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MX2015004757A - Conjugados de suministro de farmacos que contienen aminoacidos no naturales y metodo para usarlos. - Google Patents

Conjugados de suministro de farmacos que contienen aminoacidos no naturales y metodo para usarlos.

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Publication number
MX2015004757A
MX2015004757A MX2015004757A MX2015004757A MX2015004757A MX 2015004757 A MX2015004757 A MX 2015004757A MX 2015004757 A MX2015004757 A MX 2015004757A MX 2015004757 A MX2015004757 A MX 2015004757A MX 2015004757 A MX2015004757 A MX 2015004757A
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MX
Mexico
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cancer
pharmaceutically acceptable
acceptable salt
compound according
compound
Prior art date
Application number
MX2015004757A
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English (en)
Inventor
Iontcho Radoslavov Vlahov
Christopher Paul Leamon
Original Assignee
Endocyte Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
Application filed by Endocyte Inc filed Critical Endocyte Inc
Publication of MX2015004757A publication Critical patent/MX2015004757A/es

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Abstract

En la presente se describen conjugados de suministro de fármacos para la terapia dirigida. Específicamente, en la presente se describen conjugados de suministro de fármacos que incluyen conectores polivalentes que comprenden uno o más aminoácidos no naturales que son útiles para tratar cánceres y enfermedades inflamatorias.

Description

CONJUGADOS DE SUMINISTRO DE FÁRMACOS QUE CONTIENEN AMINOÁCIDOS NO NATURALES Y MÉTODOS PARA USARLOS CAMPO DE LA INVENCION La invención descrita en la presente se refiere a conjugados de suministro de fármacos para terapia dirigida a un blanco. Específicamente, la invención descrita en la presente se refiere a conjugados de suministro de fármacos que incluyen conectores polivalentes que comprenden uno o más aminoácidos no naturales.
ANTECEDENTES DE LA INVENCION El sistema inmune de los mamíferos provee un medio para el reconocimiento y la eliminación de células patógenas, tales como células de tumores y otros patógenos extraños invasores. Si bien el sistema inmune normalmente provee una fuerte línea de defensa, existen numerosos casos en los cuales las células patógenas, tales como las células de cáncer y otros agentes infecciosos evaden una respuesta inmune del hospedero y proliferan o persisten en la patogenicidad del hospedero. Se han desarrollado agentes quimioterapéuticos y las terapias de radiación para eliminar, por ejemplo neoplasmas replicantes. Sin embargo, muchos de los agentes quimioterapéuticos actualmente disponibles y regímenes de terapia de radiación tienen efectos colaterales adversos porque carecen de suficiente selectividad para destruir en forma preferencial Ref .:255963 células patógenas y en consecuencia, también dañan las células hospederas normales, tales como las células del sistema hematopoyético. Los efectos colaterales adversos de estos fármacos anticáncer resaltan la necesidad del desarrollo de terapias nuevas selectivas para poblaciones de células patógenas y con toxicidad del hospedero reducida.
Se ha descubierto que los conjugados de suministro de fármacos que incluyen conectores polivalentes formados a partir de uno o más aminoácidos no naturales son eficaces en el tratamiento de poblaciones de células patógenas.
En una de las modalidades ilustrativas y no taxativas de la invención, en la presente se describen compuestos de la fórmula: B-L-Dx.
En otra modalidad, también se describen en la presente composiciones farmacéuticas que contienen uno o más de los compuestos. En uno de los aspectos, las composiciones incluyen una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más compuestos para tratar a un paciente con cáncer, inflamación y similares. Se debe entender que las composiciones pueden incluir otros componentes y/o ingredientes, que incluyen, en forma no taxativa, otros compuestos terapéuticamente activos y/o uno o más portadores, diluyentes, excipientes y similares. En otra modalidad, también se describen en la presente métodos para usar los compuestos y las composiciones farmacéuticas para tratar a pacientes con cáncer, inflamación y similares. En uno de los aspectos, los métodos incluyen el paso de administrar uno o más de los compuestos y/o las composiciones descritos en la presente a un paciente con cáncer, inflamación, y similares. En otro aspecto, los métodos incluyen administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más compuestos y/o composiciones descritos en la presente para tratar a pacientes con cáncer, inflamación y similares. En otra modalidad, también se describe el uso de los compuestos y las composiciones en la fabricación de un medicamento para tratar a pacientes con cáncer, inflamación y similares. En uno de los aspectos, los medicamentos incluyen una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más compuestos y/o composiciones para tratar a un paciente con cáncer, inflamación y similares.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1A muestra la afinidad relativa de EC1669 en células KB, 1 hora a 37°C. La Figura IB muestra la afinidad relativa de EC1669 en células CHO-b, 1 hora a 37°C.
La Figura 2 muestra el efecto citostático de EC1669 sobre células RAW264.7, como lo describe la viabilidad de células XTT a las 2 horas y a las 72 horas.
La Figura 3A muestra la actividad in vivo sola de EC1456 contra tumores de KB en ratones nu/nu a los que se administra 1 pmol/kg tres veces por semana (M/W/F) (TIW) durante dos semanas consecutivas (·), comparado con EC1456 que se administra conjuntamente con EC0923 a 100 mmo?/kg (A), y controles (PBS) sin tratar (¦). La línea de puntos vertical representa el día de la dosis final. La Figura 3B muestra que EC1456 no derivó en ninguna toxicidad grave observable que se determina por el peso corporal de los animales.
La Figura 4A muestra la actividad de EC1663 en ratones nu/nu que tienen tumores KB subcutáneos, donde EC1663 se administró por vía intravenosa comenzando el Día 7 con 0,5 mGhoI/kg (A), tres veces por semana (M/W/F) durante un período de 2 semanas, y comparado con controles sin tratar (¦), N = 5 animales por cada grupo. Línea de puntos vertical = día de la dosificación final. La Figura 4A muestra 4/4 PRs en los animales del ensayo. La Figura 4B muestra que EC1663 no presentó una toxicidad importante del animal hospedero.
La Figura 5A muestra la actividad de EC1456 contra tumores MDA-MB-231 subcutáneos establecidos. Los animales que tienen tumores MDA-MB-231 subcutáneos (94-145 mm3) se trataron por vía intravenosa comenzando el Día 17 con 2 mmol/kg (panel A) de EC1456 (·), tres veces por semana (M/W/F) durante un período de 2 semanas, y comparado con los animales sin tratar (¦), como se muestra en la Figura 5A. N = 5 animales por cada grupo. Línea de puntos vertical = día de la dosis final. La Figura 5B muestra que EC1456 no produjo una toxicidad del animal complete grave como se determinó por el porcentaje de cambio de peso.
La Figura 6A muestra la actividad de EC1456 en animales que tienen tumores KB-CR2000 subcutáneos (98-148 mm3), donde EC1456 se administró por vía subcutánea comenzando el Día 6 con 2 mmo?/kg (·), tres veces por semana (M/W/F) durante un período de 2 semanas, o con 3 mg/kg de cisplatino (A), dos veces por semana (T/Th) durante un período de 2 semanas, y comparado con los controles sin tratar (¦), N = 5 animales por cada grupo. Línea de puntos vertical = día de la dosificación final. La Figura 6B muestra que EC1456 no presentó una toxicidad del animal hospedero importante, y que el cisplatino sí presentó una toxicidad del animal hospedero importante durante el período de dosificación.
La Figura 7 muestra la eficacia in vivo de EC1496 contra la artritis inducida por coadyuvantes. Las flechas indican los días de tratamiento, (a) control sano, (b) control sin tratar, (c) EC1496, (d) EC1496 + EC0923.
La Figura 8A muestra la eficacia in vivo de EC1669 contra la artritis, (a) control sano, (a) control sin tratar, (b) EC1669 (375 nmol/kg), (c) EC1669 + 500x EC0923. La Figura 8B muestra que EC1669 no presenta toxicidad del animal completa, (a) control sin tratar, (b) EC1669 (375 nmol/kg), (c) EC1669 + 500x EC0923, (d) control sano.
La Figura 9A muestra la eficacia in vivo de EC1669 contra la artritis, que se determina por la hinchazón de la pata. La Figura 9B muestra la eficacia in vivo de EC1669 contra la artritis, que se determina por radiografías óseas.
La Figura 10A muestra la eficacia in vivo de EC1669 solo, y la terapia conjunta de combinación de EC1669 más CellCept en ratas AIA, donde el día 0 es 9 días después de la inducción, y las flechas indican los días de tratamiento, (a) control sano, (b) control sin tratar, (c) EC1669 (1000 nmol/kg, siw, se), (d) CellCept™ (30 mg/kg, po, qdx5), (e) EC1669 + CellCept™. La Figura 10B muestra la toxicidad del animal completa comparada con el control para cada uno de los protocolos de tratamiento.
La Figura 11 muestra la eficacia in vivo de EC1669 solo, y la terapia conjunta de combinación de EC1669 más CellCept en ratas AIA, que se determina por la hinchazón de la pata.
La Figura 12A muestra la eficacia in vivo de EC1669 contra EAU (calificaciones de uveítis totales para ambos ojos). Se trata a los animales con EC1669 (¦), EC1669 más EC0923 (?), y MTX (¨) cada dos días comenzando el día 8 después de la inducción de EAU o de animales sin tratar (·). El Día 0 es 8 días después de la inducción y las flechas indican los días de tratamiento. La Figura 12B muestra que EC1669 no produce una toxicidad del animal total.
La Figura 13A muestra la eficacia in vivo de EC1496 contra EAU (calificaciones de uveítis totales para ambos ojos), (a) control sin tratar con uveítis, (b) EC1496 (375 nmol/kg), (c) EC1496 + exceso de EC0923. La Figura 13B muestra la eficacia in vivo de EC1496 contra EAU, que se determina por histología.
La Figura 14A muestra la eficacia in vivo de EC1669 contra EAE, (a) control con EAE sin tratar, (b) EC1669 (250 nmol/kg), (c) EC1669 + exceso de EC0923. Se trató a los animales cada dos días (como lo indican las flechas) comenzando el día 8 después de la inducción de EAE, y comparado con el control sin tratar. La Figura 14B muestra el porcentaje de cambios en el peso corporal (b), promediado para cada grupo.
La Figura 15 muestra la eficacia in vivo de EC1496 contra EAE. Se muestran las calificaciones de EAE individuales de animales sin tratar y animales tratados con EC1496 y EC1496 más EC0923 cada dos días comenzando el día 8 después de la inducción de EAE y se las compara con el control sin tratar.
La Figura 16A muestra la f rmacocinética de EC1496 (500 nmol/kg, subcutáneo), y la producción de aminopterina y aminopterina hidracida. La Figura 16B muestra la farmacocinética de EC0746 (compuesto comparador, 500 nmol/kg, subcutáneo), y la producción de aminopterina y aminopterina hidracida.
Las Figuras 17A-17F muestran la biodistribución farmacocinética de 3H-EC1669, figuras 17A, 17C, y 17E; y 3H-metotrexato en ratones, figuras 17B, 17D, y 17F. Los compuestos del ensayo se administraron a ratones Balb/c a 500 nmol/kg, subcutáneos.
La Figura 18 muestra la comparación de la captación de RBC de 3H-EC1669 (¦) y 3H-MTX (?) en ratones, como una medida de radioactividad en el tiempo.
La Figura 19 muestra la toxicidad del animal entera relativa entre (b) EC1496 (3 pmol/kg) y (c) EC0746 (compuesto comparador, 3 pmol/kg)), y comparado con el control con excipiente (a) cuando la dosis de BIW durante 2 semanas en ratas con deficiencia de folato.
La Figura 20 muestra la dosis máxima tolerada (MTD) de EC1456 comparado con los controles con excipiente. Control con excipiente (¦), EC1456 a 0,33 pmol/kg (·), EC1456 a 0,41 mmo?/kg (Á), EC1456 a 0,51 mtho?/kg (?), y EC1456 a 0,67 mmol/kg (¨).
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Se describen varios ejemplos de modalidades de la invención mediante las siguientes cláusulas.
Un compuesto de la fórmula B-L(D)X, o una sal farmacéuticamente aceptable de él, en donde B es un radical de una unión al receptor de la superficie celular y/o un ligando dirigido, D es en cada caso un radical de un fármaco seleccionado independientemente, x es un número entero seleccionado de l, 2, 3, 4y 5y L es un conector desprendible polivalente que comprende uno o más aminoácidos no naturales y donde B está unido en forma covalente a L y L está unido en forma covalente a cada D; y donde el compuesto no es ninguna ni ningún subgrupo o subconjunto de las siguientes fórmulas: .
. EC0074 l _ · · EC0136 .
, EC0260 y/o donde el compuesto no es de las siguientes fórmulas EC0153 y/o donde el compuesto no es ninguna ni ningún subgrupo o subconjunto de las siguientes fórmulas ' . I - - - - - - - - ' 5 . . l | EC0894 y/o donde el compuesto no es ninguna ni ningún subgrupo subconjunto de las siguientes formulas: EC0082 1 - EC0084 y/o donde el compuesto no es de la siguiente fórmula: EC0060 y/o ninguna combinación de los precedentes; o ninguna de sus sales farmacéuticamente aceptables.
El compuesto de la cláusula precedente en donde B-L(D)X es capaz de unirse al receptor de la superficie celular.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde el ligando es un ligando de unión a una vitamina.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde el ligando es un ligando de unión al receptor de folato.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde el ligando es un folato.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde el ligando es un folato que comprende D-glutamilo, también denominado en la presente D-folato, o ácido pteroil-D-glutámico. Se debe entender en la presente que cuando B es un radical de D-folato, la parte de D-glutamilo incluida de B no forma parte del conector L.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde B es un radical de folato no natural de la fórmula El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un aminoácido no natural tiene la modalidad de D.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un aminoácido no natural se selecciona de D-alanina, ácido D-aspártico, D-asparagina, D-cisteína, ácido D-glutámico, D-fenilalanina, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leucina, D-metionina, D- prolina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-valina, D-triptófano, D-tirosina, y D-ornitina, y cualquier derivado de aminoácido de ellos.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un aminoácido no natural se selecciona de ácido D-aspártico, D-asparagina, D-cisteína, ácido D-glutámico, D-histidina, D-lisina, D-metionina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-triptófano, D-tirosina, y D-ornitina, y cualquier derivado de aminoácido de ellos.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un aminoácido no natural se selecciona de ácido D-aspártico, D-asparagina, D-cisteína, ácido D-glutámico, D-histidina, D-lisina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-triptófano y D-ornitina, y cualquier derivado de aminoácido de ellos.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un aminoácido no natural se selecciona de ácido D-aspártico, D-cisteína, ácido D-glutámico, D-lisina, D-arginina, D-serina, y D-ornitina, y cualquier derivado de aminoácido de ellos.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde L comprende dos o más aminoácidos no naturales.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde L comprende tres o más aminoácidos no naturales.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde L comprende cuatro o más aminoácidos no naturales.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde L además comprende uno o más disulfuros.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un disulfuro comprende D-cisteinilo.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un disulfuro comprende L-cisteinilo.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde L además comprende uno o más radicales hidrófilos divalentes.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde L también comprende dos o más radicales hidrófilos divalentes.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde L además comprende tres o más radicales hidrófilos divalentes.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde L también comprende cuatro o más radicales hidrófilos divalentes.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde L además comprende uno o más radicales divalentes.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde L también comprende dos o más radicales polioxi divalentes.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde L además comprende tres o más radicales polioxi divalentes.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde L además comprende cuatro o más radicales polioxi divalentes.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde L además comprende uno o más radicales polihidroxi divalentes.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde L además comprende dos o más radicales polihidroxi divalentes.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde L además comprende tres o más radicales polihidroxi divalentes.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde L además comprende cuatro o más radicales polihidroxi divalentes.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un aminoácido no natural comprende un radical polihidroxi.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos dos aminoácidos no naturales comprenden un radical de polihidroxi.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos tres aminoácidos no naturales comprenden un radical de polihidroxi.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos cuatro aminoácidos no naturales comprenden un radical de polihidroxi.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos uno de los radicales de polihidroxi es de la fórmula: CH2-(CH(OH))n-CH2-0H donde n se selecciona de 1, 2, 3, 4, 5, y 6.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde n se selecciona de 1, 2, 3 y 4.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde n se selecciona de 3 y 4.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde L comprende un radical de ácido poliglutámico divalente, donde por lo menos un ácido glutámico forma una amida con un radical de aminopolihidroxi.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde L comprende un radical de ácido poliglutámico divalente, donde por lo menos dos ácido glutámicos forman una amida, con un radical de aminopolihidroxi.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde L comprende un radical de ácido poliglutámico divalente, donde por lo menos tres ácidos glutámicos forman una amida con un radical de aminopolihidroxi.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde L comprende un radical de ácido poliglutámico divalente, donde por lo menos cuatro ácidos glutámicos forman una amida con un radical de aminopolihidroxi.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos uno de los ácidos glutámicos es ácido D-glutámico.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos dos de los ácidos glutámicos son ácido D-glutámico.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos tres de los ácidos glutámicos son ácido D-glutámico.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos cuatro de los ácidos glutámicos son ácido D-glutámico.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos uno de los ácidos glutámicos es ácido D-glutámico no sustituido.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos dos de los ácidos glutámicos son ácido D-glutámico no sustituido.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos tres de los ácidos glutámicos son ácido D-glutámico no sustituido.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos cuatro de los ácidos glutámicos son ácido D-glutámico.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde L comprende un radical de ácido poli(D-glutámico) divalente, donde por lo menos un ácido glutámico forma una amida con un radical de aminopolihidroxi.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde L comprende un radical de ácido D(poli-glutámico) divalente, en donde por lo menos dos ácidos glutámico forman una amida con un radical de aminopolihidroxi.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde L comprende un radical de ácido poli(D-glutámico) divalente, en donde por lo menos tres ácidos glutámicos forman una amida con un radical de aminopolihidroxi.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde L comprende un radical de ácido poli (D-glutámico) divalente, en donde por lo menos cuatro ácidos glutámicos forman una amida con un radical de aminopolihidroxi.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes, en donde L comprende un radical divalente de la fórmula (K-L)d, donde K es un radical de ácido D-glutámico divalente, L es un radical de ácido L-glutámico divalente que forma una amida con un radical de aminopolihidroxi y d es l, 2, 3, o 4.
El compuesto de conformidad con la cláusula precedente en donde d es 2, 3, o 4.
El compuesto de conformidad con la clausula precedente en donde d es 3 o 4.
El compuesto de conformidad con la cláusula precedente en donde d es 3.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos uno de los radicales de aminopolihidroxi es de la fórmula: NH-CH2- (CH(OH))m-CH2-0H donde m se selecciona de 1, 2, 3, 4, 5, y 6.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos uno de los radicales de aminopolihidroxi es de la fórmula: NH-CH2-(CH(OH))m-R donde m se selecciona de 1, 2, 3, 4, 5, y 6; y R es H, alquilo, cicloalquilo, o arilalquilo.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde m se selecciona de 1, 2, 3, y 4.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde m se selecciona de 3 y 4.
El compuesto de cualquiera de la clausulas precedentes en donde L-D comprenden un radical de la formula S-CH2CH2-O-C(O)- D.
El compuesto de cualquiera de la clausulas precedentes en donde L-D comprenden un radical de la formula S-S-CH2CH2-O-C(O)-D El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde L comprende un radical divalente de la fórmula S-CH2CH2-O-C(O).
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde L comprende un radical divalente de la fórmula S-S-CH2CH2-0-C(O).
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde x es 3.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde x es 2.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes, en donde x es 1.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un fármaco es un agente citotóxico.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un fármaco es un agente de tratamiento del cáncer.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un fármaco es un alcaloide de vinca.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un fármaco es una monohidracida de desacetil vinblastina.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un fármaco es tubulisina.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un fármaco es tubulisina A.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un fármaco es tubulisina B.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un fármaco es hidracida de tubulisina A.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un fármaco es hidracida de tubulisina B.
El compuesto de cualquiera de las clausulas precedentes en donde al menos un fármaco es una tubulisina en donde el residuo TUV incluye un éter animal.
El compuesto de cualquiera de las clausulas precedentes en done al menos un fármaco es una hidracida de tubulisina en donde el residuo TUV incluye un éter animal.
El compuesto de cualquiera de las clausula precedentes en donde al menos un fármaco es un agente de tratamiento de la inflamación.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un fármaco es un agente antiinflamatorio.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un fármaco es un inhibidor de reductasa de dihidrofolato.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un fármaco es aminopterina o metotrexato.
El compuesto de cualquiera de las clausulas precedentes en donde al menos un fármaco es aminopterina.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un fármaco es un inhibidor del blanco de rapamicina de mamífero (mTOR).
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un fármaco es sirolimus (rapamicina), temsirolimus, everolimus, o ridaforolimus.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un fármaco no es T-2 micotoxina.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un fármaco no es duocarmicina.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un fármaco no es mitomicina.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un fármaco no es monohidracida de desacetil vinblastina.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un D es un radical de la fórmula: El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un D es un radical de la fórmula: _ .
I > , El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un D es un radical de la fórmula: donde n = 1, 2, 3, 4, 5, o 6, o alternativamente, n = 1, 2, o 3, o alternativamente, n = 2 o 3.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un D es un radical de la fórmula: donde n = 1, 2, 3, 4, 5, o 6, o alternativamente, n = 1, 2, o 3, o alternativamente, n = 2 o 3.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde por lo menos un fármaco es un compuesto capaz de unirse o de reaccionar con un ácido nucleico o un factor de transcripción de ADN, un profármaco de ellos.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde B-L es un radical de la fórmula: , - - El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde B-L es un radical de la fórmula: - - - - i El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde B-L es un radical de la fórmula: El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde B-L es un radical de la fórmula - ? I El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde el compuesto es de la fórmula EC1456 . - 1 , I o una sal farmacéuticamente aceptable de él.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde el compuesto no es de la fórmula EC1456 i o una sal farmacéuticamente aceptable de él.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde el compuesto es de la fórmula EC1496 ..1 , ' o una sal farmacéuticamente aceptable de él.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde el compuesto no es de la fórmula EC1496 una sal farmacéuticamente aceptable de él.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde el compuesto es de la fórmula EC1669 1 o una sal farmacéuticamente aceptable de él.
El compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde el compuesto no es de la fórmula EC1669 l . o una sal farmacéuticamente aceptable de él.
Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en combinación con uno o más portadores, diluyentes o excipientes, o una combinación de ellos.
Una dosis unitaria o una forma de dosificación unitaria que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más compuestos de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes, opcionalmente en combinación con uno o más portadores, diluyentes o excipientes, o una combinación de ellos.
Una composición para tratar el cáncer o la inflamación en un animal hospedero, la composición comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más compuestos de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes, o una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más compuestos de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes, opcionalmente que además comprende uno o más portadores, diluyentes o excipientes, o una combinación de ellos.
Un método para tratar el cáncer o la inflamación en un animal hospedero, el método comprende el paso de administrar al animal hospedero una composición que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más compuestos de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes o una composición farmacéutica que comprende uno o más compuestos de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes, opcionalmente que también comprende uno o más portadores, diluyentes o excipientes, o una combinación de ellos.
El uso de uno o más compuestos de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes, opcionalmente en combinación con uno o más portadores, diluyentes o excipientes, o una combinación de ellos, en la fabricación de un medicamento para tratar un cáncer o una inflamación en un animal hospedero.
El método o la composición o una dosis unitaria de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde el cáncer es un cáncer resistente al fármaco.
El método o la composición o la dosis unitaria o el uso de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde el cáncer es un cáncer resistente al platino.
El método o la composición o la dosis unitaria o el uso de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde el cáncer es un cáncer resistente al cisplatino.
El método o la composición o la dosis unitaria o el uso de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde el cáncer es un cáncer de ovarios.
El método o la composición o la dosis unitaria o el uso de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde el cáncer es un cáncer de ovarios resistente al fármaco.
El método o la composición o la dosis unitaria o el uso de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde el cáncer es un cáncer de ovarios resistente al cisplatino.
El método o la composición o la dosis unitaria o el uso de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde el cáncer es un cáncer de ovarios resistente al cisplatino, tal como cáncer de ovarios relacionado con NCI/ADR-RES o NCI/ADR-RES.
El método o la composición o la dosis unitaria o el uso de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde el cáncer es un cáncer de ovarios resistente al platino, tal como un cáncer de ovarios relacionado con IGROVCDDP o IGROVCDDP.
El método o la composición o la dosis unitaria o el uso de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde el cáncer es cáncer de mama.
El método o la composición o la dosis unitaria o el uso de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde el cáncer es un cáncer de mama resistente al fármaco.
El método o la composición o la dosis unitaria o el uso de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde el cáncer es un cáncer de mama triple negativo, tal como cáncer de mama relacionado con MDA-MB-231 o MDA-MB-231.
El método o la composición o la dosis unitaria o el uso de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde el cáncer es un cáncer de pulmón de células no pequeñas.
El método o la composición o la dosis unitaria o el uso de conformidad con cualquiera de las cláusulas precedentes en donde el cáncer es un carcinoma o cáncer hepatocelular.
Un compuesto intermedio para preparar un compuesto de conformidad con cualquiera de las clausulas precedentes, de la fórmula: o una sal farmacéuticamente aceptable de él, en donde L es un grupo saliente.
Un compuesto intermedio para preparar un compuesto de conformidad cualquiera de las clausulas precedentes de la fórmula : o una sal farmacéuticamente aceptable de él, en donde M es hidrógeno o un catión.
Un compuesto intermedio para preparar un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, de la fórmula í o una sal farmacéuticamente aceptable de él, en donde L es un grupo saliente.
En otra modalidad, los compuestos descritos en la presente se pueden internalizar en las células patógenas dirigidas uniéndolas al receptor de la superficie celular correspondiente. Específicamente, receptores de vitamina, tales como receptores de folato, se unen específicamente a la vitamina y la internalización puede ocurrir, por ejemplo, a través de la endocitosis mediada por el receptor. Una vez internalizado, el conector desprendible incluido en los compuestos descritos en la presente permite el suministro de la carga del fármaco al interior de la célula blanco, que por lo tanto reduce la toxicidad contra los tejidos no blanco. Por consiguiente, los compuestos descritos en la presente actúan en forma intracelular suministrando el fármaco a un proceso bioquímico intracelular.
En otra modalidad, los compuestos descritos en la presente presentan mayor especificidad para el receptor de folato comparados con los compuestos que no incluyen por lo menos un aminoácido no natural. En otra modalidad, los compuestos descritos en la presente muestran alta actividad para las células que expresan el receptor de folato. En otra modalidad, los compuestos descritos en la presente presentan una actividad in vitro e in vivo potente contra células patógenas, tales como las células KB, que incluyen las células KB resistentes al cisplatino, células NCI/ADR-RES-CI2, células IGROV1 y células MDA-MB-231. En otra modalidad, los compuestos descritos en la presente no presentan una unión importante a células negativas de receptor de folato. En otra modalidad, los compuestos descritos en la presente ingresan en células en forma preferencial o exclusiva a través de los receptores de folato de alta afinidad, tales como un receptor alfa (a) de folato y/o un receptor beta (b) de folato. En otra modalidad, los compuestos descritos en la presente generalmente no ingresan sustancialmente en las células mediante transporte masivo, tal como a través del portador de folato reducido (RFC, por sus siglas en inglés). En otra modalidad, los compuestos descritos en la presente presentan más baja toxicidad del animal hospedero comparados con los compuestos que no incluyen por lo menos un aminoácido no natural. En otra modalidad, los compuestos descritos en la presente presentan mayor estabilidad del suero comparados con los compuestos que no incluyen por lo menos un aminoácido no natural. En otra modalidad, los compuestos descritos en la presente se eliminan rápidamente comparados con los compuestos que no incluyen por lo menos un aminoácido no natural. En otra modalidad, los compuestos descritos en la presente se eliminan principalmente mediante eliminación renal comparada con la eliminación hepática.
Los compuestos descritos en la presente se pueden usar para aplicaciones de medicina clínica humana así como de veterinaria. Por lo tanto, el animal hospedero que aloja la población de células patógenas y tratado con los compuestos descritos en la presente puede ser humano o, en el caso de las aplicaciones veterinarias, puede ser un animal de laboratorio, agrícola, doméstico o salvaje. La presente invención se puede aplicar a animales hospederos que incluyen, en forma no taxativa, humanos, animales de laboratorio tales como roedores (por ejemplo, ratones, ratas, hámsteres, etc), conejos, monos, chimpancés, animales domésticos tales como perros, gatos y conejos, animales agrícolas tales como vacas, caballos, cerdos, ovejas, cabras, y animales salvajes en cautiverio tales como osos, pandas, leones, tigres, leopardos, elefantes, cebras, jirafas, gorilas, delfines y ballenas.
La invención es aplicable a poblaciones de células patógenas que producen una variedad de patologías en estos animales hospederos. De conformidad con la invención, por "células patógenas" se entiende células de cáncer, agentes infecciosos tales como bacterias y virus, células infectadas por bacterias o virus, macrófagos activados capaces de provocar un estado de enfermedad y cualquier otro tipo de células patógenas que expresan en forma exclusiva, expresan en forma preferencial, o sobreexpresan receptores de vitamina o receptores que se unen a análogos o derivados de vitaminas. Las células patógenas también pueden incluir todas las células que producen un estado de enfermedad para cuyo tratamiento con los compuestos descritos en la presente deriva en la reducción de los síntomas de la enfermedad. Por ejemplo, las células patógenas pueden ser células hospederas que son patógenas en algunas circunstancias tales como células del sistema inmune que son responsables de la enfermedad del injerto contra el hospedero, pero no son patógenas en otras circunstancias.
Por lo tanto, la población de células patógenas puede ser una población de células de cáncer que es tumorigénica, que incluye tumores benignos y tumores malignos, o puede ser no tumorigénica. La población de células de cáncer puede surgir espontáneamente o mediante procesos tales como mutaciones presentes en la línea germinal del animal hospedero o mutaciones somáticas, o se puede inducir en forma química, viral, o por radiación. La invención se puede utilizar para tratar cánceres tales como carcinomas, sarcomas, linfomas, enfermedad de Hodgekin, melanomas, mesoteliomas, linfoma de Burkitt, carcinomas nasofaríngeos, leucemias, y mielomas. La población de células de cáncer pueden incluir, en forma no taxativa, cáncer oral, tiroideo, endocrino, de piel, gástrico, esofágico, laríngeo, pancreático, de colon, de vejiga, óseo, de ovarios, cervical, uterino, de mamas, testicular, de próstata, rectal, renal, hepático y pulmonar.
En otra modalidad, también se describe el método o la composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las modalidades precedentes en donde la enfermedad se selecciona del grupo formado por artritis, que incluye artritis reumatoide y osteoartritis, glomerulonefritis, retinopatía proliferativa, restenosis, colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn, fibromialgia, psoriasis y otras inflamaciones de la piel, osteomielitis, síndrome de Sjógren, esclerosis múltiple, diabetes, aterosclerosis, fibrosis pulmonar, lupus eritematoso, sarcoidosis, esclerosis sistémica, rechazo de transplante de órganos (GVHD) e inflamaciones crónicas.
El fármaco puede ser cualquier molécula capaz de modular o modificar de otro modo la función celular, que incluye compuestos farmacéuticamente activos. Las moléculas adecuadas pueden incluir, en forma no taxativa, péptidos, oligopéptidos, oligopéptidos retro-inversos, proteínas, análogos de proteínas en los cuales por lo menos una ligadura que no es de péptido reemplaza a una ligadura de péptido, apoproteínas, glicoproteínas, enzimas, coenzimas, inhibidores de enzimas, aminoácidos y sus derivados, receptores y otras proteínas de la membrana, antígenos y anticuerpos de ellos; haptenos y anticuerpos de ellos; hormonas, lípidos, fosfolípidos, liposomas; toxinas; antibióticos; analgésicos; broncodilatadores; betabloqueantes; agentes antimicrobianos; agentes antihipertensivos; agentes cardiovasculares que incluyen antiarrítmicos, glucósidos cardiacos, antianginosos y vasodilatadores; agentes del sistema nervioso central que incluyen estimulantes, psicotrópicos, antimaníacos, y depresores; agentes antivirales; antihistamínicos; fármacos para el cáncer que incluyen agentes quimioterapéuticos; tranquilizantes; anti-depresivos; antagonistas de H-2; anticonvulsivos; antinauseosos; prostaglandinas y análogos de prostaglandinas; relajantes musculares; sustancias antiinflamatorias; inmunosupresores, estimulantes; descongestivos; antieméticos; diuréticos; antiespasmódicos; antiasmáticos; agentes anti-Parkinson; expectorantes; supresores de la tos; mucolíticos; y aditivos minerales y nutricionales.
Además, el fármaco puede ser cualquier fármaco conocido en el arte que es citotóxico, mejora la permeabilidad del tumor, inhibe la proliferación celular, promueve la apoptosis, reduce la actividad apoptótica en las células blanco, se usa para tratar enfermedades provocadas por agentes infecciosos, mejora una respuesta inmune endógena dirigida a las células patógenas, o es útil para tratar un estado de enfermedad provocado por todos los tipos de células patógenas. Los fármacos adecuados para su uso de conformidad con la presente invención incluyen adrenocorticoides y corticosteroides, agentes de alquilación, antiandrógenos, antiestrógenos, andrógenos, aclamicina y derivados de aclamicina, estrógenos, antimetabolitos tales como citosina arabinósido, análogos de purina, análogos de pirimidina y metotrexato, busulfán, carboplatino, clorambucil, cisplatino y otros compuestos platino, tamoxifeno, taxol, paclitaxel, derivados de paclitaxel, Taxotere, ciclofosfamida, daunomicina, rizoxina, toxina T2, alcaloides de plantas, prednisona, hidroxiurea, tenipósido, mitomicinas, discodermolidas, inhibidores de microtúbulos, epotilonas, tubulisinas, ciclopropil benz[e]indolona, seco-ciclopropil benz[e]indolona, O-Ac -seco-ciclopropil benz[e]indolona, bleomicina y cualquier otro antibiótico, mostazas de nitrógeno, nitrosureas, alcaloides de vinca, tales como vincristina, vinblastina, vindesina, vinbrelbina y análogos y derivados de ellas tales como monohidracida de desacetilvinblastina (DAVLBH), colchicina, derivados de colchicina, alocolchicina, tiocolchicina, tritil cisteína, halicondrina B, dolastatinas tales como dolastatina 10, amanitinas tales como a-amanitina, camptotecina, irinotecán, y otros derivados de camptotecina de ellos, geldanamicina y derivados de geldanamicina, estramustina, nododazol, MAP4, colcemid, agentes inflamatorios y proinflamatorios, inhibidores de la transducción de señales de péptidos y de peptidomiméticos, y cualquier otro fármaco o toxina reconocidos en el arte. Otros fármacos que se pueden usar incluyen rapamicinas, tales como sirolimus o everolimus, penicilinas, cefalosporinas, vancomicina, eritromicina, clindamicina, rifampina, cloranfenicol, antibióticos de aminogluclósidos, gentamicina, anfotericina B, aciclovir, trifluridina, ganciclovir, zidovudina, amantadina, ribavirina, y otros compuestos antimicrobianos conocidos en el arte.
En otra modalidad, el fármaco se selecciona de una criptoficina, bortezomib, tiobortezomib, una tubulisina, aminopterina, rapamicina, paclitaxel, docetaxel, doxorubicina, daunorrubicina, everolimus, a-amanatina, verucarina, didemnina B, geldanomicina, purvalanol A, everolimus, ispinesib, budesonida, dasatinib, una epotilona, una maitansina, y un inhibidor de tirosina cinasa, que incluye análogos y derivados de los precedentes.
En otra modalidad, el conjugado incluye por lo menos dos fármacos (D) seleccionados por ejemplo de un alcaloide de vinca, una criptoficina, bortezomib, tiobortezomib, una tubulisina, aminopterina, una rapamicina, tal como everolimus o sirolimus, paclitaxel, docetaxel, doxorrubicina, daunorrubicina, everolimus, -amanatina, verucarina, didemnina B, geldanomicina, purvalanol A, ispinesib, budesonida, dasatinib, una epotilona, una maitansina, metotrexato, aminopterina, y un inhibidor de tirosina cinasa, que incluye análogos y derivados de los precedentes. En una variante, los fármacos (D) son los mismos. En otra variante, los fármacos (D) son diferentes.
Los conjugados de suministro de fármacos y los compuestos descritos en la presente se pueden administrar en una terapia de combinación con cualquier otro fármaco conocido sea o no que el fármaco esté dirigido. Otros ejemplos de fármacos incluyen, en forma no taxativa, péptidos, oligopéptidos, oligopéptidos retro-inversos, proteínas, análogos de proteínas en los cuales por lo menos una ligadura que no contiene peptides reemplaza a una ligadura de péptidos, apoproteínas, glucoproteínas, enzimas, coenzimas, inhibidores de enzimas, aminoácidos y sus derivados, receptores y otras proteínas de la membrana, antígenos y anticuerpos de ellas, haptenos y anticuerpos de ellos, hormonas, lípidos, fosfolípidos, liposomas, toxinas, antibióticos, analgésicos, broncodilatadores, betabloqueantes, agentes antimicrobianos, agentes antihipertensivos, agentes cardiovasculares que incluyen antiarrítmicos, glucósidos cardiacos, antianginosos, vasodilatadores, agentes del sistema nervioso central que incluyen estimulantes, psicotrópicos, antimaníacos, y depresores, agentes antivirales, antihistamínicos, fármacos para el cáncer que incluyen agentes quimioterapéuticos, tranquilizantes, antidepresivos, antagonistas de H-2, anticonvulsivos, antinauseosos, prostaglandinas y análogos de prostaglandinas, relajantes musculares, sustancias antiinflamatorias, estimulantes, descongestivos, antieméticos, diuréticos, antiespasmódicos, antiasmáticos, agentes anti-Parkinson, expectorantes, supresores de la tos, mucolíticos, y aditivos minerales y nutricionales.
En otra modalidad por lo menos una composición adicional que comprende un factor terapéutico se puede administrar al hospedero en combinación o como un coadyuvante a la metodología detallada anteriormente, para mejorar la eliminación de la población de células patógenas mediada por un conjugado de suministro de fármacos, o se puede administrar más de un factor terapéutico adicional. El factor terapéutico se puede seleccionar de un compuesto capaz de estimular una respuesta inmune endógena, un agente quimioterapéutico, u otro factor terapéutico capaz de complementar la eficacia del conjugado de suministro de fármacos administrado. El método de la invención se puede realizar administrando al hospedero, además de los conjugados descritos anteriormente, compuestos o composiciones capaces de estimular una respuesta inmune endógena (por ejemplo, una citocina) que incluyen, en forma no taxativa, citocinas o factores de crecimiento celular inmune tales como interleucinas 1-18, factor de células madre, FGF básico, EGF, G-CSF, GM-CSF, ligando de FLK-2, HILDA, MIP-IOÍ, TGF-OÍ, TGF-b, M-CSF, IFN-OÍ, IFN-b, IFN-g, CD23 soluble, LIF, y combinaciones de ellos.
Se pueden usar combinaciones terapéuticamente efectivas de estos factores. En una de las modalidades, se pueden usar, por ejemplo, cantidades terapéuticamente efectivas de IL-2, por ejemplo, en cantidades que están en la gama de 0,1 MIU/m2/dosis/día en un régimen diario de varias dosis, e IFN-OÍ, por ejemplo, en cantidades que están en la gama de 0,1 MIU/m2/dosis/día a 7,5 MIU/m2/dosis/día en un régimen diario de varias dosis, junto con los conjugados de suministro de fármacos para eliminar, reducir o neutralizar células patógenas en un animal hospedero que aloja las células patógenas (MIU = millón de unidades internacionales; m2 = superficie corporal aproximada de un humano promedio). En otra modalidad, se usan IL-12 e IFN-a en las cantidades terapéuticamente efectivas descritas anteriormente para interleucinas e interferones y aún en otra modalidad, se usan IL-15 e IFN-OÍen las cantidades terapéuticamente efectivas descritas anteriormente para interleucinas e interferones. En otra modalidad, se usan IL-2, IFN-OÍ o IFN-g y GM-CSF en combinación en las cantidades terapéuticamente efectivas descritas anteriormente. La invención también contempla el uso de cualquier otra combinación efectiva de citocinas que incluyen combinaciones de otras interleucinas e interferones y factores estimulantes de colonias.
Los agentes quimioterapéuticos, que son, por ejemplo, citotóxicos por ellos mismos o pueden funcionar para mejorar la permeabilidad del tumor, también son adecuados para su uso en el método de la invención en combinación con los conjugados de suministro de fármacos. Tales agentes quimioterapéuticos incluyen adrenocorticoides y corticosteroides, agentes de alquilación, antiandrógenos, antiestrógenos , andrógenos, aclamicina y derivados de aclamicina, estrógenos, antimetabolitos tales como citosina arabinósido, análogos de purina, análogos de pirimidina y metotrexato, busulfán, carboplatino, clorambucil, cisplatino y otros compuestos platino, tamoxifeno, taxol, paclitaxel, derivados de paclitaxel, Taxotere, ciclofosfamida, daunomicina, rizoxina, toxina T2, alcaloides de plantas, prednisona, hidroxiurea, tenipósido, mitomicinas, discodermolidas, inhibidores de microtúbulos, epotilonas, tubulisina, ciclopropil benz[e]indolona, seco-ciclopropil benz[e]indolona, O-A c-seco-ciclopropil benz[e]indolona, bleomicina y cualquier otro antibiótico, mostazas de nitrógeno, nitrosureas, vincristina, vinblastina, y análogos y derivados de ellos tales como monohidracida de desacetilvinblastina, colchicina, derivados de colchicina, alocolchicina, tiocolchicina, tritil cisteína, Halicondrina B, dolastatinas tales como dolastatina 10, amanitinas tales como a-amanitina, camptotecina, irinotecan, y otros derivados de camptotecina de ellos, geldanamicina y derivados de geldanamicina, estramustina, nocodazol, MAP4, colcemid, agentes inflamatorios y proinflamatorios, inhibidores de la transducción de señales de péptidos y peptidomiméticos, y cualquier otro fármaco o toxina conocidos en el arte. Otros fármacos que se pueden usar de conformidad con la invención incluyen penicilinas, cefalosporinas, vancomicina, eritromicina, clindamicina, rifampina, cloranfenicol, antibióticos de aminoglucósidos, gentamicina, anfotericina B, aciclovir, trifluridina, ganciclovir, zidovudina, amantadina, ribavirina, maitansinas y análogos y derivados de ellos, gemcitabina, y cualquier compuesto antimicrobiano reconocido en el arte.
Como se usa en la presente, el término "conector" incluye una cadena de átomos que conecta dos o más partes funcionales de una molécula para formar un conjugado. De manera ilustrativa, la cadena de átomos se selecciona de C, N, O, S, Si y P, o C, N, O, S y P, C, N, O, y S. La cadena de átomos conecta covalentemente diferentes capacidades funcionales del conjugado, tales como ligandos de unión, fármacos, agentes de diagnóstico, agentes de imagen, y similares. El conector puede tener una amplia variedad de longitudes, tales como en el intervalo de aproximadamente 2 a aproximadamente 100 átomos en la cadena principal contigua. Los átomos usados para formar el conector se pueden combinar en todas las formas químicamente relevantes, tales como cadenas de átomos de carbono que forman grupos de alquileno, alquenileno, y alquinileno, y similares; cadenas de átomos de carbono y oxígeno que forman grupos de éteres y polioxialquileno, o que cuando están combinadas con grupos carbonilo forman ásteres y carbonatos, y similares; cadenas de átomos de carbono y nitrógeno que forman aminas, iminas, poliaminas, hidracinas, hidrazonas, o que cuando se combinan con grupos carbonilo forman amidas, ureas, semicarbacidas, carbacidas, y similares; cadenas de átomos de carbono, nitrógeno, y oxígeno que forman alocoxiaminas, alcoxilaminas, o que cuando se combinan con grupos carbonilos forman uretanos, aminoácidos, aciloxilaminas, ácidos hidroxámicos, y similares; y muchos otros. Además, debe entenderse que los átomos que forman la cadena en cada de las modalidades ilustrativas anteriores pueden ser saturados o insaturados, formando así enlaces sencillos, dobles o triples, de tal manera que, por ejemplo, alcanos, alquenos, alquinos, iminas y similares pueden ser radicales que se incluyen en el conector. Además, debe entenderse que los átomos que forman el conector también pueden cielizarse entre sí o ser parte de una estructura cíclica para formar estructuras cíclicas divalentes que forman el conector, incluidos cicloalcanos, éteres cíclicos, aminas cíclicas y otros heterociclos, arilenos, heteroarilenos y similares en el conector. En este último arreglo, debe entenderse que la longitud del conector pude definirse por cualquier camino a través de cada una de las estructuras cíclicas.Debe entenderse que los conectores pueden sustituirse opcionalmente en cualquiera de los átomos de carbono, nitrógeno, silicio, o fósforo.También debe entenderse que el conector puede conectar uno o más partes funcionales de una molécula para formar un conjugado en cualquier valencia abierta, y no es necesario que una de las dos o más partes funcionales de una molécula que forma el conjugado sea unida a algún extremo aparente del conector.
En otra modalidad, se describe un compuesto intermedio de ligando de folato que tiene la siguiente fórmula: en donde m, n, y q son números enteros que se seleccionan independientemente del intervalo de 0 a 8; AA es un aminoácido, R1 es hidrógeno, alquilo o un grupo protector de nitrógeno y los fármacos opcionalmente unidos en los átomos (*). En uno de los aspectos, AA es un aminoácido natural de la modalidad natural o no natural. En otro aspecto, uno o más de AA es un aminoácido hidrófilo. En otro aspecto, uno o más de AA son Asp y/o Arg. En otro aspecto, el número entero n es 1 o más. En otro aspecto, el número entero n es 2 o más. En otro aspecto, el número entero n es 3 o más. En otro aspecto, el número entero n es 4 o más. En otro aspecto, el número entero n es 5 o más. En otro aspecto, el número entero q es 1 o más. En otro aspecto, el número entero q es 1. En otro aspecto, el número entero m es 1 o más. En otro aspecto, el número entero m es 1. En otro aspecto, R1 es hidrógeno. Los fármacos y opcionalmente conectores adicionales y ligandos de unión al receptor adicionales se pueden conectar a la fórmula precedente en las cadenas laterales de NH libre de los fragmentos del ácido 2,w-diaminoalcanoico, o en el carboxilato del extremo como lo indican las valencias libres del mismo. Debe enetenderse que todas las combinaciobnes de los aspectos precedentes son descritos como modalidades adicionales de la invención. Por ejemplo, en otra modalidad, n es 1 o mayor, y m es 1 o mayor, o n es 1 o mayor, m es 1 y es 1; y así sucesivamente.
En otra modalidad, se describe un compuesto intermedio de ligando de folato que tiene la siguiente fórmula en donde m, h, q, y p son números enteros que se seleccionan independientemente del intervalo de 0 a 8; AA es un aminoácido, R1 es hidrógeno, alquilo, o un grupo protector de nitrógeno y los fármacos opcionalmente se unen en los átomos (*). En uno de los aspectos, AA es un aminoácido natural de la modalidad natural o no natural. En otro aspecto, uno o más de AA es un aminoácido hidrófilo. En otro aspecto, uno o más de AA son Asp y/o Arg. En otro aspecto, el número entero n es 1 o más. En otro aspecto, el número entero n es 2 o más. En otro aspecto, el número entero n es 3 o más. En otro aspecto, el número entero n es 4 o más. En otro aspecto, el número entero n es 5 o más. En otro aspecto, los números enteros q y/o p son 1 o más. En otro aspecto, el número entero m es 1 o más. En otro aspecto, el número entero m es 1. En otro aspecto, R1 es hidrógeno. Los fármacos y opcionalmente conectores adicionales y ligandos de unión al receptor adicionales se pueden conectar a la formula precedente en las cadenas laterales de NH libres de los fragmentos del ácido 2,w-diaminoalcanoico, en los grupos cisteinil tiol, o en el carboxilato del extremo, como lo indican las valencias libres del mismo. Debe enetenderse que todas las combinaciobnes de los aspectos precedentes son descritos como modalidades adicionales de la invención. Por ejemplo, en otra modalidad, n es 1 o mayor, y m es 1 o mayor, o n es 1 o mayor, m es 1 y es 1; y así sucesivamente.
En otra modalidad, se describe un compuesto intermedio de folato que tiene la siguiente fórmula: en donde m, n, q, p, y r son números enteros que se seleccionan independientemente del intervalo de 0 a 8; AA es un aminoácido, R1 es hidrógeno, alquilo o un grupo protector de nitrógeno y los fármacos se unen opcionalmente en los átomos (*). En uno de los aspectos, AA es un aminoácido natural de la modalidad natural o no natural. En otro aspecto, uno o más de AA es un aminoácido hidrófilo. En otro aspecto, uno o más de AA son Asp y/o Arg. En otro aspecto, el número entero n es 1 o más. En otro aspecto, el número entero n es 2 o más. En otro aspecto, el número entero n es 3 o más. En otro aspecto, el número entero n es 4 o más. En otro aspecto, el número entero n es 5 o más. En otro aspecto, los números enteros q y/o p y/o r son 1 o más. En otro aspecto, los números enteros q y/o p y/o r son 1. En otro aspecto, el número entero m es 1 o más. En otro aspecto, el número entero m es 1. En otro aspecto, R1 es hidrógeno. Los fármacos y opcionalmente conectores adicionales y ligandos de unión al receptor adicionales se pueden conectar a la formula precedente en las cadenas laterales de NH de los fragmentos del ácido 2,w-diatninoalcanoico, en los grupos cisteinil tiol, en los grupos serinil hidroxi, o en el carboxilato del extremo, como lo indican las valencias libres de ellos.
Debe enetenderse que todas las combinaciobnes de los aspectos precedentes son descritos como modalidades adicionales de la invención. Por ejemplo, en otra modalidad, n es 1 o mayor, y m es 1 o mayor, o n es 2 o mayor, m es 1 y q es 1; o n es 2 o mayor, m es 1, q es 1, y p es 1; o n es 2 o mayor, m es 1, q es 1, y r es 1; o n es 2 o mayor, m es 1, q es 1, p es 1, p es 1, r es 1; y asi sucesivamente En otra modalidad el conector polivalente incluye uno o mas radicales hidrofilicos divalentes, como se describe en la presente, también llamados conectores o conectores de separadores..
Se apreciará que la disposición y/o la orientación de los diversos conectores hidrófilos pueden estar en una forma lineal o ramificada, o ambas. Por ejemplo, los conectores hidrófilos pueden formar la cadena principal del conector que forma el conjugado entre el folato y el fármaco, el agente de formación de imágenes, o el agente de diagnóstico. Alternativamente, la parte hidrófila del conector puede ser dependiente o estar unido a la cadena principal de la cadena de átomos que conectan el ligando de unión B al fármaco D. En esta última disposición, la parte hidrófila puede estar próxima o distal con respecto a la cadena principal de átomos.
En otra modalidad, el conector es más o menos lineal y los grupos hidrófilos están dispuestos principalmente en una serie para formar un conector similar a una cadena en el conjugado. El de otra manera, los grupos hidrófilos forman algunos o la totalidad de la cadena principal del conector en esta modalidad lineal.
En otra modalidad, el conector está ramificado con grupos hidrófilos. En esta modalidad ramificada, los grupos hidrófilos pueden estar próximos a la cadena principal o distal a la cadena principal. En cada una de estas disposiciones, el conector tiene una forma más esférica o cilindrica. En una de las variantes, el conector tiene una forma similar a un cepillo de botella. En uno de los aspectos, la cadena principal del conector se forma por una serie lineal de amidas y la parte hidrófila del conector se forma por disposición paralela de cadenas laterales ramificadas, tal como conectando monosacáridos, sulfonatos, y similares y derivados y análogos de ellos.
Se entiende que el conector puede ser neutro o ionizable en determinadas condiciones, tales como las condiciones fisiológicas que se enfrentan in vivo. Para los conectores ionizables, en las condiciones seleccionadas, el conector puede desprotonar para formar un ion negativo, o alternativamente protonarse para formar un ion positivo. Se apreciará que puede ocurrir más de un evento de desprotonación o de protonación. Además, se entiende que el mismo conector puede desprotonarse o protonarse para formar sales o compuestos zwiteriónicos interiores.
En otra modalidad, los conectores de separadores hidrófilos son neutros, es decir en condiciones fisiológicas, los conectores no se protonan ni se desprotonan significativamente. En otra modalidad, los conectores de separadores hidrófilos se pueden protonar para transportar una o más cargas positivas. Se entiende que la capacidad de protonación depende de las condiciones. En uno de los aspectos, las condiciones son condiciones fisiológicas y el conector se protona in vivo. En otra modalidad, los separadores incluyen tanto regiones que son neutras como regiones que se pueden protonar para transportar una o más cargas positivas. En otra modalidad, los separadores incluyen tanto regiones que se pueden desprotonar para transportar una o más cargas negativas como regiones que se pueden protonar para transportar una o más cargas positivas. Se entiende que en esta última modalidad que se pueden formar zwiteriones o sales interiores.
En uno de los aspectos, las regiones de los conectores que se pueden desprotonar para transportar una carga negativa incluyen ácidos carboxílíeos, tales como ácido aspártico, ácido glutámico, y grupos ácido carboxílico de cadena más larga y ásteres de ácido sulfúrico, tales como ásteres de alquilo de ácido sulfúrico. En otro aspecto, las regiones de los conectores que se pueden protonar para transportar una carga positiva incluyen grupos aminoácidos, tales como poliaminoalquilenos que incluyen etilendiaminas, propilendiaminas, butilendiaminas y similares, y/o heterociclos que incluyen pirrolidinas, piperidinas, piperazinas y otros grupos amino, cada uno de los cuales opcionalmente se sustituye. En otra modalidad, las regiones de los conectores que son neutros incluyen grupos polihidroxilo, tales como azúcares, carbohidratos, sacáridos, inositoles, y similares, y/o grupos poliéter, tales como grupos polioxialquileno que incluyen polioxietileno, polioxipropileno y similares.
En una de las modalidades, los conectores de separadores hidrófilos descritos en la presente se forman principalmente a partir de carbono, hidrógeno y oxígeno y tienen una relación de carbono/oxígeno de 3:1 o menos, o de 2:1 o menos. En uno de los aspectos, los conectores hidrófilos descritos en la presente incluyen una pluralidad de grupos funcionales éter. En otro aspecto, los conectores hidrófilos descritos en la presente incluyen una pluralidad de grupos funcionales hidroxilo. Ejemplos de fragmentos que se pueden usar para formar tales conectores incluyen compuestos polihidroxilo tales como carbohidratos, compuestos poliéter, tales como unidades de polietilenglicol y grupos ácidos tales como ácidos carboxil y alquil sulfúrico. En una de las variantes, los separadores de oligoamida y similares también pueden estar incluidos en el conector.
Ejemplos de separadores de carbohidrato incluyen sacaropéptidos descritos en la presente que incluyen tanto un elemento de péptido como un elemento de azúcar, glucurónidos, que pueden incorporarse mediante la cielación [2+3] de Huisgen, también denominada química clic; b-alquil glucósidos, tales como 2-desoxihexapiranosas (2-desoxiglucosa, 2-desoxiglucurónido y similares), y b-alquil manopiranosidos. Ejemplos de grupos PEG incluyen aquellos de un agama de longitud específica de 4 a 20 grupos PEG. Ejemplos de esteres del ácido alquil sulfúrico también se pueden introducir con la química clic directamente en la cadena principal. Ejemplos de separadores de oligoamida incluyen separadores de EDTA y de DTPA, b-aminoácidos y similares.
En otra modalidad, los conectores de separadores hidrófilos descritos en la presente incluyen un poliéter, tal como los conectores de las siguientes fórmulas: " - donde m es un número entero que se selecciona indépendientemente en cada caso de 1 a 8; p es un número entero que se selecciona de 1 a 10; y n es un número entero que se selecciona independientemente en cada caso de 1 a 3. En uno de los aspectos, m es independientemente en cada caso de 1 a 3. En otro aspecto, n es 1 en cada caso. En otro aspecto, p es independientemente en cada caso de 4 a 6. Por ejemplo los poliéteres de polipropileno que corresponden a los precedentes están contemplados en la presente y se pueden incluir en los conjugados como conectores de separadores hidrófilos. Además, se aprecia que se pueden incluir poliéteres de polietileno y polipropileno mezclado en los conjugados como conectores de separadores hidrófilos. Además, las variantes cíclicas de los compuestos poliéter precedentes, tales como aquellos que incluyen tetrahidrofuranilo, 1,3-dioxanos, 1,4-dioxanos, y similares están contempladas en la presente.
En otro modalidad ejemplar, los conectores de separadores hidrófilos descritos en la presente incluyen una pluralidad de grupos funcionales hidroxilo, tales como conectores que incorporan monosacáridos, oligosacáridos, polisacáridos y similares. Se debe entender que los conectores de separadores que contienen polihidroxilo comprenden una pluralidad de grupos -(CROH)-, donde R es hidrógeno o alquilo.
En otra modalidad, los conectores polivalentes L incluyen uno o más de los siguientes fragmentos: _ - i, ( en donde R es H, alquilo, cicloalquilo, o arilalquilo; m es un número entero de 1 a 3; n es un número entero de 1 a 5, o de 2 a 5, p es un número entero de 1 a 5, y r es un número entero que se selecciona de 1 a 3. En uno de los aspectos, el número entero n es 3 o 4. En otro aspecto, el número entero p es 3 o 4. En otro aspecto, el número entero r es 1.
En otra modalidad, el conector polivalente L incluyen uno o más de los siguientes fragmentos: en donde R es H, alquilo, cicloalquilo, o arilalquilo; m es un número entero de 1 a 3; n es un número entero de 1 a 5, o d.e 2 a 5, p es un número entero de 1 a 5, y r es un número entero que se selecciona de 1 a 3. En uno de los aspectos, el número entero n es 3 o 4. En otro aspecto, el número entero p es 3 o 4. En otro aspecto, el número entero r es 1.
En otra modalidad, el conector polivalente L incluye uno o más de los siguientes grupos polihidroxilo: — I en donde n es un número entero de 2 a 5, p es un número entero de 1 a 5, y r es un número entero de 1 a 4. En uno de los aspectos, el número entero n es 3 o 4. En otro aspecto, el número entero p es 3 o 4. En otro aspecto, el número entero r es 2 o 3. Se entiende que todas las formas estereoquímicas de tales secciones de los conectores están contempladas en la presente. Por ejemplo, en la formula precedente, la sección puede derivar de ribosa, xilosa, glucosa, mañosa, galactosa, u otro azúcar y retener las disposiciones estereoquímicas de los grupos hidroxilo y alquilo dependientes que están presentes sobre esas moléculas. Además, se entiende que en las fórmulas precedentes, también están contemplados diversos compuestos desoxi. Por ejemplo, están contemplados compuestos de las siguientes fórmulas: - en donde n es igual o menor que r, por ejemplo cuando r es 2 o 3, n es l o 2, o 1, 2, o 3, respectivamente.
En otra modalidad, el conector polivalente L incluye un compuesto polihidroxilo de la siguiente fórmula en donde n y r son cada uno un número entero que se selecciona de 1 a 3. En uno de los aspectos, el conector polivalente L incluye uno o más compuestos polihidroxilo de las siguientes fórmulas: Se entiende que todas las formas estereoquímicas de tales secciones de los conectores están contempladas en la presente. Por ejemplo, en la fórmula precedente, la sección puede derivar de ribosa, xilosa, glucosa, mañosa, galactosa, u otro azúcar y puede retener las disposiciones estereoquímicas de los grupos hidroxilo y alquilo dependientes que están presentes sobre esas moléculas.
En otra modalidad, los conectores hidrófilos L descritos en la presente incluyen grupos polihidroxilo que están separados de la cadena principal del conector. En una de las modalidades, tales grupos carboxilato o grupos polihidroxilo están conectados a la cadena principal por un grupo triazol, formando conectores de separadores hidrófilos unidos a triazol. Por1 ejemplo, tales conectores incluyen fragmentos de las siguientes fórmulas en donde n, m, y r son números enteros y cada uno de ellos se selecciona independientemente en cada caso de 1 a 5. En uno de los aspectos, m es independientemente 2 o 3 en cada caso. En otro aspecto, r es 1 en cada caso. En otro aspecto, n es 1 en cada caso. En una de las variantes, el grupo que conecta el grupo polihidroxilo a la cadena principal del conector es un grupo heteroarilo diferente, que incluye en forma no taxativa, pirrol, pirazol, 1,2,4-triazol, furano, oxazol, isoxazol, tienilo, tiazol, isotiazol, oxadiazol y similares. En forma similar, están contemplados grupos heteroarilo del anillo de 6 miembros. Otras variantes de los ejemplos de conectores de separadores hidrófilos precedentes incluyen grupos oxialquileno, tales como las siguientes fórmulas: en donde n y r son números enteros y cada uno de ellos se selecciona independientemente en cada caso de 1 a 5; y p es un número entero que se selecciona de 1 a 4.
En otra modalidad, tales grupos carbohidrato o grupos polihidroxilo están conectados a la cadena principal por un grupo amida, formando conectores de separadores hidrófilos unidos a amida. Por ejemplo, tales conectores incluyen fragmentos de las siguientes fórmulas: . en donde n es un número entero que se selecciona de 1 a 3, y m es un número entero que se selecciona de 1 a 22. En un ejemplo de aspecto, n es 1 o 2. En otro ejemplo de aspecto, m se selecciona de 6 a 10, por ejemplo 8. En una de las variantes, el grupo que conecta el grupo polihidroxilo a la cadena principal del conector es un grupo funcional diferente, que incluye en forma no taxativa, ásteres, ureas, carbamatos, acilhidrazonas y similares. En forma similar, están contempladas variantes cíclicas. Otras variantes de los ejemplos de conectores de separadores hidrófilos precedentes incluyen grupos oxialquileno, tales como las siguientes fórmulas: _ . en donde n y r son números enteros y se seleccionan independientemente en cada caso de 1 a 5; y p es un número entero que se selecciona de 1 a 4.
En otra modalidad, los conectores de separadores incluyen uno o más de los siguientes fragmentos: . en donde R es H, alquilo, cicloalquilo o arilalquilo; m es un número entero que se selecciona independientemente de 1 a 3; n es un número entero de 1 a 6, p es un número entero de 1 a 5, y r es un número entero que se selecciona de 1 a 3. En una de las variantes, n es 3 o 4. En otra variante, el número entero p es 3 o 4. En otra variante, el número entero r es 1.
En otra modalidad, los conectores de separadores incluyen uno o más de los siguientes fragmentos: en donde R es H, alquilo, cicloalquilo o alquilarilo; m es un número entero que se selecciona independientemente de 1 a 3; n es un número entero de 2 a 6, p es un número entero de 1 a 5, y r es un número entero que se selecciona de 1 a 3. En una de las variantes, el número entero n es 3 o 4. En otra variante, el número entero p es 3 o 4. En otra variante, el número entero r es 1.
En otra modalidad, los conectores de separadores incluyen uno o más de los siguientes fragmentos: - - . , . . en donde m es un número entero que se selecciona independientemente de 1 a 3; n es un número entero de 1 a 6, p es un número entero de 1 a 5, y r es un número entero que se selecciona de 1 a 3. En una de las variantes, el número entero n es 3 o 4. En otra variante, el número entero p es 3 o 4. En otra variante, el número entero r es 1.
En otra modalidad, los conectores de separadores incluyen uno o más de los siguientes fragmentos: - 11 en donde m es un número entero que se selecciona independientemente de 1 a 3; n es un número entero de 2 a 6, p es un número entero de 1 a 5, y r es un número entero que se selecciona de 1 a 3. En una de las variantes, el número entero n es 3 o 4. En otra variante, el número entero p es 3 o 4. En otra variante, el número entero r es 1.
En otra modalidad, los conectores de separadores incluyen uno o más de los siguientes fragmentos: - en donde m es un número entero que se selecciona independientemente de 1 a 3; n es un número entero de 1 a 6, p es un número entero de 1 a 5 y r es un número entero que se selecciona de 1 a 3. En una de las variantes, el número entero n es 3 o 4. En otra variante el número entero p es 3 o 4. En otra variante, el número entero r es 1.
En otra modalidad, el conector polivalente L comprende una combinación de la cadena principal y motivos laterales ramificados tales como los ilustrados por las siguientes fórmulas: . en donde n es un número entero que se selecciona independientemente en cada caso de 0 a 3. Las fórmulas precedentes están destinadas a representar azúcares cíclicos de 4, 5, 6 y aún más miembros. Además, se debe entender que las fórmulas precedentes se pueden modificar para representar desoxi azúcares, donde uno o más de los grupos hidroxi presentes sobre las fórmulas se reemplazan por hidrógeno, alquilo o amino. Además, se debe entender que los compuestos carbonilo correspondientes están contemplados por las fórmulas precedentes, donde uno o más de los grupos hidroxilo se oxida hacia el carbonilo correspondiente. Además, en este modalidad ejemplar, la piranosa incluye grupos funcionales carboxilo y I amino y (a) se puede insertar en la cadena principal y (b) puede proveer mangos sintéticos para cadenas laterales ramificadas en variantes de esta modalidad. Se puede usar cualquiera de los grupos hidroxilo dependientes para unir otros fragmentos químicos, que incluyen azúcares adicionales para preparar los oligosacáridos correspondientes. También se contemplan otras variantes de esta modalidad, que incluyen insertar la piranosa u otro azúcar en la cadena principal en un solo carbono, es decir una disposición de espiro, en un par de carbonos germinal, y disposiciones similares. Por ejemplo, uno o dos extremos del conector, o el fármaco D, o el ligando de unión B se pueden conectar al azúcar que se ha de insertar en la cadena principal en una disposición de 1,1; 1,2; 1,3; 1,4; 2,3, u otras disposiciones.
En otra modalidad, los conectores de separadores hidrófilos descritos en la presente se forman principalmente a partir de carbono, hidrógeno y nitrógeno y tienen una relación de carbono:nitrógeno de 3:1 o menos, o de 2:1 o menos. En uno de los aspectos, los conectores hidrófilos descritos en la presente incluyen una pluralidad de grupos funcionales amino.
En otra modalidad, los conectores de separadores incluyen uno o más grupos amino de las siguientes fórmulas: , donde n es un número entero que se selecciona independientemente en cada caso de 1 a 3. En uno de los aspectos, el número entero n es independientemente 1 o 2. En otro aspecto, el número entero n es 1 en cada caso.
En otra modalidad, el conector polivalente L hidrófilo es un áster de ácido sulfúrico, tal como un áster de alquilo de ácido sulfúrico. Por ejemplo, el conector polivalente L es de las siguientes fórmulas: en donde n es un número entero que se selecciona independientemente en cada caso de 1 a 3. Por ejemplo, n es independientemente 1 o 2, en cada caso.
Se entiende que en tal polihidroxilo, poliamino, ácido carboxílico, ácido sulfúrico y conectores similares que incluyen hidrógenos libres unidos a heteroátomos, uno o más de estos átomos de hidrógeno libres se pueden proteger con el grupo protector de hidroxilo, amino o ácido, respectivamente, o alternativamente se los puede bloquear como los profármacos correspondientes, los último de los cuales se seleccionan para el uso particular, tales como profármacos que liberan el fármaco parental en condiciones fisiológicas generales o específicas.
En otra modalidad, el conector polivalente comprende uno o más de los siguientes radicales: en donde n es un número entero de 2 a 5, p es un número entero de 1 a 5 y r es un número entero de 1 a 4, como se describió anteriormente.
Se debe entender además que en las modalidades precedentes, las posiciones abiertas, tales como los átomos (*) son ubicaciones para la unión del ligando de unión (B) o cualquier fármaco (D) que se debe suministrar. Además, se debe entender que tal unión de uno o ambos de B y cualquier D puede ser directa o a través de un conector interviniente que comprende uno o más de los radicales descritos en la presente. Además, los átomos (*) pueden formar conectores desprendibles con cualquier fármaco D, u otra parte del conector L.
En otra modalidad, el conector polivalente L hidrófilo comprende uno o más conectores que contienen carbohidratos o que contienen grupos polihidroxilo. En otra modalidad, el conector polivalente L hidrófilo comprende por lo menos tres conectores que contienen carbohidratos o que contienen grupos polihidroxilo. En otra modalidad, el conector polivalente L hidrófilo comprende uno o más conectores que contienen carbohidratos o que contienen grupos polihidroxilo y uno o más ácidos aspárticos. En otra modalidad, el conector polivalente L hidrófilo comprende uno o más conectores que contienen carbohidratos o que contienen grupos polihidroxilo y uno o más ácidos glutámicos. En otra modalidad, el conector polivalente L hidrófilo comprende uno o más conectores que contienen carbohidratos o que contienen grupos polihidroxilo, uno o más ácidos glutámicos, uno o más ácidos aspárticos, y una o más beta amino alaninas. En una serie de variantes, en cada una de las modalidades precedentes, el conector polivalente L hidrófilo también incluye una o más cisteínas. En otra serie de variantes, en cada una de las modalidades precedentes, el conector polivalente L hidrófilo también incluye por lo menos una arginina.
En otra modalidad, el conector polivalente L hidrófilo comprende una o más 1,4-piperazinas que están incluidas en la cadena de átomos que conectan por lo menos uno de los ligandos de unión (L) con por lo menos uno de los fármacos (D). En una de las variantes, el conector polivalente L hidrófilo incluye uno o más conectores que contienen carbohidratos o que contienen grupos polihidroxilo. En otra variante, el conector polivalente L hidrófilo incluye uno o más conectores de separadores que contienen carbohidratos o que contienen grupos polihidroxilo y uno o más ácidos aspárticos. En otra variante, el conector polivalente L hidrófilo incluye uno o más conectores que contienen carbohidratos o que contienen grupos polihidroxilo y uno o más ácidos glutámicos. En una serie de variantes, en cada una de las modalidades precedentes, el conector polivalente L hidrófilo también incluye una o más cisternas. En otra serie de variantes, en cada una de las modalidades precedentes, el conector polivalente L hidrófilo también incluye por lo menos una arginina.
En otra modalidad, el conector polivalente L hidrófilo comprende uno o más separadores hidrófilos de oligoamida, tales como en forma no taxativa, aminoetilpiperazinilaceta ida.
En otra modalidad, el conector polivalente L hidrófilo comprende uno o más conectores que contienen carbohidratos unidos a triazol o que contienen grupos polihidroxilo. En otra modalidad, el conector polivalente L hidrófilo comprende uno o más conectores que contienen carbohidratos unidos a amida o que contienen grupos polihidroxilo. En otra modalidad, el conector polivalente L hidrófilo comprende uno o más grupos PEG y una o más cisteínas. En otra modalidad, el conector polivalente L hidrófilo comprende uno más derivados de EDTE.
En otra modalidad, se describe el compuesto de cualquiera de las modalidades descritas en la presente, en donde L comprende un conector de la fórmula en donde * indica el punto de unión a un folato y ** indica el punto de unión a un fármaco y F y G son cada uno independientemente 1, 2, 3 o 4.
En otra modalidad, se describe el compuesto de cualquiera de las modalidades descritas en la presente en donde L es un conector comprende un conector divalente de la fórmula ' en donde *, **, *** indican cada uno puntos de unión al I grupo de unión al receptor de folato B, y uno o más fármacos D. Se debe entender que cuando hay menos fármacos, *, ** *** se sustituyen con hidrógeno o un heteroátomo. F y G son cada uno independientemente 1, 2, 3, o 4 y W1 es NH u 0. En otro aspecto, m1 es 0 o 1.
En cualquiera de las modalidades descritas en la presente los conectores de heteroátomos pueden ser -NRÍR2-, oxígeno, azufre y las fórmulas -(NHR!NHR2)-, -SO-, -(SO2)-, y -N(R3)0-, en donde R1, R2, y R3 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno, alquilo, arilo, arilalquilo, arilo sustituido, alquilarilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido y alcoxialquilo.
Debe entenderse que los conectores heteroátomos pueden usarse para unir covalentemente cualquiera de los radicales des critos en la presente, incluidos los radicales D de fármacos, al conector polivalente los radicales B de ligandos al conector polivalente o varios radicales bi y polivalentes que forman el conector polivalente.
Radicales bivalentes ilustrativos adicionales que se pueden usar para formar parte del conector son como sigue: Radicales ilustrativos que indiquen enlaces desprendibles, o forman un enlace desprendible con B y/o cualquier hemiacetal D y variantes de azufre de ellos, acetales y variantes de azufre de ellos, hemiaminales, aminales y similares o que se pueden formar a partir de fragmentos de metileno sustituidos con por lo menos un heteroátomo, tabocono 1-alcoxialquileno, 1-alcoxicicloalquileno, 1-alcoxialquilencarbonilo, 1-alcoxicicloalquilencarbonilo y similares. Ejemplos de conectores desprendibles descritos en la presente incluyen conectores polivalentes que incluyen carbonilarilcarbonilo, carbonil (carboxiaril)carbonilo, carbonil(biscarboxiaril)carbonilo, haloalquilencarbonilo y similares. Ejemplos de conectores desprendibles descritos en la presente incluyen conectores polivalentes que incluyen alquileno(dialquillsililo), alquileno (alquilarilsililo), alquileno (diarilsililo), (dialquilsilil)arilo, (alquilarilsilil)arilo, (diarilsilil)arilo y similares. Ejemplos de conectores desprendibles descritos en la presente incluyen oxicarboniloxi, oxicarboniloxialquilo, sulfoniloxi, oxisulfonilalquilo y similares. Ejemplos de conectores desprendibles descritos en la presente incluyen conectores polivalentes que incluyen iminoalquilidenilo, carbonilalquilideniminilo, iminocicloalquilidenilo, carbonilcicloalquilideniminilo y similares. Ejemplos de conectores desprendibles descritos en la presente incluyen conectores polivalentes que incluyen alquilentio, alquilenariltio, y carbonilalquiltio y similares. Cada uno de los fragmentos precedentes se sustituye opcionalmente con un sustituyente X2, que se define en la presente.
Los sustituyentes X2 pueden ser alquilo, alcoxi, alcoxialquilo, hidroxi, hidroxialquilo, amino, aminoalquilo, alquilaminoalquilo, dialquilaminoalquilo, halo, haloalquilo, sulfhidrilalquilo, alquiltioalquilo, arilo, arilo sustituido, arilalquilo, arilalquilo susituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, carboxi, carboxialquilo, carboxilato de alquilo, alcanoato de alquilo, guanidinoalquilo, R4-carbonilo, R^-carbonilalquilo, R®-acilamino, y R7-acilaminoalquilo, en donde R4 y R5 se seleccionan cada uno independientemente de aminoácidos, derivados de aminoácidos y péptidos y en donde R^ y R7 se seleccionan independientemente de aminoácidos, derivados de aminoácidos y péptidos. En esta modalidad, el conector de heteroátomo puede ser nitrógeno y el sustituyente X2 y el conector de heteroátomo se pueden tomar junto con el conector desprendible al cual están unidos para formar un hetprociclo. 1 Los heterociclos pueden ser pirrolidinas, piperidinas, oxazolidinas, isoxazolidinas, tiazolidinas, isotiazolidinas, pirrolidinonas, piperidinonas, oxazolidinonas, isoxazolidinonas, tiazolidinonas , isotiazolidinonas, y succinimidas.
En cualquiera de las modalidades descritas en la presente, el conector desprendible puede incluir oxígeno unido a metileno, 1-alcoxialquileno, 1-alcoxicicloalquileno, 1-alcoxialquilencarbonilo y 1-alcoxicicloalquilencarbonilo para formar un acetal o cetal, en donde cada uno de los fragmentos se sustituye opcionalmente con un sustituyente X2, como se define en la presente. Alternativamente, el metileno o alquileno se sustituye con un arilo opcionalmente sustituido.
En cualquiera de las modalidades descritas en la presente, el conector desprendible puede incluir oxígeno unido a sulfonilalquilo para formar un sulfonato de alquilo.
En cualquiera de las modalidades descritas en la presente, el conector desprendible puede incluir nitrógeno unido a iminoalquilidenilo, carbonilalquilideniminilo, iminocicloalquilidenilo y carbonilcicloalquilideniminilo para formar una hidrazona, cada una de las cuales se sustituye opcionalmente con un sustituyente , definido en la presente. En otra modalidad, la hidrazona se puede acilar con un derivado de ácido carboxílico, un derivado de ortoformato, o un derivado de carbamoilo para formar conectores desprendibles que contienen diversas acilhidrazonas.
En cualquiera de las modalidades descritas en la presente, el conector desprendible puede incluir oxígeno unido a alquileno(dialquilsililo), alquileno (alquilarilsililo), alquileno(diarilsililo), (dialquilsilil)arilo, (alquilarilsilil)arilo y (diarilsilil)arilo para formar un silanol, cada uno de los cuales opcionalmente se sustituye con un sustituyente X2, que se define en la presente.
En cualquiera de las modalidades descritas en la presente, el conector desprendible puede incluir nitrógeno unido a carbonilarilcarbonilo, carbonil (carboxiaril)carbonilo, carbonil(biscarboxiaril)carbonilo para formar una amida, o alternativamente una amida con un nitrógeno del fármaco.
En cualquiera de las modalidades descritas en la presente, el conector desprendible puede incluir oxígeno unido a carbonilarilcarbonilo, carbonil (carboxiaril)carbonilo, carbonil(biscarboxiaril)carbonilo para formar un áster, o alternativamente un áster con oxígeno del fármaco.
Se debe entender que los conectores de separadores bivalentes se pueden combinar en cualquier forma químicamente pertinente, directamente o a través de un heteroátomo interviniente para construir los conectores desprendibles descritos en la presente. También se debe entender que la naturaleza de la disposición de los conectores de separador y de heteroátomo define dónde el conector desprendible se descompondrá in vivo. Por ejemplo, dos conectores de separador que terminan en un átomo de azufre cuando se combinan forman un disulfuro, que es el enlace que se puede descomponer en el conector desprendible formado de ese modo.
Po ejemplo en otra modalidad, el conector polivalente comprende un grupo 3-tiosuccinimid-1-ilalquiloximetiloxi, donde el metilo se sustituye opcionalmente con alquilo o arilo sustituido.
En otra modalidad, el conector polivalente comprende un 3-tiosuccinimid-l-ilalquilcabonilo, donde el carbonilo forma una acilaziridina con el fármaco.
En otra modalidad, el conector polivalente comprende un grupo 1-alcoxicicloalquilenoxi.
En otra modalidad, el conector polivalente comprende un alquilenaminocarbonil(dicarboxilarileno)carboxilato.
En otra modalidad, el conector polivalente comprende una ditioalquilcarbonilhidracida, donde la hidracida forma una hidrazona con el fármaco.
En otra modalidad, el conector polivalente comprende una 3-tiosuccinimid-1-ilalquilcarbonilhidracida, donde la hidracida forma una hidrazona con el fármaco.
En otra modalidad, el conector polivalente comprende un 3-tioalquilsulfonilalquil(silil disustituido)oxi, donde el sililo disustituido se sustituye con alquilo o arilo opcionalmente sustituido.
En otra modalidad, el conector polivalente comprende una pluralidad de conectores de separadores seleccionados del grupo formado por aminoácidos naturales y sus estereoisómeros.
En otra modalidad, el conector polivalente comprende un 2-ditioalquiloxicarbonilo, donde el carbonilo forma un carbonato con el fármaco.
En otra modalidad, el conector polivalente comprende un 2-ditioarilalquiloxicarbonilo, donde el carbonilo forma un carbonato con el fármaco y el arilo está opcionalmente sustituido.
En otra modalidad, el conector polivalente comprende un 4-ditioarilalquiloxicarbonilo, donde el carbonilo forma un carbonato con el fármaco, y el arilo está opcionalmente sustituido.
En otra modalidad, el conector polivalente comprende un 3-tiosuccinimid-1-ilalquiloxialquiloxialquilideno, donde el alquilideno forma una hidrazona con el fármaco, cada alquilo se selecciona independientemente y el oxialquiloxi está opcionalmente sustituido con alquilo o arilo opcionalmente sustituido.
En otra modalidad, el conector polivalente comprende un 2-ditioalquiloxocarbonilhidracida.
En otra modalidad, el conector polivalente comprende un 2- o 3-ditioalquilamino, donde el amino forma una amida viníloga con el fármaco.
¡ En otra modalidad, el conector polivalente comprende un 2-ditioalquilami.no, donde el amino forma una amida viníloga con el fármaco y el alquilo es etilo.
En otra modalidad, el conector polivalente comprende un 2- o 3-ditioalquilaminocarbonilo, donde el carbonilo forma un carbamato con el fármaco.
En otra modalidad, el conector polivalente comprende un 2-ditioalquilaminocarbonilo, donde el carbonilo forma un carbamato con el fármaco. En otra modalidad, el alquilo es etilo.
En otra modalidad, el conector polivalente comprende un 2-ditioalquiloxicarbonilo, donde el carbonilo forma un carbamato con el fármaco. En otra modalidad, el alquilo es etilo.
En otra modalidad, el conector polivalente comprende un 2-ditioarilalquiloxicarbonilo, donde el carbonilo forma un carbamato o una carbamoilaziridina con el fármaco.
En otra modalidad, el conector polivalente comprende un 4-ditioarilalquiloxicarbonilo, donde el carbonilo forma un carbamato o una carbamoilaziridina con el fármaco.
En otra modalidad, los conectores polivalentes descritos en la presente comprenden conectores polivalentes de las fórmulas (II): ( H ) donde n es un número entero que se selecciona de 1 a 4; Ra y Rb se seleccionan cada uno independientemente del grupo formado por hidrógeno y alquilo, que incluye alquilo inferior tal como alquilo de C1-C4 que está opcionalmente ramificado; o Ra y Rb se toman junto con el átomo de carbono unido para formar un anillo carbocíclico; R es un grupo alquilo opcionalmente sustituido, un grupo acilo opcionalmente sustituido, o un grupo protector de nitrógeno seleccionado adecuadamente; y (*) indica puntos de unión para el fármaco, agente de formación de imágenes, agente de diagnóstico, otros conectores bivalentes, u otras partes del conjugado.
En otra modalidad, los conectores polivalentes descritos en la presente comprenden conectores divalentes de la fórmula (III) ( III ) donde m es un número entero que se selecciona de 1 a 4; R es un grupo alquilo opcionalmente sustituido, un grupo acilo opcionalmente sustituido, o un grupo protector de nitrógeno seleccionado adecuadamente; y (*) indica puntos de unión para el fármaco, vitamina, agente de formación de imágenes, agentes de diagnóstico, otros conectores bivalentes u otras partes del conjugado.
En otra modalidad, los conectores polivalentes descritos en la presente comprenden conectores divalentes de las fórmulas (IV) (IV) donde m es un número entero de 1 a 4; R es un grupo alquilo opcionalmente sustituido, un grupo acilo opcionalmente sustituido, o un grupo protector de nitrógeno seleccionado adecuadamente; y (*) indica puntos de unión para el fármaco, vitamina, agente de formación de imágenes, agente de diagnóstico, otros conectores divalentes u otras partes del conjugado.
En otra modalidad, los compuestos descritos en la presente comprenden uno o más radicales divalentes seleccionados de las fórmulas : , en donde X es NH, O, o S .
En otra modalidad, los conectores polivalentes descritos en la presente comprenden un radical que tiene la fórmula: En otra modalidad, los conectores polivalentes descritos en la presente comprenden un radical que tiene la fórmula donde X es un heteroátomo, tal como nitrógeno, oxígeno o azufre, n es un número entero que se selecciona de 0, 1, 2, y 3, R es hidrógeno, o un sustituyente, que incluye un sustituyente capaz de estabilizar una carga positiva en forma inductiva o mediante la resonancia sobre el anillo de arilo, tal como alcoxi y similares y el símbolo (*) indica puntos de unión. Se apreciará que pueden estar presentes otros sustituyentes sobre el anillo de arilo, el carbono de bencilo, el ácido alcanoico o el puente de metileno, que incluyen en forma no taxativa hidroxi, alquilo, alcoxi, alquiltio, halo, y similares.
En otra modalidad, los conectores polivalentes descritos en la presente comprenden radicales que se seleccionan del grupo formado por carbonilo, tionocarbonilo, alquileno, cicloalquileno, alquilenocicloalquilo, alquilenocarbonilo, cicloalquilenocarbonilo, carbonilalquilcarbonilo, 1-alquilensuccinimid-3-ilo, 1-(carbónilalquil)succinimid-3-ilo, alquilensulfoxilo, sulfonilalquilo, alquilensulfoxilalquilo, alquilensulfonil lquilo, carboniltet ahidro-2H-piranilo, carboniltetrahidrofuranilo, 1- (carboniltetrahidro-2H-piranil)succinimid-3-ilo, y 1-(carboniltetrahidrofuranil)succinimid-3-ilo, en donde cada uno de los conectores de separadores se sustituye opcionalmente con uno o más sustituyentes ; en donde cada sustituyente X^- se selecciona independientemente del grupo formado por alquilo, alcoxi, alcoxialquilo, hidroxi, hidroxialquilo, amino, aminoalquilo, alquilaminoalquilo, dialquilaminoalquilo, halo, haloalquilo, sulfhidrilalquilo, alquiltioalquilo, arilo, arilo sustituido, arilalquilo, arilalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, carboxi, carboxialquilo, carboxilato de alquilo, alcanoato de alquilo, guanidinoalquilo, R4-carbonilo, R5- carbonilalquilo, R^-acilamino, y R7-acilaminoalquilo, en donde R4 y R5 se seleccionan cada uno independientemente del grupo formado por un aminoácido, un derivado de aminoácido y un péptido y en donde R^ and R7 se seleccionan cada uno independientemente del grupo formado por un aminoácido, un derivado de aminoácido y un péptido.
Los compuestos descritos en la presente pueden contener uno o más centros quirales, o pueden de otro modo ser capaces de existir como estereoisómeros múltiples. Se debe entender que en una modalidad, la invención descrita en la presente no se limita a ningún requisito estereoquímico particular, excepto cuando se indique específicamente, y que los compuestos y las composiciones, métodos, usos y medicamentos que los incluyen pueden ser ópticamente puros, o pueden ser cualquiera de una variedad de mezclas estereoisoméricas, que incluyen mezclas racémicas y otras mezclas de enantiómeros, otras mezclas de diastereómeros y similares. También se debe entender que tales mezclas de estereoisómeros pueden incluir una sola modalidad estereoquímica en uno o más centros quirales, mientras que incluyen mezclas de modalidad estereoquímica en uno o más centros quirales adicionales.
En forma similar, los compuestos descritos en la presente pueden incluir centros geométricos, tales como enlaces dobles cis, trans, E y Z. Se debe entender que en otra modalidad, la invención descrita en la presente no se limita a ningún requisito de isómero geométrico particular y que los compuestos, y las composiciones, métodos, usos y medicamentos que los incluyen pueden ser puros y pueden ser cualquiera de una variedad de mezclas de isómeros geométricos. También se debe entender que tales mezclas de isómeros geométricos pueden incluir una sola modalidad en uno o más enlaces dobles, mientras que incluyen mezclas de geometría en otro u otros enlaces dobles.
Como se usa en la presente, el término ligando de unión o dirigido al receptor de superficie celular generalmente se refiere a compuestos que se unen y/o se dirigen a receptores que se hallan sobre superficies celulares, y específicamente a aquellos que se hallan, se sobreexpresan y/o se expresan en forma preferencial sobre la superficie de las células patógenas. Ejemplos de ligandos incluyen, en forma no taxativa, vitaminas y compuestos de unión al receptor de vitamina.
Ejemplos de grupos vitamina incluyen carnitina, inositol, ácido lipoico, puridoxal, ácido ascórbico, niacina, ácido pantoténico, ácido fólico, riboflavina, tiamina, biotina, vitamina BI2, y las vitaminas A, D, E y K solubles en el lípido. Estas vitaminas, y sus análogos y derivados de unión al receptor, constituyen la entidad dirigida a partir de la cual se puede formar un radical para la unión covalente al conector ! polivalente L. Ejemplos de análogos de biotina que se unen a receptores de biotina incluyen, en forma no taxativa, biocitina, sulfóxido de biotina, oxibiotina, y similares).
Ejemplos de análogos de ácido fólico que se unen a receptores de folato incluyen, en forma no taxativa, ácido folínico, ácido pteropoliglutámico y pteridinas de unión al receptor de folato tales como tetrahidropterinas, dihidrofolatos, tetrahidrofolatos, y sus análogos de deaza y dideaza. Los términos análogos de "deaza" y "dideaza" se refieren a los análogos reconocidos en el arte que tienen un átomo de carbono sustituido por uno o dos átomos de nitrógeno en la estructura del ácido fólico natural, o un análogo o derivado de él. Por ejemplo, los análogos de deaza incluyen los análogos de 1-deaza, 3-deaza, 5-deaza, 8-deaza, y 10-deaza de folato, ácido folínico, ácido pteropoliglutámico y pteridinas de unión al receptor de folato tales como tetrahidropterinas, dihidrofolatos, y tetrahidrofolatos. Los análogos de dideaza incluyen, por ejemplo, análogos de 1,5-dideaza, 5,10-dideaza, 8,10-dideaza, y 5,8-dideaza de folato, ácido folínico, ácido pteropoliglutámico y pteridinas de unión al receptor de folato, tales como tetrahidropterinas, dihidrofolatos, y tetrahidrofolatos. Otros folatos útiles como ligandos que forman complejos para la presente invención son los análogos de unión al receptor de folato aminopterina, ametopterina (también denominada metotrexato),N10-metilfolato, 2-deamino-hidroxifolato, análogos de deaza tales como 1-deazametopterina o 3-deazametopterina, y ácido 3',5'-dicloro- 4-amino-4-desoxi-N10-metilpteroilglutamico (diclorometotrexato). Los análogos y/o derivados de ácido fólico precedentes se denominan convencionalmente "folatos," que reflejan su capacidad de de unirse con receptores de folato y tales ligandos cuando se conjugan con moléculas exógenas son efectivos para mejorar el transporte transmembrana, tal como mediante endocitosis mediada por folato como se describe en la presente.
Otros análogos de ácido fólico que se unen a receptores del ácido fólico se describen en las Publicaciones de Solicitudes de Patentes Estadounidenses Acta N° 2005/0227985 y 2004/0242582, cuyas invenciones se incorporan en la presente como referencia. Por ejemplo, tales análogos de folato tienen la fórmula general: en donde X y Y se seleccionan cada uno independientemente del grupo formado por halo, R2, OR2, SR3, y NR4R5; U, V, y W representan grupos divalentes cada uno de los cuales se selecciona independientemente del grupo formado por -(R6a)C=, -N=, -(R6a)C(R7a)-, y -N(R4a)-; Q se selecciona del grupo formado por C y CH; T se selecciona del grupo formado por S, 0, N, y -C=C-; A1y A2 se seleccionan independientemente del grupo formado por oxígeno, azufre, -C(Z)-, -C(Z)0-, -OC(Z)-, -N (R4b)-, -C(Z)N (R4b)-, -N(R4 b)C(Z)-, -0C(Z)N(R4b)-, -N (R4b)C(Z)O-, -N (R4b)C(Z)N (R5b)-, -S(O) -S(O)2-, -N (R4a)S(O)2-, -C(R6b)(R7b)-, -N (CºCH)-, -N(CH2CºCH) -, alquileno de C1-C12, y alquilenoxi de C1-C12, donde Z es oxígeno o azufre; R1 se selecciona del grupo formado por hidrógeno, halo, alquilo de C1-C12, y alcoxi de C1-C12; R2, R3, R4, R4a, R4b, R5, R5b, R6b, y R7b se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno, halo, alquilo de C1-C12, alcoxi de C1-C12, alcanoilo de C1-C12, alquenilo de C1-C12, alquinilo de C1-C12, (alcoxi de C1-C12)carbonilo, y (alquilamino de C1-C12)carbonilo; R6 y R7 se seleccionan cada uno independientemente del grupo formado por hidrógeno, halo, alquilo de C1-C12, y alcoxi de C1-C12; o, R6 y R7 se toman juntos para formar un grupo carbonilo; R6a y R7a se seleccionan cada uno independientemente del grupo formado por hidrógeno, halo, alquilo de C1-C12, y alcoxi de C1-C12; o R6a y R7a se toman juntos para formar un grupo carbonilo; L es un conector divalente que se describe en la presente; y n, p, r, s y t son cada uno independientemente 0 o 1.
Como se usa en la presente, el término aminoácido se refiere en general a aminoácidos beta, gamma, y más prolongado, tales como aminoácidos de la fórmula: -N (R)-(CR'R")q-C(0)- donde R es hidrógeno, alquilo, acilo, o un grupo protector de nitrógeno adecuado, R' y R" son un hidrógeno o un sustituyente, cada uno de los cuales se selecciona independientemente en cada aparición y q es un número entero tal como 1, 2, 3, 4, o 5. Por ejemplo, R' y/o R" corresponden independientemente, en forma no taxativa, a hidrógeno o las cadenas laterales presentes sobre aminoácidos naturales, tales como metilo, bencilo, hidroximetilo, tiometilo, carboxilo, carboxilmetilo, guanidinopropilo y similares y derivados y derivados protegidos de ellos. La fórmula descrita anteriormente incluye todas las variantes estereoisoméricas. Por ejemplo, el aminoácido se puede seleccionar de asparagina, ácido aspártico, cisteína, ácido glutámico, lisina, glutamina, arginina, serina, ornitina, treonina y similares.
Como se usa en la presente, el término "derivado de aminoácido" en general se refiere a un aminoácido definido en la presente donde uno o ambos del grupo amino y/o la cadena lateral está sustituida. Ejemplos de derivados de aminoácidos incluyen profármacos y grupos protectores del grupo amino y/o la cadena lateral, tal como amina, amida, hidroxi, ácido carboxílico, y profármacos y grupos protectores de tio. Otros ejemplos de derivados de aminoácidos incluyen variantes sustituidas del aminoácido descrito en la presente, en forma no taxativa, éteres y ásteres de grupos hidroxi, amidas, carbamatos, y ureas de grupos amino, ásteres, amidas, y derivados de ciano de grupos ácido carboxílico y similares.
Como se usa en la presente, las tubulisinas se refieren en general a compuestos tetrapéptidos de la fórmula: y sus sales farmacéuticas, en donde n es 1-3; V es H, OR2, o halo, y W es H, OR2, o alquilo, donde R2 se selecciona independientemente en cada caso de H, alquilo, y C(O)R3, donde R3 es alquilo, cicloalquilo, alquenilo, arilo, o arilalquilo, cada uno de los cuales opcionalmente está sustituido; siempre que R2 no sea H cuando tanto V como W son OR2; o V y W se toman junto con el carbono al cual están unidos para formar un carbonilo; X=H, alquilo de C1-4, alquenilo, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido, o CH2QR9; donde Q es -O-, o -S-; R9=H, alquilo de Ci-4, alquenilo, arilo, o C(O)R10; y R10=alquilo de C1-6, alquenilo, arilo, o heteroarilo, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido; Z es alquilo y Y es 0; o Z es alquilo o C(0)R4, y Y está ausente, donde R4 es alquilo, CF3, o arilo; R1 es H, o R1 representa 1 a 3 sustituyentes que se i seleccionan de halo, nitro, carboxilato o un derivado de ellos, ciano, hidroxilo, alquilo, haloalquilo, alcoxi, haloalcoxi, y OR6, donde R6 es hidrógeno o arilo opcionalmente sustituido, Un grupo protector de fenol, un grupo profármaco, alquilo, arilalquilo, C(O)R7, P(O)(OR8)2, o S03R8, donde R7 y R8 se seleccionan independientemente en cada caso de H, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, y arilalquilo, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido, o R8 es un catión de metal; y R es OH o un grupo saliente, o R forma un derivado de ácido carboxílico, tal como acilhidracida.
Los conjugados de cada una de las tubulisinas precedentes se describen en la presente. En una de las variantes, Z es metilo. En otra variante, R1 es H. En otra variante, R1 es OR6 en C(4), donde R6 es H, alquilo, o COR7. En otra variante, V es H, y W es 0C(O)R3. En otra variante, X=CH2QR9. En otra variante, X=CH2OR9. En otra variante, R^ es alquilo o alquenilo. En otra variante, R^ es C(0)R10. En otra variante, R10= alquilo de Ci-6 opcionalmente sustituido. En otra variante, R10= alquilo de Ci-6. En otra variante, R forma una acilhidracida. Se debe entender que la descripción precedente es una descripción explícita de cada combinación químicamente posible de variantes de la estructura de tubulisina general. Por ejemplo, se debe entender que la descripción precedente es una descripción de la variante en la cual Z es metilo, y R1 es H; donde R1 es OR6 en C(4), y R6 es H; donde Z es metilo, R1 es OR6 en C(4), R6 es H, y X=CH2OR9; y similares.
Las tubulisinas naturales son generalmente tetrapéptidos lineales que comprenden ácido N-metil pipecólico (Mep), isoleucina (lie), un aminoácido no natural denominado tubuvalina (Tuv), y un aminoácido no natural denominado tubutirosina (Tut, un análogo de tirosina) o un aminoácido no natural denominado tubufenilalanina (Tup, un análogo de fenilalanina). En otra modalidad, se describen tubulisinas naturales y los análogos y derivados de ellas, de las siguientes fórmulas: y sus sales farmacéuticas, donde R, R1, y R10 se describen en las diversas modalidades de la presente. En la presente se describen conjugados de cada una de las tubulisinas precedentes.
En otra modalidad, se describen conjugados de tubulisinas naturales de la siguiente fórmula general: y sus sales f rmacéuticas.
Como se usa en la presente, se entiende que el término "una rapamicina" incluye sirolimus (rapamicina), temsirolimus, everolimus, y ridaforolimus, y compuestos relacionados y compuestos de la fórmula: y sus sales farmacéuticamente aceptables, en donde gA es 0RC o OCH2CH2ORC; uno de RA, RB, o Rc es un enlace conectado a L; y los otros dos de RA, RB, y Rc se seleccionan en cada caso independientemente del grupo formado por hidrógeno, heteroarilo opcionalmente sustituido, un grupo que forma profármacos, y C(O)RD, donde RD se selecciona independientemente en cada caso del grupo formado por hidrógeno y alquilo, alquenilo, heteroalquilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, y heteroarilalquilo, cada uno de los cuales se describe opcionalmente sustituido.
Como se usa en la presente, el término "alquilo" incluye una cadena de átomos de carbono, que está opcionalmente ramificada. Como se usa en la presente, el término "alquenilo" y "alquinilo" incluye una cadena de átomos de carbono, que está opcjionalmente ramificada e incluye por lo menos un enlace doble i o un enlace triple, respectivamente. También se debe entender que el alquinilo también puede incluir uno o más enlaces. Se debe entender también que en determinadas modalidades, el alquilo tiene ventajosamente una longitud limitada, que incluye C1-C24, C1-C12, Ci-Ce, Ci-Ce, y C1-C4. Por ejemplo, tales grupos alquilo de longitud limitada particularmente, que incluye Ci-Ce, C1-C6, y C1-C4 se pueden denominar alquilo inferior. Se debe entender también que en determinadas modalidades el alquenilo y/o el alquinilo pueden cada uno ventajosamente tener una longitud limitada, que incluye C2-C24, C2-C12, C2-C8, C2-C& , y C2-C4. Por ejemplo, tales grupos alquenilo y/o alquinilo de longitud particularmente limitada, que incluyen C2-C8, C2-C6, y C2-C4 se pueden denominar alquenilo y/o alquinilo inferior. Se ha apreciar en la presente que los grupos alquilo, alquenilo, y/o alquinilo más cortos pueden agregar menos lipolificidad al compuesto y por consiguiente tienen un comportamiento farmacocinético diferente. En modalidades de la invención que se describen en la presente, se debe entender, en cada caso, que la citación de alquilo se refiere a un alquilo definido en la presente y opcionalmente a alquilo inferior. En modalidades de la invención que se describen en la presente, se debe entender, en cada caso, que la citación de alquenilo se refiere a alquenilo definido en la presente, y opcionalmente a alquenilo inferior. En modalidades de la invención que se describen en la presente, se debe entender, en cada caso, que la citación de alquinilo se refiere a alquinilo como se define en la presente, y opcionalmente a alquinilo inferior. Ejemplos de grupos alquilo, alquenilo y alquinilo son, en forma no taxativa, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, tere-butilo, pentilo, 2-pentilo, 3-pentilo, neopentilo, hexilo, heptilo, octilo y similares y los grupos correspondientes que contienen uno o más enlaces dobles y/o triples, o una combinación de ellos.
Como se usa en la presente, el término "alquileno" incluye una cadena divalente de átomos de carbono, que está opcionalmente ramificado. Como es usa en la presente, el término "alquenileno" y "alquinileno" incluye una cadena divalente de átomos de carbono, que está opcionalmente ramificada e incluye por lo menos un enlace doble o un enlace triple, respectivamente. Se debe entender que el alquinileno también puede incluir uno o más enlaces dobles. Se debe entender también que en determinadas modalidades, alquileno tiene ventajosamente una longitud limitada, que incluye C1-C24, C1-C12, Ci-Cs, C1-C6, y C1-C4. Por ejemplo, tales grupos alquileno de longitud particularmente limitada, que incluye Ci-Ce, C1-C6, y C1-C4 se pueden denominar alquileno inferior. Se ha de entender también que en determinadas modalidades, alquenileno y/o alquinileno puede cada uno ventajosamente tener una longitud limitada, que incluye C2-C24, C2-C12, C2-Cs, C2-C6, y C2-C4· Por ejemplo, tales grupos alquenileno y/o alquinileno particularmente limitados, que incluyen C2-Cs, C2-C6, y C2-C4 se pueden denominar alquenileno y/o alquinileno inferior. Se apreciará en la presente que los grupos alquileno, alquenileno y/o alquinileno más cortos pueden agregar menos lipofilicidad al compuesto y por consiguiente tienen un comportamiento farmacocinético diferente. En modalidades de la invención descritas en la presente, se debe entender, en cada caso, que la citación de alquileno, alquenileno y alquinileno se refiere a alquileno, alquenileno y alquinileno como se definen en la presente, y opcionalmente alquileno, alquenileno y alquinileno inferior. Ejemplos de grupos alquilo son, en forma no taxativa, metileno, etileno, n-propileno, isopropileno, n-butileno, isobutileno, sec-butileno, pentileno, 1,2-pentileno, 1,3-pentileno, hexileno, heptileno, octileno y similares.
Como se usa en la presente, el término "cicloalquilo" incluye una cadena de átomos de carbono, que está opcionalmente ramificada, donde por lo menos una parte de la cadena es cíclica. Se debe entender que el cicloalquilalquilo es un subgrupo de cicloalquilo. Se debe entender que el cicloalquilo puede ser policíclico. Ejemplos de cicloalquilo incluyen, en forma no taxativa, ciclopropilo, ciclopentilo, ciclohexilo, 2-metilciclopropilo, ciclopentilet-2-ilo, adamantilo y similares. Como se usa en la presente, el término "cicloalquenilo" incluye una cadena de átomos de carbono, que está opcionalmente ramificado e incluye por lo menos un enlace i doble, donde por lo menos una parte de la cadena es cíclica.
Se debe entender que uno o más enlaces dobles pueden estar en la parte cíclica de cicloalquenilo y/o la parte no cíclica del cicloalquenilo. Se debe entender que el cicloalquenilalquilo y el cicloalquilalquenilo son cada uno subgrupos de ciclohexilo. Se debe entender que el cicloalquilo puede ser policíclico. Ejemplos de cicloalquenilo incluyen, en forma no taxativa, ciclopentenilo, ciclohexileten-2-ilo, cicloheptenilpropenilo y similares. Se debe entender también que la cadena que forma cicloalquilo y/o cicloalquenilo tiene ventajosamente una longitud limitada, que incluye C3-C24, C3-C12, C3-C8, C3-C6, y C5-Ce . Se aprecia en la presente que las cadenas de alquilo y/o alquenilo más cortas que forman cicloalquilo y/o cicloalquenilo, respectivamente, pueden agregar menos lipofilicidad al compuesto y por consiguiente tienen un comportamiento farmacocinético diferente.
Como es usa en la presente, el término "heteroarilo" incluye una cadena de átomos que incluye tanto carbono como por lo menos un heteroátomo y está opcionalmente ramificada. Ejemplo de heteroátomos incluyen nitrógeno, oxígeno y azufre. En determinadas variantes, ejemplos de heteroátomos también incluyen fósforo y selenio. Como se usa en la presente, el término "cicloheteroalquilo" que incluye heterociclilo y heterociclo, incluye una cadena de átomos que incluye tanto carbono como por lo menos un heteroátomo, tal como i heteroalquilo y está opcionalmente ramificada, donde por lo menos una parte de la cadena es cíclica. Ejemplos de heteroátomos incluyen nitrógeno, oxígeno y azufre. En determinadas variantes, ejemplos de heteroátomos también incluyen fósforo y selenio. Ejemplos de cicloheteroalquilo incluyen, en forma no taxativa, tetrahidrofurilo, pirrolidinilo, tetrahidropiranilo, piperidinilo, morfolinilo, piperazinilo, homopiperazinilo, quinuclidinilo y similares.
Como se usa en la presente, el término "arilo" incluye grupos carbocíclicos aromáticos monocíclicos y policíclicos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido. Ejemplos de grupos carbocíclicos aromáticos descritos en la presente incluyen, en forma no taxativa, fenilo, naftilo y similares. Como se usa en la presente, el término "heteroarilo" incluye grupos heterocícilcos aromáticos, cada uno de los cuales opcionalmente puede estar sustituido.Ejemplos de grupos heterocíclicos aromáticos incluyen, en forma no taxativa, piridinilo, pirimidinilo, pirazinilo, triazinilo, tetrazinilo, quinolinilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, tienilo, pirazolilo, imidazolilo, oxazolilo, tiazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, oxadiazolilo, tiadiazolilo, triazolilo, bencimidazolilo, benzoxazolilo, benztiazolilo, bencisoxazolilo, bencisotiazolilo y similares.
Como se usa en la presente, el término "amino" incluye el grujoo N¾, alquilamino y dialquilamino, donde ambos grupos alquilo del dialquilamino pueden ser iguales o diferentes, es decir, alquilalquilamino. Por ejemplo, amino incluye metilamino, etilamino, dimetilamino, metiletilamino, y similares. Además, se debe entender que cuando amino modifica o está modificado por otro término, tal como aminoalquilo, o acilamino, las variantes precedentes del término amino están incluidas en la presente. Por ejemplo, aminoalquilo incluye H2N-alquilo, metilaminoalquilo, etilaminoalquilo, dimetilaminoalquilo, metiletilaminoalquilo y similares. Por ejemplo, acilamino incluye acilmetilamino, aciletilamino y similares.
Como se usa en la presente, el término "amino y sus derivados" incluye amino como se lo describe en la presente, y alquilamino, alquenilamino, alquinilamino, heteroalquilamino, heteroalquenilamino, heteroalquinilamino, cicloalquilamino, cicloalquenilamino, cicloheteroalquilamino, cicloheteroalquenilamino, arilamino, arilalquilamino, arilalquenilamino, arilalquinilamino, heteroarilamino, heteroarilalquilamino, heteroari1alquenilamino, heteroarilalquinilamino, acilamino, y similares, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido. El término "derivado de amino" también indica urea, carbamato y similares.
Como se usa en la presente, el término "hidroxi y sus derivados" incluye OH y alquiloxi, alqueniloxi, alquiniloxi, heteroalquiloxi, heteroalqueniloxi, heteroalquiniloxi, cicloalquiloxi, cicloalqueniloxi, cicloheteroalquiloxi, cicloheteroalqueniloxi, ariloxi, arilalquiloxi, arilalqueniloxi, arilalquiniloxi, heteroariloxi, heteroarilalquiloxi, heteroarilalqueniloxi, heteroarilalquiniloxi, aciloxi y similares, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido. El término "derivado de hidroxi" también incluye carbamato y similares.
Como se usa en la presente, el término "tío y sus derivados" incluye SH y alquiltio, alqueniltio, alquiniltio, heteroalquiltio, heteroalqueniltio, heteroalquiniltio, cicloalquiltio, cicloalqueniltio, cicloheteroalquiltio, cicloheteroalqueniltio, ariltio, arilalquiltio, arilalqueniltio, arilalquiniltio, heteroariltio, heteroarilalquiltio, heteroari1alqueniltio, heteroarilalquiniltio, aciltio y similares, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido. El término "derivado de tio" también incluye tiocarbamato y similares.
Como se usa en la presente, el término "acilo" incluye formilo y alquilcarbonilo, alquenilcarbonilo, alquinilcarbonilo, heteroalquilcarbonilo, heteroalquenilcarbonilo, heteroalquinilcarbonilo, cicloalquilcarbonilo, cicloalquenilcarbonilo, cicloheteroalquilcarbonilo, cicloheteroalquenilcarbonilo, arilcarbonilo, arilalquilcarbonilo, arilalquenilcarbonilo, ari1alquinilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, heteroarilalquilcarbonilo, heteroarilalquenilcarbonilo, heteroarilalquinilcarbonilo, acilcarbonilo y similares, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido.
Como se usa en la presente, el término "carbonilo y sus derivados" incluye el grupo C(O), C(S), C(NH) y sus derivados de amino sustituidos.
Como se usa en la presente, el término "ácido carboxílico y sus derivados" incluye el grupo CO2H y sus sales, y sus ésteres y amidas, y CN.
El término "opcionalmente sustituido", como se usa en la presente, incluye el reemplazo de átomos de hidrógeno con otros grupos funcionales sobre el radical que está opcionalmente sustituido. Aquellos otros grupos funcionales por ejemplo incluyen, en forma no taxativa, amino, hidroxilo, halo, tiol, alquilo, haloalquilo, heteroalquilo, arilo, acilalquilo, arilheteroalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, heteroarilheteroalquilo, nitro, ácidos sulfónicos y sus derivados, ácidos carboxílíeos y sus derivados y similares. Por ejemplo, cualquiera de amino, hidroxilo, tiol, alquilo, haloalquilo, hetaroalquilo, arilo, arilalquilo, arilheteroalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, heteroarilheteroalquilo, y/o ácido sulfónico está opcionalmente sustituido.
Como se usa en la presente, los términos "arilo opcionalmente sustituido" y "heteroarilo opcionalmente sustituido" incluyen el reemplazo de átomos de hidrógeno con otros grupos funcionales sobre el arilo o heteroarilo que está opcionalmente sustituido. Aquellos otros grupos funcionales por ejemplo incluyen, en forma no taxativa, amino, hidroxi, halo, tio, alquilo, haloalquilo, heteroalquilo, arilo, arilalquilo, arilheteroalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, heteroarilheteroalquilo, amino, ácidos sulfónicos y sus derivados, ácidos carboxílicos y sus derivados y similares. Por ejemplo, cualquiera de amino, hidroxi, tio, alquilo, haloalquilo, heteroalquilo, arilo, arilalquilo, arilheteroalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, heteroarilheteroalquilo y/o ácido sulfónico está opcionalmente sustituido.
Ejemplos de sustituyentes incluyen, en forma no taxativa, un radical -(CH2)XZX, donde x es un número entero de 0-6 y Zx se selecciona de halógeno, hidroxi, alcanoiloxi, que incluye alcanoiloxi de C1-C6, aroiloxi opcionalmente sustituido, alquilo, que incluye alquilo de C1-C6, alcoxi, que incluye alcoxi de Ci-Ce, cicloalquilo, que incluye cicloalquilo de C3-Cs, cicloalcoxi, que incluye cicloalcoxi de C3-C8, alquenilo, que incluye alquenilo de C2-C6, alquinilo, que incluye alquinilo de C2-C6, haloalquilo, que incluye haloalquilo de C1-C6, haloalcoxi, que incluye haloalcoxi de Ci-Ce , halocicloalquilo, que incluye halocicloalquilo de C3-C8, halocicloalcoxi, que incluye halocicloalcoxi de C3-C8, amino, alquilamino de Ci-Ce, i (alquilo de Ci-Ce)(alquilo de Ci-C6)amino, alquilcarbonilamino, N-(alquilo de Ci-Ce)alquilcarbonilamino, aminoalquilo, alquilaminoalquilo de Ci-C6, (alquilo de C1-C6)(alquilo de Ci-Ce)aminoalquilo, alquilcarbonilaminoalquilo, N-(alquilo de Ci-Ce) alquilcarbonilaminoalquilo, ciano, y nitro; o Zx se selecciona de -CO2R4y -CONR5R6, donde R4, R5, y R6 se seleccionan cada uno independientemente en cada aparición de hidrógeno, alquilo de C1-C6, aril-alquilo de C1-C6, y heteroaril-alquilo de C1-C6.
Como se usa en la presente, el término "radical" con referencia, por ejemplo, al ligando de unión y/o dirigido al receptor de la superficie celular y/o el fármaco seleccionado independientemente, se refiere a un ligando de unión y/o dirigido al receptor de la superficie celular y/o un fármaco seleccionado independientemente, como se describe en la presente, donde uno o más átomos o grupos, tales como un átomo de hidrógeno, o un grupo alquilo sobre un heteroátomo y similares, se elimina para proveer un radical para la conjugación al conector polivalente L. Tales radicales de ligandos y radicales de fármacos también se pueden denominar en la presente análogos de ligandos y análogos de fármacos, respectivamente.
Como se usa en la presente, el término "grupo saliente" se refiere a un grupo funcional reactivo que genera un sitio electrófilo sobre el átomo al cual está unido de manera tal que se pueda agregar al sitio electrófilo sobre el átomo.
Ejemplos de grupos salientes incluyen, en forma no taxativa, halógenos, fenoles opcionalmente sustituidos, grupos aciloxi, grupos sulfonoxi y similares. Se debe entender que tales grupos salientes pueden estar sobre alquilo, acilo y similares. Tales grupos salientes también se pueden denominar en la presente grupos activadores, tales como cuando el grupo saliente está presente sobre el acilo.
Además, agentes acopladores convencionales, de péptidos amidas y esterea tales como, pero sin limitación PyBop, BOP-U, BOP, penta fluorofenol, isobutilcloroformato y similares formas varios compuestos intermediarios que incluyen un grupo saliente como se describe en la presente, en un grupo carbonilo.
Se debe entender que en todos los casos revelados en la presente, la citación de una gama de números enteros para cualquiera de las variables describe la gama citada, todos los miembros individuales del intervalo y todas las subgamas posibles para esa variable. Por ejemplo, la citación de que n es un número entero de 0 a 8, describe esa gama, los valores individuales y seleccionables de O, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, y 8, tal como n es 0, o n es 1, o n es 2, etc. Además la citación de que n es un número entero de 0 a 8 también describe todas y cada una de las subgamas, cada una de las cuales para la base de otra modalidad, tal como n es un número entero de 0 a 8 i también describe todas y cada una de las subgamas, cada una de las cuales puede ser el fundamento para otra modalidad, tal como n es un número entero de 1 a 8, de 1 a 7, de 1 a 6, de 2 a 8, de 2 a 7, de l a 3, de 2 a 4, etc.
Como se usa en la presente, el término "composición" generalmente se refiere a todos los productos que comprenden los ingredientes especificados en las cantidades especificadas, así como todos los productos que derivan, directa o indirectamente, de la combinación de los ingredientes especificados en las cantidades especificadas. Se debe entender que las composiciones descritas en la presente se pueden preparar a partir de compuestos aislados descritos en la presente o de sales, soluciones, hidratos, solvatos y otras formas de los compuestos descritos en la presente. Se apreciará que determinados grupos funcionales, tales como hidroxi, amino y grupos similares forman complejos y/o compuestos de coordinación con agua y/o diversos solventes, en las diversas formas físicas de los compuestos. Se debe entender que las composiciones se pueden preparar a partir de diversas formas amorfas, no amorfas, parcialmente cristalinas, cristalinas y/u otras formas morfológicas de los compuestos descritos en la presente. También se debe entender que las composiciones se pueden preparar a partir de diferentes hidratos y/o solvatos de los compuestos descritos en la presente. Por consiguiente, también se debe entender que aquellas composiciones farmacéuticas que citan compuestos descritos en la presente incluyen cada uno o cualquier combinación de las diferentes formas morfológicas y/o formas de solvato o de hidrato de los compuestos descritos en la presente. Además, se debe entender que las composiciones se pueden preparar a partir de diversos co-cristales de los compuestos descritos en la presente.
Por ejemplo, las composiciones pueden incluir uno o más portadores, diluyentes y/o excipientes. Los compuestos descritos en la presente, o las composiciones que los contienen, se pueden formular en una cantidad terapéuticamente efectiva en cualquier forma de dosificación apropiada para los métodos descritos en la presente. Los compuestos descritos en la presente, o las composiciones que los contienen, que incluyen las formulaciones, se pueden administrar por una amplia variedad de vías convencionales para los métodos descritos en la presente, y en una amplia variedad de formas de dosificación, utilizando procedimientos conocidos (véase en general, Remington: La Ciencia y Práctica de la Farmacia, (21a edición, 2005)).
El término "cantidad terapéuticamente efectiva" como se usa en la presente, se refiere a aquella cantidad del compuesto activo o del agente farmacéutico que produce la respuesta biológica o medicinal en un sistema de tejido, animal o humano que está buscando un investigador, veterinario, médico u otro clínico, que incluye el alivio de los síntomas de la enfermedad o trastorno que se está tratando. En uno de los aspectos, la cantidad terapéuticamente efectiva es aquella que puede tratar o aliviar la enfermedad o los síntomas de la enfermedad a una relación de riesgo/beneficio razonable aplicable a cualquier tratamiento médico. Sin embargo, se debe entender que el uso diario total de los compuestos y las composiciones descritos en la presente se puede decidir el médico que atiende al paciente dentro del alcance del juicio médico sensato. El nivel de dosis terapéuticamente efectivo específico para cualquier paciente particular depende de una variedad de factores, que incluyen el trastorno que se está tratando y la gravedad del trastorno; la actividad de del compuesto específico empelado; la composición específica empleada; la edad, el peso corporal, la salud general, el sexo y la dieta del paciente; el tiempo de administración, la vía de administración y la velocidad de excreción del compuesto específico empleado; la duración del tratamiento; los fármacos usados en combinación o coincidentemente con el compuesto específico empleado; y factores similares conocidos para el investigador, veterinario, médico u otro clínico normal.
El término "administrar" como se usa en la presente incluye todos los medios para introducir los compuestos y las composiciones descritos en la presente al paciente, que incluye, en forma no taxativa, oral (po), intravenosa (iv), I intramuscular (im), subcutánea (se), transdérmica, por inhalación, bucal, ocular, sublingual, vaginal, rectal y similares. Los compuestos y las composiciones descritos en la presente se pueden administrar en formas de dosificación unitarias y/o formulaciones que contienen portadores, coadyuvantes y excipientes farmacéuticamente aceptables no tóxicos convencionales.
Ejemplos de formas para la administración oral incluyen tabletas, cápsulas, elixires, jarabes y similares.
Ejemplos de vías para la administración parenteral incluyen intravenosa, intraarterial, intraperitoneal, epidural, intrauretral, intrasternal, intramuscular y subcutánea, así como cualquier otra vía de administración parenteral reconocida en el arte.
Según cuál sea la enfermedad descrita en la presente, la vía de administración y/o si los compuestos y/o las composiciones se administran en forma local o sistémica, en la presente se contempla una amplia variedad de dosificaciones admisibles, que incluyen dosis que están en la gama de 1 mg/kg a 1 g/kg. Las dosificaciones pueden ser únicas o divididas y se pueden administrar de conformidad con una amplia variedad de protocolos, que incluyen una vez por día, dos veces por día, tres veces por día o aún una vez cada dos días, una vez por semana, una vez por mes, una vez cada tres meses y similar. En cada uno de estos casos se entiende que las cantidades terapéuticamente efectivas descritas en la presente corresponden al caso de la administración, o alternativamente a la dosis diaria, semanal, mensual o trimestral, como lo determina el protocolo de dosificación.
El término "profármaco" como se usa en la presente en general se refiere a todos los compuestos que cuando se administran a un sistema biológico generan un compuesto I biológicamente activo como resultado de una o más reacciones químicas espontáneas, reacciones químicas catalizadas por enzimas y/o reacciones químicas metabólicas o una combinación de ellas. In vivo, normalmente una enzima (tal como estearasas, amilasas, fosfatasas y similares), una composición química biológica simple u otro proceso in vivo actúa sobre el profármaco para liberar o regenerar el fármaco farmacológicamente activo. Esta activación puede ocurrir a través de la acción de una enzima hospedera endógena o una enzima no endógena que se administra al hospedero antes, después o durante la administración del profármaco. Otros detalles del uso de profármacos se describen en la Patente Estadounidense N° 5.627.165 y Pathalk et al, Téenicas de grupos protectores de enzimas en síntesis orgánica, Stereosel. Biocatal. 775-797 (2000). Se aprecia que el profármaco se convierte ventajosamente en el fármaco original tan pronto como se 1alcanza la meta, tal como el suministro dirigido, la seguridad, la estabilidad y similares, seguido por la posterior eliminación rápida del remanente liberado de los grupos que fortnan el profármaco.
Los profármacos se pueden preparar a partir de los compuestos descritos en la presente uniendo grupos que finalmente se descomponen in vivo hacia uno o más grupos funcionales presentes en el compuesto, tales como -OH-, -SH, -CO2H, -NR.2. Ejemplos de profármacos incluyen en forma no taxativa ásteres de carboxilato donde el grupo es alquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, aciloxialquilo, alcoxicarboniloxialquilo asi como ásteres de hidroxilo, tiol y aminas donde el grupo unido es un grupo acilo, un alcoxicarbonilo, aminocarbonilo, fosfato o sulfato. Ejemplos de ásteres, también denominados ásteres activos, incluyen en forma no taxativa 1-indanilo, N-oxisuccinimida, grupos aciloxialquilo tales como acetoximetilo, pivaloiloximetilo, b-acetoxietilo, b-pivalooloxietilo, 1-(ciclohexilcarboniloxi)prop-1-ilo, (1 -aminoetil)carboniloximetilo y similares; grupos alcoxicarboniloxialquilo, tales como etoxicarboniloximetilo, a-etoxicarboniloxietilo, b-etoxicarboniloxietilo y similares; grupos dialquilaminoalquilo, que incluyen grupos dialquil inferior amino alquilo, tales como dimetilaminometilo, dimetilaminoetilo, dietilaminometilo, dietilaminoetilo y similares; grupos 2-(alcoxicarbonil)-2-alquenilo tales como 2-(isobutoxicarbonil) pent-2-enilo, 2- (ietoxicarboni1)but -2-eni lo y similares; y grupos lactona tales como ftalidilo, dimetoxi ftalidilo y similares .
Otros ejemplos de profármacos contienen un grupo químico, tal como un grupo amida o fósforo que funciona para aumentar la volatilidad y/o la estabilidad de los compuestos descritos en la presente. Otros ejemplos de profármacos para grupos amino incluyen, en forma no taxativa, (C3-C20)alcanoilo; halo- (C3-C2o).alcanoilo; (C3-C20)alqueni lo ; (C4-C7)cic loalcano i10; (C3-C6)-cicloalqui 1 (C2-Ci6)alcanoi lo; aroilo opcionalmente sustituido, tal como aroilo no usituido o aroilo sustituido por 1 a 3 sustituyentes que se seleccionan del grupo formado por halógeno, ciano, trif luorometanosulf oniloxi , (Ci-C3)alqui lo y (Ci-C3)alcoxi, cada uno de los cuales está opcionalmente sust ituido además por 1 a 3 átomos de halógeno; arilo opcionalmente sustituido (C2-Ci6)alcanoilo y heteroarilo opcionalmente sustituido (C2-C16)alcanoilo, tal como el radical de arilo o de heteroarilo que es no sustituido o está sustituido por 1 a 3 sustituyent es que se seleccionan del grupo formado por halógeno, (Ci-C3)alquilo y (C1-C3)alcoxi , cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido además con 1 a 3 átomos de halógeno ; y he teroari 1alcanoi lo opcionalmente sustituido que tiene de uno a tres heteroátomos que se seleccionan de 0, S y N en el grupo heteroarilo y de 2 a 10 átomos de carbono en el grupo alcanoilo, tal como el radical de heteroarilo que no se sustituye o está sustituido por 1 a 3 sustituyentes que se seleccionan del grupo formado por halógeno, ciano, trifluorometanosulfoniloxi, (C1-C3)alquilo y (C1-C3)alcoxi, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido además con 1 a 3 átomos de halógeno. Los grupos ilustrados son ejemplos, no taxativos y se pueden preparar I mediante procesos convencionales.
Se entiende que los profármacos por sí solos pueden no poseer actividad biológica importante, pero en cambio experimentan una o más reacciones químicas espontáneas, reacciones químicas catalizadas por enzimas y/o reacciones químicas metabólicas, o una combinación de ellas después de la administración in vivo para producir el compuesto descrito en la presente que es biológicamente activo o es un precursor del compuesto biológicamente activo. Sin embargo, se apreciará que en algunos casos, el profármaco es biológicamente activo. Se aprecia también que los profármacos pueden frecuentemente servir para mejorar la eficacia o la seguridad del fármaco a través de la biodisponibilidad oral mejorada, la semivida farmacodinámica y similares. Los profármacos también se refieren a derivados de los compuestos descritos en la presente que incluyen grupos que simplemente enmascaran propiedades I indeseables del fármaco o mejoran el suministro del fármaco. Por ejemplo, uno o más compuestos descritos en la presente pueden presentar una propiedad indeseable que se bloquea ventajosamente o se minimiza y puede hacerse una barrera farmacológica, farmacéutica o farmacocinética en la aplicación clínica de fármacos, tal como baja absorción oral del fármaco, falta de especificidad del sitio, inestabilidad química, i toxicidad y mala aceptación del paciente (sabor desagradable, olor desagradable, dolor en el sitio de la inyección y i similares) y otros. Se apreciará en la presente que un profármaco, u otra estrategia que usa derivados reversibles, pueden ser útiles en la optimización de la aplicación clínica de un fármaco.
Los compuestos, conectores, compuestos intermedios, y conjugados descritos en la presente se pueden preparar usando procesos convencionales, que incluyen aquellos descritos en las Publicaciones de Patentes Internacionales Números WO 2009/002993, WO 2004/069159, WO 2007/022494, y WO 2006/012527, y en la Solicitud de Patente Estadounidense N° 13/837539 (presentada el 15 de marzo de 2013) . Las invenciones de cada una de las precedentes se incorporan en la presente como referencia en su totalidad.
Cada publicación citada en la presente se incorpora en la presente como referencia.
Los siguientes ejemplos ejemplifican adicionalmente modalidades específicas de la invención; sin embargo, los siguientes ejemplos no deben interpretarse de ninguna manera como taxativos de la invención.
EJEMPLOS EJEMPLOS DE COMPUESTOS Los compuestos descritos en la presente se deben preparar usando el proceso y la síntesis descritos en la presente, así como usando métodos sintéticos orgánicos generales. Específicamente, los métodos para preparar los compuestos se describen en la publicación de solicitud de patente estadounidense 2005/0002942, cuya invención se incorpora en la presente como referencia en su totalidad.
EJEMPLO. Formación general de péptidos de folato. El fragmento de peptidilo que contiene folato Pte-Glu-(AA)n-NH(CHR2)C02H (3) se prepara mediante un enfoque secuencial con soporte polimérico usando métodos comunes, tales como la estrategia de Fmoc sobre un Fmoc-AA-resina de Wang sensible al ácido (1), cono se muestra en el siguiente Esquema de reacción: Esquema de reacción — - (a) 20% piperidina/DMF; (b) Fmoc-AA-OH, PyBop, DIPEA, DMF; (c) Fmoc-Glu(O-t-Bu)-OH, PyBop, DIPEA, DMF; (d) 1.
N10(TFA)-Pte-OH; PyBop, DIPEA, DMSO; (e) TFAA, (CH2SH)2, i-Pr3SiH; (f) NH40H, pH 10,3.
Se debe entender que los aminoácidos no naturales pueden estar incluidos en el proceso precedente usando los materiales de partida apropiados.
En este modalidad ejemplar de los procesos descritos en la presente, Ri es Fmoc, R2 es la cadena lateral de aminoácido protegida apropiadamente deseada y DIPEA es diisopropiletilamina. Se usan procedimientos de acoplamiento normales, tales como PyBOP y otros descritos en la presente o conocidos en el arte, donde el agente de acoplamiento se aplica por ejemplo como el reactivo de activación para asegurar el acoplamiento eficiente. Los grupos protectores de Fmoc se eliminan después de cada paso de acoplamiento en condiciones normales, tales como después del tratamiento con piperidina, fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF) y similares. Se usan bloques de formación de aminoácidos apropiadamente protegidos, tales como Fmoc-Glu-OtBu, Fmoc-D-Glu-OtBu, N10-TFA-Pte-OH, y similares, como describe en el Esquema de reacción, y están representados en el paso (b) por Fmoc-AA-OH. Por lo tanto, AA se refiere a todos los materiales de partida de aminoácidos que están protegidos apropiadamente. Se debe entender que el término aminoácido como se usa en la presente se refiere a todos los reactivos que tienen tanto una amina como un grupo funcional ácido carboxílico separado por uno o más carbonos, e incluye los alfa y beta aminoácidos naturales, así como los derivados y análogos de aminoácidos de estos aminoácidos. Específicamente, los aminoácidos que tienen cadenas laterales que están protegidas, tales como serina, treonina, cisteína, aspartato protegidos y similares también se pueden usar en la síntesis de péptido de folato descrita en la presente. Además, aminoácidos gamma, delta u homólogos más largos también pueden estar incluidos como los materiales de partida en la síntesis de péptidos de folato descrita en la presente. Además, los análogos de aminoácidos que tienen cadenas laterales homologas, o estructuras de ramificación alternada, tales como norleucina, isovalina, b-metil treonina, b-metil cisteína, b,b-dimetil cisteína y similares, también pueden estar incluidas como materiales de partida en la síntesis de péptidos de folato descrita en la presente.
La secuencia de acoplamiento (pasos (a) y (b)) que comprende Fmoc-AA-OH se realiza "n" veces para preparar el péptido de soporte sólido (2), en donde n es un número entero y puede equivaler a 0 hasta 100. Después del último paso de acoplamiento, se elimina el grupo Fmoc remanente (paso (a)), y el péptido se acopla en forma secuencial a un derivado de glütamato (paso (c)), se desprotege y se acopla al ácido pteroico protegido por TFA (paso (d)). Posteriormente, el péptido se descompone desde el soporte polimérico al tratarlo con ácido trifluoroacético, etanoditiol, y triisopropilsilano (e)). Estas condiciones de la reacción derivan en la eliminación simultánea de los grupos protectores t-Bu, t-Boc y Trt que pueden formar parte de la cadena lateral de aminoácido protegida apropiadamente. El grupo protector TFA se elimina al tratarlo con una base (paso (f)) para proveer el fragmento de peptidilo que contiene folato (3).
. · EC119 LCMS [ESI [M + H]+: 1046; RMN-1!! parcial (D20, 300 MHz): d 8,68 (s, 1H, FA H-7), 7,57 (d, 2H, J = 8,4 Hz, FA H-12 &16), 6,67 (d, 2H, J = 9 Hz, FA H-13 y 15), 4,40-4 :,75 (series de m, 5H), 4,35 (m, 2H), 4,16 (m, 1H), 3,02 (m, 2H), 2,55-2,95 (series de m, 8H), 2,42 (m, 2H), 2,00-2,30 (m, 2H), ]L,55-1,90 (m, 2H), 1,48 (m, 2H) ppm.
EJEMPLO. También se pueden preparar los compuestos correspondientes que contienen uno o más D-aminoácidos, tales como los siguientes: - , EC1213 LCMS [ESI, [M+H] +1) 1046. RMN-1!! parcial (DMSO) d(rrpi) 8 , 6 (s) , 7 , 5 (d) , 6, 6(d) , 3 , 8- , 6 (m) , 2,8-3,2(m) , 2,2-2,8(m) , 1-2, 2 (m) - EC0835 MS (ESI, [M+H] +1) = 1046,5. RMN-!H parcial (DMSO) 5(ppm) 8, 6 (s) , 7, 5(d) , 6, 6(d) , 3,8-4,6(m) , 2,8-3,2(m), 2,2-2,8(m) , 1 2,2 (m) EC819 MS (ESI, [M+H] +1) = 1046,4. RMN-1!! parcial (DMSO) 6(ppm) 8 , 6, ( s ) , 7, 6(d) , 6, 6(d) , 4-4, 6 (m) , 3,4-3,8(m) , 3-3,15(m) , 1- 2, 8 (m) EC2 59 [M+H] + = 1047,52. ¾ parcial (D20) : 8,6 (s, 1H) , 7,5 (d, 29) , 6,65 (d, 2H) , 4,4 (dd, 2H) , 4,18 (m, 4H) , 2,9 (t, 2H) , 2,75 (t, 2H) , 2,6-2,15 (m, 10H) , 2, 1-1, 8 (m, 3H) , 1, 7-1,4 (m, 3H) , 1,3 (m, 3H) .
EC1544 MS (ESI [M + H]+) : 1046. Datos de ¾ ? CH CH parcial (D20, 300 MHz) : d(rrth) 8,68 (s, 1H, FA H-7) , 7,57 (d, 2H, J = 8,4 Hz, FA H- 12 y 16) , 6,67 (d, 2H, J = 9 Hz , FA H-13 y 15) .
EC1547 MS (ESI, [M + H]+) = 1046,7. RMN-1!! (D20) 6(ppm) : 8,6(s) , 7 , 5 (d) , 6, 6(d) , 4 , 4 -4 , 8 (m) , 4-4, 2 (m) 2,2-3(m) , l,8-2,2(m) , 1 , 3 - 1 , 7 (m) y similares .
EC0347 EJEMPLO . Preparación de hidrazidas de tubulisina. Se ejemplifica preparando EC0347 (TubB-H). N,N- Diisopropiletilamina (DIPEA, 6,1 pL) y cloroformato de isobutilo (3,0 pL) se agregaron con una jeringa en tándem a una solución de tubulisina B (0,15 mg) en EtOAc anhidro (2,0 mL) a -15°C. Después de agitar durante 45 minutos a -15°C bajo argón, la mezcla de la reacción se enfrió a -20°C y a ello se agregó hidracina anhidra (5,0 pL). La mezcla de la reacción se agitó bajo argón a -20°C durante 3 horas, se enfrió con 1,0 mM amortiguador de fosfato de sodio (pH 7,0, 1,0 mL), y se inyectó I en una HPLC preparativa para la purificación. Columna: Waters XTerra Prep MS Ci810 mm, 19x250 mm; Fase Móvil A: 1,0 mM amortiguador de fosfato de sodio, pH 7,0; Fase móvil B: acetonitrilo; Método: 10%B a 80%B durante 20 minutos, velocidad de flujo = 25mL/minuto. Fracciones de 15,14-15,54 minutos se recogieron y se liofilizaron para producir EC0347 como un sólido blanco (2,7 mg). El método precedente es igualmente aplicable para preparar otras hidrazidas de tubulisinas mediante la selección apropiada del compuesto de partida de tubulisina.
EJEMPLO. Síntesis del reactive de acoplamiento EC0311.
Se agregó DIPEA (0,60 mL) a una suspensión de HOBt-OCC>2-(CH2)2-SS-2-piridina HCl (685 mg, 91%) en DCM anhidro (5,0 mL) a 0°C, se agitó bajo argón durante 2 minutos, y a ello se agregó hidracina anhidra (0,10 mL). La mezcla de la reacción se agitó bajo argón a 0°C durante 10 minutos y a temperatura ambiente durante otros 30 minutos, se filtró y el producto de la filtración se purificó mediante cromatografía rápida (gel de sílice, 2% MeOH en DCM) que dio EC0311 como un aceite denso transparente (371 mg), que se solidificó en reposo.
EJEMPLO. Preparación de disulfuros de tubulisina (proceso por etapas) I Ejemplificado para EC0312. Se agregaron DIPEA (36 pL) y cloroformato de isobutilo (13 ml con una jeringa en tándem a una solución de tubulisina B (82 mg) en EtOAc anhidro (2,0 mL) a -15°C. Después de agitar durante 45 minutos a -15°C bajo argón, se agregó a la mezcla de la reacción una solución de EC0311 en EtOAc anhidro (1,0 mL). La solución resultante se agitó bajo argón a -15°C durante 15 minutos y a temperatura ambiente durante otros 45 minutos, se concentró y el residuo se purificó mediante cromatografía rápida (gel de sílice, 2 a 8% MeOH en DCM) que dio EC0312 como un sólido blanco (98 mg). El método precedente es igualmente aplicable para preparar otros derivados de tubulisina mediante la selección apropiada del compuesto de partida de tubulisina.
EJEMPLO A una solución de doxorrubicina (100 mg, 0,184 mmol) y 2-[benzotriazol-1-il-(oxicarboniloxi)-etildisulfañil]-piridina (77,8 mg, 0,184 mmol) en DCM (4 mi) se agregó DIPEA (0,064 mi, 0,368 mmol.). Se dejó agitar la reacción durante 2 horas. La TLC (10% MeOH en DCM) indicó que la reacción había terminado. Se eliminó DCM bajo presión reducida y se purificó sobre una columna de S1O2 (10% MeOH en DCM) que dio el producto puro (90 mg, 65%). LCMS (ESI): (M + H)+ Calculado para C35H36N2O13S2, 757,17; hallado 757,30, XH (300 MHz, CDCI3/CD3OD): d 8,44 (br s, 1H), 8,00 (d, 1H), 7,65-7,82 (m, 3H), 7,38 (d, 1H), 7,18 (br s, 1H), 5,45 (s, 1H), 5,25 (s, 3H), 4,70 (m, 2H), 4,3 (m, 1H), 4,22-3,90 (m, 2H), 3,75 (s, 1H), 3,62 (s, 1H), 3,35-2,90 (m, 2H), 2,45-2,10 (m, 2H), 1,85 (m, 5H), 1,32 (d, 3H).
EJEMPLO. Piridiildisulfuro de tubulisina B.
En forma similar, se prepara este compuesto como se describe en la presente.
EJEMPLO , EC1577 MS (ESI, [M + H]+) = 1681. ¾ parcial (D20): 8,96 (s), 7,65 (d), 6,81 (d), 4,66 (s), 4,40-4,15 (m), 3,90-3,54 (m), 3,50- 3,18 (m), 2,97-2,90 (m), 2,51-1,80 (m).
EJEMPLO. Síntesis General Conjugados de Tubulisina que Contienen Disulfuro Ejemplificado con derivados de disulfuro de piridinilo de determinadas tubulisinas naturales, donde R1 es H o OH, y R10, es alquilo o alquenilo. Un compuesto intermedio de conector de ligando que contiene un grupo tiol se recoge en agua desionizada (20 mg/mL, que burbujeó con argón durante 10 minutos antes de usarlo) y el pH de la suspensión se ajustó mediante NaHC03 saturado (que burbujeó con argón durante 10 minutos antes de usarlo) a 6,9 (la suspensión se puede convertir en una solución cuando se incrementa el pH). Se agrega agua desionizada adicional (20-25%) a la solución según sea necesario y a la solución acuosa se agrega inmediatamente una solución de EC0312 en THF (20 mg/mL). La mezcla de la reacción se hace homogénea rápidamente. Después de agitar bajo argón, por ejemplo durante 45 minutos, la mezcla de la reacción se diluye con 2,0 mM de amortiguador de fosfato de sodio (pH 7,0, 150% en volumen) y el THF se elimina mediante evacuación. La suspensión resultante se filtra y el producto de la filtración se puede purificar mediante HPLC preparativa (como se describe en la presente). Las fracciones se liofilizan para aislar los conjugados. El método precedente es igualmente aplicable para preparar otros conjugados mediante la selección apropiada del compuesto de partida tubulisina.
EJEMPLO. EC1663 y EC1664 Los siguientes compuestos adicionales se pueden preparar usando los métodos y procesos descritos en la presente: Fosfato - - - · I EJEMPLO. EC1426 se prepara de conformidad con el siguiente proceso . ií i - , , í i . í i EJEMPLO. EC1456 se prepara de conformidad con el siguiente proceso - - , - , - -I , EC1456 O??qH?6dN23q4d$3 Peso Molecular 2625,81 EJEMPLO. EC1454 protegido por N^O-TFA se prepara de conformidad con el siguiente proceso . - - . , - - - . , - - - , - - - . - i - - - -- EJEMPLO. EC1454 se prepara de conformidad con el siguiente proceso . , - MS (ESI, [M+2H] 2+) = 84090, [M+H] + = 1681,3. EIMN-? parcial (DMSO) 6(ppm) : 8 , 6 (s) , 7, 6(d) , 6, 6(d) , 4,45(s) , 4,35(t) , 4,15-4 , 3 (m) , 3 , 3 -3 , 6 (m) , 3,25(m) , 3 , 0 (m) , 2,7-2,9(m) , 2-2, 3 (m) , 1,6-2(m) 1 EC1415 [M + H]+ = 1709.69, [M+2H] 2+ = 855,22. ¾ parcial (D20, 300 MHz ) d (ppm) : 8,6 (s, 1H) , 7,45 (d, 2H) , 6,5 (d, 2H) , 4,5 (s, 2H) , 4, 3-4,1 (m, 6H) , 3,95 (t, 1H) , 3, 8-3,4 (m, 19H) , 3,4-2,95 (m, 7H) , 2, 4-1, 7 (m, 26H) , 1,6 (m, 1H) , 1,25 (s, 2H) , 1,05 (s, 3H) .
EJEMPLO. EC1004 se prepara de conformidad con el siguiente proceso I i Dentro de un matraz de fondo circular equipado con una barra de agitación magnética y una sonda de temperatura, se agregan el dipéptido EC1456, imidazol, y cloruro de metileno. Una vez que todos los sólidos se han disuelto, la solución se enfría usando un baño de hielo. Se agrega clorotrietilsilano (TESC1) gota a gota y se elimina el baño de hielo. La reacción se ¡monitorea hasta terminar. Se agrega una segunda parte de clorotrietilsilano y/o imidazol si fuera necesario. La sal de HCl de imidazol se elimina mediante filtración y se agrega cloruro de metileno. Los elementos orgánicos se lavan con una solución saturada de cloruro de sodio (salmuera), la capa acuosa se extrae nuevamente una vez con cloruro de metileno, y las capas orgánicas combinadas se lavan con salmuera. La capa orgánica se seca sobre sulfato de sodio y se concentra sobre un evaporador giratorio. El residuo se disuelve en tetrahidrofurano (THF) y se enfría a aproximadamente -45°C. Una solución de bis(trimetilsilil)amida de potasio (KHMDS) en tolueno se agrega gota a gota. Con la agitación, se agrega butirato de clorometilo y se monitorea el reactivo. La reacción se enfría con metanol y luego se agregan acetato de etilo y salmuera. La capa acuosa se descarta y los elementos orgánicos se lavan una vez con salmuera. La capa orgánica se concentra sobre un evaporador giratorio y el residuo aceitoso se pasa a través de un tapón corto de gel de sílice. El tapón se lava con 20% de solución de acetato de etilo en éter de petróleo. Los elementos orgánicos combinados se concentran sobre un evaporador giratorio hasta que cesa la destilación. El aceite de EC1004 crudo se analiza mediante LC y RMN y se almacena en un congelador hasta que se use.
EJEMPLO. EC1005 se prepara de conformidad con el siguiente proceso , .
- En un matraz de hidrogenación del tamaño apropiado colocar pipecolinato de R-N-metilo (MEP), pentafluorofenol, N-metil pirrolidinona (NMP) y etil dimetilaminopropil carbodiimida (EDC)· La mezcla se agita durante por lo menos 16 horas. Se agregan EC1004 disuelto en N-metil pirrolidinona (NMP) y 10% en peso de Pd/C. La mezcla de la reacción se agita/bate bajo presión de hidrógeno hasta que la reacción es completa mediante análisis de LC. La Pd/C se elimina mediante filtración a través de celita. La celita se lava con acetato de etilo y los elementos orgánicos combinados se lavan tres veces con 1% de bicarbonato de sodio (10% de solución de cloruro de sodio). La capa orgánica se seca sobre sulfato de sodio y se concentra sobre un evaporador giratorio. El residuo se disuelve en DCM y se purifica mediante cromatografía de gel de sílice usando acetato de etilo y éter de petróleo como eluyentes. Se recogen las fracciones, se controla su pureza, se combinan y se secan sobre un evaporador giratorio. El aceite de EC1005 se ensaya mediante LC y se almacena en un congelador hasta usarlo.
EJEMPLO. EC1008 se prepara de conformidad con el siguiente proceso - EC1005 se disuelve en 1,2-dicloroetano (DCE) y se agrega hidróxido de trimetiltina. La mezcla de la reacción se calienta y la reacción se monitorea mediante LC. Cuando termina, la mezcla se enfría con un baño de hielo y se filtra. Los sólidos luego se lavan con DCE. La capa orgánica se lava una vez con agua y se seca sobre sulfato de sodio. La solución se concentra sobre un evaporador giratorio y el residuo se disuelve en tetrahidrofurano (THF). Se agrega trihidrofluoruro de trietilamina y la mezcla se agita mientras se la monitorea con LC. Se agregan piridina, dimetilaminopiridina (DMAP), y anhídrido acético. La reacción se agita y se la monitorea mediante LC. La mezcla de la reacción se concentra a un residuo y el producto se purifica mediante cromatografía de columna de C18 con acetonitrilo y agua como eluyentes. Las fracciones del producto se recogen, se concentran y se liofilizan y dan un polvo blanco a blancuzco.
EJEMPLO. EC1426 se prepara de conformidad con el siguiente proceso , , , 1 , Paso 6 EC1422 se disuelve en tetrahidrofurano (THF) y se agregan hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-iloxi)tripirrolidinofosfonio (PyBop) y diisopropiletilamina (DIPEA). Una vez que todos los sólidos se han disuelto se agrega hidracina y la reacción se agita y se la monitorea hasta que termine. Se agrega EC0607 y la mezcla se agita y se monitorea hasta que termine mediante LC. Se agrega acetato de etilo y los elementos orgánicos se lavan una vez con cloruro de amonio saturado, dos veces con bicarbonato de sodio saturado y una vez con cloruro de sodio saturado. Los elementos orgánicos se secan sobre sulfato de sodio y se concentran sobre un evaporador giratorio. El EC1426 crudo se purifica mediante cromatografía de columna de sílice con diclorometano y metanol como eluyentes. Las fracciones se recogen y las fracciones de producto combinadas se concentran sobre un evaporador giratorio y dan un sólido Amarillo.
EJEMPLO. EC1428 se prepara de conformidad con el siguiente proceso - .
EC1008 se disuelve en diclorometano y se agregan pentafluorofenol disuelto en DCM junto con N-ciclohexilcarbodiimida, N'-metil poliestireno (DCC-resina). La mezcla se agita y la finalización de la reacción se monitorea mediante LC. La mezcla se filtra para eliminar la resina y la capa orgánica se concentra sobre un evaporador giratorio y da EC1008 activado. En un matraz por separado, EC1426 se disuelve en diclorometano y se agrega ácido trifluoroacético. La mezcla de la reacción se agita y se monitorea su finalización mediante LC. La mezcla de la reacción se concentra sobre un evaporador giratorio y da EC1426 desprotegido. El EC1008 activado se disuelve en DMF y se agrega diisopropiletilamina (DIPEA). El EC1426 desprotegido se disuelve en DMF y se agrega a la mezcla de la reacción. La reacción se agita y se monitorea su finalización mediante LC. Se agrega acetato de etilo y los elementos orgánicos se lavan tres veces con cloruro de sodio acuoso saturado. La capa orgánica se seca sobre sulfato de sodio y los elementos volátiles se eliminan mediante evaporación giratoria. El EC1428 crudo se purifica mediante cromatografía de columna de sílice usando diclorometano y metanol como eluyentes. Las fracciones se recogen, se controla su pureza y las fracciones del producto combinadas se concentran mediante evaporación giratoria y dan un sólido amarillo. El EC1428 se almacena en un congelador.
EJEMPLO. Se pueden preparar tubulisinas y compuestos intermedios de tubulisina adicionales de conformidad con los procesos descritos en WO 2012/019123, WO 2009/055562, Solicitud de Patente Internacional PCT Acta N° US2013/034672, Solicitud de Patente Provisoria Estadounidense Acta N° 61/793082, cuyas invenciones se incorporan en la presente como referencia en su totalidad.
EJEMPLO. Los ejemplos de tubulisinas son los siguientes: Compuesto 100a 100b 100c Tub B R alilo n-butilo n-pentilo IC50 sobre FR+ celula KB (nM) 1 , 2 0 , 7 0,8 1 , 2 EJEMPLO. EC1454 se prepara de conformidad con el siguiente proceso La síntesis de fase sólida de EC1454 protegido por N10-TFA se inicia con D-cisteína protegida por tritilo unida a la resina. La resina se suspenden dimetilformamida (DMF) y se lava dos veces con DMF. EC0475 (ácido L-glutámico modificado por glucamina), hexafluorofosfato de (Benzotriazol-1-iloxi)tripirrolidinofosfonio (PyBOP), y diisopropiletilamina (DIPEA) se agregan a la mezcla de la reacción. Después de por lo menos 1 hora, se realiza un ensayo de Kaiser para asegurar que el acoplamiento terminó. La resina se lava tres veces con DMF, tres veces con IPA y tres veces con DMF. La resina se lava lentamente tres veces con piperidina en DFM, tres veces con I DMFy tres veces con IPA. Se realiza un ensayo de Kaiser para confirmar la desprotección. La resina se lava tres veces con DMF y el aminoácido siguiente en la secuencia se acopla siguiendo el mismo proceso. Los monómeros se acoplan en el siguiente orden: 1) EC0475, 2) Fmoc-D-Glu(OtBu)-OH, 3) EC0475, 4) Fmoc-D-Glu(OtBu)-OH, 5) EC0475, 6) Fmoc-D-Glu-OtBu, y 7) Una vez que el acoplamiento final termina, la resina se lava tres veces con metanol y se seca pasando argón a través de la resina a temperatura ambiente. La resina seca se suspende en una mezcla de TFA, agua, etanoditiol y triisopropilsilano. Después de 1 hora la resina se elimina mediante filtración y se lava con TFA. El producto se precipita agregándolo a éter etílico frío, se filtra y se lava con éter. Los sólidos se secan bajo vacío a temperatura ambiente y se almacenan dentro de un congelador.
- · : - I N10-TFA EC1454 se disuelve en agua asperjada con argón. Se agrega carbonato de sodio (1M en agua, argón asperjado) para alcanzar un pH de 9,4 - 10,1. La mezcla de la reacción se agita durante por lo menos 20 minutos.Una vez que la reacción termina como se determina mediante LC, se enfría ajustando el pH a 1,9 2,3 con 2M HCl. El producto se purifica mediante cromatografía de columna de C18 usando acetonitrilo y amortiguador de acetato de amonio a pH 5 como eluyentes. Se recogen las fracciones y se controla su pureza mediante HPLC. Las fracciones del producto combinadas se concentran sobre un evaporador giratorio y luego se liofilizan y dan EC1454 como un sólido amarillo. MS (ESI, [M+2H]2+) = 840,90, [M+H1]+ = 1681,3. RMN-1!! seleccionado (DMSO, 300 MHz) d (ppm): 8,6(s), 7,6(d), 6,6(d), 4,45(s), 4,35(t), 4,15-4,3(m), 3,3-3,6(m), 3,25(m), 3,0(m), 2,7-2,9(m), 2-2,3(m), l,6-2(m). El producto se almacena a -20°C.
EJEMPLO. EC1456 se prepara de conformidad con el siguiente proceso - · EC1428 se disuelve en acetonitrilo y se agrega una solución de EC1454 en amortiguador de fosfato de sodio a pH 7,4. La solución se asperja con argón antes y después del agregado. La mezcla de la reacción se agita durante por lo menos 15 minutos y luego se controla que termine. El producto deseado se purifica mediante cromatografía de columna de C18 usando acetonitrilo y amortiguador de fosfato a pH 7,4 como eluyentes. Las fracciones del producto se recogen, se controla su pureza, se combinan y se concentran mediante ultra-filtración y dan una solución acuosa que es 10-20 mg/mL de EC1456. Se toman muestras de la solución del producto final para el ensayo y luego se la almacena dentro de un congelador.
El espectro de masa de electrospray positivo de EC1456 se obtuvo en un espectrómetro de masa Waters Acquity UPLC Xevo Gs-S QTOF de alta resolución. El espectro se obtuvo después de la separación del componente principal sobre un sistema de entrada de UPLC, la potencia de resolución fue aproximadamente 35.000. La medición de masa precisa del pico monoisotópico de M+H fue 2625,0598, que es 1,1 ppm de diferencia de error con respecto al valor teórico de 2625,0570 para un ion de la fórmula C110H166N23O45S3. La distribución isotópica también coincide con esa fórmula.
Características espectrales de masa del espectro de ES+ para EC1456 Una muestra de 30 mg de EC1456 se disolvió en 665 uL de una mezcla 9:1 de sulfóxido de dimetilo deuterado y agua deuterada. El espectro de XH se obtuvo a 500MHz a 26°C sobre un espectrómetro Agilent modelo DD2 equipado con una sonda de 2 canales que contiene arrollamientos de observación de protones y de banda ancha. El espectro de RMN 13C se obtuvo a 125 MHz sobre el mismo instrumento en idénticas condiciones. Para todos los espectros se tomaron como referencia las señales residuales de solvente de DMSO a 2,5ppm (XH) y 39,50 ppm (13C).
Todas las características espectrales se asignan para ambos espectros de RMN de las tablas siguientes (? y 13C) usando la numeración de átomos de la siguiente figura, donde el símbolo * indica la conexión para el enlace de disulfuro.
- Se hicieron asignaciones sobre la base de experimentos de RMN ID así como de 2D, que incluye a través de la conectividad del de H-H del enlace usando los experimentos de COSY y TCSY 2D, a través de la proximidad de H-H del espacio usando 2D NOESY, medición de multiplicidad de carbonos usando el experimento de ID DEPT y a través de la conectividad de C-H del enlace usando los experimentos de 2D detectado por el protón HSQC y HMBC. En la mayor parte de los casos de superposición en los espectros de ID (protones diferentes o carbonos que resuenan en el mismo desplazamiento químico) se podrían resolver en los espectros de 2D, en estos casos las tablas reflejan los desplazamientos químicos medidos a partir de los espectros de 2D pero las integraciones sumadas para el grupo de especies que resuenan en forma conjunta. En algunos casos de superposición de ID (tales como las subunidades de ácido glutámico y glucamina casi idénticas) también hubo una superposición en los espectros de correlación de 2D lo cual impide una asignación no ambigua de una sola o varias resonancias entre varios números de átomos, en estos casos hay varias entradas para el desplazamiento químico y/o asignaciones de números de átomos en una sola fila de la tabla siguiente.
Los protones de NH y OH se intercambiaron con átomos de deuterio de D20 y están casi ausentes del espectro, excepto picos anchos débiles en la región de 5-10 ppm. Los picos de CH en él espectro que no están enumerados en la tabla incluyen un pico de HOD ancho a 3,75 ppm y un pico de DMSO a 2,50 ppm. El pico de HOD no hace que ninguna resonancia sea confusa, pero eleva las integraciones para resonancias cercanas a 4,2 y 3,4-3,7 ppm debido al aumento de la línea base ancha. El pico de DMSO hace confusa la resonancia para H129, que no se integra por este motivo. Los picos de 13C del espectro no enumerados en la tabla incluyen el solvente de DMSO muy grande a 39,50 ppm. El pico de DMSO hace confusas ambas señales de C91 y de C93. El pico de C116 no se puede observar en el espectro de 13C debido al ensanchamiento amplio debido a los cambios de conformación alrededor del grupo amida cercano. Los tres desplazamientos químicos (C91, C93, C116) son visibles y se miden en los espectros de correlación de 2D detectados por protones.
Asignaciones de RMN de protones para EC1456 Asignaciones de RMN de carbonos para EC1456 El espectro infrarrojo de EC1456 se adquirió sobre un espectrofotómetro infrarrojo de transformada de Fourier (FT- Nexus 6700® (Thermo Nicolet) equipado con una fuente de radiación infrarroja media/lejana Ever-Glo, un separador de haces bromuro de potasio de alcance extendido (KBr) y un detector de sulfato de triglicina deuterada (DTGS). Se usó un accesorio de reflectancia total atenuada (ATR) (Thunderdome™, Thermo Spectra-Tech), con un cristal de germanio (Ge) para la adquisición de datos. El espectro representa 256 barridos agregados conjuntamente recogidos a una resolución espectral de 4 enr1. Se adquirió un grupo de datos de fondo con un cristal de Ge limpio. Se adquirió un espectro de Log 1 /R (R = reflectancia) tomando una relación de estos dos grupos de datos uno contra otro. Se realizó la calibración de la longitud de onda usando poliestireno.
Asignaciones de bandas infrarrojas para la sustancia de referencia EC1456 El espectro ultravioleta de EC1456 adquirido sobre un espectrómetro Perkin-Elmer Lambda 25 UV/Vis. El espectro se registró a 40,7 mM en 0,1M solvente de NaOH sobre una celda de longitud de camino de 1 cm a 25°C. Las máximas locales a 366 nm, 288 nm y 243 nm se deben principalmente a las subestructuras de ácido pteroico, benzamida / fenol y tiazol-amida, respectivamente, aunque la molécula contiene docenas de cromóforos con absorción superpuesta en la región ultravioleta.
EJEMPLO. EC1579 protegido por N10-TFA se prepara de conformidad con el siguiente proceso , .
. - - - - · \ EJEMPLO. EC1579 se prepara de conformidad con el siguiente proceso EC1579 MS (ESI, [M+2H]2+) = 840,89 (M+1H) 1+ = 1681,0. RMN-CH parcial (D20) d (ppm) : 8,6(s) , 7 , 5 (d) , 6 , 65 (d) , 4,4-4, 8 (m) , 4-4, 2 (m), 3 , 4 -3 , 8 (m) 3-3, 3 (m) 2,75(s) , l,6-2,4(m) .
EC0948 se prepara de conformidad con el siguiente proceso EC0848 MS (ESI, [M+2H] 2+) = 840,8. [M+H] + = 1681,1. RMN-1!! seleccionado (DMSO) d (ppm) : S, 8,6; d, 7,6; d, 6,6; S, 4,45; m, 4-4,2; m, 3,3-3,8; m, 3, 1-3,3; m, 3-3,1; m, 2, 7-2, 9; tn, 1,7-2, 3; s, 1,15 EC1669 EJEMPLO. EC1669 se prepara de conformidad con los procesos descritos en la presente a partir de EC1579 y de EC0469 de la siguiente manera: — EC1579 (200 mg, 1,0 equivalente) se disuelve en amortiguador desoxigenado (burbujeo de argón) 20 mM P04 (pH=7) (4,0 mL) y se agrega gota a gota a una solución agitada de EC0469 (80 mg, 1,0 equivalente) en sulfóxido de dimetilo seco (4,0 mL) a temperatura ambiente con burbujeo de argón. Después de 30 minutos, EC1669 (132mg) se purifica mediante HPLC preparativa en 0-30% acetonitrilo/50 mM amortiguador de NH4HCO3 a pH 7 y se liofiliza (49% de rendimiento). Fórmula Química: <-:87H122N26®40®2 > Masa Exacta: 2234,78; Peso molecular 2236,18. MS (ESI, [M+2H]2+) Predicho 1118,39, Hallado 1119,52.
CH parcial (DMSO c/ 10% D20) d (ppm) 8,67 (s), 8,59 (2), 7,61 (d), 7,56 (d), 6,71 (d), 6,61 (d), 3,34-3,39 (m)'.
EJEMPLO. Los siguientes compuestos adicionales se describen y se preparan de conformidad con los procesos generales descritos en la presente.
· - | EC1456 .. 1 . ,, 1 I ' EC1739 (C113H173N23O44S3. Peso molecular 2653,91) EC1454 (8,5mg, 1,5 equivalente) se disolvió en 20mM amortiguador de fosfato a pH 7 desgasificado (burbujeo de Ar) (2,0mL) y se agregó gota a gota a una solución agitada de EC1717 (3,8mg, 1,0 equivalente) en sulfóxido de dimetilo seco (2,0mL, Aldrich) a temperatura ambiente con burbujeo de Ar. Después de 30 minutos, EC1739 (5,3mg, 59%) se purificó mediante HPLC preparativa en 10-100% de acetonitrilo/50mM amortiguador de NH4HCO3 a pH7 y se liofilizó. MS (ESI, [M+2H]2+) = 1327 , 06 Hallado 1327,73 - EC1664 (C111H169N23044S3; Peso Molecular 2625,85) EC1454 (5,5mg, 1,0 equivalente) se disolvió en 20mM amortiguador de fosfato a pH 7 desgasificado (burbujeo de Ar) (2,0mL) y se agregó gota a gota a una solución agitada de EC1662 (3,6mg, 1,0 equivalente) en sulfóxido de dimetilo seco (2,0mL, Aldrich) a temperatura ambiente con burbujeo de Ar. Después de 30 minutos, EC1664 (4,6mg, 54%) se purificó mediante HPLC preparativa en 10-100% acetonitrilo/50mM amortiguador de NH4HCO3 a pH 7 y se liofilizó. MS (ESI, [M+2H]2+) Predicho 1313,05, Hallado 1313,37. ¾ Parcial (DMSO c/ 10% D20, 300 MHz) d (ppm) 8,61 (s), 8,15 (s), 7,58 (d), 6,94 (d), 6,60 (m), 5,78 (d), 5,22 (d), 4,47 (m), 4,09-4,33 (m), 0,99 (d), 0,93 (d), 0,76 (t), 0,71 (t), 0,61 (d).
EC1663 (Fórmula Química: C]_]oHi67N23044S3; Peso molecular 2611,83) EC1454 (16,lmg, 1,2 equivalente) se disolvió en 20 mM amortiguador de fosfato a pH 7 desgasificado (burbujeo de Ar) (2,0mL) y se agregó gota a gota a una solución agitada de EC1661 (8,7mg, 1,0 equivalente) en sulfóxido de dimetilo seco (2,0mL, Aldrich) a temperatura ambiente con burbujeo de Ar. Después de 30 minutos, EC1663 (15,8mg, 76%) se purificó mediante HPLC preparativa en 10-100% acetonitrilo/50mM amortiguador de NH4HCO3 a pH 7 y se liofilizó.MS (ESI, [M+2H]2+) Predicho 1306,04, Hallado 1306,82.
EC1416 (C112H169N23045S3; Peso molecular 2653,87) EC1415 (20 mg) se disolvió en fosfato a pH 7 (pH 7,75, purgado con argón). A esta solución se agregó una suspensión de EC0312 (14 mg) en igual volumen de MeOH. La mezcla de la reacción se agitó a temperatura ambiente bajo argón durante 56 minutos y luego se cargó en HPLC preparatoria (Fase móvil A = 5O mM amortiguador de NH4HCO3, pH = 7,0. B = ACN. Método: 5-80% B en 20 minutos) para la purificación. Las fracciones que contienen el producto deseado se recogieron, y se secaron por congelamiento y se obtuvo el producto (18 mg) como un sólido amarillo claro. MS(ESI, [M+2H]2+) 1328, CH (DMSO-d6, D20, 300MHz): 8,6 (s, 1H), 8,15 (s, 1H), 7,85 (bd, 1H), 7,55 (d, 2H), 6,95 (d, 2H), 6,6 (m, 4H), 6,2 (d, 1H), 5,68 (d, 1H), 5,2 (d, 1H), 4,5 (bs, 3H), 4,5-4,3 (m, 4H), 4,3-4,0 (m, 10H), 3,5-3,3 (m, 13H), 3,2 (bd, 5H), 3,1-2,8 (m, 8H), 2,75 (bs, 5H), 2,6-1,6 (m, 50H), 1,4 (m, 9H), 1,2 (m, 9H), 1,0 (dd, 9H), 0,7 (m, 11H), 0,6 (d, 3H).
. EC1299 (C85H118N22028S3'· Peso molecular 1992,18] Una solución de EC0259 (35 mg) en 20 mM amortiguador de fosfato a pH7 (3,0 mL) y una solución de NaHCCb saturado (1,5 mL) se agregó a una solución de EC0312 (39 mg) en MeOH (5,5 mL) en tándem. La solución homogénea resultante se agitó a temperatura ambiente bajo argón durante 20 minutos y luego se cargó directamente sobre HPLC preparatoria (Fase móvil A = 50 mMiamortiguador de NH4HCO3, pH = 7,0. B = ACN. Método: 5-80% B en 20 minutos) para la purificación. Se recogieron fracciones que contienen el producto deseado, se combinaron y se secaron por congelamiento y dieron el producto (25 mg) como un sólido amarillo pálido. MS (ESI, [M+H]+) 1993.
EC1549 (C85H]_]_8N22°28S3' Peso molecular 1992,17) Una solución de EC0259 (35 mg) en 20 mM amortiguador de fosfato a pH 7 (3,0 mL) y una solución de NaHCCh saturado (1,5 mL) se agregaron a una solución de ECO312 (39 mg) en MeOH (5,5 L) en tándem. La solución homogénea resultante se agitó a temperatura ambiente bajo argón durante 20 minutos y luego se cargó en HPLC preparatoria (Fase móvil A = 50 mM amortiguador de NH4HCO3, pH = 7,0. B = ACN. Método: 5-80% B en 20 minutos) para la purificación. Las fracciones que contienen el producto i deseado se recogieron, se combinaron y se secaron por congelamiento y dieron el producto (25 mg) como un sólido amarillo pálido. MS (ESI, [M+H]+) 1993.
EC1548 (Cg5H]_igN22028s3 Peso molecular 1992,17) Una solución de EC1544 (55,1 mg) en 20 mM amortiguador de fosfato a pH7 (1,95 mL) y una solución de NaHCCh saturado (0,30 mL) se agregaron a una solución de EC1248 (58,0 mg) en MeOH (2,30 mL) en tándem. La solución homogénea resultante se agitó a temperatura ambiente bajo argón durante 20 minutos y luego se cargó directamente en HPLC preparatoria (Fase móvil A = 50 mM amortiguador de NH4HCO3, pH = 7,0. B = ACN. Método: 5-80% B en 20 minutos) para la purificación. Las fracciones que contienen el producto deseado se recogieron, se combinaron y se secaron por congelamiento y dieron el producto (61,5 mg) como un sólido amarillo pálido. MS (ESI, [M+H]+) 1993.
EC1393 (CgyH^22^22®28^3' Psso molecular 2020,23) El pH de una solución de EC1392 (20 mg) en 40 mM amortiguador de fosfato a pH 7 se ajustó a 8 con una solución NaHCC>3 saturado. A la solución se agregó una suspensión de EC0312 (20 mg) en igual volumen de MeOH. La mezcla de la reacción se agitó a temperatura ambiente bajo argón durante 30 minutos y luego se cargó en HPLC preparatoria (Fase móvil A = 50 mM amortiguador de NH4HCO3, pH = 7,0. B = ACN. Método: 5-80% B en 20 minutos) para la purificación. Las fracciones que contienen el producto deseado se recogieron, se combinaron y se secaron por congelamiento y dieron el producto (15 mg) como un sólido amarillo pálido. MS(ESI, [M+2H]2+) 1011,39.2H (DMSO-d6, D20, 300 MHz): 8,6 (s, 1H), 8,15 (s, 1H), 7,85 (bd, 1H), 7,55 (d, 2H), 6,95 (d, 2H), 6,6 (m, 4H), 6,2 (d, 1H), 5,68 (d, 1H), 5,2 (d, 1H), 4,6 (t, 1H), 4,5 (m, 3H), 4,5-4,0 (m, 11H), 3,2-2,8 (m, 6H), 2,8-2,5 (m, 8H), 2,4 (m, 5H), 2,2-2,0 (m, 14H), 2,0-1,7 (m, 7H), 1,6-1,3 (m, 13H), 1,25 (d, 8H), 1,1-0,95 (dd, 8H), 0,75 (m, 10H), 0,6 (d, 2H).
Los compuestos descritos en la presente se pueden preparar mediante los siguientes métodos: Método A: El separador de folato se disuelve en agua ajustando el pH de la solución con la solución de NaHCC>3 a pH = 7 con purga de argón. Luego se agrega el agente tiofílico en solvente orgánico (MeOH, ACN, THF o DMSO). La mezcla de la reacción se agita a temperatura ambiente con purga de argón. El progreso de la reacción se monitorea mediante HPLC analítica (Fase móvil A = 50 mM amortiguador de NH4HCO3, pH = 7,0; B = ACN). Después de que la reacción termina, el solvente orgánico se evapora y la solución resultante luego se purifica mediante HPLC preparativa con una columna de C18 (Fase móvil A = 50 mM de amortiguador de NH4HCO3 o 2 mM amortiguador de fosfato, pH = 7.0; B = ACN).
Método B: El separador de folato se disuelve en agua y el pH se ajusta a 2 con ácido (AcOH o HCl diluido). El separador con pH ajustado se liofiliza, y luego se disuelve en DMSO. La mezcla de la reacción se purga con argón y se agregan 10 equivalentes molares de Et3N (o DIPLA). A esta solución se agrega el agente tiofílico en solvente orgánico (DMSO, THF, ACN, etc). El progreso de la reacción se monitorea mediante HPLC (Fase móvil A = 50 mM amortiguador de NH4HCO3 o 20 mM de amortiguador de fosfato, pH = 7,0. B = ACN). Después de que la reacción termina, la mezcla de la reacción se purifica mediante HPLC preparatoria con columna de C18 (Fase móvil A = 50 mM amortiguador de NH4HCO3 o 2 mM amortiguador de fosfato, pH = 7,0; B = ACN).
EJEMPLOS Otros ejemplos de compuestos intermedios de conectores (también denominados separadores de folato) se describen en la presente: .
EC014 ECO014 ¾ (D20, 500 MHz ) d (ppm) 8,73(s, 1H, FA H-7) , 7,56 (d, 2H , FA H-12 y H16) , 6,73 (d, 2H, FA H-13 y H15) , 4,45(m, 2H) , 4 , 1 (m, 2H) , 3 , 61 (d, 2H) , 2,82(m, 3H) , 2,74(dd, 1H) , 2,37 (m, 2H) , 2 , 18 (th, 1H) , 2,09(m, 3H) , 1,74 (m, 1H) .
EJEMPLO EC 20 Pte-y-D-Glu-P-Dap-Asp-Cys EC0020 MS (ESI, [M+H]+) 746. ¾ (D20, 500 MHz) 6(ppm) 8,76(s, 1H, FA H-7), 7,68(d, 2H, FA H-12 y H16), 6,8 (d, 2H, FA H-13 y H15), 4,71 (dd, 1H, Asp H-2), 4,64(s, 2H FA H-9), 4,41(dd, 1H, D-Glu H-2), 4,3 (dd, 1H, Cys H-2), 4,l(dd, Dpr H-2), 3,72(dd, 1H, Dpr H-3A), 3,52 (dd, 1H, Dpr H-3B), 2,89(dd, 1H, Cys H-3A), 2,85(dd, 1H, Cys H-3B), 2,81(dd, 1H, Asp H-3A), 2,62 (dd, 1H, Asp H-3B), 2,44 (dd, 2H, D-Glu H-4), 2,27(m, 1H, D-Glu H-3A), 2,08(m, 1H, D-Glu H-3B). RMN 13C (DMS0-d6+D20, 75 MHz): d 174,78, 174,42, 172,68 (2C), 170,45, 168,25, 167,08, 162,24, 156,24, 154,38, 151,24, 149,41 (2C), 129,52, 128,14, 121,74, 111,98, 55,76, 53,02 (2C), 52,77, 50,89, 46,16, 36,61, 32,26, 27,32, 26,60 EJEMPLOS Pte-y-D-Glu-P-D-Dap-D-Asp-D-Cys MS (ESI, [M+H] +) 746 - - - .
EC0066 : MS (ESI, [M+H] + 1317 EC0067 : MS (ESI, [M+H] +) 699 .
EC149 Pte-Glu-D-Dap-D-Glu-Pte [M+H]+ = 631. ¾ (D20): 8,55 (s, 1H), 7,5 (d, 2H), 6,61 (d, 2H), 4,42 (s, 2H), 4,35 (dd, 1H), 4,25 (m, 2H), 4,1 (s, 1H), 3,68 (m, 1H), 3,5 (m, 1H), 3,35-3,2 (m, 3H), 3,1 (dd, 1H), 2,4-2,1 (m, 3H), 2,1-1,9 (m, 4H).
EC150 Pte-Glu-D-Dap-Cys MS (ESI, [M+H] +) 631. 1H seleccionado (D2O) 5(ppm) 8,42 (s, 1H, FA H- 7 ) , 7 , 50 (d, 2H, FA H-12 y 16) , 6,65(d, 2H, FA H-13 y 15) , 4,42 (s, 2H) , 4 , 3 -4 , 1 (m, 2H) , 4,0-3,85 (m, 1H) , 3,35- 3,30 (m, 1H) , 3,30-3,10 (m, 2H) , 3 , 10-2 , 90 (m, 2H) , 2,80-2,70(m, 1H) , 2, 65-2, 50 (m, 2H) , 2,30-2,10(m, 3H) , 2,10-l,85(m, 2H) , 1, 95-1, 80 (m, 2H) .
EC151 Pte-D-Glu-Dap-Cys MS (ESI, [M+H]+) 630.1H seleccionado (D2O) d(rrih) 8 ,42 (s, 1H, FA H-7) , 7,50(d, 2H, FA H-12 y 16), 6,65(d, 2H, FA H-13 y 15) , 4,42 (s , 2H), 4,3-4,l(m, 2H), 4,0-3,85 (m, 1H), 3,35- 3 , 30 (m, 1H) , 3,30-3,10 (m, 2H), 3,10-2,90(m, 2H), 2,80-2,70(m, 1H) , 2,65-2,50 (m, 2H) , 2,30-2,10(m, 3H) , 2 , 10-1 , 85 (m, 2H) , 1,95-1,80 (m, 2H) .
EC 232 MS (ESI, [M+H] +) 774. ¾ (D20) : 8,56 (s) , 7,50 (d) , 6,65 (d) , 4,48-4,41 (m) , 4,21 (dd) , 4,08 (dd) , 3,48-3,42 (m) , 3,28-3,09 (m) , 2,61-2,35 (m) , 2,28-2,18 (m) , 2,16-2,02 ( ) , 1,97-1,62 (m) .
I I H2N N N EC 252 [M+H] 1046,83. ¾ (D20) : 8,58 (s, 1H) , 7,5 (d, 2H) , 6,6 (d, 2H) , 3,05-2,6 (m, 5H) , 2, 3-1, 9 (m, 4H) , 1, 8-1,2 (m, 7H) .
[M+H] + = 1047,52. ¾ (D20) : 8,6 (s, 1H) , 7,5 (d, 2H) , 6,65 (d, 2H) , 4,4 (dd, 2H) , 4,18 (m, 4H) , 2,9 (t, 2H) , 2,75 (t, 2H) , 2,6-2,15 (m, 10H) , 2, 1-1, 8 (m, 3H) , 1, 7-1,4 (th, 3H) , 1,3 (m, 3H) . 2 EC1213 (EC119-D-Glu(2)-Diastereómero} LCMS (ESI [M + H]+) : 1046. Datos de ¾ seleccionado (D2O, 300 MHz) : d 8,68 (s, 1H, FA H-7) , 7,57 (d, 2H, J = 8,4 Hz, FA H- 12 y 16) , 6,67 (d, 2H, J = 9 Hz, FA H-13 y 15) .
EC1214 (EC119-D-Arg(4)-Diastere6mero LCMS (ESI [M + H]+): 1046. Datos de 1H seleccionado (D2O, 300 MHz): d 8,68 (s, 1H, FA H-7), 7,57 (d, 2H, J = 8,4 Hz, FA H-12 y 16), 6,67 (d, 2H, J = 9 Hz, FA H-13 y 15).
; . EC1215 (EC119-D-Asp{5)-Diastereómero) LCMS (ESI [M + H]+): 1046. Datos de 1H seleccionado (D20, 300 MHz): d 8,68 (s, 1H, FA H-7), 7,57 (d, 2H, J = 8,4 Hz, FA H-12 y 16), 6,67 (d, 2H, J = 9 Hz, FA H-13 y 15).
EC1216 (EC119-D-Asp(6)-Diastereómero LCMS (ESI [M + H]+): 1046 Datos de ^-H seleccionado (D20, 300 MHz): 68,68 (s, 1H, FA H-7) 7,57 (d, 2H, J = 8,4 Hz, FA H-12 y 16), 6,67 (d, 2H, J = 9 Hz FA H-13 y 15).
LCMS (ESI [M + H]+): 1046. Datos de CH seleccionado (D20, 300 MHz) : d 8,68 (s, 1H, FA H-7) , 7,57 (d, 2H, J = 8,4 Hz, FA H-12 y 16) , 6,67 (d, 2H, J = 9 Hz, FA H-13 y 15) .
[M + H] + = 1074,85. ¾ (D20, 300 MHz) d(rrih) : 8,55 (s, 1H) , 7,45 (d, 2H) , 6,5 (d, 2H) , 4,6 (m, 2H) , 4,45 (t, 1H) , 4,35 (bs , 2H) , 4,2 (m, 1H) , 4,1 (s, 1H) , 4,05 (m, 1H) , 2,9 (t, 2H) , 2,75-2,4 (m, 6H) , 2,3 (m, 2H) , 2, 2-1, 9 (m, 2H) , 1, 8-1,4 (m, 2H) , 1,2 (m, 2H) , 1,3 (s, 3H) , 1,2 (s, 3H) .
Pte D-Gfu D-Arg O-Cys Peso Molecular 700,73 MS (ESI, [M + H] +) 701,57. RM -!H seleccionado (DMSO, 300 MHz) d (ppm) : 8,65(s) , 7, 6(d) , 6, 6(d) , 4,2-4,6(m) , 2,6- 3 , 2 (m) , 1 , 8 -2 , 6 (m) , l,l-l,7(m) EC0589 (a-isómero de EC2Q) MS (ESI, [M+H] +) 746. 1H seleccionado (DMS0-d6+Ü20, 300 MHz ) : d 8 , 46 ( s , 1H) , 7,45 (d, J = 8,4 Hz , 2H) , 6,47 (d, J = 8,4 Hz, 2H) , 4,39 (t, J = 6,6 Hz , 1H) .
H2N N N D-Glu D-Asp D-Arg D-Asp D-Asp Cys EC0819 MS (ESI, [M+H]+)= 1046,4. RMN-1H seleccionado (DMSO) 6(ppm) : 8 , 6 ( s ) , 7, 6(d) , 6, 6(d) , 4-4, 6 (m) , 3,4-3,8(m) , 3- 3,15 (m) , 1-2,8 (m) .
II H,N N N Pte D-Glu D-Asp D-Asp EC0823 MS (ESI, [M+H] +) = 672.3. RMN-^ seleccionado (DMSO) d(rrth) : 7, 6(d) , 6, 6(d) , 4,4-4,6(m), 4, -4,4 (m) , 3,4- 3 , 8 (m) , 1 ,8-2,8 (m) , 1 , 15 ( s ) i H N N N Pte D-Glu D-Asp Arg Asp Asp Cys EC083S MS (ESI, [M+H] +) =1046 , 5. RMN-^ seleccionado (DMSO) 5(ppm) : 8 , 6 (s) , 7 , 5 (d) , 6,6(d) , 3,8-4.6 (m) , 2,8-3,2(m) , 2,2- 2, 8 (m) , 1-2 , 2 (m) H,N N N Pte Glu D-Asp D-Asp EC0923 MS (ESI, [M+H] +) = 672,3. RMN-i-H seleccionado (D20) 8(ppm) 8 , 8 ( s) , 7, 75(d) , 6, 85(d) , 4,4-5(m) , 2,6-2,9(m), 2,4-2,6(m) , 2 2 , 6 (m) Pte O-Gtu Ácido D-Folico MS (ESI, [M+H]+)= 442,3. RMN-1!! seleccionado (DMSO) 5(ppm) 8 , 7 (s) , 7, 6(d) , 6, 6(d) , 4,55(s) , 4 , 3 (m) , 2,2-2,6(m) , 1,8 2 , 2 (m) , 1-1, 2 (m) , [M+H] + = 1100,51. ? (D20) : d 8,75 (s, 1H) , 7,6 (d, 2H) , 6,75 (d, 2H) , 4, 7-4, 5 (m, 5H) , 4,38 (m, 2H) , 4,2 (m, 2H) , 4,1 (d, 1H) , 3,85-3,5 (m, 10H) , 2,95-2,6 (m, 4H) , 2,45 (m, 2H) , 2, 3-2, 0 (m, 2H) . _ [M+H] + = 2175,5. ¾ (D20) : 8,6 (s, 1H) , 7,5 (d, 2H) , 6,6 (d, 2H) , 4,45 (bs , 3H) , 4,35-4,2 (m, 4H) , 4,05 (t, 1H) , 3,6- 3,35 (bs , 114H) , 3,2 (s, 6H) , 2,77 (t, 2H) , 2,65 (dd, 1H) , 2,55-2,45 (m, 3H) , 2, 4-2, 2 (m, 6H) , 2, 1-1, 8 (m, 2H) .
EC0373 [M+H] + = 1346,0. ¾ (D20) : 8,55 (s, 1H) , 7,5 (d, 2H) , 6,6 (d, 2H) , 4,4 ( s , 2H) , 4,25 (m, 2H) , 4,05 (t, 1H) , 3,7 (dd, 1H) , 3, 6-3, 3 (m, 50H) , 3,25 (dd, 3H) , 3,05 (dd, 3H) , 2,8 (t, 2H) , 2,7 (dd, 2H) , 2,6 (dd, 1H) , 2,4 (t, 2H) , 2,2-1, 9 (m, 4H) .
[M+2H] 2+ = 941,2. CH (D20) : 8,55 (s, 1H) , 7,5 (d, 2H) , 6,6 (d, 2H) , 4,4 ( s , 2H) , 4,25 (m, 2H) , 4,1 (m, 5H) , 3,85 (t, 1H) , 3, 8-3,4 (m, 21H) , 3,4-2,95 (m, 7H) , 2,8 (s, 2H) , 2, -2,4 (ddd, 2H) , 2,4-1, 7 (m, 22H) , 1,55 (m, 1H) .
En la presente se describen otros ejemplos de compuestos y procesos para preparar los compuestos: Conjugados de EC1579 ,, ' , ... i : , i , : : : - . .
'· : EC1828 EC1824 I ..
¡ II I II .
EC1823 Una solución de EC1579 (acidificada, 13,0 mg, 0,0077 mmol) en DMSO (0,4 mL) y 12 mL de DIPEA (0,070 mmol, 13,5 equivalentes) se agregaron a una solución de EC1822 (5,6 mg, 0,0052 mmol) en DMSO (0,2 mL) en tándem. La solución homogénea resultante se agitó a temperatura ambiente bajo argón durante 20 minutos y luego se cargó directamente en una HPLC preparatoria (Fase móvil A = 50 M amortiguador de NH4HCO3, pH = 7,0. B = ACN. Método: 5-80% B en 20 minutos) para la purificación. Las fracciones que contienen el producto deseado se recogieron, se combinaron y se secaron por congelamiento y dieron el producto (12,4 mg) como un sólido amarillo pálido. ¾ Seleccionado (DMSO-de) d(rrth) 8,62 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,60 (d, 2H), 7,56 (d), 6,93 (d, 2H), 6,61 (m, 3H), 5,25(d, 1H), 4,51(d, 1H), 4,50-4,40(m, 3H), 4,32-4,10(m, 10H), 3,65- 3,50(m, 10H), 3,40-3,30 (m, 10H), 3,30-3,10(m, 7H), 3,10- 2,95(m, 3H), 2,95-2,80(m, 3H), 2,75-2,60(br, 3H), 2,40-2,00(m, 14H), 2,0-1,3(m, 24H), 1,30-l,05(m, 6H), 0,99(d, 3H), 0,88(d, 3H), 0,86(d, 3H), 0,79(t, 6H), 0,73(t, 3H), 0,64(br, 3H) : , l II - .
EC1756 EJEMPLO Síntesis de EC1746 - - , , Una solución de EC1579 (30,9 mg) en 20 mM amortiguador de fosfato a pH 7 (4,2 mL) y una solución de NaHCCh saturado (0,30 mL) se agregaron a una solución de EC1662 (16,9 mg) en MeOH (4,8 mL) en tándem. La solución homogénea resultante se agitó a temperatura ambiente bajo argón durante 20 minutos y luego se cargó directamente a una HPLC preparatoria (Fase móvil A = 50 mM amortiguador de NH4HCO3, pH 7,0. B = ACN. Método: 5-80% B en 10 minutos) para la purificación. Las fracciones que contienen el producto deseado se recogieron, se combinaron y se secaron por congelamiento y dieron el producto (33,1 mg) como un sólido amarillo esponjoso. MS (ESI, M+H) = 2627. EC1746 ¾ (D20): 8,66 (s), 8,10 (s), 7,62 (b), 6,99 (b), 6,69 (b), 5,81 (b), 5,18 (b), 4,60-4,18 (m), 3,91-0,57 (m).
EJEMPLO Síntesis de EC1669 l i l : ¡ | EC1579 (200 mg, 1,0 equivalente) se disolvió en 20 mM amortiguador PO4 a pH 7 desgasificado (burbujeo de argón) (4,0 mL) y se agregó gota a gota a una solución agitada de EC0469 crudo (80 mg, 1,0 equivalente) en sulfóxido de dimetilo seco (4,0 mL, Aldrich) a temperatura ambiente con burbujeo de Ar. Después de 30 minutos, EC1669 (132 mg, 49%) se purificó mediante HPLC preparativa en 0-30% acetonitrilo/50 mM amortiguador de NH4HCO3 a pH 7 y se liofilizó.MS (ESI, [M+2H]2+) Predicho 1118,39, Hallado 1119,52. ¾ parcial (DMSO c/ 10% D20) & (ppm) 8,67 (s), 8,59 (2), 7,61 (d), 7,56 (d), 6,71 (d), 6,61 (d) , 3 , 34 -3 , 39 (m) .
EJEMPLO Síntesis de EC1665 i " : , · E , EC1579 (15 mg, 1,0 equivalente) se disolvió en 20 mM amortiguador de P04 a pH 7 desgasificado (burbujeo de argón) (2,0 mL) y se agregó gota a gota a una solución de EC0564 (10,5 mg, 1,0 equivalente) en sulfóxido de dimetilo seco (4,0 mi, Aldrich) a temperatura ambiente con burbujeo de Ar. Después de 30 minutos, EC1665 (13,4 mg, 555) se purificó mediante HPLC preparativa en 10-100% de acetonitrilo/10 mM amortiguador de NH4OAc a pH 5 y se liofilizó. MS (ESI, [M+2H]2+) Predicho: 1368,09, Hallado: 1368,30.
Conjugados de EC1454 EJEMPLO Síntesis de EC1751 .
- .. I ‘ , i : : l : , EC1454 (21,1 mg, 1,3 equivalente) se disolvió en 20 mM amortiguador de P04 a pH 7 desgasificado (burbujeo de Ar) (2 mL) y se agregó gota a gota a una solución agitada de EC1756 (10,8 mg, 1,0 equivalente)en sulfóxido de dimetilo seco (2,0 mi, Aldrich) a temperatura ambiente con burbujeo de Ar. Después de 30 minutos, EC1751 (8,5 mg, 33%) se purificó mediante HPLC preparativa en 10-100% acetonitrilo/50 mM amortiguador de NH4HCO3 a pH 7 y se liofilizó. MS (ESI, [M+2H]2+) Predicho 1320,05, Hallado 1320,72. ¾ seleccionado (DMSO c/ 10% D20) &(ppm) 8,61 (S), 8,15 (s), 7,58 (d), 6,94 (d), 6,60 (m), 5,79 (d), 5,22 (d), 4,47 (m), 4,09-4,33 (m), 0,98 (d), 0,93 (d), 0,75 (m), 0,61 (d) EJEMPLO Síntesis de EC1570 .
I EC1454 (31,3 mg, 1,3 equivalente) se disolvió en 20 mM amortiguador de P04 a pH 7 desgasificado (burbujeo de Ar) (2,0 mL) y se agregó gota a gota a una solución agitada de EC1715 (15,3 mg, 1,0 equivalente) en sulfóxido de dimetilo seco (2,0 mL, Aldrich) a temperatura ambiente con burbujeo de Ar. Después de 30 minutos, EC1750 (18,0 mg, 97%) se purificó mediante HPLC preparativa en 10-100% de acetonitrilo/50 mM amortiguador de NH4HCO3 a pH 7 y se liofilizó. MS (ESI, [M+2H]2+) Predicho 1299,03, Hallado 1299,19. ¾ parcial (DMSO c/ 10% D20) Se (ppm) 8,61 (s), 8,14 (s), 7,57 (d), 6,93 (d), 6,60 (m), 5,77 (d), 5,23 (d), 4,47 (m), 0,98 (d), 0,92 (d), 0,76 (m), 0,71 (t), 0,61 (d) EJEMPLO Síntesis de EC1739 £01739 EC1454-EC1717 ftaHinNaOuSs Masa Exacta: 2652.12 Peso Molecular 2653,91 EC1454 (8,5 mg, 1,5 equivalente) se disolvió en 20 mM amortiguador de P04 a pH 7 desgasificado (burbujeo de Ar) (2,0 mL) y se agregó gota a gota a una solución agitada de EC1717 (3,8 mg, 1,0 equivalente) en sulfóxido de dimetilo seco (2 mL, Aldrich) a temperatura ambiente con burbujeo de Ar. Después de 30 minutos, EC1739 (5,3 mg, 50%) se purificó mediante HPLC preparativa en 10-100% de acetonitrilo/50 mM de amortiguador de NH4HCO3 a pH 7 y se liofilizó. MS (ESI, [M+2H]2+) predicho 1327 .06 , Hallado 1327 , 73 . t : MS (ESI, [M+2H]2+) Predicho 1313,05, Hallado 1313,37. ¾ seleccionado (DMSO c/ 10% D20) & (ppm) 8,61 (s), 8,15 (s), 7,58 (d), 6,94 (d), 6,60 (m), 5,78 (d), 5,22 (d), 4,47 (m), 4,09-4,33 (m), 0,99 (d), 0,93 (d), 0,76 (t), 0,71 (t), 0,61 (d).
EJEMPLO EC1454 (5,5 mg, 1,0 equivalente) se disolvió en 20 mM amortiguador de P04 a pH 7 desgasificado (burbujeo de Ar) (2,0 mL) y se agregó gota a gota a una solución agitada de EC1662 (3,6 mg, 1,0 equivalente) en sulfóxido de dimetilo seco (2,0 mL, Aldrich) a temperatura ambiente con burbujeo de Ar. Después de 30 minutos, EC1664 (4,6 mg, 54%) se purificó mediante HPLC preparativa en 10-100% acetonitrilo/50 mM amortiguador de NH4HCO3 a pH 7 y se liofilizó.
EJEMPLO Síntesis de EC1663 I ·. ^ í : | I l EC1454 (16,1 mg, 1,2 equivalente) se disolvió en 20 mM amortiguador de P04 a pH 7 desgasificado (burbujeo de Ar) (2,0 mL) y se agregó a una solución agitada de EC1661 (8,7 mg, 1,0 equivalente) en sulfóxido de dimetilo seco (2,0 mL, Aldrich) a temperatura ambiente con burbujeo de Ar. Después de 30 minutos, EC1663 (15,8 mg, 76%) se purificó mediante HPLC preparativa en 10-100% de acetonitrilo/50 mM amortiguador de NH4HCO3 a pH 7 y se liofilizó. MS (ESI, [M+2H]2+) Predicho 1306,04, Hallado 1306,82 EJEMPLO Síntesis de EC1653 .
' EC1454 (8,3 mg, 1,0 equivalente) se disolvió en 20 mM amortiguador de P04 a pH 7 desgasificado (burbujeo de Ar) (2,0 mL) y se agregó gota a gota a una solución agitada de EC1564 (5,8 mg, 1,0 equivalente) en sulfóxido de dimetilo seco (4,0 mL, Aldrich) a temperatura ambiente con burbujeo de Ar. Después de 30 minutos, EC1653 (6,3 mg, 46%) se purificó mediante HPLC preparativa en 10-100% de acetonitrilo/10 mM amortiguador de NH4HCO3 a pH 5 y se liofilizó. MS (ESI, ((M-2)/2)) Predicho 136¡8,09, Hallado 1368,74. : · - . , l : t EC1496 ¾7H?22N26¾B$: Masa Exacta 2234.78 Peso Molecular: 2236.16 EC1454 (324 mg, 1,0 equivalente) se disolvió en 20 mM amortiguador de P04 a pH 7 desgasificado (burbujeo de Ar) (4,0 mL) y se agregó gota a gota a una solución agitada de EC0469 crudo (142 mg, 1,1 equivalente) en sulfóxido de dimetilo seco (4,0 mL, Aldrich) a temperatura ambiente con burbujeo de Ar. Después de 30 minutos, EC1496 (221 mg, 51%) se purificó mediante HPLC preparativa en 0-30% de acetonitrilo/50 mM amortiguador de NH4HCO3 a pH 7 y se liofilizó. MS (ESI, ((M+2)/2)) Predicho 1118,39, Hallado 1119,02. , l .
EJEMPLOS Conjugados de EC1415 - ’ : . . , .1 I 1 - , . ! l EC1415 (20 mg) se disolvió en fosfato a pH 7 (pH 7,75, purgado con argón). A esta solución se agregó una suspensión de EC0312 (14 mg) en igual volumen de MeOH.
La mezcla de la reacción se agitó a temperatura ambiente bajo argón durante 45 minutos y luego se cargó en una HPLC preparatoria (Fase Móvil A = 50 mM amortiguador de NH4HCO3, pH = 7,0. B = ACN. Método: 5-80% B en 20 minutos) para la purificación. Las fracciones que contienen el producto deseado se recogieron, se combinaron y se secaron por congelamiento y dieron el producto (18 mg) como un sólido amarillo pálido. MS (ESI, [M+2H]2+) 1328.
(DMS0-ds, D20, 300MHz): 8,6 (s, 1H) , 8,15 (s, 1H), 7,85 (bd, 1H), 7,55 (d, 2H), 6,95 (d, 2H), 6,6 (m, 4H), 6,2 (d, 1H), 5,68 (d, 1H), 5,2 (d, 1H), 4,5 (bs, 3H), 4,5-4,3 (m, 4H), 4,3-4,0 (m, 10H), 3,5-3,3 (m, 13H), 3,2 (bd, 5H), 3,1-2,8 (m, 8H), 2,75 (bs, 5H), 2,6-1,6 (m, 50H), 1,4 (m, 9H), 1,2 (m, 9H), 1,0 (dd, 9H), 0,7 (m, 11H), 0,6 (d, 3H).
EJEMPLOS. Conjugados de EC1392 I | - l .
. - EJEMPLO. Conjugados de EC59 Una solución de EC59 (13,2 mg) en 20 mM amortiguador de fosfato a pH 7,1 (2,4 mL) se agregó a una solución de EC0312 (14,2 mg) en MeOH (2,4 mL). La solución homogénea resultante se agitó a temperatura ambiente bajo argón durante 20 minutos y luego se cargó directamente a una HPLC preparatoria (Fase móvil A = 50 mM amortiguador de NH4HC03, pH = 7,0. B = ACN. Método: 5-80% B en 20 minutos) para la purificación. Las fracciones que contienen el producto deseado se recogieron, se combinaron y se secaron por congelamiento y dieron el producto (15,3 mg) como un sólido amarillo esponjoso. - : l . 1 l ; . . . il .
EC1208: LCMS [ESI (M + H)+: 1918]. Datos de ¾ seleccionado para EC145 (D20, 300 MHz): d 8,67 (s, 1H, FA H-7), 7,50 (br s, 1H, VLB H-11'), 7,30-7,40 (br s, 1H, VLB H-14'), 7,35 (d, 2H, J = 7,8 Hz, FA H-12 y 16), 7,25 (m, 1H, VLB H-13'), 7,05 (br s, 1H, VLB H-12'), 6,51 (d, 2H, J = 8,7 Hz, FA H-13 y 15), 6,4 (s, 2H, VLB H-14 y 17), 5,65 (m, 1H, VLB H-7), 5,5 (m, 1H, VLB H-6) , 4,15 (m,1H, VLB H-8') , 3,82 (s, 3H, VLB Ci8- -CO2CH3) , 3,69 ( s, 3H, VLB Cíe -OCH3) , 2,8 (s, 3H, VLB N-CH3) , 1,35 (br s, 1H, VLB H - 3 ' ) , 1,15 (m, 1H, VLB H-2') , 0,9 (t, 3H, J = 7 Hz, VLB H-21'), 0,55 (t, 3H, J = 6,9 Hz, VLB H-21) ppm. ' l EC 1209 EC1209 : LCMS [ESI (M + H) + : 1918] . Datos de ¾ seleccionado para EC145 (D20, 300 MHz): d 8,67 (s, 1H, FA H- 7), 7,50 (br s, 1H, VLB H-ll'), 7,30-7,40 (br s, 1H, VLB H-14'), 7,35 (d, 2H, J = 7,8 Hz, FA H-12 y 16), 7,25 (m, 1H, VLB H-13'), 7,05 (br s, 1H, VLB H-12'), 6,51 (d, 2H, J = 8,7 Hz, FA H-13 y 15), 6,4 (s, 2H, VLB H-14 y 17), 5,65 (m, 1H, VLB H-7), 5,5 (m, 1H, VLB H-6), 4,15(m,lH, VLB H-8'), 3,82 (s, 3H, VLB Cis' -CO2CH3), 3,69 (s, 3H, VLB Ci6 -OCH3), 2,8 (s, 3H, VLB N-CH3), 1,35 (br s, 1H, VLB H-3'), 1,15 (m, 1H, VLB H-2'), 0,9 (t, 3H, J = 7 Hz, VLB H-21'), 0,55 (t, 3H, J = 6,9 Hz, VLB H-21) ppm .
; EC1575: Una solución de EC1577 (9,5 mg) en 20 mM amortiguador de fosfato a pH 7 (2,0 mL) y una solución de NaHCCL saturado (0,50 mL) se agregaron a una solución de EC0312 (10,1 mg) en MeOH (2,0 mL) en tándem. La solución homogénea resultante se agitó a temperatura ambiente bajo argón durante 20 minutos y luego se cargó directamente a una HPLC preparatoria (Fase móvil A = 50 mM amortiguador de NH4HCC>3, pH = 7,0. B = ACN. Método: 5-80% H en 20 minutos) para la purificación. Las fracciones que contienen el producto deseado se recogieron, se combinaron y se secaron mediante congelamiento y dieron el producto (9,5 mg) como un sólido amarillo pálido. LCMS [ESI (M + H)+: 2627] ¾ (D20, 300 MHz): 8,70 (s), 8,11 (s), 7,62 (d), 7,00 (d), 6,71 (dd), 6,11 (d), 5,80 (d), 5,33 (d), 4,60-4,50 (m), 4,40-4,15 (m), 3,88-3,51 (m), 3,50-3,20 (m), 3,19-2,80 (m), 2,76 (s), 2,60-1,43 (m), 1,40-1,27 (m), 1,18 (d), 1,02 (d), 0,97-0,82 (m), 0,76-0,63 (m). - ' i , EC1548 Una solución de EC1544 (55,1 mg) en 20 mM amortiguador de fosfato a pH 7 (1,95 mL) y una solución de NaHCC>3 saturado (0,30 mL) se agregaron a una solución de EC1248 (58,0 mg) en MeOH (2,30 mL) en tándem. La solución homogénea resultante se agitó a temperatura ambiente bajo argón durante 20 minutos y luego se cargó a una HPLC preparatoria (Fase móvil A = 50 mM amortiguador de NH4HCO3, pH = 7,0. B = ACN. Método: 5-80% B en 20 minutos) para la purificación. Las fracciones que contienen el producto deseado se recogieron, se combinaron y se secaron por congelamiento y dieron el producto (61,5 mg) como un sólido amarillo pálido. MS (ESI, M+l) 1993. ; ' í : , EC1549: Una solución de EC1547 (23,5 mg) en 20 mM amortiguador de fosfato a pH 7 (2,0 mL) y una solución de NaHC03 saturado (0,30 mL) se agregaron a una solución de EC1248 (24,7 mg) en MeOH (2,3 mL) en tándem. La solución homogénea resultante se agitó a temperatura ambiente bajo argón durante 20 minutos y luego se cargó directamente a una HPLC preparatoria (Fase móvil A = 50 mM amortiguador de NH4HCO3, pH = 7,0. B = ACN. Método: 5-80% B en 20 minutos) para la purificación. Las fracciones que contienen el producto deseado se recogieron, se combinaron y se secaron por congelamiento y dieron el producto (29,2 mg) como un sólido amarillo pálido. MS (ESI, M+l) 1993.
EJEMPLO ¡ . l .
EJEMPLO EC1229 Una solución de EC0259 (35 mg) en 20 mM amortiguador de fosfato a pH 7 (3,0 mL) y una solución de NaHCC>3 saturado (1,5 mL) se agregaron a una solución de EC0312 (39 mg) en ACN (5,5 mL) en tándem. La solución homogénea resultante se agitó a temperatura ambiente bajo argón durante 20 minutos y luego se cargaron directamente a una HPLC preparatoria (Fase móvil A = 50 mM amortiguador de NH4HCO3, pH = 7,0. B = ACN. Método: 5-80% B en 20 minutos) para la purificación. Las fracciones que contienen el producto deseado se recogieron, se combinaron y se secaron por congelamiento y dieron el producto (25 mg) como un sólido amarillo pálido. MS (ESI, M+l) 1993.
EJEMPLO l : . . . - - l i Peso Molecular: 1517,04 EC153: MS (ESI, (M + H]+) 1023; ( ESI, [M - H] ) 1021 XH (DMS0-d6, 300 Hz): 8,84 (s, 1H), 7 ,70 (d, 2H), 6,80(d, 2H), 4,60(m, 1H), 4,56 (s, 2H), 4,34 (m, 2H), 4,10(m, 2H), 3,85(m, 2H), 3,60-3,30(m, 5H), 3,20(s, 2H) , 3,18-3,05(m, 1H), 3,0(br, 2H), 2,90-2,70(m, 2H), 2,40-2,00 (m, 4H), 1,95(m, 3 H) , EJEMPLOS: Los siguientes compuestos se prepararon de conformidad con los procesos descritos en la presente partiendo desde EC0059 : . | , l | ( EC0746 (C87H122N26O40S2; MW 2236,18) EJEMPLOS COMPARATIVOS: Se describen los siguientes ejemplos comparativos: EJEMPLO COMPARATIVO .
EC0531(C110H165N23O45S3; MW 2625,811 EJEMPLO COMPARATIVO EC0923.
EC0923 (C27H299012; MW 671,57) MÉTODOS Y EJEMPLOS General. En la presente se usan las siguientes abreviaturas: respuesta parcial (PR); respuesta completa (CR), tres veces por semana (M/W/F) (TIW).
MÉTODO. Ensayo de Afinidad Relativa. La afinidad para receptores de folato (FR) en relación con folato se determina de conformidad con un método descrito previamente (Westerhof, G.R., J. H. Schornagel et al (1995) Mol. Pharm.48: 459-471) con una modificación ligera. En resumen, las células KB FR-positivas se siembran en forma densa en placas de cultivo de células de 24 receptáculos y se deja que se adhieran al plástico durante 18 horas. Los medios de incubación usados se reemplazan en receptáculos desgasificados con RPMI libre de folato (FFRPMI) complementado con 100 nM 3H-ácido fólico en ausencia y en la presencia de concentraciones crecientes del artículo de ensayo o ácido fólico. Las células se incuban durante 60 minutos a 37°C y luego se enjuagan 3 veces con PBS, a pH 7,4. Se agregan 500 microlitros de 1% SDS en PBS, a pH 7,4 por cada receptáculo. Los lisados de células luego se recogen y se agregan a cada frasco que contiene 5 mL de un cóctel de centelleo y luego se cuentan para la radioactividad. Los tubos control negativos contienen solamente el 3H-ácido fólico en FFRPMI (ningún competidor). Los tubos control positivos contienen una concentración final de 1 mM ácido fólico y los CPM medidos en estas muestras (que representan la unión no específica del marcador) se restan de todas las muestras. Las afinidades relativas se definen como la relación molar inversa del compuesto necesario para desplazar 50% de 3H-ácido fólico unido al FR sobre células KB, donde la afinidad relativa del ácido fólico para el FR se fija a 1.
EJEMPLO. EC1669 muestra altas afinidades de unión hacia receptores de folato como se determina mediante un ensayo de unión competitiva in vitro que mide la capacidad del ligando paria competir contra 3H-ácido fólico para la unión a los rec ptores de folato de la superficie celular (FR). EC1669 ().
Los valores de afinidad relativa de EC1669 (normalizado contra ácido fólico, que se fija a (1) se determina que son 0,53 y 0,13 sobre células KB y CHO-FR , respectivamente (véanse la Figura 1A y la Figura IB). En comparación, metotrexato (MTX) mostró una mala unión a los FR de la superficie celular. Sin estar unidos a la teoría, se cree en la presente que la alta afinidad a la unión de EC1669 permite la captación celular eficiente a través de la endocitosis mediada por FR.
MÉTODO. Inhibición de la Síntesis de ADN Celular. Los compuestos descritos en la presente se evalúan usando un ensayo de citotoxicidad in vitro que predice la capacidad del fármaco para inhibir el crecimiento de células positivas para el receptor de folato, tal como células KB, macrófagos de RAW264,7 y similares. Se debe entender que la elección del tipo de célula se puede hacer basado en la susceptibilidad de esas células seleccionadas al fármaco que forma el conjugado. Los compuestos del ensayo están compuestos de folato unido a un fármaco quimioterapéutico respectivo, preparado de conformidad con los procesos descritos en la presente. Las células del ensayo se exponen a concentraciones variables del conjugado de folato y fármaco y también en la ausencia o la presencia de un exceso de por lo menos 100 veces de ácido fólico para evaluar la actividad que es específica para la mediación del receptor de folato.
EJEMPLO. Los conjugados de fármacos citotóxicos descritos en la presente son activos contra células KB. La actividad está mediada por el receptor de folato como lo indican los experimentos de competencia que usan ácido fólico administrado en forma conjunta. Las células KB se exponen durante hasta 7 horas a 37°C a las concentraciones indicadas del conjugado de folato y fármaco en la ausencia o presencia de un exceso de por lo menos 100 veces de ácido fólico. Las células luego se enjuagan una vez con un medio de cultivo nuevo y se incuban en el medio de cultivo nuevo durante 72 horas a 37°C. La actividad celular se evaluó usando un ensayo de incorporación de 3H-timidina. Para los compuestos descritos en la presente, la citotoxicidad que depende de la dosis es generalmente medible y en la mayor parte de los casos, los valores de IC50 (concentración del conjugado de fármaco necesaria para reducir la incorporación de 3H-timidina en un ADN recién sintetizado en un 50%) están la gama nanomolar baja. Aunque quedar atados por la teoría, cuando las citotoxicidades de los conjugados se reducen en la presencia de ácido fólico libre en exceso, se cree en la presente que tales resultados indican que la muerte celular observada está mediada por la unión al receptor de folato.
EJEMPLO. EC1669 muestra un efecto citotóxico potente contra macrófagos RA 264.7 murinos. La actividad antiproliferativa de EC1669 se mide en un ensayo de viabilidad de las células XTT (Figura 2) sobre células RAW264.7 después de una exposición de 2 horas y un total de 72 horas de incubación. Los macrófagos RAW264.7 son susceptibles al fármaco que forma el conjugado de EC1669, aminopterina. La viabilidad celular se evalúa agregando XTT (2,3-bis(2-metoxi-4-nitro-5-sulfo-fenil)-2H-tetrazolio-5-carboxanilida) siguiendo las instrucciones del fabricante. EC1669 mostró una inhibición de la proliferación celular que depende de la dosis con un valor de IC50 relativa de 1,2 nM. El efecto antiproliferativo observado fue 100% compatible en la presencia de un exceso de 100 veces de ácido fólico (FA), lo cual indica una forma de acción específica de FR para EC1669.
MÉTODO. Actividad in vitro contra diferentes líneas de células. Se generan valores de IC50 para diferentes líneas de células. Las células se siembran densamente en placas de Falcon de 24 receptáculos y se deja que formen monocapas casi confluentes toda la noche. Treinta minutos antes del agregado del compuesto de ensayo, el medio usado se aspira desde todos los receptáculos y se reemplaza con un medio de RPMI con falta de folato nuevo (FFRPMI). Se designa un subgrupo de receptáculos para recibir medios que contienen 100 mM de ácido fólico. Las células de los receptáculos designados se usan para determinar la especificidad dirigida. Sn estar unidos a la teoría creemos en la presente que la actividad citotóxica producida por los compuestos del ensayo en la presencia de excéso de ácido fólico, es decir, donde hay una competencia por la unión a FR, corresponde a la parte de la actividad total que no está relacionada con el suministro específico de FR. Después de un enjuague con 1 mL de FFRPMI nuevo que contiene 10% de suero de ternero fetal inactivado por el calor, cada receptáculo recibe 1 mL del medio que contiene concentraciones crecientes del compuesto del ensayo (4 receptáculos por cada muestra) en la presencia o ausencia de 100 mM de ácido fólico como se indica. Las células tratadas se impulsan durante 2 horas a 37°C, se enjuagan 4 veces con 0,5 mL de medios, y luego se los marca en 1 mL de medio nuevo hasta 70 horas. El medio usado se aspira desde todos los receptáculos y se lo reemplaza con un medio nuevo que contiene 5 pCi/mL 3H-timidina. Después de otras 2 horas de incubación a 37°C, las células se lavan 3 veces con 0,5 mL de PBS y luego se tratan con 0,5 mL de 5% ácido tricloroacético enfriado con hielo por cada receptáculo. Después de 15 minutos, el ácido trifluoroacético se aspira y el material celular se solubiliza agregando 0,5 mL de 0,25 N hidróxido de sodio durante 15 minutos. Una alícuota de 450 pL de cada muestra solubilizada se transfiere a un frasco de centelleo que contiene 3 mL de un cóctel de centelleo Ecolume y luego se cuenta en un contador de centelleo líquido. Los resultados finales se expresan como el porcentaje de incorporación de 3H-timidina en relación con los controles sin trajtar.
EJEMPLO. Los compuestos descritos en la presente presentan una actividad in vitro potente contra células patógenas, tales como células KB. Los compuestos descritos en la presente presentan más especificidad para el receptor de folato comparado con los compuestos que no incluyen por lo menos un aminoácido no natural. Por ejemplo, EC1456 presenta una especificidad de 1000 veces para el receptor de folato como se determinó mediante la especificidad de competencia del ácido fólico = diferencia en IC5o entre el grupo que compitió y el grupo que no compitió) y una mejora de 4 veces en la especificidad comparado con el compuesto comparador EC0531, que no incluye un conector L que tiene un aminoácido no natural.
EJEMPLO. La selectividad para células que expresan el receptor de folato. Los compuestos descritos en la presente muestran una alta actividad para las células que expresan el receptor de folato. Los compuestos descritos en la presente no muestran una unión importante a las células negativas para el receptor de folato. EC1456 muestra una unión compatible alta a células que expresan FR baja y alta (FR+) y no muestra una unión a células que no expresan FR (FR-).
Actividad de EC1456 en Líneas de Células (FR+) y (FR-) (a) la actividad se evaluó a partir de 0,1-100 nM contra estas líneas de células seleccionadas específicamente (FR-) (A549, H23, HepG2, AN3CA, LNCaP); NA=no aplicable MÉTODO. Inhibición del Crecimiento del Tumor en Ratones. Se compran ratones de cuatro a siete semanas de edad (cepas Balb/c o un/un) a Harían Sprague Dawlcy, Inc. (Indianapolis, Indiana). El alimento para roedores normal contiene una alta concentración de ácido fólico (6 mg/kg de alimento); por consiguiente, los animales del ensayo se mantienen con una dieta sin folato (dieta Harían N° TD00434) durante 1 semana antes de la implantación del tumor para lograr concentraciones de folato en el suero cercanas a la gama de suero humano normal y durante el Método. Para la inoculación de células de tumor, 1 x 106 células M109 (un carcinoma pulmonar singenético) en la cepa Balb/c, o 1 x 106 células KB en la cepa nu/nu, en 100 pL se inyectan en el tejido subcutáneo de la zona dorsal medial (axila derecha). Los tumores se miden en dos direcciones perpendiculares cada 2-3 días usando un calibre y sus volúmenes se calculan como 0,5 x L x W2, donde L = medición del eje más largo en mm y W = medición del eje perpendicular a L en mm. Los valores de registro de muerte de células (LCK) y tratadas sobre control (T/C) se calculan luego siguiendo los procedimientos publicados (véanse, por ejemplo, Lee et al., "BMS-247550: un análogo de epotilona novedoso con una forma de acción similar a paclitaxel pero que posee una eficacia antitumor superior" Clin Cáncer Res 7:1429-1437 (2001); Rose, "Quimioterapia de combinación basada en taxol y otros estudios antitumor preclínicos in vivo" J Nati Cáncer Inst Monogr 47-53 (1993)).
La dosificación se inicia cuando los tumores subcutáneos tienen un valor promedio de entre 50-100 mm3 (to), normalmente 8 días después de la inoculación del tumor (PTI) para tumores de KB, y 11 días después dé la inoculación del tumor para tumores de M109. Se inyecta a los animales del ensayo (5/grupo) por'vía intravenosa, generalmente tres veces por semana (TIW), durante 3 semanas con dosis variables, tal como con 1 pmol/kg a 5 mmol/kg, del conjugado de suministro de fármaco o con un volumen de la dosis equivalente de PBS (control), a menos que se indique de otro modo. Se preparan soluciones de dosificación nuevas cada día en PBS y se las administra a través de la vena lateral de la cola de los ratones.
MÉTODO. Ensayo General de Tumores 4T-1. Se obtienen ratones de seis a siete semanas de edad (cepa Balb/c hembra) de Harían, Inc., Indianapolis, Indiana. Se mantiene a los ratones con un alimento sin folato de Harían durante un total de tres semanas antes del inicio y durante el método. Las células de tumores 4T-1 negativas para receptor de folato (1 x 106 células por cada animal) se inoculan en la zona subcutánea de la axila derecha. Aproximadamente 5 días después de la inoculación del tumor cuando el volumen promedio del tumor 4T-1 es 100 mm3 (t0), se inyecta a los ratones (5/grupo) por vía intravenosa tres veces por semana (TIW), durante 3 semanas con dosis variables, tales como 3 pmol/kg, del conjugado de suministro de fármaco o con un volumen de dosis equivalente de PBS (control), a menos que se indique de otro modo en la presente. Se mide el crecimiento del tumor usando calibres en intervalos de 2 días o de 3 días en cada grupo de tratamiento. Los volúmenes de los tumores se calculan usando la ecuación V = a x b2/2, donde "a" es la longitud del tumor y "b" es el ancho expresado en milímetros.
MÉTODO. Toxicidad del fármaco. La toxicidad persistente del fármaco se evalúa extrayendo sangre a través de punciones cardíacas y sometiendo al suero a análisis independientes de nitrógeno de urea en sangre (BUN), creatinina, proteína total, AST-SGOT, ALT-SGPT más un panel de células hematológicas normales en Ani-Lytics, Inc. (Gaithersburg, MD). Además, los patólogos certificados por el consejo realizan una evaluación histopatológica del corazón fijado con formalina, los pulmones, el hígado, el bazo, los riñones, los intestinos,el músculo esquelético y el hueso (tibia/peroné) en los Laboratorios de Referencia de Patología de Animales (ARUP; Salt Lake City, Utah).
MÉTODO.Toxicidad Medida por el Descenso de Peso.El porcentaje de cambio de peso de los animales del ensayo se determina en días seleccionados después de la inoculación del tumor (PTI) y durante la dosificación. Los resultados se grafican.
EJEMPLO. Actividad in vivo contra tumores. Los compuestos descritos en la presente muestran potencia y eficacia contra tumores KB en ratones nu/nu. Los compuestos descritos en la presente muestran una actividad específica contra tumores que expresan el receptor de folato, con baja toxicidad del animal hospedero. Por ejemplo, EC1456 muestra una respuesta completa en 4/4 animales del ensayo cuando se les administra por vía intravenosa a 1 pmol/kg tres veces por semana, durante dos semanas. EC1456 también muestra actividad específica mediada por'el receptor de folato como lo demuestra al ser compatible con un exceso del compuesto comparador EC0923 (50 o 100 pmol/kg), como se muestra en la Figura 3A. EC1456 no muestra ninguna prueba de toxicidad complete del animal, como se muestra en la Figura 3B.
EJEMPLO. El comportamiento terapéutico de EC1663 se evaluó contra los tumores KB humanos. Los datos de la Figura 4A mu stran 4/4 respuestas parciales donde el volumen del tumor se redujo en forma fundamental comparado con el control, pero no llegó a cero y el tumor empezó a volver a crecer después de que terminó la dosificación. Se cree en la presente que una dosis más alta puede derivar en una respuesta y/o curación completa. Los datos de la Figura 4B muestran que a la dosis eficaz administrada, no se observó toxicidad del animal completa.
MÉTODO. Ensayo de Tumores TNBC. El cáncer de mama triple negativo (TNBC) es un subtipo caracterizado por la falta de expresión de genes para estrógeno, progesterona y Her2/neu. TNBC es difícil de tratar y se informa que el índice de muerte resultante en los pacientes es desproporcionadamente más alto que para cualquier otro subtipo de cáncer de mama. Se generó un modelo de xenoinjerto de TNBC en una forma análoga a los modelos de KB y M109 descritos en la presente implantando células de cáncer de mama MDA-MB-231 en ratones nu/nu. La doS|ificación se inicia cuando los tumores subcutáneos tienen un volumen promedio de entre 110-150 (generalmente 130) mm3 (to), normalmente 17 días después de la inoculación (PIT). Se inyecta a los animales del ensayo (5/grupo) por vía intravenosa, generalmente tres veces por semana (TIW), durante 2-3 semanas con dosis variables, tal como con pmol/kg a 5 mmol/kg, del conjugado de suministro de fármaco o con un volumen de dosis equivalente de PBS (control), a menos que se indique de otro modo. Se preparan soluciones de dosificación nuevas cada día en PBS y se las administra a través de la vena lateral de la cola de los ratones.
EJEMPLO. Cuando se ensaya contra xenoinjertos de cáncer de mama MDA-MB-231 subcutáneo FR-positivo triple negativo establecido, se halla que EC1456 es muy activo a una dosis intravenosa de 2 mmo?/kg administrada en un esquema de reacción de tres veces por semana, durante 2 semanas consecutivas. El tratamiento produjo 4 o 5 respuestas completas, donde el volumen del tumor se redujo a cero y el nuevo crecimiento no ocurrió durante la ventana de observación durante casi 135 días. Sin quedar atados a la teoría, se cree en la presente que los animales del ensayo se curaron del cáncer de mama triple negativo. Los resultados para EC1456 se muestran en la Figura 5A. La actividad anticáncer no se logró debido a un descenso de peso importante en los animales del ensayo, como se muestra en la Figura 5B.
MÉTODO. Línea humana de células resistentes al cisplatino. Se crea una línea humana de células resistentes al cisplatino cultivando células KB FR-positivas en la presencia de concentraciones de cisplatino crecientes (100-2000 nM; durante un período de > 12 meses). Se halla que las células resistentes a cisplatino, marcadas como células KB-CR2000, son tu origénicas y se halla que retienen su estado de expresión de FR in vivo. Se confirma que los tumores KB-CR2000 son resistentes a la terapia de cisplatino. El tratamiento con una dosis tóxica, alta de cisplatino (descenso de peso promedio del 10,3%, como se muestra en la Figura 6B), no produjo siquiera una respuesta parcial (PR), como se muestra en la Figura 6A. En cambio, se halla que EC1456 es muy activo contra tumores KB-CR, donde se observan 5/5 respuestas completas. Además, el nuevo crecimiento del tumor solo se observo en 1/5 animales del ensayo. Sin quedar atados a la teoría, se cree que 4/5 animales del ensayo se curaron del cáncer resistente a cisplatino, donde el nuevo crecimiento no ocurrió durante el período de observación de casi 70 días. Además, a diferencia del cisplatino, EC1456 no produjo ningún descenso de peso en este grupo de ratones y en consecuencia no presentó ninguna prueba de toxicidad grave de los animales durante el período de dosificación.
EJEMPLO. Comparación de fármacos conjugados y no conjugados. El comportamiento terapéutico de los fármacos tubmlisina B no conjugada y TubB-H no conjugada (EC0347) se evaílúa in vivo contra tumores KB humanos en ratones. La eficacia antitumor y la toxicidad grave, determinada por cambios de peso corporal, de cada fármaco no conjugado se compara con el conjugado de EC1456. EC1456 produjo una actividad antitumor que responde a la dosis en el modelo. Se observaron respuestas completas en las condiciones de tratamiento que produjeron escaso a ningún descenso de peso. En cambio, ambos fármacos basados en tubulisina no conjugados no lograron producir ninguna respuesta antitumor, ni siquiera cuando se administraron dosis muy tóxicas a los ratones. Los resultados se muestran en la siguiente tabla.
*El grupo control sin tratar tuvo un descenso de peso promedio del 2,4% 1E1 grupo recibió solamente 2 dosis debido a la toxicidad.
Estos resultados confirman que a pesar de que tubulisina B y TubBH son altamente citotóxicas las células del cultivo (IC50 típica de 1 nM), ambos agentes produjeron toxicidades que limitan la dosis en ratones a niveles que no produjeron un efecto antitumor. Por lo tanto, los compuestos conjugados no presentan una ventana terapéutica. En cambio, las formas conjugadas de los fármacos, tales como TubBH (EC1456) producen respuestas antitumor sin toxicidad importante a ratones que tienen xenoinjertos de tumores humanos bien establecidos. La conjugación como se la describe en la presente provee una ventana terapéutica a fármacos muy tóxicos.
EJEMPLO. Los compuestos descritos en la presente presentan alta afinidad al receptor de folato comparados con el ácido fólico (afinidad relativa=l) en 10% de suero/FDRPMI, actividad in itro potente, actividad in vivo potente, especificidad para el preceptor de folato y un índice terapéutico suficientemente alto comparados con el fármaco no conjugado (a) comparado con el ácido folleo; (b) determinada mediante la incorporación de timidina; (c) IC50 para el compuesto del ensayo cuando compitió con el exceso de ácido fólico; cuanto más alta es la IC50 más específica es la mediación de folato; (d) especificidad in vitro = diferencia en la IC50 entre el grupo que compitió y el grupo que no compitió; (e) determinada en el tumor KB en ratones nu/nu; CR= respuesta completa, donde el volumen del tumor, definido en la presente, durante el período de observación era cero para los animales del ensayo del grupo; (f) tubulisina parental; NT= no usado.
MÉTODO. Modelo de artritis inducida por un coadyuvante (AIA). Se alimenta a ratas Lewis hembras con una dieta con falta de folato (Harían Teklad, Indianapolis, Indiana) durante 9-lp días antes de la inducción de la artritis. La artritis inducida por el coadyuvante (AIA) se reduce mediante inoculación intradérmica (en la base de la cola) de 0,4-0,5 mg de Mycobacteria butyricum muerta por calor (BD Diagnostic Systems, Sparks, MD) en 100 mL de aceite mineral claro (Sigma). Diez días después de la inducción de la artritis, el edema de la pata (nivel de artritis) en las ratas se evalúa usando un sistema de calificación de artritis modificado: 0= sin artritis; 1= hinchazón en un tipo de articulación; 2= hinchazón en dos tipos de articulación; 3= hinchazón en tres tipos de articulación, 4= hichazón de la pata completa. Se calcula una calificación total para cada rata sumando las calificaciones para cada una de las cuatro patas, dando una calificación máxima de 16 para cada rata. El Día 10 después de la inducción de la artritis, se retiró del estudio a las ratas con una calificación de artritis de ³2 y se distribuyó a las ratas restantes uniformemente a través de los grupos control y tratamiento- (n = 5 para todos grupos excepto que n = 2-3 para los controles sanos). Todos los tratamientos se iniciaron el Día 10 a menos que se indique de otro modo. Las patas de las ratas también se evalúan en forma radiográfica para evaluar y determinar el daño óseo.
EJEMPLO. Los compuestos descritos en la presente son potentes en el tratamiento de enfermedades inflamatorias, tales como la inflamación y el daño óseo que acompaña a la artritis. EC1496 es potente y eficaz en la reducción de la inflamación de la pata en un modelo de rata de la artritis inducida por el coadyuvante, como se muestra en la Figura 7. La Figura 7 es eficaz en la prevención del desarrollo de la artritis basado en la evaluación del edema de la pata. EC1496 (trazo (d)) es muy diferente del control sin tratamiento (trazo (b)). Además, los datos indican que el efecto está mediado por el receptor de folato porque EC1496 (trazo (d)) también es muy diferente del grupo control de competencia donde EC196 se administra conjuntamente con un exceso de ácido fólico (trazo (d)).
EJEMPLO. Los compuestos descritos en la presente son potentes para tratar enfermedades inflamatorias, tales como la inflamación y el daño óseo que acompañan a la artritis. Por ejemplo, EC1496 es potente y eficaz en la reducción y/o la prevención del daño óseo en un modelo de rata de la artritis inducida por el coadyuvante, determinada mediante análisis radiográfica. La radiografía muestra que los animales tratados no presentan el daño óseo observado en los animales control sin tratamiento, basado en la calificación visual. En cambio, los animales tratados y los animales sanos muestran una estructura ósea similar.
EJEMPLO. EC1669 presenta actividad específica del receptor de folato contra la artritis inducida por coadyuvante. Partiendo 9 días después de la inducción, las ratas con desarrollo de AIA se distribuyen de conformidad con las calificaciones de la artritis en tres grupos (n=5): (1) control de AIA sin tratamiento; (2) grupo tratado con EC1669; y (3) grupo de competencia de EC1669 más EC0923. Todos los tratamientos duran 2 semanas consecutivas. Los animales del grupo control AIA se dejan sin tratar. A los animales del grupo de tratamiento con EC1669 se les administran dosis subcutáneas dos veces por semana de EC1669 a un nivel de 375 nmol/kg. A los animales del grupo de EC1669 más EC0923 se les administran dosis subcutáneas dos veces por semana de EC1669 a una dosificación de 375 nmol/kg en conjunto con EC0923 a una dosificación de 187,5 pmol/kg. Los puntos finales del estudio se muestran en la Figura 8A, Figura 8B, Figura 9A, y Figura 9B y son: (a) calificación de artritis; (b) cambio en el peso corporal; y (c) hinchazón de la pata, evaluada por el porcentaje de aumento en el peso de la pata (recolectado 4 días después de la última dosis), y (d) radiografía ósea. Se halla que EC1669 es muy efectiva en el alivio de la hinchazón de la pata (80% comparado con control) el daño óseo (80% comparado con control). La actividad antiartrítica de EC1669 es compatible (bloqueada) con el competidor de folato (EC0923).
EJEMPLO. En un estudio de dosificación posterior, se evaluaron diversos regímenes de dosificación de EC1669 que incluyen una vez por semana a 1000 nmol/kg, dos veces por semana a 250 nmol/kg y dos veces por semana a 500 nmol/kg. Sorpresivamente, la dosificación tres veces por semana a 250 nmol/kg fue superior a la dosificación una vez por semana a ÍOO'O nmol/kg, una reducción de dos veces en la dosis total. Se halló que EC1669 es más eficaz cuando se lo dosifica dos veces por semana que cuando se lo dosifica una vez por semana en la reducción de la hinchazón de la pata al 81% de la reducción a 500 nmol/kg, dos veces por semana, y un 64% de reducción a 250 nmol/kg, dos veces por semana, comparado con un 44% de reducción a 1000 nmol/kg, una vez por semana.
EJEMPLO. EC1669 más CellCept es más efectivo que el agente solo contra la artritis inducida por el coadyuvante. CellCept es un profármaco del ácido micofenólico, un fármaco inmunosupresor usado para prevenir el rechazo de órganos en el transplante. CellCept se activa in vivo y libera su producto activo que puede inhibir la proliferación de las células T e interferir con la adhesión de los leucocitos a las células endoteliales. Para ensayar el efecto de la combinación de EC1669 y CellCept, las ratas que desarrollan AIA se distribuyen de conformidad con las calificaciones de artritis en cuatro grupos (n=5): (1) el control con AIA sin tratar; (2) grupo tratado con EC1669; (3) grupo tratado con CellCept y (4) el grupo de competencia de EC1669 y CellCept. Todos los tratamientos se inician el día 9 después de la inducción de AIA y duran 2 semanas consecutivas. Los animales del grupo control con AIA están sin tratar. A los animales del grupo de tratamiento con EC1669 se les administran dosis subcutáneas semanales de EC1669 a una dosificación de 1000 nmol/kg. A los animales de los grupos de tratamiento con CellCept se les administran dosis orales diarias de CellCept a una dosificación de 30 mg/kg, 5 días por semana. A los animales del grupo de tratamiento de combinación de EC1669 y CellCept se les administran dosis subcutáneas semanales de EC1669 a una dosificación de 1000 nmol/kg y dosis orales diarias de CellCept a una dosificación de 30 mg/kg, 5 días por semana. Como se muestra en la Figura 10A y en la Figura 11, la terapia de combinación de EC1669 y CellCept es más efectiva que cualquiera de los agentes solo en la reducción de las calificaciones de artritis, hinchazón de la pata y descenso de peso debido al progreso de la enfermedad. La Figura 10B muestra que la terapia de combinación de EC1669 y CellCept produce una toxicidad más baja que cualquiera de los fármacos administrado solo.
MÉTODO. Modelo de Artritis Inducida por Colágeno (CIA). La artritis inducida por colágeno (CIA) se induce en ratas Lewis hembras con una dieta con falta de folato (Harían Teklad, Indianapolis, Indiana). El Día 0, se inmuniza a las ratas con 500 mg de colágeno bovino Tipo II (Chondrex, Redmond, WA) formulado con coadyuvante completo de Freund. Se administra un intensificador de inmunización el Día 7 con 250 pg del colágeno bovino formulado con coadyuvante incompleto de Freund. Se evalúa la enfermedad de artritis mediante un sistema de calificación clínica cualitativa descrito por el fabricante (C¾ondrex, Redmond, WA): 0 = normal, 1 = Enrojecimiento leve pero no definitivo e hinchazón del tobillo o la muñeca, o enrojecimiento evidente e hinchazón limitada a cada dedo individual, independientemente del número de dedos afectados, 2 = Enrojecimiento moderado e hinchazón del tobillo o la muñeca, 3 = Enrojecimiento grave e hinchazón de la pata completa que incluye los dedos y 4 = Extremidad inflamada al máximo que involucra a varias articulaciones. El Día 10 después de la inmunización, se distribuyó uniformemente a las ratas (de conformidad con la calificación de artritis) a través de los grupos control y de tratamiento. A las ratas con CIA se les administran diez dosis subcutáneas consecutivas del compuesto del ensayo los días 10-19. Para cada fármaco, se administran una dosis de inducción (por ejemplo, 500 nmol/kg los días 10 y 15 y una dosis de mantenimiento (por ejemplo, 100 nmol/kg) los días 11-14 y 16-19. Los animales del grupo control con artritis quedan sin tratar. La calificación de artritis y el peso corporal de los animales se registran cinco veces por semana.
MÉTODO. Modelo de Uveítis Autoinmune Experimental de Animal. La uveítis autoinmune experimental (EAU) se induce en ratas Lewis hembras mantenidas con una dieta con falta de folato (Harían Teklad, Indianapolis, Indiana). El Día 0, se inmunizó a los animales por vía subcutánea con 25 mg de péptido S-Ag PDSAg bovino formulado con el coadyuvante incompleto de Freund que contiene 0,5 mg de M. Tuberculosis H37Ra . Se administra la toxina de la tos convulsa purificada (PT) a una dosificación de 1 mg por animal el mismo día mediante inyección intraperitoneal. La gravedad de la uveítis en cada ojo se evalúa mediante un sistema de calificación visual cualitativa: 0 = Sin enfermedad, el ojo es translúcido y refleja la luz (reflejo rojo); 0,5 (traza) = Vasos sanguíneos dilatados dentro del iris, 1 = Vasos sanguíneos congestionados dentro del, contracción anormal de la pupila; 2 = Cámara anterior borrosa, reflejo rojo reducido; 3 = Cámara anterior moderadamente opaca, pero pupila aún visible, reflejo rojo lento; y 4 = Cámara anterior opaca y pupila oscurecida, reflejo rojo ausente, proptosis. Esta evaluación da una calificación máxima de uveítis de 8 por animal.
EJEMPLO. Los compuestos descritos en la presente son potentes en el tratamiento de la uveítis. EC1669 presenta actividad específica del receptor de folato contra la uveítis autoinmune. Los animales que presentan EAU se asignan al azar y se distribuyen en tres grupos: (1) control con EAU sin tratar (n=ll), (2) grupo tratado con el compuesto del ensayo (n=7), tal como EC1669, (3) grupo tratado con el compuesto del ensayo y un compuesto competidor (n=7), tal como EC1669 y EC0923, y (4) el grupo tratado con control positivo (n=7), tal como metotrexato (MTX). Todos los tratamientos comienzan el día 8 después de la inducción de EAU. Los animales del grupo control con EAU quedan sin tratar. A los animales del grupo de tratamiento con EC1669 se les administran cinco dosis subcutáneas de EC1669 a una dosificación de 250 nmol/kg una vez cada dos días (q2d).A los animales del grupo de tratamiento con EC1669 más EC0923 se les administran cinco dosis subcutáneas de EC1669 a una dosificación de 250 nmol/kg una vez cada dos días más un exceso de 500 veces de EC0923 a una dosificación de 125 mmo?/kg como el competidor del folato. A los animales del grupo de tratamiento con MTX se les administran cinco dosis subcutáneas de MTX a una dosificación de 250 nmol/kg una vez cada dos días. La calificación de uveítis y el peso corporal de los animales se registran para cada animal a frecuencias predeterminadas. La gravedad clínica de EAU se monitorea diariamente usando un oftalmoscopio y se clasifica en una escala de 0 a 4 por cada ojo con una calificación máxima posible de 8 por cada animal. El día 16, se sacrifica a los animales y los globos oculares de las ratas se fijan en formalina para la histología. Como se muestra en la Figura 12A, el tratamiento con EC1669 al inicio de la enfermedad reduce efectivamente los síntomas de EAU en una forma que depende de FR y su actividad es competitiva con MTX subcutáneo. No se observó un descenso de peso relacionado con el tratamiento con los compuestos del conjugado descritos en la presente que incluyen un conector que comprende por lo menos un aminoácido no natural, como se muestra en la Figura 12B.
EJEMPLO. EC1496 es potente y eficaz contra la uveítis autóinmune específica del receptor de folato, como se muestra en la Figura 13A. Se evalúan tejidos mediante histología como se muestra en la Figura 13B.
MÉTODO. Modelo de Encefalomielitis Autoinmune (EAE). Se induce la EAE en ratas mediante la inmunización contra 25 pg de proteína básica de mielina de conejillos de Indias (MBP) formulada con CFA que contiene 1 mg de Mycobacterium tuberculosis H37Ra . Se administra la toxina de la tos convulsa por vía intraperitoneal (1 mg/rata) para aumentar la autoinmunidad específica del órgano. Comenzando 8 días después de la inducción, se divide a las ratas en 4 grupos: (1) control sin tratar (n = 8), (2) compuesto del ensayo (n = 7), y (3) compuesto del ensayo más compuesto competidor (n = 7), tal como la competencia con EC0923. Todos los tratamientos comienzan el día 8 después de la inducción de EAE. Los animales del grupo control con EAE quedan sin tratar. A los animales del grupo de tratamiento con el compuesto del ensayo se les administran cuatro dosis subcutáneas del compuesto del ensayo a una dosificación de 250 nmol/kg una vez cada dos días (q2d). A los animales del grupo de tratamiento con el compuesto del ensayo más el compuesto competidor se les administran cuatro dosis subcutáneas del compuesto del ensayo a una dosificación de 250 nmol/kg una vez cada dos días más un exceso de 500 veces del compuesto competidor, tal como EC0923 a una dosificación de 125 pmol/kg como un ejemplo de competidor de receptor de foláto. La gravedad clínica de la EAE se monitorea diariamente y se la califica en una escala de 0 a 5 por animal. Los signos clínicos la parálisis ascendente de las ratas con EAE se dividen en una escala de 0-5: 0 = Sin enfermedad, 0,5 = cola laxa distal, 1 = cola laxa, 2 = paraparesis leve; ataxia-extremidades posteriores debilitadas, 3 = paraparesis moderada; paresis de extremidades posteriores, 4 = parálisis completa de extremidades posteriores, 5 = parálisis completa de extremidades posteriores e incontinencia (eutanasia). El día 16, se sacrifica a los animales y su cerebro y médula espinal se fijan en formalina para la histología.
EJEMPLO. Los compuestos descritos en la presente son potentes en el tratamiento de la encefalomielitis autoinmune experimental (EAE). EC1669 presenta actividad específica del receptor de folato contra EAE. Como se muestra en la Figura 14A, el tratamiento con EC1669 al inicio de la enfermedad suprime efectivamente los síntomas neurológicos durante la fase aguda de EAE. No se observó un descenso de peso relacionado con el tratamiento con EC1669 cuando se administró solo, como se muestra en la Figura 14B. El efecto terapéutico de EC1669 se bloquea con el competidor del receptor de folato EC0923.
EJEMPLO. EC1496 es potente y efectivo contra EAE, como se muestra en la Figura 15. No se observó descenso de peso relacionado con el tratamiento con EC1496 cuando se administró solo.
MÉTODO. Estabilidad en suero humano. Se ensaya la estabilidad de los compuestos descritos en la presente en el suero humano usando protocolos y metodos convencionales. En resumen, el compuesto del ensayo se administra al animal del ensayo, tal como mediante inyección subcutánea. La concentración en el plasma del conjugado, y opcionalmente uno o más metabolitos, se moni torea en el tiempo. Los resultados se grafican para determinar Cmax, lYnax, semivida y AUC para el compuesto del ensayo y los metabolitos.
EJEMPLO. Los compuestos del conjugado descritos en la presente que incluyen un conector que comprende por lo menos un aminoácido no natural son más estables en el plasma que los compuestos de conjugados comparadores que no tienen un conector que comprende por lo menos un aminoácido natural . EC1495 y EC0746 (compuesto comparador) se administran cada uno a 500 nmol/kg mediante inyección subcutánea . La concentración en el plasma del conjugado y los metabolitos (aminopterina e hidrazida de aminopterina) se monitorean en el tiempo . EC1496 muestra una Cmax más alta que EC0746 , como se muestra en la Figura 16A y en la Figura 16B, respectivamente . Además , la Figura 16A y la Figura 16B muestran que EC1496 libera sustancialmente menos fármaco en el plasma que EC0746 . Como también se muestra en la siguiente tabla, el fármaco libre se libera como la aminopterina parental y el derivado de hidrazida (EC0470) .
Sin atarnos a la teoría, creemos en la presente que los datos indican que los compuestos descritos en la presente que incluyen un conector que comprende por lo menos un aminoácido no natural, tal como EC1496, presentan mayor estabilidad en el plasma. Además, EC0746 del ejemplo comparativo, que no incluye un conector que comprende por lo menos un aminoácido no natural, libera más de 2 veces más fármaco que EC1496 después de una dosis subcutánea en ratas. EC1496 también muestra una Cmax más alta que EC0746 que deriva en una dosis terapéutica efectiva más alta. Finalmente, EC1496 muestra una semivida más corta. Sin atarnos a la teoría, creemos en la presente que la eliminación rápida puede derivar también en una toxicidad más baja porque la duración de la exposición al fármaco liberado en forma prematura desde los conjugados descritos en la presente, comparados con los compuestos que no incluyen un conector que comprende por lo menos un aminoácido no natural, también se reduce.
MÉTODO. Eliminación del plasma. Los estudios in vivo incluyen un mínimo de 3 animales de ensayo, tales como ratas, por punto de tiempo. Por ejemplo, a ratas Lewis hembras con catéteres de vena yugular (Harían, dieta para roedores normal) se les administra una sola inyección subcutánea del compuesto del ensayo, tal como EC1669 a 500 nmol/kg. Se extraen muestras de sangre completa (300 pL) en los siguientes puntos de tiempo: 1 minuto, 10 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 8 horas,y 12 horas después de la inyección. Las muestras de sangre se colocan en tubos anticoagulantes que contienen 1,7 mg/mL de K3-EDTA y 0,35 mg/mL de W-maleoil-beta-alanina (0,35 mg/mL) en 0,15% solución de ácido acético. Se obtienen muestras de plasma mediante centrifugación durante 3 minutos a 2.000 g y se las almacena a -80°C. Las cantidades del compuesto del ensayo en el plasma y todos los metabolitos, tales como EC1669 y sus dos metabolitos activos aminopterina (AMT) y AMT hidrazida (EC0470), respectivamente, se miden mediante LC-MS/MS.
EJEMPLO. EC1669 muestra una eliminación rápida del plasma después de la administración subcutánea en ratas. EC1669 es detectable en el torrente sanguíneo dentro de minutos, con una Cmax de 472 nM que ocurre a los 30 minutos después de la dosis y se mantiene una meseta hasta los 60 minutos después de la inyección. AMT derivada de EC1669 y EC0470 se detectan como valores de Cmax similares de 27 nM y 21 nM, respectivamente, pero hay un retardo de 30 minutos comparada con la Cmax de EC1669. Si bien EC1669 solo se elimina rápidamente desde la sangre con una semivida de eliminación de 37 minutos, las semividas de eliminación de ambos metabolitos son aproximadamente 2-3 veces más prolongadas a los 66 minutos (AMT) y a los 112 minutos (EC0470), respectivamente. Los valores de la superficie debajo de la curva correspondiente (AUC) para EC1669, AMT y EC0470 son 52, 5,9 y 3,9 mmol*minuto/mL, respectivamente. Basado en sus respuestas de AUC, se estima un 15,8% de exposición/liberación del fármaco acttivo (AMT más EC0470) en el plasma durante el período de extracción de 12 horas, como se muestra en la siguiente tabla.
Sin estar atados a la teoría, creemos en la presente que la eliminación rápida del plasma observada para los compuestos descritos en la presente, tales como EC1669, puede derivar en una toxicidad del animal más baja porque la duración de la exposición al fármaco liberado prematuramente desde los conjugados descritos en la presente, comparados con los compuestos que no incluyen un conector que comprende por lo menos un aminoácido no natural, también se reduce.
MÉTODO. Biodistribución farmacocinética. Los estudios de esta sección incluyeron un mínimo de 3 animales de ensayo (ratones) por cada punto de tiempo. La biodistribución farmacocinética del compuesto del ensayo, tal como 3H-EC1669 (marca sobre el fármaco), comparado con el control positivo, tal como 3H-metotrexato (3H-MTX), se observa en ratones Balb/c hembras con una dieta con falta de folato. Los compuestos se administran como una sola inyección subcutánea (SC) a 500 nmol/kg. La sangre entera (>300 mE) junto con 100 mg de cada uno de diferentes tejidos de interés se extraen en diferentes puntos de tiempo (tales como 10 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 24 horas, y 72 horas). Las muestras de sangre se colocan en tubos microtainer BD (heparina) y se centrifugan (4.000 g x 3 minutos, 4°C) para separar el plasma (>100 mB). La masa de glóbulos rojos remanentes (RBC) se lava 2x con solución salina con amortiguador de fosfato (PBS, pH 7,4) para obtener glóbulos rojos. Los tejidos extraídos se pesaron y se procesaron para determinar la distribución de 3H-EC1669 y 3H-MTX: plasma, glóbulos rojos, corazón, pulmones, hígado (el lóbulo más pequeño), bazo, riñón (1), intestinos (arriba del ciego), materia fecal (del colon), músculo y cerebro.
EJEMPLO. Comparación de biodistribución farmacocinética de 3H-EC1669 y 3H-metotrexato después de la administración subcutánea. Los resultados de la biodistribución farmacocinética comparativa se muestran en las Figuras 17A-17F (como el porcentaje de la dosis inyectada por gramo (%ID/g)). A los 10 minutos después de la dosis, el hígado capta el 31% de ID/g de 3H-MTX. Se halla el doble de 3H-EC1669 en el plasma qué de 3H-MTX (12% comparado con el 5,2% ID/g). La retención de 3H-MTX en los glóbulos rojos, el bazo, el hígado, el intestino y las heces también es consistentemente más alta que aquella de 3H-EC1669 durante el período de extracción de muestras completo. Los datos de los glóbulos rojos también se grafican en la Figura 18 que muestra que la retención de 3H-MTX es más alta que la de EC1669. Sin atarnos a la teoría, creemos en la presente que estos datos sugieren que EC1669 difiere mucho de MTX en la eliminación hepática, donde MTX es eliminada en forma preferencial por el hígado. Sin atarnos a la teoría, también creemos en la presente que estos datos sugieren que EC1669 difiere mucho de MTX en la captación de los glóbulos rojos, lo cual sugiere métodos diferentes de entrada celular. MTX entra reiteradamente en las células en forma no específica, normalmente a través del portador de folato reducido expresado en forma ubicua (RFC). Se muestra que los compuestos descritos en la presente entran específicamente a través del receptor de folato funcional. Sin estar unidos a la teoría, creemos en la presente que los datos de los glóbulos rojos también respaldan la actividad mediada por el receptor de folato de los conjugados descritos en la presente.
En un estudio de secreción renal/hepática posterior, se aloja a los ratones en jaulas metabólicas con 6 horas de ayuno antes de la administración subcutánea de 3H-EC1669 o 3H-MTX. A las 24 horas después de la dosis, se halla 14% más radioactividad en la orina mezclada de animales a los que se administró 3H-EC1669 que en animales a los que se administró 3HJMTX. En cambio, se halló el doble de radiactividad en las heces mezcladas de animales a los que se administró 3H-MTX que en animales a los que se administró EC1669. Sin atarnos a la teoría, creemos en la presente que estos datos sugieren que EC1669 difiere mucho de MTX en la relación de eliminación renal a hepática, donde EC1669 es eliminado en forma preferencial por los riñones, antes que por el hígado. Se informa que MTX provoca hepatotoxicidad como el principal efecto colateral, especialmente después del uso prolongado. Sin atarnos a la teoría, creemos en la presente que la eliminación renal preferencial de los compuestos descritos en la presente deriva en menos efectos colaterales tales como hepatotoxicidad.
EJEMPLO. Los compuestos descritos en la presente son menos tóxicos que los compuestos que no tienen un conector que comprende por lo menos un aminoácido no natural. Los compuestos del ensayo se administran por vía intravenosa a dosis equivalentes a ratas con falta de folato. Como se muestra en la Figura 19, los conjugados descritos en la presente que incluyen un conector que comprende por lo menos un aminoácido no natural, tal como EC1496, son menos tóxicos que el conjugado correspondiente que no lo incluye, tal como EC0746 del ejemplo comparativo.
EJEMPLO. Dosis tolerada máxima (MTD). Los compuestos de conjugados descritos en la presente que incluyen un conector que comprende por lo menos un aminoácido no natural muestran MTD altas, que se mejoran comparados con compuestos que no tienen conectores que comprenden uno o más aminoácidos no naturales. Los compuestos del ensayo se administran por vía intravenosa, dos veces por semana, durante 2 semanas a ratas Sprague-Dawlcy hembras. El compuesto comparador EC0531 tiene una MTD de 0,33 pmol/kg, mientras que EC1456 tiene una MTD de por lo menos 0,51 pmol/kg, una mejora del 65%, como se muestra en la Figura 20. No se observaron cambios histopatológicos con dosis de EC1456 a la MTD o por debajo de ella.
Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (40)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :
1. Un compuesto de la fórmula B-L(D)X o una sal farmacéuticamente aceptable de él, caracterizado porque B es un radical de un ligando de unión del receptor de la superficie celular, D es una tubulisina, x es 1; y L es un conector desprendióle polivalente que comprende uno o más aminoácidos no naturales; y donde B está unido covalentemente a L y L está unido covalentemente a cada D.
2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque por lo menos un aminoácido no natural tiene la configuración de D.
3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 o 2, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque por lo menos un aminoácido no natural se selecciona de D-alanina, ácido D-aspártico, D-asparagina, D-cisteína, ácido D-glutámico, D-fenilalanina, D-histidina, D-isoleucina, D-lisina, D-leucina, D-metionina, D-prolina, D-glutamina, D-arginina, D-serina, D-treonina, D-valina, D-triptófano, D-tirosina y D-ornitina.
4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 a 3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque por lo menos un aminoácido no natural es ácido D-glutámico.
5. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 a 4, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque por lo menos un aminoácido no natural es D-<¿isteína.
6. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 5, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque L comprende por lo menos una D-cisteína y por lo menos dos ácidos D-glutámicos.
7. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque L comprende una D-cisteína y dos ácidos D-glutámicos.
8. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque L comprende dos ácidos D-glutámicos.
9. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque B ligando de unión al receptor de folato.
10. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque B es un folato.
11. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque B es un D-folato.
12. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque B es de la fórmula
13. El compuesto de conformidad con las reivindicaciones 1 a 12, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque D es un radical de la fórmula:
14. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque B-L es de la fórmula
15. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque tiene la fórmula O una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
16. Un compuesto de la fórmula B-L(D)X o una sal farmacéuticamente aceptable de él, caracterizado porque x es 1, D es un fármaco, y B-L es de la fórmula en donde L está unido covalentemente a D.
17. El compuesto de conformidad con la reivindicación 16, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque D se selecciona de una criptoficina, bortezomib, tiobortezomib, una tubulisina, aminopterina, rapamicina, paclitaxel, docetaxel, doxorubicina, daunorrubicina, everolimus, oí-amanatina, verucarina, didemnina B, geldanomicina, purvalanol A, everolimus, ispinesib, budesonida, dasatinib, una epotilona, una maitansina, y un inhibidor de tirosina cinasa.
18. El compuesto de conformidad con la reivindicación 16, o úna sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque D es un radical de una tubulisina de la fórmula
19. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con uno o más portadores, diluyentes, o excipientes, o una combinación de ellos.
20. El uso de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, opcionalmente en combinación con uno o más portadores, diluyentes o excipientes, o una combinación de ellos, en la fabricación de un medicamento para tratar un cáncer o en un paciente.
21. El uso de conformidad con la reivindicación 20, en donde el cáncer es un carcinoma, un sarcoma, un linfoma, enfermedad de Hodgekin, un melanoma, un mesotelioma, linfoma de Burkitt, un carcinoma nasofaríngeo, una leucemia, o un
22. El uso de conformidad con la reivindicación 20, en donde el cáncer es oral, tiroideo, endocrino, de piel, gástrico, esofágico, laríngeo, pancréatico, de colon, de vejiga, óseo, de ovarios, cervical, uterino, de mama, testicular, de próstata, rectal, renal, hepático o pulmonar.
23. El uso de conformidad con la reivindicación 20, en donde el cáncer es un cáncer resistente al fármaco.
24. El uso de conformidad con la reivindicación 20, en donde e1 cáncer es un cáncer resistente a platino.
25. El uso de conformidad con la reivindicación 20, en donde el cáncer es un cáncer resistente a cisplatino.
26. El uso de conformidad con la reivindicación 20 a 22, en donde el cáncer es cáncer de ovarios.
27. El uso de conformidad con la reivindicación 20 a 22, en donde el cáncer es cáncer de mama.
28. El uso de conformidad con la reivindicación 20 a 22, en donde el cáncer es cáncer es cáncer pulmonar de células no pequeñas.
29. Una dosis unitaria o una composición de forma de dosificación unitaria caracterizada porque comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más compuestos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, opcionalmente en 1combinación con uno o más portadores, diluyentes, o excipientes, o una combinación de ellos.
30. El uso de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, opcionalmente en combinación con uno o más portadores, diluyentes o excipientes, o una combinación de ellos, para tratar un cáncer o en un paciente.
31. El uso de conformidad con la reivindicación 30, en donde el cáncer es un carcinoma, un sarcoma, un linfoma, ¡ enfermedad de Hodgekin, un melanoma, un mesotelioma, linfoma de Burkitt, un carcinoma nasofaríngeo, una leucemia, o un mieloma.
32. El uso de conformidad con la reivindicación 30, en donde el cáncer es oral, tiroideo, endocrino, de piel, gástrico, esofágico, laríngeo, pancréatico, de colon, de vejiga, óseo, de ovarios, cervical, uterino, de mama, testicular, de próstata, rectal, renal, hepático o pulmonar.
33. El uso de conformidad con la reivindicación 30, en donde el cáncer es un cáncer resistente al fármaco.
34. El uso de conformidad con la reivindicación 30, en donde el cáncer es un cáncer resistente a platino.
35. El uso de conformidad con la reivindicación 30, en donde el cáncer es un cáncer resistente a cisplatino.
36. El uso de conformidad con la reivindicación 30 a 32, en donde el cáncer es cáncer de ovarios.
37. El uso de conformidad con la reivindicación 30 a 32, en cionde el cáncer es cáncer de mama.
38. El uso de conformidad con la reivindicación 30 a 32, en donde el cáncer es cáncer es cáncer pulmonar de células no pequeñas.
39. Una composición para tratar un cáncer en un paciente, caracterizada porque comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más compuestos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o una composición farmacéutica que comprende una cantidad efectiva de uno o más compuestos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, opcionalmente que también comprende uno o más portadores, diluyentes o excipientes o una combinación de ellos.
40. Un método para tratar un cáncer en un paciente, caracterizado porque comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más compuestos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, o una sal f rmacéuticamente aceptable de los mismos, o una composición farmacéutica que comprende una cantidad efectiva de uno o más compuestos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, opcionalmente que también comprende uno o más portadores, diluyentes o excipientes o una combinación de ellos.
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Families Citing this family (71)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8288557B2 (en) 2004-07-23 2012-10-16 Endocyte, Inc. Bivalent linkers and conjugates thereof
CN104127878A (zh) 2007-03-14 2014-11-05 恩多塞特公司 结合配体连接的微管溶素递药缀合物
CA2690943A1 (en) 2007-06-25 2008-12-31 Endocyte, Inc. Conjugates containing hydrophilic spacer linkers
US9877965B2 (en) 2007-06-25 2018-01-30 Endocyte, Inc. Vitamin receptor drug delivery conjugates for treating inflammation
EP3838298B1 (en) 2007-08-17 2025-02-26 Purdue Research Foundation Psma binding ligand-linker conjugates and methods for using
US9951324B2 (en) 2010-02-25 2018-04-24 Purdue Research Foundation PSMA binding ligand-linker conjugates and methods for using
EP2600901B1 (en) 2010-08-06 2019-03-27 ModernaTX, Inc. A pharmaceutical formulation comprising engineered nucleic acids and medical use thereof
CN104531812A (zh) 2010-10-01 2015-04-22 现代治疗公司 设计核酸及其使用方法
US8710200B2 (en) 2011-03-31 2014-04-29 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids encoding a modified erythropoietin and their expression
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
BR112014007852B1 (pt) 2011-10-03 2021-11-03 Moderna Therapeutics, Inc Polinucleotídeo isolado modificado e composição farmacêutica
PL2791160T3 (pl) 2011-12-16 2022-06-20 Modernatx, Inc. Kompozycje zmodyfikowanego mrna
US10080805B2 (en) 2012-02-24 2018-09-25 Purdue Research Foundation Cholecystokinin B receptor targeting for imaging and therapy
US20140080175A1 (en) 2012-03-29 2014-03-20 Endocyte, Inc. Processes for preparing tubulysin derivatives and conjugates thereof
US10501512B2 (en) 2012-04-02 2019-12-10 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides
HK1206779A1 (en) 2012-04-02 2016-01-15 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
CA2887727A1 (en) 2012-10-16 2014-04-24 Endocyte, Inc. Drug delivery conjugates containing unnatural amino acids and methods for using
HK1211493A1 (en) 2012-11-15 2016-05-27 恩多塞特公司 Conjugates for treating diseases caused by psma expressing cells
DK2922554T3 (en) 2012-11-26 2022-05-23 Modernatx Inc Terminalt modificeret rna
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
US10023626B2 (en) 2013-09-30 2018-07-17 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
WO2015051214A1 (en) 2013-10-03 2015-04-09 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
EP3415489A1 (en) 2013-10-18 2018-12-19 Deutsches Krebsforschungszentrum Labeled inhibitors of prostate specific membrane antigen (psma), their use as imaging agents and pharmaceutical agents for the treatment of prostate cancer
SG10201803618RA (en) * 2013-11-14 2018-06-28 Endocyte Inc Compounds for positron emission tomography
WO2015095223A2 (en) * 2013-12-16 2015-06-25 Genentech, Inc. Peptidomimetic compounds and antibody-drug conjugates thereof
CA2945367A1 (en) * 2014-04-14 2015-10-22 Endocyte, Inc. Drug delivery conjugates for treating resistant cancer and for use in combination therapy
US20170290878A1 (en) * 2014-09-25 2017-10-12 Endocyte, Inc. Methods of treating cancer with tubulysin conjugates
WO2016085967A1 (en) * 2014-11-25 2016-06-02 Endocyte, Inc. Methods of treating cancer by targeting tumor-associated macrophages
US10188759B2 (en) 2015-01-07 2019-01-29 Endocyte, Inc. Conjugates for imaging
CN107847609A (zh) * 2015-03-13 2018-03-27 恩多塞特公司 用于治疗疾病的缀合物
WO2016168471A1 (en) * 2015-04-17 2016-10-20 Endocyte, Inc. Dual disulfide drug conjugates
JP6772186B2 (ja) * 2015-05-01 2020-10-21 エンドサイト・インコーポレイテッドＥｎｄｏｃｙｔｅ， Ｉｎｃ． 炎症の治療のための抗葉酸剤結合体
US11793880B2 (en) 2015-12-04 2023-10-24 Seagen Inc. Conjugates of quaternized tubulysin compounds
ES2919323T3 (es) 2015-12-04 2022-07-26 Seagen Inc Conjugados de compuestos de tubulisina cuaternizados
KR20180123047A (ko) 2016-03-24 2018-11-14 바이엘 파마 악티엔게젤샤프트 효소적으로 절단가능한 기를 갖는 세포독성 활성제의 전구약물
WO2017172930A1 (en) * 2016-03-29 2017-10-05 Endocyte, Inc. Pbd conjugates for treating diseases
CN110678204A (zh) * 2016-03-29 2020-01-10 恩多塞特公司 用于靶向肿瘤相关巨噬细胞的叶酸缀合物
CN109475558A (zh) * 2016-05-25 2019-03-15 普渡研究基金会 通过靶向骨髓衍生的抑制细胞而治疗癌症的方法
US10181526B2 (en) 2016-06-02 2019-01-15 Samsung Electronics Co., Ltd. Field effect transistor including multiple aspect ratio trapping structures
EP3472178A4 (en) 2016-06-17 2020-02-19 Magenta Therapeutics, Inc. COMPOSITION AND METHOD FOR DEPLYING CD117 + CELLS
IL307357A (en) 2016-11-08 2023-11-01 Regeneron Pharma Steroids and their protein conjugates
US11135307B2 (en) 2016-11-23 2021-10-05 Mersana Therapeutics, Inc. Peptide-containing linkers for antibody-drug conjugates
GB2557931A (en) * 2016-12-16 2018-07-04 Univ Bristol Unnatural amino acids
CN106632341A (zh) * 2016-12-27 2017-05-10 天津阿尔塔科技有限公司 一种d‑叶酸的合成方法
JP7348064B2 (ja) 2017-01-09 2023-09-20 アポセンス リミテッド 分子を経膜送達するための化合物及び方法
JP7244424B2 (ja) * 2017-01-18 2023-03-22 アルニラム ファーマスーティカルズ インコーポレイテッド エンドソーム切断可能なリンカー
KR20240161216A (ko) 2017-01-20 2024-11-12 하이델베르크 파마 리서치 게엠베하 Cd137+ 세포의 고갈을 위한 조성물 및 방법
KR20250008984A (ko) 2017-05-18 2025-01-16 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 사이클로덱스트린 단백질 약물 접합체
MA49421A (fr) 2017-06-15 2020-04-22 Modernatx Inc Formulations d'arn
WO2019046809A1 (en) 2017-08-31 2019-03-07 Modernatx, Inc. METHODS OF MANUFACTURING LIPID NANOPARTICLES
MX2020004691A (es) 2017-11-07 2020-08-20 Regeneron Pharma Enlazadores hidrofilicos para conjugados anticuerpo-farmaco.
EP3717021A1 (en) 2017-11-27 2020-10-07 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates
EP3727463A1 (en) 2017-12-21 2020-10-28 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates
WO2019130319A1 (en) 2018-01-01 2019-07-04 Aposense Ltd. Compounds and methods for trans-membrane delivery of molecules
MY210236A (en) 2018-01-08 2025-09-04 Regeneron Pharma Steroids and antibody-conjugates thereof
EP3781215A4 (en) 2018-04-17 2021-12-29 Endocyte, Inc. Methods of treating cancer
EP3790899A1 (en) 2018-05-09 2021-03-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-msr1 antibodies and methods of use thereof
CA3113651A1 (en) 2018-09-20 2020-03-26 Modernatx, Inc. Preparation of lipid nanoparticles and methods of administration thereof
CN113365664A (zh) 2018-10-29 2021-09-07 梅尔莎纳医疗公司 具有含肽接头的半胱氨酸工程化的抗体-药物缀合物
CN120097930A (zh) 2019-05-20 2025-06-06 因多塞特股份有限公司 制备psma缀合物的方法
AU2021205255A1 (en) * 2020-01-07 2022-07-21 Purdue Research Foundation Targeted steroid compounds
CA3163833A1 (en) 2020-01-09 2021-07-15 Timothy B. Lowinger Site specific antibody-drug conjugates with peptide-containing linkers
JP2020117509A (ja) * 2020-03-12 2020-08-06 エンドサイト・インコーポレイテッドＥｎｄｏｃｙｔｅ， Ｉｎｃ． 疾患を処置するためのコンジュゲート
CN116196435B (zh) 2020-04-02 2025-12-02 梅尔莎纳医疗公司 包含sting激动剂的抗体药物缀合物
JP2023554517A (ja) * 2020-12-22 2023-12-27 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 試料中の目的の分析物を検出するための方法
AU2022238571A1 (en) 2021-03-18 2023-09-14 Seagen Inc. Selective drug release from internalized conjugates of biologically active compounds
EP4323017A1 (en) * 2021-04-16 2024-02-21 Novartis AG Folate receptor-targeted radiotherapeutic agents and their use
WO2024025845A1 (en) * 2022-07-25 2024-02-01 Sorrento Therapeutics, Inc. Folate-conjugated drugs and uses thereof
EP4566631A1 (en) 2023-12-06 2025-06-11 Heidelberg Pharma Research GmbH New antibody drug conjugate as well as methods of production and uses thereof

Family Cites Families (215)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2515483A (en) 1946-08-10 1950-07-18 Merck & Co Inc Diacylated pteroic acid and process for preparing same
US2816110A (en) 1956-11-23 1957-12-10 Merck & Co Inc Methods for the production of substituted pteridines
US3392173A (en) 1964-03-09 1968-07-09 Lilly Co Eli Novel acyl derivatives of desacetyl-vincaleukoblastine and processes for their preparation
US3387001A (en) 1964-10-19 1968-06-04 Lilly Co Eli Novel aminoacyl esters of desacetyl vincaleukoblastine
US3641109A (en) 1968-09-04 1972-02-08 Carl D Emerson Alkyl and aryl esters of polyhalo-dithio alcohols
US3632622A (en) 1969-04-01 1972-01-04 Chevron Res Polyhaloalkylpolythioalkyl sulfite esters
US4203898A (en) 1977-08-29 1980-05-20 Eli Lilly And Company Amide derivatives of VLB, leurosidine, leurocristine and related dimeric alkaloids
US4166810A (en) 1978-04-20 1979-09-04 Eli Lilly And Company Derivatives of 4-desacetyl VLB C-3 carboxyhydrazide
US4337339A (en) 1979-04-30 1982-06-29 Baker Instruments Corp. Process for preparation of folic acid derivatives
US4639456A (en) 1980-06-10 1987-01-27 Omnichem S.A. Vinblastin-23-oyl amino acid derivatives
US4316885A (en) 1980-08-25 1982-02-23 Ayerst, Mckenna And Harrison, Inc. Acyl derivatives of rapamycin
US4713249A (en) 1981-11-12 1987-12-15 Schroeder Ulf Crystallized carbohydrate matrix for biologically active substances, a process of preparing said matrix, and the use thereof
US5140104A (en) 1982-03-09 1992-08-18 Cytogen Corporation Amine derivatives of folic acid analogs
DE3376114D1 (en) 1982-12-07 1988-05-05 Kyowa Hakko Kogyo Kk Mitomycin analogues
JPS59175493A (ja) 1983-03-25 1984-10-04 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd マイトマイシン誘導体
EP0124502B1 (fr) 1983-04-29 1991-06-12 OMNICHEM Société anonyme Nouveaux conjugués de la vinblastine et de ses dérivés, procédé pour leur préparation et compositions pharmaceutiques contenant ces conjugués
US4866180A (en) 1984-02-24 1989-09-12 Bristol-Myers Company Amino disulfide thiol exchange products
GB8413849D0 (en) 1984-05-31 1984-07-04 Amersham Int Plc Nmr contrast agents
JPS60255789A (ja) 1984-06-01 1985-12-17 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd マイトマイシン誘導体，その製造法および抗腫瘍剤
US5266333A (en) 1985-03-06 1993-11-30 American Cyanamid Company Water dispersible and water soluble carbohydrate polymer compositions for parenteral administration of growth hormone
US4650803A (en) 1985-12-06 1987-03-17 University Of Kansas Prodrugs of rapamycin
US4801688A (en) 1986-05-27 1989-01-31 Eli Lilly And Company Hydrazone immunoglobulin conjugates
ZA873600B (en) 1986-05-27 1988-12-28 Lilly Co Eli Immunoglobulin conjugates
US5103018A (en) 1986-08-26 1992-04-07 Kyowa Hakko Kogyo Kabushiki Kaisha Mitomycin derivatives
US5006652A (en) 1988-08-08 1991-04-09 Eli Lilly And Company Intermediates for antibody-vinca drug conjugates
US5094849A (en) 1988-08-08 1992-03-10 Eli Lilly And Company Cytotoxic antibody conjugates of hydrazide derivatized vinca analogs via simple organic linkers
US5108921A (en) 1989-04-03 1992-04-28 Purdue Research Foundation Method for enhanced transmembrane transport of exogenous molecules
US5688488A (en) 1989-04-03 1997-11-18 Purdue Research Foundation Composition and method for tumor imaging
WO1991007418A1 (en) 1989-11-13 1991-05-30 Xoma Corporation Chimeric mouse-human a10 antibody with specificity to a human tumor cell antigen
US5627165A (en) 1990-06-13 1997-05-06 Drug Innovation & Design, Inc. Phosphorous prodrugs and therapeutic delivery systems using same
US5998603A (en) 1994-09-29 1999-12-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. 4'-desmethyl nucleoside analogs, and oligomers thereof
ES2171392T3 (es) 1990-08-29 2002-09-16 Ct Hospitalier Regional De Nan Poliligandos de proteina unidos a un nucleo de proteina estable.
US5221670A (en) 1990-09-19 1993-06-22 American Home Products Corporation Rapamycin esters
US5130307A (en) 1990-09-28 1992-07-14 American Home Products Corporation Aminoesters of rapamycin
US5378696A (en) 1990-09-19 1995-01-03 American Home Products Corporation Rapamycin esters
US5233036A (en) 1990-10-16 1993-08-03 American Home Products Corporation Rapamycin alkoxyesters
US5120842A (en) 1991-04-01 1992-06-09 American Home Products Corporation Silyl ethers of rapamycin
US5100883A (en) 1991-04-08 1992-03-31 American Home Products Corporation Fluorinated esters of rapamycin
US5194447A (en) 1992-02-18 1993-03-16 American Home Products Corporation Sulfonylcarbamates of rapamycin
US5118678A (en) 1991-04-17 1992-06-02 American Home Products Corporation Carbamates of rapamycin
US5138051A (en) 1991-08-07 1992-08-11 American Home Products Corporation Rapamycin analogs as immunosuppressants and antifungals
US5118677A (en) 1991-05-20 1992-06-02 American Home Products Corporation Amide esters of rapamycin
US5169851A (en) 1991-08-07 1992-12-08 American Home Products Corporation Rapamycin analog as immunosuppressants and antifungals
US6335434B1 (en) 1998-06-16 2002-01-01 Isis Pharmaceuticals, Inc., Nucleosidic and non-nucleosidic folate conjugates
US5151413A (en) 1991-11-06 1992-09-29 American Home Products Corporation Rapamycin acetals as immunosuppressant and antifungal agents
US5159079A (en) 1991-12-20 1992-10-27 Eli Lilly And Company 2-piperidones as intermediates for 5-deaza-10-oxo- and 5-deaza-10-thio-5,6,7,8-tetrahydrofolic acids
US6004555A (en) 1992-03-05 1999-12-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods for the specific coagulation of vasculature
US6022966A (en) 1993-11-22 2000-02-08 Neorx Corporation Pretargeting methods and compounds
US5302584A (en) 1992-10-13 1994-04-12 American Home Products Corporation Carbamates of rapamycin
US5258389A (en) 1992-11-09 1993-11-02 Merck & Co., Inc. O-aryl, O-alkyl, O-alkenyl and O-alkynylrapamycin derivatives
US5260300A (en) 1992-11-19 1993-11-09 American Home Products Corporation Rapamycin carbonate esters as immuno-suppressant agents
US5583020A (en) 1992-11-24 1996-12-10 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Permeability enhancers for negatively charged polynucleotides
WO1994025022A1 (en) 1993-04-23 1994-11-10 Abbott Laboratories Rapamycin conjugates and antibodies
US7279561B1 (en) 1993-04-23 2007-10-09 Wyeth Anti-rapamycin monoclonal antibodies
US5562907A (en) 1993-05-14 1996-10-08 Arnon; Stephen S. Method to prevent side-effects and insensitivity to the therapeutic uses of toxins
US5391730A (en) 1993-10-08 1995-02-21 American Home Products Corporation Phosphorylcarbamates of rapamycin and oxime derivatives thereof
US5385908A (en) 1993-11-22 1995-01-31 American Home Products Corporation Hindered esters of rapamycin
US5385909A (en) 1993-11-22 1995-01-31 American Home Products Corporation Heterocyclic esters of rapamycin
US5385910A (en) 1993-11-22 1995-01-31 American Home Products Corporation Gem-distributed esters of rapamycin
US5389639A (en) 1993-12-29 1995-02-14 American Home Products Company Amino alkanoic esters of rapamycin
US5417982A (en) 1994-02-17 1995-05-23 Modi; Pankaj Controlled release of drugs or hormones in biodegradable polymer microspheres
IL112873A (en) 1994-03-08 2005-03-20 Wyeth Corp Rapamycin-fkbp12 binding proteins, their isolation and their use
US6171859B1 (en) 1994-03-30 2001-01-09 Mitokor Method of targeting conjugate molecules to mitochondria
US5362718A (en) 1994-04-18 1994-11-08 American Home Products Corporation Rapamycin hydroxyesters
US5463048A (en) 1994-06-14 1995-10-31 American Home Products Corporation Rapamycin amidino carbamates
US5491231A (en) 1994-11-28 1996-02-13 American Home Products Corporation Hindered N-oxide esters of rapamycin
US5547668A (en) 1995-05-05 1996-08-20 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Conjugates of folate anti-effector cell antibodies
AUPN449295A0 (en) 1995-07-28 1995-08-24 Inner And Eastern Health Care Network, The Radioprotectors
US6207157B1 (en) 1996-04-23 2001-03-27 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Conjugate vaccine for nontypeable Haemophilus influenzae
US6030941A (en) 1996-05-01 2000-02-29 Avi Biopharma, Inc. Polymer composition for delivering substances in living organisms
ATE365562T1 (de) 1996-05-03 2007-07-15 Immunomedics Inc Zielgerichtete kombinations-immuntherapie für krebs
DE19621133A1 (de) 1996-05-24 1997-11-27 Boehringer Mannheim Gmbh Bestimmungsverfahren mit oligomerisierten Rezeptoren
CA2264592C (en) 1996-08-27 2012-02-21 University Of Utah Research Foundation Bioconjugates and delivery of bioactive agents
WO1998008382A1 (en) * 1996-08-30 1998-03-05 Eli Lilly And Company Nonclassical pyrrolo[2,3-d]pyrimidine antifolates
EP0926955A4 (en) 1996-09-12 2003-05-07 Merck & Co Inc Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
US6056973A (en) 1996-10-11 2000-05-02 Sequus Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic liposome composition and method of preparation
US6071532A (en) 1996-10-15 2000-06-06 Emory University Synthesis of glycophospholipid and peptide-phospholipid conjugates and uses thereof
US6177404B1 (en) 1996-10-15 2001-01-23 Merck & Co., Inc. Conjugates useful in the treatment of benign prostatic hyperplasia
AU1095799A (en) 1997-10-17 1999-05-10 Philip L. Fuchs Folic acid derivatives
GB9723669D0 (en) 1997-11-07 1998-01-07 Univ Aberdeen Skin penetration enhancing components
US6380395B1 (en) 1998-04-21 2002-04-30 Bristol-Myers Squibb Company 12, 13-cyclopropane epothilone derivatives
US6093382A (en) 1998-05-16 2000-07-25 Bracco Research Usa Inc. Metal complexes derivatized with folate for use in diagnostic and therapeutic applications
WO1999061055A1 (en) 1998-05-22 1999-12-02 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Bifunctional molecules and therapies based thereon
US6589503B1 (en) * 1998-06-20 2003-07-08 Washington University Membrane-permeant peptide complexes for medical imaging, diagnostics, and pharmaceutical therapy
AU769569B2 (en) 1998-12-18 2004-01-29 Alza Corporation Method of administering a compound to multi-drug resistant cells
US6291684B1 (en) 1999-03-29 2001-09-18 Bristol-Myers Squibb Company Process for the preparation of aziridinyl epothilones from oxiranyl epothilones
MXPA01010750A (es) 1999-04-23 2003-08-20 Alza Corp Conjugado que tiene un enlace dividible para utilizarse en un liposoma.
US7238368B2 (en) 1999-04-23 2007-07-03 Alza Corporation Releasable linkage and compositions containing same
AUPQ014799A0 (en) 1999-05-04 1999-05-27 Access Pharmaceuticals Australia Pty Limited Amplification of folate-mediated targeting to tumor cells using polymers
AUPQ071299A0 (en) 1999-06-02 1999-06-24 Access Pharmaceuticals Australia Pty Limited Vitamin directed dual targeting therapy
US6822086B1 (en) 1999-08-09 2004-11-23 The General Hospital Corporation Drug-carrier complexes and methods of use thereof
EP1210121A2 (en) 1999-08-24 2002-06-05 Cellgate Inc. Enhancing drug delivery across and into epithelial tissues using oligo arginine moieties
US6669951B2 (en) * 1999-08-24 2003-12-30 Cellgate, Inc. Compositions and methods for enhancing drug delivery across and into epithelial tissues
WO2001028592A1 (en) 1999-10-15 2001-04-26 Mayo Foundation For Medical Education And Research Cobalamin conjugates useful as imaging agents and as antitumor agents
US7067111B1 (en) 1999-10-25 2006-06-27 Board Of Regents, University Of Texas System Ethylenedicysteine (EC)-drug conjugates, compositions and methods for tissue specific disease imaging
HK1049997B (en) 1999-11-24 2007-02-23 Immunogen, Inc. Cytotoxic agents comprising taxanes and their therapeutic use
NZ521898A (en) 2000-03-31 2004-11-26 Purdue Research Foundation Use of a ligand-immunogen conjugate such as folate-FITC for enhancing an endogenous immune response
US6670355B2 (en) 2000-06-16 2003-12-30 Wyeth Method of treating cardiovascular disease
US6290929B1 (en) 2000-07-28 2001-09-18 The Procter & Gamble Company Cancer treatment
MXPA03001245A (es) 2000-08-11 2003-05-27 Wyeth Corp Metodo para el tratamiento del carcionma positivo para receptores de estrogeno.
DK1319008T3 (da) 2000-09-19 2009-02-09 Wyeth Corp Vandoplöselige rapamycinestere
US6399625B1 (en) 2000-09-27 2002-06-04 Wyeth 1-oxorapamycins
US6440991B1 (en) 2000-10-02 2002-08-27 Wyeth Ethers of 7-desmethlrapamycin
US6399626B1 (en) 2000-10-02 2002-06-04 Wyeth Hydroxyesters of 7-desmethylrapamycin
JP2004526425A (ja) 2000-11-28 2004-09-02 ワイス 前立腺癌の診断および治療に有用なｆｋｂｐ核酸およびポリペプチドの発現分析
US20020168737A1 (en) 2001-01-24 2002-11-14 Cornish Virginia W. Binding and catalysis screen for high throughput determination of protein function using chemical inducers of dimerization
AR036993A1 (es) 2001-04-02 2004-10-20 Wyeth Corp Uso de agentes que modulan la interaccion entre pd-1 y sus ligandos en la submodulacion de respuestas inmunologicas
WO2002079499A1 (en) 2001-04-02 2002-10-10 Wyeth Pd-1, a receptor for b7-4, and uses therefor
US7875612B2 (en) 2001-04-24 2011-01-25 Purdue Research Foundation Folate mimetics and folate-receptor binding conjugates thereof
MXPA03010035A (es) 2001-05-02 2004-06-30 Purdue Research Foundation Tratamiento y diagnostico de enfermedades mediadas por macrofagos.
US7109165B2 (en) 2001-05-18 2006-09-19 Sirna Therapeutics, Inc. Conjugates and compositions for cellular delivery
EP1392664A4 (en) 2001-06-01 2005-01-26 Bristol Myers Squibb Co EPOTHILONE DERIVATIVES
US20040018203A1 (en) 2001-06-08 2004-01-29 Ira Pastan Pegylation of linkers improves antitumor activity and reduces toxicity of immunoconjugates
UA77200C2 (en) 2001-08-07 2006-11-15 Wyeth Corp Antineoplastic combination of cci-779 and bkb-569
CN1545512A (zh) 2001-08-22 2004-11-10 惠氏公司 雷帕霉素二醛化合物
BR0211986A (pt) 2001-08-22 2004-09-28 Wyeth Corp 29-enóis de rapamicina
DK1434603T3 (da) 2001-09-28 2010-04-26 Purdue Research Foundation Fremgangsmåde til behandling ved anvendelse af ligand-immunogen-konjugater
GR1004163B (el) 2001-11-01 2003-02-21 Πολυκυκλικα παραγωγα τροποποιησης των οπτικων ιδιοτητων και των ιδιοτητων αντοχης στο πλασμα των πολυμερων λιθογραφιας
EP1519735A4 (en) 2001-12-12 2006-01-11 Conforma Therapeutic Corp ASSAYS AND DEVICES FOR DETERMINING AND MODULATING HSP90 BINDING ACTIVITY
US20030194409A1 (en) 2002-01-17 2003-10-16 Rothman James E. Conjugate heat shock protein-binding peptides
US8043602B2 (en) 2002-02-07 2011-10-25 Endocyte, Inc. Folate targeted enhanced tumor and folate receptor positive tissue optical imaging technology
US7585491B2 (en) 2002-12-13 2009-09-08 Immunomedics, Inc. Immunoconjugates with an intracellularly-cleavable linkage
US7000695B2 (en) 2002-05-02 2006-02-21 Halliburton Energy Services, Inc. Expanding wellbore junction
NZ536467A (en) 2002-05-06 2006-11-30 Endocyte Inc Vitamin-targeted imaging agents
US6596757B1 (en) 2002-05-14 2003-07-22 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising polyethylene glycol-containing taxanes and their therapeutic use
KR20040106547A (ko) 2002-05-15 2004-12-17 엔도사이트, 인코포레이티드 비타민-마이토마이신 공액체
US7816377B2 (en) 2002-07-09 2010-10-19 R&D-Biopharmaceuticals Gmbh Tubulysin analogues
EP1521769B1 (de) 2002-07-09 2015-09-09 Dömling, Alexander Tubulysinkonjugate
EP2353611B1 (en) * 2002-07-31 2015-05-13 Seattle Genetics, Inc. Drug conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
PL374528A1 (en) 2002-07-31 2005-10-31 Schering Aktiengesellschaft New effector conjugates, process for their production and their pharmaceutical use
DE10241152A1 (de) 2002-09-05 2004-03-18 GESELLSCHAFT FüR BIOTECHNOLOGISCHE FORSCHUNG MBH (GBF) Tubulysin-Biosynthese-Gene
US20040047917A1 (en) 2002-09-06 2004-03-11 Stephen Wilson Drug delivery and targeting with vitamin B12 conjugates
CN104383554B (zh) 2002-09-06 2018-06-08 天蓝制药公司 用于传递治疗剂的以环糊精为基础的聚合物
CA2501752A1 (en) 2002-10-10 2004-04-22 Wyeth Compositions, organisms and methodologies employing a novel human kinase
AU2003286705A1 (en) 2002-10-24 2004-05-13 Research Corporation Technologies Functional mri agents for cancer imaging
DE10254439A1 (de) 2002-11-21 2004-06-03 GESELLSCHAFT FüR BIOTECHNOLOGISCHE FORSCHUNG MBH (GBF) Tubulysine, Herstellungsverfahren und Tubulysin-Mittel
CN1741741A (zh) 2002-11-21 2006-03-01 惠氏公司 用于治疗狼疮肾炎的组合物和方法
CA2512867C (en) 2003-01-27 2014-08-26 Endocyte, Inc. Vitamin receptor binding drug delivery conjugates
AR042938A1 (es) 2003-02-06 2005-07-06 Wyeth Corp Uso del cci-779 en el tratamiento de la fibrosis hepatica
EP2660322A3 (en) 2003-04-17 2013-11-13 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Modified iRNA agents
EP1622646B1 (en) 2003-05-06 2012-08-08 Purdue Research Foundation Treatment of lupus targeting the macrophages or the folate receptor
WO2004101803A2 (en) 2003-05-12 2004-11-25 Wyeth Holdings Corporation Process for producing anticancer agent ll-d45042
MXPA06000407A (es) 2003-07-16 2006-03-17 Wyeth Corp Isomero c cci-779.
ATE365169T1 (de) 2003-08-07 2007-07-15 Wyeth Corp Regioselektive synthese von cci-779
PL1718340T3 (pl) 2004-01-30 2008-04-30 Bayer Schering Pharma Ag Nowe koniugaty efektorowe, sposób ich wytwarzania i ich zastosowanie farmaceutyczne
WO2005111238A2 (en) 2004-04-19 2005-11-24 Archemix Corporation Aptamer-mediated intracellular delivery of therapeutic oligonucleotides
CA2564076C (en) 2004-05-19 2014-02-18 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
WO2005115912A1 (ja) 2004-05-25 2005-12-08 Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. 水素生成装置及びそれを用いた燃料電池システム
US8288557B2 (en) 2004-07-23 2012-10-16 Endocyte, Inc. Bivalent linkers and conjugates thereof
JP5192234B2 (ja) 2004-08-10 2013-05-08 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 化学修飾オリゴヌクレオチド
TW200616604A (en) 2004-08-26 2006-06-01 Nicholas Piramal India Ltd Nitric oxide releasing prodrugs containing bio-cleavable linker
CA2583389A1 (en) 2004-10-07 2006-04-20 Emory University Multifunctional nanoparticles conjugates and their use
WO2007001457A2 (en) 2004-11-12 2007-01-04 Xencor, Inc. Antibodies operably linked to selected chemoattractants
US20110166319A1 (en) 2005-02-11 2011-07-07 Immunogen, Inc. Process for preparing purified drug conjugates
TW200640493A (en) 2005-02-16 2006-12-01 Insert Therapeutics Inc Cyclodextrin-based polymers for therapeutics delivery
US7312217B2 (en) 2005-03-11 2007-12-25 Syntrix Biosystems, Inc. Aminopterin dosage forms and methods for inflammatory disorders
EP1863816B1 (en) 2005-03-16 2014-06-25 Endocyte, Inc. Synthesis and purification of pteroic acid and conjugates thereof
US20090081710A1 (en) 2005-03-30 2009-03-26 Purdue Research Foundation Method for Cancer Prognosis Using Cellular Folate Vitamin Receptor Quantification
CN103127523A (zh) 2005-06-20 2013-06-05 Psma开发有限公司 Psma抗体-药物缀合物
WO2007006041A2 (en) 2005-07-05 2007-01-11 Purdue Research Foundation Imaging and therapeutic method using monocytes
BRPI0615354A2 (pt) * 2005-08-19 2011-05-17 Endocyte Inc conjugado de liberação de fármaco de ligação de receptor, composição farmacêutica que o compreende, bem como seu uso
EP2382995A3 (en) 2005-08-19 2013-09-25 Endocyte, Inc. Ligand conjugates of Vinca alkaloids, analogs and derivatives
CA2619969A1 (en) 2005-08-19 2007-02-22 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated factor vii and factor viia
CA2893252C (en) 2005-08-24 2018-05-29 Immunogen, Inc. Process for preparing antibody maytansinoid conjugates
JP2009518289A (ja) 2005-11-21 2009-05-07 メディバス エルエルシー 高分子の送達用ポリマー粒子および使用方法
AR062448A1 (es) 2006-05-25 2008-11-12 Endocyte Inc Conjugados de analogos de aziridinil-epotilona y composiciones farmaceuticas que comprenden los mismos
EP2087337A4 (en) 2006-11-03 2010-09-08 Purdue Research Foundation METHOD AND DEVICE FOR EX-VIVO FLOW CYTOMETRY
US20080176958A1 (en) 2007-01-24 2008-07-24 Insert Therapeutics, Inc. Cyclodextrin-based polymers for therapeutics delivery
WO2008101231A2 (en) 2007-02-16 2008-08-21 Endocyte, Inc. Methods and compositions for treating and diagnosing kidney disease
ES2704199T3 (es) 2007-02-16 2019-03-14 Vergell Medical S A Profármacos de doble acción
CN104127878A (zh) * 2007-03-14 2014-11-05 恩多塞特公司 结合配体连接的微管溶素递药缀合物
EP2148886B1 (en) 2007-05-10 2014-02-19 R & D Biopharmaceuticals Gmbh Tubulysine derivatives
US9877965B2 (en) 2007-06-25 2018-01-30 Endocyte, Inc. Vitamin receptor drug delivery conjugates for treating inflammation
CA2690943A1 (en) * 2007-06-25 2008-12-31 Endocyte, Inc. Conjugates containing hydrophilic spacer linkers
WO2011079227A1 (en) * 2009-12-23 2011-06-30 Endocyte, Inc. Vitamin receptor drug delivery conjugates for treating inflammation
WO2009134279A1 (en) 2007-07-20 2009-11-05 The Regents Of The University Of California Tubulysin d analogues
EP3838298B1 (en) 2007-08-17 2025-02-26 Purdue Research Foundation Psma binding ligand-linker conjugates and methods for using
JP2011500835A (ja) 2007-10-25 2011-01-06 エンドサイト，インコーポレイテッド チューブリシン類および調製プロセス
EP2231194B1 (en) 2007-12-04 2017-02-22 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Folate-irna conjugates
PL2265283T3 (pl) * 2008-03-18 2015-03-31 Seattle Genetics Inc Koniugaty aurystatyny lek łącznik
EP2276506A4 (en) 2008-04-30 2014-05-07 Immunogen Inc EFFICIENT CONJUGATES AND HYDROPHILIC BINDER
US20100040669A1 (en) 2008-08-12 2010-02-18 Higuchi John W Non-Invasive Ocular Delivery of Rapamycin
EP2349274B1 (en) 2008-09-17 2025-04-09 Endocyte, Inc. Folate receptor binding conjugates of antifolates
US20100074863A1 (en) 2008-09-17 2010-03-25 Yat Sun Or Anti-infective pyrrolidine derivatives and analogs
EP2174947A1 (en) 2008-09-25 2010-04-14 Universität des Saarlandes Bioactive pre-tubulysins and use thereof
US20110288152A1 (en) 2008-10-17 2011-11-24 Purdue Research Foundation Psma binding ligand-linker conjugates and methods for using
IT1394860B1 (it) 2009-07-22 2012-07-20 Kemotech S R L Composti farmaceutici
US8394922B2 (en) 2009-08-03 2013-03-12 Medarex, Inc. Antiproliferative compounds, conjugates thereof, methods therefor, and uses thereof
EP2322537A1 (en) 2009-11-12 2011-05-18 R & D Biopharmaceuticals Gmbh Tubulin inhibitors
EP2499152B1 (en) 2009-11-12 2016-06-29 TUBE Pharmaceuticals GmbH Tubulin inhibitors
WO2011069116A1 (en) 2009-12-04 2011-06-09 Endocyte, Inc. Binding ligand linked drug delivery conjugates of tubulysins
US20120322741A1 (en) 2010-02-25 2012-12-20 Purdue Research Foundation Psma binding ligand-linker conjugates and methods for using
EP2409983A1 (en) 2010-07-19 2012-01-25 Leibniz-Institut für Pflanzenbiochemie (IPB) Tubulysin analogues
MX2013001402A (es) 2010-08-06 2013-08-29 Endocyte Inc Proceso para preparar tubulisinas.
CA2812543A1 (en) 2010-09-27 2012-04-12 Endocyte, Inc. Folate conjugates for treating inflammation of the eye
US20140243282A1 (en) 2010-12-31 2014-08-28 Satish Reddy Kallam Methods and compositions for designing novel conjugate therapeutics
AU2012236403B2 (en) 2011-03-29 2016-08-04 Immunogen, Inc. Process for manufacturing conjugates of improved homogeneity
CN107537040A (zh) 2011-03-29 2018-01-05 伊缪诺金公司 通过一步法制备类美登素抗体缀合物
EP2723389A2 (en) 2011-06-21 2014-04-30 Immunogen, Inc. Novel maytansinoid derivatives with peptide linker and conjugates thereof
BR112014013526A8 (pt) 2011-12-05 2017-06-13 Igenica Biotherapeutics Inc conjugados de anticorpo-fármaco e compostos, composições e métodos relacionados
US10080805B2 (en) 2012-02-24 2018-09-25 Purdue Research Foundation Cholecystokinin B receptor targeting for imaging and therapy
EP2822386B1 (en) 2012-02-29 2021-05-05 Purdue Research Foundation Folate receptor alpha binding ligands
US20140080175A1 (en) 2012-03-29 2014-03-20 Endocyte, Inc. Processes for preparing tubulysin derivatives and conjugates thereof
CA2873112A1 (en) 2012-05-11 2013-11-14 Alexander Krantz Site-specific labeling and targeted delivery of proteins for the treatment of cancer
CN104662000B (zh) 2012-05-15 2018-08-17 索伦托医疗有限公司 药物偶联物及其偶联方法和用途
WO2014009774A1 (en) 2012-07-12 2014-01-16 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd Conjugates of cell binding molecules with cytotoxic agents
EP2708243A1 (en) 2012-09-17 2014-03-19 OntoChem GmbH Receptor ligand linked cytotoxic molecules
US20140107316A1 (en) 2012-10-16 2014-04-17 Endocyte, Inc. Drug delivery conjugates containing unnatural amino acids and methods for using
CA2887727A1 (en) 2012-10-16 2014-04-24 Endocyte, Inc. Drug delivery conjugates containing unnatural amino acids and methods for using
HK1211493A1 (en) 2012-11-15 2016-05-27 恩多塞特公司 Conjugates for treating diseases caused by psma expressing cells
JP6133431B2 (ja) 2012-11-24 2017-05-24 ハンジョウ ディーエーシー バイオテック シーオー．，エルティディ．Ｈａｎｇｚｈｏｕ Ｄａｃ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃｏ．，Ｌｔｄ． 親水性連結体及び薬物分子と細胞結合分子との共役反応における親水性連結体の使用
US20140154702A1 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Endocyte, Inc. Methods For Treating Cancer Using Combination Therapies
TWI716339B (zh) 2012-12-21 2021-01-21 荷蘭商台醫（有限合夥）公司 親水性自消耗連接子及彼等之共軛物
SI2956173T1 (sl) 2013-02-14 2017-06-30 Bristol-Myers Squibb Company Spojine tubulizina, postopki pridobivanja in uporaba
US20140249315A1 (en) 2013-03-01 2014-09-04 Endocyte, Inc. Processes for preparing tubulysins

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