MX2011000455A - Anticuerpos monoclonales especificos al receptor 2 del factor de crecimiento de fibroblastos. - Google Patents

Abstract

La presente invención concierne a un anticuerpo monoclonal dirigidos receptor 2 del factor de crecimiento de fibroblastos, a una composición farmacéutica que comprende el mismo y a los métodos de tratamiento que comprende la administración de la composición de productos farmacéuticos a un paciente.

Description

ANTICUERPOS MONOCLONALES ESPECÍFICOS AL RECEP FACTOR DE CRECIMIENTO DE FIBROBLASTOS REFERENCIAS CRUZADAS A LAS SOLICITUDES RELACI Esta solicitud reivindica el beneficio bajo 119(e) de la Solicitud de Patente de EU No. 6 sentada el 7 de noviembre de 2008 y la Sol ente No. 61/164,870 presentada el 30 de marzo se incorporan en la presente en su total os los propósitos.

DECLARACIÓN DE INTERÉS GUBERNAMENTAL La invención que se describe en esta solicit parte con fondos proporcionados por Gr 01283-03, de los Institutos Nacionales de ierno de Estados Unidos tiene ciertos derecho ención.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Hay 22 miembros conocidos de la familia del cimiento de Fibroblastos (FGF) , que van en tama kDa y el intercambio de una región de núcleo ilitud, que puede agruparse en 7 subfamilias ba ilitud en actividad y en secuencia (Ornitz et oma 2:3005. lr 2001). Por ejemplo, el subgrup siste en los prototipo FGFs , FGFl (FGF ácida) y ica) ; el subgrupo de FGF4 consiste en FGF4 , FGF5 subfamilia FGF7 consiste en FGF3 , FGF7 , FGF1 ang et al., 281:15694 j. Biol . Chem. , 2006).

Una forma de FGF2 es un polipéptido de l cosilada cue consiste en 146 aminoácidos deriv cursor de aa 155 (Ornitz et al., Biol. genoma 1; Prohibición de Okada et al., int . j. Bioch l. 32:263, 2000). En SEQ ID NO: 4 de US20020 luye una secuencia ejemplar para un humano 146 queratinocitos (KGF) , que es producida por las gen mesenquimal y estimula la proliferación teliales (Finch et al., ADV. cáncer res 91:69, 2 al., j. National cáncer planta 98:812, 2006) resa en un número de órganos incluyendo pulmón, naria, aparato digestivo y piel y está implic arrollo de órganos y la reparación de herida o et al., AM j Pathol . 170:1964, 2007).

Bind, miembros de la familia, la FGF para cono tro receptores de tirosina cinasa, Receptores Crecimiento de Fibroblastos 1-4 (FGFRl-4) y sus las diversas FGFs enlazar los diferentes ferentes extensiones (Zhang et al., 281:15694 em. , 2006) . Se proporciona una secuencia de prot R2 humana en, por ejemplo, GenBank Locus AF48 R consta de un dominio extracelular (ECD) , que es inmunoglobulina (Ig)-como los dominios (Di, ltiples splicing alternativo de su ARNm, lleva iedad de isoformas (Ornitz et al., 271:15292 m. , 1996; véase también P21802 de Swiss-Prot y 1802-1 a -20 para secuencias de FGFR2 y sus isof rticular, hay formularios que contengan todos inios Ig (a isoforma) o sólo los dos dominios inios sin Di (ß isoforma). De particular impo FR1 - FGFR3, mientras que todas las formas co imera mitad de D3 denota Illa, dos exones alter eden utilizar para la segunda mitad del D3 , rmas Illb y lile. Para 'FGFR2 , estos son respe notado FGFR2 Illb y FGFR2IIIC (o simplemente FR2c) ; se indican las formas correspondientes d FR2 (beta) Illb y FGFR2 (beta) lile. La forma de FGFR2 (también denotado K-sam-II) es un re evada afinidad de tanto FGFl como KGF, mie FR2lIIc (también identificado K-sam-I)" se une enquimales (Duan et al . , 267:16076 J. Biol . ¦ Ch itz et al., 1996, op. cit.). Algunos de los li estos receptores tienen un patrón opuesto de lo tanto, FGF3 los miembros de la subfamilia 7 (KGF) enlazan sólo, con FGFRIIIb (Zhang et al., se expresan en los tejidos mesenquimales así acrinos efectores de células epiteliales (Ornit 6, op. cit..). ' Por el contrario, los miemb familia de FGF4 FGF4-6 se unen a FGFR2lIIc y s linajes epiteliales y mesenquimales así que pu ciones autocrinos ó' paracrinos . Debido a los p resión de las isoformas de FGFR2 y sus ligan ega un papel en las interacciones epiteliales m inch et al., Dev. Dyn. 203:223, 1995), por lo prendente que la eliminación de características R2IIIb de ratones conduce a defectos graves embr talidad {De Moerlooze et al., desarrollo 127:483, ticipa en la formación de un dímero simétrico de R (Mohammadi et al., 2005), lo que activ eptor, . la autofosforilación y la transducción de FGFs the mediar una variedad de respuestas e os de células, incluyendo la proliferación, la m diferenciación, especialmente durante el rionario (Ornitz et al. , op. cit*.. ) y en, el ad olucrados en la reparación y la homeostasis de t mplo, estimula la proliferación de FGF2 (es ogénico para) ciertas células incluyendo los fi as células endoteliales y es un factor de superv i-apoptóticas para ciertas células tales como l ronales (Okada-Ban, op. cit..) . FGF2 también e erenciación¦ (morfogénesis) y migración (motilid ulas endoteliales (Dow et al., Urology 55 : 80 ios FGFs, especialmente FGFl y FGF2 , son fa ente angiogénicas (shrader et al., citoquina.s y inantes debido a las mutaciones asociadas cond ancia de función, a menudo, facilitando la dimer eptor. En particular, la craneosinostosis grave drome de Apert (como) se asocia a uno de dos i r-252-> Panel de revisión técnica o Pro-253-> ión de vinculador de D2-D3 conservada de entan la afinidad de enlace ligando (Ibrahim C. National Acad. Sci USA 98:7182, '2001) .

Se ha reportado que FGF2 y otros FGFs des el contra el cáncer, tanto por la angiogénesis e las células tumorales directamente (Grose et al., cimiento de citocina rango de velocidad. 16:1 ader et al., op cit.) . ARN FGFR2lIIb se expresa os de tumores (Finch et al., j. Nati, plan :812, 2006), a menudo como consecuencia de su ex tejidos normales correspondientes (Orr-Urtrege l. dev. 158:475, 1993) . KGF { FGF7 ) y KGFR (FGF dos tumores mutación se constató que la sust 52W misma asociada con el síndrome de Apert . Amp sobreexpresión de FGFR2 está fuertemente asocia o indiferenciado, difuso de cáncer gástrico, qu nóstico especialmente pobres, y la inhibici tividad FGFR2 de compuestos de pequeña molécul ibidos proliferación de las células de cáncer Cáncer Res. 68:2340, 2008; Nakamura stroenterol . 131:1530, 2006).). ARN FGFR2lIIb se ceres ováricos epiteliales de 16/20 (EOC) p rmal epitelio ovárico de superficie (Steele cogene 20:5878, 2001); y los ligantes FGFR2lIIb FGF10 inducida por la proliferación, la movil otección del formulario de muerte de las célul eas celulares EOC (Steele et al., factores de c : 45, 2006), lo que sugiere que FGFR2IIIb pueden el fenotipo maligno en cáncer de ovario. ercializado desde 2005 un mAb de anti-FGFR2 que actividad en su ensayo, con preferencia por la b. Sin embargo, no ha habido ningún informe de titumoral de anticuerpos contra FGFR2 in vivo.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN En una modalidad, la invención proporciona un oclonal (mAb) al receptor del factor de creci roblastos humanos 2 (FGFR2) que inhibe el crec xenoinjerto tumoral de humano en un ratón. El ibir actividades biológicas por lo meno eferiblemente varios o todos de los receptores, lace al receptor por FGF2. El mAb puede enlaza as de las formas FGFR2 Illb y FGFRIIIc de los r r ejemplo, FGFR2lIIb pero no FGFR2lIIc preferibl de la invención es genéticamente, por ejemplo, anizado o de humano. Ejemplar de anticuerpos es ermedad, por ejemplo gástrico cáncer.

Los anticuerpos humanizados exemplificados cadena ligera humanizada, que comprende el uencia en 13 bis Fig. (GAL-FR21) y una pesa anizada que comprende CDRs de la secuencia de L-FR21), o comprende una cadena ligera humani prende el CDR de la secuencia en Fig. 16B (GAL-F ada cadena humanizada que comprende CDRs de la I Fig.. 16B (GAL-FR22) . Algunos anticuerpos h prenden la tres ECCD de cadena ligera se mues ura 13A (GAL-FR21) y la tres ECCD de cadena estra en la figura 13B (GAL-FR21 ) , o comprende la cadena ligera se muestra en la figura 16A (GAL-es ECCD de cadena- pesada se muestra en la figura 22) . Si lo desea, la región variable de cadena li menos el 95% de identidad para la secuencia most gura 13A de secuencia {HuGAL-FR21 ) y la región v GAL-FR.21) y una región de variable de cadena ne la secuencia mostrada en la figura 13B (HuGAL BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Figura 1. Diagrama esquemático de la estr R2 , que muestra los tres dominios Ig-como (Di, inio transmembrana (caja negra) y domini tracelular. La heparina vinculante sitio (HBS) , ido (AB) y alternativos Illb y lile parciales d ican. N = amino terminal, C = carboxilo terminal.

Figura 2. Resumen de las propiedades de la R2s GAL-FR21 , GAL-FG22 , GAL-FR23 * como se de emplos .

Figura 3. Enlazar ELISA de mAbs GAL-FR21 , L-FR23 y mlgG de control negativo a FGFR2lIIb.

Figura 4. ELISA vinculante de mAbs mAb de 21, GAL-FR22 y GAL-FR23 y control negativo 5 G 8 cadorr a mAb biotinylated.

Figura 6. Citometría de flujo de la mAbs -FR22 y GAL-FR23 y mAb de control negativo para SNU-16 de flujo y KATO III las células .

Figura 7. Citometría de la mAbs GAL-FR21, L-FR23 de flujo y enlace de mAb de control nega lulas 293F formados con FGFR2lIIc o FGFR2IIIb (S25 Figuras 8A y 8B. Ensayo de ELISA (A) inhibic ión de FGFl de medición (panel superior) y .F ferior) a FGFR2lIIb por mAbs GAL-FR21, GAL-FR22 y ) ensayo de ELISA la inhibición de la Unión d dición (panel superior) y FGF10 (panel in FR2lIIb por mAbs GAL-FR21 y GAL-FR22. Para (A) y control negativo del ratón mAb.

Figura 9'. Crecimiento de xenoinjertos de tumo ano de SNU-16 en ratones tratados con PBS por L~FR21, GAL-FR23 o FR2bC 54.8.11 (panel superi -FR22 (panel inferior) a humanos y FGFR2lIIb de Figura 12. ELISA de unión de GAL-FR21 (panel s -FR22 (panel inferior) a humanos y monos R2IIIb.

Figura 13. Secuencias de aminoácidos de la HuG Z cadena (A) y cadena pesada (B) regiones variabl · muestran alineadas con el ratón GAL-FR21 y e ano v regiones. La ECCD está subrayada en las GAL-FR21, y los aminoácidos cambiados inoácidos son dobles subrayó en las secuencias 21. El código de letras 1 aminoácido y Kabat meración se utilizan para ambos cadena pesada y l Figura 14. Cadena de aminoácidos totalment GAL-FR21 anticuerpos de cadena ligera (A) y pesad imer aminoácido en cada línea se numera; la num cuencial .· En la cadena ligera, se destaca noácido de la región CK, y en la cadena ra y sistema de numeración Kabat se utilizan tan ena pesada como ligera.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LAS MODALIDADES PREFE La invención proporciona anticuerpos monoclon R2 (mAbs) que inhiben las actividades biológica inhiben el crecimiento de un xenoinjerto de tu resando en un ratón, las composiciones farmacé prenden los mAbs y los métodos de uso para el' t tra una enfermedad. 1. Anticuerpos Los anticuerpos son moléculas muy grandes y eso molecular de -150 . 000 o acerca de 13 20 aminoá a intrincada estructura interna. Una molécula de tural contiene dos parejas idénticas de lipeptídicas , cada par tiene una cadena ligera y sada. Cada cadena ligera y pesada cadena a su vez omedio de 10 aminoácidos de longitud) li plementariedad en- la determinación de las region seis ECCD en un pliegue de dominio variable ( dena ligera) y tres de la cadena pesada del sta juntos en un espacio 3D para formar el siti anticuerpo real que capte el antígeno de d sición y longitud de la ECCD han sido pr finidos por Kabat, E. et al., Sequences of P nunological Interest, U.S. Department of Health rvices, 1983, 1987 Kabat, E. et al., Sequences o Immunological Interest, U.S. Department of man Services, 1983, 1987. La parte de una regió figura en la ECCD se denomina el marco, que con bíente de la ECCD.

Un anticuerpo humanizado es un anticuerpo gen ipülado en el cual la ECCD de un anticuerpo anticuerpo donador", que también puede ser de rat un anticuerpo humano. Además, con el fin de m ace de alta afinidad, al menos uno de los dos ructurales adicionales se puede emplear. Véase, 5,530,101 y 5,585,089, incorporados en este doc erencia, que proporcionan instrucciones detallad struccion de anticuerpos humanizados. Au icuerpos humanizados a menudo incorporan todos s (preferiblemente tal como se define por Kaba udo también incluyendo' hipervariable bucle Hl de thia) de un anticuerpo de ratón, también se pu menos de la ECCD completa de un anticuerpo de mploi Pascalis et al., J. Immunol. 169:3076, 20 .al., Journal of Molecular Biology, 320: 415-4 hashi et al., Mol. Immunol. 36:1079-1091, 1999; Journal of Immunology, 164:1432-1441, 2000) .

Del mismo modo, puede ser necesario incorpora te de la ECCD, a saber, el subconjunto de resid Mol. Immunol. 41: 863, 2004. En los a nanizados en posiciones en donde la uno o más r antes CDR está ausente, el aminoácido ocupando l de un aminoácido ocupando la posición correspond eración Kabat) en la secuencia de anticu eptor. El número de las sustituciones de acc antés aminoácidos en la ECCD para incluir r ilibrio de las consideraciones de la compete tituciones son potencialmente ventajosas en di ero de aminoácidos de ratón en un anticuerpo hum consecuencia, disminuyendo la inmunogenicidad embargo, sustituciones también pueden causar inidad, y preferiblemente se evitan r gnificativas en la afinidad. Posiciones para s tro de CDRs y aminoácidos para sustituir tam leccionarse empíricamente.

-Por lo tanto, normalmente un. anticuerpo anticuerpo humano maduro, una secuencia de marco iable de línea germinal (combinado con una secue ión de J) o una secuencia de consenso de anticue ión variable marco secuencias .

Del primer elemento estructural antes mencio ge el marco de la región variable de cadena icuerpo humanizado identidad de secuencia máxi y 95%) con el marco de la región variable ada del anticuerpo donantes, seleccionando ade anticuerpos del receptor de entre los muchos a anos conocidos. En el segundo elemento estructu strucción del anticuerpo humanizado, a leccionados en el marco de los anticuerpos del ano {fuera de la ECCD) se reemplazan por a respondientes de los anticuerpos del don formidad con las reglas especificadas. En con inoácidos que desee reemplazar en el marco so ano; su construcción por medio de la ingenierí bien conocida. Los anticuerpos retienen la esp enlace del anticuerpo del ratón, si oximadamente dos tercios humana; La prop cuencia no humanos presente · en ratón, a iméricos y humanizados sugiere que la inmunoge ticuerpos quiméricos es intermedio entre el ticuerpos humanizados. Otros tipos de a éticamente que pueden presentar reducción inmun lativa a los anticuerpos del ratón incluyen a anos realizados mediante métodos de visualizaci ower et al., W091 /17271 ; ' McCafferty et al., WO ierno, WO92/20791; y el invierno, FEBS Lett. 98, cada uno de los cuales se incorpora en e cumento por referencia) o mediante el uso de ansgénicos (Lonberg et al., W093/12227; Ku 91/10741, cada uno de los cuales se incorpo sente, un mAb con " reducido-inmunogenicidad" se tenga significativamente menor inmunogenicid icuerpo del ratón cuando se administra a anos . Los anticuerpos abarcan mAbs quiméricos, umano, así como mAbs realizados mediante la sust noácidos específicos en los anticuerpos de den acopio a epítopos de células b o T, po uestos residuos (Padlan, Mol. Immunol . 28 : 48 iliza en el presente, un mAb "genéticamente" es u es se han construido o poner en un entorno no na mplo, genes humanos en un ratón o en un bacteri ayuda de técnicas de ADN recombinante y por lo emplo, no abarcaría un mAb de ratón contruida tec ridoma convencional .

Otros enfoques para el diseño de anticuerpos bién pueden utilizarse para lograr el mismo res s métodos en Núm. de Patente de EU 5,530,101 y 95 De proteína Ing. Roguska et al . , 1996 ; y Pate . 6 , 072 , 035 y 5 , 639 , 641 .

El epítopo de un mAb es la región de su antíg enlaza el mAb. Dos anticuerpos se unen al epíto erpuesto si cada uno inhibe competitivamente oques) de la otra al antígeno. Es decir, un exce , 10 x, 20 x o 100 x de un anticuerpo inhibe vin otra por al menos 50% pero preferiblemente un 7 luso un 99 % como se mide en un ensayo de unión c ase, por ejemplo, Junghans et al., RES . cánce 0 ) -. Por otra parte, dos anticuerpos tienen topo si esencialmente todos aminoácido mutació ígeno que reducen o eliminación el' enlace de un ucen o eliminación el enlace de la otra. Dos a nen epítopos superpuestos- si algunas muta noácidos que reducen o eliminación el enla icuerpo reducen o eliminación el enlace de la ot andos FGF, por ejemplo, FGFl o FGF2. Para FGFR andos abarcan FGFl, FGF7 (KGF) y los demás miem familia FGF7 FGF3 , FGF10 y FGF22. Para FGFRI andos abarcan FGFl y FGF2 ; FGF4 y los demás miem familia FGF4 FGF5 y .FGF6 ; FGF8 y los demás miem familia FGF8 FGF17 y FGFl8 ; y FGF9 y los demás m subfamilia FGF9 FGF16 y FGF20. Otra importante FGFR2 que puede ser inhibido por un mAb neutra ti-FGFR2 es la estimulación de la proliferaci lulas, por ejemplo, las células epiteliales o end roblastos, células tales como las células de B e FGFR2 ha sido formado y varias células de tum ras actividades inhibitable por un mAb neutral ti-FGFR2 son la estimulación de la diferencia gración de las células, como las células endotel ducción de la angiogénesis , por ejemplo como se m timulación de la formación de proliferación wth Factor Revs 16:233, 2005), de FGFR2 y río mplo, asignar cinasas .

Un mAb neutralizante de la invención centración de, por ejemplo, 0,01, 0.1, 0.5, 1, o 50ug/ml inhibe una función biológica de FGFR2 al menos 50% pero preferiblemente 75%, más prefe r 90% o 95% o incluso un 99% y más prefe roximadamente 100% (esencialmente complet fereciar de un control negativo carecen de F sayadas por los métodos descritos en ejemplos o el arte. Por lo general, el grado de inhibici ando la cantidad de FGF ligando utilizado ficiente para estimular plenamente la actividad es 1, 2, o 5ng/ml o 0,01, 0,02, 0,05, 0.1, 0.5, 1 mi. preferiblemente,- el mAb es neutralizar, hibe la actividad biológica, cuando se utiliza co ente, pero mAbs opcionalmente 2 pueden t bind FGFR2lIIb pero enlazar menos o no d RIlIc, o también puede enlazar a FGFR2IIIC pero tectar a FGFRIIlb o en un tercer enlace alter FR2IIIb y FGFR2IIIC y el uso de cualquiera de e anticuerpos en una composición farmacéutica, esp ra el tratamiento contra el cáncer u otras enferm ención también proporciona mAbs, neutraliz tralizantes , que unen FGFR2 en uno o más de su hiben, preferiblemente completamente, el crecimi or xenoinjerto que expresa FGFR2 , por ejemplo, xenoinjerto M OCUM-2. El mAb puede inhibir el c tumores, por ejemplo, transmitir una señal de c gativo o una señal de pro-apoptóticas a través s de la invención ¦ son pref rentemente especí FR2 o enlazar de forma preferencial , es decir no lazar sólo en mucho menor medida (por ejemplo, ez veces menos) , las proteínas 'que están relaci erior. Mabs mostrando diferencial o pr eferentemente enlazar a una forma de FGFR o specto a otro, mostrar una preferencia de por eo, diez o cien doblar entre las formas, por e e mide por k una. Falta de enlace entre un an tígeno (es decir, el anticuerpo no enlazar el gnifica cualquier señal de una reacción de i lace entre los dos .es indistinguible de u gativo, por ejemplo, en el que el anticuerpo tá ausente o sustituido por un agente inactivo.

Algunos mAbs de la invención enlazar FGFR2 tón FGFR2 , o enlazar FGFR2 humano y una, dos o m ratón, rata, conejo, pollo, perro y/o monkey (po mono de filipinos) FGFR2. En algunos casos, e tón FGFR2 (por ejemplo, ratón FGFR2lIIb) con un s decir, K un) dentro de 2 , 10 o centesimal de inidad para FGFR2 humana; del mismo modo en que acias) y puede ser de cualquiera de los conocido , IgA, igM, igD e igE y sus subtipos, es dec l, IgG2, IgG3, IgG4 y el ratón IgGl, IgG2a, IgG mAbs de la invención también incluyen frag icuerpos como Fv, Fab y F(ab') 2; anticuerpos functional (por ejemplo, Lanzavecchia et al., unol . 17:105, 1987), monocatenario de anticuerp al., 85:5879 de Estados Unidos de Proc . Natí 1988; Aves et al., ciencia 242:423., 1988); si ticuerpos (Nguyen et al., Cáncer Gene Ther. 10:8 anticuerpos con regiones constantes alteradas (po s Patente de EU No. 5,624,821) . La mAbs puede ser imal (por ejemplo, ratón, rata, hámster o pollo), r genéticamente. MAbs roedores son hechas po tándar, que comprende varios inmunización con uvante apropiado i.p., i.v., o en el footpad, s tracción de fusión con · una línea celular inm mplo, Dower et al . , McCafferty et al . , winter, ., Kucherlapati, supra) .

La mAbs anti-FGFR2 GAL-FR21, GAL-FR22 y G scriben a continuación son ejemplos de la inve z que se ha aislado un sencillo, archtypal mAb a r ejemplo GAL-FR21 , que tiene las propiedades scritas en este documento de neutralizar FGFR2 cillo generar otros mAbs con propiedades sími emplo, que tienen el mismo epítopo, mediante todos de arte conocido. Por ejemplo , ratones unizados con FGFR2 como se describe más arriba, oducidos y la resultante mAbs examinados par acidad para competir con el mAb archtypal para e FR2. Ratones también pueden ser inmunizados agmento más pequeño de FGFR2 que contiene el epí e se une el mAb archtypal. El epítopo se puede r, por ejemplo, la proyección para el enlace a un de unión a FGFR2 y, a continuación, la nueva Z se empareja con un repertorio de cadena eferiblemente humanos) para seleccio eferiblemente humano) mAb de unión a FGFR2 que smo epítopo como el mAb archtypal. De forma alte iantes de, por ejemplo, GAL-FR21 puede obte tagénesis de cDNA codificación de las cadenas sadas de GAL-FR21.

Los MAbs con el mismo o superpuesto epítopo 21, GAL-FG22 o GAL-FR23, por ejemplo, que compit lace a , FGFR2 con los respectivo mAb, proporci emplos de la invención. Una forma quimérica o hum L-FR21, GAL-FG22 o GAL-FR23 es una modalidad esp eferida. MAbs que son 90%, 95% o 99% idéntico al L-FG22 o GAL-FR23 en la secuencia de aminoácid giones variables de cadena pesada y ligera {sin cuencia de señal) y mantener sus propiedades f uencia de porcentaje se determinan con secu icuerpo un máximo alineados por el Kabat Con eración. Después de alineación, si una icuerpo de objeto (por ejemplo, toda la madur ión de¦ una cadena pesada o luz) se compara co ión de un anticuerpo de referencia, la ide uencia de porcentaje entre las regiones de ant a y la referencia es -el número de puestos ocupa mo aminoácido en el asunto y la referencia ticuerpo dividido por el número total de ineados de las dos regiones, con huecos n ltiplicado por 100 para convertir en porcentaje. a fines de la clasificación de sustitu inoácidos como conservadoras o nonconservat noácidos pueden agruparse como sigue: grupo I undarias hidrofóbicas ) ; met, ala, leu, val, ile; denas de laterales hidrófilas neutras) : cys, MAbs nativo de la invención puede ser produ S hibridomas . MAbs genéticamente, por ejem iméricos o humanizado, podrá expresarse de una v todos de arte conocido. Por éjemplo, genes que ra sus regiones ligeras y pesadas- cadena v p tetizádos de superposición de oligonucleotidos to con las regiones c disponibles en vectores de or ejemplo, ' disponible en el mercado de Invit oporcionan las regiones reglamentarias necesa emplo, promotores, potenciadoreis , poli a sitios, efiere el uso del CMV promotor-enhancer . Los v resión, a continuación, pueden ser formados m o de diversos métodos conocidos como lipo ectroporación en una¦ variedad de líneas de c ífero como CHO o myelomas no productores de Se o y NSO, y las células que expresan los. a leccionados por una selección apropiada con ant exclusión de tamaño, cromatografía de i ónico, cromatografía de intercambio catiónico mas de cromatografía de afinidad basada en ánicos o el .como. Se prefieren los a tancialmente puros de por lo menos unos 90 ogeneidad y 98% o el 99% w/w o la homogen ferida, para usos farmacéuticos . 3. Métodos de tratamiento de La invención proporciona métodos de tratamie l el mAb de la invención (es decir, un MAb anti inistra a pacientes que tienen una enfermedad (t apéutico) o en riesgo de aparición o reaparici férmedad (tratamiento profiláctico) . El término cluye a pacientes humanos; pacientes veterinar tos, perros y caballos; animales de granja, t ado, ovejas y cerdos; y los animales de l ilizados para realizar pruebas, tales como ratone de el homólogo de especies tiene antigénica r zada con la proteína humana. En especies care ctividad cruzada, un anticuerpo se úti ecificidad adecuado para el homólogo de especie esa especie. Sin embargo, en xenoinjerto exper males de laboratorio, por lo general se utiliza ecificidad por la proteína humana expresad oinjerto.

En una modalidad preferida, la présente porciona una formulación farmacéutica que com icuerpos que se describe en este documento. For macéuticas contienen el mAb en un iológicamente aceptable, opcionalmente con . exc tabilizadores , en forma de soluciones a filizadas. Las compañías aceptables, excip abilizadores son no tóxicos a los destinatar is y las concentraciones empleadas e materia (Remington's Phar aceutical Science 16t I, A. Ed. 1980) . El mAb está normalmente prese centración de 0,1 - 100 mg/ml, por ejemplo, 1--50 mg/ml, por ejemplo, 5, 10, 20, 30, 40, 50 o 6 En otra modalidad preferido, la invención prop todo de tratar a un paciente con una enfermedad m o de un mAb anti-FGFR2 en una formulación farmac preparado en una formulación farmacéuti inis rarse a un paciente por cualquier vía ecialmente desde por infusión intravenosa o por bolo, por vía intramuscular o subcutánea, travenosa puede darse durante como sólo 15 min s a menudo durante 30 minutos, o durante 1, 2 6 ras . El mAb también puede ser inyectado directam tio de la enfermedad (por ejemplo, un tumor) , o llevar a cabo los agentes tales como liposomas . inistrada es suficiente para aliviar al menos e u 8) se administran para tratar el cáncer, pero inistrar dosis de 10, 20 o más. El mAb inistrados diariamente, quincenal, semanal, anas, mensualmente o en algún otro intervalo, e ejemplo, en la vida media del mAb, 1 semana, 2 anas, 8 semanas, 3-6 meses o más tiempo. Repetir tamiento también es posible, como es admi nica.

Una combinación de una dosis, la frec inis ración y vía de administración eficaz para os parcialmente una enfermedad presenten en u e se trata se conoce como régimen terapéuticamen a combinación de una dosis, la frecuencia de ad i la vía de administración eficaz para inhibir o r arición de una enfermedad en un paciente se cono imen eficaz, como profilaxis.

Enfermedades susceptibles de tratamiento co atocelular (cáncer de hígado) , carcinoma d ales (cáncer de riñon) , tumores de cabeza otelioma, melanoma, sarcomas y tumores cerebr mplo, gliomas, tales como los glioblastomas) . L vados pueden medirse en el nivel de proteína jido canceroso relativo a niveles comparables de emplo, FGFR2lIIb) o FGF (por ejemplo, FGF2 , FGF7 el tejido normal como de tejido no canceroso p ido,- preferentemente del. mismo paciente. tectables puedan medirse en el nivel de proteína jido canceroso del mismo modo y en..comparació eles de fondo en las muestras de control en e alito (por ejemplo, FGFR2 o FGF) sabe que: es au lación con los- controles negativos, en el cual de aliza mediante el uso de un anticuerpo o cártil be que no obligar a la analito o ácido dificación . analito . Leucemias, linfornas, mieloma ermedades del ojo; Psoriasis y otras enfermeda l; artritis reumatoidea; y trastornos gen ueléticos asociados con las mutaciones en el mplo, el síndrome de Apert, como se ha descrito.

En una modalidad preferida, el mAb . anti inistra en combinación con (, junto con, es dec ante o después) otra terapia. Por ejemplo, para cer, el mAb anti-FGFR2 puede administrarse junto S de los medicamentos quimioterapéuticos conoc emplo alquilantes a agentes tales como c orambucil, cisplatino, carboplatino, óxa ocarbazina y ciclofosfamida; antimetaboli uorouracilo , floxuridine, fludarabina, ge totrexato y hidroxiurea; productos naturales, inc caloides de la planta y antibióticos como b orubicina, daunorrubicina, idarrubicina, tomicina, mitoxantrona, la vinblastina, vincristi experimentales se enumeran en A2 WO 2005/017107 sente documento se incorpora por referencia) . El R2 puede utilizarse en combinación con 1, 2, 3 tos otros agentes utilizados en un Ímioterapéutico estándar. Normalmente, los demá los ya conocidos por ser efectiva para el tipo e se trata. El mAb anti-FGFR2 es especialmente erar la resistencia a los medicamentos quimiote aumentando así su eficacia.

Otros agentes con los que puede administrar el FR2 para tratar el cáncer incluyen biologics tale ticuerpos monoclonales , incluyendo Herceptin ™ tígeno HER2 ; Avastin ® contra VEGF; o' antic ceptor del Factor de crecimiento epidérmico ( itux ® (cetuximab) y Vectibix ® (pani umumab) . A ntra el Factor de Crecimiento de Hepatocitos ecialmente preferidos para su uso con el mAb a eptor cMet de HGF también es preferido, por ejem ti-cMet OA-5 D 5 (Martens et al., Clin. Res :6144, 2006) que ha. sido creado genéticamente lo un "brazo", es decir, el dominio de Unión. efieren los anticuerpos contra los otros F.GFR Rl, 3, 4 o contra varios FGFs como FGFl, FGF2 y arlo en combinación con el mAb anti-FGFR2. Adem ti-FGFR2 puede utilizarse junto con cualquier rapia de cirugía o radiación incluyendo radiaci terno, intensidad modulada (IMRT) de terapia de r alquier forma de radiocirugía, como, por ejem ife .

Tratamiento (por ejemplo, la quimioterapia cluyendo el anticuerpo anti-FGFR2 de mAb puede a fermedad mediante el aumento de la median ervivencia libre de progresión o general del ervivencia de pacientes con cáncer por al menos cial o la tasa de respuesta objetiva (completa los pacientes con estos tumores (por ejemplo strico, endometrio,( páncreas, mama, pulmón, ioblastomas especialmente cuando sufrió una fractarios) por al menos un 30% o 40% pero prefe 50%, 60% y 70% o incluso un 100% en comparació atamiento (por ejemplo, la quimioterapia) pero ti-FGFR2.

Por lo general, en un ensayo clínico (por ej se II, fase II/III o ensayo de fase III), lo cionados en promedio las tasa de supervivenc spuesta libre de progresión de los pacientes tr imioterapia más el mAb anti-FGFR2/ en relación co control de los pacientes que reciben quimioterap emás de placebo) , son estadís icamente significa emplo, en la p = 0,05 o 0,01 o incluso 0.001 sas de respuesta completa y parcial se determina la circulación de un paciente con un tumor y por uir y guiar el tratamiento contra el tumor. Po tumor asociado con altos niveles de FGFR2 (po nento respecto a pareados en tejido no cancero de el mismo paciente) son especialmente susce tamiento con un mAb anti-FGFR2. En particular mo mAbs puede utilizarse en un ELISA o radioinmu a medir el nivel de FGFR2 , por ejemplo, en el unohistoquímica para localizar la expresión de emplo, en una muestra de biopsia -del tumor." El o anti-FGFR2s enlace a epítopos diferentes (es de han compitiendo para el enlace) es especialmen desarrollo de un sensible "sandwich" ELISA par FR2. Diversos ensayos, del mAb puede ser marc léculas fluorescentes, spin-con el marcador de zimas o radioisotypes y puede recibir en forma dos los reactivos necesarios para realizar el mulario con 155 aminoácidos. Chiu et al., 5:75 0) y el FGF2 humano (el formulario con 155 am mer et al., Biochem. Biophys . 144:543 Res. com. , tetizados (GenScript, Inc) , a continuac lificado a tienen un marcador de péptido icador y clonado en un derivado del vector vitrogen) mediante el uso de técnicas estándar d ecular. Estos plásmidos se transforman e 1(DE3) de E.coli y FGFl o expresión de fgf2 iante el uso de 1 mM IPTG. El nivel de expresi termina mediante el uso de un FGFl o FGF2 especí t (R & D Systems) . FGF es purificada mediante rlas de heparina-Sepharose CL-6B (Amersham Bi o se describe' {Wiedlocha et al., Mol. de cel :270/ 1996) . Del mismo modo, un gen humano cursor formulario con 194 aminoácidos. Finch, ciencia 245:752, 1989) se sintetiza y PCR amp expresan como moléculas immunoad esin. Para l a, fragmentos del ADN codificación la tod ancia de FGFR2lIIb (aminoácidos 1-378) o inoácidos 1-377) se fusionan al Fe humana (resi 6) a través de un enlazador de polipéptido; para a constituye aminoácidos (falta Di) 152-378 ta) 152-377 Illb y aminoácidos para FGFR2 (bet ilizan en su lugar. Estas moléculas de FGFR2 -Fe s células 293F de transferencia y sel nsfectants estable en presencia de G418 (1 mg/ml expresión 293 (Invitrogen) . El FGFR2 -Fe secreta lulas 293F DNA es purificado mediante el uso de u proteína A/g. Del mismo modo, ADNc del mono no) FGFR2 ECD se clona por técnicas estánda ática mRNA y aminoácidos 1-378 se fusionan ana para crear cyno FGFR2lIIb-Fc para la impancé FGFR2lIIb-Fc se construye mediante e (2ug/ml) durante la noche a 4 ° C. A continuaci Unión inespecí fieos se bloquean con 2% BSA par cas de RT. incubar con una de las proteínas R2 descritas anteriormente {lig/ l) para 1 hr, cubación con varias concentraciones de fluidos os o hibridoma durante 1 hora. El mAb enlazado HRP-cabra anticuerpo anti-ratón seguido d ición de sustrato TMB (Sigma) y lectura en 450 nm s ensayos de ELISA, lavar placas 3 veces entre ca Citometría de flujo. Las células después de l ces en amortiguador de clasificación (CSB: PBS/1% 3) , 2 x 10 5 células son resuspended en 50µ1 de ita bien y en una estufa con 50µ1 del mAb anti-F uebas (1µ 50µ1) de 1 hora en hielo. Las células continuación, dos veces en CSB y los anticuerpos tectados por incubación con FITC-cabra anti-ackson ImmunoResearch Laboratories) durante 1 b-Fc (10ug/footpad de la dosis inicia /footpad) , o con 17 dosis FGFR2lllc-Fc (10yg/foo is inicial, luego 5 dosis en 2]ig, luego en 5u 5 dosis FGFR2 (beta) IIlc-Fc (en 5ug/footpad ígeno suspendido en MPL/TDM (Sigma-Aldrich) . pués de la inyección final, las células linfoide extraídos y fusionados con P3 / X 63-Ag8Ul eloma de ratón en una proporción de 1: 1 mediante sistema de electrosoldable de Hybrimune (Ciencia citología) . Hibridomas son seleccionados por la x HAT (Sigma) 24 horas más tarde. Diez días des sión, hibridoma cultura sobrenadantes son examina acidad para enlazar a FGFR2lIIb-Fc pero no a diante el uso de ELISA . MAbs seleccionados, a con examinados por su capacidad para reconocer FG línea de células de tumor gástrico humano -SNU-1 J. Cáncer Res. Clin. Oncol . 126:519, 2000) . bC54.8.11, FR2bC 100.7.9, FR2bC 101.8.2, FR2bC bC 149.8.8, FR2bB 11.5.3 y FR2bB 18.1.6.

Ejemplo 3: Propiedades de la mAbs anti-FGFR2 Como se ve en la Fig. 3, los tres seleccionan 1, GAL-FR22 y se enlazan bien a FGFR2lIIb en el SA descrito en el ejemplo 1 GAL-FR23. Mediante cuatro formas- diferentes de FGFR2-FC en la pru determina que cada uno¦ de estos mAbs tiene un lace diferentes y por lo tanto epítopo {Fig. 4) . une a las formas tanto el alfa y beta de FGF cir, con y sin Di), pero no a FGFRIIIc. El ep to, no puede implicar Di y debe incluir a D3II e es probable que se englobe dentro de D3lIIb o 2 2 también se une a formas alfa y beta, pero en c ib y lile, así que el epítopo es presumiblement D2-D3llla o sin duda D2-D3. Por último, . GA exceso de 100: 1 de cada una de la otra unlabel trol mAb murino 5 G 8) de enlace a FGFR2IIIb ayo de ELISA descrito anteriormente (pero reptavidina como el reactivo de detección) . Como figura 5, cada mAb compitió consigo mismo para o no con los otros mAbs, mostrando que tienen topos. Además, el mAbs . FR2bB 100.12.9, FR2bC bC 100.7.9, FR2bC 101.8.2, Fr2bC 115.1.5, FR2 pitió para enlace con biotinylated GAL-FR21 en e que tener el mismo o superpuesto epítopo como ntras el mAbs FR2bB 11.5.3 y FR2bB 18.1.5 com ace con biotinylated GAL-FR22 así que tener e erpuesto epítopo como GAL-FR22.

Para confirmar que el mAbs seleccionado e rnas adecuadas de FGFR2 en la membrana celular, flujo 'se. emplea! KATO-III (ATCC pies-103) y SN -5974) las células, que sobreexpresar FGFR -FR22 y GALFR23 pero no GALFR21 enlazar a las FGFRUlb, como se esperaba de sus epítopos. P que la mutación de S252 de FGFR2 se encuentra -ulas de cáncer, enlace de la mAbs a las cél mados con un gen de FGFR2lIIb/ construido par mutación (FGFR2lIIb (S252W) ) se prueba. Co bién en Fig. 7 , todos los mAbs enlazado a la 52W)-DNA de las células. La capacidad de enlazar 52W) es una propiedad preferida de mAbs de. la in Se utiliza para determinar la capacidad de la ibir el enlace de ligantes FGF a FGFR2 , un SA. ELISA pozos están recubiertas de 2µg/ml de c -Fc de humano durante la noche a 4 ° C. Después 2% BSA para 1 hr en RT, los pozos son incubados i de FGFR2lIIb-Fc por 1 hora, seguido de incu icador-FGFl o indicador-FGF2 {Q,2\ig / mi) en pr ias concentraciones de mAbs para 1 hr. La ind o mediante el uso de la indicador-FGF7 y Indica abién se muestra (Fig. 8B) ese bloque GAL-FR21 enlace de FGF7 y FGF10 a FGFR2lIIb. De he tajosas de la invención, como GAL-FR21 y oquear el enlace de FGF2 y FGF7 o FGF10 a eferiblemente para el 80% o 90% o 95% o compl encialmente completamente. Por lo tanto, GAL-FR 22 pero no GAL-FR23 han demostrado para neut os una actividad biológica de FGFR2.

Ejemplo 4: Modelos de xenoinjerto Los experimentos de xenoinjerto se llevan a describe anteriormente ( im et al., 362:8 turaleza, 1993) . Las células del tumor humano n ecidas en medio DMEM completa se cosechan en HBS snudo femenino athymic o ratones de NIH-III Xid -6 wks antiguos) se inyectan por vía subcutánea lumen ± SEM. El número de ratones en cada tamiento suele ser ratones de 5-7. Puede realiza tadístico, por ejemplo, mediante el uso de prue dent .

Las figuras 9 y 10 bis muestran que en erimentos GAL-FR21, GAL-FR22 y GAL-FR23 admini a dosis de 20ug (1 mg/kg) dos veces por se ertemente inhibe el crecimiento de xenoinjertos strico SNU-16, con GAL-FR21 que es más pletamente inhibe el crecimiento de la xenoinjer 2bC 54.8.11 antes mencionadas que compite para v GAL-FR21 también inhibe el crecimiento de xenoi g.lOB muestra que GAL-FR21 y GAL-FR22 se adminis a dosis de 50 g {2,5 mg/kg) dos veces por sema ertemente inhibida crecimiento de xenoinjertos d células de OCUM-2 M tumor gástrico humano (que s Yashiro et al., Jpn J cáncer Res 85:883, tamiento con ambos agentes tiene un may ibitorio que cualquier agente por sí sola.

Ejemplo 5: Enlace de mAbs a FGFR2 de otras esp Para determinar la capacidad de la mAbs para R2 de especies distintas de los humanos, ELISA iliza. ELISA pozos están recubiertas de 2ug/ml ti-IgG-Fc de humano durante la noche a 4 o C. oqueo con 2% BSA para 1 hr. en RT, los pozos son 0.2ig / mi de FGFR2lIIb-Fc por 1 hora, donde l la proteína de fusión es ya sea humano, ratón lipinos o chimpancé FGFRIIIb. Los pozos son in tinuación, con varias concentraciones de mAb L-FR22. Los mAbs enlazados se detectan mediante bra HRP-conjugados anti-mouse IgG-Fc y, a con s rato TMB. Figura 11 se muestra que el GAL-FR21 tón FGFR2 casi también (dentro de diez) como FGF o (difereciar de) FGFR2 humana, mientras que azado al chimpancé FGFR2 moderadamente bien { s centesimal de FGFR2 humano) . Preferido mA ención, como GAL-FR21 y GAL-FR22 , enlazar a ón, mono, chimpancé y FGFR2 humano y más prefe d ratón FGFR2 dentro' de 2, 10, 100 o 1000 pliegu R2 humana, o enlazar mono o chimpancé FGFR2 tesimal o difereci r desde (dentro de erimental) FGFR2 humano (como medida, por ejemp ) ."Enlace a FGFR2 de las otras especies hace pru s en las especies animales más fáciles de conduc Ejemplo 6: Humanización de .GAL-FR21 y GAL-FR22 La clonación de la variable de cadena ligera iones del GAL-FR21 mAb, construcción y expresi resión de mAb y el diseño, construcción, qui ificación de un humanizado mAb GAL-FR21 se eñar un humanizado mAb GAL-FR21, por lo general métodos de reina et al., Patentes de EU Nos. 5 85,089. La secuencia humana de VK CAG27369 y la AAB00780, como se muestra, respectivamente, en l 13B, las líneas de la parte inferior, respectiv gidos para servir como secuencias de receptor uencias VL GAL-FR21 y VH porque tien ticularmente alta homología (es decir, la ide uencia) a ellos. Un modelo molecular de compu inio variable GAL-FR21 se utiliza para loca noácidos en el marco de GAL-FR21 que ficientemente cerca como para la . ECCD pote eractuar con ellos. Para diseñar el humanizada d Z y pesados regiones variables de cadena, la ECC o de ratón GAL-FR21 en primer lugar son conce ertadas en las regiones de marco de recepto iciones de marco en el modelo de equipo su sada v secuencias de HuGAL-FR21 se muestran en y 13B respectivamente, medias líneas con el AL-FR21, donde están alineadas contra- el ante de GAL-fr21 y el receptor humano v regiones omo se define por Kabat) están subrayadas y los a Stituidos mencionados anteriormente son subrayado La invención proporciona no sólo una humanizad o, HuGAL-FR21, incluidas las regiones de cadena sada v se muestra en la figura 13, pero también l manizada mAbs . cuya luz y regiones variables sada difieren de las secuencias de HuGAL-FR2 queño número (por ejemplo, normalmente no más de 10) de reemplazos, eliminaciones o insercione neral en el marco, pero posiblemente en la rticular, sólo un subconjunto de las sustitucio scrito anteriormente, es posible en los m ceptor, o substitution (s) adicionales es pos rrespondientes de los donantes del ratón mAb u o ticuerpos humanos y incluso muchos posibles r R-contacto también ' son aptas para la sustituc dificadas incluso aminoácidos dentro de la ECCD. una sustitución de CDR es sustituir un residuo el residuo, ocupando la posición correspondie cuencia de receptor humano utilizada para pr rcos de la región variable.

Más a menudo los reemplazos realizados en las GAL-FR21 humanizadas variantes son conserva specto a los aminoácidos sustituyó de HuGAL-inoácidos pueden agruparse como sigue para d t stitución de conservador, es decir, sustituciones grupo: grupo I (hidrofóbica oolfy) : met, ala, e; Grupo II (cadenas de laterales hidrófilas neut r, thr; Grupo III (cadenas de ácidos laterales) : upo IV (cadenas de laterales básica) : asn, gln, ayos descritos en este documento de la variant 1 humanizado es esencialmente el mismo, es dec error experimental, como el de Hu ferentemente las secuencias de región de v ena variante de ligeros y pesados son al menos e ferentemente al menos el 95% y más preferenteme os un 98% idénticos a las respectivas regiones era - y pesada maduro v de HuGAL-FR21. Como al bién. son adecuados para proporcionar el ticuerpos humanizados, especialmente el kappa v r grupo humana I y las regiones de la cadena pe grupo humana de otras regiones de variable de ano con la identidad de la secuencia de alta a l 21 I o secuencias de consenso de estos subgrupos.

En otro anticuerpos humanizados,' 5 al menos 1, das las posiciones de receptor a sustituciones d cionado en relación con el- anticuerpo' lo ejempli eptor y el donante.

El mAb - ejemplar HuGAL-FR21 ha hablado aquí ana y regiones constantes de la estrella, po ún presentado en Estados Unidos 20080019974 to, es un igGl . Las. secuencias completas de l eras y pesadas (maduras) de HuGAL-FR21 se mues ura 14. Si bien estas secuencias- son respectivam otypes Km (3) y Glm(3), se entiende que mAbs lquier (IgGl, ?) allotype son llevadas a ca ignación de HuGAL-FR21. También se entenderá AL-FR21 es fabricado por procedimientos conve a varios aminoácidos en la terminal amino o ca cadena de ligera o pesada, tales como la lisina la cadena pesada, puede que falte o derivatiz te o la totalidad de las moléculas, y la compo llevadas a, cabo por la designación de HuG siderada un humanizado mAb GAL-FR21. MAbs hum ados Unidos de Proc. National Acad. SCI., 2006 longar la vida media en los seres humanos ( mplo, Hinton et al., 279:6213 j. Biol. Chem ecí ficamente, pero sin limitarse a, HuGAL-FR21 aciones en la región constante de IgG a un Gln e y/o un Leu en posición 428 son modalidades de l ención.

Para comparar la afinidad de enlace de HuGAL-F mAb de ratón GAL-FR21, un experimento petitiva se realiza mediante el uso de tecnologí ELISA. En concreto, ELISA pozos están recub /ml de cabra anti-IgG-Fc de humano durante la n Después de bloqueo con 2% BSA para 1 hr en RT, incubados con 0.5ig / mi de FGFR2lIIb~Fc . Lo tinuación, se incuban con mAb biotinylated 05ug / mi) en presencia de las crecientes conce hlgG sin marcador de anticuerpo humano GAL-FR uadernación' del mAb marcadordo en un 50%, imar que el enlace de afinidad Ka de HuGAL-FR21 al menos unos 10 9 -1. HuGAL-FR21 también podr cualquiera de los ensayos biológicos para la ac R2 se describe en este documento, por ej ibición de enlace de FGF2 o FGF7 a FGFR2 y la v iben la actividad de FGFR2 comparable a GAL-FR21.

Puede diseñarse un humanizado mAb GAL-FR22 , c oducida y ensayó del modo igual o similar que H s secuencias de aminoácidos de la variable de cad pesada (maduro) regiones del GAL-FR22 se spectivamente en Fig. 16A y 16B, líneas de marc 22. Un humanizado mAb GAL-FR22 tiene una cad anizada, que comprende el CDR de la secuencia e una pesada cadena humanizada que comprende C cuencia de Fig. 16B. En algunos casos, el mA anizado comprende la cadena ligera tres CDRs se A pesar de que la invención ha sido des ferencia a las modalidades actualmente preferi enderse que se pueden realizar diversas modifica rtarse de la invención. A menos que lo contrari de el contexto de cualquier paso, elemento, ción o aspecto de la invención puede utili lquier otra. Todas las publicaciones, licitudes de patente, números de adhesión y l tán citados en el presente documento incorpo ferencia en su totalidad para todos los efectos e dida como si cada publicación individual, paten solicitud o de la adhesión de patentes sea espec individualmente indicado para ser incorpo ferencia en su totalidad a todos los efectos . Si ácido nucleico o una secuencia de proteínas aso número de acceso, tiene por objeto la vers cuencia asociada con ese número de acceso el 7 de un depositario autorizado y reemplazados en ación, nonviability o destrucción por un perí os cincp años después de recibir la solicitud má eración de una muestra por el depositario, por al menos treinta años después de la fecha del d ante la vida ejecutoria de la patente conexa, sea el periodo es más largo. Todas las restricc ponibilidad al público de estas líneas cel itarán irrevocablemente en la emisión de una pat licitud.

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES 1. Un anticuerpo monoclonal humanizado o de hu se une al receptor 2 del factor de creci roblastos (FGFR2) e inhibe el crecimient oinjerto tumoral de humano en un ratón. "2. El mAb de la reivindicación 1, que inhibe l F2 a FGFR2. 3. El mAb de la reivindicación 1, que- se une a ro no a FGFR2IIIC. 4. El mAb de la reivindicación 1, que se une a a FGFR2IIIC. 5. El mAb de la reivindicación 1, que es ab')2 monocatenario o fragmento de anticuerpo. 6. Una composición farmacéutica que comprende reivindicación 1. 7. El uso del mAb según la reivindicación eparar una composición . farmacéutica para el t 10. El mAb de la reivindicación 8, donde es q anizado . 11. El mAb de la reivindicación 8, donde es u 1 o GAL-FR22 humanizado. 12. El mAb de la reivindicación 8, donde es de 13. Una composición farmacéutica que compren ún la reivindicación 8. 14. El uso del mAb de la reivindicación parar una composición farmacéutica ' para el t tra el cáncer en un paciente 15. El uso de la reivindicación 14, donde el cer gástrico. 16. Un anticuerpo humanizado, que comprende era humanizada que comprende CDRs de la secuen . 13 bis (GAL-FR21 ) y una pesada cadena huma prende CDRs de la secuencia de la Fig. 13B (GA comprende una cadena ligera humanizada, que co L-FR22 ) y las tres ECCD de cadena pesada que s la Figura 16B (GAL-FR22) . 18. Un anticuerpo humanizado según la reiv donde la región variable de cadena ligera tien 95% de identidad de secuencia para la secuenci la Figura 13A (HuGAL-FR21) y la región variable sada tiene al menos el 95% de identidad para la strada en la Figura 13B de la secuencia (HuGAL-FR 19. El anticuerpo humanizado según la reiv , donde los residuos H27 , H28, H30, H48 y ? meración de abat están ocupados por el residuo o sición correspondiente de la cadena pesada que la Figura 13B (GAL-FR21) . 20. El anticuerpo humanizado según la reivindi nde la región variable de cadena ligera tiene la strada en la Figura 13A (HuGAL-FR21) y la regió cadena pesada tiene la secuencia mostrada en la