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MX2010014493A - Inhibidores de ciclopropil-polimerasa. - Google Patents

Inhibidores de ciclopropil-polimerasa.

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Publication number
MX2010014493A
MX2010014493A MX2010014493A MX2010014493A MX2010014493A MX 2010014493 A MX2010014493 A MX 2010014493A MX 2010014493 A MX2010014493 A MX 2010014493A MX 2010014493 A MX2010014493 A MX 2010014493A MX 2010014493 A MX2010014493 A MX 2010014493A
Authority
MX
Mexico
Prior art keywords
compound
formula
hydrogen
sup
group
Prior art date
Application number
MX2010014493A
Other languages
English (en)
Inventor
Tim Hugo Maria Jonckers
Koen Vandyck
Original Assignee
Centocor Ortho Biotech Products L P
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
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First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=41095413&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=MX2010014493(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Centocor Ortho Biotech Products L P filed Critical Centocor Ortho Biotech Products L P
Publication of MX2010014493A publication Critical patent/MX2010014493A/es

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Abstract

Los compuestos de fórmula I: (ver fórmula I) donde: R2 es hidrógeno o alquilo C1-C4 R3 y R4 son hidrógeno, -C(=O)R5, o -C(O)CHR6-NH2 o R3 es hidrógeno y R4 es un éster de monofosfato, difosfato, o trifosfato; o R3 es hidrógeno, -C(=O)CHR5, o -C(=O)CHR6-NH2 y R4 es (ver fórmula) cada R5 es hidrógeno, alquilo C1-C6, o cicloalquilo C3-C7 R6 es hidrógeno o alquilo C1-C6 R7 es fenilo opcionalmente sustituido; naftilo; o indolilo; R8 y R8 son hidrógeno, alquilo C1-C6, bencilo; o R8 y R8' combinados forman cicloalquilo C3-C7 R9 es alquilo C1-C6, bencilo, o fenilo opcionalmente sustituido; siempre que R2, R3 y R4 no sean todos hidrógeno; o su sal o solvato aceptable para uso farmacéutico; formulaciones farmacéuticas con los compuestos I; el uso de compuestos I, incluyendo los compuestos de fórmula I donde R2, R3 y R4 son todos hidrógeno, como inhibidores del VHC.

Description

INHIBIDORES DE CICLOPROPIL-POLIMERASA CAMPO TÉCNICO Esta invención se refiere a derivados de nucleósidos que son inhibidores del virus de la hepatitis C (VHC) así como también su utilización en el tratamiento o profilaxis del VHC.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El VHC es un virus de ARN de sentido positivo, de una sola hebra, que pertenece a la familia Flaviviridae de virus en el género de hepacivirus. Luego de la infección aguda inicial, una mayoría de individuos infectados desarrollan hepatitis crónica debido a que VHC se replica preferentemente en los hepatocitos aunque no es directamente citopátíco. En particular, la falta de una respuesta de linfocitos T vigorosa y la alta propensidad del virus a mutar parecen promover un alto índice de infección crónica. La hepatitis crónica puede progresar a fibrosis hepática, conduciendo a cirrosis, enfermedad del hígado de etapa final, y HCC (carcinoma hepatocelular), convirtiéndola en la causa principal de transplantes de hígado.
Existen seis genotipos del VHC principales y más de 50 subtipos, los cuales están distribuidos en forma diferente geográficamente. El genotipo 1 del VHC es el genotipo predominante en Europa y en los Estados Unidos de América. La extensa heterogeneidad genética del VHC tiene importantes implicancias de diagnóstico y clínicas, tal vez explicando las dificultades en el desarrollo de vacunas y la eficacia limitada de la terapia actual.
La transmisión del VHC puede ocurrir a través del contacto con sangre o productos de sangre contaminados, por ejemplo, luego de transfusión de sangre o uso de fármacos intravenosos. La introducción de ensayos de diagnóstico utilizados en la selección de sangre ha conducido a una tendencia descendente en la incidencia del VHC post-transfusión. Sin embargo, dado el lento progreso a la enfermedad hepática en etapa final, las infecciones existentes seguirán presentando una carga médica y económica seria por mucho tiempo.
El tratamiento actual de preferencia anti-VHC se basa en interferón-alfa (IFN-a) (pegilado) en combinación con ribavirina. Esta terapia combinada proporciona una respuesta virológica sostenida en aproximadamente 50% de los pacientes infectados con el VHC genotipo 1 y aproximadamente 80% de aquellos infectados con los genotipos 2 y 3. Además de la eficacia limitada sobre el genotipo 1 del VHC, esta terapia combinada tiene efectos secundarios significativos y es pobremente tolerada en muchos pacientes. Los principales efectos secundarios incluyen síntomas parecidos a la influenza, anormalidades hematológicas, y síntomas neurosiquiátricos. Por ende, existe la necesidad de brindar tratamientos más eficaces, más convenientes y que sean mejor tolerados.
La experiencia con fármacos para el VIH, en particular con los inhibidores de la proteasa de VIH, nos ha enseñado que una farmacocinética subóptima y regímenes de dosificación complejos rápidamente dan como resultado fallas de cumplimiento inadvertidas. Esto, a su vez, quiere decir que, la concentración mínima a las 24 horas (concentración plasmática mínima) para los respectivos fármacos en un régimen de VIH frecuentemente cae por debajo del umbral de IC90 o ED90 por gran parte del día. Se considera que un nivel mínimo a las 24 horas de por lo menos la IC50, y más realísticamente, la IC90 o ED90, es esencial para ralentizar el desarrollo de mutantes de escape de fármaco. El logro de la farmacocinética y metabolismo del fármaco necesarios para dar lugar a dichos niveles mínimos proporciona un desafío severo para el diseño de fármacos.
La región NS5B del poligen de ARN codifica una ARN polimerasa dependiente de ARN (RdRp), la cual es esencial para la replicación viral. Por lo tanto, esta enzima ha activado un interés significativo entre los químicos de la medicina. Se conocen tanto inhibidores nucleósidos como no nucleósidos de NS5B. Los inhibidores nucleósidos pueden actuar tanto como un terminador de cadena o como un inhibidor competitivo, el cual interfiere con la unión del nucleótido a la polimerasa. Para funcionar como un terminador de cadena, el análogo de nucleósido debe ser absorbido por la célula y convertido in vivo a un trifosfato. Esta conversión al trifosfato es comúnmente mediada por quinasas celulares, lo cual imparte requerimientos estructurales adicionales sobre un potencial inhibidor nucleósido de la polimerasa. Por añadidura, esto limita la evaluación directa de nucleósidos como inhibidores de la replicación del VHC a ensayos basados en células capaces de fosforilación in situ.
Se han hecho diversos intentos de desarrollar nucleósidos como inhibidores de RdRp del VHC, sin embargo, si bien una gran cantidad de compuestos han entrado en la etapa de desarrollo clínico, ninguno ha continuado hasta la etapa de registro. Entre los problemas que han sido encontrados hasta la fecha por los nucleósidos dirigidos al VHC están la toxicidad, mutagenicidad, falta de selectividad, eficacia pobre, pobre biodisponibilidad, regímenes de dosificación subóptimos y la resultante carga de pildoras elevada, y costo de los productos.
Diversas patentes y solicitudes de patentes así como también publicaciones científicas describen análogos de nucleósidos que tienen actividad inhibidora del VHC. WO 2004/002999 describe profármacos de 2' y 3'-nucleósido modificados para tratar infecciones de flaviridae. WO 2008/043704 describe 4-amino-1-((2R,3S,4S,5R)-5-azido-4-hidroxi-5-hidroximetil-3-metil-tetrahidrofuran-2-il)-1 H-pirimidin-2-ona y derivados de éster como inhibidores de la polimerasa del VHC. Murakami Eisuke et al. en Antimicrobial Agents and Chemotherapy, American Society for Microbiology, Vol. 51 , no. 2, pp. 503-509 (2007) describe la fosforilación y la inhibición de la polimerasa NS5B del VHC de -D-2'-desoxi-2'-fluor-2'C-metilcitidina y algunos análogos. Ninguno de estos compuestos tiene un sustituyente de 2'-espirociclopropilo.
Existe la necesidad de inhibidores del VHC que puedan superar una o más de las desventajas de la terapia anti-VHC actual tal como los efectos secundarios, eficacia limitada, la emergencia de resistencia, y fallas de cumplimiento, así como también que puedan brindar una respuesta viral sostenida mejorada.
La presente invención se refiere a 4-amino-1-(7-hidroxi-6-h¡droximetil-5-oxa-espiro[2.4]hept-4-il)-fH-pirimidin-2-onas que inhiben el VHC con propiedades útiles con respecto a uno o más de los siguientes parámetros: eficacia antiviral, perfil favorable de desarrollo de la resistencia, perfil virológico favorable, un perfil toxicológico y genotoxológico favorable, y farmacocinética y farmacodinámica favorables, y facilidad de formulación y administración. Un compuesto de ese tipo, básicamente 4-amino-1-((4R,6R,7S)-7-hidroxi-6-hidroximetil-5-oxa-espiro[2.4]hept^-il)-ÍH-pirimidin-2-ona, también denominado 2'-desoxi-2'-espirociclopropilcitidina ha sido descrito en Can. J. Chem., vol. 71 , pp. 413-416, pero no como un inhibidor del VHC.
Los compuestos de la invención también pueden ser atractivos debido al hecho de que los mismos carecen de actividad contra otros virus, en particular contra el VIH. Los pacientes infectados con VIH a menudo sufren de co-infecciones tales como VHC. El tratamiento de dichos pacientes con un inhibidor del VHC que también inhibe el VIH puede conducir a la emergencia de cepas del VIH resistentes.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN En un aspecto, la presente invención proporciona compuestos, los cuales pueden ser representados por la fórmula I: incluyendo cualquiera de sus posibles estereoisómeros, donde: R2 es hidrógeno o alquiloC1-C4; R3 y R4 se seleccionan, independientemente, del grupo formado por hidrógeno, -C(=0)R5, y -C(=O)CHR6-NH2; o R3 es hidrógeno y R4 es un éster de monofosfato, difosfato, o trifosfato; o R3 es hidrógeno, -C(=0)CHR5, o -C(=0)CHR6-NH2 y R4 es un grupo de fórmula cada R5 se selecciona, independientemente, del grupo formado por hidrógeno, alquiloCi-C6, y cicloalquiloC3-C7; R6 es hidrógeno o alquilo C-i-C6; R7 es fenilo, opcionalmente sustituido con 1 , 2 ó 3 sustituyentes cada uno seleccionado independientemente entre halo, alquilo Ci-C6, alquenilo C3-C6l alcoxi C1-C6, hidroxi, y amino, o R7 es naftilo; o R7 es indolilo; R8 es hidrógeno, alquilo Ci-C6, bencilo, R8 es hidrógeno, alquilo Ci-C6, bencilo; o R8 y R8 junto con el átomo de carbono al cual están unidos forman cicloalquilo C3-C7¡ R9 es alquilo bencilo, o fenilo, donde dicho fenilo puede estar opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes cada uno seleccionado independientemente entre hidroxi, alcoxi ? ?-?T, amino, mono- y dialquilamino Ci-C6; siempre que R2, R3 y R4 no sean todos hidrógeno; o sus sales o solvatos aceptables para uso farmacéutico.
En un aspecto adicional, la invención se refiere al uso de compuestos de fórmula I, según lo especificado en esta invención, incluyendo el compuesto de fórmula I donde R2, R3 y R4 son todos hidrógeno, para inhibir y tratar la infección de VHC. Alternativamente, se proporciona el uso para la manufactura de un medicamento de un compuesto de fórmula I, según lo especificado en esta invención, incluyendo el compuesto donde R2, R3 y R4 son en su totalidad hidrógeno, para inhibir y tratar la infección de VHC.
El grupo -NH-C(R8)(R8 )-C(=0)- forma un residuo aminoácido, el cual incluye residuos aminoácidos naturales y no naturales. De interés son aquellos residuos aminoácidos donde R8 es hidrógeno. Donde en el último caso R8 es diferente de hidrógeno, la configuración en el átomo de carbono asimétrico que porta R8 puede ser aquella de un L-aminoácido. Esta configuración también puede ser designada la configuración S. Los ejemplos son alanina (Ala), es decir, donde R8 es hidrógeno y R8 es metilo; o valina (Val) es decir, donde R8 es hidrógeno y R8 es ¡sopropilo; leucina (Leu) es decir, donde R8 es hidrógeno y R8 es -CH2CH(CH3)2; isoleucina (lie) es decir, donde R8' es hidrógeno y R8 es -CH(CH3)CH2CH3; y fenilalanina (Phe) es decir, donde R8 es hidrógeno y R8 es bencilo; en particular L-Ala, L-Val, L-lle, y L-Phe. Un ejemplo de un residuo aminoácido donde R8 y R8 junto con el átomo de carbono al cual están unidos forman cicloalquilo C3-C7, es 1 ,1-ciclopropilaminoácido. Donde R8 y R8 ambos son hidrógeno, el grupo -NH-C(R8)(R8')-C(=O)- forma glicina (Gly).
El grupo -C(=0)CHR6-NH2 forma un éster de aminoácido, con un aminoácido que no tiene cadena lateral (R6 es hidrógeno) o una cadena lateral de alquilo C1-C6. Ese tipo de aminoácidos comprende glicina (R6 es hidrógeno), valina (R6 es isopropilo), leucina (R6 es -CH2CH(CH3)2, o isoleucina (R6 es -CH(CH3)CH2CH3), en particular las formas L-estereoisoméricas H-L-Val-, H-L-Leu- o H— L— Me— .
Los subgrupos de los compuestos de fórmula I son aquellos compuestos de fórmula I, o subgrupos de los compuestos de fórmula I, según lo definido en esta invención, donde R2 es hidrógeno.
Los subgrupos de compuestos de fórmula I son aquellos compuestos de fórmula I, o los subgrupos de compuestos de fórmula I, según lo definido en esta invención, donde R3 es hidrógeno.
Los subgrupos de compuestos de fórmula I son aquellos compuestos de fórmula I, o los subgrupos de compuestos de fórmula I, según lo definido en esta invención, donde R4 es hidrógeno.
Los subgrupos de compuestos de fórmula I son aquellos compuestos de fórmula I, o los subgrupos de compuestos de fórmula I, según lo definido en esta invención, donde uno de R3 y R4 es hidrógeno y el otro de R3 y R4 se selecciona entre acetilo, pivaloilo, y, preferentemente, isobutirilo; o uno de R3 y R4 es hidrógeno y el otro de R3 y R4 se selecciona entre leucilo, isoleucilo, y, preferentemente, valilo; o ambos R3 y R4 se seleccionan entre acetilo, pivaloilo, y, preferentemente, isobutirilo; o ambos R3 y R4 se seleccionan entre leucilo, isoleucilo, y, preferentemente, valilo. En una modalidad, R3 es hidrógeno y R4 es según lo definido anteriormente. En otra modalidad, R4 es hidrógeno y R3 es según lo definido anteriormente. Los subgrupos particulares de compuestos de fórmula I son aquellos compuestos de fórmula I, o los subgrupos de compuestos de fórmula I, según lo definido en esta invención, donde R3 y R4 son ambos isobutirilo (-C(=0)-CH(CH3)2).
Los subgrupos de compuestos de fórmula I son aquellos compuestos de fórmula I, o los subgrupos de compuestos de fórmula I, según lo definido en esta invención, donde R3 es hidrógeno o -C(=0)R5, y R4 es un grupo de fórmula Los subgrupos de compuestos de fórmula I son aquellos compuestos de fórmula I, o los subgrupos de compuestos de fórmula I, según lo definido en esta invención, donde cada R5 es alquilo en particular metilo, isopropil (1-metiletilo), isobutil (2-metilpropilo), sec-butil (1-metilpropilo).
Los subgrupos de compuestos de fórmula I son aquellos compuestos de fórmula I, o los subgrupos de compuestos de fórmula I, según lo definido en esta invención, donde R6 es hidrógeno o alquilo C1-C4, en particular hidrógeno, metilo o isobutilo.
Los subgrupos de compuestos de fórmula I son aquellos compuestos de fórmula I, o los subgrupos de compuestos de fórmula I, según lo definido en esta invención, donde: (a) R7 es fenilo, opcionalmente sustituido con 1 o 2 sustituyentes cada uno seleccionado independientemente entre halo, alquilo Ci-C6, alquenilo C3-C6, alcoxi C1-C6, hidroxi, y amino, o R7 es naftilo; o R7 es indolilo; (b) R7 es fenilo, opcionalmente sustituido con halo, alquilo Ci-C6, alquenilo C3-C6, o alcoxi Ci-C6, o R7 es naftilo; (c) R7 es fenilo, opcionalmente sustituido con halo o alquilo Ci-C6, o R7 es naftilo; (d) R7 es fenilo, opcionalmente sustituido con halo.
En una modalidad, el grupo indolilo en los compuestos de fórmula I o cualquiera de sus subgrupos es 5— indolilo.
Los subgrupos de compuestos de fórmula I son aquellos compuestos de fórmula I, o los subgrupos de compuestos de fórmula I, según lo definido en esta invención, donde R8 es hidrógeno y R8 es metilo o alquilo C1-C6, tal como isopropilo o isobutilo. Los subgrupos de compuestos de fórmula I son aquellos compuestos de fórmula I, o los subgrupos de compuestos de fórmula I, según lo definido en esta invención, donde la porción es glicilo, alanilo, o valilo (Gly, Ala, o Val; en particular Gly, L-Ala, o L-Val).
Los subgrupos de compuestos de fórmula I son aquellos compuestos de fórmula I, o los subgrupos de compuestos de fórmula I, según lo definido en esta invención, donde (a) R9 es alquilo Ci-C6 o bencilo; (b) R9 es alquilo Ci-C6¡ (c) R9 es alquilo Ci-C4; o (d) R9 es metilo, etilo, o t-butilo.
Los compuestos de fórmula I tienen diversos centros de quiralidad, en particular en los átomos de carbono V, 3', y 4'. Si bien la estereoquímica en estos átomos de carbono es fija, los compuestos pueden exhibir por lo menos 75%, preferentemente por lo menos 90%, tal como en exceso de 95%, pureza enantiomérica en cada uno de los centros quirales. La quiralidad también puede estar presente en los sustituyentes, tal como donde R3 y/o R4 son -C(=0)CHR6-NH2, siendo R6 diferente de hidrógeno; o tal como en el grupo el cual puede tener quiralidad en el R8 que porta carbono (donde R8 y R8 son diferentes) y en el átomo de fósforo. El centro de fósforo puede estar presente como Rp o Sp, o una mezcla de dichos estereoisómeros, incluyendo racematos. Los diastereoisómeros que son el resultado del centro de fósforo quiral y un átomo de carbono quiral pueden existir también.
Las modalidades de la invención se refieren al uso como inhibidores del VHC del compuesto denotado 2'-desox¡-2'-espirociclopropilcitidina (el compuesto de fórmula I donde R2, R3 y R4 son todos hidrógeno); o el compuesto denotado bis 3',5'-isobutiril-2'-desoxi-2'-espirociclopropilcitidina (el compuesto de fórmula I donde R2 es hidrógeno y R3 y R4 son ambos -C(=O)R5 donde R5 es isopropilo); tanto en forma libre o en la forma de una sal de adición de ácido aceptable para uso farmacéutico o su solvato; como inhibidores del VHC o en el tratamiento o prevención de la infección de VHC.
Una modalidad se refiere a los compuestos designados como compuestos 1 , 2a, 2b, 2c, 2d, 3, 4, 5, 6 y 7, según lo mencionado en la sección de ejemplos más adelante, en forma libre. Otra modalidad se refiere a estos compuestos así como también a sus sales y solvatos aceptables para uso farmacéutico. Una modalidad en particular se refiere al compuesto bis S'.S'-isobutiril^'-desoxi^'-espirociclopropilcitidina en forma libre. Una modalidad en particular adicional se refiere a bis 3',5'-isobutiril-2'-desoxi-2'-espirociclopropilcitidina, sus sales de adición de ácido y solvatos aceptables para uso farmacéutico.
En un aspecto más, la invención proporciona un compuesto de fórmula I o su sal, hidrato o solvato aceptable para uso farmacéutico, para utilizar en el tratamiento o profilaxis (o la manufactura de un medicamento para el tratamiento o profilaxis) de la infección de VHC. Los genotipos del VHC representativos en el contexto de tratamiento o profilaxis de conformidad con la invención incluyen el genotipo 1 b (prevaleciente en Europa) o 1 a (prevaleciente en América del Norte). La invención proporciona además un método para el tratamiento o profilaxis de la infección de VHC, en particular del genotipo 1a o 1 b.
Los compuestos de fórmula I son representados como un estereoisómero definido. La configuración absoluta de tales compuestos puede determinarse utilizando métodos conocidos en el arte tales como, por ejemplo, difracción de rayos X o RMN y/o implicancia de materiales de partida de estereoquímica conocida. Las composiciones farmacéuticas de conformidad con la invención comprenderán, preferentemente, preparaciones sustancial y estereoisoméricamente puras del estereoisómero indicado.
Las formas estereoisoméricas puras de los compuestos y compuestos intermedios según lo mencionado en esta invención son definidas como isómeros sustancialmente libre de otras formas enantioméricas o diastereoméricas de la misma estructura molecular básica de dichos compuestos o compuestos intermedios. En particular, el término "estereoisoméricamente puro" se refiere a los compuestos o compuestos intermedios que tienen un exceso estereoisomérico de por lo menos 80% (es decir, un mínimo de 90% de un isómero y un máximo del 10% de los otros isómeros posibles) hasta un exceso estereoisomérico de 100% (es decir, 100% de un isómero y ninguno del otro), más en particular, los compuestos o compuestos intermedios que tienen un exceso estereoisomérico de 90% hasta 100%, incluso más en particular que tienen un exceso estereoisomérico de 94% hasta 100% y más en particular que tienen un exceso estereoisomérico de 97% hasta 100%. Los términos "enantioméricamente puro" y "diastereoméricamente puro" deberían entenderse en forma similar, aunque entonces haciendo referencia al exceso enantiomérico, y el exceso diastereomérico, respectivamente, de la mezcla en cuestión.
Las formas estereoisoméricas puras de los compuestos y compuestos intermedios de esta invención pueden obtenerse mediante la aplicación de procedimientos conocidos en el arte. Por ejemplo, los enantiómeros pueden separarse uno del otro mediante la cristalización selectiva de sus sales diastereoméricas con ácidos o bases ópticamente activos. Los ejemplos de los mismos son el ácido tartárico, ácido dibenzoiltartárico, ácido ditoluoiltartárico y ácido canforsulfónico. Alternativamente, los enantiómeros pueden separarse mediante técnicas cromatográficas utilizando fases fijas quirales. Dichas formas estereoquímicamente isoméricas puras también pueden ser derivadas de las correspondientes formas estereoquímicamente isoméricas puras de los materiales de partida apropiados, siempre que la reacción se produzca estereoespecíficamente. Preferentemente, si se desea un estereoisómero específico, dicho compuesto es sintetizado mediante métodos estereoespecíficos de preparación. Estos métodos emplearán, ventajosamente, materiales de partida enantioméricamente puros.
Los racematos diastereoméricos de los compuestos de fórmula I pueden obtenerse separadamente mediante métodos convencionales. Los métodos de separación físicos apropiados que pueden emplearse ventajosamente son, por ejemplo, cristalización selectiva y cromatografía, por ej., cromatografía en columna.
La presente invención tiene el propósito de incluir además a todos los isótopos de átomos que se presentan en los presentes compuestos. Los isótopos incluyen aquellos átomos que tienen el mismo número atómico aunque diferentes números de masa. A modo de ejemplo general y sin limitación, los isótopos de hidrógeno incluyen tritio y deuterio. Los isótopos de carbono incluyen C- 3 y C-14.
Las sales de adición aceptables para uso farmacéutico comprenden las formas de sales de adición de base y ácido no tóxicas, terapéuticamente activas, de los compuestos de fórmula I. De interés son las formas libres (es decir, no sales) de los compuestos de fórmula I, o de cualquier subgrupo de compuestos de fórmula I especificado en esta invención. Como se utiliza en esta invención, el término "forma libre" se refiere a un compuesto de fórmula I que no es una forma de sal o un solvato.
Las sales de adición de ácido aceptables para uso farmacéutico pueden obtenerse, convenientemente, tratando la forma libre con un ácido apropiado. Los ácidos apropiados comprenden, por ejemplo, ácidos inorgánicos tales como ácidos halhidricos, por ej. ácido clorhídrico o bromhídrico, sulfúrico, nítrico, fosfórico y los ácidos similares; o ácidos orgánicos tales como, por ejemplo, ácido acético, propiónico, hidroxiacético, láctico, pirúvico, oxálico (es decir, etandioico), malónico, succinico (es decir, ácido butandioico), maleico, fumárico, málico (es decir, ácido hidroxibutandioico), tartárico, cítrico, metansulfónico, etansulfónico, bencensulfónico, p-toluensulfónico, ciclámico, salicílico, p-aminosalicílico, pamoico y los ácidos similares. A la inversa, dichas formas de sales de adición de ácido pueden convertirse mediante tratamiento con una base apropiada en la forma libre.
Los compuestos de fórmula I que contienen un protón ácido también pueden convertirse en sus formas de sales de adición de metal o amina aceptables para uso farmacéutico mediante tratamiento de la forma libre con una base orgánica e inorgánica apropiada. Las formas de sales de bases apropiadas comprenden, por ejemplo, las sales de amonio, las sales de metales alcalinos y alcalinotérreos, por ej., las sales de litio, sodio, potasio, magnesio, calcio y sales similares, sales como bases orgánicas, por ej., las sales de benzatina, /V-metil-D-glucamina, hidrabamina, y sales con aminoácidos tales como, por ejemplo, arginina, lisina y similares. A la inversa, dichas formas de sales de adición de metal o amina pueden convertirse en la forma libre mediante tratamiento con un ácido apropiado.
El término "solvatos" cubre cualquier solvato aceptable para uso farmacéutico que los compuestos de fórmula I asi como también sus sales, son capaces de formar. Dichos solvatos son, por ejemplo, hidratos, alcoholatos, por ej., etanolatos, propanolatos, y similares.
Algunos de los compuestos de fórmula I también pueden existir en su forma tautomérica. Por ejemplo, las formas tautoméricas de grupos amida (-C(=0)-NH-) son iminoalcoholes (-C(OH)=N-), los cuales pueden estabilizarse en anillo con carácter aromático. Dichas formas, si bien no están explícitamente indicadas en las fórmulas estructurales representadas en esta invención, tienen el propósito de estar incluidas dentro del alcance de la presente invención.
Como se utiliza en esta invención "alquilo C1-C4" como un grupo o parte de un grupo define radicales de hidrocarburo de cadena recta o ramificada saturados que tienen entre 1 y 4 átomos de carbono, tal como, por ejemplo metilo, etilo, 1 -propilo, 2-propilo, 1 -butilo, 2— butilo, 2-metil-1-propilo, 2-met¡l-2-propilo. "Alquilo Ci-C6" abarca radicales de alquilo C1-C4 y sus homólogos superiores que tienen 5 o 6 átomos de carbono tales como, por ejemplo, 1-pentilo, 2-pentilo, 3-pentilo, -hexilo, 2-hexilo, 2-metil-1-butilo, 2-metil-1-pentilo, 2— etil—1— butilo, 3-metil-2-pentilo, y similares. De interés entre alquilo C1-C6 es alquilo C^ 4.
Alcoxi C1-C6' significa un radical -O-alquilo C1-C6 donde alquilo Ci-C6 es según lo definido anteriormente. Los ejemplos de alcoxi C1-C6 son metoxi, etoxi, n-propoxi, e isopropoxi. "cicloalquilo C3-C7" incluye ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y cicloheptilo. Un subgrupo de estos es cicloalquilo C3_6. De interés es ciclopropilo.
El término "alqueniloC3_6" como un grupo o como parte de un grupo define radicales de hidrocarburo de cadena recta y ramificada que tienen enlaces carbono- carbono saturados y por lo menos un enlace doble, y que tienen entre 3 y 6 átomos de carbono, tales como, por ejemplo, 1-propenilo, 2-propenilo (o alilo), 1-butenilo, 2-butenilo, 3-butenilo, 2-metil-2-propenilo, 2-pentenilo, 3-pentenilo, 2-hexenilo, 3-hexenilo, 4-hexenilo, 2-metil-2-butenilo, 2-metil-2-pentenilo y similares. De interés entre alqueniloC3_6 es alqueniloC3_4. De interés entre alquenilo C3_6 o alquenilo C3-4 son aquellos radicales que tienen un enlace doble.
El término 'halo' es genérico de flúor, cloro, bromo y yodo.
Como se utiliza en esta invención, el término '(=0)' o Oxo' forma una porción carbonilo cuando está adherido a un átomo de carbono. Debería señalarse que un átomo puede solamente ser sustituido con un grupo oxo cuando la valencia de ese átomo así lo permite.
El término "éster de monofosfato, difosfato o trifosfato" se refiere a grupos: Como se utiliza en esta invención, las posiciones de los radicales en cualquier porción molecular utilizada en las definiciones pueden estar en cualquier otro lado en ese tipo de porción siempre y cuando sea químicamente estable. Cuando cualquier variable está presente más de una vez en cualquier porción dada, cada definición de esta variable es independiente.
Siempre que se utilice en esta invención, el término 'compuestos de fórmula , o 'los presentes compuestos' o términos similares, tiene el propósito de incluir los compuestos de fórmula I, incluyendo las posibles formas estereoquímicamente isoméricas, y sus sales y solvatos aceptables para uso farmacéutico.
Métodos de Preparación Los compuestos de fórmula I donde R3 y R4 son ambos hidrógeno, en esta invención representados mediante la fórmula l-a, pueden prepararse mediante una reacción de conversión de uracilo a citosina a partir de una 2'-desoxi-2'-espirociclopropiluridina 1f en la correspondiente 2'-desoxi-2'-espirociclopropil citidina 1g, seguido por remoción de los grupos protectores PG proporcionando el producto final deseado l-a. Esta conversión de uracilo a citosina puede llevarse a cabo haciendo reaccionar el derivado de uracilo con POCI3 o un fosforodicloridato, tal como un fenilo o fosforodicloridato de fenilo sustituido, por ej. 4-clorofenil fosforodicloridato, y triazol o tetrazol. Esta reacción puede llevarse a cabo en un solvente inerte a la reacción en presencia de una base, por ejemplo, un hidrocarburo halogenado tal como diclorometano, en presencia de una amina terciaria tal como trietilamina. O también puede utilizarse un solvente básico tal como piridina. En caso deseado, los derivados de triazol o tetrazol resultantes de las fórmulas 1h 1i pueden aislarse y purificarse. El tratamiento de estos últimos con amoníaco o R2-NH2 proporciona el correspondiente derivado de citosina 1g. La remoción de los grupos PG finalmente conduce al producto final deseado I. Como se utiliza en esta invención, PG representa un grupo protector hidroxi, en particular uno de los grupos mencionados más adelante.
Los compuestos intermedios 1f utilizados en la conversión antes descrita se obtienen mediante una reacción de formación de anillo de ciclopropano en el doble enlace exo en los compuestos intermedios 1d y subsiguiente remoción del grupo protector de nitrógeno en los compuestos intermedios 1e. La formación dél anillo de ciclopropano involucra la adición de diazometano al doble enlace exo, seguido por una redisposición fotoquímica con la formación de una porción de ciclopropano y expulsión de nitrógeno, preferentemente en presencia de un fotosintetizador tal como benzofenona. Estas reacciones, preferentemente, se llevan a cabo en solventes inertes a la reacción, por ejemplo, la reacción de diazometano puede realizarse en un éter tal como éter dietilico y la redisposición fotoquímica en un hidrocarburo aromático tal como benceno o tolueno, o un solvente dipolar aprótico tal como acetonitrilo, o mezclas de los mismos.
Los compuestos intermedios 1d se obtienen mediante una reacción de Wittig a partir de los compuestos intermedios 1c. En esta reacción, estos últimos se hacen reaccionar con un haluro de metiltrifenilfosfonio, preferentemente el cloruro o bromuro, en un solvente inerte a la reacción tal como un éter, por ej. éter dietilico o tetrahidrofurano. Los compuestos intermedios 1 c, a su vez, son derivados mediante una reacción de oxidación del grupo 2'-hidroxi en los compuestos intermedios 1 b, por ejemplo con trióxido de cromo en presencia de anhídrido acético en piridina. La protección selectiva de los grupos 4' y 5'-hidroxi en 1a proporciona los compuestos intermedios 1 b.
A fin de evitar reacciones colaterales, los grupos 4' y 5'-hidroxi son preferentemente protegidos con grupos protectores PG hidroxi y la función amino (NH) en la porción uracilo es protegida con un grupo protector amino PG1. Los grupos protectores PG hidroxi pueden ser diferentes o ¡guales o combinados pueden formar un grupo protector cíclico. PG por ejemplo es un grupo trialquilsililo tal como trimetilsililo (TMS), rerc-butildimetilsílilo (TBDMS), o triisopropilsililo (TIPS). O los dos grupos PG combinados forman un grupo disiloxano-1 ,3-diilo polialquiiado tal como tetraisopropildisiloxano-1 ,3-diilo (TIPDS). Estos grupos pueden ser eliminados mediante ácido o un ion de fluoruro (tal como NaF o fluoruro de tetra-n-butilamonio - TBAF). Otro grupo protector hidroxi, el cual también puede ser un grupo protector amino, es el grupo trifilo o grupo tritilo sustituido, por ej. 4-metoxitritilo ((4-metoxifenil)(bisfenil)metilo), el cual es eliminado bajo condiciones acidas, por ej. mediante tratamiento con etanol/HCI, o con ácido acético.
El grupo protector amino PG1 se selecciona de modo tal que sea selectivamente disociable hacia los grupos PG. Un grupo protector amino que puede utilizarse es un grupo benzoílo. Otro grupo de ese tipo es el grupo dimetilamino metileno, el cual puede ser introducido utilizando dimetilformamida dimetilacetal. El grupo dimetilamino metileno es eliminado bajo condiciones ácidas, por ej. mediante tratamiento con etanol/HCI.
Las reacciones antes descritas son ilustradas en el siguiente esquema de reacción.
ESQUEMA 1 Síntesis general de 2'-desoxi-2'-espirociclopropilcitidinas le Los compuestos de fórmula l-a, a su vez, pueden ser convertidos en fosforamidatos según lo expuesto en el siguiente esquema de reacción. Los compuestos l-a se hacen reaccionar con un fosforocloridato 2a en presencia de una base proporcionando fosforamidatos l-b. Los solventes que pueden utilizarse en esta reacción comprenden éteres, por ej. éter dietílico o THF, o piridina, o sus mezclas. Puede agregarse una base tal como N-metilimidazol para capturar el ácido que se forma durante la reacción.
ESQUEMA 2 Método general para la síntesis de fosforamidatos l-b La síntesis de los mono- o di-ésteres de l-a se ilustra en el Esquema 3 que aparece a continuación. En este esquema R3a y R4a son independientemente -C(=0)R5 o -C(=0)CHR6-NH2, o en particular R3a y R4a son independientemente -C(=0)R5. Donde R3a y R a son independientemente -C(=0)CHR6-NH2, el amino en este último grupo preferentemente es protegido mediante un grupo protector amino tal como cualquiera de los grupos protectores amino PG1 antes descritos, y este grupo puede ser representado por -C(=O)CHR6-NH-PG1. El grupo protector amino puede ser eliminado utilizando las condiciones de reacción apropiadas para la remoción de dicho grupo. Por ejemplo PG1 puede ser un grupo BOC y puede ser eliminado bajo condiciones ácidas. El grupo protector amino puede ser eliminado en cualquier etapa cuando el grupo amino libre ya no interfiere con subsiguientes pasos de reacción, aunque generalmente es eliminado en el último paso.
El grupo 5'-hidrox¡ más reacción en el compuesto intermedio 3a puede ser selectivamente protegido como en el compuesto intermedio 3b, el cual a su vez es esterificado a 3c, seguido por una conversión de uracilo a citosina a 3d. Este último es desprotegido proporcionando el 3'-monoéster I-c. La esterificación del 5'-hidroxi en l-c proporciona el producto final l-d. El 5— hidroxi más reactivo también puede ser selectivamente esterificado introduciendo un grupo R4 para proporcionar 3e, y el compuesto intermedio 5'-éster resultante puede ser posteriormente esterificado con un ácido diferente introduciendo de ese modo un grupo R3a, el cual es según lo definido anteriormente. Estas reacciones de esterificación proporcionan los compuestos intermedios di-éster 3f, los cuales son sometidos a una conversión de uracilo a citosina, para proporcionar productos finales l-d. La conversión de uracilo a citosina se realiza utilizando los procedimientos descritos anteriormente para la preparación del compuesto intermedio 1g.
ESQUEMA 3 Síntesis de mono y di-és teres esterificación desprotección Los compuestos de fórmula I donde R3a es hidrógeno y R4a es un éster según lo especificado anteriormente, estando dichos compuestos representados por l-e, pueden prepararse mediante protección del hidroxi libre en el compuesto intermedio 3b con un grupo protector hidroxi que es selectivamente disociable hacia el otro grupo protector hidroxi dando como resultado los compuestos intermedios 4a. Luego, el siguiente paso involucra la remoción del grupo protector 5'-hidroxi proporcionando los compuestos intermedios 4b, seguido por una reacción de esterificación a los compuestos intermedios 4c. La subsiguiente conversión de uracilo a citosina proporciona los correspondientes derivados de citidina protegidos con 4'-h¡droxi 4d, los cuales son desprotegidos para proporcionar derivados 5'-sustituidos, 4'-no sustituidos l-e. Estas reacciones son representadas en el Esquema 4, donde el grupo PGa tiene el mismo significado que PG, aunque se selecciona de modo que PG sea selectivamente disociable hacia el grupo PGa. Por ejemplo, PG puede ser un grupo tritilo o 4-metoxitritilo y PGa un grupo trialquilsililo tal como trimetilsililo o t.butildimetilsililo.
ESQUEMA 4 Síntesis de monoesteres Los compuestos de fórmula I donde R y R son los mismos grupos ésteres, en adelante representados por l-f, pueden prepararse a partir de los compuestos 3a esterificando ambos grupos hidroxi con el mismo ácido carboxílico.
ESQUEMA 5 Síntesis de d ¡-esteres Los materiales de partida 3a se pueden preparar mediante remoción de los grupos protectores hidroxi PG en los compuestos intermedios 1f, los cuales pueden prepararse según lo ilustrado anteriormente en el Esquema 1.
Los términos "grupo protector amino" o "grupo N-protector" incluyen grupos acilo tales como formilo, acetilo, propionilo, pivaloilo, t-butilacetilo, 2-cloroacetilo, 2-bromoacetilo, trifluoracetilo, tricloroacetilo, ftalilo, o-nitrofenoxiacetilo, a-clorobutirilo, benzoilo, 4-clorobenzoílo, 4-bromo-benzoílo, 4-nitrobenzoílo, y similares; grupos sulfonilo tales como bencensulfonilo, p-toluensulfonilo, y similares; grupos formadores de carbamato tales como benciloxicarbonilo, p-cloro-benciloxicarbonilo, p-metoxibenciloxicarbonilo, p-nitrobenciloxicarbonilo, 2-n¡trobenc¡lox¡carbonilo, p-bromobenciloxicarbonilo, 3,4-dimetoxibenciloxi-carbonilo, 4-metoxibenciloxicarbonilo, 2-nitro-4,5-d¡metoxibenciloxicarbon¡lo, 3,4,5-trimetoxibenciloxicarbonilo, 1-(p-bifenil)-1-metiletoxicarbonilo, a,a-dimetil-3,5-dimetoxibenciloxicarbonilo, benzhidriloxicarbonilo, t-butoxi-carbonilo, diisopropilmetoxicarbonilo, ¡sopropiloxicarbonilo, etoxicarbonilo, metoxicarbonilo, aliloxicarbonilo, 2,2,2-tricloroetoxicarbonilo, fenoxicarbonilo, 4-nitrofenoxicarbonilo, fluorenil-9-metoxicarbonilo, ciclopentiloxicarbonilo, adamantiloxicarbonilo, ciclohexiloxicarbonilo, feniltiocarbonilo, y similares; grupos alquilo tales como bencilo, trifenilmetilo, benciloximetilo y similares; y grupos sililo tales como trimetilsililo y similares.
Los grupos protectores hidroxi incluyen éteres tales como metilo, éteres de metilo sustituidos tales como metoximetilo, metiltiometilo, benciloximetilo, t-butoximetilo, 2-metoxietoximetilo y similares; éteres de sililo tales como trimetilsililo (TMS), t-butildimetilsililo (TBDMS) tribencilsililo, trifenilsililo, t-butildifenilsililo, triisopropilsililo y similares; éteres de etilo sustituidos tales como 1-etoximetilo, 1-metil-1-metoxietilo; t-butilo, alilo, bencilo, p-metoxibencilo, difenilmetilo, tritilo, y similares. Los grupos protectores hidroxi de ésteres incluyen ésteres tales como formiato, bencilformiato, cloroacetato, metoxiacetato, fenoxiacetato, pivaloato, adamantoato, mesitoato, benzoato y similares.
En un aspecto adicional, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéutica eficaz de un compuesto de fórmula I, según lo especificado en esta invención, y un portador aceptable para uso farmacéutico. Una cantidad eficaz terapéutica en este contexto es una cantidad suficiente para actuar de una manera profiláctica contra, o para estabilizar o reducir la infección viral, particularmente la infección viral de VHC, en sujetos infectados o sujetos que corren riesgo de ser infectados. En aun un aspecto adicional, esta invención se refiere a un proceso para preparar una composición farmacéutica según lo especificado en esta invención, el cual comprende mezclar íntimamente un portador aceptable para uso farmacéutico con una cantidad eficaz terapéutica de un compuesto de fórmula I, según lo especificado en esta invención.
Los compuestos de la presente invención o cualquier subgrupo de los mismos pueden ser formulados en diversas formas farmacéuticas para propósitos de administración. Como composiciones apropiadas, pueden citarse todas las composiciones generalmente empleadas para administrar fármacos en forma sistémica. Para preparar las composiciones farmacéuticas de esta invención, una cantidad eficaz del compuesto particular, opcionalmente en forma de sal de adición o complejo metálico, como el ingrediente activo se combina en mezcla intima con un portador aceptable para uso farmacéutico, portador que puede adoptar una amplia variedad de formas dependiendo de la forma de preparación deseada para la administración. Estas composiciones farmacéuticas están, convenientemente, en forma de dosificación unitaria adecuada, particularmente, para la administración por vía oral, rectal, percutánea o por inyección parenteral. Por ejemplo, en la preparación de las composiciones en forma de dosificación oral, puede emplearse cualquiera de los medios farmacéuticos usuales tales como, por ejemplo, agua, glicoles, aceites, alcoholes y similares, en el caso de las preparaciones líquidas orales tales como suspensiones, jarabes, elíxires, emulsiones y soluciones; o portadores sólidos tales como almidones, azúcares, caolín, lubricantes, aglutinantes, agentes desintegrantes y similares en el caso de polvos, pildoras, cápsulas y tabletas. Debido a su fácil administración, las tabletas y las cápsulas representan las formas unitarias de dosificación oral más ventajosas, en cuyo caso se emplean obviamente portadores farmacéuticos sólidos. Para las composiciones parenterales, el portador generalmente comprenderá agua estéril, por lo menos en gran parte, si bien pueden incluirse otros ingredientes, por ejemplo, para asistir en la solubilidad. Pueden prepararse, por ejemplo, soluciones inyectables, en las cuales el portador comprende solución salina, solución de glucosa o una mezcla de salina y solución de glucosa. También pueden prepararse suspensiones inyectables en cuyo caso pueden emplearse portadores líquidos apropiados, agentes de suspensión y similares. También se incluye preparaciones en forma sólida destinadas a ser convertidas, brevemente antes del uso, en preparaciones en forma líquida. En las composiciones adecuadas para la administración percutánea, el portador opcionalmente comprende un agente intensificador de la penetración y/o un agente humectante adecuado, opcionalmente combinado con aditivos adecuados de cualquier naturaleza en proporciones menores, aditivo el cual no introduce un efecto perjudicial significativo sobre la piel. Los compuestos de la presente invención también pueden ser administrados por mediante de inhalación oral o insuflación en la forma de una solución, una suspensión o un polvo seco utilizando cualquier sistema de administración conocido en la técnica.
Es especialmente ventajoso formular las composiciones farmacéuticas antes mencionadas en forma de dosificación unitaria para una fácil administración y uniformidad de dosificación. La forma de dosificación unitaria, como se utiliza en esta invención, se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de ingrediente activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el portador farmacéutico requerido. Los ejemplos de dichas formas de dosificación unitarias son tabletas (incluyendo tabletas ranuradas o recubiertas), cápsulas, pildoras, supositorios, paquetes de polvo, obleas, soluciones inyectables o suspensiones y similares, y sus múltiplos segregados.
Los compuestos de fórmula I muestran actividad contra VHC y pueden utilizarse en el tratamiento y profilaxis de la infección del VHC o enfermedades asociadas con VHC. Estas enfermedades incluyen fibrosis hepática progresiva, inflamación y necrosis que conduce a cirrosis, enfermedad hepática en etapa final y HCC. Los compuestos de esta invención, asimismo, pueden ser activos contra cepas mutadas del VHC. Por añadidura, los compuestos de esta invención pueden mostrar un perfil farmacocinético favorable y pueden tener propiedades atractivas en términos de biodisponibilidad, incluyendo una vida media aceptable, AUC (área bajo la curva) y valores pico y pueden carecer de fenómenos desfavorables tales como inicio rápido insuficiente y retención tisular.
Los compuestos de la invención son también atractivos debido a su baja toxicidad e índice de selectividad favorable según puede ser demostrado, por ejemplo, en un ensayo de toxicidad celular. Los compuestos de la invención, adicionalmente, carecen de actividad contra otros virus, en particular contra el VIH. El uso de fármacos con un efecto antiviral doble o múltiple en pacientes co-infectados puede conducir a una dosificación subóptima contra el otro virus, el cual, a su vez, puede conducir a la emergencia de cepas virales resistentes.
La actividad antiviral in vitro contra el VHC de los compuestos de fórmula I puede ser analizada en un sistema de replicón de VHC celular basado en Lohmann et al. (1999) Science 285: 1 10-1 13, con las modificaciones adicionales descritas por Krieger et al. (2001 ) Journal of Virology 75: 4614-4624 (incorporadas a la presente como referencia), lo cual es adicionalmente ejemplificado en la sección de ejemplos. Este modelo, si bien no es un modelo de infección completo para VHC, es ampliamente aceptado como el modelo más fuerte y eficaz de la replicación del ARN de VHC actualmente disponible. Se apreciará que es importante distinguir entre los compuestos que interfieren específicamente con las funciones del VHC de aquellos que ejercen efectos citotóxicos o cítostáticos en el modelo de replicón de VHC, y como consecuencia, causan una disminución en el ARN de VHC o en la concentración de la enzima reportera vinculada. Se conocen en el campo ensayos para la evaluación de la citotoxicidad celular basada por ejemplo en la actividad de enzimas mitocondriales utilizando colorantes redox fluorogénicos tales como resazurina. Por añadidura, existen screens de recuento celular para la evaluación de la inhibición no selectiva de la actividad del gen reportero vinculado, tal como luciferasa de luciérnaga. Los tipos celulares apropiados pueden estar equipados mediante transfección estable con un gen reportero de luciferasa cuya expresión depende de un promotor génico constitutivamente activo, y dichas células pueden ser utilizadas como un contra-screen para eliminar inhibidores no selectivos.
Debido a sus propiedades antivirales, particularmente sus propiedades anti-VHC, los compuestos de fórmula I, incluyendo cualquier estereoisómero posible, las sales de adición aceptables para uso farmacéutico o sus solvatos, son útiles en el tratamiento de animales de sangre caliente, en particular seres humanos, infectados con VHC, y para la profilaxis de infecciones del VHC en animales de sangre caliente, en particular en seres humanos. Por añadidura, la presente invención se refiere a un método para tratar a un animal de sangre caliente, en particular un ser humano, infectado con VHC, o que corre el riesgo de infectarse con VHC, comprendiendo dicho método la administración de una cantidad eficaz anti-VHC de un compuesto de fórmula I, según lo especificado en esta invención.
Por lo tanto, los compuestos de la presente invención pueden utilizarse como un medicamento, en particular como un medicamento anti-VHC o como un medicamento inhibidor del VHC. La presente invención también se refiere al uso de los compuestos en la manufactura de un medicamento para el tratamiento o la prevención de la infección del VHC. Dicho uso como un medicamento o método de tratamiento comprende la administración sistémica a sujetos infectados con VHC, o a sujetos susceptibles a la infección por VHC, de una cantidad de un compuesto de fórmula I, según lo especificado en esta invención, eficaz para combatir las condiciones asociadas con la infección de VHC.
En general, se contempla que una cantidad diaria eficaz antiviral seria entre aproximadamente 0.01 y aproximadamente 700 mg/kg, o entre aproximadamente 0.5 y aproximadamente 400 mg/kg, o entre aproximadamente 1 y aproximadamente 250 mg/kg, o entre aproximadamente 2 y aproximadamente 200 mg/kg, o entre aproximadamente 10 y aproximadamente 150 mg/kg de peso del cuerpo. Puede ser apropiado administrar la dosis requerida como dos, tres, cuatro o más subdosis en intervalos apropiados a lo largo del día. Dichas subdosis pueden ser formuladas como formas de dosificación unitaria, por ejemplo, que contienen entre aproximadamente 1 y aproximadamente 5000 mg, o entre aproximadamente 50 y aproximadamente 3000 mg, o entre aproximadamente 100 y aproximadamente 1000 mg, o entre aproximadamente 200 y aproximadamente 600 mg, o entre aproximadamente 100 y aproximadamente 400 mg de ingrediente activo por cada forma de dosificación unitaria.
La invención también se refiere a una combinación de un compuesto de fórmula I, su sal o solvato aceptable para uso farmacéutico, y otro compuesto antiviral, en particular otro compuesto anti-VHC. El término "combinación" puede hacer referencia a un producto que contiene (a) un compuesto de fórmula I, según lo especificado anteriormente, y (b) opcionalmente otro compuesto anti-VHC, como una preparación combinada para el uso simultáneo, separado o consecutivo en el tratamiento de infecciones de VHC.
Los compuestos anti-VHC que se pueden utilizar en ese tipo de combinaciones incluyen inhibidores de la polimerasa de VHC, inhibidores de la proteasa de VHC, inhibidores de otras dianas en el ciclo de vida del VHC, y agentes inmunomoduladores, y sus combinaciones. Los inhibidores de la polimerasa del VHC incluyen, NM283 (valopicitabina), R803, JTK-109, JTK-003, HCV-371 , HCV-086, HCV-796 y R-1479, R-7128, MK-0608, VCH-759, PF-868554, GS9190, XTL-2125, NM-107, GSK625433, R-1626, BILB-1941 , ANA-598, IDX-184, IDX-375, MK-3281 , MK-1220, ABT-333, PSI-7851 , PSI-6130, VCH-916. Inhibidores de las proteasas del VHC (inhibidores NS2-NS3 e inhibidores NS3-NS4A) incluyen BILN-2061 , VX-950 (telaprevir), GS-9132 (ACH-806), SCH-503034 (boceprevir), TMC435350 (también denominado TMC435), TMC493706, ITMN-191 , MK-7009, BI-12202, BILN-2065, BI-201335, BMS-605339, R-7227, VX-500, BMS650032, VBY-376, VX-813, SCH-6, PHX-1766, ACH-1625, IDX-136, IDX-316. Un ejemplo de un inhibidor NS5A del VHC es BMS790052, A-83 , A-689, NIM-81 1 y DEBIO-025 son ejemplos de inhibidores de ciclofilina NS5B.
Los inhibidores de otras dianas en el ciclo de vida del VHC, incluyendo NS3 helicasa; inhibidores de metaloproteasa; inhibidores de oligonucleótidos antisentido, tales como ISIS-14803 y AVI-4065; ARNsi tales como SIRPLEX-140-N; ARN de horquilla corto codificado por vector (ARNsh, siglas correspondientes a "vector-encoded short hairpin RNA"); DNAzimas; ribozimas específicas de VHC tales como heptazima, RPI.13919; inhibidores de entrada tales como HepeX-C, HuMax-HepC; inhibidores de alfa glucosidasa tales como celgosivir, UT-231 B y similares; KPE-02003002; y BIVN 401.
Los agentes inmunomoduladores incluyen, compuestos de isoformas de interferón naturales y recombinantes, incluyendo a-interíerón, ß-interferón, ?-interferón, y ?— interferón, tales como Intron A®, Roferon-A®, Canferon-A300®, Advaferon®, Infergen®, Humoferon®, Sumiferon MP®, Alfaferone®, IFN-beta®, y Feron®; compuestos de interferón derivados de polietilenglicol (pegilado), tal como PEG interferón-a-2a (Pegasys®), PEG interferón-a-2b (PEG-Intron®), y IFN-a-con1 pegilado; formulaciones de larga acción y derivaciones de compuestos de inteferón tales como el interferón fusionado con albúmina albuferon a; compuestos que estimulan la síntesis de interferón en células, tales como resiquimod; interleucinas; compuestos que aumentan el desarrollo de la respuesta de células T ayudantes tipo 1 , tales como SCV-07; agonistas del receptor topo TOLL tales como CpG-10101 (actilon), e isatoribína; timosina a-1 ; ANA-245; ANA-246; diclorhidrato de histamina; propagermanio; tetraclorodecaóxido; ampligen; IMP-321 ; KRN-7000; anticuerpos, tales como civacir y XTL-6865; y vacunas profilácticas y terapéuticas tales como InnoVac C y HCV E1 E2/MF59.
Otros agentes antivirales incluyen, ribavirina, amantadina, viramidina, nitazoxanida; telbivudina; NOV-205; taribavirina; inhibidores de la entrada interna al ribosoma; inhibidores virales de amplio espectro, tales como inhibidores IMPDH, y ácido micofenólico y sus derivados, e incluyendo, aunque sin limitarse a, VX-497 (merimepodib), VX-1 8, y/o VX-944); o combinaciones de cualquiera de los anteriores.
Los agentes particulares para utilizar en dichas combinaciones incluyen interferón-a (IFN-a), interferón-a pegilado o ribavirina, así como también agentes terapéuticos basados en anticuerpos dirigidos contra epítopos de VHC, ARN de pequeña interferencia (ARN Si), ribozimas, DNAzimas, ARN antisentido, antagonistas de molécula pequeña de, por ejemplo, NS3 proteasa, NS3 helicasa y NS5B polimerasa.
En otro aspecto, se proporcionan combinaciones de un compuesto de fórmula I según lo especificado en esta invención y un compuesto anti-VIH. Estos últimos preferentemente son aquellos inhibidores de VIH que tienen un efecto positivo sobre el metabolismo farmacológico y/o farmacocinética que mejoran la biodisponibilidad. Un ejemplo de ese tipo de inhibidor de VIH es ritonavir. Como tal, esta invención proporciona además una combinación que comprende (a) un compuesto de fórmula I o su sal o solvato aceptable para uso farmacéutico; y (b) ritonavir o una sal del mismo aceptable para uso farmacéutico. El compuesto ritonavir, sus sales aceptables para uso farmacéutico, y métodos para su preparación son descritos en WO 94/14436. US 6,037,157, y las referencias citadas allí: US 5,484,801 , US 08/402,690, WO 95/07696, y WO 95/09614, describen formas de dosificación preferidas de ritonavir.
La invención se refiere además a un proceso para preparar una combinación según lo descrito en esta invención, que comprende el paso de combinar un compuesto de fórmula I, según lo especificado anteriormente, y otro agente, tal como un agente antiviral, incluyendo un agente anti-VHC o anti-VIH, en particular aquellos mencionados anteriormente.
Dichas combinaciones pueden ser útiles en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de la infección de VHC en un mamífero infectado con el mismo, dicha combinación en particular comprende un compuesto de fórmula I, según lo especificado anteriormente e interferón-a (IFN-a), interferon-a pegilado, o ribavirina. O la invención proporciona un método para tratar a un mamífero, en particular un ser humano, infectado con VHC que comprende la administración a dicho mamífero de una cantidad eficaz de una combinación según lo especificado en esta invención. En particular, dicho tratamiento comprende la administración sistémica de dicha combinación, y una cantidad eficaz es aquella cantidad que es eficaz para tratar las afecciones clínicas asociadas con la infección de VHC.
En una modalidad, las combinaciones antes mencionadas son formuladas en la forma de una composición farmacéutica que incluye los ingredientes activos descritos anteriormente y un portador, según lo descrito anteriormente. Cada uno de los ingredientes activos puede ser formulado en forma separada y las formulaciones pueden ser co-administradas, o puede proporcionarse una formulación que contiene ambos y en caso deseado, otros ingredientes activos. En el primer caso, las combinaciones también pueden ser formuladas como una preparación combinada para el uso simultáneo, separado o consecutivo en terapia para VHC. Dicha composición puede adoptar cualquiera de las formas descritas anteriormente. En una modalidad, ambos ingredientes son formulados en una forma de dosificación tal como una combinación de dosificación fija. En una modalidad particular, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende (a) una cantidad eficaz terapéutica de un compuesto de fórmula I, incluyendo una posible forma estereoisomérica del mismo, o su sal aceptable para uso farmacéutico, o un solvato del mismo aceptable para uso farmacéutico, y (b) una cantidad eficaz terapéutica de ritonavir o su sal aceptable para uso farmacéutico, y (c) un portador.
Los componentes individuales de las combinaciones de la presente invención pueden administrarse separadamente en diferentes tiempos durante el transcurso de la terapia o en forma consecutiva en formas de combinación únicas o divididas. La presente invención tiene el propósito de abarcar todos esos regímenes de tratamiento simultáneo o alternando y el término "administrar" debe ser interpretado concordantemente. En una modalidad preferida, las formas de dosificación separadas se administran en forma simultánea.
En una modalidad, las combinaciones de la presente invención contienen una cantidad de ritonavir, o su sal aceptable para uso farmacéutico, que es suficiente para mejorar clínicamente la biodisponibilidad del compuesto de fórmula I con relación a la biodisponibilidad cuando dicho compuesto de fórmula I se administra por si solo. O, las combinaciones de la presente invención contienen una cantidad de ritonavir, o su sal aceptable para uso farmacéutico, la cual es suficiente para aumentar por lo menos una de las variables farmacocinéticas del compuesto de fórmula I seleccionado entre ti/2, Cmin, Cmax, Css, AUC a 12 horas, o AUC a las 24 horas, con relación a dicha por lo menos una variable farmacocinética cuando el compuesto de fórmula I es administrado por sí solo.
Las combinaciones de esta invención pueden administrarse a seres humanos en rangos de dosificación específicos para cada componente comprendido en dichas combinaciones, por ej. el compuesto de fórmula I según lo especificado anteriormente, y ritonavir o una sal aceptable para uso farmacéutico, pueden tener niveles de dosificación en el rango de 0.02 a 5.0 g/día. La relación de pesos del compuesto de fórmula I a ritonavir puede estar en el rango entre aproximadamente 30:1 y aproximadamente 1: 15, o aproximadamente 15: 1 y aproximadamente 1 : 10, o aproximadamente 15: 1 y aproximadamente 1 : 1 , o aproximadamente 10: 1 y aproximadamente 1 : 1 , o aproximadamente 8: 1 y aproximadamente 1 : 1 , o aproximadamente 5. 1 y aproximadamente 1: 1 , o aproximadamente 3: 1 y aproximadamente 1 : 1 , o aproximadamente 2:1 y 1 :1. El compuesto de fórmula I y ritonavir pueden administrarse en forma conjunta una o dos veces al día, preferentemente por vía oral, donde la cantidad del compuesto de fórmula I por cada dosis es según lo descrito anteriormente; y la cantidad de ritonavir por cada dosis es entre 1 y aproximadamente 2500 mg, o entre aproximadamente 50 y aproximadamente 1500 mg, o entre aproximadamente 100 y aproximadamente 800 mg, o entre aproximadamente 100 y aproximadamente 400 mg, o entre 40 y aproximadamente 00 mg de ritonavir.
Todas las referencias citadas se incorporan como referencia.
EJEMPLOS En los siguientes ejemplos, los nombres de los compuestos fueron generados mediante el programa informático Chemdraw Ultra™, Cambridgesoft, versión 9.0.7.
EJEMPLO 1 ^Amino-in7-hidroxi-^hidroximetil-5-oxa-e3pirof2.41hept--4-il)-fH- pirimidin-2-ona (1) (i) Paso 1 1-((6aR,8R.9R.9aS)-9-hidroxi-2,2,4.4-tetraisopropil-6a.8.9.9a-tetrahidro-6H-furor3,2-n[1 ,3,5,2^ltrioxadisilocin-8-il)pirim¡din-2,4(^ diona (1-1 ) Una mezcla de D-uridina (20 g) y 1 ,3— dicloro— 1 ,1 ,3,3— tetraisopropildisiloxano (1.018 eq) en piridina (300 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 64 horas. Se eliminó la piridina in vacuo (30°C). El residuo se redisolvió en 100 mL de CH2CI2, se lavó con agua (3x75 mL), se secó con MgSO4 anhidro y se filtró. El líquido filtrado se evaporó hasta sequedad y se utilizó como tal en la siguiente reacción. CL-EM: Tr: 3.16 min, m/z: 487 (M+H)+.
Paso 2 1-((6aR.8R,9aR)-2,2.4.4-tetraisoprop¡l-9-oxotetrahidro-6H-furoí3.2-f1 [1 ,3,5,2,4ltrioxadisilocin-8-il)pirimidin-2,4(1 H,3H)-diona (I-2) El compuesto intermedio 1-1 (19.93 g) se disolvió en 200 mL de CH2CI2, se agregaron piridina (1 eq) y anhídrido acético (2.91 eq) seguido por Cr03 (2.75 eq). La mezcla se agitó a temperatura ambiente y después de 30 minutos se observó una suave reflujo. Después de agitar durante 90 minutos, CL-EM indicó que se había formado el producto de reacción I-2 (50%) y que quedaba material de partida 1-1 (50%). La agitación adicional durante 2 horas dio como resultado 55% de producto 1-2 y 45% de 1-1 remanente. Se agregaron otros 10 mL de piridina, 5 mL de anhídrido de ácido acético y 5 gramos de Cr03 y la mezcla se agitó adicionalmente a temperatura ambiente durante la noche. La CL-EM indicó poco progreso. La solución de color marrón oscuro se vertió en 1300 mL de acetato de etilo y el residuo se filtró a través de una almohadilla de dicalita. El precipitado se lavó con acetato de etilo adicional. Los líquidos filtrados combinados se evaporaron hasta sequedad. El compuesto intermedio I-2 se purificó mediante cromatografía en columna utilizando CH2CI2 a CH2Cl2/acetato de etilo 1 :1. La cromatografía de capa fina (TLC, según sus siglas en inglés) indicó dos manchas. El compuesto intermedio I-2 fue, por ende, repurificado mediante cromatografía en columna utilizando heptano a heptano/acetona 7:3. Las fracciones que contienen el producto se recolectaron y evaporaron dando como resultado 8.5 gramo de un sólido blanco (I-2) CL-EM: Tr: 3.31 min, m/z: 485 (M+H)+, nota: el hidrato de la cetona es también observado: CL-EM: Tr: 3.20 min, m/z: 503 (M+H)+.
Paso 3 1-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-tetraisopropil-9-metilentetrahidro-6H-furof3,2-f1 ? ,3,5,2,4ltrioxadisilocin-8-il)pirimidin-2,4(1 H,3H)~diona (I-3) Se suspendió NaH (0.897 g) en 15 mL de sulfóxido de dimetilo seco (DMSO) y se calentó hasta 65°C durante 1.5 horas bajo Ar. Se agregó bromuro de metiitrifenilfosfonio (12.84 g) con agitación seguido por 30 mL de DMSO seco y 15 mL de tetrahidrofurano seco (THF). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1.5 horas. Se formó una mezcla amarilla/ naranja. Luego, el compuesto intermedio I-2 (6.97g), disuelto en 20 mL de THF seco, se agregó por goteo por medio de una jeringa, y la totalidad se agitó durante 1.5 horas a temperatura ambiente y luego a 50°C durante 1 hora. A continuación, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente. El precipitado se separó por filtración sobre un tapón de dicalita, el liquido filtrado se concentró (para eliminar THF) y el residuo se repartió entre CHCI3 y agua (300 mL cada uno). La capa orgánica se separó y la capa acuosa se re-extrajo con CHCI3. Las capas combinadas se filtraron sobre un tapón de dicalita y se concentraron. El producto se purificó mediante cromatografía en columna utilizando CH2CI2 a CH2CI2/acetato de etilo 7:3 como eluyente. La evaporación dio como resultado 2.97 g del compuesto intermedio I-3 en forma de un sólido de color blanco. CL-EM: Tr: 3.56 min, m/z: 483 (M+H)+.
Paso 4 S-benzoil-l-fíeaR.SR.gaS^^^^-tetraiso ropil-g-metilentetrahidro-6H-furo[3,2-f1[1 ,3,5,2,41trioxadisiloc¡n-8-¡l)pirimidin-2,4(1 H,3H)-diona ( ) El compuesto intermedio I-3 (2.4 g) se evaporó dos veces con 20 mL de piridina seca. Luego, se redisolvió en 30 mL de piridina seca. Se agregó di-isopropiletilamina (3 eq) seguido por cloruro de benzoilo (1.5 eq).
La mezcla se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. Se evaporó la piridina in vacuo por debajo de 30°C y se agregaron 150 mL de CH2CI2. La mezcla resultante se lavó dos veces con 50 mL de NaHC03 saturado. La capa orgánica se secó sobre MgS04, se filtró y evaporó, y el residuo se secó in vacuo durante 64 horas. El compuesto intermedio I-4 se purificó mediante cromatografía en columna utilizando CH2CI2 a CH2CI2/acetato de etilo 8:2 como eluyente. Después de la evaporación, se obtuvieron 2.89 g de I— 4 en forma de una espuma blanca. CL-EM: Tr: 3.79 min, m/z: 587 (M+H)+.
Paso 5 3-benzoil-1-((3'R,6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-tetraisopropi '.5',6,6a, S.ga-hexahidroespiroffurofS^-flfl .S.S^^Itríoxadisilocin-Q.S'-pirazoll-B-iDpiri-midin-2,4(1 H,3H)-diona y su epimero 3-benzoil-1-((3'S.6aR,8R.9aS)-2,2,4,4-tetraisopropi ',5',6,6a,8,9a-hexahidroespiro[furo[3,2-f1f1 ,3,5,2,4ltrio-xadisilocin-9.3'-pirazol1-8-¡npirimidin-2,4( 1 H,3H)-diona (I-5) Diazometano, generado a partir de N-metil-N-nitroso-p-toluensulfonamida (DIAZALD) (4.862 g), y KOH (2.9 g) en éter dietilico y 2-(2-etoxietoxi)etanol, se destiló en una solución de agitación de I- (1.072g) en éter dietilico (20 mL) que se enfrió en un baño de agua helada. Cuando se completó la destilación, la solución amarilla se agitó a temperatura ambiente hasta que la TLC o CL-EM mostró la compleción de la reacción. La mezcla se evaporó hasta sequedad dando como resultado 1.149 g de espuma blanca.
CL-EM indicó una mezcla 3: 1 de epimeros (I-5) que se utilizó como tal en la siguiente reacción. CL-EM: Tr: 3.67 & 3.68 min, m/z: 629 (M+H)+.
Paso 6 3-benzoil-1-((6a'R.8'R,9a'S)-2'.2',4',4'-tetraisopropilhexahidro-espiro[ciclopropan-1 ,9'-furo[3,2-f1[1 ,3,5,2,4ltrioxadisilocinl-8'-il)pirimidin-2,4 (1 H,3H)-diona (I-6) Una mezcla del compuesto intermedio I-5 (250 mg) y benzofenona (1 eq) disuelta en 5 mL de benceno seco /CH3CN 1 :1 se agitó a temperatura ambiente bajo Ar. La mezcla se irradió con una lámpara de halógeno de 150 W hasta que CL-EM mostró la completa conversión del material de partida. La mezcla se evaporó hasta sequedad y el compuesto intermedio I-6 se purificó mediante cromatografía en columna utilizando CH2CI2 como el eluyente. Luego de la evaporación de las fracciones puras, se obtuvo I-6 en forma de un aceite transparente (150 mg). CL-EM: Tr: 3.91 min, m/z: 601 (M+H)+.
Paso 7 1-((6a'R,8'R,9a'S)-2',2',4',4'-tetraisopm propan-1 ,9'-furof3,2-flf .3,5,2,4]^ na (I-7) El compuesto intermedio I-6 (150 mg) se disolvió en 3 mL CH2CI2 y se agregaron 10 mL de NH3/metanol. La mezcla se agitó durante 1 hora, se evaporó hasta sequedad y se purificó mediante cromatografía en columna utilizando CH2CI2 a CH2CI2/acetato de etilo 9: 1 como el eluyente. Luego de la evaporación, se obtuvo un aceite incoloro, el cual después de la trituración con éter dietílico y la evaporación dieron como resultado 87 mg del compuesto intermedio I-7 en forma de una espuma blanca. CL-EM: Tr: 3.66 min, m/z: 497 (M+H)+.
Paso 8 4-amino-1-((6a'R,8'R,9a'S)-2',2',4',4'-tetraisopropilhexahidro-espirofciclopropan-l .g urofS^-flfl .S.S^^ltrioxadisilocinl-S'-i pirimidin^ (1 H)-ona (I-8 Una solución de I-7 (1.0 g) se disolvió en 20 mL de piridina seca y la solución se enfrió en un baño de hielo. Se agregó por goteo 4-clorofenil fosforodicloridato (1.5 eq) y la solución se agitó en frío durante 5 minutos. Luego se agregó por goteo tetrazol (3 eq, solución 0.45 M en CH3CN). El baño de hielo se eliminó y la reacción se dejó proceder hasta que la CL-EM no mostró más progreso. Se agregó otro 1 eq de 4-clorofenil fosforodicloridato y la mezcla se agitó adictonalmente a temperatura ambiente durante 3 horas. La CL-EM indicó que ya no quedaba más material de partida. La mezcla se evaporó hasta sequedad (<40°C) y el residuo se absorbió en CH2CI2 (75 mL) y se lavó dos veces con NaHCO3 saturado. La fase orgánica se secó con Na2S04, se filtró y evaporó. El residuo de la reacción previa se disolvió en solución de 25 mL de NH3 en dioxano (0.5 M). Se agregó más NH3 en dioxano en intervalos regulares hasta que la reacción se había completado según lo juzgado por CL-EM. Cuando se terminó, la mezcla se evaporó hasta sequedad. El compuesto intermedio I-8 se purificó mediante cromatografía en columna utilizando CH2CI2 a Ch Ck/metanol 9:1 como el eluyente. Luego de la evaporación, se obtuvo I-8 en forma de un sólido pegajoso de color amarillo a naranja (840 mg). CL-EM: Tr: 3.42 min, m/z: 496 (M+H)+.
Paso 9 4-am¡no-1-(7-hidroxi-6-hidroximetil-5— oxa-espiro[2.41hept-4-il)— 1 H— pirimidin— 2— ona (1) El compuesto intermedio I-8 (840 mg) se disolvió en 25 mL de THF. Se agregó fluoruro de tetra-n-butilamonio (TBAF; 2 eq). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y luego se evaporó in vacuo. El compuesto se purificó dos veces mediante cromatografía en columna utilizando CHCI3/metanol 9:1 a CHCI3/metanol 3:1 como el eluyente. Después de la evaporación de las fracciones que contienen producto, se obtuvo el compuesto 1 (300 mg) en forma de un sólido blanco. CL-EM: Tr: 1 ,25 min m/z: 254 (M+H)+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.31 - 0.59 (m, 3 H), 0.93 - 1.02 (m, 1 H), 3.51 - 3.65 (m, 1 H), 3.71 (d, J=4.89 Hz, 2 H), 3.97 (t, J=5.87 Hz, 1 H), 4.98 (t, J=4.99 Hz, 1 H), 5.12 (d, J=5.87 Hz, 1 H), 5.72 (d, J=7.43 Hz, 1 H), 6.01 (s, 1 H), 7.13 (br, s, 2 H), 7.77 (d, J=7.24 Hz, 1 H).
EJEMPLO 2 2^(((4R.6RJS -4^4^m¡no-2- xopirimidin-1(2H¾-il)-7-hidroxi-5- oxaespiro[2.41heptan-6-il)metoxi)((fenoxi)fosforil)amino)propanoato de (2SV-bencilo (2a) Se disolvió el compuesto 1 (100 mg) en THF seco /piridina junto con 2-(cloro(fenoxi)fosforilamino)propanoato de (2S)-bencilo (279 mg, 2.0 eq). La mezcla se enfrió hasta -78°C. Se agregó N-metilimidazol (NMI) (259 mg, 8 eq) y esta mezcla se agitó durante 15 minutos a -78°C y luego se agitó a TA durante la noche. La mezcla resultante se evaporó hasta sequedad. Se agregaron 10 mL de CH2CI2 y el residuo se lavó con 10 mL de HCI 0.5N. La capa orgánica se separó y se lavó con 10 mL de agua, se secó sobre Na2S04, se filtró y evaporó. El compuesto se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice utilizando CH2CI2 a CH2CI2/MeOH 9-1 como el eluyente. (Rf= 0.2 en este eluyente). Se obtuvo un sólido amarillo, el cual se repurificó utilizando cromatografía en columna utilizando EtOAc a EtOAc/ MeOH 8-2 como el eluyente. Luego de la evaporación y secado durante la noche in vacuo, se obtuvieron 80 mg (33.4%) de 2a (mezcla de diastereómeros). CL-EM: Tr: 3.37 min m/z: 569 (M-H)~ 1H RMN (400 MHz, DMSO-c/6) £???? 0.31 - 0.41 (m, 1 H), 0.43 - 0.58 (m, 2 H), 0.95 - 1.06 (m, 1 H), 1 .20 - 1 .31 (m, 3 H), 3.82 - 4.01 (m, 3 H), 4.09 - 4.23 (m, 1 H), 4.23 - 4.36 (m, 1 H), 4.98 - 5.15 (m, 2 H), 5.29 -5.39 (m, 1 H), 5.70 (d, J=7.43 Hz, 1 H), 6.07 (s, 1 H), 6.13 (dd, J=12.81 , 10.47 Hz, 1 H), 7.08 - 7.25 (m, 6 H), 7.29 - 7.39 (m, 6 H), 7.54 (d, 1 H).
Se prepararon los siguientes compuestos de manera similar: 2-((((4R,6R,7S -(4-amino-2-oxopirim¡d¡n-1 (2H)-il)-7-hidroxi-5-oxaespiro[2.41heptan-6-il)metoxi)(4-clorofenoxi)fosforilamino)propanoato de (2S)-bencilo (2b) CL-EM: Tr: 3.65 min miz: 603 (M-H)-. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) ppm 0.30 - 0.43 (m, 1 H), 0.44 - 0.60 (m, 2 H), 0.95 - 1 .06 (m, 1 H), 1.20 - 1.31 (m, 3 H), 3.84 - 4.01 (m, 3 H), 4.09 - 4.23 (m, 1 H), 5.04 - 5.14 (m, 2 H), 5.29 - 5.39 (m, 1 H), 5.71 (d, J=7.63 Hz, 1 H), 6.07 (s, 1 H), 6.12 - 6.27 (m, 1 H), 7.08 - 7.26 (m, 5 H), 7.27 - 7.43 (m, 7 H), 7.55 (d, J=7.24 Hz, 1 H). 2-((((4R,6R,7S)-4-(4-amino-2-oxopirimidin-1 (2H)-il)-7-hidroxi-5-oxaespirof2.41heptan-6-¡l)metoxi)(fenoxi)fosforilamino)-3-fenilpropanoato de (2S)— etilo (2c) (2c) CL-EM: Tr: 1 ,84 min m/z: 585 ( +H)+ 2-((((4R,6R,7S -(4-amino-2-oxopirimidin-1 (2H)-il)-7-hidro xi-5-oxaespirof2.4lheptan-6-il)metoxi)(fenoxi)fosforilamino)propanoato de (2S)-metilo (2d) CL-EM: Tr: 1.25 min m/z: 495 (M+H)+ EJEMPLO 3 Isobutirato de (4R.6R.7S -(4-amin< -2-oxopirimidin-1(2H)-il)-6- (isobutiril-oximetil)-5-oxaespiror2.41heptan-7-ilo (3) El compuesto intermedio I-7 (11.00 g, 22.14 mmoles) se disolvió THF (280 mL) y se agregó TBAF (59.8 mL, 59.8 mmoles). La mezcla se itó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se agregó una mezcla de piridina, metanol y agua (80 mL, 3: 1 : 1 ), seguido por un intercambiador catiónico fuertemente ácido, Dowex 50 Wx4 (128g), en una mezcla de piridina, metanol y agua (320 mL, 3: 1 : 1). La mezcla de reacción se agitó durante 45 minutos y se filtró. El residuo Dowex se lavó dos veces con una mezcla de piridina, metanol y agua (320 mL, 3:1 :1 ) y los líquidos filtrados combinados se concentraron bajo presión reducida. La mezcla se purificó mediante cromatografía en gel de sílice mediante elución en gradiente a 10% de metanol en acetato de etilo, dando como resultado el compuesto intermedio I-9 (5,597 g, 84%) en forma de una espuma blanca. CL-EM Tr: 2.05 min, m/z = 253 (M-H)~.
El compuesto intermedio I-9 (5.16 g, 20.30 mmoles) se disolvió en piridina seca (100 mL) y la solución se enfrió externamente con agua fría. Se agregó anhídrido isobutirico (16.85 mL, 101 mmoles) y la reacción se dejó proceder a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se enfrió nuevamente externamente con agua fría y el exceso de anhídrido isobutirico se templó mediante la adición de metanol. Después de agitar durante 20 minutos a temperatura ambiente y evaporación de los volátiles, se agregó acetato de etilo y la mezcla se lavó con NaHCO3 acuoso saturado (2*). La fase orgánica se secó con MgSO4 y se concentró ¡n vacuo para proporcionar 1-10 (7.68 g, 96%) como un sólido blanco. CL-EM: Tr: 2.26 min, m/z = 393 (M-H)~.
Se agregó POCI3 (4.72 ml_, 50.6 mimóles) a una mezcla enfriada de 1-10 (7.68 g, 19.47 mmoles), 1 H-1 ,2,4-triazol (15.20 g, 220 mmoles) y trietilamina (30.7 ml_, 220 mmoles) en CH2CI2 seco (50 mL). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2.5 horas. El POCI3 en exceso se templó mediante la adición de agua fría y la capa orgánica se separó y se concentró in vacuo. La mezcla se purificó mediante cromatografía en gel de sílice mediante elución en gradiente CH2CI2/acetato de etilo 90:10 a 85:15, dando como resultado el compuesto intermedio 1-1 1 (7.5 g, 86%). CL-EM: Tr: 2.38 min, m/z = 446 (M+H)+.
El compuesto intermedio 1-11 (7.49 g, 16.81 mmoles) se disolvió en THF (200mL) y se trató con NH4OH acuoso concentrado (15 mL). Después de 3.5 horas, los volátiles se eliminaron bajo presión reducida. La mezcla se purificó mediante cromatografía en gel de sílice mediante elución en gradiente con 0 a 5% de metanol en CH2CI2. El producto se disolvió en acetato de etilo y la mezcla se lavó con agua (2*) y salmuera (2?). La fase orgánica se secó con MgS04 y después de la filtración, se concentró in vacuo, dando como resultado el compuesto 3 (5.597 g, 84%) en forma de una espuma blanca. CL-EM: Tr: 1.95 min, m/z = 394 (M+H)+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.36 - 0.46 (m, 1 H) 0.64 -0.75 (m, 1 H) 0.77 - 0,92 (m, 2 H) 1.06 - 1.15 (m, 12 H) 2.53 - 2.66 (m, 2 H) 4.18 - 4.36 (m, 3 H) 4.98-5.02 (m, 1 H) 5.77 (d, J=7.4 Hz, 1 H) 6.25 (s, 1 H) 7.25 (br, s, 1 H) 7.29 (br, s, 1 H) 7.55 (d, J=7.4 Hz, 1 H) EJEMPLO 4 ((4R,6RJS)^4^amino-2-oxopirimidin-1(2HHI)-7-hidroxi-S- oxaespirof2.41heptan-6-il)metil isobutirato (4) Una solución de compuesto intermedio 1-9 (350 mg, 1.377 mmoles) en piridina seca (15 mL) se enfrió en un baño de agua helada y se agregó (cloro(4-metoxifenil)metilen)dibenceno (900 mg, 2.91 mmoles). La mezcla de reacción se dejó en un baño de agua helada de derretimiento y luego se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se agregó metanol en exceso y después de 30 minutos, la mezcla de reacción se concentró, se secó y se utilizó como estaba en la siguiente reacción. CL-EM: Tr: 2.48 min, m/z = 525 (M-H)-.
A una solución del residuo anterior en DMF seca (15 mL) se le agregó terc-butilcloro-dimetilsilano (TBDMSCI; 311 mg, 2.065 mmoles) e imidazol (169 mg, 2.478 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. En total, se agregaron 6 equivalentes de TBDMSCI e imidazol durante el día siguiente y se continuó la agitación durante la noche. La mezcla se templó con metanol y los volátiles se eliminaron en parte, se diluyeron con acetato de etilo y la mezcla se lavó con agua (2*) y salmuera. La fase orgánica se secó con MgS04 y luego de la filtración, se concentró in vacuo. La mezcla se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice mediante elución por gradiente con CH2CI2 a CH2CI2/metanol 19: 1 , dando como resultado el compuesto intermedio 1-13 el cual se utilizó como estaba en la siguiente reacción. CL-EM: Tr: 3.70 min, m/z = 639 (M-H)".
El compuesto intermedio 1-13 se disolvió en ácido acético acuoso al 80% (10 mL) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente. Después de 8 horas, los volátiles se evaporaron y la mezcla se purificó mediante cromatografía en gel de sílice por elución en gradiente con CH2CI2 a 4% de metanol/CH2CI2. La evaporación del solvente dio como resultado el compuesto intermedio 1-14 (318 mg, 73%). CL-EM: Tr: 2.46 min, m/z = 367 (M-H)~ El compuesto intermedio 1-14 (318 mg 0.863 mmoles) se disolvió en piridina seca (8 mL) y la solución se enfrió externamente con agua fría. Se agregó anhídrido isobutírico (430 µ?, 2.59 mmoles) por medio de una jeringa. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se templó el anhídrido isobutírico en exceso mediante la adición de metanol, y luego se eliminaron los volátiles. Se agregó acetato de etilo y la solución se lavó con NaHCC»3 saturado, se secó con MgS04 y después de la filtración se concentró in vacuo dando como resultado el compuesto intermedio 1-15 (307 mg, 81 %). CL-EM: Tr: 3.0 min, m/z = 437 (M-H)~.
El compuesto intermedio 1-15 (307 mg, 0.700 mmoles), 1 H- ,2,4-triazol (546 mg, 7.91 mmoles) y trietilamina (1 .1 mL, 7.91 mmoles) se disolvieron en CH2Cl2 seco (7 mL) y se enfriaron a 0°C. Se agregó POCI3 (0.170 mL, 1.820 mmoles) mientras que la temperatura de reacción se mantuvo por debajo de 25°C. La mezcla se agitó durante la noche. Se agregaron 3.0 equivalentes de 1 H-1 ,2,4-triazol y trietilamina asi como también CH2CI2 (5 mL) y la mezcla se agitó durante otras 3 horas a temperatura ambiente. Se templó el POCI3 en exceso mediante la adición cuidadosa de agua fría. La capa orgánica inferior se separó y se concentró mediante evaporación bajo vacío. La mezcla se purificó mediante cromatografía en gel de sílice por elución en gradiente con CH2CI2 a 4% de metanol/CH2CI2, dando como resultado el compuesto intermedio 1-16 (200 mg, 58%). CL-EM: Tr: 3.09 min, m/z = 490 (M+H)+.
El compuesto intermedio 1-16 (200 mg, 0.408 mmoles) se disolvió en THF (5 ml_) y se trató con NH4OH acuoso concentrado (0.5 ml_). Después de 7 horas, se eliminaron los volátiles y la mezcla se concentró bajo presión reducida. La mezcla se purificó mediante cromatografía en gel de sílice por elución en gradiente con CH2CI2 a 5% de metanol/CH2CI2. Luego de la evaporación del solvente, se obtuvo el compuesto intermedio 1-17 (179 mg, 100%). CL-EM: Tr: 2.74 min, m/z = 438 (M+H)+.
A una solución de compuesto intermedio 1-17 (179 mg, 0.409 mmoles) y ácido acético (147 mg, 2.454 mmoles) en THF (10 mL), se agregó TBAF (1227 µ?, 1.227 mmoles, 1 M en THF). La mezcla se agitó a temperatura ambiente. Se continuó la agitación durante 2 horas y luego el solvente se eliminó. La mezcla se purificó mediante cromatografía en gel de sílice por elución en gradiente con metanol/CH2Cl2 4% a 8 %. El producto (100 mg) se mezcló con CaC03 (60 mg) y Dowex 50 Wx4 (200 mg) en THF (10 mL) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla se filtró y después de la evaporación de los volátiles, se repurificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (elución en gradiente: 0 a 15% de metanol en cloroformo), dando como resultado el compuesto 4 en forma de un sólido blanco (59 mg, 44%) CL-EM: Tr: 1.08 min, m/z = 324 (M+H)+.
H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.36 - 0.45 (m, 1 H) 0.46 -0.57 (m, 2 H) 0.96 - 1.05 (m, 1 H) 1.10 (d (ap.)), J=6.5 Hz, 6 H) 2.58 (h(ap.)), J=6.5 Hz, 1 H) 3.86 - 3.91 (m, 1 H) 3.97-^.01 (m, 1 H) 4.21 (dd, J=12.0, 5.9 Hz, 1 H) 4.33 (dd, J=12.0, 2.3 Hz, 1 H) 5.34 (d, J=5.7 Hz, 1 H) 5.74 (d, J=7.4 Hz, 1 H), 6.01 (s, 1 H) 7.06 - 7.28 (m, 2 H) 7.57 (d, J=7.4 Hz, 1 H).
EJEMPLO 5 (4R.6RJS)-^4-namino-2^xopirimidin-1(2HHI)-e^hidrox¡metil^ oxaespiror2.41heptan-7-il isobutirato (5) El compuesto intermedio 1-12 (250 mg, 0.475 mmoles) se disolvió en piridina seca (10 mL) y la solución se enfrió externamente con agua fría. A la solución se le agregó anhídrido isobutírico por medio de jeringa (236 pl, 1.424 mmoles), y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se agregó más anhídrido isobutírico (236 µ?, 1.424 mmoles) y la mezcla se agitó adicionalmente durante 2 horas. Se agregó más anhídrido isobutírico (236 µ?, 1.424 mmoles) y la mezcla se agitó durante la noche. Posteriormente, el anhídrido isobutírico en exceso se templó mediante la adición de metanol. La solución se agitó durante 20 minutos a temperatura ambiente y luego se concentró hasta sequedad. El residuo se absorbió en acetato de etilo (30 mL) y la solución se lavó con NaHCC>3 acuoso saturado (2x20mL). La fase orgánica se secó sobre Na2S04, el sólido se separó por filtración y el solvente se eliminó por evaporación. Dando como resultado 1-18 en forma de un aceite incoloro, utilizado como estaba en la siguiente reacción. CL-E : Tr: 3.07 min.
Se agregó POCI3 (102 µ?, 1.089 mmoles) a una mezcla enfriada de compuesto intermedio 1-18 (250 mg, 0.419 mmoles), 1 H-1 ,2,4-triazol (327 mg, 4.73 mmoles), trietilamina (661 µ?, 4.73 mmoles), y CH2CI2 (6.0 mL) mientras que la temperatura de reacción se mantuvo por debajo de 25°C (dando como resultado una precipitación blanca). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. Cuando la reacción se completó, se templó el POCI3 en exceso mediante la adición cuidadosa de H20 fría. La capa orgánica se separó y se concentró por evaporación bajo vacío. La mezcla se purificó mediante cromatografía en gel de sílice por elución en gradiente CH^C^/acetato de etilo 90:10 a 85: 15 dando como resultado el compuesto intermedio 1-19 en forma de un aceite (200 mg, 74%): Tr: 3.15 min.
El compuesto intermedio 1-19 (200 mg, 0.309 mmoles) se disolvió en THF (5 mL) y se trató con NH OH acuoso concentrado (0.6 mL). Después de 4 horas se agregó más NH4OH acuoso concentrado (0.3 mL) y la mezcla se agitó durante la noche. El solvente se eliminó in vacuo, el aceite se absorbió en acetato de etilo y se lavó con agua y salmuera. Después del secado con Na2S04l la filtración y evaporación de los volátiles, se utilizó el residuo (I— 20) como estaba en la siguiente reacción. CL-EM: Tr: 2.86 min, m/z = 594 (M-H)-.
El compuesto intermedio I-20 (180 mg, 0.302 mmoles) se disolvió en ácido acético acuoso al 80% (5 mL) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente. Luego de 9 horas, se eliminaron los volátiles y la mezcla se purificó mediante cromatografía en gel de sílice por elución en gradiente con 5% a 15% de metanol en CH2CI2. El residuo obtenido se trituró con iPr20 y se secó in vacuo. Se obtuvo el compuesto 5 (60.8 mg, 62%). CL-EM: Tr: 1.25 min, m/z = 324 (M+H)+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0.33 - 0.41 (m, 1 H) 0.62 - 0.71 (m, 1 H) 0.74 - 0.82 (m, 2 H) 1.08-1.14 (m, 6 H) 2.55-2.64 (1 H, m) 3.62-3.68 (m, 2H) 3.99 - 4.04 (m, 1 H) 4.98-5.03 (m, 1 H) 5.12 (t, J=5.2 Hz, 1 H) 5.76 (d, J=7.4 Hz, 1 H) 6.27 (s, 1 H) 7.14 - 7.33 (m, 2 H) 7.80 (d, J=7.4 Hz, 1 H) EJEMPLO 6 El isobutiril éster de (2S)-bencil 2-((((4R,6R,7S)- -(4-amino-2-oxo- pirimidin-1(2HHI)-7-hidroxi-5-oxaespiror2.41heptan-6-il)metoxH (fenoxi) fosforil-amino)propanoato (6) El compuesto 5 se disuelve en THF seco/piridina junto con 2-(cloro(fenoxi)fosforilamino)propanoato de (2S)-bencilo (2.0 eq). La mezcla se enfría hasta -78°C. Se agrega N-metilimidazol (NMI) (8 eq) y la mezcla se agita durante 15 minutos a -78°C y luego se agita a TA durante la noche. La mezcla se evapora hasta sequedad. Se agregan 10 mL de CH2CI2 y el residuo se lava con 10 mL de HCI 0,5N. La capa orgánica se separa y se lava con 10 mL de agua, se seca sobre Na2SO4, se filtra y evapora. El compuesto se purifica mediante cromatografía sobre gel de sílice utilizando un gradiente de ??2??2/?ß?? como el eluyente.
Siguiendo los mismos procedimientos aunque comenzando a partir de 2-(cloro(fenoxi)fosforilamino)propanoato de (2S)-etilo, también se prepara el isobutiril éster de 2-((((4R,6R,7S)-4-(4-amino-2-oxo-pirimidin-1 (2H)-il)-7-hidroxi-5-oxaespiro[2.4]heptan-6-¡l)metoxi) (fenoxi) fosforil-amino)propanoato de (2S)-et¡lo (7): Ejemplos Biológicos Ensayo de replicones Los compuestos de fórmula I se examinaron para determinar la actividad en la inhibición de la replicación del ARN de VHC en un ensayo celular con el objeto de identificar compuestos que inhiben una línea celular de replicación celular funcional del VHC, también conocido como replicones del VHC. El ensayo celular se basó en un constructo de expresión bicistrónica, según lo descrito por Lohmann et al. (1999), Science vol. 285 pp. 110-113 con las modificaciones descritas por Krieger et al. (2001 ), Journal of Virology 75: 4614-4624, en una estrategia de selección multi-objetivo.
El ensayo utilizó la linea celular establemente transfectada Huh- 7 luc/neo (en adelante Huh-Luc). Esta línea celular alberga un ARN que codifica un constructo de expresión bicistrónico que comprende las regiones NS3-NS5B del tipo salvaje de VHC tipo 1 b traducidas de un Sitio de Entrada Interno al Ribosoma (IRES, siglas correspondientes a "Internal Ribosome Entry Site") del virus de encefalomiocarditis (EMCV), precedido por una porción reportera (FfL-luciferasa), y una porción marcadora seleccionable (neoR, neomicina fosfotransferasa). El constructo está bordeado por 5' y 3' NTRs (regiones no traducidas) de VHC tipo 1 b. El cultivo continuado de las células de replicones en presencia de G418 (neoR) depende de la replicación del ARN de VHC. Las células de replicones establemente tránsfectadas que expresan ARN de VHC, el cual se replica autónomamente y a niveles elevados, que codifica ínter alia luciferasa, se utilizaron para la selección de los compuestos antivirales.
Las células de replicones se colocaron en placas de 384 pocilios en presencia de los compuestos de ensayo y controles los cuales fueron agregados en diversas concentraciones. Luego de una incubación de tres días, se midió la replicación del VHC ensayando la actividad de luciferasa (utilizando sustratos de ensayo de luciferasa convencionales y reactivos y un formador de imágenes de microplacas Perkin Elmer ViewLux™ ultraHTS). Las células de replicones en los cultivos de control tienen expresión elevada de luciferasa en ausencia de cualquier inhibidor. La actividad inhibidora del compuesto sobre la actividad de luciferasa se monitoreó en las células Huh-Luc, permitiendo una curva de dosis- respuesta para cada compuesto de ensayo. Luego se calcularon los valores EC50, valor que representa la cantidad del compuesto requerida para disminuir el nivel de actividad detectado de luciferasa en 50%, o más específicamente, la capacidad de replicarse del ARN de replicón de VHC genéticamente vinculado.
Toxicidad Celular Se determinó la toxicidad celular en el ensayo de replicón Huh7-CMV-Luc. Las células de replicón (2500 células/ pocilio), transformadas establemente con un gen reportero de luciferasa bajo el control del promotor constitutivo de cytomegalovirus (CMV), se cultivaron en presencia o ausencia de concentraciones del compuesto de ensayo. Después de tres días de incubación a 37°C en una atmósfera de C02 5% humidificada, se midió la proliferación celular midiendo la actividad de Luc, y se expresó como valores CC50 (citotoxicidad, 50% de concentración inhibitoria de crecimiento celular). Los ensayos se llevaron a cabo en placas de 384 pocilios.
Ensayo de VIH Los compuestos de la invención se analizaron para determinar su potencia contra el virus de inmunodeficiencia humana tipo salvaje (VIH). La actividad antiviral se evaluó utilizando un ensayo celular llevado a cabo de conformidad con el siguiente procedimiento. Se construyó la línea de células T humana MT4 con Proteina Fluorescente Verde (GFP, Green Fluorescent Protein) y un promotor específico de VIH, repetición terminal largo VIH-1 (LTR). Esta línea celular, designada MT4 LTR-EGFP, puede utilizarse para la evaluación in vitro de la actividad anti-VIH de los compuestos en investigación. En células infectadas con VIH-1 , se produce proteina Tat, la cual regula ascendentemente al promotor LTR y eventualmente conduce a la estimulación de la producción del reportero de GFP, permitiendo medir la infección del VIH progresiva en forma fluorométrica. Los valores de concentración eficaz tales como 50% de concentración eficaz (EC50) pueden determinarse y son generalmente expresados en µ?. Se define un valor de EC50 como la concentración de compuesto de ensayo que reduce la fluorescencia de células infectadas con VIH en 50%. El control de la infección de VIH-1 se llevó a cabo utilizando un microscopio de barrido. El análisis de imágenes permite una detección muy sensible de la infección viral. Las mediciones se realizaron antes de la necrosis celular, la cual generalmente se produce aproximadamente cinco días después de la infección, en particular se llevaron a cabo las mediciones tres días después de la infección. La columna IIIB en el cuadro muestra los valores de EC50 contra la cepa del tipo salvaje IIIB.
Los resultados en el siguiente cuadro ilustran que los compuestos de la presente invención muestran la actividad contra el VHC, mientras que carecen de actividad contra el VIH. Los mismos muestran resultados favorables en términos de toxicidad y tienen un índice de selectividad aceptable (relación entre EC50 y CC50).
CUADRO Resultados del Ensayo Número de EC50 (replicón) µ? CC50 (Huh7) EC50 (IIIB) µ? compuesto µ? 1 8.4 >98 >98 2a 15.3 >98 >98 2b 26.3 >98 >98 2c 98 >98 >98 2d 63.1 >98 >98 3 27.2 >98 >98 4 9.2 >98 >98 5 42.5 >98 >98

Claims (17)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES
1 - Un compuesto de fórmula I: incluyendo cualquiera de los estereoisomeros posibles, donde: R2 es hidrógeno o alquilo C!-C4; R3 y R4 se seleccionan, independientemente, del grupo formado por hidrógeno, -C(=O)R5, y -C(=0)CHR6-NH2; o R3 es hidrógeno y R4 es un éster de monofosfato, difosfato, o trifosfato; o R3 es hidrógeno, -C(=O)CHR5, o -C(=O)CHR6-NH2 y R4 es un grupo de fórmula cada R5 se selecciona, independientemente, del grupo formado por hidrógeno, alquilo Ci-C6, y cicloalquilo C3-C7; R6 es hidrógeno o alquilo Ci-C6; R7 es fenilo, opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes cada uno seleccionado independientemente entre halo, alquilo C -C&, alquenilo C3-C6, alcoxi Ci-C6, hidroxi, y amino, o R7 es naftilo; o R7 es indolilo; R8 es hidrógeno, alquilo C1-C6, bencilo; R8 es hidrógeno, alquilo Ci-C6, bencilo; o R8 y R8 junto con el átomo de carbono al cual están unidos forman cicloalquilo C3-C7; R9 es alquilo C^Ce, bencilo, o fenilo, donde dicho fenilo puede estar opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes cada uno seleccionado independientemente entre hidroxi, alcoxi Cí-Ce, amino, mono- y dialquilamino Ci-C6¡ siempre que R2, R3 y R4 no sean todos hidrógeno; o sus sales o solvatos aceptables para uso farmacéutico.
2. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R2 es hidrógeno.
3. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R3 y R4 son hidrógeno.
4. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 - 2, caracterizado además porque R3 es hidrógeno y R4 es un grupo de fórmula
5. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 - 2 o con la reivindicación 4, caracterizado además porque R7 es fenilo, opcionalmente sustituido con halo, o alquilo C^- 5l o R7 es naftilo.
6. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 - 2 o con las reivindicaciones 4 ó 5, caracterizado además porque R8 es hidrógeno, y R8 es hidrógeno o alquilo Ci-C6.
7. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 - 2 o con las reivindicaciones 4 ó 5, caracterizado además porque uno de R3 y R4 es -C(=0)R5 y el otro de R3 y R4 es hidrógeno; o donde ambos R3 y R4 son -C(=0)R5¡ y donde R5 es alquilo C!-Ce.
8.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado además porque R5 es isopropilo.
9.- El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 - 2 o con las reivindicaciones 4 - 8, caracterizado además porque R9 es alquilo Ci-C6 o bencilo.
10.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque el compuesto tiene la fórmula:
11 . - El compuesto de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado además porque el compuesto está en forma libre.
12. - Una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz antiviral de un compuesto de fórmula I según lo definido en cualquiera de las reivindicaciones 1-1 1 y un portador aceptable para uso farmacéutico.
13. - Un compuesto de fórmula I, según lo definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 - 1 1 , así como también el compuesto de fórmula I donde R2, R3 y R4 son todos hidrógeno, para utilizar como un inhibidor del VHC.
14. - Un compuesto de fórmula I, para utilizar como un inhibidor del VHC, de conformidad con la reivindicación 13, en donde el compuesto de fórmula I R2, R3 y R4 son todos hidrógeno.
15.- Un compuesto de fórmula I, para utilizar como un inhibidor del VHC, de conformidad con la reivindicación 14, en donde el compuesto está en forma libre.
16.- Una combinación que comprende un compuesto de fórmula I, así como también el compuesto de fórmula I, en donde R2, R3 y R4 son todos hidrógeno, con otro inhibidor del VHC.
17.- Un proceso para preparar un compuesto de fórmula I, según lo definido en cualquiera de las reivindicaciones 1-1 1 , en donde (a) un compuesto de fórmula I se prepara donde R3 y R4 son ambos hidrógeno, en la presente representado mediante la fórmula l-a, mediante una reacción de conversión de uracilo a citosina a partir de una 2'-desox¡-2'-espirociclopropiluridina 1f a la correspondiente 2'-desoxi-2'-espirociclopropil citidina 1g, seguido por la remoción de los grupos protectores PG proporcionando el compuesto l-a: 1f l-a ig (b) se prepara un compuesto de fórmula I donde R3 es hidrógeno y R4 es haciendo reaccionar un compuesto l-a con un fosforocloridato presencia de una base proporcionando un fosforamidato l-b: (c) se R4 es -C(=0)R5 o -C(=0)CHR6-NH2, en la presente representado por R a y dicho compuesto mediante la fórmula l-c; o R3 y R4 independientemente uno del otro son -C(=0)R5 o -C(=0)CHR6-NH2, en adelante representado mediante R3a respectivamente R4a y dicho compuesto mediante la fórmula l-d; y donde el grupo amino en -C(=O)CHR6-NH2 puede ser protegido con un grupo protector amino que puede ser eliminado después;protegiendo selectivamente el grupo 5'— hidroxi en un compuesto intermedio 3a proporcionando un compuesto intermedio 3b, el cual, a su vez, es esterificado a un compuesto intermedio 3c, seguido por una conversión de uracilo a citosina a un compuesto intermedio 3d; desprotegiendo éste último al 3'-monoéster l-c; o esterificando el 5'-hidroxi en l-c a un compuesto l-d; o esterificando selectivamente el grupo 5'— hidroxi en un compuesto intermedio 3a introduciendo de ese modo un grupo R a dando como resultado un compuesto intermedio 3e, y el compuesto intermedio 3e es posteriormente esterificado con un ácido diferente introduciendo de ese modo un grupo R3a, proporcionando un compuesto intermedio di-éster 3f, el cual es sometido a una conversión de uracilo en citosina, para proporcionar un compuesto l-d: (d) se prepara un compuesto de fórmula I donde R3 es hidrógeno y R4 es R a según lo especificado anteriormente, estando dicho compuesto representado mediante la fórmula l-e, protegiendo el hidroxi libre en un compuesto intermedio 3b con un grupo protector hidroxi que es selectivamente disociable hacia el otro grupo protector hidroxi dando como resultado un compuesto intermedio 4a; eliminando el grupo protector 5'-hidroxi proporcionando un compuesto intermedio 4b; esterificando este último a un compuesto intermedio 4c; sometiendo a este último a una conversión de uracilo en citosina obteniendo de ese modo un derivado de citidina protegida con 4'-hidroxi 4d, el cual es desprotegido para proporcionar un compuesto l-e; según lo representado en el siguiente esquema, donde el grupo PGa tiene los mismos significados que PG, aunque se selecciona de modo que sea selectivamente disociable hacia el grupo PG: Esquema 4: Síntesis de monoésteres (e) se prepara un compuesto de fórmula I donde R y R son iguales y son según lo especificado anteriormente, estando dicho compuesto representado mediante la fórmula l-f, esterificando ambos grupos hidroxi en un compuesto intermedio 3a:
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Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT2337809T (pt) * 2008-09-08 2017-11-14 Saudi Aramco Tech Co Composições de policarbonato-poliol e métodos
UY32099A (es) 2008-09-11 2010-04-30 Enanta Pharm Inc Inhibidores macrocíclicos de serina proteasas de hepatitis c
TW201201815A (en) * 2010-05-28 2012-01-16 Gilead Sciences Inc 1'-substituted-carba-nucleoside prodrugs for antiviral treatment
CA2821340A1 (en) 2010-12-30 2012-07-05 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Phenanthridine macrocyclic hepatitis c serine protease inhibitors
WO2012092409A2 (en) 2010-12-30 2012-07-05 Enanta Phararmaceuticals, Inc Macrocyclic hepatitis c serine protease inhibitors
US10201584B1 (en) 2011-05-17 2019-02-12 Abbvie Inc. Compositions and methods for treating HCV
JP5845841B2 (ja) 2011-11-18 2016-01-20 東芝ライテック株式会社 照明制御装置
MX2014009850A (es) 2012-02-14 2015-03-10 Univ Georgia Spiro [2.4] heptanos para aplicaciones relacionadas con el tratamiento de infecciones de flaviviridae.
EP3089757A1 (en) 2014-01-03 2016-11-09 AbbVie Inc. Solid antiviral dosage forms
DK3265102T3 (da) 2015-03-06 2025-10-13 Atea Pharmaceuticals Inc Beta-d-2'-deoxy-2'alpha-fluoro-2'-beta-c-substituerede-2-modificerede-n6-substituerede purinnukleotider til hcv-behandling
RU2590952C1 (ru) * 2015-05-26 2016-07-10 Вячеслав Энгельсович Семёнов Средство гепатопротекторного действия
WO2018013937A1 (en) 2016-07-14 2018-01-18 Atea Pharmaceuticals, Inc. Beta-d-2'-deoxy-2'-alpha-fluoro-2'-beta-c-substituted-4'-fluoro-n6-substituted-6-amino-2-substituted purine nucleotides for the treatment of hepatitis c virus infection
BR112019004297A2 (pt) 2016-09-07 2019-05-28 Atea Pharmaceuticals Inc método, uso de uma quantidade eficaz de um composto, composto, e, composição farmacêutica.
HRP20250266T1 (hr) 2017-02-01 2025-04-25 Atea Pharmaceuticals, Inc. Nukleotid hemi-sulfat sol za liječenje virusa hepatitisa c
EP3773753A4 (en) 2018-04-10 2021-12-22 ATEA Pharmaceuticals, Inc. TREATMENT OF PATIENTS INFECTED WITH THE HEPATITIS C VIRUS WITH CIRRHOSIS
US10874687B1 (en) 2020-02-27 2020-12-29 Atea Pharmaceuticals, Inc. Highly active compounds against COVID-19
EP4355319A4 (en) 2021-06-17 2025-01-22 ATEA Pharmaceuticals, Inc. BENEFICIAL ANTI-HCV COMBINATION THERAPY

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0727419B1 (en) 1992-12-29 2002-02-27 Abbott Laboratories Intermediates for the preparation of retroviral protease inhibiting compounds
IL110752A (en) * 1993-09-13 2000-07-26 Abbott Lab Liquid semi-solid or solid pharmaceutical composition for an HIV protease inhibitor
US5559158A (en) 1993-10-01 1996-09-24 Abbott Laboratories Pharmaceutical composition
IL111991A (en) * 1994-01-28 2000-07-26 Abbott Lab Liquid pharmaceutical composition of HIV protease inhibitors in organic solvent
US6037157A (en) * 1995-06-29 2000-03-14 Abbott Laboratories Method for improving pharmacokinetics
GB0114286D0 (en) * 2001-06-12 2001-08-01 Hoffmann La Roche Nucleoside Derivatives
MY140819A (en) * 2002-06-28 2010-01-29 Idenix Caymans Ltd Modified 2' and 3'-nucleoside prodrugs for treating flaviviridae
US7429565B2 (en) * 2003-04-25 2008-09-30 Gilead Sciences, Inc. Antiviral phosphonate analogs
EP1794172B1 (en) * 2004-08-23 2009-07-15 F.Hoffmann-La Roche Ag Antiviral 4'-azido-nucleosides
ATE493428T1 (de) * 2006-10-10 2011-01-15 Medivir Ab Hcv-nukleosidinhibitor

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PT2141172E (pt) 2013-01-14
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