MX2010012320A - Nuevos conjugados antitumorales de doble orientacion. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a compuestos citotóxicos de doble orientación de la Fórmula (I) y a su preparación. Los compuestos descritos están provistos de una acción específica para los tumores e incorporan tres unidades funcionales: una parte de reconocimiento del tumor y una secuencia de sustrato enzimático selectiva del tumor conectadas entre sí por medio de un espaciador. Estos conjugados están diseñados para garantizar la estabilidad en suero y, al mismo tiempo, la acción deseada dentro de las células tumorales como resultado de la escisión enzimática. [(L-D)nE]m-F-D-PI-SI-CT Fórmula (I).

Description

NUEVOS CONJUGADOS ANTITUMORALES DE DOBLE ORIENTACION Campo de la Invención La presente invención se refiere a derivados citotóxicos de doble orientación y a su preparación. Los compuestos descritos están dotados de una acción específica para los tumores e incorporan tres unidades funcionales: una parte de reconocimiento del tumor y una secuencia de sustratos enzimáticos selectivos del tumor. Estos conjugados están diseñados para garantizar la estabilidad en suero y, al mismo tiempo, la acción deseada dentro de las células tumorales como resultado de la escisión enzimática.

Antecedentes de la Invención La quimioterapia tradicional para el cáncer se basa en la presunción de que las células cancerígenas de rápida proliferación probablemente tienen una mayor mortalidad que las células inactivas de los tejidos fisiológicos. En realidad, los agentes citotóxicos tienen una muy pobre especificidad, lo que provoca severos efectos indeseados . En las tres últimas décadas, se han explorado varios sistemas para administrar selectivamente fármacos en su sitio de acción. Las recientes mejoras halladas en el conocimiento de los receptores típicos sobre expresados por células cancerígenas durante su proliferación permiten el uso de ligandos selectivos que, conjugados con agentes citotóxicos, Ref. 214982 son capaces de dirigirlos preferentemente a los tumores. A diferencia de los profármacos comunes, el enlace entre el ligando y el fármaco debe ser estable en la circulación y, luego de la internalización de todo el conjugado en la célula cancerígena, debe ser fácilmente escindido, a través de un mecanismo químico o enzimático, para regenerar el agente citotóxico.

Los recientes avances en los conjugados farmacológicos dirigidos a los tumores comprenden anticuerpos monoclonales , ácidos grasos poliinsaturados , ácido hialurónico y oligopéptidos como ligandos de receptores asociados a los tumores.

Actualmente, varios inmunoconjugados se encuentran en ensayos clínicos: Maitansina (Liu C, et al., Pro . Nati. Acad. Sci., 1996, 93, 8618), doxorubicina (Saleh M. N. , at al., J. Clin. Oncol., 2000, 18, 11, 2282), herceptina (Baselga, J., et al., J. Clin. Oncol,, 1996, 14, 737), caliqueamicina (Bross P. F., et al., Clin. Cáncer Res., 2001, 7, 1490; Chan S. Y. et al., Cáncer Immunol . Immunother . , 2003, 52, 243) . Con respecto a éste último, Milotarg, una caliqueamicina unida al anticuerpo CD33, fue aprobado por la FDA en el año 2000 para el tratamiento de la leucemia aguda (Hammann P. R. , et al., Bioconjugate Chem. , 2002, 13, 1, 47) .

El uso práctico de los inmunoconjugados sólo es adecuado para fármacos altamente potentes, porque una cantidad limitada de antígenos son sobre expresados en la superficie de las células tumorales y sólo se puede cargar una cantidad limitada de moléculas en cada mAb sin disminuir la afinidad de unión y aumentar la inmunogenicidad . Recientemente, se han estudiado una serie de conjugados de agentes citotóxicos con oligopéptidos dirigidos a diferentes receptores sobre expresados por las células tumorales como potenciales quimioterapias antitumorales selectivas. Entre los oligopéptidos, el más prominente parece ser la somatostatina (Pollak M. N, et al., Proc . Soc . Exp. Biol . Med. , 1998, 217, 143; Fuselier J. A. et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 2003, 13, 799), bombesina (Moody T. W., et al., J. Biol., Chem., 2004, 279, 23580), péptidos RGD mediados por integrinas (W0200117563 Ruoslahti E . , Nature revieres, 2002, 2, 83; Dickerson E. B., et al., Mol. Cáncer Res., 2004, 2, 12, 663; de Groot F. M. , et al., Mal. Cáncer Ther., 2002, 1, 901; Chen X., et al., J. Med. Chem., 2005, 48, 1098). En general, los enlazadores químicos experimentados entre la parte de reconocimiento del tumor y el fármaco anticancerígeno comprenden hidrazonas, disulfuros y sustratos peptídicos de enzimas lisosomícas. La naturaleza del enlace es el pre-requisito para determinar la suerte del conjugado in vivo, su estabilidad, solubilidad y biodisponibilidad.

Los conjugados dirigidos al tumor de la presente invención están compuestos por tres unidades funcionales (una parte de reconocimiento del tumor y un fármaco anticanceroso) conectadas entre sí por medio de un-espaciador (enlazador) .

El documento W005111064, a nombre del Solicitante, describe ciclopéptidos que presentan la unidad RGD, dotada de actividad anti - integrina . El documento W005111063, a nombre del Solicitante, informa sobre derivados de camptotecina 7-imino conjugados con los péptidos cíclicos que reconocen la integrina a través de un espaciador.

El documento W005110487, a nombre del Solicitante, informa sobre derivados de camptotecina conjugados en la posición 20 con el antagonista de integrina.

Breve Descripción de la Invención El objeto de la presente invención es el desarrollo de conjugados dirigidos al tumor que contienen una parte de reconocimiento de la integrina avE3 y av£5 conectada a un fármaco citotóxico a través de puentes moleculares que contienen tres unidades. Estas últimas están compuestas por un espaciador, un péptido escindible por enzimas asociadas al tumor y una unidad funcional autodestructiva .

Los espaciadores seleccionados están compuestos por pequeños glicoles flexibles alternados con aminoácidos hidrófilos o estructuras heterocíclicas que funcionan como partes rígidas, que confieren solubilidad a todo el conjugado, sin interferir con la unión al receptor. Estos espaciadores particulares son superiores a los glicoles de alto peso molecular ampliamente utilizados, que poseen grandes propiedades solubilizantes , pero no son aconsejables por su tendencia a formar bucles que alteran el área de unión.

Se han descrito un número de péptidos que contienen enlazadores como sustratos de Catepsina B, por ejemplo, Phe-Lys, Val-Cit (Dubowchick G. M. et al., Bioconjugate Chem. , 2002, 13, 4, 855); Gly-Phe-Leu-Gly (Rejmanova P., et al., Biomaterials, 1985, 6, 1, 45); D-Ala-Phe-Lys (de de Groot F-. M . , et al., Mol. Cáncer Ther. , 2002, 1, 901) . Algunos de estos péptidos se han aplicado con éxito cuando estaban unidos a anticuerpos que, debido a su volumen, los pueden proteger de peptidasas plasmáticas. Sin embargo, cuando se experimentó con estas secuencias de péptidos aplicadas a conjugados que contenían pequeños ligandos, como en el caso de los oligopéptidos , fueron escindidos inmediatamente y liberaron el agente citotóxico en la circulación, contrariamente a lo descrito por otros autores. En particular, el enlace Phe-Lys que contiene el péptido (ST3280) resultó altamente inestable en varios ensayos conducidos. El trabajo antes mencionado de Dubowchick trata con ligandos dipeptídicos lábiles de catepsina B. Los mismos autores también publicaron cuatro años antes otro estudio acerca de la influencia del aminoácido en la posición P2 cuando el aminoácido Cit estaba en la posición Pi, concluyendo que el mejor aminoácido en tal posición fue Val debido a sus interacciones hidrófobas dentro del sitio de unión de catepsina B (Dubowchick G.M., y otros, Bioorg. Med. Chem. , 1998, 8, 3341) , mientras el análogo que contiene Ala en lugar de Val contribuyó a disminuir notablemente la liberación de doxorubicina , que claramente fue lo contrario al objetivo de este estudio.

Sorprendentemente, se descubrió que Ala-Cit o D-Ala-Cit, que demostraron inesperadamente ser estables en la sangre de ratón y escindibles dentro de la célula tumoral, son particularmente adecuados como un medio para permitir la liberación del motivo citotóxico en el sitio de acción.

La presencia de un grupo autodestructivo también es obligatoria para exaltar la acción de las endopept idasas (Cari P. L . , et al., J. Med. Chem., 1981, 24, 5, 479; Shamis M. L. et al., J. Am. Chem. Soc . , 2004, 126, 6, 1726) . Estos nuevos enlazadores garantizan mejor las propiedades farmacológicas requeridas de los conjugados relativos, tales como estabilidad metabólica y liberación adicional del agente citotóxico después de la internalización en la célula, junto con una solubilidad y biodisponibilidad óptima. Además, fueron diseñados a fin de tener un tamaño y una conformación compatibles con la unión del dispositivo de orientación para el receptor.

Los nuevos enlazadores son puentes moleculares versátiles que se pueden · aplicar a una variedad de ligandos, así como también a diferentes fármacos antitumorales .

La invención comprende compuestos de fórmula general I [ (L-D) nE] m-F-D-PI-SI-CT Fórmula I en la cual, L es un péptido cíclico del receptor de a-integrina de reconocimiento de fórmula II c (R1-Arg-Gly-Asp-R2) Fórmula II R1 es Amp, Lys o Aad; R2 es Phe, Tyr o Amp con configuración R; D en cada aparición puede ser igual o diferente, está ausente o es un grupo divalente de fórmula III -SP1-A1-SP2-A2-SP3" Fórmula III SP1 está ausente o es R3- (CH2) q- (OCH2-CH2) q-0- (CH2) q- 4; R3 y R4, iguales o diferentes, están ausentes, o -C0-, C00-, -NH-, -0- o un radical divalente de Fórmula IV, fórmula VIII o fórmula IX Fórmula IV Fórmula VIII Fórmula IX q en cada aparición pueden ser igual o diferente y es independientemente un entero que oscila entre 0 a 6; A1 está ausente o es un aminoácido (L) o (D) natural o no natural que lleva una cadena lateral hidrófila; SP2 está ausente o es igual a SP1; A2 está ausente o es igual a A1; SP3 está ausente o es igual a SP1; m = 1 ó 2 ; n = 1 ó 2 ; E en cada aparición puede ser igual o diferente y es Glu, Lys o está ausente; F es igual a E o está ausente o es un análogo de histidina de la fórmula X; Fórmula X en donde el anillo triazol está unido a la parte D-PI-SI-CT, la parte carbonilo está unida a la parte que contiene L y SP1 es como se define anteriormente; PI es un oligopéptido natural o no natural, compuesto por los aminoácidos (L) o (D) seleccionados entre Ala y Cit; SI es el radical divalente p-aminobenciloxicarbonilo; CT representa un radical citotóxico; sus tautómeros, sus isómeros geométricos, sus formas ópticamente activas tales como sus formas de enantiómeros , diaestereómeros , y racemanto, así como sus sales farmacéuticamente aceptables; con la siguiente condición: debe estar presente al menos un D; y cuando E está presente, está unido a la parte que lleva el grupo L a través de sus partes amino cuando E es Lys, o a través de sus partes carboxilo cuando E es Glu.

Una modalidad de esta invención es la de los compuestos de fórmula I, donde CT representa un derivado de camptotecina .

Otra modalidad de esta invención es la de los compuestos de fórmula I, donde CT representa un derivado de camptotecina, R1 es Amp y R2 es Phe.

Otra modalidad de esta invención es la de los compuestos de Fórmula I, donde PI representa un oligopéptido que comprende dos o tres residuos de aminoácidos.

Otra modalidad más de esta invención es la de los compuestos de Fórmula I, donde m = 1 y n = 1.

Otra modalidad preferida de esta invención es la de los compuestos de la fórmula I, en donde m = 1 y n = 2.

Los compuestos de Fórmula I, se pueden obtener utilizando un método de acoplamiento estándar conocido por los expertos en la técnica. Se podrá apreciar que cuando se proporcionan las condiciones experimentales típicas o preferidas (es decir, temperaturas de reacción, tiempo, moles de reactivos, solventes, etc.), también se pueden utilizar otras condiciones experimentales, salvo indicación contraria. Las condiciones de reacción óptimas pueden variar con los reactivos o solventes particulares utilizados, pero las condiciones pueden ser determinadas por el experto en la técnica a través de procedimientos de optimización de rutina.

Además, la invención brinda un procedimiento para la preparación de compuestos de Fórmula general (I), por ejemplo, haciendo reaccionar el grupo amino libre del fragmento PI de un compuesto de fórmula V (CT-SI-PI) -NH2 (Fórmula V) en la cual CT, SI y PI son tal como se han descrito anteriormente, con un derivado que contiene azida de fórmula VI L- (SP^A^SP^A^SP3) -N3 (Fórmula VI) en la cual L, SP1, A1, SP2, A2 Y SP3 son tal como se han descrito anteriormente, y R4 es CO.

Alternativamente, los compuestos de Fórmula I se pueden obtener haciendo reaccionar un compuesto de Fórmula VII (CT-SI-PI) -CO-C=CH (Fórmula VII) en la cual CT, SI y PI son tal como se han descrito anteriormente, con compuestos de fórmula VI, en la cual L, SP1, A1, SP2, A2 y SP3 en los compuestos de Fórmula VI son tal como se han descrito anteriormente, con la condición de que R4 esté ausente, tal como describe Rostovtsev V.V. , et al., Angew. Chem. , 2002, 41, 2596.

Los compuestos de la fórmula I también pueden obtenerse haciendo reaccionar un ??t??µ?e^ de la fórmula XI (CT-SI-PI) -D-NHCH2-C=CH (Fórmula XI) en donde CT, SI, PI y D son como se han descrito anteriormente , con compuestos de la fórmula XII [ (L-D) nE] m-COCH2-N3 (Fórmula XII) en donde L, D y E son como se han descrito anteriormente .

Alternativamente, los compuestos de la fórmula I pueden obtenerse haciendo reaccionar un compuesto de la fórmula XIII (CT-SI-PI) -D-N3 (Fórmula XIII) en donde CT, SI, PI y D son como se han descrito anteriormente, con compuestos de la fórmula XIV [ (L-D)nE]m-CO-CH(NHD)CH2-C=CH (Fórmula XIV) en donde L, D, y E son como se han descrito anteriormente .

Los aminoácidos que tienen una cadena lateral hidrófila se refieren a aminoácidos seleccionados entre el grupo que comprende arginina, asparagina, ácido aspártico, citrulina, cisteína, ácido glutámico, glutamina, lisina, serina, treonina y tirosina.

Un derivado de camptotecina o radical citotóxico significa una camptotecina como los derivados descritos en los documentos WOOO/53607 y W004/083214 presentados a nombre del Solicitante.

Otro objeto de la presente invención es un método para tratar un mamífero que sufre un crecimiento celular no controlado, invasión y/o condición de metástasis, que consiste en administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula (I) tal como se ha descrito anteriormente.. La frase "cantidad terapéuticamente eficaz" tal como se utiliza en la presente se refiere a una cantidad de un agente terapéutico necesario para tratar, mejorar una enfermedad o afección, ó exhibir un efecto terapéutico detectable.

Para cualquier compuesto, la dosis terapéuticamente eficaz se puede estimar inicialmente en ensayos de cultivo celular o en modelos animales, habitualmente en ratones, ratas, conejillos de india, conejos, perros o cerdos. El modelo animal también se puede utilizar para determinar el intervalo de concentración apropiado y la vía de administración. La información luego se puede utilizar para determinar dosis y vías de administración útiles en seres humanos. Para calcular la Dosis Equivalente Humana (DEH) , se recomienda utilizar la tabla de conversión provista en el documento Guidance for Industry and Reviewers (2002, U.S. Food and Drug Administration, Rockville, Maryland, EE.UU.) .

La dosis eficaz precisa para un sujeto humano dependerá de la gravedad de la enfermedad, la salud general del sujeto, la edad, el peso y el sexo del sujeto, la dieta, el tiempo y frecuencia de administración, combinación (es) de fármacos, sensibilidades de reacción, y tolerancia/respuesta a la terapia. Esta cantidad se puede determinar a través de experimentación de rutina y queda a criterio del médico. En general, una dosis . eficaz oscilará entre 0.01 mg/kg y 100 mg/kg, preferentemente, entre 0.05 mg/kg y 50 mg/kg. Las composiciones se pueden administrar en forma individual a un paciente o se pueden administrar en combinación con otros agentes, fármacos u hormonas.

El medicamento también puede contener un portador farmacéuticamente aceptable, para la administración de un agente terapéutico. Los portadores incluyen anticuerpos y otros polipéptidos , genes y otros agentes terapéuticos tales como liposomas, siempre y cuando el portador no induzca por sí mismo la producción de anticuerpos perjudiciales para el individuó que recibe la composición, y pueda ser administrado sin una excesiva toxicidad.

Los portadores adecuados pueden ser macromoléculas grandes de metabolización lenta tales como proteínas, pol isacáridos , ácidos pol i láct i eos , ácidos poliglicólicos , aminoácidos poliméricos, copolímeros de aminoácidos y partículas de virus inact ivos .

Se puede encontrar una descripción minuciosa de portadores farmacéuticamente . aceptables en Remington's Pharmaceut i cal Sciences (Mack Pub . Co . , N. J. , 1991) .

Los portadores farmacéuticamente aceptables en composiciones terapéuticas pueden contener adicionalmente líquidos tales cómo agua, solución salina, glicerol y etanol . Adicionalmente, en las composiciones pueden estar presentes sustancias auxiliares, tales como agentes humectantes o emulsionantes, sustancias reguladoras del pH y similares. Los portadores permiten que las composiciones farmacéuticas sean formuladas como comprimidos, pildoras, grageas, cápsulas, líquidos, geles, jarabes, suspensiones acuosas, suspensiones y similares, para la ingesta por parte del paciente.

Una vez formuladas, las composiciones de la invención se pueden administrar directamente al sujeto. Los sujetos que se tratarán pueden ser animales; en particular, se pueden tratar sujetos humanos.

El medicamento de la presente invención se puede administrar a través de una serie de vías que incluyen, sin carácter limitativo, aplicación oral, intravenosa, intramuscular, intra-arterial , intramedular , intratecal, intraventricular , transdérmica o trasncutánea , subcutánea, intraperi toneal , intranasal, enteral, tópica, sublingual, intravaginal , medios rectales o localmente en el tejido enfermo después de la operación quirúrgica .

El tratamiento de dosificación puede ser un esquema de una única dosis o un esquema de múltiples dosis .

Otro objeto de la presente invención es una composición farmacéutica que contiene al menos un compuesto de Fórmula (I) como ingrediente activo, en una cantidad tal que produce un efecto terapéutico significativo. Las composiciones que abarca la presente invención son enteramente convencionales y se obtienen utilizando métodos que son de práctica común en la industria, farmacéutica. De acuerdo con la vía de administración elegida, las composiciones se presentarán en forma sólida o líquida y serán adecuadas para la administración oral, parenteral o intravenosa. Las composiciones de acuerdo con la presente invención contienen, junto con el ingrediente activo, al menos un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.

Breve Descripción de las Figuras Las Figura l.a-1.1 describen las estructuras químicas de los varios fragmentos utilizados para sintetizar derivados citotóxicos de doble orientación.

Las Figuras 2.a-2.h describen las estructuras químicas de derivados citotóxicos de doble orientación.

Las Figuras 3.a-3.e describen la síntesis de algunos bloques de construcción utilizados para la síntesis de los Fragmentos 1 (Fig. 3.a), 2 (Fig. 3.b) , 5 (Fig. 3.c) , 6 (Fig. 3.d), y 12 (Fig. 3.c) así como la síntesis completa del Fragmento 10 (Fig. 3.e) .

La Tabla A describe esquemáticamente la naturaleza de dos fragmentos requeridos para sintetizar cada compuesto final.

TABLA A Los siguientes ejemplos ilustrados no constituyen una lista exhaustiva de lo que la presente ' invención intenta proteger.

EJEMPLOS Abreviaturas : Aad: ácido aminoadípico Allpc : aliloxicarbonilo Amp : p-aminometilfenilalaniña Boc : t-butoxicarbonilo Cit : citrulina CPT: camptotecina DCM: diclorómetaño DIPEA: diisopropiletilamina¦ DMF : dimetilformamida equiv. : equivalente Et20 : éter dietílico Fmoc : 9H-fluorenilmetoxicarbonilo HCTU: (hexafluorofosfato de 2- (6-cloro-lH-benzotriazol-l-il) -1,1,3,3, 3 -tetrametilamonio) HOAt : l-hidroxi-7-azabenzotriazol HOBt : 1-hidroxibenzotriazol MALDI : ionización de desabsorción inducida por láser y asistida por una matriz MeOH: metanol NMP: N-metilpirrolidona PABA: alcohol 4 -aminobencílico PABC : para-aminobeciloxicarbonilo Pmc : 2,2,5,7, 8 -pentametil -cromano- 6 - sulfonilo RP-HPLC: cromatografía líquida de alto rendimiento de fase inversa TA: temperatura ambiente tr : tiempo de retención SPPS: síntesis de péptidos de fase sólida TBTU: tetrafluoroborato de O- (benzotriazol-l-il) -?,?,?' ,?' -Tetrametiluronio TEA: trietilamina TFA: ácido trifluoroacético Tof : tiempo de vuelo Notas generales: Los espectros 1H se registraron en solución de DMSO-D6, CDC13, o D20 tal como se indica, a 300 MHz con un instrumento Bruker. Los valores del desplazamiento químico se expresan en ppm y las constantes de acoplamiento en Hz . La cromatografía en columna vaporización instantánea se llevó a cabo utilizando gel de sílice (malla Merck de 230-400) .

Ejemplo 1 Síntesis de ST3833 Se agregó el Fragmento 2 (1 equiv.) disuelto en 2 mi . de DMF a una solución de DMF (7 mi) que contenía el Fragmento 1 (preparada in situ, 0.32 mmol) y DIPEA (1 equiv.) . El pH se ajustó aproximadamente a 7.5 con DIPEA y la mezcla de reacción se agitó a TA en la oscuridad. Después de 2 horas, se agregó otro equivalente de Fragmento 1, nuevamente ajustando el pH, y la mezcla de reacción se dejó bajo agitación durante la noche.

Después de la purificación mediante HPLC preparativa (columna, Discovery Bio ide poro C18, Supelco, 250 x 21.2 mm, 10 µp?: fase móvil: 29% CH3CN en H20 + 0.1% de TFA, ? = 220 nM) y liofilización, se obtuvieron 365 mg de ST3833 con una pureza del 97.6%.

Rendimiento 60%.

HPLC analítica (Gemini, Phenomenex, C18, 250 x 4.6 mm, 5 µ??: fase móvil: 34% de CH3CN en H20 + 0.1% de TFA, ? = 220 nM) . El conjugado muestra dos picos a ta 7.96 y 10.43 minutos, debido a la mezcla de los isómeros E/Z de la molécula citotóxica original .

Masa Maldi-Tof: 1650.71 [MH]+.

•"•H-NMR (DMS0-D6) , desplazamientos principales, d: 9.28, 8.57, 8.28., 8.22, 8.14, 8.07, 7,93, 7.88, 7.75, 7.65, 7.55, 7.45, 7.36, 7.24, 7.15, 7.11, 7.03, 7.02, 6.42, 5.95, 5.42, 4.94, 4.60, 4.41, 4.28, 4.09, 3.95, 3.89, 3.57, 3.48, 3.18, 3.00-2.31, 1.91, 1.75, 1.60-1.30, 1.25, 0.90.

Ejemplo 2 (para comparación) Síntesis de ST3280 El acoplamiento entre el Fragmento 1 y el Fragmento 3 se llevó a cabo siguiendo el procedimiento que se describe en el Ejemplo 1 antes de la remoción del grupo protector de alloc. A una solución de [Alloc-ST3280] , (0.078 mmoles) en 3 mi de DMF, se agregó Bu3SnH (0.172 mmoles), AcOH (0.375 mmoles) y Pd(PPh3)4 (0.003 mmoles). La mezcla de reacción se agitó durante 1 h a TA bajo Ar. Después de la evaporación del solvente bajo presión reducida, el residuo se purificó mediante HPLC preparativa (columna, Alltima, Alltech, RP18, 10 µp?, 250x22 mm; fase móvil: 34% de CH3CN en H20 + 0.1% de TFA) . Después de la liofilización, se obtuvo el conjugado con un 99.9% de pureza.

Rendimiento = 55% HPLC analítica: (Gemini, Phenomenex, C18, 250 x 4.6 mm, 5 µ??: fase móvil: 35% de CH3CN en H20 + 0.1% de TFA, ? = 360 nm) . ta de los isómeros E/Z = 7.24 y 9.61 min.

Masa ESI : 1696 [MH] +. 1H-NMR (DMS0-D6) , desplazamientos principales d: 8.57, 8.28, 8.22, 8.14, 8.07-7.50, 7.36, 7.24, 7.20-6.90, 6.42, 5.42, 4.94, 4.60, 4.41, 4.28, 4.18-4.00, 3.95, 3.90, 3.57, 3.48, 3.12-2.25, 1.91, 1.55, 1.38, 0.90.

Ejemplo 3 Síntesis de ST4167 A una solución del Fragmento 4 (0.09 mmoles) y el Fragmento 5 (88 mg, 0.09 mmoles) en 2 mi de DMF, se agregó una solución de ascorbato de sodio (0.089 mmoles) y CuS04.5 H20 (0.009mmoles) en 500 µ? de H20. El pH se ajustó en pH 6 por adición de NaOH y la suspensión se agitó a TA durante la noche. Después de la evaporación del solvente bajo presión reducida, el residuo se purificó mediante HPLC preparativa (columna, Al1tima C18, 10 µp, Alltech; fase móvil: 33% CH3CN en H20 + 0.1% de TFA, ? = 220 nm) . Después de la liofilización, se obtuvieron 72 mg del aducto deseado con 97% de pureza.

Rendimiento 44%.

HPLC analítica: (columna, Gemini C18, 250 x 4.6 mm, 5 µ??: fase móvil: 34% CH3CN en H20 + 0.1% de TFA, ? = 220 nm) . ta 7.7 y 9.9 min.

Masa ESI: 1745.7 [M+H] + . 1H-NMR (DMSO-D6 + D20) , desplazamientos principales, d: 8.90, 8.44, 8.33, 8.18, 8.03-7.84, 7.8-7.69, 7.45, 7.39, 7.2-6.94, 5.48-5.30, 5.19, 4.89, 4.69, 4.6-4.24, 4.20, 4.13, 4.02, 3.89-3.52, 3.5-3.37, 3.24, 3.10-2.62, 2.4-2.30, 1.93-1.25, 0.85.

Ejemplo 4 Síntesis de ST4215 El acoplamiento entre el Fragmento 4 y el Fragmento 6 se llevó a cabo siguiendo el procedimiento que se describe en el Ej emplo 3.

El producto de reacción crudo obtenido de la cicloadición se purificó mediante HPLC preparativa (columna, Alltima, C18, 10 µp?, Alltech; fase móvil: 30% CH3CN en H20 + 0.1% de TFA) . Después de la liofilización, se obtuvieron 52 mg con 98.6% de pureza.

Rendimiento 41%.

HPLC analítica: (Gemini, Phenomenex C18, 250 x 4.6 mm, 5 um : fase móvil: 30% CH3CN en H20 + 0.1% de TFA, ? = 220 nm) . ta - 11.23 y 15.43 min.

Masa ESI: 2106 [M + H] + .

¦"¦H-NMR (DMSO-D6) , desplazamientos principales d: 9,79, 9.13, 8.42, 8.15, 7.95, 7.86, 7, 80-7, 69, 7, 45-7, 39, 7, 186.70, 5.47-5.24, 4.85, 4.60-4.30, 4.28- 3.65 , 3.64 - 3.31 , 3.30-2.61, 2.43-2.30, 1.91-1.38, 1.33, 0.84.

Ejemplo 5 Síntesis de ST5548TF1 La cicloadición entre el Fragmento 4 y el Fragmento 7 se llevó a cabo siguiendo el procedimiento que se describe en el Ejemplo 3. Después de HPLC preparativa, se obtuvo el el aducto deseado con 100% de pureza.

Rendimiento = 45%.

HPLC analítica: (Gemini, Phenomenex, C18, 250 x 4.6 mm, 5 µt?: fase móvil: 29% CH3CN en H20 + 0.1% de TFA, ? = 220 nm) .. ta = 10.84 y 15.22 min.

Masa Maldi: 2120,89 [M+H] + .

¦"•H-NMR (DMS0-Ds) , desplazamientos principales, d: 9.94, 9.28, 9.04, 8.58, 8.52, 8.27-8.17, 8.03, 7.93-7.73, 7.55, 7.37, 7.25, 7.11-7.07, 6.82, 6.56, 6.41, 5.90, 5.42-5.29, 4.95, 4.60-4.53, 4.46, 4.37, 4.25, 4.16, 4.01-3.96, 3.84, 3.65-3.37, 3.17, 3.10, 3.01-2.88, 2.42-2.36, 1.90-1.86, 1.75-1.71, 1.61-1.58, 1.50-1.30, 0.89.

Ejemplo 6 Síntesis de ST5546TF1 El acoplamiento entre el Fragmento 4 y el Fragmento 8 se llevó a cabo siguiendo el procedimiento que se describe en el Ejemplo 3. El producto de reacción crudo obtenido de la cicloadición se purificó mediante HPLC preparativa (Alltima, Alitech RP18, 250 x 22 mm, 10 pm; fase móvil: 28% CH3CN en H20 + 0.1% de TFA, ? = 220 nm) . Después dé la liofilización, se obtuvo ST5546TF1 con 100% de pureza.

Rendimiento = 38% HPLC analítica: (Gemini, Phenomenex, C18, 250 x 4.6 mm, 5 µ??: fase móvil: 28% CH3CN en H20 + 0.1% de TFA, 7 = 220 nm) . ta - 11.38 y 16.16 min.

Masa Maldi: 2480 [M+H] + .

""•H-NMR (D20) , desplazamientos principales, d: 8.73, 8.52, 7.83-7.74, 7.62, 7.39, 7.19, 7.05, 6.93, 6.87, 6.63, 5.58-5.49, 4.91, 4.68-4.26, 4.04, 3.85-3.42, 3.24-3.12, 2.93-2.87, 2.77, 2.65-2.60, 2.11, 1.93, 1.82, 1.72, 1.63, 1.58-1.58-1.49, 1.12.

Ej emplo 7 Síntesis de ST5744TF1 Se agregó una solución acuosa de 14 µ? de ascorbato de sodio (0.014 mmoles) y de CuS04.5H20 (0.0014 mmoles) a 2 mi 'de solución (DMF/H20 : 1/1 ) conteniendo el Fragmento 9 (15 mg, 0.014 mmoles). y el Fragmento 10 (34 mg, 0.016 mmoles) . La mezcla de reacción resultante se agitó a TA por 1.5 horas. Después se eliminó el solvente bajo presión reducida. Después de la purificación a través de HPLC (columna, Alltima, Alltech, C18, 10 im, 250x22 mm; fase móvil: 30% CH3CN en H20 + 0.1% de TFA) , se obtuvo el aducto deseado.

Rendimiento = 37%.

HPLC analítica (columna Gemini , fase móvil 29% CH3CN en H20 + 0.1% de TFA) . ta = 9.2 y 12.6 min.

Maldi-TOF [M + H]+ 2988.78.

^- MR (DMS0-D6 + D20) desplazamientos principales d: 9.30, 8.56, 8.40, 8.22, 8.19, 8.01, 7.92-7.85, 7.83, 7.78-7.69, 7.53, 7.37, 7.23, 7.08, 6.68, 5.42-5.3, 5.21, 5.10, 4.93, 4,74, 4.37-4.34, 4.23, 4.20-4.03, 3.89, 3.85, 3.61, 3.56-3.36, 3.29-3.16, 3.07, 3.00-2.73, 2.38, 2.10, 1.85, 1.72, 1.55, 1.40-1.30, 1.23, 0.87.

Ejemplo 8 Síntesis de ST5745TF1 Una solución acuosa de 16 µ? de ascorbato de sodio (0.016 mmoles) y de CuS0 .5H20 (0.0016 mmoles) se agregaron a una solución (DMF / H20: 4 / 3, 3.5 mi) conteniendo el Fragmento 11 (33.2 mg, 0.032 mmoles) y el Fragmento 12 (84 mg, 0.031 mmoles) . La solución resultante se sometió a irradiación de microondas (90 W) por 2 min. La temperatura máxima observada llegó a 120°C. Después de la purificación a través de HPLC (columna, Alltima, Alltech, C18, 10 µ??, 250x22 mm; fase móvil: 32% CH3CN en H20 + 0.1% de TFA) , se obtuvo el aducto deseado con 97% de pureza.

Rendimiento = 42%.

HPLC analítica (columna Gemini , fase móvil 29% CH3CN en H20 + 0.1% de TFA). ta = 10.2 y 12.5 min.

Masa Maldi: [M + H] + 3723. 1H-NMR (DMS0-D6 + D20) desplazamientos principales, d : 9.05, 8.34-8.09, 7.82-7.71, 7.42- 7.24, 7.06-6.99, 6.66, 5.49, 5.55-5.11, 4.79, 4.57, 4.37-3.97, 3.70-3.38, 3.16, 3.01- 2.87, 2.34-2.32, 2.00-1.55, 1.42- 1.28, 1.19, 0.84.

Ejemplo 9 Síntesis del Fragmento 1 c(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Amp [C0-CH2- (Q-CH2-CH2) 2-0-CH2-CO--N3]} Síntesis en fase sólida asistida por microondas del ciclopéptido acilhidrazida Se suspendió Fmoc -Gly- SASRIN® (2.53 g, 2 inmoles) en 40 mi de DMF que contenía 20% de piperidina y se sometió a 25 W durante 3 minutos. Después del filtrado y lavado de la resina, se agregó una solución que contenía 2 equiv. del aminoácido siguiente, luego de la adición de una solución que contenía 2 equiv. de HOBT y TBTU en 36 mi de DMF. Finalmente, se agregaron 4 equiv. de DIPEA disueltos en 5 mi de NMP y la suspensión se irradió a 30 W durante 5 minutos. Después del filtrado y desprotección de Fmoc, los siguientes acoplamientos se llevaron a cabo del mismo modo' hasta completar el péptido. El orden de la adición de los aminoácidos fue Fmoc-Arg (Pmc) -OH, bloque de construcción Fmoc-Amp (ver Figura 3.a para la síntesis), Fmoc-D-Phe-OH y Fmoc -Asp (OtBu) -OH .

Después de la última desprotección de Fmoc y lavado, se llevó a cabo la escisión de la resina mediante el tratamiento con una solución al 1% de TFA en DCM (60 mi) durante 15 minutos. Después de la filtración, se repitió la misma operación 5 veces. Los filtrados combinados se neutralizaron a través de la adición de piridina y se absorbieron a sequedad. Al residuo disuelto en 1500 mi de CH3CN, se agregaron HOBT y TBTU (3 equiv. ) más 1% de DIPEA y la mezcla de reacción se agitó durante 1 h a TA. El solvente después se evaporó bajo presión reducida. Después de la purificación mediante cromatografía de vaporización instantánea (DCM/MeOH: 94/6 —» 92/8), se obtuvo el ciclopéptido protegido deseado con un rendimiento del 50%.

Este último se disolvió en TFA/H20: 95/5 y se agitó a TA durante 1 h. Luego, se evaporó el solvente bajo presión reducida y se obtuvo el ciclopéptido con un rendimiento del 98% después de la purificación mediante precipitación a partir de TFA/Et20.

HPLC analítica: (columna, Purosphere STAR® Merck, RP18, 250 x 4 mm, 5 µp?; fase móvil: 20% CH3CN en H20 + 0.1% de TFA; ? = 220 nm) . ta = 9.14.

Masa Maldi-TOF: 870.13 [M+H] + La acilhidrazida desprotegida (0.32 mmoles) y HOAT (1.91 mmoles) se disolvieron en 7 mi de DMF y se agregó nitrito de t-butilo (0.38 mmoles) . La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos. La azida de acilo no se aisló y se utilizó sin otra purificación en la siguiente etapa.

Ejemplo 10 Síntesis del Fragmento 2 HC1. Ala-Cit-PABC-CPT ETAPA 1: Se agitó una solución de Boc-Cit-OH (1 g, 3.63 mmoles) , (PABA, 1.3 g, 10.9 mmoles) , HOAT (0.74 g, 5.45 mmoles) , DIPEA (0.93 mi, 5.45 mmoles) y DCC (1.12 g, 5.45 mmoles) en DMF (65 mi) a TA durante la noche. Después de la evaporación del solvente a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía de vaporización instantánea (DCM/MeOH: 90/10 ? 85/15) . Se realizó la desprotección de Boc haciendo reaccionar el intermediario anterior con TFA/DCM: 1/1, y se obtuvieron, después de la remoción del solvente bajo presión reducida, 520 mg de TFA. Cit-PABA. Rendimiento = 73%.

ETAPA 2 : A una solución de Alloc-Ala-OH (472 mg, 2.68 mmoles), DCC (272 mg, 1.34 mmoles) y DIPEA (460 µ?, 2.68 mmoles) en una mezcla de DCM/DMF (v/v = 1/1, 20 mi) a 0°C se agregó TFA. Cit-PABA y la solución se dejó bajo agitación durante 6 horas. El solvente se removió bajo presión reducida y el residuo se disolvió en agua a pH 2. La solución resultante se extrajo dos veces con EtOAc. La fase acuosa se neutralizó mediante la adición de NaHC03 y se removió el agua bajo presión reducida. La purificación mediante cromatografía de vaporización instantánea (EtOAc/MeOH = 85/15) produjo 398 mg de Alloc-Ala-Cit-PABA.

Rendimiento del 69%.

ETAPA 3: A una solución del último (392 mg, 0.9 mmoles) en 5 mi de DMF seco, se agregó 4-nitro-fenil cloroformiato (363 mg, 1.8 mmoles) disuelto en 20 mi de DCM y 150 µ? de piridina y la mezcla de reacción se agitó durante 1 h. El solvente se removió bajo presión reducida y el residuo se trituró varias veces con Et20 frío.

ETAPA 4: A una solución del aducto anterior en 25 mi de DMF, se agregaron 7- (2 -aminoetoxiimina) -metil-camptotecina-HCl (423.5 mg, 0.90 mmoles) y TEA (150 µ? , 1.1 mmoles) y la mezcla de reacción se agitó durante 5 horas. El solvente se removió bajo presión reducida y el residuo se trituró varias veces con agua para remover el exceso de TEA. Después de la purificación mediante cromatografía de vaporización instantánea (DCM/MeOH : 90/10), se obtuvieron 320 mg (0.36 mmoles) del Fragmento 2 protegido.

Rendimiento = 40%, (2 etapas) .

ETAPA 5 A una solución del Fragmento 2 en DMF (3.8 mi) se agregó una solución de Bu3SnH (220 µ?, 0.8 mmoles) en DCM (3.8 mi), 40 µ? de agua y finalmente Pd [(PPh)3]4 (17 mg, 0.014 mmoles) y la mezcla de reacción resultante se agitó durante 15 minutos. El solvente se removió bajo presión reducida para obtener un sólido que se absorbió en agua (65 mi) a pH 3. La capa acuosa se extrajo con Et20 (25 mi x 3) antes de ser concentrada para obtener el Fragmento 2 puro como sal de clorhidrato.

Rendimiento = 93%.

HPLC (Gemini, Phenomenex, C18, 250 x 4,6 mm, 5 µt?: fase móvil: 28% CH3CN en H20 + 0.1% de TFA, ? = 220 nm) . ta= 8.9 y 12.3 min.

Masa Maldi : 834 [M + Na]+.

Ejemplo 11 Síntesis del Fragmento 3 TFA. Phe-Lys (Alloc). -PABC-CPT Se obtuvo el compuesto del título siguiendo el procedimiento que se describe en el Ejemplo 10 a partir de Boc-Lys (Alloc) -OH en lugar de Boc-Cit-OH y utilizando Boc-Phe-OH en la segunda etapa el lugar de Alloc-Ala-OH.

HPLC analítica: (Purosphere STAR, Merck, 5 µt?; fase móvil: 35%. CH3CN en H20 + 0.1% de TFA; ? = 220 nm) . ta = 18.00 y 25.29 min.

Masa Maldi: 965 [M + Na] + Ejemplo 12 Síntesis del Fragmento 4 (HC=C-CQ-Ala-Cit-PABC-CPT) A una solución del Fragmento 2 (0.12 mmoles) en 3 mi de DMF, se agregó DIPEA (0.31 mmoles), ácido propiónico (0.18 mmoles) y HOAT (0.18 mmoles) y la solución se enfrió a 0°C antes de agregar DCC (0.21 mmoles) . La mezcla de reacción se agitó a TA durante 1.5 h. Después de la remoción del solvente bajo presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía de vaporización instantánea (DCM/MeOH: 9/1 - 8/2) .

Rendimiento = 72%.

HPLC analítica (Gemini, Phenomenex, C18, 250 x 4.6 mm, 5 ]i : fase móvil: 31% CH3CN en H20 + 0.1% de TFA, ? = 220 nra) .¦ ta = 11.46 y 16.14 min.

Masa Maldi : 863.8 [M+H] + y 885.8 [M+Na]+.

Ejemplo 13 Síntesis del Fragmento 5 c{Arg-Gly-Asp-D-Phe-Amp [C0-CH2- (0-CH2-CH2) 2-0-CH2-C0-N3] } El ciclopéptido del título se sintetizó siguiendo el procedimiento que se describe en el Ejemplo 9, incorporando el bloque de construcción Fmoc-Amp [CO- (CH2) 2- (0-CH2-CH2) 2-0- (CH2) 2-N3] en la segunda etapa de SPPS.

HPLC analítica (Gemini, Phenomenex, C18, 250 x 4.6 mm, 5 um: fase móvil: 30% CH3CN en H20 + 0.1% de TFA, ? = 220 nm) . ta = 8.3 min.

Masa Maldi: 881 [M+H]+.

Ejemplo 14 Síntesis del Fragmento 6 c{Arg-Gly-Asp-D-Phe-Amp- [C0- (CH2) 2- (Q-CH2-CH2) 2-0- (CH2) 2-NH-Cit-C0- (CH2) 2- (0-C¾-CH2) 2-0- (CH2) 2-N3] } ciclopéptido se sintetizó siguiendo procedimiento que se describe en el Ejemplo 9, incorporando el bloque de construcción Fmoc-Amp [C0-(CH2) 2- (0-CH2-CH2) 2-0- (CH2) 2-NH-Cit-C0- (CH2) 2- (0-CH2-CH2) 2-0-(CH2)2-N3] en lugar de Fmoc [C0-CH2- (0-CH2-CH2) 2-0-CH2-CO-N3] en la segunda etapa de SPPS.

HPLC analítica (Gemini, Phenomenex, C18, 250 x 4.6 mm, 5 µ??: fase móvil: 25% CH3CN en H20 + 0.1% de TFA) , tr = 10.79 min.

Masa Maldi-Tof: 1241 [M+H]+.

Ejemplo 15 Síntesis del Fragmento 7 c{Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Amp- [CP- (CH2)2- (0-CH2-CH2) 2-0- (CH2) 2-NH-Cit-C0- (CH2) 2- (0-CH2-CH2) 2-0 (CH2) 2-N3] } El ciclopéptido del título se sintetizó sigüiendo el procedimiento que se describe en el Ejemplo 14, incorporando Fmoc -D-Tyr- ( t -Bu) -OH en la tercera etapa de SPPS.

HPLC analítica (Gemini, Phenomenex, C18, 250 x 4.6 mm, 5 µ? : fase móvil: 25% CH3CN, ? = 220 nm) . ta = 8.87 min.

Masa Maldi: 1256.96 [M+H] + . 1H-NMR (D20) desplazamientos principales, d: 7.43, 7.29, 7.19, 6.94, 4.93, 4.59, 4.53-4.37, 4.01-3.65, 3.57, 3.35, 3.27, 3.14-3.07, 2.95-2.87, 2.79-2.72, 2.03- 1.60.

Ejemplo 16 Síntesis del Fragmento 8 c{Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Amp- [CP- (CH2)2- (0-CH2-CH2) 2-0-(CH2)2-NH-Cit]2-CO- (CH2)2- (P-CH2-CH2)2-P- (CH2)2-N3} El ciclopéptido del título se sintetizó siguiendo el procedimiento que se describe en el Ejemplo 15, incorporando Fmoc-Amp- [C0- (CH2) 2- (0-CH2-CH2) 2-0- (CH2) 2-NH-Cit] 2-C0- (CH2) 2- (P-CH2-CH2) 2-0- (CH2) 2-N3 en la segunda etapa de SPPS.

HPLC analítica (Gemini, Phenomenex, C18, 250 x 4.6 mm, 5 µt?: fase móvil: 21% CH3CN, d = 220 nm) . ta = 11.62 min.

Masa Maldi: 1617.31 [M+H] + .

¦"¦H-NMR (D20) desplazamientos principales, 5: 7.23, 7.10, 7.05, 6.73, 4.58, 4.40, 4.33-4.17, 3.82-3.47, 3.40, 3.38, 3.16-3.05, 2.96-2.82, 2.75, 2.69, 2.58, 1.84-1.40..

Ejemplo 17 Síntesis del Fragmento 9 ETAPA 1: A una suspensión de ácido 3,6,9-trioxaundecanedioico anhidro (2.1 g, 9.43 mmoles) en 63 mi DCM a 0°G, se agregó DCC (97.2 mg, 0.47 mmoles), p-nitrofenol (437 mg, 0.31 mmoles), TEA (1.31 mi, 9.43 mmoles) y DMAP (7.7 mg, 0.06 mmoles) . Después de 30 min la mezcla de reacción se lavó con H20, 0.1 N de HCl, H20 y, después del secado sobre sulfato de sodio, se concentró a un pequeño volumen y se mantuvo en el congelador por 1 h. antes de filtrarse. Se agregó clorhidrato de propargilamina (144 mg, 1.57 ramoles) y TEA (262 µ?, 1.88 mmoles) al filtrado y después de unos cuantos minutos el solvente se removió bajo presión reducida. El residuo resultante se disolvió en 20 mi de H20 y se filtró a través de Dowex 50 W X8. Los licores madre se extrajeron con DCM para eliminar el nitrofenol restante y se concentraron para dar 'alquino-PEG-C02H como un sólido blanco .

Rendimiento = 72%.

ETAPA 2: Se agregó DCC (25 mg, 0.12 mmoles) a una solución fría (0°C)' de Ala-Cit-PABC-CPT (Fragmento 2, 56 mg, 0.06 mmoles), alquino-Peg-C02H (22 mg, 0.085 mmoles), HOAT (16 mg, 0.12 mmoles) y DIPEA (41 µ?, 0.24 mmoles) en 1.5 mi DMF. La mezcla de reacción después se agitó a TA durante la noche. Después de la filtración, el filtrado se concentró a sequedad y el residuo resultante se purificó por cromatografía de vaporización instantánea (DCM / MeOH: 85 / 15) para finalmente obtener 40 mg del aducto deseado como un sólido amarillo.

Rendimiento = 63.5%.

HPLC analítica (columna Gemini Phenomenex C18; 250 x 4.6 mm, 5 µp\; 32% CH3CN en H20 + 0.1% de TFA) . ta = 11.6 y 16.3 min .

Masa ESI [M + H] + 1053.42 Ejemplo 18 Síntesis del Fragmento 10 (Ver Figura 3.e) ETAPA 1: Se agregó DCC (84 mg, 0.41 mmoles) a una solución fría (0°C) de clorhidrato de éster di-ter-butílico de ácido L-glutámico (100 mg, 0.34 mmoles), ácido azidoacético (41 mg, 0.41 mmoles), HOAT (0.41 mmoles) y DIPEA (127 mi, 0.74 mmoles) en 4.6 mi DCM. La mezcla de reacción se agitó a RT por 2.5 h. Después de la filtración, la solución orgánica se diluyó con DCM hasta 30 mi y se lavó con H20, 1 N HC1 , 5% de NaHC03 y H20. El solvente se removió bajo presión reducida y el residuo resultante se disolvió en 3 mi TFA y agitó por 1 h. El TFA se removió a su vez bajo presión reducida para dar ácido 2- (2-azido-acetilamino) -pentandioico .

ETAPA 2 : Se disolvió ácido 2- (2-Azido-acetilamino) -pentandioico en una mezcla de 45 mi DCM / DMF (8/1) . El acoplamiento estándar con ter-butil-12-amino-4 , 7 , 10- trioxadodecanoato (281 mg, 1.01 mmoles), HOAT (137 mg, 1.01 mmoles), DIPEA (174 µ?) y DCC (209 mg, 1.014 mmoles) permitió la obtención de un producto crudo que se purificó por cromatografía de vaporización instantánea (DCM / MeOH: 95 / 5) para dar 175 mg del intermediario de éster bis-carboxílico deseado como un producto sólido. Rendimiento = 68.4%. 1H-NMR (CDC13) , d: 7.54, 7.23, 6.74, 4.42, 4.01, 3.70, 3.61, 3.41, 2.50, 2.35, 2.08, 1.44.

ETAPA 3 : El compuesto antes obtenido se desprotegió utilizando condiciones estándar por medio de TFA. Una vez que desapareció todo el material de partida, se eliminó el TFA bajo presión reducida para conducir hacia el intermediario bis-carboxílico que se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional.

ETAPA 4 : Se agregó una solución de N-hidroxisuccinimida (63 mg, 0.55 mmoles) en DMF a 0°C a una solución del intermediario obtenido, seguido por la adición de DCC (115 mg, 0.55 mmoles) . La mezcla de reacción se agitó durante la noche a TA. El producto crudo deseado se obtuvo después de un desarrollo estándar, y se utilizó en la siguiente etapa sin ninguna purificación adicional.

ETAPA 5: El intermediario antes obtenido se disolvió en 2 mi DCM y se hizo reacción a TA por 1.5 h con el ciclopéptido c{Arg(Pmc) -Glv-Asp (OtBu) -D-Tyr(tBu) -Amp) (725 mg, 0.69 mmoles) disuelto con 3.5 mi de DMF en la presencia de DIPEA (153 µ?, 0.93 mmoles). El ciclopéptido c{Arg (Pmc) -Gly-As (OtBu) -D-Ty (tBu) -Amp } se preparó por SPPS de acuerdo con el procedimiento descrito en el ejemplo 15 utilizando Fmoc-Amp(Cbz)-OH en lugar de Fmoc-Amp- [CO- (CH2) 2- (0-CH2-CH2) 2-0- (CH2) 2-NH-Cit-CO- (CH2)2- (0-CH2-CH2)2-0- (CH2)2-N3] }) . El residuo crudo se purificó por HPLC preparativa (columna Alltima, C18 Alltech; 10 µp?, 250x22 mm; 69% de CH3CN en H20 + 0.1% de TFA).

Rendimiento = 48%.

ETAPA 6: La desprotección final se llevó a cabo en 1 mi de DCM con TFA (540 equiv.) y tioanisol (110 equiv.) para dar el producto crudo que se purificó a través de varias precipitaciones de Et20 frío. El fragmento 10 deseado se obtuvo como un sólido blanco.

Rendimiento = 69%.

HPLC analítica (columna Gemini Phenomenex C18; 250 x 4.6 mm, 5 µp?; 22% de CH3CN en H20 + 0.1% de TFA) . ta = 10.9 Masa MALDI [M + H] + 1935.22.

Ejemplo 19 Síntesis del Fragmento 11 A una solución del Fragmento 2 (80 mg, 0.094 mmoles) y DIPEA (19 µ?, 0.11 mmoles) en DMF (1 mi), se agregó el derivado de succinimida obtenido en. la etapa ii durante la síntesis del bloque de construcción del Fragmento 5 (Figura 3.c, 37 mg, 0.11 mmoles) disuelto en 0.5 mi de DCM. La mezcla de reacción se agitó a TA por 5 h. Después de la evaporación del solvente bajo presión reducida, el residuo se purificó por HPCL preparativa (columna Alltima, 10 µp\, 250x22 mm; fase móvil 37% de CH3CN en H20 + 0.1% de TFA) . tr = 9.7 y 12.4 min.

Rendimiento = 76.3%.

Masa ESI [M + H] + 1041.42.

Ejemplo 20 Síntesis del Fragmento 12 ETAPA 1 : Se agregó una solución acuosa de 2.5 M de ascorbato de sodio (90 µ?) y de 0.5 M CuS04.5H20 (45 µ?) a una solución de 12 mi de DMF/H20 (7/5) de éster bencílico de ácido (1,3-bis-prop-2-inilcarbamoil-propil) -carbámico (72.5 mg, 0.20 mmoles) y c {Arg (Pmc) -Gly-Asp (OtBu) -D-Tyr (tBu) -Amp- [CO- (CH2) 2-(0-CH2- CH2)2-0- (CH2)2-N3] } (572 mg, 0.45 mmoles). Lo anterior se sintetizó de acuerdo con el procedimiento descrito en el ejemplo 13 utilizando Fmoc-D-Tyr- (t-Bu) -OH en lugar de Fmoc-D-Phe-OH. La mezcla de reacción resultante se sometió a irradiación de microondas (90 W) por 2 min. La temperatura máxima se repitió tres veces hasta la desaparición completa del material de partida, que se monitoreó por HPLC (columna Gemini, 250 x 4.6 mm, 5 µp?; fase móvil 35% CH3C en H20 + 0.1% de TFA) . El solvente después se removió bajo presión reducida y la mezcla de reacción cruda se purificó a través de cromatografía de vaporización instantánea (DCM/MeOH gradiente: 93/7 ? 90/10 ? 80/20) para obtener 417 mg del producto deseado.

Rendimiento = 71%.

Masa ESI: 1453.6 (m/z 2+) , 969.4 (m/z 3+) .

ETAPA 2 : Se desprotegieron 406 mg del producto obtenido anterior disuelto en una mezcla de DMF (3 mi) y MeOH (5 mi) , con el fin de remover el grupo protector benciloxicarbonilo, por medio de formiato de amonio (44 mg, 0.70 mmoles) y Pd/C (200 mg) . La suspensión se agitó por 3 h y después se filtro. El solvente se removió bajo presión reducida y el producto resultante se utilizo sin purificación adicional en la siguiente etapa.

ETAPA 3 : Se agregó una solución del producto obtenido anterior en. DMF (3 mi) en una solución del intermediario obtenido del acoplamiento estándar entre propargil glicina y metil- (PEG) 12-NHS (102 mg, 0.15 mmoles) en DCM (4.5 mi), seguido por la adición de HCTU (62 mg, 0.15 mmoles) y DIPEA (51 µ?, 0.30 mmoles) . La solución resultante se agitó a TA por 2 h. Después de la remoción del solvente bajo presión reducida, el residuo se disolvió en DCM (300 mi) y se lavó con H20. La fase orgánica después se evaporó para dar 312 mg del aducto deseado.

Rendimiento = 67%.

Masa ESI: 1741 (m/z 2+) , 1168 (m/z 3+) .

ETAPA 4 : El intermediario obtenido anterior se desprotegió completamente por medio de una mezcla de TFA/DCM/tioánisol (1 1/1/0.3). El compuesto se purificó por precipitación de Et20 frío, para dar 245 mg del fragmento 12 deseado.

Rendimiento = 92%.

Masa MALDI : 2679.79 encontrado.

Resultados biológicos Ensayo de unión de fase sólida de los conjugados con los receptores de integrina av 3 y avS5 Los ensayos de unión al receptor se llevaron a cabo tal como se describe (Orlando R. A., et al., J. Biol . Chem. 1991, 266, 19543) . avS3 y avS5 se diluyeron a 500 ng/ml y 1 g/ml, respectivamente, en regulador de pH de recubrimiento (20 mM Tris, pH 7,4, 150 mM de NaCl, 2 mM de CaCl2, 1 ni de MgCl2, 1 mM de MnCl2) y se agregó una cantidad de 100 µ? a la placa de microtitulación de 96 cavidades y se incubó durante la noche a '4°C. La placa se lavó una vez con regulador de pH de bloqueo/unión (50 mM de Tris, pH 7.4, 100 mM de NaCl, 2 mM de CaCl2, 1 mM de MgCl2( 1 mM de MnCl2, 1% de albúmina de suero bovino) y luego se incubó durante otras 2 horas a TA. La placa se enjuagó dos veces con el mismo regulador de pH y se incubó durante 3 horas a temperatura ambiente con el ligando radiomarcado [12 I] Equistatina (Amersham Pharmacia Biotech) 0.05 nM (0.1 nM para a?ß5) en presencia de inhibidores competitivos. Después de la incubación, las cavidades se lavaron y se determinó la radioactividad con un contador gamma (Packard) . Se determinó una unión no especifica del ligando con un exceso molar (200 nM) de equistatina fría.

Los valores IC50 informados en las Tablas 1 y 2 se calcularon como concentraciones de compuestos requeridos para una inhibición del 50% de la unión a equistatina y se calcularon con el programa Prism GraphPad. El Ki de los ligandos competitivos se calculó de acuerdo con la ecuación de Cheng-Prusoff (Cheng Y.C., et al., Biochem, Pharmacol . , 1973, 22, 3099) . Los valores son el promedio + error estándar logarítmico de determinaciones por triplicado a partir de dos experimentos independientes. La mayor parte de los conjugados mostraron una actividad potente con la inhibición en el intervalo nanomolar bajo. Es notable que a actividad in vitro demostrada por ST3280 fuera principalmente debido a la actividad intrínseca de un producto de descomposición debido a la inestabilidad del compuesto mismo.

Tabla 1 Inhibición de la unión de [125I] Equistatina ceptor ??ß3 Compuesto IC50 ± log SE (nM) Ki (nM) Equistatina 0.28 ± 0.08 0.26 ST3833 78.4 ± 1.5 61.0 ST3280 9.7 ± 0.06 8.5 ST4167 11.0 ± 0.8 8.7 ST5744TF1 3.01 ± 0.11 2.4 ST5745TF1 6.21 ± 0.09 4.92 Tabla 2 Inhibición de la unión de [125I] Equistatina a los receptores OvS5 Ensayo de adhesión de células tumorales en vitronectina Se cultivaron células de carcinoma de ovario humano A2780 y de carcinoma de próstata PC3 en un medio de cultivo RPMI 1640 que contenía 10% de suero bovino fetal y 50 ug/ml de sulfato de gentamicina. Las células se mantuvieron en una incubadora a 37°C con humedad saturada y una atmósfera del 95% de aire y 5% de C02. La línea de células tumorales A2780 expresa altos niveles de la integrina ?ß5, y PC3 bajos niveles de ambas integrinas .

En placas de cultivo tisular de 96 cavidades, se agregaron 50 µ?/cavidad de una solución de vitronectina (5 µg/ml) durante 2 h a temperatura ambiente. Las soluciones se removieron volcando las placas . Se agregaron 50 µ?/cavidad de una solución de BSA al 1% durante 1 h a TA. Las placas se lavaron mediante la adición de 100 µ?/cavidad de medio de cultivo RPMI 1640 sin suero de bovino fetal (FCS) . El lavado se repitió dos veces. Las moléculas se agregaron en diferentes concentraciones en el intervalo que oscila entre 0.039 uM y 20 uM. Las soluciones se prepararon por dilución 1:2 en un medio de cultivo sin FCS. Las células tumorales en los matraces se lavaron con solución salina antes de ser separadas con una espátula, mediante la adición de 5 mi de medio de cultivo sin FCS y 1% de BSA. Se contaron las células tumorales después de la resuspensión y se agregaron a una densidad celular apropiada (40000-50000 células/cavidad) . Las placas se incubaron durante 1 h a 37°C en una incubadora humidificada con 5% de C02. Luego, se removieron las soluciones volcando las placas y se lavaron una vez con 200 µ?/cavidad de PBS con Ca2+ y Mg2+. Las células tumorales se fijaron con 100 µ? de una solución de 4% de paraformaldehido en 0.2 M de regulador de pH de fosfato Sorensen pH 7.2-7.4 durante 10 min a TA. Las placas se volcaron y se agregaron 100 µ? de una solución de azul de toluidina al 1% durante 10 minutos a TA. Las placas se lavaron dos veces por inmersión en agua bi-destilada y luego se secaron a 60°C en una incubadora de termostato (Kottermann) . Se agregaron 100 µ?/cavidad de SDS al 1%. Las placas se mantuvieron bajo agitación durante 20 minutos a TA y luego se evaluaron con un Víctor 1420 Multilabel Counter (Wallac) a 600 nm.

Se evaluó el valor IC50 como parámetro para medir el efecto inhibidor de las moléculas en la adhesión de las células tumorales a la vitronectina utilizando el programa de computación "ALLFIT" .

Se halló que los conjugados investigados bloquearon la unión de las células tumorales (PC3 y A2780) a un componente matriz extracelular como ser vitronectina, el ligando de los receptores de la superficie celular integrina OvS3 y OvS5 con valores IC50 que oscilaban entre 0.39 y 4.6 µ? (Tabla 3) sin mostrar una excesiva selectividad en una línea de células tumorales. Como se menciona para la afinidad de unión hacia los receptores ??ß3, la actividad de ST3280 hacia los receptores ??ß5 es la consecuencia de la escisión del compuesto y no del compuesto mismo.

Tabla 3 Efecto antiadherente de los conjugados en células de carcinoma de ovario A2780 y células de carcinoma de próstata PC3 con vitronectina (1 h de tratamiento) Citotoxicidad de los conjugados en diferentes líneas de células tumorales Para evaluar el efecto del compuesto en las células sobrevivientes, se utilizó la prueba con sulforodamina B. Para medir los efectos de los compuestos en el crecimiento celular, se utilizaron células de carcinoma de próstata humano PC3 y células de carcinoma de ovario humano A2780. Las células tumorales A2780 y PC3 se cultivaron en RPMI 1640 que contenía 10% de suero de bovino fetal (GIBCO) .

Se sembraron las células tumorales en placas de cultivo tisular de 96 cavidades con una confluencia de aproximadamente 10% y se permitió que se unieran y recuperaran durante al menos 24. h. Luego, se agregaron concentraciones variables de los fármacos a cada cavidad para calcular su valor IC50 (la concentración que inhibe el 50% de la sobrevida celular) . Las placas se incubaron a 37 °C durante 72 h. Al término del tratamiento, se lavaron las placas por remoción del sobrenadante y adición de PBS 3 veces. Se agregaron 200 µ? de PBS y 50 µ? de ácido tricloroacético al 80% frío (TCA). Las placas se incubaron en ' hielo durante al menos 1 h. Se removió el TCA y las placas se lavaron 3 veces por inmersión en agua destilada y se secaron en papel y a 40 °C durante 5 minutos. Luego, se agregaron 200 µ? de 0.'4% de sulforodamina B en 1% de ácido acético. Las placas se incubaron a TA durante otros 30 minutos. Se removió la sulforodamina B, las placas se lavaron por inmersión en 1% de ácido acético 3 veces, luego se secaron en papel y a 40 °C durante 5 minutos. Posteriormente, se agregaron 200 µ? de Tris 10 mM, las placas se mantuvieron bajo agitación durante 20 minutos. La sobrevida celular se determinó por densidad óptica utilizando un espectrofluorometro Multiskan a 540 nm. Se calculó la cantidad de células muertas como el porcentaje de disminución en la unión de la sulforodamina en comparación con los cultivos control.

Los valores IC50 se calcularon con el programa "ALLFIT" .

Se comparó la actividad antiproliferativa de los tres conjugados en dos líneas de células tumorales humanas (células de tumor de ovario A2780 con altos niveles de integrina y células de tumor de próstata PC3 con bajos niveles de integrina) . Las moléculas mostraron una marcada potencia citotóxica en las células tumorales con valores IC50 de 8 nM tal como se muestra en la Tabla 4. Todos los conjugados revelaron un efecto menor en las células tumorales PC3 con bajos niveles de integrina (los valores IC50 oscilaban entre 0.2 y 4.6 µ?) . En particular, tres compuestos presentaron más bien un efecto antiproliferativo en la células tumorales A2780 con respecto al observado en las células tumorales PC3 (tabla 4) con una potencia de aproximadamente cien veces mayor en la anterior.

Tabla 4 Citotoxicidad de los conjugados en células de carcinoma de ovario A2780 y células de carcinoma de próstata PC3 (72 h de tratamiento) Evaluación en vivo de la actividad antitumoral del conjugado ST3833 en el crecimiento tumoral de carcinoma de ovario xenoinj ertado en ratones desnudos CDl Se inyectaron líneas de células tumorales (3xl06) s.c. en el costado derecho de ratones desnudos CDl (Harían). Cada grupo experimental incluyó 10.ratones. Los tumores se implantaron el día 0, y se siguió el crecimiento tumoral a través de mediciones bisemanales de los diámetros del tumor con un calibrador Vernier. Se calculó el volumen del tumor de acuerdo con la fórmula: TV (mm3) = d2 X D/2, donde d y D son el diámetro más corto y el diámetro más largo, respectivamente. El tratamiento con el fármaco comenzó recién cuando se pudieron medir los tumores el día 3 después de la inoculación del tumor. El fármaco se administró por vía subcutánea durante dos semanas de acuerdo con el programa qd x 5/w x 2w en diferentes dosis en un volumen de 10 ml/kg. Los ratones control fueron tratados con el vehículo (10% de DMSO) .

Se evaluó la eficacia del fármaco tal como se describe más adelante. a) El TVI en ratones tratados con el fármaco vs . ratones control se expresó de la siguiente manera: TVI (%) = 100 - (TV tratado promedio/TV control promedio) x 100. Se evaluó el TVI 6 días después del último tratamiento, este registro del tiempo corresponde al tiempo necesario para observar una duplicación del volumen del tumor en el ratón control . b) Se calculó la muerte celular logarítmica (LCK) utilizando la siguiente fórmula: LCK = (T-C)/3.32 x DT donde T y C son el tiempo promedio (en días) requerido para tumores tratados (T) y control (C) , respectivamente, para alcanzar un volumen determinado, y DT es el tiempo necesario para observar una duplicación del volumen del tumor en el ratón control . c) CR se definió como la desaparición del tumor que se extendió al menos 6 días una vez finalizado el tratamiento. Los tumores que no se habían desarrollado al término del experimento fueron considerados "curados" .

Los efectos tóxicos del tratamiento con el fármaco se evaluaron tal como se describe más adelante. a) BWL se calculó de la siguiente manera: BWL (%) = 100 - (peso promedio corporal día x/peso promedio corporal día 1) x 100, donde el día 1 es el primer día de tratamiento, y el día x es cualquier días posterior. El BWL más alto (máximo) se informa en la tabla. Los ratones se pesaron cada día a lo largo del período de tratamiento. b) La toxicidad letal se definió como, cualquier muerte en los grupos tratados que se produjese antes de cualquier muerte control. Los ratones fueron inspeccionados diariamente para determinar la mortalidad.

Se calculó el TI (índice terapéutico) como relación MTD/ED80.

RESULTADOS Se investigó la actividad antitumoral de ST3833 frente al tumor con mayor respuesta en vi ro xenoinj ertado en ratones desnudos CD1. La molécula mostró una dosis tolerable máxima aproximada (MTD) de 25 mg/kg administrada por vía s.c. de acuerdo con el programa qdx5/wx2w, dado que BWL constituía un 25% y 1 de cada 10 ratones moría. ST3833 reveló un potente efecto antitumoral, dado que produce una regresión completa de todos los tumores (los ratones curados el día 90 representaban un 100% en la MTD) (Tabla 5). En 1/3 MTD (8.3 mg/kg) , se observó un 50% de ratones curados. En dosis menores (2.77 y 0.92 mg/kg), los ratones curados representaban un 30%. La persistencia del efecto después del último tratamiento y la buena tolerabilidad del conjugado demostró un alto índice terapéutico (TI = 8.9), lo cual sugiere un alto potencial terapéutico para el conjugado.

Tabla 5 Actividad antitumoral de ST3833 administrado por vía subcutánea (qdx5/wx2w) frente a carcinoma de ovario A2780 xenoinj ertado en ratones desnudos CD1 aDosis subcutánea utilizada en cada administración. bPorcentaje máximo de BWL debido al tratamiento con fármaco .

Animales muertos/tratados. dPorcentaje de TVI vs . ratones control. eCR: desaparición del tumor durante al menos 10 días .

Curado: ratón sin lesión 90 días después de la inyección del tumor. 9LCK, ver Métodos. hTI : índice terapéutico (MTD/ED80) .

Evaluación in vivo de la actividad antimetastásica del conjugado ST3833 en metástasis ósea inducida por inyección intracardíaca de carcinoma de próstata humano PC3 Se anestesiaron ratones desnudos CD1 machos con 4 ml/kg de una mezcla (xilazina :ketavet 100) administrada i.p. Se inocularon células tumorales PC3 por inyección intracardíaca (lxlO5 células/0.1 ml/ratón) en el ventrículo izquierdo del corazón de ratones utilizando una aguja calibre 27. Los ' ratones se subdividieron (11 ratones/grupo) en los siguientes grupos experimentales y después de tres días de la inyección del tumor, se administraron las moléculas tal como se describe : Vehículo (DMSO 10%) i.v. q4dx4 ST3833 56 mg/10 ml/kg i.v. q4dx4 Para evaluar la actividad antitumoral del fármaco, se llevó a cabo un análisis radiológico corporal total de alta resolución utilizando el sistema Faxitron. El análisis radiológico se llevó a cabo 30 días después de la inyección del tumor. Se registraron los pesos corporales a lo largo del estudio y se observó la mortalidad.

El conjugado mostró una buena tolerancia en 56 mg/kg iv (q4dx4) , dado que no se observó una reducción del peso corporal de la toxicidad letal. La molécula reveló que aumentó significativamente la vida del 45% (P<0.001) y que redujo la incidencia de lesiones osteolíticas del 91% de los ratones del grupo tratado con vehículo al 45% de los ratones en el grupo tratado con fármaco (Tabla 6) .

Tabla 6 Actividad antimetastásica de ST3833 administrado por vía intravenosa (q4dx4) frente a carcinoma de próstata PC3 xenoinj ertado en ratones desnudos CD1 aDosis intravenosa utilizada en cada administración . bPorcentaje máximo de BWL debido al tratamiento con fármaco . cAnimales muertos/tratados . dIncidencia de lesiones osteolíticas (número de ratones tratados con el fármaco con metástasis vs . ratones tratados con vehículo 30 días después de la inyección del tumor) . eMST: sobrevida media del tiempo. f% de ILS: aumento de la vida.

***P<0.001 vs . grupo tratado con vehículo (prueba de Mann-Whitney) .

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (14)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones:

1.- Un péptido cíclico de Fórmula I [ (L-D)nE]m-F-D-PI-SI-CT Fórmula I caracterizado porque L es un péptido cíclico del receptor a-integrina de reconocimiento de fórmula II c (R1-Arg-Gly-Asp-R2) Fórmula II R1 es Amp, Lys o Aad; R2 es Phe, Tyr o Amp con configuración R; D en cada aparición puede ser igual o diferente, está ausente o es un grupo divalente de Fórmula III -SP1-A1-SP2-A2-SP3" Fórmula III Sp1 está ausente o es R3- (CH2) q- (OCH2-CH2) q-0- (CH2) q- R4; R3 y R4, iguales o diferentes, están ausentes, o -CO-, -COO-, -NH- , -O- o un radical divalente de Fórmula IV, fórmula VIII o fórmula IX Fórmula IV Fórmula VIII Fórmula IX q en cada aparición pueden ser iguales o diferentes y son independientemente un entero que oscila entre 0 y 6 ; A1 está ausente o es un aminoácido (L) o (D) natural o no natural que tiene una cadena lateral hidrófila; SP2 está ausente o es igual a SP1; A2 está ausente o es igual a A1; SP3 está ausente o es igual a SP1; m = 1 ó 2 ; n = 1 ó 2 ; E en cada aparición puede ser igual o diferente y es Glu, Lys o está ausente; F es igual a E o está ausente o es un análogo de histidina de la fórmula X Fórmula X en donde el anillo triazol está unido a la parte D-PI-SI-CT, la parte carbonilo está unida a la parte que contiene L y SP1 es como se define anteriormente; PI es un oligopéptido natural o no natural, compuesto por (L) o (D) aminoácidos seleccionados entre Ala y Cit; SI es el radical divalente p-aminobenciloxicabonilo; CT representa un radical citotóxico; sus tautómeros, sus isómeros geométricos, sus formas ópticamente activas tales como sus formas de enantiómeros , diaestereómeros , y racemanto, así como sus sales farmacéuticamente aceptables; con la siguiente condición: debe estar presente al menos un D; y cuando E está presente, está unido a la parte que contiene el grupo L a través de sus partes amino cuando E es Lys, o a través de sus partes carbóxilo cuando E es Glu.

2. - Un péptido cíclico de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque CT es un derivado de camptotecina, 1 es Amp o Aad, R2 se selecciona entre Phe, Amp o Tyr.

3. - Un péptido cíclico de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque m = 1 y n = 1.

4. - Un péptido cíclico de conformidad con las reivindicaciones 1 o 2, caracterizado porque m = 1 y n = 2.

5. El uso de péptidos cíclicos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 dotados de propiedades inhibitorias de la integrina Ov£3 y ??ß5 como medicamento.

6. - Uso de péptidos cíclicos de conformidad con la reivindicación 4, que tiene una IC50 de integrina inferior a 1 µ?.

7. - Composiciones farmacéuticas caracterizadas porque contienen al menos un péptido cíclico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 como ingrediente activo en una mezcla con al menos un excipiente y/o vehículo farmacéuticamente aceptable.

8. - Procedimiento para sintetizar péptidos cíclicos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizado porque se hacen reaccionar compuestos de Fórmula V (CT-SI-PI) -NH2 (Fórmula V) en la cual CT, SI y PI son tal como se han descrito anteriormente , con un derivado que contiene azida de Fórmula VI L- (SP^A^SP^A^SP3) -N3 (Fórmula VI) en la cual L, SP1, A1, SP2, A2 y SP3 son tal como se han descrito anteriormente, y R4 es CO en la cual CT, SI y PI son tal como se han descrito anteriormente .

9. - Procedimiento para sintetizar péptidos cíclicos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizado porque se hacen reaccionar compuestos de Fórmula VII (CT-SI-PI) -CO-C=CH (Fórmula VII) en la cual CT, SI y PI son tal como se han descrito anteriormente , con compuestos de Fórmula VI, en la cual L, SP1, A1, SP2, A2 y SP3 en los compuestos de / Fórmula VI son tal como se han descrito anteriormente, con la condición de que R4 esté ausente.

10. - Procedimiento para sintetizar péptidos cíclicos de conformidad con las reivindicaciones 1 o 2 o 4, caracterizado porque se hacen reaccionar compuestos de Fórmula XI (CT-SI-PI) -D-NHCH2-C=CH (Fórmula XI) en donde CT, SI, PI y D son cómo se han descrito anteriormente , con compuestos de la fórmula XII [ (L-D)nE]m-COCH2-N3 (Fórmula XII) en donde L, D y E son como se han descrito anteriormente .

11. Procedimiento para sintetizar péptidos cíclicos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2 o 4, caracterizado porque se hacen reaccionar compuestos de Fórmula XIII (CT-SI-PI) -D-N3 (Fórmula XIII) ¦ en donde CT, SI, PI y D son como se han descrito anteriormente , con compuestos de la fórmula XIV [ (L-D)nE]m-CO-CH(NHD)CH2-C=CH (Fórmula XIV) en donde L, D, y E son como se han descrito anteriormente .

12. Uso de conformidad con la reivindicación 7 para preparar un medicamento con actividad anticancerígena.

13. - Uso de una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 3 o 4, para elaborar un medicamento para tratar un mamífero que sufre un crecimiento celular no controlado, invasión y/o condición de metástasis.

14. - Uso de conformidad con la reivindicación 13, el cual es para tratar carcinoma de ovario y/o próstata.