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MX2012002634A - Plantas tolerantes a herbicida. - Google Patents

Plantas tolerantes a herbicida.

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Publication number
MX2012002634A
MX2012002634A MX2012002634A MX2012002634A MX2012002634A MX 2012002634 A MX2012002634 A MX 2012002634A MX 2012002634 A MX2012002634 A MX 2012002634A MX 2012002634 A MX2012002634 A MX 2012002634A MX 2012002634 A MX2012002634 A MX 2012002634A
Authority
MX
Mexico
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plant
amino acid
coenzyme
acetyl
carboxylase
Prior art date
Application number
MX2012002634A
Other languages
English (en)
Inventor
Scots L Mankin
Allan R Wenck
Leon Neuteboom
Original Assignee
Basf Agrochemical Products Bv
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Basf Agrochemical Products Bv filed Critical Basf Agrochemical Products Bv
Publication of MX2012002634A publication Critical patent/MX2012002634A/es

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Abstract

La presente invención proporciona plantas tolerantes a herbicida. La presente invención también proporciona métodos para controlar el crecimiento de maleza aplicando un herbicida al cual las plantas tolerantes a herbicida de la invención son tolerantes. Las plantas de la invención pueden expresar una enzima acetil-Coenzima A carboxilasa que es tolerante a la acción de inhibidores de enzima acetil-Coenzima A carboxilasa.

Description

PLANTAS TOLERANTES A HERBICIDAS ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El arroz es uno de los cultivos de alimento más importantes en el mundo, particularmente en Asia. El arroz es un grano de cereal producido por plantas en el género Oryza. Las dos especies más frecuentemente cultivadas son Oryza sativa y Oryza glaberriwa , con O. sativa siendo el arroz doméstico más frecuentemente cultivado. Además de las dos especies domésticas, el género Oryza contiene más de 20 especies silvestres. Una de estas especies silvestres, Oryza rufipogon ("arroz rojo" también referido como Oryza sativa subsp. rufipogon) presenta un gran problema en el cultivo comercial. El arroz rojo produce semillas revestidas de rojo. Después de cultivar, las semillas de arroz se trituraron para eliminar su cáscara. Después de triturar, el arroz doméstico es blanco mientras que el arroz rojo silvestre parece descolorido. La presencia de semillas descoloridas reduce el valor del cultivo de arroz. Puesto que el arroz rojo pertenece a la misma especie como el arroz cultivado (Oryza sativa), su constitución genética es muy similar. Esta similaridad genética ha hecho difícil el control herbicida del arroz rojo.
Se ha desarrollado arroz doméstico tolerante a herbicidas de imidazolinona y se comercializan actualmente bajo el nombre comercial CLEARFIELD . Los herbicidas de imidazolinona inhiben una enzima acetohidroxiácido sintasa (AHAS) de planta. Cuando se cultiva arroz CLEARFIELD®, es posible controlar el arroz rojo y otras malezas mediante la aplicación de herbicidas de imidazolinona.
Desafortunadamente, se han desarrollado arroz rojo y maleza tolerantes al herbicida imidazolinona.
Las enzimas carboxilasa acetil-coenzima (ACCasa; EC 6.4.1.2) sintetizan malonil-CoA como el inicio de la trayectoria de síntesis entre ácido graso de novo en plantas de cloroplastos. La ACCasa en cloroplastos de césped es un polipéptido sencillo, muy largo, que codifica el genoma nuclear, multifuncional , transportado en un plástido mediante un péptido de transito N-terminal. La forma activa en cloroplastos de césped es una proteína homomérica, similar a un homodímero.
Las enzimas ACCasa en céspedes se inhiben mediante tres clases de ingredientes herbicidas activos . Las dos clases más prevalecientes son ariloxifenoxipropanoatos ("FOPs") y ciclohexandionas ("DIMs"). Además de estas dos clases, se ha descrito una tercera clase de fenilpirazolinas ( " DENs " ) .
Un número de mutaciones de tolerancia al inhibidor ACCasa (AIT) se ha encontrado en especies de maleza monocotiledónea que exhibe tolerancia hacia uno o más herbicidas DIM o FOP. Además, un maíz AIT se ha comercializado por BASF. Todas estas tales mutaciones se encuentran en el dominio carboxiltransferasa de la Enzima ACCasa, y esto parece localizarse en una cavidad de enlace de sustrato, alterando el acceso al sitio catalítico.
DIMs y FOPs son herbicidas importantes y pueden ser ventajosos si el arroz puede proporcionarse que muestre tolerancia a estas clases de herbicidas. Actualmente, estas clases de herbicidas son de valor limitado en la agricultura del arroz. En algunos casos, las mutaciones que inducen tolerancia a los herbicidas crean una desventaja de adaptación severa en la planta tolerante. Por consiguiente, existe una necesidad en la técnica para un arroz de AIT que tampoco muestre una desventaja de adaptabilidad. Esta necesidad y otras se cumplen mediante la presente invención.
BREVE COMPENDIO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a plantas tolerantes a herbicidas y métodos para producir y tratar plantas tolerantes a herbicidas. En una modalidad, la presente invención proporciona una planta de arroz tolerante a por lo menos un herbicida que muestra actividad acetil-Coenzima A carboxilasa en niveles de herbicidas que pueden inhibir normalmente el crecimiento de una planta de arroz. Típicamente, una planta de arroz tolerante a herbicidas de la invención expresa una acetil-Coenzima A carboxilasa (ACCasa) en la cual la secuencia de aminoácido difiere de una secuencia de aminoácido de una acetil-Coenzima A carboxilasa de una planta de arroz de tipo silvestre. Mediante convención, las mutaciones dentro de residuos de aminoácidos de ACCasa monocotiledónea se refieren típicamente en referencia a su posición en la secuencia de ACCasa monomérica plastídica de Alopecurus myosuroides (cola de zorra) (Genbank CAC84161.1) y se indica con un (Am) . Ejemplos de posiciones de aminoácidos en las cuales un acetil-Coenzima A carboxilasa de una planta tolerante a herbicidas de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de la correspondiente planta de tipo silvestre incluye, pero no se limita a, una o más de las siguientes posiciones: 1,781 (Am) , 1, 785 (Am), l,786(Am), 1, 811 (Am), l,824(Am), l,864(Am), l,999(Am), 2,027 (A ) , 2,039(Ain), 2,041(Am), 2,049(Am), 2,059(Am), 2,074(Am), 2,075(Am), 2,078(AiT¡), 2,079(Am), 2,080(Am), 2,081(Am), 2,088(Am), 2,095(Am), 2,096(Am), o 2,098(Am). Ejemplos de diferencia de estas posiciones de aminoácidos incluyen, pero no se limitan a, uno o más de los siguientes: el aminoácido en la posición 1, 781 (Am) es diferente de isoleucina; el aminoácido en la posición l,785(Am) es diferente de alanina; el aminoácido en la posición 1, 786 (Am) es diferente de alanina; el aminoácido en la posición 1, 811 (Am) es diferente de isoleucina; el aminoácido en la posición l,824(Am) es diferente de glutamina; el aminoácido en la posición l,864(Am) es diferente de valina; el aminoácido en la posición l,999(Am) es diferente de triptófano; el aminoácido en la posición 2,027(Am) es diferente de triptófano; el aminoácido en la posición 2, 039 (Am) es diferente de ácido glutámico; el aminoácido en la posición 2, 041 (Am) es diferente de isoleucina; el aminoácido en la posición 2,049(Am) es diferente de valina; el aminoácido en la posición 2,059(Am) es diferente de una alanina; el aminoácido en la posición 2, 074 (Am) es diferente de triptófano; el aminoácido en la posición 2,075(Am) es diferente de valina; el aminoácido en la posición 2, 078 (Am) es diferente de aspartato; la posición de aminoácido en la posición 2,079(Am) es diferente de serina; el aminoácido en la posición 2,080(Am) es diferente de lisina; la posición de aminoácido en la posición 2,081(Am) es diferente de isoleucina; el aminoácido en la posición 2,088(Am) es diferente de cisteína; el aminoácido en la posición 2,095(Am) es diferente de lisina; el aminoácido en la posición 2,096(Am) es diferente de glicina; o el aminoácido en la posición 2,098(Am) es diferente de valina. En algunas modalidades, la presente invención proporciona una planta de arroz que expresa una enzima acetil-Coenzima A carboxilasa que comprende una secuencia de aminoácido que comprende uno o más de los siguientes: el aminoácido en la posición l,781(Am) es leucina, treonina, valina, o alanina; el aminoácido en la posición 1,785 (Am) es glicina; el aminoácido en la posición l,786(Am) es prolina; el aminoácido en la posición 1, 811 (Am) es asparagina; el aminoácido en la posición 1,824(AJT?) es prolina; el aminoácido en la posición l,864(Am) es fenilalanina; el aminoácido en la posición 1,999 (Am) es cisterna o glicina; el aminoácido en la posición 2,027 (Am) es cisteína; el aminoácido en la posición 2, 03 (Am) es glicina; el aminoácido en la posición 2,041(Am) es asparagina; el aminoácido en la posición 2,049(Am) es fenilalanina; el aminoácido en la posición 2,059(Am) es valina; el aminoácido en la posición 2, 074 (Am) es leucina; el aminoácido en la posición 2,075(Am) es leucina, isoleucina o metionina; el aminoácido en la posición 2,078(Am) es glicina, o treonina; el aminoácido en la posición 2,079(A¿n) es fenilalanina; el aminoácido en la posición 2,080(Am) es ácido glutámico; el aminoácido en la posición 2,080(Am) es eliminado; el aminoácido en la posición 2, 081 (Am) es eliminado; el aminoácido en la posición 2, 088 (Am) es arginina, o triptófano; el aminoácido en la posición 2, 095 (Am) es ácido glutámico; el aminoácido en la posición 2,096(Am) es alanina, o serina; o el aminoácido en la posición 2,098(Am) es alanina, glicina, prolina, histidina, o serina.
La presente invención también proporciona métodos para producir plantas tolerantes a herbicidas y plantas producidas mediante tales métodos. Un ejemplo de una planta producida por los métodos de la invención es una planta de arroz tolerante a herbicida que es tolerante a por lo menos un herbicida que inhibe la actividad acetil-Coenzima A carboxilasa en niveles de herbicida que pueden inhibir normalmente el crecimiento de la planta, en donde la planta tolerante a herbicidas se produce por: a) obtener células a partir de una planta que no es tolerante al herbicida; b) contactar las células con un medio que comprende uno o más inhibidores de acetil-Coenzima A carboxilasa; y c) generar una planta tolerante a herbicidas a partir de células. Las plantas tolerantes a herbicidas producidas por los métodos de la invención incluyen, pero no se limitan a, plantas tolerantes a herbicidas generadas al realizar a) , b) y c) anteriores y la progenie de una planta generada al realizar a), b) , y e) anteriores. En una modalidad, las células utilizadas para practicar los métodos de este tipo serán de la forma de un callo.
La presente invención proporciona plantas que expresan enzimas acetil-Coenzima A carboxilasa que comprenden secuencias de aminoácidos definidas. Por ejemplo, la presente invención proporciona una planta de arroz, en donde uno o más de los genomas de la planta de arroz codifican una proteína que comprende una versión modificada de una o ambas de SEQ ID NOs : 2 y 3, en donde la secuencia se modifica de tal manera que la proteína codificada comprende uno o más de lo siguiente: el aminoácido en la posición 1,781 (Am) es leucina, treonina, valina, o alanina; el aminoácido en la posición l,785(Am) es glicina; el aminoácido en la posición 1, 786 (Am) es prolina; el aminoácido en la posición l,811(Am) es asparagina; el aminoácido en la posición l,824(Am) es prolina; el aminoácido en la posición 1, 864 (Am) es fenilalanina; el aminoácido en la posición l,999(Am) es cisteína o glicina; el aminoácido en la posición 2,027(Am) es cisteína; el aminoácido en la posición 2,039(Am) es glicina; el aminoácido en la posición 2,041(An?) es asparagina; el aminoácido en la posición 2,049(Am) es fenilalanina; el aminoácido en la posición 2, 059 (Am) es valina; el aminoácido en la posición 2,074(Am) es leucina; el aminoácido en la posición 2,075 (Am) es leucina, isoleucina o metionina; el aminoácido en la posición 2,078(Am) es glicina, o treonina; el aminoácido en la posición 2,079(Am) es fenilalanina; el aminoácido en la posición 2,080(Am) es ácido glutámico; el aminoácido en la posición 2,080(Am) es eliminado; el aminoácido en la posición 2,081(Am) es eliminado; el aminoácido en la posición 2,088(Am) es arginina, o triptófano; el aminoácido en la posición 2,095(Am) es ácido glutámico; el aminoácido en la posición 2,096(Am) es alanina, o serina; o el aminoácido en la posición 2,098(Am) es alanina, glicina, prolina, histidina, o serina. La Figura 19 siguiente proporciona una alineación de la secuencia de acetil-Coenzima A carboxilasa de Alopecurus myosuroides (SEQ ID NO: 1), la secuencia de acetil-Coenzima A carboxilasa Oryza sativa Indical (SEQ ID NO: 2) y la secuencia de acetil-Coenzima A carboxilasa de Oryza sativa Japónica (SEQ ID NO: 3) con ejemplos de posiciones en donde las secuencias de tipo silvestre pueden diferir con secuencias de la invención indicadas .
En otra modalidad, la presente invención comprende semillas depositadas en un depósito aceptable de acuerdo con el Tratado de Budapest, las células derivadas a partir de tales semillas, las plantas crecen a partir de tales semillas y las células derivadas de tales plantas, progenie de plantas crecen de tal semilla y células derivadas de tal progenie. El crecimiento de plantas producidas a partir de semillas depositadas y progenie de tales plantas serán tolerantes típicamente a herbicidas que inhiben acetil-Coenzima A carboxilasa en niveles de herbicida que pueden inhibir normalmente el crecimiento de una planta de tipo silvestre correspondiente. En una modalidad, la presente invención proporciona una planta de arroz que se cultiva a partir de una semilla producida de una planta de cualquiera de las líneas OsHPHl2, OsARWIl, OsARWl3, OsARWI8, u OsHPHNl, una muestra representativa de semillas de cada línea que se han depositado con American Type Culture Collection (ATCC) bajo el Número de Designación de Depósito de Patente PTA-10267, PTA-10568, PTA-10569, PTA-10570, o PTA-10571, respectivamente. La presente invención también abarca mutantes, recombinantes , y/o derivados genéticamente diseñados preparados a partir de una planta de cualquiera de las líneas OSHPHI2, OsARWIl, OSARWI3, OSARWI8, u OsHPHNl , una muestra representativa de semillas de cada línea han sido depositadas con ATCC bajo el Número de Asignación de Depósito de Patente PTA-10267, PTA-10568, PTA-10569, PTA-10570, o PTA-10571, respectivamente, así como cualquier progenie de la planta cultivada o generada a partir de una planta de cualquiera de las líneas OSHPHI2, OsARWIl, OSARWI3, OSARWI8, u OsHPHNl, una muestra representativa de semillas de cada línea ha sido depositada con ATCC bajo el Número de Asignación de Depósito de Patente PTA-10267, PTA-10568, PTA-10569, PTA-10570, o PTA-10571, respectivamente, siempre y cuando tales plantas o progenie tengan las características de tolerancia herbicida de la planta cultivada a partir de una planta de cualquiera de las líneas de OsHPHl2, OsARWIl, OSARWI3, OSARWI8, u OsHPHNl, una muestra representativa de semillas de cada línea que se ha depositado con ATCC bajo el Número de Asignación de Depósito de Patente PTA-10267, PTA-10568, PTA-10569, PTA-10570, o PTA-10571, respectivamente. La presente invención también abarca células cultivadas a partir de tales semillas y plantas y su progenie producida a partir de las células cultivadas.
Una planta tolerante a herbicidas de la invención puede ser un miembro de la especie 0. sativa. Las plantas tolerantes a herbicidas de la invención son tolerantes típicamente a herbicidas de ariloxifenoxipropionato , herbicidas de ciclohexandiona, herbicidas de fenilpirazolina o combinaciones de los mismos en niveles de herbicida que pueden inhibir normalmente el crecimiento de una planta de tipo silvestre correspondiente, por ejemplo, una planta de arroz. En algunas modalidades, una planta tolerante a herbicidas de la invención no es una planta GMO. La presente invención también proporciona una planta tolerante a herbicidas que es mutagenizada, por ejemplo, una planta de arroz mutagenizada. La presente invención también abarca células derivadas a partir de plantas y semillas de las plantas tolerantes a herbicidas descritas en lo anterior.
La presente invención proporciona métodos para controlar el crecimiento de malezas. En una modalidad, la presente invención proporciona un método para controlar el crecimiento de malezas en las cercanías de las plantas de arroz. Tales métodos pueden comprender aplicar a las malezas y plantas de arroz una cantidad de herbicida que inhibe al acetil-Coenzima A carboxilasa que inhibe naturalmente la actividad acetil-Coenzima A carboxilasa de origen natural, en donde las plantas de arroz comprenden actividad acetil-Coenzima A carboxilasa alterada de tal manera que las plantas de arroz son tolerantes a la cantidad aplicada de herbicida. Los métodos de la invención pueden practicarse con cualquier herbicida que interfiere con la actividad acetil-Coenzima A carboxilasa incluyendo, pero sin limitarse a, herbicidas de ariloxifenoxipropionato, herbicidas de ciclohexandiona, herbicidas de fenilpirazolina o combinaciones de los mismos.
La presente invención proporciona un método para controlar el crecimiento de malezas en la cercanía a las plantas de arroz. Un ejemplo de tales métodos puede comprender aplicar uno o más herbicidas a las malezas y a las planta de arroz en niveles de herbicida que pueden inhibir normalmente el crecimiento de una planta de arroz, en donde por lo menos un herbicida inhibe la actividad acetil-Coenzima A carboxilasa. Tales métodos pueden practicarse con cualquier herbicida que inhibe la actividad de acetil-Coenzima A carboxilasa. Ejemplos adecuados de herbicidas que pueden utilizarse en la práctica de métodos para controlar las malezas incluyen pero no se limitan a, herbicidas de ariloxifenoxipropionato, herbicidas de ciclohexandiona, herbicidas de fenilpirazolina o combinaciones de los mismos.
La presente invención abarca un método para controlar el crecimiento de malezas. Un ejemplo de tales métodos puede comprender (a) cruzar una planta de arroz tolerante a herbicidas con otro germoplasma de arroz, y recolectar las semillas de arroz híbrido resultante; (b) plantar la semilla de arroz híbrida; y (c) aplicar uno o más herbicidas que inhiben la acetil-Coenzima A carboxilasa en el arroz híbrido y en las malezas en la cercanía del arroz híbrido en niveles de herbicida que podrían inhibir normalmente el crecimiento de una planta de arroz. Tales métodos pueden practicarse con cualquier herbicida que inhiba la actividad acetil-Coenzima A carboxilasa. Ejemplos adecuados de herbicidas que pueden utilizarse en la práctica de métodos para controlar malezas incluyen, pero no se limitan a herbicidas de ariloxifenoxipropionato, herbicidas de ciclohexandiona, herbicidas de fenilpirazolina o combinaciones de los mismos .
En otra modalidad, la presente invención incluye un método para seleccionar una planta de arroz tolerante a herbicidas. Un ejemplo de tales métodos puede comprender (a) cruzar una planta de arroz tolerante a herbicidas con otra germoplasma de arroz, y recolectar la semilla de arroz híbrido resultante; (b) plantar la semilla de arroz híbrido; (c) aplicar uno o más herbicidas al arroz híbrido en niveles de herbicidas que puede inhibir normalmente el crecimiento de una planta de arroz, en donde por lo menos uno de los herbicidas inhibe la acetil-Coenzima A carboxilasa; y (d) recolectar las semilla a partir de las plantas de arroz a las cuales se ha aplicado el herbicida. Tales métodos pueden practicarse con cualquier herbicida que inhibe la actividad acetil-Coenzima A carboxilasa. Ejemplos adecuados de herbicidas que pueden utilizare en la práctica de métodos para controlar las malezas incluye, pero no se limita a, herbicidas de ariloxifenoxipropionato, herbicidas de ciclohexandiona, herbicidas de fenilpirazolina o combinaciones de los mismos .
La presente invención también abarca un método para cultivar plantas de arroz tolerante a herbicidas. Un ejemplo de tal método comprende (a) plantar semillas de arroz; (b) permitir a las semillas de arroz brotar; (c) aplicar uno o más herbicidas a los brotes de arroz en niveles de herbicidas que pueden inhibir normalmente el crecimiento de una planta de arroz, en donde por lo menos uno de los herbicidas inhibe acetil-Coenzima A carboxilasa. Tales métodos pueden practicarse con cualquier herbicida que inhiba la actividad acetil-Coenzima A carboxilasa. Ejemplos adecuados de herbicidas que pueden utilizarse en la práctica de métodos para controlar malezas incluyen, pero no se limitan a herbicidas de ariloxifenoxipropionato , herbicidas de ciclohexandiona, herbicidas de fenilpirazolina o combinaciones de los mismos.
En una modalidad, la presente invención proporciona una semilla de una planta de arroz tolerante a herbicidas.
Tal semilla puede utilizarse para cultivar plantas de arroz tolerante a herbicidas, en donde una planta cultivada a partir de la semilla e tolerante a por lo menos un herbicida que inhibe la actividad acetil-Coenzima A carboxilasa en niveles de herbicida que pueden inhibir normalmente el crecimiento de una planta de arroz. Ejemplos de herbicidas a los cuales las plantas cultivadas a partir de semillas de la invención pueden ser tolerantes incluyen, pero no se limitan a herbicidas de ariloxifenoxipropionato, herbicidas de ciclohexandiona, herbicidas de fenilpirazolina o combinaciones de los mismos .
En otra modalidad, la presente invención proporciona una semilla de una planta de arroz, en donde una planta cultivada a partir de semillas expresadas en acetil-Coenzima A carboxilasa (ACCasa) en la cual la secuencia de aminoácido difiere de una secuencia de aminoácido de una acetil-Coenzima A carboxilasa de una planta de arroz de tipo silvestre en una 0 más de las siguientes posiciones: 1,781 (Ara) , 1, 785 ( Am) , 1, 786 (Am) , 1, 811 (Am) , 1, 824 (Am) , 1, 864 (Am) , 1, 999 ( Am) , 2 , 027 (Am) , 2, 039 (Am) , 2 , 041 (Am) , 2, 049 (Am) , 2, 059 ( A ) , 2 , 074 (Am) , 2, 075 (Am) , 2, 078 (A ) , 2, 079 (Am) , 2, 080( Am) , 2, 081 (Am) , 2 , 088 (Am) , 2, 095 (Am) , 2, 096 (Am) , o 2,098(Am Ejemplos de diferencia de estas posiciones de aminoácidos incluyen, pero no se limitan a, uno o más de los siguientes: el aminoácido en la posición 1, 781 (Am) es diferente de isoleucina; el aminoácido en la posición 1, 785 (Am) es diferente de alanina; el aminoácido en la posición l,786(Am) es diferente de alanina; el aminoácido en la posición l,811(Am) es diferente de isoleucina; el aminoácido en la posición l,824(Am) es diferente de glutamina; el aminoácido en la posición 1, 864 (Am) es diferente de valina; el aminoácido en la posición l,999(Am) es diferente de triptófano; el aminoácido en la posición 2, 027 (Am) es diferente de triptófano; el aminoácido en la posición 2,039(Am) es diferente de ácido glutámico; el aminoácido en la posición 2, 041 (Am) es diferente de isoleucina; el aminoácido en la posición 2, 049 (Am) es diferente de valina; la posición de aminoácido 2,059(Am) es diferente de una alanina; el aminoácido en la posición 2, 074 (Am) es diferente de triptófano; el aminoácido en la posición 2,075(Am) es diferente de valina; el aminoácido en la posición 2,078(Am) es diferente de aspartato; la posición de aminoácido en la posición 2,079(Am) es diferente de serina; el aminoácido en la posición 2, 080 (Am) es diferente de lisina; la posición de aminoácido en la posición 2,081(Am) es diferente de isoleucina; el aminoácido en la posición 2,088(Am) es diferente de cisterna; el aminoácido en la posición 2,095(Am) es diferente de lisina; el aminoácido en la posición 2,096(Am) es diferente de glicina; o el aminoácido en la posición 2,098(Am) es diferente de valina.
En algunas modalidades, una planta cultivada a partir de la semilla puede expresar una enzima acetil-Coenzima A carboxilasa que comprende una secuencia de aminoácido que comprende uno o más de lo siguiente: el aminoácido en la posición l,781(Am) es leucina, treonina, valina, o alanina; el aminoácido en la posición l,785(Am) es glicina; el aminoácido en la posición l,786(Am) es prolina; el aminoácido en la posición l,811(Am) es asparagina; el aminoácido en la posición 1 , 824 (Am) es prolina; el aminoácido en la posición 1,864 (A/77) es fenilalanina; el aminoácido en la posición l,999(Am) es cisteína o glicina; el aminoácido en la posición 2,027 (Am) es cisteína; el aminoácido en la posición 2,039(Am) es glicina; el aminoácido en la posición 2, 041 (Am) es asparagina; el aminoácido en la posición 2049 (Am) es fenilalanina; el aminoácido en la posición 2, 059 (Arr¡) es valina,- el aminoácido en la posición 2,074(Am) es leucina; el aminoácido en la posición 2,075(Am) es leucina, isoleucina o metionina; el aminoácido en la posición 2, 078 (Am) es glicina, o treonina; el aminoácido en la posición 2,079(Am) es fenilalanina; el aminoácido en la posición 2,080(Am) es ácido glutámico; el aminoácido en la posición 2, 080 (Am) es eliminado; el aminoácido en la posición 2, 081 (Am) es eliminado; el aminoácido en la posición 2,088(Am) es arginina, o triptófano; el aminoácido en la posición 2, 095 (Am) es ácido glutámico; el aminoácido en la posición 2, 096 (Am) es alanina, o serina; o el aminoácido en la posición 2, 098 (Am) es alanina, glicina, prolina, histidina, o serina .
La presente invención abarca semillas de cultivos tolerantes a herbicida específicos. Un ejemplo de tales semillas es una semilla de cultivo de arroz Indical, en donde una muestra representativa de semilla de cultivo fue depositada bajo ATCC No. de Acceso PTA-10267, PTA-10568, PTA-10569, o PTA-10570. Otro ejemplo de tales semillas son aquellas de un cultivo de Nipponbarea tolerante a herbicida, en donde una muestra representativa de semillas de tal cultivo se deposito bajo ATCC No. Acceso PTA-10571. La presente invención también abarca una planta de arroz, o una parte de la misma, producida al cultivar las semillas así como el cultivo de tejido de células producidas a partir de la semilla. Los cultivos de tejido de células pueden producirse a partir de una semilla directamente o a partir de una parte de una planta cultivada a partir de una semilla, por ejemplo, a partir de hojas, polen, embriones, cotiledones, hipocotilos, células meristemáticas , raíces, puntas de raíces, pistilos, anteras, flores y/o tallos. La presente invención también incluye plantas y su progenie que se han generado a partir de cultivo de tejido de células. Tales plantas típicamente tendrán todas las características morfológicas y fisiológicas de cultivo Indical.
La presente invención también proporciona métodos para producir semillas de arroz. Tales métodos pueden comprender cruzar una planta de arroz tolerante a herbicidas con otro germoplasma de arroz; y recolectar la semilla de arroz híbrida resultante, en donde la planta de arroz tolerante a herbicidas es tolerante a herbicidas de ariloxifenoxipropionato, herbicidas de ciclohexandiona , herbicidas de fenilpirazolina o combinaciones de los mismos a niveles de herbicida que pueden inhibir normalmente el crecimiento de una planta de arroz.
El presente método también comprende métodos para producir semilla de arroz híbrida Fl . Tales métodos pueden comprender cruzar una planta de arroz tolerante a herbicidas con una planta de arroz diferente; y recolectar la semilla de arroz híbrida Fl resultante en donde la planta de arroz tolerante a herbicidas es tolerante a herbicidas de ariloxifenoxipropionato, herbicidas de ciclohexandiona, herbicidas de fenilpirazolina o combinaciones de los mismos a niveles de herbicida que pueden inhibir normalmente el crecimiento de una planta de arroz.
El presente método también comprende métodos para producir plantas híbridas Fl . Tales métodos pueden comprender cruzar una planta tolerante a herbicidas con una planta diferente; y recolectar la semilla híbrida Fl resultante y cultivar la planta híbrida Fl resultante, en donde la planta tolerante a herbicidas es tolerante a herbicidas de ariloxifenoxipropionato, herbicidas de ciclohexandiona , herbicidas de fenilpirazolina o combinaciones de los mismos a niveles de herbicida que pueden inhibir normalmente el crecimiento de una planta.
La presente invención también proporciona métodos para producir plantas de arroz tolerantes a herbicidas que pueden también comprender un transgen. Un ejemplo de tal método puede comprender transformar una célula de una planta de arroz con un transgen, en donde el transgen codifica una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa que confiere tolerancia a por lo menos un herbicida se selecciona del grupo que consiste de herbicidas de ariloxifenoxipropionato, herbicidas de ciclohexandiona, herbicidas de fenilpirazolina o combinaciones de los mismos. Cualquier célula adecuada puede ser utilizada en la práctica de los métodos de la invención, por ejemplo, las células pueden estar en la forma de un callo. En algunas modalidades, el transgen puede comprender una secuencia de ácido nucleico que codifica una secuencia de aminoácido que comprende una versión modificada de una o ambas de las SEQ ID NOs : 2 y 3 , en donde la secuencia se modifica de tal manera que la proteína codificada comprende uno o más de los siguientes: el aminoácido en la posición 1,181 {Am) es leucina, treonina, valina, o alanina; el aminoácido en la posición 1,185 (Am) es glicina; el aminoácido en la posición 1,186 (A ) es prolina; el aminoácido en la posición 1, 811 (Am) es asparagina; el aminoácido en la posición 1, 824 (Am) es prolina; el aminoácido en la posición 1,864 (Am) es fenilalanina; el aminoácido en la posición 1,999 (Am) es cisteina o glicina; el aminoácido en la posición 2, 027 (Am) es cisteina; el aminoácido en la posición 2,039 {Am) es glicina; el aminoácido en la posición 2, 041 (AmJ es asparagina; el aminoácido en la posición 2049 {Am) es fenilalanina; el aminoácido en la posición 2, 059 (Am) es valina; el aminoácido en la posición 2,014 (Am) es leucina; el aminoácido en la posición 2, 075 {Am) es leucina, isoleucina o metionina; el aminoácido en la posición 2,018 (Am) es glicina, o treonina; el aminoácido en la posición 2,019 (Am) es fenilalanina; el aminoácido en la posición 2,080 (Am) es ácido glutá ico; el aminoácido en la posición 2, 080 (Am) se elimina; el aminoácido en la posición 2, 081 (Am) se elimina; el aminoácido en la posición 2,088 (Amj es arginina, o triptófano; el aminoácido en la posición 2,095 (Am) es ácido glutámico; el aminoácido en la posición 2,096 (Am) es alanina, o serina; o el aminoácido en la posición 2,098 (Am) es alanina, glicina, prolina, histidina, o serina. La presente invención también abarca plantas producidas por tales métodos. Otro ejemplo de un método para producir una planta tolerante a herbicida que comprende un transgen puede comprender transformar una célula de una planta de arroz con un transgen que codifica una enzima que confiere tolerancia a herbicida, en donde la célula se produjo a partir de una planta de arroz o semilla de las mismas que expresa una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa que confiere tolerancia a por lo menos un herbicida se selecciona del grupo que consiste de herbicidas ariloxifenoxipropionato, herbicidas ciclohexandiona, herbicidas fenilpirazolina o combinaciones de los mismos. Cualquier célula adecuada puede utilizarse en la práctica de los métodos de la invención, por ejemplo, las células pueden estar en la forma de un callo. La presente invención también abarca plantas tolerantes a herbicida producidas por tales métodos .
En una modalidad, la presente invención comprende métodos para producir plantas recombinantes . Un ejemplo de un método para producir una planta de arroz recombinante puede comprender transformar una célula de una planta de arroz con un transgen, en donde la célula se produjo a partir de una planta de arroz que expresa una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa que confiere tolerancia a por lo menos un herbicida se selecciona del grupo que consiste de herbicidas ariloxifenoxipropionato, herbicidas ciclohexandiona, herbicidas fenilpirazolina o combinaciones de los mismos. Cualquier célula adecuada puede ser utilizada en la práctica de los métodos de la invención, por ejemplo, las células pueden estar en la forma de un callo. Un transgen para su uso en los métodos de la invención puede comprender cualquier secuencia de ácido nucleico deseada, por ejemplo, el transgen puede codificar una proteína. En un ejemplo, el transgen puede codificar una enzima, por ejemplo, una enzima que modifica metabolismo de ácido graso y/o metabolismo de carbohidrato. Los ejemplos de enzimas adecuadas incluyen pero no se limitan a, fructosiltransferasa, levansucrasa, alfa-amilasa, invertasa y enzima para el ramificado de almidón o que codifica un antisentido de estearil-ACP desaturasa. La presente invención también abarca plantas recombinantes producidas por métodos de la invención.
Los métodos de la invención pueden utilizarse para producir una planta, por ejemplo, una planta de arroz, que tiene cualesquier rasgos deseados. Un ejemplo de tal método puede comprender: (a) cruzar una planta de arroz que es tolerante a herbicida ariloxifenoxipropionato, herbicidas ciclohexandiona , herbicidas fenilpirazolina o combinaciones de los mismos a niveles de herbicida que pueden inhibir normalmente el crecimiento de una planta de arroz con una planta de otro cultivo de arroz que comprende el rango deseado para producir las plantas de progenie; (b) seleccionar una o más plantas de progenie que tienen el rango deseado para producir plantas de progenie seleccionadas; (c) cruzar las plantas de progenie seleccionadas con las plantas tolerantes a herbicida para producir plantas de progenie de retrocruzamiento; (d) seleccionar para plantas de progenie de retrocruzamiento que tienen el rasgo deseado y la tolerancia a herbicida; y (e) repetir las etapas (c) y (d) tres o más veces en sucesión para producir plantas de progenie de retrocruzamiento cuartas o superiores seleccionadas que comprenden el rasgo deseado y la tolerancia a herbicida. Cualquier rasgo deseado puede introducirse utilizando los métodos de la invención. Los ejemplos de rasgos que pueden ser deseados incluyen, pero no se limitan a, esterilidad macho, tolerancia a herbicida, tolerancia a la sequía, resistencia a insectos, metabolismo de ácido graso modificado, metabolismo de carbohidrato modificado y resistencia a enfermedades bacterianas, enfermedades fúngicas o enfermedades virales. Un ejemplo de un método para producir una planta de arroz estéril macho puede comprender transformar una planta de arroz tolerante a por lo menos un herbicida que inhibe la actividad de acetil-Coenzima A carboxilasa en niveles de herbicida que pueden inhibir normalmente el crecimiento de una planta de arroz con una molécula de ácido nucleico que confiere esterilidad macho. La presente invención también abarca plantas estériles macho producidas por tales métodos.
La presente invención proporciona composiciones que comprenden células de planta, por ejemplo, células a partir de una planta de arroz. Un ejemplo de tal composición comprende una o más células de una planta de arroz; y un medio acuoso, en donde el medio comprende un compuesto que inhibe la actividad de acetil-Coenzima A carboxilasa. En algunas modalidades, las células pueden derivarse de una planta de arroz tolerante a herbicida ariloxifenoxipropionato, herbicidas ciclohexandiona , herbicidas fenilpirazolina o combinaciones de los mismos a niveles de herbicida que normalmente inhiben el crecimiento de una planta de arroz. Cualquier compuesto que inhibe la actividad de acetil-Coenzima A carboxilasa puede utilizarse en las composiciones de la invención, por ejemplo, uno o más de herbicidas ariloxifenoxipropionato, herbicidas ciclohexandiona, herbicidas fenilpirazolina y combinaciones de los mismos .
La presente invención comprende moléculas de ácido nucleico que codifican toda o una porción de una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa. En algunas modalidades, la invención comprende una molécula de ácido nucleico recombinante, mutagenizada, sintética, y/o aislada que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa (ACCasa) de arroz en la cual la secuencia de aminoácido difiere de una secuencia de aminoácido de una acetil-Coenzima A carboxilasa de una planta de arroz tipo silvestre en una o más de las posiciones siguientes: 1, 781 (Am), 1,785 (A ), 1,786 (Am) , 1 , 811 (Am), 1 , 824 (Am), 1, 864 (A ), 1, 999 (Am , 2,027(AmJ, 2,039(Am), 2,041{Am), 2,049 (Am), 2,059 (Am), 2,074 (Am), 2, 075 (Am), 2, 078 (Am) , 2,079 (Am) , 2 , 080 (Am) , 2 , 0B1 (Am), 2,088 (Am), 2, 095 (Am) , 2 , 096 (Am) , o 2, 098 (A ) . Los ejemplos de diferencias en estas posiciones de aminoácidos incluyen, pero no se limitan a, uno o más de los siguientes: el aminoácido en la posición 1, 81 {Am) es distinto de isoleucina; el aminoácido en la posición 1, 785 {Am) es distinto de alanina; el aminoácido en la posición 1,786 (Am) es distinto de alanina; el aminoácido en la posición 1, 811 (Am) es distinto de isoleucina; el aminoácido en la posición 1,824 (Am) es distinto de glutamina,- el aminoácido en la posición 1,864 (Am) es distinto de valina; el aminoácido en la posición 1,999 {Am) es distinto de triptófano; el aminoácido en la posición 2,027(Amj es distinto de triptófano; el aminoácido en la posición 2,039 (Am) es distinto de ácido glutámico; el aminoácido en la posición 2,04.1 (Am) es distinto de isoleucina; el aminoácido en la posición 2,049 (Am) es distinto de valina; el aminoácido en la posición 2,059 (Am) es distinto de una alanina; el aminoácido en la posición 2 ,07 (Am) es distinto de triptófano; el aminoácido en la posición 2,075 (Am) es distinto de valina; el aminoácido en la posición 2, 078 (Am) es distinto de aspartato; la posición del aminoácido en la posición 2,079 (Am) es distinto de serina; el aminoácido en la posición 2,080 (Am) es distinto de lisina; la posición del aminoácido en la posición 2, 081 {Am) es distinto de isoleucina; el aminoácido en la posición 2,088 (Am) es distinto de ciste na; el aminoácido en la posición 2, 095 {Am) es distinto de lisina; el aminoácido en la posición 2, 96 (Am) es distinto de glicina; o el aminoácido en la posición 2,098(Am) es distinto de valina. En algunas modalidades, una molécula de ácido nucleico de la invención puede codificar una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa que comprende una secuencia de aminoácidos que comprende uno o más de los siguientes: el aminoácido en la posición 1 ,181 {Am) es leucina, treonina, valina, o alanina; el aminoácido en la posición 1,185 (Am) es glicina; el aminoácido en la posición 1,186 (Am) es prolina; el aminoácido en la posición 1,811 (Am) es asparagina; el aminoácido en la posición 1,824 (Am) es prolina; el aminoácido en la posición 1,864 (A ) es fenilalanina; el aminoácido en la posición 1,999 (Am) es cisteina o glicina,- el aminoácido en la posición 2,027 ' (Am) es cisteina; el aminoácido en la posición 2,039(Am^ es glicina; el aminoácido en la posición 2, 041 {Am) es asparagina; el aminoácido en la posición 2049 (Am) es fenilalanina; el aminoácido en la posición 2,059 (Am) es valina; el aminoácido en la posición 2,014 (Am) es leucina; el aminoácido en la posición 2,075 (Am) es leucina, isoleucina o metionina; el aminoácido en la posición 2, 078 (Am) es glicina, o treonina; el aminoácido en la posición 2, 079 (Am) es fenilalanina; el aminoácido en la posición 2,080 (Am) es ácido glutámico; el aminoácido en la posición 2, 080 (Am) se elimina; el aminoácido en la posición 2, 081 {Am) se elimina; el aminoácido en la posición 2, 088 (Am) es arginina, o triptófano; el aminoácido en la posición 2, 095 (Am) es ácido glutámico; el aminoácido en la posición 2, 096 (Am) es alanina, o serina; o el aminoácido en la posición 2, 098 (Am) es alanina, glicina, prolina, histidina, o serina. En algunas modalidades, la invención comprende un ácido nucleico recombinante, mutagenizado , sintético, y/o aislado que codifica una proteína que comprende toda o una porción de una versión modificada de una o ambas de la SEQ ID NOs : 2 y 3, en donde la secuencia se modifica de tal manera que la proteína codificada comprende uno o más de los siguientes: el aminoácido en la posición 1,781 (Am) es leucina, treonina, valina, o alanina; el aminoácido en la posición 1,785 (Am) es glicina; el aminoácido en la posición 1,186 (Am) es prolina; el aminoácido en la posición 1, 811 (Am) es asparagina; el aminoácido en la posición 1,824 (Am) es prolina; el aminoácido en la posición 1,864 (Am) es fenilalanina ; el aminoácido en la posición 1,999 (Am) es cisteína o glicina; el aminoácido en la posición 2,027 (Am) es cisteína; el aminoácido en la posición 2,039|??? es glicina; el aminoácido en la posición 2, 041 (Am) es asparagina; el aminoácido en la posición 2,049 (Am) es fenilalanina ; el aminoácido en la posición 2 , 059 (Am) es valina; el aminoácido en la posición 2,074 (Am) es leucina; el aminoácido en la posición 2,075 (Am) es leucina, isoleucina o metionina; el aminoácido en la posición 2, 078 (AmJ es glicina, o treonina; el aminoácido en la posición 2,079 (Am) es fenilalanina; el aminoácido en la posición 2,080 (Am) es ácido glutámico; el aminoácido en la posición 2,080(AmJ se elimina; el aminoácido en la posición 2, 81 {Am) se elimina; el aminoácido en la posición 2,088 (Am) es Arginina, o triptófano; el aminoácido en la posición 2,095 (Am) es ácido glutámico; el aminoácido en la posición 2,096 (Am) es alanina, o serina; o el aminoácido en la posición 2, 09 {Am) es alanina, glicina, prolina, histidina, o serina.
En una modalidad, la presente invención proporciona una planta ciado BEP tolerante al herbicida. Típicamente tal planta es una que tiene tolerancia incrementada a un inhibidor de ACCasa (ACCI) a diferencia de una variedad de tipo silvestre de la planta. Tales plantas pueden producirse mediante un proceso que comprende ya sea: (I) las etapas de (a) proporcionar células de planta ciado BEP que tienen a primer nivel nulo o no nulo de tolerancia a ACCI; (b) cultivar las células en contacto con un medio para formar un cultivo celular; (c) poner en contacto las células del cultivo con un ACCI; (d) cultivar las células contactadas con ACCI a partir de la etapa (c) para formar un cultivo que contiene células que tiene un nivel de tolerancia a ACCI mayor que el primer nivel de la etapa (a) ; y (e) generar, a partir de las células tolerantes a ACCI de la etapa (d) , una planta que tiene un nivel de tolerancia a ACCI mayor que aquella de una variedad de tipo silvestre de la planta; o (II) las etapas de (f) proporcionar una primera, planta ciado BEP tolerante al herbicida que tiene tolerancia incrementada a un inhibidor de ACCasa (ACCI) a diferencia de una variedad de tipo silvestre de la planta, que tiene la planta tolerante a herbicida se ha producido mediante un proceso que comprende las etapas (a) -(e); y g) producir a partir de la primera planta una segunda planta ciado BEP tolerante al herbicida que retenga la tolerancia a herbicida incrementada característica de la primera planta; obtener así una planta ciado BEP tolerante al herbicida .
En una modalidad, una planta ciado BEP tolerante a herbicida de la invención es una planta subclado BEP.
En una modalidad, una planta tolerante a herbicida subclado BET de la invención es una planta de cultivo de BET.
En algunas modalidades, la planta tolerante a herbicida de la invención puede ser un miembro del subclado Bambusoideae - Ehrhartoideae . Cualquier medio adecuado para cultivar células de planta pueden utilizarse en la práctica de la invención. En algunas modalidades, el medio puede comprender un mutágeno, mientras que en otras modalidades el medio no comprende un mutágeno. En algunas modalidades, una planta tolerante a herbicida de la invención puede ser un miembro de la subfamilia Ehrhartoideae. Cualesquier células adecuadas pueden utilizarse en la práctica de los métodos de la invención, por ejemplo, las células pueden estar en la forma de un callo. En algunas modalidades, una planta tolerante a herbicida de la invención puede ser un miembro del genero Oryza, por ejemplo, puede ser un miembro de la especie O. sativa.
La presente invención incluye plantas ciado BEP tolerantes a herbicida producidas por el método anterior. Tales plantas tolerantes a herbicida pueden expresar una acetil-Coenzima A carboxilasa (ACCasa) en la cual la secuencia de aminoácido difiere de una secuencia de aminoácido de una acetil-Coenzima A carboxilasa de una planta ciado BEP de tipo silvestre correspondiente en una o más de las posiciones siguientes: l,781CAmJ, 1, 785 (Am;, 1,786 (Am) , 1, 811 (Am), 1, 824 (Am;, 1 , 864 (Am , 1 , 999 (Am), 2,021(Am), 2,039(Am), 2, 041 (Am , 2,049 (Am;, 2,059 (Ain;, 2,074 (Am;, 2,075 (Am;, 2, 078 (A ;, 2, 079 (Am) , 2,080 (An?;, 2,081(An?;, 2, 088 (AmJ, 2, 095 (Air?;, 2,096 (Am), o 2 , 098 (Am) . Los ejemplos de diferencias en estas posiciones de aminoácidos incluyen, pero no se limitan a, uno o más de los siguientes: el aminoácido en la posición l,7Bl{Am) es distinto de isoleucina; el aminoácido en la posición 1,785 (Am) es distinto de alanina; el aminoácido en la posición 1,786 (Am) es distinto de alanina; el aminoácido en la posición 1 , Sil {Am) es distinto de isoleucina; el aminoácido en la posición l,82á (Am) es distinto de glutamina; el aminoácido en la posición 1, 86 (Am) es distinto de valina,- el aminoácido en la posición 1,999 (Am) es distinto de triptófano; el aminoácido en la posición 2,027 (Am) es distinto de triptófano; el aminoácido en la posición 2,039 (Am) es distinto de ácido glutámico; el aminoácido en la posición 2,041 (Am) es distinto de isoleucina; el aminoácido en la posición 2,049 (Am) es distinto de valina; el aminoácido en la posición 2,059 (Am) es distinto de una alanina; el aminoácido en la posición 2,07 (Am) es distinto de triptófano; el aminoácido en la posición 2,075 (Am) es distinto de valina; el aminoácido en la posición 2,078 (Am) es distinto de aspartato; la posición del aminoácido en la posición 2,079 (Am) es distinto de serina; el aminoácido en la posición 2, 080 (Am) es distinto de lisina; la posición del aminoácido en la posición 2,081(AmJ es distinto de isoleucina; el aminoácido en la posición 2,088 (Am) es distinto de cisteína; el aminoácido en la posición 2,095 (Am) es distinto de lisina; el aminoácido en la posición 2,096 (Am) es distinto de glicina; o el aminoácido en la posición 2, 098 (Am) es distinto de valina. En algunas modalidades, la planta ciado BEP tolerante a herbicida de la invención puede expresar una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa que comprende una secuencia de aminoácidos que comprende uno o más de los siguientes: el aminoácido en la posición l,181{Am) es leucina, treonina, valina, o alanina; el aminoácido en la posición 1,785 (Am) es glicina; el aminoácido en la posición 1,186 (Am) es prolina; el aminoácido en la posición l,811(Am^ es asparagina; el aminoácido en la posición 1, 824 (Am) es prolina; el aminoácido en la posición 1,864 (Am) es fenilalanina ; el aminoácido en la posición 1,999 (Am) es ciste na o glicina; el aminoácido en la posición 2,021 (Am) es cisteína; el aminoácido en la posición 2,039 (Am) es glicina; el aminoácido en la posición 2, 041 (Am) es asparagina; el aminoácido en la posición 2049 (Am) es fenilalanina; el aminoácido en la posición 2,059 (Am) es valina; el aminoácido en la posición 2,014 (Am) es leucina; el aminoácido en la posición 2,015(Am) es leucina, isoleucina o metionina; el aminoácido en la posición 2,018 (Am) es glicina, o treonina; el aminoácido en la posición 2,019 (Am) es fenilalanina; el aminoácido en la posición 2,080 (Am) es ácido glutámico; el aminoácido en la posición 2, 080 (Am) se elimina; el aminoácido en la posición 2, 081 {Am) se elimina; el aminoácido en la posición 2, 88 (Am) es Arginina, o triptófano; el aminoácido en la posición 2,095 (Am) es ácido glutámico; el aminoácido en la posición 2,096 (Am) es alanina, o serina; o el aminoácido en la posición 2,098 (A ) es alanina, glicina, prolina, histidina, o serina.
En una modalidad, la presente invención también incluye plantas de arroz que son tolerantes a inhibidores de ACCasa en virtud de tener únicamente una sustitución en su ACCasa plastídica cuando se compara con la ACCasa de tipo silvestre correspondiente. En aún otra modalidad, la invención incluye plantas de arroz que son tolerantes a inhibidores de ACCasa en virtud de tener dos o más sustituciones en su ACCasa plastídica cuando se compara con la ACCasa de tipo silvestre correspondiente.
En una modalidad, la presente invención proporciona plantas de arroz que son tolerantes a inhibidores de ACCasa, en virtud de tener dos o más sustituciones en su ACCasa plastídica cuando se compara con la ACCasa de tipo silvestre correspondiente, en donde las sustituciones son en las posiciones de aminoácido seleccionadas del grupo que consiste de l,181(Am), 1,185 (Am), l,186(Am), l,811(Am), 1, 24 (Am), 1,864 (Am), l,999(Am), 2,021(Am), 2,039(Am), 2, 041 (Am), 2,049 (Am) , 2 , 059 (Am) , 2,014(Am), 2, 075 (Am), 2,078 (Am) , 2,079 (Am) , 2, 080 (Am) , 2, 081 (Am) , 2, 088 (Am) , 2, 095 (Am) , 2 , 096 (Am) , o 2, 098 (Am) .
En una modalidad, la presente invención proporciona plantas de arroz donde las plantas de arroz comprenden ACCasa plastídica que no es transgenica. En una modalidad, la presente invención proporciona plantas donde las plantas comprenden a arroz ACCasa plastídica que es transgénica.
En una modalidad, la presente invención proporciona un método para controlar el crecimiento de malezas dentro de la cercanía de una planta de arroz como se describe en la presente, que comprende aplicar a las malezas y plantas de arroz una cantidad de una herbicida que inhibe la acetil-Coenzima A carboxilasa que inhibe la actividad de acetil-Coenzima A carboxilasa de origen natural, en donde las plantas de arroz comprenden actividad de acetil-Coenzima A carboxilasa alterada de modo que las plantas de arroz son tolerantes a la cantidad aplicada de herbicida.
En una modalidad, la presente invención proporciona métodos para producir semillas que comprenden: (i) plantar semillas producidas a partir de una planta de la invención, (ii) cultivar plantas a partir de semillas e (ii) recolectar semillas a partir de las plantas.
La presente invención también abarca plantas ciado BEP tolerantes a herbicida producidas por el proceso de (a) cruzar o retrocruzar una planta cultivada a partir de una semilla de una planta ciado BEP tolerante a herbicida producida como se describe en lo anterior con otro germoplasma; (b) cultivar las plantas resultantes de la cruza o retrocruza en la presencia de por lo menos un herbicida que normalmente inhibe la acetil-Coenzima A carboxilasa, a niveles del herbicida que pueden inhibir normalmente el crecimiento de una planta; y (c) seleccionar para otras plantas de propagación que resultan de la cruza o retrocruza, en donde las plantas seleccionadas son plantas que crecen sin daño significativo en la presencia del herbicida.
La presente invención también abarca una molécula de ácido nucleico recombinante, mutagenizado, sintético, y/o aislado que comprende una secuencia de nucleótido que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa mutagenizada de una planta en el ciado BEP de la Familia Poaceae, en la cual la secuencia de aminoácido de la acetil-Coenzima A carboxilasa mutagenizada difiere de una secuencia de aminoácido de una acetil-Coenzima A carboxilasa de la planta tipo silvestre correspondiente en una o más de las posiciones siguientes: 1 ,781 (Am), 1,785 (Am) , 1,786 (Am), 1, 11 (Am), 1, 824 (Am), 1, 64 (Am), 1, 999 (Am , 2,027(Am), 2,039(Am), 2, 041 (Am), 2,049 CAm , 2, 059 (Am , 2, 074 (Am) , 2, 075 (Am) , 2, 078 ÍAJT?;, 2,079 fAm , 2 , 080 (Am , 2, 081 (Am) , 2, 088 (Am) , 2, 095 (Am) , 2, 096 (Am) , o 2, 098 (Am) . Tal molécula de ácido nucleico puede producirse por un proceso que comprende ya sea : (I) las etapas de (a) proporcionar células de planta ciado BEP que tiene un primer nivel nulo o no nulo de tolerancia al inhibidor de ACCasa (ACCI); (b) cultivar las células en contacto con un medio para formar un cultivo celular; (c) poner en contacto las células del cultivo con un ACCI; (d) cultivar las células contactadas con ACCI a partir de la etapa (c) para formar un cultivo que contiene células que tiene un nivel de tolerancia a ACCI mayor que el primer nivel de la etapa (a) ; y (e) generar, a partir de las células tolerantes a ACCI de la etapa (d) , una planta que tiene un nivel de tolerancia a ACCI mayor que aquella de una variedad de tipo silvestre de la planta; o (II) las etapas de (f) proporcionar una primera planta ciado BEP tolerante al herbicida que tiene tolerancia incrementada a un inhibidor de ACCasa (ACCI) a diferencia de una variedad de tipo silvestre de la planta, la planta tolerante a herbicida que tiene se ha producido mediante un proceso que comprende las etapas (a) -(e); y (g) producir a partir de la primera planta una segunda planta ciado BEP tolerante al herbicida que retenga la tolerancia a herbicida incrementada característica de la primera planta; obtener así una planta ciado BEP tolerante al herbicida; y aislar un ácido nucleico de la planta ciado BEP tolerante a herbicida.
En una modalidad, la invención abarca métodos para seleccionar, aislar, identificar, y/o caracterizar mutaciones tolerantes a herbicida en ACCasas plastídicas monocotiledóneas . En una modalidad, la invención abarca el uso de un callo, o líneas celulares de planta. En otras modalidades, la invención abarca realizar el cultivo de material de plantas o células en un ambiente de cultivo de tejido. En aún otras modalidades, la invención abarca la presencia de una membrana de nylon en el ambiente de cultivo de tejido. En otras modalidades, el ambiente de cultivo de tejido comprende el medio de fase líquida mientras que en otras modalidades, el ambiente comprende medios semi-sólidos . En aún otras modalidades, la invención abarca material de planta de cultivo en la presencia de herbicida (por ejemplo, cicloxidim) en un medio líquido seguido por el cultivo en medios semi-sólidos con herbicida. En aún otras modalidades, la invención abarca material de planta de cultivo en lá presencia de herbicida en medios semi-sólidos seguido por el cultivo en un medio líquido con herbicida.
En algunas modalidades, la invención abarca la aplicación directa de una dosis letal de herbicida (por ejemplo, cicloxidim) . En otra modalidad, la invención abarca el incremento gradual en dosis de herbicida, iniciando con una dosis sub-letal. En otras modalidades, la invención abarca por lo menos uno, por lo menos dos, por lo menos tres, por lo menos cuatro, por lo menos cinco, por lo menos seis, por lo menos siete, por lo menos ocho, o más herbicidas en una etapa, o de forma simultánea.
En otras modalidades, la frecuencia mutacional se determina por el número de clones tolerantes a herbicida mutantes como una fracción del número del callo individual utilizado en el experimento. En algunas modalidades, la invención abarca una frecuencia mutacional de por menos 0.03% o mayor. En algunas modalidades, la invención abarca frecuencias mutacionales de por lo menos 0.03%, por lo menos 0.05%, por lo menos 0.10%, por lo menos 0.15%, por lo menos 0.20%, por lo menos 0.25%, por lo menos 0.30%, por lo menos 0.35%, por lo menos 0.40% o mayor. En otras modalidades, la invención abarca frecuencias mutacionales que son al menos de 2 veces, al menos 3 veces, al menos 4 veces, al menos 5 veces, al menos 6 veces, al menos 7 veces, al menos 8 veces, al menos 9 veces, al menos 10 veces o superiores de otros métodos de selección, aislamiento, identificación, y/o caracterización de mutaciones tolerantes a herbicida en ACCasas plastídicas monocotiledóneas .
En algunas modalidades, los métodos de la invención abarcan identificar la o las mutaciones tolerantes a herbicida en la ACCasa. En modalidades adicionales, la invención comprende recapitular la o las mutaciones tolerantes a herbicida en células de planta monocotiledoneas.
En algunas modalidades, la invención abarca una célula aislada o tejido tal célula o tejido de origen vegetal que tiene: a) una deficiencia en la actividad ACCasa derivada de un gen de ACCasa huésped (es decir, endógeno) ; y b) una actividad ACCasa a partir de un gen de ACCasa plastídico derivado de monocotiledónea .
Fuentes monocotiledoneas de ACCasa En otras modalidades, la invención abarca ACCasas plastídicas o porciones de la misma a partir de la familia monocotiledónea de plantas como se describe en la presente.
En otras modalidades, la invención abarca seleccionar para mutantes tolerantes a herbicida de ACCasa plastídica monocotiledónea en células de planta huésped.
En otras modalidades, la invención abarca el uso de células huésped preparadas para seleccionar para mutantes tolerantes a herbicida de ACCasa plastídica monocotiledónea. En algunas modalidades, la invención proporciona una célula huésped que se encuentra desprovista de actividad ACCasa plastídica. En otras modalidades, las células huésped de la invención expresa una ACCasa plastídica monocotiledónea que es sensible al herbicida.
En otras modalidades, los métodos de la invención comprenden células huésped deficientes en la actividad ACCasa debido a una mutación del gen de ACCasa plastídico genómico que incluye una mutación de punto simple, mutaciones de punto múltiple, una supresión parcial, una inactivación parcial, una supresión completa y una inactivación completa. En otra modalidad, la actividad ACCasa plastidica genómica se reduce o se suprime utilizando otras técnicas biológicas moleculares tales como ARNi , AR si o ARN antisentido. Tales técnicas biológicas moleculares son bien conocidas en la técnica. En aún otras modalidades, la actividad derivada de ACCasa genómica puede reducirse o suprimirse por un inhibidor metabólico de ACCasa.
En algunas modalidades, la célula huésped es una célula huésped de una planta monocotiledonea.
En aún otras modalidades, la invención abarca un método para elaborar una célula de planta transgenica que comprende: a) aislar una célula que tiene un origen vegetal monocotiledóneo; b) inactivar por lo menos una copia de un gen de ACCasa genómico; c) proporcionar un gen de ACCasa plastidica derivada de monocotiledonea en tal célula; d) aislar la célula que comprende el gen de ACCasa plastidica derivada de monocotiledonea; y opcionalmente ; e) inactivar por lo menos la copia adicional de un gen de ACCasa genómico y donde la célula es deficiente en la actividad ACCasa proporcionada por el gen de ACCasa genómico.
En una modalidad, la frecuencia mutacional tolerante a cicloxidim es mayor que 0.03%.
En una modalidad, la presente invención proporciona un método para seleccionar, en donde células de planta o tejidos tolerantes a cicloxidim son también tolerantes a otros inhibidores de ACCasa.
En una modalidad, la presente invención proporciona un método para seleccionar, en donde las células de planta o tejidos tolerantes a cicloxidim comprenden únicamente una mutación no presente en la ACCasa plastídica monocotiledónea antes del cultivo en la presencia del herbicida.
En una modalidad, la presente invención proporciona un método para seleccionar, en donde las células de planta o tejidos tolerantes a cicloxidim comprenden dos o más mutaciones no presentes en la ACCasa plastídica monocotiledónea antes del cultivo en la presencia del herbicida .
En una modalidad, la presente invención proporciona un método para seleccionar, en donde el cicloxidim se encuentra presente en una dosis sub-letal.
En una modalidad, la presente invención proporciona un método para seleccionar, en donde el cultivo en la presencia de cicloxidim se realiza en paso a paso o se incrementa en forma gradual en concentraciones de cicloxidim.
En una modalidad, la presente invención proporciona un método para seleccionar, en donde el método comprende el cultivo de células en una membrana. En una modalidad preferida, la presente invención proporciona un método para seleccionar comprende el cultivo de células en una membrana de nylon.
En una modalidad, la presente invención proporciona un método para seleccionar células de planta tolerante a cicloxidim, en donde el cultivo de células se encuentra en un medio liquido o medio semisólido.
En una modalidad, la presente invención proporciona un método para seleccionar, en donde el método además comprende la identificación de por lo menos una mutación no presente en la ACCasa plast dica monocotiledónea exógena antes del cultivo en la presencia del cicloxidim.
En una modalidad, la presente invención proporciona un método para seleccionar, en donde tal monocotiledónea es arroz .
En una modalidad, la presente invención proporciona un método para seleccionar, en donde la ACCasa plastidica monocotiledónea exógena es a partir de arroz.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 es una gráfica de barra que muestra un crecimiento relativo del callo de arroz derivado de Oryza sativa subs . indica cultivado en la presencia de niveles de selección diferencia de herbicida. La Figura 1A muestra los resultados obtenidos con tepraloxidim, la Figura IB muestra los resultados obtenidos con setoxidim, y la Figura 1C muestra los resultados obtenidos con cicloxidim.
La Figura 2 es un diagrama del proceso de selección utilizado para producir plantas de arroz tolerantes a herbicida .
La Figura 3 muestra fotografías de plantas tomadas una semana después del tratamiento con el herbicida.
La Figura 4 muestra fotografías de plantas tomadas dos semanas después del tratamiento con el herbicida.
La Figura 5 proporciona la secuencia de aminoácido de acetil-Coenzima A carboxilasa a partir de Alopecurus myosuroides (número de acceso de GenBank CAC84161) .
La Figura 6 proporciona el ARNm que codifica acetil-Coenzima A carboxilasa a partir de Alopecurus myosuroides (número de acceso de GenBank AJ310767 región: 157...7119) (SEQ ID NO: 4) .
La Figura 7A proporciona la secuencia de nucleotido genómico para el gen acetil-Coenzima A carboxilasa de Oryza sativa Indica & Japónica (SEQ ID NO: 5) .
La Figura 7B proporciona la secuencia de nucleotido que codifica la acetil-Coenzima A carboxilasa Oryza sativa Indica & Japónica (SEQ ID NO: 6) .
La Figura 7C proporciona la secuencia de aminoácido de acetil-Coenzima A carboxilasa Oryza sativa Indica (SEQ ID NO : 3 ) .
La Figura 8A proporciona la secuencia de nucleotido que codifica la acetil-Coenzima A carboxilasa Zea mays (SEQ ID NO: 11) .
La Figura 8B proporciona la secuencia de aminoácido de acetil-Coenzima A carboxilasa Zea mays (SEQ ID NO: 12) .
La Figura 9A proporciona la secuencia de nucleotido que codifica la acetil-Coenzima A carboxilasa Zea mays (SEQ ID NO: 13 ) .
La Figura 9B proporciona la secuencia de aminoácido de acetil-Coenzima A carboxilasa Zea mays (SEQ ID NO: 14) .
La Figura 10A proporciona la secuencia de nucleotido que codifica la acetil-Coenzima A carboxilasa Triticum aestivum (SEQ ID NO: 15) .
La Figura 10B proporciona la secuencia de aminoácido de acetil-Coenzima A carboxilasa T iticum aestivum (SEQ ID NO: 16) .
La Figura 11A proporciona la secuencia de nucleotido que codifica la acetil-Coenzima A carboxilasa {Setaria itálica SEQ ID NO: 17).
La Figura 11B proporciona la secuencia de aminoácido de acetil-Coenzima A carboxilasa Setaria itálica (SEQ ID NO: 18) .
La Figura 12A proporciona la secuencia de nucleotido que codifica la acetil-Coenzima A carboxilasa Setaria itálica (SEQ ID NO: 19) .
La Figura 12B proporciona la secuencia de aminoácido de acetil-Coenzima A carboxilasa Setaria itálica (SEQ ID NO: 20) .
La Figura 13A proporciona la secuencia de nucleótido que codifica acetil-Coenzima A carboxilasa Setaria itálica (SEQ ID NO: 21) .
La Figura 13B proporciona la secuencia de aminoácido de acetil-Coenzima A carboxilasa Setaria itálica (SEQ ID NO: 22) .
La Figura 14A proporciona la secuencia de nucleótido que codifica la acetil-Coenzima A carboxilasa Alopecurus myosuroides (SEQ ID NO: 23) .
La Figura 14B proporciona la secuencia de aminoácido de acetil-Coenzima A carboxilasa Alopecurus myosuroides (SEQ ID NO: 24) .
La Figura 15A proporciona la secuencia de nucleótido que codifica la acetil-Coenzima A carboxilasa Aegilops tauschii (SEQ ID NO: 25) .
La Figura 15B proporciona la secuencia de aminoácido de acetil-Coenzima A carboxilasa Aegilops tauschii (SEQ ID NO: 26) .
La Figura 16 proporciona una comparación de mutantes simples y dobles.
La Figura 17 proporciona una gráfica que muestra resultados para arroz mutante contra diversos inhibidores de ACCasa .
La Figura 18 proporciona la secuencia de aminoácido acetil-Coenzima A carboxilasa Alopecurus myosuroides (número de acceso GenBank CAC84161). Los aminoácidos que pueden alterarse en las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención se indican en negritas con subrayado doble.
La Figura 19 proporciona la secuencia de aminoácido de acetil-Coenzima A carboxilasas Oryza sativa de tipo silvestre alineadas con acetil-Coenzima A carboxilasa de Alopecurus myosuroides con algunos residuos críticos indicados .
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Definiciones Como se utiliza en la presente, "tolerante" o "tolerante a herbicida" indica una planta o porción de la misma capaz de crecer en la presencia de una cantidad de herbicida que normalmente provoca inhibición de crecimiento en una planta no tolerante (por ejemplo, de tipo silvestre) o porción de la misma. Los niveles de herbicida que inhiben normalmente el crecimiento de una planta no tolerante se conocen en y se determinan fácilmente por aquellos con experiencia en la técnica. Los ejemplos incluyen las cantidades recomendadas por los fabricantes para la aplicación. El índice máximo de es un ejemplo de una cantidad de herbicida que puede inhibir normalmente el crecimiento de una planta no tolerante.
Como se utiliza en la presente, "recombinante" se refiere a un organismo que tiene material genético de fuentes diferentes .
Como se utiliza en la presente, "mutagenizado" se refiere a un organismo que tiene un material genético alterado cuando se compara con el material genético de un organismo de tipo silvestre correspondiente, en donde las alteraciones en material genético se indujeron y/o seleccionaron por acción humana. Los ejemplos de acción humana que pueden utilizarse para producir un organismo mutagenizado incluyen, pero no se limitan a, cultivo de tejido de células de planta (por ejemplo, callos) en concentraciones sub-letales del herbicida (por ejemplo, inhibidores de acetil'-Coenzima A carboxilasa tales como cicloxidim o setoxidim) , el tratamiento de células de planta con a mutágeno químico y selección subsecuente con herbicidas (por ejemplo, inhibidores de acetil-Coenzima A carboxilasa tales como cicloxidim o setoxidim) ,· o por el tratamiento de células de planta con rayos x y selección subsecuente con herbicidas (por ejemplo, inhibidores de acetil-Coenzima A carboxilasa tales como cicloxidim o setoxidim) . Cualquier método conocido en la técnica puede utilizarse para inducir mutaciones. Los métodos para inducir mutaciones puede inducir mutaciones en posiciones aleatorias en el material genético o pueden inducir mutaciones en ubicaciones específicas en el material genético (es decir, pueden ser técnicas de mutagénesis dirigidas) .
Como se utiliza en la presente, un "organismo modificado genéticamente" (GMO) es un organismo cuyas características genéticas se han alterado mediante la inserción del material genético de otro organismo fuente o progenie del mismo que retiene el material genético insertado. El organismo fuente puede ser de un tipo diferente de organismo (por ejemplo, una planta de GMO puede contener material genético bacteriano) o a partir del mismo tipo de organismo (por ejemplo, una planta de GMO puede contener material genético de otra planta) . Como se utiliza en la presente, recombinante y GMO se consideran sinónimos e indican la presencia de material genético a partir de una fuente diferente mientras que mutagenizado indica material genéticamente alterado a partir de un organismo de tipo silvestre correspondiente pero no de material genético de otro organismo fuente.
Como se utiliza en la presente, "de tipo silvestre" o "planta de tipo silvestre correspondiente" significa la forma típica de un organismo o su material genético, cuando este es de origen natural, como se distingue a partir de las formas mutagenizada y/o recombinante .
Para la presente invención, los términos "tolerante a herbicida" y "resistente a herbicida" se utilizan intercambiablemente y se pretenden para tener un significado equivalente y un alcance equivalente. En forma similar, los términos "tolerancia a herbicida" y "resistencia a herbicida" se utilizan intercambiablemente y se pretenden para tener un significado equivalente y un alcance equivalente. En forma similar, los términos "tolerante" y "resistente" se utilizan intercambiablemente y se pretenden para tener un significado equivalente y un alcance equivalente.
Como se utiliza en la presente respecto a herbicidas útiles en varias modalidades del mismo, los términos tales como herbicida auxínico, inhibidor de AHAS, inhibidor de acetil-Coenzima A carboxilasa (ACCasa) , inhibidor de PPO, inhibidor de EPSPS, imidazolinona, sulfonilurea, y similares, se refiere a aquellos ingredientes activos herbicidas (A.I.) agronómicamente aceptables reconocidos en la técnica. En forma similar, términos tales como fungicidas, nematicidas, pesticidas, y similares, se refieren a otros ingredientes activos agronómicamente aceptables reconocidos en la técnica.
Cuando utilizado en referencia a las enzimas o polipéptidos mutantes particulares, términos tales como tolerante a herbicida (HT) y tolerancia a herbicida se refieren a la capacidad de tal enzima o polipéptido para realizar su actividad fisiológica en la presencia de una cantidad de un A.I. herbicida que puede inactivar o inhibir normalmente la actividad de la versión de tipo silvestre (no mutante) de la enzima o polipéptido. Por ejemplo, cuando se utiliza específicamente con respecto a una enzima AHAS, o polipéptido AHASL, se refiere específicamente a la capacidad para tolerar un inhibidor de AHAS. Las clases de inhibidores de AHAS incluyen sulfonilureas, imidazolinonas , triazolopirimidinas , sulfonilaminocarboniltriazolinonas , y pirimidiniloxi [ io] benzoatos .
Como se utiliza en la presente, "descendiente" se refiere a cualquier generación de planta.
Como se utiliza en la presente, "progenie" se refiere a la primera generación de planta.
Plantas La presente invención proporciona plantas monocotiledóneas tolerantes a herbicida del césped de la familia Poaceae. La familia Poaceae puede dividirse en dos ciados principales, el ciado que contiene las subfamilias Bambusoideae, Ehrhartoideae, y Pooideae (el ciado BEP) y el ciado que contiene las subfamilias Panicoideae, Arundinoideae, Chloridoideae, Centothecoideae , Micrairoideae, Aristidoideae, y Danthonioideae (el ciado PACCMAD) . La subfamilia Bambusoideae incluyes tribu Oryzeae. La presente invención se refiere a plantas del ciado BEP, en particular plantas de las subfamilias Bambusoideae y Ehrhartoideae . Las plantas de la invención son típicamente tolerantes en al menos un herbicida que inhibe la actividad de acetil-Coenzima A carboxilasa como un resultado de la expresión de una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención como se describe en lo siguiente. El ciado BET incluye subfamilias Bambusoideae, Ehrhartoideae, y el grupo Triticodae y ninguna otra subfamilia de los grupos Pooideae. Las plantas de cultivo BET son plantas de cultivo para alimento o forraje que son miembros del subclado BET, por ejemplo cebada, maíz, etcétera .
La presente invención también proporciona monocotiledóneas tolerantes a herbicida comercialmente importantes, incluyendo Caña de azúcar (Saccharum spp.), así como también los Céspedes, por ejemplo, Poa pratensis (Pasto Azul), Agrostis spp. (Agrostis), Lolium spp. (Lolios), Festuca spp. (Cañuelas), Zoysia spp. (Pasto de Zoisia) , Cynodon spp. (Pasto de las Bermudas) , Stenotaphrum secundatum (Pasto de San Agustín), Paspalum spp. (Pasto de Bahía), Eremochloa ophiuroides (Pasto sin Pie), Axonopus spp. (Pasto Alfombra) , Bouteloua dactyloides (Pasto Búfalo) , y Bouteloua var . spp. (Pasto Grama).
En una modalidad, la presente invención proporciona plantas tolerantes a herbicida de la subfamilia Bambusoideae . Tales plantas típicamente son tolerantes a uno o más herbicidas que inhiben la actividad acetil-Coenzima A carboxilasa. Los ejemplos de plantas tolerantes a herbicida de la subfamilia Bambusoideae incluyen, pero no se limitan a, aquellos de los géneros Arundinaria, Ba busa, Chusquea, Guadua, y Shibataea .
En una modalidad, la presente invención proporciona plantas tolerantes a herbicida de la subfamilia Ehrhartoideae . Tales plantas típicamente son tolerantes a uno o más herbicidas que inhiben actividad acetil-Coenzima A carboxilasa. Los ejemplos de plantas tolerantes a herbicida de la subfamilia Ehrhartoideae incluyen, pero no se limitan a, aquellas del género Erharta, Leersia, Microlaena, Oryza, y Zizania.
En una modalidad, la presente invención proporciona plantas tolerantes a herbicida de la subfamilia Pooideae. Tales plantas típicamente son tolerantes a uno o más herbicidas que inhiben actividad acetil-Coenzima A carboxilasa. Los ejemplos de plantas tolerantes a herbicida de la subfamilia Ehrhartoideae incluyen, pero no se limitan a, aquellas del género Triticeae, Aveneae, y Poeae.
En una modalidad, las plantas tolerantes a herbicida de la invención son plantas de arroz . Dos especies de arroz se cultivan más frecuentemente, Oryza sativa y Oryza glaberri a . Numerosas subespecies de Oryza sativa son comercialmente importantes incluyendo Oryza sativa subsp. indica, Oryza sativa subsp. japónica, Oryza sativa subsp. Javánica, Oryza sativa subsp. glutinosa (arroz glutinoso), Oryza sativa del grupo aromática (por ejemplo, basmati) , y Oryza sativa (grupo de arroz flotante) . La presente invención abarca plantas tolerantes a herbicida en todas las especies y subespecies antes mencionada.
En una modalidad, las plantas tolerantes a herbicidas de la invención son plantas de trigo. Dos especies de trigo se cultivan más frecuentemente, Triticum Triticum aestivum, y Triticum turgidum. Otras numerosas especies son comercialmente importantes incluyendo, pero sin limitarse a, Triticum timopheevii, Triticum monococcum, Triticum zhukovskyi y Triticum urartu e híbridos de los mismos. La presente invención abarca plantas tolerantes a herbicidas en todas las especies y subespecies antes mencionadas. Ejemplos de subespecies de T. aestivum incluidas dentro de la presente invención son aestivum (trigo común), compactum (trigo club), macha (trigo macha), vavilovi (trigo vavilovi), spelta y sphaecrococcum (trigo shot) . Ejemplos de subespecies T. turgidum incluidas dentro de la presente invención son turgidum, carthlicum, dicoccon, durum, paleocolchicuna, polonicum, turanicum y dicoccoides . Ejemplos de subespecies de T. monococcum incluida dentro de la presente invención son monococcum (escanda menor) y aegilopoides . En una modalidad de la presente invención, la planta de trigo es un miembro de la especie Triticum aestivum, y más particularmente, el cultivo de Zarceta CDC.
En una modalidad, plantas tolerantes a herbicida de la invención son plantas de cebada. Dos especies de cebada son cultivadas más frecuentemente, Hordeum vulgare y Hordeum arizonicum. Otras numerosas especies son comercialmente importantes incluyendo, pero sin limitarse, Hordeum bogdanii , Hordeum brachyantherum, Hordeum brevisubulatum, Hordeum bulbosum, Hordeum comosum, Hordeum depressum, Hordeum intercedens, Hordeum jubatum, Hordeum marinum, Hordeum marinum, Hordeum parodii, Hordeum pusillum, Hordeum secalinum, y Hordeum spontaneum. La presente invención abarca plantas tolerantes a herbicidas en todas las especies y subespecies antes mencionadas .
En una modalidad, las plantas tolerantes a herbicidas de la invención son plantas de centeno. Las especies comercialmente importantes incluyen, pero no se limitan a, Sécale sylvestre, Sécale strictum, Sécale cereale, Sécale vavilovii , Sécale africanum, Sécale ciliatoglume, Sécale ancestrale, y Sécale montanum. La presente invención abarca plantas tolerantes a herbicidas en todas las especies y subespecies antes mencionadas.
En una modalidad, las plantas tolerantes a herbicida de la invención son plantas de césped. Numerosas especies comercialmente importantes de hierbas de césped incluyen Zoysia japónica, Agrostris palustris, Poa pratensis, Poa annua, Digitaria sanguinalis, Cyperus rotund s, Kyllinga brevifolia, Cyperus amuricus, Erigeron canadensis, Hydrocotyle sibthorpioides, Kummerowia striata, Euphorbia humifusa, y Viola arvensis . La presente invención abarca plantas tolerantes a herbicidas en todas las especies y subespecies antes mencionadas.
Además de ser capaces de tolerar herbicidas que inhiben la actividad de acetil-Coenzima A carboxilasa, las plantas de la invención también pueden ser capaces de tolerar herbicidas que trabajan en otros procesos fisiológicos. Por ejemplo, las plantas de la invención pueden ser tolerantes para inhibidores de acetil-Coenzima A carboxilasa y también tolerantes a otros herbicidas, por ejemplo, inhibidores de enzima. Ejemplos de otros inhibidores de enzima en las cuales las plantas de la invención pueden ser tolerantes incluyen, pero no se limitan a, inhibidores de 5-enolpiruvilshikimata-3 -fosfato sintasa (EPSPS) tal como glifosato, inhibidores de acetohidroxiácido sintasa (AHAS) tal como imidazolinonas , sulfonilureas y herbicidas sulfonamidas , e inhibidores de glutamina sintasa tal como glufosinato. Además para inhibidores de enzima, las plantas de la invención también pueden ser tolerantes de herbicidas que tienen otros modos de acción, por ejemplo, herbicidas auxinicos tales como 2,4-D o dicamba, inhibidores de pigmentos de clorofila/carotenoide tales como inhibidores de hidroxifenilpiruvato dioxigenasa (HPPD) inhibidores de fitoen desaturasa (PDS) , inhibidores de protoporfirinogen-ix oxidasa, destructores de membrana celular, inhibidores fotosintéticos tales como bromoxinilo o ioxinilo, inhibidores de división celular, inhibidores de raíz, inhibidores de brote, y combinaciones de los mismos. De este modo, las plantas de la invención tolerantes a inhibidores de acetil-Coenzima A carboxilasa pueden hacerse resistentes a clases múltiples de herbicidas.
Por ejemplo, las plantas de la invención tolerantes a inhibidores de acetil-Coenzima A carboxilasa, tales como "dims" (por ejemplo, cicloxidim, setoxidim, cletodim, o tepraloxidim) , "fops" (por ejemplo, clodinafop, diclofop, fluazifop, haloxifop, o quizalofop) , y "dens" (tal como pinoxaden) , en algunas modalidades, puede ser tolerantes a herbicidas auxinicos, tolerantes a inhibidores de EPSPS, tales como glifosato; a inhibidores de PPO, tales como pirimidindiona, tal como saflufenacil , triazolinona, tal como sulfentrazona, carfentrazona, flumioxazin, difeniléteres , tales como acifluorfen, fomesafen, lactofen, oxifluorfen, N-fenilftalamidas , tales como flumiclorac, CGA-248757, y/o a inhibidores de GS , tales como glufosinato. Además de estas clases de inhibidores, las plantas de la invención tolerantes a inhibidores de acetil-Coenzima A carboxilasa pueden también ser tolerantes a herbicidas que tienen otros modos de acción, por ejemplo, inhibidores de pigmento de clorofila/carotenoide, introductora de membrana celular, inhibidores de fotosíntesis, inhibidores de división celular, inhibidores de raíz, inhibidores de brote, y combinaciones de los mismos. Tales rangos de tolerancia pueden expresarse, por ejemplo, como proteína EPSPS mutante, o proteína de glutamina sintetasa mutante; o ariloxialcanoato dioxigenasa nativa, congénita o transgenica mutante (AAD o DHT) , haloarilnitrilasa (BXN), ácido 2 , 2-dicloropropiónico deshalogenasa (DEH) , glifosato-N-acetiltransferasa (GAT) , glifosato descarboxilasa (GDC) , glifosato oxidoreductasa (GOX) , glutatión-S- transferasa (GST) , fosfinotricin acetiltransferasa (PAT o bar) , o proteína citocromo P450 (CYP450) que tiene una actividad de degradación del herbicida. Las plantas tolerantes a inhibidores de acetil-Coenzima A carboxilasa de la misma pueden ser apiladas con otros rasgos incluyendo, pero sin limitarse a, rasgos pesticidas tales como Bt Cry y otras proteínas que tienen actividad pesticida hacia coleópteros, lepidópteros, nematodos, u otras plagas; rasgos de nutrición o nutricionales tales como contenido de aceite modificado o rasgo de perfil de aceite, altas proteínas con rasgos de alta concentración de aminoácidos, y otros tipos de rasgos conocidos en la técnica.
Además, las plantas cubrieron también que, además de ser capaces de tolerar herbicidas que inhiben la actividad acetil-Coenzima A carboxilasa, son mediante el uso de técnica de ADN recombinantes capaces de sinterizar una o más proteínas insecticidas, especialmente aquellas conocidas en las bacterias de género Bacillus , particularmente de Bacillus thuringiensis , tal como d-endotoxinas , por ejemplo CrylA(b) , CrylA(c), CryIF, CryIF(a2), CrylIA(b) , CryIIIA, CryIIIB (bl ) o Cry9c; las proteínas insecticidas vegetativas (VIP) , por ejemplo VIPl, VIP2 , VIP3 o VIP3A; proteínas insecticidas de bacterias que colonizan nematodos, por ejemplo Photorhabdus spp. o Xenorhabdus spp.; las toxinas producidas por animales, tales como toxina de escorpión, toxina de arácnidos, toxina de avispa, u otras neurotoxinas específicas de insectos; toxinas producidas por hongo, tal como toxinas Streptomycetes , lectinas de planta, tales como lectinas de chícharo o cebada; aglutininas ; inhibidores de proteinasas, tales como inhibidores de tripsina, inhibidores de serina proteasa, inhibidores de patatina, cistatina o papaína; proteínas que inactivan el ribosoma (RIP) , tal como ricina, maíz-RIP, abrina, luffina, saporina o briodina; enzimas de metabolismo de esteroides, tal como 3-hidroxi-esteroide oxidasa, ecdisteroide-IDP-glicosil- transferasa, colesterol oxidasas, inhibidores de ecdisona o HMG-CoA-reductasa ; bloqueadores del canal iónico, tal como bloqueadores del canal iónico, tales como bloqueadores del canal de sodio o de calcio; esterasa de hormona juvenil; receptores de hormona diurética (receptores helicocinina) ; stilben sintasa, bibenzil sintasa, citinasas o glucanasas . En el contexto de la presente invención estas proteínas o toxinas insecticidas se entenderá expresamente también como pretoxinas, proteínas de híbridos, proteínas truncadas o de otra forma modificada. Las proteínas de híbridos se caracterizan por una nueva combinación de dominios de proteína, (véase, por ejemplo O 02/015701). Ejemplos adicionales de tales toxinas o plantas modificadas genéticamente capaces de sinterizar tales toxinas se describen, por ejemplo, en EP-A 374 753, WO 93/007278, WO 95/34656, EP-A 427 529, EP-A 451 878, WO 03/18810 y WO 03/52073. Los métodos para producir tales plantas genéticamente modificadas son generalmente conocidas por las personas con experiencia en la técnica y se describen, por ejemplo, en las publicaciones antes mencionadas. Estas proteínas insecticidas contenidas en las plantas genéticamente modificadas imparten a las plantas producir estas proteínas con tolerancia a las plagas perjudiciales de todos los grupos taxonómicos de artrópodos, especialmente escarabajos (Coleópteros), insectos de dos alas (Dípteros), y polillas (Lepidóptera) y a nematodos (Nematodos) .
Además, en una modalidad, las plantas también se cubren que son, por ejemplo, mediante el uso de técnicas de ADN recombinante y/o al reproducir y/o de otra forma seleccionado para tales rasgos, capaces de sintetizar una o más proteínas para incrementar la resistencia o tolerancia de esas plantas a patógenos bacterianos virales o fúngicos. Los métodos para producir tales plantas modificadas genéticamente se conocen generalmente por la persona con experiencia en la técnica. Las plantas producidas como se describe en la presente también pueden apilarse con otros rasgos, incluyendo pero no limitados a, resistencia a la enfermedad, perfil de mineral mejorado, perfil de vitaminas mejorado, perfil de aceite mejorado (por ejemplo, contenido de ácido oleico elevado) , perfil de aminoácido (por ejemplo, maíz de lisina alta), y otros tipos de rasgos conocidos en la técnica.
Además, en una modalidad, las plantas también se cubren que son, por ejemplo, mediante el uso de técnicas de ADN recombinante y/o mediante la reproducción y/o por otros medios de selección, capaces de sintetizar una o más proteínas para incrementar la productividad (por ejemplo, la producción de biomasa, la producción de granos, el contenido de almidón, el contenido de aceite o el contenido de proteína) , la tolerancia a la sequía, salinidad u otros factores ambientales que limitan el crecimiento o la tolerancia a las plagas y patógenos fúngicos, bacterianos o virales de esas plantas.
Además, en una modalidad, las plantas también se cubre que contienen, por ejemplo, mediante el uso de técnicas de ADN recombinante y/o al reproducir y/o mediante otros medios de selección, una cantidad modificada de sustancias de contenido o sustancias de contenido nuevas específicamente para mejorar la nutrición humana o animal. Además, las plantas también se cubren que contienen mediante el uso de técnicas de ADN recombinante una cantidad modificada de sustancias de contenido o sustancias nuevas de contenido, específicamente para mejorar la producción de materia prima.
Además, en algunas modalidades, las plantas de la presente invención se cubren también, las cuales son, por ejemplo, mediante el uso de las técnicas de ADN recombinante y/o al reproducir y/o de otra forma seleccionar para tales rasgos, alteradas para contener las cantidades incrementadas de vitaminas y/o minerales, y/o de perfiles mejorados de compuestos nutracéuticos .
En una modalidad, las plantas de la invención tolerantes a inhibidores de acetil-Coenzima A carboxilasa, en relación con una planta de tipo silvestre, comprende una cantidad incrementada de, o un perfil mejorado de, un compuesto seleccionado del grupo que consiste de: glucosinolatos (por ejemplo, glucorafanin (4-metilsulfinilbutil-glucosinolato) , sulforafano, 3-indolilmetil-glucosinolato (glucobrassicina) , l-metoxi-3-indolilmetil-glucosinolato (neoglucobrassicina) ) ; fenólicos (por ejemplo, flavonoides (por ejemplo, quercetina, kaempferol), derivados de hidroxicinnamoilo (por ejemplo, 1,2,2' - trisinapoilgentiobiosa, 1 , 2-diferuloilgentiobiosa, 1,2' -disinapoil-2-feruloilgentiobiosa, 3-0-cafeoil-quínico (ácido neoclorogénico) ) ; y vitaminas y minerales (por ejemplo, vitamina C, vitamina E, caroteno, ácido fólico, niacina, riboflavina, tiamina, calcio, hierro, magnesio, potasio, selenio, y zinc) .
En otra modalidad, las plantas de la invención tolerantes a inhibidores de acetil-Coenzima A carboxilasa, con relación a plantas de tipo silvestre, comprenden una cantidad incrementada de, o un perfil mejorado de, un compuesto seleccionado del grupo que consiste de: progoitrina; isotiocianatos ; índoles (productos de hidrólisis glucosinolato) ; glutationa; carotenoides tales como beta-caroteno, licopeno, y los carotenoides xantofilo tales como luteína y zeaxantina; los fenólicos comprenden los flavonoides tales como los flavonoles (por ejemplo, quercetina, rutina), las flavanas/tanninas (tales como procianidinas que comprenden coumarino, proantocianidinas , catequinas, y antocianinas ) ; flavonas; fitoestrógenos tales como coumestanos, lignanos, resveratrol, isoflavonas por ejemplo, genisteina, daidzeina, y gliciteina; lactonas de ácido resorcíclico; compuestos de organoazufre; fitoesteroles ; terpenoides tales como carnosol, ácido rosmarínico, glicirrizina and saponinas; clorofila; clorfilina, azúcares, antocianinas , y vainilla.
En otras modalidades, las plantas de la invención tolerantes a inhibidores de acetil-Coenzima A carboxilasa, con relación a una planta de tipo silvestre, comprenden una cantidad incrementad de, o un perfil mejorado de, un compuesto seleccionado del grupo que consiste de: vincristina, vinblastina, taxanos (por ejemplo, taxol (paclitaxel ) , bacatin III, 10-desacetilbacatin III, 10-desacetil taxol, xilosil taxol, 7-epitaxol, 7-epibacatin III, 10-desacetilcefalomanina, 7-epicefalomanina, taxotero, cefalomanina , xilosil cefalomanina , taxagifina, 8-benxoiloxi taxagifina, 9-acetiloxi taxosina, 9-hidroxi taxosina, taiwanxam, taxano la, taxano Ib, taxano Ic, taxano Id, GMP paclitaxel, 9-dihidro 13-acetilbacatina III, 10-desacetil-7-epitaxol, tetrahidrocanabinol (THC) , canabidiol (CBD) , genisteina, diadzeina, codeina, morfina, quinina, shikonina, ajmalacina, serpentina, y similares.
La presente invención también abarca progenie de las plantas de la invención así como también semillas derivadas a partir de plantas tolerantes a herbicidas de la invención y células derivadas a partir de plantas tolerantes herbicidas de la invención.
En diversas modalidades, las plantas de las mismas pueden utilizarse para producir productos de plantas. De este modo, un método para preparar una semilla descendiente comprende plantar una semilla de una capaz de producir una planta de la misma, cultivar la planta resultante, y cosechar la semilla descendiente de la misma. En algunas modalidades, tal método puede además comprender aplicar una composición herbicida que inhibe ACCasa en la planta resultante. Similarmente, un método para producir un producto derivado de una planta de la misma puede comprender procesar una parte de la planta de la misma para obtener un producto derivado. En algunas modalidades, tal método puede utilizarse para obtener un producto derivado que es cualquiera de, por ejemplo, forraje, pienso, harina de semilla, aceite, o semilla revestida del tratamiento de semillas. Las semillas, las semillas tratadas, y otros productos de plantas obtenidos por tales métodos son productos útiles que pueden comercializarse .
En diversas modalidades, la presente invención proporciona la producción de productos alimenticios, productos para el consumidor, productos industriales, y productos veterinarios a partir de cualquiera de las plantas descritas en la presente.
Enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasas La presente invención proporciona plantas que expresan enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasas con secuencias de aminoácidos que difieren de la secuencia de aminoácido de la enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa encontrada en la planta de tipo silvestre correspondiente. Para facilidad de entendimiento, el sistema de numeración de aminoácidos utilizado en la presente será el sistema de numeración utilizado para la acetil-Coenzima A carboxilasa de Alopecurus myosuroides [Huds.] (también referida como cola de zorro) . La secuencia de AR m que codifica la acetil-Coenzima A carboxilasa de A. myosuroides se encuentra disponible en el número de acceso de GenBank AJ310767 y la secuencia de proteína se encuentra disponible en el número de acceso de GenBank CAC84161, de los cuales se incorporan específicamente en la presente para referencia. El número de aminoácido referido será seguido con (Am) para indicar el aminoácido en la secuencia de Alopecurus myosuroides a la cual corresponde el aminoácido. La Figura 18 proporciona la secuencia de aminoácido de acetil-Coenzima A carboxilasa de Alopecurus myosuroides (número de acceso GenBank CAC84161) . Los aminoácidos que puede alterarse en las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención se indican en negritas con subrayado doble, y la Figura 19 representa la secuencia de aminoácido de acetil-Coenzima A carboxilasa Oryza sativa de tipo silvestre alineada con acetil-Coenzima A carboxilasa de Alopecurus myosuroides con algunos residuos críticos indicados .
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 1,781 (Am) . La acetil-Coenzima A carboxilasa A. myosuroides de tipo silvestre tiene una isoleucina en la posición 1,181 (Am) (11781). Los imitantes de ACCasa de 1,781 (Am) de la invención tendrán un aminoácido distinto de isoleucina en esta posición. Los ejemplos adecuados de los aminoácidos que pueden encontrarse en esta posición en las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención incluyen, pero no se limitan a, leucina (I1781L), valina (I1781V), treonina (I1781T) y alanina (I1781A). En una modalidad, una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina en la posición l,181{Am).
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 1,185 (Am). La Acetil-Coenzima A carboxilasa A. myosuroides de tipo silvestre tiene una alanina en la posición 1,185 (Am) (A1785). Los mutantes de ACCasa de 1,185 (Am) de la invención tendrán un aminoácido distinto de alanina en esta posición. Los ejemplos adecuados de aminoácidos que pueden encontrarse en esta posición en las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención incluyen, pero no se limitan a, glicina (A1785G) . En una modalidad, una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina en la posición 1,785 (Am) .
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 1,186 (Am) . La acetil-Coenzima A carboxilasa A. myosuroides de tipo silvestre tiene una alanina en la posición 1,786 (Am) (A1786). Los mutantes ACCasa de 1,186 (Am) de la invención tendrán un aminoácido distinto de alanina en esta posición. Los ejemplos adecuados de aminoácidos que pueden encontrarse en esta posición en las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención incluyen, pero no se limitan a, prolina (A1786P) . En una modalidad, una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una prolina en la posición 1, 186 (Am).
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 1 , 811 (Am). La acetil-Coenzima A carboxilasa A. myosuroides de tipo silvestre tiene una isoleucina en la posición 1, 811 (Am) (11811). Los mutantes ACCasa 1, 11 (Am) de la invención tendrán un aminoácido distinto de isoleucina en esta posición. Los ejemplos adecuados de aminoácidos que pueden encontrarse en esta posición en las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención incluyen, pero no se limitan a, asparagina (I1811N) . En una modalidad, una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 1 , 811 (Am).
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 1 , 824 (Am). La acetil-Coenzima A carboxilasa A. myosuroides de tipo silvestre tiene una glutamina en la posición 1,824 (Am) (Q1824). Los mutantes ACCasa de 1,824 (Am) de la invención tendrán un aminoácido distinto de glutamina en esta posición. Los ejemplos adecuados de aminoácidos que pueden encontrarse en esta posición en las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención incluyen, pero no se limitan a, prolina (Q1824P) . En una modalidad, una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una prolina en la posición l,824(Am).
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 1, 864 (Am). La acetil-Coenzima A carboxilasa A. myosuroides de tipo silvestre tiene una valina en la posición 1, 864 (A ) (V1864). Los mutantes ACCasa de 1 , 864 (Am) de la invención tendrán un aminoácido distinto de valina en esta posición. Los ejemplos adecuados de aminoácidos que pueden encontrarse en esta posición en las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención incluyen, pero no se limitan a, fenilalanina (V1864F) . En una modalidad, una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una fenilalanina en la posición 1 , 864 (Am) .
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 1,999 (Am). La acetil-Coenzima A carboxilasa A. myosuroides de tipo silvestre tiene un triptófano en la posición 1,999 (Am) (W1999). Los mutantes de ACCasa de 1,999 {Am) de la invención tendrán un aminoácido distinto de triptófano en esta posición. Los ejemplos adecuados de aminoácidos que pueden encontrarse en esta posición en la enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención incluyen, pero no se limitan a, ciste na (W1999C) y glicina (W1999G) . En una modalidad, una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina en la posición 1, 999 (A ) .
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2,021 {Am). La acetil-Coenzima A carboxilasa A. myosuroides de tipo silvestre tiene un triptófano en la posición 2,027(Am) ( 2027). Los mutantes de ACCasa de 2,027 (Am) de la invención tendrán un aminoácido distinto de triptófano en esta posición. Los ejemplos adecuados de aminoácidos que pueden encontrarse en esta posición en las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención incluyen, pero no se limitan a, cisteína (W2027C) y arginina (W2027R) . En una modalidad, una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína en la posición 2,027 (Am) .
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2, 039 (Am) . La acetil-Coenzima A carboxilasa A. myosuroides de tipo silvestre tiene un ácido glutámico en la posición 2, 039 (Am) (E2039) . Los mutantes de ACCasa de 2,039 (Am) de la invención tendrán un aminoácido distinto de ácido glutámico en esta posición. Los ejemplos adecuados de aminoácidos que pueden encontrarse en esta posición en las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención incluyen, pero no se limitan a, glicina (E2039G) . En una modalidad, una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina en la posición 2,039 (Am) .
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2, 41 (Am). La acetil-Coenzima A carboxilasa A. myosuroídes de tipo silvestre tiene una isoleucina en la posición 2,041(AÍT¡ (12041). Los mutantes de ACCasa de 2, 041 [Am) de la invención tendrán un aminoácido distinto de isoleucina en esta posición. Los ejemplos adecuados de aminoácidos que pueden encontrarse en esta posición en las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención incluyen, pero no se limitan a, asparagina (I2041N), o valina (I2041V) . En una modalidad, una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 2 , 041 (Am) .
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2,049 (Am;. La acetil-Coenzima A carboxilasa A. myosuroídes de tipo silvestre tiene una valina en la posición 2,049 (Am) (V2049) . Los mutantes de ACCasa de 2,049 (Am) de la invención tendrán un aminoácido distinto de valina en esta posición. Los ejemplos adecuados de aminoácidos que pueden encontrarse en esta posición en las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención incluyen, pero no se limitan a, fenilalanina (V2049F) , isoleucina (V2049I) y leucina (V2049L) . En una modalidad, una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una fenilalanina en la posición 2,049 (Am).
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2 , 059 (Am) . La acetil-Coenzima A carboxilasa A. myosuroides de tipo silvestre tiene una alanina en la posición 2,059(Am) (A2059) . Los imitantes de ACCasa de 2,059 (Am) de la invención tendrán un aminoácido distinto de una alanina en esta posición. Los ejemplos adecuados de aminoácidos que pueden encontrarse en esta posición en las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención incluyen, pero no se limitan a, valina (A2059V) . En una modalidad, una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una valina en la posición 2, 059 (Am).
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2074 (Am) . La acetil-Coenzima A carboxilasa A. myosuroides de tipo silvestre tiene un triptófano en la posición 2074 (Am) (W2074) . Los mutantes de ACCasa de 2,014(Am) de la invención tendrán un aminoácido distinto de triptófano en esta posición. Los ejemplos adecuados de aminoácidos que pueden encontrarse en esta posición en las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención incluyen, pero no se limitan a, leucina (W2074L) . En una modalidad, una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina en 2074 (Am) .
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2,015 (A ). La acetil-Coenzima A carboxilasa A. myosuroides de tipo silvestre tiene una valina en la posición 2,015 (Am) (V2075) . Los mutantes de ACCasa de 2,075 (Am) de la invención tendrán un aminoácido distinto de valina en esta posición. Los ejemplos adecuados de aminoácidos que pueden encontrarse en esta posición en las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención incluyen, pero no se limitan a, metionina (V2075M) , leucina (V2075L) e isoleucina (V2075I). En una modalidad, una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina en la posición 2, 075 (Am). En algunas modalidades, una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una valina en la posición 2075 (Am) y una valina adicional inmediatamente después de la posición 2075 [Am) y antes de la valina en la posición 2076 (Am) , es decir, puede tener tres valinas consecutivas en donde la enzima de tipo silvestre tiene dos.
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2, 018 (Am). La acetil-Coenzima A carboxilasa A. myosuroides de tipo silvestre tiene una aspartato en la posición 2,078 (Am) (D2078). Los mutantes de ACCasa de 2,078 (Am) de la invención tendrán un aminoácido distinto de aspartato en esta posición. Los ejemplos adecuados de aminoácidos que pueden encontrarse en esta posición en las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención incluyen, pero no se limitan a, lisina (D2,078K), glicina (D2078G) , o treonina (D20 8T) . En una modalidad, una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina en la posición 2 , 78 (Am).
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2,079 (Am). La acetil-Coenzima A carboxilasa A. myosuroides de tipo silvestre tiene una serina en la posición 2,079(Am) (S2079). Los mutantes de ACCasa de 2,079(Am) de la invención tendrán un aminoácido distinto de serina en esta posición. Los ejemplos adecuados de aminoácidos que pueden encontrarse en esta posición en las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención incluyen, pero no se limitan a, fenilalanina (S2079F) . En una modalidad, una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una fenilalanina en la posición 2,079 (Am) .
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2 , 80 (Am). La acetil-Coenzima A carboxilasa A. myosuroides de tipo silvestre tiene una lisina en la posición 2,080 (Am) (K2080) . Los mutantes de ACCasa de 2,080 (Am) de la invención tendrán un aminoácido distinto de lisina en esta posición. Los ejemplos adecuados de aminoácidos que pueden encontrarse en esta posición en las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención incluyen, pero no se limitan a, ácido glutámico (K2080E) . En una modalidad, una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá un ácido glutámico en la posición 2,080 (Am). En otra modalidad, las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención típicamente tendrán una eliminación de esta posición (?2080) .
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2, 081 (Am). La acetil-Coenzima A carboxilasa A. myosuroides de tipo silvestre tiene una isoleucina en la posición 2,081(Am) (12081). Los mutantes de ACCasa de 2, 081 (Am) de la invención tendrán un aminoácido distinto de isoleucina en esta posición. En una modalidad, las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención típicamente tendrán una eliminación de esta posición (?2081) .
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2,088 (Am). La acetil-Coenzima A carboxilasa A. myosuroides de tipo silvestre tiene una cisteína en la posición 2,088 (Am) (C2088). Los imitantes de ACCasa 2, 088 (Am) de la invención tendrán un aminoácido distinto de cisteína en esta posición. Los ejemplos adecuados de aminoácidos que pueden encontrarse en esta posición en las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención incluyen, pero no se limitan a, arginina (C2088R) , triptófano (C2088W) , fenilalanina (C2088F) , glicina (C2088G) , histidina (C2088H) , lisina (C2088K) , serina (C2088S) , treonina (C2088T) , leucina (C2088L) o valina (C2088V) . En una modalidad, una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una arginina en la posición 2, 088 (Am).
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2,095 (Am) . La acetil-Coenzima A carboxilasa A. myosuroides de tipo silvestre tiene una lisina en la posición 2,095 (Am) (K2095) . Los mutantes de ACCasa de 2, 095 (Am de la invención tendrán un aminoácido distinto de lisina en esta posición. Los ejemplos adecuados de aminoácidos que pueden encontrarse en esta posición en las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención incluyen, pero no se limitan a, ácido glutámico (K2095E) . En una modalidad, una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá un ácido glutámico en la posición 2,095 (Am).
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2 , 096 (Am) . La acetil-Coenzima A carboxilasa A. myosuroides de tipo silvestre tiene una glicina en la posición 2,096 (Am) (G2096) . Los mutantes de ACCasa de 2,096 (Am) de la invención tendrán un aminoácido distinto de glicina en esta posición. Los ejemplos adecuados de aminoácidos que pueden encontrarse en esta posición en las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención incluyen, pero no se limitan a, alanina (G2096A) , o serina (G2096S) . En una modalidad, una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una alanina en la posición 2,096 (Am .
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2,098 (Am). La acetil-Coenzima A carboxilasa A. myosuroides de tipo silvestre tiene una valina en la posición 2, 098 (A ) (V2098) . Los mutantes de ACCasa de 2,098 íAmJ de la invención tendrá un aminoácido distinto de valina en esta posición. Los ejemplos adecuados de aminoácidos que pueden encontrarse en esta posición en las enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención incluyen, pero no se limitan a, alanina (V2098A) , glicina (V2098G) , prolina (V2098P) , histidina (V2098H) , serina (V2098S) o cisterna (V2098C) . En una modalidad, una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una alanina en la posición 2, 098 (Am).
En una modalidad, la presente invención abarca acetil-Coenzima A carboxilasa de una planta tolerante de herbicidas de la invención que difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de la planta tipo silvestre correspondiente en únicamente una de las siguientes posiciones: 1,781 (Ara), 1, 785 (Am;, l,lS6(Am), 1, 811 (Am), l,824(Am), l,864 (Amj, 1,999 (Am), 2,027(A ), 2 , 039 (Am) , 2,041(Amj, 2,049 (Am), 2,059 (A ) , 2,014(Am), 2,075 (Am) , 2,078 (Am) , 2,079 (Am) , 2, 080 (Am) , 2, 081 (Am) , 2, 088 (Am) , 2, 095 (Am) , 2,096 (Am) , o 2,098 (A ) . En una modalidad la acetil-Coenzima A carboxilasa de una planta tolerante a herbicidas de la invención diferirá de sólo una de las siguientes posiciones: 2,078|???? , 2,088 (Am), o 2, 075 (Am) . En una modalidad preferida, la acetil-Coenzima A carboxilasa de una planta tolerante a herbicidas de la invención diferirá en únicamente una de las siguientes posiciones: 2,039(Am), 2,059(AmJ, 2,080 (Am), o 2, 095 (Am) . En una modalidad más preferida la acetil-Coenzima A carboxilasa de una planta tolerante a herbicidas de la invención diferirá en únicamente una de las siguientes posiciones: 1, 135 (Am), 1,786 (Am) , 1 , 811 (Am) , 1, 824 (Am) , 1 , 864 (Am), 2,041(Am), 2,049 (Am), 2,014(Am), 2,019(Am), 2#081(Amj, 2,096 (Am) , o 2 , 098 (Am) . En una modalidad más preferida la acetil-Coenzima A carboxilasa de una planta tolerante a herbicidas de la invención diferirá en únicamente una de las siguientes posiciones: 1, 781 (Am) , 1, 999 (Am) , 2,027 (Am , 2,0 l(Am), o 2 , 096 (Am) .
En una modalidad, las enzima de Acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrán únicamente una de las siguientes sustituciones: una isoleucina en la posición 2,015 (Am), glicina en la posición 2 ,018 (Am) , o arginina en la posición 2 , 088 (Am). En una modalidad preferida, las enzima de Acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrán únicamente una de las siguientes sustituciones: una glicina en la posición 2,039 (Am), valina en la posición 2,059 (Am) , metionina en la posición 2,015(Am), duplicación de posición 2,075 (Am) (es decir, una inserción de valina entre 2,074 (Am) y 2,015 (Am), o una inserción de valina entre la posición 2,075 (Am) y 2, 076 (A )), la eliminación de la posición de aminoácido 2,080 (Am), ácido glutámico en la posición 2,080 (Am), eliminación de la posición 2, 081 (Am), o ácido glutámico en la posición 2,095 (Am). En una modalidad más preferida, las enzimas de Acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrán únicamente una de las siguientes sustituciones: una glicina en la posición 1,185 (Am), una prolina en la posición 1,786 (Am) , una asparagina en la posición 1, 11 (Am), una leucina en la posición 2, 075 (Am) , una metionina en la posición 2,075(A/7? , una trenonina en la posición 2,018(Am), una eliminación en la posición 2, 080 (Am) , una eliminación en la posición 2 , 081 (Am) , un triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2 , 088 (Am), una serina en la posición 2, 096 (Am), una alanina en la posición 2,096 (Am) , una alanina en la posición 2,098 (Am), una glicina en la posición 2,098('Am), una histidina en la posición 2, 098 (Am), una prolina en la posición 2, 098 (Am) , o una serina en la posición 2,098 (Am) . En una modalidad más preferida, las enzimas de Acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrán únicamente una de las siguientes sustituciones: una leucina en la posición l,781(Am , una treonina en la posición 1,181 (Am), una valina en la posición l,181(Am), una alanina en la posición 1,181 (Am), una glicina en la posición l,999 (Am/>, una cisteína o arginina en la posición 2,027 (Am) , una arginina en la posición 2 , 027 (Am* , una asparagina en la posición 2, 041 (Am), una valina en la posición 2 , 041 ( Am,) , una alanina en la posición 2,096 (Am), y una serina en la posición 2, 096 (Am) .
En una modalidad, los ácidos nucleicos que codifican el péptido de Acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene únicamente una de las siguientes sustituciones: isoleucina en la posición 2,075 (Am) , glicina en la posición 2,018 (Am), o arginina en la posición 2,088 (Am) se utilizan transgénicamente . En otra modalidad, una célula de planta monocotiledónea se transforma con un constructo de vector de expresión que comprende el ácido nucleico que codifica el polipéptido de Acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene únicamente una de las siguientes sustituciones: isoleucina en la posición 2,015 (A ), glicina en la posición 2,018 (Am), o arginina en la posición 2,088 (Am).
En una modalidad, la invención proporciona plantas de arroz que comprenden ácido nucleicos que codifican polipéptidos de Acetil-Coenzima A carboxilasa que tienen una sustitución únicamente en una posición de aminoácido como se describe en lo anterior.
En una modalidad, la invención proporciona plantas ciado BEP que comprenden ácidos nucleicos que codifican polipéptidos de Acetil-Coenzima A carboxilasa que tienen una sustitución únicamente en una posición de aminoácido como se describe en lo anterior.
En una modalidad, la invención proporciona plantas subclado BET que comprenden ácidos nucleicos que codifican polipéptidos de Acetil-Coenzima A carboxilasa que tienen una sustitución únicamente en una posición de aminoácido como se describe en lo anterior.
En una modalidad, la invención proporciona plantas de cultivo BET que comprenden ácido nucleicos que codifica polipéptidos de Acetil-Coenzima A carboxilasa que tienen una sustitución únicamente en una posición de aminoácido como se describe en lo anterior.
En una modalidad, la invención proporciona plantas monocotiledóneas que comprenden ácidos nucleicos que codifican polipéptidos de Acetil-Coenzima A carboxilasa que tienen una sustitución únicamente en una posición de aminoácido como se describe en lo anterior.
En una modalidad, la invención proporciona plantas monocotiledóneas que comprenden ácidos nucleicos que codifican polipéptidos de Acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una sustitución en la posición de aminoácido 1, 781 (Am) , en donde el aminoácido en la posición 1, 781 (Am) difiere de aquel del tipo silvestre y no es leucina.
En una modalidad, la invención proporciona plantas monocotiledóneas que comprenden ácido nucleicos que codifica polipéptidos de Acetil-Coenzima A carboxilasa que tienen una sustitución en la posición de aminoácido 1 , 999 (Am) , en donde el aminoácido en la posición 1,999 (Am) difiere de aquella del tipo silvestre y no es cisterna.
En una modalidad, la invención proporciona plantas monocotiledóneas que comprenden ácido nucleicos que codifican péptidos de Acetil-Coenzima A carboxilasa que tienen una sustitución en la posición de aminoácido 2,027 (Am) , en donde el aminoácido en la posición 2,021 (Am) difiere de aquella del tipo silvestre y no es cisterna | .
En una modalidad, la invención proporciona plantas monocotiledóneas que comprenden ácido nucleicos que codifican péptidos de acetil-Coenzima A carboxilasa que tienen una sustitución en la posición de aminoácido 2, 041 (Am), en donde el aminoácido en la posición 2,041 (Am) difiere de aquella del tipo silvestre y no es valina o asparagina.
En una modalidad, la invención proporciona plantas monocotiledóneas que comprenden ácido nucleicos que codifica péptidos de acetil-Coenzima A carboxilasa que tienen una sustitución en la posición de aminoácido 2,096 (Am), en donde el aminoácido en la posición 2, 096 (Am) difiere de aquella del tipo silvestre y no es alanina.
La presente invención también abarca enzima de acetil-Coenzima A carboxilasas con una secuencia de aminoácido que difiere en más de una posición de aminoácido de aquella de la enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa encontrada en la planta de tipo silvestre correspondiente. Por ejemplo, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención puede diferir en 2, 3, 4, 5, 6, ó 7 posiciones de aquella de la enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa encontrada en la planta de tipo silvestre correspondiente.
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 1,781(AÜ?) y en una o más posiciones de aminoácido adicionales. Las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención típicamente tendrán una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición l,181(Am). Además, las enzimas de esta modalidad también comprenderán una o más de una glicina en la posición 1,785 (Am) , una prolina en la posición 1,786 (Am) , una asparagina en la posición 1, 811 {Am) , una prolina en la posición 1, 824 (Am), una fenilalanina en la posición 1,864 (Am) , una cisteína o glicina en la posición 1, 999 {Am), una cisteína o arginina en la posición 2, 027 {Am) , una glicina en la posición 2,039 (Am), una asparagina en la posición 2, 041 (Am) , una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am), una valina en la posición 2,059 (Am) , una leucina en la posición 2,074 (Am), una leucina, isoleucina, metionina, o una valina adicional en la posición 2,015 (Am), una glicina o treonina en la posición 2,018(Am), una fenilalanina en la posición 2,079 (Am) , un ácido glutámico en la posición 2, 080 (Am) , una eliminación en la posición 2,080 (Am), una eliminación en la posición 2, 081 (Am), una triptófano arginina, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, serina, treonina, o valina en la posición 2, 88 (Am), un ácido glutámico en la posición 2, 095 (Am) , una alanina o serina en la posición 2,096 (Am), y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2, 098 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición 1,181 (Am) y una glicina en la posición l,185(Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición 1,781 (Am) y una prolina en la posición 1,186 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición l,181{Am) y una asparagina en la posición 1 , 811 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición 1, 781 (Am) y una prolina en la posición 1824 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición 1,181 (Am) y una fenilalanina en la posición 1864 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición 1,781 (Am) y una cisteína o glicina en la posición 1,999 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición l,781(Am y una cisteína o una arginina en la posición 2,027 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición 1 ,181 (Am) y una glicina en la posición 2039 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición 1,181 (Am) y una asparagina en la posición 2, 041 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición 1,181 (Am) y una fenilalanina, leucina o isoleucina en la posición 2,049(Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición l,781(Am) y una valina en la posición 2059 {Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición 1 ,181 (Am) y una leucina en la posición 2, 074 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición 1, 781 (Am) y una leucina, isoleucina metionina, o valina adicional en la posición 2,015(Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición 1,181 (Am) y una glicina o treonina en la posición 2,078 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición l,181(Am) y una fenilalanina en la posición 2079 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición 1,781 (Am) y un ácido glutámico o una eliminación en la posición 2080 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición 1,781 (Am) y una eliminación en la posición 2081 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición 1, 781 { Am) y una arginina, triptófano, fenilalanina , glicina, histidina, lisina, serina, treonina, o valina en la posición 2, 088 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición 1 ,181 ( Am) y un ácido glutámico en la posición 2, 095 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición l,181( Am) y una alanina o serina en la posición 2, 096 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición l,781(Am y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteina, o serina en la posición 2, 098 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición 1, 781 (Am,), una cisteína o arginina en la posición 2,027 (Am) , y una asparagina en la posición 2,041(AmJ. En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición 1,181 (Am), una cisteína o arginina en la posición 2,027 (Am), una asparagina en la posición 2, 041 (Am), y una alanina en la posición 2, 096 (Am) .
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 1, 785 (Am) y en una o más posiciones de aminoácido adicionales. Las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención típicamente tendrán una glicina en la posición 1,785 (Am). Además, las enzimas de esta modalidad también comprenderán una o más de una leucina, treonina, una valina, o alanina en la posición 1,781 (Am) , una prolina en la posición 1,786 (Am) , una asparagina en la posición 1, 811 (Am), una prolina en la posición 1,824 (Am), una fenilalanina en la posición 1,864 (Am) , una cisteína o glicina en la posición l,999(AmJ, una cisteína o arginina en la posición 2, 027 (Am) , una glicina en la posición 2, 039 (A ), una asparagina en la posición 2, 041 (Am) , una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am) , una valina en la posición 2,059 (Am), una leucina en la posición 2,074 (Am) , una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2,015(Am), una glicina o treonina en la posición 2,018(Am), una fenilalanina en la posición 2,019 (Am), un ácido glutámico en la posición 2,080 (Am) , una eliminación en la posición 2,080 (Am), una eliminación en la posición 2, 81 {Am), una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2,088(An?J, un ácido glutámico en la posición' 2, 095 {Am), una alanina o serina en la posición 2,096 (Am), y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteina, o serina en la posición 2 , 098 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina en la posición 1.185 {Am) y una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición l,781fAm,J. En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina en la posición 1,785 (Am) y una prolina en la posición 1.186 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina en la posición 1,785 (Am) y una asparagina en la posición 1, 811 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina en la posición 1,185 (Am) y una prolina en la posición 1, 24: (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina en la posición l,785 (Am,J y una fenilalanina en la posición 1, 864 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina en la posición 1,785 (Am) y una cisteína o glicina en la posición 1, 999 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina en la posición 1,185 (Am) y una cisteína o una arginina en la posición 2,021 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina en la posición 1,185 (Am) y una glicina en la posición 2,039 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina en la posición 1,185 (Am) y una asparagina en la posición 2 , 041 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina en la posición 1,785 (Am) y una fenilalanina , isoleucina o leucina en la posición 2, 049 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina en la posición 1,185 (Am) y una valina en la posición 2,059 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina en la posición 1 ,185 (Am) y una leucina en la posición 2,014(Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina en la posición 1,785 (Am) y una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2,075 (Am;. En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina en la posición 1,185 (Am) y una glicina o treonina en la posición 2,018 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina en la posición 1,185 (Am) y una fenilalanina en la posición 2,079 (A ). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina en la posición 1,785 (Am) y un ácido glutámico o eliminación en la posición 2, 080 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina en la posición 1, 785 (Am) y una eliminación en la posición 2, 081 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina en la posición 1,785 (Am) y una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2,088(Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina en la posición 1 ,785 (Am) y un ácido glutámico en la posición 2, 095 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina en la posición 1,785 (Am) y una alanina o serina en la posición 2,096 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina en la posición 1,785 (Am) y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2,098(Am) .
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 1,786 (Am) y en una o más posiciones de aminoácido adicionales. Las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención típicamente tendrán una prolina en la posición 1,786 (Am) . Además, las enzimas de esta modalidad también comprenderán una o más de una leucina, treonina, una valina, o alanina en la posición 1,781 (Am^, una glicina en la posición 1,785 (Am) , una asparagina en la posición 1 , 811 (Am), una prolina en la posición 1,824 (Am), una fenilalanina en la posición 1 , 864 (Am) , una cisteína o glicina en la posición 1,999 (Am), una cisteína o arginina en la posición 2,027 (Am), una glicina en la posición 2, 039 (Am) , una asparagina en la posición 2, 041 (Am) , una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am), una valina en la posición 2 , 059 (?/?,) , una leucina en la posición 2,01 (Am), una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2, 075 (Am), una glicina o treonina en la posición 2,018(Am), una fenilalanina en la posición 2,079 (Am) , un ácido glutámico o eliminación en la posición 2 , 080 (Am) , una eliminación en la posición 2, 081 (Am), una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2,088 (Am), un ácido glutámico en la posición 2,095 (Am), una alanina o serina en la posición 2, 096 (Am) , y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2, 098 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una prolina en la posición 1,786 (Am) y una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición 1,781 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una prolina en la posición 1,786 (Am) y una glicina en la posición 1 , 785 (Am . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una prolina en la posición 1,786 (Am) y una asparagina en la posición 1, 811 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una prolina en la posición l,786 (Am; y una prolina en la posición 1, 824 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una prolina en la posición 1,786 (Am) y fenilalanina en la posición 1, 864 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una prolina en la posición 1,186 (Am) y una cisteína o glicina en la posición 1,999 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una prolina en la posición 1,186 (Am) y una cisteína o una arginina en la posición 2,027 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una prolina en la posición 1,786 (Am) y una glicina en la posición 2, 039 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una prolina en la posición 1,786 (Am; y una asparagina en la posición 2, 041 (A ;. En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una prolina en la posición l,786(Am; y fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una prolina en la posición 1,786 (Am) y una valina en la posición 2 , 059 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una prolina en la posición 1,786 (Am) y una leucina en la posición 2, 074 (Am . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una prolina en la posición 1,786 (Am) y una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2,015(Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una prolina en la posición 1,786 (Am) y una glicina o treonina en la posición 2,078 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una prolina en la posición 1,786 (Am) y una fenilalanina en la posición 2,079 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una prolina en la posición 1,786 (Am) y un ácido glutámico o eliminación en la posición 2 , 080 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una prolina en la posición 1,786 (Am) y una eliminación en la posición 2 , 81 {Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una prolina en la posición l,786(Am) y una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2 , 088 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una prolina en la posición 1,786 (Am) y un ácido glutámico en la posición 2,095 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una prolina en la posición 1,186 (Am) y una alanina o serina en la posición 2,096 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una prolina en la posición 1,186 (A ) y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisterna, o serina en la posición 2 , 098 (Am).
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 1, 811 (Am) y en una o más posiciones de aminoácido adicionales. Las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención típicamente tendrán una asparagina en la posición 1,811 (Am). Además, las enzimas de esta modalidad también comprenderán una o más de una leucina, treonina, una valina, o alanina en la posición l,181(Am), una glicina en la posición 1, 785 (Am) , una prolina en la posición 1,786 (Am) , una prolina en la posición 1, 824 (Am), una fenilalanina en la posición 1,864 (Am), una cisteína o glicina en la posición 1,999 (Am), una cisteína o arginina en la posición 2,021 (Am), una glicina en la posición 2,039 (Am) , una asparagina en la posición 2, 041 (Am), una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am), una valina en la posición 2,059 (Am), una leucina en la posición 2,014(Am), una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2 , 015 (Am), una glicina o treonina en la posición 2,018(Am), una fenilalanina en la posición 2,019 (Am), un ácido glutámico en la posición 2 , OSO (Am), una eliminación en la posición 2, OSO (A ), una eliminación en la posición 2, 081 (Am) , una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, istidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2,088 (Am), un ácido glutámico en la posición 2,095(Amj, una alanina o serina en la posición 2,096 (Am), y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2,098 (Am). En una modalidad, una aceti1 -Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 1,811 (Am) y una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición l,181(Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 1, il (Am) y una glicina en la posición 1,185 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 1, 811 (Am) y una prolina en la posición l,186(Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 1, Sil (Am) y una prolina en la posición 1, 824 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 1 , 811 (Am) y fenilalanina en la posición 1,864 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 1, 811 (Am) y una cisteína o glicina en la posición 1,99 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 1,811 (Am) y una cisteína o una arginina en la posición 2,027 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 1,811 (Am) y una glicina en la posición 2,039(Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 1,811 (Am) y una asparagina en la posición 2,041(A/n/). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 1, 811 (Am) y fenilalanina , isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición l,811(Am) y una valina en la posición 2, 059 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 1, 11 (Am) y una leucina en la posición 2, 074 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición l,811(Am) y una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2, 075 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 1, 811 [Am) y una glicina o treonina en la posición 2 , 018 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 1, 811 (Am) y una fenilalanina en la posición 2, 079 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 1 , 811 (Am) y un ácido glutámico o eliminación en la posición 2,080 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 1, 811 (Am) y una eliminación en la posición 2,081(Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 1, 811 (Am) y una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2, 088 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 1, 811 (Am) y un ácido glutámico en la posición 2, 095 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 1, 11 (Am) y una alanina o serina en la posición 2,096 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 1, 811 (Am) y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteina, o serina en la posición 2, 098 (Am).
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 1, 824 (Am) y en una o más posiciones de aminoácido adicionales. Las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención típicamente tendrán una prolina en la posición 1, 824 (Am). Además, las enzimas de esta modalidad también comprenderán una o más de una leucina, treonina, una valina, o alanina en la posición 1 ,1 1 (A ), una glicina en la posición 1,785 (Am) , una prolina en la posición 1,786 (Am) , una asparagina en la posición 1 ,811 (Am), una fenilalanina en la posición 1,864 (Am), una cisteína o glicina en la posición 1,999 (Am), una cisteína o arginina en la posición 2,021 (Am), una glicina en la posición 2 , 039 (Am) , una asparagina en la posición 2, 041 (Am). , una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am) , una valina en la posición 2,059 (Am), una leucina en la posición 2,01 (Am), una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2 , 075 (Am) , una glicina o treonina en la posición 2, 078 (Am) , una fenilalanina en la posición 2,019 (Am), un ácido glutámico en la posición 2 ,080 (Am) , una eliminación en la posición 2,080 (Am), una eliminación en la posición 2 , 081 (Am), una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2,088 (Am) , un ácido glutámico en la posición 2 , 095 (Am), una alanina o serina en la posición 2,096 (Am), y- una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2,098 (Am) .
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 1 , 8 64 (Am) y en una o más posiciones de aminoácido adicionales. Las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención típicamente tendrán una fenilalanina en la posición 1 , 8 64 (Am) . Además, las enzimas' de esta modalidad también comprenderán una o más de una leucina, treonina, una valina, o alanina en la posición 1 , 781 (AJTI^ , una glicina en la posición 1 , 785 (Am), una prolina en la posición 1 , 186 (Am), una asparagina en la posición 1 , 811 (Am), una prolina en la posición 1 , 824 (Am), una cisteína o glicina en la posición 1 , 999 (Am), una cisteína o arginina en la posición 2,027 (A ) , una glicina en la posición 2 , 03 9 (Am), una asparagina en la posición 2,041 (Am) , una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2 , 049 (Am), una valina en la posición 2 , 059 (Am), una leucina en la posición 2 , 014(Am), una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2, 075 (Am) , una glicina o treonina en la posición 2, 078 (Am) , una fenilalanina en la posición 2,079 (Am) , un ácido glutámico en la posición 2 , 080 (Am), una eliminación en la posición 2 , 08 0 (Am), una eliminación en la posición 2 , 081 (AmJ , una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2, 088 (Am), un ácido glutámico en la posición 2,095 (Am) , una alanina o serina en la posición 2,096 (Am), y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2 , 098 (Am).
En una modalidad, una acetil -Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 1,999 (Am) y en una o más posiciones de aminoácido adicionales. Las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención típicamente tendrán una cisteína o glicina en la posición 1, 999 (Am). Además, las enzimas de esta modalidad también comprenderán una o más de una leucina, treonina, valina, o alanina en la posición 1,781 (Am) , una glicina en la posición 1, 785 (Am) , una prolina en la posición 1,786 (Am) , una asparagina en la posición 1 , 11 (Am), una prolina en la posición 1,82 (Am) , una fenilalanina en la posición 1,864 (A ), una cisteína o arginina en la posición 2,021 (Am), una glicina en la posición 2,039 (Am), una asparagina en la posición 2,041 (Am) , una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2, 049 (Am) , una valina en la posición 2, 059 (Am) , una leucina en la posición 2, 074 (Am) , una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2, 075 (Am) , una glicina o treonina en la posición 2,018(Am), una fenilalanina en la posición 2, 079 (Am) , un ácido glutámico en la posición 2 , 080 (Am), una eliminación en la posición 2 , 080 (Am) , una eliminación en la posición 2,081(Am , una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2 , 088 (Am), un ácido glutámico en la posición 2 , 095 (Am), una alanina o serina en la posición 2 , 096 (Am), y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2 , 098 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o glicina en la posición 1,999 (Am) y una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición 1, 781 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o glicina en la posición 1 , 999 (Am) y una glicina en la posición 1 , 185 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o glicina en la posición 1 , 999 (Am) y una prolina en la posición 1 , 186 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o glicina en la posición 1 , 999 (Am) y tiene una asparagina en la posición 1 , 811 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o glicina en la posición 1 , 999 (Am) y una prolina en la posición 1 , 24 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o glicina en la posición 1 , 999 (Am) y fenilalanina en la posición 1,864 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteina o glicina en la posición 1,999 (Am) y una cisteina o una arginina en la posición 2,021 {Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteina o glicina en la posición 1,999 (Am) y una glicina en la posición 2 , 039 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteina o glicina en la posición l, 999(Amj y una asparagina en la posición 2, 041 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteina o glicina en la posición 1,999 (Am) y una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2 , 049 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteina o glicina en la posición 1,999 (Am) y una cisteina o una valina en la posición 2 , 059 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteina o glicina en la posición 1, 999 (Am) y una leucina en la posición 2,014(Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteina o glicina en la posición 1,999 (Am) y una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2,015(Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteina o glicina en la posición 1,999 (Am) y una glicina o treonina en la posición 2 , 078 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteina o glicina en la posición 1 , 999 (Am) y una fenilalanina en la posición 2, 07 (Am) . En una modalidad, una aceti1 -Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o glicina en la posición 1, 999 {Am) y un ácido glutámico o eliminación en la posición 2,080 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o glicina en la posición 1 , 999 (Am) y una eliminación en la posición 2, 081 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o glicina en la posición 1 , 999 (Am) y una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2 , 088 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o glicina en la posición 1 , 999 [Am) y un ácido glutámico en la posición 2 , 095 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o glicina en la posición 1 , 999 (Am) y una alanina o serina en la posición 2 , 096 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o glicina en la posición 1 , 999 (Am) y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2,098 (Am) .
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2,021 (Am) y en una o más posiciones de aminoácido adicionales. Las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención típicamente tendrán una cisteína o arginina en la posición 2,021 (Ara). Además, las enzimas de esta modalidad, también comprenderán una o más de una leucina, treonina, una valina, o alanina en la posición 1, 781 {Am) , una glicina en la posición 1,185 (Am), una prolina en la posición 1,186 (Am), una asparagina en la posición 1, 811 (Am), una prolina en la posición 1 , 24 (Am), una fenilalanina en la posición 1,864 (Am), una cisteína o glicina en la posición 1, 999 (Am), una glicina en la posición 2,039 (Am), una asparagina en la posición 2 , 041 (Am) , una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am), una valina en la posición 2,059 (Am), una leucina en la posición 2,014(Am), una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2,015 (Am), una glicina o treonina en la posición 2 ,018 (Am) , una fenilalanina en la posición 2,019 (Am), un ácido glutámico en la posición 2 , 080 (Am), una eliminación en la posición 2,080 (Am) , una eliminación en la posición 2, 081 (A ), una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2,088 (Am), un ácido glutámico en la posición 2, 095 (Am), una alanina o serina en la posición 2,096 (Am), y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2, 098 {Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o arginina en la posición 2,021 (Am) y una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición 1, 181 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o arginina en la posición 2,027 (Am) y una glicina en la posición l,185(Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o arginina en la posición 2,021 (Am) y una prolina en la posición l,-186(Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o arginina en la posición 2,021 (Am) y tiene una asparagina en la posición 1, 11 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o arginina en la posición 2,027(AmJ y tiene a prolina en la posición 1,824 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o arginina en la posición 2,021 (Am) y tiene a fenilalanina en la posición 1,864 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o arginina en la posición 2,021 (Am) y una cisteína o glicina en la posición 1 , 999 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o arginina en la posición 2,021 (Am) y tiene una glicina en la posición 2,039 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o arginina en la posición 2, 027 (Am) y una asparagina en la posición 2, 041 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o arginina en la posición 2,021 (Am) y una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o arginina en la posición 2,027(AmJ y tiene a valina en la posición 2,059 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o arginina en la posición 2, 027 (Am) y una leucina en la posición 2, 074 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o arginina en la posición 2, 027 (Am) y una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2 , 075 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o arginina en la posición 2,027 (Am) y una glicina o treonina en la posición 2, 078 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o arginina en la posición 2,027 (A ) y una fenilalanina en la posición 2 , 079 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o arginina en la posición 2,027 (Am) y un ácido glutámico o eliminación en la posición 2, 080 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o arginina en la posición 2,027(Am y una eliminación en la posición 2, 081 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o arginina en la posición 2, 027 (Am) y una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2,088 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o arginina en la posición 2,021 (Am) y un ácido glutámico en la posición 2, 095 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o arginina en la posición 2,027 (Am) y una alanina o serina en la posición 2,096(Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una cisteína o arginina en la posición 2,021 (Am) y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2,098 (Am) .
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2,039 (Am) y en una o más posiciones de aminoácido adicionales. Las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención típicamente tendrán una glicina en la posición 2,039 (Am). Además, las enzimas de esta modalidad también comprenderán una o más de una leucina, treonina, una valina, o alanina en la posición 1,181 (Am), una glicina en la posición 1,785 (Am) , una prolina en la posición 1,186 (Am), una asparagina en la posición 1 , 811 (Am), una prolina en la posición 1, 24 (Am), una fenilalanina en la posición 1, 864 (Am) , una cisteína o glicina en la posición 1, 999 (Am) , una cisteína o arginina en la posición 2,027 (Am) , una asparagina en la posición 2, 041 (Am), una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am) , una valina en la posición 2,059 (Am), una leucina en la posición 2,01 (Am), una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2,015 (Am), una glicina o treonina en la posición 2,078 (Am) , una fenilalanina en la posición 2,079fAm , un ácido glutámico en la posición 2, 080 (Am) , una eliminación en la posición 2 , 080 (Am) , una eliminación en la posición 2, 081 (Am), una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2,088 (Am), un ácido glutámico en la posición 2, 095 (Am) , una alanina o serina en la posición 2, 096 (Am), y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2,098(AmJ.
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2, 041 (Am) y en una o más posiciones de aminoácido adicionales. Las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención típicamente tendrán una asparagina en la posición 2, 041 (Am). Además, las enzimas de esta modalidad también comprenderán una o más de una leucina, treonina, una valina, o alanina en la posición 1 ,781 {Am) , una glicina en la posición 1,785 (Am) , una prolina en la posición 1,786 (Am) , una asparagina en la posición 1, 811 (Am) , una prolina en la posición 1, 824 (Am) , una fenilalanina en la posición 1, 86 (Am) , una cisteína o glicina en la posición 1,999 (Am), una cisteína o arginina en la posición 2,027 (Am) , una glicina en la posición 2,039 (Am), una asparagina en la posición 2041 (Am) , una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am) , una valina en la posición 2,059 (Am), una leucina en la posición 2,074 (Am) , una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2, 075 (Am), una glicina o treonina en la posición 2,078 (Am), una fenilalanina en la posición 2,079 (Am), un ácido glutámico en la posición 2, 80 {Am), una eliminación en la posición 2, 080 (Am), una eliminación en la posición 2, 81 (Am), una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2, 088 (Am) , un ácido glutámico en la posición 2, 095 (Am), una alanina o serina en la posición 2,096 (Am) , y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína o serina en la posición 2,098 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 2, 041 (Am) y una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición 1,781 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 2,041 (Am) y una glicina en la posición 1,185 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 2, 41 (Am) y una prolina en la posición 1,186 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 2 ,041 (Am) y tiene una asparagina en la posición 1 , 811 [Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 2 ,041 (Am) y una prolina en la posición 1824 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 2, 041 (Am) y una fenilalanina en la posición 1864 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 2,041 (Am) y una ciste na o glicina en la posición 1,999 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 2, 041 (Am) y una cisteina o arginina en la posición 2,021 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 2, 041 (Am) y una glicina en la posición 2039 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 2, 41 (Am) y una asparagina en la posición 2, 041 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 2, 041 {Am) y una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2, 049 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 2,041(AmJ y una valina en la posición 2 , 059 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 2, 41 (Am) y una leucina en la posición 2,014(Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 2, 041 (Am) y una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2, 075 {Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 2,041(AmJ y una glicina o treonina en la posición 2, 078 {Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 2, 041 {Am) y una fenilalanina en la posición 2079 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 2,041 (Am) y un ácido glutámico o una eliminación en la posición 2080 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una asparagina en la posición 2, 04.1 (Am) y una eliminación en la posición 2081 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una isoleucina en la posición 2, 041 (Am) y una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2,088 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una isoleucina en la posición 2, 041 (Am) y un ácido glutámico en la posición 2, 095 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una isoleucina en la posición 2, 041 (Am) y una alanina o serina en la posición 2,096 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una isoleucina en la posición 2, 041 (Ain) y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2, 098 (Am).
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2,049 (Am) y en una o más posiciones de aminoácido adicionales. Las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención típicamente tendrán una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am) . Además, las enzimas de esta modalidad también comprenderán una o más de una leucina, treonina, una valina, o alanina en la posición 1 ,181 (Am) , una glicina en la posición 1,185 (Am), una prolina en la posición 1 ,786 (Am) , una asparagina en la posición 1 , 811 (Am , una prolina en la posición 1, 24 (Am), una fenilalanina en la posición 1, 64 (Am), una cisteína o glicina en la posición 1, 999 (A ) , una cisteína o arginina en la posición 2,021 (Am), una glicina en la posición 2,039 (Am) , una asparagina en la posición 2,041 (Am) , una valina en la posición 2 , 059 (Am) , una leucina en la posición 2 , 074 (Am) , una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2,015 (Am), una glicina o treonina en la posición 2 , 078 {Am) , una fenilalanina en la posición 2,019 (Am), un ácido glutámico en la posición 2 , 080 (Am) , una eliminación en la posición 2,080 (Am) , una eliminación en la posición 2,081 (Am) , una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2, 088 (Am) , un ácido glutámico en la posición 2, 095 (Am), una alanina o serina en la posición 2,096 (Am), y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2 , 09% (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am) y una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición 1 , 781 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2 , 049 (Am) y una glicina en la posición 1,185 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am) y una prolina en la posición 1,186 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am) y tiene una asparagina en la posición 1, 811 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2, 049 (Am) y una prolina en la posición 1824 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2, 049 (Am) y una fenilalanina en la posición 1864 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2, 049 (Am) y una cisteina o glicina en la posición 1, 999 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2, 049 (Am) y una cisteina o una arginina en la posición 2,027 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am) y una glicina en la posición 2039 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am) y una asparagina en la posición 2, 041 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2 , 049 (Am) y una valina en la posición 2059 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am) y una leucina en la posición 2,014(Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am) y una leucina, isoleucina metionina, o valina adicional en la posición 2,015{Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (A ) y una glicina o treonina en la posición 2,018 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am) y una fenilalanina en la posición 2079 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am) y un ácido glutámico o una eliminación en la posición 2080 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am) y una eliminación en la posición 2081 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am) y una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, serina, treonina, o valina en la posición 2 , 088 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am) y un ácido glutámico en la posición 2 , 095 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049(Am^ y una alanina o serina en la posición 2, 096 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,04.9 (Am) y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2 , 098 (Am).
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2,059 (Am) y en una o más posiciones de aminoácido adicionales. Las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención típicamente tendrán una valina en la posición 2,059 (Am) . Además, las enzimas de esta modalidad también comprenderán una o más de una leucina, treonina, una valina, o alanina en la posición 1, 181 (Am), una glicina en la posición 1,785 (Am) , una prolina en la posición 1,786 (Am) , una asparagina en la posición 1 ,811 (Am) , una prolina en la posición 1, 824 CAmJ, una fenilalanina en la posición 1, 864 (Am) , una cisteína o glicina en la posición 1,99 (Am), una cisteína o arginina en la posición 2,021 (Am), una glicina en la posición 2,039 (Am), una asparagina en la posición 2, 041 (Am), una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2 , 049 (Am) , una leucina en la posición 2,014 (Am), una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2 , 075 (Am) , una glicina o treonina en la posición 2 , 078 (Am) , una fenilalanina en la posición 2,019 (Am), un ácido glutámico en la posición 2 , OSO (Am), una eliminación en la posición 2,080 (Am) , una eliminación en la posición 2 , 081 (Am), una arginina o triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2,088 (Am) , un ácido glutámico en la posición 2 , 095 (Am), una alanina o serina en la posición 2, 096 (Am), y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2, 098 (Am).
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2,014 (Am) y en una o más posiciones de aminoácido adicionales. Las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención típicamente tendrán una leucina en la posición 2,014(Am). Además, las enzimas de esta modalidad también comprenderán una o más de una leucina, treonina, una valina, o alanina en la posición 1, 781 (Am) , una glicina en la posición 1,785 (Am) , una prolina en la posición 1,786 (Am , una asparagina en la posición 1, 811 (Am), una prolina en la posición 1, 824 (Am), una fenilalanina en la posición 1, 864 (Am), una cisteína o glicina en la posición 1,999 (Am), una cisteína o arginina en la posición 2,021 ( Am) , una glicina en la posición 2,039 (Am) , una asparagina en la posición 2,041( Am ) , una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2 , 049 ( Am) , una valina en la posición 2 , 059 (Am) , una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2,015 (Am) , una glicina o treonina en la posición 2,018 (Am) , una fenilalanina en la posición 2,019 (Am) , un ácido glutámico en la posición 2,080 (Am) , una eliminación en la posición 2,080 (Am) , una eliminación en la posición 2,081( Am) , una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2,088 (Am) , un ácido glutámico en la posición 2, 095 (Am) , una alanina o serina en la posición 2, 096 (Am) , y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2,098 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina en la posición 2,014 (Am) y una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición 1,181 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina en la posición 2,014 (Am) y una glicina en la posición 1,185 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina en la posición 2,014 (Am ) y una prolina en la posición 1,186 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina en la posición 2,074 (Am) y tiene una asparagina en la posición 1, 811 (A ). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina en la posición 2,014 (Am) y una prolina en la posición 1824 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina en la posición 2,014 (Am) y una fenilalanina en la posición 1864 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina en la posición 2,014 (Am) y una cisterna o glicina en la posición 1,999 (A ). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina en la posición 2,014(Am) y una cisteína o una arginina en la posición 2,021 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina en la posición 2, 074 (Am) y una glicina en la posición 2039 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina en la posición 2,014 (Am) y una asparagina en la posición 2,041(??t?;. En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina en la posición 2,014 (Am) y una fenilalanina, leucina o isoleucina en la posición 2,049 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina en la posición 2,014 (Am) y una valina en la posición 2059 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina en la posición 2,014 (Am) y una leucina, isoleucina metionina, o valina adicional en la posición 2,015(Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina en la posición 2,074 (A ) y una glicina o treonina en la posición 2,018(Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina en la posición 2,074 (Am) y una fenilalanina en la posición 2079 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina en la posición 2 , 074 (Am) y un ácido glutámico o una eliminación en la posición 2080 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina en la posición 2,074 (Am) y una eliminación en la posición 2081 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina en la posición 2,014 (Am) y una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, serina, treonina, o valina en la posición 2, 088 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina en la posición 2,014 (Am) y un ácido glutámico en la posición 2 , 095 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina en la posición 2, 074 (Am) y una alanina o serina en la posición 2, 096 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina en la posición 2,014 (Am) y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisterna, o serina en la posición 2, 098 (Am) .
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2,015(A ) y en una o más posiciones de aminoácido adicionales. Las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención típicamente tendrán una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2 , 075 (Am) . Además, las enzimas de esta modalidad también comprenderán una o más de una leucina, treonina, o alanina en la posición l,181{Am), una glicina en la posición 1,785 (Am) , una prolina en la posición 1,786 (Am), una asparagina en la posición 1, 811 (Am) , una prolina en la posición 1, 824 (Am), una fenilalanina en la posición l,86á(Am), una cisteína o glicina en la posición 1, 999 (Am) , una cisteína o arginina en la posición 2,027 (Am) , una glicina en la posición 2,039 (Am), una asparagina en la posición 2, 41 (A ), una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2, 049 (Am) , una valina en la posición 2 , 059 (Am) , una leucina en la posición 2,014(Am), una glicina o treonina en la posición 2,018 (A ), una fenilalanina en la posición 2 , 079 (Am) , un ácido glutámico en la posición 2,080 (Am), una eliminación en la posición 2,080(AmJ, una eliminación en la posición 2, 081 (Am) , una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2 , 088 (Am), un ácido glutámico en la posición 2, 095 (Am), una alanina o serina en la posición 2 , 096 (Am), y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteina, o serina en la posición 2 , 098 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2,015 (Am) y una leucina, una treonina, una valina, o una alanina en la posición 1, 781 {Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2,075 (Am) y una glicina en la posición l,185(Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2, 075 (Am) y una prolina en la posición 1, 786 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2, 075 (Am) y tiene una asparagina en la posición 1 , 811 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2, 075 (Am) y una cisteina o glicina en la posición 1 , 999 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2,075 (Am) y una cisteina o arginina en la posición 2,027 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2,015[Am) y una isoleucina en la posición 2 , 04 1(AmJ. En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2 , 0 7 5 (Am) y una fenilalanina , isoleucina o leucina en la posición 2 , 04 9 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2,015(Am) y una leucina en la posición 2 , 07 4 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2,015(Am) y una glicina o treonina en la posición 2,018(Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2 , 07 5 ( AÍÍ? J y una arginina o triptófano, fenilalanina , glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2, 088 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2,015 (Am) y una alanina o serina en la posición 2, 96 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2,015(Am) y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2 , 098 (Am).
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2,078 (Am) y en una o más posiciones de aminoácido adicionales. Las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención típicamente tendrán una glicina o treonina en la posición 2, 018 ( Am) . Además, las enzimas de esta modalidad también comprenderán una o más de una leucina, treonina, una valina, o alanina en la posición l,181(Am) , una glicina en la posición 1,785 (Am) , una prolina en la posición 1,786 (Am) , una asparagina en la posición 1,811 (Am) , una prolina en la posición 1,824 (Am) , una fenilalanina en la posición 1, 864 (A ) , una cisteína o glicina en la posición 1 , 999 ( Am) , una cisteína o arginina en la posición 2,027 ( Am) , una glicina en la posición 2,039 (Am) , una asparagina en la posición 2, 41 ( Am) , una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am) , una valina en la posición 2,059 (Am) , una leucina en la posición 2,014(Am) , una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2,015(Am) , una fenilalanina en la posición 2,019 (Am) , un ácido glutámico en la posición 2 , 080 (Am) , una eliminación en la posición 2,080 (Am) , una eliminación en la posición 2, 081 ( Am) , una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2,088 (Am) , un ácido glutámico en la posición 2,095 (Am) , una alanina o serina en la posición 2 , 096 (Am) , y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteina o serina en la posición 2 , 098 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina o treonina en la posición 2 , 078 (Am) y una leucina, una treonina o una alanina en la posición l,lSl{ Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina o treonina en la posición 2,018 (Am) y una glicina en la posición 1,185 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina o treonina en la posición 2,018( Am) y una prolina en la posición 1,186 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina o treonina en la posición 2,018( Am) y una asparagina en la posición 1,811 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina o treonina en la posición 2,018( Am) y una cisteina o glicina en la posición 1, 999 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina o treonina en la posición 2 , 078 ( Arr?^ y una cisteina o arginina en la posición 2 , 027 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina o treonina en la posición 2,018 (Am) y una isoleucina en la posición 2 , 041(An?J . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina o treonina en la posición 2,078 (Am) y una fenilalanina , isoleucina o leucina en la posición 2, 049 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina o treonina en la posición 2, OIS {Am) y una leucina en la posición 2,Ql (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina o treonina en la posición 2,078(AmJ y una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2, 075 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina o treonina en la posición 2,01 (Am) y una arginina, triptófano, fenilalanina , glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2, 088 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina o treonina en la posición 2,078 (Am) y una alanina o serina en la posición 2,096 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una glicina o treonina en la posición 2,078 (Am) y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2 , 098 (Am).
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2,079 (Am) y en una o más posiciones de aminoácido adicionales. Las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención típicamente tendrán una fenilalanina en la posición 2,019 (Am). Además, las enzimas de esta modalidad también comprenderán una o más de una leucina, treonina, valina, o alanina en la posición 1 ,781 (Am) , una glicina en la posición 1,785 (Am) , una prolina en la posición 1 , 786 (Am) , una asparagina en la posición l,811(.¾inj, una prolina en la posición 1, 824 (Am), una fenilalanina en la posición 1,864 (Am) , una cisteína o glicina en la posición 1,999 (Am), una cisteína o arginina en la posición 2,02 (A ), una glicina en la posición 2,039 (Am), una asparagina en la posición 2 , 041 {Am), una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am), una valina en la posición 2,059 (Am), una leucina en la posición 2, 74 (Am), una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2, 075 (Am), una glicina o treonina en la posición 2, 078 (Am) , un ácido glutámico en la posición 2, 080 {Am) , una eliminación en la posición 2, 080 {Am) , una eliminación en la posición 2 , 081 {Am) , una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2, 088 (Am), un ácido glutámico en la posición 2, 095 (Am), una alanina o serina en la posición 2 , 096 (Am) , y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2, 098 (Am) .
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2,080 (Am) y en una o más posiciones de aminoácido adicionales. Las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención típicamente tendrán un ácido glutámico o una eliminación en la posición 2 , 080 (Am) . Además, las enzimas de esta modalidad también comprenderán una o más de una leucina, treonina, valina, o alanina en la posición 1,781 (Am) , una glicina en la posición 1, 185 (Am), una prolina en la posición 1 , 786 (Am) , una asparagina en la posición 1, 811 {Am), una prolina en la posición 1, 824 (Am), una fenilalanina en la posición 1,864 (Am), una cisteína o glicina en la posición 1, 999 {Am) , una cisteína o arginina en la posición 2,027 (Am) , una glicina en la posición 2,039 (Am) , una asparagina en la posición 2, 041 {Am) , una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2, 049 (Am) , una valina en la posición 2,059 (Am), una leucina en la posición 2,014(Am), una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2, 075 {Am) , una glicina o treonina en la posición 2 , 018 (Am), una fenilalanina en la posición 2,019 (Am), una eliminación en la posición 2 , 081 (Am) , una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2,088 (AmJ, un ácido glutámico en la posición 2, 095 (Am), una alanina o serina en la posición 2,096 (Am), y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2,098 (Am) .
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2, 081 (Am) y en una o más posiciones de aminoácido adicionales. Las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención típicamente tendrán una eliminación en la posición 2, 081 (Am). Además, las enzimas de esta modalidad también comprenderán una o más de una leucina, treonina, valina, o alanina en la posición 1,781 (Am,), una glicina en la posición 1 ,785 (Am), una prolina en la posición 1,186 (Am), una asparagina en la posición 1 , 811 (Am), una prolina en la posición 1 , 824 (Am), una fenilalanina en la posición 1, 64 (Am), una cisteína o glicina en la posición 1, 999 (Am), una cisteína o arginina en la posición 2,027 (Am) , una glicina en la posición 2,039 (Am), una asparagina en la posición 2, 041 (Am) , una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am) , una valina en la posición 2 , 059 (Am) , una leucina en la posición 2,014 (Am) , una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2,015(Am), una glicina o treonina en la posición 2,018 (Am), una fenilalanina en la posición 2,019 (Am), un ácido glutámico en la posición 2,080 (Am) , una eliminación en la posición 2,080(AmJ, una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2, 088 (Am), un ácido glutámico en la posición 2,095 (Am) , una alanina o serina en la posición 2,096 (Am), y una alanina, glicina, prolina, histidina, ciste na, o serina en la posición 2,09% (Am).
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2, 088 (Am) y en una o más posiciones de aminoácido adicionales. Las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención típicamente tendrán una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2, 088 (Am) . Además, las enzimas de esta modalidad también comprenderán una o más de una leucina, treonina, valina, o alanina en la posición 1,181 (Am), una glicina en la posición 1 , 785 (Am) , una prolina en la posición 1, 786 (Am) , una asparagina en la posición 1 , 811 (Am), una prolina en la posición 1, 824 (Am), una fenilalanina en la posición 1, 86 (Am) , una cisteína o glicina en la posición 1,999 (Am), una cisteína o arginina en la posición 2 , 027 (Am) , una glicina en la posición 2,029 (Am), una asparagina en la posición 2,041 (A ) , una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am) , una valina en la posición 2, 059 (Am) , una leucina en la posición 2, 074 (Am) , una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2, 075 (Am^, una glicina o treonina en la posición 2,078 (Am), una fenilalanina en la posición 2,019 (Am), un ácido glutámico en la posición 2,080 (Am), una eliminación en la posición 2 , OSO (Am), una eliminación en la posición 2 , 081 (Am), un ácido glutámico en la posición 2,095 (Am), una alanina o serina en la posición 2,096 (Am) , y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2 , 098 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2,088 (Am) y una leucina, una treonina, valina, o una alanina en la posición 1,181 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una arginina, triptófano, fenilalanina , glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2,088 (Am) y una glicina en la posición 1,785 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2, 88 (Am) y una prolina en la posición 1, 786 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2,088 (Am) y una asparagina en la posición 1, 811 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una arginina, triptófano, fenilalanina , glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2,088 (Am y una cisteína o glicina en la posición 1,999 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una arginina o triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2,088 (Am) y una cisteína o arginina en la posición 2,027 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2,088 (Am) y una isoleucina en la posición 2 , 041 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2,088 (Am) y una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2, 088 (Am) y una leucina en la posición 2, 074 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2, 88 (Am) y una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2,01b(Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2, 088 (Am) y una glicina o treonina en la posición 2,078 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina,' treonina, o valina en la posición 2 , 088 (Am) y una alanina o serina en la posición 2, 096 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una arginina, triptófano, fenilalanina , glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2,088 (Am) y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2 , 098 (Am) .
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2, 95 (Am) y en una o más posiciones de aminoácido adicionales. Las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención típicamente tendrán un ácido glutámico en la posición 2,095(Am/). Además, las enzimas de esta modalidad también comprenderán una o más de una leucina, treonina, valina, o alanina en la posición l,781(Am , una glicina en la posición 1,785 (Am) , una prolina en la posición 1,786 (Am) , una asparagina en la posición 1 , 811 (Am), una prolina en la posición 1,824 (Am), una fenilalanina en la posición 1,864 (Am), una cisteína o glicina en la posición 1, 999 (Am), una cisteína o arginina en la posición 2,021 (Am), una glicina en la posición 2,039 (Am), una asparagina en la posición 2, 041 (Am), una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am) , una valina en la posición 2 , 059 (Am) , una leucina en la posición 2,014(Am), una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2,015(Am), una glicina o treonina en la posición 2,018 (Am), una fenilalanina en la posición 2, 079 (Am) , un ácido glutámico en la posición 2, 080 (Am), una eliminación en la posición 2,080 (Am), una eliminación en la posición 2, 081 (Am) , una arginina o triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2, 88 (Am), una alanina o serina en la posición 2, 096 (Am) , y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2,098 (Am) .
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2,096 (Am) y en una o más posiciones de aminoácido adicionales. Las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención típicamente tendrán una alanina o serina en la posición 2,096 (Am). Además, las enzimas de esta modalidad también comprenderán una o más de una leucina, treonina, valina, o alanina en la posición 1,781 (Am) , una glicina en la posición 1,785 (Am) , una prolina en la posición 1,786 (Am) , una asparagina en la posición 1, 811 (A ), una prolina en la posición 1, 824 (Am) , una fenilalanina en la posición 1, 864 (Am), una cisteína o glicina en la posición 1,999 (A ), una cisteína o arginina en la posición 2,027 (Am) , una glicina en la posición 2,039 (Am), una asparagina en la posición 2, 041 (Am) , una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am) , una valina en la posición 2,059 (Am), una leucina en la posición 2,014 (Am) , una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2 , 075 (Am) , una glicina o treonina en la posición 2,018 (Am), una fenilalanina en la posición 2, 079 (Am) , un ácido glutámico en la posición 2,080 (Am), una eliminación en la posición 2,080 (Am), una eliminación en la posición 2 , 081 (Am) , una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2, 88 (Am), un ácido glutámico en la posición 2, 095 (Am) , y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2,098 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una alanina o serina en la posición 2,096 (Am) y una leucina, una treonina o una alanina en la posición 1,781 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una alanina o serina en la posición 2,096 (Am) y una glicina en la posición 1 , 785 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una alanina o serina en la posición 2,096 (Am) y una prolina en la posición 1,186 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una alanina o serina en la posición 2,096 (Am) y una asparagina en la posición 1 , 811 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una alanina o serina en la posición 2,096 (Am) y una cisteína o glicina en la posición 1,999 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una alanina o serina en la posición 2,096 (Am) y una cisteína o arginina en la posición 2 , 027 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una alanina o serina en la posición 2,096 (Am) y una isoleucina en la posición 2,041(Am . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una alanina o serina en la posición 2,096 (A ) y una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una alanina o serina en la posición 2,096 (Am) y una leucina en la posición 2,014(Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una alanina o serina en la posición 2,096 (Am) y una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2 , 075 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una alanina o serina en la posición 2 , 096 (Am) y una glicina o treonina en la posición 2 , 078 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una alanina o serina en la posición 2,096 (Am) y una arginina, triptófano, fenilalanina , glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2 , 088 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una alanina o serina en la posición 2 , 09 (Am) y una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteina, o serina en la posición 2 , 098 (Am) .
En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre correspondiente en la posición de aminoácido 2,098 (Am) y en una o más posiciones de aminoácido adicionales. Las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención típicamente tendrán una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteina, o serina en la posición 2 , 98 (Am). Además, las enzimas de esta modalidad también comprenderán una o más de una leucina, treonina, valina, o alanina en la posición 1,781 (Am) , una glicina en la posición 1, 785 (Am) , una prolina en la posición 1,786 (Am) , una asparagina en la posición 1 , 811 (Am), una prolina en la posición 1,824 (Am) , una fenilalanina en la posición 1 , 64 (Am), una cisteina o glicina en la posición 1 , 999 (Am), una cisteina o arginina en la posición 2,027 (Am) , una glicina en la posición 2,039 (Am), una asparagina en la posición 2 , 041 (Am), una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049 (Am) , una valina en la posición 2, 059 (Am) , una leucina en la posición 2,014(Am), una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2,01b (Am), una glicina o treonina en la posición 2 ,018 (Am) , una fenilalanina en la posición 2,079 (Am) , un ácido glutámico en la posición 2,080 (Am), una eliminación en la posición 2, 080 (Am) , una eliminación en la posición 2, 081 (Am) , una arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2, 088 (Am) , un ácido glutámico en la posición 2, 095 (Am), y una alanina o serina en la posición 2, 96 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2, 098 (Am) y una leucina, una treonina, valina, o una alanina en la posición l,181(Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2,098 (Am) y una glicina en la posición 1,185 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2,098 (Am,J y una prolina en la posición 1,786 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2,098 (Ara) y una asparagina en la posición 1, 811 (Am). En una modalidad, una aceti1 -Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2,098[Am) y una cisteína o glicina en la posición l,999(Am,). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2,098 (Am) y una cisteína o arginina en la posición 2,021 (Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2, 098 (Am) y una isoleucina en la posición 2, 041 (AmJ. En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2,098 (Am) y una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2, 049 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2,098 (Am) y una leucina en la posición 2,014(Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2,098 (Am) y una leucina, isoleucina, metionina o valina adicional en la posición 2, 075 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una alanina, glicina, prolina, histidina, cisterna, o serina en la posición 2, 098 (Am) y una glicina o treonina en la posición 2,018{Am). En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2,098 (Am) y una arginina o triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina en la posición 2, 088 (Am) . En una modalidad, una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención tendrá una alanina, glicina, prolina, histidina, cisteína, o serina en la posición 2, 098 (Am) y una alanina o serina en la posición 2, 96 (Am).
En una modalidad, la invención incluye acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una isoleucina en la posición 2,015 (Am) y una glicina en la posición 1,993 (Am); acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una metionina en la posición 2, 075 [Am) y un ácido glutámico en la posición 2, OSO (Am); acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una metionina en la posición 2, 075 (Am) y un ácido glutámico en la posición 2,095 (Am) ; acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una glicina en la posición 2,078 (Am) y una valina en la posición 2, 04.1 [Am); acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una glicina en la posición 2,018 (Am) y una glicina en la posición 2,039 (Am) ; acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una glicina en la posición 2,078 Am y una alanina en la posición 2 , 049 (Am); acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una glicina en la posición 2,078 (Am) y una ciste na en la posición 2,049 (Am); acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una glicina en la posición 2,018 (Am) y una serina en la posición 2,049 (Am) ; acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una glicina en la posición 2,018 (Am) y una treonina en la posición 2,049 (Am); acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una glicina en la posición 2,018 (Am) y una valina en la posición 2 , 059 (Am); acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una glicina en la posición 2, 078 (A J y una fenilalanina en la posición 2 , 079 (Am) ; acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una glicina en la posición 2,018 (Am) y una prolina en la posición 2,019 (Am); y acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una glicina en la posición 2,018 (Am) y una glicina en la posición 2 ,088 (Am) .
En una modalidad preferida, la invención incluye acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una leucina en la posición 1, 781 (Am,) y una prolina en la posición 1,824 (Am) ; acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una leucina en la posición 1,781 (Am y una arginina en la posición 2027 (Am) ; y acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una glicina en la posición 2,078 (Am) y una prolina en la posición 1, 824 (Am) .
En una modalidad más preferida, la invención incluye, acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una leucina en la posición 1, 781 (Am) y una fenilalanina en la posición 2 , 049 (Am) ; acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una alanina en la posición 2 , 098 (Am) y una leucina en la posición 2 , 049 (Am); acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una alanina en la posición 2 , 098 (Am) y una histidina en la posición 2088 (Am) ; acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una alanina en la posición 2,098 (Am) y una fenilalanina en la posición 2 , 088 (Am); acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una alanina en la posición 2 , 098 (Am) y una lisina en la posición 2,088 (Am) ; acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una alanina en la posición 2,098 (Am) y una leucina en la posición 2, 088 (Am) ; acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una alanina en la posición 2 , 98 (Am) y una treonina en la posición 2, 088 (Am) ; acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una glicina en la posición 2 , 098 (Am) y una glicina en la posición 2 , 088 (Am); acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una glicina en la posición 2,098 (Am) y una histidina en la posición 2 , 088 (A ); acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una glicina en la posición 2 , 098 (Am) y una leucina en la posición 2 , 088 (Am); acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una glicina en la posición 2 , 098 (Am) y una serina en la posición 2 , 088 (Am); acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una glicina en la posición 2,098 (Am) y una treonina en la posición 2 , 088 (Am); acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una glicina en la posición 2,098 (Am) y una valina en la posición 2 , 088 (Am); acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una cisteína en la posición 2, 098 (Am) y un triptófano en la posición 2088 (Am) ; acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una serina en la posición 2, 098 (Am) y un triptófano en la posición 2088 (Am) ; y acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una eliminación en la posición 2, 080 (AmJ y una eliminación en la posición 2081 (Am) .
En una modalidad más preferida, la invención incluye acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una leucina en la posición l,181(Am) y una asparagina en la posición 2 , 04.1 {Am); acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una leucina en la posición 1,781 (Am) y una cisteína en la posición 2,027 {Am) ; acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una leucina en la posición 1,781 (Am) y una leucina en la posición 2,015 (Am); acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una leucina en la posición 1,781 (Am) y una fenilalanina en la posición 1 , 864 (Am); acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una leucina en la posición 1,181 (Am) y una alanina en la posición 2098 (Am) ; acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una leucina en la posición l,181(Am) y una glicina en la posición 2,098 (Am); acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una leucina en la posición 1,781 (Am) y una duplicidad 2,015(Am); acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una glicina en la posición 1,999 {Am) y una fenilalanina en la posición 1 , 64 (Am); acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una glicina en la posición 1, 999 (Am) e isoleucina en la posición 2 , 049 (Am); acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una glicina en la posición 1 , 999 (Am) y una leucina en la posición 2 , 015 (Am); y acetil-Coenzima A carboxilasas que tienen una glicina en la posición 1 , 999 (Am) y alanina en la posición 2 , 098 (Am).
Molécula de ácido nucleico: La presente invención también abarca moléculas de ácido nucleico que codifican toda o una porción de las enzimas acetil-Coenzima A carboxilasa descritas en lo anterior. Las moléculas de ácido nucleico de la invención pueden comprender una secuencia de ácido nucleico que codifica una secuencia de aminoácido que comprende una versión modificada de una o ambas de SEQ ID NOs : 2 y 3, en donde la secuencia se modifica de modo que la proteina codificada comprende uno o más de lo siguiente: el aminoácido en la posición 1,781 (Am) es leucina, treonina, valina, o alanina; el aminoácido en la posición 1,785 (Am) es glicina; el aminoácido en la posición 1,786 (Am) es prolina; el aminoácido en la posición 1, 811 (Am) es asparagina; el aminoácido en la posición 1,824 (Am) es prolina; el aminoácido en la posición 1,864 (Am) es fenilalanina; el aminoácido en la posición 1,999 (Am) es cisteína o glicina; el aminoácido en la posición 2 , 021 (Am) es cisteína o arginina; el aminoácido en la posición 2,039 (Am) es glicina; el aminoácido en la posición 2, 041 (Am) es asparagina; el aminoácido en la posición 2049 (Am) es fenilalanina, isoleucina o leucina; el aminoácido en la posición 2,059 (Am) es valina; el aminoácido en la posición 2 , 074 (Am) es leucina; el aminoácido en la posición 2,075 (Am) es leucina, isoleucina, metionina o valina adicional; el aminoácido en la posición 2,078 (Am) es glicina, o treonina; el aminoácido en la posición 2,079 (Am) es fenilalanina ; el aminoácido en la posición 2,080 (Am) es ácido glutámico; el aminoácido en la posición 2, 080 (Am) se elimina; el aminoácido en la posición 2,081 (Am) se elimina; el aminoácido en la posición 2,088 (Am) es arginina, triptófano, fenilalanina , glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina; el aminoácido en la posición 2, 95 (Am) es ácido glutámico; el aminoácido en la posición 2,096 (Am) es alanina, o serina; o el aminoácido en la posición 2, 098 (Am) es alanina, glicina, prolina, histidina, o serina, asi como las moléculas de ácido nucleico adicionales a toda o una porción de las secuencias codificadas. En algunas modalidades, una molécula de ácido nucleico de la invención puede codificar una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene múltiples diferencias de la acetil-Coenzima A carboxilasa de tipo silvestre como se describe en lo anterior.
En una modalidad, la presente invención abarca una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa la cual difiere de la acetil-Coenzima A carboxilasa de la planta tipo silvestre correspondiente únicamente en una de las posiciones siguientes: 1,781 (Am) , 1.185 (Am), l,186(Am), 1 ,811 (Am), l,824(Am), 1 ,864 (Am), 1, 999 (Am;, 2,021(Am), 2,039(Am), 2,041(Aiíjj, 2,049(Am), 2,059 (Am), 2, 074 (Am) , 2,015(Am), 2,078 (Am) , 2,079 (Am) , 2, 080 (Am) , 2, 081 (Am) , 2,088 (Am) , 2, 095 (Am) , 2, 096 (Am) , o 2, 098 (Am) . En una modalidad la acetil-Coenzima A carboxilasa de una planta tolerante a herbicidas de la invención diferirá únicamente en una de las posiciones siguientes: 2, 078 (Am) , 2, 088 (Am), o 2,015(Am). En una modalidad preferida la acetil-Coenzima A carboxilasa de una planta tolerante a herbicidas de la invención diferirá únicamente en una de las posiciones siguientes: 2,039 (Am), 2, 059 fAn? , 2,080 (Am), o 2, 095 (Am) . En una modalidad más preferida la acetil-Coenzima A carboxilasa de una planta tolerante a herbicidas de la invención diferirá únicamente en una de las posiciones siguientes: 1,785 (Am) , 1.186 (Am), 1, 811 (Am) , 1, 24 (Am), 1, 64 (Am), 2, 041 (Am), 2,049 (Am) , 2,014(Am), 2,019 (Am), 2, 081 (Am) , 2,096 (Am) , o 2, 098 (Am) . En una modalidad más preferida la acetil-Coenzima A carboxilasa de una planta tolerante a herbicidas de la invención diferirá únicamente en una de las posiciones siguientes: l,781(Aüi), l,999(AmJ, 2,027(Am , 2,041(Am , o 2, 096 (Am) .
En una modalidad, la presente invención abarca una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene únicamente una de las sustituciones siguientes: isoleucina en la posición 2,015 (Am), glicina en la posición 2,018 (Am), o arginina en la posición 2, 088 (Am). En una modalidad preferida, la presente invención abarca una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene únicamente una de las sustituciones siguientes: glicina en la posición 2,039 (Am), valina en la posición 2,059 (Am), metionina en la posición 2,015(Am), duplicidad de posición 2,015 (Am) (es decir, una inserción de valina entre 2 , 014 (Am) y 2,015(Am), o una inserción de valina entre la posición 2,015 (Am) y 2,016 (Am), eliminación de la posición de aminoácido 2, 088 (Am), ácido glutámico en la posición 2 , 080 (Am), eliminación de la posición 2 , 088 (Am), o ácido glutámico en la posición 2, 095 (Am) . En una modalidad más preferida, la presente invención abarca una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene únicamente una de las sustituciones siguientes: una glicina en la posición l,185(Am), una prolina en la posición 1,186 (Am), una asparagina en la posición 1, 11 (Am), una leucina en la posición 2,015 (Am), una metionina en la posición 2,015 (Am), una trenonina en la posición 2,018 (Am), una eliminación en la posición 2, 080 (Am) , una eliminación en la posición 2, 081 (Am), un triptófano en la posición 2 , 088 (Am) , una serina en la posición 2,096 (Am) , una alanina en la posición 2,096 (Am), una alanina en la posición 2,098 (Am), una glicina en la posición 2, 098 (Am), una histidina en la posición 2,098 (Am) , una prolina en la posición 2 , 098 (Am), o una serina en la posición 2, 098 (Am). En una modalidad más preferida, la presente invención abarca una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene únicamente una de las sustituciones siguientes: una leucina en la posición 1, 781 {Am), una treonina en la posición l,781(Amj, una valina en la posición 1,181 (Am), una alanina en la posición 1,181 (Am), una glicina en la posición 1, 999 (Am), una cisteína en la posición 2 , 027 (Am) , una arginina en la posición 2 , 021 (Am) , una asparagina en la posición 2,041 (Am), una valina en la posición 2, 041 (Am), una alanina en la posición 2, 096 (Am) , y una serina en la posición 2, 096 (Am) .
En una modalidad, una molécula de ácido nucleico de la invención puede codificar una acetil-Coenzima A carboxilasa que comprende una leucina, treonina, valina, o una alanina en la posición 1,181 (Am) y una cisteína o glicina en la posición 1,999 (A ). En una modalidad, una molécula de ácido nucleico de la invención puede codificar una acetil-Coenzima A carboxilasa que comprende una leucina, treonina, valina, o una alanina en la posición 1,181 (Am) y una cisteína o arginina en la posición 2,021 (Am). En una modalidad, una molécula de ácido nucleico de la invención puede codificar una acetil-Coenzima A carboxilasa que comprende una leucina, treonina, valina, o una alanina en la posición 1,781 (Am) y una asparagina en la posición 2, 041 {Am) . En una modalidad, una molécula de ácido nucleico de la invención puede codificar una acetil-Coenzima A carboxilasa que comprende una leucina, treonina, valina, o una alanina en la posición 1,181 [Am) y una fenilalanina, isoleucina o leucina en la posición 2,049(Am). En una modalidad, una molécula de ácido nucleico de la invención puede codificar una acetil-Coenzima A carboxilasa que comprende una leucina, treonina, valina, o una alanina en la posición l,181[Am) y una leucina o isoleucina en la posición 2,015(Am). En una modalidad, una molécula de ácido nucleico de la invención puede codificar una acetil-Coenzima A carboxilasa que comprende una leucina, treonina, valina, o una alanina en la posición 1,181 (Am) y una glicina en la posición 2,018(Am). En una modalidad, una molécula de ácido nucleico de la invención puede codificar una acetil-Coenzima A carboxilasa que comprende una leucina, treonina, valina, o una alanina en la posición 1, 781 (AmJ y una arginina en la posición 2 , 088 (Am) . En una modalidad, una molécula de ácido nucleico de la invención puede codificar una acetil-Coenzima A carboxilasa que comprende una leucina, treonina, valina, o una alanina en la posición 1,181 (Am) y una alanina en la posición 2, 096 [A ) . En una modalidad, una molécula de ácido nucleico de la invención puede codificar una acetil-Coenzima A carboxilasa que comprende una leucina, treonina, valina, o una alanina en la posición l,781(Am) y una alanina en la posición 2 , 098 (Am) . En una modalidad, una molécula de ácido nucleico de la invención puede codificar una acetil-Coenzima A carboxilasa que comprende una leucina, treonina, valina, o una alanina en la posición 1, 781 (Am) , una cisteína en la posición 2,027 (Am), y una asparagina en la posición 2, ^1 (Am). En una modalidad, una molécula de ácido nucleico de la invención puede codificar una acetil-Coenzima A carboxilasa que comprende una leucina, treonina, valina, o una alanina en la posición 1 , 781 (Am) , una cisterna en la posición 2,027 (Am) , una asparagina en la posición 2,041(Am), y una alanina en la posición 2 , 096 (Am).
En una modalidad, la invención incluye, una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una isoleucina en la posición 2,01b (Am) y una glicina en la posición 1,999 (Am); una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una metionina en la posición 2,075 (Am) y un ácido glutámico en la posición 2,0^0 (Am); una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una metionina en la posición 2,015(Am) y un ácido glutámico en la posición 2,095(AmJ; una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una glicina en la posición 2,01Q(Am) y una valina en la posición 2,0 l(Am); una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una glicina en la posición 2,018 (Am) y una glicina en la posición 2,039 (Am); una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una glicina en la posición 2, 078 (Am) y una alanina en la posición 2,049 (Am) ; una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una glicina en la posición 2,01B(Am) y una ciste na en la posición 2 , 049 (Am) ; una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una glicina en la posición 2,018 (Am) y una serina en la posición 2 , 049 (Am) ; una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una glicina en la posición 2,018 (Am) y una treonina en la posición 2,049 (Am); una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una glicina en la posición 2,018 (Am) y una valina en la posición 2, 059 (Am) ; una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una glicina en la posición 2,018 (A ) y una fenilalanina en la posición 2,019 (Am); una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una glicina en la posición 2, 078 (Am) y una prolina en la posición 2,019 (Am); o una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una glicina en la posición 2,018(Am) y una glicina en la posición 2,088 (Am) .
En una modalidad preferida, la invención incluye una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una leucina en la posición 1,181 (Am) y una prolina en la posición 1,324 (Am); una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una leucina en la posición 1,181 (Am) y una arginina en la posición 2027 (Am) ; o una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una glicina en la posición 2,018 (Am) y una prolina en la posición 1, 824 (Am).
En una modalidad más preferida, la invención incluye una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una leucina en la posición 1,181 (Am) y una fenilalanina en la posición 2,049 (Am); una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una alanina en la posición 2,098(AmJ y una leucina en la posición 2, 049 (Am); una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una alanina en la posición 2, 098 (Ara y una histidina en la posición 2088 (TLmJ; una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una alanina en la posición 2,098 (Am) y una fenilalanina en la posición 2,088 (Am); una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una alanina en la posición 2,098 (Am) y una lisina en la posición 2 , 088 (Am); una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una alanina en la posición 2 , 098 (Am) y una leucina en la posición 2 , 088 (Am); una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una alanina en la posición 2 , 098 (Am) y una treonina en la posición 2 , 088 (Am) ; una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una glicina en la posición 2 , 098 (Am) y una glicina en la posición 2 , 088 (Am) ; una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una glicina en la posición 2 , 098 (Am) y una histidina en la posición 2 , 088 (Am); una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una glicina en la> posición 2 , 098 (Am) y una leucina en la posición 2 , 088 (Am); una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una glicina en la posición 2 , 098 (Am) y una serina en la posición 2 , 088 (Am); una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una glicina en la posición 2 , 098 (Am) y una treonina en la posición 2 , 088 (Am); una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una glicina en la posición 2 , 098 (Am) y una valina en la posición 2 , 088 (Am) ; una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una ciste na en la posición 2 , 098 (Am) y un triptófano en la posición 2088 (Am) ; una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una serina en la posición 2,098 (Am) y un triptófano en la posición 2088 (Am) ; o una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una eliminación en la posición 2,080 (Am) y una eliminación en la posición 2081 (Am) .
En una modalidad más preferida, la invención incluye, una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una leucina en la posición 1,781 (Am) y una asparagina en la posición 2,041 (Am); una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una leucina en la posición 1,181 (Am) y una cisteína en la posición 2,021 (Am); una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una leucina en la posición 1,781 (Am) y una leucina en la posición 2,015(Am); una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una leucina en la posición l,181(Am) y una fenilalanina en la posición 1 , 864 (Am); una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una leucina en la posición 1 ,181 (Am) y una alanina en la posición 2098 (Am) ; una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una leucina en la posición 1,781 (Am) y una glicina en la posición 2 , 98 (Am); una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una leucina en la posición 1,181 (Am) y una duplicidad 2,015 (Am); una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una glicina en la posición 1, 999 (Am) y una fenilalanina en la posición 1, 64 (Am); una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una glicina en la posición 1, 999 (Am) e isoleucina en la posición 2,049 (Am) ; una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una glicina en la posición 1, 999 (Am) y una leucina en la posición 2,015 (Am); o una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una glicina en la posición 1,999 (Am) y alanina en la posición 2, 098 (Am).
En una modalidad, la invención proporciona plantas de arroz que comprenden ácido nucleicos que codifican polipéptido de acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una o más sustituciones como se describe en lo anterior.
En una modalidad, la invención proporciona plantas clave BEP que comprenden ácido nucleicos que codifican polipéptido de acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una o más sustituciones como se describe en lo anterior.
En una modalidad, la invención proporciona plantas subclave BET que comprende ácido nucleicos que codifican polipéptido de acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una o más sustituciones como se describe en lo anterior.
En una modalidad, la invención proporciona plantas de cultivo BET que comprenden ácido nucleicos que codifican polipéptido de acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una o más sustituciones como se describe en lo anterior.
En una modalidad, la invención proporciona plantas monocotiledóneas que comprenden ácido nucleicos que codifican polipéptido de acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene una o más sustituciones como se describe en lo anterior.
Una molécula de ácido nucleico de la invención puede ser ADN, derivado del ADN genómico o ADNc, o ARN. Una molécula de ácido nucleico de la invención puede ser de origen natural o puede ser sintética. Una molécula de ácido nucleico de la invención puede encontrarse aislada, recombinante y/o mutagenizada .
En una modalidad, una molécula de ácido nucleico de la invención codifica una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa en la que el aminoácido en la posición 1,781 (Am) es leucina o alanina o es complementaria a tal molécula de ácido nucleico. Tales moléculas de ácido nucleico incluyen, pero no se limitan a, ADN genómico que sirve como una plantilla para una transcripción primario de ARN, una molécula plasmídica que codifica a la acetil-Coenzima A carboxilasa, así como un ARNm que codifica tal acetil-Coenzima A carboxilasa.
Las moléculas de ácido nucleico de la invención pueden comprender secuencias no codificadas, las cuales pueden o no transcribirse. Las secuencias no codificadas que pueden incluirse en las moléculas de ácido nucleico de la invención incluyen, pero no se limitan a, 5' y 3' UTRs, señales de poliadenilacion y secuencias regulares que controlan la expresión genética (por ejemplo, promotores) . Las moléculas de ácido nucleico de la invención también pueden comprender secuencias que codifican péptidos de tránsito, sitios de desdoblamiento de proteasa, sitios de modificación covalente y similares. En una modalidad, las moléculas de ácido nucleico de la invención codifican una secuencia del péptido de tránsito de cloroplasto además de una secuencia que codifica una enzima de acetil -Coenzima A carboxilasa .
En otra modalidad, las moléculas de ácido nucleico de la invención pueden codificar una enzima de acetil-Coenzima A carboxilasa que tiene al menos 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o más identidad de secuencia para una versión modificada de una o ambas de la SEQ ID NOs : 2 y 3, en donde la secuencia se modifica de modo que la proteína codificada comprende uno o más de lo siguiente: el aminoácido en la posición 1, 781 (Am) es leucina, treonina, valina, o alanina; el aminoácido en la posición 1,785 (Am) es glicina; el aminoácido en la posición 1,786 (Am) es prolina; el aminoácido en la posición 1,811 (Am) es asparagina; el aminoácido en la posición 1,824 (Am) es prolina; el aminoácido en la posición 1,864 (Am) es fenilalanina; el aminoácido en la posición 1,999 (Am) es cisteina o glicina; el aminoácido en la posición 2,027 {Am) es cisteina o arginina; el aminoácido en la posición 2, 039 (Am) es glicina; el aminoácido en la posición 2, 041 (Am) es asparagina; el aminoácido en la posición 2049 (Am) es fenilalanina , leucina o isoleucina; el aminoácido en la posición 2,059 (Am) es valina; el aminoácido en la posición 2,014 (Am) es leucina; el aminoácido en la posición 2,075(Am> es leucina, isoleucina o metionina o una valina adicional; el aminoácido en la posición 2,018 (Am) es glicina, o treonina; el aminoácido en la posición 2,019 (Am) es fenilalanina; el aminoácido en la posición 2,080 (Am) es ácido glutámico; el aminoácido en la posición 2,08 (Am) se elimina; el aminoácido en la posición 2,081 (Am) se elimina; el aminoácido en la posición 2, 088 (Am) es arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina; el aminoácido en la posición 2, 095 (Am) es ácido glutámico; el aminoácido en la posición 2,096 (Am) es alanina, o serina; o el aminoácido en la posición 2,09 (A ) es alanina, glicina, prolina, histidina, o serina, así como las moléculas de ácido nucleico complementarias a toda o una porción de las secuencias codificadas .
Como se utiliza en la presente, "por ciento (%) de identidad de secuencia" se definen como el porcentaje de nucleótidos o aminoácidos en la secuencia derivada candidata idéntica con los nucleótidos o aminoácidos en la secuencia objeto (o porción especifica de la misma) , después de alinear las secuencias e introducir espacios libres, si es necesario para lograr el porcentaje máximo de identidad de secuencia, como se genera por el programa disponible BLAST en http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi con parámetros de búsqueda establecidos para valores por defecto.
La presente invención también abarca moléculas de ácido nucleico que hibridizan a las moléculas de ácido nucleico que codifican la acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención así como las moléculas de ácido nucleico que hibridizan al complemento de reserva de las moléculas de ácido nucleico que codifican una acetil-Coenzima A carboxilasa de la invención. En una modalidad, las moléculas de ácido nucleico de la invención comprenden moléculas de ácido nucleico que hibridizan a una molécula de ácido nucleico que codifica una o más de una versión modificada de una o ambas de la SEQ ID NOs : 2 y 3 , en donde la secuencia se modifica de modo que la proteína codificada comprende uno o más de lo siguiente: el aminoácido en la posición 1,781 (A ) es leucina, treonina, valina, o alanina; el aminoácido en la posición l,785(Am es glicina; el aminoácido en la posición 1,786 (Am) es prolina; el aminoácido en la posición 1, 811 (Am) es asparagina; el aminoácido en la posición 1, 824 (Am) es prolina; el aminoácido en la posición 1, 864 (Am) es fenilalanina; el aminoácido en la posición 1,999 (Am) es cisteína o glicina; el aminoácido en la posición 2,027 (Am) es cisteína o arginina; el aminoácido en la posición 2,039 (Am) es glicina; el aminoácido en la posición 2, 041 (Am) es asparagina; el aminoácido en la posición 2049 (Am) es fenilalanina, isoleucina o leucina; el aminoácido en la posición 2,059 (Am) es valina; el aminoácido en la posición 2,014 (Am) es leucina; el aminoácido en la posición 2,015(Am) es leucina, isoleucina o metionina o una valina adicional; el aminoácido en la posición 2,018(Am) es glicina, o treonina; el aminoácido en la posición 2,019 (Am) es fenilalanina; el aminoácido en la posición 2, 080 (Am) es ácido glutámico; el aminoácido en la posición 2,080 (Am) se elimina; el aminoácido en la posición 2, 081 (Am) se elimina; el aminoácido en la posición 2,088 (Am) es arginina, triptófano, fenilalanina, glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, o valina; el aminoácido en la posición 2, 095 (Am) es ácido glutámico; el aminoácido en la posición 2,096 (Am) es alanina, o serina; o el aminoácido en la posición 2, 098 (Am) es alanina, glicina, prolina, histidina, o serina, así como las moléculas de ácido nucleico complementarias para toda o una porción de las secuencias codificadas, o el complemento de reserva de tales moléculas de ácido nucleico bajo condiciones rigurosas. La rigurosidad de hibridación puede controlarse por medio de temperatura, resistencia iónica, pH, y la presencia de agentes desnaturalizantes tales como formamida durante la hibridación y lavado. Las condiciones rigurosas que pueden utilizarse incluyen aquellas definidas en Current Protocole in Molecular Biology, Vol . 1, Chap. 2.10, John Wiley & Sons, Publishers (1994) y Sambrook et al., Molecular Cloning, Cold Spring Harbor (1989) las cuales se incorporan específicamente en la presente en relación a las condiciones rigurosas de enseñanza.
Cualquiera de los mutantes descritos en lo anterior en un plásmido con una combinación de genes de interés puede utilizarse en la transformación.
En una modalidad, la presente invención proporciona vectores de expresión que comprenden moléculas de ácido nucleico que codifican cualquiera de los mutantes ACCasa descritos en lo anterior.
En una modalidad, la presente invención proporciona para el uso de ácidos nucleicos ACCasa mutante y proteínas codificadas por tales ácidos nucleicos ACCasa mutante como se describe en lo anterior como marcadores seleccionables .
En una modalidad, las moléculas de ácido nucleico en la invención abarcan oligonucleótidos que pueden utilizarse como sondas de hibridización, cebadores de secuencia, y/o cebadores PCR. Tales oligonucleótidos pueden utilizarse, por ejemplo, para determinar una secuencia de codón en una posición particular en una molécula de ácido nucleico que codifica una acetil-Coenzima A carboxilasa, por ejemplo, por PCR alelo específica. Tales oligonucleótidos pueden ser de aproximadamente 15 a aproximadamente 30, de aproximadamente 20 a aproximadamente 30, o de aproximadamente 20-25 nucleótidos en longitud.
Prueba para genes de ACCasa mutante doble "Ensayo DBLM" : (1) En una población de prueba (de, por ejemplo, al menos 12 y de preferencia al menos 20) todas las plantas de arroz que contienen 1 ó 2 copias de gen ACCasa transgénico codifican una ACCasa al menos de doble mutante (es decir, inserciones cromosómicas de 1 mínimo y 2 máximo del gen ACCasa transgénico para probarse) , en donde las plantas de arroz son re-generantes T0 ( "T-cero" ) y en paralelo con una población control de tales plantas para utilizarse como plantas testigo sin tratar; (2) Aplicación a la población de prueba en volumen de aspersión de 200 L/ha de una composición que comprende Tepraloxidim (AI) y 1% de Concentrado de Aceite de Cultivo (COC) , para proporcionan un índice de aplicación AI equivalente a 50 g/ha de Tepraloxidim (AI) ; (3) Determinar un puntaje de fítotoxicidad para cada prueba y planta testigo, basado en un sistema de valoración de daño vegetal tradicional (por ejemplo, evaluar la evidencia visual de quemadura de herbicida, cambios morfológicos de las hojas, marchitación, amarillamiento, y otras características morfológicas, de preferencia de acuerdo con una escala de valoración de daños al menos de nivel 5 típica) ; (4) Analizar los datos recolectados para determinar si al menos 75% de las plantas en la población de prueba mostraron una citotoxicidad promedio, es decir, incremento el daño con relación a las plantas testigo, de al menos más de 10%; y (5) Identificar un resultado positivo tan determinado como demostrar que la ACCasa mutante doble proporciona una AIT aceptable.
Herbicidas La presente invención proporciona plantas, por ejemplo, plantas de arroz, que son tolerantes a las concentraciones de herbicidas que normalmente inhiben el crecimiento de plantas tipo silvestre. Las plantas típicamente son resistentes a los herbicidas que interfieren con la actividad de la acetil-Coenzima A carboxilasa. Cualquier herbicida que inhibe la actividad de la acetil-Coenzima A carboxilasa puede utilizarse junto con las plantas de la invención. Ejemplos adecuados incluyen, pero no se limitan a, herbicidas ciclohexandiona, herbicidas de ariloxifenoxi-propionato, y herbicidas fenilpirazol . En algunos métodos para controlar las malezas y/o crecimiento de plantas tolerantes a herbicidas, al menos un herbicida se selecciona del grupo que consiste de setoxidim, cicloxidim, tepraloxidim, haloxifop, haloxifop-P o un derivado de cualquiera de estos herbicidas. La Tabla 1 proporciona una lista de herbicidas ciclohexandiona (DIMs, también denomina como: oxima de ciclohexano, oxima de ciclohexandiona; y CHD) que interfiere con la actividad de la acetil-Coenzima A carboxilasa y puede utilizarse junto con las plantas tolerantes a herbicida plantas de la invención. Alguien con experiencia en la técnica reconocerá que otros herbicidas en esta clase existen y pueden utilizarse junto con las plantas tolerantes a herbicida de la invención. También incluido en la Tabla 1 se encuentra una lista de herbicidas de ariloxifenoxi propionato (también denominados como ariloxifenoxi propanoato; ariloxifenoxialcanoato ; oxifenoxi; APP; AOPP; APA; APPA; FOP, observe que éstos algunas veces se escriben con el sufijo '-oico') que interfiere con la actividad de acetil-Coenzima A carboxilasa y puede utilizarse junto con las plantas tolerantes a herbicidas de la invención. Alguien con experiencia en la técnica reconocerá que otros herbicidas en esta clase existen y pueden utilizarse junto con las plantas tolerantes a herbicidas de la invención.
Tabla 1 Además de los herbicidas enlistados en lo anterior, otros inhibidores de ACCAsa pueden utilizarse junto con las plantas tolerantes a herbicidas de la invención. Por ejemplo, los herbicidas que inhiben la ACCasa de la clase fenilpirazol , también conocidos como DENs, pueden utilizarse. Un DEN ejemplar es pinoxaden, el cual es un miembro del tipo fenilpirazolin de esta clase. Las composiciones de herbicidas que contienen pinoxaden también se venden bajo las marcas Axial y Traxos .
Las composiciones herbicidas de las mismas que comprenden uno o más herbicidas que inhiben la acetil-Coenzima A carboxilasa, y opcionalmente otros A.I. agronómicos, por ejemplo, una o más sulfonilureas (SUs) seleccionadas del grupo que consiste de amidosulfuron, flupirsulfuron, foramsulfuron, imazosulfuron, yodosulfuron, mesosulfuron, nicosulfuron, tifensulfuron, y tribenuron, sales y esteres agronómicamente aceptables de los mismos, o una o más imidazolinonas seleccionadas del grupo de imazamox, imazetapir, imazapir, imazapic, combinaciones de los mismos, y sus sales y ésteres agrícolamente adecuados, pueden utilizarse en cualquier formato agronómicamente aceptable. Por ejemplo, estos pueden formularse como soluciones acuosas listas para rociarse, polvos, suspensiones; como concentrados o acuosas altamente concentradas; oleosas u otras soluciones, suspensiones o dispersiones; como emulsiones, dispersiones oleosas, pastas, partículas finas, gránulos, u otros formatos diseminables . Las composiciones herbicidas pueden aplicarse por cualquier medio conocido en la técnica que incluye, por ejemplo, aspersión, atomización, pulverizado, propagación, humectación, tratamiento de semillas, o co-siembra en combinación con las semillas. El uso de formas depende del propósito pretendido; en cualquier caso, deben asegurar la distribución más fina posible de los ingredientes activos de acuerdo con la invención.
En otras modalidades, donde el A.l. opcional incluye un herbicida de una clase diferente en la cual la o las plantas de la misma normalmente serían susceptibles, la planta para utilizarse se selecciona de entre aquellas que además comprenden un rasgo de tolerancia para tal herbicida. Tales rasgos de tolerancia adicionales pueden proporcionarse a la planta por cualquier método conocido en la técnica, por ejemplo, incluyendo técnicas de cultivo tradicional para obtener un gen de rasgo tolerante por hibridación o introgresión, de mutagénesis, y/o de transformación. Tales plantas pueden describirse como que tienen rasgos "apilados" .
Además, cualquiera de los herbicidas que inhiben la acetil-Coenzima A carboxilasa de lo anterior pueden combinarse con uno o más herbicidas de otra clase, por ejemplo, cualquiera de los herbicidas que inhiben la acetohidroxiácido sintasa, herbicidas que inhiben la EPSP sintasa, herbicidas que inhiben glutamina sintasa, herbicidas inhibidores de la biosíntesis de lípidos o pigmentos, herbicidas alteradores de la membrana celular, herbicidas inhibidores de la fotosíntesis o respiración, o herbicidas reguladores del crecimiento o inhibidores del crecimiento conocidos en la técnica. Ejemplos no limitados incluyen aquellos citados en Weed Science Society of America ' s Herbicide Handbook, 9th Edition editado por S.A. Senseman, copy right 2007. Una composición herbicida en la presente puede contener uno o más ingredientes activos agrícolas seleccionados de los fungicidas agrícolamente aceptables, fungicidas estrobilurina, insecticidas (que incluyen nematicidas) , miticidas, y moluscicidas . Ejemplos no limitados incluyen aquellos mencionados en 2009 Crop Protection Reference (www.greenbook.net), Vanee Publications .
En una modalidad de la invención, cualquiera de los herbicidas que inhiben la acetil-Coenzima A carboxilasa anteriores de lo anterior se combinan con herbicidas que muestran un daño menor al arroz, por lo que la tolerancia del arroz a tales herbicidas puede ser ópcionalmente un resultado de modificaciones genéticas de las plantas de cultivo. Ejemplos de tales herbicidas son los herbicidas imazametabenz que inhiben la acetohidroxiácido sintasa, imazamox, imazapic, imazapir, imazaquin, imazetapir, azimsulfuron, bensulfuron, clorimuron, ciclosulfamuron, etoxisulfuron, flucetosulfuron, halosulfuron, imazosulfuron, metsulfuron, ortosulfamuron, propirisulfuron, pirazosulfuron, bispiribac, pirimisulfan o penoxsulam, los herbicidas glifosato o sulfosato que inhiben la EPSP sintasa, los herbicidas glufosinato, glufosinato-P o bialafos que inhiben la glutamina sintasa, los herbicidas benfuresato, molinato o tiobencarb inhibidores de la biosintesis de lípidos, los herbicidas bentazon, paraquat, prometrin o propanil inhibidores de la fotosíntesis, herbicidas benzobiciclona, clomazona o tefuriltriona blanqueadores, los herbicidas 2,4-D, fluroxipir, MCPA, quinclorac, quinmerac o triclopir de auxina, el herbicida pendimetalin inhibidor de microtúbulo, los herbicidas anilofos, butaclor, fentrazamida, ipfencarbazona, mefenacet, pretilaclor, acetoclor, metolaclor o S-metolaclor inhibidores de VLCFA o los herbicidas carfentrazona , oxadiazon, oxifluorfen, piraclonil o saflufenacil inhibidores de protoporfirinogen-IX-oxidasa .
En una modalidad de la invención, cualquiera de los herbicidas que inhiben la acetil-Coenzima A carboxilasa anteriores se combinan con herbicidas que muestran un daño menor a los cereales tales como el trigo, cebada o centeno, por lo que los cereales tolerantes a tales herbicidas pueden opcionalmente ser un resultado de las modificaciones genéticas de las plantas de cultivo. Ejemplos de tales herbicidas son herbicidas imazametabenz , imazamox, imazapic, imazapir, imazaquin, imazetapir, amidosulfuron, clorsulfuron, flucetosulfuron, flupirsulfuron, yodosulfüron, mesosulfuron, metsulfuron, sulfosulfuron, tifensulfuron, triasulfuron, tribenuron, tritosulfuron, florasulam, piroxsulam, pirimisulfan, flucarbazona, propoxicarbazona o tiencarbazona que inhiben la acetohidroxiácido sintasa, los herbicidas glifosato o sulfosato que inhiben la EPSP sintasa, los herbicidas glufosinato, glufosinato-P o bialafos, que inhiben la glutamina sintasa, los herbicidas prosulfocarb que inhiben la biosíntesis de lípidos, los herbicidas bentazon, clorotoluron, isoproturon, ioxinil, bromoxinil inhibidores de la fotosíntesis, los herbicidas diflufenican, flurtamona, picolinafen o pirasulfotóla blanqueadores, los herbicidas de aminociclopiraclor , aminopiralid, 2,4-D, dicamba, fluroxipir, MCPA, clopiralid, MCPP, o MCPP-P de auxina, los herbicidas pendimetalin o trifluralin inhibidores de los microtúbulos , el herbicida flufenacet inhibidor de la VLCFA, o los herbicidas de bencarbazona, carfentrazona o saflufenacil inhibidores de protoporfirinogen-IX-oxidasa , o el herbicida difenzoquat .
En una modalidad de la invención, cualquiera de los herbicidas que inhiben la acetil-Coenzima A carboxilasa anteriores se combinan con herbicidas que muestran un daño menor al césped, por lo que la tolerancia del césped a tales herbicidas puede opcionalmente ser un resultado de modificaciones genéticas de las plantas de cultivo. Ejemplos de tales herbicidas son los herbicidas imazametabenz , imazamox, imazapic, imazapir, imazaquin, imazetapir, flazasulfuron, foramsulfuron, halosulfuron, trifloxisulfuron, bispiribac o tiencarbazona que inhiben el acetohidroxiácido sintasa, los herbicidas glifosato o sulfosato que inhiben la EPSP sintasa, los herbicidas glufosinato, glufosinato-P o bialafos que inhiben la glutamina sintasa, los herbicidas antracina o bentazon inhibidores de la fotosíntesis, los herbicidas mesotriona, picolinafen, pirasulfotóla o topramezon blanqueadores, los herbicidas aminociclopiraclor , aminopiralid, 2,4-D, 2,4-DB, clopiralid, dicamba, diclorprop, diclorprop-P, fluroxipir, MCPA, CPB, MCPP, MCPP-P, quinclorac, quinmerac o triclopir de auxina, los herbicidas pendimetalin inhibidor de microtúbulos , los herbicidas dimetenamida , dimetenamida-P o ipfencarbazona inhibidores de VLCFA, los herbicidas saflufenacil o sulfentrazon inhibidores de protoporfirinogen-IX-oxidasa, o el herbicida indaziflam.
Además, cualquiera de los herbicidas que inhiben la acetil-Coenzima A carboxilasa anterior puede combinarse con protectores. Los protectores son compuestos químicos que evitan o reducen el daño en plantas útiles sin tener un impacto mayor sobre la acción herbicida de los herbicidas hacia las plantas no deseadas. Estos pueden aplicarse ya sea antes de la siembra (por ejemplo en los tratamientos de semillas, brotes o plántulas) o en la aplicación de pre-emergencia o la aplicación de pos-emergencia de la planta útil . Los protectores y los herbicidas anteriormente mencionados pueden aplicarse de manera simultánea o en serie.
Los protectores adecuados son por ejemplo, ácidos (quinolin-8-oxi ) acético, ácidos 1-fenil-5-haloalquil-lH-l , 2 , 4-triazol-3-carboxílieos , ácidos 1-fenil-4 , 5-dihidro-5-alquil-lH-pirazol-3 , 5-dicarboxílieos , ácidos 4 , 5-dihidro-5 , 5-diaril-3-isoxazolcarboxilicos , dicloroacetamidas , alfa-oximinofenilacetonitrilos , acetofenonoximas , 4 , 6-dihalo-2-fenilpirimidinas , amidas de N-[[4- {aminocarbonil ) fenil ] sulfonil ] -2-benzoicas , anhídrido 1,8-naftálico, ácidos 2-halo-4- (haloalquil ) -5-tiazolcarboxílieos , fosfortiolatos y N-alquil-O-fenilcarbamatos . Los ejemplos de protectores son benoxacor, cloquintocet , ciometrinil, ciprosulfamida , diclormid, diciclonon, dietolato, fenclorazol, fenclorim, flurazol, fluxofenim, furilazol, isoxadifen, mefenpir, mefenato, naftálico anhídrido, oxabetrinil, 4- (dicloroacetil ) -l-oxa-4-azaspiro [4.5 ] decano (MON4660, CAS 71526-07-3) y 2 , 2 , 5-trimetil-3- (dicloroacetil) -1, 3-oxazolidina (R-29148, CAS 52836-31-4).
En algunas modalidades, una composición herbicida de la misma puede comprender, por ejemplo, una combinación de: el o los herbicidas auxínicos, por ejemplo, dicamba; el o los inhibidores de AHAS, por ejemplo, la o las imidazolinonas y/o la o las sulfonilureas ) ; el o los inhibidores de ACCasa; el o los inhibidores de EPSPS) , por ejemplo, glifosato; el o los inhibidores de glutamina sintetasa, por ejemplo, glufosinato; el o los inhibidores de protoporfirinogen-IX oxidasa (PPO) , por ejemplo, saflufenacil ; el o los fungicidas, por ejemplo, el o los fungicidas estrobilurina tal como piraclostrobina; y similares. En algunas modalidades, una composición herbicida de la misma puede comprender, por ejemplo, una combinación del o los herbicidas auxínicos, por ejemplo, dicamba; un herbicida inhibidor de microtúbulos , por ejemplo, el o los fungicidas pendimetalina y estrobilurina tales como la o las piraclostrobinas . Una composición herbicida se seleccionará de acuerdo con las tolerancias de una planta de la misma, y la planta puede seleccionarse de entre aquellas que tienen rasgos de tolerancia apilados.
Los herbicidas individualmente y/o en combinación como se describe en la presente invención pueden utilizarse como pre-mezclas o mezclas de tanque. Tales herbicidas también pueden incorporarse en composiciones agronómicamente aceptables .
Aquellos con experiencia en la técnica reconocerán que algunos de los herbicidas y/o protectores mencionados en lo anterior son capaces de formar isómeros geométricos, por ejemplo isómeros E/Z. Es posible utilizar ambos, los isómeros puros y mezclas de los mismos, en las composiciones de acuerdo con la invención. Además, algunos de los herbicidas y/o protectores mencionados en lo anterior tienen uno o más centros de quiralidad y, como consecuencia, se presentan como enantiómeros o diastereómeros . Es posible utilizar ambos, los enantiómeros y diastereómeros puros y sus mezclas, en las composiciones de acuerdo con la invención. En particular, algunos de los herbicidas ariloxifenoxi-propionato son quirales, y algunos de ellos se utilizan comúnmente en forma enantioméricamente enriquecida o enantiopura, por ejemplo, clodinafop, cihalofop, fenoxaprop-P, fluazifop-P, haloxifop-P, metamifop, propaquizafop o quizalofop-P . Como un ejemplo adicional, el glufosinato puede utilizarse en una forma enantioméricamente enriquecida o enantiopura, también conocida como glufosinato-P .
Aquellos con experiencia en la técnica reconocerán que cualquier derivado de los herbicidas y/o protectores mencionados en lo anterior pueden utilizarse en la práctica de la invención, por ejemplo sales y ásteres agrícolamente adecuados .
Los herbicidas y/o protectores, o las composiciones herbicidas que los comprenden, pueden utilizarse, por ejemplo, en la forma de soluciones acuosas listas para rociarse, polvos, suspensiones, también acuosa altamente concentrada, oleosas u otras suspensiones o dispersiones; emulsiones, dispersiones oleosas, pastas, polvos finos, materiales para siembra a voleo, o gránulos, por medio de la aspersión, atomización, pulverización, propagación, humectación o tratamiento de la semilla o mezcla con la semilla. El uso de formas depende del propósito pretendido; en cualquier caso, deben asegurar la distribución más fina posible de los ingredientes activos de acuerdo con la invención .
Las composiciones herbicidas comprenden una cantidad efectiva de herbicidas de por lo menos uno de los herbicidas que inhiben la acetil-Coenzima A carboxilasas y potencialmente otros herbicidas y/o protectores y auxiliares que son habituales para la formulación de agentes de protección del cultivo.
Ejemplos de auxiliares habituales para la formulación de agentes de protección del cultivo son auxiliares inertes, portadores sólidos, tensioactivos (tales como dispersantes, coloides protectores, emulsificadores , agentes humectantes y espesantes), espesantes orgánicos e inorgánicos, bactericidas, agentes anticongelantes, antiespumantes , opcionalmente colorantes y, para formulaciones y adhesivos de semillas. La persona con experiencia en la técnica se encuentra lo suficientemente familiarizado con las recetas de tales formulaciones.
Ejemplos de espesantes (es decir, compuestos que imparten a las propiedades de flujo modificadas de formulación, es decir, alta viscosidad en el estado de reposo y baja viscosidad en movimiento) son polisacáridos , tales como goma de xantano (Kelzan® de Kelco) , Rhodopol® 23 (Rhone Poulenc) o Veegum® (from R.T. Vanderbilt), y también minerales en lámina orgánica e inorgánica, tales como Attaclay® (de Engelhardt) .
Ejemplos de antiespumantes son emulsiones de silicona (tal como, por ejemplo, Silikon® SRE, Wacker o Rhodorsil® de Rhodia) , alcoholes de cadena larga, ácidos grasos, sales de ácidos grasos, compuestos de organofluorina y mezclas de los mismos.
Los bactericidas pueden agregarse para estabilizar las formulaciones herbicidas acuosas. Los ejemplos de bactericidas son bactericidas basados en diclorofen y alcohol bencílico hemiformal (Proxel® de ICI o Acticide® RS de Thor Chemie y Kathon® K de Rohm & Haas) , y también derivados de isotiazolinona, tales como alquilisotiazolinonas y benzisotiazolinonas (Acticide MBS de Thor Chemie) .
Ejemplos de agentes anticongelantes son etilenglicol , propilenglicol , urea o glicerol.
Ejemplos de colorantes son ambos pigmentos moderadamente solubles en agua y tintes solubles en agua. Los ejemplos que pueden mencionarse son los tintes conocidos bajo los nombres de Rhodamin B, C.I. Pigment Red 112 y C.I. Solvent Red 1, y también pigmento azul 15:4, pigmento azul 15:3, pigmento azul 15:2, pigmento azul 15:1, pigmento azul 80, pigmento amarillo 1, pigmento amarillo 13, pigmento rojo 112, pigmento rojo 48:2, pigmento rojo 48:1, pigmento rojo 57:1, pigmento rojo 53:1, pigmento naranja 43, pigmento naranja 34, pigmento naranja 5, pigmento verde 36, pigmento verde 7, pigmento blanco 6, pigmento café 25, violeta básico 10, violeta básico 49, rojo ácido 51, rojo ácido 52, rojo ácido 14, azul ácido 9, amarillo ácido 23, rojo básico 10, rojo básico 108.
Ejemplos de adhesivos son polivinilpirrolidona, acetato de polivinilo, alcohol polivinílico y tilosa.
Auxiliares inertes adecuados son, por ejemplo, los siguientes: fracciones de aceite mineral de un punto de ebullición medio o alto, tales como queroseno y diesel, además aceites de alquitrán de hulla y aceites de origen vegetal o animal, hidrocarburos alifáticos, cíclicos u aromáticos, por ejemplo parafina, tetrahidronaftaleno, naftálenos alquilados y sus derivados, bencenos alquilados y sus derivados, alcoholes tales como metanol, etanol, propanol, butanol y cliclohexanol , cetonas tales como cliclohexanona o solventes fuertemente polares, por ejemplo aminas tales como N-metilpirrolidona, y agua.
Portadores adecuados incluyen portadores líquidos y sólidos. Los portadores líquidos incluyen por ejemplo, solventes no acuosos tales como hidrocarburos cíclicos y aromáticos, por ejemplo, parafinas, tetrahidronaftaleno , naftálenos alquilados y sus derivados, bencenos alquilados y sus derivados, alcoholes tales como metanol, etanol, propanol, butanol y cliclohexanol , cetonas tales como ciclohexanona, solventes fuertemente polares, por ejemplo, aminas tales como N-metilpirrolidona, y agua así como mezclas de los mismos. Los portadores sólidos incluyen por ejemplo, tierras minerales tales como sílices, geles de sílice, silicatos, talco, caolín, piedra caliza, cal, yeso, bole, loes, arcilla, dolomita, tierra de diatomeas, sulfato de calcio, sulfato de magnesio y óxido de magnesio, materiales sintéticos del suelo, fertilizantes tales como sulfato de amonio, fosfato de amonio, nitrato y ureas de amonio, y productos de origen vegetal, tales como harina de cereal, harina de corteza de árbol, harina de madera y harina de cáscara de nuez, polvos de celulosa, u otros portadores sólidos .
Tensioactivos adecuados (adyuvantes, agentes humectantes, espesantes, dispersantes y también emulsificadores ) son las sales de metal álcali, sales de metal alcalinotérreo y sales de amonio de ácidos sulfónicos aromáticos, por ejemplo ácidos lignosulfónicos (por ejemplo, tipos Borrespers, Borregaard) , ácidos fenolsulfónicos , ácidos naftalensulfónicos (tipos Morwet, Akzo Nobel) y ácido dibutilnaftalensulfónico (tipos Nekal, BASF AG) , y de ácidos grasos, alquil- y alquilarilsulfonatos , alquilsulfatos , lauril éter sulfatos y sulfatos de alcohol graso, y sales de hexa-, hepta- y octadecanoles sulfatadas, y también de glicol éteres de alcohol graso, condensados de naftaleno sulfonatado y sus derivados con formaldehído , condensados de naftaleno o de los ácidos naftalensulfónicos con fenol y formaldehído, polioxietileno octilfenol éter, isooctil-, octil- o nonilfenol etoxilado, alquilfenilo o tributilfenil-poliglicol éter, alcoholes de alquilaril poliéter, alcohol de isotridecilo, condensados de alcohol graso/óxido de etileno, aceite de ricino etoxilado, alquil éteres de polioxietileno o alquil éteres de polioxipropileno, poliglicol éter acetato de alcohol laurílico, ésteres de sorbitol, licores y proteínas residuales de lignosulfito proteínas desnaturalizadas, polisacáridos (por ejemplo, metilcelulosa) , almidones hidrofobicamente modificados, alcohol polivinílico (tipos Mowiol Clariant) , policarboxilatos (BASF AG, tipos Sokalan) , polialcoxilatos , polivinilamina (BASF AG, tipos Lupamina) , polietilenimina (BASF AG, tipos Lupasol), polivinilpirrolidona y copolímeros de los mismos.
Los polvos, materiales para moldeo y polvos finos pueden prepararse al mezclar o moler con concomitante los ingredientes activos junto con un portador sólido.
Los gránulos, por ejemplo gránulos recubiertos, gránulos impregnados y gránulos homogéneos, pueden prepararse al unir los ingredientes activos a los portadores sólidos.
Las formas de uso acuosas pueden prepararse a partir de concentrados de emulsión, suspensiones, pastas, polvos humectables o granulos dispersables en agua al agregar agua. Para preparar las emulsiones, pastas o dispersiones oleosas, las composiciones herbicidas, ya sea como tal o disueltas en un aceite o solvente, pueden homogenizarse en agua por medio de un agente humectante, espesante, dispersante o emulsificante . Alternativamente, también es posible preparar concentrados que comprenden compuestos activos, agentes humectante, espesante, dispersante o emulsificante y, si se desea, solvente o aceite, los cuales son adecuados para la dilución con agua.
Métodos para controlar las malezas Las plantas tolerantes a herbicida de la invención pueden utilizarse junto con un herbicida para el cual son tolerantes. Los herbicidas pueden aplicarse a las plantas de la invención utilizando cualquiera de las técnicas conocidas por aquellos con experiencia en la técnica. Los herbicidas pueden aplicarse en cualquier punto en el proceso de cultivo de la planta. Por ejemplo, los herbicidas pueden aplicarse en pre-plantación, en plantación, pre-emergencia, postemergencia o combinaciones de los mismos.
Las composiciones herbicidas de las mismas pueden aplicarse, por ejemplo, como tratamientos foliar, tratamientos del suelo, tratamientos de semilla, o mojar el suelo. La aplicación puede hacerse, por ejemplo, por medio de la aspersión, pulverización, sembrar a voleo, o cualquier otro modo útil conocido en la técnica.
En una modalidad, los herbicidas pueden utilizarse para controlar el crecimiento de las malezas que pueden estar creciendo en la cercanía de las plantas tolerantes a herbicida de la invención. En las modalidades de este tipo, un herbicida puede aplicarse a una parcela en la que plantas tolerantes a herbicida de la invención crecen en cercanía a las malezas . Un herbicida para el cual la planta tolerante a herbicida de la invención es tolerante, entonces puede aplicarse a la parcela en una concentración suficiente para eliminar o inhibir el crecimiento de la maleza. Las concentraciones de suficiente herbicida para eliminar o inhibir el crecimiento de las malezas se conocen en la técnica .
Será fácilmente aparente para alguien de experiencia ordinaria en las técnicas correspondientes que otras modificaciones adecuadas y adaptaciones para los métodos y aplicaciones descritas en la presente son obvias y pueden hacerse sin apartarse del alcance de la invención o cualquier modalidad de la misma. Habiendo descrito ahora la presente invención en detalle, la misma ser entendida más claramente mediante referencia a los siguientes ejemplos, los cuales se incluyen con la presente para propósitos de ilustración únicamente y no pretenden ser limitantes de la invención .
Uso del Cultivo de Tejido para la Selección de Herbicida Los cultivos tolerantes a herbicida ofrecen a los agricultores opciones adicionales para el control de maleza. Actualmente, existen soluciones genéticamente modificadas (GMO) disponibles en algunos sistemas de cultivo. Además, técnicas mutacionales se han utilizado para seleccionar actividades o estructuras de enzimas alteradas, que confiere resistencia a herbicida tal como las soluciones actuales CLEARFIELD de BASF. En el Arroz CLEARFIELD US, es la primera herramienta para manejar el arroz rojo en las áreas infestadas (USDA-ARS, 2006); sin embargo, el flujo genético entre arroz rojo y Arroz CLEARFIELD representa un riesgo considerable para la tolerancia AHAS desde el cruzamiento, se ha informado en hasta 170 Fl híbridos/ha (Shivrain et al, 2007). Los lineamientos de manejo incluyen, entre muchos otros aspectos, alternancia sin Arroz CLEARFIELD puede limitar la penetración en el mercado del Arroz CLEARFIELD. La generación del arroz cultivado con tolerancia a diferentes modos de graminicidas de acción (MO A) reduciría estos riesgos y proporcionaría más herramientas para el control de la maleza.
Una enzima que ya es un objetivo para muchos herbicidas gramíneas diferentes es la acetil CoA carboxilasa (ACCasa, EC 6.4.1.2), la cual cataliza la primera etapa comprometida en la biosíntesis de ácido graso (FA) . Los herbicidas de tipo ariloxifenoxipropionato (APP o FOP) y cliclohexandiona (CHD o DIM) se utilizan post-emergencia en cultivos de dicotiledóneas, con excepción de cihalofop-butilo el cual se selecciona en arroz para controlar el crecimiento de malezas. Además, la mayoría de estos herbicidas relativamente tienen una persistencia baja en el suelo y proporcionan cultivadores con flexibilidad para controlar la maleza y rotación del cultivo. Las mutaciones en esta enzima se sabe que confieren tolerancia a conjuntos específicos de FOPS y/o DIMS (Liu et al, 2007; Delye et al, 2003, 2005).
El cultivo de tejido ofrece una estrategia alternativa en la que grupos simples de callos representan cientos o incluso miles de células, cada una de las cuales puede seleccionarse de un rasgo novedoso tales como resistencia a herbicida (Jain, 2001). Las mutaciones que surgen espontáneamente en el cultivo de tejido o en algún tipo de inducción pueden seleccionarse directamente en eventos de cultivo y mutados seleccionados.
La explotación de la variación somaclonal que se encuentra inherente en las técnicas de cultivo de tejido in vitro ha sido una estrategia exitosa para generar selectivamente mutaciones que confieren tolerancia DIM y FOP en maíz (Somers, 1996; Somers et al., 1994; Marshal et al., 1992; Parker et al, 1990) y en grama de agua (Heckart et al, 2009) . En el caso del maíz, las eficiencias para producir eventos regenerables pueden calcularse. En Somers et al, 1994, las plantas de maíz resistentes a setoxidim se obtuvieron utilizando la selección de cultivo de tejido. Estos utilizaron 100 g de callos y obtuvieron 2 líneas tolerantes siguiendo la selección gradual a 0.5, 1.0, 2.0, 5.0 y 10 µ? de setoxidim. Un índice de mutación calculado en su protocolo sería de 2 líneas/100 g de callos o 0.02 líneas/g .
En el caso de grama de agua, Heckert utiliza directamente un nivel elevado de setoxidim y recuperó 3 líneas regenerables en aproximadamente 10,000 piezas de callos o, esencialmente, un índice de 0.03%. Aunque no es comparable, estos números más tarde se utilizarán en comparación con la mutagénesis de cultivo de tejido de arroz, en el trabajo con maíz, los callos constantemente se desecharon en la etapa de selección con únicamente el callo de crecimiento transferido; sin embargo, en el caso de grama de agua, todos los callos se transfirieron a cada subcultivo. Los genes ACCasa como marcadores seleccionables : La transformación de planta involucra el uso de genes marcadores seleccionables para identificar las pocas células transformadas o individuales a partir del grupo más grande de células no transferidas o individuales. Los genes marcadores selecciónateles existen, aunque son limitados en número y capacidad. Los genes marcadores alternativos se requieren para apilar los rasgos. Además, el uso de genes a marcadores seleccionables que confieren un rasgo agronómico (es decir, resistencia a herbicidas) a menudo es deseable. La presente invención describe genes ACCasa como marcadores seleccionables que pueden agregarse al actual conjunto limitado de genes marcadores seleccionables disponibles. Cualquiera de los mutantes descritos en la presente puede introducirse en un plásmido con un gen de interés y transformar toda la planta, tejido de planta o célula vegetal para utilizarse como marcadores seleccionables. Se describe un método detallado en el ejemplo 7 a continuación. Los marcadores seleccionables de las invenciones pueden utilizarse para producir eventos que confieran la tolerancia a campos para un grupo determinado de herbicidas y otro donde la protección cruzada se ha mostrado (es decir, FOP's).
Los sistemas modernos de transformación de planta de alto rendimiento requieren un sistema de marcador seleccionable eficaz; sin embargo, existe un número limitado disponible que es aceptable en el mercado. Por lo tanto, los sistemas de selección los cuales también transportan un rasgo comercial son siempre valiosos. El sistema descrito en la presente es un sistema de selección eficaz en/para las células vegetales las cuales también codifican un rasgo de tolerancia a herbicida adecuado para usar en cualquiera de los cultivos monocotiledóneos .
En una modalidad, la presente invención proporciona un método para seleccionar una planta transformada que comprende introducir una molécula de ácido nucleico que codifica un gen de interés en una célula vegetal, en donde la molécula de ácido nucleico codifica además una mutante de acetil-Coenzima A carboxilasa (ACCasa) en la que la secuencia de aminoácido difiere de una secuencia de aminoácido de una ACCasa de una planta de arroz del tipo silvestre correspondiente en una posición de aminoácido; y haciendo contacto las células vegetales con un inhibidor de ACCasa para obtener la planta transformada, en donde tal ACCasa mutante transfiere en la planta transferida tolerancia a herbicida incrementada en comparación con la variedad de tipo silvestre correspondiente de la planta cuando se expresa en la misma.
En una modalidad, la presente invención proporciona un método de reproducción asistida por marcadores, el método comprende reproducir cualquier planta de la invención con una segunda planta; y haciendo contacto con la progenie de la etapa de reproducción con un inhibidor de ACCasa para obtener la progenie que comprende tal ACCasa mutante; donde la ACCasa mutante confiere en la planta de progenie tolerancia a herbicidas incrementada a diferencia de la segunda planta.
En una modalidad, un gen de ACCasa simple se une al gen simple de interés. El gen de ACCasa puede unirse corriente arriba o corriente abajo del gen de interés.
En una modalidad, la presente invención proporciona el uso de un ácido nucleico y proteina de ACCasa como se describe en lo anterior en los ensayos de diagnóstico. Los usos de diagnósticos para marcadores seleccionables descritos en la presentes pueden emplearse para identificar el gen ACCasa. Los métodos diagnósticos pueden incluir metodología PCR, ensayos de proteínas, sondas etiquetadas y cualquiera de otros métodos diagnósticos estándares conocidos en la técnica .
EJEMPLOS EJEMPLO 1 Condiciones del cultivo de tejido Un ensayo de mutagénesis de cultivo de tejido in vítro se ha desarrollado para aislar y caracterizar el tejido de planta (por ejemplo, tejido de arroz) que es tolerante a los herbicidas que inhiben la acetil-Coenzima A carboxilasa, por ejemplo, tepraloxidim, cicloxidim, y setoxidim. El ensayo utiliza la variación somaclonal que se encuentra en el cultivo del tejido in vitro. Las mutaciones espontáneas derivadas de la variación somaclonal pueden mejorarse por la mutagénesis química y selección subsecuente en una manera gradual, sobre concentraciones incrementadas de herbicida.
La presente invención proporciona condiciones de cultivo de tejido para estimular el crecimiento del callo de arroz embriogénico, friable que es regenerable. Se iniciaron callos a partir de 4 diferentes cultivos de arroz que abarcan tanto la variedad Japónica (Taipei 309, Nipponbare, Koshihikari) e Indica (Indica 1). Las semillas sin cascara se esterilizaron en la superficie en 70% de etanol durante aproximadamente 1 minuto seguido de 20% de blanqueador Clorox comercial durante 20 minutos. Las semillas se enjuagaron en agua esterilizada y plantaron en un medio de inducción de callos. Se probaron diversos medios de inducción de callo. Las listas de ingredientes para los medio probados se presentan en la Tabla 2.
Tabla 2 El medio de inducción de callo R001M se selecciona después de probar numerosas variaciones. Los cultivos se mantuvieron en la oscuridad a 30°C. El callo embriogénico se subcultivo para refrescar el medio después de 10-14 días.
EJEMPLO 2 Selección de callos tolerantes a herbicida Una vez que las condiciones de cultivo de tejido se determinaron, el establecimiento adicional de las condiciones de selección se establecieron a través del análisis del tejido sobreviviente en las curvas de inactivación con cicloxidim, tepraloxidim, setoxidim (Figura 1) o haloxifop (no mostrado) . Se realizó una consideración cuidadosa de la acumulación de herbicidas en el tejido, así como su persistencia y estabilidad en las células y en el medio de cultivo. A través de estos experimentos, una dosis subletal se ha establecido durante la selección inicial del material mutado .
Después del establecimiento de la dosis inicial de setoxidim, cicloxidim, tepraloxidim, y haloxifop en el medio de selección, los tejidos se seleccionaron en una manera gradual al incrementar la concentración del inhibidor ACCasa con cada transferencia hasta que las células se recuperan de ese crecimiento de manera vigorosa en la presencia de dosis tóxicas (véase Figura 2). Los callos resultantes se subcultivaron además cada 3-4 semanas para R001M con agente selectivo. Más de 26,000 callos se sometieron para seleccionar de 4-5 subcultivos hasta que la presión selectiva estaba por encima de los niveles tóxicos como se determinó por las curvas de inactivación y observaciones de cultivo continuo. Los niveles de toxicidad se determinaron ser de 50 µ? de setoxidim, 20 µ? de cicloxidim, 2.5 µ? de tepraloxidim (Figura 1) y 10 µ? de haloxifop (no mostrado) .
Alternativamente, los cultivos líquidos iniciados a partir del callo en MS711R (Tabla 2) con agitación ligera y subcultivos semanales. Una vez que los cultivos líquidos se establecieron, el agente de selección se agregó directamente al matraz en cada subcultivo. Las siguientes 2-4 rondas de selección de líquido, los cultivos se transfirieron a filtros sobre un medio R001M sólido para el crecimiento adicional.
EJEMPLO 3 Regeneración de plantas El tejido tolerante se regeneró y caracterizó de manera molecular por las mutaciones de secuencia genética ACCasa y/o bioquímicamente durante la actividad ACCasa alterada en la presencia del agente selectivo.
Siguiendo con la selección herbicida, los callos se regeneraron utilizando un régimen de medios de R025M durante 10 - 14 días, R026M durante aproximadamente 2 semanas, R327M hasta que los brotes formados se desarrollaron bien, y R008S se encontraban bien arraigados para transferir al invernadero (Tabla 2) . La regeneración se realizó en la luz. No se incluyo un agente de selección durante la regeneración.
Una vez que se establecieron raíces fuertes, los regenerantes M0 se trasplantaron al invernadero en parcelas cuadradas de 10.16cm (4") en una mezcla de arena, suelo arcilloso de NC Sandhills, y Redi-earth (2:4:6) suplementadas con yeso. Los trasplantes se mantuvieron bajo un envase de plástico transparente hasta que se adaptaron a las condiciones de invernadero (aproximadamente 1 semana) . El invernadero se estableció a un ciclo de día/noche de 27°C/21°C (80°F/70°F) con lámparas de sodio de alta presión de 600W administrando luz para mantener una duración de día de 14 horas. Las plantas se regaron 2-3 veces al día dependiendo del clima y se fertilizaron diariamente. Las plantas de arroz seleccionadas para el incremento de la semilla se trasplantaron en macetas de galón. Conforme se acerca la madurez de las plantas y se preparan para retirarse, las macetas se colocaron en pequeñas superficies planas inundadas para mantener mejor el suministro de agua y nutrientes. Las plantas se monitorearon para conocer los insectos y sanidad vegetal y control bajo los estándares de prácticas de Gestión Integrada de Plagas.
EJEMPLO 4 Análisis de secuencia El tejido de hoja se recolecto a partir de plantas clonadas separadas para trasplantar y analizar de manera individual. El ADN genómico se extrajo utilizando un equipo de Sistema de Planta de ADN Magnético Wizard® 96 (Promega, Patentes Estadounidenses Nos. 6,027,945 y 6,368,800) como se dirige por el fabricante. El ADN aislado se amplificó por PCR utilizando un cebador directo y uno inverso.
Cebadores Directos: OsACCpU5142: 5 ' -GCAAATGATATTACGTTCAGAGCTG-3 ' (SEQ ID NO: 7) OsACCpU5205: 5 ' -GTTACCAACCTAGCCTGTGAGAAG-3 ' (SEQ ID NO: 8) Cebadores Inversos : OsACCpL7100: 5 ' -GATTTCTTCAACAAGTTGAGCTCTTC-3 ' (SEQ ID NO: 9) OsACCpL7054: 5 ' -AGTAACATGGAAAGACCCTGTGGC-3 ' (SEQ ID NO: 10) La amplificación de PCR se realizó utilizando Polimerasa de ADN de Hotstar Taq (Qiagen) utilizando un programa de termociclado descendiente como sigue: 96°C durante 15 minutos, seguido por 35 ciclos (96°C, 30 segundos; 58°C - 0.2°C por ciclo, 30 segundos; 72°C, 3 minutos y 30 segundos), 10 minutos a 72°C.
Los productos de PCR se verificaron para la concentración y tamaño de fragmento mediante la electroforesis de gel agarosa. Los productos de PCR desfosforilizados se analizaron mediante la secuencia directa utilizando los cebadores de PCR (DNA Landmarks) . Los archivos de rasgo de cromatograma (.scf) se analizaron durante la mutación en relación a Os05g0295300 utilizando el Vector NTI Advance 10™ (Invitrogen) . En base a la información de secuencia dos mutaciones se identificaron en varios individuos. 11,781 (Am)L y D2 , 078 ( Am)G se presentaron en el estado de heterocigoto . El análisis de secuencia se realizó en los cromatogramas representativos y el alineamiento AlignX correspondiente con configuraciones predeterminadas y editadas para convocar los picos secundarios .
Las muestras inconsistentes con una mutación de ACCasa se probaron por aspersión para tolerancia y descartadas como cimarrones. De manera sorprendente, la mayoría de las líneas recuperadas fueron heterocigotos durante la mutación II , 781 (Am) L y eventos resistentes se generaron en todos los genotipos probados utilizando cicloxidim o setoxidim: Indical (=18 líneas), Taipei 309 (=14 líneas) , Nipponbare (=3 líneas) , y Koshihikare (=6 líneas) . Una línea fue de heterocigotos durante una mutación D2 , 078 fAmJG. La línea heterocigoto de D2 , 078 (Am)G presentó atrofia en el crecimiento con hojas delgadas, mientras que los heterocigotos de II , 781 (Am) L variaron en apariencia, aunque la mayoría parecían normal en relación a su genotipo parental . Cimarrones diversos se recuperaron y confirmaron mediante la secuenciacion y prueba de aspersión; sin embargo, los resultados de secuenciacion de la región sensible a herbicidas de ACCasa revelo que la mayoría de los mutantes tolerantes fueron heterocigotos para una Il,781(Am)L, mutación A a T (Véase Tabla 3). Una línea, OsARWlOlO, fue heterocigoto para una D2,078(Am)G, mutación A a G. A la fecha, todas las plantas recuperadas faltantes de una mutación ACCasa han sido sensibles a la aplicación de herbicidas en invernadero.
Tabla 3 : Genotipo de las Líneas de Ar Recuperadas mediante la Selección de Cultivo de Tejido EJEMPLO 5 Demostración de tolerancia a herbicidas Los mutantes y cimarrones seleccionados se transfirieron a pequeñas parcelas. Los cultivos de tipo silvestre y de 3 variedades de arroz rojo se germinaron a partir de la semilla para servir como controles.
Después de aproximadamente 3 semanas de posttrasplante, los regenerantes MO se rociaron utilizando un aspersor de rastreo con 400-1600 g ai/ha cicloxidim (BAS 517H) administrado con 0.1% de aceite de semilla metilatado. Después de que las plantas se han adaptado a las condiciones de invernadero, un subconjunto se roció con 800 g ai/ha de cicloxidim. Una vez rociadas, las plantas se mantuvieron en condiciones de sequía durante 24 horas antes de regarse y fertilizarse nuevamente. Las plantas rociadas se fotografiaron y valoraron para el daño de herbicida en 1 (Figura 3) y 2 semanas después del tratamiento (Figura 4) . Ningún daño se observó en las plantas que contenían la mutación de heterocigotos 11,181 (Am)L¡ mientras que las plantas control y cimarrones del cultivo de tejido (plantas regeneradas negativas para las mutaciones secuenciadas ) se dañaron fuertemente después del tratamiento (Figuras 3 y 4). Las Figuras 5-15 proporcionaron ácido nucleico y/o secuencias de aminoácido de las enzimas de acetil-Coenzima A carboxilasas a partir de diversas plantas. La Figura 17 proporciona una gráfica que muestra los resultados del arroz mutante contra los diversos inhibidores de ACCasa.
EJEMPLO 6 Selección de herbicidas utilizando el cultivo de tej ido Se seleccionó el medio para uso y curvas de inactivación desarrolladas, como se especifica en lo anterior. Para la selección, se utilizaron técnicas diferentes. Ya sea que una selección gradual se aplicó, a un nivel letal inmediato de herbicidas se aplicó. En cualquier caso, todos los callos se transfirieron para cada nueva ronda de selección. Las selecciones fueron de 4-5 ciclos de cultivos con 3-5 semanas para cada ciclo. Los callos se colocaron dentro de membranas de nilón para: facilitar la transferencia (hojas de 200 mieras de poro, Biodesign, Saco, Maine) . Las membranas se cortaron para ajusfar 100x20 irati placas de Petri y se colocaron en el autoclave antes de utilizar 25-35 callos (promedio en peso/callos siendo 22mg) se utilizaron en cada placa. Además, un conjunto de callos se sometieron para seleccionar un medio de cultivo líquido con subcultivos semanales seguido mediante la selección adicional en el medio semisólido.
Las líneas mutantes se seleccionaron utilizando cicloxidim o setoxidim en 4 genotipos de arroz diferentes. Las eficiencias de mutantes obtenidos fue elevada ya sea en base al porcentaje de callos que dio lugar a una línea mutante regenerable o el número de líneas como se determinó por los gramos de tejido utilizados. En general, la frecuencia de mutación comparada con la grama de agua es 5 veces y en comparación con el maíz es de 2 veces. En algunos casos, esta diferencia es mucho mayor ( > 10 veces) como se muestra en la Tabla 4 siguiente.
Tabla 4 Si los datos se analizan utilizando los criterios de selección, es posible observar que la selección de cilcoxidim contribuyen a un índice mayor de mutantes aislados que el setoxidim, como se muestra en la Tabla 5 .
Tabla 5 Utilizando este análisis, el índice para el cicloxidim es casi de 10 veces mayor que cualquiera de los informes anteriores utilizando la selección de setoxidim, mientras que los índices que utilizan la selección de setoxidim son similares a aquellos informados previamente. Además, el 68% de las líneas se confirmaron como mutantes cuando la selección fue el cicloxidim comparado con el 21% de las líneas cuando la selección fue el setoxidim. Los incrementos parecen provenir del uso de cicloxidim en lugar de setoxidim como un agente de selección. Además, el uso de membranas hace que la transferencia de callos sea significativamente más fácil que mover cada pieza de manera individual durante los subcultivos. Más de 20 mutantes se obtuvieron. La fertilidad parece ser mayor con excepción de un mutante que tuvo una mutación conocida para provocar una desventaja de adaptabilidad (D2 , 078 ( Am) G) .
EJEMPLO 7 El uso de genes ACCasa mutantes como marcadores seleccionables en la transformación de planta Métodos : Se llevó a cabo la transformación de callo de arroz indical y Nipponbare esencialmente como se describe en Hiei y Komari (2008) con la excepción de las sustituciones del medio como se especifica (véase la tabla de medio adjunta para mayor detalle) . El callo se indujo en el medio R001M durante 4-8 semanas antes de usar en la transformación. La Agrobacteria utilizada fue LBA4404 (pSBl ) (Ishida et al. 1996) transformada con RLM185(L. Mankin, no publicado: contienen DsRed y una AHAS mutante de selección) , un gen ACC que contiene 11781 (Am)L, gen ACC que contiene 11781 (Am)L y W2027C, gen ACC que contiene 11781 (Am)L y 12041 (A ) N, o gen ACC que contiene 11781 (Am)A o de tipo silvestre el cual también contiene un gen AHAS mutante para la selección. El crecimiento de Agrobacteria durante 1-3 días en el medio sólido se suspendió en un medio M-LS-002 y OD66o ajustados aproximadamente 0.1. El callo se sumergió en la solución de Agrobacteria durante aproximadamente 30 minutos. El líquido se eliminó, y después el callo se movió a un papel filtro para co-cultivar sobre un medio ce de arroz semi-sólido. El co-cultivo se realizo durante 3 días en la obscuridad a 24°C. Los filtros que contenían el callo de arroz se transfirieron directamente al medio R001M que contiene Timentin durante 1-2 semanas para recuperar y cultivarse en la obscuridad a 30°C. El callo se subdividió en el medio R001M fresco con Timentin y suministro con ???µ? de Imazethapry, 10µ? de Cicloxidim o 2.5µ? Tepraloxidim. Después de 3-4 semanas, el callo se transfirió a un medio de selección fresco. Después de otras 3-4 semanas, el callo de crecimiento se transfirió a un medio fresco para permitir el crecimiento antes del análisis Taqman. El análisis Taqman se realizó para los terminadores Nos y se condujo para proporcionar una confirmación molecular de la naturaleza transgénica de los callos seleccionados. El crecimiento de los callos transgénicos se midió con diversos agentes de selección por medio de los callos subcultivados sobre el medio que contiene ya sea ??µ? de Cicloxidim o Haloxifop, 2.5µ? de Tepraloxidim o ???µ? de Imazethapry. El tamaño de los callos se midió a partir de las imágenes escaneadas siguiendo el subcultivo inicial y después de aproximadamente 1 mes de crecimiento.
La transformación de embriones inmaduros de maíz se realizó esencialmente como se describe por Lai et al (presentada) . En resumen, los embriones inmaduros se co-cultivaron con las mismas cepas de Agrobacterium utilizadas para la transformación de arroz suspendida en el medio M-LS-002 para un OD560 de 1.0. El co-cultivo se realizó en el medio CC de maíz durante 3 días en la oscuridad a 22°C. Los embriones se eliminaron a partir del co-cultivo y se transfirieron al medio M-MS-101 durante 4-7 días a 27°C. Los embriones de respuesta se transfirieron al medio M-LS-202 para la selección de Imazetapir o el medio M-LS-213 suministrado ya sea con ?µ? de Cicloxidim o 0.75µ? de Tepraloxidim. Los embriones se cultivaron durante 2 semanas y el callo de crecimiento se transfirió a una segunda roda de selección utilizando el mismo medio que el anterior excepto que la selección de Cicloxidim se incrementó a 5µ?. Los callos seleccionados se transfirieron a los medios M-LS-504 o M-LS-513 suministrados con ya sea 5µ de Cicloxidim o 0.75µ? de Tepraloxidim y se movieron a la luz (16hr/8hr al día/noche) para la regeneración. Los brotes aparecieron entre las 2-3 semanas y se transfirieron a cajas de plantcon que contienen ya sea M-LS-618 o M-LS-613 suministrado ya sea con 5µ? Cicloxidim o 0.75µ? de Tepraloxidim para el desarrollo de los brotes adicionales y enrai zamiento . Las muestras de hojas se presentaron para el análisis Taqman. Las plantas positivas se transfirieron al suelo para el crecimiento y generación de semilla. En el segundo conjunto de experimentos, las condiciones fueron idénticas excepto que la selección de Tepraloxidim disminuyo a 0.5µ? durante la regeneración y formación de brote y raíz. En el tercer conjunto de experimentos, el Haloxifop también se probó como un agente de selección. En estos experimentos, se utilizo ?µ? de producción para la selección Resultados y Discusión: Los callos transgénicos se obtuvieron a partir de los experimentos de transformación de arroz Indical utilizando el gen ACC que contiene 11781 (A ) L y 2027(Ara)C, y gen ACC que contiene 11781 (AmjL y 12041 (Am)N. Se obtuvo un callo a partir del gen ACC que contiene 11781 (Am)L y W2027(Am)C seguido de la selección de Tepraloxidim y 3 callos se obtuvieron a partir del gen ACC que contiene 11781 (Am) L y 12041 (Am) . Se obtuvo un callo a partir del gen ACC que contiene 11781 ( Am) L y 12041 (Am) utilizando la selección de Cicloxidim. El Taqman Nos mostró que todos estos callos fueron transgénicos . Los callos seleccionados para el crecimiento bajo diversos agentes de selección incluyendo Imazethapry (Búsqueda - P) para el marcador seleccionable a AHAS mutante.
Como puede observarse en la Tabla 6, las construcciones de mutante doble permitieron el crecimiento tanto en Cicloxidim y Tepraloxidim además de Haloxifop. Los niveles utilizados en estos experimentos de crecimiento son inhibitorios para el material del tipo silvestre.
Tabla 6: Crecimiento del callo Indical transgénico en diversos medios de selección. El crecimiento se midió como un % de cambio en el tamaño seguido de 1 mes de cultivo en el medio de selección.
Los resultados a partir del primer conjunto de experimentos con maíz revelan que el único del mutante doble puede utilizarse para seleccionar la resistencia al Cicloxidim o resistencia al Cilcoxidim o Tepraloxidim en una eficiencia relativamente elevada (Figura 16) .
Las eficiencias entre los agentes de selección fue relativamente comparable en estos experimentos con quizás una ligera disminución en la eficacia general con el mutante simple en el Cicloxidim en comparación con la selección de Búsqueda. Sin embargo, el mutante doble puede tener una eficacia ligeramente incrementada. El índice de escape - el porcentaje de eventos supuestos no confirmados - fue inferior para Cicloxidim o Tepraloxidim. Además, bajo las condiciones descritas, es posible diferenciar entre los mutantes simples y dobles utilizando la selección de Tepraloxidim.
Resultados similares se han obtenido en el segundo conjunto de experimentos (no mostrado) . En el tercer conjunto de experimentos, el Haloxifop también es un marcador seleccionable eficaz para utilizar en la transformación con cualquiera de los mutantes simples o dobles (no mostrados) .
El mutante simple es útil para la transformación de alta eficacia utilizando la selección de Cicloxidim o Haloxifop. También debería ser útil para otros compuestos relacionados tales como Sethoxidim. El mutante doble es útil para estos agentes de selección con la adición que puede utilizarse de Tepraloxidim. El mutante simple y doble puede utilizarse en una transformación de dos etapas en la que el mutante simple puede diferenciarse de la doble con la selección de Tepraloxidim. En combinación con otros marcadores de selección BASF actuales, estos proporcionan dos opciones más para las transformaciones de alta eficacia de monocotiledóneas y maíz en particular.
Los fenotipos tolerantes a herbicidas como se describe en la presente también se han mostrado por medio de las plantas de arroz tolerantes e inhibidoras de ACCasa de las mismas, en el campo bajo el tratamiento con cicloxidim de 600 g/ha (datos no mostrados) .
Aunque la invención anterior se ha descrito en algunos detalles para propósitos de claridad y entendimiento, se apreciará por alguien con experiencia en la técnica a partir de la lectura de esta descripción que diversos cambios en la forma y detalle pueden realizarse sin apartarse del alcance verdadero de la invención y reivindicaciones anexas. Todas las patentes y publicaciones citadas en la presente se incorporan en su totalidad en la presente por referencia.

Claims (58)

REIVINDICACIONES
1. Una planta monocotiledónea que expresa una aceti1-Coenzima A carboxilasa (ACCasa) mutagenizada o recombinante en la cual la secuencia de aminoácido difiere de una secuencia de aminoácido de una acetil-Coenzima A carboxilasa de una planta monocotiledónea de tipo silvestre correspondiente en dos o más posiciones de aminoácido, en donde una de las dos o más posiciones de aminoácido es 1 ,781 {Am), y en donde la ACCasa confiere a la planta tolerancia a herbicida incrementada cuando se compara con la variedad de tipo silvestre correspondiente de la planta cuando se expresa en la misma, en donde por lo menos dos de las diferencias proporcionan la tolerancia a herbicida incrementada .
2. La planta de la reivindicación 1, en donde la planta expresa una ACCasa que comprende además una sustitución en la posición de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de 1,864 (Am), 2,021 (Am), 2,041 (Am), 2,049 (Am), 2,075 (Am), 2,018(Am), y 2,098(Am).
3. La planta de la reivindicación 2, en donde: a. la diferencia en la posición l,181(Am) es una sustitución con leucina, alanina, valina, treonina; b. la diferencia en la posición 1,864 (Am) es una sustitución con fenilalanina; c. la diferencia en la posición 2,027 (Am) es una sustitución con cisteína o arginina; d. la diferencia en la posición 2, 041 (Am) es una sustitución con asparagina o valina; e. la diferencia en la posición 2,049 (Am) es una sustitución con fenilalanina, isoleucina, o leucina; f. la diferencia en la posición 2,075(Amj es una sustitución con metionina, leucina, isoleucina, o valina, en donde cuando el aminoácido en la posición 2015 (Am) es valina, existe una inserción de un valina adicional entre la posición 2, 075 (Am) y 2, 076 (Am) ; g. la diferencia en la posición 2,078(Am^ es una sustitución con lisina, glicina, o treonina, y h. la diferencia en la posición 2,098 (Am) es una sustitución con alanina, glicina, prolina, histidina, serina o cisteína.
4. La planta de la reivindicación 2, en donde: a. el aminoácido en la posición l,181(Am) es leucina, y el aminoácido en la posición 1,864 (Am) es fenilalanina; b. el aminoácido en la posición 1 ,181(Am) es leucina, y el aminoácido en la posición 2,021 (Am) es cisteína; c. el aminoácido en la posición 1 ,1 1 (A ) es leucina, y el aminoácido en la posición 2, 041 (Am) es asparagina; d. el aminoácido en la posición l,181(Am) es leucina, y el aminoácido en la posición 2,049 (Am) es fenilalanina; e. el aminoácido en la posición 1 ,1B1 (Am) es leucina, y el aminoácido en la posición 2,075 (Am) es leucina o valina, en donde cuando el aminoácido 2,075(Am) es valina, existe una inserción de una valina adicional entre la posición 2,075(Am) y 2,076(Am).
5. La planta de la reivindicación 2, en donde el aminoácido en la posición 1, 781 (An? es leucina, y el aminoácido en la posición 2,021 (Am) es cisteína; f. el aminoácido en la posición l,lBl(Am) es leucina, y el aminoácido en la posición 2,018 (Am) es glicina; Y g. el aminoácido en la posición l,181{Am) es leucina, y el aminoácido en la posición 2,098 (Am) es alanina o glicina.
6. Una planta monocotiledónea que expresa una acetil-Coenzima A carboxilasa (ACCasa) mutagenizada o recombinante en la cual la secuencia de aminoácido difiere de una secuencia de aminoácido de una acetil-Coenzima A carboxilasa de una planta monocotiledónea de tipo silvestre correspondiente en dos o más posiciones de aminoácido, en donde una de las dos o más posiciones de aminoácido es 1,999 (Am), y en donde la ACCasa confiere a la planta tolerancia a herbicida incrementada cuando se compara con la variedad de tipo silvestre correspondiente de la planta cuando se expresa en la misma, en donde por lo menos dos de las diferencias proporcionan la tolerancia a herbicida incrementada .
7. La planta de la reivindicación 6, en donde la planta expresa una ACCasa que comprende además una sustitución en las posiciones de aminoácido seleccionadas del grupo que consiste de 1,864 (Am) , 2,049 (Am) , 2,015{Am), y 2 , 098 (Am) .
8. La planta de la reivindicación 7, en donde: a. la diferencia en la posición 1, 999 (Am) es una sustitución con cisteína, o glicina; b. la diferencia en la posición 1 , 864 (Am) es una sustitución con fenilalanina; c. la diferencia en la posición 2,04.9 (Am) es una sustitución con fenilalanina, isoleucina, o leucina; d. la diferencia en la posición 2,075(Amj es una sustitución con metionina, leucina, isoleucina, o valina, en donde cuando el aminoácido en la posición 2075 (Am) es valina, existe una inserción de un valina adicional entre la posición 2,015 (Am) y 2,076 (Am ; y e. la diferencia en la posición 2, 098 {Am) es una sustitución con alanina, glicina, prolina, histidina, serina o cisteína
9. La planta de la reivindicación 7 , en donde a. el aminoácido en la posición 1, 999 (Am) es glicina, y el aminoácido en la posición 1,864 (Am) es fenilalanina . b. el aminoácido en la posición 1, 999 (Am) es glicina, y el aminoácido en la posición 2,049 (Am) es isoleucina . c. el aminoácido en la posición 1,999 (Am) es glicina, y el aminoácido en la posición 2,015 (Am) es leucina d. el aminoácido en la posición 1,999 (A m) es glicina, y el aminoácido en la posición 2, 098 (Am) es alanina.
10. Una planta monocotiledonea que expresa una acetil-Coenzima A carboxilasa (ACCasa) mutagenizada o recombinante en la cual la secuencia de aminoácido comprende sustituciones en dos o más posiciones de aminoácido cuando se compara con una secuencia de aminoácido de una acetil-Coenzima A carboxilasa de una planta monocotiledonea de tipo silvestre correspondiente, en donde las posiciones de aminoácido se seleccionan del grupo que consiste de 1 , 181 [A ), 2,049 (Am) , 2,080 (Am) , 2, 088 (Am) , y 2, 098 (Am) , y en donde la ACCasa confiere a la planta tolerancia a herbicida incrementada cuando se compara con la variedad de tipo silvestre correspondiente de la planta cuando se expresa en la misma, en donde por lo menos dos de las sustituciones proporcionan la tolerancia a herbicida incrementada.
11. La planta de la reivindicación 10, en donde las sustituciones son en las posiciones de aminoácido seleccionadas del grupo que consiste de 1,781 (Am) y 2,049(Am); 2,049(Am y 2 , 098 (Am) ; y 2,088(An? y 2 , 098 ( Am .
12. La planta de la reivindicación 11, en donde el aminoácido en la posición 1,781 (Am) es leucina, y 2, 049 (A m) es fenilalanina .
13. La planta de la reivindicación 10, en donde: a. las sustituciones son en las posiciones de aminoácido 2,049 (Am) y 2, 098 (Ara . b. el aminoácido en la posición 2,049 (Am) es leucina y 2,098 íAmj es alanina. c. el aminoácido en posición 2, 080 (Am) se elimina y el aminoácido en la posición 2, 081 (Am) se elimina. d. las sustituciones son en las posiciones de aminoácido 2,088 (Am) y 2,098 (Am . e. el aminoácido en la posición 2,088 (Am) se selecciona del grupo que consiste de fenilalanina , glicina, histidina, lisina, leucina, serina, treonina, valina, y triptófano; y f. el aminoácido en la posición 2, 093 (Am) se selecciona del grupo que consiste de alanina, glicina, serina, y cisteína.
14. Una planta monocotiledónea que expresa una acetil-Coenzima A carboxilasa (ACCasa) mutagenizada o recombinante en la cual la secuencia de aminoácido comprende sustituciones en dos o más posiciones de aminoácido cuando se compara con una secuencia de aminoácido de una acetil-Coenzima A carboxilasa de una planta monocotiledonea de tipo silvestre correspondiente, en donde las sustituciones se seleccionan del grupo que consiste de: a. el aminoácido en la posición 1, 181 (Am) es leucina y el aminoácido en la posición en 1,824 (Am) es prolina; b. el aminoácido en la posición 1,181 (Am) es leucina y el aminoácido en la posición 2,027 (Am) es arginina; y c. el aminoácido en la posición 1,824 (Am) es prolina y el aminoácido en la posición 2,078(Am) es glicina, donde al menos dos de las sustituciones proporcionan la tolerancia a herbicida incrementada.
15. Una planta monocotiledonea que expresa una ACCasa plastídica mutagenizada o recombinante, en donde una mutación en dos o más posiciones de aminoácido en la ACCasa plastídica confiere a la planta tolerancia a herbicida incrementada cuando se compara con a variedad de tipo silvestre correspondiente de la planta monocotiledonea cuando se expresa en la misma.
16. La planta de la reivindicación 15, en donde las dos o más posiciones de aminoácido son a. seleccionados del grupo que consiste de l,781(Am , 1,785 CAm;, 1,186 (Am), 1, 811 (Am), 1,824 (Am), 1, 864 (Am), 1 , 999 (Am) , 2,027 (Am), 2,039 (Am), 2,041 (Am), 2,049 (Am) , 2 , 059 (Am) , 2,014(A ), 2,015(Am), 2,078 (Am) , 2, 19 (Am), 2,080(??? , 2, 081 (Am), 2,088 (Am), 2,095(Am), 2, 096 (Am) , o 2, 98 (Am), o b. un par de eliminaciones en 2,080 (Am) y 2, 081 {Am) .
17. La planta de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, 6-9, 10-12, 14-16, en donde la ACCasa mutante es no es transgenica .
18. La planta de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-4, 6-9, 10-12, 14-16, en donde la planta es una planta ciado BEP.
19. La planta de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-4, 6-9, 10-12, 14-16, en donde la planta ciado BEP es una planta subclado BEP.
20. La planta de acuerdo con la reivindicación 19, en donde las plantas subclado BEP es una planta de cultivo de BEP.
21. Una planta de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-4, 6-9, 10-12, 14-16, en donde la planta es una planta de arroz.
22. La planta de acuerdo con la reivindicación 21, en donde la ACCasa se codifica por a ácido nucleico genómico, y comprende como su secuencia de aminoácido una SEQ ID NO: 2 modificada, en donde las secuencias modificadas comprenden las modificaciones.
23. Un método para controlar las malezas en un campo, el método comprende: cultivar, en un campo, la planta de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, 6-9, 10-12, y 14-22; y aplicando a las plantas y malezas en el campo un herbicida que inhibe la acetil-coenzima A carboxilasa a la cual la planta es tolerante en una cantidad que inhibe el crecimiento de una planta de tipo silvestre correspondiente, controlando así las malezas.
24. El método de acuerdo con la reivindicación 23, en donde el herbicida se selecciona del grupo que consiste de alloxidim, butroxidim, clethodim, cloproxidim, cicloxidim, setoxidim, tepraloxidim, tralcoxidim, chlorazifop, clodinafop, clofop, diclofop, fenoxaprop, fenoxaprop-P, fenthiaprop, fluazifop, fluazifop-P, haloxifop, haloxifop-P, isoxapyrifop, propaquizafop, quizalofop, quizalofop-P, trifop, pinoxaden, sales y ésteres agronómicamente aceptables de cualquiera de estos herbicidas, y combinaciones de los mismos .
25. Un método para controlar el crecimiento de malezas, que comprende: a. cruzar una planta de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, 6-9, 10-12, y 14-22 con otro germoplasma de planta, y recolectar las semillas híbridas resultantes ; b. plantar las semillas híbridas; y c. la aplicación de uno o más herbicidas que inhiben la acetil-coenzima A carboxilasas en la planta híbrida y a las malezas en la cercanía en la planta híbrida a niveles de herbicida que pueden inhibir normalmente el crecimiento de una planta de tipo silvestre.
26. Una célula vegetal de la planta de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, 6-9, 10-12, y 14-22.
27. Una parte de planta de la planta de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, 6-9, 10-12, y 14-22.
28. Una semilla producida por la planta de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, 6-9, 10-12, y 14-22.
29. Un método para producir una planta híbrida, que comprende la reproducción de la planta de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, 6-9, 10-12, y 14-22 con una segunda planta, en donde la planta híbrida muestra tolerancia a herbicida incrementada cuando se compara con la segunda planta .
30. Un producto alimenticio preparado a partir de la planta de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, 6-9, 10-12 , y 14-22.
31. Un producto para consumidor preparado a partir de la planta de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, 6-9, 10-12, y 14-22.
32. Un producto industrial preparado a partir de la planta de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, 6-9, 10-12, y 14-22.
33. Un producto veterinario preparado a partir de la planta de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, 6-9, 10-12 , y 14-22.
34. Una molécula de ácido nucleico aislada, recombinante, o mutagenizada que codifica la ACCasa como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1-4, 6-9, 10-12, y 14-22.
35. El uso de la molécula de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 34 como un marcador seleccionado.
36. Un método para tratar la planta monocotiledónea de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, 6-9, 10-12, y 14-22, que comprende poner en contacto la planta con una composición agronómicamente aceptable.
37. Un método para seleccionar una plata transformada, el método comprende: a. introducir una molécula de ácido nucleico que codifica un gen de interés en una célula vegetal, en donde la molécula de ácido nucleico además codifica una acetil-coenzima A carboxilasa (ACCasa) mutante en la cual la secuencia de aminoácido difiere de una secuencia de aminoácido de una ACCasa de una planta de arroz de tipo silvestre correspondiente en dos o más posiciones de aminoácido; y b. poner en contacto las células vegetales con un inhibidor de ACCasa para obtener la planta transformada, en donde la ACCasa mutante confiere a la planta transformada tolerancia a herbicida incrementada cuando se compara con la variedad de tipo silvestre correspondiente de la planta cuando se expresa en la misma.
38. Un método para reproducir, el método comprende: a. reproducir la planta que comprende la célula de la reivindicación 26 con una segunda planta; y b. determinar si la planta progenie expresada la ACCasa mutante; donde la ACCasa mutante confiere a la planta progenie tolerancia a herbicida incrementada cuando se compara con la segunda planta.
39. Una planta de arroz que expresa una ACCasa plastídica mutagenizada o recombinante, en donde la ACCasa comprende dos o más mutaciones de tolerancia a herbicida que inhiben ACCasa en dos o más posiciones de aminoácido en la ACCasa plastídica confiere a la planta tolerancia a herbicida incrementada cuando se compara con una variedad de tipo silvestre correspondiente de la planta de arroz cuando se expresa en la misma.
40. La planta de la reivindicación 39, en donde el aminoácido de por lo menos dos de las mutaciones son: a. seleccionada del grupo que consiste de l,7SHAm), l,185(Am), 1 , 786 (Am) , 1 , 811 (Am), 1 , 824 (Am), 1, 864 (Am), 1,999 (Am) , 2,027 (Am) , 2,039 (Am) , 2 , 041 (Am), 2,049 (Am) , 2 , 059 (Am) , 2,014(Am), 2,015(Am), 2,018(Am), 2,079 (Am), 2,080 (Am) , 2 , 081 (Am , 2,088 (Am , 2 , 095 (Am) , 2, 096 (Am; , o 2, 098 (Am), o b. un par de eliminaciones en 2,080 (Am) y 2, 081 (Am;.
41. La planta de la reivindicación 39, en donde la ACCasa mutante es no transgénica.
42. La planta de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 39 a 41, en donde la ACCasa se codifica por a ácido nucleico genómico, y comprende como su secuencia de aminoácido una SEQ ID NO: 2 modificada, en donde la secuencia modificada comprenden la modificación.
43. Un método para controlar el crecimiento de malezas dentro de la cercanía de una planta de cualquiera de las reivindicaciones 39 a 41, que comprende aplicar a las malezas y la planta una cantidad de un herbicida que inhibe la acetil-coenzima A carboxilasa que inhibe el crecimiento de una planta de tipo silvestre.
44. El método de acuerdo con la reivindicación 43, en donde el herbicida se selecciona del grupo que consiste de alloxidim, butroxidim, clethodim, cloproxidim, cicloxidim, setoxidim, tepraloxidim, tralcoxidim, chlorazifop, clodinafop, clofop, diclofop, fenoxaprop, fenoxaprop-P, fenthiaprop, fluazifop, fluazifop-P, haloxifop, haloxifop-P, isoxapyrifop, propaquizafop , quizalofop, quizalofop-P, trifop, pinoxaden, sales y ésteres agronómicamente aceptables de cualquiera de estos herbicidas, y combinaciones de los mismos .
45. Un método para controlar el crecimiento de malezas, que comprende: a . cruzar una planta de cualquiera de las reivindicaciones 39 a 41 con otro germoplasma de planta, y recolectar las semillas híbridas resultantes; b. plantar las semillas híbridas; y c. la aplicación de uno o más herbicidas que inhiben la acetil-coenzima A carboxilasa en la planta híbrida y a las malezas en la cercanía en la planta híbrida a niveles de herbicida que pueden inhibir normalmente el crecimiento de una planta de tipo silvestre.
46. Una célula vegetal de la planta de cualquiera de las reivindicaciones 39 a 41.
47. Una parte de planta de la planta de cualquiera de las reivindicaciones 39 a 41.
48. Una semilla producida por la planta de arroz de cualquiera de las reivindicaciones 39 a 41.
49. Un método para producir una planta híbrida, que comprende la reproducción de la planta de cualquiera de las reivindicaciones 39 a 41 con una segunda planta, en donde la planta híbrida muestra tolerancia a herbicida incrementada cuando se compara con la segunda planta.
50. Un producto alimenticio preparado a partir de la planta de cualquiera de las reivindicaciones 39 a 41.
51. Un producto para consumidor preparado a partir de la planta de cualquiera de las reivindicaciones 39 a 41.
52. Un producto industrial preparado a partir de la planta de cualquiera de las reivindicaciones 39 a 41.
53. Un producto veterinario preparado a partir de la planta de cualquiera de las reivindicaciones 39 a 41.
54. Una molécula de ácido nucleico aislada, recombinante, o mutagenizada que codifica la ACCasa como se describe in cualquiera de las reivindicaciones 39 a 41.
55. El uso de la molécula de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 54 como un marcador seleccionado .
56. Un método para tratar la planta de cualquiera de las reivindicaciones 39 a 41, poner en contacto la planta con una composición agronómicamente aceptable.
57. Una semilla de la planta de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, 6-9, 10-12, 14, 22, y 39-42 o la semilla de reivindicación 28 o 48, en donde la semilla se trata con una composición agronómicamente aceptable.
58. La semilla de la reivindicación 57, en done la composición agronómicamente aceptable es un inhibidor de ACCasa .
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