MXPA99009044A - Metodos para evaluar el estado cardiovascular ycomposiciones para usar los mismos - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a métodos para evaluar el estado cardiovascular de un individuo, que comprende determinar la secuencia en unao más posiciones poliméricas dentro de los genes humanos que codifican la enzima de conversión de angiotensina (ECA), angiotensinógeno (AGT) y/o receptor de angiotensina II tipo 1 (AT1). La invención también proveeácidos nucleicos aislados que codifican polimorfismos de ECA, AGT, y AT1, sondas deácidos nucleicos que se hibridizan a las posiciones polimórficas, equipos para predecir el estado cardiovascular y bancos deácidos nucleicos y péptidos para usarse en la identificación de fármacos cardiovasculares candidatos.

Description

MÉTODOS PARA EVALUAR EL ESTADO CARDIOVASCULAR Y COMPOSICIONES PARA USAR LOS MISMOS Campo de la Invención La presente invención se refiere a polimorfismos genéticos para evaluar el estado cardiovascular en seres humanos. Antecedente de la invención El sistema de renina-angiotensina-aldosterona (SRAA) juega un papel importante en la fisiología cardiovascular en mamíferos. Específicamente, el SRAA regula la homeostasis de sal-agua y el mantenimiento del tono vascular. La estimulación o inhibición de este sistema eleva o disminuye la presión sanguínea, respectivamente, y las alteraciones en este sistema pueden estar implicadas en la etiología de, por ejemplo, hipertensión, apoplejía e infarto al miocardio. El sistema de SRAA también puede tener otras funciones, tales como, v.gr., el control del crecimiento celular. Ei sistema de renina-angiotensina incluye por lo menos la enzima de conversión de renina, angiotensina (ECA), angiotensinogeno (AGT), receptor de angiotensina II tipo 1 (AT1) y receptor de angiotensina II tipo 2 (AT2). AGT es el substrato específico de renina, una proteasa de aspartilo. El gen de AGT humano contiene cinco exones y cuatro intrones que se expanden por 13Kb (Gaillard y otros, DNA 8:87-99, 1989: Fu amizu y otros, J. Biol. Chem. 265:7576-7582, 1990). El primer exón (37 pb) codifica la región no traducida 5' del ARNm. El segundo exón codifica el péptido de señal y los primeros 252 aminoácidos de la proteína madura. Los exones 3 y 4 son más cortos y codifican de 90 y 48 aminoácidos, respectivamente. El exón 5 contiene una secuencia de codificación corta (62 aminoácidos) y la región no traducida 3'. El plasma de AGT se sintetiza principalmente en el hígado y su expresión se regula positivamente por estrógenos, glucocorticoides, hormonas de tiroides y angiotensina II (Ang II) (Clauser y otros, Am. J. Hypertension 2:403-410, 1989). Las separación del segmento amino-terminal de AGT por renina liberada una pro-hormona de dicapéptido, angiotensina-l, que además se procesa a la angiotensina II de octapéptidos activos por la dipeptidil carboxipeptidasa designada enzima de conversión de angiotensina (ECA). La separación de AGT por la renina es el paso limitante del régimen en la activación del sistema de renina-angiotensina. Varias observaciones epidemiológicas indican un papel posible de AGT en la regulación de presión de sangre. Una correlación altamente significativa entre la concentración de AGT de plasma y la presión sanguínea se observaron en los estudios epidemiológicos (Waiker y otros, J. Hypertension 1:287-291, 1979). De manera interesante, un número de dimorfismos alélicos se han identificado en el gen de AGT. La frecuencia de por lo menos dos de ellos (174 M y 235T) se ha caracterizado parcialmente y en ciertas poblaciones se ha mostrado que están significativamente elevados en sujetos hipertensos (Jeunemaitre y otros, Cell 71_:169-180, 1991). Además, se ha sugerido que un polimorfismo específico 235T, está implicado directamente en la ateroclerosis coronaria (Ishigami y otros Circulation 9_1_:951-4, 1995). Además, la presencia de A o G en la posición 1218 en la región reguladora de AGT se ha correlacionado con diferencias en la capacidad transcripcional In vitro para este gen (Inuoe y otros, J. Clin. Invest. 9.9:1786, 1997). El gen ECA humano también es un candidato como un marcador para hipertensión e infarto al miocardio. Los inhibidores de ECA constituyen un enfoque terapéutico importante y efectivo en el control de hipertensión en humanos (Sassaho y otros, Am. J. Med. 8_3:227-235, 1987). En el plasma y sobre la superficie de las células endoteliales, ECA convierte la molécula de angiotensina I inactiva (Ang I) en angiotensina II activa (Ang II) (Bottari y otros, Front. Neuroendocrinology 1_4:123-171, 1993). Otro substrato de CE es bradiquinina, un vasodilatador potente e inhibidor de proliferación de células de músculo liso, que se inactivan por ECA (Ehlers y otros, Biochemistry 28.:5311-5318, 1989; Erdos, E.G., Hypertension ±6:363-370, 1990; Johnston, C.l. Drugs (suppl.1 ) 39:21-31, 1990). Los niveles de ECA son muy estables dentro de individuos, pero difieren en gran parte entre los individuos. Se ha sugerido que los niveles de ECA en plasma se determinen genéticamente como una consecuencia de polimorfismos dialélicos, situados dentro o cerca del gen de ECA. Antes de la presente invención, no se demostró ninguna asociación definitiva entre polimorfismos e hipertensión o presión sanguínea. Sin embargo, un riesgo mayor de infarto al miocardio se ha identificado en un grupo de sujetos con un polimorfismo ECA diseñado ECA-DD (Cambien y otros, Nature 359:641-644, 1992) y un riesgo de 12 veces mayor de infarto al miocardio se ha identificado en un subgrupo de pacientes que tienen una combinación del polimorfismo de ECA ECA-DD y uno de los polimorfismos de AGT (235T) descrito antes (Kamitani y otros., Hypertension 24:381, 1994). Recientemente, se identificaron seis polimorfismos ECA y se caracterizaron (Villard y otros, Am. J. Human Genet. 58:1268-1278, 1996). Las acciones de conservación vasoconstrictoras, de promoción de crecimiento celular y de sal de Ang II se median a través de la unión a, y a la activación de, los receptores de angiotensina, de los cuales se han clonado por lo menos dos tipos (AT1 y AT2). El receptor de Ang II tipo 1 (AT1), una proteína de dominio de transmembrana siete acoplada a la proteína G, se distribuyó ampliamente en el cuerpo y media casi todos los efectos conocidos de Ang II (Fyhrquist y otros, J. Hum. Hypertension 5519-524, 1995).

Se han identificado varios polimorfismos en el gen receptor de AT1. Los estudios iniciales sugieren que por lo menos uno de ellos es más frecuente en sujetos hipertensos (AT1166C) (Bonnardeaux y otros, Hypertension 24_:63-69, 1994). Este polimorfismos, combinado con el polimorfismo de ECA-DD, se ha mostrado que se relaciona fuertmeente con el riesgo de infarto al miocardio (Tiret y otros, Lancet 344:910-913. 1994).

La alta morbidez y la mortalidad asociadas con la enfermedad cardiovascular demuestran una necesidad en la materia para métodos y composiciones que permiten la determinación y/o predicción del régimen terapéutico que dará como resultado el tratamiento más positivo producido en un paciente que sufre de enfermedad cardiovascular. Esto incluye la identificación de individuos que son más o menos susceptibles a los regímenes terapéuticos particulares, incluyendo, v.gr., fármacos particulares que se utilizan convencionalmente para tratar enfermedad cardiovascular. También existe una necesidad en la materia de métodos y composiciones que permiten la identificación de individuos que tienen una predisposición en enfermedad cardiovascular, tal como, por ejemplo, infarto al miocardio, hipertensión, ateroclerosis y apoplejía, para facilitar la intervención temprana y la prevención de la enfermedad. Compendio de la Invención La presente invención provee métodos para evaluar el estado cardiovascular en un individuo humano. El estado cardiovascular es el estado fisiológico del sistema cardiovascular como se refleja en uno o más marcadores de estado. Los marcadores de estado incluyen sin limitación los parámetros clínicos, tales como, por ejemplo, presión sanguínea, perfil electrocardiográfico. así como diagnósticos del estado cardiovascular hechos por los médicos expertos, tales como, por ejemplo, infarto al miocardio agudo, infarto al miocardio inactivo, apoplejía y aterosclerosis. También en la evaluación del estado cardiovascular se incluyen los cambios en los marcadores de estado con el tiempo. Los métodos de la invención se llevan a cabo mediante los pasos de: (i) determinar la secuencia de una o más posiciones polimórficas dentro de uno o más de los genes que codifican la enzima de conversión de angiotensina (ECA), angiotensinogeno (AGT) y receptor de angiotensina II tipo 1 (AT1) en el individuo para establecer un patrón polimórfico para el individuo; y (ii) comparar el patrón polimórfico establecido en (i) con los patrones polimórficos de individuos que exhiben marcadores predeterminados del estado cardiovascular. El patrón polimórfico del individuo, preferiblemente es altamente similar y, más preferiblemente, es idéntico al patrón polimórfico de individuos que exhiben marcadores de estado particular, síndromes cardiovasculares y/o patrones particulares de respuesta a las intervenciones terapéuticas. Por ejemplo, se puede utilizar una comparación del patrón polimórfico de un individuo con los patrones polimórficos de individuos que exhiben diferentes respuestas a una intervención terapéutica particular para predecir el grado de responsabilidad del individuo a dicha intervención. En una forma similar, los métodos de la invención se pueden usar para predecir la predisposición a diferentes síndromes cardiovasculares. La invención también provee ácidos nucleicos aislados que codifican ECA, AGT. y AT1 en un individuo, cada uno de los cuales comprenden por lo menos una posición polimorfica En modalidades preferidas, la posición polimorfica, ya sea sola o en combinación con otras posiciones polimorficas en la secuencia de ECA, AGT o AT1 humanos, o en uno o más de otros genes humanos, se predice de un nivel particular de respuesta a un tratamiento dado y/o indica una predisposición a uno o más síndromes clínicos asociados con enfermedad cardiovascular Los ácidos nucleicos aislados de acuerdo con la invención (que se describen usando la numeración indicada en la Tabla 1 siguiente) incluyen sin limitación (i) Ácidos nucleicos que codifican ECA que tienen una o más posiciones po mórficas en la posición en la región reguladora numerada 5106, posiciones en la región de codificación numeradas 375, 582, 731, 1060, 2741, 3132 3387, 3503 y 3906, y la posición 1451 numerada en la entrada de Genbank X62855 En modalidades preferidas, las secuencias en las posiciones polimórficas en la región reguladora de ECA son uno o más de 5106C y 5106T, y las secuencias en las posiciones polimorficas en la región de codificación son uno o más de 375A, 375C, 582C, 582T, 731A, 731G, 1060G, 1060A, 2741G, 2741T, 3132C, 3132T 3387T, 3387C, 3503G, 3503C, 3906G y 3906A La invención también abarca un acido nucleico que codifica una supresión de nucleotidos 1451-1783 como se numera en la entrada de Genbank X62855 (n) Ácidos nucleicos que codifican AGT que tienen una o mas posiciones polimorficas en las posiciones en la región reguladora numerada 395, 412, 432, 449, 692, 839, 1007, 1072 y 1204; las posiciones en la región de codificación 273, 912, 997, 1116 y 1174; y la posición 49 numerada como la entrada de Genbank M24688. En modalidades preferidas, las secuencias en las posiciones polimórficas en la región reguladora de AGT son uno o más de 395T, 395A, 412C, 412T, 432G, 432A, 449T, 449C, 692C, 692T, 839G, 839A, 1007A, 1072G, 1072A, 1204C y 1204A; las secuencias en la posición polimórfica en la región de codificación son uno o más de 273C, 273T, 912C, 912T, 997G, 997C, 1116G, 116A, 1174C y 1174A; y la secuencia en la posición 49 en la entrada de Genbank M24688 ya sea A o G. (iii) Ácidos nucleicos que codifican AT1 que tienen una o más posiciones polimórficas en la posiciones en la región reguladora numerada 1427, 1756, 1853, 2046, 2354, 2355 y 2415; y la posición en la región de codificación numerada 449. En modalidades preferidas, las secuencias en las posiciones polimórficas en la región reguladora AT1 son uno o más de 1427A, 1427T, 1756T, 1756A, 1853T, 1853G, 2046T, 2046C, 2354A, 2354C, 2355G, 2355C, 2415A y 2415G; y las secuencias en las posiciones polimórficas en la región de codificación son uno o más de 449G, 449C, 678T, 678C, 1167A, 1167G, 1271A y 1271C. La invención también abarca blancos de secuencias de ácidos nucleicos aisladas en donde cada secuencia en el banco comprende de una o más posiciones polimórficas en los genes que codifican ECA, AGT, o AT1 humanos, incluyendo sin limitación las posiciones polimórficas y las secuencias descritas en la presente. También se provee sondas de ácidos nucleicos que se hibridizan específicamente a las posiciones polimórficas identificadas; péptidos y polipéptidos que comprenden posiciones polimórficas; y anticuerpos específicos para polimorfismo, es decir, anticuerpos específicos para secuencias que se unen diferencialmente a variantes polimórficas de los polipéptidos de ECA, AGT, o AT1 y, preferiblemente, se pueden usar para identificar variantes polimórficas particulares. En aún otro aspecto, la invención provee equipos para la determinación de patrones polimórficos en los genes de ECA, AGT y/o AT1 de un individuo. Los equipos comprenden un medio para detectar secuencias polimórficas, incluyendo sin limitación sondas de oligonucleótidos que se hibridizan en, o están adyacentes en las posiciones polimórficas y a los anticuerpos específicos para polimorfismo. En aún otro aspecto, la invención provee blancos de ácidos nucleicos y polipéptidos para usarse en los métodos de tamizado para identificar fármacos cardiovasculares candidatos. Los blancos de ácidos nucleicos pueden ser, v.gr., ADN o ARN y preferiblemente por lo menos son de aproximadamente 10, y aún más preferiblemente de por lo menos aproximadamente 15 de longitud y comprenden una o más posiciones polimórficas. Los blancos de péptidos son de por lo menos aproximadamente 5 aminoácidos de longitud y pueden ser tan largos o más largos que polipéptidos de ACE, AGT, o AT1 de longitud completa.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Todas las patentes, solicitudes de patentes, publicaciones y otros materiales citados en la presente son incorporados aquí por referencia en su totalidad. En el caso de inconsistencias, se pretende que controle la presente descripción, incluyendo definiciones. Definiciones 1. Un "polimorfismo" como se usa en la presente, denota una variación en la secuencia de un gen en un individuo. Una "posición polimórfica" es una posición de nucleótidos predeterminada dentro de la secuencia de un gen o una posición de aminoácidos predeterminada en la secuencia de un polipéptido en el cual se localiza un polimorfismo. Un "homocigoto" individual para un polimorfismo particular es uno en el cual ambas copias del gen contienen la misma secuencia en la posición polimórfica. Un "heterocígoto'' individual para un polimorfismo particular es uno en el cual las dos copias del gen contienen diferentes secuencias en la posición polimórfica. 2. Un "patrón de polimorfismo" como se usa en la presente, denota un conjunto de uno o más polimorfismos, que pueden estar contenidos en la secuencia de uno solo o una pluralidad de genes. Un patrón de polimorfismo puede comprender polimorfismos de nucleótidos o aminoácidos. 3. "Ácido nucleico" o "polinucleótidos" como se usa en la presente se refiere a polímeros que contienen purina y pirimidina de cualquier longitud, ya sea poliribonucleótidos o polidesoxiribonucleótidos o poliribo-polidesoxiribo nucleótidos mezclados. Los ácidos nucleicos incluyen, sin limitación, molécula de un solo hilo o de doble hilo, es decir, híbridos de ADN-ADN, ADN-ARN y ARN-ARN, así como "ácidos nucleicos de proteínas" (ANP) formados conjugando bases a una estructura de la base de aminoácidos. También incluye ácidos nucleicos que contienen bases modificadas. 4. Un ácido nucleico "aislado" o polipéptido, como se usa en la presente, se refiere a un ácido nucleico o polipéptido que se remueve de su ambiente original (por ejemplo, su ambiente natural si está presente en la naturaleza). Un ácido nucleico aislado o polipéptido contiene menos de aproximadamente 50%, preferiblemente menos de aproximadamente 75% y aún más preferiblemente menos de aproximadamente 90%, de los componentes celulares con los cuales se asoció originalmente. 5. Una secuencia de ácidos nucleicos o polipéptido, es decir que se "deriva de" una secuencia designada se refiere a una secuencia que corresponde a una región de la secuencia designada. Para secuencias de ácidos nucleicos, este abarca secuencias que son homologas o complementarias con la secuencia. 6. Una "sonda" se refiere a un ácido nucleico u oligonucleótido que forma una estructura de híbrido con una secuencia en un ácido nucleico blanco debido a la compiementariedad de, por lo menos, una secuencia en la sonda con una secuencia en el ácido nucleico blanco. 7. Los ácidos nucleicos se pueden "hibridizar" uno con el otro cuando por lo menos un hilo del ácido nucleico puede recocer otro hilo de ácido nucleico bajo condiciones de restricción definidas. La restricción de hibridización se determinó, v.gr., por a) la temperatura a la cual se lleva a cabo la hibridización y/o lavado, y b) la resistencia iónica y polaridad (v.gr., formamida) de la hibridización y soluciones de lavado, así como otros parámetros. La hibridización requiere que los dos ácidos nucleicos contengan secuencias substancialmente complementarias; dependiendo de la restricción de hibridización, sin embargo, se pueden tolerar las desigualdades. La restricción apropiada para hibridizar ácidos nucleicos depende de la longitud de ácidos nucleicos y del grado de compiementariedad, las variables bien conocidas en la técnica, por ejemplo, "alta restricción" como se usa en la presente, se refiere a la hibridización y/o lavado a 68°C en 0.2XSSC, a 42°C en 50% de formamida, 4XSSC, o bajo condiciones que dan niveles de hibridización equivalentes a las observadas bajo cualquiera de estas dos condiciones. 8. Un "gen" de una proteína particular como se usa en la presente, se refiere a una secuencia de ácidos nucleicos contigua a una secuencia presente en un genoma el cual comprende (i) una "región de codificación", que comprende exones (es decir, secuencias que codifican una secuencia de polipéptido o "secuencias de codificación de proteínas"), mirones y secuencias en la unión entre los exones y los intrones; y (ii) secuencias reguladoras, que flanquean la región de codificación en ambas terminaciones 5' y 3'. Por ejemplo, el "gen ECA" como se usa en la presente abarca las regiones reguladoras y de codificación y del gen humano que codifican la enzima de conversión de angiotensina. De manera similar, el "gen AGT" abarca las regiones reguladoras y de codificación del gen humano que codifica el angiotensinogeno y el "gen AT1" abarca las regiones reguladoras y que codifica el receptor de angiotensina II de tipo 1 de codificación de genes humanos. Normalmente, las secuencias reguladoras de acuerdo con la invención se localizan en 5' (es decir, corriente arriba) del segmento de codificación. Las secuencias de referencia, obtenidas de Genbank, que se utilizaron para practicar la presente invención se muestran en la Tabla 1.

Tabla 1 Los inventores de la presente sorprendente e inesperadamente han descubierto la existencia de polimorfismos genéticos dentro de los genes humanos que codifican ECA, AGT, y AT1 los cuales, solos o en combinación, se pueden usar para evaluar el estado cardiovascular. De acuerdo con la invención, el patrón polimórfico de las secuencias ECA, AGT y/o AT1 en un individuo puede predecir la respuesta del individuo a intervenciones terapéuticas particulares y servir como un indicador de predisposición a varias formas de enfermedad cardiovascular. La invención provee métodos para evaluar el estado cardiovascular detectando patrones polimórficos en un individuo. La presente invención también provee ácidos nucleicos aislados derivados de genes ECA, AGT y AT1 que comprenden estos polimorfismos, incluyendo sondas que se hibridizan específicamente a posiciones polimórficas; polipéptidos y péptidos aislados que comprenden residuos polimórficos; y a anticuerpos que reconocen específicamente los polipéptidos de ECA, AGT, o AT1 que contienen uno o más aminoácidos polimórficos. Métodos para Evaluar el Estado Cardiovascular La presente invención provee métodos de diagnóstico para evaluar estado cardiovascular en un individuo humano. El estado cardiovascular como se usa en la presente se refiere al estado fisiológico de un sistema cardiovascular individual como se refleja en uno o más marcadores o indicadores. Los marcadores de estado incluyen sin limitación, mediciones clínicas tales como, v.gr., presión sanguínea perfil electrocardiográfico y análisis de flujo sanguíneo diferenciado. Los marcadores de estado, de acuerdo con la invención, incluyen diagnósticos de uno o más síndromes cardiovasculares, tales como, por ejemplo, hipertensión, infarto al miocardio agudo, infarto al miocardio inactivo, apoplejía y ateroclerosis. Se entenderá que un diagnóstico de un síndrome cardiovascular hecho mediante un practicante médico abarca mediciones clínicas y juicio médico. Los marcadores del estado de acuerdo con la invención se evalúan usando métodos convencionales bien conocidos en la materia. También se incluyen en la evaluación del estado cardiovasculares los cambios cuantitativos o cualitativos en los marcadores de estado con el tiempo, de manera que se podrían utilizar, v.gr., para la determinación de la respuesta de un individuo a un régimen terapéutico. Los métodos se llevaron a cabo mediante los pasos de: (i) determinar la secuencia de una o más posiciones polimórficas dentro de uno o más de los genes que codifican la enzima de conversión de angiotensina (ECA), angiotensinogeno (AGT) o receptor de angiotensina II del tipo 1 (AT1) en el individuo para establecer un patrón polimórfico para el individuo; y (ii) comparar el patrón polimórfico establecido en (i) con los patrones de seres humanos que exhiben diferentes marcadores de estado cardiovascular. El patrón polimórfico del individuo, preferiblemente es, altamente similar y, más preferiblemente, es idéntico al patrón polimórfico de individuos que exhiben marcadores de estado particulares, síndromes cardiovasculares y/o patrones particulares de respuesta a intervenciones terapéuticas. Los patrones terapéuticos también pueden incluir posiciones polimórficas en otros genes que se muestran, en combinación con una o más posiciones polimórficas en ECA, AGT o AT1, para correlacionarse con la presencia de marcadores de estado. En una modalidad, el método implica comparar un patrón polimórfico de un individuo con patrones polimórficos de individuos que se ha mostrado que responden positiva o negativamente a un régimen terapéutico particular. El régimen terapéutico como se usa en la presente, se refiere a tratamientos auxiliados en la eliminación o disminución de síntomas y eventos asociados con enfermedad cardiovascular. Dichos tratamientos incluyen, sin limitación, uno o más de alteración en la dieta, estilo de vida y régimen de ejercicio; técnicas quirúrgicas invasivas y no invasivas tales como aterectomía, angioplastía y cirugía de derivación de coronaria; e intervenciones farmacéuticas, tales como administración de inhibidores de ECA, antagonistas re receptores de angiotensina II, diuréticos, antagonistas alfa-adrenoreceptor, glicosidos cardíacos, inhibidores de fosfodiesterasa, antagonistas beta-adrenoreceptores, bloqueadores de canal de calcio, inhibidores de reductasa HMG-CoA, bloqueadores de receptor de ímidazolina, bloqueadores de receptor de endotelio y nitritos orgánicos. También se abarcan intervenciones con agentes farmacéuticos aún no conocidos cuya actividad se correlaciona con los patrones polimórficos particulares asociados con la enfermedad cardiovascular. Los presentes inventores han descubierto que los patrones pohmorficos particulares se correlacionan con la responsabilidad de un individuo a inhibidores de ECA (ver, por ejemplo, el siguiente Ejemplo 3) Se contempla, por ejemplo, que los pacientes que son candidatos de un régimen terapéutico particular se tamizaron para patrones po mórficos que se correlacionan con la respuesta al régimen particular En una modalidad preferida, la presencia o ausencia de un individuo de un patrón polimorfico comprendiendo ACE2193 A/G, AGR 1072 G/G y AT1 A/A (ver más adelante) se determina para identificar la respuesta de un individuo a inhibidores de ECA En otra modalidad, el método implica comparar un patrón polimorfico de individuos con patrones polimorficos de individuos que exhiben o han exhibido uno o más marcadores de enfermedad cardiovascular, tales como, v gr , presión sanguínea alta, perfil electrocardiográfico anormal, infarto al miocardio, apoplejía o aterosclerosis (ver, por ejemplo, Ejemplo 2 siguiente) Para practicar los métodos de la invención, se ha establecido un patrón polimórfico del individuo obteniendo ADN del individuo y determinando la secuencia en las posiciones polimórficas predeterminadas en ECA, AGT y AT1 tal como se describió antes El ADN puede obtenerse de cualquier fuente celular Los ejemplos no limitantes de las fuentes celulares disponibles en la práctica clínica incluyen células sanguíneas, células bucales, células cervicovaginales, células epiteliales de orina, células fetales o cualesquiera células presentes en el tejido obtenido por biopsia Las células también pueden obtenerse de fluidos corporales, incluyendo sin limitación, sangre, saliva, sudor, orina, fluido cerebro-espinal, heces y exudados de tejido en el sitio de la infección o inflamación. El ADN se extrae de la fuente celular o fluido corporal usando cualquiera de los numerosos métodos que son normales en la materia. Se entenderá que el método particular usado para extraer ADN dependerá de la naturaleza de la fuente. La determinación de la secuencia del ADN extraído en posiciones polimórficas en los genes ECA, AGT y/o AT1 se logran mediante cualquier medio conocido en la materia, incluyendo pero no limitado a, secuenciación directa, hibridización con oligonucleótidos específicos para alelos, RCP específico para alelos, RCP de ligasa, separación HOT, electroforesis en gei de gradiente desnaturalizante (DDGE por sus siglas en inglés) y polimórfico conformacional de un solo hilo (SSCP por sus siglas en inglés). La secuenciación directa puede lograrse mediante cualquier método incluyendo, sin limitación, secuenciación química, usando el método de axam-Gilbert; mediante secuenciación enzimática, usando el método de Sanger; secuenciación de espectrometría de masa; y secuenciación utilizando una tecnología basada en fragmentos. Ver, por ejemplo, Little y otros, Genet. Anal. 6..151, 1996. De preferencia, el ADN de un sujeto, primero se somete a amplificación por reacción en cadena de polimerasa (RCP) usando iniciadores de amplificación específicos. En una modalidad alternativa, el tejido de biopsia se obtiene de un sujeto. Los anticuerpos que son capaces de distinguir entre diferentes formas polimórficas de ECA, AGT y/o AT1 y después se aplican a muestras del tejido para determinar la presencia o ausencia de una forma polimórfica especificada por el anticuerpo. Los anticuerpos pueden ser policlonales o monoclonales, preferiblemente monoclonales. La medición del anticuerpo específico que se une a las células, puede lograrse mediante cualquier método conocido, v.gr., citometría de flujo cuantitativa o inmunoanálisis ligado a enzimas o ligado a fluorescencia. La presencia o ausencia de un polimorfismo particular o patrón polimórfico, y su distribución alélica (es decir, homocigosidad contra heterocigosidad) se determina comparando los valores obtenidos de un paciente con normas establecidas de poblaciones de pacientes que tienen patrones polimórficos conocidos. En una modalidad alternativa, el ARN se aisla del tejido de biopsia usando métodos normales bien conocidos por los expertos en la materia tal como extracción de tiocianato de guanidinio-fenol-cloroformo (Chomocyznski y otros, 1987, Anal. Biochem., 162: 156). El ARN aislado entonces se somete a transcripción inversa acoplada y amplificación por reacción en cadena de polimerasa (TI-RCP), usando iniciadores oligonucleótidos específicos. Las condiciones para recoger el iniciador se eligen con el fin de asegurar la transcripción inversa específica y amplificación; por lo tanto, la apariencia de un producto de amplificación el diagnóstico de la presencia de alelos particulares. En otra modalidad, el ARN se transcribe inversamente y se amplifica, después de lo cual las secuencias amplificadas se identifican mediante, v.gr., secuenciación directa. Para practicar la presente invención, la distribución de patrones polimórfícos en un gran número de individuos que exhiben marcadores particulares de estado cardiovascular se determinan mediante cualquiera de los métodos descritos antes y se comparan con la distribución de patrones polimórficos en pacientes que han sido igualados por edad, origen étnico y/o otros parámetros estadística y médicamente relevantes, que exhiben marcadores de estados cuantitativa o cualitativamente diferentes. Las correlaciones se logran usando cualquier método conocido en la materia, incluyendo regresión logística nominal o análisis de regresión de cuadrados mínimos normales. En esta forma, es posible establecer correlaciones estadísticamente significativas entre patrones polimórficos particulares y estados cardiovasculares particulares. Además es posible establecer correlaciones estadísticamente significativas entre patrones polimórficos particulares y cambios en el estado cardiovascular, tal como podría resultar, v.gr., de regímenes de tratamiento particulares. De tal forma, es posible correlacionar los patrones polimórficos con la respuesta a tratamientos particulares. Posiciones Polimórficas en Genes que Codifican ECA. AGT y AT1 Las posiciones polimórficas en los genes que codifican ECA, AGT y AT1 que se abarcan por la invención, se identifican determinado la secuencia de ADN de todo o parte de los genes ECA, AGT y/o AT1 en una multiplicidad de individuos en una población. La determinación de secuencia de ADN puede lograrse usando cualquier método convencional, incluyendo, v.gr., secuenciación química o enzimática. Las posiciones polimórficas de la invención incluyen sin limitación aquellas listados más adelante, cuya numeración corresponde a las secuencias de Genbank listadas en la Tabla 1. (i) ECA: posiciones en la región reguladora (designadas ACR) numeradas 5106, 5349 y 5496; posiciones en la región de codificación (designadas ECA) numeradas 375, 582, 731, 1060, 1215, 2193, 2328, 2741, 3132, 3387, 3503 y 3906; y la posición 1451 como se numera en la entrada de Genbank X62855. (ii) AGT: posiciones en la región reguladora (designada AGR) numerada 395, 412, 432, 449, 692, 939, 1007, 1072, 1204 y 1218; posiciones en la región de codificación (designadas AGT) numeradas 273, 620, 803, 912, 997, 1116 y 1174; y la posición 49 como se numeró en la entrada de Genbank M24688. (iii) AT1: posiciones en la región reguladora (designada ATR) numerada 1427, 1756, 1853, 2046, 2354. 2355 y 2415; y las posiciones en la región de codificación (designada AT1) numerada 449, 678, 1167 y 1271. En las modalidades preferidas, la secuencia en cada una de las posiciones polimórficas anteriores es una de: (i) Región Reguladora de ECA: 5106C. 5106T, 5349A, 5349T, 5496T y 5496C; (ii) Región de Codificación de ECA: 375A, 375C, 582C, 582T, 731A, 731G, 1060G, 1060A, 1215C, 1215T, 2193G, 2193A, 2328A, 2328A, 2328G, 2741G, 2741T, 31.32C, 3132T, 3387T, 3387C, 3503G, 3503C, 3906G y 3906A; y una supresión de nucleótidos 1451-1783 como se numeró en la entrada de Genbank X62855; (iií) Región Reguladora de AGT: 395T, 395A, 412C, 412T, 432G, 432A, 449T, 449C, 692C, 692T, 839G, 839A, 1007G, 1007A, 1072G, 1072A, 1204C, 1204A, 1218A, 1218G; (iv) Región de Codificación de AGT: 273C, 273T, 620C, 620T, 803T, 803C, 912C, 912T, 997G, 997C, 1116G, 1116A, 1174C y 1174A; y A o G en la posición 49 en la entrada de Genbank M24688; (v) Región Reguladora de AT1: 1427A, 1427T, 1756T, 1756A, 1853T, 1853G, 2046T, 2046C, 2354A, 2354C, 2355G, 2355C, 2415A y 2415G; y (vi) Región de Codificación de AT1: 449G, 449C, 678T, 678C, 1167A, 1167G, 1271A y 1271C. Un individuo puede ser homocigoto o heterocigoto para una posición polimórfica particular (ver, por ejemplo Tabla 6 siguiente). Los ejemplos no limitantes de los patrones polimórficos que comprenden uno o más polimorfismos en los genes de ECA, AGT y/o AT1 de acuerdo con la invención incluyen los siguientes, que se correlacionaron una incidencia creciente de signos clínicos de enfermedad cardiovascular: ACR 5349 A/T, AGR 1218 A; ACR 5496 C, AGR 1204 A/C; ACR 5496 C/T, AGR 1218 A, AGT 620 C/T; ECA 2193 A, AGR 1204 C, ECA 2328 G; ECA 2193 A, AGR 1204 A/C; ECA 3387 T, AGR 1218 A; ECA 3387 T, AGT 620 C/T; AGR 1204 A/C, AT1 678 C/T; AGR 1204 A/C, AT1 1271 A/C; ECA 1215 C, AGR 1204 A/C; AGR 1204 A/C, AT1 1167 A, ECA 3906 A/G; AGR 1204 A, AGT 620 C, AT1 1271 A, AT1 1167 A, AGR 395 A/T, AGR 1204 A/C, AGT 620 C/T, AT1 1271 A/C, AT1 1167 A, AGR 395 T; AGR 1204 A/C, AGT 620 C/T, AT1 1271 A/C, AT1 1167 A/G, AGR 395 T; AGR 1204 A, AT1 678 C, AT1 1167 A, AGR 395 A/T; AGR 1204 A/C, AT1 678 C/T, AT1 1167 A, AGR 395 T; AGT 620 C/T, AT1 1271 A/C, AT1 1167 A, AGR 395 T, AGT 620 C/T, AT1 1271 A/C, AT1 1167 A/G, AGR 395 T; AGT 620 C, AT1 1271 A, AT1 1167 A, AGR 395 A/T; AGT 620 C, AT1 678 A, AT1 1167 A, AGR 395 A/T; AGT 620 C/T, AT1 678 C/T; AT1 1167 A, AGR 395 T; ECA 2193 A, AGR 1218 A, AGT 803 A; ECA 2193 A, AGT 620 C/T; ECA 2328 G, AGT 620 C/T; ECA 3387 T, AGR 1204 A/C; ECA 2193 A, ECA 2328 G, AGR 1204 C; y ECA 2193 A/G, AGR 1072 G/G, AT1 1167 A/A. Ácidos Nucleicos Polimórficos Aislados, Sondas y Vectores La presente invención provee ácidos nucleicos aislados que comprenden las porciones polimórficas descritas antes para los genes ECA, AGT y AT1 humanos; vectores que comprende los ácidos nucleicos; y células huésped transformadas que comprenden los vectores. La invención también provee sondas que son útiles para detectar estos polimorfismos. Para practicar la presente invención, se usan muchas técnicas convencionales en biología molecular, microbiología y ADN recombinante. Dichas son técnicas son bien conocidas y se explican completamente en, por ejemplo, Sambrook y otros, 1989, Molecular Cloning: A Laboratoy Manual. Segunda Edición, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York; DNA Cloning: A Practical Approach, Volúmenes I y II, 1985 (D.N. Glover ed.); Oligonucleotide Synthesis, 1984, (M.L. Gaid ed.); Nucleic Acid Hybridization, 1985) (Hames and Higgins); Ausubel y otros, Current Protocols in Molecular Biology, 1997, (John Wiley and Sons); and Methods in Enzymology Vol. 154 y Vol. 155 (Wu y Grossman, y Wu, eds., respectivamente). La inserción en un vector de ácidos nucleicos (normalmente los ADN) que comprenden las secuencias de la presente invención, se logra fácilmente cuando las terminaciones de ambos ADN y el vector comprende un sitio de restricción compatible. Si esto podría usarse, puede ser necesario modificar las terminaciones de los ADN y/o vector digiriendo los excedentes de ADN de un solo hilo posteriores generados por la separación de endonucleasa de restricción con el fin de producir extremos romos o para lograr el mismo resultado llenándolo en las terminaciones de un solo hilo con una polimerasa de ADN apropiada. Alternativamente, cualquier sitio deseado puede producirse, v.gr., ligando las secuencias de nucleótidos (entrelazadores) sobre las terminaciones. Dichos entrelazadores pueden comprender secuencias de oligonucleótidos específicas que definen los sitios de restricción deseados. Los sitos de restricción también pueden generarse mediante el uso de reacción en cadena de polimerasa (RCP). Ver, por ejemplo Saiki y otros, 1988, Science 239:48. El vector separado y los fragmentos de ADN también pueden modificarse si se requieren por la configuración homopolimérica. Los ácidos nucleicos se pueden aislar directamente de células o pueden sintetizarse químicamente usando métodos conocidos. Alternativamente, se puede utilizar el método de reacción en cadena de polimerasa (RCP) para producir los ácidos nucleicos de la invención. Los hilos sintetizados químicamente o el material genómico como patrones. Los iniciadores usados para RCP pueden sintetizarse usando la información de secuencia provista en la presente y además puede diseñarse para introducir sitos de restricción nuevos apropiados, si es conveniente, para facilitar la incorporación en un vector dado para la expresión recombinante. Los ácidos nucleicos de la presente invención pueden flanquearse por las secuencias de genes de ECA, AGT, o AT1 nativos o pueden asociarse con secuencias heterólogas, incluyendo promotores, mejoradores, elementos de respuesta, secuencias de señal, secuencias de poliadenilación, intrones, regiones que no codifican 5' y 3'. Los ácidos nucleicos también pueden modificarse mediante muchos medios conocidos en la materia. Los ejemplos no limitantes de dichas modificaciones incluyen metilación, ":encapsulación", substitución de uno o más de los nucleótidos presentes en la naturaleza con un análogo, modificaciones de internucleótidos tales como, por ejemplo, aquellos con enlaces no cargados (v.gr., fosfonatos de metilo, fosfotriesteres, fosforoamidatos, carbamatos, etc.,) y con ligadores cargados (v.gr., fosforotioatos, fosforoditioatos, etc,). Los ácidos nucleicos pueden contener una o más porciones ligadas covalentemente, tales como, por ejemplo, proteínas (v.gr., nucleasas, toxinas, anticuerpos, péptidos de señal, poli-L-lisna, etc.), intercaladores (v.gr., acridina, psoralen, etc), quelantes (v.gr., metales, metales radioactivos, hierro, metales oxidantes, etc), y alquilantes. También se incluyen los ANP. El ácido nucleico se puede derivatizar mediante la formación de un fosfotriéster de metilo o etilo o una ligadura de fosforamidato de alquilo. Además, las secuencias de ácidos nucleicos de la presente invención también se pueden modificar con una etiqueta capaz de proveer una señal detectable, ya se directa o indirectamente. Las etiquetas ilustrativas incluyen radioisótopos, moléculas fluorescentes, biotina y similares. La invención también provee vectores de ácidos nucleicos que comprenden las secuencias de genes derivados de AGT y AT1 descritos o derivados o fragmentos de los mismos. Un gran número de vectores, incluyendo vectores de plásmido y fúngicos, se ha descrito para la replicación y/o supresión en una variedad de huéspedes eucarióticos y procarióticos, y se pueden usar para terapia de genes así como para la clonación sencilla o expresión de proteínas. Los ejemplos no limitantes de cualquier vector incluyen, sin limitación, plásmidos de pUC, plásmidos pET (Novagen, Inc., Madison, Wl) o pRSET o pREP (Invitrogen, San Diego, CA) y muchas células huésped apropiadas, usando métodos descritos citados en la presente o de alguna manera conocidos por los expertos en la técnica relevante. La elección particular del vector/huésped no es crítica para la práctica de la invención. Las células huésped adecuadas pueden transformarse/transfectarse/infectarse según sea apropiado, mediante cualquier método incluyendo electroporación, absorción de ADN mediada por CaCI2, infección fúngica o viral, microinyección, microproyección u otros métodos establecidos. Las células huésped apropiadas incluyeron bacteria, arquebacterias, hongos, especialmente levaduras y células de plantas y animales, especialmente células de mamíferos. Un gran número de regiones reguladores de iniciación y terminación de transcripción se han aislado y se ha mostrado que son efectivas en la transcripción y traducción de proteínas heterólogas en varios huéspedes. Los ejemplos de estas regiones, métodos de aislamiento, forma de manipulación, etc., son conocidos en la materia. Bajo condiciones de expresión apropiadas, se pueden utilizar células huésped como una fuente de péptidos y polipéptidos derivados de ECA, AGT o AT1 producidos recombinantemente. Los ácidos nucleicos que codifican secuencias de genes derivados de ECA, AGT o AT1, también pueden introducirse en células mediante eventos de recombinación. Por ejemplo, dicha secuencia puede introducirse en una célula y así efectuar la recombinación homologa en el sitio de un gen endógeno o una secuencia con identidad substancial al gen. También se pueden utilizar otros métodos basados en recombinación tales como recombinaciones no homologas o supresión de genes endógenos por recombinación homologa. Los ácidos nucleicos de la presente invención se usan como sonadas para la detección de polimorfismos genéticos y como patrones para la producción recombinante de péptidos o polipéptídos derivados de ECA, AGT o AT1 normales o variantes. Las sondas de acuerdo con la presente invención comprenden sin limitación ácidos nucleicos aislados de aproximadamente 10 - 10 pb, preferiblemente de 15-76 pb y más preferiblemente 17-25 pb de longitud, los cuales se hibridizan a una alta restricción a una o más de las secuencias polimórficas derivadas de genes de ECA, AGT, o AT1 descritas en la presente o a una secuencia inmediatamente adyacente a una posición polimórfica. Además, en algunas modalidades se puede utilizar una secuencia de genes de longitud completa como una sonda. En una serie de modalidades, las sondas expanden las posiciones polimórficas en los genes ECA, AGT o AT1 descritos antes. En otra serie de modalidades, las sondas corresponden a secuencias inmediatamente adyacente a las posiciones polimórficas. Polipéptidos de ECA, AGT y AT1 Polimórficos y Anticuerpos Específicos para Polimorfismos La presente invención abarca péptidos y polipéptidos aislados que codifican ECA. AGT, AT1 que comprenden posiciones polimórficas descritas antes. En una modalidad preferida, los péptidos y polipéptidos son blancos de tamizado útiles para identificar fármacos cardiovasculares. En otras modalidades preferidas, los péptidos y polipéptidos son capaces de producir anticuerpos en un animal huésped adecuado que reacciona específicamente con un polipéptido que comprende la posición polimórfica y la distingue de otros polipéptidos que tienen una secuencia diferente a la posición. Los polipéptidos de acuerdo con la presente invención, preferiblemente tienen cinco o más residuos de longitud, preferiblemente, por lo menos, quince residuos. Los métodos para obtener dichos polipéptidos se describen más adelante. Muchas técnicas convencionales en la bioquímica de proteína e inmunología se utilizan. Dichas técnicas son bien conocidas y se explican en Immunochemical Methods in Cell and Molecular Biology, 1987 (Mayer and Waler, eds; Academic Press, London); Scopes, 1987, Protein Purification: Principies and Practice, Segunda Edición (Springer-Verlag, N.Y.) y Handbook of Experimental Immunology, 1986, Volúmenes I - 1 V (Weir and Blackwell eds). Los ácidos nucleicos que comprende secuencias de codificación de proteínas pueden usarse para dirigir la expresión recombinante de polipéptidos derivados de ECA, AGT o AT1 en células intactas o sistemas de traducción libres. El código genético conocido, concrecionado si se desea para la expresión más eficiente en un organismo huésped dado, se puede usar para sintetizar oligonucleótidos que codifican las secuencias de aminoácidos deseadas Los polipéptidos pueden aislarse de células humanas, o de organismos heterólogos o células (incluyendo, pero no limitado a, bacterias, hongos, insectos, plantas y células de mamíferos) en las cuales las secuencias de codificación de proteínas apropiadas se han introducido y expresado Además, los polipéptidos pueden ser parte de las proteínas de fusión recombinantes Los péptidos y polipéptidos pueden sintetizarse químicamente mediante procedimientos automáticos comercialmente disponibles, incluyendo, sin limitación, síntesis de fase sólida exclusivos, métodos de fase sólida parcial, condensación de fragmento o síntesis de solución clásica Los polipéptidos se preparan preferencialmente mediante síntesis de péptidos de fase sólida como se describió por Merpfield, 1963, J Am Chem Soc 852149 Los métodos para la purificación de polipeptidos son bien conocidos en la materia, incluyendo sin limitación, electrofóresis de gel de disco preparativa, enfoque isoeléctrico, CLAR, CLAR de fase inversa, filtración de gel, intercambio iónico y cromatografía de división y distribución a contracorriente Para algunos propósitos, es preferiblemente producir el pohpéptido en un sistema recombinante en el cual la proteina contiene una etiqueta de secuencia adicional que facilita la purificación tal como, pero no limitado a, una secuencia de polihistidina El polipeptido puede purificarse entonces a partir de un lisato crudo de la célula huésped por cromatografía sobre una matriz de fase solida Alternativamente, los anticuerpos producidos contra ECA, AGT o AT1 o contra péptidos derivados de los mismos, se pueden usar como reactivos de purificación. Son posibles otros métodos de purificación. La presente invención también abarca derivados y homólogos de los polipéptidos. Para algunos propósitos, las secuencias de ácidos nucleicos codifican los péptidos que pueden alterarse por substituciones, adiciones o supresiones que proveen moléculas funcíonalmente equivalentes, es decir, variantes conservadoras de la función. Por ejemplo, uno o más residuos de aminoácidos dentro de la secuencia pueden substituirse por otros aminoácidos de propiedades similares tales como, por ejemplo aminoácidos cargados positivamente (arginina, lisina e histidina); aminoácidos cargados negativamente (aspartato y glutamato); aminoácidos neutros polares; y aminoácidos no polares. Los polipéptidos aislados pueden modificarse, por ejemplo, mediante fosforilación, sulfonación, acilación u otras modificaciones de proteína. También se pueden modificar con una etiqueta capaz de proveer una señal detectable, ya sea directa o indirectamente, incluyendo, pero no limitado a, radioisótopos y compuestos fluorescentes. La invención también abarca anticuerpos que reconocen específicamente las posiciones polimórficas de la invención y distinguen un péptido o polipéptido que contiene un polimorfismo particular de uno que contiene una secuencia diferente a esta posición. Dichos anticuerpos específicos para la posición polimórfica de acuerdo con la presente invención, incluye anticuerpos policlonales y anticuerpos monoclonales. Los anticuerpos se pueden producir en un animal huésped, por inmunización con componentes inmnunogénicos derivados de ECA, AGT o AT1 o se pueden formar o inmunización in vitro de células inmunes. Los componentes inmunogénicos usados para dar los anticuerpos pueden aislarse de células humanas o producirse en sistemas recombinantes. Los anticuerpos también se pueden producir en sistemas recombinantes programados con ADN de codificación de anticuerpos apropiados. Alternativamente, los anticuerpos pueden constituirse por reconstitución bioquímica de cadenas pesadas y ligeras purificadas. Los anticuerpo incluyen anticuerpos híbridos, (es decir, que contienen dos grupos de combinaciones de cadena pesada/cadena ligera, cada uno de los cuales reconoce un antígeno diferente), anticuerpos quiméricos (es decir, en los cuales ya sea en las cadenas pesadas, cadenas ligeras o ambas, son proteínas de fusión) y anticuerpos univalentes (es decir comprendidos de un complejo de cadena pesada/cadena ligera unida a la región constante de una segunda cadena pesada). También se incluyen los fragmentos de Fab, incluyendo fragmentos de Fab' y de F(ab)2 de anticuerpos. Los métodos para la producción de todos los tipos anteriores de anticuerpos y derivado son bien conocidos en la materia y se tratan en mayor detalle enseguida. Por ejemplo, las técnicas para producir y procesar antisueros policlonales se describen en Mayer and Walek, 1987, Inmunochemical Methods in Cell and Molecular Biology, (Academic Press, London). La metodología general para formar anticuerpos monoclonales por hibridomas es bien conocida. Las líneas celulares de producción de anticuerpos inmortales pueden crearse por fusión de células y también por otras técnicas tales como transformación directa de linfocitos B con ADN oncogénico, o transfección con virus de Epstein-Barr. Ver, por ejemplo Schreier y otros, 1980, Hybridoma Techniques; Patentes de E.U.A nos. 4,341,761; 4,399,121; 4,427,783; 4,444,887; 4,466,917; 4,472,500; 4,491,631; y 4,493,890. Los paneles de anticuerpos monoclonales producidos contra epítopes derivados de CE, AGT, o AT1 se pueden tamizar para varias propiedades; es decir para afinidad de isotipo, epítope, etc. Los anticuerpos de esta invención pueden purificarse mediante métodos normales, incluyendo pero no limitado a electrofóresis de gel de disco preparativos, enfoque isoeléctrico, CLAR, CLAR de fase inversa, filtración de gel, intercambio iónico y cromatografía de división y distribución de contracorriente. Los métodos de purificación para anticuerpos se describen, v.gr., en he Art. of Antibody Purification. 1989, Amicon División, W.R. Grace & Co. Los métodos de purificación de proteína general se describen en Protein Purification: Principies and Practice, R.K. Scopes, Ed., 1987, Springer-Verlag, New York, NY. Los métodos para determinar la capacidad inmunogénica de las secuencias descritas y las características de los anticuerpos específicos para secuencia resultantes y célula inmunes son bien conocidos en la materia. Por ejemplo, los anticuerpos producidos en respuesta a un péptido que comprende la secuencia polimórfica particular pueden probarse para su capacidad de reconocer específicamente la secuencia polimórfica, es decir para unirse diferencialmente a un péptido o polipéptido que comprende la secuencia polimórfica y por lo tanto distinguirla de un péptido o polipéptido similar que contiene una secuencia diferente en la misma posición. Métodos y Equipos de Diagnóstico La presente invención provee equipos para la determinación de la secuencia en las posiciones polimórficas dentro de los genes ECA, AGT y AT1 en un individuo. Los equipos comprenden un medio para determinar la secuencia en una o más posiciones polimórficas y opcionalmente pueden incluir datos para el análisis de patrones polimórficos. La media para la determinación de la secuencia puede comprender reactivos basados en ácidos nucleicos e inmunológicos adecuados (ver enseguida). Preferiblemente, los equipos también pueden comprender soluciones reguladoras de pH adecuadas, reactivos de control en donde es apropiado y direcciones para determinar la secuencia en una posición polimórfica. Los equipos también pueden comprender datos para la correlación de patrones polimórficos particulares con regímenes de tratamientos convenientes u otros Indicadores. Los métodos y equipos de diagnóstico basados en ácidos nucleicos La invención provee métodos basados en ácidos nucleicos para detectar patrones polimórficos en una muestra biológica. La secuencia en posiciones polimórficas particulares en los genes que codifican ECA, AGT, y/o AT1 se determina utilizando medios adecuados conocidos en la materia, incluyendo sin limitación, hibridización con sondas específicas para polimorfismo y secuenciación directa. La presente invención también provee equipos adecuados para aplicaciones de diagnóstico basadas en ácidos nucleicos. En una modalidad, los equipos de diagnostico incluyen diferentes componentes: (i) Sonda de ADN: La sonda de ADN puede marcarse previamente; alternativamente, la sonda de ADN puede ser no marcada y los ingredientes para marcado pueden incluirse en el equipo de recipientes separados; y (ii) Reactivos de hibridización: El equipo también puede contener otros reactivos empacados adecuadamente materiales requeridos para el protocolo de hibridización particular, incluyendo matrices de fase sólida, si es aplicable y son normales. En otra modalidad, los equipos de diagnóstico incluyen: (i) Iniciadores de determinación de secuencia: Los iniciadores de secuencia pueden marcarse previamente o pueden contener una purificación de afinidad o porción de unión: y (ii) Reactivos de determinación de Secuencia: El equipo también puede contener otros reactivos empacados adecuadamente y materiales requeridos para el protocolo de secuenciación particular. En una modalidad preferida, el equipo comprende un panel de iniciadores de secuenciación, cuyas secuencias corresponden a las secuencias adyacentes a las siguientes posiciones polimórficas: ECA 2193 A/G, AGR 1072 G/G, AT1 1167 A/A; así como un medio para detectar la presencia de cada secuencia polimórfica. Métodos y equipos de diagnóstico basados en anticuerpos La invención también provee métodos basados en anticuerpos para detectar patrones polimórficos en una muestra biológica. Los métodos comprenden ios pasos de: (i) poner en contacto una muestra con una o más preparaciones de anticuerpos, en donde cada preparación de anticuerpos es específica para una forma polimórfica particular de ECA, AGT o AT1, bajo condiciones en las cuales se puede formar un complejo de antígeno-anticuerpo estable entre los componentes de anticuerpos y antigénicos en la muestra; y (ii) detectar cualquier complejo de antígeno-anticuerpo formado en el paso (i) usando cualquier medio adecuado conocido en la materia, en donde la detección de un complejo indica la presencia de la forma polimórfica particular en la muestra. Normalmente, el inmunoanálisis utiliza un anticuerpo marcado o un componente antigénico marcado (v.gr., que compite con el antígeno en la muestra para unirse al anticuerpo). Las marcas adecuadas incluyen, sin limitación, moléculas basadas en enzima, fluorescentes, quimioluminiscentes, radioactivas, o de colorantes. Los análisis que amplifican las señales para la sonda también son conocidos, tales como, por ejemplo, los que utilizan biotina y avidina e inmunoanáiisis marcado con enzima, tales como análisis de ELISA.

La presente invención también provee equipos adecuados para aplicaciones de diagnostico basadas en anticuerpo. Los equipos de diagnóstico normalmente incluyen uno o más de los siguientes componentes: (i) Anticuerpos específicos para polimorfismo: Los anticuerpos pueden marcarse previamente; alternativamente, el anticuerpo puede ser no marcado y los ingredientes para marcado pueden incluirse en el equipo en recipientes separados, o se provee un anticuerpo secundario marcado, y (ii) Componentes de reacción: El equipo también puede contener otros reactivos empacados adecuadamente y materiales requeridos para el protocolo de inmunoanálisis particular, incluyendo matrices de fase sólida, si es aplicable y normas. Los equipos referidos antes pueden incluir instrucciones para llevar a cabo la prueba. Además, en las modalidades preferidas, los equipos de diagnóstico se pueden adaptar a la operación de un alto número de pasos y/o automática. Blancos y Métodos de Tamizado de Fármacos De acuerdo con la presente invención, las secuencias de nucleótidos derivadas de genes que codifican ECA, AGT, y AT1 y secuencias de péptidos derivadas de los polipéptidos de ECA, AGT y AT1, particularmente aquellos que contienen una o más secuencias polimórficas. comprenden blancos útiles para identificar fármacos cardiovasculares, es decir, compuestos que son efectivos para tratar uno o más síntomas clínicos de enfermedad cardiovacular. Los blancos de fármacos incluyen sin limitación (i) ácidos nucleicos aislados derivados de los genes de codificación de ECA, AGT y AT1 y (ii) péptidos y polipéptidos aislados derivados de polipéptidos de ECA, AGT y AT1, cada uno de los cuales comprende una o más posiciones polimórficas. Métodos de tamizado in vitro: En una serie de modalidades, un ácido nucleico aislado que comprende una o más posiciones polimórficas se probaron in vitro para su capacidad de unirse a los compuestos de prueba en una forma específica para secuencia. Los métodos comprenden: (i) proveer un primer ácido nucleico que contiene una secuencia particular en una posición polimórfica y un segundo ácido nucleico cuya secuencia es idéntica a la del primer ácido nucleico excepto por una secuencia diferente en la misma posición polimórfica. (ii) poner en contacto los ácidos nucleicos con una multiplicidad de compuestos de prueba bajo condiciones apropiadas para la unión; y (¡ii) identificar los compuestos que se unen selectivamente a la primera o segunda secuencia de ácidos nucleicos. La unión selectiva como se usa en la presente se refiere a cualquier diferencia mensurable en cualquier parámetro de unión, tal como, por ejemplo, afinidad de unión, capacidad de unión, etc.

En otra serie de modalidades, un péptido o polipétido aislado que comprende una o más posiciones polimórficas se prueba in vitro para su capacidad de unirse a los compuestos de prueba de una forma específica para secuencia. Los métodos de tamizado implican: (i) proveer un primer péptido o polipéptido que contiene una secuencia particular en una posición polimórfica y un segundo péptido o polipéptido cuya secuencia es idéntica al primer péptido o polipéptido excepto por una secuencia diferente en la misma posición polimórfica; (ii) poner en contacto los polipéptidos con una multiplicidad de compuestos de prueba bajo condiciones apropiadas para la unión; y (iíi) identificar los compuestos que se unen selectivamente a una de las secuencias de ácidos nucleicos. Las modalidades preferidas, los protocolos de tamizado de un alto contenido de paso se usan para investigar un gran número de compuestos de prueba para su capacidad de unirse a los genes o péptidos descritos antes en una forma específica para secuencias. Los compuestos de prueba se tamizan a partir de grandes bancos de compuestos sintéticos o naturales. Numerosos medios se utilizan actualmente para la síntesis aleatoria y dirigida de compuestos basados en sacáridos, péptidos. y ácidos nucleicos. Los bancos de compuestos sintéticos están comercialmente disponibles de Maybridge Chemical Co. (Trevillet, Cornwall, UK), Comgenex (Princeton, NJ), Brandon Associates (Merrimack, NH), and Microsource (New Milford, CT). Alternativamente, los bancos y compuestos naturales en forma de bacterias, hongos, plantas y extractos animales están disponibles de v.gr., Pan Laboratories (Bothell, WA) o MycoSearch (NC) o se pueden producir fácilmente. Adicionalmente, los bancos naturales son producidos sintéticamente son compuestos que se modifican fácilmente a través de medios químicos, físicos y bioquímicos convencionales. Métodos de tamizado in vivo: Las células intactas o animales completos que expresan variantes polimórficas de genes que codifican ECA, AGT y/o AT1 se pueden usar los métodos de tamizado para identificar fármacos cardiovasculares candidatos. En una serie de modalidades, se establece una línea celular permanente de un individuo que exhibe un patrón polimórfico particular. Alternativamente, las células (incluyendo sin limitación células de mamíferos, insectos, levaduras o de bacteria) se programan para expresar un gen que comprende una o más secuencias polimórficas mediante la introducción de un ADN apropiado. La identificación de compuestos candidatos puede lograrse usando cualquier análisis adecuado, incluyendo sin limitación (i) análisis para medir la unión selectiva de los compuestos de prueba a variantes polimórficas particulares de ECA, AGT, o AT1; (¡i) análisis para medir la capacidad de por lo menos un compuesto para modificar (es decir, inhibir o aumentar) la cantidad mensurable o función de ECA, AGT o AT1; y (iii) análisis que mide la capacidad de un compuesto para modificar (es decir, inhibir o aumentar) la actividad transcripcíonal de secuencias derivadas de las regiones promotoras (es decir reguladoras) de genes de ECA, AGT o AT1. En otra serie de modalidades, los animales transgénicos creados en los cuales (i) uno o más genes de ECA, AGT o AT1 húmanos que tienen diferentes secuencias y posiciones polimórficas particulares se insertan establemente en el genoma del animal transgénico; y/o (ii) los genes de CE, AGT y/o AT1 endógenos se inactivan y reemplazan con los genes ECA, AGT y/o AT1 humanos que tienen diferentes secuencias en posiciones polimórficas. Ver, por ejemplo Coffman, Semin, Nephrol. 1_7:404, 1997; Esther y otros, Lab. Invst. 74/953, 1996; Murakami y otros, Blood Press. Suppl. 2.:36, 1996. Dichos animales pueden tratarse con compuestos candidatos y monitorearse para uno o más marcadores clínicos de estado cardiovascular. Los siguientes se pretende que sean ejemplos no limitantes de la invención. Ejemplo 1:Métodos para la Identificación de Posiciones Polimórficas en Genes Humanos que Codifican ECA, AGT y AT1 Los siguientes estudios se llevaron a cabo para identificar residuos polimórficos dentro de los genes que codifican ECA, AGT y AT1. Las muestras de ADN se obtuvieron de 277 individuos. Los individuos fueron hombres Caucásicos nacidos en Uppsala, Suecia entre 1920 y 1924. Los individuos se seleccionaron para la población de prueba basada en su historia médica, es decir, eran (i) saludables, sin signos y enfermedad cardiovascular (1010); o (ii) habían sufrido de un infarto al miocardio agudo (68), infarto al miocardio inactivo (34), apoplejía (18), apoplejía e infarto al miocardio agudo (19) o presión sanguínea alta a la edad de los 50 años (39). Las muestras de ADN se obtuvieron de cada individuo. En análisis de secuencia de ADN se llevó a cabo mediante: (i) amplificación de fragmentos cortos de cada uno de los genes de ECA, AGT y AT1 usando reacción en cadena de polimerasa (RCP) y (ii) secuenciando los fragmentos amplificados. Las secuencias obtenidas de cada individuo se compararon entonces con las secuencias genómicas de ECA, AGT y AT1 (ver Tabla 1). (i) Amplificación: las reacciones de RCP emplearon los iniciadores mostrados en la siguiente Tabla 2. r Oí O n n Tabla 2 o en on Oí r to n o en en en O en en ) en o en en 00 r en O en en eo en o en en en o Cuando se indica, los iniciadores se modifican en uno de los siguientes: (i) una molécula de biotina se conjugó a la terminación 5' de la secuencia indicada (B); (ii) una secuencia de nucleótidos derivada de M13, 5'-CAGGAAACAGCTATGACT-3', se agrega a la terminación 5' de la secuencia indicada (MT); o (iíi) la secuencia 5'-AGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGT-3' se agregó a la posición 5' de la secuencia indicada (T=Tail). Los nucleótidos se enumeraron de acuerdo con las secuencias Genbank listadas en la Tabla 1 en donde se indicó. Cuando las secuencias implicadas no están públicamente disponibles, la numeración fue como en los siguientes ejemplos: la designación "i-4: 1-200" indica que la secuencia del iniciador está localizada dentro de la secuencia extendiéndose 200 pb corriente arriba del primer nucleótido de codificación del exón 4. De manera similar, la designación "¡ + 4: 1-200" indica que la secuencia del iniciador está localizada dentro de la secuencia que se extiende desde el nucleótido, es decir localizada inmediatamente corriente abajo de por lo menos un nucleótido de codificación del exón 4 corriente abajo para 200 pb. En cada caso, la ubicación específica de la secuencia del iniciador está indicada en la Tabla 2 en la columna marcada "Nucleótidos". Los componentes de reacción usados para RCP se describen en la Tabla 3 siguiente: ro rO en o en en Tabla 3 en r » en o en en en en O en en en ^ ro en o en en en. en r rO en O en en Las condiciones de reacción usadas para RCP se describen en la Tabla 4 siguiente. Tabla 4 en O en en en r en o en en Todas las temperaturas se dan en grados Celsius. *) indica las temperaturas iniciales (°C) y tiempos del programa por omisión **) indica la temperatura (°C) del programa por omisión ***) indica el número de ciclos del programa por omisión, haciendo referencia a la sección del programa de RCP en donde se emplean tres diferentes temperaturas. en oo Cualquiera de las diferencias se indican en "Modificaciones" en la Tabla 5 siguiente: Los fragmentos amplificados se describen en la Tabla 5 enseguida con respecto a los iniciadores y condiciones de reacción de RCP usadas mediante la amplificación. Tabla 5 en O en o en en cr K) en o en en O) o ro ro en o en en c» ro ro en o en en to.

Todos los productos de RCP (excepto los fragmentos de ACEDI, AT1-spec. 1 y AT1-spec.2) se sometieron a secuenciación de fase sólida de acuerdo con el protocolo comercialmente disponible de Pharmacia Biotech. Las reacciones de secuenciación se llevaron a cabo con un iniciador de secuenciación que tiene una secuencia complementaria la secuencia de "Cola" previamente descrita en la Tabla 2. La secuencia de nucleótidos del iniciador de secuenciación fue 5'-CGACGTTGTAAAACGACGGCCAGT-3', y el iniciador se marcó fluorescentemente con una molécula Cy-5 sobre el nucleótido 50. Las posiciones se llevaron a cabo en una variación genética, se identificaron mediante la determinación de la secuencia de nucleótidos mediante el uso del sistema ALFexpress™ comercialmente disponible de Pharmacia Biotech. La detección del fragmento de ACEDI se llevó a cabo analizando los tamaños de los fragmentos amplificados por electroforesis de gel, en donde la presencia de un producto de RCP corto (192 pares de base) indicó el alelo D y un producto de RCP más largo (479 pares de base) indicó el alelo I. La presencia de las bandas indicó un heterocigoto para los dos alelos. La detección de la reacción especifica de alelo de la posición AT1-1271 se llevo a cabo por separado operando las reacciones de RCP de los dos alelos sobre la misma muestra y comparando los tamaños de los fragmentos amplificados. Un producto de RCP de 501 pares de base podría estar presente como un control en ambas operaciones de paralelo. Mientras la presencia de un producto de RCP de 337 pares de base en la reacción designada AT1-espec. 1 indicó la presencia de una A en esta posición. La presencia de un producto de RCP de 378 pares de base en la reacción designada AT1-espec. 2 indicó una C en esta posición. Si el producto de RCP corto está presente en ambas reacciones, el individuo es un heterocigoto para A y C. Resultados: Los resultados descritos antes resultaron en la identificación de las posiciones polimórficas dentro de los segmentos reguladores y codificación/segmentos de intrones de genes humanos que codifican ECA, AGT y AT1. Se han encontrado las posiciones polimórficas, los nucleótidos de variantes en cada una de las posiciones y el fragmento de RCP en el cual el polimorfismo se identificó, se muestra en la Tabla 6 siguiente. También se muestran las frecuencias de cada genotipo en una población de 90 individuos. Expresados como el porcentaje del estudio de la población que tienen el genotipo. También se indican los polimorfismos que resultan en aminoácidos alternos en ECA, AGT y AT1. Como se usa en seguida en la presente, las designaciones "AGR", "ACR" y "ATR" se refieren a regiones reguladoras de los genes de AGT, ECA y AT1, respectivamente; y las designaciones "AGT", "ECA" y "AT1", se refieren a las regiones de codificaciones de los genes AGT, ECA y AT1. ro ro en o en en Tabla 6 05 Oí ro ro en o en en ro ro en o en en s> oo- Un subgrupo de estas posiciones polimórficas se analizaron adicionalmente en 187 individuos adicionales. La Tabla 7 muestra las posiciones polimórficas, las secuencias en estas posiciones y las frecuencias de genotipo para cada posición en una población de 277 como se describe en el Ejemplo 1 anterior. Tabla 7 Ejemplo 2:Correlación de Patrones Polimórficos con Enfermedad Cardiovascular Las posiciones polimórficas identificadas como en el Ejemplo 1 se correlacionan con los siguientes marcadores de estado cardiovascular presentes en el estudio de población: infarto al miocardio (Ml); apoplejía; y presión sanguínea alta. Los patrones polimórficos, es decir, combinaciones de secuencias en las posiciones polimórficas particulares, que muestran una correlación estadísticamente significativa con uno o más de estos marcadores se muestran enseguida. ACR 5349 A/T, AGR 1218 A ACR 5496 C, AGR 1204 A/C ACR 5496 C/T, AGR 1218 A, AGT 620 C/T ECA 2193 A, AGR 1204 C, ECA 2326 G ECA 2193 A, AGR 1204 A/C ECA 3387 T, AGR 1218 A ECA 3387 T, AGT 620 C/T AGR 1204 A/C, AT1 678 C/T AGR 1204 A/C, AT1 1271 A/C ECA 1215 C, AGR 1204 A/C AGR 1204 A/C, AT1 1167 A, ECA 3906 A/G AGR 1204 A, AGT 620 C, AT1 1271 A, AT1 1167 A, AGR 395 A/T AGR 1204 A/C, AGT 620 C/T, AT1 1271 A/C, AT1 1167 A, AGR 395 T AGR 1204 A/C, AGT 620 C/T, AT1 1271 A/C, AT1 1167 A/G, AGR 395 T Resumen de los tres patrones polimórficos previos (que implican las mismas posiciones polimórficas AGR 1204 A, AT1 678 C, AT1 1167 A, AGR 395 A/T AGR 1204 A/C, AT1 678 C/T, AT1 1167 A, AGR 395 T Resumen de los dos patrones polimórficos previos AGT 620 C/T, AT1 1271 A/C, AT1 1167 A, AGR 395 T AGT 620 C/T, AT1 1271 A/C, AT1 1167 A/G, AGR 395 T AGT 620 C, AT1 1271 A, AT1 1167 A, AGR 395 A/T AGT 620 C, AT1 1271 A, AT1 1167 A, AGR 395 A/T Resumen de los tres patrones polimórficos previos AGT 620 C, AT1 678 A, AT1 1167 A, AGR 395 A/T AGT 620 C/T, AT1 678 C/T; AT1 1167 A, AGR 395 T Resumen de los dos patrones polimórficos previos: ECA 2193 A, AGR 1218 A, AGT 803 A ECA 2193 A, AGT 620 C/T ECA 2328 G, AGT 620 C/T ECA 3387 T, AGR 1204 A/C Ejemplo 3:Correlación Entre un Patrón Polimórfico Específico y Respuesta de Tratamiento El siguiente estudio se llevó a cabo para definir los patrones polimórficos en los genes ECA, AGT y/o AT1 humanos para predecir la eficacia de tratamientos para enfermedad cardiovascular. Se estudiaron dos grupos de pacientes hipertensos, 41 en el primer grupo y 20 en el segundo grupo. Los grupos se analizaron independientemente y en combinación. Los pacientes en esta población se trataron con uno de los siguientes cinco inhibidores de ECA: Captopríl, Trandolapril, Lisinopirl, Fosinopril o Enalapriil. El efecto de los fármacos sobre el medio de presión sanguínea arterial se cuantificó. El medio de presión sanguínea arterial se definió como 2/3 de la presión sanguínea diastólica + 1/3 de presión sanguínea sistólica. Los individuos también se categorizaron como "respondedores altos", es decir, aquellos que exhiben una disminución de mas de 16 mm Hg durante el tratamiento con un fármaco inhibidor de ECA y "respondedores bajos", es decir, aquellos que no exhiben una disminución demás de 16 mm Hg. Un patrón polimórfico particular, ECA 2193 A/G, AGR 1072 G/G, AT1 1167 A/A, que está presente en 51% del primer estudio de la población, discriminado entre los respondedores altos y los respondedores bajos. En el segundo grupo de 20 pacientes, el patrón fue menos prevaleciente (25%), pero la correlación con presión sanguínea inferior fue evidente. Los individuos que tienen este patrón polimórfico (designado "1" enseguida) experimentó una disminución más grande en la presión sanguínea que aquellos que tienen este patrón polimórfíco (designado "0" enseguida).

Además, la distribución de los respondedores altos y los respondedores bajos (como se definió antes) fue de la siguiente manera: Tomados juntos, los resultados de los dos grupos indican que la presencia de este patrón polimórfico se correlaciona con una disminución incrementada de 6.4-7.3 mm Hg en relación con individuos que no tienen este patrón polimórfico. La prevalencia de este patrón polimórfico fue de 41% de esta población hipertensa. Esto sugiere que la prueba de este patrón polimórfico en pacientes hipertensos, seguido por la prescripción de los inhibidores de ECA únicamente en aquellos pacientes que tienen este patrón polimórfico, podría incrementar el régimen de respuesta de 43% (en una población hipertensa en general) a 76% en población hipertensa seleccionada de acuerdo con los métodos de la invención.

Claims (37)

1. REIVINDICACIONES 1. Un método para evaluar la respuesta a un régimen de tratamiento de un síndrome cardiovascular en un individuo humano, cuyo método comprende comparar un patrón polimórfico establecido en una o más posiciones polimórficas dentro de uno o más de los genes ECA, AGT o AT1 de dicho individuo con un patrón polimórfico de las mismas posiciones polimórficas de humanos que tienen una respuesta conocida al régimen de tratamiento cardiovascular.
2. 2. Un método de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el régimen de tratamiento es una alteración en dieta, esto de vida y/o ejercicio; una técnica quirúrgica invasiva o no invasiva; o una intervención farmacéutica.
3. 3. Un método de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el síndrome se selecciona del grupo que consiste de infarto al miocardio, hipertensión, ateroclerosis y apoplejía.
4. 4. Un método de acuerdo con la reivindicación 2, en donde el régimen de tratamiento es una intervención farmacéutica.
5. 5. Un método de acuerdo con la reivindicación 4, en donde el régimen de tratamiento comprende administrar un fármaco cardiovascular seleccionado del grupo que consiste de inhibidores de ECA, antagonistas receptores de angiotensina II, diuréticos, antagonistas alfa-adrenoreceptores, glicósídos cardíacos, inhibidores de fosfodiesterasa, antagonistas beta-adrenoreceptores, bloqueadores de canal de calcio, inhibidores de reductasa de HMG- CoA, bloqueadores de receptor de ¡midizolina, bloqueadores de receptor de endoteiio y nitritos orgánicos.
6. 6. Un método de acuerdo con la reivindicación 5, en donde las posiciones polimórficas comprenden ECA 2193, AGR 1072 y AT1 1167.
7. 7. Un método de acuerdo con la reivindicación 6, en donde el patrón polimórfíco comprende ECA 2193 A/G, AGR 1072 G/G y AT1 1167 A/A.
8. 8. Un método de acuerdo con la reivindicación 1, para predecir la respuesta de un individuo que sufre de un síndrome cardiovascular para el tratamiento con un inhibidor de ECA, cuyo método comprende comparar el patrón polimórfico establecido determinando la secuencia de (a) el gen de ECA en la posición 2193 en la región de codificación; (b) el gen de AGT en la posición 1072 en la región reguladora; y (c) el gen AT1 en la posición 1167 en la región de codificación con los mismos patrones polimórficos de seres humanos que exhiben diferentes respuestas al inhibidor de ECA.
9. 9. Un método de acuerdo con la reivindicación 8, en donde el patrón polimórfico comprende ECA 2193 A/G, AGR 1072 G/G, AT1 1167 A/A.
10. 10. Un método de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la posición polimórfica se selecciona del grupo que consiste de posiciones en la región reguladora de ECA numerada 5160, 5349 y 5496; posiciones en la región de codificación de ECA numerada 376, 582, 731. 1060, 1215, 2193, 2328, 2741, 3132, 3387, 3503 y 3906; posición 1451 en el gen de ECA como es en la entrada de Genbank X62866; posiciones en la región reguladora de AGT numerada 395, 412, 432, 449, 692, 839, 1007, 1072, 1204, y 1218; posiciones en la región de codificación de AGT numerada 273, 620, 803, 912, 997, 1116 y 1174; posición 49 en el gen AGT como se numera en la entrada de Genbank M24688; posiciones en la región reguladora AT1 numerada 1427, 1756, 1853, 2046, 2354, 2356 y 2415; posiciones en la región de codificación AT1 numerada 449, 678, 1167 y 1271, y combinaciones de cualquiera de los anteriores.
11. 11. Un método de acuerdo con la reivindicación 10, en donde los patrones polimórficos se seleccionan del grupo que consiste de: ACR 5349 A/T, AGR 1218 A; ECA 5496 C, AGR 1204 A/C; ACR 5496 C/T, AGR 1218 A, AGT 620 C/T; ECA 2193 A, AGR 1204 C, ECA 2328 G; ECA 2193 A, AGR 1204 A/C; ECA 3387 T, AGR 1218 A; ECA 3387 T, AGT 620 C/T; AGR 1204 A/C, AT1 678 C/T; AGR 1204 A/C, AT1 1271 A/C; ECA 1215 C, AGR 1204 A/C; AGR 1204 A/C, AT1 1167 A, ECA 3906 A/G; AGR 1204 A, AGT 620 C, AT1 1271 A, AT1 1167 A, AGR 395 A/T, AGR 1204 A/C, AGT 620 C/T, AT1 1271 A/C, AT1 1167 A, AGR 395 T; AGR 1204 A/C, AGT 620 C/T, AT1 1271 A/C, AT1 1167 A/G, AGR 395 T; AGR 1204 A, AT1 678 C, AT1 1167 A, AGR 395 A/T; AGR 1204 A/C, AT1 678 C/T, AT1 1167 A, AGR 395 T; AGT 620 C/T, AT1 1271 A/C, AT1 1167 A, AGR 395 T, AGT 620 C/T, AT1 1271 A/C, AT1 1167 A/G, AGR 395 T; AGT 620 C, AT1 1271 A, AT1 1167 A, AGR 395 A/T; AGT 620 C, AT1 678 A, AT1 1167 A, AGR 395 A/T; AGT 620 C/T, AT1 678 C/T; AT1 1167 A, AGR 395 T; ECA 2193 A, AGR 1218 A, AGT 803 A; ECA 2193 A, AGT 620 C/T; ECA 2328 G, AGT 620 C/T; ECA 3387 T, AGR 1204 A/C; ECA 2193 A, ECA 2328 G, AGR 1204 C; y ECA 2193 A/G, AGR 1072 G/G, AT1 1167 A/A.
12. 12. Un ácido nucleico aislado que codifica ECA en un individuo, en donde el ácido nucleico comprende una posición polimórfica y en donde la presencia de la posición polímórfica, ya sea sola o en combinación con otras posiciones polimórficas en la secuencia de ECA humano o en uno o más de otros genes humanos, predice la respuesta de un individuo a un régimen de tratamiento de síndrome cardiovascular.
13. 13. Un ácido nucleico aislado que codifica AGT en un individuo, en donde el ácido nucleico comprende una posición polimórfica y en donde la presencia de la posición polimórfica, ya sea sola o en combinación con otras posiciones polimórficas en la secuencia de AGT humano o en uno o más de otros genes humanos, predice la respuesta de un individuo a un régimen de tratamiento de síndrome cardiovascular.
14. 14. Un ácido ' hu'cleico aislado que codifica AT1 en un individuo, en donde el ácido nucleico comprende una posición polimórfica y en donde la presencia de la posición polimórfica, ya sea sola o en combinación con otras posiciones polimórficas en la secuencia de AT1 humano o en uno o más de otros genes humanos, predice la respuesta de un individuo a un régimen de tratamiento de síndrome cardiovascular.
15. 15. Un ácido nucleico aislado derivado del gen humano que codifica la enzima de conversión de angíotensina (ECA), en donde el ácido nucleico comprende una posición polimórfica seleccionada del grupo que consiste de una posición en la región reguladora numerada 5106; posiciones en la región de codificación numerada 375, 582, 731, 1060, 2741, 3132, 3387, 3503 y 3906; y combinaciones de cualquiera de los anteriores.
16. 16. El ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 15, en donde la secuencia en la posición polimórfica en la región reguladora se selecciona del grupo que consiste de 5106C y 5106T; y la secuencia a la posición polimórfica en la región de codificación se selecciona del grupo que consiste de 357A, 375C, 682C, 582T, 731A, 731G, 1060G, 1060A, 2741G, 2741T, 3132C, 3232T, 3387T, 3387C, 3503G, 3503C, 3906G, 3906A, como se número en la entrada de Genbank X62855.
17. 17. Una sonda que se hibridiza con alta restricción en la posición polimórfica como se define en la reivindicación 15. 1d.
18. Un ácido nucleico aislado que comprende un gen humano que codifica angiotensinogeno (ANG), en donde el ácido nucleico comprende una posición polimórfica seleccionada del grupo que consiste de las posiciones en la región reguladora numerada 395, 413, 432, 449, 692, 639, 1007 y 1204; posiciones en la región de codificación numeradas 273, 912, 997, 1116, 1174 y la posición 49 en la entrada de Genbank M24688; y combinaciones de cualquiera de las mimas.
19. 19. Un ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 18, en donde la secuencia a la posición polimórfica en la región reguladora se selecciona dei grupo que consiste de 395T, 395A, 412C, 412T, 432G, 432A, 449T, 449C, 692T, 839G, 839A, 1007G, 1007A, 1072G, 1072A, 1204C Y 104A; y la secuencia a la posición polimórfica en la región de codificación se seleccionan del grupo que consiste de 273C, 273T, 912C, 912T, 997G, 997C, 1116G, 1116A, 1174C y 1174A y A o G en la posición 49 en la entrada de Genbank M24688.
20. 20. Una sonda que se hibridiza con alta restricción en la posición polimórfica como se define en la reivindicación 18.
21. 21. Un ácido nucleico aislado que comprende un gen humano que codifica ei receptor de angiotensina II tipo 1 (AT1) en donde el ácido nucleico comprende una posición polimórfica seleccionada del grupo que consiste de las posiciones en la región reguladora numerada 1427, 1756, 1853, 2046, 2354, 2355 y 2415; una posición en la región de codificación/intrón numerada 449; y combinaciones de los anteriores.
22. 22. Un ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 21, en donde la secuencia en la posición polimórfica en la región reguladora se selecciona del grupo que consiste de 1427A, 1472T, 1756T, 1756A, 1853T, 1853G, 2046T, 2046C, 2364A, 2354C, 2365G, 2365C, 2416A y 2415G; y la secuencia a la posición polimórfica en la región de codificación/intrón se selecciona del grupo que consiste de 449G y 449C.
23. 23. Una sonda que se hibridiza con alta restricción en la posición polimórfica como se define en la reivindicación 21.
24. 24. Un banco de ácidos nucleicos, cada uno de los cuales comprende una o más posiciones polimórficas dentro del gen de ECA humano, en donde las posiciones polimórficas se seleccionan del grupo que consiste de posiciones en la región reguladora de ECA numerada 5106, 5349 y 5496; y las posiciones en la región de codificación de ECA numerada 375, 582, 731, 1060, 1215, 2193, 2328, 2741, 3132, 3387, 3503 y 306 en el gen de ECA como se numeró en la entrada de Genbank X62855.
25. 25. Un banco de acuerdo con la reivindicación 24, en donde la secuencia en la posición polimórfica en la región reguladora se selecciona del grupo que consiste de 5106C, 5106T, 5349A, 5349T, 5496T y 5496C; y la secuencia en posición polimórfica en la región de codificación se selecciona del grupo que consiste de 375A, 375C, 582C, 582T, 731A, 731G, 1060G, 1060A, 1215C, 1215T, 2193G, 2193A, 2328A, 2328G, 2741G, 2741T, 3132C, 3132T, 3387T, 3387C, 3603G, 3906F, 3906A y una supresión de nucleótidos 1461-1783 como se numera en la entrada Genbank X62855.
26. 26. Un banco de ácidos nucleicos, en donde cada uno de los cuales comprenden una o más posiciones polimórficas dentro del gen AGT humano, en donde la posición polimórfica se selecciona del grupo que consiste de posiciones en la región reguladora numerada 395, 412, 432, 449. 692, 839, 1007, 1072, 1204 y 1218; posiciones en la región de codificación numerada 273, 620, 803, 912, 997, 1116 y 1174; y la posición 49 en el gen AGT como se numera en la entrada de Genbank M2468d.
27. 27. Un banco de acuerdo con la reivindicación 26, en donde la secuencia en la posición polimórfica en la región reguladora se selecciona del grupo que consiste de 395T, 395A, 412C, 412T, 432G, 432A, 449T, 449C, 592C, 692T, 839G, 339A, 1007G, 1007A, 1072G, 1072A, 1204C, 1204A, 1218A, 1218G; y la secuencia en posición polimórfica en la región de codificación se selecciona del grupo que consiste de 273C, 273T, 620C, 620T, 803T, 803C, 912C, 912T, 997G, 997C, 1116G, 1116A, 1174C, 1174A y A o G en la posición 49 en la entrada Genbank M24688. 2d.
28. Un banco de ácidos nucleicos, de cada uno de los cuales comprende una o más posiciones polimórficas dentro del gen AT1 humano, en donde la posición polimórfica se selecciona del grupo que consiste de las posiciones en la región reguladora numerada 1427, 1756, 1853, 2046, 2354, 2356 y 2415; y las posiciones en la región de codificación numerada 449, 678, 1167 y 1271.
29. 29. Un banco de acuerdo con la reivindicación 28, en donde la secuencia en la posición polimórfica en la región reguladora se selecciona del grupo que consiste de 1472A, 1427T, 1756T, 1766A, 1853T, 1853T, 1853G, 2046T, 2046C, 2354A, 2354C, 2355G, 2355C, 2415A y 2415G; y la secuencia en la posición polimórfica en la región de codificación se selecciona del grupo que consiste de 449G, 449C, 678T, 678C, 1167A, 1167G, 1217A y 1271C.
30. 30. Un banco de patrones polimórficos en los genes de ECA, AGT y/o AT1 humanos, que comprende un miembro seleccionado del grupo que consiste de: ACR 5349 A/T, AGR 1218 A; ECA 5496 C, AGR 1204 A/C; ACR 5496 C/T, AGR 1218 A, AGT 620 C/T; ECA 2193 A, AGR 1204 C, ECA 2328 G; ECA 2193 A, AGR 1204 A/C; ECA 3387 T, AGR 1218 A; ECA 3387 T, AGT 620 C/T; AGR 1204 A/C, AT1 678 C/T; AGR 1204 A/C, AT1 1271 A/C; ECA 1215 C, AGR 1204 A/C; AGR 1204 A/C, AT1 1167 A, ECA 3906 A/G; AGR 1204 A, AGT 620 C, AT1 1271 A, AT1 1167 A, AGR 395 A/T, AGR 1204 A/C, AGT 620 C/T, AT1 1271 A/C, AT1 1167 A, AGR 395 T; AGR 1204 A/C, AGT 620 C/T, AT1 1271 A/C, AT1 1167 A/G, AGR 395 T; AGR 1204 A, AT1 678 C, AT1 1167 A, AGR 395 A/T; AGR 1204 A/C, AT1 678 C/T, AT1 1167 A, AGR 395 T; AGT 620 C/T, AT1 1271 A/C, AT1 1167 A, AGR 395 T, AGT 620 C/T, AT1 1271 A/C, AT1 1167 A/G, AGR 395 T; AGT 620 C, AT1 1271 A, AT1 1167 A, AGR 395 A/T; AGT 620 C, AT1 678 A, AT1 1167 A, AGR 395 A/T; AGT 620 C/T, AT1 678 C/T; AT1 1167 A, AGR 395 T; ECA 2193 A, AGR 1218 A, AGT 803 A; ECA 2193 A, AGT 620 C/T; ECA 2328 G, AGT 620 C/T; ECA 3387 T, AGR 1204 A/C; ECA 2193 A, ECA 2328 G, AGR 1204 C; y ECA 2193 A/G, AGR 1072 G/G, AT1 1167 A/A.
31. 31. Un banco de blancos de fármacos cardiovasculares, cada uno de los blancos que comprenden un péptido aislado que comprende una o más posiciones polimórficas en la secuencia de polípéptido de ECA, en donde las posiciones polimórficas se codifican por nucleótidos seleccionados del grupo que consiste de posiciones de nucleótidos en la región de codificación de ECA numeradas 375, 582, 731, 1060, 1215, 2193, 2328, 2741, 3132, 3387, 3503 y 3906.
32. 32. Un banco de blancos de fármacos cardiovasculares, cada uno de los blancos que comprende un péptido aislado que comprenden una o más posiciones en el polipéptido AGT, en donde las posiciones poiimórficas codificadas por nucleótidos se seleccionan del grupo que consisten de posiciones de nucleótidos numeradas 273, 620, 803, 912, 997, 116 y 1174.
33. 33. Un banco de blancos de fármacos cardiovasculares, cada uno de los blancos comprenden un péptido aislado comprendiendo una o más posiciones polimórficas en el polipéptido AT1, en donde las posiciones polimórficas se codifican por nucleótidos seleccionados del grupo que consiste de posiciones de nucleótidos numeradas 449, 678, 1167 y 1271.
34. 34. Un equipo para evaluar la respuesta de un individuo para un régimen de tratamiento de un síndrome cardiovascular, dicho equipo comprendiendo: (i) iniciadores de determinación de secuencia y (ii) reactivos de determinación de secuencia, en donde los iniciadores se seleccionan del grupo que consiste de iniciadores que se hibridizan en la posiciones polimórficas en genes de ECA, AGT o AT1 humanos; e iniciadores que se hibridízan inmediatamente adyacente en las posiciones polimórficas en genes de ECA. AGT o AT1, en donde las posiciones polimórficas predicen la respuesta de un individuo a un régimen de tratamiento cardiovascular de un síndrome cardiovascular.
35. 35. Un equipo de acuerdo con la reivindicación 34, en donde las posiciones polimórficas se seleccionan del grupo que consiste de posiciones en la región reguladora de ECA numerada 5106, 5349 y 5496; las posiciones en la región de codificación ECA numerada 375, 582, 731, 1060, 1215, 2193, 2328, 2741, 3132, 3387, 3503 y 306; posición 1451 en el gen ECA como se numera en la entrada de Genbank X62855; posiciones en la región reguladora de AGT numerada 395, 412, 432, 449, 692, 839, 1007, 1072, 1204 y 1218; posiciones en la región de codificación AGT numerada 273, 620, d03, 912, 997, 116, y 1174; posición 59 en el gen de AGT como se numera en la entrada de Genbank M24688; posiciones en la región reguladora AT1 numerada 1427, 1756, 1853, 2046, 2354, 2355 y 2415; posiciones en la región de codificación AT1 numerada 449, 678, 1167 y 1271; y combinaciones de cualquier de las anteriores.
36. 36. Un equipo para evaluar el estado cardiovascular, dicho equipo comprendiendo uno o más anticuerpos específicos para una posición polimórfica dentro de los polipéptidos de ECA, AGT o AT1 humanos.
37. 37. Un equipo de acuerdo con la reivindicación 36, en donde las posiciones polimórficas se codifican por un nucleótido seleccionado del grupo que consiste de posiciones de nucleótidos en la región de codificación numerada ECA 375, 582, 731, 1060, 1215, 2193, 2328, 2741, 3132, 3387, 3503 y 3906; posiciones de nucleótidos en la región de codificación de AGT numerada 273, 620, 803, 912, 997, 1116, y 1174; posiciones en la región de codificación AT1 449, 678, 1167, y 1271 y combinaciones de cualquiera de los anteriores. r -«» » 95 RESUMEN La presente invención provee métodos para evaluar el estado cardiovascular en un individuo, que comprende determinar la secuencia en una o más posiciones polimórficas dentro de los genes humanos que codifican la enzima de conversión de angiotensina (ECA), angiotensinogeno (AGT) y/o o receptor de angiotensina II tipo 1 (AT1). La invención también provee ácidos nucleicos aislados que codifican polimorfismos de ECA, AGT, y AT1, sondas de ácidos nucleicos que se hibridizan a las posiciones polimórficas, equipos 10 para predecir el estado cardiovascular y blancos de ácidos nucleicos y péptídos para usarse en la identificación de fármacos cardiovasculares candidatos.