MXPA98009960A - Proceso para preparar 2,2'-(1-metil-1,2-etanodiiliden)bis[hidrazincarboximidamida] - Google Patents

Abstract

Se describe un proceso para la preparación de 2,2'-(1-metil-1,2-etandiiliden)bis[hidrazina carboximidamida]por:a) hacer reaccionar clorohidrato de aminoguanidina con aldehído metilglioxal o metilglioxal dimetilacetal;y b) purificar la 2,2'-(1metil-1,2-etandiiliden)bis[hidrazina carboximidamida]por cristalización a partir de un medio de alcohol isopropílico acuosoácido.

Description

PROCESO PARA PREPARAR 2 , 2 ' - (1-METIL-l , 2- ETANODIILIDEN) BIS [HIDRAZINCARBOXIMIDAMIDAl DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona a un proceso para preparar 2, 2 '- (1-metil-l, 2-etanodiiliden) bis [hidrazina carboximidamida] que tiene impurezas grandemente reducidas en la misma útil en un método para tratar el cáncer o enfermedades malignas avanzadas . El compuesto 2 , 2 '- (1-metil-l, 2-etandiiliden) bis [hidrazina carboximidamida] es conocido por varios nombres, tales como 1,1' [ (metiletandiiliden) dinitrilo] diguamidina, piruvaldehído bis (amidinohidrazona) , mitoguazona y metilglixoal bis-guanilhidrazona, metil GAG o MGBG, representado por la fórmula MGBG y sus sales han sido descritas en la técnica anterior desde 1950 para uso contra varias enfermedades como se ilustra por las siguientes patentes y publicaciones. Se reporta la actividad antitumoral de MGBB en leucemia L-1210 y adenocarcinoma 755 que portan los roedores por Freelander et al., 18 Cáncer Res. 360 (1958). La Patente Japonesa 51044643 describe MGBG y sus sales de adición acidas como agentes efectivos contra enfermedades virales de pescados para prevenir y trata infecciones, necrosis pancreática y necrosis hematopoyética. La Patente Japonesa 50029520 describe MGBG y sus sales para uso contra virus de influenza. La Patente de los Estados Unidos No. 4,201,788 describe MGBG para el tratamiento de enfermedades de la piel proliferativas no malignas. Es conocida la MGBG para inhibir la S-adenosilmetionina decarboxilasa (SMD) , la cual es una enzima clave en la síntesis de poliamida, llevando a la reducción de poliamina celular. Sin embargo, las investigaciones con MGBG revelan niveles inaceptables de toxicidad. Los efectos toxicológicos de MGBG, algunos de los cuales son peculiares para ciertas especies animales, incluyen toxicidad gastrointestinal, hipoglucemia retardada y fatal, daño hepático y renal, depresión de médula ósea, diarrea y flebitis. También estos han prevalecido en sujetos humanos que sufren de tratamiento con MGBG. Adicionalmente, se demuestran varios efectos tóxicos los cuales son únicos a los hombres. Estos incluyen esofagitis, faringitis ulcerativa, laringitis, estomatitis, hinchamiento de la mucosa genital, conjuntivitis, mucositis, eritema, edema, dermatitis descamante, y anorexia profunda como pérdida de peso asociado. Los pacientes que son administrados con MGBG en un programa diario exhiben remisión a la leucemia aguda sólo después de una lucha precaria con alguna frecuencia de vida de tratamientos de efectos laterales. En muchos pacientes, el tratamiento ha sido descontinuado antes de que pueda ser notado algún resultado benéfico. Knight et al., en Can . Treat . Rep . , £3 1933-1937 (1979) encuentra que los niveles de toxicidad son programas de dosis relacionados y pueden ser controlados. La Patente de los Estados Unidos 4,520,031 maneja la cuestión de tal control relacionada al programa de dosis con el fin de reducir la toxicidad. El control del programa de dosis, como se describe en la patente se basa en la postulación que MGBG ejerce una acción inhibitoria con relación a la biosíntesis de poliamina. Los efectos alcanzados fisiológicamente de MGBG pueden ser relacionados a la inhibición de la enzima S-adenosil metionina descarboxilasa, la cual cataliza la síntesis de la poliamina, espermidina . Se cree que la espermidina juega un papel importante en la iniciación de la síntesis de ADN. Estudios han mostrado que la depresión mediada por MGBG de la síntesis de ADN se asocia con la disminución de espermidina y acumulación de putrescina . Otra área en la cual se cree que las poliaminas juegan un papel principal es en la síntesis de ARN especialmente aquella de ARN de transferencia (t) . La metilación de ARNt puede ser estimulada directamente por poliaminas, un descubrimiento de interés particular en la luz de los reportes es que el tejido neoplástico difiere al tejido normal con respecto al grado de ARNt metilado. Aquí, también, la espermidina parece jugar un papel crítico. La acumulación de poliamina parece ser un requisito necesario para síntesis de ADN en una velocidad óptima, en tejidos tanto normales y neoplásticos. De esta forma, la toxicidad de MGBG observada en tejidos con cambio rápido (piel, G.I. mucosa y médula ósea) puede ser relacionada a la inhibición de síntesis de poliamina y reducción subsecuente de ARN y ADN, los agentes los cuales por último regulan la replicación celular. Hay, sin embargo, evidencia fuerte que: (1) las poliaminas se excretan en exceso en la mayoría de los pacientes con cáncer; (2) poliaminas, especialmente espermidina, son liberadas de células tumorales durante y después de la quimioterapia efectiva, con un incremento inicial en excreción y en niveles de suero y subsecuentes valores normales disminuyendo; y (3) la quimioterapia la cual produce solo toxicidad de médula ósea (u otro tejido normal), y no tiene eficacia antitumoral, no produce un incremento significativo en excreción de poliamina. La última observación puede sugerir ya sea que las células con cáncer tienen niveles mucho más altos de poliaminas que las células normales, incluso aquellas con proporciones más altas de síntesis de ADN, o aquella terapia la cual es efectiva produce efectos específicos diferentes en síntesis de poliamina en células con cáncßr. De esta forma, la disminución de espermidina se asocia con la acción de MGBG. En estudios realizados en hombres, han sido atribuidos los efectos toxicológicos observados clínicamente a efectos acumulativos de dosis diarias repetidas. Esta acumulación o adición de toxicidad se explica posiblemente por el periodo prolongado inusual requerido para eliminación urinaria de MGBG en el hombre. Estudios de biodisponibilidad en el hombre con MGBG-C14 han mostrado que siguiendo una infusión intravenosa simple en un periodo de 20 minutos, la radioactividad desaparece rápidamente del plasma y que sobre un periodo prolongado de 3 semanas, se excreta 60 por ciento del fármaco sin cambiar en la orina. Estos datos sugieren que la MGBG se acumula en los tejidos y se filtra lentamente de depósitos de tejido para llevar a cabo la eliminación. En la patente, después de un número considerablemente grande de estudios realizados con MGBG en el tratamiento de varios tumores, se concluye que un programa semanal de administración es más efectivo para lograr el índice terapéutico mayor mientras reduce la toxicidad a un nivel aceptable. Por consiguiente, se establece un rango de dosis de 250 mg/m2 a 1000 mg/m2 de MGBG administrado en intervalos de semanas para el tratamiento de varios tumores . Mientras que el rango de dosis indicado anteriormente disminuye efectos laterales toxicológicos y produc tratamientos de varios tumores, la acumulación a largo plazo d MGBG es todavía un problema que requiere estudios adicionale y/o modificaciones de tratamiento. En la presente, se han realizado estudios prolongado de MGBG con el objeto de reducir adicionalmente los efecto laterales tóxicos del mismo. En el curso de estos estudios s ha descubierto que MGBG contiene cantidades relativament grandes de impurezas, lo cual puede contribuir a los efecto laterales toxicológicos de MGBG. Por consiguiente, se ha realizado varios esfuerzos para identificar y reducir l cantidad de impurezas presentes en MGBG y sus sales. Se describe el proceso para preparar guanilhidrazonas por Baiocchi et al., J". Med. Chem. , £ 431 (1963) y Oliverio, Denham., J. Pharm. Sci . , ¿2 202 (1963). El proceso comprende hacer reaccionar la sal aminoguanidina con el compuesto carbonilo correspondiente en un medio acuoso o acuoso-alcohol en presencia de una cantida catalítica de ácido. El proceso usa bicarbonato de aminoguanidina comercialmente disponible y se describe como sigue. Preparación General de Guanilhidrazonas A una solución de 0.11 moles (15 g) de bicarbonato de aminoguanidina en 125 ml de agua se agregan lentamente el ácid deseado (se agregan unas cuantas gotas de alcohol amílico co el fin de evitar la espuma) hasta que el pH de la solución e menor a 7. Se filtra la solución de cantidades de trazas d sólidos insolubles. Se agrega entonces el compuesto carbonil apropiado a un filtrado ligeramente ácido a un filtrado a 60 °C. La cantidad del compuesto carbonilo usado es de tal forma qu la proporción de aminoguanidina por función carbonilo es d 1:1. Si el compuesto carbonilo no se disuelve en la mezcl acuosa, se agrega etanol hasta que la mezcla de reacción e homogénea. Se agita entonces la solución a temperatura ambient durante 16 horas. Si se forma un precipitado, se aisla e producto sólido por filtración. Similarmente- se evapora l mezcla de reacción hasta que se obtiene un residuo sólid usando metanol, etanol y combinación de solventes. La recuperación de guanilhidrazonas es baja. Además del bajo rendimiento se encuentra en l presente que los productos contienen cantidades grandes d impurezas . Experimental Se ha desarrollado en la presente métodos par análisis de diclorohidrato de mitoguazona usando varios sistemas para identificar y cuantificar sus impurezas. U sistema de análisis incluye cromatografía de Líquido de Alt Resolución. Considerados en términos para determinar niveles d purezas cromatograficas, un alto grado de especificida proporciona confidencia de que todas las especies potenciale de interés son detectables. En donde estas especies, incluyend impurezas de procesos y productos de degradación, no so disponibles para inyectar directamente en el sistem cromatográfico, se realiza usualmente la prueba d especificidad en muestras estresadas usando una o más técnica las cuales pueden ser colocadas en una de dos categoría amplias . (a) Uso de un sistema de detección especializado par extraer información adicional del pico del analito. (b) Alguna forma de comparación entre técnicas d separación complementaria, el primero que es el sistema baj validación y el segundo que es un sistema el cual, por virtu de su selectividad diferente, puede ser esperado para resolve co-elución de especies en el primer ejemplo. Ejemplos de técnicas en la primera categoría incluye el uso de detectores de arreglo de diodos y de espectroscopi de masa para obtener espectros de UV/Visibles o de masas respectivamente a partir de varias posiciones a través del pico del analito permitiendo potencialmente, la detección de especies co-eluyentes. Las técnicas en la segunda categoría incluyen el uso de aparatos de cambio de flujo para invertir el pico del analito en una segunda fase estacionaria con una selectividad diferente, o comparación de resultados del sistem que es validado con aquellos de una segunda técnica de cromatografía tal como una cromatografía de Capa Fina (TLC) .

Equipo y Químicos Se generan los datos de HPCL usando varias bombas Kontron (Watford, Herts) y Aguas ( atford, Herts) , un automuestreador, un horno para columna y modelos de detector. Se proceden los datos de HPLC usando Multichrom™ VI-82 (LabSystems, Altringham, Cheshire) . Se capturan los espectros de absorción UV/visibles, usando un detector de arreglo de diodos HPO 1040 (Hewlett Packard, Bracknell, Berks) . Se realiza la tensión de luz (Fuente de Xenón, filt ado a través de vidrio de ventana) en un Haraeus Suntest™ (Alplas Technology, Oxford) . Se obtiene el acetonitrilo grado HPLC de químicos Rathburn (Walkerburn, Scotland) , ácido heptansulfónico grado HPLC (sal de sodio) , y químicos inorgánicos de BHD limited (Poole, Dorset. Se obtiene ACVA (ácido 4 , 4 ' -azobis (4-cianovalérico) , un iniciador de radicales, exposición a los cuales se imita la contracción oxidativa, de Ajdrich (Gillingham, Dorset) . Se obtiene diclorhidrato de mitoguazona y agua purificada en casa. Preparación de Muestra Estresada Se pesan exactamente muestras de diclorohidrato de mitoguazona (aproximadamente 370 mg, equivalente a una bqse de 250 mg) en matraces volumétricas de 50 ml y se estres,an de acuerdo a condiciones dadas anteriormente. Se continúa la tensión por un máximo de 7 días o hasta que se ha logrado la degradación de 20 a 50%. Después de la tensión, se neutralizan las muestras, si es necesario, y se diluyen a un volumen co agua purificada para dar soluciones de aproximadamente 5 m (base)/ml por análisis de TLC. Se diluyen las alícuotas de estas soluciones con agua purifica para dar soluciones de aproximadamente 1 mg/ (base) /ml para uso en determinaciones de impureza por HPLC. Finalmente, se diluyen alícuotas de estas soluciones, ya sea en la fase móvil de HPLC para dar solución de aproximadamente 0.01 mg(base)/ml para ensayo de HPLC. Condiciones de Tensión Calor: La muestra se mantiene a 80 °C durante 7 días.

Acidez : Se agrega 10 ml de ácido clorhídrico 0.1 M a la muestra y se mantiene la solución a 70°C durante 7 días. Básico : Se agrega 10 ml de hidróxido de sodio 0.1 M a la muestra y se mantiene la solución a 70 °C durante 2 días. Acuoso : Se agrega 10 ml de agua purificada a la muestra y se mantiene la solución a 70°C durante 7 días. Oxida tiva : Se agrega 10 ml de una solución ACVA acuosa de 0.1 M y se mantiene la muestra a 40°C durante 7 días. Luz : La muestra recibe una iluminación total de aproximadamente 15,000 klx horas (con UV asociado) . Ensayo : Se lleva a cromatografía la muestra isocráticamente en columnas de 25 cm x 0.46 d.i. Hypersil BDS C8 5 µm (Anachem, Luton, Beds . ) usando una fase móvil que consiste de amortiguador de ortofosfato diácido de potasio 0.05 M que contiene 1 g/1 de ácido heptansulfónico (sal de sodio) y se ajusta a pH 3.0 con ácido ortofosfdrico concentrado (89% por volumen) y acetonitrilo (11% por volumen) . La velocidad de flujo es 2 ml/minuto, la longitud de onda del detector es de 283 nm, e volumen de inyección es 20 µl y la temperatura de la columna es de 40°C. Se cuantifican las muestras con respecto a un estánda externo preparado exactamente (nominalmente 0.01 mg(base)/ml. Método de Impureza: Las condiciones cromatográficas son com para el ensayo, excepto que se usa una longitud de onda del detector de 210 nm. Se usa un segundo sistema HPLC con una proporción de fase móvil acuosa a acetonitrilo de 85% a 15% po volumen, fundamentalmente para estimar las impurezas de proceso específicas. Se cuantifican las impurezas con respecto a un estándar externo preparado estrechamente (nominalmente 0.005 mg (base) /ml) . Método TLC Se colocan 20 µl de cada muestra en una placa de TLC de gel de sílice (Merck 60F254) . Se desarrolla la placa a una altura de 10 cm en acetona/hidróxido de amonio (SG 0.88) /agua (90:55.5% por volumen) fase móvil. Se estiman las impurezas contra manchas de diclorohidrato de mitoguazona diluida, ambas con luz ultravioleta de longitud de onda corta (254 nm) , y después del tratamiento con un reactivo por aspersión de nitroprusuro (sódico) -ferricianuro. Resultados Se analizan muestran por triplicado que representan 0, 80%, 100% y 120% de la concentración de diclorohidrato de mitoguazona nominal . Se dan los resultados obtenidos en la Tabla I . TABLA 1 Recuperación de Datos TABLA I (continuación) Recuperación de Datos Ensayo de HPLC*. El análisis de Regresión de Mínimos Cuadrados de los datos da una exactitud promedio de 99.8% (Coeficiente d Correlación 0.99935). Análisis de Muestras Estresadas Se ensayan las muestras estresadas por HPLC mientra se determinan los niveles de impureza cromatográfica por HPLC TLC. Se resumen los datos cromatográficos en la Tabla II. TABLA II Ensayos Cromatográficos y Datos de Impureza para Diclorohidrat de Mitoguazona Estresada Usando HPLC, TLC y espectroscopia de masa, s identifican y cuantifican las impurezas contenidas en lo materiales de partida o formadas durante el proceso par fabricar el producto final . Se encuentra en la presente que las pureza relacionadas con diaminoguanidina se cuentan por más del 70 del nivel de impureza de MGBG-diclorhidrato total .

A continuación el esquema de reacción general para l producción de las impurezas y sus nombres químicos . 1 , 3 -Diaminoquanidina Impureza O : R1 = H, R2 = CH3 Impureza E ^ = CH3 , R2 = H D v E Impureza F : Rx = H, R2 = CH3 , R3 = CH3 , R4 =H Impureza G:RX = CH3, R2 = H, R3= H, R4=CH3 Impureza H^ = H, R2 = CH3, R3=H, R4=CH3 en donde D [2- [ (aminoiminometil) hidrazonojpropiliden-carbonimidicdihidrazid . E = [2- [ (Aminoiminometil) hidrazono-1-metiletiliden]-carbonimidic dihidrazida. F = Bis [2- [ (Aminoiminometil) hidrazono-1-metiletilidenj-carbonimidic dihidrazida. G = Bis [2- [ (Aminoiminometil) hidrazono]propiliden]-carbonimidic dihidrazida.

H = [2- [ (Aminoiminometil) hidrazono]-l metiletiliden] [2- [ (aminoiminometil) hidrazono]propiliden]~ carbonimidic dihidrazida. En la solicitud copendiente D.N. 70493, No. de Seri 08/655 , 512 en la fecha con la solicitud presente, se estudia los parámetros de reacción y se modifican con el fin de reduci las impurezas en el producto final. La solicitud copendiente l cual se incorpora para referencia en su totalidad, describe u proceso para la preparación de 2 , 2 '- (1-metil-l, 2 etandiliden) bis [hidrazina carbsximidamina] que comprende la etapas de : a) eliminar impurezas del bicarbonato d aminoguanidina suspendiendo el bicarbonato d aminoguanidina en agua y filtrando la suspensión; b) hacer reaccionar el bicarbonato de aminoguanidin filtrada con metilglioxal dimetilacetal en u medio de reacción acuoso para producir 2,2' (metil-1, 2 -etandiliden) bis [hidrazina carboximidamida] ; y c) purificar la 2 , 2' - (1-metil-l, 2 etanodiliden) bis [hidrazina carboximidamidaj po recristalización a partir de un medio d isopropanol-acuoso ácido. Una etapa esencial en el proceso es la eliminación d las impurezas a partir del material de partida bicarbonato d aminoguanidina suspendiendo el bicarbonato de aminoguanidina e agua o separando por filtración las impurezas a partir d filtración. Se ha descubierto ahora en la presente que en luga de usar bicarbonato de aminoguanidina como un material d inicio, puede ser usado el clorohidrato de aminoguanidina par hacer reaccionar con metilglioxal dimetilacetal en un medio d reacción acuoso para producir 2, 2 '- (1-metil-l, 2 etandiliden) bis [hidrazina caroximidamida] . El proceso el cua incluye una etapa de purificación subsecuente proporciona u producto final el cual es por lo menos 95.5% puro. El proceso para obtener 2, 2' - (1-metil-l, 2-etandiliden) bis [hidrazina carboximidamida] altamente purificad implica reaccionar clorohidrato de aminoguanidina co metilglioxal dimetilacetal que comprende las etapas de: a) disolver una parte de clorhidrato d aminoguanidina en una mezcla de aproximadament 0.5 a 3 partes, preferiblemente aproximadament 0.93 partes de agua, y aproximadamente 0 a 3 partes de un solvente orgánico miscible, d preferencia aproximadamente 0.75 de alcohol isopropílico . b) ajustar el pH de la solución a aproximadamente 0 5, preferiblemente 0 a 1 con ácido clorhídric concentrado. c) agregar a la solución aproximadamente 0.25 a parte de aldehido metilglioxal, de preferenci aproximadamente 0.5 partes de metilglioxa dimetilacetal, a una temperatura d aproximadamente 0 a 50 °C, de preferencia de 25 30°C; d) agitar la mezcla de reacción por aproximadamente a 48 horas, preferiblemente aproximadamente 1 a 1 horas a temperatura ambiente. e) agregar aproximadamente 0.5 a 20 partes de u solvente orgánico miscible en agua, de preferenci aproximadamente 5 partes de alcohol isopropílico a la mezcla de reacción para producir 2 , 2 ' - ( 1-metil - 1, 2 -etandiliden) bis [hidrazina carboximidamida]; f) colectar 2 , 2' - (1-metil-l, 2- etandiliden) bis [hidrazina carboximidamida] sin purificar sólido y lavar el mismo con 1 a 10 partes de un solvente orgánico, de preferencia con 1 a 2 partes de alcohol isopropílico; y g) secar opcionalmente el producto final sin purificar antes de la purificación en un horno de vacío a 45°C. El proceso de purificación de 2 , 2 '- (1-metil-l, 2-etandiliden) bis [hidrazina carboximidamida] sin purificar comprende las etapas de: h) disolver el compuesto sin purificar e aproximadamente 0.5 a 4 partes de agua deionizada, de preferencia aproximadamente 3 partes de agu deionizada; 5 y) agregar aproximadamente 0.5 a 2 partes de u solvente orgánico miscible en agua, de preferenci aproximadamente 1 parte de isopropanol; j) ajustar el pH de la solución a aproximadamente 0 a 5, y preferiblemente 0 a 1 con ácido clorhídrico 10 concentrado; k) agitar la solución durante aproximadamente 0.5 a 2 horas mientras se agrega 0.1 a 2 partes de agua deionizada y se mantiene la temperatura de la solución a aproximadamente 28-32°C. 15 1) filtrar la solución para eliminar impurezas insolubles ; m) agregar a la solución filtrada aproximadamente 0.5 a 10 partes de un solvente orgánico miscible en agua, de preferencia aproximadamente 5 partes de alcohol isopropílico para precipitar el compuesto; n) enfriar la mezcla a aproximadamente 0 a 25 °C, de preferencia aproximadamente 10°C; o) recolectar el producto final por filtración y lavar el filtrado con 0.5 a 10 partes de un 25 solvente orgánico, de preferencia con una parte de alcohol isopropílico; y p) secar el producto purificado. Como se usa en la presente el proceso para sintetizar y purificar 2 , 2 '- (1-metil-l, 2 -etandiliden) bis [hidrazina carboximida] incluye síntesis y purificación de sus varias formas incluyendo sus formas clorohidrato, monohidratado, dihidratado y hemihidratado . En el proceso para sintetizar y purificar 2,2'-(l-metil-1 , 2-etandiliden) bis [hidrazina carboximidamida] se prefiere el uso de alcohol isoprop?lico . Sin embargo, pueden ser usados otros solventes orgánicos miscibles en agua los cuales incluyen metanol, etanol, alcohol n-propílico, tetrahidrofurano, ácido acético, dimetilformamida, acetonitrilo y dimetilsulfóxido o sus mezclas. El clorohidrato de aminoguanidina, aldehido metilglioxal y metilglioxal dimetilacetal son disponibles comercialmente tales como de Aldrich Chemical Co . , y pueden también ser preparados por procesos conocidos en la técnica. Un ejemplo representativo (Ejemplo 1) para sintetizar y purificar 2 , 2 '- (1-metil-l, 2 -etandiiliden) bis [hidrazina carboximidamida] ilustra la invención. Ejemplo 1 (A) Síntesis Se disuelve 60.0 gramos de clorohidrato de aminoguanidina en 56 mililitros de agua deionizada y 36 gramos de alcohol isopropllico . Se ajusta el pH de la solución a aproximadamente 0 a 1 agregando ácido clorhídrico concentrado. Se agregan 30.96 gramos de metilglioxal dimetilacetal en 1.5 a 3 horas mientras se mantiene la temperatura de reacción entre 25 y 30°C. Se agita entonces la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 16 horas adicionales. Se agregan 240 gramos de alcohol isopropílico y se enfría la mezcla de reacción a 10 °C. El producto sin purificar el cual se forma durante el proceso de reacción es recolectado por filtración y se lava con 90 mililitros de alcohol isopropílico. Se seca entonces el filtrado lavado en un horno a 45 °C durante la noche. El rendimiento es del 87% del rendimiento teórico. (B) Purificación Se disuelven 79.3 gramos del producto sin purificar obtenido (A) en 159 gramos de agua deionizada a 37°C Se agregan 60.7 gramos de alcohol isopropílico y se ajusta el pH a 0-1 agregando ácido clorhídrico concentrado. Se agita la solución ajustada en pH durante 1 hora mientras se mantiene su temperatura a 28-32°C, y agregando 10 ml de agua deionizada. Se filtra la mezcla para eliminar impurezas, tales como partículas sucias mecánicas. Se agrega entonces 312 gramos de alcohol isopropílico a la solución para precipitar el producto. Se enfría la mezcla que contiene el producto precipitado entre 8-12°C y se agita durante aproximadamente 15 minutos. Se lava entonces el producto purificado con 68 mililitros con alcohol isopropílico y se seca en un horno al vacío durante 45 °C. El rendimiento del producto purificado fue de 67.5 del rendimiento teórico. Las muestras de 2, 2 '- (1-metil-l, 2 etandilidina) bis [hidrazina carboximidamida] producidas,: 1 reaccionando bicarbonato de aminoguanidina con metilglioxa dimetilacetal o 2) Se purifican por HPLC para hacer reacciona clorohidrato de aminoguanidina con dimetilglioxa dimetilacetal . Los resultados comparativos se muestran en l Taba II y Tabla III. TABLA II Resultados de Ensayo para Lotes de Bicarbonato de Aminoguanidina usado en la Producción de MGBG y Resultados de Ensayo de MGBG Producidos por el Mismo.

TABLA III Resultados de Ensayo para Lotes de Clorohidrato de Aminoguanidina usado en la Producción de MGBG y Resultados de Ensayo de MGBG Producidos por el Mismo.

El clorohidrato de aminoguanidina contiene nivele más bajos de impurezas que el bicarbonato de aminoguanidina da una calidad superior de MGBG. La pureza de MGBG producid por el uso de clorohidrato de aminoguanidina y de acuerdo a l presente invención se encuentra que es tan alto como 99.9%. Ta MGBG altamente pura es bien adecuada para composicione farmacéuticas para el tratamiento de cáncer y otra enfermedades. Ha sido descrita la invención en detalle co referencia particular a ciertas modalidades preferidas de l misma, pero se entenderá que pueden ser efectuadas variacione y modificaciones dentro del espíritu y alcance de la invención.

Claims (6)

REIVINDICACIONES

1. Un proceso para preparar 2, 2' - (1-metil-l, 2 etandiiliden) bis [hidrazina carboximidamida] caracterizad porque comprende las etapas de : a) disolver una parte del clorohidrato d aminoguanidina en una mezcla de aproximadament 0.5 a 3 partes, de agua y aproximadamente 0 a partes de un solvente orgánico miscible en agua; b) ajustar el pH de la solución a aproximadamente 0 5; con ácido clorhídrico concentrado; c) agregar a la solución aproximadamente 0.25 a partes de aldehido metilglioxal o metilglioxa dimetilacetal, a una temperatura d aproximadamente 0 a 50 °C para obtener una mezcl de reacción; d) agitar la mezcla de reacción por aproximadamente a 48 horas, a temperatura ambiente. e) agregar aproximadamente 0.5 a 20 partes de u solvente orgánico miscible en agua a la mezcla d reacción, para producir 2 , 2 '- (1-metil-l, 2 etandiliden) bis [hidrazina carboximidamida]; f) recolectar 2 , 2 '- (1-metil-l, 2 etandiliden) bis [hidrazina carboximidamida] si purificar por filtración y lavar el mismo con 1 10 partes de un solvente orgánico; g) disolver 2, 2 '- (1-metil-l, 2 etanodiiliden) is [hidrazina carboximidamida] si purificar en aproximadamente 0.5 a 4 partes d 5 agua; h) agregar a la solución aproximadamente 0.5 a partes de un solvente orgánico miscible en agua; y) ajustar el pH de la solución a aproximadamente 0 5; 10 j) agitar la solución por aproximadamente 0.5 a horas mientras se agregan aproximadamente 0 a partes de agua y se mantiene la temperatura de l solución a aproximadamente 28 a 32°C; k) agregar a la solución aproximadamente 0.5 a 1 15 partes de un solvente orgánico miscible en agu para precipitar 2 , 2 ' - (1-metil-l, 2- etanodiiliden) bis [hidrazina carboximidamida] ,- 1) enfriar la mezcla a aproximadamente 0 a 25°C; m) recolectar la 2 , 2' - (1-metil-l, 2- 20 etandiliden) bis [hidrazina carboximidamida] sólid por filtración y lavar con 0.5 a 10 partes de u solvente orgánico; y n) secar 2 , 2 '- (1-metil-l, 2-etandiiliden) bis [hidrazin carboxmidamida] purificada. 25

2. La 2 , 2 '- (1-metil-l, 2-etandiiliden) bis [hidrazin carboximidamida] preparada por el proceso de conformidad con l reivindicación 1.

3. Un método para tratar cáncer o enfermedade malignas en un mamífero caracterizado porque comprende administrar al mamífero una cantidad efectiva de un composición farmacéutica que contiene el compuesto d conformidad con la reivindicasión 2.

4. Un proceso para preparar 2 , 2 '- (1-metil-l , 2 etandiiliden) bis [hidrazina carboximidamida] caracterizad porque comprende las etapas de: a) disolver una parte del clorohidrato d aminoguanidina en una mezcla de aproximadament 0.93 partes, de agua y aproximadamente 0.75 parte de alcohol isopropílico; b) ajustar el pH de la solución a aproximadamente 0 1, con ácido clorhídrico concentrado; c) agregar a la solución aproximadamente 0.5 d metilglioxal dimetilacetal, a una temperatura d aproximadamente 25 a 30 °C; d) agitar la solución durante aproximadamente 1 a 1 horas a temperatura ambiente; e) agregar aproximadamente 5 partes de alcohol isopropílico a la mezcla de reacción para produci 2,2'- (1-metil-l, 2 -etandiiliden) bis [hidrazina carboximidamida]; f) recolectar 2, 2' - (1-metil-l, 2- etandiiliden) bis [hidrazina carboximidamida] sin purificar por filtración y lavar el mismo con 1 a 2 partes de alcohol isopropílico; 5 g) disolver 2, 2' - (1-metil-l, 2- etanodiiliden) bis [hidrazina carboximidamida] sin purificar en aproximadamente 2 partes de agua; h) agregar aproximadamente una parte de alcohol isopropílico; 10 i) ajustar el pH de la solución a 0 a 1 con ácido clorhídrico concentrado; ) agitar la solución por aproximadamente 0.5 a 2 horas mientras se agregan aproximadamente 0 a 2 partes de agua y se mantiene la temperatura de la 15 solución a aproximadamente 28-32°C; k) filtrar la solución para eliminar las impurezas solubles de la misma; 1) agregar a la solución filtrada aproximadamente 5 partes de alcohol isopropílico para precipitar 20 2,2'-(l-metil-l, 2 -etandiiliden) bis [hidrazina carboximidamida] ; m) enfriar la mezcla a aproximadamente 10°C; n) recolectar la 2 , 2 '- (1-metil-l, 2- etandiliden) bis [hidrazina carboximidamida] sólido 25 por filtración y lavarla con una parte de alcohol isopropílico; y o) secar la 2 , 2' - (1-metil-l, 2- etandiiliden) bis [hidrazina carboxmidamida] .

5. La 2 , 2 '- (1-metil-l, 2-etandiiliden) bis [hidrazin carboximidamida] preparada por el proceso de conformidad co la reivindicación 4.

6. Un método para tratar cáncer o enfermedades malignas en un mamífero, caracterizado porque comprende: administrar al mamífero una cantidad efectiva de una composición farmacéutica que contiene el compuesto de conformidad con la reivindicación 5.