MX2008010327A

MX2008010327A - Peptidos que bloquean el enlace de inmunoglobulina g al receptor neonatal fc.

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Publication number: MX2008010327A
Application number: MX2008010327A
Authority: MX
Inventors: Alfredo Castro; Adam R Mezo; Kevin A Mcdonnell; Cristina Tan A Hehir
Original assignee: Syntonix Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2006-02-17
Filing date: 2007-02-16
Publication date: 2009-01-26
Also published as: US20110059889A1; IL193101A0; AU2007217042A2; KR20080106432A; RS20080362A; CA2638867A1; EP1991572A2; US9012603B2; TR200807263A2; BRPI0707920A2; TW200745163A; WO2007098420A8; AU2007217042A1; MEP7408A; EA200870274A1; US8101186B2; NO20083712L; TR200807263T1; US20070254831A1; JP2009527499A

Abstract

La invención se refiere a péptidos que se enlazan a FcRn humano e inhiben el enlace de la porción Fc de un IgG a un FcRn, por ello se modula los niveles IgG de suero. Las composiciones y métodos descritos pueden usarse por ejemplo, en el tratamiento de enfermedades autoinmunes y trastornos inflamatorios. La invención también se refiere a métodos de uso y métodos para hacer los péptidos de la invención.

Description

PEPTIDOS QUE BLOQUEAN EL ENLACE DE INMUNOGLOBULINA G AL RECEPTOR NEONATAL Fe CAMPO DE LA INVENCION La invención generalmente se refiere al campo de inmuno-moduladores. Más específicamente, la invención se refiere a péptidos que enlazan al Receptor neonatal Fe (FcRn, por sus siglas en inglés) e inhiben el enlace del FcRn a una porción Fe de una inmunoglobulina G (IgG), por ello modulan los niveles IgG en el suero. La invención se refiere además a moduladores de péptidoS de la actividad FcRn que puede evitar que FcRn funcione en mecanismos celulares relacionados al mantenimiento de niveles de IgG en el suero, los medicamentos que comprenden aquellos péptidos, y métodos para tratar un sujeto, enfermedades y trastornos que se pueden aliviar al disminuir los niveles de IgG en el suero al administrar aquellos medicamentos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION El isotipo de anticuerpos más abundante en el suero es IgG, que tiene un papel crítico en la protección mediada contra patógenos así como en respuestas inflamatorias y alérgicas mediadas que aceleran el reclutamiento de componentes del sistema inmunitario para los tejidos, mucosa, y superficies dérmicas. Junghans, Immunologic Research 16(1) :29 (1997) . Más aún, IgG también es un componente clave Ref.: 195200 de una variedad de enfermedades autoinmunes. Bajo condiciones normales, la semivida de IgG en el suero es un periodo prolongado relativo a la semivida del suero de otras proteínas de plasma. Por ejemplo, la semivida en el suero de IgG es 5 hasta 7 días en ratones y 22-23 días en humanos. Roopenian et al., J. Immunology 170:3528 (2003); Junghans and Anderson, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 93:5512 (1996) . En parte, esta semivida larga de IgG es debido a su enlace al receptor Fe, FcRn. El FcRn enlaza a la región constante de IgG, conocida como Fe. Aunque FcRn se caracterizó originalmente como un receptor de transporte neonatal para IgG materno, también funciona en adultos para proteger IgG de la degradación. El FcRn enlaza a la IgG con pinocitosis para protegerse de lisosomas degradativos y luego volver a reciclarse para el compartimiento extracelular . Junghans and Anderson, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 93:5512 (1996), Roopenian et al., J. Immunology 170:3528 (2003). Si la concentración de IgG alcanza un nivel que excede el FcRn disponible, el IgG no enlazado no se protegerá de mecanismos degradativos y tendrá consecuentemente una semivida en el suero más corta. Brambell et al., Nature 203:1352 (1964). Además, aunque FcRn se expresa en la superficie celular, se considera que mucho del FcRn es intracelular y se asocia con membranas de vesícula endoplásmica , y que la interacción entre IgG y FcRn ocurre intracelularmente después de que IgG hace pinocitosis en la célula . Estructuralmente, FcRn existe como un heterodimero compuesto de una cadena ligera, nombrada una cadena beta (ß) , y una cadena pesada no enlazada covalentemente , nombrada una cadena alfa (a) . La cadena ligera de FcRn, que es mejor conocida como p2-microglobulina (p2m) , también es un componente del complejo de de Histocompatibilidad principal I (MHC I, por sus siglas en inglés). La cadena FcRn es una proteina de 46 kD compuesta de un dominio extracelular que se divide en tres subdominios, al, a2, y a3; una región de transmembrana; y una cola citoplásmica relativamente corta. Burmeister et al., Nature 372:336 (1994). El FcRn se identificó primero en el intestino de rata neonatal donde funciona para mediar la absorción de anticuerpo IgG de la leche materna y facilitar su transporte al sistema circulatorio. Leach et al., J. Immunology 157:3317 (1996). El FcRn también se ha aislado de la placenta humana donde media la absorción y el transporte de IgG materno para la circulación fetal. En adultos, el FcRn se expresa en tejido epitelial (Patente de E.U.A. Nos. 6,030,613 y 6,086,875), tales como, pero no limitados a, el pulmón (Israel et al., Immunology 92:69 (1997)), epitelio tubular próximo intestinal y renal (Kobayashi et al., Am. J. Physiol. (2002); Renal Physiol. 282:F358 (2002)), asi como superficies del árbol nasal, vaginal, y biliar. Además, la expresión ubicua de FcRn en células endoteliales es sugerente de su importancia en la homeostasis IgG. Ward et al., International Immunology 15(2) :187 (2002); Ghetie et al., Eur. J. Immunology 26:690 (1996) . En general, el FcRn funciona en la homeostasis IgG al antagonizar el catabolismo de IgG al enlazar a la porción Fe de IgG. Üna vez con pinocitosis, la IgG se captura en vacuolas intracelulares que se empiezan a fusionar con endosomas tempranas ácidas. Los estudios cristalográficos sugieren que la estequiometria del complejo FcRn-IgG se compone de dos moléculas de FcRn para un IgG (Burmeister et al., Nature 372:336 (1994)) y el enlace de las dos moléculas se considera que se presenta en la porción Fe de IgG cerca de la interfase de los dominios CH2 y CH3 (Burmeister et al., Nature 372:379 (1994)). El evento de fusión endosomal representa una etapa de la trayectoria degradativa lisosomal, que degrada o cataboliza las biomoléculas del complejo contenidas dentro del endosoma en componentes constitutivos. El ambiente de pH inferior del endosoma temprano promueve el enlace de FcRn a IgG asi como la liberación de cualquier antigeno enlazado al IgG. En consecuencia, el antigeno se degrada y el complejo FcRn-IgG permite la degradación y últimamente se recicla a la superficie celular donde el pH fisiológico del ambiente extracelular promueve la liberación del IgG a partir de FcRn.

Con objeto de estudiar las contribuciones de FcRn a la homeostasis de IgG, los ratones se han procesado por ingeniería de manera que al menos parte de los genes se han codificado de la cadena pesada ß2?? y FcRn "con genes inactivados" de manera que estas proteínas no se expresen. WO 02/43658; Junghans and Anderson, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 93:5512 (1996) . En ambas líneas de estas líneas de ratones con genes inactivados, la semivida y la concentración de IgG en el suero se reducen dramáticamente, lo que sugiere un mecanismo dependiente de FcRn relacionado a homeostasis de IgG. La inhibición del enlace de IgG a FcRn reduce la semivida del suero en IgG al prevenir el reciclado de IgG. Por lo tanto, los agentes que bloquean o antagonizan el enlace de IgG a FcRn se pueden usar en métodos de regulación, tratamiento o prevención de trastornos que involucran las reacciones inmunitarias , tales como, por ejemplo, enfermedades y trastornos autoinmunitarios e inflamatorios caracterizados por la presencia de anticuerpos IgG inapropiadamente expresados. Un ejemplo de un método para bloquear IgG de Fe enlazado a FcRn involucra la generación de anticuerpos que bloquean a FcRn. De hecho, los anticuerpos capaces de bloquear el enlace de FcRn con IgG se han generado usando una línea de ratón con genes inactivados de cadena pesada FcRn (WO 02/43658). Recientemente, los péptidos se han identificado que se enlazan a complejos FcRn. Kolonin et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 99(20): 13055-60 (2002); Patente de E.U.A. No. 6,212,022. Sin embargo, en este tiempo los agentes adicionales son necesarios para regular, tratar o prevenir las condiciones, enfermedades, y trastornos caracterizados por reacciones inmunitarias .

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION En consecuencia, la presente invención proporciona péptidos que enlazan específicamente a FcRn e inhiben IgG de Fe a partir del enlace a FcRn, por ello previene al IgG del reciclado al evitar que FcRn funcione en su papel de proteger IgG de la degradación por las lisosomas. En modalidades ejemplares, el péptido se enlaza a FcRn e inhibe las subclases IgGl, IgG2, IgG3, o IgG4 de Fe a partir del enlace a FcRn. En algunas modalidades, los péptidos de la invención comprenden la secuencia: —Gly-Xg—X7—?ß—X9—Xio-Xii- en donde: -?d se elige a partir de aminoácidos cargados positivamente, aminoácidos aromáticos, aminoácidos aromáticos cargados positivamente, y análogos de los mismos; -X7 se elige a partir de fenilalanina y análogos de fenilalanina, -X8 y X9 son cada uno independientemente elegidos a partir de glicina, sarcosina, ácido aspártico, aminoácidos D, ácido a-aminoisobutírico, y análogos de los mismos, o Xs, cuando se toma junto con X9 , forma un dipéptido mimético; -Xio se elige a partir de aminoácidos y análogos de los mismos, o Xi0 , cuando se toma junto con X9 , forma un dipéptido mimético; -Xii se elige a partir de tirosina y análogos de tirosina . Alternativamente, los péptidos de la invención pueden comprender la secuencia: Ri~Gly-X6— X7—X8~ 9— Xio— ??? ~ ¾ en donde : - Ri tiene la fórmula X1 -X2-X3-X4- en donde -Xi se elige a partir de hidrógeno, acilo, y grupos protectores de aminoácido; -X2 está ausente o se elige a partir de aminoácido y péptidos de 2-15 aminoácidos de longitud, y análogos de los mismos ; -X3 está ausente o es un aminoácido o análogo del mismo que es capaz de formar un puente con X10 , X12 , o X13 , en donde el puente se elige a partir de una terminación amino hasta puente de terminación carboxi, un puente de cadena lateral a estructura, y un puente de cadena lateral a cadena lateral; y -X4 está ausente o se elige a partir de un aminoácido, péptidos de 2-15 aminoácidos de longitud, y análogos de los mismos ; -?d, - 7 _?d? ~ ^9 / -X-ior y ~Xn son como se definen arriba, y -R2 tiene la fórmula -Xi2_Xi3_Xi4_Xi5 en donde -X12 está ausente o es un aminoácido o análogo del mismo; -X13 está ausente o es un aminoácido o análogo del mismo; -Xi4 está ausente o se elige a partir de un aminoácido, péptido de 2-15 aminoácidos de longitud, y análogos de los mismos; y -Xi5 es un grupo amino o un grupo protector carboxi. Los péptidos de la invención tienen típicamente al menos 7 y tanto como 50 aminoácidos de longitud. Los péptidos de la invención pueden existir como un multímero, tal como, por ejemplo, un dímero, un trímero, o un tetrámero. En algunas modalidades, los péptidos de la invención pueden ser más susceptibles a pinocitosis, que permite el enlace más rápido del péptido y en consecuencia, menos excreción por el riñon. La invención se refiere además a composiciones farmacéuticas que comprenden uno o más péptidos de la invención. Los péptidos de la invención pueden comprender: a) una secuencia de aminoácido elegida de: QRFCTGHFGGLYPCNGP (SEQ ID NO: 1), GGGCVTGHFGGIYCNYQ (SEQ ID NO: 2), KI ICSPGHFGGMYCQGK (SEQ ID NO: 3), PSYCIEGHI DGIYCFNA (SEQ ID NO:4), y NSFCRGRPGHFGGCYLF (SEQ ID NO:5); b) una secuencia de aminoácido que es substancialmente idéntica a uno o más de SEQ ID N0:1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 y SEQ ID NO: 5; c) una secuencia de aminoácido que es al menos 80% idéntica a uno o más de SEQ ID NO:l, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO: 4 y SEQ ID NO: 5; d) SEQ ID NO:l, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO : 3 , SEQ ID NO:4 o SEQ ID NO: 5 modificado por uno, dos, tres, cuatro, o cinco mutaciones de eliminación, substitución, o adición; e) SEQ ID NO:l, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4 o SEQ ID NO: 5 modificado por al menos una substitución de aminoácido, en donde al menos un aminoácido es substituido con un aminoácido que se presenta naturalmente; f) SEQ ID NO:l, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO : 4 o SEQ ID NO: 5 modificado por al menos una substitución de aminoácido, en donde al menos un aminoácido es substituido con un aminoácido D y análogos del mismo; g) SEQ ID NO:l, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4 o SEQ ID NO: 5 modificado por al menos una substitución de aminoácido, en donde al menos un aminoácido es substituido con un aminoácido metilado por N; h) SEQ ID NO:l, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4 o SEQ ID NO: 5 modificado por al menos una substitución de aminoácido, en donde al menos un aminoácido es substituido con un aminoácido que no se presenta naturalmente; e i) SEQ ID NO:l, SEQ ID NO : 2 , SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4 o SEQ ID NO: 5 modificado por al menos una substitución de aminoácido, en donde al menos un aminoácido es substituido con un imitador de aminoácido. La invención se refiere además a un método para regular los niveles de IgG en el suero de un sujeto que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición que comprende uno o más péptidos de la invención capaces de enlazarse a y prevenir el FcRn a partir del enlace a la porción Fe de una molécula IgG. En ciertas modalidades, los métodos de la invención se emplean para reducir la semivida de IgG soluble en el suero de un sujeto. El resultado de administrar una composición de la invención es que la semivida de IgG soluble en el suero del sujeto se reduce comparado con la semivida de IgG en el suero del sujeto previo a la administración del péptido. La invención proporciona además métodos para inhibir el enlace de la porción' ^Fc de un IgG humana a FcRn para efectuar una disminución en la concentración del suero de la porción Fe de IgG para un FcRn como se compara con la concentración de suero de IgG antes del tratamiento. El método de disminuir la concentración de suero de IgG comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición que comprende uno o más péptidos de la invención capaces de enlazarse a FcRn y prevenir el FcRn a partir del enlace a la porción Fe de una molécula IgG. En una modalidad, la disminución en la concentración del suero de IgG humana es al menos 5%, tal como una disminución de al menos 15%, o una disminución en la concentración del suero de IgG humana de al menos 25%. Una modalidad de la invención proporciona un método de tratar a un sujeto que tiene al menos una enfermedad autoinmune que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición que comprende uno o más péptidos de la invención capaces de enlazarse a FcRn y prevenir el FcRn a partir del enlace a la porción Fe de una molécula IgG. Una modalidad alternativa de la invención proporciona un método de tratar un sujeto con al menos un trastorno inflamatorio al administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición que comprende uno o más péptidos de la invención capaces de enlazarse a FcRn y prevenir el FcRn a partir del enlace a la porción Fe de una molécula IgG. En otras modalidades, los métodos de la invención se pueden usar para prevenir, tratar, o regular una respuesta inmunitaria para una proteina terapéutica o un vector de terapia génica. Las modalidades, objetos, y ventajas adicionales de la invención se establecen en parte en la descripción que sigue y en parte, será obvio de la descripción, o se puede aprender por la práctica de la invención. Estas modalidades, los objetos, y ventajas de la invención se pueden realizar y afectar por medio de los elementos y combinaciones particularmente precisas en las reivindicaciones anexas. Se entenderá que tanto la descripción general anterior como la siguiente descripción detallada son solamente ejemplares y explicativas y no se restringen de la invención como se reivindica.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La figura 1 muestra las secuencias de cADN del FcRn de longitud completa humana y estructuras de lectura abierta de microglobulina de beta-2 humano (ß2??) (ORFs). La figura 2 muestra una revisión de la síntesis de monómeros de péptidos de aldehido de terminal N (SEQ ID NO: 319) . La figura 3 muestra una introducción de la síntesis de los dímeros de péptido por alquilación reductiva. La síntesis del péptido No. 270 se muestra como un ejemplo ilustrativo. La figura 4 muestra una introducción de la síntesis de los dímeros de péptido al usar una ligadura bis-tiol que contiene péptido y un péptido bromoacetilado . La síntesis del péptido No. 100 se muestra como un ejemplo ilustrativo. Los corchetes horizontales colocados arriba de la secuencia del péptido indica la presencia de un puente (SEQ ID NO: 320) .. La figura 5 muestra la síntesis de los dímeros de péptido usando un péptido que contiene una ligadura tiol y un péptido bromoacetilado . La síntesis del péptido No. 122 se muestra como un ejemplo ilustrativo. Los corchetes horizontales colocados arriba de la secuencia de péptido indican la presencia de un puente (SEQ ID NO: 320) . La figura 6 muestra la síntesis de los dímeros de péptido usando una ligadura que contiene diácido. La síntesis del péptido No. 283 se muestra como un ejemplo ilustrativo. Los corchetes horizontales colocados abajo de la secuencia del péptido indican la presencia de un puente (SEQ ID NO: 321) . La figura 7 muestra la síntesis de los dímeros de péptido usando una ligadura que contiene amina. La síntesis del péptido No. 280 se muestra como un ejemplo ilustrativo. Los corchetes horizontales colocados abajo de la secuencia del péptido indican la presencia de un puente (SEQ ID NO: 321) . La figura 8 muestra la síntesis de las fusiones de péptido-Fc usando un aldehido de péptido y la proteína CysFc. La síntesis del péptido No. 252-Fc se muestra como un ejemplo ilustrativo. Los corchetes horizontales colocados abajo de la secuencia del péptido indican la presencia de un puente. La figura 9 muestra la cinética del catabolismo de IgG humana en ratones TG32B (ratones preparados por ingeniería para expresar el FcRn humano y ß2?? humano, pero sin el FcRn de murino o ß2?p) . La figura 10 muestra que la cinética del catabolismo de IgG humana biotinilado en monos macacos se acelera después de la inyección intravenosa del péptido No. 270. La figura 11 muestra los niveles del suero de IgG endógeno en monos macados después de la inyección intravenosa del péptido No. 270. La figura 12 es una representación de los resultados mostrados en la Figura 11, en donde los niveles de IgG de mono macaco endógeno se han normalizado hasta niveles T0. La figura 13 muestra los niveles de albúmina de suero endógeno en monos macacos seguido de la inyección intravenosa del péptido No. 270. La figura 14 muestra los niveles de IgM endógeno en monos macacos seguido de la inyección intravenosa del péptido ID No. 270. La figura 15 muestra la cinética del catabolismo de IgG humana en ratones TG32B seguido de la inyección intravenosa del péptido No. 231, Péptido No. 274, y péptido No. 252-Fc. La figura 16 muestra la cinética del catabolismo de IgG humana en ratones TG32B seguido de la inyección intravenosa del péptido No. 270. La figura 17 muestra la cinética del catabolismo de IgG humana en ratones TG32B seguido por inyección intravenosa del péptido No. 283. La figura 18 muestra el peso molecular del péptido No. 289 por análisis SDS-PAGE de péptido purificado No. 289 en un gel Tris-Gly al 4-20%. La línea 1 contiene marcadores de peso molecular. La línea 2 contiene material de partida PEG30kDa no conjugado. La línea 3 contiene mezcla de reacción cruda. La línea 4 contiene péptido purificado No. 289. La figura 19 muestra la cinética del catabolismo de IgG humana en ratones TG32B después de la inyección intravenosa del péptido No. 289. La figura 20 muestra la cinética del catabolismo de IgG humana biotinilado en monos macacos seguido por inyección intravenosa de 5 mg/kg del péptido No. 283. La figura 21 muestra la cinética del catabolismo de IgG humana biotinilado en monos macacos seguido por inyección intravenosa de 1 mg/kg del péptido No. 283. La figura 22 muestra el efecto del péptido No. 283 (5 mg/kg) en la concentración de IgG en monos macacos. La figura 23 muestra el efecto del péptido No. 283 (1 mg/kg) en la concentración de IgG en monos macacos. La figura 24 muestra el efecto del péptido No. 283 (5 mg/kg, 3x/semana, iv) en la concentración de albúmina en monos macacos.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION I . Definiciones "Afinidad" se refiere a las características de la interacción de enlace entre dos moléculas biológicamente activas que indican la resistencia de la interacción de enlace. La medición de afinidad se reporta como una constante de disociación (KD) , que es la concentración, normalmente reportada en nM, pM, o fM, en una solución que comprende una molécula biológicamente activa en la cual la molécula biológicamente activa comienza a no enlazarse más (disociarse) a su compañero de enlace bajo condiciones especificas. La resistencia de afinidad se relaciona inversamente al valor de la KD. El término "aminoácido", como se usa en la presente, se refiere a un compuesto que contiene un grupo de ácido carboxilico y un grupo amino. Por ejemplo, un aminoácido puede tener la fórmula estructural H2N- [C (R) (R' ) ] n-C (O) OH, donde n es un entero mayor que o igual a uno, y R y R' son independientemente seleccionados de cadenas laterales de hidrógeno y aminoácido, y donde R y R' pueden tomarse juntos para formar un anillo carbociclico o heterociclico . Por ejemplo, cuando n es igual a uno, el aminoácido de la fórmula H2N-[C(R) (R')]_C(0)OH es un aminoácido alfa, y cuando n es igual a dos, el aminoácido de la fórmula H2N-C(Ri) (Ri' ) -C(R2) (R2')_C(0)OH es un aminoácido beta, donde Ri, Ri' , R2, y R2 son cada uno independientemente elegidos a partir de cadenas laterales de aminoácido, y donde R y R' , o R2, y R2' , se pueden tomar juntos para formar un anillo carbociclico o heterociclico. El término "residuo de aminoácido", como se usa en la presente, se refiere a un aminoácido que es parte de un péptido o proteina, y tiene la fórmula -N (H) - [C (R) (R' ) ] n-C (0) -. El término "cadena lateral de aminoácido" como se usa en la presente, se refiere a cualquier cadena lateral de un aminoácido sintético o que se presenta naturalmente. Por ejemplo, metilo se puede referir como una cadena lateral de alanina, y 2-amino-l-etilo se puede referir como la cadena lateral de ácido 2 , 4-diaminobutanoico . Un aminoácido puede tener quiralidad R o S en cualquier átomo quiral. La conversión Fischer se usa para designar la quiralidad del carbono amino alfa de los aminoácidos alfa, si el carbono amino alfa es quiral, como L- o D- . Un "aminoácido D" es un aminoácido que tiene una configuración D en el carbono alfa. Donde la configuración no especifica se indica, una persona experta en la técnica deberá entender el aminoácido para ser un aminoácido L. Los aminoácidos descritos en la presente también pueden estar en la forma de mezclas racémicas, no racémicas, y diastereoméricas . Los aminoácidos ejemplares se pueden elegir de los veinte aminoácidos codificados y análogos de los mismos, asi como de, por ejemplo, otros aminoácidos a, aminoácido ß, aminoácidos ?, aminoácidos d, y aminoácidos ?. Los aminoácidos no codificados son bien conocidos en la técnica de péptidos, tales como aquellos descritos en M. Bodanszky, Principies of Peptide Synthesis, 1st and 2nd revised ed., Springer-Verlag, New York, N.Y., (1984) and (1993), y Stewart and Young, Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd ed., Pierce Chemical Co., Rockford, III., (1984). Los aminoácidos codificados y no codificados y análogos de aminoácido se pueden adquirir comercialmente de, por ejemplo, Novabiochem; Bachem; Sigma Chemical Co.; Advanced Chemtech, o sintetizados usando métodos conocidos en la técnica . Un aminoácido puede elegirse de, por ejemplo, alanina, ß-alanina, ácido a-aminoadipico , ácido 2 -aminobutanoico , ácido 4 -aminobutanoico , ácido 1-aminociclopentancarboxilico, ácido 6-aminohexanoico , ácido 2-aminoheptandioico, ácido 7-aminoheptanoico , ácido 2-aminoisobutirico , ácido aminometilpirrol carboxilico, ácido 8-amino-3 , 6-dioxa-octanoico, ácido aminopiperidincarboxilico , ácido 3-amino-propionico, aminoserina, ácido aminotetrahidropiran-4-carboxilico, arginina, asparagina, ácido aspártico, ácido azetidina carboxilico, benzotiazolilalanina, butilglicina , carnitina, 4 -clorofenilalanina , citrulina, ciclohexilalanina, ciclohexilestatina , cisteina, ácido 2,4-diaminobutanoico , ácido 2 , 3-diaminopropionico , dihidroxifenilalanina, ácido dimetilt iazolidina carboxilico, ácido glutámico, glutamina, glicina, histidina, homoserina, hidroxiprolina, isoleucina, ácido isonipecotico , leucina, lisina, metanoprolina , metionina, norleucina, norvalina, ornitina, ácido p-aminobenzoico , penicilamina , fenilalanina , fenilglicina, pipe'ridinilalanina, piperidinilglicina, prolina, pirrolidinilalanina , sarcosina, selenocisteina, serina, estatina, tetrahidropiranglicina, tienilalanina , treonina, triptofano, tirosina, valina, alo-isoleucina, alo-treonina, ácido ácido 2 , 6-diamino- -hexanoico , ácido 2,6-diaminopimelico, ácido 2 , 3-diaminopropionico , dicarboxidina , homoarginina , homocitrulina , homocisteina, homocisteina, homofenilalanina, homoprolina, y ácido 4 -hidrazinobenzoico . Los aminoácidos se clasifican usualmente por propiedades de la cadena lateral en cuatro grupos: ácido, básico, hidrofilico (polar) , e hidrofóbico (no polar) . Los aminoácidos descritos en la presente se pueden identificar por sus nombres completos o por los códigos de una o tres letras estándar correspondiente. El caso de códigos de letras minúsculas sencillas se usan para indicar quiralidad D. Un "análogo de aminoácido" es un aminoácido, o un imitador de molécula pequeña de un aminoácido, que porta un químico común, carga, esférica, u otra propiedad de un aminoácido dado. Por ejemplo, análogos de alanina incluyen, por ejemplo, ß-alanina, etilglicina, ácido a-aminoisobutírico, y D-alanina; análogos de cisteína incluyen, por ejemplo, homocisteína, D-cisteína, y penicilamina; análogos de fenilalanina incluyen, por ejemplo, 3-fluorofenilalanina, 4-metilfenilalanina, fenilglicina, 1-naftilalanina, y 3,3- difenilalanina , 4-aminofenilalanina, pentafluorofenilalanina , 2-piridilalanina , 3-piridilalanina, 4-nitrofenilalanina, 2-pirrolidinilalanina , 3-piperidilalanina , 4 -piperidilalanina ; y análogos de histidina incluyen, por ejemplo, 1-metilhistidina, ácido 2 , 4-diaminobutirico, tiazolilalanina, ácido 2,3-diaminopropionico, guanilalanina, 2-piridilalanina, 3-piridilalanina, 4-piridilalanina, tienilalanina, ornitina, 4-guanilfenilalanina, y 4-aminofenilalanina . "Grupo protector amino", como se usa en la presente, se refiere a cualquier substituyente que se puede usar para prevenir que un grupo amino en una molécula experimente una reacción química mientras el cambio químico ocurre en cualquier lado en la molécula. Un grupo protector amino se puede remover bajo las condiciones químicas apropiadas. Los grupos protectores amino numerosos son conocidos para aquellos expertos en la técnica, y los ejemplos de grupos protectores amino, métodos para su adición, y métodos para su eliminación se pueden encontrar en T. . Green, Protective Groups in Organic Synthesis, John iley and Sons, New York, 1991; Capítulo 7, M. Bodanszky, Principies of Peptide Synthesis, lst and 2nd revised ed., Springer-Verlag, New York, N.Y. (1984) and (1993), y Stewart and Young, Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd ed., Pierce Chemical Co., Rockford, III. (1984), las descripciones de las cuales se incorporan en la presente para referencia. El término "amino (monosubstituido ) protegido" significa que hay un grupo protector amino en el átomo de amino nitrógeno (monosubstituido) . Además, el término "carboxamida protegido" significa que hay un grupo protector amino en el nitrógeno carboxamida. Los ejemplos de tales grupos protectores amino incluyen el grupo formilo ("For") , el grupo trifilo, el grupo ftalimido, el grupo tricloroacetilo, los grupos cloroacetilo, bromoacetilo, y yodoacetilo, grupos bloqueadores tipo uretano, tales como t-butoxicarbonilo ("Boc"), 2- (4-bifenilil ) propil-2-oxicarbonilo ("Bpoc"), 2-fenilpropil-2-oxicarbonilo ("Poc"), 2- ( -xenil ) isopropoxicarbonilo, 1,1-difeniletil-l-oxicarbonilo, 1, 1-difenilpropil-l-oxicarbonilo, 2- ( 3 , 5-dimetoxifenil ) propil-2-oxicarbonilo ("Ddz"), 2-(p-toluil ) propil-2-oxicarbonilo, ciclopentaniloxicarbonilo, 1-metilciclopentaniloxicarbonilo, ciclohexaniloxicarbonilo, 1-metilciclohexaniloxicarbonilo, 2-metilciclohexaniloxicarbonilo, 2- ( 4-toluilsulfonil ) -etoxicarbonilo, 2- (metilsulfonil ) etoxicarbonilo , 2- ( trifenilfosfino) -etoxicarbonilo, 9-fluorenilmetoxicarbonilo ("Fmoc"), 2- (trimetilsilil ) etoxicarbonilo, aliloxicarbonilo , 1- ( trimetilsililmetil ) prop-l-eniloxicarbonilo, 5-benzisoxalilmetoxicarbonilo, 4-acetoxibencil-oxicarbonilo, 2,2, 2-tricloroetoxicarbonilo, 2-etinil-2-propoxicarbonilo, ciclopropilmetoxicarbonilo, isoborniloxicarbonilo, 1-piperidiloxicarbonilo, benciloxicarbonilo ("Cbz") , 4- fenilbenciloxicarbonilo, 2-metilbenciloxicarbonilo, a-2,4,5,-tetrametilbenciloxicarbonilo ("Tmz") , 4-metoxibenciloxicarbonilo , 4-fluorobenciloxicarbonilo , 4-clorobenciloxicarbonilo, 3-clorobenciloxicarbonilo , 2-clorobenciloxicarbonilo, 2 , 4 -diclorobenciloxicarbonilo , 4-bromobenciloxicarbonilo, 3-bromobenciloxicarbonilo, 4-nitrobenciloxi-carbonilo, 4-cianobenciloxicarbonilo, 4- ( deciloxi ) benciloxicarbonilo y los similares; el grupo benzoilmetilsulfonilo, ditiasuccinoilo ("Dts"), el grupo 2-(nitro) fenilsulfenilo ("Nps"), el grupo óxido de difenil-fosfina y grupos protectores amino similares. Por ejemplo, los grupos protectores amino se pueden elegir a partir de Boc, Cbz, y Fmoc. Más de una variedad del grupo protector amino se pueden emplear de manera que como el grupo amino derivado es estable a las condiciones de las reacciones posteriores y se pueden remover al punto apropiado sin fragmentar al resto de los compuestos. El término "aromático", como se usa en la presente, se refiere a un sistema de anillo aromático mono, bi, u otro multicarbociclico . El grupo aromático puede opcionalmente fusionarse a uno o más anillos elegidos de aromáticos, cicloalquilos , y heterociclilos . Los aromáticos pueden tener desde 5-14 miembros en el anillo, tal como, por ejemplo, desde 5-10 miembros en el anillo. Uno o más átomos de hidrógeno también se pueden reemplazar por un grupo substituyente seleccionado de acilo, acilamino, aciloxi, alquenilo, alcoxi, alquilo, alquinilo, amino, aromático, ariloxi, azido, carbamoilo, carboalcoxi, carboxi, carboxiamido , carboxiamino , ciano, cicloalquilo, amino disubstituido, formilo, guanidino, halo, heteroarilo, heterociclilo , hidroxi, iminoamino, amino monosubstituido , nitro, oxo, fosfonamino, sulfinilo, sulfonamino, sulfonilo, tio, tioacilamino , tioureido, y ureido. Los ejemplos no limitantes de grupos aromáticos incluyen fenilo, naftilo, indolilo, bifenilo, y antracenilo. Un "aminoácido aromático", como se usa en la presente, es un aminoácido que tiene una cadena lateral que comprende una estructura de anillo aromático. Los aminoácidos aromáticos incluyen, por ejemplo, histidina, tirosina, triptofano, fenilalanina , 1-naftilalanina, y 4-piridilalanina . "Grupo protector carboxi" se refiere a uno de los derivados de éster del grupo de ácido carboxilico comúnmente empleados para bloquear o proteger el grupo de ácido carboxilico mientras las reacciones se llevan a cabo en otros grupos funcionales en el compuesto. Los ejemplos de tales grupos protectores de ácido carboxilico incluyen t-butilo, 4-nitrobencilo , 4-metoxibencilo, 3, 4-dimetoxibencilo, 2,4-dimetoxibencilo, 2 , 4 , 6-trimetoxibencilo, 2,4,6-trimetilbencilo, pentametilbencilo, 3, 4-metilendioxibencilo, benzhidrilo, 4 , 4 ' -dimetoxitritilo, 4 , 4 ' , 4"-trimetoxitritilo, 2-fenilpropilo, trimetilsililo, t-butildimetilsililo, fenacilo, 2 , 2 , 2-tricloroetilo, ß- (trimetilsilil ) etilo, beta-(di (n-butil) metilsilil) etilo, p-toluensulfoniletilo, 4-nitrobencilsulfoniletilo, alilo, cinamilo, 1-(trimetilsililmetil) -propenilo y porciones similares. La especie de grupo protector carboxi empleadas no es critica con tal de que el ácido carboxilico derivado sea estable a las condiciones de reacciones posteriores y puede removerse en el punto apropiado sin disrumpir el resto de la molécula. Los ejemplos adicionales de estos grupos se encuentran en E. Haslam, Protective Groups in Organic Chemistry, J. G. W. McOmie, Ed., Plenum Press, New York, N. Y. (1973), Cápitulo 5, y T. W. Greene, Protective-Groups in Organic Synthesis, 2nd ed., John iley and Sons, New York, N.Y. (1991), Cápitulo 5. Un término relacionado es "carboxi protegido", que se refiere a un grupo carboxi substituido con uno de los grupos protectores carboxi descritos arriba. "Enlace", "enlazado", y "unión" se refiere a una interacción no covalente entre un polipéptido y otra molécula biológicamente activa que es dependiente de la complementariedad química y estérica de las dos moléculas. La complementariedad química y estérica de polipéptidos se determina por una secuencia de aminoácido específica. "Moléculas biológicamente activas" se refiere a péptidos, ácidos nucleicos, y/o moléculas pequeñas, tales como moléculas orgánicas e inorgánicas pequeñas asi como fragmentos de las mismas, capaces de tratar una enfermedad o condición al realizar una función o una acción, o estimular o responder a una función, una acción o una reacción, en un contexto biológico (por ejemplo, en un organismo, una célula, o un modelo in vitro del mismo) . Un "puente" se refiere a un enlace covalente entre dos aminoácidos no adyacentes, análogos de aminoácido, u otras porciones químicas en un péptido. El puente puede ser, por ejemplo, un puente estructura a estructura, cadena lateral a estructura, o cadena lateral a cadena lateral. El puente se puede preparar por una reacción de ciclización que resulta en la formación de una amida nueva, éster, éter, tioéter, alqueno, o enlace de disulfuro. Un puente estructura a estructura, por ejemplo, resulta de la formación de una lactama en las terminaciones N y C. Un "péptido cíclico" se refiere a un péptido que tiene un enlace intramolecular ponteado de dos aminoácidos no adyacentes . Un "dimero" de péptido como se usa en la presente, es una molécula que comprende una primera y segunda cadena de péptido que puede ser la misma o diferente. El dimero puede comprender además al menos una ligadura opcional para la cual los dos péptidos se enlazan covalentemente . Un "dipéptido mimético" es substancialmente similar (por ejemplo, su stancialmente isoestérico, o tiene una posición u orientación substancialmente similar) a un dipéptido tal como, por ejemplo, glicilglicina. El dipéptido mimético puede comprender cualquier combinación de moléculas ligadas de manera que las limitaciones estructurales enlistadas arriba, se reconocen. Los imitadores de dipéptido pueden tener una o más ligaduras de péptido opcionalmente reemplazadas por una ligadura seleccionada de, por ejemplo, : -CH2NH-, -CH2S-, -CH2-CH2-, -CH=CH- (cis y trans) -COCH2-CH (OH) CH2-, y -CH2 SO-, por métodos bien conocidos en la técnica. La persona experimentada reconocerá que los imitadores de dipéptido también incluyen, por ejemplo, imitadores que se vuelven ß. Ver, por ejemplo, R. M. Friedinger, J. Med. Chem. 46:5553-5566 (2003), y S. Hanessian, Tetrahedron 53:12789-12854 (1997). Los ejemplos no limitantes de imitadores de dipéptido incluyen : (lactama D-L-Friedinger); (lactama L,L-Friedinger); ácido (3S) -3-amino-2-oxo-l-piperidin-acético y ácido ( 3R) -3-amino2-oxo-l-piperidin-acético ; - ácido ( 3S ) -3-amino-2-oxo-l-azepin acético y ácido (3R)- 3-amino-2-oxo-l-azepin acético; - ácido ( 3S ) -3-amino-2-oxo-l-pirrolidin acético y ácido (3R) -3-amino-2-oxo-l-pirrolidin acético; - ( 3R) -3-amino-l-carboximetil-valerolactama ; y - 3-amino-N-l-carboximetil-2 , 3 , 4 , 5-tetrahidro-lH- [ 1 ] - benzazepin-2-ona . El término "puente de disulfuro" se refiere al enlace covalente formado entre los grupos sulfhidrilo (esto es, tiol o mercaptano) de 2 aminoácidos (tales como, por ejemplo, cisteina, penicilamina , y homocisteina ) durante la oxidación.

Un puente de disulfuro puede pontearse dos aminoácidos contenidos en el mismo péptido lineal, resultando en la ciclización del péptido lineal. Un puente de disulfuro también puede formarse entre dos péptidos, por ello produce un dimero de péptido. Un "dominio" es una región de un péptido o péptidos que tienen algunas características físicas o papel distinto incluyendo, por ejemplo, una estructura de pliegue independientemente compuesta de una sección de una cadena de péptido. Un dominio puede enlazarse a otro dominio que es el mismo diferente. Un dominio puede contener la secuencia de la característica física distinta del péptido o puede contener un fragmento de la característica física que retiene sus características de enlace (esto es, puede enlazar a una segundo dominio) . "Dosis efectiva", "cantidad efectiva", "cantidad terapéuticamente efectiva", y los similares, se refieren a una cantidad de un agente suficiente para proporcionar un cambio fisiológico, farmacológico, y/o cognitivo deseado que puede variar dependiente del paciente, la enfermedad, y el tratamiento. La cantidad puede ser ya sea una dosis para el tratamiento de un sujeto que se cree que tiene un trastorno particular, en cuyo caso deberá suficientemente aliviar o mejorar los síntomas del trastorno o condición, o ser una dosis profiláctica, en cuyo caso deberá ser suficiente para prevenir, parcialmente o completamente, la aparición de los síntomas en el sujeto. El término "fusión", como se usa en la presente, se refiere a un conjugado covalente entre un péptido de la invención y otra molécula, que puede ser, por ejemplo, una proteína, un péptido, una molécula pequeña, un polímero (por ejemplo, polietilen glicol o un polisacárido) , o un ácido nucleico. Una molécula pequeña de péptido o fusión de polímero de péptido se puede preparar sintéticamente, mientras una proteína de péptido o fusión de péptido a péptido se puede preparar por conjugación química o por expresión en una célula hospedera apropiada. Los términos "modular", "modulado" y "modulación" se refiere al incremento o disminución de un nivel de un péptido activo. La modulación puede ocurrir directamente o indirectamente . El término "multímero", como se usa en la presente, se refiere a una molécula que comprende cadenas de péptido múltiples, que puede ser iguales o diferentes. El multímero puede comprender además al menos una ligadura opcional para la cual al menos al menos dos péptidos se enlazan covalentemente . Un multímero puede ser, por ejemplo, un dímero, trímero, o tetrámero. Una ligadura puede ser, por ejemplo, una ligadura bis-tiol, una ligadura tris-tiol, una ligadura tetratiol, una ligadura de ácido dicarboxílico, una ligadura de ácido tricarboxilico, una ligadura de ácido tetracarboxilico, una ligadura de amina, una ligadura de triamina, o una ligadura de tetraamina . El término "péptido" se refiere a moléculas que comprenden aminoácidos, incluyendo, por ejemplo, aminoácidos L y D, enlaces de amida a través de acoplamiento lineal. Los péptidos pueden contener adicionalmente derivados de aminoácido o porciones de no aminoácido tales como, por ejemplo, imitadores de dipéptido. Un péptido de la invención puede estar en el intervalo desde, por ejemplo, 2-100, 5-30, 7-50, 10-30, o 10-50 aminoácidos (inclusive) en longitud, tales como, por ejemplo, desde 11-35 aminoácidos. Los péptidos pueden comprender modificaciones adicionales, tales como, por ejemplo, glicosilación, acetilación, fosforilación, PEGilación, lipidación, o conjugación con una molécula orgánica o inorgánica. "Cargado positivamente", como se usa en la presente, se refiere a un aminoácido, imitador de aminoácido, o porción química que se carga positivamente en un pH mayor que 6, tales como, por ejemplo, desde pH 6-8, 6-9, 7-8, ó 7-9. Por ejemplo, aminoácidos cargados positivamente incluyen lisina, arginina, y ácido 2 , 4-diaminobutírico . El término "aminoácido aromático cargado positivamente" se refiere a un aminoácido que es cargado positivamente en un pH mayor que 6, tales como, por ejemplo, desde pH 6-8, 6-9, 7- 8, ó 7-9. Por ejemplo, aminoácidos aromáticos cargados positivamente incluyen histidina, 4-aminofenilalanina, y 4-guanilfenilalanina . Una secuencia de aminoácido que es " substancialmente idéntica" para una secuencia dada puede ser, al menos 60%, 64%, 70%, 75%, 76%, 80%, 82%, 85%, 88%, 90%, 94%, 95%, 97%, 98%, ó 99% idéntica a la secuencia dada. Puede derivarse de la secuencia dada por truncamiento, eliminación, substitución, o adición de al menos un aminoácido, y/o puede diferir de una secuencia dada por, por ejemplo, la adición, eliminación, o substitución de al menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, u 8 aminoácidos. "Tratar", "tratamiento", y "tratado" se refiere a la reducción en severidad o duración de una enfermedad o condición; el alivio de uno o más síntomas asociados con una enfermedad o condición; con la condición de que los efectos sean benéficos para un sujeto con enfermedad o condición, sin curar necesariamente la enfermedad o condición; o la prevención de una enfermedad o condición. Un "trímero" de péptido es una molécula que comprende una primera, segunda y tercera cadena de péptido, que puede ser la misma o diferente. Un trímero de péptido puede comprender además al menos una ligadura opcional para la cual al menos dos de los péptidos se enlazan covalentemente .

II . Péptidos de la invención Los péptidos de la invención se han evaluado en la base de afinidad relativa para FcRn y capacidad para bloquear la porción Fe de IgG a partir del enlace a FcRn. Los péptidos que demuestran la capacidad para enlazar FcRn y/o bloquear el enlace de FcRn a la porción Fe de IgG porta ciertos estados o característica de secuencia. Así, una modalidad de la invención proporciona un péptido capaz de inhibir el enlace de la porción Fe de un IgG humana para el receptor neonatal Fe humano, que comprende la secuencia: —Gly-X6-X7-X8-X9~Xio— Xn - en donde: -Xe se elige a partir de aminoácidos cargados positivamente, aminoácidos aromáticos, aminoácidos aromáticos cargados positivamente, y análogos de los mismos; -X se elige a partir de fenilalanina y análogos de fenilalanina , -Xe y X9 son cada uno independientemente elegidos a partir de glicina, sarcosina, ácido aspártico, aminoácidos D, ácido a-aminoisobutírico, y análogos de los mismos, o X8 , cuando se toma junto con X9 , forma un dipéptido mimético; -X10 es elige a partir de aminoácidos y análogos de los mismos, o X10 , cuando se toma junto con X9 , forma un dipéptido mimético; -X11 se elige a partir de tirosina y análogos de tirosina; y En ciertas modalidades, el péptido está en el intervalo desde 7 hasta 50 aminoácidos de longitud y el enlace a FcRn humano, previene el FcRn del enlace a IgG humana. En una modalidad ejemplar, un péptido de la invención comprende : Gly-Xe-Phe-Xs-Xg-Xio-Tyr. En otra modalidad, los péptidos de la invención se pueden representar por la fórmula: Ri_Gly-Xg-X7-Xg-X9-Xio_Xii_R2 en donde : -Ri tiene la fórmula X!-X2-X3-X4 en donde -Xi se elige a partir de hidrógeno, acilo, y grupos protectores de aminoácido; -X2 está ausente o se elige a partir de aminoácido y péptidos de 2-15 aminoácidos de longitud; -X3 está ausente o es un aminoácido que es capaz de formar un puente con ??0, Xi2 o X13, en donde el puente se elige a partir de una terminación amino para el puñete de terminación carboxi, una cadena lateral para puente de estructura, y una cadena lateral para puente de cadena lateral; -X4 está ausente o se elige a partir de aminoácido y péptidos de 2-15 aminoácidos de longitud; -X6, -X7, -Xs r -Xio y -Xii son como se definen arriba; y -R2 tiene la fórmula -Xi2-Xi3-Xi -Xi5 en donde -X12 está ausente o es un aminoácido; - i3 está ausente o es un aminoácido; -Xi4 está ausente o se elige a partir de aminoácido y péptidos de 2-15 aminoácidos de longitud; y -Xi5 es un grupo amino o un grupo protector carboxi. El término "aminoácido" como se usa para definir los péptidos de la invención incluyen análogos de aminoácido. En una modalidad, Xg es un aminoácido cargado positivamente elegidos de lisina, ornitina, ácido 2,4-diaminobutirico, ácido 2 , 3-diaminopropionico , arginina, guanilalanina, y análogos de los mismos. En otra modalidad, ? es un aminoácido aromático elegidos de tirosina, triptofano, fenilalanina, y análogos de los mismos. En otra modalidad, ? ? es un aminoácido aromático cargado positivamente elegido de histidina, 1-metilhistidina , 2-piridilalanina , 3-piridilalanina, 4-piridilalanina, 4-aminofenilalanina, 4-guanilfenilalanina , tiazolilalanina, y análogos de los mismos. En otra modalidad, X¾ es 4-guanilfenilalanina . En otra modalidad, X6 se elige de histidina, 3-piridilalanina, 4-piridilalanina , 4-guanilfenilalanina, y análogos de los mismos . Los análogos de histidina ejemplares se eligen de, pero no se limitan a: ácido diaminobutirico ; tiazolilalanina ; ácido 2 , 3-diaminopropionico; guanilalanina ; 2-piridilalanina ; 3-piridilalanina ; tienilalanina; ornitina; 4-guanilfenilalanina; 1-metilhistidina; 4 -aminofenilalanina; 2-pirrolidinilalanina ; 3-piperidilalanina; y 4-piperidilalanina . Los derivados de fenilalanina ejemplares pueden elegirse de, pero no limitados a 4-aminofenilalanina; pentafluorofenilalanina ; 2-piridilalanina; 3-piridilalanina; 4-nitrofenilalanina ; 1-naftilalanina ; homofenilalanina; fenilglicina ; 2-metilfenilalanina ; 3-metilfenilalanina ; 4-metilfenilalanina ; 2-clorofenilalanina ; 3-clorofenilalanina ; 4-clorofenilalanina; 3, 3-di-fenilalanina ; 4, 4-bi-fenilalanina; 4-t-butilfenilalanina; ciclohexilalanina ; ( 4-aminoacetil ) -fenilalanina; ácido L-1, 2, 3, -tetrahidroisoquinolin-3-carboxilico; D-betametilfenilalanina ; y L-betametilfenilalanina . En una modalidad, Xio se elige de aminoácidos neutrales e hidrofóbicos , y análogos de los mismos. En una modalidad, X2 se elige de un aminoácido y péptidos de 2 ó 3 aminoácidos de longitud. En una modalidad, X2 incluye al menos un aminoácido hidrofóbico. En otra modalidad, X2 es un aminoácido o un péptido de 2-15 aminoácidos de longitud, en donde el aminoácido de terminal carboxi es un aminoácido hidrofóbico . En una modalidad, X4 es un aminoácido o un péptido de 2- aminoácidos de longitud, en donde el aminoácido de terminal carboxi es N-metilado. En una modalidad, el péptido es lineal. En otra modalidad, al menos uno de Xio, ??2, o Xi3 es un aminoácido que es capaz de formar un puente con X3, en donde el puente se elige de una terminación amino para puente de terminación carboxi, una cadena lateral para puente de estructura, y una cadena lateral para puente de cadena lateral. En una modalidad, el puente es un puente de cadena lateral a cadena lateral, que puede ser un puente de disulfuro, un puente de éter, un puente de tioéter, un puente de alqueno, o un puente amida . En una modalidad, el puente de cadena lateral a cadena lateral es un puente de disulfuro entre: cisteina y cisteina; cisteina y homocisteina; cisteina y penicilamina; homocisteina y homocisteina; homocisteina y penicilamina; o penicilamina y penicilamina. En otra modalidad, el puente de cadena lateral a cadena lateral es un puente amida entre: ácido aspártico y lisina; ácido aspártico y ornitina; ácido aspártico y ácido 2,4-diaminobutirico; ácido aspártico y ácido 2, 3-diaminopropionico; ácido glutámico y lisina; ácido glutámico y ornitina; ácido glutámico y ácido 2, 4-diaminobutirico; o ácido glutámico y ácido 2, 3-diaminopropionico. En una modalidad, el péptido comprende al menos una cisteina (por ejemplo, en X3) o análogo de cisteina elegido de: homocisteína, D-cisteína, and penicilamina . En una modalidad, al menos uno de X8 y X9 es un aminoácido D o se elige de: glicina, ácido a-aminoisobutírico, y sarcosina. En una modalidad, Xg, tomado junto con Xg, forma un dipéptido mimético elegido de: - beta-alanina ; - ácido 4-aminobutanoico; - ácido 5-aminopentanoico; - ácido 3- ( aminometil ) benzoico ; - ácido 4- (aminometil) benzoico; - ácido 3- ( aminofenil ) acético ; - ácido 4- (aminofenil) acético; ácido 3-amino-2-oxo-l-piperidin-acético; ácido (3S) -3-amino-2-oxo-l-piperidin-acético y ácido ( 3R) -3-amino-2-oxo-l-piperidin-acético; - ácido ( 3S ) -3-amino2-oxo-l-azepin acético y ácido (3R)-3-amino-2-oxo-l-azepin acético; - ácido ( 3S ) -3-amino-2-oxo-l-pirrolidin acético y ácido (3R) -3-amino-2-oxo-l-pirrolidin acético; - ( 3R) -3-amino-l-carboximetil-valerolactama ; y 3-amino-N-l-carboximetil-2 , 3,4, 5-tetrahidro-lH- [ 1 ] -benzazepin-2-ona . En algunas modalidades, el péptido comprende al menos un análogo de fenilalanina fenilalanina elegido de: triptofano; tirosina; 2-aminofenilaianina ; 3-aminofenilalanina ; 4-aminofenilalanina ; pentafluorofenilalanina ; 2-piridilalanina; 3-piridilalanina ; 4-nitrofenilalanina; 1-naftilalanina ; homofenilalanina ; fenilglicina ; 2-metilfenilalanina ; 3-metilfenilalanina ; 4-metilfenilalanina; 2-clorofenilalanina ; 3-clorofenilalanina ; 4-clorofenilalanina; 3, 3-difenilalanina ; 4 , 4 ' -bifenilalanina ; 4 -t-butilfenilalanina ; ciclohexilalanina ; (4-aminoacetil) fenilalanina; ácido L-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-3-carboxílico; D-beta-metilfenilalanina ; y L-beta-metilfenilalanina . En algunas modalidades, el péptido comprende al menos un análogo de tirosina elegido de: fenilalanina; 4-aminofenilalanina ; 4 -metoxifenilalanina ; pentafluorofenilalanina ; 2-piridilalanina; 3-piridilalanina; 4-piridilalanina; 4- nitrofenilalanina; 2-nitrotirosina; y 4-fluorofenilalanina . En una modalidad, X9 y X10 tomados juntos, forman un dipéptido mimético elegidos de: lactama de D,L-Friedinger - lactama L,L-Friedinger En ciertas modalidades, el péptido de la invención comprende al menos un análogo de histidina elegido de: ácido 2 , 4 -diaminobutirico ; tiazolilalanina ; ácido 2,3-diaminopropionico; guanilalanina ; 2-piridilalanina ; 3-piridilalanina ; 4-piridilalanina; tienilalanina; ornitina; lisina; arginina; 4-guanilfenilalanina; 1-metilhistidina ; 3-metilhistidina ; 1 , 3-dimetilhistidina ; 4-aminofenilalanina; 2-pirrolidinilalanina; 3-piperidilalanina ; y 4-piperidilalanina .

En ciertas modalidades, el número de aminoácidos entre aquellos aminoácidos que forman un puente en el intervalo desde 6-12. En otras modalidades, ocho o nueve aminoácidos existen entre aminoácidos que forman un puente. En algunas modalidades los péptidos de la invención sn al menos siete y tanto como 50 aminoácidos de longitud. En otras modalidades los péptidos son desde 11 y 35 aminoácidos de longitud . En ciertas modalidades, los péptidos de la invención existen como un multimero, tal como un dimero, un trímero o un tetrámero. Los péptidos de un multimero pueden ser los mismos o diferentes. En una modalidad, el péptido es un dimero, tal como un dimero que es el producto de alquilación reductiva. En otra modalidad, el dimero es el producto de una reacción entre monómeros de péptido individuales y una ligadura multivalente . En una modalidad, la ligadura multivalente se elige de ligaduras de tiol, ácido, alcohol, y amina. En otra modalidad, el dimero es el producto de una reducción de alquilación, tal como, por ejemplo, la reacción de alquilación de un tiol y un haluro alquilo. En una modalidad, los péptidos se sintetizan en la resina, y luego se multimerizan (por ejemplo, dimerizados) por la reacción con una ligadura multivalente, tal como, por ejemplo, una ligadura multivalente de ácido o amina, como se describe en el Ejemplo 15. En algunas modalidades, el péptido de la invención comprende al menos 2 de las modificaciones descritas arriba. En ciertas modalidades, los péptidos de la invención comprenden: a) una secuencia de aminoácido elegida de: QRFCTGHFGGLYPCNGP (SEQ ID NO: 1), GGGCVTGHFGGIYCNYQ (SEQ ID N0:2), KIICSPGHFGGMYCQGK (SEQ ID N0:3), PSYCIEGHI DGIYCFNA (SEO ID NO: 4), y NSFCRGRPGHFGGCYLF (SEQ ID NO: 5); y b) una secuencia de aminoácido que es substancialmente idéntica a uno o más de SEQ ID NO:l, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, y SEQ ID NO : 5. En algunas modalidades, el péptido comprende una secuencia de aminoácido que es al menos 64%, al menos 70%, al menos 76%, al menos 82%, al menos 68%, al menos 94%, ó 100% idéntica a uno o más de SEQ ID NO:l, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, y SEQ ID NO: 5. En otras modalidades, el péptido de la invención puede comprender SEQ ID NO:l, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, o SEQ ID NO: 5 que tiene al menos uno o tanto como cinco mutaciones de eliminación, substitución, o adición. Todos los péptidos de la invención inhiben el enlace de FcRn humano a IgG. En algunas modalidades, un péptido de la invención puede comprende SEQ ID NO:l, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, o SEQ ID NO: 5 modificado por al menos una substitución de aminoácido conservadora. En ciertas modalidades, un péptido de la invención puede comprender SEQ ID N0:1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, o SEQ ID NO: 5 modificado por al menos una substitución de aminoácido, en donde el aminoácido es substituido con un aminoácido que se presenta naturalmente. En algunas modalidades, un péptido de la invención puede tener SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID NO : 3 , SEQ ID NO : 4 , o SEQ ID NO: 5 modificado por al menos una substitución de aminoácido, en donde el aminoácido es substituido con un aminoácido D. En algunas modalidades, un péptido de la invención puede tener SEQ ID NO:l, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, o SEQ ID NO: 5 modificado por al menos una substitución de aminoácido, en donde el aminoácido es substituido con un aminoácido metilado por N. En algunas modalidades, un péptido de la invención puede tener SEQ ID NO:l, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO: 4, o SEQ ID NO: 5 modificado por al menos una substitución de aminoácido, en donde el aminoácido es substituido con un aminoácido que no se presenta naturalmente. En ciertas modalidades, un péptido de la invención puede tener SEQ ID NO:l, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, o SEQ ID NO: 5 modificado por al menos una substitución de aminoácido, en donde el aminoácido es substituido con un imitador de aminoácido . Alternativamente, los péptidos de la invención pueden comprender una secuencia de aminoácidos elegido de la Tabla 1 que es capaz de enlazarse a FcRn, por ello inhibe FcRn enlazado a la porción Fe de una molécula IgG. La invención incluye además péptidos que comprenden una variante del listado de secuencias en la Tabla 1, en donde las variantes incluyen, pero no se limitan a: truncaciones ; péptidos que portan al menos 68%, 72%, 76%, 80%, 84%, 88%, 92%, ó 96%, de identidad con al menos uno de los péptidos de la Tabla 1. Las variantes también incluyen péptidos que comprenden un listado de secuencias en la Tabla 1 que contienen al menos una substitución de aminoácido, en donde el aminoácido es substituido con un aminoácido que se presenta naturalmente, un aminoácido que no se presenta naturalmente, un análogo de aminoácido, o un imitador de aminoácido.

Tabla 1 En una modalidad, los péptidos de la invención pueden comprender una secuencia de aminoácidos enlistada en la Tabla 1 que tiene 1, 2, 3, 4, 5, 6, o más substituciones de aminoácido conservadoras. En otra modalidad, los péptidos de la invención pueden comprender una secuencia de aminoácidos enlistada en la Tabla 1 que se ha substituido con 1, 2, 3, 4, 5, 6, o más aminoácidos que se presentan naturalmente. En algunas modalidades, los péptidos de la invención pueden comprender una secuencia de aminoácidos enlistada en la Tabla 1 que se ha substituido con 1, 2, 3, 4, 5, 6, o más aminoácidos que no se presentan naturalmente. En otra modalidad, los péptidos de la invención pueden comprender una secuencia de aminoácidos enlistados en la Tabla 1 que se han substituido con 1, 2, 3, 4, 5, 6, o más aminoácidos N-metilados. En otra modalidad, los péptidos de la invención pueden comprender una secuencia de aminoácidos enlistados en la Tabla 1 que se han substituido con 1, 2, 3, 4, 5, 6, o más aminoácidos en la configuración D. Aún en otra modalidad, los péptidos de la invención pueden comprender una secuencia de aminoácidos enlistados en la Tabla 1 que se han substituido con 1, 2, 3, 4, 5, 6, o más imitadores de aminoácido. Las modalidades ejemplares de la invención se proporcionan a continuación. Muchas de estas modalidades abarcan las secuencias de aminoácido enlistadas en la Tabla 1 modificadas para incluir una o más substituciones de aminoácido. Mientras estas modalidades proporcionan ejemplos de substituciones adecuadas, deberá entenderse que otras substituciones que no destruyen la actividad biológica de los péptidos se abarcan por la invención. En una modalidad ejemplar, un péptido de la invención comprende la secuencia de aminoácido de SEQ ID NO: 6 modificada con substitución de Cisteina a Penicilamina en la posición 6 y una substitución de glicina a Sarcosina en la posición 12 (en donde las posiciones de los aminoácidos se basan en el número de aminoácido en SEQ ID NO: 6). En otra modalidad, un péptido comprende el aminoácido de SEQ ID NO: 6 modificado con una substitución de cisteina a Penicilamina en la posición 6 y una substitución de Leucina a N-metilleucina en la posición 13. En otra modalidad, un péptido de la invención puede comprender la secuencia de aminoácido de SEQ ID NO: 6 modificada con una substitución de cisteina a Penicilamina en la posición 6, las substituciones de tanto las glicinas en las posiciones 11 y 12, respectivamente para una ( 3R) -amino-1-carboximetil-2-valerolactama sencilla; como una substitución de Leucina a N-metil leucina en la posición 13. En una modalidad, un péptido de la invención puede comprender la secuencia de aminoácido de SEQ ID NO: 6 modificada con una substitución de cisteina a Penicilamina en la posición 6, una substitución de glicina a sarcosina en la posición 12 y una substitución de Leucina a N-metilleucina en la posición 13. En otra modalidad, un péptido de la invención puede comprender la secuencia de aminoácido de SEQ ID NO: 6 modificada con una substitución de cisteina a Penicilamina en la posición 6, las substituciones de tanto las glicinas en las posiciones 11 y 12, respectivamente para una ( 3R) -amino-1-carboximetilcaprolactama sencilla y una substitución de Leucina a N-metileucina en la posición 13. En una modalidad, un péptido de la invención puede comprender la secuencia de aminoácido de SEQ ID NO: 6 modificada con una substitución de cisteina a Penicilamina en la posición 6, una substituición de histidina a 3-piridilalanina en la posición 9, una substitución de glicina a sarcosina en la posición 12 y una leucina a N-metileucina en la posición 13. En otra modalidad, un péptido de la invención puede comprender la secuencia de aminoácido de SEQ ID NO: 6 modificada con una substitución de cisteina a Penicilamina en la posición 6, una substitución de histidina a 4-guanilfenilalanina en la posición 9, una substitución de glicina a sarcosina en la posición 12 y una leucina a N-metileucina en la posición 13. Aún en otra modalidad, un péptido de la invención puede comprender la secuencia de aminoácido de SEQ ID NO: 6 modificada con una substitución de cisteina a penacilamina en la posición 6, una substitución de histidina a 4-piridilalanina en la posición 9, una substitución de glicina a sarcosina en la posición 12 y una leucina a N-metileucina en la posición 13. En ciertas modalidades, los péptidos de la invención pueden existir como un multimero, tal como un dimero, trímero, o tetrámero. Los péptidos del multimero pueden ser los mismos o diferentes. Los péptidos pueden multimerizarse como se describe arriba y en los Ejemplos asegurados. En una modalidad, la afinidad de los péptidos de la invención para FcRn se representará por KD con un valor en el intervalo desde 50 fM hasta 1 mM. En otra modalidad, la afinidad de los péptidos de la invención se representará por un KD con un valor en el intervalo desde 50 fM hasta 100 µ?, o un valor en el intervalo desde 50 fM hasta 1 nM, o un valor en el intervalo desde 1 pM hasta 1 nM. En otra modalidad, una composición comprende al menos al menos uno de los péptidos de la invención modulará la concentración de suero de IgG. En una modalidad, los péptidos de la invención pueden bloquear una región constante IgG del enlace a FcRn al enlazar a al menos un aminoácido de FcRn que también interactúa específicamente con una región constante IgG.

III . Métodos para hacer los péptidos de la invención 1. Métodos generales de péptidos sintetizados de la invención Los péptidos de la invención se pueden sintetizar usando técnicas bien conocidas en la técnica. Por ejemplo, los péptidos de la invención que se componen enteramente de aminoácidos que se presentan naturalmente se pueden sintetizar recombinantemente en células usando polinucleótidos que codifican el péptido. Ver, por ejemplo, Sambrook et al., Molecular Cloning A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, N.Y. (1989) and Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and iley Interscience , N.Y. (1989) . Alternativamente, los péptidos de la invención se pueden sintetizar usando métodos sintéticos conocidos tal como síntesis de fase sólida. Las técnicas sintéticas son bien conocidas en la técnica. Ver por ejemplo, Merrifield, Chemical Polypept ides , Katsoyannis and Panayotis eds . pp. 335-61 (1973) ; Merrifield, J. Am . Chem. Soc. 85:2149 (1963) ; Davis et al., Biochem. Intl. 10:394 (1985) ; Finn et al., The Proteins (3d ed.) 2:105 (1976) ; Erikson et al., The Proteins (3d ed.) 2:257 (1976) . Los protocolos Fmoc/tBu estándar se pueden usar como se describe en W. C. Chan and P. D. White eds. Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach Oxford University Press Inc. New York (2000) y la Patente de E.U.A. No. 3,941 ,763. Alternativamente, las proteínas quiméricas de la invención se pueden sintetizar usando una combinación de métodos sintéticos y re comb i nant e s . En ciertas solicitudes, puede ser benéfico para usar ya sea un método recombinant e , un método sintético o una combinación de métodos sintéticos y recombinantes . 2. Métodos para análogos de péptido sintetizados de los péptidos de la invención Como se usa en la presente, los veinte aminoácidos convencionales y sus abreviaturas seguido del uso convencional. Ver Immunology--A Synthesis, 2a Edición, E. S. Golub and D. R. Gren, Eds . , Sinauer Associates, Sunderland, Mass (1991). Los estereoisómeros (por ejemplo, aminoácidos D) de los veinte aminoácidos convencionales, aminoácidos no naturales tales como aminoácidos a, -di-substituidos , aminoácidos de N-alqilo, aminoácidos de N-metilo, ácido láctico, y otros aminoácidos no convencionales también pueden ser componentes adecuados para polipéptidos de la presente invención. Los ejemplos de aminoácidos no convencionales incluyen: ácido aminoisobutirico, 3-amino-l-carboximetilvalerolactama, 4-guanil-fenilalanina, ácido 5-aminopentanoico, 4-hidroxiprolina, ?-carboxiglutamato, e-N, N, N-trimetillisina, e-?-acetilisina, O-fosfoserina , N-acetilserina , N-formilmetionina, 3-metilhistidina , 5-hidroxilisina, s-?-metilarginina, penicilamina , sarcosina, y otros aminoácidos similares y ácidos imino (por ejemplo, 4-hidroxiprolina ) . En la notación de polipéptido usada en la presente, la dirección del lado izquierdo es la dirección de terminal amino y la dirección del lado derecho es la dirección de terminal carboxi, de acuerdo con el uso y convención estándar . Las substituciones de aminoácido conservadoras pueden abarcar residuos de aminoácido que no se presentan naturalmente, que se incorporan típicamente por síntesis de péptido químico en vez de por síntesis en sistemas biológicos. Estos peptidoimitadores incluidos y otras formas invertas o inversas de porciones de aminoácido. Los residuos que se presentan naturalmente se pueden dividir en clases basadas en propiedades de cadena lateral común : 1) hidrofóbicas : norleucina, Met, Ala, Val, Leu, lie; 2) hidrofóbicas neutrales: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; 3) ácidas: Asp, Glu; 4) básicas: His, Lys, Arg; 5) residuos que influyen en la orientación de la cadena: Gly, Pro; y 6) aromáticas: Trp, Tyr, Phe. Por ejemplo, las substituciones no conservadas pueden involucrar el intercambio de un miembro de una de estas clases para un miembro de otra clase. Al hacer tales cambios, de acuerdo a ciertas modalidades, el índice hidropático de aminoácido se puede considerar. A cada aminoácido se ha asignado un índice hidropático en la base de su hidrofobicidad y características de cambio. Existen: isoleucina (+4.5); valina (+4.2); leucina (+3.8); fenilalanina (+2.8); cisteína/cisteina (+2.5); metionina (+1.9); alanina (+1.8); glicina (-0.4); treonina (-0.7); serina (-0.8); triptofano (-0.9); tirosina (-1.3); prolina (-1.6); histidina (-3.2); glutamato (-3.5); glutamina {-3.5); aspartato (-3.5); asparagina (-3.5); lisina (-3.9); y arginina (-4.5). La importancia del índice de aminoácido hidropático en función biológica interactiva conferida en una proteína se entiende en la técnica. Kyte et al., J. Mol. Biol. 157:105-131 (1982). Se conoce que ciertos aminoácidos se pueden substituir por otros aminoácidos que tienen un índice o registro hidropático similar y todavía mantienen una actividad biológica similar. Al hacer los cambios con base en el índice hidropático, en ciertas modalidades, la substitución de aminoácidos aquellos índices hidropáticos que están dentro de +2 se incluye. En ciertas modalidades, aquellos que están dentro de ±1 se incluyen, y en ciertas modalidades, aquellos dentro de +0.5 se incluyen. También se entiende en la técnica que la substitución de los aminoácidos similares se pueden hacer efectivamente en la base de hidrofilicidad, particularmente donde la proteína o péptido biológicamente funcional por ello creado se pretende para usar en el enlace a un objetivo de proteína específica. Los siguientes valores de hidrofilicidad se han asignado a estos residuos de aminoácido: arginina (+3.0); lisina (+3.0); aspartato (+3.0 ± 1); glutamato ( +3.0 ± 1 ); serina (+0.3); asparagina (+0.2); glutamina (+0.2); glicina (0); treonina (-0.4); prolina (-0.5 ± 1); alanina (-0.5); histidina (-0.5); cisteina (-1.0); metionina (- 1.3); valina (-1.5); leucina (-1.8); isoleucina (-1.8); tirosina (-2.3); fenilalanina {- 2.5) y triptofano (-3.4). Al hacer los cambios basados en los valores de hidrofilicidad similar, en ciertas modalidades, la substitución de aminoácidos aquellos valores de hidrofilicidad están dentro de ±2 se incluyen, en ciertas modalidades, aquellos que están dentro de ±1 se incluyen, y en ciertas modalidades, aquellos dentro de ±0.5 se incluyen. Un experto podrá determinar variantes adecuadas del polipéptido como se establece en la presente usando técnicas bien conocidas. En ciertas modalidades, un experto en la técnica puede identificar áreas adecuadas de la molécula que se pueden cambiar sin destruir actividad al dirigir regiones no creíbles a ser importantes para la actividad. En ciertas modalidades, uno puede identificar residuos y porciones de las moléculas que se conservan entre polipéptidos similares. En ciertas modalidades, aún en áreas que pueden ser importantes para actividad biológica o para estructura pueden estar sujetos a conservadores de substituciones de aminoácido sin destruir la actividad biológica o sin afectar adversamente la estructura de polipéptido. Adicionalmente, un experto en la técnica puede revisar estudios de la función de estructura que identifican residuos en péptidos similares que son importantes para actividad o estructura. En vista de tal comparación, se puede predecir la importancia de residuos de aminoácido en un péptido que corresponde a residuos de aminoácido que son importantes para actividad o estructura en péptidos similares. Un experto en la técnica puede optar por substituciones de aminoácido químicamente similares para tales residuos de aminoácido importantes predichos. Un experto en la técnica puede también analizar la estructura de tercera dimensión y secuencia de aminoácido en relación a tal estructura en péptidos similares. Un experto en la técnica puede generar variantes de prueba que contienen una substitución de aminoácido sencillo en cada residuo de aminoácido deseado. Las variantes se pueden luego separar por exclusión usando ensayos de actividad conocidos por aquellos expertos en la técnica. Tales variantes podrían usarse para recoger información alrededor de variantes adecuadas. Por ejemplo, si uno descubre que un cambio para un residuo de aminoácido particular resulta en destruir, actividad indeseablemente reducida, o inadecuada, variantes con tal cambio se pueden evitar. En otras palabras, basado en información recogida de tales experimentos de rutina, un experto en la técnica puede determinar fácilmente los aminoácidos donde además substituciones deben evitarse ya sea solos o en combinación con otras mutaciones.

De acuerdo con ciertas modalidades, substituciones de aminoácidos pueden ser aquellas que: (1) reducen susceptibilidad a proteolisis, (2) reducen susceptibilidad a oxidación, (3) alterar afinidades de enlace asociadas con la función biológica, y/o (4) otorgar o modificar otras propiedades fisicoquímicas o funcionales en tales polipéptidos . De acuerdo con ciertas modalidades, substituciones de aminoácidos sencillas o múltiples (en ciertas modalidades, conservan substituciones de aminoácidos) se pueden hacer en la secuencia que se presenta naturalmente (en ciertas modalidades, en la porción del polipéptido exterior los dominios forman contactos intermoleculares). En ciertas modalidades, una substitución de aminoácido conservado típicamente no puede substancialmente cambiar las características estructurales de la secuencia precursora (por ejemplo, un reemplazo de aminoácido no podría romper una hélice que se presenta en la secuencia precursora, o perturba otros tipos de estructura secundaria que caracteriza la secuencia precursora). Los ejemplos de estructuras secundarias o terciarias de polipéptido reconocidos en la técnica se describen en Proteins, Structures and Molecular Principies, Creighton, Ed, W. H. Freeman and Company, New York (1984); Introduction to Protein Structure, C. Branden and J. Tooze, eds., Garland Publishing, New York, N. Y. (1991); and Thornton et al., Nature 354:105 (1991).

En ciertas modalidades, derivados de aminoácido comprenden modificaciones covalentes, que incluyen, pero no se limitan a, enlaces químicos con polímeros, lípidos, u otras porciones orgánicas o inorgánicas. En ciertas modalidades, un agente de enlace específico químicamente modificado puede tener mayor semivida circulante que un agente de enlace específico que no es químicamente modificado. En ciertas modalidades, un agente de enlace específico químicamente modificado puede tener mejora en la capacidad objetivo para células, tejidos, y/u órganos deseados. En ciertas modalidades, un agente de enlace específico derivado es covalentemente modificado para incluir una o más uniones de polímero soluble en agua, que incluye, pero no se limitan a, polietilen glicol, polioxietilen glicol, o polipropilen glicol. Ver, por ejemplo, Patentes de E.U.A Nos: 4,640,835; 4,496,689; 4,301,144; 4,670,417; 4,791,192; y 4,179,337. En ciertas modalidades, un agente de enlace específico derivado comprende uno o más polímeros, que incluyen, pero no se limitan a, monometoxi-polietilen glicol, dextrano, celulosa, u otros polímeros basados en carbohidrato, poli- (N-vinil pirrolidona ) -polietilen glicol, homopolímeros propilen glicol, un co-polímero de óxido de polipropileno/óxido de etileno, polioles polioxietilados (por ejemplo, glicerol) y polivinil alcohol, así como mezclas de tales polímeros. 3. Métodos para sintetizar análogos de los péptidos de la invención Los análogos de péptido se usan comúnmente en la industria farmacéutica como fármacos no péptidos con propiedades análogas a aquellas del péptido plantilla. Aquellos tipos de compuestos no péptidos se nombran "miméticos de péptido" o "peptidomiméticos . " Fauchere, J. Adv. Drug Res. 15:29 (1986); Veber and Freidinger, TINS p. 392 (1985); and Evans et al., J. Med. Chem. 30:1229 (1987), que se incorporan en la presente como referencia. Tales compuestos se desarrollan frecuentemente con la ayuda de modelación molecular computarizada . Los miméticos de péptido que son estructuralmente similares a péptidos terapéuticamente útiles se pueden usar para producir un efecto terapéuticamente o profilácticamente similar. Generalmente, peptidomiméticos son estructuralmente similares a un polipéptido de paradigma (esto es, un polipéptido que tiene una propiedad bioquímica o actividad farmacológica) , tal como anticuerpo humano, pero tiene una o más ligaduras de péptido opcionalmente reemplazadas por una ligadura seleccionada de: -CH2NH-, -CH2S-, -CH2-CH2-, -CH=CH-(cis y trans), -C0CH2-, -CH(OH)CH2-, y -CH2 SO-, por métodos bien conocidos en la técnica. La substitución sistemática de uno o más aminoácidos de una secuencia de consenso con un aminoácido D del mismo tipo (por ejemplo, 0-lisina en lugar de L-lisina) se puede usar en ciertas modalidades para generar más péptidos estables. Además, péptidos artificiales que comprenden una- secuencia de consenso o una variación de secuencia de consenso substancialmente idéntica se puede generar por métodos conocidos en la técnica (Rizo and Gierasch, Ann . Rev. Biochem. 61 :387 (1992), incorporada en la presente como referencia), tal como, por ejemplo, al agregar residuos de cisteina internos capaces de formar puentes de bisulfuro intramolecular que cicliza el péptido . La dimerización u oligomerización de péptidos puede aumentar la actividad de una secuencia de péptido de un receptor dado. Ver, por ejemplo, Johnson, et . al., Chem. Biol. 12:939 (1997) . Se prevé que los dimeros y multimeros de orden superior de los péptidos de la invención podrían sintetizarse usando una variedad de métodos bien conocidos en la técnica. Los dimeros o multimeros se podrían sintetizar directamente en un sintetizador de péptido automatizado como una secuencia de péptido continua. Alternativamente, multimeros de péptido se podrían sintetizar al reaccionar monómeros de péptido individuales con una porción de ligador multivalente . Ver, por ejemplo, Rose, J. Am. Chem. Soc. 116:30 (1994). Como otro ejemplo, multimeros de péptido se pueden sintetizar al incorporar grupos de ligador ramificados antes de la síntesis de la secuencia de péptido como en la síntesis de "péptidos antigénicos múltiples" (MAP) . D. Posnett et . al., J. Biol.

Chem. 263: 1719 (1988). La invención proporciona un método novedoso para formar aquellos dimeros de péptido implicados en reaccionar el término N de los péptidos, mientras que en resina, con una molécula de ligador, tal como, por ejemplo, ácido succinico, a fin de que los péptidos adyacentes en la perla de resina de fase sólida reaccionarán entre si y forman una dimero unido por el término N de péptidos. El desdoblamiento posterior de la resina proporciona un dimero de péptido ligado terminalmente a N. 4. Construcción de vectores de expresión para la expresión de péptidos de la invención Los ácidos nucleicos que codifican péptidos de la invención se pueden sintetizar por métodos estándar conocidos en la técnica, por ejemplo, al usar un sintetizador de ADN automatizado (tal como son comercialmente disponibles de Biosearch, Applied Biosystems, etc.). Los métodos adicionales de síntesis de ácido nucleico son conocidos en la técnica. Ver, por ejemplo, Patentes de E.U.A. Nos. 6,015,881; 6,281,331; 6,469,136. Para producción recombinante de péptidos de la invención, secuencias de polinucleótido que codifican los péptidos se insertan en vehículos de expresión apropiados, esto es, vectores que contienen los elementos necesarios para la transcripción y traducción de la secuencia de codificación insertada, o en el caso de un vector viral ARN, los elementos necesarios para replicación y traducción. Los ácidos nucleicos que codifican los péptidos de la invención se insertan en los vectores en el marco de lectura adecuado. Los vectores usados en la transformación por lo general contienen un marcador seleccionable usado para identificar transformantes. En sistemas de bacterias, esto puede incluir un gen de resistencia antibiótico tal como ampicilina o canamicina. Los marcadores seleccionables para uso en células de mamífero cultivadas incluyen genes que confieren resistencia a los fármacos, tal como neomicina, higromicina, y metotrexato. El marcador seleccionable puede ser un marcador seleccionable amplificable . Un marcador seleccionable amplificable es el gen DHFR o cADN DHFR. Simonsen and Levinson, Proc. Nati. Acad. Sci . USA 80:2495 (1983). Marcadores seleccionables se revisan por Thilly (Mammalian Cell Technology, Butterworth Publishers, Stoneham, MA (1986)) y la elección de marcadores seleccionables está dentro del nivel de un experto ordinario en la técnica. Los marcadores seleccionables se pueden también introducir en la célula en un plásmido separado al mismo tiempo como el gen de interés, o que se puede introducir en el mismo plásmido. Si en el mismo plásmido, el marcador seleccionable y el gen de interés pueden estar bajo el control de promotores diferentes o el mismo promotor, la última configuración que produce un mensaje bicistrónico . Los constructos de este tipo son conocidos en la técnica (por ejemplo, Patente de E.U.A. No. 4,713,339). Los elementos de expresión en sistemas de expresión varían en su fuerza y especificidad. Dependiendo en el sistema hospedero/vector utilizado, cualquiera de un número de elementos de transcripción y traducción adecuados, que incluyen promotores constitutivos e inducibles, se pueden usar en un vector de expresión. Por ejemplo, cuando la clonación en sistemas de bacterias, promotores inducibles tal como pL de bacteriófago ?, plac, ptrp, ptac (promoter híbrido ptrp-lac) , y similares se puede usar; cuando la clonación en sistemas de célula de insectos, promotores tal como el promotor poliédrico de baculovirus se puede usar; cuando la clonación en sistemas de célula de plantas, promotores derivados del genoma de células de planta (por ejemplo, promotores de choque de calor; el promotor para la subunidad pequeña de RUBISCO; el promotor para la proteína de enlace clorofila a/b) o de virus de la planta (por ejemplo, el promotor 35S ARN de CaMV; el promotor de proteína recubierta de TMV) se puede usar; cuando la clonación en sistemas de célula de mamíferos, promotores derivados del genoma de células de mamífero (por ejemplo, promotor metalotioneina ) o de virus de mamífero (por ejemplo, el último promotor de adenovirus; el promotor de virus de vacuna 7.5 K) se puede usar; cuando se generan líneas celular que contienen copias múltiples de producto de expresión, vectores basados en SV40-, BPV- y EBV- se pueden usar con un marcador selecciónatele apropiado. En casos donde vectores de expresión de planta se usan, la expresión de secuencias que codifican formas lineales o no ciclizadas de las proteínas quiméricas de la invención se pueden llevar por cualquiera de un número de promotores. Por ejemplo, promotores virales tal como los promotores 35S ARN y 19S ARN de CaMV (Brisson et al., Nature 310: 511-514 (1984)), o el promotor de proteína recubierta de TMV (Takamatsu et al., EMBO J. 6: 307-311 (1987)) se pueden usar; alternativamente, promotores de planta tal como la subunidad pequeña de RUBISCO (Coruzzi et al., EMBO J. 3: 1671-1680 (1984); Broglie et al., Science 224: 838-843 (1984)) o promotores de choque de calor, por ejemplo, frijol de soya hspl7.5-E o hspl7.3-B (Gurley et al., Mol. Cell. Biol. 6: 559-565 (1986)) se pueden usar. Aquellos constructos se pueden introducir en células de planta usando plásmidos Ti, plásmidos Ri, vectores de virus de planta, transformación directa de ADN, microinyección, electroporación, etc. Weissbach & eissbach, Methods for Plant Molecular Biology, Academic Press, NY, Section VIII, pp. 421 -463 (1988) y Grierson & Corey, Plant Molecular Biology, 2d Ed., Blackie, London, Ch . 7-9 (1988). En un sistema de expresión de insectos que se puede usar para producir las proteínas quiméricas de la invención, virus de polihidrosis nuclear de Autographa californica (AcNPV) se usa como un vector para expresar los genes extraños. El virus crece en células de Spodoptera frugiperda. Una secuencia de codificación se puede clonar en regiones no esenciales (por ejemplo, el gen poliédrico) de los virus y colocar bajo control de un promotor AcNPV (por ejemplo, el promotor poliédrico) . La inserción exitosa de una secuencia de codificación resultará en inactivación del gen de poliédrico y producción de virus recombinante no ocluido (esto es, virus que carece de la recubierta proteica codificada para el gen de poliédrico) . Estos virus recombinantes luego se usan para infectar células de Spodoptera frugiperda en las cuales el gen insertado se expresa, (ver, por ejemplo, Smith et al., J. Virol. 46:584 (1983); Patente de E.U.A. No. 4,215,051). Ejemplos adicionales de este sistema de expresión se puede encontrar en Ausubel et al., eds . , Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 2, Greene Publish. Assoc. & Wiley Interscience (1989). Otro sistema que se puede usar para expresar los péptidos de la invención es el sistema de expresión de gen de sintasa glutamina, también se refiere como el "Sistema de expresión GS" (Lonza Biologies PLC, Berkshire UK) . Este sistema de expresión se describe en detalle en Patente de E.U.A. No. 5,981, 216. En células hospederas de mamíferos, un número de sistemas de expresión con base viral se pueden utilizar. En casos donde un adenovirus se usa como un vector de expresión, una secuencia de codificación se puede ligar a un complejo de control transcripción/traducción de adenovirus, por ejemplo, el promotor final y secuencia líder tripartita. Este gen quimérico se puede luego insertar en el genoma de adenovirus por recombinación in vitro o in vivo. La inserción en una región no esencial del genoma viral (por ejemplo, región El o E3) resultará en un virus recombinante que es viable y capaz de expresar péptido en hospederos infectados. Ver por ejemplo, Logan & Shenk, Proc. Nati. Acad. Sci . USA 81: 3655 (1984). El promotor 7.5 K vacuna se puede también usar. Ver por ejemplo, Mackett et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 79: 7415 (1982); Mackett et al., J. Virol. 49: 857 (1984); Panicali et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 79:4927 (1982).

. Expresión de péptidos de la invención en la célula objetivo apropiada Los vehículos de expresión se pueden transfectar o co-transfectar en una célula objetivo adecuada, para expresar los polipéptidos de la invención. Las técnicas de transfección conocidas en la técnica incluyen, pero no se limitan a, precipitación de fosfato de calcio (Wigler et al., Cell 14:725 (1978)), electroporación (Neumann et al., EMBO, J. 1:841 (1982)), y reactivos basados en liposoma. Una variedad de sistemas de vector de expresión hospedero se puede utilizar para expresar las proteínas quiméricas descritas en la presente incluyendo ambas células procarióticas y eucarióticas . Estos incluyen, pero no se limitan a, microorganismos tal como bacteria (por ejemplo, E. coli) transformada con vectores de expresión de ADN bacteriófago recombinante o ADN de plásmido que contienen una secuencia de codificación adecuada; levadura o hongos filamentosos transformados con levadura recombinante o vectores de expresión de hongos que contienen una secuencia de codificación adecuada; sistemas de célula de insectos infectados con vectores de expresión de virus recombinante (por ejemplo, baculovirus) que contienen una secuencia de codificación adecuada; los sistemas de célula de planta infectados con vectores de expresión de virus recombinante (por ejemplo, virus de mosaico de coliflor o virus de mosaico de tabaco) o transformados con vectores de expresión de plásmido recombinante (por ejemplo, plásmido Ti) que contiene una secuencia de codificación adecuada; o sistemas de célula animal, que incluyen células de mamífero (por ejemplo, células CHO, Cos, HeLa) . 6. Métodos para sintetizar moléculas de fusión que comprenden un péptido de la invención. En algunas modalidades, los péptidos de la invención existen como una proteína de fusión que comprende el péptido de la invención y un compañero de fusión. En una modalidad, el compañero de fusión confiere propiedades, tal como uno o más de semivida extendida, estabilidad, aumento de transporte al péptido de la invención, y/o puede aumentar la eficacia in vivo o in vitro. Adicionalmente, polipéptidos heterólogos de la presente invención se pueden combinar con partes del dominio constante de inmunoglobulinas (IgG), que resultan en polipéptidos quiméricos. Estas moléculas de fusión particulares facilitan la purificación y muestra un aumento de semivida in vivo. -esto se ha mostrado, por ejemplo, en proteínas quiméricas que consisten de el primero de dos dominios del polipéptido CD4 humano y diversos dominios de las regiones constantes de las cadenas pesada o ligera de inmunoglobulinas de mamífero. EP 0 394 827; Traunecker et al., Nature, 331: 84-86 (1988). Las moléculas de fusión que tienen una estructura dimérica ligada a disulfuro debido a la parte IgG pueden en algunos casos ser más eficientes en enlazar y neutralizar otras moléculas que, por ejemplo, un fragmento solo de polipéptido monomérico o polipéptido. Ver, por ejemplo, Fountoulakis et al., J. Biochem. 270:3958-3964 (1995). La invención también proporciona un polinucleótido que codifica la molécula de fusión de cualquiera de los péptidos descritos arriba. Este polinucleótido puede ser parte de un vector que también comprende una secuencia reguladora para transcribir el polinucleótido. La invención proporciona además una célula hospedera que comprende cualquiera de las moléculas de fusión descritas arriba, un polinucleótido que codifica la molécula de fusión de cualesquiera de estos péptidos, o un vector que comprende un polinucleótido que codifica la molécula de fusión de cualesquiera de estos péptidos y una secuencia reguladora para transcripción del polinucleótido. La invención todavía proporciona además una composición que comprende cualquiera de las moléculas de fusión o nucleótidos descritos arriba, y/o cualesquiera de los vectores o células hospederas descritas arriba, y una solución amortiguadora o un portador farmacéuticamente aceptable. a. Fusiones que comprenden dominios Fe de anticuerpos En una modalidad, un péptido de la invención se puede conjugar con el dominio Fe de IgG para aumentar su circulación de semivida. En ciertas modalidades, los péptidos se ligan covalentemente al dominio Fe. Métodos para hacer proteínas quiméricas que comprenden un dominio de inmunoglobulina Fe ambos recombinantemente y semi-sinteticamente son bien conocidos por un experto en la técnica Por ejemplo, un aldehido se puede incorporar en el derivado de péptido, y reaccionar con la proteína Fe usando una reacción de alquilación reductiva que es selectiva para el término N de Fe. Kinstler, Adv. Drug Del. Rev. 54: 477 (2002). Alternativamente, un tioéster de péptido se puede reaccionar con Fe que porta un residuo de cisteina de terminal N Dawson and Kent, Ann. Rev. Biochem. 69:923 (2000). Tales derivados de fusión de péptidos Fe pueden tener una mayor capacidad para bloquear la interacción IgG-FcRn debido a la adición de dos más sitios de enlace para FcRn a través del dominio Fe. Tales fusiones de péptidos Fe pueden también proteger el péptido de la degradación y asi mejorar la eficacia ín vivo del péptido. Las proteínas de fusión que tienen una estructura dimérica ligada a disulfuro debido a la porción IgG puede también ser más eficiente en enlazar y neutralizar otras moléculas que el péptido de la invención, por ejemplo, como se describe por Fountoulakis et al., J. Biochem., 270:3958-3964 (1995). En modalidades donde el péptido de la invención es parte de una proteína de fusión con un dominio Fe IgG, el Ig Fe humano puede comprender un eje, dominios CH2, y CH3 de IgG humana, tal como IgGl, IgG2, e IgG4 humanos. La invención también proporciona una molécula de fusión que comprende un péptido de la invención y un polipéptido Fe variante o un fragmento de un polipéptido Fe variante, en donde el Fe variante comprende un eje, dominios CH2, y CH3 de IgG2 humano con una mutación Pro331Ser, como se describe en la Patente de E.U.A. No. 6,900,292. Los dominios Fe adecuados para conjugar con péptidos de la invención incluyen aquellos que tienen aminoácidos mutados en posiciones seleccionadas de la región Fe para atenuar sus funciones efectoras (incluyendo citotoxicidad celular dependiente de anticuerpo y citotoxicidad dependiente del complemento) . Por ejemplo, una variante FcY2 con la mutación Pro331 Ser tiene menos actividad complementaria que Fcy2 natural y no se enlaza al FcYR. El IgG4 Fe es deficiente en activar la cascada de complemento, y su afinidad de enlace a FcYR es alrededor de un orden de magnitud inferior a la de la mayoría de los isotipos activos, IgGl. En una modalidad, un peptide de la invención se conjuga a una variante Fcy4 con mutación Leu235Ala que exhibe funciones efectoras mínimas como se compara con el Fcy4 natural. En otra modalidad, el péptido de la invención se conjuga a una variante FcYi con mutaciones Leu234Val, Leu235Ala y Pro331Ser que también exhiben menor función efectora que el Fcvi natural. b. Fusiones que comprenden albúmina En ciertas modalidades, los péptidos de la invención se pueden conjugar a porciones que enlazan albúmina. Tales conjugados albúmina-enlace porción-péptido pueden tener semividas in vivo más largas y puede así requerir una dosis de péptido menor para lograr el efecto terapéutico deseado. Chuang et al., Pharm. Res. 19: 569 (2002); Patente de E.U.A. No. 6,685,179. Así, una modalidad de la invención proporciona una molécula de fusión que comprende el péptido de la invención con un compañero de fusión de albúmina que comprende albúmina, uno o más fragmentos de albúmina, un péptido que enlaza albúmina, y/o una molécula que se conjuga con un lipido u otra molécula que enlaza albúmina. Los métodos para hacer proteínas de fusión que comprenden albúmina son conocidos en la técnica. Por ejemplo, péptidos modificados por reactivos limitados aromáticos hidrofóbicos se han mostrado para enlazar albúmina no covalentemente y ampliar las semividas de péptidos en conejos. Zobel et . al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 13: 1513 (2003). Como otro ejemplo, los péptidos modificados con grupos reactivos tiol se ham mostrado para enlazar covalentemente a un residuo de cisteina libre sencillo en albúmina de suero. Kim et . al., Diabetes 52:751 (2003) . c. Fusiones con porciones pegiladas En una modalidad, el péptido de la invención se puede pegilar para incluir porciones PEG mono o poli (por ejemplo, 2-4) . La pegilación se puede llevar a cabo por cualquiera de las reacciones de pegilación conocidas en la técnica. Los métodos para preparar un producto de proteína pegilado generalmente incluye (a) reaccionar un polipéptido con polietilen glicol, (tal como un derivado de éster reactivo o aldehido de PEG) bajo condiciones en las que el péptido de la invención se vuelve a enlazar a uno o más grupos PEG; y (b) obtener los procedimientos de reacción) . En general, las condiciones de reacción óptimas para las reacciones se determinarán caso por caso con base en parámetros conocidos y el resultado deseado. Hay un número de métodos de enlace PEG disponibles para aquellos expertos en la técnica y descritos en, por ejemplo, EPO 401 384; Malik et al., Exp. Hematol . , 20: 1028-1035 (1992); Francis, Focus on Growth Factors, 3(2): 4-10 (1992); EP 0 154 316; EP 0401 384; WO 92/16221; y WO 95/34326. Por ejemplo, la etapa de péptidos de pegilación de la invención se pueden llevar a cabo por medio de una reacción de acilación o una reacción de alquilación con una molécula polietilen glicol reactiva . Asi, los péptidos de la invención incluyen péptidos pegilados en donde uno o más grupos PEG se enlazan por medio de grupos acilo o alquilo. Tales péptidos pueden ser mono-pegilados o poli-pegilados (por ejemplo, aquellos que contienen 2-6 o 2-5 grupos PEG) . Los grupos PEG se enlazan generalmente al péptido en los grupos amino a- ó e de aminoácidos, pero se contempla también que los grupos PEG podrían enlazarse a cualquier grupo amino del péptido que es suficientemente reactivo para enlazarse a un grupo PEG bajo condiciones de reacción adecuadas. La pegilación por acilación generalmente implica reaccionar un derivado éster activo de polietilen glicol (PEG) con un péptido de la invención. Para reacciones de acilación, los polímeros típicamente seleccionados tienen un grupo de éster reactivo sencillo. Cualquier molécula PEG reactiva conocida o posteriormente descubierta se puede usar para llevar a cabo la reacción de pegilación. Un ejemplo de un éster PEG activado adecuado es PEG esterificado a N-hidroxisuccinimida (NHS) . Como se usa en la presente, la acilación se contempla para incluir, sin limitación, los siguientes tipos de enlaces entre un péptido de la invención y un polímero tal como PEG: amida, carbamato, uretano, y similares. Ver, por ejemplo, Chamow, Bioconjugate Chem. , 5: 133-140 (1994). Las condiciones de reacción se pueden seleccionar de cualquiera de aquellos conocidos en la técnica de pegilación o aquellos desarrollados posteriormente, pero evitarían condiciones tales como temperatura, solvente, y pH que inactiva el péptido de la invención. La pegilación por acilación generalmente resultará en un péptido poli-pegilado de la invención. El enlace de conexión puede ser una amida. El producto resultante puede ser substancialmente solo (por ejemplo, >95%) mono, di- o tri-pegilado. Sin embargo, algunas especies con un mayor grado de pegilación se pueden formar en cantidades dependientes de las condiciones de reacción específica usadas. Si se desea, más especies pegiladas purificadas se pueden separar de la mezcla (particularmente especies no reactivas) por técnicas de purificación estándar, incluyendo entre otras, diálisis, desplazamiento salino, ultrafiltración, cromatografía de intercambio de iones, cromatografía de filtración de gel y electroforesis. La pegilación por alquilación involucra hacer reaccionar un derivado aldehido terminal de PEG con un péptido de la invención en la presencia de un agente reductor. Por la reacción de alquilación reductiva, los polímeros seleccionados deberán tener un grupo de aldehido reactivo sencillo. Un aldehido PEG reactivo ejemplar es polietilen glicol propionaldehído, el cual es estable al agua o derivados de mono alcoxi o ariloxi C1-C10 de los mismos. Ver, por ejemplo, Patente de E.U.A. No. 5,252,714. 7. Purificación de los péptidos biológicamente expresados de la invención Dependiendo en el sistema de expresión usado, el péptido expresado de la invención luego se aisla por los procedimientos bien establecidos en la técnica (por ejemplo, cromatografía de afinidad, cromatografía de tamaño de exclusión, cromatografía de intercambio de ión) . Los vectores de expresión pueden codificarse por etiquetas que se permiten para la purificación fácil de la proteína quimérica recombinantemente producida. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan al vector pUR278 (Ruther et al., E BO J. 2: 1791 (1983)) en los cuales el ADN codifica un péptido de la invención ligado en el vector en el marco con la región codificada lac Z de manera que una proteina híbrida se produce; los vectores pGEX pueden usarse para expresar las proteínas quiméricas de la invención con una etiqueta de glutationa S-transferasa (GST) . Estas proteínas son usualmente solubles y pueden fácilmente purificarse de las células por la absorción a perlas de glutationa-agarosa seguidas por la elusión en la presencia de la glutationa libre. Los vectores incluyen sitios de desdoblamiento (trombina o proteasa del factor Xa o PreScission Protease™ (Pharmacia, Peapack, NJ. ) para la remoción fácil de la etiqueta después de la purificación . Para incrementar la eficiencia de la producción, los polinucleótidos pueden designarse para codificar unidades múltiples de los péptidos de la invención separados por los sitios de desdoblamiento enzimáticos. El polipéptido resultante puede desdoblarse (por ejemplo, por el tratamiento con la enzima apropiada) con objeto de recuperar las unidades de péptido. Esto puede incrementar el rendimiento de los péptidos manejados por un promotor sencillo. Cuando se usan los sistemas de expresión virales apropiados, la traducción de cada péptido de la invención se codifica por el mARN se dirige internamente en la transcripción, por ejemplo, por un sitio de entrada de ribosoma interno, IRES. Así, el policistrónico construido dirige la transcripción de un mARN policistrónico largo sencillo el cual, a su vez, dirige la traducción de los polipéptidos individuales múltiples. Este enfoque elimina la producción y procesamiento enzimático de las poliproteinas y puede significativamente incrementar el rendimiento de los péptidos de la invención manejando por un promotor sencillo. Las células hospederas que contienen constructos de ADN que codifican los péptidos de la invención pueden crecer en un medio de crecimiento apropiado, esto es, un medio que contienen nutrientes requeridos para el crecimiento de las células. Los nutrientes requeridos para el crecimiento celular pueden incluir una fuente de carbono, una fuente de nitrógeno, aminoácidos esenciales, vitaminas, minerales y factores de crecimiento. Opcionalmente el medio puede contener suero de ternero de bovino o suero de ternero fetal. En una modalidad, el medio no contiene substancialmente IgG. El medio de crecimiento deberá generalmente seleccionarse para las células que contienen el constructo de ADN por, por ejemplo, la selección o deficiencia del fármaco en un nutriente esencial el cual se complementa por el marcador seleccionable en el constructo de ADN o co-t ransfecta con el constructo de ADN. Las células de mamífero cultivadas generalmente crecen en medios libres de suero o que contiene suero comercialmente disponible (por ejemplo, MEM, DMEM) . La selección de un medio apropiado para la línea celular particular está dentro del nivel de la habilidad ordinaria en la técnica. Los péptidos de la invención pueden producirse en un animal transgénico, tal como un roedor, vaca, cerdo, oveja, cabra u otros animales no humanos que se incorporan un gen anterior en su genoma. Debido a que este gen se presenta en los tejidos germinales, este se pasa del precursor a la descendencia. Los genes exógenos se introducen en los embriones con células sencilla (Brinster et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 82:4438, 1985). Los métodos para producir animales transgénicos son conocidos en la técnica, incluyendo transgénicos que producen moléculas de inmunoglobulina . agner et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 78:6376 (1981); McKnight et al., Cell 34:335 (1983); Brinster et al., Nature 306:332 (1983); Ritchie et al., Nature 312:517 (1984); Baldassarre et al., Theriogenology 59:831 (2003); Robl et al., Theriogenology 59:107 (2003); Malassagne et al., Xenotransplantation 10 (3) :267 (2003) . 8. Métodos para separación por exclusión y descubridores de péptidos que enlazan FcRn y bloquean la interacción FcRn-IgG Los péptidos que enlazan al FcRn pueden identificarse usando colecciones que exhiben fagos. Las colecciones que exhiben fagos pueden generarse fácilmente como se describe en Smith and Petrenko, Chem. Rev. 87:391 (1997). Alternativamente, las colecciones que exhiben fagos pueden adquirirse de una fuente comercial, tal como, por ejemplo, Dyax Corp. (Cambridge, MA) . Dependiendo en las condiciones de separación por exclusión, el fago puede identificarse con una variedad de propiedades diferentes. Para identificar los péptidos que enlazan a FcRn (y asi competir con IgG para enlazar a FcRn) , una colección fago puede separarse por exclusión por enlazar a FcFn y por la competencia con IgG. Opcionalmente, los péptidos que enlace a los receptores alternativos pueden eliminarse de la colección por incubar la colección fago con uno o más receptores alternativos. Asi, el fago que enlaza a los receptores alternativos deberá agotarse del grupo deseado del fago. Por el procesamiento de ADN de los clones fago capaces de enlazar a FcRn, los péptidos capaces de enlazar a FcRn e inhibir el enlace IgG-FcRn puede identificarse. Los ejemplos de otros métodos para identificar los péptidos de enlace de FcRn incluyen: exhibir mARN (Roberts and Szostak, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 94:12297 (1997), exhibiciones basadas en células (Boder and ittrup, Nat. Biotechnol. 15:553 (1997), y colecciones de péptido sintéticos (Lam, Nature 354:82 (1991); Houghten et. al., Nature 354:84 (1991) ) . 9. Métodos para péptidos de ensayo que se enlazan a FcRn y bloquean la interacción Igg : FcRn Un número de métodos pueden usarse para evaluar la habilidad de un péptido o péptido mimético para enlazar a FcRn y bloquear la interacción FcRn: IgG. Por ejemplo, la resonancia del plasmo de la superficie (SPR) es un método bien conocido en la técnica para evaluar los eventos de enlace (Biacore AB, Uppsala, Suecia) . Usando este método, uno de los patrones de enlace (FcRn o IgG) se inmoviliza en la microplaqueta sensor SPR y mientras el otro patrón de enlace se pasa sobre la microplaqueta, la cual se monitorea para una señal resultante. En el mismo experimento, el péptido a evaluarse como un competidor de la interacción entre IgG y FcRn se pasa sobre la microplaqueta. Cualquier disminución en la señal puede interpretarse como una medición de la habilidad del péptido para bloquear la interacción entre FcRn y IgG. Otros métodos para ensayar los inhibidores de péptido posibles de la interacción IgG: FcRn también son bien conocidos en la técnica. Uno de tales métodos es un ensayo de la competencia IgG en un formato de placa de 96 pozos. En este ensayo del ejemplo, el FcRn humano soluble en una placa de 96 pozos se expone a IgG y un péptido de prueba. El enlace residual IgG, como se detectar por un anticuerpo anti-IgG y los reactivos de visualización ELISA estándar, proporcionan una medición de la habilidad del péptido para bloquear la interacción FcRn-IgG. La capacidad de un péptido para bloquear el enlace IgG-FcRn puede también llevarse a cabo en las células transíectadas con ADN que codifican un FcRn humano para desarrollar una linea celular capaz de expresar el FcRn humano en su superficie celular. Un ensayo de competencia de enlace puede aplicarse donde los inhibidores de péptido del enlace IgG-FcRn compiten con una molécula IgG fluorescentemente etiquetada. El nivel del Igg residual enlaza a las células que pueden medirse usando, por ejemplo, un clasificador de células activadas fluorescentes estándar (FACS). d. Usos de los péptidos de la invención Los péptidos de la invención enlazan FcRn e inhiben la porción Fe de la región constante IgG a partir del enlace a FcRn resultando en el incremento del catabolismo de IgG en comparación al catabolismo de IgG en la ausencia de los péptidos de la invención. En las modalidades ejemplares, la región constante IgG es de las subclases IgGl, IgG2, IgG3 ó IgG . En las modalidades particulares, la región constante IgG es de las subclases IgGl, IgG2 ó IgG4. Los péptidos de la invención son por lo tanto útiles para tratar cualquier enfermedad o condición, donde el incremento del metabolismo de IgG es deseable. Por ejemplo, los péptidos de la invención pueden usarse para tratar una enfermedad autoinmune, un trastorno inflamatorio, enfermedad cardiovascular con una etiología basada en la inflamación (por ejemplo, esclerosis arterial), rechazo al transplante y/o enfermedad de injerto contra hospedero (GVHD) . Los péptidos de la invención pueden también usarse para detectar FcRn en un paciente o una muestra biológica (por ejemplo, un fluido corporal, un tejido o muestra celular, sobrenadantes de cultivo celular) . Los péptidos de la invención pueden también usarse para purificar Fcrn de una muestra biológica (por ejemplo, un fluido corporal, un tejido o muestra celular, sobrenadante de cultivo celular) . Asi, la invención proporciona un método para regular un estado de la enfermedad caracterizado por expresar inapropiadamente los anticuerpos IgG o cantidades no deseadas o niveles de IgG, que comprenden administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un péptido de la invención. En una modalidad, el estado de la enfermedad se elige de las enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunes, y cáncer. En otras modalidades, la invención proporciona método para regular un estado de enfermedad por modular la concentración de suero de IgG. En ciertas modalidades, los métodos de la invención pueden emplearse para tratar, prevenir o regular una reacción inmune a una proteína terapéutica, tal como, por ejemplo, una eritropoyetina, una enzima de almacenamiento lisosomal, o un factor de coagulación, tal como, por ejemplo, fibrinogeno, protrombina, factor V, factor VII, factor VIII, factor IX, factor X, factor XI, factor XII, factor XIII o factor von willebrand. En otras modalidades, los métodos de la invención pueden emplearse para tratar, prevenir o regular una reacción inmune a un vector de terapia génica. 1. Enfermedades autoinmunes Los péptidos de la invención puede usarse para tratar enfermedades autoinmunes incluyendo, pero no limita a Alopacia areata, espondilitis anquilosante, síndrome antifosfolípido, enfermedad autoinmune addison, anemia hemolítica autoinmune, hepatitis autoinmune, síndrome limfoproliferativos autoinmune (ALPS), púrpura trombocitópenica autoinmune (ATP), enfermedad Behcet, pénfigo vesicular, cardiomiopatia, enfemedad celíaca-dermatitis herpetiforme, síndrome de disfunción inmune de fatiga crónica (CFIDS), polineuropatía desmielinizante inflamatoria crónica, pemfigoide de cicatriz, síndrome CREST, enfermedad de alutinina fría, enfermedad de Crohn, enfermedad de Degos, dermatomiositis , dermatomiositis juvenil, lupus discoide, crioglobulinemia mezclada esencial, fibromialgia-fibromiositis , enfermedad de Graves, tiroiditis Guillain-Barré Hashimoto, fibrosis pulmonar idiomática, Púrpura de trombocitopenia idiopática (ITP), neuropatía IgA, diabetes dependiente de insulina, artritis juvenil, liquen planus, enfermedad de Méniere, enfermedad del tejido conectivo mezclado, esclerosis múltiple, miastenia gravis (MG) , pénfigo, pénfigo vulgar, anemia perniciosa, poliarteritis nodosa, policondritis , síndrome poliglandular , polimialgia reumática, polimiositis y dermatomiositis , agammaglobulinemia primaria, cirrosis biliar primaria, psoriasis, fenómeno de Raynaud, síndrome Reiter, fiebre reumática, artritis reumatoide, sarcoidosis, escleroderma, síndrome sjógren, síndrome del hombre rígido, arteritis de Takayasu, arteritis temperal/arteritis de células gigantes, rechazo al transplante, uveitis de colitis ulcerativa, vasculitis, vitíligo y granulomatosis de Wegener. En una modalidad, la enfermedad autoinmune se elige de pénfigo vesicular, púrpura trombocitopenia idiopática (ITP), miastenia gravis (MG) , pénfigos (por ejemplo, pénfigo vulgar), y rechazo al transplante. En otra modalidad, los péptidos de la invención pueden usarse en combinación con esteroides para inmunosupresión . 2. Trastornos inflamatorios Los péptidos de la invención pueden usarse para tratar trastornos inflamatorios incluyendo, pero no limitanto a asma, colitis ulcerativa y alergia del síndrome del intestino inflamatorio, incluyendo rinitis alérgica/sinusitis, alergias de la piel (urticaria/roncha, angioderma, dermatitis atópica) , alergias a los alimentos, alergias a fármacos, alergias a insectos, mastocitosis , artritis incluyendo osteoartritis , artritis reumatoide, y espondiloartropatias . 3. Enfermedades o condiciones que requieren la administración de una proteina terapéutica . Frecuentemente, en las enfermedades o condiciones que requieren la administración de una proteina terapéutica, el sujeto deberá desarrollar anticuerpos contra la proteina terapéutica, la cual, a su vez, previene la proteina terapéutica disponible para su propósito terapéutico destinado. En consecuencia, los péptidos de la invención pueden usarse en combinación con la proteina terapéutica para aumentar el beneficio de la proteina terapéutica por reducir los niveles de IgG; en donde, los anticuerpos IgG son responsables de disminuir la biodisponibilidad de una proteina terapéutica. En consecuencia, una modalidad proporciona un método para regular, tratar o prevenir una condición, enfermedad o trastorno que resulta de una respuesta inmunitaria a un factor de coagulación que comprende poner en contacto una célula con una cantidad terapéuticamente efectiva de cualquiera de los péptidos descritos en la presente, en donde el factor de coagulación se elige de fibrinogeno, protrombina, factor V, factor VII, factor VIII, factor IX, factor X, factor XI, factor XII, factor XIII o factor von willebrand. Este método puede usarse para regular o tratar, o prevenir una respuesta inmunitaria a un factor de coagulación en un paciente que padece, por ejemplo, de hemofilia A o hemofilia B. En una modalidad, los péptidos de la presente invención bloquean inhibidores del factor VIII. En otra modalidad, el método puede usarse para regular o tratar, o prevenir una respuesta inmunitaria a, por ejemplo, eritropoyetina terapéutica, en un paciente que padece de aplasia de glóbulos rojos pura (PRCA) . 4. Enfermedades o condiciones que requieren terapia génica Los obstáculos para la implementación exitosa de la terapia génica para el tratamiento de una enfermedad o condición también incluye el desarrollo de anticuerpos específicos para la proteína terapéutica codificada por el transgen así como la posibilidad al vector usado para entregar el transgen. En consecuencia, el péptido de la invención puede administrarse en combinación con la terapia génica para aumentar el beneficio de la proteína terapéutica codificada por reducir los niveles de IgG. Estos métodos son particularmente usados en situaciones donde los anticuerpos IgG son responsables para la b i odi sponib i 1 idad disminuida de un vector de terapia génica o la proteína terapéutica codificada. El vector terapéutico del gen puede ser, por ejemplo, un vector viral tal como adenovirus y virus asociado con adeno . Las enfermedades que pueden tratarse usando terapia génica incluyen, pero no se limitan a, bifrosis cística, hemofilia, PRCA, distrofia muscular o enfermedades de almacenamiento lisosomal, tal como, por ejemplo, enfermedad de Gaucher y enfermedad de Fabry.

. Formación de imagen in vivo y detección de FcRn Los péptidos de la invención pueden también usarse en ensayos para detectar FcRn. En algunas modalidades, el ensayo es un ensayo de enlace que detecta el enlace de un péptido de la invención con FcRn. En estos ensayos, ya sea FcRn o los péptidos de la invención pueden inmovilizarse, mientras el otro (ya sea FcRn o los péptidos de lainvención) se pasen sobre el patrón de enlace inmunovilizado . Ya sea FcRn o los péptidos de la invención pueden etiquetarse detectablemente . Las etiquetas adecuadas incluyen, pero no se limitan a 64Cu, 67Cu, 0Y, inln, 1241 , 1251 , 131I, 137Cs, 186Re, 211At, 212Bi, 213Bi, 223Ra, 241Am, 244Cm y 99mTc-MOP; las enzimas tienen productos detectables (por ejemplo, luciferasa, peroxidasa, fosfatasa alcalina, ß-galactosidasa y similares); fluorescencia y etiquetas fluorescentes; por ejemplo, isotiocianato de fluoresceina, rodamina, ficoeritrina , ficocianina, aloficocianina, o-ftaldehido y fluorescamina; fluorescencia emitida por metales, por ejemplo, 152Eu, u otros de las series de lantánidos enlazados a los péptidos de la invención a través de grupos quelantes de metales tales como EDTA; compuestos quimioluminiscentes, por ejemplo, luminol, isoluminol, éster acridinio teromático, sales de acridinio, imidazol y ésteror de oxalato; y compuestos bioluminiscentes , por ejemplo, luciferina o aequorina (proteina fluorescente verde) , moléculas de enlace especificas, por ejemplo, partículas magnéticas, microesferas, nanoesferas, nanocristales de punto cuánticos luminiscentes y similares. Alternativamente, los pares de enlace específicos pueden usarse, involucrando, por ejemplo, un segundo anticuerpo de la etapa o reactivo que es etiquetado detectablemente y que puede amplificar la señal. Por ejemplo, los péptidos de la invención pueden conjugar a la biotina y se agrega estreptavidina conjugada de peroxidasa raíz de rábano como un segundo reactivo de etapa. Digoxina y antidigoxina proporciona otro par de enlace adecuado. En otras modalidades, una segunda etapa del anticuerpo puede conjugarse a una enzima tal como peroxidasa en combinación con un substrato que sufre un cambio de color en la presencia de la peroxidasa. La ausencia o presencia del enlace entre los péptidos de la invención y FcRn pueden administrarse por diversos métodos, incluyendo citometría de flujo de las células disociadas, microscopía, radiografía, fluorimetría, detección cromogénica, formación de imágenes de fósforo, detección de quimioluminiscencia en la película y conteo de escintilación . Tales reactivos y sus métodos de uso son bien conocidos en la técnica. Para las aplicaciones de diagnóstico in vivo, tejidos específicos o aun trastorno celulares específicos que pueden caracterizarse, al menos en parte, por la expresión de FcRn, pueden formar imágenes por la administración de una cantidad suficiente de un péptido etiquetado de la invención.

Una variedad amplia de los iones de metal adecuados por la formación de imágenes de tejido in vivo que se prueban y se utilizan clínicamente. Para la formación de imágenes con radioisótopos, las siguientes características son generalmente deseable: (a) dosis de radicación baja al paciente; (b) rendimiento de fotón alto el cual permite un procedimiento de medicina nuclear para llevarse a cabo en un periodo de tiempo corto; (c) la habilidad para producirse en cantidades suficientes; (d) costo aceptable; (e) preparación simple para la administración; y (f) no requiere que el paciente se detenga posteriormente. Estas características generalmente se traducen en lo siguiente: (a) la radiación expuesta al órgano más crítico es de menos de 5 rad; (b) una imagen sencilla puede obtenerse dentro de diversas horas después de la infusión; (c) el radioisótopo no se descompone por la emisión de una particular; (d) el isótopo puede fácilmente detectarse; y (e) la semivida es menos de 4 días (Lamb and Kramer, "Commercial Production of Radioisotopes for Nuclear Medicine", In Radiotracers For Medical Applications, Vol . 1, Rayudu (Ed.), CRC Press, Inc., Boca Ratón, pp . 17-62) . En una modalidad, el metal es tecnecio-99m. En consecuencia, la invención proporciona un método para obtener una imagen de una región interna de un sujeto el cual comprende administrar a un sujeto una cantidad efectiva de una composición que comprende al menos uno de los péptidos de la invención que contienen un metal en el cual el meta es radioactivo y registran la imagen escintrigráfica obtenida de la descomposición del metal radioactivo. Similarmente, la invención proporciona métodos para aumentar una imagen de resonancia magnética (MR) de una región interna de un sujeto el cual comprende administrar a un sujeto una cantidad efectiva de una composición que comprende al menos uno de los péptidos de la invención que contienen un metal en el cual el metal es paramagnético y registra la imagen MR de una región interna del sujeto. Otros métodos proporcionados por esta invención incluyen un método para aumentar una imagen sonográfica de una región interna de un sujeto que comprende administrar a un sujeto una cantidad efectiva de una composición que comprende al menos uno de los péptidos de la invención que contienen un metal y registran la imagen sonográfica de una región interna del sujeto. En esta solicitud, el metal puede ser cualquier ión de metal pesado no tóxico. Un método para aumentar una imagen de rayos X de una región interna de un sujeto también proporcionado el cual comprende administrar a un sujeto una composición de péptido que contienen un metal y registra la imagen de rayos X de una región interna del sujeto. Un radioactivo, ión de metal pesado no tóxico puede usarse. Los péptidos de la invención pueden ligarse a queladores tales como aquellos descritos en la Patente de E.U.A. No. 5,326,856. El complejo quelador del péptido puede luego radioetiquetarse para proporcionar un agente formador de imágenes para diagnóstico o tratamiento de enfermedades o condiciones que involucran la regulación de los niveles de IgG. Los métodos de la invención pueden también usarse en los métodos que se describen en la patente de E.U.A. No. 5,449,761 para crear un péptido radioetiquetado para uso en la formación de imágenes o radioterapia. 6. Modalidades de dosis y tratamiento Los péptidos de la invención pueden administrarse intravenosamente, subcutáneamente, intra-muscularmente , sublingualmente , bucalmente, sublingualmente, nasalmente, rectalmente, vaginalmente o por medio de la ruta pulmonar. Los péptidos de la invención pueden implantarse dentro o ligarse a un soporte sólido biopolimerico que permite la liberación baja de la proteina quimérica al sitio deseado. La dosis del péptido de la invención varia dependiendo en la enfermedad o condición a tratarse, la severidad de la enfermedad o condición, el sujeto incluyendo su género, edad, peso y resultado deseado y durante la ruta particular de administración usada. La dosis puede ser en el intervalo desde 0.1 hasta 100,000 ug/kg peso corporal. En una modalidad, el intervalo de dosis es 1-10,000 µg/kg. En otra modalidad, el intervalo de dosis es 10-1,000 µ?/)?. En otra modalidad, el intervalo de dosis es 100-500 yg/kg. El péptido de la invención puede administrarse continuamente o en intervalos de tiempo específicos. Los ensayos in vitro pueden emplearse para determinar los intervalos de dosis óptimos y/o programas para la administración. Otras dosis efectivas pueden fácilmente determinarse por alguien de habilidad ordinaria en la técnica por curvas de respuesta de dosis que establecen tríales de rutina, por ejemplo, la cantidad de los péptidos de la invención necesarios para incrementar o disminuir el nivel de IgG que puede calcularse de la experimentación in vivo. Aquellos de habilidad deberán fácilmente apreciar que los niveles de dosis pueden variar como una función del compuesto específico, la severidad de los síntomas y la susceptibilidad del sujeto para los efectos laterales y dosis preferidas para un compuesto dado se determinan fácilmente por aquellos de habilidad en la técnica por una variedad de medios. Por ejemplo, con objeto de calcular la dosis de los péptidos de la invención, aquellos de habilidad en la técnica pueden usar información fácilmente disponible con respecto a la cantidad necesaria para tener el efecto deseado, dependiendo durante el agente particular usado. 7. Composiciones farmacéuticas La invención también se refiere a una composición farmacéutica que comprende al menos uno de los péptidos de la invención y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable. Los ejemplos de los portadores farmacéuticos adecuados se describen en Remington's Pharmaceutical Sciences by E.W. Martin. Los ejemplos de excipientes puede incluir almidón, glucosa, lactosa, sucrosa, gelatina, malta, arroz, harina, arcilla, gel de sílice, estearato de sodio, monoestearato de glicerol, talco, cloruro de sodio, leche descremada en polvo, glicerol, propileno, glicol, agua, etanol y similares. La composición puede también contener reactivos de la solución amortiguadora de pH, y agentes humectantes o emulsificantes . Para la administración oral, la composición farmacéutica puede tomar la forma de tabletas o cápsulas preparadas por los medios convencionales. La composición también puede prepararse como un líquido, por ejemplo, como un jarabe o una suspensión. El líquido puede incluir agentes de suspensión (por ejemplo, jarabe de sorbitol, derivados de celulosa o grasas comestible hidrogenasa) , agentes emulsificantes (lecitina o acacia), vehículos no acuosos (por ejemplo, aceite de almendra, ésteres aceitosos, alcohol etílico, o aceites vegetales fraccionados) y conservadores (por ejemplo, metilo o propil-p-hidrobenzoatos o ácido sórbico) . Las preparaciones pueden también incluir agentes saborizantes, colorantes u endulzantes. Alternativamente, la composición puede presentarse como un producto seco por la constitución con agua u otro vehículo adecuado . Para la administración bucal o sublingual la composición puede tomar forma de comprimidos o pastillas de conformidad a los protocolos convencionales. Para la administración por inhalación, los compuestos para uso de conformidad a la presente invención se liberan convenientemente en la forma de un rocío en aerosol de un empaque presurizado o nebulizador (por ejemplo, en PBS), con un propulsor adecuado, por ejemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluorometano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado, la unidad de dosis puede determinarse por proporcionar una válvula para liberar una cantidad medida. Las cápsulas y cartuchos de, por ejemplo, gelatina para uso en un inhalador o insuflador pueden formularse que contienen una mezcla de polvo del compuesto y una base de polvo adecuada tal como lactosa o almidón. La composición farmacéutica puede formularse por la administración parenteral (esto es, intravenosa o intramuscular) por inyección de bolo. Las formulaciones para la inyección pueden presentarse en una forma de dosis unitaria, por ejemplo, en ampolletas o contenedores de múltiples dosis con un conservado agregado. Las composiciones pueden tomarse de tales formas como suspensiones, soluciones o emulsiones en los vehículos aceitosos o acuosos y contienen agentes formuladores tales como agentes de suspensión, estabilizadores y/o dispersantes. Alternativamente, el ingrediente activo puede ser en forma de polvo para la constitución con un vehículo adecuado, por ejemplo, agua libre de pirógenos. La composición farmacéutica puede también formularse por la administración rectal como un supositorio o enema de retención, por ejemplo, que contiene bases supositorios convencionales tales como manteca de cacao u otros gliceridos. Los péptidos de la invención pueden ligarse a los quemadores tales como aquellos descritos en la Patente de E.U.A. No. 5,326,856. El complejo quelador péptido puede luego radioetiquetarse para proporcionar un agente formador de imágenes para diagnóstico o tratamiento de enfermedad o condiciones que involucran la regulación de los niveles de IgG. Los péptidos de la invención pueden también usarse en los métodos que se describe en la Patente de E.U.A. No. 5,449,761 para crear un péptido radioetiquetado para uso en radioterapia. 8. Purificación de FcRN Los péptidos de la invención pueden también usarse para purificar FcRn. En algunas modalidades, el péptido se enlaza covalentemente a una matriz cromatográfica apropiada para formar un medio de separación FcRn eficiente. Una solución que contiene FcRn luego se pasó sobre la matriz cromatográfica resultando en el enlace no covalente de FcRn al patrón de enlace inmovilizado. Las soluciones que contienen FcRn pueden ser muestrasbiológicas tales como un fluido corporal, un tejido o muestra celular, sobrenadante del cultivo celular. El FcRn se purificó por lavar el péptido inmovilizado: complejo FcRn con una solución adecuada para remover las impurezas y luego liberar el FcRn de la matriz cromatográfica con una solución de elución adecuada. Los péptidos de la invención pueden enlazarse a matrices cromatográficas adecuadas usando un número de enfoques químicos bien conocidos por aquellos de habilidad en la técnica. Por ejemplo, los péptidos de la invención pueden enlazarse a matrices que contienen grupos adecuadamente reactivos, tales como tioles, aminas, ácidos carboxílieos , alcoholes, aldehidos, haluros de alquilo, N-alquil-maleimidas , éster de N-hidroxi-sucinimidilo, epoxidos, hidroxilaminas , hidrazidas . En otras modalidades, los péptidos de la invención pueden modificarse para contener porciones químicas o secuencias de péptidos que no se enlazan covalentemente a una matriz cromatográfica apropiada. Por ejemplo, los péptidos podrían modificarse con una porción de biotina y podrían no ser enlaces covalentes a una matriz cromatográfica que contienen una proteina de avidina . Alternativamente, el péptido modificado podrían incubarse con la solución FcRn y la mezcla resultante se pasa sobre la matriz cromatográfica apropiada para aislar el complejo FcRn : péptido . Los ejemplos de usos similares de los péptidos para la purificación de afinidad pueden encontrarse en Kelley et al, "Development and Validation of an Affinity Chromatography Step Using a Peptide Ligand for cGMP Production of Factor VIII", In Biotechnology and Bioengineering, Vol. 87, No. 3, Wiley InterScienc, 2004, pp . 400-412 y en la patente de E.U.A. No. 6, 197, 526.

EJEMPLOS Los ejemplos, los cuales se intentan como ejemplares meramente de la invención y deberán por lo tanto no considerarse para limitar la invención en cualquier manera, también describen y detallan aspectos y modalidades de la invención descritos arriba. Los ejemplos no se intentan para representar que los experimentos a continuación son todos o solamente los experimentos que se llevan a cabo. Los esfuerzos se hacen para asegurar la exactitud con respecto a los números usados (por ejemplo, cantidades, temperatura, etc.) pero algunos errores experimentales y desviaciones deberán tomarse en cuenta. Al menos de que se indique de otra manera, las partes son partes en peso, el peso molecular es el peso molecular promedio en peso, la temperatura es en grados centígrados y la presión es en o cerca de la presión atmosférica .

Ejemplo 1: Expresión del FcRn humano soluble (shFcRn) El ADNc FcRn humano soluble se clonó, se expresó y se purificó como se describe en la literatura usando el sistema de expresión de sintetasa glutamina en células de ovario de hámster chino (CHO) . Ver Patente de E.U.A. No. 5,623,053. Un codón de detención se colocó después de la posición del aminoácido 274 en la secuencia de la proteína del FcRn humano con objeto de remover la región de transmembrana.

Ejemplo 2: Transfección de las células HEK 293 con FcRn humano Las células de riñon embriónicas humanas (HEK) (ATCC, Manassas, VA) se transíectaron usando el reactivo de transfección Super Fect (Qiagen, Valencia, CA) de conformidad al protocolo recomendado por el fabricante. El constructo de cADN FcRn de longitud completa se detalla en la figura 1 (C.M. Story et al., J. Exp . Med. 180:2377-2381 (1994), N. E. Simister et al., Eur. J. Immunol . 26:1527-1531 (1996)) se clonó originalmente en pcADN6 (Invitrogen, Carlsbad, CA) como el vector plásmido con objeto para generar el vector de expresión FcRn, FcRn:pCADN6. El constructo cADN p2m humano, también detallado en la figura 1 se clonó originalmente en el pcADN3 (Invitrogen) como el vector plásmido para generar el vector de expresión ß2p? humano, p2m:pcADN3 (D. Gussow et . al., J. Immunol. 139:3132-3138 (1987)). El día antes de la transíección, las células HEK293 se sembraron en las 0.5-2.5 x 106 células por platos de 100 mm y se incubaron a 37 °C y 5% C02 durante 16 horas en cDMEM. La composición de cDMEM contiene: 1 L DMEM (Invitrogen #11995-065); 10 mi de 1 M HEPES , pH 7.55; 10 mi Solución de aminoácido MEM (Invitrogen #11130-051) ; 10 mi solución de aminoácido no esencial MEM (Invitrogen #11140-050) ; 10 mi de 100 mM piruvato de sodio (Invitrogen #11360-070); 10 mi de liquido de estreptomicina de penicilina (Invitrogen #15140-148); 10 mi de solución de L-glutamina (Invitrogen #25030-081); 1 mi de solución de 2-mercaptoetanol en 55 mM solución amortiguadora salina de fosfato Dulbecco (DPBS) (Invitrogen #21985-023) ; 100 mi de suero de bovino fetal inactivado del corazón (FBS) (Invitrogen) . En el dia de la transíección, 5 µg del constructo FcRn : pCADN6 y 5 µg de 2m:pCADN3 ADN se agregaron a 290 µ?· de DMEM (Invitrogen) . La solución se mezcló durante algunos segundos y se centrifugó. Luego, 60 pL del reactivo de transfección superFect (Qiagen) se agregó a la solución de ADN y se colocó en vórtice durante 10 segundos. La solución de ADN/SuperFect se incubó durante 5 hasta 10 minutos a temperatura ambiente, durante este tiempo el medio del plato que contiene la célula se aspiró y las células se levaron una vez con 4 mi de PBS. Después de 5 hasta 10 minutos de incubación del ADN/SuperFect, 3 mi del medio de crecimiento completo (cD EM) se agregó a la solución de ADN/SuperFect, la solución se mezcló y se agregó inmediatamente a las células en platos de 100 mm. Las células se incubaron con la solución ADN/SuperFect durante 2 hasta 3 horas a 37 °C y 5% de C02. El medio que contiene la solución ADN/SuperFect se removió de las células, las células se lavaron 3 veces con PBS y cDMEM fresco se agregó a las células. Después de 48 horas de incubación, el medio se evaluó por análisis de inmunotransferencia para determinar si la expresión transciende del complejo FcRn/ 2m producido. Además, las células se pasaron a una relación de 1 :4 en cDMEM que contiene 250 pg/L de Geneticina (Invitrogen) como un antibiótico y 5 pg/L de Blasticidina para seleccionar transíectantes estables resistentes a Blasticidina. Después de 4 semanas de selección de antibiótico, las células que sobreviven se sembraron en placas de cultivo de tejido de 96-pozo a una densidad de 1 célula por pozo. Finalmente se seleccionaron 12 clones y cada uno expandido y revisado durante la expresión por análisis de inmunotransferencia por FcRn y ß2p\. Este análisis identifica el FcRn y 293 clone 11 expresando ß2??, como poseen en los niveles más altos de expresión y asi se uso en ensayos subsecuentes.

Ejemplo 3: Separación por exclusión de Colecciones de fago para inhibidores FcRn-IgG Los péptidos capaces de inhibir el enlace de la porción IgG Fe hasta FcRn se identificaron por separación por exclusión que exhiben colecciones de fago filamentoso con licencia de Dyax Corp. (Cambridge, MA) . Más específicamente, las siguientes tres colecciones se usaron en combinación; TN-9-IV, TN10-X, TN-ll-I y TN-12-I se usaron en la separación por exclusión. El número total de fago viable individual contenido en cada colección se reflejó por el número de transformantes establecido por cada colección cuando las colecciones se expresaron en E. coli y coloco en una dilución clonal como se describe por el procotol Dyax. El número de transformantes para TN-9-IV, TN10-X, TN-ll-I y TN-12-1 fue 3.2 x 109, 2 x 109, 2.7 x 109 y 1.4 x 109, respectivamente. Otro medio para referir a el número absoluto de fagos viables en un volumen dado es por mantener las unidades formadas de placas (pfu) por volumen de unidad.

A. Soluciones amortiguadoras usadas en la separación por exclusión de fagos Las siguientes soluciones amortiguadoras se usaron para la separación por exclusión de péptidos enlazados a FcRn. 1. Caldo NZCYM: 10 g de NZ de Amina-A; 5 g de cloruro de sodio; 5 g de Extracto de Levadura Bacto (Difco); 1 g de ácidos de Casamino; 1 g de polvo anhidro de sulfato de magnesio: los ingredientes se disolvieron en 800 mi de agua, ajustado al pH 7.5 con hidróxido de sodio 1 N y luego llevado hasta un volumen total de 1 L con agua y auntoclave durante 20 min. 2. Solución amortiguadora de enlace (BB) : PBS, pH 6 más 10 mM de EDTA.C. NZCYM-T: caldo NZCYM más 12.5 pg/ml de Tetraciclina . 3. HBSS-E: Solución Salina Balanceada de Hank (Invitrogen) más 10 mM EDTA ( Invitrogen) . 4. Sales A Min: 10.5 g de K2HP04 (fosfato de potasio dibásico) ; 4.5 g de KH2P04 (fosfato de potasio monobásico); 1.0 g de (NH4)2S04 (sulfato de amonio) y 0.5 g de citrato de sodio disuelto en 1 L agua. 5. Caldo LB: 10 g de Triptona Bacto; 5 g de extracto de levadura Bacto; 10 g de cloruro de sodio disuelto en 1 L de agua y autoclave durante 20 min. 6. CBS pH 2: 50 mM citrato de sodio; 150 mM cloruro de sodio: solución amortiguadora se llevó hasta pH 2 con HC1 y filtro esterilizado. 7. Agar LB: 30 g de Triptona Bacto; 15 g de extracto de levadura Bacto; 30 g de cloruro de sodio disuelto en 3 L de agua y autoclave durante 20 minutos. 8. Agar suave LB : 20 g de Triptona Bacto; 10 g de extracto de levadura Bacto; 20g de cloruro de sodio; 14g de agar Bacto disuelto en 2 L de agua usando calor suave sin hervir. 9. solución amortiguadora TE: 10 mM Tris, 1 mM EDTA, pH 7 B. Protocolo de Separación por exclusión: Ronda 1 Aproximadamente 100 colecciones aleatorias equivalentes de cada colección se agruparon de acuerdo a su titulo, lo cual significa; 24 yL de TN9-IV (1.3 x 1010" pfu/yL) , 12.5 yL de TN10-X (1.6 x 1010 pfu/yL) , 225 yL de TN11-I (1.2 x 109 pfu/ yL) , y 48.7 yL de TN12-I (2.9 x 109 pfu/ yL) se mezclaron con 189 yL de PBS, 75 yL de enfriado en hielo 17% polietilen glicol (PEG) (promedio de peso molecular: 8000 Da, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) y 75 yL de cloruro de sodio 3 M e incubado en hielo durante 30 minutes. Un matraz T75 de células 293 clon 11 (Ejemplo 2) se dividió a una relación de 1 :3 con HBSS-E. Las células se transfirieron a un tubo microcentrifugo de 1 mi, se lavó una vez con solución amortiguadora de enlace fría y el sobrenadante se removió. Las células se incubaron con el fago durante 1.5 horas a 4°C en un rotador. Después de la incubación, las células se lavaron cinco veces con 1 mi de BB enfriado en hielo seguida cada una de las veces por centrifugación a 1400 rpm durante 2 minutos. Los fagos enlazados fuertemente se eluyeron por agregar IgG humana 66 yM (Calbiochem, San Diego, CA) que han sido dializados en BB . La mezcla de fago - IgG se incubó con las células durante 1 hora a 40°C. Después de una etapa de centrifugación (girando a 1400 rpm por 2 min. ) , célula peletizada se lavó primero con 200 de 66 µ IgG, centrifugado (girando a 1400 rpm por 2 min.) y se lavó al final con 100 µ? de IgG. Los IgG lavados se combinaron con la elusión IgG para un volumen final de 500 µ? . Los fagos en el eluyente se titularon y amplificaron como se describe a continuación.

C . Concentración de Fagos Las soluciones de fago se diluyeron en etapas de 100 veces. Típicamente 2 µ? de solución de fago se agregó a 198 yL de caldo NZCYM de una manera serial para lograr diluciones de arriba de 10~10. Los fagos diluidos se agregaron a un cultivo de células Azul XL1 MRF E. coli, cuando las células Azul XL1 MRF' E. coli se cultivaron en la fase larga y llevando a una densidad óptica de 0.5 a A600 (absorbancia UV a 600 nm) . El cultivo se incubó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Después, 0.5 mi de las células infectadas se agregaron a 3.5 mi de agar superior fundido (a 50/50 mix de caldo LB y agar LB) en aproximadamente 55°C y propagación en una placa agar estándar e incubado durante la noche a 37 grados. El título se calculó de una placa que contiene 30 hasta 300 placas. Para una placa que contiene 50 placas, colocadas de una dilución de fago 10~8, las calculaciones se realizaran como sigue: 50 placas / 500 µL de células infectadas x 10-veces dilución durante la infección x 108 de dilución de fago = 108 unidades formadas de placas por iL. Cuando sea necesario para ELISA de fago subsecuente y análisis de secuencia, tapones de agar individuales que contienen placas de fago se recogieron con pipetas de Pasteur de autoclave. Los tapones se depositaron en placas de cultivo de tejido de fondo redondo estéril de 96 pozos (Greiner) , en el cual se agregaron TE de 100 µL por pozo TE. Los fagos se eluyeron de las placas durante 2 horas a 37 °C o durante la noche a 4°C.

O . Amplificación de Fagos Un cultivo de células azul XL1 MRF' de E. coli se cultivaron en caldo NZCYM-T, de una dilución 1/100 de un cultivo durante la noche saturado hasta que el cultivo se llevo a una densidad óptica de 0.5 a A600. Las células se concentraron por centrifugación para ello durante 15 minutos a 3500 rpm, seguido por resuspensión en sales A Min hasta 1/20 del volumen original. El fago eluido de células después de una ronda de selección se diluyeron a un volumen final de 1 mi en sales A Min A y se agregó a 1 mi del cultivo bacteriano concentrado. Después de 15 minutos de incubación en un baño de agua a 37°C, la mezcla de fago-célula se agregó a 2 mi de caldo 2X NZCYM y propagación en una placa NUNC larga con NZCYM más 50 g/ml de Ampicilina hasta que se seco. Las placas se incubaron durante 14 hasta 18 horas a 37°C. Las colonias que se forman durante la noche se rasparon suavemente con una barra de propagación en la presencia de 20 mi de PBS . Las bacterias que contienen PBS y fagos se colectaron en un tubo centrifugo. La bacteria restante en la placa se raspó nuevamente en la presencia de 10 mi de PBS y colectó. Un PBS final enjuagado de 10 mi se aplicó a la placa, y agruparon junto con todo el material raspado. Las células de bacterias se peletizarón por centrifugación (15 minutos a 3500 rpm) , y el sobrenadante limpio se decantó en otro tubo de centrifuga, clarificada nuevamente, y finalmente decantado nuevamente. Luego, un volumen de 0.15 mL de 17% de PEG + NaCl 3M se agregó al sobrenadante, el cual se mezcló y almacenó durante la noche a 4°C. El fago precipitado colectado por centrifugación (8500 x g durante 30 minutos), después en el cual, el sobrenadante se descartó. El fago peletizado se volvió a suspender en un volumen pequeño de PBS, clarificado con un giro breve, y precipitado nuevamente con un volumen de 0.15 de 17% de PEG + NaCl 3M. El fago final peletizado se volvió a suspender en PBS y se titulo en preparación para la ronda siguiente de selección.

E . Ronda 2 La colección de fago amplificada se diluyó tal que solamente 10 colecciones aleatorias equivalentes se diluyeron en 1 mi de solución amortiguadora de enlace. Una tercera parte de un matraz T75 de células 293 no transfectadas se lavó una vez con solución amortiguadora de enlace fría. Una etapa de substracción incluyendo para remover fago de la colección que expresa péptidos capaces de enlazar a células que no expresan FcRn se realizó dos veces por incubar el fago con las células no transfectadas durante 15 minutos. El sobrenadante se recuperó. Luego, una tercera parte de una matraz T75 de células 293 del clon 11 se lavó una vez con solución amortiguadora de enlace fría e incubado con el fago durante 1.5 horas a 4°C en un rotador. Las células se lavaron y centrifugaron (girando a 1400 rpm por 2 min.) cinco veces con 1 mi de solución amortiguadora de enlace fría y el fago enlazado fuertemente se eluyeron con 200 µ?, de IgG humana 66 µ? (dializado en solución amortiguadora de enlace) por incubar la mezcla fago-célula- IgG durante 1 hora a 4°C. Después la centrifugación (girando a 1400 rpm por 2 min.) , el sobrenadante se colectó y el peletizado se lavó con 200 L de IgG 66 uM, seguido por un lavado 100 yL de IgG 66 uM. El fago en el eluyente se titulo y amplifico como se describe a continuación en las secciones titulo de fago etiquetado y amplificación de fago.

F. Ronda 3 Esta ronda se realizó como se describe anteriormente para la ronda 2. Al terminar la ronda 3, el fago en el eluyente se tituló y ensayó para inhibidores IgG-FcRn usando el fago ELISA.

G. Fago ELISA Las etapas siguientes se llevaron a cabo para identificar, por ensayo inmunosorbente ligado a enzimas (ELISA), fagos codificando péptidos que pudieron enlazar FcRn. Primero, las siguientes soluciones se prepararon: Solución amortiguadora A: PBS + 0.1% de Tween + 0.5% de BSA. Solución amortiguadora B: 100 mM de MES, pH 5.5 + 150 mM de NaCl + 0.1% Tween. Solución amortiguadora C: 50 mM de MES, pH 6.0 + 150 mM de NaCl + 0.1 % de Tween Un cultivo azul XL1 MRF' de E. coli para la propagación de un fago que demuestra la capacidad para enlazar FcRn se cultivó a una densidad óptica de 0.5 a A600 de a 1 :100 de dilución de un cultivo durante la noche. Luego, 10 µ? de cada placa de fago eluido que se preparó como se describe anteriormente se agregaron a 30 µ? de células E. coli MRF' azul XL1 en pozos de una placa de 96 pozos e incubado durante 15 minutos a temperatura ambiente. Luego, 130 µ? de caldo NZCYM que contiene 50 ]iq/ l de Ampicilina se agregaron a cada pozo y las placas se incubaron durante la noche a 37 °C. Una placa de microtítulación bloqueada recubierta con estreptavidina , BSA (Pierce) se preparó por enjuagar con 200 µ? por pozo de solución amortiguadora A, y recubriendo durante la noche a 4°C con 1 mg/ml de FcRn humano soluble biotinilado (Ejemplo 4, sección A), en solución amortiguadora A. La solución amortiguadora que contiene FcRn se descartó y la placa se enjuagó dos veces con solución amortiguadora C. Entonces, 70 µ? de solución amortiguadora B se agregó a cada pozo de la placa, seguido por la adición de 30 µ? de un cultivo de bacteria que contiene fagos. Después de 1 hora a temperatura ambiente, la placa se lavó cinco veces con 200 µ? de solución amortiguadora C. Luego, 100 µ? de solución amortiguadora C que contiene una dilución 1:10000 de un anticuerpo anti-Ml3 conjugado de HRP (Amersham Pharmacia) se agregó a cada pozo. La placa se incubó a temperatura ambiente durante una hora. Entonces, las placas se lavaron 9 veces con solución amortiguadora C, desarrollado con 1 etapa TMB (KPL) , detenido después de 5-15 minutos con ácido sulfúrico 2 y y leer en 450 nm con un lector de placa Spectra Max Plus (Molecular Devices).

H . Amplificación PCR de ADN de Fago Los fagos eluidos con placas en TE se amplificaron durante la secuencia por usar el kit II de sistema de núcleo PCR por las instrucciones de (Promega) . Entonces, 5 mi de fago eluido se agregó a una mezcla de reacción que contienen 200 µ? cada dNTP, 500 nM del cebador 3PCRUP (5.-CGGCGCAACTATCGGTATCAAGCTG-3' ) (SEQ ID NO: 11 ), 500 nM del cebador 3PCRDN ( 5. -CATGTACCGTAACACTGAGTTTCGTC-3. ) (SEQ ID NO: 12), lx solución amortiguadora de polimerasa de ADN Taq (lOx: 500 mM de KC1, 100 mM de Tris-HCl pH 9.0 a 25°C, 1% de Tritón de X-100, 15 mM de MgCb) , y 1.25 unidades de enzima de polimerasa de ADN Taq. Las reacciones se sometieron al siguiente programa en un ciclizador térmico Research MJ PCT-200: 5 minutos a 94°C; 30 ciclos que consisten de 15 segundos a 94°C, 30 segundos a 55°C, y 60 segundos a 72°C, seguido por 7 minutos a 72°C. El producto resultante se purificó usando el kit prep. PCR QiaQuick (Qiagen) de acuerdo a las instrucciones del fabricante, cuantificado por la absorbancia a A260, y la secuencia usando cebador 3SEQ-80 ( 5' -GATAAACCGATACAATTAAAGGCTCC- 3' ) (SEQ ID NO: 13) . La secuencia de fagos que se amplificó siguiendo las 3 rondas de separación por exclusión, reveló las secuencias de ADN que codifican las secuencias de aminoácido proporcionando en la Figura 1. Estos "golpes de fago" se usaron colectivamente para identificar un consenso de secuencia de péptido, definido por la secuencia de aminoácido: G-H-F-G-G-X-Y (SEQ ID NO: 14) .

Ejemplo 4: ELISA de competencia del Péptido-IgG Con objeto de determinar si los péptidos de la invención que se derivaron de la separación por exclusión de los filamentos de fago que exhiben colecciones también están disponibles para bloquear el enlace de IgG para FcRn, el siguiente ensayo ELISA se planeó y realizó.

A. Biotinilación de shFcRn Una solución de FcRn humana soluble (shFcRn) en solución amortiguadora Tris, se dializó dos veces, cada una de las veces durante 3 horas en 2 litros de PBS, pH 8.0. La cantidad de shFcRn recuperado se determinó por medir la absorbancia a 280 nm. La concentración de shFcRn se obtuvo por multiplicar la absorbancia leídas por el coeficiente de extinción para shFcRn, la cual es: e = 85880 M" 1 cm"1. Biotinilación de ShFcRn se completó por tratar el shFcRn dializado con un exceso molar 2-veces de S u 1 f o -NH S -LC -B i ot i n (Invitrogen, Carlsbad, CA) durante 2 horas a 4°C. Después, la mezcla de reacción shFcRn - Su 1 f o-NHS -LC - B i o t in se dializó dos veces en 2 L de PBS frío, seguido por otro lector de absorbancia para determinar la concentración de la proteína restante. La biotinilación shFcRn se almacenó a 4°C con 0.1% de azida de sodio hasta que se necesite .

B. Ensayo ELISA de competencia Péptido-IgG Las placas recubiertas de ReactiBind Neutravidin de 96 pozos bloqueadas con BSA (Pierce, Rockford, IL) se lavaron dos veces con 200 µ?/???? de solución amortiguadora A (solución amortiguadora A: PBS pH 7.4 (Gibco, 14040), 0.5% de BSA libre de IgG, 0.05% de Tween-20) . Los pozos se recubrieron con 100 µ?/???? de 1 µg/ml de biotinilado-shFcRn en solución amortiguadora A. La placa se selló e incubó a 37°C durante 2 horas. Después, la placa se lavó con 200 µ?/???? de solución amortiguadora B (solución amortiguadora B: 100 mM de MES pH 6, 150 mM de NaCl, 0.5% de BSA libre de IgG (Jackson ImmunoResearch , West Grove, PA) , 0.05% de Tween-20) . Luego, 50 µ?/???? de IgG humana 6 nM (Calbiochem, San Diego, CA) en solución amortiguadora B asi como 50 µ?/???? de varios competidores de péptido (en varias concentraciones) se agregaron, asi que la concentración final de IgG en el pozo fue 3 nM. Para permitir la mezcla, la placa se sacudió durante 2 minutos, selló e incubó a 37°C durante 2 horas. Después de la incubación, el liquido se aspiró de la placa y 100 µ?/???? de una dilución 1:10000 del fragmento F(ab')2 especifico del fragmento F(ab') IgG antihumano de cabra conjugado de Peroxidasa (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA) en solución amortiguadora B se agregó. La placa se cubrió, se incubó durante 30 minutos a temperatura ambiente y lavó 4 veces con 200 µ?/???? de solución amortiguadora B enfriada en hielo. La solución de substrato TMB SureBlue (100 µ?/????, KPL, Gaithersburg , MD) se agregó y la placa se permitió incubar a temperatura ambiente hasta desarrollar color, que tomó 5 hasta 10 minutos. Una vez desarrollado el color, 100 µ?/???? de solución detenida TMB (KPL, Gaithersburg, MD) se agregó y la absorbancia se midió a 450 nm. Los datos se trazan como absorbancia vs . concentración de péptido para derivar los valores de concentración inhibitoria 50% (IC50) .

Ejemplo 5: Ensayo FACS de competencia de Péptido-IgG Además de usar el enfoque ELISA descrito en el Ejemplo 4 para determinar si los péptidos de la invención que se derivaron de la separación por exclusión de los filamentos de fago que exhiben colecciones también se dispusieron para bloquear el enlace de IgG hasta FcRn en células, el siguiente ensayo de clasificación activado fluorescente (FACS) se planeó y realizó.

A. Etiquetado de Synagis® con Alexa-Fluor-488 El IgGI humanizado (Synagis®, Medlmmune, Gaithersburg, MO) se etiquetó con el kit de proteina etiquetado Alexa Fluor 488 (Molecular Probes /Invitrogen, Carlsbad, CA) de acuerdo al protocolo sugerido por el fabricante. Brevemente, 50 µ? de bicarbonato de sodio 1 M, pH 9.0 se agregó a 500 µ? de una solución 2 mg/ml de IgG en PBS. Esta solución de proteina se agregó al éster de succinimidilo Alexa Fluor 488 (polvo seco) e incubado a temperatura ambiente durante 1 hora. La proteina se purificó por cromatografía de exclusión de tamaño usando la columna del componente del kit (resina de purificación de exclusión de tamaño fino Bio-Rad BioGel P-30). La muestra se cargó en la columna y eluyó con PBS. La primera banda de color contiene la proteína etiquetada. El grado de la etiqueta se determinó por medir la absorbancia del IgG eluido a 280 nm y 494 nm. La concentración molar de la proteína se determinó usando la fórmula: concentración de la proteína (M) = (A280-(A494 x 0.11 ) x factor de dilución] /203, 000. Además, la fórmula usada para derivar los moles de tinte por mol de la proteína fue: = ?494 x factor de dilución/71 , 000 x concentración de la proteína (M) . Típicamente, 4-7 moles de Alexa-Fluor 488 se incorporaron por mol de IgG.

B. Ensayo FACS de competencia IgG-Péptido usando células 293 clon 11 En preparación para el ensayo, células HEK 293 clon 11 (Ejemplo 2) en medio DMEM completo (Gibco, Carlsbad, CA) containing 5 pg/ml Blasticidin y 250 g/ml G418 (Gibco, Carlsbad, CA) se hilaron abajo y resuspendieron en solución amortiguadora C (solución amortiguadora C: Dulbecco's PBS (Gibco, Carlsbad, CA) que contiene 10 mM de EOTA (Gibco) ) en una concentración de 3 x 106 de células/ml. Las células (0.1 mi) se colocaron en pipetas en cada pozo de una placa de ensayo de 96 pozos y las placas se centrifugaron a 2600 RPM durante 5 min usando un centrifugo de banco superior Sorvall RT7. Los sobrenadantes se decantaron suavemente y la placa se borró en una toalla de papel. Los competidores péptidos (90 µ?) solubilizados en solución amortiguadora C en varias concentraciones se agregaron a la placa y mezclaron con una pipeta multi-canal. 10 µ? de Synagis® etiquetada Alexa 488 se agregó a cada pozo en la placa, de tal manera que la concentración final de Synagis® etiquetada Alexa 488- fue 100 nM. La placa se envolvió en papel aluminio, se colocó en hielo durante una hora y centrifugado subsecuentemente a 2600 rpm durante 5 minutos en un centrifugo de banco superior Sorvall RT7 seguido por un solo lavado con 100 µ? de solución amortiguadora C y una segunda etapa de centrifugación. Las células se volvieron a suspender en 200 µ? de solución amortiguadora C y analizaron en un citómetro de flujo Beckman Coulter EPICS XL.

Ejemplo 6: Métodos para la Determinación de Constantes de enlace de Equilibrio ( D) para Péptidos usando Resonancia de Plasma de Superficie (SPR) Las etapas siguientes se realizaron para reticular FcRn de humano soluble o de macaco a la superficie de dextrano de un chip de sensor CM5 (Biacore AB, Uppsala, Suecia) por una reacción de acoplamiento de amina que involucra clorhidrato 1-etil- ( 3-dimetilaminopropil ) -carbodiimida (EDC) (Biacore AB, Uppsala, Suecia) y N-hidroxisuccinimida (NHS) (Biacore AB, Uppsala, Suecia) como se recomienda por Biacore (BIAapplications Handbook, versión AB, sección 4.2, Biacore AB, Uppsala, Suecia) . La proteina FcRn se diluyó en 50 mM de acetato de sodio, pH 4.5 (Biacore AB, Uppsala, Suecia) a una concentración de 10 hasta 30 g/ml y se usó para recubrir un flujo celular microplaqueta sensorial. Los sitios residuales en el flujo celular de FcRn se bloquearon con clorhidrato de etanolamina 1 M pH 8.5 (Biacore AB, Uppsala, Suecia). Un control de flujo celular se bloqueó con etanolamina para referencia de substracción. Para análisis de los péptidos monoméricos, FcRn se recubrió a una densidad final de 4000-5000 unidades de respuesta (RU) . Para análisis de los diméros del péptido, FcRn se recubrió a una densidad de 2000-2500 RU . Todas las medidas SPR se realizaron usando un Instrumento BIACORE 3000 (Biacore AB Uppsala, Suecia) . Para hacer las mediciones en ya sea pH 6 o pH 7.4, los experimentos se realizaron en 50 mM de fosfato, 100 mM de cloruro de sodio, 0.01% de tensoactivo P20 (Biacore AB, Uppsala, Suecia).

A. Procedimiento Representativo para la Determinación de Constantes de Enlace de Péptidos Monoméricos Diez, disoluciones de 2 veces del péptido se inyectaron sobre la microplaqueta FcRn-CM5 en una relación de 20 µ?/min durante 2 min. El péptido se disocia de la microplaqueta durante 2.5 minutos con solución amortiguadora. Cualquier péptido restante se removió de la microplaqueta con una segunda inyección 30 de solución amortiguadora HBS-P (Biacore AB, Uppsala, Suecia) en una relación de 30 µ?/min. Los sensorgramos se generaron y analizaron usando software BiaEval versión 3.1 (Biacore AB, Uppsala, Suecia). El equilibrio RU observado para cada inyección se trazan contra la concentración. Los calores KD de equilibrio se derivaron por análisis de las parcelas usando el modelo de afinidad de estado constante incluyendo en el software BiaEval.

B . Procedimiento Representativo para Determinación de Enlace Constante de Péptidos Diméricos Diez, diluciones de 2 veces del péptido se inyectaron sobre la microplaqueta FcRn-CM5 en una relación de 30 µ?/min durante 10 min. Los péptidos se disocian de la microplaqueta durante 10 minutos con solución amortiguadora. Cualquier péptido restante se removió de la microplaqueta con dos, inyecciones de 60 segundos de una solución que contiene 50 mM de Tris-clorhidrato, 100 mM de NaCl, 0.01% de tensoactivo P20 pH 9.0 a 100 µ?/min. Los Sensogramas se generaron y analizaron usando software BiaEval versión 3.1 (Biacore AB, Uppsala, Suecia). El equilibrio RU observado para cada inyección se trazan contra la concentración. Los valores KD de equilibrio se derivaron por análisis de las parcelas usando el modelo de afinidad de estado constante incluyendo en el software BiaEval.

Ejemplo 7 : Síntesis de Péptidos Monoméricos que contienen Enlaces Disulfuro La síntesis de péptidos monoméricos se realizó usando síntesis de péptido de fase sólida ya sea manualmente con un matraz de fondo redondo con vidrio poroso o por usar un sintetizador 396-omega Chemtech avanzado (Advanced Chemtech, Louisville, KY) . Los protocolos Fmoc/tBu estándar se usaron (W. C. Chan y P. D. hite eds., Fmoc Solíd Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach Oxford University Press Inc. New York (2000) ) , en combinación con una resina amida Rink (Novabiochem, San Diego, CA) o PAL-PEG-PS (Applied Biosystems, Foster City, CA) para proporcionar desdoblamiento superior de amidas de terminal C. Los reactivos de acoplamiento fueron 2-(lH-Benzotriazol-l-il ) -1, 1, 3, 3, -tetrametiluronio hexafluorofosfato (HBTU) y N-hidroxibenzotriazol (HOBt) (Novabiochem, San Diego, CA) . La base fue diisopropiletilamina (DIEA) (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) , y N, N-dimetilformamida (DMF) fue el solvente (EM Science, Kansas City, MO) . El ciclo de síntesis típico involucra 2 x 10 minutos de etapas de desprotección con piperidina al 20% en DMF, 2 x 30 minutos de aminoácido de acoplamiento con HOBt/HBTU y una etapa de nivelación de 10 minuto con anhídrido acético/HOBt . Los péptidos se desdoblaron de la resina por tratamiento durante 2 horas con 95% de ácido trifluoroacético; 2.5% de taneditiol; 1.5% de triisopropilsilana y 1% de agua y precipitado con éter enfriado en hielo, centrifugado y triturado tres veces con éter. Los péptidos que contienen cisteina cruda se oxidaron para sus disulfuros correspondientes por disolver los péptidos en una concentración de 1 mg/ml en una mezcla 4:1 de ácido acético y agua (EM Science, Kansas City, MO) . Diez equivalentes molares de yodo (solución 1 M en agua, Sigma-Aldrich, St . Louis, MO) se agregaron a la solución y la mezcla de reacción se mezcló durante una hora a temperatura ambiente. La reacción se detuvo por la adición progresiva de tiosulfato de sodio 1 M ( Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) hasta que se obtuvo una solución clara. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y se purificó subsecuentemente usando un sistema CLAR de fase inversa Waters Prep600 (Millford, MA) equipado con una columna C18 250 mm x 21.2 mm Phenomenex (Torrence CA) . El eluyente elegido para la etapa de purificación CLAR fue un gradiente de acetonitrilo en agua que contiene 0.1 % (p/v) de TFA. Las fracciones apropiadas se colectaron, combinaron y liofilizaron . La identidad o pureza del péptido se confirmó por CLAR analítica de fase inversa en combinación con una columna 250 mm x 2 mm (Phenomenex, Torrence, CA) acoplado con espectrometría de masa de electrorocio (Mariner ES-MS) (Applied Biosystems, Foster City, CA) . La Tabla 2 proporciona un listado de las secuencias de péptido de fago original derivadas de la separación por exclusión de la colección de expresión del péptido usado para identificar péptidos con una afinidad alta para FcRn humana y la capacidad para bloquear la interacción IgG-FcRn. La columna 1 que contiene el péptido identificado. La columna 2 contiene la secuencia de aminoácidos de los péptidos. La columna 3 contiene el IC50 de cada péptido copmo se determina por ELISA de competencia IgG resumido en el Ejemplo 4. Las columnas 4 y 5 contienen el KD de cada péptido como se determina en el pH 6 y pH 7.4, respectivamente, por el análisis Biacore resumido en el Ejemplo 6.

Tabla 2. Secuencias de Péptido de Fago Original Secuencia ICso KD KD µ? (PH 6) pH 7.4 ? µ? SEQ ID NO:6 AGQRFCTGHFGGLYPCNGPGTGG GK 36 5.7 45 SEQ ID NO:7 AGGGCVTGHFGGIYCNTOGTGGGK 33 5.2 34.7 SEQ ID NO:8 AGKIICSPGHFGG YCQGKGTGGG K 64 22 78 SEQ ID NO:9 AGPSYCIEGHIDGIYCFNAGTGGGK 49 8.8 76 SEQ ID NO: 10 AGNSFCRGRPGHFGGCYLFGTGG GK 33 9.4 93 La Tabla 3 proporciona un listado de truncaciones de la SEQ ID NO: 6 de péptido. El efecto de las truncaciones en los parámetros de enlace de estos péptidos con FcRn humano se muestran. La columna 1 contiene el identificador del péptido.

La columna 2 contiene la secuencia de aminoácidos de los péptidos. La columna 3 contiene el IC50 de cada péptido como se determina por ELISA de competencia IgG resumido en el Ejemplo 4. Las columnas 4 y 5 contienen el KD de cada péptido como se determina en el pH 6 y pH 7.4, respectivamente, por el análisis Biacore resumido en el Ejemplo 6.

Tabla 3. Truncacxones de la SEQ ID NO : 6 Secuencia IC60 D KD µ? (PH 6) pH 7.4 µ? µ? SEQ ID NO:6 AGQRFCTGHFGGLYPCNGPGTGGGK 36 5.7 45 SEQ ID NO:1 QRFCTGHFGGLYPCNGP 26 5.1 30 SEQ ID NO:17 CTGHFGGLYPCNGP 239 34 nd SEQ ID NO:18 QRFCTGHFGGLYPC 27 4.2 26 SEQ ID NO:19 CTGHFGGLYPC 110 20 320 SEQ ID NO:20 TGHFGGLYP >250 >250 nd SEQ ID NO:21 RFCTGHFGGLYPCNGP 24 2.9 78 SEQ ID NO:22 FCTGHFGGLYPCNGP 67 11 120 SEQ ID NO:23 QRFCTGHFGGLYPCNG 34 4.6 69 SEQ ID NO:24 QRFCTGHFGGLYPCN 31 6.1 73 La Tabla 4 proporciona un listado de SEQ ID NO:l -derivados de péptidos y péptido análogo, en el cual los aminoácidos sencillos se han substituido con alanina (un escaneo de alanina) . El efecto de las substituciones en los parámetros de enlace de estos péptidos con FcRn humano se muestran. La columna 1 contiene el ident ificador del péptido. La columna 2 contiene la secuencia de aminoácidos de los péptidos. La columna 3 contiene el IC50 de cada péptido como se determina por ELISA de competencia IgG resumido en el Ejemplo 4. Las columnas 4 y 5 contienen el KD de cada péptido como se determina en el pH 6 y pH 7.4, respectivamente, por el análisis Biacore resumido en el Ejemplo 6.

Tabla 4. Barrido de Alanina de SEQ ID NO Secuencia ic50 KD D µ? (pH 6) pH 7.4 µ? µ? SEQ ID NO:1 QRFCTGHFGGLYPCNGP 26 5.1 30 SEQ ID NO:25 QAFCTGHFGGLYPCNGP 23 7.7 nd SEQ ID NO:26 QRACTGHFGGLYPCNGP 95 28 nd SEQ ID NO:27 QRFCAGHFGGLYPCNGP 30 4.9 nd SEQ ID NO:28 QRFCTAHFGGLYPCNGP >125 >250 nd SEQ ID NO:29 QRFCTGAFGGLYPCNGP >125 >250 nd SEQ ID NO:30 QRFCTGHAGGLYPCNGP >125 >250 nd SEQ ID NO:31 Q R FCTGH FAG LY PC NG P >125 230 200 SEQ ID NO:32 QRFCTGHFGALYPCNGP >125 120 110 SEQ ID NO:33 QRFCTGHFGGAYPCNGP 107 26 81 SEQ ID NO:34 QRFCTGHFGGLAPCNGP >125 >250 nd SEQ ID NO:35 QRFCTGHFGGLYACNGP 96 14 100 SEQ ID NO:36 QRFCTGHFGGLYPCAGP 30 8 nd La Tabla 5 proporciona un listado de los pépt idc derivados de SEQ ID NO: 1 y péptidos análogos en el cual las substituciones de cisteinas con derivados de cisteina se han realizado. El efecto de las substituciones en los parámetros de enlace de estos péptidos con FcRn humano se muestran. La columna 1 contiene el identificador del péptido. La columna 2 contiene la secuencia de aminoácidos de los péptidos. La columna 3 contiene el IC50 de cada péptido como se determina por ELISA de competencia IgG resumido en el Ejemplo 4. Las columnas 4 y 5 contienen el KD de cada péptido como se determina en el pH 6 y pH 7.4, respectivamente, por el análisis Biacore resumido en el Ejemplo 6.

Tabla 5. Derivados de Cisteina de SEQ ID NO:l Secuencia IC50 KD D (SEQ ID NOS 1 & 37-47) µ? (pH 6) pH 7.4 µ.? µ SEQ ID NO:1 QRF-C-TGHFGGLYP-C-NGP 26 5.1 30 Péptido No. 27 QRFCTGHFGGLYP-hC-NGP 21 3.9 Péptido No. 28 QRF-hC-TGHFGGLYP-hC-NGP 20 3.8 Péptido No. 29 QRF-c-TGHFGGLYP-C-NGP >125 150 Péptido No. 30 QRF-C-TGHFGGLYP-c-NGP 125 31 Péptido No. 31 QRF-c-TGHFGGLYP-c-NGP >500 200 Péptido No. 32 QRF-Pen-TGHFGGLYP-C-NGP 2 0.25 Péptido No. 33 QRF-C-TGHFGGLYP-Pen-NGP 18 2.7 Péptido No. 34 QRF-Pen-TGHFGGLYP-Pen-NGP 2 0.37 Péptido No. 69 QRF-Pen-TGHFGGLYP-hC-NGP 2 0.31 Péptido No. 70 QRF-hC-TGHFGGLYP-Pen-NGP 16 2.1 Péptido No. 295 QRF-Pen-TGHFG-e-LYP-Pen-NGP 1.6 0.28 * "Pen" = L-penicilamina; "hC" = L-homocisteina; La Tabla 6 proporciona un listado de los péptidos derivados de SEQ ID No: 1 y Péptido No. 32 en los cuales los aminoácidos sencillos se han substituido para aminoácido de N-metilo. El efecto de las substituciones en los parámetros de enlace de estos péptidos con FcRn humano se muestran. La columna 1 contiene el ident if icador del péptido. La columna 2 contiene la secuencia de aminoácidos de los péptidos. La columna 3 contiene el IC50 de cada péptido como se determina por ELISA de competencia IgG resumido en el Ejemplo 4. Las columnas 4 y 5 contienen el KD de cada péptido como se determina en el pH 6 y pH 7.4, respectivamente, por el análisis Biacore resumido en el Ejemplo 6.

Tabla 6. Barrido de N-metilo de SEQ ID NO:l y Péptido No. 32 Secuencia tC5o KD KD (SEQ ID NOS 1 & 48-60) µ? ( H 6) pH 7.4 µ? µ SEQ ID NO:1 QRFCTGHFGGLYPCNGP 26 5.1 30 Péptido Mo. 196 QRFC-N eAla-GHFGGLYPCNGP 169 18 Péptido No. 32 QRF-Pen-TGHFGGLYP-C-NGP 2 0.25 Péptido No. 108 QRF-Pen-T-Sar-HFGGLYP-C-NGP >125 88 Péptido No. 192 RF-Pen-TG-NMeHis-FGGLYPC >2S0 nd Péptido No. 110 QRF-Pen-TGH-N eP e-GGLYPCNGP >125 >250 Péptido No. 11 1 QRF-Pen-TGHF-Sar-GLYPCNGP 27 2 Péptido No. 112 QRF-Pen-TGHFG-Sar-LYPCNGP 0.9 0.11 Péptido No. 113 QRF-Pen-TGHFGG-NMeLeu-YPCNGP 1.6 0.086 Péptido No. 114 QRF-Pen-TGHFGGL-NMeTyr-PCNGP >125 92 Péptido No. 146 RF-Pen-TGHFGG-NMeLeu-YPCNGP 2.1 0.059 0.28 Péptido No. 147 RF-Pen-TGHFG-Sar-YPCNGP 1.0 0.058 0.35 Péptido No. 187 QRF-Pen-TGHFG-Sar NMeLeu-YPCNGP 0.42 0.O46 0.23 Péptido No. 235 RF-Pen-TGHFG-Sar-NMeLeu-YPC 0.49 0.031 0.17 * Sar = sarcosina ; N eAla = N-metilo alanina ; prefijo "NMe" indica aminoácido N-metilo La Tabla 7 proporciona un listado de truncaciones de derivados de péptidos derivados del Péptido No. 32. El efecto de las truncaciones en los parámetros de enlace de estos péptidos con FcRn humano se muestran. La columna 1 contiene el ident i f icador del péptido. La columna 2 contiene la secuencia de aminoácidos de los péptidos. La columna 3 contiene el IC50 de cada péptido como se determina por ELISA de competencia IgG resumido en el Ejemplo 4. Las columnas 4 y 5 contienen el KD de cada péptido como se determina en el pH 6 y pH 7.4, respectivamente, por el análisis Biacore resumido en el E j emplo 6.

Tabla 7. Truncaciones del Péptido No . 32 Secuencia IC50 KD KD (SEQ ID OS 61 -69) µ (pH 6) pH 7.4 µ? µ.? Péptido No. 32 QRF-Pen-TGHFGGLYPCNGP 2 0.25 1 .2 Péptido No. 82 F-Pen-TGHFGGLYPC T.7 0.31 5 Péptido No. 83 NH F-Pen-TGHFGGLYPC 3.1 0.29 12 Péptido No. 99 RF-Pen-TGHFGGLYPC 2.0 0.17 3.4 Péptido No. 141 QRF-Pen-TGHFGpLYPC 1.5 0.19 Péptido No. 142 RF-Pen-TGHFGpLYPC 1.5 0.1 Péptido No. 143 F-Pen-TGHFGpLYPC 1.7 Péptido No. 144 RF-Pen-TGHFGpLYPCNGP 1.5 Péptido No. 145 F-Pen-TGHFGpLYPCNGP 3.1 . "pen- _ L-penicilamina La Tabla 8 proporciona un listado de derivados péptidos del Péptido No. 32 y péptidos análogos, en el cual las substituciones con varios aminoácidos y derivados de aminoácidos se han generado donde generalmente existe la secuencia: Gly-Gly-Leu. La columna 1 contiene el identificdor del péptido. La columna 2 contiene la secuencia de aminoácidos de los péptidos. La columna 3 contiene el IC50 de cada péptido como se determina por ELISA de competencia IgG resumido en el Ejemplo 4. Las columnas 4 y 5 contienen el KD de cada péptido como se determina en el pH 6 y pH 7.4, respectivamente, por el análisis Biacore resumido en el Ejemplo 6.

Tabla 8. Análogos del Péptido No . 32 en Gly-Gly-Leu Secuencia IC50 D D (SEQ ID NOS 70-98) µ (PH 6) pH 7.4 µ µ? Péptido No. 32 QRF-Pen-TGHF-GG^LYP-C-NGP 2 0.25 1.2 Péptido No. 40 QRF-Pen-TGHF-G-p-LYPCNGP 1.4 0.23 1.1 Péptido No. 41 QRF-Pen-TGHF-Obr-LYPCNGP 8.1 0.83 8.8 Péptido No. 42 QRF-Pen-TGHF-G-h-LYPCNGP 12 2 20 Péptido No. 43 QRF-Pen-TGHF-GJ-LYPCNGP 18 2.2 41 Péptido No. 44 QRF-Pen-TGHF-GJ-LYPCNGP 13 1.7 100 Péptido No. 45 QRF-Pen-TGHF-G-v-LYPCNGP 13 1.5 31 Péptido No. 46 QRF-Pen-TGHF-G-A¡b-LYPCNGP 2.4 0.48 5.3 Péptido No. 47 QRF-Pen-TGHF-d-G-LYPCNGP 3.1 038 4J3 Péptido No. 48 QRF-Pen-TGHF-p-G-LYPCNGP 5 0.79 21 Péptido No. 49 QRF-Pen-TGHF-M3-LYPCNGP 4.1 0.31 Péptido No. 50 QRF-Pen-TGHF-h-G-LYPCNGP 3.6 0.41 Péptido No. 51 QRF-Pen-TGHF-nG-LYPCNGP 9.4 2.6 Péptido No. 52 QRF-Pen-TGHF-M3-LYPCNGP 2.8 0.51 Péptido No. 53 QRF-Pen-TGHF-y-G-LYPCNGP 3.2 0.32 Péptido No. 54 QRF-Pen-TGHF-Aib-G-LYPCNGP 17 5.2 Péptido No. 74 QRF-Pen-TGHF-G-a-LYPCNGP 2 0.48 12 Péptido No. 75 QRF-Pen-TGHF-a-G-LYPCNGP 4.5 0.49 4.5 Péptido No. 148 QRF-Pen-TGHF-a^-LYPCNGP 4.5 0.45 Péptido No. 149 QRF-Pen-TGHF-a^-LYPCNGP 3.7 0.43 Péptido No. 150 QRF-Pen-TGHF-tfi-LYPCNGP 5.9 0.72 Péptido No. 151 QRF-Pen-TGHF-t -LYPCNGP 4.3 0.41 Péptido No. 152 QRF-Pen-TGHF-e^-LYPCNGP 21 3.3 Péptido No. 153 QRF-Pen-TGHF-f-G-N eLeu-YPCNGP 1.3 0.24 Péptido No. 154 QRF-Pen-TGHF-a-G-NMeLeu-YPCNGP 3.2 0.23 Péptido No. 155 QRF-Pen-TGHF-f-G-P-YPCNGP 39 18.3 Péptido No. 202 QRF-Pen-TGHF-p-P-LYPCNGP >250 >100 Péptido No. 203 QRF-Pen-TGHF-^P-LYPCNGP 22 3.8 Péptido No. 189 QRF-Pen-TGHF-a-Sar-LYPCNGP 1.7 0.19 * "Sar" = sarcosina; "Aib" = ácido aminoisobutírico La Tabla 9 proporciona un listado de péptidos derivados de Péptido No. 32 y péptidos análogos, en el cual las substituciones con varios aminoácidos y derivados de aminoácidos se han generado donde normalmente existe la secuencia: Ar g- Phe - Pen i c i 1 amina . La columna 1 contiene el i dent i f i cado r del péptido. La columna 2 contiene la secuencia de aminoácidos de los péptidos. La columna 3 contiene el IC50 de cada péptido como se determina por ELISA de competencia IgG resumido en el Ejemplo 4. Las columnas 4 y 5 contienen el KD de cada péptido como se determina en el pH 6 y pH 7.4, respectivamente, por el análisis Biacore resumido en el 6.

Tabla 9. Análogos del Péptido No . 32 en Arg-Phe-Pen Secuencia ICso D 0 (SEQ ID NOS 99-102) µ? (pH 6) pH 7.4 uM µ? Péptido No. 32 QR-F-Pen-TGHFGGLYPCNGP 2 0.25 1.2 Péptido No. 96 QR-f-Pen-TGHFGGLYPCNGP 11.4 1.8 Péptido No. 97 QR-Y-Pen-TGHFGGLYPCNGP 2.4 0.31 Péptido No. 98 QR-W-Pen-TGHFGGLYPCNGP 1.5 0.29 La Tabla 10 proporciona un listado de péptidos derivados del péptido No. 32 y péptidos análogos, en el cual las substituciones con varios aminoácidos y derivados de aminoácidos se han generado donde normalmente existe la secuencia: Penicilamina-Thr-Gly . La columna 1 contiene el iden t i f i cado r del péptido. La columna 2 contiene la secuencia de aminoácidos de los péptidos. La columna 3 contiene el IC50 de cada péptido como se determina por ELISA de competencia IgG resumido en el Ejemplo 4. Las columnas 4 y 5 contienen el KD de cada péptido como se determina en el pH 6 y pH 7.4, respectivamente, por el análisis Biacore resumido en el Ejemplo 6 Tabla 10. Análogos del Péptido No. 32 en Pen-Thr-Gly Secuencia ?C50 KD D (SEQ ID NOS 103-106) µ? ( H 6) pH 7.4 µ µ Péptido No. 32 QRF-Pen-T-GHFGGLYPCNGP 2 0.25 1.2 Péptido No. 296 QRF-Pen-H-GHFGGLYPCNGP 3 0.15 0.96 Péptido No. 195 QRF-Pen-G-GHFGGLYPCNGP 7.7 0.76 Péptido No. 213 QRF-Pen-(NMeAla)-GHFGGLYPCNGP 5.5 1.0 * "NMeAla" = N-metilo alanina La Tabla 11 proporciona un listado del Péptido No. 187-derivado de péptidos y péptidos análogos, en el cual las substituciones con varios aminoácidos y derivados de aminoácidos se han generado donde normalmente existe la secuencia: Phe-Gly-Sarcosina. La columna 1 contiene el identificador del péptido. La columna 2 contiene la secuencia de aminoácidos de los péptidos. La columna 3 contiene el IC50 de cada péptido como se determina por ELISA de competencia IgG resumido en el Ejemplo 4. Las columnas 4 y 5 contienen el KD de cada péptido como se determina en el pH 6 y pH 7.4, respectivamente, por el análisis Biacore resumido en el Ejemplo 6.

Tabla 11. Análogos del Péptido No. 187 en Phe-Gly-Sar Secuencia IC60 KD D (SEQ ID NOS 107-119) µ ( H 6) pH 7.4 µ µ Péptido No. 87 QRF-Pen-TGHF-G-Sar-N eLeu- YPCNGP 0.42 0.046 0.23 Péptido No. 188 QRF-Pen-TGHF-a-Sar-N eleu- YPCNGP 6.5 0.73 Péptido No. 235 RF-Pen-TGHF-G-Sar-NMeLeu-YPC 0.49 0.031 0.17 Péptido No. 217 RF-Pen-TGHF-f-Sar-N eLeu-YPC 11 1.4 Péptido No. 218 RF-Pen-TGHF-y-Sar-NMeLeu-YPC >50 13 Péptido No. 219 RF-Pen-TGHF-|-Sar-NMeLeu-YPC 4 0.47 Péptido No. 220 RF-Pen-TGHF-w-Sar-NMeLeu-YPC 11 2.7 Péptido No. 240 RF-Pen-TGHF-t-Sar-N eLeu-YPC 71 4.8 Péptido No. 241 RF-Pen-TGHF-s-Sar-NMeLeu-YPC 23 1.1 Péptido No. 242 RF-Pen-TG HF-d-Sar-NMeLeu- YPC 33 2.6 Péptido No. 243 RF-Pen-TGHF-n-Sar-NMeLeu-YPC 29 2.1 Péptido No. 244 RF-Pen-TGHF-e-Sar-NMeLeu-YPC 6.4 0.58 Péptido No. 245 RF-Pen-TGHF-g-Sar-N eLeu-YPC 4.5 0.36 * "Sar" = sarcosina; "Aib" = ácido aminoisobutirico La Tabla 12 proporciona un listado de péptidos derivados del Péptido No. 32 y péptidos análogos, en el cual las substituciones con varios aminoácidos y derivados de aminoácidos se han generado donde normalmente existe la secuencia: His-Phe-Gly . La columna 1 contiene el identificador del péptido. La columna 2 contiene la secuencia de aminoácidos de los péptidos. La columna 3 muestra la estructura química de cadena lateral de Phe análogo. La columna 4 contiene el IC50 de cada péptido como se determina por ELISA de competencia IgG resumido en el Ejemplo 4. La columna 5 contiene el KD de cada péptido como se determina en el pH 6 por el análisis Biacore resumido en el Ejemplo 6.

Tabla 12. Análogos del Péptido No. 32 en His-Phe-Gly Secuencia Cadena IC50 KD (SEQ ID NOS 120-145) lateral µ (PH €) análogo µ? Phe Péptido No. 32 QRF-Pen-TGH-F-GGLYPCNGP -O 2 0.25 Péptido No. 55 QRF-Pen-TGH-(4-amino-Phe¾-GGLYPCNGP 13 1 Péptido No. 56 QRF-Pen-TGH-(4- metoxi-Phe )-GGLYPCNGP ioo 18 Péptido No. 57 QRF-Pen-TGH-(pentafluoro-Phe)-GGLYPCNGP 120 70 Péptido No. 58 QRF-Pen-TGH-(2- piridilalanina )-GGLYPCNGP 90 1.2 Péptido No. 59 QRF-Pen-TGH-(3-PiridilAla K5GLYPCNGP O 60 19 Péptido No. 60 QRF-Pen-TGH-(4-nitro-Phe)-GGLYPCNGP -o* >125 84 Péptido No. 61 QRF-Pen-TGH-n- naftilalanina ) - GGLYPCNGP Péptido No. 62 QRF-Pen-TGH-(2- naftilalanina )- GGLYPCNGP 90 11 Péptido No. 88 Péptido No. 89 Péptido No. 90 Péptido No. 92 Péptido No. 93 Péptido No. 94 QRF-Pen-TGH-(PheNHAc)-GGLYPCNGP >125 270 Péptido No. 95 QRF-Pen-TGH-W-GGLYPCNGP Péptido No. 102 QRF-Pen-TGH-í fenil GlvVGGLYPCNGP Péptido No. 103 QRF-Pen-TGH-(Tjc)-GGLYPCNGP >125 >250 Péptido o. 104 QRF-AsD-TGH-(2MePhe)-GGLYP-Lvs-NGP 1 ~P 11 Péptido No. 221 RF-Pen-TGH-Í2-Cl-P e)-GGLYPC 4 Péptido No. 222 -P RF-Pen-TGH-(3-CI-Phe)-GGLYPC -Qo 3.7 Péptido No. 223 RF-Pen-TGH-(4-CI-PheVGGLYPC -o 43 Péptido No. 224 RF-Pen-TGH-(3.3-Di-Phe)-GGLYPC 32 Péptido No. 225 RF-Pen-TGH-(4,4-Bi-Phe)-GGLYPC -oOG >1·25 Péptido No. 226 RF-Pen-TGH-(4-t- Butil -PheKSGLYPC >1·25 Péptido No. 267 RF-Pen-TGH-((D/L)- betametilPhe)-G-Sar- NMeLeu-YPC 16 *"Sar" = sarcosina; "NMeLeu" = N-metil leucina 1 SYN927 se cicliza por medio de un enlace amida entre las cadenas laterales Asp y Lys La Tabla 13 proporciona un listado de varios péptidos y péptidos análogos, en la cual los aminoácidos sencillos se han substituido con tirosina. El efecto de las substituciones en los parámetros de enlace de estos péptidos con FcRn humano también se proporciona. La columna 1 contiene el identificador del péptido. La columna 2 contiene la secuencia de aminoácidos de los péptidos. La columna 3 muestra la estructura química de la cadena lateral de Tyr análoga. La columna 4 contiene el IC50 de cada péptido como se determina por ELISA de competencia IgG resumido en el Ejemplo 4. Las columnas 5 y 6 contienen el KD de cada péptido como se determina en el pH 6 y pH 7.4, respectivamente, por el análisis Biacore resumido en el Ejemplo 6.

Tabla 13. Substituciones de Tirosina Secuencia Cadena IC50 D o (SEQ ID NOS 1 & 146-155) lateral uM (?? 6) pH 7.4 análogo µ? µ? Tyr SEQ ID NO:1 QRFCTGHFGGL-Y-PCNGP -O 26 5.1 30 Péptido No. 26 QRFCTGHFGGL-F-PCNGP O >125 230 Péptido No. 32 ORF-Pen-TGHFGGL-Y-PCNGP -o* 2 0.25 1.2 Péptido No. 63 ORF-Pen-TGHFGGL-(4-amino-Phe)- PCNGP o- 110 34 Péptido No. 64 QRF-Pen-TGHFGGL-(4-metoxiPhe)- PCNGP 120 31 Péptido No. 65 QRF-Pen-TGHFGGL-(DentafluoroPhe)- PCNGP Ür >125 72 Péptido No. 66 QRF-Pen-TGHFGGL-(2- piridilAla )-PCNGP -o >125 120 Péptido No. 67 QRF-Pen-TGHFGGL-(3- piridilAla )-PCNGP o 92 34 Péptido No. 68 QRF-Pen-TGHFGGL-(4-nitro-Phe)-PCNGP 122 180 Péptido No. 87 QRF-Pen-TGHFGGL-(2-nitro-Tvr)-PCNGP >125 290 Péptido No. ORF-Pen-TGHFGGL-(4-fluoro-Phe)-PCNGP 140 26 2.2 24 La Tabla 14 proporciona un listado de péptidos derivados del péptido No. 32 y péptidos análogos, en el cual las substituciones con varios aminoácidos y derivados de aminoácidos se han generado donde normalmente existe la secuencia: Gly-Leu. La columna 1 contiene el identif icador del péptido. La columna 2 contiene la secuencia aminoácidos de los péptidos. La columna 3 contiene el IC5n de cada péptido como se determina por ELISA de competencia IgG resumido en el Ejemplo 4. Las columnas 4 y 5 contienen el KD de cada péptido como se determina en pH 6 y pH 7.4, respectivamente, por el análisis Biacore resumido en el Ejemplo 6.

Tabla 14. Análogos del Péptido No. 32 en Gly-Leu La Tabla 15 proporciona un listado de péptidos derivados del péptido No. 32 y péptidos análogos con una substitución de una glicina y una leucina tomados juntos para un dipéptido mimético donde normalmente existe la secuencia: Gly-Leu. La columna 1 contiene el ident i f icador del péptido. La columna 2 contiene la secuencia de aminoácidos de los péptidos. La columna 3 proporciona la descripción para la identidad de X en la secuencia. La columna 4 muestra la estructura química del análogo designado X. La columna 5 contiene el IC50 de cada péptido como se determina por ELISA de competencia IgG resumido en el Ejemplo 4. La columna 6 contiene el KD de cada péptido como se determina en el pH 6 por el análisis Biacore resumido en el Ejemplo 6.

Tabla 15. Peptidomiméticos Análogos del Péptido No . 32 en Gly- Leu lactama L-L Péptido No. QRF-Pen-TGHFG-X-YPCNGP 216 Friedinger ¿ Y 19 lactama D,L Péptido No. QRF-Pen-TGHFG-X-YPCNGP Friedinger 194 4.9 Ejemplo 8: Sintesis de Péptidos que contienen Análogos de Histidina Los análogos de histidina modificados (Tabla 16) se sintetizaron como se describe en el Ejemplo 7 para la sintesis de disulfuros de péptido monomérico excepto por los siguientes análogos de histidina modificados. El péptido No. 259 se sintetizó por suspender la resina que contiene los análogos de péptido completamente protegidos al Péptido No. 99 en yoduro de metilo puro durante 15 horas. La resina se lavó con diclorometano y el péptido se desdobló de la resina, se oxidó y purificó por CLAR como se describe anteriormente para proporcionar el Péptido No. 259 del péptido de histidina mono-met i lado . El Péptido No. 260 se sintetizó por suspender la resina que contienen el análogo del péptido completamente protegido al Péptido No. 99 en yoduro de metilo puro durante 72 horas. La resina se lavó con diclorometano y el péptido se desdobló de la resina, oxidó y purificó purified por CLAR como se describe anteriormente para proporcionar el Péptido No. 260 del péptido de histidina di-metilado. El péptido No. 269 se sintetizó por suspender la resina que contiene el análogo del péptido completamente protegido al Péptido No. 248 en diclorometano bajo nitrógeno. Dies equivalentes molares de 2 , 4 , 6-tri-tert-but ilpiridina (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) se agregaron a la suspensión seguida por cinco equivalentes molares de sulfonato de met i 1 - 1 r i f luorome t ano (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) . La reacción se permitió procesar durante 4 horas mientras se sacudió y enjuagó primero con diclorometano, seguido por un enjuague con dimetilformamida y finalmente con diclorometano nuevamente. El péptido se desdobló de la resina, oxidó y purificó por CLAR como se describe anteriormente para proporcionar el péptido N-metil-tiazolio, Péptido No. 269. El péptido No. 271 se sintetizó por tratar el péptido del Péptido No. 261 con 30 equivalentes de sulfato de cobre, 30 equivalentes de ácido ascórbico y 10 equivalentes de azida de sodio en una solución de solución amortiguadora de fosfato de sodio 100 mM en pH 7.5 con 33% de etanol, 10% de acetonit rilo , 10% de N,N-dimet i 1 formamida . La reacción procedió durante 2 horas y la mezcla se purificó por CLAR como se describe anteriormente para proporcionar la cadena lateral 1,2,3-triazol que contiene el péptido del Péptido No. 271. La Tabla 16 proporciona un listado de varios péptidos y péptidos análogos, en los cuales los aminoácidos sencillos se han substituido por histidina. El efecto de las substituciones en los parámetros de enlace de estos péptidos con FcRn humano también se proporcionan. La columna 1 contiene el ident if icador del péptido. La columna 2 contiene la secuencia de aminoácidos de los péptidos. La columna 3 muetsra la estructura química de cadena lateral de His análogo. La columna 4 contiene el IC50 de cada péptido como se determina por ELISA de competencia IgG resumido en el Ejemplo 4. Las columnas 5 y 6 contienen el KD de cada péptido como se determina en el pH 6 y pH 7.4, respectivamente, por el análisis Biacore resumido en el Ejemplo 6.

Tabla 16. Substituciones de histidina Secuencia Cadena IC '50 Kn Kn (SEQ ID NOS 1 & 168-196) lateral µ? (pH 6) pH 7.4 Análogo His µ? µ? SEQ ID NO:1 QRFCTG-H-FGGLYPCNGP 26 5.1 30 Péptido No. 36 QRFCTG-Dab-FGGLYPCNGP >125 211 Péptido No. 32 QRF-Pen-TG-H-FGGLYP-C-NGP Péptido No. 91 QRF-Pen-TG-Thz-FGGLYPCNGP 44 7.9 21 Péptido No. 109 QRF-Pen-TG-Dap-FGGLYPCNGP >125 >100 Péptido No. 297 QRF-Pen-TG-Dap( Guanil V-FGGLYPCNGP 54 13 16 Péptido No. 138 QRF-Pen-TG-(1 e)His-FGGLYPCNGP 3.4 0.74 14 Péptido No. 139 QRF-Pen-TG-Dab-FGGLYPCNGP 64 7.3 8.4 Péptido No. RF-Pen-TG-NMeHis-FGGLYPC 192 Ñ >250 nd nd Péptido No. RF-Pen-TG-Thz-FG-Sar-NMeL-YPC 248 1.6 .84 1.1 Péptido No. RF-Pen-TG-2 PiridilAla -FG-Sar-NMeL-YPC 249 -O 6.2 .33 0.41 Péptido No. RF-Pen-TG-3 PiridilAla -FG-Sar-NMeL-YPC 250 O 1.2 .064 0.26 Péptido No. RF-Pen-TG- TienilAla -FG-Sar-NMeL-YPC 251 45 2 3 Péptido No. RF-Pen-TG-Dab-FG-Sar-NMeL-YPC 253 16 1.2 1.2 Péptido No. 254 RF-Pen-TG-Orn-FG-Sar-NMeL-YPC 12 1.3 1.2 Péptido No. RF-Pen-TG-Lys-FG-Sar-NMeL-YPC 255 40 1.3 1.1 Péptido No. RF-Pen-TG-Arg-FG-Sar-NMeL-YPC 256 5.5 0.5 0.5 Péptido No. RF-Pen-TG-4 GuanilPhe -FG-Sar-NMeL-YPC -o- 257 1.7 ?.074 0.073 Péptido No. RF-Pen-TG-4aminoPhe-FG-Sar-NMeL-YPC 258 4.6 0r22 1.1 Péptido No. 259 RF-Pen-TG-His(Me¾-FGGLYPC 2.9 0.14 0.38 Péptido No. 260 RF-Pen-TG-His(Me¾2-FGGLYPC Péptido No. RF-Pen-TG- PropargilGly -FG-Sar-NMeLeu- 261 YPC 160 13 11 Péptido No. RF-Pen-TG-(2- PirrolidinilAla )-FG-Sar- 262 NMeLeu-YPC ¦ 150 8.4 13 Péptido No. RF-Pen-TG-(3- PiperidilalAla )-FG-Sar- 263 NMeLeu-YPC o. RF-Peci-TG-(4- PiperidilAla )-FG-Sar- -0 6.3 0.66 0.86 Péptido N 264 NMeLeu-YPC 85 5.2 6.4 Ejemplo 9 : Síntesis de Péptidos que contienen Peptidomiméticos Análogos de Gly-Gly Todos los aminoácidos miméticos Gly-Gly (Tabla 17) se incorporaron como sus aminoácidos protegidos Fmoc-amino y están comercialmente disponibles a menos que se indique de otra manera (Chem-Impex, ood Dale, IL) . Los péptidos que contienen 3 (R) -3-amino-2-oxo-l-piperidin-acético se sintetizaron por incorporar el N-Fmoc derivado del ácido 3 (R) -3-amino-2-oxo-l-piperidin-acético en el Péptido No. 227 de acuerdo a el protocolo descrito por R. M. Freidinger et . al., J. Org. Chem. 47: 104-109 (1982). Los péptidos que contienen ácido 3(R)-3-amino-2-oxo-l-pirrolidin acético se sintetizaron por incorporar el N-Fmoc derivado del ácido 3 (R) -3-amino-2-oxo-l-pirrolidin acético en el Péptido No. 214 de acuerdo al protocolo por R. M. Freidinger et . al., J. Org. Chem. 47: 104-109 (1982). Los péptidos que contienen el imitador del dipéptido 5, 5-biciclico se sintetizaron por incorporar el imitador del dipéptido 5,5- biciclico en el Péptido No. 197 o Péptido No. 198 de acuerdo al protocolo descrito por N. L. Subasinghe et. al., J. Med. Chem. 36: 2356-2361 (1993) con la excepción que todos los D-aminoácidos se usaron. Los péptidos que contienen el imitador del dipéptido 6, 5-biciclico se sintetizaron por incorporar el dipéptido 6, 5-biciclico en el Péptido No. 204 de acuerdo a el protocolo descrito por F.A. Etzkorn et. al., J. Am. Chem. Soc. 116: 10412 (1994) con la excepción que todos los D-aminoácidos se usaron. Los péptidos que contienen lactama ( D, L) -Freidinger se sintetizaron por incorporar the ( D, L) -Freidinger en el péptido No. 216 de acuerdo a el protocolo descrito por R. M. Freidinger et al., J. Org. Chem. 47: 104- 109 (1982) con la excepción que L-metionina se usó en lugar de O-metionina. La Tabla 17 proporciona un listado de los péptidos derivados de la SEQ ID NO: 1 y péptidos análogos en el cual las substituciones con varios aminoácidos y derivados de aminoácidos se han generado donde normalmente existen dos glicinas adyacentes (Gly-Gly) . La columna 1 contiene el identificador del péptido. La columna 2 contiene la secuencia de aminoácidos de los péptidos. La columna 3 contiene el IC5o de cada péptido como se determina por ELISA de competencia IgG resumido en el Ejemplo 4. Las columnas 4 y 5 contienen el KD de cada péptido como se determina en el pH 6 y pH 7.4, respectivamente, por el análisis Biacore resumido en el Ejemplo 6.

Tabla 17. Análogos de SEQ ID N0:1 a Gly-Gly Secuencia IC50 D D (SEQ ID NOS 1 & 197-201 ) µ? (pH 6) pH 7.4 µ µ? SEQ ID N0:1 QRFCTGHFGGLYPCNGP 26 5.1 30 Péptido No. 22 QRFCTGHF-a-GLYPCNGP 48 10 137 Péptido No. 23 QRFCTGHFG-a-LYPCNGP 57 12 184 Péptido No. 24 QRFCTGHF-a-a-LYPCNGP 69 22 >250 Péptido No. 25 QRFCGHF-betaAla-LYPCNGP >125 >250 nd Péptido No. 35 QRFCTGHF-Apa-LYPCNGP >125 220 nd * "beta-Ala" = beta-alanina ; "Apa" = ácido 5-aminopentanoico La Tabla 18 proporciona un listado de péptidos derivados del péptido No. 99 y análogos de péptidos con una substitución de dos glicinas tomadas juntas por un análogo peptidomimético donde este es normalmente la secuencia: Gly-Gly. La columna 1 contiene el identificador de péptido. La columna 2 contiene la secuencia de aminoácido de los péptidos. La columna 3 proporciona la descripción para la identidad del análogo peptidomimético designado como X en la secuencia. La columna 4 muestra la estructura química del análogo designado X. La Columna 5 contiene el IC50 de cada péptido como se determina por la competición IgG ELISA resumida en el ejemplo 4. La columna 6 contiene el KD de cada péptido como se determina el pH 6 por el análisis Biacore análisis resumido en el ejemplo 6.

Tabla 18. Análogos peptidomiméticos de Péptido No. 99 a Gly-Gly benzoico Péptido No. 135 RF-Pen-TGHF-X-LYPC ácido (3-amino 57 metil)-benzoico Péptido No. 136 RF-Pen-TGHF-X-LYPC ácido 4- >125 aminofenilacético Péptido No. 137 RF-Pen-TGHF-X-LYPC ácido 3- 14 aminofenilacético Péptido No. 178 RF-Pen-TGHF-X-LYPC ácido 3-amino-2- 0.66 0.16 ???-1-piperidina- acético Péptido No. 179 RF-Pen-TGHF-X-LYPC ácido 3-amino-2- 7.2 0.S7 oxo-1 -piperidina- acético Péptido No. 193 RF-Pen-TGHF-X-LYPC ácido (3S)-3- 7.3 amino-2-oxo-1- piperidina-acético Péptido No. 80 RF-Pen-TGHF-X-LYPC 3-amino-N-1- 159 carboximetil- 2,3,4, 5-tetrahidro -1H-[1]- benzazepina-2- ona i Péptido No. 198 RF-Pen-TGHF-X-LYPC 23 i Péptido No. 204 RF-Pen-TGHF-X-LYPC 2.2 0.32 Péptido No. 205 RF-Pen-TGHF-X-LYPC 0.64 0.103 Péptido No. 214 RF-Pen-TGHF-X-LYPC 2.3 0.28 pirrolidina acético RF-Pen-TGHF-X- (3R)-3-amino-1- Péptido No. 227 NMeLeu-YPC carboximetil- 0.53 0.043 valerolactama RF-Pen-NMeAla-GHF-X- (3R)-3-amino-1- Péptido No. 228 1.1 0.145 NMeLeu-YPC carboximetil- valerolactama Péptido No. 239 Ejemplo 10: Síntesis de los péptidos ciclizados por medio del puente de Lactama A Los Péptidos ciclizados de lactama (Tabla 19) se sintetizaron por síntesis de péptido de fase sólida como se resumen arriba en el ejemplo 7 con la excepción que los siguientes aminoácidos se usaron como substituyentes para diversas cisteinas: Fmoc-Lys (Aloe) -OH, Fmoc-Om (Aloe) -OH, Fmoc-0ab(Aloc)-0H y Fmoc-Oap (Atoe) -OH, Fmoc-Glu (OAllyl) -OH y Fmoc-Asp (OAllyl) -OH (Bachem, Torrance, CA) . Siguiendo la competencia de los procesos para generar los péptidos completamente protegidos en la resina, la resina se hinchó en diclorometano, se purgó con nitrógeno y se trató con 0.1 molar equivalentes de tetraquis- ( trifenilfosfina) paladio (0) (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) y 30 equivalentes molares de fenilsilano ( Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) y la reacción se permitió procesar durante tres horas. La resina se lavó primero con diclorometano, con DMF y finalmente cinco veces adicionales con una solución de 1% (v/v) trietilamina y 1% (p/v) ácido dietilditiocarbámico en DMF. Una etapa de lavado adicional con DMF seguida por el tratamiento de la resina con hexafluorofosfato de benzotriazol-l-il-oxi-tris-pirrolidino-fosfonio (PySOP) (Novabiochem, San Diego CA) y DIEA durante 16 horas. Los péptidos se desdoblaron de la resina y se purificaron como se describe arriba en el ejemplo 7. La Tabla 19 proporciona un listado de diversos péptidos de la invención con substituciones de aminoácidos de los residuos de cisteina para los aminoácidos y análogos de aminoácidos que deberán permitirse para la ciclización de los péptidos respectivos por medio de un puente de lactama. El impacto de las substituciones en los parámetros de enlace de estos péptidos con FcRn humano también se proporcionan. La Columna 1 contiene el identificador del péptido. La Columna 2 contiene la secuencia de aminoácido de los péptidos. La Columna 3 contiene el IC50 de cada péptido como se determina por la competencia IgG ELISA resumida en el ejemplo 4. Las Columnas 4 y 5 contienen el KD de cada péptido como se determina en el pH 6 y pH 7.4, respectivamente, por el análisis Biacore resumido en el ejemplo 6.

Tabla 19. Péptidos ciclizados de lactama Secuencia1 IC50 D KD (SEQ ID NOS 220-246) µ? (pH 6) pH 7.4 µ? µ? Péptido o. 38 QRF-Asp-TGHFGGLYP-Dab-NGP 68 17 150 Péptido No. 39 QRF-Asp-TGHFGGLYP-Lvs-NGP 10 1.2 12 Péptido No. 72 QRF-Dab-TGHFGGLYP-Glu-NGP 81 4.8 nd Péptido No. 73 QRF-Lvs-TGHFGGLYP-Glu-NGP 33 1.2 nd Péptido No. 76 QRF-Glu-TGHFGGLYP-Lvs-NGP 100 27 320 Péptido No. 77 QRF-Glu-TGHFGGLYP-Dab-NGP 86 22 210 Péptido No. 78 QRF-Glu-TGHFGGLYP-Dap-NGP 71 9.6 81 Péptido No. 79 QRF-Asp-TGHFGGLYP-Dap-NGP 32 4.5 30 Péptido No. 80 QRF-Lvs-TGHFGGLYP-Asp-NGP 60 10 52 Péptido No. 81 QRF-Dab-TGHFGGLYP-Asp-NGP 31 8.4 45 Péptido No. 85 QRF-Asp-TGHFGGLYP-Orn-NGP 16 2.7 nd Péptido No. 86 QRF-Glu-TGHFGGLYP-Orn-NGP 80 15 nd Péptido No. 107 QRF-Asp-TGHFGGLY-Lvs-NGP >125 >250 nd Péptido No. 105 QRF-Asp-TGHFG-a-LYP-Lvs-NGP 12 2.1 nd Péptido No. 06 QRF-Asp-TGHF-a-GLYP-Lvs-NGP 17 3.7 nd Péptido No. 123 Asp-TGHFGGLYP-Lvs-NGP 47 Péptido No. 124 F-Asp-TGHFGGLYP-Lvs-NGP 22 Péptido No. 125 RF-Asp-TGHFGGLYP-Lvs-NGP 9.4 Péptido No. 126 QRF-Asp-TGHFGGLYP-Lvs-NGP 13 Péptido No. 127 QRF-Asp-TGHFGGLYP-Lvs-N 7.6 Péptido No. 128 QRF-Dap-TGHFGGLYP-Asp-NGP 120 Péptido No. 129 QRF-Dap-TGHFGGLYP-Glu-NGP >125 Péptido No. 130 QRF-Orn-TGHFGGLYP-Asp-NGP 120 Péptido No. 131 QRF-Orn-TGHFGGLYP-Glu-NGP 30 Péptido No. 132 RF-Asp-TGHFGGLYP-Lys 11 0.90 Péptido No. 133 QRF-Asp-TGHFGGLYP-Lvs 13 0.90 Péptido No. 159 QRF-Asp-TGHFG-p-LYP-Lys-NGP 15 1.2 Hay un enlace amida entre las cadenas laterales de los aminoácidos subrayados; Dab = ácido 1 , 3-diaminobutirico; Dap = ácido 1, 2-diaminoproprionico; Orn = ornitina Ejemplo 11 : Síntesis de análogos del péptido lineal Los análogos de péptido lineales se sintetizaron como se describe arriba en el Ejemplo 7, con la excepción que los aminoácidos que formaron el disulfuro se substituyeron como se establece en las tablas 20 y 21. La Tabla 20 proporciona un listado de los péptidos lineales derivados de SEQ ID NO : 1 y péptido análogos de la invención. Los parámetros de enlace de estos péptidos con FcRn humano también se proporcionan. La Columna 1 contiene el identif icador de péptido. La Columna 2 contiene la secuencia de aminoácido de los péptidos. La Columna 3 contiene el IC50 de cada péptido como se determina por la competencia IgG ELISA resumida en el ejemplo 4. Las Columnas 4 y 5 contienen el KD de cada péptido como se determina en el pH 6 y pH 7.4, respectivamente, por el análisis Biacore resumido en el ejemplo 6.

Tabla 20. Análogos lineales de SEQ ID NO:l Secuencia1 IC50 KD KD (SEQ ID NOS 1 & 247-273) µ? (pH 6) pH.7.4 µ uM SEQ ID NO:1 QRFCTGHFGGLYPCNGP 26 5.1 30 Péptido No. 71 QRF-S-TGHFGGLYP-S-NGP >125 230 Péptido No. 156 Q R F- -TG H F-pj3- LYP- A-NG P >250 Péptido No. 157 QRF-V-TGHF-G-p-LYP-A-NGP 195 16 Péptido No. 58 QRF-V-TGHF-p-G-LYP-A-NGP >250 Péptido No. 162 QRF-L-TGHF-G-P-LYP-A-NGP >250 Péptido No. 163 QRF-T-TGHF-G-p-LYP-A-NGP >250 Péptido No. 164 QRF-F-TGHF-G-p-LYP-A-NGP >250 Péptido No. 165 QRF-Y-TGHF-Gj£-LYP-A-NGP >250 Péptido No. 166 QRF-W-TGHF-GjD-LYP-A-NGP >250 Péptido No. 167 QRF-V-TGHF-G-p-LYP-V-NGP 93 Péptido No. 168 QRF-V-TGHF-G_ -LYP-L-NGP 100 Péptido No. 69 QRF-V-TGHF-G-P-LYP-T-NGP 72 15 Péptido No. 170 QRF-V-TGHF-G-P-LYP-F-NGP >250 Péptido No. 171 QRF-V-TGHF-G-P-LYP-Y-NGP 150 Péptido No. 172 QRF-V-TGHF-G-p-LYP-W-NGP 150 Péptido No. 173 QRF-V-TGHF-G^E-V-YP-A-NGP >250 Péptido No. 174 QRF-V-TGHF-G-P-I-YP-A-NGP 94 Péptido No. 175 QRF-V-TGHF-G-p-F-YP-A-NGP 200 Péptido No. 176 QRF-V-TGHF-G-p-Y-YP-A-NGP 230 Péptido No. 177 QRF-V-TGHF-G^-W-YP-A-NGP 52 5.8 96 Péptido No. 190 QRF-V-TGHF-G-P-W-YP-I-NGP 49 4.2 Péptido No. 209 RF-V-TGHF-G-P-W-YP >125 Péptido No. 210 RF-V-TGHF-G-P-W-YP-A-NGP 100 10 Péptido No. 211 F-V-TGHF-G-P-W-YPA 100 8 Péptido No. 212 V-TGHF-G-p-W-YP-A >250 Péptido No. 236 RF V-TGHF-G-Sar-NMeLeu-YP-A 37 1.85 9 Péptido No. 246 RF-V-TGHF-G-P-W-YPA 60 3.6 1"Sar" = sarcosina; "NMeLeu" = N-metil leucina La Tabla 21 proporciona un listado de péptidos derivados del péptido No. 236 donde diversos análogos pept i domimé t i c o s se substituyen donde estos son normalmente una secuencia de G 1 i c i na - S a r co s i na (Gly-Sar) . La Columna 1 contiene el i de nt i f i cado r de péptido. La Columna 2 contiene la secuencia de aminoácido de los péptidos. La Columna 3 proporciona la descripción para la identidad del análogo pept idomimético designado como X en la secuencia. La Columna 4 muestra la estructura química del análogo peptidomimético designado X. La Columna 5 contiene el IC50 de cada péptido como se determina por la competencia IgG ELISA resumida en el ejemplo 4. La Columna 6 contiene el KD de cada péptido como se determina en el pH 6 por el análisis Biacore resumido en el ejemplo 6.

Tabla 21. Análogos lineales del Péptido peptidomiméticos Péptido No. 182 ácido 3-amino-2- RF-V-TGHF-X-LYPA 38 3.3 ???-1-piperidina- acético Péptido No. 183 RF-V-TGHF-X-LYPA ácido 3-amino-2-oxo >250 -1-piperidina-acético Péptido No. 184 3-amino-N-1- RF-V-TGHF-X-LYPA carboximetil-2,3,4,5- >250 tetrahidro- 1 H-[1 ]-benzazepina-2-ona Péptido No. 185 3-amino-N-1-carboximetil RF-V-TGHF-X-LYPA -2,3,4,5-tetrahidro-1 H-[1] 57 3.1 -benzazepina-2-ona Péptido No. 186 ácido 3-aminofenilacético RF-V-TGHF-X-LYPA >250 Péptido No. 191 QRF-V-TGHF-X-WYPINGP ácido 3-amino-2-oxo-1- nd 333 piperidina-acético Péptido No. 206 RF-V-TGHF-X-LYPA imitador de dipéptido >250 5,5-biclclico Péptido No. 207 RF-V-TGHF-X-LYPA imitador de dipéptido >125 20 6,5-bicíclico Péptido No. RF-V-TGHF-X-LYPA ácido oxo-1- 23 2.3 azepinaacético *"Sar" = sarcosina; "NMeLeu" = N-metil leucina Ejemplo 12: Síntesis de dimeros del péptido por medio de alquilación reductxva Los dimeros del péptido (Tabla 22) se generaron por alquilación reductiva de un aldehido péptido y un péptido amino (N) o carboxi (C) de terminal amina. Las aminas de terminal N del péptido se sintetizaron como se describe arriba en el Ejemplo 7 para la síntesis de disulfuros de péptidos monomericos . Las aminas de terminal C del péptido también se sintetizaron como se describe arriba en el Ejemplo 7 para la síntesis de disulfuros de péptido monomericos, excepto que la resina de 1 , 2-diaminoetano (Novabiochem, San Diego, CA) se usó en la etapa de síntesis. Posteriormente, el desdoblamiento de la resina resulta en una etil amina de terminal C. Los aldehidos de terminal N del péptido (Figura 2) se sinterizaron por hacer reaccionar la amina no protegida del aminoácido de terminal N con 5 equivalentes de anhídrido succínico (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) en la presencia de DIEA en OMF durante 2 horas. Una reacción posterior con 2, 2-dimetil-l, 3-dioxolano metamina (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) en la presencia de PyBOP y DIEA durante 2 horas proporcionó la resina de diol protegida. Luego, el desdoblamiento del péptido crudo de la resina, seguido por la oxidación de cisteina y purificación como se describe arriba en el ejemplo 7 para la síntesis de los disulfuros de péptido monomérico, proporcionando el diol péptido. El diol se disolvió en 33% de acido acético seguido por 2 equivalentes de periodato de sodio (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) se agregó y la reacción se permitió procesar durante 5 minutos. La mezcla de reacción se apagó con 20 equivalentes (con respecto al diol) de etilen glicol (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) y después de diez minutos, la mezcla de reacción cruda se diluyó 3 veces con agua y se purificó sobre una columna C18 Sep-Pak (Waters Corp., Milford, MA) usando un incremento de gradiente de acetonitrilo en agua que contiene 0.1% de TFA. El aldehido péptido se liofilizó y se sometió a análisis por espectroscopia de masas (Mariner ES-EM) seguida por cromatografía líquida (Applied Biosystems, Foster City, CA) como se describe en el Ejemplo 7. Los aldehidos de terminal C del péptido se sintetizaron como se describe arriba en el ejemplo 7 para la síntesis de disulfuros de péptido monomérico, excepto que la resina Fmoc-l-amino-2, 3-propanediol-2 ' -clorotritilo (Novabiochem, San Diego, CA) se usó en lugar de la resina de amida Rink. Por lo tanto la resina de péptido resultante contiene un diol de terminal C enmascarada . Durante el desdoblamiento de la resina, el diol se oxidó hasta un aldehido como se describe arriba por los aldehidos de terminal N. Los monómeros del péptido para sintetizar los péptidos ciclizados de lactama tales como el péptido No. 275, se sintetizaron de conformidad al método descrito arriba en el ejemplo 10 para sintetizar los péptidos ciclizados por una puente de lactama, por ello la ciclización Asp-Lys se llevo a cabo en la resina, previo al desdoblamiento de la resina. Los dímeros del péptido se sintetizaron (Figura 3) por hacer reaccionar un equivalente del aldehido péptido con un equivalente del péptido que contiene una amina a una concentración de 40 mg/ml en DMF que contiene 2% ácido acético. Después de 60 min., 2 equivalentes de cianoborohidruro de sodio (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) se agregaron y la reacción se permitió agitar durante 1 hora. La mezcla de reacción se diluyó 10-veces con agua y se purificó por CLAR y se analizó por espectroscopia de masa (Mariner ES-EM) seguido por cromatografía líquida (Applied Biosystems, Foster City, CA) como se describe en el Ejemplo 7. La tabla 22 proporciona un listado de péptidos diméricos de la invención que se sintetizaron por alquilación reductiva. La Columna 1 contiene el identificador de péptido. La Columna 2 contiene la secuencia de aminoácido de los péptidos. La Columna 3 contiene el IC5o de cada péptido como se determina por la competencia IgG ELISA resumida en el ejemplo 4. Las Columnas 4 y 5 contienen el Kp de cada péptido como se determina en el pH 6 y pH 7.4, respectivamente, por el análisis Biacore resumido en el ejemplo 6. La Columna 6 contiene el IC50 de cada péptido como se determina por por el análisis FACS de enlace IgG competitivo como se resume en el ejemplo 5.

Tabla 22. Dimeros y trímeros sintetizados por alquilación reductiva Péptido 30 2.9 \ /?"? (RF-Pen- e Ala -GHF-X-N eLeu-YPC] No. 231 V-\J °l. „ |RF-Pe 1n-NMeAla-GHF-X-NMeLeu-YPC 1] Péptido 0. <0.8 0. <0.8 Péptido — [RF-Pen-TGHFG-Sar-NMeLeu-YPC] 2.1 <0. <0.9 4 No. 273 5 . [RF-Pen-TGHFG-Sar-NMeLeu-YPC] 17 NQP274 [RF-Pen-TG-4GuPhe-FG-Sar-NMeLeu-YPC] VOL ^ |RF-Pen-TG-4GuP e-FG-Sar-NMeLeu-YPC] X= 3 (r) -3-amino-l-carboximetil-valerolactama Ejemplo 13: Síntesis de dimeros del péptido por ligaduras de tiol y péptidos bromoacetilados Los dimeros del péptido (tabla 23) también se sintetizaron por hacer reaccionar los péptidos bromoacetilados con ligados de tiol. Los péptidos bromoacetilados se sintetizaron (figura 4) por hacer reaccionar el grupo a-amino libre de la resina del péptido protegido con 4 equivalentes de bromuro de bromoacetilo (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) y 8 equivalentes de DIEA (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) en DMF. Después de 1 hora, la resina se lavó con DMF, seguido por DCM y se desdobló de la resina como se describe arriba en el Ejemplo 7. En el caso donde los péptidos ciclizados de lactama se dimerizaron usando un ligador bis-tiol, la etapa de ciclización en la resina se llevó a cabo previo a la etapa de bromoacetilación . En el caso donde los péptidos que contienen disulfuro donde se dimerizan usando un ligador bis-tiol, la etapa de oxidación de yoduro se llevó a cabo después del desdoblamiento como se describe arriba en el ejemplo 7. Los ligados bis-tiol se sintetizaron (figura 4) por hacer reaccionar la resina NH2-Gly-2-clorotritilo ( Novabiochem, San Diego, CA) con 2 equivalentes de hemisulfato de N, N-bis (N 1 -Fmoc-3-aminopropil ) glicina potasio (Chem-lmpex, Wood Dale, IL) en la presencia de 2 equivalentes de PyBOP (Novabiochem, San Diego, CA) y DIEA en DMF durante 18 horas. El grupo protector Fmoc se removió con dos tratamientos de 10 minutos de 20% de piperidina en DMF. Para alguno de los compuestos ligadores, las beta-alaninas también se incorporaron como unidades especiadoras . La Fmoc-beta-Ala-OH (Novabiochem) se acopló a la resina como arriba usando PyBOP y DIEA. Después de que el grupo protector Fmoc se removió con 20% piperidina en DMF, ya sea otra unidad espadadora de beta-alanina se incorporó, o el ligador bis-tiol se incorporó por hacer reaccionar la amina de terminal N libre con 2 equivalentes de N-succinimidil-S-acet ilt ioproprionato (SATP; Pierce, Rockford, IL) y 4 equivalentes de DIEA durante 18 horas. Posteriormente, la remoción del grupo protector de S-acetilo se completó por hacer reaccionar 0.05 mmol de la resina del péptido con una solución desgasificada que contiene 1 mi de DMF y 0.4 mi de solución amortiguadora A (Solución amortiguadora A: clorhidrato de hidroxilamina 1M (Sigma-Aldrich, St . Louis, MO) , 40 mM fosfato de sodio pH 7.5, 50 mM EDTA (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) ) durante 18 horas. Las resinas se lavaron con DMF, seguido por DCM, y se desdoblaron de la resina con 50% de una solución de TFA en DCM con 2% triisopropilsilano durante 15 min. Las ligaduras cruzados se procesaron y se purificaron como se describe arriba en el ejemplo 7. Los dimeros del péptido se generaron usando las ligaduras bis-tiol (figura 4) por hacer reaccionar un equivalente del ligador de bis-tiol purificado con dos equivalentes del péptido de terminal N bromoacetilado en DMF con 10% de agua y 50% de fosfato de sodio 100 mM, pH 7.5. Después de 18 horas, la mezcla de reacción cruda se purificó por una columna CLAR de fase inversa como se describe arriba en el ejemplo 7. El péptido No. 122 se sintetizó (Figura 5) al hacer reaccionar un péptido bromoacetilado con un péptido derivado con SATP. Brevemente, la resina de péptido crudo con una amina de terminal N libre se hizo reaccionar con 2 equivalentes de SATP en DMF durante 2 horas. El grupo protector S-acetilo se removió como se describe arriba, seguido por desdoblamiento de la resina y purificación posterior como se describe arriba. La tabla 23 proporciona una lista de péptidos diméricos de la invención que se sintetizaron por ligaduras tiol. La columna 1 contiene el ídentificador de peptido. La columna 2 contiene la secuencia de aminoácido de los péptidos. La columna 3 contiene el IC50 de cada péptido como se determina por el ELISA de competencia IgG resumido en el Ejemplo 4. Las columnas 4 y 5 contienen el KD de cada péptido como se determina en el pH 6 y pH 7.4, respectivamente, por el análisis Biacore resumido en el Ejemplo 6. La columna 6 contiene el IC50 de cada péptido como se determina por análisis FACS de enlace IgG competitivo como se resume en el Ejemplo 5.

Tabla 23. Dimeros sintetizados usando ligaduras Tiol Péptido Pen = penicilamina; Suc = ácido succtnico; Sar = sarcosina; p = D-prolina; X= (3R)-3- amino-1 -carboximetilvalerolactama; NMeLeu = N-metil leucina Ejemplo 14 : Síntesis de trímeros de péptido por medio de alquilación reductiva: Péptido No. 247 Los trímeros de péptido (Tabla 22) se generaron por alquilación reductiva de un aldehido de péptido y una amina terminal N de péptido amino. Las aminas de terminal N de péptido se sintetizaron como se describen arriba en el Ejemplo 7 para la síntesis de disulfuros de péptido monomérico con la excepción de que la terminación N se tapó con una ligadura de amina bifuncional tal como glicina bis-aminipropilo (BAPG; usado como Bis-Fmoc-BAPG adquirido de Sigma-Aldrich, Stl. Louis, MO) , seguido por acoplamiento de sarcosina. Los aldehidos de terminal N de péptido (Figura 2) se sintetizaron como se describe en el Ejemplo 12. Los trímeros de péptido se sintetizaron (como en la Figura 3) al hacer reaccionar dos equivalentes de aldehido péptido con un equivalente de péptido que contiene amina a una concentración de 40 mg/ml en DMF que contiene ácido acético al 2%. Después de 60 min., 4 equivalentes de cianoborohidruro de sodio (Sigma-Aldrich, St . Louis, MO) se agregaron y la reacción se permitió agitar durante 1 hora. La mezcla de reacción se diluyó 10 veces con agua y se purificó por CLAR y se analizó por espectroscopia (Mariner ER-EM) seguido por cromatografía líquida (Applied Biosystems, Foster City, CA) como se describe en el Ejemplo 7.

Ejemplo 15: Síntesis de dimeros de péptido usando ligaduras de diácido y amina Los dimeros de péptido ligados a amida (Tabla 24) se generaron ya sea al hacer reaccionar la terminación N de dos monómeros de péptido en la resina con una ligadura de ácido bi-funcional o al realizar la síntesis del péptido en la resina que contiene una ligadura de amina bi-funcional, por ello se hace en extensiones laterales de la terminación C de dos monómeros de péptido en la resina. Los dimeros de péptido ligados terminalmente a N se sintetizaron como se describen arriba en el Ejemplo 7 para la síntesis de disulfuros de péptido monomérico con las siguientes excepciones: Antes los péptidos se desdoblan de la resina, la terminación N de dos monómeros de péptido se unen con una ligadura de ácido bi-funcional. Por ejemplo, Péptido No. 283 se sintetiza al hacer reaccionar la resina de péptido contiene los análogos de la secuencia de péptido para Péptido No. 235 con una terminación N no protegida con 0.5 equivalentes de ácido succínico (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) en la presencia de 1 equivalente de PyBOP y 2 equivalentes de DIEA. Estos resultados en péptidos adyacentes en la resina se enlazan covalentemente por enlaces de amida por medio de su terminación N. El dimero de péptido resultante se desdobla de la resina y se purifica como se describe en el Ejemplo 7 con la excepción de que los disulfuros de péptido no se oxidan previo a la purificación CLAR. El péptido reducido purificado se disuelve hasta ca. 0.1 mg/mL en fosfato de sodio 10 mM, pH 7.5 con D SO al 20% y se mezcla durante 3 días a temperatura ambiente. Esta etapa de oxidación permite la formación de los enlaces de disulfuro dentro de un monómero de péptido del dimero, al contrario para entre dos monómeros de un dimero. La mezcla de reacción se diluye con agua para la concentración de péptido de 0.05 mg/mL y se purifica sobre una columna C18 Sep-Pak (Waters Corp., Milford, MA) usando un gradiente incrementado de acetonitrilo en agua que contiene TFA al 0.1 %. El dimero de péptido se liofilizó y se sometió a análisis por espectroscopia (Mariner ER-EM) seguido por cromatografía líquida (Applied Biosystems, Foster City, CA) como se describe en el Ejemplo 7. (ver figura 6). En el caso del Péptido No. 283, el patrón de ligadura de disulfuro se confirmó al digerir el péptido con tripsina durante 30 minutos, luego se analizan los péptidos resultantes por CLEM. La tripsina se conoce para desdoblar después los residuos de arginina y lisina, y desdoblamiento del Péptido No. 283 en el enlace de arginina-fenilalanina . El producto principal de CLEM del Péptido No. 283 es NH2-[Phe Phe-Pen-Thr-Gly-His-Phe-Gly-Sar-NMeLeu-Tyr-Pro-Cys] - C0NH2 (disulfuro) (CLEM: M+H = 1355.6 Da), que indica que los enlaces de disulfuro del Péptido No. 283 se forman entre cada uno de los 13 monómeros de péptido de aminoácido. El Péptido No. 201 se sintetizó como el Péptido No: 283 con las excepciones de que la secuencia de péptido fue análogo hasta Péptido No. 32, la ligadura de diácido usada fue etilen glicol-bis (ácido succinico-éster N-hidroxisuccinimida ) (Sigma-Aldrich, St . Louis, MO) y que PyBOP no se usó para la reacción de acoplamiento. El Péptido No. 279 se sintetizó como en el Péptido No. 283 con la excepción de que la ligadura de diácido usada fue éster de Bis-dPEG6-N-hidroxisuccinimida (Quanta Biodesigns Ltd.) y que PyBOP no se usó para la reacción de acoplamiento. El Péptido No. 281 se sintetizó como el Péptido No. 283 con la excepción de que la resina de péptido se trató con un exceso grande de anhídrido succínico (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) , que resulta en todos los péptidos de la resina que contienen una terminación N tapada de succinato. Esta resina se trató con 0.5 equivalentes de N, N' -dimetiletilendiamina (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) en la presencia de 1 equivalente de PyBOP y 2 equivalentes de DIEA. Las etapas de desdoblamiento, purificación y oxidación posteriores se realizaron como con el Péptido No.283. El Péptido No. 282 se sintetizó como el Péptido No. 283 con la excepción de que la ligadura de diácido usada fue ácido N-metil-iminodiacético (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) . El péptido No. 284 se sintetizó como el Péptido No. 283 con la excepción de que la ligadura de diácido usada fue ácido 3 , 3-dimetilglutárico (Sigma-Aldrich. St. Louis, MO) . El péptido No. 285 se sintetizó como el Péptido No. 283 con la excepción de que la ligadura de diácido usada fue Boc- Asp(OH)-OH (Novabiochem, San Diego, CA) . El péptido No. 286 se sintetizó como el Péptido No. 283 con la excepción de que la ligadura de diácido usada fue Boc-Glu(OH)-OH (Novabiochem, San Diego, CA) . Los dimeros de péptido ligados en terminal C se sintetizaron como se describen arriba en el Ejemplo 7 para la síntesis de disulfuros de péptido monomérico con la excepción de que una ligadura de amina bifuncional se acopla a la resina previo a la síntesis de péptido. Estos resultados en dimeros de péptido con su enlace covalentemente en la terminal C por enlaces amida. Por ejemplo, el Péptido No. 280 se sintetizó por acoplamiento primero Fmoc-Lys ( Fmoc) -OH (Novabiochem, San Diego, CA) a la resina, seguido por el acoplamiento de aminoácidos para dar un análogo de secuencia para el péptido No. 235. Estos resultados en el enlace covalente de dos cadenas de péptido como se sintetizan en la resina. El dímero de péptido resultante se desdobla de la resina, se purifica y oxidiza como se describe arriba para los dimeros ligados en la terminal N (ver Figura 7) El péptido No. 287 se sintetizó como el Péptido No. 280 con la excepción de que un residuo glicina (Gly) se inserta entre la secuencia de Péptido No. 235 y la ligadura de Lisina ramificada.

El péptido No. 288 se sintetizó como el Péptido No. 280 con las excepciones de que dos residuos de glicina (Gly-Gly) se insertaron entre la secuencia de Péptido No. 235 y la ligadura de lisina ramificada. La tabla 24 proporciona una lista de péptidos diméricos de la invención que se sintetizaron usando enlaces amida. La columna 1 contiene el identificador de péptidos. La columna 2 contiene la secuencia de aminoácido de los péptidos. La columna 3 contiene el IC5o de cada péptido como se determina por el ELISA de competencia IgG resumido en el Ejemplo 4.

Tabla 2 . Dimeros sintetizados usando ligaduras amida Secuencia IC60 Péptido No. 279 o-~°^~y N ^ |RF-Pen-TGHFG-Sai-NMeL-YPC] °~ 0'~ L - [RF-Pen-TGHFG-Sar-NMeL-YPCJ Péptido No. 280 |RF-Pen-TGHFG-Sai-N eL- YPC] - 25 i i |RF-Pen-TGHFG-Sat-NMeL-YPC]— Péptido No. 281 5.2 Péptido No. 282 4.7 Péptido No. 284 8.5 Péptido No. 285 4.6 Péptido No. 286 5.6 Péptido No. 287 [RF-Pen-TGHFG-Sar-NMeL-YPCG] - N- 20 [RF-Pen-TGHFG-Sar-NMeL-YPCG] - N Péptido No. 288 16 Pen = penicilamina; Sar = sarcosina ; NMeLeu = N-metil leucina Ejemplo 16: Síntesis de fusiones péptido-Fc por medio de alquilación reductiva Los aldehidos de terminal N de péptido del péptido No. 252, Péptido No. 229 y Péptido No. 232 (Tabla 25) se sintetizaron como se describe en el Ejemplo 12. Las tres fusiones de péptido-Fc se generaron usando el mismo protocolo (Figura 8): CysFc (procesamiento de dominio Fe en una cisteina de terminal N) y 4.5 equivalentes de aldehido péptido se incubaron en hielo en acetato de sodio 80 mM de pH 5.5 durante 1 hora. El cianoborohidruro de sodio se agregó a una concentración final de 20 mM y la reacción se incubó durante 16 horas a 4°C. La mezcla de reacción se analizó por SDS-PAGE a asegurar la adición de predominantemente un péptido sencillo a la proteina Fe. La mezcla de proteina se dializó dos veces con PBS y se procesaron por ensayo por actividad de bloqueo ín vítro (Tabla 25) . En el caso del Péptido No. 252-Fc, la proteina también se evalúo en el modelo de catabolismo IgG de ratón TG32B. (Figura 15) . La producción de CysFc se puede realizar como se describe en la Publicación de Solicitud de Patente de E.U.A. No. US 2005/0027109, donde la descripción de la producción de CysFc se incorpora en la presente para referencia . La Tabla 25 proporciona una lista de proteínas de fusión del péptido-Fc de la invención que se sintetizaron usando CysFc y péptidos de aldehido. La columna 1 contiene el i dent i f i cado r de fusión del péptido-Fc. La columna 2 contiene la secuencia de aminoácido de los péptidos. La columna 3 contiene el IC50 de cada péptido como se determina por el ELISA de competencia IgG resumido en el Ejemplo 4.

Tabla 25. Fusiones de péptido-Fc Secuencia IC50 n CysFc 210 Péptido No. 229-Fc Péptido No. 232-Fc Q N- [RF-Pen-TGHFG-Sar-N eleu-YPC] Fe . [RF-Pen-TGHFG-Sar-N eLeu-YPC] Péptido No. 252-Fc 39 Pen = penicilamina ; Sar = sarcosina; NMeLeu = N-metil leucina Ejemplo 17: Ratones transgenicos Los ratones transgénicos se obtuvieron a partir de Dr. Roopenian del The Jackson Laboratory en Bar Harbor, ME. Los genes FcRn y de murino endógeno se inactivaron por inserción de una secuencia de polinucleót ido externo por recombinación homologa y se reemplazan t ransgénicament e con los genes FcRn humano y P2m humano (muFcRn (-/-) , muP2m (-/-) , +huFcRn, +huP2m) . Estos ratones se refieren por el nombre de cepa TG32B.

Ejemplo 18: Efecto del Péptido No. 270 en catabolismo de IgG humana en ratones TG32B usando 5 mg/kg y 10 mg/kg Los ratones TG32B adultos se inyectaron intrvenosamente con 500 mg/kg de IgG humana (MP Biomedicals, Irvine, CA) en t = 0 horas (T0) . En 24, 48, 72, 96 y 120 horas, los ratones se inyectaron intravenosamente con ya sea 5 mg/kg o 10 mg/kg del Péptido No. 270. Las inyecciones de control se realizaron en cada punto de tiempo usando el PBS de vehículo con acetato de etilo 15 mM, pH 5. Las muestras de sangre se tomaron previo a las inyecciones en todos los puntos de tiempo, así como en 168 horas. El suero se preparó y almacenó a -20°C hasta que un ELISA se realizó (Figura 9) . Un ELISA específico de dominio IgG Fe se usó para detectar los niveles de IgG humana en el suero en cada punto de tiempo. Brevemente, 30 µ? de una solución de reserva 10 µg/ml de IgG anti-humano de cabra (Pierce, Rockford, IL) se diluyó con 6 mi de bicarbonato de sodio 0.05 M, pH 9.6 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) . Una placa de 96 pozos se recubrió con 50 µ?/???? de esta solución y se incubó durante 1 hora a 37°C. La solución recubierta se removió y lavó una vez con PBST (solución salina amortiguada en fosfato con Tween-20 al 0.05%). Luego 200 µ?/???? de una solución de reserva de albúmina de suero bovino al 2% (BSA) en PBS se agregó y la placa se incubó durante 1 hora a 37°C. Los pozos se lavaron tres veces con PBST y una curva estándar se generó en triplicado al realizar diluciones 2.5 veces partiendo de 50 ng/ml de hlgGl. Luego 100 µ? de ya sea las soluciones estándar o de muestra se agregó a los pozos y la placa se incubó durante 1 hora a 37 °C. Tres lavados PBST más se realizaron seguido por la adición de 100 µ? de una dilución 1:10,000 de un conjugado IgG[Fc]-HRP anti-humano de cabra (Pierce, Rockford, IL) en PBS que contiene BSA al 2%. La placa se permitió incubar durante 1 hora a 37 °C seguido por lavados con PBST y la adición de 100 µ? de substrato de un componente TMB (BioFX, Owings Mills, MD) para cada pozo. El desarrollo de color se detuvo después de 5 minutos por la adición de 100 µ? de ácido sulfúrico 0.25 M para cada pozo. La absorbancia UV para cada pozo se midió a 450 nm y una curva de calibración se usó para derivar un grupo de concentración IgG en el suero contra tiempo para los experimentos.

Ejemplo 19: Efecto del Péptido No. 231, Péptido No. 274 y Péptido No. 252-Fc en catabolismo IgG humano en ratones TG32B Los ratones TG32B adultos se inyectaron intravenosamente con 500 mg/kg de IgG humana (MP Biomedicals, Irvine, CA) en t = 0 horas (T0) . En 24, 48 y 72 horas, los ratones se inyectaron intravenosamente con ya sea 1 mg/kg del Péptido No. 231, 1 mg/kg del Péptido No. 274 o 20 mg/kg del Péptido No. 252-Fc. Las inyecciones de control se realizaron en cada punto de tiempo usando acetato de sodio 15 mM, pH 5 y sirven como el vehículo para todas las inyecciones. Las muestras de sangre se tomaron previo a las inyecciones en todos los puntos de tiempo, así como en 30, 96 y 144 horas. El suero se preparó y almacenó a -20°C hasta que un ELISA se realizó. La concentración de IgG humana en el suero en cada punto de tiempo se determinó como se describe arriba en el Ejemplo 18 (Figura 15) .

Ejemplo 20: Efecto del Péptido No. 270 en catabolismo de IgG humana asi como IgG endógeno, IgM y albúmina en monos macacos Tres monos macacos adultos con un peso promedio de 4.8 kg se inyectaron intravenosamente con una IV dosis de IgG humana biotinilado 5 mg/kg (MP Biomedicals, Irvine, CA) en 0 horas. En 24, 48, 72 y 96 horas, los animales se inyectaron intravenosamente en una relación de 1 ml/min con ya sea 10 mg/kg del Péptido No. 270 o un volumen igual de vehículo (acetato de sodio 30 mM, pH 5) . En 120 horas, el animal C06215 se trató con una quinta dosis de 10 mg/kg del Péptido No. 270. Las muestras de sangre se tomaron previo a todas las inyecciones, así como en 120, 168, 192, y 244 hrs y en 30 días. El suero se preparó y almacenó a -20°C hasta que un ELISA se realizó (Figuras 10-12) . El rastreador de biotina-hlgG se detectó usando un ELISA especifico de estreptavidina-Fc . Las placas recubiertas con estreptavidina (Pierce, Rockford, IL, cat#15121) se lavaron tres veces con PBST (solución salina amortiguada de fosfato + Tween-20 al 0.05%) . Las muestras y estándares en el suero se diluyeron con PBSB (PBS + BSA al 2%) . Una curva estándar se estableció con un intervalo desde 1.56 ng/ml hasta 200 ng/ml. Las muestras o estándares diluidos (100 µ?) se agregaron por pozo e incubaron durante dos horas a temperatura ambiente. Después, los pozos se lavaron tres veces con PBST (300 µ?/????) . El Fc-HRP anti-humano de cabra (Pierce, Rockford, IL, , Cat#31416) se diluyó 1:25,000 con PBSB y 100 µ?/???? se agregó y las placas se incubaron durante 30 minutos a temperatura ambiente. La placa se lavó tres veces con PBST (300 µ?/????) y se desarrolló con 100 µ?/???? de substrato TMB supersensible BioFx (BioFX, O ing Mills, MD) durante aproximadamente cinco minutos a temperatura ambiente. El desarrollo de la reacción se detuvo al agregar 100 µ?/???? de ácido sulfúrico 0.25 M y la absorbancia de cada pozo se midió a una longitud de onda de 450 nm. La IgG de macaco endógeno se detectó usando el siguiente protocolo ELISA. Primero, IgG anti-mono de conejo se diluyó a 2 µg/ml en solución amortiguadora recubierta (solución amortiguadora recubierta = 1 cápsula de carbonato-bicarbonato, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO cat#C-3041, disuelta en 100 mL de agua) . Después, una placa de 96 pozos (Costar/Corning) se recubrió con 100 µ?/???? de un IgG anti-mono de conejo 2 µg/ml (Sigma-Aldrich, St. Louis, O) y se incubó durante una hora a 37°C. La placa se lavó cuatro veces con PBST (PBS con Tween-20 al 0.05%) y se bloqueó durante una hora a 37°C con 200 µ?/???? de PBSB (1% de BSA en PBS; diluido a partir de BSA al 10% en reserva PBS; KPL) . La placa se lavó nuevamente cuatro veces con PBST. Las muestras y estándares en el suero se diluyeron con PBSB. Una curva estándar se estableció con un intervalo de 2000 ng/ml hasta 1.9 ng/ml de IgG de mono (Antibodies Incorporated, Davis, CA) . Luego 100 µ?/???? de cada muestra se incubó durante una hora a 37°C. La placa se lavó tres veces con PBST. 100 µ?/???? de una dilución 1:30,000 de IgG-HRP anti-mono de conejo (Sigma-Aldrich, St . Louis, MO) en PBSB se agregó e incubó durante una hora a 37 °C. La placa se lavó tres veces con PBST y se desarrolló con 100 µ?/???? de substrato SureBlue TMB (KPL, Gaithersburg, MD) durante aproximadamente cinco minutos a temperatura ambiente. La reacción de desarrollo se detuvo con 100 µ?/???? de solución de paro TMP (KPL, Gaithersburg, MD) y la absorbancia de cada pozo se midió a una longitud de onda de 450 nm. La albúmina de suero en macacos endógenos se detectó usando el siguiente protocolo ELISA. Primero, albúmina de suero anti-mono de conejo se diluyó hasta 5 µg/ml en solución amortiguadora recubierta (solución amortiguadora recubierta = 1 cápsula de carbonato-bicarbonato, Sigma-Aldrich, St . Louis, MO cat#C-3041, disuelto e 100 mL de agua) . Después, una placa de 96 pozos (Costar/Corning) se recubrió con 100 µ?/???? de la albúmina de suero anti-mono de conejo 5 µ?/t?? (Nordic Immunology, Países Bajos, cat#RA on/Alb) y se incubó durante una hora a 37 °C. La placa se lavó cuatro veces con PBST { PBS con Tween-20 al 0.05%) y se bloqueó durante una hora a 37°C con 300 µ?/???? de una gelatina de pescado al 5% (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO cat#G-7765) de solución de reserva en PBS. La placa se lavó nuevamente cuatro veces con PBST. Las muestras y estándares en el suero se diluyeron con PBSB. Una curva estándar se estableció con un intervalo de 200 ng/ml hasta 0.39 ng/ml de albúmina de suero de mono (Nordic Immunology, Países Bajos, cat#MonAlb Batch#6082) . Luego 100 µ?/???? de cada muestra se incubó durante una hora a 37°C. La placa se lavó seis veces con PBST. 100 µ?/???? de una dilución 1:30,000 de conjugado HRP de albúmina anti-humana de cabra (Academy Bio- edical, Inc., Houston, X, cat#AL10H-Gla ) en PBSB se agregó e incubó durante una hora a 37 °C. La placa se lavó seis veces con PBST y se desarrollo con 100 µ?/???? de substrato SureBlue TMB ( KPL, Gaithersburg, D) durante aproximadamente cinco minutos a temperatura ambiente. La reacción de desarrollo se detuvo con 100 µ?/???? de solución de paro TMP (KPL, Gaithersburg, MD) y la absorbancia de cada pozo se midió a una longitud de onda de 450 nm (Figura 13) . El IgM de macaco endógeno se detectó usando el siguiente protocolo ELISA. Primero, el anticuerpo anti-mono-IgM de cabra se diluyó hasta 5 µ?/p?? en solución amortiguadora recubierta (solución amortiguadora recubierta = 1 cápsula de carbonato-bicarbonato, Sigma-Aldrich, St . Louis, MO cat#C-3041, disuelta en 100 mL de agua) . Después, una placa de 96 pozos (Costar/Corning) se recubrió con 100 µ?/???? del IgM anti-mono de cabra 5 µg/ml (KPL, Gaithersburg, MD, cat#071-ll-031) y se incubó durante una hora a 37°C. La placa se lavó cuatro veces con PBST (PBS con Tween-20 al 0.05%) y se bloqueó durante una hora a 37°C con 200 µ?/???? de PBSB (1% BSA en PBS; diluido de BSA al 10% en reserva PBS; KPL) . La placa se lavó nuevamente cuatro veces con PBST. Las muestras y estándares en el suero se diluyeron con PBSB. Una curva estándar se estableció con un intervalo de 2000 ng/ml hasta 15.6 ng/ml de IgM de mono (Alpha Diagnostic International, San Antonio, TX, cat#2001301 ) . Luego 100 µ?/???? de cada muestra se incubó durante una hora a 37°C. La placa se lavó cuatro veces con PBST. 100 µ?/???? de una dilución 1:10,000 de conjugado IgM-HRP anti-mono de cabra (RDI, Concord, MA, cat#617103007 ) en PBSB se agregó e incubó durante una hora a 37 °C. La placa se lavó cuatro veces con PBST y se desarrolló con 100 µ?/???? de substrato StireBlue TMB (KPL, Gaithersburg, MD) durante aproximadamente cinco minutos a temperatura ambiente. La reacción de desarrollo se detuvo con 100 µ?/???? de solución de paro TMP (KPL, Gaithersburg, MD) y la absorbancia de cada pozo se midió a una longitud de onda de 450 nm (Figura 14) .

Ejemplo 21: Efecto del Péptido No. 270 en catabolismo de IgG humana en ratones TG32B usando varios programas de dosificación . Los ratones TG32B adultos se inyectaron intravenosamente con 500 mg/kg de IgG humana (MP Biomedicals, Irvine, CA) en t = 0 horas (T0) . Un grupo de cuatro ratones se inyectaron intravenosamente con 5 mg/kg del Péptido No. 270 en t = 24 horas; un segundo grupo de cuatro ratones se inyectaron intravenosamente con 5 mg/kg del Péptido No. 270 en t= 24 y 72 horas; un tercer grupo de cuatro ratones se inyectó intravenosamente con 2.5 mg/kg del Péptido No. 270 en t = 24, 48, 72, 96 horas. Las inyecciones de control se realizaron en cada punto de tiempo usando el vehículo PBS con acetato de sodio 15 mM, pH 5 usando un grupo adicional de ratones. Las muestras de sangre se tomaron previo a las inyecciones en todos los puntos de tiempo, asi como en 168 horas. El suero se preparó y almacenó a -20°C hasta que un ELISA se realizó como en el Ejemplo 18 (Figura 16) .

Ejemplo 22: Experimentos adicionales con ratones TG32B Los experimentos adicionales se realizaron con el Péptido No. 270 en ratones TG32B. Usando el mismo diseño experimental como se describe en el Ejemplo 18, Péptido No. 270 se encontró efectivo en acelerar la relación del catabolismo IgG usando rutas de administración subcutáneas (SC) e intraperitoneales (IP) . Cinco dosis diaria de 5 mg/kg del Péptido No. 270 iniciando en 24 horas se encontró para reducir la semivida de IgG hasta 56 horas después de tanto inyecciones subcutáneas (SC) como intraperitoneales (IP) del Péptido No. 270. Estas semividas son más cortas de manera importante que los grupos de control típicos que muestran semividas IgG de 80 hasta 100 horas. Además, la concentración de hlgG se redujo al 56% (SC) y 66% (IP) después de 168 horas usando el Péptido No. 270 como se compara con el grupo de control. El péptido No. 230 también se probó en los ratones TG32B usando el protocolo experimental descrito en el Ejemplo 18. Veinticuatro horas después de la inyección intravenosa de IgG humana, las inyecciones intravenosas diarias (IV) de 5 mg/kg del Péptido No. 230 se administraron durante un total de cinco días. La semivida de hlgG se redujo hasta 39 hr como se compara con la semivida del grupo de control de 92 hr. Además, la concentración de hlgG se redujo al 76% después 168 horas como se compara con el grupo de control. El péptido No. 230 también se probó en dos experimentos diseñados para evaluar el efecto de una dosis de péptido sencillo como se compara con tres dosis de péptido diaria. Usando el protocolo experimental descrito en el Ejemplo 18, veinticuatro horas después la inyección IV de IgG humana, un grupo animal se trató con una dosis IV sencilla de 5 mg/kg del péptido No. 230, mientras que un segundo grupo animal recibe tres dosis IV consecutivas diariamente de 5 mg/kg del péptido No. 230. Después de 120 horas, la dosis sencilla del Péptido No. 230 reduce la concentración de hlgG en los ratones al 41%. En el grupo de ratones que reciben tres dosis diarias del Péptido No. 230 la concentración de hlgG disminuye 61% después de 120 horas.

Ejemplo 23: Efecto del Péptido No. 283 en catabolismo de IgG humana en ratones TG32B Los ratones TG32B adultos se inyectaron intravenosamente con 500 mg/kg de IgG humana (MP Biomedicals, Irvine, CA) en t = 0 horas (T0) . En 24, 48, 72 y 96 horas, los ratones se inyectaron intravenosamente con ya sea 0.5, 1, 2.5, 5, ó 10 mg/kg del Péptido No. 283. Las inyecciones de control se realizaron en cada punto de tiempo usando acetato de sodio 15 mM, pH 5 y sirvieron como el vehículo para todas las inyecciones. Las muestras de sangre se tomaron previo a las inyecciones en todos los puntos de tiempo, 120 horas, y 168 horas, así como en 30 días. El suero se preparó y almacenó a -20°C hasta que un ELISA se realizó. La concentración de IgG humana en el suero en cada punto de tiempo se determinó como se describe arriba en el Ejemplo 18 {Figura 17) .

Ejemplo 24. Síntesis de Péptido No. 289 pegilado . El péptido No. 285 se disolvió en solución amortiguadora de pH 7.4 de fosfato 10 mM y se trató con un equivalente de PEG30kDa_ést er de succinimidi lo ( NO F Corp, Japón, Sunbright MEGC-30TS) durante 18h. La mezcla de reacción cruda se purificó en una columna C4 (Júpiter, Phenomenex) como se describe en el Ejemplo 7, se liofilizó, y purificó nuevamente con cromatografía de intercambio de catión (Fractoprep S03~ , Cat No. 1.17972, EMD Chemicals Inc, Gibbstown, NJ) por ello el péptido enlazado a la resina en acetato de sodio 10 mM pH 5, la resina se lavó con acetato de sodio 10 mM pH 5, y el péptido se eluyó con cloruro de sodio 100 mM en acetato de sodio 10 mM pH 5. La solución de péptido se dializó nuevamente con ácido acético al 1%, y se liofilizó. El péptido purificado se analizó por SDS-PAGE demostrando una banda de tinción de péptido a ~ 50 kDa, y por CLAR demostrando que no hay un péptido libre residual (Figura 18.) Tabla 26. Análogo pegilado del Péptido No. Secuencia IC50 nM Péptido No. ver a continuación 18 289 Ejemplo 25: Efecto del Péptido No. 289 en catabolismo de IgG humana en ratones TG32B Los ratones TG32B adultos se inyectaron intravenosamente con 500 mg/kg de IgG humana (MP Biomedicals, Irvine, CA) en t = 0 horas (T0) . En 24 horas, los ratones se inyectaron intravenosamente con 25 mg/kg del Péptido No. 289. Las muestras de sangre se tomaron en 24, 48, 72, 96, 120 y 168 horas. El suero se preparó y almacenó a -20°C hasta que un ELISA se realizó. La concentración de IgG humana en el suero en cada punto de tiempo se determinó como se describe arriba en el Ejemplo 18. (Figura 19.) Ejemplo 26: Efecto del Péptido No. 283 en catabolismo hlgG y concentraciones IgG, IgM, y albúmina endógenas en monos macacos . Dieciocho monos macacos se dividieron en seis grupos de tres animales cada uno y todos los animales se trataron con 5 mg/kg de IgG humana biotinilado (MP Biomedical) en t = -3 días. Partiendo en t=0, los animales se trataron durante cuatro semanas con el péptido No. 283 de acuerdo al siguiente régimen de dosificación: 1) 1 mg/kg 3x/semana intravenosamente; 2) 1 mg/kg lx/semana subcutáneamente; 3) 1 mg/kg 3x/semana subcutáneamente; 4) 5 mg/kg 3x/semana intravenosamente; 5) 5 mg/kg lx/semana subcutáneamente; 6) 5 mg/kg 3x/semana subcutáneamente. Se nota que la última dosis de péptido para el grupo 4 fue en el día 16. Las muestras de suero se tomaron en el día -3d, -15min, Id, 2d, 3d, 4d, 5d, 7d, 9d, lid, 14d, 16d, 18d, 21d, 23d, 25d, 28d, 30d, 32d, 35d, 42d, 49d, 77d. Las concentraciones de IgG humana biotinilado, IgG endógeno, y albúmina se determinaron como se describe en el Ejemplo 20 y se muestra en las Figuras 20-24.

La especificación se entiende más completamente a la luz de las enseñanzas de las referencias citadas dentro de la especificación. Las modalidades dentro de la especificación proporcionan una ilustración de las modalidades de la invención y no deberán construirse para limitar el alcance de la invención. La persona experimentada fácilmente reconocerá que muestras otras modalidades se abarcan por la invención. Todas las publicaciones y patentes citadas en esta descripción se incorporan para referencia en su totalidad. Para la extensión el material se incorpora para referencia que contradice o es inconsistente con esta especificación, la especificación substituirá cualquier material. La cita de cualesquiera referencias en la presente no es una admisión de tales referencias son previas a la técnica para la presente invención. A menos que se indique de otra manera, todos los números expresan cantidades de ingredientes, condiciones de reacción, y asi sucesivamente usadas en la especificación, incluyendo reivindicaciones, son para entenderse como se modifican en todos los casos por el término "alrededor de". En consecuencia, a menos que se indique de otra manera lo contrario, los parámetros numéricos son aproximaciones y pueden variar dependiendo de las propiedades deseadas seleccionadas para obtenerse por la presente invención. Al menos, y no como un intento para limitar la solicitud de la doctrina de equivalentes para el alcance de las reivindicaciones, cada parámetro numérico deberá construirse en luz del número de dígitos importantes y enfoque de corrida ordinaria . A menos que se indique de otra manera, el término "al menos" precede una serie de elementos se entiende para referirse a cada elemento en la serie. Aquellos experimentados en la técnica reconocerán, o serán capaces de averiguar usando no más de un experimento de rutina, muchos equivalentes para las modalidades específicas de la invención descrita en la presente. Tales equivalentes se pretenden abarcarse por las siguientes reivindicaciones. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Un péptido capaz de inhibir el enlace de la porción Fe de una inmunoglobulina humana (IgG) para el receptor neonatal Fe humana (FcRn), caracterizado porque comprende la secuencia: —Gly-X6— X7— ?ß— Xio-Xii ~ en donde : -Xe se elige a partir de aminoácidos cargados positivamente, aminoácidos aromáticos, aminoácidos aromáticos cargados positivamente, y análogos de los mismos; -X7 se elige a partir de fenilalanina y análogos de fenilalanina , -Xg y X9 son cada uno independientemente elegidos a partir de glicina, sarcosina, ácido aspártico, aminoácidos D, ácido a-aminoisobutirico, y análogos de los mismos, o X8 , cuando se toma junto con Xg , forma un dipéptido mimético; -X10 es elige a partir de aminoácidos y análogos de los mismos, o X10 , cuando se toma junto con Xg , forma un dipéptido mimético; -X11 se elige a partir de tirosina y análogos de tirosina; y en donde el péptido está en el intervalo desde 7 hasta 50 aminoácidos de longitud, y el péptido inhibe el enlace de FcRn humano a IgG humana. 2. El péptido de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende la secuencia: Ri—Gly-Xg—X7—X8-Xg—Xio-X - 2 en donde: -Ri tiene la fórmula X1-X2-X3-X4- en donde -Xi se elige a partir de hidrógeno, acilo, y grupos protectores de aminoácido; -X2 está ausente o se elige a partir de aminoácido y péptidos de 2-15 aminoácidos de longitud, y análogos de los mismos ; -X3 está ausente o es un aminoácido o análogo del mismo que es capaz de formar un puente con ??0, Xi2, o X13, en donde el puente se elige a partir de una terminación amino hasta puente de terminación carboxi, un puente de cadena lateral a estructura, y un puente de cadena lateral a cadena lateral; -X4 está ausente o se elige a partir de un aminoácido, péptidos de 2-15 aminoácidos de longitud, y análogos de los mismos ; -R2 tiene la fórmula -Xi2-Xi3-Xi4-Xi5 en donde -Xi2 está ausente o es un aminoácido o análogo del mismo; -X13 está ausente o es un aminoácido o análogo del mismo; -Xi4 está ausente o se elige a partir de un aminoácido, péptido de 2-15 aminoácidos de longitud, y análogos de los mismos; y -X15 es un grupo amino o un grupo protector carboxi . 3. El péptido de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende la secuencia: Gly-Xe-Phe-Xs-Xg-Xio-Tyr. 4. El péptido de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque es lineal. 5. El péptido de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque al menos uno de X10, X12, o X13 es un aminoácido o análogo del mismo que es capaz de formar un puente con X3, en donde el puente se elige de un puente de terminación amino a terminación carboxi, un puente de cadena lateral a estructura, y un puente de cadena lateral a cadena lateral. 6. El péptido de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque X3 forma un puente con X10, X12, o X13. 7. El péptido de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque X3 forma un puente con X10. 8. El péptido de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque X3 forma un puente con X12. 9. El péptido de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque X3 forma un puente con X13. 10. El péptido de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque nueve aminoácidos existen entre los aminoácidos que forman un puente. 11. El péptido de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque el puente es un puente de terminación amino a terminación carboxi. 12. El péptido de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque el puente es un puente de cadena lateral a estructura. 13. El péptido de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque el puente es un puente de cadena lateral a cadena lateral. 14. El péptido de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque el puente de cadena lateral a cadena lateral es un puente de disulfuro, un puente de éter, un puente de tioéter, un puente alqueno, o un puente amida. 15. El péptido de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el puente de cadena lateral a cadena lateral es un puente de disulfuro entre: - cisteina y cisteina; - cisteina y homocisteina; - cisteina y penicilamina; - homocisteina y homocisteina; - homocisteina y penicilamina; y - penicilamina y penicilamina. 16. El péptido de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el puente de cadena lateral a cadena lateral es un puente amida entre: - ácido aspártico y lisina; - ácido aspártico y ornitina; - ácido aspártico y ácido 2, 4-diaminobutirico; - ácido aspártico y ácido 2 , 3-diaminopropiónico - ácido glutámico y lisina; - ácido glutámico y ornitina; - ácido glutámico y ácido 2, 4-diaminobutirico; - ácido glutámico y ácido 2 , 3-diaminopropiónico . 17. El péptido de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque comprende al menos una cisteina. 18. El péptido de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque al menos una cisteina es un análogo de cisteina elegido de: - homocisteina ; - D-cisteina; y - penicilamina . 19. El péptido de conformidad con las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque al menos uno de Xe y X9 se elige de: - glicina; - Aminoácidos D; - ácido a-aminoisobutirico ; y - sarcosina. 20. El péptido de conformidad con las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque X8, tomado junto con X9, forma un dipéptido mimético elegido de: - beta-alanina ; - ácido 4-aminobutanoico; - ácido 5-aminopentanoico; - ácido 3- ( aminometil ) benzoico - ácido 4- (aminometil ) benzoico - ácido 3- (aminofenil ) acético; - ácido 4- (aminofenil) acético; - ácido 3-amino-2-oxo-l-piperidin-acético; - ácido ( 3R) -3-amino-2-oxo-l-piperidin-acético; - ácido ( 3R) -3-amino-2-oxo-l-azepin acético; - ( 3R) -3-amino-
2-oxo-l-pirrolidin acético; - ( 3R) -3-amino-l-carboximetil-valerolactama ; y
3-amino-N-l-carboximetil-2 , 3, 4, 5-tetrahidro-lH- [1] -benzazepin-2-ona . 21. El péptido de conformidad con las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque al menos una fenilalanina es un análogo de fenilalanina, cada uno de al menos un análogo de fenilalanina se elige independientemente de: - triptofano; - tirosina; - 2-aminofenilalanina ; - 3-aminofenilalanina ; -
4-aminofenilalanina; - pentafluorofenilalanina ; - 2-piridilalanina ; - 3-piridilalanina ; - 4-nitrofenilalanina; - 1-naftilalanina ; - homofenilalanina ; - fenilglicina ; - 2-metilfenilalanina; - 3-metilfenilalanina; - 4-metilfenilalanina - 2-clorofenilalanina ; - 3-clorofenilalanina ; - 4-clorofenilalanina; - 3 , 3-difenilalanina ; - 4 , 4 ' -bifenilalanina ; - 4-t-butilfenilalanina; - ciclohexilalanina ; - ( 4-aminoacetil ) fenilalanina ; - ácido L-l , 2 , 3 , 4-tetrahidroisoquinolin-3-carboxílico; - D-beta-metilfenilalanina ; y - L-beta-metilfenilalanina . 22. El péptido de conformidad con las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque al menos una tirosina es un análogo de tirosina, cada uno de al menos un análogo de tirosina se elige independientemente de: - fenilalanina; - 4-aminofenilalanina; - 4-metoxifenilalanina; - pentafluorofenilalanina ; - 2-piridilalanina ; - 3-piridilalanina ; - 4-piridilalanina ; - 4-nitrofenilalanina; - 2-nitrotirosina; y - 4-fluorofenilalanina . 23. El péptido de conformidad con las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque X9 y X10, tomados juntos, forman un dipéptido mimético elegido de: - lactama de D.L-Friedinaer - lactama L,L-Friedinger 24. El péptido de conformidad con las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque al menos una histidina es un análogo de histidina, cada uno de al menos un análogo de histidina se elige independientemente de: - ácido 2, -diaminobutirico; - tiazolilalanina; - ácido 2 , 3-diaminopropionico ; - guanilalanina; - 2-piridilalanina; - 3-piridilalanina ; - 4-piridilalanina; - tienilalanina ; - ornitina; - lisina; - arginina; - 4-guanilfenilalanina; - 1-metilhistidina ; - 3-metilhistidina; - 1, 3-dimetilhistidina; - 4-aminofenilalanina; - 2-pirrolidinilalanina ; - 3-piperidilalanina ; y - 4-piperidilalanina . 25. El péptido de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque X2 se elige de un aminoácido, péptidos de 2 ó 3 aminoácidos de longitud, y análogos de los mismos. 26. El péptido de conformidad con las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque X6 es un aminoácido cargado positivamente o análogo del mismo elegido de lisina, ornitina, ácido 2 , 4-diaminobutirico, ácido 2 , 3-diaminopropionico, arginina, guanilalanina, y análogos del mismo. 27. El péptido de conformidad con las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque X6 es un aminoácido aromático o análogo del mismo elegido de tirosina, triptofano, fenilalanina, y análogos del mismo. 28. El péptido de conformidad con las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque X6 es un aminoácido aromático cargado positivamente elegido de histidina, 1-metilhistidina, 2-piridilalanina, 3-piridilalanina, 4-piridilalanina, 4- aminofenilalanina, 4-guanilfenilalanina, tiazolilalanina, y análogos del mismo. 29. El péptido de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque X6 es 4-guanilfenilalanina y análogos del mismo. 30. El péptido de conformidad con las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque X6 se elige de histidina, 3-piridilalanina, 4-piridilalanina, 4-guanilfenilalanina, y análogos del mismo. 31. El péptido de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque X6 se elige de histidina y análogos del mismo . 32. El péptido de conformidad con las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque X10 se elige de aminoácidos hidrofóbicos y neutrales, y análogos del mismo. 33. El péptido de conformidad con las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque es un multimero. 34. El péptido de conformidad con la reivindicación 33, caracterizado porque es un dimero, un trímero o un tetrámero. 35. El péptido de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque es un dimero. 36. Un péptido capaz de inhibir el enlace de la porción Fe de una inmunoglobulina humana (IgG) para el receptor neonatal Fe humano (FcRn), caracterizado porque comprende: a) una secuencia de aminoácido elegida de: QRFCTGHFGGLYPCNGP (SEQ ID NO: 1), GGGCVTGHFGGIYCNYQ (SEQ ID NO: 2), KIICSPGHFGGMYCQGK (SEQ ID NO: 3), PSYCIEGHIDGIYCFNA (SEQ ID NO: 4), y NSFCRGRPGHFGGCYLF (SEQ ID NO: 5); b) una secuencia de aminoácido que es substancialmente idéntica a a) ; c) una secuencia de aminoácido que es al menos 80% idéntica a a) ; d) una secuencia de aminoácido con uno, dos, tres, cuatro o cinco mutaciones de eliminación, substitución o adición comparadas con a) ; e) una secuencia de aminoácido de a) modificada por al menos una substitución de aminoácido, en donde al menos un aminoácido es substituido con un aminoácido que se presenta naturalmente; f) una secuencia de aminoácido de a) modificada por al menos una substitución de aminoácido, en donde al menos un aminoácido es substituido con un aminoácido D y análogos del mismo; g) una secuencia de aminoácido de a) modificada por al menos una substitución de aminoácido, en donde al menos un aminoácido es substituido con un aminoácido metilado por N; h) una secuencia de aminoácido de a) modificada por al menos una substitución de aminoácido, en donde al menos un aminoácido es substituido con un aminoácido que no se presenta naturalmente; e i) una secuencia de aminoácido de a) modificada por al menos una substitución de aminoácido, en donde al menos un aminoácido es substituido con un imitador de aminoácido, en donde el péptido inhibe el enlace de FcRn humano a IgG humana. 37. Un péptido de conformidad con la reivindicación 36, caracterizado porque la secuencia de aminoácido en c) es al menos 90% idéntica a a) . 38. Un dimero caracterizado porque comprende el péptido de conformidad con la reivindicación 36. 39. El dimero, de conformidad con la reivindicación 35 ó 38, caracterizado porque es el producto de alquilación reductiva . 40. El dimero de conformidad con la reivindicación 35 ó 38, caracterizado porque es el producto de una reacción entre monómeros de péptido individuales y una ligadura multivalente . 41. El dimero de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque la ligadura multivalente se elige de ácido tiol, alcohol, y ligaduras de amina. 42. Un péptido de conformidad con la reivindicación 36, caracterizado porque es un trímero. 43. Un péptido de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1, 2, ó 36, caracterizado porque enlaza específicamente a FcRn humano. 44. El péptido de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque la afinidad del péptido para FcRn humano está en el intervalo desde 50 fM hasta 1 mM. 45. El péptido de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque la afinidad del péptido para FcRn humano está en el intervalo desde 500 fM hasta 100 µ?. 46. El péptido de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque la afinidad del péptido para FcRn humano está en el intervalo desde 5 pM hasta 1 µ?. 47. El péptido de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1, 2, ó 36, caracterizado porque inhibe el enlace de FcRn humano a IgG humana, y tiene un IC50 en el intervalo desde 50 fM hasta 1 mM. 48. Un péptido, caracterizado porque comprende la siguiente estructura (SEQ ID NO: 319) 49. Una fusión, caracterizada porque comprende el péptido de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1, 2, ó 36, con otra molécula. 50. La fusión de conformidad con la reivindicación 49, caracterizada porque la molécula se elige de polietilen glicol (PEG), albúmina, transferrina, y la porción Fe de una inmunoglobulina . 51. La fusión de conformidad con la reivindicación 50, caracterizada porque la molécula es la porción Fe de una inmunoglobulina . 52. La fusión de conformidad con la reivindicación 51, caracterizada porque la inmunoglobulina se elige de IgGl, IgG2, IgG3, e IgG4. 53. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende una cantidad terapéuticamente efectiva del péptido de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1, 2, ó 36. 54. La composición de conformidad con la reivindicación 53, caracterizada porque la cantidad terapéuticamente efectiva del péptido es capaz de disminuir la concentración de suero de IgG humana como se compara con la concentración de suero de IgG humana antes del tratamiento con el péptido. 55. La composición de conformidad con la reivindicación 54, caracterizada porque la disminución en la concentración de suero de IgG humana es al menos 5%. 56. La composición de conformidad con la reivindicación 55, caracterizada porque la disminución en la concentración de suero de IgG humana es al menos 15%. 57. La composición de conformidad con la reivindicación 56, caracterizada porque la disminución en la concentración de suero de IgG humana es al menos 25%. 58. Un método para regular un estado de la enfermedad, caracterizado porque comprende poner en contacto una célula con el péptido de una cantidad terapéuticamente efectiva de un péptido de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1, 2, ó 36. 59. El método de conformidad con la reivindicación 58, caracterizado porque la célula expresa FcRn. 60. El método de conformidad con la reivindicación 58, caracterizado porque comprende además regular el estado de la enfermedad al modular la concentración de suero de IgG. 61. El método de conformidad con la reivindicación 60, caracterizado porque el IgG es especifico para una proteina terapéutica . 62. El método de conformidad con la reivindicación 61, caracterizado porque la proteina terapéutica es eritropoyetina . 63. El método de conformidad con la reivindicación 60, caracterizado porque el IgG es especifico para un vector de terapia génica. 64. El método de conformidad con la reivindicación 58, caracterizado porque el estado de enfermedad se elige de enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunes, y cáncer . 65. El método de conformidad con la reivindicación 64, caracterizado porque la enfermedad autoinmune se elige de alopecia areata, espondilitis anquilosante, síndrome antifosfolipido, enfermedad de Addison autoinmune, anemia hemolitica autoinmune, hepatitis autoinmune, síndrome linfoproliferativo autoinmune (alps), púrpura trombocitopénica autoinmune (atp) , enfermedad de Behcet, pénfigo vesicular, cardiomiopatía , herpetiformis de dermatitis de esprúe celiaco, síndrome de disfunción inmune de fatiga crónica (cflds), polineuropatía desmielinizante inflamatoria crónica, pénfigo cicatricial, síndrome cREst, enfermedad de aglutinina fría, enfermedad de Crohn, enfermedad de Degos, dermatomiositis , dermatomiositis juvenil, lupus discoide, crioglobulinemia mezclada esencial, fibromialgia-fibromiositis , enfermedad de Graves, tiroiditis de Guillain-Barre Hashimoto, fibrosis pulmonar idiopática, púrpura de trombocitopenia idiopática (Itp), nefropatía Iga, diabetes dependiente de insulina, artritis juvenil, liquen plano, lupus, enfermedad de Meniere, enfermedad de tejido conectivo mixto, esclerosis múltiple, miastenia gravis (mG) , pénfigo, pénfigo vulgar, anemia perniciosa, poliarteritis nodosa, policondritis , síndromes poliglandulares , polimialgia reumática, polimiositis y dermatomiositis, agammaglobulinemia primaria, cirrosis biliar primaria, soriasis, fenómeno de Raynaud, síndrome de Reiter, fiebre reumática, artritis reumatoide, sarcoidosis, escleroderma, síndrome de Sjógren, síndrome del hombre rígido, arteritis de Takayasu, arteritis temporal/arteritis de célula gigante, rechazo al transplante, uveitis de colitis ulcerativa, vasculitis, vitíligo, y granulomatosis de Wegener. 66. El método de conformidad con la reivindicación 64, caracterizado porque la enfermedad autoinmune se elige de pénfigo vesicular, púrpura de trombocitopenia idiopática (ITP), miastenia gravis (MG) , pénfigo, y rechazo al transplante . 67. El método de conformidad con la reivindicación 66, caracterizado porque el pénfigo es pénfigo vulgar. 68. El método de conformidad con la reivindicación 64, caracterizado porque el estado de enfermedad se elige de enfermedades inflamatorias. 69. El método de conformidad con la reivindicación 68, caracterizado porque las enfermedades inflamatorias se eligen de asma, colitis ulcerativa y alergia del síndrome del intestino inflamatorio, incluyendo rinitis/sinusitis alérgica, alergias en la piel (urticaria/ronchas, angioedema, dermatitis atópica) , alergias por alimentos, alergias por fármacos, alergias por insectos, mastocitosis , artritis, incluyendo osteoartritis, artritis reumatoide, y espondiloartropatias . 70. El método de conformidad con la reivindicación 61, caracterizado porque la proteína terapéutica es un factor de coagulación . 71. El método de conformidad con la reivindicación 70, caracterizado porque el factor de coagulación se elige de fibrinogeno, protrombina, factor V, factor VII, factor VIII, factor IX, factor X, factor XI, factor XII, factor XIII, o factor von illebrand. 72. El método de conformidad con la reivindicación 70, caracterizado porque el factor de coagulación es factor VIII. 73. Un método para detectar FcRn, caracterizado porque comprende: etiquetar el péptido de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1, 2, ó 36 con una etiqueta detectable elegida de radioisótopos, enzimas que tienen productos detectables, fluoroforos, compuestos quimioluminiscentes , partículas magnéticas, microesferas , nanoesferas, biotina, estreptavidina, y digoxina. 74. El método de conformidad con la reivindicación 73, caracterizado porque el método de detección se incluye en un kit de diagnóstico. 75. Un método para sintetizar un dímero de péptido, caracterizado porque comprende una primera etapa de la síntesis de péptido de fase sólida, una segunda etapa para tratar la resina de fase sólida con una molécula que puede reaccionar con y ligar dos péptidos adyacentes; y una tercera etapa de liberar los péptidos ligados de la resina. 76. Un método para purificar FcRn, caracterizado porque comprende : (a) inmovilizar el péptido de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1, 2, ó 36 para un soporte sólido, (b) poner en contacto una solución que contiene FcRn con el péptido inmovilizado en un soporte sólido; y (c) purificar FcRn al separar la solución del soporte sólido .