MX2013004846A - Composiciones nasales de vitamina b-12. - Google Patents

Abstract

La deficiencia de vitamin B-12 es muy común entre la población. Las causas principales de la deficiencia de vitamin B-12 incluyen falta de factores intrínsecos y otros factores intestinales (por ejemplo, mala absorción), trastornos genéticos raros y toma inadecuada. La presente invención se relaciona con formulaciones intranasales de derivados de vitamin B tales como metilcobalamina. Cianocobalamina, que suministran absorción transnasal mejorada.

Description

COMPOSICIONES NASALES DE VITAMINA B12 CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con composiciones intranasales de la clase de derivados de la vitamina B12 tales como Metilcobalamina, cianocobalamina e hidroxicobalamina y el proceso para su preparación.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La deficiencia de vitamina B12 es muy común entre la población. Encuestas grandes hechas en los Estados Unidos y el Reino Unido han mostrado que cerca del 6% de aquellos con edades por encima o igual a 60 años tienen deficiencia de vitamina B12. Más aún, en países en desarrollo como India esta deficiencia es mucho más común, iniciándose temprano en la vida y persistiendo a lo largo de ella. Un estudio hecho en 441 hombre en edad media en Pune (India) reveló que 67% de los hombres tenían concentraciones bajas de vitamina B12 (<150 pmol/L). De la clase media urbana, 81 % tenía una baja concentración de B 2 y los vegetarianos tenían 4,4 veces más de riesgo de tener bajas concentraciones de vitamina B12.

Las causas principales de la deficiencia de B-12 incluyen la carencia de factores intrínsecos y otros factores intestinales (por ejemplo, malabsorción), desórdenes genéticos raros, y ingesta inadecuada. Por lo tanto, es necesario solucionar la deficiencia de B-12 mediante suplementar con Metilcobalamina, cianocobalamina e hidroxicobalamina por diversas rutas de administración tales como parenteral, oral etc.

La terapia oral no es adecuada para todos los pacientes, por ejemplo pacientes con carencia de factores intrínsecos, condiciones asociadas con atrofia gástrica, infestación con el gusano de cinta de pescado, etc. Para tales pacientes la administración nasal sería más apropiada. El suministro de fármacos por vía intranasal también ofrece el suministro efectivo de un fármaco a la circulación sistémica lo que resulta en una mejor efectividad terapéutica. También se sabe que para un suministro sistémico mejorado de un fármaco por vía intranasal es esencial tener el fármaco solubilizado. En general una droga altamente soluble es considerada como un buen candidato para tales terapias.

La Metilcobalamina se basa en un anillo de corina y tiene la fórmula molecular C36H91CoN13014P. Los compuestos que pertenecen a la clase de las variantes de vitamina B-12 también incluyen Cyanocobalamina e Hydroxicobalamina. La Metilcobalamina tiene una mucho menor solubilidad en agua en comparación con la Cyanocobalamina o la Hydroxicobalamina. En agua, la Hidroxicobalamina tiene la más alta solubilidad, mientras que la Metilcobalamina exhibe la más baja solubilidad.

Se sabe que la Metilcobalamina es altamente susceptible a la degradación y por lo tanto la menos estable entre los derivados de la vitamina B-12. En vista de la rápida degradación de la Metilcobalamina, es una práctica usual agregar altos rangos de sobredosificación que varían entre 50% a 100% en formulaciones líquidas de Metilcobalamina (por ejemplo, inyecciones), para compensar por la pérdida debido a la degradación ocurrida durante almacenamiento. Las sobredosificaciones en tal alta concentración no son deseables ya que resultan en cantidades medianamente altas de productos de degradación a medida que se incrementa la vida del producto.

Se conoce el uso de Cyanocobalamina en dosis de al menos 500 mcg/0,1ml por semana mediante administración intranasal. También se conoce el uso de Metilcobalamina para el tratamiento de la deficiencia de vitamina B-12 al igual que para enfermedades tales como ADHD. Sin embargo, es menos preferida sobre otros derivados de Cobalamina y no se usa en formulaciones intranasales disponibles comercialmente debido a sus problemas inherentes de baja solubilidad y alta inestabilidad.

La patente US 4.724.231 describe una preparación intranasal de Cyanocobalamina disuelta en agua presente en una concentración de 500 mcg/0,1 mi. Además, las composiciones descritas en dicha patente están en la forma de geles, cremas, ungüentos, las cuales tienen altas viscosidades en el rango entre 2500 a 10000 CPS. Los inventores han escogido el rango de alta viscosidad para incrementar el tiempo de residencia de la composición con la mucosa nasal. Tales geles altamente viscosos son difíciles de administrar con una dosificación precisa y causan incomodidad al paciente durante el lapso del tratamiento.

La solicitud de patente Estadounidense No. 20090012039 describe un método de uso de una preparación intranasal de Metilcobalamina para el tratamiento de la deficiencia de atención. La dicha solicitud de patente describe composicines para administración nasal, que pueden ser preparadas mediante disolver, dispersar, mezclar o incorporar Metilcobalamina (con o sin ácido folínico) y opcionalmente excipientes farmacéuticos, tales como agua, salmuera, dextrosa acuosa, glicerol, etanol, y similares, para formar una solución o suspensión. Se menciona que la composición que va a ser administrada nasalmente puede también contener cantidades menores de sustancias auxiliares no tóxicas tales como agentes humectantes o emulsificadores, agentes amortiguadores del pH y similares, por ejemplo, acetato de sodio, mono laurato de sorbitán, trietanolamina acetato de sodio, oleato de trietanolamina, sorbato de potasio, glicerina, lecitina, etc., si se requiere.

La patente Estadounidense No. 7229636 divulga formulaciones acuosas de baja viscosidad de Cyanocobalamina para suministro intranasal con un pH en el rango entre 4 a 6 siendo lo más preferido y ejemplificado 4,5 a 5,5. La patente relaciona los problemas de consistencia desagradable de las formulaciones en gel intranasal comercializadas (NASCOBAL) para suministrar formulaciones por rociado intranasales de baja viscosidad aceptables de Cyanocobalamina. La Cyanocobalamina ha sido más preferida que la Metilcobalamina debido a su mayor estabilidad y facilidad para el desarrollo de formulaiones.

Aunque el arte previo divulga formulaciones intranasales de Cyanocobalamina y algunos proyectos para usar Metilcobalamina, varios problemas con respecto a la baja solubilidad, inestabilidad de la Metilcobalamina, y por lo tanto su impacto sobre la biodisponibilidad para lograr una efectividad terapéutica optimizada aún permanece sin resolver. Más aún, la viscosidad optimizada y el pH de las formulaciones para suministro intranasal efectivo permanece como un reto y por lo tanto las formulaciones comerciales efectivas terapéuticamente de Metilcobalamina no están disponibles en el mercado. Además, sería deseable suministrar formulaciones para mejorar la biodisponibilidad de las formulaciones de la familia de los derivados de vitamina B-12 para lograr mejorar la eficacia terapéutica.

La presente invención suministra formulaciones intranasales novedosas y estables de Metilcobalamina con concentraciones optimizadas del fármaco en su forma solubilizada y la viscosidad de la formulación para lograr la biodisponibilidad deseada para la efectividad terapéutica. También suministra formulaciones novedosas de otros derivados de vitamina B-12, por ejemplo, Cyanocobalamina, con una biodisponibilidad significativamente mayor al compararla con las preparaciones del estado de la técnica.

OBJETIVOS DE LA INVENCIÓN El objetivo principal de la invención es suministrar composiciones intranasales de la clase de derivados de la vitamina B-12 tales como Metilcobalamina, Cyanocobalamina e Hydroxicobalamina y el proceso para su preparación.

Otro objetivo de la invención es suministrar formulaciones de alta concentración y estables para aplicaciones intranasales con una biodisponibilidad mejorada de la Metilcobalamina para lograr una eficacia terapéutica mejorada mediante el uso de promotores de penetración dirigidos.

Otro objetivo de la invención es suministrar formulaciones de alta concentración de otros derivados de la vitamina B-12, por ejemplo, Cyanocobalamina, que tengan una biodisponibilidad notablemente mayor en comparación con las preparaciones del estado de la técnica.

Otro objetivo de la invención es suministrar soluciones de Metilcobalamina estables, de alta concentración, claras y transparentes en agua mediante el uso de co-solventes o solubilizantes adecuados o mezclas de estos, con o sin promotores de penetración para maximizar la biodisponibilidad del fármaco luego de la administración intranasal.

Otro objetivo de la invención es suministrar soluciones de Metilcobalamina estables, claras y transparentes en agua mediante el uso de co-solventes o solubilizantes adecuados o mezclas de estos, con o sin promotores de penetración, en donde el quantum de los co-solventes o solubilizantes o mezclas de estos se selecciona de una manera tal que la formulación resulte en solubilidad mejorada sin incrementar significativamente la viscosidad de la formulación intranasal.

Otro objetivo de la invención es suministrar las dichas soluciones de Metilcobalamina estables, de alta concentración, claras y transparentes en concentraciones de Metilcobalamina desde cerca de 500 mcg/0,1 mi hasta cerca de 1500 mcg/0,1 mi.

Otro objetivo de la invención es suministrar las dichas soluciones de Metilcobalamina estables, de alta concentración, claras y transparentes en agua, que tengan un pH adecuado para el suministro intranasal sistémico del fármaco de Metilcobalamina en el rango entre 5,0 a cerca de 7,0.

Otro objetivo de la invención es suministrar las dichas soluciones de derivados de la vitamina B-12 estables, de alta concentración, claras y transparentes en agua, que tengan una viscosidad que varía entre cerca de 1 a 200 CPS adecuada para el suministro intranasal sistémico del fármaco.

Otro objetivo de la invención es suministrar las dichas soluciones de derivados de Metilcobalamina estables, de alta concentración, claras y transparentes en agua, que tengan opcionalmente una cantidad adecuada de un agente mucoadhesivo o mezclas de estos que sean adecuadas para el suministro intranasal sistémico del fármaco.

Otro objetivo de la invención es suministrar las dichas soluciones de derivados de Metilcobalamina estables, de alta concentración, claras y transparentes en agua, con o sin promotores de penetración tales como sales de bilis, Vitamina E TPGS, alquil maltosidas o mezclas de estos que sean adecuadas para el suministro intranasal sistémico del fármaco.

Otro objetivo de la invención es suministrar las dichas soluciones de derivados de Metilcobalamina estables, de alta concentración, claras y transparentes en agua, en combinación con una cantidad adecuada de agentes quelantes tales como Disodio EDTA, que sean adecuadas para el suministro intranasal sistémico del fármaco.

Otro objetivo de la invención es suministrar las dichas soluciones de derivados de Metilcobalamina estables, de alta concentración, claras y transparentes en agua, en combinación con preservativos y antioxidantes adecuados.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención suministra formulaciones para suministro intranalas, que comprenden derivados de la vitamina B-12 tal como Metilcobalamina, disueltos en agua con la ayuda de co-solventes o solubilizantes adecuados o mexclas de estos y un sistema amortiguador opcionalmente con promotores de penetración adecuados tales como las sales de bilis o agentes mucoadhesivos o antioxidantes o agentes quelantes tales como Edetato de Sodio o humectantes o antioxidantes o preservativos o combinaciones de estos. La invención también provee un proceso para preparar y un método de administración de la formulación descrita.

En una de las modalidades, la presente invención suministra composiciones para el suministro intranasal que comprenden Cyanocobalamina e Hydroxicobalamina disuetas en agua con o sin la ayuda de co-solventes o solubilizantes adecuados o mezclas de estos y un sistema amortiguador con promotores de penetración adecuados para mejorar la biodisponibilidad.

En una modalidad, la presente invención suministra composiciones que comprenden una cantidad efectiva del derivado de la vitamina B-12 en una concentración de cerca 500 mcg/0,1 mi a 1500 mcg/0.1 mi.

En otra modalidad, la presente invención suministra composiciones novedosas para suministro de fármaco que comprenden Metilcobalamina disuelta en agua con la ayuda de co-solventes o solubilizantes adecuados, con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables adicionales tales como un sistema amortiguador o preservativos o promotores de penetración o una combinación de estos.

En otra modalidad adicional, la presente invención suministra composiciones novedosas para el suministro del fármaco que comprenden Metilcobalamina disuelta en agua con la ayuda de co-solventes o solubilizantes, con uno o más de otros excipientes farmacéuticamente aceptables tales como un sistema amortiguador o preservativos o promotores de penetración tales como sales de bilis o cualquier combinación de estos o un agente mucoadhesivo o Edetato de Sodio o antioxidantes o humectantes o cualquier combinación de estos.

La Metilcobalamina tiene una solubilidad en agua mucho más baja comparada con la Cyanocobalamina o la Hydroxicobalamina. Para suministrar un beneficio terapéutico óptimo por vía nasal, es necesario solubilizar la Metilcobalamina de modo que las soluciones tengan una concentración de cerca 500 mcg/0,1 mi a 1500 mcg/0.1 mi. Hemos encontrado de manera sorprendente que la solubilización puede ser lograda en el rango de concentración deseada para producir soluciones con viscosidades controladas, mediante formular juiciosamente un sistema solvente usando co-solventes o solubilizantes por ejemplo, glicofurol, propilenglicol, polietilen glicoles o mezclas de estos individualmente o en ombinación con agua, en donde la cantidad de co-solventes o solubilizantes está entre 1 a 35% p/v. Más aún, las formulaciones han sido optimizadas en términos de sus viscosidades y pH para asegurar la maximización de la absorción intranasal del fármaco para lograr una eficacia terapéutica efectiva y biodisponibilidad con la complacencia mejorada del paciente.

Además del sistema solvente, la formulación incluye otros excipientes farmacéuticamente aceptables seleccionados de pero sin limitarse a un grupo de excipientes que comprende humectantes tales como glicerina, o preservativos o antioxidantes o promotores de penetración o mucoadhesivos.

Los preservativos de la presente invención se seleccionan entre benzalconio, cloro, metil parabeno, etil parabeno, propil parabeno, ácido benzoico, alcohol de bencilo, bronopol, butilato, hidroxilo anisol, hidroxiltolueno butilado, clorocresol, o alcohol isopropilo o combinaciones de estos.

Los promotores de penetración de la presente invención pueden ser seleccionados de sales de bilis, Vitamina E TPGS, alquil Maltosidas, tensoactivos no iónicos, aniónicos o anfotéricos que tengan un valor HLB entre 8 a 14 o combinaciones de estos. Los ejemplos no limitativos de tales promotores de penetración son glicocolato de sodio, taurocolato de sodio, dodecil maltosidas, tridecil maltosidas o tetradecil maltosidas, o cualquier combinación de estos. Los promotores de penetración son usados hasta 2,5% en peso de las composiciones.

Los mucoadhesivos son seleccionados de polímeros sintéticos tal como derivados de celulosa (metilcelulosa, etilcelulosa, hidroxi-etilcelulosa, hidroxi propilcelulosa, hidroxi propil metilcelulosa, carboxi metilcelulosa sodio; poli(ácido acrílico) polímeros (carbómeros o carbopoles, policarbofilo) tales como carbopol 934; poli (hydroxietil metilacrilato); poli (óxido de etileno); poli (vinil pirrolidona); poli (vinil alcohol). Los mucoadhesivos son además seleccionados entre polímeros naturales tales como tragacanto, alginato de sodio, goma Karaya, goma Guar, goma Xantano, Lecitina, almidón soluble, gelatina, pectina chitosan y son usados en cantidades hasta 5% en peso de las composiciones.

Los humectantes se seleccionan entre glicerina, lactato de sodio, sorbitol, xilitol, butilenglicoles.

Hemos encontrado de manera sorprendente que es posible lograr la viscosidad deseada entre 1 a 200 CPS mediante una juiciosa combinación de los ingredientes especialmente del sistema solvente y así suministrar una absorción transnasal significativamente mejorada de la Metilcobalamina. Las formulaciones son presentadas en la forma de una solución, gotas o paquetes para rociado, en recipientes de múltiples dosis, para suministrar volúmenes predeterminados. Es importante notar que a pesar de la baja viscosidad de las formulaciones de la presente invención, estas no comprometen la absorción transnasal del fármaco. El arte previo enseña que las formulaciones deben tener alta viscosidad (Patente Estadounidense No 4724231 recomienda viscosidades entre 2500 a 10000 CPS) para asegurar el tiempo de residencia deseado sobre la mucosa nasal. La presente invención es una desviación distinta de las enseñanzas del arte previo y también logra un balance perfecto entre la viscosidad, rociabilidad, absorción t biodisponibilidad mejorada.

Las formulaciones de la presente invención comprenden opcionalmente excipientes farmacéuticamente aceptables adicionales que son usados para aumentar aún más la estabilidad de las formulaciones. Ejemplos no limitativos de tales excipientes son los agentes quelantes tales como Sodio EDTA o antioxidantes que no irriten la mucosa nasal. Un ejemplo no limitativo de tales antioxidantes el ácido ascórbico.

Las formulaciones de las soluciones nasales de Metilcobalamina descritas aquí exhiben una estabilidad deseada y además permiten dosificaciones más bajas.

Simplemente lograr la solubilización no es una condición suficiente para asegurar la máxima absorción del fármaco tal como la Metilcobalamina. Parámetros tales como la viscosidad de la formulación, la estabilidad del fármaco con respecto a su vida de almacenamiento también requieren ser optimizados para asegurar la absorción transnasal y la biodisponibilidad requeridas para lograr la efectividad terapéutica.

Un rango de soluciones que tienen pH en el rango entre 3,75 a 7 fueron preparadas. Sistemas amortiguadores adecuados tales como el amortiguador de citrato pueden ser usados para lograr el pH deseado. Fue necesario determinar el impacto del pH sobre la absorción intranasal de la Metilcobalamina.

Para poder evaluar el impacto del pH sobre la absorción intranasal de la Metilcobalamina, se prepararon soluciones de Metilcobalamina y se llevaron a cabo estudios de biodisponibilidad para las formulaciones que exhibieron un pH entre 3,75 y 6,25. Hemos encontrado de manera sorprendente que el pH por encima de 6 es más apropiado para lograr la absorción intranasal deseada de la Metilcobalamina. Los resultados se dan en las Tablas 1 y 2 adelante.

Tabla 1 Resultados: AUC0-t (pg.hr/ml) para Mecobalamina con la dosis de 1500 mcg y dosis ajustada de 500 mcg con corrección de vaselina se presenta adelante.

Tabla 2 Ensayo C 4044,998 1348,33 Proceso para la preparación de las composiciones: La preparación completa se llevó a cabo enjuague con nitrógeno bajo una lámpara de vapor de sodio. Los niveles de oxígeno disuelto se mantuvieron al mínimo factible, preferiblemente cerca de 1 a 1,5 ppm. El proceso comprende las etapas de i) Agregar Glicofurol a 80% v/v de agua para la tanda; ii) Disolver cloruro de benzalconio y glicerina con agitación; iii) Amortiguar la solución usando amortiguador de citrato; iv) Agregar Metilcobalamina con agitación hasta su disolución; v) Ajustar el pH hasta el valor requisito mediante agregar ácido o base vi) Hacer el volumen de la solución para obtener la concentración deseada de 500 mcg por 0,1 mi de la solución de rociado nasal.

Las composiciones de la presente invención típicamente comprenden: El fármaco 500 mcg/0,1 mi a 1500 mcg/0,1 mi; Solventes (total) 1-35%; Humectantes 0-5%, Mucoadhesivo hasta 5%; promotores de penetración hasta 2,5%; Preservativos hasta 4%. Como se describió adicinalmente en la especificación, las composiciones pueden contener además los ingredientes amortiguadores para ajustar el pH al valor requisito, dependiendo del fármaco usado.

ESTUDIOS SOBRE LA BIODISPONIBILIDAD DE LAS FORMULACIONES Un estudio de biodisponibilidad de los aerosoles nasales preparados como se describió antes, que contienen 500 mcg/0,1 mi de Metilcobalamina fueron conducidos en sujetos humanos saludables bajo condiciones de ayuno. El diseño del estudio era de un estudio de biodisponibilidad Comparativo, cruzado en 3 vías, de dosis única, de tres secuencias, tres tratamientos, tres periodos, aleatohzado, de etiqueta abierta bajo condiciones de ayuno en 6 sujetos humanos adultos saludables.

Métodos: El estudio se llevó a cabo para determinar la biodisponibilidad de los tres productos de ensayo mediante evaluar los parámetros farmacocinéticos, Cmax, AUCO-t, AUC 0-inf., bajo condiciones de ayuno en 6 sujetos humanos adultos saludables en un estudio cruzado aleatorizado. Todos los sujetos suministraron su consentimiento informado por escrito para participar en el estudio antes de enrolarse y eran libres de retirarse en cualquier momento durante el estudio. El estudio fue aprobado por el comité de ética institucional y se llevó a cabo de acuerdo con las Buenas Prácticas Clínical y la Declaración de Helsinki.

Productos del Estudio: (Formula divulgada en la Tabla 1) Producto de prueba (A): Mecobalamina Nasal Aerosol 500 mcg/0,1 mi Producto de prueba (B): Mecobalamina Nasal Aerosol 500 mcg/0,1 mi Producto de prueba (C): Mecobalamina Nasal Aerosol 500 mcg/0,1 mi Evaluación del pre-estudio: Los sujetos fueron clasificados por datos demográficos, historia médica, examen físico, ECG de 12 derivaciones, hemograma, bioquímica, serología, urinalisis y selección de la orina para análisis de fármacos.

Administración del fármaco: Los sujetos recibieron cada tratamiento (Mecobalamina Nasal Aerosol) de una manera cruzada de acuerdo con el Programa de aleatorización de las Formulaciones con un periodo de lavado de al menos 7 días entre cada periodo.

Después de ayuno durante la noche de 10 horas, se les administró a los sujetos la dosis programada de la Formulación de prueba (A) o la Formulación de prueba (B) o la Formulación de prueba (C) las cuales fueron administradas por vía nasal, bajo la supervisión del personal médico.

Cebado (Activación) del aerosol nasal: Antes de administrar la primera dosis, la bomba fue cebada. Para cebar la bomba, la boquilla fue colocada entre el primero y segundo dedos con el pulgar sobre el fondo de la botella. La unidad fue bombeada firme y rápidamente hasta la primera aparición de rocío. La bomba fue cebada 2 veces adicionales y así el aerosol quedó listo para ser usado.

Procedimiento de administración: Se le pidió a los sujetos voltear ligeramente la cabeza hacia atrás para facilitar la administración nasal por aerosol. Entonces se les roció tres veces profundamente dentro de la ventana de la nariz. Se le pidió a los sujetos sentarse en la misma posición durante dos minutos para que la dosis no se saliera.

Monitoreo del sujeto durante el estudio: Examen físico, monitoreo de signos vitales y su bien estar fue monitoreado a las 0,00 horas (pre-dosis), 2,00, 5,00, 12,00, 24,00 y 36,00 horas (pos-dosis), ± 30 minutos, y como y cuando se requiera.

Determinación pos-estudio: se efectuaron ECG de 12 derivaciones, hemograma, bioquímica y urinalisis después de la última recolección de muestras de sangre del periodo-lll o en la discontinuación o retiro del sujeto del estudio.

Alojamiento: Desde aproximadamente 12 horas antes de la administración del fármaco y hasta 36 horas después de la administración del fármaco.

Comidas: Comidas estandarizadas fueron suministradas a los sujetos a las 4,00, 8,00, 12,00, 25, 29 y 33 horas después de la dosis en cada periodo de estudio.

Recolección de muestras: No. Total de muestras de sangre: veinte (20) por periodo.

Horario de toma de muestras: -10,00, -06,00, 0,00 horas (aplicación previa de muestras para la vaselina), 0,50, 0,75, 1 ,00, 1 ,25, 1 ,50, 1 ,75, 2,00, 2,50, 3,00, 4,00, 5,00, 6,00, 8,00, 12,00, 18,00, 24,00 y 36,00 horas (Aplicación posterior). Las muestras de sangre fueron recolectadas en vacutainer color ámbar cubierto con hoja de aluminio.

Pérdida total de sangre: Se recolectó una muestra de sangre de 5,0 mL y se descartó 0,1 mL antes de cada toma de muestras lo que representa 306 mi. Un total de aproximadamente 326 mL (incluyendo 20 mL para los ensayos de Laboratorio Clínico previo y posterior del estudio) de sangre fue extraída de cada sujeto, para todos los periodos.

Procesamiento de las muestras: A las muestras de sangre se les permitió coagularse durante 1 hora a temperatura ambiente y luego fueron centrifugadas a 4000 ± 300 rpm durante 10 min. El suero fue separado y transferido rápidamente a frascos (previamente etiquetados con el código del estudio y el código de la muestra) de tamaño apropiado con tapa atornillada de polipropileno color ámbar, por duplicado. Todas las muestras fueron almacenadas en un congelador profundo mantenido a -20°C + 5°C.

Parámetros farmacocinéticos: Parámetros principales: Cmax, AUC0-t, AUCO-inf Parámetros secundarios: VA, ke, Tmax Método analítico: La concentración de Mecobalamina fue medida mediante el método analítico previamente validado.

Evaluación estadística Se llevaron a cabo dos pruebas unilaterales ANOVA para comparar y análisis de proporción para los parámetros farmacocinéticos no transformados y transformados logarítmicamente Cmax, AUC0-t, AUCO-inf. Como todos los parámetros fueron indicando conclusiones similares, se suministra el parámetro más relevante para el beneficio terapéutico, AUCO-t, en los resultados para las formulaciones ejemplificadas.

Este estudio llevado a cabo para la dosis de 1500 mcg de Metilcobalamina y el análisis estadístico fue llevado a cabo para la dosis de 1500 mcg al igual que para la dosis ajustada de 500 mcg. El perfil de concentración media de plasma-tiempo para la dosis de 1500 mcg se muestra en la figura 1 y el perfil de concentración media de plasma-tiempo para los datos corregidos para la dosis única de 500 mcg se muestra en la figura 2. El área media bajo la curva (AUC0-t) para la dosis de 1500 mcg y la de 500 mcg de las formulaciones de prueba se listan en la Tabla 2.

Resultados: El AUC0-t (pg.hr/ml) para Mecobalamina con dosis de 1500 mcg y dosis ajustada de 500 mcg con corrección con vaselina se presenta adelante.

Tabla 3 Los resultados de los estudios de biodisponibilidad de todas las tres formulaciones muestran que el ensayo A proveyó con el suministro nasal máximo de Metilcobalamina. Es notable que la disponibilidad de la Metilcobalamina se incrementó drásticamente al incrementar el pH desde 3,75 a 6,25. Los gráficos para la dosis de 1500 mcg como también para la dosis ajustada a 500 mcg se dan en la figura 1 y la figura 2.

Sorprendentemente, el rango de pH para una absorción favorable de Metilcobalamina se estableció entre 5 a 7 con el pH más preferido entre 5,5 a 7 y más preferido 6,25 para la más alta absorción. Puede notarse que los valores del pH por encima de 7 no son preferidos porque en esos pH altos se facilita el crecimiento de bacterias patogénicas en las vías nasales.

También se encontró de manera sorprendente que la adición de promotores de penetración tales como las sales de bilis, Vitamina E TPGS (succinato de d-alfa-tocoferil polietilen glicol 1000), o alquil matosidas tales como dodecil maltosidas, tridecil maltosidas o tetradecil maltosidas, o cualquier combinación de estos, impactan significativamente la absorción y biodisponibilidad de la Metilcobalamina cuando se suministra la formulación nasalmente.

De acuerdo a lo anterior, una formulación de Metilcobalamina con 2% de promotor de penetración (Ensayo E) para determinar el efecto del promotor de penetración sobre la absorción intranasal de la Metilcobalamina. El pH de estas formulaciones se ajustó a 6,25 ± 0,25. La composición de estas formulaciones de prueba se divulga en la Tabla que sigue. Por favor refiérase también a la figura 3 y a la figura 4.

Tabla 4 Los resultados muestran de manera sorprendente que la penetración transnasal de la Metilcobalamina se incrementó significativamente en la presencia de una cantidad pequeña del promotor de penetración. Esto fue confirmado adicionalmente por los resultados del estudio que mide la concentración de vitamina B12 total en el plasma. Ya que se encontró que concentraciones más altas de glicolato de sodio causan irritación nasal, la concentración de glicolato de sodio se ajustó preferiblemente a no más de 2,5% p/v de las formulaciones.

Formulaciones similares a la del Ensayo E con concentraciones variadas de glicolato de sodio, por ejemplo, 2% p/v, 1 ,5% p/v, y 1 % p/v fueron preparadas t evaluadas en cuanto a la absorción transnasal de la Metilcobalamina mediante un estudio de bioequivalencia de tres vías. Los resultados del estudio que indican los niveles totales de vitamina B12 se muestran abajo.

Tabla 6 Los resultados del anterior estudio, como también se muestra en la figura 5, demuestra claramente qie la incorporación de 1 % p/v de glocolato de sodio resulta en una mayor absorción de Metilcobalamina comparado con 2% p/v de glicolato de sodio. En otras palabras, la absorción se incrementa cuando se reduce la cantidad de penetrador de 2% p/v a 1% p/v. De acuerdo a lo anterior, la disminución de la cantidad de promotor de penetración resultó en una mayor absorción.

Otro conjunto de experimentos fueron llevados a cabo para determinar el rol del promotor de penetración tal como el glicolato de sodio en formulaciones que contienen Cianocobalamina o hidroxicobalamina.

Un estudio de bioequivalencia de tres vías fue llevado a cabo para evaluar el efecto del glicolato de sodio sobre la absorción intranasal de Cianocobalamina como también para comparar los niveles de Metilcobalamina producida por las respectivas formulaciones. Las formulaciones sometidas al estudio de bioequivalencia compredían formulaciones de Cianocobalamina preparadas para incorporar glicolato de sodio de acuerdo con la presente invención (Ensayo G), una formulación intranasal de Cianocobalamina en aerosol comercializada (Nascobal-USA) y la formulación de Metilcobalamina de la presente invención (Ensayo F). Las fórmulas del Ensayo F y el Ensayo G se dan en la tabla que sigue.

La concentración de Metilcobalamina al igual que el total de vitamina B12 en el plasma se midió para determinar el efecto de administrar Metilcobalamina con respecto a la Cianocobalamina para formulaciones intranasales. El aerosol nasal Nascobal ® es una solución de Cianocobalamina en la forma de aerosol para el suministro a la mucosa nasal. Cada botella del aerosol Nasal Nascobal contenía 2,3 mi de una solución de 500 mcg/0,1 mi de Cíanocobalamina con citrato de sodio, ácido cítrico, glicerina y cloruro de Benzalconio en agua purificada. La solución comercial de Cíanocobalamina (Nascobal) fue ensayada y luego las formulaciones F y G fueron preparadas de acuerdo con la presente invención para incorporar cantidades equivalentes de Metilcobalamina y Cíanocobalamina respectivamente, para comparar de manera precisa la biodisponibilidad de las dos formulaciones. El pH de Nascobal era 5 y por lo tanto el pH de la formulación de Cíanocobalamina de la presente invención (ensayo G) se ajustó a cerca de 4,96. Los resultados del estudio de bioequivalencia se muestran adelante, también en la figura 6 y la figura 7. El pH de la formulación de Metilcobalamina se ajustó a 6,25 ± 0,25.

Tabla 8 Fue muy sorprendente encontrar que , la formulación de Cíanocobalamina que contiene glicolato de sodio preparada según la presente invención produjo más del doble de la biodisponibilidad del total de vitamina B12 en comparación con el aerosol comercial de Cianocobalamina (Nascobal). Más aún, los niveles del total de vitamina B12 de la formulación de Metilcobalamina de la presente invención (Ensayo F) fueron significativamente más altos en comparación con la de Nascobal.

También se encontró que la formulación de Metilcobalamina de la presente invención (Ensayo F) produjo niveles de Metilcobalamina significativamente más altos en comparación con las otras dos formulaciones de Cianocobalamina. Es pertinente notar que solo la formulación de Metilcobalamina según la presente invención suministró altos niveles de Metilcobalamina que es la co-enzima activa de la Vitamina B12.

Los resultados establecen sin ambigüedad que la formulación intranasal que comprende Cianocobalamina con al menos un promotor de penetración, opcionalmente un preservativo, agente quelante, humectantes o una combinación de estos con un pH alrededor de 4 a 6 y viscosidad de cerca de 1-200 CPS provee un incremento significativo en el suministro sistémico del fármaco resultando en una efectividad mejorada de la terapia sin comprometer la complacencia del paciente o la estabilidad de la formulación.

La invención se ejemplifica adicionalmente con los siguientes ejemplos no limitativos.

Ejemplo 1 El pH de la formulación se ajustó a 6,25 ± 0,5 y se observó que la viscosidad de la formulación estaba en el rango de acuerdo con la presente invención.

Ejemplo 10 El pH de la formulación se ajustó a 6,25 ± 0,5 y se observó que la viscosidad de la formulación estaba en el rango según la presente invención.

Las composiciones de viscosidades sustancialmente más altas pueden ser preparadas cuando el nivel de carbopol, polietilenglicol es incrementado.

Claims (14)

REIVINDICACIONES

1. Composiciones acuosas intranasales comprenden Metilcobalamina en una concentración entre 500 mcg/0,1 mi y 1500 mcg/0,1 mi, cosolventes o solubilizadores o mezclas de estos en agua, y opcionalmente con promotores de penetración, y opcionalmente preservativos, agentes mucoadhesivos, agentes quelantes, humectantes, antioxidantes, o combinaciones de estos, y en donde el pH de la composición está entre 5 y 7 y la viscosidad de 1 a 200 Cps.

2. Las composiciones acuosas intranasales de acuerdo con la reivindicación 1 en donde el pH de la formulación está preferiblemente en el rango de cerca de 6 a 6,5.

3. Una composición acuosa intranasal que comprende Cianocobalamina en una concentración de 500 mcg/0,1 mi y 1500 mcg/0,1 mi, con o sin cosolventes o solubilizadores o mezclas de estos en agua, al menos un promotor de penetración, opcionalmente preservativo, agente mucoadhesivo, agente quelante, humectantes, antioxidantes, o combinaciones de estos, y en donde el pH de la composición está entre cerca de 4 a 6 y la viscosidad cerca de 1 a 200 Cps.

4. La composición acuosa intranasal de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 3, en donde los cosolventes o solubilizadores se seleccionan entre glicofurol, propilenglicol, polietilen glicoles o mezclas de estos.

5. La composición acuosa intranasal de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 3, en donde los cosolventes o solubilizadores están en el rango de cerca de 1 a 35% p/v.

6. La composición acuosa intranasal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes en donde el promotor de penetración es seleccionado de sales de bilis, Vitamina E TPGS, alquil maltosidas, o tensoactivos no iónicos, aniónicos o anfotéricos que tengan un valor HLB entre 8 a 14 o combinaciones de estos.

7. La composición acuosa intranasal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes en donde el promotor de penetración es glicocolato de sodio, taurocolato de sodio, desoxicolato de sodio, dodecil maltosidas, tridecil maltosidas o tetradecil maltosidas, o cualquier combinación de estos.

8. La composición acuosa intranasal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes en donde la cantidad del promotor de penetración o sus combinaciones es de hasta 2,5% p/v de la composición.

9. La composición acuosa intranasal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes en donde el agente mucoadhesivo es seleccionado de polímeros sintéticos tal como derivados de celulosa; polímeros poli(ácido acrílico) tales como carbopoles; poli (hydroxietil metilacrilato); poli (óxido de etileno); poli (vinil pirrolidona); poli (vinil alcohol), o polímeros naturales tales como tragacanto, alginato de sodio, goma Karaya, goma Guar, goma Xantano, Lecitina, almidón soluble, gelatina, pectina chitosan o cualquier combinación de estos.

10. La composición acuosa intranasal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes en donde el agente mucoadhesivo se encuentra hasta 5% en peso de la composición.

11. La composición acuosa intranasal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes en donde el preservativo se selecciona de cloruro de benzalconio, metil parabeno, etil parabeno, propil parabeno, ácido benzoico, alcohol de bencilo, bronopol, hidroxil anisol butilado, hidroxil tolueno butilado, clorocresol, o alcohol isopropilo o combinaciones de estos.

12. La composición acuosa intranasal de acuerdo con la reivindicación 11 en donde el preservativo está hasta 4% en peso de la composición.

13. La composición acuosa intranasal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes en donde los humectantes son seleccionados entre glicerina, lactato de sodio, sorbitol, xilitol, butilen glicoles.

14. La composición acuosa intranasal de acuerdo con la reivindicación 13 en donde los humectantes están presentes en 5% en peso de la composición.