MX2010003149A - Derivados que contienen fluor de pirido[4,3-b]indoles hidrogenados con propiedades neuroprotectoras y de mejoramiento de cognicion, proceso de preparacion y uso. - Google Patents

Abstract

Algunas modalidades ilustrativas comprenden derivados que contienen flúor de pirido[4,3-b]índoles (y métodos ilustrativos para elaborar los mismos) que pueden ser administrados a un mamífero (incluyendo un ser humano) en una cantidad efectiva para uso potencial en el tratamiento o profilaxis de padecimientos neurológicos que incluyen AD, deterioro cognitivo moderado, demencia senil y vascular, HD, ALS, mal de Parkinson, demencia relacionada con SIDA, patologías cerebrales isquémicas, dolor neuropático, ADHD (desorden por déficit de atención/síndrome de hiperactividad), desórdenes alimenticios tales como anorexia y bulimia, ataques de pánico, síndrome de abstinencia por abuso de drogas tales como cocaína, etanol, nicotina y benzodiacepinas, esquizofrenia (en particular el déficit cognitivo por esquizofrenia) accidente cerebro-vascular y también padecimientos asociados con traumatismo espinal y/o lesión de cabeza. Estos derivados también pueden ser útiles para el tratamiento de desorden de personalidad limítrofe, obesidad y para uso como geroprotectores. Los compuestos también pueden ser utilizados como herramientas farmacológicas para una investigación del mecanismo de protección contra padecimientos neurodegenerativos in vivo o in vitro.

Description

Descripción de la Técnica Relacionada Bajo condiciones sicológicas normales, los aminoácidos i excitadores ("EEAs") están in olucrados] en los conductos neurales i ¦ , asociados con el aprendizaje y la memoria [Wang H., Hu Y., Tsein J.Z. Molecular and systems mechanisms p if memory consolidation and storage. Prog. Neurobiol. 2006; 79(3)1123-35]. Una variedad de padecimientos necrológicos y enfermedades neurodegenerativas, tales como mal de Alzheimer ("AD") , j enfermedad de Huntington ("HD"), esclerosis lateral amiotrófica ('¡'ALS") e isquemia cerebral del receptor NMDA en la neurona post-sináptica y, una vez que el canal es liberado del magnesio que lojocupa bajo condiciones de reposo, permite la afluencia de calcio desde el medio extracelular dentro del medio intracelular. Si el canal NMDA permanece abierto a i la afluencia de calcio durante más de | unos cuantos miliseguridos (condiciones patológicas), se inicia ulna cascada de reacciones intracelulares, que conducen a la muerte! neuronal (apoptosis). En consecuencia, el receptor NMDA es un objetivo atractivo y validado para el tratamiento de AD [Sam!anta M.K., Wilson B., Santhi : • obesidad y para uso como , ge'roprotectór'es los cuales pueden ser aplicados para retrasar el envejecimient , prolongar la duración de la vida de un individuo o de las células en un individuo y/o mejorar la i calidad de vida de un individuo que desarrolla o que. tiene un riesgo de desarrollar manifestaciones y/o patologías asociadas con I-a edad.

BREVE DESCRIPCION DE liOS DIBUJOS Las FIGURAS 1A-1B son un cuadro cié rendimientos y puntos de fusión para varios compuestos ilustrativos presentados aquí; ¡ Las FIGURAS 2A-2C es un cuadrojde datos NMR para varios compuestos ilustrativos presentados aquíj · La FIGURA 3 muéstra los resultados de prueba obtenidos con respecto a la influencia de un compuesto jilustrativo en la exploración objeto en ubicaciones familiares nuevas'; y La FIGURA 4 muestra resultados prueba obtenidos respecto a Ja influencia d otro compuesto ilustrativo en la ? exploración objeto en ubicaciones familiares y nuevas.

DESCRIPCION DETALLADA D Las modalidades ilustrativas aquí presentadas incluyen ! derivados de piridoetilo que contienen flúor de p i r i d o [ 4 , 3-b]indoles. i ' " . para modulación de trayectorias celulares de calcio (por ejemplo, I como bloqueadores de transporte glutaímato-inducido de iones de I calcio), para antagonismo de receptores de serotonina específicos (por ejemplo, 5-HT6), para neuroprotección eficiente, para uso como, agentes mejoradores de la cognición para el tratamiento dé padecimientos neurológicos y enfermedades neurodegenerativas (por mechanisms of dimebon and memahtin'e on AMPA- and NMDA- . . ' 1 subtypes giutamate receptors in rat cerebral neurons. Bu 11. Exp. Biol. Med. 2003; 136(5): 474-7], y bloquea de manera efectiva el transporte glutamato-inducido de ionesj de, calcio dentro de las ' dimebon on cognition, activíties of daily living, behaviour, and global function in patients wíth mild-to-moderate Alzheimer's disease: a randomised, double-blind, placebo-contrjolled study . ¦ Lancet 2008; 372: 207-15]-. Esta medicina se encuentra ahora en la etapa final de pruebas clínicas para AD, y está entrando a la Fase II de las pruebas clínicas para H D. i Está creciendo el interés sobre ej rol de los receptores de serotonina con respecto a la formación y jrecuperación de la memoria [Foley A. G., Murphy K.J.', Hirst W.D., Gallagher H.C , Hagan J.J., Upton N., Walsh, F.S., Regan, CM. T e 5-HT('6) receptor antagonist ! SB-271046 reverses scopolamine-disrupted consolidaron of a passive avoidance task and ameliorates s'patial task déficits in' aged i i rats. Neuropsychopharmacology 2004; i 29: 93-100]. Se han identificado hasta ahora catorce receptores de serotonina, cada uno acoplado a uno de cuatro diferentes complejos de señalización. El receptor 5-HT6, el cual estimula la producción .de cA P a través de adenilato ciclasa y activación de Gs-prqteína, es uno de los más í recientemente descubiertos [Monsma F.'<J., Shen Y., Ward R.P., I Hamblin M.W., Sibley D.R., 1993. Cloning and expression of a novel serotonin receptor with high affinity for tíicyclic psychotropic drugs.

Molecular Pharmacology 43, 32(0-327]. La detección i ¡nmunohistoquímica de receptores 5-?"?6 utilizando microscópico I electrónico indica que la expresión es cásji exclusivamente dentro del neutróifilo, con muy poca expresión en soma neuronal [Hamon M., Doucet E., Lefevre ., Miquel M.C., Lanfumey L., Insausti R., i Frechilla D., Del Rio J,, Verge D. Antibodies and antjsense oligonucleotide for probing the distributiojn and put'ative functions of I central 5-HT6 receptors. Neuropsychopharm. 1999; .21: 68-76], Además de la expresión extendida dentro del cerebro, los receptores 5-HT6 parecen modular muchos sistemas neurotransmiso.res, que incluyen señalización glutamatérgica, dop'aminérgica, noradrenérgica y colinérgica [Lacroix L.P., Dawson L.A., ;Hagan J.J., Heidbreder CA. I 5-HT6 receptor antagonist SB-271046 enjhances extracellular levéis of monoamines in the rat medial prefrontajl cortex. Synapse 2004; 51: • '. unidos pueden formar un grupo heterocí lico que contiene nitrógeno o un grupo heteroarilo que co o; R2 y R3 son seleccionados de maneja independiente a partir de un hidrógeno y un grupo metilo; R~ y R3j pueden formar juntos una cadena de la fórmula -CH2CH2-; j R4, R5, Rs y R? cada uno representa, de manera independiente unos de los otros, un átomo de hidrógeno o de halógeno o' un grupo trif luorometilo, trif luorometoxi , ciano, hidjroxilo, (C 1 - C 6 ) ai q ü i I o , (C1- C6)alcoxi, fenoxi, fenilo o piridilo opción a Invente sustituido con un i i átomo de halógeno o un grupo metilo, metoxi, ciano, trif luorometilo, ? o hidroxilo; R5 y R6 forman juntos, un grupo cícli co de la fórmula -OCH20-, OCH2CH20- o. -CH2CH2CH2CH2-; Ciertas modalidades comprenden el uso del compuesto de la fórmula I , en donde: Rf es seleccionado a partir de un átomo de flúor o un grupo trifluorometilo; R1 es seleccionado a partir de un H,j (C1-C6)alquilo; hidroxi(C2-C6)alquilo¡ (hetero)aril(C2-C6)alquilo; (¡C3-C7)cicloalquilo; o (C2-C6)alquenilo; R2 y R3 son seleccionados de manera independiente a partir de un hidrógeno y un grupo metilo; R¿ y R3 forman juntos una cadena de la fórmula -CH2CH2-; j í R4, R5, Rs y R7 cada 'uno representa, de manera independiente ! unos de los otros, un átomo de hidrógeno o de halógeno o un grupo trifluorometilo, trifluorometoxi, ciano, hid roxilo, metilo, etilo, metoxi, etoxi, ciano, o hidroxilo; pirido[4.3-b]indol; ( . . ' · ! 8-fluoro-5-[2-(5-fluoropiridin-3-il)etili]-2-metii-2,3,4,5-tetrahidro- estearato de magnesio y/u otros componentes. Las composiciones farmacéuticas pueden ser administrada's como dosis durante un período particular o por medio de otros regímenes.. Las composiciones farmacéuticas pueden estar en la forma de una cápsula, formulación intravenosa, formulación intranasal,' formulación transdérmica, formulación para inyección . muscular, . jarabe, supositorio, aerosol, o pesario coljocado en un empaque farmacéuticamente aceptable. j MÉTODOS DE ELABORACIÓ En ciertas modalidades, los' derivadlos de pirído[4,3-b]indol que contienen flúor de la fórmula I pueden ser preparados mediante adición nucleofílica de un pirido[4, 3-b]indol hidrogenado de la fórmula II a una vinilpiridina reactiva de la fórmula III, en donde Rf, R1R7 tienen el mismo significado que se dio para fórmula I. La reacción de una gama-carboliná de la fórmula l con una I vinilpiridina de la fórmula III se lleva a cabo de manera preferible en un solvente (por ejemplo, D F, DIVISO, H IMPTA, NMP., etanol, etc.) y con I ¡ Una mezcla de 7.0 g (0.04 mol) de 3-fluoro-5-bromopiridina, 15.3 g (0.048 mol) tributil(vinil)esta!iano, 2.5 g (0.002 mol) tetraquis(trifenilfosfin)paladio en 70 mi de tolueno fueron colocados en ebullición con reflujo durante 16 horas El tolueno fue evaporado con una columna de 30 cm. El residuo fue fraccionado dos v.eces. . , i , ¦ i Datos analíticos; j i Rendimiento 60%, bp 76-77 C a 30 mm Hg; · 1 H NMR espectro(CDC13); 3 ); 19F NMR espectro (CDC13): 4.9.80· di J 9.7.

Métodos generales para modalidades ilustrativas 1 mmol de carbolina II, 1' mmol dé 3-fluoro-5-vinilpiridina III, 200 mg CsF, y 5 mg de hidroquinona! en 1.5 mi DMSO fueron calentados con agitación a 135-140 Cj durante 8 h. DMSO y la vinilpiridina fueron removidos en vacíoj a 3 mm Hg; después, el producto fue extraído con CH2CI2. El solvente fue evaporado y el residuo fue aislado mediante cromatografiía sobre gel de sílice (malla 60) con CH3OH/CHCI3 (1/5) como eluyenté. l MÉTODOS DE USO ! ' I Ciertas modalidades comprenden | tratamientos con estos i compuestos, lós cuales incluyen administrar á un mamífero (incluyendo un ser humano) una cantidad efectiva' de un derivado de pirido[4,3-b]indol de la fórmula I. Se cojnsidera que los compuestos, de la fórmula I son de uso potencial en el tratamiento o profiláxis de como anorexia y bulim.ia, ataques de pánico, síndrome de abstinencia por abuso de drogas tales como cocaína, etano'l, nicotina y benzodiacepinas, esquizofrenia (en particular el déficit cognitivo de esquizofrenia), accidente cerebrovasculair y también padecimientos asociados con traumatismo espinal y/o les iión de la cabeza. Los diferentes compuestos ilustrativos aquí presentados pueden ser útiles en el tratamiento de condiciones, caracterizadas por lo menos en parte por un estado de déficit colinérgico, tal como miastenia gra.vis, discinesi'a tardía, J demencia asociada con síndrome de Down. Los compuestos también pueden ser utilizados como ''herramientas farmacológicas" para una in estigación del mecanismo de protección contra lo Is padecimient ¦os d .e la , neurodegeneración in vivo o in vitro. Los compuestos pueden ser administrados por vía oral, intramuscular, subcutánea, rectal o tópica. Las FIGURAS 1A-1B son un cuadro de rendimientos, y puntos de fusión de múltiples compuestos ilustrativos que corresponden a números de estructura uno (1) a (15). Mostrados en el cuadro (de izquierda a derecha) están la estructura, rendimiento en base a porcentaje de resonancia magnética nuclear en una mezcla de reacción, rendimiento aislado' (% base), y puntos de ebullición por sales de hidrocloruro (grados Celsius) p'ara compuestos ilustrativos que corresponden a los números de estructura (1) a (15). Las FIGURAS 2A-2C son un cuadro de datos . NMR para múltiples compuestos ilustrativos que corresponden a. los números de estructura uno (1) a (15). Los efectos de los compuestos ilustrativos, tales como aquellos mostrados en las FIGURAS 1A-1B y las FIGURAS 2A-2C, se estudiaron en la farmacología preclínica, ex vivo, in vitro, e in vivo. Se ha demostrado que los compuestos ilustrativos ex vivo, inhiben captación de ion de calcio estimulada con glutamato, total y específica en sinaptosomas de cerebroj de rata en un rango concentración sub-micromolar. Se ha démostrado que los compujestos ilustrativos in vitro, inhiben de manera selectiva la butirilcolij ni esterasa ("BuChE") en un rango de concentración sub-micromolar. La acetilcolinesterasa ("AChE") predomina en un cerebro saluda Ible, considerándose que la BuChE desempeña un rol menor en la regulación de lo.s niveles de acetilcolina cerebral (ACh). Sin embargo, la actividad de BuChE. Incrementa de manera progresiva en pacientes con AD, en tanto que la actividad de AChE permanece sin cambio o se reduce [Geula C, Mesulam M. Cholinesterases and the pathjology of Alzheimer disease. Alzheimer Dis. Assoc. Disord. 1995; 9 Suppl. 2:23-8]. La investigación" indica que la BuChE se encontró en cantidades significativamente más elevadas en placas de AD que en placas de cerebros de personas sin demencia, agrupadas por edad. Además, se encontró que la BuChE altera la agregación del péptido beta-amilpide que es un factor neurotóxico, que induce procesos neurodegenerativos en las neuronas AD [Greig N., et.al. Selective butyrylcholinesterase inhibition elevates brain acety l'choline, augmente learning and lowers Alzhéimér beta-amyloid pe p ti de in rodent. Proc. Nati. Acad. Sci. U S A. 20oL; 102(47): 17213-8], Se ha demostrado que la BuChE puede desarro lar un rol .importante en la regulación in vivo de las concentraciones sinápticas de acetilcolina en los cerebros de pacientes AD. La inhibición de la BuChE cerebral representa un nuevo objetivo de fármaco para el tratamiento AD [Greig N.H., Lahiri D. K., Sambamuri K. Butyrylcholinesterase: an importa. nt new target in Alzheimer's disease therapy. Int. Psychogeriatr. 2002; 14 Suppl 1:77-91], In vitro, se ha encontrado de manejra sorpresiva que, algunos compuestos ilustrativos son antagonistas funcionales de los receptores de serotonina 5-Ht6, que son nuevos objetivos atractivos para el mejoramiento de la cognición [Mitchell E.S., Neum.aier J.F. 5-HT6 receptors: a novel target for cognitive enhancement. Pharmacol. Ther. 2005; 108(3):320-33], Los receptores 5-HT6 están presentes de manera selectiva en regiones cerebrales que están asociadas con el aprendizaje y la memoria, y el bloqueo de su función incrementa la neurotransmisión ACh y glutamate-mediada, y mejora los procesos cognitivos [Holenz J.,.et.al. Medicinal chemistry strategies to 5-HT6 receptor ligands as potential cognitive enhancers and antiobesity agents. DDT 2006; 7/8:283-96], ' In vivo, se ha demostrado que álgunos de los compuestos ilustrativos previenen el desarrollo de convulsión NMDA-inducida en animales experimentales. Los resultados indican fuertes propiedades anti-NMDA de los compuestos ilustrativos! probados.

In vivo, algunos de los compuestos ilustrativos demostraron propiedades de mejoramiento de la memoria en la tarea de reconocimiento de objeto ("ORT") como se describe en la presente, la cual es un método para medir una foj Irna específica de memoria episódica en roedores. Los ratones .tratados con solvente en la condición de intervalo Ínter prueba de 1 hora de retención no discriminaron entre el objeto novedoso y el objet.o familiar (el índice de discriminación fue igual a cero), en tanto que los ratones tratados con los compuestos ilustrativos (en dosis que varían désde 0.010 mg/kg - 5.0 mg/kg) alcanzaron un buen djesempeño de memoria en el reconocimiento de objeto. j Por lo tanto, los compuestos ilustrativos pueden ser utilizados' de manera ventajosa para el tratamiento de padecimientos neurológicos, enfermedades neurodegenerativas y obesidad, por ejemplo AD o HD, debido a su actividad antagonista combinada única sobre los receptores NMDA, acción antagonista sobre los receptores 5-HT6 y propiedades inhibidoras sobre la! enzima BuChE.

Resultados Biológicos Prueba de reconocimiento de objeto como un método para investigar sobre los efectos de ciertos Jompuestos ilustrativos en la memoria en ratones. La prueba de reconocimiento de objeto se basa en un comportamiento espontáneo de. ratas y ratones para explorar un objeto novedoso o una nueva ubicación de un objeto con .mayor frecuencia que uno familiar. Esta prueba fue desarrollada primero para ratas [Ennaceur A., Delacour J. A new one-trial test for neurobiological studies of memory ¡n rats. 1: behavioral data. Behav. Brain Res. 1988; 31:47-59], Posteriormente, varios investigadores han demostrado- que la prueba también es adecuada para determinar el desempeño de memoria en ratones [por ejemplo, Dodart. J.,C, Mathis C, Ungerer A. " Scopolamine-induced déficits in a two-t'rial object recognition task in mice. NeuroReport 8 (1997), pp. 11,73- 1178]. La prueba de reconocimiento de objeto está dividida en dos pruebas: una prueba de reconocimiento de un una nueva ubicación de un objeto que es utilizada para investigación sobre la memoria ¦ espacial, y una prueba de reconocimiento de un nuevo objeto que es usada para investigación sobre la memoria no espacial. Se utilizaron ratones hembra de veinte (20) a veintidós (22) meses de edad (ratones viejos) y ratones machos de cuatro (4) a seis (6) meses de edad (ratones jóvenes) de la cepa C57BL/6.' Se colocaron cinco animales por jaula bajo un ciclo de luz normal (12 x 12, encendido a las 8:00 AM) y con libre acceso al agua y el alimento. La caja de entrenamiento estaba hecha de vidrio orgá¡nico blanco opaco con dimensiones de 48 x 38 x 30 cm. Se utilizaron; dos clases de artículos de plástico como objetos de reconocimiento: un cilindro blanco (diámetro . = 4 cm, altura = 2.8 cm), y un prisma triangular, negro (2.5 x 2.5 x 3.5 cm y altura = 3.4 cm). Se tuvo cuidado de evitar los estímulos olfatorios mediante la limpieza. cuidadosa de los objetos y de la caja. Dos (2) a tres (3) minutos antes de que los ratones fueran colocados dentro de la caja, ios objetos y la-caja fueron enjuagados con etanol al 85%. Los animales fueron colocados siempre en la parte media de la caja :de entrenamiento. · 1 ' Haciendo referencia de nuevo a las FIGURAS 1A-1B y las FIGURAS 2A-2C, se. inyecto por vía intraperitoneal a los ratones algunos de los diferentes compuestos ilustrativos mostrados en 'las figuras, o sólo con el vehículo (solvente) en el mismo volumen, úna hora antes de la prueba de recordatorio. . ¡ Procedimientos.

Adaptación. 1 El primer día del experimento, los ratones fueron manejados en el cuarto de investigación durante 20 a 30 minutos para'' aclimatación.

Después, uno por uno, los ratones fueron habituados a la caja de entrenamiento mediante colocación dentro de la caja sin nin:gún objeto durante 20 minutos para explorar la caja, y fueron regresados a sus jaulas. ¡ Entrenamiento (adquisición). I Al siguiente día, los mismos ratones fueron llevados al cuadro de investigación. Después de 20-30 minutos de aclimatación, ; cajda ! ' i ratón fue colocado en una caja vacía durante'un minuto. Después, ;el ratón fue retirado de la caja de entrenamiento. Dos objetos ¡déntic'os 'i (cilindros blancos) fueron colocados aproximadamente a 5 pulgadas de distancia desde dos esquinas adyacentes de la caja < e inmediatamente un animal fue devuelto a la caja. El tiempo 'de exploración de cada objeto individual se registró, por separado con' la ayuda de dos cronómetros electrónicos (hasta en 0.1 segundos). 'Se ; ; I observe el comportamiento de cada animal a través de un espejo. ¡La Í exploración fue definida operativamente como el dirigir la nariz hacia el objeto desde una distancia menor a 2 cm, o tocar el objeto con la nariz. La duración de la prueba de entrenamiento fue de 5, Í0,' 15 y, 20 minutos. ' ' ! ¡ Prueba (recordatorio).

Las condiciones de intervalo de retraso, (el intervalo entre el entrenamiento y la prueba) fueron 1, 4 o -24 horas, dependiendo :del problema experimental. La prueba se realizó de la misma manera que el entrenamiento, . aunque uno de los dos objetos familiares ifue cambiado por el nuevo objeto (prisma negro). Cuando mejoró el reconocimiento de una-nüeva localización' de un objeto, se ejecutó la misma secuencia experimental, excepto que sólo se cambió la localización de uno de los objetos familiares en la sesión de'prueba. ¡ Análisis estadístico. i Se midió una variabilidad significativa de los tiempos de exploración de objeto entre los animales.. La relación de objetos^ tiempos de exploración se calculó como sigue: cada uno de los tiempos de exploración de objeto se dividió entre la suma de ambos tiempos de exploración del objeto durante la misma sesión ¡de prueba, y se expresó en porcentaje: . :' (tnew X 100%) / (tfem„,er '+ tnew) : ¡ I Los datos fueron analizados utilizando un análi;sis unidireccional de varianza seguido pos una prueba-t de Student. ! Los siguientes ejemplos demuestran los resultados obtenidos: Ejemplo 3. ! La FIGURA 3 muestra los resultados de prueba obtenidos con respecto a la influencia de un compuesto ilustrativo sobre! la exploración de objeto en ubicaciones familiares y nuevas. Un. grupo de. control de los ratones exploró el objeto en una ubicación famijliar durante aproximadamente 49.1 +/- 7.4% de un período, y exploró el objeto en Una nueva ubicación durante aproximadamente 50.9 +/-7.4% del período cuando fue sometido a prueba 48 horas después del entrenamiento. Estos resultados indican que los ratones1 no recordaron en donde habían sido colocados los objetos- durante el entrenamiento. En contraste a un grupo de control', los ratones. tratados antes del entrenamiento con 0.1. mg/kg del comp-uesto 5 dedicaron menos tiempo a la exploración del objeto en una ubicación familiar, aproximadamente 43.0 +/- 4.6% del período, y más tiempo a la exploración del objeto en una nueva ubicación, 57 +/- 4.6% del período (P = 0.003). Esto indica que en este grupo de prueba, los animales recordaron el objeto en una ubicación familiar, y pasaron más tiempo explorando el' objeto ^ubicado en un Nuevo sitio. Los resultados con la inyección de 0.02 mg/kg del compuesto 5 jno difirieron significativamente del control. 1 Ejemplo 4 · ¦ . ¡ La FIGURA 4. muestra los resultados, de prueba obtenidos con respecto a la influencia de otro compuesto ilustrativo sobre la exploración de objeto en ubicaciones familiares y nuevas. Se encontró la misma actividad elevada para el compuesto 8. Los animales tratados con 0.1 mg/kg del compuesto 8 pasaron 60.8 + /- 6.9% de su tiempo de exploración de objeto con el objeto en una nueva ubicación, y 39.2 +/- 6.9% de su tiempo de exploración de objeto con el objeto en una ubicación familiar (P = 0,002) Sin embargo, la relación de discriminación de los ratones tratados con 0.02 mg/kg no fue diferente de aquella de los ratones de control. Estos resultados sugieren que los compuestos 5 y ,8 poseen alta influencia de activación sobre el aprendizaje y la memoria, la cual perdura no menos de 48 horas después del entrenamiento.

Estos compuestos parecen ser aproximadamente 25 veces más efectivos que la memantina como agentes estimulantes de , la memoria (y la memantina. es un tratamiento médico bien conocido para la enfermedad de Alzheimer).

Ejemplo 5. ¡ Inhibición de receptor de serotonina-6 · (5-TH6), y butinilcolin esterasa (BuChE) como una determinación, del beneficio potenciali de los compuestos en la terapia de enfermedades neurodegenerativas.

Procedimiento.

Prueba de butirilcolin esterasa. ' ' : La prueba se condujo como sigue [Ellman G. L., Courtney K;D., Andrés Jr.V., and Featherstone R.N. A new and rapio! colorime'tric determination of acetylcholinesterase activity. · Biochem. Pharmacol. 1961, 7:88-95]: ' ; Fuente de enzima: * suero humano; ! Sustrato: 560 uM S-Butiriltiocolina ' Vehículo: 1 % DMSO; ! Tiempo de pre-incubación de la enzima: 15 min at 25 C; 1 Tiempo de incubación del compuesto ; con la enzima: · 2 horas a 25° C I Concentración de compuesto: 10 uM; j i Regulador de incubación: 0.1 M regulador de '< ¡ fosfato de sodio, pH 7¡.4, 0.5% Tween 20; ' | i Método de cuantificación: cuantificación I ? espectrofotométrica de I tiocolina. ! Enlace con receptor 5-HT6.

La prueba se condujo como sigue [Monsma F.J., Jr, Shen jY., . ' K Ward R.P., Hamblin M.W., and Sibley D. R. Cloning and Expressjion I of a novel serotonin receptor with high affinity for tricyclic psycbotropic drugs. Mol. Pharmacol. Í993, 43: 320-327]: i Fuente de receptor células HeLa recombinantes humanas;! i Ligando: 1.5nM [3H]-ácido dietilamidlisérgico j (LSD); Vehículo: 1% DMSO; ; Tiempo de incubación: 2 horas a 37° C; I Regulador de incubación 50 mM Tris-HCI, pH 7.4, 150 mM¡ NaCI, 2 mM ácido ascórbico, 0.001 % BSA; · | Concentración de compuesto: 10 uM; ·.

Ligando no-especí.f ico: 5 uM serotonina (5-HT); Método de cuantif icación : enlace de radioligand Se considera que los distintos compuestos ilustrativos novedosos y no obvios (y los métodos nuevos y no obvios para elaborarlos) aquí presentados tienen propiedades, in vitro e in v^ivo : ? funcionales drásticamente mejoradas sobre un compuesto existejnte comúnmente conocido como dimebon. Entre otras cosas, j se considera' que los compuestos aquí presentados tienen una vilda-media mejorada y/o sostenibilidad en los mamíferos (por ejemplo, seres humanos), lo que representa un logro importante para! el establecimiento y mantenimiento de cantidades terapéuticas activas y/o farmacológicamente efectivas dentro de mamíferos. En consecuencia, los datos en base a dimebon pueden proporcionar ulna guía para, los diferentes métodos ilustrativos descritos én |ia presente, que incluyen métodos de combinación o de "coctel novedosos y no obvios o métodos que involucran los compuestos aquí presentados y compuestos ya conocidos, tales como donepez Dimebon fue noticia por su habilidad para mejorar a pacientes AD durante por lo menos 12 meses en las cinco medicion'es cognitívas [véase por ejemplo, "Chicago: Dimebon Safe for 18 Meses," Esther Landhuis and Gabrielle Strobel, Alzheimer Researich Forum, 8 Agosto 2008]. Los datos de la Conferencia Internacional sobre la Enfermedad de Alzheimer (ICAD por sus siglas en inglés), efectuada en julio de 2008 incluyeron información que sugiere q'ue dimebon actúa para estabilizar la mitocondria. Dicho objetivo jes I distinto de aquellos de los fármacos AD actualmente disponibles que funcionan para inhibir las acetilcolinesterasas (enzimas que interrumpan un neutrotransmisor de aprendizaje/memoria clave) o los receptores NMDA (proteínas cuya hiperactivación puede ser la base de la degeneración de las células colinérgicas). Asimismo, Dimebon actúa sobre esas moléculas como se demuestra en un trabajo previo de científicos rusos (Bachurin et al , '2001; Bachurin et al., 2003). Debido a que la potencia es un factor crítico, en el desarrollo del fármaco,, los investigadores en Medivation han confirmado los hallazgos inicíales de acetilcolinesterasa en dos conjuntos *de experimentos — uno que utiliza enzima recombinante y otro que utiliza muestras de sangre recientes a partir de tres voluntarios. :En estos estudios de seguimiento presentados en ICAD, dimebon bloqueó la actividad de acetilcolinesterasa con una concentración inhibidora media-máxima ( I C 50 ) en el rango 31-72 micro-molar ; — varias miles de veces menor que aquella de donepézil, el fármaco anti-colinesterasa ampliamente prescrito. En los en.sayos de enlace de receptor NMDA, la constante de inhibición de dimebon (KÍ- una i medida de potencia relacionada, definida como la concentración :de compuesto dé prueba requerida para enlazar 50 por ciento de receptores en ausencia de agonista) fue de 97 micro-molar, jen comparación con 0.5 micro-molar para el fármaco AD memantina. , De manera adicional, dimebon funciona de manera diferente a los fármacos AD actuales ya que su perfil de efecto colateraTen estudios con seres humanos muestra que menos del 3 por cíento'de I los participantes en pruebas clínicas que tomaron dimebon reportaron problemas gastrointestinales. En contraste, se considera que más del 20 por ciento de los pacientes AD que toman donepézil de manera rutinaria experimentan esos síntomas. La implicación ¦ de la mitocondria como uno de los mecanismos del dimebon fue sugerida por las pruebas de inhibición de enzima, pruebas j de actividad en base a célula, perfil de quinasa, y servicios de tamizado de compuesto comercial. Previamente, la disfunción mitocond;rial estuvo vinculada al envejecimiento y las enfermedades neurodegenerativas, incluyendo la enfermedad de Alzheimer. Al igual que las plantas de energía primaria de la célula, la mitocondria produce compuestos tóxicos que pueden acelerar la producción de la placa beta amiloide- en modelos de ratón AD. En ratones transgé-nicps con un defecto de enzima mitocondrial que conduce a la acumulación i de aldehidos dañinos, activó la neurodegeneración relacionada con la edad y condujo a una muerte prematura. I- I Las actividades mitocondrial-es potenciales de dimebon han ; i sido estudiadas por el investigador que trata células 'de neuroblastoma humano SK-N-SH con ionomicina, la cual reduce ¡el gradiente electroquímico a través de las membranas mitocondrialés, activando la apoptosis. La función mitocondrial se determinó utilizando JC-1, un tinte que tiene una fluorescencia de color rojo cuando se acumula en la mitocondria sana y de color verde cuando I es forzado a permanecer en el citoplasma debido a potenciales ;de membrana mitocondrial colapsados. Esto permitió a l los i I investigadores medir la salud mitocondrial como un porcentaje de las I. células que tienen fluorescencia en color rojo contra el color verde. La proporción de rojo/verde de células impactadas por la ¡onomícijna se redujo a un 70%en comparación con aquel de las células ;no tratadas. Las concentraciones picomolares de dimebon llevaron: la relación hasta 85-90 por ciento de las células de control en un mo|do i dependiente de la concentración. Como se midió en pruebas MTT (bromuro de 3-[4,5-dimetil-2-tiazol¡l]-2,5-difen¡l-2H-tetrazolio), i el tratamiento con ionomicina redujo la viabilidad celular hasta 40 por ciento de las células de control, y el dimebon picomolar restauró; la supervivencia hasta 75-85 por ciento. Experimentos separados examinaron la función mitocondrial en una línea relaciona con ¦ ·.. ¦ . ¦ . neu robl astom a (SH-SY5Y) utilizando una .sonda diferente (tetrametil rodamin metil éster,. o TMRM), Con éste, los investigadores reportaron también que el pre-tratamiento con el dimebon nano-mojar protegió a las células del estrés inducido con ' ionomicina. En conjunto, estos hallazgos sugieren que los efectos estabilizadores ¡de la mitocondria del dimebon son potentes y se correlacionan conj la viabilidad celular mejorada. ¦ . ¡ Debido a que la mitocondria dendrítica puede ser importante para la plasticidad sináptica, un proceso crítico para el aprendizaje y i la memoria, los investigadores examinaron los efectos de dimebon ,en ¦ ·. i el crecimiento de neuritas. En neuronas corticales de rata primaria cultivadas durante tres días ya sea con factor neurotrófico derivado de cerebro (BDNF) o dimebon, concentraciones picomolares !de dimebon incrementaron el crecimiento neurítico como lo hizo 'también el BDNF aplicado en sus concentraciones de máxima efectividad; 1 De igual manera, en ICAD, Jeffrey' Cummings de la Universidad de California, Los Angeles, presentó resultados clínicos de ! la extensión de seis meses de duración, con etiqueta abierta de! la prueba de, Fase 2 de dimebon en Rusia, que llevó el periodo !de exposición . al fármaco a 18 meses en estos pacientes con ÁD 'de ligera a moderada. En esta extensión, los pacientes que habían estado tomando dimebon durante la fase ciega continuaron con dimebon. Los pacientes que habían sido estudio aleatorizado con¡tra placebo y cruzado con dimebon. Esto creó, en el lapso de 18 mes¡es, una mezcla de personas que habían estado con dimebon durantej.18 meses con una ligera mejoría sobre la- línea base en 12 meses,, y lias otras personas quienes habían declinado en el grupo que recioió placebo durante 12 meses. Las personas que habían estado 'c|on dimebon mostraron deterioro después de alrededor de 12 meses, aunque concluyeron el plazo de 18 meses sólo con un cambio ADÁS- Cog de aproximadamente menos 2 desde el inicio de la prueba. ¡ Al parecer se mantuvieron bien, es decir, en torno a la línea base, 'en una escala de clasificación psiquiátrica. Las personas que habían esta"do previamente con placebo durante 18 meses permanecier ion estables en el nivel inferior de. la función cognitiva en el cual habían i terminado sus 12 meses con placebo. Los resultados tampoco indicaron problemas de seguridad o de tolerancia. El único efejcto colateral reportado con mayor frecuencia en el grupo de tratamiento • I fue la depresión. Esta depresión fue auto-reportada, no medida ¡por • . · I transición de permeabilidad mitocondriai representan un complejo ¡de multiproteína que incluye componentes tanto de la membrana interna como externa. Los poros regulan el transporte de iones y péptidos dentro y fuera de la mitocondria. Su regulación está asociada con ¡un mecanismo general para mantener la homeóstasis Cá(2 + ) en la célula ¦ ! y la apoptosis. Varios factores patológicos pueden - inducir .una activación patológica de la transición de permeabilidad y una apertura irreversible de los poros de la mitocondria. Este evejito puede ser una etapa principal en el desarrollo de la neurotoxicidad y í la neurodegeneración. Su investigación explora el efecto de MPP'( + ) j y fragmento beta-amiloide 25-35, que son neurotoxinas que son ' ¦ ! conocidas por generar un síndrome similar al mal de Parkinson y| la enfermedad de Alzheimer, en la regulación de los poros mitocondriaies. Ambas neurotoxinas inducen la apertura de los poros mitocondriaies, lo cual se evita por medio de la ciclosporina A, ¡ un inhibidor específico de la transición de permeabilidad. El efecto ¡de MPP( + ) y beta-amiloide también se puede evitar pór medio ;de ,un precursor endógeno de melatonina, N-acetilserotonina, por medio'de una tacrina de medicación contra la enfermedad de Alzheimer, y por ¦ i medio de dimebon, el cual está en desarrollo como un agente para la terapia de la enfermedad de Alzheimer y otros tipos de demencia. ! Su investigación ilustra que el efecto sobre los poros mitocondriaies puede ser un aspecto importante del mecanismo de neurotoxicidad.

Las sustancias que pueden prevenir la apertura de los po os i mitocondriaies inducida por neurotoxinas pueden preservar la función ¦ i I mitocondrial y, por tanto, pueden tener el potencial como agentes neuroprotectores.

Ejemplo 7.

Se considera que los diversos compuestos ilustrati os novedosos y no obvios (y los métodos novedosos y no obvios para elaborarlos) aquí presentados han mejorado drásticamente las propiedades in vitro e in vivo funcionales sobre un compuesto existente conocido de manera común como dimebon. Entre ot^as cosas, se considera que los compuestos aquí presentados tienen una vida media mejorada y/o sostenibilidad en mamíferos (por ejempjlo, seres humanos), lo que representa un logro impresionante paral el establecimiento y mantenimiento de cantidades terapéuticas activas o farmacológicamente efectivas en mamíferos. En consecuencia, los datos en base a dimebon pueden brindar una guía para los diversos métodos ilustrativos descritos en la presente. i Dimebon tiene una actividad contra calcio, en particular se]ha encontrado que es capaz de inhibir la entrada de iones de callcio dentro de las células nerviosas, lo cual fue inducido por la activación. de receptores glutamato. Por otra parte, se sabe que ; la i hiperacumulación de iones de calcio en las células induce üna cascada de procesos degenerativos, lós cuales acompañan ! el proceso de envejecimiento y un desarrollo de las enfermedades degenerativas correspondientes. Una alteración en la homeósta:sis de' • ! calcio es la base para la llamada teoría de envejecimiento ! y I demencia debidos al calcio [Calcium Hypothesis of Ageing and Dementia.. Ann. N.Y. Acad. Sd., 1994, v. 747]. ! i ' Se descubrió también que dimebon desaceleró jel envejecimiento, prolongó la vida, redujo la ocurrencia de pérdida del cabello y redujo las cataratas en- ratones añosos. Por lo tanto, debido a las nuevas e inesperadas propiedades que no provienen de la estructura de dimebon, los compuestos descritos en la presente I pueden ser utilizados como geroprotectores. La definición ¡de • i "actividad geroprotectora", representa una actividad biológica q;ue desacelera el en ejecimiento y/o prolonga la vida y/o incrementa o mejora la calidad de vida a través de una disminución en la cantidad y/o el nivel de patologías o condiciones que no amenazan la vida aunque están asociadas con el proceso de envejecimiento y que son comunes para personas ancianas. Las patologías o condiciones que no amenazan la vida pero que están asociadas con el proceso 'de i envejecimiento incluyen patologías o condiciones tales como pérdida de la vista (cataratas), deterioro del integumento dermat o capilar I (alopecia), y una disminución de peso asociada con la edad debida la I 'muerte de células musculares y/o grasas. i Métodos tales como un método para desacelerar el envejecimiento pueden comprender la administración a un individuo i (tal como un paciente humano) de una herram ie.nta farmacológica que contiene la cantidad efectiva de dimebon en una dosis de entre 0.1 y 10 mg/kg del peso corporal, por lo menos una vez al día y durante un período que se requiera para lograr el" efecto terapéutico. En otras variaciones, la dosis diaria (u otra frecuencia de dosis) 'es entre aproximadamente 0.1 y aproximadamente 8 mg/kg; o ent're aproximadamente 0. 1 hasta aproximadamente 6 mg/kg; o entre aproximadamente 0 1 y aproximadamente 4 mg/kg; o entre aproximadamente 0 1 y aproximadamente 2 mg/kg; ' o entre aproximadamente 0 1 ¦ y aproximadamente 1 mg/kg; o .entre aproximadamente 0 5 y aproximadamente 10 mg/kg; o entre aproximadamente 1 y aproximadamente 10 mg/kg; o entre aproximadamente 2 y aproximadamente 10 ' mg/kg; o entre aproximadamente 4 hasta . aproximadamente 10 mg/kg; o entre aproximadamente 6 hasta aproximadamente 10 mg/kg; o entre aproximadamente 8 hasta aproximadamente 10 mg/kg; o ; entre aproximadamente 0 1 y aproximadamente 5 mg/kg; o . entre aproximadamente 0 1 y .aproximadamente 4 mg/kg; o : entre aproximadamente 0 5 , y aproximadamente 5 mg/kg; o en:tre aproximadamente 1 y aproximadamente 5 mg/kg; o ; enjtre aproximadamente 1 y aproximadamente 4 mg/kg; o e'nitre aproximadamente 2 y aproximadamente 4 mg/kg; o en'tre aproximadamente 1 y aproximadamente 3 mg/kg; . o enjtre aproximadamente 1 5 y aproximadamente 3 mg/kg; o entre aproximadamente 2 y aproximadamente 3 mg/kg; o entre I aproximadamente 0. 01 y aproximadamente 10 mg/kg; o entre aproximadamente 0.01 y 4 mg/kg; o entre aproximadamente 0'.01 mg/kg y 2 mg/kg; o entre aproximadamente 0.05 y 10 mg/kg; o entre ¦ · . ! aproximadamente 0.05 y 8 mg/kg; o entre aproximadamente 0.05 y, 4 mg/kg; .o entre, aproximadamente, 0.05 y. 4 mg/kg; o .entre aproximadamente 0.05 y aproximadamente 3 mg/kg; o entre mayor a una vez al día, como cualquiera de 2, 3, 4, 5, o más ,-de ¡5 dosis al día. La frecuencia de dosificación puede ser de 3 veces al i día. La frecuencia de dosificación puede ser una dosificación d tres veces a la semana. La frecuencia de dosificación puede ser u†a dosificación de cuatro veces a la semana. La frecuencia de dosificación puede ser una dosificación de dos veces a la semana.

La frecuencia de dosificación puede ser una dosificación mayon a una vez a la semana aunque menor que la dosificación diaria, la frecuencia de dosificación puede ser una dosificación de una vez |al mes. La frecuencia de dosificación puede ser una dosificación de dos I veces a la semana. La frecuencia de dosificación puede ser una dosificación mayor a una vez al mes aunque menor a la dosificación de una vez a la semana. La frecuencia de dosificación puede ser intermitente (por ejemplo, una dosificación diaria durante 7 días seguida por un período de 7 días sin dosis, repetida en cualquier ! período de 14 días, tales como.2 meses. 4 meses, 6 meses o más).

La frecuencia de dosificación puede ser continua (por ejemplo, ujna dosificación semanal durante semanas continuas). Se puede utilizar * i cualquiera de las frecuencias de dosificación con cualquier cantid'ad de dosis, por ejemplo, cúalquiera de las frecuencias de d osif icacijón ; i' puede emplear una cantidad de dosis de 10 mg/kg. Cualquiera de lias frecuencias de dosificación puede usar cualquiera de los compuestos ¦ i descritos en la presente junto con 'cualquiera de las dosis ac|uí descritas, por ejemplo, la frecuencia de dosificación puede ser u|ná dosis de 10 mg/kg tres veces al día de dimebon. ' ! I .' . ; ¦ [ . I ¦ i i '¦ ¦ I ' I Los compuestos como se describen aquí pueden s^r administrados a mamíferos en una forma de composiciones orales • ¦ . . I ; generalmente aceptadas-, tales como tabletas, tabletas recu biertajs, cápsulas de gel en un revestimiento . duro o suave, emulsiones suspensiones. Ejemplos de vehículos, los cuales pueden, s!er utilizados para la preparación de dichas composiciones, son lactosja, i almidón de maíz o sus derivados, talco, estearato o sus sales, : I etcétera. Los vehículos aceptables para cápsulas de gel con revestimiento suave son, por ejemplo, aceites vegetales, ceras, grasas, polióles semisólidos y líquidos, y así sucesivamente. Además, las .preparaciones farmacéuticas pueden contener conservadores, solubilizantes, estabilizadores, agentes de rje-humectación, emulgadores, edulcorantes, tintes, ajustadores, 'saljes para el ajuste de la presión osmótica, reguladores de pH, agentes 'de recubrimiento o antioxidantes. Las preparaciones pueden contener también otras sustancias, las cuales tienen valiosas propiedadjes terapéuticas. Las formas terapéuticas pueden estar representadas por una dosis estándar usual y pueden ser preparadas a través id e cualquier método farmacéutico conocido. Las formulaciones • i . adecuadas se pueden encontrar, ' por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, Mace Publishing Company, P h i la d el phji a , Pa., (2000), la cual está incorporada en la presente mediaijite i referencia. Cualquiera de los compuestos descritos en la presente > 1 I pueden ser formulados en una tableta en cualquier forma de dosis i descrita, por ejemplo,' dimebon o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se puede formular como una tableta de 10. mg.

Cualquiera de los compuestos aquí descritos se pueden formular ¡en ! cualquier dosis como una formulación de liberació sostenida. Varijas modalidades descritas en la presente proporciona también un medio de liberación sostenida, por ejemplo, un parche transdérmico. o un medio implantable que comprende como el ingrediente activo cualquiera de los compuestos aquí descritos en cualquier cantid!ad total de manera que el individuo recibe una cantidad efectiva 'de compuesto durante el período de liberación sostenida. El resultado I técnico, que se puede lograr después de la aplicación de la presente i invención, puede ser una desaceleración del envejecimiento, y/o u;na prolongación significativa de la vida, y/o un mejoramiento de la calidad de vida a través de una disminución en la cantidad y/ ¡ el nivel de intensidad de patologías. o condiciones que no amenazanj la vida aunque están asociadas con el proceso de envejecimiento, ¡t al I como pérdida de la vista (cataratas), deterioro del integumento i dermatocapilar (alopecia), una disminución de peso asociada con! la edad debido a muerte de células musculares y/o grasas. ¦ ¡ Las modalidades descritas en la presente suministran además equipos para llevar a cabo los diferentes métodos de la invención, ! los cuales comprenden uno o más compuestos. Los equipos pueden ¦ ¡ emplear cualquiera de los compuestos aquí descritos. Los equipos pueden ser utilizados para uno o más de los usos descritos en! la presente, y en consecuencia, puede contener instrucciones para uno o más de los siguientes usos: desaceleración del envejecimiento (tal ' I como retrasar el inicio o desaceleración del avance de ,una . ' I manifestación y/o patología o condición asociada con la edad¡ o relacionada con la edad), prolongación del tiempo de vida de un individuo, prolongación del tiempo de vida de células en jun individuo, mejoramiento de la calidad de vida de un individuo y reducción del riesgo de desarrollar una condición relacionada conj la ed'ad, tal como una patología o condición relacionada con la, ed¡ad que no amenaza l-a vida. i Los equipos comprenden de manera general empaque I adecuado. Los equipos pueden comprender uno o más recipientes que comprenden cualquier compuesto descrito en la presente. , Gajda componente (si hay más de un componente) puede ser empacado jen recipientes separados o ciertos componentes pueden ser combinados i en un recipiente en donde la reactividad cruzada y la vida útil !en almacenamiento lo permiten. Los equipos pueden incluir de modo opcional un conjunto de instrucciones, por lo general instrucciones por escrito, aunque también son aceptables medios 'de almacenamiento electrónico (por ejemplo, diskette magnético o disco óptico) que contiene instrucciones, con relación al uso del (los) componente(es) de los métodos de la presente invención, las instrucciones incluidas con el equipo incluyen generalmente información acerca de los componentes y su administración a |un i individuo. i j Ejemplo 8. i I I Se considera que los diversos compuestos ilustrativas novedosos y no obvios (y los métodos novedosos y no obvios para elaborarlos) aquí presentados tienen propiedades in vitro e in viívo funcionales drásticamente mejoradas sobre un compuesto existente i conocido de manera común como dimebon. Entre otras cosas, ¡se considera que los compuestos aquí presentados tienen una vida- media y/o sostenibilidad mejorada en mamíferos (por ejemplo, humanos), lo que representa un logro impresionante para establecer y mantener cantidades terapéuticas activas y/o farmacológicas efectivas en mamíferos. En consecuencia, los datos en base! a I dimebon pueden brindar una guía para los diversos métodos ilustrativos aquí descritos. : j I ¦ i ' Determinación de Propiedades de Bloqueo de Calcio (de I Dimebon. ' ¡ La evaluación de las propiedades de bloqueo de calcio ¡de dimebon se condujo con fracción-P'2 de sinaptosomas, que ¡se aislaron a partir del cerebro de ratas recién nacidas (8-11 · días) ' de acuerdo con el protocolo descrito en [Bachurín et al. N.eu roprotectiive and cognition enhancing properties of MK- 801 flexible analogs. Structure-activity relationships. // Ann.; N. Y. Acad. Sci., 2001, j v. 939, pp. 219-235]. En esta prueba, se determinó la habilidad de :los I compuestos para inhibir una captación específica de iones de .calejo a través de canales de' ión asociados con receptores glutamato. :- ! .i Las sinaptosomas fueron colocadas dentro del regulador de incubación A (132 mM NaCI, 5 m KCI, 5 mM HEPES) y fueron mantenidas a 0 grados Celsius ("C") durante todo el experimento. Se colocaron alícuotas de sinaptosomas (50 .mu.l) en el medio ?· que contiene los compuestos investigados y una preparación del calcio radioetiquetado, ,sup.45Ca. La captación de calcio fue estimulada • i mediante la introducción dentro del medio de los 20 .mu.l de ¡la ! I solución 10 mM de glutamato. Después de una incubación i'def 5 minutos a 30°C, se interrumpió la reacción mediante Una filtración a través de. filtros GF/B, los cuales fueron lavados tres veces con jel I. regulador de pH frío B (145 mM KCI, 10 mM tris, 5 mM trilon B). después, los filtros estuvieron sujetos al deterioro del calcio radioetiquetado. Se condujo la medición utilizando un' contador de centelleo 'SL-4000 I ntertechnic' . El tamizado inicial fue conducido ¦ · ¦ ·¦ I con una concentración de cada compuesto de 5 .mu.M. Se calculó i una captación de calcio específica utilizando la siguiente ecuacijón K(43/21) = [(Ca4-Ca3)/(Ca2-Cal)]*100% en donde: Cal es u|na captación de calcio en un experimento de control (sin glutamato; ni compuesto de prueba agregado); Ca2 es una cáptación de calcio, sólo 1 1 en presencia de glutamato (Captación de Calcio Glutamato Inducida — GICU); Ca3 es una captación de calcio en la presencia sólo de un compuesto, de prueba (sin glutamato agregado); Ca4 ¡es ! i ' una capación de calcio en presencia tanto de glutamato como ide compuesto de prueba. Dimebon exhibió pronunciadas propiedades de bloqueo de calcio. Esto sugiere que de acuerdo con la hipótesis de envejecimiento y demencia descrita con anterioridad, dimebon puede tener un potencial como un geroprotector. ¡ Ejemplo 9.

Se considera que los diversos compuestos ilustrativ s novedosos y no obvios (y los métodos novedosos y no obvios; para elaborarlos) aquí presentados tienen propiedades in vitro e in i| o funcionales drásticamente mejoradas sobre uh compuesto existente conocido de manera común como dimebon. Entre otras cosas, ¡se i . considera que los compuestos, aquí presentados tienen ' una ' vida-media y/o sostenibilidad mejorada en mamíferos (por ejempjlo, humanos), lo que representa un logro impresionante para establecer y mantener cantidades terapéuticas activas y/o farmacológicas efectivas en mamíferos. En consecuencia, los datos en base!, a i dimebon pueden brindar una guía para los diversos métodos ilustrativos aquí descritos. j . · ' : ¦ . ¦ ! I ¦ · .i I Datos sobre la Actividad de Dimebon como un Geroprotector Se evaluó a dimebon como un agente que prolonga la vida, y mejora la calidad de vida (caracterizado por los cambios en j la cantidad de patologías que acompañan al envejecimiento) en los animales de laboratorio. j Los experimentos se condujeron con ratones hembra C,57/,B, iniciando a partir de su edad de 12 meses. Los ratones fueron ! mantenidos en jaulas, 10 animales por cada jaula. Tanto el grupo de control como el experimental incluyeron 50 animales en cada grupo.

Los animales tuvieron libre acceso al alimento y al agua. ?? · ciclo I día-noche fue.de 12 horas. ! Antes del experimento, se midieron los consumos de agjua ¦ ¦ . i diario y semanal de los animales en una jaula. Se agregó Dimeb'on en el agua en una cantidad tal que cada animal consumiría 3 mg/jkg de Dimebon al día en promedio. Las botellas con agua que contiene j Dimebon fueron reemplazadas cada 7 días. Los animales en el grupo de control estuvieron recibiendo agua pura. ! . I Antes del experimento, todos los animales fueron pesados, yise determinó un peso promedio en cada grupo, cada jaula, así como^ el peso de todos los animales en cada jaula. Se determinó también; la condición de la .piel| pelo y ojos mediante inspección visual, lio a animales AU parecieron saludables y no tenían lesiones visibiles i antes del experimento. La evaluación de todos estos parámetros ifue conducida en una base mensual. : · Se calcularon estadísticas utilizando la prueba-Student T y ¡los criterios 'Chi-cuadrado'. < 1 ! ¦ ' .i . i I I Resultados. ¡ . · · ' i i Duración de la vida. ' . ! ; j I La evaluación del . parámetro de longitud de la vida se condujo empleando métodos utilizados en demografía. Este parámetro fue una probabilidad de muerte en cada grupo de edad. Durante todoj el i experimento el número de animales en el grupo experimental fue mayor que en el grupo de control. Dicho en otras palabras, j la probabilidad de muerte fue menor en todos los grupos de edad jen animales que estuvieron recibiendo dimebon. En los grupos de ed^d de 20-23 meses esta diferencia fue estadísticamente significativa (P<0.05).

Dinámicas en Peso de Animales. j ; l Se observó una disminución en el peso del animal durante toldo el experimento en el grupo de control. Esté es un proceso natural,! el cual es conocido como una recesión de peso relacionada con ! la edad. No se observó recesión de peso en el grupo de animale.s qiue fueron tratados con dimebon Sólo se observe recesión en peso en¡ el • i grupo experimental en los animales de 23 meses de edad, aunque, I incluso entonces, su peso fue superior en comparación con jos animales en el grupo de control. Se observará que, la variación i observada en peso no fue estadísticamente significativa (P>0.05). < I ¦ i Alteraciones de la Visión. ! í ¦ I i Las alteraciones de la visión, que aparecen como un desarrollo de cataratas en uno o ambos ojos, se observaron en el grupo ¡de control de animales en el segundo mes del experimento. La cantid'ad de animales con cataratas en este grupo estuvo creciendo cjon rapidez cada mes. La cantidad de animales que tuvieron cataratas jen el grupo que recibe dimebon fue significativamente menor (P<0.05, para ratones de 13 a 20 meses de edad). Iniciando en el mes 8,| la cantidad de animales que tienen cataratas también se incrementó jen el grupo experimental. El análisis comparativo entre los grupos jde control y experimental entre los meses 18 a 21 se complicó, debido a que muchos animales que tuvieron cataratas en el grupo de copyol murieron, en tanto que los animales en el grupo experimental aún permanecieron vivos. j :.' I ¦ Condición de Piel y Pelo. | Iniciando a partir del primer mes en el experimento,- ; se i observaron animales con alteraciones en su integumento derrho-' capilar, en la forma de áreas sin pelo o la llamada alopecia.; El tamaño de las áreas sin pelo varió desde 1 a 25% de la superfijcie corporal. Para el final del experimento, al igual que en el casojde i cataratas, la cantidad de animales que tuvieron alopecia en el grupo ; I de control declinó debido a la muerte de los animales, en tanto que los animales en el' grupo experimental aún estaban vivos. ¡ Los resultados sugieren que dimebon reduce estadí.sticamen'te de manera confiable la probabilidad de muerte de animales viejcjs. Además, existe una evidencia estadísticamente confiable de que hay una fuerte correlación entre la alimentación de los animales viejos con dimebon y la desaceleración del desarrollo de patologías no. fatales, tales como la pérdida de la visión y la alopecia. Una disminución en peso, la cual es una característica válida del envejecimiento, es significativamente menor en un grupo que r.ecijbe dimebon en comparación con el grupo de control. Por lo tanto, dimebon prolonga la vida y reduce la probabilidad de patologías relacionadas con la edad no fatales. Dicho de otra manera, mejora! la calidad de vida de animales viejos. El AU de lo anterior sugiere qjue dimebon, además de su habilidad para tener un potencial eh Jna : ¡ terapia de enfermedad de Alzheimer es un efectivo geroprotector. | Ejemplo 10. j . i ! Se considera que los diversos compuestos ilustrativos novedosos y no obvios (y los métodos novedosos y no obvios para elaborarlos) aquí presentados tienen propiedades in vitro e in vivo funcionales drásticamente mejoradas sobre un compuesto existente conocido de manera común como dimebon. Entre otras · cosas, ¡ se considera que los compuestos aquí presentados tienen una vida-media y/o sostenibilidad mejorada en mamíferos (por ejemplo, ¦: i humanos), lo que representa un logro impresionante para establecer y mantener cantidades terapéuticas activas y/o farmacoiógicjas I efectivas ,en mamíferos. En consecuencia, los datos en basej a dimebon pueden brindar una guía para los diversos mé odjos ilustrativos aquí descritos. ¡ Propiedades antihístam ¡nicas. , j i Debido a las propiedades antihistamínicas conocidas ide dimebon, los diversos compuestos ilustrativos aquí descritos pueden poseer también propiedades . similares, incluyendo el actuar como antagonistas de receptores de Ht y/o H3 histamina en mamíferos, i en donde actúan como autoreceptores en neuronas histami.nérlgicas presinápticas, y también controlar el recambio de histamina mediarite inhibición de retroalimentación de síntesis y liberación de histamina. i Se ha demostrado también que el. receptor H3 receptor inhibe presinápticamente la · liberación de un número de otrjos neurotransmisores (es decir, actúa como un heteroreceptor inhibidor) incluyendo, aunque probablemente sin limitase a dopamina, GABA, acetilcolina, noradrenalina, y serotonina. Este receptor ha- sildo propuesto como un objetivo para el tratamiento de desórdenes del s u e ñ o . . ! En tanto que se han descrito con anterioridad varias ¦ I modalidades, se comprenderá que han sido presentadas sólo' a · ¦¦ ¦ ¦ - I manera de ejemplo, y no como limitación. Por lo tanto, la extensión y alcance de una modalidad preferida no estarán limitados por ninguna de las modalidades ilustrativas antes descritas. . ¡

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES 1. Un compuesto que tiene una fórmula general: en donde | Rf es seleccionado a partir de un átomo de flúor, dos átomos jde flúor, p un grupo trifluorometilo; j R1 es seleccionado a partir de a H, (C 1 -C6)alquilo; hidroxi(G2- ! I C5)alquilo; (hetero)aril(C2-C6)alquilo; (C3-C7)c¡cloalqui'lo; ' (G2-C6)alquenilo; (C1 -C 6) a Iq u ¡ I s u If on i I o ; (hetero)arilsulfonilo; (¿1- C6)alcanoilo; (hetero)aroíio, (C1-C6) alcoxicarbonilo; (C1-06) i alcoxi(C 1 - C 6 ) a I q'u i I o (hetero)ariloxi(C1-C6)alquilo; , amino(C1-C6)alquilo, en donde el grupo amino puede ser opcionalmepte sustituido- por alquilo, (hetero)arilo, alquenilo,. alcanoilo, i (hetero)aroi o y otros; o un grupo CONR8R9 o S02NR8N9, en dondej R8 and R9 representan de- manera independiente hidrógeno o (C1-C6)alquilo, o R8 y R9 ju,nto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos pueden formar un grupo heterocíclico que contiene nitrógeno j o un grupo heteroariio que contiene nitrógeno; ¡ R2 y R3 son seleccionados de manera independiente a partí r¡ de I ' ? ? un hidrógeno y un grupo metilo; y j . R , R = R y R' cada uno representa, de manera independiente unos de los otros, un átomo de hidrógeno o de halógeno o un gruDO trifluorometilo. trifluorometoxi, ciano, hidroxilo, (C 1 -C6)alquilo, (dl- I C6)alcoxi, fenoxi, fenilo o piridilo opcíonalmente sustituido con ¡un átomo de halógeno o un grupo metilo, metoxi, ciano, trifluorometilo, 0 hidroxilo. : . ¡ 2. Un compuesto o una sal farmacológicamente aceptable del mismo, el cual es seleccionado a partir de un grupo que comprende: 5-[2-(5-fluoropiridin-3-il)etil]-2-metil-2,3,4,5-tetrahidro-1 H- j pirido [4,3-b] indol; | 5-[2-(5-fluoropiridín-3-il)etil]-2;8-d¡metil-2,3,4,5-tetrahidro-1 H'- x .i ' pirido[4,3-b]indol; j 8-fluoro-5-[2-(5-fluoropirid i n-3-il)etil]-2-meti 1-2,3,4, 5-tetrah id fo- 1 H-pirido[4 3-b]indol; .' j : 8-c1oro-5-[2-(5-flupropiridin-3-il)etil]-2-met¡ 1-2,3,4, 5-tetrah idro- 1 H-pirido[4,3-b]indol; | 8-bromo-5-[2-(5-fluoropirid¡n-3-il)etir]-2-metil-2,3,4,5-tet'rahidro- 1 H-pirido[43-b]indol; | i ' · ' I 5-[2-(5-fluoropirídin-3-il)etil]-8-metox¡-2-metil-2.3,4,5- ¡ . , j tetrahidro-1 H-pirido[4,3-b]indol; ; .. ¦ I 5-[2-(5-fluoropiridin-3-il)etil]-2,6,8-trimetil-2,3,4,5-tetrahidro- tH-pirido[4,3-b]indol; 6,8-difluoro-5-[2-(5-fluoropiridin-3-il)etil]-2-metil-2,3,4,5- ; | tetrahidro-1 H-pirido[4,3-b]indol; i • i 5-[2-(5-fluoropiridin-3-il)etil]-2-metil-8-(trifluorometil)-2,3,4;5-| tetrahidro-1 H-pirido[4,3-b]indol; j 5-[2-(5-fluoropiridin-3-il)etil]-2'-metil-8-(trifluorometoxi)-2,-3,4, -tetra hi d ro- 1 H-pirido[4,3-b]indol; ' 2-et¡l-5-[2-(5-fluoropiridin-3-¡l)etil]-2,3/4,5-tetrah¡dro-1H- ' ' ? I pirido[4,3-b]indol; , ' ' | 2-etil-5-[2-(5-fluoropiridin-3-il)etil]-8-metil-2,3,4,5-tetrahidro- 1 i 1 H-pirido[4.3-b]indol; r ¦ ¦ · I 2-bencit-5-[2-(5-fluoropiridin-3-il)etil]-8-metil-2,3,4,5-tetrahid o 1 H-p¡rido[4/3-b]indo ; | 2-etil-8-fluoro-5-[2-(5-fluoropiridin-3-il)etil]-2,3,4,5-tetrahidro 1 H-pirido[4,3-b]indol; 8-cloro-2-etil-5-[2-(5-fluoropiridin-3-il)etil]-2,3,4,5-tetrahidro-! '· ? 1 H-pirido[4,3-b]indol; — j 2-metil-5-{2-[6-(trifluorometil)piridin-3-yl]etil}-2,3,4,5- , | l' tetrahidro-1 H-pirido(4,3-b]indol; j 2¡8-dimetil-5-{2-[6-(trifluoromet¡l)pirid¡n-3-il]etil}-2,3,4,5- j tetrahidro-1 H-pirido[4,3-b]indol; j I . 8-fluoro-2-metil-5-{2-[6-(trifluorometil)piridin-3-il]etil}-2,3,4,5;-tetrahidro-1 H-pirido[4,3-b]indol; j 8-cloro-2-metil-5-{2-[6-(t,rifluorometil)piridin-3-il]etil}-2,3,4,5-i tetrahidro-1 H-pirido[4, 3-b]indol ¡ ] 2-metil-8-(trifluorometilo)-5-{2-[6-(trifluorornetil)piridin-3-il]etil} 2/3,4/5-tetrahidro-1 H-pirido[4,3-b]indol; \ 5-[2-(6-fluoropiridin-3-il)etil]-2-metil-2/3,4,5-tetrahidró-1 H-' j ¦ -¦ ¦ ? ¦ pirido[4,3-b]¡ndol; 5-[2-(6-fluoropiridm-3-il)etil]-2,8-dimetil-2,3;4, 5-tetrah id ró- 1 H pirído[4,3-b]indol; : 8-fluoro-5-[2-(6-fluoropiridin-3-il)et¡l]-2-metil-2,3,4,5-tetrahidrio 1 H-pir¡do[4,3-b]indol; 5-[2-(2-fluorop¡ridin-4-il)etil]-2-metil-2/3/4/5-tetrahidro-1 H- ' pirido[4,3-b]indol; 5-[2-(2-fluorop¡ridin-4-il)etil]-2/8-dimetil-2 , 3,4, 5-tetrah¡dro-1 H pir¡do[4,3-b]indol; 8-fluoro-5-[2-(2-fluorop¡ridin-4-il)etil]-2-metil-2!'3,4,5-tetrahidiío-1 H-piri.do[4/3-b]indol; ' . ! 5-[2-(3-fluoropiridin-4-il)etil]-2-metil-2, 3,-4, 5-tetrah idro-1 H- | I ' pirido[4,3-b]indol; j 5-[2-(3-f luoropirid i n-4-il')etil]-2,8-d i metí 1-2,3,4, 5-tetrah idro-1 H-pirído[4,3-b]indol; i 8-f!uoro-5-[2-(3-f luoropirid i n-4-il)et i I] -2 -metí 1-2,3,4, .5-tetrah idro-1 H-pirido[4,3-b]indol; ! 2-metil-5-{2-[2-(trifluorometil)pir¡diri-4-yl]etil}-2,3,4,5- ! I tetrahidro-1 H-pirido[4,3-b]indol; i i 2,8-dimetil-5-{2-[2-(trifluorometii)piridin-4-yl]etil}-2,3,4,5-; | tetrahidro-1 H-pirido[4,3-b]indol; !. 8-fluoro-2-metil-5-{2-[2-(.trifluorometil)piridin-4-il]etil}-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-pirido[4,3-b]indol; : j 2-{5-[2-(5-fluoropirid¡n-3-il)etil]-1 , 3 , 4 , 5-tet-ra hid ro-2H- . ¦ | I pirido[4,3-b]indol-2-il}etanol; ¡ 2-{5-[2-(5-fluoropiridin-3-i!)etil]-8-metil-1 ,3,4,5-tetrahidro-2H-¡ i pindo[4 , 3-b]indol-2-y I } e t á n o I ; o ' ¡ ¡ ' '¦ i 2-{8-fluoro-5-[2-(5-fluoropir¡din-3-il)etil]-1 , 3,4,5-tetrahidro-2H¡-pirido[4,3-b]indol-2-il}etanol. ¡ , 3. Un método para la síntesis de un derivado de p i r ¡ d p [4 ¡ 3-b]indol que' contiene flúor que tiene una fórmula general del i compuesto I, el método que comprende: ¡ agregar un p i r i d o [ , 3- b] i n d o I hidrogenado que tiene una fórmula general del compuesto II a una vinilpiridina reactiva que tiene una I fórmula general del compuesto III. , i 4. Un método para la síntesis de compuestos de la fórmula Ijde conformidad con la reivindicación 1 mediante adición nucleofílícaj de un pirido[4/3-b]indol hidrogenado de la fórmula II a una vinilpiridiina i reactiva de la fórmula III: i 5.' Una composición farmacéutica que comprende por lo ,??e??e I I uno de los compuestos de conformidad con la reivindicación 2 ó una sal, hidruro, solvato, isómero o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo, en asociación con un vehículo, diluyentej o excipiente farmacéuticamente aceptable del mismo, para tratamiento de un padecimiento mediado por receptor 5-HT6, receptor NMDA' y • i enzima BuChE. I 6. La composición farmacéutica de conformidad con ¡ la reivindicación 5, caracterizada , porque el padecimiento es ! l-a enfermedad de Al zhe i mer. j I 7. La composición farmacéutica de conformidad con j la ' I reivindicación 5,' caracterizada porque el padecimiento es j la i ¦enfermedad de.Huntington. ¡ 8. Un método para tratar un padecimiento- mediado por receptor 5-HT6, receptor NMDA, enzima BuChE o mitocondrial en jun mamífero, el método que comprende: , administrar al mamífero una cantidad efectiva de una ¡ composición farmacéutica que comprende por lo menos uno de ios / i I compuestos de la reivindicación 2. ; 9. El método de conformidad con- la reivindicación 8, el método que comprende además: ! ¦ ¦ I antagonizar el receptor 5-HT5: · j 10. El método de conformidad con la reivindicación 8, ' el método que comprende además: ¡ ' ' i antagonizar el receptor NMDA. ¡ 11. El método de conformidad con la reivindicación 8, ; el i • i I ¦ i método que comprende además: inhibir la enzima BuChE. 12. El método de conformidad con la reivindicación método que comprende además: I 5 · ali iar el padecimiento mitocondrial rnediado. | . . 13. El método de conformidad con la reivindicación 8, ¡el. i método qué comprende además: antagonizar un receptor histamina en él mamífero. ! 14. El método de conformidad con la reivindicación 13, |el 1 ' i 10. método que comprende además: ¡ ! Inhibir una liberación dé una histamina en el mamífero. I 15. El método de conformidad con la reivindicación '8, ¡ el método que comprende además: ¡ antagonizar un receptor H3 histamina en el mamífero. { 15 16. El método de conformidad con la reivindicación 8, ] el método que comprende además: ] administrar una cantidad efectiva de un a nti-depresi vo. ! 17. El método de conformidad con la reivindicación ;8,¡ el método que comprende además: i 20 administrar una cantidad efectiva de un segundo modulador para tratar padecimiento mediado por receptor 5-HT6, receptor NM DA, enzima BuChE o mitocondri al. j i 18. El método de conformidad con la reivindicación ¡17, i caracterizado porque el segundo modulador es donepezil. ! • ¦ i.- 25 19. El método de conformidad con la reivindicación ;17, I I caracterizado porque el segundo' modu.lador es memantina. I 20. El método de conformidad con la reivindicación 8, jel método que comprende además: ; I mejorar la habilidad cognitiva de un mamífero. ¡ ¦ ' · . I ¦ 21. El método de conformidad con la reivindicación ! i8,' caracterizado porque la cantidad efectiva es entre aproximadamente 1 mg a 1 gramo del compuesto administrado al mamífero durante ¡un periodo de veinticuatro horas. ¦ : j 22. Un método que comprende utilizar por lo menos uno de ijos compuestos de reivindicación 2 como una herramienta farmacológica para una investigación de un mecanismo de protección contra padecimientos de la neurodegeneración ín vivo o in vitro. : j 23. Un método seleccionado a partir del grupo que comprende: (1) desacelerar el envejecimiento en un, mamífero, el método qjue comprende administrar a un mamífero por lo menos uno- de jos compuestos de la reivindicación 2 o una sal, hidrato, solva^o, i isómero o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo, ;en i asociación con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable del mismo, efectivo para desacelérar- el en ejecimiento; (2) desacelerar la progresión de la pérdida ¡de ¦ · i cabello asociada con la edad en un mamífero, el método que I comprende administrar a un mamífero una cantidad de por lo, menos i uno de los compuestos de la reivindicación 2 o una sal, hi'drajto, solvato, isómero o profármaco farmacéuticamente aceptable ciel mismo, en asociación ¦ con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable del mismo efectivo para desacelerar ¡la progresión de la pérdida de cabello asociada con la edad; (;3) desacelerar la progresión de la pérdida de peso asociada con |la edad en un mamífero, el método que comprende administrar a un mamífero una cantidad de por lo menos uno de los compuestos de ! la ! reivindicación 2 o una sal, hidrato, solvato, isómero o profárma'co i . ¦ ' ¦ i farmacéuticamente aceptable del mismo, en asociación con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable del mismo efectivo para desacelerar la progresión de' a pérdida de' peiso ' ' I i asociada con la edad; (4) retrasar el inicio de una alteración !de i la visión asociada con la edad en un mamífero, el método q¡ue i comprende administrar a un mamífero una. cantidad de por lo menjos uno de los compuestos de la reivindicación 2 o una sal, hidrato, -i ' r i ! solvato, isómero o profármaco farmacéuticamente aceptable del ·· ' i mismo, en asociación , con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable del mismo efectivo para retrasan el inicio de una alteración de la visión relacionada con la edad; '(5) prolongar la duración de la vida de un mamífero, el método que comprende administrar a un mamífero una .cantidad de por lo menos i ¦ · uno de los compuestos de ra reivindicación 2 o una sal, hidra'to, ' ' ·· : ! solvato, isómero o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo, en asociación con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable del mismo efectivo para prolongar! la duración de la vida del mamífero; y (6) mejorar la calidad de vida de mamífero, el método que comprende administrar a un mamífero una cantidad de por lo menos uno de los compuestos de ¡la reivindicación 2 o una sal, hidrato, solvato, isómero- o pr.ofármalco farmacéuticamente aceptable del mismo, en asociación con ¡un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable leí mismo efectivo para mejorar la calidad de vida del mamífero.