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MX2008013201A - Agonistas receptores de eritropoyetina. - Google Patents

Agonistas receptores de eritropoyetina.

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MX2008013201A
MX2008013201A MX2008013201A MX2008013201A MX2008013201A MX 2008013201 A MX2008013201 A MX 2008013201A MX 2008013201 A MX2008013201 A MX 2008013201A MX 2008013201 A MX2008013201 A MX 2008013201A MX 2008013201 A MX2008013201 A MX 2008013201A
Authority
MX
Mexico
Prior art keywords
seq
amino acid
acid sequence
epo receptor
extracellular domain
Prior art date
Application number
MX2008013201A
Other languages
English (en)
Inventor
Randal R Ketchem
Hongxing Zhou
Luis Borges
Ai Ching Lim
Christopher Mehlin
Original Assignee
Amgen Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
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Abstract

Se proveen anticuerpos que fijan el Receptor de eritropoeitina. También se proveen los métodos para realizar y utilizar dichos anticuerpos. También se proveen Kits que contienen dichos anticuerpos.

Description

AGONISTAS RECEPTORES DE ERITROPOYETINA CAMPO DE LA INVENCIÓN Las presentes instrucciones generalmente se relacionan con los agonistas del receptor de eritropoyetina , los kits que comprenden los agonistas del receptor de eritropoyetina y los métodos de uso de los agonistas del receptor de eritropoyetina . ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La eritropoyetina (Epo) es una hormona glucoproteina involucrada en el crecimiento y maduración de las células progenitoras del eritro en las células rojas de la sangre. La EPO es producida por el hígado durante la vida fetal y por los ríñones de los adultos y estimula la producción de las células rojas de la sangre a partir de los precursores del eritro. La disminución de la producción de la EPO que comunmente ocurre en los adultos como resultado de un mal funcionamiento de los ríñones, lleva a la anemia. La EPO se ha producido a través de técnicas de ingeniería genética involucrando la expresión y secreción de la proteína desde una célula huésped transfectada con el gen que codifica la eritropoyetina. La administración de EPO recombinada ha sido efectiva en el tratamiento de la anemia. Por ejemplo, Eschbach et al. (N. Engl J Med 316, 73 (1987)) describe el uso de la EPO para corregir la anemia resultante de un mal REF. : 197245 funcionamiento renal crónico. La purificación de la EPO urinaria humana fue descripta por Miyake et al. (J. Biol. Chem. 252, 5558 (1977)). La identificación, clonación y expresión de genes que codifican la eritropoyetina es descripta por la Patente Estadounidense N° 4.703.008 a Lin. Una descripción de un método para la purificación de la EPO recombinada de un medio celular está incluida en la Patente Estadounidense N° 4.667.016 a Lai et al. El receptor de la eritropoyetina (EPO-R) se piensa que existe como un complejo multimérico. Estudios de sedimentación sugirieron que su peso molecular es 330 +/- 48 kDa (Mayeux et al. Eur. J. Biochem. 194, 271 (1990)). Estudios de vínculos cruzados indicaron que el complejo receptor incluye distintos polipéptidos múltiples, una especie 66-72 kDa y especies 85 y 100 kDa (Mayeux et al. J. Biol. Chem. 266, 23380 (1991)); McCaffery et al. J. Biol. Chem. 264, 10507 (1991)). Una proteína distinta 95 kDa fue también detectada por inmunoprecipitación del receptor EPO (Miura & Ihle Blood 81, 1739 (1993)). Otro estudio de vínculo cruzado reveló tres EPO conteniendo complejos del 110, 130 y 145 kDa. Los complejos 110 y 145 kDa contenían receptor EPO ya que ellos pueden ser inmunoprecipitados con anticuerpos cultivados contra el receptor (Miura & Ihle, supra) . La expresión de un receptor EPO truncado en el terminal carboxílico resultó en la detección del complejo 110 kDa pero no del complejo 145 kDa. Esto sugiere que el complejo de mayor peso molecular contiene presentes polipéptidos en el complejo 110 kDa y adicionalmente una proteina 35 kDa. Una idea adicional sobre la estructura y funcionamiento del complejo receptor EPO se obtuvo mediante la clonación y expresión de receptores EPO de ratones y humanos (D'Andrea et al. Célula 57, 277 (1989); Jones et al. Sangre 76, 31 (1990); Winkelmann et al. Sangre 76, 24 (1990); PCT Aplicación No. W090/08822; Patente Estadounidense No. 5.278.065 a D'Andrea et al.) El receptor EPO humano total es una proteina transmembránica del aminoácido 483 con un dominio extracelular aproximado del aminoácido 224 y un péptido de señal de aminoácido 25. El receptor humano muestra una secuencia homológica de cerca del 82% del aminoácido comparada con el receptor del ratón. El receptor EPO entero clonado que aparece en la células de los mamíferos (66-72kDa) se ha demostrado como unido a la EPO con una afinidad similar a la del receptor nativo en las células progenitoras del eritro. Por lo tanto, esta forma se especula que contiene el principal determinante unificador de la EPO. Las proteínas 85 y 110 kDa observadas como parte de un complejo de vínculo cruzado son distintas del receptor EPO, pero están probablemente en una proximidad cercana a la EPO debido a que la EPO puede estar entrecruzada con ellas. Las proteínas 85 y 110 kDa están relacionadas entre sí y la proteína 85 kDa puede ser un producto proteolitico desdoblado de las especies 100 kDa (Sawyer J. Biol. Chem. 264, 13343 (1989)). Una forma soluble (truncada) del receptor EPO conteniendo sólo el dominio extracelular ha sido producido y se encontró que estaba unido a la EPO con una afinidad de cerca de 1 n , o cerca de 3 a 10 veces menor que el receptor entero (Harris et al. J. Biol. Chem. 267, 15205 (1992); Yang & Jones Blood 82, 1713 (1993)). La activación del receptor EPO resulta en diversos efectos biológicos. Tres de las actividades incluyen la estimulación de proliferación de eritroblastos inmaduros, la estimulación de diferenciación en eritroblastos inmaduros y la inhibición de la apóptosis en las células progenitoras del eritro (Liboi et al. Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90, 11351 (1993); Koury Science 248, 378 (1990)). El camino de la señal transductora que resulta en la estimulación de la proliferación y estimulación de diferenciación parece ser separable (Noguchi et al. Mol. Cell. Biol. 8, 2604 (1988); Patel et al. J. Biol. Chem. 267, 21300 (1992); Liboi et al. ibid) . BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN En ciertas modalidades, se provee un fragmento de una variable cadena simple. En ciertas modalidades, el fragmento de una variable cadena simple comprende: a) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 1 y SEQ ID NO. 2; b) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 3 y SEQ ID NO. 4; c) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 5 y SEQ ID NO. 6; d) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 7 y SEQ ID NO. 8; e) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 9 y SEQ ID NO. 10; f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 56 y SEQ ID NO. 58; g) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 60 y SEQ ID NO. 62; h) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 64 y SEQ ID NO. 66; i) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 68 y SEQ ID NO. 70; j) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 72 y SEQ ID NO. 74; k) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 76 y SEQ ID NO. 78; 1) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 80 y SEQ ID NO. 82; m) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 84 y SEQ ID NO. 86; n) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 88 y SEQ ID NO. 90; o) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 92 y SEQ ID NO. 94; p) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 96 y SEQ ID NO. 98; q) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 100 y SEQ ID NO. 102; r) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 104 y SEQ ID NO. 106; s) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 108 y SEQ ID NO. 110; o t) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 112 y SEQ ID NO. 11 .
En ciertas modalidades, se provee un fragmento de una variable de cadena simple fusionado a Fe. En ciertas modalidades, el fragmento de una variable de cadena simple comprende: a) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 1 y SEQ ID NO. 2; b) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 3 y SEQ ID NO. 4; c) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 5 y SEQ ID NO. 6; d) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 7 y SEQ ID NO. 8; e) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 9 y SEQ ID NO. 10; f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 56 y SEQ ID NO. 58; g) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 60 y SEQ ID NO. 62; h) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 64 y SEQ ID NO. 66; i) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 68 y SEQ ID NO. 70; j) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 72 y SEQ ID NO. 74; k) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 76 y SEQ ID NO. 78; 1) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 80 y SEQ ID NO. 82; m) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 84 y SEQ ID NO. 86; n) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 88 y SEQ ID NO. 90; o) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 92 y SEQ ID NO. 94; p) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 96 y SEQ ID NO. 98; q) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 100 y SEQ ID NO. 102; r) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 104 y SEQ ID NO. 106; s) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 108 y SEQ ID NO. 110; o t) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 112 y SEQ ID NO. 114. En ciertas modalidades, se provee un método de tratar la anemia en un paciente. En ciertas modalidades, el método para tratar la anemia en un paciente comprende la administración de un fragmento variable de la cadena simple en la que el mismo comprende: a) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 1 y SEQ ID NO. 2; b) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 3 y SEQ ID NO. 4; c) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 5 y SEQ ID NO. 6; d) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 7 y SEQ ID NO. 8; e) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 9 y SEQ ID NO. 10; f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 56 y SEQ ID NO. 58; g) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 60 y SEQ ID NO. 62; h) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 64 y SEQ ID NO. 66; i) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 68 y SEQ ID NO. 70; j) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 72 y SEQ ID NO. 74; k) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 76 y SEQ ID NO. 78; 1) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 80 y SEQ ID NO. 82; m) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 84 y SEQ ID NO. 86; n) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 88 y SEQ ID NO. 90; o) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 92 y SEQ ID NO. 94; p) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 96 y SEQ ID NO. 98; q) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 100 y SEQ ID NO. 102; r) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 104 y SEQ ID NO. 106; s) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 108 y SEQ ID NO. 110; o t) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 112 y SEQ ID NO. 114. En ciertas modalidades, se provee un método de promocionar la protección tisular en un paciente. En ciertas modalidades, el método para promocionar la protección tisular en un paciente comprende la administración de un fragmento variable de la cadena simple en la que el mismo comprende: a) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 1 y SEQ ID NO. 2; b) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 3 y SEQ ID NO. 4; c) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 5 y SEQ ID NO. 6; d) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 7 y SEQ ID NO. 8; e) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 9 y SEQ ID NO. 10; f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 56 y SEQ ID NO. 58; g) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 60 y SEQ ID NO. 62; h) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 64 y SEQ ID NO. 66; i) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 68 y SEQ ID NO. 70; j) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 72 y SEQ ID NO. 74; k) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 76 y SEQ ID NO. 78; 1) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 80 y SEQ ID NO. 82; m) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 84 y SEQ ID NO. 86; n) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 88 y SEQ ID NO. 90; o) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 92 y SEQ ID NO. 94; p) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 96 y SEQ ID NO. 98; q) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 100 y SEQ ID NO. 102; r) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 104 y SEQ ID NO. 106; s) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 108 y SEQ ID NO. 110; o t) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 112 y SEQ ID NO. 114. En ciertas modalidades, se provee un método para activar la actividad endógena del receptor de la eritropoyetina . En ciertas modalidades, el método para activar la actividad endógena de un receptor de la eritropoyetina en un mamífero comprende la administración a dicho mamífero de una cantidad de fragmento variable de cadena simple comprende: a) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 1 y SEQ ID NO. 2; b) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 3 y SEQ ID NO. 4; c) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 5 y SEQ ID NO. 6; d) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 7 y SEQ ID NO. 8; e) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 9 y SEQ ID NO. 10; f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 56 y SEQ ID NO. 58; g) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 60 y SEQ ID NO. 62; h) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 64 y SEQ ID NO. 66; i) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 68 y SEQ ID NO. 70; j) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 72 y SEQ ID NO. 74; k) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 76 y SEQ ID NO. 78; 1) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 80 y SEQ ID NO. 82; m) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 84 y SEQ ID NO. 86; n) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 88 y SEQ ID NO. 90; o) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 92 y SEQ ID NO. 94; p) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 96 y SEQ ID NO. 98; q) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 100 y SEQ ID NO. 102; r) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 104 y SEQ ID NO. 106; s) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 108 y SEQ ID NO. 110; o t) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 112 y SEQ ID NO. 114. En ciertas modalidades, se provee un anticuerpo. En ciertas modalidades, el anticuerpo comprende: a) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 1 y SEQ ID NO. 2; b) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 3 y SEQ ID NO. 4; c) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 5 y SEQ ID NO. 6; d) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 7 y SEQ ID NO. 8; e) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 9 y SEQ ID NO. 10; f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 56 y SEQ ID NO. 58; g) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 60 y SEQ ID NO. 62; h) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 64 y SEQ ID NO. 66; i) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 68 y SEQ ID NO. 70; j) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 72 y SEQ ID NO. 74; k) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 76 y SEQ ID NO. 78; 1) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 80 y SEQ ID NO. 82; m) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 84 y SEQ ID NO. 86; n) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 88 y SEQ ID NO. 90; o) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 92 y SEQ ID NO. 94; p) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 96 y SEQ ID NO. 98; q) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 100 y SEQ ID NO. 102; r) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 104 y SEQ ID NO. 106; s) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 108 y SEQ ID NO. 110; o t) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 112 y SEQ ID NO. 114. En ciertas modalidades, se provee un método de tratar la anemia en un paciente. En ciertas modalidades, el método para tratar la anemia en un paciente que comprenda la administración al paciente de un anticuerpo que comprenda: a) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 1 y SEQ ID NO. 2; b) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 3 y SEQ ID NO. 4; c) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 5 y SEQ ID NO. 6; d) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 7 y SEQ ID NO. 8; e) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 9 y SEQ ID NO. 10; f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 56 y SEQ ID NO. 58; g) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 60 y SEQ ID NO. 62; h) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 64 y SEQ ID NO. 66; i) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 68 y SEQ ID NO. 70; j) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 72 y SEQ ID NO. 74; k) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 76 y SEQ ID NO. 78; 1) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 80 y SEQ ID NO. 82; m) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 84 y SEQ ID NO. 86; n) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 88 y SEQ ID NO. 90; o) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 92 y SEQ ID NO. 94; p) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 96 y SEQ ID NO. 98; q) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 100 y SEQ ID NO. 102; r) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 104 y SEQ ID NO. 106; s) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 108 y SEQ ID NO. 110; o t) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 112 y SEQ ID NO. 114. En ciertas modalidades, se provee un método de promocionar la protección tisular en un paciente. En ciertas modalidades, el método para promocionar la protección tisular en un paciente que comprenda la administración al paciente de un anticuerpo que comprenda: a) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 1 y SEQ ID NO. 2; b) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 3 y SEQ ID NO. 4; c) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 5 y SEQ ID NO. 6; d) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 7 y SEQ ID NO. 8; e) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 9 y SEQ ID NO. 10; f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 56 y SEQ ID NO. 58; g) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 60 y SEQ ID NO. 62; h) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 64 y SEQ ID NO. 66; i) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 68 y SEQ ID NO. 70; j) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 72 y SEQ ID NO. 74; k) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 76 y SEQ ID NO. 78; 1) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 80 y SEQ ID NO. 82; m) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 84 y SEQ ID NO. 86; n) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 88 y SEQ ID NO. 90; o) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 92 y SEQ ID NO. 94; p) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 96 y SEQ ID NO. 98; q) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 100 y SEQ ID NO. 102; r) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 104 y SEQ ID NO. 106; s) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 108 y SEQ ID NO. 110; o t) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 112 y SEQ ID NO. 114. En ciertas modalidades, se provee un método para activar la actividad endógena del receptor de la eritropoyetina en un mamífero. En ciertas modalidades, el método para activar la actividad endógena de un receptor de la eritropoyetina en un mamífero que comprenda la administración a dicho mamífero de una cantidad de anticuerpo que comprenda: a) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 1 y SEQ ID NO. 2; b) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 3 y SEQ ID NO. 4; c) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 5 y SEQ ID NO. 6; d) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 7 y SEQ ID NO. 8; e) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 9 y SEQ ID NO. 10; f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 56 y SEQ ID NO. 58; g) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 60 y SEQ ID NO. 62; h) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 64 y SEQ ID NO. 66; i) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 68 y SEQ ID NO. 70; j) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 72 y SEQ ID NO. 74; k) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 76 y SEQ ID NO. 78; 1) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 80 y SEQ ID NO. 82; m) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 84 y SEQ ID NO. 86; n) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 88 y SEQ ID NO. 90; o) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 92 y SEQ ID NO. 94; p) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 96 y SEQ ID NO. 98; q) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 100 y SEQ ID NO. 102; r) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 104 y SEQ ID NO. 106; s) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 108 y SEQ ID NO. 110; o t) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 112 y SEQ ID NO. 114. En ciertas modalidades se provee un fragmento de una variable de cadena simple. En ciertas modalidades, el fragmento de una variable de cadena simple comprende: a) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 14, SEQ ID NO. 15 y SEQ ID NO. 16; b) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 17, SEQ ID NO. 18, y SEQ ID NO. 19; c) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 20, SEQ ID NO. 21, y SEQ ID NO. 22; d) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 23, SEQ ID NO. 24, SEQ ID NO. 25, SEQ ID NO. 26, SEQ ID NO. 27, y SEQ ID NO. 28; e) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 29, SEQ ID NO. 30, SEQ ID NO. 31, SEQ ID NO. 32, SEQ ID NO. 33, y SEQ ID NO. 34; f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 123, SEQ ID NO.: 124, SEQ ID NO.: 125, SEQ ID NO.: 126, SEQ ID NO.: 127, y SEQ ID NO.: 128; g) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. : 129, SEQ ID NO.: 130, SEQ ID NO.: 131, SEQ ID NO.: 132, SEQ ID NO.: 133, y SEQ ID NO.: 134; h) f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 135, SEQ ID NO.: 136, SEQ ID NO.: 212, SEQ ID NO.: 137, SEQ ID NO.: 138, y SEQ ID NO.: 139; i) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 140, SEQ ID NO.: 141, SEQ ID NO.: 142, SEQ ID NO.: 143, SEQ ID NO.: 144, y SEQ ID NO.: 145; j) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 146, SEQ ID NO.: 147, SEQ ID NO.: 148, SEQ ID NO.: 149, SEQ ID NO.: 150, y SEQ ID NO.: 151; k) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 152, SEQ ID NO.: 153, SEQ ID NO.: 154, SEQ ID NO.: 155, SEQ ID NO.: 156, y SEQ ID NO.: 157; 1) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 158, SEQ ID NO.: 159, SEQ ID NO.: 160, SEQ ID NO.: 161, SEQ ID NO.: 162, y SEQ ID NO.: 163; m) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 164, SEQ ID NO.: 165, SEQ ID NO.: 166, SEQ ID NO.: 167, SEQ ID NO.: 168, y SEQ ID NO.: 169; n) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 170, SEQ ID NO.: 171, SEQ ID NO.: 172, SEQ ID NO.: 173, SEQ ID NO.: 174, y SEQ ID NO.: 175; o) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 176, SEQ ID NO.: 177, SEQ ID NO.: 178, SEQ ID NO.: 179, SEQ ID NO.: 180, y SEQ ID NO.: 181; p) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 182, SEQ ID NO.: 183, SEQ ID NO.: 184, SEQ ID NO.: 185, SEQ ID NO.: 186, y SEQ ID NO.: 187; q) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 188, SEQ ID NO.: 189, SEQ ID NO.: 190, SEQ ID NO.: 191, SEQ ID NO.: 192, y SEQ ID NO.: 193; r) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 194, SEQ ID NO.: 195, SEQ ID NO.: 196, SEQ ID NO.: 197, SEQ ID NO.: 198, y SEQ ID NO.: 199; s) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 200, SEQ ID NO.: 201, SEQ ID NO.: 202, SEQ ID NO.: 203, SEQ ID NO.: 204, y SEQ ID NO.: 205; o t) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 206, SEQ ID NO.: 207, SEQ ID NO.: 208, SEQ ID NO.: 209, SEQ ID NO.: 210, y SEQ ID NO.: 211. En ciertas modalidades, se provee un fragmento de una variable de cadena simple fusionado a Fe. En ciertas modalidades, el fragmento de una variable de cadena simple comprende: a) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 14, SEQ ID NO. 15 y SEQ ID NO. 16; b) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 17, SEQ ID NO. 18, y SEQ ID NO. 19; c) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 20, SEQ ID NO. 21, y SEQ ID NO. 22; d) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 23, SEQ ID NO. 24, SEQ ID NO. 25, SEQ ID NO. 26, SEQ ID NO. 27, y SEQ ID NO. 28; e) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 29, SEQ ID NO. 30, SEQ ID NO. 31, SEQ ID NO. 32, SEQ ID NO. 33, y SEQ ID NO. 34; f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 123, SEQ ID NO.: 124, SEQ ID NO.: 125, SEQ ID NO.: 126, SEQ ID NO.: 127, y SEQ ID NO.: 128; g) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 129, SEQ ID NO.: 130, SEQ ID NO.: 131, SEQ ID NO.: 132, SEQ ID NO.: 133, y SEQ ID NO.: 134; h) f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 135, SEQ ID NO.: 136, SEQ ID NO.: 212, SEQ ID NO.: 137, SEQ ID NO.: 138, y SEQ ID NO.: 139; i) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 140, SEQ ID NO.: 141, SEQ ID NO.: 142, SEQ ID NO.: 143, SEQ ID NO.: 144, y SEQ ID NO.: 145; j) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 146, SEQ ID NO.: 147, SEQ ID NO.: 148, SEQ ID NO.: 149, SEQ ID NO.: 150, y SEQ ID NO.: 151; k) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 152, SEQ ID NO.: 153, SEQ ID NO.: 154, SEQ ID NO.: 155, SEQ ID NO.: 156, y SEQ ID NO.: 157; 1) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 158, SEQ ID NO.: 159, SEQ ID NO.: 160, SEQ ID NO.: 161, SEQ ID NO.: 162, y SEQ ID NO. : 163; m) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 164, SEQ ID NO.: 165, SEQ ID NO.: 166, SEQ ID NO.: 167, SEQ ID NO.: 168, y SEQ ID NO.: 169; n) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. : 170, SEQ ID NO.: 171, SEQ ID NO.: 172, SEQ ID NO.: 173, SEQ ID NO.: 174, y SEQ ID NO.: 175; o) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 176, SEQ ID NO.: 177, SEQ ID NO.: 178, SEQ ID NO.: 179, SEQ ID NO.: 180, y SEQ ID NO.: 181; p) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 182, SEQ ID NO.: 183, SEQ ID NO.: 184, SEQ ID NO.: 185, SEQ ID NO.: 186, y SEQ ID NO.: 187; q) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 188, SEQ ID NO.: 189, SEQ ID NO.: 190, SEQ ID NO.: 191, SEQ ID NO.: 192, y SEQ ID NO.: 193; r) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 194, SEQ ID NO.: 195, SEQ ID NO.: 196, SEQ ID NO.: 197, SEQ ID NO.: 198, y SEQ ID NO.: 199; s) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 200, SEQ ID NO.: 201, SEQ ID NO.: 202, SEQ ID NO.: 203, SEQ ID NO.: 204, y SEQ ID NO.: 205; o t) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 206, SEQ ID NO.: 207, SEQ ID NO.: 208, SEQ ID NO.: 209, SEQ ID NO.: 210, y SEQ ID NO.: 211. En ciertas modalidades, se provee un método de tratar la anemia en un paciente. En ciertas modalidades, el método para tratar la anemia en un paciente comprende la administración de un fragmento variable de la cadena simple en la que el mismo comprende: a) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 14, SEQ ID NO. 15 y SEQ ID NO. 16; b) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 17, SEQ ID NO. 18, y SEQ ID NO. 19; c) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 20, SEQ ID NO. 21, y SEQ ID NO. 22; d) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 23, SEQ ID NO. 24, SEQ ID NO. 25, SEQ ID NO. 26, SEQ ID NO. 27, y SEQ ID NO. 28; e) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 29, SEQ ID NO. 30, SEQ ID NO. 31, SEQ ID NO. 32, SEQ ID NO. 33, y SEQ ID NO. 34; f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 123, SEQ ID NO.: 124, SEQ ID NO.: 125, SEQ ID NO.: 126, SEQ ID NO.: 127, y SEQ ID NO.: 128; g) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 129, SEQ ID NO.: 130, SEQ ID NO.: 131, SEQ ID NO.: 132, SEQ ID NO.: 133, y SEQ ID NO.: 134; h) f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 135, SEQ ID NO. : 136, SEQ ID NO.: 212, SEQ ID NO.: 137, SEQ ID NO.: 138, y SEQ ID NO.: 139; i) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 140, SEQ ID NO.: 141, SEQ ID NO.: 142, SEQ ID NO.: 143, SEQ ID NO.: 144, y SEQ ID NO.: 145; j) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 146, SEQ ID NO.: 147, SEQ ID NO.: 148, SEQ ID NO.: 149, SEQ ID NO. : 150, y SEQ ID NO. : 151; k) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 152, SEQ ID NO.: 153, SEQ ID NO.: 154, SEQ ID NO.: 155, SEQ ID NO.: 156, y SEQ ID NO.: 157; 1) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 158, SEQ ID NO.: 159, SEQ ID NO.: 160, SEQ ID NO.: 161, SEQ ID NO.: 162, y SEQ ID NO.: 163; m) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 164, SEQ ID NO.: 165, SEQ ID NO.: 166, SEQ ID NO.: 167, SEQ ID NO.: 168, y SEQ ID NO.: 169; n) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 170, SEQ ID NO.: 171, SEQ ID NO.: 172, SEQ ID NO.: 173, SEQ ID NO.: 174, y SEQ ID NO.: 175; o) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 176, SEQ ID NO.: 177, SEQ ID NO.: 178, SEQ ID NO.: 179, SEQ ID NO.: 180, y SEQ ID NO.: 181; p) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 182, SEQ ID NO.: 183, SEQ ID NO.: 184, SEQ ID NO.: 185, SEQ ID NO.: 186, y SEQ ID NO.: 187; q) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 188, SEQ ID NO.: 189, SEQ ID NO.: 190, SEQ ID NO.: 191, SEQ ID NO.: 192, y SEQ ID NO.: 193; r) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 194, SEQ ID NO.: 195, SEQ ID NO.: 196, SEQ ID NO.: 197, SEQ ID NO. : 198, y SEQ ID NO. : 199; s) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 200, SEQ ID NO.: 201, SEQ ID NO.: 202, SEQ ID NO.: 203, SEQ ID NO.: 204, y SEQ ID NO.: 205; o t) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. : 206, SEQ ID NO.: 207, SEQ ID NO.: 208, SEQ ID NO.: 209, SEQ ID NO.: 210, y SEQ ID NO.: 211. En ciertas modalidades, se provee un método de promocionar la protección tisular en un paciente. En ciertas modalidades, el método para promocionar la protección tisular en un paciente comprende la administración de un fragmento variable de la cadena simple en la que el mismo comprende: a) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 14, SEQ ID NO. 15 y SEQ ID NO. 16; b) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 17, SEQ ID NO. 18, y SEQ ID NO. 19; c) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 20, SEQ ID NO. 21, y SEQ ID NO. 22; d) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 23, SEQ ID NO. 24, SEQ ID NO. 25, SEQ ID NO. 26, SEQ ID NO. 27, y SEQ ID NO. 28; e) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 29, SEQ ID NO. 30, SEQ ID NO. 31, SEQ ID NO. 32, SEQ ID NO. 33, y SEQ ID NO. 34; f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 123, SEQ ID NO.: 124, SEQ ID NO.: 125, SEQ ID NO.: 126, SEQ ID NO.: 127, y SEQ ID NO.: 128; g) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 129, SEQ ID NO.: 130, SEQ ID NO.: 131, SEQ ID NO.: 132, SEQ ID NO.: 133, y SEQ ID NO.: 134; h) f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 135, SEQ ID NO.: 136, SEQ ID NO.: 212, SEQ ID NO.: 137, SEQ ID NO.: 138, y SEQ ID NO. : 139; i) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 140, SEQ ID NO.: 141, SEQ ID NO.: 142, SEQ ID NO.: 143, SEQ ID NO.: 144, y SEQ ID NO.: 145; j) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 146, SEQ ID NO.: 147, SEQ ID NO.: 148, SEQ ID NO.: 149, SEQ ID NO.: 150, y SEQ ID NO.: 151; k) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 152, SEQ ID NO.: 153, SEQ ID NO.: 154, SEQ ID NO.: 155, SEQ ID NO.: 156, y SEQ ID NO.: 157; 1) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 158, SEQ ID NO.: 159, SEQ ID NO.: 160, SEQ ID NO.: 161, SEQ ID NO.: 162, y SEQ ID NO. : 163; m) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 164, SEQ ID NO.: 165, SEQ ID NO.: 166, SEQ ID NO.: 167, SEQ ID NO.: 168, y SEQ ID NO.: 169; n) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 170, SEQ ID NO.: 171, SEQ ID NO.: 172, SEQ ID NO.: 173, SEQ ID NO.: 174, y SEQ ID NO.: 175; o) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 176, SEQ ID NO.: 177, SEQ ID NO.: 178, SEQ ID NO.: 179, SEQ ID NO.: 180, y SEQ ID NO.: 181; p) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 182, SEQ ID NO.: 183, SEQ ID NO.: 184, SEQ ID NO.: 185, SEQ ID NO.: 186, y SEQ ID NO.: 187; q) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 188, SEQ ID NO.: 189, SEQ ID NO.: 190, SEQ ID NO.: 191, SEQ ID NO.: 192, y SEQ ID NO.: 193; r) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 194, SEQ ID NO.: 195, SEQ ID NO.: 196, SEQ ID NO.: 197, SEQ ID NO.: 198, y SEQ ID NO.: 199; s) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 200, SEQ ID NO.: 201, SEQ ID NO.: 202, SEQ ID NO.: 203, SEQ ID NO.: 204, y SEQ ID NO.: 205; o t) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 206, SEQ ID NO.: 207, SEQ ID NO.: 208, SEQ ID NO.: 209, SEQ ID NO.: 210, y SEQ ID NO.: 211. En ciertas modalidades, se provee un método para activar la actividad endógena del receptor de la eritropoyetina en un mamífero. En ciertas modalidades, el método para activar la actividad endógena de un receptor de la eritropoyetina en un mamífero comprende la administración a dicho mamífero de una cantidad de fragmento variable de cadena simple comprende: a) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 14, SEQ ID NO. 15 y SEQ ID NO. 16; b) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 17, SEQ ID NO. 18, y SEQ ID NO. 19; c) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 20, SEQ ID NO. 21, y SEQ ID NO. 22; d) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 23, SEQ ID NO. 24, SEQ ID NO. 25, SEQ ID NO. 26, SEQ ID NO. 27, y SEQ ID NO. 28; e) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 29, SEQ ID NO. 30, SEQ ID NO. 31, SEQ ID NO. 32, SEQ ID NO. 33, y SEQ ID NO. 34; f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 123, SEQ ID NO.: 124, SEQ ID NO.: 125, SEQ ID NO.: 126, SEQ ID NO.: 127, y SEQ ID NO.: 128; g) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 129, SEQ ID NO.: 130, SEQ ID NO.: 131, SEQ ID NO.: 132, SEQ ID NO.: 133, y SEQ ID NO.: 134; h) f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 135, SEQ ID NO.: 136, SEQ ID NO.: 212, SEQ ID NO.: 137, SEQ ID NO.: 138, y SEQ ID NO.: 139; i) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 140, SEQ ID NO.: 141, SEQ ID NO.: 142, SEQ ID NO.: 143, SEQ ID NO.: 144, y SEQ ID NO.: 145; j) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 146, SEQ ID NO.: 147, SEQ ID NO.: 148, SEQ ID NO.: 149, SEQ ID NO.: 150, y SEQ ID NO.: 151; k) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 152, SEQ ID NO.: 153, SEQ ID NO.: 154, SEQ ID NO.: 155, SEQ ID NO.: 156, y SEQ ID NO.: 157; 1) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 158, SEQ ID NO.: 159, SEQ ID NO.: 160, SEQ ID NO. : 161, SEQ ID NO.: 162, y SEQ ID NO.: 163; m) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 164, SEQ ID NO.: 165, SEQ ID NO.: 166, SEQ ID NO.: 167, SEQ ID NO.: 168, y SEQ ID NO.: 169; n) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 170, SEQ ID NO.: 171, SEQ ID NO.: 172, SEQ ID NO.: 173, SEQ ID NO.: 174, y SEQ ID NO.: 175; o) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 176, SEQ ID NO.: 177, SEQ ID NO.: 178, SEQ ID NO. : 179, SEQ ID NO.: 180, y SEQ ID NO.: 181; p) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 182, SEQ ID NO.: 183, SEQ ID NO.: 184, SEQ ID NO.: 185, SEQ ID NO.: 186, y SEQ ID NO.: 187; q) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 188, SEQ ID NO.: 189, SEQ ID NO.: 190, SEQ ID NO.: 191, SEQ ID NO.: 192, y SEQ ID NO.: 193; r) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 194, SEQ ID NO.: 195, SEQ ID NO.: 196, SEQ ID NO.: 197, SEQ ID NO.: 198, y SEQ ID NO.: 199; s) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. : 200, SEQ ID NO.: 201, SEQ ID NO.: 202, SEQ ID NO.: 203, SEQ ID NO. : 204, y SEQ ID NO.: 205; o t) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 206, SEQ ID NO.: 207, SEQ ID NO.: 208, SEQ ID NO.: 209, SEQ ID NO.: 210, y SEQ ID NO.: 211. En ciertas modalidades, se provee un anticuerpo. En ciertas modalidades, el anticuerpo comprende: a) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 14, SEQ ID NO. 15 y SEQ ID NO. 16; b) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 17, SEQ ID NO. 18, y SEQ ID NO. 19; c) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 20, SEQ ID NO. 21, y SEQ ID NO. 22; d) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 23, SEQ ID NO. 24, SEQ ID NO. 25, SEQ ID NO. 26, SEQ ID NO. 27, y SEQ ID NO. 28; e) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 29, SEQ ID NO. 30, SEQ ID NO. 31, SEQ ID NO. 32, SEQ ID NO. 33, y SEQ ID NO. 34; f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 123, SEQ ID NO.: 124, SEQ ID NO.: 125, SEQ ID NO.: 126, SEQ ID NO.: 127, y SEQ ID NO.: 128; g) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 129, SEQ ID NO.: 130, SEQ ID NO.: 131, SEQ ID NO.: 132, SEQ ID NO.: 133, y SEQ ID NO.: 134; h) f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 135, SEQ ID NO.: 136, SEQ ID NO.: 212, SEQ ID NO.: 137, SEQ ID NO.: 138, y SEQ ID NO.: 139; i) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 140, SEQ ID NO.: 141, SEQ ID NO.: 142, SEQ ID NO.: 143, SEQ ID NO.: 144, y SEQ ID NO.: 145; j) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 146, SEQ ID NO.: 147, SEQ ID NO.: 148, SEQ ID NO.: 149, SEQ ID NO.: 150, y SEQ ID NO.: 151; k) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 152, SEQ ID NO.: 153, SEQ ID NO.: 154, SEQ ID NO.: 155, SEQ ID NO.: 156, y SEQ ID NO.: 157; 1) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 158, SEQ ID NO.: 159, SEQ ID NO.: 160, SEQ ID NO.: 161, SEQ ID NO.: 162, y SEQ ID NO.: 163; m) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 164, SEQ ID NO.: 165, SEQ ID NO.: 166, SEQ ID NO.: 167, SEQ ID NO.: 168, y SEQ ID NO.: 169; n) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 170, SEQ ID NO.: 171, SEQ ID NO.: 172, SEQ ID NO.: 173, SEQ ID NO.: 174, y SEQ ID NO.: 175; o) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 176, SEQ ID NO.: 177, SEQ ID NO.: 178, SEQ ID NO.: 179, SEQ ID NO.: 180, y SEQ ID NO.: 181; p) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 182, SEQ ID NO.: 183, SEQ ID NO.: 184, SEQ ID NO.: 185, SEQ ID NO.: 186, y SEQ ID NO.: 187; q) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 188, SEQ ID NO.: 189, SEQ ID NO.: 190, SEQ ID NO.: 191, SEQ ID NO.: 192, y SEQ ID NO.: 193; r) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 194, SEQ ID NO.: 195, SEQ ID NO.: 196, SEQ ID NO.: 197, SEQ ID NO.: 198, y SEQ ID NO.: 199; s) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 200, SEQ ID NO.: 201, SEQ ID NO.: 202, SEQ ID NO.: 203, SEQ ID NO.: 204, y SEQ ID NO.: 205; o t) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 206, SEQ ID NO.: 207, SEQ ID NO.: 208, SEQ ID NO.: 209, SEQ ID NO.: 210, y SEQ ID NO.: 211. En ciertas modalidades, se provee un método de tratar la anemia en un paciente. En ciertas modalidades, el método para tratar la anemia en un paciente que comprenda la administración al paciente de un anticuerpo que comprenda: a) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 14, SEQ ID NO. 15 y SEQ ID NO. 16; b) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 17, SEQ ID NO. 18, y SEQ ID NO. 19; c) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 20, SEQ ID NO. 21, y SEQ ID NO. 22; d) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 23, SEQ ID NO. 24, SEQ ID NO. 25, SEQ ID NO. 26, SEQ ID NO. 27, y SEQ ID NO. 28; e) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 29, SEQ ID NO. 30, SEQ ID NO. 31, SEQ ID NO. 32, SEQ ID NO. 33, y SEQ ID NO. 34; f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 123, SEQ ID NO.: 124, SEQ ID NO.: 125, SEQ ID NO.: 126, SEQ ID NO.: 127, y SEQ ID NO.: 128; g) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 129, SEQ ID NO.: 130, SEQ ID NO.: 131, SEQ ID NO.: 132, SEQ ID NO.: 133, y SEQ ID NO.: 134; h) f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 135, SEQ ID NO.: 136, SEQ ID NO.: 212, SEQ ID NO.: 137, SEQ ID NO.: 138, y SEQ ID NO.: 139; i) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 140, SEQ ID NO.: 141, SEQ ID NO.: 142, SEQ ID NO.: 143, SEQ ID NO.: 144, y SEQ ID NO.: 145; j) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 146, SEQ ID NO.: 147, SEQ ID NO.: 148, SEQ ID NO.: 149, SEQ ID NO.: 150, y SEQ ID NO.: 151; k) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 152, SEQ ID NO.: 153, SEQ ID NO.: 154, SEQ ID NO.: 155, SEQ ID NO.: 156, y SEQ ID NO.: 157; 1) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 158, SEQ ID NO.: 159, SEQ ID NO.: 160, SEQ ID NO.: 161, SEQ ID NO.: 162, y SEQ ID NO.: 163; m) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 164, SEQ ID NO.: 165, SEQ ID NO.: 166, SEQ ID NO.: 167, SEQ ID NO.: 168, y SEQ ID NO.: 169; n) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. : 170, SEQ ID NO. : 171, SEQ ID NO.: 172, SEQ ID NO.: 173, SEQ ID NO.: 174, y SEQ ID NO.: 175; o) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 176, SEQ ID NO.: 177, SEQ ID NO.: 178, SEQ ID NO.: 179, SEQ ID NO.: 180, y SEQ ID NO.: 181; p) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 182, SEQ ID NO.: 183, SEQ ID NO.: 184, SEQ ID NO.: 185, SEQ ID NO.: 186, y SEQ ID NO.: 187; q) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 188, SEQ ID NO.: 189, SEQ ID NO.: 190, SEQ ID NO.: 191, SEQ ID NO.: 192, y SEQ ID NO.: 193; r) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. : 194, SEQ ID NO. : 195, SEQ ID NO.: 196, SEQ ID NO.: 197, SEQ ID NO.: 198, y SEQ ID NO.: 199; s) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 200, SEQ ID NO.: 201, SEQ ID NO.: 202, SEQ ID NO.: 203, SEQ ID NO.: 204, y SEQ ID NO.: 205; o t) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 206, SEQ ID NO.: 207, SEQ ID NO.: 208, SEQ ID NO.: 209, SEQ ID NO.: 210, y SEQ ID NO.: 211. En ciertas modalidades, se provee un método de promocionar la protección tisular en un paciente. En ciertas modalidades, el método para promocionar la protección tisular en un paciente que comprenda la administración al paciente de un anticuerpo que comprenda: a) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 14, SEQ ID NO. 15 y SEQ ID NO. 16; b) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 17, SEQ ID NO. 18, y SEQ ID NO. 19; c) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 20, SEQ ID NO. 21, y SEQ ID NO. 22; d) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 23, SEQ ID NO. 24, SEQ ID NO. 25, SEQ ID NO. 26, SEQ ID NO. 27, y SEQ ID NO. 28; e) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 29, SEQ ID NO. 30, SEQ ID NO. 31, SEQ ID NO. 32, SEQ ID NO. 33, y SEQ ID NO. 34; f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 123, SEQ ID NO.: 124, SEQ ID NO.: 125, SEQ ID NO.: 126, SEQ ID NO.: 127, y SEQ ID NO.: 128; g) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 129, SEQ ID NO.: 130, SEQ ID NO.: 131, SEQ ID NO.: 132, SEQ ID NO.: 133, y SEQ ID NO.: 134; h) f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 135, SEQ ID NO.: 136, SEQ ID NO.: 212, SEQ ID NO.: 137, SEQ ID NO.: 138, y SEQ ID NO.: 139; i) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 140, SEQ ID NO.: 141, SEQ ID NO.: 142, SEQ ID NO.: 143, SEQ ID NO.: 144, y SEQ ID NO.: 145; j) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 146, SEQ ID NO.: 147, SEQ ID NO.: 148, SEQ ID NO.: 149, SEQ ID NO.: 150, y SEQ ID NO.: 151; k) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 152, SEQ ID NO.: 153, SEQ ID NO.: 154, SEQ ID NO.: 155, SEQ ID NO.: 156, y SEQ ID NO.: 157; 1) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 158, SEQ ID NO.: 159, SEQ ID NO.: 160, SEQ ID NO.: 161, SEQ ID NO.: 162, y SEQ ID NO.: 163; m) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 164, SEQ ID NO.: 165, SEQ ID NO.: 166, SEQ ID NO.: 167, SEQ ID NO.: 168, y SEQ ID NO. : 169; n) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 170, SEQ ID NO.: 171, SEQ ID NO.: 172, SEQ ID NO.: 173, SEQ ID NO.: 174, y SEQ ID NO.: 175; o) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 176, SEQ ID NO.: 177, SEQ ID NO.: 178, SEQ ID NO.: 179, SEQ ID NO.: 180, y SEQ ID NO.: 181; p) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 182, SEQ ID NO.: 183, SEQ ID NO.: 184, SEQ ID NO.: 185, SEQ ID NO.: 186, y SEQ ID NO.: 187; q) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 188, SEQ ID NO.: 189, SEQ ID NO.: 190, SEQ ID NO.: 191, SEQ ID NO.: 192, y SEQ ID NO.: 193; r) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 194, SEQ ID NO.: 195, SEQ ID NO.: 196, SEQ ID NO.: 197, SEQ ID NO.: 198, y SEQ ID NO.: 199; s) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 200, SEQ ID NO.: 201, SEQ ID NO.: 202, SEQ ID NO.: 203, SEQ ID NO.: 204, y SEQ ID NO.: 205; o t) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 206, SEQ ID NO.: 207, SEQ ID NO.: 208, SEQ ID NO.: 209, SEQ ID NO.: 210, y SEQ ID NO.: 211. En ciertas modalidades, se provee un método para activar la actividad endógena del receptor de la eritropoyetina en un mamífero. En ciertas modalidades, el método para activar la actividad endógena de un receptor de la eritropoyetina en un mamífero que comprenda la administración a dicho mamífero de una cantidad de anticuerpo que comprenda: a) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 14, SEQ ID NO. 15 y SEQ ID NO. 16; b) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 17, SEQ ID NO. 18, y SEQ ID NO. 19; c) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 20, SEQ ID NO. 21, y SEQ ID NO. 22; d) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 23, SEQ ID NO. 24, SEQ ID NO. 25, SEQ ID NO. 26, SEQ ID NO. 27, y SEQ ID NO. 28; e) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 29, SEQ ID NO. 30, SEQ ID NO. 31, SEQ ID NO. 32, SEQ ID NO. 33, y SEQ ID NO. 34; f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 123, SEQ ID NO.: 124, SEQ ID NO.: 125, SEQ ID NO.: 126, SEQ ID NO.: 127, y SEQ ID NO.: 128; g) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 129, SEQ ID NO.: 130, SEQ ID NO.: 131, SEQ ID NO.: 132, SEQ ID NO.: 133, y SEQ ID NO.: 134; h) f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 135, SEQ ID NO.: 136, SEQ ID NO.: 212, SEQ ID NO.: 137, SEQ ID NO.: 138, y SEQ ID NO.: 139; i) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 140, SEQ ID NO.: 141, SEQ ID NO.: 142, SEQ ID NO.: 143, SEQ ID NO.: 144, y SEQ ID NO.: 145; j) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 146, SEQ ID NO.: 147, SEQ ID NO.: 148, SEQ ID NO.: 149, SEQ ID NO.: 150, y SEQ ID NO.: 151; k) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 152, SEQ ID NO.: 153, SEQ ID NO.: 154, SEQ ID NO.: 155, SEQ ID NO.: 156, y SEQ ID NO.: 157; 1) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 158, SEQ ID NO.: 159, SEQ ID NO.: 160, SEQ ID NO.: 161, SEQ ID NO.: 162, y SEQ ID NO.: 163; m) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 164, SEQ ID NO.: 165, SEQ ID NO.: 166, SEQ ID NO.: 167, SEQ ID NO.: 168, y SEQ ID NO. : 169; n) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 170, SEQ ID NO.: 171, SEQ ID NO.: 172, SEQ ID NO.: 173, SEQ ID NO.: 174, y SEQ ID NO.: 175; o) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 176, SEQ ID NO.: 177, SEQ ID NO.: 178, SEQ ID NO.: 179, SEQ ID NO.: 180, y SEQ ID NO.: 181; p) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 182, SEQ ID NO.: 183, SEQ ID NO.: 184, SEQ ID NO.: 185, SEQ ID NO.: 186, y SEQ ID NO.: 187; q) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 188, SEQ ID NO.: 189, SEQ ID NO.: 190, SEQ ID NO.: 191, SEQ ID NO.: 192, y SEQ ID NO.: 193; r) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 194, SEQ ID NO.: 195, SEQ ID NO.: 196, SEQ ID NO.: 197, SEQ ID NO.: 198, y SEQ ID NO.: 199; s) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 200, SEQ ID NO.: 201, SEQ ID NO.: 202, SEQ ID NO.: 203, SEQ ID NO.: 204, y SEQ ID NO. : 205; o t) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 206, SEQ ID NO.: 207, SEQ ID NO.: 208, SEQ ID NO.: 209, SEQ ID NO.: 210, y SEQ ID NO.: 211. En ciertas modalidades, se provee un anticuerpo. En ciertas modalidades, el anticuerpo comprende: a) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 45; b) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 46; c) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 47; d) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 48; o e) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 49. En ciertas modalidades, se provee un método de tratar la anemia en un paciente. En ciertas modalidades, el método para tratar la anemia en un paciente que comprenda la administración al paciente de un anticuerpo que comprenda: a) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 45; b) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 46; c) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 47; d) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 48; o e) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 49. En ciertas modalidades, se provee un método de promocionar la protección tisular en un paciente. En ciertas modalidades, el método para promocionar la protección tisular en un paciente que comprenda la administración al paciente de un anticuerpo que comprenda: a) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 45; b) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 46; c) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 47; d) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 48; o e) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 49. En ciertas modalidades, se provee un método para activar la actividad endógena del receptor de la eritropoyetina en un mamífero. En ciertas modalidades, el método para activar la actividad endógena de un receptor de la eritropoyetina en un mamífero que comprenda la administración a dicho mamífero de una cantidad de anticuerpo que comprenda: a) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 45; b) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 46; c) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 47; d) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 48; o e) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 49. En ciertas modalidades, se provee un método para generar un fragmento de una variable de cadena simple. En ciertas modalidades, el método de creación de un fragmento de una variable de cadena simple que comprende expresar dicho fragmento en una célula huésped en el que dicho fragmento comprende: a) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 1 y SEQ ID NO. 2; b) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 3 y SEQ ID NO. 4; c) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 5 y SEQ ID NO. 6; d) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 7 y SEQ ID NO. 8; o e) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 9 y SEQ ID NO. 10; f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 56 y SEQ ID NO. 58; g) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 60 y SEQ ID NO. 62; h) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 64 y SEQ ID NO. 66; i) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 68 y SEQ ID NO. 70; j) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 72 y SEQ ID NO. 74; k) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 76 y SEQ ID NO. 78; 1) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 80 y SEQ ID NO. 82; m) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 84 y SEQ ID NO. 86; n) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 88 y SEQ ID NO. 90; o) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 92 y SEQ ID NO. 94; p) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 96 y SEQ ID NO. 98; q) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 100 y SEQ ID NO. 102; r) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 104 y SEQ ID NO. 106; s) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 108 y SEQ ID NO. 110; o t) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 112 y SEQ ID NO. 114. En ciertas modalidades, se provee un método para generar un fragmento de una variable de 'cadena simple fusionado a un Fe. En ciertas modalidades, el método para generar un fragmento de una variable de cadena simple fusionado a un Fe que comprende expresar dicho fragmento de una variable de cadena simple fusionado a Fe en una célula huésped, en el que dicho fragmento comprende: a) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 1 y SEQ ID NO. 2; b) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 3 y SEQ ID NO. 4; c) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 5 y SEQ ID NO. 6; d) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 7 y SEQ ID NO. 8; e) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 9 y SEQ ID NO. 10; f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 56 y SEQ ID NO. 58; g) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 60 y SEQ ID NO. 62; h) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 64 y SEQ ID NO. 66; i) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 68 y SEQ ID NO. 70; j) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 72 y SEQ ID NO. 74; k) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 76 y SEQ ID NO. 78; 1) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 80 y SEQ ID NO. 82; m) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 84 y SEQ ID NO. 86; n) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 88 y SEQ ID NO. 90; o) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 92 y SEQ ID NO. 94; p) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 96 y SEQ ID NO. 98; q) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 100 y SEQ ID NO. 102; r) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 104 y SEQ ID NO. 106; s) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 108 y SEQ ID NO. 110; o t) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 112 y SEQ ID NO. 114. En ciertas modalidades, se provee un método para generar un fragmento de una variable de cadena simple. En ciertas modalidades, el método para generar un fragmento de una variable de cadena simple que comprende expresar un fragmento de una variable de cadena simple en una célula huésped, en el que dicho fragmento comprende: a) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 14, SEQ ID NO. 15 y SEQ ID NO. 16; b) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 17, SEQ ID NO. 18, y SEQ ID NO. 19; c) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 20, SEQ ID NO. 21, y SEQ ID NO. 22; d) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 23, SEQ ID NO. 24, SEQ ID NO. 25, SEQ ID NO. 26, SEQ ID NO. 27, y SEQ ID NO. 28; e) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 29, SEQ ID NO. 30, SEQ ID NO. 31, SEQ ID NO. 32, SEQ ID NO. 33, y SEQ ID NO. 34; f) una' secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 123, SEQ ID NO.: 124, SEQ ID NO.: 125, SEQ ID NO.: 126, SEQ ID NO.: 127, y SEQ ID NO.: 128; g) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 129, SEQ ID NO.: 130, SEQ ID NO.: 131, SEQ ID NO.: 132, SEQ ID NO.: 133, y SEQ ID NO.: 134; h) f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 135, SEQ ID NO.: 136, SEQ ID NO.: 212, SEQ ID NO.: 137, SEQ ID NO.: 138, y SEQ ID NO.: 139; i) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 140, SEQ ID NO.: 141, SEQ ID NO.: 142, SEQ ID NO.: 143, SEQ ID NO.: 144, y SEQ ID NO.: 145; j) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 146, SEQ ID NO.: 147, SEQ ID NO.: 148, SEQ ID NO.: 149, SEQ ID NO.: 150, y SEQ ID NO.: 151; k) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 152, SEQ ID NO.: 153, SEQ ID NO.: 154, SEQ ID NO.: 155, SEQ ID NO.: 156, y SEQ ID NO.: 157; 1) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 158, SEQ ID NO.: 159, SEQ ID NO.: 160, SEQ ID NO.: 161, SEQ ID NO. : 162, y SEQ ID NO. : 163; m) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 164, SEQ ID NO.: 165, SEQ ID NO.: 166, SEQ ID NO.: 167, SEQ ID NO.: 168, y SEQ ID NO.: 169; n) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 170, SEQ ID NO.: 171, SEQ ID NO.: 172, SEQ ID NO.: 173, SEQ ID NO.: 174, y SEQ ID NO.: 175; o) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 176, SEQ ID NO.: 177, SEQ ID NO.: 178, SEQ ID NO.: 179, SEQ ID NO.: 180, y SEQ ID NO.: 181; p) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 182, SEQ ID NO.: 183, SEQ ID NO.: 184, SEQ ID NO.: 185, SEQ ID NO.: 186, y SEQ ID NO.: 187; q) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 188, SEQ ID NO.: 189, SEQ ID NO.: 190, SEQ ID NO.: 191, SEQ ID NO.: 192, y SEQ ID NO.: 193; r) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 194, SEQ ID NO.: 195, SEQ ID NO.: 196, SEQ ID NO.: 197, SEQ ID NO.: 198, y SEQ ID NO.: 199; s) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 200, SEQ ID NO.: 201, SEQ ID NO.: 202, SEQ ID NO.: 203, SEQ ID NO.: 204, y SEQ ID NO.: 205; o t) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 206, SEQ ID NO.: 207, SEQ ID NO.: 208, SEQ ID NO.: 209, SEQ ID NO.: 210, y SEQ ID NO.: 211. En ciertas modalidades, se provee un método para generar un fragmento de una variable de cadena simple fusionado a un Fe. En ciertas modalidades, el método para generar un fragmento de una variable de cadena simple fusionado a un Fe que comprende expresar un fragmento de una variable de cadena simple fusionado a un Fe en una célula huésped, en el que dicho fragmento comprende: a) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 14, SEQ ID NO. 15 y SEQ ID NO. 16; b) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 17, SEQ ID NO. 18, y SEQ ID NO. 19; c) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 20, SEQ ID NO. 21, y SEQ ID NO. 22; d) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 23, SEQ ID NO. 24, SEQ ID NO. 25, SEQ ID NO. 26, SEQ ID NO. 27, y SEQ ID NO. 28; e) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 29, SEQ ID NO. 30, SEQ ID NO. 31, SEQ ID NO. 32, SEQ ID NO. 33, y SEQ ID NO. 34; f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 123, SEQ ID NO.: 124, SEQ ID NO.: 125, SEQ ID NO.: 126, SEQ ID NO.: 127, y SEQ ID NO.: 128; g) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 129, SEQ ID NO.: 130, SEQ ID NO.: 131, SEQ ID NO.: 132, SEQ ID NO.: 133, y SEQ ID NO.: 134; h) f) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 135, SEQ ID NO.: 136, SEQ ID NO.: 212, SEQ ID NO.: 137, SEQ ID NO.: 138, y SEQ ID NO.: 139; i) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 140, SEQ ID NO.: 141, SEQ ID NO.: 142, SEQ ID NO.: 143, SEQ ID NO.: 144, y SEQ ID NO.: 145; j) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 146, SEQ ID NO.: 147, SEQ ID NO.: 148, SEQ ID NO.: 149, SEQ ID NO.: 150, y SEQ ID NO.: 151; k) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 152, SEQ ID NO.: 153, SEQ ID NO.: 154, SEQ ID NO.: 155, SEQ ID NO.: 156, y SEQ ID NO.: 157; 1) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. : 158, SEQ ID NO. : 159, SEQ ID NO.: 160, SEQ ID NO.: 161, SEQ ID NO. : 162, y SEQ ID NO. : 163; m) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 164, SEQ ID NO.: 165, SEQ ID NO.: 166, SEQ ID NO.: 167, SEQ ID NO.: 168, y SEQ ID NO.: 169; n) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 170, SEQ ID NO.: 171, SEQ ID NO.: 172, SEQ ID NO.: 173, SEQ ID NO.: 174, y SEQ ID NO.: 175; o) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 176, SEQ ID NO.: 177, SEQ ID NO.: 178, SEQ ID NO.: 179, SEQ ID NO.: 180, y SEQ ID NO.: 181; p) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 182, SEQ ID NO.: 183, SEQ ID NO.: 184, SEQ ID NO.: 185, SEQ ID NO.: 186, y SEQ ID NO.: 187; q) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 188, SEQ ID NO.: 189, SEQ ID NO.: 190, SEQ ID NO.: 191, SEQ ID NO.: 192, y SEQ ID NO.: 193; r) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 194, SEQ ID NO.: 195, SEQ ID NO.: 196, SEQ ID NO.: 197, SEQ ID NO.: 198, y SEQ ID NO.: 199; s) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 200, SEQ ID NO.: 201, SEQ ID NO.: 202, SEQ ID NO.: 203, SEQ ID NO.: 204, y SEQ ID NO.: 205; o t) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO.: 206, SEQ ID NO.: 207, SEQ ID NO.: 208, SEQ ID NO.: 209, SEQ ID NO.: 210, y SEQ ID NO.: 211. En ciertas modalidades, se provee un método para generar un fragmento de una variable de cadena simple fusionado a un Fe. En ciertas modalidades, el método para gerar un fragmento de una variable de cadena simple fusionado a un Fe que comprende expresar el fragmento de una variable de cadena simple fusionado a Fe en una célula huésped, en el que dicho fragmento comprende: a) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 45; b) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 46; c) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 47; d) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 48; o e) una secuencia de aminoácido que comprende SEQ ID NO. 49. En ciertas modalidades, se provee un fragmento de una variable de cadena simple. En ciertas modalidades, el fragmento de una variable de cadena simple específicamente se une a: a) por lo menos a los aminoácidos F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; b) por lo menos a los aminoácidos S91, F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; c) por lo menos a los aminoácidos F93 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; d) por lo menos a los aminoácidos E62, F93, y M150 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; e) por lo menos a los aminoácidos V48, E62, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; f) por lo menos a los aminoácidos V48, 64, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; g) por lo menos a los aminoácidos A44, V48, P63, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; o h) por lo menos a los aminoácidos L66, y R99 del dominio extracelular del Receptor Epo humano. En ciertas modalidades, se provee un fragmento de una variable de cadena simple fusionado a Fe. En ciertas modalidades, el fragmento de una variable de cadena simple específicamente se une a: a) por lo menos a los aminoácidos F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; b) por lo menos a los aminoácidos S91, F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; c) por lo menos a los aminoácidos F93 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; d) por lo menos a los aminoácidos E62, F93 y M150 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; e) por lo menos a los aminoácidos V48, E62, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; f) por lo menos a los aminoácidos V48, W64, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; g) por lo menos a los aminoácidos A44, V48, P63, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; o h) por lo menos a los aminoácidos L66, y R99 del dominio extracelular del Receptor Epo humano. En ciertas modalidades, se provee un método de tratar la anemia en un paciente. En ciertas modalidades, el método para tratar la anemia en un paciente comprende la administración a un paciente un fragmento de una variable de cadena simple, en la que el mismo une específicamente a: a) por lo menos a los aminoácidos F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; b) por lo menos a los aminoácidos S91, F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; c) por lo menos a los aminoácidos F93 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; d) por lo menos a los aminoácidos E62, F93 y M150 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; e) por lo menos a los aminoácidos V48, E62, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; f) por lo menos a los aminoácidos V48, W64, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; g) por lo menos a los aminoácidos A44, V48, P63, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; o h) por lo menos a los aminoácidos L66, y R99 del dominio extracelular del Receptor Epo humano. En ciertas modalidades, se provee un método de promocionar la protección tisular en un paciente. En ciertas modalidades, el método para promocionar la protección tisular en un paciente comprende la administración de un fragmento de una variable de cadena simple en la que el mismo une específicamente a: a) por lo menos a los aminoácidos F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; b) por lo menos a los aminoácidos S91, F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; c) por lo menos a los aminoácidos F93 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; d) por lo menos a los aminoácidos E62, F93 y M150 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; e) por lo menos a los aminoácidos V48, E62, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; f) por lo menos a los aminoácidos V48, W64, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; g) por lo menos a los aminoácidos A44, V48, P63, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; o h) por lo menos a los aminoácidos L66, y R99 del dominio extracelular del Receptor Epo humano. En ciertas modalidades, se provee un método para activar la actividad endógena del receptor de la eritropoyetina en un mamífero. En ciertas modalidades, el método para activar la actividad endógena de un receptor de la eritropoyetina en un mamífero comprende la administración a dicho mamífero de una cantidad de fragmento de una variable de cadena simple en la que dicho fragmento une específicamente a: a) por lo menos a los aminoácidos F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; b) por lo menos a los aminoácidos S91, F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; c) por lo menos a los aminoácidos F93 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; d) por lo menos a los aminoácidos E62, F93 y M150 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; e) por lo menos a los aminoácidos V48, E62, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; f) por lo menos a los aminoácidos V48, W64, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; g) por lo menos a los aminoácidos A44, V48, P63, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; o h) por lo menos a los aminoácidos L66 y R99 del dominio extracelular del Receptor Epo humano. En ciertas modalidades, se provee un anticuerpo. En ciertas modalidades, el anticuerpo une específicamente a: a) por lo menos a los aminoácidos F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; b) por lo menos a los aminoácidos S91, F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; c) por lo menos a los aminoácidos F93 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; d) por lo menos a los aminoácidos E62, F93 y M150 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; e) por lo menos a los aminoácidos V48, E62, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; f) por lo menos a los aminoácidos V48, W64, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; g) por lo menos a los aminoácidos A44, V48, P63, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; o h) por lo menos a los aminoácidos L66, y R99 del dominio extracelular del Receptor Epo humano. En ciertas modalidades, se provee un método de tratar la anemia en un paciente. En ciertas modalidades, el método para tratar la anemia en un paciente que comprenda la administración al paciente de un anticuerpo, en la que anticuerpo une específicamente a: a) por lo menos a los aminoácidos F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; b) por lo menos a los aminoácidos S91, F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; c) por lo menos a los aminoácidos F93 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; d) por lo menos a los aminoácidos E62, F93 y 150 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; e) por lo menos a los aminoácidos V48, E62, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; f) por lo menos a los aminoácidos V48, W64, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; g) por lo menos a los aminoácidos A44, V48, P63, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; o h) por lo menos a los aminoácidos L66, y R99 del dominio extracelular del Receptor Epo humano. En ciertas modalidades, se provee un método de promocionar la protección tisular en un paciente. En ciertas modalidades, el método para promocionar la protección tisular en un paciente que comprenda la administración al paciente de un anticuerpo, en la que anticuerpo une específicamente a: a) por lo menos a los aminoácidos F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; b) por lo menos a los aminoácidos S91, F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; c) por lo menos a los aminoácidos F93 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; d) por lo menos a los aminoácidos E62, F93 y M150 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; e) por lo menos a los aminoácidos V48, E62, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; f) por lo menos a los aminoácidos V48, W64, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; g) por lo menos a los aminoácidos A44, V48, P63, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; o h) por lo menos a los aminoácidos L66, y R99 del dominio extracelular del Receptor Epo humano. En ciertas modalidades, se provee un método para activar la actividad endógena del receptor de la eritropoyetina en un mamífero. En ciertas modalidades, el método para activar la actividad endógena de un receptor de la eritropoyetina en un mamífero que comprenda la administración a dicho mamífero de una cantidad de anticuerpo, en la que anticuerpo une específicamente a: a) por lo menos a los aminoácidos F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; b) por lo menos a los aminoácidos S91, F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; c) por lo menos a los aminoácidos F93 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; d) por lo menos a los aminoácidos E62, F93 y 150 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; e) por lo menos a los aminoácidos V48, E62, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; f) por lo menos a los aminoácidos V48, W64, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; g) por lo menos a los aminoácidos A44, V48, P63, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; o h) por lo menos a los aminoácidos L66, y R99 del dominio extracelular del Receptor Epo humano. En ciertas modalidades, se provee un método para generar un fragmento de una variable de cadena simple. En ciertas modalidades, el método para generar un fragmento de una variable de cadena simple que comprenda la expresión de un fragmento de una variable de cadena simple en una célula huésped. En ciertas modalidades, el fragmento de una variable de cadena simple específicamente se une a: a) por lo menos a los aminoácidos F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; b) por lo menos a los aminoácidos S91, F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; c) por lo menos a los aminoácidos F93 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; d) por lo menos a los aminoácidos E62, F93 y 150 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; e) por lo menos a los aminoácidos V48, E62, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; f) por lo menos a los aminoácidos V48, W64, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; g) por lo menos a los aminoácidos A44, V48, P63, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; o h) por lo menos a los aminoácidos L66, y R99 del dominio extracelular del Receptor Epo humano. En ciertas modalidades, se provee un método para generar un fragmento de una variable de cadena simple fusionado a un Fe. En ciertas modalidades, el método para generar un fragmento de una variable de cadena simple fusionado a un Fe que comprenda la expresión de un fragmento de una variable de cadena simple fusionado a un Fe en una célula huésped. En ciertas modalidades, el fragmento de una variable de cadena simple específicamente se une a: a) por lo menos a los aminoácidos F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; b) por lo menos a los aminoácidos S91, F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; c) por lo menos a los aminoácidos F93 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; d) por lo menos a los aminoácidos E62, F93 y M150 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; e) por lo menos a los aminoácidos V48, E62, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; f) por lo menos a los aminoácidos V48, W64, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; g) por lo menos a los aminoácidos A44, V48, P63, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; o h) por lo menos a los aminoácidos L66, y R99 del dominio extracelular del Receptor Epo humano. En ciertas modalidades, se provee un anticuerpo que se une al Receptor Epo humano. En ciertas modalidades, dicho anticuerpo comprende una o más secuencias seleccionadas de: A) una primera secuencia de aminoácido comprendiendo: i) un CDR1 que tiene la fórmula: Xi YWM X5, donde Xi es algún aminoácido y X5 es algún aminoácido; ii) CDR2 que tiene la fórmula: NIKPDGSEKYV Xi2 SVKG donde Xi2 es algún aminoácido; y iii) un CDR3 que tiene la fórmula: VSRGGS X7 SD donde X7 es algún aminoácido; y B) una segunda secuencia de aminoácido que comprende: i) un CDR1 que tiene la fórmula: TGTSSD X7 G Xg Y Xn YVS donde X7 es algún aminoácido y X9 es algún aminoácido y Xn es algún aminoácido y ii) un CDR2 que tiene la fórmula: ?? V X3 X RPS donde Xi es algún aminoácido y X3 es algún aminoácido y X4 es algún aminoácido.
En ciertas modalidades, se provee un fragmento de una variable de cadena simple que une a un Receptor Epo humano. En ciertas modalidades, el fragmento de la variable de cadena simple, comprende una o más secuencias seleccionadas de: A) una primera secuencia de aminoácido comprendiendo: i) un CDR1 que tiene la fórmula: Xi YWM X5, donde ?? es algún aminoácido y X5 es algún aminoácido; ii) CDR2 que tiene la fórmula: NIKPDGSEKYV Xi2 SVKG donde X12 es algún aminoácido; y iii) un CDR3 que tiene la fórmula: VSRGGS X7 SD donde X7 es algún aminoácido; y B) una segunda secuencia de aminoácido que comprende: i) un CDR1 que tiene la fórmula: TGTSSD X7 G X9 Y Xn YVS donde X es algún aminoácido y X9 es algún aminoácido y Xn es algún aminoácido y ii) un CDR2 que tiene la fórmula: Xi V X3 X4 RPS donde Xi es algún aminoácido y X3 es algún aminoácido y X4 es algún aminoácido. En ciertas modalidades, se provee un anticuerpo que está unido a un Receptor Epo tipo humano salvaje pero falla al unirse a un Receptor Epo mutante donde el aminoácido en la posición 34 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina. En ciertas modalidades, se provee un anticuerpo que está unido a un Receptor Epo tipo humano salvaje pero falla al unirse a un Receptor Epo mutante donde el aminoácido en la posición 60 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina.
En ciertas modalidades, se provee un anticuerpo que está unido a un Receptor Epo tipo humano salvaje pero falla al unirse a un Receptor Epo mutante donde el aminoácido en la posición 88 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina. En ciertas modalidades, se provee un anticuerpo que está unido a un Receptor Epo tipo humano salvaje pero falla al unirse a un Receptor Epo mutante donde el aminoácido en la posición 150 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina. En ciertas modalidades, se provee un anticuerpo que está unido a un Receptor Epo tipo humano salvaje pero falla al unirse a un Receptor Epo mutante donde el aminoácido en la posición 87 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina. En ciertas modalidades, se provee un anticuerpo que está unido a un Receptor Epo tipo humano salvaje pero falla al unirse a un Receptor Epo mutante donde el aminoácido en la posición 63 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina. En ciertas modalidades, se provee un anticuerpo que está unido a un Receptor Epo tipo humano salvaje pero falla al unirse a un Receptor Epo mutante donde el aminoácido en la posición 64 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina.
En ciertas modalidades, se provee un anticuerpo que está unido a un Receptor Epo tipo humano salvaje pero falla al unirse a un Receptor Epo mutante donde el aminoácido en la posición 99 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina. En ciertas modalidades, se provee un fragmento de una variable de cadena simple que está unido a un Receptor Epo tipo humano salvaje pero falla al unirse a un Receptor Epo mutante donde el aminoácido en la posición 34 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina. En ciertas modalidades, se provee un fragmento de una variable de cadena simple que está unido a un Receptor Epo tipo humano salvaje pero falla al unirse a un Receptor Epo mutante donde el aminoácido en la posición 60 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina. En ciertas modalidades, se provee un fragmento de una variable de cadena simple que está unido a un Receptor Epo tipo humano salvaje pero falla al unirse a un Receptor Epo mutante donde el aminoácido en la posición 88 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina. En ciertas modalidades, se provee un fragmento de una variable de cadena simple que está unido a un Receptor Epo tipo humano salvaje pero falla al unirse a un Receptor Epo mutante donde el aminoácido en la posición 150 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina.
En ciertas modalidades, se provee un fragmento de una variable de cadena simple que está unido a un Receptor Epo tipo humano salvaje pero falla al unirse a un Receptor Epo mutante donde el aminoácido en la posición 87 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina. En ciertas modalidades, se provee un fragmento de una variable de cadena simple que está unido a un Receptor Epo tipo humano salvaje pero falla al unirse a un Receptor Epo mutante donde el aminoácido en la posición 63 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina. En ciertas modalidades, se provee un fragmento de una variable de cadena simple que está unido a un Receptor Epo tipo humano salvaje pero falla al unirse a un Receptor Epo mutante donde el aminoácido en la posición 64 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina. En ciertas modalidades, se provee un fragmento de una variable de cadena simple que está unido a un Receptor Epo tipo humano salvaje pero falla al unirse a un Receptor Epo mutante donde el aminoácido en la posición 99 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La figura 1 muestra un diagrama de flujo de pasos para examinar los anticuerpos agonísticos EpoR de las bibliotecas de exhibición de fagos scFv humanos de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 1.
La figura 2 muestra un diagrama esquemático que describe la conversión racionalizada de los clones del scFv fago de la muestra de las bibliotecas de exhibición de fagos scFv a una forma scFv-Fc en una construcción de la expresión mamífera, pDC409a-huGlFc de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 2. Ncol y Pcil crean un final cohesivo para ligadura. El proceso de la conversión por baches de los fragmentos restingidos del scFv Ncol/Notl al Pcil/Notl restringido vector pDC409a-huGlFc es altamente eficiente. La figura 3 muestra el análisis de FACS de anticuerpos unidos a células de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 3. La concentración de anticuerpos y Epo utilizada para teñir es de 5 g/ml . El Panel A muestra una intensidad de fluorescencia de células de UT-7 después de unir el clon 2, clon 5, clon 7, clon 10 o clon 30 en scFv-Fc en presencia (línea sólida) y ausencia (línea punteada) del Epo humano durante el teñido. Las concentraciones de anticuerpo y Epo utilizadas son ambas es de 5 pg/ml . Las curvas sombreadas son del teñido sólo con cabra anti-humano F(ab')2 conjugado con ficoeritrina sin ningún anticuerpo primario. El Panel B muestra una intensidad de fluorescencia de células COS-1 después de unir con el clon 2, clon 5, clon 7, clon 10 o clon 30 en scFv-Fc (línea sólida) . Las curvas sombreadas son del teñido sólo con cabra anti-humano F(ab')2 conjugado con ficoeritrina sin ningún anticuerpo primario.
Las figuras 4A-4B muestran la unión competitiva del clon número 2, 5, 7, 10 y 30 con el huEpoR soluble mediante ELISA de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 5. La figura 4A muestra la unión competitiva entre el clon 5 fago y clon 2, clon 5, clon 7, clon 10 o clon 30 en formato scFv-Fc. La figura 4B muestra la unión competitiva entre el clon 30 fago y el clon 2, clon 5, clon 7, clon 10, y clon 30 en formato scFv-Fc . La figura 5 muestra los anticuerpos del clon 2, clon 5, clon 7, clon 10 o clon 30 unidos a la proteína EpoR del ratón (muEpoR) mediante ELISA de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 6. Las barras punteadas muestran uniones en formato scFv-Fc. Las barras abiertas muestran uniones en formato IgG2. La figura 6 muestra los sensogramas BIAcore de la proteína huEpoR a las proteínas scFv-Fc del clon 2, clon 5, clon 7, clon 10 y clon 30 capturadas en un chip CM4 de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 7. La figura 7 muestra curvas de dosificación por titulación de la activación del huEpoR para Maxibodys Mxb 2, Mxb 5, Mxb 7, Mxb 10, y Mxb 30 de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 8. Las células UT-7-Luc (células UT-7 que contienen el gen repórter luciferante) fue tratado durante seis horas con Maxibodys serialmente diluidos en placas de 96 pozos, por triplicado, para una concentración final de 1000, 333, 111, 37.04, 12.35, 4.115, 1.372, 0.457, 0.152, 0.051, 0.017, y 0.006 nM para Mxb 5, Mxb 10, y Mxb 30, y 2500, 1250, 625, 312.5, 156.25, 78.125, 39.0625, 19.53125, 9.765625, 4.882813, 2.441406, 1.220703, 0.610352, 0.3051758, 0.1525879, 0.76294, 0.038147, 0.019073, 0.009537, 0.004768, 0.002384, 0.001192, 0.000596, 0.000298 nM para Mxb 2 y Mxb 7. El Epo humano recombinante fue utilizado como una referencia estándar y fue serialmente diluido en el misma placa usada para testear cada Maxibody. Cada dilución Epo fue corrida por triplicado en las siguientes concentraciones para Mxb 2, Mxb 5, Mxb 10, y Mxb 30: 100, 10, 1, 0.1, 0.01, y 0.001 nM, y a las siguientes concentraciones para Mxb 7: 1488, 744, 372, 186, 93, 46.5, 23.2, 11.6, 5.8, 2.9, 1.5, 0.71, 0.36, 0.18, 0.09, 0.045, 0.023, 0.011, 0.006, 0.003, 0.0015, 0.0007, 0.0004, 0.0002 nM. Luego de la adición del sustrato luciferante, la actividad luciferante fue leída en un luminómetro de placa de 96 pozos. Los datos crudos fueron procesados substrayendo la luminiscencia posterior (valores de los pozos conteniendo sólo medio) y presentado como el promedio de tres valores ± la desviación estándar. La figura 8 muestra una comparación de los niveles de máxima actividad para las proteínas IgG2 (Ab) y las proteínas scFv-Fc (Mxb) en la inducción del huEpoR de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 9. La máxima actividad luciferante para cada reactivo del test fue el valor más alto tomado de la curva de dosificación por titulación de cada proteina scFv-Fc y proteina IgG2 dividida por la máxima actividad luciferante para rHuEpo estándar tomado de la curva de dosificación por titulación del rHuEpo en cada placa individual. Esta relación está representada arriba y es el promedio de tres valores ± la desviación estándar. La figura 9 muestra la activación de las célula UT-7 mediante el rHuEpo, Mxb 2, y IgG2 2 como indicado por fosforización de las moléculas señaladoras Stat5 y Akt de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 10. La figura 10 muestra las proteínas scFv-Fc Mxb 2, Mxb 5, Mxb 7 y Mxb 30 activando CD34+ células progenitoras de la sangre humana periférica (CD34+PBPC) y estimulando la producción de clones derivados BFU-E de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 11. La figura 11 muestra que una inyección singular de Mxb 5 produce un incremento en el número de reticulocitos que es dependiente de la dosificación y es sustenido por un período de tiempo significativamente más largo que en los animales tratados con PEG-NESP de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 12A. La figura 12 muestra que una única inyección de Mxb 5 produce un incremento en los niveles de hemoglobina que es dependiente de la dosificación y es sustenido por un período de tiempo significativamente más largo que en los animales tratados con PEG-NESP de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 12A. La figura 13 muestra que una única inyección de Mxb 7 produce un incremento en el número de reticulocitos que es dependiente de la dosificación y es sustenido por un periodo de tiempo significativamente más largo que en los animales tratados con PEG-NESP de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 12B. La figura 14 muestra que una única inyección de Mxb 7 produce un incremento en los niveles de hemoglobina que es dependiente de la dosificación y mantenido durante un periodo de tiempo significativamente más largo que en los animales tratados con PEG-NESP de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 12B. La figura 15 muestra que una única inyección de Mxb 10 produce un incremento en el número de reticulocitos que es dependiente de la dosificación y es sustenido por un periodo de tiempo significativamente más largo que en los animales tratados con PEG-NESP de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 12C. La figura 16 muestra que una única inyección de Mxb 10 produce un incremento en los niveles de hemoglobina que es dependiente de la dosificación y es sustenido por un periodo de tiempo significativamente más largo que en los animales tratados con PEG-NESP de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 12C. La figura 17 muestra que una única inyección de xb 2 produce un incremento en el número de reticulocitos que es sustenido por un periodo de tiempo similar aquelle medido en los animales tratados con PEG-NESP de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 12D. La figura 18 muestra que una única inyección de Mxb 2 produce un incremento en los niveles de hemoglobina que es dependiente de la dosificación y es sustenido por un periodo de tiempo significativamente más largo que en los animales tratados con PEG-NESP de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 12D. La figura 19 muestra el cambio en la concentración del suero de Mxb 5 ("#5 Scfv-Fc") y IgGi 5 ("#5 IgGi") durante un tiempo de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 13. La figura 20 muestra los parámetros farmacocinéticos del IgGi 5 y Mxb 5 en ratones de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 13. La figura 21 muestra el CDRs del Mxb 2, Mxb 5, Mxb 7, Mxb 10 y Mxb 30. La figura 22 muestra un análisis de FACS de ciertas proteínas scFv-Fc unidas a células de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 15. La concentración de anticuerpos y Epo utilizada para teñir es de 5 g/ml. Las curvas sombreadas son del teñido sólo con cabra anti-humano F(ab')2 conjugado con ficoeritrina sin ningún anticuerpo primario. Panel A: La intensidad de fluorescencia de las células UT-7 después de la unión del xb 13, xb 15, Mxb 16, Mxb 29 o xb 34 en presencia (lineas sólidas) y ausencia (lineas punteadas) del Epo humano durante el teñido. Panel B. Intensidad de fluorescencia de las células COS-1 después de la unión del Mxb 13, Mxb 15, Mxb 16, Mxb 29 o Mxb 34 (linea sólida) . La figura 23 muestra la unión y la unión competitiva del EpoR de las proteínas scFv-Fc de acuerdo al trabajo tratado en los Ejemplos 15, 16 y 17. La unión del EpoR a humano (hu) , ratón (mu) y mono de Cynomolgus (cyno) fue testeado mediante ELISA y FACS. La capacidad del Epo de competir con el clon 2, clon 5, clon 7, clon 10, clon 13, clon 15, clon 16, clon 29, clon 30 o clon 34 para unirse al EpoR fue testeado mediante FACS en células UT-7. La capacidad del Epo de competir con el clon 201, clon 276, clon 295, clon 307, clon 318, clon 319, clon 323, clon 330, clon 352 o clon 378 para unirse al EpoR fue testeado mediante la competición ELISA. La capacidad del clon 5 de competir con el clon 2, clon 5, clon 7, clon 10, clon 13, clon 15, clon 16, clon 29, clon 30 o clon 34 para unirse al EpoR fue testeado mediante ELISA basado en placa. La capacidad del clon 30 de competir con el clon 2, clon 5, clon 7, clon 10, clon 13, clon 15, clon 16, clon 29, clon 30 o clon 34 para unirse al EpoR fue testeado mediante ELISA basado en placa. La figura 24 muestra que una única inyección de Mxb 276_G1MB produce un incremento en el número de reticulocitos que es sostenido a lo largo de un periodo de tiempo de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 20. El incremento es sustenido significativamente más tiempo que en animales tratados con PEG-NESP. La figura 25 muestra que una única inyección de Mxb 276_G1MB produce un incremento en la hemoglobina que que es sustenido por un periodo de tiempo de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 20. El incremento en hemoglobina es sotenido significativamente más tiempo que en animales tratados con PEG-NESP. La figura 26A muestra números absolutos de reticulocitos en monos de Cynomolgus después de la administración de Mxb 5 humano punto mutante Fe (Fe no-glicosilado) ("huMxb#5" en la figura), un Mxb 5 Cynomolgus punto mutante Fe (Fe no-glicosilado) ("cynoMxb#5" en la figura), un Mxb 10 humano punto mutante Fe (Fe no-glicosilado) ("huMxb#10" en la figura), y un Mxb 30 humano punto mutante Fe (Fe no-glicosilado) ("huMxb#30" en la figura) , o inyecciones de control ("Peg-NESP" y "Vehículo" en la figura) de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 22. Cada mono fue dosificado dos veces con inyección IV, la primera administración de inyecciones ocurrió el día 1 y la segunda el día 15. Las proteínas scFv-Fc fueron dosificadas a 0,5mg/kg para la primera administración el día 1 y a 5 mg/kg para la segunda administración el día 15. El Peg-Nesp fue dosificado a 0,03mg/kg para ambas inyecciones. El control del vehículo ("Vehículo" en la figura) (lOmM fosfato de potasio, 161 mM L-Arginina, pH 7,5) fue dosificado a lml/kg para ambas inyecciones. La figura 26B muestra número de reticulocitos graficados como un porcentaje de los niveles de reticulocitos línea base para cada grupo después de la administración de huMxb#5, cynoMxb#5, huMxb#10, y huMxb#30 o inyecciones de control de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 22. Los niveles de reticulocitos línea base fueron obtenidos del análisis de la sangre recolectada el día 1 antes de la primera administración. Cada mono fue dosificado dos veces con inyección IV, la primera administración de los artículos del test ocurrió el día 1 y la segunda el día 15. Las proteínas scFv-Fc fueron dosificadas a 0,5mg/kg para la primera administración del día 1 y 5mg/kg para la segunda administración del día 15. El Peg-Nesp fue dosificado a 0,03mg/kg para ambas inyecciones. El control del vehículo fue dosificado a lml/kg para ambas inyecciones. La figura 27 muestra ciertas condiciones de reacción PCR usadas para hacer construcciones de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 21. Las figuras 28A, 28B, 28C y 28D muestran secuencias de aminoácidos que fueron usados como plantillas para la mutagénesis del sitio de la glicosilación del N 297 S en humano y Cynomolgus Fe ' s de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 21. El aminoácido resaltado en rojo muestra donde toma lugar la mutación del N 297 S. La porción amarilla es de la secuencia del líder VH5, la verde es el scFv y la azul es la región Fe. La porción en blanco en las figuras 28A, 28B y 28C incluyen un G de la biblioteca original del scFv y los aminoácidos de la introducción de un lugar de restricción para facilitar la clonación. Las figuras 29A, 29B, 29C y 29D muestran los clones finales y las secuencias de los mutados, proteínas scFv-Fc Mxb#5 humano punto mutante Fe, Mxb#10 humano punto mutante Fe, Mxb#30 humano punto mutante Fe, Mxb#5 cynomolgus punto mutante Fe) de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 21. El aminoácido resaltado en rojo muestra la mutación del N 297 S. La porción amarilla es de la secuencia del líder VH5, la verde es el scFv y la azul es la región Fe. La porción en blanco incluye a G de la biblioteca original del scFv y los aminoácidos de la introducción de un lugar de restricción para facilitar la clonación. La figura 30 muestra un ensayo de una unión ELISA para la proteína EpoR mutante unida al Mxb 10 de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 23. E62A, F93A y M150A disminuyen la unión relativa al WT y aparecen como ser parte del epitope de la unión del Mxb 10. La figura 31 muestra un ensayo LANCE para las proteínas EpoR mutantes unidas al Mxb 10 de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 23. E62A, F93A y M150A disminuyen la unión relativa al WT y aparecen como ser parte del epitope de la unión del Mxb 10. Las figuras 32A-32B muestran una comparación de la unión del Mxb 10 a los mutantes del EpoR arginina y alanina de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 23. La figura 32A muestra que una mutación del W64 a arginina o alanina, no disminuye la unión relativa al WT. W64A aparece como no formar parte del epitope del Mxb 10. La figura 32B muestra una mutación del M150 a la unión alanina disminuida del Mxb 10. Mutación del M150 a la unión alanina altamente disminuida. Las figuras 33A-33B muestran alineamientos de secuencia de las A) regiones CDR de la cadena variable pesada y B) regiones CDR de la cadena variable liviana de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 24. Los alineamientos de secuencia estaban basados en el programa MiniPileup usando regiones CDR electrónicamente empalmadas. Los alineamientos son codificados por color para indicar aminoácidos polares (azul) , no polares (rojo) , ácidos (verde) y básicos (amarillo) . El símbolo "*" representa una región vínculo que separa el CDR1, CDR2 y CDR3.
Las figuras 34A-34B muestran un análisis filogenético de: Figura 34A las regiones CDR de la cadena variable pesada y Figura 34B las regiones CDR de la cadena variable liviana de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 24. Los árboles están basados en análisis de unión vecina de las secuencias de aminoácidos de las regiones CDR. La figura 35 muestra las secuencias de consenso en el CDR de las cadenas variable pesada y las cadenas variable liviana en los alineamientos de secuencia de la figura 33, de acuerdo al trabajo tratado en el Ejemplo 24. El símbolo "X" representa un aminoácido que puede variar en la secuencia de consenso. El subíndice cercano a la "X" representa la posición del aminoácido en la secuencia, p.ej., "Xi" representa el primer aminoácido en la secuencia de consenso.
La figura 36A muestra la completa secuencia de aminoácido del Receptor Epo. La figura 36B muestra la secuencia del aminoácido del dominio extra-celular del Receptor Epo. La secuencia de aminoácido del dominio extra-celular fue usada para identificar los aminoácidos en los experimentos del mapeo epitope descripta en el Ejemplo 23 y las figuras 30 a 32. El dominio extra-celular carece de los primeros 24 aminoácidos presentes en la secuencia de aminoácidos del completo Receptor Epo. El domino extra-celular carece también de los aminoácidos 251 a 508 del completo Receptor Epo.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Todos los documentos o porciones de documentos citados en esta solicitud, incluyendo pero no limitado a patentes, solicitudes de patente, artículos, libros y tratados están expresamente incorporados como referencia aquí en su totalidad para cualquier propósito. En caso que uno o más documentos incorporados como referencia defina un término que contradiga la definición de dicho término en esta solicitud, esta solicitud controla. A menos que se provean definiciones específicas, las nomenclaturas utilizadas en conexión con y los procedimientos y técnicas de laboratorio de química analítica, química de síntesis orgánica y química medicinal y farmacéutica descriptas aquí son aquellas bien conocidas y usadas en la materia. Técnicas estándar pueden ser usadas para síntesis química, análisis químico, preparación farmacéutica, formulación, suministro y tratamiento de pacientes. En esta solicitud, el uso del singular incluye el plural al menos que lo contrario esté específicamente establecido. En esta solicitud, el uso de "o" significa "y/o" al menos que esté establecido lo contrario. En el contexto de una reivindicación múltiple dependiente, el uso de "o" se refiere hacia atrás a más de una reivindicación precedente independiente o dependiente sólo en la alternativa. Además, el uso del término "incluyendo", como también las formas, tales como "incluye" e "incluido", no es limitante. También, términos tales como "elemento" o "componente" abarca ambos elementos y componentes comprendiendo una unidad y elementos y componentes que comprenden más de una subunidad al menos que se establezca específicamente lo contrario. Como utilizado de acuerdo con la presente declaración, los siguientes términos, al menos indicado lo contrario, deben entenderse como teniendo los siguientes significados: El término "polinucleótido aislado" como usado aquí debe significar un polinucleótido de origen genómico, cDNA, o sintético o alguna combinación de estos, el cual por virtud de su origen el "polinucleótido aislado" (1) no está asociado con todos o una porción de un polinucleótido en el que el "polinucleótido aislado" se encuentra en la naturaleza, (2) está vinculado a un polinucleótido el que no está vinculado en la naturaleza, o (3) no ocurre en la naturaleza como parte de una secuencia mayor. Los términos "polinucleótido" y "oligonucleótido" son usados intercambiadamente , y tal lo referido aquí significan una forma polimérica de nucleótidos de al menos 2 bases de largo. En ciertas modalidades, las bases pueden comprender por lo menos uno de los ribonucleótidos, deoxiribonucleótidos y una forma modificada de algún tipo de nucleótido. El término incluye formas arrolladas singulares y dobles del DNA. En ciertas modalidades, se proveen los polinucleótidos complementarios a polinucleótidos específicos que codifican ciertos polipéptidos descritos aquí. El término "nucleótidos que se dán naturalmente" incluye los deoxiribonucleótidos y ribonucleótidos . Los deoxiribonucleótidos incluyen, pero no están limitados a, adenosina, guanina, citosina y timidina. Los ribonucleótidos incluyen, pero no están limitados a, adenosina, citosina, timidina y uracilo. El término "nucleótidos modificados" incluye, pero no está limitado a, nucleótidos con grupos sacarosa modificados o sustituidos y semejantes. El término "vínculos polinucleótidos" incluye, pero no está limitado a, vínculos polinucleótidos tales como fósforotioato, fósforoditioato, fósforoselenoato, fósforodiselenoato, fósforoanilotioato, fósforoaniladato, fósforoamidato y semejantes. Ver, p.ej., LaPlanche et al. Nucí. Acids Res. 14:9081 (1986); Stec et al. J. Am. Chem. Soc. 106:6077 (1984); Stein et al. Nucí. Acids Res. 16:3209 (1988); Zon et al. Anti-Cancer Drug Design 6:539 (1991); Zon et al. Oligonucleótidos y análogos: A Practical Approach, pp . 87-108 (F. Eckstein, Ed. , Oxford University Press, Oxford England (1991)); Stec et al. Patente Estadounidense N° 5.151.510; Uhlmann and Peyman Chemical Reviews 90:543 (1990). En ciertas modalidades, un polinucleótido puede incluir una etiqueta para detección. El término "polipéptido aislado" se refiere a cualquier polipéptido que (1) es libre de al menos algunas proteínas con las que podría normalmente encontrarse, (2) está esencialmente libre de otras proteínas del mismo origen, p.ej., de las mismas especies, (3) está expresado por una célula de una especie diferente, o (4) no ocurre en la naturaleza . Los términos "polipéptido", "péptido" y "proteína" son usados aquí en forma intercambiable y se refieren a polímeros de dos o más aminoácidos unidos a cualquier otro por uniones peptídicas o uniones peptídicas modificadas, p.ej., péptidos isósteros. Los términos se aplican a polímeros de aminoácidos conteniendo aminoácidos que se manifiestan naturalmente así como polímeros de aminoácidos en los que uno o más residuos de aminoácidos es un aminoácido que no aparece naturalmente o un aminoácido químicamente análogo que se manifiesta naturalmente. Un polímero de aminoácido puede contener uno o más residuos de aminoácidos que han sido modificados por uno o más procesos naturales, tal como un procesamiento post-translacional , y/o uno o más residuos de aminoácidos que ha sido modificado por una o más técnicas de modificación química conocidas en la materia. Un "fragmento" de una referencia polipeptídica se refiere a un estiramiento contiguo de aminoácidos de cualquier porción del polipéptido de referencia. Un fragmento puede ser de cualquier longitud que sea menor que el polipéptido de referencia. Una "variante" del polipéptido de referencia se refiere a un polipéptido que tiene una o más sustituciones, supresiones o inserciones de aminoácidos relativas al polipéptido de referencia. En ciertas modalidades, una variante de un polipéptido de referencia tiene una ubicación de modificación post-translacional alterada (p.ej., una ubicación de glicosilación) . En ciertas modalidades, ambos un polipéptido de referencia y una variante de un polipéptido de referencia son agentes específicos de vinculación. En ciertas modalidades, ambos un polipéptido de referencia y una variante de un polipéptido de referencia son anticuerpos. Variantes de un polipéptido de referencia incluyen, pero no están limitadas a, variantes de glicosilación. Variantes de glicosilación incluyen variantes en las que el número y/o tipo de las ubicaciones de glicosilación han sido alteradas comparadas con el polipéptido de referencia. En ciertas modalidades, variantes de glicosilación de un polipéptido de referencia comprenden un mayor o menor número de lugares de glicosilación de vínculo N que en el polipéptido de referencia. En ciertas modalidades, una ubicación de glicosilación de vínculo N está caracterizada por la secuencia Asn-X-Ser o Asn-X-Thr, donde el residuo de aminoácido designado como X puede ser cualquier residuo de aminoácido excepto prolina. En ciertas modalidades, las variantes de glicosilación de un polipéptido de referencia comprenden un reordenamiento de las cadenas de carbohidratos N-vinculados donde una o más ubicaciones de glicosilación N-vinculadas (típicamente aquellas que se manifiestan naturalmente) son eliminadas y se crean una o más nuevas ubicaciones N-vinculadas . Variantes de un polipéptido de referencia incluyen, pero no están limitadas a, variantes de cisteína. En ciertas modalidades, las variantes de la cisteína incluyen variantes en las que uno o más residuos de cisteína del polipéptido de referencia son reemplazados por uno o más residuos de no-cisteína, y/o uno o más residuos de no-cisteína del polipéptido de referencia que son reemplazados por uno o más residuos de cisteína. Las variantes de cisteína pueden ser útiles, en ciertas modalidades, cuando un polipéptido particular debe ser replegado en una . conformación biológicamente activa, p.ej., después de la aislación de cuerpos de inclusión insolubles. En ciertas modalidades, las variantes de cisteína de un polipéptiodo de referencia tienen menos residuos de cisteína que el polipéptido de referencia. En ciertas modalidades, las variantes de cisteína de un polipéptido de referencia tienen un número igual de cisteínas para minimizar las interacciones resultantes de las cisteínas no apareadas. En ciertas modalidades, las variantes de cisteínas tienen más residuos de cisteína que la proteína nativa . Un "derivado" de un polipéptido de referencia se refiere a: un polipéptido: (1) que tiene una o más modificaciones de uno o más residuos de aminoácido del polipéptido de referencia; y/o (2) en el que uno o más vínculos peptidílicos han sido reemplazados con uno o más vínculos no-peptidílicos , y/o (3) en el que el terminal N y/o el terminal C han sido modificados. Ciertas modificaciones ejemplo incluyen, pero no están limitadas a, acetilación, acilación, ADP-ribosilación, amidación, biotinilación, adjunto covalente de la flavina, adjunto covalente de una fracción molecular heme, adjunto covalente de un nucleótido o derivado nucleotídico, adjunto covalente de un lípido o derivado lipídico, adjunto covalente del fosfotidilinositol, ligadura cruzada, ciclización, formación de uniones disulfito, demetilación, formación de covalente de unión cruzada, formación de cistina, formación de piroglutamato, formilación, carboxilación gama, glicosilación, formación de anclaje GPI, hidroxilación, iodinación, metilación, miristoilación, oxidación, procesamiento proteolítico, fosforilación, prenilación, racemización, selenilación, sulfación, adición intermediada por transferencia RNA de aminoácidos a proteínas tales como la arginilación y la ubiquitinación . En ciertas modalidades, ambos un polipéptido de referencia y un derivado de un polipéptido de referencia son agentes específicos de vinculación. En ciertas modalidades, ambos un polipéptido de referencia y un derivado de un polipéptido de referencia son anticuerpos . Los polipéptidos incluyen, pero no están limitados a, secuencias de amnioácido modificadas o por procesos naturales, tales como el procesamiento post-translacional o por técnicas de modificación química que son bien conocidas en la materia. En ciertas modalidades, las modificaciones pueden ourrir en cualquier parte de un polipéptido, incluyendo la columna vertebral del péptido, las cadenas laterales de aminoácido y los terminales amino o carboxilo. En ciertas modalidades, las modificaciones pueden estar presentes al mismo o variable grado en diferentes ubicaciones en un dado polipéptido. En ciertas modalidades, un dado polipéptido contiene muchos tipos de modificaciones tales como supresiones, adiciones y/o sustituciones de uno o más aminoácidos de una secuencia nativa. En ciertas modalidades, los polipéptidos pueden ser ramificados y/o cíclicos. Los polipéptidos cíclicos, ramificados y cíclico ramificados pueden resultar de procesos naturales post-translacionales (incluyendo, pero no limitados a la ubiquitinación) o pueden ser obtenidos por métodos sintéticos. En ciertas modalidades, ciertas secuencias de polipéptidos comprenden al menos una región determinante complementaria (CDR) . El término "ocurre naturalmente" aplicado a un objeto significa que un objeto puede ser encontrado en la naturaleza. Por ejemplo, un polipéptido o polinucleótido que está presente en un organismo (incluyendo los virus) que pueden ser aislado de una fuente en la naturaleza y que no ha sido intencionalmente modificado por el hombre en el laboratorio o que por otro lado ocurre naturalmente. El término "vinculado operativamente" como usado aquí se refiere a componentes que están en una relación permitiéndoles a ellos a funcionar en su forma deseada. Por ejemplo, en el contexto de una secuencia polinucleótida una secuencia de control puede estar "vinculada operativamente" a una secuencia codificada cuando la secuencia de control y la secuencia de codificación están en asociación mutua de tal manera que la expresión de la secuencia codificada es alcanzada bajo condiciones compatibles con el funcionamiento de la secuencia de control. El término "secuencia de control" se refiere a una secuencia de polinucleótido que puede llevar a cabo la expresión y procesamiento de las secuencias de codificación con las cuales están en asociación. La naturaleza de tales secuencias de control pueden diferir dependiendo del organismo anfitrión. Ciertas secuencias de control ejemplares para procariotes incluyen, pero no están limitadas a, promotores, lugares de unión ribosomal y secuencias de terminación de transcripción. Ciertas secuencias de control ejemplares para eucariotes incluyen, pero no están limitadas a, promotores, resaltadores y secuencias de terminación de transcripción. En ciertas modalidades, las "secuencias de control" pueden incluir secuencias de líder y/o secuencias de socio fusionado. En ciertas modalidades, una primera secuencia de codificación de polinucleótido está vinculada operativamente a una segunda secuencia de codificación de polinucleótido cuando la primera y segunda secuencia de codificación de polinucleótido son transcriptas en un sólo mRNA contiguo que puede ser traducido a un único polipéptido contiguo. En el contexto de polipéptidos , dos o más polipéptidos están "vinculados operativamente" si cada polipéptido vinculado es capaz de funcionar en su forma deseada. Un polipéptido que es capaz de funcionar en su forma deseada cuando está operativamente vinculado a otro polipéptido puede o no ser capaz de funcionar en su forma deseada cuando no está operativamente vinculado a otro polipéptido. Por ejemplo, en ciertas modalidades, un primer polipéptido puede ser incapaz de funcionar en su forma deseada cuando está desvinculado, pero puede ser estabilizado mediante el vínculo a un segundo polipéptido tal que él puede ser capaz de funcionarse en su forma deseada. Alternativamente, en ciertas modalidades, un primer polipéptido puede ser capaz de funcionarse en su forma deseada cuando está desvinculado y puede retener dicha capacidad cuando está vinculado operativamente a un segundo polipéptido. Como utilizado aquí, dos o más polipéptidos están "fusionados" cuando los dos o más polipéptidos están vinculados para formar una sola molécula contigua. En ciertas modalidades, dos o más polipéptidos están fusionados por transformación de ellos en una sola secuencia contigua de polipéptido o por sintetización de los mismos como una sola secuencia contigua de polipéptido. En ciertas modalidades, dos o más polipéptidos fusionados pueden haber sido transformados in vivo de dos o más secuencias de codificación de polinucleótidos operativamente vinculados. En ciertas modalidades, dos o más polipéptidos fusionados pueden haber sido transformados in vitro de dos o más secuencias de codificación de polinucleótidos operativamente vinculados. En ciertas modalidades, dos o más polipéptidos están fusionados si los dos polipéptidos están vinculados por un vinculo de polipéptido o no-polipéptido . Como usado aquí, dos o más polipéptidos están "vinculados operativamente" si cada polipéptido vinculado es capaz de funcionarse en su forma deseada. En ciertas modalidades, un primer polipéptido que contiene dos o más unidades de polipéptidos distintos es considerado como unido a un segundo polipéptido siempre que al menos una de las distintas unidades de polipéptido del primer polipéptido esté vinculado al segundo polipéptido. Como un ejemplo no limitante, en ciertas modalidades, un anticuerpo es considerado vinculado a un segundo polipéptido en todas las siguientes instancias: (a) el segundo polipéptido está vinculado a uno de los polipéptidos de cadena pesada del anticuerpo, (b) el segundo polipéptido está vinculado a uno de los polipéptidos de cadena liviana del anticuerpo, (c) un primera molécula del segundo polipéptido está vinculada a uno de los polipéptidos de cadena pesada del anticuerpo y una segunda molécula del segundo polipéptido está vinculado a uno de los polipéptidos de cadena liviana del anticuerpo; y (d) la primera y segunda moléculas del segundo polipéptido están vinculadas a la primero y segundo polipéptido de cadena liviana del anticuerpo y la tercer y cuarta moléculas del segundo polipéptido están vinculadas al primer y segundo polipéptido de cadena liviana del anticuerpo . En ciertas modalidades, el lenguaje "un primer polipéptido vinculado a un segundo polipéptido" abarca situaciones donde: (a) sólo una molécula de un primer polipéptido está vinculada a sólo una molécula de un segundo polipéptido, (b) sólo una molécula de un primer polipéptido está vinculada a más de una molécula de un segundo polipéptido, (c) más de una molécula de un primer polipéptido está vinculada a sólo una molécula de un segundo polipéptido y (d) más de una molécula de un primer polipéptido está vinculada a más de una molécula de un segundo polipéptido. En ciertas modalidades, cuando una molécula vinculada comprende más de una molécula de un primer polipéptido y sólo una molécula de un segundo polipéptido, todas o menos que todas las moléculas del primer polipéptido pueden estar vinculadas en forma covalente o no covalente al segundo polipéptido. En ciertas modalidades, cuando una molécula vinculada comprende más de una molécula de un primer polipéptido, una o más moléculas del primer polipéptido pueden estar vinculadas en forma covalente o no covalente a otras moléculas del primer polipéptido. Como usado aquí, un "vinculo flexible" se refiere a cualquier vinculo que no está predicho, de acuerdo a su estructura química, a ser fijado en el espacio tridimensional. Un experto en la materia puede predecir si un vínculo particular es flexible en su contexto previsto. En ciertas modalidades, un vínculo péptido comprendiendo 3 o más aminoácidos es un vínculo flexible. Como usado aquí, los veinte aminoácidos convencionales y sus abreviaturas siguen el uso convencional. Ver Immunology--A Synthesis (2nd Edition, E. S. Golub y D. R. Gren, Eds . , Sinauer Associates, Sunderland, Mass. (1991)). En ciertas modalidades, uno o más aminoácidos no convencionales pueden ser incorporados en un polipéptido. El término "aminoácido no convencional" se refiere a cualquier aminoácido que no es uno de los veinte aminoácidos convencionales. El término "aminoácidos que no se manifiestan naturalmente" se refiere a aminoácidos que no se encuentran en la naturaleza. Aminoácidos que no se manifiestan naturalmente es un subconjunto de aminoácidos no convencionales. Aminoácidos no convencionales incluyen, pero no están limitados a, estereoisómeros (p.ej., D-aminoácidos ) de los veinte aminoácidos convencionales, aminoácidos no naturales tales como a-, aminoácidos a-disubstituidos, N-alquilaminoácidos , ácido láctico, homoserina, homocisteina, 4-hidroxiprolina, ?-carboxiglutamato, e-?, , N-trimetillisina , e-?-acetillisina , O-fosfoserina, N-acetilserina, N-formilmetionina , 3-metilhistidina , 5-hidroxilisina , s-?-metilarginina , y otros aminoácidos e iminoácidos similares (p.ej., 4-hidroxiprolina) conocidos en la materia. En la notación polipeptidica usada aquí, la dirección izquierda es la dirección del terminal amino y la dirección derecha es la dirección del terminal carboxi, de acuerdo con el uso estándar y la convención. En ciertas modalidades, substituciones de aminoácidos conservativos incluyen substitución con uno o más residuos de aminoácidos no convencionales. En ciertas modalidades, los residuos de aminoácidos no convencionales son incorporados mediante la síntesis de química peptídica más que por la síntesis en los sistemas biológicos.
El término "residuo ácido" se refiere a un residuo de aminoácido en forma D- o L- que comprende al menos un grupo ácido cuando es incorporado en un polipéptido entre dos otros residuos de aminoácido que son el mismo o diferente. En ciertas modalidades, un residuo ácido comprende una cadena lateral que comprende al menos un grupo ácido. Ejemplos de residuos ácidos incluyen, pero no están limitados a, ácido aspártico (D) y ácido glutámico (E) . En ciertas modalidades, un residuo ácido puede ser un aminoácido no convencional. El término "residuo aromático" se refiere a un residuo de aminoácido en forma D- o L- que comprende al menos a un grupo aromático. En ciertas modalidades, un residuo aromático comprende una cadena lateral que comprende al menos un grupo aromático. Ejemplos de residuos aromáticos incluyen, pero no están limitados a, fenilalanina (F), tirosina (Y) y triptófano (W) . En ciertas modalidades, un residuo aromático puede ser un aminoácido no convencional. El término "residuo básico" se refiere a un residuo de aminoácido en forma D- o L- que puede comprender al menos un grupo básico cuando es incorporado en un polipéptido cerca de uno o más residuos de aminoácido que son el mismo o diferente. En ciertas modalidades, un residuo básico comprende una cadena lateral que comprende al menos un grupo básico. Ejemplos de residuos básicos incluyen, pero no están limitados a, histidina (H) , lisina (K) y arginina (R) . En ciertas modalidades, un residuo básico puede ser un aminoácido no convencional. El término "residuo hidrofilico neutral" se refiere a un residuo de aminoácido en forma D- o L- que comprende al menos un grupo hidrofilico y/o polar, pero no comprende un grupo ácido o básico cuando es incorporado en un polipéptido cerca de uno o más residuos de aminoácido que son el mismo o diferente. Ejemplos de residuos hidrofilicos neutrales incluyen, pero no están limitados a, alanina (A) , cisteina (C) , serina (S), treonina (T) , asparagina (N) y glutamina (Q) . En ciertas modalidades, un residuo hidrofilico neutral puede ser un aminoácido no convencional. Los términos "residuo lipofilico" y "Laa" se refieren a un residuo de aminoácido en forma D- o L- que tiene al menos un grupo no cargado alifático y/o aromático. En ciertas modalidades, un residuo lipofilico comprende una cadena lateral que comprende al menos un grupo no cargado alifático y/o aromático. Ejemplos de cadenas laterals lipofilicas incluyen, pero no están limitados a, alanina (A) , fenilalanina (F) , isoleucina (I), leucina (L) , norleucina (Nle) , metionina (M) , valina (V) , triptófano (W) y tirosina (Y). En ciertas modalidades, un residuo lipofilico puede ser un aminoácido no convencional. El término "residuo amfifilico" se refiere a un residuo de aminoácido en forma D- o L- que es capaz de ser un residuo hidrofílico o lipofílico. Un ejemplo de residuo amfifílico incluye, pero no está limitado a, alanina (A) . En ciertas modalidades, un residuo amfifílico puede ser un aminoácido no convencional . El término "residuo no funcional" se refiere a un residuo de aminoácido en forma D- o L- al que le faltan grupos ácido, básico y aromático cuando es incorporado en un polipéptido cerca de uno o más residuos de aminoácido que son el mismo o diferente. Ejemplos de residuos de aminoácido no funcionales incluyen, pero no están limitados a, metionina (M) , glicina (G) , alanina (A), valina (V), isoleucina (I), leucina (L) y norleucina (Nle) . En ciertas modalidades, un residuo no funcional puede ser un aminoácido no convencional. En ciertas modalidades, la glicina (G) y prolina (P) son considerados residuos de aminoácido que pueden influenciar la orientación de la cadena polipéptida. En ciertas modalidades, una substitución conservativa puede involucrar el reemplazo de un miembro de un tipo de residuo con un miembro del mismo tipo de residuo. Como ejemplo no limitante, en ciertas modalidades, una substitución conservativa puede involucrar reemplazar un residuo ácido, tal como D, con un residuo ácido diferente, tal como E. En ciertas modalidades, una substitución no conservativa puede involucrar el reemplazo de un miembro de un tipo de residuo con un miembro de diferente tipo de residuo. Como un ejemplo no limitante, en ciertas modalidades, una substitución no conservativa puede involucrar el reemplazo de un residuo ácido, tal como D, con un residuo básico, tal como K. En ciertas modalidades, un residuo de cisteina es substituido con otro residuo de aminoácido para prevenir la formación de la ligadura disulfito con esta posición en el polipéptido. Para hacer substituciones conservativas o no conservativas, de acuerdo a ciertas modalidades, el índice hidropatic de los aminoácidos debe ser considerado. A cada aminoácido se le ha asignado un índice hidropatic en base a su hidrofobicidad y características de carga. Los índices de hidropatía de los 20 aminoácidos que aparecen naturalmente son: isoleucina (+4.5); valina (+4.2); leucina (+3.8); fenilalanina (+2.8); cisteína/cistína (+2.5); metionina (+1.9); alanina (+1.8); glicina (-0.4); treonina (-0.7); serina (-0.8); triptófano (-0.9); tirosina (-1.3); prolina (-1.6); histidina (-3.2); glutamato (-3.5); glutamina (-3.5); aspartato (-3.5); asparagina (-3.5); lisina (-3.9); y arginina (-4.5). La importancia del índice de aminoácido hidropatic del en conferir función biológica interactiva en una proteína es entendido en la materia. Kyte et al., J. Mol. Biol., 157:105-131 (1982). Es conocido en ciertas instancias que ciertos aminoácidos pueden ser substituidos por otros aminoácidos que tienen índice hidropatic similar o resultan y aún retienen una actividad biológica similar. Al hacer cambios basados en el índice hidropatic, en ciertas modalidades, se incluye la substitución de los aminoácidos que tiene índices de hidropatía dentro del +2. En ciertas modalidades, se incluyen aquellos que están dentro del +1, y en ciertas modalidades, se incluyen aquellos que están dentro del ±0.5. También se entiende en la materia que la substitución de aminoácidos similares puede ser hecha efectivamente en base a la hidrofilicidad, particularmente donde la proteína o el péptido biológicamente funcional creado de ese modo es deseado para el uso en modalidades inmunológicas , como en el caso presente. En ciertas modalidades, el mayor promedio local de hidrofilicidad de una proteína, como gobernado por la hidrofilicidad de sus aminoácidos adyacentes, se correlaciona con su inmunogenicidad y antigenicidad, p.ej., con una propiedad biológica del polipéptido. Los siguientes valores de hidrofilicidad han sido asignados a estos residuos de aminoácidos: arginina (+3.0); lisina ( +3.0); aspartato (+3.0 ± 1); glutamato ( +3.0 ± Inseriría (+0.3); asparagina (+0.2); glutamina (+0.2); glicina (0); treonina (-0.4); prolina (-0.5 ± 1); alanina (-0.5); histidina (-0.5); cisteína (-1.0); metionina (-1.3); valina (-1.5); leucina (-1.8); isoleucina (-1.8); tirosina (-2.3); fenilalanina (-2.5) y triptófano (-3.4). Al hacer cambios basados en valores de hidrofilicidad similares, en ciertas modalidades, se incluye la substitución de los aminoácidos cuyos valores de hidrofilicidad están dentro del ±2, en ciertas modalidades, se incluyen aquellos que están dentro del ±1 y en ciertas modalidades, se incluyen aquellos que están dentro del ±0.5. En ciertas instancias, uno puede también identificar epitopes de secuencias de aminoácido en base a la hidrofilicidad . Estas regiones son también referidas como "regiones de núcleo epitópico". Ejemplos de substituciones de aminoácido están mostrados en la Tabla 1.
Tabla 1 Substituciones de Amino Ácidos Original Substituciones Substituciones Residuos Ejemplares ejemplares más especificas Ala Val, Leu, lie Val Arg Lis, Gln, Asn Lis Asn Gln Gln Asp Glu Glu Cis Ser, Ala Ser Gln Asn Asn Original Substituciones Substituciones Residuos Ejemplares ejemplares más especificas Glu Asp Asp Gli Pro, Ala Ala His Asn, Gln, Lis, Arg Arg lie Leu, Val, Met, Ala, Leu Fe, Norleucina Leu Norleucina, lie, lie Val, Met, Ala, Fe Lis Arg, 1 , 4 Ácido Arg diamino-butírico, Gln, Asn Met Leu, Fe, lie Leu Fe Leu, Val, lie, Ala, Leu Tir Pro Ala Gli Ser Tr, Ala, Cis Tr Tr Ser Ser Trp Tir, Fe Tir Tir Trp, Fe, Tr, Ser Fe Val lie, Met, Leu, Fe Leu Ala, norleucina Similarmente , como se usa aquí, a no ser que se especifique de otro modo, el extremo izquierdo de las secuencias polinucleotidas de un solo trenzado es el extremo 5' ; la dirección izquierda de las secuencias polinucleotidas de doble trenzado se conoce como la dirección 5' . La dirección de 5' a 3' adiciones de transcripciones de RNA nacientes se conoce aquí como la dirección de trascripción; las regiones de secuencia en el trenzado de DNA que tienen la misma secuencia así como el RNA y que son 5' al extremo 5' de la trascripción de RNA se conocen aquí como "secuencias ascendentes"; las regiones de secuencia del trenzado de DNA que tienen la misma secuencia así como el RNA y que son 3' al extremo 3' del transcripción de RNA se conocen aquí como "secuencias descendentes". En ciertas modalidades, las substituciones moderadas de amino ácidos abarcan residuos amino ácidos no naturales ocurrentes, que son típicamente incorporados por síntesis peptídico química o por síntesis en sistemas biológicos. Aquellos residuos amino ácidos no naturales ocurrentes incluyen, pero no están limitados a péptido miméticos y otras formas invertidas o revertidas de partes de amino ácidos. Un experto en la materia podría determinar variantes de substitución adecuadas de un polipéptido de referencia como se usa aquí en adelante aquí utilizando técnicas conocidas. En ciertas modalidades, un experto en la materia puede identificar áreas adecuadas de la molécula que pueden ser cambiadas sin destruir la actividad apuntando a regiones que no se creían eran importantes para la actividad. En ciertas modalidades, uno puede identificar residuos y porciones de las moléculas que se conservan entre polipéptidos similares. En ciertas modalidades, aún áreas que pueden ser importantes para la actividad biológica, incluyendo, pero no limitadas a, las CDRs de un anticuerpo, o que pueden ser importantes para la estructura pueden estar sujetas a sustituciones moderadas de amino ácidos sin destruir la actividad biológica o sin afectar adversamente la estructura del polipéptido. Adicionalmente , en ciertas modalidades, un experto en la materia puede revisar estudios de función y estructura identificando residuos en polipéptidos similares que son importantes para la actividad y/o estructura. Vistas dichas comparaciones, en ciertas modalidades, uno puede predecir la importancia de los residuos de amino ácidos en un polipéptido que corresponden a los residuos de amino ácidos que son importantes para la actividad o estructura de polipéptidos similares. En ciertas modalidades, un experto en la materia puede optar por substituciones de amino ácidos químicamente similares para aquellos residuos de amino ácidos importantes y anticipados. En ciertas modalidades, un experto en la materia puede también analizar la estructura tridimensional y secuencia de los amino ácidos en relación a tal estructura en polipéptidos similares. Vista dicha información, un experto en la materia puede predecir la alineación de residuos de amino ácidos de un anticuerpo con respecto a su estructura dimensional. En ciertas modalidades, un experto en la materia puede escoger no hacer cambios radicales a residuos amino ácidos anticipados a estar en la superficie de la proteina, en vista de que dichos residuos pueden estar involucrados en interacciones importantes con otras moléculas. Además, en ciertas modalidades, un experto en la materia puede generar variantes de prueba conteniendo una sola substitución de amino ácidos en cada residuo de amino ácido deseado. En ciertas modalidades, las variantes pueden ser filtradas utilizando ensayos de actividades conocidos para aquellos expertos de la ciencia. Por ejemplo, en ciertas modalidades, las variantes se pueden filtrar debido a su capacidad para adherir un anticuerpo. En ciertas modalidades, dichas variantes se pueden utilizar para recolectar información con respecto a las variantes adecuadas. Por ejemplo, en ciertas modalidades, si alguien descubriese que un cambio en un residuo de amino ácido particular resultase en una actividad no adecuada, indeseablemente reducida o destruida, se evitarían variantes con dicho cambio. En otras palabras, basado en la información recolectada de dichos experimentos de rutina, un experto en la materia puede fácilmente determinar los amino ácidos en donde se deben evitar substituciones adicionales, ya sean sola o en combinación con otras mutaciones. Un número de publicaciones científicas han sido devotas a la predicción de estructuras secundarias. Ver Moult J. , Curr. Op. in Biotech., 7(4):422-427 (1996), Chou et al., Biochemistry, 13 (2 ): 222-245 (1974); Chou et al., Biochemistry, 113 (2 ): 211-222 (1974); Chou et al., Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol., 47:45-148 (1978); Chou et al., Ann . Rev. Biochem., 47:251-276 y Chou et al., Biophys . J. , 26:367-384 (1979). Además, en la actualidad hay programas de computadora disponibles para asistir en la predicción de estructuras secundarias. Un método de predecir estructura secundaria está basado en modelación de homología. Por ejemplo, dos polipéptidos o proteínas que tienen una identidad de secuencia mayor del 30%, o similarmente mayor que al 40% a tienen a menudo topologías estructurales similares. El reciente crecimiento de la base de datos estructural de proteínas (PDB) ha proveído mayor predictibilidad de estructuras secundarias, incluyendo el número potencial de pliegues dentro de un polipéptido o estructura de proteína. Ver Holm et al., Nucí. Acid. Res., 27 ( 1 ) : 244 -247 (1999). Se ha sugerido que hay un número límite de pliegues en un polipéptido dado o proteína y que una vez un número crítico de estructuras se han resuelto, la predicción estructural se volverá dramáticamente más precisa. Ver, por ejemplo., Brenner et al., Curr. Op. Struct. Biol . , 7(3): 369-376 (1997) . Métodos ejemplares adicionales de predecir estructura secundaria incluyen, pero no están limitadas a, "trenzado" (Jones, D., Curr. Opin. Struct. Biol., 7(3):377-87 (1997); Sippl et al., Structure, 4(1):15-19 (1996)), "análisis de perfil" (Bowie et al., Science, 253:164-170 (1991); Gribskov et al., Meth. Enzym. , 183:146-159 (1990); Gribskov et al., Proc. Nat. Acad. Sci., 84 ( 13 ): 355-4358 (1987)), y "enlace evolucionarlo" (See Holm, supra (1999), and Brenner, supra (1997) ) . En ciertas modalidades, la identidad y similitud de polipéptidos relacionados pueden ser fácilmente calculadas por métodos conocidos. Dichos métodos incluyen, pero no están limitados a, aquellos descritos en Biología Molecular Computacional , Lesk, A.M., ed. Oxford University Press, New York (1988); Biocomputación : Proyectos de Genoma e Informática, Smith, D.W., ed., Prensa Académica, Nueva York (1993); Análisis por Computadora de Información de Secuencia, Parte 1, Griffin, A.M., y Griffin, H.G., eds . , Prensa Humana, New Jersey (1994); Secuencia y Análisis en Biología Molecular, von Heinje, G., Academic Press (1987); Análisis de Secuencia Primer, Gribskov, M. y Devereux, J. , eds., M.
Stockton Press, New York (1991); y Carillo et al., SIAM J. Applied Math., 48:1073 (1988). En ciertas modalidades, un polipéptido substancialmente idéntico tiene una secuencia de amino ácidos que es aproximadamente 90%, o aproximadamente 95%, o aproximadamente 96%, o aproximadamente 97%, o aproximadamente 98%, o aproximadamente 99% idéntico a una secuencia de amino ácido referencial. En ciertas modalidades, se designan métodos para determinar la identidad para dar la coincidencia mayor entre las secuencias probadas. En ciertas modalidades, se describen ciertos métodos para determinar la identidad en programas de computadora disponibles al público. Ciertos métodos en programas de computadora para determinar la identidad entre dos secuencias incluyen, pero no están limitados a, el paquete informático GCG, incluyendo GAP (Devereux et al., Nucí. Acid. Res., 12:387 (1984); Grupo de Computadoras de Genética, University of Wisconsin, Madison, WI, BLASTP, BLASTN, y FASTA (Altschul et al., J. Mol. Biol . , 215:403-410 (1990)). El programa BLASTX está disponible al público a través del (NCBI) Centro Nacional para Información de Biotecnología y otras fuentes (BLAST Manual, Altschul et al. NCB/NLM/NIH Bethesda, MD 20894; Altschul et al., supra (1990)). En ciertas modalidades, el algoritmo Smith Waterman, que es conocido por la ciencia, se puede usar también para determinar la identidad.
Ciertos esquemas de alineación para alinear dos secuencias de amino ácidos pueden resultar en el emparejamiento de solo una pequeña región de las dos secuencias, y esta pequeña región alineada puede tener una identidad de secuencia muy alta aunque no hay relación significativa entre las dos secuencias de longitud total. Por consiguiente, en ciertas modalidades, el método de alineación seleccionado (programa GAP) resultará en una alineación que dure al menos 50 amino ácidos continuos del polipéptido objetivo. Por ejemplo, usando el algoritmo de computadora GAP (Grupo de Computadoras de Genético, Universidad de Wisconsin, adison, WI), se alinean dos polipéptidos para los cuales se debe determinar la identidad de secuencia porcentual para un emparejamiento óptimo de se sus amino ácidos respectivos (la "duración igualada", como se determina por el algoritmo). En ciertas modalidades, se usan en conjunto con el algoritmo una penalidad de abertura de intervalo (que es calculada como 3X la diagonal promedio; la "diagonal promedio" es el promedio de la diagonal de la matriz de comparación usada; la "diagonal" es el puntaje o número asignado para cada igualación perfecta de amino ácido por la matriz comparación particular) , y una penalidad de extensión de intervalo (que es usualmente de 1 a 10 veces la penalidad de abertura de intervalo) , asi como también una matriz de comparación tal como PAM 250 o BLOSUM 62. En ciertas modalidades, una matriz de comparación estándar se usa también por el algoritmo. Ver, e.g., Dayhoff et al., Atlas de Estructura y Secuencia de Proteína, 5(3) (1978) para la matriz de comparación PAM 250; Henikoff et al., Proc. Nati. Acad. Sci USA, 89:10915-10919 (1992) para la matriz de comparación BLOSUM 62. En ciertas modalidades, los parámetros para una comparación de secuencia de polipéptidos incluyen lo siguiente: Algoritmo: Needleman et al., J. Mol. Biol . , 48:443- 453 (1970); Matriz de Comparación: BLOSUM 62 por Henikoff et al., supra (1992); Penalidad de Intervalo: 12 Penalidad de Longitud de Intervalo: 4 Umbral de Similitud: 0 En ciertas modalidades, el programa GAP puede ser útil con los parámetros de arriba. En ciertas modalidades, los parámetros antes mencionados son los parámetros por defecto para las comparaciones de polipéptidos (y con ninguna penalidad para los intervalos finales) usando el algoritmo de GAP. De acuerdo con ciertas modalidades, las substituciones de amino ácidos son aquellas que: (1) Reducen la susceptibilidad a la proteólisis, (2) Reducen la susceptibilidad a la oxidación, (3) Alteran la afinidad de enlace para formar complejos de proteínas, (4) alterar las afinidades de enlace, y/o (4) Conferir o modificar otras propiedades funcionales o físico químicas en dichos polipéptidos . De acuerdo a ciertas modalidades, las substituciones de amino ácidos simples o múltiples (en ciertas modalidades, substituciones moderadas de amino ácidos) se pueden hacer en la secuencia ocurrente de manera natural (en ciertas modalidades, en la porción del polipéptido fuera del dominio (s) formando contactos moleculares ) . En ciertas modalidades, una substitución de amino ácidos moderada típicamente puede no cambiar substancialmente las características estructurales de la secuencia fuente (por ejemplo, un amino ácido de reemplazo no debería tender a romper una hélice ocurrente en la secuencia fuente, o romper otros tipos de estructura secundaria que caracterizan a la secuencia fuente). Se describen ejemplos de estructuras secundarias y terciarias de polipéptidos reconocidos por la ciencia, por ejemplo, en Proteínas, Estructuras y Principios Moleculares (Creighton, Ed., W. H. Freeman and Company, New York (1984)); Introducción a la Estructura de Proteína (C. Branden y J. Tooze, eds . , Garland Publishing, New York, N.Y. (1991)); y Thornton et al. Nature 354:105 (1991).
El término "fragmento polipéptido" como se utiliza aquí se refiere a un polipéptido que no tiene supresión terminal amino y/o supresión Terminal-carboxi . En ciertas modalidades, los fragmentos tienen por lo menos de 2 a 1000 amino ácidos en longitud. Se apreciará que en ciertas modalidades, los fragmentos tienen por lo menos 5, 6, 8, 10, 14, 20, 50, 70, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500 o 1000 amino ácidos en longitud. Los análogos péptido se utilizan comúnmente en la industria farmacéutica como drogas no péptidas con propiedades analógicas para aquellas de la plantilla peptida. Estos compuestos de tipo no-péptido se denominan "miméticos péptido" o "péptido miméticos". Fauchere, J. Adv. Drug Res. 15:29 (1986); Veber y Freidinger TINS p.392 (1985); y Evans et al. J. Med. Chem. 30:1229 (1987). Tales compuestos a menudo se desarrollan con la ayuda de modelación molecular computarizada . Los péptido miméticos que son estructuralmente similares a péptidos terapéuticamente útiles se pueden utilizar para producir un efecto terapéutico o profiláctico similar. Generalmente, los péptido miméticos son estructuralmente similares a un polipéptido paradigmático (por ejemplo un polipéptido que tiene una propiedad bioquímica o actividad farmacológica) , tales como un anticuerpo humano, pero tienen uno o más enlaces péptido reemplazados opcionalmente por una enlace seleccionado de: ~CH2 NH-- , —CH2 S--, —CH2 -CH2 — , --CH=CH-(cis y trans), --COCH2 — , --CH (OH)CH2 --, y —CH2 SO—, por métodos bien conocidos por la ciencia. Se puede usar una substitución sistemática de uno o más amino ácidos de una secuencia por consenso con un ácido Di-amino del mismo tipo (por ejemplo, Di-lisina en lugar de L-lisina) en ciertas modalidades para generar péptidos más estables. Además, los péptidos restringidos que incluyen una secuencia por consenso o una variación de secuencia de consenso substancialmente idéntica se pueden generar por métodos conocidos por la ciencia (Rizo y Gierasch Ann. Rev. Bioquímica. 61:387 (1992)); por ejemplo, y sin limitación, agregando residuos internos de cisteina capaces de formar puentes di-sulfúricos intramoleculares los cuales logran la ciclizacion del péptido. El término "se enlaza específicamente" se refiere a la capacidad de un anticuerpo de enlazarse a un objetivo con mayor afinidad que con la que se enlaza a un no-objetivo. En ciertas modalidades, el enlace específico se refiere a enlazar a un objetivo con una afinidad de por lo menos 10, 50, 100, 250, 500 o 1000 veces mayor que la afinidad por un no-objetivo. En ciertas modalidades, la afinidad se determina por un ensayo de afinidad ELISA. En ciertas modalidades, la afinidad se determina por un ensayo de afinidad ELISA. En ciertas modalidades, la afinidad se determina por un método cinético. En ciertas modalidades, la afinidad se determina por un método de equilibrio/solución. Ambos "Anticuerpo" o "péptido(s) de anticuerpo" se refieren a un anticuerpo intacto o a un fragmento de lo mismo. En ciertas modalidades. El fragmento incluye porciones continuas de un anticuerpo intacto. En ciertas modalidades. El fragmento incluye porciones no-continuas de un anticuerpo intacto. En ciertas modalidades, un anticuerpo incluye un scFv. En ciertas modalidades, un anticuerpo incluye un polipéptido incluyendo por lo menos un CDR (región determinante de complementariedad). En ciertas modalidades, el fragmento de anticuerpo puede ser un fragmento de enlace que concurra con el anticuerpo intacto para un enlace especifico. El término "anticuerpo" también incluye anticuerpos policlonales y anticuerpos monoclonales . En ciertas modalidades, los fragmentos de enlace se producen por técnicas de DNA recombinado. En ciertas modalidades, los fragmentos de enlace se producen por división enzimática o química de anticuerpos intactos. En ciertas modalidades, los fragmentos de enlace se producen por técnicas de ADN recombinado. Los fragmentos de enlace incluyen pero no están limitados a, Fab, Fab ' , F(ab')2, Fv, scFv, scFv-Fc (Maxibodies ) , y anticuerpos de una sola cadena. Los fragmentos de enlace no-antígenos incluyen, pero no están limitados a, fragmentos Fe. El término "anticuerpo" también abarca anticuerpos anti-idiotípicos que se enlazan específicamente a la región variable de otro anticuerpo. En ciertas modalidades, se pueden utilizar anticuerpos idiotípicos para detectar la presencia de un anticuerpo particular en una muestra o bloquear la actividad de un anticuerpo . Ciertos ensayos para determinar la especificidad de un anticuerpo son muy conocidos por el experto en la ciencia e incluyen, pero no están limitados a, ELISA, ELISPOT, Western blots, ensayos BIAcore, y afinidad de solución de ensayos de enlace . El término "anticuerpo aislado" como se utiliza aquí da a entender un anticuerpo que (1) está libre de por lo menos algunas proteínas con las cuales se lo encontraría normalmente, (2) está esencialmente libre de otras proteínas de la misma fuente, por ejemplo, de las mismas especies, (3) está expresado por una célula de una especie diferente, o (4) no ocurre por naturaleza. El término "anticuerpo policlonal" se refiere a una mezcla heterogénea de anticuerpos que se enlaza a diferentes epítopes del mismo antígeno. El término "anticuerpos monoclonales" se refiere a una colección de anticuerpos codificados por la misma molécula de ácido nucleico. En ciertas modalidades, los anticuerpos monoclonales se producen por un solo hibridoma u otra línea de célula, o por un mamífero transgénico. Los anticuerpos monoclonales por lo general reconocen el mismo epítope. El término "monoclonal" no está limitado a cualquier método para hacer un anticuerpo. El término "anticuerpo injertado en CDR" se refiere a un anticuerpo en el que las RDC de un anticuerpo se injertan en la estructura de otro anticuerpo. En ciertas modalidades, el anticuerpo del cual se derivan las CDR y el anticuerpo del cual se deriva la estructura son de especies distintas. En ciertas modalidades, el anticuerpo del cual se derivan las RDC y el anticuerpo del cual se deriva la estructura son de especies isotipos distintos. El término "anticuerpo multi-específico" se refiere a un anticuerpo en el que dos o más regiones variables se enlazan a diferentes epítopes. Los epítopes pueden estar en el mismo o diferente objetivo. En ciertas modalidades, un anticuerpo multi-específico es un "anticuerpo bi-específico" , el cual reconoce dos epítopes diferentes en el mismo o diferente antígeno . El término "anticuerpo catalítico" se refiere a un anticuerpo en el cual una o más partes catalíticas están anexadas. En ciertas modalidades, un anticuerpo catalítico es un anticuerpo citotóxico, que incluye una parte citotóxica . El término "anticuerpo humanizado" se refiere a un anticuerpo en el cual todas o una parte de la región de la estructura de un anticuerpo se deriva de un ser humano, pero toda o parte de una o más de las CDR se derivan de otras especies, por ejemplo un ratón. En ciertas modalidades, la humanización se puede llevar a cabo métodos conocidos por la ciencia (Ver, por ejemplo, Jones et al., Nature 321, 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332, 323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science 239, 1534-1536 (1988)), al sustituir Regiones Determinantes de Complementariedad (CDR) de roedores para las regiones correspondientes de un anticuerpo humano. Los términos "anticuerpo humano", y "anticuerpo humano total" se usan de manera intercambiable y se refieren a un anticuerpo en el cual ambos, las CDR y la estructura incluyen secuencias humanas sustanciales. En ciertas modalidades, los anticuerpos totalmente humanos se producen en mamíferos no humanos, incluyendo, pero no limitados a, ratones, ratas, y lagomorfos. En ciertas modalidades, los anticuerpos totalmente humanos se producen en células hibridomas. En ciertas modalidades, los anticuerpos totalmente humanos se producen por recombinación. "Anticuerpo quimérico" se refiere a un anticuerpo que tiene una región variable del anticuerpo de una especie primaria fusionada a otra molécula, por ejemplo, una región constante del anticuerpo de otra especie secundaria. Ver, e.g., Patente USA No. 4,816,567 y Morrison et al., Proc Nati Acad Sel (USA), 81:6851-6855 (1985). En ciertas modalidades, las especies primarias pueden ser distintas de las especies secundarias. En ciertas modalidades, las especies primarias pueden ser iguales a las especies secundarias. En ciertas modalidades, los anticuerpos quiméricos se pueden formar a través de mutagénesis o injerto de las CDR. El injerto de las CDR por lo general involucra injertar las CDR de un anticuerpo con la especificidad deseada dentro de las regiones de la estructura (FRs) de otro anticuerpo. Se entiende que, un anticuerpo bivalente además de un anticuerpo "multi-específico" o "multi-funcional" , por lo general tiene cada uno de sus sitios de enlace idénticos. Un anticuerpo inhibe sustancialmente adhesión de un ligando a un receptor cuando un exceso de anticuerpo reduce la cantidad de un receptor enlazado a un ligando en por lo menos un 20%, 40%, 60%, 80%, 85% o más (como se midió en un ensayo de enlace competitivo in vitro) . El término "epitope" se refiere a una porción de una molécula capaz de estar enlazada por un agente de enlace especifico. Los epitopes ejemplares pueden incluir cualquier polipéptido determinante capaz de un enlace especifico a un objetivo. Los determinantes epitopes ejemplares incluyen, pero no están limitados a, agrupamientos de moléculas químicamente activos en la superficie, por ejemplo, pero no limitados a, amino ácidos, cadenas laterales de azúcar, grupos fosforiles, y grupos sulfoniles. En ciertas modalidades, los determinantes epitopes pueden tener características estructurales tridimensionales específicas, y/o características de carga específicas. En ciertas modalidades, un epítope es una región de un antígeno que está enlazada por un anticuerpo. Los epitopes pueden ser continuos o no continuos. En ciertas modalidades, los epitopes pueden ser miméticos en cuanto incluyen una estructura tridimensional que es similar a un epítope utilizado para generar el anticuerpo, pero sin embargo no incluyen ninguno o solo algunos de los residuos de amino ácidos encontrados en dicho epítope usado para generar el anticuerpo . Los términos "epitopes neutrali zadores y/o inhibidores" se refieren a un epítope, el cual cuando está enlazado por un agente de enlace específico resulta en una disminución de actividad biológica in vivo, in vitro, y/o in situ. En ciertas modalidades, se coloca o se asocia un epítope neutralizador con una región biológicamente activa de un obj etivo . El término "epítope activador" se refiere a un epítope, el cual cuando está enlazado por un agente de enlace específico resulta en la activación o mantenimiento de una actividad biológica in vivo, in vitro, y/o in situ. En ciertas modalidades, se coloca o se asocia un epitope activador con una región biológicamente activa de un ob etivo . El término "agente" se usa aquí para denotar un compuesto químico, una mezcla de compuestos químicos, una macromolécula biológica, o un extracto hecho de materiales biológicos . El término "agente farmacéutico o droga" como se usa aquí se refiere a un compuesto químico o composición capaz de inducir un efecto terapéutico deseado cuando se administra apropiadamente a un paciente. El término "modulador", como se usa aquí, es un compuesto que cambia o altera la actividad o función de una molécula. Por ejemplo, un modulador puede causar un incremento o disminución en la magnitud de cierta actividad o función de una molécula comparada a la magnitud de la actividad o función observada en la ausencia del modulador. En ciertas modalidades, un modulador es un inhibidor o antagonista, que disminuye la magnitud de por lo menos una actividad o función de una molécula. En ciertas modalidades, un modulador es un inhibidor o antagonista, que incrementa la magnitud de por lo menos una actividad o función de una molécula. Ciertas actividades ejemplares y funciones de una molécula incluyen, pero no están limitadas a, afinidad de enlace, actividad enzimática, o transducción de señal. Ciertos inhibidores ejemplares incluyen, pero no están limitados a, proteínas, péptidos, anticuerpos, pepticuerpos , carbohidratos y moléculas orgánicas pequeñas. Se describen pepticuerpos ejemplares, por ejemplo, en WO 01/83525. Como se usa aquí, "sustancialmente puro" significa que una especie objetiva la especie presente predominante (por ejemplo, en una base molar es más abundante que cualquier otra especie individual en la composición) . En ciertas modalidades, una fracción sustancialmente purificada es una composición en donde la especie objetivo incluye por lo menos un aproximado de 50 por ciento (en una base molar) de todas las especies macromoleculares presentes. En ciertas modalidades, una composición sustancialmente pura incluirá más de un 80%, 85%, 90%, 95%, or 99% de todas las especies macromoleculares presentes en la composición. En ciertas modalidades, la especie objetivo se purifica para una homogeneidad esencial (las especies contaminantes no se pueden detectar en la composición por métodos de detección convencionales) en donde la composición consiste esencialmente de una sola especie macromolecular . El término "paciente" incluye sujetos animales y humanos . "Agregación" se refiere a la formación de multímeros de moléculas de proteínas individuales a través de interacciones covalentes o no covalentes. La agregación puede ser reversible o irreversible. En ciertas instancias, cuando la pérdida de estructura terciaria o despliegue parcial ocurre, los residuos amino ácidos hidrofobicos que por lo general están escondidos dentro de la estructura de proteina plegada son expuestas a la solución. En ciertas instancias, esto promueve interacciones hidrofobicas-hidrofobicas entre moléculas de proteínas individuales, resultando en una agregación. Srisialam et al J Am Chem Soc 124 (9): 1884-8 (2002), por ejemplo, ha determinado que ciertos cambios de conformación de una proteína acompañan agregación, y que ciertas regiones de proteínas específicas se pueden identificadas como particularmente responsables de la formación de los agregados. En ciertas instancias, se puede inducir la agregación de proteínas por calor (Sun et al. J Agrie Food Chem 50(6): 1636-42 (2002)), solventes orgánicos (Srisailam et al., supra) , y reactivos tales como SDS y lisofosfolípidos (Hagihara et al., Biochem 41(3): 1020-6 (2002)). La agregación puede ser un problema significativo en la purificación y formulación de proteínas in Vitro. En ciertas instancias, después de la formación de agregados, se puede necesitar una solubilización con fuertes soluciones desnaturalizantes seguidas de una renaturalización y despliegue apropiados antes de que se reestablezca la actividad biológica.
Las unidades estructurales de anticuerpos por lo general incluyen un tetrámero. Cada uno de dichos tetrámeros por lo general está compuesto de dos pares idénticos de cadenas de polipéptidos , teniendo cada par una cadena de longitud total "ligera" (en ciertas modalidades, aproximadamente 25 kDa) , y una cadena de longitud total "pesada" (en ciertas modalidades, aproximadamente 50-70 kDa) . El término "cadena pesada" incluye cualquier polipéptido que tenga una secuencia de región variable suficiente para conferir especificidad para un antigeno particular. Una cadena pesada de longitud total incluye un dominio de región variable, VH, y tres dominios de región constante, CH1, CH2 , y CH3. El dominio VH está en el término amino del polipéptido, y el dominio CH3 está en el término carboxi. El término "cadena pesada", como se usa aquí, incluye una cadena pesada de anticuerpos de longitud total y fragmentos de la misma. El término "cadena ligera" incluye cualquier polipéptido que tenga una secuencia de región variable suficiente para conferir especificidad para un antigeno particular. Una cadena ligera de longitud total incluye un dominio de región variable, VL, y un dominio de región constante, CL. Asi como la cadena pesada, el dominio de región variable de la cadena ligera está en el término amino del polipéptido. El término "cadena ligera", como se usa aquí, incluye una cadena pesada de anticuerpos de longitud total y fragmentos de la misma.
La porción amino-terminal de cada cadena por lo general incluye una región variable (VH en la cadena pesada y VL en la cadena ligera) de aproximadamente 100 a 110 o más amino ácidos que por lo general es responsable del reconocimiento de antigenos. La porción carboxi-terminal de cada cadena por lo general define una región constante (dominios CH en la cadena pesada y CL en la cadena ligera) que puede ser la responsable de la función de efecto. Las funciones de efecto de los anticuerpos incluyen la activación de complementación y estimulación de opsonofagocitosis . Las cadenas ligeras humanas por lo general se clasifican en kappa y lambda Las cadenas pesadas por lo general se clasifican en mu, delta, gamma, alfa, o epsilon, y definen el isotipo del anticuerpo como IgM, IgD, IgG, IgA, e IgE, respectivamente. IgG tienen algunas subclases, incluyendo, pero no limitadas a, IgGl, IgG2, IgG3, e IgG4. IgM tienen subclases incluyendo, pero no limitadas a, IgMl e IgM2. IgA es subdivida similarmente en subclases incluyendo, pero no limitadas a, IgAl e IgA2. Dentro de las cadenas de longitud total pesadas y livianas, las regiones constantes y variables están unidas por una región "J" de aproximadamente 12 o más amino ácidos, con la cadena pesada también incluyendo una región "D" de aproximadamente unos 10 o más amino ácidos. Ver, e.g., Fundamental Immunology Ch. 7 (Paul, W. , ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y. (1989)). Las regiones variables de cada par de cadena ligera/pesada forman el sitio de enlace del antigeno. Las regiones variables por lo general exhiben la misma estructura general de regiones de estructura relativamente conservadas (FR) unida por tres regiones hipervariables , también llamadas regiones determinantes de complementariedad o CDR. Las CDRs de las cadenas ligeras y pesadas de cada par por lo general están alineadas por las regiones de estructura, las cuales pueden permitir el enlace a un epitope especifico. De la Terminal-N a la Terminal-C, ambas regiones variables de cadenas ligeras y pesadas por lo general incluyen los dominios FR1, CDR1, FR2 , CDR2 , FR3 , CDR3, y FR . La asignación de amino ácidos a cada dominio por lo general está hecha de acuerdo con las definiciones de Las Secuencias de Proteínas de Interés Inmunológico de Kabat (Institutos Nacionales de Salud, Bethesda, Md. (1987 y 1991)), o Chothia & Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); Chothia et al. Nature 342:878-883 (1989). Como se discutió arriba, hay varios tipos de fragmentos de anticuerpos. Un fragmento Fab se conforma de una cadena ligera y las regiones CH1 y variables de una cadena pesada. La cadena pesada de una molécula Fab no puede formar un enlace de disulfuro con otra molécula de cadena pesada. Un fragmento Fab contiene una cadena ligera y una cadena pesada que contiene más de la región constante, entre los dominios CH1 y CH2, tal así que una intercadena de enlace de bisulfuro se puede formar entrer dos cadenas pesadas para formar una molécula F(ab')2. Un fragmento Fab es similar a una molécula F(ab')2, excepto que la región constante en las cadenas pesadas de la molécula se extiende hasta el final del dominio CH2. La región Fv incluye las regiones variables de ambas, cadenas ligeras y pesadas, pero carece de las regiones constantes. Un solo fragmento variable de cadena (scFv) incluye regiones variables de ambas cadenas ligeras y pesadas en donde las regiones variables de las cadenas pesadas y ligeras se fusionan para formar una sola molécula que forma una región de enlace de antígeno. En ciertas modalidades, un scFv incluye una sola cadena de polipéptidos . Un anticuerpo de una sola cadena incluye un scFv. En ciertas modalidades, un anticuerpo de una sola cadena incluye polipéptidos adicionales fusionados al scFv, tales como, por ejemplo y sin limitación, una o más regiones constantes. Se discuten anticuerpos de una sola cadena ejemplares, por ejemplo, en WO 88/01649 y Nos. de Patente USA. 4,946,778, 5,260,203, y 5,869,620. Un fragmento Fe contiene los dominios CH2 y CH3 de una cadena pesada y contiene toda o parte de la región constante entre los dominios CH1 y CH2. En ciertas modalidades, toda o parte de la región constante entre los dominios CH1 y CH2 comprende una o más cisteinas las cuales permiten la formación de uno o más intercadenas de enlaces de bisulfuro entre los fragmentos Fe. En ciertas modalidades, un anticuerpo de una sola cadena es un Maxibody. El término "Maxibody" incluye un scFv fusionado (puede ser por un anexo directo o enlazador) a un fragmento Fe o Fe. En ciertas modalidades, un anticuerpo de una sola cadena es un Maxibody que enlaza huEpor ("un Maxibody huEpoR) . En ciertas modalidades, un anticuerpo de una sola cadena es un Maxibody que enlaza a y activa huEpor. Las fusiones de dominios Fe en forma Ig se exponen en la Patente USA No. 6, 117, 655. En ciertas modalidades, se pueden generar anticuerpos usando plataformas alternativas. El término "plataforma alternativa" se refiere a una estructura distinta a la estructura de anticuerpos tradicional de dos cadenas ligeras y dos cadenas pesadas, en donde la estructura puede llevar uno o más amino ácidos alterados y/o uno o más inserciones de secuencia (tales como las secuencias CDR) que confieren en la proteina resultante la capacidad de enlazarse específicamente a un objetivo por lo menos. En ciertas modalidades, una plataforma alternativa lleva uno o más CDR para generar un anticuerpo. En ciertas modalidades, una plataforma alternativa se basa en una proteína humana. En ciertas modalidades, una plataforma alternativa se basa en la proteína de un mamífero. En ciertas modalidades, una plataforma alternativa se basa en una proteína de una eucariota. En ciertas modalidades, una plataforma alternativa se basa en una proteina procariótica . Ciertos ejemplos de anticuerpos con plataformas alternativas incluyen, pero no están limitados a, nanocuerpos, aficuerpos, microcuerpos , evicuerpos y anticuerpos de dominio. Ciertos ejemplos de plataformas alternativas útiles para crear anticuerpos incluyen, pero no están limitadas a, anticuerpos de un solo dominio de camélidos; inhibidores de proteasa, transferrina de suero humano; CTLA-4; fibronectinas , incluyendo pero limitadas a, dominios de fibronectina tipo III; dominios semejantes a lectina tipo C; proteínas de la familia lipocalina; proteínas de repetición ankyrin; el dominio-Z de la proteína A; ?-cristalina; Tendamistat; Neocarzinostatin ; CBM4-2; el receptor de célula-T; Im9; proteínas AR designadas; proteínas TPR designadas; dominios dedo de zinc; Polipéptido Pancreático Aviar; GCN4; dominios WW; dominios de Homología Src 3 (SH3); dominios de Homología Src 2 (SH2); dominios PDZ; TEM-1 ß-lactamasa; GFP; Tioredoxina; nucleasa de Estafilococo; dominios de dedos PHD; Cl-2; BPTI; APPI; HPSTI; Ecotina; LACI-Dl; LDTI; MTI-II; toxinas de escorpión, Péptido A de Defensina de Insectos; EETI-II; Min-23; CBD; PBP; Citocroma b562 Transferrina; Receptor LDL del Dominio A; y ubiquitina. Ciertos ejemplos de plataformas alternatives se discuten en Hey et al., "Proteínas de enlace de no- anticuerpos artificiales para aplicaciones farmacéuticas e industriales" Tendencias en Biotecnología, 23:514-22 (2005) y Binz et al., "Desarrollando proteínas de enlace nuevas de dominios no inmunológicos" Biotecnología de la Naturaleza , 23: 1257-68 (2005) . En ciertas modalidades, los dominios funcionales, CH1, CH2 , CH3, y secuencias intervinientes , se pueden mezclar para crear una región constante de anticuerpos distinta. Por ejemplo, en ciertas modalidades, tales regiones constantes híbridas se pueden optimizar una vida media en sueros, para el conjunto y pliegue del tetramero del anticuerpo, y/o para una función de efector mejorada. En ciertas modalidades, se pueden producir regiones constantes de anticuerpos modificadas introduciendo mutaciones de un punto dentro la secuencia de amino ácidos de la región constante y probando el anticuerpo resultante para un mejoramiento de las calidades, por ejemplo, uno o más de aquellos citados arriba.
En ciertas modalidades, un anticuerpo de un isotipo se convierte en un isotipo diferente por medio de un cambio de isotipos sin perder su especificidad por una molécula objetiva. Algunos métodos para cambio de isotipos incluyen, pero no están limitados a, técnicas recombinantes directas (ver e.g., Patente de USA No .4 , 816, 397 ) y técnicas de fusión de célula (ver e.g., Patente USA No .5, 916, 771 ) , entre otros. En ciertas modalidades, un anticuerpo se puede convertir de una subclase a otra subclase utilizando técnicas descritas arriba o de otro modo conocidas por la ciencia sin perder su especificidad por una molécula objetivo particular, incluyendo, pero no limitadas a, conversión de una subclase IgG2 a una subclase IgGl, IgG3, o IgG . En ciertas modalidades, se proveen anticuerpos quiméricos que incluyen por lo menos una porción de una secuencia humana y otras especies. En ciertas modalidades, dicho anticuerpo quimérico puede resultar en una respuesta de inmunidad más reducida en un huésped que un anticuerpo sin las secuencias de anticuerpo de este huésped. Por ejemplo, en ciertas instancias, un animal de interés se puede usar como un modelo para una enfermedad humana en particular. Para estudiar el efecto de un anticuerpo en esta enfermedad en el huésped animal, un podría usar un anticuerpo de especies diferentes. Pero, en ciertas instancias, dichos anticuerpos de otras especies, pueden sacar una respuesta inmune a los anticuerpos por si mismos en el huésped animal, impidiendo así la evaluación de estos anticuerpos. En ciertas modalidades, el reemplazar parte de la secuencia de amino ácidos de un anticuerpo con una secuencia de amino ácidos de anticuerpos del huésped animal puede disminuir la magnitud de la respuesta anti-anticuerpo del huésped animal.
En ciertas modalidades, un anticuerpo quimérico incluye una cadena ligera y una pesada, en donde las regiones variables de la cadena ligera y la cadena pesada están de una primera especie y las regiones constantes de la cadena ligera y pesada son de una segunda especie. En ciertas modalidades, la región constante de la cadena pesada del anticuerpo es una región constante de la cadena pesada del anticuerpo de una especie aparte de la humana. En ciertas modalidades, la región constante de la cadena ligera del anticuerpo es una región constante de la cadena ligera del anticuerpo de una especie aparte de la humana. En ciertas modalidades, la región constante de la cadena pesada del anticuerpo es una región constante de la cadena pesada del anticuerpo, y la región variable de la cadena pesada del anticuerpo es una región variable de la cadena pesada del anticuerpo de una especie aparte de la humana. En ciertas modalidades, la región constante de la cadena ligera del anticuerpo es una región constante de la cadena ligera del anticuerpo, y la región variable de la cadena ligera del anticuerpo es una región variable de la cadena ligera del anticuerpo de una especie aparte de la humana. Regiones contantes ejemplares del anticuerpo incluyen, pero no están limitadas a, una región constante de un anticuerpo humano, una región constante del anticuerpo de un mono cinomolgo, una región constante del anticuerpo de un ratón, y una región constante del anticuerpo de un conejo. Regiones variables de anticuerpos ejemplares incluyen, pero no están limitadas a, regiones variables de anticuerpos humanos, regiones variables de anticuerpos de ratón, regiones variables de anticuerpos de cerdo, regiones variables de anticuerpos de conejillos de indias, regiones variables de anticuerpos de un mono cinomolgo, y una región variable de anticuerpos de conejo. En ciertas modalidades, las regiones de estructura de la región variable en la cadena pesada y ligera se pueden reemplazar con regiones de estructura derivadas de otras secuencias de anticuerpos. Ciertos anticuerpos quiméricos ejemplares se pueden producir por métodos bien conocidos para aquellos de habilidad ordinaria en la ciencia. En ciertas modalidades, el polinucleótido de las primeras especies que codifica la región variable de la cadena pesada y el polinucleótido de las segundas especies que codifica la región constante de la cadena pesada se pueden fusionar. En ciertas modalidades, el polinucleótido de la primera especie que codifica la región variable de la cadena liviana y la secuencia del nucleótido de la segunda especie que codifica la región constante de la cadena ligera pueden ser fusionados. En ciertas modalidades, estas secuencias de nucleótidos fusionadas se pueden introducir dentro de una célula ya sea en un vector de expresión simple (por ejemplo, un plásmido) o en vectores de expresión múltiple. En ciertas modalidades, una célula que contiene por lo menos un vector de expresión se puede utilizar para hacer polipéptidos . En ciertas modalidades, estas secuencias de nucleótidos fusionadas se pueden introducir dentro de una célula ya sea en vectores de expresión separada o en vectores de expresión simple. En ciertas modalidades, la célula huésped expresa ambos la cadena ligera y la cadena pesada, las cuales se combinan para producir un anticuerpo. En ciertas modalidades, una célula que contiene por lo menos un vector de expresión se puede utilizar para hacer un anticuerpo. Métodos ejemplares para producir y expresar anticuerpos se discuten a continuación. En ciertas modalidades, las modificaciones conservadoras a las cadenas ligeras y pesadas de un anticuerpo (y modificaciones correspondientes a los nucleótidos de codificación) producirán anticuerpos que tendrán características químicas y funcionales similares a aquellas del anticuerpo original. En contraste, en ciertas modalidades, se pueden lograr modificaciones sustanciales en las características funcionales y químicas de un anticuerpo seleccionando sustituciones en la secuencia de amino ácidos de las cadenas ligeras y pesadas que difieren significativamente en su efecto de mantener (a) la estructura del núcleo molecular en el área de sustitución, por ejemplo, como una conformación helicoidal o de lamina, (b) la carga o hidrofobicidad de la molécula en el sitio objetivo, o (c) el grueso de la cadena lateral.
Ciertas sustituciones deseadas de amino ácidos (ya sean conservadoras o no conservadoras) se pueden determinar por aquellos expertos en la materia en el momento en que se deséen dichas sustituciones. En ciertas modalidades, las sustituciones de amino ácidos se pueden usar para identificar importantes residuos de anticuerpos, tales como aquellos que pueden incrementar o disminuir la afinidad de los anticuerpos o la función efectora de los anticuerpos. Se pueden producir varios anticuerpos específicos a un antígeno en una serie de maneras. En ciertas modalidades, un antígeno que contiene un epítope de interés se puede introducir dentro de un huésped animal (por ejemplo un ratón) , y así producir anticuerpos específicos a este epítope. En ciertas instancias, los anticuerpos específicos a un epítope de interés se pueden obtener de muestras biológicas tomadas de huéspedes que hayan sido expuestos naturalmente al epítope. En ciertas instancias, la introducción de inmunoglobulina humana (lg) loci dentro de ratones en los cuales se hayan inactivado los genes endógenos lg, ofrece la oportunidad de obtener anticuerpos monoclonales humanos (MAbs). En ciertas modalidades, los anticuerpos específicos a un epítope de interés se pueden obtener por filtración In Vitro con estudios de cadenas ligeras y pesadas, por ejemplo, técnica Phage Display. Un anticuerpo biespecífico o bifuncional incluye dos diferentes pares de cadena ligeras/pesadas y dos sitios de enlace diferentes. Los anticuerpos biespecificos se pueden producir por una variedad de métodos incluyendo, pero no limitados a, fusión de hibridomas o enlace de fragmentos Fab . Ver, por ejemplo, Songsivilai & Lachmann Clin. Exp. Immunol. 79: 315-321 (1990), Kostelny et al. J. Immunol. 148:1547-1553 (1992) . En ciertas modalidades, los anticuerpos se pueden expresar en lineas de células aparte de las lineas de células hibridomas. En ciertas modalidades, las secuencias que codifican anticuerpos particulares, incluyendo anticuerpos quiméricos, se pueden usar para la transformación de células huéspedes mamiferas. De acuerdo a ciertas modalidades, las transformación se puede dar por cualquier método conocido para introducir polinucleótidos dentro de una célula huésped, incluyendo, por ejemplo empaquetar el polinucleótido en un virus (o dentro de un vector viral) y transduciendo una célula huésped con el virus o transíectando un vector utilizando procedimientos conocidos por la ciencia, como se ejemplifica en los números de la Patente de USA 4,399,216; 4,912,040; 4,740,461; y 4,959,455. En ciertas modalidades, un vector de expresión comprende una secuencia de polinucleótidos codificando un anticuerpo. En ciertas modalidades, se provee un método para hacer un polipéptido que incluye el producir el polipéptido en una célula que incluye un vector de expresión en condiciones apropiadas para expresar el polinucleótido contenido ahi dentro para producir el polipéptido. En ciertas modalidades, se provee un método para hacer un polipéptido que incluye el producir el anticuerpo en una célula que incluye por lo menos un vector de expresión en condiciones apropiadas para expresar los polinucleótidos contenidos ahi dentro para producir el anticuerpo. En ciertas modalidades, una proteina scFv-Fc se expresa por una célula huésped. En ciertas modalidades, por lo menos algunas de las proteínas scFv-Fc expresadas en una célula huésped forman multimeros, incluyendo, pero no limitados a, dimeros. En ciertas modalidades, las proteínas scFV-Fc en una célula huésped incluyen monómeros y multimeros. En ciertas modalidades, un vector se transfecta en una célula. En ciertas modalidades, el procedimiento de transfección utilizado puede depender del huésped a ser transformado. Ciertos métodos para la introducción de polinucleótidos heterológicos dentro de células mamíferas son conocidos por la ciencia e incluyen, pero no están limitados a, transfección mediada por dextrán, precipitación de fosfato de calcio, transfección mediante polibreno, fusión de protoplasto, electroporación, encapsulado del (los) polinucleótido ( s ) en liposomas, y microinyección directa del DNA dentro del núcleo. Ciertas lineas de células mamiferas disponibles como huéspedes para expresión son conocidas por la ciencia e incluyen, pero no están limitadas a, muchas lineas de células inmortalizadas disponbibles a través del (ATCC) Recolección de Cultura de Tipo Americana, incluyendo pero no limitada las células de ovario de Hámster chino (CHO) , células E5, células HeLa, células de riñon de ratón bebé (BHK) , células de riñon de mono (COS), células de carcinoma hepatocelular humano (e.g., Hep G2), células NSO, células SP20, células Per C6, células 293, y un número de lineas de células adicionales. En ciertas modalidades, se pueden seleccionar lineas de células determinando cuales lineas de células tienen niveles de expresión altos y producen anticuerpos con propiedades de enlace de antigenos constitutivo. En ciertas modalidades, los vectores pueden ser transfectados dentro de una célula huésped que incluye secuencias de control que son ligadas operativamente a un polinucleótido codificando un anticuerpo. En ciertas modalidades, las secuencias de control facilitan la expresión del polinucleótido ligado, resultando asi en la producción del polipéptido codificado por el polinucleótido enlazado. En ciertas modalidades, el vector también incluye secuencias de polinucleótidos que permiten una replica independiente del cromosoma en la célula huésped. Los vectores ejemplares incluyen, pero no están limitados a, plásmidos (por ejemplo BlueScript, puc, etc.)? cósmicos, y YACS. En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV DSVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCARVSRGGSYSDWGQGTLVTVSS. (SEQ ID. NO. : 1) , y QSVLTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVS YQQHPGKAPKL IYEVSKRPSGVP DRFSGSKSGNTASLTVSGLQPEDEADYYCSSYAGRNWVFGGGTQLTVL (SEQ ID. NO. : 2) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSY MS VRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV DSVKGRFTISRDNAKNSVYLQ NSLRAEDTAVYYCARVSRGGSYSDWGQGTLVTVSS (SEQ ID. NO. : 3) , y QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYIYVS YQQHPGKAPKL IYDVSRRPSGIS DRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCNSYTTLSTWLFGGGTKVTVL (SEQ ID. NO. : 4) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV DSVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCARVSRGGSYSDWGKGTLVTVSS (SEQ ID. NO. : 5) , y QSALTQPASVSGSPGQSI I ISCTGTRSDIGGYNYVSWYQHHPGRAPKLI IFDVNNRPSGVS HRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCNSFTDSRTWLFGGGTKLTVL (SEQ ID.
NO. : 6) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYA DSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKDRVAVAGKGSYYFDSWGRGTTVTV SS (SEQ ID. NO. : 7) , y QSVLTQPPSVSEAPGQRVTIACSGSSSNIGNNAVSWYQQLPGKAPTLLIYYDNLLPSGVSD RFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLNDWVFGGGTKVTVL (SEQ ID. NO. : 8) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYN DYAVSVKSRMTIKADTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARDEGPLDY GQGTLVTVSA (SEQ ID. NO. : 9) , y QAVLTQPSSVSGAPGQRVTISCTGSSSNLGTGYDVH YQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVP DRFSGSKSDTSGLLAITGLQAEDEATYYCQSYDFSLSAMVFGGGTKVTVL (SEQ ID. NO. : 10) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: QVQLQQSGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISNHGKSTYYA DSVKGRFTISRDNSKHMLYLQMNSLRADDTALYYCARDIALAGDYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO. : 56) , y DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLN YQQLPGKVPKLLIYGASKLQSGVPSR FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQDYNYPLTFGPGTRLEIK (SEQ ID NO.: 58).
En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: QVQLQESGPGLVRPSGTLSLTCAVSGGSIGSSNWWSWVRQAPGKGLEWIGEISQSGSTNYN PSLKGRVTISLDRSRNQLSLKLSSVTAADTAVYYCARQLRSIDAFDIWGPGTTVTVSA (SEQ ID NO. : 60) , y SYVLTQPPSVSVSPGLTATITCSGDKLGDKYASWYQQKPGQSPVLVIYQDRKRPSGIPERF SGSNSGNTATLTISGTQAVDEADYYCQA DSDTSYVFGTGTQLTVL (SEQ ID NO.: 62) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGYINNYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIHYSGSTYYNP SLKSRVTISEDTSKNQFSLKLSSATAADTAVYYCARVGYYYDSSGYNLA YFDLWGRGTLV TVSA (SEQ ID NO. : 6 ) , y SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDNLRSYSATWYQQKPGQAPVLVLFGENNRPSGI PDRF SGSKSGDTAVLTITGTQTQDEADYYCTSRVNSGNHLGVFGPGTQLTVL (SEQ ID NO. : 66) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: EVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYY HWVRQAPGQGLEW GWINPNSGGTNYA QKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARGGHMTTVTRDAFDIWGQGTMVTVS A (SEQ ID NO. : 68) , y SSELTQDPAVSVALGQTIRITCQGDSLRYYYATWYQQKPGQAPILVIYGQNNRPSGVPDRF SGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCGTWDSSVSASWVFGGGTKVTVL (SEQ ID NO. : 70) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: QVQLQQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGSTNYA QKFLGRVTMTRDTSISTAYMELSSLRSDDTAVYYCARGHSGDYFDY GQGTLVTVSA ( SEQ ID NO. : 72) y EIVLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSSWLA YQQRPGQAPKLLIYAARLRGGGPSRF SGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYFCQQSYSTPISFGGGTKLEIK (SEQ ID NO.: 74) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: QVQLQESGSGLARPSQTLSLTCAVSGGSISSSAFSWNWIRQPPGKGLEWIGYIYHTGITDY NPSLKSRVTISVDRSKNQFSLNVNSVTAADTAVYYCARGHGSDPAWFDPWGKGTLVTVSS (SEQ ID NO. : 76) y QSVLTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYASWYQQRPGQSPVLVIYRDTKRPSGIPERF SGSNSGNTATLTISGTQAVDEADYYCQAWDSTTSLVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO.: 78) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLE VANIKPDGSEKYYV DSVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCARVSRGGSYSDWGRGTMVTVSS (SEQ ID NO. : 80) y QSVLTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGFNYVS YQKYPGKAPKLVIYEVSKRPSGVP DRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCSSWAPGKNLFGGGTKLTVL (SEQ ID NO. : 82) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMS VRQAPGKGLE VSGISGSGSSEGGT YYADSVKGRFTLSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALYYCVKDRPSRYSFGYYFDYWGRGTLV TVSS (SEQ ID NO. : 84) y LPVLTQPPSVSVSPGQTASIACSGNKLGDKYVSWYQQKPGQSPLLVIYQDTKRPSGI PERF SGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSTDVVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO.: 86) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTFSKYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV ESVKGRFTISRDNAKNSVYLQ NSVRAEDTAVYYCARVSRGGSFSDWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO. : 88) y QSVLTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVS YQQHPDKAPRLMIYDVNKRPSGVP DRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEAHYYCNSYAGSNNWVFGGGTQLTVL (SEQ ID NO. : 90) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTFSKYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV ESVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSVRAEDTAVYYCARVSRGGSFSD GQGTLVTVSS (SEQ ID NO. : 92) y QSVLTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVS YQQHPGRAPKLI IYEVSKRPSGVP DRFSGSKSGNTASLTVSGLQADDEADYYCNSYAGSIYVFGSGTKVTVL (SEQ ID NO. : 94) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: QVQLVQSGAEIKKPGASVKVSCKTFGSPFSTNDIHWVRQAPGQGLEWMGI IDTSGAMTRYA QKFQGRVTVTRETSTSTVYMELSSLKSEDTAVYYCAREGCTNGVCYDNGFDIWGQGTLVTV SS (SEQ ID NO. : 96) y DIQMTQSPSTLSASIGDRVTITCRASEGIYHWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLASGAPSR FSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQQYSNYPLTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO.: 98) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTFSKYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV ESVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSVRAEDTAVYYCARVSRGGSFSDWGRGTMVTVSS (SEQ ID NO. : 100) y QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGSYNLVSWYQQHPGKVPKLI IYEVSNRPSGVS HRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSLTSSGTWVFGGGTKVTVL (SEQ ID NO. : 102) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTFSKY MT VRQAPGKGLE VANI PDGSEKYYV ESVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSVRAEDTAVYYCARVSRGGSFSDWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO. : 104) y QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGAYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVARRPSGVP DRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCSSYAGSNNFAVFGRGTKLTVL (SEQ ID NO. : 106) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFRFSSY MTWVRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV DSVKGRFTMSRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCARVSRGGSFSDWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO. : 108) y QSALTQPASVSGSPGQSITI PCTGTSSDIGTYDYVSWYQQHPGKVPKVI IYEVTNRPSGVS NRFSGSKSGNTASLTISGLQADDEADYYCNSFTKNNTWVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO. : 110) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: QVQLVESGGGLVQPGRSLILSCAVSGFTFSKYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV ESVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSVRAEDTAVYYCARVSRGGSFSDWSQGTLVTVSS (SEQ ID NO. : 112) y QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSGDVGAYNYVSWYQQYPGKAPKLMIYEVSKRPSGVP DRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCNSYRGSNGPWVFGGGTKVTVL (SEQ ID NO. : 114) . En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV DSVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCARVSRGGSYSDWGQGTLVTVSS. (SEQ ID. NO. : 1) , y QSVLTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVS YQQHPGKAPKLMIYEVSKRPSGVP DRFSGSKSGNTASLTVSGLQPEDEADYYCSSYAGRNWVFGGGTQLTVL (SEQ ID.
NO. : 2) . En ciertas modalidades se provee un fragmento de una variable de cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKPDGS EKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCARVSRGGSYSDWGQGTLVTVS S (SEQ ID. NO. : 3) , y QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYIYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSRRPSGIS DRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCNSYTTLSTWLFGGGTKVTVL (SEQ ID. NO. : ) . En ciertas modalidades se provee un fragmento de una variable de cadena simple que se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV DSVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCARVSRGGSYSD GKGTLVTVSS (SEQ ID. NO. : 5) , y QSALTQPASVSGSPGQSI I ISCTGTRSDIGGYNYVSWYQHHPGRAPKLI I FDVNNRPSGVS HRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCNSFTDSRTWLFGGGTKLTVL (SEQ ID. NO. : 6) . En ciertas modalidades se provee un fragmento de una variable de cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYA DSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKDRVAVAGKGSYYFDSWGRGTTVTV SS (SEQ ID. NO. : 7) , y QSVLTQPPSVSEAPGQRVTIACSGSSSNIGNNAVSWYQQLPGKAPTLLIYYDNLLPSGVSD RFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLNDWVFGGGTKVTVL (SEQ ID. NO. : 8) . En ciertas modalidades se provee un fragmento de una variable de cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAA N IRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYN DYAVSVKSR TIKADTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARDEGPLDYWGQGTLVTVSA (SEQ ID. NO. : 9) , y QAVLTQPSSVSGAPGQRVTISCTGSSSNLGTGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVP DRFSGSKSDTSGLLAITGLQAEDEATYYCQSYDFSLSA VFGGGTKVTVL (SEQ ID. NO. : 10) . En ciertas modalidades se provee un fragmento de una variable de cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: QVQLQQSGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISNHGKSTYYA DSVKGRFTI SRDNSKHMLYLQMNSLRADDTALYYCARDIALAGDY GQGTLVTVSA (SEQ ID NO. : 56) , y DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQLPGKVPKLLIYGASKLQSGVPSR FSGSGSGTDFTLTI SSLQPEDFATYYCLQDYNYPLTFGPGTRLEIK (SEQ ID NO. : 58) . En ciertas modalidades se provee un fragmento de una variable de cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: QVQLQESGPGLVRPSGTLSLTCAVSGGSIGSSNWWSWVRQAPGKGLEWIGEISQSGSTNYN PSLKGRVTISLDRSRNQLSLKLSSVTAADTAVYYCARQLRSIDAFDIWGPGTTVTVSA (SEQ ID NO. : 60) , y SYVLTQPPSVSVSPGLTA ITCSGDKLGDKYASWYQQKPGQSPVLVIYQDRKRPSGI PERF SGSNSGNTATLTISGTQAVDEADYYCQAWDSDTSYVFGTGTQLTVL (SEQ ID NO. : 62) .
En ciertas modalidades se provee un fragmento de una variable de cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGYINNYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIHYSGSTYYNP SLKSRVTISEDTSKNQFSLKLSSATAADTAVYYCARVGYYYDSSGYNLAWYFDLWGRGTLV TVSA (SEQ ID NO.: 64), y SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDNLRSYSATWYQQKPGQAPVLVLFGENNRPSGI PDRFSGSKSGDTAVLTITGTQTQDEADYYCTSRVNSGNHLGVFGPGTQLTVL (SEQ ID NO. : 66) . En ciertas modalidades se provee un fragmento de una variable de cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: EVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLE MGWINPNSGGTNYA QKFQGRVTMTRDTSISTAY ELSRLRSDDTAVYYCARGGH TTVTRDAFDIWGQGTMVTVS A (SEQ ID NO. : 68) , y SSELTQDPAVSVALGQTIRITCQGDSLRYYYATWYQQKPGQAPILVIYGQNNRPSGVPDRF SGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCGTWDSSVSASWVFGGGTKVTVL (SEQ ID NO. : 70) . En ciertas modalidades se provee un fragmento de una variable de cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: QVQLQQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSGYYMHWVRQAPGQGLEW G INPNSGSTNYA QKFLGRVT TRDTSISTAYMELSSLRSDDTAVYYCARGHSGDYFDYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO. : 72) y EIVLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSSWLAWYQQRPGQAPKLLIYAARLRGGGPSRF SGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYFCQQSYSTPISFGGGTKLEIK (SEQ ID NO.: 74) . En ciertas modalidades se provee un fragmento de una variable de cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: QVQLQESGSGLARPSQTLSLTCAVSGGSISSSAFSWNWIRQPPGKGLEWIGYIYHTGITDY NPSLKSRVTISVDRSKNQFSLNVNSVTAADTAVYYCARGHGSDPAWFDPWGKGTLVTVSS (SEQ ID NO. : 76) y QSVLTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYASWYQQRPGQSPVLVIYRDTKRPSGIPERF SGSNSGNTATLTISGTQAVDEADYYCQAWDSTTSLVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO.: 78) . En ciertas modalidades se provee un fragmento de una variable de cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYW S VRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV DSVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCARVSRGGSYSDWGRGTMVTVSS (SEQ ID NO. : 80) y QSVLTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGFNYVSWYQKYPGKAPKLVIYEVSKRPSGVP DRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCSSWAPGKNLFGGGTKLTVL (SEQ ID NO. : 82) . En ciertas modalidades se provee un fragmento de una variable de cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSGISGSGSSEGGT YYADSVKGRFTLSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALYYCVKDRPSRYSFGYYFDY GRGTLV TVSS (SEQ ID NO. : 84) y LPVLTQPPSVSVSPGQTASIACSGNKLGDKYVSWYQQKPGQSPLLVIYQDTKRPSGI PERF SGSNSGNTATLTISGTQA DEADYYCQAWDSSTDVVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO.: 86) . En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTFSKYWMT VRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV ESVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSVRAEDTAVYYCARVSRGGSFSD GQGTMVTVSS (SEQ ID NO. : 88) y QSVLTQPPSASGSPGQSVTI SCTGTSSDVGGY YVSWYQQHPDKAPRLMIYDVNKRPSGVP DRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEAHYYCNSYAGSNNWVFGGGTQLTVL (SEQ ID NO. : 90) . En ciertas modalidades se provee un fragmento de una variable de cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTFSKYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV ESVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSVRAEDTAVYYCARVSRGGSFSDWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO. : 92) y QSVLTQPPSASGSPGQSVTI SCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGRAPKLI IYEVSKRPSGVP DRFSGSKSGNTASLTVSGLQADDEADYYCNSYAGSIYVFGSGTKVTVL (SEQ ID NO. : 94) . En ciertas modalidades se provee un fragmento de una variable de cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: QVQLVQSGAEIKKPGASVKVSCKTFGSPFSTNDIHWVRQAPGQGLE MGI IDTSGAMTRYA QKFQGRVTVTRETSTSTVY ELSSLKSEDTAVYYCAREGCTNGVCYDNGFDI GQGTLVTV SS (SEQ ID NO. : 96) y DIQMTQSPSTLSASIGDRVTITCRASEGIYHWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLASGAPSR FSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQQYSNYPLTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO. : 98) . En ciertas modalidades se provee un fragmento de una variable de cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTFSKYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV ESVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSVRAEDTAVYYCARVSRGGSFSDWGRGTMVTVSS (SEQ ID NO. : 100) y QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGSYNLVSWYQQHPGKVPKLI IYEVSNRPSGVS HRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSLTSSGTWVFGGGTKVTVL (SEQ ID NO. : 102) . En ciertas modalidades se provee un fragmento de una variable de cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTFSKY MTWVRQAPGKGLE VANIKPDGSEKYYV ESVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSVRAEDTAVYYCARVSRGGSFSDWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO. : 104) y QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGAYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVARRPSGVP DRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCSSYAGSNNFAVFGRGTKLTVL (SEQ ID NO. : 106) . En ciertas modalidades se provee un fragmento de una variable de cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFRFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV DSVKGRFTMSRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCARVSRGGSFSD GQGTLVTVSS (SEQ ID NO. : 108) y QSALTQPASVSGSPGQSITI PCTGTSSDIGTYDYVS YQQHPGKVPKVI IYEVTNRPSGVS NRFSGSKSGNTASLTISGLQADDEADYYCNSFTKNNT VFGGGTKLTVL (SEQ ID NO. : 110) . En ciertas modalidades se provee un fragmento de una variable de cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: QVQLVESGGGLVQPGRSLILSCAVSGFTFSKYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV ESVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSVRAEDTAVYYCARVSRGGSFSDWSQGTLVTVSS (SEQ ID NO. : 112) y QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSGDVGAYNYVSWYQQYPGKAPKL I YEVSKRPSGVP DRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCNSYRGSNGPWVFGGGTKVTVL (SEQ ID NO. : 114) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: SYWMS (SEQ ID NO. : 11); NIKPDGSEKYYVDSVKG (SEQ ID NO.: 12); y VSRGGSYSD (SEQ ID NO.: 13) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: TGTSSDVGGYNYVS (SEQ ID NO. : 14); EVSKRPS (SEQ ID NO.: 15); y SSYAGRNWV (SEQ ID NO. : 16) .
En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: SYW S (SEQ ID NO. : 11) ; NIKPDGSEKYYVDSVKG (SEQ ID NO.: 12) ; VSRGGSYSD (SEQ ID NO. : 13); TGTSSDVGGYNYVS (SEQ ID NO. : 14) ; EVSKRPS (SEQ ID NO. : 15) ; y SSYAGRNWV (SEQ ID NO.: 16) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: TGTSSDVGGYIYVS (SEQ ID NO. : 17); DVSRRPS (SEQ ID NO.: 18); y NSYTTLSTWL (SEQ ID NO. : 19) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: SYWMS (SEQ ID NO. : 11) ; NIKPDGSEKYYVDSVKG (SEQ ID NO.: 12) ; VSRGGSYSD (SEQ ID NO. : 13) ; TGTSSDVGGYIYVS (SEQ ID NO. : 17); DVSRRPS (SEQ ID NO. : 18) ; y NSYTTLSTWL (SEQ ID NO.: 19) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: TGTRSDIGGYNYVS (SEQ ID NO.: 20); FDVNNRPS (SEQ ID NO.: 21); y NSFTDSRTWL (SEQ ID NO. : 22) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: SYWMS (SEQ ID NO.: 11) ; NIKPDGSEKYYVDSVKG (SEQ ID NO.: 12) ; VSRGGSYSD (SEQ ID NO.: 13); TGTRSDIGGYNYVS (SEQ ID NO. : 20) ; FDVNNRPS (SEQ ID NO. : 21) ; y NSFTDSRTWL (SEQ ID NO. : 22) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: SYAMS (SEQ ID NO. : 23) ; AISGSGGSTYYADSVKG (SEQ ID NO.: 24); y DRVAVAGKGSYYFDS (SEQ ID NO. : 25) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: SGSSSNIGNNAVS (SEQ ID NO.: 26); YDNLLPSG (SEQ ID NO.: 27); y AAWDDSLNDWV (SEQ ID NO. : 28) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: SYAMS (SEQ ID NO.: 23); AISGSGGSTYYADSVKG (SEQ ID NO.: 24); DRVAVAGKGSYYFDS (SEQ ID NO.: 25); SGSSSNIGNNAVS (SEQ ID NO.: 26); YDNLLPSG (SEQ ID NO.: 27); y AAWDDSLNDWV (SEQ ID NO.: 28). En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: SNSAAWN (SEQ ID NO.: 29) ; RTYYRSKWYNDYAVSKS (SEQ ID NO. : 30) ; y DEGPLDY (SEQ ID NO. : 31) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: TGSSSNLGTGYDVH (SEQ ID NO.: 32); GNSNRPS (SEQ ID NO.: 33); y QSYDFSLSAMV (SEQ ID NO. : 34) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: SNSAAWN (SEQ ID NO.: 29); RTYYRSKWYNDYAVSKS (SEQ ID NO.: 30); DEGPLDY (SEQ ID NO.: 31); TGSSSNLGTGYDVH (SEQ ID NO.: 32); GNSNRPS (SEQ ID NO.: 33); y QSYDFSLSAMV (SEQ ID NO.: 34). En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: DYAMH (SEQ ID NO.: 123); VISNHGKSTYYADSVKG (SEQ ID NO.: 124); y DIALAGDY (SEQ ID NO.: 125) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: RASQSISSYLN (SEQ ID NO.: 126) ; GASKLQS (SEQ ID NO.: 127); y LQDYNYPLT (SEQ ID NO.: 128) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: DYAMH (SEQ ID NO.: 123); VISNHGKSTYYADSVKG (SEQ ID NO.: 124); DIALAGDY (SEQ ID NO.: 125); RASQSISSYLN (SEQ ID NO.: 126); GASKLQS (SEQ ID NO.: 127) ; y LQDYNYPLT (SEQ ID NO.: 128). En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: SSNWWS (SEQ ID NO.: 129); EISQSGSTNYNPSLKG (SEQ ID NO.: 130); y QLRSI DAFDI (SEQ ID NO. : 131) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: DKYAS (SEQ ID NO.: 132); YQDRKRPSGI (SEQ ID NO.: 133); y WDSDTSYV (SEQ ID NO.: 134); En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: SSNWWS (SEQ ID NO.: 129) ; EISQSGSTNYNPSLKG (SEQ ID NO.: 130); QLRSIDAFDI (SEQ ID NO.: 131); DKYAS (SEQ ID NO.: 132); YQDRKRPSGI (SEQ ID NO.: 133); y WDSDTSYV (SEQ ID NO.: 134). En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: NYYWS (SEQ ID NO.: 135); YIHYSGSTYYNPSLKSR (SEQ ID NO.: 136); y VGYYYDSSGYNLAWYFDL (SEQ ID NO. : 212) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: QGDNLRSYSAT (SEQ ID NO.: 137); GENNRPS (SEQ ID NO.: 138); y TSRVNSGNHLGV (SEQ ID NO.: 139) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: NYYWS (SEQ ID NO.: 135); YIHYSGSTYYNPSLKSR (SEQ ID NO.: 136); VGYYYDSSGYNLAWYFDL (SEQ ID NO.: 212); QGDNLRSYSAT (SEQ ID NO.: 137); GENNRPS (SEQ ID NO.: 138); y TSRVNSGNHLGV (SEQ ID NO.: 139). En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: GYY H (SEQ ID NO.: 140); WINPNSGGTNYAQKFQGR (SEQ ID NO.: 141); y GGHMTTVTRDAFDI ( SEQ ID NO. : 142) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: QGDSLRYYYAT (SEQ ID NO.: 143); GQNNRPS (SEQ ID NO.: 144); y GTWDSSVSASWV (SEQ ID NO.: 145) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: GYYMH ( SEQ ID NO.: 140) ; WINPNSGGTNYAQKFQGR ( SEQ ID NO.: 141); GGHMTTVTRDAFDI ( SEQ ID NO.: 143); GQNNRPS ( SEQ ID NO.: 144); y GTWDSSVSASWV ( SEQ ID NO. : 145) .
En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: GYYMH (SEQ ID NO.: 146); WINPNSGSTNYAQKFLG ( SEQ ID NO.: 147); y GHSGDYFDY ( SEQ ID NO. : 148) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: RASQSVSSWLA (SEQ ID NO.: 149) ; AARLRG ( SEQ ID NO.: 150); y QQSYSTPIS ( SEQ ID NO.: 151) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: GYYMH (SEQ ID NO.: 146); WINPNSGSTNYAQKFLG ( SEQ ID NO.: 147); GHSGDYFDY ( SEQ ID NO.: 148); RASQSVSSWLA ( SEQ ID NO.: 149); AARLRG ( SEQ ID NO.: 150) ; y QQSYSTPIS ( SEQ ID NO.: 151). En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: SSAFSWN (SEQ ID NO.: 152) ; YIYHTGITDYNPSLKS ( SEQ ID NO.: 153); y GHGSDPAWFDP ( SEQ ID NO. : 154) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: SGDKLGDKYAS ( SEQ ID NO.: 155); RDTKRPS ( SEQ ID NO.: 156); y QAWDSTTSLV ( SEQ ID NO. : 157) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: SSAFSWN ( SEQ ID NO.: 152); YIYHTGITDYNPSLKS ( SEQ ID NO.: 153); GHGSDPAWFDP ( SEQ ID NO.: 154); SGDKLGDKYAS ( SEQ ID NO.: 155); RDTKRPS ( SEQ ID NO.: 156); y QAWDSTTSLV ( SEQ ID NO.: 157). En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: SY S (SEQ ID NO.: 158); NIKPDGSEKYYVDSVKG (SEQ ID NO.: 159); y VSRGGSYSD (SEQ ID NO.: 160) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: TGTSSDVGGFNYVS ( SEQ ID NO.: 161); EVSKRPS (SEQ ID NO.: 162); y SSWAPGKNL ( SEQ ID NO. : 163) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: SYWMS (SEQ ID NO.: 158); NIKPDGSEKYYVDSVKG (SEQ ID NO.: 159); VSRGGSYSD (SEQ ID NO.: 160); TGTSSDVGGFNYVS ( SEQ ID NO.: 161); EVSKRPS (SEQ ID NO.: 162); y SSWAPGKNL ( SEQ ID NO.: 163). En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: SYAMS (SEQ ID NO.: 164); GISGSGSSEGGTYYADSVKG ( SEQ ID NO.: 165); y DRPSRYSFGYYFDY ( SEQ ID NO. : 166) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: SGNKLGDKYVS ( SEQ ID NO.: 167); QDTKRPS ( SEQ ID NO.: 168); y QAWDSSTDVV ( SEQ ID NO. : 169) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: SYAMS (SEQ ID NO.: 164); GISGSGSSEGGTYYADSVKG ( SEQ ID NO.: 165); DRPSRYSFGYYFDY ( SEQ ID NO.: 166); SGNKLGDKYVS ( SEQ ID NO.: 167); QDTKRPS ( SEQ ID NO.: 168); y QAWDSSTDVV ( SEQ ID NO.: 169). En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: KYWMT ( SEQ ID NO.: 170); NIKPDGSEKYYVESVKG ( SEQ ID NO.: 171); y VSRGGSFSD ( SEQ ID NO. : 172) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: TGTSSDVGGYNYVS (SEQ ID NO.: 173); DVNKRPS ( SEQ ID NO.: 174); y NSYAGSNNWV ( SEQ ID NO. : 175) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: KYWMT ( SEQ ID NO.: 170); NIKPDGSEKYYVESVKG ( SEQ ID NO.: 171); VSRGGSFSD ( SEQ ID NO.: 172); TGTSSDVGGYNYVS (SEQ ID NO.: 173); DVNKRPS ( SEQ ID NO.: 174); y NSYAGSNNWV ( SEQ ID NO.: 175). En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: KYWMT ( SEQ ID NO.: 176); NIKPDGSEKYYVESVKG ( SEQ ID NO.: 177); y VSRGGSFSD ( SEQ ID NO. : 178) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: TGTSSDVGGYNYVS (SEQ ID NO.: 179); EVSKRPS (SEQ ID NO.: 180); y NSYAGSIYV ( SEQ ID NO. : 181) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: KYWMT ( SEQ ID NO.: 176); NIKPDGSEKYYVESVKG ( SEQ ID NO.: 177); VSRGGSFSD ( SEQ ID NO.: 178); TGTSSDVGGYNYVS (SEQ ID NO.: 179); EVSKRPS (SEQ ID NO.: 180); y NSYAGSIYV ( SEQ ID NO.: 181). En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: TNDIH ( SEQ ID NO.: 182); IIDTSGAMTRYAQKFQG ( SEQ ID NO.: 183); y EGCTNGVCYDNGFDI ( SEQ ID NO. : 184) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: RASEGIYHWLA ( SEQ ID NO.: 185); KASSLAS ( SEQ ID NO.: 186); y QQYSNYPLT ( SEQ ID NO. : 187) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: TNDIH ( SEQ ID NO.: 182); IIDTSGAMTRYAQKFQG ( SEQ ID NO.: 183); EGCTNGVCYDNGFDI ( SEQ ID NO.: 184); RASEGIYHWLA ( SEQ ID NO.: 185); KASSLAS ( SEQ ID NO.: 186); y QQYSNYPLT ( SEQ ID NO.: 187). En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: KYWMT ( SEQ ID NO.: 188); NIKPDGSEKYYVESVKG ( SEQ ID NO.: 189); y VSRGGSFSD ( SEQ ID NO. : 190) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: TGTSSDVGSYNLVS ( SEQ ID NO.: 191); EVSNRPS ( SEQ ID NO.: 192); y SSLTSSGTWV ( SEQ ID NO. : 193) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: KYWMT ( SEQ ID NO.: 188); NIKPDGSEKYYVESVKG ( SEQ ID NO.: 189); VSRGGSFSD ( SEQ ID NO.: 190); TGTSSDVGSYNLVS ( SEQ ID NO.: 191); EVSNRPS ( SEQ ID NO.: 192); y SSLTSSGTWV ( SEQ ID NO.: 193). En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: KYWMT ( SEQ ID NO.: 194); NIKPDGSEKYYVESVKG ( SEQ ID NO.: 195); y VSRGGSFSD ( SEQ ID NO. : 196) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: TGTSSDVGAYNYVS ( SEQ ID NO.: 197); EVARRPS ( SEQ ID NO.: 198),-y SSYAGSNNFAV ( SEQ ID NO. : 199) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: KYWMT ( SEQ ID NO.: 194); NIKPDGSEKYYVESVKG ( SEQ ID NO.: 195); VSRGGSFSD ( SEQ ID NO.: 196); TGTSSDVGAYNYVS ( SEQ ID NO.: 197); EVARRPS ( SEQ ID NO.: 198) ; y SSYAGSNNFAV ( SEQ ID NO.: 199). En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: SYWMT ( SEQ ID NO.: 200); NIKPDGSEKYYVDSVKG (SEQ ID NO.: 201); y VSRGGSFSD ( SEQ ID NO. : 202) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: TGTSSDIGTYDYVS ( SEQ ID NO.: 203); EVTNRPS ( SEQ ID NO.: 204); y NSFTKNNTWV ( SEQ ID NO. : 205) .
En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: SYWMT ( SEQ ID NO.: 200); NIKPDGSEKYYVDSVKG (SEQ ID NO.: 201); VSRGGSFSD ( SEQ ID NO.: 202); TGTSSDIGTYDYVS ( SEQ ID NO.: 203); EVTNRPS ( SEQ ID NO.: 204); y NSFTKNNT V ( SEQ ID NO.: 205). En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: KYWMT ( SEQ ID NO.: 206); NIKPDGSEKYYVESVKG ( SEQ ID NO.: 207); y VSRGGSFSD ( SEQ ID NO. : 208) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: TGTSGDVGAYNYVS ( SEQ ID NO.: 209); EVSKRPS (SEQ ID NO.: 210); y NSYRGSNGPWV ( SEQ ID NO. : 211) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende las siguientes secuencias: KYWMT ( SEQ ID NO.: 206); NIKPDGSEKYYVESVKG ( SEQ ID NO.: 207); VSRGGSFSD ( SEQ ID NO.: 208); TGTSGDVGAYNYVS ( SEQ ID NO.: 209); EVSKRPS (SEQ ID NO.: 210); y NSYRGSNGPWV ( SEQ ID NO.: 211). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: SYWMS (SEQ ID NO.: 11); NIKPDGSEKYYVDSVKG (SEQ ID NO.: 12); y VSRGGSYSD (SEQ ID NO.: 13) . En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: TGTSSDVGGYNYVS (SEQ ID NO.: 14); EVSKRPS (SEQ ID NO.: 15) ;y SSYAGRNWV (SEQ ID NO.: 16). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: SYWMS (SEQ ID NO.: 11); NIKPDGSEKYYVDSVKG (SEQ ID NO.: 12); VSRGGSYSD (SEQ ID NO.: 13); TGTSSDVGGYNYVS (SEQ ID NO.: 14); EVSKRPS (SEQ ID NO.: 15),-y SSYAGRNWV (SEQ ID NO.: 16) . En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: TGTSSDVGGYIYVS (SEQ ID NO.: 17); DVSRRPS (SEQ ID NO.: 18); y NSYTTLSTWL (SEQ ID NO.: 19). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: SYWMS (SEQ ID NO.: 11); NIKPDGSEKYYVDSVKG (SEQ ID NO.: 12); VSRGGSYSD (SEQ ID NO.: 13); TGTSSDVGGYIYVS (SEQ ID NO.: 17); DVSRRPS (SEQ ID NO.: 18); y NSYTTLSTWL (SEQ ID NO.: 19). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: TGTRSDIGGYNYVS (SEQ ID NO.: 20); FDVNNRPS (SEQ ID NO.: 21); y NSFTDSRTWL (SEQ ID NO.: 22). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: SYWMS (SEQ ID NO.: 11); NIKPDGSEKYYVDSVKG (SEQ ID NO.: 12); VSRGGSYSD (SEQ ID NO.: 13); TGTRSDIGGYNYVS (SEQ ID NO.: 20); FDVNNRPS (SEQ ID NO.: 21); y NSFTDSRTWL (SEQ ID NO.: 22). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: SYAMS (SEQ ID NO.: 23); AISGSGGSTYYADSVKG (SEQ ID NO.: 24); y DRVAVAGKGSYYFDS (SEQ ID NO. : 25) . En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: SGSSSNIGNNAVS (SEQ ID NO.: 26); YDNLLPSG (SEQ ID NO.: 27) ;y AAWDDSLNDWV (SEQ ID NO.: 28). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: SYAMS (SEQ ID NO.: 23); AISGSGGSTYYADSVKG (SEQ ID NO.: 24); DRVAVAGKGSYYFDS (SEQ ID NO.: 25); SGSSSNIGNNAVS (SEQ ID NO.: 26); YDNLLPSG (SEQ ID NO.: 27) ;y AAWDDSLNDWV (SEQ ID NO.: 28). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: SNSAAWN (SEQ ID NO.: 29); RTYYRSKWYNDYAVSKS (SEQ ID NO.: 30); y DEGPLDY (SEQ ID NO.: 31) . En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: TGSSSNLGTGYDVH (SEQ ID NO.: 32); GNSNRPS (SEQ ID NO.: 33); y QSYDFSLSAMV (SEQ ID NO.: 34). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: SNSAA N (SEQ ID NO.: 29); RTYYRSKWYNDYAVSKS (SEQ ID NO.: 30); DEGPLDY (SEQ ID NO.: 31); TGSSSNLGTGYDVH (SEQ ID NO.: 32); GNSNRPS (SEQ ID NO.: 33); y QSYDFSLSAMV (SEQ ID NO.: 34). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: DYAMH ( SEQ ID NO.: 123); VISNHGKSTYYADSVKG ( SEQ ID NO.: 124); y DIALAGDY ( SEQ ID NO. : 125) . En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: RASQSISSYLN ( SEQ ID NO.: 126); GASKLQS ( SEQ ID NO.: 127); y LQDYNYPLT ( SEQ ID NO.: 128). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: DYAMH ( SEQ ID NO.: 123); VISNHGKSTYYADSVKG ( SEQ ID NO.: 124); DIALAGDY ( SEQ ID NO.: 125); RASQSISSYLN ( SEQ ID NO.: 126); GASKLQS ( SEQ ID NO.: 127); y LQDYNYPLT ( SEQ ID NO.: 128). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: SSNWWS ( SEQ ID NO.: 129); EISQSGSTNYNPSLKG ( SEQ ID NO.: 130); y QLRSIDAFDI ( SEQ ID NO.: 131). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: DKYAS ( SEQ ID NO.: 132); YQDRKRPSGI ( SEQ ID NO.: 133); y DSDTSYV ( SEQ ID NO.: 134). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: SSNWWS ( SEQ ID NO.: 129); EISQSGSTNYNPSLKG ( SEQ ID NO. : 130) ; QLRSIDAFDI ( SEQ ID NO. : 131); DKYAS ( SEQ ID NO.: 132); YQDRKRPSGI ( SEQ ID NO.: 133); y WDSDTSYV ( SEQ ID NO.: 134). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: NYYWS ( SEQ ID NO.: 135); YIHYSGSTYYNPSLKSR ( SEQ ID NO.: 136); y VGYYYDSSGYNLAWYFDL (SEQ ID NO. : 212) . En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: QGDNLRSYSAT ( SEQ ID NO.: 137); GENNRPS ( SEQ ID NO.: 138); y TSRVNSGNHLGV ( SEQ ID NO.: 139) . En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: NYYWS ( SEQ ID NO.: 135); YIHYSGSTYYNPSLKSR ( SEQ ID NO.: 136); VGYYYDSSGYNLAWYFDL (SEQ ID NO.: 212); QGDNLRSYSAT ( SEQ ID NO.: 137); GENNRPS ( SEQ ID NO.: 138); y TSRVNSGNHLGV ( SEQ ID NO.: 139). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: GYYMH ( SEQ ID NO.: 140); WINPNSGGTNYAQKFQGR ( SEQ ID NO.: 141); y GGHMTTVTRDAFDI (SEQ ID NO. : 142) . En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: QGDSLRYYYAT ( SEQ ID NO.: 143); GQNNRPS ( SEQ ID NO.: 144); y GTWDSSVSASWV ( SEQ ID NO.: 145) . En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: GYYMH ( SEQ ID NO.: 140); WINPNSGGTNYAQKFQGR ( SEQ ID NO.: 141); GGHMTTVTRDAFDI ( SEQ ID NO.: QGDSLRYYYAT ( SEQ ID NO.: 143); GQNNRPS ( SEQ ID NO.: 144); y GTWDSSVSASWV ( SEQ ID NO.: 145). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: GYYMH ( SEQ ID NO.: 146); WINPNSGSTNYAQKFLG ( SEQ ID NO.: 147); y GHSGDYFDY ( SEQ ID NO. : 148) .
En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: RASQSVSSWLA ( SEQ ID NO.: 149); AARLRG ( SEQ ID NO.: 150); y QQSYSTPIS ( SEQ ID NO.: 151). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: GYY H ( SEQ ID NO.: 146); WINPNSGSTNYAQKFLG ( SEQ ID NO.: 147); GHSGDYFDY ( SEQ ID NO.: 148); RASQSVSSWLA ( SEQ ID NO.: 149); AARLRG ( SEQ ID NO.: 150); y QQSYSTPIS ( SEQ ID NO.: 151). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: SSAFSWN ( SEQ ID NO.: 152); YIYHTGITDYNPSLKS ( SEQ ID NO.: 153); y GHGSDPAWFDP ( SEQ ID NO. : 154) . En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: SGDKLGDKYAS ( SEQ ID NO.: 155); RDTKRPS ( SEQ ID NO.: 156); y QAWDSTTSLV ( SEQ ID NO.: 157). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: SSAFSWN ( SEQ ID NO.: 152); YIYHTGITDYNPSLKS ( SEQ ID NO.: 153); GHGSDPAWFDP ( SEQ ID NO.: 154); SGDKLGDKYAS ( SEQ ID NO.: 155); RDTKRPS ( SEQ ID NO.: 156); y QAWDSTTSLV ( SEQ ID NO.: 157).
En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: SYWMS (SEQ ID NO.: 158); NIKPDGSEKYYVDSVKG (SEQ ID NO.: 159); y VSRGGSYSD (SEQ ID NO.: 160) . En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: TGTSSDVGGFNYVS ( SEQ ID NO.: 161); EVSKRPS (SEQ ID NO.: 162); y SSWAPGKNL ( SEQ ID NO.: 163). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: SYWMS (SEQ ID NO.: 158); NIKPDGSEKYYVDSVKG (SEQ ID NO. : 159) ; VSRGGSYSD (SEQ ID NO. : 160); TGTSSDVGGFNYVS ( SEQ ID NO.: 161); EVSKRPS (SEQ ID NO.: 162); y SSWAPGKNL ( SEQ ID NO.: 163). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: SYAMS (SEQ ID NO.: 164); GISGSGSSEGGTYYADSVKG ( SEQ ID NO.: 165); y DRPSRYSFGYYFDY ( SEQ ID NO. : 166) . En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: SGNKLGDKYVS ( SEQ ID NO.: 167); QDTKRPS ( SEQ ID NO.: 168); y QAWDSSTDVV ( SEQ ID NO.: 169). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: SYAMS (SEQ ID NO.: 164); GISGSGSSEGGTYYADSVKG ( SEQ ID NO.: 165); DRPSRYSFGYYFDY ( SEQ ID NO.: 166); SGNKLGDKYVS ( SEQ ID NO.: 167); QDTKRPS ( SEQ ID NO.: 168); y QAWDSSTDVV ( SEQ ID NO.: 169). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: KYWMT ( SEQ ID NO.: 170); NIKPDGSEKYYVESVKG ( SEQ ID NO.: 171); y VSRGGSFSD ( SEQ ID NO. : 172) . En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: TGTSSDVGGYNYVS (SEQ ID NO.: 173); DVNKRPS (SEQ ID NO.: 174); y NSYAGSNN V (SEQ ID NO.: 175). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: KYWMT (SEQ ID NO.: 170); NIKPDGSEKYYVESVKG ( SEQ ID NO.: 171); VSRGGSFSD ( SEQ ID NO.: 172); TGTSSDVGGYNYVS (SEQ ID NO.: 173); DVNKRPS ( SEQ ID NO.: 174); y NSYAGSNNWV ( SEQ ID NO.: 175). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: KYWMT ( SEQ ID NO.: 176); NIKPDGSEKYYVESVKG ( SEQ ID NO.: 177); y VSRGGSFSD ( SEQ ID NO. : 178) .
En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: TGTSSDVGGYNYVS (SEQ ID NO.: 179); EVSKRPS (SEQ ID NO.: 180); y NSYAGSIYV ( SEQ ID NO.: 181). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: KYWMT ( SEQ ID NO.: 176); NIKPDGSEKYYVESVKG ( SEQ ID NO.: 177); VSRGGSFSD ( SEQ ID NO.: 178); TGTSSDVGGYNYVS (SEQ ID NO.: 179); EVSKRPS (SEQ ID NO.: 180); y NSYAGSIYV ( SEQ ID NO.: 181). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: TNDIH ( SEQ ID NO.: 182); II DTSGAMTRYAQKFQG ( SEQ ID NO.: 183); y EGCTNGVCYDNGFDI ( SEQ ID NO. : 184) . En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: RASEGIYHWLA ( SEQ ID NO.: 185); KASSLAS ( SEQ ID NO.: 186); y QQYSNYPLT ( SEQ ID NO.: 187). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: TNDIH ( SEQ ID NO.: 182); II DTSGAMTRYAQKFQG ( SEQ ID NO.: 183); EGCTNGVCYDNGFDI ( SEQ ID NO.: 184); RASEGIYHWLA ( SEQ ID NO.: 185); KASSLAS ( SEQ ID NO.: 186); y QQYSNYPLT ( SEQ ID NO.: 187).
En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: KYWMT ( SEQ ID NO.: 188); NIKPDGSEKYYVESVKG ( SEQ ID NO.: 189); y VSRGGSFSD ( SEQ ID NO. : 190) . En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: TGTSSDVGSYNLVS ( SEQ ID NO.: 191); EVSNRPS ( SEQ ID NO.: 192); y SSLTSSGTWV ( SEQ ID NO.: 193). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: KYWMT ( SEQ ID NO.: 188); NIKPDGSEKYYVESVKG ( SEQ ID NO.: 189); VSRGGSFSD ( SEQ ID NO.: 190); TGTSSDVGSYNLVS ( SEQ ID NO.: 191); EVSNRPS ( SEQ ID NO.: 192); y SSLTSSGTWV ( SEQ ID NO.: 193) . En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: KYWMT ( SEQ ID NO.: 194); NIKPDGSEKYYVESVKG ( SEQ ID NO.: 195); y VSRGGSFSD ( SEQ ID NO. : 196) . En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: TGTSSDVGAYNYVS ( SEQ ID NO.: 197); EVARRPS ( SEQ ID NO.: 198),-y SSYAGSNNFAV ( SEQ ID NO.: 199). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: KYWMT ( SEQ ID NO.: 194); NIKPDGSEKYYVESVKG ( SEQ ID NO.: 195); VSRGGSFSD ( SEQ ID NO.: 196); TGTSSDVGAYNYVS ( SEQ ID NO.: 197); EVARRPS ( SEQ ID NO.: 198) ;y SSYAGSNNFAV ( SEQ ID NO.: 199). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: SYWMT ( SEQ ID NO.: 200); NIKPDGSEKYYVDSVKG (SEQ ID NO.: 201); y VSRGGSFSD ( SEQ ID NO. : 202) . En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: TGTSSDIGTYDYVS ( SEQ ID NO.: 203); EVTNRPS ( SEQ ID NO.: 204); y NSFTKNNTWV ( SEQ ID NO.: 205). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: SYWMT (SEQ ID NO.: 200); NIKPDGSEKYYVDSVKG (SEQ ID NO.: 201); VSRGGSFSD (SEQ ID NO.: 202); TGTSSDIGTYDYVS ( SEQ ID NO.: 203); EVTNRPS ( SEQ ID NO.: 204); y NSFTKNNTWV ( SEQ ID NO.: 205). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: KYWMT ( SEQ ID NO.: 206); NIKPDGSEKYYVESVKG ( SEQ ID NO.: 207); y VSRGGSFSD ( SEQ ID NO. : 208) .
En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: TGTSGDVGAYNYVS (SEQ ID NO.: 209); EVSKRPS (SEQ ID NO.: 210); y NSYRGSNGPWV (SEQ ID NO.: 211). En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de una cadena simple se fusiona a Fe que comprende las siguientes secuencias: KYWMT ( SEQ ID NO.: 206); NIKPDGSEKYYVESVKG ( SEQ ID NO.: 207); VSRGGSFSD ( SEQ ID NO.: 208); TGTSGDVGAYNYVS ( SEQ ID NO.: 209); EVSKRPS (SEQ ID NO.: 210); y NSYRGSNGPWV ( SEQ ID NO.: 211). En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende la siguiente secuencia: EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV DSVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCARVSRGGSYSDWGQGTLVTVSSGGGG SGGGGSGGGGSAQSVLTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLM IYEVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQPEDEADYYCSSYAGRNWVFGGGTQLTVLG AAAEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEK TISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV HEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO. : 45) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende la siguiente secuencia: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV DSVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCARVSRGGSYSDWGQGTLVTVSSGGGG SGGGGSGGGGSAQSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYIYVSWYQQHPGKAPKLM IYDVSRRPSGISDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCNSYTTLSTWLFGGGTKVTVL GAAAEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL ISRTPEVTCVVVDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQD LNGKEYKCKVSNKALPAPIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTT PPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO. : 46) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende la siguiente secuencia: EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV DSVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCARVSRGGSYSDWGKGTLVTVSSGGGG SGGGGSGGGGSAQSALTQPASVSGSPGQSI I ISCTGTRSDIGGYNYVS YQHHPGRAPKLI I FDVNNRPSGVSHRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCNSFTDSRTWLFGGGTKLTVL GAAAEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTT PPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO. : 47) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende la siguiente secuencia: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLE VSAISGSGGSTYYA DSVKGRFTISRDNSKNTLYLQ NSLRAEDTAVYYCVKDRVAVAGKGSYYFDSWGRGTTVTV SSGGGGSGGGGSGGGGSAQSVLTQPPSVSEAPGQRVTIACSGSSSNIGNNAVS YQQLPGK APTLLIYYDNLLPSGVSDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLND VFGGG TKVTVLGAAAEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDV SHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA LPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE NNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO. : 48) . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que comprende la siguiente secuencia: QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYN DYAVSVKSRMTIKADTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARDEGPLDY GQGTLVTVSAGGG GSGGGGSGGGGSGAPQAVLTQPSSVSGAPGQRVTISCTGSSSNLGTGYDVHWYQQLPGTAP KLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSDTSGLLAITGLQAEDEATYYCQSYDFSLSAMVFGGGTK VTVLAAAEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHE DPEVKFN YVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPA PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO. : 49) . En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de cadena simple fusionado a Fe que une específicamente a aminoácidos F93 y H114 del dominio extracelular del receptor Epo humano. En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de cadena simple fusionado a Fe que une específicamente a aminoácidos S91, F93, y H114 del dominio extracelular del receptor Epo humano. En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de cadena simple fusionado a Fe que une específicamente a aminoácidos F93 del dominio extracelular del receptor Epo humano . En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de cadena simple fusionado a Fe que une específicamente a aminoácidos 62, F93 y 150 del dominio extracelular del receptor Epo humano. En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de cadena simple fusionado a Fe que une específicamente a aminoácidos V48, E62, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del receptor Epo humano. En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de cadena simple fusionado a Fe que une específicamente a aminoácidos V48, W64, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del receptor Epo humano. En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de cadena simple fusionado a Fe que une específicamente a aminoácidos A44, V48, P63, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del receptor Epo humano . En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de cadena simple fusionado a Fe que une específicamente a aminoácidos L66 y R99 del dominio extracelular del receptor Epo humano. En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que une específicamente a aminoácidos F93 y H114 del dominio extracelular del receptor Epo humano.
En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que une específicamente a aminoácidos S91, F93 yl4 del dominio extracelular del receptor Epo humano En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que une específicamente a aminoácidos F93 del dominio extracelular del receptor Epo humano. En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que une específicamente a aminoácidos E62, F93 y M150 del dominio extracelular del receptor Epo humano. En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que une específicamente a aminoácidos V48, E62, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del receptor Epo humano. En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que une específicamente a aminoácidos V48, W64, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del receptor Epo humano. En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que une específicamente a aminoácidos A44, V48, P63, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del receptor Epo humano. En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que une específicamente a aminoácidos L66 y R99 del dominio extracelular del receptor Epo humano. En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de cadena simple fusionado a Fe que une específicamente a aminoácidos F93, E60 y H114 del dominio extracelular del receptor Epo humano .
En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de cadena simple fusionado a Fe que une específicamente a aminoácidos V48 del dominio extracelular del receptor Epo humano . En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de cadena simple fusionado a Fe que une específicamente a aminoácidos L66 del dominio extracelular del receptor Epo humano . En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de cadena simple fusionado a Fe que une específicamente a aminoácidos W64 del dominio extracelular del receptor Epo humano . En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de cadena simple fusionado a Fe que une específicamente a aminoácidos H70 del dominio extracelular del receptor Epo humano . En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de cadena simple fusionado a Fe que une específicamente a aminoácidos V48 y W64del dominio extracelular del receptor Epo humano. En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de cadena simple fusionado a Fe que une específicamente a aminoácidos V48 y L66 del dominio extracelular del receptor Epo humano. En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de cadena simple fusionado a Fe que une específicamente a aminoácidos V48 y R68 del dominio extracelular del receptor Epo humano. En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de cadena simple fusionado a Fe que une específicamente a aminoácidos V48 y H70 del dominio extracelular del receptor Epo humano. En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de cadena simple fusionado a Fe que une específicamente a aminoácidos W64 y R68 del dominio extracelular del receptor Epo humano. En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de cadena simple fusionado a Fe que une específicamente a aminoácidos 64 y H70 del dominio extracelular del receptor Epo humano. En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de cadena simple fusionado a Fe que une específicamente a aminoácidos L66 y R68 del dominio extracelular del receptor Epo humano. En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de cadena simple fusionado a Fe que une específicamente a aminoácidos L66 y H70 del dominio extracelular del receptor Epo humano. En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de cadena simple fusionado a Fe que une específicamente a aminoácidos R68 y H70 del dominio extracelular del receptor Epo humano. En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de cadena simple fusionado a Fe que une específicamente a aminoácidos A44, V48, E62, P63, W64, L66, R68, H70, S91, F93, R99, H114 y M150 del dominio extracelular del receptor Epo humano . En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que une específicamente a aminoácidos F93, E60 y H114 del dominio extracelular del receptor Epo humano. En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que une específicamente a aminoácidos V48 del dominio extracelular del receptor Epo humano. En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que une específicamente a aminoácidos L66 del dominio extracelular del receptor Epo humano. En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que une específicamente a aminoácidos W64 del dominio extracelular del receptor Epo humano. En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que une específicamente a aminoácidos H70 del dominio extracelular del receptor Epo humano. En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que une específicamente a aminoácidos V48 y W6 del dominio extracelular del receptor Epo humano.
En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que une específicamente a aminoácidos V48 y L66 del dominio extracelular del receptor Epo humano, En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que une específicamente a aminoácidos V48 y R68 del dominio extracelular del receptor Epo humano, En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que une específicamente a aminoácidos V48 y H70 del dominio extracelular del receptor Epo humano, En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que une específicamente a aminoácidos 64 y R68 del dominio extracelular del receptor Epo humano, En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que une específicamente a aminoácidos W64 y H70del dominio extracelular del receptor Epo humano, En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que une específicamente a aminoácidos L66 y R68 del dominio extracelular del receptor Epo humano, En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que une específicamente a aminoácidos L66 y H70 del dominio extracelular del receptor Epo humano, En ciertas modalidades se provee un anticuerpo que une específicamente a aminoácidos R68 y H70 del dominio extracelular del receptor Epo humano, En ciertas modalidades se provee un fragmento variable de cadena simple fusionado a Fe que une específicamente a aminoácidos A44, V48, E62, P63, W64, L66, R68, H70, S91, F93, R99, H114 y M15 del dominio extracelular del receptor Epo humano . En ciertas modalidades, se pueden evaluar los efectos de un anticuerpo midiendo una reducción en la cantidad de síntomas de una enfermedad de interés. En ciertas modalidades, la enfermedad de interés puede ser causada por un patógeno. En ciertas modalidades, una enfermedad puede ser establecida en un huésped animal por otros métodos incluyendo introducción de una sustancia (tal como un carcinógeno) y manipulación genérica. En ciertas modalidades, se pueden evaluar los efectos detectando uno o más eventos adversos en el huésped animal. El término "evento adverso" incluye, pero no está limitado a, una reacción adversa en el huésped animal que recibe un anticuerpo que no está presente en un huésped animal que no recibe el anticuerpo. En ciertas modalidades, los eventos adversos incluyen, pero no están limitados a, una fiebre, una respuesta inmune a un anticuerpo, inflamación y/o muerte del huésped animal. En ciertas modalidades, la composición además incluye un Maxibody y por lo menos una azúcar. Como se usa aquí, el término "azúcar" se refiere a los monosacáridos tales como la glucosa y mañosa, o polisacáridos incluyendo bisacáridos tales como la sucrosa y lactosa, asi como también derivados de la azúcar incluyendo alcoholes y ácidos del azúcar. Los alcoholes del azúcar incluyen, pero no están limitados a, manitol, xilitol, eritritol, treitol, sorbitol y glicerol. Un ejemplo no limitante de un ácido del azúcar es el L-gluconato. Ciertos azucares ejemplares incluyen, pero no están limitados a, trehalosa, fucosa y glicina. En ciertas modalidades, la composición incluye además por lo menos un agente regulador de la osmolaridad/abultamiento . Tales agentes pueden ser ya sea cristalinos (por ejemplo, glicina, manitol) o amorfos (por ejemplo, L-histidina, sucrosa, polímeros tales como dextrán, polivinilpirolidona , carboximetilcelulosa y lactosa) . En ciertas modalidades, un agente regulador de la osmolaridad/abultamiento se provee a una concentración entre el 2% y el 5%. En ciertas modalidades, un agente regulador de la osmolaridad/abultamiento se provee a una concentración entre el 2,5% y el 4,5%. En ciertas modalidades, los anticuerpos que se enlazan a una proteína particular y bloquean la interacción con otros compuestos de enlace pueden tener uso terapéutico. En esta aplicación, cuando se discute el uso de anticuerpos para tratar enfermedades o condiciones, tal uso puede incluir el usar las composiciones que incluyen anticuerpos; y/o terapias de combinación que incluyan anticuerpos y uno o más ingedientes activos adicionales. Cuando se usan anticuerpos para "tratar" una enfermedad o condición, tal tratamiento puede o puede no incluir la prevención de la enfermedad o condición . En ciertas modalidades, un anticuerpo se administra solo. En ciertas modalidades, se administra un anticuerpo previamente a la administración de por lo menos uno agente terapéutico adicional. En ciertas modalidades, se administra un anticuerpo simultáneamente a la administración de por lo menos uno agente terapéutico adicional. En ciertas modalidades, se administra un anticuerpo posteriormente a la administración de por lo menos uno agente terapéutico. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos para tratar animales no humanos, tales como mascotas (perros, gatos, pájaros, primates, etc) , y animales domésticos de granja (caballos, ganado, ovejas, cerdos, pájaros, etc). En ciertas circunstancias, se puede determinar una dosis apropiada de acuerdo al peso del cuerpo del animal. Por ejemplo, en ciertas modalidades, se puede usar una dosis de 0.2-1 mg/kg. En ciertas modalidades, la dosis se puede determinar de acuerdo al a 'rea de superficie del animal, una dosis ejemplaria que va del 0.1 al 20 mg/in2 o de 5 a 12 mg/m2. Para animales pequeños como gatos y perros, en ciertas modalidades, una dosis adecuada es 0.4 mg/kg. En ciertas modalidades, los anticuerpos se administran por inyección u otra ruta apropiada una o más veces por semana hasta que la condición del animal se mejore, o se puede administrar indefenidamente . Se entiende que la respuesta por parte de pacientes individuales para las medicaciones antes mencionadas o terapias de comnbinación puede variar, y se puede determinar una combinación eficaz apropiada para cada paciente por parte de su doctor. En ciertas modalidades, un anticuerpo puede ser parte de una molécula conjugada que incluye toda o parte del anticuerpo y la prodroga. En ciertas modalidades, el término "prodroga" se refiere a un precursor o forma derivativa de una sustancia activa de manera farmacéutica. En ciertas modalidades, una prodroga es menos citotóxica para las células comparada a la drogra fuente y es capaz de ser activada enzimaticamente o convertida en la forma fuente más citotóxicamente activa. Las prodrogas ejemplares incluyen, pero no están limitadas a, fosfato que conteniendo prodrogas, tiofosfato conteniendo prodrogas, sulfato conteniendo prodrogas, péptidos conteniendo prodrogas, prodrogas D-amino ácidas modificadas, prodrogas glicosilatadas , beta-lactam conteniendo prodrogas, fenoxiacetamidas sustituidas opcionalmente conteniendo prodrogas, y fenilacetamidas sustituidas opcionalmente conteniendo prodrogas, 5-fluorocitosina y otras prodrogas 5-fluororidinas que pueden ser convertidas en una droga más activa y libre de citotoxicidad . Ejemplos de drogas citotóxicas que se pueden derivar en forma de prodroga incluyen, pero no están limitadas a, aquellos agentes citotóxicos descritos arriba. Ver, por ejemplo, Patente EE.UU. N° 6.702.705. En ciertas modalidades, el anticuerpo conjuga la función al hacer que la porción del anticuerpo de la molécula apunte la porción citotóxica o porción de prodroga de la molécula a una población especifica de células en el paciente. En ciertas modalidades, se proveen métodos para tratar un paciente incluyendo la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo. En ciertas modalidades, se proveen métodos para tratar un paciente incluyendo la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo conjugado. En ciertas modalidades, se usa un anticuerpo en conjunto con una cantidad terapéuticamente efectiva de por lo menos un agente terapéutico adicional, como se discute arriba. Como se discutió anteriormente, en ciertas modalidades, los anticuerpos pueden ser administrados concurrentemente con una u otras drogas adicionales que son administradas al mismo paciente, siendo administrada cada droga de acuerdo a un régimen apropiado para dicho medicamento. Dicho tratamiento incluye un pre-tratamiento, tratamiento simultáneo, tratamiento secuencial o regímenes alternativos. Ejemplos adicionales de dichas drogas incluyen, pero no están limitadas a, antivirales, antibióticos, analgésicos, corticosteroides , antagonistas de citoquinas, antiinflamatorios no esferoides DMARD, quimioterapia, inhibidores de la angiogénesis, y estimuladores de la angiogénesis . En ciertas modalidades, una composición incluye una cantidad efectiva terapéuticamente de un anticuerpo y un diluyente, portador, solubilizador , emulsificante, preservativo y/o adyuvante aceptable de manera farmacéutica.
En ciertas modalidades, se proveen composiciones farmacéuticas que incluyen una cantidad efectiva terapéuticamente de un anticuerpo y una cantidad efectiva terapéuticamente de por lo menos un agente terapéutico adicional, junto con un diluyente, portador, solubilizador, emulsificante, preservativo y/o adyuvante aceptable de manera farmacéutica. En ciertas modalidades, los materiales de formulación aceptables son preferiblemente no tóxicos a los recipientes en las dosis y concentraciones empleadas. En ciertas modalidades, la composición farmacéutica puede contener materiales de formulación para por ejemplo modificar, mantener o preservar el pH, osmolaridad, viscosidad, claridad, color, isotonicidad, odor, esterilidad, estabilidad, tasa de disolución o liberación, adsorbción o penetración de la composición. En ciertas modalidades, los materiales de formulación apropiados incluyen, pero no están limitados a, amino ácidos (tales como la glicina, glutamina, asparagina, arginina o lisina); antimicrobials ; antioxidantes (tales como ácido ascorbico, sulfito de sodio o sulfito-hidrógeno de sodio) ; tampones (tales como borato, bicarbonato, Tris-HCl, citratos, fosfatos u otros ácidos orgánicos); agentes de abultamiento (como el manitol o glicina) ; agentes quelatantes (tales como ácido etilenodiamino tetraacético (EDTA) ) ; agentes de complexión (tales como la cafeína, polivinilpirrolidina, beta-ciclodextrina hidroxipropil-beta-ciclodextrina ) ; rellenos; monosacáridos ; bisacáridos; y otros carbohidratos (tales como la glucose, mañosa y dextrinas); proteínas (tales como albúmina de suero, gelatina o inmunoglobulinas ) ; agentes colorantes, saborizantes y diluyentes; agentes emulsificantes ; polímeros hidrofílicos (tales como la polivinilpirrolidona); polipéptidos de bajo peso molecular; contadores formadores de sal (tales como el sodio) ; preservativos (tales como el cloruro benzalconio, ácido benzoico, ácido salicílico, timerosal, alcohol fenetil, metilparabeno, propilparabeno, clorhexidina , ácido sorbico o peroxide de hidrógeno) ; solvents (tales como glicerina, glicol propileno o glicol polietileno) ; alcoholes de azúcares (tales como el manitol o el sorbitol); agentes de suspensión, surfactantes o agentes humectantes (tales como plurónicos, PEG, esteres sorbitanos, polisorbatos tales como el polisorbato 20, polisorbato 80, tritón, trometamina, lecitina, colesterol, tiloxapal); agentes aumentadores de la estabilidad (tales como sucrosa o el sorbitol) ; agentes aumentadores de la tonicidad (tales como haluros metal álcali, preferiblemente sodio o cloruro de potasio, manitol sorbitol); portadores de entrega, diluyentes, excipientes y/o adyuvantes farmacéuticos. (Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edición, A.R. Gennaro, ed., Mack Publishing Company (1990) . En ciertas modalidades, un anticuerpo y/o una molécula terapéutica adicional se enlaza a un portador de extensión de media vida conocido por la ciencia. Dichos portadores se describen, por ejemplo, en la Patente de USA No. 6,660,843 y Aplicación publicada PCT No.WO 99/25044. En ciertas modalidades, se determinará la composición farmacéutica óptima por un experto en la materia dependiendo de, por ejemplo, la ruta de administración pretendida, formato de entrega y dosis deseada. Ver, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, supra . En ciertas modalidades, tales composiciones pueden influenciar el estado físico, estabilidad, tasa de soltura in vivo y tasa de clarificación in vivo de los anticuerpos. En ciertas modalidades, el vehículo primario o portador en una composición farmacéutica puede ser acuoso o no acuoso en la naturaleza. Por ejemplo, en ciertas modalidades, un vehículo apropiado o portador puede ser agua para inyección, solución fisiológica salina o fluido cerebroespinal artificial, posiblemente suplementado con otros materiales comunes en composición para administración parenteral. En ciertas modalidades, la salina tamponada neutral o salina mezclada con albúmina de suero son además portadores ejemplares. En ciertas modalidades, las composiciones farmacéuticas incluyen tampones Tris con un pH aproximado de 7.0 a 8.5, o tampón de acetato con pH aproximado de 4.0 a 5.5, que puede además incluir sorbitol o un sustituto adecuado del msimo. En ciertas modalidades, una composición farmacéutica es una formulación acuosa o líquida que incluye un tampón de acetato con pH aproximado de 4.0 a 5.5, un poliol (polialcohol ) , y opcionalmente , un surfactante, en donde la composición no comprende una sal, por ejemplo, cloruro de sodio, y en donde la composición es isotónica para el paciente. Entre los polioles ejemplares se incluyen, pero no están limitados a, sucrosa, glucosa, sorbitol y manitol . Un surfactante ejemplar incluye, pero no está limitado a, polisorbato. En ciertas modalidades, una composición farmacéutica es una formulación acuosao líquida que incluye un tampón de acetato con pH aproximado de 5.0, sorbitol y un polisorbato, en donde la composición no comprende una sal, por ejemplo, cloruro de sodio, y en donde la composición es isotónica para el paciente. Ciertas composiciones ejemplares se encuentran, por ejemplo, en Patente de USA No. 6.171.586. Los portadores farmacéuticos adicionales incluyen, pero no están limitados a, aceites, aceites de petróleo, aceite animal, aceite vegetal, aceite de maní, aceite de soja, aceite mineral, aceite de sésamo, y similares. En ciertas modalidades, se pueden emplear también soluciones de glicerol y dextrosa acuosas como portadores líquidos, particularmente para soluciones inyectables. En ciertas modalidades, un composición que incluye un anticuerpo, con o sin por lo menos un agente terapéutico adicional, se puede preparar para almacenaje mezclando la composición seleccionada que tiene el grado de pureza deseado con agentes de formulación opcionales [Remington' s Pharmaceutical Sciences, supra) en forma de una aglutinación liofilizada o una solución acuosa. Adicionalmente , en ciertas modalidades, una composición que incluye un anticuerpo, con o sin por lo menos un agente terapéutico adicional, se puede formular como un liofilizado utilizando las soluciones excipientes apropiadas (por ejemplo sucrosa) como diluyentes. En ciertas modalidades, los anticuerpos se administran en la forma de una composición fisiológicamente aceptable que incluye una proteína recombinante purificada en conjunto con portadores fisiológicamente aceptables, excipientes o diluyentes. En ciertas modalidades, dichos portadores son no tóxicos a los recipientes en las dosis y concentraciones empleadas. En ciertas modalidades, el preparar dichas composiciones puede involucrar combinar los anticuerpos con tampones, antioxidantes tales como ácido ascórbico, polipéptidos de bajo peso molecular (tales como aquellos que tienen menos de 10 amino ácidos), proteínas, amino ácidos, carbohidratos tales como la glucosa, sucrosa o dextrinas, agentes de quelación tales como el EDTA, glutatión y/o otros estabilizadores y excipientes. En ciertas modalidades, las dosis apropiadas se determinan en pruebas de dosis estándares, y pueden variar de acuerdo a la ruta de administración escogida. En ciertas modalidades, de acuerdo con los estándares apropiados de la industria, se pueden agregar también preservativos, que incluyen, pero no están limitados al alcohol de bencilo. En ciertas modalidades, la cantidad y la frecuencia de administración se puede determinar en base a factores tales como la naturaleza y severidad de la enfermedad que se está tratando, la respuesta deseada, la edad y condición del paciente, y así. En ciertas modalidades, las composiciones farmacéuticas se pueden seleccionar para entrega general. La preparación de ciertas composiciones farmacéuticas aceptables está dentro de la destreza de la ciencia. En ciertas modalidades, los componentes de formulación están presentes en las concentraciones que son aceptables para el sitio de administración. En ciertas modalidades, se usan tampones para mantener la composición a un pH fisiológico o a un pH ligeramente inferior, típicamente dentro de un rango de pH de aproximadamente 5 a 8. En ciertas modalidades, cuando se contempla administración parenteral, puede haber una composición terapéutica en forma de solución acuosa parenteralmente aceptable y libre de pirógenos incluyendo los anticuerpos deseados, con o sin agentes terapéuticos adicionales, en un vehículo farmacéuticamente aceptable. En ciertas modalidades, un portador para inyección parenteral es agua destilada estéril en la cual el anticuerpo, con o sin por lo menos un agente terapéutico adicional, es formulado como una solución isotónica, estéril y preservada apropiadamente. En ciertas modalidades, la preparación puede involucrar la formulación de la molécula deseada con un agente, tales como microesferas inyectables, partículas bio-erosionables , compuestos poliméricos (tales como ácidos polilacticos o ácidos poliglicoles ) , gotas o liposomas, que pueden proveer para la liberación sostenida o controlada del producto el cual puede entonces ser entregado por medio de una inyección de depósito. En ciertas modalidades, se puede usar ácido hialurónico, y puede tener el efecto de promover una duración sostenida en la circulación. En ciertas modalidades, se pueden utilizar dispositivos implantables de entrega de droga para introducir la molécula deseada. En ciertas modalidades, una composición farmacéutica se puede formular por inhalación. En ciertas modalidades, la administración por inhalación es beneficiosa cuando se tratan enfermedades asociadas con desordenes pulmonares. En ciertas modalidades, un anticuerpo, con o sin por lo menos un agente terapéutico adicional, se puede formular como un polvo seco para la inhalación. En ciertas modalidades, una solución de inhalación incluyendo un anticuerpo, con o sin por lo menos un agente terapéutico adicional, se puede formular con un propelente para entrega en aerosol. En ciertas modalidades, las soluciones se pueden nebulizar. Se describe la administración pulmonar adicionalmente en la publicación PCT No. WO94/20069, la cual describe la entrega pulmonary de proteínas modificadas químicamente. En ciertas modalidades, se contempla que las formulaciones puedan ser administradas oralmente. En ciertas modalidades, un anticuerpo, con o sin por lo menos un agente terapéutico adicional, que se administra en este estilo puede ser formulado con o sin aquellos portadores usados como de costumbre en la composición de formas de dosis sólidas tales como tabletas o cápsulas. En ciertas modalidades, se puede designar una cápsula para liberar la porción activa de la formulación en el punto del sistema gastrointestinal cuando se maximiza la biodisponibilidad y se minimiza una degradación pre-sistémica . En ciertas modalidades, se puede incluir por lo menos un agente adicional para facilitar la absorción del anticuerpo y/o de cualquier agente terapéutico adicional. En ciertas modalidades, se pueden también emplear, diluyentes, saborizantes , ceras con bajo punto de fusión, aceites vegetales, lubricantes, agentes de suspensión, agentes desintegradotes de tabletas, y/o aglutinantes. En ciertas modalidades, una composición farmacéutica puede involucrar cantidad efectiva de anticuerpos, con o sin por lo menos un agente terapéutico adicional, en una mezcla con excipientes no tóxicos que son apropiados para la manufactura de tabletas. En ciertas modalidades, al disolver las tabletas en agua estéril, u otro portador apropiado, las soluciones se pueden preparar en forma de dosis unitarias. Como excipientes apropiados se incluyen, pero no están limitados a, diluyentes inertes como carbonato de calcio, carbonato o bicarbonato de sodio, lactosa, o fosfato de calicó; y agentes aglutinantes, tales como el almidón, gelatina y acacia; y agentes lubricantes tales como estearato de magnesio, ácido estereático y talco. Las composiciones farmacéuticas adicionales serán evidentes para aquellos expertos en la materia, incluyendo formulaciones que incluyan anticuerpos, con o sin por lo menos un agente terapéutico adicional, en formulaciones de entrega controlada o sostenida. Como ciertas formulaciones ejemplares de entrega controlada y sostenida se incluyen, pero no se limitan a, portadores de liposoma, microparticulas bio-erosionables , burbujas porosas, e inyecciones de depósito. Ciertas técnicas ejemplares para preparar ciertas formulaciones son conocidas por aquellos expertos en la materia. Ver por ejemplo, publicación PCT No. W093/15722, que describe la liberación controlada de microparticulas poliméricas porosas para la entrega de composiciones farmacéuticas. En ciertas modalidades, las preparaciones de liberación sostenida pueden incluir matrices de polímeros semi-permeables en forma de artículos configurados, por ejemplo, películas o microcápsulas . Las matrices de liberación sostenida incluyen, pero no están limitadas a, poliésteres, hidrogeles, poliactidos (Patente USA No. 3,773,919 y EP 058,481), copolímeros de ácido L-glutámico y gamma etil-L-glutamato (Sidman et al., Biopolymers, 22:547-556 (1983)), poli ( 2-hidroxietil-metacrilato ) (Langer et al., J. Biomed. Mater. Res., 15:167-277 (1981) y Langer, Chem. Tech., 12:98-105 (1982)), etileno vinil acetato (Langer et al., supra) , y ácido poli-D ( - ) -3-hidroxibutírico acid (EP 133,988). En ciertas modalidades, las composiciones de liberación sostenida también pueden incluir liposomas, las cuales pueden ser preparadas, en ciertas modalidades, con cualquiera de los varios métodos conocidos por la ciencia.
Ver por ejemplo., Eppstein et al., Proc . Nati. Acad. Sci. USA, 82:3688-3692 (1985); EP 036,676; EP 088,046 y EP 143, 949. En ciertas modalidades, la composición farmacéutica a ser usada para administración in vivo es estéril. En ciertas modalidades, la composición farmacéutica a ser usada para administración in vivo se hace estéril por filtración a través de membranas de filtración estéril. En ciertas modalidades, en donde se liofiliza la composición, se puede conducir la esterilización utilizando membranas de filtración estéril ya sea previo a o siguiendo la liofilización y reconstitución. En ciertas modalidades, la composición para administración parenteral puede ser guardada en forma liofilizada o en una solución. En ciertas modalidades, las composiciones parenterales por lo general se colocan dentro de un recipiente que tiene un puerto de acceso estéril, por ejemplo, una bolsa o ampolleta de solución intravenosa que tiene un tapón perforable por la aguja de una inyección hipodérmica . En ciertas modalidades, después de que la composición farmacéutica ha sido formulada, se puede guardar en ampolletas estériles como una solución, suspensión, gel, emulsión, sólido o como un polvo liofilizado o deshidratado. En ciertas modalidades, tales formulaciones se pueden guardar ya sea en una forma lista para usar o (por ejemplo, una forma liofilizada) una forma que se reconstituye previo a la administración . En ciertas modalidades, se proveen kits para producir unidades de administración de una sola dosis. En ciertas modalidades, los kits de accesorios pueden contener ambos, un recipiente que tiene una proteina seca y un segundo recipiente que tiene una formulación acuosa. En ciertas formulaciones, se incluyen kits que contienen jeringas pre-llenadas con una sola o múltiples cámaras (por ejemplo, jeringas liquidas y lioj eringas ) . En ciertas modalidades, la cantidad efectiva de una composición farmacéutica que incluye un anticuerpo, con o sin por lo menos un agente terapéutico adicional, para ser empleado terapéuticamente dependerá, por ejemplo, en el contexto terapéutico y objetivos. Un experto en la materia observará que los niveles de dosis apropiadas para el tratamiento, de acuerdo a ciertas modalidades, variará asi dependiendo, en parte, de la molécula entregada, la indicación para la cual el anticuerpo, con o sin por lo menos un agente terapéutico adicional, esta siendo usado, la ruta de administración, y el tamaño (peso del cuerpo, superficie del cuerpo o tamaño del órgano) y/o condición (la edad y salud general) del paciente. En ciertas modalidades, el clínico puede titular la dosis y modificar la ruta de administración para obtener el efecto terapéutico óptimo.
En ciertas modalidades, una dosis típica puede extenderse de aproximadamente 0.1 µg/kg hasta aproximadamente 100 mg/kg o más, dependiendo en los factores mencionados arriba. En ciertas modalidades, las dosis puede externderse desde 0.1 µg/kg hasta aproximadamente 100 mg/kg; o de 1 µg/kg a aproximadamente 100 mg/kg; o de 5 µg/kg a aproximadamente 100 mg/kg; o de 0.1 mg/kg a aproximadamente 100 mg/kg. En ciertas modalidades, la frecuencia de dosis tomará en cuenta los parámetros fármaco-cinéticos del anticuerpo y/o cualquier otro agente terapéutico adicional en la formulación usada. En ciertas modalidades, un clínico administrará la composición hasta que se alcance una dosis que logre el efecto deseado. En ciertas modalidades, la composición puede por lo tanto se administrada como una sola dosis, o como dos o más dosis (que pueden o no contener la misma cantidad de la molécula deseada) en el tiempo, o como una infusión continua vía un dispositivo de implantación o catéter. Ciertos métodos para refinar adicionalmente la dosis apropiada se hallan dentro de la ciencia. En ciertas modalidades, se pueden determinar dosis apropiadas a través del uso de datos de respuesta de dosis apropiada. En ciertas modalidades, la ruta de administración de la composición farmacéutica está de acuerdo a métodos conocidos, por ejemplo, oralmente, a través de inyecciones por rutas intravenosa, intraperitoneal , intracerebral (intra- parenquimal ) , intracerebroventricular , intramuscular, infraocular, intraarterial , intraportal, o intralesional ; por sistemas de liberación sostenida o por dispositivos de implantación. En ciertas modalidades, las composiciones se pueden administrar por inyección de bolo o continuamente por infusión, o por dispositivo de implantación. Como se discutió arriba, en varias modalidades, se puede usar cualquier ruta eficaz de administración para administrar anticuerpos. Si se inyectan, los anticuerpos se pueden administrar, en ciertas modalidades, por ejemplo, via intra-articular, intravenosa, intramuscular, intralesional, intraperitoneal , intracraneal, intranasal, inhalación o rutas subcutáneas por inyección de bolo o por infusión continua. Métodos ejemplares de administración incluyen, pero no están limitados a, liberación sostenida de implantes, inhalación por aerosol, gotas de ojos, preparaciones orales, y preparaciones tópicas tales como lociones, geles, sprays, ungüentos, y otras técnicas apropiadas. Cuando los anticuerpos se administran en combinación con uno o más de otros compuestos activos biológicamente, en ciertas modalidades, estos se pueden administrar por la mismas o diferentes rutas, y pueden ser administrados juntos, separadamente, o secuencialmente . En ciertas modalidades, la composición se puede administrar localmente via implantación de una membrana, esponja, u otro material apropiado dentro del cual la molécula ha sido absorbida o encapsulada. En ciertas modalidades, en donde se utiliza un dispositivo de implantación, el dispositivo se puede implantar dentro del téj ido apropiado u órgano, y la entrega de la molécula deseada puede ser vía difusión, bolo de liberación temporizada, o administración continua. En ciertas modalidades, puede ser deseable usar una composición farmacéutica que incluye un anticuerpo, con o sin por lo menos un agente terapéutico adicional, en una manera ex vivo. En dichas modalidades, las células, tejidos y/u órganos que han sido removidos del paciente se exponen a una composición farmacéutica que incluye un anticuerpo, con o sin por lo menos un agente terapéutico adicional, después del cual las células, tejidos y/u órganos son implantados subsecuentemente en el paciente nuevamente. En ciertas modalidades, un primer anticuerpo se enlaza a un primer epitope en una molécula y un segundo anticuerpo se enlaza a un segundo epitope en la misma molécula. En ciertas modalidades, el primer epitope se superpone con el segundo epitope de tal manera que el enlace ya sea del primer anticuerpo o del segundo anticuerpo a la molécula inhibe el enlace del otro anticuerpo a la molécula. En ciertas modalidades, el primer epitope no se superpone con el segundo epitope de tal manera que el enlace del primer anticuerpo o del segundo anticuerpo a la molécula no inhibe el enlace del otro anticuerpo. En ciertas modalidades, un epitope en un receptor se superpone con un sitio de enlace de un ligando en el receptor. En ciertas modalidades, el enlace de un anticuerpo al receptor inhibe el enlace del ligando al receptor. En ciertas modalidades, el enlace de un anticuerpo al receptor bloquea el enlace del ligando al receptor. En ciertas modalidades, el enlace de un anticuerpo inhibe parcialmente el enlace del ligando al receptor . En ciertas modalidades, un epitope en una molécula receptora no se superpone con un sitio de enlace de un ligando en el receptor. En ciertas modalidades, el enlace de un anticuerpo al epitope por lo menos activa parcialmente el receptor. En otras ciertas modalidades, el enlace de un anticuerpo al epitope no activa el receptor. En ciertas modalidades, un epitope en una molécula del receptor se superpone con un sitio de enlace de un ligando en el receptor. En ciertas modalidades, el enlace de un anticuerpo al epitope por lo menos activa parcialmente el receptor. En otras ciertas modalidades, el enlace de un anticuerpo al epitope no activa el receptor. En ciertas modalidades, el enlace de un anticuerpo al epitope en el receptor inhibe la activación del receptor por el ligando del receptor. En ciertas modalidades, el enlace de un anticuerpo al epitope en el receptor bloquea la activación del receptor por el ligando del receptor. En ciertas modalidades, la dimerización de un receptor incrementa su activación. En ciertas modalidades, los receptores deben dimerizarse para activarse. En ciertas modalidades, un anticuerpo bivalente facilita la dimerización del receptor. En ciertas modalidades, un anticuerpo monovalente se enlaza de manera cruzada con otro anticuerpo monovalente para crear una molécula bivalente. En ciertas modalidades, un EpoR agonizante es un anticuerpo que activa huEpoR. En ciertas modalidades, un anticuerpo que activa huEpoR (un anticuerpo huEpoR) es un axibody. En ciertas modalidades, un anticuerpo huEpoR se administra menos frecuentemente que una proteina estimulante de eritropoiésis (ESP) . Ejemplos de ESPs incluyen epoietina alfa, epoietina beta y darbepoietina alfa. En ciertas modalidades, un anticuerpo huEpoR se administra aproximadamente una vez por mes, o aproximadamente una vez cada dos meses, o aproximadamente una vez cada tres meses, o aproximadamente una vez cada cuatro meses, o aproximadamente una vez cada cinco meses, o aproximadamente una vez cada seis meses . En ciertas modalidades, los anticuerpos contra un anticuerpo huEpoR no pueden contra reaccionar con la eritropoiétina nativa (Epo) y por lo tanto no pueden inducir Aplasia pura de la serie roja (PRCA) Como una consecuencia, la administración de un anticuerpo huEpoR lleva un riesgo reducido de inducir PRCA cuando se lo compara con la administración de otras proteínas estimuladoras de la eritropoiésis . En ciertas modalidades, un anticuerpo huEpoR con un riesgo reducido de inducir PRCA se usa para tratar una enfermedad o condición utilizando un método de administración para permitir la liberación controlada en un período extendido de tiempo. Por ejemplo, y sin limitación, un anticuerpo huEpoR puede ser administrado oralmente o con dispositivos de entrega no invasivos sin incrementar el riesgo de PRCA. En ciertas modalidades, por lo menos un anticuerpo se usa para tratar una enfermedad o condición. En ciertas modalidades, un anticuerpo que incluye una secuencia de aminoácidos que incluyen el SEQ ID NO. 1 y SEQ ID NO. 2 se usa para tratar una enfermedad o condición. En ciertas modalidades, un anticuerpo que incluye una secuencia de aminoácidos que incluyen el SEQ ID NO. 3 y SEQ ID NO. 4 se usa para tratar una enfermedad o condición. En ciertas modalidades, un anticuerpo que incluye una secuencia de aminoácidos que incluyen el SEQ ID NO. 5 y SEQ ID NO. 6 se usa para tratar una enfermedad o condición. En ciertas modalidades, un anticuerpo que incluye una secuencia de aminoácidos que incluyen el SEQ ID NO. 7 y SEQ ID NO. 8 se usa para tratar una enfermedad o condición. En ciertas modalidades, un anticuerpo que incluye una secuencia de aminoácidos que incluyen el SEQ ID NO. 9 y SEQ ID NO. 10 se usa para tratar una enfermedad o condición. En ciertas modalidades, un anticuerpo que incluye una secuencia de aminoácidos que incluye SEQ ID NO. 56 y SEQ ID NO. 58 se usa para tratar una enfermedad o condición. En ciertas modalidades, un anticuerpo que incluye una secuencia de aminoácidos que incluye SEQ ID NO. 60 y SEQ ID NO. 62 se usa para tratar una enfermedad o condición. En ciertas modalidades, un anticuerpo que incluye una secuencia de aminoácidos que incluye SEQ ID NO. 64 y SEQ ID NO. 66 se usa para tratar una enfermedad o condición. En ciertas modalidades, un anticuerpo que incluye una secuencia de aminoácidos que incluye SEQ ID NO. 68 y SEQ ID NO. 70 se usa para tratar una enfermedad o condición. En ciertas modalidades, un anticuerpo que incluye una secuencia de aminoácidos que incluye SEQ ID NO. 72 y SEQ ID NO. 74 se usa para tratar una enfermedad o condición. En ciertas modalidades, un anticuerpo que incluye una secuencia de aminoácidos que incluye SEQ ID NO. 76 y SEQ ID NO. 78 se usa para tratar una enfermedad o condición. En ciertas modalidades, un anticuerpo que incluye una secuencia de aminoácidos que incluye SEQ ID NO. 80 y SEQ ID NO. 82 se usa para tratar una enfermedad o condición. En ciertas modalidades, un anticuerpo que incluye una secuencia de aminoácidos que incluye SEQ ID NO. 84 y SEQ ID NO. 86 se usa para tratar una enfermedad o condición. En ciertas modalidades, un anticuerpo que incluye una secuencia de aminoácidos que incluye SEQ ID NO. 88 y SEQ ID NO. 90 se usa para tratar una enfermedad o condición. En ciertas modalidades, un anticuerpo que incluye una secuencia de aminoácidos que incluye un SEQ ID NO. 92 y SEQ ID NO. 94 se usa para tratar una enfermedad o condición. En ciertas modalidades, un anticuerpo que incluye una secuencia de aminoácidos que incluye SEQ ID NO. 96 y SEQ ID NO. 98 se usa para tratar una enfermedad o condición. En ciertas modalidades, un anticuerpo que incluye una secuencia de aminoácidos que incluye SEQ ID NO. 100 y SEQ ID NO. 102 se usa para tratar una enfermedad o condición. En ciertas modalidades, un anticuerpo que incluye una secuencia de aminoácidos que incluye SEQ ID NO. 104 y SEQ ID NO. 106 se usa para tratar una enfermedad o condición. En ciertas modalidades, un anticuerpo que incluye una secuencia de aminoácidos que incluye SEQ ID NO. 108 y SEQ ID NO. 110 se usa para tratar una enfermedad o condición. En ciertas modalidades, un anticuerpo que incluye una secuencia de aminoácidos que incluye SEQ ID NO. 112 y SEQ ID NO. 114 se usa para tratar una enfermedad o condición.
En ciertas modalidades, un anticuerpo que específicamente se liga a los aminos ácidos F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano se usa para tratar una enfermedad o condición. En ciertas modalidades, un anticuerpo que específicamente se liga a los aminos ácidos S91, F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano se usa para tratar una enfermedad o condición. En ciertas modalidades, un anticuerpo que específicamente se liga a lo amino ácido F93 del dominio extracelular del Receptor Epo humano se usa para tratar una enfermedad o condición. En ciertas modalidades, un anticuerpo que específicamente se liga a los aminos ácidos E62, F93 y M150 del dominio extracelular del Receptor Epo humano se usa para tratar una enfermedad o condición. En ciertas modalidades, un anticuerpo que específicamente se liga a los aminos ácidos V48, E62, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano se usa para tratar una enfermedad o condición. En ciertas modalidades, un anticuerpo que específicamente se liga a los aminos ácidos V48, W64, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano se usa para tratar una enfermedad o condición. En ciertas modalidades, un anticuerpo que específicamente se liga a los aminos ácidos A44, V48, P63, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano se usa para tratar una enfermedad o condición. En ciertas modalidades, un anticuerpo que específicamente se liga a los aminos ácidos L66 y R99 del dominio extracelular del Receptor Epo humano se usa para tratar una enfermedad o condición. En ciertas modalidades, la enfermedad o condición tratada se asocia con los niveles disminuidos de células rojas y hemoglobina. En ciertas modalidades, la enfermedad o condición tratada es anemia. En ciertas modalidades, el tratamiento de anemia con un anticuerpo huEpoR se caracteriza por una respuesta erytropoietica de mayor duración que la que se observa con otros ESPs. En ciertas modalidades, se usa un anticuerpo huEpoR para tratar la anemia de enfermedades o condiciones crónicas. Crónico significa persistente o duradero. En ciertas modalidades, una enfermedad crónica o condición se puede empeorar en el tiempo. En ciertas modalidades, una enfermedad crónica o condición puede no empeorar en el tiempo. Enfermedades crónicas ejemplares incluyen, pero no están limitadas a, enfermedad crónica de los ríñones, falla congestiva del corazón, y síndromes mielodisplásticos . En ciertas modalidades, un anticuerpo hEpoR posee un perfil farmacocinético apropiado para tratar una enfermedad crónica o condición. En ciertas modalidades, un anticuerpo huEpoR posee un perfil farmacocinético que incluye una respuesta eritropoiética entendiéndose por una mayor duración que la respuesta eritropoiética que se observa con otros ESPs . En ciertas modalidades, un anticuerpo huEpoR se usa para tratar anemia del cáncer, anemia inducida por quimioterapia, anemia del anciano, u otras anemias, incluyendo pero no limitadas a, anemia debido a infección, inflamación, deficiencia de hierro, pérdida de sangre, hemolisis, hiperparatiroidismo secundario, diálisis inadecuada, malnutrición de energía proteínica, deficiencias de vitaminas, o toxicidad a los metales (por ejemplo aluminio) . En ciertas modalidades, un anticuerpo huEpoR se usa para tratar APSR en pacientes que desarrollan esta condición como resultado de una enfermedad o en respuesta a la administración de drogas eritropoiéticas . En ciertas modalidades, se usa un anticuerpo huEpoR para promover la protección de tejidos en células responsivas a la eritropoiésis , tejidos y órganos. Por ejemplo, y sin limitación, en ciertas modalidades, se usa un anticuerpo huEpoR para promover la protección del tejido durante o después de un infarto al miocardio o un golpe. En ciertas modalidades, se usa un anticuerpo huEpoR para promover la protección en tejidos que pueden ser protegidos por la administración de eritropoiétina . Ciertos ejemplos de células, tejidos, y órganos que pueden ser protegidos por la administración de eritropoiétina se describen en las publicaciones PCT WO 02/053580 y WO 00/61164.
En ciertas modalidades, un anticuerpo huEpoR se usa para incrementar los hematócritos en pacientes en necesidad de los mismos. En ciertas modalidades, un anticuerpo huEpoR se administra una vez para incrementar los hematócritos por un periodo de aproximadamente 30 días, o aproximadamente 60 días, o aproximadamente 90 días, o aproximadamente 120 días, o aproximadamente 150 días, o aproximadamente 180 días.
EJEMPLOS Ejemplo 1 -Identificación de anticuerpos anti-huEpoR desde biblioteca de exhibición de fago scFv humano naive . Estrategia de Selección 1 En una primera secuencia de selección, aproximadamente un 1012 fagos humanos scFv desde bibliotecas de exhibición naive fueron incubados con 200 nM de huEpoR biotinilado en 1 mi de leche sin grasa a 2% en PBS/0,1% Tween 20 (PBS/T) por 1 hora a temperatura ambiente seguido por 5 lavadas utilizando PBS/T. El fago scFv enlazado a huEpoR se capturo utilizando cuentas magnéticas revestidas con estreptavidina . Se liberaron fagos enlazados de las cuentas magnéticas por medio de incubación con 1 mi de solución de tripsinización (50 g/ml tripsina porcina en 50mM Tris HC1/1 mM CaC12 a pH 8,0) a 37°C por 10 minutos. Para reintroducir el fago liberado en células E.coli, se usaron 10 mi de células de la fase log TGl para la incubación con toda la población del fago liberado de las cuentas magnéticas a 37°C por 30 minutos sin agitar y otros 30 minutos con agitación lenta. Las células TG1 gentilmente peletizadas fueron re-suspendidas en aproximadamente 1.5 mi de medio 2xYT, distribuidas en placas de 2 Nunc (25 cm x 25 cm) con medio 2xYT suplementado con 100 pg/ml de carbenicilina y 4% de glucosa y amplificadas durante la noche a 30°C. Las células amplificadas luego se desecharon de las placas y fueron juntadas. Aproximadamente 10-100 µ? de las células juntadas, cubriendo más de 10 veces el doble de las partículas de fago liberado, se utilizaron para inocular 25 mi de medio de 2xYT/100 µq/m.l de carbenicilina y 2% de glucosa y crecidos a 37°C con agitación a un OD6oo de 0.5. Este cultivo de la fase log fue luego super-infectado con aproximadamente 1011 fago auxiliar M13K07 a 37°C por 30 minutos y otros 30 minutos con agitamiento gentil. Las células fueron peletizadas y re-suspendidas en 25 mi de medio 2xYT suplementado con 100 vg/ l de carbenicilina y 25 pg/ml de kanamicina. Se agitaron células a 250 rpm a 25°C durante la noche. El sobrenadante del cultivo se recolectó por centrifugación a 10.000 rpm por 10 minutos. El fago en el sobrenadante se precipitó agregando 1/5 de volumen de PEG800/2.5 MNaCl 20% incubado en hielo por más de 30 minutos. El fago fue peletizado luego por centrifugación a 10.000 rpm por 10 minutos y resuspendido en tampón TE (10 mM Tris y 1 mM EDTA, pH7.5) . En una segunda secuencia de selección, el fago scFv resuspendido se incubón con 50 nM de huEporE biotinilado por 1 hora a temperatura ambiente seguido de 10 lavadas usando PBS/0.1% Tween 20. Se capturó el fago scFv enlazado a huEpoR utilizando cuentas magnéticas revestidas con estreptavidina . Se liberó fago de enlaces de las cuentas magnéticas por incubación con 1 mi de solución de tripsinización a 37°C por 10 minutos. La mitad del fago liberado se usó en la Estrategia de Selección 2 descrita abajo. Una pequeña fracción del fago liberado de la segunda secuencia de selección se reintrodujo dentro de TG1 al incubar apropiadamente fago diluido con células E.coli de la fase log media. Las células TG1 se colocaron en placas Petri 2xYT 100 g/ml carbenicilina para generar colonias simples. 384 colonias simples seleccionadas al azar fueron tomadas individualmente de las placas Petri y colocadas en pozos separados de 96 placas de pozo conteniendo 100 µ? de medio 2xYT suplementado con 100 µg/ml de carbenicilina y 2% de glucosa para crear placas experimenales de 96 pozos. Las placas experimentales de 96 pozos se incubaron a 37°C con agitación hasta que las células TG1 alcanzaron un OD60o de aproximadamente 0.5 (fase log media). Como un paso separado, un nuevo conjunto de placas de cultivo de 96 pozos conteniendo el mismo medio de cultivo descrito arriba se inoculó con una pequeña fracción de los cultivos crecientes en las placas experimentales de 96 pozos para crear placas duplicadas. Estas placas duplicadas se cultivaron a 37° C durante la noche. 20 µ? de una solución de glicerol al 50% se agregó entonces a cada pozo de las placas y las placas se congelaron en hielo seco y fueron guardadas a -70° C como placas principales. Los cultivos de la fase log media en las placas experimentales de 96 pozos fueron luego super-infectados con 109 fago auxiliar (helper) M13K07 a 37°C por 30 minutos y otros 30 minutos con agitación gentil. Se centrifugaron entonces las placas de 96 pozos a 3000 rpm por 5 minutos y los sobrenadantes en los pozos se removieron moviendo de un tirón las placas. Se agregaron luego 200 µ? de medio 2xYT suplementado con 100 pg/ml de carbenicilina y 25 yg/ml of Kanamicina a cada pozo y las placas se incubaron por agitación a 250 rpm a 30°C durante la noche. El cultivo de fago de toda la noche se centrifugó a 3.000 rpm por 5 minutos y las muestras de sobrenadante resultante se utilizaron para experimentos ELISA. Un Nuevo conjunto de placas ELISA de 96 pozos Nunc-Immuno Polysorp (Nalge Nunc International) se prepararon agregando huEpoR a 1 pg/ml a los pozos de las placas e incubando las placas durante la noche a 4° C. Una dilución de 1/20 de sobrenadante de cultivo conteniendo uno de los 384 diferentes fagos monoclonales en una solución de leche seca sin grasa a 2% en PBS/T se agregó a cada pozo separado de las placas de 96 pozos que contenían el huEpoR revestido en la superficie. Las placas se incubaron por 1 hora seguida de 3 lavados en PBS/T. Se llevó a cabo la detección del fago de enlace utilizando un conjugado anti-M13 mAb/HRP (Amersham Biosciences) seguido de 3 lavados en PBS/T. Se utilizó ABTS como el sustrato y absorción detectada a 405 nm. Un total de 96 fagos que se enlazan a huEpoR se identificaron de la exploración por ELISA de los 384 clones de fago escogidos al azar . Estrategia de Selección 2 La mitad de los fagos eluidos de la secuencia de selección 2 en la Estrategia de Selección 1 descrita en el primer párrafo de la página 199 fueron reintroducidos en células TG1 y se hizo una preparación de fago utilizando el mismo procedimiento como se describe en el último párrafo de lapágina 197 de la Estrategia de Selección 1. Aproximadamente 1012 fagos scFv amplificados se usaron para panning de células incubando el fago scFv con células UT-7 que expresan huEpoR (2xl06 células en 1 mi PBS/2% BSA) a 4o C por 2 horas seguido de 10 lavados con PBS/T. Los fagos de enlace UT-7 fueron eluidos de la superficie de la célula por incubación con 1 mi de tampón de glicina/HCl (100 m glicina /HC1 a pH2.5) por 10 minutos seguido de centrifugación a 3.000 rpm por 5 minutos. El sobrenadante acidico conteniendo el fago eluido se neutralizó con 50µ1 de solución base Tris 1M. Una pequeña alícuota del fago eluido del panning de célula UT-7 se introdujo dentro de las células TG1 a través de infección de fago. Las células TG1 infectadas en fago se colocaron en placas Petri 2xYT 100 g/ml carbenicilina para generar colonias simples. 192 colonias simples seleccionadas al azar fueron tomadas individualmente de las placas Petri y colocadas individualmente en pozos separados de dos placas de 96 pozos profundos conteniendo 1 mi de medio 2xYT suplementado con 100 pg/ml de carbenicilina y 2% de glucosa. Las dos placas de 96 pozos profundos se incubaron a 37°C por agitación hasta que el cultivo alcanzó un ??ß?? de aproximadamente 0.5 Como un paso separado, un nuevo conjunto de placas de cultivo de 96 pozos conteniendo el mismo medio de cultivo descrito arriba se inoculó con una pequeña fracción de los cultivos crecientes en las placas de 96 pozos profundos para crear placas duplicadas. Estas placas duplicadas se cultivaron a 37° C durante la noche. 20 µ? de una solución de glicerol al 50% se agregó entonces a cada pozo de las placas y las placas se congelaron en hielo seco y guardadas a -70° C como placas prinipales. Después de inocular las placas principales, las dos placas de 96 pozos profundos con cultivos a un OD6oo de aproximadamente 0.5 se usaron en uno experimento FACS como se describe abajo.
Selección de fago de enlace a célula UT-7 mediante FACS 1 mi de medio 2xYT/2xYT suplementado con 100 g/ml de carbenicilina y 2% de glucosa se colocó en cada pozo de una placa de 96 pozos profundos. Las nuevas muestras de fago de los 96 clones positivos identificados por ELISA en la Estratégia de Selección 1 se prepararon mediante la inoculación de lo medio en cada pozo de la placa de 96 pozos profundos con células provenientes de los pozos correspondientes en las placas principales. La placa de 96 pozos profundos fue incubada a una temperatura de 37 °C con agitación hasta que el cultivo logró un OD6oo de aproximadamente 0.5. Según lo tratado en la Estratégia de Selección 2, los cultivos que contienen 192 diferentes fagos de la Estrategia de Selección 2 fueron incubados en dos placas de 96 pozos profundos a 37 °C con agitación hasta que los cultivos lograron un OD6oo de aproximádamente 0.5. Las 3 placas de 96 pozos profundos que contenían cultivos de fase log (descritos en los dos párrafos anteriores) fueron entonces altamente infectados con aproximádamente 109 fagos auxiliares M13K07 a 37 °C durante 30 minutos y otros 30 minutos con una agitación suave. Luego las placas fueron centrifugadas a 3000 rpm durante 5 minutos y se removieron los sobrenadantes volteando las placas, lml de medio 2xYT suplementado con 100 µ?/??? de carbenicilina y de 25 g/ml de kanamicina fueron entonces agregados a cada pozo y las placas fueron incubadas por agitación a 250 rpm a 30°C durante toda la noche. Los sobrenadantes que contenían fagos fueron preparados mediante la centrifugación del cultivo de toda la noche a 3000 rpm durante 5 minutos. Se purificaron los fagos de los sobrenadantes agregándoles 1/5 vol de una solución PEG8000/2.5 M NaCl a 20%. Los fagos precipitados fueron formados en pellets mediante la centrifugación y los resultantes fagos en pellets en cada pozo de las placas de 96 pozos profundos fueron resuspendidos en 100 µ? de buffer TE (10 mM tris HC1, 1 mM EDTA, pH7.5) para uso en los experimentos FACS . En cada pozo de un nuevo grupo de tres placas de 96 pozos se incubaron las células UT-7 con una alícuota de 10 µ? de un fago único y 90 µ? de 2% BSA PBS/T durante 1 hora a 4°C. Después de 2 lavados rápidos con PBS frío, las células fueron incubadas con 100 µ? de 1 µg/ml anticuerpo monoclonal de ratón anti-M13 (Amersham Bioscience) en 2% BSA PBS/T a 4°C durante una hora. En seguida a dos lavados rápidos con PBS frío, 100 µ? de 1 de IgG Fe de cabra F(ab') 2 anti-ratón conjugada con ficoeritrina (Jackson Immuno Research Laboratories) fueron agregados a cada pozo en las placas. Luego, las placas fueron incubadas durante una hora a 4°C. Se lavaron las células por dos veces utilizando nuevamente PBS frió y resuspendidas en 1 mi de buffer de fijación (2% de paraformaldehido PBS pH 7. ) La FACS fue realizada por medio de citómetro de flujo Multiwell Caliber. Los 14 clones de fago de la Estratégia de Selección 1 y 38 de la Estratégia de Selección 2 fueron identificados como aglutinantes de células UT-7 que expresan EpoR. El análisis de secuencia de ADN de aquellas muestras de fago scFv tiene como resultado a un total de 29 secuencias únicas de scFv. Ejemplo 2 - La Conversión de fago scFv a scFv-Fc, IgG2 y la purificación y expresión de proteina IgGi Por medio del proceso de subclonación hidrodinámico (Figura 2) los 29 clones de fago scFv se convirtieron en proteínas de fusión scFv-Fc. El ADN codificando el scFv amplificó el fagomidio condificando los clones por medio de PCR utilizando un par de iniciadores específicos de vector (pUCRev/FdTet ) . Ligación de los fragmentos de restricción Ncol y Notl de scFv al Pcil (que crea un extremo cohesivo con Ncol) y vector de expresión en mamíferos digerido Notl, pDC409a-GlFc tiene como resultado la fusión del scFv con el IgGi Fe humano. pDC409a-huGl Fe contiene un IgGi Fe humano después del sitio Notl. Los fragmentos de restricción Ncol y Pcil tienen el mismo extremo cohesivo. La secreción de la proteina scFv-Fc es mediado por una secuencia de señal VH5D Maxibodies derivados de los clones de fagos individuales son denominados mediante la designación "Mxb x" donde x representa el número del clon. Al convertir los clones scFv a los constructos de expresión, se amplificaron los fragmentos de ADN que codifican a las regiones VH o VL por medio de PCR desde fagomidios codificadores de clones utilizando iniciadores específicos para cada dominio variable. La ligación del fragmento VH (Nhe/AscI) a un vector de expresión de cadena pesada IgG2 digerida por restricción de manera similar, pVE 14NhuIgG2 , tuve como resultado un constructo de expresión de cadena pesada de anticuerpo. La ligación del fragmento VD Nhel/NarI a un vector de expresión de cadena ligera IgG2 digerida por restricción de manera similar, pVE 14NhuDLC, tuve como resultado un constructo de expresión de cadena ligera lambda de anticuerpo. La ligación del fragmento VD Nhel/Bsi WI a un vector de expresión de cadena ligera digerida por restricción de manera similar, pVE414NhuDLC tuve como resultado constructos de expresión de cadena ligera kappa de anticuerpo. La selección de tipo constante de cadena ligera concuerda con los isotipos de cadena ligera variable . Para la generación de los constructos de expresión IgGi el mismo fragmento VH Nhe/AscI utilizado para el constructo de expresión IgG2 fue ligado a un vector pVE414NhuIgGl digerido por restricción de manera similar. Los constructos de expresión de cadena ligera que se describen en el párrafo anterior fueron utilizados para expresar tanto las cadenas ligeras IgGi como las cadenas ligeras IgG2. Temporalmente se expresaron las proteínas scFv-Fc en las células mamíferas COS-1 PKB E5 por cotransfección de contructos de expresión de cadena ligera y pesada de anticuerpo. Temporalmente también se expresaron las proteínas IgGl en las células mamíferas COS-1 PKB E5 por cotransfección de contructos de expresión de cadena ligera y pesada de anticuerpos. También temporalmente se expresaron las proteínas IgG2 en las células mamíferas COS-1 PKB E5 por cotransfección de contructos de expresión de cadena ligera y pesada de anticuerpo. Se purificaron los anticuerpos expresados a una pureza mayor que 95% desde el medio condicionado mediante el uso de cromatografía de afinidad con la proteína A. Las identidades de las proteínas fueron verificadas por secuenciación de aminoácido en término N y las concentraciones fueron determinadas por absorción a 280 nm. Ejemplo 3 - Análisis de fijación de anticuerpo a huEpoR de superficie de célula por medio de FACS Se analizó la fijación de la proteína scFv-Fc a un huEpoR expresado em superficie de célula por medio de FACS.
Se incubaron las células UT-7 solamente con proteina 5 nM scFv-Fc o con proteina 5 nM scFv-F más 0.5 µ?/p?? de rHuEpo durante 1 hora a 4°C. Luego de 2 lavados rápidos con PBS frío, se incubaron las células UT-7 con 1 µ?/ml de IgG Fe cabra F(ab')2 anti-humano conjugado com ficoeritrina (Jackson Immuno Research Laboratories) durante 1 hora a 4°C. Se lavaron las células por segunda vez utilizando PBS frío y fueron resuspendidas en 1 mi de buffer de fijación (2% paraformaldehido PBS pH 7.4). La FACS se llevó a cabo mediante un citómetro de flujo FACSCaliber (Becton-Dickinson) . Los rastros de la FACS de las proteínas expresadas por los vectores de expresión scFv-Fc aparecen en la Figura 3. Todos los Clones 2, 5, 7, 10 y 30 están fijados a células UT-7 que expresan huEpoR (Figura 3A) pero no a las células de control negativas (Figura 3B) . La superficie de la célula UT-7 fijada a los clones 2, 5, 7 y 10 fue bloqueada por un exceso de rHuEpo (Figura 3A) . RHuEpo no bloqueó la fijación con el clon 30 (Figura 3A) . Ejemplo 4 - Secuencias de los Clones 2, 5, 7, 10 y 30. Los clones 2, 5, 7, 10 y 30 fueron secuenciados mediante las técnicas estándar. Las secuencias de aminoácidos y ácidos nucléicos para las cadenas pesadas y ligeras variables de los clones 2, 5, 1, 10 y 30 figuran a continuación. Las cadenas pesadas y ligeras CDR1, CDR2 y CDR3 están subrayadas en orden dentro de cada secuencia de aminoácidos. >Secuencia de ácido nucleico VH Clon #2 GAGGTCCAGCTGGTGCAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCT CCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTAGCTATTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCC AGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCCAACATAAAGCCAGATGGAAGTGAGAAATACTATGTG GACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAATTCAGTGTATCTGC AAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTTTCGAGGGG TGGGAGCTACTCGGACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGT (SEQ ID. NO.: 35) >Secuencia de aminoácido VH Clone #2 EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV DSVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCARVSRGGSYSDWGQGTLVTVSS (SEQ ID. NO. : 1) >Secuencia de ácido nucleico VL Clone #2 CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCCGCGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCAGTCACCATCT CCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGTGGTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCA CCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGAGGTCAGTAAGCGGCCCTCAGGGGTCCCT GATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCGTCTCTGGGCTCCAGC CTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGCAGGCAGGAACTGGGTGTTCGGCGG AGGGACCCAGCTCACCGTTTTA (SEQ ID. NO . : 36) >Secuencia de aminoácido VL Clone #2 QSVLTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKL IYEVSKRPSGVP DRFSGSKSGNTASLTVSGLQPEDEADYYCSSYAGRNWVFGGGTQLTVL (SEQ ID.
NO.: 2) >Secuencia de ácido nucleico VH Clone #5 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCT CCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTAGCTATTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCC AGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCCAACATAAAGCCAGATGGAAGTGAGAAATACTATGTG GACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAATTCAGTGTATCTGC AAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCAAGAGTTTCGAGGGG TGGGAGCTACTCGGACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT (SEQ ID. NO.: 37) >Secuencia de aminoácido VH Clone #5 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV DSVKGRFTI SRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCARVSRGGSYSDWGQGTLVTVSS (SEQ ID. NO. : 3) >Secuencia de ácido nucleico VL Clone #5 CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCT CCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGTGGCTATATTTATGTCTCCTGGTACCAACAACA CCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGATGTCAGTCGTCGGCCCTCAGGGATTTCT GATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGG CTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAACTCATATACAACCCTCAGCACCTGGCTCTTCGG CGGAGGGACCAAGGTCACCGTCCTA (SEQ ID. NO.: 38) >Secuencia de aminoácido VL Clone #5 QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYIYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSRRPSGIS DRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCNSYTTLSTWLFGGGTKVTVL (SEQ ID. NO.: 4) >Secuencia de ácido nucleico VH Clone #7 GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCT CCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTAGCTATTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCC AGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCCAACATAAAGCCAGATGGAAGTGAGAAATACTATGTG GACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAATTCAGTGTATCTGC AAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTTTCGAGGGG TGGGAGCTACTCGGACTGGGGCAAAGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT (SEQ ID. NO.: 39) >Secuencia de aminoácido VH Clone #7 EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYW SWVRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV DSVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCARVSRGGSYSDWGKGTLVTVSS (SEQ ID. NO. : 5) >Secuencia de ácido nucleico VL Clone #7 CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCATCATCT CCTGCACTGGAACCCGCAGTGACATTGGTGGTTACAACTATGTCTCCTGGTACCAACACCA CCCAGGCAGAGCCCCCAAACTCATCATTTTTGATGTCAATAATCGGCCCTCAGGAGTCTCT CACCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGG CTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAATTCATTTACAGACAGCCGGACTTGGCTGTTCGG CGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID. NO.: 40) >Secuencia de aminoácido VL Clone #7 QSALTQPASVSGSPGQSI I ISCTGTRSDIGGYNYVSWYQHHPGRAPKLIIFDVNNRPSGVS HRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCNSFTDSRTWLFGGGTKLTVL (SEQ ID. NO.: 6) >Secuencia de ácido nucleico VH Clone #10 GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCT CCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCC AGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCA GACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGC AAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGTAAAAGATAGGGTTGC TGTAGCTGGTAAGGGTTCGTATTACTTTGACTCTTGGGGGAGGGGGACCACGGTCACCGTC TCGAGT (SEQ ID. NO.: 41) >Secuencia de aminoácido VH Clone #10 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYA DSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKDRVAVAGKGSYYFDSWGRGTTVTV SS (SEQ ID. NO. : 7) >Secuencia de ácido nucleico VL Clone #10 CAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCGGTGTCTGAAGCCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCG CCTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAATAATGCTGTAAGTTGGTACCAGCAACTCCC AGGAAAGGCTCCCACACTCCTCATCTATTATGATAATCTGCTGCCCTCAGGGGTCTCTGAC CGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCAGTCTG AGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCTGCATGGGATGACAGCCTGAATGATTGGGTGTTCGG CGGTGGGACCAAGGTCACCGTCCTA (SEQ ID. NO.: 42) >Secuencia de aminoácido VL Clone #10 QSVLTQPPSVSEAPGQRVTIACSGSSSNIGNNAVSWYQQLPGKAPTLLIYYDNLLPSGVSD RFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLND VFGGGTKVTVL (SEQ ID. NO.: 8) >Secuencia de ácido nucleico VH Clone #30 CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCA CCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTAGCAACAGTGCTGCTTGGAACTGGATCAGGCA GTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGTCCAAGTGGTATAAT GATTATGCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATGACCATAAAAGCAGACACATCCAAGAACCAGT TCTCCCTGCAACTGAACTCTGTGACTCCCGAAGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGA TGAGGGACCGCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGGCC ( SEQ ID. NO. : 43) >Secuencia de aminoácido VH Clone #30 QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYN DYAVSVKSRMTIKADTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARDEGPLDYWGQGTLVTVSA (SEQ ID. NO. : 9) >Secuencia de ácido nucleico VL Clone #30 CAGGCTGTGCTCACTCAGCCGTCCTCAGTGTCTGGGGCCCCAGGGCAGAGGGTCACCATCT CCTGCACTGGGAGCAGCTCCAACCTCGGGACAGGTTATGATGTACACTGGTACCAGCAGCT TCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAGCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCT GACCGATTCTCGGGCTCCAAGTCTGACACCTCAGGTTTGCTGGCCATCACTGGGCTCCAGG CTGAGGATGAGGCTACTTATTACTGCCAGTCCTATGACTTCAGCCTGAGTGCTATGGTATT CGGCGGAGGGACCAAGGTCACCGTCCTA (SEQ ID. NO . : 44) >Secuencia de aminoácido VL Clone #30 QAVLTQPSSVSGAPGQRVTISCTGSSSNLGTGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVP DRFSGSKSDTSGLLAITGLQAEDEATYYCQSYDFSLSAMVFGGGTKVTVL (SEQ ID. NO.: 10) Clones 2, 5, 7, 10 y 30 se utilizaron para elaborar proteínas scFv-Fc Las secuencias de ácido nucleico y de aminoácido de as proteínas cFv-Fc que codifican se muestran debajo: >Secuencia de ácido nucleico scFv-Fc Mxb #2 GAGGTCCAGCTGGTGCAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCT CCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTAGCTATTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCC AGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCCAACATAAAGCCAGATGGAAGTGAGAAATACTATGTG GACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAATTCAGTGTATCTGC AAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTTTCGAGGGG TGGGAGCTACTCGGACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGGAGGCGGCGGT TCAGGCGGAGGTGGCTCTGGCGGTGGCGGAAGTGCACAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCT CCGCGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCAGTCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGT TGGTGGTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATG ATTTATGAGGTCAGTAAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTG GCAACACGGCCTCCCTGACCGTCTCTGGGCTCCAGCCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTG CAGCTCATATGCAGGCAGGAACTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCCAGCTCACCGTTTTAGGT GCGGCCGCAGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTG AACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGAT CTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTC AAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGG AGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCT GAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAA ACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCC GGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAG CGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCT CCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCA GGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTA CACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA (SEQ ID NO.: 50) >Secuencia de aminoácido scFv-Fc Mxb #2: EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMS VRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV DSVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCARVSRGGSYSDWGQGTLVTVSSGGGG SGGGGSGGGGSAQSVLTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLM IYEVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQPEDEADYYCSSYAGRN VFGGGTQLTVLG AAAEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEV KFN YVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEK TISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE ESNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO.: 45) >Secuencia de ácido nucleico scFv-Fc Mxb #5 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCT CCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTAGCTATTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCC AGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCCAACATAAAGCCAGATGGAAGTGAGAAATACTATGTG GACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAATTCAGTGTATCTGC AAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCAAGAGTTTCGAGGGG TGGGAGCTACTCGGACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGGAGGCGGCGGT TCAGGCGGAGGTGGCTCTGGCGGTGGCGGAAGTGCACAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCT CCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGT TGGTGGCTATATTTATGTCTCCTGGTACCAACAACACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATG ATTTATGATGTCAGTCGTCGGCCCTCAGGGATTTCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTG GCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTG CAACTCATATACAACCCTCAGCACCTGGCTCTTCGGCGGAGGGACCAAGGTCACCGTCCTA GGTGCGGCCGCAGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCAC CTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCAT GATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAG GTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGG AGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTG GCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAG AAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCAT CCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCC CAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACG CCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGA GCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCA CTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA (SEQ ID NO.: 51) >Secuencia de aminoácido scFv-Fc xb #5 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSY MSWVRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV DSVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCARVSRGGSYSDWGQGTLVTVSSGGGG SGGGGSGGGGSAQSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYIYVSWYQQHPGKAPKLM IYDVSRRPSGISDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCNSYTTLSTWLFGGGTKVTVL GAAAEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE ESNGQPENNYKTT PPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV HEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO. : 46) >Secuencia de ácido nucleico scFv-Fc Mxb #7 GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCT CCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTAGCTATTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCC AGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCCAACATAAAGCCAGATGGAAGTGAGAAATACTATGTG GACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAATTCAGTGTATCTGC AAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTTTCGAGGGG TGGGAGCTACTCGGACTGGGGCAAAGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGGAGGCGGCGGT TCAGGCGGAGGTGGCTCTGGCGGTGGCGGAAGTGCACAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCT CCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCATCATCTCCTGCACTGGAACCCGCAGTGACAT TGGTGGTTACAACTATGTCTCCTGGTACCAACACCACCCAGGCAGAGCCCCCAAACTCATC ATTTTTGATGTCAATAATCGGCCCTCAGGAGTCTCTCACCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTG GCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTG CAATTCATTTACAGACAGCCGGACTTGGCTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA GGTGCGGCCGCAGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCAC CTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCAT GATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAG GTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGG AGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTG GCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAG AAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCAT CCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCC CAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACG CCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGA GCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCA CTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA (SEQ ID NO.: 52) >Secuencia de aminoácido scFv-Fc Mxb #7 EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV DSVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCARVSRGGSYSDWGKGTLVTVSSGGGG SGGGGSGGGGSAQSALTQPASVSGSPGQSI I ISCTGTRSDIGGYNYVSWYQHHPGRAPKLI IFDVNNRPSGVSHRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCNSFTDSRT LFGGGTKLTVL GAAAEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE ESNGQPENNYKTT PPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO. : 47) >Secuencia de ácido nucleico scFv-Fc Mxb #10 GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCT CCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCC AGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCA GACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGC AAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGTAAAAGATAGGGTTGC TGTAGCTGGTAAGGGTTCGTATTACTTTGACTCTTGGGGGAGGGGGACCACGGTCACCGTC TCGAGTGGAGGCGGCGGTTCAGGCGGAGGTGGCTCTGGCGGTGGCGGAAGTGCACAGTCTG TGCTGACGCAGCCGCCCTCGGTGTCTGAAGCCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCGCCTGTTC TGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAATAATGCTGTAAGTTGGTACCAGCAACTCCCAGGAAAG GCTCCCACACTCCTCATCTATTATGATAATCTGCTGCCCTCAGGGGTCTCTGACCGATTCT CTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCAGTCTGAGGATGA GGCTGATTATTACTGTGCTGCATGGGATGACAGCCTGAATGATTGGGTGTTCGGCGGTGGG ACCAAGGTCACCGTCCTAGGTGCGGCCGCAGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACAT GCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAA ACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTG AGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATG CCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCAC CGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCC CTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGG TGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCT GGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAG AACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCA AGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCA TGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA ( SEQ ID NO. : 53) >Secuencia de aminoácido scFv-Fc Mxb #10 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYA DSVKGRFTISRDNSKNTLYLQ NSLRAEDTAVYYCVKDRVAVAGKGSYYFDSWGRGTTVTV SSGGGGSGGGGSGGGGSAQSVLTQPPSVSEAPGQRVTIACSGSSSNIGNNAVSWYQQLPGK APTLLIYYDNLLPSGVSDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAA DDSLND VFGGG TKVTVLGAAAEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL ISRTPEVTCVVVDV SHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA LPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE ESNGQPE NNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO. : 48) >Secuencia de ácido nucleico scFv-Fc Mxb #30 CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCA CCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTAGCAACAGTGCTGCTTGGAACTGGATCAGGCA GTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGTCCAAGTGGTATAAT GATTATGCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATGACCATAAAAGCAGACACATCCAAGAACCAGT TCTCCCTGCAACTGAACTCTGTGACTCCCGAAGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGA TGAGGGACCGCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGGCCGGTGGCGGT GGCAGCGGCGGTGGTGGGTCCGGTGGCGGCGGATCTGGCGCGCCACAGGCTGTGCTCACTC AGCCGTCCTCAGTGTCTGGGGCCCCAGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCACTGGGAGCAG CTCCAACCTCGGGACAGGTTATGATGTACACTGGTACCAGCAGCTTCCAGGAACAGCCCCC AAACTCCTCATCTATGGTAACAGCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCGGGCT CCAAGTCTGACACCTCAGGTTTGCTGGCCATCACTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTAC TTATTACTGCCAGTCCTATGACTTCAGCCTGAGTGCTATGGTATTCGGCGGAGGGACCAAG GTCACCGTCCTAGCGGCCGCAGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGT GCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGA CACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAA GACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAA AGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCA CCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCC CCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCC TGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGG CTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTAC AAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCG TGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCT GCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA (SEQ ID NO. : 54) >Secuencia de aminoácido scFv-Fc Mxb #30 QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSK YN DYAVSVKSRMTIKADTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARDEGPLDYWGQGTLVTVSAGGG GSGGGGSGGGGSGAPQAVLTQPSSVSGAPGQRVTISCTGSSSNLGTGYDVH YQQLPGTAP KLLIYG SNRPSGVPDRFSGSKSDTSGLLAITGLQAEDEATYYCQSYDFSLSAMVFGGGTK VTVLAAAEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHE DPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPA PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE ESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO. : 49) Ejemplo 5 - Fijación competitiva a huEpoR Las proteínas scFv-Fc de clones 2, 5, 7, 10 y 30 fueron examinadas por su habilidad para competir con fagos scFv de los clones 5 y 30 con el objetivo de fijarse a huEpoR utilizando un ELISA en placas. Se inmovilizó el huEpoR biotinilado en una placa de estreptadivina . Se agregaron a la placa proteína scFv-Fc y un fago scFv. Se detectó la fijación del fago scFv por medio de un anticuerpo monoclonal de ratón anti-M13 seguido de IgG Fe cabra F(ab')2 anti-ratón conjungado con ficoeritrina (Jackson Immuno Research Laboratories) . La inhibición de fijación de fagos por la proteína scFv-Fc de los clones 2, 5, 7, 10 y 30 fue examinada con el uso de una serie de 8 concentraciones para cada proteína scFv-Fc (0, 0.032, 0.16, 0.8, 4, 20, 100 y 500nM) . Las proteínas scFv-Fc de los clones 2, 5, 7, 10 demostraron una inhibición dependiente de la dosis de la fijación del fago scFv del clon 5 al huEpoR (Figura 4A) . Sin embargo, la proteína scFv-Fc del clon 30 no inhibió la fijación del fago scFv del clon 5 con el huEpoR a concentraciones de hasta 500nM (Figura 4A) . La fijación del fago scFv del clon 30 con el huEpoR fue inhibida por la proteína scFv-Fc del clon 30 de un modo dependiente de dosis, pero no por las proteínas scFv-Fc de los clones 2, 5, 7 o 10 en concentraciones de hasta 500nM (Figura 4B) . Aquellos resultados sugieren que los epítopos para las proteínas scFv-Fc de los clones 2, 7 y 10 se superponen con lo epítopo de la proteína scFv-Fc del clon 5, sin embargo, la proteína scFv-Fc del clon 30 se une con un epítopo que no se superpone con los epitopos de las proteínas scFv-Fc de los clones 2, 5, 7 y 10. Ejemplo 6 - Anticuerpo fijado a proteina EpoR-Fc de ratón (muEpoR-Fc) Por medio del ensayo ELISA se determinó la reactividad de cruzamiento de proteínas scFv-Fc de los clones 2, 5, 7, 10 y 30 y de proteínas IgG2 los clones 2, 5, 7, 10 y 30 con EpoR de ratón (muEpoR) . Se agregaron las proteínas individuales scFv-Fc o proteínas IgG2 (100 µ? de una reserva de anticuerpo de 1 µg/ml en 50 mM NaHC03, pH8.5) a cada pozo en una placa ELISA Nunc-Immuno Polysorp (Nalge Nunc International) de manera que cada pozo contiene un solo clon. La placa fue incubada a 4°C durante toda la noche. Luego de bloquear los pozos con 4% de leche/PBS/0.1% Tween durante 1 hora a temperatura ambiente, las placas fueron lavadas 3 veces con PBS/0.1% Tween 20. Se agregó 100 µ? de proteína muEpoR-Fc biotinilada de 5 µq/ l a cada pozo y se incubó durante 1 hora a 25°C. El muEpoR-Fc ligado fue detectado mediante el uso de conjugado estreptavidina-HRP (1:1000 de dilución en 4% leche/PBS/O .1% Twe e n 20) . 2 , 2 ' - azino-bis ( 3 -etilbenztiazolina-6-ácido sulfónico) ( ABTS ) fue utilizado como sustrato y la absorción se midió a 405 nm en un lector de placas. Todos los anticuerpo s (proteínas scFV-Fc de los clones 2, 5, 7, 10 y 30 y proteínas IgG2 de los clones 2, 5, 7, 10 y 30) demostraron niveles significativos de reactividad cruzada al muEpoR-Fc (Figura 5) . Ejemplo 7 - Medición de cinética de fijación a huEpoR mediante BIAcore Se determinaron las afinidades de proteínas scFv-Fc de los clones 2, 5, 7, 10 y 30 mediante un instrumento BIAcore 3000 (BlOcore Intenational AB) . El anticuerpo Fe cabra anti-humano (Jackson Immuno Research Laboratories) fue inmovilizado en un chip CM4 (BIAcore International AB) activado mediante la química N-hidroxil succinamida. Una solución de proteína scFv-Fc circuló sobre el chip y la proteína en la solución fue capturada en el chip mediante ligación de Fe al anticuerpo Fe cabra anti-humano inmovilizado. Cada cinética en secuencia utilizó una velocidad de flujo de 50 µ?/min a 25°C. Cada secuencia utilizó proteína huEpoR a concentraciones de hasta 1000 nM como analito. Una fase de asociación de 1 minuto y una fase de disociación de 5 minutos fueron utilizadas para análisis de datos por 1:1 Langmuir con tranferencia de masa + un ajuste local Rmax utilizando un software de evaluación BIAenvaluation versión 3 proporcionado por BIAcore. Con el flujo de buffer de glicina de bajo pH (50 mM glicina HC1, pH 1.5) sobre el chip se removió la proteina scFv-Fc capturada el cual regeneró la superficie de chip CM4 del anticuerpo Fe cabra antihumano. Esta misma superficie del chip fue utilizada en forma separada para capturar cada una de las cinco proteínas scFv-Fc. Los sensogramas de fijación cinéticos BIAcore se muestran en la Figura 6 y los parámetros de fijación se resumen en la siguiente Tabla 2. Las afinidades para las 5 diferentes proteínas scFv-Fc variaron entre 1,1 nM a 14.900 nM. Las tasas de asociación y desasociación {Kon, K0ff, respectivamente) para las 5 proteínas scFv-Fc se encontraban dentro de rangos típicos para anticuerpos. La proteína scFv-Fc con la mayor afinidad, la proteína scFv-Fc del clon 10, tuvieron la menor Koff (2,2xl0~4 s"1) . La proteína scFv-Fc con la menor afinidad, la proteína scFv-Fc del clon 30, tuvieron la Kon más lenta (1.8xl04 M_1s_1) y el Koff más rápido (2,740xl0-4 s"1) .
Tabla 2. Sumario de cinética de fijación scFv-Fc BIAcore a huEpoR Ejemplo 8 - Selección de Proteínas scFv-Fc in vitro para la Activación del Receptor de Eritropoyetina Humano . Las veintinueve secuencias scFv identificadas en el Ejemplol fueron seleccionadas o como proteínas scFv-Fc o como proteínas IgG para la activación del huEpoR. La selección in vitro de las proteínas scFv-Fc y de las proteínas IgG fue efectuada mediante un ensayo de informe de luciferasa (ensayo de luciferasa) en células UT-7 (megacarioblastos humanos) transíectadas con un constructo que contenía nueve sitios de fijación STAT5 frente a un indicador de luciferasa (células UT-7-LUC) . Todas las células fueron mantenidas y los ensayos celulares conducidos a 37°C en una incubadora humidificada a 5% C02/95% aire atmosférico, a menos que hubiera sido indicado de otro modo. Todo el suero fetal bovino (FBS) fue inactivado por calor a 55°C durante 45 minutos antes de su utilización. Toda la solución salina tamponada fosfatada de Dulbecco (PBS) utilizada para la manipulación celular carecía de cloruro de calcio y cloruro de magnesio. Las células UT-7-LUC (Amgen, Inc., Thousand Oaks, CA) fueron mantenidas en un medio de crecimiento compuesto por IMDM (Invitrogen, Carlsbad, CA) que contenía 10% FBS (HyClone, Logan UT) , 500 g/mL higromicina (Roche, Penzberg, Alemania) , 100 U/ml penicilina, 100 µg/mL estreptomicina, 292 g/mL L-glutamina (IX PSG; Invitrogen) y 1 U/ml de eritropoyetina humana recombinante (Epoetin Alpha, rHuEpo; Amgen, Inc) Las células fueron lavadas dos veces en PBS (Invitrogen) y resuspendidas a 400.000 células por mi en medio de ensayo (medio RPMI 1640 con 1% FBS, IX PSG, y 12,5 mM HEPES (Invitrogen)). Luego de una incubación nocturna, se determinó el número de células y la viabilidad, y las células fueron resuspendidas a 200.000 células por mi en medio de ensayo. Cada proteína scFv-Fc fue diluida en serie en una placa opaca de 96 pozos (Corning, Corning, NY) Cada dilución fue realizada por triplicado y las siguientes concentraciones de proteínas scFv-Fc fueron usadas. xb 5, Mxb 10, Mxb 30: 1000; 0,333; 0,111; 37,04; 12,35; 4,115; 1,372; 0,457; 0,152; 0,051; 0,017, y 0,006 nM. Para Mxb 2 y Mxb 7. 2500; 1250; 0, 625; 312,50; 156, 25; 78 , 125 ; 39 , 0625 ; 19,53125; 9,765625; 4,882813; 2,441406, 1,220703, 0,610352, 0,3051758, 0,1525879, 0,76294, 0,038147, 0,019073, 0,009537, 0,004768, 0,002384, 0,001192, 0,000596, 0,000298 n Para utilizarlo de estándar de control, el rHuEpo fue diluido en serie en la misma placa usada para probar cada proteina scFv-Fc. Cada dilución de Epo fue realizada por triplicado y las siguientes concentraciones Epo fueron usadas: para las placas con xb 2, Mxb 5, Mxb 10 y Mxb 30:. 100, 0,10, 0,01 y 0,001 nM. Para la prueba en placa Mxb7. 1488, 744, 372,186, 93, 46.5, 23.2, 11,6, 5,8, 2,9, 1, 5, 0,71, 0, 36, 0,18, 0,09, 0,045, 0,023, 0,011, 0,006, 0,003, 0,0015, 0,0007, 0,0004, 0,0002 nM. Se agregaron aproximadamente 10.000 células a cada pozo. Las células fueron cultivadas por seis horas, y el ensayo fue realizado de acuerdo al protocolo del fabricante paral Ensayo de Luciferasa Steady-Glo (Promega Corporation). Se mostró que veintidós de los veintinueve maxibodies identificados en el Ejemplo 1 unían el huEpoR e inducían una respuesta en las células UT-7-LUC de varios niveles. Los resultados de Mxb2, Mxb5, Mxb7, MxblO y Mxb30 son representados gráficamente en la Figura 7. Ejemplo 9 - Selección de Anticuerpos in vitro para la Activación del huEpoR Las veintinueve proteínas scFv-Fc descriptas en el Ejemplo 2 y las veintinueve proteínas IgG2 también descriptas en el Ejemplo 2 fueron utilizadas en forma individual para activar el huEpoR utilizando un ensayo indicador de luciferasa al igual que con las proteínas scFv-Fc del ejemplo 8. Las titulaciones de las dosis resultante fueron convertidas en radios de la máxima señal de luciferasa del anticuerpo (proteína scFv-Fc o proteína IgG2) a la máxima señal de luciferasa del estándar de la eritropoyetina humana recombinante (rHuEpo) . Los resultados para las proteínas scFv-Fc del clon 2, clon 5, clon 7, clon 10 y clon 30 y para las proteínas IgG2 del clon 2, clon 5, clon 7, clon 10 y clon 30 son representados gráficamente en la Figura 8. Las proteínas scFv-Fc del clon 2, clon 5, clon 7, clon 10 y clon 30 fueron agonistas más potentes del huEpoR que las correspondientes proteínas IgG2 del clon 2, clon 5, clon 7, clon 10 y clon 30. Ejemplo 10 - Experimentos de señalización in vitro Las células UT-7 fueron mantenidas en un medio de crecimiento que consistía de I DM (Invitrogen) conteniendo 10% FBS (HyClone) , 100 U/ml penicilina, 100 pg/mL streptomicina, 292 pg/mL L-glutamina (IX PSG; Invitrogen) y 1 U/ml rHuEpo (Epoetin Alpha, rHuEpo, Amgen Inc) . Las células fueron lavadas dos veces en PBS (Invitrogen) y resuspendidas en un medio de inanición consistente de IMDM y 0,5% FBS. Luego de una incubación nocturna, se determinaron el número y la viabilidad de las células, las células fueron resuspendidas a 3.000.000 de células por mi en IMDM conteniendo 50 ng/mL rHuEpo, 1 pg/mL Mxb2, 1 pg/mL Mxb5, 1.54 pg/mL de proteína IgG2 de clon 2 (IgG22), 1.54 pg/mL de proteína IgG2 de clon 5 (IgG25), o PBS Las células fueron estimuladas durante 0, 2, 15 o 60 minutos en un bloque térmico a 37°C. La activación de estas células mediante el rHuEpo activa el huEpoR e induce la fosforilación de las moléculas de señalización Stat5 y Akt. Las suspensiones celulares fueron centrifugadas por un minuto, 7.000 rpm a 4°C y el sobrenadante fue quitado. El pellet de la célula fue lavado con PBS helado y centrifugado por 1 minuto, 7.000 rpm a 4°C. El sobrenadante fue removido y los lisatos celulares fueron generados usando el reactivo para la extracción de proteínas en los mamíferos -PER (Pierce Biothecnology, Inc; Rockford, IL) suplementado con tabletas de cocktail inhibidor de proteasa Complete (sin EDTA) (Roche Diagnostics) . Luego, todas las muestras fueron pasadas por la agitadora vortical durante 10 segundos y los lisatos fueron incubados a temperatura ambiente por 5 minutos con ocasionales pasadas por la agitadora vortical. Los lisatos fueron centrifugados a 2.000 rpm durante 5 minutos, y los supernadantes fueron transferidos a alícuotas y congelados en un baño de etanol y hielo seco y luego almacenados a -80°C hasta su uso. Western Blotting: Todas las muestras de proteínas fueron combinadas con un agente de reducción de muestras IX NuPAGE (Invitrogen) y buffer de muestras IX NuPAGE ( Invitrogen) , incubadas a 100°C dutante 5 minutos y probadas en gel premezclado 4-20% Tris-Glycine ( Invitrogen ) . Los geles fueron cargados con la escalera de proteínas SeeBlue Plus2 (Invitrogen). Las proteínas fueron transferidas a un papel de filtro de membranas de nitrocelulosa con un tamaño de poros de 0,45 pm (Invitrogen). Luego de la transferencia de proteínas, las membranas fueron bloqueadas en 5% de leche seco sin grasa bloqueador de grado blotting (leche, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) en solución salina tris-tamponada con Tween 20, pH 8.0 (TBS-T, SIGMA) durante al menos una hora a temperatura ambiente. En primera instancia, las membranas fueron transferidas con un anticuerpo anti fosforilatado Stat5 A/B (Upstate, Charlottesville, VA) a 1 g/mL en 2,5% de albúmina de suero bovino (BSA, SIGMA) en TBS-T. Las incubaciones con el anticuerpo anti fosforilatado Stat5 A/B fueron realizadas durante una hora a temperatura ambiente en una plataforma agitadora seguidas de tres enjuagues y tres lavadas durante 15 minutos en TBS-T. Las membranas fueron transferidas por medio de un anticuerpo conjugado cabra anti-ratón - peroxidasa de rábano (HRP) (Pierce Biotechnology, Inc.) diluido en 1:2000 a 1,25% BSA en TBS-T. Todas las incubaciones realizadas con el anticuerpo conjugado cabra anti-ratón - HRP fueron realizadas durante una hora a temperatura ambiente sobre una plataforma de agitación, seguidas de tres enjuagues y tres lavados durante 15 minutos en TBS-T. El sistema de detección western blotting de quimioluminescencia mejorada (Amersham Bioscience) se utilizo para detectar las proteínas en las membranas de nitrocelulosa . Las membranas fueron expuestas a una película para luz Kodak BIOMAX por quimioluminiscenicia (Kodak, Rochester, NY) . Luego de la detección, las membranas fueron despegadas en Restore Western Blot Stripping Buffer (PIERCE) durante 20 minutos. La transferencia por adsorción fue repetido usando el mismo proceso descripto precedentemente en los siguiente anticuerpos: TotalStat 5: anticuerpo primario - anti-Stat5 (Cell Signaling Technology, Danvers, A) a 1:1000, anticuerpo secundario - cabra anti-conej o-HRP (Pierce Biotechnology, Inc.) a 1:2000 de dilución. Akt fosforilado: anticuerpo primario - anti-Akt fosforilado (Thr308) (Cell Signaling Technology, Danvers, MA) a 1:1000 de dilución, anticuerpo secundario - cabra anti-conej o-HRP 1:2000 de dilución. Akt total: anticuerpo primario - anti Akt (Cell Signaling Technology) 1:1000 de dilución, anticuerpo secundario - cabra anti-conejo HRP 1:2000 de dilución. Los resultados de este experimento demostraron que Mxb 2, Mxb 5, IgG2 2 y IgG2 5 activaron el huEpoR e indujeron la fosforilación tanto de los Stat5 como de los Akt. La cinética de la fosforilación a través de Mxb 2, Mxb 5, IgG22, y IgG2 5 fue levemente demorada en relación al rHuEpo. Los resultados para Mxb .2 y IgG2 2 se muestran en la Figura 9. La Figura 9 muestra que luego de estimular las células UT-7 de modo rHuEpo, se detectó una importante fosforilación de los Stat5 dentro de los 2 minutos y alcanzó su nivel máximo a los 15 minutos, mientras que, en el caso de Mxb2 y IgG2 2, los niveles de fosforilación de los Stat5 fueron bajos 2 minutos después de la estimulación. Lo mismo ocurrió con respecto a la fosforilación de Akt. Los niveles de fosforilación de Stat5 y Akt fueron inferiores en células estimuladas mediante IgG2 2 en comparación con las células estimuladas mediante Mxb 2. Este experimento de señalización indicó que Mxb 2 y IgG22seran agonistas más débiles del huEpoR que del rHuEpo. Ejemplo 11 - Ensayos BFU-E : La actividad de un subconjunto de Mxbs incluyendo Mxb 2, Mxb 5, Mxb 7 y Mxb 30 fue evaluado en células progenitoras sanguíneas periféricas humanas CD34+ (CD34+PBPC) usando un ensayo (BFU-E) fijadades formadoras de colonias eritroides en ramillete. El ensayo BFU-E es descripto en Elliot et al, Activation of the Erythropoietin (EPO) receptor by bivalent anti-EPO receptor antibodies, J.Biol. Chem 271(40), 24691-24697. En este caso, el ensayo BFU-E probó la habilidad de las proteínas scFv-Fc para estimular la producción de colonias eritroidas de células humanas primarias aisladas de la sangre de voluntarios sanos. Ciertos agentes que promueven la formación de colonias eritroides también promueven la proliferación de células progenitoras eritroides, previenen la apoptosis e inducen la diferenciación celular. Para este ensayo, CD34+PBPC fueron purificados de productos aféresis obtenidos a partir de rhG-CSF de donantes hematológicamente normales movilizados. Mil CD34+PBPC por mi fueron cultivados en cápsulas de petri de 35 mm en un medio con base de metilcelulosa (METHOCULT™ H4230, StemCell Technologies, Vancouver, BC, Cánada) conteniendo 100 mg/ml cada uno de rhSCF, rhSCF, rhIL-3, y rhIL-6 con dosis en aumento de 0,1 a 1.000 ng/ml de rHuEpo o l a 10.000 ng/mL de Mxb 2, Mxb 5, Mxb 7, o Mxb 30, todo por triplicado. Los cultivos fueron incubados a 37' C en 5) de C02/95% de aire atmosférico en una cámara humidificada, y luego de 14 días, se contó el número de colonias BFU-E derivadas. Cada cultivo fue observado y enumerado con un microscopio de disección a 20X. Las colonias BFU-E derivadas fueron definidas como ramilletes celulares hemoglobinizados unifocales o multifocales conteniendo más de 50 células. Mxb 2, Mxb 5, Mxb 7 y Mxb 30 indujeron la formación de colonias eritroides conteniendo hemoglobina, pero todos los maxibodies fueron significativamente menos potentes que el rHuEpo al inducir las colonias BFU-E derivadas. La cantidad máxima de colonias inducidas por cualquiera de los maxibodies fue significativamente inferior a la cantidad inducida por el rHuEpo y esta cantidad máxima fue inducida a concentraciones mayores que en el caso del rHuEpo según se ve en la figura 10. Estos datos sugieren que las proteínas scFv-Fc son las agonistas de menor potencia del huEpoR comparadas al rHuEpo . Ejemplo 12 - Experimentos in vivo: El efecto de una sola inyección de Mxb 2, Mxb 5, Mxb 7 o Mxb 10 fue probado en varios experimentos realizados con ratones . Ejemplo 12A - Experimento valorativo de la dosis de Mxb 5 realizado en ratones: A ratones hembras BDF-1 de dos meses de edad se les inyectó subcutáneamente un transportador (PBS con 0,10% BSA) , 3 yg/kg PEG-NESP (PEG-NESP y los métodos de preparación de PEG-NESP son por lo general descritos en la publicación PCT nro. O01/76640), o 0,5; 2,5; 5 o 7,5mg/kg Mxb 5 en un volumen final de 200 µ?. Se juntó sangre del seno retro orbital en varios puntos en el tiempo durante 60 días y se evaluó dicha sangre por parámetros CBC usando un analizador de sangre ADVIA. Los datos son presentados en las figuras 12 y 13 con n=5 en cada momento en el tiempo. Hubo un efecto claro de la dosificación de Mxb 5 con una actividad muy limitada a 0,5 mg/kg, pero una actividad eritropoyética se observó en los ratones inyectados con dosis de Mxb 5 entre 2,5 y 7,5 mg/kg. El perfil de actividad de Mxb 5 fue diferente al de PEG-NESP la mayor cantidad de reticulositos se alcanzó al cuarto día luego de la inyección de PEG-NESP o Mxb 5, pero la duración de la respuesta reticulosita fue aumentada significativamente en el ratón que recibió la dosis de Mxb 5 entre 2,5 y 7,5 mg/kg. Las cantidades de reticulositos volvieron a su origen durante el octavo día en los ratones tratados con PEG-NESP, mientras que llevó de 14 a 18 días a los reticulositos volver a su origen en los ratones tratados con Mxb 5. En los ratones inyectados con Mxb 5 en dosis de 5 a 7,5 mg/kg, los niveles de hemoglobina se mantuvieron sin cambios de 46 a 52 días. En contraposición, el nivel de hemoglobina en los ratones .tratados con PEG-NESP volvió a su origen durante el decimosexto día, mostrando una gran diferencia en la duración y la magnitud de la respuesta de la hemoglobina en los ratones tratados con Mxb 5 y los tratados con PEG-NESP. Este experimento demuestra que una sola inyección de Mxb 5 aumenta los niveles de hemoglobina por encima de su nivel original durante un periodo de tiempo más extenso que la vida total del glóbulo rojo en ratones (40 días). Debido a que el nivel de disminución de la hemoglobina luego de la administración de un agente eritropoiético se relaciona con la vida de los eritrocitos (120 días en humanos), una sola administración de Mxb5 en humanos sería potencialmente suficiente para curar la anemia por un periodo de 2 a 4 meses.
Ejemplo 12B - Experimento valorativo de la dosis de Mxb 7 realizado en ratones : A ratones hembras BDF-1 de dos meses de edad se les inyectó subcutáneamente un transportador (PBS con 0,10% BSA) , 3 yg/kg PEG-NESP (Amgen Inc.) o 0,5; 2,5; 5 o 7,5mg/kg Mxb 7 (Amgen Inc.) en un volumen final de 200 µ?. Se juntó sangre del seno retro orbital en varios puntos en el tiempo durante 24 días y se evaluó dicha sangre por parámetros CBC usando un analizador de sangre ADVIA. Los datos son presentados en las figuras 14 y 15 con n=5 en cada momento en el tiempo. Una sola inyección de Mxb 7 produjo un aumento en el número de meticulositos y en los niveles de hemoglobina que dependían de la dosis y que se mantuvieron por un extenso período de tiempo. Luego de una sola inyección subcutánea (SC) de Mxb 7 a 7,5 mg/kg, el número de reticulositos se mantuvo por encima del número original durante 12 días mientras que en los ratones inyectados con PEG-NESP, el número de reticulositos se mantuvo por encima del número original durante 8 días. En este experimento, los niveles de hemoglobina fueron medidos por 24 días, y durante ese tiempo, el aumento de hemoglobina se mantuvo a niveles más altos y durante mayor período de tiempo en los ratones que recibieron Mxb 7 a 7,5 mg/kg comparados con los ratones tratados con PEG-NESP. Luego de recibir una sola inyección de PEG-NESP el nivel más alto de hemoglobina se alcanzó al quinto día, y retornó a su origen al decimocuarto día. En contraste, luego de recibir una sola inyección de Mxb 7 (7,5 mg/kg) , el punto más alto de hemoglobina fue alcanzado durante el decimosegundo día y la hemoglobina volvió a su origen durante el vigésimo cuarto día. Este experimento demuestra que Mxb 7 tiene propiedades muy distintas a las de PEG-NESP. Luego de una sola administración, los ratones tratados con Mxb 7 tuvieron una respuesta eritropiética de mayor duración que la de los ratones tratados con PEG-NESP según demostró el aumento en el número de reticulositos y en los niveles de hemoglobina . Ejemplo 12C - Experimento valorativo de la dosis de Mxb 10 realizado en ratones : A ratones hembras BDF-1 de dos meses de edad se les inyectó subcutáneamente un transportador (PBS con 0,10% BSA) , 3 g/kg PEG-NESP (Amgen Inc.) o 0,05; 0,15; 0,5; 1,5; 3 o 5 mg/kg Mxb 10 (Amgen Inc.) en un volumen final de 200 µ?. Se juntó sangre del seno retro orbital en varios puntos en el tiempo durante 52 días y se evaluó dicha sangre por parámetros CBC usando un analizador de sangre ADVIA. Los datos son presentados en las figuras 16 y 17 con n=5 en cada momento en el tiempo. Hubo un efecto muy claro de dependencia de la dosis de Mxb 10. Cambios en el número de reticulositos y en los niveles de hemoglobina fueron evidentes aún en las dosis más bajas. (0,05 mg/kg) de Mxb 10 que tuvo una actividad muy similar a 3 pg/kg of PEG-NESP. Mxb 10 fue un agente más potente que Mxb 2, Mxb 7 y Mxb 5. En los ratones que fueron tratados con 0,15 mg/kg de Mxb 2, el número de reticulositos permaneció por encima del número original durante 10 días y los niveles de hemoglobina se mantuvieron por encima de los niveles iniciales durante 19 días. En la dosis de 0,5 mg/kg de Mxb 10, el número de reticulositos permaneció por encima del número original durante 13 días y los niveles de hemoglobina se mantuvieron por encima de los niveles originales durante 31 días. En la dosis de 1,5 mg/kg de Mxb 10, el número de reticulositos permaneció por encima del número original durante 18 días y los niveles de hemoglobina se mantuvieron por encima de los niveles originales durante 40 días. En la dosis de 3 mg/kg de Mxb 10, el número de reticulositos permaneció por encima del número original durante 23 días y los niveles de hemoglobina se mantuvieron por encima de los niveles originales durante 50 días. En la dosis de 5 mg/kg de Mxb 10, el número de reticulositos permaneció por encima del número original durante 28 dias y los niveles de hemoglobina se mantuvieron por encima de los niveles originales durante 52 dias, cuando el experimento había finalizado. En otro experimento con ratones a los cuales se les administró una dosis de 5 mg/kg de Mxb 10, los niveles de hemoglobina volvieron a los originales durante el día 56 luego de una sola inyección subcutánea de Mxb 10. Ejemplo 12D - Experimento de una sola dosis de Mxb 2 realizado en ratones: A ratones hembras BDF-1 de tres meses de edad se les inyectó subcutáneamente un transportador (PBS con 0,10% BSA) , 3 yg/kg PEG-NESP (Amgen Inc.) o 13 mg/kg Mxb 2 (Amgen Inc.) en un volumen final de 200 µ?. Se juntó sangre del seno retro orbital en varios puntos en el tiempo durante 24 días y se evaluó dicha sangre por parámetros CBC usando un analizador de sangre ADVIA (Bayer, Alemania) . Los datos son presentados en las figuras 18 y 19 con n=5 en cada momento en el tiempo. En este experimento, los efectos eritropoiéticos de una sola dosis de Mxb 2 fueron comparados con aquellos inducidos por el agente de control PEN-NESP. El número de reticulositos se mantuvo por encima del número original durante un dia más en los animales que recibieron Mxb 2 (8 días en los animales tratados con PRG-NESP contra 9 días en los ratones tratados con Mxb 2), pero la magnitud de las diferencias en las respuestas eritropoiéticas se vieron significativamente acentuadas al considerar la respuesta de la hemoglobina. Los niveles de hemoglobina volvieron a los originales 14 días después del tratamiento con PEG-NESP, mientras que tardaron 24 dias en volver a los niveles originales en los ratones tratados con Mxb 2. Estos datos demostraron que la respuesta eritropoiética inducida mdiante Mxb 2 fue significativamente más extensa que aquella inducida por PEG-NASP. Ejemplo 13 - Estudio de farmacocinética de Mxb 5 y IgGi 5 Los perfiles farmacocinéticas (PK) de Mxb 5 y IgGi 5 fueron caracterizados en ratones hembras BDF-1. Los animales fueron inyectados intravenosamente ya sea con 3,75 mg/kg de Mxb 5 o con 5,7 mg/kg de IgGx 5 (cantidades equimolares) . Se extrajo sangre ya sea del seno retro orbital o mediante una punción cardiaca en numerosas oportfij adades durante 100 días con n=4 en cada uno de esos momentos. Las muestras de sangre fueron transferidas a tubos microcentrifugos Costar y se les permitió coagular. Las muestras fueron centrifugadas a 11.500 rpm durante 10 minutos a 4°C. Las muestras de suero resultantes fueron transferidas a tubos individuales y almacenadas a -70°C con anterioridad al análisis. Las concentraciones de Mxb 5 y IgGi 5 en las muestras fueron medidas mediante ELISA utilizando proteínas huEpoR inmobilizadas y un conjugado anti humano Fc/HRP. El análisis farmacocinética fue efectuado utilizando valores de concentraciones de suero en el tiempo. La desviación promedio y estándar de la concentración del suero para cada proteína en cada momento en el tiempo (compuesto medio) utilizado para este análisis es representado en la Figura 19. Algunos parámetros farmacocinéticos de IgGi 5 y Mxb 5 se muestran en las figuras 21A, 21B y 22. IgGi 5 mostró una vida media más prolongada que el Mxb 5 (320,1 contra 158,3 horas, respectivamente). Consistentemente, la distancia es mas lenta para IgGi 5 que paral Mxb 5 (0,0071 contra 0,012 ml/hora respectivamente) y el Tiempo de Residencia Medio es mayor para IgGi 5 que para Mxb 5 (482,27 contra 217,51 horas, respectivamente). Este análisis sugiere diferencias significativas en el perfil farmacocinético de estas dos proteínas, con un tiempo de residencia más prolongado para IgGi 5 contral Mxb 5 debido a su eliminación más lenta. Ejemplo 14 - Selección y Identificación de Clones Adicionales Fago scFv de librerías fago naif pasaron por dos selecciones en huEpoR soluble utilizando las estrategias de selección descriptas en el Ejemplo 1. Se recolectaron aleatoriamente 2.000 fagos scFv de la pileta contenedora luego de las dos etapas de selección. Los 2.000 fagos fueron utilizados en un monitor ELISA, el cual identificó 960 fagos scFv que aparecían fijando de manera específical huEpoR. Muestras de ADN plásmido de 960 clones fagos scFv fueron realizados y agrupados. El grupo de ADN formado por los 960 clones de fagos fueron digeridas con Ncol y Notl. El 0,75 kb de fragmentos fueron ligados a un vector de expresión de mamíferos Pcil y Notl digeridos, pDC409a-GlFc . pDC409a-GlFc es descrito en el Ejemplo 2. Los productos de la ligación fueron transformados en células TG1. Luego de la ligación, se recogieron 1.920 colonias individuales y se realizaron muestras de ADN plásmido de cada una de las 1.920 colonias en placas de fuente 96 utilizando un Oiagen BioRobot 3000. Estas placas de fuente 96 sirvieron como placas de almacenamiento. La concentración de ADN en cada fuente en las placas de almacenamiento estuvo entre 50 y 200 ng/ul. Alícuotas de ADN de las placas de almacenamiento fueron combinadas con Lipofectamina 2000 (Invitrogen) en un nuevo conjunto de placas de fuente 96 (primer conjunto de placas de prueba). Complejos de Lípidos/ADN fueron elaborados mediante incubación a temperatura ambiente durante 30 minutos en las fuentes del primer grupo de placas de prueba. Los complejos de lípidos/ADN fueron agregados al segundo grupo de placas fuente 96 (segundo grupo de placas de prueba) conteniendo células Cos PKB . Los complejos de ADN lipidíeos fueron transfectados a las células Cos PKB. 5 días después de la transfección, se recolectaron supernadantes cultivados conteniendo proteína expresada del segundo grupo de placas de prueba. Los supernadantes cultivados fueron sometidos a una prueba de habilidad para fijar EpoR utilizando un ensayo de activación de EpoR in Vitro Se realizaron dos ensayos de activación de EpoR in Vitro por cada proteína que se sometió a prueba. El primer ensayo utilizó supernadantes cutivados a una dilución final de 1:2. El Segundo ensayo utilizó supernadantes cultivados a una dilución final de 1:20. Los supernadantes del segundo grupo de placas de prueba también fueron probados para medir el titulo de la proteina mediante Fe. ELISA. Los rangos de concentración del Fe ELISA estuvieron entre 5-20 µq/ml. Estos monitoreos identificaron un segundo grupo de clones: clon 201, clon 276, clon 295, clon 307, clon 318, clon 319, clon 323, clon 330, clon 352, and clon 378. Clon 13, clon 15, clon 16, clon 29, y clon 34 fueron aislados según descripción general del Ejemplo 1. Las construcciones de expresiones IgG2 y Fab conteniendo el Segundo grupo de clones fueron construidos utilizando la estrategia de clonación descripta en el Ejemplo 2. Las identidades de las proteínas fueron verificadas mediante secuencias de aminoácidos Terminal-N y concentraciones determinadas en un espectrofotómetro mediante absorción a 280 nm. El segundo grupo de clones fue secuenciado. A continuación se muestran las secuencias de ADN y aminoácidos para las cadenas pesadas variables y las cadenas livianas variables paral clon 13, clon 15, clon 16, clon 29, clon 34, clon 201, clon 276, clon 295, clon 307, clon 318, clon 319, clon 323, clon 330, clon 352, y clon 378 La cadena pesada y la cadena liviana CDR1, CDR2 y CDR3 son subrayadas en orden dentro de cada secuencia. >Secuencia de ácido nucleico VH #13 CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCT CCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTATGCTATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCC AGGCAAGGGGCTAGAGTGGGTGGCAGTTATATCAAATCATGGAAAGAGCACATACTACGCA GACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGCACATGCTGTATCTGC AAATGAACAGCCTGAGAGCTGACGACACGGCTCTATATTACTGTGCGAGAGATATAGCATT GGCTGGGGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCTGCC ( SEQ ID NO. : 55) >Secuencia de aminoácidos VH #13 QVQLQQSGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISNHGKSTYYA DSVKGRFTISRDNSKHMLYLQMNSLRADDTALYYCARDIALAGDYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO. : 56) >Secuencia de ácido nucleico VL #13 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCA TCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGCTATCTTAATTGGTATCAGCAACTACCAGG GAAAGTCCCTAAACTCCTGATCTATGGTGCATCGAAGTTGCAAAGTGGGGTCCCCTCCAGG TTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAG ATTTTGCAACTTATTACTGTCTCCAAGATTACAATTATCCTCTCACTTTCGGCCCTGGGAC ACGACTGGAGATCAAA (SEQ ID NO.: 57) >Secuencia de aminoácidos VL #13 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQLPGKVPKLLIYGASKLQSGVPSR FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQDYNYPLTFGPGTRLEIK (SEQ ID NO. 58) >Secuencia de ácido nucleico VH #15 CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAGGCCTTCGGGGACCCTGTCCCTCA CCTGCGCTGTCTCTGGTGGCTCCATCGGCAGTAGTAACTGGTGGAGTTGGGTCCGCCAGGC CCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGGAAATCTCTCAGAGTGGGAGCACCAACTACAAC CCGTCCCTCAAGGGTCGAGTCACCATATCACTAGACAGGTCCAGGAACCAGTTGTCCCTGA AGTTGAGTTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGACAGCTGCGGTC GATTGATGCTTTTGATATCTGGGGCCCAGGGACCACGGTCACCGTCTCGGCC (SEQ ID NO. : 59) >Secuencia de aminoácidos VH #15 QVQLQESGPGLVRPSGTLSLTCAVSGGSIGSSNWWSWVRQAPGKGLEWIGEISQSGSTNYN PSLKGRVTISLDRSRNQLSLKLSSVTAADTAVYYCARQLRSIDAFDIWGPGTTVTVSA (SEQ ID NO. : 60) >Secuencia de ácido nucleico VL #15 TCCTATGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGTGTCCGTGTCCCCAGGACTGACAGCCACCATCA CCTGCTCTGGAGATAAATTGGGGGACAAATATGCTTCCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGCCA GTCCCCTGTGTTGGTCATCTATCAAGATAGGAAGCGACCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTC TCTGGGTCCAATTCTGGGAACACAGCCACTCTGACCATCAGCGGGACCCAGGCTGTGGATG AGGCTGACTATTACTGTCAGGCGTGGGACAGCGACACTTCTTATGTCTTCGGAACTGGGAC CCAGCTCACCGTTTTA (SEQ ID NO: 61) >Secuencia de aminoácidos VL #15 SYVLTQPPSVSVSPGLTATITCSGDKLGDKYASWYQQKPGQSPVLVIYQDRKRPSGI PERF SGSNSGNTATLTISGTQAVDEADYYCQA DSDTSYVFGTGTQLTVL (SEQ ID NO. : 62) >Secuencia de ácido nucleico VH #16 CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCA CCTGCACTGTCTCTGGTGGCTACATCAATAATTACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGCCCCC AGGGAAGGGCCTGGAGTGGATTGGGTACATCCATTACAGTGGGAGCACCTACTACAACCCG TCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGAAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGC TGAGCTCTGCGACCGCTGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTTGGGTATTACTA TGATAGTAGTGGTTATAATCTTGCCTGGTACTTCGATCTCTGGGGCCGTGGAACCCTGGTC ACCGTCTCGGCC (SEQ ID NO.: 63) >Secuencia de aminoácidos VH #16 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGYINNYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIHYSGSTYYNP SLKSRVTISEDTSKNQFSLKLSSATAADTAVYYCARVGYYYDSSGYNLAWYFDL GRGTLV TVSA (SEQ ID NO. : 64 ) >Secuencia de ácido nucleico VL #16 TCTTCTGAGCTGACTCAGGACCCTGCTGTGTCTGTGGCCTTGGGACAGACGGTCAGGATCA CATGCCAGGGAGACAACCTCAGAAGTTATTCTGCAACTTGGTACCAACAGAAGCCAGGACA GGCCCCTGTCCTTGTCCTCTTTGGTGAAAACAACCGGCCCTCAGGGATCCCAGACCGATTC TCTGGCTCCAAGTCAGGGGACACAGCTGTCTTGACCATCACTGGGACTCAGACCCAAGATG AGGCTGACTATTATTGCACTTCCAGGGTCAATAGCGGGAACCATCTGGGGGTGTTCGGCCC AGGGACCCAGCTCACCGTTTTA (SEQ ID NO.: 65) >Secuencia de aminoácidos VL #16 SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDNLRSYSATWYQQKPGQAPVLVLFGENNRPSGI PDRF SGSKSGDTAVLTITGTQTQDEADYYCTSRVNSGNHLGVFGPGTQLTVL (SEQ ID NO.: 66) >Secuencia de ácido nucleico VH #29 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCT CCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACCGGCTACTATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCC TGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTAACAGTGGTGGCACAAACTATGCA CAGAAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCAGCACAGCCTACATGG AGCTGAGCAGGCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGGGGGCACAT GACTACGGTGACCCGTGATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCT GCC (SEQ ID NO. : 67) >Secuencia de aminoácidos VH #29 EVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTNYA QKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARGGHMTTVTRDAFDI GQGTMVTVS A (SEQ ID NO. : 68) >Secuencia de ácido nucleico VL #29 TCTTCTGAGCTGACTCAGGACCCTGCTGTGTCTGTGGCCTTGGGACAGACAATCAGGATCA CATGCCAAGGAGACAGCCTCAGATACTATTATGGAACCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGACA GGCCCCTATACTTGTCATCTATGGTCAGAATAATCGGCCCTCAGGGGTCCCAGACCGATTC TCTGGCTCCAGCTCAGGAAACACAGCTTCCTTGACCATCACTGGGGCTCAGGCGGAAGATG AGGCTGACTATTACTGCGGAACATGGGATAGCAGTGTGAGTGCCTCTTGGGTGTTCGGCGG AGGGACCAAGGTCACCGTCCTA (SEQ ID NO . : 69) >Secuencia de aminoácidos VL #29 SSELTQDPAVSVALGQTIRITCQGDSLRYYYATWYQQKPGQAPILVIYGQNNRPSGVPDRF SGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCGTWDSSVSASWVFGGGTKVTVL (SEQ ID NO.: 70) >Secuencia de ácido nucleico VH #34 CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCT CCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCAGCGGCTATTATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCC TGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTAACAGTGGCAGCACAAATTATGCA CAGAAGTTTCTGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCAGCACAGCCTACATGG AACTGAGCAGCCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGGGGACACTCCGG TGACTATTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGGCC (SEQ ID NO.: 71) >Secuencia de aminoácidos VH #34 QVQLQQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSGYYMH VRQAPGQGLE MGWINPNSGSTNYA QKFLGRVTMTRDTSISTAYMELSSLRSDDTAVYYCARGHSGDYFDYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO. : 72) >Secuencia de ácido nucleico VL #34 GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTTGGAGACAGAGTCACCA TCACTTGCCGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCTGGTTGGCCTGGTATCAACAGAGACCAGG GCAAGCCCCTAAACTGCTGATCTATGCTGCACGTTTGCGAGGTGGAGGCCCTTCAAGGTTC AGTGGCAGCGGCTCTGGGACAGAATTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGACT TTGCGACTTACTTCTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCGATCAGTTTCGGCGGAGGGACCAA GCTGGAGATCAAA (SEQ ID NO . : 73) >Secuencia de aminoácidos VL #34 EIVLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSS LAWYQQRPGQAPKLLIYAARLRGGGPSRF SGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYFCQQSYSTPISFGGGTKLEIK (SEQ ID NO. : 74) >Secuencia de ácido nucleico VH #201 CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCTCAGGACTGGCGAGGCCTTCACAGACCCTGTCCCTCA CCTGCGCTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTAGTGCTTTCTCCTGGAATTGGATCCGGCA GCCACCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGATTGGATACATCTATCATACTGGGATCACCGATTAT AACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTGGACAGGTCCAAGAACCAGTTCTCCC TGAACGTGAACTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCCGTGTATTATTGTGCCAGAGGACACGG TTCGGACCCCGCCTGGTTCGACCCCTGGGGCAAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGT (SEQ ID NO. : 75) >Secuencia de aminoácidos VH #201 QVQLQESGSGLARPSQTLSLTCAVSGGSISSSAFSWNWIRQPPGKGLEWIGYIYHTGITDY NPSLKSRVTISVDRSKNQFSLNVNSVTAADTAVYYCARGHGSDPA FDPWGKGTLVTVSS (SEQ ID NO. : 76) >Secuencia de ácido nucleico VL #201 CAATCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGTGTCCGTGTCCCCAGGACAGACAGCCAGCATCA CCTGCTCTGGAGATAAATTGGGGGATAAATATGCTTCCTGGTATCAGCAGAGGCCAGGCCA GTCCCCTGTTCTGGTCATCTATCGAGACACCAAGCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTC TCTGGCTCCAACTCTGGGAACACAGCCACTCTGACCATCAGCGGGACCCAGGCTGTGGATG AGGCTGACTATTACTGTCAGGCGTGGGACAGCACCACCTCCCTGGTTTTCGGCGGAGGGAC CAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID NO.: 77) >Secuencia de aminoácidos VL #201 VLQSVLTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYASWYQQRPGQSPVLVIYRDTKRPSGI PE RFSGSNSGNTATLTISGTQAVDEADYYCQAWDSTTSLVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO.: 78) >Secuencia de ácido nucleico VH #276 GAGGTCCAGCTGGTACAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCT CCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTAGCTATTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCC TGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCCAACATAAAGCCAGATGGAAGTGAGAAATACTATGTG GACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAATTCAGTGTATCTGC AAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTTTCGAGGGG TGGGAGCTACTCGGACTGGGGCCGAGGGACAATGGTCACCGTCTCGAGT (SEQ ID NO. : 79) >Secuencia de aminoácidos VH #276 EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV DSVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCARVSRGGSYSD GRGTMVTVSS (SEQ ID NO. : 80) >Secuencia de ácido nucleico VL #276 CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCCGCGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCAGTCACCATCT CCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGCGGTTTTAACTATGTCTCCTGGTACCAAAAGTA CCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCGTCATTTATGAGGTCAGTAAGCGGCCCTCAGGGGTCCCT GATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCCGGCAACACGGCCTCCCTGACCGTCTCTGGGCTCCAGG CTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATGGGCACCTGGTAAAAACTTATTCGGCGG AGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID NO.: 81) >Secuencia de aminoácidos VL #276 QSVLTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGFNYVS YQKYPGKAPKLVIYEVSKRPSGVP DRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCSSWAPGKNLFGGGTKLTVL (SEQ ID NO.: 82) >Secuencia de ácido nucleico VH #295 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCT CCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCC AGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAGTGGTAGTGGTAGTAGTGAAGGTGGCACA TACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCCTCTCCAGAGACAATTCCAAGAATACCC TGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCTTATATTACTGTGTGAAAGA TCGCCCTAGTCGATACAGCTTTGGTTATTACTTTGACTACTGGGGCCGGGGAACCCTGGTC ACCGTCTCGAGT (SEQ ID NO.: 83) >Secuencia de aminoácidos VH #295 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSGISGSGSSEGGT YYADSVKGRFTLSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTALYYCVKDRPSRYSFGYYFDY GRGTLV TVSS (SEQ ID NO. : 84) >Secuencia de ácido nucleico VL #295 CTGCCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGTGTCCGTGTCCCCAGGACAGACAGCCAGCATCG CCTGCTCTGGAAATAAATTGGGGGATAAATATGTTTCCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGCCA GTCCCCTCTGCTGGTCATCTATCAAGATACCAAGCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTC TCTGGCTCCAACTCAGGGAACACAGCCACTCTGACCATCAGCGGGACCCAGGCTATGGATG AGGCTGACTATTACTGTCAGGCGTGGGACAGCAGCACTGATGTGGTATTCGGCGGAGGGAC CAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID NO . : 85) >Secuencia de aminoácidos VL #295 LPVLTQPPSVSVSPGQTASIACSGNKLGDKYVSWYQQKPGQSPLLVIYQDTKRPSGI PERF SGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSTDVVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO. : 86) >Secuencia de ácido nucleico VH #307 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCT CCTGTGCGGTCTCTGGGTTCACCTTTAGTAAGTATTGGATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCC AGGGAAGGGACTGGAGTGGGTGGCCAACATAAAGCCAGATGGAAGTGAGAAATACTATGTG GAGTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAATTCAGTGTATCTGC AAATGAACAGTGTGAGAGCCGAAGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTTTCGAGGGG TGGGAGCTTCTCGGACTGGGGCCAGGGGACAATGGTCACCGTCTCGAGT (SEQ ID NO.: 87) >Secuencia de aminoácidos VH #307 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTFSKY TWVRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV ESVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSVRAEDTAVYYCARVSRGGSFSDWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO. : 88) >Secuencia de ácido nucleico VL #307 CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCCGCGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCAGTCACCATCT CCTGCACTGGAACCAGCAGCGACGTTGGTGGTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAACA CCCAGACAAAGCCCCCAGACTCATGATTTATGACGTCAATAAGCGGCCCTCAGGGGTCCCT GATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCGTCTCTGGGCTCCAGG CTGAGGATGAGGCTCATTATTACTGCAACTCATATGCAGGCAGCAACAATTGGGTGTTCGG CGGAGGGACCCAGCTCACCGTTTTA (SEQ ID NO.: 89) >Secuencia de aminoácidos VL #307 QSVLTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPDKAPRLMIYDVNKRPSGVP DRFSG5KSGNTASLTVSGLQAEDEAHYYCNSYAGSNNWVFGGGTQLTVL (SEQ ID NO. : 90) >Secuencia de ácido nucleico VH #318 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCT CCTGTGCGGTCTCTGGGTTCACCTTTAGTAAGTATTGGATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCC AGGGAAGGGACTGGAGTGGGTGGCCAACATAAAGCCAGATGGAAGTGAGAAATACTATGTG GAGTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAATTCAGTGTATCTGC AAATGAACAGTGTGAGAGCCGAAGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTTTCGAGGGG TGGGAGCTTCTCGGACTGGGGCCAAGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT (SEQ ID NO.: 91) >Secuencia de aminoácidos VH #318 QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTFSKYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV ESVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSVRAEDTAVYYCARVSRGGSFSDWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO. : 92) >Secuencia de ácido nucleico VL #318 CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCCGCGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCAGTCACCATCT CCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGTGGTTATAATTATGTCTCCTGGTACCAACAACA CCCAGGCAGAGCCCCCAAACTCATCATTTATGAGGTCAGTAAGCGGCCCTCAGGGGTCCCT GATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCGTCTCTGGGCTCCAGG CTGACGATGAGGCTGATTATTACTGCAACTCATATGCAGGCAGCATTTATGTCTTCGGGAG TGGGACCAAGGTCACCGTCCTA (SEQ ID NO.: 93) >Secuencia de aminoácidos VL #318 QSVLTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGY YVSWYQQHPGRAPKLI IYEVSKRPSGVP DRFSGSKSGNTASLTVSGLQADDEADYYCNSYAGSIYVFGSGTKVTVL (SEQ ID NO.: 94) >Secuencia de ácido nucleico VH #319 CAGGTGCAGCTGGTGCAATCTGGGGCTGAAATTAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTT CCTGCAAGACATTTGGATCCCCCTTCAGCACGAATGACATACACTGGGTGCGACAGGCCCC TGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAATAATCGACACTAGTGGCGCCATGACAAGGTACGCA CAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACCGTGACCAGGGAAACGTCCACGAGCACAGTCTACATGG AGCTGAGCAGCCTGAAATCTGAAGACACGGCTGTGTACTACTGTGCGAGAGAGGGTTGTAC TAATGGTGTATGCTATGATAATGGTTTTGATATCTGGGGCCAAGGCACCCTGGTCACCGTC TCGAGT ( SEQ ID NO. : 95) >Secuencia de aminoácidos VH #319 QVQLVQSGAEIKKPGASVKVSCKTFGSPFSTNDIHWVRQAPGQGLE GI IDTSGAMTRYA QKFQGRVTVTRETSTSTVYMELSSLKSEDTAVYYCAREGCTNGVCYDNGFDIWGQGTLVTV SS (SEQ ID NO. : 96) >Secuencia de ácido nucleico VL #319 GATATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTATTGGAGACAGAGTCACCA TCACCTGCCGGGCCAGTGAGGGTATTTATCATTGGTTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCAGG GAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTATAAGGCCTCTAGTTTAGCCAGTGGGGCCCCATCAAGG TTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATG ATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAATATAGTAATTATCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGAC CAAGCTGGAGATCAAA ( SEQ ID NO.: 97) >Secuencia de aminoácidos VL #319 DIQMTQSPSTLSASIGDRVTITCRASEGIYH LA YQQKPGKAPKLLIYKASSLASGAPSR FSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQQYSNYPLTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO. : 98) >Secuencia de ácido nucleico VH #323 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCT CCTGTGCGGTCTCTGGGTTCACCTTTAGTAAGTATTGGATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCC AGGGAAGGGACTGGAGTGGGTGGCCAACATAAAGCCAGATGGAAGTGAGAAATACTATGTG GAGTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAATTCAGTGTATCTGC AAATGAACAGTGTGAGAGCCGAAGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTTTCGAGGGG TGGGAGCTTCTCGGACTGGGGCCGGGGGACAATGGTCACCGTCTCGAGT (SEQ ID NO.: 99) >Secuencia de aminoácidos VH #323 QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTFSKYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV ESVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSVRAEDTAVYYCARVSRGGSFSDWGRGTMVTVSS (SEQ ID NO. : 100) >Secuencia de ácido nucleico VL #323 CAATCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCT CCTGCACTGGAACCAGCAGTGATGTTGGGAGTTATAACCTTGTCTCCTGGTACCAACAACA CCCAGGCAAAGTCCCCAAACTCATCATTTATGAGGTCAGTAATCGGCCCTCAGGGGTTTCT CATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGACTCCAGG CTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATTGACAAGCAGCGGCACTTGGGTGTTCGG CGGAGGGACCAAGGTCACCGTCCTA (SEQ ID NO.: 101) >Secuencia de aminoácidos VL #323 QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGSYNLVSWYQQHPGKVPKLI IYEVSNRPSGVS HRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSLTSSGTWVFGGGTKVTVL (SEQ ID NO.: 102) >Secuencia de ácido nucleico VH #330 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCCGGGGGGTCCCTGAGACTCT CCTGTGCGGTCTCTGGGTTCACCTTTAGTAAGTATTGGATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCC AGGGAAGGGACTGGAGTGGGTGGCCAACATAAAGCCAGATGGAAGTGAGAAATACTATGTG GAGTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAATTCAGTGTATCTGC AAATGAACAGTGTGAGAGCCGAAGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTTTCGAGGGG TGGGAGCTTCTCGGACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGT (SEQ ID NO.: 103) >Secuencia de aminoácidos VH #330 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTFSKYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV ESVKGRFTISRDNAKNSVYLQM SVRAEDTAVYYCARVSRGGSFSD GQGTLVTVSS (SEQ ID NO. : 104) >Secuencia de ácido nucleico VL #330 CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTCCCTCCGCGTCCGGGTCTCCTGGGCAGTCAGTCACCATCT CCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGTGCTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCA CCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGAGGTCGCTAGGCGGCCCTCAGGGGTCCCT GATCGCTTCTCTGGCTCTAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCGTCTCTGGGCTCCAGG CTGAGGATGAGGCTGATTATTATTGCAGCTCATATGCAGGCAGCAACAATTTCGCGGTCTT CGGCAGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID NO.: 105) >Secuencia de aminoácidos VL #330 QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGAYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVARRPSGVP DRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCSSYAGSNNFAVFGRGTKLTVL (SEQ ID NO.: 106) >Secuencia de ácido nucleico VH #352 GA.GGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCGGGGGGGTCCCTGAGACTCT CCTGTGCAGCCTCTGGATTCAGGTTTAGTAGCTATTGGATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCC AGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCCAACATAAAGCCAGATGGAAGTGAGAAATACTATGTG GACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATGTCCAGAGACAACGCCAAGAATTCAGTGTATCTGC AAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTTTCGAGGGG TGGGAGCTTCTCGGACTGGGGCCAAGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT (SEQ ID NO.: 107) >Secuencia de aminoácidos VH #352 EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFRFSSY MTWVRQAPGKGLEWVANIKPDGSEKYYV DSVKGRFTMSRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCARVSRGGSFSDWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO. : 108) >Secuencia de ácido nucleico VL #352 CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCC CCTGCACTGGAACCAGCAGTGACATTGGTACTTATGACTATGTCTCCTGGTACCAACAACA CCCAGGCAAAGTCCCCAAAGTCATTATTTATGAGGTCACCAATCGGCCCTCAGGGGTTTCT AATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGG CTGACGACGAGGCTGATTATTACTGCAACTCATTTACAAAGAACAACACTTGGGTGTTCGG CGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA (SEQ ID NO: 109) >Secuencia de aminoácidos VL #352 QSALTQPASVSGSPGQSITIPCTGTSSDIGTYDYVSWYQQHPGKVPKVI IYEVTNRPSGVS NRFSGSKSGNTASLTISGLQADDEADYYCNSFTKNNTWVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO.: 110) >Secuencia de ácido nucleico VH #378 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGATACTCT CCTGTGCGGTCTCTGGGTTCACCTTTAGTAAGTATTGGATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCC AGGGAAGGGACTGGAGTGGGTGGCCAACATAAAGCCAGATGGAAGTGAGAAATACTATGTG GAGTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAATTCAGTGTATCTGC AAATGAACAGTGTGAGAGCCGAAGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTTTCGAGGGG TGGGAGCTTCTCGGACTGGAGCCAAGGAACCTTGGTCACCGTCTCGAGT (SEQ ID NO.: 111) >Secuencia de aminoácidos VH #378 QVQLVESGGGLVQPGRSLILSCAVSGFTFSKYW T VRQAPGKGLE VANIKPDGSEKYYV ESVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSVRAEDTAVYYCARVSRGGSFSDWSQGTLVTVSS (SEQ ID NO. : 112) >Secuencia de ácido nucleico VL #378 CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTCCCTCCGCGTCCGGGTCTCCTGGGCAGTCAGTCACCATCT CCTGCACTGGAACCAGCGGTGACGTTGGTGCTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGTA CCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGAGGTCAGTAAGAGGCCCTCCGGGGTCCCT GATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCGTCTCTGGGCTCCAGG CTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCAACTCATATAGGGGCAGCAACGGTCCTTGGGTGTT CGGCGGAGGGACCAAGGTCACCGTCCTA (SEQ ID NO.: 113) >Secuencia de aminoácidos VL #378VL QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSGDVGAYNYVSWYQQYPGKAPKLMIYEVSKRPSGVP DRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCNSYRGSNGPWVFGGGTKVTVL (SEQ ID NO.: 114) Ejemplo 15 - Análisis huEpoR de la fijación de anticuerpos a superficie celular mediante FACS La fijación de la proteina scFv-Fc a un huEpoR expresado en la superficie celular fue analizado utilizando FACS. Todas las proteínas scFv-Fc utilizadas tuvieron un Fe derivado de IgGl. Células UT-7 fueron incubadas ya sea con proteína 5 nM scFv-Fc sola o con proteína 5 nM scFv-Fc más 0,5 g/ml de rHuEpo durante 1 hora a 4'C. Luego de 2 lavados rápidos usando PBS frío, las células UT-7 fueron incubadas con l g/ml de IgG Fe antihumano y F(ab')2 de cabra conjugados con ficoeritrina (Jackson Inmuno Research Laboratories) durante 1 hora a 4'C. Las células fueron lavadas dos veces usando PBS frío y luego resuspendidas en 1 mi de buffer de fijación (2% de PBS paraformaldeido pH 7.4) . La FACS se realizó utilizando un citómetro de flujo FACScalibrador (Becton-Dickinson) . Los rastros de FACS de las proteínas expresados por los vectores de expresión scFv-Fc se muestran en la Figura 22. El clon 13, clon 15, clon 16, clon 29, y clon 34 están fijados a las células UT-7 que expresan huEpoR (Figura 22A) pero no a las células negativas de control. La fijación a la superficie de las células UT-7 del clon 15, clon 16 y clon 34 fue bloqueada debido a un exceso de rHuEpo (Figura 22A) . El rHuEpo no bloqueó a fijación del clon 13 ni del clon 29 (Figura 22A) . Ejemplo 16 - Fijación competitiva del clon 201, clon 276, clon 295, clon 307, clon 318, clon 319, clon 323, clon 330, clon 352, y clon 378. al huEpoR: El clon. 201, clon 276, clon 295, clon 307, clon 318, clon 319, clon 323, clon 330, clon 352 y clon 378 fueron probados respecto de su habilidad para competir con el Epo para fijarse a huEpoR utilizando un ELISA basado en una placa. Todas las proteínas scFv-Fc utilizadas tuvieron un Fe derivado de IgGl. Epo Biotinilateado que se une al huEpoR Fe fue utilizado como competidor. El huEpoR fue inmovilizado en la placalISA polisorp. La inhibición día fijación con el Epo del clon 201, clon 276, clon 295, clon 307, clon 318, clon 319, clon 323, clon 330, clon 352 y clon 378 en scFv-Fc fue probado mediante una valoración de la concentración con cada proteína de 0 a 50 µg/ml, usando un conjugado de HRP-streptavidina . Todos los clones excepto el clon 13, el clon 15, clon 16, clon 29, clon 30 y clon 34 bloquearon de manera sustancial la fijación al Epo en grandes concentraciones (Figura 23) . El clon 2, clon 5, clon 7, clon 10, clon 13, clon 15, clon 16, clon 29, clon 30 y clon 34 en formato fago fueron probados en relación a su habilidad para competir con el clon 5 y el clon 30 en formato de maxibodies para fijarse al Epo según la descripción general del Ejemplo 5. Ejemplo 17 - Fijación de anticuerpo a EpoR de ratón (muEpoR) y EpoR de mono cinomolgus (cinoEpoR) : La reactividad cruzada de ciertos clones en formato scFv-Fc fue probada utilizando un Ensayo ELISA. Todas las proteínas scFv-Fc utilizadas tuvieron un Fe derivado de IgGl . Los clones probados fueron: Clon 13, clon 15, clon 16, clon 29, clon 34, clon 201, clon 276, clon 295, clon 307, clon 318, clon 319, clon 323, clon 330, clon 352 y clon 378. ???µ? de 1 ug/ml (en 50 m NaHC03, pH8.5) cinoEpoR o muEpoR se agregó a cada fuente en una placalISA polisorp e incubados a 4'C durante toda la noche. Luego de bloquear las fuentes con 4% de leche/PBS/0 , 1% de Tween20 durante 1 hora a temperatura ambiente, las placas fueron lavadas tres veces con PBS/0,1% de Tween20. Se agregó a cada fuente 100 µ? de 5 µ?/p?? de scFv-Fc que fue incubado por 1 hora a 25°C. El cinoEpoR o muEpoR fue detectado usando un conjugado IgG Fc-antihumano (dilución 1:1000 en 4% de leche PBS/0,1% Tween20). ABTS (2, 2 ' -azino-bis ( 3-etilbenztiazolina-6-sulfonico ácido)) se utilizó como sustrato y la absorción se midió a 405 nm en un lector de placas. Todos los clones mostraron un nivel significativo de reactividad cruzada con el cinoEpoR (Figura 23). El clon 276, clon 323, clon 352 y el clon 378 mostraron un nivel sustancial de reactividad cruzada con muEpoR (Figura 23) . Ejemplo 18 - Medición de las constantes de rango y afinidad con respecto a EpoR humanos y cinos usando Biacore : Se realizaron experimentos de resonancia del PLSMON en la superficie a 25°C utilizando un instrumento Biacore T100 (Biacore, AB, Uppsala, Suecia) equipado con un chip sensor CM5. Cada célula de flujo en los chips CM5 fue activada con una mezcla 1:1 (v/v) de 0.1 M N-hidroxisuccinimida (NHS) y 0.4 M 1-etilo-3- ( 3-dimetilaminopropil ) carbodiimida hidroclorido (EDC) . Un anticuerpo IgG antihumano de cabra AffiniPure especifico de fragmento de Fcy a 30 pg/ml en lOmM de acetato de sodio, pH 5.0 fue inmobilizado a dos células de flujo en los chips CM5 utilizando química de acople amino estándar con un nivel meta de 10.000 fijadades de resonancia (RU) . Las superficies reactivas residuales fueron desactivadas con una inyección de 1M de etanolamina. El buffer en funcionamiento fue cambiado a HBS-EP+0,01 mg/ml de BSA para todos los pasos restantes. Por cada proteína scFv-Fc a ser probada, la proteína scF-Fc fue diluida en el buffer activo a 200 ng/ml e inyectado sobre la célula de flujo de prueba a 10 µ?/min durante 2 minutos para capturar el cuerpo máximo. Todas las proteínas scFv-Fc utilizadas tuvieron un Fe derivado de IgGl. Ninguna proteína scFv-Fc fue capturada en la superficie de la célula de flujo de control. EpoR humano o ciño EpoR fue FLOWN OVER las dos células de flujo en concentraciones de 24,7 a 6000 nM junto a BLANK del buffer. Un rango de flujo de 50 µ?/min fue utilizado y una fase de asociación de 1 minuto seguida de una fase de disociación de 5 minutos (para cinoEpoR) o de 10 minutos (para hu EpoR) Luego de cada ciclo las superficies fueron regeneradas mediante una inyección de 10 mM de glicina pH 1.5 durante 30 segundos. Luego se capturo proteina scF-Fc fresca de la célula de flujo de prueba para prepararla paral siguiente ciclo. Los datos fueron referenciados doblemente substrayendo las respuestas de la superficie de control para quitar los cambios del índice refractarios del volumen, luego la respuesta promedio del BLANK del buffer fue substraída para quitar los artefactos sistemáticos de las células de flujo experimentales. Los datos EpoR fueron procesados y adaptados globalmente a un modelo de interacción 1:1 con transferencia de masa y un software de evaluación Rmax en Biacore T100 vi .1 local. (Biacore AB, Uppsala, Suecia) . Las interacciones medidas entre el clon 30 y el EpoR humano; el clon 34 y el cinoEpoR, y el clon 318 y el ciño EpoR tuvieron rangos OFF que fueron demasiado rápidos para medirlos con exactitud por lo que los datos fueron adaptados a un modelo de estado regular. El modelo de estado regular da como resultado solamente determinaciones de afinidad y no valores cinéticos. Las constantes de rango y afinidad se resumen en la Tabla 3. Las afinidades calculadas para huEpoR con respecto a las proteínas scFv-Fc mostraron una variación entre 1,1 nM en relación al clon 10 (datos anteriores se muestran en la Tabla 2) a 4030 nM paral clon 201. Con respecto al cinoEpoR, los rangos fueron de 6,83 nm paral clon 10 a 18.600 paral clon 201. El clon 10 tuvo el koff mientras que el clon 201 tuvo el kon más lento. En general, las afinidades calculadas fueron bastante similares para EpoR humano y paral EpoR del mono cinomolgus con sólo dos proteínas scFv-Fc (clones 34 y 307) que mostraron una variación mayor a 10 x entre las especies.
Tabla 3 Resumen de la cinética de fijación de EpoR humano y cinoEpoR a las proteínas scFv-Fc Clon de la proteina KD (nM) utilizado 1/Ms) 1/s) scFv-Fc Humano No se repitió. Ver datos anteriores. #5 Cinomolgus 4.37 611 140 #10 Humano No se repitió. Ver datos anteriores. Cinomolgus 1.56 10.7 6.83 Humano 0.55 568 1,040 #13 Cinomolgus 0.65 597 920 #15 Humano 0.61 1,190 1,950 Clon de la EpoR (105, proteina KD (nM) utilizado 1/Ms) 1/s) scFv-Fc Cinomolgus 0.37 1, 150 3, 130 #16 Humano 0.65 1, 420 2, 190 Cinomolgus 0.65 2, 830 4, 360 Humano 1.29 629 487 #29 Cinomolgus 1.90 504 265 Adaptado al modelo de Humano 3, 690 #30 estado regular. Cinomolgus 2.11 4,850 2, 310 Humano 5.36 2,030 378 #34 Adaptado al modelo de Cinomolgus 5, 810 estado regular. Humano 0.046 187 4, 030 #201 Cinomolgus 0.027 508 18, 600 Humano 0.18 29.6 163 #295 Cinomolgus 0.41 221 539 Humano 22.8 2, 460 108 #307 Cinomolgus 2.99 3, 610 1,210 Humano 6.59 5, 580 847 #318 Adaptado al modelo de Cinomolgus 4890 estado regular. #319 Humano 1.58 335 212 Clon de la EpoR kon (105, koff proteina KD (nM) utilizado 1/Ms) 1/s) scFv-Fc Cinomolgus 2.13 258 121 Humano 8.22 373 45.4 #330 Cinomolgus 1.08 965 890 EJEMPLO 19: Selección de Proteínas scFv-Fc in Vitro para la Activación del Receptor de Eritropoyetina Humana Las proteínas scFv-Fc fueron monitoreadas para la activación del huEpoR. El monitoreo in Vitro de las proteínas scFv-Fc fue efectuado mediante un ensayo de informe con base en luciferasa (ensayo de luciferasa) en células UT-7 (megacarioblastos humanos) transíectadas con un constructo que contenía nueve sitios de fijación STAT5 frente a un gen indicador de luciferasa (células UT-7-LUC) . Todas las proteínas scFv-Fc utilizadas tuvieron un Fe derivado de IgGl. Todas las células fueron mantenidas y los ensayos celulares conducidos a 37 °C en una incubadora humidificada a 5% C02 y 95% de aire atmosférico, a menos que sea indicado de otro modo. Todo el suero fetal bovino (FBS) fue inactivado por calor a 55°C durante 45 minutos antes de su utilización. Toda la solución salina tamponada fosfatada de Dulbecco (PBS) utilizada para la manipulación celular carecía de clorido de calcio y clorido de magnesio. Las células UT-7-LUC (Amgen, Inc., Thousand Oaks, CA) fueron mantenidas en un medio de crecimiento compuesta por I DM (Invitrogen, Carlsbad, CA) que contenía 10% de FBS (HyClone, Logan UT) , 500 g/mL de higromicina (Roche, Penzberg, Alemania) , 100 U/ml de penicilina, 100 µg/mL de estreptomicina, 292 g/mL de L-glutamina (IX PSG; Invitrogen) y 0,5 U/ml de eritropoyetina humana recombinante (.Epoetin Alpha, rHuEpo; Amgen, Inc) Las células fueron lavadas dos veces en medio de ensayo (medio RPMI 1640 con 1% de FBS, iX PSG, y 12,5 mM HEPES ( Invitrogen) ) y resuspendidas a 400.000 células por mi en medio de ensayo. Luego de una incubación nocturna, se determinaron el número de células y la viabilidad, y las células fueron resuspendidas a 200.000 células por mi en medio de ensayo. Cada proteína scFv-Fc fue diluida en serie en una placa fuente opaca 96 (Corning, Corning, NY) El rango de concentración, dilución FOLD, número de diluciones y número de reproducciones variaron con cada experimento y se indican en la Tabla 4. Para servir de estándar de control, EPO humano recombinante fue diluido en serie en 7 fuentes por cada placa de fuente 96, por duplicado, para obtener una concentración final de 0,82 nM a 5,25 E-05 nM. Se agregaron aproximadamente 1.000 células a cada fuente. Las células fueron cultivadas de 18 a 24 horas, y el ensayo fue realizado de acuerdo al protocolo del fabricante paral Ensayo de Luciferasa con Luz Constante. (Promega Corporation) . La actividad de la luciferasa fue leída en un luminometro para placas de fuente 96. Los datos fueron transferidos a curvas de fijación y a valores EC50 usando software GraphPad Prism®. Los datos se presentan en la Tabla 5 como EC50 promedio ± la desviación estándar.
Tabla 4. Resumen de concentraciones de Mbx usadas en Ensayos de Luciferasa con respecto a UT-7.
Rango de concentración Concentración Concentración Cuerpo más alta más baja Nro. De Máximo (nM) (nM) dilución Replicas Ensayos Mxb#2 2.500 0, 032 5 1 1 Mxb#5 5.000 6,86 3 1 1 5.000 0, 028 3 3 1 2.500 0,16 5 1 1 2.500 0, 16 5 3 1 2.500 0, 16 5 2 1 2.500 0, 032 5 1 1 2.500 1, 143 3 1 1 1.000 0, 457 3 2 1 Mxb#7 2.500 0, 032 5 1 1 Mxb#10 5.000 6, 859 3 1 1 5.000 0, 0282 3 3 1 2.500 0, 032 5 1 1 Rango de concentración Concentración Concentración Cuerpo más alta más baja Nro . De Máximo (nM) (nM) dilución Replicas Ensayos Mxb#13 5.000 6,859 3 1 1 Mxb#15 5.000 6,859 3 1 1 xb#29 5.000 6,859 3 1 1 Mxb#30 2.500 1,143 3 1 1 Mxb#34 5.000 6, 859 3 1 1 25 0, 034 3 3 1 Mxb#201 5.000 6,859 3 1 1 Mxb#276 5.000 0, 028 3 3 1 5.000 6,859 3 2 1 2.500 0, 032 5 1 1 2.500 1,143 3 1 1 Mxb#295 5.000 6,859 3 1 1 Mxb#307 5.000 6,859 3 1 1 Mxb#318 25 0, 034 3 3 1 Mxb#319 5.000 6,859 3 1 1 Mxb#323 5.000 6,859 3 2 1 2.500 0, 032 5 1 1 2.500 1,143 3 1 1 Mxb#330 25 0, 034 3 3 1 Mxb#352 5.000 0, 028 3 3 1 Rango de concentración Concentración Concentración Cuerpo más alta más baja Nro. De Máximo (nM) (nM) dilución Replicas Ensayos 5.000 6,859 3 2 1 2.500 0, 032 5 1 1 2.500 1, 143 3 1 1 Mxb#378 2.500 0, 032 5 1 1 2.500 1, 143 3 1 1 Tabla 5 La tabla 5 muestra los valores EC5o para la activación del huEpoR y los niveles de actividad del EpoR con respecto a Mxb 2, Mxb 5, xb 7, Mxb 10, Mxb 13, Mxb 15, xb 16, Mxb 29, Mxb 30, Mxb 34, Mxb 201, Mxb 276, Mxb 295, Mxb 307, Mxb 318, Mxb 319, Mxb 323, Mxb 330, Mxb 352, y Mxb 378. Los resultados son presentados como valores EC50 promedio calculados utilizando software GraphPad Prism (sin substracción de fondo) ± la desviación estándar. Cuando sólo se realizó un experimento, la desviación estándar se simboliza como N/A. Ejemplo 20 - Experimentos In Vivo con Mxb 276, Mxb 323, Mxb 352, and Mxb 378. El efecto de una sola inyección de proteínas scFv-Fc Mxb 276, Mxb 323, Mxb 352 o Mxb 378 fue probado en ratones. Las proteínas scFv-Fc fueron probadas con IgGl fe o con una IgG2fc. Las proteínas scFv-Fc con un IgGlfc se abreviaron como Mxb X_G1MB or X_G1MB, en donde "X" es el número clon. Las proteínas scFv-Fc con un IgG2fc se abreviaron Mxb X_G2MB or X_G2MB, en donde "X" es el número de clon. PEG-NESP fue utilizado como un control positivo en este experimento. El transportador (lOmM Potasio Fosfato, 161mM L-Arginina, pH 7.5) fue utilizado como control negativo. A ratones hembras BDF-1 de dos meses de edad se les inyectó subcutáneamente un transportador (PBS con 0,10% BSA) , 3 yg/kg PEG-NESP (Amgen Inc.) o 100 yg de una proteína scFv-Fe en un volumen final de 200 µ?. Las siguientes proteínas scF-Fv fueron probadas como una sola dosis en bolo de 100 Ug/ratón. Mxb 276_G1MB, xb 323_G1MB, Mxb 352_G1MB, Mxb 378_G1 B, Mxb 276_G2MB, Mxb 323_G2MB, Mxb 352_G2MB, and Mxb 378_G2MB. Se juntó sangre del seno retro orbital en varios puntos en el tiempo y se evaluó dicha sangre por parámetros CBC (Hemograma) usando un analizador de sangre ADVIA. Paral primer experimento, la sangre fue extraída en los días -2, 3, 5, 9, 11, 15, 20, 22, 27, 29, 36 paral transportador y los grupos 276-Mxb. Paral grupo de ratones tratados con PEG-NESP, la sangre fue extraída en los días -2, 3, 5, 9, 11, 15, 20 y 22. Para todos los otros grupos, la sangre fue extraída en los días -2, 3, 5, 9, 11 y 16. En el segundo experimento, la sangre fue extraída en los días -2, 3, 5, 9, 11 y 16 para todos los grupos. Como se vio en las Figuras 24 y 25, no todos los ratones fueron monitoreados durante la totalidad de los 38 días. Se detuvieron las extracciones cuando los parámetros CBC retornaron al nivel de origen. Las extracciones se efectuaron a cinco ratones en cada oportfij adad . Los datos son expuestos en las Figuras 24 y 25. Mxb 276_G1MB tiene un efecto estimulante eritropoiético como se observó a través del aumento de la hemoglobina y del número de reticulositos a una dosis de 100 pg/ratón. Esta dosis no tuvo efectos significativos en ningún otro Mxb probado en este experimento. El PEG-NESP actuó como control positivo y se desempeñó según lo esperado. El perfil de actividad de Mxb 276_G1 B fue diferente al del PEG-NESP, el número más alto de reticulositos fue alcanzado el día 5 luego de la inyección de PEG-NESP o de Mxb 276_G1MB, pero la duración de la respuesta del reticulosito fue aumentada significativamente en los ratones que recibieron una dosis de Mxb 276_G1MB. El número de reticulositos regresó al número original al noveno día en los ratones tratados con PEG-NESP, pero le tomó de 19 a 20 días a los reticulositos regresar al número original en los ratones tratados conMxb 276_G1MB. En los ratones inyectados con Mxb 276_G1MB en esta dosis, los niveles de hemoglobina se mantuvieron por encima del nivel original de 22 a 29 días. En contraposición, el nivel de hemoglobina en los ratones tratados con PEG-NESP volvió a su origen durante el decimoquinto día, mostrando una gran diferencia en la duración y la magnitud de la respuesta de la hemoglobina en los ratones tratados con Mxb 276_G1MB y los tratados con PEG-NESP. Este experimento demuestra que una sola inyección de Mxb 276_G1MB aumenta los niveles de hemoglobina por encima de su nivel original durante un periodo de tiempo significativo cercano a la vida total del glóbulo rojo en los ratones (aproximadamente 40 días). Debido a que el nivel de disminución de la hemoglobina luego de la administración de un agente eritropoiético se relaciona con la vida de los eritrocitos (aproximadamente 120 días en humanos) , es posible que una sola administración de Mxb276_GlMB en humanos sea suficiente para curar la anemia por un periodo de 2 a 3 meses . EJEMPLO 21 - Generación de Fe mutante de punto humano de Mxb, y Fe mutante de punto cinomolgus de Mxb. Mxb 5, Mxb 10, y Mxb 30 (con Fe humano) y Mxb 5 (con Fe cinomolgus) fueron mutados como asparagina 297 de la porción Fe de las proteínas . La aspargina mutante se encuentra en la posición equivalente a la aspargina 297 del dominio CH2 del IgG humano. La aspargina en posición 297 fue reemplazada por un residuo de serina en todos los mutantes (N297S) utilizando Stratagene's QuikChange II Site-Directed Mutagenesis Kit . Para la mutagénesis de Fe en humanos, se usaron los siguientes iniciadores en la reacción: 4606-78 (CGG GAG GAG CAG TAC AGC AGC ACG TAC CGT GTG) y 4606-79 (CAC ACG GTA CGT GCT GCT GTA CTG CTC CTC CCG) Para la mutagénesis de Fe en cinomolgus, se utilizaron los siguientes iniciadores: 4606-76 (GGG AGA GGC AGT TCA GCA GCA CGT ACC GCG) y 4606-77 (CGC GGT ACG TGC TGC TGA ACT GCC TCT CCC) . La mutagénesis se efectuó de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Las plantillas de ADN se muestran en las Figuras 28A-28D. La mutación a aspargina 297 se llevó a cabo para inhibir la fijación del Mbx con el Fe Gama Receptor III (FcgRIII) en las células efectoras presentes in vivo. El objetivo era minimizar toda neutralización de las células progenitoras hematopoiéticas en la médula ósea mediante células efectoras inmunes que expresan FcgRIII. El compromiso de este receptor en células efectoras disparal ADCC ( citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos). Ver, por ejemplo, Radaev et al, J Biol. Chem. 2001 May 11 ;276 (19) : 16478-83 y Radaev et al., J Biol Chem 2001 May 11 ;276 (19) : 16469-77 Luego de la mutagénesis, las colonias fueron seleccionadas y la secuencia de ADN correcta fue confirmada mediante el análisis de secuencia. Los preparados máximos de ADN de clones Mxb#5-huFc-N297S (21457) , Mxb#10-huFc-N297S (21480), Mxb#30-huFc-N297S (21481) y cino-Fc N297S (21456) fueron elaborados utilizando el Qiagen Compact Prep Kit de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Un sitio 5' Hind III y un sitio 3' Bam HI se agregaron a cada uno de los clones a través de una reacción en cadena de polimerasa (PCR) Los preparados máximos mencionados anteriormente fueron utilizados como plantilla de ADN para las reacciones PCR. Los iniciadores 4611-63 (GAC TGC AAG CTT GAC ACC ATG GGG TCA ACC GCC) and 4611-64 (GCA TAC GGA TCC TCA TTT ACC CGG AGA CAG) fueron utilizados en las PCR para #5-huFc-N297S , xb#10-huFc-N297S, and Mxb#30-huFc-N297S (Figura 27). Paral Mbx 5 (con Fe cinomolgus) se utilizaron los iniciadores 4611-63 and 4606-84 (CAT GGG GGT GTG AAC TCT GCG GCC GCT AGG ACG G ) para amplificar el scFv del clon 5 y agregar 5' Hind III site en una reacción PCR. Los iniciadores 4606-83 (CCG TCC TAG CGG CCG CAG AGT TCA CAC CCC CAT G ) y 4611-65 (GCA TCA GGA TCC TCA TTT ACC CGG AGA CAC ) se utilizaron para amplificar el ciño Fe N297S y agregar 3' Bam HI site en una reacción PCR. El producto amplificado scFv del clon 5 y el producto amplificado N297S del ciño Fe fueron utilizados como plantillas en una reacción PCR "SOE-ing" División de Genes mediante una Extensión por Superposición (Figura 27). Los iniciadores 4611-63 y 4611-65 fueron utilizados en esa reacción. Todas las reacciones PCR fueron realizadas en un termociclador MJ Research Peltier (PTC, althman, MA) utilizando un sistema PCR de Alta Fidelidad Expandida (Roche, indianápolis , IN, cat . Nro. 11732650001). La reacción y las condiciones para la PCR se muestran en la Figura 27. Luego de la amplificación de la PCR, todos los productos de la amplificación fueron purificados mediante columnas utilizando un Kit de Extracción en Gel Qiagen' s Qiaquik siguiendo las instrucciones del fabricante. Los productos de la amplificación fueron cortados mediante Hind III durante 90 minutos. Los productos de la amplificación fueron purificados mediante columnas utilizando un Kit de Extracción en Gel Qiagen Qiaquik de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Los productos de la amplificación fueron cortados mediante Bam HI durante 90 minutos. Los productos cortados fueron purificados con gel utilizando un Kit de Extracción en Gel Qiagen Qiaquik de acuerdo a las instrucciones del fabricante y luego ligados al pTT5 BamHI/HindIII utilizando ligasa T4 de New England Biolab durante toda la noche . Los productos de la ligación fueron purificados por columnas al día siguiente y transformados mediante electroporación en células DH10B. Se seleccionaron las colonias para formar las secuencias y se formaron las mismas. Las cuatro secuencias de proteínas scFv-Fc son expuestas en las Figuras 29A-29D. EJEMPLO 22 - Estudio de escalamiento de Dosis de Mxb 5, Mxb 10 y Mxb 30 en Monos Cinomolgus Cada una de las cuatro proteínas descriptas en el Ejemplo 21 fue administrada en forma intravenosa a monos cinomolgus, y la farmacodinámica (efectos hematológicos ) y los efectos farmacocinéticas (PK) luego de la administración intravenosa fue medida. Según se vio en el Ejemplo 21, las regiones Fe de las proteínas scFv-Fc sometidas a prueba carecían de la habilidad para fijarse a FcgRIII. El Fe mutante de punto humano utilizado en las proteínas scFv-Fc fue Fe mutante de punto IgGl humano que carecía de un sitio de glicosilación requerido para fijarse al FcgRIII. El Fe mutante de punto cinomolgus utilizado en las proteínas scFv-Fe fue Fe IgGl ciño que carecía de un sitio de glicosilación requerido para fijarse al FcgRIII. Las proteínas scFv-Fc probadas fueron un Fe mutante de punto humano xb 5 (Fe desglicosilatado) , un Fe mutante de punto humano Mxb 10 (Fe desglicosilatado ) y un Fe mutante de punto humano Mxb30 (Fe desglicosilatado) . En el estudio se utilizó un total de 18 monos hembras con un peso de entre 2 y 4 kilos. Los monos fueron divididos en los siguientes 6 grupos experimentales: 1. Control de vehículo (lOmM potasio fosfato, 161 mM L- Arginina, pH 7.5). 2. Grupo de control positivo (Peg-NESP) 3. Fe mutante de punto humano Mxb#5 4. Fe mutante de punto humano Mxb#10 5. Fe mutante de punto humano Mxb#30 6. Fe mutante de punto cinomolgus Mxb#5 El estudio tuvo una duración de 31 días y las proteínas scFv-Fc o muestras de control fueron administradas a cada animal dos veces mediante una inyección IV. La administración de proteínas scfv_Fc, control de vehículo, y control positivo (Peg-NESP) ocurrió durante el día 1 y el día 15 del estudio. Cada inyección de proteína fue dosificada a 0,5 mg/kg en 10 mM de fosfato de potasio, 161 mM L-Arginina, pH 7.5 para la primera administración del día ly a 5 mg/kg en 10 mM de fosfato de potasio, 161 mM L-Arginina, pH 7.5 para la segunda administración del día 15. El Peg-NESP fue dosificado a 0,03 mg/kg para ambas inyecciones. El control de vehículo (lOmM potasio fosfato, 161 mM L-Arginina, pH 7.5) fue dosificado a 1 ml/kg para ambas inyecciones. Luego de la administración intravenosa, se extrajo sangre (aproximadamente 1 mi ) de cada animal para efectuarle análisis de PK y hematológico antes de la dosis (Día 2), antes de la dosis (Día 1) y 120, 192, 288, 360, 456, 528, 624, y 696 horas luego de administrar la primera dosis. El análisis preliminar de los datos mostró diferencias entre Mxb 5, Mxb 10, y Mxb 30. Ver Figuras 26A y 26B. Las dos variantes de Mxb 5 indujeron una gota en los niveles de reticulositos y de hemoglobina cuando la dosis fue de 5 mg/kg, sin embargo, Mxb 10 y Mxb 30 no indujeron ninguna gota en los reticulositos ni en la hemoglobina. Además, durante el día 5, luego de la administración de la primera dosis, el aumento en los niveles de reticulositos en monos a los cuales se les había administrado Mxb 10 fue significativo estadísticamente al compararlos con los niveles de origen de los reticulositos antes de la dosis (p=0,029, Prueba-F) . EJEMPLO 23 - El Mapeo de Epitopos de Proteina Alanina scFv-Fc (Fv-Fc de cadena simple) anticuerpo EpoR. Rastreo de EpoR Se ha determinado que la estructura crystal del dominio extracelular de fijación al ligando de EpoR se combinó con el ligando. (Syed et al., Nature 395, 511-6 (1998)) Se utilizó esta información con el fin de crear un panel de mutantes que pueden ser usado para ubicar los residuos de superficie individual que se encuentran en la fijación de anticuerpos. Se aplicó la estrategia de exámen de alanina para EpoR. Se incluyen tanto el mecanismo computacional como análisis de estructura interactiva como métodos a utilizar a la hora de seleccionar residuos para mutar Todos los residuos fueron coloreados de color rojo. Luego, se calculó la exposición al solvente de todos los residuos en el dimero. Se colorean de color verde los residuos con una superficie de = 60 Á2 o con una exposición a solvente de una relación de = 50%. Luego, se colorean de color magenta a las glicinas con ángulos positivos F, como los Asp8 y Pro9 cuando cubren la hélice de extremo N-terminal. Los residuos (coloreados de color azul) luego fueron seleccionados para rellenar los espacios de la superficie. Luego se seleccionaron más residuos en los que se observó una estructura que apunta hacia la superficie, sin embargo están excluidos de los cálculos de la exposición al solvente. Estos residuos fueron coloreados de color cian. Con el fin de reducir el número de mutaciones a 95, las prolinas en secuencias, se colorearon de color magenta específicamente a los residuos 23, 50 y 203. Luego se clasificaron los residuos de color cian según su exposición a solventes y al ratio de la exposición a solventes. Se conservaron las seis superiores de cada medición mientras que se colorea magenta al resto. se mutaron los residuos no alaninos a alanino y a su vez alanito muto a serino. La fijación de un anticuerpo con un antigeno cubre la superficie del antigeno en la región día fijación de anticuerpos. Este patch cubierto de residuos antigenos incluye ambos residuos que se encuentran directamente en la fijación de anticuerpos y otros que se encuentran en la región de la fijación de anticuerpos, pero no contribuye a la fijación en forma directa. Este patch cubierto de residuos antigenos define un epitopo estructural en el antigeno. Con el examen de alanina, los residuos que se encuentran dentro de este patch cubierto y que no se observan estar interesados en fijarse al anticuerpo pueden contribuir a la fijación de anticuerpos en forma total a través de otras interacciones. El examen de alanina es un método que examina si el residuo mutante forma parte de un epitopo functional. El epitopo funcional describe a aquellos residuos en el antigeno, los cuales se forman parte de la fijación de anticuerpos. los mutantes alaninos de único sitio fueron utilizados para determinar aquellos residuos que se encuentran dentro del antigeno con cadenas laterales que estén directamente implicados en la fijación de anticuerpos. Alanina tiene una cadena lateral más pequeña que los otros residuos, excepto la glicina y por consiguiente puede causar una pérdida de un sitio de fijación de la cadena lateral y afectar a dicho enlace. Un tipo de epitopo diferente es un epitopo estructural o aquéllos residuos dentro del antigeno con el cual se comunican o se encuentran enterrados por un anticuerpo. la introducción de mutantes argininos al antigeno es un método que examina si un residuo forma parte de un epitopo estructural. La cadena lateral arginina es grande y de masa voluminosa y bloquea en forma efectiva al enlace de anticuerpos, sin tener en cuenta si el residuo de tipo salvaje se encuentra directamente implicado en la fijación de anticuerpos. Por consiguiente, se utilizaron los mutantes argininos de sitio único para determinar aquéllos residuos en el antigeno y que a su vez se encuentran en el patch cubierto. En el caso que un residuo antigeno mutado al arginina module la fijación del anticuerpo, se sugiere que el residuo forma parte del epitopo estructural. En el caso que el residuo antigeno de tipo salvaje sea arginina, se mutan al glutamato . Contrucción, Expresión y caracterización de los Mutantes Alaninos Los 95 mutantes induviduales alaninos o serinos se produjeron de acuerdo a las técnicas de tipo estándar. los oligonucleótidos sentidos y anti-sentidos que contienen los residuos mutantes fueron sintetizados en un formato de fuente de 96. La Mutagénesis de huEpoR de tipo salvaje {Wild Type) fue realizada mediante un kit II sistema Quickchange (Stratagene) según las instrucciones del fabricante. Todos los mutantes fueron contruidos en un vector pTT5 y marcados con6xHis-Avitag (Avidity, LLC, Denver, Colorado) en el extremo carboxilico. Las reacciones y tranformaciones de la mutagénesis fueron realizadas en un formato de pozo 96. Las células en suspensión 2936-E (NRCC) fueron transíectadas en forma pasajera. Los niveles y la integridad de expresión de las proteínas recombinantes en los medios condicionados fueron evaluados por el análisis Western. Se estimó un ~5 µ?/p? del nivel de expresión promedio, Los 6 mutantes no se expresaron, mientras otros 8 mutantes expresaron en forma deficiente . Todos los residuos aminoácidos fueron ientificados por su posición en el dominio extracelular del Receptor humano Epo . Los siguientes mutantes no lograron a ser mapeados por epitopos debido a que no se expresaron o a que se expresaron en forma deficiente. R32A, S54A, K65A, Q71A, W82A, R108A, W209A y W212A Finalmente, los residuos mutados F208A y P86A afectaron la fijación de todas las proteínas de cadena simple scFv-Fc y posiblemente fueron plegados en forma incorrecta. De este modo, a pesar de haber disminuido la fijación de anticuerpos no fueron considerados como parte del epítopo. Cuando fue posible, los mutantes eran examinados para comprobar su habilidad para fijarse a Epo con el fin de confirmar que estaban correctamente plegada. Metodología del ensayo 1. Ensayo de fijación ELISA. Un ensayo de fijación ELISA se utilizó para medir la fijación de los anticuerpos anti EpoR a supernandates condicionados que contenían la proteína mutante en cuestión. 100 µ? de proteína scFv-Fc purificada a 1 pg/mL en lxPBS fueron revestidos sobre una placa Nunc Maxisorp e incubados a 4 grados durante toda la noche. Todas las proteínas scFv-Fc utilizadas tuvieron un Fe derivado de IgGl . Luego de bloquear las fuentes con 2% de BSA/PBS/0,1% de Tween20 durante 1 hora a temperatura ambiente, las placas fueron lavadas tres veces con PBS/0,1% de Tween20. Las concentraciones proteínas de EpoR mutante fueron normalizadas en base a una desintometría con gel relativa a la proteína de tipo WT . Las proteínas mutantes EpoR fuern diluidas en serie e veces en 0, l%BSA/PBS/0, l%Tween20, que también contenía una dilución constante de 1:5000 deanti-6xHis mAb-HRP (R&DSystems) . La mezcla del mutante EpoR/anti-6xHis mAb-HRP fue retenida por dos horas a temperatura ambiente. TMB (3, 3', 5, 5'- Tetrametilbenzidina ) fue utilizado como sustrato y la absorción midió 450 nm en el lector de placas. Los datos de la fijación fueron analizados mediante un análisis de regresión no lineal (pendiente variable, respuesta de la dosis sigmoidal) para generar valores EC50 utilizando software GraphPad Prism . Se sugirió que las mutaciones que hicieron desaparecer la vinculación o que la disminuyeron en un 50% en relación con el tipo salvaje eran parte del epitopo. Los datos representativos se muestran en la Figura 30. 2. Ensayo de fijación EpoR LANCE Un ensayo de LANCE FRET homogéneo (Transferencia de Energía por Resonancia Fluorescente) en relación con la fijación de EpoR-Ab también fue utilizado, usando un anti-IgG mAb conj ugado-Eu-chelate y un anti-pHis mAb conj ugado-APC . Las concentraciones de EpoR mutante fueron normalizadas en base a una desintometría con gel relativa a la proteína de tipo salvaje. Proteínas EpoR mutantes fueron diluidas en serie 2 veces en una mezcla de proteína scFv-Fc anti-EpoR purificada (1,5 nM) , 0,75 nM Eu chelate etiquetada -anti-IgG mAb (Perkin Elmer) y 35 nM APC-anti-His mAb Ab (Perkin Elmer) . Las muestras fueron incubadas durante dos horas a temperatura ambiente antes de su excitación a 535 nm y su detección a 655 nm en un lector de placa fluorescente. Los mutantes EpoR que se sugirió formaban parte del epitopo disminuyeron o hicieron desaparecer la señal de desgaste. Los datos de fijación fueron transferidos a curvas de fijación y a valores EC50 usando software GraphPad Prism®. Se sugirió que las mutaciones que hicieron desaparecer la fijación o que la disminuyeron en un 50% en relación al tipo salvaje eran parte del epitopo. Los datos representativos se muestran en la Figura 31. Monitoreo de Arginina Según lo mencionado anteriormente, todos los residuos de aminoácidos fueron identificados por su posición en el dominio extracelular del Receptor Epo humano. Los siguientes mutantes: E34R, E60R, P63R, W64R, T87R, A88R, R99E, A103R, V112R, M150R, H153R y A166R también fueron realizados según el mismo método que los mutantes alaninos. Se esperaba que los mutantes argininos introdujeran una perturbación estructural más importante que la introducida por los mutantes alaninos, confirmando de este modo nuestras funciones para estos residuos (Figura 32) . Ocho proteínas scFv-Fc agonistas posibles fueron delineadas: , Mxb #2, #5, #7, #10, #13, #15, #29 y #30. Un resumen de las mutaciones alanitas que redujeron la fijación en un 50% relativa a WT o que hicieron desaparecer la fijación tanto del ensayo LANCE como el ensayo ELISA se muestra en la Tabla 6. Asimismo, se puede ver un resumen de las mutaciones arginínicas que redujeron la fijación en un 50% relativa al WT o que hicieron desaparecer la fijación realizada mediante el ensayo ELISA. Esa tabla no excluye otros residuos que no estén listados en la tabla de ser parte del epitopo, dichos residuos pueden no haber mutado, o los ensayos pueden no haber sido suficientemente sensibles para identificarlos como parte del epitopo. Tabla 6 Resumen de los residuos que son parte afectada del epitopo EpoR humano que consta de ocho proteínas scFv-Fc agonistas anti-EpoR. proteina Residuos en el dominio Residuos en el dominio scFv-Fc extracelular de EpoR que se extracelular de EpoR que se transformó en Alanina. transformó en Arginina. Mxb #2 F93, H114 E34, E60 Mxb #5 S91, F93, H114 E60 Mxb #7 F93 E60 Mxb #10 E62, F93, M150 A88, M150 Mxb #13 V48, E62, L66, R68, H70 Mxb #15 V48, W64, L66, R68, H70 T87 Mxb #29 A44, V48, P63, L66, P63, W64 , R68, H70 Mxb #30 L66, R99 R99 Los epitopos para estos anticuerpos corresponden a dos clases distinas. La primera clase es la de las proteínas scFv-Fc competitivas con Epo (Mxb 2, Mxb 5, Mxb 7 y Mxb 10) . La segunda clase es la de aquellas proteínas scFv-Fc que no compiten con Epo (Mxb 30, Mxb 13, Mxb 15, y Mxb 29) . Esos datos son consistentes con la hipótesis respecto de que las proteínas scFv-Fc no competitivas con Epo agonizan el receptor EpoR mediante la fijación a regiones que están lejos de la cavidad del dimero fijada al ligando. Ejemplo 24 - Alineaciones de secuencias y análisis filogenéticos de regiones CDR de cadenas livianas variables y cadenas pesadas variables de proteínas scFv-Fc . Para determinar la diversidad entre los CDRs de las proteínas scFv-Fc, se utilizó la división electrónica de los CDRs. Primero se identificaron las regiones CDR. Luego se quitaron las regiones variables de las secuencias y secuencias péptidas más pequeñas fueron utilizadas como conectores entre los CDR. Una múltiple alineación de las secuencias divididas electrónicamente fue utilizada para crear árboles filogenéticos . El proceso se utilizó tanto para las secuencias en cadena liviana variable como para las secuencias en cadena pesada variable. El programa MiniPileup (software CGC) fue utilizado para producir las mútiples alineaciones y los árboles filogenéticos (Figuras 33 y 34). Los resultados se resumen en el análisis de fijaciones vecinas filogenéticos (Figura 34) . El clon 307, clon 2, clon 318, clon 378, clon 330, clon 276, clon 352, clon 7, clon 5, y el clon 323 comparten un nivel relativamente alto de identidad en las regiones CDR pesadas variables. Entre estos clones, la diversidad en la secuencia de aminoácidos de la cadena liviana variable se ve principalmente en la región CDR3. El clon 16, clon 201, clon 15, clon 13, clon 10, clon 295, clon 29, clon 34, clon 319, y el clon 30 muestran un nivel alto de variación de secuencia en ambos CDR, liviano variable y pesado variable. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones: 1. Un fragmento variable de cadena simple caracterizado porque comprende: a) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 1 y SEQ ID NO. 2 ; b) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 3 y SEQ ID NO. 4; c) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 5 y SEQ ID NO. 6; d) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 7 y SEQ ID NO. 8; e) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 9 y SEQ ID NO. 10; f) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 56 y SEQ ID NO. 58; g) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 60 y SEQ ID NO. 62; h) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 64 y SEQ ID NO. 66; i) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 68 y SEQ ID NO. 70; j) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 72 y SEQ ID NO. 74; k) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 76 y SEQ ID NO. 78; 1) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 80 y SEQ ID NO. 82; m) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 84 y SEQ ID NO. 86; n) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 88 y SEQ ID NO. 90; o) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 92 y SEQ ID NO. 94; p) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 96 y SEQ ID NO. 98; q) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 100 y SEQ ID NO. 102; r) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 104 y SEQ ID NO. 106; s) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 108 y SEQ ID NO. 110; o t) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 112 y SEQ ID NO. 114. 2. Un fragmento variable de cadena simple fusionado a un Fe, caracterizado porque el fragmento variable de cadena simple comprende: a) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 1 y SEQ ID NO. 2 ; b) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 3 y SEQ ID NO. 4; c) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 5 y SEQ ID NO. 6; d) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 7 y SEQ ID NO. 8 ; e) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 9 y SEQ ID NO. 10; f) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 56 y SEQ ID NO. 58; g) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 60 y SEQ ID NO. 62; h) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 64 y SEQ ID NO. 66; i) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 68 y SEQ ID NO. 70; j ) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 72 y SEQ ID NO. 74; k) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 76 y SEQ ID NO. 78; 1) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 80 y SEQ ID NO. 82; m) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 84 y SEQ ID NO. 86; n) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 88 y SEQ ID NO. 90; o) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 92 y SEQ ID NO. 94; p) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 96 y SEQ ID NO. 98; q) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 100 y SEQ ID NO. 102; r) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 104 y SEQ ID NO. 106; s) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 108 y SEQ ID NO. 110; o t) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 112 y SEQ ID NO. 114. 3. El fragmento variable de cadena simple fusionado a un Fe de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el fragmento variable de cadena simple también comprende un enlace polipéptido. 4. El fragmento variable de cadena simple fusionado a un Fe de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque Fe es derivado de IgGi, IgG2, IgG3, o IgG4. 5. El fragmento variable de cadena simple de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el fragmento variable simple comprende: a) una fusión de una cadena VH de la SEQ ID NO. l a una cadena VL de SEQ ID NO. 2; b) una fusión de una cadena VH de la SEQ ID NO. 3 a una cadena VL de SEQ ID NO. 4; c) una fusión de una cadena VH de la SEQ ID NO. 5 a una cadena VL de SEQ ID NO. 6; d) una fusión de una cadena VH de la SEQ ID NO. 7 a una cadena VL de SEQ ID NO. 8; e) una fusión de una cadena VH de la SEQ ID NO. 9 a una cadena VL de SEQ ID NO. 10 f) una fusión de una cadena VH de la SEQ ID NO. 56 a una cadena VL de SEQ ID NO. 58 g) una fusión de una cadena VH de la SEQ ID NO. 60 a una cadena VL de SEQ ID NO. 62 h) una fusión de una cadena VH de la SEQ ID NO. 64 a una cadena VL de SEQ ID NO. 66 i) una fusión de una cadena VH de la SEQ ID NO. 68 a una cadena VL de SEQ ID NO. 70 ) una fusión de una cadena VH de la SEQ ID NO. 72 a una cadena VL de SEQ ID NO. 74 k) una fusión de una cadena VH de la SEQ ID NO. 76 a una cadena VL de SEQ ID NO. 78 1) una fusión de una cadena VH de la SEQ ID NO. 80 a una cadena VL de SEQ ID NO. 82 m) una fusión de una cadena VH de la SEQ ID NO. 84 a una cadena VL de SEQ ID NO. 86; n) una fusión de una cadena VH de la SEQ ID NO. 88 a una cadena VL de SEQ ID NO. 90; o) una fusión de una cadena VH de la SEQ ID NO. 92 a una cadena VL de SEQ ID NO. 94; p) una fusión de una cadena VH de la SEQ ID NO. 96 a una cadena VL de SEQ ID NO. 98; q) una fusión de una cadena VH de la SEQ ID NO. 100 a una cadena VL de SEQ ID NO. 102; r) una fusión de una cadena VH de la SEQ ID NO. 104 a una cadena VL de SEQ ID NO. 106; s) una fusión de una cadena VH de la SEQ ID NO. 108 a una cadena VL de SEQ ID NO. 110; t) una fusión de una cadena VH de la SEQ ID NO. 112 a una cadena VL de SEQ ID NO. 114; 6. El fragmento variable de cadena simple de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque el término carboxi de la cadena VH se fusiona a un término amino de la cadena VL 7. Un ácido nucleico, caracterizado porque comprende una secuencia que codifica el fragmento variable de cadena simple de conformidad con la reivindicación 1. 8. El ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque también comprende uno o más elementos de control, en los que uno o más de uno o más de los elementos de control se encuentran operablemente unidos a la secuencia que codifica el fragmento variable de cadena simple. 9. Un vector, caracterizado porque comprende el ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 7. 10. Un vector, caracterizado porque comprende el ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 8. 11. Una célula huésped, caracterizada porque comprende el vector de conformidad con la reivindicación 9. 12. Una célula huésped, caracterizada porque comprende el vector de conformidad con la reivindicación 10. 13. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende el fragmento variable de cadena simple de conformidad con la reivindicación 1. 14. Uso de un fragmento variable de cadena simple donde el fragmento variable de cadena simple comprende: a) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 1 y SEQ ID NO. 2; b) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 3 y SEQ ID NO. 4; c) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 5 y SEQ ID NO. 6; d) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 7 y SEQ ID NO. 8 ; e) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 9 y SEQ ID NO. 10; f) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 56 y SEQ ID NO. 58; g) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 60 y SEQ ID NO. 62; h) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 64 y SEQ ID NO. 66; i) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 68 y SEQ ID NO. 70; j) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 72 y SEQ ID NO. 74; k) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 76 y SEQ ID NO. 78; 1) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 80 y SEQ ID NO. 82; m) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 84 y SEQ ID NO. 86; n) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 88 y SEQ ID NO. 90; o) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 92 y SEQ ID NO. 94; p) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 96 y SEQ ID NO. 98; q) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 100 y SEQ ID NO. 102; r) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 104 y SEQ ID NO. 106; s) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 108 y SEQ ID NO. 110; o t) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 112 y SEQ ID NO. 114, para elaborar un medicamento para tratar la anemia en un paciente . 15. Uso de un fragmento variable de cadena simple donde el fragmento variable de cadena simple comprende: a) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 1 y SEQ ID NO. 2; b) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 3 y SEQ ID NO. 4; c) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 5 y SEQ ID NO. 6; d) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 7 y SEQ ID NO. 8; e) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 9 y SEQ ID NO. 10; f) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 56 y SEQ ID NO. 58; g) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 60 y SEQ ID NO. 62; h) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 64 y SEQ ID NO. 66; i) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 68 y SEQ ID NO. 70; j) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 72 y SEQ ID NO. 74; k) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 76 y SEQ ID NO. 78; 1) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 80 y SEQ ID NO. 82; m) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 84 y SEQ ID NO. 86; n) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 88 y SEQ ID NO. 90; o) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 92 y SEQ ID NO. 94; p) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 96 y SEQ ID NO. 98; q) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 100 y SEQ ID NO. 102; r) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 104 y SEQ ID NO. 106; s) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 108 y SEQ ID NO. 110; o t) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 112 y SEQ ID NO. 114, para elaborar un medicamento para promocionar la protección tisular en un paciente. 16. Uso de un fragmento variable de cadena simple donde el fragmento variable de cadena simple comprende: a) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 1 y SEQ ID NO. 2 ; b) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 3 y SEQ ID NO. 4; c) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 5 y SEQ ID NO. 6; d) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 7 y SEQ ID NO. 8; e) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 9 y SEQ ID NO. 10; f) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 56 y SEQ ID NO. 58; g) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 60 y SEQ ID NO. 62; h) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 64 y SEQ ID NO. 66; i) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 68 y SEQ ID NO. 70; j) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 72 y SEQ ID NO. 74; k) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 76 y SEQ ID NO. 78; 1) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 80 y SEQ ID NO. 82; m) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 84 y SEQ ID NO. 86; n) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 88 y SEQ ID NO. 90; o) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 92 y SEQ ID NO. 94; p) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 96 y SEQ ID NO. 98; q) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 100 y SEQ ID NO. 102; r) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 104 y SEQ ID NO. 106; s) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 108 y SEQ ID NO. 110; o t) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 112 y SEQ ID NO. 114, para elaborar un medicamento para la activación de la actividad endógena de un receptor eritropoyetinico en un mamífero . 17. El uso de conformidad con la reivindicación 16, en donde el receptor eritropoyetinico es un receptor eritropoyetínico humano. 18. Un anticuerpo, caracterizado porque comprende: a) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 1 y SEQ ID NO. 2 ; b) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 3 y SEQ ID NO. 4; c) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 5 y SEQ ID NO. 6; d) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 7 y SEQ ID NO. 8; e) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 9 y SEQ ID NO. 10; f) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 56 y SEQ ID NO. 58; g) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 60 y SEQ ID NO. 62; h) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 64 y SEQ ID NO. 66; i) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 68 y SEQ ID NO. 70; j) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 72 y SEQ ID NO. 74; k) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 76 y SEQ ID NO. 78; 1) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 80 y SEQ ID NO. 82; m) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 84 y SEQ ID NO. 86; n) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 88 y SEQ ID NO. 90; o) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 92 y SEQ ID NO. 94; p) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 96 y SEQ ID NO. 98; q) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 100 y SEQ ID NO. 102; r) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 104 y SEQ ID NO. 106; s) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 108 y SEQ ID NO. 110; o t) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 112 y SEQ ID NO. 114. 19. Un ácido nucleico, caracterizado porque comprende una secuencia que codifique al anticuerpo de conformidad con la reivindicación 18. 20. El ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque también comprende uno o más elementos de control, en los que uno o más de uno o más elementos de control se encuentran operablemente unidos a la secuencia que codifica al anticuerpo. 21. Un vector, caracterizado porque comprende el ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 19. 22. Un vector, caracterizado porque comprende el ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 20. 23. Una célula huésped, caracterizada porque comprende el vector de conformidad con la reivindicación 21. 24. Una célula huésped, caracterizada porque comprende el vector de conformidad con la reivindicación 22. 25. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende el anticuerpo de conformidad con la reivindicación 18. 26. Uso de un anticuerpo donde el anticuerpo comprende: a) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 1 y SEQ ID NO. 2 ; b) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 3 y SEQ ID NO. 4; c) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 5 y SEQ ID NO. 6; d) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 7 y SEQ ID NO. 8 ; e) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 9 y SEQ ID NO. 10; f) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 56 y SEQ ID NO. 58; g) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 60 y SEQ ID NO. 62; h) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 64 y SEQ ID NO. 66; i) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 68 y SEQ ID NO. 70; j) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 72 y SEQ ID NO. 74; k) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 76 y SEQ ID NO. 78; 1) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 80 y SEQ ID NO. 82; m) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 84 y SEQ ID NO. 86; n) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 88 y SEQ ID NO. 90; o) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 92 y SEQ ID NO. 94; p) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 96 y SEQ ID NO. 98; q) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 100 y SEQ ID NO. 102; r) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 104 y SEQ ID NO. 106; s) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 108 y SEQ ID NO. 110; o t) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 112 y SEQ ID NO. 114, para elaborar un medicamento para tratar la anemia en un paciente . 27. Uso de un anticuerpo donde el anticuerpo comprende: a) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 1 y SEQ ID NO. 2; b) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 3 y SEQ ID NO. 4; c) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 5 y SEQ ID NO. 6; d) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 7 y SEQ ID NO. 8; e) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 9 y SEQ ID NO. 10; f) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 56 y SEQ ID NO. 58; g) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 60 y SEQ ID NO. 62; h) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 64 y SEQ ID NO. 66; i) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 68 y SEQ ID NO. 70; j) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 72 y SEQ ID NO. 74; k) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 76 y SEQ ID NO. 78; 1) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 80 y SEQ ID NO. 82; m) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 84 y SEQ ID NO. 86; n) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 88 y SEQ ID NO. 90; o) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 92 y SEQ ID NO. 94; p) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 96 y SEQ ID NO. 98; q) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 100 y SEQ ID NO. 102; r) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 104 y SEQ ID NO. 106; s) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 108 y SEQ ID NO. 110; o t) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 112 y SEQ ID NO. 114, para elaborar un medicamento para promocionar la protección tisular en un paciente. 28. Uso de una cantidad de anticuerpo donde el anticuerpo comprende: a) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 1 y SEQ ID NO. 2; b) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 3 y SEQ ID NO. 4; c) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 5 y SEQ ID NO. 6; d) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 7 y SEQ ID NO. 8; e) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 9 y SEQ ID NO. 10; f) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 56 y SEQ ID NO. 58; g) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 60 y SEQ ID NO. 62; h) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 64 y SEQ ID NO. 66; i) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 68 y SEQ ID NO. 70; j) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 72 y SEQ ID NO. 74; k) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 76 y SEQ ID NO. 78; 1) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 80 y SEQ ID NO. 82; m) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 84 y SEQ ID NO. 86; n) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 88 y SEQ ID NO. 90; o) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 92 y SEQ ID NO. 94; p) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 96 y SEQ ID NO. 98; q) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 100 y SEQ ID NO. 102; r) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 104 y SEQ ID NO. 106; s) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 108 y SEQ ID NO. 110; o t) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 112 y SEQ ID NO. 114, para elaborar un medicamento para activar la actividad endógena de un receptor eritropoyetinico . 29. El uso de conformidad con la reivindicación 28, en donde el receptor eritropoyetinico es un receptor eritropoyetinico humano. 30. Un fragmento variable de cadena simple, caracterizado porque comprende: a) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 14, SEQ ID NO. 15 y SEQ ID NO. 16; b) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 17, SEQ ID NO. 18 y SEQ ID NO. 19; c) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 20, SEQ ID NO. 21 y SEQ ID NO. 22; d) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 23, SEQ ID NO. 24, SEQ ID NO. 25, SEQ ID NO. 26, SEQ ID NO. 27 y SEQ ID NO. 28; e) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 29, SEQ ID NO. 30, SEQ ID NO. 31, SEQ ID NO. 32, SEQ ID NO. 33 y SEQ ID NO. 34; f) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 123, SEQ ID NO.: 124, SEQ ID NO.: 125, SEQ ID NO.: 126, SEQ ID NO.: 127, y SEQ ID NO.: 128; g) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 129, SEQ ID NO.: 130, SEQ ID NO.: 131, SEQ ID NO.: 132, SEQ ID NO.: 133, y SEQ ID NO.: 134; h) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 135, SEQ ID NO.: 136, SEQ ID NO.: 212; SEQ ID NO.: 137, SEQ ID NO.: 138, y SEQ ID NO.: 139; i) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 140, SEQ ID NO.: 141, SEQ ID NO.: 142, SEQ ID NO.: 143, SEQ ID NO.: 144, y SEQ ID NO.: 145; j) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 146, SEQ ID NO.: 147, SEQ ID NO.: 148, SEQ ID NO.: 149, SEQ ID NO.: 150, y SEQ ID NO.: 151; k) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 152, SEQ ID NO.: 153, SEQ ID NO.: 154, SEQ ID NO.: 155, SEQ ID NO.: 156, y SEQ ID NO.: 157; 1) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 158, SEQ ID NO.: 159, SEQ ID NO.: 160, SEQ ID NO.: 161, SEQ ID NO.: 162, y SEQ ID NO.: 163; m) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 164, SEQ ID NO.: 165, SEQ ID NO.: 166, SEQ ID NO.: 167, SEQ ID NO.: 168, y SEQ ID NO.: 169; n) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 170, SEQ ID NO.: 171, SEQ ID NO.: 172, SEQ ID NO.: 173, SEQ ID NO.: 174, y SEQ ID NO.: 175; o) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 176, SEQ ID NO.: 177, SEQ ID NO.: 178, SEQ ID NO.: 179, SEQ ID NO.: 180, y SEQ ID NO.: 181; p) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 182, SEQ ID NO.: 183, SEQ ID NO.: 184, SEQ ID NO.: 185, SEQ ID NO.: 186, y SEQ ID NO.: 187; q) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 188, SEQ ID NO.: 189, SEQ ID NO.: 190, SEQ ID NO.: 191, SEQ ID NO.: 192, y SEQ ID NO.: 193; r) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 194, SEQ ID NO.: 195, SEQ ID NO.: 196, SEQ ID NO.: 197, SEQ ID NO.: 198, y SEQ ID NO.: 199; s) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 200, SEQ ID NO.: 201, SEQ ID NO.: 202, SEQ ID NO.: 203, SEQ ID NO.: 204, y SEQ ID NO.: 205; o t) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 206, SEQ ID NO.: 207, SEQ ID NO.: 208, SEQ ID NO.: 209, SEQ ID NO.: 210, y SEQ ID NO.: 211. 31. Un fragmento variable de cadena simple fusionado a un Fe, caracterizado porque el fragmento variable de la cadena simple comprende: a) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 14, SEQ ID NO. 15 y SEQ ID NO. 16; b) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 17, SEQ ID NO. 18 y SEQ ID NO. 19; c) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 20, SEQ ID NO. 21 y SEQ ID NO. 22; d) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 23, SEQ ID NO. 24, SEQ ID NO. 25, SEQ ID NO. 26, SEQ ID NO. 27 y SEQ ID NO. 28; e) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 29, SEQ ID NO. 30, SEQ ID NO. 31, SEQ ID NO. 32, SEQ ID NO. 33 y SEQ ID NO. 34; f) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 123, SEQ ID NO.: 124, SEQ ID NO.: 125, SEQ ID NO.: 126, SEQ ID NO.: 127, y SEQ ID NO.: 128; g) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 129, SEQ ID NO.: 130, SEQ ID NO.: 131, SEQ ID NO.: 132, SEQ ID NO.: 133, y SEQ ID NO.: 134; h) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 135, SEQ ID NO.: 136, SEQ ID NO.: 212; SEQ ID NO.: 137, SEQ ID NO.: 138, y SEQ ID NO.: 139; i) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 140, SEQ ID NO.: 141, SEQ ID NO.: 142, SEQ ID NO.: 143, SEQ ID NO.: 144, y SEQ ID NO.: 145; j ) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 146, SEQ ID NO.: 147, SEQ ID NO.: 148, SEQ ID NO.: 149, SEQ ID NO.: 150, y SEQ ID NO.: 151; k) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 152, SEQ ID NO.: 153, SEQ ID NO.: 154, SEQ ID NO.: 155, SEQ ID NO.: 156, y SEQ ID NO.: 157; 1) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 158, SEQ ID NO.: 159, SEQ ID NO.: 160, SEQ ID NO.: 161, SEQ ID NO.: 162, y SEQ ID NO.: 163; m) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 164, SEQ ID NO.: 165, SEQ ID NO.: 166, SEQ ID NO.: 167, SEQ ID NO.: 168, y SEQ ID NO.: 169; n) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 170, SEQ ID NO.: 171, SEQ ID NO.: 172, SEQ ID NO.: 173, SEQ ID NO.: 174, y SEQ ID NO.: 175; o) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 176, SEQ ID NO.: 177, SEQ ID NO.: 178, SEQ ID NO.: 179, SEQ ID NO.: 180, y SEQ ID NO.: 181; p) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 182, SEQ ID NO.: 183, SEQ ID NO.: 184, SEQ ID NO.: 185, SEQ ID NO.: 186, y SEQ ID NO.: 187; q) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 188, SEQ ID NO.: 189, SEQ ID NO.: 190, SEQ ID NO.: 191, SEQ ID NO.: 192, y SEQ ID NO.: 193; r) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 194, SEQ ID NO.: 195, SEQ ID NO.: 196, SEQ ID NO.: 197, SEQ ID NO.: 198, y SEQ ID NO.: 199; s) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 200, SEQ ID NO.: 201, SEQ ID NO.: 202, SEQ ID NO.: 203, SEQ ID NO.: 204, y SEQ ID NO.: 205; o t) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 206, SEQ ID NO.: 207, SEQ ID NO.: 208, SEQ ID NO.: 209, SEQ ID NO.: 210, y SEQ ID NO.: 211. 32. El fragmento variable de cadena simple fusionado a un Fe de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque el fragmento variable de cadena simple también comprende un enlace de polipéptido. 33. El fragmento variable de cadena simple fusionado a un Fe de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque Fe deriva de IgGi, IgG2, IgG3, o IgG4. 34. El fragmento variable de cadena simple de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el fragmento variable de cadena simple comprende: a) una fusión de una cadena VH que comprende la SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12 y la SEQ ID NO. 13 a una cadena VL que comprende la SEQ ID NO. 14, SEQ ID NO. 15 y SEQ ID NO. 16; b) una fusión de una cadena VH que comprende la SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12 y la SEQ ID NO. 13 a una cadena VL que comprende la SEQ ID NO. 17, SEQ ID NO. 18 y SEQ ID NO. 19; c) una fusión de una cadena VH que comprende la SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12 y la SEQ ID NO. 13 a una cadena VL que comprende la SEQ ID NO. 20, SEQ ID NO. 21 y SEQ ID NO. 22; d) una fusión de una cadena VH que comprende la SEQ ID NO. 23, SEQ ID NO. 24 y la SEQ ID NO. 13 a una cadena VL que comprende la SEQ ID NO. 26, SEQ ID NO. 27 y SEQ ID NO. 28; e) una fusión de una cadena VH que comprende la SEQ ID NO. 29, SEQ ID NO. 30 y la SEQ ID NO. 13 a una cadena VL que comprende la SEQ ID NO. 32, SEQ ID NO. 33 y SEQ ID NO. 34; f) una fusión de una cadena VH que comprende la SEQ ID NO.: 123, SEQ ID NO.: 124, y SEQ ID NO.: 125 a una cadena VL que comprende la SEQ ID NO.: 126, SEQ ID NO.: 127, y SEQ ID NO.: 128; g) una fusión de una cadena VH que comprende la SEQ ID NO.: 129, SEQ ID NO.: 130, y SEQ ID NO.: 131 a una cadena VL que comprende la SEQ ID NO.: 132, SEQ ID NO.: 133, y SEQ ID NO.: 134; h) una fusión de una cadena VH que comprende la SEQ ID NO.: 135, SEQ ID NO.: 136, y SEQ ID NO.: 212 a una cadena VL que comprende la SEQ ID NO.: 137, SEQ ID NO.: 138, y SEQ ID NO.: 139; i) una fusión de una cadena VH que comprende la SEQ ID NO.: 140, SEQ ID NO.: 141, y SEQ ID NO.: 142 a una cadena VL que comprende la SEQ ID NO.: 143, SEQ ID NO.: 144, y SEQ ID NO.: 145; j) una fusión de una cadena VH que comprende la SEQ ID NO.: 146, SEQ ID NO.: 147, y SEQ ID NO.: 148 a una cadena VL que comprende la SEQ ID NO.: 149, SEQ ID NO.: 150, y SEQ ID NO. : 151; k) una fusión de una cadena VH que comprende la SEQ ID NO.: 152, SEQ ID NO.: 153, y SEQ ID NO.: 154 a una cadena VL que comprende la SEQ ID NO. : 155, SEQ ID NO. : 156, y SEQ ID NO.: 157; 1) una fusión de una cadena VH que comprende la SEQ ID NO.: 158, SEQ ID NO.: 159, y SEQ ID NO.: 160 a una cadena VL que comprende la SEQ ID NO.: 161, SEQ ID NO.: 162, y SEQ ID NO.: 163; m) una fusión de una cadena VH que comprende la SEQ ID NO.: 164, SEQ ID NO.: 165, y SEQ ID NO.: 166 a una cadena VL que comprende la SEQ ID NO.: 167, SEQ ID NO.: 168, y SEQ ID NO.: 169; n) una fusión de una cadena VH que comprende la SEQ ID NO.: 170, SEQ ID NO.: 171, y SEQ ID NO.: 172 a una cadena VL que comprende la SEQ ID NO.: 173, SEQ ID NO.: 174, y SEQ ID NO.: 175; o) una fusión de una cadena VH que comprende la SEQ ID NO.: 176, SEQ ID NO.: 177, y SEQ ID NO.: 178 a una cadena VL que comprende la SEQ ID NO.: 179, SEQ ID NO.: 180, y SEQ ID NO. : 181; p) una fusión de una cadena VH que comprende la SEQ ID NO.: 182, SEQ ID NO.: 183, y SEQ ID NO.: 184 a una cadena VL que comprende la SEQ ID NO.: 185, SEQ ID NO.: 186, y SEQ ID NO.: 187; q) una fusión de una cadena VH que comprende la SEQ ID NO.: 188, SEQ ID NO.: 189, y SEQ ID NO.: 190 a una cadena VL que comprende la SEQ ID NO.: 191, SEQ ID NO.: 192, y SEQ ID NO.: 193; r) una fusión de una cadena VH que comprende la SEQ ID NO.: 194, SEQ ID NO.: 195, y SEQ ID NO.: 196 a una cadena VL que comprende la SEQ ID NO.: 197, SEQ ID NO.: 198, y SEQ ID NO.: 199; s) una fusión de una cadena VH que comprende la SEQ ID NO.: 200, SEQ ID NO.: 201, y SEQ ID NO.: 202 a una cadena VL que comprende la SEQ ID NO.: 203, SEQ ID NO.: 204, y SEQ ID NO. : 205; o i) una fusión de una cadena VH que comprende la SEQ ID NO.: 206, SEQ ID NO.: 207, y SEQ ID NO.: 208 a una cadena VL que comprende la SEQ ID NO.: 209, SEQ ID NO.: 210, y SEQ ID NO.: 211. 35. El fragmento variable de cadena simple de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque el término carboxi de la cadena VH se fusiona al término amino de la cadena VL. 36. Un ácido nucleico caracterizado porque comprenda una secuencia que codifica al fragmento variable de cadena simple de conformidad con la reivindicación 30. 37. El ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 36, caracterizado porque también comprende uno o más elementos de control, en donde uno o más de uno o más de los elementos de control se encuentran operablemente unidos a una secuencia que codifica al fragmento variable de cadena simple. 38. Un vector, caracterizado porque comprende el ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 36. 39. Un vector, caracterizado porque comprende el ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 37. 40. Una célula huésped, caracterizada porque comprende el vector de conformidad con la reivindicación 38. 41. Una célula huésped, caracterizada porque comprende el vector de conformidad con la reivindicación 39. 42. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende el fragmento variable de cadena simple de conformidad con la reivindicación 30. 43. Uso de un fragmento variable de cadena simple en donde el fragmento variable de cadena simple comprende: a) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 14, SEQ ID NO. 15 y SEQ ID NO. 16; b) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 17, SEQ ID NO. 18 y SEQ ID NO. 19; c) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 20, SEQ ID NO. 21 y SEQ ID NO. 22; d) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 23, SEQ ID NO. 24, SEQ ID NO. 25, SEQ ID NO. 26, SEQ ID NO. 27 y SEQ ID NO. 28; e) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 29, SEQ ID NO. 30, SEQ ID NO. 31, SEQ ID NO. 32, SEQ ID NO. 33 y SEQ ID NO. 34; f) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 123, SEQ ID NO.: 124, SEQ ID NO.: 125, SEQ ID NO.: 126, SEQ ID NO.: 127, y SEQ ID NO.: 128; g) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 129, SEQ ID NO.: 130, SEQ ID NO.: 131, SEQ ID NO.: 132, SEQ ID NO.: 133, y SEQ ID NO.: 134; h) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 135, SEQ ID NO.: 136, SEQ ID NO.: 212; SEQ ID NO.: 137, SEQ ID NO.: 138, y SEQ ID NO.: 139; i) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 140, SEQ ID NO.: 141, SEQ ID NO.: 142, SEQ ID NO.: 143, SEQ ID NO.: 144, y SEQ ID NO.: 145; j) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 146, SEQ ID NO.: 147, SEQ ID NO.: 148, SEQ ID NO.: 149, SEQ ID NO.: 150, y SEQ ID NO.: 151; k) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 152, SEQ ID NO.: 153, SEQ ID NO.: 154, SEQ ID NO.: 155, SEQ ID NO.: 156, y SEQ ID NO.: 157; 1) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 158, SEQ ID NO.: 159, SEQ ID NO.: 160, SEQ ID NO.: 161, SEQ ID NO.: 162, y SEQ ID NO.: 163; m) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 164, SEQ ID NO.: 165, SEQ ID NO.: 166, SEQ ID NO.: 167, SEQ ID NO.: 168, y SEQ ID NO.: 169; n) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 170, SEQ ID NO.: 171, SEQ ID NO.: 172, SEQ ID NO.: 173, SEQ ID NO.: 174, y SEQ ID NO.: 175; o) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 176, SEQ ID NO.: 177, SEQ ID NO.: 178, SEQ ID NO.: 179, SEQ ID NO.: 180, y SEQ ID NO.: 181; p) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 182, SEQ ID NO.: 183, SEQ ID NO.: 184, SEQ ID NO.: 185, SEQ ID NO.: 186, y SEQ ID NO.: 187; q) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 188, SEQ ID NO.: 189, SEQ ID NO.: 190, SEQ ID NO.: 191, SEQ ID NO.: 192, y SEQ ID NO.: 193; r) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 194, SEQ ID NO.: 195, SEQ ID NO.: 196, SEQ ID NO.: 197, SEQ ID NO.: 198, y SEQ ID NO.: 199; s) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 200, SEQ ID NO.: 201, SEQ ID NO.: 202, SEQ ID NO.: 203, SEQ ID NO.: 204, y SEQ ID NO.: 205; o t) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 206, SEQ ID NO.: 207, SEQ ID NO.: 208, SEQ ID NO.: 209, SEQ ID NO.: 210, y SEQ ID NO.: 211, para elaborar un medicamento para tratar la anemia en un paciente . 44. Uso de un fragmento variable de cadena simple en donde el fragmento variable de cadena simple comprende: a) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 14, SEQ ID NO. 15 y SEQ ID NO. 16; b) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 17, SEQ ID NO. 18 y SEQ ID NO. 19; c) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 20, SEQ ID NO. 21 y SEQ ID NO. 22; d) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 23, SEQ ID NO. 24, SEQ ID NO. 25, SEQ ID NO. 26, SEQ ID NO. 27 y SEQ ID NO. 28; e) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 29, SEQ ID NO. 30, SEQ ID NO. 31, SEQ ID NO. 32, SEQ ID NO. 33 y SEQ ID NO. 34; f) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 123, SEQ ID NO.: 124, SEQ ID NO.: 125, SEQ ID NO.: 126, SEQ ID NO.: 127, y SEQ ID NO.: 128; g) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 129, SEQ ID NO.: 130, SEQ ID NO.: 131, SEQ ID NO.: 132, SEQ ID NO.: 133, y SEQ ID NO.: 134; h) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 135, SEQ ID NO.: 136, SEQ ID NO.: 212; SEQ ID NO.: 137, SEQ ID NO.: 138, y SEQ ID NO.: 139; i) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 140, SEQ ID NO.: 141, SEQ ID NO.: 142, SEQ ID NO.: 143, SEQ ID NO.: 144, y SEQ ID NO.: 145; j) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 146, SEQ ID NO.: 147, SEQ ID NO.: 148, SEQ ID NO.: 149, SEQ ID NO.: 150, y SEQ ID NO.: 151; k) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 152, SEQ ID NO.: 153, SEQ ID NO.: 154, SEQ ID NO.: 155, SEQ ID NO.: 156, y SEQ ID NO.: 157; 1) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 158, SEQ ID NO.: 159, SEQ ID NO.: 160, SEQ ID NO.: 161, SEQ ID NO.: 162, y SEQ ID NO.: 163; m) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 164, SEQ ID NO.: 165, SEQ ID NO.: 166, SEQ ID NO.: 167, SEQ ID NO.: 168, y SEQ ID NO.: 169; n) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 170, SEQ ID NO.: 171, SEQ ID NO.: 172, SEQ ID NO.: 173, SEQ ID NO.: 174, y SEQ ID NO.: 175; o) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 176, SEQ ID NO.: 177, SEQ ID NO.: 178, SEQ ID NO.: 179, SEQ ID NO.: 180, y SEQ ID NO.: 181; p) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 182, SEQ ID NO.: 183, SEQ ID NO.: 184, SEQ ID NO.: 185, SEQ ID NO.: 186, y SEQ ID NO.: 187; q) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 188, SEQ ID NO.: 189, SEQ ID NO.: 190, SEQ ID NO.: 191, SEQ ID NO.: 192, y SEQ ID NO.: 193; r) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 194, SEQ ID NO.: 195, SEQ ID NO.: 196, SEQ ID NO.: 197, SEQ ID NO.: 198, y SEQ ID NO.: 199; s) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 200, SEQ ID NO.: 201, SEQ ID NO.: 202, SEQ ID NO.: 203, SEQ ID NO.: 204, y SEQ ID NO.: 205; o t) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 206, SEQ ID NO.: 207, SEQ ID NO.: 208, SEQ ID NO.: 209, SEQ ID NO.: 210, y SEQ ID NO.: 211, para elaborar un medicamento para promocionar la protección tisular en un paciente. 45. Uso de una cantidad de fragmento variable de cadena simple donde el fragmento variable de cadena simple comprende : una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11 SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 14, SEQ ID NO. 15 y SEQ ID NO. 16; b una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11 SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 17, SEQ ID NO. 18 y SEQ ID NO. 19; c una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11 SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 20, SEQ ID NO. 21 y SEQ ID NO. 22; d una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 23 SEQ ID NO. 24, SEQ ID NO. 25, SEQ ID NO. 26, SEQ ID NO. 27 y SEQ ID NO. 28; e una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 29 SEQ ID NO. 30, SEQ ID NO. 31, SEQ ID NO. 32, SEQ ID NO. 33 y SEQ ID NO. 34; una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 123, SEQ ID NO.: 124, SEQ ID NO.: 125, SEQ ID NO.: 126, SEQ ID NO.: 127, y SEQ ID NO.: 128; g) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 129, SEQ ID NO.: 130, SEQ ID NO.: 131, SEQ ID NO.: 132, SEQ ID NO.: 133, y SEQ ID NO.: 134; h) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 135, SEQ ID NO.: 136, SEQ ID NO.: 212, SEQ ID NO.: 137, SEQ ID NO.: 138, y SEQ ID NO.: 139; i) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 140, SEQ ID NO.: 141, SEQ ID NO.: 142, SEQ ID NO.: 143, SEQ ID NO.: 144, y SEQ ID NO.: 145; j) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 146, SEQ ID NO.: 147, SEQ ID NO.: 148, SEQ ID NO.: 149, SEQ ID NO.: 150, y SEQ ID NO.: 151; k) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 152, SEQ ID NO.: 153, SEQ ID NO.: 154, SEQ ID NO.: 155, SEQ ID NO.: 156, y SEQ ID NO.: 157; 1) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 158, SEQ ID NO.: 159, SEQ ID NO.: 160, SEQ ID NO.: 161, SEQ ID NO.: 162, y SEQ ID NO.: 163; m) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 164, SEQ ID NO.: 165, SEQ ID NO.: 166, SEQ ID NO.: 167, SEQ ID NO.: 168, y SEQ ID NO.: 169; n) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 170, SEQ ID NO.: 171, SEQ ID NO.: 172, SEQ ID NO.: 173, SEQ ID NO.: 174, y SEQ ID NO.: 175; o) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 176, SEQ ID NO.: 177, SEQ ID NO.: 178, SEQ ID NO.: 179, SEQ ID NO.: 180, y SEQ ID NO.: 181; p) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 182, SEQ ID NO.: 183, SEQ ID NO.: 184, SEQ ID NO.: 185, SEQ ID NO.: 186, y SEQ ID NO.: 187; q) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 188, SEQ ID NO.: 189, SEQ ID NO.: 190, SEQ ID NO.: 191, SEQ ID NO.: 192, y SEQ ID NO.: 193; r) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 194, SEQ ID NO.: 195, SEQ ID NO.: 196, SEQ ID NO.: 197, SEQ ID NO.: 198, y SEQ ID NO.: 199; s) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 200, SEQ ID NO.: 201, SEQ ID NO.: 202, SEQ ID NO.: 203, SEQ ID NO.: 204, y SEQ ID NO.: 205; o t) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 206, SEQ ID NO.: 207, SEQ ID NO.: 208, SEQ ID NO.: 209, SEQ ID NO.: 210, y SEQ ID NO.: 211, para elaborar un medicamento para activar la actividad endógena de un receptor eritropoyetinico en un mamífero. 46. El uso de conformidad con la reivindicación 45, en donde el receptor eritropoyetinico es un receptor eritropoyetinico humano. 47. Un anticuerpo, caracterizado porque comprende: a) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 14, SEQ ID NO. 15 y SEQ ID NO. 16; b) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 17, SEQ ID NO. 18 y SEQ ID NO. 19; c) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID N.O. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 20, SEQ ID NO. 21 y SEQ ID NO. 22; d) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 23, SEQ ID NO. 24, SEQ ID NO. 25, SEQ ID NO. 26, SEQ ID NO. 27 y SEQ ID NO. 28; e) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 29, SEQ ID NO. 30, SEQ ID NO. 31, SEQ ID NO. 32, SEQ ID NO. 33 y SEQ ID NO. 34; f) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 123, SEQ ID NO.: 124, SEQ ID NO.: 125, SEQ ID NO.: 126, SEQ ID NO.: 127, y SEQ ID NO.: 128; g) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 129, SEQ ID NO.: 130, SEQ ID NO.: 131, SEQ ID NO.: 132, SEQ ID NO.: 133, y SEQ ID NO.: 134; h) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 135, SEQ ID NO.: 136, SEQ ID NO.: 212, SEQ ID NO.: 137, SEQ ID NO.: 138, y SEQ ID NO.: 139; i) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 140, SEQ ID NO.: 141, SEQ ID NO.: 142, SEQ ID NO.: 143, SEQ ID NO.: 144, y SEQ ID NO.: 145; j) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 146, SEQ ID NO.: 147, SEQ ID NO.: 148, SEQ ID NO.: 149, SEQ ID NO.: 150, y SEQ ID NO.: 151; k) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 152, SEQ ID NO.: 153, SEQ ID NO.: 154, SEQ ID NO.: 155, SEQ ID NO.: 156, y SEQ ID NO.: 157; 1) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 158, SEQ ID NO.: 159, SEQ ID NO.: 160, SEQ ID NO.: 161, SEQ ID NO.: 162, y SEQ ID NO.: 163; m) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 164, SEQ ID NO.: 165, SEQ ID NO.: 166, SEQ ID NO.: 167, SEQ ID NO.: 168, y SEQ ID NO.: 169; n) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 170, SEQ ID NO.: 171, SEQ ID NO.: 172, SEQ ID NO.: 173, SEQ ID NO.: 174, y SEQ ID NO.: 175; o) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 176, SEQ ID NO.: 177, SEQ ID NO.: 178, SEQ ID NO.: 179, SEQ ID NO.: 180, y SEQ ID NO.: 181; p) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 182, SEQ ID NO.: 183, SEQ ID NO.: 184, SEQ ID NO.: 185, SEQ ID NO.: 186, y SEQ ID NO.: 187; q) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 188, SEQ ID NO.: 189, SEQ ID NO.: 190, SEQ ID NO.: 191, SEQ ID NO.: 192, y SEQ ID NO.: 193; r) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 194, SEQ ID NO.: 195, SEQ ID NO.: 196, SEQ ID NO.: 197, SEQ ID NO.: 198, y SEQ ID NO.: 199; s) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 200, SEQ ID NO.: 201, SEQ ID NO.: 202, SEQ ID NO.: 203, SEQ ID NO.: 204, y SEQ ID NO.: 205; o t) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 206, SEQ ID NO.: 207, SEQ ID NO.: 208, SEQ ID NO.: 209, SEQ ID NO.: 210, y SEQ ID NO.: 211. 48. Un ácido nucleico, caracterizado porque comprende una secuencia que codifique al anticuerpo de conformidad con la reivindicación 47. 49. El ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 48, caracterizado porque también comprende uno o más elementos de control, donde uno o más de uno o más de los elementos de control se encuentran operablemente unidos a una secuencia que codifica al anticuerpo. 50. Un vector, caracterizado porque comprende el ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 48. 51. Un vector, caracterizado porque comprende el ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 49. 52. Una célula huésped, caracterizada porque comprende el vector de conformidad con la reivindicación 50. 53. Una célula huésped, caracterizada porque comprende el vector de conformidad con la reivindicación 51. 54. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende al anticuerpo de conformidad con la reivindicación 47. 55. Uso de un anticuerpo donde el anticuerpo comprende: a) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 14, SEQ ID NO. 15 y SEQ ID NO. 16; b) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 17, SEQ ID NO. 18 y SEQ ID NO. 19; c) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 20, SEQ ID NO. 21 y SEQ ID NO. 22; d) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 23, SEQ ID NO. 24, SEQ ID NO. 25, SEQ ID NO. 26, SEQ ID NO. 27 y SEQ ID NO. 28; e) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 29, SEQ ID NO. 30, SEQ ID NO. 31, SEQ ID NO. 32, SEQ ID NO. 33 y SEQ ID NO. 34; f) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 123, SEQ ID NO.: 124, SEQ ID NO.: 125, SEQ ID NO.: 126, SEQ ID NO.: 127, y SEQ ID NO.: 128; g) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 129, SEQ ID NO.: 130, SEQ ID NO.: 131, SEQ ID NO.: 132, SEQ ID NO.: 133, y SEQ ID NO.: 134; h) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 135, SEQ ID NO.: 136, SEQ ID NO.: 212, SEQ ID NO.: 137, SEQ ID NO.: 138, y SEQ ID NO.: 139; i) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 140, SEQ ID NO.: 141, SEQ ID NO.: 142, SEQ ID NO.: 143, SEQ ID NO.: 144, y SEQ ID NO.: 145; j) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 146, SEQ ID NO.: 147, SEQ ID NO.: 148, SEQ ID NO.: 149, SEQ ID NO.: 150, y SEQ ID NO.: 151; k) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 152, SEQ ID NO.: 153, SEQ ID NO.: 154, SEQ ID NO.: 155, SEQ ID NO.: 156, y SEQ ID NO.: 157; 1) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 158, SEQ ID NO.: 159, SEQ ID NO.: 160, SEQ ID NO.: 161, SEQ ID NO.: 162, y SEQ ID NO.: 163; m) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 164, SEQ ID NO.: 165, SEQ ID NO.: 166, SEQ ID NO.: 167, SEQ ID NO.: 168, y SEQ ID NO.: 169; n) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 170, SEQ ID NO.: 171, SEQ ID NO.: 172, SEQ ID NO.: 173, SEQ ID NO.: 174, y SEQ ID NO.: 175; o) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 176, SEQ ID NO.: 177, SEQ ID NO.: 178, SEQ ID NO.: 179, SEQ ID NO.: 180, y SEQ ID NO.: 181; p) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 182, SEQ ID NO.: 183, SEQ ID NO.: 184, SEQ ID NO.: 185, SEQ ID NO.: 186, y SEQ ID NO.: 187; q) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 188, SEQ ID NO.: 189, SEQ ID NO.: 190, SEQ ID NO.: 191, SEQ ID NO.: 192, y SEQ ID NO.: 193; r) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 194, SEQ ID NO.: 195, SEQ ID NO.: 196, SEQ ID NO.: 197, SEQ ID NO.: 198, y SEQ ID NO.: 199; s) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 200, SEQ ID NO.: 201, SEQ ID NO.: 202, SEQ ID NO.: 203, SEQ ID NO.: 204, y SEQ ID NO.: 205; o t) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 206, SEQ ID NO.: 207, SEQ ID NO.: 208, SEQ ID NO.: 209, SEQ ID NO.: 210, y SEQ ID NO.: 211, para elaborar un medicamento para tratar la anemia en un paciente . 56. Uso de un anticuerpo donde el anticuerpo comprende: a) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 14, SEQ ID NO. 15 y SEQ ID NO. 16; b) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 17, SEQ ID NO. 18 y SEQ ID NO. 19; c) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 20, SEQ ID NO. 21 y SEQ ID NO. 22; d) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 23, SEQ ID NO. 24, SEQ ID NO. 25, SEQ ID NO. 26, SEQ ID NO. 27 y SEQ ID NO. 28; e) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 29, SEQ ID NO. 30, SEQ ID NO. 31, SEQ ID NO. 32, SEQ ID NO. 33 y SEQ ID NO. 34; f) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 123, SEQ ID NO.: 124, SEQ ID NO.: 125, SEQ ID NO.: 126, SEQ ID NO.: 127, y SEQ ID NO.: 128; g) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 129, SEQ ID NO.: 130, SEQ ID NO.: 131, SEQ ID NO.: 132, SEQ ID NO.: 133, y SEQ ID NO.: 134; h) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 135, SEQ ID NO.: 136, SEQ ID NO.: 212, SEQ ID NO.: 137, SEQ ID NO.: 138, y SEQ ID NO.: 139; i) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 140, SEQ ID NO.: 141, SEQ ID NO.: 142, SEQ ID NO.: 143, SEQ ID NO.: 144, y SEQ ID NO.: 145; j) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 146, SEQ ID NO.: 147, SEQ ID NO.: 148, SEQ ID NO.: 149, SEQ ID NO.: 150, y SEQ ID NO.: 151; k) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 152, SEQ ID NO.: 153, SEQ ID NO.: 154, SEQ ID NO.: 155, SEQ ID NO.: 156, y SEQ ID NO.: 157; 1) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 158, SEQ ID NO.: 159, SEQ ID NO.: 160, SEQ ID NO.: 161, SEQ ID NO.: 162, y SEQ ID NO.: 163; m) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 164, SEQ ID NO.: 165, SEQ ID NO.: 166, SEQ ID NO.: 167, SEQ ID NO.: 168, y SEQ ID NO.: 169; n) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 170, SEQ ID NO.: 171, SEQ ID NO.: 172, SEQ ID NO.: 173, SEQ ID NO.: 174, y SEQ ID NO.: 175; o) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 176, SEQ ID NO.: 177, SEQ ID NO.: 178, SEQ ID NO.: 179, SEQ ID NO.: 180, y SEQ ID NO.: 181; p) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 182, SEQ ID NO.: 183, SEQ ID NO.: 184, SEQ ID NO.: 185, SEQ ID NO.: 186, y SEQ ID NO.: 187; q) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 188, SEQ ID NO.: 189, SEQ ID NO.: 190, SEQ ID NO.: 191, SEQ ID NO.: 192, y SEQ ID NO.: 193; r) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 194, SEQ ID NO.: 195, SEQ ID NO.: 196, SEQ ID NO.: 197, SEQ ID NO.: 198, y SEQ ID NO.: 199; s) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 200, SEQ ID NO.: 201, SEQ ID NO.: 202, SEQ ID NO.: 203, SEQ ID NO.: 204, y SEQ ID NO.: 205; o t) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 206, SEQ ID NO.: 207, SEQ ID NO.: 208, SEQ ID NO.: 209, SEQ ID NO.: 210, y SEQ ID NO.: 211, para elaborar un medicamento para promocionar la protección tisular en un paciente. 57. Uso de una cantidad de un anticuerpo donde el anticuerpo comprende: a) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 14, SEQ ID NO. 15 y SEQ ID NO. 16; b) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 17, SEQ ID NO. 18 y SEQ ID NO. 19; c) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 20, SEQ ID NO. 21 y SEQ ID NO. 22; d) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 23, SEQ ID NO. 24, SEQ ID NO. 25, SEQ ID NO. 26, SEQ ID NO. 27 y SEQ ID NO. 28; e) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 29, SEQ ID NO. 30, SEQ ID NO. 31, SEQ ID NO. 32, SEQ ID NO. 33 y SEQ ID NO. 34; f) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 123, SEQ ID NO.: 124, SEQ ID NO.: 125, SEQ ID NO.: 126, SEQ ID NO.: 127, y SEQ ID NO.: 128; g) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO. : 129, SEQ ID NO. : 130, SEQ ID NO. : 131, SEQ ID NO. : 132, SEQ ID NO. : 133, y SEQ ID NO.: 134; h) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO. : 135, SEQ ID NO. : 136, SEQ ID NO. : 212, SEQ ID NO.: 137, SEQ ID NO.: 138, y SEQ ID NO.: 139; i) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO. : 140, SEQ ID NO. : 141, SEQ ID NO. : 142, SEQ ID NO. : 143, SEQ ID NO. : 144, y SEQ ID NO.: 145; j) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO. : 146, SEQ ID NO. : 147, SEQ ID NO. : 148, SEQ ID NO.: 149, SEQ ID NO.: 150, y SEQ ID NO. : 151; k) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 152, SEQ ID NO. : 153, SEQ ID NO. : 154, SEQ ID NO. : 155, SEQ ID NO. : 156, y SEQ ID NO. : 157; 1) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO. : 158, SEQ ID NO.: 159, SEQ ID NO. : 160, SEQ ID NO.: 161, SEQ ID NO. : 162, y SEQ ID NO. : 163; m) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO. : 164, SEQ ID NO. : 165, SEQ ID NO.: 166, SEQ ID NO.: 167, SEQ ID NO. : 168, y SEQ ID NO.: 169; n) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO. : 170, SEQ ID NO.: 171, SEQ ID NO. : 172, SEQ ID NO. : 173, SEQ ID NO.: 174, y SEQ ID NO. : 175; o) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO. : 176, SEQ ID NO. : 177, SEQ ID NO. : 178, SEQ ID NO. : 179, SEQ ID NO.: 180, y SEQ ID NO.: 181; p) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 182, SEQ ID NO.: 183, SEQ ID NO.: 184, SEQ ID NO.: 185, SEQ ID NO.: 186, y SEQ ID NO.: 187; q) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 188, SEQ ID NO.: 189, SEQ ID NO.: 190, SEQ ID NO.: 191, SEQ ID NO.: 192, y SEQ ID NO.: 193; r) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 194, SEQ ID NO.: 195, SEQ ID NO.: 196, SEQ ID NO.: 197, SEQ ID NO.: 198, y SEQ ID NO.: 199; s) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 200, SEQ ID NO.: 201, SEQ ID NO.: 202, SEQ ID NO.: 203, SEQ ID NO.: 204, y SEQ ID NO.: 205; o t) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 206, SEQ ID NO.: 207, SEQ ID NO.: 208, SEQ ID NO.: 209, SEQ ID NO.: 210, y SEQ ID NO.: 211, para elaborar un medicamento para activar la actividad endógena de un receptor eritropoyetinico en un mamífero. 58. El uso de conformidad con la reivindicación 57, en donde el receptor eritropoyetinico es un receptor eritropoyetinico humano. 59. Un anticuerpo, caracterizado porque comprende: a) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO .45 ; b) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO .46 ; c) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO.47; d) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 8; o e) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 9. 60. Un ácido nucleico, caracterizado porque comprende una secuencia que codifique al anticuerpo de conformidad con la reivindicación 59. 61. El ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 60, caracterizado porque también comprende uno o más elementos de control, donde uno o más de uno o más elementos de control se encuentran operablemente unidos a una secuencia que codifica al fragmento variable de cadena simple . 62. Un vector, caracterizado porque comprende el ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 60. 63. Un vector, caracterizado porque comprende el ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 61. 64. Una célula huésped, caracterizada porque comprende el vector de conformidad con la reivindicación 62. 65. Una célula huésped, caracterizada porque comprende el vector de conformidad con la reivindicación 63. 66. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende el fragmento variable de cadena simple de conformidad con la reivindicación 59. 67. Uso de un anticuerpo donde el anticuerpo comprende: a) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO .45; b) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO .46 ; c) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO .47 ; d) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO .48; e) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 9, para elaborar un medicamento para tratar la anemia en un paciente. 68. Uso de un anticuerpo donde el anticuerpo comprende: a) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO .45 ; b) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO .46 ; c) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO.47; d) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO .48 ; e) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO.49, para elaborar un medicamento para promocionar la protección tisular en un paciente. 69. Uso de una cantidad de un anticuerpo donde el anticuerpo comprende: a) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO .45 ; b) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO .46 ; c) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO.47; d) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO .48 ; e) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO.49, para elaborar un medicamento para activar una actividad endógena de un receptor eritropoyetinico en un mamífero. 70. El uso de conformidad con la reivindicación 69, en donde el receptor eritropoyetinico es un receptor eritropoyetinico humano. 71. Método de creación de un fragmento variable de cadena simple, caracterizado porque comprende expresar el fragmento variable de cadena simple en una célula huésped en el que el fragmento variable de cadena simple comprende: a) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 1 y SEQ ID NO. 2 ; b) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 3 y SEQ ID NO. 4; c) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 5 y SEQ ID NO. 6; d) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 7 y SEQ ID NO. 8 ; e) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 9 y SEQ ID NO. 10; f) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 56 y SEQ ID NO. 58; g) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 60 y SEQ ID NO. 62; h) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 64 y SEQ ID NO. 66; i) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 68 y SEQ ID NO. 70; j) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 72 y SEQ ID NO. 74; k) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 76 y SEQ ID NO. 78; 1) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 80 y SEQ ID NO. 82; m) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 84 y SEQ ID NO. 86; n) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 88 y SEQ ID NO. 90; o) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 92 y SEQ ID NO. 94; p) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 96 y SEQ ID NO. 98; q) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 100 y SEQ ID NO. 102; r) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 104 y SEQ ID NO. 106; s) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 108 y SEQ ID NO. 110; o t) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 112 y SEQ ID NO. 114. 72. Método de creación de un fragmento variable de cadena simple fusionado a un Fe, caracterizado porque comprende expresar el fragmento variable de cadena simple fusionado a un Fe en una célula huésped donde el fragmento variable de cadena simple comprende: a) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 1 y SEQ ID NO. 2; b) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 3 y SEQ ID NO. 4; c) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 5 y SEQ ID NO. 6; d) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. y SEQ ID NO. 8 ; e) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 9 y SEQ ID NO. 10; f) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 56 y SEQ ID NO. 58; g) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 60 y SEQ ID NO. 62; h) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 64 y SEQ ID NO. 66; i) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 68 y SEQ ID NO. 70; j) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 72 y SEQ ID NO. 74; k) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 76 y SEQ ID NO. 78; 1) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 80 y SEQ ID NO. 82; m) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 84 y SEQ ID NO. 86; n) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 88 y SEQ ID NO. 90; o) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 92 y SEQ ID NO. 94; p) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 96 y SEQ ID NO. 98; q) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 100 y SEQ ID NO. 102; r) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 104 y SEQ ID NO. 106; s) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 108 y SEQ ID NO. 110; o t) Una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO. 112 y SEQ ID NO. 114. 73. Método de creación de un fragmento variable de cadena simple, caracterizado porque comprende expresar el fragmento variable de cadena simple en una célula huésped donde el fragmento variable de cadena simple comprende: a) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 14, SEQ ID NO. 15 y SEQ ID NO. 16; b) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 17, SEQ ID NO. 18 y SEQ ID NO. 19; c) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 20, SEQ ID NO. 21 y SEQ ID NO. 22; d) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 23, SEQ ID NO. 24, SEQ ID NO. 25, SEQ ID NO. 26, SEQ ID NO. 27 y SEQ ID NO. 28; e) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 29, SEQ ID NO. 30, SEQ ID NO. 31, SEQ ID NO. 32, SEQ ID NO. 33 y SEQ ID NO. 34; f) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 123, SEQ ID NO.: 124, SEQ ID NO.: 125, SEQ ID NO.: 126, SEQ ID NO.: 127, y SEQ ID NO.: 128; g) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 129, SEQ ID NO.: 130, SEQ ID NO.: 131, SEQ ID NO.: 132, SEQ ID NO.: 133, y SEQ ID NO.: 134; h) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 135, SEQ ID NO.: 136, SEQ ID NO.: 212, SEQ ID NO.: 137, SEQ ID NO.: 138, y SEQ ID NO.: 139; i) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 140, SEQ ID NO.: 141, SEQ ID NO.: 142, SEQ ID NO.: 143, SEQ ID NO.: 144, y SEQ ID NO.: 145; j) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 146, SEQ ID NO.: 147, SEQ ID NO.: 148, SEQ ID NO.: 149, SEQ ID NO.: 150, y SEQ ID NO.: 151; k) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 152, SEQ ID NO.: 153, SEQ ID NO.: 154, SEQ ID NO.: 155, SEQ ID NO.: 156, y SEQ ID NO.: 157; 1) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 158, SEQ ID NO.: 159, SEQ ID NO.: 160, SEQ ID NO.: 161, SEQ ID NO.: 162, y SEQ ID NO.: 163; m) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 164, SEQ ID NO.: 165, SEQ ID NO.: 166, SEQ ID NO.: 167, SEQ ID NO.: 168, y SEQ ID NO.: 169; n) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 170, SEQ ID NO.: 171, SEQ ID NO.: 172, SEQ ID NO.: 173, SEQ ID NO.: 174, y SEQ ID NO.: 175; o) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 176, SEQ ID NO.: 177, SEQ ID NO.: 178, SEQ ID NO.: 179, SEQ ID NO.: 180, y SEQ ID NO.: 181; p) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 182, SEQ ID NO.: 183, SEQ ID NO.: 184, SEQ ID NO.: 185, SEQ ID NO.: 186, y SEQ ID NO.: 187; q) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 188, SEQ ID NO.: 189, SEQ ID NO.: 190, SEQ ID NO.: 191, SEQ ID NO.: 192, y SEQ ID NO.: 193; r) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 194, SEQ ID NO.: 195, SEQ ID NO.: 196, SEQ ID NO.: 197, SEQ ID NO.: 198, y SEQ ID NO.: 199; s) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 200, SEQ ID NO.: 201, SEQ ID NO.: 202, SEQ ID NO.: 203, SEQ ID NO.: 204, y SEQ ID NO.: 205; o t) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 206, SEQ ID NO.: 207, SEQ ID NO.: 208, SEQ ID NO.: 209, SEQ ID NO.: 210, y SEQ ID NO.: 211. 74. Método de creación de un fragmento variable de cadena simple fusionado a un Fe, caracterizado porque comprende expresar el fragmento variable de cadena simple fusionado a un Fe en una célula huésped donde el fragmento variable de cadena simple comprende: a) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 14, SEQ ID NO. 15 y SEQ ID NO. 16; b) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 17, SEQ ID NO. 18 y SEQ ID NO. 19; c) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 20, SEQ ID NO. 21 y SEQ ID NO. 22; d) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 23, SEQ ID NO. 24, SEQ ID NO. 25, SEQ ID NO. 26, SEQ ID NO. 27 y SEQ ID NO. 28; e) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEQ ID NO. 29, SEQ ID NO. 30, SEQ ID NO. 31, SEQ ID NO. 32, SEQ ID NO. 33 y SEQ ID NO. 34; f) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 123, SEQ ID NO.: 124, SEQ ID NO.: 125, SEQ ID NO.: 126, SEQ ID NO.: 127, y SEQ ID NO.: 128; g) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 129, SEQ ID NO.: 130, SEQ ID NO.: 131, SEQ ID NO.: 132, SEQ ID NO.: 133, y SEQ ID NO.: 134; h) una secuencia de aminoácidos que comprende la SEQ ID NO.: 135, SEQ ID NO.: 136, SEQ ID NO.: 212, SEQ ID NO.: 137, SEQ ID NO.: 138, y SEQ ID NO.: 139; i) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 140, SEQ ID NO.: 141, SEQ ID NO.: 142, SEQ ID NO.: 143, SEQ ID NO.: 144, y SEQ ID NO.: 145; j) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 146, SEQ ID NO.: 147, SEQ ID NO.: 148, SEQ ID NO.: 149, SEQ ID NO.: 150, y SEQ ID NO.: 151; k) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 152, SEQ ID NO.: 153, SEQ ID NO.: 154, SEQ ID NO.: 155, SEQ ID NO.: 156, y SEQ ID NO.: 157; 1) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 158, SEQ ID NO.: 159, SEQ ID NO.: 160, SEQ ID NO.: 161, SEQ ID NO.: 162, y SEQ ID NO.: 163; m) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 164, SEQ ID NO.: 165, SEQ ID NO.: 166, SEQ ID NO.: 167, SEQ ID NO.: 168, y SEQ ID NO.: 169; n) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 170, SEQ ID NO.: 171, SEQ ID NO.: 172, SEQ ID NO.: 173, SEQ ID NO.: 174, y SEQ ID NO.: 175; o) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 176, SEQ ID NO.: 177, SEQ ID NO.: 178, SEQ ID NO.: 179, SEQ ID NO. : 180, y SEQ ID NO. : 181; p) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 182, SEQ ID NO.: 183, SEQ ID NO.: 184, SEQ ID NO.: 185, SEQ ID NO.: 186, y SEQ ID NO.: 187; q) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 188, SEQ ID NO.: 189, SEQ ID NO.: 190, SEQ ID NO.: 191, SEQ ID NO.: 192, y SEQ ID NO.: 193; r) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 194, SEQ ID NO.: 195, SEQ ID NO.: 196, SEQ ID NO.: 197, SEQ ID NO.: 198, y SEQ ID NO.: 199; s) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 200, SEQ ID NO.: 201, SEQ ID NO.: 202, SEQ ID NO.: 203, SEQ ID NO.: 204, y SEQ ID NO.: 205; o t) una secuencia de aminoácidos que comprende una SEQ ID NO.: 206, SEQ ID NO.: 207, SEQ ID NO.: 208, SEQ ID NO.: 209, SEQ ID NO.: 210, y SEQ ID NO.: 211. 75. Método de creación de un fragmento variable de cadena simple fusionado a un Fe, caracterizado porque comprende expresar el fragmento de cadena simple fusionado a Fe en una célula huésped donde el fragmento variable de cadena simple comprende: a) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO .45 ; b) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO .46 ; c) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO .47 ; d) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO.48; e) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO.49. 76. Un fragmento variable de cadena simple, caracterizado porque une específicamente a: a) al menos los aminoácidos F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; b) al menos los aminoácidos S91, F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humánec) al menos el aminoácido F93 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; d) al menos los aminoácidos E62, F93 y M150 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; e) al menos los aminoácidos V48, E62, L66, R68 y H70del dominio extracelular del Receptor Epo humano; f) al menos los aminoácidos V48, 64, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; g) al menos los aminoácidos A44, V48, P63, L66, R68, y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; o h) al menos los aminoácidos L66 y R99 del dominio extracelular del Receptor Epo humano. 77. Un fragmento variable de cadena simple fusionado a un Fe, caracterizado porque el fragmento variable de cadena simple une específicamente a: a) al menos los aminoácidos F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; b) al menos los aminoácidos S91, F93 y H114del dominio extracelular del Receptor Epo humano; c) al menos los aminoácidos F93 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; d) al menos los aminoácidos E62, F93 y M150 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; e) al menos los aminoácidos V48, E62, L66, R68 y H70del dominio extracelular del Receptor Epo humano; f) al menos los aminoácidos V48, W64, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; g) al menos los aminoácidos A44, V48, P63, L66, R68, y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; h) al menos los aminoácidos L66 y R99 del dominio extracelular del Receptor Epo humano. 78. El fragmento variable de cadena simple fusionado a un Fe de conformidad con la reivindicación 77, caracterizado porque el fragmento variable de cadena simple también comprende un enlace de polipéptido. 79. El fragmento variable de cadena simple fusionado a un Fe de conformidad con la reivindicación 77, caracterizado porque el Fe deriva de IgGi, IgG2, IgG3, o IgG4. 80. Un ácido nucleico, caracterizado porque comprende una secuencia que codifica al fragmento variable de cadena simple de conformidad con la reivindicación 76. 81. El ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 80, caracterizado porque también comprende uno o más elementos de control, donde uno o más de uno o más elementos de control se encuentran operablemente unidos a una secuencia que codifica al fragmento variable de cadena simple . 82. Un vector, caracterizado porque comprende el ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 80. 83. Un vector, caracterizado porque comprende el ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 81. 84. Una célula huésped, caracterizada porque comprende el vector de conformidad con la reivindicación 82. 85. Una célula huésped, caracterizada porque comprende el vector de conformidad con la reivindicación 83. 86. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende el fragmento variable de cadena simple de conformidad con la reivindicación 76. 87. Uso de un fragmento variable de cadena simple donde el fragmento variable de cadena simple une específicamente a: a) al menos los aminoácidos F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; b) al menos los aminoácidos S91, F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; c) al menos lo aminoácido F93 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; d) al menos los aminoácidos E62, F93 y M150 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; e) al menos los aminoácidos V48, E62, L66, R68 y H70del dominio extracelular del Receptor Epo humano; f) al menos los aminoácidos V48, 64, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; g) al menos los aminoácidos A44, V48, P63, L66, R68, y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; o h) al menos los aminoácidos L66 y R99 del dominio extracelular del Receptor Epo humano, para elaborar un medicamento para tratar la anemia en un paciente . 88. Uso de un fragmento variable de cadena simple donde el fragmento variable de cadena simple une específicamente a: a) al menos los aminoácidos F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; b) al menos los aminoácidos S91, F93 y H114del dominio extracelular del Receptor Epo humano; c) al menos lo aminoácido F93 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; d) al menos los aminoácidos E62, F93 y M150 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; e) al menos los aminoácidos V48, E62, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; f) al menos los aminoácidos V48, 64, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; g) al menos los aminoácidos A44, V48, P63, L66, R68, y H70 del dominio extracelular del receptor Epo humano; o h) al menos los aminoácidos L66 y R99 del dominio extracelular del receptor Epo humano, para elaborar un medicamento para promocionar la protección tisular en un paciente. 89. Uso de una cantidad de un fragmento variable de cadena simple donde el fragmento variable de cadena simple une específicamente a: a) al menos los aminoácidos F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; b) al menos los aminoácidos S91, F93 y H114del dominio extracelular del Receptor Epo humano; c) al menos los aminoácidos F93 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; d) al menos los aminoácidos E62, F93 y M150 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; e) al menos los aminoácidos V48, E62, L66, R68 y H70del dominio extracelular del Receptor Epo humano; f) al menos los aminoácidos V48, W64, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; g) al menos los aminoácidos A44, V48, P63, L66, R68, y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; o h) al menos los aminoácidos L66 y R99 del dominio extracelular del Receptor Epo humano, para elaborar un medicamento para activar una actividad endógena de un receptor eritropoyetinico en un mamífero. 90. El uso de conformidad con la reivindicación 89, en donde el receptor eritropoyetinico es receptor eritropoyetinico humano. 91. Un anticuerpo caracterizado porque une específicamente a: a) al menos los aminoácidos F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; b) al menos los aminoácidos S91, F93 y H114del dominio extracelular del Receptor Epo humano; c) al menos lo aminoácido F93 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; d) al menos los aminoácidos E62, F93 y M150 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; e) al menos los aminoácidos V48, E62, L66, R68 y H70del dominio extracelular del Receptor Epo humano; f) al menos los aminoácidos V48, W64, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; g) al menos los aminoácidos A44, V48, P63, L66, R68, y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; o h) al menos los aminoácidos L66 y R99 del dominio extracelular del Receptor Epo humano. 92. Un ácido nucleico, caracterizado porque comprenda una secuencia que codifique al anticuerpo de conformidad con la reivindicación 91. 93. El ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 92, caracterizado porque también comprende uno o más elementos de control donde uno o más de uno o más elementos de control se encuentran operablemente unidos a una secuencia que codifica al anticuerpo. 94. Un vector, caracterizado porque comprende el ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 92. 95. Un vector, caracterizado porque comprende el ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 93. 96. Una célula huésped, caracterizada porque comprende el vector de conformidad con la reivindicación 94. 97. Una célula huésped, caracterizada porque comprende el vector de conformidad con la reivindicación 95. 98. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende al anticuerpo de conformidad con la reivindicación 91. 99. Uso de un anticuerpo donde el anticuerpo une específicamente a: a) al menos los aminoácidos F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; b) al menos los aminoácidos S91, F93 y H114del dominio extracelular del Receptor Epo humano; c) al menos lo aminoácido F93 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; d) al menos los aminoácidos E62, F93 y M150 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; e) al menos los aminoácidos V48, E62, L66, R68 y H70del dominio extracelular del Receptor Epo humano; f) al menos los aminoácidos V48, W64, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; g) al menos los aminoácidos A44, V48, P63, L66, R68, y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; h) al menos los aminoácidos L66 y R99 del dominio extracelular del Receptor Epo humano, para elaborar un medicamento para tratar la anemia en un paciente . 100. Uso de un anticuerpo donde el anticuerpo une específicamente a: a) al menos los aminoácidos F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; b) al menos los aminoácidos S91, F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; c) al menos lo aminoácido F93 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; d) al menos los aminoácidos E62, F93 y M150 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; e) al menos los aminoácidos V48, E62, L66, R68 y H70del dominio extracelular del Receptor Epo humano; f) al menos los aminoácidos V48, W64, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; g) al menos los aminoácidos A44, V48, P63, L66, R68, y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; h) al menos los aminoácidos L66 y R99 del dominio extracelular del Receptor Epo humano, para elaborar un medicamento para promocionar la protección tisular en un paciente. 101. Uso de una cantidad de un anticuerpo donde el anticuerpo une específicamente a: a) al menos los aminoácidos F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; b) al menos los aminoácidos S91, F93 y H114del dominio extracelular del Receptor Epo humano; c) al menos lo aminoácido F93 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; d) al menos los aminoácidos E62, F93 y M150 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; e) al menos los aminoácidos V48, E62, L66, R68 y H70del dominio extracelular del Receptor Epo humano; f) al menos los aminoácidos V48, W64, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; g) al menos los aminoácidos A44, V48, P63, L66, R68, y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; o h) al menos los aminoácidos L66 y R99 del dominio extracelular del Receptor Epo humano, para elaborar un medicamento para activar una actividad endógena de un receptor eritropoyetinico en un mamífero. 102. El uso de conformidad con la reivindicación 101, en donde el receptor eritropoyetinico es receptor eritropoyetinico humano. 103. Método de creación de un fragmento variable de cadena simple, caracterizado porque comprende expresar el fragmento variable de cadena simple en una célula huésped donde el fragmento variable de cadena simple une específicamente a: a) al menos los aminoácidos F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; b) al menos los aminoácidos S91, F93 y H114del dominio extracelular del Receptor Epo humano; c) al menos lo aminoácido F93 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; d) al menos los aminoácidos E62, F93 y M150 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; e) al menos los aminoácidos V48, E62, L66, R68 y H70del dominio extracelular del Receptor Epo humano; f) al menos los aminoácidos V48, W64, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; g) al menos los aminoácidos A44, V48, P63, L66, R68, y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; o h) al menos los aminoácidos L66 y R99 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; 104. Método de creación de un fragmento variable de cadena simple fusionado a un Fe, caracterizado porque comprende expresar el fragmento de cadena simple fusionado a un Fe en una célula huésped donde el fragmento variable de cadena simple une específicamente a: a) al menos los aminoácidos F93 y H114 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; b) al menos los aminoácidos S91, F93 y H114del dominio extracelular del Receptor Epo humano; c) al menos lo aminoácido F93 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; d) al menos los aminoácidos E62, F93 y M150 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; e) al menos los aminoácidos V48, E62, L66, R68 y H70del dominio extracelular del Receptor Epo humano; f) al menos los aminoácidos V48, W64, L66, R68 y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; g) al menos los aminoácidos A44, V48, P63, L66, R68, y H70 del dominio extracelular del Receptor Epo humano; o h) al menos los aminoácidos L66 y R99 del dominio extracelular del Receptor Epo humano. 105. Un anticuerpo que une al receptor humano Epo, caracterizado porque comprende una o más secuencias seleccionadas de: A) una primera secuencia de aminoácidos que comprende: i) un CDR1 que posee la fórmula: Xi YWM X5, donde Xi es cualquier aminoácido y X5 es cualquier aminoácido; ii) un CDR2 que posee la fórmula: NIKPDGSEKYV X12 SVKG donde Xi2 es cualquier aminoácido; y iii) un CDR 3 que posee la fórmula: VSRGGS X7 SD donde X7 es cualquier aminoácido; y B) una segunda secuencia de aminoácidos que comprende: i) un CDR1 que posee la fórmula: TGTSSD X7 G X9 Y X1X YVS donde X7 es cualquier aminoácido y Xg es cualquier aminoácido y Xn es cualquier aminoácido; y ii) un CDR2 que posee la fórmula: Xi V X3 X4 RPS donde ?? es cualquier aminoácido y X3 es cualquier aminoácido y X4 es cualquier aminoácido. 106. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 105, caracterizado porque A) la primera secuencia de aminoácidos comprende: i) un CDR1 que posee la fórmula: ?? YWM X5, donde Xi es K o S y X5 es T o S; ii) un CDR2 que posee la fórmula: NIKPDGSEKYV X12 SVKG donde Xi2 es D o E; y iii) un CDR 3 que posee la fórmula: VSRGGS X SD donde X7 es F o Y; y B) la segunda secuencia de aminoácidos comprende: i) un CDR1 que posee la fórmula: TGTSSD X7 G X9 Y Xn YVS donde X7 es V o I, y X9 es G, A, T o S y Xn es N, D, o I; y ii) un CDR2 que posee la fórmula: Xi V X3 X4 RPS donde Xi es D o E, y X3 es N, S, A, o T, y X es K, N, o R. 107. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 105, caracterizado porque comprende la mencionada primera secuencia de aminoácidos y dicha segunda secuencia de aminoácidos . 108. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 107, caracterizado porque la primera secuencia de aminoácidos se encuentra unida covalentemente a la mencionada segunda secuencia de aminoácidos. 109. Un fragmento variable de cadena simple que une al Receptor Epo humano, caracterizado porque comprende una o más secuencias seleccionadas de: A) una primera secuencia de aminoácidos que comprende: i) un CDR1 que posee la fórmula: ?? YWM X5, donde Xi es cualquier aminoácido y X5 es cualquier aminoácido; ii) un CDR2 que posee la fórmula: NIKPDGSEKYV X12 SVKG donde Xi2 es cualquier aminoácido; y iii) un CDR 3 que posee la fórmula: VSRGGS X7 SD donde X es cualquier aminoácido; y B) una segunda secuencia de aminoácidos que comprende: i) un CDR1 que posee la fórmula: TGTSSD X7 G X9 Y Xn YVS donde X7 es cualquier aminoácido y X9 es cualquier aminoácido y Xn es cualquier aminoácido; y ii) un CDR2 que posee la fórmula: Xi V X3 X4 RPS donde Xi es cualquier aminoácido y X3 es cualquier aminoácido y X4 es cualquier aminoácido. 110. El fragmento variable de cadena simple de conformidad con la reivindicación 109, caracterizado porque A) una primera secuencia de aminoácidos que comprende: i) un CDR1 que posee la fórmula: Xx YWM X5, donde Xi es K o S y X5 es T o S; ii) un CDR2 que posee la fórmula: NIKPDGSEKYV X12 SVKG donde X12 es D o E; y iii) un CDR 3 que posee la fórmula: VSRGGS X7 SD donde X7 es F o Y; y B) una segunda secuencia de aminoácidos que comprende: i) un CDR1 que posee la fórmula: TGTSSD X7 G X9 Y Xn YVS donde X7 es V o I, y X9 es G, A, T o S y Xü es N, D, o I; y ii) un CDR2 que posee la fórmula: Xi V X3 X4 RPS donde Xi es D o E, y X3 es N, S, A, o T, y X4 es K, N, o R. 111. El fragmento variable de cadena simple de conformidad con la reivindicación 108, caracterizado porque comprende la mencionada primera secuencia de aminoácidos y dicha segunda secuencia de aminoácidos. 112. El fragmento variable de cadena simple de conformidad con la reivindicación 111, caracterizado porque la primera secuencia de aminoácidos se encuentra unida covalentemente a la mencionada segunda secuencia de aminoácidos . 113. Un anticuerpo, caracterizado porque une al Receptor Epo humano tipo natural pero no logra unir a un Receptor Epo mutante en el que el aminoácido en la posición 34 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina. 114. Un anticuerpo, caracterizado porque une al Receptor Epo humano tipo natural pero no logra unir a un Receptor Epo mutante en el que el aminoácido en la posición 60 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina. 115. Un anticuerpo, caracterizado porque une al Receptor Epo humano tipo natural pero no logra unir a un Receptor Epo mutante en el que el aminoácido en la posición 88 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina. 116. Un anticuerpo, caracterizado porque une al Receptor Epo humano tipo natural pero no logra unir a un Receptor Epo mutante en el que el aminoácido en la posición 150 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina. 117. Un anticuerpo, caracterizado porque une al Receptor Epo humano tipo natural pero no logra unir a un Receptor Epo mutante en el que el aminoácido en la posición 87 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina. 118. Un anticuerpo, caracterizado porque une al Receptor Epo humano tipo natural pero no logra unir a un Receptor Epo mutante en el que el aminoácido en la posición 63 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina. 119. Un anticuerpo, caracterizado porque une al Receptor Epo humano tipo natural pero no logra unir a un Receptor Epo mutante en el que el aminoácido en la posición 64 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina. 120. Un anticuerpo, caracterizado porque une al Receptor Epo humano tipo natural pero no logra unir a un Receptor Epo mutante en el que el aminoácido en la posición 99 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina. 121. Un fragmento variable de cadena simple, caracterizado porque une al Receptor Epo humano tipo natural pero no logra unir a un Receptor Epo mutante en el que el aminoácido en la posición 34 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina. 122. Un fragmento variable de cadena simple, caracterizado porque une al Receptor Epo humano tipo natural pero no logra unir a un Receptor Epo mutante en el que el aminoácido en la posición 60 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina. 123. Un fragmento variable de cadena simple, caracterizado porque une al Receptor Epo humano tipo natural pero no logra unir a un Receptor Epo mutante en el que el aminoácido en la posición 88 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina. 124. Un fragmento variable de cadena simple, caracterizado porque une al Receptor Epo humano tipo natural pero no logra unir a un Receptor Epo mutante en el que el aminoácido en la posición 150 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina. 125. Un fragmento variable de cadena simple, caracterizado porque une al Receptor Epo humano tipo natural pero no logra unir a un Receptor Epo mutante en el que el aminoácido en la posición 87 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina. 126. Un fragmento variable de cadena simple, caracterizado porque une al Receptor Epo humano tipo natural pero no logra unir a un Receptor Epo mutante en el que el aminoácido en la posición 63 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina. 127. Un fragmento variable de cadena simple, caracterizado porque une al Receptor Epo humano tipo natural pero no logra unir a un Receptor Epo mutante en el que el aminoácido en la posición 64 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina. 128. Un fragmento variable de cadena simple, caracterizado porque une al Receptor Epo humano tipo natural pero no logra unir a un Receptor Epo mutante en el que el aminoácido en la posición 99 del dominio extracelular del Receptor Epo mutante es Arginina.
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