MXPA97009352A

MXPA97009352A - Derivados de alfa-hortodionina con alto contenidode metionina

Info

Publication number: MXPA97009352A
Application number: MXPA/A/1997/009352A
Authority: MX
Inventors: A Rao Gururaj
Original assignee: Pioneer Hibred International Inc
Priority date: 1995-06-02
Filing date: 1997-12-01
Publication date: 1998-02-01

Abstract

Los derivados de alfa-hordotionina realizados por medio de la substitución específica a una posición con residuos de mentionina provocan el enriquecimiento de metionina en plantas.

Description

DERIVADOS DS a-HORDOTIONINA CON ALTO CONTENIDO DE METIONINA DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere a la mejora de formulaciones alimenticias. Específicamente esta invención se refiere a derivados de a-hordotionina que proporcionan altos porcentajes del aminoácido esencial metionina en las plantas. Se requieren formulaciones alimenticias para proporcionar a los animales los nutrientes esenciales críticos para el crecimiento. Sin embargo las plantas de cultivo se vuelven generalmente fuentes alimenticias con baja calidad nutrioional arque contienen bajaa porciones de varios aminoácidos que son esenciales para los animales pero que no pueden ser sintetizados por ellos. Durante muchos años los investigadores han tratado de mejorar el balance de los aminoácido esenciales en las proteínas de cultivos importantes a través de programas de reproducción. A medida que se sabe mas acerca del almacenaje de las proteínas y la expresión de los genes que codifican a esas proteínas, y se desarrollan aiatß aa de transformación para una mayor variedad de plantas, pruebas moleculares para mejorar la calidad de las proteínas de las semillas puedan proporcionar alternativaa a loa* intentos mas convencionales. Así pueden mejorarse los niveles específicoa de amino cidos en un cultivo dado por medio de biotecnología.

Un método alternativo es el expresar una proteína heterolaga de un» oompaaloian favorable de aminaacido» en niveles suficientes para mejorar el enriquecimiento del alimento o forraje. Por ejemplo se han identificado varios aminoácidos ricos en azufre. Una clave para la buena expresión de esas proteínas incluye cartuchos de expresión eficientes con promotores específicos. No solo las regiones que controlan los genes dirigen la síntesis de altos niveles de mARN, el mARN debe trasladarse a una proteína estable. Entre los aminoácidos esenciales necesarios para la nutrición animal, frecuentemente escasos en las plantas de cultivo, se encuentra la metianina, trianinft y Haitta-. kas intentos de aumentar los niveles de esos aminoácidos libres por medio de la reproducción, selección mutante y/o cambiar la composición de las proteínas almacenadoras acumuladas en las plantas de cultivo ha tenido un éxito reducido. Generalmente la expresión de la proteína almacenadora transgenica era demasiado baja. El cartucho de expresión de la nuez de Brasil promovido con faseolina 2S es un efecto de un gene quimérico especifico a la semilla efectivo. Sin embargo aun a través de la proteína de la nuez de brasil aumenta la cantidad total de etionina y la metionina ligada, mejorando ßl valor nutricional, parece haber un limite de umbral en lo que se refiere a la cantidad total de metionina acumulada en laa semillas. Laa aßmillaa siguen alendo fuentes insuficientes de metionina.

Una alternativa para mejorar los niveles aminoácidos específicos al alterar los niveles de proteínas que contienen loa aminoácidos deseados es la modificación de la biosíntesis de aminoácidos. Las tecnológicas de ADN recombinante y las tecnologías de transferencia genérica se han aplicado para alterar la actividad enzimática catalizando etapas clave en la trayectoria biosintetica de los aminoácidos. Glassman, en la patente de EE.UU. No. 5.258,300; Galili ßt, al en la solicitud de patente europea no. 485870; [1992]. Sin embargo la modificación de los niveles aminoácidos en las semillas no siempre esta correlacionado con cambios en el nivel de proteínas que incorporan esos aminoácidos. Burrow et al., Mo1.Gen.Gane . ; vol. 241; págs. 431-439 (1993). Aunque aumentos importantes en los niveles de lisina libre en las hojas se han obtenido por medio de la selección de los mutantes DHSPS o al expresar la EiCQlJ DHDPS en plantas, permanece mostrado que esas alteraciones pueden aumentar los aminoácidos objetivos ligados, que representan aproximadamente el 90% o mas de loa aminoácidos totales» Así existe un impacto mínimo en el valor nutricional de las semillas. En base a lo anterior existe la necesidad de métodos para aumentar los niveles de los aminoácidos esenciales, etionina, lißina y treonina en las semillas de plantas. Por lo tanto es un objeto de la presente invención el proporcionar métodos para modificar genéticamente las plantas para aumentar los niveles del aminoácido esencial metionina en las plantas. Es otro objeto de la presente invención es el de proporcionar a las semillas para alimentos y/o forrajes con niveles superiores del aminoácido esencial metionina que las especies silvestres de las mismas semillas. Se ha determinado que una clase de compuestos, las a-hordotioninas pueden ser modificadas para aumentar su contenido de metionina. La a-hordotionina es una proteína de 45 aminoácidos que ha sido bien caracterizadas. Puede aislarse de semillas de cebada [Hordeu vulgare]. La molécula ae eatabilisa por cuatro enlaces de disulfuro resultantes de ocho residuos de cisteina. La secuencia aminoacida como se provee en la identificación de secuencia no. 1 En su forma naturales es especialmente rica en arginina y lisina, conteniendo 5 residuos [10%] de cada uno. Sin embargo no contiene al aminoácido esencial metionina. La proteína se ha sintetizado y la estructura tridimensional se ha determinado por medio de moldeado por computadora. El moldeado de la proteína predice que los diez residuos cargados [arginina en las posiciones 5,10,17,19 y 30, y la lisina en las posiciones 1,23,32,38 y 45] todas se realizan en la superficie de la molécula. Laß cadenas laterales de loe amino cidos polares [asparagina en la posición 11, glutamina en la posición 22 y treonina en la posición 41] también se presenta en la superficie de la molécula. Además los aminoácidos hidofóbicos [tales como las cadenas laterales de leucina en las posiciones 8, 15, 24 y 44 y valina en la posición 18] también son accesibles para los solventes. El moldeado tri-dimensional de la proteína indica que el residuo de argina en la posición 10 es critico para la retención de la estructura tridimensional apropiada y posible doblamiento a través de las interacciones de enlaces de hidrógeno con el residuo de la terminal C de la proteina. Una substitución de metionina en ese punto interrumpiría los enlaces de hidrógeno que incluyen a la arginina en la posición 10, serina en la posición 2 y lisina en la posición 45, conduciendo a la desestabilización de la estructura. El peptido sintético que tiene esta substitución no podría doblarse correctamente, lo que apoya este análisis. La conservación de los residuos de arginina en la posición 10 proporciono una proteína que se doblo correctamente. Ya que la metionina es una aminoácido hidrofóbico, los residuos aminoácidos hidrofóbicos superficiales, leucina en las posiciones 8,15 y 33, y vallina en la posición 18, se substituyeron con metionina. Los aminoácidos polares asparagina en la posición 11, glutamina en la posición 22 y treonina en la oßicion 41, se substituyen con ßtionina. El compuesto resultante tienß la secuencia indicada en la SECUENCIA IDENTIFICADA NO. 2. La molécula puede aar sintetizada por medio de síntesis de peptidos en fase solida y ae dobla en una estructura estable. Tiene siete residuos de mßtionina [15.5%] e incluye las ochos sisterinas, la propteina modificada tiene un contenido de aminoácido de azufre del 33%. Mientras que la SECUENCIA IDENTIFICADA no. 2 es ilustrativa de la presente invención, no se pretende que sea una limitación. Substituciones de metionina se pueden realizar también en posiciones que contienen aminoácidos cargados. Solo la arginina en la posición 10 es critica para mantener la estructura de la proteína a través de una red de enlace de hidrogeno con lisina en la sposiciones 1,23,32 y/o 38, con arginina en las posiciones 5,17,19 y/o 30.. El compuesto resultante tiene la secuencia indicada en la SECUENCIA IDENTIFICADA NO. 3. La síntesis de los compuestos se realizan de acuerdo con los métodos de síntesis de peptidos que son bien conocidos en la técnica y por lo tanto no forman parte de la invención. In vitro los compuestos han sido sintetizados y aplicados a un sintetizador de peptidoß de Applied Biosyßtems 413a que usa químicos fastmocmr que incluye hbtu [hexaflurofosfato de 2-(lh-benzotrßiazol-l-il0-l,2,3,3-tßtramßtilurino publicada por Rao ßt al. Int-J.Pep.Prot.Rea. : vol. 40; págs. 508-515;

[1992]. Loe pßptidoß ßß dividen siguiendo loe protocolos estándar y ßß purifican por medio tto « £**« inversa usando métodos estándar. La secuencia aminoacida de cada peptido se confirmo por medio de degradación automática de Edman en un secuenciador de proteína/analizador 120a pth 477a de Applied Biosystems. Mas preferentemente, sin embargo,os compuestos de la invención se sintetizan in vitro por medio de células bacterianas o vegetales que han sido transformadas por medio de la inserción de un cartucho de expresión que contiene un gene sintético cuando se transcriben y transladas dan el compuesto deseado. Esos cartuchos de expresión vacíos, que proporcionan las secuencias reguladoras apropiadas para la expresión vegetal o bacteriana de la secuencia deseada, también son bien conocidos, y la secuencia nucleotida para el gene sintético, ya sea ARN o ADN, puede derivarse fácilmente de la secuencia aminoacida para la proteína usando textos de referencia estándar. Preferentemente esos genes sintéticos emplearan codones preferidos por las plantas para mejorar la expresión de la proteína deseada. La siguiente descripción ejemplifica las composiciones de esta invención y los métodos de prepararlas y usarlas. Sin embargo se entenderá que otros métodos conocidos que aquellos con experiencia normal en la técnica saben que son equivalente, podrían emplearse también. Los genes que codifican esos compuestos pueden insertarse en cartuchos de expresión apropiados e introducirse en células de especies vegetales. Asi una modalidad especialmente preferida de este método incluye ßl insertar en ß el genoma de la planta una secuencia de ADN que codifica a un compuesto de esta invención en un marco de lectura apropiada, junto con el iniciador de transcripción y secuencias promotoras activas en la planta. La transcripción y traslación de la secuencia de ADN bajo control de las secuencias reguladoras provocan la expresión de la secuencia proteica en niveles que proporcionan una cantidad elevada de una proteína en los tejidos de la planta. Las plantas preferidas que han de transformarse de acuerdo con los métodos de la invención son cereales incluyendo maíz, centeno, cebada, trigo, sorgo, avena, mijo, arroz, girasol, alfalfa, colza y soya. Entonces pueden prepararse secuencias de ADN que codifican a la secuencia apropiada de aminoácidos y esta secuencia sintética de ADN pueden insertarse en un cartucho de expresión vegetal adecuado. De igual manera, varios cartuchos y vectores de expresión de vegetales son bien conocidos en la técnica. Con el termino "cartucho de expresión" se implica un grupo completo de secuencias de control incluyendo secuencias iniciadoras, promotoras y terminales que funcionan en una célula vegetal cuando franquean un gene estructural en ßl marco de lectura adecuado. Los cartuchos de expresión frecuente y preferentemente contienen cualquier surtido de puntos de restricción adecuados para la división ß inserción de cualquier gene estructural deseado. Es importante que el gene clonado tenga un codón de inicio en el marco de lectura adecuado para la secuencia estructural . Además el cartucho de expresión vegetal preferentemente incluye una fuerte secuencia promotora de constitución en un extremo para provocar que el ene sea transcrito a una alta frecuencia, y una secuencia de reconocimiento de poli-a en el otro extremo para el procesamiento y trasporte adecuados del ARN mensajero. Un ejemplo de ese cartucho de expresión preferido [vació] en el cual el cADN de la presente invención puede insertarse en el plasmido pPHI414 desarrollado por Beach, et.al., de Pioneer Hi-Bred International, Inc., Johnston, IA, descrita en la solicitud de patente de ee.uu. NO. 07/785,648 [1991]. Se Diseñaran cartuchos de expresión vegetales altamente preferidos que incluyen uno o mas genes marcadores seleccionableß, tales como los genes de resistencia a la kanamicina o de tolerancia a los herbicidas. Con ßl termino "vector" se implica una secuencia de ADN que es capaz de replicar y expresar un gene extraño en una célula anfitriona. Típicamente, el vector tiene uno o mas puntos de reconocimiento de endocnuclßaaa que pueden cortarse en una forma predßciblß por el uso de la enzima apropiada, tales vectores están construidos preferentemente para incluir secuencias genéticas estructurales que impartan resistencia a los antibióticos o herbicidas los cuales entonces sirven como marcadores para identificar y separar celdas transformadas. Los agentes marcadores/selectores preferidos incluyen kanamicina, clorosulfurona, fosfonomicina, higromicina y metatrezato. Una célula en la cual el material genético extraño en un vector es expresado funcionalmente ha sido "transformado" por el vector y se le llama "transformante". Un vector particularmente preferido es un plasmido, con lo cual se implica una molécula de ADN de dos tiras circular que no es parte de los cromosomas de la célula. Como se menciona antes, puede usarse tanto genomico y cADN que codifica al gene de interés en esta invención. El vector de interés puede construirse parcialmente de un clon de cADN y parcialmente de un clon genomico. Cuando el gene de interés ha sido aislado, se hacen construcciones genéticas que contienen las secuencias reguladoras necesarias que proporcionan la expresión eficiente del gene en la célula anfitriona. De acuerdo con la invención, la construcción genética contendrá [a] una primera secuencia genética que codifique la proteína o característica de interés y [b] una o mas secuencias reguladoras que están ligadaa a cualquier lado del gene estructural de interés. Típicamente, las secuencias reguladoras ae seleccionaran del grupo que comprende los promotores y terminadorßs. Las secuencias reguladores pueden ser de fuenteß autologaß o hßtßrologos.

Promotores que pueden usarse en la secuencia genética incluyen los promotores NOS, OCS y CaMV. Un promotor vegetal eficiente que puede usarse es un promotor vegetal sobreproductor. Los promotores vegetales sobreproductores que pueden ser usados en la invención incluyen el promotor de la proteína ligante de clorofila a-ß y el promotor de la sub-unidad pequeña [ss] de carboxilasa de ribulosa-l,5-bifosfato de soya. Ver por ejemplo Berry-Lowe, et. al., J.Molecular and APP.Gen. : vol. 1; págs. 483-498; [1982]. Esos dos promotores se sabe que son inducidos por la luz en células vegetales eucaritotica. Ver por ejemplo An Agricultural Perspectiva, A. Cashmnore, Pelham, Nueva York; págs. 29-38; (1983); G. Coruzzi, et. al. J.Blol.tTh m. : vol. 258; pégs. 1399; (1983); y P. Dunsmuir et. al., and AP . Gen . I vol. 2; pag. 285, [1983]. El cartucho de expresión contiene el gene estructural de la proteína de esta invención ligada operativamente a las secuencias de control deseadas puede ligarse en un vector clonante adecuado. En general, se usan vectores de plasmidoß o virales [bacteriófagos] que contienen secuencias de replica y control derivadas de las especies compatibles con la célula anfitriona. El vector de clonación típicamente portara un origen de replica si como genes específicos que son capaces de proporcionar marcadores de selección fßnotipica en laa cálulaa anfitrionaß transformadas. Típicamente, se usan loe genes que confieren resistencia a los antibióticos o herbicidas seleccionados. Después de que el material genético se introduce en las células objetivas, las células y/o colonias transformadas de las células pueden aislarse por medio de la selección en base a esos marcadores. Típicamente, se usara una célula anfitriona intermedia se usara en la practica de la invención para aumentar el numero de copias del vector clonante. Con un numero grande de copias, el vector que contiene el gene de interés puede aislarse en cantidades importantes para introducirse en las células vegetales. Las células vegetales que pueden usarse en la practica de la invención incluyen procariotes, incluyendo anfitriones bacterianos tales como E.CQli, S.Tvphiirmr-him. y Ser tia marcescena. Los anfitriones eucarioticos tales como levadura u hongos filamentos pueden también usarse en esta invención. Y que estos anfitriones también son microorganismos será esencial asegurar que los promotores vegetales que no provoquen la expresión de la proteína en la bacteria se usen en el vector. El vector clonante aislado se introducirá entonces en la célula vegetal usando cualquier técnica conveniente incluyendo electroporacion [en protoplaatoa] , retrovirua, bombardeo y microinyección en células de plantas monocotiledoneaß o dicotilendoneaß en cultivos células o de tejidos para proporcionar célulaa vegetales transformada» qu» contienen como ADN extraño cuando menos una copia de la secuencia de ADN del cartucho de expresión vegetal. Preferentemente las especies monocotiledoneas se seleccionaran de maíz, sorgo, trigo o arroz, y las especies dicotiledóneas se seleccionaran de soya, alfalfa, colza, girasol o tomate. Usando técnicas conocidas los protoplastos pueden regenerarse y el cultivo células o de te idos puede regenerarse para formar plantas fértiles enteras que portan y expresan el gene para una proteína de acuerdo con la invención. De acuerdo con esto, una modalidad altamente preferida de la presente invención es una planta de maíz transformada, cuyas células contienen como ADN extraño cuando menos una copia de la secuencia de ADN de un cartucho de expresión de esta invención. También aquellos con experiencia ordinaria en la técnica apreciaran que los vectores vegetales provistos aquí pueden incorporarse en aarohacterium turnefacl na, que pueden usarse para transferir el vector en células vegetales susceptibles, principalmente de especies dicotiledóneas. Asi la invención provee un método para aumentar los niveles de metionina en plantas dicotiledóneas susceptibles de aarobacterium tu efaclena en las cuales el cartuchos de expresión se introducen en las células al infectar las células con Agrnbacterium tumefacían*, del cual un plasmido ha sido modificado para incluir un cartucho de expresión vegetal de la invención.

LISTADO DE LA SECUENCIA [1] INFORMACIÓN GENERAL: [i] SOLICITANTE: PIONNER HI-BRED INTERNATIONAL, INC. [ii] TITULO DE LA INVENCIÓN: DERIVADOS DE a-HORDOTIONINA CON ALTO CONTENIDO DE METIONI A [iii] NUMERO DE SECUENCIAS: 3 [iv] DIRECCIÓN PARA CORRESPONDENCIA [A] DESTINATARIO: PIONNER HI-BRED INTERNATIONAL, INC. [B] DIRECCIÓN: 700 Capital Square, 400 Locust Street [C] CIUDAD: Des Moines [D] ESTADO: Iowa [E] PAÍS: EE.UU. [F] CÓDIGO POSTAL: 50309 [v] FORMA LEGIBLE PARA LA COMPUTADORA: [A] TIPO DE MEDIO: Disco flexible [B] COMPUTADORA: PC compatible con IBM [C] SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS [D] SOFTWARE: Patentln Realease # 1.0, versión #1.30 [vi] DATOS DE LA SOLICITUD ACTUAL: [A] NUMERO DE SOLICITUD:PCT: [B] FECHA DE PRESENTACIÓN: [C] CLASIFICACIÓN: [vii]INFORMACIÓN SOBRE EL ABOGADO/AGENTE: [A] NOMBRE: Simón, Soma G. [B] NUMERO DE REGISTRO: 37,444 [C] NUMERO DE REFERENCIA/DOCUMENTO: 355-PCT [2] INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO.:l: [i] CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: [A] LONGITUD: 45 aminoácidos [B] TIPO: aminoácido [C] TOPOLOGÍA: lineal [XI] DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO. 1: Lys Ser Cys Cys Arg Ser Thr Leu Gly Arg Asn Cys Tyr Asn Leu Cys 1 5 10 15 Arg Val Arg Gly Ala Gln Lys Ley Cys Ala Gly Val Cys Arg Cys Lys 20 25 30 Leu Thr Ser Ser Gly Lys Cys Pro Thr Gly Phe Pro Lys 35 40 45 [2] INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO.: 2: [i] CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: tA] LONGITUD: 45 aminoácidos [B] TIPO: aminoácido [D] TOPOLOGÍA: lineal [XI] DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO. 2: Lys Ser Cys Cys Arg Ser Thr Mßt Gly Arg Mßt Cys Tyr Aan Mßt Cya 1 5 10 15 Arg Met Arg Gly Ala Met Lyß Leu Cyß Ala Gly Val Cyß Arg Cyß Lys 20 25 30 Mßt Thr Ser Ser Gly Lya Cya Pro Met Gly Pha Pro Lya 35 40 45 [2] INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO.: 3: [A] LONGITUD: 45 aminoaciodos [B] TIPO: aminoácido [D] TOPOLOGÍA: lineal [XI] DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO. 3: Met Ser Cys Cys Met Ser Thr Met Gly Arg Met Cys Tyr Asn Met Cys 1 5 10 15 Met Met Met Gly Ala Met Met Met Cys Ala Gly Val Cys Met Cys Met 20 25 30 Met Thr Ser Ser Gly Met Cys Pro Met Gly Phe Pro Lys 35 40 45

Claims

REIVINDICACIONES 1.- Una proteína que tiene la secuencia con la IDENTIFICACIÓN DE SECUENCIA NO. 3 en la cual los residuos aminoácidos en una o mas de las posiciones 1,5,8,11,15,17, 18,19,22,23,24,30,32,33,38 y 41 son metionina y el resto de los residuos en esas posiciones son los residuos de las posiciones correspondientes en la IDENTIFICACIÓN DE SECUENCIA NO. 1.
2.- Una proteína de acuerdo con la reivindicación 1 en la cual uno o mas de los residuos aminoácidos en 8,11,15,18, 22,33 y 41 son metionina.
3.- Una proteína de acuerdo con la reivindicación 2 en la cual cuando menos 3 de los residuos aminoácidos en las posicioneß 8,11,15,18, 22,33 y 41 son metionina.
4.- Una proteína de acuerdo con la reivindicación 3 en la cual cuando menos 5 de los residuos aminoácidos en las posiciones 8,11,15,18, 22,33 y 41 son metionina.
5.- Una secuencia nucleotida que codifica una proteína que tiene la secuencia correspondiente a la IDENTIFICACIÓN DE SECUENCIA NO. 2, en la cual los residuos aminoácidos en una o maß de laß posicioneß 1,5,8,11,15,17,18,19,22,23,24,30, 32,33,38 y 41 son metionina y el resto de loe reßiduoß en eßaß posiciones son los residuos de laß posiciones correspondientes en la IDENTIFICACIÓN DE SECUENCIA NO. 1.
6.- Una secuencia de ARN que codifica una proteína que tiene la secuencia correspondiente a la IDENTIFICACIÓN DE SECUENCIA NO. 2, en la cual los residuos aminoácidos en una o mas de las posiciones 1,5,8,11,15,17,18,19,22,23,24,30, 32,33,38 y 41 son metionina y el resto de loa residuos en esas posiciones son los residuos de las posiciones correspondientes en la IDENTIFICACIÓN DE SECUENCIA NO. 1.
7.- Una secuencia de ADN que codifica una proteína que tiene la secuencia correspondiente a la IDENTIFICACIÓN DE SECUENCIA NO. 3, en la cual los residuos aminoácidos en una o mas de las posiciones 1,5,7,8,11,15,17,18,19,22,23,24,30, 32,33,38 y 41 son treonina y el resto de los residuos en esas posiciones son los residuos de las posiciones correspondientes en la IDENTIFICACIÓN DE SECUENCIA NO. 1.
8.- Un cartucho de expresión que contiene la secuencia de ADN de acuerdo con la reivindicación 7 unida de forma operable a las secuencias reguladoras de la planta que provoca la expresión de la secuencia de ADN en las células de la planta.
9.- Un vector de transformación bacteriana que consiste de un cartucho de expresión de acuerdo con la reivindicación 8, unido de manera operatoria a laß ßecuenciaß reguladoraß de la expresión bacteriana que provocan la replica del cartucho de expresión en laß células bacterianas.
10.- Células bacterianas que contienen como plasmido extraño cuando menos una copia de un vector de transformación bacteriana de acuerdo con la reivindicación 9.
11.- Células vegetales transformadas que contienen cuando menos una copia del cartucho de expresión de acuerdo con al reivindicación 8.
12.- Las células vegetales transformadas de acuerdo con la reivindicación 11, en la cual las células son de una especie monocotiledonea.
13.- Las células vegetales transformadas de acuerdo con la reivindicación 11, en la cual lars células se seleccionan del grupo que consiste de células de maíz, sorgo, trigo y arroz.
14.- Las células vegetales transformadas de acuerdo con la reivindicación 11, en la cual las células son de una especie dicotiledónea.
15.- Las células vegetales transformadas de acuerdo con la reivindicación 14, en la cual las células se seleccionan del grupo que consiste de células de soya, alfalfa, colza, girasol, tabaco y tomate.
16.- Un cultivo celular o de tejidos de maíz que consiste de células de acuerdo con la reivindicación 13.
17.- Un método para mejorar el contenido de treonina de una célula o semilla vegetal que comprende la etapa de expresar una prot?ína de acuerdo con la reivindicación 1 en la célula o la semilla.
18.- Un método de acuerdo con la reivindicación 17 en el cual la planta es una planta dicotiledónea.
19.- Un método de acuerdo con la reivindicación 17 en ßl cual la planta ßß una planta monocotiledonea.
20.- El método de acuerdo con la reivindicación 19 por medio del cual se mejora el contenido de metionina de la semilla de la planta.