[go: up one dir, main page]

MX2013012190A - Derivados de tetrahidroquinolina utiles como inhibidores de bromodominio. - Google Patents

Derivados de tetrahidroquinolina utiles como inhibidores de bromodominio.

Info

Publication number
MX2013012190A
MX2013012190A MX2013012190A MX2013012190A MX2013012190A MX 2013012190 A MX2013012190 A MX 2013012190A MX 2013012190 A MX2013012190 A MX 2013012190A MX 2013012190 A MX2013012190 A MX 2013012190A MX 2013012190 A MX2013012190 A MX 2013012190A
Authority
MX
Mexico
Prior art keywords
compound
methyl
acetyl
amino
mmol
Prior art date
Application number
MX2013012190A
Other languages
English (en)
Other versions
MX338515B (es
Inventor
Dominique Amans
Emmanuel Hubert Demont
Darren Jason Mitchell
Robert J Watson
Original Assignee
Glaxosmithkline Llc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Glaxosmithkline Llc filed Critical Glaxosmithkline Llc
Publication of MX2013012190A publication Critical patent/MX2013012190A/es
Publication of MX338515B publication Critical patent/MX338515B/es

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
    • C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D215/38—Nitrogen atoms
    • C07D215/42—Nitrogen atoms attached in position 4
    • C07D215/44—Nitrogen atoms attached in position 4 with aryl radicals attached to said nitrogen atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4706—4-Aminoquinolines; 8-Aminoquinolines, e.g. chloroquine, primaquine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
    • C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D215/38—Nitrogen atoms
    • C07D215/42—Nitrogen atoms attached in position 4
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Quinoline Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Abstract

Derivados de tetrahidroquinolina (I), composiciones farmacéuticas que contienen estos compuestos, y su uso en terapia. (ver Fórmula).

Description

DERIVADOS DE TETR AH I DROQUI NOLI N A UTILES COMO INHIBIDORES DE BROMODOM I N IQ CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a derivados tetrahidroquinolina, composiciones farmacéuticas que contienen compuestos, y a su uso en terapia.
ANTECEDENTES DE LA INVENCION Los genomas de los organismos eucariotas están muy bien organizados dentro del núcleo de la célula. Las cadenas largas de ADN dúplex se enrollan alrededor de un octómero de proteínas histonas (muy usualmente comprendiendo dos copias de histonas H2A, H2B, H3 y H4) para formar un nucleosoma. Esta unidad básica se comprime entonces por la agregación y pliegue de los nucleosomas para formar una estructura de cromatina muy condensada. Es posible una gama de estados diferentes de condensación, y la estrechez de esta estructura varía durante el ciclo celular, siendo más compacta durante el proceso de división celular. La estructura de la cromatina desempeña una función crítica en la regulación de la transcripción génica, lo cual no puede ocurrir eficientemente a partir de la cromatina muy condensada. La estructura de la cromatina es controlada por una serie de modificaciones de postraducción de las proteínas histonas, notablemente las histonas H3 y H4, y muy comúnmente dentro de las colas de histona que se extienden más allá de la estructura de nucleosoma de núcleo. Estas modificaciones incluyen acetiláción , metilación, fosforilación , ubiquitinilación, SUMOilación. Estas marcas epigenéticas son escritas y borradas por enzimas específicas* que colocan las etiquetas sobre residuos específicos dentro de la cola de histona, formando así un código epigenético, que entonces es interpretado por la célula para permitir la regulación específica de gen de la estructura de la cromatina y con ello la transcripción.
La acetiláción de la histona muy usualmente se asocia con la activación de la transcripción génica, ya que la modificación relaja la i nteracci ón de l ADN y el octómero de h iston a cambiando la electrostática. Además de este cambio físico, proteínas específicas se unen a residuos de Usina acetilados dentro de las histonas para leer el código epigenético. Los bromodominios son pequeños dominios distintos (-1 1 0 aminoácidos) dentro de las proteínas que se unen a residuos de Usina acetilados, comúnmente pero exclusivamente en el contexto de histonas. Existe una familia de alrededor de 50 proteínas conocidas que contienen bromodominios y tienen una gama de funciones dentro de la célula.
La familia BET de proteínas que contienen bromodominio comprende 4 proteínas (BRD2, BRD3, BRD4 y BRD-t) que contienen bromodominios en tándem capaces de unirse a dos residuos de Usina acetilados en estrecha proximidad, aumentando la especificidad de la interacción. Se reporta que BRD2 y BRD3 se asocian con histonas junto a genes transcritos activamente, y pueden estar implicados en la facilitación del alargamiento transcripcional (Leroy ef al, Mol. Cell. 2008 30(1):51-60), mientras que BRD4 parece estar implicado en el reclutamiento del complejo pTEF-ß para genes inducibles, dando como resultado la fosforilación de ARN polimerasa y mayor producción transcripcional (Hargreaves et al, Cell, 2009 138(1): 129-145). También se ha reportado que BRD4 o BRD3 se pueden fusionar con NUT (proteína nuclear de testículo) formando oncogenes de fusión novedosos, BRD4-NUT o BRD3-NUT, en una forma muy maligna de neoplasia epitelial (French et al, Cáncer Research, 2003, 63, 304-307; y French et al., Journal of Clinical Oncology, 2004, 22 (20), 4135-4139). Los datos sugieren que las proteínas de fusión BRD-NUT contribuyen a la carcinogénesis (Oncogene, 2008, 27, 2237-2242). El BRQ-t es expresado únicamente en testículos y ovario. Se ha reportado que todos los miembros de la familia tienen alguna función en aspectos de control o ejecución del ciclo celular, y se ha mostrado que permanecen en complejo con los cromosomas durante la división celular -sugiriendo una función en el mantenimiento de la memoria epigenética. Además, algunos virus utilizan estas proteínas para atar sus genomas a la cromatina de la célula hospedera, como parte del proceso de la replicación viral (You ef al., Cell, 2004, 117(3):349-60).
La solicitud de patente japonesa JP2008-156311 revela un derivado de bencimidazol del cual se dice que es un agente de unión del bromodominio BRD2 que tiene utilidad con respecto a la infección/proliferación de virus.
La solicitud de patente WO2009084693 revela una serie de derivados de tienotriazolodiazepina de los cuales se dice que inhiben la unión entre una histona acetilada y una proteína que contiene bromodominio, y que son útiles como agentes anticancerosos.
Las solicitudes de patente de PCT PCT/EP201 0/06693 y PCT/EP2010/066701 revelan una serie de derivados de tetrahidroquinolina que inhiben la unión de bromodom inios de la familia BET con residuos de Usina acetilados.
Se ha encontrado una clase novedosa de compuestos que inhiben la unión de los bromodominios con sus proteínas acetiladas cognadas, más particularmente una clase de compuestos que inhiben la unión de los bromodominios de la familia BET con residuos de Usina acetilados. Estos compuestos serán referidos en adelante como "inhibidores de bromodominio".
BREVE DESC RI PCIÓN DE LA I NVE NCIÓN En un primer aspecto de la presente invención, se provee un compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo, más particularmente una sal farmacéuticamente aceptable del mismo: (l) En un segundo aspecto de la presente invención, se provee una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y uno o más vehículos, diluentes o excipientes farmacéuticamente aceptables.
En un tercer aspecto de la presente invención, se provee un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para usarse en terapia, en particular en el tratamiento de enfermedades o afecciones para las cuales está indicado un inhibidor de bromodominio.
En un cuarto aspecto de la presente invención , se provee un método de tratamiento de enfermedades o afecciones para las cuales está indicado un inhibidor de bromodominio en un sujeto en necesidad del mismo, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En un quinto aspecto de la presente invención , se provee el uso de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades o afecciones para las cuales está indicado un inhibidor de bromodominio.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a los compuestos de fórmula (I) o una sal de los mismos: en donde: X y Y son, independientemente, CH o N, con la condición de que por lo menos uno de X y Y debe ser CH; R1 es un grupo C(0)OR4 en donde R4 es alquilo de C1-4 o cicloalquilo de C3.7; o R1 es un grupo seleccionado de fenilo, piridilo, pirazinilo y pirimidinilo, dichos grupos sustituidos opcionalmente con uno o dos sustituyentes seleccionados de halógeno, alquilo de Ci- y CN; R2 es alquilo de C1-4; R3 es alquilo de Ci-4; R5 y R6 son, independientemente, alquilo de d. ; o R5 y R6 se combinan junto con el N al que están unidos para formar un heterociclilo de 5 o 6 miembros; R7 está ausente o es alquilo de C^; m es 0, 1 o 2; n es 1 o 2.
En una modalidad, la invención provee compuestos de formula (I) con estereoquímica relativa c/'s a través del anillo de tetrahidroquinolina con respecto a los sustituyentes en la posición 2 y 4 del anillo. En una modalidad, el compuesto de fórmula (I) o la sal del mismo es el enantiómero (2S,4f?).
En una modalidad, X y Y son ambos CH. En una modalidad adicional, es CH y Yes N.
En una modalidad, R1 es un grupo C(0)OR4 en donde R4 es isopropilo.
En una modalidad adicional, R1 es fenilo o piridilo sustituido opcionalmente con uno o dos sustituyentes seleccionados de halógeno, alquilo de C1. y CN. En una modalidad más, R1 es 4-clorofenilo o R1 es 5-cianopiridin-2-ilo.
En una modalidad R2 es metilo.
En una modalidad R3 es metilo.
En una modalidad m es 0.
En una modalidad n es 0. En una modalidad adicional n es 1.
En una modalidad R5 y R6 son ambos metilo.
Se apreciará que cuando R7 es alquilo de C1.4 se formará una porción de amonio cuaternizado. En una modalidad R7 está ausente.
Aunque arriba se han indicado en general las modalidades de cada variable, separadamente para cada variable, esta invención incluye todas las combinaciones de las modalidades anteriormente descritas, incluyendo las sales de los mismos.
Compuestos particulares de acuerdo con la invención son: 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((4-clorofenil)amino)-2-metil-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de 2-(dimetilamino)etilo; 2-((4-((2S,4tf)-1-acetM-4-((4-clorofenil)amino)-2-met¡l-1,2,3,4 tetrahidroquinolin-6-¡l)benzoil)oxi)-/\/, ?/,/V-trimetiletanaminio; 3-((4-((2S,4R)-1-acetil-4-((4-clorofenil)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoil)oxi)-A/, N, A/-trimetilpropan-1 -aminio; 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((4-clorofenil)am¡no)-2-metil-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de 3-(dimetilamino)propilo; 6-((2S,4f?)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)nicotinato de 3-(dimetilamino)propilo; 6-((2f?,4f?)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)nicotinato de 2-(dimetilamino)etilo; 4-((2S,4R)-1 -acetil-4-((isopropoxicarbonil)amino)-2-metil-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de 3-(d¡metilam¡no)propilo; y 4-((2S,4/ )-1-acetil-4-((isopropoxicarbonil)amino)-2-metil-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de 2-(dimetilamino)et¡lo¡ o una sal de los mismos.
En toda la presente especificación, a menos que se indique de otra manera: • el término "halógeno" se usa para describir un grupo seleccionado de flúor, cloro o bromo; • los términos "alquilo de C 1 .4" y "alquilo de C1 -6" se usan para describir un grupo o parte de un grupo que comprende un grupo alquilo lineal o ramificado que contiene de 1 a 4 o de 1 a 6 átomos de carbono, respectivamente. Ejemplos adecuados de estos grupos incluyen metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo y hexilo; • el término "cicloalquilo de C3.7" se usa para describir un anillo carbocíclico no aromático que contiene por lo menos tres y a lo más siete átomos de carbono. Ejemplos del cicloalquilo de C3-7 incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y cicloheptilo; • el término heterociclilo de 5 o 6 miembros se refiere a un anillo saturado no aromático que comprende 1 , 2 o 3 heteroátomos seleccionados de O, N y S. Ejemplos de estos grupos incluyen pirrolidinilo, morfolinilo, piperidinilo y piperazinilo.
Se apreciará que la presente invención cubre los compuestos de fórmula (I) como la base libre y como las sales de los mismos, por ejemplo como una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. En una modalidad, la invención se refiere a los compuestos de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
Debido a su uso potencial en medicina, las sales de los compuestos de fórmula (I), convenientemente, son farmacéuticamente aceptables. Las sales farmacéuticamente aceptables adecuadas pueden incluir sales de adición de ácido o base. Como se usa en la presente, el término "sal farmacéuticamente aceptable" significa cualquier sal o solvato farmacéuticamente aceptable de un compuesto de la invención, que tras su administración al receptor sea capaz de proveer (directa o indirectamente) el compuesto de la invención. Para una revisión sobre sales adecuadas véase Berge et al., J. Pharm. Sci., 66:1-19 (1977). Típicamente, una sal farmacéuticamente aceptable se puede preparar fácilmente usando el ácido o base deseada según sea apropiado. La sal resultante puede precipitar de la solución y se puede recoger por filtración, o se puede recuperar por evaporación del disolvente.
Una sal de adición de base farmacéuticamente aceptable se puede formar por reacción de un compuesto de fórmula (I) con una base inorgánica u orgánica adecuada (por ejemplo, trietilamina, etanólamina, trietanolamina, colina, arginina, lisina o histidina), opcionalmente en un disolvente adecuado, para dar la sal de adición de base, que usualmente se aisla, por ejemplo, por cristalización y filtración. Las sales de base farmacéuticamente aceptables incluyen las sales de amonio, sales de metal alcalino como las sales de sodio y potasio, sales de metal alcalinotérreo como las sales de calcio y magnesio, y las sales con bases orgánicas que incluyen sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, tales como isopropilamina, dietilamina, etanólamina, trimetilamina, diciclohexilamina y /V-metil-D-glucamina.
Una sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable se puede formar por reacción de un compuesto de fórmula (I) con un ácido inorgánico u orgánico adecuado (tal como ácido bromh ídrico, clorhídrico, sulfúrico, n ítrico, fosfórico, succínico, maleico, acético, propiónico, fumárico, cítrico, tartárico, láctico, benzoico, salicílico, glutámico, aspártico, p-toluenosulfónico, bencenosulfónico, metanosulfónico, etanosulfónico, naftalenosulfónico, tal como 2-naftalenosulfónico, o hexanoico), opcionalmente en un disolvente adecuado, tal como un disolvente orgánico, para dar la sal que usualmente se aisla, por ejemplo, por cristalización y filtración. Una sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable de un compuesto de fórmula (I) puede comprender o ser, por ejemplo, una sal de bromhidrato, clorhidrato, sulfato, nitrato, fosfato, succinato, maleato, acetato, propionato, fumarato, citrato, tartrato, lactato, benzoato, salicilato, glutamato, aspartato, p-toluenosulfonato, bencenosulfonato, metanosulfonato, etanosulfonato, naftalenosulfonato (por ejemplo, 2-naftalenosulfonato) o hexanoato.
Otras sales no aceptables farmacéuticamente, por ejemplo formiatos, oxalatos o trifluoroacetatos, se pueden usar por ejemplo para el aislamiento de los compuestos de fórmula (I) , y se incluyen dentro del alcance de esta invención.
La invención incluye dentro de su alcance todas las formas estequiométricas y no estequiométricas posibles de las sales de los compuestos de fórmula (I).
Se apreciará que muchos compuestos orgánicos pueden formar complejos con disolventes en los que reaccionan o de los que precipitan o se cristalizan. Estos complejos se conocen como "solvatos" . Por ejemplo, un complejo con agua se conoce como un "hidrato". Los disolventes con puntos de ebullición altos y/o capaces de formar enlaces de hidrógeno, tales como agua, xileno, /V-metilpirrolidona, metanol y etanol, se pueden usar para formar solvatos. Los métodos para identificar los solvatos incluyen, sin limitación , RM N y microanálisis. Los solvatos de los compuestos de fórmula (I) están dentro del alcance de la invención.
La invención incluye dentro de su alcance todas las formas estequiométricas y no estequiométricas posibles de los solvatos de los compuestos de formula (I).
Los compuestos de fórmula (I) pueden estar en forma cristalina o amorfa. Además, algunas de las formas cristalinas de los compuestos de fórmula (I) pueden existir como polimorfos, que están incluidos dentro del alcance de la presente invención. Las formas polimórficas de los com puestos de fórmula (I) se pueden caracterizar y diferenciar usando varias técnicas analíticas convencionales que incluyen, sin limitación, patrones de difracción de rayos X en polvo (XRPD) , espectros de infrarrojo (I R) , espectros Raman, calorimetría de escaneo diferencial (DSC) , análisis termogravimétrico (TGA) y resonancia magnética nuclear de estado sólido (SSNMR).
Los compuestos descritos en la presente contienen átomos quirales, de modo que se pueden formar isómeros ópticos, por ejemplo enantiómeros o diasteroisómeros. Por consiguiente, la presente invención abarca todos los isómeros de los compuestos de fórmula (I), ya sea como isómeros individuales aislados, por ejemplo sustancialmente libres del otro isómero (es decir, puros), o como mezclas (es decir, racematos y mezclas racémicas) . Un isómero individual aislado, por ejemplo sustancialmente libre del otro isómero (es decir, puro) , puede estar aislado de manera que está presente menos de 1 0% del otro isómero, particularmente menos de aproximadamente 1 % , por ejemplo menos de aproximadamente 0.1 %.
La separación de los isómeros se puede lograr mediante las técnicas convencionales conocidas para los expertos en la materia, por ejemplo mediante cristalización fraccionada, cromatografía o HPLC.
Algunos compuestos de fórmula (I) pueden existir en varias formas tautoméricas. Se entenderá que la presente invención abarca todos los tautomeros de los compuestos de fórmula (I), ya sea como tautomeros individuales o como mezclas de los mismos.
De lo anterior se apreciará que se incluyen dentro del alcance de la invención los solvatos, isómeros y formas polimórficas de los compuestos de fórmula (I) y sus sales.
Los compuestos de fórmula (I) y sus sales se pueden preparar mediante una variedad de métodos que incluyen qu ímica estándar. Cualquier variable previamente definida continuará teniendo el significado previamente definido, a menos que se indique de otra manera. Más abajo se dan métodos sintéticos generales ilustrativos, y después se preparan compuestos específicos de fórmula (I) o sus sales en los ejemplos de trabajo.
La presente invención provee, además, un procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo, que comprende un procedimiento seleccionado de (a) y (b), en donde: (a) comprende hacer reaccionar un compuesto de fórmula (II): (ID en donde R1 , R2, R3, X, Y y m son como se define en la fórmula (I), con un compuesto de fórmula (I I I): (III) en donde R5, R6 y n son como se define en la fórmula (I). (b) comprende hacer reaccionar un compuesto de fórmula (I I) o una sal del mismo con un compuesto de fórmula (IV) : en donde R5, R6, R7 y n son como se define en la fórmula (I), y Hal es halógeno.
Procedim iento (a) La reacción entre los compuestos de fórmula (I I) y (I I I) se puede efectuar en presencia de un agente activador adecuado (tal como diciclohexilcarbodiim ida (DCC) o 1 -etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC)) y un catalizador de transferencia de acilo adecuado (tal como 4-dimetilamonopiridina), en un disolvente adecuado (tal como diclorometano o DM F).
Los compuestos de fórmula (I I) se pueden preparar mediante los métodos descritos en la presente o procedimientos análogos a los mismos. Los compuestos de fórmula (I II) están disponibles comercialmente.
Procedimiento (b) Para el procedim iento (b) un grupo Hal adecuado es el bromo. La reacción entre los compuestos de fórmula (I I) y fórmula (IV) típicamente se efectúa en un disolvente adecuado (tal como DMF) en presencia de una base adecuada (tal como carbonato de potasio) .
Los compuestos de fórmula (I I) se pueden preparar mediante los métodos descritos en la presente o procedimientos análogos a los mismos. Los compuestos de fórmula (IV) están disponibles comercialmente.
Será apreciado por los expertos en la materia que puede ser ventajoso proteger uno o más grupos funcionales de los compuestos descritos. Ejemplos de los grupos protectores y los medios para su separación se pueden encontrar en T. W. Greene "Protective Groups in Organic Synthesis" (4a edición , J . Wiley and Sons, 2006) . Los grupos protectores de amino adecuados incluyen acilo (por ejemplo, acetilo, carbamato (por ejemplo, 2',2' ,2'-tricloroetoxicarbonilo, benciloxicarbonilo o t-butoxicarbonilo) y arilalquilo (por ejemplo, bencilo) , que pueden ser separados por hidrólisis (por ejemplo usando un ácido como ácido clorh ídrico en dioxano o ácido trifluoroacético en diclorometano) , o reductivamente (por ejemplo, hidrogenólisis de un grupo bencilo o benciloxicarbonilo o separación reductiva de un grupo 2', 2',2'-tricloroetoxicarbonilo usando zinc en ácido acético), según sea apropiado. Otros grupos protectores de amina adecuados incluyen trifluoroacetilo (-COCF3), que se puede separar por medio de hidrólisis catalizada por base.
Se apreciará que en cualquiera de los métodos sintéticos descritos en la presente, puede variar el orden preciso de los pasos sintéticos mediante los cuales se introducen los diversos grupos y porciones a la molécula. Será del dominio del profesional calificado asegurarse de que los grupos o porciones introducidas en una etapa del procedimiento no sean afectados por transformaciones y reacciones subsiguientes, y seleccionar el orden de los pasos sintéticos en consecuencia.
Se cree que algunos compuestos intermediarios de fórmula (I I) son novedosos y por lo tanto forman un aspecto más de la invención.
Los compuestos de fórmula (I) y sus sales son inhibidores de bromodom inio, y por tanto se cree que tienen utilidad potencial en el tratamiento de enfermedades o afecciones para las cuales está indicado un inhibidor de bromodominio.
La presente invención provee así un compuesto de fórmula (I ) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para usarse en terapia.
El compuesto de fórmula (I) o su sal farmacéuticamente aceptable se puede usar en el tratamiento de enfermedades o afecciones para las cuales está indicado un inhibidor de bromodominio.
La presente invención provee así un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para usarse en el tratamiento de cualquier enfermedad o afección para la cual está indicado un inhibidor de bromodominio.
También se provee el uso de un compuesto de fórmula (I) o una sal farm acéutica me nte ace pta ble del m ism o en la fabricación de u n medicamento para el tratamiento de enfermedades o afecciones para las cuales está indicado un inhibidor de bromodominio.
También se provee un método de tratamiento de enfermedades o afecciones para las cuales está indicado un inhibidor de bromodominio en un sujeto en necesidad del mismo, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Convenientemente, el sujeto en necesidad del mismo es un mam ífero, particularmente un humano.
Como se usa en la presente, el término "cantidad eficaz" significa aquella cantidad de fármaco o agente farmacéutico que provocará la respuesta biológica o médica de un tejido, sistema, animal o humano que es buscada, por ejemplo, por un investigador o médico. Además, el término "cantidad terapéuticamente eficaz" significa cualquier cantidad que, en comparación con un sujeto correspondiente que no recibe dicha cantidad, da como resultado un mejoramiento del tratamiento, sanación, prevención o alivio de una enfermedad, trastorno, o efecto secundario, o una disminución en la velocidad de avance de una enfermedad o trastorno. El término también incluye dentro de su alcance cantidades eficaces para mejorar la función fisiológica normal.
Se cree que los inhibidores de bromodominio son útiles en el tratamiento de una variedad de enfermedades o afecciones relacionadas con la inflamación sistémica o de tejido, respuestas inflamatorias a la infección o hipoxia, activación y proliferación celular, metabolismo de lípido, fibrosis, y en la prevención y tratamiento de infecciones virales.
Los inhibidores de bromodominio pueden ser útiles en el tratamiento de una amplia variedad de afecciones autoinmunes y/o inflamatorias crónicas, tales como artritis reumatoide, osteoartritis, gota aguda, psoriasis, lupus eritematoso sistémico, esclerosis múltiple, enfermedad inflamatoria del intestino (enfermedad de Crohn y colitis ulcerativa), asma, enfermedad obstructiva crónica de las vías aéreas, neumonitis, miocarditis, pericarditis, miositis, eczema, dermatitis (tal como dermatitis atópica), alopecia, vitíligo, enfermedades bulosas de la piel, nefritis, vasculitis, aterosclerosis, enfermedad de Alzheimer, depresión, síndrome de Sjógren, sialoadenitis, oclusión de la vena retinal central, oclusión de la vena retinal ramificada, síndrome de Irvine-Gass (posterior a cataratas y posquirúrgico), retinitis pigmentosa, pars plana, retinocoroidopatía de perdigonada, membrana epirretinal, edema macular quístico, telengiectasis parafovea, maculopatías traccionales, síndromes de tracción vitreomacular, desprendimiento de la retina, neurorretinitis, edema macular idiopático, retinitis, ojo seco (queratoconjuntivitis sica), queratoconjuntivitis vernal, queratoconjuntivitis atópica, uveítis anterior, panuveítis, uveítis posterior, edema macular asociado con uveítis, escleritis, retinopatía diabética, edema macular diabético, distrofia macular asociada con la edad, hepatitis, pancreatitis, cirrosis biliar primaria, colangitis esclerosante, enfermedad de Addison, hipofisitis, tiroiditis, diabetes de tipo I y rechazo agudo de órganos trasplantados.
Los inhibidores de bromodominio pueden ser útiles en el tratamiento de una amplia variedad de afecciones inflamatorias agudas, tales como gota aguda, arteritis de célula gigante, nefritis que incluye nefritis de lupus, vasculitis con implicación de órgano como glomerulonefritis, vasculitis que incluye arteritis de célula gigante, granulomatosis de Wegener, poliarteritis nudosa, enfermedad de Behcet, enfermedad de awasaki, arteritis de Takayasu, pioderma gangrenoso, vasculitis con implicación de órgano y rechazo agudo de órganos trasplantados.
Los inhibidores de bromodominio pueden ser útiles en la prevención o tratamiento de enfermedades o afecciones que incluyen respuestas inflamatorias a infecciones con bacterias, virus, hongos, parásitos o sus toxinas, tales como sepsis, síndrome de sepsis, choque séptico, endotoxemia, síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SI RS), síndrome de disfunción de múltiples órganos, síndrome de choque tóxico, lesión aguda del pulmón, ARDS (síndrome de dificultad respiratoria en el adulto), falla renal aguda, hepatitis fulminante, quemaduras, pancreatitis aguda, síndromes posquirúrgicos, sarcoidosis, reacciones de Herxheimer, encefalitis, mielitis, meningitis, malaria y SIRS asociada con infecciones virales como influenza, herpes zpster, herpes simple y coronavirus.
Los inhibidores de bromodominio pueden ser útiles en la prevención o tratamiento de afecciones asociadas con daño por isquemia-reperfusión, tales como infarto de miocardio, isquemia cerebrovascular (apoplejía), síndromes coronarios agudos, dañó por reperfusión renal, trasplante de órgano, Injerto de derivación de arteria coronaria, procedimientos de derivación cardiopulmonares, embolia pulmonar, renal, hepática, gastrointestinal o de miembro periférico.
Los inhibidores de bromodominio pueden ser útiles en el tratamiento de trastornos del metabolismo de lípido mediante la regulación de APO-A1, tales como hipercolesterolemia, aterosclerosis y enfermedad de Alzheimer.
Los inhibidores de bromodominio pueden ser útiles en el tratamiento de afecciones fibróticas tales como fibrosis pulmonar idiopática, fibrosis renal, constricción postoperatoria, formación de cicatriz queloide, esclerodermia (que incluye morfea) y fibrosis cardiaca.
Los inhibidores de bromodominio pueden ser útiles en la prevención y tratamiento de infecciones virales como virus de herpes, virus de papiloma humano, adenovirus y poxvirus, y otros virus de ADN.
Los inhibidores de bromodominio pueden ser útiles en el tratamiento del cáncer, que incluye cáncer hematológico (tal como leucemia, linfoma y mieloma múltiple), epitelial (que incluye carcinomas de pulmón , mama y colon) , carcinomas de línea media, tumor mesenquimático, hepático, renal y neurológico.
Los inhibidores de bromodominio pueden ser útiles en el tratamiento de la patolog ía dérmica, tal como melanoma no maligno (queratosis actínica y célula basal) , melanoma in situ, carcinoma de célula escamosa y linfoma cutáneo de células T.
En una modalidad, la enfermedad o afección para la cual está indicado un inhibidor de bromodominio se selecciona de las enfermedades asociadas con el síndrome de respuesta inflamatoria sistémica, tal como sepsis, quemaduras, pancreatitis, trauma mayor, hemorragia e isquemia. En esta modalidad , el inhibidor de bromodom inio se administraría en el momento del diagnóstico para reducir la incidencia de: SI RS, el inicio de choque, síndrome de disfunción de múltiples órganos, que incluye el inicio de lesión aguda del pulmón, ARDS, lesión aguda y mortalidad renal , hepática, cardiaca y gastrointestinal. En otra modalidad , el inhibidor de bromodominio se administraría antes de un procedimiento quirúrgico u otro procedimiento asociado con un alto riesgo de sepsis, hemorragia, daño extenso de tejido, SI RS o MODS (síndrome de disfunción de múltiples órganos). En una modalidad particular, la enfermedad o afección para la cual está indicado el inhibidor de bromodominio es la sepsis, síndrome de sepsis, choque séptico o endotoxemia. En otra modalidad , el inhibidor de bromodominio está indicado para el tratamiento de la pancreatitis aguda o crónica. En otra modalidad, el inhibidor de bromodominio está indicado para el tratamiento de quemaduras.
En una modalidad, la enfermedad o afección para la cual está indicado un inhibidor de bromodominio se selecciona de infecciones y reactivaciones de herpes simple, herpes labial, infecciones y reactivaciones de herpes zoster, varicela, culebrilla, virus de papiloma humano, virus de inmunodeficiencia humana (VI H), neoplasia cervical, infecciones de adenovirus que incluyen enfermedad respiratoria aguda, infecciones de poxvirus tales como viruela del ganado y viruela y virus de la fiebre del cerdo africano. En una modalidad particular, un inhibidor de bromodominio está indicado para el tratamiento de i nfecci o nes del vi rus de pa pi lom a h u mano de la pi e l o ep ite l i o cervica l .
El término "enfermedades o afecciones para las cuales está indicado un inhibidor de bromodominio" , incluye todos y cada uno de los estados patológicos anteriormente mencionados.
En una modalidad se provee un método para inhibir un bromodominio, que comprende poner en contacto el bromodomini;o con un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Aunque para usarse en terapia es posible administrar un compuesto de fórmula (I) y también sus sales farmacéuticamente aceptables como la sustancia química cruda, es común presentar el ingrediente activo como una composición farmacéutica.
Por lo tanto, la presente invención provee, en un aspecto adicional , una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable y uno o más vehículos, diluentes o excipientes farmacéuticamente aceptables. Los compuestos de la fórmula (I) y las sales farmacéuticamente aceptables son como se describen arriba. Los veh ículos, diluentes o excipientes deben ser aceptables en el sentido de ser compatibles con los otros ingredientes de la composición, e inocuos para el receptor de los mismos. De acuerdo con otro aspecto de la invención, también se provee un procedimiento para la preparación de una composición farmacéutica, que incluye mezclar un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, con uno o más vehículos, diluentes o excipientes farmacéuticamente aceptables. La composición farmacéutica puede ser pa ra usarse en el trata mi ento de cu a lq uiera de las afecciones descritas en la presente.
Puesto que los compuestos de fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables están destinados a usarse en composiciones farmacéuticas, se entenderá fácilmente que se proveen preferiblemente en una forma sustancialmente pura, por ejemplo por lo menos 60% pura, más convenientemente por lo menos 75% pura, y preferiblemente por lo menos 85% pura, especialmente por lo menos 98% pura (% en una base de peso a peso).
Las composiciones farmacéuticas se pueden presentar en formas de dosis unitarias que contienen una cantidad predeterminada de ingrediente activo por dosis unitaria. Las composiciones de dosis unitarias preferidas son las que contienen una dosis o subdosis diaria o una fracción apropiada de la misma, de un ingrediente activo. Por lo tanto, estas dosis unitarias se pueden administrar más de una vez al día. Las composiciones de dosis unitarias preferidas son las que contienen una dosis o subdosis diaria (para su administración más de una vez al d ía) , como se cita aquí anteriormente, o una fracción apropiada de la misma, de un ingrediente activo.
Las composiciones farmacéuticas se pueden adaptar para su administración mediante cualquier vía apropiada, por ejemplo mediante la vía oral (que incluye bucal o sublingual), rectal, inhalación, intranasal, tópica (que incluye bucal, sublingual o transdérmica), ocular (que incluye tópica, infraocular, subconjuntival, episcleral o de subténon) , vag inal o parenteral (que incluye subcutánea, intramuscular, intravenosa o intradérm ica). Estas composiciones se pueden preparar mediante cualquier método conocido en el arte de la farmacia, por ejemplo asociando el ingrediente activo con el vehículo o excipiente.
En una modalidad , la composición farmacéutica se adapta para administración parenteral, particularmente administración intravenosa.
En una modalidad , la composición farmacéutica se adapta para administración oral .
En una modalidad , la composición farmacéutica se adapta para administración tópica.
Una forma de dosis preferida que resulta en la oclusión y modificación de la penetración de la piel, ya sea para aumentar o disminuir la exposición sistémica a los compuestos de bromodóminio, incluye sin limitación las formas farmacéuticamente aceptables de carboximetilcelulosa , un alginato, gelatina o polivinilpirrolidona.
Las composiciones farmacéuticas adaptadas para administración parenteral incluyen soluciones inyectables estériles acuosas y no acuosas que pueden contener antioxidantes, amortiguadores, bacteriostáticos y solutos que hacen a la composición isotónica con la sangre del receptor deseado; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes. Las composiciones se pueden presentar en recipientes de dosis unitarias o dosis múltiples, por ejemplo ampolletas y viales sellados, y se pueden almacenar en una condición criodesecada (liofilizada) que sólo requiere la adición del veh ículo líquido estéril, por ejemplo agua para inyección, inmediatamente antes de usarse, Se pueden preparar soluciones y suspensiones inyectables extemporáneas a partir de polvos, gránulos y tabletas estériles.
Las composiciones farmacéuticas adaptadas para administración oral se pueden presentar como unidades discretas tales como cápsulas o tabletas; polvos o gránulos; soluciones o suspensiones en líquidos acuosos o no acuosos; espumas o batidos comestibles; emulsiones l íquidas de aceite en agua o emulsiones l íquidas de agua en aceite.
Por ejemplo, para administración oral en forma de una tableta o cápsula, el componente activo se puede combinar con un vehículo inerte inocuo farmacéuticamente aceptable tal como etanol, glicerol, agua, etc. Polvos adecuados para incorporarse en tabletas o cápsulas se pueden preparar reduciendo el compuesto a un tamaño fino adecuado (por ejemplo por medio de micronización) y mezclando con un vehículo farmacéutico preparado similarmente, tal como un carbohidrato comestible, por ejemplo almidón y manitol. También puede estar presente un agente saborizante, conservador, dispersante y colorarite.
Las cápsulas se pueden hacer preparando una mezcla de polvo, como se describe arriba, y vaciándolo en cubiertas de gelatina formadas. Antes de la operación de vaciado se pueden añadir a la mezcla de polvo deslizantes y lubricantes tales como sílice coloidal, talco, estearato de magnesio, estearato de calcio o polietilénglicol sólido. Para mejorar la disponibilidad del medicamento cuando se ingiere la cápsula también se puede añadir un agente desintegrador o solubilizante, tal como agar-agar, carbonato de calcio o carbonato de sodio.
Además, cuando se desea o es necesario, también se pueden incorporar en la mezcla aglutinantes, deslizantes, lubricantes, agientes edulcorantes, saborizantes, agentes desintegradores y agentes colorantes adecuados. Los aglutinantes adecuados incluyen almidón, gelatina, azúcares naturales como glucosa o beta-lactosa, edulcorantes de maíz, gomas naturales y sintéticas como acacia, tragacanto o alginato de sodio, carboximetilcelulosa, polietilénglicol, ceras, etc.; Los lubricantes usados en estas formas de dosis incluyen oleato de sodio, estearato de sodio, estearato de magnesio, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio, etc. Los desintegradores incluyen, sin limitación, almidón, metilcelulosa, agar, bentonita, goma de xáritano, etc. Las tabletas se formulan, por ejemplo, preparando una mezóla de polvo, granulando o formando bolitas, agregando un lubricante y desintegrador y comprimiendo en tabletas. Una mezcla de polvo se prepara mezclando el compuesto, pulverizado adecuadamente, con un diluente o base como se describen arriba, y opcionalmente con un aglutinante como carboximetilcelulosa, un alginato, gelatina o polivinilpirrolidona, una solución retardadora tal como parafina, un acelerador de reabsorción tal como una sal cuaternaria y/o un agente de absorción tal como bentonita, caolín o fosfato dicálcico. La mezcla de polvo se puede granular mojándola con un aglutinante tal como jarabe, pasta de almidón, mucílago de acacia o soluciones de materiales celulósicos o poliméricos, y forzándola a través de un tamiz. Como una alternativa a la granulación, la mezcla de polvo se puede pasar a través de la máquina tableteadora y el resultado son bolitas de forma i m perfecta que se rompe n en g rán u l os . Los g rá n u l os se pueden lu brica r para impedir la adherencia a las matrices formadoras de tableta por medio de la adición de ácido esteárico, una sal de estearato, talco o aceite mineral. Después, la mezcla lubricada se comprime en tabletas. Los compuestos de fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables también se pueden combinar con un veh ículo inerte dé libre flujo y comprimirse en tabletas directamente sin pasar a través de los pasos de granulación o formación de bolitas. Se puede proveer un recubrimiento protector transparente u opaco que consiste en un recubrimiento de sellado de goma laca, un recubrim iento de azúcar o material polimérico y un recubrimiento de pulido de cera. Se pueden añadir sustancias colorantes a estos recubrimientos para distinguir entre diferentes dosis unitarias.
Los fluidos orales, tales como solución, jarabes y el íxires, se pueden preparar en forma de dosis unitaria, de tal manera qué una cantidad dada contiene una cantidad predeterminada del compuesto. Los jarabes se pueden preparar disolviendo el compuesto en una solución acuosa convenientemente saborizada, mientras que los el íxires se preparan utilizando un veh ículo alcohólico inocuo. Las suspensiones se pueden formular dispersando el compuesto en un veh ículo inocuo. También se pueden añadir solubilizantes y emulsionantes, tales como alcoholes isoestearílicos etoxilados y éteres de polioxietileno sorbitol, conservadores, aditivos saborizantes tales como aceite de menta o edulcorantes naturales o sacarina u otros edulcorantes artificiales y similares.
Cuando sea apropiado, las composiciones de dosis unitarias para administración oral se pueden microencapsular. La formulación también se puede preparar para prolongar o sostener la liberación , como por ejemplo recubriendo o incrustando material en partículas en polímeros, cera o sim ilares.
Los compuestos de fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables también se pueden administrar en forma de sistemas de suministro de liposoma, tales como vesículas unilaminares pequeñas, vesículas unilaminares grandes y vesículas multilaminares. Los liposomas se pueden formar de una variedad de fosfolípidos , tales! como colesterol, estearilamina o fosfatidilcolinas.
Las composiciones farmacéuticas adaptadas para administración tópica se pueden formular como ungüentos, cremas, suspensiones, emulsiones, lociones, polvos, soluciones, pastas, geles, espráis, espumas, aerosoles o aceites. Estas composiciones farmacéuticas pueden incluir aditivos convencionales que incluyen, sin limitación, conservadores, disolventes para ayudar a la penetración del fármaco, codisolventes, emolientes, propulsores, agentes modificadores de la viscosidad (agentes gelificantes), agentes tensoactivos y vehículos. En una modalidad se provee una composición farmacéutica adaptada para administración tópica que comprende 0.01-10 %, o 0.01-1 % del compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en peso de la composición.
Para tratamientos del ojo y otros tejidos externos, por ejemplo la boca y la piel, las composiciones se aplican preferiblemente como una solución, suspensión, emulsión, ungüento, crema, gel, espray o espuma tópica. Cuando se formula en un ungüento, el ingrediente activo se puede usar con una base de ungüento parafínica o miscible en agua. Alternativamente, el ingrediente activo se puede formular en una crema con una base de crema de aceite en agua o una base de agua en aceite. Cuando se formula en una espuma, el agente activo se puede formular con propulsores, agentes tensoactivos, disolventes, codisolventes y agentes modificadores de la viscosidad.
Las composiciones farmacéuticas adaptadas para administración tópica al ojo incluyen gotas oftálmicas, en donde el ingrediente activo se disuelve o suspende en un vehículo adecuado, especialmente un disolvente acuoso. Las composiciones para administrarse al ojo tendrán pH y osmolalidad compatibles para uso oftálmico. En una composición de la invención se pueden incluir uno o más agentes ajustadores de pH y/o agentes amortiguadores aceptables para uso oftálmico, que incluyen ácidos tales como ácido acético, bórico, cítrico, láctico, fosfórico y clorhídrico; bases tales como hidróxido de sodio, fosfato de sodio, borato de sodio, citrato de sodio, acetato de sodio y lactato de sodio; y amortiguadores tales como citrato/dextrosa, bicarbonato de sodio y cloruro de amonio. Estos ácidos, bases y amortiguadores se pueden incluir en una cantidad requerida para mantener el pH de la composición en una escala aceptable para uso oftálmico. Se puede incluir en la composición una o más sales aceptables para uso oftálmico en una cantidad suficiente para llevar la osmolalidad de la composición a una escala aceptable para uso oftálmico. Estas sales incluyen las que tienen los cationes sodio, potasio o amonio, y los aniones cloruro, citrato, ascorbato, borato, fosfato, dicarbonato, sulfato, tiosulfato o bisulfito.
Se puede diseñar un dispositivo de suministro ocular para la liberación controlada de uno o más agentes terapéuticos con múltiples velocidades de liberación y cinética y permeabilidad de dosis sostenida definidas. La liberación controlada se puede obtener mediante el diseño de matrices poliméricas que incorporan diferentes elecciones y propiedades de polímeros biodegradables/bioerosionables (por ejemplo, acetato de poli(etilenvinilo) (EVA), PVA superhidrolizado), hidroxialquilcelulosa (HPC), metilcelulosa (MC) , hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), policaprolactona, ácido poli(glicólico), ácido poli(láctico), polianhídrido, de pesos moleculares de polímero, cristalinidad de pol ímero, proporciones de copol ímero, condiciones de procesamiento, acabado de superficie, geometría, adición de excipiente y recubrimientos poliméricos, que incrementarán la difusión, erosión, disolución y osmosis del fármaco.
Las composiciones farmacéuticas para suministro ocular también incluyen composiciones acuosas gelificables in situ. Tal composición comprende un agente gelificante en una concentración eficaz para promover la gelificación por contacto con el ojo o con un fluido lagrimal. Los agentes gelificantes adecuados incluyen, sin limitación, polímeros de termofraguado. El término "gelificable in situ", como se usa en la presente, incluye no sólo líquidos de baja viscosidad que forman geles por contacto con el ojo o fluido lagrimal, sino que también incluye líquidos más viscosos tales como geles semifluidos y tixotrópicos que exhiben una viscosidad sustancialmente incrementada o rigidez de gel por administración al ojo; véase, por ejemplo, Ludwig (2005), Adv. Drug Deliv. Rev. 3; 57:1595-639, que se incorpora en la presente como referencia para fines de sus enseñanzas de ejemplos de polímeros para usarse en el suministro ocular de fármaco.
Las formas de dosis para administración nasal o por inhalación se pueden formular convenientemente como aerosoles, soluciones, suspensiones, geles o polvos secos.
Para composiciones adecuadas y/o adaptadas para administración por inhalación, se prefiere que el compuesto de fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables estén en una forma de tamaño de partícula reducido, por ejemplo obtenido por micronización. El tamaño de partícula preferido del compuesto de tamaño reducido (por ejemplo micronizado) o su sal se define por un valor D50 de aproximadamente 0.5 a aproximadamente 10 mieras (por ejemplo medido usando difracción de láser) .
Las formulaciones de aerosol , por ejemplo para administración por inhalación, pueden comprender una solución o suspensión fina de la sustancia activa en un disolvente acuoso o no acuoso farmacéuticamente aceptable. Las formulaciones de aerosol se pueden presentar en cantidades individuales o de multidosis en forma estéril en un recipiente sellado, que puede tener la forma de un cartucho o recarga para usarse con un dispositivo atomizador o inhalador. Alternativamente, el recipiente sellado puede ser un dispositivo despachador unitario, tal como un inhalador nasal de una sola dosis, o un despachador de aerosol equipado con una válvula dosificadora (inhalador dosificador) que está destinado al desecho una vez que se ha agotado el contenido del recipiente.
Cuando la forma de dosis comprende un despachador de aerosol, contiene preferiblemente un propulsor adecuado bajo presión, tal como aire comprimido, dióxido de carbono o un propulsor orgánico, tal como un fluorohidrocarburo (HFC). Los propulsores de HFC adecuados incluyen 1 , 1 , 1 ,2, 3, 3, 3-heptafluoropropano y 1 , 1 , 1 ,2-tetrafluoroetano. Las formas de dosis de aerosol también pueden tener la forma dé una bomba-atomizador. El aerosol presurizado puede contener una solución o una suspensión del compuesto activo. Esto puede requerir la incorporación de excipientes adicionales, por ejemplo codisolventes y/o agentes tensoactivos, para mejorar las características de dispersión y homogeneidad de las formulaciones en suspensión. Las formulaciones de solución también pueden requerir la adición de codisolventes tales como etanol.
Para composiciones farmacéuticas adecuadas y/o adaptadas para administración por inhalación, la composición farmacéutica puede ser una composición inhalable de polvo seco. Esta composición puede comprender una base de polvo como lactosa, glucosa, trehalosa, manitol o almidón, el compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo (preferiblemente en forma de tamaño de partícula reducido, por ejemplo en forma micronizada) , y opcionalmente un modificador de rendimiento como L-leucina u otras sales de ácido esteárico de aminoácido y/o metales, tales como estearato de magnesio o calcio. Preferiblemente, la composición inhalable de polvo seco comprende una mezcla de polvo seco de lactosa, por ejemplo lactosa monohidrato, y el compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo. Estas composiciones se pueden administrar al paciente usando un dispositivo adecuado, tal como el dispositivo DI SKUS®, comercializado por GlaxoSmithKIine, que se describe por ejemplo en GB 2242134 A.
Los compuestos de fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables se pueden formular como una formulación fluida para su suministro desde un despachador de fluido, por ejemplo un despachador de fluido que tiene una boquilla de despacho u orificio de despacho a través de la cual se despacha una dosis medida de la formulación fluida después de la aplicación de una fuerza aplicada por el usuario a un mecanismo de bomba del despachador de fluido. Estos despachadores de fluido generalmente se proveen de un depósito de múltiples dosis medidas de la formulación de fluido, las dosis siendo despachables por accionamientos secuenciales de la bomba. La boquilla u orificio de despacho se puede configurar para su inserción en las fosas nasales del usuario para el despacho de espray de la formulación de fluido en la cavidad nasal. Un despachador de fluido del tipo anteriormente mencionado se describe e ilustra en WO-A-2005/044354.
Una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo dependerá de varios factores que incluyen, por ejemplo, la edad y peso del animal, la afección precisa que requiere el tratamiento y su severidad, la naturaleza de la formulación y la vía de administración, y finalmente será a criterio del médico o veterinario a cargo. En la composición farmacéutica, cada dosis unitaria para administración oral o parenteral contiene preferiblemente de 0.01 a 3000 mg, muy preferiblemente de 0.5 a 1000 mg de un compuesto de la invención, calculado como la base libre. Cada dosis unitaria para administración nasal o inhalada contiene preferiblemente de 0.001 a 50 mg, muy preferiblemente de 0.01 a; 5 mg de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, calculada como la base libre.
Los compuestos farmacéuticamente aceptables de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos se pueden administrar en una dosis diaria (para un paciente adulto) de por ejiemplo una dosis oral o parenteral de 0.01 mg a 3000 mg por día, o de 0.5 a 1000 mg por día, o una dosis nasal o inhalada de 0.001 a 50 mg por día, o de 0.01 a 5 mg por día del compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, calculada como la base libre. Esta cantidad se puede dar como una sola dosis por día, o más usualmente en varias subdosis por día (tales como dos, tres, cuatro, cinco o seis), de tal manera que la dosis diaria total sea la misma. Una cantidad eficaz de una sal del mismo se puede determinar como una proporción de la cantidad eficaz del compuesto de fórmula (I) per se.
Los compuestos de fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables se pueden usar solos o en combinación con otros agentes terapéuticos. Las terapias de combinación de acuerdo con la presente invención comprenden, de esta manera, la administración de por lo menos un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y el uso de por lo menos otro agente farmacéuticamente activo. Preferiblemente, las terapias de combinación de acuerdo con la presente invención comprende la administración de por lo menos un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y por lo menos otro agente farmacéuticamente activo. Los compuestos de la fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables, y los otros agentes farmacéuticamente activos, se pueden administrar juntos en una sola composición farmacéutica o separadamente, y cuando se administran separadamente esto puede ocurrir de manera simultánea o secuencial, en cualquier orden. Las cantidades de los compuestos de fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables y de los otros agentes farmacéuticamente activos, y los tiempos relativos de administración, serán seleccionados para obtener el efecto terapéutico combinado deseado. De esta manera, en un aspecto adicional, se provee un producto farmacéutico de combinación que comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y por lo menos otro agente farmacéuticamente activo.
De esta manera, en un aspecto, el compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se pueden usar en combinación con, o incluir, uno o más de otros agentes terapéuticos, por ejemplo seleccionados de antibióticos, antivirales, glucocorticosteróides, antag on i stas m usca rín icos , agoni stas beta-2 y a n á log os de l a Vitam i na D3. En un aspecto adicional, un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del m i sm o de acue rdo con la invención se puede usar en combinación con un agente terapéutico adicional que es adecuado para el tratamiento del cáncer.
Se apreciará que cuando el compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se administra en combinación con otros agentes terapéuticos administrados normalmente vía inhalación, intravenosa, oral o intranasal, la composición farmacéutica resultante se puede administrar por las mismas vías. Alternativamente, los componentes individuales de la composición se pueden administrar por vías diferentes.
Una modalidad de la invención abarca combinaciones que comprenden uno o dos de otros agentes terapéuticos.
Será evidente para el experto en la materia que, cuando sea apropiado, los otros ingredientes terapéuticos se pueden usar en forma de sales, por ejemplo como sales de metal alcalino o amina, ó como sales de adición de ácido, o profármacos, o como ésteres, por ejemplo ésteres de alquilo inferior, o como solvatos, por ejemplo hidratos, para optimizar la actividad y/o estabilidad y/o características físicas, tales como solubilidad , del ingrediente terapéutico. También será evidente que, cuando sea apropiado, los ingredientes terapéuticos se pueden usar en forma ópticamente pura.
Las combinaciones anteriormente mencionadas se pueden presentar convenientemente para usarse en forma de una composición farmacéutica, y por lo tanto las composiciones farmacéuticas que comprenden una combinación como se define arriba, junto cón un diluente o vehículo farmacéuticamente aceptable, representan un aspecto adicional de la invención.
Los compuestos de fórmula (I) y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos se pueden preparar mediante los métodos que se describen más abajo o mediante métodos similares. De está manera, los siguientes intermediarios y ejemplos sirven para ilustrar la preparación de los compuestos de fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables, y no se consideran limitativos del alcance de la invención en modo alguno.
Detal les experimentales generales Todas las temperaturas mencionadas son en °C.
Los nombres de los siguientes compuestos se obtuvieron usando el programa de nomenclatura de compuestos "ACD Ñame Pro 6.02" o Chem Draw Ultra 1 2.0.
Abreviaturas AcOH se refiere a ácido acético BI NAP se refiere a 2 ,2'-bis(difenilfosfino)-1 , 1 '-binaftilo BOC se refiere a ter-butoxicarbonilo CV se refiere a volúmenes de columna DCM se refiere a diclorometano 1 ,2-DCE se refiere a 1 ,2-dicloroetano DCC se refiere a diciclohexilcarbodiimida DI PEA se refiere a diisopropiletilamina DMAP se refiere a 4-dimetilaminopiridina DMSO se refiere a sulfóxido de dimetilo DMF se refiere a A/, A/-dimetilformamida Éter se refiere a éter dietíl ico Et20 se refiere a éter dietílico EtOAc se refiere a acetato de etilo FMOC se refiere a 9-fluorenilmetoxicarbonilo HATU se refiere a hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-1 -il)-?, ?, ?' , ?'-tetrametiluronio HPLC se refiere a cromatografía de líquidos de alto rendimiento I PA se refiere a propan-2-ol i-Pr20 se refiere a éter diisopropílico L¡AI H se refiere a hidruro de litio y aluminio MDAP se refiere a H PLC preparativa dirigida a la masa MeCN se refiere a acetonitrilo MeOH se refiere a metanol MgS04 se refiere sulfato de magnesio p.f. se refiere a punto de fusión t.a. se refiere a temperatura ambiente tR se refiere a tiempo de retención Na2S04 se refiere a sulfato de sodio TM EDA se refiere a tetrametiletilendiamina TFA se refiere a ácido trifluoroacético THF se refiere a tetrahidrofurano TLC se refiere a cro m atog rafía en capa delgada Metodología LC/MS (usada para algunos intermediarios y compuestos de referencia) Los detalles experimentales de los métodos de LC-MS A - F referidos en la presente son de la siguiente manera: LC/MS (Método A) . Se hizo en una columna Acquity UPLC BEH C1 8 (50mm x 2.1 mm DI , 1 .7pm de diámetro de empaque) a 40 grados centígrados, eluyendo con bicarbonato de amonio 10 mM en agua ajustada a pH 10 con solución de amoniaco (disolvente A) y acetonitrilo (disolvente B), usando el siguiente gradiente de elución: 0-1 .5 min 1 -97% de B, 1 .5-1 .9 min 97% de B, 1 .9 -2.0 min 1 00% de B, a una velocidad de flujo de 1 ml/min. La detección en UV fue una señal sumada de la longitud de onda de 210 nm a 350 nm. Los espectros de masa se registraron en un espectrómetro de masa Waters ZQ usando electroaspersión positiva y negativa de escaneado alterno. Los datos de ionización se redondearon al entero más cercano.
LC/MS (Método B). Se hizo en una columna Acquity UPLC BEH C18 (50mm x 2.1mm DI, 1.7pm diámetro de empaque) a 40 grados centígrados, eluyendo con una solución de ácido fórmico en agua al 0.1% v/v (disolvente A) y una solución de ácido fórmico en acetonitrilo al 0.1% v/v (disolvente B), usando el siguiente gradiente de elución: 0-1.5 min 3-100% de B, 1.5-1.9 min 100% de B, 1.9-2.0 min 3% de B, a una velocidad de flujo de 1 ml/min. La detección en UV fue una señal sumada de la longitud de onda de 210 nm a 350 nm. Los espectros de masa se registraron en un espectrómetro de masa Waters ZQ usando electroaspersión positiva y negativa de escaneado alterno. Los datos de ionización se redondearon al entero más cercano.
LC/MS (Método C). Se hizo en una columna Acquity UPLC BEH C18 (50mm x 2.1mm DI, 1.7pm de diámetro de empaque) a 40 grados centígrados, eluyendo con una solución de ácido trifluoroacético en agua al 0.1% v/v (disolvente A) y una solución de ácido trifluoroacético en acetonitrilo al 0.1% v/v (disolvente B), usando el siguiente gradiente de elución: 0-1.5 min 3-100% de B, 1.5-1.9 min 100% de B, 1.9-2.0 min 3% de B, a una velocidad de flujo de 1 ml/min. La detección en UV fue una señal sumada de la longitud de onda de 210 nm a 350 nm. Los espectros de masa se registraron en un espectrómetro de masa Waters ZQ usando electroaspersión positiva. Los datos de ionización se redondearon al entero más cercano.
LC/MS (Método D) . Se hizo en una columna Supelcosil LCABZ+PLU S (3µ??, 3.3cm x 4.6mm DI) eluyendo con HC02H al 0.1 % y acetato de amonio 0.01 M en agua (disolvente A) y 95% de acetonitrilo y 0.05% de HC02H en agua (disolvente B), usando el siguiente gradiente de elución: 0-0.7 minutos 3-0% de B, 0.7-4.2 minutos 0 -> 1 00% de B, 4.2-5.3 minutos 1 00% de B, 5.3-5.5 minutos 1 00 - 0% de B, a una velocidad de flujo de 3 ml/min. Los espectros de masa (MS) se registraron en un espectrómetro de masa Fisons VG Platform usando los modos de ionización de electroaspersión positiva [(ES + , para dar los iones moleculares [M+H]+ y [M + NH4]+] , o ionización de electroaspersión negativa [(ES-, para dar los iones moleculares [M-H]"]. Los datos analíticos de este aparato se dan en el siguiente formato: [M + H]+ o [M- LC/MS (Método E). Se hizo en una columna Chromolith Performance RP 1 8 (100 x 4.6 mm DI) eluyendo con acetato de amonio 0.01 M en agua (disolvente A) y acetonitrilo 1 00% (disolvente B) , usando el siguiente gradiente de elución: 0-4 minutos 0-1 00% de B, 4-5 minutos 100% de B, a una velocidad de flujo de 5 ml/min . Los espectros de masa (MS) se registraron en un espectrómetro de masa Micromass Platform-LC usando los modos de ionización qu ímica positiva a presión atmosférica [(AP+, para dar los iones moleculares MH+], o ionización química negativa a presión atmosférica [(AP-, para dar los iones moleculares (M-H)"]. Los datos analíticos de este aparato se dan en el siguiente formato: [M + H]+ o [M-H]".
LC/MS (Método F) . Se hizo en una columna Sunfire C 1 8 (30mm x 4.6mm DI, 3.5µ?? diámetro de empaque), a 30 grados centígrados, eluyendo con una solución de ácido trifluoroacético en agua al 0.1% v/v (disolvente A) y una solución de ácido trifluoroacético en acetonitfilo al 0.1% v/v (disolvente B), usando el siguiente gradiente de elución: 0-0.1 min 3% de B, 0.1-4.2 min 3-100% de B, 4.2-4.8 min 100% de B, 4.8-4.9 min 100-3% B, 4.9-5.0 min 3% de B, a una velocidad de flujo de 3 ml/min. La detección en UV fue una señal promediada de longitud de onda de 210 nm a 350 nm, y los espectros de masa se registraron en un espectrómetro de masa usando ionización de electroaspersión positiva. Los datos de ionización se redondearon al entero más cercano.
LC/MS (Método G). Se hizo en una columna Acquity UPLC BEH C18 (50mm x 2.1mm DI, 1.7µ?? diámetro de empaque) a 40 grados centígrados, eluyendo con una solución de ácido fórmico en agua al 0.1% v/v (disolvente A) y una solución de ácido fórmico en acetonitrilo al 0.1% v/v (disolvente B), usando el siguiente gradiente de elución: 0-1.5 min 1-97% de B, 1.5-1.9 min 97% de B, 1.9-2.0 min 97% a 100% de B, a una velocidad de flujo de 1 ml/min. La detección en UV fue una señal sumada de longitud de onda de 210 nm a 350 nm. Los espectros de masa se registraron en un espectrómetro de masa Waters ZQ usando electroaspersión positiva y negativa de escaneado alterno. Los datos de ionización se redondearon al entero más cercano.
LC/HRMS: Se hizo HPLC analítica en una columna Uptisphere-hsc (3 m, 33 x 3 mm DI) eluyendo con acetato de amonio 0.01 M en agua (disolvente A) y 100% acetonitrilo (disolvente B), usando el siguiente gradiente de elución: 0-0.5 minutos 5% B, 0.5-3.75 minutos 5 -» 100% de B, 3.75-4.5 minutos 100% de B, 4.5-5 minutos 100 -» 5% de B, 5-5.5 min 5% de B, a una velocidad de flujo de 1.3 ml/minuto. Los espectros de masa (MS) se registraron en un espectrómetro de masa Micromass LCT usando los modos de ionización de electroaspersión positiva [ES + , para dar los iones moleculares MH+], o ionización de electroaspersión negativa [ES-, para dar los iones moleculares (M-H)"].
La TLC (cromatografía en capa delgada) se refiere al uso de placas de TLC vendidas por Merck, recubiertas con gel de sílice 60 F254.
Se hizo "autopreparación dirigida a la masa" / "HPLC preparativa dirigida a la masa" en un sistema como: Waters FractionLynx que comprende una bomba de gradiente Waters 600, un inyector/recolector Waters 2767, un manejador Waters Reagent Manager, un recolector de desecho Gilson Aspee, un detector de UV de post-fracciones Gilson 115 y un Sistema de computación. La columna usada es típicamente una columna Supelco LCABZ++ cuyas dimensiones son 20mm de diámetro interno por 100mm de longitud. El tamaño de partícula de la fase estacionaria es de 5µ??. Se usó una velocidad de flujo de 20 ml/min con ácido fórmico o ácido trifluoroacético al 0.1% en agua (disolvente A) y ácido fórmico o ácido trifluoroacético al 0.1% en acetonitrilo (disolvente B), usando el gradiente de elución apropiado. Los espectros de masa se registraron en un espectrómetro de masa Micromass ZQ usando los modos positivo y negativo de electroaspersión, escaneado alterno. El software usado fue MassLynx 4.0 o sistemas equivalentes alternativos.
Metodología de LCMS Método de formiato (modificador de ácido fórmico) Condiciones de LC: El análisis de UPLC se hizo en una columna Acquity UPLC BEH C18 (50mm x 2.1mm DI, 1.7µ?? diámetro de empaque) a 40°C.
Los disolventes usados fueron: A = solución de ácido fórmico en agua al 0.1% v/v B = solución de ácido fórmico en acetonitrilo al 0.1% v/v El gradiente usado fue.
La detección en UV fue una señal sumada de la longitud de onda de 210nm a 350nm.
Condiciones de MS: MS: Waters ZQ Modo de ionización: Escaneado alterno de electroaspersión positiva y negativa Escala de escaneado: 100 a 1000 AMU Tiempo de escaneado: 0.27s Demora entre escaneados: 0.10s Método de HpH (modificador de bicarbonato de amonio) Condiciones de LC: El análisis de UPLC se hizo en una columna Acquity UPLC BEH C18 (50mm x 2.1mm DI, 1.7µ?t? diámetro de empaque) a 40°C.
Los disolventes usados fueron: A = carbonato ácido de amonio en agua 10mM, ajustado a pH10 con solución de amoniaco B = acetonitrilo El gradiente usado fue.
La detección en UV fue una señal sumada de la longitud de onda de 210nm a 350nm.
Condiciones de MS: MS: Waters ZQ Modo de ionización: Escaneado alterno de electroaspersión positiva y negativa Escala de escaneado: 100 a 1000 AMU Tiempo de escaneado: 0.27s Demora entre escaneados: 0.10s Método de MDAP Método de formiato (modificador de ácido fórmico) Condiciones de LC: El análisis de HPLC se hizo en una columna Sunfire C18 (100mm x 19mm DI, 5pm diámetro de empaque), o en una columna Sunfire C18 (150mm x 30mm DI, 5 ¡m diámetro de empaque) a temperatura ambiente.
Los disolventes usados fueron: A = solución de ácido fórmico en agua al 0.1% v/v B = solución de ácido fórmico en acetonitrilo al 0.1% v/v Se corrió como gradiente durante 15 o 25 min (corrida extendida) con una velocidad de flujo de 20 ml/min (100mm x 19mm DI, 5µ?? diámetro de empaque), o 40 ml/min (150mm x 30mm DI, 5pm diámetro de empaque).
La detección en UV fue una señal sumada de la longitud de onda de 210nm a 350nm.
Condiciones de MS: MS: Waters ZQ Modo de ionización: Escaneado alterno de electroaspersión positiva y negativa Escala de escaneado: 100 a 1000 AMU Tiempo de escaneado: 0.50s Demora entre escaneados: 0.20s Método de HpH (modificador de bicarbonato de amonio) Condiciones de LC: El análisis de HPLC se hizo en una columna Xbridge C18 (100mm x 19mm DI, 5µ?? diámetro de empaque), o en una columna Xbridge C18 (100mm x 30mm DI, 5µ?t? diámetro de empaque) a temperatura ambiente.
Los disolventes usados fueron: A = bicarbonato de amonio en agua 10mM, ajustado a pH10 con solución de amoniaco B = acetonitrilo Se corrió como gradiente durante 15 o 25 min (corrida extendida) con una velocidad de flujo de 20 ml/min (100mm x 19mm DI, 5µ?? diámetro de empaque), o 40 ml/min (100mm x 30mm DI, 5µ?p diámetro de empaque).
La detección en UV fue una señal sumada de la longitud de onda de 210nm a 350nm.
Condiciones de MS: MS: Waters ZQ Modo de ionización: Escaneado alterno de electroaspersión positiva y negativa Escala de escaneado: 100 a 1000 AMU Tiempo de escaneado: 0.50s Demora entre escaneados: 0.20s Intermediario 1 1 -((2S.4R)-4-Amino-6-bromo-2-metil-3,4-dihidroquinolin-1 (2H)-il)-etanona Una suspensión de cloruro de amonio (41 .2 g , 309 mmol) en DCM (480 mi) a 0 °C y bajo nitrógeno se trató con una solución de ((2S,4R)-1 acetil-6-bromo-2-metil-1 ,2, 3,4-tetrahidroquinolin-4-il)carbamato de isopropilo (30 g , 81 mmol) en DCM (80 mi) por medio de una cánula, y la mezcla resultante se agitó a esta temperatura durante 30 minutos. Después, la mezcla de reacción se trató lentamente con una mezcla de trietilamina ( 1 36 mi, 975 mmol) y metanol (48 mi) mediante una cánula. La torta formada resultante se agitó en acetato de etilo (800 mi), se aisló por filtración y subsiguientemente se dividió entre DCM (800 mi) y solución acuosa saturada de NaHC03 (800 mi). Se le agregó tartráto de sodio y potasio (300 g) y la mezcla resultante se agitó vigorosamente durante 2 h. Las capas se separaron y la capa de DCM se filtró a través de un embudo sinterizado. El filtrado se secó (MgS04) y se concentró al vacío para dar una primera cosecha de 1 -((2S,4R)-4-amino-6-bromo-2-metil-3,4-dihidroquinolin-1 (2H)-il)etanona (19.6 g, 69.2 mmol, 85% de rendimiento) como una espuma amarilla. La fase acuosa se trató adicionalmente con DCM (800 mi) y la mezcla bifásica se agitó durante la noche. Las capas se separaron y la capa orgánica se secó (sobre MgS04) y se concentró al vacío para dar una segunda cosecha de 1 -((2S,4f?)-4-am¡no-6-bromo-2-metil-3,4-dihidroqu¡nolin-1 (2H)-il)etanona (3.4 g , 1 2.01 mmol, 14.78% de rendimiento).
LC S (H pH, 2 mín): tR= 0.77 min; MH+ = 283 (1 Br) .
Intermediario 2 6-(((2S.4/¾)-1 -Acetil-6-bromo-2-met¡l-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-il)-amino)nicotinonitrilo A una mezcla de 1 -((2S,4f?)-4-amino-6-bromo-2-metil-3,4-dihidroquinolin-1 (2H)-il)etanona (para su preparación véase el intermediario 1 ) (2.28 g, 8.05 mmol) y 6-cloronicotinonitrilo (2:231 g , 16.10 mmol) , se le agregó NMP (20 mi), y la mezcla se trató con DIPEA (4.22 mi, 24.16 mmol). La mezcla se dividió entre 2 matraces y cada matraz se inundó con nitrógeno, se selló y se agitó bajo irradiación de microondas a 200 °C por 2 h. Las mezclas de reacción se combinaron y el producto se dividió entre agua y EtOAc. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (x4) y la capa orgánica combinada se lavó con agua (x3) , luego salmuera, y se secó (MgS04), se filtró y se concentró al vacío. El residuo sólido pardo se purificó por cromatografía (EtOAc en gradiente de hexano) para dar el 6-(((2S,4R)-1 -acetil-6-bromo-2-metil-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-il)-amino)nicotinonitrilo como una espuma amarilla pálida ( 1 .940 g , 5.04 mmol, 62.5% de rendimiento).
LCMS (HpH , 2 min): tR= 1 .02 min; MH+ = 386 (1 Br) .
I ntermediario 3 4-((2S,4 ?)-1 -Acet¡l-4-((5-cianopirid¡n-2-il)amino)-2-metil-1.2.3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de metilo A un matraz cargado con 6-(((2S,4f?)-1 -acetil-6-bromo-2-metil-1 ,2, 3,4-tetrahidroquinolin-4-il)amino)nicotinonitrilo (para su preparación véase el intermediario 2) (1000 mg , 2.60 mmol), ácido (4-(metoxicarbonil)fenil)borónico (561 mg, 3.1 1 mmol), tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0) (300 mg , 0.260 mmol) y carbonato de potasio (1076 mg , 7.79 mmol), se le agregó DME (20 mi) y agua (4.0 mi). La mezcla resultante se agitó a 1 00 °C bajo nitrógeno por 1 h, luego se enfrió a temperatura ambiente y se concentró al vació. El residuo se dividió entre EtOAc y agua y las capas se separaron. La fase orgánica se secó (MgS0 ), se concentró al vacío, y el residuo se purificó por cromatografía (columna 1 0 g, gradiente MeOH/DCM), para dar el 4-((2S,4R)-1 -acetil-4-((5-cianopirid¡n-2-il)amino)-2-metil-1 ,2, 3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de metilo como una espuma anaranjada (1 002 mg, 2.275 mmol , 88% de rendimiento).
LCMS (H pH, 2 min): tR= 1 .09 min; MH+ = 441 .
Intermediario 4 Acido 4-((2S.4ff)-1 -acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1.2.3.4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoico Una solución de 4-((2S,4R)-1 -acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)am¡no)-2-metil-1 ,2, 3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de metilo (para su preparación véase el intermediario 3) ( 1 .0 g , 2.270 mmol) en metanol (1 5 mi) , a temperatura ambiente, se trató con una solución acuosa de hidróxido de sodio (2N, 2.27 mi, 4.54 mmol), y la mezcla resultante se agitó a esta temperatura durante 24 h. La mayor parte del MeOH se evaporó al vacío y el residuo acuoso se trató con ácido acético (0.39 mi, 6.81 mmol) , dando un precipitado que se aisló por filtración y se secó al vacío a 40 °C para producir el ácido 4-((2S,4R)-1 -acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1 ,2, 3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoico como un sólido amarillo (820 mg , 1 .923 mmol, 85% de rendimiento).
LCMS (HpH , 2 min): tR= 0.64 min; MH+ = 427.
Intermediario 5 6-(((2S.4R)-1 -Acetil-2-metil-6-(4.4.5.5-tetrametil-1 .3,2-dioxaborolan-2-il)-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-il)amino)nicotinonitrilo A un matraz cargado con 6-(((2S,4ft)-1 -acetil-6-bromo-2-metil-1 , 2,3,4-tetrahidroquinolin-4-il)amino)nicotinonitrilo (para su preparación véase el intermediario 2) (847 mg , 2. 199 mmol), bis(pinacolato)diboro (1 228 mg, 4.84 mmol), PdCI2 (dppf) (161 mg , 0.220 mmol) y acetato de potasio (324 mg , 3.30 mmol), se le agregó DMSO (7 mi); la mezcla se desgasificó bajo nitrógeno y se agitó bajo nitrógeno por 1 h a 80 °C. Se le agregaron más porciones de bis(pinacolato)diboro ( 1 g) , PdCI2 (dppf) (1 00 mg) y acetato de potasio (1 50 mg) y la mezcla se agitó durante 45 min. Se le agregaron más porciones de bis(pinacolato)diboro (1 g) , PdCI2 (dppf) ( 1 00 mg) y acetato de potasio (1 50 mg) y la mezcla se agitó durante 45 min. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se trató con EtOAc y agua. La fase bifásica se filtró a través de una almohadilla de Celite™ (10 g) y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (x2) y la capa orgánica combinada se lavó con agua (x4), luego salmuera; se secó (MgS04) y se concentró al vacío. La purificación del residuo por cromatografía [columna 50 g, gradiente de EtOAc/hexano] produjo el 6-(((2S,4R)-1 -acetil-2-metil-6-(4,4,5,5-tetrametil-1 ,3,2-dioxaborolan-2-il)-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-il)amino)-nicotinonitrilo como una goma roja (800 mg, 1.850 mmol, 84% de rendimiento).
LC S (formiato, 2 min): tR= 1.08 min; MH+ = 433.
Intermediario 6 6-((2S,4 ?)-1 -Acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)am¡no)-2-metil-1.2.3,4-tetrahidroquinolin-6-il)nicotinato de metilo A un matraz cargado con 6-(((2S,4ft)-1 -acetil-2-metil-6-(4,4,5,5-tetra metí 1-1 ,3,2-dioxaborolan-2-il)-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-il)amino)-nicotinonitrilo (para su preparación véase el intermediario 5) (800 mg, 1.850 mmol), 6-bromonicotinato de metilo (440 mg, 2.036 mmol), carbonato de potasio (767 mg, 5.55 mmol) y tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0) (214 mg, 0.185 mmol), se le agregó tolueno (8 m i) y etanol (8 mi) . La mezcla resultante se agitó a 90 °C bajo nitrógeno durante 3 h , al final de las cuales se le agregaron porciones de carbonato de potasio (384 mg), tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0) ( 107 mg) y 6-bromonicotinato de metilo (220 mg), y la mezcla de reacción se siguió agitando por 5 h . La mezcla luego se enfrió a temperatura ambiente y se concentró al vacío. El residuo se dividió entre EtOAc y agua. Las fases se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc. La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó (MgS04) y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía [columna 25 g, gradiente de EtOAc/hexano], para dar el 6-((2S,4R)-1 -acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1 ,2,3,4-tetrahidroqu inol i n-6-il)n icoti nato de eti lo como una espuma blanca (600 mg , 1 .317 mmol, 71 .2% de rendimiento).
LC S (HpH , 2 min): tR= 1 .07 m in ; MH+ = 456.
Intermediario 7 Acido 6-((2S,4/?)-1 -Acetil-4-((5-cianopirid¡n-2-il)amino)-2-metil-1.2.3.4-tetrahidroqu inolin-6-il)nicotínico Una solución de 6-((2S,4f?)-1 -acetil-4-((5-c¡anopiridin-2-il)am¡no) 2-met¡l-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)n¡cot¡nato de metilo (para su preparación véase el intermediario 6) (580 mg, 1 .273 mmol) en etanol (10 mi), se trató con una solución acuosa de hidróxido de litio (1N, 2.55 mi, 2.55 mmol), y la mezcla resultante se agitó durante 2 h. La mayor parte del etanol se evaporó al vacío y el residuo se diluyó con agua (aprox. 5 mi). La mezcla turbia se trató con ácido acético (0.146 mi, 2.55 mmol) y el precipitado formado se aisló por filtración, se lavó con Et20 y se secó a 60 °C por 16 h, para dar el ácido 6-((2S,4fi)-1^acétil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)-; nicotínico como un sólido amarillo pálido (410 mg, 0.959 mmol, 75% de rendimiento), que se usó en el siguiente paso sin más purificación.
LCMS (HpH, 2 min): tR= 0.63 min; MH+ = 428.
Intermediario 8 2-(4-((2S.4/?)-1-Acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil- 1,2 ,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)fenil)acetato de etilo A una solución de 6-(((2S,4R)-1-acetil-2-metil-6-(4,4,5,5-tetra metí 1-1 ,3,2-dioxaborolan-2-il)-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-il)amino)-nicotinonitrilo (para su preparación véase el intermediario 5) (1.67 g, 3.86 mmol), 2-(4-bromofen¡l)acetato de etilo (1.127 g, 4.64 mmol) y carbonato de potasio (1.602 g, 11.59 mmol) en tolueno (10 mi) y etanol (10.0 mi), se le agregó tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0) (0.446 g, 0.386 mmol) bajo nitrógeno. La mezcla de reacción se calentó a 100 °C por 1 h, luego se dividió entre EtOAc y agua. Las capas se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (x3). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó (MgS04), se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía de vaporización instantánea sobre gel de sílice (25 g), eluyendo con un gradiente de EtOAc/cicIohexano (10 a 80 %). Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron al vacío para dar el 2-(4-((2S,4fí)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)fenil)acetato de etilo como un aceite viscoso incoloro (752 mg, 42%).
LC S (formiato, 2 min): tR= 1 .10 min; MH+ = 469.
Intermediario 9 Sal de litio del ácido 2-(4-((2S,4?)-1 -acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1.2.3.4-tetrahidroquinolin-6-il)fenil)acético A una solución de 2-(4-((2S,4f?)-1 -acetil-4-((5-cianopiridin-2- il)amino)-2-metil-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)fenil)acetato de etilo (para su preparación véase el intermediario 8) (300 mg, 0.640 mmol) en metanol (5 mi), se le agregó una solución de hidróxido de litio (0.768 mi, 0.768 mmol). La mezcla resultante se agitó a 40 °C por 2 h, después de lo cual se concentró al vacío para dar el carboxilato de litio crudo del ácido 2-(4-((2S,4f?)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)fenil)acético como un sólido blanco (286 mg, 100%), que se usó en el siguiente paso sin más purificación.
LCMS (formiato, 2 min): tR= 1.10 min; MH+ = 433.
Intermediario 10 Acido 3-(4-((2S.4 ?)-1 -acetil-4-((S-cianopiridin-2-il)amino)-2-met¡l-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)fenil)propanoico A una solución de 6-(((2S,4R)-1 -acetil-2-metil-6-(4, 4,5,5-tetrametil-1 ,3,2-dioxaborolan-2-il)-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-il)amino)-nicotinonitrilo (para su preparación véase el intermediario 5) (382 mg, 0.884 mmol) y ácido 3-(4-bromofenil)propanoico (243 mg, 1 .060 mmol) en tolueno (6 mi) y etanol (6 mi), se le agregó sucesivamente tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0) (102 mg, 0.088 mmol) y carbonato de potasio (366 mg, 2.65 mmol). La mezcla resultante se agitó a 80 °C por 2 h, luego se dividió entre agua y EtOAc. Las capas se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (x3). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó (MgS04), se filtró y se concentró al vacío. El residuo crudo se purificó por cromatografía de vaporización instantánea sobre gel de sílice (25 g), eluyendo con EtOAc en ciclohexano (10-70%). Las fracciones apropiadas se combinaron y el producto se concentró bajo presión reducida para dar el ácido 3-(4-((2S,4f?)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)fenil)propanoico como un sólido blanco (209 mg, 52%).
LCMS (formiato, 2 min): tR= 0.91 min; MH+ = 455.
Intermediario 11 Carbamato de 1-metiletil (2E)-2-butenoilo En un recipiente Lara de 3L se cargó carbamato de isopropilo (30 g, 291 mmol, disponible de TCI) y se le agregó tetrahidrofurano (THF) seco (150 mi). Se le agregó bajo nitrógeno cloruro de (2E)-2-buténoilo (31.2 mi, 326 mmol, disponible de Aldrich) y la camisa se enfrió a -30 °C. Cuando la temperatura de la solución alcanzó -17 °C, se le agregó ter-butóxido de litio (1 M, 655 mi, 655 mmol) por medio de una bomba peristáltica durante 2 h, manteniendo la temperatura de la reacción entre -10 °C y -18 °C. Una vez que se terminó la adición, la mezcla se agitó 30 min y se llevó a 0 °C. Se le agregó éter dietílico (450 mi) y ácido clorhídrico (1M, 375 mi), y la mezcla se llevó a 20 °C con agitación vigorosa. La agitación se detuvo, las capas se dejaron separar y la capa acuosa se vació. Se le agregó salmuera (375 mi) y la mezcla se agitó vigorosamente. La agitación se detuvo, las capas se dejaron separar y la capa acuosa se vació. La capa orgánica se secó (MgS04), se filtró y se evaporó hasta dejar un aceite pardo (60 g). Este se aplicó a una columna de sílice (40+M Biotage) y se eluyó con DCM/acetato de etilo (1:1 a 0:1, 10CV). Las fracciones que contenían producto se evaporaron hasta sequedad y se cargaron en una columna de sílice Redisep Isco (1500 g), y se eluyó con un gradiente de acetato de etilo en ciclohexano (0-40%). Las fracciones limpias que contenían producto se evaporaron hasta dejar un sólido blanquecino (15.41 g).
LCMS (Método C): tR = 0.68, MH+ = 172.
Intermediario 12 (3S)-3-r(4-Bromofenil)am¡no1butano¡l}carbamato dé 1-metiletilo El (2E)-2-butenoilcarbamato de 1-metiletilo (para su preparación véase el intermediario 11) (9.38 g, 54.8 mmol) se agitó en tolueno (281 mi) bajo nitrógeno y se le agregó (R-BINAP)ditriflatobis(acetonitrilo)paladio(ll) (intermediario 24, 3.35 g, 3.01 mmol). El catalizador formó una bola gomosa, la solución se volvió una mezcla amarilla opaca y se agitó durante 20 min. Se le agregó 4-bromoanilina (14.14 g, 82 mmol); la solución se volvió de color pardo claro transparente y el catalizador gomoso se disolvió más. La mezcla se agitó durante 16 h. Similarmente, un segundo lote de (2E)-2-butenoilcarbamato de 1-metiletilo (intermediario 11, 8.51 g, 49.7 mmol) se agitó en tolueno (255 mi) bajo nitrógeno y se le agregó (R-BINAP)ditriflatobis(acetonitrilo)paladio(ll) (3.04 g, 2.73 mmol). El catalizador formó una bola gomosa, la solución se convirtió en una mezcla amarilla opaca y se agitó durante 20 min. Se le agregó 4-bromoanilina (12.83 g, 74.6 mmol); la solución se volvió de color pardo claro transparente y el catalizador gomoso se disolvió más. La mezcla se agitó durante 16 h. Las dos mezclas de reacción se combinaron y el producto se cargó en una columna Isco Redisep de sílice de 1.5 kg. La columna se eluyó con DCM/MeOH (0% -» 0.5%, 19 CV). Las fracciones limpias que contenían producto se evaporaron hasta dejar un aceite pardo pálido. La mezcla se secó en un horno de vacío durante la noche a 40 °C para dar un sólido blanco (24.2 g, 67% en total).
LCMS (Método C): tR = 0.91, MH+ = 343; ee = 92%.
Intermediario 1 3 r(2S,4fl)-6-Bromo-2-metil-1 ,2.3,4-tetrah idro-4-quinolinillcarbamato de 1 -metiletilo El {(3S)-3-[(4-bromofenil)amino]butanoil}carbamato de 1 -metiletilo (para su preparación véase el intermediario 1 2) (1 7.9 g , 52.2 mmol) se tomó en etanol (1 50 mi) y se enfrió a menos de -1 0 "C (temperatura interna) en un baño de C02/acetona. Se le agregó NaBH (1 .381 g ; 36.5 mmol) seguido por cloruro de magnesio hexahidrato ( 1 1 .35 g , 55.8 mmol) en agua (25 mi) , manteniendo la temperatura por abajo de -5 °C. La mezcla se dejó agitando a < 0 °C durante 1 h y luego se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 1 h. La suspensión espesa resultante se vació en una mezcla de ácido cítrico (25.05 g, 1 30 mmol), HCI ( 1 M en agua, 205 mi, 205 mmol) y DCM (205 mi). La mlezcla bifásica se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Las capas se separaron y la capa orgánica se secó con Na2S04, se filtró y se concentró para producir el producto como un sólido pardo claro (14.;1 g).
LCMS (Método B): tR = 1 . 1 3, MH+ = 327.
I ntermediario 14 r( 2S.4R)-1 -Acetil-6-bromo-2-metil-1 .2.3.4-tetrahidro-4-quinolinilicarbamato de 1 -metiletilo El [(2S,4R)-6-bromo-2-metil-1 ,2, 3,4-tetrahidro-4-quinolinil]-carbamato de 1 -metiletilo (para su preparación véase el intermediario 13) ( 14. 1 g, 43. 1 mmol) se tomó en DCM (400 mi) bajo nitrógeno a temperatura ambiente. Se le agregó piridina (1 0.46 mi, 129 mmol), luego cloruro de acetilo (4.60 mi, 64.6 mmol), y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h; luego se dividió entre EtOAc (2000 mi) y una solución acuosa saturada de NaHC03 (800 mi) . Las capas se separaron y la fase orgánica se lavó con agua, luego salmuera (1 500 mi cada una), y luego se secó con Na2S04 y se concentró al vacío para producir un sólido púrpura. El producto crudo se tomó en un mínimo de DCM y se aplicó a una columna Companion XL de 330g y se eluyó con un gradiente de acetato de etilo 1 2-63% en ciclohexano para dar el producto como un sólido blanquecino ( 1 2.37 g).
LCMS (Método B) : tR = 1 .03, MH+ = 369. [alfa]D = +281 . 1025° (T = 20.7°C, celda 1 0mm, c= 0.508g/100 mi, etanol).
Intermediario 1 5 4-T(2S.4R)-1 -Acetil-2-met¡l-4-({r(1 -metiletil)ox¡1carbonil)amiino)-1.2.3.4-tetrahidro-6-quinolin¡nbenzoato de etilo El [(2S,4R)-1 -acetil-6-bromo-2-metil-1 , 2,3,4-tetrahidro-4-quinolinil]carbamato de 1 -metiletilo (para su preparación véase el intermediario 14) (39.0 g, 1 06 mmol) , ácido {4-[(etiloxi)carbonil]fenil}-borónico (22.5 g , 1 1 6 mmol) y tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0) (1 ,83 g , 1 .58 mmol) se mezclaron en DME (430 mi), y la mezcla resultante se trató con Na2C03 acuoso (2N , 21 0 mi , 420 mmol) . La mezcla se desgasificó bajo el vacío del laboratorio con varios enfriamientos rápidos con nitrógeno y luego se agitó a 1 05 °C bajo nitrógeno durante aproximadamente 6 h, antes de dejar enfriar a temperatura ambiente. La mezcla se dividió entre EtOAc y agua y las capas se separaron. La fase acuosa se extrajo con EtOAc y la fase orgánica combinada se lavó con salmuera. La fase orgánica se filtró entonces a través de un cartucho de sílice de 70 g , lavando el cartucho con EtOAc. El filtrado y los lavados combinados se concentraron al vacío. El residuo sé trituró con Et20 y luego se separó por filtración. El sólido obtenido se secó al aire para dar el 4-[(2S,4R)- 1 -acetil-2-metil-4-({[(1 -metiletil)oxi]carbonil}- amino)-1 ,2,3,4-tetrahidro-6-quinolinil]benzoato de etilo como un sólido gris (35.2 g, 80.2 mmol, 76%). El filtrado se concentró al vacío y el residuo obtenido se trituró con Et20 (aproximadamente 30 mi). El sólido formado se aisló por filtración y se secó al aire para dar el 4-[(2S,4ft)-1-acetil-2-metil-4-({[(1-metiletil)oxi]carbonil}amino)-1 ,2,3,4-tetrahidro-6-quinolinil]benzoato de etilo como un sólido gris (5.96 g, 13.5 mmol, 13%).
LC S (formiato, 2 min): tiempo de retención: 1.16 min; M¡H+ = 439.
Intermediario 16 4-T(2S,4R)-1 -Acetil-4-amino-2-metil-1 ,2,3,4-tetrahidro-6-quinolinillbenzoato de etilo A una suspensión de cloruro de aluminio (10.3 g, 77 mmol) en DCM (160 mi) enfriada con un baño de hielo/agua, se le agregó 4-[(2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-({[(1-metiletil)oxi]carbonil}amino)-1 ,2,3,4-tetrahidro-6-quinolinil]benzoato de etilo (para su preparación véase el intermediario 15) (8.90 g, 20.30 mmol). La temperatura se elevó de 0 °C a aproximadamente 6 °C después de la adición. La mezcla resultante se agitó a aproximadamente 0 °C por 20 min , y luego se trató con una solución de metanol (18 mi) y trietilamina (34 mi , 245 mmol) durante ~30 s. La mezcla resultante se agitó a 0 °C por ~30 min, y luego se dividió entre EtOAc y una solución acuosa saturada de NaHC03.
La misma reacción se hizo en paralelo usando 4-[(2S,4R)-1 -acetil- 2-metil-4-({[(1 -metiletil)oxi]carbonil}amino)-1 ,2, 3,4-tetrahidro-6-quinolinil]benzoato de etilo (para su preparación véase el intermediario 15) (0.89 g 2.030 mmol), cloruro de aluminio (1 .03 g , 7.72 mmol), trietilamina (3.4 mi, 24.53 mmol), DCM (16 mi) y MeOH (1 .3 mi). Los productos de las dos reacciones se combinaron en esta etapa y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante aproxi madame nte 1 0 m i n (vo l u me n tota l : a proxi m ad amente 1 L). La mezcla se filtró a través de Celite™, el residuo insoluble se lavó con EtOAc y u na solución acuosa saturada de NaHC03 y las capas se separaron. La fase acuosa se extrajo con EtOAc y la fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó (frita hidrófoba) y se concentró al vacío, para dar el 4-[(2S,4R)-1 -acetil-4-amino-2-metil-1 ,2, 3,4-tetrahidro-6-quinolinil]benzoato de etilo como un sólido de color crema (6.6 g , 84% -tomando en cuenta la adición del experimento paralelo).
LCMS (formiato, 2 min): tiempo de retención 0.73 min; [M-NH2]+ = 336.
Intermediario 1 7 4-((2S.4f?)-1 -Acetil-4-r(4-clorofen¡naminol-2-metil-1 , 2,3,4-tetrahidro-6-quinolinil)benzoato de etilo El 4-[(2S,4R)-1 -acetil-4-amino-2-metil-1 , 2,3,4-tetrahidro-6-quinoliniljbenzoato de etilo (para su preparación véase el intermediario 16) (6.6 g, 1 8.73 mmol) , 1 -bromo-4-clorobenceno (3.94 g , 20.60 mmol) , bis(dibencilidenacetona)paladio(0) (690 mg, 1 .2 mmol) y [2'-(diciclohexilfosfanil)-2-bifen¡l¡l]dimetilamina (Dave-phos) (590 mg, 1 .499 mmol) se mezclaron en tolueno (1 20 mi), y la mezcla resultante se trató con t-butóxido de sodio (2.52 g , 26.2 mmol). La reacción se desgasificó bajo el vacío del laboratorio con varios enfriamientos rápidos con nitrógeno; se calentó a 70 °C bajo nitrógeno durante 1 6 h , luego se dejó enfriar a temperatura ambiente y se filtró. El residuo ínsoluble se lavó con tolueno y luego Et20. El filtrado y los lavados com binados se lavaron con agua (x2) y luego se sometieron a extracción con ácido clorh ídrico (2N , x20) , dando como resultado la precipitación de un aceite anaranjado que se recolectó con las fases acuosas ácidas. Los extractos ácidos se lavaron con Et20 y la fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó (frita hidrófoba) y se concentró al vació. El residuo se purificó por cromatografía sobre un cartucho de s ílice (330 g) , eluyendo con un gradiente de EtOAc/cicIohexano (5-45%). Las fracciones apropiadas se combinaron y se redujeron hasta sequed!ad al vacío para dar una espuma amarilla pálida. Esta espuma se disolvió en EtOAc (50 mi) y se trató con sílice tiourea funcional (0.56 g , barredor de paladio). La mezcla se agitó a temperatura ambiente (aire atmosférico) por ~20 min y después se dejó a temperatura ambiente durante 16 h . La mezcla se filtró y el residuo insoluble se lavó con EtOAc. El filtrado y los lavados combinados se concentraron al vacío para dar el 4-{(2S,4R)-1 -acetil-4-[(4-clorofenil)amino]-2-metil-1 ,2, 3,4-tetrahidro-6-quinolinil}-benzoato de etilo como un aceite amarillo (3.7 g , 8.0 mmol, 32%).
Intermediario 1 8 Acido 4-f(2S,4f?)-1 -acetil-4-r(4-clorofenil)am¡no1-2-metil- 1.2,3, 4-tetrahidro-6-quinolinil)benzoico El 4-{(2S,4R)-1 -acetil-4-[(4-clorofenil)amino]-2-metil-1 ,2,3,4-tetrahidro-6-quinolinil}benzoato de etilo (para su preparación véase el intermediario 1 7) (5.41 g , 1 1 .69 mmol) se disolvió en etanol ( 1 00 mi) y la solución se trató con una solución acuosa de NaOH (2M, 50 mi, 1 00 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente (aire atmosférico) durante aproximadamente 2 h y luego la mayor parte del etanol se eliminó al vacío. La solución amarilla resultante se diluyó con agua (dando como resultado la formación de un precipitado oleoso amarillo). La fase acuosa se lavó dos veces con DCM (que no disuelve el precipitado previamente formado) , luego se acidificó con ácido clorhídrico (2N) hasta pH 1 y se extrajo con EtOAc (x2) . La fase combinada de EtOAc se lavó con salmuera, se secó (frita hidrófoba) y se concentró al vacío. La espuma amarilla residual se trituró con Et20 durante aproximadamente 1 h. El sólido resultante se aisló por filtración , se lavó con Et20 y se secó al aire, para dar el ácido 4-{(2S,4ft)-1 -acetil-4-[(4-clorofenil)amino]-2-metil- 1 , 2, 3,4-tetrahidro-6-quinoliniljbenzoico como un sólido de color crema (4.41 g , 10. 1 mmol, 87%).
LCMS (HpH): tiempo de retención 1 .08 min; [M-H]- = 433.
Intermediario 1 9 4-((2S,4R)-1 - Acetil-4-((isopropoxicarbonil)amino)-2-metil-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de metilo A una solución de ((2S,4R)- 1 -acetil-6-bromo-2-metil-1 , 2,3,4-tetrahidroquinolin-4-il)carbamato de isopropilo (5 g , 1 3.54 mmol) y 4-(4,4, 5, 5-tetrametil-1 , 3,2-dioxaborolan-2-il)benzoato de metilo (3.90 g , 14.89 mmol) en DME (50 mi) y agua (10.0 mi) , se le agregó sucesivamente paladio tetrakis(trifenilfosfina) ( 1 .565 g , 1 .354 mmol) y carbonato de potasio (5.61 g, 40.6 mmol). La mezcla resultante se agitó 1 h a 1 00 °C, después de lo cual se dejó enfriar a temperatura ambiente y se filtró a través de Celite™. El filtrado se concentró al vacío y el residuo se dividió entre EtOAc y agua. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (x3) y la capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró al vacío. El compuesto crudo se purificó por cromatografía de vaporización instantánea sobre un cartucho de gel de sílice (50 g), eluyendo con EtOAc en ciclohexano (5-60%). Las fracciones apropiadas se combinaron y concentraron bajo presión reducida para dar el 4-((2S,4R)-1 -acetil-4-((isopropoxicarbonil)amino)-2-metil- 1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)- benzoato de metilo como una goma blanca (4.64 g , 81 %).
LCMS (formiato, 2 min): tR= 1 .09 min; MH+ = 425.
Intermediario 20 4-((2S,4R)-1 -Acetil-4-((¡sopropoxicarbonil)amino)-2-metil- 1.2.3.4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de litio A una solución de 4-((2S,4R)-1 -acetil-4- ((isopropoxicarbonil)amino)-2-metil-1 ,2, 3,4-tetrahidroquinolin-6-il)- benzoato de metilo (para su preparación véase el intermediario 1 9) (1 .63 g, 3.84 mmol) en metanol (20 mi), se le agregó hidróxido de litio (4.61 mi, 4.61 mmol). La mezcla resultante se agitó 6h a 40 °C, después de lo cual se concentró bajo presión reducida para dar el 4-((2S,4R)-1 -acetil- 4-((isopropoxicarbonil)amino)-2-metil-1 , 2, 3, 4-tetrah¡droqu¡ noli n-6- il)benzoato de litio (1 .65 g, 100%) , que no se purificó y se usó directamente en el paso subsiguiente.
LCMS (formiato, 2 min) : tR= 0.87, MH+ = 41 1 .
Intermediario 21 Acido 4-((2S,4/?)-1 -acetil-4-((isopropoxicarbonil)amino)-2-metil-1.2.3.4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoico El 4-((2S,4R)-1 -acet¡l-4-((isopropoxicarbonil)amino)-2-met¡l-1 ,2,3,4-tetrah¡droqu¡nolin-6-il)benzoato de litio ( 1 .05 g , 2.52 mmol) (para su preparación véase el intermediario 20) se dividió entre EtOAc y ácido clorh ídrico (2M). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (x3). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre MgS0 , se filtró y se concentró al vacío, para dar el ácido 4-((2S,4f?)-1 -acetil-4-((isopropoxicarbonil)amino)-2-metil-1 ,2, 3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoico como un sólido blanco (898 mg , 87%) .
LC S (formiato, 2 min) : tR= 0.87; M H+ = 41 1 .
Intermediario 22 2-(4-((2S,4ff)-1 -Acetil-4-((isopropoxicarbonil)amino)-2-metil-1.2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)fenil)acetato de etilo A un matraz cargado con (4-bromofenil)acetato de etilo (0.174 mi, 1.000 mmol), [(2S,4fi)-1-acetil-2-metil-6-(4,4,5,5-tetrametil-1 ,3,2-d¡oxaborolan-2-il)-1 ,2,3,4-tetrahidro-4-quinolinil]carbamato dé 1 -metiletilo (416 mg, 1 mmol), carbonato de potasio (415 mg, 3.00 mmol) y PdCI2(dppf) (73.2 mg, 0.100 mmol), se le agregó 1,4-dioxano (6 mi) y agua (2.0 mi), y el matraz se inundó con nitrógeno. La mezcla resultante se agitó bajo irradiación de microondas a 120 °C por 30 min, luego se enfrió a temperatura ambiente. La mayor parte del dioxano se eliminó al vacío y el residuo se dividió entre EtOAc y agua. Las capas se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc. La capá orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04 y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía (columna 25 g, MeOH/DC ) para dar el 2-(4-((2S,4f?)-1 -acetil-4-((isopropoxicarbonil)-amino)-2-metil-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)fenil)acetato de etilo (270 mg, 59.7% de rendimiento). Este compuesto se usó en el siguiente paso sin más purificación.
LCMS (HpH , 2 min): tR= 1 .16; MH+ = 453.
Intermediario 23 Acido 2-(4-((2S.4ff)-1 -acetil-4-(( isopropoxicarbonil)amino)-2-metil-1.2.3.4-tetrahidroquinolin-6-ihfenihacético A una solución de {4-[(2 S,4R)-1 -acetil-2-metil-4-({[( 1 -metiletil)oxi]-carbonil}amino)-1 ,2, 3,4-tetrahidro-6-quinolinil]fenil}acetato de etilo (para su preparación véase el intermediario 22) (270 mg , 0.597 mmol) en metanol (6 mi) y agua (2.0 mi), se le agregó hidróxido de sodio acuoso (2N , 0.597 mi , 1 .1 93 mmol) a temperatura ambiente, y la mezcla resultante se agitó por 6 h. Se le agregó hidróxido de sodio acuoso (2N , 0.5 mi) y la mezcla se dejó reposar durante la noche. La mayor parte del metanol se eliminó al vacío y el residuo resultante se dividió entre agua y Et20 y las capas se separaron . La capa acuosa se acidificó con ácido clorhídrico (2N, 2 mi) y se extrajo dos veces con EtOAc. La fase orgánica combinada se secó sobre MgS04 y se concentró al vacío para dar el ácido {4-[(2S,4f?)-1 -acetil-2-metil-4-({[( 1 -metiletil)oxi]cárbonil}-amino)-1 ,2, 3,4-tetrahidro-6-quinolinil]fenil}acético como una espuma parda (200 mg , 0.471 mmol, 79% de rendimiento) . Este compuesto se usó en el siguiente paso sin más purificación.
LCMS (HpH, 2 min): tR= 0.65, MH+ = 425.
Intermediario 24 (R-BINAP)ditriflatobis(acetonitrilo)paladio(in El R-( + )-BINAP (6.08 g, 9.76 mmol, disponible de Avocado) se agitó en DCM (626 mi) y se le agregó diclorobis(acetonitrilo)paladio (II) (2.5 g, 9.64 mmol, disponible de Aldrich). La mezcla se agitó bajo nitrógeno por 30 min; la suspensión no se hizo solución y se le agregó más DCM (100 mi). La mezcla se agitó 30 min más y se le agregó triflato de plata (5.00 g, 19.47 mmol, disponible de Aldrich) disuelto en acetonitrilo (250 mi). La mezcla cambió de una suspensión turbia anaranjada a una suspensión amarilla. La mezcla se agitó 1 h, se filtró a través de Celite™ y se evaporó hasta dejar un sólido anaranjado. El residuo se secó al vacío (a aproximadamente 14 mbar) a temperatura ambiente durante el fin de semana, para dar el producto deseado (10.69 9)· 1H RMN (400 MHz, MeCN-d3) d ppm 2.0 (s, 6 H), 6.7 (d, 2H), 6.9 (br m, 4H), 7.1 (br t, 2H), 7.2 (t, 2H), 7.5 - 7.9 (m, 22H).
Ejemplo 1 Clorhidrato de 4-((2S,4ft)-1 -acetil-4-((4-clorofen¡namino)-2-meti 1-1 ,2.3.4-tetrahidroqu i nolin-6-il)benzoato de 2- (dimetilamino)etilo El ácido 4-{(2S,4R)-1 -acet¡l-4-[(4-clorofenil)amino]-2-metil-1 , 2,3,4-tetrahidro-6-quinolinil}benzoico (para su preparación véase el intermediario 1 8 ( 100 mg, 0.230 mmol) se suspendió en DCM ( 1 mi). Se le agregó DMAP (33.7 mg, 0.276 mmol) y DCC (52.2 mg , 0.253 mmol) y la mezcla se agitó 5 min, produciendo una solución amarilla clara. Subsiguientemente se le agregó 2-(dimetilamino)etanol (20.5 mg, 0.230 mmol) en DCM (0.5 mi) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se diluyó con DCM (8.5 mi) y se lavó con NaOH (2N), agua y salmuera (1 0 mi de cada una) ; luego se secó con Na2S0 , se filtró y se concentró al vacío para producir un semi$ólido blanquecino. El producto crudo se disolvió en un volumen m ínimo de DCM (con unas gotas de MeOH para ayudar a la solubilidad) y se aplicó a un cartucho de 25 g. El cartucho se secó al vacío a 40 °C por 1 h, luego se eluyó con NH3 2M en metanol 1 % /DCM por 2CV, luego N H3 2M en metanol 1 -5% en DCM por 10CV, luego se mantuvo a 5% por 5CV.
Las fracciones apropiadas se concentraron al vacío para producir el producto de amina libre (18.8 mg) como un aceite claro. Este se tomó en un mínimo de DCM y se le agregó HCI en Et20 (1N, 0.19 mi, 0.190 mmol) y el disolvente se evaporó bajo una corriente de nitrógeno. Se le agregó una cantidad pequeña de Et20 (~1 mi) y se evaporó bajo nitrógeno para producir el clorhidrato de 4-{(2S,4/:?)-1 -acetil-4-[(4-clorofenil)amino]-2-metil-1 ,2,3,4-tetrahidro-6-quinolinil}benzoato de 2-(dimetilamino)etilo como un sólido blanco (76.7 mg, 0.135 mmol, 58.6% de rendimiento).
LCMS (formiato, 2 min): tR= 0.91 min; MH+ = 506. 1H RMN (DMSO-d6): d 1.16 (3H, d), 1.30 (1 H, m), 2.21 (3H, s), 2.65-2.74 (7H, m), 3.24 (2H, m), 4.36 (1H, m), 4.56 (2H, m), 4.76 (1 H, m), 6.38 (1 H, d), 6.80 (2H, d), 7.19 (2H, d), 7.52 (1H, s), 7.54 (1H, d), 7.72 (1H, dd), 7.77 (2H, d), 8.13 (2H, d), 9.92 (1 H, bs).
Ejemplo 2 Formiato de 2-((4-((2S,4R)-1 -acetil-4-((4-clorofenil)amino)-2-metil-1.2,3.4-tetrahidroquinolin-6-ihbenzoil)oxi)- V,A .<V-trimetiletanaminio A una solución de ácido 4-{(2S,4R)-1 -acetil-4-[(4-clorofenil)am ino]-2-metil-1 , 2,3,4-tetrahidro-6-quinolinil}benzoico (para su preparación véase el intermediario 1 8) (200 mg , 0.460 mmol) en DMF (5 mi), se le agregó sucesivamente K2C03 (95 mg, 0.690 mmol) y bromuro de (2-bromoetil)trimetilamonio ( 1 70 mg , 0.690 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche, después de lo cual se concentró bajo presión reducida. El residuo se disolvió en una mezcla de MeOH/DMSO 1 : 1 y se purificó por medio de M DAP (formiato) . Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron al vacío para dar el formiato de 2-((4-((2S,4R)-1 -acetil-4-((4-clorofenil)amino)-2-metil-1 , 2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoil)oxi)-/V,/V, /V-trimetiletanaminio como un sólido blanquecino (1 33 mg, 51 %).
LCMS (formiato, 2 min): tR= 0.89 min; MH+ = 520.
Ejemplo 3 Formiato de 3-((4-((2S.4R)-1 -acetil-4-((4-clorofenil)amirio)-2-metil-1.2.3.4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoil)oxi)-A/,A.A-trimetilpropan-1 -aminio El ácido 4-{(2S,4ft)-1-acetil-4-[(4-clorofenil)amino]-2-metil-1 ,2,3,4-tetrahidro-6-quinolinil}benzoico (para su preparación véase el intermediario 18) (150 mg, 0.345 mmol), se disolvió en DMF (3 mi) y se le agregó K2C03 (47.7 mg, 0.345 mmol) y luego bromuro de 3-bromo-/V,/V,A/-trimetil-1-propanaminio (90 mg, 0.345 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche, después de lo cual la mezcla de reacción se concentró al vacío y se purificó por medio de MDAP (formiato) para dar el formiato de 3-{[(4-{(2S,4ft)-1-acetil-4-[(4-clorofenil)amino]-2-metil-1 ,2,3,4-tetrahidro-6-quinolinil}fenil)carbonil]oxi}-/\/,/\/,/\/-trimetil-1-propanaminio como un aceite amarillo (41 mg, 0.064 mmol, 19% de rendimiento).
LCMS (formiato, 2 min): tR= 0.86 min; MH+ = 534.
Ejemplo 4 4-í(2S.4/? -1 -Acetil-4-((4-clorofenil)ami no)-2-metil-1.2.3.4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de 3-(dimetilamino)propilo A una solución de ácido 4-{(2S,4R)-1 -acetiU4-[(4-clorofenil)amino]-2-metil-1 ,2,3,4-tetrahidro-6-quinolinil}benzoico (para su preparación véase el intermediario 1 8) (250 mg , 0.575 mmol) en DMF (1 0 mi), se le agregó sucesivamente 3-(dimetilamino)-1 -propanól (71 .2 mg, 0.690 mmol) , EDC (220 mg, 1 .1 50 mmol) y DMAP (7.0 mg, 0.057 mmol) . La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche, luego se concentró al vacío, se disolvió en una mezcla de MeOH/DMSO 1 : 1 y se purificó por medio de MDAP (HpH). Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron bajo , presión reducida para dar el 4-((2S,4R)-1 -acetM-4-((4-clorofenil)amino):2-metil-1 ,2, 3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de 3-(dimetilam ino)propilo como un aceite viscoso incoloro (41 mg, 1 7%) .
LCMS (formiato, 2 min): tR= 0.94 min ; MH+ = 520.
Ejemplo 5 6-((2S.4f?)-1-Acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2.3.4-tetrahidroquinolin-6-il)nicotinato de 3-(dimetilamino)propilo A una solución de ácido 6-((2S,4R)-1 -acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1 ,2,3,4-tetrahidroquinol¡n-6-il)nicotínico (para su preparación véase el intermediario 7) (100 mg, 0.234 mmol) en DMF (5 mi), se le agregó 3-(dimetilamino)-1-propanol (121 mg, 1.170 mmol), EDC (90 mg, 0.468 mmol) y DMAP (2.86 mg, 0.023 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche; la mezcla de reacción se concentró al vacío, se disolvió en una mezcla de MeOH/DMSO 1:1 y se purificó por medio de DAP (HpH). Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron bajo presión reducida para dar el 6-((2S,4f?)-1-acetM-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1 ,2,3, 4-tetrahidroquinolin-6-il)nicotinato de 3-(dimetilamino)prop¡lo como un aceite incoloro (23 mg, 19%).
LCMS (formiato, 2 min): tR= 0.70 min; MH+ = 513.
Ejemplo 6 6-((2S,4R)-1 -Acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1.2.3.4-tetrah id roquín ol i n-6-il)nicoti nato de 2-(dimetilamino)etilo A una solución de ácido 6-((2S,4R)-1 -acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1 ,2 , 3,4-tetrahidroquinolin-6-il)nicotínico (para su preparación véase el intermediario 7) (54 mg , 0.1 26 mmol) en DMF (5 mi), se le agregó K2C03 (26.2 mg, 0.1 89 mmol) y 2-bromo-N ,N-dimetiletanamina (28.8 mg , 0.189 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 3 h ; la mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida y el residuo se disolvió en una mezcla de MeOH/DMSO 1 : 1 y se purificó por medio de MDAP (formiato). Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron al vacío para dar el 6-((2R,4ft)-1 -acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)am ino)-2-metil-1 , 2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)nicotinato de 2-(dimetilamino)etilo como un aceite viscoso incoloro (16.5 mg, 24%).
LCMS (formiato, 2 min): tR= 0.69 min; MH+ = 499.
Ejemplo 7 4-((2S.4/?)-1 -Acetil-4-((isopropoxicarbonil)amino)-2-metil-1.2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de 3-(dimetilamino)propilo A una solución de ácido 4-((2S,4ft)-1 -acetil-4- ((isopropoxicarbonil)-amino)-2-metil-1 ,2, 3,4-tetrahidroquinolin-6-il)-benzoico (para su preparación véase e l i nterm ed i a rio 21 ) ( 1 64 mg , 0.400 mmol) y 3-(dimetilamino)propan-1 -ol (206 mg , 1 .998 mmol) en DMF (3 mi), se le agregó clorhidrato de N1 -((et¡lim¡no)metilen)-/V3, W3-dimetilpropano-1 ,3-diamina (1 53 mg, 0.799 mmol) y ?/, A/-dimetilpiridin-4-amina (4.88 mg , 0.040 mmol) . La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h; la mezcla de reacción se diluyó con agua y se le agregó EtOAc. Las capas se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (x3). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se disolvió en una mezcla de MeOH/DMSO 1 : 1 y se purificó por medio de MDAP (HpH) . Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron bajo presión reducida para dar el 4-((2S,4f?)-1 -acetil-4-((¡sopropoxicarbon¡l)amino)-2-metil-1 ,2, 3,4-tetrahidroquinolin-6-il)-benzoato de 3-(dimetilamino)propilo como un aceite viscoso incoloro (29.3 mg .1 5%) .
LC S (formiato, 2 min) : tR= 0.75 min; MH+ = 476.
Ejemplo 8 4-((2S,4fl)-1 -Acetil-4-((isopropoxicarbonil)amino)-2-metil- 1.2.3.4-tetrahidroqu inolin-6-il)benzoato de 2-(dimetilamino)etilo A una solución de 4-((2S,4R)-1 -acetil-4- ((isopropoxicarbonil)amino)-2-metil-1 ,2,3,4-tetrah id roquín olin-6-il)-benzoato de litio (para su preparación véase el intermediario 20) (246 mg , 0.591 mmol) y 2-bromo-/ /, A/-dimetiletanamina ( 1 35 mg , 0.886 mmol) en DMF (5 mi) , se le agregó carbonato de potasio ( 1 22 mg , 0.886 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h; la mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida. El residuo se disolvió en una mezcla de MeOH/DMSO 1 : 1 y se purificó por medio de MDAP (formiato) . Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron al vacío para dar el 4-((2S,4R)-1 -ácetil-4-((isopropoxicarbonil)amíno)-2-metil-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)-benzoato de 2-(dimetilamino)etilo como un aceite viscoso incoloro (14.5 mg, 5%).
LCMS (formiato, 2 min): tR= 0.72 min; MH+ = 482.
COMPUESTOS DE REFERENCIA Compuesto de referencia A: 2-Metil-6-(metilox¡)-4/-/-3.1 -benzoxazin-4-ona Una solución de ácido 5-metoxiantran ílico (Lancaster) (41 .8 g , 0.25 mol) se puso a reflujo en anh ídrido acético (230 mi) durante 3.5 h antes de concentrarse bajo presión reducida. Después, el compuesto crudo se concentró dos veces en presencia de tolueno antes de filtrarse y lavarse dos veces con éter, para producir el compuesto del título como un sólido pardo (33.7 g, 71 % de rendimiento) .
LC/MS (Método D) : m/z 1 92 [M+H]+; tR= 1 .69 min.
Compuesto de referencia B: r2-Amino-5-(metiloxi)fehil1(4-clorofeniDmetanona A una solución de 2-metil-6-(met¡loxi)-4H-3, 1 -benzoxazin-4-ona (para su preparación véase el compuesto de referencia A) (40.0 g , 0.21 mol) en una mezcla de tolueno/éter (2/1 ) (760 mi) a 0°C se le agregó a gotas una solución de bromuro de 4-clorofenilmagnesio ( 1 70 m|, 1 M en Et20, 0.1 7 mol) . La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó 1 h antes de apagar con HCI 1 N (200 mi). La capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 1 50 mi) y la capa orgánica combinada se lavó con salmuera ( 100 mi), se secó sobre Na2S04, se filtró y se concentró bajo presión reducida. Después, el compuesto crudo se disolvió en EtOH (400 mi) y se le agregó HCI 6N ( 160 mi). La mezéla de reacción se puso en reflujo por 2 h antes de concentrarse hasta su tercera parte en volumen. El sólido resultante se filtró y se lavó dos veces con éter antes de suspenderse en EtOAc y neutralizarse con NaOH 1 N . La capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 150 mi) y la capa orgánica combinada se lavó con salmuera (1 50 mi) , se secó sobre Na2S04, se filtró y se concentró bajo presión reducida. El compuesto del título se obtuvo como un sólido amarillo (39 g , 88% de rendimiento); LC/MS (Método D): m/z 262 [M+H] + ; tR 2.57 min.
Compuesto de referencia C : /Vf-r(AClorofenil)carbonin4-(met¡lox¡)fen¡n-/V2-(r(9H-fluoren-9-ilmetil)oxi1carbonil)-L-a-asparaqinato de metilo Se disolvió cloruro de A/-{[(9H-fluoren-9-ilmetil)oxi]carbonil}-L-a-aspartilo (Int. J. Peptide Protein Res. 1 992, 40, 13- 18) (93 g, 0.24 mol) en CHCI3 (270 mi) y se le agregó [2-amino-5-(metiloxi)fenil](4-clorofen¡l)metanona (para su preparación véase el compuesto de referencia B) (53 g, 0.2 mol). La mezcla resultante se agitó a 60°C durante 1 h antes de enfriarse y concentrarse al 60% en volumen. Se le agregó éter a 0°C y el precipitado resultante se filtró y se desechó. El filtrado se concentró bajo presión reducida y se usó sin más purificación.
Compuesto de referencia D: r(3S)-5-(4-Clorofenil)-7-(metiloxi)-2-oxo-2.3-dihidro-1 H-1 .4-benzodiazepi n-3-il1acetato de metilo A una solución de N 1 -[2-[(4-clorofenil)carbonil]-4-(metilox¡)fen¡l]- N2-{[(9H-fluoren-9-ilmetil)oxi]carbonil}-L-a-asparaginato de metilo (para su preparación véase el compuesto de referencia C) (0.2 mol supuestos) en DCM (500 mi) , se le agregó Et3N (500 mi, 3.65 mol), y la mezcla resultante se puso en reflujo por 24h antes de concentrarse. La amina cruda resultante se disolvió en 1 ,2-DCE (1 .5 L) y se le agregó cuidadosamente AcOH ( 1 04 mi, 1 .8 mol) . La mezcla de reacción se agitó entonces a 60°C por 2h antes de concentrarse al vacío y disolverse en DCM. La capa orgánica se lavó con HCI 1 N y la capa acuosa se extrajo con DCM (x3). La capa orgánica combinada se lavó dos veces con agua y salmuera; se secó sobre Na2S04, se filtró y se concentró bajo presión reducida. El sólido crudo se recristalizó en MeCN produciendo el compuesto del título como un sólido amarillo pálido (51 g). El filtrado se pudo concentrar y recristalizar en MeCN para dar otros 10 g del producto deseado.
Rf = 0.34 (DCM/MeOH : 95/5) .
H RMS (M + H)+ calculada para C1 9H 1835CI N204 373.0955; encontrada 373.0957.
Compuesto de referencia E: r(3S)-5-(4-Clorofenil)-7-(metiloxi)-2-tioxo-2.3-dihidro-1 H-1.4-benzodiazepin-3-¡l1acetato de metilo Una suspensión de P4 S 10 (36.1 g, 81 .1 mmol) y Na2C03 (8.6 g, 81 .1 mmol) en 1 , 2-DCE (700 mi) a temperatura ambiente sé agitó durante 2 h antes de agregarle [(3S)-5-(4-clorofenil)-7-(metiloxi)-2-oxo-2, 3-dihidro-1 H-1 ,4-benzodiazepin-3-il]acetato de metilo (para su preparación véase el compuesto de referencia D) (16.8 g, 45.1 mmol). La mezcla resultante se agitó a 70°C durante 2 h antes de enfriarse y filtrarse. El sólido se lavó dos veces con DCM y el filtrado se lavó con solución saturada de NaHC03 y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2S04, se filtró y se concentró bajo presión reducida, El producto crudo se purificó por cromatografía de vaporización instantánea sobre gel de sílice (DCM/MeOH : 99/1 ), para producir el compuesto del título como un sólido amarillento (17.2 g , 98% de rendimiento).
LC/MS (Método D): m/z 389 [M(35CI) + H]+; tR = 2.64 min.
HRMS (M + H)+ calculada para C1 9H1 835CI N203S 389.0727; encontrada 389.0714.
Compuesto de referencia F: r(3S)-2-r(1 Z)-2-Acetilhidrazino1-5-(4-clorofenil)-7-(metiloxi)-3H-1 ,4-benzodiaze pin -3 -MI acetato de metilo A una suspensión de [(3S)-5-(4-clorofenil)-7-(metiloxi)-2-tioxo-2, 3-dihidro-1 H-1 ,4-benzodiazepin-3-il]acetato de metilo (para su preparación véase el compuesto de referencia E (9.0 g , 23.2 mmol) en THF (300 m i) a 0°C, se le agregó a gotas hidrazina monohidrato (3.4 mi, 69.6 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 5h entre 5°C y 15°C antes de enfriarse a 0°C. Después se le agregó lentamente Et3N (9.7 mi, 69.6 mmol) y se le agregó cloruro de acetilo (7.95 mi, 69.6 mmol) gota a gota. Luego la mezcla se dejó calentar a la temperatura ambiente durante 16h antes de concentrarse bajo presión reducida. El producto crudo se disolvió en DCM y se lavó con agua. La capa orgánica se secó sobre Na2S04, se filtró y se concentró al vacío, para dar el compuesto del título crudo (9.7 g, 98% de rendimiento) que se usó sin más purificación. Rf = 0.49 (DCM/MeOH : 90/10).
Compuesto de referencia G: r(4S)-6-(4-Clorofenil)-1 -metil-8-(metí ????)-4??-G1.2, 41 triazolor4,3-aU1, 41 benzodiazepin-4-iH acetato de metilo El [(3S)-2-[(1Z)-2-acetilhidrazino]-5-(4-clorofenil)-7-(metiloxi)-3H-1 ,4-benzodiazepin-3-il]acetato de metilo crudo (para su preparación véase el compuesto de referencia F) (9.7 g supuestos) se suspendió en THF (100 mi) y se le agregó AcOH (60 mi) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a esta temperatura durante 2 días antes de concentrarse bajo presión reducida. El sólido crudo se trituró en /'-Pr20 y se filtró para dar el compuesto del título como un sólido blanquecino (8.7 g, 91% por los 3 pasos).
HRMS (M + H)+ calculada para C21H20CI 4O3 411.1229; encontrada 411.1245.
Compuesto de referencia H: Acido r(4S)-6-(4-clorofenil)-1 -metii-8-(metiloxi)-4H-ri .2.4 riazolor4.3-airi .41benzodiazepin-4^ ¡Hacético A una solución de [(4S)-6-(4-clorofenil)-1 -metil-8-(metiloxí)-4H-[1 ,2,4]triazolo[4, 3-a][1 ,4]benzodiazepin-4-il]acetato de metilo (para su preparación véase el compuesto de referencia G) (7.4 g , 18.1 mmúl) en THF ( 1 30 mi), a temperatura ambiente, se le agregó NaOH 1 N (36, 2 mi, 36.2 mmol). La mezcla de reacción se agitó a esta temperatura durante 5h antes de apagarse con HCI 1 N (36.2 mi) y se concentró al vacío. Después se le agregó agua y la capa acuosa se extrajo con DCM (x3) y la capa orgánica combinada se secó sobre Na2S04, se filtró y se concentró bajo presión reducida, para dar el compuesto del título como un sólido amarillo pálido (7 g , 98% de rendimiento) .
LC/MS (Método D): m/z 397 [M + H]+.
Compuesto de referencia I: r5-((r(4S)-6-(4-Clorofenil)-1-nietil-8-(metiloxi)-4H-ri,2,41triazolof4,3-airi ,41benzodiazepin-4-il1acetil>amino)pentillcarbamato de 1,1-dimetiletilo Una mezcla de ácido [(4S)-6-(4-clorofenil)-1-metil-8-(metiloxií)-4H-[1 ,2,4]triazolo[4,3-a][1 ,4]benzodiazep¡n-4-M]acét¡co (para su preparación véase el compuesto de referencia H) (1.0 g, 2.5 mmol), HATU (1.9 g, 5 mmol) y DIPEA (0.88 mi, 5 mmol), se agitó durante 80 minutos a temperatura ambiente; a esto se le agregó (4-aminobutil)carbamato de 1,1-dimetiletilo (1.05 mi, 5.0 mmol, disponible de Aldrich). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2h antes de concentrarla. El residuo se tomó en diclorometano y se lavó con HCI 1N. La capa acuosa se extrajo con diclorometano dos veces. La capa orgánica se lavó con hidróxido de sodio 1N, seguido por una solución saturada de cloruro de sodio; se secó sobre sulfato de sodio y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía de vaporización instantánea sobre sílice usando diclorometano/metanol 95/5 para dar el compuesto del título como un sólido amarillo (1.2 g).
LC/MS (Método D): tR= 3.04 min.
Compuesto de referencia J : Trifluoroacetato de N-(5-aminopentil)-2-r(4S)-6-(4-clorofenil)-1 -metil-8-(metiloxi)-4H-n .2.41triazolor4.3-ain .41-benzodiazep¡n-4-¡Hacetamida A una solución de [5-({[(4S)-6-(4-clorofenil)-1 -metil-8-(metiloxi)-4H-[ 1 ,2, 4]triazolo[4, 3-a] [ 1 ,4]benzodiazepin-4-il]acetil}amino)pentil]-carbamato de 1 , 1 -dimetíletilo (para su preparación véase el compuesto de referencia I) (0.2 g , 0.34 mmol) en diclorometano (3 mi) se le agregó, gota a gota a 0°C, ácido trifluoroacético (0.053 mi, 0.68 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 3h de 0°C a la temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró hasta sequedad para producir el compuesto del título como un aceite amarillo higroscópico (200mg) LC/MS (Método D): tR = 2.33 min .
HRMS (M + H)+ calculada para C25 H 29C I N602 481 .21 1 9; encontrada 481 .21 62.
Compuesto de referencia K: Mezcla de isómeros 5 y 6 de Alexa Flúor 488-N-(5-aminopentil)-2-r(4S)-6-(4-clorofenil)-1-metil-8- (metiloxi)-4H-ri.2,41-triazolor4.3-ain .41benzodiazepin-4-inacetamida Se disolvió trifluoroacetato de N-(5-aminopentil)-2-[(4S)-6-(4- clorofenil)-1-met¡l-8-(met¡loxi)-4H-[1,2,4]triazolo[4,3-a][1,4]- benzod¡azepin-4-¡l]acetam¡da (para su preparación véase el compuesto de referencia J) (7.65 mg, 0.013 mmol) en ?,?-dimetilformamida (DMF) (300 µ?) y esto se agregó al éster succinimidilo de Alexa Flúor 488 ácido carboxílico (5 mg, 7.77 µ????, mezcla de los isómeros 5 y 6, disponible de Invitrogen, número de producto A-20100) en un tubo de Eppendorf de centrífuga. Se le agregó base de Hunig (7.0 µ?, 0.040 mmol) y la mezcla se agitó con vórtice durante la noche. Después de 18h, la mezcla de reacción se evaporó hasta sequedad y el residuo se volvió a disolver en DMSO/agua (50%, <1 mi total), se aplicó a una columna preparativa Fenomenex Júpiter C18 y se eluyó con un gradiente de 95% A: 5% B a 100% B (A = ácido trifluoroacético al 0.1% en agua, B= TFA 0.1% /90% acetonitrilo/10% agua) a una velocidad de flujo de 10 ml/min durante 1 50 minutos. Las fracciones impuras se combinaron y se volvieron a purificar usando el mismo sistema. Las fracciones se com binaron y se evaporaron para producir el producto del título (2.8 mg) como una mezcla de los 2 regioisómeros mostrados.
LC/MS (Método F): MH+ = 999; tR = 1 .88 min.
Métodos de prueba biológ icos Ensayo de un ión por an isotropía fl uorescente La unión de los compuestos de fórmula (I) a los bromodominios BRD2, BRD3 y BRD4 se puede evaluar usando un ensayo de unión por anisotropía fluorescente.
La proteína de bromodominio, el ligando fluorescente (compuesto de referencia K, véase arriba) y una concentración variable del compuesto de prueba, se incuban juntos para alcanzar el equilibrio termodinámico bajo condiciones tales que, en ausencia del compuesto de prueba, el ligando fluorescente se enlaza significativamente (>50%), y en presencia de una concentración suficiente de un inhibidor potente, la anisotropía del ligando fluorescente no enlazado es mensurablemente diferente del valor del ligando enlazado.
Todos los datos se normalizaron con respecto a la media de 16 pocilios de control alto y 16 de control bajo en cada placa. Después se aplicó un ajuste de curva de cuatro parámetros de la siguiente forma: y = a + ((b-a) / (1 + (1 0??/1 0Ac)Ad) en donde 'a' es el m ínimo, 'b' es la pendiente de HUI, *c' es el pC 150, y 'd' es el máximo.
Los bromodominios humanos recombinantes (BRD2 (1-473), BRD3 (1-435) y BRD4 (1-477)) se expresaron en células de E. coli (en el vector pET15b) con una etiqueta de seis histidinas en el extremo N. El bromodominio etiquetado con histidina se extrajo de las células de E. coli usando lisozima a 0.1 mg/ml y sonicación. Después, el bromodominio se purificó por cromatografía de afinidad sobre una columna HisTRAP HP, eluyendo con un gradiente lineal de imidázol 10-500 mM, por 20 CV. Se hizo purificación adicional por medio de una columna de exclusión de tamaño grado preparativo Superdex 200. La proteína purificada se guardó a -80°C en HEPES 20 mM, pH 7.5, y NaCI 100 mM.
Protocolo para el bromodominio BRD2: Todos los componentes se disolvieron en una composición amortiguadora de HEPES 50 mM, pH 7.4, NaCI 150 mM y CHAPS 0.5 mM, con concentraciones firiajes de BRD2, 75 nM, ligando fluorescente, 5 nM. Se agregaron 10 µ? de esta mezcla de reacción usando una Micro Multidrop a pocilios que contenían 100 ni de varias concentraciones del compuesto de prueba o vehículo de DMSO (1% final) en una placa negra de microtitulación de volumen bajo de 384 pocilios Greiner, y se equilibraron en la oscuridad por 60 minutos a temperatura ambiente. La anisotropía fluorescente se Heyó en Envision (?ß?= 485 nm, ?ß?? = 530 nm; Dicroico - 505 nm).
Protocolo para el bromodominio BRD3: Todos los componentes se disolvieron en una composición amortiguadora de HEPES 50 mM, pH 7.4, NaCI 150 mM y CHAPS 0.5 mM, con concentraciones finales de BRD3, 75 nM, ligando fluorescente, 5 nM. Se agregaron 10 µ? de esta mezcla de reacción usando una Micro Multidrop a pocilios que contenían 100 ni de varias concentraciones del compuesto de prueba o vehículo de DMSO (1% final) en una placa negra de microtitulación de volumen bajo de 384 pocilios Greiner, y se equilibraron en la oscuridad por 60 minutos a temperatura ambiente. La anísotropía fluorescente se leyó en Envision (?ß?= 485 nm, ?ß?? = 530 nm; Dicroico - 505 nm).
Protocolo para el bromodominio BRD4: Todos los componentes se disolvieron en una composición amortiguadora de HEPES 50 mM, pH 7.4, NaCI 150 mM y CHAPS 0.5 mM, con concentraciones finales de BRD4, 75 nM, ligando fluorescente, 5 nM. Se agregaron 10 µ? de esta mezcla de reacción usando una Micro Multidrop a pocilios que contenían 100 ni de varias concentraciones del compuesto de prueba o vehículo de DMSO (1% final) en una placa negra de microtitulación de volumen bajo de 384 pocilios Greiner, y se equilibraron en la oscuridad por 60 minutos a temperatura ambiente. La anisotropía fluorescente se leyó en Envision (?ß?= 485 nm, em = 530 nm; Dicroico - 505 nm).
Ensayo de transferencia de energía por resonancia fluorescente resuelta en el tiempo (TR-FRET) La unión de los compuestos de fórmula (I) a los bromodominios BRD2, BRD3 y BRD4 se evaluó usando un ensayo de unión por medio de transferencia de energía por resonancia fluorescente resuelta en el tiempo, que mide la unión de un péptido de histona acetilada a la proteína de bromodominio. ! La proteína de bromodominio, el péptido de histona y una concentración variable del compuesto de prueba se incuban juntos para alcanzar el equilibrio termodinámico. La prueba se configura de tal manera que, en ausencia del compuesto de prueba, el bromodominio y el péptido se enlazan significativamente (~30%) , y en presencia de una concentración suficiente de un inhibidor potente, esta interacción es interrumpida produciendo una caída mensurable en la transferencia de energ ía de resonancia fluorescente.
Péptido de histona: H-Ser-Gly-Arg-Gly-Lys(Ac)-Gly-Gly-Lys(Ac)-Gly-Leu-Gly-Lys(Ac)-Gly-Gly-Ala-Lys(Ac)-Arg-His-Gly-Ser-Gly-Ser-Lys(Biotina)-OH . 35FA El pé ptid o proteg id o se ensam bló en u n s i ntetizad o r de fase sól id a usando resina de Wang previamente cargada y utilizando los protocolos estándares de síntesis de Fmoc. La Usina C-term inal se protegió por medio de un grupo hipersensible al ácido, permitiendo su separación selectiva al final del ensamble y unión de la biotina. El péptido crudo se obtuvo después de la escisión de la resina con una mezcla de ácido trifluoroacético (TFA) , triisopropilsilano y agua (95:2.5:2.5) durante 3 h a temperatura ambiente, y después se purificó usando una columna C1 8 de fase inversa utilizando un gradiente de amortiguador acuoso-TFA 0.1 % /acetonitrilo. Las fracciones resultantes se analizaron y las fracciones que eran > 95% puras, según una H PLC analítica y que dan el PM correcto (por medio de espectroscopia de masa MALDiTOF), se reunieron y se criodesecaron. El material final se analizó por HPLC para confirmar la pureza.
Producción de proteína: Los bromodominios humanos recombinantes (BRD2 (1-473), BRD3 (1-435) y BRD4 (1-477)) se expresaron en células de E. coli (en el vector pET15b) con una etiqueta de seis histidinas en el extremo N. El bromodominio etiquetado con histidina se extrajo de las células de E. coli usando sonicación, y se purificó usando una columna de níquel Sepharose 6FF; las proteínas se lavaron y luego se eluyeron con Tris-HCI 50 mM, pH 8.0, NaCI 300 nM, ß-mercaptoetanol 1 mM e imidazol 20 mM. Se realizó una purificación adicional por cromatografía de afinidad en una columna HisTRAP HP, eluyendo con un gradiente lineal de cloruro de sodio 0-500 mM, por 20 volúmenes de columna. La purificación final se completó por medio de una columna de exclusión de tamaño grado preparativo Superdex 200. La proteína purificada se guardó a -80°C en HEPES 20 mM, pH 7.5, y NaCI 100 mM. La identidad de la proteína se confirmó por medio de análisis de huella peptídica de la masa del péptido, y el peso molecular pronosticado se confirmó por espectroscopia de masa.
Protocolo para los ensayos de bromodominio BRD2, 3 y 4:. Todos los componentes del ensayo se disolvieron en una composición amortiguadora de HEPES 50 mM, pH 7.4, NaCI 50 mM y CHAPS Ó.5 mM. La concentración final de las proteínas de bromodominio era de 100 nM y del péptido de histona de 300 nM; estos componentes se mezclaron previamente y se dejaron equilibrando una hora en la oscuridad. Se agregaron 8 µ? de esta mezcla de reacción a todos los pocilios que contenían 50 ni de varias concentraciones del compuesto de prueba o vehículo de DMSO (0.5% final) en placas negras de microtitulación de volumen bajo de 384 pocilios Greiner, y se incubaron en la oscuridad por 60 minutos a temperatura ambiente. A todos los pocilios se les agregaron 2 µ? de la mezcla de detección que contenía anticuerpo anti-6his XL665 marcado y estreptavidina marcada con criptato de europio, y se hizo una incubación adicional en la oscuridad de por lo menos 30 minutos. Después, las placas se leyeron en la lectora de placas Envision (?ß?= 317 nm, ?ß?? donador = 615 nm; em aceptor = 665 nm; dicroico LANCE DUAL). Las mediciones de la intensidad de fluorescencia resuelta en el tiempo se hicieron a ambas longitudes de onda de emisión, y se calculó la relación de aceptor/donador y se usó para el análisis de los datos. Todos los datos se normalizaron con respecto a la media de 16 pocilios de control alto y 16 de control bajo en cada placa. Después se aplicó un ajuste de curva de cuatro parámetros de la siguiente forma: y = a + ((b-a) / (1 + (10??/10Ac)Ad) en donde 'a' es el mínimo, '£>' es la pendiente de Hill, 'c' es el pCI50, y 'd' es el máximo.
Los compuestos de los ejemplos 1-8 se probaron en cada uno de los ensayos anteriores y se encontró que tenían un pCI50 en la escala de 6.3-7.2.
Medición de la secreción de IL-6 inducida por LPS en sangre completa La activación de las células monocíticas por agonistas de receptores de tipo Toll, tales como el lipopolisacárido bacteriano (LPS), resulta en la producción de mediadores inflamatorios clave que incluyen IL-6. Estas rutas se consideran ampliamente centrales para la patofisiología de una gama de trastornos autoinmunes e inflamatorios.
Los compuestos por probar se diluyen para dar una gama de concentraciones apropiadas de las cuales se añade 1 µ? de las reservas diluidas a una placa de 96 pocilios. Después de la adición de sangre completa (130 µ?), las placas se incuban a 37 grados (5% C02) durante 30 minutos antes de la adición de 10 µ? de LPS 2.8 Mg/ml, diluido en RPMI 1640 completo (concentración final = 200 ng/ml), para dar un volumen total de 140 µ? por pocilio. Después de una incubación adicional por 24 horas a 37 grados, se agregan 140 µ? de PBS a cada pocilio. Las placas se sellan, se agitan durante 10 minutos y luego se centrifugan (2500 rpm x 10 min). Se retiran 100 µ? del sobrenadante y se determina la concentración de IL-6 por medio de un inmunoensayo (típicamente por medio de tecnología esoScale Discovery), ya sea inmediatamente o después de almacenamiento a -20 grados. Se generaron curvas de concentración-respuesta de cada compuesto a partir de los datos y se calculó un valor de Cl50.
Los compuestos de los ejemplos 1, 2, 3, 5, 6, 7 y 8 se probaron en el ensayo anterior y se encontró que tenían un pCI50 en la escala de 5.5-6.7.
Estos datos demuestran que los inhibidores de bromodominio probados en los ensayos anteriores de sangre completa inhibieron la producción del mediador inflamatorio clave IL-6.
Modelo de endotoxem ia de ratón in vivo Dosis altas de endotoxina (lipopolisacárido bacteriano) administradas a animales producen un síndrome de choque profundo que incluye una respuesta inflamatoria fuerte, desequilibrio de la función cardiovascular, falla de órgano y finalmente la muerte. Este patrón de respuesta es muy similar a la sepsis humana y choque séptico, en donde la respuesta del cuerpo a una infección bacteriana significativa puede ser similarmente una amenaza para la vida.
Para probar los compuestos para usarse en la invención, a grupos de ocho ratones Balb/c machos se les administró una dosis letal dé LPS a 1 5 mg/kg por inyección intraperitoneal. Noventa minutos después los animales recibieron intravenosamente veh ícu lo (20% de ciclodextri na , 1 % de etanol, en agua libre de pirógenos) o compuesto ( 1 0 mg/kg). La supervivencia de los animales se monitoreó a los 4 días.
Ensayo de crecimiento de cél ulas de oncolog ía Se cultivaron líneas celulares humanas (n = 33, que comprenden 1 5 líneas celulares hemo, 14 líneas celulares de mama y otras 4 líneas celulares) en RPM I-1640 que contenía 1 0% de suero fetal bobino; se sembraron 1000 células viables por pocilio en placas negras de poliestireno de fondo plano de 384 pocilios (Greiner #781086) en 48 µ? de medio de cultivo. Todas las placas se pusieron a 5% de CO¿, 37°C, durante la noche. Al d ía siguiente una placa fue cosechada con CelITiter-Glo (CTG, Promega #G7573) durante un tiempo igual a medición 0 (T0), y a las placas restantes se les agregó el compuesto (titulación de 20 puntos de 14.7 ? a 7 pM). La concentración final de DMSO en todos los pocilios era de 0.1 5% . Las células se incubaron 72 horas o el tiempo indicado, y cada placa se desarrolló con el reactivo de CelITiter-Glo usando un volumen equivalente al volumen de cultivo celular en los pocilios. Las placas se agitaron durante aproximadamente 2 minutos y la señal quimioluminiscente se leyó en la lectora de placa Analyst GT (Molecular Devices) o EnVision Píate Reader (Perkin Élmer).
Los resultados se expresan como el porcentaje del TO y se graficaron contra la concentración del compuesto. El valor de TO se normalizó a 1 00% y representa el número de células en el momento de la adición de compuesto, y los datos de concentración-respuesta se ajustaron con un ajuste de curva de 4 parámetros usando el software XLfit (modelo 205). La concentración que inhibió el crecimiento celular en 50% (gCI50) es el punto medio de la 'ventana de crecim iento' (entre el T0 y el control de DMSO). El valor Ymin-T0 se determina restando e valor de T0 (1 00%) del valor Ymin (%) determinado del ajuste de la curva de concentración-respuesta. Los valores de los pocillois sin células se restaron de todas las muestras para corrección del fondo.
Todas las publicaciones citadas en esta especificación,, que incluyen sin limitación patentes y solicitudes de patente, se incorporan en la presente como referencia, como si se indicara especifica e individualmente que cada publicación individual es incorporada por referencia para todo propósito.

Claims (26)

REIVINDICACIONES
1.- Un compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo: 0) en donde: X y Y son, independientemente, CH o N, con la condición de que por lo menos uno de X y Y debe ser CH; R1 es un grupo C(0)OR4 en donde R4 es alquilo de d-4 o cicloalquilo de C3.7; o R1 es un grupo seleccionado de fenilo, piridilo, pirazinilo y pirimidinilo, dichos grupos sustituidos opcionalmente con uno o dos sustituyentes seleccionados de halógeno, alquilo de C^ y CN; R2 es alquilo de C1-4; R3 es alquilo de Ci-4; R5 y R6 son, independientemente, alquilo de C1.4; o R5 y R6 se combinan junto con el N al que están unidos para formar un heterociclilo de 5 o 6 miembros; R7 está ausente o es alquilo de C^; m es 0, 1 o 2; n es 1 o 2.
2. - El compuesto o sal del mismo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque X y Y son ambos CH.
3. - El compuesto o sal del mismo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque X es CH y Yes N<
4. - El compuesto o sal del mismo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizado además porque R es un grupo C(0)OR4 en donde R4 es isopropilo.
5. - El compuesto o sal del mismo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizado además porque R1 es fenilo o piridilo sustituido opcionalmente con uno o dos sustituyentes seleccionados de halógeno, alquilo de C1-4 y CN.
6. - El compuesto o sal del mismo de conformidad Con la reivindicación 5, caracterizado además porque R1 es 4-clorofenilo o 5-cianopiridin-2-ilo.
7. - El compuesto o sal del mismo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-6, caracterizado además porque R2 es metilo.
8. - El compuesto o sal del mismo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-7, caracterizado además porque R3 es metilo.
9.- El compuesto o sal del mismo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, caracterizado además porque m es 0.
10.- El compuesto o sal del mismo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-9, caracterizado además porque R5 y R6 son ambos metilo.
11 - El compuesto o sal del mismo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, caracterizado además porque R7 está ausente.
12. - El compuesto o sal del mismo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-11, caracterizado además porque el compuesto de fórmula (I) es el enantiómero (2S.4R).
13. - Un compuesto que es 4-((2S,4f?)-1 -acetil-4-((4-clorofenil)amino)-2-metil-1 ,2,3, 4-tet ra h id roqu i noli ?-6-il) benzoato de 2-(dimetilamino)etilo.
14.- Un compuesto seleccionado de: 2- ((4-((2S,4fl)-1-acetil-4-((4-clorofen¡l)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoil)oxi)-/V, N, /V-trimetileta na minio; 3- ((4-((2S,4R)-1-acetil-4-((4-clorofenil)amino)-2-metil-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoil)oxi)-/V, N, A/-trimetilpropan-1 -aminio; 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((4-clorofenil)amino)-2-metil-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de 3-(dimetilamino)propilo; 6-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)am¡no)-2-metil-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)nicotinato de 3-(dimetilamino)propilo; 6-((2f?,4f?)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)nicotinato de 2-(dimetilamino)etilo; 4- ((2S,4R)-1-acetil-4-((isopropoxicarbonil)amino)-2-metil-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de 3-(dimetilamino)propilo; y 4-((2S,4R)-1 -acetil-4-((isopropoxicarbonil)amino)-2-metil-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de 2-(dimet¡lam¡no)etilo; o una sal de los mismos.
15. - Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -14 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
16. - Una composición farmacéutica que comprende un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo como se definen en la reivindicación 1 5, y uno o más veh ículos, diluentes o excipientes farmacéuticamente aceptables.
17. - Un producto farmacéutico de combinación que comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo como se definen en la reivindicación 1 5, junto con uno o mas de otros agentes terapéuticamente activos.
18 - El compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo que se definen en la reivindicación 1 5, para usarse en terapia:
1 9. - El compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo que se definen en la reivindicación 1 5, para usarse en el tratamiento de enfermedades o afecciones para las cuales está indicado un inhibidor de bromodominio.
20. - El compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo de conformidad con la reivindicación 19, en donde la enfermedad o afección es una afección autoinmune y/o inflamatoria crónica.
21 .- El compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo de conformidad con la reivindicación 19, en donde la enfermedad o afección es el cáncer.
22.- El uso de un compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo como los que se reclaman en la reivindicación 1 5, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades o afecciones para las cuales está indicado un inhibidor de bromodqminio.
23. - Un método de tratamiento de enfermedades o afecciones para las cuales está indicado un inhibidor de bromodom inio en un sujeto en necesidad del mismo, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo que se definen en la reivindicación 1 5.
24. - El método que se reclama en la reivindicación 23, en donde la enfermedad o afección es una afección autoinmune y/o inflamatoria crónica.
25. - El método que se reclama en la reivindicación 23, en donde la enfermedad o afección es el cáncer.
26. - U n método para inhibir un bromodominio, que comprende poner en contacto el bromodominio con un compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo que se definen en la reivindicación 1 5.
MX2013012190A 2011-04-21 2012-04-19 Derivados de tetrahidroquinolina utiles como inhibidores de bromodominio. MX338515B (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB201106743A GB201106743D0 (en) 2011-04-21 2011-04-21 Novel compounds
PCT/EP2012/057111 WO2012143413A1 (en) 2011-04-21 2012-04-19 Tetrahydroquinoline derivatives useful as bromodomain inhibitors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
MX2013012190A true MX2013012190A (es) 2014-01-31
MX338515B MX338515B (es) 2016-04-20

Family

ID=44147335

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MX2013012190A MX338515B (es) 2011-04-21 2012-04-19 Derivados de tetrahidroquinolina utiles como inhibidores de bromodominio.

Country Status (16)

Country Link
US (1) US9029395B2 (es)
EP (1) EP2699550B1 (es)
JP (1) JP5840763B2 (es)
KR (1) KR101896599B1 (es)
CN (1) CN103619820B (es)
AU (1) AU2012244759B2 (es)
BR (1) BR112013026834A2 (es)
CA (1) CA2832763C (es)
EA (1) EA022341B1 (es)
ES (1) ES2544302T3 (es)
GB (1) GB201106743D0 (es)
IL (1) IL228707A (es)
MX (1) MX338515B (es)
SG (1) SG194469A1 (es)
WO (1) WO2012143413A1 (es)
ZA (1) ZA201307645B (es)

Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201107325D0 (en) 2011-05-04 2011-06-15 Glaxosmithkline Llc Novel compounds
US9765039B2 (en) 2012-11-21 2017-09-19 Zenith Epigenetics Ltd. Biaryl derivatives as bromodomain inhibitors
US9073878B2 (en) 2012-11-21 2015-07-07 Zenith Epigenetics Corp. Cyclic amines as bromodomain inhibitors
CN105073744B (zh) 2012-12-21 2019-11-08 齐尼思表观遗传学有限公司 作为溴结构域抑制剂的新型杂环化合物
HRP20182179T1 (hr) 2013-03-14 2019-02-22 Glaxosmithkline Intellectual Property (No. 2) Limited 2,3-disupstituirani 1-acil-4-amino-1,2,3,4-tetrahidrokonolin derivati i njihova uporaba kao inhibitora bromodomena
MX366703B (es) 2013-03-15 2019-07-22 Incyte Holdings Corp Heterociclos tricíclicos como inhibidores de la proteína bet.
US9636328B2 (en) 2013-06-21 2017-05-02 Zenith Epigenetics Ltd. Substituted bicyclic compounds as bromodomain inhibitors
CA2915838C (en) 2013-06-21 2023-04-18 Zenith Epigenetics Corp. Bicyclic bromodomain inhibitors
US9290514B2 (en) 2013-07-08 2016-03-22 Incyte Holdings Corporation Tricyclic heterocycles as BET protein inhibitors
CN105593224B (zh) 2013-07-31 2021-05-25 恒元生物医药科技(苏州)有限公司 作为溴结构域抑制剂的新型喹唑啉酮类化合物
US9399640B2 (en) 2013-11-26 2016-07-26 Incyte Corporation Substituted pyrrolo[2,3-c]pyridines and pyrazolo[3,4-c]pyridines as BET protein inhibitors
US9315501B2 (en) 2013-11-26 2016-04-19 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as BET protein inhibitors
US9309246B2 (en) 2013-12-19 2016-04-12 Incyte Corporation Tricyclic heterocycles as BET protein inhibitors
WO2015120393A1 (en) 2014-02-10 2015-08-13 Concert Pharmaceuticals, Inc. Substituted triazolobenzodiazepines
EA034972B1 (ru) 2014-04-23 2020-04-13 Инсайт Корпорейшн 1h-пирроло[2,3-c]пиридин-7(6h)-оны в качестве ингибиторов белков bet
ES2896400T3 (es) * 2014-08-01 2022-02-24 Nuevolution As Compuestos activos frente a bromdominios
SMT201900019T1 (it) 2014-09-12 2019-02-28 Glaxosmithkline Ip No 2 Ltd Derivati di tetraidrochinolina come inibitori di bromodominio
EP3194406B8 (en) 2014-09-15 2021-03-31 Incyte Corporation Tricyclic heterocycles for use as bet protein inhibitors
AU2015326910B2 (en) * 2014-10-02 2018-03-01 Glaxosmithkline Intellectual Property (No.2) Limited Compound
EP3227280B1 (en) 2014-12-01 2019-04-24 Zenith Epigenetics Ltd. Substituted pyridines as bromodomain inhibitors
EP3227281A4 (en) 2014-12-01 2018-05-30 Zenith Epigenetics Ltd. Substituted pyridinones as bromodomain inhibitors
US10292968B2 (en) 2014-12-11 2019-05-21 Zenith Epigenetics Ltd. Substituted heterocycles as bromodomain inhibitors
HK1245247A1 (zh) 2014-12-17 2018-08-24 恒翼生物医药科技(上海)有限公司 溴结构域的抑制剂
GB201504694D0 (en) 2015-03-19 2015-05-06 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Covalent conjugates
WO2016203335A1 (en) 2015-06-18 2016-12-22 Pfizer Inc. Novel pyrido[2,3-b]pyrazinones as bet-family bromodomain inhibitors
AR106520A1 (es) 2015-10-29 2018-01-24 Incyte Corp Forma sólida amorfa de un inhibidor de proteína bet
PT3472157T (pt) 2016-06-20 2023-05-30 Incyte Corp Formas sólidas cristalinas de um inibidor bet
ES2937307T3 (es) 2016-07-26 2023-03-27 Univ Southern California Inhibición selectiva del bromodominio del BDF1 fúngico
WO2018111805A1 (en) * 2016-12-13 2018-06-21 St. Jude Children's Research Hospital Tetrahydroquinoline-based bromodomain inhibitors
US11833155B2 (en) 2020-06-03 2023-12-05 Incyte Corporation Combination therapy for treatment of myeloproliferative neoplasms

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9004781D0 (en) 1990-03-02 1990-04-25 Glaxo Group Ltd Device
JP4641526B2 (ja) 2003-11-03 2011-03-02 グラクソ グループ リミテッド 流体分配デバイス
JP2008156311A (ja) 2006-12-26 2008-07-10 Institute Of Physical & Chemical Research Ｂｒｄ２ブロモドメイン結合剤
EP2239264A4 (en) 2007-12-28 2012-01-11 Mitsubishi Tanabe Pharma Corp ANTITUMORAL MEDIUM
EP2415764A4 (en) * 2009-03-31 2012-08-08 Kowa Co PROPHYLACTIC AND / OR THERAPEUTIC AGENT AGAINST ANEMIA WITH A TETRAHYDROCHINOLINE COMPOUND AS AN ACTIVE SUBSTANCE
GB0919431D0 (en) * 2009-11-05 2009-12-23 Glaxosmithkline Llc Novel compounds
US9360482B2 (en) * 2009-11-05 2016-06-07 Glaxosmithkline Llc Process for the identification of a compound which inhibits the binding of the second bromodomain of each of human BRD-2, BRD-3, and BRD-4
GB0919432D0 (en) * 2009-11-05 2009-12-23 Glaxosmithkline Llc Use
GB0919434D0 (en) * 2009-11-05 2009-12-23 Glaxosmithkline Llc Novel compounds
GB201106750D0 (en) * 2011-04-21 2011-06-01 Glaxosmithkline Llc Novel compounds
GB201107325D0 (en) * 2011-05-04 2011-06-15 Glaxosmithkline Llc Novel compounds
WO2013033268A2 (en) * 2011-08-29 2013-03-07 Coferon, Inc. Bivalent bromodomain ligands, and methods of using same

Also Published As

Publication number Publication date
EP2699550B1 (en) 2015-06-10
KR101896599B1 (ko) 2018-09-07
JP5840763B2 (ja) 2016-01-06
IL228707A (en) 2016-09-29
CA2832763A1 (en) 2012-10-26
KR20140025484A (ko) 2014-03-04
US20140039006A1 (en) 2014-02-06
EA022341B1 (ru) 2015-12-30
CN103619820A (zh) 2014-03-05
ZA201307645B (en) 2015-04-29
GB201106743D0 (en) 2011-06-01
ES2544302T3 (es) 2015-08-28
SG194469A1 (en) 2013-12-30
MX338515B (es) 2016-04-20
US9029395B2 (en) 2015-05-12
EA201391285A1 (ru) 2014-04-30
CN103619820B (zh) 2015-08-19
EP2699550A1 (en) 2014-02-26
WO2012143413A1 (en) 2012-10-26
AU2012244759B2 (en) 2016-03-03
BR112013026834A2 (pt) 2016-12-27
JP2014511891A (ja) 2014-05-19
CA2832763C (en) 2019-09-24
AU2012244759A1 (en) 2013-10-31
IL228707A0 (en) 2013-12-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
MX2013012190A (es) Derivados de tetrahidroquinolina utiles como inhibidores de bromodominio.
JP5926793B2 (ja) ブロモドメイン阻害剤としてのテトラヒドロキノリン誘導体
EP3168213B1 (en) Tetrahydroquinoline derivatives useful as bromodomain inhibitors
JP5856673B2 (ja) ７−（３，５−ジメチル−４−イソオキサゾリル）−８−（メチルオキシ）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン誘導体
CN103889984B (zh) 4-(8-甲氧基-1-(1-甲氧基丙烷-2-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-7-基)-3,5-二甲基异噁唑及其作为溴结构域抑制剂的用途
JP5819840B2 (ja) ブロモドメイン阻害剤としてのテトラヒドロキノリン誘導体
JP5524343B2 (ja) ベンゾジアゼピンブロモドメイン阻害剤

Legal Events

Date Code Title Description
FG Grant or registration