MX2010014406A - Composiciones de peracido y 2-hidroxi acido y metodos para tratar productos agricolas. - Google Patents
Composiciones de peracido y 2-hidroxi acido y metodos para tratar productos agricolas.Info
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Abstract
Se proporcionan métodos y composiciones para tratar productos agrícolas para controlar microorganismos. El método trata productos agrícolas poniendo en contacto la superficie de los productos agrícolas con una solución acuosa que comprende i) un perecido orgánico de la formula RC(O)OOH en donde R es metilo, estilo. N-propilo o s-propilo; ii) un 2-hidroxi ácido orgánico seleccionado de ácido tartárico, ácido cítrico, ácido málico, ácido mandélico y ácido láctico; y (opcionalmente) iii) un surfactante aniónico; en donde la solución acuosa tiene un pH de 2,5 a 6,0.
Description
COMPOSICIONES DE PERÁCIDO Y 2-HIDROXI ÁCIDO ORGÁNICO Y MÉTODOS
PARA TRATAR PRODUCTOS AGRÍCOLAS
Referencia Cruzada a Solicitudes de Patentes Relacionadas
Esta solicitud de patente reivindica prioridad de la Solicitud de Patente Provisoria Estadounidense Acta N° 61/075.267, presentada el 24 de junio de 2008, cuyo contenido se incorpora en la presente como referencia para todos los fines.
DECLARACIÓN EN CUANTO A DERECHOS A INVENCIONES HECHAS CON INVESTIGACIÓN Y DESARROLLO AUSPICIADOS POR EL GOBIERNO FEDERAL NO CORRESPONDE
REFERENCIA A UN APÉNDICE DE "LISTADO DE SECUENCIAS" , UNA TABLA, O
UN LISTADO DE PROGRAMAS DE COMPUTACIÓN PRESENTADO EN UN DISCO
COMPACTO
NO CORRESPONDE
Antecedentes de la invención
Los medios seguros y confiables para eliminar microorganismos de la superficie de productos agrícolas tales como frutas y verduras son una preocupación de salud pública creciente dado el mayor crecimiento en su comercio internacional y consumo. Los métodos existentes para eliminar o reducir los microorganismos de los alimentos no controlan suficientemente los microorganismos que tienen el potencial para provocar enfermedades o echar a perder el producto agrícola. Por consiguiente, existe una enorme necesidad de métodos y composiciones nuevas que reduzcan en gran medida la presencia de microorganismos en los productos agrícolas.
Esta invención proporciona composiciones y métodos que satisfacen estas necesidades .
Extracto de la invención
La invención proporciona composiciones y métodos útiles en la higienizacion y el mantenimiento de la calidad de productos agrícolas, por ejemplo, frutas y verduras. En un primer aspecto, la invención proporciona composiciones útiles en la higienizacion de productos agrícolas. Las composiciones son soluciones acuosas que tienen un pH de 2,5 a 6,0 y que comprenden i) un perácido orgánico de la fórmula RC(0)OOH en donde R es metilo, etilo, n-propilo, o s-propilo; ii) un 2-hidroxi ácido orgánico seleccionado del grupo formado por ácido tartárico, ácido cítrico, ácido málico, ácido mandélico, y ácido láctico iii) agua; y opcionalmente iv) un surfactante aniónico. En realizaciones preferidas, el perácido es ácido peroxiacético (también denominado ácido peracético o hidroperóxido de acetilo) , el ácido orgánico es ácido láctico (también denominado ácido 2-hidroxipropiónico) y si está presente, el surfactante aniónico preferido se lauril sulfato de sodio. Como las soluciones higienizadoras acuosas de perácidos pueden existir en equilibrio con, o formarse a partir de soluciones concentradas de peróxido de hidrógeno, su ácido correspondiente y agua, las soluciones higienizadoras acuosas también pueden contener peróxido de hidrógeno y el ácido correspondiente (por ejemplo, ácido ; acético en el caso del ácido peroxiacético) . Las soluciones higienizadoras se pueden proveer como concentrados o en formulaciones acuosas listas para usar. Las composiciones también se pueden proveer como parte de un estuche para su uso en la higienizacion o tratamiento de productos agrícolas.
En un segundo aspecto la invención proporciona métodos para higienizar o tratar productos agrícolas, que incluyen verduras y frutas poniendo la superficie del producto agrícola en contacto con una solución higienizadora acuosa de la invención. El contacto puede higienizar la superficie del producto agrícola reduciendo en gran medida el número de microbios, que incluyen todos los patógenos humanos, presentes o que se adhieren a la superficie del producto agrícola. El contacto también puede servir para prevenir que se eche a perder el producto agrícola debido a la contaminación microbiana nativa sobre la superficie del producto agrícola. El contacto también puede servir para preservar la calidad del producto agrícola durante el almacenamiento reduciendo malos olores, la putrefacción y/o inhibiendo el crecimiento de microbios nativos sobre la superficie del producto agrícola.
Breve descripción de los dibujos
La Figura 1 es una comparación de cinco tratamientos, en orden de izquierda a derecha: a) agua clorada: 50-70 ppm de cloro activo a pH 6,5; b) CS : un limpiador de productos agrícolas comercial con los ingredientes activos principales como ácido cítrico más surfactantes ; c) ácido peroxiacético : 70 a 80 ppm de ácido peroxiacético + 0,01% de surfactante; d) solución de ácido láctico: del 0,9 al 1,2% de ácido láctico + 0,01% de surfactante; y e) FE: de 70% a 80 ppm de ácido peroxiacético + 0,9 al 1,2% de ácido láctico + 0,01% de surfactante) en un ensayo de desafío de células suspendidas en agua de acequia. El surfactante usado fue lauril sulfato de sodio.
La Figura 2 es una composición de cada uno de los cinco tratamientos de la Figura 1 en un ensayo de desafío de células unidas a una hoja.
La Figura 3 es una comparación de la capacidad del agua clorada y de una solución acuosa de acuerdo con la invención (FE: ácido peroxiacético, ácido láctico y lauril sulfato de sodio) de reducir la putrefacción de los productos agrícolas tratados .
La Figura 4 es una comparación de la capacidad del agua clorada y una solución acuosa de acuerdo con la invención (FE: ácido peroxiacético, ácido láctico y lauril sulfato) para reducir el mal olor en productos agrícolas tratados.
La Figura 5 es una comparación de la capacidad de agua clorada y una solución acuosa de acuerdo con la invención (ácido peroxiacético, ácido láctico y lauril sulfato de sodio) para reducir la putrefacción de la Mezcla de Primavera con un bajo contenido de humedad.
La Figura 6 es una comparación de la capacidad de tratamiento con agua clorado o una solución acuosa de acuerdo con la invención (ácido peroxiacético, ácido láctico y lauril sulfato de sodio) para reducir el mal olor en una Mezcla de Primavera con un bajo contenido de humedad.
La Figura 7 es una comparación de la capacidad de agua clorada y una solución acuosa de acuerdo con la invención (ácido peroxiacético, ácido láctico y lauril sulfato de sodio) de inhibir el crecimiento de microorganismos nativos en una Mezcla de Primavera con un bajo contenido de humedad.
La Figura 8 es una comparación de la capacidad de agua clorada y una solución acuosa de acuerdo con la invención (ácido peroxiacético, ácido láctico y lauril sulfato de sodio) de inhibir la putrefacción de una Mezcla de Primavera con un bajo contenido de humedad.
La Figura 9 es una comparación de la capacidad de agua clorada y una solución acuosa de acuerdo con la invención (ácido peroxiacético, ácido láctico y lauril sulfato de sodio) para reducir la putrefacción de la Mezcla de Primavera con un alto contenido de humedad.
La Figura 10 es una comparación de la capacidad de tratamiento con agua clorada o una solución acuosa de acuerdo con la invención (ácido peroxiacético, ácido láctico y lauril sulfato de sodio) para reducir el mal olor en una Mezcla de Primavera con un alto contenido de humedad.
La Figura 11 es una comparación de la capacidad de agua clorada y una solución acuosa de acuerdo con la invención (ácido peroxiacético, ácido láctico y lauril sulfato de sodio) para inhibir el crecimiento de microorganismos nativos en una Mezcla de Primavera con un alto contenido de humedad.
La Figura 12 es una comparación de la capacidad de agua clorada y una solución acuosa de acuerdo con la invención (ácido peroxiacético, ácido láctico y lauril sulfato de sodio) para inhibir la putrefacción de la Mezcla de Primavera con un alto contenido de humedad.
La Figura 13 es una comparación de la capacidad de agua clorada y una solución acuosa de acuerdo con la invención (ácido peroxiacético, ácido láctico y lauril sulfato de sodio) para reducir la putrefacción de la espinaca.
La Figura 14 es una comparación de la capacidad de tratamiento con agua clorada o una solución acuosa de acuerdo con la invención (ácido peroxiacético, ácido láctico y lauril sulfato de sodio) para reducir el mal olor en la espinaca.
La Figura 15 es una comparación de la capacidad de agua clorada y una solución acuosa de acuerdo con la invención (ácido peroxiacético, ácido láctico y lauril sulfato de sodio) para inhibir el crecimiento de microorganismos nativos en la espinaca con un alto contenido de humedad.
La Figura 16 es una comparación de la capacidad de agua clorada y una solución acuosa de acuerdo con la invención (ácido peroxiacético, ácido láctico y lauril sulfato de sodio) para inhibir microorganismos de la putrefacción en la espinaca.
Descripción Detallada de la invención
La invención se relaciona con el descubrimiento de que una solución acuosa que comprende ácido peroxiacético, ácido láctico, y (opcionalmente) lauril sulfato de sodio es sorpresivamente eficaz en el tratamiento de productos agrícolas para reducir la contaminación microbiana sobre la superficie de productos agrícolas tratados y para prevenir la putrefacción de los productos agrícolas tratados. Estas ventajas se han demostrado para la lechuga, la espinaca y una mezcla de primavera de diferentes lechugas tiernas y verduras. La combinación de los ingredientes es mucho más eficaz en la reducción de microbios unidos a las hojas que cualquiera de los ingredientes actuando solos y también es especialmente eficaz en la reducción de la putrefacción de productos agrícolas.
La actividad antimicrobiana del ácido peroxiacético se basa en su alto potencial de oxidación. El mecanismo de oxidación es la transferencia de electrones, en consecuencia cuanto más potente es el oxidante, más rápidamente se están transfiriendo los electrones al microorganismo y más rápidamente se inactiva o se mata al microorganismo. En consecuencia basado en la tabla siguiente el ácido peroxiacético tiene un potencial de oxidación más alto que los higienizadotes de cloro pero menos que aquel del ozono .
Capacidad de Oxidación de Higienizadores Seleccionados
Higienizador eV*
Ozono 2,07
Ácido Peroxiacético 1,81
Dióxido de Cloro 1/57
Hiploclorito de Sodio (Blanqueador de cloro) 1,36
* electrón-Voltios
Como la difusión de la molécula es más lenta que su semivida, el ácido peroxiacético reacciona con todos los compuestos oxidables en su velocidad. Puede dañar virtualmente todos los tipos de macromoléculas asociadas con un microorganismo; por ejemplo carbohidratos, ácidos nucleicos (mutaciones) , lípidos (peroxidación de lípidos) y aminoácidos (por ejemplo, la conversión de Phe en m-Tyr y o-Tyr) , y finalmente la lisis de la célula. Convencionalmente se enseñaría que 2-hidroxi ácidos orgánicos tales como ácido láctico que posee las propiedades químicas de compuestos orgánicos oxidables no se usan juntos con un oxidante, particularmente con referencia a perácidos. Por lo tanto, es particularmente sorprendente combinar el ácido peracético y ácido láctico en esta invención y se muestra, que los dos compuestos tienen efectos sinérgicos en lugar uno que contrarresta al otro.
De iniciones
Se debe indicar que, como se usa en esta memoria descriptiva y las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un", "una" y "el/la" incluyen referentes plurales a menos que el contenido indique claramente de otro modo. Por lo tanto, por ejemplo, la referencia a un "surfactante" incluye dos o más de tales surfactantes .
A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados en la presente tienen el mismo significado que se entiende comúnmente un experto en el arte al cual pertenece la invención. Todas las imágenes incluyen los valores finales.
Con referencia a las soluciones acuosas y métodos de la invención, "perácido" y "perácido orgánico" se refieren a compuestos de la estructura RC(0)OOH en donde R es un grupo alifático que tiene de 1 a 3 átomos de carbono. R puede ser metilo, etilo, n-propilo, o s-propilo. Un perácido particularmente preferido es ácido peracético/ácido peroxiacético/PAA/ (CH3C (0) 00H) . Se pueden usar mezclas de los perácidos orgánicos precedentes.
En soluciones acuosas, los perácidos orgánicos existen en un equilibrio químico con peróxido de hidrógeno y por consiguiente se pueden formar a partir de los ácidos orgánicos correspondientes peróxido de hidrógeno en la reacción:
RCOOH+H202 i ^ RC(0)00H +H20
La concentración del equilibrio de cada reactivo se puede calcular a partir de la ecuación de equilibrio.
([RC000H] [H20])/([RCOOH] [H202]) = Kap d? ^ en donde: [RC000H] es la concentración de perácido en moles/L; [H20] es la concentración de agua en moles/L; [RCOOH] es la concentración de ácido orgánico en moles/L; y [H202] es la concentración de peróxido de hidrógeno en moles/L; y Kap es el equilibrio evidente constante para la reacción de equilibrio de perácido (Ecuación I) .
La constante de equilibrio evidente, Kap, varía tanto con el perácido elegido como con la temperatura. La constante de equilibrio para la formación del perácido se puede hallar en D. Swern, ed., Peróxidos Orgánicos, Volumen 1, Wiley-Interscience,
New York, 1970. A una temperatura de 40 °C, la constante de equilibrio evidente para el ácido peroxiacético es 2,21. De acuerdo con esta reacción de equilibrio, las soluciones de perácido orgánico comprenden peróxido de hidrógeno y el ácido orgánico correspondiente además del perácido orgánico.
Cuando se diluye, un período de tiempo relativamente prolongado puede caducar antes de que se logre un nuevo equilibrio. Por ejemplo, las soluciones de equilibrio que comprenden 5% de ácido peroxiacético normalmente comprenden el 22% de peróxido de hidrógeno. Las soluciones de equilibrio que comprenden un 15% de ácido peroxiacético normalmente comprenden un 10% de peróxido de hidrógeno. Cuando estas soluciones de equilibrio se diluyen a soluciones que comprenden 50 ppm de ácido peroxiacético, la solución producida mediante la dilución del 5% de la solución de ácido peroxiacético comprende 220 ppm de peróxido de hidrógeno y la solución producida mediante la dilución de 15% de solución comprende 33 ppm de peróxido de hidrógeno. Por consiguiente, en algunas realizaciones, la solución higienizadora se provee como un concentrado que se diluye a la concentración deseada del perácido con agua o con una solución acuosa que comprende otros componentes de la solución higienizadora de acuerdo con la invención inmediatamente antes de usarla. En algunas realizaciones, las soluciones higienizadoras se proveen como concentrados que se diluyen inmediatamente antes de usarlas.
Los perácidos están comercialmente disponibles de acuerdo con el equilibrio precedente. El ácido peroxiacético (CAS N° 79-21-0) normalmente está comercialmente disponible, por ejemplo, como una solución acuosa que comprende ácido peroxiacético (35%) , peróxido de hidrógeno (6,5%), ácido acético 69-19-7 (40%), ácido sulfúrico (1%) y agua (17%) (todas las unidades son en p/p) .
El 2-hidroxi ácido orgánico se selecciona de ácido tartárico, ácido cítrico, ácido málico, ácido mandélico, y ácido láctico. Se prefieren los isómeros ópticos biológicos predominantes. El 2-hidroxi ácido orgánico también se puede proveer como el racemato, así como cualquiera de los isómeros ópticamente puros. En algunas realizaciones, se prefiere el (+) enantiómero (por ejemplo, ácido L-láctico, ácido L- (+) -láctico)
Como se usa en la presente, por el término "higienizar" se entiende la reducción de microorganismos viables sobre superficies con la excepción de endosporas bacterianas. En algunas realizaciones, la reducción es de por lo menos el 99,9%, 99,99%, 99,999% (por ejemplo, en 3, 4, 5 unidades logarítmicas, respectivamente) o por lo menos en 3, 4, 5, 6, 7, 8 unidades logarítmicas medidas antes y después del contacto con las soluciones higienizadoras de acuerdo con la invención. En algunas realizaciones, las superficies higienizadas tienen niveles de microorganismos patógenos considerados seguros de acuerdo con todas las ordenanzas de salud pública aplicables o por debajo de umbrales que se piensa que presentan riesgos de infección o de enfermedad. Por consiguiente, una superficie no necesita tener una eliminación o destrucción completa de todas las formas de vida microbiana que se deben higienizar. La reducción puede ser mediante eliminación física, o toxicidad al microorganismo que deriva en la destrucción o inhibición del crecimiento del microorganismo.
"Producto agrícola" hace referencia a verduras y frutas orgánicas o no orgánicas enteras o cortadas, que incluyen en forma no taxativa aquellas que se comen sin cocción. En algunas realizaciones, el producto agrícola es Mezcla de Primavera, espinaca, lechuga romana, palta, batata, espárragos, rúcula, escarola, achicoria, brotes de arveja, eneldo, cebollín, lechuga, lechuga de hoja (por ejemplo, lechuga morada y verde), lechuga Iceberg, endibia, perejil, espinacas, rábanos, apio, zanahorias, remolachas, cebollas, ruibarbo, berenjena, pimientos, calabazas, calabacines, pepinos, tomates, papas, batatas, nabos, rutabagas, calabacín, repollo (por ejemplo, repollo morado y verde) , col (por ejemplo, col verde y morada) colinabo, hojas de col rizada, coliflor, verduras orientales (por ejemplo, bakchoy tierna, judías, planta de la mostaza, brócoli chino, col napa, cebollines, cilantro, yau-choy, esponja vegetal) , repollitos de Bruselas, quimbombó, champiñones, chícharos, soja, brócoli, arveja dragón, maíz y hojas de diente de león, frutas como manzana, ananá, melón (por ejemplo, melón, sandía, melaza, melón dulce, melón de invierno), cítricos (por ejemplo, naranja, limón, mandarina, pomelo), golgi, acai, duraznos, cerezas, damascos, nísperos, kiwi, membrillo, ciruelas, ciruelas pasas, uvas y peras, y las bayas tales como frutillas, frambuesas, grosellas, frambuesa americana, moras, arándanos, grosellas, bayas de sauce, moras y arándanos .
Por el término "esencialmente libre" se entiende que el compuesto o la sustancia de la referencia está presente en la solución a un nivel inferior a 300, preferentemente inferior a 150 y más preferentemente inferior a 50 y más preferentemente inferior a 10 ppm o aún 1 ppm en peso .
Composiciones de la invención
Por consiguiente, en un primer aspecto, la invención proporciona una solución acuosa que comprende 1) un perácido orgánico de la fórmula RC(0)OOH en donde R es metilo, etilo, n-propilo, o s-propilo ii) un 2-hidroxi ácido orgánico seleccionado de ácido tartárico, ácido cítrico, ácido málico, ácido mandélico, y ácido láctico,- iii) agua; y opcionalmente, iv) un surfactante aniónico, en donde la solución acuosa tiene un pH de 2,5 a 6,0. En algunas realizaciones, el pH es de 2,5 a 3,5, 2,5 a 4,0, 2,7 a 3,5, 2,5 a 5,0, 3,0 a 4,0, 3,0 a 5,0, 3,0 a 6,0, o de 3,5 a 4,5.
Los 2-hidroxi ácidos orgánicos adecuados para su uso en las soluciones acuosas de la invención son ácido tartárico, ácido cítrico, ácido málico, ácido mandélico y ácido láctico (es decir, ácido 2 -hidroxipropanoico) . Un ejemplo de 2-hidroxi ácido orgánico es el ácido láctico. Se puede usar una combinación de dos o más de cualquiera de los 2-hidroxi ácidos orgánicos precedentes (por ejemplo, ácido láctico + ácido cítrico; ácido láctico + ácido tartárico; ácido láctico + ácido málico; ácido láctico + ácido mandélico)
En algunas realizaciones, el perácido es ácido peroxiacético, el ácido orgánico es ácido láctico y el surfactante aniónico es lauril sulfato de sodio. En otras realizaciones, la concentración del ácido perácido en la solución es de 3 a 100 ppm (p/p) , la concentración del 2-hidroxi ácido orgánico en la solución es del 0,1% al 2% (p/p); y el pH es entre 2,5 y 5,0. En aún otra realización, la concentración del perácido es de 5 a 100 ppm (p/p), la concentración del 2-hidroxi ácido orgánico es del 0,1% al 2% (p/p) .
En otra realización, la solución acuosa de la invención tiene una concentración de perácido en la solución de 60 a 80 ppm (p/p) , una concentración de 2-hidroxi ácido orgánico en la solución del 0,2% al 1,25% (p/p); y un pH de entre 2,8 y 4,2 o entre 3,8 y 4,2 inclusive .
En algunas realizaciones, la concentración del perácido en la solución puede ser de 3 a 100 ppm (p/p), la concentración de 2-hidroxi ácido orgánico en la solución del 0,1% al 2% (p/p) y el pH es entre 2,5 y 5,0. En aún otra realización, la concentración del perácido es de 50 a 100 ppm (p/p) y la concentración de 2-hidroxi ácido orgánico es del 0,1% al 1% (p/p) · En otras realizaciones, el perácido se ácido peroxiacético y el 2-hidroxi ácido orgánico es ácido láctico (por ejemplo, ácido L(+)-láctico) . En aún otra realización, la concentración del ácido peracético es de 60 a 90 ppm o de 70 a 80 ppm. En aún otras realizaciones, la concentración del ácido láctico es del 0,1% al 0,8% o del 0,2 al 0,4% (p/p) .
En una realización particularmente preferida, la invención proporciona una composición que comprende, o consiste esencialmente en, una solución acuosa de ácido peroxiacético y ácido láctico (por ejemplo, ácido L (+) -láctico) a un pH de 2 , 5 a 6,0 y más preferentemente a un pH de entre 2,8 y 4,2 entre 3,8 y 4,2 inclusive, en donde una cantidad de la solución además comprende peróxido de hidrógeno y ácido acético y la composición está sustancialmente libre de cualquier surfactante. En algunas realizaciones, la solución acuosa está sustancialmente libre de cualquier isómero de ácido láctico diferente de ácido L- (+) -láctico. En otras realizaciones de cualquiera de los precedentes, la concentración del perácido (por ejemplo, ácido peroxiacético) en la solución es de 30 a 300 ppm (p/p) , de 60 a 80 ppm (p/p) , de 50 a 200 ppm (p/p) ; de 60 a 160 ppm (p/p) , de 120 a 160 ppm (p/p) , o de 140 a 160 ppm (p/p) ; y la concentración del 2-hidroxi ácido orgánico (por ejemplo, ácido láctico) en la solución se selecciona del 0,1% al 5% (p/p), del 0,1% al 2%, del 0,2% al 1%, del 0,2% al 0,6%, o del 0,1% al 0,5%, o del 2%, 3%, o 4%; y el pH es de entre 2,5 y 6,0, 2,5 a 5.0, 2,8 y 3,2, 2,5 y 3,5, o 2,6 y 3,2. En otras realizaciones de lo precedente la solución es para el contacto con el producto agrícola que se debe higienizar de 10, 20 o 30 segundos a 2 minutos o 10, 20, 30 o 40 segundos. En otras realizaciones, la concentración del ácido per cido es de 30 a 100 ppm (p/p) , y la concentración del 2-hidroxi ácido orgánico es de 0,3 a 2,0% (p/p) · En una realización particularmente preferida, la concentración del perácido se de 70 a 80 ppm (p/p) , y la concentración del 2-hidroxi ácido orgánico es del 0,2 al 0,4% (p/p). En otras realizaciones de cualquiera de los precedentes, la solución está a una temperatura de 1,6°C a 7,2°C o a temperatura ambiente. Estas soluciones acuosas pueden estar libres o sustancialmente libres de surfactantes que incluyen todos y cada uno de surfactantes no iónicos, surfactantes catiónicos o surfactantes aniónicos . Generalmente, bajos niveles de peróxido de hidrógeno de 1 a 20 ppm, de 5 a 15 ppm, o de 7 a 12 ppm pueden estar presentes en la solución. En algunas realizaciones, cualquier perácido del 2-hidroxi ácido orgánico formado a partir de peróxido de hidrógeno o presente en la solución acuosa puede estar presente en una cantidad que es inferior a l/l0a, l/5a, l/20a, o l/50a de la cantidad del 2-hidroxi ácido orgánico en la solución. En una realización preferida de lo precedente, el perácido es ácido peroxiacético y el 2-hidroxi ácido orgánico se selecciona de uno o más de ácido tartárico, ácido cítrico, ácido málico, ácido mandélico y ácido láctico. En una realización particularmente preferida, de cualquiera de los precedentes, el 2-hidroxi ácido orgánico es ácido láctico.
Un catalizador, agregado para acelerar la velocidad a la cual el perácido orgánico alcanza el equilibrio, también puede estar presente en la solución de acuerdo con la invención. Los catalizadores típicos son ácidos fuertes, tales como, ácido sulfúrico, ácido sulfónico, ácido fosfórico y fosfónico. Cuando la solución de perácido se diluye para producir el nivel de perácido deseado, el catalizador también se puede diluir. La presencia de bajos niveles de ácido sulfúrico, por ejemplo, concentraciones en la gama de 1 ppm a 50 ppm, no afecta en forma negativa la proporción de la composición higienizadora.
Opcionalmente , cualquiera de las soluciones de la invención puede comprender además un agente para reducir o suprimir la formación de espuma de la solución durante el uso o el contacto con el producto agrícola. La solución de acuerdo con la invención también puede estar esencialmente libre de cualquier surfactante no iónico, aniónico y/o catiónico y/o también puede estar esencialmente libre de cualquier agente espesante.
La solución de acuerdo con la invención también puede comprender un colorante para facilitar la detección de la solución sobre el producto agrícola.
Si se deben agregar surfactantes aniónicos a las soluciones acuosas de la invención éstos se seleccionan de materiales seguros para los alimentos conocidos en el arte, sulfatos y/o sulfonatos de alquilo de C6-i8 (por ejemplo, lauril sulfato de sodio o de potasio) y mezclas de ellos. Los sulfatos de alquilo son preferidos, para lograr eficacia y sabor agradable, especialmente en la forma de sales de sodio y/o de potasio. El sulfato de dodecilo de sodio, o el lauril sulfato de sodio, es un surfactante aniónico particularmente preferido.
En algunas realizaciones, por consiguiente, el perácido es ácido peroxiacético , el ácido orgánico es ácido láctico, y el surfactante aniónico es lauril sulfato de sodio. En otras realizaciones, la concentración del ácido perácido en la solución es de 3 a 100 ppm (p/p),k la concentración del 2—hidroxi ácido orgánico en la solución es del 0,1% al 2% (p/p) y la concentración del surfactante aniónico en la solución es de 10 a 2500 ppm y el pH es entre 2,5 y 5,0. En aún otra realización, la concentración del perácido es de 5 a 100 ppm (p/p) , la concentración del 2-hidroxi ácido orgánico es del 0,1% al 2% (p/p) y Ia concentración del surfactante aniónico es de 50 a 400 ppm.
Generalmente, la concentración del peróxido de hidrógeno en la solución acuosa es de 5 veces a 10 veces menor que la concentración del perácido y su presencia refleja el equilibrio o la interconversión del perácido con el ácido correspondiente y peróxido de hidrógeno. La concentración del peróxido de hidrógeno puede ser por ejemplo inferior a 5 ppm, 10 ppm o 20 ppm, según la selección y la concentración del perácido. Por consiguiente, la concentración del peróxido de hidrógeno en la solución acuosa es normalmente mucho menor que aquella del perácido.
Por consiguiente, en algunas realizaciones, la invención proporciona una solución acuosa que comprende i) un perácido orgánico de la fórmula RC(0)OOH en donde R es metilo, etilo, n-propilo, o s-propilo; ii) un 2-hidroxi ácido orgánico seleccionado del grupo formado por ácido tartárico, ácido cítrico, ácido málico, ácido mandélico, y ácido láctico; y, opcionalmente , iii) un surfactante aniónico; en donde la solución acuosa tiene un pH de 2,5 a 6,0, de 4,0 a 6,0, de 3,5 a 4,5, de 3,0 a 5,0, de 3,6 a 4,2, de 2,5 a 5,0, de 2,5 a 4,5, de 2,5 a 3,5, de 2,7 a 3,5, de 3,6 a 4,6, de 2,8 a 3,2, inclusive, o de 3,0 (por ejemplo, 3,0 +/-0,2; 3,0 +/-0,3); y la concentración del perácido es de 40 al 250 ppm (p/p) inclusive, y la concentración del 2-hidroxi ácido orgánico es del 0,1% al 1% (p/p), inclusive. En otras realizaciones, la solución acuosa tiene un perácido que es ácido peroxiacético y un 2-hidroxi ácido orgánico que es ácido L— (+) -láctico. En aún otras realizaciones, la concentración del ácido peroxiacético en la solución es de 50 a 100 ppm (p/p) , la concentración del ácido láctico en la solución es del 0,1% al 0,6% (p/p) . Una solución acuosa tiene una concentración de ácido peroxiacético de 60 a 80 ppm (p/p) y una concentración del ácido láctico del 0,1% al 0,4% (p/p). En otras realizaciones de cualquiera de los precedentes el pH está en la gama seleccionada de 2,5 a 4,5, de 2,8 a 3,2, de 2,5 a 5,0, y de 2,7 a 3,5. En otras realizaciones de cualquiera de los precedentes, la solución está a una temperatura de 1,6°C a 7,2°C o a temperatura ambiente. Estas soluciones acuosas pueden estar sustancialmente libres de surfactantes que incluyen todas y cada uno de surfactantes aniónicos, surfactantes catiónicos o surfactantes aniónicos. En general, los niveles bajos de peróxido de hidrógeno de 1 a 20 ppm, de 5 a 15 ppm, o de 7 a 12 ppm pueden estar presentes en la solución. Cualquier peroxi 2-hidroxi ácido orgánico formado o presente en la solución acuosa puede estar presente en una cantidad que es menor de 1/10°, 1/5°, 1/20°, o 1/50° de la cantidad del 2-hidroxi ácido orgánico en la solución.
En algunas realizaciones, la solución acuosa se forma agregando una solución del 2-hidroxi ácido orgánico que está sustancialmente libre de peróxido de hidrógeno a una solución del perácido o agregando una solución del perácido a una solución del 2-hidroxi ácido orgánico que está sustancialmente libre de peróxido de hidrógeno. La mezcla resultante puede ser un concentrado o una premezcla descrita anteriormente o en una concentración higienizadora adecuada para el contacto con productos agrícolas descritos en la presente. En otras realizaciones, el ácido orgánico que está sustancialmente libre de cualquier peróxido de hidrógeno y el perácido se agregan por separado a un fluido acuoso usado para lavar o higienizar el producto agrícola. En algunas realizaciones, el pH y/o la concentración del perácido y/o la concentración del 2-hidroxi ácido orgánico en la solución se mantiene monitoreando uno o más del pH, la concentración del perácido, la concentración del 2-hidroxi ácido orgánico, o el potencial de reducción de oxidación de la solución y agregando un concentrado o una premezcla de la solución acuosa para mantener el pH, la concentración del perácido y el ácido láctico en la solución acuosa durante el uso de la solución en el contacto con el producto agrícola.
Cualquiera de las soluciones precedentes de la invención puede comprender en particular un agente para reducir o suprimir la formación de espuma de la solución durante el uso o el contacto con el producto agrícola. Las soluciones de acuerdo con la invención también pueden estar esencialmente libres de cualquier surfactante no iónico y/o catiónico y/o también estar sustancialmente libres de cualquier agente espesante.
En una realización adicional, la solución acuosa de la invención tiene una concentración de perácido en la solución de 60 a 80 ppm (p/p) , una concentración de 2-hidroxi ácido orgánico en la solución del 0,2% al 1,25% (p/p) ; y una concentración de surfactante aniónico en la solución de 150 a 200 ppm (p/p) y un pH de entre 3,8 y 4,2, inclusive o entre 3,8 y 4,2, inclusive.
Las soluciones acuosas de acuerdo con la invención pueden1 incluir opcionalmente un agente secuestrador que quela metales que catalizan la descomposición de peróxido de hidrógeno. Estos agentes incluyen, en forma no taxativa, ácidos fosfónicos orgánicos capaces de secuestrar cationes de metales bivalentes, así como las sales solubles en agua de dichos ácidos. Un quelante
t
común es el ácido 1-hidroxietilideno-l , 1-difosfónicó . Los quelantes presentes en la composición higienizadora normalmente se diluyen al usarlos, por lo tanto minimizan su efecto durante el uso. Específicamente, una solución higienizadora acuosa de la invención puede opcionalmente contener un agente para quelar magnesio o calcio.
Sin atarnos a la teoría, la presencia del surfactante aniónico opcional puede servir para reducir la tensión superficial y la viscosidad de la solución acuosa y facilitar la propagación de la solución sobre la superficie del producto agrícola. La baja viscosidad mejora la finalización del tratamiento promoviendo la propagación sobre la superficie del alimento, especialmente cuando hay capas, rugosidades, etc. La baja viscosidad también mejora las propiedades de enjuague y la velocidad de todo secado residual .
En algunas realizaciones, la solución acuosa es capaz de reducir una contaminación microbiana sobre 'la superficie del producto agrícola en al menos 2 unidades logarítmicas, más preferentemente, en por lo menos 3 unidades logarítmicas y aún más preferentemente en por lo menos 4 unidades logarítmicas de acuerdo con cualquier método descrito en los Ejemplos (por ejemplo, usando sustitutos de patógenos E. Coli o Listeria unidos a hojas de lechuga) . En otras realizaciones, el método inhibe la putrefacción o prolonga la vida útil del producto agrícola en un 10%, 20%, 30, 40%, 20 a 50% o en 1, 2, 3, 4, o 5 días de acuerdo con cualquier método descrito en los Ejemplos.
En Estados Unidos, el uso y la selección de ingredientes limpiadores con el propósito de lavar frutas y verduras se describe en el Código de Normas Federales de Estados Unidos, Título 21, Artículo 173.315: "Ingredientes para uso en el lavado o desprendimiento de lejía de frutas y verduras". Estas normas, que se incorporan en la presente como referencia, exponen ingredientes que se pueden usar para el contacto directo con alimentos y se describen como "generalmente considerados seguros" (GRAS) y otros pocos ingredientes seleccionados. Estas secciones también proporcionan ciertas funciones en la cantidad del material que se pueden usar en un contexto dado.
Preferentemente, las sustancias agregadas directamente o contactadas con alimentos humanos, se puede elegir que sean generalmente reconocidas como seguras (GRAS) incorporadas anteriormente. Los ingredientes GRAS Directos se usan de acuerdo con las buenas prácticas de fabricación actuales que incluyen que un ingrediente alimenticio humano directo sea de nivel de alimento apropiado, que se prepare y se manipule como un ingrediente alimenticio, y que la cantidad del ingrediente agregado al alimento no exceda la cantidad razonablemente necesaria para alcanzar el efecto físico, nutricional u otro efecto técnico deseado en el artículo alimenticio.
Las soluciones se pueden proporcionar como una premezcla o concentrado que se diluye con agua para obtener una solución higienizadora para entrar en contacto con productos alimenticios como se describe en la presente. Están contempladas premezclas o concentrados que requieren una dilución de 4 a 200 veces, de 10 a 100 veces, de 10 a 50 veces, de 10 a 25 veces, de 4 a 10 veces con agua antes de su uso (por ejemplo, una dilución de 5, 10, 20, 40 , 50 , 100 veces) .
Por el término "sustancialmente libre" en general se entiende que la sustancia de referencia está ausente o presente como un componente que no puede cambiar esencialmente las propiedades del material de referencia. Con respecto al peróxido de hidrógeno, una solución de 2-hidroxi ácido orgánico que está sustancialmente libre de peróxido de hidrógeno puede ser una que no tiene peróxido de hidrógeno o que tiene una cantidad de peróxido de hidrógeno que es inferior a 0,1 ppm (p/p) . Con respecto a un peroxi 2-hidroxi ácido orgánico, una solución higienizadora está sustancialmente libre del 2-hidroxi perácido orgánico si el 2-hidroxi perácido orgánico está ausente en una composición de referencia o si está presente en una cantidad que inferior a 1/10°, 1/20° , 1/40° o 1/100° del 2-hidroxi ácido orgánico correspondiente o está presente solamente como un producto de la reacción que se formó primero mediante una reacción del 2-hidroxi ácido orgánico en una solución que contiene peróxido de hidrógeno y un perácido orgánico de la fórmula RC(0)OOH en donde R es metilo, etilo, n-propilo, o s-propilo. Por consiguiente, en algunas realizaciones, la composición higienizadora o la solución de 2-hidroxi ácido orgánico usada en la elaboración de la composición higienizadora está sustancialmente libre de un perácido del 2-hidroxi ácido orgánico.
Envases y Estuches
En algunas realizaciones, la invención proporciona un estuche que comprende la solución higienizadora acuosa de acuerdo con la invención e instrucciones para su uso en el tratamiento de productos agrícolas. En otras realizaciones, el estuche proporciona una primera parte que comprende una solución de perácido que está en equilibrio o cerca del equilibrio. Normalmente la solución se provee lista para usar o comprende un 5% al 35% en peso de un perácido, tal como ácido peroxiacético , o una mezcla de perecidos y viene con instrucciones sobre cuánto se debe diluir con agua antes de usarla. El estuche contiene un tazón para remojo y un filtro. La formulación lista para usar se puede proveer en un frasco para aspersión. En otras realizaciones, el estuche puede proveer la solución higienizadora acuosa como un concentrado en un envase junto con un frasco para aspersión que se puede rellenar que opcionalmente contiene una cantidad de la formulación lista para usar. Este estuche incluiría instrucciones en cuanto al factor de dilución apropiado para usar cuando se produce el concentrado con agua. Normalmente, el concentrado estaría 4, 5, 6, 8, 10 o 20 veces más concentrado que la formulación lista para usar. Dichos estuches serían especialmente adecuados para su uso por el consumidor.
Métodos de la invención
En un segundo aspecto, la invención proporciona un método para tratar productos agrícolas, dicho método comprende poner en contacto a la superficie con una solución higienizadora acuosa de acuerdo con la invención. La solución se puede poner en contacto o aplicar al producto agrícola por cualquier medio adecuado conocido para las personas con conocimiento normal del arte. Por ejemplo, la solución se puede aplicar mediante cualquier método que asegure el buen contacto entre la superficie que se debe higienizar y la solución higienizadora. Dichos métodos incluyen baño, lavado, recubrimiento, cepillado, hundimiento, inmersión, limpieza, rociado, aspersión y nebulización. Estos pasos se pueden repetir para asegurar un contacto completo. Üna vez aplicado, después de un tiempo de permanencia suficiente para asegurar el nivel deseado de acción higienizadora (por ejemplo, 4, 5, 6, 7 u 8 veces logarítmicas de eliminación de un contaminante microbiano) , la solución se puede retirar físicamente de la superficie del producto agrícola mediante la centrifugación y/o el drenaje y/o el enjuague o el lavado del producto agrícola con agua adecuada para su uso sobre alimentos (por ejemplo, agua potable) . Todas las combinaciones de estos pasos se pueden realizar en cualquier orden. El enjuague no es esencial cuando el perácido, 2-hidroxi ácido orgánico, y el lauril sulfato de sodio están presentes en cantidades GRAS . Específicamente, los perecidos preferentemente usados son volátiles y, en consecuencia, dejarían escasos residuos sobre el producto agrícola al secarlo.
El tiempo de permanencia varía con la concentración del perácido (por ejemplo, ácido peroxiacético, el 2-hidroxi ácido orgánico (por ejemplo, ácido L- (+) -láctico) , y el surfactante (si existiera) . Sin embargo, está contemplado que la superficie del producto agrícola pueda ser puesta en contacto con la solución higienizadora acuosa durante un tiempo de permanencia e 10 segundos a 10 minutos. Más preferentemente, el tiempo de permanencia es de 20 segundos a l, 2, o 4 minutos. El tiempo de permanencia puede variar de acuerdo con las temperaturas y la concentración del perácido y el 2-hidroxi ácido orgánico. Las temperaturas y concentraciones más bajas requerirían un tiempo de contacto más prolongado que podría determinar en forma empírica rápidamente un experto en el arte .
La temperatura a la cual se aplica la solución de enjuague de la solución higienizadora acuosa deberá estar de acuerdo con la tolerancia térmica del producto agrícola. Generalmente, las temperaturas más frías prolongan la vida útil del producto agrícola. Por consiguiente, la solución higienizadora se puede aplicar eficazmente a temperaturas de entre 1,6°C y 15 °C. Preferentemente, la temperatura es entre 3,3°C y 5,5°C. Sin embargo, se pueden usar otras temperaturas de acuerdo con la tolerancia térmica del producto agrícola que se esté tratando.
En algunas realizaciones, el contacto reduce una contaminación microbiana sobre la superficie del producto agrícola por lo menos 4 unidades logarítmicas, más preferentemente por lo menos 5 unidades logarítmicas, y aún más preferentemente por lo menos 6, 7 u 8 unidades logarítmicas. En otras realizaciones, el método inhibe la putrefacción o prolonga la vida útil del producto agrícola un 10%, 20%, 30, 40%, o 20% a 50% o 1, 2, 3, 4, o 5 días. El contaminante puede ser un patógeno humano (por ejemplo, una cepa de E. coli 0157H7, Listeria monocyogenes, Salmo'nella) o un microorganismo nativo que generalmente se encuentra sobre la superficie de los productos agrícolas.
La solución higienizadora acuosa de acuerdo con la invención se puede usar para aplicaciones domésticas y comerciales, tales como en el servicio de alimentos, procesamiento de alimentos e industrias de la protección de la salud. Aunque la composición higienizadora se usa especialmente sobre alimentos y superficies que están en contacto con alimentos también se puede usar sobre otras superficies de contacto. En realizaciones particulares, las soluciones de acuerdo con la invención se usan para tratar productos agrícolas antes, durante o después del transporte, mientras están en exposición, durante el almacenamiento o poco antes de la preparación y/o el consumo de comidas.
El método es especialmente adecuado para tratar frutas y verduras, que incluyen especialmente aquellas que se pueden comer sin cocción. Por ejemplo, en forma no taxativa, el método se puede practicar sobre mezcla de primavera, rúcula, achicoria, brotes de arveja, eneldo, cebollín, espinaca, lechuga romana, espárragos, lechuga, lechuga de hoja, lechuga Iceberg, endibia, perejil, espinacas, rábanos, apio, zanahorias, remolachas, cebollas, ruibarbo, berenjena, pimientos, pepinos, tomates, papas, batatas, nabos, rutabagas, calabacín, repollo, col, colinabo, hojas de col rizada, coliflor, repollitos de Bruselas, quimbombó, champiñones, chícharos, soja, brócoli, arveja dragón, maíz y hojas de diente de león, frutas como manzana, cantalupo, ananá, sandía, melaza, naranja, limón, mandarina, duraznos, cerezas, damascos, membrillo, ciruelas, uvas y peras; y bayas tales como frutillas, frambuesas, grosellas, moras-frambuesa, moras, arándanos, grosellas, bayas de sauce, moras y arándanos y hierbas .
En algunas realizaciones, el contaminante microbiano que se debe reducir mediante el tratamiento es un patógeno humano (por ejemplo, una bacteria enterotóxica) , que incluye en forma no taxativa, una bacteria (por ejemplo E.coli 0157H7, Listeria moncytogenes , Salmonella) , un virus, un hongo o un moho. En otras realizaciones, el contaminante microbiano es uno que puede acelerar la putrefacción del producto agrícola.
También se ha descubierto sorpresivamente que la formulación conjunta del perácido (por ejemplo, ácido peroxiacético) con el 2-hidroxi ácido orgánico (por ejemplo, ácido L- (+) -láctico) en la composición higienizadora acuosa proporciona una composición higienizadora particularmente eficaz y de duración prolongada cuando se usa. Cuando se usa para tratar productos agrícolas, la composición se debe refrescar o complementar con perácido y 2-hidroxi ácido orgánico adicional a un índice mucho menor para mantener una concentración del perácido en una gama de 60 a 80 ppm y el ácido láctico a una concentración del 0,2% al 0,4%, o del 2,5%.
En algunas realizaciones, la composición higienizadora se provee como una mezcla de premezcla acuosa (por ejemplo, un concentrado de 5-200 veces, un concentrado de 5, 10,20, 40,50 o 100 veces) que se debe agregar al agua que se debe poner en contacto con el producto agrícola. En algunas realizaciones, la concentración del perácido y/o 2-hidroxi ácido orgánico se ajusta en la solución de lavado para mantener su concentración (es) mediante el agregado de la premezcla o el concentrado basado en la concentración del perácido y/o 2-hidroxi ácido orgánico en la solución de lavado como se determina mediante datos de medición real o de consumo histórico .
En aplicaciones comerciales, en algunas realizaciones, el producto agrícola se transporta a la solución de lavado donde el producto agrícola se pone en contacto con higienizadora mediante la inmersión en la solución. Se pueden generar burbujas de aire para facilitar el contacto y/o la mezcla de una premezcla. El producto agrícola luego se retira de la solución higienizadora, opcionalmente se enjuaga asperjando con agua libre de un perácido o 2-hidroxi ácido orgánico y/o mediante la inmersión en agua libre de un perácido o 2-hidroxi ácido orgánico. El agua de enjuague se puede retirar también agitando el producto agrícola o centrifugando el producto agrícola que opcionalmente se puede secar con aire para eliminar todo exceso de humedad.
Los siguientes ejemplos están destinados a ilustrar, en forma no taxativa, la invención.
EJEMPLOS
Ejemplo 1. El presente ejemplo ilustra el uso de una solución higienizadora acuosa de acuerdo con la invención. Como se ilustra en las figuras 1 a 16, la solución de acuerdo con la invención elimina ventajosamente microorganismos de la superficie de una variedad de productos agrícolas, inhibe el crecimiento de microorganismos nativos sobre los productos agrícolas tratados y puede eliminar patógenos de la superficie de los productos agrícolas. También se muestra que los métodos y las composiciones de la invención mejoran en gran medida la vida útil de los productos agrícolas y retardan en gran medida la putrefacción de los productos agrícolas. Los hallazgos se extienden a microorganismos tan diversos como bacterias, levadura y moho.
A. Procedimiento de operación estándar para el estudio de la vida útil
Este método se puede usar para determinar la vida útil de productos agrícolas que se han tratado con una solución higienizadora, en general y en particular, aquellas de acuerdo con la invención.
Preparación
Ocho envases de 90 litros enfriados 75% de agua a 7,2°C
Doce cubas de 22,5 litros de autoclave envueltas bien en papel de aluminio con por lo menos 1 día de anticipación al procesamiento.
1. Según el tipo de producto agrícola, use los tubos OTR correspondientes; corte, marque y selle para formar bolsas. Coloque las bolsas bajo una luz ultravioleta en el gabinete de seguridad biológica durante 2 horas para minimizar la contaminación .
Procesamiento
1. Formule higienizadores químicos inmediatamente antes de usarlos. Todos los cálculos están basados en masa/masa Llene los envases hasta los ¾ del total solamente de manera tal de prevenir que se desborden durante el procesamiento
Coloque el producto crudo suavemente dentro de una cesta de acero inoxidable con tapa y llénelo hasta ¾ del total Inicie el cronómetro cuando la cesta se sumerja dentro del higienizador químico
Circule hacia arriba y hacia abajo la cesta llena suavemente durante 30 segundos
Retire la cesta tratada con productos agrícolas del envase con solución química y transfiérala inmediatamente a otro envase lleno hasta ¾ del total con agua para enjuagar
Haga circular hacia arriba y abajo 10 veces en agua para eliminar la mayor parte del producto químico residual sobre la superficie de producto agrícola tratada
Coloque la cesta con el producto agrícola tratado en forma invertida y vacíe el contenido suavemente dentro de revestimiento de compartimiento de secadora
Repita los pasos ?3' a '8' hasta que el revestimiento del compartimiento de la secadora esté completo. Cierre la tapa de la secadora y centrifugue durante 20 minutos
Vacíe el producto agrícola secado del revestimiento del compartimiento hacia cubas estériles y deje que el producto agrícola tratado seco en reposo durante 10-15 minutos adicionales para equilibrar la humedad con el medio ambiente para lograr el mismo contenido de humedad que la instalación de producción correspondiente.
11. Limpie las herramientas, los equipos y los envases
12. Repita los pasos ?' a '11' para otros tratamientos con higienizador
Embolsado y sellado
1. Tare la balanza con la bolsa cada vez
2. Llene la bolsa con la masa de producto agrícola deseada
3. Selle las bolsas con una máquina selladora apropiada
4. Guarde en cajas a 7,2°C y realice evaluaciones: análisis microbiológicos , Evaluación de Bolsa Abierta (OBE) , inspección visual en los días apropiados de interés
Evaluación
1. Use los formularios apropiados para la OBE
2. Inspeccione visualmente el producto agrícola y tome fotografías de las diferencias de las muestras de diferentes productos químicos
a. Determinación de humedad de OBE: pese la masa inicial de hojas, esparza las hojas sobre toallas de papel dobladas y seque presionando con las manos para eliminar la humedad exterior y tome un peso final
Cálculos :
Volumen que se debe usar de una solución de material con una solución concentrada:
Mmateriai = [Deseada ]Mdeseada
[Material ]
Diferencia de humedad:
Diferencia = (Mantes) - (Mdespués)
Porcentaje de humedad-:
%humedad = (Mantés) ~ (Mdespués)
(Mantes)
3. Para el análisis visual asegúrese de que las bolsas estén marcadas antes del primer análisis para seguir las mismas bolsas durante toda la vida útil
4. Enumere la población microbiana del producto agrícola tratado usando dilución en serie y esparza las placas
5. Las muestras para el análisis microbiano y de OBE se pueden recuperar, por ejemplo, los días 1, 5, 7, 9, 12 y 15
B. Procedimiento de Operación Estándar para el Ensayo de Desafio de Células Suspendidas
Este procedimiento se usa para determinar la aqtividad antimicrobiana de los higienizadores sobre microorganismos que están suspendidos en un líquido.
Parámetros de procesamiento y tratamientos
1. Temperatura 7,2°C
2. Tiempo de permanencia: 30 +/- 10 segundos pH: 3 +/- 0,3
3. Sustitutos de patógenos: E. coli K12, histeria innocua
4. Sustitutos de microorganismos de putrefacción: Pseudomonas flourescens , Saccharomyces cerevisiae
Realización del ensayo
1. Transfiera 1,00 mL de un cultivo de material de 108 cfu/g a un tubo de ensayo que contiene 9,00 gramos de solución ensayada
2. Revuelva la mezcla durante 15 segundos
3. Detenga la reacción transfiriendo 1 mL de las muestras tratadas a 9 mL de Tampón de Fosfato Butterfield
4. Enumere las células residuales viables a través de diluciones en serie y esparza las placas
5. Asegúrese de que la temperatura de la operación se mantenga a 7,2°C +/- 17,2°C (se retira solamente un tubo de ensayo del refrigerador por vez ya que la cinética de los productos químicos cambia significativamente si todo el ensayo se realiza a temperatura ambiente)
c. Procedimiento de operación estándar para el Ensayo de Desafio de Células Unidas
Este método se puede usar para determinar la actividad antimicrobiana de los higienizadores sobre microorganismos que están unidos sobre la superficie de las hojas.
Parámetros de Procesamiento y tratamientos
1. Temperatura: 7,2°C
2. Tiempo de permanencia: 45 segundos
3. pH: 3 +/- 0,3
4. Tratamientos: agua, agua clorada, CS, ácido láctico, ácido peroxiacético, higienizador de FE (es decir, aquí, soluciones acuosas que comprenden ácido peroxiacético y ácido láctico) a 16 niveles
5. Productos ensayados: lechuga romana, espinaca, mezcla de primavera
6. Sustituto de Patógeno: E.Coli K12, Listeria innocua
7. Microorganismos ensayados: microorganismos nativos sobre hojas de productos agrícolas (cuentas totales de placas aeróbicas [APC] , levadura y moho [YM] )
Preparación de las muestras
1. Tome 3-4 hojas del producto agrícola ensayado y colóquelas dentro de un cesto de polipropileno (PP) estéril de 15 cm x 15 cm x 12,5 cm. Si el producto agrícola ensayado es lechuga romana, corte la lechuga romana en rectángulos de 5 cm x 10 cm
2. Recupere 100 mL del cultivo de material de 108 cfu/g con una pipeta de 1 mL y atraviese lentamente la superficie de las hojas goteando gotas de tamaño pequeño del inoculo sobre la superficie de las hojas. Tenga cuidado de no agitar el cesto de PP y hacer que las gotitas caigan fuera de las hojas antes de secarlas.
3. Deje que el cesto con las hojas atravesadas esté en reposo en un gabinete de seguridad biológica con un ventilador encendido (0,5 VI. C.) durante 1,75 horas
4. Retire los cestos de PP con las hojas atravesadas del gabinete y transfiéralos a un ambiente frío/heladera a 4°C- 7°C durante 0,25 horas.
Tratamiento de las hojas atravesadas
1. Coloque un cesto de PP con las hojas atravesadas dentro de un envase estéril que contiene 3 litros de agua a 7°C durante 45 segundos con remolino
2. Enjuague inmediatamente durante 10 segundos sumergiendo el cesto tratado en agua a 7°C
3. Tome las hojas tratadas del cesto y colóquelas dentro de una bolsa Stomacher por medio de una pinza estéril
4. Marque la bolsa Stomacher con el tratamiento asociado para las hojas
5. Repita el Paso 1 a 4 con los otros tratamientos del ensayo
Enumeración de hojas tratadas
1. Agregue tampón de fosfato dentro de una bolsa Stomacher con las hojas tratadas hasta que se alcance una dilución de 10 veces
2. Cierre la bolsa con el tampón de fosfato y las hojas tratadas durante 30 segundos
3. Agite las hojas nuevamente dentro de la solución de tampón de fosfato y repita el cierre durante otros 30 segundos 4. Retire el tarapón de la muestra cerrada y enumere las células residuales mediante dilución en serie y esparza las placas
5. Repita el paso 1 a 4 para todos los demás tratamientos
Procedimiento de Operación Estándar para Preparación de Cultivo de Material Microbiano
Este procedimiento se usa para preparar un cultivo de material de 108-109 cfu/g para ensayos de desafío con células suspendidas y unidas. La concentración de células del cultivo de material se enumera antes de ensayar la solución.
1. ACTIVACIÓN DE CULTIVO DE MATERIAL
a. Todos los procedimientos se realizan en un medio estéril (por ejemplo, dentro de un Gabinete de Seguridad Biológica=
b. Se recupera un bucle de células del cultivo de material puro por medio de un bucle estéril. El bucle de células se transfiere en forma aséptica a un tubo de ensayo con 10 mi de medio de crecimiento estéril (caldo)
c. El paso *b' se repite 3 veces
Incube los tubos inoculados del paso "b" y "c" durante 2 días bajo una temperatura óptima de crecimiento para los microorganismos que se deben activar
El paso "b" a "d" se denomina primera transferencia (laT)
Recupere 0,1 mL de medio de crecimiento de un tubo de ensayo de la laT y transfiéralo en forma aséptica a otro tubo de ensayo con 10 mL de medio de crecimiento estéril
Controle que el tubo de la laT tenga cultivo puro esparciendo placas de una muestra de 50 a 100 L de medio de crecimiento sobre una placa de agar
Repita el paso "g" 2 veces
Incube ambas placas y transfiera los tubos N°2 durante dos días a la temperatura óptima seleccionada Los Pasos "f" a "i" se denominan 2aT
Repita los Pasos "f" a "i" con 100 mL de medio de crecimiento para la 3aT
Almacene los matraces de cultivo de Erlenmeyer resultantes de la 3aT a una heladera durante toda la noche
Tome el matraz de la 3aT del Paso "1" y transfiéralo igualmente a 4 tubos de centrífuga
n. Centrifugue los tubos con un cultivo de material puro a 10.000 RPM durante 10 minutos
o. Decante inmediatamente el medio de crecimiento. Se formaría una pelotilla de células en el fondo del tubo centrifugado
p. Agregue la misma cantidad de agua desionizada estéril a la pelotilla de células
q. Revuelva para aflojar y resuspender la pelotilla células
r. Repita el paso "n" y "o" otras dos veces
s. Para obtener 108-109 cfu/g final de cultivo de células suspendidas, agregue 1/10 del volumen inicial de agua desionizada estéril a la pelotilla de células del Paso "r"
t. Fusione todos los cultivos de células resuspendidas en un tubo de centrífuga para formar el cultivo de material suspendido final
Loa efectos de una solución higienizadora de acuerdo con la invención sobre la eliminación de microbios sobre la superficie de productos agrícolas
Resultados
Las siguientes tablas muestran los resultados de los ensayos de desafío con células suspendidas con y sin surfactante:
Listeria Suspendida Surfactante No
Reducciones Logarítmicas
Concentración PAA (ppm)
60 70 80
LA (%) 0,6% 3,4 5,0 >8,4
0, 9% 4,5 6, 0 >8,4
1,2% 4.9 6.0 >8.4
Listeria Suspendida Surfactante Sí
Reducciones Logarítmicas
Concentración PAA (ppm)
60 70 80
LA (%) 0,6% 6,3 7,7 >9, 0
0, 9% 7,7 7,5 >9, 0
1,2% 7,6 8, 0 >9, 0
Agua Control 0,0
Cloro 64 ppm 2,1
CS 0,6% 3,2
E . Coli Suspendida Surfactante No
Reducciones Logarítmicas
Concentración PAA (ppm)
60 70 80
LA (%) 0,6% 5,6 6,2 6,6
0,9% 6,1 7,3 8,7
1,2% 7,2 8,5 >9
Listeria Suspendida Surfactante Sí
Reducciones Logarítmicas
Concentración PAA (ppm)
60 70 80
LA (%) 0,6% 5,6 6,6 6,8
0,9% 6,2 8,4 >9
1,2% 8,4 9,1 >9
Agua Control 0,0
Cloro 64 ppm 3,7
CS 0,6% 6,1
Las siguientes tablas muestran los resultados para el ensayo desafío de células unidas:
E. Coli Unidas Espinaca
Concentración PAA (ppm)
0 60 70 80
LA (%) 0,0% 0, 00 0,69 1,33 2 ,46
0,6% 0,09 0,65 1,70 2, 94
0, 9% 0, 42 1,37 1, 92 3, 70
1,2% 0,81 1, 82 2 , 37 4 , 17
Cloro 64 ppm 1,35
CS 0,6% 1,47
E. Coli Unidas Lechuga Romana
Concentración PAA (ppm)
0 60 70 80
LA (%) 0,0% 0,05 0,26 0, 53 1,18
0,6% 0, 24 0,47 0, 76 1,68
0,9% 0,37 1,06 1,39 2, 60
1,2% 1,28 1,25 1, 64 4, 51
Cloro 64 ppm 0,61
CS 0,6% 0,71
Listeria Unidas Espinaca
Concentración PAA (ppm)
0 60 70 80
LA (%) 0,0% 0,0 0,3 0,5 1,2
0,6% 0,1 0,3 1,6 3,0
0,9% 0,2 0,3 2 , 0 3,5
1,2% 0,2 0,7 3,9 3,9
Cloro 64 ppm 0,4
CS 0,6% 0,5
Listeria Unidas Lechuga Romana
Concentración PAA(p pm)
0 60 70 80
LA (%) 0, 0% 0, 0 0,6 1,0 1.7
0,6% 1,1 0,9 2,3 4.1
0, 9% 1,4 1,6 3,2 4.5
1,2% 1,5 2,2 4,1 4.8
Cloro 64 ppm 1,0
CS 0,6% 1,2
Los resultados precedentes están de acuerdo con un aumento sorpresivamente eficaz y llamativo en la eliminación de microorganismos y la mejora de la vida útil del producto asociada debido al uso de una solución acuosa de acuerdo con la invención.
Ejemplo 2. El siguiente ejemplo muestra que la presencia de un 2-hidroxi ácido orgánico (por ejemplo, ácido láctico) reduce en gran medida el consumo de ácido peroxiacético durante el tratamiento de productos agrícolas e ilustra el uso de una solución higienizadora acuosa de acuerdo con la invención. Como se muestra a continuación, las soluciones de acuerdo con la invención conservan ventajosamente el ácido peroxiacético durante la eliminación de microorganismos de la superficie de una variedad de productos agrícolas. Se muestra también que los métodos y las composiciones de la invención mejoran en gran medida la vida útil del producto agrícola y retarda en gran medida la putrefacción de los productos agrícolas . Los ahorros deben extenderse a diversos microorganismos tales como bacterias, levadura y moho.
Sinergismo con respecto a la eficacia en un Ensayo de Desafio de Células Suspendidas a 20 segundos de tiempo de permanencia sin ningún surfactante
Los grupos de tratamiento experimental fueron agua de grifo, agua clorada, un agua de lavado higienizadora de FE (FE, higienizador de FE, una solución de ácido peroxiacético y ácido láctico, como también se especifica en un experimento dado) . Los parámetros experimentales fueron de 4°C a 7°C; el tiempo de permanencia fue de 20 segundos; el pH:
Agua ( 7 )
Agua clorada (6,5 a 7,1)
Ácido láctico (3,8 a 4,0)
Ácido peroxiacético (6,5 a 6,8)
Agua de lavado higienizadora de FE
Los sustitutos microbianos fueron Listeria innocua o E. coli K-12 con un gen de resistencia de estreptomicina.
El protocolo experimental fue el siguiente:
1. Transfiera 1,00 mL de un cultivo de material de 108 cfu/g de Lactobacillus plantarum (ATCC 14917) en un tubo de ensayo que contiene 9,00 mL de solución de ensayo de tratamiento
2. Revuelva la mezcla durante 15 segundos
3. Detenga la reacción transfiriendo 1 mL de las muestras tratadas a 9 mL de Tampón de Fosfato Butterfield
4. Enumere células residuales viables a través de diluciones en serie y esparza las placas con transferencias de 1 mL. 5. Asegúrese de que la temperatura de operación se mantenga de 4°C a 7°C (se saca solamente un tubo de ensayo de la heladera por vez ya que la cinética de los productos químicos cambia significativamente si el ensayo completo se realiza a temperatura ambiente)
6. Repita los Pasos 1 a 5 otras dos veces.
7. Repita los Pasos 1 a 6 con agua de acequia
8. Repita los Pasos 1 a 6 con agua clorada
9. Repita los Pasos 1 a 8 con diferentes niveles de FE
10. Repita los Pasos 1 a 8 con diferentes niveles de ácido láctico
11. Repita los Pasos 1 a 8 con diferentes niveles de ácido peroxiacético
12. Repita los Pasos 1 a 10 con Listeria innocua (ATCC33090)
Estimación de reducciones logarítmicas
1. La activación logarítmica es una medida del porcentaje de microorganismos que se inactivan durante el proceso de desinfección y se define como Inactivación Logarítmica = Logio (N0/NT) donde N0 es la concentración de afluente inicial de microorganismos viables; NT es la concentración de los microorganismos sobrevivientes. Cuando M cfu/g = población microbiana de cultivo de material; cfu/g = población microbiana de "Tratamiento con Agua" y X cfu/g = población microbiana en solución de "X Tratamiento" , la reducción logarítmica provocada por "Tratamiento X" = Log (w/x)
Resultados y Conclusiones
Tabla 2.1. Comparación de reducción logarítmica de células de Listeria innocua suspendidas por agua de lavado clorada, agua de lavado con ácido láctico, agua de lavado con ácido peroxiacético y agua de lavado higienizadora .
Tabla 2.2. Comparación de reducción logarítmica de células de Lactobacillus plantarum suspendidas por agua de lavado clorada, agua de lavado con ácido láctico (LA) , agua de lavado con ácido peroxiacético (PA) , y agua de lavado con higienizador de FE.
La reducción logarítmica del higienizador de FE de ensayó (aquí, una combinación de ácido láctico y ácido peroxiacético como se especificó anteriormente) sobre L. innocua y L. plantarum fue significativamente mejor que el agua de lavado de PA y el agua de lavado de LA. Esto indicó claramente los efectos sinérgicos de la combinación de LA y PA. El agua de lavado con higienizador de FE con 70 ppm de PA y 2000 ppm de LA a 20 segundos de tiempo de permanencia proporcionó una reducción de 3 logio sobre histeria innocua. La reducción logarítmica proporcionada por la combinación de ácido láctico y ácido peroxiacético fue significativamente de 2 a 4 veces mejor que el ácido peroxiacético sin ningún agregado de ácido láctico.
Ejemplo 3. Los siguientes experimentos comparan los efectos de los higienizadores sobre patógenos vegetales suspendidos en un líquido
Parámetros de procesamiento y tratamientos
Tratamientos: agua de grifo, agua clorada, agua de lavado con higienizador de FE
Temperatura: 4°C a 7°C; Tiempo de Permanencia: 30 segundos pH:
agua (7)
agua clorada (6,5 a 7,1)
agua de lavado con higienizador (2,7 a 32,)
Patógenos :
Cóctel de 5 cepas de E. coli 0151: El (F4546, F4637, SEA13B88, TW14359, 960218)
Cóctel de 5 cepas de Listeria monocytogenes (ATCC 19115, ATCC51414, ATCC15313, FRR ?24?2 (SCOTT A), 1838)
Cóctel de 5 cepas de Salmonella (S. Newport , S. Tennessee, S. muenchen , S cubana, S. St. Paul)
Activación de cultivo de material
1. Activación de cultivo de material se alcanza a través de una serie de transferencias de cultivo de material al medio de crecimiento óptimo en forma aséptica en un gabinete de seguridad biológica.
2. Recupere un bucle pequeño (100 i ) de cultivo puro del cultivo de material en almacenamiento y transfiéralo a un tubo de ensayo que contiene 100 mL de caldo de medio de crecimiento óptimo específico para cada microorganismo recomendado por la Colección de Cultivo de Tipo Estadounidense (ATCC) o artículos publicados
3. Incube el cultivo hasta que llegue al final de la fase de crecimiento logarítmico a su temperatura de crecimiento óptima recomendada por la ATCC o artículos publicados
4. Controle la pureza del cultivo transferido con placas de vetas y placas esparcidas
5. Recupere 1,5 mi de caldo de cultivo del Paso 3 y transfiéralo a un Matraz de Erlenmeyer de 250 mL que contiene 150 mL de caldo de medio de crecimiento óptimo específico para cada microorganismo recomendado por la Colección de Cultivos de Tipo Estadounidense (ÁTCC) o artículos publicados
6. Incube el cultivo hasta que llegue al final de la fase de crecimiento logarítmica a su temperatura de crecimiento óptima recomendada por la ATCC o artículos publicados
7. Controle la pureza del cultivo transferido mediante placas de vetas
8. Enumere la concentración del caldo de cultivo del Paso 6 mediante placa esparcida y dilución en serie a transferencias de 1 mi
9. Refrigere el cultivo de material del Matraz de Erlenmeyer de 150 mi a una temperatura de refrigeración durante 1 a 4 horas antes de la incubación
Preparación de inoculo y enumeración
1. Separe el cultivo de material refrigerado de 150 mL en el matraz de Erlenmeyer de 2a transferencia en tres tubos de centrífuga de 50 mL a igual volumen (50 mL cada uno)
2. Centrifugue los tubos a 10.000 RPM durante 15 minutos a 4°C
3. Decante el caldo líquido desde cada tubo de centrífuga dejando separada la pelotilla de células
4. Llene el tubo de centrífuga del Paso 3 con 5 mL de agua de pectosa al 0,1% estéril y revuelva para aflojar y mezclar la pelotilla de células
5. Vierta todo el cultivo de material resuspendido dentro de un tubo de centrífuga para formar 108 cfu/g de inoculo
Enumere y confirme la población microbiana del inoculo obtenido del paso '5' esparciendo placas a través diluciones en serie con transferencias de 1 mL.
6. Transfiera 1,00 mL de un cultivo de material de cóctel de 5 cepas de 108 cfu/g de E. coli 0157:H7 en un tubo de ensayo que contiene 9,00 mL de solución de ensayo
7. Revuelva la mezcla durante 15 segundos
8. Detenga la reacción transfiriendo 1 mL de las muestras tratadas a 9 mL de Tampón de Fosfato de Butterfield
9. Enumere células residuales viables a través de diluciones en serie y esparza placas con transferencias de 1 mL
10. Asegúrese de que la temperatura de operación se mantenga de 4°C a 7°C (solamente un tubo de ensayo se retira de la heladera por vez porque la cinética de productos químicos cambia significativamente si el ensayo completo se realiza a temperatura ambiente)
11. Repita los pasos 1 a 5 otras dos veces
12. Repita los pasos 1 a 6 con agua de acequia
13. Repita los pasos 1 a 6 con agua clorada (10 ppm de cloro activo a pH 6,5 a 7)
14. Repita los pasos 1 a 8 con otro nivel de FE
15. Repita los pasos 1 a 8 con otro cóctel de 5 cepas de histeria monocytogenes
16. Repita los Pasos 1 a 8 con otro cóctel de 5 cepas de
Salmonella
Resultados y Conclusiones
Tabla 3.1. Comparación de reducción logarítmica de células de E.Coli 0151 l suspendidas por agua de lavado clorada y las aguas de lavado con higienizadores de FE de ensayo
Cóctel de 5 Cepas de E. coli Población Reducción
0157 : 1-17 microbiana (log logarítmica
cfu/mL)
Tiempo de permanencia 30 segundos
Fecha del Ensayo 21/1/2009
Temperatura 04°C a 7°C
Población microbiana de 9,0
inoculo
Agua de grifo 8,0
( 9 mL de agua con 1 mL de
inóculo)
Agua clorada, 10 ppm a pH 7,1 7,0 0,9 (9 mL agua clorada con 1 mL
de inoculo)
FE1 - PA: 68ppm, LA; 4600 ppm, <1, 0 >7
pH 2,8 a 3 (9 mL de Ninguna célula
higienizador de FE con 1 mL residual a 101
de inoculo)
FE2- PA: 71 ppm, LA 5100 ppm, <1, 0 >7
pH 2,8 a 3 ( 9mL de Ninguna célula
higienizador de FE con 1 mL residual a 101
de inoculo)
Tabla 3.2. Comparación de reducción logarítmica de células de Salmonella suspendidas por agua de lavado clorada y agua de lavado con higienizadores de FE de ensayo
Cóctel de 5 cepas de Población Reducción
Salmonella microbiana logarítmica
(log cfu/mL)
Tiempo de permanencia 30 segundos
Fecha del ensayo 21/1/2009
Temperatura 4°C a 7°C
Tabla 3.3. Comparación de reducción logarítmica de células de Listeria monocytogenes suspendidas por agua de lavado clorada
y agua de lavado con higienizadores de FE
10 ppm de agua clorada redujeron la población de cada patógeno en 1 logio comparado con el control agua de grifo. Las dos concentraciones de cuentas de placas con agua de lavado con higienizador de FE no tuvieron ninguna colonia residual y los resultados se registraron como <1,0 logio cfu/mL. Por lo tanto el agua de lavado con higienizador de FE suministró reducciones de más de 7 logio para Listeria monocytogenes comparado con el control agua de grifo. La reducción menor observada en Listeria monocytogenes no indica que el higienizador de FE fue menos eficaz contra ese patógeno ya que los resultados informados se restringieron con la población original del inoculo de material.
Ejemplo 4. El propósito de estos experimentos fue determinar la actividad antimicrobiana de higienizadores sobre patógenos vegetales que están unidos sobre la superficie de las hojas
Parámetros de procesamiento y tratamientos
Tratamientos: agua de grifo, agua clorada, agua de lavado con higienizador de FE
Temperatura: 4°C a 7°C; Tiempo de permanencia: 30 segundos pH:
agua ( 7 )
agua clorada (6,5 a 7,1)
agua de lavado con higienizador de FE (2,7 a 3,2) Productos ensayados: hojas de lechuga romana cortadas en dados y hojas de espinaca maduradas
Patógenos :
Cóctel de 5 cepas de E. coli 0157 :H7 (F4546, F4637, SEA13B88, TW14359, 960218)
Cóctel de 5 cepas de Listeria monocytogenes (ATCC 19115, ATCC51414, ATCC15313, FRR B2472 (SCOTT A) , 1838)
Cóctel de 5 cepas de Salmonella (S. Newport, S. Tennessee, S. muenchen, S cubana, S. St . Paul)
Activación de cultivo de material
1. La activación del cultivo de material se alcanza á través de una serie de transferencias de cultivo de material al medio de crecimiento óptimo en forma aséptica en un gabinete de seguridad biológica
2. Recupere un bucle pequeño (100 mL) de cultivo puro del cultivo de material en almacenamiento y transfiéralo a un tubo de ensayo que contiene 10 mi de caldo de medio de crecimiento óptimo específico para cada microorganismo recomendado por la Colección de Cultivo Típico (ATCC) o artículos publicados
Incube el cultivo hasta que llegue al final de la fase de crecimiento de logaritmo a su temperatura de crecimiento óptima recomendada por la ATCC o artículos publicados
Controle la pureza del cultivo transferido mediante placa de vetas y placa esparcida
Recupere 1,5 mi de caldo de cultivo del Paso 3 y transfiéralo a un Matraz de Erlenmeyer de 250 mL que contiene 150 mL de caldo de medio de crecimiento óptimo de 150 mL específico para cada microorganismo recomendada por la Colección de Cultivo de Tipo Estadounidense (ATCC) o artículos publicados
Incube el cultivo hasta que llegue al final de la fase de crecimiento logarítmica a su temperatura de crecimiento óptimo recomendada por la ATCC o artículos publicados
Controle la pureza del cultivo transferido por placa de vetas
Enumere la concentración del caldo de cultivo del Paso 6 mediante placa esparcida y dilución en serie a transferencias de 1 mi
Refrigere el cultivo de material de matraz de Erlenmeyer de 150 mL a una temperatura de refrigeración durante 1 a 4 horas antes de la inoculación
Preparación de Inoculo y enumeración
1. Separe 150 mL de cultivo de material refrigerado en el matraz de Erlenmeyer de 2a transferencia en tres tubos de centrífuga de 50 mL a igual volumen (50 mL cada uno)
2. Centrifugue los tubos a 10.000 RPM durante 15 minutos a 4°C
3. Decante el caldo líquido de cada tubo de centrífuga dejando a un lado la pelotilla de células
4. Llene el tubo de centrífuga del Paso 3 con 5 mi de solución de Suero de Caballo al 5% estéril y revuelva para aflojar y mezclar las pelotillas de células
5. Vierta todo el cultivo de material resuspendido en un tubo de centrífuga para formar 108 cfu/g de inoculo
6. Enumere y confirme la población microbiana del inoculo obtenida del Paso v 5' mediante placas esparcidas a través de diluciones en serie con transferencias de 1 mi
Preparación de muestras
1. Tome 4 hojas del producto agrícola ensayado y colóquelas en un cesto de polipropileno (PP) estéril de 15 cm x 15 cm x 12,5 cm. Si el producto agrícola ensayado es lechuga romana, corte la lechuga romana en rectángulos de 3,75 cm x 6,25 cm
De las cuatro hojas del Paso 1, dos deben tener la epidermis superior mirando hacia arriba y dos deben tener la epidermis inferior mirando hacia arriba
Recupere 50 pL del cultivo de material de 108 cfu/g con una pipeta de 100 µ?? y pinche lentamente cada hoja goteando gotitas de tamaño pequeño (de 10 a 15 gotitas) del inoculo sobre la superficie plana de la hoja y la nervadura central que están mirando hacia arriba. Asegúrese de retirar el exceso de material sobre los costados de la punta de la pipeta antes de pinchar las hojas. Tenga cuidado de no agitar el cesto de PP y hacer que las gotitas caigan fuera de las hojas antes de secarse
Ordene los cestos con las hojas pinchadas en un gabinete de seguridad biológica con Drierita como se muestra en la Fotografía 1 durante 1-1,5 hora a una temperatura de 21 °C a 26 °C y del 38% al 48% de humedad relativa. Asegúrese de que la temperatura del sombrerete esté estacionaria (< +/--16°C) durante el proceso de secado
Asegúrese de que las hojas no estén en estado marchito al final del período de secado
Tratamiento de hojas pinchadas
Transferencia de 3L de solución de ensayo desde el garrafón de PP a la cuba de PP estéril de 5L
1. Agregue el volumen requerido del ingrediente final a la solución de 3L y mezcle totalmente con una pinza esterilizada si es necesario
2. Transfiera dos hojas pinchadas (1 pinchada sobre la epidermis superior y la otra pinchada sobre la epidermis inferior) en un cesto de PP estéril vacío
3. Coloque el cesto de PP con las hojas pinchadas dentro de un envase estéril que contiene 3L de la formulación terminada de la solución del ensayo
4. Mantenga la temperatura de la solución del ensayo de 4°C- 7°C
5. Use una pinza para empujar suavemente las hojas dentro de la solución de ensayo para asegurarse la inmersión total de las hojas en todos los momentos y prevenir que las hojas se doblen y se superpongan
6. Empiece a detener el reloj para la temporización de 30 segundos una vez que las hojas están totalmente sumergidas
7. Tome hojas tratadas del cesto y colóquelas dentro de una bolsa Stomacher mediante una pinza estéril
Marque la bolsa Stomacher con el tratamiento asociado para las hojas
Aplaste las hojas en pedazos mediante un matillo de melón de goma higienizado
Repita el Paso 1 a 7 con los demás tratamientos del ensayo Cada tratamiento debe hacerse por triplicado siguiendo la secuencia del Paso 13
Cada réplica se debe realizar por separado para evitar errores de la muerte de bacterias durante el proceso de secado. El orden del ensayo es el siguiente:
a. Ia Replicación. 1 muestra de control sin ninguna espiga, control con bacterias pinchadas, bacterias pinchadas con lavado de agua, bacterias pinchadas con lavado de agua clorado, bacterias pinchadas con lavado con FE1, y bacterias pinchadas con lavado con FE2. b. 2a Replicación. 1 muestra de control con ninguna pinchadura, control con bacterias pinchadas, bacterias pinchadas con lavado de agua, bacterias pinchadas con lavado de agua clorada, bacterias pinchadas con lavado de FE1, bacterias pinchadas con lavado de FE2
c. 3a Replicación. 1 muestra de control con ninguna pinchadura, control con ninguna pinchadura, control con bacterias pinchadas, bacterias pinchadas con lavado de agua, bacterias pinchadas con lavado de agua clorada, bacterias pinchadas con lavado con FE1, bacterias pinchadas con lavado con FE2.
13. La enumeración de muestras debe realizarse inmediatamente después de cada replicación
Enumeración de hojas tratadas
1. Agregue 100 mL de tampón de fosfato en una bolsa Stomacher con las hojas aplastadas tratadas hasta que se alcanza una dilución de 100 veces
2. Cierre la bolsa con tampón de fosfato y trate las hojas durante 30 segundos
3. Agite las hojas nuevamente en la solución de tampón de fosfato y repita el cierre durante otros 30 segundos
4. Retire el tampón de la muestra cerrada y enumere las células residuales mediante dilución residual y placas esparcidas con transferencias de 1 mL
5. Repita el paso 1 a 4 para todos los demás tratamientos
Estimación de reducciones logarítmicas
M cfu/g = población microbiana sobre hojas sin ningún
tratamiento ;
R cfu/g = población microbiana en solución de agua para el
"Tratamiento con Agua" ;
W cfu/g = población microbiana sobre hojas del "Tratamiento con Agua" ;
X cfu/g = población microbiana sobre hojas de "Tratamiento X" ;
Por lo tanto, la reducción logarítmica por el "Tratamiento X" = Log (w/x)
Microorganismos eliminados debido al lavado mecánico = R Microorganismos muertos durante el proceso de secado = M - W - R
Resultados
Tabla 4.1. Reducción logarítmica de patógenos unidos sobre espinaca y lechuga romana (promedio de 3 réplicas) por agua de grifo a una temperatura 4°C a 7°C.
Lavado con Agua de
Grifo
E. coli 0157 :H7 sobre 0,8
Espinaca
E. coli 0157 :H7 sobre 1,5
lechuga romana
Salmonella sobre Espinaca 0,9
Salmonella sobre lechuga 0,3
romana
L. monocytogenes sobre 1,4
Espinaca
L. monocytogenes sobre 1,4
lechuga romana
El lavado con agua de grifo elimino de 0,3 a 1,5 logio de células inoculadas de las hojas que indica que no se logró la unión completa de células sobre las hojas. Esto probablemente estuvo causado por la disecación y el marchitamiento de las hojas bajo baja humedad relativa del envase (20% al 23% en lugar de 38% a 48% enumerado en el protocolo) .
Tabla 4.2. Reducción logarítmica adicional de patógenos unidos sobre espinaca y lechuga romana (promedio de 3 réplicas) por agua de lavado clorada comparada con el agua de lavado de grifo
Agua de lavado con agua clorada a 4°C - 7°C
PH Concentración Reducción
ppm logarítmica
E. coli 0157:H7 7,1 9,7 2,3
sopbre Espinaca
E . coli 0157:H7 7,0 9,7 1,4 sobre lechuga romana
Salmonella sobre 6,9 9,3 1,2
espinaca
Salmonella sobre 6,9 9,7 0,8 lechuga romana
L. monocytogenes 6,9 9,3 0,1
sobre espinaca
L . monocytogenes 6,9 9,0 0,4 sobre lechuga romana
Los 10 ppm de agua clorada proporcionaron una reducción adicional de 0,1 logio a 1,4 logi0 sobre los patógenos. Los 2,3 logio en el caso de la espinaca fueron excepcionalmente altos comparados con los resultados de células unidas sustitutas y estuvieron probablemente causadas por la unión incompleta de las células sobre las hojas como lo muestran los resultados de lavado con agua de grifo.
Tabla 4.3. Reducción logarítmica adicional de patógenos unidos sobre espinaca y lechuga romana (promedio de 3 réplicas) por agua de lavado con higienizador de FE a una temperatura de 4°C a 7°C Agua de lavado con higienizador de FE a 4°C - 7°C
Concentración Concentración Reducción
de ácido de ácido logarítmica peroxiacético láctico
(ppm) (ppm)
E. coli 0157 :H7 sobre 68 4846 2,?
espinaca
E. coli 0157 :H7 sobre 67 4800 2,6
lechuga romana
Saltnonella sobre 66 4833 2,3
espinaca
Salmonella sobre 69 4758 2,1 lechuga romana
L. monocytogenes sobre 70 4782 2,2
Espinaca
L. monocytogenes sobre 71 4769 3,4
lechuga romana
El agua de lavado con higienizador de FE del ensayo (69 ppm de ácido peroxiacético y 4800 ppm de ácido láctico) proporcionó una reducción adicional de 2,1 logi0 a 3,4 logio sobre los patógenos comparada con el lavado de agua de grifo.
Cuando se compara con el agua clorada, el higienizador de FE proporcionó una reducción 2 log10 adicionales que se unieron a las hojas. Además, el almacenamiento de las placas esparcidas a 4°C indicó que las células con lesiones no pudieron crecer a temperaturas refrigeradas dentro de una semana. Si las células bacterianas no pudieron crecer sobre placas de agar ricas en nutrientes, es más probable que no crezcan sobre el producto agrícola fresco tratado.
Ejemplo 5. Estos experimentos evaluaron el consumo o el agotamiento del ácido peroxiacético cuando se usó para lavar productos agrícolas. El objetivo por consiguiente fue comparar la cantidad de lechuga romana picada requerida para agotar 2700 litros de agua de lavado clorada, 2700 litros de agua dé lavado con ácido peroxiacético, y 2700 litros de agua de lavado con higienizador de FE .
PARÁMETROS DE PROCESAMIENTO Y TRATAMIENTOS
Tratamientos: agua clorada, agua de lavado con ácido peroxiacético, agua de lavado con higienizador de FE
Temperatura: 3°C a 4°C
Tiempo de permanencia: 20 segundos
pH:
agua clorada (6,5 a 7,1)
ácido peroxiacético (6,5 a 6,8)
agua de lavado con higienizador de FE (2,7 a 3,2)
Producto agrícola: lechuga romana en dados de 3,75 cm x 5 cm
A. Determinación de la cantidad de Lechuga Romana que pudo agotar 2700 litros de agua de lavado con ácido peroxiacético
1. Realice la higienización completa en el Sistema de Líneas Piloto
2. Llene el 2° tanque de acequia, 2° depósito y 2° tanque de filtrado con agua de grifo
3. Recircule el agua a través del sistema hasta que el agua del sistema se enfríe bien a 4°C
4. Calibre el Sistema Prominente y use el Sistema Prominente para monitorear la concentración de PAA en el agua de lavado
5. Agregue PAA al 2 o tanque de filtrado hasta que se alcance el límite de procesamiento deseado
6. Corte la lechuga romana en dados a través del transcortador
7. Recoja la lechuga romana cortada en dados de 5 cm x 5 cm en bolsas
8. Registre el peso de cada bolsa antes de transferirla a la 2a acequia
9. Recoja tres bolsas sin tratar de lechuga romana de cada cesto (1 superior, una del medio y 1 inferior)
10. Recoja tres bolsas tratadas de lechuga romana al final de F2 (1 inicial, 1 intermedia y 1 final del cesto)
11. Coloque bolsas blancas en el fondo de los lugares con reame de agua. Devuelva el agua derramada de regreso al tanque de acequia según sea necesario
12. Coloque bolsas blancas en las salidas del fondo de la centrífuga para recoger el líquido que se centrifugaría desde las hojas. Devuelva el agua recogida de regreso al tanque de acequia según sea necesario
13. Repita los Pasos ' e' a xk' para el resto de los cestos hasta que las concentraciones de FE caigan debajo de los límites de procesamiento mínimos
14. Enumere la población microbiana (APC y Levadura y moho) sobre las muestras recogidas
B. Determinación de la cantidad de lechuga romana que puede agotar 2700 litros de agua de lavado con FE
1. Realice la higienización completa en el Sistema de Línea Piloto
Llene el tanque de Ia acequia, tanque de 2 a acequia, Io depósito, 2 ° depósito, tanque de Ia filtración y tanque de 2a filtración con agua de grifo
Recircule el agua a través del sistema hasta que el agua del sistema se esté refrigerando a 4°C
Encienda los desvíos para los sistemas de tanque de Ia y 2a acequia de manera que el agua no esté yendo a través de los sistemas de filtrado sino sólo recirculando desde el tanque de acequia a su depósito asociado en forma continua
Agregue el ingrediente químico a ambos tanques hasta que se alcance el límite de procesamiento deseado
Controle la concentración de FE mediante la sonda del Sistema de Monitoreo Prominente en el tanque de Ia acequia (Fl) , Io Depósito (Rl) , tanque de 2a acequia (F2) y el 2° Depósito (R2=
Recoja muestras de agua de Fl y F2
Una los cestos con lechuga romana a continuación del contenedor de residuos
Transfiera hojas de lechuga romana enteras desde el cesto a la cinta transportadora
Asegúrese de que la tapa arriba de Fl esté cerrada. Gire en conmutador "Encendido/Apagado" del transcortador a "Encendido"
Gire la cinta transportadora para transferir hojas al transcortador a "encendido"
Asegúrese de que la lechuga romana picada se suministre en forma pareja dentro del tanque de acequia sin agregado y formación de grumos
Recoja tres bolsas sin tratar de lechuga romana de cada cesto (1 superior, 1 intermedia y 1 inferior)
Recoja tres bolsas tratadas de lechuga romana la final de F2 (1 inicial, 1 intermedia, y 1 final del cesto)
Controle el pH, la temperatura y la concentración de FE en el tanque de Ia acequia (Fl) , Io depósito (Rl) , tanque de 2a acequia (F2) y el 2 ° Depósito (R2) antes y después del procesamiento de un cesto
Coloque bolsas blancas en el fondo de los lugares con derrame de agua. Devuelva el agua derramada de regreso al tanque de acequia según sea necesario
Coloque bolsas blancas en las salidas del fondo de la centrífuga para recoger el líquido que se centrifugaría desde las hojas. Devuelva el agua recogida dé regreso dentro del tanque de acequia según sea necesario
Repita los pasos 'e' a 'o' para el resto de los cestos hasta que las concentraciones de FE caigan debajo de los límites de procesamiento mínimos
19. Enumere la población microbiana (APC y Levadura y moho) en las muestras recogidas
c. Determinación de la cantidad de lechuga romana que agotaría 2700 litros de agua clorada a la concentración inferior a la óptima
1. Realice la higienización completa en el Sistema de Línea Piloto
2. Llene el tanque de Ia acequia, tanque de 2 a acequia, Io depósito, tanque de Io filtrado y tanque de 2° filtrado con agua de grifo
3. Recircule el agua a través del sistema hasta que el agua del sistema se halla refrigerado a 4°C
4. Encienda los desvíos para los sistemas de tanque de Ia y 2°A acequia de manera que el agua no esté yendo a través de los sistemas de filtrado sino solamente recirculando desde el tanque de acequia a su depósito asociado en forma continua
5. Agregue los ingredientes químicos a ambos tanques hasta que se alcance el límite de procesamiento deseado
6. Controle la concentración del agua clorada mediante la sonda del Sistema de HACH en el tanque de Ia acequia (Fl) , Io depósito (Rl) , tanque de 2a acequia 8F2) y 2o depósito (R2)
7. Recoja muestras de agua de Fl y F2
8. Una los cestos de lechuga romana a continuación del contenedor de residuos
b
9. Transfiera hojas de lechuga romana desde el cesto a la cinta transportadora
10. Asegúrese de que la tapa arriba de Fl esté cerrada. Gire el conmutador "encedido/apagado" del transcortador a "encendido"
11. Gire la cinta transportadora para transferir hojas al transcortador a "encendido"
12. Asegúrese de que la lechuga romana picada se suministre en forma pareja al tanque de acequia sin agregado y formación de grumos
13. Recoja tres bolsas sin tratar de lechuga romana de cada cesto (1 superior, 1 intermedia y 1 inferior)
14. Recoja tres bolsas tratadas de lechuga romana al final de F2 (1 inicial, 1 intermedia y 1 al final del cesto)
0 15. Controle el pH, la temperatura, y la concentración del agua clorada en el tanque de Ia acequia (Fl) , Io depósito (Rl) , tanque de 2 a acequia (F2) y 2° Depósito (R29 antes y después del procesamiento de un cesto
16. Coloque bolsas blancas en el fondo de los lugares con derrame de agua. Devuelva el agua derramada de regreso al tanque de acequia según sea necesario
17. Coloque bolsas blancas en las salidas del fondo de la centrífuga para recoger el líquido que se centrifugaría fuera de las hojas. Devuelva el agua recogida de regreso al tanque de acequia según sea necesario
18. Enumere la población microbiana (APC y levadura y moho) en las muestras recogidas
Resultados y Conclusiones
Tabla 5.1. Agotamiento de ácido peroxiacético/PA sin ningún ácido láctico/LA en la presencia de materia orgánica basado en el ensayo de escala comercial
Producto : Lechuga romana cortada en dados
Volumen de 2700 litros
higienizador
Temperatura 3°C a 4°C
de lavado de
agua
Peso de Peso Acumulado PA (ppm) LA (ppm) Peróxido Lechuga de lechuga (ppm) romana romana cortada
cortada en en dados
dados (libras)
agregada
(libras)
0,0 0,0 84,8 0 7,5
55,2 55,2 83,3 0 7,4
59,7 114,9 82,7 0 7,4
42,3 157,2 82,4 0 7,4
50,6 207,7 82,0 0 7,4
65,2 272,9 81,4 0 7,3
52,9 325,8 81,0 0 7,3
45,5 371,3 80,5 0 7,1
53,4 424,7 79,6 0 6,9
78,0 502,6 78,7 0 6,9
62,3 565,0 78,4 0 6,9
64,0 629,0 77,7 0 6,4
68,1 697,1 76,1 0 6,4
65,6 762,7 75,4 0 6,1
63,9 826,6 74,7 0 6,0
69,5 896,2 73,7 0 6,0
53,7 949,9 73,1 0 6,0 Cantidad de PA consumido 11,7 ppm
Libras de PA consumido 0,012078 libra
Libras de lechuga romana tratada 949,90 libras
Agotamiento de PA 0,000013 libra de PA por cada libra
de lechuga romana
Tabla 5.2. Reducción de microorganismos nativos por ácido peroxiacético con ningún agua de lavado con ácido láctico basado en el ensayo de escala comercial
Tabla 5.3. Agotamiento de agua de lavado con higienizador de FE (Ácido peroxiacético/PA/PAA con ácido láctico/LA) ) en la presencia de materia orgánica basado en el ensayo de escala comercial
64,0 629,0 77,7 0 6,4
68,1 697,1 76,1 0 6,4
65,6 762,7 75,4 0 6,1
63,9 826,6 74,7 0 6,0
69,5 896,2 73,7 0 6,0
53,7 949,9 73,1 0 6,0
Cantidad de PAA consumido 10,7 ppm
Libras de PAA consumido 0,011 libras
Libras de lechuga romana consumida 4011 libras
Agotamiento de PAA 0,0000028 libra de PAA por cada libra de lechuga romana
Tabla 5.4. Reducción de microorganismos nativos (ácido peroxiacético con ácido láctico) basado en el ensayo de escala comercial
Tabla 5.5. Agotamiento de 10 ppm de agua de lavado clorada en la presencia de materia orgánica basado en el ensayo de escala comercial
Cantidad de cloro libre consumido 6,4 ppm
Libras de cloro libre consumido 0,006594 libra
Libras de lechuga romana tratada 287 libras
Agotamiento de cloro libre 0,000023 libra de cloro libre por cada libra de lechuga romana
Tabla 5.6. Reducción de microorganismos nativos por agua de lavado clorada basado en el ensayo de escala comercial
Cuentas de Placas aeróbicas
Log cfu/g
Sin tratar 5,1
Agua clorada 3,9
Reducción logarítmica 1,2
El agotamiento de ácido peroxiacético en el higienizador de FE fue 5 veces menos (500%) menor que aquel de la solución de ácido peroxiacético con ningún agregado de ácido láctico. Esto muestra que bajo el mismo volumen y concentración de ácido peroxiacético, el higienizador de FE ensayado puede desinfectar 5 veces más producto agrícola que el higienizador de ácido peroxiacético con ningún agregado de ácido láctico. Además de las libras del cloro libre requerido para tratar una libra de lechuga romana fue 8,5 veces (850%) mayor que aquel del higienizador de FE ensayado que así indica que por cada libra del higienizador de FE ensayado puede desinfectar 8,5 veces más producto agrícola que por cada libra de agua clorada.
La reducción de logio de microorganismos nativos sobre la hoja de lechuga romana para 73-84 ppm de agua de lavado con ácido peroxiacético, agua de lavado con higienizador de FE (59 a 69 ppm de PA y 2.389 a 2.724 ppm de LA) y 1,2 a 7,6 ppm de agua de lavado con cloro libre fue 0,7, 2,6 y 1,2 logio respectivamente.
Aunque el higienizador de FE en el estudio fue inferior al límite inferior óptimo, su reducción de logio sobre microorganismos nativos unidos sobre la hoja de lechuga romana fue aún 2,2 y 3,7 veces respectivamente, más alta que aquella de agua clorada y agua de lavado con ácido peroxiacético .
Todas las publicaciones, patentes y solicitudes de patentes citadas en la presente, sea arriba o abajo, se incorporan en la presente como referencia en su totalidad en la misma medida que si cada publicación, patente o solicitud de individual se indicara específica e individualmente que se incorpora como referencia .
Claims (24)
- REIVINDICACIONES Una solución acuosa para higienizar productos agrícolas, CARACTERIZADA PORQUE comprende : i) un perácido orgánico de la fórmula RC(0)OOH en donde R es metilo, etilo, n-propilo o s-propilo; ii) un 2-hidroxi ácido orgánico seleccionado de ácido tartárico, ácido cítrico, ácido málico, ácido mandélico y ácido láctico; y opcionalmente , iii) un surfactante aniónico; en donde la solución acuosa tiene un pH de 2,5 a 6,0, inclusive y la concentración del perácido es de 40 a 250 ppm (p/p) inclusive, y la concentración del 2-hidroxi ácido orgánico es del 0,1% al 1% (p/p), inclusive. La solución de acuerdo con la reivindicación 1, CARACTERIZADA PORQUE el perácido es ácido peroxiacético y el 2-hidroxi ácido orgánico es ácido L- (+) -láctico. La solución de acuerdo con la reivindicación 2, CARACTERIZADA PORQUE la concentración del ácido peroxiacético en la solución es de 50 a 100 ppm (p/p) , la concentración del ácido láctico en la solución es del 0,1% al 0,6% (p/p) . La solución de acuerdo con la reivindicación 2, CARACTERIZADA PORQUE el ácido peroxiacético en la solución es de 60 a 80 ppm (p/p) , la concentración del ácido láctico en la solución es del 0,1% al 0,4% (p/p) . La solución de acuerdo con la reivindicación 2 , CARACTERIZADA PORQUE el pH es entre 2,5 y 4,5. La solución de acuerdo con la reivindicación 1, CARACTERIZADA PORQUE el pH es de 2,8 a 3,2. La solución de acuerdo con la reivindicación 1, CARACTERIZADA PORQUE el pH es 3,0. La solución de acuerdo con la reivindicación 1, CARACTERIZADA PORQUE la solución está a una temperatura de 1,6°C a 7,2°C. La solución de acuerdo con la reivindicación 1, CARACTERIZADA PORQUE la solución está sustancialmente libre de surfactantes no iónicos, surfactantes catiónicos o surfactantes aniónicos . Un método para tratar productos agrícolas mediante el contacto de la superficie del producto agrícola con una solución acuosa CARACTERIZADA PORQUE comprende : i) un perácido orgánico de la fórmula RC(0)OOH en donde R es metilo, etilo, n-propilo o s-propilo; ii) un 2-hidroxi ácido orgánico seleccionado de ácido tartárico, ácido cítrico, ácido málico, ácido mandélico y ácido láctico; y opcionalmente , iii) un surfactante aniónico; en donde la solución acuosa tiene un pH de 2,5 a 6,0, inclusive y la concentración del perácido es de 40 a 250 ppm (p/p) inclusive, y la concentración del 2-hidroxi ácido orgánico es del 0,1% al 1% (p/p), inclusive. El método de acuerdo con la reivindicación 10, CARACTERIZADO PORQUE el contacto es durante un período de tiempo de por lo menos 10 segundos. El método de acuerdo con la reivindicación 10, CARACTERIZADO PORQUE el contacto es durante un período de tiempo de 10 segundos a 1 minuto. El método de acuerdo con la reivindicación 10 CARACTERIZADO PORQUE el perácido es ácido peroxiacético el 2-hidroxi ácido orgánico es ácido L- (+) -láctico. El método de acuerdo con la reivindicación 10, CARACTERIZADO PORQUE la concentración del ácido peracético en la solución es de 50 a 100 ppm (p/p) , la concentración del ácido láctico en la solución es del 0,1% al 0,6% (p/p) . El método de acuerdo con la reivindicación 13, CARACTERIZADO PORQUE la concentración del ácido peroxiacético en la solución es de 60 a 80 ppm (p/p) , la concentración del ácido láctico en la solución es del 0,1% al 0,4% (p/p) . El método de acuerdo con la reivindicación 13, CARACTERIZADO PORQUE la concentración del ácido peroxiacético es de 70 a 80 ppm (p/p) y la concentración del ácido láctico es del 0,2% al 0,4% (p/p) . 17. El método de acuerdo con la reivindicación 13, CARACTERIZADO PORQUE la solución está a una temperatura seleccionada de temperatura ambiente, o de 1,6°C a 29 °C. 18. El método de acuerdo con la reivindicación 13, CARACTERIZADO PORQUE la solución está a una temperatura seleccionada de temperatura ambiente, o de 1,6°C a 29°C. 19. El método de acuerdo con la reivindicación 10, CARACTERIZADO PORQUE la solución está sustancialmente libre de surfactantes no iónicos, surfactantes catiónicos o surfactantes aniónicos . El método de acuerdo con la reivindicación 10, CARACTERIZADO PORQUE las cantidades del perácido o el 2- hidroxi ácido orgánico se agrega a la solución acuosa en respuesta a una medición de uno o más cualquiera de pH, la concentración del perácido, el potencial de oxidación- reducción, o la concentración del 2-hidroxi ácido orgánico, para mantener el pH, el perácido, o la concentración del 2- hidroxi ácido orgánico de la solución acuosa durante su uso en el contacto del producto agrícola. El método de acuerdo con la reivindicación 10, CARACTERIZADO PORQUE la solución acuosa se forma agregando una solución del 2-hidroxi ácido orgánico y que está sustancialmente libre de peróxido de hidrógeno a una solución del perácido o agregando una solución del perácido a una solución del 2-hidroxi ácido orgánico y que está sustancialmente libre de peróxido de hidrógeno. 22. El método de acuerdo con la reivindicación 10, CARACTERIZADO PORQUE el 2-hidroxi ácido orgánico que está sustancialmente libre de cualquier peróxido de hidrógeno y el perácido se agregan por separado a un fluido acuoso usado para transportar o lavar el producto agrícola. 23. El método de acuerdo con la reivindicación 10, CARACTERIZADO PORQUE el tratamiento higieniza el producto agrícola matando o inhibiendo el crecimiento de las bacterias sobre, o unidas al producto agrícola. 24. Un estuche para higienizar productos agrícolas, CARACTERIZADO PORQUE el estuche comprende : i) un envase que contiene una solución higienizadora acuosa de acuerdo con la reivindicación 1 o un envase que contiene una solución acuosa concentrada que se puede diluir para obtener una solución higienizadora acuosa de acuerdo con la reivindicación 1, ü) e instrucciones para aplicar la solución higienizadora acuosa a productos agrícolas.
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