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MX2015003033A - Compuestos de bis(floroalquil)-1,4-benzodiazepinona como inhibidores de notch. - Google Patents

Compuestos de bis(floroalquil)-1,4-benzodiazepinona como inhibidores de notch.

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MX2015003033A
MX2015003033A MX2015003033A MX2015003033A MX2015003033A MX 2015003033 A MX2015003033 A MX 2015003033A MX 2015003033 A MX2015003033 A MX 2015003033A MX 2015003033 A MX2015003033 A MX 2015003033A MX 2015003033 A MX2015003033 A MX 2015003033A
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MX
Mexico
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trifluoropropyl
oxo
dihydro
benzodiazepin
succinamide
Prior art date
Application number
MX2015003033A
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MX367474B (es
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Brian E Fink
Yufen Zhao
Ashvinikumar V Gavai
George V Delucca
Daniel O'malley
Patrice Gill
Claude A Quesnelle
Francis Y Lee
Original Assignee
Squibb Bristol Myers Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
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First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=49263506&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=MX2015003033(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Squibb Bristol Myers Co filed Critical Squibb Bristol Myers Co
Publication of MX2015003033A publication Critical patent/MX2015003033A/es
Publication of MX367474B publication Critical patent/MX367474B/es

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Abstract

La presente invención se refiere a compuestos de la Fórmula (I) y/o sus sales: (ver Fórmula) en donde R1 es -CH2CH2CF3 R2 es -CH2CH2CF3 o -CH2CH2CH2CF3 R3 es H, -CH3 o Rx; R4 es H o Ry; el anillo A es fenilo o piridinilo; y Rx, Ry, Ra, Rb, y e z son como se definen en la presente. También se describen métodos para usar tales compuestos con el fin de inhibir el receptor de Notch, y composiciones farmacéuticas que comprenden tales compuestos. Estos compuestos son útiles para el tratamiento, la prevención o el enlentecimiento de la progresión de enfermedades o trastornos en varias áreas terapéuticas, tales como el cáncer; o como profármacos de tales compuestos.

Description

COMPUESTOS DE BIS(FLUOROALQUIL)-1,4-BENZODIAZEPINONA COMO INHIBIDORES DE NOTCH Campo de la Invención La presente invención se refiere, en general, a compuestos de benzodiazepinona útiles como inhibidores de Notch. La invención también se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden al menos un compuesto de conformidad con la invención que es útil para el tratamiento de afecciones relacionadas con la trayectoria de Notch, tales como el cáncer y otras enfermedades proliferativas.
Antecedentes de la Invención La señalización de Notch ha sido implicada en diversos procesos celulares, tales como descripción, diferenciación, proliferación, apoptosis y angiogénesis del destino celular. (Bray, Nature Reviews Molecular Cell Biology, 7:678-689 (2006); Fortini, Developmental Cell 16:633-647 (2009)). Las proteínas Notch son moléculas transmembranales heterodiméricas de una sola pasada. La familia Notch incluye 4 receptores, NOTCH 1-4, que se activan luego de la fijación a ligandos de la familia DSL (similares a Delta 1, 3, 4, y Dentado 1 y 2).
La activación y maduración de NOTCH requiere de una serie de etapas de procesamiento, incluida una etapa de escisión proteolítica mediada por gamma Secretasa, un REF.:254912 complejo de multiproteínas que contiene Presenilina 1 o Presenilina 2, nicastrina, APH1 y PEN2. Cuando NOTCH se escinde, el dominio intracelular de NOTCH (NICD, por sus siglas en inglés) se libera de la membrana. El NICD liberado se trasloca al núcleo, donde funciona como un activador transcripcional junto con los miembros de la familia CSL (RBPSUH, "supresor de hairless" y LAG1). Los genes objetivo de NOTCH incluyen miembros de la familia HES, tales como HES-1. HES-1 funciona como un represor transcripcional de genes, tales como HERP1 (también conocido como HEY2), HERP2 (también conocido como HEY1) y HATH1 (también conocido como AT0H1).
La activación anómala de la trayectoria de Notch contribuye a la tumorigénesis. La activación de la señalización de Notch está involucrada en la patogénesis de varios tumores sólidos, que incluyen el de ovarios, páncreas y mama, y tumores hematológicos, tales como leucemias, linfomas y mieloma múltiple. La función de la inhibición de Notch y su utilidad en el tratamiento de varios tumores sólidos y hematológicos se describen en Miele, L. et al., Current Cáncer Drug Targets, 6:313-323 (2006); Bolos, V. et al., Endocrine Reviews , 28:339-363 (2007); Shih, I-M. et al., C ncer Research, 67:1879-1882 (2007); Yamaguchi, N. et al., Cáncer Research, 68:1881-1888 (2008); Miele, L., Expert Review Anti -cancer Therapy, 8:1197-1201 (2008); Purow, B., Current Pharmac eut i cal Biotechnology , 10:154-160 (2009); Nefedova, Y. et al., Drug Resistance Updates, 11:210-218 (2008); Dufraine, J. et al., Oncogene, 27:5132-5137 (2008); y Jun, H.T.et al., Drug Development Research, 69:319-328 (2008).
Aún es necesario obtener compuestos que sean útiles como inhibidores de Notch y que tengan una suficiente estabilidad metabólica para proporcionar niveles eficaces de exposición al fármaco. Además, aún es necesario obtener compuestos útiles como inhibidores de Notch que se puedan administrar al paciente por via oral o intravenosa.
La patente estadounidense No.7,053,084 B1 describe compuestos de succinoilamino benzodiazepina útiles para tratar trastornos neurológicos, tales como la enfermedad de Alzheimer. La referencia describe que estos compuestos de succinoilamino benzodiazepina inhiben la actividad gamma secretasa y el procesamiento de la proteína precursora de amiloide ligada a la formación de depósitos neurológicos de proteína amiloide.
Los solicitantes descubrieron compuestos potentes que tienen actividad como inhibidores de Notch y suficiente estabilidad metabólica para brindar niveles eficaces de exposición al fármaco con la administración oral o intravenosa. Estos compuestos se proporcionan por ser de utilidad como compuestos farmacéuticos con valores deseables de estabilidad, biodisponibilidad, índice terapéutico y toxicidad, que son importantes para su accesibilidad a fármacos.
Breve Descripción de la Invención La presente invención satisface la necesidad anterior, dado que proporciona compuestos de bis(fluoroalquil)1,4-benzodiazepinona que son útiles como inhibidores selectivos de la trayectoria de señalización de Notch, incluidos sus profármacos.
La presente invención también proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden un portador farmacéuticamente aceptable; y al menos un compuesto de la Fórmula (I).
La presente invención también proporciona un método para tratar una enfermedad o trastorno asociados a la actividad del receptor de Notch, en donde el método comprende administrar a un paciente mamífero al menos un compuesto de la Fórmula (I).
La presente invención también proporciona procesos e intermediarios para obtener los compuestos de la Fórmula (I)· La presente invención también proporciona los compuestos de la Fórmula (I) para usarse en terapia.
La presente invención también proporciona el uso de los compuestos de la Fórmula (I) para manufacturar un medicamento para el tratamiento del cáncer.
Los compuestos de la Fórmula (I) y las composiciones que comprenden los compuestos se pueden usar para el tratamiento, la prevención o la cura de varias afecciones relacionadas con el receptor de Notch. Las composiciones farmacéuticas que comprenden estos compuestos son útiles para el tratamiento, la prevención o el enlentecimiento de la progresión de enfermedades o trastornos en varias áreas terapéuticas, como el cáncer.
Se expondrán en forma amplia estas y otras características de la invención en toda la descripción.
Breve Descripción de las Figuras La invención se ilustra con referencia a los dibujos adjuntos que se describen a continuación.
La Figura 1 muestra la eficacia antitumoral del Ejemplo 1 contra la leucemia linfoblástica aguda de linfocitos T humana TALL1. Las dosis se administraron por vía oral en los días indicados con ( ); PO, QDxlO. Cada símbolo representa la carga tumoral mediana de un grupo de 8 ratones. (·) control; (O) Ejemplo 1, 0.625 mg/kg/adm; (¦) Ejemplo 1, 1.25 mg/kg/adm; (?) Ejemplo 1, 2.5 mg/kg/adm; (A) Ejemplo 1, 10 mg/kg.
La Figura 2 muestra la eficacia antitumoral del Ejemplo 1 en el carcinoma de mama humano MDA-MB-157. Las dosis se administraron por vía oral en los días indicados con ( ); PO, BID x 15 (10 días de administración; 2 días de reposo; 5 días de administración). Cada símbolo representa la carga tumoral mediana de un grupo de 8 ratones. (·) control; (¨) Ejemplo 1, 2.5 mg/kg/adm, BID; (?) Ejemplo 1, 5 mg/kg/adm, BID; (A) Ejemplo 1, 7.5 mg/kg/adm, BID.
La Figura 3 muestra la eficacia antitumoral del Ejemplo 1 en el carcinoma de mama humano MDA-MB-157. Las dosis se administraron por vía oral en los días indicados con ( ); PO, QD x 15 (10 días de administración; 2 días de reposo; 5 días de administración). Cada símbolo representa la carga tumoral mediana de un grupo de 8 ratones. (·) control; (O) Ejemplo 1, 5 mg/kg/adm, QD; (A) Ejemplo 1, 10 mg/kg/adm, QD; (?) Ejemplo 1, 20 mg/kg/adm, QD.
La Figura 4 muestra la eficacia antitumoral del Ejemplo 3 contra la leucemia linfoblástica aguda de linfocitos T humana TALL1. Las dosis se administraron por vía oral en los días indicados con ( ); PO, QDxlO. Cada símbolo representa la carga tumoral mediana de un grupo de 8 ratones. (·) control; (O) Ejemplo 1, 0.625 mg/kg/adm; (¦) Ejemplo 1, 1.25 mg/kg/adm; (?) Ejemplo 1, 2.5 mg/kg/adm; (A) Ejemplo 1, 10 mg/kg.
La Figura 5 muestra la eficacia antitumoral del Ejemplo 1 en el carcinoma de mama triple negativo humano HCC-1599 con traslocación de Notch 1. Las dosis se administraron por vía oral en los días indicados con ( ); PO, QD x 15 (10 días de administración; 2 días de reposo; 5 días de administración). Cada símbolo representa la carga tumoral mediana de un grupo de 8 ratones. (·) control; (¨) Ejemplo 1, 5 mg/kg/adm, QD; (?) Ejemplo 1, 10 mg/kg/adm, QD; (?) Ejemplo 1, 20 mg/kg/adm, QD.
Figura 6 muestra la eficacia antitumoral sinérgica mediante la quimioterapia combinada con el Ejemplo 1 y Paclitaxel en el carcinoma de mama humano MDA-MB-468. Cada símbolo representa la carga tumoral mediana de un grupo de 8 ratones. (·) control; (¨) Paclitaxel, 12 mg/kg/adm, Q7D x 3, IV; (?) Ejemplo 1, 2.5 mg/kg/adm, PO, BID x 15 (10 días de administración; 2 días de reposo; 5 días de administración); (¦) Ejemplo 1, 5 mg/kg/adm, PO, BID x 15 (10 días de administración; 2 días de reposo; 5 días de administración); (?) combinación de Paclitaxel y Ejemplo 1, 2.5 mg/kg/adm; (D) combinación de Paclitaxel y Ejemplo 1, 5 mg/kg/adm.
Descripción Detallada de la Invención El primer aspecto de la presente invención proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I): (I) y/o al menos una sal del mismo; en donde: Ri es -CH2CH2CF3; R2 es -CH2CH2CF3 o -CH2CH2CH2CF3; R3 es H, -CH3 o Rx; R4 es H o Ry ; Rx es -CH2OC(O) CH(CH3)NH2/ -CH2OC (0) CH (NH2 ) CH (CH3 ) 2 , CH2OC (0) CH ( (CH (CH3) 2) NHC (0) CH (N¾) CH (CH3) 2 , H3C -CH20C(O)CH2C(CH3)2 -CH20C(0)CH2— V-0P(0)(0H)2 (H0)2(0) -P-CH, Ry es -SCH2CH(NH2) C(0)0H, -SCH2CH (NH2) C (0) 0CH3 o -SCH2CH(NH2)C(0)0C(CH3)3; El anillo A es fenilo o piridinilo; cada Ra es independientemente C1, alquilo C1-3, CH2OH, -CF3, ciclopropilo, -OCH3 y/u -0 (ciclopropilo); cada Rb es independientemente F, Cl, -CH3í -CH20H, - CF3, ciclopropilo y/u -0CH3; y es O, 1 o 2; y z es 0, 1 o 2; siempre que si el anillo A es fenilo y z es 0, entonces y es 1 o 2 y al menos un Ra es alquilo C1-3, -CF3, ciclopropilo u -0 (ciclopropilo); siempre que si R3 es Rx, entonces R4 es H; y siempre que si R4 es Ry, entonces R3 es H o -CH3.
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I), en donde R3 es H o -CH3; R4 es H; y Ri, R2, el anillo A, Ra, Rb, y, y z se definen en el primer aspecto. Esta modalidad incluye los compuestos de la Fórmula (II), en donde R3 es H y R4 es H: (II) y los compuestos de la Fórmula (III), en donde R3 es -CH3 y ¾ es H: (III).
Los compuestos de la Fórmula (II) y la Formula (III) son útiles como inhibidores selectivos de la trayectoria de señalización de Notch.
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, en donde (i) R3 es Rx y R4 es H; o (ii) R4 es Ry y R3 es H o -CH3; y Ri, R2, el anillo A, Ra, Rb, Rx, Ry, y, y z se definen en el primer aspecto. Esta modalidad incluye los compuestos de la Fórmula (IV), en donde R3 es Rx y R4 es H: (iv) y los compuestos de la Fórmula (V), en donde R4 es Ry y R3 es H o -CH3: (V).
Los compuestos de esta modalidad son útiles como profármacos de los compuestos de la Fórmula (II) y la Formula (III)· Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (IV) y/o al menos una sal del mismo, en donde R3 es Rx y R4 es H; y Ri, R2, Rx, el anillo A, Ra, Rb, y, y z se definen en el primer aspecto. Esta modalidad incluye compuestos en donde el anillo A es fenilo. Los compuestos de esta modalidad son útiles como profármacos de los compuestos de la Fórmula (II) y la Formula (III).
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (V) y/o al menos una sal del mismo, en donde R4 es Ry y R3 es H o -CH3; y Ri, R2, Ry, el anillo A, Ra, Rb, y, y z se definen en el primer aspecto. Esta modalidad incluye compuestos en donde R3 es H y el anillo A es fenilo. Esta modalidad también incluye compuestos en donde R3 es -CH3 y el anillo A es fenilo. Los compuestos de esta modalidad son útiles como profármacos de los compuestos de la Fórmula (II) y la Formula (III).
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, en donde el anillo A es fenilo; y Ri, R2, R3, R4, RX, Ry, Ra, Rb, y, y z se definen en el primer aspecto. Esta modalidad incluye compuestos en donde R3 es H. Esta modalidad también incluye compuestos en donde R3 es H y z es 1 o 2.
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I), en donde el anillo A es fenilo; R3 es H o CH3; R4 es H; y Ri, R2, Ra, Rb, y, y z se definen en el primer aspecto. Esta modalidad incluye compuestos en donde R3 es H. Esta modalidad también incluye compuestos en donde R3 es H y z es 1 o 2.
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, en donde R2 es -CH2CH2CF3; y Ri, R3, R4, el anillo A, Rx, Ry, Ra, Rb, y, y z se definen en el primer aspecto. Esta modalidad incluye compuestos en donde el anillo A es fenilo. Esta modalidad también incluye compuestos en donde z es 1 o 2.
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, en donde R2 es -CH2CH2CH2CF3; y Ri, R3, R4, el anillo A, Ra, Rb, y, y z se definen en el primer aspecto. Esta modalidad incluye compuestos en donde el anillo A es fenilo. Esta modalidad también incluye compuestos en donde z es 1 o 2.
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, en donde el anillo A es piridinilo; y Ri, R2, R3, R4, Ra, Rb, y, y z se definen en el primer aspecto. Esta modalidad incluye compuestos en donde R3 es H. Esta modalidad también incluye compuestos en donde R3 es H y z es 1 o 2.
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, en donde R2 es -CH2CH2CF3; el anillo A es fenilo; Ra es alquilo Ci-3 o -CH2OH; cada Rb es independientemente F y/o Cl; y es 1; z es 1 o 2; y Ri, R3 y R4 se definen en el primer aspecto.
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, en donde y es 1, z es 1 o 2, y Ri, R2, R3, R4, el anillo A, Ra y Rb se definen en el primer aspecto. Esta modalidad incluye compuestos en donde el anillo A es fenilo. Esta modalidad también incluye compuestos en donde el anillo A es fenilo y z es 1.
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, que tiene la estructura: en donde : Ri es -CH2CH2CF3; R2 es -CH2CH2CF3 o -CH2CH2CH2CF3; R3 es H, -CH3 o Rx ; R4 es H o Ry ; Rx es: -CH20C(0)CH(CH3)NH2, -OfcOCÍO) CH (NH2) OKCHs) 2 CH2OC (0) CH ( (CH (CH3) 2 ) NHC ( 0 ) CH ( H2 ) CH ( CH3 ) 2 , Ry es: -SCH2CH(NH2) C(0)0H, -SCH2CH (NH2) C (0) 0CH3 O SCH2CH (NH2 ) C ( 0 ) OC ( CH3 ) 3 ; Ra es Cl, -CH3/ -CH(CH3)2, -CH20H, CF3, ciclopropilo, -OCH3 u -O (ciclopropilo); cada Rb es independientemente F, Cl, -CH20H, CF3 ciclopropilo y/u -OCH3; y es 0 o 1; z es 0, 1 o 2; siempre que si z es 0, entonces y es 1 y Ra es -CH3, -CH2OH, -CF3, ciclopropilo u -0(ciclopropilo). En esta modalidad se incluyen compuestos en donde y es 1; y z es 0, 1 0 2. Esta modalidad tambien incluye compuestos en donde y es 1 y z es 1.
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, que tiene la estructura: en donde Ri, R2, R3, R4, Ra y Rb se definen en el primer aspecto. Esta modalidad incluye compuestos en donde Ra es Cl, -CH2OH o alquilo C1-3, y R es F, Cl, -CH3, -CF3/ ciclopropilo u -OCH3. Esta modalidad también incluye compuestos en donde Ra es metilo, y Rb es F, Cl o CF3.
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, que tiene la estructura: en donde Ra es alquilo Ci-3; Rb es F o Cl; y Ri, R2, R3 y R4 se definen en el primer aspecto. Esta modalidad incluye compuestos en donde R2 es -CH2CH2CF3. Esta modalidad también incluye compuestos en donde R2 es -CH2CH2CF3, Ra es metilo, y Rb es F o Cl.
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, que tiene la estructura: en donde y es 0, y Ri, R2, R3, R¾ y Rb se definen en el primer aspecto. Esta modalidad incluye compuestos en donde Rb es -CH3, -CH2OH u -OCH3. Esta modalidad también incluye compuestos en donde R3 es H o -CH3, y R4 es H.
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, que tiene la estructura: en donde R3 y R4 se definen en el primer aspecto. Esta modalidad incluye compuestos en donde R3 es H o -CH3, y R4 es H.
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, que tiene la estructura: en donde R3 es H, -CH3 o Rx, en donde Rx se define en el primer aspecto. Esta modalidad también incluye compuestos en donde R3 es Rx.
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, que tiene la estructura: en donde R3 es H o -CH3, y Ry se define en el primer aspecto. Esta modalidad incluye compuestos en donde R3 es H. Esta modalidad también incluye compuestos en donde R3 es -CH3.
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, que tiene la estructura: en donde Ra es -CH3 o -CH2OH; R3 es H o -CH3, y Ry se define en el primer aspecto. Esta modalidad incluye compuestos en donde R3 es H. Esta modalidad también incluye compuestos en donde R3 es -CH3.
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o una sal del mismo, que tiene la estructura: en donde R3 es H o Rx; R4 es H o Ry; siempre que si R3 es RX entonces R4 es H; y siempre que si R4 es Ry, entonces R3 es H; y en donde Rx y Ry se definen en el primer aspecto.
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I) que tiene la estructura: en donde R3 es H o -CH3.
Una modalidad proporciona un compuesto Fórmula (I) que tiene la estructura: Una modalidad proporciona un compuesto de la Fórmula (I) que tiene la estructura: o un compuesto de la Fórmula (I) que tiene una estructura: o cualquier mezcla de los dos compuestos.
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o una sal del mismo, que tiene la estructura: en donde Rx se define en el primer aspecto.
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o una sal del mismo, que tiene la estructura: en donde R es H o -CH3 ; y Ry se define en el primer aspecto.
Una modalidad proporciona una composición que comprende: (i) al menos un compuesto de la Fórmula (I) que tiene la estructura: y/o una sal del mismo; (ii) un compuesto de la Fórmula (I) que tiene la estructura: . o (iii) una mezcla de (i) y (ii); en donde R3 es H o Rx; R4 es H o Ry; siempre que si R3 es Rx, entonces R4 es H; y siempre que si R4 es Ry, entonces R3 es H; y en donde Rx y Ry se definen en el primer aspecto.
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o una sal del mismo, que tiene la estructura: en donde R3 es H o Rx; R4 es H o Ry; siempre que si R3 es Rx, entonces R4 es H; y siempre que si R4 es Ry, entonces R3 es H; y en donde Rx y Ry se definen en el primer aspecto. Esta modalidad incluye compuestos en donde R3 es H o -CH3; y R4 es H. Esta modalidad también incluye compuestos en donde R3 es H y R4 es H.
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, en donde Ri, R2, R3, R4, el anillo A, Ra, Rb, y, y z se definen en el primer aspecto, y siempre que si el anillo A es fenilo y z es 0, entonces y es 1 o 2, y al menos un Ra es metilo, isopropilo, -CH2OH, ciclopropilo y/u -0(ciclopropilo).
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, en donde R3 es H; y Ri, R2, R4, Ra, Rb, y, y z se definen en el primer aspecto. Esta modalidad incluye compuestos en donde R3 es deuterio (D) o tritio (T). Esta modalidad también incluye compuestos en donde R2 es -CH2CH2CF3.
Una modalidad proporciona al menos compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, en donde R3 es -CH3; y Ri, R2, R4, Ra, Rb, y, y z se definen en el primer aspecto. R3 incluye grupos metilo en donde uno o más átomos de hidrógeno se sustituyen de manera isotópica con deuterio (D) y/o tritio (T). En un ejemplo de esta modalidad, R3 es -CD3. Esta modalidad también incluye compuestos en donde R2 es -CH2CH2CF3.
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, en donde Ri, 2, R3, R4, el anillo A, Ra, Rb, y, y z se definen en el primer aspecto, siempre que el compuesto de la Fórmula (I) o la sal del mismo no sean: Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I) en donde R3 es H o -CH3; R4 es H; Ri, R2, el anillo A, Ra, Rb, y, y z se definen en el primer aspecto, siempre que el compuesto de la Fórmula (I) no sea Una modalidad proporciona un compuesto de la Fórmula (I) seleccionado de: (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil- -oxo-2,3-dihidro-IH-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (1); (2R,3S)- N-((3S)-5-(3-clorofenil)-9-etil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (2); (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-clorofenil)-9-isopropil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (3); (2R,3S)-N-(9-cloro-5-(3,4-dimetilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (4); (2R,3S)-N-(9-cloro-5(3,5-dimetilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-lH-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4, -trifluorobutil)- 2-(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (5); (2R,3S)-N-((3S)-9-etil-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-lH-l,4-benzodiazepin- 3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (6); (2R,3S)- N-( (3S)-5-(3-clorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida(7); (2R,3S)-N-((3S)-5-(3- clorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-IH-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (8); (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-metilfenil)-2-oxo-9-(trifluorometil)-2,3-dihidro-1H-l,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (9); (2R,3S)-N-((3S)-9-cloro-5(3,5-dimetilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (10); (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-metilfenil)-2-oxo-9-(trifluorometil)-2,3-dihidro-lH-l,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (11); (2R,3S)-N-((3S)-9-isopropil-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (12); (2R,3S)-N-((3S)-9-isopropil-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro- 1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (13); (2R,3S)-N-((3S)-9- (ciclopropiloxi)-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (14); (2R,3S)-N-((3S)-9- (ciclopropiloxi)-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-lH-l,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (15); (2R,3S)-N-((3S)-9-(ciclopropiloxi)-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (16); (2R,3S)-N-((3S)-9-cloro-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4- benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (17); (2R,3S)-N-((3S)-9-metil-2-oxo-5- (3-(trifluorometil)fenil)-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (18); (2R,3S)-N-((3S)-9- (ciclopropiloxi)-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro-lH-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (19); (2R,3S)-N-((3S)-9-metil-2-oxo-5-(3- (trifluorometil)fenil)-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis (3,3,3-trifluoropropil)succinamida (20); (2R,3S)- N-((3S)-9-cloro-5-(2-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (21); (2R,3S)-N-((3S)-5-(4-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-lH-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (22); (2R,3S)-N-((3S)-9-metil-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis (3,3,3-trifluoropropil)succinamida (23); (2R,3S)-N-((3S)- 9-ciclopropil-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis (3,3,3-trifluoropropil)succinamida (24); (2R,3S)-N-((3S)-9-cloro-5- (3-ciclopropilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-lH-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (25); (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-clorofenil)-9-metoxi-2-oxo-2,3-dihidro-lH-l,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis (3,3,3-trifluoropropil)succinamida (26); (2R,3S)-N-((3S)-5-(4-clorofenil)-9-metoxi-2-oxo-2,3-dihidro- 1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (27); (2R,3S)-N-((3S)-9-cloro-5- (3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)- 2.3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (28); (2R,3S)-N- ( (3S)-5-(3-metilfenil)-9-metoxi-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (29); (2R,3S)-N-((3S)-5-(4-(hidroximetil)fenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (30); (2R,3S)-N-((3S)-5-(2-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-lH-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (31); (2R,3S)-N-((3S)- 5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-IH-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (32); (2R,3S)- N-((3S)-9-metoxi-2-oxo-5-(5-(trifluorometil)-2-piridinil)- 2.3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (33); (2R,3S)-N-((3S)-5-(5-cloro- 2-piridinil)-9-metoxi-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin- 3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (34); (2R,3S)-N-((3S)-5-(4-metoxifenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (35); (2R,3S)-N-((3S)-5-(4-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H- 1.4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (36); (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-(hidroximeti1)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (37); L-valinato de ((3S)-3-(((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-l,4-benzodiazepin- 1-il)metilo (38); L-alaninato de ((3S)-3-(((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-1-il)metilo (39); S-(((2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3-(((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil- 2-oxo-2,3-dihidro-lH-l,4-benzodiazepin-3-il)carbamoil)-2- (3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-L-cisteína (40); S-(((2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3-(((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil- 2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)carbamoil)-2- (3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-L-cisteinato de tere-butilo (41); S- (((2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3-(((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-lH-l,4-benzodiazepin- 3-il)carbamoil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-L-cisteinato de metilo (42); (4-(fosfonooxi)fenil)acetato de ( (3S)-3-(((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-lH-l,4-benzodiazepin-1-il)metilo (43); L-valil-L-valinato de ((3S)-3-(((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-lH-l,4-benzodiazepin-l-il)metilo (44); y sales de los mismos.
Una modalidad proporciona un compuesto de la Fórmula (I) seleccionado de: (2R,3S)-N-((3S)-5-(3 fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (1); L valinato de ((3S)-3-(((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6-trifluoro-2 (3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-1-il)metilo (38); L-alaninato de ((3S)-3-(((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6 trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-1-il)metilo (39); S-(((2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3-(((3S)-5-(3 fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)carbamoil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-L-cisteína (40); S- (((2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3-(((3S)-5-(3 fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)carbamoil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-L-cisteinato de tere-butilo (41); S-(((2S,3R)-6,6,6-trifluoro 3- (((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)carbamoil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)mino) -L-cisteinato de metilo (42) (4-(fosfonooxi)fenil)acetato de ((3S)-3-(((2R,3S)-3 carbamoil-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-l-il)metilo (43); L valil-L-valinato de ((3S)-3-(((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6 trifluoro-2- (3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3- fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-l,4-benzodiazepin-l-il)metilo (44); y sales de los mismos.
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I), en donde R3 es H o -CH3; y R4 es H; en donde el compuesto de la Fórmula (I) tiene un valor de vida útil metabólica de al menos 45 minutos, medido en el ensayo de vida útil de estabilidad metabólica humana que se describe en la presente.
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I), en donde R3 es H o -CH3; y R4 es H; en donde el compuesto de la Fórmula (I) tiene un valor de vida útil metabólica de al menos 60 minutos, medido en el ensayo de vida útil de estabilidad metabólica humana que se describe en la presente.
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I), en donde R3 es H o -CH3; y R4 es H; en donde el compuesto de la Fórmula (I) tiene un valor de vida útil metabólica de al menos 70 minutos, medido en el ensayo de vida útil de estabilidad metabólica humana que se describe en la presente.
La presente invención se puede realizar en otras formas específicas sin apartarse del espíritu ni de sus atributos esenciales. Esta invención abarca todas las combinaciones de los aspectos y/o modalidades de la invención expuestas en la presente. Cabe destacar que todas las modalidades de la presente invención pueden tomarse en conjunto con cualquier otra modalidad, a fin de describir la adición de más modalidades. Asimismo, cabe destacar que cada elemento individual de las modalidades tiene como fin que se lo combine con cualquier otro elemento de cualquiera de las modalidades para describir una modalidad adicional.
DEFINICIONES Las características y ventajas de la invención pueden comprenderlas con más facilidad los expertos en la téenica mediante la lectura de la siguiente descripción detallada. Debe tenerse en cuenta que ciertas características de la invención que, a fin de que resulten más claras, se describen más atrás y más adelante en el contexto de modalidades separadas, también pueden combinarse para formar una sola modalidad. Por otra parte, varias características de la invención que, a fin de expresar brevedad, se describen en el contexto de una sola modalidad, también se pueden combinar, a fin de formar subcombinaciones de estas. Las modalidades identificadas en la presente como de ejemplo o de preferencia tienen como objetivo ser ilustrativas y no limitativas.
A menos que en la presente se establezca específicamente lo contrario, las referencias en singular también pueden incluir el plural. Por ejemplo, "un" puede referirse a uno o más de uno.
A menos que se indique lo contrario, debe asumirse que cualquier heteroátomo con valencias insatisfechas tiene suficientes átomos de hidrógeno como para satisfacer las valencias.
Las definiciones que se establecen en la presente prevalecerán sobre las definiciones en cualquier otra patente, solicitud de patente y/o publicación de solicitud de patente incorporada en la presente como referencia.
A continuación, se enumeran definiciones sobre varios términos usados para describir la presente invención. Estas definiciones se aplican a los términos como se usan en toda la descripción (a menos que se limiten en momentos específicos), ya sea individualmente o como parte de un grupo más grande.
En toda la descripción, el experto en la téenica puede elegir los grupos y sus sustituyentes, para proporcionar compuestos y porciones estables.
Los términos "halo" y "halógeno", como se usan en la presente, se refieren a F, Cl, Br o I.
El término "alquilo", como se usa en la presente, se refiere a grupos de hidrocarburo alifáticos saturados de la cadena lineal o ramificada que contienen, por ejemplo, de 1 a 12 átomos de carbono, de 1 a 6 átomos de carbono y de 1 a 4 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos de alquilo incluyen, entre otros, metilo (Me), etilo (Et), propilo (por ejemplo, n-propilo e i-propilo), butilo (por ejemplo, n-butilo, i-butilo, sec-butilo y t-butilo) y pentilo (por ejemplo, n-pentilo, isopentilo, neopentilo), n-hexilo, 2-metilopentilo, 2-etilobutilo, 3-metilopentilo y 4-metilpentilo. Cuando aparezcan números en superíndice después del símbolo "C", el superíndice define con mayor especificidad la cantidad de átomos de carbono que un grupo particular puede contener. Por ejemplo, "alquilo C1-3" indica grupos alquilo de cadena lineal o ramificada con 1 a 3 átomos de carbono.
La frase "farmacéuticamente aceptable" se emplea en la presente para referirse a los compuestos, los materiales, las composiciones y/o las formas de dosificación que, dentro del alcance del criterio médico sensato, son adecuados para usar en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin provocar excesiva toxicidad, irritación, reacción alérgica ni otros problemas o complicaciones proporcionales con una relación riesgo/beneficio razonable.
Los compuestos de la Fórmula (I) pueden formar sales que también se encuentran dentro del alcance de la presente invención. A menos que se indique lo contrario, la referencia a un compuesto de la invención pretende incluir la referencia a una o más sales de aquel. El término "sal(es)" indica sales ácidas y/o básicas formadas con ácidos y bases orgánicas y/o inorgánicas. Además, el término "sal(es)" puede incluir zwitteriones (sales internas), por ejemplo, cuando un compuesto de la Fórmula (I) contiene una porción básica, tal como una amina o un anillo de piridina o imidazol, y una porción ácida, tal como un ácido carboxílico. Se prefieren sales farmacéuticamente aceptables (es decir, sales no tóxicas fisiológicamente aceptables), por ejemplo, sales de metal y de amina aceptables en donde el catión no contribuye considerablemente a la toxicidad ni a la actividad biológica de la sal. Sin embargo, otras sales también pueden ser útiles, por ejemplo, en las etapas de aislamiento o purificación que se pueden usar durante la preparación y, por ello, están contempladas dentro del alcance de la invención. Las sales de los compuestos de la Fórmula (I) se pueden formar, por ejemplo, mediante la reacción de un compuesto de la Fórmula (I) con una cantidad de ácido o base, tal como una cantidad equivalente, en un medio, tal como uno en el que la sal precipita o en un medio acuoso, y la posterior liofilización.
Las sales de adición ácida de ejemplo incluyen acetatos (tales como los que se forman con ácido acético o ácido trihaloacético, por ejemplo, ácido trifluoroacético), adipatos, alginatos, ascorbatos, aspartatos, benzoatos, bencensulfonatos, bisulfatos, boratos, butiratos, citratos, camforatos, camforsulfonatos, ciclopentanpropionatos, digluconatos, dodecilsulfatos, etansulfonatos, fumaratos, glucoheptanoatos, glicerofosfatos, hemisulfatos, heptanoatos, hexanoatos, clorhidratos (formados con ácido clorhídrico), bromhidratos (formados con bromuro de hidrógeno) , yodhidratos, maleatos (formados con ácido maleico), 2-hidroxietansulfonatos, lactatos, metansulfonatos (formados con ácido metansulfónico), 2-naftalensulfonatos, nicotinatos, nitratos, oxalatos, pectinatos, persulfatos, 3-fenilpropionatos, fosfatos, picratos, pivalatos, propionatos, salicilatos, succinatos, sulfatos (tales como los que se forman con ácido sulfúrico), sulfonatos (tales como los que se mencionan en la presente), tartratos, tiocianatos, toluensulfonatos, tales como tosilatos, undecanoatos y similares.
Los ejemplos de sales básicas incluyen sales de amonio, sales de metales álcali, tales como sales de sodio, litio y potasio, sales de metales alcalinotérreos, tales como sales de calcio y magnesio; sales de bario, zinc y aluminio; sales con bases orgánicas (por ejemplo, aminas orgánicas), tales como trialquilaminas, tales como trietilamina, procaína, dibencilamina, N-bencil- -fenetilamina, 1-efenamina, N,N' -dibenciletilen-diamina, dehidroabietilamina, N-etilpiperidina, bencilamina, diciclohexilamina o aminas y sales similares farmacéuticamente aceptables con aminoácidos, tales como arginina, lisina y similares. Los grupos que contienen nitrógeno básico se pueden cuaternizar con agentes, tales como haluros de alquilo inferior (por ejemplo, cloruros, bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo y butilo), sulfatos de dialquilo (por ejemplo, sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo y diamilo), haluros de cadena larga (por ejemplo, cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo y estearilo), haluros de aralquilo (por ejemplo, bromuros de bencilo y fenetilo), y otros. Las sales preferidas incluyen sales de monoclorhidrato, hidrogensulfato, metansulfonato, fosfato o nitrato.
Los compuestos de la Fórmula (I) pueden proporcionarse como sólidos amorfos o sólidos cristalinos. Puede emplearse la liofilización para proporcionar los compuestos de la Fórmula (I) como un sólido.
Además, cabe destacar que los solvatos (por ejemplo, hidratos) de los compuestos de la Fórmula (I) también se encuentran dentro del alcance de la presente invención. El término "solvato" significa una asociación física de un compuesto de la Fórmula (I) con una o más moléculas solventes, orgánicas o inorgánicas. Esta asociación física incluye la unión al hidrógeno. En ciertos casos, el solvato es capaz de aislarse, por ejemplo, cuando una o más moléculas solventes se incorporan en la red cristalina del sólido cristalino. El "solvato" abarca tanto solvatos en fase de solución como solvatos que se pueden aislar. Los solvatos de ejemplo incluyen hidratos, etanolatos, metanolatos, isopropanolatos, solvatos de acetonitrilo y solvatos de acetato de etilo. Los métodos de solvatación son conocidos en el estado de la téenica.
Todo compuesto que pueda convertirse in vivo para proporcionar el agente bioactivo (es decir, el compuesto de la Fórmula (I)) es un profármaco dentro del alcance y espíritu de la invención. Los compuestos de la Fórmula (I) en donde R3 es Rx o R4 es Ry son útiles como profármacos de los compuestos de la Fórmula (I), en donde R3 es H o -CH3, y R4 es H.
En el estado de la técnica, se conocen varias formas de profármacos, y estas se describen en: a) Wermuth, C.G. et al., The Practice of Medicinal Chemistry, capítulo 31, Academic Press (1996); b) Bundgaard, H. ed., Design of Prodrugs, Elsevier (1985); c) Bundgaard, H., capítulo 5, "Design and Application of Prodrugs", Krosgaard-Larsen, P. et al., eds., ? Textbook of Drug Design and Developmen t, pp. 113-191, Harwood Academic Publishers (1991); y d) Testa, B. et al., Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism, Wilcy-VCH (2003).
Además, los compuestos de la Fórmula (I), después de la preparación, se pueden aislar y purificar para obtener una composición que contiene una cantidad en peso igual o superior a 99 % de un compuesto de la Fórmula (I) ("considerablemente puro"), que luego se usa o se formula como se describe en la presente. Tales compuestos "considerablemente puros" de la Fórmula (I) también se contemplan en la presente como parte de la presente invención.
Las expresiones "compuesto estable" y "estructura estable" se refieren a un compuesto que es lo suficientemente potente para sobrevivir al aislamiento a un grado útil de pureza de una mezcla de reacción, y a la formulación en un agente terapéutico eficaz. La presente invención pretende comprender compuestos estables.
La frase "cantidad terapéuticamente eficaz" pretende incluir una cantidad de un compuesto de la presente invención solo, una cantidad de la combinación de compuestos reivindicados o una cantidad de un compuesto de la presente invención en combinación con otros ingredientes activos eficaces para actuar como inhibidores de un receptor NOTCH, o eficaces para tratar o prevenir enfermedades proliferativas, tales como el cáncer.
Como se usan en la presente, los términos "tratar" o "tratamiento" abarcan el tratamiento de un estado de enfermedad en un mamífero, particularmente en un ser humano, e incluyen: (a) evitar que ocurra la enfermedad en un mamífero, en particular, cuando el mamífero tiene predisposición a la enfermedad, pero aún no se le ha diagnosticado; (b) inhibir la enfermedad, es decir, detener su desarrollo y/o (c) aliviar la enfermedad, es decir, provocar la regresión de la enfermedad.
Los compuestos de la presente invención pretenden incluir todos los isótopos de átomos que se producen en los presentes compuestos Los isótopos incluyen los átomos que tienen el mismo número atómico, pero diferentes números músicos. A fin de brindar ejemplos generales y sin limitación, los isótopos de hidrógeno incluyen deuterio (D) y tritio (T). Los isótopos de carbono incluyen 13C y 14C. Por lo general, los compuestos de la invención rotulados de manera isotópica se pueden preparar mediante téenicas convencionales conocidas por las personas del oficio de nivel medio o mediante procesos análogos a los que se describen en la presente, usando un reactivo adecuado rotulado de manera isotópica en lugar de un reactivo no rotulado.
Los compuestos de conformidad con la Fórmula (I) y/o las sales de los mismos pueden administrarse por cualquier medio adecuado para la afección que se desea tratar, que puede depender de la necesidad de un tratamiento específico del sitio o de la cantidad del compuesto de la Fórmula (I) que debe administrarse.
Esta invención también abarca una clase de composiciones farmacéuticas que comprenden el compuesto de la Fórmula (I) y/o una sal del mismo; y uno o más portadores y/o diluyentes y/o adyuvantes farmacéuticamente aceptables (denominados, en forma conjunta, materiales "portadores") y, si se desea, otros ingredientes activos. Los compuestos de la Fórmula (I) pueden administrarse mediante cualquier vía adecuada, preferentemente, en forma de una composición farmacéutica adaptada a tal vía y en una dosis eficaz para el tratamiento previsto. Los compuestos y las composiciones de la presente invención pueden administrarse, por ejemplo, de manera oral, a través de la mucosa o de manera parenteral, que incluye la administración intravascular, intravenosa, intraperitoneal, subcutánea, intramuscular e intraesternal en formulaciones de unidad de dosis que contienen portadores, adyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables. Por ejemplo, el portador farmacéutico puede contener una mezcla de manitol o lactosa, y celulosa microcristalina. La mezcla puede contener componentes adicionales, tales como un agente lubricante, por ejemplo, estearato de magnesio, y un agente de desintegración, tal como crospovidona. La mezcla del portador puede cargarse en una cápsula de gelatina o puede tener forma de comprimido. La composición farmacéutica puede administrarse en forma de dosificación oral o, por ejemplo, como una infusión.
Para la administración oral, la composición farmacéutica puede ser en forma, por ejemplo, de un comprimido, una cápsula, una cápsula líquida, una suspensión o un líquido. Preferentemente, la composición farmacéutica presenta una forma de unidad de dosificación que contiene una cantidad particular del ingrediente activo. Por ejemplo, la composición farmacéutica puede proporcionarse como un comprimido o una cápsula que comprende una cantidad del ingrediente activo en el intervalo de alrededor de 1 a 2000 mg, preferentemente, de alrededor de 1 a 500 mg y, con mayor preferencia, de alrededor de 5 a 150 mg. Una dosis diaria adecuada para un ser humano u otro mamífero puede variar ampliamente, en función de la afección del paciente y de otros factores, pero puede determinarse usando métodos de rutina.
Todas las composiciones farmacéuticas que se contemplan en la presente pueden administrarse, por ejemplo, de manera oral a través de cualquier preparación oral aceptable y adecuada. Las preparaciones orales de ejemplo incluyen, entre otras, comprimidos, pastillas, caramelos, suspensiones acuosas y aceitosas, polvos o gránulos dispersables, emulsiones, cápsulas duras y blandas, cápsulas líquidas, jarabes y elíxires. Las composiciones farmacéuticas para la administración oral pueden prepararse de conformidad con cualquier método conocido en la téenica para manufacturar composiciones farmacéuticas para la administración oral. A fin de proporcionar preparaciones farmacéuticas de sabor agradable, una composición farmacéutica de conformidad con la invención puede contener, al menos, un agente seleccionado de agentes endulzantes, agentes saborizantes, agentes colorantes, emolientes, antioxidantes y agentes conservadores.
Por ejemplo, un comprimido puede prepararse mezclando, al menos, un compuesto de la Fórmula (I) con, al menos, un excipiente farmacéuticamente aceptable no tóxico adecuado para la manufactura de comprimidos. Por ejemplo, los excipientes incluyen, entre otros, diluyentes inertes, tales como carbonato de calcio, carbonato de sodio, lactosa, fosfato de calcio y fosfato de sodio; agentes de granulación y desintegración, tales como celulosa microcristalina, croscarmelosa de sodio, almidón de maíz y ácido algínico; agentes de fijación, tales como almidón, gelatina, polivinil-pirrolidona y acacia; y agentes lubricantes, tales como estearato de magnesio, ácido esteárico y talco. Además, un comprimido puede estar no recubierto o recubierto mediante téenicas conocidas, a fin de disimular el sabor desagradable de un fármaco o de retrasar la desintegración y la absorción del ingrediente activo en el tubo gastrointestinal y, de esa manera, prolongar los efectos del ingrediente activo durante más tiempo. Los ejemplos de materiales hidrosolubles para disimular el sabor, incluyen, entre otros, hidroxipropil-metilcelulosa e hidroxipropil-celulosa. Los ejemplos de materiales retardadores incluyen, entre otros, etilcelulosa y acetato butirato de celulosa.
Los comprimidos duros de gelatina pueden prepararse, por ejemplo, mezclando al menos un compuesto de la Fórmula (I) con al menos un diluyente sólido inerte, tal como carbonato de calcio, fosfato de calcio y caolín.
Los comprimidos blandos de gelatina pueden prepararse, por ejemplo, mezclando al menos un compuesto de la Fórmula (I) con al menos un portador hidrosoluble, tal como propilenglicol, y al menos un medio aceitoso, tal como aceite de maní, parafina líquida y aceite de oliva.
Una suspensión acuosa puede prepararse, por ejemplo, mezclando al menos un compuesto de la Fórmula (I) con al menos un ejemplo adecuado para la manufactura de una solución acuosa. Los ejemplos de excipientes adecuados para la manufactura de una suspensión acuosa incluyen, entre otros, agentes de suspensión, tales como carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa, hidroxipropilmetil-celulosa, alginato de sodio, ácido algínico, polivinil-pirrolidona, goma de tragacanto y goma acacia; agentes dispersantes o humectantes, tales como una fosfátido natural, por ejemplo, lecitina; productos de condensación de óxido de alquileno con ácidos grasos, tales como estearato de polioxietileno; productos de condensación de óxido de etileno con alcoholes alifáticos de cadena larga, tales como heptadecaetilen- oxicetanol; productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y hexitol, tales como monooleato de polioxietileno sorbitol; y productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, tales como monooleato de polioxietileno sorbitán. Una suspensión acuosa también puede contener, al menos, un conservante, tal como p-hidroxibenzoato de etilo y n-propilo; al menos, un agente colorante; al menos, un agente saborizante; y/o al menos, un agente endulzante, incluidos, entre otros, sacarosa, sacarina y aspartame.
Las suspensiones aceitosas pueden prepararse, por ejemplo, suspendiendo, al menos un compuesto de la Fórmula (I) en un aceite vegetal, tal como aceite de arachis, aceite de oliva, aceite de sésamo o aceite de coco; o en un aceite mineral, tal como parafina líquida. Una suspensión aceitosa también puede contener, al menos, un agente espesante, tal como cera de abejas, parafina sólida y alcohol de cetilo. A fin de obtener una suspensión aceitosa de sabor agradable, puede agregarse, al menos, uno de los agentes endulzantes descritos anteriormente y/o, al menos, un agente saborizante a la suspensión aceitosa. Una suspensión aceitosa también puede contener, al menos, un conservante, incluidos, entre otros, un antioxidante, tal como hidroxianisol butilado y alfa-tocoferol.
Los polvos y gránulos dispersables pueden prepararse, por ejemplo, mezclando, al menos, un compuesto de la Fórmula (I) con al menos un agente dispersante y/o humectante, al menos, un agente de suspensión y/o, al menos, un conservante. Los agentes dispersantes, agentes humectantes y agentes de suspensión adecuados son como se describieron anteriormente. Los ejemplos de conservadores incluyen, entre otros, antioxidantes, por ejemplo, ácido ascórbico. Además, los polvos y gránulos dispersables también pueden contener, al menos, un excipiente, incluido, entre otros, agentes endulzantes, agentes saborizantes y agentes colorantes.
Una emulsión de, al menos, un compuesto de la Fórmula (I) puede prepararse, por ejemplo, como una emulsión de aceite en agua. La fase aceitosa de las emulsiones que comprenden compuestos de la Fórmula (I) puede formarse con ingredientes conocidos en una forma conocida. Por ejemplo, la fase aceitosa puede proporcionarse mediante un aceite vegetal, tal como aceite de oliva y aceite de arachis, un aceite mineral, tal como parafina líquida, y mezclas de estos. Si bien la fase puede comprender solo un emulsionante, puede comprender una mezcla de, al menos, un emulsionante con una grasa o con un aceite, o con ambos. Los agentes emulsionantes incluyen, entre otros, fosfátidos naturales, por ejemplo, lecitina de soja, ésteres o ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, tales como monooleato de sorbitán, y productos de condensación de ásteres parciales con óxido de etileno, tales como monooleato de polioxietilen sorbitán. Preferentemente, se incluye un emulsionante hidrófilo junto con un emulsionante que actúa como estabilizador. También se prefiere incluir un aceite y una grasa. Juntos, el emulsionante con o sin el estabilizador constituye la denominada cera emulsionante, y la cera junto con el aceite y la grasa constituyen la denominada base de ungüento emulsionante que forma la fase dispersa aceitosa de las formulaciones cremosas. Una emulsión también puede contener un agente endulzante, un agente saborizante, un agente conservante y/o un agente antioxidante. Los emulsionantes y los estabilizantes de emulsión adecuados para usar en una formulación de la presente invención incluyen Tween 60, Span 80, alcohol de cetoestearilo, alcohol de miristilo, monoestearato de glicerilo, laurilsulfato de sodio, distearato de glicerilo solo o con una cera, u otros materiales conocidos en la téenica.
Los compuestos de la Fórmula (I) también se pueden administrar, por ejemplo, de manera intravenosa, subcutánea y/o intramuscular mediante cualquier forma inyectable adecuada y farmacéuticamente aceptable. Los ejemplos de formas inyectables incluyen, entre otros, soluciones acuosas estériles que comprenden solventes y vehículos aceptables, tales como agua, solución de Ringer y solución isotónica de cloruro de sodio; microemulsiones estériles de aceite en agua; y suspensiones acuosas u oleaginosas.
Las formulaciones para la administración parenteral pueden ser en forma de soluciones o suspensiones inyectables isotónicas estériles acuosas o no acuosas. Estas soluciones y suspensiones pueden prepararse de polvos o gránulos estériles usando uno o más de los portadores o diluyentes mencionados para usar en formulaciones para la administración oral o usando otros agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspensión. Los compuestos pueden disolverse en agua, polietilenglicol, propilenglicol, etanol, aceite de maíz, aceite de algodón, aceite de maní, aceite de sésamo, bencilalcohol, cloruro de sodio, goma tragacanto y/o varios amortiguadores. En las téenicas farmacéuticas, se conocen ampliamente otros adyuvantes y modos de administración. El ingrediente activo también puede administrarse mediante inyección como una composición con portadores adecuados, que incluyen solución salina, dextrosa o agua, o con ciclodextrina (es decir, CAPTISOL®), solubilización cosolvente (es decir, propilenglicol) o solubilización micelar (es decir, Tween 80).
La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o solvente aceptable para la administración parenteral no tóxico, por ejemplo, como una solución en 1,3-butandiol.
Entre los vehículos y solventes aceptables que pueden emplearse, se encuentran el agua, la solución de Ringer y la solución de cloruro de sodio isotónica. Además, los aceites fijos estériles se emplean de manera convencional como un solvente o medio de suspensión. Con este fin, puede emplearse cualquier aceite fijo blando, incluidos los monoglicéridos o diglicéridos sintéticos. Además, los ácidos grasos, tales como el ácido oleico, pueden usarse en la preparación de inyectables.
Una microemulsión de aceite en agua estéril inyectable puede prepararse, por ejemplo, 1) disolviendo, al menos, un compuesto de la Fórmula (I) en una fase aceitosa, tal como una mezcla de aceite de soja y lecitina; 2) combinando la Fórmula (I) que contiene la fase aceitosa con una mezcla de agua y glicerol; y 3) procesando la combinación para formar una microemulsión.
Una suspensión acuosa u oleaginosa estéril puede prepararse de conformidad con métodos conocidos en la téenica. Por ejemplo, una solución o suspensión acuosa estéril puede prepararse con un diluyente o solvente no tóxico aceptable para la administración parenteral, tal como 1,3-butandiol; y una suspensión oleaginosa estéril puede prepararse con un solvente o medio de suspensión no tóxico estéril, tal como aceites fijos estériles, por ejemplo, monoglicéricos o diglicéricos sintéticos; y ácidos grasos, tales como ácidos oleico.
Los portadores, adyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables que pueden usarse en las composiciones farmacéuticas de esta invención incluyen, entre otros, cambiadores iónicos, alúmina, estearato de aluminio, lecitina, sistemas autoemulsionantes de administración de fármacos (SEDDS), tales como succionato de d-alfa-tocoferol polietilenglicol 1000, tensioactivos usados en formas de dosificación farmacéutica, tales como Tweens, aceite de ricino polietoxilado, tal como tensioactivo CREMOPHOR® (BASF), u otras matrices de administración polimérica, proteínas séricas, tales como albúmina de suero humana, sustancias amortiguadoras, tales como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potasio, mezclas de glicéridos parciales de ácidos grasos vegetales saturados, agua, sales o electrolitos, tales como sulfato de protamina, fosfato de hidrógeno disódico, hidrogenofosfato de potasio, cloruro de sodio, sales de zinc, sílice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinilpirrolidona, sustancias a base de celulosa, polietilenglicol, carboximetilcelulosa de sodio, poliacrilatos, ceras, polímeros del bloque polietileno-polioxipropileno, polietilenglicol y lanolina. Las ciclodextrinas, tales como alfa, beta y gamma-ciclodextrina, o los derivados químicamente modificados, tales como hidroxialquilciclodextrinas, incluidas 2 y 3-hidroxipropil- ciclodextrinas, u otros derivados solubilizados, también pueden usarse de manera beneficiosa para mejorar la administración de compuestos de las fórmulas descritas en la presente.
Los compuestos farmacéuticamente activos de esta invención pueden procesarse de conformidad con métodos farmacéuticos convencionales, a fin de producir agentes medicinales para la administración a pacientes, incluidos los seres humanos y otros mamíferos. Las composiciones farmacéuticas pueden someterse a operaciones farmacéuticas convencionales, tales como esterilización y/o pueden contener adyuvantes convencionales, tales como conservadores, estabilizadores, agentes humectantes, emulsionantes, amortiguadores, etc. Las pastillas y las píldoras pueden prepararse de manera adicional con recubrimientos entéricos. Tales composiciones también pueden comprender adyuvantes, tales como agentes humectantes, endulzantes, saborizantes y perfumantes.
Las cantidades de compuestos que se administran y el régimen de dosificación para tratar una afección con los compuestos y/o las composiciones de esta invención dependen de varios factores, que incluyen la edad, el peso, el sexo, la afección médica del sujeto, el tipo de enfermedad, la gravedad de la enfermedad, la vía y la frecuencia de administración y el compuesto particular que se emplea. Por ello, el régimen de dosificación puede variar ampliamente, pero puede determinarse de rutina usando métodos estándares. Puede ser adecuada una dosis diaria de alrededor de 0.001 a 100 mg/kg de peso corporal, preferentemente, de entre alrededor de 0.005 y alrededor de 50 mg/kg de peso corporal y, con máxima preferencia, de entre alrededor de 0.01 a 10 mg/kg de peso corporal. La dosis diaria puede administrarse en una a cuatro dosis por día.
Los compuestos activos de esta invención se combinan de manera ordinaria con uno o más adyuvantes adecuados para la vía de administración indicada con fines terapéuticos. Si se administran de manera oral, los compuestos pueden mezclarse con lactosa, sacarosa, almidón en polvo, ásteres de celulosa de ácidos alcanoicos, alquilésteres de celulosa, talco, ácido esteárico, estearato de magnesio, óxido de magnesio, sales de sodio y calcio de ácido fosfórico y sulfúrico, gelatina, goma acacia, alginato de sodio, polivinilpirrolidona y/o alcohol de polivinilo, y luego, se producen comprimidos y cápsulas para la administración conveniente. Tales cápsulas o comprimidos pueden contener una formulación para la liberación controlada en una dispersión del compuesto activo en hidroxipropilmetilcelulosa.
Las composiciones farmacéuticas de esta invención comprenden al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, y opcionalmente, un agente adicional seleccionado de cualquier portador, adyuvante y vehículo farmacéuticamente aceptables. Las composiciones alternativas de esta invención comprenden un compuesto de la Fórmula (I) que se describe en la presente, o un profármaco de este, y un portador, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable.
UTILIDAD Los compuestos de la Fórmula (I) son útiles para el tratamiento del cáncer, por ejemplo, tipos de cáncer dependientes de la activación de Notch. La activación de Notch está involucrada en la patogénesis de varios tumores sólidos, que incluyen el de ovarios, páncreas y mama, y tumores hematológicos, tales como leucemias, linfornas y mieloma múltiple.
En una modalidad, se proporciona un método para tratar el cáncer, que comprende administrar a un mamífero que lo necesita un compuesto de la Fórmula (I) y/o una sal del mismo. El método de esta invención se puede usar para tratar una variedad de tipos de cáncer, incluidos, entre otros, cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer gástrico, cáncer de cabeza y de cuello, cáncer de riñón, cáncer de hígado, cáncer de pulmón, incluido el cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC, por sus siglas en inglés), cáncer de ovarios, cáncer de páncreas, cáncer de la vesícula biliar, cáncer de próstata, cáncer de tiroides, osteosarcoma, rabdo iosarcoma, histiocitoma fibroso maligno (MFH, por sus siglas en inglés), fibrosarcoma glioblastomas/astrocitomas, neuroblastoma, melanoma, leucemia linfoblástica aguda de línfocitos T (T-ALL, por sus siglas en inglés) y mesotelioma. Por ejemplo, el método de esta modalidad se usa para tratar cáncer de mama, cáncer de colon o cáncer de páncreas. Preferentemente, el mamífero es un ser humano. Por ejemplo, en el método de la presente modalidad, puede administrarse una cantidad terapéuticamente eficaz para tratar el cáncer. El método de esta modalidad incluye la administración del compuesto que tiene la estructura: y/o al menos una sal del mismo. En la presente modalidad, las vías de administración incluyen la administración parenteral y la administración oral.
En una modalidad, se proporciona un método para tratar el cáncer, que comprende administrar a un mamífero que lo necesita al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, en donde el cáncer es cáncer colorrectal. Preferentemente, el mamífero es un ser humano.
Por ejemplo, en el método de la presente modalidad, puede administrarse una cantidad terapéuticamente eficaz para tratar el cáncer. En la presente modalidad, las vías de administración incluyen la administración parenteral y la administración oral.
En una modalidad, se proporciona un método para tratar el cáncer, que comprende administrar a un mamífero que lo necesita al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, en donde el cáncer es cáncer de mama triple negativo. Preferentemente, el mamífero es un ser humano. Por ejemplo, en el método de la presente modalidad, puede administrarse una cantidad terapéuticamente eficaz para tratar el cáncer. En la presente modalidad, las vías de administración incluyen la administración parenteral y la administración oral.
En una modalidad, se proporciona un método para tratar el cáncer, que comprende administrar a un mamífero que lo necesita al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, en donde el cáncer tiene una traslocación de al menos uno de los receptores de Notch. Por ejemplo, el carcinoma de mama triple negativo humano HCC-1599 tiene una traslocación de Notch 1.
En una modalidad, se proporciona un método para tratar el cáncer, que comprende administrar a un mamífero que lo necesita al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, en donde el cáncer es cáncer de pulmón de células no pequeñas. Preferentemente, el mamífero es un ser humano. Por ejemplo, en el método de la presente modalidad, puede administrarse una cantidad terapéuticamente eficaz para tratar el cáncer. En la presente modalidad, las vías de administración incluyen la administración parenteral y la administración oral.
En una modalidad, se proporciona un método para tratar el cáncer, que comprende administrar a un mamífero que lo necesita al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, en donde el cáncer es cáncer pancreático. Preferentemente, el mamífero es un ser humano. Por ejemplo, en el método de la presente modalidad, puede administrarse una cantidad terapéuticamente eficaz para tratar el cáncer. En la presente modalidad, las vías de administración incluyen la administración parenteral y la administración oral.
En una modalidad, se proporciona un método para tratar el cáncer, que comprende administrar a un mamífero que lo necesita al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, en donde el cáncer es cáncer de ovarios. Preferentemente, el mamífero es un ser humano. Por ejemplo, en el método de la presente modalidad, puede administrarse una cantidad terapéuticamente eficaz para tratar el cáncer. En la presente modalidad, las vías de administración incluyen la administración parenteral y la administración oral.
En una modalidad, se proporciona un método para tratar el cáncer, que comprende administrar a un mamífero que lo necesita al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, en donde el cáncer es melanoma. Preferentemente, el mamífero es un ser humano. Por ejemplo, en el método de la presente modalidad, puede administrarse una cantidad terapéuticamente eficaz para tratar el cáncer. En la presente modalidad, las vías de administración incluyen la administración parenteral y la administración oral.
En una modalidad, se proporciona el uso de al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, para la manufactura de un medicamento para el tratamiento del cáncer. Preferentemente, en la presente modalidad, los tipos de cáncer que pueden tratarse incluyen uno o más de los siguientes: cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer gástrico, cáncer de cabeza y de cuello, cáncer de riñón, cáncer de hígado, cáncer de pulmón, incluido el cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), cáncer de ovarios, cáncer de páncreas, cáncer de la vesícula biliar, cáncer de próstata, cáncer de tiroides, osteosarcoma, rabdomiosarcoma, histiocitoma fibroso maligno (MFH), fibrosarcoma, glioblastomas/astrocitomas, neuroblastoma, melanoma, leucemia linfoblástica aguda de linfocitos T (T-ALL) y mesotelioma. Los medicamentos adecuados de la presente modalidad incluyen medicamentos para la administración parenteral, tales como soluciones, suspensiones y medicamentos para la administración oral, tales como comprimidos, cápsulas, soluciones y suspensiones.
Una modalidad proporciona al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, para usar en la terapia para el tratamiento del cáncer. En la presente modalidad, los tipos de cáncer que pueden tratarse incluyen uno o más de los siguientes: cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer gástrico, cáncer de cabeza y de cuello, cáncer de riñón, cáncer de hígado, cáncer de pulmón, incluido el cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), cáncer de ovarios, cáncer de páncreas, cáncer de la vesícula biliar, cáncer de próstata, cáncer de tiroides, osteosarcoma, rabdomiosarcoma, histiocitoma fibroso maligno (MFH), fibrosarcoma, glioblastomas/astrocitomas, neuroblastoma, melanoma, leucemia linfoblástica aguda de linfocitos T (T-ALL) y mesotelioma.
En una modalidad, se proporciona un método para tratar el cáncer en un mamífero, en donde el cáncer depende de la activación de Notch, que comprende administrar al paciente al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo. El método de esta invención se puede usar para tratar una variedad de tipos de cáncer, incluidos, entre otros, cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer gástrico, cáncer de cabeza y de cuello, cáncer de riñón, cáncer de hígado, cáncer de pulmón, incluido el cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), cáncer de ovarios, cáncer de páncreas, cáncer de la vesícula biliar, cáncer de próstata, cáncer de tiroides, osteosarcoma, rabdomiosarcoma, histiocitoma fibroso maligno (MFH), fibrosarcoma, glioblastomas/astrocitomas, neuroblastoma, melanoma, leucemia linfoblástica aguda de linfocitos T (T-ALL) y mesotelioma. Preferentemente, el método de esta modalidad se usa para tratar cáncer de mama, cáncer de colon o cáncer de páncreas. Preferentemente, el mamífero es un ser humano. Por ejemplo, en el método de la presente modalidad, puede administrarse una cantidad terapéuticamente eficaz para tratar el cáncer. Las vías de administración adecuadas incluyen la administración parenteral y la administración oral.
Para el tratamiento del cáncer, con frecuencia resulta beneficioso usar una combinación de agentes quimioterapéuticos y/u otros tratamientos (por ejemplo, radioterapia). El segundo (o tercer) agente puede tener un mecanismo de acción igual o diferente del agente terapéutico primario. Por ejemplo, pueden emplearse combinaciones de fármacos, en donde dos o más de los fármacos que se administran actúan de diferentes maneras o en diferentes fases del ciclo celular, y/o en donde dos o más de los fármacos tienen toxicidades o efectos secundarios que no se superponen, y/o en donde cada uno de los fármacos que se combinan tienen eficacia demostrada para tratar la enfermedad particular manifestada por el paciente.
En una modalidad, se proporciona un método para tratar el cáncer, que comprende administrar a un mamífero que lo necesita al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo; y administrar uno o más agentes antineoplásicos adicionales.
La frase "agente antineoplásico adicional" se refiere a un fármaco seleccionado de cualquiera de los siguientes: agentes alquilantes (que incluyen mostazas de nitrógeno, sulfonatos de alquilo, nitrosoureas, derivados de etillenimina y triazenos); antiangiogénicos (que incluyen inhibidores de metaloproteinasa de matriz ); antimetabolitos (que incluyen inhibidores de adenosina desaminasa, antagonistas del ácido fólico, análogos de purina y análogos de pirimidina); antibióticos o anticuerpos (que incluyen anticuerpos monoclonales, anticuerpos CTLA-4, antracielinas); inhibidores de aromatasa; modificadores de la respuesta del ciclo celular; enzimas; inhibidores de la proteína farnesil transferasa; esteroides y agentes hormonales y antihormonales (que incluyen análogos sintéticos, glucocorticoides , estrógenos/antiestrógenos [por ejemplo, SERM] , andrógenos/antiandrógenos, progestinas, agonistas del receptor de progesterona, y agonistas y antagonistas de liberación de la hormona luteinizante [LHRH]); moduladores del sistema del factor de crecimiento tipo insulina (IGF)/receptor del factor de crecimiento tipo insulina (IGFR) (que incluyen inhibidores de IGFR1); inhibidores de la señalización de integrina; inhibidores de cinasa (que incluyen inhibidores de multicinasa y/o inhibidores de cinasa Src o Src/abl, inhibidores de cinasa dependiente de cielina [CDK], anticuerpos panHer, Her-1 y Her-2, inhibidores de VEGF, que incluyen anticuerpos anti-VEGF, inhibidores de EGFR, inhibidores de la proteína activada por mitógenos [MAP], inhibidores de MET, inhibidores de MEK, inhibidores de aurora cinasa, inhibidores de PDGF, y otros inhibidores de tirosina cinasa o inhibidores de serina/treonina cinasa; agentes disruptores de icrotúbulos, tales como ecteinascidinas o sus análogos y derivados; agentes de estabilización de microtúbulos, tales como taxanos, y epotilonas naturales y sus análogos sintéticos y semisintéticos; agentes desestabilizantes de unión a microtúbulos (que incluyen alcaloides de la vinca); inhibidores de topoisomerasa; inhibidores de la proteína prenil transferasa; complejos de coordinación de platino; inhibidores de la transducción de señal; y otros agentes usados como agentes antineoplásicos y citotóxicos, tales como modificadores de la respuesta biológica, factores de crecimiento y moduladores inmunitarios.
En consecuencia, los compuestos de la presente invención pueden administrarse en combinación con otros tratamientos contra el cáncer útiles para tratar el cáncer u otras enfermedades proliferativas. La presente invención también comprende el uso de un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo para preparar medicamentos para el tratamiento del cáncer, y/o comprende el envoltorio de un compuesto de la Fórmula (I) junto con indicaciones de que el compuesto debe usarse en combinación con otros agentes antineoplásicos o citotóxicos y tratamientos contra el cáncer. La presente invención también comprende combinaciones de al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo, y al menos un agente adicional en forma de kit, por ejemplo, cuando se envuelven juntos o se colocan en envoltorios separados para venderlos juntos como un kit, o cuando se envuelven para que se formulen juntos.
En una modalidad, se proporciona un método para tratar el cáncer, que comprende administrar a un mamífero que lo necesita al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo; administrar dasatinib; y opcionalmente, uno o más agentes antineoplásicos adicionales.
En una modalidad, se proporciona un método para tratar el cáncer, que comprende administrar a un mamífero que lo necesita al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo; administrar paclitaxel; y opcionalmente, uno o más agentes antineoplásicos adicionales.
En una modalidad, se proporciona un método para tratar el cáncer, que comprende administrar a un mamífero que lo necesita al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo; administrar tamoxifeno; y opcionalmente, uno o más agentes antineoplásicos adicionales.
En una modalidad, se proporciona un método para tratar el cáncer, que comprende administrar a un mamífero que lo necesita al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo; administrar glucocorticoides; y opcionalmente, uno o más agentes antineoplásicos adicionales. Un ejemplo de un glucocorticoide adecuado es dexametasona.
En una modalidad, se proporciona un método para tratar el cáncer, que comprende administrar a un mamífero que lo necesita al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo; administrar carboplatino; y opcionalmente, uno o más agentes antineoplásicos adicionales.
Los compuestos de la presente invención pueden formularse o coadministrarse con otros agentes terapéuticos que se seleccionan porque son particularmente útiles para tratar los efectos asociados a las afecciones antes mencionadas. Por ejemplo, los compuestos de la invención pueden formularse con agentes para prevenir náuseas, hipersensibilidad e irritación gástrica, tales como antieméticos, y antihistamínicos Hi y ¾ .
En una modalidad, se proporcionan composiciones farmacéuticas que comprenden al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo; uno o más agentes adicionales seleccionados de un agente inhibidor de cinasa (molécula pequeña, polipéptido y anticuerpo), un inmunosupresor, un agente antineoplásico, un agente antiviral, un agente antiinflamatorio, un agente antifúngico, un antibiótico o un compuesto contra la hiperproliferación vascular; y cualquier portador, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptables.
Los otros agentes terapéuticos anteriores, cuando se usan en combinación con los compuestos de la presente invención, se pueden emplear, por ejemplo, en las cantidades indicadas en el manual de referencia para médicos Physicians ' Desk Reference (PDR) o según lo determine un experto en la téenica. En los métodos de la presente invención, tales otros agentes terapéuticos se pueden administrar antes, durante o después de la administración de los compuestos de la invención.
Sin embargo, el nivel de dosis específico y la frecuencia de dosificación para cualquier sujeto particular pueden modificarse y, en general, esto depende de varios factores, que incluyen, entre otros, la biodisponibilidad del compuesto específico de la Fórmula (I) en la forma administrada, la estabilidad metabólica y la duración de la acción del compuesto específico de la Fórmula (I), la especie, el peso corporal, la salud general, el sexo, la dieta del sujeto, el modo y el tiempo de administración, la velocidad de eliminación, la combinación farmacológica y la gravedad de la afección particular. Por ejemplo, puede ser adecuada una dosis diaria de alrededor de 0.001 a 100 mg/kg de peso corporal, preferentemente, de alrededor de 0.005 a alrededor de 50 mg/kg de peso corporal y, con máxima preferencia, de alrededor de 0.01 a 10 mg/kg de peso corporal. La dosis diaria puede administrarse en una a cuatro dosis por día.
La administración puede ser continua, es decir, todos los días, o intermitente. Los términos "intermitente" o "de forma intermitente", como se usan en la presente, significan detener y comenzar en intervalos regulares o irregulares. Por ejemplo, la administración intermitente incluye la administración de 1 a 6 días por semana; la administración en ciclos (por ejemplo, la administración diaria durante 2 a 8 semanas consecutivas y, luego, un período de reposo sin administración de hasta 1 semana); o la administración en días alternos.
En una modalidad, al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo se administran de forma continua a un paciente que lo necesita, una o más veces al día. Por ejemplo, se administra una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de la Fórmula (I) a un paciente que lo necesita, una o más veces al día durante días consecutivos.
En una modalidad, al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo se administran de forma intermitente a un paciente que lo necesita, una o más veces al día. Por ejemplo, se administra una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de la Fórmula (I) a un paciente que lo necesita, una o más veces al día de conformidad con un esquema intermitente.
En una modalidad, al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo se administran a un paciente que lo necesita, una o más veces al día durante días consecutivos y, luego, uno o más días sin administración. Preferentemente, se administra una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de la Fórmula (I). Los ejemplos de la dosificación continua con un reposo farmacológico son ciclos de: 7 días de tratamiento y, luego, 7 días sin tratamiento; 14 días de tratamiento y, luego, 7 días sin tratamiento; y 7 días de tratamiento y, luego, 14 días sin tratamiento. Un ciclo de tratamiento/sin tratamiento puede repetirse varias veces, según sea necesario para tratar a un paciente.
En una modalidad, al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo se administran a un paciente que lo necesita, de conformidad con un esquema de dosificación intermitente. Los esquemas de dosificación intermitente son esquemas de repetición que incluyen días en los que al paciente se le administra el compuesto de la Fórmula (I) y días en los que al paciente no se le administra el compuesto de la Fórmula (I). Los ejemplos de esquemas de dosificación intermitente son los siguientes: dosificación 4 días por semana durante 3 semanas consecutivas y, luego, una semana sin dosificación, y la repetición con un intervalo de 4 semanas; dosificación 5 días por semana durante 2 semanas consecutivas y, luego, 1 semana sin dosificación, y la repetición con un intervalo de 3 semanas; y la dosificación 4 días por semana durante una semana y, luego, 2 semanas sin dosificación, y la repetición con un intervalo de 3 semanas. Preferentemente, se administra una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de la Fórmula (I).
En una modalidad, al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo se administran 1 día, luego siguen 6 días de reposo, y se repite en un esquema semanal.
En una modalidad, al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo se administran 1 día, luego siguen 6 días de reposo, y se repite en un esquema semanal durante 1 a 4 semanas, y luego sigue una semana de reposo. Por ejemplo, el compuesto de la Fórmula (I) se administra 1 día, luego siguen 6 días de reposo durante 3 semanas, y luego una semana de reposo. Este ciclo de 4 semanas se puede repetir una o más veces.
En una modalidad, al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo se administran 2 días consecutivos, luego siguen 5 días de reposo, y se repite en un esquema semanal.
En una modalidad, al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo se administran 3 días consecutivos, luego siguen 4 días de reposo, y se repite en un esquema semanal.
En una modalidad, al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo se administran 1 día, y luego siguen de 10 a 13 días de reposo.
En una modalidad, al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo se administran una vez por día (QD). Esta modalidad incluye la administración oral una vez por día.
En una modalidad, al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo se administran dos veces por día (BID). Esta modalidad incluye la administración oral dos veces por día.
En una modalidad, al menos un compuesto de la Fórmula (I) y/o al menos una sal del mismo se administran día por medio: un día de administración seguido por un día de reposo. Este ciclo de 2 días se puede repetir una o más veces.
MÉTODOS DE PREPARACIÓN Los compuestos de la presente invención pueden prepararse de varias maneras conocidas por los expertos en la téenica de síntesis orgánica. Los compuestos de la presente invención se pueden sintetizar con los métodos descritos a continuación, junto con los métodos de síntesis conocidos en la técnica de la química orgánica sintética o sus variaciones consideradas por el experto en la técnica. Los métodos preferidos incluyen, entre otros, los que se describen a continuación. Todas las referencias citadas en la presente se incorporan en su totalidad como referencia.
Los compuestos de la presente invención se pueden preparar con las reacciones y técnicas descritas en esta sección. Las reacciones se realizan en solventes adecuados para los reactivos y materiales usados, y son adecuadas para las transformaciones que se llevan a cabo. Además, en la descripción de los métodos de síntesis indicados a continuación, se debe tener en cuenta que todas las condiciones de reacción propuestas, incluso la elección del solvente, la atmósfera de reacción, la temperatura de reacción, la duración del experimento y los procedimientos de preparación se seleccionan por ser las condiciones estándares para esa reacción, que debe reconocer fácilmente un experto en la téenica. Un experto en la técnica de la síntesis orgánica comprenderá que la funcionalidad presente en varias porciones de la molécula debe ser compatible con los reactivos y las reacciones propuestas. Las restricciones a los sustituyentes que son compatibles con las condiciones de reacción serán evidentes para un experto y, por ello, se deben usar métodos alternativos. En ocasiones, esto requerirá cierto criterio para modificar el orden de las etapas de síntesis o para seleccionar un esquema particular del proceso en lugar de otro, a fin de obtener el compuesto deseado de la invención. Otra consideración importante en la planificación de cualquier trayectoria de síntesis en esta área es la elección prudente del grupo protector que se usa para la protección de los grupos funcionales reactivos presentes en los compuestos descritos en esta invención. Una explicación con autoridad que describe muchas alternativas para el médico experto es Greene et al. ( Protective Groups in Organic Synthesis, 3.a edición, Wilcy and Sons (1999)).
Los compuestos de la Fórmula (I) pueden prepararse con referencia a los métodos ilustrados en los siguientes Esquemas de reacción. Como puede verse allí, el producto final es un compuesto que tiene la misma fórmula estructural que la Fórmula (I). Cabe destacar que cualquier compuesto de la Fórmula (I) puede producirse mediante los esquemas de reacción por medio de la selección adecuada de reactivos con sustitución apropiada. Un experto en la téenica puede seleccionar con facilidad los solventes, las temperaturas, las presiones y otras condiciones de reacción. Los materiales de inicio están disponibles en el comercio, o los expertos en la técnica pueden prepararlos con facilidad. Los constituyentes de los compuestos son como se definen en la presente o en otra sección de la descripción.
La síntesis de los compuestos de la Fórmula (I) puede llevarse a cabo usando los métodos resumidos en los Esquemas de reacción 1 a 7.
Esquema de reacción 1 La preparación de benzodiazepinona (iv) puede llevarse a cabo mediante múltiples métodos conocidos por los expertos en la técnica. Por ejemplo, como se indica en el Esquema de reacción 1, una 2-aminobenzofenona (i) sustituida de manera adecuada (por ejemplo, de Walsh, D.A., Synthesis, 677 (1980); y las referencias allí citadas, u otros métodos conocidos por las personas del oficio de nivel medio) se puede acoplar con el derivado de glicina protegido (ii) (PG = grupo protector, por ejemplo, PG = CBz, véase Katritzky, A.R. et al., Org. Chem. , 55:2206-2214 (1990)), tratado con un reactivo, tal como amoníaco, y sujeto a la cielización para obtener la benzodiazepinona (iii), de conformidad con el procedimiento descrito en la literatura (por ejemplo, Sherrill, R.G. et al., J. Org. Chem. , 60:730 (1995); u otras vías conocidas por las personas del oficio de nivel medio). La mezcla racémica resultante puede separarse (usando los procedimientos conocidos por los expertos en la téenica) para obtener los enantiómeros individuales o puede usarse como racemato. Además, si R3 es H, (iii) puede tratarse, por ejemplo, con un reactivo, tal como Mel, y una base, tal como K2CO3, en un solvente, tal como DMF, a fin de preparar R3 que es metilo.
Etapa 2: La desprotección de (iii) puede llevarse a cabo mediante varias formas conocidas por los expertos en la técnica. Por ejemplo, con PG = CBz, el Compuesto (iii) puede tratarse con un reactivo, tal como HBr, en un solvente, tal como AcOH. El Compuesto (iv) puede usarse como racemato. De manera alternativa, el Compuesto (iv) puede someterse a resolución enantiomérica usando métodos estándares (por ejemplo, cromatografía preparativa quiral).
Esquema de reacción 2 O Y o A NH 8 - , XI El compuesto (xii) en el Esquema de reacción 2 puede prepararse mediante la secuencia de síntesis descrita en el Esquema de reacción 2.
Etapa 1: El ácido (v) puede convertirse en el compuesto (vii) de múltiples formas conocidas por las personas del oficio de nivel medio. Por ejemplo, el tratamiento del ácido (v) con un reactivo, tal como cloruro de oxalilo, en un solvente, tal como DCM, produce el cloruro ácido (vi). El compuesto (vi) se puede tratar con una oxazolidinona (a) en condiciones estándares para obtener el compuesto (vii) (Evans, D.A. et al., J. Am. Chem Soc., 112:4011 (1990)).
Etapa 2: La segunda etapa del Esquema de reacción 2 se lleva a cabo tratando el compuesto (vii) con una base, tal como bis(trimetilsilil)-amida de sodio o diisopropilamida de litio, en un solvente, tal como THF, a baja temperatura, tal como -78 °C, en una atmósfera inerte. El enolato resultante de (vii) se trata con un reactivo, tal como bromoacetato de tere-butilo, para obtener el compuesto (viii, Ry = t-butilo).
Etapa 3: La conversión del compuesto (viii) en (ix) puede llevarse a cabo tratando el compuesto (viii) con peróxido de hidrógeno e hidróxido de litio a una temperatura adecuada, usando una mezcla de solventes, tal como THF/agua.
Etapa 4: El compuesto (ix) puede convertirse en una mezcla del compuesto (x) y el compuesto (xi) generando el enolato de (ix) con una base, tal como LDA, en un solvente, tal como THF, a baja temperatura, tal como -78 °C, en una atmósfera inerte y con un tratamiento adicional con un reactivo (R2-LG) que tiene un grupo saliente adecuado (por ejemplo, LG = triflato). La mezcla resultante de diastereómeros (x/xi) luego se puede utilizar en las etapas de síntesis posteriores.
Etapa 5: De manera alternativa, la mezcla (x/xi) puede someterse a condiciones de epimerización, por ejemplo, mediante el tratamiento con LDA y cloruro de dietilaluminio, y luego la inactivación con metanol o ácido acético, a fin de enriquecer el diastereómero deseado. La mezcla resultante de compuestos (x/xi) enriquecida diastereoméricamente luego se puede utilizar en etapas de síntesis posteriores, o la mezcla de diastereoisómeros se puede separar, si se desea, usando condiciones adecuadas, tales como HPLC preparativa, HPLC preparativa quiral o cromatografía en gel de sílice, y el diastereisómero puro deseado resultante (xi) se puede usar en las siguientes etapas.
Etapa 6: Alternativamente, la mezcla de ácidos diastereoméricos (x) y (xi) se puede proteger mediante el tratamiento, por ejemplo, con bromuro de bencilo en presencia de una base, tal como K2CO3, en un solvente, tal como DMF. La mezcla resultante de diastereoisómeros se puede separar, si se desea, usando condiciones adecuadas, tales como HPLC preparativa, HPLC preparativa quiral o cromatografía en gel de sílice, y el compuesto de diastereisómero puro deseado resultante (xii) se puede usar en la siguiente etapa.
Etapa 7: La última etapa del Esquema de reacción 2 es la etapa de desprotección, y puede llevarse a cabo mediante varias formas conocidas por una persona del oficio de nivel medio. Por ejemplo, cuando Rw = bencilo en el compuesto (xii), el tratamiento en condiciones de alta hidrogenación mediante el uso de un catalizador, tal como v paladio sobre carbón, en un solvente, tal como MeOH, en una atmósfera de hidrógeno puede proporcionar el compuesto (xi) que se puede usar con posterioridad.
Alternativamente, el compuesto (xi) se puede preparar de conformidad con la secuencia de etapas del Esquema de reacción 3.
Esquema de reacción 3 .
R, O etapa 6 U OR etapa 7 - Etapa 1: La primera etapa del Esquema de reacción 3 se obtiene convirtiendo el compuesto (xiii) en un áster (xv) y usando una de las múltiples formas conocidas por las personas del oficio de nivel medio, tales como el tratamiento con un acetimidato sustituido, tal como el compuesto (xiv) en presencia de un reactivo, tal como trifluoruro de boro eterato, a una temperatura adecuada en un solvente, tal como THF.
Etapa 2: El ácido (v) puede convertirse en el compuesto (vi) de múltiples formas conocidas por las personas del oficio de nivel medio. Por ejemplo, el tratamiento del ácido (v) con un reactivo, tal como cloruro de oxalilo, en un solvente, tal como DCM, produce el cloruro ácido (vi). El compuesto (vi) se puede tratar con una oxazolidinona (a) en condiciones estándares para obtener el compuesto (vii) (Evans, D.A. et al., J. Am. Chem Soc . , 112:4011 (1990)) .
Etapa 3: El compuesto (vii) se puede convertir en una mezcla de diastereómeros (xvi) de varias maneras (Baran, P. et al., J. Am. Chem. Soc., 130 (34 ) : 11546 (2008)) . Por ejemplo, el compuesto (xv) se trata con una base, tal como LDA, en un solvente, tal como tolueno, a baja temperatura, tal como -78 °C, en una atmósfera inerte, tal como N2. La mezcla resultante se agrega a una solución del compuesto (vii) tratado con cloruro de litio y una base, tal como LDA, en un solvente, tal como tolueno, en una atmósfera inerte, tal como N2. A la mezcla resultante de los enolatos de los compuestos (xv) y (vii) , se agrega bis (2-etilhexanoiloxi ) cobre , a baja temperatura, tal como -78 °C, en una atmósfera inerte, tal como N2, y se calienta a temperatura ambiente para obtener el compuesto (xvi) .
Etapa 4: La conversión del compuesto (xvi) en una mezcla del compuesto (x) y el compuesto (xi) puede llevarse a cabo tratándolo con peróxido de hidrógeno e hidróxido de litio a una temperatura adecuada, usando una mezcla de solventes, tal como THF/agua. La mezcla resultante de diastereómeros luego se puede utilizar en las etapas de síntesis posteriores. Si es necesario, en este punto, puede separarse la mezcla resultante de diasterómeros mediante cromatografía en gel de sílice o HPLC preparativa.
Etapa 5: De manera alternativa, la mezcla (x/xi) puede someterse a condiciones de epimerización, por ejemplo, mediante el tratamiento con LDA y cloruro de dietilaluminio, y luego la inactivación con metanol o ácido acético, a fin de enriquecer el diastereómero deseado. La mezcla resultante de compuestos enriquecida diastereoméricamente luego se puede utilizar en etapas de síntesis posteriores, o la mezcla de diastereoisómeros se puede separar, si se desea, usando condiciones adecuadas, tales como HPLC preparativa, HPLC preparativa quiral o cromatografía en gel de sílice, y el diastereisómero puro deseado resultante (xi) se puede usar en las siguientes etapas.
Etapa 6: Alternativamente, la mezcla de ácidos diastereoméricos (x) y (xi) se puede proteger mediante el tratamiento, por ejemplo, con bromuro de bencilo en presencia de una base, tal como K2CO3, en un solvente, tal como DMF. La mezcla resultante de diastereoisómeros se puede separar, si se desea, usando condiciones adecuadas, tales como HPLC preparativa, HPLC preparativa quiral o cromatografía en gel de sílice, y el compuesto de diastereisómero puro deseado resultante (xii) se puede usar en las siguientes etapas.
Etapa 7: La última etapa del Esquema de reacción 3 es la etapa de desprotección, y puede llevarse a cabo mediante varias formas conocidas por una persona del oficio de nivel medio. Por ejemplo, cuando Rw = bencilo en el compuesto (xii), el tratamiento en condiciones de alta hidrogenación mediante el uso de un catalizador, tal como paladio sobre carbón, en un solvente, tal como MeOH, en una atmósfera de hidrógeno puede proporcionar el compuesto (xi) que se puede usar con posterioridad, por ejemplo, en la etapa 1 del Esquema de reacción 4.
Esquema de reacción 4 - · xiv Etapa 1: Los compuestos de estructura pueden acoplar al compuesto diastereomér icamente puro (xi) o a una mezcla diastereomérica de compuestos (x/xi) en presencia de un reactivo de acoplamiento, tal como TBTU, y una base, tal como TEA, en un solvente, tal como DMF, para obtener el compuesto (xiii) como un compuesto diastereoméricamente puro o como una mezcla de diastereoisómeros , según corresponda, de conformidad con la pureza enant iomérica y/o diastereomérica de los socios de acoplamiento. Esta mezcla se puede usar como tal en la siguiente etapa o, si se desea, se puede purificar usando una téenica de separación adecuada, tal como cromatografía preparativa quiral, para obtener los compuestos diastereoméricamente puros.
Etapa 2: El tratamiento del compuesto (xiii) con un ácido, tal como TFA, a una temperatura adecuada, tal como 0 °C, en un solvente, tal como DCM, proporciona el compuesto (xiv) como un diastereoméricamente puro o como una mezcla de diastereoisómeros. Esta mezcla se puede usar como tal en la siguiente etapa o, si se desea, se puede purificar usando una técnica de separación adecuada, tal como cromatografía preparativa quiral, para obtener los compuestos diastereoméricamente puros .
Etapa 3: La conversión del compuesto (xiv) en el compuesto (xv, R4 = H) puede llevarse a cabo mediante el acoplamiento del compuesto (xiv) con una fuente de amina adecuada, tal como cloruro de amonio o amoníaco, una carbodi imida , tal como EDC, HOBT y una base, tal como TEA, en un solvente, tal como DMF. Si es necesario, la mezcla diastereomér ica puede separarse usando una téenica de separación adecuada, tal como una cromatografía preparativa quiral.
Se pueden preparar otros compuestos de la presente invención a partir del compuesto xv (R4 = H), de conformidad con el Esquema de reacción 5.
Esquema de reacción 5 O — I Etapa 1: Un ácido carboxílico fune ional izado de manera adecuada (PG-L-CO2H) o una sal de carboxilato (xvi) se pueden tratar con un agente alquilante, tal como clorosulfato de clorometilo, en presencia de una base, tal como Na2CC>3, y una sal de amonio cuaternario, tal como sulfato de tetrabut ilamonio , en una mezcla bifásica de agua y un solvente orgánico adecuado, tal como DCM a baja temperatura, tal como 0 °C, para obtener el compuesto xvi i.
Etapa 2: El tratamiento del compuesto xv con el compuesto xvii en un solvente adecuado, tal como DCM, en presencia de una base, tal como K2CO3, produce el compuesto xviii.
Etapa 3: La desprotección del compuesto xviii puede llevarse a cabo mediante varias formas conocidas por una persona del oficio de nivel medio. Por ejemplo, cuando PG = tBu o Boc , el compuesto xviii se puede tratar con un reactivo, tal como ácido tr ifluoroacé tico, en un solvente, tal como DCM, para obtener el compuesto xix (-CH2OC(O)L = Rx).
De manera alternativa, los compuestos xix se pueden preparar como se describe en el Esquema de reacción 6 .
Esquema de reacción 6 .
XIX Etapa 1: Se pueden usar varios métodos conocidos en el estado de la téenica para preparar los compuestos xix. Por ejemplo, como se indica en el Esquema de reacción 6, una benzodiazepina sustituida de manera adecuada (xv) se puede tratar con un tioéter de haloalquilo, tal como (clorometil)(metil)sulfano, en presencia de una base, tal como carbonato de cesio, en un solvente adecuado, tal como N,N-dimetilformamida (DMF), para obtener los compuestos de la Fórmula xx.
Etapa 2: El tratamiento del compuesto xx con un reactivo, tal como cloruro de sulfurilo, en presencia de una sal de amina, tal como cloruro de trietilamonio en un solvente aprótico, tal como diclorometano (DCM), se puede usar para la transformación en los compuestos de la Fórmula xxi (Hal = cloro).
Etapa 3: Los compuestos de la Fórmula xviii se pueden preparar del compuesto xxi mediante el tratamiento con un ácido carboxílico sustituido de manera adecuada o sal de carboxilato en presencia de una base (cuando se comienza de un ácido carboxílico), tal como carbonato de potasio en un solvente aprótico, tal como acetonitrilo o DMF.
Etapa 4: La desprotección del compuesto iv puede llevarse a cabo mediante varias formas conocidas por una persona del oficio de nivel medio. Por ejemplo, cuando PG = tBu o Boc, el compuesto xviii se puede tratar con un reactivo, tal como ácido trifluoroacético, en un solvente, tal como DCM, para obtener el compuesto xix (-CH20C(O)L = Rx).
La preparación de profármacos a base de sulfenamida del compuesto de origen xv se muestra en el Esquema de reacción 7.
Esquema de reacción 7 xxiii Etapa 1: Una mezcla de una sal de plata, tal como nitrato de plata, y un disulfuro, tal como 2,2'-disulfandiilbis(etan-2,1-diil)dicarbamato de tere-butilo en un solvente alcohólico, tal como MeOH, se puede tratar con el compuesto i en presencia de una base, tal como trietilamina, para obtener el compuesto xxii.
Etapa 2: La desprotección del compuesto xxii puede llevarse a cabo mediante varias formas conocidas por una persona del oficio de nivel medio. Por ejemplo, cuando PG = tBu o Boc, el compuesto xxii se puede tratar con un reactivo, tal como ácido trifluoroacético, en un solvente, tal como DCM, para obtener el compuesto xxiii (-S-M = Ry).
EJEMPLOS La invención también se define en los siguientes Ejemplos. Debe comprenderse que los Ejemplos solo se incluyen a fines ilustrativos. Mediante el análisis anterior y los Ejemplos, el experto en la téenica puede determinar las características esenciales de la invención y, sin apartarse del espíritu y alcance de esta, puede realizar varios cambios y modificaciones, a fin de adaptar la invención a varios usos y condiciones. Como resultado, la invención no se limita a los ejemplos ilustrativos indicados a continuación, sino que se define mediante las reivindicaciones adjuntas.
ABREVIATURAS: ACN acetonitrilo AcOH ácido acético AlMe3 trimetilaluminio ac acuoso Bn bencilo Boc terc-butoxicarbonilo B0C2O dicarbonato de di-tere-butilo CBz benciloxicarbonilo DCC 1,3-diciclohexilcarbodiimida DCM diclorometano DIEA diisopropiletilamina DMAP dimetilaminopiridina DME 1,2-dimetoxietano DMF dimetilformamida DMSO sulfóxido de dimetilo Pd (dppf ) 2Cl2 [ 1 , 1 ' -bis (difenilfosfino)ferrocen]dicloropaladio(II) EDC clorhidrato de 1- (3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida Et2AlCl cloruro de dietilaluminio Et3N trietiamina Et20 dietiléter EtOH etanol EtOAc acetato de etilo equiv. equivalencia(s) g gramo(s) h hora(s) HOBt hidroxibenzotriazol HPLC cromatografía de líquidos de alta presión iPrOH alcohol isopropílico KOtBu terc-butóxido de potasio LCMS cromatografía de líquidos-espectroscopia de masa LDA diisopropilamida de litio LiHMDS bis(trimetilsilil)amida de litio Me metilo Mel yoduro de metilo MeOH metanol min minuto(s) mi mililitro(s) mmol milimolar MTBE metil t-butiléter NaHMDS bis(trimetilsilil)amida de sodio n-BuLi n-butil litio NH40Ac acetato de amonio NMP N-metilpirrolidinona Pd(0Ac)2 acetato de paladio RT o Rt tiempo de retención sat saturado t-Bu butilo terciario t-BuLi t-butil litio tBuOH alcohol butílico terciario tBuOMe terc-butilmetiléter TBTU tetrafluoroborato de O-(1H-benzotriazol-1-il)- N, N, N' , N'-tetrametiluronio TEA trietilamina TFA ácido trifluoroacético Tf20 anhídrido trifluorometilsulfónico THF tetrahidrofurano Intermediario S-l: Ácido (2R,3S)-3-( terc-butoxicarbonil)-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoico (S-l) Intermediario S-1A: Trifluorometansulfonato 3,3,3-trifluoropropilo A una solución agitada fría (-25 °C) de 2,6-lutidina (18.38 mi, 158 mmol) en DCM, se agregó Tf20 (24.88 mi, 147 mmol) durante 3 min, y la mezcla se agitó durante 5 min. A la mezcla de reacción, se agregó 3,3,3-trifluoropropan-l-ol (12 g, 105 imvol) durante un intervalo de 3 min. Después de 2 h, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 1 h. La mezcla de reacción se concentró hasta la mitad de su volumen, luego se purificó cargándola directamente en una columna de gel de sílice (330 g, ISCO) , y el producto se eluyó con DCM para obtener el Intermediario S-1A (13.74 g, 53 %) como un aceite incoloro. RMN-1!! (400 MHz, CDCI3 ) d ppm 4.71 (2 H, t, J = 6.15 Hz) , 2.49-2.86 (2 H, m) .
Intermediario S-1B : (4S)-4-bencil-3-(5,5,5-trifluoropentanoil)-1,3-oxazolidin-2-ona g trifluoropentanoico (14.76 g, 95 ramol) y DMF (0.146 ml) en DCM (50 ml), se agregó lentamente cloruro de oxalilo (8.27 ml, 95 mmol). Después de 2 h, la mezcla se concentró hasta secarse. Se cargó un matraz diferente con (S)-4-benciloxazolidin-2-ona (16.75 g, 95 mmol) en THF (100 ml) y luego se enfrió a -78 °C. A la solución, se agregó lentamente n-BuLi (2.5 M, 37.8 ml, 95 mmol) durante 10 min, se agitó durante 10 min, y luego se agregó lentamente una solución del cloruro ácido anterior en THF (50 ml) durante 5 min. La mezcla se agitó durante 30 min y luego se calentó a temperatura ambiente. La reacción se inactivó con NH4CI acuoso saturado. Luego, se agregó 10 % de LiCl acuoso a la mezcla, y esta se extrajo con Et2Ü. La capa orgánica se lavó con NaHCC acuoso saturado y luego con salmuera, se secó (MgSO4), se filtró y se concentró hasta secarse. El residuo se purificó mediante cromatografía SÍO2 (columna ISCO, 330 g, que se eluyó con un gradiente de 100 % de hexano a 100 % de EtOAc) para obtener el producto Intermediario S-1B; (25.25 g, 85 %): RMN-!H (400 MHz, CDCI3) d ppm 7.32-7.39 (2 H, m), 7.30 (1 H, d, J = 7.05 Hz), 7.18-7.25 (2 H, m), 4.64-4.74 (1 H, m), 4.17-4.27 (2 H, m), 3.31 (1 H, dd, J = 13.35, 3.27 Hz), 3.00-3.11 (2 H, m), 2.79 (1 H, dd, J = 13.35, 9.57 Hz), 2.16-2.28 (2 H, m), 1.93-2.04 (2 H, m).
Intermediario S-1C: (3R)-3-(((4S)-4-bencil-2-oxo- 1,3-oxazolidin-3-il)carbonil)-6,6,6-trifluorohexanoato de tere-butilo (S-1C) A una solución agitada fría (-78 °C) del Intermediario S-1B (3.03 g, 9.61 mmol) en THF (20 mi), se agregó NaHMDS (1.0 M en THF) (10.6 mi, 10.60 mmol) en una atmósfera de nitrógeno. Después de 2 h, se agregó 2-bromoacetato de tere-butilo (5.62 g, 28.8 mmol) puro mediante una jeringa a -78 °C y se continuó agitando a la misma temperatura. Después de 6 horas, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se dividió en NH4CI saturado y EtOAc. La fase orgánica se separó, y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (3x). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (Teledyne ISCO CombiFlash Rf, 5 % a 100 % de solvente A/B=hexanos/EtOAc, REDISEP® S1O2120 g). La concentración de las fracciones adecuadas produjo el Intermediario S-1C (2.79 g, 67.6 %) como un aceite viscoso incoloro: RMN-1H (400 MHz, CDCI3) d ppm 7.34 (2 H, d, J = 7.30 Hz), 7.24-7.32 (3 H, m), 4.62-4.75 (1 H, m, J = 10.17, 6.89, 3.43, 3.43 Hz), 4.15-4.25 (3 H, m), 3.35 (1 H, dd, J = 13.60, 3.27 Hz), 2.84 (1 H, dd, J = 16.62, 9.57 Hz), 2.75 (1 H, dd, J = 13.35, 10.07 Hz), 2.47 (1 H, dd, J = 16.62, 4.78 Hz), 2.11-2.23 (2 H, m), 1.90-2.02 (1 H, m), 1.72-1.84 (1 H, m), 1.44 (9 H, s).
Intermediario S-1D: Ácido (2R)-2-(2-terc-butoxi-2-oxoetil)-5,5,5-trifluoropentanoico A una solución agitada fría (0 °C) del Intermediario S-1C (2.17 g, 5.05 mmol) en THF (50 mi) y agua (15 mi), se agregó una solución de LiOH (0.242 g, 10.11 mmol) y H2O2 (2.065 mi, 20.21 mmol) en H2O (2 mi). Después de 10 min, la mezcla de reacción se retiró del baño de hielo, se agitó durante 1 h y luego se enfrió a 0 °C. Se agregaron NaHCÜ3 acuoso saturado (25 mi) y Na2SC>3 acuoso saturado (25 mi) a la mezcla de reacción, y la mezcla se agitó durante 10 min y luego se concentró parcialmente. La mezcla resultante se extrajo con DCM (2x), se enfrió con hielo y se acidificó con HCl concentrado a pH 3. La mezcla se saturó con NaCl sólido, se extrajo con EtOAc (3x), se secó en MgSCU, se filtró y se concentró hasta lograr un aceite incoloro para obtener el Intermediario S-1D, 1.2514 g, 92 %): RMN-1!! (400 MHz, CDCl3) d ppm 2.83-2.95 (1 H, m), 2.62-2.74 (1 H, m), 2.45 (1 H, dd, J = 16.62, 5.79 Hz), 2.15-2.27 (2 H, m), 1.88-2.00 (1 H, m), 1.75-1.88 (1 H, m), 1.45 (9 H, s).
Intermediario S-l: Acido (2R,3S)-3-(terc-butoxicarbonil)-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoico y el Intermediario S-1E: Ácido (2R,3R)-3-(tere-butoxicarbonil)-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoico (S-1E) ión agitada fría (-78 °C) del Intermediario S-1D (5 g, 18.50 mmol) en THF (60 mi), se agregó lentamente LDA (22.2 mi, 44.4 mmol, 2.0 M) durante 7 min. Después de agitarla durante 2 h, se agregó el Intermediario S-1A (6.38 g, 25.9 mmol) a la mezcla de reacción durante 3 min. Después de 60 min, la mezcla de reacción se calentó a -25 °C (hielo/MeOH/hielo seco) y se agitó durante 60 min más, en cuyo momento se agregó NH4C1 acuoso saturado. La fase acuosa separada se acidificó con HCl 1 N a pH 3 y luego se extrajo con Et20. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (2x), se secaron en MgSCU, se filtraron se concentraron para obtener una mezcla 1:4 (II:I1E) (determinada mediante ¾ NMR) del Intermediario S-l y del Intermediario S-1E (6.00 g, 89 %) como un sólido amarillo pálido. RMN-!H (500 MHz, CDCI3) d ppm 2.81 (1 H, ddd, J = 10.17, 6.32, 3.85 Hz), 2.63-2.76 (1 H, m), 2.02-2.33 (4 H, m), 1.86-1.99 (2 H, m), 1.68-1.85 (2 H, m), 1.47 (9 H, s).
A una solución agitada fría (-78 °C) de una mezcla del Intermediario S-l y del Intermediario S-1E (5.97 g, 16.30 mmol) en THF (91 mi), se agregó por goteo LDA (19 mi, 38.0 mmol, 2.0 M en THF/hexano/etilbenceno) mediante una jeringa durante 10 min (la temperatura interna nunca superó los -65 °C, sonda J-KEM® en solución de reacción). La mezcla se agitó durante 15 min, luego se calentó a temperatura ambiente (baño de agua a 24 °C), se agitó durante 15 min y se enfrió a -78 °C durante 15 min. A la mezcla de reacción, se agregó Et2AlCl (41 mi, 41.0 mmol, 1 M en hexano) mediante una jeringa (la temperatura interna nunca superó los 55 °C), la mezcla se agitó durante 10 min, luego se calentó a temperatura ambiente (baño a 24 °C) durante 15 min y luego nuevamente a -78 °C durante 15 min. Mientras tanto, un matraz de fondo redondo de 1000 mi se cargó con MeOH (145 mi) y se enfrió previamente a -78 °C. La mezcla de reacción se transfirió con agitación vigorosa a través de una cánula durante 5 min a MeOH. El matraz se retiró del baño, se agregó hielo y luego se agregó lentamente HCl 1 N (147 mi, 147 mmol). Se observó evolución de gas a medida que se agregaba HCl. La mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, durante lo cual la evolución de gas disminuyó. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (750 mi), se saturó con NaCl, y la fase orgánica se separó, se lavó con una solución de fluoruro de potasio (8.52 g, 147 mmol) y HCl 1 N (41 mi, 41.0 mmol) en agua (291 mi) y salmuera (100 i), luego se secó (Na2s04), se filtró y se concentró al vacío. RMN-1!! mostró que el producto era una mezcla 9:1 del Intermediario S-l y del Intermediario S-1E. La mezcla enriquecida del Intermediario S-l y del Intermediario S-1E (6.12 g, >99 % de rendimiento) se obtuvo como un sólido ámbar oscuro: EMN-^-H (400 MHz, CDCl3) d ppm 2.64-2.76 (2 H, m), 2.04-2.35 (4 H, m), 1.88-2.00 (2 H, m), 1.71-1.83 (2 H, m), 1.48 (9 H, s).
Procedimiento alternativo para elaborar el Intermediario S-l: Intermediario S-1F: 4-terc-butil 2,3-bis (3,3,3-trifluoropropil)succinato de (2R,3S)-1-bencilo (S-1F) A una solución agitada de una mezcla 9:1 enriquecida del Intermediario S-l e Intermediario S-1E (5.98 g, 16.33 mmol) en DMF (63 mi), se agregaron carbonato de potasio (4.06 g, 29.4 mmol) y bromuro de bencilo (2.9 mi, 24.38 mmol); luego la mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (1000 mi), se lavó con LiCl al 10 % (3 x 200 mi) y salmuera (200 mi), se secó (Na2s04), se filtró, se concentró y luego se secó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía con SÍO2 usando un gradiente de tolueno:hexano. El Intermediario S-1F purificado en forma diastereomérica (4.81g, 65 %) se obtuvo como un sólido incoloro: RMN-1!! (400 MHz, cloroformo-d) d 7.32-7.43 (m, 5H), 5.19 (d, J = 12.10 Hz, 1H), 5.15 (d, J = 12.10 Hz, 1H), 2.71 (dt, J = 3.52, 9.20 Hz, 1H), 2.61 (dt, J = 3.63, 9.63 Hz, 1H), 1.96-2.21 (m, 4H), 1.69-1.96 (m, 3H), 1.56-1.67 (m, 1H), 1.45 (s, 9H).
Intermediario S-l: Ácido (2R,3S)-3-(terc-butoxicarbonil)-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoico A una solución del Intermediario S-1F (4.81 g, 10.54 mmol) en MeOH (100 mi), se agregó paladio sobre carbón al 10 % (húmedo, tipo Degussa, 568.0 mg, 0.534 mmol) en un matraz de presión de ¾ . El recipiente se purgó con N2 (4x), luego con ¾ (2x), finalmente se presurizó a 3.52 kg/cm2(50 psi) y se agitó durante la noche. El recipiente de reacción se despresurizó y se purgó con nitrógeno. La mezcla se filtró a través de CELITE®, se lavó con MeOH, luego se concentró y se secó al vacío. El Intermediario S-l (3.81 g, 99 % de rendimiento)) se obtuvo como un sólido incoloro: RMN-1!! (400 MHz, cloroformo-d) d 2.62-2.79 (m, 2H), 2.02-2.40 (m, 4H), 1.87-2.00 (m, 2H), 1.67-1.84 (m, 2H), 1.48 (s, 9H).
Procedimiento alternativo para elaborar el Intermediario S-l: Intermediario S-l: Ácido (2R,3S)-3-(fcerc-butoxicarbonil)-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoico El Intermediario S-l, como una mezcla con el Intermediario S-1E, se preparó mediante un procedimiento similar al anterior del Intermediario S-1D para obtener una mezcla 1:2.2 del Intermediario S-l y del Intermediario S-1E (8.60 g, 23.48 mmol), que se enriqueció usando LDA (solución 2.0 M en THF, etilbenceno y heptano, 28.2 mi, 56.4 mmol) y cloruro de dietilaluminio (solución 1.0 M en hexano, 59 mi, 59.0 mmol) en THF (91 mi). Después de la preparación como se describió anteriormente, el residuo resultante se obtuvo como una mezcla 13.2:1 (mediante 1H NMR) del Intermediario S-l y del Intermediario S-1E, que se trató de la siguiente manera: El material crudo se disolvió en MTBE (43 mi). Se cargaron lentamente hexanos (26 mi) a la mezcla de reacción mientras la temperatura se mantenía por debajo de 30 “C. La mezcla de reacción se agitó durante 10 min. Luego, se agregó terc-butilamina (2.7 mi, 1.1 eq.) lentamente durante un período de 20 minutos mientras la temperatura se mantenía por debajo de 30 °C. Se observó que esta adición era exotérmica. La mezcla de reacción se agitó durante 2 h por debajo de 30 °C y luego se filtró. El material sólido se lavó con 5:3 de MTBE:hexano (80 mi), y el filtrado se concentró y se apartó. El sólido filtrado se disolvió en diclorometano (300 mi), se lavó con HCl 1 N (100 mi), y la capa orgánica se lavó con salmuera (100 mi x 2) y luego se concentró a presión reducida por debajo de 45 °C para obtener el Intermediario S-l (5.46 g, 64 )· Segundo procedimiento alternativo para preparar el Intermediario S-l: Intermediario S-1G: 5,5,5-trifluoropentanoato de tere-butilo (S-1G) A una solución agitada de ácido 5,5,5-trifluoropentanoico (5 g, 32.0 mmol) en THF (30 mi) y hexano (30 mi) a 0 °C, se agregó 2,2,2-tricloroaceti idato de tere-butilo (11.46 mi, 64.1 mmol). La mezcla se agitó durante 15 min a 0 °C. Se agregó trifluoruro de boro eterato (0.406 mi, 3.20 mmol), y la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente durante la noche. A la mezcla de reacción transparente, se agregó NaHCC sólido (5 g) y se agitó durante 30 min. La mezcla se filtró a través de MgSC>4 y se lavó con hexanos (200 mi). La solución se dejó en reposo durante 45 min, y el material sólido resultante se retiró filtrándolo en el mismo filtro de MgSÜ4 nuevamente, se lavó con hexanos (100 mi) y se concentró a presión reducida sin calentamiento. El volumen se redujo a alrededor de 30 mi, se filtró a través de un embudo fritado limpio, se lavó con hexano (5 mi), y luego se concentró a presión reducida sin calentamiento. El aceite puro resultante se filtró a través de un disco de filtro de membrana de nailon de 0.45 mm para obtener el Intermediario S-1G (6.6 g, 31.4 mmol 98 % de rendimiento) como un aceite incoloro: RMN-1!! (400 MHz, CDCI3) d ppm 1.38 (s, 9 H) 1.74-1.83 (m, 2 H) 2.00-2.13 (m, 2 H) 2.24 (t, J = 7.28 Hz, 2 H).
Intermediario S-1H: (4S)-4-(propan-2-il)-3-(5,5,5-trifluoropentanoil)-1,3-oxazolidin-2-ona agitada de ácido trifluoropentanoico (5.04 g, 32.3 mmol) en DCM (50 mi) y DMF (3 gotas), se agregó cloruro de oxalilo (3.4 mi, 38.8 mmol) por goteo durante 5 min. La solución se agitó hasta que disminuyó el burbujeo. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida para obtener un aceite amarillo pálido. A otro matraz cargado una solución de (4S)-4-(propan-2-il)-1,3-oxazolidin-2-ona (4.18 g, 32.4 mmol) en THF (100 mi) a -78 °C, se agregó por goteo n-BuLi (2.5 M en hexano) (13.0 mi, 32.5 mmol) a mediante una jeringa durante 5 min. Después de agitar durante 10 min, se agregó el cloruro ácido anterior disuelto en THF (20 mi) mediante una cánula durante 15 min. La mezcla de reacción se calentó a 0 °C y luego a temperatura ambiente, mientras el baño se calentaba, y se agitó durante la noche. A la mezcla de reacción, se agregó NH4C1 saturado, y la mezcla se extrajo con EtOAc (2x). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material crudo se purificó mediante cromatografía instantánea (Teledyne ISCO CombiFlash Rf, de 5 % a 60 % de solvente A/B = hexanos/EtOAc, REDISEP® S1O2 de 120 g). La concentración de las fracciones adecuadas produjo el Intermediario S-1H (7.39 g, 86 %) como un aceite incoloro: R N-1!! (400 MHz, CDCI3) d ppm 4.44 (1 H, dt, J = 8.31, 3.53 Hz), 4.30 (1 H, t, J = 8.69 Hz), 4.23 (1 H, dd, J = 9.06, 3.02 Hz), 2.98-3.08 (2 H, m), 2.32-2.44 (1 H, m, J = 13.91, 7.02, 7.02, 4.03 Hz), 2.13-2.25 (2 H, m), 1.88-2.00 (2 H, ), 0.93 (3 H, d, J = 7.05 Hz), 0.88 (3 H, d, J = 6.80 Hz).
Intermediario S-1I : 6, 6, 6-trifluoro-3- ( (S) -4-isopropil-2-axoaxazolidin-3-carbonil) -2- (3 , 3 , 3-trif luoropropil) hexanoato de (2S, 3R) -tere-butilo e Intermediario S-1J: 6, 6, 6-trifluoro-3- ( (S) -4-isopropil-2-oxooxazolidin-3-carbonil) -2- (3, 3, 3-trif luoropropil) hexanoato de (2R, 3R) - tere-butilo I A una solución agitada fría (-78 °C) de diisopropilamina (5.3 mi, 37.2 mmol) en THF (59 mi) en una atmósfera de nitrógeno, se agregó n-BuLi (2.5 M en hexano) (14.7 mi, 36.8 mmol). La mezcla luego se calentó a 0 °C para obtener una solución 0.5 M de LDA. Otro recipiente se cargó con el Intermediario S-1H (2.45 g, 9.17 mmol). El material se azeotropó dos veces con benceno (la entrada de aire de RotoVap se equipó con una entrada de nitrógeno para excluir la humedad por completo), y luego se agregó tolueno (15.3 mi). Esta solución se agregó a un matraz que contenía cloruro de litio seco (1.96 g, 46.2 mmol). A la mezcla se resultante, enfriada a -78 °C, se agregó la solución de LDA (21.0 mi, 10.5 mmol), y la mezcla se agitó a -78 °C durante 10 min, se calentó a 0 °C durante 10 min y luego se enfrió a -78 °C. A otro recipiente de reacción que contenía el Intermediario S-1G (3.41 g, 16.07 mmol), que también se azeotropó dos veces con benceno, se agregó tolueno (15.3 mi), se enfrió a -78 °C, y se agregó LDA (37.0 mi, 18.5 mmol). La solución resultante se agitó a -78 °C durante 25 min. En ese momento, el enolato derivado del áster se transfirió mediante una cánula a la solución de enolato de oxazolidinona y se agitó a -78 °C durante 5 min más, en cuyo momento se retiró el tapón; se agregó rápidamente bis (2-etilhexanoiloxi)cobre en polvo sólido (9.02 g, 25.8 mmol) al recipiente de reacción, y se reemplazó el tapón. El recipiente se retiró de inmediato del baño frío y se sumergió en un baño de agua caliente (40 °C) con agitación rápida; simultáneamente, el color cambió del turquesa inicial a marrón. La mezcla de reacción se agitó durante 20 min, luego se vertió en NH40H acuoso al 5 % (360 mi) y se extrajo con EtOAc (2x). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (Teledyne ISCO CombiFlash Rf, de 0% a 60% de solvente A/B=hexanos/EtOAc, REDISEP® S1O2 120 g). La concentración de las fracciones adecuadas produjo una mezcla del Intermediario S-1I y del Intermediario S-1J (2.87 g, 66 %) como un aceite viscoso amarillo pálido. EMN-1!! mostró que el producto era una mezcla 1.6:1 de diastereómeros S-1I:S-1J, según se determinó mediante la integración de los multipletes a 2.74 y 2.84 ppm: RMN-1!! (400 MHz, CDCI3) d ppm 4.43-4.54 (2 H, m), 4.23-4.35 (5 H, m), 4.01 (1 H, ddd, J = 9.54, 6.27, 3.51 Hz), 2.84 (1 H, ddd, J = 9.41, 7.28, 3.64 Hz), 2.74 (1 H, ddd, J = 10.29, 6.27, 4.02 Hz), 2.37-2.48 (2 H, m, J = 10.38, 6.98, 6.98, 3.51, 3.51 Hz), 2.20-2.37 (3 H, m), 1.92-2.20 (8 H, m), 1.64- I.91 (5 H, m), 1.47 (18 H, s), 0.88-0.98 (12 H, m).
Intermediario S-l: Ácido (2R,3S)-3-( terc-butoxicarbonil)-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoico e Intermediario S-1E: Ácido (2R,3R)-3-(terc-butoxicarbonil)-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoico (S-1E) ón agitada fría (0 °C) del Intermediario S-1I y del Intermediario S-1J (4.54 g, 9.51 mmol) en THF (140 mi) y agua (42 mi), se agregaron secuencialmente peróxido de hidrógeno (30 % en agua) (10.3 g, 91 mmol) y LiOH (685.3 mg, 28.6 mmol). La mezcla se agitó durante 1 h. En ese momento, el recipiente de reacción se retiró del baño frío y luego se agitó durante 1.5 h. A la mezcla de reacción, se agregaron NaHCC>3 saturado (45 mi) y Na2s03 saturado (15 mi), y luego la mezcla se concentró parcialmente a presión reducida. La solución cruda resultante se extrajo con DCM (3x). La fase acuosa se acidificó a pH~l-2 con HCl 1 N, y se extrajo con DCM (3x) y luego con EtOAc (lx). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida para obtener una mezcla de los Intermediarios S-l y S-1E (3.00 g, 86 %) como un aceite incoloro: HMN-1!! (400 MHz, CDCI3) d ppm 2.76-2.84 (1 H, m, diastereómero 2), 2.64-2.76 (3 H, m), 2.04-2.35 (8 H, m), 1.88-2.00 (4 H, m), 1.71-1.83 (4 H, m), 1.48 (9 H, s, diastereómero 1), 1.46 (9 H, s, diastereómero 2); RMN-1!! mostró una mezcla 1.7:1 de S-1E:S-1F mediante la integración de los picos de los grupos t-butilo.
Intermediario S-l : Ácido (2R,3S)-3-(ere butoxicarbonil)-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoico e Intermediario S-1F: Ácido (2R,3R)-3-(terc-butoxicarbonil)-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoico (S-1E) A una solución agitada fría (-78 C) de diisopropilamina (1.7 mi, 11.93 mmol) en THF (19 mi) en una atmósfera de nitrógeno, se agregó n-BuLi (2.5 M en hexanos) (4.8 mi, 12.00 mmol). La mezcla se agitó durante 5 min y luego se calentó a 0 °C. En un recipiente separado, a una solución agitada fría (-78 °C) de la mezcla de los Intermediarios S-l y S-1E (1.99 g, 5.43 mmol) en THF (18 mi), se agregó lentamente la solución LDA preparada con anterioridad a través de una cánula durante 25 min. La mezcla se agitó durante 15 min, luego se calentó a temperatura ambiente (se colocó en un baño de agua a 24 °C) durante 15 min y luego se volvió a enfriar a -78 °C durante 15 min. A la mezcla de reacción, se agregó Et2AlCl (1 M en hexano) (11.4 mi, 11.40 mmol) con una jeringa. La mezcla se agitó durante 10 min, se calentó a temperatura ambiente durante 15 min y luego se volvió a enfriar a -78 °C durante 15 min. Se agregó metanol (25 mi) con rapidez, se agitó vigorosamente mientras se calentaba a temperatura ambiente y luego se concentró a ~l/4 del volumen original. La mezcla se disolvió en EtOAc, y se lavó con HCl 1 N (50 mi) y hielo (75 g). La fase acuosa se separó y se extrajo con EtOAc (2x). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con una mezcla de KF (2.85 g en 75 mi de agua) y HCl 1 N (13 mi) [solución resultante a pH 3-4] y luego con salmuera, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida para obtener una mezcla diastereomérica enriquecida 9:1 (S-1:S-1E) (según se determinó mediante 1H NMR) del Intermediario S-l y del Intermediario S-1E (2.13 g, >99 %) como un aceite viscoso amarillo pálido: RMN-!H (400 MHz, CDCI3) d ppm 2.64-2.76 (2 H, m), 2.04-2.35 (4 H, m), 1.88-2.00 (2 H, m), 1.71-1.83 (2 H, m), 1.48 (9 H, s).
Intermediario S-2 : Acido (2R,3S)-3-( tere butoxicarbóni1)-6,6,6-trifluoro-2-(3-fluoropropil)hexanoico (S-2) Intermediario S-2: Ácido (2R,3S)-3-(terc-butoxicarbonil)-7,7,7-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)heptanoico e Intermediario S-2A: Ácido (2R,3R)-3-(terc-butoxicarbonil)-7,7,7-trifluoro-2-(3,3,3 trifluoropropil)heptanoico (S-2A) n agitada fría (-78 °C) del Intermediario S-1D (1.72 g, 6.36 mmol) en THF (30 mi), se agregó lentamente LDA (7.32 mi, 14.6 mmol) durante 7 min. Después de agitar durante 1 h, se agregó 4,4,4-trifluorobutiltrifluorometansulfonato (2.11 g, 8.11 mmol) a la mezcla de reacción durante 2 min. Después de 15 min, la mezcla de reacción se calentó a -25 °C (hielo/MeOH/hielo seco) durante 1 h, y luego se enfrió a -78 °C. Después de 80 min, la reacción se inactivó con una solución acuosa saturada de NH4CI (10 mi). La mezcla de reacción se volvió a diluir con salmuera, y la solución se ajustó a pH 3 con HCl 1 N. La capa acuosa se extrajo con éter. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron en sulfato de magnesio anhidro y se concentraron a presión reducida para obtener una mezcla de los Intermediarios S-2 y S-2A (2.29 g, 95 %) como un aceite incoloro. RMN-1!! (400MHz, cloroformo-d) d 2.83-2.75 (m, 1H), 2.64 (ddd, J = 9.9, 6.7, 3.6 Hz, 1H), 2.32-2.03 (m, 5H), 1.98-1.70 (m, 3H), 1.69-1.52 (m, 3H), 1.50-1.42 (m, 9H). EMN-1!! mostró una mezcla 1:4.5 (S-2:S-2A) de diastereómeros mediante la integración de los picos de los grupos t-Bu.
Intermediario S-2: Ácido (2R,3S)-3-(t erc-butoxicarbonil)-7,7,7-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)heptanoico e Intermediario S-2A: Ácido (2R,3R)-3-(terc-butoxicarbonil)-7,7,7-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)heptanoico (S-2A) Una mezcla del Intermediario S-2 y del Intermediario S-2A (2.29 g, 6.02 mmol) se disolvió en THF (38 mi) para obtener una solución incolora que se enfrió a -78 °C. Luego, se agregó lentamente LDA (7.23 mi, 14.5 mmol) (2.0 M en heptano/THF/etilbenceno) a la mezcla de reacción durante 3 min. Después de agitar durante 15 min, la mezcla de reacción se colocó en un baño de agua a temperatura ambiente. Después de 15 min, la mezcla de reacción se volvió a colocar en un baño a -78 °C, y luego se agregó lentamente cloruro de dietilaluminio (14.5 mi, 14.5 mmol) (1 M en hexano) durante 5 min. La mezcla de reacción se agitó a -78 °C. Después de 15 min, la mezcla de reacción se colocó en un baño de agua a temperatura ambiente durante 10 min y luego se volvió a enfriar a -78 °C. Después de 15 min, la reacción se inactivó con MeOH (30.0 mi, 741 mmol), se retiró del baño a -78 °C y se concentró. A la mezcla de reacción, se agregó hielo y HCl (60.8 mi, 60.8 mmol), y la mezcla resultante se extrajo con EtOAc (2 x 200 mi). La capa orgánica se lavó con fluoruro de potasio (3.50 g, 60.3 mmol) en 55 mi de H2O y 17.0 mi de HCl 1N. Las capas orgánicas se secaron en sulfato de magnesio anhidro y se concentraron a presión reducida para obtener una mezcla enriquecida del Intermediario S-2 y del Intermediario S-2A (2.25 g, 98 % de rendimiento) como un aceite amarillo claro. RMN-CH (400MHz, cloroformo-d) d 2.83-2.75 (m, 1H), 2.64 (ddd, J = 9.9, 6.7, 3.6 Hz, 1H), 2.32-2.03 (m, 5H), 1.98-1.70 (m, 3H), 1.69-1.52 (m, 3H), 1.50-1.42 (m, 9H). RM -^H mostró una relación 9:1 a favor del diastereómero deseado Intermediario S-2.
Intermediario S-2B: 4-fcerc-butil 2,3-bis(4,4,4-trifluorobutil)succinato de (2R,3S)-1-bencilo A una mezcla 9:1 de Intermediario S-2 Intermediario S-2A (2.24 g, 5.89 mmol) y carbonato de potasio (1.60 g, 11.58 mmol) en DMF (30 mi) se agregó bromuro de bencilo (1.20 mi, 10.1 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 19 h. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (400 mi) y se lavó con una solución de LiCl al 10 % (3 x 100 mi) y salmuera (50 mi), luego se secó en sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se concentró hasta secarse al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (Teledyne ISCO CombiFlash de 0 % a 100 % solvente A/B = hexano/EtOAc, REDISEP® S1O2 de 220 g, que se detectó a 254 nm y se controló a 220 nm). La concentración de las fracciones adecuadas produjo el Intermediario S-2B (1.59 g, 57.5 %). HPLC: RT = 3.863 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD de 4.6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos que contenía 0.1 % de TFA, 4 ml/min, que se controló a 220 nm), RMN-1H (400MHz, cloroformo-d) d 7.40-7.34 (m, 5H), 5.17 (d, J = 1.8 Hz, 2H), 2.73-2.64 (m, 1H), 2.55 (td, J = 10.0, 3.9 Hz, 1H), 2.16-1.82 (m, 5H), 1.79-1.57 (m, 3H), 1.53-1.49 (m, 1H), 1.45 (s, 9H), 1.37-1.24 (m, 1H).
Intermediario S-2: Acido ( 2R, 3S) -3- (terc-butoxicarbonil)-6,6,6-trifluoro-2-(4,4,4-trifluorobutil)hexanoico : A una solución agitada del Intermediario S-2B (1.59 g, 3.37 mmol) en MeOH (10 mi) y EtOAc (10 mi) en nitrógeno, se agregó Pd/C al 10 % (510 mg) . La atmósfera se reemplazó con hidrógeno, y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2.5 h. El catalizador de paladio se filtró a traves de una película de policarbonato de 4 M y se enjuagó con MeOH. El filtrado se concentró a presión reducida para obtener el Intermediario S-2 (1.28 g, 99 %) . RMN-1H (400MHz, clorof ormo-d) d 2.76-2.67 (m, 1H) , 2.65-2.56 (m, 1H) , 2.33-2.21 (m, 1H) , 2.17-2.08 (m, 3H) , 1.93 (dtd, J = 14.5, 9.9, 5.2 Hz , 1H) , 1.84-1.74 (m, 2H) , 1.70-1.52 (m, 3H) , 1.48 (s, 9H) .
Intermediario A- 1 : (2-amino-3-metilfenil) (3-fluorofenil)metanona (A-l) Intermediario A-1A: 2-amino-N-metoxi-N,3- dimetilbenzamida En un matraz de fondo redondo de 11, se agregaron ácido 2-amino-3-metilbenzoico (11.2 g, 74.1 mol) y clorhidrato de N,O-dimetilhidroxilamina (14.45 g, 148 mmol) en DCM (500 mi) para obtener una suspensión de color marrón pálido. La mezcla de reacción se trató con EtaN (35 mi), HOBT (11.35 g, 74.1 mmol) y EDC (14.20 g, 74.1 mmol) y luego se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. La mezcla se lavó con LiCl al 10 % y luego se acidificó con HCl 1N. La capa orgánica se lavó sucesivamente con LiCl al 10 % y NaHCC>3 acuoso. La capa orgánica se decoloró con carbón, se filtró, y el filtrado se secó en MgSCh. La mezcla se filtró y se concentró para obtener 13.22 g (92 % de rendimiento) del Intermediario A-1A. MS(ES): m/z = 195.1 [M+H-]; HPLC: RT = 1.118 min. (H2O/Me0H con TFA, CHROMOLITH® ODS S54.6 x 50 mm, gradiente = 4 min, longitud de nm); RMN-!H (500MHz, cloroformo-d) d 7.22 (dd, J = 7.8, 0.8 Hz, 1H), 7.12-7.06 (m, 1H), 6.63 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 4.63 (br. s., 2H), 3.61 (s, 3H), 3.34 (s, 3H), 2.17 (s, 3H).
Intermediario A-1: (2-amino-3-metilfenil)(3-fluorofenil)metanona (A-l) En un matraz de fondo redondo de 500 mi, se enfrió una solución de l-fluoro-3-yodobenceno (13.61 mi, 116 mmol) en THF (120 mi) en un baño a -78 °C. Se agregó por goteo una solución de n-BuLi, (2.5 M en hexano, 46.3 mi, 116 mmol) durante 10 minutos. La solución se agitó a -78 °C durante 30 minutos y luego se trató con una solución del Intermediario A-1A (6.43 g, 33.1 mmol) en THF (30 mi). Después de 1.5 h, la mezcla de reacción se agregó a una mezcla de hielo y HCl 1 N (149 mi, 149 mmol), y el matraz de reacción se enjuagó con THF (5 mi) y se combinó con la mezcla acuosa. La mezcla resultante se diluyó con LiCl acuoso al 10 %, y el pH se ajustó a 4 con NaOH 1 N. Luego la mezcla se extrajo con Et2Ü, se lavó con salmuera, se secó en MgSO4, se filtró y se concentró. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (220 g de ISCO) que se eluyó con un gradiente de 10 % EtOAc/hexano a 30 % EtOAc/hexano para obtener el Intermediario A-l (7.11 g, 94 % de rendimiento) como un aceite. MS(ES): m/ z = 230.1 [M+H+]; HPLC: RT 2.820 min Pureza 99%. (H2O/Me0H con TFA, CHROMOLITH® ODS S5 4.6 x 50 mm, gradiente = 4 min, longitud de nm).
Los compuestos enumerados a continuación en la Tabla 1 (Intermediarios A-2 a A-9) se prepararon de conformidad con el procedimiento de síntesis general descrito para el Intermediario A-l, usando el reactivo de anilina y organometálico adecuado.
Tabla 1 i H2O/CH3CN con TFA, BEH C181.75 mm, 2.1 x 50 mm, gradiente = 2 min, longitud de nm. 2 HzO/MeOH con TFA al 0.1%, Luna C183 mth, 4.6 x 30 mm, gradiente = 3.5 min, longitud de 3 Me0H/H2O/TFA al 0.1 %, Waters Sunfire C183.5 m, 2.1 x 30 mm, 1 ml/min, 4 min de gradiente, longitud de nm. 4 H2O/CH3CN con TFA al 0.05 %, BEH C181.7 mm, 2.1 x 50 mm, gradiente (2 %-98 %) = 1 min, longitud de 5 H20/Me0H con TFA al 0.1 %, PHENOMENEX® 2.5 mm, 2.0 x 30 mm, gradiente = 2 min, longitud de
Intermediario A-10: (2-amino-3-isopropilfenil)(3-clorofenil)metanona (A-10) Se agregó por goteo 2-isopropilanilina (3 mi, 21.19 mmol) a una solución de tricloroborano (1 M en diclorometano) (23.31 mi, 23.31 mmol) y dicloroetano (50 mi) a 0 °C, y la mezcla se agitó durante 10 min. Luego, se agregaron 3-clorobenzonitrilo (5.83 g, 42.4 mmol) y tricloruro de aluminio (3.11 g, 23.31 mmol), y la mezcla se agitó a 0 °C durante 25 minutos. Se retiró el baño de hielo, y la mezcla se calentó a 75 °C durante la noche. Luego la mezcla se enfrió a temperatura ambiente. Luego, se agregó HCl 6 N (60 mi, 10 eq.), y la mezcla se calentó a 75 °C. Después de 4 h, se agregó HCl 12 N (10 mi), y el calentamiento continuó durante la noche a 75 °C. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se transfirió a un matraz Erlenmcyer, se diluyó con acetato de etilo, se enfrió a 0 °C y se elevó cuidadosamente a pH 10 con NaOH acuoso al 50 %. La mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (4x). Los extractos de acetato de etilo se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron en sulfato de sodio anhidro y se concentraron para obtener un aceite ámbar transparente. El aceite se suspendió en una cantidad mínima de heptano y se purificó en un sistema de cromatografía ISCO companion (cartucho de sílice de 220 g, que se eluyó con 0-20 % acetato de etilo/heptano, 150 ml/min) para obtener el Intermediario A-10 (2.85 g, 10.41 mmol, 49.1% de rendimiento). RT de HPLC = 3.876 min, de 10/90 a 90/10 (Me0H/H2O/TFA al 0.1 %, Waters Sunfire C183.5 mm, 2.1 x 30 mm, 1 ml/min, 4 min de gradiente, longitud de nm); MS(ES): m/z = 274 [M+H+]; RMN-1!! (400MHz, cloroformo-d) d 7.63 (t, J = 1.7 Hz, 1H), 7.55-7.48 (m, 2H), 7.44-7.29 (m, 3H), 6.65 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 6.43 (br. s., 2H), 3.11-2.87 (m, 1H), 1.34 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
Los compuestos enumerados a continuación en la Tabla 2 (Intermediarios A-11 a A-14) se prepararon de conformidad con el procedimiento de síntesis general descrito para el Intermediario A-10, usando la anilina y el nitrilo de arilo adecuados, obtenidos mediante los métodos conocidos por las personas del oficio de nivel medio.
Tabla 2 1 Me0H/H2O/TFA al 0.1 %, aters Sunfire C183.5 m 2.1 x 30 mm, 1 ml/min, 4 min de gradiente, longitud de onda 254 nm.
Intermediario A-15: (2-amino-3-ciclopropoxifenil)(m-tolil)metanona Intermediario A-15A: Ácido 3-hidroxi-2-nitrobenzoico .
(A-15A) A un matraz de 250 mi, se agregaron ácido 3-cloro 2-nitrobenzoico (10 g, 49.6 mmol) y una solución de hidróxido de potasio (40 g, 727 mmol) en agua (70 mi). La suspensión espesa se calentó a reflujo durante 12 horas. La solución se enfrió en hielo y se llevó cuidadosamente a pH 3 con HCl concentrado. La mezcla acuosa se extrajo con EtOAc (3x). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron con sulfato de sodio y se concentraron al vacío. La mezcla de producto crudo se disolvió en diclorómetaño, y el precipitado amarillo resultante se filtró para obtener el Intermediario A-15A (6 g, 32.8 mmol, 66.0 % de rendimiento). HPLC: RT = 0.85 min (H2O/Me0H con TFA, Sunfire C18 3.5 pm, 2.1 x 30 trun, gradiente = 4 min, longitud de nm); MS(ES): m/z = 206 [M+Na]+; KMN-? (400MHz, cloroformo-d) d 7.56-7.35 (m, 1H), 7.23 (dd, J = 7.9, 1.5 Hz, 1H).
Intermediario A-15B: 3-hidraxi-2-nitrobenzoato de metilo (A-15B) A un matraz de 100 mi que contenía MeOH (60 mi) a 0 °C, se agregó lentamente cloruro de tionilo (9.96 mi, 137 mmol). La solución se agitó a 0 °C durante 30 minutos, y luego se agregó el Intermediario A-15A (10 g, 54.6 mmol). La solución de reacción se calentó a reflujo durante 6 h. La mezcla de reacción se concentró hasta secarse para obtener un residuo amarillo brillante. La mezcla de producto crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (de 0 % a 100 % de EtOAC/heptano durante 15 minutos, columna de 80 g) para obtener el producto deseado (10.2 g, 95 % de rendimiento). HPLC: RT = 1.75 min (H2O/Me0H con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 2.1 x 30 mm, gradiente = 4 min, longitud de nm); MS(ES): m/z = 220 [M+Na]+; RMN-iH (400MHz, cloroformo-d) d 7.60 (dd, J = 8.5, 7.4 Hz, 1H), 7.33-7.22 (m, 5H), 7.10 (dd, J = 7.5, 1.3 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H).
Intermediario A-15C: 2-nitro-3-(viniloxi)benzoato de metilo (A-15C) Una mezcla de acetato de cobre (II) (11.98 g, 65.9 mmol) y diclorometano (80 mi) se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos, antes de la adición del compuesto 2,4,6-trivinil-1,3,5,2,4,6-trioxatriborinano:piridina (1:1) (10.63 g, 44.2 mmol, 0.67 eq), el Intermediario A-15B (13 g, 65.9 mmol), piridina (26.7 mi, 330 mmol) y tamices moleculares (1 g). La mezcla resultante de color azul oscuro se agitó a temperatura ambiente durante 5 días, y la mezcla de reacción se dejó abierta al aire. La mezcla de reacción se filtró a través de una almohadilla de CELITE® y se lavó con diclorometano. El filtrado se lavó con acetato de amonio acuoso 3 M (2x), agua y salmuera, luego se secó y se concentró al vacío. La mezcla de producto crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (de 0 % a 20 % de EtOAC/DCM durante 15 minutos, columna de 120 g) para obtener el Intermediario A-15C (7.42 g, 33.2 mmol, 50.4 % de rendimiento). HPLC: RT = 2.487 min (H2O/Me0H con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 2.1 x 30 mm, gradiente = 4 min, longitud de nm); MS(ES): m/z = 246 [M+Na]+; RMN-!H (400MHZ, cloroformo-d) d 7.77 (dd, J = 7.8, 1.2 Hz, 1H), 7.55 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.38 (dd, J = 8.4, 1.3 Hz, 1H), 6.61 (dd, J = 13.6, 5.9 Hz, 1H), 4.95 (dd, J = 13.6, 2.4 Hz, 1H), 4.69 (dd, J = 5.9, 2.4 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 1.56 (s, 1H), 0.03 (s, 1H).
Intermediario 15D : 3-ciclopropoxi-2-nitrobenzoato de metilo (A-15D) Una solución de ácido 2,2,2-tricloroacético (16.30 g, 100 mmol) en diclorometano (100 mi) se agregó lentamente a través de un embudo de adición a una solución de dietilzinc (hexanos 1 M, 100 mi, 100 mmol) a -10 °C en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó durante 10 min, luego se agregó diyodometano (8 mi, 1+00 mmol) por goteo a través de una jeringa, y la mezcla de reacción se agitó durante 10 min. Se agregó lentamente una solución del Intermediario A-15C (7.42 g, 33.2 mmol) en diclorometano (20 mi) a través de un embudo de adición. La solución se calentó a temperatura ambiente durante la noche. Luego la mezcla de reacción se enfrió a 0 °C y se inactivó con HCl 1 M. La mezcla de reacción se transfirió a una ampolla de decantación, y la capa acuosa se extrajo con diclorometano (3x). Los extractos combinados se lavaron con bicarbonato de sodio saturado, agua y salmuera, se secaron en sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron. La mezcla de producto crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0 % EtOAC/heptano durante 15 minutos, columna de 220 g) para obtener el Intermediario A-15D (4.7 g, 19.81 mmol, 60 . 0 % de rendimiento) . HPLC : RT 2 .66 min (H20/Me0H con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 2.1 x 30 mm, gradiente = 4 min, longitud de nm); MS(ES): m/z 260 [M+Na]+; RMN-Uí (400MHz, cloroformo-d) d 7.68-7.57 (m, 2H), 7.57-7.41 (m, 1H), 4.03-3.82 (m, 4H), 0.94-0.78 (m, 4H) Intermediario A-15E: Ácido 3-ciclopropoxi-2-nitrobenzoico (A-15E) Una solución de Intermediario A-15D (4.7 g, 19.81 mmol) en THF (30 mi) y MeOH (30 mi) se trató con una solución de hidróxido de litio (2.88 g, 120 mmol) en agua (15 mi, 833 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Los solventes orgánicos se retiraron a presión reducida. La suspensión acuosa resultante se diluyó con agua, se acidificó con HCl 1 M y se extrajo con acetato de etilo (3x). Los extractos se combinaron y se lavaron con salmuera, se secaron en sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron para obtener el Intermediario A-15E (4.35 g, 19.8 mmol, 98 % de rendimiento). HPLC: RT = 2.186 min (H20/Me0H con TFA, Sunfire C183.5 mth, 2.1 x 30 mm, gradiente = 4 min, longitud de nm); MS(ES): m/z = 246 [M+Na]+; RMN-!H (400MHz, cloroformo-d) d 7.76 (dd, J = 7.7, 1 . 8 Hz , 1H) , 7. 68-7.46 (m, 2H) , 4 . 02 (tt , J = 6 . 0 , 2 . 9 Hz , 1H), 1.00-0.52 (m, 4H).
Intermediario A-15F: Ácido 2-amino-3-ciclopropoxibenzoico (A-15F) Una mezcla del Intermediario A-15E (420 mg, 1.882 mmol), zinc (1230 mg, 18.82 mmol) y cloruro de amonio (1007 mg, 18.82 mmol) en etanol (10 mi) y agua (5 mi) se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. La mezcla de reacción se concentró al vacío, y luego la mezcla de reacción se diluyó con agua. La mezcla se acidificó levemente y luego se extrajo con DCM (2x). Las capas orgánicas combinadas se secaron en Na2s04 y se concentraron para obtener el Intermediario A-15F como un aceite de color tostado. HPLC: RT = 1.96 min (H20/Me0H con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 2.1 x 30 mm, gradiente = 4 min, longitud de nm); MS(ES): m/z = 194.12 [M+H]+; RMN-1!! (400MHz, metanol-d4) d 7.67-7.43 (m, 1H), 7.23 (dd, J = 7.9, 1.1 Hz, 1H), 6.62 (s, 1H), 3.82 (s, 1H), 0.82-0.63 (m, 4H).
Intermediario A-15G: 8-ciclopropoxi-2-metil-4H-benzo [d] [1 , 3 ] oxazin- -ona Una solución del Intermediario A-15F (1 g, 5.18 mmol) y anhídrido acético (4.88 mi, 51.8 mmol) se calentó a 140 °C durante 1 hora. La mezcla de reacción se enfrió y se concentró al vacío, y el residuo se diluyó con tolueno y se concentró para obtener el Intermediario A-15G. HPLC: RT = 1.22 min (H2O/Me0H con TFA, Sunfire C183.5 mm, 2.1 x 30 mm, gradiente = 4 min, longitud de nm); MS(ES): m/z = 218.12 [M+H]+; RMN-XH (400MHz, cloroformo-d) d 7.82 (dd, J = 7.9, 1.3 Hz, 1H), 7.71 (dd, J = 8.1, 1.3 Hz, 1H), 7.55-7.37 (m, 1H), 4.02-3.75 (m, 1H), 2.52 (s, 3H), 1.08-0.74 (m, 4H).
Intermediario A-15H: N- (2-ciclopropoxi-6-(3-metilbenzoil)fenil)acetamida (A-15H) Una solución del Intermediario A-15G (1 g, 4.60 mmol) en éter (5 mi) y tolueno (10 mi) se enfrió a -10 °C (metanol/hielo). Se agregó por goteo una solución de bromuro de m-tolilmagnesio (5.06 mi, 5.06 mmol) durante 10 minutos.
Una vez que se completó la adición, el matraz se retiró del baño de hielo y se agitó a temperatura ambiente durante 1.5 h. Luego la solución se enfrió a -10 °C, y se agregaron 40 mi de HCl 1 N. La mezcla se diluyó con acetato de etilo (50 mi). La fase orgánica se lavó con NaOH 0.5 M y luego con agua, y se concentró al vacío. El residuo se usó en la siguiente reacción en el estado en que se encontraba. HPLC: RT = 2.808 min ( O/MeOH con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 2.1 x 30 mm, gradiente = 4 min, longitud de nm); MS(ES): m/z = 310.05 [M+H]+.
Intermediario A-15: (2-amino-3-ciclopropoxifenil)(m-tolil)metanona (A-15] Una solución del Intermediario A-15H (495 mg, 1.6 mmol) en etanol (10 mi) y HCl 6 N (5 mi) se calentó a 90 °C durante 4.5 horas. La mezcla de reacción se concentró, luego se diluyó con 10 mi de agua y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 mi). Las fases orgánicas agrupadas se lavaron con hidróxido de sodio 1 N, se secaron en Na2SO4 y se concentraron al vacío. La mezcla de producto crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (de 0 % a 100% EtOAC/heptano durante 10 minutos, columna de 12 g) para aislar el Intermediario A-15 (250 mg, 0.935 mmol, 58.4 % de rendimiento) como un aceite amarillo. HPLC: RT = 3.58 min (H20/Me0H con TFA, Sunfire C183.5 mm, 2.1 x 30 rara, gradiente = 4 min, longitud de nm); MS(ES): m/z = 268.02 [M+H]+.
Los compuestos enumerados a continuación en la Tabla 3 (Intermediarios A-16 a A-17) se prepararon de conformidad con el procedimiento de síntesis general descrito para el Intermediario A-15, usando el reactivo de anilina y organometálico adecuados, obtenidos mediante los métodos conocidos por las personas del oficio de nivel medio.
Tabla 3 ^ O/CHBCN con NH4OAc, PUROSPHER® STAR RP-183.5 pm, 4 x 55 mm, gradiente = 2 min, longitud de nm.
Intermediario A-18: (2-amino-3-clorofenil)(m-tolil)metanona (A-18) Intermediario A-18A: (3-cloro-2-nitrofenil)(m-toli1)metanona (A-18A) Una solución de ácido 3-cloro-2-nitrobenzoico (2.5 g, 12.40 mmol) en tetrahidrofurano (50 mi) se trató con cloruro de oxalilo (1.194 mi, 13.64 mmol) y luego con DMF (0.096 mi, 1.240 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Después de enfriar a 0 °C, se agregó una solución 1 M de bromuro de m-tolilmagnesio (24.81 mi, 24.81 mmol). Después de 1 h, se agregó otra porción de bromuro de m-tolilmagnesio (24.81 mi, 24.81 mmol). Después de 1 h, la mezcla de reacción se dividió en acetato de etilo (200 mi) y HCl 1 N (150 mi). La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 100 mi). Las fases orgánicas combinadas se secaron en Na2SC>4, se filtraron y se concentraron. El material crudo se purificó mediante cromatografía instantánea (Teledyne ISCO CombiFlash Rf, de 0 % a 100 % de solvente A/B = acetato de etilo/heptano, REDISEP® SÍO2 de 120 g) para obtener el Intermediario A-18A (0.700 g, 21 %). RMN-1!! (400MHz, DMSO-d6) d 8.04 (dd, J = 8.1, 1.1 Hz, 1H), 7.82 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.71 (dd, J = 7.7, 1.1 Hz, 1H), 7.66-7.54 (m, 3H), 7.52-7.46 (m, 1H), 2.40 (s, 3H).
Intermediario A-18: Una mezcla del Intermediario A-18A (0.710 g, 2.58 mmol) en THF (7.5 mi), etanol (14.75 mi) y agua (3.7 mi) se trató con cloruro de amonio acuoso saturado (4 mi) y hierro en polvo (0.647 g, 11.59 mmol). Luego la mezcla se calentó a 100 °C con agitación. Después 2 h, la mezcla de reacción se filtró a través de CELITE®, y el filtrado se dividió en acetato de etilo (100 mi) y NaHCCh acuoso saturado (75 mi). La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (1 x 50 mi). Las fases orgánicas combinadas se secaron con Na2s04, se filtraron y se concentraron. El material crudo se purificó mediante cromatografía instantánea (Teledyne ISCO CombiFlash Rf, de 0 % a 100 % de solvente A/B = acetato de etilo/heptano, REDISEP® Si02 de 24 g) para obtener el Intermediario A-18 (0.417 g, 66 %). RMN-1H (400MHz, DMS0-d6) d 7.56 (dd, J = 7.8, 1.4 Hz, 1H), 7.47-7.35 (m, 4H), 7.31 (dd, J = 8.0, 1.4 Hz, 1H), 7.01 (s, 2H), 6.61 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 2.39 (s, 3H).
Intermediario A-19: (2-amino-3-metoxifenil)(m-tolil)metanona (A-19) El Intermediario A-19 se preparó del ácido 3-metoxi-2-nitrobenzoico de conformidad con el procedimiento de síntesis general descrito para el Intermediario A-18. RT de HPLC = 2.21 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C183.5 mm, 2.1 x 30 m , gradiente = 2 min, longitud de nm). [M+H+] = 246.
Intermediario A-20: (2-amino-3-clorofenil)(o-tolil)metanona (A-20) Intermediario A-20A: 7-cloro-3-hidroxi-3-(o-tolil)indolin-2-ona (A-20A) En un matraz de fondo redondo de 100 mi, se enfrió una solución de 7-cloroindolin-2,3-diona (1 g, 5.51 mmol) en THF (10 mi) en un baño de hielo/agua. Se agregó una solución de bromuro de o-tolilmagnesio (2 M, 5.51 mi, 11.01 mmol), y la mezcla de reacción se retiró del baño de enfriamiento y se calentó a temperatura ambiente. Después de 1 hora, la mezcla de reacción se inactivó con NH4CI acuoso saturado y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó en MgSO4, se filtró y se concentró para obtener el Intermediario A-20A. MS(ES): m/z = 272 [M-H]; HPLC: RT = 2.478 min (H2O/Me0H con TFA, CHROMOLITH® ODS S5 4.6 x 50 mm, gradiente = 4 min, longitud de nm).
Intermediario A-20: En un matraz de fondo redondo de 250 mi, se calentó una solución de ferrocianuro de potasio (5.28 g, 14.33 mmol), NaHCO3 (1.25g, 14.88 mmol) y NaOH (0.22 g, 5.51 mmol) en agua (45 mi) a 100 °C. Después de 30 min, se agregó por goteo una solución del Intermediario A-20A (1.5 g, 5.51 mmol) en THF (2 mi) durante 5 min, la mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 17 horas' y luego se enfrió a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con NaHCCh acuoso saturado y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se trató con carbón activado, se secó en MgS04, se secó y se concentró para obtener el Intermediario A-20 (1.208 g, 89 %). MS(ES): m/z = 246 [M+H+]; HPLC: RT = 3.208 min (H20/Me0H con TFA, CHROMOLITH® ODS S5 4.6 x 50 mm, gradiente = 4 min, longitud de nm).
RMN-1H (500MHz, DMSO-d6) d 7.55 (dd, J = 7.6, 1.5 Hz, 1H), 7.48-7.37 (m, 3H), 7.33 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.29 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.22 (dd, J = 7.6, 1.2 Hz, 1H), 7.05 (dd, J = 8.2, 1.5 Hz, 1H), 6.54 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 2.16 (s, 3H).
Los compuestos enumerados a continuación en la Tabla 4 (Intermediarios A-21 a A-22) se prepararon de conformidad con el procedimiento de síntesis general descrito para el Intermediario A-20, usando el reactivo de isatina y organometálico adecuado.
Tabla 4 1 Me0H/H2O/TFA al 0.1 %, Waters Sunfire C183.5 mp\ 2.1 x 30 mm, 1 ml/min, 4 min de gradiente, longitud de onda 254 nm). 2 H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 2.1 x 30 mm, gradiente = 4 min, longitud de nm.
Intermediario A-23: (2-aminofenil)(m-tolil)metanona (A-23) A un matraz de fondo redondo de 250 mi, cargado con magnesio (0.947 g, 39.0 mmol) y dietiléter (50.0 mi), se agregaron 2 gotas de dibromoetano. La mezcla de reacción se calentó a 60 °C durante 5 min y luego se retiró del calor. Luego, se agregó lentamente l-bromo-3-metilbenceno (5 g, 29.2 mmol) en dietiléter (50 mi), en porciones hasta que se obtuvo el reflujo. Se agregó por goteo el bromuro resultante para mantener el reflujo. Después de la adición, la mezcla de reacción se sometió a reflujo durante 3 h. Luego, se agregó lentamente 2-aminobenzonitrilo (1.151 g, 9.74 mmol) en dietiléter (50.0 mi) durante 10 min. La mezcla resultante se sometió a reflujo durante la noche. El volumen de la mezcla de reacción se redujo a 1/3, y se agregaron 100 g de hielo picado y 50 mi de HCl 6 N con agitación. Después de 3 h a temperatura ambiente, el pH se ajustó a pH 8 con NaOH 5 N, y la reacción se diluyó con NaHCCb saturado (50 mi). Las dos fases se separaron, y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 200 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron con MgSC>4, se filtraron y se concentraron. El material crudo se purificó mediante cromatografía instantánea (Teledyne ISCO CombiFlash Rf, de 0 % a 70 % de solvente A/B = acetato de etilo/heptano, REDISEP® S1O2 de 80 g) para obtener el Intermediario A-23 (1.84 g, 89%). RMN-1!! (400MHz, DMSO-d6) d 7.44-7.23 (m, 6H), 7.08 (br. s.f 2H), 6.86 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.50 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 2.38 (s, 3H).
Los compuestos enumerados a continuación en la Tabla 5 (Intermediarios A-24 a A-27) se prepararon de conformidad con el procedimiento de síntesis general descrito para el Intermediario A-23, usando el haluro de arilo y nitrilo de arilo adecuados.
Tabla 5 1H20/CH CN con TFA, Sunfire C18 3 .5 mth, 2.1 x 30 mm gradiente = 2 min, longitud de nm.
Intermediario A-28: (2-amino-3-metoxifenil)(5 (trifluorometil)piridin-2-il)metanona Intermediario A-28A: (2-metoxi-6-(5- (trifluorometil)picolinoil)fenil)carbamato de tere-butilo A una solución agitada fría (-23 °C) de 2- metoxifenilcarbamato de tere-butilo (443.3 mg, 1.986 mmol) en eter (5 mi) en N2, se agregó t-BuLi (2.6 mi, 4.42 mmol) . La mezcla de reacción se agitó durante 2 h y luego se enfrió a -78 °C. A la mezcla de reacción, se agregó por goteo una solución de 5-(trifluorometil)picolinato de metilo (501.3 mg, 2.44 mmol) en éter (10 mi) a través de una cánula durante 5 min. Después de 2 h, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 1 hora más, y luego la reacción se inactivó mediante la adición de agua con agitación vigorosa. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc, la fase orgánica se separó, se lavó con NaCl saturado, luego se secó (Na2SO4) , se filtró y se concentró para obtener un sólido amarillo. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (Teledyne ISCO CombiFlash Rf, de 0 % a 100 % de solvente A/B = hexano/EtOAc , REDISEP® SÍO2 de 40 g) para obtener el Intermediario A-28A (546.8 mg, 69.5 % de rendimiento) como un sólido amarillo: RMN-1!! (400 MHz, clorof ormo-d) d ppm 8.83-8.88 (1 H, m) , 8.24 (1 H, d, J = 8.4 Hz) , 8.07 (1 H, dd, J = 8.4, 1.8 Hz) , 7.25 (1 H, d, J = 1.5 Hz) , 7.18-7.24 (1 H, m) , 7.09 (1 H, dd, J = 8.0, 1.7 Hz) , 6.95 (1 H, s) , 3.93 (3 H, s) , 1.25 (9 H, s) .
Intermediario A-28: A una solución agitada del Intermediario A-28A (545 mg, 1.375 mmol) en DCM (15 mi), se agregó TFA (0.106 mi, 1.375 mmol). Después de 2 h, la mezcla de reacción se diluyó con tolueno (30 mi) y luego se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía instantánea (Teledyne ISCO CombiFlash Rf, de 0 % a 20 % de solvente A/B = DCM/MeOH, REDISEP® Si02 de 40 g, que se cargó con una solución de DCM) para obtener el producto Intermediario A-28 (376.8 mg, 93 % de rendimiento)): RMN-1!! (400 MHz, cloroformo-d) d ppm 8.94-8.99 (1 H, m), 8.11 (1 H, dt, J = 8.1, 1.1 Hz), 7.86 (1 H, d, J = 8.1 Hz), 7.17 (1 H, dd, J = 8.4, 1.1 Hz), 6.89 (1 H, dd, J = 7.9, 1.1 Hz), 6.55 (1H, m, J = 16.1 Hz), 3.92 (3H, s).
Intermediario A-29: (2-amino-3-metoxifenil)(5-cloropiridin-2-il)metanona (A-29) Intermediario A-28A: (2-(5-cloropicolinoil)-6-metoxifenil)carbamato de tere-butilo A una solución agitada fría (-23 °C) de 2-metoxifenilcarbamato de tere-butilo (548 mg, 2.454 mmol) en éter (6 mi) en N2í se agregó t-BuLi (3.2 mi, 5.44 mmol).
Después de agitar durante 2.5 h, la mezcla de reacción se enfrió a -78 °C. A la mezcla de reacción, se agregó por goteo una solución de 5-cloropicolinato de etilo (564.5 mg, 3.04 mmol) en éter (12 mi) a través de una cánula durante 5 min. La mezcla de reacción se agitó durante 60 min y luego se calentó a temperatura ambiente. Después de 1.5 h, a la mezcla de reacción, se agregó H2O con agitación vigorosa. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc, y la fase orgánica se separó, se lavó con NaCl saturado, luego se secó (Na2SO4), se filtró y se concentró para obtener el producto Intermediario A-29A (511.5 mg, 57.4 % de rendimiento)) como un sólido amarillo: RMN-1!! (400 MHz, cloroformo-d) d ppm 8.55 (1 H, dd, J = 2.3, 0.6 Hz), 8.08 (1 H, dd, J = 8.4, 0.7 Hz), 7.80 (1 H, dd, J = 8.4, 2.4 Hz), 7.16-7.25 (2 H, m), 7.06 (1 H, dd, J = 7.5, 2.2 Hz), 6.90 (1 H, s), 3.92 (3 H, s), 1.28 (9 H, s).
Intermediario A-29: A una solución agitada del Intermediario A-29A (511.5 mg, 1.410 mmol) en DCM (14 mi), se agregó TFA (14 mi, 182 mmol). Después de 60 min, la mezcla de reacción se concentró al vacío, se volvió a disolver en DCM, se lavó con NaHC03 saturado, se secó (MgS04), se filtró y se concentró para obtener el Intermediario A-29 (402.1 mg, 100 % de rendimiento) como un sólido ámbar: RT de HPLC = 2.763 min.
(Waters Sunfire C18 2.5 mm 2.1 x 30 mm, Me0H/H20/TFA, 4 min de gradiente, longitud de nm), RMN-^H (400 MHz, cloroformo-d) d ppm 8.66 (1 H, dd, J = 2.4, 0.7 Hz) , 7.85 (1 H, dd, J = 8.4, 2.4 Hz) , 7.75 (1 H, dd, J = 8.4, 0.7 Hz), 7.25 (1 H, dd, J = 8.4, 1.1 Hz) , 6.89 (1 I i, dd, J = 7.7, 1.1 Hz) , 6.55 (1 H, dd, J = 8.3, 7.8 Hz) , 4 .74 (2 H, br. s.), 3.91 (3 H, s) . MS(ES) : m/z = 263 [M+H ] .
Intermediario B-l: (S)-3-amino-5 -(3-fluorofenil)-9-metil-IH-benzo [e][1,4]diazepin-2 (3H)-ona (B-l) Intermediario B-1A: (5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-benzo [e][1,4]diazepin-3-il)carbamato de (S)-bencilo (B-1A) En un matraz de fondo redondo de 1 1, se enfrió una solución de ácido 2- (IH-benzo [d][1,2,3]triazol-1-il)-2-( (fenoxicarbonil)amino)acético (J. Org . Chem. , 55:2206-2214 (1990)) (19.37 g, 62.0 mmol) en THF (135 mi) en un baño de hielo/agua y se trató con cloruro de oxalilo (5.43 mi, 62.0 mmol) y 4 gotas de DMF. La mezcla de reacción se agitó durante 4 horas. Luego, se agregó una solución del Intermediario A-l (7.11 g, 31.0 mmol) en THF (35 mi), y la solución resultante se retiró del baño de hielo/agua y se agitó a temperatura ambiente durante 1.5 horas. Luego la mezcla se trató con una solución de amoníaco (7 M en MeOH) (19.94 mi, 140 mmol). Después de 15 min, se agregó otra porción de amoníaco (7 M en MeOH) (19.94 mi, 140 mmol), y la mezcla resultante se selló en N2 y se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró a ~l/2 del volumen, luego se diluyó con AcOH (63 mi) y se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. Luego la mezcla de reacción se concentró, y el residuo se diluyó con 500 mi agua para obtener un precipitado. Se agregaron hexano y Et20, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora para formar un sólido naranja. Se retiró Et20 en un flujo de nitrógeno, y la capa acuosa decantó. El residuo se trituró con 40 mi de iPrOH y se agitó a temperatura ambiente para obtener un precipitado blanco. El sólido se filtró, se lavó con iPrOH, y luego se secó en un filtro en un flujo de nitrógeno para obtener el Intermediario B-1A racémico (5.4 g, 41.7 % de rendimiento).
El Intermediario B-1A racémico (5.9 g, 14.3 mmol) se resolvió usando las condiciones de SFC quiral descritas a continuación. El estereoisómero deseado se recolectó como el segundo pico en orden de elución: Instrumento: Berger SFC MGIII, columna: CHIRALPAK® IC 25 x 3 cm, 5 cm; temp. de columna: 45 °C; fase móvil: CO2/Me0H (45/55); velocidad de flujo: 160 ml/min; detección a 220 nm.
Después de la evaporación del solvente, se obtuvo el Intermediario B-1A (2.73 g, 46 % de rendimiento) como un sólido blanco. HPLC: RT = 3.075 min (H2O/Me0H con TFA, CHROMOLITH® ODS S54.6 x 50 mm, gradiente = 4 min, longitud de nm). RT de HPLC quiral: 8.661 min (AD, 60 % (EtOH/MeOH)/heptano) > 99%ee. MS(ES): m/z = 418.3 [M+H+];RMN- ¾ (500MHz, DMSO-de) d 10.21 (s, 1H), 8.38 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.57-7.47 (m, 2H), 7.41-7.29 (m, 8H), 7.25-7.17 (m, 2H), 5.10-5.04 (m, 3H), 2.42 (s, 3H).
Intermediario B-l: (S)-3-amino-5-(3-fluorofenil)-9-metil-1H-benzo[e] [1,4]diazepin-2(3H)-ona.
En un matraz de fondo redondo de 100 mi, una solución del Intermediario B-1A (2.73 g, 6.54 mmol) en ácido acético (12 mi) se trató con HBr, 33 % en HOAc (10.76 mi, 6,.4 mmol), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La solución se diluyó con Et20 para obtener un precipitado amarillo. El sólido amarillo se filtró y se enjuagó con Et20 en nitrógeno. El sólido se transfirió a un matraz de fondo redondo de 100 mi, y se agregó agua (se formó un precipitado blanco). La suspensión se volvió lentamente básica con NaHCO3 saturado. El precipitado pegajoso resultante se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con agua, se secó en MgSC , luego se filtró y se concentró hasta secarse para obtener el Intermediario B-l (1.68 g, 91 % de rendimiento) como una espuma sólida blanca. MS(ES): m/z = 284.2 [M+H+]; HPLC: RT = 1.72 min (H2O/Me0H con TFA, CHROMOLITH® ODS S54.6 x 50 mm, gradiente = 4 min, longitud de nm). RMN-1!! (400MHz, DMSO-d6) d 10.01 (br. s.f 1H), 7.56-7.44 (m, 2H), 7.41-7.26 (m, 3H), 7.22-7.11 (m, 2H), 4.24 (s, 1H), 2.55 (br. s., 2H), 2.41 (s, 3H).
Los compuestos enumerados a continuación en la Tabla 6 (Intermediarios B-2 a B-3) se prepararon de conformidad con el procedimiento de síntesis general descrito para el Intermediario B-l, usando los materiales de inicio, el Intermediario A-10 y el Intermediario A-4, respectivamente.
Tabla 6 1 Me0H/H20/TFA al 0.1 %, Waters Sunfire C183.5 mm, 2.1 x 30 mm, 1 ml/min, 4 min de gradiente, longitud de nm. 2 H2O/CH3CN con TFA al 0.05 %, BEH C181.7 mm, 2.1 x 50 mm, gradiente (2 %-98 %) = 1 min, longitud de nm.
Condiciones de separación quiral: a Instrumento: Berger SFC MGIII; columna: Lux Cell- 4, 250 x 30 mm ID, 5 mm, temp. de columna: 45 °C; fase móvil: CO2/Me0H (70/30); velocidad de flujo: 200 ml/min; detección 220 nm. b Instrumento: Berger SFC MGIII, columna: CHIRALPAK® IC 25 x 3 cm, 5 m; temp. de columna: 45 °C; fase móvil: CÜ2/MeOH (55/45); velocidad de flujo: 180 ml/min; detección a 220 nm.
Intermediario B-4: (S)-3-amino-9-metil-5-fenil-1H-benzofe] [1,4]diazepin-2(3H)-ona (B-4) Intermediario B-4A: (9-metil-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro-lH-benzo[e][1,4]diazepin-3-il)carbamato de (S) bencilo (B-4A) Una mezcla de ácido 2-(IH-benzo [d][1,2,3]triazol-1-il)-2-(((benciloxi)carbonil)amino)acético (5.50 g, 16.87 mmol) se suspendió en THF (40.9 mi) y se enfrió a 0 °C. Se agregó cloruro de oxalilo (1.477 mi, 16.87 mmol) y luego 50 ml de DMF. Se observó evolución de gas. Después de 2 h, se agregó una solución del Intermediario A-9 (1.62 g, 7.67 mmol) y N-metilmorfolina (2.53 mi, 23.00 mmol) en THF (20 mi), y la mezcla de reacción se calentó gradualmente. Después de 3.5 h, se agregó amoníaco (7 M en MeOH) (21.29 mi, 149 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. A esta mezcla, se agregaron 5 mi de amoníaco 7 M, y la mezcla de reacción se agitó durante 5 horas. Luego la mezcla se diluyó con EtOAc, se lavó con H2O, NaOH 1 M y salmuera. La capa orgánica se concentró y se suspendió en ácido acético (15.34 mi), y luego se agregó acetato de amonio (2.96 g, 38.3 mmol). Después de 4.5 horas, se agregó H20 para precipitar el producto. El precipitado se recolectó mediante filtración, se lavó con agua y se secó al aire para obtener el Intermediario B-4A (2.48 g, 81 %). HPLC: RT = 1.01 min (H2O/CH3CN con TFA, BEH C181.75 mm, 2.1 x 50 mm, gradiente = 2 min, longitud de nm); MS(ES): m/z = 400.3 [M+H]+.
El Intermediario B-4A racémico (10.8 g, 27.0 mmol) se resolvió usando las condiciones de SFC quiral descritas a continuación. El estereoisómero deseado se recolectó como el primer pico en orden de elución: Instrumento: Berger SFC MGIII, columna: OJ-H 25 X 3 cm, 5 cm; temp. de columna: 45 °C; fase móvil: CCb/MeOH (70/30); velocidad de flujo: 200 ml/min; detección a 220 nm. Después de la evaporación del solvente, se obtuvo el Intermediario B-4A (2.67 g, 6.68 mmol) como un sólido blanco. HPLC: RT = 2.761 min (H20/Me0H con TFA, CHROMOLITH® SpeedROD 4.6 x 50 mm, gradiente = 4 min, longitud de nm). MS(ES).- m/z = 400.3 [M+H]+.
Intermediario B-4: Una solución del Intermediario B-4A (2.6 g, 6.51 mmol) en 33 % de HBr en HOAc (10.71 mi, 65.1 mmol) se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Se agregó dietiléter, y el sólido amarillo resultante se recolectó mediante filtración y se enjuagó con eter. El sólido higroscópico se disolvió en MeOH, se concentró y se secó al vacío para obtener el Intermediario B-4 (2.59 g, 93 %) . HPLC: RT = 1.433 min (H2O/Me0H con TEA, CHRCMOLITH® SpeedROD 4.6 x 50 mm, gradiente = 4 min, longitud de nm) . MS (ES) : m/z = 266 .0 [M+H] + .
Intermediario B-5: 3-amino-5-(4-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)fenil)-IH-benzo[e][1,4]diazepin- 2(3H)-ona (B-5) Intermediario B-5A: (5-(4-(((tere-butildimetilsilil)oxi)metil)fenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-benzo[e] [1,4]diazepin-3-il)carbamato de bencilo i En un matraz de fondo redondo de 100 mi, una suspensión de ácido 2-(IH-benzo[d][1,2,3]triazol-1-il)-2- (benciloxicarbonilamino)acético (0.952 g, 2.92 mmol) y del Intermediario A-27 (0.83 g, 2.430 mmol) en DCM (20 ml) se trató con una solución de DCC (0.602 g, 2.92 mmol) en DCM (5 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente en nitrógeno durante la noche. A la mezcla de reacción, se agregó Na2C03 saturado (25 ml), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La suspensión se filtró, las capas se separaron, y la fase orgánica se concentró hasta secarse. La mezcla de reacción cruda se diluyó con MeOH (10 ml), y se agregó amoníaco 2 N en metanol (14.58 ml, 29.2 mmol). Luego la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Luego se agregó AcOH (13.91 ml, 243 mmol) directamente a la mezcla de reacción, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente en nitrógeno durante 72 h. El pH de la reacción se ajustó a H 12 con NaHCCb saturado. La mezcla de reacción se dividió en DCM (100 ml) y salmuera (50 ml). La capa acuosa se volvió a extraer con DCM (2 x 50 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron con Na2s04, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material crudo se purificó mediante cromatografía instantánea (Teledyne ISCO CombiFlash Rf, de 0 % a 75 % de solvente A/B = acetato de etilo/heptano, REDISEP® S1O2 de 80 g). La concentración de las fracciones adecuadas produjo una muestra que se purificó nuevamente mediante cromatografía instantánea (Teledyne ISCO CombiFlash Rf, de 0 % a 60 % de solvente A/B = acetato de etilo/heptano, REDISEP® S1O2 de 40 g). La concentración de las fracciones adecuadas produjo el Intermediario B-5A (0.368 g, 29 %). LC/MS RT = 2.472 min, de 10/90 a 90/10 (Me0H/H2O/TFA al 0.1 %, Waters Sunfire C183.5 mp\, 2.1 x 30 mm, 1 ml/min, 2 min de gradiente, longitud de nm); MS(ES): m/z = 530 [M+l]; RMN-1!! (400MHz, DMSO-de) d 10.84 (s, 1H), 8.39 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 7.7Hz, 1H), 7.50-7.43 (m, 1H), 7.43-7.28 (m, 10H), 7.29-7.21 (m, 1H), 5.09 (s, 1H), 5.05 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.98 (s, 1H), 4.78 (s, 2H), 0.95-0.88 (m, 9H), 0.13-0.03 (m, 6H).
Intermediario B-5: Una solución del Intermediario B-5A (330 mg, 0.623 mmol) en acetato de etilo (20 mi) se trató con Pd/C al 20 % (agua al 50 %) (200 mg, 0.623 mmol) para obtener una suspensión. La mezcla de reacción se purgó 3 veces con vacío y nitrógeno, y luego se purgó 3 veces con vacío e hidrógeno. La mezcla se agitó en una atmósfera de hidrógeno durante 4 h. La mezcla de reacción se filtró en CELITE®, y el filtrado se concentró a presión reducida para obtener el Intermediario B-5 (0.190 g, 77 %). HPLC: RT = 2.0.3 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C183.5 mm, 2.1 x 30 mm, gradiente = 2 min, longitud de nm). LC/MS: M+H = 396; RMN-^-H (400MHz, DMSO-d6) d 10.66 (br. s., 1H), 7.59 (ddd, J = 8.3, 7.1, 1.5 Hz, 1H), 7.49-7.43 (m, 2H), 7.41-7.34 (m, 2H), 7.30-7.24 (m, 3H), 7.24-7.17 (m, 1H), 4.77 (s, 1H), 4.71 (s, 1H), 4.24 (s, 2H), 0.94-0.91 (m, 9H), 0.10 (s, 6H).
Los compuestos enumerados a continuación en la Tabla 7 (Intermediarios B-6 a B-26) se prepararon de conformidad con el procedimiento de síntesis general descrito para el Intermediario B-l y los Intermediarios B-4 a B-5, usando el material de inicio indicado.
Tabla 7 i H2 O/CH3CN con TFA, BEH C18 1.75 mm, 2.1 x 50 mtn, gradiente = 2 min, longitud de nm. 2 Me0H/H20/TFA al 0.1 %, Waters Sunfire C18 3.5 mm, 2.1 x 30 mm, 1 ml/min, 4 min de gradiente, longitud de nm. 3 H20/Me0H con TFA al 0.1 %, Luna C18 3 mm, 4.6 x 30 mm, gradiente = 3.5 min, longitud de nm. 4 H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 2.1 x 30 mm, gradiente = 2 min, longitud de nm. 5 Waters Sunfire C18 2.1 x 30 mm 3.5 mth; H20/Me0H/TFA, gradiente = 4 min, longitud de nm. 6 H20/CH3CN con TFA al 0.05 %, BEH C18 1.7 mp\, 2.1 x 50 mm, gradiente (2 %-98 %) = 1 min, longitud de 7 H 0/Me0H con TFA, CHROMOL I TH® ODS S5, 4.6 x 50 mm, gradiente = 4 min, longitud de nm.
Intermediario B-28: 3-amino-9-ciclopropil-5-fenil IH-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona (B-28) Intermediario B-28A: (9-bromo-2-oxo-5-fenil-2,3· dihidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-3-il)carbamato de bencilo (B-28A) El Intermediario B-28A se preparó del Intermediario A-22 mediante los procedimientos generales descritos para el Intermediario B-l. HPLC: RT = 2.048 min (H20/Me0H con TFA, Ascentis Express C182.7 mm, 2.1 x 50 mm, gradiente = 4 min, longitud de nm); MS(ES): m/z = 464 [M+H+].
Intermediario B-28B: (9-ciclopropil-2-oxo-5-fenil- 2,3-dihidro-1H-benzo [e][1,4]diazepin-3-il)carbamato de bencilo (B-28B) A una mezcla agitada del Intermediario B-28A (2.00 g, 4.31 mmol), Pd(dppf)2CI2 (946 mg, 1.29 mmol), fosfato de potasio dibásico (2.25 g, 12.9 mmol) y éster del ácido ciclopropilborónico con el ácido metiliminodiacético (1.70 g, 8.61 mmol) en dioxano (12 mi) en nitrógeno, se agregó agua (3 mi). La mezcla de reacción se calentó a 85 °C durante 20 h y luego se enfrió a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con EtOAc (40 mi) y se filtró a través de una almohadilla de gel de sílice de 1 pulgada (2.54 cm), y en la parte superior se colocó una almohadilla de CELETE® de 1/2 pulgada (l.27cm). Se volvió a eluir con EtOAc. El filtrado se concentró a presión reducida y se purificó mediante cromatografía instantánea (Teledyne ISCO CombiFlash, de 0 % a 17 % de solvente A/B = DCM/acetona, REDISEP® Si02 de 120 g, que se detectó a 254 nM y se controló a 220 nM). La concentración de las fracciones adecuadas produjo el Intermediario B-28B (1.20 g, 65 %). HPLC: RT = 3.246 in (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4.6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenía TFA al 0.1 %, 4 ml/min, controlado a 220 nm) . MS(ES) : m/z = 426.1 [M+H+] ; RMN-1!! (400MHz, DMSO-de) d 10.29 (s, 1H) , 8.38 (d, J = 8.6 Hz, 1H) , 7.57-7.32 (m, 10H) , 7.30 (d, J = 7.5 Hz, 1H) , 7.20 (t, J = 7.6 Hz, 1H) , 7.11 (d, J = 7.3 Hz, 1H) , 5.08 (s, 2H) , 5.04 (d, J = 8.4 Hz , 1H) , 2.26-2.13 (m, 1H) , 1.09-0.95 (m, 2H) , 0.87-0.78 (m, 1H) , 0.61-0.52 (m, 1H) .
Intermediario B-28: El Intermediario B-28 se preparó del Intermediario B-28A mediante tratamiento con 33 % HBr/ácido acético de conformidad con el procedimiento general detallado para el Intermediario B-l. HPLC: RT = 2.085 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4.6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenía TFA al 0.1 %, 4 ml/min, controlado a 220 nm). LC/MS: M+H = 292.1.
RMN-1H (400MHz, DMSO-d6) d 10.78 (s, 1H), 9.01 (br. s., 3H), 7.65-7.48 (m, 5H), 7.38 (dd, J = 7.6, 1.2 Hz, 1H), 7.26 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.19-7.14 (m, 1H), 2.27-2.16 (m, 1H), 1.14-0.98 (m, 2H), 0.91-0.80 (m, 1H), 0.67-0.56 (m, 1H).
Los siguientes Intermediarios (B-29 a B-30) se prepararon de conformidad con los métodos generales descritos para el Intermediario B-5 del material de inicio indicado.
Tabla 8 1 H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 2.1 x 30 mm, gradiente = 2 min, longitud de nm.
Ejemplo 1 (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-l,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida .
Intermediario 1A: 6,6,6 -trifluoro-3-(((S)-5-(3- fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H benzo [e] [1 , 4 ] diazepin-3 - il ) carbamoil) -2 - (3 , 3 , 3 -trifluoropropil)hexanoato de (2S,3R)-tere-butilo ' ' ' En un matraz de fondo redondo de 100 mi, una solución del Intermediario B-l (1683 mg, 5.94 mmol), Et3N (1.656 mi, 11.88 mmol) e Intermediario S-l en DMF (20 mi) se trató con tetrafluoroborato de o-benzotriazol-1-il -N,N,N' ,N'-tetrametiluronio (3815 mg, 11.88 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se diluyó con agua y NaHCCb acuoso saturado. Se formó un precipitado blancuzco, que se filtró y se lavó con agua. El sólido resultante se secó en el filtro en un flujo de nitrógeno para obtener el Intermediario 1A (3.7 g, 99 % de rendimiento). MS(ES): m/z = 632.4[M+H+],- HPLC: RT = 3.635 min Pureza = 98%. (H2O/Me0H con TFA, CHROMOLITH® ODS S54.6 x 50 mm, gradiente = 4 min, longitud de nm). RMN-Hí (400MHz, metanol-d-i) d 7.53 (t, J = 4.5 Hz, 1H), 7.46-7.30 (m, 3H), 7.28-7.23 (m, 1H), 7.23-7.18 (m, 2H), 5.37 (s, 1H), 2.88 (td, J = 10.4, 3.4 Hz, 1H), 2.60 (td, J = 10.2, 4.1 Hz, 1H), 2.54-2.40 (m, 1H), 2.47 (s, 3 H), 2.33-2.12 (m, 3H), 1.98-1.69 (m, 4H), 1.51 (s, 9H).
Intermediario IB: Ácido (2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3- (((S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-3-il)carbamoil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoico .
. (IB) En un matraz de fondo redondo de 250 mi, una solución del Intermediario 1A (3.7 g, 5.86 mmol) en DCM (25 mi) se trató con TFA (25 mi), y la solución resultante de color naranja pálido se agitó a temperatura ambiente durante 1.5 horas. Luego la mezcla de reacción se concentró para obtener el Intermediario IB. HPLC: RT = 3.12 min (H20/Me0H con TFA, CHROMOLITH® ODS S54.6 x 50 rara, gradiente = 4 min, longitud de nm). MS(ES): m/z = 576.3 (M+H)+. RM -1!! (400MHz, metanol-d4) d 7.54 (t, J = 4.5 Hz, 1H), 7.49-7.29 (m, 3H), 7.28-7.15 (m, 3H), 5.38 (br. s., 1H), 2.89 (td, J = 10.3, 3.7 Hz, 1H), 2.67 (td, J = 9.9, 4.2 Hz, 1H), 2.56-2.38 (m, 1H), 2.48 (s, 3 H), 2.34-2.13 (m, 3H), 2.00-1.71 (m, 4H).
Ejemplo 1: En un matraz de fondo redondo de 250 mi, una solución del Intermediario IB (4.04 g, 5.86 mmol) en THF (50 mi) se trató con amoníaco (2 M en iPrOH) (26.4 mi, 52.7 mmol), y luego con HOBT (1.795 g, 11.72 mmol) y EDC (2.246 g, 11.72 mmol). La suspensión blanca resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se diluyó con agua y NaHCC>3 acuoso saturado. El sólido resultante se filtró, se enjuagó con agua y luego se secó en el filtro en un flujo de nitrógeno. El producto crudo se suspendió en 20 mi de iPrOH, se agitó a temperatura ambiente durante 20 min, luego se filtró, se lavó con iPrOH y se secó al vacío para obtener 2.83 g de sólido. El sólido se disolvió en EtOH a reflujo (100 mi) y se trató lentamente con 200 mg de carbón activado, que se agregó en pequeñas porciones. La mezcla caliente se filtró a través de CELITE® y se enjuagó con EtOH caliente. El filtrado se redujo a la mitad del volumen y se dejó enfriar, y el precipitado blanco formado se filtró y se enjuagó con EtOH para obtener 2.57 g de sólido blanco. Una segunda recristalización de EtOH (70 mi) produjo el Ejemplo 1 (2.39 g, 70 % de rendimiento) como un sólido blanco. HPLC: RT = 10.859 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 3.0 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 575.3 [M+H+]; RMN-1H (400MHz, metanol-d4) d 7.57-7.50 (m, 1H), 7.47-7.30 (m, 3H), 7.29-7.15 (m, 3H), 5.38 (s, 1H), 2.85-2.75 (m, 1H), 2.59 (td, J = 10.5, 4.0 Hz, 1H), 2.53-2.41 (m, 4H), 2.31-2.10 (m, 3H), 1.96-1.70 (m, 4H).
Ejemplo 2 (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-clorofenil)-9-etil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (2) Intermediario 2A: 3- ((5-(3-clorofenil)-9-etil-2-oxo-2,3-dihidro-IH-benzo[e][1,4]diazepin-3-il)carbamoil)- 6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoato de (2S,3R)-tere-butilo (2A) A una solución del Intermediario B-7 dibromhidrato (130 mg, 0.273 mmol), Intermediario S-l (100 mg, 0.273 mmol) y TBTU (105 mg, 0.328 mmol) en DMF (2 mi), se agregó TEA (0.190 mi, 1.367 mmol) por goteo. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla de reacción se vertió lentamente en una solución agitada de agua con cierta cantidad de NaHCCb saturado. La mezcla de producto se extrajo con DCM, se lavó con solución de LiCl al 10 %, se secó y se concentró al vacío. La mezcla de producto crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (ISCO, de 0 % a 50 % de EtOAC/heptano durante 10 minutos, usando una columna de 12 g) para obtener el Intermediario 2A (116 mg, 0.175 mmol, 64.1 % de rendimiento). RT de HPLC = 1.20 min, H2O/CH3CN con TFA, BEH C181.75 mm, 2.1 x 50 mm, gradiente = 2 min, longitud de nm. MS(ES): m/z = 662.3 [M+H+].
Intermediario 2B: Acido (2S,3R)-3-((5-(3-clorofenil)-9-etil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-3-il)carbamoil)-6,6,6-trifluoro-2 (3,3,3-trifluoropropil)hexanoico (2B) Una solución del Intermediario 2A (115 mg, 0.174 mmol) en DCM (3 i) se trató con TFA (0.668 mi, 1.737 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y luego se concentró hasta secarse. La mezcla cruda se diluyó con tolueno y nuevamente se concentró hasta secarse para obtener el Intermediario 2B (87 mg, 0.144 mmol, 83 % de rendimiento). HPLC RT = 3.695 (H2O/CH3CN con TFA, Waters Sunfire C182.1 x 30 mm 3.5 um, 4 min de gradiente, detección a 220 nm). MS(ES): m/z = 606.1 [M+H+].
Ejemplo 2: Una solución del Intermediario 2B (101 mg, 0.167 mmol), HOBT (77 mg, 0.500 mmol) y EDC (96 mg, 0.500 mmol) en THF (2381 ml) se trató con amoníaco 2 N en IPA (583 ml, 1.167 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Luego la mezcla de reacción se diluyó con agua (5 mi) y se extrajo con DCM. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron y luego se concentraron al vacío. La mezcla de producto crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (ISCO, de 0 % a 100 % de EtOAC/heptano durante 15 minutos, usando una columna de 12 g). Después de la separación de los diastereómeros (Berger SFC MGII, IC quiral, 25 x 3 cm ID, 5 mm, 92/8 CCh/MeOH, 85 ml/min, detección a 220 nm), se obtuvo el Ejemplo 2 (38 mg, 38 %). HPLC: RT = 9.656 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mih, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 605.1 [M+H+]; RMN-1H (400MHz, metanol-d4) d 7.70-7.63 (m, 1H), 7.61- 7.56 (m, 1H), 7.55-7.45 (m, 2H), 7.44-7.37 (m, 1H), 7.33-7.19 (m, 2H), 5.38 (s, 1H), 3.38-3.26 (m, 2H), 3.08-2.88 (m, 1H), 2.87-2.70 (m, 2H), 2.69-2.40 (m, 2H), 2.36-2.02 3H), 2.01-1.69 (m, 3H), 1.34 (t, J = 7.5 Hz, 3H).
Los siguientes ejemplos se prepararon de conformidad con los métodos generales descritos para el Ejemplo 1 y el Ejemplo 2.
Ejemplo 3 (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-clorofenil)-9-isopropil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-l,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (3) El Ejemplo 3 se preparó del Intermediario B-2 y del Intermediario S-l quirales de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. Se obtuvo el Ejemplo 3. HPLC: RT = 10.134 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): xa/ z - 619 [M+H+]; RMN-1!! (400MHz, metanol-d4) d 7.67 (m, 2H), 7.48 (m, 2H), 7.42 (m, 1H), 7.33 (m, 1H), 7.23 (m, 1H), 5.38 (s, 1H), 3.56-3.38 (m, 1H), 2.92-2.74 (m, 1H), 2.68-2.42 (m, 2H), 2.38-2.09 (m, 3H), 2.00-1.69 (m, 4H), 1.41 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.29 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
Ejemplo 4 (2R,3S)-N-(9-cloro-5-(3,4-dimetilfenil)-2-oxo-2,3 dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)succinamida .
El Ejemplo 4 se preparó del Intermediario B-6 y del Intermediario S-2 de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. Después de la separación de los diastereómeros mediante SFC quiral (instrumento: Berger SFC MGII, columna: IC quiral 25 x 3 cm, 5 pm; fase móvil: 88/12 CCb/MeOH, velocidad de flujo: 85 ml/min; detección a 220 nm), se obtuvo el Ejemplo 4. HPLC: RT = 9.771 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 619 [M+H+]; RMN-1H (400MHz, metanol-d4) d 7.76 (dd, J = 7.8, 1.7 Hz, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.34-7.15 (m, 4H), 5.35 (s, 1H), 2.75 (td, J = 10.6, 4.3 Hz, 1H), 2.58-2.48 (m, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.25-2.05 (m, 3H), 1.86-1.66 (m, 4H), 1.65-1.45 (m, 3H).
Ejemplo 5 (2R,3S)-N-(9-cloro-5(3,5-dimetilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2- (3,3,3-trifluoropropil)succinamida (5) El Ejemplo 5 se preparó del Intermediario B-27 y del Intermediario S-2 de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. Después de la separación de los diastereómeros mediante SFC quiral (instrumento: Berger SFC MGII, columna: RR Whelk 0125 x 3 cm, 5 pm; fase móvil: 85/15 C02/Me0H, velocidad de flujo: 85 ml/min; detección a 220 nm), se obtuvo el Ejemplo 5. HPLC: RT = 9.824 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 619 [M+H+]; RMN-1!! (400MHz, metanol-d.í) d 7.76 (dd, J = 7.7, 1.8 Hz, 1H), 7.32-7.23 (m, 2H), 7.16 (s, 3H), 5.36 (s, 1H), 2.81-2.71 (m, 1H), 2.53 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 2.31 (s, 6H), 2.24-2.04 (m, 3H), 1.84-1.69 (m, 3H), 1.62-1.47 (m, 3H), 1.29 (s, 1H).
Ejemplo 6 (2R,3S)-N-((3S)-9-etil-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida ' ' El Ejemplo 6 se preparó del Intermediario B-8 y del Intermediario S-l de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separación de los diastereómeros (Berger SFC MGII, CHIRALPAK® IC, 25 x 3 cm ID, 5 mm, 92/8 CO2/Me0H, 85 ml/min, detección a 220 nm) produjo el Ejemplo 6. HPLC: RT = 9.556 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 4.6 x 150 m, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z 585.2 = [M+H+]; RMN-1H (400MHz, metanol-d-i) d 7.60-7.52 (m, 1H), 7.49-7.43 (m, 1H), 7.38-7.16 (m, 5H), 5.37 (s, 1H), 3.04-2.89 (m, 1H), 2.87-2.71 (m, 2H), 2.68-2.39 (m, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.33-2.09 (m, 3H), 1.99-1.65 (m, 4H), 1.34 (t, J = 7.5 Hz, 3H).
Ejemplo 7 (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-clorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3 dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (7) El Ejemplo 7 se preparó del Intermediario B-3 y del Intermediario S-l de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separación de los diastereómeros mediante cromatografía SFC preparativa (instrumento: Berger SFC MGII, columna: OD-H quiral 25 x 3 cm, 5 mm; fase móvil: 90/10 CCh/MeOH; velocidad de flujo: 85 ml/min; detección a 220 nm.) produjo el Ejemplo 7. HPLC: RT = 9.328 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 3.0 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 591.2 [M+H+]; RMN-HI (400MHz, metanol-d4) d 7.65 (t, J = 1.9 Hz, 1H), 7.59-7.50 (m, 2H), 7.50-7.44 (m, 1H), 7.44-7.37 (m, 1H), 7.27-7.20 (m, 2H), 5.39 (s, 1H), 2.86-2.76 (m, 1H), 2.66-2.56 (m, 1H), 2.56-2.46 (m, 4H), 2.33-2.14 (m, 3H), 1.95-1.74 (m, 4H).
Ejemplo 8 (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-clorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil) 2-(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (8) El Ejemplo 8 se preparó del Intermediario B-3 y del Intermediario S-2 de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separación de los diastereómeros mediante cromatografía SFC preparativa (instrumento: Berger SFC MGII, columna: Regis Welk-0 R,R 25 x 3 cm, 5 mm; fase móvil: 85/15 COa/MeOH; velocidad de flujo: 85 ml/min; detección a 220 nm.) produjo el Ejemplo 8. HPLC: RT = 9.531 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C183.5 mm, 3.0 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 605.2 [M+H+]; RMN-1H (400MHz, metanol-d4) d 7.69 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.58-7.50 (, 2H), 7.47-7.40 (m, 2H), 7.27-7.19 (m, 2H), 5.37 (s, 1H), 2.78 (td, J = 10.3, 4.0 Hz, 1H), 2.60-2.46 (m, 5H), 2.30-2.11 (m, 3H), 1.89-1.71 (m, 3H), 1.67-1.50 (m, 3H).
Ejemplo 9 (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-metilfenil)-2-OXO-9- (trifluorometil)-2,3-dihidro-1H-l,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis (3,3,3-trifluoropropil)succinamida ' El Ejemplo 9 se preparó del Intermediario B-9 y del Intermediario S-l de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separación de los diastereómeros mediante cromatografía SFC preparativa (instrumento: Berger SFC MGII, columna: OD-H quiral 25 x 3 cm, 5 pm; fase móvil: 92/8 C02/Me0H; velocidad de flujo: 85 ml/min; detección a 220 nm.) produjo el Ejemplo 9. HPLC: RT = 9.488 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 3.0 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 625.3[M+H+]; RMN-ÍH (400MHz, metanol-d4) d 8.03 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.68-7.62 (m, 1H), 7.53-7.45 (m, 2H), 7.40-7.30 (m, 3H), 5.47 (s, 1H), 2.82 (td, J = 10.5, 4.0 Hz, 1H), 2.60 (td, J = 10.5, 3.7 Hz, 1H), 2.53-2.41 (m, 1H), 2.38 (s, 3H), 2.32-2.14 (m, 3H), 1.99-1.71 (m, 4H).
Ejemplo 10 (2R,3S)-N-((3S)-9-cloro-5(3,5-dimetilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (10) El Ejemplo 10 se preparó del Intermediario B-27 y del Intermediario S-l de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separación de los diastereómeros mediante SFC quiral (instrumento: Berger SFC MGIII, columna: CHIRALCEL® OD-H 25 x 3 cm, 5 pm; fase móvil: 92/18 CC>2/MeOH; velocidad de flujo: 150 ml/min; detección a 220 nm) produjo el Ejemplo 10. HPLC: RT = 10.878 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 605 [M+H+]; RMN-1!! (400MHz, metanol-d4) d 7.76 (dd, J = 7.7, 1.5 Hz, 1H), 7.33-7.23 (m, 2H), 7.15 (s, 3H), 5.39 (s, 1H), 2.84-2.75 (m, 1H), 2.59 (td, J = 10.3, 4.2 Hz, 1H), 2.51-2.39 (m, 1H), 2.30 (s, 6H), 2.26-2.12 (m, 3H), 1.95-1.70 (m, 4H).
Ejemplo 11 (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-metilfenil)-2-oxo-9-(trifluorometil)-2,3-dihidro-1H-l,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)sucoinamida (11) El Ejemplo 11 se preparó del Intermediario B-9 y del Intermediario S-2 de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separación de los diastereómeros mediante cromatografía SFC preparativa (instrumento: Berger SFC MGII, columna: OD-H quiral 25 x 3 cm, 5 pm; fase móvil: 92/8 CC>2/ eOH; velocidad de flujo: 85 ml/min; detección a 220 nm) produjo el Ejemplo 11. HPLC: RT = 9.699 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 3.0 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 639.3 [M+H+]; RMN-1!! (400MHz, metanol-d4) d 8.03 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.67-7.61 (m, 1H), 7.52-7.44 (m, 2H), 7.41-7.31 (m, 3H), 5.45 (s, 1H), 2.83-2.74 (m, 1H), 2.61-2.42 (m, 2H), 2.39 (s, 3H), 2.35-2.05 (m, 3H), 1.90-1.69 (m, 3H), 1.68-1.48 (m, 3H).
Ejemplo 12 (2R,3S)-N-((3S)-9-isopropil-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (12) El Ejemplo 12 se preparó del Intermediario B-10 y del Intermediario S-l de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separación de los diastereómeros (instrumento: Berger SFC MGIII, columna: Lux Cell-4, 250 x 30 mm, 5 mm; temp. de columna: 45 °C, fase móvil: 88/12 CO2/MeOH; detección a 220 nm) produjo el Ejemplo 12. HPLC: RT = 15.924 min (Me0H/H2O con TFA, Sunfire C183.5 mth, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254); MS(ES): m/z = 599 [M+H+]; RMN-1!! (400MHz, metanol-d4) d 7.63 (dd, J = 7.7, 1.3 Hz, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.37-7.24 (m, 4H), 7.19 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.36 (s, 1H), 3.52-3.37 (m, 1H), 2.86-2.74 (m, 1H), 2.64-2.42 (m, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.32-2.11 (m, 3H), 1.96-1.69 (m, 4H), 1.39 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.28 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
Ejemplo 13 (2R,3S)-N-((3S)-9-isopropil-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (13) El Ejemplo 13 se preparó del Intermediario B-ll y del Intermediario S-l de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separación de los diastereómeros (instrumento: Berger SFC MGII, columna: CHIRALPAK® IC 250 x 30 mm, 5 mp?; fase móvil: 90/10 CCh/MeOH; velocidad de flujo: 85 ml/min; detección a 220 nm) produjo el Ejemplo 13. HPLC: RT = 15.481 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 586 [M+H+]; RMN-1H (400MHz, metanol-d-i) d 7.70-7.56 (m, 3H), 7.56-7.47 (m, 1H), 7.47-7.36 (m, 2H), 7.36-7.25 (m, 1H), 7.25-7.12 (m, 1H), 5.39 (s, 1H), 3.53-3.38 (m, 1H), 2.83 (m, 1H), 2.70-2.41 (m, 2H), 2.37-2.05 (m, 3H), 2.00-1.69 (m, 4H), 1.40 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.35-1.21 (m, 3H).
Ejemplo 14 (2R,3S)-N-((3S)-9-(ciclopropiloxi)-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-l,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)succinamida ' El Ejemplo 14 se preparó del Intermediario B-12 y del Intermediario S-2 de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separación de los diastereómeros (Berger SFC MGII, AS-H quiral 25 X 3 cm ID, 5 mm, 80/20 CCh/MeOH, 85 ml/min, detección a 220 nm) produjo el Ejemplo 14. HPLC: RT = 10.064 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 627.20 [M+H+]; RMN-1H (400MHz, metanol-d-i) d 7.65-7.56 (m, 1H), 7.46-7.39 (m, 1H), 7.37-7.16 (m, 4H), 7.00-6.84 (m, 1H), 5.37 (s, 1H), 4.06-3.91 (m, 1H), 2.87-2.68 (m, 1H), 2.64-2.44 (m, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.32-2.00 (m, 3H), 1.98-1.50 (m, 4H), 1.50-1.22 (m, 2H), 1.05-0.84 (m, 4H).
Ejemplo 15 (2R,3S)-N-((3S)-9-(ciclopropiloxi)-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-l,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida ' El Ejemplo 15 se preparó del Intermediario B-12 y del Intermediario S-l de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separación de los diastereómeros (Berger SFC MGII, AS-H quiral 25 X 3 cm ID, 5 mm, 80/20 CC^/MeOH, 85 ml/min, detección a 220 nm) produjo el Ejemplo 15. HPLC: RT = 9.844 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 pm, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 613.25 [M+H+]; RMN-!H (400MHz, metanol-d4) d 7.63-7.58 (m, 1H), 7.47-7.39 (m, 1H), 7.38-7.20 (m, 4H), 6.98-6.91 (m, 1H), 5.40 (s, 1H), 4.04-3.94 (m, 1H), 2.88-2.75 (m, 1H), 2.66-2.55 (m, 1H), 2.55-2.39 (m, 1H), 2.39-2.33 (m, 2H), 2.32-2.09 (m, 3H), 2.01-1.65 (m, 3H), 1.52-1.23 (m, 3H), 1.03-0.84 (m, 4H).
Ejemplo 16 (2R,3S)-N-((3S)-9-(ciclopropiloxi)-2-oxo-5-fenil- 2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-rif luoropropil)succinamida (16) El Ejemplo 16 se preparó del Intermediario B-13 y del Intermediario S-2 de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separación de los diastereómeros (Berger SFC MGII, AS-H quiral 25 X 3 cm ID, 5 mm, 80/20 CCh/MeOH, 85 ml/min, detección a 220 nm) produjo el Ejemplo 16. HPLC: RT = 9.74 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mth, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 613.2 [M+H+]; RMN-Hí (400MHz, metanol-d4) d 7.64-7.55 (m, 3H), 7.55-7.49 (m, 1H), 7.44 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.26 (s, 1H), 6.98-6.91 (m, 1H), 5.38 (s, 1H), 4.04-3.96 (m, 1H), 2.81-2.71 (m, 1H), 2.62-2.41 (m, 2H), 2.18 (s, 4H), 1.90-1.68 (m, 3H), 1.68-1.33 (m, 3H), 0.93-0.86 (m, 4H).
Ej emplo 17 (2R,3S)-N-((3S)-9-cloro-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-IH-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil) 2-(3,3,3-trifluoropropil)succinamida ' El Ejemplo 17 se preparó del Intermediario B-14 e Intermediario S-2 de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. El sólido se purificó mediante cromatografía SFC preparativa (Berger SFC MGII, AD-H 250 x 30 mm ID, 5 cm, 75/25 CO2/IPA, 150 ml/min) para obtener el Ejemplo 17. HPLC: RT = 11.04 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 605.3 [M+H+]; RMN-!H (400MHz, DMSO-de) d 10.45 (s, 1H), 9.45 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.84 (dd, J = 5.9, 3.3 Hz, 1H), 7.62 (br. s., 1H), 7.41 (s, 1H), 7.38-7.34 (m, 2H), 7.33-7.26 (m, 3H), 7.03 (s, 1H), 5.21 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 2.79-2.70 (m, 1H), 2.69-2.59 (m, 1H), 2.46-2.38 (m, 1H), 2.34 (s, 3H), 2.31-2.19 (m, 2H), 2.18-2.07 (m, 1H), 1.65-1.53 (m, 3H), 1.49-1.41 (m, 1H), 1.39-1.29 (m, 2H).
Ejemplo 18 (2R,3S)-N-((3S)-9-metil-2-oxo-5-(3- (trifluorometil)fenil)-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (18) E1 Ejemplo 18 se preparó del Intermediario B-15 y del Intermediario S-2 de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separación de los diastereómeros mediante cromatografía SFC preparativa (instrumento: Berger SFC MGII, columna: Regis Welk-0 R,R 25 x 3 cm, 5 mm; fase móvil: 90/10 CC/MeOH; velocidad de flujo: 85 ml/min; detección a 220 nm.) produjo el Ejemplo 18. HPLC: RT = 9.678 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C183.5 mm, 3.0 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 639.4 [M+H+]; RMN-1H (400MHz, metanol-d4) d 8.01 (s, 1H), 7.83 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.68-7.60 (m, 1H), 7.57 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.28-7.17 (m, 2H), 5.40 (s, 1H), 2.79 (td, J = 10.5, 4.0 Hz, 1H), 2.62-2.45 (m, 5H), 2.35-2.18 (m, 2H), 2.16-2.03 (m, 1H), 1.91-1.70 (m, 3H), 1.69-1.48 (m, 3H).
Ejemplo 19 (2R,3S)-N-((3S)-9-(ciclopropiloxi)-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (19) El Ejemplo 19 se preparó del Intermediario B-13 y del Intermediario S-l de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separación de los diastereómeros (Berger SFC MGII, AS-H quiral 25 x 3 cm ID, 5 mm, 80/20 CCh/MeOH, 85 ml/min, detección a 220 nm) produjo el Ejemplo 19. HPLC: RT = 14.967 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mth, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 599.1 [M+H+]; RMN-1!! (400MHz, metanol-d4) d 7.61 (dd, J = 8.1, 1.3 Hz, 1H), 7.59- 7.54 (m, 2H), 7.54-7.47 (m, 1H), 7.47-7.37 (m, 2H), 7.25 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.95 (dd, J = 7.9, 1.1 Hz, 1H), 5.41 (s, 1H), 4.00 (t, J = 4.4 Hz, 1H), 2.82 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 2.61 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 2.55-2.38 (m, 1H), 2.36-2.11 (m, 3H), 2.07-1.70 (m, 4H), 0.91 (d, J = 4.4 Hz, 4H).
Ejemplo 20 (2R,3S)-N-((3S)-9-meti1-2-oxo-5-(3-(trifluorometil)fenil)-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida ' . (20) El Ejemplo 20 se preparó del Intermediario B-15 y del Intermediario S-l de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separación de los diastereómeros mediante cromatografía SFC preparativa (instrumento: Berger SFC MGII, columna: PHENOMENEX® Lux Cellulose 2 25 x 3 cm, 5 pm; fase móvil: 92/8 CCh/MeOH; velocidad de flujo: 85 ml/min; detección a 220 nm) produjo el Ejemplo 20. HPLC: RT = 9.483 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 3.0 x 150 ratn, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 625.1 [M4H+]; RMN-1!! (400 MHz, metanol-d4) d 7.97 (s, 1H), 7.81 (dd, J = 13.1, 7.8 Hz, 2H), 7.67-7.60 (m, 1H), 7.57 (dd, J = 6.8, 1.3 Hz, 1H), 5.43 (s, 1H), 2.83 (td, J = 10.5, 4.0 Hz, 1H), 2.61 (td, J = 10.3, 3.5 Hz, 1H), 2.57-2.46 (m, 4H), 2.32-2.12 (m, 3H), 1.98-1.74 (m, 4H).
Ejemplo 21 (2R,3S)-N-((3S)-9-cloro-5-(2-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (21) El Ejemplo 21 se preparó del Intermediario B-16 y del Intermediario S-l de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. El estereoisómero deseado se recolectó como el segundo pico en orden de elución mediante cromatografía SFC (instrumento: Berger SFC MGII, columna: OD-H quiral 25 x 3 cm, 5 mm; fase móvil: 85/15 CC>2/MeOH; velocidad de flujo: 85 ml/min; detección a 220 nm) para obtener el Ejemplo 21. HPLC: RT = ll.llmin (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 591[M+H+]; RMN-1H (500MHz, metanol-d4) d 7.73 (dd, J = 8.0, 1.4 Hz, 1H), 7.40-7.32 (m, 1H), 7.29-7.21 (m, 3H), 7.18 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.08 (dd, J = 7.9, 1.5 Hz, 1H), 5.45 (s, 1H), 2.79 (td, J = 10.5, 4.0 Hz, 1H), 2.59 (td, J = 10.4, 3.9 Hz, 1H), 2.51- 2.38 (m, 1H), 2.30-2.08 (m, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.94-1.67 (m, 4H).
Ej emplo 22 (2R, 3S) -N- ( ( 3S) -5 - (4 - f luorof enil ) -9-metil-2-oxo-2 , 3 -dihidro- 1H- l , 4 -benzodiazepin-3 - il ) -2 , 3 -bis (3 , 3 , 3 -trif luoropropil) succinamida (22) El Ejemplo 22 se preparó del Intermediario B-17 y del Intermediario S-l de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separación de los diastereómeros mediante cromatografía SFC preparativa (instrumento: Berger SFC MGII, columna: IC quiral 25 x 3 cm, 5 pm; fase móvil: 92/8 CO2/Me0H; velocidad de flujo: 85 ml/min; detección a 220 nm) produjo el Ejemplo 22. HPLC: RT = 9.016 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 3.0 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 575.1 [M+H+]; RM -1H (400MHz, metanol-d4) d 7.69-7.60 (m, 2H), 7.53 (dd, J = 5.8, 2.5 Hz, 1H), 7.24-7.18 (m, 2H), 7.17-7.09 (m, 2H), 5.36 (s, 1H), 2.80 (td, J = 10.4, 4.1 Hz, 1H), 2.58 (td, J = 10.5, 3.6 Hz, 1H), 2.53-2.43 (m, 4H), 2.31-2.11 (m, 3H), 1.95-1.73 (m, 4H).
Ejemplo 23 (2R,3S)-N-((3S)-9-metil-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro 1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (23) El Ejemplo 23 se preparó del Intermediario B-4 y del Intermediario S-l de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. HPLC: RT = 7.843 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 557.4 [M+H+]; RMN-^ (400MHz, metanol-d4) d 7.63-7.57 (m, 1H), 7.56-7.47 (m, 1H), 7.46-7.37 (m, 1H), 7.25-7.18 (m, 1H), 5.39 (s, 1H), 2.82 (td, J = 10.5, 4.0 Hz, 1H), 2.61 (td, J = 10.5, 3.5 Hz, 1H), 2.56-2.40 (m, 4H), 2.36-2.07 (m, 3H), 1.99-1.70 (m, 4H).
Ejemplo 24 (2R,3S)-N-((3S)-9-ciclopropil-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro-IH-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (24) El Ejemplo 24 se preparó del Intermediario B-28 y del Intermediario S-l de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. Este sólido se purificó mediante cromatografía SFC preparativa (Berger SFC MGII, IC quiral 250 x 30 mm ID, 5 mm, 85/15 CC MeOH, 85 ml/min) para obtener el Ejemplo 24. HPLC: RT = 11.56 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 583.2 [M+H+]; RMN-1!! (400 MHz, DMSO-de) d 10.28 (s, 1H), 9.45 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.65 (br. s., 1H), 7.56-7.49 (m, 3H), 7.47-7.40 (m, 2H), 7.28 (dd, J = 7.7, 1.3 Hz, 1H), 7.20 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.15-7.08 (m, 2H), 5.24 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 2.81 (td, J = 9.8, 5.1 Hz, 1H), 2.54 (br. s., 1H), 2.31-2.07 (m, 4H), 1.78-1.53 (m, 5H), 1.11-0.96 (m, 2H), 0.84-0.76 (m, 1H), 0.71-0.62 (m, 1H).
Ejemplo 25 (2R,3S)-N-((3S)-9-cloro-5-(3-ciclopropilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (25) El Ejemplo 25 se preparó del Intermediario B-18 y del Intermediario S-l de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. La separación de los diastereómeros (instrumento: Berger SFC MGII, IC quiral 25 x 3 cm ID, 5pm, 90/10 CCh/MeOH, 85 ml/min, detección a 220 nm) produjo el Ejemplo 25. HPLC: RT = 8.81 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 617.0 [M+H+]; RMN-¾ (400MHz, metanol-d4) d 7.88-7.70 (m, 1H), 7.45-7.11 (m, 6H), 5.46-5.31 (m, 1H), 2.82 (td, J = 10.4, 4.1 Hz, 1H), 2.69-2.40 (m, 2H), 2.36-2.06 (m, 3H), 2.00-1.58 (, 5H), 1.06-0.94 (m, 2H), 0.80-0.62 (m, 2H).
Ejemplo 26 (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-clorofenil)-9-metoxi-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (26) El Ejemplo 26 se preparó del Intermediario B-19 y del Intermediario S-l de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. El sólido se purificó mediante cromatografía SFC preparativa (instrumento: Berger SFC MGII, AS-H 250 x 30 mm ID, 5 um, 82/18 CO2/Me0H, 85 ml/min) para obtener el Ejemplo 26. HPLC: RT = 9.32 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 607 [M+H+]; RMN-1H (400MHz, metanol-d4) d 10.13 (s, 1H), 9.51 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.68-7.59 (m, 3H), 7.52-7.45 (m, 1H), 7.42-7.32 (m, 2H), 7.30-7.24 (m, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.92 (dd, J = 7.9, 1.1 Hz, 1H), 5.25 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H), 2.85-2.75 (m, 1H), 2.63-2.54 (m, 1H), 2.31-2.09 (m, 4H), 1.75-1.52 (m, 4H).
Ejemplo 27 (2R,3S)-N-((3S)-5-(4-clorofenil)-9-metoxi-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida El Ejemplo 27 se preparó del Intermediario B-20 y del Intermediario S-l de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. El sólido se purificó mediante cromatografía SFC preparativa (instrumento: Berger SFC MGII, AS-H 250 x 30 mm ID, 5 mm, 82/18 CO2/Me0H, 85 ml/min) para obtener el Ejemplo 27. HPLC: RT = 9.44 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mth, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 607 [M+H+]; RMN-1!! (400 MHz, DMSO-de) d 10.12 (s, 1H), 9.51 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.66 (br. s., 1H), 7.58-7.50 (m, 4H), 7.36-7.31 (m, 1H), 7.30-7.22 (m, 1H), 7.14 (s, 1H), 6.90 (dd, J = 7.8, 1.2 Hz, 1H), 5.24 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 2.82-2.74 (m, 1H), 2.64-2.55 (m, 1H), 2.30-2.08 (m, 4H), 1.76-1.51 (m, 4H).
Ejemplo 28 (2R,3S)-N-((3S)-9-cloro-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (28) El Ejemplo 28 se preparó del Intermediario B-14 y del Intermediario S-l de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. El sólido se purificó mediante cromatografía SFC preparativa (instrumento: Berger SFC MGII, IC-H 250 x 30 mm ID, 5 mm, 92/8 CO2/Me0H, 85 ml/min) para obtener el Ejemplo 28. HPLC: RT = 9.36 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 591 [M+H+]; RMN-i-H (400 MHz, DMSO-ds) d 10.48 (br. s., 1H), 9.40 (br. s., 1H), 7.87-7.60 (m, 2H), 7.47-7.04 (m, 5H), 5.15 (br. s., 1H), 4.15 (dd, J = 5.7, 3.3 Hz, 1H), 2.81 (td, J = 9.9, 4.8 Hz, 1H), 2.40-2.02 (m, 5H), 1.83-1.53 (m, 4H), 1.45-1.18 (m, 3H), 0.98-0.79 (m, 2H).
Ejemplo 29 (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-metilfenil)-9-metoxi-2-oxo- 2,3-dihidro-1H-l,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida ' El Ejemplo 29 se preparó del Intermediario B-21 y del Intermediario S-l de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. El material crudo se purificó mediante HPLC preparativa en las siguientes condiciones: Columna: Waters XBridge C18, 19 x 250 mm, partículas de 5 pm; columna Guard: Waters XBridge C18, 19 x 10 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; gradiente: 15-100 % de B durante 25 minutos, luego 5 minutos de retención a 100 % de B; flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El material se volvió a purificar mediante HPLC preparativa en las siguientes condiciones: Columna: Waters XBridge C18, 19 x 250 mm, partículas de 5 mm; columna Guard: Waters XBridge C18, 19 x 10 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; gradiente: 20-55% de B durante 40 minutos, luego 15 minutos de retención a 55% de B; flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. El material se volvió a purificar mediante HPLC preparativa en las siguientes condiciones: Columna: Waters XBridge C18, 19 x 100 mm, partículas de 5 mih; columna Guard: Waters XBridge C18, 19 x 10 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 5:95 de acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 de acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; gradiente: 5-100 % de B durante 10 minutos, luego 5 minutos de retención a 100 % de B; flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga para obtener el Ejemplo 29. HPLC: RT = 2.38 min (H2O/CH3CN con TFA, SUPELCO® Ascentis Express C18, 4.6 x 50 mm, 2.7 um, gradiente = 4 min, longitud de MS(ES): m/z = 586 [M+H+]; RM -1H (500 MHz, DMSO-de) d 10.12 (br. s., 1H), 9.53 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.43-7.10 (m, 7H), 6.87 (dd, J = 7.9, 1.0 Hz, 1H), 5.24 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 2.80 (td, J = 10.0, 4.7 Hz, 1H), 2.63-2.54 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.30-2.09 (m, 3H), 1.78-1.53 (m, 4H).
Ejemplo 30 (2R,3S)-N-((3S)-5-(4-(hidroximetil)fenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-l,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida El Ejemplo 30 se preparó del Intermediario B-5 y del Intermediario S-l de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. El sólido se purificó mediante cromatografía SFC preparativa (instrumento: Berger SFC MGII, Lux Cellulose-2 250 x 30 mm ID, 5 mm, 85/15 CC^/MeOH, 85 ml/min) para obtener el Ejemplo 30. HPLC: RT = 6.91 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C183.5 mm, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 573 [M+H+]; RMN-1!! (400 MHz, DMSO-de) d 10.84 (s, 1H), 9.49 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.70-7.60 (m, 2H), 7.51-7.43 (m, 2H), 7.42-7.36 (m, 2H), 7.36-7.29 (m, 2H), 7.29-7.22 (m, 1H), 7.14 (br. s., 1H), 5.30 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 5.25 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.57 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 2.88-2.73 (m, 1H), 2.64-2.54 (m, 2H), 2.31-2.00 (m, 3H), 1.85-1.43 (m, 4H).
Ejemplo 31 (2R,3S)-N-((3S)-5-(2-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro 1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (31) El Ejemplo 31 se preparó del Intermediario B-29 y del Intermediario S-l de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. El sólido se purificó mediante cromatografía SFC preparativa (instrumento: Berger SFC MGII, Lux Cellulose-2 250 x 30 mm ID, 5 mm, 90/10 CCb/MeOH, 85 ml/min) para obtener el Ejemplo 31. HPLC: RT = 8.68 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C183.5 pm, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 557 [M+H+]; RMN-1!! (400 MHz, DMSO-de) d 10.94 (br. s., 1H), 9.47 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.69-7.55 (m, 2H), 7.41-7.21 (m, 4H), 7.20-7.11 (m, 3H), 7.05 (dd, J = 7.9, 1.3 Hz, 1H), 5.29 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 2.78 (td, J = 10.0, 4.7 Hz, 1H), 2.31-2.07 (m, 3H), 2.02-1.94 (m, 3H), 1.76-1.51 (m, 4H).
Ejemplo 32 (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro 1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (32) El Ejemplo 32 se preparó del Intermediario B-22 y del Intermediario S-l de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. Este sólido se purificó mediante cromatografía SFC preparativa (instrumento: Berger SFC MGII, PHENOMENEX® Lux Cellulose-2 250 x 30 mm ID, 5pm, 90/10 CCh/MeOH, 85 ml/min) para obtener el Ejemplo 32. HPLC: RT = 9.35 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 557 [M+H+]; RMN-XH (400 MHz, DMSO-d6) d 10.84 (s, 1H), 9.50 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.69-7.61 (m, 2H), 7.40-7.18 (m, 7H), 7.14 (br. s., 1H), 5.26 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 2.87-2.75 (m, 1H), 2.55 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 2.33 (s, 3H), 2.30-2.06 (m, 3H), 1.80-1.50 (m, 4H).
Ejemplo 33 (2R,3S)-N-((3S)-9-metoxi-2-oxo-5-(5- (trifluorometil)-2-piridinil)-2,3-dihidro-1H-l,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (33) El Ejemplo 33 se preparó del Intermediario B-24 y del Intermediario S-l de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. Después de la separación de los diastereómeros (instrumento: Berger SFC MGII, AS-H 250 x 46 mm ID, 5 mm, 80/20 CC>2/MeOHf 85 ml/min) se obtuvo el Ejemplo 33. HPLC: RT = 9.364 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mth, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 642 [M+H+]; RMN-1!! (400 MHz, DMSO-de) d ppm 10.19 (1 H, s), 9.58 (1 H, d, J = 7.5 Hz), 8.98 (1 H, d, J = 0.9 Hz), 8.40 (1 H, dd, J = 8.4, 2.0 Hz), 8.15 (1 H, d, J = 8.4 Hz), 7.65 (1 H, br. s.), 7.30 (1 H, dd, J = 8.4, 1.1 Hz), 7.20 (1 H, t, J = 8.0 Hz), 7.14 (1 H, br. s.), 6.93 (1 H, dd, J = 7.9, 1.1 Hz), 5.35 (1 H, d, J = 7.3 Hz), 3.92 (3 H, s), 2.74-2.85 (1 H, m), 2.55-2.65 (1 H, m), 2.05-2.31 (4 H, m), 1.47-1.77 (4 H, m).
Ejemplo 34 (2R,3S)-N-((3S)-5-(5-cloro-2-piridinil)-9-metoxi-2-oxo-2,3-dihidro-IH-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida ' El Ejemplo 34 se preparó del Intermediario B-26 y del Intermediario S-l de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. Este sólido se purificó mediante cromatografía SFC preparativa (instrumento: Berger SFC MGII, AS-H 250 x 46 mm ID, 5 mm, 75/25 CO2/Me0H, 85 ml/min) para obtener el Ejemplo 34. HPLC: RT = 8.43 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 pm, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 587 [M+H+]; RM -1!! (400 MHz, DMS0-ds) d 10.14 (s, 1H), 9.55 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 8.68-8.58 (m, 1H), 8.11 (dd, J = 8.5, 2.5 Hz, 1H), 7.99 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.66 (br. s., 1H), 7.33-7.26 (m, 1H), 7.21 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.14 (br. s., 1H), 6.93 (dd, J = 7.9, 1.1 Hz, 1H), 5.30 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 2.84-2.72 (m, 1H), 2.65-2.56 (m, 1H), 2.31-2.04 (m, 3H), 1.76-1.47 (m, 4H).
Ejemplo 35 (2R,3S)-N-((3S)-5-(4-metoxifenil)-2-oxo-2,3 dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida El Ejemplo 35 se preparó del Intermediario B-25 y del Intermediario S-l de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. Los diastereómeros se separaron mediante HPLC quiral (CHIRALPAK® AD 5 cm x 50 cm 10 mM de i-propanol al 30 % isocrático : heptano 100 ml/min) para obtener el Ejemplo 35. HPLC: RT = 8.68 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 573 [M+H+]; RMN-!H (400 MHz, DMSO-de) d 10.81 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 9.48 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 8.7, 4.1 Hz, 2H), 7.39-7.22 (m, 3H), 7.00 (dd, J = 8.8, 3.3 Hz, 2H), 5.22 (dd, J = 9.4, 7.6 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 2.97- 2.84 (m, 1H), 2.37-2.08 (m, 4H), 1.85-1.55 (m, 4H), 1.43-1.32 (m, 3H).
Ejemplo 36 (2R,3S)-N-((3S)-5-(4-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro 1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida El Ejemplo 36 se preparó del Intermediario B-23 y del Intermediario S-l de conformidad con los procedimientos generales descritos anteriormente. Los diastereómeros se separaron mediante HPLC preparativa quiral (CHIRALPAK® AD 5 cm x 50 cm 10 m de i-propanol al 20% isocrático :heptano 100 ml/min) para obtener el Ejemplo 36. HPLC: RT = 9.32 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 557 [M+H+]; RMN-!H (400 MHz, DMSO-d6) d 10.80 (s, 1H), 9.46 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.70-7.57 (m, 2H), 7.39 (d, .7= 8.1 Hz, 2H), 7.35-7.19 (m, 5H), 7.12 (s, 1H), 5.23 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 2.84-2.74 (m, 1H), 2.36 (s, 3H), 2.27-2.07 (m, 3H), 1.77-1.52 (m, 5H).
Ejemplo 37 (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-(hidroximetil) 2-oxo-2,3-dihidro-IH-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (37) Intermediario 3 7A : N-metoxi-N,3-dimetil-2-nitrobenzamida A una suspensión de ácido 3-metil-2-nitrobenzoico (5 g, 27.6 mmol) en DCM (50 mi), se agregó cloruro de oxalilo (4.83 mi, 55.2 mmol) y luego 2 gotas de DMF. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1.5 h, luego se concentró y se azeotropó con DCM/tolueno, lo que dio como resultado un sólido blanco que se secó en alto vacío durante la noche. A una mezcla de N,O-dimetilhidroxilamina, HCl (5.38 g, 55.2 mmol) y TEA (11.54 mi, 83 mmol) en DCM (80 mi) a 0 °C, se agregó lentamente una solución del cloruro ácido anterior en DCM (20 mi). La reacción se agitó durante 30 min, luego se inactivó con agua y se extrajo con DCM. La capa orgánica se separó, se lavó con HCl 1 N, NaHCO3 saturado y salmuera, luego se secó y se concentró para obtener el Intermediario 37A (6.05 g, 98 %). HPLC: RT = 1.27 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4.6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenía 0.1 % de TFA, 4 ml/min, controlado a 220 nm), RMN-1!! (400 MHz, cloroformo-d) d 7.52 - 7.45 (m, 1H), 7.42 - 7.35 (m, 2H), 3.48 (br. s., 3H), 3.33 (s, 3H), 2.51 (s, 3H).
Intermediario 37B: 3-(bromometil)-N-metoxi-N-metil- 2-nitrobenzamida Una mezcla del Intermediario 37A (5.5 g, 24.53 mmol), NBS (5.24 g, 29.4 mmol) y peróxido de benzoilo (0.594 g, 2.453 mmol) en CCl4 (80 mi) se purgó con nitrógeno y luego se calentó a 80 °C durante 4.5 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y luego se inactivó con agua. La mezcla se extrajo con DCM, y los extractos combinados se lavaron con NaHCC>3 saturado y salmuera, luego se secaron (Na2s04), se filtraron y se concentraron hasta secarse. El material crudo se purificó mediante cromatografía instantánea (columna de Si02, 80 g, EtOAc/hexano = 0 - 100 %) para obtener el Intermediario 37B.
Intermediario 37C: 3- (hidroximetil)-N-metoxi-N metil-2-nitrobenzamida Una mezcla del Intermediario 37B (3.7 g, 4.88 mmol) y carbonato de calcio (2.93 g, 29.3 mmol) en dioxano (25 mi)/agua (25 mi) se agitó a reflujo durante 5 h. Luego la mezcla se enfrió a temperatura ambiente, el sólido se retiró mediante filtración, y el filtrado se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (MgS04), se filtraron y se concentraron hasta secarse. El residuo crudo se purificó mediante cromatografía instantánea (columna de SÍO2, 80 g, EtOAc/hexano = 20-100 %) para obtener el Intermediario 37C (1.079 g, 78 %). HPLC: RT = 0.75 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4.6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenía 0.1 % de TFA, 4 ml/min, controlado a 220 nm), MS(ES): m/z = 241.0 [M+H+] .
Intermediario 37D: 3- ((( tere butildimetilsilil)oxi)metil)-N-metoxi-N-metil-2 nitrobenzamida A una solución del Intermediario 37C (1.079 g, 4.49 m ol) y TBDMS-Cl (1.016 g, 6.74 mmol) en DMF (4 mi), se agregó imidazol (0.612 g, 8.98 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Se agregó agua, y la mezcla se extrajo con EtOAc. Los extractos combinados se lavaron con LiCl al 10 % y salmuera, se secaron en MgSC>4, se filtraron y se concentraron hasta secarse. El material crudo se purificó mediante cromatografía instantánea (columna de SÍO2, 40 g, EtOAc/hexano = 0-30 %) para obtener el Intermediario 37D (1.25 g, 79 %). HPLC: RT = 3.05 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4.6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenía 0.1 % de TFA, 4 ml/min, controlado a 220 nm), MS(ES): m/z = 355.0 [M+H+]. RMN-1}! (400 MHz, cloroformo-d) d 7.90 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.70 - 7.62 (m, 1H), 7.47 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.98 (s, 2H), 3.46 (br. s., 3H), 3.36 (br. s., 3H), 0.98 (s, 9H), 0.15 (s, 6H).
Intermediario 37E: 2-amino-3- (((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-N-metoxi-N-metilbenzamida I i Una mezcla del Intermediario 37D (1.25 g, 3.53 mmol) y 10 % de Pd/C (200 mg, 0.188 mmol) en EtOAc (50 mi) se purgó con hidrógeno. Luego la mezcla se agitó en una atmósfera de hidrógeno durante 1.5 h. La suspensión se filtró, y el filtrado se concentró hasta secarse. El material crudo se purificó mediante cromatografía instantánea (columna de S1O2, 24 g, EtOAc/hexano = 0-40 %) para obtener el Intermediario 37E (939 mg, 82 %). HPLC: RT = 2.986 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4.6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenía 0.1 % de TFA, 4 ml/min, controlado a 220 nm), MS(ES): m/z = 325.2 [M+H+]; RMN-1!! (400 MHz, cloroformo-d) d 7.32 (dd, J = 7.7, 1.5 Hz, 1H), 7.11 (dd, J = 7.5, 1.5 Hz, 1H), 6.68 - 6.62 (m, 1H), 5.21 (br. s., 2H), 4.71 (s, 2H), 3.61 (s, 3H), 3.36 (s, 3H), 0.92 (s, 9H), 0.09 (s, 6H).
Intermediario 37F: (2-amino-3-(((fcerc-butildimetilsilil)oxi)metil)fenil)(3-fluorofenil)metanona (37F) A una solución de 1-fluoro-3-yodobenceno (0.782 mi, 6.66 mmol) en THF (6 mi) a -78 °C, se agregó por goteo nBuLi (2.5 M en hexano, 2.66 mi, 6.66 mmol). Después de que se completó la adición, la mezcla se agitó a -78 °C durante 40 min. Luego se agregó por goteo una solución del Intermediario 37E (540 mg, 1.664 mmol) en THF (2.5 mi). Luego la mezcla se agitó a -78 °C durante 2 h. La mezcla resultante se vertió en hielo con HCl (7.49 mi, 7.49 mmol) y se extrajo con EtOAc. Los extractos combinados se lavaron con salmuera, se secaron y se concentraron. El material crudo se purificó mediante cromatografía instantánea (columna de SÍO2, 12 g, EtOAc/hexano = 0-15 %) para obtener el Intermediario 37F (271 mg, 45 %). HPLC: RT = 3.70 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4.6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenía 0.1 % de TFA, 4 ml/min, controlado a 220 nm), MS(ES): m/z = 360.4 [M+H+]; RMN-ÍH (400 MHz, cloroformo-d) d 7.49 - 7.33 (m, 4H), 7.27 - 7.20 (m, 2H), 6.84 (br. s., 2H), 6.57 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 4.77 (s, 2H), 0.95 (s, 9H), 0.13 (s, 6H).
Intermediario 37G: 9- (((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-5-(3-fluorofenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-benzo [e][1,4]diazepin-3-il)carbamato de bencilo i A una solución de ácido 2-(1H benzo [d][1,2,3]triazol-1-il)-2- (((benciloxi)carbonil)amino)acético (608 mg, 1.864 mmol) en THF (7 mi) enfriada a 0 °C, se agregó cloruro de oxalilo (0.157 mi, 1.789 mmol) y luego DMF (0.02 mi). La mezcla resultante se agitó a 0 °C durante 1.5 h. Luego se agregó lentamente una solución del Intermediario 37F (268 mg, 0.745 mmol) y 4-metilmorfolina (0.246 mi, 2.236 mmol) en THF (3 mi). Después de la adición, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 1 h. A continuación, se agregó amoníaco 7 N en MeOH (4 mi, 28.0 mmol), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla resultante se concentró, y el residuo se trató con EtOAc y agua. La capa orgánica se separó, y la capa acuosa se extrajo con EtOAc . Los extractos orgánicos combinados se lavaron con NaOH 1 N, NaHCC>3 saturado y salmuera, luego se secaron en MgS04, se filtraron y se concentraron. Luego el residuo se disolvió en ácido acético (1.5 mi, 26.2 mmol) y se trató con acetato de amonio (287 mg, 3.73 mmol). La mezcla se agitó a 40 °C durante 2 h. Luego la mezcla de reacción se trató con agua y se extrajo con EtOAc. Los extractos combinados se lavaron con agua, NaHC03 saturado y salmuera, luego se secaron y se concentraron. El material crudo se purificó mediante cromatografía instantánea (columna de Si02.12 g, EtOAc/hexano = 0-40 %) para obtener el Intermediario 37G (256 mg, 63 %). HPLC: RT = 3.61 in (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4.6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenía 0.1 % de TFA, 4 ml/min, controlado a 220 nm), MS(ES): m/z = 548.5 [M+H+].
Intermediario 37H: 3-amino-5- (3-fluorofenil)-9-(hidroximetil)-IH-benzo[e][1,4]diazepin-2(3H)-ona (37H) Una mezcla del Intermediario 37G (255 mg, 0.466 mmol) en 33 % de HBr en HOAc (1149 ml, 6.98 mmol) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Se agregó éter, y el precipitado sólido resultante se recolectó mediante filtración y se enjuagó con éter. El sólido se disolvió en MeOH (10 mi), y se agregó K2CO3 (1.3 g). La mezcla se agitó durante 40 min, luego se filtró y se concentró hasta secarse para obtener el Intermediario 37H (133 mg). HPLC: RT = 1.102 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4.6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenía 0.1 % de TFA, 4 ml/min, controlado a 220 nm), MS(ES): m/z = 300.2 [M+H+].
Intermediario 371: 6,6,6-trifluoro-3- ((5-(3-fluorofenil)-9-(hidroximetil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-3-il)carbamoil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoato de (2S,3R)-tere-butilo 11 (37i; A una solución del Intermediario 37H (130 mg, 0.434 mmol), Intermediario S-l (159 mg, 0.434 mmol) y TBTU (167 mg, 0.521 mmol) en DMF (1.5 mi), se agregó TEA (0.133 mi, 0.956 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 45 min. Se agregó agua, y el sólido se recolectó mediante filtración, se enjuagó con agua y se secó. El sólido resultante se purificó mediante cromatografía instantánea (columna de Si02, 12 g, EtOAc/hexano = 0-80 %) para obtener el Intermediario 371 (66 mg 23 %). HPLC: RT = 3.27 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4.6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenía 0.1 % de TFA, 4 ml/min, controlado a 220 nm), MS(ES): m/z = 648.3 [M+H+].
Intermediario 37J: Ácido (2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3- ( (5-(3-fluorofenil)-9-(hidroximetil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-benzo [e][1,4]diazepin-3-il)carbamoil)-2-(3,3,3-trifluoropropil) hexanoico A una solución del Intermediario 371 (65 mg, 0.100 mmol) en DCM (2 ml), se agregó TFA (2 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 h y luego se concentró hasta secarse. El material crudo se purificó mediante HPLC preparativa de fase inversa ( MeOH acuoso, que contenía 0.1 % de TFA) . Las fracciones deseadas se combinaron y se concentraron hasta secarse para obtener el Intermediario 37J (30 mg, 51 %). HPLC: RT = 2.680 in (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4.6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenía 0.1 % de TFA, 4 ml/min, controlado a 220 nm) , MS (ES) : m/z = 592 .3 [M+H+] .
Ejemplo 37: A una mezcla del Intermediario 37J (30 mg, 0.051 mmol), EDC (34.0 mg, 0.178 mmol) y HOBT (27.2 mg, 0.178 mmol) en THF (2 mi), se agregó amoníaco 2 M en IPA (0.507 mi, 1.014 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche y luego se concentró. Se agregó agua al residuo, y la mezcla se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con NaHCCt saturado y salmuera, luego se secaron (MgSO-) y se concentraron para obtener 30 mg del producto crudo como una mezcla de dos diastereómeros. Los diastereómeros se separaron mediante SFC quiral (Berger SFC MGII, ID quiral 25 x 3 cm ID, 5 mm, 85/15 CO2/Me0H, 85 ml/min, detección a 220 nm) para obtener el Ejemplo 37 (10 mg, 35 %). HPLC: RT = 7.44 min (H2O/CH3CN con TFA, Xbridge Phenyl 3.5 um, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 591.2 [M+H+]; RMN-1!! (400 MHz, metanol-dí) d 7.68 - 7.62 (m, 1H), 7.46 - 7.39 (m, 1H), 7.38 - 7.20 (m, 5H), 5.43 (s, 1H), 4.94 - 4.88 (m, 1H), 4.80 - 4.73 (m, 1H), 2.80 (td, J = 10.3, 4.0 Hz, 1H), 2.59 (td, J = 10.5, 3.7 Hz, 1H), 2.54 - 2.39 (m, 1H), 2.31 - 2.10 (m, 3H), 1.96 - 1.70 (m, 4H).
Ejemplo 38 L-valinato de ((3S)-3-(((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-l-il)metilo Intermediario 38A: 2-((terc-butoxicarbonil)amino) 3-metilbutanoato de (S)-clorometilo A una mezcla de ácido (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoico (4 g, 18.41 mmol), sulfato ácido de tetrabutilamonio (1.25 g, 3.68 mmol) y Na2CC>3(9.76 g, 92 mmol) en DCM (80 mi) y agua (80 mi) agitada vigorosamente, enfriada en un baño de hielo/agua, se agregó lentamente clorosulfato de clorometilo (3.8 mi, 36.8 mmol) durante 4 min. Después de agitar en el baño de hielo/agua durante 30 min, el baño frío se retiró, y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente. Después de agitar durante 16 h a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con agua y se extrajo con DCM. La capa acuosa se volvió a extraer con DCM, y las capas orgánicas combinadas se secaron en MgSC>4, se filtraron y se concentraron para obtener el Intermediario 38A (5.45 g).
Intermediario 38B: 2-((terc-butoxicarbonil)amino)- 3-metilbutanoato de (S)-((S)-3-((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanamido)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-benzo[e][1,4]diazepin-1-il)metilo (38B) A una mezcla agitada del Ejemplo 1 (400 mg, 0.696 mmol) y K2CO3 (289 mg, 2.089 mmol) en DMF (4 mi), se agregó lentamente el Intermediario 38A (555 mg, 2.089 mmol) en DMF (3 mi). Después de agitar a temperatura ambiente durante 22 h, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó 3 veces con solución acuosa de LiCl al 10 %. La capa orgánica se secó en MgSCL, se filtró y se concentró. El material crudo se purificó mediante cromatografía instantánea (Teledyne ISCO CombiFlash de 20 % a 70 % de solvente A/B = hexano/acetona, REDISEP® SÍO2120 g, detectado a 254 nm y controlado a 220 nm) para obtener el Intermediario 38B (213.3 mg, 38.1 %). HPLC: RT = 3.428 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4.6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenía 0.1 % de TFA, 4 ml/min, controlado a 220 nm), MS(ES): m/z = 804.5 [M+H+].
Ejemplo 38: A una mezcla agitada del Intermediario 38B (213.3 mg, 0.265 mmol) en DCM (6 mi), se agregó HCl 4 N en dioxano (0.663 mi, 2.65 mmol) a temperatura ambiente. Después de agitar durante 1.5 h, la mezcla de reacción se concentró, y el material crudo se purificó mediante HPLC preparativa (YMC C18, 30 x 100, 10-90 % de metanol acuoso durante 12 minutos, que contenía 0.1 % de TFA, 30 ml/min, detectado y controlado a 220 nM). Las fracciones que contenían el producto se combinaron y luego se concentraron mediante liofilización para obtener el Ejemplo 38 (154 mg, 70.3 %) como una sal de TFA. HPLC: RT = 10.854 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C183.5 pm, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 704.6[M+H+]; RMN-1H (500 MHz, DMSO-d6) d 9.46 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 8.14 (br. s., 3H), 7.72-7.62 (m, 2H), 7.57-7.50 (m, 1H), 7.47-7.37 (m, 4H), 7.27 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.15 (d, J = 10.3 Hz 1H), 5.50 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 5.38 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 2.83 (td, J = 10.2, 4.3 Hz, 1H), 2.45 (s, 4H), 2.29-2.18 (m, 1H), 2.17-2.06 (m, 2H), 1.81-1.72 (m, 1H), 1.72-1.48 (m, 4H), 0.66 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.62 (d, J = 6.9 Hz, 3H).
Ejemplo 39 L-alaninato de ((3S)-3-(((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-l,4-benzodiazepin-1-il)metilo (39) Intermediario 39A: 2-((t erc-butoxicarbonil)amino)propanoato de (S)-clorometilo A una mezcla de ácido (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino) propanoico (1 g, 5.29 mmol), sulfato ácido de tetrabutilamonio (0.359 g, 1.057 mmol) y Na2C03 (2.80g, 26.4mmol) en DCM 20 (mi) y agua (20 mi) agitada vigorosamente, enfriada en un baño de hielo/agua, se agregó lentamente clorosulfato de clorometilo (1.09 mi, 10.57 mmol) durante 4 min. Después de agitar un baño de hielo/agua durante 30 min, el baño frío se retiró, y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente. Después de agitar durante 16 h a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con agua y se extrajo con DCM. La capa acuosa se volvió a extraer con DCM, y las capas orgánicas combinadas se secaron en MgSO4, se filtraron y se concentraron. El material crudo (1.64 g) se usó en el estado en que se encontraba sin purificación adicional.
Ejemplo 39: El Ejemplo 39 se preparó del Ejemplo 1 y del Intermediario 39A de conformidad con el procedimiento general indicado para el Ejemplo 38. HPLC: RT = 7.443 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mm, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 676 [M+H+]; RMN-iH (500 MHz, DMS0-d6) d 9.45 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 8.17 (br. s., 3H), 7.72-7.63 (m, 2H),·7.58-7.49 (m, 1H), 7.48-7.36 (m, 4H), 7.25 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.14 (br. s., 1H), 6.15 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 5.50 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 5.38 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 2.83 (td, J = 10.1, 4.2 Hz, 1H), 2.45 (s, 3H), 2.29-2.06 (m, 3H), 1.77-1.48 (m, 4H), 0.94 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
Ejemplo 40 S-(((2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3-(((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)carbamoil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-L-cisteína (40) Intermediario 40A: 3 ,3'-disulfandiilbis(2-(( terc-butoxicarbonil)amino)propanoato) de (2R,2rR)-di-terc-butilo Una suspensión de diclorhidrato de 3,3'-disulfandiilbis(2-aminopropanoato) de (2R,2'R)-di-terc-butilo (1.9 g, 4.47 mmol) en DMF (50 mi) a temperatura ambiente se trató con TEA (1.556 mi, 11.17 mmol) y luego con dicarbonato de di-terc-butilo (2.437 g, 11.17 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se vertió en EtOAc (100 mi) y se lavó con HCl 0.1 N (2 x 100 mi) y luego con NaHCÜ3 acuoso saturado (100 mi) y salmuera (100 mi). La capa orgánica se secó (NaasCU), se filtró y se concentró hasta secarse. El producto crudo se disolvió en una pequeña cantidad de DCM y se purificó mediante cromatografía instantánea (columna de SÍO2, 0 % de acetato de etilo/hexanos a 20 % de acetato de etilo/hexanos, 120 g, 30 min de gradiente) para obtener el Intermediario 40A (1.65 g, 66.8 %). RMN-!H (400MHz, cloroformo-d) d 5.34 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 4.46 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 3.27-3.07 (m, 4H), 1.49 (s, 18H), 1.46 (s, 18H).
Intermediario 40B: 2-((terc-butoxicarbonil)mino)- 3-(((2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3-(((S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-IH-benzo [e][1,4]diazepin-3-i1)carbamoi1)-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanamido)tio)propanoato de (R)-tere-butilo (40B) Una suspensión leve de nitrato de plata (118 mg. 0.696 mmol) en metanol (18 mi) se trató con el Intermediario 40A (385 mg, 0.696 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 30 min, y luego se agregaron el Ejemplo 1 (100 mg, 0.174 mmol) y TEA (97 ml, 0.696 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche y luego se concentró hasta secarse. El producto crudo se disolvió en una pequeña cantidad de DCM y se purificó mediante cromatografía instantánea (columna de S1O2, 0 % de acetato de etilo/hexanos a 100% de acetato de etilo/hexanos, 24 g, 30 min de gradiente) para obtener el Intermediario 40B (78 mg, 52.7%). RT de HPLC= 3.443 min (CHROMOLITH® SpeedROD, 5.0 um, 4.6 mm x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso que contenía 0.1 % de TFA, 4 min de gradiente, controlado a 220 nm). [M+H+] = 850.5.
Ejemplo 40: Una solución del Intermediario 40B (78 mg, 0.092 mmol) en DCM (5 mi) a 0 °C se trató con TFA (0.5 mi, 6.49 mmol) y se calentó lentamente a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche y luego se concentró hasta secarse. El producto de la reacción cruda se disolvió en una pequeña cantidad de MeOH y se purificó mediante HPLC de fase inversa (YMC ODS C185 um 30 x 100 mm, 10-90 % de metanol acuoso que contenía 0.1 % de TFA, 15 ml/min, 30 min de gradiente, controlado a 220 nm). El producto (tiempo de retención = 24.980 minutos) se aisló y se liofilizó hasta secarse. El sólido resultante se suspendió en agua y se trató con HCl 0.1 N (1 mi) a 0 °C. La solución se volvió a liofilizar hasta secarse para obtener el Ejemplo 40 como una sal de HC1 (29 mg, 41.5 %). RT de HPLC: = 9.328 min (Sunfire C183.5 um, 3 x 150 mm, 10 % 95/5 agua/ACN con 0.05 % de TFA a 100 % 5/95 agua/ACN con 0.05 % de TFA, 15 min de gradiente, velocidad de flujo = 0.5 ml/min, controlado a 220 y 254 nm). MS(ES): m/z = 694.4 [M+H+]. RMN-1!! (400 MHz, DMSO-d6) d 10.23 (s, 1H), 9.65 (s, 1H), 9.52 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 8.44 (br. s., 2H), 7.55 (dd, J = 6.6, 1.5 Hz, 1H), 7.51-7.44 (m, 1H), 7.42-7.33 (m, 2H), 7.28-7.23 (m, 1H), 7.22-7.17 (m, 2H), 5.25 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 4.02-3.94 (m, 1H), 3.27 (dd, J = 15.1, 4.1 Hz, 1H), 3.02 (dd, J = 15.1, 8.9 Hz, 1H), 2.92 (td, J = 10.6, 3.3 Hz, 1H), 2.74-2.65 (m, 1H), 2.28-2.11 (m, 4H), 1.85-1.74 (m, 1H), 1.73-1.64 (m, 1H), 1.64-1.54 (m, 1H), 1.48-1.36 (m, 1H).
Ejemplo 41 S-(((2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3-(((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)carbamoil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-L-cisteinato de tere-butilo (41) Una solución del Intermediario 40B (417 mg, 0.491 mmol) en DCM (20 mi) se trató con TFA (2 mi, 26.0 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 24 h. La solución resultante se concentró hasta secarse. El producto de la reacción cruda se disolvió en una pequeña cantidad de MeOH y se purificó mediante HPLC de fase inversa (YMC ODS C18 5 um 20 x 100mm, 10-90 % de metanol acuoso que contenía 0.1 % de TFA, 15 ml/min, 30 min de gradiente, controlado a 220 nm). El producto (tiempo de retención = 27.037 minutos) se aisló y se liofilizó hasta secarse. El material resultante se convirtió en base libre con NaHCC>3 acuoso saturado para obtener el Ejemplo 41 (12 mg, 3.03 %). HPLC: RT = 8.726 min (Xbridge Phenyl 3.5 mm, 3 x 150 mm, 10 % 95/5 agua/ACN con 0.05 % de TFA a 100 % 5/95 agua/ACN con 0.05 % de TFA, 15 min de gradiente, velocidad de flujo = [velocidad de flujo], controlado a 220 y 254 nm). MS(ES): m/z = 750.4.4 [M+H+].
R N-XH (400 MHz, DMS0-d6) d 10.25 (s, 1H), 9.62 (s, 1H), 9.54 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 8.46 (br. s., 3H), 7.56 (dd, J = 6.6, 1.8 Hz, 1H), 7.53-7.45 (m, 1H), 7.43-7.33 (m, 2H), 7.29-7.24 (m, 1H), 7.23-7.17 (m, 2H), 5.26 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 3.98 (br. s., 1H), 3.24 (dd, J = 15.0, 4.2 Hz, 1H), 3.03 (dd, J = 15.0, 9.0 Hz, 1H), 2.94 (td, J = 10.3, 3.4 Hz, 1H), 2.76-2.66 (m, 1H), 2.48-2.44 (m, 1H), 2.29-2.12 (m, 3H), 1.87-1.77 (m, 1H), 1.75-1.67 (m, 1H), 1.65-1.54 (m, 1H), 1.49 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 1.46 (s, 9H).
Ejemplo 42 S-(((2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3-(((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-l,4-benzodiazepin-3-il)carbamoil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-L-cisteinato de metilo (42] Intermediario 42A: 2-((terc-butoxicarbonil)amino) 3-(((2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3-(((S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-lH-benzo [e][1,4]diazepin-3-i1)carbamoil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanamido)tio)propanoato de (R)-metilo , (42A) Una solución de nitrato de plata (118 mg, 0.696 mmol) en metanol (9 mi) se trató con 3,3'-disulfandiilbis(2-((terc-butoxicarbonil)amino) propanoato) de (2R,2'R)-dimetilo (326 mg, 0.696 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos, y luego se agregaron el Ejemplo 1 (100 mg, 0.174 mmol) y TEA (0.097 ral, 0.696 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche y luego se concentró hasta secarse. El producto crudo se disolvió en una pequeña cantidad 'de CH2CI2 y se purificó mediante cromatografí instantánea (columna de Si02, 0 % de acetato de etilo/hexanos a 80 % de acetato de eti lo/hexanos , 4 g) para obtener el Intermediario 42A. (80 mg, 57 %). RT de HPLC = 3.20 min (CHROMOL ITH® SpeedROD, 5.0 um, 4.6 mm x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso que contenía 0.1 % de TFA , 4 min de gradiente, controlado a 220 nm). MS(ES): m/z = 808.3 [M+H+].
Ejemplo 42 : A una solución del Intermediario 42A (80 mg, 0.099 mmol) en DCM (2 mi) a 0 °C, se agregó TFA (0.5 mi) . La mezcla se agitó durante 2.5 h mientras se calentaba a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró, y el residuo se purificó mediante cromatografía instantánea en gel de sílice (columna de 4 g, 0-8 % MeOH/DCM con 0.1 % de NH4OH) para obtener un sólido blanco, que se trató adicionalmente con éter para obtener el producto purificado (29.5 mg , 41 %). RT de HPLC = 2.570 min (CHROMOL ITH® SpeedROD, 5.0 um, 4.6 mm x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso que contenía 0.1 % de TFA, 4 min de gradiente, controlado a 220 nm) . MS(ES) : m/z = 708 . 2 [M+H+] . RMN- H (400 MHz , metanol-d4) d 7.58-7.52 (m, 1H) , 7.48-7.32 (m, 3H) , 7.30-7.19 (m, 3H) , 5.39 (s, 1H) , 3.75 (s, 3H) , 3.63 (dd, J = 8.7, 4.1 Hz, 1H) , 3.30-3.24 (m, 1H) , 2.90 ( td, J = 10.4, 3.6 Hz , 1H) , 2.78 (dd, J = 14.3, 8.6 Hz, 1H) , 2.69 (td, J = 10.0, 3.6 Hz, 1H) , 2.57-2.38 (m, 4H) , 2.36 -2.06 (m, 3H) , 2.05-1.90 (m, 1H) , 1.89-1.74 (m, 2H) , 1.63 (tt , J = 12.5, 4.3 Hz , 1H) .
Ejemplo 43 (4-(fosfonooxi)fenil)acetato de ((3S)-3-(((2R,3S)- 3-carbamoil-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-1-il)metilo (43) Intermediario 43A: (2R,3S)-3-(trifluoropropil)-Nl-( (S,Z)-1-(metiltiometil)-2-oxo-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2,3-dihidro-1H-benzo [e] [1,4]diazepin-3-il)metil-2-(3,3,3- trifluoropropil)succinamida A una mezcla del Ejemplo 1 (278 mg, 0.484 mmol) en DMF (2.75 mi), se agregaron CS2CO3 (315 mg, 0.968 mmol) y (clorometil)(metil)sulfano (0.081 mi, 0.919 mmol) en nitrógeno. Esta mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 110 min y luego se diluyó con agua. La capa acuosa se extrajo con EtOAc. Los extractos de EtOAc combinados se lavaron con salmuera. La capa orgánica se secó en sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para obtener el producto crudo. El material crudo se purificó mediante cromatografía instantánea (Teledyne ISCO CombiFlash de 0 % a 100 % de solvente A/B = hexano/EtOAc, REDISEP® S1O2 40 g, detectado a 254 nM y controlado a 220 nM). La concentración de las fracciones adecuadas produjo el Intermediario 43A (198 mg, 64.5 %). HPLC: RT = 3.205 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4.6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenía 0.1 % de TFA, 4 ml/min, controlado a 220 nm), MS(ES): m/z = 635.4 [M+H+]; RMN-m (400 MHz, DMSO-d6) d 9.49 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.57-7.51 (m, 1H), 7.49-7.36 (m, 4H), 7.23 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.13 (s, 1H), 5.57 (d, J = 14.1 Hz, 1H), 5.33 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 4.38 (d, J = 14.3 Hz, 1H), 2.80 (td, J = 9.8, 4.1 Hz, 1H), 2.61-2.54 (m, 1H), 2.46-2.44 (m, 1H), 2.42 (s, 3H), 2.30-2.06 (m, 4H), 1.68 (s, 3H), 1.64-1.48 (m, 3H).
Intermediario 43B: 2- (4-(di-terc-butoxifosforiloxi)fenil)acetato de metilo (43B) Una solución agitada de 2-(4-hidroxifenil)acetato de metilo (1.80 g, 10.83 mmol) se combinó con IH-tetrazol en MeCN (65 mi, 10.83 mmol), y luego se agregó dietilfosforamidita de di-tere-butilo (5.91 g, 23.70 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 35 min y luego se concentró hasta secarse. El material crudo se disolvió en 50 mi de DCM, y se agregó H2O2 al 30 % (30 mi). Después de agitar a temperatura ambiente durante 30 min, la mezcla se diluyó con DCM y se lavó con agua, solución saturada de NaHC03 y luego salmuera. La capa orgánica se concentró y se purificó mediante cromatografía instantánea (Teledyne ISCO CombiFlash de 0 % a 100 % de solvente A/B = hexano/EtOAc, REDISEP® S1O2 80 g, detectado a 254 nM y controlado a 220 nM). La concentración de las fracciones adecuadas produjo el Intermediario 43B (3.94 g, rendimiento cuantitativo). RMN-1H (400MHz, cloroformo-d) d ppm 7.25-7.14 (m, 4H), 3.69 (s, 3H), 3.59 (s, 2H), 1.51 (s, 18H).
Intermediario 43C: Ácido 2- (4-(di-fcerc-butoxifosforiloxi)fenil)acético A una solución agitada del Intermediario 43B (0.635 g, 1.772 mmol) en THF (12.0 mi) y agua (3.00 mi), se agregó hidróxido de litio (0.122 g, 2.14 mol) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h, y luego las capas orgánicas se retiraron a presión reducida. La mezcla resultante se diluyó con 10 mi de solución de fosfato a pH 4. La mezcla resultante se extrajo con EtOAc. Los extractos de EtOAc combinados se lavaron con salmuera, se secaron sulfato de magnesio anhidro, se filtraron y se concentraron para obtener el Intermediario 43C (0.462 g, 76 %). RMN-1!! (400MHz, DMS0-d6) d ppm 12.30 (br. s., 1H), 7.25 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.13-7.03 (m, 2H), 3.55 (s, 2H), 1.44 (s, 1H).
Intermediario 43D: 2- (4-(di-terc-butoxifosforiloxi)fenil)acetato de ((S,Z)-3-((R)-2-((S)-1-amino-3-trifluoro-1-oxopropan-2-il)-5,5,5- trifluoropentanamido)-2-oxo-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2,3 dihidro-IH-benzo[e][1,4]diazepin-1-il)metilo A una mezcla agitada del Intermediario 43A (195 mg , 0.307 mmol) y clorhidrato de trietilamina (85.0 mg, 0.615 mmol) en DCM (3.00 mi) en nitrógeno, se agregó cloruro de sulfurilo (0.037 mi, 0.461 mmol) . La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 25 min y luego se concentró hasta secarse para obtener un sólido amarillo. El Intermediario 43C (221 mg, 0.640 mmol) y CS2CO3 (417 mg, 1.281 mmol) se combinaron en DMF (1.50 mi) a temperatura ambiente en nitrógeno. A esta mezcla se agregó una solución del sólido amarillo anterior en DMF (2.00 mi) . La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 148 minutos y luego se diluyó con agua y EtOAc . La capa orgánica se separó y se lavó con solución de LiCl al 10 % y luego con salmuera. La capa orgánica se secó con sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se concentró hasta secarse. El producto crudo se purificó mediante cromatografía instantánea (Teledyne ISCO CombiFlash de 0 % a 100 % de solvente A/B hexano/EtOAc , REDISEP® S1O2 24 g, detectado a 254 nM y controlado a 220 nM). La concentración de las fracciones adecuadas produjo el Intermediario 43D (152 mg, 53.5 %). HPLC : RT = 3.640 min (columna CHROMOL ITH® SpeedROD 4.6 x 50 mm , 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenía 0.1 % de TFA, 4 ml/min, controlado a 220 nm), MS(ES) : m/z = 931.6 [M+H +]; RMN-1H (400 MHz, DMSO-de) d 9.47 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.68-7.60 (m, 2H), 7.54-7.46 (m, 1H), 7.44- 7.33 (m, 4H), 7.20 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.13 (br. s., 1H) , 6.97-6.91 (m, 2H), 6.87-6.80 (m, 2H), 6.05 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 5.38 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 5.36 (s, 1H) , 3.22 (t, J = 1.0 Hz, 2H), 2.81 (dt, J = 9.8, 5.0 Hz, 1H) , 2.45 (d, J = 3.3 Hz, 1H) , 2.41 (s, 3H), 2.30-2.20 (m, 1H), 2.18-2.06 (m, 3H), 1.69 (d, J = 10.6 Hz, 1H), 1.63-1.51 (m, 3H), 1.43 (s, 18H).
Ejemplo 43: A una solución agitada del Intermediario 43D (148 mg, 0.159 mmol) en DCM (1.64 mi), se agregó TFA (0.16 mi, 2.077 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a 0 °C durante 10 min y luego a temperatura ambiente durante 40 min, y a continuación se concentró a presión reducida para obtener el Ejemplo 43 (126.6 mg, 94 %). HPLC: RT = 9.95 min (H2O/CH3CN con TFA, Sunfire C18 3.5 mhi, 4.6 x 150 mm, gradiente = 15 min, longitud de y 254 nm); MS(ES): m/z = 819.5 [M+H+]; RMN-Hí (400 MHz, DMS0-d6) d 9.51 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 7.54-7.49 (m, 1H), 7.48-7.40 (m, 3H), 7.37 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.15 (br. s., 1H), 6.97 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.84 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.07 (d, J = 10.6 Hz, 1H), 5.40 (s, 1H), 5.38 (s, 1H), 3.32-3.15 (m, 2H), 2.83 (br. s., 1H), 2.58-2.56 (m, 1H), 2.43 (s, 3H), 2.15 (dd, J = 19.7, 8.5 Hz, 4H), 2.01 (s, 1H), 1.71 (s, 2H), 1.67-1.51 (m, 3H).
Ejemplo 44 L-valil-L-valinato de ((3S)-3-(((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-1-il)metilo (44) Intermediario 44A: (2R,3S)-3-(trifluoropropil)-Nl- ((S,Z)-1-(metiltiometil)-2-oxo-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2,3 dihidro-1H-benzo [e][1,4]diazepin-3-il)metil-2-(3,3,3-trifluoropropil)succinamida A una mezcla del Ejemplo 1 (278 g, 0.484 mmol) en DMF (2.75 mi), se agregaron CS2CO3 (315 mg, 0.968 mmol) y (clorometil)(metil)sulfano (0.081 mi, 0.919 mmol) en nitrógeno. Esta mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 110 min y luego se diluyó con agua. La capa acuosa se extrajo con EtOAc. Los extractos de EtOAc combinados se lavaron con salmuera. La capa orgánica se secó en sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para obtener el producto crudo. Se purificó mediante cromatografía instantánea (Teledyne ISCO CombiFlash de 0 % a 100 % de solvente A/B = hexano/EtOAc, REDISEP® SÍO240 g, detectado a 254 nM y controlado a 220 nM). La concentración de las fracciones adecuadas produjo el Intermediario 44A (198 mg, 64.5 %). HPLC: RT = 3.205 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4.6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenía 0.1 % de TFA, 4 ml/min, controlado a 220 nm) , MS(ES) : m/z = 635.4 [M+H+] ; RMN-1!! (400 MHz , DMSO-d6) d 9.49 (d, J = 7.3 Hz , 1H) , 7.63 (d, J = 8.4 Hz , 2H) , 7.57- 7.51 (m, 1H) , 7.49-7.36 (m, 4H) , 7.23 (d, J = 7.5 Hz, 1H) , 7.13 (s, 1H) , 5.57 (d, J = 14.1 Hz, 1H) , 5.33 (d, J = 7.0 Hz, 1H) , 4.38 (d, J = 14.3 Hz, 1H) , 2.80 (td, J = 9.8, 4.1 Hz, 1H) , 2.61-2.54 (m, 1H) , 2.46-2.44 (m, 1H) , 2.42 (s, 3H) , 2.30-2.06 (m, 4H) , 1.68 (s, 3H) , 1.64-1.48 (m, 3H) .
Intermediario 44B : 2- ( (S) -2- ( (tere-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-3-metilbutanoato de (S)-((S)-3-((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanamido)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-IH-benzo [e][1,4]diazepin-1-il)metilo (44B) A una mezcla agitada del Intermediario 44A (157 mg, 0 .247 mmol) y clorhidrato de trietilamina (68.1 mg, 0.495 mmol) en DCM (3.00 mi) en nitrógeno, se agregó cloruro de sulfurilo (0.030 mi, 0.371 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 60 min y luego se concentró hasta secarse para obtener un sólido amarillo. El residuo se disolvió en DMF (2 mi) y se agregó a una mezcla agitada de ácido (S)-2-((S)-2-((tere-butoxicarboni1)amino)-3-metilbutanamido)-3-metilbutanoico (313 mg, 0.989 mmol) y CS2CO3 (403 mg, 1.236 mmol) en DMF (2.0 mi) a temperatura ambiente en nitrógeno. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2.5 h, y luego se agregaron agua y NaHCC acuoso saturado. Se formó un precipitado blanco, que se recolectó mediante filtración, se enjuagó con agua y se secó al vacío. El material crudo se purificó mediante cromatografía instantánea (Teledyne ISCO CombiFlash de 20 % a 70 % de solvente A/B = hexano/acetona, REDISEP® Si0280 g, detectado a 254 nM y controlado a 220 nM). La concentración de las fracciones adecuadas produjo el Intermediario 44B (148.4 mg, 66.5 %). HPLC: RT = 3.486 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4.6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenía 0.1 % de TFA, 4 ml/min, controlado a 220 nm), MS(ES): m/z = 903.7 [M+H+].
Ejemplo 44: A una solución agitada del Intermediario 44B (148 mg, 0.164 mmol) en DCM (4.00 mi) en nitrógeno, se agregó HCl 4 N en dioxano (0.410 mi, 1.639 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 60 min y luego se concentró hasta secarse para obtener el Ejemplo 44 (148 mg, 97 %). HPLC: RT = 8.038 min (columna CHROMOLITH® SpeedROD 4.6 x 50 mm, 10-90 % de metanol acuoso durante 4 minutos, que contenía 0.1 % de TFA, 4 ml/min, controlado a 220 nm), MS(ES): m/z = 803.6 [M+H+]; RMN-1H (500 MHz, DMSO-d6) d 9.49 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 8.35 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 4.4 Hz, 3H), 7.69-7.62 (m, 2H), 7.55-7.48 (m, 1H), 7.45-7.35 (m, 4H), 7.24 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.12 (br. s., 1H), 6.03 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 5.41-5.34 (m, 2H), 3.93 (dd, J = 7.6, 5.4 Hz, 1H), 3.66- 3.62 (m, 1H), 2.82 (td, J = 10.2, 4.3 Hz, 1H), 2.43 (s, 4H), 2.29-2.07 (m, 3H), 1.99 (dq, J = 13.2, 6.8 Hz, 1H), 1.76-1.66 (m, 2H), 1.63-1.49 (m, 3H), 0.88 (dd, J = 10.0, 6.9 Hz, 6H), 0.61 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.57 (d, J = 6.7 Hz, 3H).
Compuestos comparativos 45 a 48 Los compuestos comparativos 45 a 48 se pueden preparar de conformidad con los procedimientos descritos en la patente estadounidense No. 7,053,084 para los Ejemplos 8, 12a, 38 y 45a, respectivamente.
Ejemplo 49 Formulación farmacéutica que comprende (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-fluorofenil)- 9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida Se formuló un producto farmacológico de inyección que comprendía (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida, Ejemplo 1, como una solución estéril lista para usar (RTU, por sus siglas en inglés) de uso único para la administración intravenosa (IV). Se preparó una mezcla de vehículos mezclando 80 % v/v de polietileglicol 400 y 20 % v/v de agua a temperatura ambiente. Se agregó el Ejemplo 1 (0.2 mg/ml) a la mezcla del vehículos preparada. La formulación se sometió a ultrasonido durante alrededor de 20 minutos hasta que se disolvió el Ejemplo 1.
Ejemplo 50 Formulación farmacéutica que comprende (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-fluorofenil)- 9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida Se formuló un producto farmacológico que comprendía (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida. Ejemplo 1, adecuado para la administración oral como una solución o cápsula. La formulación oral comprendía 70 % v/v de polietilenglicol 300, 10 % v/v de etanol, 10 % v/v de TPGS, 10 % v/v de CREM0PH0R® RH40 y el Ejemplo 1 (hasta 4 mg/ml de la concentración del fármaco).
Se calentaron previamente TPGS sólido y CREM0PH0R® para licuar los materiales. Luego se midió la cantidad adecuada de cada uno de los excipientes y se mezclaron a temperatura ambiente. Se agregó la cantidad necesaria del Ejemplo 1 a la mezcla de vehículos preparada. La formulación se sometió a ultrasonido durante alrededor de 20 minutos hasta que se disolvió el Ejemplo 1.
Ejemplo 51 Formulación farmacéutica que comprende (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida Se formuló un producto farmacológico que comprendía (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida, Ejemplo 1, adecuado para la administración oral como una solución o cápsula. La formulación oral comprendía 80 % v/v de polietilenglicol 300, 10 % v/v de etanol, 10 % v/v de TPGS y el Ejemplo 1 (hasta 4 mg/ml de la concentración del fármaco).
Se calentó previamente TPGS sólido para licuar el material. Luego se midió la cantidad adecuada de cada uno de los excipientes y se mezclaron a temperatura ambiente. Se agregó la cantidad necesaria del Ejemplo 1 a la mezcla de vehículos preparada. La formulación se sometió a ultrasonido durante alrededor de 20 minutos hasta que se disolvió el Ejemplo 1.
ENSAYOS BIOLÓGICOS Las propiedades farmacológicas de los compuestos de la presente invención se pueden confirmar mediante varios ensayos biológicos. Los ejemplos de ensayos biológicos, que aparecen a continuación, se llevaron a cabo con los compuestos de la invención.
Ensayo de transactivación de Notch-CBFl El ensayo de transactivación celular Notch-CBFl (factor I de fijación al promotor C) se basa en la capacidad que tienen los fragmentos de dominio intracelular Notch liberados (NICD, por sus siglas en inglés) de funcionar como factores de transcripción junto con CBF1 y otros factores nucleares. Se usaron ensayos de luciferasa para medir el antagonismo de la actividad transcripcional de Notch-CBFl. Las células de cáncer de cuello uterino HeLa se cotransfectan de manera transitoria con los plásmidos pCDNA3.l/hygro que contenían los receptores Notch 1, Notch 2, Notch 3 o Notch 4 truncados y un vector indicador de luciferasa PGL3 que contenía 4 copias del sitio de fijación a CBFl. Luego las células se evaluaron para determinar la actividad de Notch-CBFl en ausencia o presencia de los compuestos de prueba. Las células HeLa, mantenidas en DMEM (alta glucosa con HEPES), lx glutamina/penicilina/estreptomicina y 10 % de suero bovino fetal, se transfectaron de manera transitoria en un matraz T175 (4.5 xlO6 células/matraz) usando el kit Monster Transfection (Mirus #MIR2906) de conformidad con las indicaciones de los fabricantes. La Tabla 9 indica la cantidad de ADN respectivo para las transíecciones.
Tabla 9 Seis horas después de la transíección, las células se tripsinizaron y se colocaron en placas de cultivo tisular negras recubiertas con Poli-D-lisina de 384 pocilios a una densidad de 5 x 103 células/pocillo en 95 ml de un medio de ensayo (DMEM (alta glucosa con HEPES), lx glutamina/penicilina/estreptomicina, 0.0125 % de BSA, lx aminoácidos no esenciales). Se agregó a las células un medio de ensayo (5 ml) que contenía los compuestos de prueba en concentraciones finales que variaban de 5 mM a 8.4 x 105 mM (triple dilución serial), y luego las placas celulares se incubaron durante 18 horas a 37 °C y 5 % de CO2. Los pocilios de control contenían el vehículo DMSO (recuentos totales) o 0.5 mM de un inhibidor de moléculas pequeñas interno (recuentos de fondo). Se usaron duplicados para cada muestra. La actividad de luciferasa se midió después de una incubación de 20 minutos con 50 ml de reactivos de luciferasa STEADY-GLO® de conformidad con las indicaciones del fabricante (Promega, cat. #E2550) y se analizó mediante el lector de placas Envision (PerkinElmer, Boston, MA).
El efecto antagonista de los compuestos se expresó como 100 x [1-(muestra promedio-fondo promedio)/ (total promedio- fondo promedio)], en donde la muestra es la actividad de luciferasa en presencia del compuesto de prueba, el fondo es igual a la actividad de luciferasa en presencia del control del inhibidor de moléculas pequeñas, y el total se induce por señales en los pocilios de DMSO. Los datos se representaron usando una ecuación logística de cuatro parámetros, y el valor IC50 se definió como la concentración del compuesto que inhibió el 50 % de la actividad de luciferasa.
La siguiente Tabla 10 enumera los valores IC50 de Notch 1 y Notch 3 para los Ejemplos 1-37 de la presente invención y los compuestos comparativos 45-48 que se midieron anteriormente en el ensayo de transactivación de Notch-CBFl. En algunos casos, el valor es un promedio de varios experimentos en donde N es la cantidad de experimentos realizados. Los compuestos de la presente invención, de conformidad con los Ejemplos 1-37, mostraron valores de Notch 1 de 12.2 nM o menos y valores IC50 de Notch 3 de 15.0 nM o menos.
Tabla 10 Panel de estabilidad metabólica de alto rendimiento (HD Los compuestos administrados de manera parenteral ingresan en el torrente sanguíneo y experimentan una o más pasadas a través del hígado. Los compuestos que no se metabolizan fácilmente mediante el hígado se pueden administrar en niveles de plasma terapéuticamente eficaces durante períodos terapéuticamente eficaces.
Generalmente, los compuestos administrados de manera oral se absorben a través de las paredes intestinales en el torrente sanguíneo y experimentan una primera pasada a través del hígado. Los compuestos que no se metabolizan fácilmente en la primera pasada a través del hígado se pueden distribuir a otras áreas del cuerpo en cantidades terapéuticamente eficaces.
El ensayo de estabilidad metabólica evaluó la estabilidad metabólica mediada por CYP in vitro usando microsomas de seres humanos, rata, ratón, perrón y/o mono después de una incubación de diez minutos. Cada compuesto se evaluó en duplicado.
Los resultados de estos ensayos se expresaron como la fracción del compuesto de origen que permaneció en la mezcla de reacción después de una incubación de diez minutos (porcentaje remanente). En general, estos resultados se usaron para evaluar solo el alcance del metabolismo mediado por CYP o dependiente de NADPH del compuesto de prueba. Cuando el compuesto se metabolizaba significativamente (<40-50 % remanente), esto indicaba una alta depuración del compuesto in vivo debido al metabolismo mediado por CYP. Sin embargo, si el compuesto demostraba un metabolismo moderado (50-80 %) o bajo (>85 %) en estos ensayos in vitro, una alta depuración era posible in vivo mediante otras vías de metabolismo y eliminación.
Los resultados de porcentaje remanente de estos ensayos se utilizaron para predecir la depuración del compuesto in vivo, suponiendo que el metabolismo mediado por CYP era una vía de eliminación predominante. En diferentes especies microsómicas, los intervalos de resultados fueron aproximadamente como se indicaron en la Tabla 11.
Tabla 11 Pautas para la interpretación de los resultados de estabilidad metabólica Métodos y materiales Incubación con microsomas de hígado El compuesto de prueba se recibió como una solución de reserva de 3.5 mM en 100 % de DMSO. El compuesto de prueba se diluyó para crear una solución de 50 mM de acetonitrilo (ACN) que contenía 1.4 % de DMSO, que luego se usó como una reserva lOOx para la incubación con microsomas. Cada compuesto se evaluó por separado en duplicado en cada una de las tres especies en el conjunto de ensayos de estabilidad metabólica en ser humano, rata y ratón o como especies individuales en el conjunto de ensayos de estabilidad metabólica en perros o de estabilidad metabólica en monos . Las soluciones de compuesto, NADPH y microsomas hepáticos se combinaron para la incubación en tres etapas : 1. Se calentaron previamente a 37 °C, 152 m? de suspensión de microsomas hepáticos, concentración proteica de 1.1 mg/ l en 100 mM de NaPi, pH 7.4, 5 rriM de amortiguador MgG.2. 2. Se agregaron 1.7 m? de 50 mM de coapuesto (98.6 % de ACN, 1.4 % de DMSO) al mismo tubo y se incubaron previamente a 37 °C durante 5 minutos. 3. La reacción se inició mediante la adición de 17 m? de 10 a de una solución de NADPH calentada previamente en 100 p?M NaPi, pH 7.4.
Los componentes de la reacción se mezclaron adecuadamente, y se transfirieron inmediatamente 75 m? de la mezcla de reacción a 150 m? de solución de inactivación/ detención (punto de tienpo cero, T0) . Las reacciones se incubaron a 37 °C durante 10 minutos, y luego, se transfirió una alícuota adicional de 75 m? en 150 m? de solución de inactivación. Se usó acetonitrilo que contenía 100 mM de DMN (un estándar de UV para el control de calidad de inyección) , cc o la solución inactivadora, a fin de terminar las reacciones metabólicas.
Las mezclas inactivadas se centrifugaron a 1500 rpm (-500 X g) en un rotor centrífugo SX4750 ALLEGRA® X-12 (Beckman Coulter Inc . , Fullerton, CA) durante 15 minutos hasta obtener pelotillas de microsomas desnaturalizados. Se transfirió un volumen de 90 ml de extracto de sobrenadante, que contenía la mezcla de un compuesto de origen y sus metabolitos a una placa separada de 96 pocilios para análisis de UV-LC/MS-MS, a fin de determinar el porcentaje de compuesto de origen que permaneció en la mezcla.
Tabla 12 Ensayo de estabilidad metabólica-Componentes de la reacción Análisis de muestras-Instrumentación HPLC: Pump-Thermo Surveyor; Muestreador automático-CTC/LEAP HTS; detector de UV-Thermo Surveyor PDA plus; Columna VARIAN® C18, 3 mm, 2 x 20 mm con un filtro en línea de 0.5 mth; fase móvil para el análisis previo de integridad estructural: (A) 98 % de agua, 2 % de acetonitrilo con 10 mM de acetato de amonio; (B) 10 % de agua, 90 % de acetonitrilo con 10 mM de acetato de amonio; análisis de muestra de reacción de fase móvil: (A) 98 % de agua, 2 % de acetonitrilo con 0.1 % de ácido fórmico; (B) 2 % de agua, 98 % de acetonitrilo con 0.1 % de ácido fórmico; (C) 0.1 % de hidróxido de amonio en agua; (D) 0.1 % de hidróxido de amonio en acetonitrilo.
Espectrómetro de masa: Espectrómetro de masa de triple cuadrupolo Thermo TSQ QUANTUM® Ultra; Análisis de muestras-Análisis previo de la integridad estructural El análisis de integridad estructural de estabilidad metabólica se usó para evaluar la pureza de los compuestos que se analizan. Los compuestos se recibieron en placas de 96 pocilios como 57 ml de una solución de 3.5 mM de DMSO. Las soluciones de reserva de DMSO de 3.5 mM de compuesto se diluyeron 18 veces con una solución que contenía volúmenes iguales de acetonitrilo, isopropanol y MÍIIÍQ-H2O. Las soluciones resultantes (200 mM) se analizaron para determinar la integridad estructural mediante LC-UV/MS en un espectrómetro de masa de trampa de iones Thermo LCQ Deca XP Plus, usando una columna Waters XBridge C18, 5 mm, 2 x 50 mm con una columna Guard Waters Sentry de 2.1 mm y las condiciones de LC descritas en la tabla a continuación, con una inyección de 5 ml y una velocidad de flujo de 1 ml/min. Los datos adquiridos reflejaron pureza mediante absorbancia UV a 220 nm. Solo se informaron los resultados de los compuestos con una pureza superior al 50 %.
Tabla 13 Estabilidad metabólica-Gradiente de integridad estructural Análisis de muestras-Muestras incubadas La optimización de las condiciones mediante MS/MS se realizó en un espectrómetro de masa cuadripolo triple Thermo TSQ Quantum equipado con una fuente de electrorrocío calentada (H-ESI) mediante infusión automatizada para obtener transiciones de SRM y sus correspondientes valores de energía de colisión. Las soluciones de compuesto en una concentración de 20 M en 1:1 metanol:agua se sometieron a infusión a una velocidad de flujo de 90 ml/min; luego, se combinaron con la fase móvil a una velocidad de flujo de 50 ml/min antes de introducirse en la fuente. Todos los compuestos se optimizaron usando primero las fases móviles A y B (50 % de A y 50 % de B) y, de ser necesario, usando la fase móvil C y D (también con una composición 50:50). Los parámetros optimizados, que incluyen polaridad, transición de SRM y energía de colisión, se almacenaron en una base de datos de MICROSOFT ACCESS®.
Las condiciones de espectrometría de masa obtenidas de la infusión automatizada se usaron para analizar las muestras de incubación del ensayo de estabilidad metabólica. El volumen de inyección fue de 5 m? y la velocidad de flujo fue de 0.8 ml/min. El gradiente utilizado se muestra en la tabla a continuación. Se inyectaron todas las muestras con gradiente usando primero las fases móviles A y B. De ser necesario (por ejemplo, por motivos de cromatografía), se volvieron a inyectar las muestras con el mismo gradiente, pero usando las fases móviles C y D. Todos los parámetros del análisis mediante LC-MS/MS se capturaron en forma electrónica en los archivos de datos sin procesar.
Tabla 14 Estabilidad metabólica - Gradiente de análisis de muestras Análisis de datos La integración pico se realizó con el software XCALIBUR®. El cálculo de porcentaje restante se realizó comparando las áreas pico de LC-MS/MS de las muestras de Tiominuto con aquellas de las muestras de Tominuto para cada compuesto.
Control de calidad Se evaluó un conjunto de tres compuestos junto con el compuesto de prueba en cada placa del ensayo. Los datos se aceptaban y se cargaban solo si los resultados para los tres compuestos de control se encontraban dentro de los intervalos esperados que se indican a continuación.
Tabla 15 Ensayo de estabilidad metabólica - Valores de compuestos de control por especie de icrosoma.
SD Desviación estándar Panel de vida útil de estabilidad metabólica La tasa de metabolismo y vida útil determinada in vitro en microsomas de hígado de ser humano o animal se usó para determinar la depuración intrínseca (CLint) y la depuración hepática (CLh,b) de un compuesto. Estos parámetros fueron útiles para predecir depuración humana in vivo, que define el nivel de exposición al fármaco in vivo (Obach et al., 1997, 1999).
El panel de ensayo de vida útil de la estabilidad metabólica evalúa el curso de tiempo y la tasa del metabolismo mediado por CYP (dependiente de NADPH) in vitro en microsomas de ser humano, rata, ratón, perro y mono. El curso del tiempo abarca 45 minutos de incubación e incluye puntos temporales de 0, 5, 10, 15, 30 y 45 minutos, en cada uno de los cuales se midió la cantidad de compuesto de prueba restante en la mezcla.
Pautas para la interpretación de los resultados Los resultados del ensayo de vida útil de estabilidad metabólica se expresan como una vida útil (Ti/2, min). En general, estos resultados deben usarse para evaluar únicamente el alcance del metabolismo mediado por CYP o dependiente de NADPH, del compuesto de prueba. Cuando el compuesto se metabolizó de manera considerable (Ti/2 < 14 minutos), esto indicó una alta depuración in vivo debido al metabolismo mediado por CYP. Sin embargo, si el compuesto demostraba un metabolismo moderado (14-70 minutos) o bajo (>70 minutos) en estos ensayos in vi tro , aun así era posible una depuración elevada in vivo mediante otras vías de metabolismo y eliminación.
Los resultados de estos ensayos predijeron la depuración del compuesto in vi vo , suponiendo que el metabolismo mediado por CYP era una vía de eliminación predominante. En microsomas de ser humano, los intervalos de resultados fueron, aproximadamente, como se indican en la siguiente tabla: Tabla 16 Pautas para la interpretación de los resultados de vida útil de estabilidad metabólica Métodos y materiales Se compraron microsomas de hígado de BD-Biosciences (Woburn, MA) y NADPH de AppliChem Inc; todos los demás reactivos se obtuvieron de Sigma.
Incubación con microsomas de hígado El compuesto de prueba se recibió como una solución de reserva de 3.5 mM en 100 % de DMSO. El compuesto de prueba se diluyó para crear una solución de 50 mM de acetonitrilo (ACN) que contenía 1.4 % de DMSO, que luego se usó como una reserva de 100 veces para la incubación con microsomas. Cada compuesto se evaluó en microsomas de hígado de ser humano, rata, ratón, perro y mono. Las soluciones de compuesto, NADPH y microsomas de hígado se combinaron para la incubación en tres etapas: 1. Se calentaron previamente a 37 °C, 450 ml de suspensión de microsomas hepáticos, concentración proteica de 1.1 mg/ml en 100 mM de NaPi, pH 7.4, 5 mM de amortiguador MgC]_2. 2. Se agregaron 5 ml de 50 mM de compuesto (98.6 % de ACN, 1.4 % de DMSO) al mismo tubo y se incubaron previamente a 37 °C durante 5 minutos. 3. La reacción se inició mediante la adición de 50 ml de 10 mM de una solución de NADPH calentada previamente en 100 mM NaPi, pH 7.4.
Los componentes de la reacción se mezclaron bien y se transfirieron de inmediato 65 m? a 130 m? de solución de inactivación/detención (punto temporal cero, To). Las reacciones se incubaron a 37 °C durante 5, 10, 15, 30 y 45 minutos, y en cada punto temporal, se transfirió una alícuota de 65 m? a 130 m? de solución de inactivación. Se usó acetonitrilo que contenía el estándar interno (100 ng/ml) como solución de inactivación para finalizar las reacciones metabólicas.
Las mezclas inactivadas se centrifugaron a 1500 rpm (-500 X g) en un rotor centrífugo SX4750 ALLEGRA® X-12 (Beckman Coulter Inc., Fullerton, CA) durante 15 minutos hasta obtener pelotillas de microsomas desnaturalizados. Un volumen de 90 m? de extracto de sobrenadante, que contenía la mezcla de compuesto de origen y sus metabolitos, se transfirió luego a una placa separada de 96 pocilios para el análisis mediante LC/MS-MS, a fin de determinar el porcentaje de compuesto de origen que permanecía en la mezcla.
Tabla 17 Ensayos de vida útil de estabilidad metabólica- Componentes de la reacción Análisis de muestras-Instrumentación HPLC: Bombas binarias Pump-Shimadzu LC-20 AD Series; Muestreador automático CTC/LEAP HTS La siguiente Tabla 18 enumera el valor de vida útil metabólica mediado por CYP para los Ejemplos 1-37 de la presente invención y los Compuestos comparativos 45-48 medidos en el ensayo de vida útil de estabilidad metabólica humana. En algunos casos, el valor es un promedio de varios experimentos en donde N es la cantidad de experimentos realizados. Los compuestos de la presente invención, de conformidad con los Ejemplos 1-37, tuvieron valores de vida útil de estabilidad metabólica de 31 minutos o más. Por el contrario, los Compuestos comparativos 45-48 tuvieron valores de vida útil de estabilidad metabólica de 8 minutos o menos.
Tabla 18 Los compuestos de ejemplo de la invención mostraron la sorpresiva ventaja de una depuración baja debido al metabolismo mediado por CYP en el ensayo de vida útil de estabilidad metabólica humana. Los compuestos de la presente invención, de conformidad con los Ejemplos 1-37, tuvieron vidas útiles metabólicas en el intervalo de 31 minutos a más de 120 minutos en el ensayo de vida útil de estabilidad metabólica humana. Por el contrario, los Compuestos comparativos 45-48 tuvieron vidas útiles metabólicas de 8 minutos o menos en el ensayo de estabilidad metabólica humana. Los Compuestos comparativos 45-48 mostraron una depuración alta en el ensayo de estabilidad metabólica humana, lo cual indicó que los compuestos se retiraron mediante microsomas de hígado.
Los compuestos de la presente invención (Ejemplos 1-37) se compararon con los Compuestos comparativos 45-48 descritos en la patente estadounidense No.7,456,172, y se descubrió que son especialmente convenientes. Los compuestos de la presente invención tuvieron la sorprendente ventaja de la actividad combinada como inhibidores de Notch 1 y Notch 3 y de una estabilidad metabólica superior con respecto a los microsomas de hígado. Como se muestra en las Tablas 10 y 18, en las pruebas informadas, los Ejemplos 1-37 de la presente invención tuvieron valores IC50 de Notch 1 de 12.2 nM o menos y valores IC50 de Notch 3 de 15.0 nM o menos; y vidas útiles de estabilidad metabólica humana de 31 minutos o más en el ensayo de vida útil de estabilidad metabólica humana. Por el contrario, en pruebas similares, los Compuestos comparativos 45-48 tuvieran valores IC50 de Notch 1 en el intervalo de 5.1 nM a 64.1 nM y valores IC50 de Notch 3 en el intervalo de 12.5 nM a 74.5 nM; y vidas útiles de estabilidad metabólica humana de 8 minutos o menos.
Modelos de xenoinjerto tuoral humano en ratones Todos los roedores se obtuvieron de Harían Sprague Dawlcy Co. (Indianápolis, Indiana) y se mantuvieron en un ambiente libre de amoníaco, en una colonia definida y libre de patógenos. Todos los ratones se pusieron en cuarentena aproximadamente 1 semana antes de su uso para las pruebas de propagación tumoral y eficacia farmacológica. Se les suministraron alimentos y agua a los ratones, a demanda. El programa de cuidado de animales del Instituto de investigaciones farmacéuticas de Bristol-Myers Squibb cuenta con la completa acreditación de la American Association for Accreditation of Laboratory Animal Care (AAALAC). Todos los experimentos se realizaron de conformidad con los métodos y las pautas para pruebas en animales de Bristol-Myers Squibb (BMS).
Los xenoinjertos tumorales se cultivaron y se mantuvieron de manera subcutánea (SC) en ratones NOD-SCID, nu/nu sin pelo o balb/c inmunodeprimidos (Harían Sprague Dawley). Los tumores se propagaron como trasplantes subcutáneos en la cepa de ratones adecuada (Tabla 19) usando fragmentos tumorales obtenidos de los ratones donantes.
Tabla 19 Tipos histológicos y requisito de cepa/género de los ratones huésped para la propagación de varios xenoinjertos tumorales humanos en ratones Ensayos preclínicos de quimioterapia Las cantidades de animales necesarias para detectar una respuesta significativa se agruparon al comienzo del experimento, y a cada uno se le administró un implante subcutáneo de un fragmento tumoral (~ 20 mg) con un trocar de calibre 13. Los tumores crecieron hasta la ventana de tamaño predeterminado (se excluyeron los tumores fuera del intervalo), y los animales se distribuyeron de manera uniforme en distintos grupos de tratamiento y de control. En general , había 8 ratones por grupo de tratamiento y de control , con la excepción de los experimentos realizados en el modelo de tumor SAL- IGF (no se incluye en la Tabla 19) , en el cual había generalmente 5 ratones por grupo de tratamiento o de control. El tratamiento de cada animal se basó en el peso corporal individual . Los animales que recibieron tratamiento se controlaron a diario para determinar la toxicidad/mortalidad relacionadas con el tratamiento . Cada grupo de animales se pesó antes del inicio del tratamiento (Wt ) y nuevamente despues de la última dosis de tratamiento (Wt2) . La diferencia de peso corporal (Wt2-Wti) proporciona una medida de toxicidad relacionada con el tratamiento .
La respuesta del tumor se determinó mediante la medición de los tumores con un calibre dos veces por semana, hasta que los tumores alcanzaron un tamaño "obj etivo" predeterminado de 0 .5 mg o 1 mg, según el tipo de tumor . Los pesos tumorales (mg) se calcularon de la fórmula : Peso tumoral = (longitud x ancho2) ÷ 2 Los criterios de respuesta del tumor se expresan en términos de inhibición del crecimiento tumoral (% de TGI). El retraso del crecimiento tumoral se define como la diferencia en tiempo (días) necesaria para que los tumores tratados (T) alcancen un tamaño objetivo predeterminado, en comparación con los del grupo de control (C). Para ello, el peso tumoral de un grupo se expresa como peso tumoral medio (MTW, por sus siglas en inglés).
La inhibición del crecimiento tumoral se calcula de la siguiente manera: de inhibición del crecimiento tumoral en donde Ct = mediana del tamaño del tumor de control al final del tratamiento Co = mediana del tamaño del tumor de control al inicio del tratamiento Tt = mediana del tamaño del tumor del grupo tratado al final del tratamiento To = mediana del tamaño del tumor del grupo tratado al inicio del tratamiento La actividad se define como la inhibición del crecimiento tumoral durable en un 50 ¾ o más (es decir, TGI > 50 %) o log de destrucción celular de 0.5 o más (LCK > 0.5) durante un período equivalente al menos a un tiempo de duplicación del volumen de 1 tumor, y el tratamiento farmacológico debe realizarse durante un período equivalente al menos a un tiempo de duplicación del volumen de 2 tumores.
La respuesta del tumor también se expresó en términos de retardo del crecimiento del tumor (valor de TGD), que se define como la diferencia en tiempo (días) necesaria para que los tumores sometidos a tratamiento (T) alcancen ún tamaño objetivo predeterminado, en comparación con los del grupo de control (C).
Siempre que fue posible, la actividad antitumoral se determinó en un intervalo de niveles de dosis hasta la dosis máxima tolerada (MTD, por sus siglas en inglés), que se define como el nivel de dosis inmediatamente por debajo del cual ocurrió la toxicidad excesiva (es decir, más de una muerte). Cuando se produjo la muerte, se registró el día de la muerte. Se consideró que los ratones sometidos al tratamiento que murieron antes de que sus tumores alcanzaran el tamaño objetivo murieron por la toxicidad del fármaco. No murió ningún ratón de control con un tumor que tuviera un tamaño menor al tamaño objetivo. Se consideró que los grupos de tratamiento con más de una muerte causada por la toxicidad del fármaco tuvieron tratamientos excesivamente tóxicos, y sus datos no se incluyeron en la evaluación de la eficacia antitumoral de un compuesto.
La posible interacción de la toxicidad del fármaco que afecta la tolerabilidad del tratamiento es una consideración importante en los ensayos de quimioterapia combinada. La interpretación de los resultados de terapias combinadas debe basarse en la comparación de la actividad antitumoral de la mejor respuesta posible para los agentes individuales con la combinación en dosis toleradas de manera comparable. Por lo tanto, el sinergismo terapéutico se definió como el efecto terapéutico alcanzado con un régimen tolerado de los reactivos combinados que superó el efecto óptimo alcanzado en cualquier dosis tolerada de monoterapia. Las evaluaciones estadísticas de los datos se realizaron usando la prueba generalizada Wilcoxon de Gehan. La significancia estadística se declaró en P < 0.05.
Administración farmacológica En estudios in vitro, todos los agentes se disolvieron en 100 % de DMSO y se diluyeron en serie en medios/10 % de suero bovino fetal. Los siguientes excipientes se usaron para la administración de los inhibidores de Notch a los roedores: ETOH/TPGS/PEG300 (10:10:80). En general, los inhibidores de Notch se administraron por vía oral en un esquema de QDxl5, 10 días de administración-2 días de reposo-5 días de administración, aunque también se habían evaluado otros esquemas que demostraron ser eficaces. Por ejemplo, el régimen de dosificación que consiste en QDxl2, 4 días de administración-3 días de reposo demostró ser tan eficaz como QDxl5, 10 días de administración-2 días de reposo-5 días de administración. En los estudios BID, la segunda dosis se administró de 6 a 12 horas después de la primera dosis.
Actividad antitumoral in vivo La actividad antitumoral del Ejemplo 1 administrado por vía oral (PO) se evaluó en xenoinjertos de tumores humanos implantados en ratones. Como se muestra en las Figuras 1-4, el Ejemplo 1 exhibió actividad antitumoral.
La siguiente Tabla 20 enumera la actividad antitumoral de los ejemplos de esta invención medida en los modelos de xenoinjertos tumorales humanos en ratones. Los compuestos de la presente invención, como se ejemplifican mediante los Ejemplos 1 y 3, indicaron actividad antitumoral con administración oral (PO).
Tabla 20 Administración oral TALL1: QDxlO.
MDA-MD-157 y MDA-MB-468: QDxl5, 10 días de administración-2 días de reposo-5 días de administración.
QD - Una vez por día. LCK - Log de destrucción celular.
Evaluación del profármaco: Farmacocinética de dosis única en ratas Se usaron ratas macho SPRAGUE DAWLEY® (250-300 g) para los estudios farmacocinéticos. Las ratas fueron sometidas a ayuno durante la noche anterior a la administración de la dosis y se alimentaron 4 h después de la dosis. En cada estudio, distintos grupos de animales (N = 2-3) recibieron el compuesto de prueba mediante gavaje oral. Se tomaron muestras de sangre (~0.3 mi) de la vena yugular en tubos que contenían K2EDTA 0.5, 1, 3, 5, 7 y 24 h después de la dosis. Las muestras de plasma, obtenidas mediante centrifugación a 4 °C (1500-2000 xg), se almacenaron a -20 °C hasta el momento del análisis mediante LC/MS/MS.
Análisis de datos para los ensayos farmacocinéticos Los parámetros farmacocinéticos se obtuvieron mediante análisis no compartimental de concentración plasmática (determinada mediante LC/MS/MS) en comparación con los datos temporales (Software ThermoKinetica versión 5.0). La concentración máxima (Craax) y el tiempo de Craax, Tmax, se registraron directamente de observaciones experimentales. El área debajo de la curva desde el tiempo cero hasta el tiempo de la última toma de muestras (AUCo-t) se calculó usando una combinación de sumas trapezoidales lineales y logarítmicas. La depuración plasmática total (CLTp), el volumen constante de la distribución (Vss), la vida útil de eliminación aparente (ti/2) y el tiempo medio de residencia (MRT) se calcularon después de la administración IV. El cálculo de ti/2 se realizó usando un mínimo de 3 puntos temporales con concentraciones cuantificables. La biodisponibilidad oral absoluta F se calculó como la relación de los valores de AUC normalizados por dosis después de la dosis oral e IV. Se compararon las exposiciones plasmáticas del Ejemplo 1 (AUCo-24h o AUC0-7I1) después de la administración de los profármacos con la exposición después de la administración del Ejemplo 1. Se calcularon las biodisponibilidades relativas de los profármacos con respecto al Ejemplo 1 (Tabla 21).
Tabla 21 Administración del profármaco de ejemplo a ratas: Niveles sanguíneos del Ejemplo 1 *AUC0-7h Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes. 1. Un compuesto de la Fórmula (I): I (I) y/o al menos una sal del mismo, caracterizado porque : Ri es -CH2CH2CF3; R2 es -CH2CH2CF3 o -CH2CH2CH2CF3; R3 es H, -CH3 o Rx; R4 es H o Ry ; K es: -CH20C(O)CH(CH3)NH2, -CH2OC (0) CH(NH2) CH (CSh) 2, -CH2OC (O) CH ( (CH(CH3) 2)NHC(O) CH (NH2) CH (CH3) 2 Ry es: -SCH2CH(NH2)C(0)0H, -SCH2CH (NH2) C (O) OCH3 - SCH2CH (NH2 ) C ( O ) OC ( CH3 ) 3 ; el anillo A es fenilo o piridinilo; cada Ra es independientemente Cl, alquilo Ci-3, CH2OH, -CF3Í ciclopropilo, -0CH3 y/u -0(ciclopropilo); cada Rb es independientemente F, Cl, -CH3, -CH2OH, -CF3, ciclopropilo y/u -OCH3; y es 0, 1 o 2; y z es 0, 1 o 2; siempre que si el anillo A es fenilo y z es 0, entonces y es 1 o 2 y al menos un Ra es alquilo C1-3, -CH2OH, -CF3, ciclopropilo u -0(ciclopropilo); siempre que si R3 es RX entonces R4 es H; y siempre que si R4 es Ry/ entonces R3 es H o -CH3. 2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 y/o al menos una sal del mismo, caracterizado porque: el anillo A es fenilo; R3 es H; y z es 1 o 2. 3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 y/o al menos una sal del mismo, caracterizado porque: R2 es -CH2CH2CF3; el anillo A es fenilo; y z es 1 o 2. 4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 y/o al menos una sal del mismo, caracterizado porque: R2 es -CH2CH2CF3; el anillo A es fenilo; Ra es alquilo C1-3 o -CH2OH; cada Rb es independientemente F y/o Cl; y es 1; y z es 1 o 2. 5. El compuesto de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque tiene la siguiente estructura: p de conformidad reivindicación 1 y/o al menos una sal del mismo, caracterizado porque tiene la siguiente estructura: en donde: R3 es H o Rx; R4 es H o Ry; siempre que si R3 es Rx, entonces R4 es H; y siempre que si R4 es Ry, entonces R3 es H. 7. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque tiene la siguiente estructura: 8. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque es seleccionado de: (2R,3S) -N- ( (3S) -5- ( 3 - fluorofenil) -9-metil-2-oxo-2 , 3-dihidro-1H-l, 4-benzodiazepin-3-il) -2, 3-bis (3, 3, 3-trifluoropropil) succinamida (1) ; (2R, 3S) -N- ( (3S) -5- (3-clorofenil) - 9 -etil -2 -oxo-2, 3-dihidro-lH-l , 4 -benzodiazepin-3 -il) -2,3-bis(3,3, 3-trifluoropropil) succinamida (2) ; (2R, 3 S ) -N- ( (3S) -5- (3-clorofenil) -9-isopropil-2-oxo-2 , 3-dihidro-lH-1, -benzodiazepin-3-il) -2,3-bis(3,3,3-trif luoropropil) succinamida (3); (2R, 3S) -N- (9-cloro-5- (3,4-dimetilf enil) -2 -oxo- 2 , 3 -dihidro-IH- 1 , 4 -benzodiazepin-3 - il) -3- (4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (4); (2R,3S)-N-(9-cloro-5(3,5-dimetilfenil)-2-oxo-2,3- dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)- 2-(3,3,3-trifluoropropil)succinaraida (5); (2R,3S)-N-((3S)-9-etil-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin- 3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (6); (2R,3S)- N-((3S)-5-(3-clorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamid (7); (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-clorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (8); (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-metilfenil)-2-oxo-9-(trifluorometil)-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (9); (2R,3S)-N-((3S)-9-cloro-5(3,5-dimetilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-IH-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (10); (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-metilfenil)-2-oxo-9-(trifluorometil)-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (11); (2R,3S)-N-((3S)-9-isopropil-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (12); (2R,3S)-N-((3S)-9-isopropil-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro- 1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (13); (2R,3S)-N-((3S)-9- (ciclopropiloxi)-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3- trifluoropropil)succinamida (14); (2R,3S)-N-((3S)-9- (ciclopropiloxi)-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (15); (2R,3S)-N-((3S)-9-(ciclopropiloxi)-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2- (3,3,3-trifluoropropil)succinamida (16); (2R,3S)-N-((3S)-9-cloro-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (17); (2R,3S)-N-((3S)-9-metil-2-oxo-5-(3-(trifluorometil)fenil)-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (18); (2R,3S)-N-((3S)-9- (ciclopropiloxi)-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (19); (2R,3S)-N-((3S)-9-metil-2-oxo-5-(3- (trifluorometil)fenil)-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (20); (2R,3S)- N-((3S)-9-cloro-5-(2-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (21); (2R,3S)-N-((3S)-5-(4-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (22); (2R,3S)-N-((3S)-9-metil-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis (3,3,3-trifluoropropil)succinamida (23); (2R,3S)-N-((3S)- 9-ciclopropil-2-oxo-5-fenil-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin- 3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (24); (2R,3S)-N-((3S)-9-cloro-5-(3-ciclopropilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (25); (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-clorofenil)-9-metoxi-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (26); (2R,3S)-N-((3S)-5-(4-clorofenil)-9-metoxi-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (27); (2R,3S)-N-((3S)-9-cloro-5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-lH-1,4-benzodiazepin-3-il)- 2.3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (28); (2R,3S)-N- ((3S)-5-(3-metilfenil)-9-metoxi-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (29); (2R,3S)-N-((3S)-5-(4-(hidroximetil)fenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (30); (2R,3S)-N-((3S)-5-(2-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (31); (2R,3S)-N-((3S)- 5-(3-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (32); (2R,3S)- N-((3S)-9-metoxi-2-oxo-5-(5-(trifluorometil)-2-piridinil)- 2.3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (33); (2R,3S)-N-((3S)-5-(5-cloro- 2-piridinil)-9-metoxi-2-oxo-2,3-dihidro-lH-l,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (34); (2R,3S)-N-((3S)-5-(4-metoxifenil)-2-OXO-2,3-dihidro-1H-l,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (35); (2R,3S)-N-((3S)-5-(4-metilfenil)-2-oxo-2,3-dihidro-lH- 1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (36); (2R,3S)-N-((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-(hidroximetil)-2-oxo-2,3-dihidro-lH-1,4-benzodiazepin-3-il)-2,3-bis(3,3,3-trifluoropropil)succinamida (37); L-valinato de ((3S)-3-(((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin- 1-il)metilo (38); L-alaninato de ((3S)-3-(((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-lH-l,4-benzodiazepin-1-il)metilo (39); S-(((2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3-(((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil- 2-oxo-2,3-dihidro-lH-l,4-benzodiazepin-3-il)carbamoil)-2- (3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-L-cisteína (40); S-(((2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3-(((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil- 2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il)carbamoil)-2- (3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-L-cisteinato de tere-butilo (41); S- (((2S,3R)-6,6,6-trifluoro-3-(((3S)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-lH-l,4-benzodiazepin- 3-il)carbamoil)-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-L-cisteinato de metilo (42); (4-(fosfonooxi)fenil)acetato de ( (3S)-3-(((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3- trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-l,4-benzodiazepin-1-il)metilo (43); L-valil-L-valinato de ((3S)-3-(((2R,3S)-3-carbamoil-6,6,6-trifluoro-2-(3,3,3-trifluoropropil)hexanoil)amino)-5-(3-fluorofenil)-9-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-l-il)metilo (44); y sales de los mismos. 9. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 y/o al menos una sal del mismo; y un portador farmacéuticamente aceptable. 10. Una composición caracterizada porque comprende: (i) al menos un compuesto de la Fórmula (I¡ que tiene la siguiente estructura: y/o al menos una sal del mismo; (ii) un compuesto de la Fórmula (I) que tiene siguiente estructura: (iii) Una mezcla de (i) y (ii) en donde: R3 es H o Rx; R4 es H O Ry ; Rx es : -CH2OC (0) CH (CH3 ) NH2 , -CH20C (O) CH (NH2) CH (CH3) 2 f Ry es: -SCH2CH(NH2)C(0)0H, -SCH2CH (NH2)C(0)0CH3 o - SCH2CH(NH2)C(0)OC(CH3)3; siempre que si R3 es Rx, entonces R4 es H; y siempre que si R4 es Ry, entonces R3 es H. 11. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 o las sales del mismo farmacéuticamente aceptables, para usarse en la terapia para el tratamiento del cáncer. 12. El compuesto de conformidad con la reivindicación 11 o las sales del mismo farmacéuticamente aceptables, caracterizado porque la terapia también comprende uno o más agentes de adición seleccionados de dasatinib, paclitaxel, tamoxifeno, dexametasona y carboplatino para el tratamiento del cáncer, administrados de manera secuencial o concurrente. 13. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 o las sales del mismo farmacéuticamente aceptables, para usarse en la manufactura de un medicamento para el tratamiento del cáncer.
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