MX2008014466A

MX2008014466A - Conservadores de bebidas.

Info

Publication number: MX2008014466A
Application number: MX2008014466A
Authority: MX
Inventors: Peter J Taormina; Peter G Simpson; Evangelia Komitopoulou; Esteban A Bertera
Original assignee: Coca Cola Co
Priority date: 2006-05-12
Filing date: 2006-12-20
Publication date: 2008-11-26
Also published as: CN101437413A; WO2007133272A1; US20070264401A1; TW200810706A; AR060902A1; EP2037765A1; JP2009536822A; CL2007001350A1; PE20080933A1

Abstract

La presente invención se dirige a por lo menos un extracto que comprende saponinas que pueden utilizarse como un conservador y/o utilizarse como parte de un sistema conservador para retardar, mantener, inhibir y/o reducir el crecimiento de microorganismos seleccionados de mohos, levaduras y/o bacterias, en bebidas o alimentos.

Description

CONSERVADORES DE BEBIDAS Esta solicitud reclama el beneficio de la Solicitud Provisional Norteamericana No. 60/799,641, presentada el 12 de mayo de 2006, la cual se incorpora para referencia en la presente en su totalidad para cualquier propósito. La presente invención se dirige a conservadores y a composiciones que comprenden por lo menos un extracto que comprende saponinas utilizada como un conservador en una cantidad efectiva para inhibir y/o reducir el crecimiento de por lo menos un microorganismo seleccionado de mohos, levaduras y bacterias. Además, la presente invención se dirige a un sistema conservador que comprende por lo menos un extracto que comprende saponinas y por lo menos un conservador adicional, en donde el sistema conservador exhibe una inhibición mejorada y/o un crecimiento reducido de por lo menos un microorganismo seleccionado de mohos, levaduras y bacterias cuando se compara a por lo menos un extracto que comprende saponinas o por lo menos un conservador adicional utilizado solo. El deterioro microbiano de bebidas es una preocupación en la industria de la bebida hoy en dxa. Las bebidas tienen grados variables de sensibilidad a deterioro microbiano dependiendo de los factores intrínsecos de la bebida tal como el pH, el contenido de nutrientes (por ejemplo, jugo, vitamina o contenido de micronutrientes) , nivel de carbonatación, grado Brix, calidad del agua (por ejemplo, alcalinidad y/o dureza), y los conservadores. Casos de deterioro ocurren cuando los microorganismos son capaces de superar los factores y el crecimiento intrínsecos de la bebida. La capacidad de los microorganismos para superar estos obstáculos puede influenciarse entre otras cosas, por el nivel de contaminación inicial, la temperatura y la integridad del empaque de la bebida contra la pérdida de carbonatación, es decir, en el caso de refrescos carbonatados. El deterioro microbiológico puede resultar de una o más levaduras, bacterias y/o microorganismos del moho. Por ejemplo, las levaduras y bacterias son capaces de deteriorar bebidas carbonatadas y no carbonatadas tales como refrescos, tés, cafés, aguas enriquecidas, etc. La capacidad de las levaduras y ciertas bacterias para desarrollarse anaeróbicamente permite su crecimiento en bebidas carbonatadas, mientras los mohos se restringen al metabolismo aeróbico, y por lo tanto no crecen. Véase Stratford, M. et al., Fruit Juices, Fruit Drinks, y Soft Drinks, En The Microbiological Safety & Quality of Food (eds. B.M. Lund, T. C. Baird-Parker, y G.W. Gould, Aspen Publishers 2000) . Típicamente, el deterioro de levaduras se manifiesta como la fermentación con la producción de gas y de etanol, así como sedimentación, ausencia de sabores y olores, y pérdida de turbidez o estabilidad de emulsión. Las bacterias tienden a producir ausencia de sabores y olores con la sedimentación asociada. Por otro lado, los mohos pueden sobrevivir, pero en general no son capaces de desarrollarse en ambientes bajos en oxígeno y de este modo, no deterioran a los refrescos carbonatados excepto cuando la carbonatación se disminuye . Puede ocurrir sin embargo, el deterioro de moho de bebidas no carbonatadas, y puede ser evidente después del crecimiento micelial del moho, al flotar glóbulos, aglomeraciones o películas superficiales. Aunque las levaduras tales como Saccharomyces, Zygosaccharo yces, Candida y Dekkera spp., son a menudo responsables de incidentes de deterioro en bebidas comunes, bacterias acidofílicas tales como Lactobacillus, Leuconostoc, Gluconobacter, y Zymomonas spp., y mohos como Penicillium y Aspergillus spp., y pueden deteriorar bebidas de llenado en frío. Las esporas de bacterias termofílicas , acidofílicas, tales como Alicyclobacillus spp., y esporas de mohos resistentes al calor de Byssochlamys y Neosartorya spp., pueden sobrevivir la pasteurización y pueden deteriorar productos de llenado en caliente, no carbonatados tales como bebidas o tés deportivos . Las aguas envasadas son susceptibles a crecimiento de mohos también. La protección contra deterioro microbiológico de bebidas puede lograrse utilizando conservadores químicos y/o técnicas de procesamiento tales como llenado en caliente, pasteurización en túnel, tratamiento a temperatura ultraelevada (UHT) o pasteurización seguida por envasado aséptico, y/o pasteurización seguida enfriando la bebida. Generalmente, las bebidas con un pH <4.6, pueden conservarse químicamente, procesarse con calor y llenarse en paquetes de manera que el producto no se vuelva a contaminar. Por ejemplo, técnicas del proceso tales como llenado en frío con conservadores químicos o pasteurización seguida por llenado en frió pueden utilizarse para conservar este tipo de bebida. En una manera similar, esta misma bebida puede procesarse utilizando técnicas no conservadas tales como llenado en caliente, pasteurización de túnel, pasteurización seguida por llenado aséptico o incuso requiriendo que la bebida se enfríe, es decir, bajo refrigeración después de la etapa de pasteurización. Las bebidas que tienen un pH > 4.6 deben procesarse de manera que se destruyen las esporas utilizando temperaturas ultraelevadas seguidas por llenado aséptico en paquetes o replicar empaques sellados del producto. Sistemas de conservaciones actuales para refrescos carbonatados y no carbonatados no perecederos, acídicos se basan en conservadores de ácidos débiles (por ejemplo, ácido benzoico y/o sórbico) . Los ácidos benzoico y sórbico (y sales de los mismos) inhiben efectivamente levaduras, bacterias y mohos con algunas excepciones . Los ácidos débiles en bebidas existen en equilibrio entre sus formas disociadas y no disociadas el cual es dependiente de la constante de disociación del ácido (pKa) y el pH de la bebida. La pKa para el ácido benzoico es de 4.19 y la pkA del ácido sórbico es 4.76. Un pH promedio debajo de la pKa del ácido particular empuja el equilibrio hacia la forma no disociada. La forma no disociada es más eficaz contra microorganismos, y por lo tanto, los conservadores de ácidos débiles pueden ser más efectivos en el intervalo de pH bajo. Las propiedades de conservación de los ácidos débiles pueden mejorarse por la adición de los compuestos quelantes a la bebida. Por ejemplo, los compuestos quelantes comunes agregados a las bebidas incluyen etilendiamintetraácetico (EDTA) de calcio-disodio o uno o más de los polifosfatos, tales como hexametafosfato de sodio (SHMP) . En productos no carbonatados con nutrientes elevados, tales como aquellas bebidas que contienen jugo, vitaminas y/o minerales, los ácidos débiles son más probables que ejerzan inhibición si se utilizan junto con mejoradores de conservadores . Los sistemas de conservación de ácidos débiles, sin embargo, tienen limitaciones. La adaptación genética y la resistencia subsiguiente por microorganismos pueden ser una de las preocupaciones más grandes. Véase Piper, P. et al., Weak Acid Adaptation: The Stress Response that Confers Yeasts with Resistance to Organíc Acid Food Preservatives, 147 Microbiol. 2635-2642 (2001) . Ciertas levaduras, tales como Z. bailii, Z. hisporus, C. krusei y S. cerevisiae, tienen genes específicos que les permiten resistir los conservadores de ácidos débiles y al crecimiento, a pesar de su presencia e independientemente de la co-presencia de EDTA o SHMP. Algunas bacterias, tales como Gluconobacter spp., se piensa que también son resistentes al conservador. Los niveles de ácidos débiles necesarios para superar esta resistencia han demostrado que son límites mucho más regulatorios en los niveles de uso. El deterioro de tés conservados, bebidas que contienen jugo y bebidas carbonatadas es común debido a las levaduras resistentes a conservadores. Se sabe también que los ácidos débiles imparten una escaldadura en la garganta o en la boca cuando se utiliza a niveles elevados . Aunque existen ciertas bebidas no perecederas donde esto puede ser aceptable, a menudo esta percepción sensorial se considera negativa. Además, organizaciones no gubernamentales y también algunas agencias de gobiernos internacionales han suscitado preocupaciones con respecto al uso de conservadores de ácido libre en bebidas y alimentos . Además, las otras técnicas del proceso para bebidas bajas en ácido (es decir, con un pH > 4.6) tienen limitaciones. Tales bebidas bajas en ácido deben tratarse térmicamente para destruir apropiadamente esporas de Clostridium botulinum y Bacillus cereus . Ejemplos de tales procesos incluyen UHT y replicación. Incluso después de tal procesamiento, el producto debe manejarse en una forma para evitar la contaminación después del procesamiento. La investigación, sin embargo, sugiere que puede haber varias cepas de microorganismos que forman esporas que pueden sobrevivir estas diferentes técnicas de procesamiento. Para este fin, estas técnicas de procesamiento pueden no eliminar el potencial de deterioro. Conservadores naturales que tienen la capacidad de no únicamente conservar bebidas, sino también de ser capaces de impartir beneficios para la salud pueden ser deseables para los consumidores . Los conservadores que podrían etiquetarse como naturales podrían también eliminar requerimientos de llenado en caliente para bebidas libres de conservadores no perecederas, no conservadas. De este modo, podría ser deseable proporcionar un conservador natural y/o un sistema conservador que inhiba el crecimiento de microorganismos para resolver por lo menos una de las limitaciones antes mencionadas en la técnica. Se ha descubierto que por lo menos un extracto que comprende saponinas puede utilizarse como un conservador y/o utilizarse como una parte de un sistema conservador para inhibir y/o reducir el crecimiento de microorganismos seleccionados de mohos, levaduras y/o bacterias en bebidas y/o alimentos . En una modalidad, la presente invención se dirige a un conservador de bebidas o alimentos de por lo menos un extracto que comprende saponinas, en donde se presenta por lo menos un extracto en una cantidad efectiva para inhibir y/o reducir el crecimiento de microorganismos seleccionados de mohos , levaduras y bacterias . En otra modalidad, la presente invención se dirige a un sistema conservador que comprende por lo menos un extracto que comprende saponinas y por lo menos un conservador adicional, en donde el sistema conservador exhibe inhibición mejorada y/o crecimiento reducido de por lo menos un microorganismo seleccionado de mohos, levaduras y bacterias cuando se compara con por lo menos un extracto que comprende saponinas o por lo menos un conservador adicional utilizado solo. Se debe entender que tanto la descripción general anterior como la siguiente descripción detallada son ejemplares y aclaratorias solamente y no son restrictivas de la presente invención, como se reclama.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 es una gráfica de barras que muestra las máximas poblaciones de levaduras obtenidas en un lapso de tiempo del día 0 al día 28 en el ácido débil conservado o caldo de extracto de malta conservado con extracto de yuca y corresponde a los datos presentados en las Tablas DOS y CUATRO . La Figura 2 es una gráfica de barras que muestra las máximas poblaciones de moho obtenidas en un lapso de tiempo del día 0 al día 28 en ácido débil conservado o caldo de extracto de malta conservado con extracto de yuca y corresponde a los datos presentados en las Tablas DOS y CUATRO . La Figura 3 es una gráfica de barras que muestra las máximas poblaciones de bacterias acidofílicas obtenidas en un lapso de tiempo del día 0 al día 28 en ácido débil conservado o en caldo de extracto de malta conservado con extracto de yuca y corresponde a los datos presentados en las Tablas DOS y CUATRO. La Figura 4 es una gráfica de barras que muestra las máximas poblaciones de bacterias que forman esporas obtenidas en un lapso de tiempo del día 0 al día 28 en ácido débil conservado o caldo de extracto de malta con extracto de yuca y corresponde a los datos presentados en las Tablas DOS y CUATRO. La Figura 5 es una gráfica de barras que muestra las máximas poblaciones de levadura obtenidas en un lapso de tiempo del día 0 al día 28 en ácido débil conservado o soluciones de sacarosa conservada de extracto de yuca y corresponde a los datos presentados en las Tablas CINCO y NUEVE . La Figura 6 es una gráfica de barras que muestra las máximas poblaciones de levadura obtenidas en un lapso de tiempo del día 0 al día 28 en el ácido débil conservado o soluciones de sacarosa conservadas de extracto de quillaja y corresponde a los datos presentados en las Tablas SIETE y NUEVE . La Figura 7 es una gráfica de barras que muestra las máximas poblaciones de mohos obtenidas en un lapso de tiempo del día 0 al día 28 en el ácido débil conservado o soluciones de sacarosa conservadas de extracto de yuca y corresponde a los datos presentados en las Tablas CINCO y NUEVE. La Figura 8 es una gráfica de barras que muestra las poblaciones máximas de bacterias acidofílicas obtenidas en un lapso de tiempo del día 0 al día 28 en el ácido débil conservado o soluciones de sacarosa conservadas de extracto de yuca y corresponde a los datos presentados en las Tablas CINCO, SEIS y NUEVE. La Figura 9 es una gráfica de barras que muestra las máximas poblaciones de bacterias acidofílicas obtenidas en un lapso de tiempo del día 0 al día 28 en ácido débil conservado o soluciones de sacarosa conservadas de extracto de Quillaja y corresponde a datos presentados en las Tablas SIETE, OCHO y NUEVE. La Figura 10 es una gráfica de barras que muestra las máximas poblaciones de bacterias que forman esporas obtenidas en un lapso de tiempo del día 0 al día 28 en el ácido débil conservado o soluciones de sacarosa conservadas de extracto de yuca y corresponde a los datos presentados en las Tablas CINCO, SEIS y NUEVE. La Figura 11 es una gráfica de barras que muestra las máximas poblaciones de bacterias que forman esporas obtenidas en un lapso de tiempo del día 0 al día 28 en ácido débil conservado para soluciones de sacarosa conservadas de extracto de Quillaja y corresponde a los datos presentados en las Tablas SIETE, OCHO y NUEVE. La presente invención se dirige a una composición para conservador que comprende por lo menos un extracto que comprende saponinas, en donde la composición para conservador logra estabilidad microbiana de por lo menos un microorganismo seleccionado de moho, levadura y bacterias en una bebida o alimento. Como un resultado, la composición de la bebida y/o el alimento no requiere técnicas de procesamiento adicionales tales como pasteurización de jarabe, llenado en caliente de la bebida, o la incorporación de niveles tradicionales de conservadores de ácido débil en la bebida con el fin de obtener inhibición y/o reducción en el crecimiento microbiano. Debido a que la composición de la bebida o el alimento puede no requerir niveles tradicionales de conservadores y puede utilizar un conservador natural, las composiciones de la presente invención pueden minimizar la ausencia de sabores asociada con los niveles elevados de conservadores, pueden reducir la dependencia de los sistemas de conservadores tradicionales conduciendo a resistencia antimicrobiana, pueden utilizar por lo menos un conservador natural, y pueden reducir el nivel de conservadores tradicionales . Se describen la descripción general anterior y la siguiente descripción detallada de la presente invención, para propósitos de ejemplo, junto con una composición para bebidas . Se contempla que las modalidades descritas en la presente son capaces de utilizarse en otras composiciones tales como alimentos, por ejemplo, alimento para consumo humano y consumo animal, cosméticos y composiciones farmacéuticas. De este modo, se pretende que la presente invención cubra modificaciones y variaciones de la invención, siempre que entren dentro del alcance de las reivindicaciones anexas y sus equivalentes. Se ha descubierto sorprendente e inesperadamente que por lo menos un extracto que comprende saponinas puede utilizarse como un conservador en por ejemplo, una bebida, contra proliferación microbiana y como un resultado, mantiene la estabilidad microbiológica de la bebida después de una inoculación inicial con microorganismos seleccionados de mohos, levaduras y bacterias. Como se utiliza en la presente, "estabilidad microbiológica" o "estabilidad microbiana" o "inhibición microbiana" se refiere a un incremento o declive no significativo en un inoculo microbiano en una bebida o bebida modelo del día 0 al día 28, es decir, un incremento no mayor o igual a 1.0 log o un incremento de menos de 1.0 log queda en estasis o una reducción no mayor de 1.0 log de viabilidad de microorganismos del día 0 al día 28. Como se utiliza en la presente, "estabilidad microbiana extendida" o "inhibición microbiana extendida" se refiere a un incremento o declive significativo en la viabilidad de un inoculo microbiano en una bebida o bebida modelo del día 0 al día 60, es decir, un incremento no mayor de o igual a 1.0 log o un incremento de menos de 1.0 log queda en estasis, o una reducción no mayor de 1.0 log de viabilidad de microorganismos del día 0 al día 60. La "reducción microbiana" se refiere a más de un 1.0 log de una población menor en CFU/ml de un inoculo microbiano en un lapso de 28 días en comparación con el punto de tiempo del día 0 o nivel de inoculo conocido. La "reducción microbiana mejorada" se refiere a la reducción completa del inoculo microbiano en un lapso de 28 ó 60 días. Como se utiliza en la presente, el término "bebida" o "composición para bebida" se refiere a una bebida líquida que es apropiada para el consumo humano o animal . Puede hacerse mención de bebidas, pero sin limitarse por ejemplo, a bebidas energéticas, agua saborizada, malteadas, bebidas deportivas, jugos de frutas (por ejemplo, bebidas con jugo y jugos de fruta fortificados) , sodas carbonatadas/jugos, batidos, bebidas proteínicas (por ejemplo, lácteas, de soya, arroz u otras) , reemplazos de comida, yogures lácteos bebibles, tés, cafés, bebidas de cola, aguas fortificadas, bebidas bajas en ácido como se define en 21 C.F.R. § 113, bebidas acidificadas como se define en 21 C.F.R § 114, jarabes, jarabes de frutas, jugos dxluibles tales como zumos, bebidas saludables, bebidas funcionales (por ejemplo, nutracéuticos) , néctares, tónicos, horchata (es decir, componentes vegetales y/o de arroz hechos en una bebida) , bebidas carbonatadas congeladas y bebidas no carbonatadas congeladas . Como se utiliza en la presente, "alimento" se refiere por lo menos a un producto alimenticio comestible, tal como un comestible semisólido o sólido. Puede hacerse mención de productos alimenticios tales como, pero sin limitarse a helado o postres congelados, yogur, alimentos para bebés/niños, cueritos/rollitos de frutas, yogures lácteos, yogures de soya, barras/bocadillos de granóla, galletas saladas, barras de frutas, barras energéticas, barras nutricionales, pastas de dientes, y cualquiera otra composición comestible que puede deteriorarse como un resultado de contaminación por microorganismos. Extracto que comprende saponinas Se descubrió que ciertos niveles de por lo menos un extracto que comprende saponinas pueden utilizarse como un conservador en una bebida o un producto alimenticio y además, en combinación con por lo menos un conservador adicional diferente de por lo menos un extracto que comprende saponinas . Las saponinas son un grupo de glicósidos de origen natural, predominantemente encontrados en el reino vegetal. Comprenden un aglicón sin carbohidratos acoplado a las unidades de la cadena del azúcar. Las saponinas se dividen en dos grupos: saponinas esferoidales y triterpénicas . Más de 100 saponinas esferoidales e incluso un número más elevado de saponinas triterpénicas se han identificado hasta ahora. K. Hostettmann, & A. Marston, Saponins (Cambridge University Press 1995) . Un extracto que comprende saponinas puede derivarse de por ejemplo, pero sin limitarse a plantas comestibles tales como soya, frijoles, chícharos, avena, especies Solanum y Allium, tomate, espárrago, té, cacahuate, espinacas, remolacha azucarera, camote, zarzamora, raíz de regaliz, raíz de prímula, raíz de senega, Quillaja, Yucca y Gyposphila. Los extractos que comprenden saponina comercialmente disponibles generalmente se derivan de Yucca, tal como Yucca schidigera y Quillaja, tal como Quillaja saponaria. La Yucca schidigera es una planta que crece silvestre en la parte suroeste de los Estados Unidos y en la parte norte de México. La Quillaja saponaria es un árbol encontrado en Sudamérica tal como en las regiones secas de Chile. Estudios sostienen que las saponinas no se absorben generalmente en el tracto digestivo y de este modo, no causan problemas toxicológicos serios, aunque se ha estimado una toxicidad oral baja de las saponinas. Price et al., Chemistry and Biological Significance of Saponins in Foods and Feedingstuffs, 26 CRC Crit . Rev. Food Sci . Nutr. 27-135 (1987) . De acuerdo con la presente invención, por lo menos un extracto que comprende saponinas puede derivarse de una fuente sencilla o de múltiples fuentes. Además, por lo menos un extracto que comprende saponinas puede seleccionarse de saponinas esferoidales y triterpénicas , y mezclas de las mismas . Se sabe que los extractos que comprenden saponina tienen ciertas características benéficas y usos tales como agentes espumantes como se utiliza en la Patente Norteamericana No. 4,986,994, tensoactivos como se utiliza en las Patentes Norteamericanas Nos. 5,503,766 y 6,214,349, saborizantes de alimentos como se utiliza en la Patente Norteamericana No. 5,804,239, agentes en toallas limpiadoras como se utiliza en la Patente Norteamericana No. 6,734,157, y los agentes terapéuticos como se utiliza en la Publicación Norteamericana No. 2004/0096527. Además, la Publicación Japonesa No. 2003009832 enseña un mejorador de mantenimiento particularmente dirigido para inhibir el crecimiento de brotes de esporas bacterianas que contiene un extracto de vegetación con saponinas seleccionado de Sapindus mukurossi, una castaña de Indias y espárrago como agentes activos . Aunque se han utilizado extractos que comprenden saponina en diferentes capacidades, se descubrió sorprendentemente que por lo menos un extracto que comprende saponinas puede utilizarse como un conservador en reemplazo de sistemas conservadores tradicionales y/o puede utilizarse junto con conservadores conocidos para mantener la estabilidad microbiana, la reducción microbiana o la estabilidad mejorada o reducción o incluso mejorar la microestabilidad y puede utilizarse para reducir los niveles de sistemas conservadores tradicionales . Esto ha sido demostrado por la mayor destrucción de células de levadura en bebidas y sistemas de bebidas (por ejemplo, reducciones de 1.0 log y/o 2.0 log en CFU/ml en un lapso de 28 días) que los exhibidos utilizando sistemas conservadores de ácido débil tradicionales, la inhibición de levaduras resistentes al conservador (Zygosaccharomyces y Candida krusel) que crecen en bebidas conservadas en ácido débil o sistemas de bebidas sin saponinas, la reducción de esporas de mohos o la inhibición del crecimiento visible de mohos, y la inhibición de proliferación bacteriana (un incremento de menos de 1.0 log en CFU/ml en un lapso de 28 días) en estos mismos sistemas . Se postula que las propiedades antimicrobianas del origen de las saponinas a partir de la interacción de las moléculas de saponinas con esteróles de membrana, las cuales comprenden una porción significativa de la membrana celular de por ejemplo, levaduras. Incluso cuando las membranas bacterianas son bajas en colesterol, haciéndolas resistentes a los efectos de las saponinas, se ha demostrado que la composición de ácido graso de las membranas de células bacterianas puede también ser un objetivo para las saponinas. El mayor efecto de saponinas en bacterias es la interrupción de membranas y la fuga de proteínas y enzimas. Hoagland et al., Effect of Alfalfa Saponins on Rhizosphere Bacteria, 86 Phytopathology S97 (1996); Zablotowicz et al., Effects of Saponins on the Growth and Activity of Rhizosphere Bacteria, in Saponins Used in Food and Agriculture 83-95 (G.R. Waller & K. Yamasaki eds . , 1996). La interacción con los esteróles de membrana, las proteínas y los fosfolípidos parece ser por lo menos uno de los posibles mecanismos del antibacteriano así como la actividad antifúngica de las saponinas . Provistos posteriormente en la Tabla UNO son los ejemplos no limitantes de varios tipos de microorganismos tales como mohos , levaduras y bacterias , que contaminan comúnmente una bebida. El Aspergillus spp. , y Penicillium spp., representan géneros de moho comunes que pueden desarrollarse fácilmente en bebidas no carbonatadas tales como bebidas de jugos y aguas enriquecidas si no se controlan por conservación o calentamiento. Byssochlamys spp. y Neosartorya spp., son ejemplos de mohos resistentes al calor que sobreviven la pasteurización y el crecimiento en, por ejemplo, bebidas deportivas isotónicas no conservadas y tés. Las levaduras Zygosaccharomyces spp., Saccharomyces spp., y Candida spp., pueden ser problemáticas en bebidas no perecederas acidicas en particular debido a su resistencia potencial al ácido sórbico y benzoico. Dekkera spp., son un género de levaduras que son únicamente tolerantes a niveles elevados de carbonatación, y de este modo pueden desarrollarse y deteriorar bebidas carbonatadas . Lactobacillus spp. y Gluconobacter spp. son bacterias acidofilicas que pueden deteriorar bebidas no carbonatadas. El género Alicyclobacillus spp., es una bacteria que forma esporas que pueden sobrevivir a la pasteurización y desarrollarse a temperatura elevada de bebidas tales como bebidas deportivas isotónicas y jugos. Bacillus spp y Clostridium spp., son bacterias que forman esporas que pueden sobrevivir a tratamientos de pasteurización moderados y al deterioro de productos alimenticios y bebidas bajas en ácido.

TABLA UNO : Ejemplos de microorganismos que pueden desarrollarse y causar deterioro de bebidas.

Las saponinas son compuestos de origen natural y pueden encontrarse en una variedad de plantas. Por ejemplo, los cacahuates tienen de 1.3% a 1.6%, la raíz de la espinaca tiene aproximadamente 4.7%, la castaña de Indias tiene aproximadamente 3% a 6%, la goma guar tiene aproximadamente 10%, y el espárrago tiene aproximadamente 1.5% de saponinas. Price et al., The Chemistry and Biologxcal Significance of Saponins in Foods and Feeding Stuffs, 26 CRC Crit . Rev. Food Sci. Nutr. 27-135 (1987). A pesar de aquellas saponinas de origen natural en muchas plantas utilizadas como alimento humano, existen únicamente dos fuentes vegetales que se aprueban como aditivos alimenticios. Los dos son: Quillaja saponaria (saponinas triterpénicas) y Yucca schidigera (saponinas esferoidales) . Estos extractos que comprenden saponinas se consideran actualmente como generalmente reconocidos como productos seguros (GRAS) y se permiten utilizar en alimentos y bebidas en el Reino Unido y en los Estados Unidos y otras regiones. Además, los extractos de Yucca contienen en general aproximadamente 10% de las saponinas en peso seco. Oleszek, Wieslaw, et al., Steroidal Saponins of Yucca schidigera Roezel, 49 J. Agrie. Food Chem. 4392 (2001) . De acuerdo con la presente invención, las propiedades antimicrobianas del extracto que comprende saponinas son aprovechadas como un conservador en composiciones tales como bebidas utilizando una cantidad efectiva del extracto que comprende saponinas , en donde el conservador logra estabilidad microbiana de por lo menos un microorganismo seleccionado de moho, levadura y bacterias en una bebida o un alimento. La cantidad efectiva del extracto que comprende saponinas puede depender de la naturaleza de la bebida. Por ejemplo, el extracto que comprende saponinas puede presentarse en el producto para bebidas en una cantidad que varia de aproximadamente 50 ppm a aproximadamente 20,000 ppm tal como de aproximadamente 250 ppm a aproximadamente 5000 ppm en un nutriente elevado (por ejemplo, jugo, vitamina, nitrógeno, etc.) bebidas, o por ejemplo, de aproximadamente 100 ppm a aproximadamente 1000 ppm en bebidas bajas en nutrientes (por ejemplo, bebidas que carecen de vitamina o vitaminas, niveles bajos de nitrógeno, etc., y de aproximadamente <3% de jugo) y además, por ejemplo, de aproximadamente 250 ppm a aproximadamente 1000 ppm tal como 250 ppm a 750 ppm en bebidas bajas en ácido . Inicialmente, se examinaron cepas de varios microorganismos en un caldo de extracto de malta para evaluar si por lo menos un extracto que comprende saponinas, por ejemplo, un extracto sin procesar de Yucca. schidígera, exhibió actividad antimicrobiana contra estos microorganismos y para determinar mínimas concentraciones inhibidoras. El caldo de extracto de malta se seleccionó debido a que se utiliza comúnmente en la industria de bebidas para enumeración de microorganismos de deterioro. El caldo de extracto de malta se ajustó a pH 5.0 con ácido cítrico. Aunque algunos antimicrobianos no pueden ejercer al máximo, mucho menos cualquier efecto en pH elevado (en este caso, pH5) , el objetivo fue determinar los niveles inhibidores mínimos del extracto que comprende saponinas bajo condiciones casi ideales para el desarrollo de los microorganismos. Esto proporciona un peor escenario para probar la efectividad de los antimicrobianos, y la inhibición de microorganismos en bebidas acídicas puede esperarse con seguridad que sea mayor (es decir, menor crecimiento o mayor destrucción de células microbianas o esporas) debido a un pH inferior y menos biomoléculas de nitrógeno. Se replicaron experimentos tres veces y se tabularon logaritmos de poblaciones promedio en muestras con el tiempo. Como se proporciona en las Tablas DOS y TRES posteriores, el extracto que comprende saponinas demostró grados variables de inhibición/reducción de crecimiento contra un intervalo de microorganismos . Los datos presentados posteriormente en las Tablas DOS a TRES utilizaron soluciones estándares de 20 ml/L y 10 mi del extracto de Yucca o Quillaja preparado agregando asépticamente 20 mi o 10 mi del extracto de Yucca. de 980 mi a 990 mi de un caldo de extracto de malta y ácido granular para ajustar el pH a aproximadamente 5.0. Los ensayos antimicrobianos para cada extracto que comprende saponinas se prepararon por separado utilizando soluciones operativas preparadas en concentraciones finales de Yucca de 0.1, 0.25, 0.5, 1 y 2 ml/L, como sigue: para una solución de 0.1 ml/L (100 ppm) , 0.1 ml/L de 10 ml/L de la solución estándar en 9.9 mi del caldo; para 0.25 ml/L (250 ppm) de la solución, 0.25 mi de 10 mi de la solución estándar en 9.75 mi del caldo; para 0.5 ml/L (500 ppm) de la solución, 0.25 mi de 20 ml/L de la solución estándar en 9.75 mi del caldo; para 1 ml/L (1000 ppm) de la solución, 0.5 ml/L de 20 ml/L de la solución estándar en 9.5 mi del caldo; y para 2 ml/L (2000 ppm) de la solución, 1 mi de 20 mi de la solución estándar en 9.0 mi del caldo. Se debe observar que debido a que se prepararon aquellas soluciones con base en el porcentaje en volumen/volumen, los valores de ppm indicados en paréntesis y en las tablas deben multiplicarse por la densidad de los extractos sin procesar no diluidos con el fin de obtener un valor ppm más exacto. La densidad de los extractos no diluidos fue aproximadamente 1.22 g/ml. De este modo, 100 ppm de la solución, el valor de ppm fue realmente 122 ppm. Así mismo, 250 ppm de la solución deben ser 305 ppm, 500 ppm de la solución deben ser 610 ppm, 1000 ppm de la solución deben ser 1220 ppm, y 2000 ppm de la solución deben ser 2440 ppm. La Tabla CUATRO resume el caldo de extracto de malta inoculado con microorganismos similares encontrados en las Tablas DOS y TRES, pero utilizados como un sistema conservador tradicional, es decir, benzoato/sorbato/EDTA.

H o O TABLA DOS: Evaluación de extracto de Yuca contra diferentes mohos, levaduras y bacterias en caldo de extracto de malta en un pH 5.0, 25°C. Los niveles de microorganismos se muestran en una colonia de log10 promedio formando unidades (CFU) por milímetro ± desviación estándar (SD).

Concentraciones de extracto de Yuca (ppm) Tiempo Microorganismo (Días) 0 100 250 500 1000 2000 0 3.01 ±0.12 3.39 ± 0.13 3.40 ± 0.01 3.42 ± 0.18 3.31 ± 0.17 3.21 ± 0.14 7 7.36 ± 0.10 2.48 ± 0.12 <1.00 • <1.00 <1.00 <1500 LEVADURA 14 7.16 ± 0.13 7.40 ± 0.53 2.30 ± 0.25 <1.00 <1.00 <1.00 Zygosaccharomyces 21 ND ND 3.36 ± 0.18 <1.00 <1.00 <1.00 bailii 28 ND ND 2.14 ± 0.47 <1.00 <1.00 <1.00 60 ND ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 0 3.21 ±0.06 3.41 ±0.18 3.51 ± 0.04 3.47 ± 0.14 3.46 ± 0.18 3.35 ± 0.27 7 7.20 ± 0.06 <1.00 <1.00 <1.00 ' <1.00 <1.00 · LEVADURA 14 7.15 + 0.09 <1.00 <1.00 •<1.00 <1.00 <1.00 Dekkera bruxellensis 21 ND 1.47 + 0.72 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 28 ND 7.30 ± 0.89 <1.00 <1.00 <1.00 <1·.00 60 ND ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 ISJ H o 171 O 0 3.12 ±0.06 3.61 ±0.03 3.56 ±0.05 3.43 ±0.16 3.47 ±0.06 3.30 + 0.09 7 6.74 ±0.10 6.47 ±0.29 6.35 ±0.25 <1.00 <1.00 <1.00 LEVADURA 14 7.12 ±0.11 ND ND <1.00 <1.00 <1.00 Saccharomyces 21 ND ND ND <1.00 <1.00 <1.00 cerevlsiae 28 ND ' ND ND <1.00 <1.00 <1.00 60 ND ND ND <1.00 <1.00 <1.00 0 3.21 ± 0.06 3.30 ±0.29 3.38 ±0.18 3.42 ±0.22 3.53 ±0.07 3.45 ±0.15 7 6.84 ±0.10 6.75 ±0.06 6.42 ±0.23 6.72 ±0.07 6.53+0.32 6.73 ±0.07 LEVADURA 14 ND ND ND ND ND ND Candida krusei 21 ND ND ND ND ND . ND 28 ND ND ND ND ND ND 60 ND ND ND ND ND ND 0 3.14 ±0.06 3.47 ±0.08 3.41 ±0.08 3.32 ± 0.02 3.48 + 0.08 3.32 + 0.16 7 6.36 ±0.12 <1.00 <1.00 <1.00 < .00 <1.00 LEVADURA 14 7.10 ±0.06 3.26 ±0.24 3.16 ±0.16 <1.00 <1.00 ' <1.00 Pichia 21 ND 6.39 ±0.46 2.48 ± 0.46 <1.00 <1.00 • <1.00 membranaefaciens 28 ND ND 7.06 ± 0.06 2.35 ±0.14 <1.00 <1.00 60 . ND ND ND 5.94 ±0.61 <1.00 <1.00 MOHO 0 2.06 ±0.10 2.12 + 0.10 2.26 ±0.05 2.22 ± 0.05 2.06 ±0.06 2.08 ±.0.09 Byssochlamys fulva 7 TNTC TNTC <1.00, <1.00 <1.00 <1.00 H H ?? o U1 O IJ1 14 ND ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 21 ND ND TNTC TNTC <1.00 <1.00 28 ND ND ND . ND <1.00 <1.00 60 ND ND ND ND <1.00 <1.00 MOHO 0 1.96 ±0.06 2.14 ±0.06 2.1 ±0.03 2.04 ±0.04 2.01 ±0.02 1.90 ±0.05 Neosartorya físcheri .7 TNTC TNTC TNTC TNTC , TNTC - TNTC 14 ND ND ND ND ND ND- 0 2.10 ±0.06 2.30 ±0.01 2.05 ±0.04 2.11 ±0.07 2.00 ±0.04 2.13 ±0.02 MOHO 7 TNTC TNTC TNTC TNTC TNTC TNTC Fusaríum oxysporum 14 ND ND ND ND ND ND 0 1.96 ±0.08 2.06 ± 0.06 1.91 ±0.12 1.94 ±0.03 2.02 ±0.08 2.05 ± 0.06 7 TNTC TNTC <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 MOHO 14 ND ND 3.13±0.15 3.23 ±0.21 1.16 ±0.15 <1.00 · Penicillium iialicum 21 ND ND 2.45 ±0.50 <1.00 <1.00 · <1.00 28 ND ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 60 ND ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 BACTERIA 0 3.23 ±0.10 3.21 ±0.08 3.34 ±0.08 3.40 ±0.15 3.24 ±0.28 3.29 ±0.13 Gfuconacetobacter 3 8.10±0.10 6.94 ±0.67 1.40 ±0.45 ¦1.40 ±0.46 2.00 ±0.09 1.52 ±0.45 xylinus 6 ND ND 3.37 ±0.33 3.32 ±0.30 2.44 ±0.45 2.32 ±0.30 H o 01 o ?p 12 ND ND 7.43 ±0.16 6.92 ±0.43 <1.00 . <1.00 20 ND ND ND ND <1.00 <1.00 60 ND ND ND ND < 1.00 <1.00 0 3.10 ±0.08 3.26 + 0,08 3.27 ±0.13 3.18 ±0.17' 3.15 ±0.21 3.24 ±0.28 3 8.16 ±0.12 8.22 ±0.22 <1.00 <1.00 <1.00 , <1.00 BACTERIA 6 ' ND • ND <1.00 <1.00 <1,00 . <1.00 Aíicyclobacillus 12 ¦ ND ¦ ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 acidoterrestris 20 · ND ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 60 ND ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 0 3.24 ±0.06 3.31 ±0.09 3.20 ±0.18 3.35 ±0.08 3.29 ±0.14 •3.29 ±0.05 3 8.12 + 0.06 7.14 ±0.32 <1.00 <1.00 <1,00 <1.00 BACTERIA . 6 ND ND. <1.00 <1.00 <1.00 . <1.00 Baclllus 12 ND ND 1.65 ±0.33 1.72 ±0.36 <1.00 <1.00 stearothermophilus 20 ND • ND 7.32 ± 0.29 6.61 ±0.74 4.98 ±0.75 2.97 ±0.77 .60 ND ND ND ND <1.00 <1.00 BACTERIA 0 3.10 ±0.06 3.55 ± 0.07 3.30 + 0.27 3.23 ±0.23 3.17 ±0.17 3.24 ±0.14 Clostrídium botulinum 3 8.25 ±0.03 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 , <1.00 6 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 12 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 20 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 H O O <J1 60 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 : <1.00 0 3.21 ± 0.047 3.39 ± 0.25 3.47 ±0.35 3.22 ±0.21 3.21 ± 0.23 3.38 ±0.20 3 8.12 ±0.06 <1.00 <1.00. <1.00 <1.00 . <1.00 BACTERIA 6 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 Cbstridium 12 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 acetobutyricum 20 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 60 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 0 3.21 ±0.14 3.34 ±0.16 3.41 ±0.17 3.51 ±0.10 3.35 + 0.21 3.27 ±0.14 'BACTERIA 3 7.42 ± 0.09 2.44 ±0.33 2.50 ±0.10 1.53 ±0.21 <1.00 <1.00 Leuconostoc oenus 6 ND 7.58 ±0.03 8.04 ±0.43 8.04 ± 0.43 4.05 ± 0.65 3.60 + 0.63 12 ND ND ND ND 5.01 ±0.51 5.84 ±0.69 0 3.19 ±0.22 3.25 ±0.02 3.31 ±0.12 3.29 ±0.04 3.27 ±0.16 3.21 ±0.17 3 6.26 ±0.21 <1.00. <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 BACTERIA 6 ND <1.00. <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 Leuconostoc. 12 ND <1.00 • <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 pseudomesenteroides 20 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 60 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 BACTERIA . 0 3.32 ±0.06 3.36 ±0.12 3.3.1 ±0.13 3.27 ±0.13 3.29 ±0.12 .3.24 ±018 • Lactobacilius ¦3 7.56 ±0.11 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 acetotolerans 6 ND <1.00 <1.00 <1.00 • <1.00 <1.00 t t H H ?p o Ul O 12 ND 7.06 ±0.40 6.23 ±0.18 4.63 ± 0.26 5.30 ±0.26 4.43 ±0.19 ND representa "no hecho"; TNTC representa "muy numeroso para contar t H o O Ln TABLA TRES: Evaluación de niveles más elevados de extracto de Yuca contra diferentes mohos y levaduras en caldo de extracto de malta en pH 5.0, 25°C. Los niveles de microorganismos se muestran en log10 promedio CFU/ml ± SD. Concentraciones de extracto de yuca (ppm) Cepa de levadura Tiempo (días 0 3000 5000 7000 10,000 0 3.26 ± 0. 0 3.33 ± 0.06 3.17 ±0.09 3.31 ± 0.02 3.08 ± 0.09 7 6.21 ± 0.06 <1.00 ' <1.00 <1.00 <1.00 LEVADURA 14 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 Candida krusei 21 ND <1,00 <1.00 . <1.00 •<1.00 28 ND <1.00 < .00 <1.00 <1.00 60 ' ND <1.00 <1.00 <1.00 ' <1.00 0 2.16 ± 0.11 2.14 ± 0.03 2.05 ± 0.06 2.01 ± 0.02 2.14 ± 0.15 7 TNTC <1.00 <1.00 <1.00 ¦ <1.00 MOHO 14 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 Byssochlamys fulva 21 ND TNTC <1.00 <1.00 <1.00 28 ND ND <1.00 <1.00 <1.00 60 ND ND . <1.00 <1.00 <1.00 MOHO 0 2.21 ± 0.12 1.97 ± 0.07 2.11 ± 0.07 2.33 ± 0.03 1.86 ± 0.03 Neosartotya fischeri 7 TNTC <1.00 <1.00 <1.00 <1.00· 14 ND TNTC TNTC TNTC TNTC t H H o OI O OI 21 . ND ND ND ND ND 28 ND ND ND ND ND 60 ND ND ND ND • ND 0 2.36 ± 0.05 2.14 ± 0.09 2.06 ± 0.06 1.92 ± 0.03 . 2.13 ± 0.16 7 TNTC TNTC TNTC TNTC TNTC MOHO 14 ND ND ND ND ND 21 ND ND ND ND ND Fusaríum oxysporum 28 ND ND • ND ND . ND 60 ND ND ND ND ND 0 2.00 ± 0.1 1.86 ± 0.03 • 1.97 ± 0.03 2.11 ± 0.18 1.95 ± 0.05 ' 7 TNTC <1.00 <1.00 <1.00 ¦ <1.00 MOHO 14 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 PenicHIium ¡talicum 21 ND <1.00 <1.00 <1.00 ¦ <1.00 .28 ND <1.00 <1.00 .<1.00 <1.00 - 60 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 ND representa "no hecho"; TNTC representa "muy numeroso para contar" TABLA CUATRO : Evaluación de una mezcla de 200 ppm de benzoato, 150 ppm de sorbato y 25 ppm de EDTA contra diferentes microorganismos a 25 °C en un caldo de extracto de malta (pH 5.0) . Los niveles de microorganismos se muestran en logio promedio CFU/ml ± SD. 14 ND ND 0 2.13 ± 0.06 2.21 ± 0.03 MOHO 7 TNTC . TNTC Fusarium oxysporum 14 ND ' ND 0 2.21 ± 0.13 2;30 ± 0;18· - MOHO 7 TNTC TNTC Penici/lium ¡taücum 14 ND ND " 0 3.26 ± 0.08 3.21 ± 0.23 3 8.17 ± 0.12 2.22 ± 0.23 BACTERIA 6 ND 4.71 ± 0.65 ¦ Gluconacetobacter 12 ND 6.57 ± 0.38 xytinus 20 ND ND 60 ND ND 0 3. 8 ± 0.22 3.21 ± 0.23 3 8.06 ± 0.02 <1.00 BACTERIA 6 ND <1.00 Alicyclobaciilus 12 ND <1.00 acidoterrestris 20 ND <1.00 60 . ND <1.00 · 0 3.48 ± 0.28. . 3.30 ± 0.18 3 8.17 ± 0.12 <1.00 BACTERIA 6 ND 2.62 ± 0.72 BaciJIus 12 ND 8.04 ± 0.33 stearothermophitus 20 ND ND 60 ND ND BACTERIA 0 3.27 ± 0.15 3.34 ±0.21 Clostridium botuünum 3 8.29 ± 0.36 <1.00 6 ND <1.00 12 ND <1.00 NP <1.00 60 . ND <1.00 0 3.16 ±0.28 3.44 ±0.21 3 7.69 ± 0.05 <1.00 BACTERIA 6 ND <1.00 Clostridium 12 ND <1.00 acetobutyricum 20 ND <1.00 60 ND <1.00 0 3.36 ±0.19 3.20 ±0.12 BACTERIA 3 7.85 ±0.18 2.51 ± 0.43 Leuconostoc oenus 6 ND 7.49 ±0.16 0 3.52 ± 0.06 3.34 ±0.16 3 6.08 ±0.61 1.55 ± 0.59 BACTERIA 6 ND • <1.00 L. 12 ND <1.00 pseudomesenteroides 20 ND <1.00 60 ND <1.00 BACTERIA 0 3.24 ±0.19 3.26 ±0.10 Lactobacillus 3 8.12 ±0.09 <1.00 acetotolerans 6 ND <1.00 representa "no hecho"; 1 "NTC representa "muy numeroso para contar A partir de las Tablas DOS y TRES, por lo menos un extracto que comprende saponinas conduce a destrucción observada de muchas especies de levadura aproximadamente por 3 log CFU/ml y algunos mohos por aproximadamente 2 log CFU/ml y las bacterias aproximadamente 3 log CFU/ml en los sistemas de caldo de pH 5.0. Esto apoya el potencial antimicrobiano del extracto de Yuca, es decir, por lo menos un extracto que comprende saponinas en bebidas . Demuestra también que la inhibición puede lograrse utilizando niveles en o por debajo de 100 ppm, la cual fue la concentración mínima probada. Además, la inhibición e incluso la destrucción de microorganismos pueden ocurrir probablemente cuando los extractos que comprenden saponina se utilizan junto con otros compuestos antimicrobianos. Los datos en las Tablas DOS y TRES comparados con la Tabla CUATRO sugieren que por lo menos un extracto que comprende saponinas puede proporcionar inhibición microbiana mejorada en comparación con los conservadores para bebidas tradicionales tales como la combinación de benzoato, sorbato y EDTA. A partir de los datos en las Tablas DOS y CUATRO, las Figuras 1 a 4 muestran las máximas poblaciones de levaduras (Figura 1) , mohos (Figura 2) , bacterias acidofllicas (Figura 3) y bacterias que forman esporas (Figura 4) obtenidas en un lapso de tiempo del día 0 al día 28 en ácido débil conservado y el caldo de extracto de malta conservado en extracto de Yuca. En los siguientes experimentos, se reemplazó el caldo de extracto de malta con un sistema de bebida modelo, es decir, una solución de sacarosa acidificada a pH 3.0 con ácido cítrico. Este tipo de medio de sacarosa se utiliza comúnmente en la industria, y permite la prueba sistémica de microorganismos en un ambiente de crecimiento representativo de la mayoría de las bebidas listas para beber, no perecederas, acídicas. Además, la sacarosa o edulcorante similarmente en funcionamiento se encuentra a menudo en una bebida y un ácido cítrico es un acidulante comúnmente utilizado en una bebida, es decir, la solución de sacarosa y ácido cítrico representa una bebida matriz reducida. Como tal, con microorganismos proliferantes en un medio de crecimiento, la solución de sacarosa representa un peor escenario en comparación con una bebida carbonatada tradicional que consiste de un edulcorante, ácido y agua carbonatada debido a que la solución de sacarosa proporciona vastos carbohidratos fermentables para microorganismos y la falta de carbonatación (es decir, mayor presencia de oxígeno) dará mayor potencial de crecimiento para mohos y bacterias . Los datos presentados posteriormente en las Tablas CINCO a DIEZ utilizaron soluciones estándares de 20 ml/L y 10 ml/L de extracto de Yucca o Quillaja preparado agregando asépticamente 20 mi o 10 mi de extracto de Yucca o Quillaja de 980 mi a 990 mi de solución de sacarosa que comprende agua destilada, jarabe de maíz alto en fructosa o sacarosa, y ácido granular para ajustar el pH a aproximadamente 3.0 a aproximadamente 3.1. Los ensayos antimicrobianos para cada extracto que comprende saponinas se prepararon en forma separada utilizando soluciones operativas preparadas en las concentraciones de Yucca y Quillaja finales de 0.1, 0.25, 00.5, 1 y 2 ml/L, como sigue: para una solución de 0.1 ml/L (100 ppm), 0.1 mi de la solución estándar de 10 ml/L en 9.9 mi de la solución de sacarosa; para 0.25 ml/L (250 ppm) de la solución, 0.25 mi de 10 mi de la solución estándar en 9.75 mi de la solución de sacarosa; para 0.5 ml/L (500 ppm) de la solución, 0.25 mi de 20 ml/L de la solución estándar en 9.75 mi de la solución de sacarosa; para 1 ml/L (1000 ppm) de la solución; 0.5 mi de 20 ml/L de la solución estándar en 9.5 mi de la solución de sacarosa; y para 2 ml/L (2000 ppm) de la solución, 1 mi de 20 mi de la solución estándar en 9.0 mi de la solución de sacarosa. Como se menciona, aquellas diluciones se basaron en porcentajes de volumen/volumen y como tal, los valores ppm listados anteriormente deben multiplicarse por la densidad del extracto sin procesar no diluido de Yucca, es decir, 1.22 g/ml, con el fin de obtener un valor ppm más exacto. De este modo, para la solución de 100 ppm, el valor de ppm fue 122 ppm. Así mismo, 250 ppm de la solución deben ser 305 ppm, 500 ppm de la solución deben ser 610 ppm, 1000 ppm de la solución deben ser 1220 ppm y 2000 ppm de la solución deben ser 2440 ppm. El pH del extracto de Yucca no diluido fue alrededor de 3.8 y aquel del extracto de Quillaja no diluido fue alrededor de 3.9. Las soluciones estándares preparadas en el sistema de sacarosa tuvieron un pH de alrededor de 3.0 a 3.14 y de este modo, la adición de solución estándar a la solución de sacarosa resultó en un cambio mínimo en pH, si lo hay. ? o o ? TABLA CINCO: Evaluación de extracto de Yuca contra diferentes mohos, levaduras y bacterias en soluciones de sacarosa en pH 3.0, 25°C. El nivel de microorganismos se muestra en log10 promedio CFU/ml ± SD.

Concentraciones de extracto de yuca (ppm) Microorganismo Tiempo 0 100- 250 500 1000 2000 (días) 0 3.36 ±0.19 3.35 ±0.14 3.41 ± 0.08 •3.50 ± 0.02 3.50 ±0.03 3.55 ±0.05 7 5.29 ±0.15 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 LEVADURA 14 7.96 ±0.26 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 Zygosaccharomyces 21 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 bailii 28 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 ' <1.00 60 ND <1.00 <1.00 · <1.00 <1.00 <1.00 0 3.44 ±0.11 3.43 ±0.06 3.44 ±0.04 ¦ 3.49 ±0.08 3.44 ±0.09 3.48 ±0.12 7 4.28 ±0.15 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 LEVADURA 14 7.00 ±0.12 <1,00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 Dekkera bruxelbnsis 21 ND <1,00 <1.00 • < .00 <1.00 <1.00 28 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 60 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 LEVADURA 0 3.35 ±0.18 3.34 ± 0.09 3.31 ±0.14 3.31 ±0.15 3.29 ±0.15 3.21 ±0.17" Saccharomyces 7 7.24 ±0.43 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 o en cerevisiae 14 ND • <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 - <1.00 21 ND · <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 • <1.00 28 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 60 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 0 3.41 ± 0.08 3.36 ± 0.07 3.31 ± 0.07 3.27 ± 0.06 3.38 ±0.21 3.33 ± 0.17 7 7.66 ± 0.20 • <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 LEVADURA 14 ND 2.57-± 0.21 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 · Candida krusei 21 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 28 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 ' <1.00 60 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 • 0 3.44 ±0.06 3.41 ± 0.18 3.34 ± 0.08 3.33 ± 0.07 3.33 ± 0.14 3.28 ±0.19 7 4.28 ± 0.13 <1.00 • <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 LEVADURA 14 6.32 ± 0.10 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 Pichia 21 ND <1.00 <1.00 <i.od <1.00 <1.00 membranaefaciens 28 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 60 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 MOHO 0 2.33 ± 0.19 2.34 ± 0.12 2.36 ± 0.16 2.36 ± 0.25 2.26 ± 0.22 2.33 ±0.14 Byssochlamys fulva 7 TNTC 2.71 ± 0.60 2.82 ± 0.17 2.21 ±0.20 0.57 ± 0.88 0.43 ± 0.75 14 ND TNTC TNTC TNTC <1.00 <1.00 21 ND ND ND ND <1.00 <1.00 t H o o 01 28 ND ND ND ND <1.00 • <1.00 ¦ 60 ND ND ND ND <1.00 <1.00 MOHO 0 2.39 ± 0.29 2.36 ±0.11 2.43 ±0.14 2.39 ±0.19 2.47 + 0.12 2.51 ±0.10 Neosartorya fischeri 7 TNTC TNTC TNTC TNTC TNTC ' TNTC 14 ND ND ND ND ND ND 21 ND ND ND . ND ND ND 28 ND ND ND ND ND ND · 60 ND ND ND ND ND ND 0 2.29 ±0.09 2.23 ±0.07 '2.25 ±0.16 2.25 ±0.05 2.28 ±0.10 2,24 ±0.21.

MOHO 7 TNTC TNTC TNTC TNTC TNTC 2.86 ±0.17 Fusarium oxysporum 14 ND ND ND ND ND TNTC 21 ND ND ND ND ND ND 28 ND ND ND ND ND ND 60 ND ND ND ND ND ND 0 2.33 + 0.19 2.31 ±0.10 2.25 ±0.12 2.21+0.19 2.22 ±0.12 2.22 ±0.09 7 TNTC <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 MOHO 14 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 Peniclllium italicum 21 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 28 ND TNTC TNTC TNTC TNTC TNTC 60 ND TNTC TNTC TNTC TNTC TNTC t H H o OI O 0 3.39 ±0.22 3.31 ±0.14 3.36±0.16 3.43 ±0.06 3.34 ±0.15 3.38 ±0.18 7 5.12 ±0.26 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 BACTERIA 14 · 7.69 ± 0.22 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 ' Gluconacetobacter 21 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 xylinus 28 ND 7.13 ±0.65 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00· 60 ND ND <1.00 <1.00 ' <1.00 <1.00 0 3.25 ± 0.14 3.26 ±0.17 3.31 ±0.06 3.33 ±0.14 3.25 ±0.13 3.17 ±0.26 7 3.38 ±0.65 <1.00 . <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 BACTERIA 14 3.74 ±0.42 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 Alícyclobacillus 21 4.28 ±0.36 <1.00 <1.00 ' <1.00. <1.00 <1.00 acidoterrestris 28 4.16 ±0.12 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 60 <1.00 <1.00 < .00 <1.00 <1.00 <1.00 0 3.40 ±0.15 3.36 ±0.16 3.29 ±0.13 3:34 ±0.14 3.29 ±0.15 3.30 ±0.12 7 3.52 + 0.38 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 BACTERIA 14 3.76 ±0.28 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 Baclllus 21 3.69 ±0.44 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 stearothermophilus 28 4.01 ±0.10 <1.00 <1.00 •<1.00 <1.00 <1.00 60 4.09 ±0.28 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 BACTERIA 0 3.29 ±0.11 3.21 ±0.23 3.41 ± 0.03 3.35 ±0.11 3.33 ±0.13 3.30 ±0.12 Cbstrídium botulinum 7 7.15 ±0.22 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 H o o 14 ND 6.84 ± 0.60 <1.00 <1.00 <1.0O <1.00 21 ND ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 28 ND ND <1.00 <1.00 <1.00 . <1.00 60 ND ND <1.00 <1.00 <1.00 ¦ <1.00 0 3.28 ± 0.10 3.22 ± 0.17 3.38 ± 0.11 3.31 ± 0.14 .3.30 ± 0.12 3.31 ± 0.14 7 .6.85 ± 0.18 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 · <1.00 BACTERIA 14 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 Clostr!dium 21 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 acetobutyricum 28 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 60 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 0 3.25 ±0.18 3.35 ± 0.07 3.33 ± 0.11 3.28 ± 0.06 3.29 ± 0.11 3.24 ±0.22 7 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 BACTERIA 14 <1.00 • <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 Leuconostoc oenus 21 <1.00 <1.00 · . <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 28 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00' <1.00 60 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 BACTERIA 0 3.20 ± 0.06 3.35 ± 0.11 3.37 ± 0.09 3.28 ±0.10 3.19 ± 0.21 3.21 ±0.22 L 7 6.00 ± 0.13 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 pseudomesenteroides 14 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 21 ND <1.00 <1.00 • <1.00 <1.00 <1.00 H H O ?p o 28 ND <1.00 <1.00 · <1.00 <1.00 <1.00 60 ND <1.00 <1.00 ' <1.00 , <1.00 .· <1.00 0 3.11 ± 0.40 7 6.54 ±0.10 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 BACTERIA 14 ND . <1.00 ¦ <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 Lactobacfflus 21 ND <1.00 <1.00 . <1.00 <1.00 <1.00 acetotolerans 28 ND 2.20 ± 0.45 <1.00 • <1.00 <1.00 <1.00 60 ND <1.00 <1.00 ' <1.00 . <1.00 <1.00 IMD representa "no hecho"; T MTC represenl a "muy numeroso para contar" H H o OI O OI TABLA SEIS: Evaluación de extracto de Yuca contra diferentes bacterias en soluciones de sacarosa en pH 3.0 en la temperatura óptima de cada organismos (25° -37°C para mesófilos y 42°-55°C para termófilos). El nivel de microorganismos se muestra en log10 promedio CFU/ml ± SD.

Concentración de extracto de Yuca (ppm) Cepa bacterial Tiempo (días) 0 100 250 500 1000 2000 0 3.34 ± 0.18 3.27 + 0.16 3.32 ± 0.06 3.40 ± 0.04 3.37 ±0.09 3.46 ± 0.04 7 8.19 ±0.24 3.31 ± 0.32 2.65 ± 0.45 1.98 ± 0.40 1.58 ± 0.51 1.78 ± 0.43 BACTERIA 14 ND 3.08 ± 0.39 2.62 ± 0.08 <1.00 <1.00 <1.00 Gluconacetobacter 21 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 xylinus 28 ND <1.00 <1.00 - <1.00 <1.00 <1.00 60 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 0 3.34 ± 0.21 3.38 + 0.15 3.18 ± 0.22 3.38 ± 0. 8 3.35 ± 0.23 3.22 ± 0.15 7 3.45 ± 0.20 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 BACTERIA 14 3.28 ±0.39 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 Alicyclobacfflus 21 3.41 ±0.26 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 acidoterrestrís 28 3.46 ± 0.31 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 60 3.62 ± 0.40 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 · <1.00 BACTERIA ¦ 0 3.31 ± 0.08 3.29 ± 0.25 3.25 ± 0.22 3.37 ± 0.11 3.37 ± 0.06 3.28 ± 0.06 o oí o U1 Bacillus 7 3.43 ±0.37 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 stearothermophilus 14 3.69 ±0.38 - <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 21. 4.15 ±0.57 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 28 4.11 ±0.53 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 60 4.36 ±0.50 <1.00 <1.00 <1.00' <1.00 : <1.00 · 0 3.34 ±0.18 3.27 ±0.08 3.31 ±0.21 3.35 ±0.17 3.34 ±0.08 3.32 ±0.15 7 8.34 ±0.21 8.35 ±0.06 6.34 ±0.09 6.34 ±0.10 5.45 ±0.10 1.20 ±1.04 BACTERIA 14 ND ND ND ND ND 2.48 ± 0.32 Clostrídlum botulm' um 21 ND ND ND ND ND 2.43 ± 0.360 28 ND ND ND ND ND <1.00 60 ND ¦ ND ND ND ND <1.00 0 3.31 ±0.18 3.33 ±0.09 3.34 ±0.07 3.32 ±0.08 3.36 ±0.09 3.29 ±0.11 7 8.14±0.12 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 BACTERIA 4 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 Clostridium 21 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00. acetobutyrícum 28 ND <1.00 ' <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 60 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 BACTERIA 0 3.34 ±0.25 3.44 ±0.03. 3.30 ±0.15 3..38±0.07 3.31 ±0.14 3.39 ±0.12 Leuconostoc oenus 7 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 14 <1.00 <1.00 . <1.00 <1:00 <1.00 <1.00 O O U1 ND representa "no hecho"; TNTC representa "muy numeroso para contar" H o <J1 O U1 TABLA SIETE: Evaluación de extracto de Quillaja contra diferentes mohos, levaduras y bacterias en soluciones de sacarosa en pH 3.0, 25°C. Los niveles de los microorganismos se muestran en log10 promedio CFU/ml ± SD.

Concentraciones de extracto de Quillaja (ppm) Microorganismo Tiempo (días) 0 100 250 500 1000 2000 0 · 3.37 + 021 3.39 ± 0.10 3.33 ± 0.09 3.34 ± 0.17 3.34 ± 0.16 3.29 ± 0.23 7 4.21 ± 0.12 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 LEVADURA 14 7.98 ±0.22 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 Zygosaccharomyces 21 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 ' baílíl 28 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 60 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 0 3.34 ±021 3.28 ± 0.17 3.33 ± 0.13 3.32 ± 0.03 3.42 ± 0.06 3.49 ± 0.10 7 4.12 ±0.21 <1.00 <1.00 <1.00 · <1.00 <1.00 LEVADURA 14 5.00 ± 0.21 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 Dekkera bruxellensis 21 7.31 ± 0.09 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 28 ND <1.00' <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 60 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 LEVADURA 0 3.39 ± 0.09 3.32 ± 0.04 3.32 ± 0.12 3.32 ± 0.08 3.37 ± 0.18 3.32 ± 0.04 7 7.45 ± 021 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 H o ? O Saccharomyces 14 ND 2.22 ±0.23 2.17 ±0.17 <1.00 <1.00 <1.00 cerevtsi'ae 21 ND 2.58 ±0.32 2.43 ±0.13 <1.00 <1.00 <1.00 28 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 60 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 0 3.14 ±0.12 3.20 ±0.09 3.24 ±0.11 3.29 ±0.09 • 3.25 ±0.09 3.34 ±0.12 7 7.49 ± 0.16 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 LEVADURA 14 ND . <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 • <1.00 Candida krusei 21 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 " <1.00 28 ND • <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 60 ND <1.00 <1.00 <1.00 . <1.00 <1.00 0 3.32 + 0.07 3.29 ± 0.09 3.28 ±0.08 3.27 ±0.11 3.26 ±0.05 3.27 ± 0.09 7 3.20 ±0.09 <1.00 <1.00 <1.00 <1,00 <1.00 LEVADURA 14 6.32 ±0.09 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 Pichia 21 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 membranaefaciens 28 ND 7.36 ±0.19 6.44 ±0.15 6.62 ±0.13 5.64 ± 0.21 5.40 ±0.12 60 ND ND ND ND ND ND MOHO 0 2.30 ±0.17 2.27 + 0.16 2.26 ±0.24 2.32 ±0.17 2.32 ±0.15 2.39 ±0.17 Byssochlamys fulva 7 TNTC TNTC 2.87 ±0.36 2.53 ± 0.08 2,64 + 0.47 . <1.00 14- ND ND 2.56 ± 0.09 2.30 ± 0.26 1.26 ±0.24 <1.00 21 ND ND 1.65 ±0.15 1.82 ±0.07 1.78 ±0.26 <1.00 t H o ?p o 28 ND ND TNTC TNTC TNTC TNTC 60 ND ND ND ND ND ND- MOHO 0 2.23 ±0.06 2.39 ± 0.09 2.48 ±0.03 2.46 ±0.05 2.49 ±0.10 2.49 ±0.06 Neosartorya fischeii 7 TNTC TNTC TNTC TNTC TNTC TNTC 14 ND ND ND ND ND ND 21 ND ND ND ND ND ND 28 ND ND ND ND ND ND •60 ' ND " ND ND ND ND ND 0 2.37 ±0.14 2.29 ±0.21 2.23 ±0.21 2.23 ±0.13 2.19 ±0.21 MOHO 7 TNTC TNTC TNTC • TNTC TNTC 2.83 + 0.13 Fusaríum oxysporum 14 ND ND ND ND ND TNTC 21 ND ND ND ND ND ND 28 ND ND ND ND ND ND. 60 ND ND' ND ND ND ND MOHO 0 2.2 ±0.08 2.17 ±0.12 2.21 ±0.19 2.25 ±0.13 2.23 ±0.13 2.13 ±0.14 PenicilHum italicum 7 TNTC TNTC TNTC ' TNTC ' TNTC TNTC 14 ND ND ND ND ND ND 21 ND ND ND • ND ND ND ' 28 ND . ND ND ND ND. ND 60 ND ND ' ND ND ND ND t H H o O 0 3.29 ± 0.08 3.41 ±0.03 3.39 ±0.07 3.45 ±0.02 3.41 ±0.03 3.32 ±0.13 7 3.59 ±0.09 • <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 BACTERIA 14 7.25 ±0.36 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 Gluconacetobacter 21 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 xylinus 28 ND <1.00 <1.00 <1.00 .<1.00 <1.00 60 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 0 3.35 ±0.11 3,32 ±0.06 3.30 ±0.12 3.26 ±0.10 3.27 ±0.13 3.22 ±0.21 7 3.49 ± 022 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 BACTERIA 14 3.59 ±0.23 <1.00 <.1.00 <1.00 <1.00 <1.00 Aficyclobacillus 21 3.71 ±0.32 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 acidoterrestris 28 3.86 ±0.39 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 . <1.00 60 3.93±0.20 <1.00 <1.00 <1.00 < .00 <1.00 0 3.48 ± 0.12 3.50 ± 0.04 3.50 ± 0.07 3.49 ±0.02 3.52 ± 0.06 3.49 ±0.03. 7 3.68 ±0.32 <1.00. <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 BACTERIA 14 3.88 ± 0.47 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 Bacillus 21 4.25 ±0.36 <1..00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 stearothermophilus 28 4.32 ±0.39 <1.00 <1.00 <1.00. <1.00 <1.00 60 4.39 ±0.41 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 BACTERIA 0 3.36 ± 0.05 3.36 ±0.16 3.'38±0.11 3.44 ±0.05 3.41 ±0.05 3.41 ±0.08 Clostrídium botulinum 7 8.14 ±0.14 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 t ? o ?p O s? 14 ND <1.00 ' <1.00 <1.00 <r.oo " <1.00 • 21 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 28 ND <1.00 < .00 <1.0Q- <1.00 <1.00 60 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 • <1.00 0 3.35 ±0.25 3.37 ± 0.19 3.30 ±0.11 3.31 ± 0.14 3.31 ± 0.12 3.43 ± 0.15 7 8.10 ± 0.16 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 BACTERIA 14 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00. Clostridlum 21 ND <1.00 . <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 acetobutyricum 28 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 60 ND <1.00 <1.00' <1.00 <1.00 <1.00 0 3.39 ± 0.05 3.38 ± 0.15 3.33 ± 0.11 ¦ 3.44 ± 0.05 3.44 ±0.03 3.38 ± 0.08 7 <1.00 ' <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 . BACTERIA 14 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 Leuconostoc oenus 21 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <i:oo <1.00 . 28 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.0.0 60 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <r.oo <1.00 BACTERIA 0 3.25 ±0.20 3.23 ± 0.12 3.26 ± 0.09 3.32 ± 0.14 3.32 ±0.13 3.28 ± 0.25 1. 7 6.55 ±0.22 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 pseudomesenteroides 14 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 21 ND <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 H O ND representa "no hecho"; TNTC representa "muy numeroso para contar" H H o un O U1 TABLA OCHO: Evaluación de extracto de Quillaja contra diferentes bacterias en soluciones de sacarosa en pH 3.0 a la temperatura óptima de cada organismo (25°-37°C para mesófilos y 42°-55°C para termófilos). Los niveles de microorganismos se muestran en log10 promedio CFU/ml ± SD.

Concentración de Quillaja (ml/L) Tiempo Cepa bacterial (días) 0 0.1 0.25 0.5 1 2 0 3.36 ±0.20 3.34 ±0.12 3.46 ± 0.03 3.45 ± 0.06 •3.42 ±0.09 3.39 ±0.19 7 8.17 ±0.16 8.19 ±0.22 3.06 ± 0.28 2.92 ±0.17 2.03 ± 0.37 2.37 + 0.13 BACTERIA 14 ND ND 8.25 ± 0.21 7.66 ±0.06 7.43 ±0.25 6.41 ±0.34 Gluconacetobacter 21 ND ND ND ND ND ND xlinus 28 ND ND ND ND . ND ND 60 ND ND ND ND ND ND 0 3.25 ±0.14 3.27 ±0,14 3.32±o;i1 3.29 ±0.13 3.19±0.19 3.29 ±0.13 7 3.20 ±0.28 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 · BACTERIA 14 3.30 ±0.18 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 Alicyclobacillus 21 3.42 ± 0.37 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 acldoterrestris 28 3.49 ±0.35 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 60 3.52 ±0.49 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 o 3.36 ±0.17 3.37 ±0.17 3.28 ±0.16 3.36 ±0.14 3.32 ±0.12 3.46 ±0.02 0 BACTERIA 7 3.52 ±0.38 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 Bacillus 14 3.67 ±0.21 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 stearothermophilus 21 3.88 ±0.39 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 28 4.16 ±0.36 <1;00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 60 4.29 ±0.42 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 0 3.34 ±0.18 3.35 ±0.08 3.43 ± 0.04 3.36 ±0.06 3.39 ±0.09 3.39 ±0.10 7 8.19 + 0.14 5.79 ±0.35 4.77 ±0.10 3.56 + 0.13 3.19 ±0.21 2.38 ± 0,22 BACTERIA 14 ND ND 2.37 ±0.33 2.40 ±0.17 2.70 ±0.37 1.59 ±0.11 Cfostrídium botulinum 21 ND ND 3.47 ±0.17 3.47 ±0.17 3.12 ±0.30 • <1.00 28 ND ND 4.43 ±0.02 4.43 ±0.16 3.54 ±0.14 ' <1.00 60 ND ND 7.27 ±0.44 7.28 ±0.72 6.71 ±0.09 <1.00 0 3.35 + 0.14 3.33 + 0.09 3.21 ±0.21 3.30 ±0.13 3.29 ± 0.03 3.31 ± 0.06 7 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 BACTERIA 14 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 Leuconostoc oenus 21 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 28 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 O.OO <1.00 60 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 <1.00 · <1.00 0 3.34 ±0.10 3.36 ±0.16 3.37 ±0.10 3.38 ±0.11 3.29 ±0.03 3.31 ± 0.06 H H ? o o ND representa "no hecho"; TNTC representa "muy numeroso para contar" TABLA NUEVE: Evaluación de una mezcla de 200 ppm de benzoato, 150 ppm de sorbato y 25 ppm de EDTA contra diferentes organismos a 25 °C en soluciones de sacarosa (pH 5.0). Los niveles de microorganismos se muestran en log10 promedio CFU/ml ± SD. Concentraciones de Benzoato/Sorbato/EDTA (mg/L) Microorganismo Tiempo 0 200/150/25 (días) o · ' 3.40 ± 0. 5 3.36 ± 0.20 7 4.29 ± 0.32 <1.00 LEVADURA 14 7.15 ± 0.25 <1.00 Zygosaccharomyces 21 ND <1.00 ' bailii 28 '· ND <1.00 60. ND <1.00 0 3.42 ± 0.12 3.38 ± 0.31 7 4.00 ± 0.41 <1.0Q LEVADURA 14 6.23 ± 0.56 <1.00 Dekkera bruxellensis 21 ND <1.00 28 ND <1.00 60 ND <1.00 0 3.42 ± 0.25 3.38 ± 0.10 7 6.82 ± 0.19 < .00 LEVADURA 14 ND <1.00 Saccharomyces 21 ND <1.00 cerevislae 28 ND <1.00 60 ND <1.00 LEVADURA 0 3.36 ± 0.18 3.26 ± 0.24 Candida krusei- 7 7.44 ± 0.26 <1.00 14 ND <1.00 21 ND <1.00 28 ND <1.00 60 ND <1.00 0 3.34 ± 0.25 3÷44 ± 0.08 7 5.17 ± 0.54 . <1.00 LEVADURA 14 6.87 ± 0.32 <1.00 Pichia 21 ND <1.00 membranaefaciens 28 ND <1.00 60 ND <1.00 MOHO 0 1.25 ± 0.21 1.18 ± 0.16 Byssochlamys fulva 7 TNTC <1.00 14 ND <1.00 21 ND <1.00 28 ND <1.00 60 ND . <1.00 0 2.53 ± 0.19 2.64 ± 0. 9 7 TNTC <1.00 MOHO 14 ND . <1.00 Neosartorya físcheri 21 ND <1.00 28 ND <1.00 60 ND • <1.00 0 2.38 ± 0.25 2.31 ± 0.19 7 ND <1.00 MOHO 14 ND <1.00 . 21 • ND <1.00 Fusarium oxysporum 28 ND <1.00 60 ND <1.00 MOHO 0 2.26 + 0.18 2.33 ± 0. 8 Penicillium italicum 7 TNTC <1.00 14 ND <1.00 21 ND <1.00 21 ND <1.00 28 ND <1.00 60 ND <1.00 0 3.28 ± 0.18 3.31 ± 0.21 7 <1.00 <1.00 BACTERIA 14 <1.00 <1.00 Leuconostoc oenus 21 <1.00 <1.00 28 <1.00 <1.00 60 <1.00 <1.00 0 3.39 ± 0.24 3.40 ± 0.17 7 5.11 ± 0.20 <1.00 BACTERIA 14 ND <1.00 L. 21 ND <1.00 pseudomesenterordes 28 ND <1.00 · 60 ND <1.00 0 3.25 ± 0.19 3.28 ± 0.14 7 6.19 ± 0.12 <1.00 BACTERIA 14 ND <1.00 LactobacMus 21 ND <1.00 acetotolerans 28 ND <1.00 60 ND . <1.00 ND representa "no hec ho"; TIMTC representa "muy numeroso para contar" TABLA DIEZ ; Evaluación de una mezcla de 200 ppm de benzoato, 150 ppm de sorbato y 25 ppm de EDTA contra diferentes bacterias en la temperatura óptima de cada organismo (25°-37°C para mesófilos y 42°-55°C para termófilos) en solución de sacarosa (pH 5.0). Los niveles de microorganismos se muestran en logi0 promedio CFU/ml + SD.

Concentraciones de Benzoato/Sorbato/EDTA (mg/L) Microorganismo Tiempo (días) 0 200/150/25 0 3.46 ± 0.19 3.42 ± 0.06 7 8.25 ± 0.14 2.54 ± 0.40 BACTERIA 14 ND · <1.00 Gluconacetobacter 21. ND <1.00 xylinus 28 ND <1.00 60 ND <1.00 0 3.39 ± 0.08 3.32 ± 0.12 7 3.28 ± 0.17 <1.00 BACTERIA 14 3.35 ± 0.29 <1.00 Alicyclobaciflus 21 3.37 ± 0.28 <1.00 acidoterrestris . 28 3.45 ± 0.16 <1.00 60 3.55 ± 0.18 <1.00 0 3.32 ± 0.16 3.34 ± 0.12 7 3.52 ± 0.26 <1.00 BACTERIA 14 3.48 ± 0.18 <1-.00 Bacülus 21 3.56 ±0.28 < .00 stearothermophflus 28 3.63 ± 0.38 <1.00 60 3.77 ± 0.28 <1.00 BACTERIA 0 3.44 ± 0. 6 3.42 ± 0.10 Clostrídium botulinum 7 8.15 ± 0.16 3.32 ± 0.07 14 ND 7.79 ± 0.40 21 • ND ND 28 ND ND 60 ND ND 0 3.38 ± 0.15 3.41 ± 0.08 7 8.19 ± 0.10 2.45 ± 0.03 BACTERIA 14 ND 2.68 ± 0.08 Clostridium 21 ND 2.42 ± 0.22 acetobutyrícum 28 • ND 2.54 ± 0.41 60 ND 3.41 ± 0.51 0 3.-37 ± 0.24 • 3.33 ± 0.13 7 <1.00 <1.00 BACTERIA 14 · <1.00 <1.00 Leuconostoc oenus 21 <1.00 <1.00 28 <1.00 ' <1.00 60 <1.O0 <1.00 0 3.18 ± 0.19 3.33 ± 0.14 7 5.16 + 0.10 <1.00 BACTERIA 14 ND <1.00 L. 21 ¦ ND <1.00 pseudomesenteroides 28 ND <1.00 60 ND <1.00 0 3.36 ± 0.10 3.33 ± 0.07 7 6.08 ± 0.08 <1.00 BACTERIA 14 ND <1.00 Lactobaclllus 21 ND <1.00 acetotoferans 28 ND <1.00 60 ND <1.00 ND representa "no hecho"; TNTC representa "muy numeroso para contar" A partir de las Tablas CINCO a DIEZ, en una concentración de 0 ppm de extractos de Yucca o Quillaja o benzoato/sorbato/EDTA, la mayoría de los microorganismos crecieron fácilmente en el caldo y en bebidas modelo de sacarosa. Esto demuestra la capacidad de los microorganismos inoculados para desarrollarse en las bebidas modelo que carecen de antimicrobianos, la cual se llama el control de crecimiento positivo. La falta de crecimiento del inoculo en muestras con antimicrobianos se evidencia por valores CFU/ml iguales a, o inferiores que el inoculo original en el día 0. El retraso en el crecimiento causado por antimicrobianos se evidencia por valores CFU/ml inferiores que aquellos observados en los controles de crecimiento positivos . La destrucción del inóculo se evidencia por valores CFU/ml inferiores en muestras que contienen niveles de extractos de Yucca o Quillaja que el inóculo original en el día 0. En muchos casos, se observó la destrucción de microorganismos inoculados. En algunos casos, se observó el retraso en el crecimiento o sin crecimiento de microorganismos inoculados . Se demostró que Saccharomyces, Zygosaccharomyces, Candida, Dekkera y Pichia se inhiben en sistemas de bebidas de sacarosa por extractos ricos en saponina triterpénica de Quillaja saponaria así como por extractos ricos esferoidales de Yucca schidigera. Véanse las Tablas CINCO a OCHO. Además, el extracto de Yucca y Quillaja demostró inhibición contra microorganismos que proliferan con la combinación de la combinación de benzoato/sorbato/EDTA. Por ejemplo, en la Tabla NUEVE, la bacteria Gluconacetobacter xylinus se desarrolló en benzoato/sorbato/EDTA que contiene sacarosa, como se evidencia por un incremento en los valores de CFU/ml comparados con el inoculo original en el dia 0. En contraste, en las Tablas CINCO a SIETE, esta misma bacteria exhibió destrucción por los valores CFU/ml inferiores en muestras que contienen extractos de Yucca y Quillaja que el inoculo original en el día 0. La bacteria Clostridium acetobutyrícum demostró un fenómeno similar en la muestra de benzoato/sorbato/EDTA (Tabla DIEZ) comparado con la Yuca (Tabla SEIS) y la Quillaja (Tabla OCHO) . Esto demuestra la capacidad de la Yuca y la Quillaja para actuar en microorganismos resistentes a los sistemas conservadores tradicionales en un sistema de bebida. Al ser capaz de actuar en estos microorganismos, se sugiere que la combinación de un extracto que comprende saponinas con un conservador adicional puede exhibir inhibición mejorada en microorganismos. A partir de los datos en las Tablas CINCO, SEIS, NUEVE y DIEZ, las Figuras 5, 7, 8 y 10 muestran las máximas poblaciones de levaduras (Figura 5) , mohos (Figura 7) , bacterias acidofílicas (Figura 8) y bacterias que forman esporas (Figura 10) obtenidos en un lapso de tiempo del día 0 al día 28 en el ácido débil conservado y la solución conservada de extracto de Yucca, es decir, un sistema de bebidas modelo. A partir de los datos en las Tablas SIETE a DIEZ, las Figuras 6, 9 y 11 muestran las máximas poblaciones de levaduras (Figura 6) , bacterias acidofílicas (Figura 9) y bacterias que forman esporas (Figura 11) obtenidos en un lapso de tiempo del día 0 al día 28 en ácido débil conservado y una solución de sacarosa conservada de extracto de Quillaja, es decir, el sistema de bebida modelo. Como se proporciona con la prueba de caldo de extracto de malta no carbonatado y de sacarosa, los extractos de Yucca y de Quillaja se examinaron respectivamente en sistemas de caldo carbonatados y sistemas de sacarosa carbonatada. Aquellos sistemas carbonatados se utilizaron para determinar si el extracto de Yucca o Quillaja exhibieron actividad antimicrobiana contra microorganismos tales como bacterias, levaduras y/o mohos, y para determinar las concentraciones inhibidoras mínimas de los mismos . A partir de estos datos, como se encontró para el caldo de extracto de malta no carbonatado y sistemas de sacarosa, se observó en general la inhibición microbiana o reducción microbiana de los microorganismos inoculados . Aquellos resultados fueron dependientes por lo menos del nivel de Yucca o Quillaja, el tipo de microorganismo (bacteria, levadura o moho) , y/o el género/especie del microorganismo. pH Las composiciones de la presente invención, por ejemplo, bebidas, pueden tener un pH que varía de aproximadamente 2 a aproximadamente 9. Las bebidas acídicas tienen en general un pH que varía de aproximadamente 2 a aproximadamente 4.6, mientras que las bebidas con pH neutro tienen un pH que varía de aproximadamente 4.6 a 7.0, y las bebidas básicas tienen típicamente un pH mayor de 7.0. Se sabe en la técnica que el pH de una bebida puede ser un factor para mantener una bebida no perecedera, cuando algunos microorganismos crecen, pueden ocultarse bajo condiciones acídicas. Esto, sin embargo, no es el caso para microorganismos tales como Saecharomyees y Candida, en cuyo caso estos microorganismos proliferan en tal ambiente acídico. Utilizar un conservador de la presente invención permite a la composición mantener una estabilidad microbiana incluso en condiciones acídicas . Además, las composiciones de la presente invención pueden comprender frutas y vegetales que resultan en un ácido elevado y/o en sabores agrios. Generalmente, una bebida que tiene por lo menos un carbohidrato en la cantidad que varía de 0% a 15% en peso con relación a la composición total y por lo menos un ácido que varía de 0% a 0.5% en peso con relación a la composición total puede contrarrestar tal ácido y/o sabores agrios. Este intervalo puede ser adecuado no únicamente para bebidas, sino también para jarabes cuando se diluyen apropiadamente para formar una bebida fortificada sencilla. Para una bebida acídica (pH que varía de aproximadamente 2 a aproximadamente 4.6), la acidez de la bebida puede ajustarse a, y mantenerse dentro del intervalo relatado por métodos conocidos y convencionales en la técnica. Por ejemplo, el pH puede ajustarse utilizando por lo menos un acidulante. Además, el uso de acidulantes puede ayudar en la inhibición microbiana al mismo tiempo cuando se mantiene el pH de la bebida. Las composiciones de la presente invención, sin embargo, pueden tener inherentemente un pH deseable sin el uso de ningunos acidulantes u otros componentes para modificar el pH. De este modo, la incorporación de por lo menos un acidulante es opcional en composiciones de la presente invención. Puede hacerse mención entre posibles acidulantes, pero sin limitarse a, ácidos orgánicos e inorgánicos que.se utilizan para ajustar el pH de una composición de la presente invención tal como una bebida. Los acidulantes pueden también estar en una forma no disociada o en su respectiva forma de sal tales como sales de potasio, de sodio o de clorhidrato. Los acidulantes utilizados en la presente composición pueden, pero no se limitan a lo siguiente: ácido cítrico, ácido ascórbico, ácido málico, ácido benzoico, ácido fosfórico, ácido acético, ácido adípico, ácido fumárico, ácido glucónico, ácido tartárico, ácido láctico, ácido propiónico, ácido sórbico o mezcla de los mismos . En una modalidad, el acidulante es ácido cítrico. Además, las cantidades del o de los acidulantes, las cuales pueden presentarse en la composición de acuerdo con la presente descripción, son aquellos utilizados convencionalmente en las composiciones de la presente invención tales como bebidas y alimentos. Por ejemplo, puede presentarse por lo menos un acidulante en una cantidad que varía de aproximadamente 0% a aproximadamente 1% en peso con relación a la composición.

Conservadores Opcionales La composición de la presente invención puede además comprender por lo menos un conservador adicional, a diferencia de por lo menos un extracto que comprende saponinas. Como se utiliza en la presente, el término "conservador" incluye todos los conservadores aprobados para uso en composiciones de bebidas y/o productos alimenticios. Puede hacerse mención entre conservadores adicionales tales como, pero sin limitarse a conservadores químicos (por ejemplo, benzoatos, sorbatos, citratos y sales de los mismos) , agentes quelantes (por ejemplo, hexametafosfato de sodio, ácido etilendiamintetraacético (EDTA) ) , ácidos grasos libres, esteres y derivados de los mismos, péptidos, alginato láurico, dextrosa cultivada, aceite de neem, eugenol, p-cimeno, timol, carvacrol, linalool, ácido hidroxicinámico, ácido cinámico, aldehido cinámico, natamicina, aceite de árbol de té, extracto de dendelio, polvo de acaí, isotiocianato de 4-hidroxibencilo y/o aceite esencial de semilla de mostaza blanca, ácido ferúlico, y mezcla de los mismos. Conservadores adicionales, además, pueden incluir, pero sin limitarse a lacto-antimicrobianos tales como lactoferrina, lactoperoxidasa, lactoglobulinas y lactolipidos , ovo-antimicrobianos tales como lisozima, ovotransferrina, ovoglobulina IgY y avidina, Fito-antimicrobianos tales como Fito-fenoles , flavonoides, tiosulfinatos, catequinas, glucosinolatos y agar, bacto-antimicrobianos tales como probióticos, nisina, pediocina, reuterina y sacacinas, antimicrobianos acídicos tales como ácido láctico, ácido sórbico, ácido acético y ácido cítrico, antimicrobianos ambientales tales como cloruro de sodio, polifosfatos , clorocidas y ozono. Por lo menos un conservador adicional puede presentarse en una cantidad que no excede niveles exigidos máximos, como se establece por la Dirección de Alimentos y Drogas de los Estados Unidos u otros órganos de gobierno de alimentos y bebidas . Se cree que la combinación de por lo menos un extracto que comprende saponinas junto con por lo menos un conservador adicional proporciona inhibición adicional contra microorganismos de deterioro típicos, por ejemplo, en una bebida comparada con controles de crecimiento positivos no conservados. Por ejemplo, la combinación de por lo menos un extracto que comprende saponinas con por lo menos un conservador adicional exhibe inhibición y/o reducción mejorada en el crecimiento de microorganismos comparada con el uso de por lo menos un extracto que comprende saponinas o por lo menos un conservador adicional utilizado solo en una bebida o en un alimento. Además, con el uso de por lo menos un extracto que comprende saponinas, se cree que por lo menos un conservador adicional puede utilizarse en un nivel reducido en comparación cuando el conservador adicional se utiliza solo. Esto puede no únicamente conducir a reducción de las concentraciones inhibidoras mínimas de estos conservadores adicionales, sino también minimiza cambios en el sabor que pueden atribuirse al conservador adicional. De este modo, se cree que se mejora la utilidad de tales conservadores adicionales . Por ejemplo, el uso de por lo menos un extracto que comprende saponinas junto con conservadores de ácido débil tales como ácidos sórbico y/o benzoico y sus sales asociadas puede tener el beneficio agregado de causar inhibición o destrucción de microorganismos resistentes al conservador, es decir, Zygosaccharomyces spp., S. cerevisiae, C. krusei y Gluconobacter spp., por ejemplo, sirviendo como un agente activo de superficie en y comprometiendo la integridad de las paredes celulares microbianas, por lo que se evaden los mecanismos resistentes al conservador.

Componentes Opcionales Las composiciones de la presente invención pueden además comprender componentes opcionales comúnmente encontrados en bebidas y/o productos alimenticios convencionales . Tales ingredientes opcionales pueden dispersarse, solubilizarse o de otra manera mezclarse en o con la composición de la presente invención. Por ejemplo, puede hacerse mención de componentes para bebidas y/o alimentos convencionales, tales como, pero sin limitarse a agua, agentes colorantes, agentes saborizantes , jugos, flavonoides, vitaminas, minerales, proteínas, edulcorantes y edulcorantes no calóricos, emulsionantes, componentes de carbonatación, espesantes, es decir, modificadores de viscosidad y agentes que dan cuerpo, antioxidantes, agentes anti-espuma y mezclas de los mismos.

Agua De acuerdo con una modalidad de la presente invención, la composición puede además comprender agua. El agua puede ser "agua tratada" , "agua purificada" , "agua desmineralizada" y/o "agua destilada". El agua debe ser adecuada para consumo humano y la composición no debe ser, o debe no estar en forma sustancial perjudicialmente afectada por la inclusión del agua.

En una modalidad, el agua puede presentarse en una cantidad que varía de aproximadamente 1% a aproximadamente 99.9%. El componente de agua agregada puede también cumplir ciertos estándares de calidad tales como criterios biológicos, nutrientes y de sedimento. Por ejemplo, la demanda de oxígeno biológico, la dureza del agua, la conductividad del agua y/o la resistividad del agua pueden ser factores para consideración cuando se formula una bebida y/o alimento.

Agentes Colorantes Las composiciones de la presente invención pueden también comprender además por lo menos un agente colorante. Puede hacerse mención, entre los colorantes, pero sin limitarse a, tintes FD&C, lacas FD&C y mezclas de los mismos. Cualquier otro colorante utilizado en bebidas y/o productos alimenticios pueden utilizarse. Por ejemplo, una mezcla de tintes FD&C o un tinte de laca FD&C en combinación con otros colorantes para bebidas y/o alimentos convencionales pueden utilizarse. Además, otros agentes colorantes naturales pueden utilizarse incluyendo, por ejemplo, extractos de fruta, vegetales y/o plantas tales como uva, grosellas negras, zanahoria, remolacha roja, repollo rojo e hibisco.

Agentes Saborizantes La presente composición puede además comprender por lo menos un agente saborizante . Por lo menos un agente saborizante puede incluir, pero no se limita a aceites, extractos, resinas oleoginosas, aceites esenciales, cualquier otro agente saborizante conocido en la técnica, y mezclas de los mismos. Por ejemplo, sabores adecuados incluyen, pero no se limitan a sabores de frutas, sabores de cola, sabores de té, sabores de café, sabores de chocolate, sabores lácteos, café, té, nuez de kola, ginseng, cacao y mezclas de los mismos. Aceites y extractos adecuados pueden incluir, pero no se limitan a, extracto de vainilla, aceite y extracto extrico, y mezclas de los mismos. Estos sabores pueden derivarse de fuentes naturales tales como jugos, aceites y extractos esenciales, o pueden prepararse en forma sintética. Además, por lo menos un agente saborizante puede ser una mezcla de varios sabores tales como frutas y/o vegetales.

Jugos La composición de la presente invención puede además comprender por lo menos un jugo. Por lo menos un componente de jugo puede .proporcionar a la composición de la presente invención características benéficas tales como sabor y nutrientes. Aunque por lo menos un jugo imparte propiedades benéficas a las composiciones, también puede ser una fuente alimenticia para microorganismos que han infectado la composición. Como resultado, el uso de la presente invención proporciona la incorporación de por lo menos un jugo sin someterse a estabilidad microbiana. Además, por lo menos un extracto que comprende saponinas puede incorporarse en composiciones tales como bebidas y alimentos sin afectar perjudicialmente el sabor o nutrientes de por lo menos un jugo. Por lo menos un componente de jugo puede derivarse de, pero sin limitarse a frutas cítricas y no cítricas, vegetales, plantas botánicas o mezclas de las mismas. Puede hacerse mención, entre frutas cítricas y no cítricas, pero sin limitarse a duraznos, nectarinas, peras, membrillos, cerezas, albaricoque, manzanas, ciruelas, higos, kiwis, clementinas, naranja china, minneolas, mandarinas, naranjas, tangerina japonesa, tangerinas, tángelos, limones, limas, toronjas, plátanos, aguacates, dátiles, hog plum, mangos, grosella, carambolas, guayacán africano, guayabas, maracuyá, papayas, granadas, higo chumbo, moras azules, zarzamoras, frambuesas, uvas, bayas, cantalupo, piñas, sandías, grosellas, fresas, arándanos y mezclas de los mismos. Puede hacerse mención entre los vegetales, pero sin limitarse a, zanahorias, tomates, espinaca, pimientos, repollo, coles, brócoli, papas, apio, anís, pepinos, perejil, acelgas, grama canina, espárrago, calabacín, ruibarbo, nabo, nabo sueco, chirivía, rábano y mezclas de los mismos.

Jugos botánicos se obtienen a menudo de por ejemplo, pero sin limitarse a granos, nueces, corteza, hojas y raíces de una planta, es decir, algo distinto de la fruta de la planta. Por ejemplo, los jugos botánicos pueden impartir sabor tales como vainilla, café, té, cola y coca. Estos sabores pueden derivarse en forma natural o sintéticamente .

Flavonoides La presente invención puede comprender opcionalmente por lo menos un flavonoides, el cual es una sustancia natural de una clase de metabolitos secundarios de la planta. Los flavonoides se conocen por tener actividad antioxidante, antimicrobiana y anti-cáncer. Los flavonoides pueden encontrarse en plantas, vegetales, frutos, flores o cualquier otra fuente natural conocida por un técnico experimentado. Los flavonoides pueden derivarse de estas fuentes por medios convencionales conocidos en la técnica. La derivación no se limita a una fuente sencilla de flavonoides, sino también pueden incluir una mezcla de fuentes tales como la extracción de uno solo o una mezcla de vegetales. Además, los flavonoides pueden prepararse en forma sintética o por otro medio químico apropiado e incorporarse en la presente composición. Puede hacerse mención de flavonoides tales como, pero sin limitarse a quercetina, quenferol, miricetina, isohametina, catequina y derivados o mezclas de los mismos.

Vitaminas y Minerales De acuerdo con la presente invención, por lo menos una vitamina y/o mineral adicional puede incorporarse opcionalmente en las composiciones de la presente invención. Similar por lo menos a un componente de jugo, la o las vitaminas agregadas y/o mineral o minerales pueden también servir como una fuente alimenticia para los microorganismos. Históricamente, las vitaminas y minerales tales como calcio, hierro y magnesio no pudieron fortificarse en una composición para bebidas debido a que los conservadores tales como polifosfatos podrían unirse a, e inactivar la vitamina y/o el mineral. Esto puede evitarse con el conservador de por lo menos un extracto que comprende saponinas y las composiciones contempladas . Puede hacerse mención entre las vitaminas tales como, pero sin limitarse a, riboflavina, niacina, ácido pantoténico, piridoxina, cobalaminas, bitartato de colina, niacinamida, tiamina, ácido fólico, pantotenato de d-calcio, biotina, vitamina A, vitamina C, una o más vitaminas del complejo B tales como clorhidrato de vitamina Bi, vitamina B2, vitamina B3, clorhidrato de vitamina B6 y vitamina B12 , vitamina D, acetato de vitamina E, vitamina K y derivados de mezclas de los mismos. Puede hacerse mención, entre los minerales tales como, pero sin limitarse a calcio, zinc, hierro, magnesio, manganeso, cobre, yodo, fluoruro, selenio y mezclas de los mismos. Vitaminas y minerales sintéticos se contemplan también dentro del alcance de las composiciones de la presente invención. La adición de vitaminas y minerales opcionales deben hacerse con tal cuidado que el sabor de la presente composición no puede disminuirse significativamente . Por lo menos una vitamina y/o mineral adicional pueden agregarse también para ayudar al consumidor a cumplir el Insumo Diario Recomendado en los Estados Unidos (RDI) para vitaminas y minerales .

Proteína Además, las composiciones de la presente invención pueden además comprender por lo menos un componente de proteínas, por ejemplo, extracto de proteína de soya. Por lo menos un componente de proteínas puede ser de, por ejemplo, pero sin limitarse a proteínas de leche tales como caseína (caseinato) , proteína de suero, claras de huevo, gelatina, colágeno y mezclas de los mismos.

Edulcorante Las composiciones de la presente invención pueden además comprender por lo menos un edulcorante elegido de edulcorantes nutritivos, edulcorantes no nutritivos, y mezclas de los mismos . Por lo menos un edulcorante puede ser natural, artificial o mezclas de los mismos. De los edulcorantes nutritivos (es decir, calóricos) , las presentes composiciones pueden incluir, por ejemplo, edulcorantes con carbohidratos tales como monosacáridos y/o disacáridos. Puede hacerse mención entre los edulcorantes calóricos, pero sin limitarse a, fructosa, sacarosa, glucosa, alcoholes de azúcar, jarabe de maíz, jugo de caña evaporado, jarabes de arroz, jarabe de Maple, jarabes de malta negra, concentrado de jugo de frutas, miel, agave, jarabe de tapioca, jarabe de achicoria y mezclas de los mismos. Los edulcorantes no nutritivos incluyen, pero no se limitan a, luo han guo, stevia y derivados de los mismos, eritritol, acesulfame de potasio, aspartame, neotame, sacarina, sucralosa, tagatosa, alitame, ciclamato y mezclas de los mismos. Las mezclas de edulcorantes nutritivos así como no nutritivos se contemplan en la presente.

Emulsionante La presente invención comprende opcionalmente por lo menos un emulsionante . Cualquier emulsionante para bebida y/o de grado alimenticio puede utilizarse par estabilizar una emulsión. Puede hacerse mención de emulsionantes tales como, pero sin limitarse a goma acacia, almidones alimenticios modificados (por ejemplo, almidones alimenticios modificados con alquenilsuccinato) , polímeros aniónicos derivados de celulosa (por e emplo, carboximetilcelulosa) , goma ghatti, goma ghatti modificada, goma de xantano, goma de tragacanto, goma guar, goma de algarroba, peetina, lecitina y mezclas de los mismos. Por ejemplo, una bebida puede comprender una emulsión turbia o una emulsión con sabor. Para emulsiones turbias, el agente de turbiedad puede comprender por lo menos una grasa o aceite estabilizado como una emulsión de aceite en agua utilizando un emulsionante de grado alimenticio adecuado. Cualquier variedad de grasas o aceites pueden emplearse como el agente de turbiedad, siempre que la grasa o el aceite sea adecuado para su uso en composiciones tales como bebidas. Cualquier emulsionante para bebidas y/o de grado alimenticio adecuado puede utilizarse, el cual puede estabilizar la grasa o el aceite del agente de turbiedad como una emulsión de aceite en agua . Las emulsiones de sabor útiles en las composiciones, por ejemplo, bebidas de la presente invención comprenden por lo menos un aceite de sabor adecuado, extracto, resina oleaginosa, aceite esencial y similares, conocidos en la técnica para su uso como saborizantes en bebidas .

Carbonatación Cuando las composiciones de la presente invención son bebidas, carbonatación (por ejemplo, dióxido de carbono) pueden además agregarse con base en técnicas comúnmente conocidas por el técnico experimentado. Por ejemplo, el dióxido de carbono puede agregarse al agua introducida en la bebida o concentrado de bebida. La cantidad de la carbonatación introducida en las composiciones de la presente invención dependerá de la naturaleza de la bebida y el nivel deseado de carbonatación.

Espesantes Las composiciones de la presente invención pueden comprender opcionalmente por lo menos un espesante. Puede hacerse mención, entre los espesantes, es decir, modificadores de viscosidad y/o agentes que dan cuerpo, tales como, pero sin limitarse a compuestos de celulosa, goma ghatti, goma ghatti modificada, goma guar, goma de tragacanto, goma arábiga, pectina, goma de xantano, carragenina, goma de algarrobo, pectina, lecitina y mezclas de los mismos.

Antioxidantes Las composiciones de la presente invención además comprenden por lo menos un antioxidante . Por lo menos un antioxidante puede incluir, pero sin limitarse a ácido ascórbico, goma guar; propilgalacto, sulfito y sales de metabisulfito; ácido tiodipropiónico y ésteres de los mismos; extractos de condimentos; semilla de uva; extractos de té; y mezclas de los mismos.

Aminoácidos De acuerdo con la presente invención, las composiciones pueden además comprender por lo menos un aminoácido. Por lo menos un aminoácido puede incluir, pero sin limitarse a alanina, arginina, asparagina, cisteína, glutamina, glicina, histidina, leucina, lisina, metionina, ornitina, prolina, fenilalanina, serina, treonina, triptofano, tirosina, valina y mezclas de los mismos.

Agentes anti-espuma La presente invención puede además comprender por lo menos un agente anti-espuma. Por lo menos el agente anti-espuma puede incluir, pero sin limitarse a, alginato de calcio, polímeros de silicona tales como polidimetilsiloxano, y ésteres del ácido graso tales como ésteres del ácido graso de propilenglicol, ésteres de ácidos grasos de glicerina y ésteres de ácido graso de sorbitán y mezclas de los mismos . Las cantidades de estos componentes opcionales anteriores, los cuales pueden presentarse en las composiciones de acuerdo con la invención, son aquellos utilizados convencionalmente en composiciones de bebidas y/o productos alimenticios. Además, la cantidad de estos componentes adicionales dependerá de la bebida deseada y/o del producto alimenticio.

Preparación Las presentes composiciones, por ejemplo, bebidas, pueden hacerse de acuerdo con los métodos los cuales son bien conocidos por los técnicos experimentados en el arte. Por ejemplo, la composición para bebida puede prepararse dispersando, disolviendo, propagando o de otra manera mezclando todos los ingredientes simultáneamente juntos o agregando secuencialmente ingredientes con base en la solubilidad o cualesquiera otros parámetros con la adición de agua, cuando sea apropiado. Esto puede hacerse con un agitador mecánico o por técnicas de homogeneización comúnmente conocidas en el arte. Además, la composición de la presente invención puede hacerse en un concentrado liquido o de bebida seca.

Evaluación Microbiana Las composiciones de la presente invención pueden evaluarse para determinar la estabilidad microbiana con base en técnicas conocidas por aquellos con experiencia ordinaria en el arte. Por ejemplo, una forma para determinar la estabilidad microbiana es inocular una bebida matriz de la presente invención para evaluación con un grupo de microorganismos tales como mohos, levaduras y bacterias. Estos microorganismos pueden ser aquellos previamente identificados en bebidas causando problemas de deterioro, tales como aquellos mencionados en la Tabla UNO o cualquier otro tipo de levadura, moho o bacteria y/o mezclas de los mismos. Una vez que el medio se inocula, el conteo plaquetario periódico puede preformarse para determinar el crecimiento de los microorganismos. Con base en los conteos plaquetarios , se puede determinar el grado de crecimiento de microorganismos en la composición inoculada, por ejemplo, la bebida. Se utilizaron métodos estándares de enumeración en microbiología de bebidas y alimentos, por ejemplo, tales como aquellos descritos en Ito & Pouch-Downes , Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods (4a edición, Amer. Pub. Health Assoc . 2001) y aquellos encontrados en Notermans, et al., A User's Guide to Microbiological Challenge Testing for Ensuring the Safety and Stability of Food products, 10 Food Microbiology 145-57 (1993) , los contenidos de la cual se incorporan en la presente para referencia. Además, la citometría de flujo puede también utilizarse para determinaciones de crecimiento de los microorganismos. Véase, Jay, J. M. , Modern Food Microbiology (Aspen Publishers, Inc., 2000). La citometría de flujo utiliza los principios de dispersión de luz, activación de luz y emisión de moléculas de fluorocromo para identificar y contar los microorganismos. Por ejemplo, una muestra de composiciones inoculadas se inyecta en el centro de un buffer de flujo. Cuando el microorganismo intercepta la fuente de luz, dispersa la luz y el fluorocromo se excita a un estado de energia más elevado. El estado de energía más elevado se libera como un fotón de luz que tiene propiedades específicas. La luz se convierte esencialmente en pulsos eléctricos que se transmiten entonces en un formato legible tal como una gráfica de conteo celular viable. Otras modalidades de la invención serán aparentes para aquellos con experiencia en la técnica a partir de la consideración de la especificación y la práctica de la invención descrita en la presente . Se pretende que la especificación y ejemplos se consideran como ejemplares únicamente, con un alcance y espíritu real de la invención que se indican por las siguientes reivindicaciones. A diferencia de los ejemplos operantes, o cuando se indiquen de otro modo, todos los números que expresan cantidades de ingredientes, condiciones de reacción, etc., utilizados en la especificación y reivindicaciones son para entenderse como siendo modificados en todos los casos por el término "aproximadamente". Por consiguiente, a menos que se indique lo contrario, los parámetros numéricos establecidos en esta especificación y reivindicaciones anexas son aproximaciones que pueden variar dependiendo de las propiedades deseadas pretendidas para obtenerse por la presente descripción. Por lo menos en las reivindicaciones, cada parámetro numérico debe interpretarse en vista del número de dígitos significativos y enfoques de rutina ordinarios . A pesar de que los intervalos numéricos y parámetros que establecen el amplio alcance de la presente descripción son aproximaciones, los valores numéricos establecidos en los ejemplos específicos se reportan lo más precisamente posible. Cualquier valor numérico, sin embargo, contiene inherentemente ciertos errores que resultan necesariamente de la desviación estándar encontrada en sus mediciones de prueba respectivas .

EJEMPLOS Los siguientes ejemplos incluyen modalidades de composiciones para bebidas de acuerdo con la presente invención. Aquellas composiciones se prepararon y se evaluaron para determinar la estabilidad microbiana, es decir, la inhibición y/o reducción del crecimiento microbiano y/o destrucción de microorganismos cuando se inoculan con varios microorganismos.

Los siguientes ejemplos se consideran para representar la presente invención y de ningún modo deben interpretarse como limitaciones en la presente invención. Se formuló una configuración para bebidas no carbonatadas . La formulación de bebidas carbonatadas y los detalles de procesamiento se proporcionan posteriormente. Se preparó una configuración para bebidas no carbonatadas de 9 litros que incluye : Ingredientes Cantidad Sacarosa 10% (p/v) Jugo puro (manzana) 10% (p/v) Emulsión de sabor naranja* 0.2% (p/v) Ácido Cítrico 0.15% (p/v) Agua tratada 7,168.5 mi *La emulsión de sabor naranja incluye agua, goma arábiga, ácido cítrico, aceite de naranja comprimido en frío y acetato-isobutirato de sacarosa y 10% de un agente de valoración de etanol . Para esterilizar botellas de laboratorio, se agregó 150 mi de la bebida matriz. Cada botella se tapó entonces y se pasteurizó a 75°C durante aproximadamente 12 minutos con una agitación de 100 rpm en un baño. Las botellas de laboratorio se removieron del baño y se voltearon para mezclar. Las botellas se dejaron enfriar a 50°C o por debajo. La siguiente lista de conservadores y combinaciones de los conservadores se evaluaron para calcular la actividad antimicrobiana de la presente invención: Número de Botella Conservadores y Niveles 1 No conservado (Control) 2 750 ppm de SHMP, 200 ppm de ácido benzoico, 150 ppm de ácido sórbico 3 750 ppm de SHMP, 200 ppm de ácido benzoico, 150 ppm de ácido sórbico, 25 ppm de EDTA 4 200 ppm de ácido benzoico, 150 ppm de ácido sórbico, 25 ppm de EDTA 5 250 de ácido sórbico, 25 de EDTA 6 350 ppm de Yuca, 200 ppm de ácido benzoico, 150 ppm de ácido sórbico, 25 ppm de EDTA 7 350 ppm de Yuca, 200 ppm de ácido benzoico 8 350 ppm de Yuca, 200 ppm de ácido sórbico 9 350 ppm de Yuca, 25 ppm de EDTA 10 350 ppm de Yuca, 250 ppm de ácido sórbico, 25 ppm de EDTA 11 350 ppm de Yuca 12 350 ppm de Yuca, 25 ppm de arginato láurico 13 350 ppm de Yuca, 200 ppm de linalool 14 350 ppm de Yuca, 25 ppm de Natamicina (50 ppm de Natamax G) 15 350 ppm de Yuca, 260 ppm de ácido hidroxicinámico (ácido ferúlico) 16 350 ppm de Yuca, 200 ppm de eugenol 17 350 ppm de Yuca, 200 ppm de ácido clorogénico 18 350 ppm de Yuca, 200 ppm de ácido cinámico 19 350 ppm de Yuca, 200 ppm de carvacrol 20 350 ppm de Yuca, p-cimeno 21 350 ppm de Yuca, 250 ppm de timol 22 350 ppm de Yuca, 250 ppm de e- polilisina 49 200 ppm de linalool 50 25 ppm de Natamicina (50 ppm de Natamax G) 51 250 ppm de ácido hidroxicinámico (ácido ferúlico) 52 200 ppm de eugenol 53 200 ppm de ácido cloréngico 54 200 ppm de ácido cinámico 55 200 pm de carvacrol 56 200 ppm de p-cimeno 57 250 ppm de timol 58 250 ppm de e-polilisina 59 200 ppm de acaí (extracto de etanol) 60 50 ppm de 4-HBITC 61 200 ppm de monolaurina 62 200 ppm de ácido ellágico Como se observa en lo anterior, debido a que los conservadores y combinaciones de conservadores se prepararon con base en un porcentaje en volumen/volumen, los valores de ppm indicados anteriormente y observados en las tablas correspondientes deben multiplicarse por la densidad del extracto sin procesar de la Yucca con el fin de obtener un valor de ppm más exacto. La densidad del extracto sin procesar sin diluir fue aproximadamente 1.22 g/ml . De este modo, para 350 ppm de la solución de Yucca, el valor de ppm fue realmente 427 ppm. Así mismo, 500 ppm de la solución deben ser 610 ppm de la Yucca. Con el fin de examinar aquellos conservadores y combinaciones listadas de conservadores, se utilizaron los siguientes microorganismos para preparar los diversos inóculos de bacterias, levaduras y mohos: Bacterias: Lactobacillus plantarum, L. paracasei, L. acidophilus y Gluconobacter oxydans Levaduras: Zygosaccharomyces Bailii, Saccharomyces cerevisiae, Candida krusei, Dekkera bruxellensis, Debrarymyces hansenii Mohos: Penicillium glabrum, Aspergillus ochraceus, Byssochlamys fulva, Neosartorya fischerii El inoculo para cada tipo de microorganismo se preparó como sigue: Inoculo de Bacterias y Levaduras : Se prepararon cultivos bacterianos colocando un bucle lleno de las cuatro especies en forma separada en caldo de Lactobacillus MRS acidificado a un pH 3.8 con ácido cítrico. Los cultivos se incubaron a 35 °C durante 48 horas. Los cultivos individuales de cada especie de levadura se prepararon colocando un bucle completo de cada uno en una bebida modelo pasteurizada y enfriada a un pH 3.0. La bebida modelo inoculada se incubó a 25°C durante aproximadamente 72 horas para permitir el crecimiento de levaduras. Los microorganismos se formaron en placas y se contaron para niveles de CFU/ml . Un cultivo de levaduras o bacterias saludable puede ser alrededor de 1 x 106 cfu/ml o mayor. Cultivos individuales se combinaron de manera que se crearon inóculos de especies múltiples de bacterias y de especies múltiples de levaduras para inocular variables de pruebas de la bebida modelo. Inoculo de Moho : Se inocularon in situ platos Petri de dextrosa-agar de papa acidificado en forma separada con cada especie de moho. Las placas se incubaron durante aproximadamente cuatro semanas . Las esporas se removieron de las placas y las esporas se separan de los fragmentos de las hifas por centrifugación. Las esporas se volvieron a suspender en tampón de fosfato y las poblaciones se enumeraron por enchapado superficial en agar de dextrosa de papa acidificado o medio de levadura y moho verde modificado. Las placas se incubaron a 25°C durante aproximadamente 3 a 5 días antes del conteo . Las botellas no conservadas y conservadas preparadas anteriormente de la bebida matriz se inocularon con microorganismos, es decir, generalmente 1 x 103 CFU/ml de levaduras, bacterias o mohos (se prepararon tubos por triplicado por inoculo) . Los tubos se agitaron con vórtex durante 10 segundos y las muestras iniciales se removieron de cada recipiente para representar el tiempo 0. Los microorganismos se incubaron en los tubos inoculados a 25°C. En los intervalos de tiempo designados, las muestras se monitorearon por enchapado en espiral o enchapado dispersado sobre el agar de extracto de malta para muestras de levadura y moho, o agar de Lactobacillus MRS para bacterias. Los datos posteriores en las Tablas ONCE a TRECE presentan los valores log promedio de los microorganismos respectivos en los puntos de tiempo designados. Los datos presentados en las Tablas ONCE a TRECE son una muestra de aquellos conservadores y combinaciones de conservadores identificados anteriormente. En general, los datos presentados posteriormente se basan en los conservadores y/o combinaciones del par de conservadores que exhiben la mejor actividad antimicrobiana. Por ejemplo, la variable 22 es de 350 ppm de Yuca y de 250 ppm de e-polilisina y la variable 43 es de 500 ppm de Yuca y 250 ppm de e-polilisina. Con base en los valores de cambio de log del día 28 y 62, la variable 43 exhibió más de un descenso en el inoculo microbiano en la bebida modelo en comparación con la variable 22. Como un resultado, los datos para la variable 43 se proporcionan en las Tablas ONCE a TRECE. Se reportan cambios de log en el dia 28 y 62 posteriormente para los conservadores examinados . Aquellos cambios de log se calcularon tomando el nivel de microorganismos en el día 28 ó 62 y sustrayendo el nivel de microorganismos encontrados en el día 0. Si un descenso inmediato en microorganismos se observó en el día 0 y se sostuvo hasta los días 28 ó 62, se estimó el cambio de log para ser -3.0 para levadura o moho, y -3.5 para bacterias.

Valores positivos indican un incremento en el crecimiento de microorganismos, mientras que los valores negativos demuestran reducciones en el crecimiento de microorganismos . o o (J1 TABLA ONCE: Evaluación del extracto que comprende saponinas solo y en combinación con otros conservadores así como otros conservadores solos contra diferentes bacterias en una configuración de bebida. El nivel de bacterias mostrado en (3 replicas) 1010 promedio CFU/ml.

Día de incubación a 25 °C Número Cambio Cambio de Conservadores y nivel 0 7 14 21 28 42 62 de log de log Botella día 28 día 62 1 No conservado 3.49 4.25 3.66 3.94 4.53 4.53 4.35 1.04 0.86 200 ppm de ácido benzoico, 4 150 ppm de ácido sórbico, 3.51. 4.26 ND 3.58 5.85 5.85. TNTC 2.34 2.34 25 ppm de EDTA 350 ppm de Yuca, 200 6 ppm de ácido benzoico, 3.35 3.44 3.26 1.50 1.51 1.14 1.30 -1.84 -2.05 150 ppm de ácido sórbico, 25 ppm de EDTA 7 350 ppm de Yuca, 200 ppm 3.34 3.80 3.68 4,16 4.72 4.72 4.66 1.39 1.32 de ácido benzoico B 350 ppm de Yuca, 200 ppm 3.56 3.79 3.66 3.10 3.62 3.62 3.42 0.06 -0.14 de ácido sórbico 9 350 ppm de Yuca, 25 ppm 3.59 3.80 2.99 4.22 5.88 5.88 TNTC 2.29 2.29 de EDTA H o O 11 350 ppm de Yuca '3.60 3!88 3.74 3.23 5.46 5.46 TNTC 1.87 1.87 12 350 ppm de Yuca, 25 ppm 3.55 3.42 3.08 3.30 4.09 4.09 4.67 • 0.54 1.13 de arginato láurico 13 350 ppm de Yuca, 200 ppm 3.69 4.32 3.77 3.17 5.68 5.68 TNTC 1.99 1.99 de linalool 18 350 ppm de Yuca, 200 ppm 3.45 4.08 2.53 3.46 3.03 3.02 2.88 -0.42 ¦0.57 de ácido cinámico 19 350 ppm de Yuca, 200 ppm O.OO 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 -3.50 -3.50 de carvacrol 350 ppm de Yuca, p-cimeno 3.51 3.76 2.89 3.67 5.28 5.28 ¦ TNTC 1.77 1.77 350 ppm de Yuca, 200 ppm 3.54 3.53 0.00 3.19 2.09 2.26 3.09 -1.45 -0.45 de monolaurina 32 500 ppm de Yuca 3.56 3.75 4.67 4.41 3.05 3.08 3.56 -0.52 0.00 500 ppm de Yuca, 25 ppm 35 de Natamicina (50 ppm 3.56 3.57 3.45 1.49 1.69 1.87 4.44 -1.87 0.88 de Natamax G) 36 500 ppm de Yuca, 250 ppm 3.59 3.34 3.64 2.07 3.07 4.23 4.24 -0.51 0.65 de ácido hidoxicinámico H o s? (ácido ferúlico) 37 500 ppm de Yuca, 200 ppm 3.58 4.18 3.59 3.27 2.74 3.32 4.00 -0.84 0.43 de eugenol 38 500 ppm de Yuca, 200 ppm 3.50 3.83 4.32 2.55 0.63 4.04 4.65 -2.86 1.15 de ácido clorogénico 42 500 ppm de Yuca, 250 ppm 3.68 4.14 3.31 2.93 5.39 TNTC TNTC 1.71 1.71 de timol 43 500 ppm de Yuca, 200 ppm 3.68 3.88 4.83 4.33 6.76 TNTC TNTC 3.08 3.08 e-polilisina 44 500 ppm de Yuca, 200 ppm 3.66 4.13 4.42 4.24 6.11 TNTC TNTC 2.45 2.45 de acaí (extracto de etanol) 45 500 ppm de Yuca, 40 ppm 3.60 4.18 3.88 4.11 6.24 TNTC TNTC 2.64 2.64 de 4-HBITC 500 ppm de Yuca, 200 ppm 47 3.60 3.78 3.82 2.51 3.12 3.91 4.56 -0.49 0.95 de ácido ellágico 48 25 ppm de arginato láurico 3.61 4.13 2.88 2.82 1.10 3.69 3.77 -2.50 0.16 49 200 ppm de linalool 3.52 4.03 3.89 2.60 1.18 2.62 4.51 -2.34 0.99 H o U1 O ppm de Natamicina 50 3.55 3.63 2.97 2.22 2.62 2.76 3.10 -0.93 -0.45 (50 ppm de Natamax G) 250 ppm de ácido 51 hidroxicinámico 3.49 4.56 4.24 3.70 5.08 TNTC TNTC 1.59 1.59 (ácido ferúlico) 52 200 ppm de eugenol 3.38 0.97 0.79 1.48 0.96 2.41 3.61 -2.42 0.23 53 200 ppm de ácido cloréngico 3.48 3.67 3.50 3.74 4.29 TNTC TNTC 0.81 0.81 54 200 ppm de ácido cinámico 3.67 2.79 1.44 0.00 0.00 0.00 0.73 -3.67 -2.93 55 200 pm de carvacrol 1.48 0.00 0.00 0.73 0.00 0.00 0.00 -1.48 -1.48 56 200 ppm de p-cimeno 3.39 3.18 2.81 251 1.10 0.00 0.00 -2.29 -3.39 57 250 ppm de timol 3.38 0.77 0.43 0.33 0.00 0.00 0.00 -3.38 -3.38 58 250 ppm de e-polilisina 3.56 3.87 4.60 4.76 3.93 4.64 4.71 0.38 1.16 200 ppm de acaí 59 3.41 1.89 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 -3.41 -3.41 (extracto de etanol) t H o O TABLA DOCE: Evaluación de extracto que comprende saponinas solo y en combinación con otros conservadores así como otros conservadores solos contra diferentes levaduras en una configuración de bebida. El nivel de levadura mostrado en log10 promedio CFU/ml.

Día de incubación a 25°C Número Conservadores Cambio Cambio 0 7 14 21 28 42 62 de Botella y nivel de log de log día 28 día 62 1 No conservado 2.73 4.54 7.00 TNTC TNTC TNTC TNTC 4.27 4.27 200 ppm de ácido 4 benzoico, 150 ppm 2.77 4.00 3.31 7.00 7.00 TNTC 4.23 4.23 de ácido sórbico, 25 ppm de EDTA 350 ppm de Yuca, 6 200 ppm de ácido 2.54 0.59 1.00 0.49 0.00 0.78 3.08 -2.54 0.54 benzoico, H H o ?? O 150 ppm de ácido sórbico, 25 ppm de EDTA 350 ppm de Yuca, 7 200 ppm de ácido 2.93 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 -2.93 -2.93 benzoico 350 ppm de Yuca, 8 200 ppm de ácido 2.73 0.00 0.00 0.00 0.82 0.00 1.10 -1.91 -1.63 sórbico 350 ppm de Yuca, 9 2.79 2.39 2.09 2.92 0.00 2.08 1.96 -2.79 -0.82 25 ppm de EDTA 11 350 ppm de Yuca 3.11 1.19 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 ¦3.11 -3.11 ' 350 ppm de Yuca, 12 25 ppm de arginato 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 ' 0.00 -3.00 -3.00 láurico 13 350 ppm de Yuca, 2.85 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 -2.85 -2.85 200 ppm de linalool 350 ppm de Yuca, 18 200 ppm de ácido 2.91 0.97 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 -2.91 -2.91 cinámico 350 ppm de Yuca, 19 200 ppm de 1.90 0.00 0.33 0.33 0.00 0.00 0.00 -3.00 -3,00 carvacrol t o ? o s? 350 ppm de Yuca, 20 2.60 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 -2.60 -2.60 p-cimeno 350 ppm de Yuca, 25 200 ppm de 2.73 0.92 0.00 0.00 1.00 0.70 0.97 -1,73 r1.76 monolaurina 32 500 ppm de Yuca 2.72 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.33 -2.72 -2.38 500 ppm de Yuca, 35 25 ppm de 1.90 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 -1.90 -1.90 Natamicina (50 ppm de Natamax G) 500 ppm de Yuca, 36 250 ppm de ácido 2.72 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 -2.72 -2.72 hidoxicinámico (ácido ferúlico) 37 500 ppm de Yuca, 2.40 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 -2.40 -2.40 200 ppm de eugenol 500 ppm de Yuca, 38 200 ppm de ácido 2.58 0.00 0.00 0.00 · 0.00 0.00 0.00 -2.58 •2.58 clorogénico 500 ppm de Yuca, 42 2.15 0.33 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 -2.15 -2.15 250 ppm de timol H o s? o ? 43 500 ppm de Yuca, 1.60 0.00 0.65 0.00 0.00 0.00 0.00 -3.00 -3.00 200 ppm e-polilisina 500 ppm de Yuca, 44 200 ppm de acaí 2.23 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 -2.23 -2.23 (extracto de etanol) 500 ppm de Yuca, 45 0.00 0.00 0.00 0.00. 0.00 -2.51 40 ppm de 4-HBITC 2.51 0.00 -2.51 500 ppm de Yuca, 47 200 ppm de ácido 2.32 1.13 0.82 0.79 0.57 1.01 1.00 -1.76 -1.32 ellágico 48 25 ppm de arginato 2.04 3.29 2.71 4.08 5.41 7.00 TNTC 3.37 4.96 láurico 49 200 ppm de linalool 2.64 ' 4.00 7.00 TNTC TNTC TNTC TNTC 4.36 4.36 ppm de 50 Natamicina (50 ppm 1.30 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 -3.00 -3.00 de Natamax G) 250 ppm de ácido 51 hidroxicinámico 2.63 4.00 7.00 TNTC TNTC TNTC TNTC 4.37 4.37 (ácido ferúlico) 53 200 ppm de ácido 2.73 4.00 7.00 TNTC TNTC TNTC TNTC 4.27 4.27 cloréngico o ?? O U1 54 200 ppm de ácido 2.70 2.13 1.01 3.96 0.67 3.10 4.17 •2.03 1.47 cinámico 55 200 pm de carvacrol 2.04 1.08 0.00 0.78 0.53 0.83 1.61 -1.51 -0.44 200 ppm de 56 p-cimeno 2.75 4.00 7.00' TNTC TNTC TNTC TNTC 4.25 4.25 57 250 ppm de timol 2.70 4.00 7.00 TNTC TNTC TNTC TNTC 4.30 4.30 250 ppm de 58 e-pblilisina 1.95 0.49 2.82 4.09 4.70 "7.00 TNTC 2.74 5.05 59 200 ppm de acaí 2.95 4.00 7.00 TNTC TNTC TNTC TNTC 4.05 4.05 (extracto de etanol) 60 50 ppm de 4-HBITC 2.40 4.00 7.00 TNTC TNTC TNTC TNTC 4.60 4.60 61 200 ppm de 2.61 4.00 7.00 TNTC TNTC TNTC TNTC 4.39 4.39 monolaurina 62 200 ppm de ácido 2.65 4.00 7.00 TNTC TNTC TNTC TNTC 4.35 4.35 ellágico ? o s? o TABLA TRECE: Evaluación del extracto que comprende saponinas solo y en combinación con otros conservadores así como otros conservadores solos contra diferentes mohos en una configuración de bebida. El nivel de moho mostrado en log10 promedio CFU/ml.

Día de incubación a 25° C Cambio Número Cambio Conservadores y nivel 0 7 14 21 28 42 62 de log de Botella de log día 28 día 62 1 No conservado 2.68 4.00 TNTC TNTC TNTC TNTC TNTC 1.32 1.32 200 ppm de ácido benzoico, 4 150 ppm de ácido sórbico, 2.60 1.74 2.35 2.53 0.87 3.21 3.10 -1.73 0.50 25 ppm de EDTA 350 ppm de Yuca, 200 ppm de 6 ácido benzoico, 150 ppm de 2.77 2.17 1.98 2.59 1.88 2.80 3.36 -0.89 0.59 ácido sórbico, 25 ppm de EDTA 350 ppm de Yuca, 200 ppm 7 2.78 1.33 2.85 2.39 0.97 3.33 3.30 -1.81 0.53 de ácido benzoico 350 ppm de Yuca, 200 ppm 6 2.81 2.01 1.24 0.95 0.87 1.03 1.05 -1.94 -1.77 de ácido sórbico 350 ppm de Yuca, 9 3.02 0.86 2.67 4.00 TNTC TNTC TNTC -0.35 0.98 25 ppm de EDTA t o o <J1 11 350 ppm de Yuca 2.65 1.26 2.67 4.00 TNTC TNTC TNTC 1.35 1.35 12 350 ppm de Yuca, 25 ppm 2.65 2.72 4.00 TNTC TNTC TNTC TNTC 1.35 1.35 de arginato láurico 13 350 ppm de Yuca, 200 ppm 2.79 2.59 0.00 1.00 2.40 4.00 TNTC -0.39 1.21 de linalool 350 ppm de Yuca, 200 ppm de 18 4.00 -1.97 1.16 ácido cinámico 2.84 2.37 2.67 2.55 0.87 2.67 350 ppm de Yuca, 200 ppm 19 de carvacrol 2.60 1.42 0.33 0.00 0.00 0.00 0.43 -2.60 -2.60 350 ppm de Yuca, p-cimeno 2.79 2.94 4.00 TNTC TNTC TNTC TNTC 1.21 1.21 350 ppm de Yuca, 200 ppm 2.88 2.19 4.00 TNTC TNTC TNTC TNTC 1.12 1.12 de monolaurina 32 500 ppm de Yuca 2.82 1.37 4.00 TNTC TNTC TNTC TNTC • 1.18 1.18 500 ppm de Yuca, 25 ppm 35 de Natamicina (50 ppm de 2.72 0.33 0.00 · 0.00 0.00 0.00 0.00 -2.72 -2.72 Natamax G) 500 ppm de Yuca, 250 ppm 36 de ácido hidoxicinámico 2.74 3.28 4.00 TNTC TNTC TNTC TNTC 1.26 1.26 (ácido ferúlico) H o a? O OI 500 ppm de Yuca, 200 ppm 37 2.77 2.23 2.04 ' 3.02 3.24 4.00 7.00 0.47 1.23 de eugenol 38 500 ppm de Yuca, 200 ppm 2.88 2.36 4.00 TNTC TNTC TNTC TNTC 1.12 1.12 de ácido clorogénico 42 500 ppm de Yuca, 250 ppm 2.85 2.15 4.00 TNTC TNTC TNTC TNTC 1.15 1: 5 de timol 43 500 ppm de Yuca, 200 ppm 2.66 2.79 4.00 TNTC TNTC TNTC TNTC 1.34 1.34 E-polilisina 44 500 ppm de Yuca, 200 ppm de 2.72 2.47 4.00 TNTC TNTC TNTC TNTC 1.28 ' 1.28 · acaí (extracto de etanol) 45 500 ppm de Yuca, 40 ppm 2.85 2.19 4.00 TNTC TNTC. TNTC TNTC 1.15 1.15 de 4-HBITC 47 500 ppm de Yuca, 200 ppm 2.70 3.18 4.00 TNTC TNTC TNTC TNTC ? .30 1.30 de ácido ellágico 48 25 ppm de arginato láurico 2.73 1.33 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 -2.73 -2,73 * 49 200 ppm de linalool 0.00 1.33 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 -3.00 -3.00 50 25 ppm de Natamicina 2.90 0.67 0.00 0.00 (50 ppm de Natamax G) . o.oo · 0.00 0.00 -2.90 -2.90 t H o <J1 O ?p 51 250 ppm de ácido 2.64 4.00 TNTC TNTC TNTC TNTC TNTC 1.36 1.36 hidroxicinámico (ácido ferúlico) 52 200 ppm de eugenol 2.66 2.55 4.00 TNTC TNTC TNTC TNTC 1.34 1.34 53 200 ppm de ácido cloréngico 2.66 4.00 TNTC. TNTC TNTC TNTC TNTC 1.34 1.34 54 200 ppm de ácido cinámico 2.91 0.33 0.00 0.00 0.00 0.00 O.OO -2.91 -2.91 55 200 pm de carvacrol 2.18 0.87 0.00 0.00 0.00 0.00 0.63 -2.18 . -1.54 56 200 ppm de p-cimeno 2.76· 3.60 4.00 TNTC TNTC TNTC TNTC 1.24 1.24 57 250 ppm de timol 2.75 2.10 4.00 TNTC TNTC TNTC TNTC 1.25 1.25 58 250 ppm de e-polilisina 2.96 4.00 TNTC TNTC TNTC TNTC TNTC 1.04 1.04 59 200 ppm de acaí 2.99 4.00 TNTC TNTC TNTC TNTC TNTC 1.01 1.01 (extracto de etanol) 60 50 ppm de 4-HBITC 2.88 4.00' TNTC TNTC TNTC TNTC TNTC 1.12 1.12 t D H O ?? O OI o 00 A partir de las Tablas ONCE a TRECE, el número 1 variable sirvió como el control de crecimiento positivo no conservado y los números 4 y 48-62 variables sirvieron como variables del conservador que demuestran la actividad de por lo menos un conservador adicional solo en un sistema de bebidas sin el uso de por lo menos un extracto que comprende saponinas . Los números 6-10, 12-31 y 33-47 variables demuestran la actividad de por lo menos un conservador adicional en un sistema de bebidas con el uso combinado de por lo menos un extracto que comprende saponinas. Las variables 11 y 32 representan la actividad de por lo menos un extracto que comprende saponinas sólo en un sistema de bebidas sin el uso de un conservador adicional . La estabilidad microbiana, la estabilidad microbiana extendida, así como la reducción microbiana y la reducción microbiana mejorada se demostraron con conservadores de acuerdo con la presente invención en microorganismos seleccionados de bacterias, levaduras y mohos. Aquellos resultados fueron al menos dependientes de por lo menos el nivel y/o la combinación de conservadores, el tipo de microorganismo (bacterias, levaduras o mohos) y/o el género del microorganismo . Por ejemplo, en la Tabla ONCE, por lo menos los números 8 y 12 variables exhibieron estabilidad microbiana teniendo un incremento no mayor o igual a 1.0 log del día 0 al día 28. Por lo menos un número 6 variable, sin embargo, exhibió reducción microbiana teniendo un descenso mayor de 1.0 log en un lapso de 28 días en comparación al inoculo en el día 0. Se observó la estabilidad microbiana extendida en por lo menos las variables 25 y 32, en donde no hubo un incremento mayor de o igual a 1.0 log del día 0 al día 62. En la Tabla DOCE, la mayoría de las variables conservadas de acuerdo con la presente invención exhibió reducción microbiana, es decir, un descenso mayor de 1.0 log en un lapso de 28 días en comparación con el inoculo en el día 0, mientras algunas variables conservadas de acuerdo con la presente invención demostraron estabilidad microbiana extendida. Diversas variables incluyendo, pero sin limitarse a 7, 11, 12, 13, 18 y 19 exhibieron reducción mejorada, es decir, descenso completo del inoculo. A partir de la Tabla TRECE, por lo menos los números 6 y 9 variables exhibieron estabilidad microbiana, mientras que por lo menos los números 6, 7 y 9 variables desplegaron estabilidad microbiana extendida y por lo menos los números 8 variables demostraron inhibición microbiana. Además, los números 19 y 35 variables desplegaron reducción microbiana mejorada.

Claims

REIVINDICACIONES 1. Una composición conservadora, que comprende por lo menos un extracto que comprende saponinas, en donde la composición conservadora logra estabilidad microbiana de por lo menos un microorganismo seleccionado de mohos, levaduras y bacterias en una bebida o un alimento.
2. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, además porque comprende por lo menos un conservador adicional .
3. La composición de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en donde la composición conservadora logra estabilidad microbiana extendida en una bebida o un alimento.
4. La composición de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en donde la composición conservadora logra reducción microbiana en una bebida o un alimento.
5. La composición de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en donde la composición conservadora logra reducción microbiana mejorada en una bebida o un alimento.
6. La composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde por lo menos un extracto que comprende saponinas se presenta en una cantidad que varía de aproximadamente 50 ppm a aproximadamente 20,000 ppm.
7. La composición de acuerdo con la reivindicación 6, en donde por lo menos un extracto que comprende saponinas se presenta en una cantidad que varía de aproximadamente 250 ppm a aproximadamente 5,000 ppm.
8. La composición de acuerdo con la reivindicación 7 , en donde por lo menos un extracto que comprende saponinas se presenta en una cantidad que varía de aproximadamente 250 ppm a aproximadamente 1,000 ppm.
9. La composición de acuerdo con la reivindicación 6 , en donde por lo menos un extracto que comprende saponinas se presenta en una cantidad que varía de aproximadamente 100 ppm a aproximadamente 1,000 ppm.
10. La composición de acuerdo con la reivindicación 8 , en donde por lo menos un extracto que comprende saponinas se presenta en una cantidad que varía de aproximadamente 250 ppm a aproximadamente 750 ppm.
11. La composición de acuerdo con cualquiera de una de las reivindicaciones 2 a 10, en donde por lo menos un conservador adicional se selecciona de ácidos débiles y sales de los mismos, hexametafosfato de sodio, ácido etilendiamintetraacético , ácidos grasos libres, ésteres y derivados de los mismos, péptidos, arginato láurico, dextrosa cultivada, aceite de neem, eugenol , p-cimeno, timol, carvacrol , linalool, ácido hidroxicinámico , ácido cinámico, aldehido cinámico, natamicina, aceite de árbol del té, extracto de dendelio, polvo de acaí, isotiocianato de 4- hidroxibencilo y/o aceite esencial de semilla de mostaza blanca, ácido ferúlico y mezclas de los mismos.
12. La composición de acuerdo con cualquiera de una de las reivindicaciones precedentes, en donde por lo menos un extracto que comprende saponinas se deriva de soya, frijoles, chícharos, avena, especies Solanum y Allium, tomate, espárrago, té, cacahuate, espinaca, remolacha azucarera, camote, zarzamora, raíz de "regaliz, raíz de prímula, raíz de senega, Quillaja, Yucca, Gyposphila y mezclas de los mismos.
13. La composición de · acuerdo con la reivindicación 12, en donde por lo menos un extracto que comprende saponinas se deriva de Yucca schidigera, Quillaja saponaria y mezclas de las mismas.
14. Una composición conservadora que comprende la composición conservadora de acuerdo a cualquiera de una de las reivindicaciones precedentes.