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MXPA00009106A - Composiciones de acidos linoleicos conjugados - Google Patents

Composiciones de acidos linoleicos conjugados

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Publication number
MXPA00009106A
MXPA00009106A MXPA00009106A MXPA00009106A MX PA00009106 A MXPA00009106 A MX PA00009106A MX PA00009106 A MXPA00009106 A MX PA00009106A MX PA00009106 A MXPA00009106 A MX PA00009106A
Authority
MX
Mexico
Prior art keywords
acid
composition
octadecadienoic
linoleic acid
cla
Prior art date
Application number
Other languages
English (en)
Inventor
Asgeir Saebo
Carl Skarie
Daria Jerome
Gudmunder Haraldsson
Original Assignee
Conlinco Inc
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Filing date
Publication date
Family has litigation
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Priority claimed from US09/042,767 external-priority patent/US6015833A/en
Priority claimed from US09/132,593 external-priority patent/US7078051B1/en
Application filed by Conlinco Inc filed Critical Conlinco Inc
Publication of MXPA00009106A publication Critical patent/MXPA00009106A/es
Publication of MX238954B publication Critical patent/MX238954B/es

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Abstract

La presente invención se refiere a novedosas composiciones conteniendoácidos linoleicos conjugados son eficaces como aditivos para alimento para animales y complementos dietéticos humanos. Elácido linoleico es convertido a sus formas conjugadas, en las cuales la composición resultante es baja en ciertos isómeros inusuales comparados con productos linoleicos conjugados convencional

Description

COMPOSICIONES DE ÁCI DOS LI NOLEICOS CONJ UGADOS CAMPO DE LA I NVENCIÓN La presente invención se refiere al campo de nutrición humana y animal , y en particular a ciertas composiciones novedosas de ácidos linoleicos conjugados (CLA). Estas composiciones se preparan de acuerdo con un novedoso método que controla la ¡somerización de ácido 9, 12-linoleico.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN En 1 978, investigadores en la Universidad de Wisconsin descubrieron la identidad de una substancia contenida en carne cocida que pareció inhibir la mutagénesis. Se encontró que la substancia era una mezcla de isómeros posicionales de ácido linoleico (C 1 8: 2) teniendo dobles enlaces conjugados. Los isómeros c9,t1 1 y t1 0,c1 2 están presentes en gran abundancia, pero es incierto cuales isómeros son responsables de la actividad biológica observada. Se ha notado a partir de estudios de captación marcada que el isómero 9, 1 1 parece ser captado un tanto preferencialmente e incorporado en la fracción de fosfolípidos de tejidos animales, y a un menor grado el isómero 1 0, 1 2. (Ver Ha , et al. , Cáncer Res. , 50: 1 097 (1 991 )) . La actividad biológica asociada con ácidos linoleicos conjugados (llamados CLA) es diversa y compleja. En la actualidad , se sabe muy poco sobre los mecanismos de acción , aunque es posible que varios estudios preclínicos y clínicos en progreso impartan nueva luz sobre los modos fisiológ icos y bioquímicos de acción . Las propiedades anticarcinogénicas de CLA han sido bien documentadas. La administración de CLA inhibe la tumorigénesis mamaria en ratas, como es demostrado por HA, et al. , Cáncer Res. , 52: 2035s (1 992). Ha, et al . , Cáncer Res. , 50: 1 097 (1 990) reportaron resultados similares en un modelo de neoplasia parte anterior del estómago de ratón . También se ha identificado a CLA como un fuerte agente citotóxico contra melanoma humano objetivo, células de cáncer colorectal y de pecho in vitro. Un reciente artículo de revisión mayor confirma las conclusiones obtenidas de estudios individuales (I p, Am. J. Clin. Nutr. , 66 (6 Supp): 1 523s (1997)) . Aunque los mecanismos de la acción de CLA son todavía obscuros, existe evidencia de que algunos componentes del sistema inmune pueden estar involucrados, al menos in vivo. La patente estadounidense no. 5,585,400 (Cook et al.), incorporada en la presente por referencia, describe un método para atenuar las reacciones alérgicas en animales medidadas por hipersensibilidad tipo I o Tg E al administrar una dieta conteniendo CLA. También se mostró que CLA en concentraciones de aproximadamente 0. 1 a 1 .0 porciento es un auxiliar efectivo para conservar los glóbulos blancos. La patente estadounidense no. 5,674,901 (Cook et al. ) , incorporada en la presente por referencia, describió que la administración oral o parenteral de CLA, ya sea en forma de sal o ácido libre, resultó en la elevación en subpoblaciones de linfocitos CD-4 y CD-8 asociadas con la inmunidad mediada por células. Los efectos adversos que surgen del pretratamiento con factor de necrosis de tumor exógeno podrían aliviarse indirectamente por elevación o mantenimiento de niveles de células CD-4 y CD-8 en animales, a los cuales se administró CLA. Finalmente, la patente estadounidense no. 5,430, 066, incorporada en la presente por referencia, describe el efecto de CLA al prevenir la pérdida de peso y anorexia mediante estimulación inmune. Aparte de las aplicaciones terapéuticas y farmacológicas potenciales de CLA, como se expuso antes, ha habido m ucha excitación con respecto al uso de CLA de manera nutritiva como un complemento dietético. Se ha encontrado que CLA ejerce un profundo efecto generalizado en la composición corporal , en particular, al redirigir la división de masa de tejido puro y grasa. La patente estadounidense no. 5,554,646 (Cook et al.) , incorporada en la presente por referencia, describe un método para utilizar CLA como un complemento dietético en el cual se alimentan cerdos, ratones y humanos con dietas conteniendo 0.5 porciento de CLA. En cada especie, se observó una caída significativa en el contenido de grasa con un incremento concomitante en la masa proteica. Es interesante que en estos animales, incrementar el contenido de ácidos grasos de la dieta mediante la adición de CLA no resultó en incremento en el peso corporal, sino que se asoció con una redistribución de grasa y carne magra dentro del cuerpo. Otro fenómeno dietético de interés es el efecto de la complementación de CLA en la conversión de alimento. La patente estadounidense no. 5,428,072 (Cook, et al. ), incorporada en la presente por referencia, proporcionó datos que muestran que la incorporación de CLA en el alimento animal (aves y mam íferos) incrementó la eficiencia de conversión de alimento que conduce a mayor ganancia de peso en los animales complementados con CLA. Los efectos benéficos potenciales de la complementación de CLA para criadores de animales para alimento es evidente. Otra fuente importante de interés en CLA, y una que subraya su potencial comercial temprano, es que ocurre de manera natural en alimentos consum idos por humanos y animales a la par. En particular, CLA es abundante en productos de rumiantes. Por ejemplo, se han conducido varios estudios en los cuales CLA ha sido investigado en varios productos lácteos. Aneja, et al . , J. Dairy Sci. , 43: 231 ( 1 990) observó que el procesamiento de leche en yogurt resultó en una concentración de CLA. (Shanta, et al. , Food Chem. , 47: 257 ( 1 993)) mostró que un incremento combinado en la temperatura de procesam iento y adición de suero aumentó la concentración de CLA durante la preparación de queso procesado. En un estudio separado, Shanta et al. , J. Food Sci. , 60: 695 ( 1 995) reportó que aunque las condiciones de procesamiento y almacenam iento no redujeron apreciablemente las concentraciones de CLA, no observaron ningún incremento. De hecho, varios estudios han indicado que la variación estacional o interanimal puede responder hasta por tres veces de diferencia en el contenido de CLA de leche de vaca, (por ejemplo, ver, Parodi, et al . , J. Dairy Sci. 60: 1 550 ( 1 977)) . Además, los factores dietéticos han sido implicados en la variación de contenido de CLA, como se notó por Chin , et al. , J. Food Camp. Anal. , 5: 1 85 ( 1992). Debido a su variación en el contenido de CLA en fuentes naturales, la ingestión de cantidades prescritas de varios alimentos no garantizará que el individuo o animal recibirá las dosis óptimas para asegurar alcanzar el efecto nutritivo deseado.
El ácido linoleico es un importante componente de biol ípidos, y comprende una proporción significativa de triglicéridos y fosfolípidos. El ácido linoleico es conocido como un ácido graso "esencial", significando que el animal debe obtenerlo de fuentes dietéticas exógenas, ya que no puede ser autosintetizado. La incorporación de la forma de CLA de ácido linoleico puede resultar en una substitución directa de CLA en posiciones lipídicas, donde habría migrado el linoeico no conjugado. Pero esto no ha sido probado, y algunos de los efectos altamente benéficos pero no explicados observados pueden resultar incluso de un reposicionam iento de CLA dentro de la arquitectura lipídica en sitios donde el ácido linoleico no conjugado no habría migrado de otra manera. Ahora está claro que una fuente de CLA animal, especialmente en productos dietéticos, viene de la acción bioquímica de ciertas bacterias de rumen en ácido linoleico natural, al isomerizar primero el ácido linoleico a CLA, y entonces secretarlo en la cavidad de rumen . Kepler, et al. , J. Nutrition, 56: 1 1 91 (1 966) aisló una bacteria de rumen, Butyrivibrio fibrisolvens, la cual cataliza la formación de 9, 1 1 -CLA como un intermediario en la biohidrogenación de ácido linoleico. Chin, et al. , J. Nutrition, 1 24: 694 (1 994) encontró además que el CLA encontrado en los tejidos de roedor estaba asociado con bacterias, ya que las ratas libres de gérmenes correspondientes no producía CLA. En el desarrollo de una fuente comercial definida de CLA tanto para aplicación terapéutica como nutricional, se necesita un proceso para generar grandes cantidades de material definido. El problema la mayoría de los productos CLA hechos mediante aproximaciones convencionales es su heterogeneidad y variación substancial en isoformas de lote a lote. Se ha dado una considerable atención al hecho de que la ingestión de grandes cantidades de aceites hidrogenados y manteca para mezclar con la masa, en lugar de cebo animal, ha resultado en una dieta alta en contenido de ácido graso trans. Por ejemplo, Holman et al . , PNAS, 88:4830 ( 1 991 ) mostró que las ratas alimentadas con aceites hidrogenados ocasionaron una acumulación en el h ígado de rata de isómeros de ácidos grasos poliinsaturados inusuales, los cuales parecieron interferir con el metabolismo normal de ácidos grasos poliinsaturados que ocurren de manera natural . Estas preocupaciones fueron resumidas en un editorial anterior en Am. J. Public Health, 84: 722 (1 974). Por lo tanto, existe una fuerte necesidad de un producto de CLA biológicamente activo de composición definida.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LA I NVENCIÓN La presente invención proporciona novedosas composiciones de ácidos grasos isomerizados derivados de aceites de semillas de grado alimenticio, clarificados. El ácido linoleico contenido en un aceite de semilla seleccionado por tener al menos 50 porciento de ácido linoleico, como una materia práctica, normalmente está en exceso de 90 porciento del isómero 9, 12-octadecadienoico. Durante la isomerización, el ácido 9, 1 2-octadecadienoico es convertido en una mezcla de otros isómeros para formar una composición que tiene al menos 50 porciento de CLA. La composición conteniendo ácido linoleico conjugado pretende ser de consumo tanto para humanos como animales, incluyendo animales de alimento, tales como, ganado vacuno, puercos, borregos y aves, y como un medicamento humano y un complemento nutricional. Un objetivo importante de esta invención es proporcionar un producto seguro, definido, para estas aplicaciones. Además, productos convencionales contienen cantidades significativas de especies de ácidos grasos desconocidos e isómeros inusuales que resultan del procesamiento. Entre los isómeros de CLA inusuales se encuentran los isómeros de ácido 1 1 , 1 3-octadecadienoico y ácido 8, 1 0-octadecadienoico. En la presente composición, un alto porcentaje de ácido linoleico es convertido principalmente a los isómeros c9,t1 1 y t1 0,c12 conjugados en una reacción cuidadosamente controlada, que produce más de 90 porciento de estos isómeros, de manera que menos de un 1 porciento combinado de los isómeros 1 1 , 13, menos de 1 porciento de los isómeros 8, 1 0, menos de 1 porciento de las especies doble trans (los isómeros t9,t1 1 y t, 1 0,t 1 2) y menos de 1 porciento total de especies de ácido linoleico no identificadas, está presente en contraste con las composicions convencionales. En muchas corridas de productos individuales, la composición final tiene niveles de estaas especies virtualmente no detectables mediante análisis GC. El lím ite de 1 porciento en la concentración de los isómeros 1 1 , 1 3, 8, 1 0 y trans-trans sirve como una garantía de calidad práctica y conveniente estándar de pureza para un producto de grado alimenticio, fabricado a escala comercial. La presente invención también proporciona un nuevo proceso para hacer novedosas composiciones conteniendo ácido linoleico conjugado de la pureza requerida y composición definida. El proceso comprende los pasos de disolver en el específico solvente no acuoso propilenglicol , un álcal i compatible con un medio no acuoso, tal como, hidróxido de potasio, hidróxido de cesio, carbonato de cesio o un álcali orgánico, tal como, hidróxido de tetraetil amonio, en la ausencia de sistemas de catalizador de isomerización con base metálica, mezclar en el propilenglicol alcalino un aceite de semilla, calentar bajo una atmósfera de gas inerte y a presiones ambiente a una temperatura en el rango de 1 30-165°C, preferiblemente alrededor de 1 50°C, bajo condiciones sin reflujo, separar la fracción de ácidos grasos mediante acidificación , y opcionalmente purificar y deshidratar adicionalmente mediante destilación molecular a vacío y/o centrifugación. Opcionalmente, la corriente de proceso puede ser interrumpida después de que se prepara la mezcla de reacción, ya sea antes o después del paso de calentamiento. La mezcla puede ser almacenada entonces durante procesamiento adicional en pasos de acidificación y destilación continuos y/o puede ser procesada adicionalmente en otra ubicación. Después de calentar para efectuar la isomerización, la mezcla de reacción combinada, isomerizada, contiene 30-60 porciento de aceite de semilla procesado, 1 0-40 porciento de álcali y 30-60 porciento de propilenglicol. En este proceso, es importante utilizar propilenglicol debido a sus propiedades de calentamiento y los patrones de isomerización obtenidos. Los componentes de la mezcla de reacción de ácidos grasos disuelto están presentes como sigue: 30-60 porciento de aceite de semilla 1 0-40 porciento de álcali 30-60 porciento de propilenglicol De esta manera, en algunas modalidades, el proceso comprende formar una mezcla de reacción combinada que contiene aceite de semilla conteniendo ácido linoleico, propilenglicol y un álcali compatible con un medio no acuoso, isomerizar dicho ácido linoleico contenido en dicho aceite de sem illa mediante calentamiento para formar ácidos linoleicos conjugados, acuificar para liberar glicerol. Se evita la toxicidad, como se presentará si se usan otros solventes orgánicos no deseables, tal como etilenglicol . Bajo las condiciones de no reflujo, es posible variar la temperatura de procesamiento sobre un rango para obtener el resultado deseado con aceites de composición de ácidos grasos que difieren. La tem peratura es crítica, ya que el porcentaje de especies trans, trans, así como otras especies no deseadas y no identificadas, se incrementa conforme se eleva la temperatura. El tiempo de procesamiento requiere aproximadamente 2 a 6.5 horas y produce rendimientos isomerizados de más de 90 porciento, frecuentemente tan altos como 99.5 porciento. En algunas modalidades, el ácido linoleico que contiene aceite de semilla puede ser tratado primero para producir alquilésteres (por ejemplo, metilésteres o etilésteres) del ácido linoleico. Todavía en otras modalidades, los ácidos linoleicos conjugados producidos pueden ser incorporados en un triglicérido al tratar con una lipasa en la presencia de glicerol . En otras modalidades, la presente invención proporciona la preparación de CLA de baja impureza producida mediante los procesos anteriores. En el presente proceso, se prefiere el uso de aceite de girasol y cártamo debido a su alto contenido natural de ácido linoleico 9, 12, pero también debido a bajos niveles de esteróles, fosfolípidos contaminantes y otros residuos que tienden a contaminar el equipo de procesamiento y resultan en un producto final menos puro. Otros aceites de semillas, tales como, aceites de maíz, soya y linaza, también pueden ser empleados, pero el producto final será definido en cuanto a composición , y los niveles de impureza pueden desviarse para cerrar los valores de umbral del control de calidad contemplado antes, y el proceso de isomerización por sí mismo puede ser menos predecible. Aunque el aceite de semilla conteniendo al menos 50 porciento de ácido linoleico es deseable como una materia práctica para la isomerización industrial , con el fin de optimizar los rendimientos por unidad de procesamiento, no existe límite de proceso para iniciar con materiales conteniendo ácido linoleico teniendo menor o mayor contenido de linoleico. La dism inución de contenido linoleico puede ocurrir como en la situación en la cual se mezclan aceites de diferentes fuentes, o donde los aceites se combinan con componentes no oleosos antes de la isomerización . De manera similar, el contenido de ácido linoleico del fluido de isomerización puede ser mucho mayor que los niveles presentes en aceites de semilla naturales, como en la situación en la cual se va a isomerizar linoleico purificado o sintético. En algunas modalidades, el CLA de baja impureza descrito antes puede ser proporcionado como acilgliceroles o alquilésteres. De acuerdo con esto, en algunas modalidades, se proporciona una composición de acilglicerol la cual comprende una pluralidad de moléculas de acilgliceroles de la estructura: en donde R1 : R2 y R3 son seleccionados del grupo que consiste de un grupo hidroxilo y un ácido octadecadienoico, estando caracterizada la composición por contener al menos aproximadamente 30% de ácido t1 0,c1 2 octadecadienoico, al menos aproximadamente 30% de ácido c9,t1 1 octadecadienoico y aproximadamente menos de 1 % total de ácido 8, 1 0 octadecadienoico, ácido 1 1 , 1 3 octadecadienoico y trans-trans octadecadienoico en las posiciones R1 ? R2 y R3. De igual manera, en otras modalidades, se proporciona una composición de ácido linoleico conjugado comprendiendo una mezcla de esteres de isómeros de ácido linoleico conjugado, la mezcla conteniendo al menos aproximadamente 30% de ácido t1 0, c1 2 octadecadienoico, al menos aproximadamente 30% de ácido c9,t1 1 octadecadienoico y aproximadamente menos de 1 % total de ácido 8, 1 0 octadecadienoico, ácido 1 1 , 1 3 octadecadienoico y trans-trans octadecadienoico. En modalidades alternativas, los ácidos grasos libres de CLA, acilgliceroles y alquilésteres de la presente invención pueden formularse con productos alimenticios, incluyendo alimentos para animales y alimentos para consumo humano. En otras modalidades, las composiciones de CLA de la presente invención pueden formularse con portadores fisiológicamente aceptables o vehículos de entrega oral. En otras modalidades, pueden utilizarse los efectos biológicos del CLA de baja impureza. En la presente invención, un alquil éster de ácido linoleico conjugado seguro para alimento es fabricado bajo condiciones que preferencialmente controlan la isomerización a los isómeros 10, 12 y 9, 1 1 deseados, al tiempo que limitan la formación de las especies 8, 10; 1 1 , 1 3; y trans, trans. Tales condiciones son cumplidas al emplear una reacción catalizada por alcoholato alcalino, en la cual un aceite de semilla es fraccionado para liberar los ácidos grasos libres de un esqueleto de glicerol , y entonces esterificar antes de la isomerización . La clave para una adaptación de este proceso a un producto comercialmente viable es la reducción en los pasos de proceso, los cuales añaden costo. Normalmente, los residuos derivados de los componentes no oleosos de los aceites de semilla, tales como esteróles y fosfátidos, contaminan el equipo y reducen la aceptabilidad para uso en alimentos. En el caso de aceites de semilla normales, tales como soya y maíz, estos residuos están presentes en cantidad suficiente que un producto de CLA-éster no podría ser usado en productos consumibles. En la composición de la presente invención , los residuos no oleosos no son purificados lejos del componente oleoso, sino que en su lugar la fuente de aceite es seleccionada para mantener tales residuos en niveles aceptables. Al seleccionar el aceite de cártamo o girasol como una fuente de aceite, los niveles de residuos críticos pueden ser controlados entre 0. 1 y 0.5% de fosfátidos y a una fracción de esterol insaponificable conteniendo entre 5 y menos de 20 porciento de cada uno de campesterol y estigmasterol, sin pasos de procesamiento de degomificado y destilación extensos. El alquiléster de ácido linoleico resultante está comprendido por al menos 50 porciento hasta aproximadamente 99 porciento en peso de isómeros de éster de ácido octadecanoico, representando combinaciones de varios porcentajes individuales posibles de alquiléster de ácido c9,t1 1 -octadecanoico y alquiléster de ácido 51 0,c12-octadecanoico. En el proceso catalizado por alcoholato de álcali, se producen cantidades aproximadamente iguales de cada uno de estos isómeros de éster, pero los porcentajes relativos pueden ser alterados mediante la adición de uno u otro de una composición enriquecida por un isómero. El éster de CLA puede ser incorporado entonces en un alimento animal al componer el alimento a partir de ingredientes convencionales en una ración normal para la especie y edad del animal, y mezclarlo con los mismos alquil esteres de ácidos linoleicos conjugados en una concentración biológicamente activa, en general aproximadamente 0.05 hasta 3.5 porciento en peso. El producto de CLA-éster de la presente invención es obtenido mediante isomerización directa de un ácido linoleico no refinado, por ejemplo, una fuente de ácido linoleico no sometida a pasos de refinación . La composición de CLA-éster tiene una parte que comprende al menos 50 porciento en peso de isómeros de éster (hasta substancialmente 1 00 porciento) de una mezcla de isómeros de éster de éster de ácido c9,t1 1 -octadecanoico y éster de ácido t10,c1 2-octadecanoico, comprendiendo una segunda parte menos de aproximadamente 1 0 porciento en peso de agregado de isómeros de éster de la estructura de éster de ácido 8, 1 0-octadecanoico, éster de ácido 1 1 , 1 3-octadecanoico y esteres de ácido trans, trans-octadecanoico, y conteniendo una tercera parte de un residuo de fosfatidil de entre 0. 1 y 0.5 porciento del peso de la composición total. Los grupos alquilo pueden ser metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo y similares. Los grupos alquilo pueden ser metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo y similres. Los ajustes en la concentración de los isómeros c9,t1 1 y t1 0,c1 2 pueden hacerse mediante la adición de una composición enriquecida para uno u otro isómero, para producir una composición de éster, en donde el c9,t1 1 o el t10, c1 2 respectivamente conten idos en la primera parte de composición, constituye más del 60 porciento de los isómeros totales de esteres de ácido octadecanoico. En la modalidad de proceso de la presente invención que resulta en una composición de grado alimenticio adecuada para un alimento para animales, ingrediente alimenticio o complemento dietético humano, se trata un CLA-éster no refinado teniendo un residuo de fosfatidilo menor que 0.5 porciento con un alcoholato de álcali en la presencia de un alcohol monoh ídrico de bajo peso molecular, tal como alcohol metílico o etílico, continuando el tratamiento a baja temperatura (aproximadamente 90 a 145°C) , hasta que al menos 50 porciento del éster es convertido en CLA-éster, acidificando mediante la adición de un ácido acuoso, y entonces separar el CLA-éster del ácido acuoso sin un paso de destilación.
BREVE DESC RI PCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 es una diagrama de flujo del procedim iento usado para producir CLA.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA I NVENCIÓN Definiciones: Como se usa en la presente, "ácido linoleico conjugado" o "CLA", se refiere a cualquier ácido linoleico conjugado o ácido graso libre octadecadienoico. Se pretende que este término abarque e indique todos los isómeros posicionales y geométricos de ácido linoleico con dos dobles enlaces carbono-carbono conjugados en cualquier lugar de la molécula. CLA difiere del ácido linoleico ordinario porque el ácido linoleico ordinario tiene dobles enlaces en los átomos de carbono 9 y 1 2. Ejemplos de CLA incluyen isómeros cis y trans "isómeros E/Z") de los siguientes isómeros posicionales: Ácido 2,4-octadecadienoico, ácido 4,6-octadecadienoico, ácido 6,8-octadecadienoico, ácido 7, 9-octadecadienoico, ácido 8, 1 0-octadecadienoico, ácido 9, 1 1 -octadecadienoico y ácido 1 0, 1 2-octadecadienoico, ácido 1 1 , 1 3-octadienoico. Como se usa en la presente, "CLA" abarca un isómero simple, una mezcla seleccionada de dos o más isómeros, y una mezcla no seleccionada de isómeros obtenida de fuentes naturales, así como CLA sintético y semisintético. Como se usa en la presente, se pretende que los "triglicéridos" de CLA contengan CLA en cualquier o las tres posiciones en el esqueleto de triglicérido. De acuerdo con esto, un triglicérido conteniendo CLA puede contener cualquiera de los isómeros posicionales y geométricos de CLA. Como se usa en la presente, se pretende que los "esteres" de CLA incluyan cualquier y todos los isómeros posicionales y geométricos de CLA unido a través de un enlace de éster a un alcohol o cualquier otro grupo químico, incluyendo, pero no limitando a, alcoholes fisiológicamente aceptables, que ocurren de manera natural (por ejemplo, metanol, etanol, propanol). En consecuencia, un éster de CLA o CLA esterificado puede contener cualquiera de los isómeros posicionales y geométricos de CLA. Se pretende que los "isómeros que no ocurren de manera natural" de CLA incluyan, pero no están limitados a, c11,t13; t11,c13; t11,t13; c11,c13; c8,t10; t8,c10; t8,t10; c8,c10; e isómeros trans-trans de ácido octadecadienoico, y no incluye los isómeros t10,c12 y c9,t11 de ácido octadecadienoico. Los "isómeros que no ocurren de manera natural" también pueden ser referidos como "isómeros menores" de CLA ya que estos isómeros son producidos generalmente en bajas cantidades cuando CLA es sintetizado mediante isomerización alcalina. Como se usa en la presente, CLA de "baja impureza" se refiere a composiciones de CLA, incluyendo ácidos grasos libres, alquilésteres y triglicéridos, los cuales contienen menos de 1% total de ácidos 8,10 octadecadienoico, ácidos 11,13 octadecadienoico y ácidos trans-trans octadecadienoico. "Producto alimenticio preparado" significa cualquier alimento pre-empacado aprobado para consumo humano. Como se usa en la presente, "c" abarca un enlace químico en la orientación cis, y "t" se refiere a un enlace químico en la orientación trans. Si un isómero posicional de CLA es designado sin un "c" o un "t", entonces esa designación incluye los cuatro isómeros posibles. Por ejemplo, el ácido 10,12 octadecadienoico abarca ácido c10,t12; t10,c12; 110,t12; y c1 0, c1 2 octadecadienoico, mientras que ácido t1 0,c1 2 octadecadienoico o CLA se refiere sólo a ese isómero. Como se usa en la presente, el término "aceite" se refiere a un l íquido que fluye libre conteniendo ácidos grasos de cadena larga (por ejemplo, CLA) u otros grupos hidrocarburos de cadena larga. Los ácidos grasos de cadena larga incluyen, pero no están lim itados a, los diversos isómeros de CLA. Como se usa en la presente, el término "portador fisiológicamente aceptable" se refiere a cualquier portador o excipiente comúnmente usado con farmacéuticos oleosos. Tales portadores o excipientes incluyen, pero no están limitados a, aceites, almidón , sacarosa y lactosa. Como se usa en la presente, el término "vehículo de entrega oral" se refiere a cualquier medio para entregar un farmacéutico oralmente, incluyendo pero no limitando a, cápsu las, pildoras, tabletas y jarabes. Como se usa en la presente, el término "producto alimenticio" se refiere a cualquier alimento adecuado para consumo por humanos, animales no ruminates o animales rumiantes. El "producto alimenticio" puede ser un alimento preparado y empacado (por ejemplo, mayonesa, aderezo, pan o queso) , o un alimento animal (por ejemplo, alimento para animales extruido y pelletizado o alimento mezclado grueso) . La composición de la presente invención resulta de un proceso de isomerización altamente controlado y de usar el material de inicio preferido de aceite de girasol o cártamo. Esta composición no ha sido obtenida hasta ahora, para aplicación a una escala industrial , debido a que los procesos convencionales producen históricamente ácidos linoleicos conjugados para fines completamente diferentes, a saber, como aceites de secado en la industria de la pintura. Además, no ha habido una apreciación de las implicaciones del contenido de isómeros del producto final , debido a que los métodos analíticos para caracterizar los ácidos grasos no han estado ampliamente disponibles. En los procesos de isomerización más viejos, algunos de los cuales todavía están en uso en formato más moderno, la producción de los ácidos grasos conjugados se realizó en álcali acuoso (generalmente NaOH) a altas temperaturas en exceso de 200°C, y usualmente a presiones superatmosféricas. Por ejemplo, la patente estadounidense no. 2 , 350, 583 (Bradley) describe un proceso de álcali acuoso utilizando jabones tratados, en los cuales ocurrió tanto la conjugación como la polimerización de preferencia bajo condiciones severas a 200 hasta 250°C durante un periodo de varias horas. Las fracciones de aceite secante, iniciando con aceite de linaza, se obtuvieron mediante destilación (ver además Br. Pat. No. 558, 881 para un proceso muy sim ilar). En una variación del proceso, la patente estadounidense no. 4, 381 ,264 muestra un proceso donde una zona de reacción de bajo contenido de agua (0.5% de agua) contiene una base estequiométrica en la presencia de SO2 para obtener conjugación de los dobles enlaces de varios ácidos grasos poliinsaturados. El proceso de álcali acuoso fue adaptado en la patente estadounidense no. 4, 1 64, 505 a un proceso de flujo continuo, en el cual un hidróxido de metal alcalino y agua se cargaron continuamente en una zona de flujo mantenida entre 200 y 370°C. A estas temperaturas, el tiempo de reacción debería ser reducido enormemente, pero existe relativamente poco control sobre la isomerización. En el extremo mayor del rango de temperatura, uno prediciría casi la conversión completa a especies doble trans. Los métodos para producir CLA que usan varios solventes no acuosos y catalizadores, han sido descritos en la literatura. Burr (patente estadounidense no. 2, 242,230) describe el uso de solventes tales como, metanol , butanol, etanol y glicol em combinación con varios catalizadores. Estos parámetros de reacción son resum idos en la Tabla 1 . Con la excepción de glicol , las reacciones fueron conducidas ya sea bajo condiciones de reflujo o en tubos sellados. Estas condiciones de reacción resultan en control impreciso de dos de los parámetros de reacción importantes identificados por los inventores - temperatura y presión. Es probable que el control impreciso de estos parámetros de reacción conduzca a menos de una conjugación completa y a la formación de isómeros indeseables.
Tabla 1 - Patente 2,242,230 De igual manera, Baltes et al. , (patente estadounidense no. 3, 1 62 ,658) describen el uso de solventes no acuosos y varias bases metálicas como catalizadores para la conjugación de ácidos grasos. Los diversos parámetros de reacción de los métodos descritos por Baltes et al. , son resum idos en la Tabla 2. Baltes et al. , también describen el uso de varios solventes de punto de ebullición bajo. Como la mayoría de estas reacciones fueron conducidas a temperaturas por arriba del punto de ebullición del solvente empleado, es evidente que las reacciones fueron conducidas bajo presión, la cual es un factor independiente que influencia la formación de isómeros de ácido octadecadienoico. De esta manera, el producto derivado a partir de estas reacciones contendrá isómeros indeseables.
Tabla 2 - Patente 3,162,658 El CLA de la presente invención carece de isómeros tales como, el isómero 8, 1 0, el isómero 1 1 , 1 3 y los diversos isómeros trans-trans. Esta composición fue producida mediante un proceso de isomerización de álcali no acuoso fuertemente controlado, presentado en forma de diagrama de flujo en la Figura 1 . De preferencia, el aceite de girasol o el aceite de cártamo se hacen reaccionar a una presión ambiente bajo una atmósfera de gas inerte con un exceso de álcali en un solvente de alto punto de ebullición, a saber propilenglicol a una temperatura por debajo del punto de ebullición del solvente. Estas condiciones de reacción permiten el control preciso de la temperatura (y una presión ambiente constante) del proceso de conjugación . De preferencia, el álcali es un álcali inorgánico, tal como, hidróxido de potasio, hidróxido de cesio, carbonato de cesio o un álcali orgánico, tal como, hidróxido de tetraetil amonio. El catalizador es proporcionado, de preferencia, en un exceso molar, como se compara con el contenido de ácidos grasos del aceite. El solvente es propilenglicol. De preferencia, la reacción es conducida dentro de un rango de temperatura de 130 a 165°C, muy preferiblemente a aproximadamente 1 50°C. Sin embargo, el tiempo de la reacción puede variar, existe una probabilidad incrementada de la formación de isómeros indeseables cuando la reacción es conducida durante periodos largos. Un tiempo de reacción relativamente corto de 2.0 a 6.5 horas, ha probado ser satisfactorio para excelentes rendimientos. Una persona experta en la técnica entenderá que para producir la composición deseada, las condiciones de reacción descritas antes pueden variarse dependiendo del aceite a ser conjugado, la fuente de álcali y el equipo. U n preanálisis de un aceite particular puede indicar que las condiciones deben variarse para obtener la composición deseada. En consecuencia, el rango de temperatura, presión y otros parámetros de reacción representan un punto de inicio para el diseño del proceso individual y se pretenden como una gu ía solamente. Por ejemplo, no se implica que el rango de temperatura descrito sea el único rango que pueda ser usado. El aspecto esencial es proporcionar un control de temperatura preciso. Sin embargo, debe tenerse cuidado porque incrementar la presión puede conducir a una isomerización menos que completa y la formación de isómeros indeseables. Finalmente, la longitud de la reacción de conjugación puede variarse. En general, las cantidades en aumento de isómeros indeseables se forman con reacción o longitud creciente. Por lo tanto, el tiempo de reacción óptimo permite que la reacción vaya casi o esencialmente a terminación , pero no resulte en la formación de isómeros indeseables. Siguiendo la reacción de conjugación, la composición conteniendo CLA resultante puede ser purificada adicionalmente de acuerdo con la Figura 1 . Para separar los ácidos grasos de la mezcla de reacción de conjugación, la mezcla de reacción es enfriada a aproximadamente 95°C, se agrega un exceso de agua a 50°C y la mezcla es agitada lentamente, mientras que la temperatura es reducida a aproximadamente 50°C hasta 60°C. Sobre la adición del agua, se forma un jabón de los ácidos grasos y se forma glicerol como un sub-producto. A continuación , se adiciona un exceso molar de HCl concentrado al tiempo que se está agitando. Se permite entonces que las capas acuosas y no acuosas se separen a aproximadamente 80-90°C. Entonces, la capa inferior que contiene agua y propilenglicol es retirada. El propilenglicol restante es removido mediante deshidratación a vacío a 60-80°C. Entonces, de preferencia, la composición de CLA seca puede ser desgasificada en una unidad desgasificadora con una trampa fría para remover cualquier propilenglicol residual. A continuación , el CLA es destilado a 1 90°C en una planta de destilación molecular a un vacío de 1 0 a 1 00 Pa. La ventaja de este sistema de purificación es el tiempo corto (menos de un minuto) al cual el CLA es sostenido a una temperatura elevada. Los procedimientos de destilación por lote convencionales serán estrictamente evitados, ya que involucran una temperatura elevada de aproximadamente 1 80-200°C durante hasta varias horas. A estas temperaturas elevadas, ocurrirá la formación de isómeros trans-trans indeseables. Aproximadamente 90% del material de alimento es recuperado como un destilado ligeramente amarillo. El CLA puede ser deodorizado entonces al calentar hasta aproximadamente 1 20°C-1 70°C, de preferencia a aproximadamente 150°C durante 2 horas para mejorar el olor y el sabor. Un calentamiento excesivo puede resultar en la formación de isómeros trans-trans. Estos procedim ientos producen una composición de CLA con un nivel de solvente de menos de aproximadamente 5 ppm , preferiblemente menos de alrededor de 1 ppm . Este proceso elimina los niveles de trazas tóxicos de solvente, de manera que la composición resultante está esencialmente libre de residuos de solventes tóxicos. Los procesos descritos antes son fácilmente adaptables tanto a escalas piloto como comerciales. Por ejemplo, pueden conjugarse 400 kg de aceite de cártamo a 1 50°C durante 5 horas en 400 kg de propilenglicol con 200 kg de KOH adicionado como un catalizador. El CLA resultante puede ser purificado entonces como se describió antes. Además, los sistemas por lote de escala comercial pueden ser modificados fácilmente para producir la composición de CLA deseada. Por ejemplo, los reactores de acero inoxidable preferiblemente deberían ser revestidos con vidrio para prevenir la corrosión debido a los niveles de pH por debajo de 3.0. Sin embargo, se debería notar que los procesos de conjugación que utilizan solventes no acuosos, generalmente son menos corrosivos que aquéllos conducidos con agua. Los aceites preferidos para conjugación son aceite de girasol y de cártamo. Como se compara con el aceite de soya, estos aceites tienen menores concentraciones de componentes indeseables, tales como fosfátidos y esteróles. Estos componentes indeseables pueden contribuir a la formación de gomas, las cuales contaminan el equipo de conjugación y otros polímeros indeseables. Varias propiedades de estos aceites se resumen en las Tablas 3, 4 y 5.
COMPARACIÓN DE CONTAMINANTES TABLA 3 TABLA 4 Puede no ser igual a 1 00 TABLA 5 En los Ejemplos que siguen, se realizaron varios experimentos comparativos para destacar las propiedades clave de las presentes composiciones de CLA, en contraste con aquéllas hechas bajo ya sea condiciones subóptimas o de acuerdo con los métodos de álcali acuosos de la técnica anterior. En el Ejemplo 1 , se preparó el CLA mediante el presente método. CLA se produjo mediante el método de álcali acuoso convencional en el Ejemplo 2. En el Ejemplo 3, la reacción del Ejemplo 1 se repite substancialmente, solo que a alta temperatura. Finalmente, en el Ejemplo 4, la reacción de álcali acuoso substancialmente idéntica a aquélla del Ejemplo 2 es corrida a baja temperatura. Las condiciones precisas y detalles de cada uno de los experimentos se exponen en los Ejemplos. Los perfiles del análisis del contenido de isómeros de CLA se exponen en las tablas 1 -4. Haciendo referencia a los datos en la Tabla 5, el porcentaje de área relativa está dado para cada pico identificado correspondiente a los isómeros individuales, para cada uno de los cuatro experimentos. La gráfica de GC proporcionó una variedad de picos para cada muestra probada. El área bajo cada uno de estos picos fue integrada para obtener un valor total. La identidad del pico fue determinada por su posición relativa, a partir de los atlas publicados de perfiles de levigación estándares y la literatura científica. La fila superior representa el valor residual para material de inicio no conjugado, ácido 9, 1 2 linoleico. Tanto la reacción a alta como a baja temperatura en propilenglicol proporcionó conversiones extremadamene altas por encima del 99 porciento del material de inicio total. Haciendo referencia a la columna 1 , es impresionantemente evidente que a diferencia de cualquiera de las composiciones de control , en el Ejemplo 1 , un pico correspondiente a la mezcla de isómeros 1 1 , 1 3, el pico correspondiente a c1 1 , c1 3 específicamente, los picos para cualquiera de los isómeros 8, 1 0 y el pico para los isómeros no identificados, faltan completamente. En el caso del isómero c9,t 1 1 , los picos en GC para ambos isómeros 8, 10 y 9, 1 1 están superpuestos, y se resuelven aquí solamente para el material del Ejemplo 1 al substraer esa porción del pico identificado como 8, 1 0 mediante estudios de N MR. Esto no se hizo en los demás experimentos, de manera que la fila 3 proporciona los valores para 8, 1 0 y 9, 1 1 combinados para los Ejemplos 2-4. En general , para los isómeros 8, 1 0, 1 1 , 1 3 y no identificados, un valor de menos de 1 porciento hasta no detectable es de valor terapéutico y nutricional , porque reduce a niveles de trazas contaminantes potencialmente perjudiciales, especialmente aquéllos conocidos por tener rutas de absorción sospechosas en lipogénesis. En animales no rumiantes, por ejemplo, la adición de 0.25 a 2.5 porciento de CLA a la dieta, puede incrementar la incidencia de CLA en tejidos para aproximarse a aquélla en rumiantes, de manera que otros animales pueden ser la fuente de CLA siempre que no estén presentes isómeros adulterantes. El Ejemplo 2 proporciona un producto de álcali acuoso normal representativo de CLAs fabricados convencionalmente. La conversión es menos eficiente sobre el total, y para producir los isómeros c9,t1 1 y t1 0, c12. Nótese también un alto porcentaje de los isómeros 1 1 , 1 3 sospechosos, y un porcentaje significativo de material no identificado. El Ejemplo 3 ilustra lo crítico del parámetro de temperatura. Un desplazamiento hacia arriba en la temperatura en el medio de propilenglicol incrementa de manera aguda la cantidad de los isómeros contaminantes a expensas de los isómeros c9,t1 1 y t1 0, c1 2. También es de interés que a mayor temperatura existe un dramático aumento en las especies trans, trans, ya que los rearreglos de doble enlace son favorecidos, lo cual produce una configuración de electrones más estables en los niveles de tensión de energ ía incrementada. El Ejemplo 4 ilustra que disminuir la temperatura en el sistema de álcali acuoso, de hecho, reduce las cantidades de algunos de los isómeros contami nantes. Sin em bargo, existe una dramática caída en el rendim iento, y el nivel del grupo de isómeros 1 1 , 1 3 sigue muy alto, sugiriendo que la formación de esta configuración de electrones es influenciada más por la acción de la base en un medio acuoso, que lo que se explica por la energ ía cinética global en el sistema. Nótese además el tiempo de reacción extremadamente largo de 22.5 horas; demasiado para un proceso por lotes de escala industrial eficiente. La Tabla 6 convierte simplemente los porcentajes de isómeros relativos en las diversas reacciones como una función del área pico a sus proporciones de pico correspondientes. El presente proceso produce una conversión virtualmente completa de ácido 9, 12-linoleico a una cantidad aproximadamente igual de cada uno de los dos isómeros de CLA deseados. A mayor temperatura, incluso en propilenglicol , la incidencia del isómero 1 1 , 13 todavía es un tercio de aquélla del proceso de álcali acuoso a baja temperatura. En algunas modalidades, la presente invención también proporciona métodos para producir alquil esteres de CLA. Después del fraccionamiento y deshidratación de grasas, los ácidos grasos libres se combinan con metanol u otro alcohol monohídríco de bajo peso molecular, y se calienta a la temperatura a la cual hierve el alcohol. La esterificación procede bajo condiciones de reflujo con remoción del agua de reacción a través de un condensador. Después de la adición de una cantidad extra del mismo alcohol o un alcohol monoh ídrico diferente, se mezcla un catalizador de alcoholato en la mezcla de esteres. Los catalizadores de alcoholato normales son etóxido de sodio o potasio, o sus contrapartes de metilo, butilo o propilo. En la esterificación , se prefieren el metanol o el etanol , aunque pueden usarse otros alcoholes monohídricos de cadena lineal o ram ificada. Mientras más larga sea la cadena alifática del grupo alquilo, más compatible al l ípido se vuelve el material . Además, la viscosidad tiende a incrementarse. Para diferentes tipos de alimentos, cuya consistencia varía, el producto de viscosidad variante puede ser usado para obtener las características de flujo o formación de compuesto deseadas, sin afectar las propiedades terapéuticas o nutricionales que surgen de las porciones de CLA. La teoría y práctica de la esterificación son convencionales. Una explicación básica de los métodos más comunes se expone en la Enciclopedia de Ciencia y Tecnolog ía de McGraw-Hill , McGraw-Hill Book Co. , N .Y. : 1 996 (5a ed.) . El cuerpo animal y humano tiene una variedad de esterasas, de manera que el CLA-éster es cortado para liberar los ácidos grasos libres fácilmente. La captación de tejido puede tener una cinética diferente dependiendo del tejido involucrado y el beneficio buscado. En el paso de isomerización , se encontró que la catálisis de alcoholato produjo un producto superior que la isomerización mediada por álcali acuoso. El último proceso produjo siempre isómeros indeseables aún bajo condiciones de reacción suaves. Las condiciones más suaves proporcionan menos cantidades de isómeros no deseados, pero con un gran costo del rendimiento, como se muestra en los Ejemplos. En la mayoría de los sistemas, la aparición de los isómeros c9,t1 1 y t10, c1 2 domina y se forman en cantidades aproximadamente equimolares. Hasta ahora no ha sido posible controlar la isomerización de un isómero para la exclusión del otro. Aunque es deseable incrementar el porcentaje de uno u otro isómero (dependiendo del efecto fisiológico a ser alcanzado) , en el presente debe realizarse extensamente al adicionar una fuente enriquecida del isómero deseado. La presente invención contempla el uso de derivados de la preparación pura de CLA. Por ejemplo, CLA puede estar libre o unido a través de enlaces de éster, o proporcionado en la forma de un aceite conteniendo triglicéridos de CLA, como se describe en los Ejemplos 5 y 6. En estas modalidades, los triglicéridos pueden estar comprendidos parcial o com pletamente por CLA unido a un esqueleto de glicerol. El CLA también puede ser proporcionado, de preferencia, como un metiléster o etiléster, como se describe en los Ejemplos 8 y 9. Adicionalmente, el CLA puede estar en la forma de una sal no tóxica, tal como una sal de potasio o sodio (por ejemplo, una sal formada al reaccionar cantidades químicamente equivalentes de los ácidos libres con un hidróxido de álcali a un pH de aproximadamente 8 a 9). En una modalidad de la presente invención, se sintetiza un novedoso triacilglicerol comprendiendo la novedosa mezcla de isómeros de CLA descrita de aquí en adelante para isomerización no acuosa de ácido linoleico a partir de aceites de girasol y/o cártamo. Los triacilgliceroles puros altamente enriquecidos para CLA (90-96 porciento) pueden confirmarse mediante H NMR. La esterificación procedo usando lipasa de Candida antárctica inmovilizada. De preferencia, el CLA contendrá al menos 40 y hasta 45-48 porciento de ácidos c9,t1 1 -octadecadienoico y 51 0,c1 2-octadecadienoico, y mezclas de los mismos. Habrá menos de un uno porciento de esteres de isómeros 8, 1 0; 1 1 , 1 3; y trans, trans o menos de un cinco porciento en el agregado. El triacilglicerol resultante no es purificado adicionalmente para remover todos los niveles de residuos de fosfatidilo y esterol . Pero aquellos niveles restantes de isomerización de aceites de girasol y cártamo serán adecuados para aplicaciones comerciales involucrando productos seguros, comestibles, en alimentos. La lipasa de Candida antárctica inmovilizada será empleada en una manera similar a aquélla descrita para ácidos grasos poliinsaturados tipo n-3 en Harraldson et al. La reacción de esterificación es conducida a 50°C-75°C, de preferencia a 65°C, en la ausencia de cualquier solvente y un vacío empleado con el fin de remover el agua o alcoholes co-producidos (de esteres) sobre la formación. Esto cambia la producción de triacilglicerol a la terminación y asegura un producto altamente puro, virtualmente libre de cualquier mono- y diacilglicerol en rendimientos esenciamente cuantitativos. Pueden usarse cantidades estequiométricas de ácidos grasos libres, es decir, 3 equivalentes molares como base en el glicerol o 1 equivalente molar como base en el número de equivalentes molares de grupos hidroxilo presentes en la porción de glicerol . Solo se necesita el 10% de la dosificación de lipasa como se basa en el peso total de los substratos, lo cual puede ser usado un número de veces. Esto es muy importante para el punto de vista de la productividad. Todo esto, junto con el hecho de que no ser requiere solvente alguno, hace a este proceso de alta viabilidad desde el punto de vista de escalado e industrialización , ya que el corte en volumen es enorme. Además, un ligero exceso (<5/5) de ácidos grasos libres puede ser usado con el fin de acelerar la reacción hacia el final y asegurar una terminación de la reacción. En la iniciación de la reacción, se forma primero el 1 - o 3-mono-acilglicérido, seguido por el 1 , 3 diacilglicérido, y finalmente el triglicérido en los tiempos de reacción más prolongados. Los mono- y diacilglicéridos son intermediarios útiles, ya que manifiestan actividad biológica, pero tienen mayor solubiidad en ambientes celulares acuosos y pueden participar en rutas sintéticas moleculares alternativas, tales como, síntesis de fosfol ípidos u otros l ípidos funcionales. En contraste, los triglicéridos son depositados frecuentemente intactos en las membranas celulares o vesículas de almacenamiento. De esta manera, la administración de CLA en forma de mono-, di- o triglicerol en lugar de ácido graso libre o éster, puede influenciar el modo y distribución de la captación, velocidad metabólica y papel estructural o fisiológico del componente de CLA. En una modalidad preferida, la administración es oral. El CLA puede ser formulado con portadores adecuados, tales como, almidón , sacarosa o lactosa en tabletas, pildoras, dragees, cápsulas, soluciones, l íquidos, pastas, suspensiones y emulsiones. El CLA puede ser proporcionado en solución acuosa, solución oleosa o en cualquier otra forma discutida antes. La tableta o cápsula de la presente invención puede ser cubierta con un recubrimiento entérico, el cual se disuelve a un pH de aproximadamente 6.0 a 7.0. Un recubrim iento entérico adecuado, el cual se disuelve en el intestino delgado pero no el estómago, es acetato ftalato de celulosa. En algunas modalidades, el CLA es proporcionado como cápsulas de gelatina suave conteniendo 750 mg de CLA 80% (TonalinM R) . El CLA también puede ser proporcionado mediante cualquiera de una variedad de rutas distintas, incluyendo pero no limitando a, medio intravenoso, intramuscular, intra-arterial, intramedular, intratecal , intraventricular, transdérmico, subcutáneo, intraperitoneal, intranasal , enteral , tópico, sublingual o rectal. Detalles adicionales en las técnicas para formulación y para administración pueden encontrarse en la última edición de Remington 's Pharmaceutiucal Sciences (Ciencias farmacéuticas de Remington) , (Maack Publishing Co. , Easton, PA). Una cantidad efectiva de CLA también puede ser proporcionada como un complemento en varias bebidas y productos alimenticios preparados. Para los fines de esta aplicación, producto alimenticio preparado significa cualquier producto alimenticio natura, procesado, dietético o no dietético al cual se ha adicionado CLA. El CLA puede ser adicionado en la forma de ácidos grasos libres o como un aceite conteniendo triglicéridos parciales o completos de CLA. Por lo tanto, CLA puede ser incorporado directamente en varios productos alimenticios preparados, incluyendo pero no limitando a, bebidas dietéticas, barras dietéticas, complementos, comidas congeladas preparadas, dulces, productos de bocadillos (por ejemplo, patatas fritas), productos de carne preparados, leche, queso, yogur y otros alimentos conteniendo grasas o aceites. CLA es susceptible a la oxidación. Por lo tanto, es deseable empacar CLA para uso humano con antioxidantes adecuados, tales como lecitina , tocoferoles, ascorbato, palmitato de ascorbilo o extractos de especias, tal como extracto de romero.
EJ EM PLOS : Ejemplo 1 Isomerización de aceite de cártamo usando propilenglicol a baja tem peratura El aceite de cártamo se ¡somerizó en propilenglicol a bajas temperaturas usando KOH como un catalizador. El aparato de isomerización consistió de un matraz de dos cuellos con un termómetro colocado en un cuello, dejando una pequeña abertura para liberar el exceso de presión . Se unió un sum inistro de nitrógeno al otro cuello del matraz. Las soluciones adiconadas al matraz se agitaron mediante el uso de una barra magnética y un agitador magnético. La temperatura del matraz se controló al colocar el matraz en un baño de aceite controlado con termostato, colocado en el agitador magnético. El matraz se llenó con 60.27 g de propilenglicol y 28.20 g de KOH y se sumergió en el baño de aceite. La temperatura se incrementó a 1 30°C para disolver el KOH . Después de que el KOH se había disuelto, se introdujeron 60.09 g de aceite de cártamo en el matraz. Se hizo circular un alto volumen de nitrógeno a través del matraz de dos cuellos durante 5 minutos, y entonces se redujo a un volumen menor. La mezcla se calentó a 1 50°C, lo cual tomó aproximadamente 40 min . Entonces se permito que la mezcla reaccionara a 1 50°C durante 3.5 horas. En intervalos, se retiraron muestras de 3 ml. Las muestras fueron colocadas directamente en 6 ml de agua caliente y se agregó ácido cítrico en exceso hasta que los ácidos grasos libres separados como la capa superior. El calentamiento fue necesario para prevenir la solidificación aunque se adicionara el ácido cítrico. Para convertir los ácidos grasos libres en metilésteres para análisis por cromatografía de gases, se adicionaron 0.025 g de los ácidos grasos libres, 5 ml de una solución al 4% de HCl y etanol a un tubo de prueba. Se adicionó nitrógeno al tubo, entonces se selló el tubo y se colocó en un baño de agua a 60°C durante 20 mín . Entonces el tubo se enfrió y se adicionaron 1 ml de agua purificada y 5 ml de isooctano. Se adicionó nitrógeno al tubo y el tubo se agitó durante 30 segundos. La capa superior resultante se adicionó a 1 µl de agua purificada en un tubo de prueba nuevo y nuevamente se agitó bajo nitrógeno. La capa superior resultante se lavó entonces de isooctano y se decantó en un tercer tubo de prueba. Se adicionó una pequeña cantidad de sulfato de sodio para absorción de agua. Entonces se inyectó directamente una muestra de 1 µl en el cromatógrafo de gases. Las condiciones de cromatografía de gases fueron como sigue: Sistema: Perkins-Elmer Auto System Inyector: Sin fraccionado a 240°C Detector: Detector de ionización de flama a 280°C Portador: Helio Columna: WCOT Fused Silica 0.25 mm X100M, CP-SL 88 para FAME, DF 0.2 Programa de horno: 80°C (0 min) incrementando a 220°C a 10°C por min y sostenido a 220°C durante 10 mín.
Todos los resultados se expresan como el porcentaje de área pico relativa. Los estándares generalmente no están disponibles, de manera que los picos que levigaron fueron verificados con otros sistemas. GC-MS determina el número, pero no la posición de los enlaces cis y trans. Por lo tanto, se usó un análisis de NMR para verificar las posiciones de los enlaces. Los picos principales fueron c9,t11 y t10,c12. Para el análisis de NMR de los isómeros de CLA, favor de ver Marcel S.F. Lie Ken Jie y J. Mustafa, Lipids, 32(10) 1019-34 (1997), incorporada en la presente por referencia. Estos datos, presentados en la Tabla 6 y resumidos en la Tabla 10, demuestran que la isomerización de aceite de cártamo usando polipropilenglicol como solvente, KOH como catalizador y bajas temperaturas, resulta en la producción de ácido linoleico conjugado que carece de los isómeros 8,10 y 11,13. Las columnas altamente polares utilizadas en este experimento pueden ser usadas exitosamente para separar los isómeros 8,10 y 11,13 de los isómeros c9,t11 y t10,c12. Los isómeros 8,10 tienden a colevigar o levigar justo después del isómero c9,t1 1 . El isómero 1 1 , 1 3 leviga en frente del isómero t1 0, c1 1 o coleviga con el isómero t1 0,c1 2, dependiendo de las condiciones de columna. El ácido linoleico conjugado producido de acuerdo con este método es caracterizado al comparar los diversos isómeros producidos. Primero, la reacción de isomerización se fue esencialmente a la terminación. El grado de terminación de la reacción es obtenido al dividir el área de pico total para los isómeros de ácido linoleico menos el ácido linoleico c9,t1 2 residual por el área de pico total. Este valor es 0.994. Segundo, puede determinarse la proporción de los isómeros c9,t1 1 y t1 0,c12 al área de pico total. Este valor es 0.953. Tercero, puede determinarse la proporción de los isómeros t9,t1 1 y 11 0 ,t 1 2 para los isómeros c9,t1 1 y 11 0, c12. Este valor es 0. 1 0. Cuarto, puede determinarse la proporción de los isómeros t9,t1 1 y 11 0,t 12. Este valor es 0.009. Quinto, la proporción del isómero t1 0,c1 2 al isómero c9,t1 1 puede determinarse. Este valor es 1 .01 8. Estas proporciones se resumen en la Tabla 1 1 .
Ejemplo 2 Isomerización acuosa a alta temperatura y presión. Se adicionaron cincuenta gramos de agua y 25.32 g de NaOH a un reactor de alta presión (Parr Modelo 450 M L Benchtop Alloy 400, equipado con un medidor de presión y agitador). Se permitió que el NaOH se disolviera y se adicionaron 94.0 g de aceite de cártamo al reactor. El reactor se cerró y se purgó durante 2 min con nitrógeno y entonces se cerraron todas las válvulas. El reactor se calentó en una junta eléctrica a 210°C y se mantuvo a esta temperatura durante 6 horas. La temperatura se redujo entonces a 60°C antes de que la presión se liberara y se abriera el reactor. Se tomaron dos gramos del jabón solidificado resultante del reactor y se disolvieron en agua a aproximadamente 40°C. Entonces se adicionó ácido cítrico para reducir el pH de la solución por debajo de 6. Se retiró una muestra de la capa superior de ácido graso y se preparó para cromatografía de gases como en el Ejemplo 1 . Los resultados de la cromatografía de gases se presentan en la Tabla 7 y se resumen en la Tabla 1 0. Estos datos indican que este método de isomerización resulta en la formación de cantidades relativamente altas de los isómeros 8, 1 0 y 1 1 , 1 3. Las proporciones se presentan en la Tabla 1 1 .
Ejemplo 3 Isomerización de álcali no acuoso de aceite de cártamo a alta temperatura y presión. Se adicionaron 1 00.48 g de propilenglicol y 46.75 g de KOH a un reactor de alta presión como se describió en el Ejemplo 2. El reactor fue calentado entonces a 1 30°C para disolver el KOH . Entonces se adicionaron 1 00.12 g de aceite de cártamo a la mezcla de KOH-propilenglicol. El reactor se cerró, se purgó durante 1 min con nitrógeno y se cerraron todas las válvulas. Entonces el reactor se calentó a 21 0°C y se mantuvo a esa temperatura durante 1 hora. El reactor se enfrió y los conten idos se decantaron en 1 20 g de agua caliente. Mientras se agitaba, se adicionaron serialmente 35.3g de HCl al 37% y 27.59 g de ácido cítrico a los ácidos grasos. Se tomó una muestra de la capa superior y se secó en un matraz de vacío a 60°C. Se analizó una muestra de los ácidos grasos resultantes mediante cromatografía de gases como se describe en el Ejemplo 1 . Los resultados se presentan en la Tabla 8 y se resumen en la Tabla 1 0. Este experimento demuestra que la isomerización de aceite de cártamo con KOH y un solvente no acuoso a alta temperatura resulta en la formación de cantidades significativas de isómeros de 8, 1 0 y 1 1 , 1 3, así como isómeros t9,t1 1 y t1 0,t1 2. Las proporciones se presentan en la Tabla 1 1 .
Ejemplo 4 Reacción de álcali acuoso a baja tem peratura Se adicionaron 49.94 g de agua y 39.96 g de NaOH a un reactor de alta presión como se describió en el Ejemplo 3. Esta mezcla se calentó hasta que se disolvió el NaOH. A continuación , se adicionaron 1 00.54 g de aceite de cártamo al reactor de presión alta, el reactor se purgó con nitrógeno, y todas las válvulas se cerraron . El reactor de alta presión se calentó a 1 79°C durante 22.5 horas. Las muestras se prepararon para cromatografía de gases como en el Ejemplo 3. Los datos se proporcionan en la Tabla 9 y se resumen en la Tabla 1 0. Este experimento demuestra que cuando se usan bajas temperturas para isomerización de álcali acuoso, la reacción de conjugación no llega a la terminación. Adicionalmente, se producen cantidades significativas de los isómeros 8, 1 0 y 1 1 , 1 3. Las proporciones se presentan en la Tabla 1 1 .
TABLA 6 TABLA 7 Tabla 7 (continuación) TABLA 8 TABLA 8 (continuación) TABLA 9 TABLA 9 (continuación) TABLA 10 - Porcentaje de área relativa na - el valor es reflejado como componente de c9,t11/8,10 TABLA 1 1 * c9,t1 1 incluye el isómero 8, 10 na - no se detectó 1 1 , 1 3 Ejemplo 5 La preparación de triacilgliceroles de CLA mediante esterificación directa. General. Se registraron los espectros de resonancia magnética nuclear H en un espectrómetro de NMR Bruker AC 250 en cloroformo deuterado como solvente. Las separaciones de HPLC se realizaron mediante un instrumento PrepLC R System 500a de Waters usando la columna PrepPak® 500 Silica Cartridge de Millipore, levigando con 1 0% de dietiléter en éter de petróleo. Se condujo GLC analítica en un cromatóg rafo de gas Perkin-Elmer 8140, de acuerdo con un procedimiento previamente descrito, como se describe en Haraldsson et al . , Acta Chem Scan ned 45: 723 (1 991 ) . La lipasa de Candida antárctica inmovilizada se proporcionó por Novo Nordisk en Dinamarca como NovozymeMR. Se usó directamente como fue proporcionada en los experimentos de esterificación. El dietil éter grado anal ítico comprado a Merck se usó sin ninguna purificación , pero el n-hexano grado sintético también de Merck fue recién destilado antes de usarse en las extracciones y cromatografía de HPLC. Se compró el glicerol (99%)' a Sigma y Aldrich Chemical Company y se usó sin purificación adicional. El concentrado de CLA fue proporcionado por Natural Lipids en Noruega como ácidos grasos libres como Tonalin R. Su pureza fue confirmada mediante GLC analítica y espectroscopia de NMR de campo alto, las cuales revelaron algunas impurezas de glicérido. Se encontró que el concentrado de CLA contenía 43.3% de ácido 9-cis, 1 1 -trans-linoleico, 44.5% de ácido 10-trans, 12-cis-linoleico, 5.4% de otros isómeros de CLA, 5.6% de ácido oleico y 0.6% de cada uno de ácido palm ítico y ácido esteárico, como se determinó por GLC en el Instituto de Ciencias.
EJEM PLO 6 La preparación de triacilgliceroles de CLA mediante esterificación directa. Se adicionó la lipasa de Candida antárctica inmovilizada (1 .25 g) a una mezcla de glicerol ( 1 .22 g , 13.3 mmol) y CLA como ácido graso libre (peso molecular 280.3 g/mol; 1 1 .6 g, 41 .5 mmol). La mezcla se agitó suavemente en un agitador magnético de placa caliente a 65°C bajo vacío continuo de 1 .333-66.65 Pa. El agua volátil producida durante el progreso de la reacción se condensó continuamente en trampas enfriadas con nitrógeno líquido. Después de 48 h, la reacción se suspendió, se adicionó n-hexano y la enzima se separó mediante filtración . La fase orgánica se trató con una solución acuosa alcalina de carbonato de sodio para remover el exceso de ácidos grasos libres (cuando fue requerido). El solvente orgánico (después de secarse sobre sulfato de magnesio anhidro cuando fue apropiado) se removió a vacío en un evaporador rotatorio seguido por tratamiento a alto vacío para dar el producto virtualmente puro como un aceite ligeramente amarillento (1 0.9 g , peso molecular promedio 878.6 g/mol; 93% de rendimiento). Cuando se usaron cantidades estequiométricas de ácidos grasos libres, se aplicó la titulación mediante hidróxido de sodio estandarizado para determinar el contenido de ácidos grasos libres del producto de reacción crudo (menos de 1 % de contenido de ácidos grasos libres, como base en el número de mol de grupos éster, correspondiente a al menos 99% de incorporación , lo cual es equivalente al m ínimo de 97% de contenido de triglicéridos). El producto crudo fue introducido directamente a H PCL, levigando con 10% de dietiléter en n-hexano para dar triglicérido 1 00% puro como un aceite incoloro. 250 MHz 1 H N MR (CDCI 1 3) 8 (ppm) 6.35-6.23 (3H , ddt, Jtrans= 1 5.0 Hz, J = 1 0.9 Hz, Jalilo= 1 .3, =CHCH=CH), 5.98-5.90 (3H , dd, lcis = 1 0.9, J = 10.9, -CH = CHCH=), 5.71 -5.59 (3H , dtd, Jtrans= 1 5.0 Hz, J=6.9 Hz, J=6.9 Hz, J=2.2 Hz, =CH = CHCH2-) , 5.35-5.26 (4H , m , =CH2CH = CH- y -CH2C -ICH2- ), 4.33-4.26 (2H, dd, Jgem = 11.9 Hz, J=4.3, -CH2CHCH2-), 4.18-4.10 2H, dd, Jgem = 1.8 Hz, J=6.0, -CH2CHCH2-), 2.37-2.31 (6H, t, J=7.4 H2, -CH2COOR), 1.43-1.30 (18H, m, -CH2-), 0.91.0.86 (9H, t, J = 6.7 Hz, -CH3). 13C-NMR (CDCI3): 8 (ppm) 173.2, 172.8, 134.6, 130.0, 128.6, 125.5, 68.8, 62.0, 34.0, 32.9, 31.6, 29.6, 28.9 (6C), 27.6, 24.8, 22.5, 14.1. Con el fin de monitorear el progreso de la reacción y proporcionar más detalles sobre la composición de glicéridos individuales durante la reacción, se recolectaron muestras de manera regular conforme se procedió la reacción. Se analizaron mediante espectroscopia de HNMR y proporcionó un buen discernimiento en la composición de mono-, di- y triacilgliceroles durante el progreso de la reacción. Los resultados se muestran en la Tabla 12 a continuación. Como se puede notar a partir de la tabla, los 1,3-diacilgliceroles dominaron la mezcla de reacción durante las primeras dos horas de la reacción. Después de 4 horas, los triacilgliceroles prevalecieron y habían alcanzado 98% de la composición después de 22 horas y 100% después de 48 horas. Como se esperaría, los 1 ,2-diacilgliceroles alcanzaron niveles considerablemente menores que los 1 ,3-diacilgliceroles. Los 1-monoacilgliceroles alcanzaron un máximo durante la primera hora de la reacción, pero no se detectaron 2-monoacilgliceroles a lo largo de la reacción.
TABLA 12 Ejemplo 7 Efecto de variar temperatura y duración de reacción sobre el rendimiento y composición de CLA Se determ inó el efecto de la temperatura y la duración de reacción sobre la conjugación de aceite de cártamo. Se adicionaron agua y NaOH a un reactor de alta presión (Parr Modelo 450 ML Benchtop Alloy 400, equipado con un medidor de presión y agitador) como se indica en la Tabla 1 , columnas 1 y 2. Se permitió que el NaOH se disolviera y se adicionó aceite de cártamo (columna 3) al reactor. El reactor se cerró y se purgó durante 2 min con nitrógeno, y entonces se cerraron todas las válvulas. El reactor se calentó en una junta eléctrica a la temperatura deseada (colum na 4) y se mantuvo a esa temperatura d urante el tiempo deseado (columna 5). La temperatura se redujo entonces a 60°C antes de que la presión se liberara y el reactor se abriera. Para cada reacción, se tomaron dos gramos del jabón solidificado resultante del reactor y se disolvieron en agua a aproximadamente 40°C. Entonces se adicionó ácido cítrico para reducir el pH de la solución por debajo de 6. Se retiró una muestra de la capa superior de ácido graso y se preparó para cromatografía de gases. Los resultados de la cromatografía de gases se presentan en la columna 6 (porcentaje total de isómeros 9, 1 1 y 1 0, 1 2), columna 7 (porcentaje total de isómeros 1 1 , 1 3) y columna 8 (porcentaje total de todos los isómeros de CLA o rendimiento) . Estos datos indican que conforme aumentan la duración de reacción y la temperatura, la cantidad total de la conjugación y el porcentaje de los isómeros 1 1 , 1 3 aumentan. Bajo condiciones donde es baja la formación del isómero 1 1 , 1 3, la cantidad total de la conjugación también es baja.
TABLA 13 Ejemplo 8 Conjugación de metiléster de ácido graso de cártamo (FAM E) La reacción se realizó en un recipiente cerrado. Los siguientes componentes se mezclaron: 1 00 g de FMA de cártamo y una mezcla de aproximadamente 2.8 g de KOHC3 y 2.8 g de metanol. Probablemente hubo más KOMe que metanol debido a la evaporación de metanol durante el mezclado de los dos componentes. La mezcla se agitó durante 5 horas a 1 1 1 -1 15°C en atmósfera de nitrógeno en un recipiente de reacción cerrado. La distribución de isómeros se analizó mediante cromatografía degases. Los resultados se resumen en la Tabla 2. Los datos de GC crudos se presentan en la Tabla 3. Estos datos indican que la conjugación de FAME de cártamo puede lograrse mediante condiciones suaves, resultando en un producto que carece de cantidades apreciables de isómeros 8,10 y 11,13 indeseables.
TABLA 14: Distribución de isómeros Acido palmítico 6.6% Acido esteárico 2.7% Acido oleico 12.9% Acido linoleico 5.7% (sin conjugar) CLA c9,t11 34.1% CLA t10,c12 33.3% CLA c,c 1.8% CLA t,t 1.0% CLA total 70.2% EJEMPLO 9 Producción por lotes a gran escala de FAME conjugado de cártamo La producción de FAME conjugado de cártamo puede dividirse en dos pasos, metanólisis y conjugación. Para la metanólisis, se llevaron 6,000 kg de aceite de cártamo a un reactor cerrado. El reactor se purgó con nitrógeno a presión atmosférica y se adicionaron 1150 litros de metanol y 160 kg de NaOHC3 (30% de solución). La mezcla se calentó a 65°C al tiempo que se agitaba, y se hizo reaccionar a 65°C durante 2 horas. La capa inferior resultante fue decantada mientras que el reactor se purgaba con gas nitrógeno. Entonces se adicionaron 1 000 litros de agua (40-50°C, en los cuales se habían disuelto 50 kg de monohidrato de ácido cítrico) mientras se agitaba. Se permitió que las capas se separaran (aproximadamente 60 min) y la capa inferior se decantó al tiempo que se purgaba el reactor con gas nitrógeno. El producto de FAME de cártamo resultante se secó a 80°C bajo vacío durante una hora. Para conjugar el FMA de cártamo, se adicionaron al reactor 250 kg de KOCH3 disueltos en metanol para formar una pasta. Entonces la mezcla se calentó a 1 20°C mientras que se agitaba y se permitió que la reacción continuara durante 3 horas. La mezcla se enfrió a 1 00°C y se adicionaron 1 000 litros de agua (40-50°C, en los cuales se habían disuelto 50 kg de monohidrato de ácido cítrico) mientras que se agitaba. La mezcla se agitó durante 15 minutos, y entonces se permitió que las capas se separaran durante 20 minutos. La capa inferior se decantó y el producto se secó a 80°C durante 1 hora y entonces se almacenó bajo nitrógeno. El CLA resultante se analizó usando un Perkin Elmer Autosystem XL GC bajo las siguientes condiciones: Columna: WCOT Fused Silica 1 00 m X 0.25 mm , Recubrim iento CP Sil 88 Portador: Gas He, 30.0 kg/cm2 Temp: 220°C Tiempo de corrida: 35-90 min I nyec : Sin fraccionado, 240°C Detec: FID, 280°C Los resultados de GC se resumen en las Tabla 1 5 y 16. TABLA 15 TABLA 16 Los siguientes son ejemplos de raciones para animales normales conteniendo los ácidos grasos libres de CLA, triglicéridos y esteres de la presente invención.
EJEMPLO 10 A. RACION ES I NICIADORAS PARA CERDO TABLA 17 B. RACIONES DE CRIADOR-TERMI N ADOR PARA CERDOS (DE 18-109 KG) TABLA 18 RACIONES DE CRIADOR TERMINADOR DE CERDO (PARA CERDOS DE 55-109 KG) TABLA 19 COMPOSICIÓN Y ANÁLISIS DE REMEZCLA DE MINERALES EN TRAZAS PARA CERDO TABLA 20 COMPOSICIÓN DE PREMEZCLA DE VITAMINAS PARA CERDO TABLA 21 RACIONES DE CAPA DE PROTEINA 18% PARA GALLINAS TABLA 22 RACIONES INICIADORA Y TERMINAL PARA POLLOS TIERNOS TABLA 23 Tabla 23 (continuación) RACIONES DE CRIADOR/TERMINAL PARA PAVO TABLA 24 Tabla 24 (continuación) FORMULA PARA ALIMENTO SECO PARA PERRO TABLA 25 H. FORMULAS DE ALIMENTO SEMI-HUMEDO PARA PERRO TABLA 26

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES 1 . Una composición que contiene al menos 50 porciento de ácido linoleico conjugado siendo caracterizada dicha composición por tener menos de 1 porciento de isómeros de ácido octadecadienoico que no ocurre de manera natural. 2. La composición de la reivindicación 1 , en donde dicha composición contiene menos de 1 porciento total de isómeros de ácido 1 1 , 1 3-octadecadienoico e isómeros de ácido trans-trans octadecadienoico. 3. La composición de la reivindicación 1 , en donde dicha composición contiene menos de 1 porciento total de isómeros de ácido 8, 1 0-octadecadienoico e isómeros de ácido trans-trans octadecadienoico. 4. La composición que contiene ácido linoleico conjugado de la reivindicación 1 , en donde dicha composición tiene un nivel total de ácido t9,t1 1 -octadecadienoico y ácido t1 0,t12-octadecadienoico de menos de 1 porciento. 5. La composición que contiene ácido linoleico de las reivindicaciones 1 -4, en donde dicha composición es un artículo de aceite de sem illa isomerizado. 6. La composición que contiene ácido linoleico de la reivindicación 5, en donde dicho artículo de aceite de semilla es seleccionado del grupo que consiste de aceite de girasol y aceite de cártamo. 7. Una composición de ácido linoleico conjugado, biológicamente activo que comprende: una mezcla de isómeros de ácido linoleico conjugado de ácidos grasos libres, conteniendo dicha mezcla al menos aproximadamente 30% de ácido t10,c12 octadecadienoico, al menos aproximadamente 30% de ácido c9,t1 1 octadecadienoico y al menos aproximadamente 1 % total de ácido 8, 10 octadecadienoico, ácido 1 1 , 13 octadecadienoico y ácido trans-trans octadecadienoico. 8. La composición de la reivindicación 7, comprendiendo además un producto alimenticio que incorpora dicho ácido t1 0, c12 octadecadienoico. 9. La composición de la reivindicación 8, en donde dicho producto alimenticio es para consumo humano. 1 0. La composición de la reivindicación 8, en donde dicho producto alimenticio es un alimento formulado para consumo animal. 1 1 . Una composición de acilglicerol biológicamente activa, que comprende una pluralidad de moléculas de acilglicerol de la estructura: en donde Ri , R2 y R3 son seleccionados del grupo que consiste de un grupo hidroxilo y un ácido octadecadienoico, caracterizada dicha composición por contener al menos aproximadamente 30% de ácido t1 0,c1 2 octadecadienoico, al menos aproximadamente 30% de ácido c9,t1 1 octadecadienoico, y aproximadamente menos de 1 % total de ácido 8, 1 0 octadecadienoico, ácido 1 1 , 1 3 octadecadienoico y ácido trans-trans-octadecadienoico en las posiciones Ri , R2 y R3. 1 2. La composición de la reivindicación 1 1 , comprendiendo además un producto alimenticio que incorpora dicho ácido t10,c12 octadecadienoico. 1 3. La composición de la reivindicación 12, en donde dicho producto alimenticio es para consumo humano. 14. La composición de la reivindicación 1 2, en donde dicho producto alimenticio es un alimento formulado para consumo animal. 1 5. Una composición de ácido linoleico conjugado, biológicamente activa que comprende: una mezcla de esteres de isómeros de ácido linoleico conjugado, conteniendo dicha mezcla al menos aproximadamente 30% de ácido t1 0, c1 2 octadecadienoico, al menos aproximadamente 30% de ácido c9,t1 1 octadecadienoico y aproximadamente menos de 1 % total de ácido 8, 10 octadecadienoico, ácido 1 1 , 1 3 octadecadienoico y ácido trans-trans octadecadienoico. 1 6. La composición de la reivindicación 1 5, comprendiendo además un producto alimenticio que incorpora dicho ácido t1 0,c1 2 octadecadienoico. 1 7. La composición de la reivindicación 16, en donde dicho producto alimenticio es para consumo humano. 1 8. La composición de la reivindicación 16, en donde dicho producto alimenticio es un alimento formulado para consumo animal . 19. Un proceso para producir ácido linoleico conjugado que comprende proporcionar un ácido linoleico que contiene aceite de semilla, propilenglicol y un álcali compatible con un medio no acuoso; formar una mezcla de reacción combinada con dicho aceite de semilla, dicho propilenglicol y dicho álcali compatible con un medio no acuoso; isomerizar dicho ácido linoleico contenido en dicho aceite de semilla mediante calentamiento para formar ácidos linoleicos conjugados; y acuificar para liberar el glicerol. 20. El proceso de la reivindicación 1 9, en donde dicho calentamiento es realizado a 1 30 hasta 165°C durante 2 hasta 6.5 horas. 21 . El proceso de la reivindicación 1 9 junto con los pasos adicionales de acidificar para liberar el glicerol, secar a vacío para remover el agua, y destilación molecular para remover impurezas de ácido linoleico no conjugado y deodorización. 22. El proceso de la reivindicación 21 , en donde dicho calentamiento es realizado a 1 30 hasta 165°C durante 2 hasta 6.5 horas. 23. El proceso de la reivindicación 1 9, comprendiendo además el paso de tratar dicho ácido linoleico conjugado de ácidos grasos libres con lipasa para formar triglicéridos. 24. Un proceso para producir ácido linoleico conjugado, biológicamente activo, de baja impureza, que comprende proporcionar un ácido linoleico conteniendo aceite de semilla, propilenglicol y un álcali compatible con un medio no acuoso; tratar dicho ácido linoleico conteniendo aceite de sem illa para formar alquilésteres de dicho ácido linoleico; formar una mezcla de reacción combinada con dichos alquilésteres, dicho propilenglicol, y dicho álcali compatible con un medio no acuoso; isomerizar dichos alquilésteres medíante calentam iento para formar ácidos linoleicos conjugados; y acuificar para liberar glicerol. 25. El proceso de la reivindicación 24, en donde dicho calentamiento es realizado a 1 30 hasta 165°C durante aproximadamente 2 hasta 6.5 horas. 26. Una mezcla de reacción combinada isomerizada, q ue contiene 30-60 porciento de aceite de semilla procesado, 1 0-40 porciento de álcali y 30-60 porciento de propilenglicol. 27. Un alimento animal compuesto de ingredientes convencionales en una ración normal para la especie y edad de un animal , junto con alquilésteres de ácido linoleico conjugado en una concentración biológicamente activa. 28. El alimento animal de la reivindicación 27, en donde la concentración de alquilésteres de ácido linoleico conjugado, en dicho alimento, es aproximadamente 0.05 hasta 3.5 porciento en peso. 29. El alimento animal de la reivindicación 27, en donde dicho alquiléster de ácido linoleico conjugado está comprendido por al menos 50 porciento hasta aproximadamente 99 porciento en peso de isómeros de alquiléster de ácido octadecanoico seleccionado del grupo que consiste de alquiléster de ácido c9,t1 1 -octadecanoico y alquiléster de ácido t1 0, c12-octadecanoico, con menos de 1 porciento de alquiléster de ácido 1 1 , 1 3-octadecanoico y alquilésteres trans-trans. 30. Un proceso para producir un alquiléster de ácido linoleico conjugado para usarse en alimento para animales domésticos, ingredientes alimenticios o complementos dietéticos humanos, que comprende proporcionar un alquiléster de ácido linoleico no refinado teniendo residuo de fosfatidilo en el rango de aproximadamente 0.1 hasta aproximadamente 0.5 porciento, tratar con alcoholato de álcali a baja temperatura en la presencia de un alcohol monohídrico de bajo peso molecular, para provocar la isomerización de al menos 50 porciento de alquiléster de ácido linoleico a alquil éster de ácidlo linoleico conjugado a baja temperatura , acidificar mediante adición de un ácido acuoso, y separar el alquil éster de ácido linoleico conjugado de dicho ácido acuoso sin destilación.
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