MX2008013381A - Nuevos compuestos antibacterianos. - Google Patents

Abstract

Esta invención se refiere a un nuevo compuesto purificado PM181104, de fórmula (I) de peso molecular 1514 y fórmula molecular C66H66N18O13S5, que se obtiene por fermentación del microorganismo perteneciente a la especie Kocuria (ZMA B-1/MTCC 5269). La invención incluye todas las formas estereoisoméricas y todas las formas tautoméricas del compuesto PM181104 y sus sales farmacéuticamente aceptables y derivados tales como ésteres y éteres. La presente invención inclusive se refiere a los procesos para la producción de nuevos compuestos antibacterianos, a la producción del microorganismo perteneciente a la especia Kocuria (ZMA B-1/MTCC 5269), y a las composiciones farmacéuticas que contienen e estos nuevos compuestos antibacterianos como ingrediente activo y a sus usos en medicinas para el tratamiento y prevención de enfermedades caudadas por infecciones bacterianas.

Description

NUEVOS COMPUESTOS ANTIBACTERIANOS CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se relaciona con un compuesto nuevo PM181104, que tiene actividad antibacteriana, el cual se obtiene por la fermentación del microorganismo perteneciente a la especie Kocuria (ZMA B-l/ MTCC 5269) . La invención también incluye todas las formas estereoisoméricas y todas las formas tautoméricas de PM181104 y las sales farmacéuticamente aceptables y derivados del mismo. La presente invención además se relaciona con los procesos para la producción de nuevos compuestos antibacterianos, a la producción del microorganismo perteneciente a la especie Kocuria (ZMA B-l/ MTCC 5269) , y a las composiciones farmacéuticas que contienen dichos nuevos compuestos como un ingrediente activo, y a sus usos en medicinas para el tratamiento y la prevención de enfermedades causadas por infecciones bacterianas .

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El surgimiento de resistencia de las bacterias a un número de agentes antimicrobianos tales como antibióticos con base en beta-lactamas, macroluros, quinolonas y vancomicina se está convirtiendo en un problema de salud alrededor del mundo (Trends in Microbiology, 1994, 2, 422-425) . El problema más significativo en la práctica clínica es el incremento en la incidencia de infecciones por Staphylococcus aureus resistente a la meticilina (MRSA por sus siglas en inglés) . Actualmente, el único tratamiento efectivo para infecciones múltiples por MRSA es la vancomicina. Sin embargo, existen varios reportes del surgimiento de resistencia a la vancomicina en algunas cepas de MRSA aisladas (Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 1998, 42, 2188-2192) . Otro grupo de bacterias resistentes a medicamentos múltiples clínicamente relevantes que ha surgido recientemente son los enterococos, algunos de los cuales también muestran resistencia a la vancomicina. La aparición de infecciones por enterococos resistentes a la vancomicina (VRE por sus siglas en inglés) ha forzado un dilema entre los médicos. Las combinaciones de linezolida, un compuesto de oxazolidinona y estreptogramina son las nuevas opciones en medicamentos para tratar infecciones por MRSA. Sin embargo, la resistencia a estas combinaciones de oxazolidinonas (Clinical Infectious Diseases, 2003, 36, suplemento 1, S11-S23; Annals of Pharmacotherapy, 2003, 37, 769-74) y estreptograminas (Current Drug Targets Infectious Disorders, 2001, 1, 215-25) y varios glicopéptidos (Clinical Infectious Disorders 2003, 36, suplemento 1, Sil- S23) requieren el desarrollo expandido de agentes con objetivos o modos de acción alternativos. El incremento en la resistencia del patógeno importante en la comunidad Streptococcus pneumoniae a la penicilina y otros antibacterianos se está convirtiendo en un problema de salud global. Han surgido en varios países cepas del Mycobacterium tuberculosis reintentes a medicamentos compuestos. El surgimiento y la proliferación de patógenos resistentes adquiridos en los nosocomios y en la comunidad se está convirtiendo en una gran amenaza para la salud pública global. Existe una necesidad urgente de descubrir nuevos compuestos que se utilicen como medicamentos para tratar pacientes infectados con bacterias, particularmente las bacterias resistentes a medicamentos compuestos, como los MRSA y VRE .

SUMARIO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con un nuevo compuesto purificado, (designado aquí como PM181104) , aislado a partir del caldo fermentado del microorganismo perteneciente a la especie Kocuria (ZMA B-l/ MTCC 5269) , que tiene actividad antibacteriana. La invención también se relaciona con todas las formas estereoisoméricas y todas las formas tautoméricas del PM181104 y sus sales farmacéuticamente aceptables, así como a los derivados éster y éter de los mismos, representados por la fórmula I (según se describe aquí) . El compuesto PM181104 y sus isómeros, las sales farmacéuticamente aceptables y derivados éster y éter de los mismos, son útiles para el tratamiento y prevención de enfermedades causadas por bacterias, particularmente bacterias resistentes a los medicamentos compuestos, tales como MRSA y VRE. La invención además se relaciona con composiciones farmacéuticas que comprenden el nuevo compuesto PM181104, un isómero, las sales farmacéuticamente aceptables, y los derivados éster y éter de los mismos, como un ingrediente activo para el tratamiento de afecciones medicas causadas por bacterias, particularmente las bacterias resistentes a medicamentos compuestos, tales como MRSA y VRE. La presente invención además se relaciona con los procesos para la producción del compuesto PM181104 y/o sus isómeros a partir del microorganismo perteneciente a la especie Kocuria (ZMA B-l/ MTCC 5269) . La presente invención también se relaciona con los procesos para la producción del microorganismo perteneciente a la especie Kocuria (ZMA B-l/ MTCC 5269) , el cual en el cultivo produce el compuesto PM181104 y sus isómeros . La presente invención se relaciona con la producción de los derivados de éster y éter del compuesto PM181104.

DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 muestra el espectro de absorción ultravioleta (UV) del PM181104. La Figura 2 muestra el espectro de absorción infrarrojo (IR) del PM181104. La Figura 3 muestra el espectro de RMN de 1H (500 MHz) del PM181104 en DMSO-d6. La Figura 4 muestra el espectro de RMN de 13C (125 MHz) del PM181104 en DMSO-d6.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona un nuevo compuesto antibacteriano PM181104 y también incluye todas las formas estereoisoméricas y todas las formas tautoméricas del PM181104 y las sales farmacéuticas aceptables y sus derivados, tales como los esteres y éteres del mismo. De acuerdo, la presente invención se relaciona con nuevos compuestos antibacterianos de la siguiente formula I; en donde R = H (PM181104) , alquilo, alquilcarbonilo, (HO)2PO-, alquil-, OPO(OH)-, (alquil-O) 2PO- , cicloalquilo, cicloalquilcarbonilo, arilo, arilcarbonilo, heterociclilo y heterociclil carbonilo. Tal como se utiliza aquí, el término "alquilo" ya sea que se utilice solo o como parte de un grupo sustituyente , se refiere a los radicales de los grupos alifáticos saturados, incluyendo grupos alquilo de cadena recta o ramificada. Además, a menos que se indique de otra forma, el término "alquilo" incluye grupos alquilo no sustituidos incluyendo grupos alquilo, los cuales están sustituidos por uno o más sustituyentes . En las condiciones preferidas, una cadena recta o una cadena ramificada alquílica tiene 20 o menos átomos de carbono en su estructura (por ejemplo, a C20 para cadena recta, C3 a C20 para cadena ramificada) . Ejemplos de residuos alquílicos que contienen desde 1 hasta 20 átomos de carbono son: metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo, decilo, undecilo, dodecilo, tetradecilo, heptadecilo y eicosilo, los n- isómeros de todos estos residuos; isopropilo, isobutilo, 1-metilbutilo, isopentilo, neopentilo, 2 , 2-dimetilbutilo, 2-metilpentilo, 3-metilpentilo, isohexilo, 2 , 3 , 4-trimetilhexilo, isodecilo, secbutilo, o terbutilo. Un alquilo sustituido se refiere a un residuo alquílico en el cual uno o más, átomos de hidrógeno, por ejemplo 1, 2, 3, 4 ó 5 átomos de hidrógeno se remplazan con sustituyentes , por ejemplo, grupos halógeno, hidroxilo, sulfonilo, alcoxilo, cicloalquilo, ciano, azido, amino, aciloxilo, heterociclo, aralquilo, arilo o grupos fluorescentes tales como el NBD [N- (7-nitrobenz-2-oxa-l, 3-diazol-4-il) amino] o el grupo BODIPY [4 , 4-difluoro-5 , 7-dimetil-4-bora-3a, 4a-diaza-s-indaceno] . Tal como se utiliza aquí, el término "cicloalquilo" se refiere a un sistema saturado mono- o bicíclico que contiene de 3 a 10 átomos de carbono, y más preferentemente que tiene 3, 4, 5, 6 ó 7 átomos de carbono en la estructura del anillo. Ejemplos de residuos cicloalquílieos que contienen anillos de 3 , 4, 5, 6 ó 7 átomos de carbono son el ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo o cicloheptilo . Además, a menos que se indique lo contrario, el término 'cicloalquilo' incluye cicloalquilos no sustituidos y cicloalquilos los cuales están sustituidos por uno o más grupos idénticos o diferentes seleccionados de entre halógeno, hidroxilo, alcoxilo, alquilo, cicloalquilo, ciano, amino, aminoalquilo, aciloxilo, heterociclo, aralquilo y/o un grupo arilo. Tal como se utiliza aquí, el término "aril" se refiere a un grupo hidrocarbonato monocíclico o policíclico que tiene anillos de hasta 10 átomos de carbono, en los cuales se encuentra presente al menos un anillo carbocíclico que tiene un sistema conjugado de electrones p. Ejemplos adecuados de residuos de arilos de C6 a C10 incluyen al fenilo, naftilo o el bifenilo, especialmente el fenilo y el naftilo. Los residuos de arilo, por ejemplo el fenilo o el naftilo, pueden en general sustituirse opcionalmente por uno a más grupos consistentes en halógeno, alquilo, hidroxilo, aciloxilo, amino, amino sustituido y ciano. El término "heterociclilo" se refiere a un sistema de anillo saturado, parcialmente insaturado o monociclo aromático o policiclo heterocíclico que contiene anillos de 5 , 6, 7, 8, 9 ó 10 átomos de los cuáles 1, 2 ó 3 son idénticos o diferentes heteroátomos seleccionados de entre: nitrógeno, oxígeno y azufre. Ejemplos adecuados de tales grupos heterociclilos son el piridinilo, piperazinilo, piperidinilo, imidazolilo, pirrolidinilo y morfilinilo . En el sistema del anillo policíclico heterocíclico el heterociclilo puede comprender ya sea anillos fusionados en los cuáles dos o más carbonos son comunes a dos anillos adyacentes, o anillos puenteados en los cuales los anillos se encuentran unidos a través de átomos no adyacentes. En el sistema del anillo heterocíclico policíclico el heterociclilo preferentemente comprende dos anillos fusionados (bicíclico) , al menos uno de los cuales es un anillo heterocíclico de 5 a 6 miembros. Grupos ejemplares bicíclicos heterocíclicos incluyen: benzoxazolilo, quinolilo, isoquinolilo, carbazolilo, indolilo, isoindolilo, fenoxazinilo, benzotiazolilo, benzimidazolilo, benzoxadiazolilo y benzofurazanilo . Los residuos heterociclilos , pueden en generalmente ser sustituidos opcionalmente por uno o más sustituyentes idénticos o diferentes seleccionados de los grupos consistentes en halógeno, alquilo, hidroxilo, alcoxilo, aciloxilo, amino, amino sustituido y ciano. De acuerdo a las modalidades preferidas a la invención presente, el grupo R en la fórmula I puede representar H, CH3CH2CH2CO, CH3 (CH2) 15CH2CO De acuerdo a una modalidad más preferida, el compuesto PM181104 representado por la fórmula I (en donde R = H) se aisla a partir del caldo fermentado del microorganismo perteneciente a la especie Kocuria (ZMA B-l/ MTCC 5269) y posteriormente se purifica. El nuevo compuesto PM181104 tiene la fórmula molecular C69H66N18013S5 (peso molecular 1514) y se puede caracterizar por cualquiera de una o más de sus propiedades fisicoquímicas y espectrales, tales como datos espectroscópicos de cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC) , espectro de masas (MS) , ultra violeta (UV) , infrarrojo (IR) y resonancia magnética nuclear ( MR) tal como se discute más abajo aquí. La estructura del nuevo compuesto PM181104 se elucidó y su caracterización se hizo con datos espectroscópicos de HPLC, MS, UV, IR y NMR. La estructura se confirmó por medio de un estudio tridimensional (3D) de NMR del bioactivo PM181104 marcado con 15N y 13C. El compuesto PM181104 y sus derivados de éster y éter son antibióticos activos contra bacterias, particularmente las bacterias resistentes a medicamentos compuestos, tales como MRSA y VRE . El microorganismo, el cual puede utilizarse para la producción del compuesto PM181104, es una cepa de la especie Kocuria (ZMA B-l/ MTCC 5269) , referida aquí posteriormente como el cultivo No. ZMA B-l, aislado a partir de una muestra marina colectada en Palk Bay, en la costa de Tamil Nadu, India. La presente invención además proporciona un proceso para la producción del compuesto PM181104 a partir del cultivo ZMA B-l, sus mutantes y variantes, el proceso incluye los pasos de: hacer crecer el cultivo ZMA B-l bajo condiciones aeróbicas sumergido en un medio nutriente que contiene una o más fuentes de carbono y una o más fuentes de nitrógeno y opcionalmente sales nutrientes inorgánicas y/o elementos traza aislar el compuesto PM181104 del caldo de cultivo; y purificar el compuesto PM181104 utilizando procedimientos de purificación generalmente utilizados en las técnicas relacionadas. Tal como se utiliza aquí, el término "mutante" se refiere a un organismo o célula que porta una mutación, la cual es un fenotipo alternativo a los de tipo natural . Tal como se utiliza aquí, el término "variante" se refiere a un organismo individual que se reconoce como diferente de un tipo estándar arbitrario en aquella especie . La identificación preliminar del cultivo No. ZMA B-l, el cual es el productor del PM181104, se llevó a cabo por examen de la morfología de su colonia, observación de cantidad de humedad y la reacción de tinción de Gram. Los estudios microscópicos de la cepa del cultivo aislado No. ZMA B-l se llevaron a cabo en el caldo Zobell Marine Broth 2216 (caldo marino 2216), que contenía 1.5% de agar y se hicieron observaciones a los 1, 2 y 3 días de incubación a 25°C. El cultivo del Zobell Marine Broth 2216 (caldo marino 2216), que contiene 1.5% de agar genera colonias de 2 mm de diámetro con una superficie lisa, de pigmentación amarilla naranja, margen regular y consistencia suave. No se observan en este medio pigmentos difusibles. Bajo microscopio de luz de contraste de fase, se observan los cocos en ampliación 400x. Los cocos se separan bien y se aislan. Son Gram positivos y sin movimiento. La morfología observada clasifica a este organismo como un miembro de la familia Micrococcaceae . La identificación de los aislados se completó al comparar su reacción en cadena de polimerasa 16S rRNA (PCR) con las secuencias existentes disponibles en el sitio web del Nacional Center of Biotechnology Information (NCBI) (URL: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) . El cultivo ZMA B-l se depositó en la Colección de Cultivos Tipo Microbiano (MTCC por sus siglas en inglés) , en el Institute of Microbial Technology, Sector 39-A, Chandigarh -160 036, India una Agencia de Depósito Internacional (IDA) reconocida por la Organización Mundial de la Propiedad Intelectual (OMPI) y le ha sido otorgado el número de acceso MTCC 5269. Adicionalmente al microorganismo específico descrito aquí, se debe entender que los mutantes, tales como aquello producidos por el uso de mutágenos químicos o físicos incluyendo rayos X, rayos UV, etc. y organismos cuya estructura genética se ha modificado con técnicas de biología molecular, también se pueden cultivar para producir el compuesto PM181104. La búsqueda de los mutantes adecuados y las variantes que pueden producir el compuesto de acuerdo a la invención puede confirmarse por medio de HPLC y/o la determinación de actividad biológica de los compuestos activos acumulados en el caldo de cultivo, por ejemplo al probar los compuestos en busca de actividad antibacteriana. EL medio y/o el medio nutriente utilizados para aislar y purificar el cultivo ZMA B-l, que produce el compuesto PM181104, contiene preferentemente fuentes de carbono, nitrógeno y sales inorgánicas. Las fuentes de carbono son, por ejemplo, una o más de almidón, glucosa, sacarosa, dextrina, fructosa, melazas, glicerol, lactosa o galactosa. Una fuente preferida de carbono es la glucosa. Las fuentes de nitrógeno son, por ejemplo, una o más de harina de soya, harina de cacahuate, extracto de levadura, extracto de carne de res, peptona, extracto de malta, licor de maíz fermentado, gelatina o ácidos casamiónicos . Las fuentes preferidas de nitrógeno son la peptona y el extracto de levadura. Las sales inorgánicas de nutrientes son, por ejemplo, una o más de cloruro de sodio, cloruro de potasio, cloruro de calcio, cloruro de magnesio, cloruro de estroncio, bromuro de potasio, fluoruro de sodio, fosfato ácido de sodio, fosfato ácido de potasio, fosfato disódico, carbonato de calcio, bicarbonato de sodio, silicato de sodio, nitrato de amonio, nitrato de potasio, sulfato de sodio, sulfato de amonio, sulfato de magnesio, citrato férrico o ácido bórico. Se prefieren el carbonato de calcio, cloruro de sodio y cloruro de magnesio. Se puede mantener el cultivo No. ZMA B-l a una temperatura entre 21°C y 35°C y un pH de alrededor de 6.5 a 8.5. Típicamente, el cultivo No. ZMA B-l se mantiene de 27°C a 29°C y un pH de alrededor de 7.4 a 7.8. Los cultivos bien crecidos se pueden preservar en el refrigerador de 4°C a 8°C. Las semillas de cultivo de ZMA B-l se pueden obtener a una temperatura entre 25°C y 35°C y un pH de alrededor de 6.5 a 8.5, por 20 a 55 horas a 200- 280 rpm.

La semilla del cultivo No. ZMA B-l se incuba a 29°C a 31°C y un pH alrededor de 7.4 a 7.8, durante 24 a 48 horas a 230-250 rpm. La producción del compuesto PM181104 se puede llevar a cabo incubando el cultivo No. ZMA B-l por fermentación a una temperatura de entre 26 °C y 36°C y un pH de alrededor de 6.5 a 8.5, durante 24 a 96 horas entre 60 y 140 rpm y 100 a 200 lpm de aireación. Típicamente, el cultivo no. ZMA B-l se incuba a 30°C-32°C y pH 7.4-7.8 de 40-72 hours a 90-110 rpm y 140-160 lpm de aireación. La producción del compuesto PM181104 se puede llevar a cabo al cultivar el No. ZMA B-l en un caldo nutriente apropiado bajo las condiciones descritas aquí, preferentemente bajo condiciones aeróbicas sumergidas, por ejemplo en matraces de agitación así como en termentadores de laboratorio. El avance de la fermentación y la producción del compuesto PM181104 se pueden detectar por medio de cromatografía de alta resolución (HPLC) y al medir la bioactividad del caldo de cultivo frente a especies estafilococos y/o enterococos con el método de ensayo conocido de difusión en placa de agar microbiano. El cultivo preferido es el Staphylococcus aureus 3066, el cual es una cepa resistente a la meticilina, un antibiótico lactámico reportado en la literatura, y el Enterococcus faecium R2 (VRE) el cual es resistente a la vancomicina. En el caldo de cultivo resultante, el compuesto PM181104 está presente en el filtrado de cultivo así como en la masa celular y se puede aislar utilizando técnicas conocidas de separación, tales como extracción con disolvente y cromatografía de columna. Entonces, el compuesto PM181104 se puede recobrar del filtrado de cultivo por medio de extracción a un pH alrededor de 5 a 9 con un disolvente inmiscible con el agua, tal como éter de petróleo, diclorometano, cloroformo, acetato de etilo, éter dietílico o butanol o por medio de cromatografía de interacción hidrofóbica utilizando resinas poliméricas, tales como "Diaion ??-20F" (Mitsubishi Chemical Industries Limited, Japón), "Amberlite XAD*" (Rohm and Haas Industries U.S.A.), carbón activado, o por cromatografía de intercambio iónico a pH de 5 a 9. El material activo se puede recuperar de la masa celular por medio de extracción con un disolvente miscible con agua como el metanol, acetona, acetonitrilo, n-propanol, o iso-propanol o con un disolvente inmiscible con el agua como éter de petróleo, diclorometano, cloroformo, acetato de etilo, o butanol. Otra opción es extraer el caldo completo con un disolvente seleccionado de entre éter de petróleo, diclorometano, cloroformo, acetato de etilo, metanol, acetona, acetonitrilo, n-propanol, iso-propanol, o butanol. Normalmente, el material activo se extrae con acetato de etilo del caldo completo. La concentración y liofilización de los extractos produce el material activo crudo. El compuesto PM181104 de la presente invención puede recobrarse del material crudo por fraccionamiento utilizando cualquiera de las siguientes técnicas: cromatografía de fase normal (utilizando alúmina o gel de sílice como fase estacionara; los eluyentes tales como éter de petróleo, acetato de etilo, diclorometano, acetona, cloroformo, metanol o combinaciones de los mismos; y las adiciones de aminas tales como NEt3) ; cromatografía de fase inversa (utilizando gel de sílice de fase inversa tal como gel de dimetiloctadecilsilil sílice, (RP-18) o gel de dimetiloctilsilil sílice (RP-8) como fase estacionara; y eluyentes tales como agua, buffers (por ejemplo, fosfato, acetato, citrato (pH 2-8)), y disolventes orgánicos (por ejemplo, metanol, acetonitrilo, acetona, tetrahidrofurano o combinaciones de estos disolventes) ; cromatografía de permeación en gel (utilizando resinas tales como Sephadex LH-20® (Pharmacia Chemical Industries, Suecia) , TSKgel® Toyopearl H (TosoHaas, Tosoh Corporation, Japón) en disolventes tales como metanol, cloroformo, acetona, acetato de etilo, o sus combinaciones, o Sephadex® G-10 y G-25 en agua) ; o por cromatografía a contracorriente (utilizando un sistema de eluyente bifásico hecho de dos o más disolventes tales como agua, metanol, etanol, iso-propanol , n-propanol, tetrahidrofurano, acetona, acetonitrilo, cloruro de metileno, cloroformo, acetato de etilo, éter de petróleo, benceno y tolueno) . Estas técnicas se pueden utilizar repetidamente, solas o en combinación. Un método típico es la cromatografía sobre gel de sílice de fase inversa (RP-18) . El compuesto PM181104 y sus isómeros inclusive, se pueden convertir en sus sales farmacéuticamente aceptables, las cuáles se contemplan en su totalidad por la presente invención. Las sales se pueden preparar por procedimientos estándares conocidos por alguien hábil en la técnica, por ejemplo, sales como las sales de sodio y de potasio, se pueden preparar al tratar el compuesto PM181104 e inclusive sus isómeros, con una base apropiada de sodio o potasio, por ejemplo hidróxido de sodio, hidróxido de potasio . Los ésteres y éteres del compuesto P 181104 representados por la fórmula I pueden prepararse por os métodos que se describen en la literatura (Advanced Organic Chemistry, 1992, 4a. Edición, J. March, Jhon iley & Sons). Los ésteres también pueden prepararse por el método descrito en la literatura (J. Med. Chemistry, 1992, 35, 145-151) . En una modalidad preferida de la invención, los compuestos de la fórmula I en donde R es alquilo, cicloalquilo , arilo o heterociclilo se preparan al hacer reaccionar el PM181104 con un ácido apropiado que tenga la fórmula RCOOH; en donde R es alquilo, cicloalquilo, arilo o heterociclilo, en la presencia de un agente acoplador tal como la diciclohexil carbodiimida (DCC) y cantidades catalíticas de una base tal como la dimetilaminopiridina (DMAP) . Los ásteres del fosfato se pueden preparar por un método reportado en la literatura (Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 1994, vol 4, No. 21, 2567-2572) . Los éteres se pueden preparar por el método tal y como se describe en la patente de US No. 7,022,667, la cual se incorpora aquí como referencia. El compuesto PM181104 tiene actividad antibacteriana contra una gran variedad de cepas bacterianas. El compuesto PM181104, los estereoisómeros , las sales farmacéuticamente aceptables y derivados tales como los ésteres y éteres inclusive, solos o juntos, se pueden administrar a animales, tales como mamíferos, incluyendo humanos, como productos farmacéuticos y en forma de composiciones farmacéuticas. Igualmente, la presente invención también se relaciona con el compuesto PM181104, sus estereoisómeros, sus sales farmacéuticamente aceptables y sus derivados de éster y éteres para usarse como productos farmacéuticos y para el uso del compuesto PM181104, los estereoisómeros, las sales farmacéuticamente aceptables y sus derivados de éter para la producción de medicamentos que tienen actividad antibacteriana. La presente invención además se relaciona con las composiciones farmacéuticas que contienen una cantidad efectiva del compuesto PM181104 y/o estereoisómeros y/o una o más sales farmacéuticamente aceptables y/o derivados, particularmente los esteres y éteres del mismo, junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable. La cantidad efectiva del compuesto PM181104, o sus estereoisómeros , o sus sales farmacéuticamente aceptables o sus derivados, como ingrediente activo en las preparaciones farmacéuticas normalmente es desde 0.01 mg hasta 100 mg. La presente invención también se relaciona con un método para la preparación de un medicamento que contiene el compuesto PM181104 y/o estereoisómeros y/o una o más sales farmacéuticamente aceptables y/o éster y éter derivados del mismo, para el tratamiento y prevención de enfermedades causadas por infecciones bacterianas . Los compuestos de la presente invención son especialmente útiles como agentes antibacterianos. La presente invención igualmente se relaciona con el uso del compuesto PM181104 y/o estereoisómeros y/o una o más sales farmacéuticamente aceptables y/o derivados del mismo para la manufactura de un medicamento para le prevención o el tratamiento de enfermedades causadas por infecciones bacterianas. Las infecciones bacterianas para cuyo tratamiento los compuestos de la presente invención se utilizan pueden ser causados por bacterias pertenecientes a las especies estafilococos, estreptococos, enterococos y bacilos.

El término "especie Staphylococcus " se refiere a una bacteria Gram-positiva, la cual aparece como cúmulos en forma de uvas cuando se ven a través de un microscopio y son grandes, redondos, colonias amarillo dorado, frecuentemente con -hemolisis, cuando crecen en placas de agar de sangre. El Staphylococcus aureus el cual pertenece a la especie estafilococo causa una variedad de infecciones que supuran (forman pus) tales como lesiones superficiales de la piel como furúnculos, orzuelos y furunculosis; infecciones más serias como la neumonía, mastitis, flebitis, meningitis e infecciones del tracto urinario; e infecciones arraigadas, tales como osteomielitis y endocarditis. El Staphylococcus aureus es la principal causa de infecciones adquiridas en el hospital (nosocomio) de las heridas quirúrgicas e infecciones asociadas con la manipulación de aparatos médicos. El Staphylococcus aureus provoca el envenenamiento de alimentos al liberar enterotoxinas en el alimento, y síndrome de shock tóxico por la liberación de superantígenos hacia el torrente sanguíneo . El término "especie Streptococcus" se refiere a un género de bacterias esféricas, Gram positivas y a un miembro de la división Fir icutes . Los estreptococos son bacterias del ácido láctico. La especie Staphylococcus es responsable de enfermedades infecciosas tales como meningitis, neumonía bacteriana, endocarditis, erisipelas y fascitis necrotizante (las infecciones bacterianas que se "comen la carne" ) . El término "especie Enterococcus" se refiere a un género de bacteria ácido láctica de la división Firmicutes . Son cocos Gram positivos que frecuentemente se encuentran en pares (diplococos) . Los enterococos son organismos facultativos anaerobios. Los enterococos se encuentran entre las causas más frecuentes de infecciones adquiridas en los hospitales. Los enterococos desarrollan resistencia a los antibióticos tales como la gentamicina y la vancomicina . El término "especie Bacillum" se refiere a un gran número de diversas bacterias en forma de bastón, Gram positivas, que tienen movimiento por flagelas perítrocas y son aeróbicas . Es también un miembro de la división Firmicutes . Los miembros de este género son capaces de producir endoesporas que son altamente resistentes a condiciones ambientales desfavorables. El Bacillus cereus que pertenece a la especie Bacillum provoca dos tipos de intoxicaciones por consumo de alimentos. Un tipo está caracterizado por síntomas de náusea, vómito y contracciones abdominales. El segundo tipo se manifiesta principalmente por contracciones abdominales y diarrea. Las infecciones atribuidas al Bacillus subtilis el cual pertenece a la especie Bacillum , incluye bacteremia, endocarditis, neumonía, y septicemia en pacientes con sistema inmunológico comprometido. Los compuestos de la presente invención se pueden administrar por vías oral, nasal, tópica, subcutánea, intramuscular, intravenosa o por otros modos de administración . Las composiciones farmacéuticas que contienen PM181104 o un estereoisómero o una sal farmacéuticamente aceptable o un éster o éter derivados de los mismos, con otras sustancias farmacéuticamente activas se pueden preparar al mezclar los compuestos activos con uno o más auxiliares farmacológicamente aceptables tolerados y/o excipientes tales como, agentes humectantes, solubilizadores tales como surfactantes , vehículos, agentes tónicos, cargas, colorantes, enmascaradores del sabor, lubricantes, desintegrantes, diluyentes, aglutinantes, plastificantes , emulsificantes , bases para ungüentos, emolientes, agentes espesantes, polímeros, lípidos, aceites, co-solventes , agentes acomplejantes o sustancias reguladoras del pH, y al convertir la mezcla en una forma farmacéutica adecuada tal como, por ejemplo, tableta, tabletas recubiertas, cápsulas, gránulos, polvos, cremas, ungüentos, geles, jarabes, emulsiones, suspensiones o soluciones adecuadas para la administración parenteral.

Ejemplos de auxiliares y/o excipientes que pueden mencionarse son: cremofor, poloxámero, cloruro de benzalconio, sulfato de lauril sodio, dextrosa, glicerina, estearato de magnesio, polietilenglicol , almidón, dextrina, lactosa, celulosa, carboximetilcelulosa de sodio, talco, agar-agar, aceite mineral, aceite animal, aceite vegetal, ceras orgánicas y minerales, parafina, geles, propilenglicol , alcohol bencílico, dimetilacetamida, etanol, poliglicoles , tween 80, solutol HS 15, y agua. También es posible administrar las sustancias activas tal como están , sin vehículos o diluyentes, en una forma adecuada, por ejemplo, en cápsulas. Como se acostumbra, la formulación galénica y el método de administración así como el rango de dosis que son los apropiados en un caso específico dependen de la especie a ser tratada y del estado de la afección o enfermedad respectiva, y se puede optimizar utilizando los métodos conocidos en la técnica. En promedio, la dosis diaria del compuesto activo en un paciente es de 0.0005 mg a 15 mg por kg, normalmente 0.001 mg a 7.5 mg por kg. Los siguientes ejemplos se presentan como ejemplos ilustrativos de la presente invención y no limitan el alcance la misma: Ejemplo 1 Aislamiento del cultivo No. ZMA B-l a partir de la fuente marina a) Composición del medio de aislamiento: Zobell Marine Broth 2216 (agarificado con 1.5% de agar-agar) Digesto péptico de tejido animal 5.0 g, extracto de levadura 1.0 g, citrato férrico 0.1 g, cloruro de sodio 19.45 g, cloruro de magnesio 8.8 g, sulfato de sodio 3.24 g, cloruro de calcio 1.8 g, cloruro de potasio 0.55 g, bicarbonato de sodio 0.16 g, bromuro de potasio 80.0 mg, cloruro de estroncio 34.0 mg, ácido bórico 22.0 mg, silicato de sodio 4.0 mg, fluorato de sodio 2.4 mg, nitrato de amonio 1.6 mg, fosfato disódico 8.0 mg, polvo de agar 15.0 mg, agua bidestilada 1.0 L, pH final (a 25°C) 7.4 a 7.8. b) Procedimiento La muestra de esponja, Spirastrella inconstans var. digitata (Dendy) se recolectó en Palk Bay en la costa de Tamil Nadu, India, mediante buceo a una profundidad de tres metros. La muestra de esponja se enjuagó en agua estéril de mar e inmediatamente se transfirió a contenedores estériles de polietileno. Los contenedores se guardaron a -20°C y se transportaron manteniendo la temperatura por debajo de 0°C, al laboratorio para estudios posteriores. Al llegar al laboratorio, las muestras de esponja se almacenaron a menos de 0°C y más tarde se descongelaron a temperatura ambiente (25±2°C) justamente antes del aislamiento del cultivo. La muestra de esponja se cortó asépticamente en piezas de 2 x 2 cm y se suspendió en 5 mL de agua estéril de mar en un tubo de ensayo esterilizado de 25 mL. El tubo de ensayo se colocó en un Vortex por 30 segundos; el agua de mar se drenó y se agregó agua de mar limpia. Se repitió el mismo proceso tres veces. Finalmente, el agua de mar se drenó y se depositó la pieza de esponja sobre cajas petri que contenían el medio aislante mencionado anteriormente [Zobell Marine Broth 2216 (agarificado con 1.5% de agar-agar); HiMedia] . La caja petri se incubó a temperatura ambiente (25±2°C) hasta que se observó crecimiento en las cajas. Las colonias que crecieron en las cajas se aislaron con base en sus características de colonia y se sembraron por estriado en cajas petri que contenían el medio de aislamiento mencionado anteriormente [Zobell Marine Broth 2216 (agarificado con 1.5% de agar-agar); HiMedia]. Los aislados se subcultivaron repetidamente hasta que se obtuvo el cultivo puro No. ZMA B-l. El cultivo No. ZMA B-l entonces se aisló de entre los microorganismos cultivados como un solo aislado.

Ejemplo 2 Purificación del cultivo No. ZMA B-l a) Composición del medio de asilamiento: Zobel Marine Broth 2216 (agarificado con 1.5% de agar agar) Peptona 5.0 g, extracto de levadura 1.0 g, citrato férrico 0.1 g, cloruro de sodio 19.45 g, cloruro de magnesio 8.8 g, sulfato de sodio 3.24 g, cloruro de calcio 1.8 g, cloruro de potasio 0.55 g, bicarbonato de sodio 0.16 g, bromuro de potasio 0.08 g, cloruro de estroncio 34.0 mg, ácido bórico 22.0 mg, silicato de sodio 4.0 mg, fluorato de sodio 2.4 mg, nitrato de amonio 1.6 mg, fosfato disódico 8.0 mg, agar 15.0 g, agua desmineralizada 1.0 L, pH final 7.4 a 7.8. b) Procedimiento: El cultivo estuvo disponible en Zobell Marine Broth 2216 (agarificado con 1.5% de agar agar) en una caja de petri de 15 mm. El cultivo de la caja petri se sembró por estriado sobre una placa inclinada de Zobel Marine Broth 2216 (agarificado con 1.5% de agar agar). La placa inclinada se incubó por 2 días a 25 °C. Una de las colonias individuales de la parte superior de la placa se transfirió a nuevas placas. Las placas se incubaron por 2 días a 25 °C. Éstas se utilizaron posteriormente para fermentación en matraces agitados con el propósito del primer tamizado anti- infeccioso .

Ejemplo 3 Mantenimiento de la cepa productora - cultivo No. ZMA b-1 a) Composición del medio (Zobel Marine Broth 2216) : Peptona 5.0 g, extracto de levadura 1.0 g, citrato férrico 0.1 g, cloruro de sodio 19.45 g, cloruro de magnesio 8.8 g, sulfato de sodio 3.24 g, cloruro de calcio 1.8 g, cloruro de potasio 0.55 g, bicarbonato de sodio 0.16 g, bromuro de potasio 0.08 g, cloruro de estroncio 34.0 mg, ácido bórico 22.0 mg, silicato de sodio 4.0 mg, fluorato de sodio 2.4 mg, nitrato de amonio 1.6 mg, fosfato disódico 8.0 mg, agar 15.0 mg, agua desmineralizada 1.0 L, pH 7.4 a 7.8. b) Después de disolver los ingredientes completamente por calentamiento, la solución resultante se distribuyó en tubos de ensayo y se esterilizó a 121°C por 30 min. Los tubos de ensayo se enfriaron y se les dejó solidificar en posición inclinada. Los inclinados de agar se sembraron por estriado con el cultivo ZMA B-1 por medio de un asa y se incubaron a 27-29°C hasta que se observó un crecimiento bueno. Los cultivos que crecieron bien se almacenaron en el refrigerador a 4-8°C.

Ejemplo 4 Fermentación del cultivo No. ZMA B-l en los matraces de agitación a) Composición del medio semilla (Zobel Marine Broth 2216) : Peptona 5.0 g, extracto de levadura 1.0 g, citrato férrico 0.1 g, cloruro de sodio 19.45 g, cloruro de magnesio 8.8 g, sulfato de sodio 3.24 g, cloruro de calcio 1.8 g, cloruro de potasio 0.55 g, bicarbonato de sodio 0.16 g, bromuro de potasio 0.08 g, cloruro de estroncio 34.0 mg, ácido bórico 22.0 mg, silicato de sodio 4.0 mg, fluorato de sodio 2.4 mg, nitrato de amonio 1.6 mg, fosfato disódico 8.0 mg, agua desmineralizada 1.0 L, pH final 7.4 a 7.8. b) El medio anterior se distribuyó en porciones de 40 mi en matraces Erlenmeyer y se esterilizó con autoclave a 121°C durante 30 min. Los matraces se enfriaron a temperatura ambiente y cada matraz se inoculó con una asa de cepa productora de buen crecimiento (cultivo No. ZMA B-l) en el medio inclinado y se agitó sobre un agitador rotatorio durante 24 a 48 horas a 230-250 rpm a 30°C (±1°C) para proporcionar el cultivo semilla. c) Composición del medio de producción: Peptona 5.0 g, extracto de levadura 1.0 g, citrato férrico 0.1 g, cloruro de sodio 19.45 g, cloruro de magnesio 8.8 g, sulfato de sodio 3.24 g, cloruro de calcio 1.8 g, cloruro de potasio 0.55 g, bicarbonato de sodio 0.16 g, bromuro de potasio 0.08 g, cloruro de estroncio 34.0 mg, ácido bórico 22.0 mg, silicato de sodio 4.0 mg, fluorato de sodio 2.4 mg, nitrato de amonio 1.6 mg, fosfato disódico 8.0 mg, agua desmineralizada 1.0 L, pH final 7.4 a 7.8. d) Se esterilizaron en autoclave 40 mi del medio de producción en matraces Erlenmeyer de 500 mi de capacidad a 121°C por 30 min, se enfriaron hasta 29 a 30 °C y se sembraron con 2 mi del cultivo semilla mencionado en el ejemplo 4b. e) Parámetros de fermentación Temperatura 29 a 30°C; agitación 230 a 250 rpm; tiempo de cosecha 48 a 72 horas. La producción del compuesto PM181104 en el caldo de fermentación se determinó con pruebas de bioactividad frente a Enterococcus faecium R2 (VRE) y/o cepas de S. aureus 3066 MRSA utilizando el método de difusión buena en agar. El pH de cosecha del caldo de cultivo fue de 7.0 a 8.0. El caldo de cultivo se cosecho y el total del caldo se utilizó para pruebas de bioactividad, lo cual es indicativo de la presencia del compuesto PM181104 en el caldo fermentado.

Ejemplo 5 Preparación de la semilla de cultivo en los matraces de agitación para la fermentación a) composición del medio: Peptona 5.0 g, extracto de levadura 1.0 g, citrato férrico 0.1 g, cloruro de sodio 19.45 g, cloruro de magnesio 8.8 g, sulfato de sodio 3.24 g, cloruro de calcio 1.8 g, cloruro de potasio 0.55 g, bicarbonato de sodio 0.16 g, bromuro de potasio 0.08 g, cloruro de estroncio 34.0 mg, ácido bórico 22.0 mg, silicato de sodio 4.0 mg, fluorato de sodio 2.4 mg, nitrato de amonio 1.6 mg, fosfato disódico 8.0 mg, agua desmineralizada 1.0 L, pH 7.4 a 7.8. b) El medio anterior se distribuyó en cantidades de 200 mL en matraces Erlenmeyer de 1 L y se esterilizó en autoclave a 121°C por 30 min. Los matraces se enfriaron hasta temperatura ambiente y cada matraz se inoculó con una asa completa de la cepa productora de buen crecimiento (cultivo No. ZMA B-l) en los medios inclinados y se agitó sobre un agitador rotatorio durante 24 a 48 horas a 230-250 rpm entre 29 y 31°C para dar un cultivo semilla.

Ejemplo 6 Cultivo del cultivo No. ZMA B-l en el termentador a) Composición del medio de producción: Glucosa 50.0 g, extracto de levadura 11.0 g, peptona 4.0 g, extracto de carne de res 4.0 g, carbonato de calcio 5 g, cloruro de sodio 2.5 g, agua desmineralizada 1L, pH 7.6 (antes de la esterilización). b) Se esterilizaron in situ 250 L del medio de producción en el termentador de 300 L junto con 80 mL de desmofeno como agente antiespumante, durante 30 min a 121°C, se enfriaron a 29-31°C y se sembraron con 6L de la semilla de cultivo mencionada en el ejemplo 5b. c) Parámetros de fermentación: Temperatura 30 a 32°C, agitación 100 rpm; aireación 150 lpm, tiempo de cosecha 44 a 66 horas. La producción del compuesto PM181104 en el caldo de fermentación se determinó probando la bioactividad contra el S. aureus 3066 (cepa MRSA) y/o el Enterococcus faecium R2 (VRE) utilizando el método de difusión buena en agar. El pH del caldo de cultivo fue de 7.0 a 8.0. El caldo de cultivo se cosechó y el caldo íntegro se utilizó para aislar y purificar al compuesto PM181104.

Ejemplo 7 Aislamiento y purificación del compuesto PM181104 El caldo íntegro (240 L) del Ejemplo 6 se cosechó y se extrajo utilizando acetato de etilo (240 L) con agitación en un recipiente de vidrio. La fase orgánica se separó utilizando un separador de pila de discos (Alfa-laval, modelo No. LAPX404) y se concentró para obtener el extracto crudo (296 g) . El material crudo obtenido se agitó y sonicó durante 30 min utilizando éter de petróleo (3 x 1L) se filtró para obtener el residuo insoluble (38 g) , el cual se cromatografió con cromatografía de líquidos al vacío utilizando el siguiente método. El residuo insoluble (35.5 g) se disolvió en una mezcla de metanol y acetonitrilo (3:1, 400 mi) y se preabsorbió sobre LiChroprep RP-18 [25-40 , 40 g] y se aplicó a un filtro estéril (grado G-4; 10 cm x 10.5 cm) empacado con adsorbente LiChroprep RP-18 (25-40 , 110 g) .

Se llevó a cabo la elusión utilizando vacío de la línea (100-120 mm) inicialmente con agua (4 L) , seguida de agua: metanol (1:1, 5L) , metanol (3L) , metanol : acetonitrilo (2.5 L) y acetonitrilo. El monitoreo de la purificación se llevó a cabo con bioensayo contra Ent . faecium R2 y/o S. aureus 3066 y/o HPLC analítica. El compuesto PM181104 se detectó en las fracciones de metanol, metanol : acetonitrilo y acetonitrilo. Tales fracciones se combinaron y concentraron para obtener el material semipuro (1.826 g) . La purificación final se hizo con HPLC preparativa repetida utilizando las siguientes condiciones Columna Eurospher RP-18 (10 , 32x250 mm) Eluyente acetonitrilo : agua (56:44) Velocidad de flujo 50 ml/min Detección (UV) 220 nm Tiempo de retención 12 a 14 min La pureza de las fracciones se revisó con bioensayo contra Ent . faecium R2 y/o S. aureus 3066 y o HPLC analítica. Las muestras que contenían el compuesto PM181104 se combinaron y concentraron bajo presión reducida para retirar el disolvente y obtener 600 mg del compuesto puro .

Propiedades fisicoquímicas y espectrales del compuesto PM181104 Apariencia : sólido amorfo blanco Punto de fusión : >300°C (se descompone) Solubilidad : Metanol, D SO HPLC : Rt 5.61 min Columna : Kromasil C18 (5 ; 150x4.6 mm I.D.) (Temperatura de la columna 40°C) Fase móvil : agua : acetonitrilo (1:1) Volumen de inyección : 10 1 (concentración 0.1 mg/ml en la fase móvil) Velocidad de flujo : 1 ml/min Detección 220 nm HR-ES1(+)MS m/z 1515.3733 (M+H) Fórmula Molecul C69H66N18°13S5 Peso Molecular 1514 UV (MeOH) 205.2 , 220.6 y 306.2 nm (Ver figura 1) IF (KBr) 3368, 2981, 1654, 1516, 1429, 1314 1199, 1269, 1074, 1034, 805, 580 era" (Ver figura 2) :H MR ver tabla 1 y Figura 3 13C NMR ver tabla 2 y Figura 4 Tabla 1: RMN de XH del compuesto PM181104 en DMSO- Pico d Pico d Pico d 1 1 33-1.34 (d,3H) 21 5 33 (m, 1H) 41 8.57-8.58 (d, 1H) 2 1 94 (m,4H) 22 5 52 (s, 1H) 42 8.65 (s,lH) 3 2.05-2.06 23 5 63 (S,1H) 43 8.81 (t,2H) (m ancho, 1H) 4 2. 12 (m ancho, 1H) 24 5 83 (s,lH) 44 9.07 (S,1H) 2.25-2.28 25 5 92 (s, 1H) 45 9.16 (S,1H) (d ancho, 1H) 6 2. 40-2.42 26 6 07 ( s, 1H) 46 9.48 (s,lH) (m ancho, 1H) 7 2. 68 (s,3H) 27 6 60 ( S,1H) 47 10.03 (S,1H) 8 2. 76-2.82 (m,2H) 28 6 59- 6.61 (d,2H) 9 2. 97-2.99 (d,lH) 29 6 86 (s, 1H) 10 3. 17-3.21 (m,lH) 30 7 04- 7.06 (d,2H) 11 3. 24-3.26 (m,lH) 31 7 17- 7.18 (m,lH) 12 3. 62 (t, 2H) 32 7 26 (d,4H) 13 3. 69 (m,lH) 33 7 30 (s, 1H) 14 3. 77 (S,2H) 34 7 33- 7.35 (d,lH) 15 4. 49-4.50 (d,lH) 35 7 53 (s, 1H) 16 4. 69-4.71 (t,lH) 36 7 69 (s, 1H) 17 4. 80 (m,lH) 37 7 90 (s, 1H) 18 4. 89 (m,lH) 38 7 95 (S, 1H) 19 4. 93-4.97 (t,lH) 39 8 27- 8.29 (d,2H) 20 5. 23 (t,lH) 40 8 49- 8.50 (d,lH) Tabla 2 : NMR de 13C del compuesto PM181104 en DMSO- señal d señal d señal d 1 12 . 04 22 115 46* 43 151 04 2 16 . 88 23 116 92 44 152 08 3 25 . 16* 24 118 77 45 153 43 4 29 . 42 25 122 84 46 154 20 33 . 09 26 123 39 47 156 27 6 36 . 67 27 124 33 48 156 45 7 37 . 00 28 127 08 49 159 06 8 38 . 62 29 127 36 50 161 27 9 38 . 73 30 128 71* 51 161 54* 47 . 22 31 129 18 52 162 79 11 47 . 76 32 129 76* 53 163 35 12 47 . 88 33 130 11 54 165 58 13 48 . 88 34 130 99* 55 167 95 14 52 . 69 35 133 99 56 169 98 54 . 43 36 135 17 57 170 39 16 59 . 92 37 136 87 58 171 03 17 60 . 56 38 137 67 59 171 77 18 77 . 80 39 140 92 60 171 96 19 103 . 89 40 147 97 61 173 51 104 . 94 41 149 173 62 174 14 21 107 . 52 42 150 83 63 174 90 * dos carbonos EVALUACIÓN BIOLÓGICA DEL COMPUESTO PM181104 Ensayo in-vitro Ejemplo 8 La potencia in-vitro se estableció con determinaciones la concentración inhibidora mínima (MIC por sus siglas en inglés) del compuesto PM181104 frente a cepas bacterianas, utilizando el método de dilución Macro del caldo según las reglas del National Committee for Clinical Laboratory Standard (2000) [Journal of Anti-microbial Chemotherapy, 2002, 50, 125-128 (Referencia cruzada 8: Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria that Grow Aerobically-Fifth Edition: Approved Standard M7-A5. NCCLS, Wayne, PA, USA)]. A menos que se establezca otra cosa, se utilizó caldo Mueller-Hilton como medio nutriente para el ensayo. Se utilizó Linezolida (elaborada por Glenmark Pharma Ltd; Lote No. K2005028) como estándar conocido en todos los experimentos in-vitro. Para la preparación de la solución base se disolvió el compuesto PM181104 en cloroformo (5% del volumen total requerido) y se diluyó utilizando metanol (95% del volumen total requerido) .

Resultado : Los compuestos que se obtuvieron se muestran más adelante en la tabla 3, y demuestran que el compuesto tratamiento de infecciones Tabla 3: MICs del compuesto PM181104 frente a cepas bacterianas Las abreviaturas utilizadas en la tabla 3 son - S: Staphylococcus E: Enterococci B: Bacillus Ensayo in-vivo Se estableció la potencia in-vivo por medio de determinaciones de dosis de protección (PD por sus siglas en inglés) del compuesto PM181104 para su actividad antibiótica en tres modelos animales utilizando ratones Balb/C tanto machos como hembras. Los modelos utilizados fueron los modelos de prueba de eficacia para propósito general y otros modelos de prueba de eficacia específica en órganos/tejidos. Los modelos de prueba de eficacia de propósito general que se utilizaron fueron el modelo de infección sistémica (septicemia) , el modelo de infección localizada (modelo de muslo neutrofénico) . Los modelos de infección específica Órgano/tejido que se utilizaron para la prueba de eficacia fueron infección de riñon, pulmón, el modelo de absceso en la piel.

Ejemplo 9 Modelo de infección sistémica Los animales se infectaron intraperitonealmente con ~108 a 109 ufe de un cultivo durante la noche del Staphylococcus aureus E710 (MRSA) resistente a la meticilina, suspendido en solución salina normal (0.85% de cloruro de sodio) . La solución de PM181104 se preparó en una formulación cremofor-etanol , según se describe en el ejemplo 14. La solución se administró intravenosamente en dosis de 5 mg, 2.5 mg y 1.25 mg/kg, inmediatamente después de la infección. Cada grupo animal consistió de diez animales. Se determinó que el PD100 del PM181104 para el modelo de septicemia es 5 mg/kg comparado con el antibiótico estándar Linezolid (fabricado por Glenmark Pharma Ltd; Lote No. K2005028) cuyo PD100 fue 25 mg/kg.

Ejemplo 10 Modelo Neutrofénico en muslo Los ratones se hicieron Neutrofénicos con ciclofosmamida (150 mg y 100 mg/kg) a 96 y 24 horas, respectivamente, antes de la infección con S. aureus E-710. Se infectaron los animales en los músculos intramuscularmente con ~107 ufe de un cultivo cultivado durante la noche de S. aureus E-710, suspendido en salmuera normal (cloruro de sodio al 0.85%). Cada grupo experimental consistió de seis animales. Se preparó el PM181104 en solución cremofor-etanol según se describe en el ejemplo 14. La solución se administró intravenosamente en dosis de 5 mg/kg, después de dos horas de la infección. Se sacrificó a los animales en varios puntos del tiempo y el tejido del músculo se cosechó para determinar el recuento de microorganismos viables. Se observó una disminución aproximadamente de 1 Log con el PM181104 en dosis de 5 mg/kg, en el punto del tiempo de 6 horas, que fue comparable con el antibiótico estándar utilizado viz. Linezolid (fabricado por Glenmark Pharma Ltd; Lote No. K2005028) con dosis de 25 mg/kg.

Ejemplo 11 Modelo de infección en riñon Se administraron intravenosamente 0.2 mi de gamma carragenina al 2% a ratones Balb/C siete días posteriores a la infección. Se inyectó intravenosamente un cultivo de toda la noche de Enterococcus faecium ATCC 47077 ajustado aproximadamente a 109 ufc/ml, a los ratones en un volumen de 0.2 mi. Se administró a los ratones la solución de PM181104, preparada en cremofo-etanol formulada según el ejemplo 14, a las 4 horas, 24 horas y 48 después de la infección. A las 72 horas después de la infección se sacrificaron los animales y los ríñones se recolectaron para determinar la carga bacteriana. Se observó una disminución en el recuento bacteriano de aproximadamente 1 Log con dosis de 5 mg/kg de PM181104, que fue comparable con el antibiótico estándar utilizado viz. Linezolid (fabricado por Glenmark Pharma Ltd; Lote No. K2005028) en 25 mg/kg y clorhidrato de vancomicina (fabricado por HiMedia; Catálogo No. RM217-500 mg; Lote No. 06-0350) en dosis de 150 mg/kg.

Ejemplo 12 Modelo de infección en pulmón Se hicieron neutrofénicos los ratones Balb/C al administrar intraperitonealmente 200 mg/kg de ciclofosmamida cuatro y dos días posteriores a la infección. El día de la infección, se anestesiaron los ratones y se infectaron con un cultivo en suspensión en la fase logarítmica de S. aureus E-710 con densidad bacteriana de aproximadamente 106 a 107 ufc/ml. A las 24 y 36 horas posteriores a la infección se administraron intravenosamente las primera y segunda dosis respectivas del medicamento. A las 48 horas posteriores a la infección se practicó la eutanasia a los ratones y sus pulmones se colectaron asépticamente para determinar el recuento de bacterias viables. En este modelo, el PM181104 se probó en dosis de 5 mg/kg preparado en una formulación en cremofor-etanol como se describe en el ejemplo 14. Se utilizaron como controles positivos dos antibióticos estándares viz. Linezolid (una sola dosis de 80 mg/kg a las 24 horas posteriores a la infección) y Vancomicina (dos dosis de 110 mg/kg a las 24 y 48 horas posteriores a la infección) . El PM181104 mostró tener actividad bacteriostática, que fue comparable con la del estándar Linezolid (fabricado por Glenmark Pharma Ltd; Lote No. K2005028) . El clorhidrato de vancomicina estándar (fabricado por HiMedia; catalogo No. RM217-500 mg; Lote No. 06-0350) mostró un perfil bactericida. Hubo aproximadamente 2 Log de diferencia en la cuenta bacteriana en los pulmones de animales tratados con PM181104 comparados con los de los animales de control no tratados .

Ejemplo 13 Modelo de absceso en la piel Se infectaron ratones Balb/C subcutáneamente con aproximadamente 108 ufe de un cultivo crecido durante la noche del S. aureus E710 (MRSA) resistente a la meticilina. Las bacterias se suspendieron en de una mezcla 1:1 de gotas de citodex al 2% en salmuera normal (cloruro de sodio al 0.85%) . Se preparó una formulación de PM181104 en cremofor-etanol como se describe en el ejemplo 14. Se administró la solución intravenosamente en dosis de 2.5 mg, 5 mg y 10 mg/kg, dos horas posteriores a la infección. Cada grupo experimental contenía seis animales. Después de la formación de abscesos se sacrificaron los animales y se cosecharon los abscesos para determinar las cuentas viables. Se observó una disminución en el recuento bacteriano de aproximadamente 1 Log con la dosis de 5 mg/kg de PM181104, la cual fue comparable con el antibiótico estándar utilizado viz . Linezolid (fabricado por Glenmark Pharma Ltd; Lote No. K2005028) en dosis de 50 mg/kg.

FORMULACIÓN DEL COMPUESTO PM181104 Ejemplo 14 Se prepararon formulaciones inyectables con el siguiente método general : Etanol y cremofor EL se mezclaron en proporción 1:1 (en peso) . A esto se adicionó PM181104 y se agitó. Esta mezcla se sónico a 25°C. Esta mezcla (considerándola como constituyente al 10%) se diluyó adicionando agua (90%) y se agitó para obtener la formulación inyectable.

DERIVADOS DEL COMPUESTO PM181104 E emplo 15 Derivado del éster del ácido butírico del PM181104 A una solución de PM181104 (0.13 g, 0.085 mmol) en diclorometano (2 mi) se adicionaron ácido butírico (0.008 1, 0.085 mmol), DCC (0.018 g, 0.085 mmol) y una cantidad catalítica de DMAP (0.002 g, 0.016 mmol) y la mezcla de reacción se agitó por 18 h bajo atmósfera de nitrógeno. A la mezcla de reacción se adicionó agua fría y se separó la fase orgánica; la fase acuosa se extrajo con diclorometano (3 x 50 mi) , los extractos orgánicos se concentraron y lavaron con agua (2 x 30 mi) . La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró. El producto crudo se purificó utilizando una columna de cromatografía [gel de sílice (malla 60 - 120) , 4% de metanol en cloroformo] para obtener el compuesto del título como un sólido blanco. Rendimiento: 0.11 g (81 %) ; MS m/z (ESI) : 1585 (M+H) El derivado del éster del ácido butírico del PM181104 mostró un valor de MIC de 2.5 g/ml frente al E. faecium R-2, cepa bacteriana (VRE) .

Ejemplo 16 Derivado del ácido esteárico del PM181104 A una solución de PM181104 (0.12 g, 0.079 mmol)' en diclorometano (2 mi), se adicionó ácido esteárico (0.022 1, 0.079 mmol), DCC (0.016 g, 0.079 mmol) y una cantidad catalítica de DMA (0.002 g, 0.016 mmol) y la mezcla de reacción se agitó por 6 h bajo atmósfera de nitrógeno. A la mezcla de reacción se adicionó agua fría y se separó la fase orgánica; la fase acuosa se extrajo con diclorometano, (3 x 50 mi) , los extractos orgánicos se mezclaron y se lavaron con agua (2 x 30 mi) . La fase orgánica se secó con sulfato de sodio anhidro y se concentró. El producto crudo se purificó utilizando una columna de cromatografía [gel de sílice (malla 60-120) , metanol al 4% en cloroformo] para obtener el compuesto del título como un sólido blanco. Rendimiento 0.1 g (71%); MS m/z (ESI): 1781 (M+H).

El derivado del éster del ácido esteárico del PM181104 mostró un valor de MIC del 1.25 g/ml frente a la cepa bacterial (VRE) E. faecium R-2.

Ejemplo 17 Derivado del éster del ácido nicotínico del PM181104. A una solución de PM181104 (0.02 g, 0.013 mmol) en N, N-dimetilformamida (1 mi), se adicionaron ácido nicotínico (0.008g, 0.065 mmol), DCC (0.014 g, 0.065 mmol) y una cantidad catalítica de DMAP (0.0008g, 0.0065 mol) y la mezcla de reacción se agitó por 18h bajo atmósfera de nitrógeno. El disolvente se eliminó y se agregaron 10 mi de diclorometano al residuo. La urea sin disolver se filtró y el filtrado se lavó con agua (2 x 10 mi) . La fase orgánica se secó con sulfato de sodio anhidro y se concentró hasta sequedad. El producto crudo se purificó por cromatografía de columna [columna de fase inversa C-18 (Euroesfera, 20 nm) , acetonitrilo al 55% en agua] para obtener el compuesto del título como un sólido blanco. Rendimiento 0.011 g (56%) ; MS m/z (ESI) : 1621 (M+H) . El derivado del éster del ácido nicotínico del PM181104 se probó frente a cepas bacterianas. Los resultados obtenidos se muestran en la tabla 4 de abajo, y demuestran que el derivado del éster del ácido nicotínico del PM181104 es útil en el tratamiento de infecciones bacterianas . Tabla 4. MICs del derivado del éster del ácido nicotínico del PM181104 frente a cepas bacterianas.

Claims (22)

1. REIVINDICACIONES : Compuestos nuevos con la siguiente fórmula en donde R = H, alquilo, alquilcarbonilo, (HO)2PO"( alquil-OPO(OH) ', (alquil-O) 2PO", cicloalquilo, cicloalquilcarbonilo, arilo, arilcarbonilo, heterociclilo y heterociclil carbonilo; o el o los estereoisómeros o el o los tautómeros o la o las sales farmacéuticamente aceptables del mismo. 2. Un compuesto nuevo, PM181104 según la reivindicación 1, en donde en los compuestos de la fórmula I, R es H; o un estereoisómero o un tautómero o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 3. El nuevo compuesto PM181104 según la reivindicación 2, o un estereoisómero o un tautómero del mismo, que tiene actividad antibacteriana; el compuesto aisla del caldo fermentado del microorganismo perteneciente a la especie Kocuria (ZMA B-l/MTCC 5269) y sea caracterizado por: (a) peso molecular de 1514, (b) fórmula molecular C69H66N18013S5 (c) espectro de UV como se muestra en la Figura 1, (d) espectro de IR como se muestra en la Figura 2, (e) espectro de NMR de 1H como se muestra en la
2. Figura 3 , (f) espectro de NMR de C como se muestra en la
3. Figura 4.
4. 4. Un proceso para la producción del compuesto PM181104 según la reivindicación 2 ó 3, que consiste en los pasos de : (a) cultivar el microorganismo de la especie Kocuria ( ZMA B-l/MTCC 5269) o una de sus variantes o imitantes bajo condiciones sumergidas aerobias en un medio nutriente que contiene fuentes de carbono y nitrógeno para producir el compuesto PM181104, (b) aislar el compuesto PM181104 a partir del caldo fermentado, y (c) purificar el compuesto PM181104,
5. 5. Un proceso según la reivindicación 4, que además contempla el paso para convertir el compuesto PM181104 en su sal farmacéuticamente aceptable. 6. Un proceso según la reivindicación 4, que además incluye el paso para hacer reaccionar el compuesto
6. PM181104 con un ácido que contiene la fórmula RCOOH; en donde R es alquilo, cicloalquilo, arilo o heterociclilo , para obtener los compuestos nuevos de fórmula I según la reivindicación 1, en donde R = alquilo, cicloalquilo, arilo y heterociclilo.
7. 7. Los compuestos según la reivindicación 1, en donde R = CH3CH2CH2CO, CH3 (CH2) 15CH2CO o
8. 8. Una composición farmacéutica que consistente en una cantidad efectiva de los compuestos según la reivindicación 1, con al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable o un aditivo o un auxiliar.
9. 9. La composición farmacéutica según la reivindicación 8, en donde la composición farmacéutica está en forma de tableta, tableta recubierta, cápsula, gránulo, polvo, crema, ungüento, gel, emulsión, suspensión, o solución para inyección.
10. 10. Una composición farmacéutica según la reivindicación 8, en donde dicha composición se adapta para el tratamiento de infección bacteriana.
11. 11. La composición farmacéutica según la reivindicación 10, en donde dicha infección bacteriana es causada por bacterias pertenecientes a las especies estafilococos, estreptococos, enterococos o bacilos.
12. 12. La composición farmacéutica según la reivindicación 11, en donde dicha bacteria pertenece a las especies estafilococos o enterococos.
13. 13. La composición farmacéutica según la reivindicación 12, en donde dicha bacteria pertenece a la especie estafilococo resistente a la meticilina.
14. 14. La composición farmacéutica según la reivindicación 12, en donde dicha bacteria pertenece a la especie estafilococos resistente a la vancomicina.
15. 15. La composición farmacéutica según la reivindicación 12, en donde dicha bacteria pertenece a la especie enterococos resistente a la vancomicina.
16. 16. Un método para tratar una infección bacteriana consistente en administrar a un mamífero que requiera del mismo, una cantidad efectiva de un compuesto según la reivindicación 1.
17. 17. El método según la reivindicación 16, en donde la infección bacteriana es causada por bacterias pertenecientes a las especies estafilococos, estreptococos, enterococos o bacilos.
18. 18. El método según la reivindicación 17, en donde la infección bacteriana es causada por bacterias pertenecientes a las especies estafilococos o enterococos .
19. 19. El método según la reivindicación 18, en donde dicha bacteria pertenece a la especie estafilococo resistente a la meticilina.
20. 20. El método según la reivindicación 18, en donde dicha bacteria pertenece a la especie estafilococo resistente a la vancomicina.
21. 21. El método según la reivindicación 18, en donde dicha bacteria pertenece a la especie enterococos resistentes a la vancomicina.
22. 22. El uso de compuestos según la reivindicación 1, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una infección bacteriana.