MX2010013035A - Metodos para aumentar el valor de grano mejorando el rendimiento y calidad de grano. - Google Patents

Abstract

La invención proporciona una planta transgénica, que expresa un transgene que codifica una sintasa de citrato (CS) en donde la semilla de planta transgénica de la invención se caracteriza por rendimiento aumentado y/o niveles mejorados de proteína, aminoácidos esenciales o aceite, cuando se compara con una Isolina que no expresa el transgene; y también proporciona métodos para producir plantas transgénicas con trazos económicamente relevantes y proporciona vectores de expresión que comprenden polinucleótidos que codifican Sintasa de Citrato.

Description

MÉTODOS PARA AUMENTAR EL VALOR DE GRANO MEJORA EL RENDIMIENTO Y CALIDAD DE GRANO ECEDENTES DE LA INVENCIÓN po de la Invención La presente invención está dirigida sgénicas, que expresan sintasa de citrato de ) y los métodos de uso. Las plantas transgé resan transgene CS, particularmente cuando se e illas o en semillas y está dirigidas adem partimientos de célula tales como plástidos eles superiores en rendimiento de grano, y/o am particular cisteína, y/o aceite cuando se com troles de Isolina que no contienen el transgene promotor de semilla preferido o enlazad ablemente a una secuencia de meta de comparti o por hectárea para llenar estas demandas. Puest 90% del grano de maíz se usa para alimento ucción de etanol en la actualidad, el maíz es u chas más importantes para nutrición animal. El de diente amarillo consiste de 60-70% de almid roteína, y 3-4% de aceite. Sin embargo, a pesar onentes valiosos de alimentación, el maíz d illo no contiene suficientes calorías y am ciales para soportar el crecimiento óptimo y d la mayoría de los animales. Por lo tanto, para s desventajas, es necesario suplementar la ali da en maíz de diente amarillo con otros nutrie nmente, el maíz de diente amarillo se mezcla c frijol de soya para mejorar la composición de a alimento. Desafortunadamente, los animales carec uctos secundarios de las industrias de rest on y refinería. El uso de desperdicio ani ementar alimentación de ganado se ha descontinua u asociación con la encefalopatía espongiforme rmedad de Creutzfeldt-Jakob . Las mejoras en re grano y las cualidades nutricionales de grano ntar el valor por hectárea, energía por hec rar la eficiencia de alimentación y reducirán e ental y otros costos asociados con producción de La respiración, incluyendo el ciclo d arboxílico (TCA) , no solamente proporciona la sintetizar los compuestos de almacenamiento per ra intermediarios para biosíntesis de a oácido. La sintasa de citrato (CS) cataliza la itrato de oxiloacetato y CoA de acetilo. Este Fuente y col. mostró que la expresión de un asa de -citrato de Pseudomonas aeruginosa e ntó la tolerancia al aluminio (Science 276: 15 ). López y col. reportaron admisión de fósforo do a ácidos orgánicos que solub8ilizarn for bles de fosfato (Nature Biotech 18: 450-453, 2 rgo, este acercamiento parece estar sujeto a in entales ya que otro grupo fue incapaz de reprodu ubrimientos usando estas mismas plantas asi c as para expresar el gene de sintasa de citrato a rior (Delhaize y col. Plant Physiology 125: 2 ) .

WO 2004/056968 describió que la sobre expr de sintasa de citrato Arabidopsis (At3g5875= o como un aumento de 7% en aceite de semilla o y col., 2000; Kayama y col., 2000). Sin emba rtes que la expresión de un gene de sintasa de c domonas aeruginosa en tabaco no está asociada c ulación de citrato mejorada o eflujo (Plant Ph , Vol. 125:2059-2067). Los autores sugieren esión de CS en plantas es improbable que sea e te y fácilmente reproducible para mejorar la t luminio y P-nutrición de cosechas.

Mientras que los aminoácidos ligados (co roteina) cuentan 90.99% de aminoácidos totales e maíz, los aminoácidos libres cuentan por 1-10 oácidos totales. Estos son retos serios para ionalmente los contenidos de aminoácido esencial que aumentar la concentración de aminoácido pre resulta en aumento de aminoácido total d eína, metionina, lisina y/o arginina.

Continúa existiendo una necesidad de rendi o aumentado y. . de grano de planta qu cterísticas agronómicas y con niveles aumen oácidos esenciales, proteína o aceite.

ENDIO DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona una sgénica, y sus partes, que expresa un gene que proteína de sintasa de citrato (CS) en la se ta transgénica, o en el compartimiento intracelu lla, en donde la CS confiere niveles más ele imiento de grano y/o niveles superiores de am es como cisteína, metionina, arginina, treonina valina) y/o aceite cuando se compara con una ina o semilla que no expresa la proteína de s róloga, expresada en la semilla o en un comparti la intracelular de la semilla, en donde el polin elecciona del grupo que consiste de: a) un polin tiene una secuencia como se define en SEC ID NO: 5, 6, 7, 8, 12, 13, 14, o 15; b) un polinucle fica un polipéptido que tiene una secuencia ne en SEC ID NO: 16, 17, 18, 19, 22, 23, 24 o nucleótido que tiene cuando menos 70% de ide encia a un polinucleotido · que tiene una secuenci ine en SEC ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 12, d) un polinucleotido que codifica un polipé e cuando menos 70% de identidad de secuenc ipéptido que tiene una secuencia como se define 16, 17, 18, 19, 22, 23, 24, k o 25; e) un polin se hibridiza bajo condiciones estrictas la planta es un monocotilidóneo o dicotiledóne cificamente, la planta se selecciona del g iste en maíz, trigo, arroz, cebada, avena, o, banana, ballico, chícharo, alfalfa, frijol horia, perejil, tomate, patata, algodón, enta, colza de aceite de semilla, remolac flor, brócoli, lechuga y Arabidopsis thali lidad adicional de la planta transgénica pr rita provee, en donde la expresión del polinucl z de conferir a la planta un trazo econó rtante y además en donde el trazo econó rtante se selecciona del grupo que consiste de s 2% de aumento en contenido de aceite sobre el aceite de una Isolina, cuando menos 4% de au eína del contenido de cisteína de una Isolina, Otra modalidad provee semilla de la sgénica previamente descrita, en donde (a) la e un aumento de cuando menos 3% en uno o más am ccionados del grupo que. consiste de: treonina, na, metionina, lisina, y arginina, sobre las c icho aminoácido en una Isolina; o (b) la semilla nto de alrededor de 4%-27% en contenido de ciste contenido de cisteina de una Isolina; o (c) la e un aumento de alrededor de 2%-13% en cont onina sobre el contenido de metionina de una I la semilla tiene un aumento de alrededor de 2 enido de aceite sobre el contenido de aceite ina. Modalidades adicionales proporcionan una ucida de la planta transgénica antes mencionada, emilla comprende el nucleótido y una modalidad a) Un aumento de cuando menos 10.5 litros por (3 bushel por acre9 en rendimiento de grano Isolina; b) Un aumento de cuando menos 10.5 litros por (3 bushel por acre) de rendimiento de grano isolina y la semilla tiene cuando menos cisteina que la semilla de Isolina; c) Cuando menos 10.5 litros/hectárea (3 bushel aumento en rendimiento de grano sobre la Iso semilla tiene cuando menos 4% de aumento de y cuando menos 2% de aumento en metionin semilla de Isolina; y d) Cuando menos 10.5 litros por hectárea (3 b acre) de aumento en rendimiento de grano Isolina y la semilla tiene cuando menos nucleótido, en donde el- polinucleótido cod péptido que es- capaz de conferir el trazo econó vante, y en donde el polinucleótido se selecc o que consiste de: a) Un polinucleótido que tiene una secuencia define en SEC ID NO: 1, 2 , 3, 4, 5, 6, 7, 8, 14, o 15; b) Un polinucleótido que codifica un polipép tiene una secuencia como se define en SEC I 17, 18, 19, 22, 23, 24, o 25; c) Un polinucleótido que tiene cuando menos identidad de secuencia a un polinulceótido una secuencia como se define en SEC ID NO: 4, 5, 6, 7, 8, 12, 13, 14, 0 15; d) Un polinucleótido que codifica un polipép f) Un polinucleótido que se hibridiza bajo co estrictas a un polinucleótido que codi polipéptido que tiene una secuencia como se SEC. ID NO: 16, 17, 18, 19, 22, 23, 24, o 25; g) Un polinucleótido complementario a cualquier polinucleotidos de a) a f) y B) selecciona transgénicas con el trazo económicamente rele modalidad de la invención proporciona un sgénica y sus partes, que sobre expresa una s ato heterólogo activo en el citosol de una se e la proteina de CS aislada se codifica inucleótido seleccionado del grupo que consiste d a) Un polinucleótido que tiene una secuencia define en SEC ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 d) un polinucleótido que codifica un polipép tiene cuando menos 70% de identidad de secuen polipéptido que tiene una secuencia como se SEC. ID NO: 16, 17, 18, 19, 22, 23, 24, o 25; e) un polinucleótido que se hibridiza bajo co estrictas a un polinucleótido que tiene una como se define en SEC ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 12, 13, 14, o 15; f) un polinucleótido que se hibridiza bajo co estrictas a un polinucleótido que codi polipéptido que tiene una secuencia como se SEC ID NO: 16, 17, 18, 19, 22, 23, 24, o 25; g) un polinucleótido complementario a cualquier plinucle { otidos de a) a f) . modalidad adicional de la presente invención p b) un polinucleótido que codifica un polipép tiene una secuencia como se define en SEC ID 17, 18, 19, 22, 23, 24, 0 25; c) un polinucleótido que tiene 70% de iden secuencia a un polinucleótido que tiene una como se define en SEC ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 12, 13, 14 O 25; d) un polinucle { otido que codifica un polipép tiene cuando menos 70% de identidad de secue polipéptido que tiene una secuencia como se SEC ID NO: 16, 17, 18, 19, 22, 23, 24, 0 25; e) un polinucleótido que se hibridiza bajo co estrictas a un polinucleótido que tiene una como se define en SEC ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 12, 13, 14, o 15; latorio de transcripción preferido de semilla de xpresión puede ser un promotor preferido de en inventores determinaron que dirigir la expresión r{ologo en pl{astico o citosol de semillas es ef ntar rendimiento de grano y/o aumentar cont iente de grano tal como la cisteina de am cial .

Otra modalidad de la invención se relacion do para producir una planta transgénica que o económicamente relevante, en donde el método pasos de: A) introducir en la planta un v esión que comprende el polinucleótido de la se describe arriba, en donde la exprés nucleótido confiere el trazo económicamente rel lanta; y B) seleccionar las plantas transgénica Isolina y la semilla tiene cuando menos cisteina que la semilla de Isolina; c) cuando menos 10.5 litros/hectárea (3 bushel/ rendimiento de grano sobre la Isolina y la tiene cuando menos un aumento de 4% más de que la semilla de Isolina; d) cuando menos 10.5 litros/hectárea (3 bushel/ aumento en rendimiento de grano sobre la Iso semilla tiene cuando menos 4% de aumento de y cuando menos 2% de aumento en metionin semilla de Isolina; y e) cuando menos 10.5 litros por hectárea (3 b acre) de aumento en rendimiento de grano Isolina y la semilla tiene cuando menos cisteina y cuando menos 2% más aceite que l ccionar plantas transgénicas con el trazo econó vante. En una modalidad, el trazo econó vante de una planta transgénica se selecciona consiste de: a) un aumento de alrededor de 10.5-6*6.5 li hectárea (3-19 bushel por acre) en rendim grano sobre la Isolina; b) un aumento de alrededor de 10.5-66.5 li hectárea (3-19 bushel por acre) en rendim grano sobre la Isolina y la semilla tiene de 4-27% más cisteina que la semilla de Isoli c) un aumento de alrededor de 10.5-66.5 li hectárea (3-19 bushel/acre) en rendimiento sobre la Isolina y alrededor de 4-27% de a cisteina y alrededor de 2-18% de aumento en ómicamente relevante, en donde el método compr s de: A) introducir en la planta un vector de comprende el polinucleótido de la invención ribe arriba, en donde la expresión del polin iere el trazo económicamente relevante a la plañ ccionar plantas transgénicas con el trazo econó vante. En una modalidad, el trazo econó vante de una planta transgénica se selecciona consiste de: a) un aumento de alrededor de 10.5-35.0 li hectárea (3-10 bushel por acre9 en rendim grano sobre la Isolina; b) un aumento de alrededor de 10.5-35.0 li hectárea (3-10 bushel por acre9 en rendim grano sobre la Isolina y la semilla tiene Isolina y la semilla tiene alrededor de 4 cisteina y alrededor de 2-5% más aceite que l de Isolina. modalidad de la invención se relaciona con u producir una planta transgénica que tiene ómi'Camente relevante, en donde el método compr s de: A) introducir en la planta un vector de comprende el polinucleótido de la invención ribe arriba, en donde la expresión del polin iere un trazo económicamente relevante a la pla ccionar las plantas transgénicas con e ómicamente relevante. En una modalidad, e ómicamente relevante de una planta transg cciona del grupo que consiste de: a cuando menos 2% de aumento en contenido d treonina, cisteina, valina, metionina, l arginina, sobre las cantidades del aminoácid Isolina; y e) un aumento de alrededor de 2-10% en cont aceite en semillas sobre el contenido de a semillas de Isolina. modalidad de la presente invención es un sgénica y sus partes producidas mediante cual métodos arriba descritos.

E DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura la-b muestra los genes y elem SEC ID Nos. correspondientes.

La Figura 2 muestra los porcentajes de al/similitud de secuencia de proteina de AnaCS 19), e.COLIcsl (sec id no: 16), MaizCSl 8SED I E.coliCSl (SEC ID NO: 16), Maíz CXI (SEC ID CS2 (SEC ID NO: 25), CalabazaCS (SEC ID NO: 20), ID NO: 22), ArrozCS2 (SEC ID NO: 23), Legvadur O: 17), y LevaduraCS2 (SEC. ID NO: 18). El aná encia se realizó en suite de software Vec alidad de apertura de espacio = 10, pena nsión de espacio = 0.05, penalidad de separ cio = 8 ) .

La Figura 4 muestra el porcentaje de al de secuencia de ADN de AnaCS (SEC ID NO: 7), ID NO: 1), MaizCSl (SEC ID NO: 14), MaizCS2 (S CalabazaCS (SEC ID NO: 9), ArrozCSl (SEC ID zCS2 (SEC ID NO: 13), Levadura CS1 (SEC ID N duraCS2 (SEC ID NO: 5) . El análisis de ADN se r e de software Vector NT19 (penalidad de ape lizó en suit-e de software Vector NT19 (pena rtura de espacio = 10), penalidad de extensión d .05, penalidad de separación de espacio = 8).

La Figura 6a-c muestra el alineamiento de proteina de Anabaena_CS (SEC ID NO: 19), E.coli. NO: 16), Maiz_CSl (SEC ID NO: 24), aiz_CS2 (SE , Calabaza_CS (SEC ID NO: 20), Arroz_CSl (SEC ID z_CS2 (SEC ID NO: 23), Levadura_CSl (SEC ID NO dura_CS2 (SEC ID NO: 18). El análisis de secu izó en serie de software Vector NT19 (pena tura de espacio = 10, penalidad de extensión de , penalidad de separación de espacio = oácidos idénticos y conservativos se denotan as en el casilla superior solas mientras oácidos similares se denotan por las letras e casilla superior solos mientras que los ami lares se denotan por letras en casilla inferior.

La Figura 8 muestra el alineamiento se sec eina de: Maiz:CSl (SEC ID NO: 24), Calabazares 20), Arroz_CSl (SEC ID NO: 22), Levadura_CSl (SE y Levadura_CS2 (SEC ID NO: 18). El análisis de realizó en serie de software Vector NT19 (pena tura de espacio = 19) , penalidad de extensión d .05, penalidad de separación de espacio = oácidos idénticos y conservativos se denotan as de Casilla superior solas mientras que los am lares se denotan mediante letras de casilla infer La Figura 9 muestra el alineamiento de sec eina de Anabaena_CS (SEC ID NO: 19) y E.coli_CSl 16) . El análisis de secuencia se realizó en . Los cuadros cerrados denotan la actividad de semilla de maiz de control de Isolina y las rtos denotan cresta de CS de maiz y una c vidad adicional de levadura CS2 alrededor de la La Figura 10B muestra la actividad de leva struccion CS1012) en semillas en desarrollo de . Los cuadros cerrados denotan la actividad de semilla de maiz de control de Isolina y los rtos denotan la cresta de CS nativa de maiz y u actividad adicional de levadura CS1 alrededo ción 25. Siguiendo el mismo patrón de cuadros tando la cresta de CS de maiz nativo en la I sformada y cuadros abiertos denotando tanto la de Maiz nativo como la cresta de actividad adic ransgénico en semillas en desarrollo de maiz (23 007) en alrededor de la fracción 30.

La Figura 11 muestra el efecto de expres rsas construcciones que comprenden CS heter osición nutriente de grano en semillas T2.

La Figura 12 muestra el efecto (promedio eventos probados a través de 3-6 ubicaciones) de eterólogo en un híbrido de maíz (producido po ado con el criado propietario B) en rendi osición de grano, en particular cuando s ablemente a un promotor preferido de semilla o ablemente a un promotor preferido de semill encia de dirección intracelular , La Figura 13 muestra el efecto de exp rólogo en un híbrido de maíz (producido median cruzamiento con el criado propietario B) en u (producidos mediante evento cruzado con lso ietarios A, B y C, individualmente) . El rendim o se probó en 12 ubicaciones a través de 4 est o Oeste. La prueba de composición de nutriente e condujo en 3 ubicaciones.

La Figura 15 muestra el efecto de exp rólogo (Levadura CS1 con diferentes promo cciones intracelulares) en tres híbridos ducidos mediante evento cruzado con los ietarios A, B y C, individualmente. El rendim o se probó en 12 ubicaciones a través de 4 es o Oeste. La prueba de composición de nutriente e condujo en 3 ubicaciones.

RIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención se puede ente ién se pueden encontrar en Rieger y col., 1991 Genetics: Classical and Molecular, ta Ed., nger-Verlag; y en Current Protocols in Molecular Ausubel y col., Eds . , Current Protocols, un unto entre Greene Publishing Associates, Inc. y & Sons, Inc. (1998) Suplemento) .

A través de esta solicitud, se hace refe as publicaciones. Las exposiciones de toda icaciones y aquellas referencias citadas dentro icaciones en sus totalidades se incorporan enté mediante referencia en esta solicitud a ribir más completamente el estado del ramo enece esta invención. Esta solicitud reclama la a solicitud de Patente provisional de EUA 60 rporada por la presente por referencia en esta s nview, new York; Sambrook y col., 1989 Molecular ncla Edición, Cold Spring Harbor Laboratory, P York; Maniatis y col., 1982 Molecular Cloni ng Harbor Laboratory, Plainvie , new York; Wu ( . Enzymol. 28, Parte I; Wu (Ed. ) 1979 Meth Enz col., (Eds) 1983 Meth. Enzymol, 100 y 101; Gr ave (Eds.) 1980 Meth. Enzymol, 65; Miller (E riments in Molecular Genetics, Cold Spring ratory, Cold Spring Harbor, New York: Oíd and , Principies of Gene Manipulation, Univer fornia Press, Verkeley6; Schleif y Wensin tical Methods in Molecular Biology; Glover (Ed.) ing Vol . I y II, IRL Press, Oxford, RU; Hames .) 1985 Nucleic Acid hibridization, IRL Press, y Setlow y Hollaender 1979 Genetic Eng ivo", también referido como ADN "endógeno", sig nucleotido que puede existir naturalmente en la as especias huésped, hacia las que se introduce, vo, también referido como un ADN "heterólogo" polinucleótido que se origina de las células cie diferente a la especia huésped. ADN No nat uir un ADN nativo con algunas modificaciones q en encontrar en la especie huésped.

"Semilla de planta transgénica" como se u enté significa una semilla de planta que sgene de interés establemente incorporado en el lla. "Semilla de planta" puede incluir, pero tado a, semilla criada, semilla híbrida Fl ando una linea parenteral macho con una linea p ra. Semilla F2 crecida de híbridos Fl, y nta" también se refiere a cualquier planta, i partes, y pude incluir, pero no limitarse a, pl cha. Las partes de planta incluyen, pero tadas a, tallos, raices, brotes, frutas, mbres, hojas, embriones, regiones meristemáticas callo, gametofitos, esporofitos, polen, micr cotilos, cotiledones, antenas, sépalos, pétalos llas, y lo semejante. La clase de plantas es gen amplia como la clase de plantas superiores e i se pueden llevar a técnicas de transformación, i oespermas (plantas monocotiledóneas y dicotil oespermas, heléchos, colas de caballo, ps fitos y algas multicelulares. La planta puede S ro seleccionado del grupo que consiste de persicohn, Brassica, Cucumis, Solanhum, orium, Lactuca, Bromus, Asparagus, Ant rocallis, nbemesis, Pelargonio, Paneium, P nculus, Senecio, Salpiglossis, Browaalia, P a, y Alliu. "Plantas" como se usa en la present plantas de cosecha monocotiledóneas, tales plo, cereales incluyendo trigo (Triticus a da (hardeum vulgare) , sorgo (Sorhum bicolor) , 11 ale cereale) , triticdale, maíz (Zea mays) , arro va) , caña de azúcar, y árboles incluyendo manza rillo-, ciruela, cereza, durazno, nectarina, m ya, mango, álamo, pino, sequoia, cedro y roble. en incluir plantas de cosecha dicotiledóneas, t haro, alfalfa, frijol de soya, zanahoria, te, patata, algodón, tabaco, pimienta, colza d aceite, remolacha, col, coliflor, brócoli, l e actividad de CS. "el término "alrededor" se usa para s ximadamente, más o menos, en torno de, o en las Cuando el término "alrededor" se usa en conju escala numérica, modifica esa escala extendi tes superior e inferior de los valores estos. En general, el término "alrededor" se u enté para modificar un valor numérico por encima valor manifestado por una variación de 10 po ba o abajo (superior o inferior) .

"Contenido de aminoácido", como se usa en la ifica la cantidad de aminoácidos totales, i oácidos libres y aminoácidos limitados en la eina. Todos los porcentajes de aminoácidos, te, y almidón mencionados en la presente son p o que consiste de ácido aspártico, treonina, eina, valina, metionina, isoleucina, histidina, nina y triptofán.

El contenido de aceite de la semilla d sgénica de la invención se aumenta por cuando e el contenido de aceite de semilla de planta i tra modalidad, el contenido de aceite de la se ta transgénica se aumenta por cuando menos 4% enido de aceite de semilla de planta isogénica. lidad, el contenido de aceite de la planta trans nta en alrededor de 2-10% sobre el contenido de lla de planta isogfenica.

La invención abarca una planta tr sformada con un vector de expresión que comp nucleótido aislado. En una modalidad, el polin 85-90%, 90-95% o cuando menos 95%, 96%, 97%, 98 idéntico o similar a un polinucleótido que t encia como se define en SEC ID NO: 1, 2, 3, 4, 2, 13, 14, o 15, o una porción de la misma. En modalidad, un polinucleótido de la invención olinucleótido que codifica un polipéptido que t encia como se define en SEC ID NO: 16, 17, 18, 24, o 25. La identidad de secuencia y sími encia como se define abajo.

Una de las modalidades abarca variantes al olinucleótido que tiene una secuencia como se ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 12, 13, 14, o nucleótido que codifica un polipéptido que t encia como se define en SEC ID NO: 16, 17, 18, 24, o 25. Como se usa en la presente, el icas se pueden identificar haciendo secuencia eico de interés en un número de plantas difere pueden llevar a cabo fácilmente usando, por as de hibridizació para identificar la misma tica de gene en esas plantas. Cualquiera y t aciones de ácido nucleico en un polinucl morfismos de aminoácido resultantes o variacion eina que son el resultado de variación alélica no alteran la actividad funcional de la ficada, se pretende que estén dentro del alcan nc9ión.

V y Como se usa en la presente, el tér idiza bajo condiciones estrictas" se pret riba condiciones para hibridización y lavado es las secuencias de nucleótido cuando m eríelo, de condiciones estrictas son hibridizaci { uro de sodio/citrato de sodio (SSC) a alrededor ido por una o más lavadas en 0.2X SSC, 0.1% S .

En todavía otra modalidad, un ácido ado es complementario a un polinucleótido como EC ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 12, 13, 14, o nucleótido que codifica un polipéptido que t encia como se define en SEC ID NO: 16, 17, 18, 24, o 25, o un polinucleótido que tiene 70% de ecuencia a un polinucleótido como se define en S , 3, 4, 5, 6, 7, 8, 12, 13, 14, o 15, o un polin codifica un polipéptido que tiene 70% de iden encia a un polipéptido como se define en SEC I 18, 19, 22, 23, 24, o 25, o un polinucleótid cíficamente, las purinas se emparejarán en midinas para formar una combinación de guanina e citosina (G:C) y adenina emparejada con ya se ) en el caso de ADN, o adenina emparejada con ) en el caso de RNA.

En otra modalidad, los polinucleótidos nción comprenden un polinuycleótido que ti encia como se define en SEC ID NO: 1, 2, 3, 4, 2, 13, 14, o 15, o un polinucleótido que co péptido que tiene una secuencia como se define 16, 17, 18, 19, 22, 23, 24, o 25, o cualquier lógos de polinucleótido antes mencionados, en nucleótidos codifican CS que confieren u ómicamente relevante en una planta. Adem nucleótidos de la invención pueden comprender e producir transformando el gene CS en una plant quier método conocido para transformar un monoco icotiledóneo. Una variedad de métodos para i nucleótidos en el genoma de plantas y neracifon de plantas de tejidos de planta o cé ta se conocen. Ver, v. gr., Plant Molecular Bio echnology (CRC Press, Boca Ratón, Florida) , capi 71-119 (1993); White FF (1993 (Vectors for Gene igher Plants; Transgenic Plants, vol. 1, Engine ization, Ed. : Kung y Wu R, Academic Press, 15-38; ol. (1993) Techniques for Gene Transfer, T ts, vol. 1, Engineering and utilización, Ed. : Academic Press, pág. 128-143; Potrykus (1991) t Physiol Plant Molec Biol 442:205-2205; Hal ry PR 82000) Br Med Bull 56(l):62-73. micdroinyeccion . En el caso de estos mét sformación directa, el plásmido usado no necesi unos requerimientos particulares. Los plásmidos como aquellos de la serie pUC, pBR322, serie M13 jante se pueden usar. Si plantas intactas S nerar de las células transformadas, un gene ccionable adicional se ubica de preferencia mido. Las técnicas de transformación dire lmente apropiadas para plantas dicotiled{ cotiledóneas .

La transformación también se puede lleva ante infección bacteriana por medio de vectore 0 067 553; US 4,407,956; WO 95/34668; WO 93/031 o de polen ( (EP 0 370 356, WO 85/01856, US 4, técnicas de transformación basadas en agrobact sformación mediada por Agrohacterium se descri plo, en horsch RB y col. (1985) Science 225: sformaci{on de plantas por Agrobacteria se desc plo, en White FF, Vectors for Gene Transfer i ts, Transgenic Plants, Vol . 1, Entineer izacion, editada por S.D. Kung y R. WU, Academ , pág. 15- 38; Janes B y col. Techniqaues sfer, Transgenic Plants, Vol. 1, Engieer ización, editada por S. D. Kung y R. Wu, Academ , pág. 128-143; Potrykus (1991) Annu Rev Plant t Mole Biol 42:205-225.

El gene CS se puede transformar en una usando bombardeo de partículas como se expon ntes de EUA Nos. 4, 945, 050, 5,036, 006, 5 2,523; 5,464,765; 5,120,657; 6,084,154, y los se ribe, por ejemplo, en Zoubenko, y col. (1994) s Res. 22, 3819-3824; Ruf, y col. (2001) echnol. 19, 870-875; Kuroda y col. (2001) Plant 430-436, Kuroda y col. (2001) Nucleic Acids 975; HHajdujkiewica y col. (2001) Plant J. 27, 1 eille, y col. (2001) Plant J. 72, 171-178. M{e sformación de plástido adicionales que mp grasa de fato phiC31 se describen en Lutz y c Plant J. 37, 906. Los mfetodos de trans ionales incluyen, pero no están limitados ientes materiales de partida y métodos en el Cua ro 1 edad Material / Citación tas monocotile- Embriones inmadures (EP-A1 672 as Callos (EP-A1 604 662) ? EP-Al 897 013; US 6,215,051; "0 01/12828 o AU-B 738 153; EP-Al 856 060 oles US 5,169,770; EP-Al 397 687 sica US 5,188,958M; EP-Al 270 615; #P-A1 1,009,845 o US 6,150,587 ico US 6, 103, 55 AU 729 635 dóh US 5,004,863; EP-Al 270 5,846,797; EP-Al 1,183,37 1,050,334; EP-Al 1,197,57 1,159,436 Transformación de polen (US 5, En transformación de pí de hoja primario, o superior de frijol de soya germi alrededor de 7 días Cultivos de callos organogénic Ejes de embrión deshidratados US 5,376,543; EP-A1 397 5,416,011; US 5,968,830; US US 5,959,179; EP-A1 652 96 1,141, 346 lacha de azúcar EP-A1 517 833; O 01/42480 te US 5,565,347 De conformidad con la invención, el polin codifica el gene CS puede estar presente en ette de expresión apropiado para expresión de u I nucleótido operablemente enlazado. Un titutivo" se refiere a un promotor que es esar el cuadro de lectura abierta o el latorio que controla en todos o casi todos los t ta durante todos o casi todas las etapas de desa planta. Los promotores consecutivos incluyen, n limitados a, el promotor 35S CaMX para virus nck y col., Cell 21:385-294, 198=, el promotor N ol., The Plant Cell 3:225-233, 1990; el proi uitina (Christensen y col., Plant Mol. Biol. 12 y 18:581-8, 1991), el promotor MAS (Velten y c 3:2723-30, 1984)1, el promotor de histona H3 etit y col., Mol Gen. Genet 231:276-85, 1 otor ALS ( O96/30530 ) , el promotor 19S C 2, 605), el súper-promotor (US 5, 955, 646), el pr esperma, o cotiledón) o tipos de célula es es como parenchima de hoja o células de almacena lla) . También se incluye promotores que son temp lados, tales como en embriogénesis temprana o nte maduración de fruta al desarrollar semillas hoja totalmente diferenciada, o al princ scencia. Los promotores apropiados incluyen un ene napin de semilla de colza (US 5,608,152), el SP de Vicia faba (Baeumlein y col., Mol Ge 3): 459-67, 1991), el promotor de oleosina de Ar 98/45461), el promotor de faseolina de Phaseolus 5,504,200), el promotor de Bce4 de brassica (WO promotor de legumina B4 (LeB4; Baeumlein y co nal, 2(2):233-9, 1992) asi como promotores que esión especifica de semilla en plantas monocot piados para observar son el promotor lpt2 o lptl da ( O 95/1538? y "0 95/23230) o aquellos descri 6890 (promotores del gene hordein de cebada, elina de arroz, gene de orizin de arroz, gene de rroz, gene de liadin de trigo, gene de glutelin de zein de maíz, gene de glutelin de avena, gen Sorgo y gene de secalin de cebada) . Los p cificos de endoesperma incluyen, por ejemplo, un D zein de maíz (Kirihara y col., Gene, 71:359-37 otor 27 kD zein de maíz (Russel y Fromm, arch 6 (2) : 157-168, 1997). Los promotores apropi esión preferencial en tejido de raíz de planta ejemplo, el promotor derivado de gene de si tianamina de maíz (US 2003/0131377) y promotor z (US 2006/0101541) . El promotor apropiado para 7,084; 5,728,925; 6,063,601; 6,130,366; y las se péptidos de tránsito de compartimiento de uyen, pero no están limitados a, el péptido de ferredoxina y el péptido de tránsito 2b de e ficación de almidón. El cassette de expresión qu gene CS también puede contener secuencias de te piadas y otras secuencias regulatorias, qu mizar la expresión del gene en la planta.

El término "identidad de secuencia" o i el contexto de dos secuencias de ácido nu péptido hace referencia a esas posiciones en encias en donde pares idénticos de símbolos ca do las secuencias están alineadas para corres ma a través de una ventana de comparación espe ejemplo, ya sea la secuencia entera como rar sin afectar la función de proteína. Medios p ajuste son bien conocidos por aquellos de exper ramo. Típicamente esto involucra marcar una sub ervativa como una coincidencia parcial más bien a de coincidencia , aumentando de esta ma entaje de similitud de secuencia.

Como se usa en la presente, "porce tidad de secuencia" o "porcentaje de iden encia" denota un valor determinado primero notan encias óptimamente alineadas a través de una v aración, ya sea global o localmente, en cada tituyen en cuanto a si la base de ácido nucleico siduo de aminoácido ocurre en ambas secuencias, una coincidencia, o no ocurre en ambas se tado como una falta de coincidencia. Com ro entre el número total de posiciones en la v aración, y finalmente multiplica el resultado proporcionar el porcentaje de identidad de s centaje de similitud de secuencia" para secue eína se puede calcular usando el mismo princ e la substitución conservativa se calcula como coincidencia parcial más bien que completa, ra, por ejemplo, cuando un aminoácido idéntico r a de 1 y una substitución no conservativa se pr una marca de cero, una substitución conservati marca entre cero y 1. El marcado de subst ervativas se puede obtener de matrices de a cidas en el ramo, por ejemplo matrices Blosum o Los métodos de alineamiento de secuenc aración son bien conocidos en el ramo. La dete an (PNAS, 85(8); 2444-2448, 1988), el algoritmo ltschul (J. Mol. Biol, 215 { 3 ): 403-410 , 199 873-5877, 1993) . Implementaciones de computadora ritmos matemáticos se pueden utilizar para compa encias para determinar identidad de secuencia tificar homólogos. Estas implementaciones inclu stán limitadas a los programas abajo descritos.

El término "alineamiento de secuencia" usa enté se refiere al resultado de aplicar uno d dos de disponer las secuencias primarias de ADN eina para identificar regiones de similitud qu una consecuencia de relaciones funcionales, estr e evolución entre las secuencias. Los acer utacionales a alineamiento de secuencia gen an en dos categorías: alineamientos glo rando la sensibilidad de alineamiento de iple progresiva a través de pesado de s lidades de espacio especifico de posición y sel iz de peso (Nucleic Acids Res. 22:4673-4680, 19 implementa, por ejemplo, en el paquete Ve itrogen, 1600 Faradayt Ave., Carlsbad, CA 92008).

Es bien sabido en el ramo que uno o más am una secuencia nativa se puede substituir c oácidos, la carga y polaridad de los cuales son uel del aminoácido nativo, es decir, una substi oácido conservativo. Las substituciones conserv minoácido dentro de la secuencia de polipéptido e seleccionar de otros miembros de la clase enece el aminoácido que ocurre naturalmen oácidos se pueden dividir en los siguiente na, treonina, · cisteina, tirosina, asparagina y g 4) aminoácidos no polares neutros (hidrofóbico alanina, leucina, isoleucina, valina, lalanina, triptofán y metionina.

Un uso de codón típico de un organismo tie rente de aquel de otro. El uso de codón diferent cido que afecta la expresión de un gene no nati introduce en un genoma extraño que tiene un uso rente. La información usualmente utilizada eso de optimización es la secuencia de ADN o pro va a optimizar y un cuadro de uso de co uentemente se refiere como el juego de refere nismo huésped. La optimización de codón bá lucra alterar los codones raros en el gene de que reflejen más estrechamente el uso de c inando de esta manera el gasto e impacto iado con alimentaciones que contienen harina de . Además, el contenido de aceite mejorado de la maiz transgénico de la invención permitirá uctores de alimento animal reducir al mínimo e uctos secundarios animales como aditivos a ali al, reduciendo al mínimo de esta manera la aminación de la cadena de alimento humano con cciosos tales como el agente de ence ngiforme bovina. Los granjeros serán capaces de relación de conversión de alimentación más ópti aíz transgénico de la invención de lo que es és de alimentar maíz de diente amarillo. La se transgénico de la invención, por lo ta icularmente útil como alimento animal. ingrediente químico o un ADN transgénico o sgénica. Por ejemplo, puede ser la proteína CS e N que se va a trazar. Esto puede ser útil para ridad de alimento y/o capturar valor.

La invención se ilustra adicionalmente ientes ejemplos, que no se deben considerar en a como imponer limitaciones en el alcance de la PLOS plo 1 - Síntesis de gene CS y optimización de c esión de maíz.

Secuencias de ADN CS de E.coli y S. cerev mizaron para expresión en maíz y el novo si ante métodos conocidos por aquellos de experien (Gustafsson y col, Trends Biotechnol. 22: ). La secuencia de aminoácido que codifica c nal 10(1): 165-74, 1996) ¦ se usó como un vector generar el véctor de plásmido pEXSlOOO. El cas inador de promotor¦ ZmAHASL2 : : ZmAHASL2gene : ZmAHAS insertó entre la repetición de borde izquier tición de borde derecho del vector SB11 de asa de acetohidroxiácido, o "AHAS", y secu truccionesw que comprenden las secuencias de riben en US 6,653,529. Los cassettes de ienen gene de trazo de promotor de interés:: t se insertaron en el vector pEXSlOOO de plásmido rar los vectores de plásmido para recombina or SB11 de plásmido antes de transformación de construcciones como se muestran en el Cuad eron para transformación de maiz. Estas construc sformaron a una linea crida de maiz optrimizada (SEC IUD No. 4 ):: terminad Promotor 10 kD zein de maíz::pé tránsito Ferredoxin: : maíz-codón E. optimizado (SEC ID No. 2):: terminado Promotorshrunken-2- de maiz::pépt tránsito 2b de enzima de ramific almidón de Levadura CS1 optimizada c codón (SEC ID NO. 4 ):: terminador Nos Promotor shrunken-2 de maíz: pép tránsito 2b de enzima de ramific almidón de maíz:: E. coli CS1 optim maiz-codón (SEC ID No. 2 ):: terminador Promotor lOkD zein de maíz::pép tránsito de ferredoxina: :Anaba optimizada con maíz-codón (SEC Promotor 10kD zein de maiz::pép tránsito de Ferrodoxina :: Levadu optimizada con maiz-codón (SEC 6) : : terminado Nos Promotor ahrunken-2 de maiz::pép tránsito de fgerrodoxina : Levadu optimizada con maia-codón (SEC 6) : : terminado Nos Promotor de sintasa I de alm maiz : : péptido de tránsito de enzim ramificación de almidón de maiz:: Lev optimizada con maiz-codón (SEC 4) : : terminador Nos Promotor shurnken-2 de maiz:: Leva optimizada con maiz-codón (SEC 10) : :terminador Nos 14 Promotor de sintasa I de alm arroz :: péptido de tránsito Ferrodoxina: ¡Levadura CS1 optimiz maiz-codón (SEC ID NO. ) : : terminador 15 Promotor lOkD zein de maiz::pép tránsito de Ferredoxina : : glioxisoma Calabaza optimizado con maiz-codón NO. 10 ):: terminador Nos plo 3 - Transformación de maíz Células de agrobacteria gue hospedan un contiene el gene de interés y el gene AHAS de ma desarrollaron en medio YP suplementado con ant piados durante 1-2 días. Un lazo de cél ubo que contiene células de Agrobacterium en sol nf .

La infección de Agrobacterium de los embr ó a cabo invirtiendo el tubo varias veces. La ió hacia un disco de papel de filtro sobre la s na placa que contiene medio de co-cultivo (M-LS -solución liquida se removió y los embri robaron bajo un microscopio y se colocaron con e dete hacia arriba. Los embriones se cultivaro ridad a 22°C durante 2-4 dias, y se transfiriero -101 sin selección y se incubaron durante cuatr . Los embriones luego se transfirieron a medio contiene 0.75 uM de imazethapyr y se desa nte cuatro semanas a 27 °c para seleccionar por c o transformadas. plantaron a macetas más grandes y se mantuvier rnadero hasta la madurez. plo 4 - Análisis de expresión de CS en sgénicas - Ensayo de Sintasa de Citrato Utilizando espigas T3, T4, o T5, cinco g de una espiga congelada cosechada a 23 dias d olinización (DAP) se molieron primero a un povo ortero enfriado a -20 °C y luego a una suspensió a adición de 5 mi de tampón de extracción Tris f mM Tirs-HCI pH 8.05, 5 mM EDTA, 10% glicerol) . luble se removió mediante centrifugación a 13,00 nte 5 min. El sobrenadante se usó para ensayo d actividad de sintasa de citrato se ensayó mid ucción de CoA a través de reacción con diti obenzoato) (DTNB) como se describe por Srere, a absorción se midió a 412 nm. Las activi ularon basados en la diferencia de absorción de izados en presencia o ausencia del substrato entraciones de proteina se determinaron mediant nlace de tinte de Gradford.

Debido a que hay actividad CS de maiz nati sgénico se separó del maiz CS nativo mediante irmar la expresión de proteina CS transgénica atografia de intercambio de anión. Los granos d DAP se molieron en un mortero enfriado con h os en 20 mi) con tampón de extracción (50 mM de .0, 5 mM de EDTA, 2% de PEG-98000) . La suspe ificó a 9, 500 xg y 4°C durante 30 min y el sob ajustó a 20% de PEG-8000. Las proteínas ipitaron después de 60 min sobre hielo se recu rvisó en fracciones de columna a través de rea iobis- (2-nitrobenzoato) (DTNB) esencialmente ribge (Srere, P. 1969. Meth Enzymol 3:3-11).

Las Figuras lOa-g contienen gráficas que números de fracción con actividad de CS (umol Co cada fracción para las construcciones CS1008, 001, CS1002, CS1004, CS1005, y CS1007, respect a CS transgénico mostró una cresta de actividad e la cresta de actividad de CS de maiz (Figura 45a- plo 5 - Análisis de aminoácido, proteina y illas transténicas .

Semillas transgénicas TI que contienen u plantaron en un invernadero. Las plantas T2 se a zigomosidad de transgene mediante PCR cuanti de hoja. Las plantas homozigómicas fuer izaron para proteina cruda (Combustión Analysi Official ¦ Method 990.03, 2000), k grasa crud action, AOAC Official Method 920.39 (A), 2000), no de vaio, AOAC Official Method 934.01, 2000).

El análisis de composición de grano, mostr ra 11, demuestra que las plantas que expr eina de CS heteróloga tuvo contenidos mejo iente de grano en las l{ineas T2. Los r rados en la Figura 11 han demostrado clara iente : Plantas que contienen un gene de CS heter rentes organismos tales como levadura CS1 y CS2, o gluoxisoma de calabaza CS, dirigido al condrios, citosol, o glioxisoma de semilla raron aumentos de cuando menos 5% en prot e mejora de nutrición de grano. La Figura 11 mu aumentar la nutrición de grano, un CS heter erencia se expresa en un compartimiento intrace el citosol la mitocondria, o el plást erentemente, un CS heterólogo se expresa ticos .

La Figura 11 indica que el promotor usado para expresión de un CS heterólogo en semilla de m r un impacto sobre mejora de nutrición de gr plo, usando ya sea promotor 10 kD zein de otor Shrunken-2 (Sh-2) de maíz para impulsar la levadura CS1 en el plástido mostró un mayor a ición de grano que usando promotor de sintasa d zado de gránulo de maíz (GBSS) . plo 6 - Prueba de Campo de Híbrido Transgénico iante métodos NIR conocidos por aquellos de exper ramo. Ver por ejemplo, Givens y col (1997) arch Reviews 10: 83-114.

Para análisis de aminoácido total de g stras de grano maduro se molieron con un molino ico IKA® All (I A® Works, Inc., Wilmington, stras se remolieron y analizaron para perfil de a leto (AAP) usando el método descrito en Assoc icial Analytical Chemists (AOAC) Official Method b, c), CHP 45.3.05, 2000. Debido a que u rcial es un solo evento seleccionado de ci tos generados por una transformación a gran esca strucción, es importante ver el funcionamient strucción no solamente como un promedio, sino tam tos individuales. Por lo tanto, el dato se prese eína CS heteróloga tuvo rendimiento de grano contenidos de nutriente de grano mejorados ta eína y metionina.

Los resultados mostrados en las Figuras estran lo siguiente: 1. - Plantas que expresan una prot rologa de diferentes organismos tales como leva dura CS2 y E-. coli CS1 en el plástido de semill raron un mínimo de alrededor de 10.5 litros/he el/acre) de aumento en rendimiento de grano rol de tipo salvaje que no expresa un CS heterólo 2. - Las plantas que expresan una proteí va, específicamente Levadura CS1 en la Figura 1 sol (CS1011) de semilla de maíz mostró un pro dedor de 17.5 litros por hectárea (5 bushel por aumento de cisteína o hasta · alrededor de 10% de a ionina . 4.- Plantas que expresan levadura CS1 act condrio (CS10'06) mostraron una disminu imiento significativa, todavía mostraron un ificativo en cisteína. Las plantas que expr oxisoharina CS activa en glioxisoma no a ificativamente el rendimiento de grano o compo o . plo 7 - Prueba de Campo de Híbridos Transgénicos Un maíz transgénico criado que contiene zygoso (CS) se cruzó respectivamente con tre das propietarias (A, B, C) para hacer semillas Los híbridos transgénicos junto con el híbrido d ipo salvaje respectivo se plantaron en 12 ubicac ition Research Reviews 19: 83-114.

Para análisis de aminoácido total de g tras de grano maduro se molieron con un molino co IKA® All (IKA® Works, Inc., Wilmington, tras se remolieron y analizaron para perfil de a leto (AAP) usando el método descrito en Associ cial Analytical Chemists (AOAC) Official Method b, c) , CHP 45.3.05, 2000.

El maíz es una cosecha híbrida. El rcial se desarrolla cruzando uno crido a otro rupo heterótico diferente. Hay una fuerte inter oplasma que afecta la heterosis en rendimiento icional. Adicionalmente, hay un gene fuerte e in ental que afecta el rendimiento y calidad nut lo tanto, evaluamos el efecto de transgene o por cuando menos 10.5 litros por hectárea (3 b ) en dos de tres híbridos probados. En unos poc rendimiento fue similar entre un evento tr cífico y el control respectivo. Esto no es i iderando las · interacciones fuertes entre d oplasma y el gene por interacciones ambientales, luvia pesada en estados del Medio Oeste en junio nos planos de campo se inundaron y perdieron. So ato múltiples ubicaciones y múltiples pruebas d ró que la sobre expresión de levadura CSl y leva coli CSl en un compartimiento intracelular au imiento de grano por cuando menos 10.5 litros/he el/acre) .

Se sabe que las combinaciones de promoto en afectar la función de gene. Cuatro p lsar sobre expresión de levadura CS1, todos IO otores preferidos de endoespera mostraron un au imiento de grano sobre el control cuando se usa e expresar gene de levadura CS1 (Figura ltados mostraron que sobre expresar un CS heter lla puede aumentar el rendimiento de grano os por hectárea (3 bushel por acre) sobre el co xpresa un CS heterologo.

El análisis de composición de grano mostró tas que expresan una proteina CS heterólog lar o mayor que los contenidos de nutriente de rol tales como cisteina y metionina (Figura 14),.

Los ejemplos anteriores muestran que di esión de CS a la semilla, y además en un compa acelular, produce trazos valiosos tales como au tivo al aumentar rendimiento de grano y/o enido de nutriente de grano tal como la cis oácido esencial. plo 8 - Apilamiento de Eventos de CS Los ejemplos anteriores muestran que sobre olo CS en un compartimiento intracelular produ osos tales como aumentar rendimiento de grano alidad nutricional. Apilar un evento CS con otro tos puede conducir a mejora adicional de los t to de apilamiento puede ser el mismo CS heter esa en diferente compartimiento intracelular o S heterólogo diferente o eventos de diferentes g plo, los eventos se puede apilar mediante pol ada en maíz, eventos que expresan levadura C tido se pueden cruzar con eventos que expresan -contienen los genes apilados pueden entonces pr campo para demostrar el efecto de apilamien ionamiento de trazo tal como rendimiento de g nos casos, más de dos genes se pueden apilar par funcionamiento de trazo. Otra forma de apilar una pila de construcción mediante la cual la os o más genes en el mismo vector de transfo rentes vectores de transformación, de dos o más rtan de preferencia en las mismas ubi litando la conversión de trazo y comercializació Los ejemplos anteriores se proporció trar la invención pero no limitan su alcanc antes de la invención serán fácilmente aparentes riencia ordinaria en el ramo y están abarcadas indicaciones anexas.

Claims (1)

1. INDICACIONES 1.- Una planta transgénica, y sus par rende un polinucleótido que codifica una si ato heteróloga, expresada en la semilla o imiento de célula intracelular de la semilla sol de la semilla, en donde el polinucle cciona del grupo que consiste de: n polinucleótido que tiene una secuencia como EC ID NO: 5, 0 6; un polinucleótido que codifica un polipéptido secuencia como se define en SEC ID NO. 18; n polinucleoptido que tiene cuando menos 70% de ecuencia a un polinucleótido que tiene una secue efine en SEC ID NO: 5 o 6; un polinucleótido que codifica un polipéptido un polinucleotido complementario a cualquiera nucleótidos de a) a f ) . 2. - Una semilla producida de la p ormidad con la reivindicación 1, en donde la polinucleotido en la semilla confiere u ómicamente relevante a la semilla que no está p resenta al mismo nivel en una Isolina. 3. - La semilla de conformidad indicación w, en donde el trazo económicamente un aumento de cuando menos 10.5 litros por he el por acre) en rendimiento de grano sobre la Is 4. - La planta de conformidad con la reivi en donde el polinucleotido tiene una secuencia ne en SEC ID NO: 5 o 6, o el polinucleotido que olipéptido que tiene una secuencia como se defi 6. - La planta de conformidad con la reivi en donde la planta es una monocotiledóne tiledónea, o se selecciona del grupo que con , trigo, arroz, cebada, avena, centeno, sorgo, ico, chícharo, alfalfa, frijol de soya, z jil, tomate, patata, algodón, tabaco, pimienta, colza, remolacha, col, coliflor, brócoli, l idopsis thaliana. 7. - La .planta de conformidad con la reivi n donde la planta tiene un aumento de alrededor litros por hectárea (3-19 bushel por imiento de grano sobre el rendimiento de gran ina . 8. - Un vector de expresión que comp entó regulatorio de transcripción preferido de EC ID NO: 5 o 6; un polinucleótido que codifica un polipéptido do menos 70T de identidad a un polipéptido que encia como se define en SEC ID NO: 18; un polinucleótido que se hibridiza bajo co ictas a un polinucleótido que tiene una secuenci ne en SEC ID NO: 5 o 6; un polinucleótido que se hibridiza bajo co ictas a un polinucleótido que codifica un polipé e la secuencia como se define en SEC ID NO: 18; un polinucleótido complementario a cualquiera nucleótidos de a) a f ) . 9.- El vector de expresión de conformida indicación 8, en donde el elemento regula scripción preferido de semilla está además oper encia como se define en SEC ID NO: 5 o nucleótido tiene cuando menos 70% de iden encia a un polinucleótido que tiene una secuenci ne en SEC ID NO: 5 o 6. 12. - El vector de expresión de conformid indicación 8, en donde el polinucleótido cod péptido que tiene una secuencia como se define 18 o el polinucleótido codifica un polipéptido do menos 70% de identidad de secuencia a un po tiene una secuencia como se define en SEC ID NO: 13. - Un método para producir una sgénica que comprende un trazo económicamente r onde el método comprende los pasos de: introducir en la planta el vector de expr formidad con la reivindicación 8, 9, o 10 en in cl imiento de una Isolina o es un aumento de alr -66.5 litros por hectárea (3-19 bushel por imiento de grano sobre el rendimiento de gran ina . 15.- Una planta transgénica y sus partes ante el método de conformidad con cualquiera indicaciones 13-14. MEN DE LA INVENCIÓN La invención proporciona una planta tra expresa un transgene que codifica una sintasa d ) en donde la semilla de planta transgénic ención se caracteriza por rendimiento aumen eles mejorados de proteina, aminoácidos esen ite, cuando se compara con una Isolina que no e nsgene; y también proporciona métodos para ntas transgénicas con trazos económicamente rel porciona vectores de expresión que c inucleótidos que codifican Sintasa de Citrato. UMEN DE LA INVENCIÓN La invención proporciona una planta tr expresa un transgene que codifica una sintasa d ) en donde la semilla de planta transgénic ención se caracteriza por rendimiento aumen elés mejorados de protelna, aminoácidos ese ite, cuando se compara con una Isolina que no e sgene; y también proporciona métodos para ntas transgénicas con trazos económicamente rel porciona vectores de expresión que inucleótidos que codifican Sintasa de Citrato.