MX2012005429A

MX2012005429A - Inhibidores de n1-pirazoloespirocetona acetil-coa carboxilasa.

Info

Publication number: MX2012005429A
Application number: MX2012005429A
Authority: MX
Inventors: Daniel Wei-Shung Kung; David Andrew Griffith; Scott William Bagley
Original assignee: Pfizer
Priority date: 2009-11-10
Filing date: 2010-10-29
Publication date: 2012-06-19
Also published as: CU20120071A7; KR20140034919A; EP2676958A1; GEP20146169B; RS53156B; TW201127838A; KR20120099460A; PE20121469A1; JP5114610B1; US8802690B2; CA2778886A1; US8288405B2; CA2778886C; PT2499139E; IL219373A; JP2013510192A; ES2444543T3; US20130296319A1; AP2012006269A0; AU2010317501A1

Abstract

La invención proporciona un compuesto de Fórmula (I) (VER FORMULA) o una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto, en la que R1, R2, R3 y R4 son como se describen en el presente documento; composiciones farmacéuticas del mismo; y el uso del mismo en el tratamiento de enfermedades, afecciones o trastornos modulados por la inhibición de una(s) enzima(s) acetil-CoA carboxilasa(s) en un animal.

Description

INHIBIDORES DE N1-PIRAZOLOESPIROCETONA ACETIL-CoA CARBOXILASA CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a compuestos de pirazoloespirocetona sustituidos que actúan como inhibidores de una o más acetil CoA carboxilasas y a su uso en el tratamiento de enfermedades, afecciones o trastornos modulados por la inhibición de una o más enzimas acetil-CoA carboxilasas.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las acetil-CoA carboxilasas (ACC) son una familia de enzimas encontradas en la mayoría de las especies y están asociadas con la síntesis y el metabolismo de los ácidos grasos por medio de la catálisis de la producción de malonil-CoA a partir de acetil-CoA. En mamíferos se han identificado dos isoformas de la enzima ACC. La ACC1 , que se expresa en altos niveles en tejidos lipogénicos, tales como la grasa y el hígado, controla la primera etapa comprometida en la biosíntesis de ácidos grasos de cadena larga. Si no se carboxila la acetil-CoA para formar malonil-CoA, se metaboliza a través del ciclo de Krebs. La ACC2, un componente minoritario de la ACC hepática pero la isoforma predominante en corazón y músculo esquelético, cataliza la producción de malonil-CoA en la superficie citosólica de las mitocondrias, y regula la cantidad de ácido graso que se utiliza en la ß-oxidación por inhibición de la carnitina palmitoil transferasa. De esta manera, al aumentar la utilización de ácidos grasos y al prevenir aumentos en la síntesis de ácidos grasos de novo, la administración crónica de un inhibidor de ACC (ACC-I) también puede reducir las reservas de triglicéridos (TG) en tejido adiposo e hígado en sujetos obesos que consumen una dieta de alto o bajo contenido de grasa, lo cual conduce a la perdida selectiva de grasa corporal.

Los estudios realizados por Abu-Etheiga, y col., sugieren que la ACC2 juega un papel esencial en el control de la oxidación de los ácidos grasos y, como tal, proporcionaría una diana en la terapia contra la obesidad y enfermedades relacionadas con la obesidad, tales como diabetes tipo 2. Véase Abu-Etheiga, L, y col., "Acetyl-CoA carboxylase 2 mutant mice are protected against obesity and diabetes induced by high-fat/high-carbohidrate diets" PNAS, 100(18) 10207-10212 (2003). Véase también Choi, C.S. y col., "Continuous fat oxidation in Acetyl-CoA carboxylase 2 knockout mice increases total energy expenditure, reduces fat mass, and improves insulin sensitivitv" PNAS, 104(42) 16480-16485 (2007).

Cada vez está más claro que la acumulación hepática de lípidos produce resistencia hepática a la insulina y contribuye a la patogénesis de la diabetes tipo 2. Salvage y col., demostraron que tanto la ACC1 como la ACC2 están implicadas en la regulación de la oxidación de grasas en hepatocitos, mientras que la ACC1 , la isoforma dominante en hígado de rata, es el único regulador de la síntesis de ácidos grasos. Además, en su modelo, se requiere la reducción combinada de las dos isoformas para reducir significativamente los niveles hepáticos de malonil-CoA, aumentar la oxidación de grasas en estado posprandial, reducir la acumulación de lípidos y mejorar la acción de la insulina in vivo. De esta manera, se muestra que los inhibidores de las ACC1 y ACC2 hepáticas pueden ser útiles en el tratamiento de la enfermedad de hígado graso no alcohólico (HGNA) y la resistencia hepática a la insulina. Véase Savage D.B., y col., "Reversal of diet-induced hepatic steatosis and hepatic insulin resistance by antisense oligonucleotide inhibitors of acetyl-CoA carboxylases 1 and 2" J Clin Invest doi: 10.1 172/JCI27300. Véase también, Oh, W., y col., "Glucose and fat metabolism in adipose tissue of acetyl-CoA carboxylase 2 knockout mice" PNAS, 102(5) 1384-1389 (2005).

Por consiguiente, existe la necesidad de medicamentos que contengan inhibidores de ACC1 y/o ACC2 para tratar la obesidad y enfermedades relacionadas con la obesidad (tales como HGNA y diabetes tipo 2) mediante la inhibición de la síntesis de ácidos grasos y el aumento de la oxidación de ácidos grasos.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a compuestos que tienen la estructura de Fórmula (I) en la que R1 es alquilo (Ci-C6), cicloalquilo (C3-C7), tetrahidrofuranilo u oxetanilo; en el que dicho alquilo (CrC6) está opcionalmente sustituido con 1 a 2 sustituyentes seleccionados independientemente entre alcoxi (C1-C3); hidroxi, halo, fenilo, tetrahidrofuranilo u oxetanilo; R2 es hidrógeno, halo, alquilo (C1-C3), ciano o -C(=NH)(OCH3); cada R3 es independientemente hidrógeno o alquilo (C1-C3); R4 es arilo (C6-C10), heteroarilo de 5 a 12 miembros o arilo heterociclico condensado de 8 a 12 miembros; en el que cada uno de dicho arilo (C6-C10), heteroarilo de 5 a 12 miembros o arilo heterociclico condensado de 8 a 12 miembros está opcionalmente sustituido con uno a tres sustituyentes seleccionados independientemente entre alquilo (C1-C3), alcoxi (C-I-C3), halo, amino, alquil (C-i-C3)-amino, dialquil (CrC3)-amino, hidroxi, ciano, amido, fenilo, heteroarilo de 5 a 6 miembros o heterociclilo de 5 a 6 miembros; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. Una modalidad preferida de la presente invención son compuestos de Fórmula (I) en la que R4 es arilo (C6-C-io) seleccionado entre fenilo o naftilo; un heteroarilo de 5 a 12 miembros seleccionado entre piridinilo, pirazolilo, pirimidinilo, triazolilo, indolizinilo, indazolilo, pirrolo[2,3-fc]piridinilo, pirrolo[3,2-b]piridinilo, p¡rrolo[1 ,2-a]pirazinilo, imidazo[1 ,2-a]p¡r¡dinilo, im¡dazo[1 ,5-a]pirid¡n¡lo, benzo[d]imidazolilo, pirazolo[3,4-6]piridinilo, pirazolo[4,3-b]p¡rid¡n¡lo, pirazolo[1 ,5-a]pirimidinilo, benzo[o]pm¡dazol-2-onilo, 1 ,6-naftiridinilo, quinoxalinilo, quinolin-4-onilo o isoquinolin-1-onilo; o un arilo heterocíclico condensado de 8 a 12 miembros seleccionado entre 3,4-dihidroquinolin-2-onilo o indolin-2-onilo; estando cada grupo R4 opcionalmente sustituido con uno a cuatro sustituyentes seleccionados independientemente entre alquilo (Ci-C3), alcoxi (C1-C3), halo, amino, alquil (Ci-C3)-amino, dialquil (C C3)-amino, hidroxi, ciano, amido, fenilo, heteroarilo de 5 a 6 miembros o heterociclilo de 5 a 6 miembros; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Otra modalidad preferida de la presente invención es el compuesto de Fórmula (I) en la que R1 es alquilo (Ci-C6), cicloalquilo (C3-C7) o tetrahidrofuranoilo; y R2 es hidrógeno o metilo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Aún otra modalidad preferida de la presente invención es el compuesto de fórmula (I) en la que R1 es etilo, isopropilo o t-butilo; y R4 es fenilo, pirazolilo, imidazolilo, triazolilo, piridinilo, pirimidinilo, indolilo, benzopirazinilo, benzoimidazolilo, benzoimidazolonilo, pirrolopiridinilo, pirrolopirimidinilo, pirazolopiridinilo, pirazolopirimidinilo, indazolilo, indolinonilo, naftiridinilo, quinolinilo, quinolinonilo, dihidroquinolinonilo, oxo-dihidroquinolinonilo, isoquinolinilo, isoquinolinonilo, dihidroisoquinonilo u oxo-dihidroisoquinonilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno a tres sustituyentes seleccionados independientemente entre flúor, cloro, metilo, amino, metilamino, dimetilamino, amido, ciano, fenilo, imidazolilo, pirazolilo, triazolilo, piridinilo o morfolinilo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Una modalidad preferida adicional de la presente invención es el compuesto de fórmula (I) en la que R es isopropilo o t-butilo; R2 es hidrógeno; y cada R3 es hidrógeno; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Aún otra modalidad preferida de la presente invención es el compuesto de fórmula (I) en la que R4 es indazolilo, benzoimidazolilo, 1 -oxo-1 ,2-dihidroisoquinolinilo, 1 H-pirrolo[3,2-b]pirid¡nilo, 2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[d]imidazolilo, 1 H-pirazolilfenilo, 1 /-/-pirazolilpiridinilo o 1 H-imidazolilfenilo; cada uno opcionalmente sustituido con uno a dos metilo, cloro o flúor; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Otra modalidad preferida de la presente invención es un compuesto seleccionado entre 1 -isopropil-1 '-(1-oxo-1 ,2-dihidroisoquinolin-6-carbonil)-4,6-dihidroespiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(1 AV)-ona; 1 -isopropil-1 '-(1 - -pirroloIS^-^piridin-e-carboni ^.e-dihidroespirol'indazol-S^'-piperidinl-yíl H)-ona; 1 -(terc-butil)-l '-(2-metil-3H-benzo[cf]imidazol-5-carbonil)-4,6-dihidroespiro[indazol-5,4'-pipehdin]-7(1 /-/)-ona; "/-fierc-butil)-1 '-(1 H-pirrolo[3,2-b]piridin-6-carbonil)-4,6-dihidroespiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(1H)-ona; 1-(terc-butil)-1 ,-(1 /-/-indazol-5-carbonil)-4,6-dihidroespiro[indazol-5,4,-piperidin]-7(1 H)-ona; 1 -(ferc-butil)-l '-(2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzoIdJimidazol-S-carbonilH.e-dihidroespiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(1 H)-ona; 1 -isopropil-1 '-(2-oxo-2,3-dihidro-1 /-/-benzo[d]imidazol-5-carbonil)-4,6-dihidroespiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(1 /- )-ona; 1-(7-fluoro-1H-indazol-5-carbonil)-1-¡sopropil-4,6- d¡h¡droesp¡ro[indazol-5,4'-piperid¡n]-7(1/-/)-ona; 1-¡sopropil-1 '-(1-met¡l-2-oxo- ^-dihidro-IH-benzolc/Jimidazol-S-carbonilJ^^-dihidroespirotindazol-S^'-piperidin]-7(1 H)-ona; 1 '-(7-cloro-2-metil-3/-/-benzo[cf]imidazol-5-carbonil)-1 -isopropil-4,6-dihidroespiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(1 H)-ona; 1 '-(/-/-indazol-6-carbonil)-1-isopropil-4,6-dihidroespiro[indazol-5,4,-piperidin]-7(1/-/)-ona; 1-isopropil-1'-(3-(1 /-/-pirazol-4-il)benzoil)-4,6-dihidroespiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(1 /-/)-ona; 1-isopropil-1 2-metil-1/-/-benzo[d]imidazol-5-carbonil)-4,6-dihidroespiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(1 /-/)-ona; 1'-(1/-/-indazol-5-carbonil)-1-isopropil-4,6-dihidroespiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(1H)-ona; 1'-(1H-indazol-5-carbonil)-1 -isopropil-3-metil-4,6-dihidroespiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(1 H)-ona; 1-(terc-butil)-1 ,-(2-(1H-pirazol-3-il)piridin-4-carbonil)-4,6-dihidroespiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(1 H)-ona; 1 -(terc-butil)-l '-(3-(1 H-pirazol-3-il)benzoil)-4,6-dihidroespiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(1/-/)-ona; 1-isopropil-1'-(1 H-pirrolo[3,2-b]piridin-2-carbonil)-4,6-dihidroespiro[indazol-5,4'-pipendin]-7(1 H)-ona; 1 -(terc-butil)-1 '-(4-(1 - -imidazol-2-il)benzoil)-4,6-dihidroespiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(1 H)-ona; 1 -(ierc-butil)-l '-(3(1 H-imidazol-2-il)benzoil)-4,6-dihidroespiro[indazol-5,4'-p¡peridin]-7(1H)-ona; o 1-(terc-butil)-1'-(1/-/-indazol-6-carbonil)-4,6-dihidroespiro[indazol-5,4,-piperidin]-7(1/-/)-ona; o una sal farmacéuticamente aceptable de las mismas.

Otro aspecto de la presente invención es una composición farmacéutica que comprende una cantidad de un compuesto de formula (I) como se describe en cualquiera de las modalidades; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un excipiente, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable. Preferentemente, la composición comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. La composición también puede contener al menos un agente farmacéutico adicional. Los agentes preferidos incluyen agentes antidiabéticos y/o agentes antiobesidad (descritos más adelante en el presente documento).

Otro aspecto más de la presente invención es un procedimiento para tratar una enfermedad, afección o trastorno mediado por la inhibición de enzima(s) acetil-CoA carboxilasa(s) en un mamífero, que incluye la etapa de administrar a un mamífero, preferentemente un ser humano, que necesita dicho tratamiento, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición farmacéutica del mismo.

Las enfermedades, trastornos o afecciones mediadas por inhibidores de acetil-CoA carboxilasas incluyen diabetes Tipo II y enfermedades relacionadas con la diabetes tales como enfermedad de hígado graso no alcohólico (HGNA), resistencia hepática a la insulina, hiperglucemia, síndrome metabólico, alteración de la tolerancia a la glucosa, neuropatía diabética, nefropatía diabética, retinopatía diabética, obesidad, dislipidemia, hipertensión, hiperinsulinemia y síndrome de resistencia a la insulina. Las enfermedades, trastornos o afecciones preferidas incluyen diabetes Tipo II, enfermedad de hígado graso no alcohólico (HGNA), resistencia hepática a la insulina, hiperglucemia, alteración de la tolerancia a la glucosa, obesidad y síndrome de resistencia a la insulina. Son más preferidas la diabetes Tipo II, enfermedad de hígado graso no alcohólico (HGNA), resistencia hepática a la insulina, hiperglucemia y obesidad. La más preferida es diabetes Tipo II.

Una modalidad preferida es un procedimiento para tratar (por ejemplo, retrasar la progresión o el inicio de) la diabetes Tipo 2 y trastornos relacionados con la diabetes en animales, que comprende la etapa de administrar a un animal que necesita dicho tratamiento una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o una composición del mismo.

Otra modalidad preferida es un procedimiento para tratar la obesidad y trastornos relacionados con la obesidad en animales, que comprende la etapa de administrar a un animal que necesita dicho tratamiento una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o una composición del mismo.

Otra modalidad preferida es un procedimiento para tratar la enfermedad de hígado graso no alcohólico (HGNA) o resistencia hepática a la insulina en animales, que comprende la etapa de administrar a un animal que necesita dicho tratamiento una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o una composición del mismo.

Los compuestos de la presente invención pueden administrarse en combinación con otros agentes farmacéuticos (en particular, agentes antiobesidad y antidiabéticos descritos más adelante en el presente documento). La terapia de combinación puede administrarse como (a) una sola composición farmacéutica que comprende un compuesto de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, al menos un agente farmacéutico adicional descrito en el presente documento y un excipiente, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable; o (b) dos composiciones farmacéuticas separadas que comprenden (i) una primera composición que comprende un compuesto de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un excipiente, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable, y (ii) una segunda composición que comprende al menos un agente farmacéutico adicional descrito en el presente documento y un excipiente, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable. Las composiciones farmacéuticas pueden administrarse simultánea o secuencialmente y en cualquier orden.

BREVE DESCRIPICIÓN DE LAS SECUENCIAS La SEQ ID NO: 1 proporciona una secuencia de ACC1 humana recombinante (SEQ ID NO:1) que puede emplearse en el ensayo Transcreener in vitro.

La SEQ ID NO: 2 proporciona una secuencia de ACC2 humana recombinante (SEQ ID NO:2) que puede emplearse en el ensayo Transcreener in vitro.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Definiciones La frase "cantidad terapéuticamente eficaz" significa una cantidad de un compuesto de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo que: (i) trata o previene la enfermedad, afección o trastorno particular, (ii) atenúa, mejora o elimina uno o más síntomas de la enfermedad, afección o trastorno particular, o (iii) previene o retrasa el inicio de uno o más síntomas de la enfermedad, afección o trastorno particular descrito en el presente documento.

El término "animal" se refiere a seres humanos (varones o hembras), animales de compañía (por ejemplo, perros, gatos y caballos), animales como fuente de alimento, animales de zoológico, animales marinos, aves y otras especies animales similares. "Animales comestibles" se refiere a animales como fuente de alimento tales como vacas, cerdos, ovejas y aves de corral.

La frase "farmacéuticamente aceptable" indica que la sustancia o composición debe ser compatible química y/o toxicológicamente con los demás ingredientes que constituyen una formulación, y/o el mamífero que se va a tratar con la misma.

Los términos "tratar" o "tratamiento" incluyen tanto el tratamiento preventivo, es decir profiláctico, como el paliativo.

Los términos "modulado", "modular" o "modula", como se usan en el presente documento, a menos que se indique otra cosa, se refieren a la inhibición de la(s) enzimas acetil-CoA carboxilasa(s) (ACC) con compuestos de la presente invención.

Los términos "mediado", "mediación" o "media", como se usan en el presente documento, a menos que se indique otra cosa, se refieren al (i) tratamiento o prevención de la enfermedad, afección o trastorno particular, (ii) atenuación, mejoría o eliminación de uno o más síntomas de la enfermedad, afección o trastorno particular o (iii) prevención o retraso del inicio de uno o más síntomas de la enfermedad, afección o trastorno particular descrito en el presente documento, mediante la inhibición de la(s) enzima(s) acetil-CoA carboxilasa(s) (ACC).

La expresión "compuestos de la presente invención" (a menos que se identifique específicamente otra cosa) se refiere a compuestos de Formula (I) y a cualquier sal farmacéuticamente aceptable de los compuestos, así como a todos los estereoisómeros (incluyendo diasteroisómeros y enantiómeros), tautómeros, isómeros conformacionales y compuestos marcados con isótopos. Los hidratos y solvatos de los compuestos de la presente invención se consideran composiciones de la presente invención, en las que el compuesto está en asociación con agua o un disolvente, respectivamente.

Los términos "alquilo (C Ce)" y "alquilo (C1-C3)" son grupos alquilo del número especificado de carbonos, de uno a seis o de uno a tres carbonos, respectivamente, que pueden ser lineales o ramificados. Por ejemplo, el término "alquilo (C1-C3)" tiene de uno a tres carbonos y consta de metilo, etilo, n-propilo e isopropilo.

El término "cicloalquilo (C3-C7)" significa un grupo cicloalquilo con tres a siete átomos de carbono y consta de ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y cicloheptilo. El término "halo" significa flúor, cloro, bromo o yodo. El término "arilo (C6-C10)" significa un grupo carbocíclico, aromático, que consta de seis a diez átomos de carbono, tal como fenilo o naftilo.

El término "heteroarilo de 5 a 12 miembros" significa un grupo aromático de cinco a doce miembros que contiene al menos un heteroátomo seleccionado entre nitrógeno, oxígeno y azufre. Como se usa en el presente documento, el punto de unión del grupo "heteroarilo de 5 a 12 miembros" está sobre un átomo de carbono de ese grupo. El grupo "heteroarilo de 5 a 12 miembros" puede ser monocíclico o bicíclico. Las modalidades preferidas de heteroarilos monocíclicos incluyen, pero sin limitación, pirazolilo, imidazolilo, triazolilo, piridinilo y pirimidiniio. Las modalidades preferidas de heteroarilos bicíclicos incluyen, pero sin limitación, radicales de los siguientes sistemas de anillos: , , H-imidazo[1 ,2-a]piridina H-imidazo[1 ,5-a]piridina H-pirrolo[1 ,2-a]pirazina 1 H-benzofdjimidaz-l 1H-pirazolo[4,3-b]piridina pirazolo[1 ,5-a]pirimidina 1 H El término "arilo heterocíclico condensado de 8 a 12 miembros" significa un sistema de anillos de 8 a 12 miembros en el que un anillo heterocíclico no aromático está condensado con un anillo de arilo. Como se usa en el presente documento, el punto de unión del grupo "arilo heterocíclico condensado de 8 a 12 miembros" está sobre un átomo de carbono de ese grupo. Una modalidad preferida incluye radicales de sistemas de anillos tales como: ¡ndolin-2-ona 3,4-dih¡droqu¡nolin-2( 1 H)-ona 3,4-dihidroisoquinolin- 1 (2H)-ona Los compuestos de la presente invención pueden sintetizarse por rutas sintéticas que incluyen procedimientos análogos a aquellos bien conocidos en las técnicas químicas, particularmente en vista de la descripción contenida en el presente documento. Los materiales de partida generalmente están disponibles de fuentes comerciales tales como Aldrich Chemicals (Milwaukee, Wl) o se preparan fácilmente usando procedimientos bien conocidos por los expertos en la materia (por ejemplo, se preparan por procedimientos descritos generalmente en Louis F. Fieser y Mary Fieser, Reaqents for Orqanic Svnthesis. v. 1-19, Wiley, Nueva York (1967-1999 ed.), o Beilsteins Handbuch der orqanischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Veriag, Berlín, incluyendo suplementos (también disponibles a través de la base de datos en línea Beilstein)).

Con fines ilustrativos, los esquemas de reacción que se representan a continuación proporcionan rutas potenciales para sintetizar los compuestos de la presente invención así como intermedios clave. Para una descripción más detallada de las etapas de reacción individuales, véase la sección de Ejemplos que se muestra a continuación. Los expertos en la materia apreciarán que pueden usarse otras rutas sintéticas para sintetizar los compuestos de la invención. Aunque en los esquemas se representan materiales de partida y reactivos específicos y se analizan a continuación, pueden sustituirse fácilmente por otros materiales de partida y reactivos para proporcionar una diversidad de derivados y/o condiciones de reacción. Además, muchos de los compuestos preparados por los procedimientos que se describen a continuación pueden modificarse adicionalmente en vista de la presente divulgación usando la química convencional bien conocida por los expertos en la materia.

En la preparación de compuestos de la presente invención, puede ser necesaria la protección de una funcionalidad remota (por ejemplo, amina primaria o secundaria) de intermedios. La necesidad de dicha protección variará dependiendo de la naturaleza de la funcionalidad remota y de las condiciones de los procedimientos de preparación. Los grupos protectores de amino adecuados (NH-Pg) incluyen acetilo, trifluoroacetílo, f-butoxicarbonilo (BOC), benciloxicarbonilo (CBz) y 9-fluorenilmetilenooxicarbonilo (Fmoc). De forma análoga, un "grupo protector de hidroxi" se refiere a un sustituyente de un grupo hidroxi que bloquea o protege la funcionalidad hidroxi. Los grupos protectores de hidroxilo apropiados (O-Pg) incluyen, por ejemplo, alilo, acetilo, sililo, bencilo, para-metoxibencilo, trifilo y similares. La necesidad de dicha protección se determina fácilmente por un experto en la materia. Para una descripción general de grupos protectores y su uso, véase T, W. Greene, Protecti e Groups in Orqanic Svnthesis, John Wiley y Sons, Nueva York, 1991.

Los siguientes esquemas de reacción, Esquema de Reacción I a Esquema de Reacción IV, proporcionan procedimientos representativos que se usan para preparar los compuestos de Fórmula (I). Debe apreciarse que estos esquemas de reacción deben considerarse de una manera no limitante y que pueden usarse variaciones razonables de los procedimientos representados para preparar los compuestos de Fórmula (I).

El Esquema de Reacción I resume los procedimientos generales que podrían usarse para proporcionar compuestos de la presente invención que tienen la Fórmula (la), que son compuestos de Fórmula (I) en la que cada uno de R2 y R3 es hidrógeno. El derivado de espiropiperidina protegido (Villa) puede formarse por tratamiento del aldehido de piperidina apropiadamente protegido (Xa) con metil vinil cetona (IXa). El grupo Pg representa un grupo protector de amina apropiado y es preferentemente N-terc-butoxicarbonilo (BOC) o carbobenciloxi (Cbz). Esta reacción puede realizarse en presencia de hidróxido potásico etanólico de acuerdo con un procedimiento análogo al descrito por Roy, S. y col., Chem. Eur. J. 2006, 12, 3777-3788 a 3786. Como alternativa, la reacción puede realizarse en presencia de ácido para-toluenosulfónico (pTSA) en benceno a reflujo para proporcionar el producto deseado (Villa).

ESQUEMA DE REACCIÓN I El derivado de espiropiperidina (Villa) puede hacerse reaccionar después con fr/s-(N,N-dimetilamino)metano en tolueno a reflujo para proporcionar el derivado de espiropiperidina funcionalizado con enamina (Vlla). Como alternativa, la enamina (Vlla) puede prepararse haciendo reaccionar la espiropiperidina (Villa) con ?,?-dimetilformamida dimetil acetal como disolvente a la temperatura de reflujo. Esta reacción también puede realizarse en un disolvente alcohólico tal como 2-propanol, un disolvente de hidrocarburo aromático tal como tolueno o un disolvente aprótico polar tal como ?,?-dimetilformamida. Además, esta reacción puede catalizarse mediante la adición de ácido 4-toluenosulfónico, tris(d¡metilamino)metano o diversas bases tales como hidróxido de litio, DBU y N,N-diisopropiletilamina. Esta transformación también puede realizarse con, o por reacción con, t-butoxi bis(dimetilamino)metano en tolueno a la temperatura de reflujo.

Después, el compuesto (Vlla) se hace reaccionar con un derivado de hidrazina apropiado R NHNH2 en presencia de ácido acético en etanol o tolueno a reflujo para proporcionar el compuesto ciclado deseado de fórmula (Vía) (véase Murali Dhar, T.G. y col. Bioorg. Med. Chem. Lett 2007, 17, 5019-5024 a 5020). El compuesto de fórmula (Vía) puede tratarse después con N-bromosuccinimida (NBS) en presencia de agua en THF para proporcionar el derivado de bromo hidroxi correspondiente de fórmula (Va). Después, el derivado de bromo hidroxi (Va) se oxida con reactivo de Jones en un procedimiento análogo al proporcionado en Wolinsky, J. y col., J. Org. Chem. 1978, 43(5), 875-881 a 876, 879 para proporcionar el derivado de a-bromo ceto de fórmula (IVa). Como alternativa, la oxidación de (Va) puede realizarse con perrutenato de tetrapropilamonio catalítico y N-óxido de N-metilmorfolina. Después, el compuesto de fórmula (IVa) puede desbromarse usando procedimientos convencionales tales como tratamiento con cinc y ácido acético o, como alternativa, cinc en presencia de cloruro de amonio acuoso en tetrahidrofurano para proporcionar el compuesto de fórmula (Illa).

Después, el compuesto de fórmula (Illa) puede desprotegerse para proporcionar el derivado de espiropiperidina libre de fórmula (Ha) usando procedimientos convencionales que dependen de qué grupo protector Pg se haya empleado. Por ejemplo, cuando Pg representa ferc-butiloxicarbonilo (BOC), pueden usarse condiciones de desprotección con un ácido fuerte convencional, tal como ácido clorhídrico 4 N en dioxano o ácido trifluoroacético en un disolvente apropiado, tal como diclorometano, para retirar el grupo BOC. Cuando Pg representa carbobenciloxi (Cbz), puede emplearse hidrogenación sobre paladio sobre carbono en etanol o el tratamiento con una fuente de hidrógeno tal como formiato amónico o 1-metil-1 ,4-ciclohexadieno en presencia de paladio sobre carbono en etanol o acetato de etilo para realizar la desprotección.

Después, el derivado de espiropiperidina de Fórmula (lia) puede adiarse empleando procedimientos convencionales para proporcionar el compuesto de Fórmula (la). Por ejemplo, el compuesto (la) puede formarse después usando una reacción de acoplamiento de péptidos convencional con el ácido carboxilico deseado (R4C02H). Por ejemplo, el intermedio de espiropiperidina (lia) y ácido carboxilico (R4CO2H) pueden acoplarse formando un éster del ácido carboxilico activado, tal como poniendo en contacto el ácido carboxilico (R4CO2H) con un reactivo de acoplamiento de péptidos, tal como hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU) o clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetiliaminopropiljcarbodiimida (EDC HCI), en presencia o ausencia de un agente de activación, tal como hidroxibenzotriazol (HOBt) y en presencia de una base adecuada, tal como ?,?-diisopropiletilamina (DIEA), trietilamina o N-metilmorfolina (NMM), en un disolvente adecuado, tal como THF y/o DMF, dimetilacetamida (DMA) o diclorometano, y después poniendo en contacto el éster del ácido carboxílico activado con el derivado de espiropiperidina (lia) para formar un compuesto de Fórmula (la).

Como alternativa, los compuestos de Fórmula (la) puede formarse convirtiendo primero el ácido carboxílico (R CC>2H) en un cloruro de ácido (R COCI), tal como haciéndolo reaccionar con cloruro de tionilo, y después haciendo reaccionar el cloruro de ácido con el derivado de espiropiperidina (lia) en presencia de una base apropiada, tal como trietilamina en un disolvente apropiado, tal como diclorometano, para formar un compuesto de Fórmula (la). Otro procedimiento alternativo más implica tratar el ácido carboxílico (R4C02H) con 2-cloro-4,6-dimetoxitr¡azina en presencia de una base adecuada, tal como N-metilmorfolina en un disolvente adecuado, tal como THF y/o DMF. Al éster activado se le añade una solución del derivado de espiropiperidina (lia) y una base, tal como N-metilmorfolina, en un disolvente adecuado, tal como THF y/o DMF que después proporciona el compuesto de Fórmula (la).

El Esquema de Reacción II proporciona una síntesis alternativa de compuestos de Fórmula (la) partiendo del intermedio de Fórmula (Vía). El compuesto de Fórmula (Vía) se trata con N-bromosuccinimida (NBS) en presencia de metanol en THF, o preferentemente en metanol, (Nishimura, T. y col. Org. Lett. 2008, 10(18), 4057-4060 a 4059) para proporcionar el derivado de metoxi bromo espiropiperidina de Fórmula (Vb). La eliminación inducida por una base del compuesto de Fórmula (Vb) por tratamiento con una base fuerte, tal como terc-butóxido potásico, en THF, proporciona el compuesto de Fórmula (IVb) que después se trata con un ácido fuerte, tal como ácido clorhídrico 2 N en THF para proporcionar el compuesto de Fórmula (Illa). El compuesto de Fórmula (Illa) puede desprotegerse después y adiarse como se ha descrito previamente en el Esquema de Reacción 1 para proporcionar compuestos de Fórmula (la).

ESQUEMA DE REACCION II El Esquema de Reacción III proporciona una síntesis de compuestos de Fórmula (Ib) que son compuestos de Fórmula (I) en la que R2 es bromo y cada R3 es hidrógeno. El compuesto de Fórmula (Vía) se hace reaccionar con aproximadamente dos equivalentes de N-bromosuccinimida en presencia de metanol para proporcionar el derivado de dibromo metoxi espiropiperidina de Fórmula (Ve). Después, el compuesto de Fórmula (Ve) se somete a condiciones de eliminación por tratamiento con una base fuerte, tal como ferc-butóxido potásico en un disolvente apropiado para proporcionar el compuesto de Fórmula (IVc). El tratamiento del compuesto de fórmula (IVc) con un ácido fuerte, tal como ácido clorhídrico 2 N, proporciona el compuesto de Fórmula (lllb). La desprotección del compuesto de Fórmula (lllb) para proporcionar el compuesto de Fórmula (llb) seguida de acilación para proporcionar el compuesto de Fórmula (Ib) puede realizarse como se ha descrito previamente para el Esquema de Reacción I.

ESQUEMA DE REACCIÓN III El Esquema de Reacción IV representa la preparación de ciertos otros compuestos dentro de la Fórmula (I) a partir de ciertos intermedios representados previamente. La primera transformación en el Esquema de Reacción IV muestra la introducción de un grupo metilo en la posición R2 haciendo reaccionar el derivado de bromo espiropiperidina de Fórmula (lllb) con trimetilboroxina en dimetilformamida en presencia de un catalizador de paladio apropiado, tal como tetraquis trifenilfosfina paladio en presencia de carbonato potásico y agua para proporcionar el compuesto de Fórmula (lile). Pueden introducirse otros grupos alquilo en la posición R2 de una manera análoga. Después, el compuesto de Fórmula (lile) puede desprotegerse y acilarse como se ha descrito previamente. La segunda transformación en el Esquema de Reacción IV representa la introducción de un grupo ciano en la posición R2. El compuesto de bromo espiropiperidina (lllb) se hace reaccionar con cianuro de cinc en presencia de zinc y un catalizador de paladio apropiado para proporcionar el compuesto de Fórmula (llld) que después puede desprotegerse y acilarse para proporcionar un compuesto de Fórmula (Id). La tercera transformación en el Esquema de Reacción IV representa la introducción de un grupo apropiado en la posición R3 del compuesto de Fórmula (lile). El compuesto de Fórmula (lile) se desprotona con una base fuerte, tal como hexametildisilazida de litio (LHMDS) en condiciones anhidras apropiadas en un disolvente apropiado, preferentemente a baja temperatura. El enolato formado de esta manera se hace reaccionar después con un electrófilo apropiado R3Lg en el que Lg representa un grupo saliente apropiado (tal como un haluro cuando R3Lg es un haluro de alquilo) para proporcionar el compuesto de Fórmula (lllf) en la que R3 es un grupo apropiado, tal como un grupo alquilo. Después, si se desea, pueden realizarse de nuevo la desprotonación del compuesto de Fórmula (lllf) y la reacción con otro R3Lg. Después, el compuesto de Fórmula (lllf) puede desprotegerse y acilarse como se ha descrito previamente para proporcionar el compuesto de Fórmula (le).

ESQUEMA DE REACCIÓN IV Los compuestos de la presente invención pueden aislarse y usarse per se o en forma de sus sales farmacéuticamente aceptables. De acuerdo con la presente invención, los compuestos con múltiples átomos de nitrógeno básicos pueden formar sales con un número variable de equivalentes ("equiv.") de ácido. Se entenderá por los médicos que todas estas sales están dentro del alcance de la presente invención.

Las sales farmacéuticamente aceptables, como se usan en el presente documento con respecto a compuestos de la presente invención, incluyen sales inorgánicas y orgánicas farmacéuticamente aceptables del compuesto. Estas sales pueden prepararse in situ durante el aislamiento y purificación finales de un compuesto, o haciendo reaccionar por separado su compuesto con un ácido orgánico o inorgánico adecuado y aislando la sal formada de esta manera. Las sales representativas incluyen, pero sin limitación, las sales bromhidrato, clorhidrato, yodhidrato, sulfato, bisulfato, nitrato, acetato, trifluoroacetato, oxalato, besilato, palmitato, pamoato, malonato, estearato, laurato, malato, borato, benzoato, lactato, fosfato, hexafluorofosfato, benceno sulfonato, tosilato, formiato, citrato, maleato, fumarato, succinato, tartrato, naftilato, mesilato, glucoheptonato, lactobionato y laurilsulfonato, y similares. Éstas también pueden incluir cationes basados en metales alcalinos y alcalinotérreos, tales como sodio, litio, potasio, calcio, magnesio, y similares, así como cationes de amonio no tóxicos, de amonio cuaternario y de amina, incluyendo, pero sin limitación, amonio, tetrametilamonio, tetraetilamonio, metilamonio, dimetilamonio, trimetilamonio, trietilamonio, etilamonio, y similares. Para ejemplos adicionales véase, por ejemplo, Berge, y col., J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977).

Los compuestos de la presente invención pueden existir en más de una forma de cristal. Los polimorfos de compuestos de Fórmula (I) y sales de los mismos (incluyendo solvatos e hidratos) forman parte de la presente invención y pueden prepararse por cristalización de un compuesto de la presente invención en diferentes condiciones. Por ejemplo, usando diferentes disolventes o diferentes mezclas de disolventes para la recristalización; cristalización a diferentes temperaturas; diversos modos de enfriamiento, que varían de enfriamiento muy rápido a enfriamiento muy lento durante la cristalización. Los polimorfos también pueden obtenerse por calentamiento o fusión de un compuesto de la presente invención seguido de enfriamiento gradual o rápido. La presencia de polimorfos puede determinarse mediante espectroscopia de resonancia magnética nuclear de sonda sólida (RMN), espectroscopia de infrarrojos (IR), calorimetría diferencial de barrido, difracción en polvo de rayos X u otras técnicas de este tipo.

La presente invención también incluye compuestos marcados con isótopos, que son idénticos a los descritos por la Fórmula (1 ), pero en los que uno o más átomos se reemplazan por un átomo que tiene una masa atómica o número másico diferente de la masa atómica o número másico que se encuentra normalmente en la naturaleza. Los ejemplos de isótopos que pueden incorporarse en compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, azufre y flúor, tales como 2H, 3H, 13C, C, 5N, 180, 170, 35S, 36CI, 25l, 129l y 8F, respectivamente. Ciertos compuestos marcados con isótopos de la presente invención, por ejemplo aquellos en los que se incorporan isótopos radiactivos tales como 3H y C, son útiles en los ensayos de distribución de fármacos y/o sustratos en tejidos. Los isótopos tritio (es decir, 3H) y carbono-14 (es decir, 14C), se prefieren particularmente por su facilidad de preparación y detectabilidad. Además, la sustitución con isótopos más pesados tales como deuterio (es decir, 2H), puede producir ciertas ventajas terapéuticas producidas por una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo mayor semi-vida in vivo o menores requisitos de dosificación, e incluso puede preferirse en algunas circunstancias. En general, los compuestos marcados con isótopos de la presente invención pueden prepararse realizando los procedimientos desvelados en los esquemas y/o en los Ejemplos que se muestran a continuación, sustituyendo un reactivo no marcado con isótopos por un reactivo marcado con isótopos fácilmente disponible.

Los compuestos de la presente invención pueden contener centros estereogénicos. Estos compuestos pueden existir en forma de mezclas de enantiómeros o en forma de enantiómeros puros. Cuando el compuesto incluye un centro estereogénico, el compuesto puede resolverse en los enantiómeros puros por procedimientos conocidos por los expertos en la materia, por ejemplo por formación de sales diastereoisoméricas que pueden separarse, por ejemplo, por cristalización; formación de derivados estereoisoméricos o complejos que pueden separarse, por ejemplo, por cristalización, cromatografía de gas-líquido o de líquidos; reacción selectiva de un enantiómero con un reactivo específico de enantiómero, por ejemplo, esterificación enzimática; o cromatografía de gas-líquido o de líquidos en un medio quiral, por ejemplo en un soporte quiral, por ejemplo sílice con un ligando quiral unido o en presencia de un disolvente quiral. Se apreciará que cuando el estereoisómero deseado se convierte en otra entidad química por uno de los procedimientos de separación descritos anteriormente, se requiere una etapa adicional para liberar la forma enantiomérica deseada. Como alternativa, los estereoisómeros específicos pueden sintetizarse usando un material de partida ópticamente activo, por síntesis asimétrica usando reactivos, sustratos, catalizadores o disolventes ópticamente activos, o convirtiendo un estereoisómero en el otro por transformación asimétrica.

Los compuestos de la presente invención pueden existir en diferentes formas conformacionales estables que pueden ser separables. La asimetría torsional debida a la rotación restringida alrededor de un enlace sencillo simétrico, por ejemplo debido al impedimento estérico o a la tensión de la cadena, puede permitir la separación de diferentes confórmeros. Los compuestos de la presente invención incluyen además cada isómero conformacional de los compuestos de Fórmula (I) y mezclas de los mismos.

Los compuestos de la presente invención son útiles para tratar enfermedades, afecciones y/o trastornos modulados por la inhibición de la(s) enzima(s) acetil-CoA carboxilasa(s) (en particular, ACC1 y ACC2). Otra modalidad de la presente invención es una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un excipiente, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable. Los compuestos de la presente invención (incluyendo las composiciones y procedimientos usados en ella) también pueden usarse en la preparación de un medicamento para las aplicaciones terapéuticas descritas en el presente documento.

Una formulación típica se prepara mezclando un compuesto de la presente invención y un vehículo, diluyente o excipiente. Los vehículos, diluyentes y excipientes adecuados son bien conocidos por los expertos en la materia e incluyen materiales tales como carbohidratos, ceras, agua soluble y/o polímeros hinchables, materiales hidrófilos o hidrófobos, gelatina, aceites, disolventes, agua y similares. El vehículo, diluyente o excipiente particular usado dependerá del medio y del propósito para el que se aplique el compuesto de la presente invención. Los disolventes se seleccionan generalmente basándose en disolventes reconocidos por las personas expertas en la materia como seguros (GRAS) para su administración a un mamífero. En general, son disolventes seguros los disolventes acuosos no tóxicos tales como agua y otros disolventes no tóxicos que son solubles o miscibles en agua. Los disolventes acuosos adecuados incluyen agua, etanol, propilenglicol, polietilenglicoles (por ejemplo, PEG400, PEG300), etc y mezclas de los mismos. Las formulaciones también pueden incluir uno o más tampones, agentes estabilizantes, tensioactivos, agentes humectantes, agentes lubricantes, emulsionantes, agentes de suspensión, conservantes, antioxidantes, agentes opacificantes, deslizantes, ayudantes del procesamiento, colorantes, edulcorantes, agentes perfumantes, agentes aromatizantes y otros aditivos conocidos por proporcionar una presentación elegante del fármaco (es decir, un compuesto de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o una composición farmacéutica del mismo) o facilitar la fabricación del producto farmacéutico (es decir, para su uso en medicina tal como en la preparación de un medicamento).

Las formulaciones pueden prepararse usando procedimientos de disolución y mezclado convencionales. Por ejemplo, la sustancia farmacológica a granel (es decir, el compuesto de la presente invención o forma estabilizada del compuesto (por ejemplo, complejado con un derivado de ciclodextrina u otro agente de complejación conocido)) se disuelve en un disolvente adecuado en presencia de uno o más de los excipientes descritos anteriormente. La velocidad de disolución de compuestos poco solubles en agua puede mejorarse mediante el uso de una dispersión secada por pulverización, tales como las que se describen por Takeuchi, H., y col. en "Enhancement of the dissolution rate of a poorly water-soluble drug (tolbutamide) by a spray-drying solvent deposition method and disintegrants" J. Pharm. Pharmacol.. 39, 769-773 (1987); y en el documento EP0901786 B1 (US2002/009494), que se incorpora en el presente documento por referencia. El compuesto de la presente invención se formula típicamente en formas de dosificación farmacéuticas para proporcionar una dosificación fácilmente controlable del fármaco y para dar al paciente un producto elegante y fácilmente manipulable.

Las composiciones farmacéuticas también incluyen solvatos e hidratos de los compuestos de la presente invención. El término "solvato" se refiere a un complejo molecular de un compuesto representado por Fórmula (I) (incluyendo sales farmacéuticamente aceptables del mismo) con una o más moléculas disolventes. Dichas moléculas disolventes son las usadas habitualmente en la técnica farmacéutica, que se sabe que son inocuas para el receptor, por ejemplo, agua, etanol, etilenglicol y similares, El término "hidrato" se refiere al complejo en el que la molécula disolvente es agua. Los solvatos y/o hidratos preferentemente existen en forma cristalina. Pueden usarse otros disolventes como solvatos intermedios en la preparación de solvatos más deseables, tales como metanol, metil t-butil éter, acetato de etilo, acetato de metilo, (S)-propilenglicol, (R)-propilenglicol, 1 ,4-butinodiol y similares.

La composición farmacéutica (o formulación) para aplicación puede envasarse de varias maneras dependiendo del procedimiento usado para administrar el fármaco. En general, un artículo para distribución incluye un recipiente que tiene depositado en su interior la formulación farmacéutica en una forma apropiada. Dichos recipientes son bien conocidos por los expertos en la materia e incluyen materiales tales como frascos (de plástico y vidrio), sobrecillos, ampollas, bolsas de plástico, cilindros de metal y similares. El recipiente también puede incluir un cierre inviolable para evitar el acceso indiscreto al contenido del envase. Además, el recipiente tiene depositada una etiqueta que describe el contenido del recipiente. La etiqueta también puede incluir advertencias apropiadas.

La presente invención también proporciona un procedimiento para tratar enfermedades, afecciones y/o trastornos modulados por la inhibición de la(s) enzima(s) acetil-CoA carboxilasa(s) en un animal que incluye administrar a un animal que necesita dicho tratamiento una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención o una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de la presente invención y un excipiente, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable. El procedimiento es particularmente útil para tratar enfermedades, afecciones y/o trastornos que se benefician de la inhibición de la(s) enzima(s) acetil-CoA carboxilasa(s).

Un aspecto de la presente invención es el tratamiento de la obesidad, y trastornos relacionados con la obesidad (por ejemplo, sobrepeso, ganancia de peso o mantenimiento del peso). La obesidad y el sobrepeso generalmente se definen por el índice de masa corporal (IMC), que está correlacionado con la grasa corporal total y estima el riesgo relativo de enfermedad. El IMC se calcula mediante el peso en kilogramos dividido por la altura en metros cuadrados (kg/m2). El sobrepeso se define típicamente como un IMC de 25-29.9 kg/m2, y la obesidad se define típicamente como un IMC de 30 kg/m2. Véase, por ejemplo, National Heart, Lung, and Blood Institute, Clinical Guidelines on the Identification, Evaluation, and The Treatment of Overweight and Obesity in Adults, The Evidence Report, Washington, DC: U.S. Department of Health and Human Services, publicación NIH N° 98-4083 (1998).

Otro aspecto de la presente invención es el tratamiento o retraso de la progresión o del comienzo de la diabetes o de trastornos relacionados con la diabetes, incluyendo diabetes de Tipo 1 (diabetes mellitus insulinodependiente, también denominada "IDDM") y de Tipo 2 (diabetes meilitus no insulinodependiente, también denominada "NIDDM"), tolerancia alterada a la glucosa, resistencia a la insulina, hiperglucemia y complicaciones diabéticas (tal como aterosclerosis, enfermedad cardiaca coronaria, ictus, enfermedad vascular periférica, nefropatía, hipertensión, neuropatía y retinopatía).

En otro aspecto más de la presente invención está el tratamiento de comorbidades de la obesidad, tales como síndrome metabólico. El síndrome metabólico incluye enfermedades, afecciones o trastornos tales como dislipidemia, hipertensión, resistencia a la insulina, diabetes (por ejemplo, diabetes de Tipo 2), enfermedad arterial coronaria e insuficiencia cardiaca. Para una información más detallada sobre el Síndrome Metabólico, véase, por ejemplo, Zimmet, P.Z., y col., "The Metabolic Syndrome: Perhaps an Etiologic Mystery but Far From a Myth - Where Does the International Diabetes Federation Stand?," Diabetes & Endocrinoloqy, 7(2), (2005); y Alberti, K.G., y col., "The Metabolic Syndrome - A New Worldwide Definition," Lancet, 366,1059-62 (2005). Preferentemente, la administración de los compuestos de la presente invención proporciona una reducción estadísticamente significativa (p<0.05) en al menos un factor de riesgo de enfermedad cardiovascular, tal como disminución de leptina en plasma, proteína C reactiva (CRP) y/o colesterol, en comparación con un vehículo de control que no contiene fármaco. La administración de compuestos de la presente invención también puede proporcionar una reducción estadísticamente significativa (p<0.05) en los niveles de glucosa en suero.

En otro aspecto más de la invención está el tratamiento de enfermedad de hígado graso no alcohólica (EHGNA) y resistencia hepática a la insulina.

Para un ser humano adulto normal que tiene un peso corporal de aproximadamente 100 kg, típicamente es suficiente una dosificación en el intervalo de de aproximadamente 0.001 mg a aproximadamente 10 mg por kilogramo de peso corporal, preferentemente de aproximadamente 0.01 mg/kg a aproximadamente 5.0 mg/kg, más preferentemente de aproximadamente 0.01 mg/kg a aproximadamente 1 mg/kg. Sin embargo, puede requerirse alguna variabilidad en el intervalo de dosificación general dependiendo de la edad y el peso del sujeto que se trate, la vía de administración deseada, el compuesto particular que se administre y similares. La determinación de intervalos de dosificación y dosificaciones óptimas para un paciente particular está bien dentro de la capacidad de un experto en la materia que tenga el beneficio de la presente divulgación. También debe apreciarse que los compuestos de la presente invención pueden usarse en formulaciones de liberación sostenida, liberación controlada y liberación retrasada, cuyas formas también son bien conocidas por un experto en la materia.

Los compuestos de la presente invención también pueden usarse junto con otro u otros agentes farmacéuticos para el tratamiento de las enfermedades, afecciones y/o trastornos descritos en el presente documento.

Por lo tanto, también se proporcionan procedimientos de tratamiento que incluyen la administración de compuestos de la presente invención junto con otros agentes farmacéuticos. Los agentes farmacéuticos adecuados que pueden usarse junto con los compuestos de la presente invención incluyen agentes antiobesidad (incluyendo supresores del apetito), agentes antidiabéticos, agentes antihipergiucemiantes, agentes para reducir los niveles de lípidos y agentes antihipertensivos.

Los agentes antiobesidad adecuados incluyen inhibidores de ? ?ß-hidroxi esteroide deshidrogenasa-1 (? ?ß-HSD tipo 1), inhibidor de estearil-CoA desaturasa-1 (SCD-1), agonistas de MCR-4, agonistas de colecistoquinina-A (CCK-A), inhibidores de la recaptación de monoamina (tales como sibutramina), agentes simpatomiméticos, agonistas adrenérgicos ß3, agonistas de dopamina (tales como bromocriptina), análogos de la hormona estimuladora de melanocitos, agonistas de 5HT2c, antagonistas de la hormona concentradora de melanina, leptina (la proteína OB), análogos de leptina, agonistas de leptina, antagonistas de galanina, inhibidores de lipasa (tales como tetrahidrolipstatina, es decir, orlistat), agentes anorécticos (tales como un agonista de bombesina), antagonistas del neuropéptido-Y (por ejemplo, antagonistas de NPY Y5), PYY3-36 (incluyendo sus análogos), agentes tiromiméticos, deshidroepiandrosterona o un análogo de la misma, agonistas o antagonistas de glucocorticoides, antagonistas de orexina, agonistas del péptido 1 similar a glucagón, factores neurotróficos ciliares (tales como Axokine™ disponible en Regeneron Pharmaceuticals, ¡na, Tarrytown, NY y Procter & Gamble Company, Cincinnati, OH), inhibidores de la proteína relacionada con agouti humana (AGRP), antagonistas de grelina, antagonistas o agonistas inversos de histamina 3, agonistas de neuromedina U, inhibidores de MTP/ApoB (por ejemplo, inhibidores selectivos intestinales de MTP, tales como dirlotapida), antagonistas de opioides, antagonistas de orexina, y similares.

Los agentes antiobesidad preferidos para su uso en los aspectos de combinación de la presente invención incluyen inhibidores selectivos intestinales de MTP (por ejemplo, dirlotapida, mitratapida e implitapida, R56918 (No. CAS 403987) y No. CAS 913541-47-6), agonistas de CCKa (por ejemplo, N-bencil-2-[4-(1 H-indol-3-ilmetil)-5-oxo-1-fen¡l-4,5-dihidro-2,3,6,10b-tetraaza-benzo[e]azulen-6-il]-N-isopropil-acetamida descrita en la Publicación PCT No. WO 2005/116034 o en la Publicación de Estados Unidos No. 2005-0267100 A1), agonistas de 5HT2c (por ejemplo, lorcaserina), agonistas de MCR4 (por ejemplo, los compuestos descritos en el documento US 6,818,658), inhibidores de lipasa (por ejemplo, Cetilistat), PYY3-36 (como se usa en el presente documento "PYY3-36" incluye análogos, tales como PYY3-36 pegilado, por ejemplo los descritos en la Publicación de Estados Unidos 2006/0178501), antagonistas de opioides (por ejemplo, naltrexono), oleoil-estrona (No. CAS 180003-17-2), obinepitida (TM30338), pramlintida (Symlin®), tesofensina (NS2330), leptina, liraglutida, bromocriptina, orlistat, exenatida (Byetta®), AOD-9604 (No. CAS 221231-10-3) y sibutramina. Preferentemente, los compuestos de la presente invención y las terapias de combinación se administran junto con ejercicio y una dieta sensata.

Los agentes antidiabéticos adecuados incluyen un inhibidor del cotransportador de sodio-glucosa (SGLT), un inhibidor de fosfodiesterasa (PDE)-10, un inhibidor de diacilglicerol aciltransferasa (DGAT) 1 ó 2, una sulfonilurea (por ejemplo, acetohexamida, clorpropamida, diabinesa, glibenclamida, glipizida, gliburida, glimepirida, giiclazida, glipentida, gliquidona, glisolamida, tolazamida y tolbutamida), una meglitinida, un inhibidor de oc-amilasa (por ejemplo, tendamistat, trestatina y AL-3688), un inhibidor de a-glucósido hidrolasa (por ejemplo, acarbosa), un inhibidor de a-glucosidasa (por ejemplo, adiposina, camiglibosa, emiglitato, miglitol, voglibosa, pradimicina-Q y salbostatina), un agonista de PPARy (por ejemplo, balagiitazona, ciglitazona, darglitazona, englitazona, isaglitazona, pioglitazona, rosiglitazona y troglitazona), un agonista de PPAR a/? (por ejemplo, CLX-0940, GW-1536, GW-1929, GW-2433, KRP-297, L-796449, LR-90, MK-0767 y SB-219994), una biguanida (por ejemplo, metformina), un agonista del péptido 1 similar a glucagón (GLP-1) (por ejemplo, Byetta™, exendina-3 y exendina-4), un inhibidor de la proteína tirosina fosfatasa-1B (PTP-1B) (por ejemplo, trodusquemina, extracto de hirtiosal, y los compuestos desvelados por Zhang, S., y col., Druo Discoverv Today, 12(9/10), 373-381 (2007)), inhibidor de SIRT-1 (por ejemplo, reservatrol), un inhibidor de la dipeptidil peptidasa IV (DPP-IV) (por ejemplo, sitagliptina, vildagliptina, alogliptina y saxagliptina), un secretagogo de insulina, un inhibidor de la oxidación de ácidos grasos, un antagonista de A2, un inhibidor de quinasas c-jun amino-terminales (JNK), insulina, un mimético de insulina, un inhibidor de glucógeno fosforilasa, un agonista del receptor VPAC2 y un activador de glucoquinasa. Son agentes antidiabéticos preferidos metformina, un agonista del péptido 1 similar a glucagón (GLP-1) (por ejemplo, Byetta™) e inhibidores de DPP-IV (por ejemplo, sitagliptina, vildagliptina, alogliptina y saxagliptina).

Todas las patentes y publicaciones de Estados Unidos enumeradas, incluyendo todos los comunicados técnicas referenciados en los Ejemplos, se incorporan en el presente documento por referencia en su totalidad.

Los Ejemplos que se exponen a continuación en el presente documento sólo tienen fines ilustrativos. Las composiciones, procedimientos y diversos parámetros reflejados en el presente documento sólo pretenden ejemplificar diversos aspectos y modalidades de la invención, y no pretenden limitar de ninguna manera el alcance de la invención reivindicada.

EJEMPLOS Los compuestos e intermedios que se describen a continuación se nombraron generalmente de acuerdo con las recomendaciones de la IUPAC (Unión Internacional de Química Pura y Aplicada) sobre la Nomenclatura de Química Orgánica y las normas del índice CAS. A menos que se indique otra cosa, todos los reactivos se obtuvieron en el mercado.

La cromatografía ultrarrápida se realizó de acuerdo con el procedimiento descrito por Still y col., J. Org. Chem., 1978, 43, 2923.

Todas las purificaciones Biotage®, analizadas en el presente documento, se realizaron usando una columna Biotage® 40M o 40S que contenía sílice KP-SIL (40-63 µ?, 60 Ángstroms) (Biotage AB; Uppsala, Suecia).

Todas las purificaciones CombiFiash®, analizadas en el presente documento, se realizaron usando un sistema CombiFiash® Companion (Teledyne Isco; Lincoln, Nebraska) utilizando columnas de sílice envasadas RediSep®.

Los Espectros de Masas se registraron en un espectrómetro Waters (Waters Corp.; Milford, MA) Micromass Platform II. A menos que se especifique otra cosa, los espectros de masas se registraron en un espectrómetro Waters (Milford, MA) Micromass Platform II.

Los desplazamientos químicos de RMN de protones se dan en partes por millón campo abajo a partir de tetrametilsilano y se registraron en un espectrómetro Varían Unity de 400 ó 500 MHz (megaHertzios) (Varían Inc.; Palo Alto, CA). Los desplazamientos químicos de RMN se dan en partes por millón campo abajo a partir de tetrametilsilano (para protones) o de fluorotriclorometano (para flúor).

Las preparaciones que se describen a continuación se usaron en la síntesis de compuestos ejemplificados en los siguientes ejemplos.

Preparación de Materiales de Partida e Intermedios Materiales de Partida de Ácido Carboxílico Los siguientes ácidos carboxílicos disponibles en el mercado se usaron para preparar los compuestos ejemplificados de la presente invención: ácido 4-cloro-3-metilbenzoico (Alfa Aesar, Ward Hill, MA), ácido 1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-carboxílico (Sphinx Scientific Laboratory Product List), ácido 1-metil-1 - -indazol-6-carboxílico (PharmaBlock R&D Product List), ácido 1 H-benzoimidazol-5-carboxílico (Affinitis Pharma LLC, New Haven, CT), ácido 1 -/-indazol-5-carboxílico (Tyger Scientific, Inc., Ewing, NJ), ácido 4-amino-2-metilpirimidin-5-carboxílico (Tyger Scientific, Inc., Ewing, NJ), ácido 2-(metilamino)isonicotinico (Aurora Building Blocks), ácido 1 H-pirrolo[3,2-b]piridin-6-carboxílico (Matrix Scientific), ácido 2-metil-1 H-benzoimidazol-5-carboxílico (Apollo Scientific Intermediates for Research and Development), ácido 7H-pirrolo[2,3-b]piridin-2-carboxílico (Ryan Scientific Product List), ácido 1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-carboxilico (Matrix Scientific), ácido 2-oxoindolin-5-carboxílico (Apollo Scientific Intermediates for Research and Development), ácido 2-0X0-2, 3-dihidro-1 H-benzoimidazol-5-carboxílico (AKos Building Blocks Product List), ácido 2-oxo-1 ,2,3,4-tetrahidroquinolin-7-carboxílico (AKos Building Blocks Product List), ácido 2-amino-1 ,6-naftiridin-3-carboxílico (ACES Pharma Product List), ácido 3-aminoquinoxalin-2-carboxílico (AsisChem Screening Library), ácido 7-aminopirazolo[1 ,5-a]pirimidin-6-carboxílico (Ryan Scientific Product List), ácido 1-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzoimidazol-5- carboxílico (AKos Building Blocks Product List), ácido 4-(1 H-imidazol-2-il)benzoico (Sphinx Scientific Laboratory Product List), ácido 3-(1 H-imidazol-4-il)benzoico (Apollo Scientific Intermediates for Research and Development), ácido 5-amino-2-fenil-2H-1 ,2,3-triazol-4-carboxílico (Ryan Scientific Screening Library), ácido 8-metil-4-oxo-1 ,4-dihidroquinolin-2-carboxílico (Aurora Building Blocks), ácido 2-carbamoilnicotinico (J & K Scientific Product List), ácido 8-metilimidazo[1,2-a]piridin-2-carboxílico (Aurora Building Blocks), ácido 3-(1 H-pirazol-3-il)benzoico (Maybridge. Cornwall, Reino Unido), ácido 3-(1H-pirazol-1-il)benzoico (AKos Screening Library), ácido 1H-pirrolo[2,3-b]piridin-3-carboxílico (Aldrich), ácido 6-morfolin-4-ilnicotínico (Ryan Scientific Product List), ácido 7-metilimidazo[1 ,2-a]piridin-2-carboxílico (Aurora Building Blocks), ácido imidazo[1 ,2-a]piridin-2-carboxilico (Aurora Building Blocks), ácido 5-piridin-3-il-1H-pirazol-3-carboxílico (AKos Screening Library), ácido 6-metil-2-(metilamino)nicotínico (Aurora Building Blocks), ácido ¡midazo[1 ,5-a]piridin-7-carboxílico (Bepharm Product List), ácido 3H-imidazo[4,5-b]piridin-6-carboxílico (Sphinx Scientific Laboratory Product List), ácido 7-hidroxipirazolo[1 ,5-a]pirimidin-6-carboxílico (Butt Park Screening Library), ácido indolizin-2-carboxílico (Ryan Scientific Product List), ácido 2-piridin-2-il-1H-imidazol-5-carboxílico (Ambinter Stock Screening Collection), ácido 3-(1H-imidazol-2-il)benzoico (Greenchem Institute Product List), ácido pirrolo[1,2-c]pirimidin-3-carboxílico (Milestone PharmTech Product List), ácido 1 H-pirrolo[3,2-b]piridin-2-carboxílico (Azasynth Building Blocks), ácido 1H-pirrolo[3,2-c]piridin-2-carboxílico (Aurora Building Blocks), ácido imidazo[1 ,2- a]pirid¡n-7-carboxílico (Bepharm Product List), ácido 4-(1 H-1 ,2,4-triazol-1 -il)benzoico (AKos Building Blocks Product List), ácido 1-metil-1 H-benzoimidazol-5-carboxílico (AKos Building Blocks Product List), ácido 6-(1 H-pirazol-1-il)nicotínico (Butt Park Screening Library), ácido 1 ,6-naftiridin-2-carboxílico (Bepharm Product List), ácido 1 H-imidazo[4,5-b]piridin-5-carboxílico (Sphinx Scientific Laboratory Product List), ácido 1-metil-4-oxo-4,7-dihidro-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-carboxílico (Aurora Screening Library), ácido ¡midazo[1 ,2-a]piridin-6-carboxílico (Apollo Scientific Intermediates for Research and Development), ácido 1 H-pirrolo[2,3-c]piridin-2-carboxílico (Parkway Scientific Product List), ácido 1H-indazol-6-carboxílico (Aldrich), ácido quinoxalin-2-carboxilico (Aldrich), ácido 3-acetamidobenzoico (Apollo Scientific Intermediates for Research and Development), ácido 4-cloro-1H-indazol-6-carboxílico (Sinova Product List), ácido 2-morfolinopirimidin-5-carboxílico (AKos Screening Library), ácido 1 H-imidazo[1 ,2-b]pirazol-6-carboxílico (Aurora Building Blocks), ácido 3-hidroxiquinolin-4-carboxílico (AKos Screening Library), ácido 8-hidroxiquinolin-7-carboxílico (TCI Laboratory Chemicals) y ácido 3-(1 H-pirazol-4-il)benzoico (AKos Building Blocks Product List).

Los siguientes ácidos carboxílicos (que se usaron para preparar los compuestos descritos en los Ejemplos que se muestran a continuación) se prepararon por medios publicados previamente: ácido 3-hidrox¡-6-metilpicolínico (P. Korovchenko y col., Catalysis Today 2007, 121, 13-21); ácido 4-hidroxi-1 ,3-dimetil-1 H-pirazol-5-carboxílico (Tet Let 1971 , 19, 1591 ); ácido 3-amino-2,6-dimetilisonicotínico (Gulland, J.M., Robinson, R. J. Chem. Soc, Trans. 1925, 127, 1493-503); ácido 5-hidroxiquinolin-6-carboxílico (Bogert, M. T.; Fisher, Harry L. Orig. Com. 8th Intern. Cangr. Appl. Chem. 1912, 6, 37-44; ácido 5-hidroxiisoquinolin-6-carboxilico (puede prepararse por hidrólisis del éster metílico correspondiente: Dyke, S. F.; White, A. W. C; Hartley, D. Tetrahedron 1973, 29, 857-62); ácido 3-metil-1-(piridin-3-il)-1 H-pirazol-5-carboxílico (puede prepararse por una química análoga a J. Met Chem. 1999, 36, 217).

Los siguientes materiales de partida de ácido carboxílico (que se usaron para preparar los compuestos descritos en los Ejemplos que muestran a continuación) se prepararon como se describe a continuación. Preparación del Ácido 1: ácido 4-cloro-1 H-benzoimidazol-6-carboxílico A una mezcla de ácido 4-amino-3-nitrobenzoico (10 g, 56 mmoles) en ácido acético (100 mi) a 0 °C se le añadió cloruro de sulfurilo (8.98 g, 66 mmoles). La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante una noche. La mezcla se vertió en agua enfriada con hielo, se filtró y se secó al aire para dar ácido 4-amino-5-cloro-3-nitrobenzoico (7.35 g, 62 %) en forma de un sólido de color amarillo. RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) d ppm 8.24 (s, 2 H) 8.19 (s, 1 H) 7.86 (s, 1 H) Una suspensión de ácido 4-amino-5-cloro-3-nitrobenzoico (7.35 g, 34 mmoles) en metanol (150 mi) se trató con ácido sulfúrico concentrado (40 mi). La suspensión se calentó a reflujo durante una noche. La solución de reacción se concentró al vacío, dando un sólido de color amarillo que se recogió en acetato de etilo (200 mi) y agua (30 mi). La solución se enfrió a 0 °C y se añadió carbonato potásico (12.4 g) en agua (30 mi). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (200 mi). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron al vacío, dando 4-amino-5-cloro-3-nitrobenzoato de metilo en forma de un sólido de color amarillo (7.25 g, 93 %). RMN H (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.50 (d, J = 2.15 Hz, 1 H) 8.02 (d, J = 1.95 Hz, 1 H) 7.84 (s a, 2 H) 3.80 (s, 3 H).

A una solución de 4-amino-5-cloro-3-nitrobenzoato de metilo (4.29 g, 18.6 mmoles) en etanol (115 mi), agua (250 mi) y tetrahidrofurano (200 mi) se le añadió hidrosulfito sódico (80 g, 391 mmoles). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante dos horas. A la reacción se le añadió agua (55 mi). Después de agitar durante una hora más, a la reacción se le añadió bicarbonato sódico acuoso saturado (140 mi). La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se extrajo dos veces con acetato de etilo (200 mi cada vez). Los extractos orgánicos se combinaron y se lavaron con bicarbonato sódico acuoso saturado (100 mi) seguido de cloruro sódico acuoso saturado (100 mi). La fase orgánica se concentró al vacío hasta alcanzar un volumen final de 100 mi y después se dejó en reposo a temperatura ambiente durante una noche, dando un precipitado. La mezcla se filtró y se secó en una corriente de nitrógeno, dando 3,4-diamino-5-clorobenzoato de metilo (973 mg, 26 %). El filtrado se concentró al vacío, dando 3,4-diamino-5-clorobenzoato de metilo (2.45 g, 66 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 7.1 1 (d, J = 1.95 Hz, 1 H) 7.08 (d, J = 1.95 Hz, 1 H) 5.44 (s, 2 H) 5.08 (s, 2 H) 3.70 (s, 3 H).

Se añadió 3,4-diamino-5-clorobenzoato (1.2 g, 6 mmoles) a agua (10 mi) y ácido fórmico (826 mg, 18 mmoles) y se calentó a reflujo durante 4 horas. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se añadió hidróxido potásico acuoso (21 mi, 1 M). La solución de reacción se lavó con acetato de etilo (2 x 25 mi cada vez). La fase acuosa se acidificó a pH = 5 con ácido clorhídrico acuoso (1 N), dando un precipitado que se filtró, se lavó con agua y se secó en una corriente de nitrógeno, dando el compuesto del título (439 mg, 37 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.45 (s, 1 H) 8.10 (d, J = 1.17 Hz, 1 H) 7.77 (d, J = 1.37 Hz, 1 H).

Preparación del Ácido 2: ácido 7-cloro-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzofdlimidazol-5-carboxílico Se combinaron 3,4-diamino-5-clorobenzoato (de la preparación del ácido 1 , 100 mg, 0.50 mmoles) y carbonil diimidazol (89 mg, 0.55 mmoles) en tetrahidrofurano (2 mi) y se agitaron durante 16 horas. La solución de reacción se calentó a 60 °C durante 3 horas. A la reacción se le añadió carbonil diimidazol (81 mg, 0.50 mmoles) y la reacción se continuó a 60 °C durante dos horas. La reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas. Se formó un precipitado. La mezcla se filtró. El filtrado se concentró al vacío y el residuo se suspendió en acetato de etilo. La suspensión se filtró en el mismo filtro de la filtración original. Los sólidos recogidos se lavaron con una porción sobre acetato de etilo y después se secaron en una corriente de nitrógeno, dando 7-cloro-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo en forma de un sólido de color blanco (93 mg, 82 %). RMN H (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 11.60 (s a, 1 H) 11.16 (s, 1 H) 7.55 (d, J = 1.37 Hz, 1 H) 7.38 (d, J = 1.56 Hz, 1 H) 3.80 (s, 3 H).

Se combinaron 7-cloro-2-oxo-2,3-dihidro-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo (351 mg, 1.55 mmoles), hidróxido de litio acuoso 1 M (0.774 mi, 1.55 mmoles) y tetrahidrofurano (5 mi) y se calentaron a 50 °C durante 2 horas. A la reacción se le añadieron hidróxido de litio acuoso 1 M (0.774 mi, 1.55 mmoles) y metanol (10 mi) y la reacción se calentó a reflujo durante 6 horas y después se dejó enfriar a temperatura ambiente durante una noche. La solución de reacción se concentró al vacio para retirar el tetrahidrofurano y el metanol. La fase acuosa residual se extrajo con acetato de etilo (2 mi). A la fase acuosa se le añadieron agua (2 mi), acetato de etilo (2 mi) y ácido clorhídrico acuoso 3 M. Se formó un precipitado. La mezcla se filtró y los sólidos se lavaron con agua y acetato de etilo. Los sólidos se secaron en una corriente de nitrógeno, dando el compuesto del título (296 mg, 90 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 11.54 (s, 1 H) 11.12 (s, 1 H) 7.54 (d, J = 1.37 Hz, 1 H) 7.38 (d, J = 1.37 Hz, 1 H).

Preparación del Ácido 3: ácido 4-fluoro-1 H-benzo[d1¡midazol-6-carboxílico A un tubo para microondas de 2.5-5 mi se le añadió 6-bromo-4-fluoro-1 H-benzo[d]imidazol (160 mg, 0.744 mmoles) suspendido en 1 ,4-dioxano desgasificado (1.5 mi). A esto se le añadieron trans-di(u-acetato)bis[o-(di-o-tolilfosfino)bencil]di-paladio (II) (26 mg, 0.043 mmoles) y molibdeno hexacarbonilo (100 mg, 0.38 mmoles) junto con carbonato sódico (237 mg, 2.23 mmoles) disuelto en agua desgasificada (2 mi). La mezcla se agitó durante 20 segundos y después se calentó a 155 °C en el microondas durante 10 minutos, manteniendo la presión por debajo de 16 bar. El recipiente se ventiló antes de manipularse y se dejó en reposo durante una noche a temperatura ambiente. A la reacción se le añadieron agua (2 mi) y acetato de etilo (3 mi) y después la mezcla se filtró a través de Celite®. El filtrado se repartió con acetato de etilo y se separó. La fracción acuosa se lavó una vez más con acetato de etilo y las fases orgánicas combinadas se apartaron. A la fase acuosa se le añadió otra porción de agua (5 mi) y se acidificó con HCI 0.5 M a pH 3; se formó un precipitado de color pardo. La mezcla se dejó en reposo en el frigorífico a 4 °C durante 1 hora. La mezcla se filtró y se lavó con agua, dando ácido 4-fluoro-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxilico en forma de un sólido de color gris (rendimiento del 63 %). RMN 1H (500 MHz, DMSO-de) d ppm 12.99 (s a, 1 H) 8.47 (s, 1 H) 8.02 (s, 1 H) 7.52 (d, J = 11.71 Hz, 1 H).

\ Preparación del Ácido 4: ácido 1-oxo-1 ,2-dihidroisoquinolin-6-carboxílico A una mezcla de ácido (E)-3-(3-bromofenil)acrílico (100 g, 0.44 moles) y trietilamina (0.48 moles) en tolueno (1000 mi) se le añadió gota a gota difenilfosforil azida (127.4 g, 0.45 moles) a 0-10 °C. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La cromatografía de capa fina (éter de petróleo/acetato de etilo = 8:1) indicó que la reacción se había completado. La mezcla resultante se lavó con hidróxido sódico 1 N (500 mi) y se extrajo con acetato de etilo (2000 mi x 3). La fase orgánica se concentró, dando (E)-1-azido-3-(3-bromofenil)prop-2-en-1-ona en bruto, que se usó directamente en la siguiente etapa.

Una mezcla de la (E)-1-azido-3-(3-bromofen¡l)prop-2-en-1-ona en bruto (aproximadamente 120 g en bruto) y tolueno (200 mi) se calentó a reflujo durante dos horas. La cromatografía de capa fina (éter de petróleo/acetato de etilo = 8:1) indicó que la mayor parte del material de partida se había consumido. La mezcla se concentró, dando (E)-1-bromo-3-(2-isocianatovinil)benceno en bruto (100 g, 94 %), que se usó directamente en la siguiente etapa.

Una solución del (E)-1-bromo-3-(2-isocianatovinil)benceno (100 g, 0.44 moles) en tolueno (200 mi) se añadió gota a gota a una mezcla de tributilamina (100 mi) y oxidibenceno (500 mi) a 190 °C. Después de la adición, la mezcla se calentó a 210 °C durante dos horas más. La cromatografía de capa fina (éter de petróleo/acetato de etilo = 1 :1) indicó que la reacción se había completado. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se filtró y el sólido se lavó con acetato de etilo (50 mi x 3). El sólido se secó al vacío, dando 6-bromoisoquinolín-1(2H)-ona en bruto (30 g, 30 %) en forma de un sólido de color amarillo claro, que se usó directamente en la siguiente etapa.

Una mezcla de la 6-bromoisoquinolin-1(2H)-ona (30 g, 134 mmoles), trietilamina (17.6 g, 174 mmoles), cloruro de paladio (II) (0.24 g, 1.34 mmoles) y (S)-(-)-2,2'-bis(difenilfosfino)-1 ,1'-binaftilo (0.84 g, 1.34 mmoles) en metano (300 mi) se calentó a 100 °C a 2 MPa de monóxido de carbono y se agitó durante 12 horas.

La cromatografía de capa fina (éter de petróleo/acetato de etilo = 1 :1) indicó que la reacción se había completado. La mezcla de reacción se concentró, el residuo se lavó con agua y el sólido se filtró y se secó al vacío, dando 1-oxo-1 ,2-dihidroisoquinolin-6-carboxilato de metilo en bruto (23.8 g, 95 %) en forma de un sólido de color amarillo, que se usó directamente en la siguiente etapa.

A una mezcla del 1-oxo-1 ,2-dihidroisoquinolin-6-carboxilato de metilo (25 g, 0.133 moles), tetrahidrofurano (200 mi) y agua (200 mi) se le añadió hidróxido de litio (16.8 g, 0.40 moles) a temperatura ambiente y la mezcla se agitó durante cuatro horas. La cromatografía de capa fina (éter de petróleo/acetato de etilo = 1 :1) indicó que la reacción se había completado. La mezcla de reacción se extrajo con acetato de etilo (100 mi x 3) para retirar las impurezas. La fase acuosa se acidificó con HCI acuoso 4 N a pH 5 y se filtró. El sólido se secó al vacío, dando ácido 1-oxo-1 ,2-dihidroisoquinolin-6-carboxílico (11.3 g, 48 %) en forma de un sólido de color amarillo claro. RMN 1H (400 MHz, DMSO-cfe) d ppm 11.48 (s, 1 H), 8.24 (d, 2 H), 7.93 (d, 1 H), 7.22 (d, 1 H), 6.68 (d, 1 H).

Preparación del Ácido 5: ácido 1-oxo-1 ,2-dihidroisoquinolin-7-carboxílico Se preparó ácido 1-oxo-1 ,2-dihidroisoquinolin-7-carboxílico de una manera análoga a ácido 1-oxo-1 ,2-dihidroisoquinolin-6-carboxílico, (preparación del ácido 4).

Preparación del Ácido 6: ácido 5-(1 H-imidazol-1-il)picolínico Se combinaron 5-bromopicolinonitrilo (2.0 g, 10.9 mmoles), imidazol (818 mg, 12 mmoles), carbonato potásico (1.66 g, 12 mmoles) y dimetilformamida (40 mi) y se calentaron a 130 °C durante 20 horas. La solución de reacción se evaporó y el residuo se repartió entre diclorometano (150 mi) y agua (100 mi). Las fases se separaron y la fase orgánica se lavó con agua (50 mi), se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó, dando un residuo que se purificó por cromatografía ultrarrápida eluyendo con un gradiente de metanol al 2-3 % en diclorometano, dando 5-(1 H-imidazol-1-il)picolinonitrilo (1.23 g, 66 %).

Se calentó a reflujo 5-(1H-imidazol-1-il)picolinonitrilo (136 mg, 0.80 mmoles) en ácido clorhídrico acuoso 6 N (10 mi) durante 2 horas. La mezcla de reacción se evaporó y el residuo se destiló azeotrópicamente con tres porciones de tolueno, dando un residuo que se purificó sobre una columna de intercambio iónico (AG-50 Biorad) eluyendo con un gradiente de piridina al 0-10 % en agua, dando el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (128 mg, 84 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 9.10 (s, 1 H), 8.50 (s, 1 H), 8.26-8.33 (m, 1 H), 8.13-8.20 (m, 1 H), 7.96 (s, 1 H), 7.16 (s, 1 H).

Preparación del Ácido 7: ácido 7-cloro-1 H-indazol-5-carboxílico A una mezcla de 4-amino-3-cloro-5-metil-benzonitrilo (3.0 g, 18.0 mmoles) en cloroformo (50 mi) se le añadió anhídrido acético (3.92 mi, 41.4 mmoles). La mezcla se calentó a reflujo durante 5 horas y después se enfrió a temperatura ambiente. A la mezcla se le añadieron acetato potásico (530 mg, 5.4 mmoles) y nitrito de isoamilo (5.28 mi, 39.6 mmoles). La reacción se calentó a reflujo durante 16 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se extrajo con bicarbonato sódico acuoso saturado y los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron al vacío, proporcionando un aceite de color pardo. El aceite se disolvió en metanol (25 mi) y se añadió ácido clorhídrico concentrado (25 mi). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 22 horas y el metanol se concentró al vacío. La fase acuosa restante se ajustó a un pH de 7 y el precipitado resultante se filtró, proporcionando un sólido de color pardo que se purificó por cromatografía ultrarrápida usando diclorometano al 50 % en heptano como eluyente, proporcionando 7-cloro-1/-/-indazol-5-carbonitrilo en forma de un sólido (585 mg, 18 %): -IEN EM (M-1) 176.0; RMN H (400 MHz, CDCI3) d ppm 8.29 (s a, 2 H), 8.08 (s, 1 H), 7.61 (s, 1 H).

A una mezcla de 7-cloro-1 H-indazol-5-carbonitrilo (1.36 g, 7.66 mmoles) en etanol (52.5 mi) se le añadieron agua (17.5 mi) e hidróxido potásico (6.44 g, 1 15 mmoles). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 16 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se extrajo dos veces con etil éter, la fase acuosa se acidificó con ácido clorhídrico 1 N y el precipitado resultante se filtró, proporcionando ácido 7-cloro-1 H-indazol-5-carboxílico en forma de un sólido de color pardo (900 mg, 60 %): -IEN EM (M-H) 195.2.

Preparación del Ácido 8: ácido 5-morfolinopicolínico Se añadió gota a gota malonato de dietílo (151 g, 0.944 moles) con agitación a hidruro sódico al 60 % en aceite mineral (37.8 g, 0.944 moles) en tetrahidrofurano seco (1 I). Después de que cesara el desprendimiento de hidrógeno, se añadió 2-cloro-5-nitropiridina (125 g, 0.787 moles). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 2 horas y después el tetrahidrofurano se evaporó al vacío, dando (5-nitropiridin-2-il)malonato de dietilo en bruto, que se usó en la siguiente etapa sin purificación.

Se añadió (5-nitropiridin-2-il)malonato de dietilo en bruto a ácido nítrico al 65 % en ebullición (1.5 I) con agitación. La mezcla de reacción se calentó a reflujo con agitación durante 15 horas. La mezcla de reacción se concentró al vacío y el sólido resultante se lavó con cloroformo, dando ácido 5-nitropiridin-2-carboxílico (rendimiento del 65 %, 85.9 g).

El ácido 5-nitropiridin-2-carboxilico (100 g, 0.60 moles) se calentó a reflujo en metanol (1 I) y ácido sulfúrico (57 mi) durante 5 horas. La mezcla de reacción se enfrió, se redujo a la mitad de su volumen al vacío y el residuo se neutralizó con una solución de carbonato sódico. El precipitado resultante se filtró, dando 5-nitropiridin-2-carboxilato de metilo (rendimiento del 89 %, 98 g).

El 5-nitropiridin-2-carboxilato de metilo (182 g, 1 mol) se calentó a reflujo en piperidina (250 mi) durante 1 hora. La mezcla de reacción se concentró al vacío, dando 5-nitro-2-(piperidin-1-ilcarbonil)piridina en bruto, que se usó para la siguiente etapa sin purificación adicional.

La 5-nitro-2-(piperidin-1-ilcarbonil)piridina en bruto se redujo con hidrógeno a presión atmosférica en presencia de paladio al 10 % sobre carbono (4 g) en ácido acético (500 mi). El catalizador se separó por filtración y el disolvente se evaporó al vacío, dando 6-(piperidin-1-ilcarbonil)piridin-3-amina en bruto, que se usó para la siguiente etapa sin purificación adicional.

Una solución de nitrito sódico (69 g) en ácido clorhídrico concentrado (1.5 I) se añadió a la 6-(piperidin-1-ilcarbonil)piridin-3-amina en bruto a 0 °C y la mezcla se agitó durante 10 minutos. Se añadió urea (20 g) y la mezcla se agitó durante 15 minutos. Se añadió yoduro sódico (150 g) y el producto se separó por filtración y se recristalizó en etanol, dando 5-yodo-2-(piperidin-l-ilcarbonil)piridina (rendimiento del 23 % calculado para 5-nitropiridin-2-carboxilato de metilo, 71 g).

Una mezcla de la 5-yodo-2-(piperidin-1-ilcarbonil)piridina (71 g, 0.23 moles), acetato de paladio (II) (1.03 g, 46 mmoles), 2-(di-ferc-butilfosfino)bifenilo (2.76 g, 92 mmoles), morfolina (23.7 g, 0.28 moles) y terc-butóxido sódico (27.8 g, 0.28 moles) en tolueno (400 mi) se agitó en una atmósfera de argón a 95 °C durante 2 horas. El producto se aisló por cromatografía (gel de sílice, acetato de etilo) y se recristalizó en etanol, dando 4-[6-(piperidin-1-ilcarbonil)piridin-3-il]morfolina (rendimiento del 37 %, 22 g).

Se añadió KOH al 25 % (100 mi) a 4-[6-(piperidin-1-ilcarbonil)piridin-3-il]morfolina (18.3 g) y la mezcla se calentó a reflujo y después se neutralizó con HCI. La solución se evaporó al vacío y el producto se extrajo con isopropanol caliente, dando el compuesto del título (rendimiento del 71 %, 11.5 g). +IEN EM (M+H) 209.7; RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.34 (s a, 1 H), 8.03 (d, 1 H), 7.65 (dd, 1 H), 3.75 (s a, 4 H), 3.40 (s a, 4 H).

Preparación del Ácido 9: ácido 7-cloro-2-metil-1 H-benzofdlimidazol-5-carboxílico Se añadió ácido clorhídrico 2 N (8 mi) a una solución de 3,4-diamino-5-clorobenzoato (de la preparación del ácido 1 , 435 mg, 2.17 mmoles) en etanol (20 mi). La mezcla se calentó a reflujo y después a la solución de color amarillo se le añadió acetilacetona (437 mg, 4.37 mmoles).

La solución amarilla se volvió de color púrpura después de la adición. Se agitó a la temperatura de reflujo durante 1 hora y la solución volvió a ser de color amarillo. Se agitó a la temperatura de reflujo durante 1 hora más. El disolvente se concentró, dando un residuo incoloro. Se añadió agua (20 mi). La suspensión se extrajo con acetato de etilo (20 mi). La fase acuosa se basificó con hidróxido sódico 2 N (~8 mi) a pH -10. Se extrajo con acetato de etilo (3 x 15 mi). Los extractos orgánicos combinados de la extracción básica se lavaron con salmuera (5 mi). Se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron, se concentraron y se secaron a alto vacío, produciendo 7-cloro-2-metil-1 H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo (290 mg, 59 %) en forma de un sólido incoloro. RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d ppm 2.68 (s, 3 H), 3.93 (s, 3 H), 7.25 (s, 1 H), 7.96 (s, 1 H).

Se añadió hidróxido sódico 2 N (5 mi, 5 mmoles) a una solución de 7-cloro-2-metil-1 H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo (280 mg, 1.25 mmoles) en metanol (7.5 mi). Se agitó a 65 °C durante 16 horas. El metanol se concentró al vacío y la fase acuosa restante se extrajo con acetato de etilo (10 mi). La fase acuosa se acidificó a pH ~4 con ácido clorhídrico 1 N (~5 mi). Se filtró un precipitado incoloro y se secó a alto vacío, produciendo el compuesto del título (189 mg, 72 %). RMN 1H (400 MHz, CD3OD) d ppm 2.61 (s, 3 H), 7.86 (d, J = 1.37 Hz, 1 H), 8.08 (d, J = 1.17 Hz, 1 H).

Preparación del Ácido 10: ácido 7-cloro-2-metil-1 H-benzo[dlimidazol-5-carboxilico matraz de fondo redondo se cargó con 5-bromo-3-fluorobenceno-1 ,2-diamina (400 mg, 2 mmoles) y 30 mi de etanol. Después, se añadió ácido clorhídrico 5 N (8 mi, 40 mmoles). Esta mezcla se calentó a reflujo y se añadió 2,4-pentanodiona. La mezcla de reacción se volvió de color púrpura oscuro y después volvió lentamente a color castaño. Se dejó que la reacción se desarrollara durante 3 horas y después se enfrió y se neutralizó con una solución saturada de bicarbonato sódico. Después, la mezcla de reacción se extrajo tres veces con diclorometano. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron al vacío, La mezcla en bruto se trituró en éter dietilico y después se filtró, dando 6-bromo-4-fluoro-2-metil-1 H-benzo[d]imidazol (375 mg, 82 %) en forma de un sólido de color castaño. RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d ppm 7.44 (s a, 1 H), 7.10 (d, J = 1 1.22 Hz, 1 H), 2.63 (s, 3 H).

Un vial para microondas de 5 mi se cargó 6-bromo-4-fluoro-2-metil-1 H-benzo[d]imidazol (187 mg, 0.815 mmoles) y se suspendió en dioxano desgasificado (2 mi), trans-di-µ-acetatobis[2-(di-0-tolilfosfino)bencil]dipaladio (II) (28 mg, 0.048 mmoles) y molibdenohexacarbonilo (1 10 mg, 0.417 mmoles). Después, se añadió carbonato sódico acuoso desgasificado al 10 % (2.45 mi, 2.45 mmoles). Después, la reacción se agitó durante 20 segundos, antes de hacerse reaccionar en el microondas a 155 °C a muy alta absorción durante 10 minutos. Después, el recipiente se ventiló y se dejó en reposo durante una noche a temperatura ambiente. Después, se añadieron agua (2 mi) y acetato de etilo (3 mi) y la mezcla se filtró a través de Celite®. Las fases se separaron y la fase acuosa se lavó con acetato de etilo (x 2). Las fases de acetato de etilo combinadas se apartaron. A la fase acuosa se le añadió agua (5 mi), después se acidificó con ácido clorhídrico 0.5 M a un pH de 3 y después se enfrió a 4 °C. Se formó un sólido que se filtró y se lavó con agua, dando el compuesto del título (61 mg, 37 %) en forma de un sólido de color amarillo. Se formó un segundo cultivo que después se filtró, dando el compuesto del título (100 mg, 63 %). RMN 1H (500 MHz, CD3OD) d ppm 8.22 (d, J = 0.98 Hz, 1 H), 7.91 (d, J = 10.49 Hz, 1 H), 2.95 (s, 3 H).

Preparación del Ácido 11: ácido 1 H-pirazolof4,3-b1pir¡din-6-carboxílico A una suspensión de hidruro sódico (5.08 g, 127 mmoles) en dimetilformamida (75 mi) se le añadió malonato de dietilo (19.26 mi, 127 mmoles) a 0 °C. Después, la solución se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos y se añadió gota a gota una solución de 5-bromo-2-cloro- 3-nitropiridina (30 g, 127 mmoles) en dimetilformamida (75 mi). Después, la mezcla de color pardo oscuro se agitó a 100 °C durante 2 horas antes de enfriarse a temperatura ambiente e inactivarse con una solución saturada de cloruro de amonio (500 mi) a 0 °C. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 500 mi) y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de magnesio. El disolvente se retiró al vacío, dando un aceite de color pardo oscuro que se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida (acetato de etilo al 10 %/hexano), proporcionando 2-(5-bromo-3-nitropiridin-2-il)malonato de dietilo en forma de un sólido de color pardo (31.8 g, 88 mmoles, 69 %). RMN 1H (400 MHz, CDCI3): d ppm 8.86 (s, 1 H), 8.61 (s, 1 H), 5.44 (1 H, s), 4.29 (c, 4 H), 1.27 (t, 6 H).

Una mezcla del 2-(5-bromo-3-nitropiridin-2-il)malonato de dietilo (31.8 g, 88 mmoles) en ácido clorhídrico acuoso (6 M, 1.4 I) se agitó a la temperatura de reflujo durante 18 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se añadió muy lentamente a una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (4 I) a 0 °C. Después, la mezcla se extrajo con diclorometano (7 I), se secó sobre sulfato de magnesio y el disolvente se retiró al vacío, dando 5-bromo-2-metil-3-nitropiridina en forma de un aceite de color naranja (13.8 g, 63.9 mmoles, 72 %) que solidificó después de un periodo de reposo. RMN 1H (300 MHz, CDCI3): d ppm 8.78 (s, 1 H), 8.43 (s, 1 H), 2.79 (s, 3 H).

A una solución de 5-bromo-2-metil-3-nitropiridina (13.8 g, 63.9 mmoles) en alcohol metilado industrial (330 mi) a 40 °C se le añadió polvo de hierro (20 g) (en porciones para evitar la aglutinación) seguido de ácido clorhídrico acuoso concentrado (5 mi). La mezcla de color pardo oscuro se agitó vigorosamente a la temperatura de reflujo durante 2 horas y después se enfrió y se filtró a través de Celite® (que se lavó con 1 I de alcohol metilado industrial). Después, el disolvente se retiró al vacío y el residuo se recogió en acetato de etilo (200 mi) y se lavó con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (200 mi), se secó sobre sulfato de magnesio y el disolvente se retiró al vacío, dando 5-bromo-2-metilpiridin-3-amina en forma de un sólido de color naranja, (10.7 g, 57.5 mmoles, 89.9 %). RMN 1H (400 MHz, CDCI3): d ppm 7.91 (s, 1 H), 7.00 (s, 1 H), 3.75 (s a, 2 H), 2.25 (s, 3 H).

A una solución de la 5-bromo-2-metilpiridin-3-amina (10.7 g, 57.5 mmoles) en diclorometano (575 mi) se le añadió anhídrido acético (12 mi, 126.5 mmoles) a 0 °C seguido de trietilamina (22 mi, 158 mmoles). La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 18 horas, momento en el que se añadió un equivalente más de anhídrido acético (6 mi, 63 mmoles). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 72 horas más. La mezcla de reacción se inactivo con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (500 mi) y la fase orgánica se lavó con cloruro sódico acuoso saturado (500 mi), se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró al vacío, dando un sólido de color pardo. Este sólido se trituró con acetato de etilo al 30 % en hexanos, produciendo N-(5-bromo-2-metilpiridin-3-il)acetamida en forma de un sólido de color blanquecino, (8.28 g, 36 mmoles, 63 %). RMN 1H (400 MHz, CD3OD): d ppm 8.31 (s, 1 H), 8.18 (s, 1 H), 2.43 (s, 3 H), 2.18 (s, 3 H).

A una solución de N-(5-bromo-2-met¡lp¡r¡d¡n-3-il)acetamida (8.28 g, 36 mmoles) en cloroformo (550 mi) a temperatura ambiente se le añadieron acetato potásico (4.32 g, 43.6 mmoles) y ácido acético (2.5 mi, 43.6 mmoles) seguido de anhídrido acético (6.86 mi, 72.6 mmoles). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos antes de calentarse a 40°C. Después, se añadió gota a gota nitrito de isoamilo. Después, la reacción se agitó a 60 °C durante 48 horas. La mezcla de reacción se vertió lentamente en una solución saturada de bicarbonato sódico (500 mi) a 0 °C. La fase orgánica se retuvo y la fase acuosa se extrajo con diclorometano (500 mi). Después, los extractos orgánicos combinados se concentraron, dando un aceite de color pardo que se disolvió en metanol (500 mi). Se añadió hidróxido sódico acuoso (2 M, 500 mi) a 0 °C y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora antes de que el metanol se retirara al vacío. Después, la mezcla acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 500 mi). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de magnesio y el disolvente se retiró al vacío, dando 6-bromo-1H-pirazolo[4,3-b]piridina en forma de un sólido de color pardo claro (5.5 g, 27.9 mmoles, 77 %). RMN 1H (400, CD3OD): d ppm 8.55 (s, 1 H), 8.24 (s, 1 H), 8.21 (s, 1 H).

A una solución de la 6-bromo-1 H-pirazolo[4,3-b]piridina (5.5 g, 27.9 mmoles) en metanol (125 mi) y acetonitrilo (75 mi) se le añadieron trietilamina (22 mi, 156 mmoles), 2,2,-bis(difenilfosfino)-1 ,1'-binaftilo (1.98 g, 3.07 mmoles), dicloruro de paladio (1.23 g, 6.98 mmoles). La mezcla se puso a 20 bar de monóxido de carbono, se calentó a 100 °C y se agitó vigorosamente durante 18 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró a través de Celite® antes de que el disolvente se retirara al vacío, produciendo un aceite de color pardo. Después, este aceite en bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida (1 :1 , acetato de etilo.hexano), dando H-pirazolo[4,3-b]piridin-6-carboxilato de metilo en forma de un sólido de color amarillo pálido (4.52 g, rendimiento del 92 %). RMN 1H (400, CDCI3) d ppm 10.56 (s, 1 H), 9.23 (s, 1 H), 8.35 (s, 1 H), 8.40 (s, 1 H), 4.01 (s, 3 H).

A una solución del 1 H-pirazolo[4,3-b]piridin-6-carboxilato de metilo (3.52 g, 20 mmoles) en metanol (250 mi) y agua (190 mi) a 0 °C se le añadió gota a gota hidróxido sódico acuoso (2 M, 64 mi, 128 mmoles). Después, la suspensión se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 18 horas. Después, el metanol se retiró al vacío y la mezcla acuosa se extrajo con acetato de etilo (250 mi) antes de acidificarse (a pH 5-6) con ácido clorhídrico acuoso (2 M, 70 mi). Después, el sólido de color crema que había precipitado se retiró por filtración y se secó en un desecador, produciendo el compuesto del título (0.675 g, 4.16 mmoles, rendimiento del 21 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 8.97 (s, 1 H), 8.45 (s, 1 H), 8.39 (s, 1 H).

Preparación del Ácido 12: ácido 3-ciano-1/-/-indazol-5-carboxílico Una suspensión de (2-nitrofenil)-acetonitrilo (30 g, 185 mmoles) y paladio al 10 % sobre carbono (2 g) en ácido acético (450 mi) se hidrogenó en un aparato Parr a una presión de 206.84 kPa (30 psi) a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla se filtró a través de una capa de Celite® y el filtrado se concentró al vacío. El residuo obtenido se disolvió en acetato de etilo (250 mi). La solución resultante se lavó con agua (2 x 100 mi) y cloruro sódico saturado (50 mi) y después se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró al vacío, produciendo el producto. El material en bruto se purificó por cromatografía en columna (malla 100-200 de gel de sílice) usando acetato de etilo al 8 % en éter de petróleo como eluyente, proporcionando (2-aminofenil)acetonitrilo (13.5 g, 55 %) en forma de un sólido. RMN 1H (CDCI3) d ppm 7.3-7.1 (m, 2 H), 6.9-6.7 (m, 2 H), 3.7 (a, 2 H), 3.5 (s, 2 H).

A una solución enfriada de (2-aminofenil)acetonitrilo (13 g, 98 mmoles) en dimetilformamida (150 mi) a 0 °C se le añadió en porciones N-bromosuccinimida (19.3 g, 108 mmoles) durante 30 minutos y se mantuvo a 0 °C durante 1 hora. La mezcla se diluyó con acetato de etilo (300 mi) y se lavó con agua (3 x 100 mi) y cloruro sódico saturado (50 mi). La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró al vacío. El producto en bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna (malla 100-200 de gel de sílice) usando acetato de etilo al 10 % en éter de petróleo como eluyente, proporcionando (2-amino-5-bromofenil)acetonitrilo (11 g, 53 %) en forma de un sólido. RMN 1H (CDCI3) d 7.35 (s, 1 H), 7.25 (d, 1 H), 6.65 (d, 1 H), 3.7 (a, 2 H), 3.52 (s, 2 H).

A una solución enfriada de (2-amino-5-bromofenil)acetonitrilo (11 g, 52 mmoles) en ácido clorhídrico concentrado (110 mi) a -50 °C se le añadió lentamente una solución de nitrito sódico (3.9 g, 57 mmoles) en agua (20 mi). Después de la adición, la mezcla se agitó a -50 °C durante 2 h. La mezcla se neutralizó con hidróxido de amonio al 33 % a 0 °C y se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 mi). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con cloruro sódico saturado (100 mi), se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron. El producto en bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna (malla 100-200 de gel de sílice) usando acetato de etilo al 10 % en éter de petróleo como eluyente, proporcionando 5-bromo-3-cianoindazol (7 g, 60 %) en forma de un sólido. RMN 1H (CDCI3) d ppm 10.7 (a, 1 H), 8.1 (s, 1 H), 7.64 (d, 1 H), 7.5 (d, 1 H).

Una suspensión de 5-bromo-3-cianoindazol (3 g, 13.51 mmoles), dicloruro de 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno paladio (1.76 g, 2.16 mmoles), acetato sódico (3.32 g, 40.5 mmoles) y dimetilformamida (1 mi) en metanol (100 mi) se desgasificó y se mantuvo en una atmósfera de monóxido de carbono (551.58 kPa (80 psi)) a 80 °C en un autoclave durante 16 horas. La mezcla se diluyó con agua (50 mi), se filtró a través de un lecho de Celite® y el filtrado se concentró. El residuo obtenido se acidificó con una solución al 10 % de ácido cítrico y se extrajo con acetato de etilo (2 x 100 mi). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (50 mi), se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron. El producto en bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna (malla 100-200 de gel de sílice) usando acetato de etilo al 10 % en cloroformo como eluyente, proporcionando 3-ciano-1H-indazol-5-carboxilato de metilo (1.8 g, 68 %) en forma de un sólido. RMN 1H (CDCI3) d ppm 10.8 (s, 1 H), 8.7 (s, 1 H), 8.22 (d, 1 H), 7.64 (d, 1 H), 4.0 (s, 3 H).

A una solución del 3-ciano-1/-/-indazol-5-carboxilato de metilo (2.5 g, 12 mmoles) en etanol (40 mi) se le añadió una solución de hidróxido de litio (1.04 g, 24.9 mmoles) en agua (15 mi) y se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla se concentró y el residuo obtenido se disolvió en agua (25 mi) y se lavó con acetato de etilo (20 mi). La fase acuosa se acidificó con una solución al 10 % de ácido cítrico y el precipitado obtenido se filtró, se lavó con acetato de etilo al 50 % en éter de petróleo (2 x 10 mi) y se secó, proporcionando el compuesto del título (1.9 g, 82 %) en forma de un sólido de color pardo. RMN 1H (DMSO-d6) d ppm 13.8-12.4 (a, 2 H), 8.44 (s, 1 H), 8.1 (d, 1 H), 7.82 (d, 1 H).

Preparación del Ácido 13: ácido 2-(1 H-pirazol-3-il)isonicotínico A una solución agitada de 29.0 g (69 mmoles) 2-bromo-4- metilpiridina en 150 mi ácido sulfúrico concentrado se le añadieron en porciones 67.9 g (231 mmoles) de dicromato potásico. La mezcla de reacción se enfrió con un baño de hielo para que la temperatura permaneciera entre 20-50 °C. Después de que se completara la adición, la agitación se continuó a temperatura ambiente durante 2 horas más. Después, la mezcla de reacción se vertió lentamente sobre 21 de hielo-agua y la mezcla se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. Los cristales resultantes se recogieron por filtración, se lavaron con agua hasta que los lavados se decoloraron y se secaron al vacío, proporcionando 30.0 g (88 %) de ácido 2-bromoisonicotínico.

A una solución enfriada con hielo del ácido 2-bromoisonicotínico (73 g, 0.361 moles) en diclorometano (500 mi) y metanol (35 g, 1.08 moles) se le añadió en porciones clorhidrato de 1-etil-3-[3- (dimetilamino)propil]carbodiimida (67 g, 0.434 moles). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Después, se añadieron 120 g gel de sílice y el disolvente se evaporó. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida, eluyendo con acetato de etilo al 5 % en éter de petróleo, proporcionando 58 g (75 %) de 2-bromoisonicotinato de metilo en forma de un sólido de color blanco.

El 2-bromoisonicotinato de metilo (216 g, 1 mol), acetonitrilo seco (1.7 I), etinil(trimetil)silano (117 g, 1.2 moles), diisopropilamina (122 g, 1.2 moles) y diclorobis(trifenilfosfina)paladio (36 g, 0.05 moles) se pusieron en un matraz de tres bocas con las paredes secas que se purgó dos veces con una corriente de nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó durante 0.5 horas, se enfrió a 10 °C y se añadió yoduro de cobre (19 g, 0.1 mol) en una corriente de nitrógeno. A 20 °C, la mezcla de reacción se volvió espesa y de color negro y se observó una exotermia que se siguió de la formación de un precipitado. Después de la adición de yoduro de cobre, la mezcla de reacción se agitó durante 2 horas más a temperatura ambiente. El residuo precipitado se separó por filtración y se lavó dos veces con éter dietílico (800 mi). El filtrado se lavó con cloruro de amonio saturado (2 x 300 mi) y salmuera (2 x 300 mi). Después del secado sobre sulfato sódico, el disolvente se evaporó. El residuo se purificó usando una columna de gel de sílice, eluyendo con hexano seguido de acetato de etilo al 5 % en éter de petróleo, produciendo 191 g (82 %) de 2-((trimetilsilil)etinil)isonicotinato de metilo.

Se añadió ácido sulfúrico concentrado (60 mi, 1.1 mol) a una suspensión del 2-((trimetilsilil)et¡nil)isonicotinato de metilo (127 g, 0.54 moles) en tetrahidrofurano (600 mi) y acetato de mercurio (51.5 g, 0.16 moles). La suspensión se agitó durante 3 horas a 50 °C y se mantuvo durante una noche. La mezcla de reacción se diluyó con éter dietílico (1.5 I) y el ácido sulfúrico se neutralizó con bicarbonato sódico saturado (150 g, 1.7 moles). Se separó un residuo de sales de mercurio por filtración. La solución de éter se lavó con agua y se secó sobre sulfato sódico. El disolvente se retiró, dando 2-acetilisonicotinato de metilo en forma de un aceite que se usó directamente en la siguiente etapa.

A un matraz de tres bocas y de 2 I se le añadieron el 2-acetilisonicotinato de metilo (160 g, 0.894 moles), dimetilformamida-dimetilacetamida (350 mi) y tolueno (350 mi). La mezcla se calentó a reflujo durante aproximadamente 5 horas con un purgador Dean-Stark para retirar el metanol producido. Se añadieron más cantidad de dimetilformamida-dimetilacetamida y tolueno para mantener el volumen de reacción a aproximadamente 800-900 mi. Cuando la cromatografía liquida-espectrometría de masas mostró que la reacción se había completado, el disolvente se retiró, produciendo 2-(3-(dimetilamino)acriloil)isonicotinato de (Z)-metilo en bruto en forma de un sólido de color oscuro. El sólido en bruto se usó directamente en la siguiente etapa.

A un matraz de tres bocas y de 2 I se le añadieron el 2-(3-(dimetilamino)acriloil)isonicotinato de (Z)-metilo (0.894 moles), hidrazina hidrato (48.8 g) y etanol anhidro (1 I). La suspensión se agitó a 20 °C durante una noche. El disolvente se retiró al vacío. El residuo se recogió en ácido clorhídrico concentrado (600 mi) y se calentó a reflujo durante 2 horas. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente. El precipitado resultante se filtró, se lavó con agua, etanol y acetona y se secó, dando 78.6 g del compuesto del título en forma de un sólido de color pardo. RMN 1H (DMSO-de DaO) d ppm 8.80 (d, 1 H), 8.50 (s, 1 H), 7.91 (d, 1 H), 7.87 (dd, 1 H), 7.15 (d, 1 H).

Preparación del Ácido 14: ácido 3-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzofdlimidazol-5-carboxilico Se añadió una solución acuosa de hidrosulfito sódico (17.4 g, 100 mmoles en 80 mi de agua) a 3-(metilamino)-4-nitrobencenocarboxilato de metilo (855 mg, 4.75 mmoles) en tetrahidrofurano (70 mi) y etanol (30 mi) a 0 °C. La solución de color naranja se convirtió en una suspensión naranja después de la adición. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La suspensión de color naranja se convirtió en una suspensión de color amarillo durante este tiempo. Se añadió bicarbonato sódico saturado (100 mi) y después la suspensión de color amarillo se volvió incolora. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (2 x 100 mi). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (30 mi). Se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron, se concentraron y se secaron a alto vacío, produciendo 4-amino-3-(metilamino)benzoato de metilo (586 mg, 68 %) en forma de un aceite de color amarillo. El aceite resultante comenzó a cristalizar después de un periodo de reposo de 10 minutos. RMN H (400 MHz, CDCI3) d ppm 2.89 (s, 3 H), 3.37 -3.81 (m, 2 H), 3.85 (s, 3 H), 6.67 (d, J = 8.01 Hz, 1 H), 7.33 (d, J = 1.37 Hz, 1 H), 7.44 (dd, J = 8.11 , 1.66 Hz, 1 H).

Se añadió carbonil diimidazol (567 mg, 3.50 mmoles) a una solución de 4-amino-3-(metilamino)benzoato de metilo (586 mg, 3.19 mmoles) en tetrahidrofurano (20 mi) a temperatura ambiente. La solución de color amarillo se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. Se añadió carbonil diimidazol (500 mg, 0.96). Se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. Se añadió acetato de etilo (75 mi). Se lavó con ácido cítrico al 10 % (5 mi), hidróxido sódico 1 N (5 mi) y salmuera (5 mi). Los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron, se concentraron y se secaron a alto vacío, produciendo un sólido en bruto de color amarillo (690 mg, 100 %). Este sólido en bruto se trituró con acetato de etilo (10 mi). El precipitado se filtró y se secó a alto vacío, produciendo 3-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo (422 mg, 64 %). RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d ppm 3.46 (s, 3 H), 3.92 (s, 3 H), 7.12 (d, J = 8.21 Hz, 1 H), 7.68 (s, 1 H), 7.84 (dd, J = 8.31 , 1.47 Hz, 1 H), 9.87 - 10.03 (m, 1 H).

Se añadió hidróxido sódico 1 N (6.1 mi, 6.1 mmoles) a una suspensión de 3-metil-2-oxo-2,3-dihidro-1H-benzo[d]imidazol-5-carbox¡lato de metilo (420 mg, 2.04 mmoles) en metanol (10 mi). La suspensión se convirtió en una solución después de la adición de hidróxido sódico 1 N. Se agitó a 65 °C durante 16 horas. Se enfrió a temperatura ambiente y después se concentró para retirar el metanol. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (5 mi). La fase acuosa se acidificó con cloruro ácido 2 N (3 mi) a pH ~2. La fase acuosa se concentró, dando un sólido. El sólido se trituró con agua (3 mi). El precipitado se filtró y se secó a alto vacío, produciendo el compuesto del título (234 mg, 59 %) en forma de un sólido de color pardo pálido. RMN 1H (400 MHz, DMSO-cíe) d ppm 3.28 (s, 3 H), 7.01 (d, J = 8.21 Hz, 1 H), 7.57 (s, 1 H), 7.63 (dd, J = 8.11 , 1.27 Hz, 1 H), 1 1.19 (s, 1 H), 12.60 (s, 1 H).

Preparación del Ácido 15: ácido 7-bromo-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzofdlimidazol-5-carboxílico Una suspensión de 4-amino-3-bromo-5-nitrobenzoato de metilo (10 g, 36.3 mmoles) y cloruro de estaño (II) (33 g, 14.5 mmoles) en metanol (100 mi) se calentó a 60 °C y se mantuvo durante 4 horas. La masa de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró, obteniendo un residuo; el residuo se basificó usando bicarbonato sódico acuoso saturado hasta que el pH fue 1 1 y la fase acuosa se extrajo con diclorometano (3 x 200 mi). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con cloruro sódico acuoso saturado (200 mi), se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron, obteniendo 3,4-diamino-5-bromobenzoato de metilo en forma de un sólido de color blanquecino (5 g, 58 %). RMN 1H (CDCI3): d ppm 7.74 (s, 1 H), 7.35 (s, 1 H), 4.18 (s ancho, 2 H), 3.85 (s, 3 H) y 3.38-3.56 (s ancho, 2 H).

Una solución de 3,4-diamino-5-bromobenzoato (1 g, 4.0 mmoles) y trietilamina (0.4 g, 4.0 mmoles) en diclorometano (6 mi) se enfrió a 0 °C. A esta solución se le añadió una solución de trifosgeno (1.2 g, 4.08 mmoles) en diclorometano (15 mi). La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se mantuvo durante 18 horas. La masa de reacción se inactivo con agua (3 mi) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 10 mi). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con cloruro sódico acuoso saturado (50 mi), se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron, obteniendo 7-bromo-2-???-2, 3-dihidro-1 H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo en forma de un sólido de color blanquecino (500 mg, 45 %). RMN 1H (CDCI3 + DMSO-d6): d 1 1.35 (s, 1 H), 11.05 (s, 1 H), 7.75 (s, 1 H), 7.52 (s, 1 H) y 3.85 (s, 3 H).

El 7-bromo-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo (238 mg, 0.878 mmoles) e hidróxido sódico acuoso 2 N (1.50 mi, 3.0 mmoles) se combinaron en metanol (5 mi) y se calentaron a 50 °C durante 90 minutos. La solución de reacción se concentró para retirar el metanol. Al residuo de la reacción se le añadió acetato de etilo (5 mi). La solución resultante se acidificó con ácido clorhídrico acuoso 1 N (1.5 mi), dando un pH final de 4. Se formó un precipitado que se filtró y se secó al vacío, dando el compuesto del título (226 mg, 100 %) en forma de un sólido. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) d ppm 7.89 (d, J = 1.37 Hz, 1 H) 7.65 (d, J = 1.37 Hz, 1 H).

Preparación del Ácido 16: ácido 2-(3-metil-1 ,2,4-oxadiazol-5-¡Disonicotinico Una mezcla de acetonitrilo (2 moles), clorhidrato de hidroxilamina (2 moles) y metóxido sódico (2 moles) se agitó a temperatura ambiente durante 3 días, después se filtró y el filtrado se concentró por debajo de 20 °C, dando (Z)-N'-hidroxiacetimidamida (150 g) en forma de un sólido de color blanco que se usó directamente en la siguiente etapa.

Una mezcla de metanol (800 mi), hidróxido potásico (44 g, 0.95 moles) y piridin-2,4-dicarboxilato de dimetilo (ChemPacific) (156 g, 0.79 moles) se calentó a reflujo durante 0.5 horas y después se evaporó al vacío, proporcionando ácido 4-(metoxicarbonil)picolínico (144 g) en forma de un sólido de color amarillo.

A ácido 4-(metoxicarbonil)picolínico (150 g, 1.62 moles) en diclorometano (500 mi) se le añadió cloruro de oxalilo (400 mi) manteniendo la temperatura a 25-30 °C durante 3 días. La reacción se evaporó al vacío, proporcionando 2-(clorocarbonil)isonicotinato de metilo en forma de un aceite de color amarillo.

A una solución del 2-(clorocarbonil)isonicotinato de metilo en diclorometano (500 mi) se le añadieron (Z)-N'-hidroxiacetimidamida y trietilamina, manteniendo la temperatura a 25-30 °C durante 1 día. La reacción se concentró al vacío, proporcionando 2-((1-aminoetilidenoaminooxi)carbonil)isonicotinato de (Z)-metilo en forma de un sólido de color amarillo.

Una solución del 2-((1-am¡noetilidenoaminooxi)carbonil)isonicotinato de (Z)-metilo en tolueno (1 I) se calentó a reflujo durante una noche. La mezcla obtenida se evaporó y se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice, proporcionando 2- (3-met¡l-1 ,2,4-oxadiazol-5-il)isonicotinato de metilo en forma de un sólido de color blanco.

Una mezcla de hidróxido de litio (15 g, 0.35 moles), etanol (500 mi) y 2-(3-metil-1 ,2,4-oxadiazol-5-il)isonicotinato de metilo (52 g, 0.23 moles) se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas y después la mezcla se concentró al vacío. Se añadió agua y después se extrajo con acetato de etilo. La fase de agua se llevó a pH 1.5 con ácido clorhídrico acuoso 1 N y se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se concentró al vacío, proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (42 g). RMN 1H (300 MHz, DMSO-c/6) d ppm 14.08 (s a, 1 H) 9.00-8.98 (m, 1 H) 8.50 (s, 1 H) 8.09-8.07 (m, 1 H), 2.46 (s, 3 H).

Preparación l-1A-1a: 9-oxo-3-azaespiro[5.51undec-7-en-3- carboxilato de tere-butilo Se añadió metil vinil cetona (146 mi) a una solución de 4- formilpiperidin-1-carboxilato de íerc-butilo (375 g) en tetrahidrofurano (18 I). La mezcla de reacción se enfrió a -5 °C y se añadió gota a gota una solución de hidróxido potásico en etanol (3 N, 0.243 I) durante 10 minutos. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas.

Se añadió ciclohexano (10 I) y la solución se lavó con cloruro sódico saturado (3 x 10 I). La fase orgánica se concentró, dando un aceite. Este aceite se disolvió en 2 I de 80:20 de ciciohexano/acetato de etilo y se filtró a través de Celite® para retirar el material insoluble. El filtrado se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida (70:30 de hexano/acetato de etilo), proporcionando el producto en forma de un aceite. El aceite se trituró en hexanos, proporcionando el producto deseado en forma de un sólido de color blanco (131 g, 28 %).

Preparación l-1A-1b: 10-((dimetilamino)metileno)-9-oxo-3-azaespirof5.51undec-7-en-3-carboxilato de (E)-terc-butilo La preparación l-1A-1a (101 g) y tris(dimetilaminometano) (133 mi) se disolvieron en tolueno (800 mi) y se calentaron a reflujo durante 17 horas. La mezcla de reacción se concentró hasta un volumen de agitación mínimo y se añadió acetato de etilo (600 mi). Esta mezcla se calentó a reflujo y se añadió heptano (1.2 I) durante 20 minutos. La solución caliente se enfrió a temperatura ambiente durante 3 horas. Los sólidos se filtraron a través de una frita sinterizada áspera y se lavaron con heptano (300 mi). El sólido resultante se secó en una estufa de vacío a 40 °C durante 3 horas, proporcionando el producto deseado en forma de un sólido de color amarillo (107 g). RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d ppm 7.48 (s, 1 H), 6.57 (d, J = 9.97 Hz, 1 H), 5.99 (d, J = 10.16 Hz, 1 H), 3.32 - 3.51 (m, 4 H), 3.06 (s, 6 H), 2.72 (s, 2 H), 1.57 - 1.66 (m, 2 H), 1.41 - 1.53 (m, 11 H).

Preparación l-1A-1c: 1-isopropil-1 ,4-dihidroesp¡ro[indazol-5,4'-piperidinl-1'-carboxilato de tere-butilo La preparación l-1A-1b (107 g) se recogió en tolueno (700 mi) y se añadió isopropil hidrazina (44.4 g). La reacción se agitó a la temperatura de reflujo durante 4 horas. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se añadió acetato de etilo (500 mi). La solución de reacción se lavó con ácido cítrico (2 x 300 mi, acuoso al 10 %) y agua (400 mi). La fase orgánica se concentró al vacío, proporcionando 1-1A-1c en forma de un sólido de color amarillo (109 g). RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d ppm 7.25 (s, 1 H) 6.42 (dd, J = 10.05, 0.49 Hz, 1 H) 5.84 (d, J = 9.95 Hz, 1 H) 4.42 - 4.52 (m, 1 H) 3.36 - 3.53 (m, 4 H) 2.62 (s, 2 H) 1.56 - 1.68 (m, 2 H) 1.45 - 1.55 (m, 17 H).

Preparación I-1A-1Ó: 1-isopropil-7-oxo-1 ,4,6,7-tetrahidroespirofindazol l-5,4'-piperidinl-1'-carboxilato de ferc-butilo A una solución de la Preparación l-1A-1c (109 g) en metanol (1 I) se le añadió /V-bromosuccinimida (61.4 g). La reacción se agitó durante 1 hora. La reacción se interrumpió con tiosulfato sódico (10 g en 300 mi de agua) y después se destiló hasta alcanzar un volumen final de 500 mi. La solución se enfrió a temperatura ambiente y se añadieron 2-metil tetrahidrofurano (1 I) y agua (100 mi). La fase orgánica se retiró y la fase acuosa se extrajo con 2-metiltetrahidrofurano. Las fases orgánicas se combinaron y se lavaron con hidróxido sódico acuoso (1 N, 250 mi), agua y cloruro sódico acuoso saturado. La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró, dando un aceite de color naranja. El aceite se disolvió en tetrahidrofurano (500 mi) y se añadió terc-butóxido potásico (76.8 g) en tetrahidrofurano (500 mi). La solución se calentó a 60 °C y se agitó durante 1 hora. Se añadió ácido clorhídrico acuoso (1 N, 1 I) y la solución se agitó durante 30 minutos. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (700 mi). Las fases orgánicas se combinaron y se lavaron con agua (400 mi) y cloruro sódico acuoso saturado ( 00 mi). La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró al vacío, dando un residuo. El residuo se secó en una estufa de vacío a 40 °C durante 16 horas, proporcionando el compuesto del título en forma de una cera de color naranja (117 g). RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d ppm 7.35 (s, 1 H), 5.32 - 5.42 (m, 1 H), 3.29 - 3.51 (m, 4 H), 2.73 (s, 2 H), 2.51 (s, 2 H), 1.47 - 1.57 (m, 4 H), 1.42 -1.46 (m, 15 H); +IEN EM (M+H) = 348.5.

Preparación l-1A-1e: 1-isopropil-4.6-dihidroespirofindazol-5,4'-piperidinl-7(1 H)-ona La Preparación 1-1 A-1d (23.5 g) se suspendió en acetato de etilo (260 mi) y metanol (70 mi). La solución de reacción se enfrió a <2 °C y se añadió gota a gota cloruro de acetilo (33.6 mi) durante 20 min. La reacción se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante 4 horas. La solución de reacción se enfrió a 0 °C y el precipitado se filtró. El precipitado se lavó con acetato de etilo (200 mi) y se secó en una estufa de vacío (40 °C, 10 mm de Hg) durante 16 horas, proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido de color amarillo claro. RMN H (400 MHz, CD3OD) d ppm 7.43 (s, 1 H), 5.32 - 5.42 (m, 1 H), 3.15 - 3.25 (m, 4 H), 2.89 (s, 2 H), 2.64 (s, 2 H), 1.69 - 1.90 (m, 4 H), 1.37 - 1.45 (m, 6 H); +IEN EM (M+H) = 248.4.

Preparación alternativa de 1-isopropil-4.6-< dihidroespiroíindazol- 5,4'-Piperidinl-7(1H)-ona Preparación (l-1A-1e): disolvieron 9-oxo-3-azaespiro[5.5]undec-7-en-3-carboxilato de /ere-butilo (250 g) y tris(dimetilaminometano) (325 mi) en tolueno (1.9 I) y se calentaron a reflujo durante 4 horas. La mezcla se destiló, se concentró hasta alcanzar un volumen mínimo de agitación (110 °C) y después se añadió tolueno (1.9 I). La reacción se destiló de nuevo hasta alcanzar un volumen de agitación mínimo y se enfrió a temperatura ambiente. Se añadieron tolueno (1.8 I) y clorhidrato de isopropilhidrazina (135 g) y la solución se calentó a reflujo durante 5 horas. La reacción se enfrió a temperatura ambiente, después se lavó con ácido cítrico (acuoso al 10 %, 2 x 150 mi) y agua (200 mi) y después la fase orgánica se destiló hasta alcanzar un volumen mínimo de agitación. Se añadió metanol (2 I) y se destiló hasta alcanzar un volumen mínimo de agitación. Esto se repitió con metanol (2 I). La solución se disolvió de nuevo en metanol (2.5 I) y se añadió en una porción N-bromosuccinimida (176 g). La solución se agitó a 23 °C durante 2 horas. Se añadió una solución acuosa de tiosulfato sódico (al 5 % en peso, 0.5 I) y la mezcla se agitó durante 15 minutos. La mezcla de reacción se concentró por destilación (45 °C, 210 mm de Hg) a ~0.5 I y después se añadió 2-metil tetrahidrofurano (2.5 I).

Después de agitar durante 15 minutos, la fase acuosa se desechó. La fase orgánica se concentró a -0.2 I y se añadió tetrahidrofurano (0.5 I). A la mezcla se le añadió una solución de íerc-butóxido potásico en tetrahidrofurano (1.9 I, solución 1 M). La solución se calentó a 60 °C y se agitó durante 1 hora. Después de enfriar a temperatura ambiente, se añadió ácido clorhídrico acuoso (1 N, 2.2 I) durante 20 minutos. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos y después se dejó que las fases se separaran. La fase acuosa se retiró y se extrajo de nuevo con acetato de etilo (1.75 I). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua (1 I) y la fase orgánica se concentró por destilación (se retiraron 4 I de disolvente). Se añadió acetato de etilo (1.8 I) y la solución se concentró hasta alcanzar un volumen mínimo de agitación. Se añadieron acetato de etilo (3 I) y metanol (0.8 I) y la solución se enfrió a 0 °C. Se añadió gota a gota cloruro de acetilo (401 mi) durante 20 minutos y la solución se agitó a 0 °C durante 4 horas. El precipitado se recogió por filtración en una atmósfera de nitrógeno. El filtrado se lavó con acetato de etilo (0.5 I) y se secó en una estufa de vacío a 40 °C, proporcionando el 1-1 A-1e en forma de un sólido de color blanquecino (241 g). RMN H (400 MHz, CD3OD) d ppm 7.43 (s, 1 H), 5.32 - 5.42 (m, 1 H), 3.15 - 3.25 (m, 4 H), 2.89 (s, 2 H), 2.64 (s, 2 H), 1.69 - 1.90 (m, 4 H), 1.37 - 1.45 (m, 6 H); +IEN (M+H) = 248.4.

Preparación 1-1 A-2: 9-oxo-3-azaespiro[5.51undec-7-en-3-carboxilato de bencilo A una solución en benceno (700 mi) de 4-formilpiperidin-1-carboxilato de bencilo (90.0 g, 363.9 mmoles) en agitación en un matraz de 3 bocas y de 2 I equipado con un purgador Dean-Stark se le añadió ácido p-toluenosulfónico (6.92 g, 36.4 mmoles). La reacción se calentó a 70 °C, se añadió 3-buten-2-ona (61.8 mi, 753 mmoles) y la mezcla se calentó a reflujo durante 24 horas, recogiendo el agua expelida en el purgador. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se lavó con 500 mi de bicarbonato sódico acuoso saturado. La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró. El aceite de color pardo oscuro resultante se recogió en 200 mi de diclorometano y se filtró a través de una capa de sílice (600 mi de sílice), eluyendo con 2 I de heptano seguido de 3 I de acetato de etilo al 50 %/heptano y después 3 I de acetato de etilo, recogiendo por fracciones de 1 I. Las fracciones que contenían el producto limpio se combinaron y se concentraron, produciendo 68.1 g del compuesto del título en forma de un aceite espeso de color pardo. Las fracciones que contenían el producto impuro se combinaron, se concentraron y se purificaron por cromatografía ultrarrápida (acetato de etilo al 10-80 %/heptano, 340 g gel de sílice), produciendo 23.6 g más del compuesto del título en forma de un aceite espeso de color pardo. Se consiguió un rendimiento combinado de 91.7 g, (94.1 %). RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d ppm 7.27 - 7.43 (m, 5 H), 6.79 (d, J = 10.3 Hz, 1 H), 5.95 (d, J = 10.3 Hz, 1 H), 5.13 (s, 2 H), 3.56 - 3.71 (m, 2 H), 3.39 - 3.55 (m, 2 H), 2.38 - 2.50 (m, 2 H), 1.96 (t, J = 6.7 Hz, 2 H), 1.70-1.52 (m, 4 H).

Preparación l-1A-2a: 10-((dimetilamino)metileno)-9-oxo-3-azaespiro[5.51undec-7-en-3-carboxilato de bencilo Se disolvió éster bencílico del ácido 9-oxo-3-aza-espiro[5.5]undec-7-en-3-carboxílico, Preparación I-1A-2 (15.2 g, 51 mmoles), en 180 mi de tolueno y se añadió tris(dimetilamino)metano (22.2 g, 27 mmoles). La reacción se calentó a reflujo durante 5 horas y después se dejó enfriar a temperatura ambiente durante una noche. La solución de reacción se concentró al vacío para proporcionar el compuesto del título (18.0 g, 100 %): +IQPA EM (M+H) 354.6; RMN H (400 MHz, CDCI3) d ppm 7.49 (s, 1 H), 7.28 - 7.40 (m, 5 H), 6.59 (d, J = 10.16 Hz, 1 H), 6.01 (d, J = 9.97 Hz, 1 H), 5.13 (s, 2 H), 3.52 - 3.66 (m, 2 H), 3.39 - 3.52 (m, 2 H), 3.07 (s, 6 H), 2.74 (s, 2 H), 1.58 - 1.73 (m, 2 H), 1.41 - 1.58 (m, 2 H).

Preparación l-1A-2b: 1-ferc-butil- ,4-dihidroespiro[indazol-5,4'-piperidinl-1 '-carboxilato de bencilo La Preparación 1-1 A-2a (59.2 g, 167 mmoles) se disolvió en 835 mi de etanol. A la solución de reacción se le añadieron ácido acético (20 mi, 345 mmoles) y clorhidrato de terc-butilhidrazina (29.1 g, 234 mmoles). La reacción se calentó a reflujo durante 1 hora. La solución de reacción se enfrió a temperatura ambiente y después se concentró al vacío, dando un aceite de color naranja que se purificó por cromatografía ultrarrápida usando acetato de etilo al 20-40 % en heptano como eluyente, proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido de color amarillo pálido (50 g, 79 %): +IEN EM (M+H) 380.5; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d ppm 7.26 - 7.40 (m, 5 H) 7.17 (s, 1 H) 6.66 (d, J = 9.95 Hz, 1 H) 5.77 (d, J = 10.15 Hz, 1 H) 5.12 (s, 2 H) 3.38 -3.64 (m, 4 H) 2.58 (s, 2 H) 1.60 (s, 12 H) 1.50 (s a, 1 H).

Preparación l-1A-2c: 6-bromo-1 -terc-butil-7-hidroxi-1 , 4,6,7-tetrahidroespiro[indazol-5,4'-piper¡din1-1 '-carboxilato de bencilo La Preparación 1-1 A-2b (50 g, 132 mmoles) se disolvió en 1 I de tetrahidrofurano. A la reacción se le añadieron /V-bromosuccinimida (24.6 g, 138 mmoles) y 250 mi de agua. La reacción se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. La reacción se repartió entre acetato de etilo y agua. Las fases se separaron y la fase orgánica se lavó 2 veces más con agua y una vez con cloruro sódico acuoso saturado. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se concentró al vacio y se cristalizó en éter, proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido de color crema (60.7 g, 97 %): +IEN EM (M+H) 476.5; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d ppm 7.28 - 7.36 (m, 5 H), 7.27 (s, 1 H), 5.23 (t, J = 4.68 Hz, 1 H), 5.12 (s, 2 H), 4.24 (d, J = 4.49 Hz, 1 H), 3.87 (s a, 2 H), 3.12 (s a, 2 H), 2.79 (d, J = 16.00 Hz, 2 H), 2.59 (d, J = 15.80 Hz, 2 H), 1.95 (s a, 1 H), 1.66 (s, 11 H), 1.58 (s a, 1 H).

Preparación I-1A-2Ó: 6-bromo-1 -terc-butil-7-oxo-1 , 4,6,7-tetrahidroespirof indazol-5,4'-piperidin1-1 '-carboxilato de bencilo La Preparación l-1A-2c (57.9 g, 122 mmoles) se disolvió en 1 I de acetona y después se enfrió a 0 °C en un baño de hielo. A la solución se le añadieron 122 mi de reactivo de Jones (Fillion, E. Tetrahedron Letters 2004, 46, 1091-1094). El baño de hielo se retiró y la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente, a la que se agitó durante 45 minutos. Se añadió bicarbonato sódico acuoso saturado hasta que no se apreció más desprendimiento de gas y el pH alcanzó un valor de 7. La mezcla resultante se filtró a través de una capa de Celite® aclarando con acetato de etilo. Las fases filtradas se separaron y la fase acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos se combinaron, se lavaron dos veces con agua y una vez con cloruro sódico acuoso saturado, se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron al vacío. El residuo se cristalizó en acetato de etilo/heptano, proporcionando el compuesto del título (50.4 g, 87 %): +IEN EM (M+H) 474.5; RMN H (400 MHz, CDCI3) d ppm 7.32 (d, J = 9.38 Hz, 6 H), 5.11 (s, 2 H), 4.24 (s, 1 H), 3.58 - 3.84 (m, 2 H), 3.16 - 3.41 (m, 2 H), 2.67 -2.91 (m, 2 H), 1.80 (s a, 1 H), 1.61 - 1.76 (m, 1 1 H), 1.52-1.61 (m, 1 H).

Preparación l-1A-2e: 1-ferc-butil-7-oxo-1 ,4,6,7-tetrahidroespirofindazol-5,4'-piperidin1-T-carboxilato de bencilo La Preparación l-1A-2d (50.4 g, 106 mmoles) se disolvió en 600 mi de tetrahidrofurano y a esto se le añadieron cloruro de amonio acuoso saturado (600 mi) y polvo de cinc (20.8 g, 319 mmoles). La reacción se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente. La reacción se filtró a través de Celite®, las fases se separaron y la fase orgánica se lavó con agua y cloruro sódico acuoso saturado, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró al vacío, dando una espuma. La espuma se trituró una vez en acetato de etilo/heptano y una vez en éter y se filtró, proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (40.4 g, 96 %): +IEN EM (M+H) 396.5; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d ppm 7.24 - 7.38 (m, 6 H), 5.1 1 (s, 2 H), 3.36 - 3.61 (m, 4 H), 2.74 (s, 2 H), 2.54 (s, 2 H), 1.64 (s, 9 H), 1.51 (s a, 4 H).

Preparación l-1A-2f: 1 -ferc-butil-4,6-d¡hidroespiro[indazol-5,4'-p¡peridinl-7(1/- -ona (1-1A-2D La Preparación l-1A-2e (46.6 g, 118 mmoles) se disolvió en 730 mi etanol y la solución se añadió a paladio al 10 % sobre carbono (9.4 g). A esto se le añadió 1-metil-1 ,4-ciclohexadieno (90 mi, 769 mmoles). La reacción se agitó a la temperatura de reflujo durante 2 horas. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró a través de Celite®. El filtrado se concentró al vacío, dando un sólido de color gris. El sólido se disolvió en 150 mi de acetato de etilo y a esto se le añadieron 35 mi de ácido clorhídrico 4 M en dioxano. Se formó un precipitado y se recogió por filtración, proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (34 g, 97 %); +IEN EM (M+H) 262.5; RMN 1H (400 MHz, CD3OD) d ppm 7.34 (s, 1 H) 3.12 - 3.25 (m, 4 H) 2.90 (s, 2 H) 2.66 (s, 2 H) 1.67 - 1.85 (m, 4 H) 1.62 (s, 9 H).

Preparación l-2A-42a: 1-(2-etoxi-2-oxoetil)-1 ,4-dihidroespirofindazol-5 ,4'-piperidin1-1'-carboxilato de tere-butilo Se añadió clorhidrato de hidrazinoacetato de etilo (0.92 g, 5.95 mmoles) a una solución de la Preparación l-1A-2a (1.25 g, 3.90 mmoles) en etanol (30 mi). La mezcla se agitó a la temperatura de reflujo durante 1 hora. Una alícuota indicó que la reacción se había completado por RMN 1H. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a alto vacío, dando un aceite de color pardo. El aceite se trituró con éter dietílico (50 mi). El precipitado se filtró y el filtrado se concentró y se secó a alto vacío, produciendo el compuesto del título (1.50 g, 100 %) en forma de un aceite de color pardo. +IQPA EM (M+H) 376.2; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d ppm 1.21 -1.26 (m, 3 H), 1.43 (s, 9 H), 1.45 - 1.52 (m, 2 H), 1.54 - 1.64 (m, 2 H), 2.62 (s, 2 H), 3.33 - 3.49 (m, 4 H), 4.15 - 4.22 (m, 2 H), 4.82 (s, 2 H), 5.87 (d, J = 9.97 Hz, 1 H), 6.26 (d, J = 9.97 Hz, 1 H), 7.24 (s, 1 H).

Preparación l-2A-42b: 2-(1 '-(terc-butoxicarbonil)espiroíindazol-5,4'-PiperidinM (4H)-il)malonato de dietilo La Preparación l-2A-42a (1.45 g 3.86 mmoles) en tolueno (5 mi) se añadió gota a gota a una suspensión de hidruro sódico (0.148 g, dispersión al 60 % en aceite mineral) en carbonato de dietilo (30 mi) a 80 °C durante 30 minutos. La reacción se agitó a la temperatura de reflujo durante 1.5 horas. El análisis por RMN 1H indicó que el material de partida se había consumido y que se había formado el producto deseado. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente. Se añadió metanol (1 mi) y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se añadió agua (5 mi). La solución se acidificó a pH ~3 con ácido clorhídrico acuoso 2 N (3 mi) y después se extrajo con diclorometano (3 x 15 mi). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron, se concentraron y se secaron a alto vacío, produciendo una goma de color pardo (1.59 g, 92 %). El material en bruto se trituró con 1 :1 de éter dletllico:heptanos (50 mi). El precipitado se filtró. El filtrado se concentró y se secó a alto vacío, produciendo el compuesto del título (1.25 g, 72 %). +IQPA EM (M+H) 348.1 ; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d ppm 1. 3 - 1.32 (m, 6 H), 1.40 - 1.46 (m, 9 H), 1.46 - 1.54 (m, 2 H), 1.59 (d, J = 13.68 Hz, 3 H), 2.62 (s, 2 H), 3.31 - 3.51 (m, 4 H), 4.27 (c, J = 7.23 Hz, 4 H), 5.85 (d, J = 9.97 Hz, 1 H), 6.34 (d, J = 9.97 Hz, 1 H), 7.24 (s, 1 H).

Preparación l-2A-42c: 1-(1.3-dihidroxipropan-2-il)- ,4-dihidroespiro[indazol-5,4'-piperidin1-1 '-carboxilato de terc-butilo Se añadió tetrahidrofurano (40 mi) a hidruro de litio y aluminio (900 mg) en un matraz de fondo redondo de 125 mi y de 3 bocas equipado con una entrada de nitrógeno y termómetro. La solución se enfrió a -2 °C. Se añadió gota a gota la Preparación l-2A-42b (1 g) en tetrahidrofurano (5 mi) durante 5 minutos. La temperatura nunca fue superior a -0.2 °C durante la adición. La reacción se agitó a 0 °C durante 3 horas y después la reacción se interrumpió a través de la adición secuencial de agua (1.0 mi), hidróxido sódico acuoso al 15 % (1.0 mi) y agua (3 mi). La temperatura interna nunca fue superior a 3.2 °C durante la adición. Después, la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente durante 15 minutos. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite® y se lavó con éter dietílico (3 x 20 mi). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (5 mi), se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron, se concentraron y se secaron a alto vacío, produciendo un vidrio de color amarillo pálido (548 mg, 67 %). Este material se cromatografió sobre 25 g de sílice eluyendo con metanol del 2 % al 8 % en dlclorometano con hidróxido de amonio al 0.1 % durante 30 minutos, produciendo el compuesto del título (133 mg, 16 %). +IQPA EM (M+H) 364.2; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d ppm 1.45 (s, 9 H), 1.51 (s a, 2 H), 1.60 (s a, 4 H), 2.62 (s, 2 H), 3.32 - 3.53 (m, 4 H), 4.05 (s a, 4 H), 4.26 (t, J = 4.89 Hz, 1 H), 5.89 (s, 1 H), 6.40 (d, J = 9.77 Hz, 1 H), 7.23-7.25 (m, 1 H).

Preparación l-2A-42d. 1-(oxetan-3-il)-1 ,4-dih¡droespiro[indazol- 5,4'-piperidinH'-carboxilato de tere-butilo Se añadió n-but¡l litio 2.5 M en hexanos (0.33 mi, 165 µ?) a una solución de la Preparación l-2A-42c (150 mg, 0.41 mmoles) en tetrahidrofurano (8 mi) a -6.2 °C. La temperatura nunca fue superior a -3.7 °C durante la adición. La solución se agitó a -8 °C durante 30 minutos. A la mezcla de reacción se le añadió una solución de cloruro de p-toluenosulfonilo (79 mg) en tetrahidrofurano (2 mi) a -5 °C. La temperatura nunca fue superior a -2 °C durante la adición. La reacción se agitó a -5 °C durante 1 hora y después la mezcla de reacción se enfrió a -6 °C y se añadió n-butil litio 2.5 en hexanos (0.33 mi, 165 µ?) durante 2 minutos. La temperatura nunca fue superior a -3.5 °C durante la adición. El baño de refrigeración se retiró y la reacción se agitó a una temperatura interna de 60 °C durante 16 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se añadió acetato de etilo (20 mi). La solución de reacción se lavó con agua (35 mi) y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (15 mi). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (5 mi), se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron, se concentraron y se secaron a alto vacío, produciendo un sólido de color amarillo. El sólido se purificó por cromatografía sobre 8 g de sílice eluyendo con acetato de etilo del 25 % al 75 % en heptanos durante 36 minutos, produciendo el compuesto del título (58 mg, 40 %). +IEN EM (M+H); RMN H (400 MHz, CDCI3) d ppm 1.45 (s, 9 H), 1.49 (d, J = 3.71 Hz, 1 H), 1.55 (s, 4 H), 1.59 (s a, 1 H), 2.61 (s, 2 H), 3.32 - 3.50 (m, 4 H), 5.00 (m, J = 7.22, 7.22 Hz, 2 H), 5.13 (t, J = 6.44 Hz, 2 H), 5.36 - 5.46 (m, 1 H), 5.88 (d, J = 9.95 Hz, 1 H), 6.43 (d, J = 9.95 Hz, 1 H), 7.33 (s, 1 H).

Preparación l-2A-42e: 6-bromo-7-metoxi-1-(oxetan-3-iQ-1.4,6,7-tetrahidroespiro[indazol-5,4'-piperidinl-1 '-carboxilato de /ere-butilo Se añadió /V-bromosuccinimida (30 mg, 0.17 mmoles) a la Preparación l-2A-42d (56 mg, 0.17 mmoles) en metanol (1.0 mi) a temperatura ambiente. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, después se añadió /V-bromosuccinimida (4.5 mg) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se concentró en una corriente de nitrógeno, dando un residuo. Se añadió acetato de etilo (15 mi) y la solución de reacción se lavó con ácido cítrico al 10 % (3 mi), hidróxido sódico 1 N (3 mi) y salmuera (3 mi). La fase orgánica se concentró y se secó a alto vacío, produciendo el compuesto del título (74 mg, 100 %) en forma de un sólido incoloro. +IQPA EM (M+H) 458.2; RMN H (400 MHz, CDCI3) d ppm 1.44 (s, 9 H), 1.69 (s a, 4 H), 2.51 (d, J = 15.83 Hz, 1 H), 2.67 (d, J = 15.83 Hz, 1 H), 3.06 - 3.31 (m, 3 H), 3.54 (s, 3 H), 3.62 - 3.72 (m, 1 H), 4.39 (s, 1 H), 4.66 (s, 1 H), 4.87 - 4.93 (m, 1 H), 4.97 (t, J = 6.84 Hz, 1 H), 4.99 - 5.04 (m, 1 H), 5.30 (s, 1 H), 5.34 - 5.40 (m, 1 H), 7.43 (s, 1 H).

Preparación I-2A-42†: 1 -(oxetan-3-il)- 7-oxo- 1,4,6, 7-tetrahidroespirofindazol--5,4'-piperidinl-1'-carboxilato de tere-butilo Se añadió ferc-butóxido potásico 1 M en tetra h id rotura no (0.320 mi) a una solución de la Preparación l-2A-42e (72 mg, 0.16 mmoles) en tetra h id rotura no (1.0 mi) a temperatura ambiente. La solución incolora se volvió de color amarillo después de la adición. La solución se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. Se añadió hidrógeno cloruro acuoso 1 N (0.475 mi, 3 equiv.) y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. El tetrahidrofurano se concentró en una corriente de nitrógeno. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 5 mi). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (3 mi) y después la fase orgánica se concentró y se secó a alto vacío, dando el compuesto del título en forma de un sólido de color amarillo pálido (54 mg, 96 %). -IQPA E (M-H) 360.2; RMN 1H (400 MHz, CD3OD) d ppm 1.38 - 1.45 (m, 9 H), 1.46 - 1.56 (m, 4 H), 2.57 (s, 2 H), 2.82 (s, 2 H), 3.33 - 3.53 (m, 4 H), 4.94 - 5.06 (m, 4 H), 6.08-6.21 (m, 1 H), 7.53 (s, 1 H).

Preparación l-2A-42g: 1-(oxetan-3-il)-4,6-dihidroespiro[indazol-5,4'-piperidin1-7(1H)-ona Se añadió ácido trifluoroacético (0.2 mi) a una solución de la Preparación l-2A-42f (50 mg, 0.14 mmoles) en diclorometano (2 mi) a 0 °C. El baño de refrigeración se retiró y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1.5 horas. La mezcla de reacción se concentró, dando un residuo en una corriente de nitrógeno y se secó a alto vacío durante 20 minutos. El residuo se trituró con éter dietílico (5 mi). El disolvente se decantó y el precipitado resultante se secó a alto vacío, produciendo el compuesto del título (52 mg, 100) en forma de un sólido de color amarillo pálido. +IQPA EM (M+H) @ 262.2; RMN 1H (400 MHz, CD3OD) d ppm 1.65 - 1.86 (m, 4 H), 2.63 (s, 2 H), 2.89 (s, 2 H), 3.14 - 3.27 (m, 4 H), 5.02 (s, 4 H), 6.07 - 6.21 (m, 1 H), 7.53 - 7.60 (m, 1 H).

Preparación l-2A-75a: 1-lsopropil-1 ,4-dihidroespiro[indazol-5,4'-piperidin1-1'-carboxilato de bencilo La preparación l-1A-2a (6.38 g, 18 mmoles) se disolvió en 90 mi de etanol. A la solución de reacción se le añadieron ácido acético (2.16 g, 36 mmoles) y clorhidrato de 1-isopropilhidrazina (2.79 g, 25 mmoles). La reacción se calentó a reflujo durante 2 horas y después la solución de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró al vacío, dando un aceite de color naranja que se purificó por cromatografía ultrarrápida usando acetato de etilo al 12-100 % en heptano como eluyente, proporcionando el compuesto del título en forma de una goma de color amarillo (6.58 g, 69 %): +IEN EM (M+H) 366.5; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d ppm 7.28 - 7.39 (m, 5 H), 7.25 (s, 1 H), 6.42 (d, J = 9.95 Hz, 1 H), 5.84 (d, J = 9.95 Hz, 1 H), 5.14 (s, 2 H), 4.41 - 4.54 (m, 1 H), 3.42 - 3.65 (m, 4 H), 2.62 (s, 2 H), 1.58 - 1.70 (m, 2 H), 1.50 - 1.58 (m, 2 H), 1.49 (d, J = 6.83 Hz, 6 H).

Preparación l-2A-75b: 3,6-dibromo-1-isopropil-7-metoxi-1 ,4,6,7-tetrahidroespiroíindazol-5,4'-piperid¡n1-1 '-carboxilato de bencilo La preparación l-2A-75a (679 mg, 1.86 mmoles) se disolvió en 15 mi de metanol, se trató con /V-bromosuccinimida (728 mg, 4.09 mmoles) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. El metanol se retiró a presión reducida. La espuma de color castaño resultante se recogió en 50 mi de acetato de etilo y se lavó con hidróxido sódico 0.5 M (2 x 50 mi) y 20 mi de tiosulfato sódico acuoso saturado. La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró. El aceite resultante se sometió a cromatografía ultrarrápida (25 g de sílice, gradiente de acetato de etilo al 10-80 %/heptano), produciendo 784 mg (76 %) del compuesto del título en forma de una espuma de color blanco: +IQPA-EM (M+H) = 554.1 , 556.2, 558.2: RMN H (400 MHz, CDCI3) d ppm 7.26 - 7.42 (m, 5 H), 5.12 (s, 2 H), 4.67 (d, J = 1.76 Hz, 1 H), 4.36 (s, 1 H), 4.27 (m, 1 H), 3.79 (d, J = 71.90 Hz, 1 H), 3.59 -3.73 (m, 1 H), 3.53 (s, 3 H), 3.24 - 3.40 (m, 1 H), 3.19 (ddd, J = 13.61 , 10.00, 3.12 Hz, 1 H), 2.56 (d, J = 16.19 Hz, 1 H), 2.34 (d, J = 16.19 Hz, 1 H), 1.56 -1.85 (m, 4 H), 1.38-1.55 (m, 6 H).

Preparación l-2A-75c: 3-bromo-1-isopropil-7-oxo-1 , 4,6,7- tetrahidroespiro|indazol-5,4'-piperidinM '-carboxilato de bencilo La preparación l-2A-75b (784 mg, 1.4 mmoles) se disolvió en 15 mi de tetrahldrofurano. Se añadió t-butóxido potásico (2.82 mi, 2 equiv., tetrahldrofurano 1 M) y la reacción se agitó durante 18 horas a temperatura ambiente. A la reacción se le añadieron 25 mi de ácido clorhídrico 2 N. La mezcla se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con 25 mi de agua y se extrajo con acetato de etilo (2 x 50 mi). Los extractos orgánicos se combinaron y se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron. El aceite resultante se sometió a cromatografía ultrarrápida (50 g de sílice, gradiente de acetato de etilo al 8-66 %/heptano), produciendo 612 mg del compuesto del título en forma de una espuma de color blanco: +IEN EM (M+H) = 462.5 RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d ppm 7.25 - 7.38 (m, 5 H), 5.24 - 5.42 (m, 1 H), 5.12 (s, 2 H), 3.49 - 3.66 (m, 2 H), 3.46 (dd, J = 7.41, 4.88 Hz, 2 H), 2.63 (s, 2 H), 2.52 (s, 2 H), 1.48 - 1.65 (m, 4 H), 1.44 (d, J = 6.63 Hz, 6 H).

Preparación l-2A-75d: 3-bromo- -isopropil-7-???- 1 ,4,6,7-tetrahidroespirofindazol-5 ,4'-piperidin1-1'-carboxilato de tere-butilo La preparación l-2A-75c (612 mg, 1.33 mmoles) se disolvió en 10 mi de ácido bromhídrico al 33 %/ácido acético y la mezcla se agitó durante 60 minutos a temperatura ambiente. El disolvente se evaporó y el residuo de color rojo-naranja se recogió en 50 mi de agua, se hizo básico con carbonato sódico acuoso saturado y se extrajo con acetato de etilo (2 x 50 mi). La fase orgánica se concentró hasta alcanzar un volumen de 20 mi y se trató con 20 mi de bicarbonato sódico acuoso saturado y dicarbonato de di-terc-butilo (348 mg). La mezcla bifásica se agitó durante una hora a temperatura ambiente. Las fases se separaron y la fase orgánica se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró a presión reducida. El aceite resultante se sometió a cromatografía ultrarrápida (acetato de etilo al 10-70 %/heptano, 10 g de sílice), produciendo 364 mg del compuesto del título. +IEN EM (M+H) = 413.5; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d ppm 5.24 - 5.43 (m, 1 H) 3.41 - 3.56 (m, 2 H) 3.28 -3.41 (m, 2 H) 2.63 (s, 2 H) 2.51 (s, 2 H) 1.47-1.56 (m, 4 H) 1.40 - 1.49 (m, 15 H).

Preparación l-2A-75e: 1 -isopropil-3-metil-7-oxo-1 ,4,6,7-tetrahidroespirofindazol l-5,4'-piperidin1-1'-carboxilato de tere-butilo La preparación l-2A-75d (440 mg, 1.03 mmoles), tetraquis trifenilfosfina paladio (1 19 mg, 0.103 mmoles), carbonato potásico (146 mg, 1.03 mmoles) y agua (94 mg, 5.16 mmoles) se combinaron en dimetilformamida (2 mi) y se desgasificaron con nitrógeno durante 2 minutos. El vial de reacción se cerró herméticamente y se calentó en un reactor de microondas durante 30 minutos a 100 °C. El vial se retiró del reactor de microondas y después se calentó a 100 °C en un bloque de calentamiento convencional durante 4 días. La reacción se concentró al vacío y después se repartió entre agua (5 mi) y acetato de etilo (5 mi). Las fases se separaron y la fase orgánica se concentró y después se cromatografió sobre una columna de 40 g eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 20-40 % en heptano, dando 268 mg (72 %) del compuesto del título. +IEN EM (M+H) = 362.5; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d ppm 5.20 - 5.53 (m, 1 H), 3.32 - 3.54 (m, 4 H), 2.62 (s, 2 H), 2.50 (s, 2 H), 2.23 (s, 3 H), 1.53 (t, J = 5.76 Hz, 4 H), 1.46 (s, 9 H), 1.44 (d, J = 6.64 Hz, 6 H).

Preparación l-2A-75f: 1-isopropil-3-metil-4,6- dihidroespiro[indazol-5,4'-piperidinl-7(1H)-ona La preparación l-2A-75e (375 mg, 1.04 mmoles) se disolvió en 3 mi de éter dietílico y se trató con cloruro de hidrógeno 4 M en dioxano (1 mi). La solución se agitó durante una hora y después se concentró al vacío, proporcionando 300 mg del compuesto del título en forma de una espuma de color blanco: RMN 1H (400 MHz, DMSO-t/6) d ppm 5.10 - 5.35 (m, 1 H), 4.34 (s a, 4 H), 2.70 (s, 2 H), 2.56 (s, 2 H), 2.17 (s, 3 H), 1.66 (s a, 4 H), 1.34 (d, J = 6.64 Hz, 6 H).

Preparación l-2A-76a: 3-ciano-1-isopropil-7-oxo-1.4,6,7- tetrahidroespiro[indazol-5,4'-piperidin1-1 '-carboxilato de /ere-butilo En un tubo schlenk lavado abundantemente con nitrógeno se añadieron la Preparación l-2A-75d (250 mg, 0.59 mmoles), aducto de tris(dibencilidenoacetona)dipaladio (O)-cloroformo (23.8 mg, 0.02 mmoles), polvo de cinc (9.6 mg, 0.15 mmoles), cianuro de cinc (75.7 mg, 0.65 mmoles) y 1 ,1 '-bis(difenilfosfino)ferroceno (26.1 mg, 0.05 mmoles). Se añadió dimetilacetamida anhidra (3.5 mi) y el matraz se lavó abundantemente con nitrógeno y después se tapó con una tapa a rosca de Teflon®. La reacción se agitó a 120 °C durante 16 horas. La reacción se enfrió y después se filtró a través de una capa de Celite®, lavando con acetato de etilo. El filtrado se lavó con agua y la fase acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con cloruro sódico acuoso saturado, se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron al vacío. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida usando un gradiente de acetato de etilo al 5-30 % en heptano, dando 204 mg del compuesto del título en forma de un sólido (93 %): +IEN EM (M-Boc+H) 273.5; RMN 1H (400 MHz, CD3OD) d ppm 5.44 (m, 1 H), 3.44 (m, 4 H), 2.89 (s, 2 H), 2.64 (s, 2 H), 1.53 (m, 4 H), 1.46- 1.43 (m, 15H).

Preparación l-8a-1b: 1 -isopropil-7-oxo-1 ,4,6,7- tetrahidroespiro[indazol-5,4'-p¡per¡din1-3-carbonitrilo La preparación l-2A-76a (70 mg, 0.19 mmoles) se disolvió en diclorometano (3 mi) y ácido trifluoroacético (0.2 mi) y se agitó a temperatura ambiente durante 90 minutos. El disolvente se concentró al vacío y el residuo se co-disolvió con tolueno seguido de acetato de etilo, dando 149 mg (100 %) del compuesto del título en forma de un sólido de color amarillo: +IEN EM (M+H) 273.5.

Preparación l-4A-1a: 6-Bromo-7-hidroxi-1-isopropil-1 , 4,6,7-tetrahidroespirofindazol-5,4'-piperidinM '-carboxilato de bencilo La preparación l-2A-75a (4.20 g, 11 mmoles) se disolvió en 130 mi de tetrahidrofurano. A la reacción se le añadieron N-bromosuccinimida (2.49 g, 14 mmoles) y 30 mi de agua. La reacción se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. La reacción se repartió entre acetato de etilo y cloruro sódico acuoso saturado. La fase orgánica se separó y después se lavó una vez más con cloruro sódico acuoso saturado. La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico y se concentró al vacío, proporcionando el compuesto del título en forma de una espuma de color blanquecino (5.31 g, 100 %): +IEN EM (M+H) 463.8.

Preparación l-4A-1b: 6-Bromo-1-isopropil-7-oxo-1 , 4,6,7-tetrahidroespirofindazol-5,4'-piperidin1-1 '-carboxilato de bencilo La preparación l-4A-1a (5.30 g, 11 mmoles) se disolvió en 53 mi de acetona y después se enfrió a 0 °C en un baño de hielo. A la solución se le añadieron 83 mi de reactivo de Jones (Pillion, E. Tetrahedron Letters 2004, 46, 1091-1094). El baño de hielo se retiró y la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente, a la que se agitó durante 45 minutos. La reacción se enfrió a 0 °C en un baño de hielo y después se añadió bicarbonato sódico acuoso saturado hasta que no se apreció más desprendimiento de gas. La mezcla resultante se filtró a través de una capa de Celite® aclarando con acetato de etilo. Las fases filtradas se separaron y la fase acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos se combinaron, se lavaron dos veces con agua y una vez con cloruro sódico acuoso saturado, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron al vacío, proporcionando el compuesto del título (5.27 g, 100 %); +IEN E (M+H) 460.4.

Preparación l-4A-1c: 6-Bromo-1-isopropil-7-oxo-1 ,4,6,7-tetrahidroespiro[indazol-5,4'-piperidin1-1'-carboxilato de bencilo La preparación l-4A-1b (5.63 g, 12 mmoles) se disolvió en 55 mi de ácido acético y a esto se le añadió polvo de cinc (2.40 g, 37 mmoles). La reacción se agitó durante 35 minutos a temperatura ambiente. La reacción se concentró al vacío y después se repartió entre bicarbonato sódico acuoso saturado y acetato de etilo. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos se combinaron, se lavaron con agua y cloruro sódico acuoso saturado, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron al vacío, dando un aceite. El aceite se purificó por cromatografía ultrarrápida usando acetato de etilo al 12-100 % en heptano como eluyente, proporcionando el compuesto del título en forma de un aceite (2.25 g, 48 %): +IEN EM (M+H) 382.4; RMN H (400 MHz, CDCI3) d ppm 7.28 - 7.40 (m, 6 H), 5.32 - 5.45 (m, 1 H), 5.13 (s, 2 H), 3.41 - 3.61 (m, 4 H), 2.76 (s, 2 H), 2.54 (s, 2 H), 1.50 - 1.62 (m, 4 H), 1.47 (d, J = 6.63 Hz, 6 H).

Preparación l-4A-1d: 1 -lsopropil-6-metil-7-oxo-1 ,4,6,7-tetrahidroespiro[indazol-5,4'-piperidin1-1'-carboxilato de bencilo La preparación l-4A-1c (397 mg, 1.04 mmoles) en tetrahidrofurano (8 mi) se enfrió a -70 °C. A esto se le añadió bis(trimetilsilil)amida de litio (1.56 mi, 1.56 mmoles) en forma de una solución 1.0 M en tetrahidrofurano durante un periodo de diez minutos. La solución de color amarillo resultante se agitó durante treinta minutos a -70 °C. A la reacción se le añadió 1 ,3-dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-2(7H)-pirim¡dinona (1.6 mi) y la agitación se continuó a -70 °C durante diez minutos. A la reacción se le añadió yodometano (746 mg, 5.2 mmoles). La reacción se dejó calentar a temperatura ambiente, a la que se agitó durante 18 horas. A la reacción se le añadió bicarbonato sódico acuoso saturado (2 mi) y después la mezcla se repartió entre agua (20 mi) y acetato de etilo (150 mi). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (150 mi). Las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y después se concentraron, dando un aceite transparente. El aceite se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando acetato de etilo al 10-40 % en heptano como eluyente, proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (351 mg, 85 %): +IEN EM (M+H) 396.2; R N 1H (400 MHz, DMSO-cfe) d ppm 7.44 (s, 1 H), 7.35 (s, 5 H), 5.17 - 5.34 (m, 1 H), 5.06 (s, 2 H), 3.52 - 3.72 (m, 4 H), 2.79 (s, 2 H), 2.42 - 2.48 (m, 1 H), 1.38 - .49 (m, 4 H), 1.35 (t, J = 6.74 Hz, 6 H), 1.04 (d, J = 7.04 Hz, 3 H).

Preparación l-4A-1e: 1-isopropil-6-metil-4,6-dihidroespiro[indazol- 5.4'-piperidinl-7(1H)-ona El compuesto del título se preparó a partir de la Preparación I 4A-1d de una manera análoga a Preparación I-1A-2Í.

Preparación l-6A-1a: 1 -lsopropil-6,6-dimetil-7-oxo-1 , 4,6,7-tetrahidroespiroíindazol-5,4'-p¡peridinl-1 '-carboxilato de bencilo Una solución de la preparación l-4A-1d (84 mg, 0.21 mmoles) en 1 mi de tetrahidrofurano se enfrió a -70 °C y después se trató con b¡s(trimetilsilil)amida de litio (0.318 mi, 0.318 mmoles) en forma de una solución 1.0 M en tetrahidrofurano durante diez minutos. Después, a la reacción se le añadió 1 ,3-dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-2(7H)-pirimidinona (0.2 mi).

La agitación se continuó durante diez minutos a -70 °C y después a la reacción se le añadió yodometano (152 mg, 1.06 mmoles). La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente, a la que se mantuvo durante cuatro horas. A la reacción se le añadió cloruro de amonio acuoso saturado (1 mi) y después la mezcla se repartió entre agua (2 mi) y acetato de etilo (10 mi). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (5 mi). Las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y después se concentraron, dando un aceite de color amarillo transparente. El aceite se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando acetato de etilo al 10-40 % en heptano como eluyente, proporcionando el compuesto del título en forma de un aceite transparente (58 mg, 67 %): +IEN EM (M+H) 410.3; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d ppm 7.28 - 7.44 (m, 5 H), 7.27 (s, 1 H), 5.40 (m, 1 H), 5.13 (s, 2 H), 3.85 - 4.24 (m, 2 H), 2.86 - 3.11 (m, 2 H), 1.58 - 1.79 (m, 2 H), 1.56 (s, 2 H), 1.46 (d, J = 6.64 Hz, 6 H), 1.19 - 1.40 (m, 2 H), 1.15 (s, 6 H).

Preparación I-6A-1 : 1 -isopropil-6,6-dimetil-4,6-dihidroespiro[indazol-5,4'-piperidinl-7(1/- )-ona La preparación l-6A-1b se preparó a partir de la Preparación I-6A-1a de una manera análoga a Preparación I-1A-2 Preparación l-13A-1a: 1-terc-butil-7-oxo-1 ,4,6,7-tetrahidroespiro[indazol-5,4'-piperidin1-1 '-carboxilato de tere-butilo La sal clorhidrato de la preparación 1-1 A-2f (1040 mg, 3.492 mmoles), dicarbonato de di-terc-butilo (800 mg, 3.67 mmoles) y trietilamina (730 mg, 7.2 mmoles) se combinaron en diclorometano (30 mi). La solución de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. A la reacción se le añadió diclorometano (20 mi). La solución de reacción se lavó con ácido clorhídrico acuoso 1 N (5 mi), agua (5 mi) y cloruro sódico acuoso saturado (5 mi). La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró, dando l-13A-1a (1262 mg, 100 %): -IQPA EM (M-H) 360.3; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d ppm 7.30 (s, 1 H), 3.29 - 3.56 (m, 4 H), 2.77 (s, 2 H), 2.56 (s, 2 H), 1.67 (s, 9 H), 1.48 - 1.56 (m, 4 H), 1.46 (s, 9 H).

Preparación l-13A-1b: 3-bromo-1-terc-butil-7-oxo-1 ,4,6,7-tetrahidroespirofindazol l-5.4'-piperid¡n1-1'-carboxilato de ferc-butilo La preparación l-13A-1a (1090 mg, 3.015 mmoles) y acetato sódico (1050 mg, 12.80 mmoles) se combinaron en etanol (40 mi) y agua (10 mi). A esta solución se le añadió bromo (1870 mg, 11.7 mmoles). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. A la reacción se le añadió etanol (40 mi). La reacción se agitó durante 16 horas más. La solución de reacción se vertió en agua (20 mi) y se extrajo dos veces con acetato de etilo (75 mi cada vez). Los extractos orgánicos combinados se lavaron dos veces con tiosulfato sódico acuoso saturado (25 mi cada vez) y cloruro sódico acuoso saturado (25 mi). La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró hasta alcanzar un volumen final de 20 mi, dando un precipitado. La mezcla se filtró y los sólidos se recogieron, dando el compuesto del título en forma de un sólido (679 mg, 51 %): +IQPA EM (M+H-Boc) 342.1 ; RMN H (400 MHz, CDCI3) d ppm 3.28 - 3.60 (m, 4 H), 2.66 (s, 2 H), 2.56 (s, 2 H), 1.65 (s, 9 H), 1.48 - 1.55 (m, 4 H), 1.46 (s, 9 H).

Preparación l-13A-1c: 3-bromo-1-terc-butil-4,6- dihidroespiro[indazol-5,4'-piperidin1-7(1 H)-ona La preparación l-13A-1b (670 mg, 1.52 mmoles) y cloruro de hidrógeno 4 M en dioxano (8 mi) se combinaron y se agitaron durante 2.5 horas. A la reacción se le añadió éter dietilico (20 mi). Se formó un precipitado que se filtró y los sólidos se recogieron, dando l-13A-1c (573 mg, 97 %): +IQPA EM (M+H) 342.1 ; RMN H (400 MHz, CD3OD) d ppm 3.24 (t, J = 5.96 Hz, 4 H), 2.80 (s, 2 H), 2.74 (s, 2 H), 1.71 - 1.92 (m, 4 H), 1.65 (s, 9 H).

EJEMPLO 1 Preparación de 1-isopropil-1'-(4-cloro-3-metilbenzoil)-4,6- dihidroespiroíindazol-5,4'-piperidin1-7(1 H)-ona (1A-1): Se suspendió ácido 4-cloro-3-metilbenzoico (253 mg, 1.48 mmoles) en cloruro de tionilo (3000 mg, 30 mmoles) y se calentó a reflujo durante 30 minutos. La solución se concentró al vacío en presencia de diclorometano, dando un residuo. El residuo se disolvió en 1 mi de diclorometano y se añadió a una solución de diisopropil etilamina (890 mg, 6.9 mmoles) y la Preparación l-1A-1e (204 mg, 0.83 mmoles) en 8 mi de diclorometano. La reacción se agitó durante 10 minutos. La reacción se repartió entre diclorometano y bicarbonato sódico acuoso saturado. La fase orgánica se separó y después se lavó con cloruro sódico acuoso saturado. La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico y se concentró al vacío, dando un aceite. El aceite se purificó por cromatografía ultrarrápida usando acetato de etilo al 15-100 % en heptano como eluyente, proporcionando el compuesto del título en forma de una espuma de color blanco (153 mg, 46 %): +IEN EM (M+H) 400.2; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d ppm 7.32 - 7.40 (m, 2 H), 7.28 (s, 1 H), 7.1 1 - 7.17 (m, 1 H), 5.31 - 5.45 (m, 1 H), 3.74 (s a, 2 H), 3.42 (s a, 2 H), 2.80 (s, 2 H), 2.59 (s, 2 H), 2.39 (s, 3 H), 1.49 - 1.84 (m, 4 H), 1.46 (d, J = 6.63 Hz, 6 H).

Los compuestos que se muestran en el cuadro 1 a continuación se prepararon usando procedimientos análogos a los descritos anteriormente para la síntesis del Ejemplo 1 , Compuesto 1A-1 , usando los materiales de partida apropiados que están disponibles en el mercado, se preparan usando preparaciones bien conocidas por los expertos en la materia o se preparan de manera análoga a rutas descritas anteriormente para otros intermedios.

CUADRO 1 EJEMPLO 2 Preparación de 1 -isopropil-1 '-(1 H-pirazolor3,4-b1piridin-5-carbonil)-4.6- dihidroespironndazol-5,4'-piperidinl-7(1 H)-ona (2A-1 ): La sal clorhidrato de la Preparación l-1A-1e (80 mg, 0.28 mmoles), ácido 1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-5-carboxílico (46 mg, 0.28 mmoles), hexafluorofosfato de 0-(azabenzotriazol-1-¡l)-/V,/V,N',A/'-tetramet¡luronio (107 mg, 0.28 mmoles) y trietilamina (115 mg, 1.13 mmoles) se combinaron en 3 mi de dimetilformamida y se agitaron a temperatura ambiente durante 16 horas. La reacción se repartió entre 10 mi de acetato de etilo y 10 mi de bicarbonato sódico acuoso saturado. La fase orgánica se separó y después se concentró, dando un aceite. El aceite se purificó por cromatografía ultrarrápida usando acetato de etilo al 50-100 % en heptano como eluyente, proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido (48 mg, 44 %): +IQPA EM (M+H) 393.2; RMN H (400 MHz, CDCI3) d ppm 11.08 (s a, 1 H), 8.67 (d, J = 1.95 Hz, 1 H), 8.22 (d, J = 1.76 Hz, 1 H), 8.16 (s, 1 H), 7.40 (s, 1 H), 5.32 - 5.46 (m, 1 H), 3.24 - 4.13 (m, 4 H), 2.84 (s, 2 H), 2.63 (s, 2 H), 1.66 (s a, 4 H), 1.47 (d, J = 6.63 Hz, 6 H).

Los compuestos que se muestran en la cuadro 2 a continuación se prepararon usando procedimientos análogos a los descritos anteriormente para la síntesis del Compuesto 2A-1 usando los materiales de partida apropiados que están disponibles en el mercado, se preparan usando preparaciones bien conocidas por los expertos en la materia o se preparan de manera análoga a rutas descritas anteriormente para otros intermedios. Los compuestos que se muestran a continuación se aislaron inicialmente en forma de la base libre y pueden convertirse en su sal clorhidrato correspondiente para el ensayo.

CUADRO 2 EJEMPLO 3 Preparación de 1 -isopropil-1 '-(2-metil-1 H-benzofdT¡midazol-5-carbonil)- 4,6-dihidroespirorindazol-5,4'-piperidin1-7(1 H)-ona (3A-1 ): Se recogió ácido 2-metil-1 H-benzoimidazol-5-carboxílico (15 g) en tetra h id rotura no (500 mi) y se añadieron dimetilformamida (329 µ?) y cloruro de oxalilo (22.1 mi). La solución de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La solución se concentró al vacío y el residuo se recogió en diclorometano y se concentró (x 2) a presión reducida. Al cloruro de ácido resultante se le añadieron tetrahidrofurano (500 mi), la Preparación l-1A-1 e (25.9 g) y trietilamina (71.2 mi). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. A la reacción se le añadió bicarbonato sódico acuoso saturado (250 mi) y la solución se agitó durante 5 min. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con 1 :1 de acetato de etilo/tetrahidrofurano. Las fases orgánicas se combinaron, se diluyeron con acetato de etilo (1 I) y se lavaron con bicarbonato sódico acuoso saturado (200 mi) y cloruro sódico acuoso saturado. La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró al vacío, dando un sólido de color amarillo claro. El sólido se disolvió en metanol caliente (300 mi) y después se calentó a reflujo. A la solución se le añadieron 350 mi de acetato de etilo y se retiraron 300 mi del disolvente por destilación. Se añadió gota a gota más cantidad de acetato de etilo hasta que se alcanzó una temperatura interna de 70 °C. La solución se enfrió a temperatura ambiente durante 3 horas. Los sólidos se recogieron por filtración y se secaron en una estufa de vacío (40 °C) durante 16 horas, proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (20.5 g, 59 %); +IEN EM (M+H) 406.5; RMN H (400 MHz, DMSO-cíe) d ppm 12.25 - 12.33 (m, 1 H), 7.35 - 7.51 (m, 3 H), 7.05 - 7.16 (m, 1 H), 5.16 - 5.31 (m, 1 H), 3.32 - 3.58 (m, 4 H), 2.77 (s, 2 H), 2.57 (s, 2 H), 1.40 - 1.52 (m, 4 H), 1.32 (d, J = 6.45 Hz, 6 H).

En el presente ejemplo, se entiende que el material de partida ácido 2-metil-1 H-benzoimidazol-5-carboxílico empleado en este ejemplo también existe en su forma tautomérica ácido 2-metil-1 H-benzoimidazol-6-carboxílico (también conocido como ácido 2-metil-3H-benzoimidazol-5-carboxílico) y cada una de ellas se designa por el mismo N° CAS 709-19-3. También debe entenderse que el presente ejemplo se ha representado anteriormente como una de las dos formas tautoméricas del compuesto con respecto al grupo 2-metil benzoimidazolilo y que el compuesto del título es sinónimo de la forma tautomérica 1-isopropil-1'-(2-metil-1 H-benzo[d]imidazol-6-carbonil)-4,6-dihidroespiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(1 H)-ona que se representa como: EJEMPLO 4 Preparación de 1 1H-indazol-5-carbonil)-1-isopropil-6-metil-4,6- dihidroespirofindazol-5,4'-piperidinV7(1H)-ona (4A-1): La Preparación l-4A-1e (177 mg, 0.677 mmoles), ácido \H-indazol-5-carboxilico (1 10 mg, 0.677 mmoles), hexafluorofosfato de O-(azabenzotriazol-1-il)-/V,/V,A/',/V4etrametiluronio (257 mg, 0.677 mmoles) y trietilamina (138 mg, 1.35 mmoles) se combinaron en 3 mi de dimetilformamida y se agitaron a temperatura ambiente durante 18 horas. A la reacción se le añadió bicarbonato sódico acuoso saturado (2 mi). La reacción se repartió entre acetato de etilo (80 mi) y agua (20 mi). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (50 mi). Las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron, dando un aceite. El aceite se purificó por cromatografía ultrarrápida usando metanol al 0-5 % en diclorometano como eluyente, proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido (196 mg, 72 %); +IQPA EM (M+H) 406.2; RMN 1H (400 Hz, DMSO-c/6) d ppm 13.21 (s a, 1 H), 8.13 (s, 1 H), 7.82 (s, 1 H), 7.56 (d, J = 8.60 Hz, 1 H), 7.46 (s, 1 H), 7.37 (dd, J = 8.60, 1.37 Hz, 1 H), 5.25 (m, 1 H), 3.21 - 3.39 (m, 4 H), 3.01 - 3.19 (m, 1 H), 2.74 - 2.94 (m, 2 H), 1.41 - 1.62 (m, 4 H), 1.34 (d, J = 6.64 Hz, 6 H), 1.07 (d, J = 7.23 Hz, 3 H).

EJEMPLO 5 Preparación de (+)-1'-(1H-lndazol-5-carbonil)-1-isopropil-6-metil-4,6- dihidroespirorindazol-5,4'-piperidin1-7f1H)-ona (5A-1) y (-)-1'-(1 H-indazol- 5-carbonil)-1-isopropil-6-metii-4,6-dihidroespiro[indazol-5,4'-piperidin1- 7(1 H)-ona (5A-2): El compuesto racémico del Ejemplo 4 (Compuesto 4A-1 ) se separó, dando los dos enantiómeros correspondientes, usando HPLC quiral: [ChiralpakI AD-H (10 x 250); fase móvil: 70:30 (C02/Etanol); caudal = 10 ml/min]. Compuesto 5A-1 : tiempo de retención = 4.17 min; resultados de rotación óptica: c = 0.0053 g/ml en etanol; longitud de la ruta = 1 dcm; rotación observada = +0.202 (línea D de una lámpara de sodio (589 nm) a 20 °C); rotación especifica = +38.1. Compuesto 5A-2: tiempo de retención = 5.47 min; resultados de rotación óptica: c = 0.0053 g/ml en etanol; longitud de la ruta = 1 dcm; rotación observada = -0.184 (línea D de una lámpara de sodio (589 nm) a 20 °C); rotación específica = -34.1.

EJEMPLO 6 Preparación de 1 '-(1 H-indazol-5-carbonilH -isopropil-6,6-dimetil-4,6- dihidroespirofinda2ol-5,4'-piperidin1-7(1H)-ona (6A-1): Una solución de ácido 1H-indazol-5-carboxílico (27 mg, 0.167 mmoles) en dimetilformamida (2 mi) se trató con N-metil morfolina (51 mg, 0.167 mmoles) seguido de 2-cloro-4,6-dimetoxi-1 ,3,5-triazina (29 mg, 167 mmoles). La solución se agitó a temperatura ambiente durante dos horas. A la reacción se le añadieron la Preparación l-6A-1b (46 mg, 0.17 mmoles) y N-metil morfolina (34 mg, 0.334 mmoles) en forma de una solución en dimetilformamida (2 mi). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. A la reacción se le añadió cloruro de amonio acuoso saturado (1 mi). La reacción se repartió entre acetato de etilo (30 mi) y agua (5 mi). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (30 mi). Las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron, dando un aceite. El aceite se purificó por cromatografía ultrarrápida usando metanol al 0-5 % en diclorometano como eluyente, proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido (39 mg, 56 %): +IQPA EM (M+H) 420.3; RMN 1H (400 MHz, D SO-d6) d ppm 13.18 (s, 1 H), 8.10 (s, 1 H), 7.80 (s, 1 H), 7.53 (d, J = 8.78 Hz, 1 H), 7.42 (s, 1 H), 7.34 (dd, J = 8.58, 1.37 Hz, 1 H), 5.24 (m, 1 H), 3.84 (s a, 6 H), 1.38 - 1.72 (m, 4 H), 1.32 (d, J = 6.63 Hz, 6 H), 1.06 (s, 6 H).

EJEMPLO 7 Preparación de 1'-(1H-benzofd1imidazol-5-carbonil)-1-isopropil-3-metil- 4.6-dihidroespirofindazol-5,4'-piperidin1-7(1H)-ona (7A-1): La Preparación l-2A-75f (150 mg, 0.50 mmoles), ácido 1 H-benzo[d]imidazol-5-carboxílico (82 mg, 0.50 mmoles), hexafluorofosfato de O-(azabenzotriazol-1-il)-/V,/V,/V',A/4etrametiluronio (198 mg, 0.50 mmoles) y trietilamina (103 mg, 1.01 mmoles) se combinaron en 3 mi de dimetilformamida y se agitaron a temperatura ambiente durante 16 horas. La reacción se repartió entre 10 mi de acetato de etilo y 10 mi de bicarbonato sódico acuoso saturado. La fase orgánica se separó y después se concentró, dando un aceite. El aceite se purificó por cromatografía ultrarrápida usando etanol al 5-10 % en diclorometano como eluyente, proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido (82 mg, 40 %): +IQPA EM (M+H) 406.2; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d ppm 8.05 (s, 1 H), 7.71 (s, 1 H), 7.43 (m, 2 H), 5.35 (m, 1 H), 3.62 (m, 4 H), 2.82 (s, 2 H), 2.57 (s a, 2 H), 2.24 (s, 3 H), 1.49 - 1.89 (m, 4 H), 1.44 (d, J = 6.64 Hz, 6 H).

EJEMPLO 8 Preparación de 1 '-(1 H-benzord1imidazol-5-carbonil)-1 -isopropil-7-???- 1 ,4,6,7-tetrahidroespirofindazol-5,4'-piperidin1-3-carbonitrilo (8A-1); La Preparación l-2A-76b (50 mg, 0.18 mmoles), ácido 1 H-benzo[d]imidazol-5-carboxílico (30 mg, 0.18 mmoles), hexafluorofosfato de O-(azabenzotriazol-1-il)-/V,/V,A/',A/'-tetrametiluronio (77 mg, 0.20 mmoles) y trietilamina (56 mg, 0.55 mmoles) se combinaron en 2.3 mi de diclorometano y se agitaron a temperatura ambiente durante 16 horas. A la reacción se le añadió bicarbonato sódico acuoso saturado (3 mi). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con una porción adicional de diclorometano. Las fases orgánicas se combinaron y se concentraron, dando un residuo. El residuo se disolvió en metanol y se añadió carbonato potásico (49 mg, 0.36 mmoles). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. La reacción se interrumpió con la adición de cloruro de amonio acuoso saturado (2 mi) y el metanol se concentró al vacío, dando un residuo. El residuo se repartió entre agua y diclorometano y después las fases se separaron. La fase orgánica se lavó con cloruro sódico acuoso saturado, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró al vacío, dando un residuo que se purificó por cromatografía ultrarrápida usando metanol al 0-10 % en acetato de etilo como eluyente, proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido (17 mg, 22 %): +IEN EM (M+H) = 417.5; RMN H (400 MHz, CD3OD) d ppm 8.26 (s, 1 H), 7.51 - 7.88 (m, 2 H), 7.33 (d, J = 9.77 Hz, 1 H), 5.35 - 5.47 (m, 1 H), 3.33 - 3.91 (m, 4 H), 2.96 (s, 2 H), 2.71 (s, 2 H), 1.48 - 1.83 (m, 4 H), 1.44 (d, J = 6.64 Hz, 6 H).

EJEMPLO 9 Preparación de 1'-(1H-indazol-5-carbonil)-1-(oxetan-3-il)-4,6- dihidroespirofindazol-5.4'-piperidin1-7(1H -ona (9A-1): La Preparación I-2A-42 g (12.4 mg, 0.042 mmoles), ácido 1H-indazol-5-carboxílico (7 mg, 0.043 mmoles), hexafluorofosfato de O-(azabenzotriazol-l-i -^^A/'./V'-tetrametiluronio (16 mg, 0.042 mmoles) y trietilamina (14 mg, 0.14 mmoles) se combinaron en 3 mi de dimetilformamida y se agitaron a temperatura ambiente durante 16 horas. La reacción se diluyó con acetato de etilo y se lavó una vez con cada uno de ácido cítrico (0.5 M en agua), cloruro sódico acuoso saturado y bicarbonato sódico acuoso saturado. La fase orgánica se separó y después se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró, dando un residuo. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida usando metanol al 0-20 % en acetato de etilo como eluyente, proporcionando el compuesto del título en forma de un aceite (7 mg, 40 %); +IQPA EM (M+H) 406.2; RMN H (400 MHz, CD3OD) d ppm 8.15 (s, 1 H), 7.91 (s, 1 H), 7.63 (d, J = 8.60 Hz, 1 H), 7.58 (s, 1 H), 7.46 (dd, J = 8.70, 1.47 Hz, 1 H), 6.10 - 6.25 (m, 1 H), 4.95 - 5.13 (m, 4 H), 3.41 - 4.06 (m, 4 H), 2.93 (s, 2 H), 2.66 (s, 2 H), 1.44 - 1.85 (m, 4 H).

EJEMPLO 10 Preparación de 1'-(1H-indazol-5-carbonil)-1-isopropil-4,6- dihidroespirorindazol-5,4'-piperidin1-7f1 H)-ona (10A-1): La Preparación l-1A-1e (30.3 g, 94.6 mmoles) y ácido 1H-indazol-5-carboxílico (16.96 g, 104.6 mmoles) se suspendieron en dimetil acetamida (430 mi) y se añadió clorhidrato de 1-etil-3-[3-(dimetilamino)propil]carbodiimida (22.3 g, 115 mmoles), seguido de la adición gota a gota de trietilamina (65 mi, 475 mmoles). Después, se añadió 1-hidroxibenzotriazol hidrato (16.2 g, 106 mmoles) y la mezcla de reacción se agitó a 60 °C durante 2 horas. La reacción se vertió en cloruro de amonio acuoso semisaturado (500 mi) y se extrajo con acetato de etilo (1 x 1 I, 2 x 500 mi). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con bicarbonato sódico acuoso (2 x 500 mi), agua (3 x 500 mi) y cloruro sódico acuoso saturado (1 x 500 mi). La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró a presión reducida, dando un aceite. El aceite se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida (metanol al 1-6 % en diclorometano), proporcionando el producto deseado (27.1 g). Se cristalizó una pequeña cantidad usando acetato de etilo/heptano. Ésta se usó para sembrar la siguiente cristalización. El producto se disolvió en acetato de etilo (100 mi) y se calentó a reflujo hasta que la solución se volvió brumosa. Se añadió una pequeña cantidad de cristal seminal. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se formó un precipitado que se agitó durante 80 horas. El precipitado se recogió por filtración y se lavó con acetato de etilo frío (2 x 30 mi). El material se secó al aire y después se secó adicionalmente a alto vacío, proporcionando el producto del título deseado en forma de un sólido de color blanquecino (23 g, 62 %). +IEN EM (M+H) 392.5; RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 13.19 (s, 1 H), 8.08 - 8.12 (m, 1 H), 7.78 - 7.80 (m, 1 H), 7.49 - 7.57 (m, 1 H), 7.43 (s, 1 H), 7.29 - 7.38 (m, 1 H), 5.17 - 5.31 (m, 1 H), 3.45 (s a, 4 H), 2.78 (s, 2 H), 2.59 (s, 2 H), 1.48 (s a, 4 H), 1.32 (d, J = 6.63 Hz, 6 H).

EJEMPLO 11 Preparación de 1'-(4-(1 H-imidazol-2-il)benzoil)-1-isopropil-4,6- d¡hidroespirofinda2ol-5,4'-piperidin1-7(1 H)-ona (11 A-1 ): Se combinaron ácido 4-(1 H-imidazol-2-il)benzoico (1.4 mg, 75 umol), acetonitrilo anhidro (400 ul), la Preparación 1-1 A-1f (1.9 mg, 75 ul), trietilamina (21 ul, 150 umol) y hexafluorofosfato de O-(azabenzotriazol-l-il)-?/,?/,?/',?/'-tetrametiluronio (2.9 mg, 75 umol) y se calentaron a 30 °C durante 14 horas. La solución de reacción se concentró al vacío y se purificó por HPLC preparativa, dando el compuesto del título. Procedimiento de HPLC Preparativa: columna = Luna 5 u 100 x 21.2 mm, fase disolvente A = ácido trifluoroacético al 0.1 % en agua, fase B = acetonitrilo, caudal = 23 ml/min y detector = UV.

Gradiente: Procedimiento de HPLC Analítica: columna = materiales de expansión XB-C18 2.1 x 50 mm, fase de disolvente A = H20 (1 I de H20 con 0.5 mi de ??3?20), fase de disolvente B = acetonitrilo, caudal: 0.8 ml/min. Tiempo de retención = 2.419 minutos.

Gradiente: Parámetros de masas: Intervalo de masa = 170-1000 Fragmentador = 50 Flujo de gas = 10 l/min Temperatura de gas seco = 350 °C Voltaje de Capilaridad (v) = 2500 M+H = 418 Los compuestos que se indican en el cuadro 3 a continuación se prepararon usando procedimientos análogos a los descritos anteriormente para la síntesis del Ejemplo 11 , Compuesto 11A-1 , usando los materiales de partida apropiados que están disponibles en el mercado, se preparan usando preparaciones bien conocidas por los expertos en la materia o se preparan de manera análoga a rutas descritas anteriormente para otros intermedios. Los compuestos que se indican a continuación se aislaron inicialmente en forma de la base libre y pueden convertirse en su sal clorhidrato correspondiente para el ensayo. Los compuestos se caracterizaron por el mismo procedimiento de HPLC analítica referenciado para el Ejemplo 11 , Compuesto 11A-1 (procedimiento A) o por un procedimiento en el que se sustituyó la fase de disolvente A (procedimiento B) por ácido trifluoroacético al 0.05 % en agua.

CUADRO 3 EJEMPLO 12 Preparación de 1 -terc-butil-1 '-(1 H-pirrolor2,3-b1piridin-2-carbonil)-4,6- d'ihidroespirofindazol-5,4'-piperidin1-7(1H)-ona: La Preparación l-1a-2f (88 mg, 0.3 mmoles), ácido H-pirrolo[2,3-b]piridin-2-carboxílico (48 mg, 0.3 mmoles), hexafluorofosfato de O-(azabenzotriazol-l-ilJ-tyfy/V^A/'-tetrametiluronio (116 mg, 0.3 mmoles) y trietilamina (0.83 mi, 0.59 mmoles) se combinaron en 3 mi de dimetilformamida y se agitaron a temperatura ambiente durante 30 horas. La reacción se repartió entre 10 mi de acetato de etilo y 10 mi de cloruro de amonio acuoso saturado. La fase orgánica se separó y después se lavó con bicarbonato sódico acuoso saturado y cloruro sódico acuoso saturado, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró, dando un sólido de color crema. El sólido se purificó por cromatografía ultrarrápida usando metanol al 0-20 % en acetato de etilo como eluyente, proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (91 mg, 76 %): +IEN EM (M+H) 406.5; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d ppm 1 .05 (s a, 1 H), 8.50 (dd, J = 4.69, 1.56 Hz, 1 H), 7.94 (dd, J = 8.01 , 1.56 Hz, 1 H), 7.30 (s, 1 H), 7.1 1 (dd, J = 8.01 , 4.69 Hz, 1 H), 6.67 (s, 1 H), 3.91 (s a, 2 H), 3.86 (s a, 2 H), 2.83 (s, 2 H), 2.63 (s, 2 H), 1.65 (s a, 13 H).

EJEMPLO 13 Preparación de 3-bromo-1'-(7-bromo-2-oxo-2,3-dihidro-1 H- benzofd1imidazol-5- carbonil)-1-terc-butil-4,6-dihidroespirofindazol-5,4'- piperidin1-7(1H)-ona: La Preparación l-3A-1c (190 mg, 0.504 mmoles), ácido 7-bromo-2-0X0-2, 3-dihidro-1 H-benzo[d]imidazol-5-carboxílico (130 mg, 0.506 mmoles), hexafluorofosfato de 0-(azabenzotriazol-1-il)-/\/,/ /,/\/',/S/-tetrametiluron¡o (205 mg, 0.52 mmoles) y trietilamina (100 mg, 1.0 mmol) se combinaron en diclorometano (10 mi) y se agitaron a temperatura ambiente durante 16 horas. A la solución de reacción se le añadió acetato de etilo (30 mi). La solución de reacción se lavó con ácido cítrico acuoso al 10 % p/p (5 mi), bicarbonato sódico acuoso saturado (5 mi) y cloruro sódico acuoso saturado (5 mi). La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró, dando un residuo que se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con un gradiente de metanol al 2-8 % en diclorometano, dando 13A-1 (52 mg, 18 %): +IEN EM (M+H) 580.4; RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d ppm 10.05 (s a, 1 H), 9.74 (s a, 1 H), 6.95 - 7.37 (m, 2 H), 3.17 - 4.03 (m, 4 H), 2.70 (s a, 2 H), 2.60 (s a, 2 H), 1.62 (s a, 13 H).

Datos farmacológicos Protocolos Biológicos |a utilidad de los compuestos de la presente invención en el tratamiento de enfermedades (tales como las detalladas en el presente documento) en animales, particularmente mamíferos (por ejemplo, seres humanos) puede demostrarse por su actividad en ensayos convencionales conocidos por un experto habitual en la materia, incluyendo los ensayos in vitro e in vivo descritos más adelante.

Estos ensayos también proporcionan un medio por el que las actividades del compuesto de la presente invención pueden comparase con las actividades de otros compuestos conocidos.

Inhibición Directa de las Actividades de ACC1 y ACC2 La actividad inhibidora de ACC del compuesto de la presente invención se demostró por procedimientos basados en procedimientos convencionales. Por ejemplo, se determinó la inhibición directa de la actividad ACC para el compuesto de Formula (1), usando preparaciones de ACC1 humana recombinante (rhACCI) y ACC2 humana recombinante (rhACC2). En la SEQ ID N° 1 y SEQ ID N° 2, se proporcionan secuencias representativas de la ACC1 y ACC2 humanas recombinantes que pueden usarse en el ensayo. [1] Preparación de rhACCI Se suspendieron dos litros de células SF9, infectadas con baculovirus recombinante que contenía ADNc de ACC1 humana de longitud completa, en tampón de lisis enfriado con hielo (Tris 25 mM, pH 7.5; NaCI 150 mM; glicerol al 10%; imidazol 5 mM (EMD Bioscience; Gibbstown, NJ); TCEP 2 mM (BioVectra; Charlottetown, Canadá); nucleasa Benzonase (10000 U/100 g de pasta celular; Novagen; Madison Wl); cóctel inhibidor de proteasa sin EDTA (1 tab/50 mi; Roche Diagnostics; Mannheim, Alemania). Las células se lisaron por 3 ciclos de congelación-descongelación y se centrifugaron a 40,000 X g durante 40 minutos (4°C). El sobrenadante se cargó directamente en una columna bruta HisTrap FF (GE Healthcare; Piscataway, NJ) y se eluyó con un gradiente de imidazol de hasta 0.5 M sobre 20 volúmenes de columna (CV). Se reunieron las fracciones que contenían ACC1 y se diluyeron 1 :5 con Tris 25 mM, pH 7.5, TCEP 2 mM, glicerol al 10% y se cargaron directamente en una columna CaptoQ (GE Healthcare) y se eluyeron con un gradiente de NaCI de hasta 1 M sobre 20 VC. Se retiraron los grupos fosfato de la ACC1 purificada por incubación con lambda fosfatasa (100 U/10 µ? de proteína diana; New England Biolabs; Beverly, MA) durante 14 horas a 4°C; se añadió ácido okadaico (concentración final 1 µ?; Roche Diagnostics) para inhibir la fosfatasa. La ACC1 purificada se sometió a intercambio en Tris 25 mM, pH 7.5, TCEP 2 mM, glicerol al 10%, NaCI 0.5 M mediante 6 horas de diálisis a 4°C. Se prepararon alícuotas y se congelaron a - 80°C. [2] Medición de la inhibición de rhACCI . Se ensayó hACC1 en una placa de 384 pocilios Costar N° 3676 (Costar, Cambridge, MA) usando el kit de ensayo FP de detección de ADP Transcreener (Bellbrook Labs, Madison, Wisconsin) usando las condiciones recomendadas por el fabricante para una reacción de ATP 50 µ?. Las condiciones finales para el ensayo fueron HEPES 50 mM, pH 7.2, MgCI2 10 mM, citrato tripotásico 7.5 mM, DTT 2 mM, BSA 0.1 mg/ml, acetil-CoA 30 µ?, ATP 50 µ? y KHC03 10 mM. Típicamente se realizó una reacción de 10 µ? durante 120 minutos a 25°C y se añadieron 10 µ? de tampón de terminación y detección del Transcreener y la combinación se incubó a temperatura ambiente durante 1 hora más. Los datos se adquirieron en un lector de Fluorescencia Envision (Perkinelmer) usando un espejo doble general Cy5 FP de excitación 620, un filtro Cy5 FP de excitación 620, filtro de emisión 688 (S) y un filtro de emisión 688 (P). [3] Preparación de rhACC2. Se midió la inhibición de la ACC2 humana usando ACC2 humana recombinante purificada (hrACC2). En resumen, se adquirió un clon Cytomax de longitud completa de ACC2 en Cambridge Bioscience Limited y se secuenció y subclonó en PCDNA5 FRT TO-TOPO (Invitrogen, Carisbad, CA). La ACC2 se expresó en células CHO por inducción con tetraciclina y se recogió en 5 litros de DMEM/F12 con glutamina, botina, higromicina y blasticidina con 1 µg/ml de tetraciclina (Invitrogen, Carisbad, CA). Después se aplicó el medio acondicionado que contenía ACC2 a una columna de Softlink Soft Reléase Avidin (Promega, Madison, Wisconsin) y se eluyó con biotina 5 mM. Se eluyeron 4 mg de ACC2 a una concentración de 0.05 mg/ml (determinada por A280) con una pureza estimada del 95% (determinada por A280). La ACC2 purificada se dializó en Tris 50mM, NaCI 200 mM, DTT 4 mM, EDTA 2 mM y glicerol al 5%. La proteína enfriada se congeló y se almacenó a - 80°C sin pérdida de actividad después de la descongelación. Para la medición de la actividad de ACC2 y la evaluación de la inhibición de ACC2, los compuestos de ensayo se disolvieron en DMSO y se añadieron a la enzima rhACC2 como una solución madre 5X con una concentración final de DMSO del 1%. [4] Medición de la inhibición de ACC2 humana. Se ensayó hACC2 en una placa de 384 pocilios Costar N° 3676 (Costar, Cambridge, MA) usando el kit de ensayo FP de detección de ADP Transcreener (Bellbrook Labs, Madison, Wisconsin) usando las condiciones recomendadas por el fabricante para una reacción de ATP 50 uM. las condiciones finales para el ensayo fueron HEPES 50 mM, pH 7.2, MgCI2 5 mM, citrato tripotásico 5 mM, DTT 2 mM, BSA 0.1 mg/ml, acetil-CoA 30 µ?, ATO 50 µ? y KHCO3 8 mM. Típicamente se realizó una reacción de 10 µ? durante 50 minutos a 25°C y se añadieron 10 µ? de tampón de terminación y detección Transcreener y la combinación se incubó a temperatura ambiente durante 1 hora más. Los datos se adquirieron en un lector de Fluorescencia Envision (Perkinelmer) usando un espejo doble general Cy5 FP de excitación 620, un filtro Cy5 FP de excitación 620, filtro de emisión 688 (S) y un filtro de emisión 688 (P).

Los resultados obtenidos usando los ensayos Transcreener de hACC1 recombinante y hACC2 recombinante descritos anteriormente se resumen en el cuadro presentado a continuación para los compuestos de Formula (I) ejemplificados en los ejemplos anteriores.

Ejemplo hACC1 n hACC2 n (nM) (nM) 1A-1 267 3 68 3 1A-2 444 3 62.3 3 1A-3 646 3 155 6 1A-4 2980 3 719 3 1A-5 800 3 127 3 2A-1 282 3 69.7 4 2A-2 8300 3 3570 3 2A-3 2720 2 680 3 2A-4 8730 3 2530 3 2A-5 1220 3 481 3 2A-6 640 3 88.8 4 2A-7 4340 3 965 4 2A-8 16000 2 4890 3 2A-9 4260 1 1850 3 2 A- 10 188 3 29.2 3 2A-11 261 3 33.5 3 2A-12 94 3 32.2 9 2 A- 13 95.3 3 28 5 2A-14 172 3 27 7 2 A- 15 2030 3 775 3 2A-16 46.9 3 13.6 7 2A-17 795 3 287 3 2 A- 18 1010 2 458 3 2A-19 57.4 3 22.1 9 2A-20 121 4 93 5 2A-21 93.3 2 32.7 4 2A-22 1890 1 334 3 2A-23 32.3 3 23.3 9 A-24 30.7 3 15.8 5 A-25 69.5 3 22.7 6 A-26 43.8 3 42.4 4 A-27 308 1 91.8 4 A-28 47.8 3 17 5 A-29 24.1 3 9.81 10 A-30 170 2 51 3 A-31 43.5 3 28.8 4 A-32 37 3 28.6 6 A-33 53.7 3 14.5 10 A-34 72.4 2 32.1 3 A-35 97.3 2 34.1 4 A-36 123 2 29.6 4 A-37 87.4 2 34.5 3 A-38 297 2 99.7 3 A-39 527 2 122 6 A-40 262 2 116 3 A-41 176 2 90 3 A-42 1300 3 766 3 A-43 304 2 149 3 A-44 106 2 30.2 3 A-45 73.7 2 32.9 3 A-46 167 3 29.5 6 A-47 48.2 3 15.9 5 A-48 51.1 3 17.2 8 A-49 92.1 2 71.6 3 A-50 269 5 64.1 7 A-51 72.7 2 29.9 3 A-52 54.2 3 19.3 7 A-53 39.6 3 17.2 8 2A-54 214 2 51.5 3 2A-55 266 2 105 3 2A-56 31.2 3 15.1 4 2A-57 66.5 4 20.8 5 2A-58 280 2 74.1 3 2A-59 115 3 69.2 4 2A-60 8240 1 3990 1 2A-61 2320 1 2190 1 2A-62 4210 1 1280 1 2A-63 9330 1 3200 1 2A-64 229 1 253 1 2A-65 74.9 1 51.5 1 2A-66 30000 1 14000 1 2A-67 799 4 653 3 2A-68 68.4 4 51.2 3 2A-69 122 4 42,9 3 2A-70 9790 4 3760 3 2A-71 1060 4 387 3 2A-72 599 4 290 3 2A-73 516 4 139 3 2A-74 128 4 47.3 3 2A-75 1 13 3 37.7 6 2A-76 6620 1 1500 3 2A-77 6160 1 1300 3 2A-78 3840 1 1270 3 3A-1 96.1 8 48,6 17 4A-1 399 2 125 3 5A-1 4480 1 866 3 A-2 175 1 80.7 4 A-1 1530 1 373 3 A-1 63.2 1 39.8 4 8A-1 7620 1 1660 3 9A-1 704 3 264 3 10A-1 43.8 3 22.3 5 11A-1 147 4 31.8 4 11A-2 1480 2 658 4 11A-3 74.7 3 25.4 4 11A-4 19600 1 5800 3 11A-5 16400 1 13200 3 11A-6 989 1 459 3 11A-7 36.8 3 10.4 3 11A-8 40.9 1 26.8 3 11A-9 34.4 3 19.7 5 11A-10 6670 1 789 3 11A-11 10600 1 1450 3 11A-12 152 1 850 3 11A-13 37.6 1 35.7 3 11A-14 418 1 253 3 11A-15 112 4 43.8 5 11A-16 621 1 190 3 11A-17 129 2 48.4 3 11A-18 235 2 56.3 4 11A-19 242 2 71.6 3 11A-20 25.5 3 8.46 3 11A-21 112 1 73.4 3 11A-22 1260 1 539 3 11A-23 87.1 3 20.4 5 11A-24 6060 1 836 3 11A-25 331 1 745 3 1A-26 130 2 41.5 4 11A-27 584 1 309 3 11A-28 917 1 391 3 11A-29 151 1 64.5 5 11A-30 224 106 4 11A-31 117 1 83.4 3 11A-32 155 1 96.4 3 11A-33 272 93.1 4 11A-34 2140 1 638 3 11A-35 3340 1 2130 3 11A-36 194 2 75.6 4 11A-37 1030 1 463 3 11A-38 2170 2 1030 4 11A-39 69 2 81.3 4 11A-40 1140 2 588 4 11A-41 122 4 30.1 5 11A-42 11700 1 2850 3 11A-43 143 1 45.6 3 11A-44 4170 1 4600 3 11A-45 1500 1 745 3 11A-46 391 2 97.1 4 11A-47 850 1 373 3 11A-48 78.9 2 41.2 4 11A-49 13500 1 4910 3 11A-50 581 1 371 3 11A-51 110 1 108 3 11A-52 550 1 176 3 11A-53 68.3 3 22.8 5 11A-54 1500 1 295 3 1 1A-55 213 2 60.4 4 1 1A-56 1010 1 359 3 1 1A-57 9230 1 2330 3 1 1A-58 131 1 73.6 3 11A-59 86.8 1 80.1 3 11A-60 404 1 171 3 11A-61 2570 1 1350 3 1 1A-62 338 2 1 12 4 1 1A-63 8720 1 2550 3 11A-64 105 3 24.4 4 1 A-65 1080 1 388 3 11A-66 4080 1 1390 3 1 1A-67 203 1 139 3 1 1A-68 825 2 285 4 11A-69 580 2 288 4 11A-70 1860 1 1040 3 1 1A-71 1560 1 285 3 11A-72 867 1 153 3 11A-73 37.4 1 37.4 3 1 1A-74 23.7 3 16.8 4 12A-1 39.5 3 67.3 4 13A-1 264 3 316 3 Evaluación Aguda in vivo de la Inhibición de ACC en Animales Experimentales La actividad inhibidora de ACC de los compuestos de la presente invención puede confirmarse in vivo mediante la evaluación de su capacidad de reducir los niveles de malonil-CoA en tejido hepático y muscular de animales tratados.

Medición de la inhibición de la producción de malonil-CoA en animales experimentales. En este procedimiento se distribuyeron aleatoriamente ratas Sprague-Dawley macho, mantenidas con una dieta convencional y agua ao* libitum (225-275 g) antes del estudio. Los animales se alimentaron o se dejaron en ayunas durante 18 horas antes de empezar el experimento. Después de dos horas en el ciclo luminoso, los animales se dosificaron por vía oral con un volumen de 5 ml/kg (metil celulosa al 0.5%; vehículo) o con el compuesto apropiado (preparado en vehículo). Se incluyeron controles con vehículo alimentados para determinar los niveles básales de malonil-CoA en el tejido, mientras que se incluyeron animales en ayunas para determinar el efecto que tenía el ayuno sobre los niveles de malonil-CoA. Una hora después de la administración del compuesto, los animales se asfixiaron con C02 y se retiraron los tejidos. Específicamente, se recogió sangre por punción cardiaca y se puso en tubos BD Microtainer que contenían EDTA (BD Biosciences, NJ), se mezclaron y se pusieron en hielo. Se usó plasma para determinar la exposición al fármaco. Se retiraron el hígado y los cuádriceps, se sometieron inmediatamente a la técnica freeze-clamp, se envolvieron en papel de aluminio y se almacenaron en nitrógeno líquido.

Los tejidos se pulverizaron bajo N2 líquido para asegurar la uniformidad en el muestreo. Se extrajo Malonil-CoA del tejido (150-200 mg) con 5 volúmenes de ácido tricarboxílico al 10% en Matriz de Lisis A (MP Biomedicals, PN 6910) en un FastPrep FP120 (Thermo Scientific, velocidad = 5.5; durante 45 segundos). El sobrenadante que contenía malonil-CoA se retiró del desecho celular después de la centrifugación a 15000 x g durante 30 minutos (Eppendorf Centrifuge 5402). Las muestras se congelaron de forma estable a -80°C hasta que se completó el análisis.

El análisis de los niveles de malonil-CoA en hígado y tejido muscular puede evaluarse usando la siguiente metodología.

El procedimiento utiliza los siguientes materiales: se usaron sal de tetralitio de Malonil-CoA y sal de trilitio de malonil- 3C3-CoA que se adquirieron en Isotec (Miamisburg, OH, USA), perclorato sódico (Sigma, n° de cat. 410241), ácido tricloroacético (ACROS, n° de cat. 42145), ácido fosfórico (J.T. Baker, n° de cat. 0260-01 ), formiato amónico (Fluka, n° de cat. 17843), metanol (calidad HPLC, J.T. Baker, n° de cat. 9093-33) y agua (calidad HPLC, J.T. Baker, 4218-03) para preparar las fases móviles necesarias. Se obtuvieron columnas de extracción en fase sólida en línea Strata-X, 25 µ??, 20 mm x 2.0 mm D.l (n° de cat. 00M-S033-B0-CB) en Phenomenex (Torrance, CA, USA). Las columnas de fase inversa SunFire C18, 3.5 µ?t?, 100 mm x 3.0 mm D.l (n° de cat. 186002543) se adquirieron en Waters Corporation (Milford, MA, USA).

Este procedimiento puede realizarse utilizando el siguiente equipo. Cromatografía bidimensional usando una bomba binaria Agilent 1 100, una bomba cuaternaria Agilent 1 100 y dos válvulas de dos posiciones de 6 puertos Valco Cheminert. Las muestras se introdujeron a través de un automuestreador LEAP HTC PAL con refrigeración de Peltier mantenido a 10°C y una espira de muestra de 20 µ?. Las soluciones de lavado de la aguja para el automuestreador son ácido tricloroacético al 10% en agua (p/v) para el Lavado 1 y 90:10 de metanol:agua para el Lavado 2. La columna analítica (Sunfire) se mantuvo a 35°C usando un Micro Tech Scientific Micro-LC Column Oven. El eluyente se analizó en un espectrómetro de masas triple cuadrupolo ABI Sciex API3000 con nebulización iónica Turbo.

La cromatografía bidimensional se realizó en paralelo usando distintas condiciones de elución en gradiente para la extracción en fase sólida y la cromatografía en fase inversa en línea. El diseño general del procedimiento fue tal que la primera dimensión se utilizó para la limpieza de la muestra y la captura del analito de interés seguido de un breve acoplamiento de las dos dimensiones para la elución de la primera dimensión sobre la segunda dimensión. Las dimensiones posteriormente se desacoplaron permitiendo la elución en gradiente del analito de la segunda dimensión para la cuantificación mientras se preparaba simultáneamente la primera dimensión para la siguiente muestra en la secuencia. Cuando las dos dimensiones se acoplaron brevemente entre sí, el flujo de la fase móvil en la primera dimensión se invirtió para la elución del analito sobre la segunda dimensión, permitiendo una anchura de pico, forma de pico y tiempo de elución óptimos.

La primera dimensión del sistema de HPLC utilizó la columna de extracción en fase sólida en línea Phenomenex strata-X y la fase móvil consistía en perclorato sódico 00 mM/ácido fosfórico al 0.1% (v/v) en el caso del disolvente A y metanol en el caso del disolvente B.

La segunda dimensión del sistema de HPLC utilizó la columna de fase inversa Waters Sunfire C18 y la fase móvil consistía en formiato amónico 100 mM en el caso del disolvente A y metanol en el caso del disolvente B. La condición inicial del gradiente se mantuvo durante dos minutos y, durante este tiempo, el analito se transfirió a la columna analítica. Fue importante que la condición inicial estuviera a una concentración suficiente para el eluir el analito desde la columna SPE en línea mientras que se retenía en la analítica. Posteriormente, el gradiente se elevó de forma lineal al 74.5% de A en 4.5 minutos antes de la etapa de lavado y reequilibrio.

La espectrometría de masas, cuando se acopla con HPLC, puede ser un procedimiento muy selectivo y sensible para medir cuantitativamente analitos en matrices complejas, pero aún está sometido a interferencias y supresión. Mediante el acoplamiento de una HPLC bidimensional al espectrómetro de masas, estas interferencias se redujeron significativamente. Además, utilizando la característica de Monitorización de Reacción Múltiple (MRM) del espectrómetro de masas triple cuadrupolo, se mejoró significativamente la relación entre señal e interferencias.

Para este ensayo, el espectrómetro de masas se hizo funcionar en modo de ión positivo con un voltaje TurbolonSpray de 2250 V. El gas de nebulización se calentó a 450°C. El Potencial de Desolvatación (DP), el Potencial de Enfoque (FP) y la Energía de Colisión (EC) se fijaron a 60, 340 y 42 V, respectivamente. La resolución del cuadrupolo 1 (Q1) se fijo a la resolución unitaria, fijándose el cuadrupolo 3 (Q3) por debajo. El gas CAD se fijó a 8. Las transiciones de MRM monitorizadas fueron para malonil CoA: 854.1 ? 347.0 m/z (L Gao y col. (2007) J. Chromatogr. B 853,303-313); y para malonil- 3C3-CoA: 857.1 ? 350.0 m/z con tiempos de permanencia de 200 ms. El eluyente se desviaba al espectrómetro de masas cerca del tiempo de elución esperado para el analito, de lo contrario se desviaba al residuo para ayudar a conservar la fuente y mejorar la solidez de la instrumentación. Los cromatogramas resultantes se integraron usando el software Analyst (Applied Biosystems). Las concentraciones de tejido para malonil CoA se calcularon a partir de una curva patrón preparada en una solución al 10% de ácido tricloroacético en agua.

Se prepararon muestras que comprendían la curva patrón para la cuantificación de malonil-CoA en extractos de tejido en ácido tricloroacético (TCA) al 10% (p/v) y variaban de 0.01 a 1 pmol/µ?. Se añadió malonil-13C3-CoA (concentración final de 0.4 pmol/µ?) a cada componente de la curva patrón y muestra como patrón interno.

Se prepararon seis controles de calidad intra-ensayo; tres procedentes de un extracto reunido preparado a partir de animales en ayunas y tres procedente de un conjunto preparado a partir de animales alimentados. Estos se procesaron como muestras independientes a las que se habían añadido 0, 0.1 o 0.3 pmol/µ? de 12C-malonil-CoA así como malonil-13C3-CoA (0.4 pmol/µ?). Cada control de calidad intra-ensayo contenía un 85% de extracto de tejido acuoso, aportando la parte restante el patrón interno (0.4 pmol/µ?) y 2C-malonil-CoA. En cada ensayo se incluyeron controles interensayo; consistían en una muestra de cuádriceps reunida en ayunas y una en estado posprandial y/o una muestra de hígado en ayunas y en estado posprandial de hígado. A todos estos controles se les añade malonil-13C3-CoA (0.4 pmol/µ?).

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Un compuesto de Fórmula (I) en la que R1 es alquilo (CrC6), cicloalquilo (C3-C7), tetra h id rotura ni lo u oxetanilo; en el que dicho alquilo (Ci-Ce) está opcionalmente sustituido con 1 a 2 sustituyentes seleccionados independientemente entre alcoxi (C1-C3), hidroxi, flúor, fenilo, tetrahidrofuranilo u oxetanilo; R2 es hidrógeno, halo, alquilo (C1-C3) o ciano; cada uno de R3 es independientemente hidrógeno o alquilo (C1-C3); R4 es un arilo (C6-Ci0), heteroarilo de 5 a 12 miembros o arilo heterocíclico condensado de 8 a 12 miembros; en el que cada uno de dicho arilo (C6-Ci0), heteroarilo de 5 a 12 miembros o arilo heterocíclico condensado de 8 a 12 miembros está opcionalmente sustituido con uno a tres sustituyentes seleccionados independientemente entre alquilo (C^Ca), alcoxi (C1-C3), halo, amino, alquil (Ci-C3)-amino, dialquil (C C3)-amino, hidroxi, ciano, amido, fenilo, heteroarilo de 5 a 6 miembros o heterociclilo de 5 a 6 miembros; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

2 - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R es alquilo (C-I-CB), cicloalquilo (C

3-C7) o tetrahidrofuranoilo; y R2 es hidrógeno o metilo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 3. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque R1 es etilo, isopropilo o t-butilo; cada R3 es hidrógeno; y R4 es fenilo, pirazolilo, ¡midazolilo, triazolilo, piridinilo, pirimidinilo, indolilo, benzopirazinilo, benzoimidazolilo, benzoimidazolonilo, pirrolopiridinilo, pirrolopirimidinilo, pirazolopiridinilo, pirazolopirimidinilo, indazolilo, indolinonilo, naftiridinilo, quinolinilo, quinolinonilo, dihidroquinolinonilo, oxo-dihidroquinolinonilo, isoquinolinilo, isoquinolinonilo, dihidroisoquinonilo u oxo-dihidroisoquinonilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno a tres sustituyentes seleccionados independientemente entre flúor, cloro, metilo, metoxi, amino, metilamino, dimetilamino, amido, ciano, fenilo, ¡midazolilo, pirazolilo, triazolilo, piridinilo o morfolinilo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

4. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado además porque R1 es isopropilo o t-butilo; R2 es hidrógeno; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

5. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado además porque R4 es indazolilo, benzoimidazolilo, 1-oxo-1 ,2-dihidroisoquinolinilo, 1H-pirrolo[3,2-b]piridinilo, 2-oxo-2,3-dihidro-1H-benzo[o]imidazolilo, 1 H-pirazolilfenilo, 1 /-/-pirazolilpiridinilo o 1H-imidazolilfenilo; cada uno opcionalmente sustituido con uno a dos metilo, cloro o flúor; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 6. - l-isopropil-I IH-pirrolo ^-blpiridin-B-carbonil)^^-dihidrospiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(1/-/)-ona, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 7. - Un compuesto de fórmula 8. - 1 -isopropil-1 '-(2-metil-1 H-benzo[d]imidazol-

6-carbonil)-4,6-dihidroespiro[indazol-5,4'-piperidin]-7(1H)-ona, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 9. - Un compuesto de fórmula Un compuesto de fórmula o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 11. - Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un excipiente, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable. 12. - La composición de conformidad con la reivindicación 11 , caracterizada además porque comprende además al menos un agente antidiabético adicional. 13. - La composición de conformidad con la reivindicación 12, caracterizada además porque dicho agente antidiabético se selecciona entre el grupo que consiste en metformina, acetohexamida, clorpropamida, diabinese, glibenclamida, glipicida, gliburida, glimepirida, gliclazida, glipentida, gliquidona, glisolamida, tolazamida, tolbutamida, tendamistat, trestatina, acarbosa, adiposina, camiglibosa, emiglitato, miglitol, voglibosa, pradimicina-Q, salbostatina, balaglitazona, ciglitazona, darglitazona, englitazona, isaglitazona, pioglitazona, rosiglitazona, troglitazona, exendina-3, exendina-4, trodusquemina, reservatrol, extracto de hirtiosal, sitagliptina, vildagliptina, alogliptina y saxagliptina. 14. - Uso del compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 en la elaboración de un medicamento para tratar o retrasar la progresión o el inicio de diabetes Tipo 2. 15. - Uso del compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 en la elaboración de un medicamento para tratar la enfermedad de hígado graso no alcohólico (HGNA) o resistencia hepática a la insulina. 16. - Uso de la composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13 en la elaboración de un medicamento para tratar o retrasar la progresión o inicio de diabetes Tipo 2. 17. - Uso de la composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13 en la elaboración de un medicamento para tratar la enfermedad de hígado graso no alcohólico (HGNA) o la resistencia hepática a la insulina.