MX2009000460A

MX2009000460A - Sal xinafoato de un compuesto de 5-oxazol-2-il-quinolina sustituido.

Info

Publication number: MX2009000460A
Application number: MX2009000460A
Authority: MX
Inventors: Pauline C Ting; Man Zhu; Joe F Lee; Kung I Feng; Michael R Reeder; Scott T Trzaska; Chen Mao; Dimitar L Filipov; Dimitrios Zarkadas
Original assignee: Schering Corp
Priority date: 2006-07-11
Filing date: 2007-07-10
Publication date: 2009-01-27
Also published as: RU2009104346A; AR061890A1; CA2657902A1; EP2038277A2; JP5097774B2; US7919505B2; NZ574070A; JP2009542811A; BRPI0712915A2; TW200813040A; PE20110391A1; CO6190533A2; WO2008008327A2; US20080027101A1; ECSP099045A; PE20080550A1; SG173366A1; CN101547920B; AU2007273007B2; AU2007273007A1

Abstract

La presente invención se refiere al compuesto de fórmula (ver fórmulas) a métodos para tratar enfermedades obstructivas de las vías aéreas superiores e inferiores utilizando dicho compuesto, a formulaciones que lo comprende, y a polimorfos y procedimientos de síntesis de las formas polimórficas.

Description

SAL XINAFOATO DE UN COMPUESTO DE 5-OXAZOL-2-IL-QUINOLINA SUSTITUIDO CAMPO TECNICO La presente invención se refiere a la sal xinafoato del etil éster de la 1 -[[5-(1 (S)-aminoetil)-2-[8-metoxi-2-(trifluorometil)-5-quinolil]-4-oxazolil]carbonil]-4(R)-[(ciclopropil-carbonil)amino]-L-prolina, a composiciones farmacéuticas que comprenden dicha sal, y a métodos para tratar enfermedades obstructivas de las vías aéreas superiores e inferiores por inhalación de dicha sal.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION Las fosfodiesterasas son conocidas por regular el AMP (por sus siglas en inglés) cíclico, y la fosfodiesterasa 4 (PDE4) ha demostrado ser el regulador predominante del AMP cíclico en el músculo liso respiratorio y las células inflamatorias. Los inhibidores de PDE4 son útiles en el tratamiento de una variedad de enfermedades, que incluyen enfermedades alérgicas e inflamatorias, diabetes, enfermedades del sistema nervioso central, dolor, y virus que producen TNF (por sus siglas en inglés). Se describen inhibidores de PDE4 de quinolilo amino-sustituidos en la Patente Estadounidense No. 5,804,588; se describen inhibidores de PDE4 de quinolilo sustituidos con sulfonamida en la Patente Estadounidense 5,834,485; y se describen inhibidores de PDE4 sustituidos con heteroarilo benzo-fusionado en la Patente Estadounidense 6,069,151. Se describen inhibidores de PDE4 de quinolilo sustituidos con oxazolilo en la PCT/US2005/017 34. El compuesto al que se hace referencia como Compuesto A en la presente, se describe como su base libre y formas salinas aceptables para uso farmacéutico en el documento WO2005/116009A1 en la página 95, Ejemplo 26-347 y en la página 228, Reivindicación 19; esas descripciones se incorporan a la presente como referencia en su totalidad.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION La presente invención provee la sal xinafoato del etil éster de la 1 -[[5-(1 (S)-aminoetil)-2-[8-metoxi-2-(trifluorometil)-5-quinolil]-4-oxazolil]carbonil]-4(R)-[(ciclopropil-carbonil)amino]-L-prolina. Es decir, el compuesto de Fórmula I: La invención además se refiere a un método para tratar enfermedades obstructivas de las vías aéreas superiores o inferiores en un paciente que necesita tal tratamiento que comprende administrar por inhalación a dicho paciente una cantidad eficaz del compuesto de fórmula 1. La invención además se refiere a un método para tratar enfermedades obstructivas de las vías aéreas superiores o inferiores en un paciente que necesita tal tratamiento que comprende administrar por inhalación a dicho paciente una cantidad eficaz de una combinación del compuesto de fórmula 1 y al menos un agente adicional útil para tratar enfermedades obstructivas de las vías aéreas superiores o inferiores. Otros agentes preferidos son los beta-agonistas, antagonistas muscarínicos o corticoesteroides. La invención además se refiere a una composición farmacéutica inhalable que comprende una cantidad eficaz del compuesto de fórmula I. La invención además se refiere a una composición farmacéutica inhalable que comprende una cantidad eficaz de una combinación del compuesto de fórmula 1 y al menos un agente adicional útil para tratar enfermedades obstructivas de las vías aéreas superiores o inferiores. La invención además se refiere a polimorfos cristalinos y a un pseudo-polimorfo (hidrato) del compuesto de fórmula I donde dicho polimorfo se selecciona del grupo integrado por: Forma 1 que exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo sustancialmente similar al patrón que se muestra en la FIG 1 ; Forma 2 que exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo sustancialmente similar al patrón que se muestra en la FIG 2; y Dihidrato Forma 1 que exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo sustancialmente similar al patrón que se muestra en la FIG. 3. Forma 3 que exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo sustancialmente similar al patrón que se muestra en la FIG 10. La presente invención además provee un polimorfo cristalino de Forma 1 de fórmula I que exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo que tiene localizaciones de máximos característicos de 6.1 ; 7.7; 13.0 y 15.9 grados 2T. En otra modalidad, el polimorfo cristalino de Forma 1 de fórmula I exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo que tiene localizaciones de máximos característicos de 5.6; 6.1 ; 7.7; 13.0; 15.9; 17.8; 18.4 y 26.1 grados 2T. En otra modalidad, el polimorfo cristalino de Forma 1 de fórmula I exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo que tiene localizaciones de máximos característicos de 5.6; 6.1 ; 7.7; 9.2; 13.0; 14.2; 15.9; 17.8; 18.4; 20.5; 22.9 y 26.1 grados 2T. Esta invención además provee un polimorfo cristalino de Forma 2 de fórmula I que exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo que tiene localizaciones de máximos característicos de 10.6, 13.6, 19.1 , y 21 .2 grados 2T. En otra modalidad, el polimorfo cristalino de Forma 2 de fórmula I exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo que tiene localizaciones de máximos característicos de 10.6; 13.6; 17.9; 18.8; 19.1 ; 20.2; 21.2 y 23.9 grados 2T. En otra modalidad, el polimorfo cristalino de Forma 2 de fórmula I exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo que tienen localizaciones de máximos característicos de 9.4; 10.6; 13.6; 17.9; 18.8; 19.1 ; 20.2; 21 .2; 23.9; 26.0; 26.6 y 28.1 grados 2T. Esta invención además provee a Dihidrato cristalino Forma 1 de fórmula I que exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo que tiene localizaciones de máximos característicos de 8.2; 16.5; 18.5; y 24.9 grados 2T. En otra modalidad, el Dihidrato cristalino Forma 1 de fórmula I exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo que tiene localizaciones de máximos característicos de 5.5; 8.2; 14.3; 16.5; 16.9; 18.5; 20.6; y 24.9 grados 2T. En otra modalidad, el Dihidrato cristalino Forma 1 de fórmula I exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo que tiene localizaciones de máximos característicos de 5.5; 7.2; 8.2; 14.3; 14.7; 16.5; 16.9; 18.5; 20.6; 24.1 ; 24.9 y 26.8 grados 2T. Esta invención además provee un polimorfo cristalino de Forma 3 de fórmula I que exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo que tiene localizaciones de máximos característicos de 4.6; 7.9; 12.1 ; y 18.9 grados 2T. En otra modalidad, el polimorfo cristalino de Forma 3 de fórmula I exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo que tiene localizaciones de máximos característicos de 4.6; 7.9; 9.1 ; 12.1 ; 13.7; 15.8; 16.5; y 18.9 grados 2T. En otra modalidad, el polimorfo cristalino de Forma 3 de fórmula I exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo que tiene localizaciones de máximos característicos de 4.6; 7.9; 9.1 ; 12.1 ; 13.7; 15.8; 16.5; 18.9; 20.0; 23.9; 24.3; y 25.7 grados 2T. La invención además provee dos procedimientos para preparar la sal xinafoato polimorfo Forma 1 del compuesto A.

Compuesto A que comprende los etapas de: a) disolver el compuesto A en etanol caliente y agregar ácido xinafóico mientras se continúa calentando la mezcla; b) agregar etanol y agua adicionales, y calentar la mezcla hasta casi ebullición; c) filtrar la mezcla caliente, luego enfriar lentamente hasta temperatura ambiente y permitir que la mezcla repose a temperatura ambiente durante toda la noche hasta que los cristales de la Forma I precipiten; y d) enfriar el filtrado hasta 0°C y filtrar los cristales de la Forma 1.

Segundo método Compuesto A que comprende los etapas de: a) agregar tolueno y metanol al Compuesto A y ácido xinafóico y mezclar, formando una suspensión; b) calentar dicha suspensión hasta aproximadamente 62°C mientras se mezcla, dando una mezcla homogénea; c) destilar dicha mezcla homogénea a presión atmosférica, enfriar la mezcla destilada hasta aproximadamente 50°C, sembrando dicha mezcla destilada con semillas de la Forma 1 del Compuesto A, obteniéndose cristales en una suspensión; d) agitar dicha suspensión durante aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 50°C y enfriar la suspensión hasta aproximadamente 10°C; e) agregar tolueno adicional a la suspensión enfriada y destilar al vacío, luego agregar tolueno adicional y agitar durante aproximadamente 20 minutos a aproximadamente 20°C, formando material sólido; f) recolectar los sólidos resultantes utilizando un secador agitado al vacío formando una torta húmeda; lavar dicha torta húmeda con tolueno y secar a aproximadamente 50°C durante aproximadamente 3 horas sin agitación, luego a aproximadamente 80°C durante aproximadamente 12 horas con una agitación de aproximadamente 20 R.P.M., luego a aproximadamente 80°C durante aproximadamente 12 horas con una agitación de aproximadamente 60 R.P.M., todo al vacío.

Tercer Método Compuesto A que comprende los etapas de: a) disolver el compuesto A y ácido xinafóico en metanol caliente por separado; b) filtrar ambas soluciones calientes y mezclar las dos soluciones; c) someter a reflujo la mezcla y destilar el exceso de metanol; y d) enfriar la mezcla hasta 0°C formando un precipitado y filtrar los cristales de la Forma 1. La invención además provee un polimorfo cristalino Forma 1 del compuesto A que es el producto del procedimiento anterior. La invención además provee un procedimiento para preparar el polimorfo Forma 2 de la sal xinafoato del Compuesto A: Compuesto A que comprende los etapas de: a) disolver el compuesto A en metanol caliente y agregar ácido xinafóico mientras se continúa calentando la mezcla; b) agregar agua, y calentar la mezcla hasta casi ebullición; c) filtrar la mezcla caliente, luego enfriar lentamente hasta temperatura ambiente y permitir que la mezcla repose a temperatura ambiente durante toda la noche hasta que los cristales de la Forma 2 precipiten; y d) enfriar el filtrado hasta 0°C y filtrar los cristales de la Forma 2. La invención además provee un polimorfo cristalino Forma 2 de la sal xinafoato del compuesto A que es el producto del procedimiento anterior. La invención además provee un procedimiento para preparar el Dihidrato de la Forma 1 a partir del polimorfo de Forma 1 de la sal xinafoato del compuesto A: Compuesto A que comprende los etapas de: a) El agregado de agua durante la formación de la sal xinafoato es necesario para obtener la forma cristalina. Suspender el polimorfo Forma I de la sal xinafoato del compuesto A en una mezcla de agua y metanol; b) la suspensión se agitó durante 21 horas, los sólidos se aislaron por centrifugación de la suspensión luego de decantar el sobrenadante; c) Los sólidos se secaron al vacío a temperatura ambiente. La invención además provee un Dihidrato de la Forma 2 cristalino de la sal xinafoato del compuesto A que es el producto del procedimiento anterior. La invención además provee un procedimiento para preparar el polimorfo Forma 3 de la sal xinafoato del Compuesto A: Compuesto A que comprende los etapas de: a) combinar una mezcla del compuesto A y ácido xinafóico en 2-propanol; b) calentar la mezcla a reflujo y agregar 2-propanol adicional; mantener la mezcla a reflujo durante aproximadamente 1 hora, luego enfriarla hasta temperatura ambiente; c) filtrar la mezcla, lavar los sólidos con 2-propanol, secar al vacío. La invención además provee un polimorfo cristalino Forma 3 de la sal xinafoato del compuesto A que es el producto del procedimiento anterior. La invención además provee una forma purificada del polimorfo Forma 1 del compuesto de fórmula G. La invención además provee una forma purificada del polimorfo Forma 2 del compuesto de fórmula I. La invención además provee una forma purificada del Dihidrato de la Forma 1 del compuesto de fórmula I. La invención además provee una forma purificada del polimorfo Forma 3 del compuesto de fórmula I. La invención además reivindica un método para tratar enfermedades obstructivas de las vías aéreas superiores o inferiores en un paciente que necesita tal tratamiento que comprende administrar por inhalación a dicho paciente una cantidad eficaz del polimorfo Forma 1 del compuesto de fórmula I, como así también una composición farmacéutica inhalable que comprende una cantidad eficaz del polimorfo Forma 1 del compuesto de fórmula I y un vehículo aceptable para uso farmacéutico. La invención además reivindica un método para tratar enfermedades obstructivas de las vías aéreas superiores o inferiores en un paciente que necesita tal tratamiento que comprende administrar por inhalación a dicho paciente una cantidad eficaz del polimorfo Forma 2 del compuesto de fórmula I, como así también una composición farmacéutica inhalable que comprende una cantidad eficaz del polimorfo Forma 2 del compuesto de fórmula I y un vehículo aceptable para uso farmacéutico. La invención además reivindica un método para tratar enfermedades obstructivas de las vías aéreas superiores o inferiores en un paciente que necesita tal tratamiento que comprende administrar por inhalación a dicho paciente una cantidad eficaz del Dihidrato Forma 1 del compuesto de fórmula I, como así también una composición farmacéutica inhalable que comprende una cantidad eficaz del Dihidrato Forma 1 del compuesto de fórmula I y un vehículo aceptable para uso farmacéutico. La invención además reivindica un método para tratar enfermedades obstructivas de las vías aéreas superiores o inferiores en un paciente que necesita tal tratamiento que comprende administrar por inhalación a dicho paciente una cantidad eficaz del polimorfo Forma 3 del compuesto de fórmula I, como así también una composición farmacéutica inhalable que comprende una cantidad eficaz del polimorfo forma 3 del compuesto de fórmula I y un vehículo aceptable para uso farmacéutico.

BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS La FIG. 1 es un gráfico de un patrón de difracción de rayos x de polvo (PXRD) de la Forma 1 del compuesto de fórmula I, generado utilizando un difractómetro de rayos X. El gráfico representa la intensidad de los máximos definida por recuentos por segundo versus el ángulo de difracción 2 T en grados.

FIG. 2 es un gráfico de un patrón PXRD de la Forma 2 del compuesto de fórmula I, generado utilizando un difractómetro de rayos X. El gráfico representa la intensidad de los máximos definida por recuentos por segundo versus el ángulo de difracción 2 T en grados. La FIG. 3 es un gráfico de un patrón PXRD del Dihidrato de la Forma 1 del compuesto de fórmula I, generado utilizando un difractómetro de rayos X. El gráfico representa la intensidad de los máximos definida por recuentos por segundo versus el ángulo de difracción 2 T en grados. La FIG. 4 es una copia del espectro de RMN del compuesto 10, el producto del Etapa 8. La FIG. 5 es una copia del espectro de RMN del compuesto 11 , al que se hace referencia además como Compuesto A. La FIG. 6 es un gráfico el análisis térmico de la Forma 1 del compuesto de fórmula I generado por Calorimetría de Barrido Diferencial (DSC -por sus siglas en inglés). La FIG. 7 es una traza del análisis térmico de la Forma 2 del compuesto de fórmula I generado por Calorimetría de Barrido Diferencial (DSC). La FIG. 8 es una traza del análisis térmico del Dihidrato de la Forma 1 del compuesto de fórmula I generado por Calorimetría de Barrido Diferencial (DSC). La FIG. 9 es una traza del análisis gravimétrico térmico del Dihidrato de la Forma 1 del compuesto de fórmula I generado por Análisis Termogravimétrico (TGA). La FIG.10 es un gráfico de un patrón PXRD del Forma 3 del compuesto de fórmula I, generado utilizando un difractometro de rayos X. El gráfico representa la intensidad de los máximos definida por recuentos por segundo versus el ángulo de difracción 2 T en grados. La FIG. 11 es un gráfico del análisis térmico de la Forma 3 del compuesto de fórmula I generado por Calorimetría de Barrido Diferencial (DSC).

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION La base libre de fórmula I, en adelante denominada Compuesto A y con la estructura se describe como Ejemplo 26-381 en PCT/US2005/017 34, incorporada a la presente como referencia. El compuesto de fórmula I, la sal xinafoato del compuesto A, es una sal cristalina, no higroscópica y exhibe tres polimorfos y un hidrato. El compuesto de fórmula I tiene un perfil físico y farmacocinético inesperadamente superior para tratar enfermedades de las vías aéreas superiores e inferiores cuando se administra por inhalación en comparación con el Compuesto A u otras sales del compuesto A. Las sales fosfato, maleato y succinato son amorfas; el tartrato es cristalino, pero es higroscópico; el fumarato tiene formas cristalinas, pero esas formas son hidratos inestables. De este modo, la sal xinafoato es inesperadamente superior a otras sales para utilizar en una formulación inhalada comparada con otras sales. Más aún, la sal xinafoato exhibe una inhibición 25 veces mejor de las células inflamatorias mediante la administración ¡ntra-traqueal comparada con la administración oral. Se halló que existen tres polimorfos cristalinos distintos y un hidrato del compuesto de fórmula I. Estas cuatro formas se denominan en adelante Formas 1 , 2, 3 y Dihidrato de la Forma 1 . Dado que el uso de este compuesto tiene la forma de un agente farmacéutico terapéuticamente activo, las formas aceptables para uso farmacéutico más estable del compuesto de fórmula I serán de gran interés. La Forma 1 es la forma preferida para utilizar en el método de esta invención. El polimorfismo puede caracterizarse como la capacidad de un compuesto de cristalizar en diferentes formas cristalinas, mientras mantiene la misma fórmula química. Un polimorfo cristalino de una sustancia fármaco dada es químicamente idéntico a cualquier otro polimorfo cristalino de esa sustancia fármaco al contener los mismos átomos unidos uno con otro en la misma forma, pero difiere en sus formas cristalinas, que pueden afectar una o más propiedades físicas, tales como estabilidad, solubilidad, punto de fusión, densidad aparente, propiedades de flujo, biodisponibilidad, etc. Tal como se utiliza en la presente especificación, los siguientes términos, a menos que se especifique lo contrario, deben entenderse que tienen los siguientes significados: "Paciente" incluye tanto seres humanos como otros animales. "Mamífero" incluye seres humanos y otros animales mamíferos. "Polimorfo" significa una forma cristalina de una sustancia que es distinta de otra forma cristalina pero que comparte la misma fórmula química. "Polimorfo de la invención" significa un polimorfo cristalino del compuesto de fórmula I. "Alcohol" significa un compuesto orgánico que contiene un grupo hidroxilo (-OH). "Excipiente" significa una sustancia esencialmente inerte utilizada como diluyente o para dar forma o consistencia a una formulación. "Eficaz" o " eficaz para uso terapéutico" describe un polimorfo de un compuesto o una composición de la presente invención eficaz como un inhibidor de PDE4 y de este modo producir el efecto terapéutico, de alivio, inhibidor o preventivo deseado. "Cantidad eficaz" o "cantidad eficaz para uso terapéutico" describe una cantidad de polimorfo o una composición de la presente invención eficaz como inhibidor de PDE4 y de este modo producir ei efecto terapéutico, de alivio, inhibidor o preventivo deseado. La enfermedad obstructiva de la vías respiratorias superiores e inferiores tratada por el compuesto de fórmula I incluye asma, COPD (enfermedad pulmonar obstructiva crónica), bronquitis crónica, fibrosis quística, rinitis alérgica, rinitis no alérgica, rinosinusitis, enfermedad respiratoria en adultos, síndrome disneico respiratorio agudo, virus respiratorios, tos, neumonitis intersticial, sinusitis crónica, obstrucción del flujo de aire, hiper receptividad de las vías aéreas (es decir, hiper reactividad de la vía aérea), bronquiectasia, bronquiolitis, bronquiolitis obliterante (es decir, síndrome de bronquiolitis obliterante), disnea, enfisema, hipercapnea, hiperinflación, hipoxemia, inflamaciones inducidas por hiperoxia, fibrosis pulmonar, hipertensión pulmonar, enfermedad de las vías aéreas pequeñas, sibilancia y resfríos. Los compuestos de fórmula I son preferentemente útiles para tratar asma, COPD, tos, obstrucción del flujo de aire, hiper-receptividad de las vías aéreas (es decir, hiper-reactividad de las vías aéreas), bronquiolitis, bronquitis crónica, enfisema, fibrosis pulmonar, hipertensión pulmonar, enfermedad de las vías aéreas pequeñas, sibilancia y rinitis alérgica. Con mayor preferencia, los compuestos de fórmula I son útiles para tratar COPD y asma. Otros agentes para tratar una enfermedad de la vía aérea obstructiva (por ej., COPD o asma) para uso en combinación con el compuesto de fórmula I se seleccionan del grupo integrado por: esteroides (por ej. glucocorticoides), inhibidores de 5-lipoxigenasa, agonistas adrenoceptores ß-2, agonistas de receptores a-adrenérgicos, antagonistas M1 muscarínicos, antagonistas M3 muscarínicos, antagonistas M2 muscarínicos, antagonistas LTB4, antagonistas de cisteínil leucotrienos, broncodilatadores, inhibidores de PDE4, inhibidores de elastasa, inhibidores de MMP, inhibidores de fosfolipasa A2, inhibidores de fosfolipasa D, antagonistas de histamina H1 , antagonistas de histamina H3, agonistas de dopamina, agonistas de adenosina A2, NK1 , antagonistas de NK2 y NK3, agonistas de GABA-b, agonistas de nociceptina, expectorantes, agentes mucolíticos, descongestivos, estabilizantes de mastocitos, antioxidantes, anticuerpos anti-IL-8, anticuerpos anti-IL-5, anticuerpos anti-lgE, anticuerpos anti-TNF, IL-10, inhibidores de moléculas de adhesión, hormonas del crecimiento y otros inhibidores de PDE4. Para usar en combinación con los compuestos de fórmula I, ejemplos no limitativos de antihistamínicos incluyen astemizol, azatadina, azelastina, acrivastina, bromfeniramina, certirizina, clorfeniramina, clemastina, ciclizina, carebastina, ciproheptadina, carbinoxamina, descarboetoxiloratadina, doxilamina, dimetindeno, ebastina, epinastina, efletirizina, fexofenadina, hidroxizina, cetotifen, loratadina, levocabastina, mizolastina, equitazina, mianserina, noberastina, meclizina, norastemizol, picumast, pirilamina, prometazina, terfenadina, tripelennamina, temelastina, trimeprazina y triprolidina.

Ejemplos no limitativos de antagonistas del receptor H3 de histamina incluyen: tioperamida, impromidina, burimamida, clobenpropit, impentamina, mifetidina, S-sopromidina, R-sopromidina, SKF-91486, GR-175737, GT-2016, UCL-1 199 y clozapina. Otros compuestos se pueden evaluar fácilmente para determinar la actividad en los receptores H3 mediante métodos conocidos, que incluyen el ensayo de membrana de cerebro de cobayo y el ensayo de contracción del íleo neuronal del cobayo, los cuales se describen en la Patente Estadounidense 5,352,707. Otro ensayo útil emplea membranas de cerebro de rata y se describe en West et al., "Identification of Two-H3-Histamine Receptor Subtypes," Molecular Pharmacology, Vol. 38, páginas 610-613 (1990). El término "inhibidor de leucotrienos" incluye cualquier agente o compuesto que inhibe, restringe, retarda o interactúa de otro modo con la acción o actividad de los leucotrienos. Ejemplos no limitativos de inhibidores de leucotrieno incluyen montelukast y su sal de sodio; ácido 1 -(((R)-(3-(2-(6,7-difluoro-2-quinolinil)etenil)fenil)-3-(2-(2-hidroxi-2-propil)fenil)tio)metil-ciclopropan-acético, y su sal de sodio, descritos en la Patente Estadounidense 5,270,324; ácido 1 -(((1 (R)-3(3-(2-(2,3-diclorotieno[3,2-b]piridin-5-il)-(E)-etenil)fenil)-3-(2-(1 -hidroxi-1 -metiletil)fenil)propil)tio)met¡l)ciclo-propanacét¡co y su sal de sodio, descritos en la Patente Estadounidense 5,472,964; pranlukast; zafirlukast; y ácido [2-[[2(4-ter-butil-2-tiazol¡l)-5-benzofuranil]oximetil]fenil]acético, descritos en la Patente Estadounidense 5,296,495.

Ejemplos no limitativos de agonistas del receptor ß-adrenérgico incluyen: albuterol, bitolterol, isoetarina, mataproterenol, perbuterol, salmeterol, terbutalina, isoproterenol, efedrina y epinefrina. Ejemplos no limitativos de agonistas del receptor a-adrenérgico incluyen arilalquilaminas, (por ej., fenilpropanolamina y pseudofedrina), imidazoles (por ej., nafazolina, oximetazolina, tetrahidrozolina, y xilometazolina), y cicloalquilaminas (por ej., propilhexedrina). Un ejemplo no limitativo de un estabilizante de células mastocitos es nedocromil sódico. Un ejemplo no limitativo de un expectorante es guaifenesin. Ejemplos no limitativos de descongestivos son pseudoefedrina, fenilpropanolamina y fenilefrina. Ejemplos no limitativos de otros inhibidores de PDE4 incluyen roflumilast, teofillina, rolipram, piclamist, cilomilast y CDP-840. Ejemplos de esteroides incluyen prednisolona, fluticasona, triamcinolona, beclometasona, mometasona, budisamida, betametasona, dexametasona, prednisona, flunisolida y cortisona. Ejemplos no limitativos de antagonistas del receptor de NK-i , NK2 y NK3 taquinina incluyen CP-99,994 y SR 48968. Ejemplos no limitativos de antagonistas muscarínicos incluyen ipratropio bromuro y tiatropio bromuro. Ejemplos no limitativos de agonistas de GABAB incluyen baclofen y ácido 3-aminopropil-fosfínico. Los agonistas de dopamina incluyen quinpirol, ropinirol, pramipexol, pergolide y bromocriptina. Los "inhibidores de 5-lipoxigenasa" incluyen cualquier agente o compuesto que inhibe, restringe, retarda o interactua de otro modo con la acción enzimática de la 5-lipoxigenasa. Ejemplos no limitativos de inhibidores de 5-lipoxigenasa incluyen zileuton, docebenona, piripost, ICI-D2318, y ABT 761. El compuesto de fórmula I se prepara mediante el procedimiento delineado en los Esquemas 1 o 2 y se detalla en los siguientes Ejemplos 1 o 2. En el Ejemplo 1 y cualquier parte de la solicitud, Et significa etilo, Me significa metilo, THF es tetra h id rotura no, DMF es ?,?-dimetilformamida, t-BOC y BOC significan t-butoxicarbonilo, RT es temperatura ambiente, HATU es hexafluorofosfato de /\/-[(d¡metilamino)-1 H-1 ,2,3-triazolo[4,5-¿)]pirid¡n-1-ilmetileno]-A/-metilmetanaminio, /V-óxido.

ESQUEMA 1 Etapa 9 Fórmula I A (compuesto 11) EJEMPLO 1 Etapa 1 A una suspensión agitada por medios mecánicos del compuesto 1 (100.6 g, 0.767 moles) in EtOH (1000 mi) y enfriada hasta 0 °C se agregó SOCI2 (136.9 g, 1.15 moles, 84.0 mi) gota a gota mediante un embudo de adición de modo que la temperatura interna fue <15°C. La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 2.5 h, luego se enfrió hasta 0°C. Se agregó éter (1000 mi), y precipitó un sólido blanco. El sólido se aisló por filtración al vacío y se lavó con éter. El producto 2 (sal de HCI) se secó en estufa de vacío para dar 1 6.3 g (97%) de un sólido blanco. EM (M+1 ): m/e 160. 1H-RMN (DMSO) d 1.25 (t, 3H), 2.05 (m, 1 H), 2.20 (m, 1 H), 3.05 (d, 1 H), 3.40 (dd, 1 H), 4.20 (q, 2H), 4.45 (m, 2H), 5.65 (ancho s, 1 H).

Etapa 2 A una solución del compuesto 2 (sal de HCI, 146.2 g, 0.747 moles) disuelto en CH2CI2 (1600 ml) y EtOH (100 mi) y enfriada hasta 0°C se agregó Et3N (1 13.4 g, 1.12 moles, 156.2 ml). Se agregó anhídrido de t-BOC (195.6, 0.90 moles) en porciones. La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 15 min, luego a RT durante 16 h. La mezcla resultante se concentró hasta un volumen de ~ 800 ml y se lavó con agua. La solución orgánica se secó (MgSO4), se filtró, y se concentró. La purificación por cromatografía de gel de sílice (eluyente: 20% de EtOAc-CH2CI2) dio el producto 3 (193.7 g, 100%) en forma de un aceite color amarillo. EM (M+Na): m/e 282. H-RMN (CDCI3) d 1.30 (t, 3H), 1 .45 (s, 9H), 1.75 (m, 1 H), 2.10 (m, 1 H), 2.30 (m, 1 H), 3.45 y 3.55 (d, 1 H para dos rotámeros), 3.65 (dd, 1 H), 4.25 (m, 2H), 4.40 y 4.45 (t, 1 H para dos rotámeros), 4.55 (ancho s, 1 H).

Etapa 3 A una solución del compuesto 3 (36.5 g, 0.141 moles) y trifenilfosfina (46.2 g, 0. 76 moles) disuelto en THF seco (1000 mi) y enfriada hasta 0 °C se agregó dietil azodicarboxilato (30.7 g, 0.176 moles) gota a gota mediante un embudo de adición. La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 5 min, luego se agregó LiBr (61.1 g, 0.704 moles) en una porción. La mezcla resultante se agitó a RT durante 16 h. El solvente se evaporó, se agregó agua (1500 mi), y la solución acuosa se extrajo con CH2CI2. Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgS04), se filtraron, y se concentraron. La purificación por cromatografía de gel de sílice (eluyente: 2% de EtOAc - CH2CI2 hasta 5% de EtOAc - CH2CI2) dio el producto 4 (31.8 g, 70%) en forma de un aceite color amarillo. EM (M+1 ): m/e 322 y 324. H-RMN (CDCI3) 51 .30 (m, 3H), 1.45 y 1 .50 (s, 9H para dos rotámeros), 2.45 (m, 1 H), 2.85 (m, 1 H), 3.75 (m, 1 H), 4.05 - 4.40 (m, 5H).

Etapa 4 A una solución del compuesto 4 (41.2 g, 0.128 moles) disuelto en DMSO seco (300 mi) se agregó NaN3 (9.15 g, 0.141 moles). La mezcla de reacción se agitó a RT durante 16 h. Se agregó agua (300 mi), y la solución acuosa se extrajo con éter. Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO ), se filtraron, y se concentraron para dar el producto 5 (36.4 g, 100%) en forma de un aceite. EM (M+Na): m/e 307. 1H-RMN (CDCI3) 61.30 (t, 3H), 1.45 y 1.50 (s, 9H para dos rotámeros), 2.20 (m, 1 H), 2.35 (m, 1 H), 3.50 y 3.60 (m, 1 H para dos rotámeros), 3.75 (m, 1 H), 4.15 - 4.45 (m, 4H).

Etapa 5 A una solución del compuesto 5 (36.4 g, 0.128 moles) disuelto en THF (800 mi) se agregó 10% de catalizador de paladio sobre carbono (10.0 g). La mezcla de reacción se agitó sobre un agitador Parr bajo 2.81 kg/cm2 (40 psi) de presión de hidrógeno durante 16 h. El catalizador se eliminó por filtración y se lavó con isopropanol. El filtrado se concentró. La purificación por cromatografía de gel de sílice (eluyente: CH2CI2 luego 0% de MeOH con NH3 - CH2CI2) dio el producto 6 (24.2 g, 73%) en forma de un sólido color gris claro. EM (M+1 ): m/e 259. 1H-RMN (CDCI3) .61.30 (t, 3H), 1.45 y 1.50 (3, 9H para dos rotámeros), 2.00 (m, 1 H), 2.15 (m, 1 H), 3.10 y 3.20 (m, 1 H para dos rotámeros), 3.70 (m, 2H), 4.20 (m, 2H), 4.35 y 4.40 (m, 1H para dos rotámeros).

Etapa 6 A una solución del compuesto 6 (12.0 g, 0.0464 moles) disuelto en CH2CI2 seco (300 mi) se agregó Et3N (9.4 g, 0.093 moles, 13.0 mi) luego cloruro de ciclopropancarbonilo (5.3 g, 0.051 moles, 4.64 mi). La mezcla de reacción se agitó a RT durante 16 h. Se agregó agua (200 mi), y la solución acuosa se extrajo con CH2CI2. Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgS04), se filtraron, y se concentraron. La purificación por cromatografía de gel de sílice (eluyente: 5% de MeOH con NH3 - CH2CI2) dio el producto 7 (14.3 g, 94%) en forma de un aceite. EM (M+Na): m/e 349. 1H-RMN (CDCI3) .50.75 (d, 2H), 1.00 (ancho s, 2H), 1.30 (t, 3H), 1.35 (m, 1 H), 1.45 y 1.50 (s, 9H para dos rotámeros), 2.25 y 2.30 (m, 2H para rotámeros), 3.30 y 3.45 (dm, 1 H para rotámeros), 3.80 (m, 1 H), 4.15 - 4.45 (m, 3H), 4.55 (m, 1 H), 5.95 y 6.10 (singulete ancho, 1 H para rotámeros).

Etapa 7 A una solución del compuesto 7 (40.0 g, 0.123 moles) disuelto en CH2CI2 (550 mi) se agregó HCI 4N en dioxano (153 mi, 0.613 moles). La mezcla de reacción se agitó a RT durante 4 h luego se concentró para dar el producto 8 (32.2 g, 100%) en forma de una espuma incolora. EM (M+1 ): m/e 227. 1H-RMN (CDCI3) d 0.75 (d, 2H), 0.90 (m, 2H), 1 .30 (t, 3H), 1.55 (m, 1 H), 2.35 (m, 1 H), 2.55 (m, 1 H), 3.70 (m, 2H), 4.25 (m, 2H), 4.75 (m, 2H), 8.35 (d, 1 H), 9.05 (ancho s, 1 H).

Etapa 8 A una mezcla del compuesto 8 (5.5 g, 20.8 mmoles) y ácido carboxílico 9 (10.0 g, 20.8 mmoles) en DMF seco (300 mi) se agregó tamices 3 A (10.0 g), Et3N (6.3 g, 62.3 mmoles, 8.7 mi), luego HATU (15.8 g, 41.6 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a RT durante 21 horas luego el solvente se concentró. Se agregó agua (400 mi), y la solución acuosa se extrajo con CH2CI2. Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgS04), se filtraron, y se concentraron. La purificación por cromatografía en gel de sílice (eluyente: 20% de EtOAc - CH2CI2 hasta 60% de EtOAc - CH2CI2) dio el producto 10 (14.0 g, 98%) en forma de una espuma incolora. EM (M+1 ): m/e 690. Ver FIG 3 para el espectro de RMN.

Etapa 9 A una solución del compuesto 10 (42.1 g, 0.061 moles) disuelto en CH2CI2 (600 mi) y enfriado hasta 0°C se agregó 4 N HCI en dioxano (76 mi, 0.305 moles). La mezcla de reacción luego se agitó a RT durante 5 h y luego se concentró. El producto bruto se disolvió en 1 :1 EtOH:H20 (120 mi) y se hizo básico (pH = 9 - 10) con 25% de NaOH acuoso. Se agregó CH2CI2 (700 mi), y la mezcla de reacción se agitó hasta que todos los sólidos se disolvieron. Las capas se separaron, y la solución acuosa se extrajo con CH2CI2. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO4), se filtraron, y se concentraron. Se agregó CH2CI2 adicional, y la mezcla se concentró nuevamente. Se agregó éter, y la mezcla se concentró para dar el compuesto 11 (Compuesto A) (34.4 g, 96%) en forma de un sólido color amarillo claro. EM (M+1 ): m/e 590. Ver FIG. 4 para el espectro de RMN. En el Ejemplo 2 y en otras partes de la solicitud, Et significa etilo, Me significa metilo, ETOH significa etanol, RMN significa Resonancia Magnética Nuclear, THF es tetrahidrofurano, DMF es ?,?-dimetilformamida, t-BOC y BOC mean t-butoxicarbonilo, RT es temperatura ambiente, DMSO significa dimetil sulfóxido, Et3N significa trietilamina, NaHMDS es sodiobis(trimetilsilil)amida, HOBT es hidroxibenzotriazol, EDCI HCI es clorhidrato de 1-etil-3-[3-dimetilamino)propil]-carbodimida, NMP es N-metilpirrolidinona, ca es arca (aproximadamente), KF es Karl Fisher, y EtOAc es acetato de etilo.

ESQUEMA 2 EJEMPLO 2 Etapa 1 Se cargó ácido (S)-2-ter-butoxicarbonilam¡no-prop¡ónico, 8.8 kg (46.5 moles, 2 eq), en un reactor Hastelloy de 50 I equipado con un termopar, entrada de N2 y tanque de alimentación. Se agregó tetrahidrofurano seco (90 litros) (THF, KF <0.05%) al lote y se cargó para disolver. Se agregó diciclohexilamina, 8.5 kg (46.9 moles, 2 eq), al lote y se cargó lentamente durante aproximadamente 30 minutos en una escala de temperatura entre -5 y 5°C. El lote se agitó durante aproximadamente 15 minutos en un escala de temperatura entre -5 y 5°C. Se agregó cloruro de trimetilacetilo, 5.7 kg (47.3 moles, 2 eq), al lote y se cargó lentamente durante aproximadamente 30 minutos en un escala de temperatura entre -5 y 5°C. El lote se agitó durante aproximadamente 3 horas en un escala de temperatura entre -5 y 5°C. Se agregó heptano (27 litros) al lote y se cargó, seguido de 4.5 kg de celite. El lote se filtró bajo N2, y la torta del filtro se lavó con 30% v/v de THF en heptano. El filtrado se concentró. El filtrado y los lavados contenían el lote al vacío hasta un volumen de lote de aproximadamente 36 litros. Se agregó THF (27 litros) al lote y se cargó. La temperatura del lote se ajustó hasta aproximadamente 20 hasta 30°C. El lote se muestreó para KF (<0.06 ppm). El lote fue una solución mezclada en THF anhidro y se utilizó en la próxima etapa sin purificación posterior. El compuesto (1A), 9.0 kg (23.3 moles, 1 eq), se cargó en un reactor de vidrio de 50 galones equipado con un termopar, entrada de N2 y tanque de alimentación. Se agregó tetrahidrofurano seco al lote, 126 litros (THF, KF<0.05%), y se cargó para disolver. El lote se concentró a 1.033 kg/cm2 (1 atmósfera) a un volumen del lote de aproximadamente 81 litros. La temperatura se ajustó hasta aproximadamente -60 a -70°C. Se agregó NaHMDS (2M en THF, 2.70 kg, 5.9 moles, 0.25 eq) y se cargó durante aproximadamente 15 minutos en un escala de temperatura entre -60 y -70°C. El lote se agitó a un escala de temperatura entre -60 y -70°C durante aproximadamente 5 minutos. El anhídrido mixto en solución de THF (0.83 kg activo, 3.2 moles, 0.14 eq) anterior se agregó y se cargó durante aproximadamente 15 minutos en un escala de temperatura entre -60 y -70°C. El lote se agitó en un escala de temperatura entre -60 y -70°C durante aproximadamente 10 minutos. La secuencia de dos cargas (NaHMDS 2M en THF) y el anhídrido mixto se repitió siete veces más para un total de ocho conjuntos de cargas o hasta que la conversión fue >70%. Se continuó con la carga de NaHMDS (2M en THF) seguido del anhídrido mixto en la misma relación sobre la base de la cantidad de material de partida restante hasta que la conversión fue >94%. Lentamente, durante aproximadamente 15 minutos, el lote se transfirió a una solución acuosa de 13.5 kg de KH2PO4 disueltos en 90 litros de H20 mientras que la temperatura del lote se mantenía por debajo de 30°C. Se agregó y se cargó acetato de etilo, (59 litros), y luego se agitó durante aproximadamente 15 minutos y las capas se dejaron asentar. La capa acuosa se extrajo con 45 litros de acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron dos veces con 32 litros de NaCI p/v acuoso al 10%. Las capas orgánicas se concentraron en forma discontinua a 1.033 kg/cm2 (1 atmósfera) hasta un volumen de lote de aproximadamente 45 litros. Se agregó metilterbutiléter (MTBE), 90 litros, al lote y se cargó. El lote se concentró a 1.033 kg/cm2 (1 atmósfera) hasta un volumen de lote de aproximadamente 54 litros. Se cargó metilterbutiléter, 45 litros, a una temperatura entre 55 y 65°C. Se agregó heptano, 108 litros, al lote y se cargó a una temperatura entre 55 y 65°C. La temperatura se ajustó hasta aproximadamente 45 a 55°C y se agitó durante aproximadamente 30 minutos. La temperatura luego se ajustó hasta aproximadamente -5 hasta 5°C durante aproximadamente 1 hora. El lote se agitó durante aproximadamente 30 minutos a una temperatura entre -5 y 5°C. El lote se filtró formando una torta de filtro y se lavó con metilterbutiléter al 33% v/v en heptano. El lote se secó en un estufa de vacío durante al menos 12 horas a 45 hasta 55°C dando 8.4 kg (72.2%) del compuesto (2A) en forma de un sólido con un ee de >99.0%. H RMN (400 MHz, CDCI3); 9.89 (1 H, d); 8.56 (1 H, d); 7.94 (1 H, d); 7.22 (1 H, d); 5.91 (1 H, s,b); 5.58 (1 H, s, b); 4.47 (2H, q); 4.43 (3H, s); 3.75 (2H, t); 1.47 (9H, s); 1.19 (9H, s).

Etapa 2 El compuesto (2A) 20 g (39.3 mmoles, 1 eq) se agregó y se cargó en un matraz de fondo redondo de tres cuellos ajustado con un agitador mecánico, un embudo adicional y un termopar. Se agregaron THF (60 mi), EtOH (20 mi) y agua (100 mi) al matraz y la mezcla de reacción se cargó. A continuación, se agregaron 8 mi de solución de hidróxido de sodio al 25% a la mezcla de reacción y se cargó. La mezcla de reacción se agitó a 40°C durante aproximadamente 4 horas. Una vez completada la reacción por análisis de HPLC, se agregó agua (100 mi) a la mezcla y el lote se cargó y se calentó hasta 50°C. Una vez a 50°C, se agregó solución de HCI 1 N (30 mi) al lote y se cargó durante 30 minutos. El lote se agitó a esta temperatura durante otros 30 minutos, luego se agregaron otros 24 mi de solución de HCI 1 N al lote y el lote se cargó durante 30 minutos. Se agregó agua (60 mi) al lote y el lote se cargó durante 30 minutos a 50°C, formando una suspensión. La suspensión resultante se enfrió hasta temperatura ambiente durante casi 1 hora formando un producto que se recolectó por filtración por succión, el cual formó una torta húmeda. La torta húmeda se lavó con 40 mi de una mezcla de solventes etanol-agua (1/5, v/v). Los sólidos resultantes se secaron al vacío a 60°C durante 12h dando 16.8 g (90%) del compuesto (3A) en forma de un sólido blancuzco. 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO): 9.97 (1 H, d), 8.42 (1 H, d), 8.20 (1 H, d), 7.48 (1 H, d), 5.40 (1 H, m), 4.07 (3H, s), 1 .45 (3H, d), 1.30 (9H, s).

Etapa 3 Parte A El 1-ter-butil éster 2-etil éster del ácido (2R, 4S)- 4(ciclopropancarbonil-amino)-pirrolidin-1 ,2-dicarboxilico (BP) (60g, 184 mmoles, 1 eq) se disolvió en EtOAc (1 .2 I) y se tomó una muestra como un estándar de HPLC para el 100%. El lote se enfrió hasta 20-35°C y se agregó HCI (g) (36 g, 980mmoles, 5.3 eq) al lote y se cargó mientras que la temperatura de reacción se mantenía entre 20-35°C. La sal de HCI del producto precipitó a medida que procedía la reacción. Al final de la carga de HCI, el lote se calentó hasta 20-30°C y se agitó durante 1 h. Después de 1 h, se controló la reacción para su terminación tomando muestra de la mezcla de reacción y comparando la respuesta del área de HPLC de la reacción con el estándar anterior. La reacción se muestreó hasta que la cantidad de BP con relación al estándar fue un área <0.5%. El lote se concentró al vacío a 35-45°C hasta 600 mi lo cual formó una suspensión espesa. Luego se agregó NMP (280 mi) al lote. El lote se concentró al vacío a 35-45°C hasta un volumen de aproximadamente 560 mi, lo cual formó una solución transparente. La solución transparente se utilizó directamente en la etapa de acoplamiento en la Parte B.

Parte B El compuesto (3) se disolvió en un matraz de fondo redondo de 3 cuellos, (80 g, 166 mmoles, 1 eq), HOBT- H20 (28 g, 182 mmoles, 1 .1 eq) y EDCI- HCI (48 g, 250 mmoles, 1.4 eq) en NMP (320 mi) y EtOAc (320 mi). El lote se agitó a 25°C durante 40 min. La solución de BP (de la parte A) se agregó al lote y se agitó durante 10 min. Se agregó /V-metil morfolina (80 mi, 724 mmoles, 4.4 eq) a la reacción a una proporción que mantenía la temperatura por debajo de 35°C. Una vez que se completó la reacción, se agregaron EtOAc (320 mi) y agua (800 mi) al lote. El lote resultante se agitó 15 min y las capas se separaron. La capa orgánica se lavó con HCI M (400 mi), luego K2CO3 10% (400 mi) y agua (400 mi). La capa orgánica se concentró hasta -160 mi y se agregó acetona (800 mi) a la capa orgánica. El lote se concentró nuevamente hasta -240 mi a ~40-50°C a presión reducida. Se diluyó la reacción con otros 800 mi de acetona y se concentró el lote hasta -240 mi @ 40-50°C a presión reducida. La temperatura del lote se mantuvo a ~40°C y se agregaron 800 mi de heptanos lentamente al lote, lo cual dio por resultado la formación de algunos sólidos. Los sólidos del producto se recolectaron por filtración y se secaron al vacío a 50°C durante 12 h para dar (103 g, 90%) del compuesto (4A) en forma de un sólido blancuzco.

RMN (400 MHz, d DMSO): 9.55, 9.03, 8.18, 7.90, 7.77, 7.66, 7.10, 7.04, 6.70, 6.66, 6.10, 5.76, 5.36, 4.91 , 4.80, 4.4-3.5, 2.58, 2.30, 1.82, 1.56, 1.47, 1.31 , 1.07, 1 ,001.84, 0.74. Nota: debido a la presencia de rotómeros, los máximos observados se mencionan únicamente como se observaron.

Etapa 4 Al Compuesto (4A) (20 g, 29 mmoles, 1 eq) se agregó a un matraz y se cargó para disolver en THF (60ml) y la solución se enfrió hasta 0-10°C. Se agregó HCI concentrado (20ml) lentamente para mantener la temperatura a 0-20°C. Al final de la carga, la solución se entibió hasta 20-30 °C y se agitó durante aproximadamente 4 h momento en el cual se determinó la terminación de la reacción por análisis de HPLC. El lote se diluyó con 2-Me-THF (120ml) y THF (40 mi) y la reacción se templó con K2C03 20% (110ml) para dar un pH de 8-8.5. Después de ajusfar el pH, se agregó agua adicional (80 mi) y el lote se calentó hasta aproximadamente 30°C para obtener una separación de fases nítida. El lote se asentó durante aproximadamente 15 min, la capa acuosa inferior se separó, y la capa orgánica se lavó con agua (80 mi). La fase orgánica se diluyó con 2-Me-THF (200ml) y luego se concentró a reflujo a presión atmosférica hasta aproximadamente 100 mi. El producto sólido se observó a este volumen. El lote luego se enfrió hasta 0-10°C y se filtró dejando una torta húmeda. La torta húmeda se lavó 2 veces con 2-Me-THF (40ml cada vez). La torta húmeda lavada se secó durante al menos 12 h a 60°C al vacío dando 3.50g (79%) del compuesto (5A) también denominado Compuesto A en la presente, en forma de un sólido blanco. 1H RMN (el espectro indica los rotómeros, sólo se informa desplazamiento químico, sin integración ni multiplicidad de máximos; 400 MHz, ¿6-DMSO) d 9.82, 9.62, 8.51 , 8.38, 8.07, 7.45, 5.46, 4.69, 4.57, 4.33, 4.15, 4.08, 3.99, 3.83, 2.39, 2.26, 2.16, 1 .56, 1.44, 1 .22, 0.82, 0.69; EMES+ m/z (intensidad relativa) 590 (M+H).

Formación de la sal xinafoato Polimorfo forma 7: Método 1 A una solución del compuesto A (34.4 g, 0.0583 moles) disuelto en EtOH caliente (800 mi) se agregó cuidadosamente en porciones ácido xinafóico (10.98 g, 0.0583 moles) mientras se continuaba calentando la solución de EtOH. Se agregaron cantidades adicionales de EtOH (200 mi) y agua (6 mi). La mezcla de reacción se calentó hasta casi ebullición para disolver todos los sólidos, luego se filtró. El filtrado se enfrió lentamente hasta RT, al cabo de lo cual se produjo la cristalización y la mezcla se dejó asentar a RT durante toda la noche. El filtrado se enfrió hasta 0°C, y la sal xinafoato sólida se aisló por filtración al vacío. La sal xinafoato sólida se lavó con isopropanol, luego éter, y se secó a alto vacío a 60°C para dar 36.8 g (81 %) de un sólido blanco.

Polimorfo forma 1: Método 2 A un matraz de fondo redondo de tres cuellos de 500 mi, equipado con una entrada de nitrógeno y refrigerante a reflujo se agregó el compuesto (5A) (30 g, 50.89 mmoles, 1 eq) del Esquema 2, Ejemplo 2 y ácido 1 -hidroxi-2-naftóico (10.5 g, 55.80 mmoles, 1.1 eq). A este matraz luego se agregó tolueno (154 mi) y metanol (103 mi) y la suspensión resultante se calentó hasta ca. 62°C momento en el cual el contenido se tornó homogéneo. Después de agitar durante 15 min, el contenido se destiló a presión atmosférica hasta 2 0 mi luego se enfrió hasta ca 50°C y luego se sembró con cristales de Forma 1 (3 g en 10 mi de tolueno, 10% en peso) haciendo que la sal del producto cristalice formando una suspensión. Después de agitar esta suspensión durante 30 min a 50°C, el contenido se enfrió hasta ca 10°C, momento en el cual se agregó tolueno (90 mi) y la suspensión se destiló al vacío hasta ca 210 mi. Se realizó un segundo agregado de tolueno (90 mi) y el contenido se agitó durante 20 min a ca 20°C. Los sólidos resultantes se recolectaron utilizando un secador agitado al vacío y la torta húmeda se lavó con tolueno (60 mi). Estos sólidos se secaron utilizando el siguiente protocolo: (a) Tj=50°C, presión= 0.102 kg/cm2 (0.1 bar), sin agitación, tiempo = 3h; (b) Tj=80°C, presión = 0.102 kg/cm2 (0.1 bar), 20 rpm, tiempo = 12 h; (c) Tj=80°C, presión = 0.102 kg/cm2 (0.1 bar), 60 rpm, tíempo=12 h. Un total de 35 g (81 %) del compuesto (6A) del Esquema 2, Ejemplo 2, se recuperaron en forma de un sólido. H RMN (el espectro indica los rotómeros, sólo se informa desplazamiento químico, sin integración ni multiplicidad de máximos; 400 MHz, d6-DMSO) d 9.86, 9.62; 8.55-8.41 ; 8.14; 8.03; 7.70; 7.45-7.37; 6.90; 5.46; 4.69; 4.57; 4.33; 4.15; 4.08; 3.99; 3.83; 2.39; 2.26; 2.16; 1.56; 1.44; 1.22; 0.82; 0.69 Polimorfo Forma 1 Método 3 Una solución del compuesto A (5.0g, 0.00848 moles) en MeOH (75 mi) calentado hasta 50°C, se filtró y se enjuagó con MeOH (10 mi). Una solución de ácido xinafóico (1.76g, 0.00933 moles) en MeOH (35ml) se calentó hasta 50°C y se filtró en la solución del Compuesto A. La mezcla se calentó hasta reflujo durante aproximadamente 10 minutos, se destiló en la atmósfera hasta aproximadamente 50 mi, se enfrió hasta 0°C durante aproximadamente 1 hora y se agitó durante aproximadamente 30 minutos. La mezcla se filtró, se lavó con MeOH triturado (20ml) y se secó a temperatura ambiente al vacío durante aproximadamente 12 horas para dar un sólido blancuzco 5.63g (85.4%).

Polimorfo Forma 2 A una solución del compuesto A (34.4 g, 0.0583 moles) disuelto en CH3OH caliente (800 mi) se agregó cuidadosamente en porciones ácido xinafóico (10.98 g, 0.0583 moles) mientras se continúa calentando la solución de CH3OH. Se agregó agua (6 mi). La mezcla de reacción se calentó hasta casi ebullición para disolver todos los sólidos, luego se filtró. El filtrado se enfrió lentamente hasta RT, momento en el cual se produjo la cristalización y la mezcla se dejó asentar hasta RT durante toda la noche. El filtrado se enfrió hasta 0 °C, y la sal xinafoato sólida se aisló por filtración al vacío. La sal xinafoato sólida se lavó con isopropanol luego éter y se secó a alto vacío a 60°C para dar 36.8 g (81 %) de un sólido blanco.

Dihidrato de Forma 1 El agregado de agua durante la formación de la sal xinafoato es necesario para obtener la forma cristalina. El Dihidrato de Forma 1 se preparó suspendiendo la Forma 1 (504.83 mg, 0.65 mmoles) en una mezcla de agua (0.9 mi) y metanol (3.1 mi). La suspensión se agitó durante 21 horas. Los sólidos se aislaron por centrifugación de la suspensión luego de decantar el sobrenadante. Los sólidos se secaron al vacío a temperatura ambiente.

Polimorfo Forma 3 La Forma 3 se preparó combinando una mezcla de la base libre, Compuesto A (3.0 g, 5.1 mmoles), y ácido xinafóico (0.96 g, 5.1 mmoles) en 2-propanol (90 mi). La mezcla se calentó a reflujo y se agregó 2-propanol adicional (30 mi). La mezcla se mantuvo a reflujo durante 1 hora luego se enfrió hasta temperatura ambiente. La mezcla se filtró y los sólidos se lavaron con 2-propanol (6 mi) y luego se secaron al vacío para dar 3.24 g del producto.

Preparación de la Muestra de Difracción de Rayos X de polvo Las Formas 1, 2, 3, y el Dihidrato de la Forma 1 de la sal xinafoato se analizaron en forma de polvo seco para los análisis de difracción de rayos x ("PXRD"). La Forma 1 se micronizó en un molino de chorro antes del análisis PXRD utilizando el procedimiento siguiente.

Micronizado por Molino de chorro La distribución del tamaño de partículas del polvo micronizado se controla ajustando la presión de chorro y la velocidad de alimentación en el molino de chorro. Las partículas se alimentaron a una velocidad de 1 g/min en la cámara del molino del MC ONE JETMILL (Jetpharma Group, South Plainfield, NJ) a través de un sistema venturi por nitrógeno presurizado. La caída de la presión a través del venturi se fija en 5.099 kg/cm2 (5 bar). Las partículas se aceleran en un movimiento espiral dentro de la cámara del molino mediante cuatro boquillas ubicadas alrededor de la periferia de la cámara del molino. La caída de presión a través de las boquillas se fija en 4.079 kg/cm2 (4 bar). El efecto de micronizado tiene lugar por la colisión entre las partículas entrantes más lentas y las ya aceleradas en la corriente espiral. Las fuerzas centrífugas retienen las partículas más grandes en la periferia de la cámara del molino, mientras que las partículas más pequeñas salen con el gas de escape del centro de la cámara por medio de un clasificador estático y se recuperan en un contenedor de recolección justo debajo del molino de chorro.

Las muestras se analizaron con preparación mínima para evitar cualquier cambio de forma. Las muestras se frotaron suavemente para asegurar que las partículas no estaban aglomeradas. No se utilizaron etapas de solventes, secado u otra preparación para estos análisis. Los datos de PXRD pueden identificar únicamente el hidrato y las formas polimórficas.

Difracción de Rayos X de polvo Los patrones de difracción de rayos x de polvo de las Formas 1 y 2 se recolectaron en un difractómetro Rigaku Miniflex equipado con una radiación CuKa (?=1.54056?) a 30 kv, 15 mA y un detector de estado sólido (Rigaku MSC, The Woodlands, TX). Se registró un barrido continuo para todas las muestras con un tamaño de etapa de 0.02° 2 T y una velocidad de barrido de 2°/min. Los patrones de difracción de rayos x de polvo del Dihidrato de la Forma 1 se recolectaron en un difractómetro Bruker D8 con fuente CuKa-? (? =1 .5406Á) a 40 kV y 40 mA. Se registró un barrido continuo con un tamaño de etapa de 0.032° 2T y un tiempo de etapa de 0.5 segundos. Los patrones de difracción de rayos x de polvo de Forma 3 se recolectaron en un Kratos XRD 6000. Las muestras se prepararon empacando suavemente el material en el vehículo de muestras y alisando suavemente para producir una superficie de muestra plana. Las muestras se analizaron desde 2 hasta 40 grados 2 Theta con un tamaño de etapa de 0.02 grados y duraciones de la etapa de 0.6 segundos. El análisis de los datos se llevó a cabo utilizando el software Basic Process, versión 2.6, provisto por Kratos. Los datos se ajustaron utilizando el procedimiento de ajuste automático en el software. Utilizando los métodos y el equipamiento descrito anteriormente, el polimorfo Forma 1, Forma 2 y Forma 3 y Dihidrato de la Forma 1 de la sal xinafoato del compuesto A se sometieron al análisis PXRD. Se generaron los patrones de PXRD y se muestran en las FIGS 1-3 y 10. La intensidad de los máximos (el eje y es en recuentos por segundo) se gráfica en función del ángulo 2T (el eje x está en grados 2T). Además, se graficaron datos con recuentos del detector normalizados para el tiempo de recolección por etapa versus el ángulo 2T. La localización de los máximos (eje X 2T) consistente con estos perfiles se muestra en la Cuadro 1. Las localizaciones de estos máximos de PXRD son características de los polimorfos cristalinos de Formas 1, 2, 3 y el Dihidrato de Forma 1 cristalino del compuesto de fórmula I.

CUADRO 1 Posiciones de los máximos PXRD para las Formas 1, 2, 3 y Dihidrato de la Forma 1 Comenzando con las localizaciones de máximos PXRD según se muestra en el Cuadro 1 , las localizaciones de máximos más características de cada polimorfo o hidrato se pueden seleccionar y agrupar por intensidad relativa para distinguir en forma conveniente la estructura cristalina de otros. Tal selección de máximos únicos se muestra en el Cuadro 2. De este modo, por ejemplo, la estructura cristalina de la Forma 1 del compuesto de fórmula I se puede identificar por el Grupo de Localización de máximos No. 1 , que consiste en 4 localizaciones de máximos PXRD característicos. En forma alternativa, la estructura cristalina de la Forma 1 del compuesto de fórmula I se puede identificar por el Grupo de Localización de máximos No. 2, que consiste en 4 localizaciones de máximos PXRD característicos del Grupo No.1 y otras 4 localizaciones de máximos. En forma alternativa, la estructura cristalina de la Forma 1 del compuesto de fórmula I se puede identificar por el Grupo de Localización de máximos No. 3, que consiste en 8 localizaciones de máximos PXRD características del Grupo No. 2 y otras 4 localizaciones de máximos. Este esquema se aplica a cada una de las cuatro formas polimórficas para identificar y distinguir una de otra.

CUADRO 2 Localizaciones características de máximos de PXRD para las Formas 1. 2, 3 y Dihidrato de la Forma 1 de fórmula I Localización Localización de los picos (grados 2T) de Máximos Polimorfo Forma Dihidrato de la Polimorfo Forma 2 Polimorfo Forma 3 Grupo No. 1 Forma 1 6.1 8.2 10.6 4.6 7.7 16.5 13.6 7.9 1 13.0 18.5 19.1 12.1 15.9 24.9 21.2 18.9 5.6 5.5 10.6 4.6 6.1 8.2 13.6 7.9 7.7 14.3 17.9 9.1 13.0 16.5 18.8 12.1 2 15.9 16.9 19.1 13.7 17.8 18.5 20.2 15.8 18.4 20.6 21.2 16.5 26.1 24.9 23.9 18.9 5.6 5.5 9.4 4.6 6.1 7.2 10.6 7.9 7.7 8.2 13.6 9.1 3 9.2 14.3 17.9 12.1 13.0 14.7 18.8 13.7 14.2 16.5 19.1 15.8 15.9 16.9 20.2 16.5 17.8 18.5 21.2 18.9 18.4 20.6 23.9 20.0 3 20.5 24.1 26.0 23.9 22.9 24.9 26.6 24.3 26.1 26.8 28.1 25.7 Los expertos en la técnica reconocerán que las mediciones de la localización de los máximos PXRD para una forma cristalina dada del mismo compuesto variarán dentro de un margen de error. Dicha variación puede ser introducida por diferencias en la preparación de la muestra, la instrumentación o técnica analítica, entre otros factores. Las mediciones de las localizaciones de máximos individuales pueden variar hasta un grado pequeño, pero el perfil de un máximo completo puede variar en un grado mayor, debido a variantes en la densidad de las muestras empacadas, por ejemplo.

Pureza del Polimorfo Con preferencia, las Formas 1, 2, 3 del polimorfo cristalino y el Dihidrato Forma 1 del compuesto de fórmula I están sustancialmente libres de impurezas químicas (por ej., subproductos generados durante la preparación de los polimorfos) y de otras formas cristalinas polimórficas. "Sustancialmente libre" de impurezas químicas a los fines de esta invención significa inferior o igual a aproximadamente 5% p/p de impurezas químicas, preferentemente, inferior o igual a aproximadamente 3% p/p de impurezas químicas, con mayor preferencia, inferior o igual a aproximadamente 2% p/p de impurezas químicas, e incluso con mayor preferencia, inferior o igual a aproximadamente 1 % p/p de impurezas químicas. El término "purificado" o "en forma purificada" para un polimorfo se refiere al estado físico de dicho polimorfo después de obtenerse de un procedimiento o procedimientos de purificación descritos en la presente o bien conocidos por los expertos en la técnica, en suficiente pureza para ser caracterizable por técnicas analíticas estándar descritas en la presente o bien conocidas por los expertos en la técnica. Las formas purificadas de los polimorfos cristalinos Formas 1, 2 y 3 y el Dihidrato de la Forma 1 del compuesto de fórmula I están sustancialmente libres de impurezas químicas.

Calorimetría de Barrido Diferencial El instrumento DSC utilizado para ensayar las muestras de los polimorfos Formas 1 y 2 fue un modelo 2920 TA Instruments® (fabricado en 2001 ), el cual venía equipado con un sistema de enfriamiento refrigerado. La celda de DSC/cámara de muestra se purgó con 40 ml/min de nitrógeno gaseoso de pureza ultra alta. El instrumento se calibró con indio de elevada pureza. La precisión de la temperatura de la muestra medida con este método está dentro de aproximadamente +/- 1°C, y el calor de fusión se puede medir dentro de un error relativo de aproximadamente +/- 5%. La muestra se colocó en una bandeja de DSC de aluminio estándar con tapa que contiene orificios de dos polos para permitir la liberación de la presión. Aproximadamente 2 mg del polvo de muestra se colocó en el fondo de la bandeja y se le dio un leve golpecito para hacer contacto con la bandeja. El peso de la muestra se midió con precisión y se registró hasta una centésima de miligramo. El instrumento utilizó una bandeja de referencia vacía. El análisis de DSC se llevó a cabo a una velocidad de calentamiento de 10°C/min. El instrumento DSC utilizado para ensayar las muestras del Dihidrato de la Forma 7 y el polimorfo Forma 3 fue un Q100 TAInstruments®. Nuevamente, las muestras se sellaron en las bandejas de aluminio herméticas y se realizaron dos orificios en las tapas de las bandejas de la muestra. El análisis se llevó a cabo bajo una purga de nitrógeno con una velocidad de calentamiento de 10°C por minuto. El flujo de calor, el cual se normalizó por un peso de la muestra, se gráfico en función de la temperatura de la muestra medida. Los datos se informaron en unidades de vatios/gramo ("W/g"). El gráfico se realizó con los máximos endotérmicos señalando hacia abajo. El pico de fusión endotérmico se evaluó para las temperaturas de inicio y fin extrapoladas (principio), la temperatura de máximos, y el calor de fusión en este análisis. Un perfil de DSC para la Forma 1 de la fórmula I se muestra en la Figura 6. Para la Forma 1 del compuesto de fórmula I, se observó una única endoterma con una temperatura de inicio de 192°C y una temperatura máxima de 193°C. Un perfil de DSC para la Forma 2 de la fórmula I se muestra en la Figura 7. Para la Forma 2 del compuesto de fórmula I, se observaron dos endotermas solapadas con una temperatura de inicio de 152°C y temperaturas máximas de 161 °C y 181 °C. Un perfil de DSC para el Dihidrato de la Forma 1 de la fórmula I se muestra en la Figura 8. Para el Dihidrato de la Forma 1 del compuesto de fórmula I, a 10 °C/min, el Dihidrato Forma 1 sufre deshidratación y se transforma en una forma anhidra metaestable a temperatura ambiente. Este evento se refleja en el termograma de DSC (Fig. 8) en forma de una endoterma ancha con una temperatura de inicio de 73°C y el calor de 143 J/g. La cantidad de agua del hidrato perdida durante el calentamiento asciende a 4.1 % del peso total, lo cual se muestra como una pérdida de peso del tipo etapa en los datos de TGA (Figura 9), indicando la estequiometría del dihidrato. La forma metaestable a temperatura ambiente experimenta fusión con una temperatura de inicio de 144°C. El calor de fusión no puede determinarse debido al inicio de la descomposición, lo cual corresponde a la pérdida de peso después de 150°C en los datos de TGA (Figura 9), antes de la terminación del evento de fusión. Un perfil de DSC para la Forma 3 de fórmula I se muestra en la Figura 11 . Para la Forma 3 del compuesto de fórmula I, se observó una única endoterma con una temperatura de inicio de 182°C y una temperatura máxima de 186°C. La premisa para el tratamiento por inhalación consiste en administrar el fármaco directamente al sitio de acción (los pulmones) con efectos colaterales sistémicos mínimos. Por lo tanto, un compuesto inhalado debe exhibir un perfil farmacocinético con una concentración sanguínea baja (AUC -por sus siglas en inglés) debido a una biodisponibilidad oral baja y/o alta eliminación cuando se administra por inhalación o vías de dosificación orales. Es importante que la AUC oral sea baja a fin de minimizar el efecto del fármaco ingerido durante la inhalación. Muchas veces, los niveles de AUC bajos son difíciles de medir. Por lo tanto, se prefieren datos de AUC reproducibles.

Protocolo de ensayo para ratas Brown-Norway alérgicas Se obtuvieron ratas BN machos endogámicas que pesaban de 150 a 200 g de Charles River Laboratory (Wilmington, MA). Antes del uso, los animales recibieron alimentos y agua ad libitum. Los compuestos de ensayo se administraron 5 horas antes de la provocación del antígeno ya sea por vía oral o por inhalación, según se detalla en la sección de "administración de compuestos de ensayo".

Sensibilización y broncoprovocación con antígeno Los animales se dividieron en dos grupos principales, a saber un grupo de alúmina y un grupo antígeno. En el grupo antígeno, los animales se sensibilizaron mediante una inyección intra-peritoneal (i.p.) de 1 mi de antígeno precipitado con alúmina que contenía 20 µg de ovalbúmina (OVA, grado III; Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) y 8 mg de AI(OH)3 suspendido en 0.9% de vehículo de solución salina. Una inyección reforzante de esta mezcla de alúmina-OVA se administró nuevamente 7 días más tarde. Los animales pertenecientes al grupo alúmina recibieron inyecciones que contenían sólo alúmina. Siete días posteriores a la segunda inyección, los animales se expusieron a la broncoprovocación del antígeno aerosolizado el cual se llevó a cabo colocando las ratas en una cámara de plexiglás cerrada (21 litros) y exponiendo a las ratas a OVA aerosolizado (1 %) durante 30 min. La OVA aerosolizada se produjo mediante un nebulizador ultrasónico (DeVilbiss, Somerset, PA, USA; Model Ultra-Neb 99) a un caudal de aproximadamente 8 litros/min. Veinticuatro horas después de la provocación de la OVA aerosolizada, los animales se sacrificaron con una sobredosis de pentobarbital sódico. La tráquea se exteriorizó y se intubó, y los pulmones se lavaron con dos alícuotas de 3 mi de solución salina fisiológica. El fluido de lavado broncoalveolar (BALF) recolectado de este modo se sometió a recuento celular. Se utilizaron diez microlitros del BALF para recontar en forma manual los glóbulos blancos totales utilizando un hemocitómetro. Se utilizaron cien microlitros de BALF para preparar citocentrífuga que se tiñó con el sistema de tinción Hema3 ™ (Fisher Scientific, Springfield, NJ) para identificar y recontar los glóbulos blancos diferenciales tales como eosinófilos, neutrófilos, células mononucleares y células epiteliales. Un total de 200 células se recontaron a partir de cada citocentrífuga. Se informa la capacidad del compuesto para inhibir el reclutamiento de células inflamatorias en las vías respiratorias.

Administración de compuestos de ensayo Administración oral: los compuestos se disolvieron en metiicelulosa 0.4% y se administraron a los animales por vía oral @ 3 ml/kg. Un volumen equivalente de metiicelulosa 0.4% se administró tanto a grupos control negativos (grupo de alúmina) como positivos (antígeno). Administración intra-traqueal: la dosis apropiada del compuesto se mezcló con polvo de lactosa para obtener una cantidad final de 3 mg, la cual se administró por vía intra-traqueal a los animales anestesiados utilizando un microaspersor de punta fina. Los animales se mantuvieron en una posición hacia arriba durante 3-4 minutos y se dejó que se recuperasen de la anestesia antes de retornar a sus jaulas. Utilizando los procedimientos de ensayo anteriores, se obtuvieron los siguientes resultados: sal tartrato: 52% de inhibición de células inflamatorias a 0.02 mpk (dosificación intra-traqueal), sal xinafoato: 69% de inhibición de las células inflamatorias a 0.02 mpk (dosificación intra-traqueal).

Protocolo de Ensayo para Ensayo PK de Mono: Se dosificaron por vía oral dos monos en ayunas a 3 mpk con el compuesto de ensayo en vehículo de HPMC 0.4%. El volumen de la dosis fue de 2 ml/kg. Se recolectó plasma a las 0.5, 1 , 2, 4, 8, y 24 horas. Se recolectaron muestras de sangre con heparina, y el plasma se conservó con EDTA. Las muestras de sangre para cada individuo se caracterizaron por análisis EM/EM.

Utilizando el procedimiento de ensayo anterior, se obtuvieron los siguientes resultados: Sal tartrato: AUC de mono = 30 ng.h/ml a 10 mpk p.o. sal xinafoato: AUC de mono = 0 ng.h/ml a 10 mpk p.o.

Protocolo de ensayo para ensayo de PK en rata Se dosificaron por vía oral dos ratas Sprague Dawley en ayunas a 10 mpk con el compuesto en vehículo de HPMC 0.4%. El volumen de la dosis fue de 5 ml/kg. Se recolectó plasma a las 0.5, 1 , 2, 3, 4, y 6 horas. Se recolectaron muestras de sangre con heparina, y el plasma se conservó con EDTA. Las dos muestras de sangre en cada punto de tiempo se agruparon para análisis por EM/EM. Sal tartrato: AUC = 0 hasta 1350 ng.h/ml a 30 mpk p.o. (variable) sal xinafoato: AUC = 350 ng.h/ml a 30 mpk p.o.

Protocolo de ensayo para ensayo de la función del pulmón La función del pulmón se midió utilizando una técnica de maniobras espiratorias forzadas. En este procedimiento, las ratas se anestesiaron y se insertó un catéter traqueal. Las ratas se colocaron dentro de un pletismógrafo de cuerpo completo que contenía una válvula de respiración capaz de separar inflaciones y deflaciones de los pulmones. Los pulmones luego se sometieron a inflación forzada hasta la capacidad del pulmón total seguido de la rápida deflación a volumen residual. Las mediciones de la capacidad vital forzada y el flujo espiratorio máximo se utilizaron para medir los efectos de la provocación del antígeno y evaluar los efectos inhibidores del compuesto de fórmula I. El fármaco se mezcló con lactosa para administración intra-traqueal y se administró directamente en la tráquea con un microaspersor fino 5 horas antes de la provocación con antígeno. El compuesto administrado por vía oral se administró en vehículo de metilcelulosa 0.4% 5 horas antes de la provocación del antígeno. Los animales control recibieron lactosa o metilcelulosa intra-traqueal, respectivamente. La provocación con antígeno consistió en la exposición aerosolizada durante 30 minutos a ovoalbúmina al 1 %. Las funciones espiratorias forzadas del pulmón se midieron 24 horas después de la exposición al antígeno (ovoalbúmina). El compuesto de fórmula I exhibe 54% de inhibición de capacidad vital forzada (FVC) a 0.02 mpk it (intra-traqueal) y 31 % de inhibición de FVC a 3 mpk p.o.

Composiciones farmacéuticas Para preparar composiciones farmacéuticas a partir de los polimorfos descritos en esta invención, los vehículos inertes, aceptables para uso farmacéutico pueden ser sólidos o líquidos. Ejemplos de vehículos aceptables para uso farmacéutico y métodos de producción para varias composiciones se pueden hallar en A. Gennaro (ed.), Remington's Pharmaceutical Sciences, 18° Edición, (1990), Mack Publishing Co., Easton, Pennsilvania. Las preparaciones en forma líquida incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones para administración intranasal. Las preparaciones en aerosol adecuadas para inhalación pueden incluir soluciones y sólidos en forma de polvo, las cuales pueden estar en combinación con un vehículo aceptable para uso farmacéutico, tal como un gas comprimido inerte, por ej. nitrógeno.

Dosificaciones La cantidad de compuesto activo en una dosis unitaria de preparación puede variar o ajustarse desde aproximadamente 0.01 µ9 hasta aproximadamente 100 mg, preferentemente desde aproximadamente 0.01 µg hasta aproximadamente 75 mg, con mayor preferencia desde aproximadamente 0.01 µg hasta aproximadamente 50 mg, y con máxima preferencia desde aproximadamente 0.01 µ9 hasta aproximadamente 25 mg, de acuerdo con la aplicación particular. La dosificación real empleada puede variar dependiendo de los requerimientos del paciente y la severidad de la afección a ser tratada. La determinación del régimen de dosificación apropiado para una situación particular está dentro de la capacidad de la técnica. Por conveniencia, la dosificación total puede dividirse y administrarse en porciones durante el día según se requiera. La cantidad y frecuencia de administración de los compuestos de la invención y/o sus sales aceptables para uso farmacéutico estará regulada de acuerdo con el criterio del profesional actuante considerando factores tales como la edad, condición y tamaño del paciente como así también la severidad de los síntomas a ser tratados. Un régimen de dosificación típico diario para inhalación puede variar desde aproximadamente 0.04 µg/día hasta aproximadamente 400 mg/día, en una a cuatro dosis divididas. A diferencia de lo que se muestra en los ejemplos de operación o según se indique de otro modo, todos los números utilizados en la especificación y las reivindicaciones que expresan las cantidades de ingredientes, condiciones de reacción, etc., se entiende que son modifican en todas las instancias por el término "aproximadamente". La descripción anterior no tiene la intención de detallar todas las modificaciones y variantes de la invención. Los expertos en la técnica apreciarán que pueden realizarse cambios a las modalidades descritas anteriormente sin apartarse del concepto de la invención. Se entiende, por lo tanto, que la invención no está limitada a las modalidades particulares descritas anteriormente, pero tiene la intención de cubrir modificaciones que están dentro del espíritu y alcance de la invención, según lo definido por el lenguaje de las siguientes reivindicaciones.

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES 2.- El uso del compuesto de la reivindicación 1 para la fabricación de un medicamento útil para tratar enfermedades obstructivas de las vías aéreas superiores o inferiores en un paciente, en donde dicho medicamento es adaptado para ser administrable mediante inhalación. 3.- El uso como se reclama en la reivindicación 2, en donde el cual la enfermedad tratada es asma o enfermedad pulmonar obstructiva crónica. 4.- El uso de una combinación del compuesto de la reivindicación 1 y al menos un agente adicional útil para tratar enfermedades obstructivas de las vías aéreas superiores o inferiores para la fabricación de un medicamento útil para tratar enfermedades obstructivas de las vías aéreas superiores o inferiores en un paciente, en donde el medicamento es adaptado para ser administrable por inhalación. 5. - El uso como se reclama en la reivindicación 4, en donde la enfermedad tratada es asma o enfermedad pulmonar obstructiva crónica. 6. - El uso como se reclama en la reivindicación 4, en donde el agente adicional se selecciona del grupo integrado por beta-agonistas, antagonistas muscarínicos y corticoesteroides. 7. - Una composición farmacéutica inhalable que comprende una cantidad eficaz del compuesto de la reivindicación 1. 8. - Una composición farmacéutica inhalable que comprende una cantidad eficaz de una combinación del compuesto de la reivindicación 1 y al menos un agente adicional útil para tratar enfermedades obstructivas de las vías aéreas superiores o inferiores. 9. - La composición de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada además porque los agentes adicionales se seleccionan del grupo integrado por beta-agonistas, antagonistas muscarínicos y corticoesteroides. 10. - Un polimorfo cristalino de un compuesto de la fórmula: donde dicho polimorfo se selecciona del grupo integrado por: la Forma 1 que exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo sustancialmente similar al patrón que se muestra en la FIG 1 ; la Forma 2 que exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo sustancialmente similar al patrón que se muestra en la FIG 2; y el Dihidrato de la Forma 1: que exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo sustancialmente similar al patrón que se muestra en la FIG 3. la Forma 3 que exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo sustancialmente similar al patrón que se muestra en la FIG 10. 11. - Un polimorfo cristalino Forma 1 del compuesto de la reivindicación 10 que exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo que tienen localizaciones de máximos característicos de 6.1 ; 7.7; 13.0 y 15.9 grados 2T. 12. - El polimorfo cristalino de conformidad con la reivindicación 1 1 , caracterizado además porque exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo que tienen localizaciones de máximos característicos de 5.6; 6.1 ; 7.7; 13.0; 15.9; 17.8; 18.4 y 26.1 grados 2T. 13. - El polimorfo cristalino de conformidad con la reivindicación 1 1 , caracterizado además porque exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo que tienen localizaciones de máximos característicos de 5.6; 6.1 ; 7.7; 9.2; 13.0; 14.2; 15.9; 17.8; 18.4; 20.5; 22.9 y 26.1 grados 2T. 14.- El polimorfo cristalino Forma 1 de conformidad con la reivindicación 10. 15.- Un polimorfo cristalino Forma 2 del compuesto de la reivindicación 10 que exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo que tiene localizaciones de máximos característicos de 10.6, 13.6, 19.1 y 21 .2 grados 2T. 16. - El polimorfo cristalino de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado además porque exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo que tiene localizaciones de máximos característicos de 10.6; 13.6; 17.9; 18.8; 19.1 ; 20.2; 21 .2 y 23.9 grados 2T. 17. - El polimorfo cristalino de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado además porque exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo que tiene localizaciones de máximos característicos de 9.4; 10.6; 13.6; 17.9; 18.8; 19.1 ; 20.2; 21 .2; 23.9; 26.0; 26.6 y 28.1 grados 2T. 18. - El polimorfo cristalino Forma 2 de conformidad con la reivindicación 10. 19. - Un Dihidrato de la Forma 1 cristalino del compuesto de la reivindicación 10 que exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo que tiene localizaciones de máximos característicos de 8.2; 16.5; 18.5 y 24.9 grados 2T. 20. - El dihidrato cristalino de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado además porque exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo que tiene localizaciones de máximos característicos de 5.5; 8.2; 14.3; 16.5; 16.9; 18.5; 20.6; y 24.9 grados 2T. 21. - El dihidrato cristalino de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado además porque exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo que tiene localizaciones de máximos característicos de 5.5; 7.2; 8.2; 14.3; 14.7; 16.5; 16.9; 18.5; 20.6; 24.1 ; 24.9 y 26.8 grados 2T. 22. - El Dihidrato de la Forma 1 cristalino de conformidad con la reivindicación 10. 23. - Un polimorfo cristalino Forma 3 del compuesto de la reivindicación 10 que exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo que tiene localizaciones de máximos característicos de 4.6; 7.9; 12.1 ; y 18.9 grados 2T. 24. - El polimorfo cristalino de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado además porque exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo que tiene localizaciones de máximos característicos de 4.6; 7.9; 9.1 ; 12.1 ; 13.7; 15.8; 16.5; y 18.9 grados 2T. 25. - El polimorfo cristalino de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado además porque exhibe un patrón de difracción de rayos x de polvo que tiene localizaciones de máximos característicos de 4.6; 7.9; 9.1 ; 12.1 ; 13.7; 15.8; 16.5; 18.9; 20.0; 23.9; 24.3 y 25.7 grados 2T. 26. - El polimorfo cristalino Forma 3 de conformidad con la reivindicación 10. 27. - Un procedimiento para preparar el polimorfo Forma 1 de la reivindicación 10 a partir de Compuesto A que comprende los etapas de: a) disolver el compuesto A, en etanol caliente y agregar ácido xinafoico mientras se continúa calentando la mezcla; b) agregar etanol y agua adicionales y calentar la mezcla hasta casi ebullición; c) filtrar la mezcla caliente, luego enfriar lentamente hasta temperatura ambiente y permitir que la mezcla repose a temperatura ambiente durante toda la noche hasta que los cristales de la Forma 1 precipiten; y d) enfriar el filtrado hasta 0°C y filtrar los cristales de la Forma 1. 28.- Un procedimiento para preparar el polimorfo Forma 1 de la reivindicación 10 a partir del Compuesto A que comprende los etapas de: e) agregar tolueno y metanol al Compuesto A y ácido xinafóico y mezclar, formando una suspensión; f) calentar dicha suspensión hasta aproximadamente 62°C mientras se agita, dando una mezcla homogénea; g) destilar dicha mezcla homogénea a presión atmosférica, enfriar la mezcla destilada hasta aproximadamente 50°C, sembrar dicha mezcla destilada con semillas de la Forma 1 del Compuesto A, obteniendo cristales en una suspensión; h) agitar dicha suspensión durante aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 50°C y enfriar la suspensión hasta aproximadamente 10°C; i) agregar tolueno adicional a la suspensión enfriada y destilar al vacío, luego agregar más tolueno y agitar durante aproximadamente 20 minutos a aproximadamente 20°C formando material sólido; j) recolectar los sólidos resultantes utilizando un secador agitado al vacío formando una torta húmeda; lavar dicha torta húmeda con tolueno y secar a aproximadamente 50°C durante aproximadamente 3 horas sin agitación, luego a aproximadamente 80°C durante aproximadamente 12 horas con agitación de aproximadamente 20 R.P.M., luego a aproximadamente 80°C durante aproximadamente 12 horas con una agitación de aproximadamente 60 R.P.M., todo al vacío. 29.- Un procedimiento para preparar el polimorfo Forma 1 de la reivindicación 10 a partir del Compuesto A k) que comprende los etapas de: disolver el compuesto A y el ácido xinafóico en metanol caliente en forma separada; I) filtrar ambas soluciones calientes y mezclar las dos soluciones; m) someter a reflujo la mezcla y destilar el exceso de metanol; y n) enfriar la mezcla hasta 0°C formando un precipitado y filtrar los cristales de la Forma 1. 30 - Una composición farmacéutica inhalable que comprende un polimorfo cristalino de la Forma 1 de la reivindicación 10 y al menos un excipiente o vehículo aceptable para uso farmacéutico. 31 .- Una forma purificada del polimorfo de Forma 1 de la reivindicación 10. 32. - El uso de un polimorfo de Forma 1 de la reivindicación 10 para la fabricación de un medicamento útil para tratar enfermedades obstructivas de las vías aéreas superiores o inferiores en un paciente, en donde el medicamento es adaptado para ser administrable por inhalación. 33. - Un procedimiento para preparar el polimorfo Forma 2 de la reivindicación 10 a partir del Compuesto A que comprende los etapas de: o) disolver el compuesto A en metanol caliente y agregar ácido xinafóico mientras se continúa calentando la mezcla; p) agregar agua, y calentar la mezcla hasta casi ebullición; q) filtrar la mezcla caliente, luego enfriar lentamente hasta temperatura ambiente y permitir que la mezcla repose a temperatura ambiente durante toda la noche hasta que los cristales de la Forma 2 precipiten; y r) enfriar el filtrado hasta 0°C y filtrar los cristales de la Forma 1. 34.- Una composición farmacéutica inhalable que comprende un polimorfo cristalino Forma 2 de la reivindicación 10 y al menos un excipiente o vehículo aceptable para uso farmacéutico. 35.- Una forma purificada del polimorfo Forma 2 de la reivindicación 10. 36.- El uso de un polimorfo de Forma 2 de la reivindicación 10 para la fabricación de un medicamento útil para tratar enfermedades obstructivas de las vías aéreas superiores o inferiores en un paciente, en donde el medicamento es adaptado para ser administrable por inhalación. 37.- Un procedimiento para preparar el Dihidrato de la Forma 1 de la reivindicación 10 a partir de la sal xinafoato del polimorfo Forma 1 del compuesto A: Compuesto A que comprende los etapas de: r) suspender el polimorfo Forma I de la sal xinafoato del compuesto A en una mezcla de agua y metanol; s) la suspensión se agitó durante 21 horas, los sólidos se aislaron por centrifugación de la suspensión luego de decantar el sobrenadante; t) los sólidos se secaron al vacío a temperatura ambiente. 38. - Una composición farmacéutica inhalable que comprende el Dihidrato de la Forma 1 cristalino de la reivindicación 10 y al menos un excipiente o vehículo aceptable para uso farmacéutico. 39. - Una forma purificada del Dihidrato de la Forma 1 cristalino de la reivindicación 10. 40. - El uso del Dihidrato de la Forma 1 de la reivindicación 10 para la fabricación de un medicamento útil para tratar enfermedades obstructivas de las vías aéreas superiores o inferiores en un paciente, en donde el medicamento es adaptado para ser administrable por inhalación. 41.- Un procedimiento para preparar el polimorfo Forma 3 de la reivindicación 10 a partir del Compuesto A que comprende los etapas de: u) combinar una mezcla del compuesto A y el ácido xinafóico en 2-propanol; v) calentar la mezcla a reflujo y agregar más 2-propanol; mantener la mezcla a reflujo durante 1 hora, luego enfriar a temperatura ambiente; w) filtrar la mezcla, lavar los sólidos con 2-propanol, secar al vacío. 42. - Una composición farmacéutica ¡nhalable que comprende un polimorfo cristalino de Forma 3 de la reivindicación 10 y al menos un excipiente o vehículo aceptable para uso farmacéutico. 43. - Una forma purificada del polimorfo Forma 3 de la reivindicación 10. 44. - El uso de un polimorfo Forma 3 de la reivindicación 10 para la fabricación de un medicamento para tratar enfermedades obstructivas de las vías aéreas superiores o inferiores en un paciente, en donde el medicamento es adaptado para ser administrable por inhalación.