-, en donde p es un número entero de 2 a 6 , de manera que forman un anillo, el anillo está opcionalmente sustituido por hasta 3 suetituyentes que se seleccionan de hidroxilo, halo, alquilo de d-C4/ trihalometilo, alcoxi de C3-C4, trihalometoxi, alquiltio de d-C4, alquilsulfinilo de C1-C4, alquilsulfonilo de -d, hidroxialquilo de d-C4, -C02H, -CN, -CONH (alquilo de d-C4) , -NH2, alquilamino de d-C4, dialquilamino de C1-C4, -NHS02 (alquilo de d-C4) , -NHCO (alquilo de d-C4) y -N02.

3. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada porque R7 y R8 se concatenan juntos como -(CH2)p- para formar un anillo en donde p es un número entero de 2 a 6 , el anillo está opcionalmente sustituido con 1-3 sustituyentes que se seleccionan de alquilo de d-C3, trifluorometilo, halógeno, fenilo, nitro y -CN.

4. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende uno o más estrógenos y 5-benciloxi-2- (4-fluorofenil) -3-metil) -lH-indol .

5. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende uno o más estrógenos y 5-benciloxi-2- (4-benciloxifenil) -3-metil) -1-ilmetil- (4-fenilbromuro) -indol .

6. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende uno o más estrógenos y 5-benciloxi-2- (4-fluoro-fenil) -3-metil) -1-ilmetil- (4-fenilbromuro) -indol.

7. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende uno o más estrógenos y la reivindicación 1 comprende uno o más estrógenos y 2- (4-hidroxifenil) -3-metil) -1-ilmetil- (4-fenilbromuro) -indol-5-ol.

8. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende uno o más estrógenos y (E) -N, N-dietil-3- {4- [5-hidroxi-2- (4-hidroxifenil) -3 -metil -indol-1- ilmetil] -fenil} -acrilamida.

9. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende uno o más estrógenos y 1 (E) -N- ter-butil-3 - {4 - [5-hidroxi-2 - (4 -hidroxifenil) -3 -metil -indol -1-ilmetil] -fenil} -acrilamida.

10. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende uno o más estrógenos y (E) -pirrolidino-3- {4- [5-hidroxi-2- (4-hidroxi-fenil) -3 -metil -indol -1-ilmetil] -fenil} -acrilamida.

11. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende uno o más estrógenos y (E) -N, N-dimetil-3- {4- [5-hidroxi-2- (4-hidroxifenil) -3-metil-indol-l-ilmetil] -fenil} -acrilamida .

12. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende uno o más estrógenos y (E) -N, N-dibutil-3- {4- [5-hidroxi-2- (4-hidroxifenil) -3-metil-indol-l-ilmetil] -fenil} -acrilamida.

13. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende uno o más estrógenos y (E) -N-butil N' -metil-3- {4- [5-hidroxi-2- (4-hidroxifenil) -3 -metil -indol -1-ilmetil] -fenil} -acrilamida.

14. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende uno o más estrógenos y (E) -morfolinino-3- {4- [5-hidroxi-2- (4-hidroxi-fenil) -3-metil-indol-l-ilmetil] -fenil} acrilamida.

15. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende uno o más estrógenos y (E) -3- {4- [5-hidroxi-2- (4-hidroxi-fenil) -3-metil-indol -1-ilmetil] -fenil} -acrilamida.

16. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende uno o más estrógenos y (E) .N, metil-3- {4- [5-hidroxi-2- (4 -hidroxifenil) -3-metil-indol-1-ilmet?l] -fenil} -acrilamida.

17. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende uno o más estrógenos y (E) -N, N-dibutil-3- {4- [5-hidroxi-2- (4-fluorofenil) -3-metil-indol-l-ilmetil] -fenil} -acrilamida.

18. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende uno o más estrógenos y (E) -N-butil, N1 -metil-3- {4- [5-hidrox?-2- (4-fluorofenil) -3 -metil -indol -1-ilmetil] -fenil} -acrilamida.

19. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende uno o más estrógenos y 2- (4-hidroxifenil) -3-metil-l- [4- (3-N,N-dimetil-l-il-prop-1-inil) bencil] -lH-indol-5-ol .

20. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende uno o más estrógenos y 2- (4-hidrox?fenil) -3-metil-l- [4- (3-piperidin-l-ilprop-1-inil) -bencil] -lH-mdol-5-ol ;

21. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende uno o más estrógenos y 2- (4-hidroxifenil) -3-metil-l- [4- (3-pirrolidin-l-ilprop-1-inil) -bencil] -lH-indol-5-ol .

22. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende uno o más estrógenos y un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable.

23. Una composición farmacéutica, de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, caracterizada porque uno o más estrógenos se seleccionan de equilina, equilenina, estradieno, etinilestradiol, 17ß-estradiol, 17alfa-dihidroequilenina, 17ß-dih?droequilenina, menstranol, estrógenos conjugados, estrona, sulfato de 17alfa-estradiol, deltad, 9-deshidroestrona, equol o enterolactona; o una sal o éster del mismo farmacéuticamente aceptable.

24. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 23, caracterizada porque la sal farmacéuticamente aceptable de uno o más estrógenos es una sal de sodio.

25. Un método para tratar o prevenir pérdida ósea en un mamífero, el método está caracterizado porque comprende administrar a un mamífero en necesidad del mismo un estrógeno y una cantidad efectiva de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

26. Un método para tratar o prevenir estado de enfermedad o síndromes los cuales son causados o están asociados con una deficiencia de estrógeno en un mamífero, el método está caracterizado porque comprende administrar al mamífero en necesidad del mismo un estrógeno y una cantidad efectiva de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

27. Un método para tratar o prevenir enfermedades cardiovasculares en un mamífero, el método está caracterizado porque comprende administrar al mamífero en necesidad del mismo un estrógeno y una cantidad efectiva de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

28. Un método para tratar o prevenir enfermedades en un mamífero, las cuales resultan de la proliferación del desarrollo normal, acciones de crecimiento de tejido endometrial o similar endometrial, el método está caracterizado porque comprende administrar a un mamífero en necesidad del mismo una cantidad efectiva de un estrógeno y una cantidad efectiva de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

29. El método de tratamiento de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque la enfermedad es endometriosis .

30. Un producto, caracterizado porque comprende un compuesto de fórmula (I) o (II), de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y uno o más estrógenos en combinación para administración por separado, en secuencia o simultáneamente.