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MX2014011970A - Compuestos heterociclicos y sus usos. - Google Patents

Compuestos heterociclicos y sus usos.

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MX2014011970A
MX2014011970A MX2014011970A MX2014011970A MX2014011970A MX 2014011970 A MX2014011970 A MX 2014011970A MX 2014011970 A MX2014011970 A MX 2014011970A MX 2014011970 A MX2014011970 A MX 2014011970A MX 2014011970 A MX2014011970 A MX 2014011970A
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pharmaceutically acceptable
diseases
compound
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MX2014011970A
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Hue Thanh Bui Minna
D Cushing Timothy
González Lopez De Turiso Felix
Hao Xiaolin
Lucas Brian
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Amgen Inc
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Abstract

Se describen heteroarilo bicíclicos sustituidos y composiciones que los contienen, para el tratamiento de inflamación general, artritis, enfermedades reumáticas, osteoartritis, trastornos inflamatorios del intestino, trastornos inflamatorios de los ojos, trastornos inflamatorios de la vejiga o vejiga inestable, psoriasis, complicaciones de la piel con componentes inflamatorios, afecciones inflamatorias crónicas, incluyendo pero no restringido a enfermedades autoinmunitarias tales como lupus eritematoso sistémico (SLE), miastenia grave, artritis reumatoide, encefalomielitis aguda diseminada, púrpura trombocitopénica idiopática, esclerosis múltiple, síndrome de Sjoegren y anemia hemolítica autoinmunitaria, afecciones alérgicas incluyendo todas las formas de hipersensibilidad. La presente invención también abarca métodos para el tratamiento de cánceres que están mediados, dependen de o asociados con actividad p110d, incluyendo pero no restringidos a leucemias, tal como Leucemia mieloide aguda (AML), Síndrome mielo-displástico (MDS), enfermedades mielo-proliferativas (MPD), Leucemia Mieloide Crónica (CML), leucemia linfoblástica aguda de célula T (T-ALL), leucemia linfoblástica aguda de célula B (B-ALL), Linfoma No de Hodgkins (NHL), linfoma de célula B y tumores sólidos, tal como cáncer de mama.

Description

COMPUESTOS HETEROCÍCLICOS Y SUS USOS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere generalmente a enzimas de fosfatidilinositol 3-cinasa (PI3K), y más particularmente a inhibidores selectivos de actividad PI3K y a métodos de uso de tales materiales.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La señalización celular por medio de fosfoinositidas 3'-fosforiladas se ha implicado en una variedad de procesos celulares, por ejemplo, transformación maligna, señalización del factor de crecimiento, inflamación, e inmunidad (ver Rameh et al., J. Biol Chem, 274:8347-8350 (1999) para una revisión). La enzima responsable para generar estos productos de señalización fosforilados, fosfatidilinositol 3-cinasa (PI 3-cinasa; PI3K), se identificó originalmente como una actividad asociada con oncoproteinas víricas y tirosina cinasas del receptor del factor de crecimiento que fosforilan fosfatidilinositol (PI) y sus derivados fosforilados en el 3'-hidroxilo del anillo inositol (Panayotou et al., Trends Cell Biol 2:358-60 (1992)).
Los niveles de fosfatidilinositol-3,4,5-trifosfato (PIP3), el producto primario de la activación de cinasa PI 3, se incrementan durante el tratamiento de células con una variedad de estímulos. Estos incluyen señalización a través de receptores para la mayoría de factores de crecimiento y muchos estímulos inflamatorios, hormonas, neurotransmisores y antígenos, y de esta manera la activación de PI3K representa uno, si no el más prevalente, de los eventos de transducción de señal asociados con activación del receptor de superficie de célula de mamífero (Cantlcy, Science 296:1655-1657 (2002); Vanhaesebroeck et al. Annu.Rev.Biochem, 70: 535-602 (2001)). La activación de la cinasa PI 3, por lo tanto, está involucrada en una amplia variedad de respuestas celulares que incluyen crecimiento celular, migración, diferenciación, y apoptosis (Parker et al., Current Biology, 5:577-99 (1995); Yao et al., Science, 267:2003-05 (1995)). Aunque los objetivos cadena abajo de los lípidos fosforilados generados después de la activación de cinasa PI 3 no se han caracterizado completamente, se conoce que las proteínas que contienen dominio de homología de pleckestrina (PH) y dominio de dedo FYVE se activan cuando se enlaza a varios lípidos de fosfatidilinositol (Sternmark et al., J Cell Sci, 112:4175-83 (1999); Lem on et al., Trends Cell Biol, 7:237-42 (1997)). Se han estudiado dos grupos de efectores PI3K que contienen el dominio PH en el contexto de señalización celular inmunitaria, miembros de la familia TEC de tirosina cinasa y las serina/treonina cinasas de la familia AGC. Los miembros de la familia Tec que contienen dominios PH con selectividad aparente para Ptdlns (3,4,5)P3 incluyen Tec, Btk, Itk y Etk. El enlace de PH a PIP3 es crítico para la actividad de tirosina cinasa de los miembros de la familia Tec (Schaeffer y Schwartzberg, Curr.Opi .Immunol. 12: 282-288 (2000)). Los miembros de la familia AGC que se regulan por PI3K incluyen la cinasa dependiente de fosfoinositida (PDK1), AKT (también llamados PKB) y ciertas isoformas de proteína cinasa C (PKC) y cinasa S6. Hay tres isoformas de AKT y la activación de AKT está fuertemente asociada con proliferación dependiente de PI3K y señales de supervivencia. La activación de AKT depende de la fosforilación por PDK1, que también tiene un dominio PH selectivo de 3-fosfoinositida para reclutar a la membrana donde interactúa con AKT. Otros sustratos PDK1 importantes son cinasa PKC y S6 (Deane y Fruman, Annu.Rev.Immunol. 22_563-598 (2004)). In vitro, algunas isoformas de la proteína cinasa C (PKC) están activadas directamente por PIP3. (Burgering et al., Nature, 376:599-602 (1995)).
Actualmente, la familia de la enzima cinasa PI 3 se ha dividido en tres clases con base en sus especificidades de sustrato. Las PI3Ks Clase I pueden fosforilar fosfatidilinositol (PI), fosfatidilinositol-4-fosfato, y fosfatidilinositol-4,5-bifosfato (PIP2) para producir fosfatidilinositol-3-fosfato (PIP), fosfatidilinositol-3,4-bifosfato, y fosfatidilinositol-3,4,5-trifosfato, respectivamente. Las Pl3Ks Clase II fosforilan PI y fosfatidilinositol-4-fosfato, mientras que las PI3Ks Clase III sólo pueden fosforilar PI.
La purificación inicial y clonación molecular de la cinasa PI 3 revela que fue un heterodímero consistente de subunidades p85 y pllO (Otsu et al., Cell, 65:91-104 (1991); Hiles et al., Cell, 70:419-29 (1992)). Desde entonces, se han identificado cuatro PI3Ks de Clase I distintas, designadas PI3K OÍ, b, d, y g, cada una consiste de una subunidad catalítica de 110 kDa distinta y una subunidad reguladora. Más específicamente, tres de las subunidades catalíticas, es decir, r??qa, r??qb y r??qd, cada una interactúan con la misma subunidad reguladora, p85; mientras que pllOy interactúa con una subunidad reguladora distinta, plOl. Como se describe enseguida, los patrones de expresión de cada uno de estos PI3Ks en células y tejidos humanos también son distintos. Aunque se ha acumulado una abundancia de información en el pasado reciente en las funciones celulares de cinasas PI 3 en general, los papeles jugados por las isoformas individuales no se entienden completamente.
Se ha descrito la clonación de pllOa de bovino. Se identificó esta proteína como se relaciona con la proteína Saccharomyces cerevisiae: Vps34p, una proteína involucrada en el procesamiento de proteína vacuolar. El producto pllOa recombinante también se mostró que se asocia con p85a, para proporcionar una actividad PI3K en células COS-1 transíectadas. Ver Hiles et al., Cell, 70, 419-29 (1992).
La clonación de una segunda isoforma pllO humana, designada r??qb, se describe en Hu et al., Mol Cell Biol, 13:7677-88 (1993). Esta forma se dice que se asocia con p85 en células, y se expresa ubicuamente, como mARN r??qb se ha encontrado en numerosos tejidos humanos y de ratón así como en células endoteliales de la vena umbilical humanos, células T leucémicas humanas Jurkat, células de riñón embriónicas humanas 293, fibroblastos 3T3 de ratón, células HeLa, y células de carcinoma de vejiga de rata NBT2. Tal expresión amplia sugiere que esta isoforma es ampliamente importante en las trayectorias de señalización.
La identificación de la isoforma r??qd de cinasa PI 3 se describe en Chantry et al., J Biol Chem, 272:19236-41 (1997). Se observó que la isoforma r??qd humana se expresa en una manera restringida al tejido. Se expresa a altos niveles en linfocitos y tejidos linfoides y se ha mostrado que juega un papel clave en la señalización mediada por cinasa PI 3 en el sistema inmunitario (Al-Alwan etl al. JI 178: 2328-2335 (2007); Okkenhaug et al JI, 177: 5122-5128 (2006); Lee et al.
PNAS, 103: 1289-1294 (2006)). También se ha mostrado que P1105 se expresa a niveles inferiores en células de mama, melanocitos y células endoteliales (Vogt et al. Virology, 344: 131-138 (2006) y se ha implicado en conferir propiedades migratorias selectivas a las células de cáncer de mama (Sawyer et al. Cáncer Res.63:1667-1675 (2003)). Los detalles concernientes a la isoforma P1105 también pueden encontrarse en las Pat. E.U.A. Nos.5,858,753; 5,822,910; y 5,985,589.
Ver también, Vanhaesebroeck et al., Proc Nat. Acad Sci EUA, 94:4330-5 (1997), y publicación internacional WO 97/46688.
En cada uno de los subtipos RI3Ka, b, y d, la subunidad p85 actúa para localizar la cinasa PI 3 a la membrana de plasma por la interacción de su dominio SH2 con residuos de tirosina fosforilada (presente en un contexto de secuencia apropiado) en proteínas objetivo (Rameh et al., Cell, 83:821-30 (1995)). Se han identificado cinco isoformas de p85 (p85a, r85b, r55g, r55a y r50a) codificadas por tres genes. Los transcriptos alternativos del gen Pik3rl que codifican las proteínas r85a, p55a y p50 (Deane y Fruman, Annu.Rev.Immunol. 22: 563-598 (2004)). La p85a se expresa ubicuamente mientras que la r85b, se encuentra primariamente en tejidos cerebral y linfoide (Volinia et al., Oncogene, 7:789-93 (1992)). La asociación de la subunidad p85 a las subunidades catalíticas r??qa, b, o d de la cinasa PI 3 parece que se requiere para la actividad y estabilidad catalítica de estas enzimas. Además, el enlace de las proteínas Ras también sobre regula la actividad de la cinasa PI 3.
La clonación de r??qg revela todavía una complejidad adicional dentro de la familia PI3K de enzimas (Stoyanov et al., Science, 269:690-93 (1995)). La isoforma r??qg está cercanamente relacionada a pllOa y r??qb (45-48% de identidad en el dominio catalítico), pero como se nota no hace uso de p85 como una subunidad de dirección. En su lugar, pllOy enlaza una subunidad reguladora plOl que también enlaza a las subunidades bg de las proteínas G heterotriméricas. La subunidad reguladora plOl para PI3Kgamma se clonó originalmente en cerdos, y el ortólogo humano identificado posteriormente (Krugmann et al., J Biol Chem, 274:17152-8 (1999)). La interacción entre la región de terminal N de plOl con la región de terminal N de pllOy se conoce para activar R?3Kg a través de Obg. Recientemente, se ha identificado un homólogo plOl, p84 o p87PIKAP (proteína adaptadora RI3Kg de 87 kDa) que enlaza pllOy (Voigt et al. JBC, 281: 9977-9986 (2006), Suire et al. Curr.Biol. 15: 566-570 (2005)). La r87rikAr es hornóloga a plOl en áreas que enlazan pllOy y Qbg y también media la activación de pllOy cadena abajo de receptores acoplados a la proteína G. Al contrario de plOl, p87PIKAP se expresa altamente en el corazón y puede ser crucial para la función cardiaca de RI3Kg.
Se describe un polipéptido PI3K constitutivamente activo en la publicación internacional WO 96/25488. Esta publicación describe la preparación de una proteina de fusión quimérica en la cual el fragmento de residuo 102 de p85 conocido como la región inter-SH2 (iSH2) se fusiona a través de una región ligadora a la terminal N de pllO de murino. El dominio p85 iSH2 aparentemente es capaz de activar la actividad PI3K de una manera comparable a la p85 intacta (Klippel et al., Mol Cell Biol, 14:2675-85 (1994)).
De esta manera, las cinasas PI 3 pueden definirse por su identidad de aminoácido o por su actividad. Los miembros adicionales de esta familia de genes de crecimiento incluyen proteina cinasas y lipidos más distantemente relacionados que incluyen Vps34 TOR1, y TOR2 de Saccharomyces cerevisiae (y sus homólogos mamíferos tales como FRAP y mTOR), el producto de gen de ataxia telangiectasia (ATR) y la subunidad catalítica de la proteína cinasa dependiente del ADN (ADN-PK). Ver generalmente, Hunter, Cell, 83:1-4 (1995).
La cinasa PI 3 también está involucrada en un número de aspectos de la activación del leucocito. Se ha mostrado una actividad de cinasa PI 3 asociada con p85 para asociarse físicamente con el dominio citoplásmico de CD28, que es una molécula coestimuladora importante para la activación de células T en respuesta al antigeno (Pages et al., Nature, 369:327-29 (1994); Rudd, Immunity, 4:527-34 (1996)). La activación de células T a través de CD28 disminuye el umbral para la activación por antigeno e incrementa la magnitud y duración de la respuesta proliferativa. Estos efectos están ligados para incrementar en la transcripción de un número de genes que incluyen interleucina 2 (IL2), un factor de crecimiento de célula T importante (Fraser et al., Science, 251:313-16 (1991)). La mutación de CD28 tal que no pueda interactuar más con la cinasa PI 3 lleva a una falla para iniciar la producción de IL2, lo que sugiere un papel critico para la cinasa PI 3 en la activación de célula T.
Los inhibidores específicos contra miembros individuales de la familia de enzimas proporcionan herramientas invaluables para descifrar funciones de cada enzima. Dos compuestos, LY294002 y wortmanina, se han usado ampliamente como inhibidores de cinasa PI 3. Estos compuestos, sin embargo, son inhibidores PI3K no específicos, ya que no distinguen entre los cuatro miembros de las cinasa PI 3 Clase I. Por ejemplo, los valores IC50 de wortmanina contra cada una de las varias cinasas PI 3 de Clase I están en el intervalo de l-10nM. Similarmente, los valores IC5o para LY294002 contra cada una de estas cinasas PI 3 es de alrededor de ImM (Fruman et al., Ann Rev Biochem, 67:481-507 (1998)). Por lo tanto, la utilidad de estos compuestos para estudiar los papeles de las cinasas PI 3 de Clase I individual es limitada.
Con base en los estudios usando wortmanina, hay evidencia de que la función de cinasa PI 3 también se requiere para algunos aspectos de la señalización de leucocito a través de los receptores acoplados a la proteína G (Thelen et al., Proc Nati Acad Sci EUA, 91:4960-64 (1994)). Por otro lado, se ha mostrado que la wortmanina y LY294002 bloquean la migración del neutrófilo y la liberación del superóxido. Sin embargo, puesto que estos compuestos no distinguen entre las varias isoformas de PI3K, se mantiene no claro a partir de estos estudios que isoforma PI3K particular o isoformas están involucradas en estos fenómenos y que funciones realizan las enzimas PI3K Clase I diferentes en tejidos tanto normales como enfermos en general. La co expresión de varias isoformas PI3K en la mayoría de los tejidos tiene esfuerzos confundidos para segregar las actividades de cada enzima hasta recientemente.
La separación de las actividades de las varias isozimas PI3K se ha avanzado recientemente con el desarrollo de ratones genéticamente manipulados que permiten el estudio de ratones inactivos en el gen especifico en isoforma y con gen activado muerto por cinasa y el desarrollo de inhibidores más selectivos para algunas de las isoformas diferentes. Se han generado ratones inactivos en el gen PllOa y r??qb y son ambos embriónicos letales y puede obtenerse poca información de estos ratones con respecto a la expresión y función de pllO alfa y beta (Bi et al. Marran.Genome, 13:169-172 (2002); Bi et al. J.Biol.Che . 274:10963-10968 (1999)). Más recientemente, se generaron ratones con inactivación de gen muertos por cinasa pllOa con un punto sencillo de mutación en la porción DFG de la cavidad de enlace ATP (pll0aD933A) que afecta la actividad de cinasa pero conserva la expresión de cinasa pllOa mutante. En contraste para ratones con remplazo de gen, el enfoque de inactivación de gen conserva la estequiometria del complejo de señalización, funciones de andamiaje e imita los enfoques de molécula pequeña más realmente que los ratones con remplazo de gen. Igual que los ratones KO pllOa, los ratones homocigotos pll0aD933A son embrióticos letales. Sin embargo, los ratones heterocigotos son viables y fértiles pero exhiben señalización severamente menguada por medio de las proteínas del sustrato del receptor de insulina (IRS), mediadores clave de insulina, factor 1 del crecimiento tipo insulina y acción de leptina. La capacidad de respuesta defectuosa a estas hormonas lleva a hiperinsulinemia, intolerancia a la glucosa, hiperfagia, adiposidad incrementada y crecimiento general reducido en hetetocigotos (Foukas, et al. Nature, 441: 366-370 (2006)). Estos estudios revelan un papel no redundante definido para pllOa como un intermediario en IGF-1, señalización de insulina y leptina que no se sustituye por otras isoformas. Esperaremos la descripción para ratones con inactivación de gen muertos por cinasa r??qb para entender de forma adicional la función de esta isoforma (los ratones ya se han hecho pero aún no se publican; Vanhaesebroeck).
Los ratones con inactivación de gen muertos por cinasa y con remplazo de gen RIIOg ambos se han generado y muestran en general fenotipos similares y moderados con defectos primarios en la migración de células del sistema inmunitario innato y un defecto en el desarrollo tímico de células T (Li et al. Science, 287: 1046-1049 (2000), Sasaki et al. Science, 287: 1040-1046 (2000), Patrucco et al. Cell, 118: 375-387 (2004)).
Igual que pllOy, los ratones con inactivación de gen muertos por cinasa y con remplazo de gen PI3K delta se han hecho y están disponibles con fenotipos moderados y similares. Los ratones con inactivación de gen mutantes r110d°910? demuestran un papel importante para delta en el desarrollo y función de célula B, con células B en zona marginal y células B1 CD5+ casi indetectables, y señalización del receptor de antígeno de célula B y T (Clayton et al.
J.Exp.Med. 196:753-763 (2002); Okkenhaug et al. Science, 297: 1031-1034 (2002)). Los ratones pll05D910A se han estudiado extensivamente y han elucidado el papel diverso que juega delta en el sistema inmunitario. Las respuestas inmunitarias independientes de célula T y dependientes de célula T se atenúan severamente en r110d°91OA y la secreción de citoquina TH1 (INF-g) y TH2 (IL-4, IL-5) son dispares (Okkenhaug et al. J.Immunol. 177: 5122-5128 (2006)). Un paciente humano con una mutación en r??qd también se ha descrito recientemente. Un niño de Taiwán con una inmunodeficiencia de célula B primaria y una gamma-hipoglobulinemia de actiologia previamente desconocida presentada con una sustitución de par base sencilla, m.3256G para A en el codón 1021 en el exón 24 de r??qd. Esta mutación resulta en una sustitución de aminoácidos de sentido erróneo (E a K) en el codón 1021, que se localiza en el dominio catalítico altamente conservado de la proteína r??qd. El paciente no tiene otras mutaciones identificadas y su fenotipo es consistente con la definición de r??qd en ratones en la medida de lo estudiado. (Jou et al. Int. J. Immunogenet.33: 361-369 (2006)).
Se han desarrollado compuestos de molécula pequeña selectivos en isoforma con éxito variado en todas las isoformas de cinasa PI3 de Clase I (Ito et al. J. Phar . Exp. Therapeut., 321:1-8 (2007)). Son deseables los inhibidores para alfa debido a que las mutaciones en pllOex se han identificado en varios tumores sólidos; por ejemplo, una mutación de amplificación de alfa se asocia con 50% de cáncer de ovarios, de cérvix, de pulmón y mama y se ha descrito una mutación de activación en más del 50% de cáncer de intestino y 25% de cáncer mama (Hennessy et al. Nature Reviews, 4: 988— 1004 (2005)). Yamanouchi ha desarrollado un compuesto YM-024 que inhibe alfa y delta equipolentemente y es 8 y 28 veces selectivo sobre beta y gamma respectivamente (Ito et al. J. Pharm. Exp. Therapeut., 321:1-8 (2007)).
La RIIOb está involucrada en la formación de trombos (Jackson et al. Nature Med. 11: 507-514 (2005)) y los inhibidores de molécula pequeña específicos para esta isoforma se piensan después para indicación que involucra trastornos de coagulación (TGX-221: 0.007uM en beta; 14 veces selectivo sobre delta, y más de 500 veces selectivo sobre gamma y alfa) (Ito et al. J. Pharm. Exp. Therapeut., 321:1-8 (2007)).
Los compuestos selectivos para pllOy se han desarrollado por varios grupos como agentes inmunosupresores para enfermedad autoinmunitaria (Rueckle et al. Nature Reviews, 5: 903-918 (2006)). De notar, AS 605240 se ha mostrado para ser eficaz en un modelo de ratón de artritis reumatoide (Camps et al. Nature Medicine, 11: 936-943 (2005)) y para retardar el inicio de la enfermedad en un modelo de lupus eritematoso sistémico (Barber et al. Nature Medicine, 11: 933-935 (205)).
También se han descrito recientemente inhibidores selectivos delta. Los compuestos más selectivos incluyen los inhibidores.de quinazolinona purina (PIK39 y IC87114). El IC87114 inhibe r??qd en el intervalo nanomolar alto (dígito triple) y tiene más de 100 veces la selectividad contra contra pllOa, es 52 veces selectivo contra r??qb pero carece de selectividad contra pllOy (aproximadamente 8 veces). No muestra actividad contra ninguna proteína cinasas probadas (Knight et al. Cell, 125: 733-747 (2006)). Se mostró que usando compuestos selectivos delta o ratones genéticamente manipulados (pll06D910A) además de jugar un papel clave en la activación de célula B y T, delta también está parcialmente involucrado en la migración del neutrófilo y el arrebato respiratorio de neutrófilo cebado y lleva a un bloqueo parcial de desgranulación de célula madre mediada por el antígeno IgE (Condliffe et al. Blood, 106: 1432-1440 (2005); Ali et al. Nature, 431: 1007-1011 (2002)). Por lo tanto r??qd emerge como un mediador importante de muchas respuestas inflamatorias clave que también se conoce que participan en condiciones inflamatorias aberrantes, que incluyen pero no se limitan a enfermedad autoinmunitaria y alergia. Para soportar esta noción, hay un cuerpo de crecimiento de datos de validación de objetivo r??qd derivados de estudios que usan tanto herramientas genéticas como agentes farmacológicos. De esta manera, al usar el compuesto selectivo delta IC 87114 y los ratones pllOóD910A, Ali et al. (Nature, 431: 1007-1011 (2002)) ha demostrado que delta juega un papel crítico en un modelo murino de enfermedad alérgica. En ausencia de delta funcional, la anafilaxis cutánea pasiva (PCA) se reduce significativamente y puede atribuirse a una reducción en activación y desgranulación de células madre inducido por el alérgeno IgE. Además, la inhibición de delta con IC 87114 se ha mostrado que aminora significativamente la inflamación y enfermedad en urr-modelo murino de asma usando inflamación de las vías respiratorias inducida por ovalbúmina (Lee et al. FASEB, 20: 455-465 (2006). Estos datos que utilizan el compuesto se corroboraron en ratones pll05D910A mutantes usando el mismo modelo de inflamación de vías respiratorias alérgicas por un grupo diferente (Nashed et al. Eur.J.Im unol.37:416-424 (2007)).
Existe la necesidad para una caracterización adicional de la función PI3K5 en escenarios inflamatorios y auto-inmunitarios. Adicionalmente, el entendimiento del solicitante de PI3K5 requiere la elaboración adicional de interacciones estructurales de r??qd, ambos con su subunidad reguladora y con otras proteínas en la célula. También queda una necesidad para inhibidores más potentes y selectivos o específicos de PI3K delta, con objeto de evitar la toxicología potencial asociada con actividad en isozimas pllO alfa (señalación de insulina) y beta (activación de plaquetas). En particular, los inhibidores selectivos o específicos de PI3K5 son deseables para explorar el papel de esta isozi a adicional y para desarrollo de farmacéuticos superiores para modular la actividad de la isozima.
SUMARIO DE LA INVENCIÓN La presente invención comprende compuestos nuevos que tienen propiedades y actividad biológica mejoradas en PI3K5 humana DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Un aspecto de la invención se refiere a compuestos que tienen las estructuras y o cualquier sal farmacéuticamente aceptable de las mismas.
Otro aspecto de la invención se refiere a un método para tratar afecciones o trastornos mediados por PI3K.
En ciertas modalidades, la afección o trastorno mediado por PI3K se selecciona de artritis reumatoide, espondilitis anquilosante, osteoartritis, artritis psoriásica, psoriasis, enfermedades inflamatorias, y enfermedades autoinmunitarias. En otras modalidades, la afección o trastorno mediado por PI3K se selecciona de enfermedades cardiovasculares, ateroesclerosis, hipertensión, trombosis venosa profunda, apoplejía, infarto al miocardio, angina inestable, tromboembolia, embolia pulmonar, enfermedades trombolíticas, isquemia arterial aguda, oclusiones trombóticas periféricas, y enfermedad de arteria coronaria. Todavía en otras modalidades, la afección o trastorno mediado por PI3K se selecciona de cáncer, cáncer de colon, glioblastoma, carcinoma endometrial, cáncer hepatocelular, cáncer de pulmón, melanoma, carcinoma de célula renal, carcinoma de tiroides, linfoma celular, trastornos linfoproliferativos, cáncer de pulmón de célula pequeña, carcinoma de pulmón de célula escamosa, glioma, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de ovario, cáncer de cérvix, y leucemia. Aún en otra modalidad, la afección o trastorno mediado por PI3K se selecciona de diabetes de tipo II. Todavía en otras modalidades, la afección o trastorno mediado por PI3K se selecciona de enfermedades respiratorias, bronquitis, asma, y enfermedad pulmonar obstructiva crónica. En ciertas modalidades, el sujeto es un humano.
Otro aspecto de la invención se refiere al tratamiento de artritis reumatoide, espondilitis anquilosante, osteoartritis, artritis psoriásica, psoriasis, enfermedades inflamatorias o enfermedades autoinmunitarias que comprende la etapa de administrar un compuesto de conformidad con cualquiera de las modalidades anteriores.
Otro aspecto de la invención se refiere al tratamiento de artritis reumatoide, espondilitis anquilosante, osteoartritis, artritis psoriásica, psoriasis, enfermedades inflamatorias y enfermedades autoinmunitarias, trastornos inflamatorios del intestino, trastornos inflamatorios de los ojos, trastornos inflamatorios de la vejiga o vejiga inestable, complicaciones de la piel con componentes inflamatorios, afecciones inflamatorias crónicas, enfermedades autoinmunitarias, lupus eritematoso sistémico (SLE), míastenia grave, artritis reumatoide, encefalomielitis aguda diseminada, púrpura trombocitopénica idiopática, esclerosis múltiple, síndrome de Sjoegren y anemia hemolítica autoinmunitaria, afecciones alérgicas e hipersensibilidad, que comprende la etapa de administrar un compuesto de conformidad con cualquiera de las modalidades anteriores o siguientes.
Otro aspecto de la invención se refiere al tratamiento de cánceres que están mediados, dependen de o asociados con actividad r??qd, que comprende la etapa de administrar un compuesto de conformidad con cualquiera de las modalidades anteriores o siguientes.
Otro aspecto de la invención se refiere al tratamiento de cánceres que se seleccionan de leucemia mieloide aguda, síndrome mielo-displástico, enfermedades mielo-proliferativas, leucemia mieloide crónica, leucemia linfoblástica aguda de célula T, leucemia linfoblástica aguda de célula B, linfoma no de Hodgkins, linfoma de célula B, tumores sólidos y cáncer de mama, que comprende la etapa de administrar un compuesto de conformidad con cualquiera de las modalidades anteriores o siguientes.
Otro aspecto de la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto de conformidad con cualquiera de las modalidades anteriores y un diluyente o portador farmacéuticamente aceptable.
Otro aspecto de la invención se refiere al uso de un compuesto de conformidad con cualquiera de las modalidades anteriores como un medicamento.
Otro aspecto de la invención se refiere al uso de un compuesto de conformidad con cualquiera de las modalidades anteriores en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de artritis reumatoide, espondilitis anquilosante, osteoartritis, artritis psoriásica, psoriasis, enfermedades inflamatorias, y enfermedades autoinmunitarias.
Los compuestos de esta invención pueden tener en general varios centros asimétricos y típicamente se describen en la forma de mezclas racémicas. Esta invención se pretende que abarque mezclas racémicas, mezclas parcialmente racémicas y enantiómeros y diaestereómeros separados.
"Sal farmacéuticamente aceptable" significa una sal preparada por medios convencionales, y son bien conocidos por aquellos experimentados en la téenica. Las "sales farmacológicamente aceptables" incluyen sales básicas de ácidos orgánicos e inorgánicos, incluyendo pero no limitados a ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido metansulfónico, ácido etansulfónico, ácido málico, ácido acético, ácido oxálico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido láctico, ácido fumárico, ácido succínico, ácido maléico, ácido salicilico, ácido benzoico, ácido fenilacético, ácido mandélico y similares. Cuando los compuestos de la invención incluyen una función ácida tal como un grupo carboxi, entonces los pares de catión farmacéuticamente aceptables adecuados para el grupo carboxi son bien conocidos para aquellos experimentados en la téenica e incluyen cationes alcalinos, alcalinotérreos, de amonio, de amonio cuaternarios y similares. Para ejemplos adicionales de "sales farmacológicamente aceptables," ver infra y Berge et al., J. Pharm. Sci.66:1 (1977).
"Grupo de partida" generalmente se refiere a grupos fácilmente desplazables por un nucleófilo, tal como una amina, un tiol o un nucleófilo de alcohol. Tales grupos de partida son bien conocidos en la técnica. Los ejemplos de tales grupos de partida incluyen, pero no se limitan a, N-hidroxisuccinimida, N-hidroxibenzotriazol, haluros, triflatos, tosilatos y similares. Los grupos de partida preferidos se indican en la presente donde sean apropiados.
"Grupo protector" generalmente se refiere a grupos bien conocidos en la técnica que se usan para prevenir que grupos reactivos seleccionados, tales como carboxi, amino, hidroxi, mercapto y similares, experimenten reacciones indeseadas, tales como nucleofilicas, electrofílicas, oxidación, reducción y similares. Los grupos protectores preferidos se indican en la presente donde sea apropiado. Los ejemplos de grupos protectores amino incluyen, pero no se limitan a, aralquilo, aralquilo sustituido, cicloalquenilalquilo y cicloalquenil alquilo sustituido, alilo, alilo sustituido, acilo, alcoxicarbonilo, aralcoxicarbonilo, sililo y similares. Los ejemplos de aralquilo incluyen, pero no se limitan a, bencilo, orto-metilbencilo, tritilo y benchidrilo, que pueden estar opcionalmente sustituidos con halógeno, alquilo, alcoxi, hidroxi, nitro, acilamino, acilo y similares, y sales, tales como sales de fosfonio y amonio. Los ejemplos de grupos arilo incluyen fenilo, naftilo, indanilo, antracenilo, 9- (9-fenilfluorenil), fenantrenilo, durenilo y similares. Los ejemplos de radicales cicloalquenilalquilo o cicloalquenilalquilo sustituido, preferiblemente que tienen 6-10 átomos de carbono, incluyen, pero no se limitan a, ciclohexenil metilo y similares. Los grupos acilo, alcoxicarbonilo y aralcoxicarbonilo adecuados incluyen benciloxicarbonilo, t-butoxicarbonilo, iso-butoxicarbonilo, benzoilo, benzoilo sustituido, butirilo, acetilo, trifluoroacetilo, tricloro acetilo, ftaloilo y similares. Una mezcla de grupos protectores puede usarse para proteger el mismo grupo amino, tal como un grupo amino primario puede protegerse por tanto un grupo aralquilo como un grupo aralcoxicarbonilo. Los grupos protectores amino también pueden formar un anillo heterocíclico con el nitrógeno al cual se unen, por ejemplo, 1.2-bis(metilen)benceno, ftalimidilo, succinimidilo, maleimidilo y similares y donde estos grupos heterocíclicos pueden incluir además anillos arilo y cicloalquilo contiguos. Además, los grupos heterocíclicos pueden ser mono-, di o tri-sustituidos, tales como nitroftalimidilo. Los grupos amino también pueden protegerse contra reacciones indeseadas, tales como oxidación, a través de la formación de una sal de adición, tal como clorhidrato, ácido toluensulfónico, ácido trifluoroacético y similares. Muchos de los grupos protectores amino también son adecuados para proteger grupos carboxi, hidroxi y mercapto. Por ejemplo, grupos aralquilo. Los grupos alquilo también son grupos adecuados para proteger grupos hidroxi y mercapto, tal como tert-butilo.
Los grupos protectores sililo son átomos de silicio opcionalmente sustituidos por uno o más grupos alquilo, arilo y aralquilo. Los grupos protectores sililo adecuados incluyen, pero no se limitan a, trimetilsililo, trietilsililo, triisopropilsililo, tert-butildimetilsililo, dimetilfenilsililo, 1,2-bis (dimetilsilil)benceno, 1.2-bis(dimetilsilil)etano y difenilmetilsililo. La sililación de los grupos amino proporciona grupos mono o di-sililamino. La sililación de compuestos de aminoalcohol puede llevar a un derivado de N,N,O-trisililo. La eliminación de la función sililo de una función de éter de sililo se realiza fácilmente por tratamiento con, por ejemplo, un reactivo de hidróxido de metal o fluoruro de amonio, ya sea como una etapa de reacción discreta o in situ durante una reacción con el grupo de alcohol. Los agentes de sililación adecuados son, por ejemplo, cloruro de trimetilsililo, cloruro de tert-butil-dimetilsililo, cloruro de fenildimetilsililo, cloruro de difenilmetilo sililo, o sus productos de combinación con imidazol o DMF. Los métodos para sililación de aminas y eliminación de grupos protectores sililo son bien conocidos para aquellos experimentados en la téenica. Los métodos de preparación de estos derivados de amina de aminoácidos correspondientes, amidas de aminoácidos o ésteres de aminoácidos también son bien conocidos para aquellos experimentados en la técnica de química orgánica incluyendo aminoácido/éster de aminoácido o química de aminoalcohol.
Los grupos protectores se remueven bajo condiciones que no afectarán la porción restante de la molécula. Estos métodos son bien conocidos en la técnica e incluyen hidrólisis ácida, hidrogenólisis y similares. Un método preferido involucra eliminación de un grupo protector, tal como eliminación de un grupo benciloxicarbonilo por hidrogenólisis que utiliza paladio en carbono en un sistema de solvente adecuado tal como un alcohol, ácido acético, y similares o mezclas de los mismos. Un grupo protector t-butoxicarbonilo puede removerse utilizando un ácido orgánico o inorgánico, tal como HCl o ácido trifluoroacético, en un sistema de solvente adecuado, tal como dioxano o cloruro de metileno. La sal amino resultante puede fácilmente neutralizarse para proporcionar la amina libre. El grupo protector carboxi, tal como metilo, etilo, bencilo, tert-butilo, 4-metoxifenilmetilo y similares, puede removerse bajo condiciones de hidrólisis e hidrogenólisis bien conocidas para aquellos experimentados en la téenica.
Debe notarse que los compuestos de la invención pueden contener grupos que pueden existir en formas tautoméricas, tales como grupos de amidina y guanidina cíclicos y acíclicos, heteroátomo sustituido por grupos heteroarilo (Yr O, S, NR), y similares, que se ilustran en los siguientes ejemplos: y aunque una forma se nombra, describe, muestra y/o reivindica en la presente, todas las formas tautoméricas se pretenden para incluirse inherentemente en tal nombre, descripción, exhibición y/o reivindicación.
Los profármacos de los compuestos de esta invención también se contemplan por esta invención. Un profármaco es un compuesto activo o inactivo que se modifica químicamente a través de acción fisiológica in vivo, tal como hidrólisis, metabolismo y similares, en un compuesto de esta invención después de la administración del profármaco a un paciente. Lo idóneo y las téenicas involucradas en hacer y usar profármacos son bien conocidos por aquellos experimentados en la técnica. Para una discusión general de profármacos que involucran ésteres ver Svensson and Tunek Drug Metabolism Reviews 165 (1988) y Bundgaard Design of Prodrugs, Elsevier (1985). Los ejemplos de un anión de carboxilato enmascarado incluyen una variedad de ésteres, tales como alquilo (por ejemplo, metilo, etilo), cicloalquilo (por ejemplo, ciclohexilo), aralquilo (por ejemplo, bencilo, p-metoxibencilo), y alquilcarboniloxialquilo (por ejemplo, pivaloiloximetilo). Las aminas se han enmascarado como derivados sustituidos de arilcarboniloximetilo que se desdoblan por esterases in vivo liberando el fármaco libre y formaldehido (Bungaard J. Med. Chem.2503 (1989)). También, los fármacos que contienen un grupo NH ácido, tales como imidazol, imida, indol y similares, se han enmascarado con grupos N-aciloximetilo (Bundgaard Design of Prodrugs, Elsevier (1985)). Los grupos hidroxi se han enmascarado como ésteres y éteres. La EP 039,051 (Sloan and Little, 4/11/81) describe profármacos de ácido hidroxámicos de base Mannich, su preparación y uso.
La especificación y reivindicaciones contienen listado de especies usando el lenguaje "seleccionados de ... y .. . " y "es .. . o .. . " (algunas veces referidos como grupos arkush). Cuando este lenguaje se usa en esta solicitud, a menos que se establezca de otra manera significa incluir el grupo como un todo, o cualquiera de los miembros sencillos del mismo, o cualquiera de los subgrupos de los mismos. El uso de este lenguaje se meramente para propósitos de taquigrafía y no significa de ninguna manera limitar la eliminación de elementos o subgrupos individuales como sea necesario.
Experimental Se usan las siguientes abreviaturas: ac. - acuoso BINAP - 2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftilo conc - concentrado DCM diclorometano DMF - N,W-dimetilformamida Et20 - dietil éter EtOAc - acetato de etilo EtOH - alcohol etílico h - hora(s) min - minutos MeOH - alcohol metílico ta temperatura ambiente sat. - saturado THF - tetrahidrofurano General Los reactivos y solventes usados a continuación pueden obtenerse de fuentes comerciales. Los espectros ^-RMN se registraron en los espectrómetros Bruker 400 MHz y 500 MHz RMN. Los picos importantes se tabulan en el orden: multiplicidad (s, singlete; d, doblete; t, triplete; q, cuarteto; m, multiplete; br s, singlete amplio), constantes de acoplamiento en hercios (Hz) y número de protones. Los resultados de espectrometría de masa se reportan como la relación de masa sobre carga, seguido por la abundancia relativa de cada ion (entre paréntesis ionización de Electrorocío (ESI)) se condujo el análisis de espectrometría de masa en un espectrómetro de masa de electrorocío LC/MSD Agilent™ serie 1100. Todos los compuestos pueden analizarse en el modo ESI positivo usando acetonitrilo:agua con ácido fórmico al 0.1% como el solvente de suministro. Se llevó a cabo HPLC analítica de fase inversa usando un Agilent™ serie 1200 en columna Agilent Eclipse XDB-C185 mm (4.6 x 150 m) como la fase estacionaria y eluyendo con acetonitrilo:agua con TFA al 0.1%. Se llevó a cabo HPLC semi-prep de fase inversa usando un Agilent™ Serie 1100 en una columna Phenomenex Gemini™ 10 pm C18 (250 x 21.20 mm) como la fase estacionaria y eluyendo con acetonitrilo:¾0 con TFA al 0.1%. Se purifican los compuestos quirales usando columna AD, gradiente Isopropanol/Hexano. La designación de quiralidad se basa en los datos bioquímicos.
Ejemplo 1 : Preparación de 4-amino-6- ( ( (1S) -1- (8-f luoro-2- (2- (metilsulfonil) fenil) -3-qumolinil) etil) amino) -5-pirimidincarbonitrilo N- (2-fluorofenil) cinnamamida A una solución de 2-fluoroanilina (25.Og, 225 mmol) y carbonato de potasio (47 g, 337 mmol) en agua (112 mL) y acetona (45 mL) a 0 °C se agregó cloruro de cinamoilo (37.0 g, 225 mmol, 1 eq) en acetona (45 mL) durante 2 h. La reacción se agitó por 1 h a 0 °C, y apaga en 200 mL de agua con hielo. El sólido cristalino blanco se filtró y lavó con agua. El sólido se secó al aire por 2 h, luego se lava con 400 mL de hexanos. El sólido se secó bajo vació durante la noche para proporcionar la N-(2-fluorofenil)cinnamamida (56 g, 103% de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) ppm 8.49 (br t, J = 7.8Hz, 1 H), 7.80 (d, J = 15.3 Hz, 1 H), 7.57 (m, 3H), 7.41 (m, 3 H), 7.17 (m, 3 H), 6.61 (d, J = 15.6 Hz, 1 H). Espectro de Masa (ESI) m/e = 242.1 (M + 1). 8-fluoroquinolin-2(1H)-ona La N- (2-Fluorofenil)cinnamamida (10.5g, 44 mmol) se disolvió en clorobenceno (60 mL) y se agregó tricloruro de aluminio (29.0 g, 218 mmol, 5 eq). La reacción se calentó hasta 125 °C por 3 h y luego se enfria hasta ta durante 45 min. La reacción se vertió sobre 300 g de hielo con agitación, produciendo un sólido color marrón. El sólido se filtró y lavó con 100 mL de agua y 3 x 100 mL de hexanos y secó bajo alto vacio. El sólido se extrajo con 1 L de DCM y es filtrado para remover subproductos insolubles. El solvente se removió in vacuo para proporcionar la 8-fluoroquinolin-2(1H)-ona. XH RMN (400 MHz, CDCl3) d ppm 10.95 (br s, 1H), 7.77 (dd, J = 9.8, 1.6 Hz, 1 H), 7.35 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.27 (ddd, J = 10.2, 7.8, 1.2 Hz, 1 H), 7.14 (td, J = 8.0, 5.1 Hz, 1 H), 6.76 (d, J = 9.4 Hz, 1 H). 2-cloro-8-fluoroquinolina La 8-fluoroquinolin-2(1H)-ona (26.0 g, 159 mmol) se hizo en mezcla espesa con tricloruro de fosforilo (163 mi, 1.73 mol, 11 eq) y es calentada hasta 125 °C por 2 h. La reacción se enfrió hasta ta y es vertida sobre 1.2 L de agua con hielo con agitación vigorosa. Cuando la mezcla ha sido enfriada hasta ta, el sólido anaranjado se filtró y lavó con agua y es secado bajo vació durante la noche para proporcionar 27 g del material crudo. El material crudo se volvió a cristalizar a partir de hexanos al disolver en ~700 mL de hexanos a reflujo y decantar del alquitrán residual. La solución de hexano se enfrió hasta 0 °C y la 2-cloro-8-fluoroquinolina precipitada se filtró. El licor madre se concentró in vacuo y volvió a cristalizarse a partir de hexanos para obtener un segundo cultivo de 2-cloro-8-fluoroquinolina (21.3 g, 74% de rendimiento total). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) d ppm 8.14 (dd, J 8.6, 1.2 Hz, 1 H), 7.62 (br d, 1H), 7.52 (td, J 7.8, 4.7 Hz, 1 H), 7.45 (m, 2 H). 1-(2-cloro-8-fluoroquinolin-3-il)etanol La 2-cloro-8-fluoroquinolina (5.00 g, 27.5 mmol) se disolvió en THF (60 mL) y es enfriada hasta -78°C. A esta solución se le agregó diisopropilamida de litio recientemente preparada y titrada (solución 1M en THF, 30 mL, 30 mmol, 1.1 eq) durante 5 min. La reacción se permitió que se agitara a -78°C por 20 min, después de cuyo tiempo se agregó acetaldehido (2.3 mL, 41.3 mmol, 1.5 eq.) por medio de una jeringa durante 30 segundos (exotérmico). Después de 30 min a -78°C, la reacción se apagó con solución de NH4C1 saturada al 50% y es diluida con EtOAc. Las capas se separaron y lavaron con salmuera, son secadas sobre MgSO4, y son filtradas. La mezcla de reacción cruda se depositó en 30 g de gel de sílice y es pasada a través de un tapón de 60 g de gel de sílice, eluida con 8:2 hexanos:EtOAc. Se colectaron las fracciones que contienen producto y un regioisómero céreamente eluido (segundo). Las fracciones se concentraron y el sólido crudo se hizo en mezcla espesa en 140 mL de 9:1 hexanos:EtOAc a reflujo por 30 min. Después de enfriar hasta ta, el sólido se filtró y lavó con una pequeña cantidad de 9:1 hexanos:EtOAc frío para proporcionar el 1-(2-cloro-8-fluoroquinolin-3-il)etanol puro (3.1 g, 13.7 mmol, 50% de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 8.43 (br s, 1 H), 7.64 (td, J = 7.8, 5.1 Hz, 1 H), 7.41 (ddd, J = 10.2, 7.4, 1.2 Hz, 1 H), 5.39 (qdd, J = 6.3, 3.9, 0.8 Hz, 1 H), 2.22 (d, J = 3.9 Hz, 1 H), 1.62 (d, J = 6.3 Hz, 3 H). 1-(2-cloro-8-fluoroquinolin-3-il)etanona A un matraz de fondo redondo que contiene tolueno (183 mL) se agregó 1-(2-cloro-8-fluoroquinolin-3-il)etanol (6.20 g, 27.5 mmol) y dióxido de manganeso (19.1 g, 220 mmol, 8 eq). La reacción se calentó hasta reflujo por 2 h, es enfriada hasta ta es filtrada y concentrada. El producto se diluyó con hexanos y es filtrado para dar como un sólido blanco la 1-(2-cloro-8-fluoroquinolin-3-il)etanona (4.43 g, 72% de rendimiento). XH RMN (400 MHz, CDCl3) d ppm 8.40 (d, J = 1.6 Hz, 1 H), 7.71 (br d, J = 8.2 Hz, 1 H), 7.56 (td, J = 7.8, 5.1 Hz, 1 H), 7.54 (ddd, J = 9.8, 7.8, 1.6 Hz, 1 H). Espectro de Masa (ESI) m/e ^ 223.9 (M + 1).
( R ) -1-(2-cloro-8-fluoroquinolin-3-il)etanol En un matraz de fondo redondo se disolvió (+)-dip-cloruro(tm) (17.5g, 540 mmol, 2.2 eq) en THF anhidro (200 mL) y la solución se enfrió hasta -55 °C (usando un baño de hielo seco/MeCN). A esta solución se le agregó 1-(2-cloro-8-fluoroquinolin-3-il)etanona (5.50 g, 24.5 mmol) como una solución en THF (50 mL). La reacción se permitió que se entibiara hasta ta lentamente durante la noche. Después de este tiempo la reacción se apagó con 10 mL de acetona y 100 mL de Na2CC>3 al 10% y se permite que se asiente por 2 h a ta. Se agregó acetato de etilo (750 mL) y las capas se separaron. La fase orgánica se lavó 3x con una solución de bicarbonato de sodio saturada al 50% y una vez con salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, es filtrada, y concentrada. El material crudo se concentró bajo alto vacío a 75 °C para remover el pineno. El residuo se hizo en mezcla espesa en 150 mL de hexanos y 150 mL de agua por 3 h a ta. Se forma un precipitado blanco y se filtró y es secado para proporcionar 4.9g de 98% ee de producto. El sólido se disolvió en 25 mL de EtOAc en ebullición y se agregó 25 mL de hexano caliente para formar un precipitado a reflujo. La mezcla se enfrió hasta -15°C, es filtrada, y lavada con 9:1 hexanos:EtOAc frío para proporcionar el (R) -1-(2-cloro-8-fluoroquinolin-3-il)etanol (4.07g, 73% de rendimiento). HPLC Quiral (10% IPA en hexanos, quiralcel AD-H muestra que el producto es > 99.9% ee. El enantiómero deseado se eluye a 9.6 min, el enantiómero no deseado se eluye a 8.1 min. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 8.43 (br s), 7.64 (br d, J = 8.2 Hz, 1 H), 7.50 (td, J = 7.8, 4.7 Hz, 1 H), 7.41 (ddd, J = 10.2, 7.8, 1.2 Hz, 1 H), 5.40 (qd, J = 5.9, 0.8 Hz, 1 H), 2.22 (br s, 1 H), 1.62 (d, J = 6.3 Hz, 3 H). Espectro de Masa (ESI) m/e = 226.0 (M + 1).
(S)-2-(1-(2-cloro-8-fluoroquinolin-3-il)etil)isoindolin-1,3-diona En un matraz de fondo redondo se combinó ftalimida (6.38 g, 43.3 mmol), trifenilfosfina (1.14 g, 43.3 mmol), y (R)—1— (2-cloro-8-fluoroquinolin-3-il)etanol (8.15 g, 36.2 mmol) en THF (240 mL). La solución se enfrió hasta 0 °C se agregó y diisopropilazodicarboxilato (DIAD, 8.5 mL, 43.3 mmol) gota a gota. La reacción se permitió que se entibiara hasta ta durante la noche. La reacción se concentró hasta un volumen de ~100 mL y es diluida con 1 L de Et20 y 200 mL de agua. Las capas se separaron y la capa acuosa se volvió a extraer con 200 mL de Et20. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con 160 mL de salmuera, son secadas sobre MgSO4, son filtradas, y concentradas. La cromatografía de columna usando DCM al 100% proporciona la (S)-2-(1-(2-cloro-8-fluoroquinolin-3-il)etil)isoindolin-1,3-diona (10.5 g, 82% de rendimiento). XH RMN (400 MHz, CDCl3) d ppm 8.60 (br s, 1 H), 7.74 (m, 2 H), 7.64 (m, 3 H), 7.45 (td, J = 7.8, 4.9 Hz, 1 H), 7.35 (ddd, J = 10.2, 7.8, 1.2 Hz, 1 H), 5.89 (q, J = 7.2 Hz, 1 H), 1.90 (d, J = 7.0 Hz, 3 H). 2-((1S)-1-(8-fluoro-2-(2-(metiltio)fenil)quinolin-3-il)etil)-isoindolin-1,3-diona La (S)-2-(1-(2-Cloro-8-fluoroquinolin-3-il)etil)-isoindolin-1,3-diona (14.0 g, 39.5 mmol), ácido 2-(metiltio)-fenilborónico (9.95 g, 59.2 mmol), y carbonato de potasio (16.4 g, 118 mmol) se combinaron en 300mL de D F anhidro bajo en atmósfera de N2. La solución se burbujeó con N2 por ~5min antes de agregar PdCl2(dppf)CH2Cl2 (3.22 g, 3.95 mmol). La solución se calentó a 100 °C por 3 h, y luego se enfría hasta 50 °C. La solución se concentró bajo vació para dar un residuo de tono café, el cual se diluyó con EtOAc (600 mL). La capa orgánicas luego se lavaron con H2O (3 x 80 mL), seguido por salmuera (1 x 100 mL). Las capas acuosas combinadas se extrajeron con DCM (3x200 mL). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4 y luego concentraron bajo vació. El residuo obtenido se purificó por cromatografía instantánea en gel de sílice eluyendo con un gradiente de 20% hexano hasta 40% EtOAc/hexano. Las fracciones que contiene el producto puro se combinaron y concentraron bajo vació para dar la 2-((1S)-1-(8-fluoro-2-(2-(metiltio)fenil)quinolin-3-il)etil)isoindolin-1,3-diona (14.6 g, 33.0 mmol, 84 % de rendimiento) como una espuma amarillo ligero. La RMN de protones refleja una relación 53/47 de atropisómeros a 25°C.
RMN (500 MHz, CDCI3) d ppm 8.71 (br s, 0.53 H), 8.65 (br s, 0.47 H), 7.79 (m, 1H), 7.66 (s, 4 H), 7.55 (m, 1 H), 7.45-7.27 (series de m, 3.6 H), 6.87 (m, 1.4 H) , 5.70 (q J = 6.4 Hz,.0.47 H), 5.63 (q, J = 6.8 Hz, 0.53 H), 2.47 (br s, 1.4 H), 1.91 (m, 3 H), 1.52 (br s, 1.6 H).
Espectro de Masa (ESI) m/e = 443.2 (M + 1). 2-((1S)-1-(8-fluoro-2-(2-(metilsulfonil)fenil)-3-quinolinil)-etil)-1H-isoindol-1,3(2H)-diona A 70 mL de DCM se le agregó 13.56g (1.2g/lmmol de sustrato) de Montmorillonita húmeda (~0.2g H2O/lg de arcilla), y oxone (17.37 g, 28.2 mmol)1. A esta suspensión se agregó una solución de 2- ((1S)-1-(8-fluoro-2-(2-(metiltio)fenil)quinolin-3-il)etil)isoindolin-1,3-diona (5.0 g, 11.3 mmol) disuelta en DCM (10 mL). La mezcla espesa se agitó a ta por 72 h y luego es filtrada a través de un embudo poroso. Los sólidos se lavaron con DCM {~600 mL) y los filtrados se concentraron bajo vació para dar la 2-((lS)-1- (8-flúoro-2-(2-(metilsulfonil)fenil)-3-quinolinil)etil)-1H-isoindol-1,3(2H)-diona 7.11g (97%) como un sólido amarillo ligero. La RMN de protones refleja una relación 59/41 de atropisómeros a 25°C. 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) d ppm 8.86 (s, 0.59 H), 8.79 (s, 0.41 H), 8.26 (d, J = 7.8 Hz, 0.41 H), 8.04 (d, J = 7.8 Hz, 0.59 H), 7.89-7.36 (series de m, 9.6 H), 7.20 (d, J = 7.6 Hz, 0.41 H), 5.70 (q, J = 7.1 Hz, 0.59 H), 5.54 (q, J = 7.3 Hz, 0.41 H), 3.19 (s, 1.75 H), 3.15 (s, 1.25 H), 1.98 (d, J = 7.3 Hz, 1.75 H), 1.85 (d, J = 7.1 Hz, 1.25 H).
Espectro de Masa (ESI) m/e = 475.0 (M + 1). 1.Hirano, M.; Tomaru, J.; Morimoto, T. Bull . Chem . Soc.
Jpn . , 1991, 64, 3752-54. (1S)-1-(8-fluoro-2-(2-(metilsulfonil)fenil)-3-quinolinil)-etanamina La 2- ((1S)-1-(8-fluoro-2-(2-(metilsulfonil)fenil) quinolin-3-il)etil)isoindolin-1,3-diona (9.10 g, 19.2 mmol) e hidrato de hidrazina (9.32 mL, 192 mmol) se agregaron a EtOH (190 mL). Después de calentar a 65°C por 3 h, la mezcla espesa resultante se enfrió hasta ta, es diluida con 900 mL de EtOAc, y es filtrada a través de un embudo poroso. El filtrado se lavó con H2O (3x200 mL), salmuera (1x200 mL) y luego es secado sobre MgSC antes de ser concentrado bajo vació para dar la (1S)-1-(8-fluoro-2-(2-(metilsulfonil)-fenil)quinolin-3-il)etanamina (6.06 g, 17.6 mmol, 92 % de rendimiento) como un sólido anaranjado ligero. La RMN de protones refleja una relación 73/27 de atropisómeros a 25°C. 1H RMN (500 MHz, CDCl3) d ppm 8.55 (d, J = 1.5Hz, 0.73 H), 8.50 (d, J = 1.5 Hz, 0.27 H), 8.26 (dd, J = 8.1, 1.2 Hz, 0.27 H), 8.23 (dq, J = 7.81.2 Hz, 0.73 H), 7.73 (m, 3 H), 7.52 (m, 1.27 H), 7.40 (m, 1.73 H), 4.16 (q, J = 6.6 Hz, 0.27 H), 4.03 (q, J = 6.4 Hz, 0.73 H), 3.36 (s, 0.79 H), 3.17 (s, 2.21 H), 1.36 (m, 3H). Espectro de Masa (ESI) m/e = 345.2 (M + I)· 4-amino-6-(((1S)-1-(8-fluoro-2-(2-(metilsulfonil)fenil)-3 quinolinil)etil)amino)-5-pirimidincarbonitrilo La (1S)-1-(8-fluoro-2-(2-(metilsulfonil)fenil)quinolin-3-il)etanamina (9.16 g, 26.6 mmol), N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (13.7 mL, 80 mmol), y 4-amino-6-cloropirimidin-5-carbonitrilo (4.32 g, 27.9 mmol) se combinaron en n-butanol (67 mL) y luego es calentado hasta 110 °C bajo en atmósfera de N2. Después de 3 h a 110 °C, la temperatura de la reacción se incrementó hasta 120 °C por 2 h. Después de enfriar en un baño de hielo, la mezcla se filtró dejando 14 g de un sólido de tono café. El filtrado se calentó hasta 120 °C por 3 h, es enfriado hasta 40°C y concentrado bajo vació dejando un aceite café. El aceite y los sólidos se combinaron y purificaron en una columna instantánea de gel de sílice eluyendo con 2% MeOH/DCM. Las fracciones que contienen el producto puro se combinaron y concentraron bajo vació para dar un sólido amarillento ligero. Las fracciones que contiene el producto impuro se combinaron y purificaron en una columna instantánea de gel de sílice eluyendo con un gradiente de 1.5% MeOH/DCM hasta 2% MeOH/DCM. Las fracciones que contienen el producto puro se combinaron y concentraron bajo vació para dar un sólido amarillento ligero. Los 5 sólidos puros combinados se disolvieron en EtOH con calentamiento (~60°C), y luego son concentrados bajo vació, repitiendo la disolución en EtOH seguido por concentración bajo vació. Los sólidos obtenidos se secaron entonces en la tubería al vacío a 120 °C hasta que el etanol residual estuvo ^ debajo de 0.5% en peso. El sólido obtenido fue 4-amino-6- (((1S)-1-(8-fluoro-2-(2-(metilsulfonil)fenil)-3-quinolinil)- etil)amino)-5-pirimidincarbonitrilo, 10.3g (84% de rendimiento). La RMN de protones refleja una relación 87/13 de atropisómeros a 25°C. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) d ppm 5 8.80 (br s, 0.13 H), 8.58 (br s, 0.87 H), 8.13 (dd, J = 7.7, l.2 Hz, 0.87 H), 7.95-7.52 (series de m, 8H), 7.30-6.99 (br m, 2 H), 6.82 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 5.62 (quinteto, J = 6.9 Hz, 0.13 H), 5.22 (quinteto, J = 6.9 Hz, 0.87 H), 3.37 (s, 2.57 H), 3.319s, 0.43 H), 1.60 (d, J = 6.9 Hz, 0.4 H), 1.35 ^ (d, J = 6.9 Hz, 2.6 H). Espectro de Masa (ESI) m/e = 463.1 (M + 1).
Ejemplo 2: Preparación de (S)-4-amino-6-((1-(7-fluoro-2-(2- (metilsulfonil)fenil)quinolin-3-il)etil)amino)pirimidin-5-carbonitrilo 2-cloro-7-fluoroquinolin-3-carbaldehido El P0Cl3 (0.837 L, 9.17 mmol) se agregó gota a gota a DMF (253 mL, 3.28 mmol) en un matraz de tres cuellos equipado con agitador mecánico a 0 °C. La mezcla semi-sólida se agitó a ta por 30 min y se agregó N-(3-fluorofenil)acetamida (200 g, 1.31 mol) en una porción. La mezcla resultante se calentó a 75 °C durante la noche. Después de enfriar hasta ta, la mezcla de reacción se vertió cuidadosamente en agua con hielo (9 kg). El sólido resultante se filtró, es lavado con agua, NaHCO3, y es secado al aire. La mezcla cruda (200 g, 73%) se volvió a cristalizar en EtOAc (5 L) para dar el 2-cloro-7-fluoroquinolin-3-carbaldehído como agujas blanco opaco (150 g). Espectro de Masa (ESI) m/e = 210 (M + 1). 1-(2-cloro-7-fluoroquinolin-3-il)etanol Una suspensión de 2-cloro-7-fluoroquinolin-3-carbaldehído (44.7 g, 213 mmol) en THF (600 mL) se trató con MeMgBr (78.0 mL, 234 mmol 1.1 eq) a -20 °C. Después de agitación durante la noche, la reacción se apagó con solución de NH4C1 y extrajo con Et20 (300 mL y 100 mL). Las capas orgánicas se lavaron con agua, salmuera, son secadas sobre Na2S04, concentradas y volvió a cristalizarse a partir de EtOAc (100 mL) y hexano (1 L). Un sólido amarillo pálido de 1-(2-cloro-7-fluoroquinolin-3-il)etanol fue obtenido (41 g, 85%). Espectro de Masa (ESI) m/e = 226 (M + 1). 1-(2-cloro-7-fluoroquinolin-3-il)etanona El 1-(2-cloro-7-fluoroquinolin-3-il)etanol (7.7 g, 34 mmol), Mn02 (30 g, 10 eq) y tolueno (200 mL) se calentaron hasta reflujo por 2 h. La LC-MS muestra que se completa la reacción. La filtración seguida con remoción de solvente da un sólido blanco opaco de 1-(2-cloro-7-fluoroquinolin-3-il)-etanona (6.2 g, 81%). Espectro de Masa (ESI) m/e = 224 (M + 1)· (R)-1-(2-cloro-7-fluoroquinolin-3-il)etanol Una solución de 1-(2-cloro-7-fluoroquinolin-3-il)etanona (164 g, 733 mmol) en THF (1.34 L) se agregó a una solución de (+)-DIP-C1 (517.5 g, 2.2 eq) en THF (3.5 L) a - 45 °C (hielo seco y acetonitrilo) gota a gota. La reacción se entibió lentamente hasta ta durante la noche. La reacción se apagó entonces con acetona (750 mL) y Na2CO3 al 10 % (750 mL) a 0 °C y es agitada a ta por 1 h antes de la adición de EtOAc (3.5 L). La mezcla se entibió hasta ta y lavó con Na2C03 al 10% y agua. La capa orgánica se secó con salmuera, es concentrada y tratada con hexano (1.0 L) y agua (1.8 L). La mezcla se agitó a ta por 40 min y es filtrada. El sólido blanco se lavó con agua y hexano, es secado al aire durante la noche (143 g). Este material se secó en el evaporador rotatorio a 60 °C por 4 h bajo alto vacio (2 miti Hg) para dar un polvo blanco de (R)-1-(2-cloro-7-fluoroquinolin-3-il)etanol (122 g, 73.7%). HPLC Quiral en columna AD (isopropanol en hexano, 10%) muestra ee >99%. Espectro de Masa (ESI) m/e = 226 (M + 1)· S)-2-(1-(2-cloro-7-fluoroquinolin-3-il)etil)isoindolin-1,3-diona A una mezcla de (R)-1-(2-cloro-7-fluoroquinolin-3-il)-etanol (3.03 g, 13.4 m ol), ftalimida (2.37 g, 1.20 eq) y PPh3 (4.23 g, 1.20 eq) En THF (70 mL) se agregó DIAD (3.13 mL, 1.20 eq) gota a gota a 0 °C. La mezcla se agitó entonces a ta durante la noche antes de dividir entre EtOAc (200 mL) y agua (200 mL). La capa orgánica se separó, es lavada con agua, salmuera, es secada sobre Na2SO4 y concentrada. El residuo se purificó por la cromatografía de columna en gel de sílice (DCM) para dar una espuma blanca de (S)-2-(1-(2-cloro-7-fluoroquinolin-3-il)etil)isoindolin-1,3-diona (3.8 g, 80%). Espectro de Masa (ESI) m/e = 355 (M + 1). (1-(2-cloro-7-fluoroquinolin-3-il)etil)carbamato de (S)-tert-butilo A una solución de (S)-2-(1-(2-cloro-7-fluoroquinolin-3-il)etil)isoindolin-1,3-diona (l.Og, 2.8 mmol) en EtOH (10 L) se agregó gota a gota NH2NH2 (10 eq, 0.88 mL) a ta antes de entibiar hasta 90 °C por 30 min. Después de enfriar hasta ta, la mezcla de reacción se concentró, dividiendo entre EtOAc (20 mL) y agua (5 mL). La capa orgánica se separó, es lavada con agua, salmuera, es secada sobre Na2S04 y concentrada para dar un aceite incoloro, el cual se disolvió en THF (10 mL) y es tratado con B0C20 (1.1 eq, 0.68 g) y TEA (1.0 eq, 0.39 mL) a reflujo. Después de enfriar hasta ta, la mezcla de reacción se concentró y purificó por la cromatografía de columna en gel de sílice (EtOAc/hexano, 1/9) para dar un sólido blanco (1-(2-cloro-7-fluoroquinolin-3-il)-etil)carbamato de (S)-tert-butilo (0.70 g, 76%). Espectro de Masa (ESI) m/e = 325 (M + 1). (1-(7-fluoro-2-(2-(metiltio)fenil)quinolin-3-il)etil)-carbamato de (S)-tert-butilo Una mezcla de (1-(2-cloro-7-fluoroquinolin-3-il)etil)-carbamato de (S)-tert-butilo (382 mg, 1.2 mmol), ácido 2-(metiltio)fenilborónico (257 mg, 1.3 eq), Na2CO3 (623 mg, 5.0 eq), Pd(PPh3)4 (93 mg, 5%), MeCN (9 mL) y agua (3 mL) se calentó hasta 85 °C bajo N2 durante la noche. Después de enfriar hasta ta, la reacción se dividió entre EtOAc (10 L) y agua (5 mL). La capa orgánica se separó, lavada, secada y concentrada. El residuo se purificó por la cromatografía de columna en gel de sílice para dar un sólido blanco (l-(7-fluoro-2-(2-(metiltio)fenil)quinolin-3-il)etil)carbamato de (S)-tert-butilo (460 mg, 94.8%). Espectro de Masa (ESI) m/e 413 (M + 1). (1-(7-fluoro-2-(2-(metilsulfonil)fenil)quinolin-3-il)etil) carbamato de (S)-tert-butilo Bajo una atmósfera de N2, se disolvió (1-(7-fluoro-2-(2-(metiltio)fenil)quinolin-3-il)etil)carbamato de (S)-tert-butilo (412 mg, 999 pmol) en acetona (3.00 mi, 40.8 m ol) y agua (3 mL), y se agregó NMO (351 mg, 3.00 mmol) seguido por OsCd (12.7 mg, 0.05 mmol). La reacción se permitió que se agitara a ta durante la noche. La LC-MS muestra que la reacción no está completa. La reacción se trató con 0s04 (12.7 mg, 0.05 mmol) de nuevo y es agitada durante la noche. La LC-MS sólo muestra un rastro del reactivo de partida. La reacción se apagó por la adición de 5 mL de una solución de tiosulfato de sodio saturado. La reacción se diluyó con EtOAc y es lavada con Na2CO3 al 5%. La capa orgánica luego se lavó con salmuera, es secada (Na2SO4), es filtrada y concentrada in vacuo. El residuo crudo se purificó eluyendo con EtOAc al 30% hasta 60% en hexanos para proporcionar un sólido blanco (1-(7-fluoro-2-(2-(metilsulfonil)fenil·)-quinolin-3-il)etil)carbamato de (S)-tert-butilo (440 mg, 99%). Espectro de Masa (ESI) m/e = 445 (M + 1).
(S) -4-amino-6- ( (1- (7-fluoro-2- (2- (metilsulfonil) fenil) qumolin-3-il) etil) amino) pirimidin-5-carbonitrilo Al (l-(7-fluoro-2-(2-(metilsulfonil)fenil)quinolin-3-il)etil)carbamato de (S)-tert-butilo (440 mg, 1.0 mmol) se agregó HCl, 4M (1 mL). La mezcla resultante se agitó a ta por 1 h. El solvente se removió y la (S)-1-(7-fluoro-2-(2-(metilsulfonil)fenil)quinolin-3-il)etanamina cruda se usó sin trabajo adicional. Una solución de (1S)-1-(7-fluoro-2-(2-(metilsulfonil)fenil)quinolin-3-il)etanamina (100 mg, 290 gmol), 4-amino-6-cloropirimidin-5-carbonitrilo (45 mg, 290 pmol) y DIEA (101 ml, 581 pmol) en DMF (4 mL) se calentó hasta 100 °C durante la noche. El solvente se removió bajo presión reducida y es purificado por medio de CC1 preparatoria usando 3% de MeOH/DCM para proporcionar un polvo blanco de (S)-4-amino-6-((1-(7-fluoro-2-(2-(metilsulfonil)-fenil)quinolin-3-il)etil)amino)pirimidin-5-carbonitrilo (6.9 mg, 5.1%). 1H RMN (500 MHz, CD3OD) d ppm 1.51 (d, J=7.09 Hz, 3 H) 3.17 (s, 3 H) 5.43 (d, J=6.85 Hz, 1 H) 7.48 (d, J=2.45 Hz, 1 H) 7.60 7.63 (m, 1 H) 7.66 7.69 (m, 2 H) 7.73 (d, =1.47 Hz, 1 H) 7.81 (s, 1 H) 8.07 (dd, J=9.05, 6.11 Hz, 1 H) 8.13 - 8.17 (m, 1 H) 8.49 (s, 1 H). Espectro de Masa (ESI) m/e = 463 (M + 1).
Ejemplo 3: Preparación de 4-amino-6-((S)-1-(7-fluoro-2-(3-fluorofenil)quinolin-3-il)etilamino)pirimidin-5-carbonitrilo. 2-((S)-1-(7-fluoro-2-(3-fluorofenil)quinolin-3-il)etil)-isoindolin-1,3-diona A una solución de (S)-2-(1-(2-cloro-7-fluoroquinolin-3-il)etil)isoindolin-1,3-diona (150mg, 423 pmol), ácido 3-fluorofenilborónico (65 mg, 465 pmol) y carbonato de sodio (90 mg, 846 mmo?) en MeCN (8mL) y agua (2 mL) se purgó con N2 seguido por la adición de Pd(PPh3)4 (24 mg, 21 mpio?) y la mezcla resultante se agitó a 90 °C durante la noche. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc es lavada con agua, salmuera y es secada sobre Na2SO4. La purificación usando CCL preparatoria eluyendo con EtOAc al 100% proporciona el ácido 2-( ((S)-1-(7-fluoro-2-(3-fluorotenil)quinolin-3-il)etil)-carbamoil)benzoico (120 mg, 66%). Espectro de Masa (ESI) m/e 433 (M + 1). El ácido 2- (((S)-1-(7-fluoro-2-(3- fluorofenil)quinolin-3-il)etil)carbamoil)benzoico se disolvió en EtOH (2 mL) y se agregó HCl conc. (0.1 mL). La solución resultante se calentó hasta 80 °C por 4 h. El solvente se removió y se agregó NaHCO3 satd. a la mezcla de reacción y extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con salmuera, es secada sobre Na2SO4, concentrada y purificada por medio de CCL preparatoria usando 3% MeOH/DCM saturado con gas de NH3 para proporcionar un sólido blanco de 2-((S)-1-(7-fluoro-2-(3-fluorofenil)quinolin-3-il)etil)isoindolin-1,3-diona (85 mg, 49%). Espectro de Masa (ESI) m/e = 415 (M + 1). 4-amino-6-((S)-1-(7-fluoro-2-(3-fluorofenil)quinolin-3-il)-etilamino)pirimidin-5-carbonitrilo A una solución de 2-((S)-1-(7-fluoro-2~(3-fluorofenil)-quinolin-3-il)etil)isoindolin-1,3-diona (60.0 mg, 145 mmo?) en EtOH (2 mL) se agregó NH2NH2 (1.0 mL, 1.45 mmol, 10 eq) y la solución resultante se calentó hasta 80 °C por 2 h. Se filtró un precipitado y el filtrado se removió bajo presión reducida para proporcionar la (1S)-1-(7-fluoro-2-(3-fluorofenil)quinolin-3-il)etanamina. Al residuo crudo de (1S)-1-(7-fluoro-2-(3-fluorofenil)quinolin-3-il)etanamina en DMF (2 raL) se agregó 4-amino-6-cloropirimidin-5-carbonitrilo (22 mg, 145 pmol) y DIEA (0.06 mL, 319 pmol). La mezcla resultante se calentó hasta 100 °C durante la noche. El solvente se removió bajo presión reducida y purifica por medio de HPLC preparatoria usando 15-60% MeCN/H2O p/0.01% TFA para proporcionar un sólido blanco de 4-amino-6-((S)-1-(7-fluoro-2-(3-fluorofenil)quinolin-3-il)etilamino)pirimidin-5-carbonitrilo (9.3 mg, 16%). XH RMN (500 MHz, CD3OD) d ppm 1.63 (d, J=6.85 Hz, 3 H) 5.70 (q, J=7.01 Hz, 1 H) 7.25 - 7.34 (m, 1 H) 7.44 - 7.54 (m, 2 H) 7.55 - 7.63 (m, 2 H) 7.74 (dd, J=9.78, 2.45 Hz, 1 H) 8.05 (s, 1 H) 8.18 (dd, J=9.05, 5.87 Hz, 1 H) 8.72 (s, 1 H). Espectro de Masa (ESI) m/e = 403 (M + 1)· Ejemplo 4: Preparación de (S)-4-amino-6-((1-(7-fluoro-2- (piridin-2-il)quinolin-3-il)etil)amino)pirimidin-5-carbonitrilo 2-((S)-1-(7-fluoro-2-(piridin-2-il)quinolin-3-il)etil)-isoindolin-1,3-diona Una mezcla de (S)-2-(1-(2-cloro-7-fluoroquinolin-3-il)-etil)isoindolin-1,3-diona (85.6 g, 241 mmol), Pd(PPh3)4 (14 g, 12 mmol, 0.05eq) y 2-(tributilestanil)piridina (107 g, 289 mmol, 1.2 eq) en dioxano (3.0 L) se calentó hasta 90 °C bajo N2. Después de agitación durante la noche, la LC-MS muestra el 30% de completado. La mezcla de reacción se calentó hasta 101 °C por 2 dias adicionales. La mezcla de reacción luego se enfrió hasta ta, decanta y los restantes 200 mL de solución son filtrados para remover el residuo de Pd. Los solventes combinados se concentraron hasta 300 mL y son filtrados para dar un sólido color marrón, el cual se lavó con EtOAc/hexano (1/1) y es secado para proporcionar (82.1 g). El licor madre se concentró hasta 100 mL y trata con EtOAc/hexano, 1/1 (200 mL) para dar un segundo cultivo de producto (2.2 g). En general se obtuvo un sólido color marrón de 2-((S)-1-(7-fluoro-2-(piridin-2-il)quinolin-3-il)-etil)isoindolin-1,3-diona (84.3 g, 88%). Espectro de Masa (ESI) m/e = 398 (M + 1).
(S)-1-(7-fluoro-2-(piridin-2-il)quinolin-3-il)etanamina A una mezcla espesa de 2-((S)-1-(7-fluoro-2-(piridin-2-il)quinolin-3-il)etil)isoindolin-1,3-diona (2.1 g, 5.3 mmol) en etanol anhidro (15 mL) se agregó NH2NH2 (0.85 g, 26 mmol) gota a gota durante 5 minutos. La mezcla de reacción se calentó hasta 90 °C por 30 min y es enfriada hasta ta. La mezcla de reacción se filtró y lavó con EtOAc. La solución de EtOAc resultante se lavó con agua, salmuera y es secada sobre Na2SO4. La remoción de solventes da un aceite color marrón de (S)-1-(7-fluoro-2-(piridin-2-il)quinolin-3-il)-etanamina (1 g, 71%). Espectro de Masa (ESI) m/e = 468 (M + 4-amino-6-((S)-1-(7-fluoro-2-(piridin-2-il)quinolin-3-il)-etilamino)pirimidin-5-carbonitrilo Una mezcla de (S)-1-(7-fluoro-2-(piridin-2-il)quinolin-3-il)etanamina (85 mg, 0.32 mmol), 4,6-dicloro-5-cianopirimidina (55 mg, 0.32 mmol, 1.0 eq) y N,N-diisopropiletila ina (68 ml, 0.38 mmol, 1.2 eq) en THF (3 mL) se agitó a ta por 30 min antes de calentar hasta 50 °C. Después de 4 h, la mezcla se concentró y purifica por la cromatografía de columna (EtOAc/1/1) para dar un sólido blanco, el cual se trató con NH3 saturado en dioxano (3 mL) en un tubo sellado a 110 °C durante la noche. La mezcla de reacción se concentró y purificó por HPLC de fase inversa (MeCN/H2O/0.1%TFA) y liofiliza para dar un polvo blanco 4-amino-6- ((S)-1-(7-fluoro-2-(piridin-2-il)quinolin-3-il)-etilamino)pirimidin-5-carbonitrilo (19 mg, 15%). 1H RMN (500 MHz, CD30D) d ppm 1.78 (d, J-6.85 Hz, 3 H) 5.82 (q, J=6.85 Hz, 1 H) 7.71 (td, J=8.80, 2.45 Hz, 1 H) 7.89 (dd, J=9.66, 2.32 Hz, 1 H) 8.10 (ddd, J=7.83, 5.62, 0.98 Hz, 1 H) 8.19 (s, 1 H) 8.27 (dd, J=9.05, 5.87 Hz, 1 H) 8.45 (d, J=7.83 Hz, 1 H) 8.63 (td, J=7.95, 1.47 Hz, 1 H) 8.94 (s, 1 H) 9.03 - 9.09 (m, 1 H). Espectro de Masa (ESI) m/e = 386 (M + 1). Ejemplo 5: Preparación de (S)-4-amino-6-((1-(5-cloro-3-(2-(metilsulfonil)fenil)quinoxalin-2-il)etil)amino)pirimidin-5-carbonitrilo Ácido 2-((3-cloro-2-nitrofenil)amino)butanoico Una mezcla de l-cloro-3-fluoro-2-nitrobenceno (2.00 Kg, 11.4 mol), ácido 2-aminobutírico (1.22 kg, 11.8 mol) y K2CO3 (1.58 Kg, 11.4 mol) en DMSO anhidro (4.2 L) se calentó a 80 °C por 16 h (después de que inicia la reacción, la temperatura interna se eleva hasta 110 °C). En este tiempo, el análisis LC-MS muestra que la reacción se completó. Después de enfriar hasta ta, la mezcla de reacción se vertió cuidadosamente en agua (10 L) con agitación vigorosa. La capa acuosa se lavó con éter de tert-butil metilo (2 x 5 L) para remover impurezas orgánicas. La capa acuosa se hizo ácida entonces hasta pH ~1.5 con HCl concentrado para dar un sólido anaranjado. El sólido anaranjado se colectó por filtración, es lavado con agua (2 x 4 L) y es secado al aire para dar el ácido 2-((3-cloro-2-nitrofenil)amino)butanoico (2.85 Kg), el cual se usó como tal en la siguiente etapa.1H RMN ( DMSO-de ) d ppm 7.35 (t, J=8.3 Hz, 1 H), 6.82 - 6.91 (m, 2 H), 6.25 (d, J=7.6 Hz, 1 H), 4.14 (td, J=7.4, 5.4 Hz 1 H), 3.4 (br. s., 1 H), 1.74 - 1.92 (m, 2 H), 0.88 (t, J=7. Hz, 3 H). Espectro de Masa (ESI) m/z = 259.2 (M+l) 8-cloro-3-etil-3,4-dihidroquinoxalin-2(1H)-ona A una solución de ácido 2-((3-cloro-2-nitrofenil)amino) butanoico (1.5 Kg, 5.8 mol), HC1 ac.4 N (4.35 L, 17.4 mol) y EtOH (5.3 L) se agregó SnCl2.2H2O (3.93 Kg, 17.4 mol). La mezcla de reacción se calentó hasta reflujo por 5 h. En este tiempo el análisis LC-MS muestra que la reacción se completó. Después de enfriar hasta ta la mezcla de reacción se evaporó bajo presión reducida. El residuo resultante se enfrió hasta 0 °C usando un baño de agua con hielo y se agregó cuidadosamente una solución acuosa de KOH 10 N (12 L, 180 mol) con agitación vigorosa. Después de la filtración para remover sólidos insolubles, el filtrado se extrajo con DCM (2 x 10 L) es lavado con agua, salmuera, es secado sobre Na2SO4 anhidro, y evapora bajo presión reducida para dar 8-cloro-3-etil-3,4-dihidroquinoxalin-2(1H)-ona (1.1 Kg) como un sólido amarillo, el cual se usó sin purificación adicional. 1H RMN ( DMSO-d6 ) d ppm 9.70 (s, 1 H), 6.65 - 6.83 (m, 3 H), 6.31 - 6.44 (m, 1 H), 3.66 3.72 (m, 1 H), 1.53 1.71 (m, 2 H), 0.92 (t, J=7.4 Hz, 3 H). Espectro de Masa (ESI) m/z = 211.2 (M+l). 8-cloro-3-etilquinoxalin-2(1H)-ona A una solución de 8-cloro-3-etil-3,4-dihidroquinoxalin-2(1H)-ona (1.30 Kg, 6.17 mol) en 1,4-dioxano anhidro (15 L) se agregó DDQ (1.47 Kg, 6.48 mol). La mezcla de reacción se agitó por 3 h (la temperatura interna se llevó hasta 45 °C después de la adición DDQ). Después de este tiempo el análisis LC-MS muestra que la reacción se completó. La mezcla se evaporó bajo presión reducida para dar un residuo café. A este residuo se le agregó NaOH acuoso 2M para ajustar el pH hasta 7 - 8. El sólido amarillo resultante se colectó por filtración, suspende en NaHCO3 ac. saturada, agitando por 1 h, y filtrado para dar un sólido verde ligero. El sólido verde ligero se suspendió en NaHC03 acuoso saturado, agita, es filtrado y es lavado con NaHC03 acuoso saturado y agua para dar un sólido blanco opaco. El sólido blanco opaco se suspendió en agua, se mezcla bien, es filtrado, es lavado con agua, es secado al aire durante la noche, y secó bajo alto vacio a 50 °C para dar 8-cloro-3-etilquinoxalin-2(1H)-ona (1 Kg). 1H RMN ( DMSO-de) d ppm 7.69 - 7.75 (m, 1 H), 7.59 - 7.65 (m, 1 H), 7.29 (t, J=8.0 Hz, 1 H), 2.84 (q, J=7.4 Hz, 2 H), 1.23 (t, J=7.4 Hz, 3 H). Espectro de Masa (ESI) m/z = 209.1 (M+l). 3,5-dicloro-2-etilquinoxalina I l l A una mezcla espesa gruesa de 8-cloro-3-etilquinoxalin- 2(1H)-ona (1.00 Kg, 4.79 mol) en P0Cl3 (2.68 L, 28.8 mol) se agitó a 100 °C por 2 h. En este tiempo el análisis LC-MS muestra que la reacción se completó. Después de la remoción de la mayoría del P0Cl3 bajo presión reducida, el residuo se vertió cuidadosamente en agua con hielo y neutraliza con una combinación de NaOH 2M ac. y NaHCO3 ac. saturado. La suspensión resultante se extrajo con DCM (3 x 4 L). La fase orgánica se lavó con salmuera, es secada sobre Na2S04 anhidro, es filtrada, y evapora bajo presión reducida. El crudo se purificó por cromatografía de columna instantánea eluyendo con hexano/EtOAc (30/1) para dar 3,5-dicloro-2-etilquinoxalina (840 g) como un sólido blanco.1H RMN ( DMSO -d6) d ppm 8.01-8.08 (m, 2 H), 7.84 (t, J=8.0 Hz, 1 H), 3.10 -3.17 (d, J=7.3 Hz, 2 H), 1.36 (t, J=7.3 Hz, 3 H). Espectro de Masa (ESI) m/z = 227.1 (M+l). 2-(1-bromoetil)-3,5-dicloroquinoxalina La 3,5-dicloro-2-etilquinoxalina (1.10 Kg, 4.84 mol) se disolvió en CCl4 (4.4 L) a ta. Se agregaron entonces 1,3-dibromo-5,5-dimetilhidantoina (762 g, 2.66 mol) y peróxido de benzoilo (116 g, 0.48 mol). La suspensión resultante se calentó a reflujo por 2 h. En este tiempo el análisis LC-MS muestra que la reacción se completó. Después de enfriar hasta ta se forman cristales blancos en el recipiente de reacción. Los cristales blancos se colectaron por filtración, son lavados con NaHCO3 acuoso saturado (3 x 5 L), y secados bajo alto vacio para dar 2-(1-bromoetil)-3,5-dicloroquinoxalina como un sólido blanco (1.05 Kg).1H RMN ( DMSO-de ) d ppm 8.04 - 8.12 (m, 2 H), 7.78 - 7.90 (m, 1 H), 5.76 - 5.84 (m, 1 H), 2.09 (d, J=6. 1 Hz, 3 H). Espectro de Masa (ESI) m/z = 304.8 [(M+l) (79Br)], 306.9 [(M+l) (81Br)]. 2-(1-(3,5-dicloroquinoxalin-2-il)etil)isoindolin-1,3-diona A una solución de 2-(1-bromoetil)-3,5-dicloroquinoxalina (1.00 Kg, 3.27 mol) en DMF (8.2 L) se agregó ftalimida de potasio (1.21 Kg, 6.54 mol). La mezcla de reacción se agitó por 3 h. En este tiempo el análisis LC-MS muestra que la reacción se completó. La mezcla se transfirió a un embudo de separación de 50 L y se agregaron agua (12 L) y EtOAc (6 L) a esto con agitación. Una gran cantidad de sólido blanco se quiebra y se colectó por filtración. La fase acuosa se separó y extrajo de nuevo con EtOAc (2 x 4 L). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, son secadas sobre Na2SO4 anhidro, filtradas, y el volumen se redujo hasta 5 L bajo presión reducida. Después de enfriar hasta ta, el producto se obtuvo como un sólido blanco. El sólido blanco se filtró, trituró con hexano y es secado bajo vació para dar la 2-(1-(3,5-dicloroquinoxalin-2-il)etil)isoindolin-1,3-diona (1.24 Kg). XH RMN ( DMSO-d6) d ppm 8.02 - 8.21 (2 H, m), 7.83 -8.02 (m, 5 H), 5.89 (q, J=6.8 Hz, 1 H), 1.87 (d, J=6.8 Hz, 3 H). Espectro de Masa (ESI) m/z = 372.0 (M+l).
(S)-2-(1-(3,5-dicloroquinoxalin-2-il)©til)isoindolin-1,3 diona l La 2-(1-(3,5-dicloroquinoxalin-2-il)etil)isoindolin-1,3-diona racémica (1 Kg) se purificó en una unidad Novasep HPLC. Las condiciones de operación usadas para el proceso de separación fueron: Columna: CHIRALPAK®AS 20mM, 11 cm id x 25 cm L Fase Móvil: Hexano-IPA 70-30 Relación de Flujo: 400 mL/min Temperatura: 25°C Detección UV: 340 nm La solubilidad fue lg/L en la fase móvil. Se requirieron agitación y calentamiento para mantener la muestra en la solución. La solución se filtró antes de usarse. El volumen de inyección fue 510 mL cada 8.0 minutos. Las fracciones colectadas del proceso cromatográfico se evaporaron usando evaporadores de capa delgada Artisan y evaporadores rotatorios a 45°C. Después de que el solvente se remueve, el producto se secó hasta peso constante en un horno al vacio a 40 °C para dar: (S)-2-(1-(3,5-dicloroquinoxalin-2-il)etil)isoindolin-1,3-diona, 1er enantiómero (425.7 g, 85.1% de rendimiento, 98.7% e.e.) y (R)—2—(1—(3,5— dicloroquinoxalin-2-il)etil)isoindolin-1,3-diona, 2d0 enantiómero (432.5 g, 86.2% de rendimiento, 97.7% e.e.). 2- ( (1S) -1- (5-cloro-3- (2- (metiltio) fenil) quinoxalin-2-il) -etil) isoindolin-1 , 3-diona Un matraz de fondo redondo de tres cuellos de 5 L equipado con un agitador mecánico, un condensador, una entrada de gas de nitrógeno y una sonda de temperatura se cargó con DMF (2.16 L), (S)-2-(1-(3,5-dicloroquinoxalin-2-il)etil)isoindolin-1,3-diona (273 g, 733 mmol) y ácido 2- (metiltio)fenilborónico (136 g, 807 mmol). A la mezcla, se agregó carbonato de potasio (203 g, 147 mmol) y cloruro de [1,1-bis(difenilfosfino)ferrocen]paladio (ii), en complejo con DCM (29.9 g, 36.7 mmol). La mezcla se purgó al vacío con N2 (2x), y es calentada hasta 100 °C. La reacción se vigiló por LC-MS, y considera completa después de 4 h. La reacción se enfrió hasta ta (21 °C), y luego se divide en dos lotes. Cada lote se dividió entre EtOAc (1.08 L) y agua (1.35 L) en un embudo de separación de 4 L. Después de la fase de separación, la capa orgánica se lavó con salmuera (2 x 500 mL) y concentra para proporcionar el producto crudo. Los lotes combinados del material crudo se cargaron en gel de sílice y purifican por cromatografía instantánea (ISCO/RediSep™) (hexano:EtOAc = 10:0 hasta 6:4) para proporcionar el producto como un sólido café ligero 320g con 98% de pureza LC y 95% de rendimiento. 1H R N (400 MHz, DMS0-d5) d ppm 8.15 - 8.31 (m, 1 H), 8.07 (m, 1H), 7.93 (m, 1 H), 7.77 (m, 2 H), 7.64 (br.s., 2 H), 7.16 -7.55 (, 3 H), 6.58 - 7.02 (m, 1 H), 5.72 - 5.98 (m, 1H), 3.29 (s, 3 H), 1.79 (d, J=6.9 Hz, 3 H) Espectro de Masa (ESI) m/z = 460.0 (M+l). 2-((1S)-1-(5-cloro-3-(2-(metilsulfonil)fenil)quinoxalin-2-il)etil)isoindolin-1,3-diona l Un matraz de fondo redondo de tres cuellos de 5 L equipado con un embudo de adición, entrada de nitrógeno, agitador de domo y termopar se cargó con Montmorillonita K10 (274 g, 274 mmol) y agua (54.2 mL). La mezcla se agitó vigorosamente por ~10 min, cuando se obtuvo un polvo de flujo libre. En este tiempo se agregó DCM (1.26 L) seguido por Oxone (421 g, 685 mmol). La reacción teperature cae hasta 15 °C. Se agregó una solución de 2-((1S)-1-(5-cloro-3-(2- (metiltio)fenil)quinoxalin-2-il)etil)isoindolin-1,3-diona (126 g, 274 mmol) en DCM (630 mL) a ta (18-20 °C) a la suspensión de Montmorillonita/oxone a través de un embudo de adición y la temperatura interna se controló debajo de 21 °C por un baño de agua/hielo. La reacción se agitó a ta (19-21 °C) y vigiló por LC. Se consideró que se había completado después de 96 h. La mezcla de reacción se filtró y los sólidos se lavaron con DCM (2 x 250 mL). La solución orgánica combinada se lavó con solución ac. al 10% en peso de Na2SC>3 (2 x 250 raL), concentra y es secada para proporcionar el producto como un sólido amarillo ligero H Og con 97.6% de pureza LC y 82% de rendimiento. 1H RMN (400 MHz, DMSO-dg) d ppm 8.14 - 8.29 (m, 1 H), 7.64 - 8.14 (m, 8 H), 7.52 (dd, J=5.5, 3.0 Hz, 1 H), 7.21 - 7.38 (m, 1 H), 5.59 - 5.94 (m, 1 H), 3.10 - 3.27 (m, 3 H), 1.66 - 1.91 (m, 3 H) Espectro de Masa (ESI) m/z = 492.0 (M+l).
(S)-1-(5-cloro-3-(2-(metilsulfonil)fenil)quinoxalin-2-il)-etanamina Un matraz de fondo redondo de tres cuellos de 5 L equipado con un agitador de domo, termopar y condensador a reflujo con un entrada de nitrógeno se cargó con (S)-2-(l-(5-cloro-3-(2-(metilsulfonil)fenil)quinoxalin-2-il)etil)-isoindolin-1,3-diona (193 g, 392 m ol), agua (1351 mL) e hidrazina, solución al 35 % en peso en agua (711 mL, 785 mmol). La mezcla espesa blanca resultante se agitó vigorosamente a 65 °C bajo nitrógeno por 6 h y luego se permitió enfriar hasta ta durante la noche. Después de este tiempo el análisis LC-MS muestra la conversión completa al producto deseado. El sólido blanco se aisló por filtración, es lavado con agua y es secado en el filtro de vidrio bajo una corriente de nitrógeno por 4 h para dar la (S)—1—(5— cloro-3-(2-(metilsulfonil)fenil)quinoxalin-2-il)etanamina (129.7g). Espectro de Masa (ESI) m/z = 362.0 (M+l).
(S)-4-amino-6-((1-(5-cloro-3-(2-(metilsulfonil)fenil)-quinoxalin-2-il)etil)amino)pirimidin-5-carbonitrilo l Un matraz de fondo redondo de tres cuellos de 3 L equipado con un agitador de domo, entrada de nitrógeno y termopar se cargó con (1S)-1-(5-cloro-3-(2-(metilsulfonil)fenil)quinoxalin-2-il)etanamina (130 g, 358 m ol), 4-amino-6-cloropirimidin-5-carbonitrilo (55.4 g, 358 mmol), butan-1-ol (920 mL) y N,N-diisopropiletilamina (187 mL, 1.08 mol). La mezcla de reacción se calentó hasta una temperatura interna de 95-100 °C por 6 h y luego se permite enfriar hasta ta durante la noche. Después de este tiempo la reacción se calentó hasta una temperatura interna de 100 °C y luego se enfria hasta una temperatura interna de 50 °C. Se agregó acetato de etilo (~1.5 L) a 50 °C y la reacción se permitió enfriar hasta ta. La solución resultante se lavó con agua (3 x 1 L), NaHSO4 ac. al 10 % en peso (4 x 1 L) y salmuera (1 x 500 mL). La capa orgánica separada se secó sobre MgS04, es filtrada y concentrada in vacuo. El residuo resultante se suspendió en tolueno (1 L), evapora in vacuo y secó bajo alto vacio por 36 h (247g del material crudo se obtuvo). El material crudo se suspendió en EtOAc (2 L), es filtrado y es lavado con una solución de NaHS04 al 10 % en peso acuosa (4 x 1 L). Se comienza a formar un sólido blanco en la capa EtOAc. Se agregó una barra de agitación magnética y la suspensión se agitó a ta durante la noche y a 0 °C por 2 h. El sólido blanco se aisló por filtración del EtOAc y es secado en un filtro de vidrio bajo una corriente de nitrógeno por dos dias, el filtrado EtOAc (filtrado A) se deja a un lado. El sólido blanco (51 g) luego se vuelve a suspender en EtOAc (2 L) y se agregó NaHCO3 acuoso saturado (1 L). La suspensión resultante se agitó por 15 min resultando en una mezcla de dos capas. La capa orgánica se separó, es secada sobre MgS04, es filtrada y concentrada in vacuo para dar el producto deseado. El filtrado A se concentró entonces in vacuo, adsorbe en sílice y purificó por MPLC (DCM/MeOH+10%NH4OH: 100/0 hasta 90/10) para dar 92 g del producto deseado. Los dos productos aislados se combinaron y disolvieron en EtOH (500 mL). La solución resultante se concentró in vacuo. Este proceso de disolución en EtOH y concentración se repitió tres veces (3 x 500 mL). Se molió el sólido resultante (mortero) hasta un polvo y es secado en un horno al vacio (temperatura: 90-100 °C) sobre P205 por 84 h. Después de este tiempo el material se molió de nuevo, transfiriendo a una criba más grande y secó bajo alto vacio a 100-110 °C por 24 h para dar (S)-4-amino-6-((1-(5-cloro-3-(2- (metilsulfonil)fenil)quinoxalin-2-il)etil)amino)pirimidin-5-carbonitrilo (127.9 g). 1H RMN ( DMSO-d6) d ppm 8.06 - 8.20 (m, 3 H), 7.96 - 7.77 (m, 5 H), 7.64-7.65 y 6.79-6.80 (m, 1 H), 7.28 (br.s., 2H), 5.42-5.45 (m, 1 H), 3.32 y 3.22 (s, 3 H), 1.51 y 1.40 (d, J=6.6 Hz, 3 H). Espectro de Masa (ESI) m/z = 480.0 (M+l). Los análisis Karl Fisher y GC de una muestra analítica muestran que el material contiene 0.45% en peso de agua y 0.55% en peso de EtOH.
Ejemplo 6: Preparación de 2-((S)-1-(6-amino-5-cianopirimidin-4-ilamino)etil)-3-(2-(metilsulfonil)fenil)quinoxalin-5-carbonitrilo 2-((S)-1-(1,3-dioxoisoindolin-2-il)etil)-3-(2-(metilsulfonil)fenil)quinoxalin-5-carbonitrilo l Un matraz de fondo redondo de tres cuellos de 5 L equipado con un condensador, entrada de nitrógeno, agitador de domo y termopar se cargó con 2-((1S)-1-(5-cloro-3-(2- (metilsulfonil)fenil)quinoxalin-2-il)etil)isoindolin-1,3-diona (400 g, 813 mmol), dicianozinc (143 g, 1.22 mol) y 1,4-dioxano (4.0 L). La solución se agitó vigorosamente y desgasifica con Ar por 1 h. A la solución se le agregó entonces precatalizador XPhos (66.1 g, 89 mmol). La mezcla se desgasificó entonces con Ar por 1 h y es calentada hasta 90 °C. La reacción se vigiló por LC, y considera completa después de 8 h. La reacción se enfrió hasta ta (20-21 °C) y divide en dos lotes. Para cada lote, se agregaron EtOAc (2.0 L), NaHCO3 (400 mL) y agua (400 mL). La mezcla se agitó por 10 min y se forma un precipitado. Los precipitados se filtraron para proporcionar el producto puro como un sólido blanco 201.5g. El licor madre se lavó con salmuera (800mL) y la capa orgánica se concentra para proporcionar el producto crudo ~400g. El material crudo luego se hizo en mezcla espesa en EtOAc (1.2 L) por 30 min a ta. El sólido se filtró, es lavado con EtOAc (2 x 400mL) y es secado para proporcionar el producto como un sólido color marrón 220g. Todos los sólidos se combinaron, secaron en una frita de vidrio bajo vacio medio y una corriente de N2 por 2 dias para proporcionar el producto como sólido blanco 378g con 99.6% de pureza LC y 96 % de rendimiento. 1H RMN (400 MHz, DMSO-dg) d ppm 8.47 - 8.68 (m, 2 H), 7.66 - 8.19 (m, 7 H), 7.52 (dd, J=5.5, 3.0 Hz, 1 H), 7.22 - 7.40 (m, 1 H), 5.61 - 5.95 (m, 1H), 3.11 - 3.27 (m, 3 H), 1.68 - 1.93 (m, 3H) Espectro de Masa (ESI) m/z = 483.0 (M+l). 2-((S)-1-aminoetil)-3-(2-(metilsulfonil)fenil)quinoxalin-5-carbonitrilo Un matraz de fondo redondo de tres cuellos de 5 L equipado con una entrada de nitrógeno, agitador de domo y termopar se cargó con hidrato de hidrazina (381 mL, 783 mol) y EtOH (3.0 L). D la solución se le agregó entonces 2-((S)-1-(1,3-dioxoisoindolin-2-il)etil)-3-(2-(metilsulfonil)fenil)-quinoxalin-5-carbonitrilo (378 g, 783 mmol) en una porción y es calentada hasta 80 °C. La reacción se vigiló por LC, y considera completa una vez la reacción alcanza de nuevo 80 °C. La reacción se enfrió hasta temperatura ambiente (20-21°C), cuando se agregaron DCM (3.0 L) y solución de NaHCO3 sat. (600 mL). Después de la fase de separación, la capa orgánica se lavó con salmuera (2 x 600 mL), es concentrada y es secada bajo vació y flujo de N2 por 24 h para proporcionar el producto como un sólido amarillo ligero 257.7g con 94.4% de pureza LC, (no se detecta enantiómero R) y 93% de rendimiento. CH RMN (400 MHz, D SO-dj) d ppm 8.45 - 8.54 (m, 2 H), 8.18 (dt, J=7.7, 1.5 Hz, 1 H), 8.05 (dd, J=8.5, 7.4 Hz, 1 H), 7.76 - 8.00 (m, 3 H), 3.83 - 4.03 (m, 1 H), 3.25 - 3.32 (m, 3 H), 1.19 - 1.39 (m, 3 H) Espectro de Masa (ESI) m/z = 353.0 (M+l). 2-((S)-1-(6-amino-5-cianopirimidi.n-4-ilami.no)etil)-3-(2-(metilsulfonil)fenil)quinoxalin-5-carbonitrilo Un matraz de fondo redondo de tres cuellos de 5 L equipado con un agitador mecánico, un condensador, una entrada de gas de nitrógeno y una sonda de temperatura se cargó con 2- ((S)-1-aminoetil)-3-(2-(metilsulfonil)fenil)-quinoxalin-5-carbonitrilo (257.7 g, 731 mraol), 4-amino-6-cloropirimidin-5-carbonitrilo (120 g, 775 mmol), y butan-1-ol (2.5 L). La solución se agitó a ta (19-22 °C) por 5 min y N,N-diisopropiletilamina (363 mL, 219 mmol) se agregó en una porción. La solución se calentó hasta 95 °C, vigiló por LC, y considera completa después de 4 h. La reacción se enfrió hasta ta cuando se agregaron EtOAc (2.0 L) y agua (500 mL). Las dos capas se separaron y la capa orgánica se lavó con salmuera (500 mL), se concentra hasta que la mayoría del EtOAc se removió, y se forma un precipitado. El precipitado se filtró y lavó con una cantidad mínima de MeOH. El sólido se secó bajo vació por 18 h para proporcionar un sólido amarillo ligero, 305g. El licor madre se concentró, hasta que se precipita más producto. El sólido se filtró, es lavado con MeOH (2 x 200mL), es secado bajo vació por 24 h para proporcionar el producto como un sólido (45g). Un matraz de fondo redondo de tres cuellos de 5 L equipado con un agitador mecánico, una entrada de gas de nitrógeno y una sonda de temperatura se cargó con 350g de producto crudo combinado y MeOH (3.5 L). La mezcla se agitó a ta (19-22 °C) por 2 días. El sólido se filtró, es lavado con MeOH (2x 350mL), es secado bajo vació y flujo de N2 por 24 h para proporcionar un sólido de color crema (276.2g) con 99.4% de pureza HPLC, (no se detecta enantiómero R) y 80% de rendimiento. 1H RMN (400 MHz, DMSO-dg) d ppm 8.43 - 8.59 (m, 2 H), 8.01 - 8.23 (m, 2 H), 7.71- 7.99 (, 4 H), 7.61 (d, J=1.0 Hz, 1 H), 7.24 (br. s., 2 H), 5.33 - 5.68 (m, 1 H), 3.19 - 3.33 (m, 3 H), 1.34 -1.55 (m, 3 H) Espectro de Masa (ESI) m/z = 471.1 (M+l).
Ejemplo 7: Preparación de (S)-4-amino-6-((1-(6-fluoro-3 (piridina-2-il)quinoxalin-2-il)etil)amino)irimidin-5 carbonitrilo Ácido 2-((4-fluoro-2-nitrofenil)amino)butanoico Una mezcla de 2,5-difluoronitrobenceno (119 mi, 1.10 mol), ácido 2-aminobutanoico (114 g, l.lOmol), y carbonato de potasio (152.2 g, 1.10 mol) en sulfóxido de dimetilo (410 mi, 1.10 mol) se agitó a 80 °C por 23 h. ([Nota 1]: La mezcla tiene un color rojo anaranjado profundo. La temperatura interna de la mezcla se lleva hasta ~110 °C por 1 h y luego se regresa hasta 80 °C). Después de 23 h, la reacción se enfrió hasta ta y vierte cuidadosamente en agua (2 L + 1 L).
La mezcla acuosa se lavó con éter de dietilo (1 L x 2) para remover impurezas orgánicas, La capa acuosa se hizo ácida entonces hasta ~ pH 1.5 con HCl concentrado (300 mL) para generar un sólido amarillo, El sólido amarillo se colectó por filtración, es lavado con agua (3 L), y es secado al aire para dar el producto deseado un sólido anaranjado húmedo, El sólido anaranjado húmedo s<s volvió a cristalizar a partir de 3 L de tolueno y se deja a ta durante la noche para proporcionar el producto deseado como un sólido cristalino anaranjado. El sólido cristalino anaranjado se filtró, es lavado con tolueno (2 L), y secó bajo alto vacío a 80 °C por 4 h y luego en un liofilizador durante la noche para proporcionar el ácido 2-(4-fluoro-2-nitrofenilamino)butanoico (203.6 g, 76.4% de rendimiento) como un sólido cristalino anaranjado. El sólido cristalino anaranjado se llevó adelante sin purificación adicional a la siguiente etapa.
XH RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 13.30 (br. s.1 H), 8.28 (d, J=7.4 Hz, 1 H), 7.90 (dd, J=9.4, 2.9 Hz, 1 H), 7.49 - 7.60 (m, 1 H), 7.09 (dd, J=9.6, 4.7 Hz, 1 H), 4.49 (dt, J=7.2, 5.5 Hz, 1 H), 1.79 - 2.00 (m, 2 H), 0.85 - 0.93 (m, 3 H), Espectro de Masa (ESI) m/e = 243.1 (M + 1). 3-Etil-7-fluoro-3 , 4-dihidroquinoxalin-2 (1H) -ona La mezcla heterogénea de ácido 2- (4—fluoro-2-nitrofenilamino)butanoico (181.7 g, 750.0 mmol), HCl 3 N ac. (750.0 mi, 2250 mmol), y etanol (1923 mi, 750.0 mmol) en el matraz de fondo redondo de tres cuellos de 5-L se agregó dihidrato de cloruro de estaño (II) (507.7 g, 2250 mmol) y la mezcla anaranjada se calentó a 78 °C con agitación usando un agitador de domo por 4 h ([Nota 1]: La mezcla heterogénea anaranjada se vuelve una mezcla homogénea anaranjada y el color anaranjado cambia a color rojo sobre ~ 2 horas). Después de 4 h, la mezcla se enfrió hasta ta y concentra bajo presión reducida para remover el etanol, y deja a ta por 48 h.
El precipitado amarillo resultante se colectó por filtración y es lavado con agua (500 mL). EL sólido amarillo se suspendió en agua con hielo (1 L) y la mezcla se ajustó ~ pH 13 con KOH (~250 g). La mezcla heterogénea se extrajo con DCM (1 L x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (1 L x 1) y salmuera (1 L x 1), secaron sobre Na2SO4, filtraron, y concentraron bajo presión reducida para dar 3-etil-7-fluoro-3,4-dihidroquinoxalin-2(1H)-ona (60.92 g, 41.8% de rendimiento) como un sólido amarillo ligero. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) d ppm 10.26 (s, 1 H), 6.68 (dd, J=8.6, 5.5 Hz, 1 H), 6.47 - 6.61 (m, 2 H), 5.95 (d, J=1.2 Hz, 1 H), 3.62 (ddd, J=6.7, 5.0, 2.0 Hz, 1 H), 1.50 - 1.72 (m, 2 H), 0.92 (t, J=7.4 Hz, 3 H), Espectro de Masa (ESI) m/e = 195.1 (M + 1)· 3-Etil-7-fluoroquinoxalin-2(1H)-ona A una solución homogénea de 3-etil-7-fluoro-3,4-dihidroquinoxalin-2(1H)-ona (60.61 g, 312.1 m ol) y 1,4- dioxano (1350 ml) se agregó 2,3-dicloro-5,6-diciano-l,4-benzoquinona (75.91 g, 327.7 mmol) y la mezcla se agitó usando un agitador de domo a ta por 2.5 h. En este tiempo, la mezcla se concentró bajo presión reducida para dar un residuo café. El residuo café se suspendió en NaHCO3 acuoso saturado (2 L), agita por 30 min, es filtrado, es lavado con NaHC03 acuoso saturado (1 L) para dar un sólido verde ligero. El sólido verde ligero se volvió a suspender en NaHC03 acuoso saturado (500 mL), se mezcla bien, es filtrado, y es lavado con NaHC03 acuoso saturado (500 mL) para dar un sólido blanco opaco. El sólido blanco opaco se suspendió en agua (500 mL), mezcla bien, es filtrado, es lavado con agua (1 L), es secado al aire durante la noche, y secó bajo alto vacío a 22 °C por 2 h para dar 3-etil-7-fluoroquinoxalin-2(1H)-ona (56.87 g, 94.8% de rendimiento) como un sólido blanco opaco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) d ppm 12.36 (br. S, 1 H.), 7.76 (dd, J=9.0, 5.9 Hz, 1 H), 7.11 (td, J=8.8, 2.7 Hz, 1 H), 7.00 (dd, J=9.6, 2.7 Hz, 1 H), 2.78 (q, J=7.4 Hz, 2 H), 1.20 (t, J=7.4 Hz, 3 H) Espectro de Masa (ESI) m/e = 193.0 (M + 1). 3- (1-Bromoetil) -7-f luoroquinoxalin-2 (1H) -ona La 3-etil-7-f luoroquinoxalin-2 ( 1H) -ona (20. 61 g, 107 .2 mmol) y 1,3-dibromo-5,5-dimetilhidantoina (18.77 g, 64.34 mmol) es suspendida en tetracloruro de carbono (1072 mi, 107.2 mmol). A la mezcla heterogénea se agregó peróxido de benzoilo (3.463 g, 10.72 mmol) y la mezcla se calentó a reflujo con agitación (temperatura del baño de aceite: 80 °C) por 20 h. Después de 20 h, la mezcla se enfrió hasta ta. Después de enfriar, la mezcla se vertió en solución de bicarbonato de sodio acuoso saturado (1 L) con agitación. El precipitado se colectó por filtración y es lavado con agua (1 L) para dar 3- (1-bromoetil)-7-fluoroquinoxalin-2 (1H)-ona (23.19 g, 79.8% de rendimiento) como un sólido color marrón: XH RMN (400 MHz, DMSO-d6) d pp 12.68 (br. S, 1 H.), 7.85 (dd, J=9.0, 5.9 Hz, 1 H), 7.19 (td, J=8.8, 2.7 Hz, 1 H), 7.05 (dd, J= 9.8, 2.7 Hz, 1 H), 5.62 (q, J=6.7 Hz, 1 H) , 1.99 (d, J= 6.7 Hz, 3 H) , -90% puro Espectro de Masa (ESI) m/e = 271.0 [M+H(79Br) ]+ y 273.0 [M+H 2-(1-Bromoetil)-3-cloro-6-fluoroquinoxalina 3-Cloro-2-(1-cloroetil)-6-fluoroquinoxalina l Una mezcla heterogénea de 3- (1-bromoetil)-7-fluoroquinoxalin-2(1H)-ona (58.86 g, 217.1 mmol) y oxicloruro de fósforo (198.8 mi, 2171 mmol) en un matraz de fondo redondo de 1 L se agitó a 100 °C por 2 h. La mezcla fue heterogénea al inicio de la reacción y luego una solución negra homogénea sobre 1 h. Después de 2 h, la mezcla se enfrió hasta ta y concentra bajo presión reducida. Al residuo negro se le agregó cuidadosamente hielo (~ 400 mi) en porciones y luego agua (200 mi) con agitación. La mezcla se neutralizó con NH40H (200 mi) y hielo (~ 200 mi) con agitación. El precipitado resultante se colectó por filtración, enjuagó con agua (1 L), y secó bajo alto vacio durante la noche para dar 2- (1-bromoetil)-3-cloro-6-fluoroguinoxalina (58.31 g, 92.8% de rendimiento) incluyendo 3-cloro-2-(1-cloroetil)-6-fluoroquinoxalina como un sólido café. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) , relación de análogo de bromoetilo y análogo de cloroetilo = 2.5:1 Espectro de Masa (ESI) /e = 288.9 [M+H(79Br)]+ y 291.0 [M+H (81Br)]+ 2-(1-(3-Cloro-6-fluoroquinoxalin-2-il)etil)isoindolin-1,3-diona l A una mezcla de 2- (1-bromoetil)-3-cloro-6- fluoroquinoxalina (57.17 g, 197.5 mmol) que contiene 3-cloro-2-(1-cloroetil)-6-fluoroquinoxalina (48.39 g, 197.5 mmol) en N,N-dimetilformamida (700.0 ml, 197.5 mmol) se agregó ftalimida de potasio (91.43 g, 493.6 mmol) a ta y la mezcla se agitó a ta por 1 h.
Después de 1 h, a la mezcla se le agregó agua (2 L). La mezcla se extrajo con DCM (500 mL x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (1 L x 1), secaron sobre MgSO4, filtraron, y concentraron bajo presión reducida para dar un liquido rojo. El liquido rojo se filtró a través de un tapón de sílice (13.97 centímetros de diámetro x 12.70 centímetros de alto (5.5 pulgadas de diámetro x 5 pulgadas de alto)), y eluye con 20% de EtOAc en hexano, luego 30% de EtOAc en hexano, y luego 100% de EtOAc como eluyente para dar dos fracciones. Segunda fracción, producto deseado 2-(l-(3-cloro-6-fluoroquinoxalin-2-il)etil)isoindolin-1,3-diona (53.367 g, 75.97% de rendimiento) como un sólido rosa. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d ) d ppm 8.25 (dd, J=9.4, 5.9 Hz, 1 H), 7.81 - 7.95 (m, 6 H), 5.86 (q, J=6.8 Hz, 1 H), 1.86 (d, J=7.0 Hz, 3 H). Espectro de Masa (ESI) m/e = 356.0 (M + 1). 2-(1-(6-Fluoro-3-(piridin-2-xl)quinoxalin-2 il)etil)isoindolin-1,3-diona Una solución de 2- (1-(3-cloro-6-fluoroquinoxalin-2-il)etil)isoindolin-1,3-diona (50.14 g, 140.9 mmol), 2-tri-n-bucilestanilpiridina (80% pura) (76.95 mi, 211.4 m ol), y tetraquis(trifenilfosfina)paladio(0) (16.29 g, 14.09 mmol) en 1,4-dioxano (1175 mi, 140.9 mmol) se agitó a 110 °C por 29 h. Después de 29 h, la mezcla se enfrió hasta ta y concentra bajo presión reducida para dar un sólido en forma de jarabe verde. Al residuo se le agregó DCM (200 mL). La mezcla se calentó bajo reflujo por 20 min y luego se enfria hasta 0 °C con agitación. El sólido se colectó por filtración y es lavado con EtOAc-hexano (1:5, 500 mL) para dar el producto deseado (52.82 g, 94.07% de rendimiento). El sólido café oscuro se disolvió en CH2Cl2:MeOH (9:1, 400 mL, tibio), es filtrado a través de un tapón de gel de sílice (150 g, 8.5cm de diámetro x 5.5cm de alto) para remover el paladio residual y es lavado con CH2Cl2:MeOH (9:1, 600 mL). El filtrado se concentró bajo presión reducida para dar un sólido café (49.94 g, 88.9% de rendimiento). El sólido café se suspendió en EtOAc-hexano (1:9, 400 mL) y la mezcla se calentó bajo reflujo por 40 min. La mezcla se enfrió hasta ta, es filtrada, es lavada con EtOAc-hexano (1:9, 600 mL), y es secada para dar el producto deseado 2- (1-(6-fluoro-3- (piridin-2-il)quinoxalin-2-il)etil)isoindolin-1,3-diona (47.76 g, 85.06% de rendimiento) como un sólido color marrón. LH RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.47 - 8.53 (m, 1 H), 8.20 (dd, J=9.4, 5.9 Hz, 1 H), 7.94 (dd, J=9.4, 2.7 Hz, 1 H), 7.85 (td, J=8.9, 2.9 Hz, 1 H), 7.64 - 7.80 (m, 6 H), 7.30 - 7.37 (m, 1 H), 6.42 (q, J=6.9 Hz, 1 H), 1.76 (d, J=7.0 Hz, 3 H). Espectro de Masa (ESI) m/e = 399.1 (M + 1). 1-(6-fluoro-3-(piridin-2-il)quinoxalin-2-il)etanamina A una mezcla heterogénea de 2-(1-(6-fluoro-3-(piridin-2-il)quinoxalin-2-il)etil)isoindolin-1,3-diona (47.26 g, 118.6 mmol) en etanol (768.3 mi, 118.6 mmol) se agregó monohidrato de hidrazina (28.77 mi, 593.1 mmol) y la mezcla se agitó a 95 °C por 1 h. la mezcla de reacción heterogénea sale de la solución después de 15 min, pero seguido de ppt blanco voluminoso. Después de 1 h la mezcla se enfrió hasta ta. El precipitado se rompe con una espátula, es filtrado y es lavado con EtOAc (porciones de 3 x 250 mL). El filtrado se concentró bajo presión reducida. El residuo se volvió a disolver en EtOAc (600 mL) y agua (300 mL). La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (100 L x 3). La capa orgánica combinada se secó sobre MgSO4, es filtrada, y concentrada bajo presión reducida para dar 1-(6-fluoro-3-(piridin-2-il)quinoxalin-2-il)etanamina (30.95 g, 97.25% de rendimiento) como un sólido café. :H RMN (400 MHz, DMSO-d^) d ppm 8.75 (dq, J=4.7, 0.9 Hz, 1 H), 8.20 (dd, J=9.0, 5.9 Hz, 1 H), 7.98 - 8.11 (m, 2 H), 7.91 (dd, J=9.4, 2.7 Hz, 1 H), 7.78 - 7.86 (m, 1 H), 7.56 - 7.61 (m, 1 H), 4.66 (q, J=6.7 Hz, 1 H), 2.08 (br. S, 2 H), 1.35 (d, J=6.7 Hz, 3 H). Espectro de Masa (ESI) m/e = 269.0 (M + 1). [HPLC Quiral] (columna Chiralpak AD-H, 0.46 x 250mm, 5 um) usando isocrático de isopropanol al 10% en hexano como eluyente: dos picos a 9.350 min y a 10.678 min a 254 nm, (columna Chiralpak OD-H, 0.46 x 250mm, 5 um) usando isocrático de isopropanol al 10% en hexano como eluyente: dos picos a 9.69 min y a 11.22 min a 254 nm.
(S)-1-(6-Fluoro-3-(piridin-2-il)quinoxalin-2-il)etanamina (R)-1-(6-Fluoro-3-(piridin-2-il)quinoxalin-2-il)etanamina Separación Quiral: La mezcla racémica (30.95 g) se envió a separación quiral usando SFC. La muestra se disolvió en 800 mL de MeOH (+residuo de TFA), 1.3 mL de solución muestra, es decir 50.3 mg de cada inyección en el sistema de separación. Se llevó a cabo cromatografía de fluido supercrítica Semi-Prep (SFC) usando un Thar 350 SFC (presión de salida: 117 bar, a 327 nm) con una: columna AS-H, 250 x 30 mm (5 micron) Fase Móvil: 36 g/min MeOH(0.2% DEA) más 54 g/min CO2 (Temp. = 22 °C) Después de la separación quiral, cada fracción se co-evaporó dos veces con tolueno y etanol para remover la dietilamina. Primer Pico en columna AS-H y segundo pico en columna AD-H (10.678 min): (R)-1-(6-fluoro-3-(piridin-2-il)quinoxalin-2-il)etanamina (13.5173 g, 50.4 mmol, 43.7 % de rendimiento) como un sólido café. RMN (400 MHz, DMSO-de) d ppm 8.76 (dq, J=4.7, 0.9 Hz, 1 H), 8.20 (dd, J=9.0, 5.9 Hz, 1 H), 7.99 8.10 (m, 2 H), 7.91 (dd, J=9.4, 2.7 Hz, 1 H), 7.82 (td, J=8.9, 2.9 Hz, 1 H), 7.56 7.61 (m, 1 H), 4.66 (q, J=6.7 Hz, 1 H), 2.07 (s, 2 H), 1.35 (d, J=6.7 Hz, 3 H), este contiene óxido de trifenilfosfina; Espectro de Masa (ESI) m/e = 269.0 (M + 1). [HPLC] un pico a 4.996 min, 99.56% puro a 254 nm; [HPLC Quiral] (columna Chiralpak AD-H, 0.46 x 250mm, 5 m ) usando isocrático de isopropanol al 10% en hexano como eluyente: un pico a 11.432 min (enantiómero de segunda elución) a 254 nm; [Análisis de Exceso Enantiomérico]: 99% ee, enantiómero de primera elución en columna AS-H. Segundo pico en columna AS-H y primer pico en columna AD-H (9.350 min): (S)-1-(6-fluoro-3-(piridin-2-il)quinoxalin-2-il)etanamina (12.6738 g, 47.2 mmol, 40.9 % de rendimiento) como un sólido con consistencia de jarabe café: CH RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.73 - 8.78 (m, J=4.8, 1.2, 0.9, 0.9 Hz, 1 H), 8.20 (dd, J=9.4, 5.9 Hz, 1 H), 7.99 - 8.10 (m, 2 H), 7.91 (dd, J=9.4, 2.7 Hz, 1 H), 7.82 (td, J=8.9, 2.9 Hz, 1 H), 7.58 (ddd, J=7.4, 4.9, 1.4 Hz, 1 H), 4.66 (q, J=6.4 Hz, 1 H), 2.07 (br. s., 2 H), 1.35 (d, J=6.7 Hz, 3 H); Espectro de Masa (ESI) m/e = 269.0 (M + 1). [HPLC Quiral] (columna Chiralpak AD-H, 0.46 x 250mm, 5 mm) usando isocrático de isopropanol al 10% en hexano como eluyente: un pico a 9.135 min (enantiómero de primera elución) a 254 nm; [Análisis de Exceso Enantiomérico]: 98.86%ee, enantiómero de segunda elución en columna AS-H. La estereoquímica se confirmó como isómero S en la siguiente etapa.
(S)-4-Amino-6-((1-(6-fluoro-3-(piridin-2-il)quinoxalin-2 il)etil)amino)pirimidin-5-carbonitrilo Una mezcla de 4-amino-6-cloropirimidin-5-carbonitrilo (0.060 g, 0.39 m ol), (S)-1-(6-fluoro-3-(piridin-2-il)quinoxalin-2-il)etanamina (0.105 g, 0.391 mmol), y N,N-diisopropiletilamina (0.205 mL, 1.17 mmol) en butan-1-ol (3.91 mL) se agitó a 120 °C por 3 h. Después de 3 h, la mezcla se removió del calor y deja a ta. La mezcla se concentró bajo presión reducida para dar un sólido amarillo. Al sólido amarillo se le agregó agua (30 mL). El sólido resultante se filtró, es lavado con agua (30 mL), y es secado al aire para dar el producto como un sólido café. El sólido café se purificó por la cromatografía de columna en 40 g de una columna Redi-Sep usando 0 a 50% gradiente de CH2CI2:MeOH:NH4OH (89:9:1) en CH2CI2 sobre 14 min y luego isocrático al 50% de CH2Cl2:eOH:NH4OH (89:9:1) en CH2Cl2 por 14 min como eluyente para dar un sólido amarillo ligero (0.1246 g). El sólido amarillo ligero se suspendió en EtOAc-hexano (1:4), es filtrado, y es secado para dar (S)-4-amino- 6-(1-(6-fluoro-3-(piridin-2-il)quinoxalin-2-il)etilamino)pirimidin-5-carbonitrilo (0.1121 g, 0.290 mmol, 74.1 % de rendimiento) como un sólido color marrón.
RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.66 - 8.74 (m, 1 H), 8.19 (dd, J=9.4, 5.9 Hz, 1 H), 7.99 - 8.09 (m, 2 H), 7.95 (dd, J=9.4, 2.7 Hz, 1 H), 7.80 - 7.89 (, 2 H), 7.70 (d, J=7.4 Hz, 1 H), 7.53 (ddd, J=6.9, 5.0, 1.8 Hz, 1 H), 7.20 (br. s., 2 H), 6.09 - 6.21 (m, 1 H), 1.54 (d, J=6.7 Hz, 3 H); Espectro de Masa (ESI) m/e = 387.1 (M + 1). [HPLC Quiral] (columna Chiralpak AD-H, 0.46 x 250mm, 5 mm) usando isocrático de isopropanol al 10% en hexano como eluyente: un pico a 16.038 min at 254 nm.
Ensayos biológicos Expresión recombinante de PI3Ks Las subunidades pllO de longitud completa de PI3k a, b y d, etiquetadas con terminal N con etiqueta polyHis, se coexpresaron con p85 con vectores de expresión de virus Báculo en células de insecto sf9. Los heterodimeros Pll0/p85 se purificaron por Ni-NTA secuencial, Q-HP, cromatografía Superdex-100. Las isozimas a, b y d purificadas se almacenaron a -20°C en Tris 20mM, pH 8, NaCl 0.2M, glicerol al 50%, DTT 5mM, colato de Na 2mM. El PI3Ky truncado, residuos 114-1102, etiquetados con terminal N con etiqueta polyHis, se expresó con virus Báculo en células de insecto Hi5. La isozima g se purificó por cromatografía Ni-NTA, Superdex-200, Q-HP secuencial. La isozima se almacenó congelada a -80°C en NaH2P04, pH 8, NaCl 0.2M, etilen glicol al 1%, b-mercaptoetanol 2mM.
Ensayos de enzima in vi tro Los ensayos se realizaron en 25 mL con las concentraciones finales de arriba de componentes en placas de polipropileno blancas (Costar 3355). El fosfoaceptor de fosfatidil inositol, Ptdlns(4,5)P2 P4508, fue de Echelon Biosciences. La actividad ATPase de las isozimas alfa y gamma no se estimuló mucho por Ptdlns(4,5)P2 bajo estas condiciones y por lo tanto se omitió del ensayo de estas isozimas. Los compuestos de prueba se disolvieron en sulfóxido de dimetilo y diluyeron con diluciones en serie tres veces. El compuesto en DMSO (1 pL) se agregó por pozo de prueba, y se determinó la inhibición relativa a reacciones que no contiene compuesto, con y sin enzima. Después de la incubación del ensayo a ta, la reacción se detuvo y el ATP residual se determinó por adición de un volumen igual de un kit de bioluminiscencia ATP comercial (Perkin Elmer Easilite) de acuerdo a las instrucciones del fabricante, y detectó usando un luminómetro AnalystGT.
Proliferación de Células B Humanas estimulada por anti-IgM Células B humanas aisladas : Se aíslan PBMCs de Leukopac o de sangre fresca humana. Se aíslan células B humanas al usar protocolo Miltenyi y kit II de aislamiento de célula B. Se purificaron células B humanas al usar AutoMacs.column.
Activación de células B humanas Se usa placa de fondo plano de 96 pozos, la placa 50000/pozo purifica células B en medio de proliferación de célula B (DMEM + FCS al 5%, Hepes 10 mM, 50 mM 2-mercapto-etanol); 150 mL de medio contiene 250 ng/mL de proteína recombinante CD40L-LZ (Amgen) y 2 mg/mL de anticuerpo IgM anti-humano (Jackson ImmunoReseach Lab.#109-006-129), se mezcla con 50 pL de medio de célula B que contiene inhibidores PI3K y se incuba 72 h a 37°C en la incubadora. Después de 72h, se pulsan células B etiquetadas con 0.5-1 uCi/pozo ¾ timidina durante la noche ~18 h, y se cosecha la célula usando cosechador TOM.
Proliferación de Células B Humanas estimulada por IL-4 Células B humanas aisladas : Se aíslan PBMCs humanos de Leukopac o de sangre fresca humana. Se aíslan células B humanas usando protocolo Miltenyi- kit de aislamiento de célula B. Las células B humanas se purificaron por AutoMacs.column.
Activación de células B humanas Se usa placa de fondo plano de 96 pozos, la placa 50000/pozo purifica células B en medio de proliferación de célula B (DMEM + FCS al 5%, 50 mM de 2-mercaptoetanol, Hepes lOmM). El medio (150 pL) contiene 250 ng/mL de proteína recombinante CD40L-LZ (Amgen) y 10 ng/mL de IL-4 (R&D system # 204-IL-025), se mezcla con 50150 mL de medio de célula B que contiene compuestos e incuba 72 h a 37°C en la incubadora. Después de 72 h, se pulsan células B etiquetadas con 0.5-1 uCi/pozo 3H timidina durante la noche ~18 h, y se cosecha la célula usando cosechador TOM.
Ensayos de proliferación PBMC humano que inducen el antigeno T especifico (toxoide de Tétanos) Los PBMC humanos se prepararon de soluciones madre congeladas o se purifican de sangre humana fresca usando un gradiente Ficoll. Se usa placa de fondo redondo de 96 pozos y placa 2xl05 PBMC/pozo con medio de cultivo (RPMI1640 + FCS al 10%, 50uM 2-Mercaptoetanol, Hepes 10 mM). Para determinaciones IC5o, los inhibidores PI3K se probaron desde 10 mM hasta 0.001 mM, en la mitad de los incrementos log y en triplicado. Se agregó toxoide de tétanos, antigeno especifico de célula T (University of assachusetts Lab) a 1 mg/mL e incubó 6 dias a 37°C en la incubadora. Los sobrenadantes se recolectan después de 6 días durante ensayo IL2 ELISA, luego las células se pulsan con 3H-timidina durante ~18 h para medir la proliferación.
Ensayos 6FP para detectar inhibición de PI3K clase la y clase III AKT1 (PKBa) se regula por PI3K Clase la activado por factores mitogénicos (IGF-1, PDGF, insulina, trombina, NGF, etc.). En respuesta a estímulo mitogénico, el AKT1 que se transubica del citosol al Forkhead de membrana de plasma (FKHRL1) es un sustrato para AKT1. Es citoplásmico cuando se fosforila por AKT (sobrevivencia/crecimiento). La inhibición de AKT (estasis/apoptosis) - transubicación forkhead a los dominios FYVE del núcleo enlazados a PI(3)P. La mayoría se genera por acción constitutiva de PI3K Clase III.
Ensayo para alterar la membrana AKT (células CHO-IR-AKTl-EGFP/GE Healthcare) Lavar células con solución amortiguadora de ensayo. Tratar con compuestos en solución amortiguadora de ensayo 1 h. Agregar 10 ng/mL de insulina. Fijar después de 10 min a temperatura ambiente y hacer en imagen.
Ensayo de transubicación Forkhead (células GFP Forkhead-Diversa MDA MB 68) Tratar células con compuesto en medio de crecimiento 1 h. Fijar y hacer en imagen.
Ensayo PI (3)P Clase III ( células U20S EGFP-2XFYVE/GE Healthcare) Lavar células con solución amortiguadora de ensayo. Tratar con compuestos en la solución amortiguadora de ensayo 1 h. Fijar y hacer en imagen.
Control para los 3 ensayos es Wortmanína lOuM: AKT es citoplásmico Forkhead es nuclear PI(3)P eliminado de endosomas Ensayo biomarcador: Estimulación del receptor de célula B de expresión CD69 o B7.2 (CD86) La sangre completa humana heparinizada se estimuló con 10 mg/mL de anti-IgD (Southern Biotech, #9030-01). 90 mL de la sangre estimulada luego se colocó en alícuota por pozo de una placa de 96 pozos y trató con 10 pL de varias concentraciones de compuesto de bloqueo (desde 10-0.0003 pM) diluido en IMDM + FBS al 10% (Gibco). Las muestras se incubaron juntas durante 4 h (para expresión CD69) hasta 6 h (para expresión B7.2) a 37 °C. La sangre tratada (50 pL) se transfirió a una placa de pozo profundo de 96 pozos (Nunc) para tinción de anticuerpo con 10 mL cada uno de CD45-PerCP (BD Biosciences, #347464), CD19-FITC (BD Biosciences, #340719), y CD69-PE (BD Biosciences, #341652). Los segundos 50 pL de la sangre tratada se transfirieron a una segunda placa de pozo profundo de 96 pozos para tinción de anticuerpo con 10 pL cada uno de CD19-FITC (BD Biosciences, #340719) y CD86-PeCy5 (BD Biosciences, #555666). Todas las tinciones se realizaron durante 15-30 min en la oscuridad a ta. La sangre luego se liso y fijó usando 450 pL de solución de lisis FACS (BD Biosciences, #349202) durante 15 min a ta. Las muestras luego se lavaron 2X en PBS + FBS al 2% antes del análisis FACS. Las muestras se separaron en ya sea células positivas dobles CD45/CD19 para tinción CD69, o células positivas CD19 para tinción CD86.
Contra selección Gamma: Estimulación de monocitos humanos para expresión fosfo-AKT Una linea celular de monocito humana, THP-1, se mantuvo en RPMI + FBS al 10% (Gibco). Un día antes de la estimulación, las células se contaron usando exclusión de azul de tripano en un hemocitómetro y suspendieron en una concentración de 1 x 106 células por mL de medio. 100 pL de células más medio (1 x 105 células) luego se colocó en alícuota por pozo de 4-96-pozo, platos de pozo profundo (Nunc) para probar ocho diferentes compuestos. Las células se reposaron durante la noche antes del tratamiento con varias concentraciones (desde 10-0.0003mM) del compuesto de bloqueo. El compuesto diluido en medio (12 pL) se agregó a las células durante 10 min a 37 °C. El MCP-1 humano (12 pL, R&D Diagnostics, #279-MC) se diluyó en medio y agregó a cada pozo en una concentración final de 50 ng/mL. La estimulación se prolongó durante 2 min a ta. La solución amortiguadora FACS Fosflow Lyse/Fix precalentada (1 mL de 37°C) (BD Biosciences, #558049) se agregó a cada pozo. Las placas luego se incubaron a 37°C durante unos 10-15 min adicionales. Las placas se giraron en 1500 rpm durante 10 min, el sobrenadante se aspiró completamente, y 1 mL de MEOH al 90% enfriado con hielo se agregó a cada pozo con agitación vigorosa. Las placas luego se incubaron ya sea durante la noche a -70°C o en hielo durante 30 min antes de la tinción del anticuerpo. Las placas se giraron y lavaron 2X en PBS + FBS al 2% (Gibco). El lavado se aspiró y las células se suspendieron en solución amortiguadora restante. pAKT de conejo (50 mL, Señalización Celular, #4058L) en 1:100, se agregó a cada muestra durante 1 h a ta con agitación. Las células se lavaron y giraron en 1500 rpm durante 10 min. El sobrenadante se aspiró y las células se suspendieron en solución amortiguadora restante. El anticuerpo secundario, Alexa 647 anti-conejo de cabra (50 mL, Invitrogen, #A21245) en 1:500, se agregó durante 30 in a ta con agitación. Las células luego se lavaron IX en solución amortiguadora y suspendieron en 150 mL de solución amortiguadora para análisis FACS. Las células necesitan dispersarse muy bien por pipeteo antes de correrlas en el citómetro de flujo. Las células se corrieron en un LSR II (Becton Dickinson) y separaron en dispersión lateral y delantera para determinar niveles de expresión de pAKT en la población de monocito. Contra selección gamma: Estimulación de monocitos para expresión fosfo-AKT en médula ósea de ratón Los fémures de ratón se disecaron de cinco ratones BALB/c hembra (Charles River Labs.) y recolectaron en RPMI + medio FBS al 10% (Gibco). La médula ósea de ratón se removió al cortar los extremos del fémur y al mojar con 1 mL de medio usando una jeringa de calibre 25. La médula ósea luego se dispersó en medio usando una aguja de calibre 21. El volumen del medio se incrementó hasta 20 mL y las células se contaron usando exclusión de azul de tripano en un hemocitómetro. La suspensión celular luego se incrementó hasta 7.5 x 106 células por 1 mL de medio y 100 pL (7.5 x 105 células) se puso en alícuota por pozo en platos de pozo profundo de 4-96 pozos (Nunc) para probar ocho diferentes compuestos. Las células se reposaron a 37°C durante 2 h antes del tratamiento con varias concentraciones (desde 10-0.0003mM) de compuesto de bloqueo. El compuesto diluido en el medio (12 pL) se agregó a las células de la médula ósea durante 10 min a 37°C. El MCP-1 de ratón (12 mL, R&D Diagnostics, #479-JE) se diluyó en medio y agregó a cada pozo en una concentración final de 50 ng/mL. La estimulación se prolonga durante 2 min a ta. 1 mL de solución amortiguadora FACS Fosflow Lyse/Fix pre calentada a 37°C (BD Biosciences, #558049) se agregó a cada pozo. Las placas luego se incubaron a 37°C durante unos 10-15 min adicionales. Las placas se giraron en 1500 rpm durante 10 min. El sobrenadante se aspiró completamente y 1 mL de MEOH al 90% enfriado con hielo se agregó a cada pozo con agitación vigorosa. Las placas luego se incubaron ya sea durante la noche a -70°C o en hielo durante 30 min antes de la tinción del anticuerpo. Las placas se giraron y lavaron 2X en PBS + FBS al 2% (Gibco). El lavado se aspiró y las células se suspendieron en solución amortiguadora restante. El bloqueo Fe (2 pL, BD Pharmingen, #553140) luego se agregó por pozo durante 10 min a ta. Después del bloqueo, 50 mL de anticuerpos primarios diluidos en solución amortiguadora; CDllb-Alexa488 (BD Biosciences, #557672) en 1:50, CD64-PE (BD Biosciences, #558455) en 1:50, y pAKT de conejo (Cell Signaling, #4058L) en 1:100, se agregaron a cada muestra durante 1 h a ta con agitación. La solución amortiguadora de lavado se agregó a células y giró en 1500 rpm durante 10 min. El sobrenadante se aspiró y las células se suspendieron en solución amortiguadora restante. El anticuerpo secundario; Alexa 647 anti-conejo de cabra (50 mL, Invitrogen, #A21245) en 1:500, se agregó durante 30 min a ta con agitación. Las células luego se lavaron IX en solución amortiguadora y suspendieron en 100 mL de solución amortiguadora para análisis FACS. Las células se corrieron en un LSR II (Becton Dickinson) y seccionaron en células positivas dobles CDllb/CD64 para determinar los niveles de expresión de pAKT en la población de monocito.
Ensayo pAKT en vivo El vehículo y compuestos se administran p.o. (0.2 mL) al dar (Oral Gavage Needles Popper & Sons, New Hyde Park, NY) a ratones (3751 de linea transgénica, hembra, 10-12 semana Amgen Inc, Thousand Oaks, CA) 15 min antes de la inyección i.v (0.2 mLs) de FITO anti-IgM (50 ug/ratón) (Jackson Immuno Research, West Grove, PA). Después de 45 min los ratones se sacrifican dentro de una cámara COå. La sangre se retira por medio de punción cardiaca (0.3 mL) (jeringas lee de 25 g, Sherwood, St. Louis, MO) y transfiere en un vial cónico de 15 mL (Nalge/Nunc International, Dinamarca). La sangre se fija inmediatamente con 6.0 mL de solución amortiguadora BD Fosflow Lyse/Fix (BD Bioscience, San Jose, CA), invierte 3X's y colocó en baño de agua a 37°C. La mitad del bazo se remueve y transfiere a un tubo eppendorf que contiene 0.5 mL de PBS (Invitrogen Corp, Grand Island, NY). El bazo se aplasta usando un molinillo de tejido (Pellet Pestle, Kimble/Kontes , Vineland, NJ) y fija inmediatamente con 6.0 L de solución amortiguadora BD Fosflow Lyse/Fix, invierte 3X y coloca en baño de agua a 37°C. Una vez que los tejidos se han recolectado el ratón se disloca cervicalmente y es carcasa para eliminarse. Después de 15 min, los viales cónicos de 15 mL se remueven del baño de agua a 37°C y colocan en hielo hasta que los tejidos además se procesan. Los bazos aplastados se filtran a través de un colador de célula 70 mm (BD Bioscience, Bedford, MA) en otro vial cónico de 15 mL y lavan con 9 mL de PBS. Los esplenocitos y sangre se giran @ 2,000 rpms durante 10 min (frío) y la solución amortiguadora se aspira. Las células se volvieron a suspender en 2.0 mL de alcohol metílico al 90% frío (-20°C) (Mallinckrodt Chemicals, Fillipsburg, NJ). MeOH se agrega lentamente mientras que el vial cónico se coloca en vórtice rápidamente. Los tejidos luego se almacenan a -20°C hasta que las células pueden teñirse para análisis FACS.
Inmunización TNP de dosis múltiple La sangre se recolectó por sangrados del ojo retro-orbital de ratones hembra BALB/c de 7-8 semanas de edad (Charles River Labs.) en el día 0 antes de la inmunización. La sangre se permitió coagular durante 30 min y giró a 10,000 rpm en tubos microcontenedores de suero (Becton Dickinson) durante 10 min. Los sueros se recolectaron, colocaron en alícuotas en tubos Matrix (Matrix Tech. Corp.) y almacenaron a -70°C hasta que se realizó el ELISA. Los ratones se les dio oralmente el compuesto antes de la inmunización y en periodos de tiempo posteriores con base en la vida de la molécula. Los ratones luego se inmunizaron con ya sea 50 mg de TNP-LPS (Biosearch Tech., #T-5065), 50 pg de TNP-Ficoll (Biosearch Tech., #F-1300), o 100 pg de TNP-KLH (Biosearch Tech., #T-5060) más alumbre al 1% (Brenntag, #3501) en PBS. La solución de TNP-KLH más alumbre se preparó al invertir suavemente la mezcla 3-5 veces cada 10 min durante 1 h antes de la inmunización. En el día 5, después del último tratamiento, los ratones se sacrificaron con CO2 y punción cardiaca. La sangre se permitió coagular durante 30 min y giró a 10,000 rpm en tubos microcontenedores de suero durante 10 min. Los sueros se recolectaron, colocaron en alícuota en tubos Matrix, y almacenaron a -70°C hasta que se realizó el análisis adicional. Los niveles IgGl, IgG2a, IgG3 e IgM específicos de TNP en el suero luego se midieron por medio de ELISA. TNP-BSA (Biosearch Tech., #T-5050) se usó para capturar los anticuerpos específicos TNP. TNP-BSA (10 pg/mL) se usó para recubrir placas ELISA de 384 pozos (Corning Costar) durante la noche. Las placas luego se lavaron y bloquearon durante 1 h usando solución de Bloqueo ELISA BSA al 10% (KPL). Después del bloqueo, las placas ELISA se lavaron y muestras/estándares de suero se diluyeron en serie y permitieron para enlazar a las placas durante 1 h. Las placas se lavaron y los anticuerpos secundarios conjugados Ig-HRP (IgGl de anti-ratón de cabra, Southern Biotech #1070-05, IgG2a anti-ratón de cabra, Southern Biotech #1080-05, IgM anti-ratón de cabra, Southern Biotech #1020-05, IgG3 anti-ratón de cabra, Southern Biotech #1100-05) se diluyeron en 1:5000 e incubaron en las placas durante 1 h. Se usó solución de peroxidasa de TMB (SureBlue Reserve TMB de KPL) para visualizar los anticuerpos. Las placas se lavaron y las muestras se permitieron desarrollar en la solución TMB aproximadamente 5-20 min dependiendo del Ig analizado. La reacción se detuvo con ácido sulfúrico 2M y las placas se lcyeron en un OD de 450 nm.
Para el tratamiento de enfermedades mediadas por PI3K6, tales como artritis reumatoide, espondilitis anquilosante, osteoartritis, artritis psoriática, psoriasis, enfermedades inflamatorias y enfermedades autoinmunitarias los compuestos de la presente invención pueden administrarse oralmente, parentalmente, por rocío por inhalación, rectalmente, o tópicamente en formulaciones de dosificación unitaria que contienen portadores, adyuvantes, y vehículos farmacéuticamente aceptables convencionales. El término parenteral como se usa en la presente incluye, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intrasternal, téenicas de infusión o intraperitonealmente.
El tratamiento de enfermedades y trastornos en la presente se pretende también para incluir la administración profiláctica de un compuesto de la invención, una sal farmacéutica del mismo, o una composición farmacéutica de cualquier sujeto (esto es, un animal, preferiblemente un mamífero, lo más preferiblemente un humano) considerado que necesita de tratamiento preventivo, tal como, por ejemplo, artritis reumatoide, espondilitis anquilosante, osteoartritis, artritis psoriática, psoriasis, enfermedades inflamatorias, y enfermedades autoinmunitarias y similares.
El régimen de dosificación para tratar enfermedades mediadas por PI3K5, cáncer, e/o hiperglicemia con los compuestos de esta invención y/o composiciones de esta invención se basa en una variedad de factores, incluyendo el tipo de enfermedad, la edad, peso, sexo, afección médica del paciente, la severidad de la afección, la ruta de administración, y el compuesto particular empleado. De esta manera, el régimen de dosificación puede variar ampliamente, pero puede determinarse de forma rutinaria usando métodos estándares. Los niveles de dosificación del orden desde alrededor de 0.01 mg hasta 30 mg por kilogramo de peso corporal por día, preferiblemente desde alrededor de 0.1 mg hasta 10 mg/kg, más preferiblemente desde alrededor de 0.25 mg hasta 1 mg/kg son útiles para todos los métodos de uso descritos en la presente.
Los compuestos farmacéuticamente activos de esta invención pueden procesarse de acuerdo con métodos convencionales de farmacia para producir agentes medicinales para administración a pacientes, incluyendo humanos y otros mamíferos.
Para administración oral, la composición farmacéutica puede estar en la forma de, por ejemplo, una cápsula, un comprimido, una suspensión, o líquido. La composición farmacéutica preferiblemente se hace en la forma de una dosificación unitaria que contiene una cantidad dada del ingrediente activo. Por ejemplo, estas pueden contener una cantidad de ingrediente activo desde alrededor de 1 hasta 2000 mg, preferiblemente desde alrededor de 1 hasta 500 mg, más preferiblemente desde alrededor de 5 hasta 150 mg. Una dosis diaria adecuada para un humano u otro mamífero puede variar ampliamente dependiendo de la afección del paciente y otros factores, pero, una vez de nuevo, puede determinarse usando métodos de rutina.
El ingrediente activo también puede administrarse por inyección como una composición con portadores adecuados incluyendo solución salina, dextrosa, o agua. El régimen de dosificación parenteral diario será desde alrededor de 0.1 hasta alrededor de 30 mg/kg de peso corporal total, preferiblemente desde alrededor de 0.1 hasta alrededor de 10 mg/kg, y más preferiblemente desde alrededor de 0.25 mg hasta 1 mg/kg.
Las preparaciones inyectables, tales como suspensiones oleaginosas o ac. inyectables estériles, pueden formularse de acuerdo a lo conocido se usan agentes de suspensión y agentes de humectación o dispersión adecuados. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un solvente o diluyente parenteralmente aceptable no tóxico, por ejemplo como una solución en 1,3-butandiol. Entre los vehículos y solventes aceptables que pueden emplearse son agua, solución de Ringer, y solución de cloruro de sodio isotónico. Además, los aceites fijos, estériles se emplean convencionalmente como un solvente o medio de suspensión. Para este propósito cualquier aceite fijo blando puede emplearse, incluyendo mono o diglicéridos sintéticos. Además, los ácidos grasos tales como ácido oleico encuentran uso en la preparación de inyectables.
Los supositorios para administración rectal del fármaco pueden prepararse al mezclar el fármaco con un excipiente no irritante adecuado tal como manteca de cacao y polietilen glicoles que son sólidos a temperaturas ordinarias pero líquidos a la temperatura rectal y por lo tanto se fundirán en el recto y liberarán el fármaco.
Una dosis tópica adecuada de ingrediente activo de un compuesto de la invención es 0.1 mg hasta 150 mg administrada una hasta cuatro, preferiblemente una o dos veces al día. Para administración tópica, el ingrediente activo puede comprender desde 0.001% hasta 10% p/p, por ejemplo, desde 1% hasta 2% en peso de la formulación, aunque puede comprender tanto como 10% p/p, pero preferiblemente no más de 5% p/p, y más preferiblemente desde 0.1% hasta 1% de la formulación.
Las formulaciones adecuadas para administración tópica incluyen preparaciones líquidas o semi-líquidas adecuadas para penetración a través de la piel (por ejemplo, linimentos, lociones, ungüentos, cremas, o pastas) y gotas adecuadas para administración al ojo, oído, o nariz.
Para administración, los compuestos de esta invención se combinan ordinariamente con uno o más adyuvantes apropiados por la ruta indicada de administración. Los compuestos pueden mezclarse con lactosa, sacarosa, polvo de almidón, ésteres de celulosa de ácido alcanoico, ácido esteárico, talco, estearato de magnesio, óxido de magnesio, sodio y sales de calcio de ácidos fosfórico y sulfúrico, acacia, gelatina, alginato de sodio, polivinil-pirrolidina, y/o alcohol de polivinílico, y comprimido o encapsulado para administración convencional. Alternativamente, los compuestos de esta invención pueden disolverse en solución salina, agua, polietilenglicol, propilenglicol, etanol, aceite de maíz, aceite de cacahuate, aceite de semilla de algodón, aceite de ajonjolí, goma de tragacanto, y/o varias soluciones amortiguadoras. Otros adyuvantes y modos de administración son bien conocidos en la téenica farmacéutica. El portador o diluyente puede incluir material para retardar el tiempo, tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo solo o con una cera, u otros materiales bien conocidos en la técnica.
La composición farmacéutica puede hacerse en una forma sólida (incluyendo gránulos, polvos o supositorios) o en una forma líquida (por ejemplo, soluciones, suspensiones, o emulsiones). Las composiciones farmacéuticas pueden someterse a operaciones farmacéuticas convencionales tales como esterilización y/o pueden contener adyuvantes convencionales, tales como conservadores, estabilizadores, agentes humectantes, emulsificadores, soluciones amortiguadoras etc.
Las formas de dosificación sólidas para administración oral pueden incluir cápsulas, comprimidos, pildoras, polvos, y gránulos. En tales formas de dosificación sólida, el compuesto activo puede mezclarse con al menos un diluyente inerte tal como sacarosa, lactosa, o almidón. Tales formas de dosificación también pueden comprender, como en la práctica normal, sustancias adicionales diferentes de diluyentes inertes, por ejemplo, agentes lubricantes tales como estearato de magnesio. En el caso de cápsulas, comprimidos, y pildoras, las formas de dosificación también pueden comprender agentes amortiguadores. Los comprimidos y pildoras adicionalmente pueden prepararse con recubrimientos entéricos.
Las formas de dosificación liquidas para administración oral pueden incluir emulsiones farmacéuticamente aceptables, soluciones, suspensiones, jarabes, y elixires que contienen diluyentes inertes comúnmente usados en la téenica, tales como agua. Tales composiciones también pueden comprender adyuvantes, tales como agentes humectantes, edulcorantes, saborizantes, y de perfume.
Los compuestos de la presente invención pueden poseer uno o más átomos de carbono asimétricos y de esta manera son capaces de existir en la forma de isómeros ópticos asi como en la forma de mezclas racémicas o no racémicas de los mismos. Los isómeros ópticos pueden obtenerse por resolución de las mezclas racémicas de acuerdo a procesos convencionales, por ejemplo, por formación de sales diaestereoisoméricas, por tratamiento con un ácido o base ópticamente activo. Los ejemplos de ácidos apropiados son ácido tartárico, diaceti1tartárico dibenzoiltartárico, ditoluoiltartárico, y ácido canforsulfónico y luego separación de la mezcla de diaestereoisómeros por cristalización seguido por liberación de las bases ópticamente activas de estas sales. Un proceso diferente para separación de isómeros ópticos involucra el uso de una columna de cromatografía quiral óptimamente elegida para maximizar la separación de los enantiómeros. Todavía otro método disponible involucra síntesis de moléculas diaestereoisómericas covalentes al hacer reaccionar compuestos de la invención con un ácido ópticamente puro en una forma activa o un isocianato ópticamente puro. Los diaestereoisómeros sintetizados pueden separarse por medios convencionales tales como cromatografía, destilación, cristalización o sublimación, y luego hidrolizarse para suministrar el compuesto enantioméricamente puro. Los compuestos ópticamente activos de la invención pueden igualmente obtenerse al usar materiales de partida activos.
Estos isómeros pueden estar en la forma de un ácido libre, una base libre, un éster o una sal.
De la misma manera, los compuestos de esta invención pueden existir como isómeros, que son compuestos de la misma fórmula molecular pero en la cual los átomos, uno con respecto al otro, se configuran diferentemente. En particular, los sustituyentes alquileno de los compuestos de esta invención, normalmente y preferiblemente se configuran e insertan en las moléculas como se indica en las definiciones para cada uno de estos grupos, que se leen de izquierda a derecha. Sin embargo, en ciertos casos, alguien experimentado en la téenica apreciará que es posible preparar compuestos de esta invención en los cuales estos sustituyentes están inversos en orientación con relación a los otros átomos en la molécula. Esto es, el sustituyente a insertarse puede ser el mismo como aquel señalado arriba excepto que se inserta en la molécula en la orientación inversa. Alguien experimentado en la técnica apreciará que estas formas isoméricas de los compuestos de esta invención son para construirse como se abarca dentro del alcance de la presente invención.
Los compuestos de la presente invención pueden usarse en la forma de sales derivadas de ácidos orgánicos o inorgánicos. Las sales incluyen, pero no se limitan a, las siguientes: acetato, adipato, alginato, citrato, aspartato, benzoato, bencensulfonato, bisulfato, butirato, canforato, canforsulfonato, digluconato, ciclopentanpropionato, dodecilsulfato, etansulfonato, glucoheptanoato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, fumarato, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, 2-hidroxietansulfonato, lactato, maleato, metansulfonato, nicotinato, 2-naftalensulfonato, oxalato, palmoato, pectinato, persulfato, 2-fenilpropionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartrato, tiocianato, tosilato, mesilato, y undecanoato. También, los grupos que contienen nitrógeno básicos pueden cuaternizarse con tales agentes como haluros de alquilo inferior, tales como cloruro, bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo, y de butilo; sulfatos de dialquilo tipo sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo, y diamilo, haluros de cadena larga tales como cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo y estearilo, haluros de aralquilo tipo bromuros de bencilo y fenetilo, y otros. Se obtienen por ello agua o productos dispersables o solubles en aceite.
Los ejemplos de ácidos que pueden emplearse para sales de adición ácida farmacéuticamente aceptables incluyen tales ácidos inorgánicos como ácido clorhídrico, ácido sulfúrico y ácido fosfórico y tales ácidos orgánicos como ácido oxálico, ácido maleico, ácido succinico y ácido cítrico. Otros ejemplos incluyen sales con metales alcalinos o metales alcalinotérreos, tales como sodio, potasio, calcio o magnesio o con bases orgánicas.
También abarcados en el alcance de la presente invención son ésteres farmacéuticamente aceptables de un ácido carboxílico o hidroxilo que contiene el grupo, incluyendo un éster metabólicamente voluble o una forma de profármaco de un compuesto de esta invención. Un éster metabólicamente inestable es uno que puede producir, por ejemplo, un incremento en niveles sanguíneos y prolongar la eficacia de la forma no esterificada correspondiente del compuesto. Una forma de profármaco es una que no está en una forma activa de la molécula ya que se administra pero que se vuelve terapéuticamente activa después de alguna actividad en vivo o biotransformación, tal como metabolismo, por ejemplo, desdoblamiento enzimático o hidrolítico. Para una discusión general de profármacos que involucran ésteres ver Svensson y Tunek Drug Metabolism Reviews 165 (1988) y Bundgaard Design of Prodrugs, Elsevier (1985). Los ejemplos de un anión de carboxilato enmascarado incluyen una variedad de ésteres, tal como alquilo (por ejemplo, metilo, etilo), cicloalquilo (por ejemplo, ciclohexilo), aralquilo (por ejemplo, bencilo, p-metoxibencilo), y alquilcarboniloxialquilo (por ejemplo, pivaloiloximetilo). Las aminas se han enmascarado como derivados sustituidos de arilcarboniloximetilo que se desdoblan por esterasas en vivo que se liberan del fármaco libre y formaldehido (Bungaard J. Med. Chem. 2503 (1989)). También, los fármacos que contienen un grupo NH ácido, tal como imidazol, imida, indol y similares, se han enmascarado con grupos N-aciloximetilo (Bundgaard Design of Prodrugs, Elsevier (1985)). Los grupos hidroxi se han enmascarado como ésteres y éteres. EP 039,051 (Sloan y Little, 4/11/81) describe profármacos de ácido hidroxámico de base Mannich, su preparación y uso. Los ésteres de un compuesto de esta invención, pueden incluir, por ejemplo, los ésteres de metilo, etilo, propilo, y butilo, así como otros ésteres adecuados formados entre una porción ácida y un hidroxilo que contiene la porción. Los ésteres metabólicamente volubles, pueden incluir, por ejemplo, metoximetilo, etoximetilo, iso-propoximetilo, a-metoxietilo, grupos tales como a-(alquiloxi (C1-C4))etilo, por ejemplo, metoxietilo, etoxietilo, propoxietilo, iso-propoxietilo, etc.; grupos 2-oxo-1,3-díoxolen-4-ilmetilo, tales como 5-metil-2-oxo-l,3,dioxolen-4-ilmetilo, etc.; grupos alquiltiometilo C1-C3, por ejemplo, metiltiometilo, etiltiometilo, isopropiltiometilo, etc.; grupos aciloximetilo, por ejemplo, pivaloiloximetilo, a-acetoximetilo, etc.; etoxicarbonil-1-metilo; o grupos metilo a-aciloxi-a-sustituido, por ejemplo a-acetoxietilo.
Además, los compuestos de la invención pueden existir como sólidos cristalinos que pueden cristalizarse de solventes comunes tales como etanol, N,N-dimetil-formamida, agua, o similares. De esta manera, las formas cristalinas de los compuestos de la invención pueden existir como polimorfos, solvatos e/o hidratos de los compuestos precursores o sus sales farmacéuticamente aceptables. Todas de tales formas de manera similar son para construirse ya que caen dentro del alcance de la invención.
Aunque los compuestos de la invención pueden administrarse como el agente farmacéutico activo único, también pueden usarse en combinación con uno o más compuestos de la invención u otros agentes. Cuando se administran como una combinación, los agentes terapéuticos pueden formularse como composiciones separadas que se dan al mismo tiempo o tiempo diferente, o los agente terapéuticos pueden darse como una composición sencilla.
Lo anterior es meramente ilustrativo de la invención y no se pretende limitar la invención para los compuestos descritos. Las variaciones y cambios que son obvios para alguien experimentado en la téenica se pretenden para estar dentro del alcance y naturaleza de la invención que se definen en las reivindicaciones anexas.
De la descripción anterior, alguien experimentado en la téenica puede fácilmente establecer las características esenciales de esta invención, y sin alejarse del espíritu y alcance de la misma, pueden hacer varios cambios y modificaciones de la invención para adaptarse a varios usos y condiciones.

Claims (22)

NOVEDAD DE LA INVENCION Habiendo descrito la presente invención, se considera co o novedad, y por lo tanto se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes: REIVINDICACIONES
1. Un compuesto, caracterizado porque es seleccionado de o cualquier sal farmacéuticamente aceptable de las mismas.
2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque tiene la estructura i o cualquier sal farmacéuticamente aceptable de la misma.
3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque tiene la estructura o cualquier sal farmacéuticamente aceptable de la misma.
4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 caracterizado porque tiene la estructura o cualquier sal farmacéuticamente aceptable de la misma.
5. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque tiene la estructura o cualquier sal farmacéuticamente aceptable de la misma.
6. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque tiene la estructura o cualquier sal farmacéuticamente aceptable de la misma.
7. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque tiene la estructura o cualquier sal farmacéuticamente aceptable de la misma.
8. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque tiene la estructura o cualquier sal farmacéuticamente aceptable de la misma.
9. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de conformidad con la reivindicación 2; y un excipiente o portador farmacéuticamente aceptable.
10. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de conformidad con la reivindicación 3; y un excipiente o portador farmacéuticamente aceptable.
11. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de conformidad con la reivindicación 4; y un excipiente o portador farmacéuticamente aceptable.
12. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de conformidad con la reivindicación 5; y un excipiente o portador farmacéuticamente aceptable.
13. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de conformidad con la reivindicación 6; y un excipiente o portador farmacéuticamente aceptable.
14. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de conformidad con la reivindicación 7; y un excipiente o portador farmacéuticamente aceptable.
15. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de conformidad con la reivindicación 8; y un excipiente o portador farmacéuticamente aceptable.
16. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque es para el uso en el tratamiento de una enfermedad seleccionada de artritis reumatoide, espondilitis anquilosante, osteoartritis, artritis psoriásica, psoriasis, enfermedades inflamatorias y enfermedades autoinmunitarias, trastornos inflamatorios del intestino, trastornos inflamatorios de los ojos, trastornos inflamatorios de la vejiga o vejiga inestable, complicaciones de la piel con componentes inflamatorios, afecciones inflamatorias crónicas, enfermedades autoinmunitarias, lupus eritematoso sistémico (SLE), miastenia grave, artritis reumatoide, encefalomielitis aguda diseminada, púrpura trombocitopénica idiopática, esclerosis múltiple, síndrome de Sjoegren y anemia hemolitica autoinmunitaria, afecciones alérgicas e hipersensibilidad.
17. El compuesto de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque es para el uso en el tratamiento de una enfermedad seleccionada de artritis reumatoide, espondilitis anquilosante, osteoartritis, artritis psoriásica, psoriasis, enfermedades inflamatorias y enfermedades autoinmunitarias, trastornos inflamatorios del intestino, trastornos inflamatorios de los ojos, trastornos inflamatorios de la vejiga o vejiga inestable, complicaciones de la piel con componentes inflamatorios, afecciones inflamatorias crónicas, enfermedades autoinmunitarias, lupus eritematoso sistémico (SLE), miastenia grave, artritis reumatoide, encefalomielitis aguda diseminada, púrpura trombocitopénica idiopática, esclerosis múltiple, síndrome de Sjoegren y anemia hemolitica autoinmunitaria, afecciones alérgicas e hipersensibilidad.
18. El compuesto de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque es para el uso en el tratamiento de una enfermedad seleccionada de artritis reumatoide, espondilitis anquilosante, osteoartritis, artritis psoriásica, psoriasis, enfermedades inflamatorias y enfermedades autoinmunitarias, trastornos inflamatorios del intestino, trastornos inflamatorios de los ojos, trastornos inflamatorios de la vejiga o vejiga inestable, complicaciones de la piel con componentes inflamatorios, afecciones inflamatorias crónicas, enfermedades autoinmunitarias, lupus eritematoso sistémico (SLE), miastenia grave, artritis reumatoide, encefalomielitis aguda diseminada, púrpura trombocitopénica idiopática, esclerosis múltiple, síndrome de Sjoegren y anemia hemolítica autoinmunitaria, afecciones alérgicas e hipersensibilidad.
19. El compuesto de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque es para el uso en el tratamiento de una enfermedad seleccionada de artritis reumatoide, espondilitis anquilosante, osteoartritis, artritis psoriásica, psoriasis, enfermedades inflamatorias y enfermedades autoinmunitarias, trastornos inflamatorios del intestino, trastornos inflamatorios de los ojos, trastornos inflamatorios de la vejiga o vejiga inestable, complicaciones de la piel con componentes inflamatorios, afecciones inflamatorias crónicas, enfermedades autoinmunitarias, lupus eritematoso sistémico (SLE), miastenia grave, artritis reumatoide, encefalomielitis aguda diseminada, púrpura trombocitopénica idiopática, esclerosis múltiple, síndrome de Sjoegren y anemia hemolítica autoinmunitaria, afecciones alérgicas e hipersensibilidad.
20. El compuesto de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque es para el uso en el tratamiento de una enfermedad seleccionada de artritis reu atoide, espondilitis anquilosante, osteoartritis, artritis psoriásica, psoriasis, enfermedades inflamatorias y enfermedades autoinmunitarias, trastornos inflamatorios del intestino, trastornos inflamatorios de los ojos, trastornos inflamatorios de la vejiga o vejiga inestable, complicaciones de la piel con componentes inflamatorios, afecciones inflamatorias crónicas, enfermedades autoinmunitarias, lupus eritematoso sistémico (SLE), miastenia grave, artritis reumatoide, encefalomielitis aguda diseminada, púrpura trombocitopénica idiopática, esclerosis múltiple, síndrome de Sjoegren y anemia hemolítica autoinmunitaria, afecciones alérgicas e hipersensibilidad.
21. El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque es para el uso en el tratamiento de una enfermedad seleccionada de artritis reumatoide, espondilitis anquilosante, osteoartritis, artritis psoriásica, psoriasis, enfermedades inflamatorias y enfermedades autoinmunitarias, trastornos inflamatorios del intestino, trastornos inflamatorios de los ojos, trastornos inflamatorios de la vejiga o vejiga inestable, complicaciones de la piel con componentes inflamatorios, afecciones inflamatorias crónicas, enfermedades autoinmunitarias, lupus eritematoso sistémico (SLE), miastenia grave, artritis reumatoide, encefalomielitis aguda diseminada, púrpura trombocitopénica idiopática, esclerosis múltiple, síndrome de Sjoegren y anemia hemolítica autoinmunitaria, afecciones alérgicas e hipersensibilidad.
22. El compuesto de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque es para el uso en el tratamiento de una enfermedad seleccionada de artritis reumatoide, espondilitis anquilosante, osteoartritis, artritis psoriásica, psoriasis, enfermedades inflamatorias y enfermedades autoinmunitarias, trastornos inflamatorios del intestino, trastornos inflamatorios de los ojos, trastornos inflamatorios de la vejiga o vejiga inestable, complicaciones de la piel con componentes inflamatorios, afecciones inflamatorias crónicas, enfermedades autoinmunitarias, lupus eritematoso sistémico (SLE), miastenia grave, artritis reumatoide, encofalomielitis aguda diseminada, púrpura trombocitopénica idiopática, esclerosis múltiple, síndrome de Sjoegren y anemia hemolítica autoinmunitaria, afecciones alérgicas e hipersensibilidad.
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