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MX2008006524A - Metodo para la produccion de una molecula efectora de union a queratina. - Google Patents

Metodo para la produccion de una molecula efectora de union a queratina.

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Publication number
MX2008006524A
MX2008006524A MX2008006524A MX2008006524A MX2008006524A MX 2008006524 A MX2008006524 A MX 2008006524A MX 2008006524 A MX2008006524 A MX 2008006524A MX 2008006524 A MX2008006524 A MX 2008006524A MX 2008006524 A MX2008006524 A MX 2008006524A
Authority
MX
Mexico
Prior art keywords
keratin
nucleic acid
molecule
skin
hair
Prior art date
Application number
MX2008006524A
Other languages
English (en)
Inventor
Arne Ptock
Heiko Barg
Burghard Liebmann
Martin Volkert
Heike Reents
Original Assignee
Basf Se
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Basf Se filed Critical Basf Se
Publication of MX2008006524A publication Critical patent/MX2008006524A/es

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Abstract

La invención se refiere a un método para la producción de moléculas efectoras de unión a queratina, los productos intermedios y los productos finales del método inventivo, y el uso de las moléculas efectoras de unión a queratina que se producen de acuerdo con el método, en dermocosméticas. La invención además se refiere a un método para aplicar las sustancias activas dermocosméticas a la piel y/o el cabello, así como a un método para aumentar el tiempo durante el cual una sustancia activa permanece sobre la piel y el cabello.

Description

MÉTODO PARA LA PRODUCCIÓN DE UNA MOLÉCULA EFECTORA DE UNIÓN A QUERATINA La invención se refiere a un método para la producción de moléculas efectoras de unión a queratina, y a los intermediarios y productos finales del método de acuerdo con la invención y al uso de las moléculas efectoras de unión a queratina que se producen de acuerdo con la invención en dermocosméticos . Además, la invención se refiere a un método de aplicación de ingredientes dermocosméticos activos a la piel y/o cabello y a un método para aumentar el tiempo de permanencia de un ingrediente activo sobre la piel y el cabello.
Las células de los vertebrados contienen filamentos, de los cuales un grupo esta construido de queratinas. Las proteínas específicas, como puede ser, por ejemplo, desmoplaquina o placofilina, se unen a estas queratinas, las cuales también se encuentran en el cabello, piel y uñas de las manos y uñas de los pies, por medio de un motivo de secuencia específico, un denominado dominio de unión a queratina (Fontao L, Favre B, Rious S, Geerts D, Jaunin F, Saurat JH, Green KJ, Sonnenberg A, Borradori L., Interaction of the bullous pemphigoid antigen 1 (BP230) y desmoplakin with intermedíate filaments is mediated by distinct sequences within their COOH terminus. Mol. Biol Cell 2003 Mayo; 14 (5): 1978-92. Epub 180 interacts with the N-terminal domain of BP230, thereby mediating keratin cytoskeleton anchorage to the cell suface at the site of the hemidesmosome, Mol Biol Cell. 2000 enero; 11 (1): 277-86; Smith E.A. Fuchs E . , Defining the interactions Between Intermedíate Filaments and desmosomes, The Journal of Cell Biology, Volumen 141, 1998) .
La piel humana es objeto de ciertos procesos de envejecimiento, algunos de los cuales pueden atribuirse a procesos intrínsecos (cronoenvejecimiento) y algunos de los cuales pueden ser atribuidos a factores exógenos (ambientales, por ejemplo fotoenvej ecimiento) . Además, pueden surgir cambios temporales o persistentes en la apariencia de la piel como puede ser acné, piel grasosa o reseca, queratosis, rosácea, reacciones fotosensibles, inflamatorias, eritematosas , alérgicas o autoinmunes, como pueden ser dermatosis y fotodermatosis .
Factores exógenos incluyen, en particular, luz solar o fuentes ratifícales de radiación con un espectro comparable, y también compuestos radicales libres o iónicos los cuales pueden surgir como resultado de la radiación. Estos factores también incluyen el humo del cigarro y los compuestos reactivos presentes en este, como puede ser ozono, radicales libres, oxigeno singlete y otros compuestos de oxigeno o nitrógeno reactivo que perturban la fisiología o morfología natural de la piel.
En Alemania, desde 1968 el ozono total ha disminuido en general a solo por debajo de 10%, o aproximadamente 3% por década. En el mismo periodo, la radiación UV a aumentando aproximadamente 15%. La radiación UV-B causante de quemaduras de sol de aproximadamente 300 nanómetros de longitud tiene la eficacia más grande para producir cáncer. Este aumenta el riesgo de enfermar con el denominado cáncer de la piel no melanoma (espinalomia o cáncer epidermoide o basalioma o cáncer de células básales) . En este sentido, el riesgo de tumor aumenta con el número de quemaduras de sol. En particular, la exposición a la luz UV en los primeros 10 años de vida (quemaduras de sol en el caso de niños) influye en el riesgo de cáncer.
De acuerdo con estimados de la OMS, cada años dos millones de personas en todo el mundo enferman de carcinomas de células básales y carcinomas epidermoides de la piel, y aproximadamente 200 000 de melanoma. En Alemania, el número de nuevos casos de cáncer de piel es aproximadamente 12,000 de los cuales 7% son melanomas. Cada año en Alemania aproximadamente 1600 muertes se pueden atribuir a cáncer de piel melanoma o no melanoma. (Arztezeitung 5.17.2000).
Para prevenir y tratar el daño antes mencionado, enfermedades y también el cuidado y tratamiento decorativo de la piel, cabello, uñas de las manos y uñas de los pies, existe una creciente necesidad de nuevos ingredientes activos y productos para métodos de aplicación innovadores de éstos.
La Solicitud de Patente Alemana con la referencia de archivo DE 102005011988.3 describe el uso de dominios de unión a queratina en preparaciones cosméticas. La Solicitud de Patente Internacional con la referencia de archivo PCT/EP/05/005599 revela que los dominios de unión a queratina también pueden ser acoplados con moléculas efectoras.
Un objetivo de la presente invención fue proporcionar nuevos tipos de compuestos ingredientes activos dermocosméticos para aplicación a la piel, cabello, uñas de las manos y uñas de los pies, y también los métodos para la producción de éstos. Ventajosamente los compuestos ingredientes activos fueron identificados los cuales tienen una propiedad de unión a queratina y además son apropiados para producir formulaciones o preparaciones cosméticas y/o dermocosméticos. Además, un objetivo de la presente invención fue identificar compuestos apropiados que puedan acoplarse a un polipéptidos con propiedades de unión a queratina a través de un enlace covalente. En particular, fue un objetivo de la presente invención proporcionar un método de aplicación innovador para ingredientes activos dermocosméticos. Además, el objetivo fue proporcionar un método de aumentar el tiempo de permanencia de un ingrediente activo dermocosmético sobre la piel, cabello y/o uñas de las manos y uñas de los pies.
Compendio de la invención En una primera modalidad, la invención se refiere a un método para producir una molécula efectora de unión a queratina mediante · el acoplamiento de una molécula efectora (i) que lleva por lo menos una función hidro o amino sobre un polipéptido de unión a queratina (ii) utilizando una molécula ligadora (iii) la cual tiene por lo menos dos funcionalidades de acoplamiento que pueden introducir enlaces seleccionados del grupo que consiste en tioéster, éster, tioéter, éter y enlaces amida, y (a) en un primer paso de acoplamiento, en primer lugar la molécula efectora (i) se une a la molécula ligadora (iii) a través de un enlace éster o amida, y (b) en otro paso de acoplamiento, el producto de reacción de (a) se acopla al polipéptido de unión a queratina (ii) a través de una funcionalidad de acoplamiento todavía libre de la molécula ligadora (iii) En otra modalidad de la invención, el acoplamiento de acuerdo con la invención de la molécula ligadora (iii) con la molécula efectora (i) se lleva a cabo a través de una reacción de esterificación mediada por carbodiimida o cloruro ácido.
En una modalidad preferida de la invención, la molécula efectora (i) que se utiliza en el método de acuerdo con la invención se elige del grupo que consiste en colorantes, agentes fotoprotectores , vitaminas, provitaminas, carotenoides, antioxidantes y descomponedores peróxido. modalidad particularmente preferida, utilizan polipéptido de unión a queratina (ii) los cuales tienen una afinidad de unión a la queratina de la piel, cabello o uñas del humano.
Preferentemente, el polipéptido de unión a queratina (ii) que se utiliza de acuerdo con la invención, contiene : (a) por lo menos una de las secuencias de acuerdo con la ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170, ó (b) un polipéptido el cual es por lo menos 40% idéntico a por lo menos una de las secuencias de acuerdo con la ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170, y tiene la capacidad para unirse a la queratina.
Preferentemente, el polipéptido de unión a queratina (ii) que se utiliza de acuerdo con la invención tiene una afinidad de unión a la queratina de la piel, cabello o uñas del humano y puede preferentemente ser codificado por una molécula ácido nucleico que contenga por lo menos una molécula ácido nucleico elegida del grupo que consiste en: a) molécula de ácido nucleico que codifique un polipéptido que contenga la secuencia que se muestra en la ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170; b) molécula de ácido nucleico que contenga por lo menos un polipéptido de la secuencia que se muestra en ID 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 145, 149, 152, 159, 161, 163, 165, 167 ó 169; molécula de ácido nucleico que codifique un polipéptido de acuerdo con las secuencias ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170; molécula de ácido nucleico con una secuencia de ácido nucleico que corresponde a por lo menos una de las secuencias de acuerdo con ID SEC No.: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 145, 149, 152, 159, 161, 163, 165, 167 ó 169 o una molécula de ácido nucleico derivada de éstas por sustitución, deleción o inserción, la cual codifica un polipéptido que es por lo menos 40% idéntico a por lo menos una de las secuencias de acuerdo con ID SEC No. : 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170 y tiene la capacidad para unirse a queratina; molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que es reconocido por un anticuerpo monoclonal dirigido hacia un polipéptido que es codificado por las moléculas de ácido nucleico de acuerdo con (a) a (c) . molécula de ácido nucleico que codifica para una proteina de unión a queratina, que, en condiciones restrictivas, híbrida con una molécula de ácido nucleico de acuerdo con (a) a (c) . g) molécula de ácido nucleico que codifica para una proteina de unión a queratina, la cual puede ser aislada de un banco de DNA utilizando una molécula de ácido nucleico de acuerdo con (a) a (c) o fragmentos o parte de ésta de por lo menos 15 nt, preferentemente 20 nt, 30 nt, 100 nt, 200 nt o 500 nt como sonda en condiciones de hibridación restrictivas, y h) molécula de ácido nucleico que puede ser producida por retrotraducción de una de las secuencias de aminoácidos que se muestran en las secuencias ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170.
En una modalidad de la presente invención preferentemente, se utilizan moléculas ligadoras (iii) las cuales tienen por lo menos dos funcionalidades de acoplamiento diferentes. Preferentemente, estas son moléculas ligadoras (iii) que llevan grupos maleimida. En el método de acuerdo con la invención, las moléculas ligadoras (iii) particularmente de preferencia utilizadas son maleimidas portadoras de grupos ácido carboxilico de acuerdo con la fórmula general 1, Fórmula 1 en donde "n" es un entero entre 0 y 20.
En una modalidad más preferida del método de acuerdo con la invención, se utiliza el ácido maleimido capróico como moléculas ligadoras (iii) .
En otra modalidad preferida de la presente invención, este es un método en el cual: (i) el polipéptido de unión a queratina que se utiliza comprende una de las secuencias que se muestran en la ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170, y j) la molécula ligadora (iii) utilizada es ácido maleimido capróico, y k) la molécula efectora (i) se elige del grupo que consiste en ácido pantoténico, pantenol, ésteres de pantenol, éteres de pantenol y pantenoles catiónicamente derivados.
La invención también se refiere a las moléculas efectoras de unión a queratina, donde la molécula efectora (i) se acopla indirectamente al polipéptido de unión a queratina a través de una molécula ligadora (iii) , con la condición de que la molécula ligadora (iii) no sea una maleimida, el polipéptido de unión a queratina (ii) no corresponda a la ID SEC No. : 166 y la molécula efectora (ii) no sea un colorante fluorescente. En una modalidad preferida, esta es una molécula efectora de unión a queratina que comprende, como polipéptido de unión a queratina (ii) un polipéptido o proteina que comprende una de las secuencias de acuerdo con la ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170, como molécula ligadora (iii), ácido maleimido capróico se utilizo y además comprende una molécula efectora (i) elegida del grupo que consiste en ácido pantoténico, pantenol, ésteres de pantenol, éteres de pantenol y pantenoles catiónicamente derivados.
La invención además proporciona el uso de moléculas efectoras de unión a queratina antes descritas de acuerdo con la invención en dermocosméticos , donde los dermocosméticos particularmente preferidos que han de mencionarse son: composiciones de protección de la piel, composiciones para el cuidado de la piel, composiciones limpiadoras de la piel, composiciones protectoras del cabello, composiciones para el cuidado del cabello, composiciones limpiadoras del cabello, colorantes para el cabello, composiciones para el cuidado de las uñas de las manos y uñas de los pies y cosméticos decorativos.
Además, la invención propone un método de aplicación de los ingredientes dermocosméticos activos a la queratina de la piel, cabello y/o uñas, en donde: 1) el ingrediente dermocosmético activo se acopla a un polipéptido de unión a queratina, y, m) la molécula efectora de unión a queratina de acuerdo con k) se aplica como constituyente de una preparación dermocosmético a la queratina de la piel, cabello y/o uñas.
Además, la invención proporciona un método para aumentar el tiempo de permanencia de un ingrediente activo dermocosmético sobre la queratina de la piel cabello y/o uñas, en donde. n) el ingrediente dermocosmético activo se acopla a un polipéptido de unión a queratina, y o) La molécula efectora de unión a queratina de acuerdo con m) se aplica como constituyente de una preapelación dermocosmética a la queratina de la piel, cabello y/o uñas, y p) el ingrediente activo se une indirectamente a la piel, cabello o uñas de las manos o uñas de los pies, mediado por el dominio de unión a queratina.
La invención además proporciona los compuestos de la fórmula 2, Fórmula 2 donde "n" corresponde a un entero entre 0 y 20.
La presente invención además proporciona dermocosméticos que contienen una molécula efectora de unión a queratina que se produce de acuerdo con el método antes descrito, donde el polipéptido de unión a queratina (ii) no corresponde a la ID SEC No.: 166.
Definiciones Para el propósito de la presente invención, "anticuerpos" son proteínas que los humanos y vertebrados portadores de mandíbulas producen para protegerse contra los antígenos (patógenos de infección o material biológico extraño para el cuerpo) . Estos son un constituyente central del sistema inmunitario de eucariotas superiores y se secretan por una clase de corpúsculos celulares blancos, las células B. Estos se presentan en la sangre y en líquido extracelular del tej ido .
Para el propósito de la presente invención, "retrotraduccion" significa la traducción de una secuencia proteinica en una secuencia de ácido nucleico que codifica para esta proteina. La retrotraduccion de este modo es un proceso de decodificación de una secuencia de aminoácidos en la secuencia de ácido nucleico que corresponde a ésta. Los métodos acostumbrados se basan en crear tablas de uso de codones para un cierto organismo, las cuales se producen por comparaciones de las secuencias, asistido por computadora. El uso de las tablas de uso de codones es posible para determinar los codones que se utilizan con mayor frecuencia para un determinado aminoácido para un organismo especifico. La retrotraduccion de proteínas puede llevarse a cabo utilizando algoritmos de computadora que se conocen para los expertos en la técnica y especialmente se generan para este propósito (Andrés Moreira y Alejandro Maass. TIP: Protein backtraslation aided by genetic algorithms. Bioinformatics, Volumen 20, Número 13 Pp. 2148-2149 (2004); G Pesóle, M Attimonelli, y S. Liuni. A backtraslation method based on dodon usage strategy. Nucleic Acids Res. 1988 Marzo 11; 16 (5 Pt A): 1715-1728) .
"Cosméticos decorativos" significa auxiliares cosméticos que no se utilizan principalmente para el cuidado, sino para embellecer o mejorar la apariencia de la piel, cabello y/o uñas de las manos y uñas de los pies. Los auxiliares de este tipo son conocidos apropiadamente para el experto en la técnica y comprende, por ejemplo, lápices kohl, máscara, sobras para ojos, cremas de día con tinte, polvos, barras correctoras, rubor, lápices labiales, lápices delineadores, maquillaje, barniz para uñas, gel glamour, etcétera. También se incluyen composiciones apropiadas para colorear la piel o el cabello.
"Dermocosméticos" , a quienes también se hace referencia como "cosmecéuticos" o "composiciones dermocosméticas" o "preparaciones dermocosméticas" son composiciones o preparaciones (i) para proteger contra daño a la piel, cabello y/o uñas de las manos y uñas de los pies, (ii) para tratar el daño existente a la piel, cabello y/o uñas de las manos y uñas de los pies, y (iii) para el cuidado de la piel, cabello y/o uñas de las manos y uñas de los pies, que consiste en composiciones, preparaciones y formulaciones cosméticas de la piel, cosméticas de las uñas, cosméticas del cabello, para la higiene dermatológica o farmacéuticas y para mejorar la sensación de la piel (propiedades sensoriales) . Las composiciones para cosméticos decorativos se incluyen explícitamente. También se incluyen composiciones para el cuidado de la piel, con las cuales el uso dermatológico farmacéutico propuesto se logra tomando en consideración los puntos de vista cosméticos. Las composiciones o preparaciones de este tipo se utilizan para ayudar, prevenir y tratar trastornos de la piel y, además del efecto cosmético, desarrollar un efecto biológico. Para el propósito de la definición que se da antes, "dermocosméticos" comprende, en un medio cosmético compatible, auxiliares y aditivos apropiados los cuales son familiares para el experto en la técnica y pueden encontrarse en los manuales de cosméticos, por ejemplo Schrader, Grundlagen und Rezepturen der Kosmetika [Fundaments and formulations of cosmetics], Hüthig Verlag, Heidelberg, 1989, ISBN 3-7785-1491-1, ó Umbach, Kosmetik: Entwicklung, Herstellung und Anwendung Kosmetischer Mittel [Cosmetics: development, manufacture and use of cosmetic compositions ] , 2a edición extendida, 1995, Georg Thieme Verlag, ISBN 3 13 712602 9.
Para el provisto de la presente invención, "ingredientes dermocosméticos" o "ingredientes dermocosméticos activos" son los ingredientes activos presentes en los dermocosméticos de acuerdo con la definición dada en lo anterior, los cuales están involucrados en realizar el modo individual de los dermocosméticos . De este modo, estos son, por ejemplo, ingredientes activos que llevan a cabo protección contra daño a la piel, cabello y/o uñas de las manos y uñas de los pies, (ii) pueden utilizarse para tratar daño existente a la piel, cabello y/o uñas de las manos y uñas de los pies, (iii) tienen propiedades para el cuidado de la piel, cabello y/o uñas de las manos y uñas de los pies y (iv) se utilizan para embellecimiento o mejoramiento decorativo de apariencia de la piel, cabello y/o uñas de las manos y uñas de los pies. También están incluidos los ingredientes activos para el cuidado de la piel en los cuales el uso farmacéutico dermatológico propuesto se logra tomando en consideración dos puntos de vistas cosméticos. Los ingredientes activos de este tipo se utilizan para ayudar, prevenir y tratar trastornos de la piel y, además del efecto cosmético, desarrollar un efecto biológico. Los ingredientes activos de este tipo se eligen, por ejemplo, a partir del grupo de polímeros naturales o sintéticos, pigmentos, humectantes, aceites, ceras, proteínas, enzimas, minerales, vitaminas, filtros solares, colorantes, perfumes, antioxidantes, descomponedores peróxidos y preservadores e ingredientes farmacéuticos activos que se utilizan para ayudar, evitar y tratar trastornos de la piel y tienen un efecto biológico que cura, previene el daño, regenera o mejora el estado general de la piel.
Para el propósito de la presente invención, "molécula efectora" significa moléculas o ingredientes dermocosméticos activos que tienen un cierto efecto predecible, preferentemente un efecto biológico o fisiológico, protector, preventivo y/o auxiliar sobre la piel, cabello y/o uñas de las manos y uñas de los pies y/o tienen un efecto cosmético decorativo. Las moléculas efectoras son preferentemente compuestos no proteinógenos , como pueden ser colorantes, agentes fotoprotectores, vitaminas, proteínas, enzimas, provitaminas, antioxidantes, descomponedores peróxidos y ácidos grasos, acondicionadores o compuestos que contienen iones metálicos, muy particularmente de preferencia vitaminas, provitaminas y precursores de vitaminas de los grupos A, B, C y E, donde las vitaminas Bl, B2 y B5 son particularmente preferidas. Se da preferencia muy particular al ácido pantoténico y pantenol, y derivados de pantenol, en particular los ésteres y éteres de pantenol, y también son muy particularmente preferidos los pantenoles catiónicamente derivados.
"Aumento en el tiempo de permanencia de los ingrediente activos dermocosméticos sobre la piel, cabello y/o uñas de las manos y uñas de los pies" significa un tiempo de permanencia de tiempo prolongado y asi disponibilidad de este ingrediente activo sobre la piel y/o cabello en comparación con los ingredientes activos que no están acoplados a polipéptidos de unión a queratina. Preferentemente, el tiempo de permanencia aumentado sobre la piel, cabello y/o .uñas de las manos o uñas de los pies significa presencia temporal del ingrediente activo sobre la piel, cabello y/o uñas de las manos y uñas de los pies aumentada por 10%, 15%, 20%, particularmente de preferencia 30%, 40%, 50%, con muy particular preferencia 75%, 100%, 125%, más preferentemente 150%, 200%, 300%, más preferentemente 500%, 750%, 1000%, en comparación con el ingrediente activo no acoplado identificado, bajo condiciones de aplicación de otro modo idénticas.
Para los propósitos de la presente invención, "queratina" significa filamentos intermedios construidos a partir de complejos proteinicos tipo cuerda. Los filamentos intermedios están construidos a partir de múltiples proteínas del mismo tipo {monómeros) los cuales se posicionan en paralelo para obtener una estructura tipo tubo. Los filamentos intermedios están unidos para dar ases relativamente grandes (tonofibrillas) . Los filamentos intermedios forman el fitoesqueleto de la célula con los microtúbulos filamentos de actina. Se hace una diferencia entre 5 tipos de filamentos intermedios: queratinas ácidas y básicas, desminas, neurofilamentos y láminas. De preferencia especifica para el propósito de la presente invención son las queratinas ácida y básica que se presentan en el epitelio (capas de células únicas o múltiples que cubren todas las superficies externas del cuerpo de organismos animales multicelulares) . "queratina" o "queratinas" (también: sustancia córnea, escleroproteina ) significa una proteina que es responsable de la estabilidad y forma de las células. Esta proteina es un constituyente de la piel, cabello y uñas de los mamíferos. La resistencia de la queratina se aumenta mediante la formación de fibras: las cadenas de aminoácidos individuales forman una alfa-hélice que se enrolla hacia la derecha, y cada tres de estas hélices forman una súper hélice que enrolla hacia la izquierda (= protofibrillas ) . Once protofibrillas se combinan para dar una microfibrilla - ésta se combinan a su vez para dar ases y forman macrofibrillas que, por ejemplo, rodean las células del cabello.
"Polipéptido de unión a queratina" significa un polipéptido o una proteina que tiene la propiedad de unirse a la queratina, dentro del significado de la definición antes dada. Los polipéptidos de unión a queratina de este modo son también proteínas intermedias asociadas a filamentos. Estos polipéptidos de unión a queratina tienen una afinidad de unión hacia la queratina o las macroestructuras que consisten en queratina, como pueden ser profibrillas, microfibrillas o macrofibrillas . Además, los polipéptidos de unión a queratina se entienden que significan aquellos polipéptidos que tienen una afinidad de unión para la piel, cabello y/o uñas de las manos y uñas de los pies de los mamíferos.
"Polipéptidos de unión a queratina" también son polipéptidos que, dentro de un organismo mamífero, tienen una función biológica asociada con la unión de la queratina, fibras de queratina, piel o cabello. Los polipéptidos de unión a queratina del mismo modo significan los motivos de unión o dominios de la proteína necesarios para la unión real a la queratina, las fibras de queratina, piel o cabello. La unión del polipéptido de unión a queratina (ii) a la queratina puede ser probada en las condiciones que se describen en el Ejemplo 8, 9 y 10. Los polipéptidos de unión a queratina son aquellos polipéptidos que, en las pruebas de unión a queratina cuantitativas antes mencionadas, tienen aproximadamente 10%, 20%, 30%, 40% ó 50%, preferentemente 50%, 60%, 70%, 80% ó 90%, particularmente de preferencia 100%, 125%, 150%, muy particularmente . de preferencia 200%, 300% ó 400%, más preferentemente 500%, 600%, 700% o 1000% o más de capacidad de unión a queratina de desmoplaquina (ID SEC No.: 2), preferentemente del dominio de unión a queratina B de desmoplaquina (ID SEC No.: 4).
Para el propósito de la presente invención, las composiciones cosméticas para el cuidado oral, cuidado dental, cuidado de las encías y cuidado de la dentadura significa todas las composiciones, preparaciones y formas de suministro apropiadas para higiene oral, higiene dental, higiene de las encías e higiene de la dentadura como se describe en los libros de texto, por ejemplo, Umbach: Kosmetik: Entwicklung, Herstellung und Anwendung Kosmetischer Mittel [Cosmetics: development, manufacture and use of cosmetic compositions ] , capítulo 7, páginas 187-219, 2a edición extendida, 1995, Georg Thieme Verlag, ISBN 3 13 712602 9, a la cual se hace referencia expresamente por este medio. Estas composiciones, preparaciones y formas de suministro son conocidas para los expertos en la técnica y comprende, por ejemplo, polvos dentales, cremas dentales, pastas de dientes, cremas dentales para niños, geles dentales, cremas dentales liquidas, lavados bucales, enjuagues bucales, ungüentos y pastas, aunque esta lista no se considera exhaustiva. La fabricación de tales composiciones es conocida para el trabajador experto en la técnica y puede encontrarse en los libros de texto generales (por ejemplo Umbach: Kosmetik: Entwicklung, Herstellung und Anwendung Kosmetischer Mittel [Cosmetics: development, manufacture and use of cosmetic compositions ] , 2a edición extendida, 1995, Georg Thieme Verlag, ISBN 3 13 712602 9) . Asi pues, además de las moléculas efectoras de unión a queratina de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método inventivo, estas composiciones también contienen otros ingredientes conocidos para el trabajador experto en la técnica. Estos pueden ser, por ejemplo, agentes tensoactivos , cuerpos limpiadores, ingredientes activos, aglutinantes, humectantes, reguladores de la consistencia, preservadores, colorantes, aromas y edulcorantes, aunque esta lista no pretende ser exhaustiva. Los ingredientes activos especificados preferentemente son ingredientes activos que se utilizan para inflamaciones de las encías o para lesiones de la cavidad oral. Además, estos ingredientes activos pueden ser eficaces, por ejemplo, para combatir la placa bacteriana o para protegerlas las encías. Se hace referencia explícita por este medio a los ejemplos de formulaciones que se muestran en el libro de texto Umbach: Kosmetik: Entwicklung, Herstellung und Anwendung Kosmetischer Mittel [Cosmetics: development, manufacture and use of cosmetic compositions ] , 2a edición extendida, 1995, Georg Thieme Verlag, ISBN 3 13 712602 9, o en las páginas 205 a 207.
"Medio cosmético compatible" debe entenderse en el amplio sentido y significa sustancias apropiadas para la producción de preparaciones cosméticas o dermocosméticas , y mezclas de éstas. Estos son medios preferentemente compatibles con proteínas.
Tras el contacto con el tejido de la piel o cabello humano y/o animal, las "sustancias cosméticas compatibles" no dan origen a irritaciones ni daño y no tienen incompatibilidades con otras sustancias. Además, estas sustancias tienen un leve potencial alergénico y están aprobadas por las autoridades de registro estatales para uso en preparaciones cosméticas. Estas sustancias son conocidas para el trabajador experto en la técnica y pueden encontrarse, por ejemplo, en manuales cosméticos, por ejemplo, Schrader, Grundlagen und Rezepturen der Kosmetika [Fundaments and formulations of cosmetics], Hüthig Verlag, Heidelberg 1989, ISBN 3-7785-1491-1. Ácido nucleico" o "molécula de ácido nucleico" significa desoxirribonucleótidos, ribonucleótidos o polímeros o híbridos de éstos en forma monocatenaria o bicatenaria, en orientación sentido o antisentido. El término ácido nucleico o molécula de ácido nucleico puede utilizarse para describir un gen, DNA, cDNA, mRNA, oligonucleótido o polinucleótido .
"Secuencia de ácido nucleico" significa una secuencia sucesiva y ligada entre sí de desoxirribonucleótidos o ribonucleótidos de una molécula de ácido nucleico de acuerdo con la definición antes dada, como puede investigarse utilizando las técnicas de secuenciación de DNA/RNA disponibles, y representada o mostrada en una lista de abreviaturas, letras o palabras que presentan nucleótidos.
Para el propósito de la presente invención, "polipéptido" significa una macromolécula construida a partir de moléculas de aminoácidos en las cuales los aminoácidos están ligados entre si linealmente a través de enlaces peptidicos. El polipéptido puede estar constituido de algunos aminoácidos (aproximadamente 10 a 100), pero incluye proteínas que generalmente se construyen a partir de por lo menos 100 aminoácidos, pero también puede comprender varios miles de aminoácidos. Preferentemente, los polipéptidos contienen por lo menos 20, 30, 40 ó 50, particularmente de preferencia por lo menos 60, 70, 80 ó 90, muy particularmente de preferencia por lo menos 100, 125, 150, 175 ó 200, más preferentemente por lo menos más de 200 aminoácidos, siendo posible que el limite superior sea varios miles de aminoácidos.
"Homología" o "identidad" entre dos secuencias de ácido nucleico se entiende que significa la identidad de la secuencia de ácido nucleico sobre toda la longitud de la secuencia en cuestión, la cual se calcula por comparación con la ayuda del algoritmo de programa GAP (Wisconsin Package versión 10.0, Universidad de Wisconsin, Genetics Computer Group (GCG) , adison EUA; Altschul y col. (1997) Nucleic Acids Res. 25: 3389ff) con los siguientes parámetros: Peso del hueco: 50 Peso de longitud: 3 Apareamiento promedio: 10 Apareamiento erróneo prom. : 0 Por medio de un ejemplo, una secuencia que tiene una homología de por lo menos 80% basada en ácido nucleico con la secuencia ID SEC No. : 1 se entiende que significa una secuencia que tiene una homología de por lo menos 80% si se compara con la secuencia ID SEC No.: 1 de acuerdo con el algoritmo de programa anterior con la serie de parámetros anteriores.
Por homología entre dos polipéptidos se entiende que significa la identidad de la secuencia de aminoácidos sobre toda la longitud de la secuencia pertinente, la cual se calcula por comparación con la ayuda del algoritmo de programa GAP (Wisconsin Package Versión 10.0, University of Wisconsin, Genetics Computer Group (GCG) , Madison, EUA) con los siguientes parámetros: Peso del hueco: 8 Peso de longitud: 2 Apareamiento promedio: 2.912 Apareamiento erróneo prom. : 2.003 Por medio de un ejemplo, una secuencia que tiene una homología de por menos 80% basada en el polipéptido con la secuencia ID SEC No.: 2 se entiende que significa una secuencia que tiene una homología de por lo menos 80% si se compara con la secuencia ID SEC No. : 2 de acuerdo con el algoritmo de programa anterior con la serie de parámetros anteriores. "Condiciones de hibridación" debe entenderse en el amplio sentido y significa condiciones de hibridación, restrictivas o menos restrictivas, dependiendo de la aplicación. Tales condiciones de hibridación están descritas, entre otros, en Sambrook J, Fritsch EF, Maniatis T y col., en Molecular Cloning (A Laboratory Manual) , 2a edición, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989, páginas 9.31-9.57) o en Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N. Y. (1989), 6.3.1-6.3.6. La persona experta en la técnica podrá elegir las condiciones de hibridación las cuales le permitirán diferenciar hibridaciones especificas a partir de hibridaciones no especificas. Por ejemplo, las condiciones durante el paso de lavado pueden elegirse a partir de condiciones con baja rigurosidad (con aproximadamente 2X SSC a 50°C) y aquellas con elevada rigurosidad (con aproximadamente 0.2X SSC a 50°C, preferentemente a 65°C) (20X SSC: citrato de sodio 0.3 M, NaCl, 3M, pH 7.0). Además, la temperatura durante el paso de lavado puede aumentarse desde condiciones de baja rigurosidad a temperatura ambiente, aproximadamente 22°C, hasta condiciones de mayor rigurosidad a aproximadamente 65°C. Ambos parámetros, la concentración salina y temperatura, pueden variar al mismo tiempo o en forma individual, manteniendo el otro parámetro en cada caso constante. Durante la hibridación, también es posible utilizar agentes desnaturalizantes como puede ser, por ejemplo, formamida o SDS, en presencia de formamida al 5o% la hibridación preferentemente se lleva a cabo a 42°C. Algunas condiciones ejemplares para la hibridación y el paso de lavado se dan a continuación: 1. Las condiciones de hibridación pueden elegirse, por ejemplo, a partir de las siguientes condiciones: a) 4X SSC a 65°C, b) 6X SSC a 45°C, c) 6X SSC, 100 de DNA de esperma de pescado fragmentado, desnaturalizado, a 68°C, d) 6X SSC, SDS al 0.5%, 100 de DNA de esperma de salmón, desnaturalizado, a 68°C, e) 6X SSC, SDS al 0.5%, 100 µg/mL de DNA de esperma de salmón fragmentado, desnaturalizado, formamida al 50% a 42°C, f) formamida al 50%, 4X SSC a 42°C, o, g) formamida al 50% (vol./vol.), albúmina sérica bobina al 0.1%, Ficoll al 0.1%, polivinilpirrolidona al 0.1%, búfer de fosfato de sodio 50 mM, pH 6.5, NaCl 750 mM, citrato de sodio 75 mM a 42°C, o, i) 2X o 4X SSC a 50°C (condición de baja de rigurosidad) j) formamida al 30 a 40%, 2X o 4X SSC a 42°C (condición de baja rigurosidad) 500 mN de búfer de fosfato de sodio pH 7.2, FDF al 7% (g/V), EDTA 1 mM 10 iq/mL de DNA monocatenario, BSA al 0.5% (g/V) (Church and Gilbert, Genomic Secuencing, Proc. Nati. Acad. Sci. EUA. 81: 1991.1984). 2. Los pasos de lavado pueden elegirse, por ejemplo, a partir de las siguientes condiciones: a) NaCl 0.015 M/citrato de sodio 0.0015 M/SDS al 0.1% a 50°C, b) 0.1X SSC a 65°C, c) 0.1X SSC, SDS al 0.5% a 68°C, d) 60. IX SSC, SDS al 0.5%, formamida al 50% a 42°C, e) 0.2X SSC, SDS al 0.1% a 42°C, f) 2X SSC a 65°C (condición de baja rigurosidad) .
En una modalidad, las condiciones de hibridación rigurosas se eligen como sigue: Se elige un búfer de hibridación que contenga formamida, NaCl y PEG 6000. La presencia de formamida en el búfer de hibridación desestabiliza las moléculas de ácido nucleico bicatenarias , como resultado de lo cual la temperatura de hibridación puede reducirse a 42°C sin reducir la rigurosidad. El uso de sal en el búfer de hibridación aumenta la tasa de renaturalización de un dúplex, o la eficiencia de la hibridación. Aunque el PEG aumenta la viscosidad de la solución, la cual tiene un efecto negativo sobre las tasas de renaturalización, como resultado de la presencia del polímero en la solución, la concentración de la sonda en el medio restante se aumenta, lo cual aumenta la tasa de hibridación. La composición del búfer es como sigue: Búfer de hibridación Búfer de fosfato de sodio 250 mM, pH 7.2 EDTA 1 mM SDS al 7% (g/v) NaCl 20 mM 10 ng/mL de ssDNA Polietilenglicol (PEG) 6000 al 5% Formamida al 40% Tabla 1: Búfer de hibridación Las hibridaciones se llevan a cabo durante la noche a 42°C. Los filtros se lavan la mañana siguiente 3X con 2X SSC + SDS al 0.1% durante aproximadamente 10 min en cada caso. En relación con la descripción "molécula efectora portadora de la función hidroxilo", "función hidroxi" significa grupos OH libres o grupos hidroxilo que habilitan a estas moléculas portadoras de grupos OH para unirse covalentemente a otras moléculas mediante una reacción de esterificación . Para el propósito de la presente invención, "funciones hidroxi" también son aquellas que pueden ser convertidas químicamente en funciones OH, como puede ser, por ejemplo, derivados como metoxi, etoxi. En este caso, las moléculas efectoras de acuerdo con la invención tienen por lo menos un grupo hidroxilo. Sin embargo, también es posible utilizar moléculas efectoras con 2, 3, o más funciones hidroxi.
En relación con la descripción, "molécula efectora portadora de la función amino", "funciones amino" significa grupos amino que permiten a las moléculas portadoras de la función unirse covalentemente a otras moléculas mediante un enlace amida. Para el propósito de la presente invención, "funciones amino" también son aquellas que pueden ser convertidas químicamente en funciones amino. En este caso, las moléculas efectoras de acuerdo con la invención tienen por lo menos una función amino. Sin embargo, también es posible utilizar moléculas efectoras con 2, 3 o más funciones amino y/o grupos amino secundarios. "Acoplamiento" en relación con la unión de una molécula ligadora a una molécula efectora o proteina de unión a queratina significa un enlace covalente de las moléculas.
"Funcionalidades de acoplamiento" son grupos funcionales de una molécula ligadora que pueden entrar en un enlace covalente con grupos funcionales de la molécula efectora o la proteina de unión a queratina. Los ejemplos no limitativos que pueden mencionarse son: grupos hidroxi, grupos carboxilo, grupos tio y grupos amino. "funcionalidades de acoplamiento" o "funcionalidad de acoplamiento" y "grupos ancla" o "grupo ancla" se utilizan como sinónimos.
Descripción detallada de la invención La presente invención proporciona un método para producir una molécula efectora de unión a queratina mediante el acoplamiento de una molécula efectora (i) que lleva por lo menos una función hidroxi o amino en un polipéptido de unión a queratina (ii) utilizando una molécula ligadora (iii) que tiene por lo menos dos funcionalidades de acoplamiento que pueden entrar en enlaces elegidos del grupo que consiste en enlaces tioéster, éster, tioéter, éter y amida, y (a) en un primer paso de acoplamiento, en primer lugar la molécula efectora (i) se une a la molécula ligadora (iii) a través de un enlace éster o amida, y (b) en otro paso de acoplamiento, el producto de reacción de (a) se acopla al polipéptido de unión a queratina (ii) a través de una funcionalidad de acoplamiento todavía libre de la molécula ligadora (iü) · En una modalidad preferida de la invención, la molécula ligadora (iii) tiene por lo menos dos funcionalidades de acoplamiento o grupos ancla, de los cuales por lo menos uno de estos grupos es una función carbonilo .
El acoplamiento de la molécula ligadora (iii) a la molécula efectora toma lugar a través de la función carboxilo, y la molécula ligadora efectora se acopla al polipéptido de unión a queratina (ii) con el grupo ancla restante .
Los enlaces de unión preferidos de la molécula ligadora (iii) al polipéptido de unión a queratina (ii) toma lugar a través de funciones amino, tiol o hidroxi las cuales, por ejemplo, con una función carboxilo de la molécula ligadora (iii) , si es apropiado luego de la activación, pueden entrar en un enlace amida, tioéster o éster correspondiente.
En una modalidad particularmente preferida de la invención, la molécula ligadora (iii) tiene por lo menos dos funcionalidades de acoplamiento diferentes, dando aquí muy particular preferencia a las moléculas ligadoras (iii) que tienen un grupo maleimida.
En el método de acuerdo con la invención, las moléculas ligadoras (iii) utilizadas son particularmente de preferencia maleimidas que llevan grupos ácido carboxilico de acuerdo con la fórmula general 1, Fórmula 1 en la cual "n" es un entero entre 0 y 40 ó 0-20, preferentemente entre 0 y 15, particularmente de preferencia entre 0 y 10, muy particularmente de preferencia entre 1 y 9, o entre 2 y 8, o entre 3 y 7, más preferentemente de 5. El uso de ácido maleimido capróico es el más preferido. Además, el uso de cloruro del ácido maleimido capróico es muy particularmente preferido. En otra modalidad particularmente preferida, la molécula ligadora (iii) tiene por lo menos dos funcionalidades de acoplamiento diferentes y además un módulo el cual aumenta la hidrofilicidad o lipofilicidad. Esta molécula ligadora preferida esta representada en la fórmula Ib, Formula Ib en donde "n" es un entero entre 0 y 40 ó 0 y 20, preferentemente entre 0 y 15, particularmente de preferencia entre 0 y 10, muy particularmente de preferencia entre 1 y 9 ó entre 2 y 8, o entre 3 y 7, y X es los radicales O, S, N, CH2, -0-C=C-0-, -NR, -NR-C=0, 0=C-NR-, y R es H, grupos alquilo ramificados o no ramificados de Ci- ^, como puede ser metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, ter-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, ter-pentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo, decilo, undecilo, dodecilo o cicloalquilo, benzoilo, bencilo, arilo de Cg a Cío, como puede ser fenilo y naftilo, heteroarilo, preferentemente H, metilo y etilo, y el "módulo" es un radical etilenglicol o polietilenglicol que tiene 2 a 40, preferentemente 2 a 20, particularmente de preferencia 2 a 10 unidades repetidas, o un aminoácido, preferentemente elegido del grupo que consiste en glicina, alanina, serina, treonina, ácido glutámico, glutamina, ácido aspártico, asparagina, arginina y cisteina, o un polipéptido que tenga 2 a 40, preferentemente 2 a 20, particularmente de preferencia 2 a 10 aminoácidos, donde los aminoácidos preferentemente son aminoácidos polares, particularmente de preferencia elegidos del grupo que consiste en glicina, alanina, serina, treonina, ácido glutámico, glutamina, ácido aspártico, asparagina, arginina y cisteina, o un radical poliácido acrilico que tenga 2-100, preferentemente 2-80, particularmente de preferencia 2-50, más preferentemente 2-20 unidades monómeros, o, para aumentar la lipofilicidad, el "módulo" es un radical alquilo que tiene 2-40 átomos de carbono o radical poliolefina que tenga 2 a 40, preferentemente 2 a 20, particularmente de preferencia 2 a 10 unidades repetidas, o un aminoácido, preferentemente elegida del grupo que consiste en glicina, valina, leucina, isoleucina, fenilalanina , triptofano, prolina, metionina o un polipéptido que tenga 2 a 40, preferentemente 2 a 20, particularmente de preferencia 2 a 10 aminoácidos, donde los aminoácidos son preferentemente aminoácidos no polares, elegidos particularmente de preferencia del grupo que consiste en glicina, valina, leucina, isoleucina, fenilalanina , triptofano, prolina, metionina, o un poliéster, poliamida o poliuretano que tenga que tenga 2-100, preferentemente 2-80, particularmente de preferencia 2-50, más preferentemente 2-20 unidades monoméricas .
En una modalidad más preferida, la molécula ligadora es una molécula de acuerdo con la fórmula general le, Fórmula le donde X en la posición o, m, ó p es COOH o R-COOH, y R es un grupo alquilo lineal o ramificado de C1-C12 como puede ser metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, ter-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, ter-pentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo, decilo, undecilo, dodecilo o un grupo alquilo cíclico como puede ser un radical cicloalquilo de C5-C12, opcionalmente sustituido por uno o más grupos alquilo de Ci-C4 o una unidad arilo, bencilo o benzoilo con orientación o, m, o p, preferentemente ciclohexilo, fenilo y naftilo.
En otra modalidad preferida, R también puede ser el "módulo" que se describe en la fórmula Ib.
En otra modalidad preferida, el acoplamiento de la molécula ligadora (iii) con la molécula efectora (i) descrito en (a) es una reacción de esterificación o formación de amida mediada por carbodiimida, anhídrido o cloruro ácido, donde el uso del cloruro ácido de la molécula ligadora (iii) es particularmente preferido. La reacción mediada por carbodiimida, anhídrido o cloruro ácido significa la activación del grupo carboxilo de la molécula ligadora (iii) necesaria para la formación de un éster o amida entre la molécula ligadora (iii) y la molécula efectora (i) por reacción con carbodiimidas , por reacción para dar un anhídrido simétrico o mixto o por reacción para dar el cloruro ácido.
Las carbodiimidas que pueden mencionarse son preferentemente diciclohexilcarbodiimida (DCC) , diisopropilcarbodiimida (DIC), clorhidrato de N'-(3-dimetilaminopropil) -N-etilcarbodiimida (EDC) , donde el 4 uso de diisopropilcarbodiimida o EDC es particularmente preferido. Además, es posible llevar a cabo una activación con carbonildiimidazol (CDI). Estas esterificaciones se llevan a cabo en presencia de 0.1-100% mol de N, -dimetilaminopiridina (DMAP) , preferentemente 0.5-10%, particularmente de preferencia 1-6%. La formación de amidas puede tomar lugar haciendo reaccionar el compuesto activado con carbodiimida con la amida. Opcionalmente, la formación de amida puede llevarse a cabo en presencia de aditivos, como puede ser, por ejemplo, N-hidroxisuccinimida, pentafluorofenol o N-hidroxibenzotriazol . Tales aditivos son conocidos para los expertos en la técnica. Si se obtienen ésteres activos que pueden aislarse mediante estos aditivos, las reacciones de estos ésteres activos aislados con las moléculas efectoras también se entienden de acuerdo con la invención como esterificación o formación de amida mediada por carbonodiimida .
La reacción de la molécula ligadora (iii) para dar el anhídrido toma lugar por lo métodos generales, como es sabido para los expertos en la técnica. Se da preferencia al uso de anhídridos mixtos, como se obtiene en, por ejemplo, por reacción con anhídrido acético, anhídrido de pivaloilo, cloruro de cetilo, cloruro de pivaloilo o ésteres clorofórmicos . Se da preferencia particular a los anhídridos de pivaloilo y a los anhídridos con ácido carbónico. Cuando se utilizan los cloruros ácidos, es conveniente llevar a cabo la formación del anhídrido en presencia de una base terciaria como puede ser, por ejemplo, piridina, trietilamina .
El acoplamiento de la molécula ligadora (iii) con la molécula efectora (i) descrita en (a) puede preferentemente llevarse a cabo después de la activación antes descrita de la molécula ligadora (iii) para dar el anhídrido en presencia de una base. Las bases preferidas que pueden mencionarse son: alquilaminas aromáticas y terciarias, por ejemplo piridina, trietilamina, tributilamina, trioctilamina, etildiisopropilamina, etcétera. En una modalidad particularmente preferida, la base que se utiliza trietilamina.
Para la reacción de la molécula ligadora (iii) al cloruro ácido, los agentes clorantes utilizados son los agentes clorantes acostumbrados conocidos para los expertos en la técnica, por ejemplo, cloruro de tionilo, tricloruro de fósforo, pentacloruro de fósforo, cloruro de oxalilo, fosgeno o oxicloruro de fósforo. Se da preferencia muy particular al uso de cloruro de tionilo (S0C12) . Mediante el uso de cloruro de tionilo es posible convertir el ácido maleimido capróico en cloruro ácido. Los disolventes apropiados en este caso son: hidrocarburos aromáticos y alifáticos, por ejemplo benceno, tolueno, xilenos, hexano, heptano, etcétera, hidrocarburos halogenados, por ejemplo cloruro de metileno, éteres, por ejemplo dietiléter, THF, etcétera, y un exceso del propio agente clorante. En una modalidad preferida se utiliza tolueno. La cloración puede llevarse a cabo con o sin catalizador. Para la cloración se utiliza particularmente de preferencia DMF como catalizador.
En otra modalidad preferida, el acoplamiento de la molécula ligadora (iii) con la molécula efectora (i) descrita en (a) se lleva a cabo directamente después de la activación antes descrita de la molécula ligadora (iii) para dar el cloruro ácido en presencia de una base. Las bases preferidas son: alquilaminas aromáticas y terciarias, por ejemplo piridina, trietilamina, tributilamina, trioctilamina, etildiisoprolamina , etcétera. En una modalidad particularmente preferida, la base que se utiliza es trietilamina.
Sorprendentemente se ha encontrado que durante la acilación del pantenol con el cloruro maleimido capróico en presencia de trietilamina, con respecto a la formación de los isómeros posibles, puede obtenerse una selectividad que no sea para el acoplamiento mediado por carbodiimida . Durante la acilación de pantenol con el cloruro maleimido capróico en presencia de trietilamina, solo se forman dos de tres posibles isómeros monoacilados en una proporción de aproximadamente 4:3 (ver el Ejemplo 12) .
La invención asi además preferentemente proporciona el uso de trietilamina como catalizador base en combinación con una molécula ligadora (iii) que reacciona para dar un cloruro ácido, donde la molécula ligadora (iii) es particularmente de preferencia ácido maleimido capróico, y la molécula efectora (i) es particularmente de preferencia pantenol.
Como una opción, el producto de reacción del paso (a) (a quien se hace referencia más adelante como molécula efectora ligadora (iv) ) además puede ser purificado para separar los isómeros posibles del producto de la reacción. En este caso, es posible utilizar todos los métodos acostumbrados para purificar sustancias químicas, por ejemplo destilación, rectificación, cristalización, extracciones y métodos de purificación cromatográfica . Preferentemente se lleva a cabo cromatografía en columna.
La unión del producto de reacción que surge del paso (a) antes descrito con el polipéptido de unión a queratina (ii) se lleva a cabo a través del segundo grupo ancla todavía libre de la molécula ligadora. Por ejemplo, un grupo ancla como este puede ser una función tiol, por medio de la cual el ligador puede entrar en un enlace disulfuro con un radical · cisteína del polipéptido de unión a queratina (ii) .
El uso de ligadores diseñados permite el acoplamiento preciso del ligador de la molécula efectora ligadora (iv) al polipéptido de unión a queratina. Además es posible, como resultado, ligar dos o más moléculas efectoras a un^polipéptido de unión a queratina (ii).
El ligador utilizado es regulado por la funcionalidad que va a ser acoplada. De adecuabilidad son, por ejemplo, moléculas que acoplan polipéptidos (ii) para que sean unidos a queratina por medio de grupos reactivos a sulfhidrilo (por ejemplo maleimidas, disulfuros de piridilo, a-haloacetilos, vinilsulfonas, sulfatos alquilsulfonas (preferentemente sulfato etilsulfonas) ) . Se da preferencia a un enlace covalente de la molécula ligadora (iii) con el polipéptido de unión a queratina (ii) . Esto puede tomar lugar, por ejemplo, a través de las cadenas laterales del polipéptido de unión a queratina (ii) en particular por funciones amino, funciones hidroxilo,. funciones carboxilato o funciones tiol. Se da preferencia a un enlace a través de las funciones amino de uno o más radicales lisina, uno o más grupos tiol y los radicales cisteina, uno o más grupos hidroxilo de los radicales serina, treonina o tirosina, uno o más grupos carboxilo de los radicales ácido aspártico o ácido glutámico o por la función N-terminal o C-terminal del polipéptido de unión a queratina (ii). Además de las funciones aminoácido que se presentan en la secuencia primaria del polipéptido de unión a queratina (ii) , también es posible adicionar aminoácidos con funciones apropiadas (por ejemplo cisteinas, lisinas, aspartatos, glutamatos) a la secuencia, o sustituir los aminoácidos de la secuencia del polipéptido por tales funciones aminoácido. Los métodos para la mutagénesis o manipulación de las moléculas de aminoácidos son suficientemente conocidos para el trabajador experto en la técnica. Algunos métodos seleccionados se describen más adelante.
Se da preferencia particular al uso de una molécula efectora ligadora (iv) la cual haya sido preparada utilizando el ácido maleimido capróico especificado como siendo preferido para el método de acuerdo con la invención. En el caso de tal molécula efectora ligadora (iv), los radicales cisteina presentes en el polipéptido de unión a queratina se utilizan para el acoplamiento.
El éxito del acoplamiento efector puede ser monitorizado por medio de dos pruebas diferentes: (i) la prueba de Ellmann en la que el número de grupos Cys-SH libres de la proteina pueden ser determinado antes y después del acoplamiento del efector. Una reducción considerable en los grupos SH libres después del acoplamiento indica buen progreso de la reacción (ver el Ejemplo 24.). (ii) Prueba de actividad en la que puede medirse la unión del polipéptido de unión a queratina con y sin molécula efectora ligadora acoplada al cabello (ver el Ej emplo 24a ) .
En otra modalidad de acuerdo con la invención, la unión de la molécula efectora toma lugar en tal forma que estos pueden ser eliminados y liberados de los polipéptidos de unión a queratina (II) en el sentido de una "liberación lenta" o "liberación controlada" como resultado del efecto de las enzimas endógenas (por ejemplo, esterasas, lipasas o glucosidasas ) o como resultado de las condiciones ambientales sobre la piel (por ejemplo humedad, pH ácido) con el tiempo. Los polipéptidos de unión a queratina (II) de este modo pueden utilizarse como sistema de aplicación en el cual, a través de la aplicación única o repetida, cantidades pequeñas de moléculas efectoras libres sobre la piel pueden lograrse. En principio, es sabido para las personas expertas en la técnica que los efectores pueden ser liberados sobre la piel a partir de sus derivados correspondientes, por ejemplo a partir de acetato de tocoferol, palmitato de ascorbilo o glucósidos de ascorbilo (literatura ejemplar: Redoulés D. y col., J. Invest. Dermatol. 125, 2005, 270, Beijersbegen van Henegouwen, G. M. J. y col., Photochem. Photobiol. 29, 1995, 45) .
En otra modalidad preferida de la invención, para el método de acuerdo con la invención, las moléculas efectoras (i) que llevan grupos hidroxilo o amino se utilizan elegidas del grupo que consiste en colorantes, agentes fotoprotectores, vitaminas, provitaminas, carotenoides , antioxidantes y descomponedores peróxidos, en este caso las moléculas efectoras pueden tener uno o más grupos hidroxilo o amino.
Colorantes Entre los colorantes, se da preferencia a los colorantes grado alimenticio, colorantes semipermanentes, colorantes reactivos o colorantes de oxidación. En el caso de los colorantes de oxidación, se prefiere ligar un componente como molécula efectora (i) con la secuencia del polipéptido de unión a queratina (ii) y luego acoplar oxidativamente con el segundo componente colorante en el sitio de acción, es decir, después de la unión al cabello. También se prefiere en el caso de colorantes de oxidación llevar a cabo el acoplamiento de los componentes colorantes antes del acoplamiento con la secuencia del polipéptido de unión queratina (ii).
Los colorantes apropiados son, en principio, todos los colorantes acostumbrados para el cabello siempre que estos tengan un grupo hidroxilo o amino con capacidad de acoplamiento. Los colorantes apropiados son conocidos para los expertos en la técnica a partir de los manuales de cosméticos, por ejemplo Schrader, Grundlagen und Rezepturen der Kosmetika [Fundaments and formulations of cosmetics], Hüthig Verlag, Heidelberg, 1989, ISBN 3-7785-1491-1. Los colorantes grado alimenticio preferidos son antocianinas , antocianidinas (pelargonidina, cianidina, delfinidina, peonidina, petunidina, malvidina) , betalainas, como puede ser, por ejemplo, betacianina, betaxantina, carmina, ácido cármico, ácido quermésico, cochineal rojo A, hidroxicumarinas (umbeliferona, esculetina, escopoletina, fraxetina) , 2-hidroxi-l, 4-naftoquinona .
Los colorantes particularmente ventajosos son aquellos que se especifican en la lista siguiente. Los números del índice de Color (CIN) se toman del Rowe Colour Index, 3a edición, Society of Dyers and Colourists, Bradford, Inglaterra, 1971.
Tabla 2: Colorantes ventajosos.
Los colorantes antes mencionados también pueden utilizarse como moléculas efectoras (i) para la secuencia polipeptidica de unión a la piel o las uñas (ii) para colorear la piel o las uñas, por ejemplo en tatuajes. De adecuabilidad particular es el uso de moléculas efectoras de unión a queratina que contienen colorantes fluorescentes (por ejemplo los colorantes fluorescentes que se incluyen en la Tabla 2) para obtener un tono de piel sano y luminiscente y para iluminar ópticamente la piel ("blanqueado de la piel") luego de la aplicación a la piel. El uso de pigmentos fluorescentes esta descrito, por ejemplo, en US 6753002. Los colorantes fluorescentes para producir un tono de piel más sano están descritos en "Filling the Fluorescent Palette, Cosmetics & Toiletries, 26-34, 121, No. 5, 2006". Se da preferencia, por ejemplo a los colorantes fluorescentes de DayGlo. Además, estas moléculas efectoras de unión a queratina que contienen colorantes fluorescentes también pueden utilizarse para iluminar el cabello y para producir reflejos o resplandores especiales sobre el cabello. Esto esta descrito, por ejemplo, en "Hair lightening by fluorescent dyes, Cosmetics & Toiletries, 56-57 120, No. 7, 2005" y la especificación US 2004/0258641 mencionada en éste.
Otras moléculas efectoras (i) preferidas son los carotenoides . De acuerdo con la invención, por carotenoides se entiende los siguientes compuestos y derivados esterificados o glucosilados de éstos: xantofilas, como puede ser violaxantina, luteina y zeaxantina, también astaxantina, capsantina, capsorubina, criptoxantina, bixina, 3-hidroxiechinenon, adonirubina, individualmente o como mezcla. Los carotenoides preferentemente utilizados son luteina, astaxantina, zeaxantina, mutatoxantina, luteoxantina y auroxantina.
Otras moléculas efectoras (i) preferidas son vitaminas, en particular vitamina A y ésteres de ésta.
Para el propósito de la presente invención, retinoides significa vitamina A alcohol (retinol) . El término ácido retinóico en este caso incluye ácido retinóico todos trans y también ácido 13-cis-retinóico . El término retinol preferentemente incluye los compuestos todo-trans. Un retinoide preferido que se utiliza para las suspensiones de acuerdo con la invención es todo-trans-retinol , mencionado más adelante como retinol.
Otras moléculas efectoras preferidas (i) son vitaminas, provitaminas y precursores de vitaminas de los grupos A, C y E, en particular 3 , -didehidroretinol , ácido ascórbico (vitamina C) , y ésteres palmiticos, glucósidos o fosfatos de ácido ascórbico, tocoferoles, en particular a-tocoferol. La vitamina E o tocoferoles para el propósito de la presente invención incluye ocho derivados lipido solubles los cuales se subdividen en tocoferoles y tocotrienoles . Aunque la cadena lateral isoprenoide de los tocoferoles se deriva de pirofosfato de fitilo (PP) , los tocotrienoles tienen una cadena lateral derivada del geranilgeranil-PP . Los derivados a, ß, ? y d de estas subclases difieren en el grado de mutilación de la estructura del anillo 6-cromanol. Los tocoferoles tienen una cadena lateral saturada (1) y los tocotrienoles (2) tienen una cadena lateral insaturada.
R1 R2 R3 a CH3 CH3 CH3 ß CH3 H CH3 Y H CH3 CH3 d H H CH3 En la presente invención, la vitamina E o tocoferol significa todos los tocoferoles o tocotrienoles antes mencionados. Además, los derivados ß-cromanol también pueden utilizarse de acuerdo con la invención como moléculas efectoras.
Las vitaminas, provitaminas o precursores de vitaminas del grupo de la vitamina B o derivados de este, y los derivados de 2-furanona para ser utilizados con referencia de acuerdo con la invención incluyen, entre otros : Vitamina Bl, nombre común tiamina, nombre químico cloruro de 3- [ (4 ' -amino-2' -metil-5' -pirimidinil ) metil] -5-(2-hidroxietil ) -4-metiltiazolio .
Vitamina B2, nombre común riboflavina, nombre químico , 8-dimetil-10- (1-D-ribitil) benzo [g] pteridin-2,4(3H, 10H)-diona. En forma libre, la riboflavina se encuentra, por ejemplo, en el suero, otros derivados de riboflavina pueden ser aislados de bacterias y levaduras. Un estereoisómero de riboflavina que del mismo modo es apropiado de acuerdo con la invención es lixoflavina, la cual puede ser aislada de harina o hígado de pescado y lleva un radical D-arabitilo en lugar del D-ribitilo. Vitamina B5 (ácido pantotenóico y pantenol) . Se da preferencia al uso de pantenol. Los derivados de pantenol que pueden utilizarse de acuerdo con la invención son, en particular, los éster y éteres de pantenol, y los pantenoles catiónicaraente derivados. En otra modalidad preferida, de la invención, también es posible utilizar derivados de 2-furanona además del ácido pantoténico o pantenol. Los derivados particularmente preferidos son las sustancias también disponibles en el comercio dihidro-3-hidroxi- , -dimetil-2 ( 3H) -furanona con el nombre común pantolactona (Merck) , 4 -hidroximetil-?-butirolactona (Merck), 3 , 3-dimetil-2-hidroxi-y-butirolactona (Aldrich) y 2 , 5-dihidro-5-metoxi-2-furanona (Merck) , con todos los estereoisómeros expresamente incluidos .
Estos compuestos imparten ventajosamente propiedades humectantes y calmantes de la piel a las moléculas efectoras de unión a queratina de acuerdo con la invención .
La vitamina B6, la cual no se entiende en la presente como una sustancia uniforme, pero los derivados de 5-hidroximetil-2-metilpiridin-3-ol conocidos con los nombres comunes piridoxina, piridoxamina y piridoxal. De acuerdo con la invención, los derivados apropiados (sales, ésteres, azúcares, nucleótidos, nucleósidos, péptido y lipidos) de los compuestos pueden utilizarse como moléculas efectoras. Los antioxidantes solubles en aceite, lipofílicos, preferidos de este grupo son tocoferol y derivados de éste, ésteres gálicos, flavonoides y carotenoides , y butilhidroxitolueno/anisol . Se da preferencia particular a los flavonoides que se muestran en la Tabla 8.
Además se da preferencia a los denominados descomponedores de peróxido, es decir, compuestos que pueden descomponer peróxidos, con particular preferencia peróxidos lipidos. Estos se entienden como que incluyen sustancias orgánicas, por ejemplo, 5-pirimidinol y derivados de 3-piridinol y probucol.
Otras moléculas efectoras preferidas son siliconas, por ejemplo hexametildisiloxano, octametiltrisiloxano, decametiltetrasiloxano, 1,1,3, 3-tetraisopropildisiloxano, octafenil trisiloxano, 1, 3, 5-trivinil-l, 1, 3, 5, 5-pentametiltrisiloxano, etcétera. En una modalidad preferida, los clorosiloxanos reaccionan con compuestos de la fórmula 1, Ib o le para obtener los ésteres siloxilo correspondientes.
Los clorosiloxanos que pueden utilizarse son, por ejemplo: cloropentafenildisiloxano, 1, 3-diclorotetrafenildisiloxano, 1, 3-diclorotetrametildisiloxano, 1, 5-diclorohexametiltrisiloxano, etcétera .
En otra modalidad preferida, los halometildixiloxanos reaccionan con compuestos de la fórmula 1, Ib ó le para obtener los ésteres metilsiloxil correspondientes, por ejemplo clorometilpentadisiloxano, clorometilheptametilciclotetrasiloxano, 3-clorometilheptametiltrisiloxano, 1, 3-bis (bromometil) tetrametildisiloxano, 3, 5-bis (clorometil) octametiltetrasiloxano, etcétera. En otra modalidad preferida, se utilizan siliconas que tienen grupos hidroxi o amino y pueden utilizarse para hacer reaccionar con compuestos de la fórmula 1, Ib o le para formar ésteres o amidas. Los ejemplos de tales siliconas son: 3-aminopropilpentametildisiloxano, 3-hidroxipropil-pentametildisiloxano, 1, 1, 3, 3-tetrafenildisiloxandiol, 1,3-bis (hidroxibutil) tetrametildisiloxano, etcétera.
Otras moléculas efectoras (i) preferidas son filtros protectores de la luz UV. Se entiende que estos significan sustancias orgánicas que pueden absorber rayos ultravioleta y liberar la energía absorbida otra vez en forma de radiación de onda más larga, por ejemplo calor. Las sustancias orgánicas pueden ser solubles en aceite o solubles en agua.
Los filtros UV-B solubles en aceite que pueden utilizarse son, por ejemplo, las siguientes sustancias: derivados del ácido 4-aminobenzóico, preferentemente derivados de 4- (dimetilamino) -benzoato de 2-etilhexilo, 4- (dimetilamino) benzoato de 2-octilo y 4- (dimetilamino) benzoato de amilo con una función NH libre; los ésteres del ácido salicilico, preferentemente salicilato de 2-etilhexilo, salicilato de 4-isopropilbencilo, salicilato de homomentilo; derivados de benzofenona, preferentemente 2-hidroxi- -metoxibenzofenona, 2-hidroxi-4-metoxi-4 ' -metilbenzofenona , 2,2' -dihidroxi-4-metoxibenzofenona; ésteres de del ácido benzalmalónico, preferentemente derivados de 4-metoxibenzmalonato de 2-etilhexilo con una función OH libre; propan-1, 3-dionas, como puede ser, por ejemplo, 1- ( 4-terbutilfenil ) -3- ' -metoxifenil ) propan-1 , 3-diona . Las sustancias solubles en agua apropiadas son: derivados del ácido sulfónico de benzofenonas , preferentemente ácido 2-hidroxi-4 -metoxibenzofenon-5-sulfónico y sus sales.
Se da preferencia particular al uso de ésteres de ácido cinámico, preferentemente derivados de 4-metoxicinamato de 2-etilhexilo, 4 -metoxicinamato de isopentilo, 2-ciano-3-fenilcinamato de 2-etilhexilo (octocrileno) con una función OH libre.
Además, el uso de derivados de benzofenona, en particular 2-hidroxi- -metoxibenzofenona, 2-hidroxi-4-metoxi-4' -metilbenzofenona, 2,2' -dihidroxi-4 -metoxibenzofenona , y se prefiere el uso de propan-1, 3-dionas, como puede ser por ejemplo 1- ( 4-ter-butilfenil ) -3- ( 4 ' -metoxifenil ) propan-1 , 3-diona .
Los filtros UV-A comunes, apropiados son: derivados de benzoilmetano, como puede ser por ejemplo 1- (4' -terbutilfenil ) -3- (4' -hidroxifenil ) propan-1, 3-diona, 4-terbutil-4 ' -hidroxidibenzoil metano o 1- fenil-3- (4' -isopropilfenil ) propano-1, 3-diona; los derivados aminohidroxi sustituidos de benzofenonas como puede ser, por ejemplo N-hexilbenzoato de N, -dietilaminohidroxibenzoilo .
Los filtros UV-A y UV-B pueden, desde luego, también utilizarse en mezclas.
Las sustancias filtros UV apropiados se en la siguiente tabla.
Tabla 3: Sustancias filtros UV adecuadas.
Además de los dos grupos antes mencionados de sustancias fotoprotectoras primarias, también es posible utilizar agentes fotoprotectores secundarios del tipo antioxidante los cuales interrumpen la cadena de reacciones fotoquímicas que se activan cuando la radiación UV penetra en la piel. Los ejemplos comunes de estos son tocoferoles (vitamina E) y ácido ascórbico (vitamina C) .
Otro grupo son los anti-irritantes que tienen una acción anti-inflamatoria sobre la piel dañada por la luz UV. Tales sustancias son, por ejemplo, bisabolol, fitol y fitantriol .
Otros grupos de moléculas efectoras preferidas son los polifenoles. Para el propósito de la presente invención, polifenoles es un nombre colectivo para compuestos fenólicos con principalmente más de dos grupos fenol o fenol éter que pertenecen a diferentes clases de sustancias : a) ácido hidroxicinámico, hidroxicumarinas, ácido hidroxibenzóico b) catechinas, leucoantocianidinas c) antocianidinas d) flavononas e) flavonas, flavonoles En el método de acuerdo con la invención se da preferencia a aquellos polipéptidos de unión a queratina (ii) los cuales: a) contiene por lo menos una de las secuencias de acuerdo con la ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164 , 166, 168 ó 170, ó corresponden a un polipéptido que es por lo menos 40%, 45% o 50%, preferentemente por lo menos 55%, 60%, 65% ó 70%, particularmente de preferencia por lo menos 75%, 80%, 85% 90%, 91% 92%, 93% ó 94%, muy particularmente de preferencia por lo menos 95% o 96% idéntico a por lo menos una de las secuencias de acuerdo con la ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170 y puede unirse a queratina. a modalidad preferida de la presente invención, el polipéptido de unión a queratina (ii) que se utiliza está codificado por una molécula de ácido nucleico que contiene por lo menos una molécula de ácido nucleico elegida del grupo que consiste en: a) molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que contiene la secuencia que se muestra en ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170; molécula de ácido nucleico que contiene por lo menos un polinucleótido de la secuencia que se muestra en la ID SEC No.: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 145, 149, 152, 159, 161, 163, 165, 167, 169, con particular preferencia 165 y 167, más preferentemente 167; molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido de acuerdo con las secuencias ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170; molécula de ácido nucleico con una secuencia de ácido nucleico correspondiente a por lo menos una de las secuencias de acuerdo con ID SEC No.: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 145, 149, 152, 159, 161, 163, 165, 167 ó 169 o una molécula de ácido nucleico derivada de éstas por sustitución, deleción o inserción que codifica un polipéptido que es por lo menos 40%, 45% ó 50%, preferentemente por lo menos 55%, 60%, 65% ó 70%, con particular preferencia por lo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93% a 94%, muy particularmente de preferencia por lo menos 95% o 96% idéntico a por lo menos una de las secuencias de acuerdo con ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170 y puede unirse a queratina; molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que es reconocido por un anticuerpo monoclonal dirigido hacia un polipéptido que es codificado por las moléculas de ácido nucleico de acuerdo con (a) a (c) ; molécula de ácido nucleico que codifica para una proteina de unión a queratina la cual, en condiciones restrictivas, híbrida con una molécula de ácido nucleico de acuerdo con (a) a (c) ; molécula de ácido nucleico que codifica para una proteína de unión a queratina que puede ser aislada a partir de un banco de DNA utilizando una molécula de ácido nucleico de acuerdo con (a) a (c) o fragmentos de éstas que contienen por lo menos 15 nt, preferentemente 20 nt, 30 nt, 50 nt, 100 nt, 200 nt, o 500 nt como sonda en condiciones de hibridación restrictivas, y molécula de ácido nucleico la cual puede ser producida por retro-traducción de una de las secuencias de aminoácidos que se muestran en las secuencias ID SEC No.: 2,4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 166, 168 ó 170. Los dominios del polipéptido de unión a queratina apropiados de acuerdo con la invención están presentes en las secuencias de polipéptidos de desmoplaquinas , placofilinas , placoglobinas, plectinas, periplaquinas, envoplaquinas, trichohialinas , epiplaquinas o proteínas del folículo piloso, particularmente de preferencia desmoplaquinas y placofilinas .
En una modalidad preferida de la presente invención, desmoplaquinas o secuencias parte de éstas de acuerdo con las secuencias ID SEC No.: 2, 42, 44, 46, 48, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164 ó 166, y/o placofilinas o secuencias parte de estas de acuerdo con las secuencias ID SEC No.: 18, 20, 26, 28, 32, 34, 36, 168, 170 y/o placoglobinas o secuencias parte de estas de acuerdo con las secuencias con ID SEC No.: 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70 y/o la periplaquina de acuerdo con la secuencia con ID SEC No.: 86 y/o envoplaquinas o secuencias parte de éstas de acuerdo con las secuencias con ID SEC No.: 90, 92, 94, 96, 98, 102, 104, 105 y/o las secuencias de acuerdo con ID SEC No.: 138 y 140 se utilizan como polipéptidos de unión a queratina. Los dominios de unión a queratina preferidos son los polipéptidos desmoplaquina que se muestran en las secuencias ID SEC Nos.: 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170, y los equivalentes funcionales de estos. En una modalidad particularmente preferida de la presente invención, los polipéptidos de unión a queratina que se muestran en las secuencias ID SEC No.: 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 y/o 170 se utilizan en el método de acuerdo con la invención. En una modalidad de la presente invención la cual es la más preferida, se utiliza la proteina de unión a queratina que se muestra en la secuencia ID SEC No.: 168. Es necesario decir que esta proteina puede utilizarse con o sin las anclas de histidina presentes en la ID SEC No.: 168. Asi pues, la ancla de histidina (o un sistema de purificación/detección para ser utilizado en forma análoga) también puede estar presente en forma C terminal. En el uso práctico de las proteínas de unión a queratina (por ejemplo en preparaciones cosméticas), un ancla de histidina (o un sistema de purificación/detección para ser utilizado en forma análoga) no es necesario. De este modo se prefiere el uso de proteínas sin secuencias de aminoácidos adicionales.
La invención además proporciona composiciones cosméticas para tratar materiales que contienen queratina, que contienen, en un medio cosmético compatible, por lo menos un polipéptido de unión a queratina (ii) el cual se codifica por una molécula de ácido nucleico que contiene por lo menos una molécula de ácido nucleico elegida del grupo que consiste en: (i) molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que contiene la secuencia que se muestra en la ID SEC No.: 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170; j) b) [sic] molécula de ácido nucleico que contiene por lo menos un polinucleót ido de la secuencia que se muestra en la ID SEC No. : 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 145, 149, 152, 159, 161, 163, 165, 167 ó 169, particularmente de preferencia 165 y 167, más preferentemente 167; molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido de acuerdo con las secuencias ID SEC No.: 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, '54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170; molécula de ácido nucleico con una secuencia de ácido nucleico correspondiente a por lo menos una de las secuencias de acuerdo con ID SEC No.: 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 145, 149, 152, 159, 161, 163, 165, 167 ó 169 o una molécula de ácido nucleico derivada de éstos por sustitución, deleción o inserción la cual codifica un polipéptido que es por lo menos 40%, 45% ó 50%, preferentemente por lo menos 55%, 60%, 65% ó 70%, particularmente de preferencia por lo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93% ó 94%, muy particularmente de preferencia por lo menos 95% o 96% idéntico a por lo menos una de las secuencias de acuerdo con la ID SEC No.: 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170 y puede unirse a queratina ; molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido el cual es reconocido por un anticuerpo monoclonal dirigido hacia un polipéptido el cual es codificado por las moléculas de ácido nucleico de acuerdo con (a) molécula de ácido nucleico que codifica para una proteina de unión a queratina la cual, en condiciones restrictivas híbrida con una molécula de ácido nucleico de acuerdo con (a) a (c) ; molécula de ácido nucleico que codifica para una proteína de unión a queratina la cual puede ser aislada de un banco de DNA utilizando una molécula de ácido nucleico de acuerdo con (a) a (c) o fragmentos parte de esta que contiene por lo menos 15 nt, preferentemente 20 nt, 30 nt, 50 nt, 100 nt, 200 nt o 500 nt como sonda en condiciones de hibridación restrictivas, y molécula de ácido nucleico que puede ser producida por retro-traducción de una de las secuencias de aminoácidos que se muestran en las secuencias SEC ID No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 166, 168 ó 170.
Los dominios del polipéptido de unión a queratina apropiados de acuerdo con la invención están presentes en las secuencias polipeptidicas de desmoplaquinas, placofilinas , placoglobinas , plectinas, periplaquinas , evoplaquinas , trichohialinas, epiplaquinas o proteínas del folículo piloso, particularmente de preferencia desmoplaquinas y placofilinas .
En una modalidad preferida de la presente invención, desmoplaquinas o secuencias parte de estas de acuerdo con las secuencias ID SEC No.: 2, 42, 44, 46, 48, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164 ó 166 y/o placofilinas o secuencias parte de estas de acuerdo con las secuencias ID SEC No.: 18, 20, 26, 28, 32, 34, 36, 168, 170 y/o placoglobinas o secuencias parte de estas de acuerdo con las secuencias con ID SEC No.: 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70 y/o la periplaquina de acuerdo con la secuencia con ID SEC No. : 86 y/o envoplaquinas [sic] o secuencias parte de esta de acuerdo con las secuencias con ID SEC No.: 90, 92, 94, 96, 98, 102, 104, 105 y/o las secuencias de acuerdo con' ID SEC No.: 138, y 140 se utilizan como polipéptidos de unión a queratina. Los dominios de unión a queratina preferidos son los polipéptidos desmoplaquina que se muestran én las secuencias ID SEC No.: 4, 6, 8, 10, 12, 14, 1146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170 y los equivalentes funcionales de éstos. En una modalidad particularmente preferida de la presente invención, los polipéptidos de unión a queratina que se muestran en las secuencias ID SEC No.: 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 y/o 170 se utilizan en el método de acuerdo con la invención. En una modalidad de la presente invención la cual es la más preferida, la proteina de unión queratina que se muestra en la secuencia ID SEC No.: 168 es la que se utiliza. Es necesario decir en este caso que esta proteina puede utilizarse con o sin anclas de histidina presentes en- la ID SEC No.: 168. Asi pues, la ancla de histidina (o un sistema de purificación/detección para ser utilizado en forma análoga) también puede estar presente en forma C-terminal. En el uso práctico de las proteínas de unión a queratina (por ejemplo en preparaciones cosméticas) , un ancla de histidina (o un sistema de purificación/detección para ser utilizado en forma análoga) no es necesario. De este modo, se prefiere el uso de proteínas sin secuencias de aminoácidos adicionales.
La presente invención además proporciona las composiciones farmacéuticas para tratar materiales que contienen queratina, que consiste en, en un medio farmacéutico compatible, por lo menos uno de los polipéptidos de unión a queratina (ii) antes definidos.
La formulación base de las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención preferentemente contienen auxiliares farmacéuticos aceptables. De aceptación farmacéutica son los auxiliares conocidos para uso en el campo de la farmacia, tecnología de alimentos y campos relacionados, en particular aquellos que se enlistan en la farmacopea pertinente (por ejemplo DAB, Ph. Eur, BP NF) y también · otros auxiliares cuyas propiedades no impidan el uso fisiológico.
Del mismo modo incluidos de acuerdo con la invención son los "equivalentes funcionales" de los polipéptidos de unión a. queratina (ii) .descritos específicamente y el uso de éstos en el método de acuerdo con la invención.
Para el propósito de la presente invención, "equivalentes funcionales" o análogos de los polipéptidos de unión a queratina (ii) específicamente descritos son los polipéptidos diferentes de éstos que también tienen la actividad biológica deseada, como puede ser, por ejemplo la unión a queratina. Asi pues, por ejemplo, "equivalentes funcionales" de los polipéptidos de unión a queratina se entiende como aquellos polipéptidos que, en condiciones de otro modo comparables, en las pruebas de unión a queratina cuantitativas descritas en los ejemplos, tienen aproximadamente 10%, 20%, 30%, 40% ó 50%, preferentemente 60%, 70%, 80% ó 90%, particularmente de preferencia 100%, 125%, 150%, muy particularmente de preferencia 200%, 300% ó 400%, más preferentemente 500%, 600%, 700% ó 1000% o más de la capacidad de unión a queratina de los polipéptidos que se muestran en bajo la ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14 , 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134 , 136 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170, de preferencia en la ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 40, 42, 44 , 46, 48, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170, particularmente de preferencia 166 y 168, más preferentemente 168.
De acuerdo con la invención, "equivalentes funcionales" se entienden en particular también las muteinas que tienen un aminoácido además del específicamente dado en por lo menos una posición de secuencias de las secuencias de aminoácidos antes mencionadas pero no obstante tienen una de las actividades biológicas antes mencionadas. "Equivalentes funcionales" de este modo incluye las muteinas que pueden obtenerse por una mutación donde los cambios especificados pueden surgir en cualquier posición de las secuencias a condición de que estos den origen a una luteína con el perfil de propiedades de acuerdo con la invención .
Para el propósito de la presente invención, "mutación" significa el cambio en la secuencia de ácido nucleico de una variante génica en un plásmido o en el genoma de un organismo. Las mutaciones pueden surgir, por ejemplo, como resultado de errores durante la replicación, o ser causadas por mutágenos. La tasa de mutaciones espontáneas en el genoma celular de los organismos es muy baja aunque un gran número de mutágenos biológicos, químicos o físicos son conocidos para las personas expertas en la técnica.
Las mutaciones incluyen sustituciones, inserciones, deleciones de uno o más radicales ácidos nucleicos. Las sustituciones se entienden como el reemplazo de las bases de los ácidos nucleicos, haciendo una diferencia en este caso entre transiciones (sustitución de una base purina o una base purina o una base pirimidina por una base pirimidina) y las transversiones (sustitución de una base purina por una base pirimidina (o viceversa ) ) .
Las adiciones o inserciones se entienden como significado la incorporación de radicales ácido nucleico adicionales en el DNA, posiblemente dando como resultado desplazamientos en el marco de lectura. Con desplazamientos en el marco de lectura de este tipo, se hace una distinción entre inserciones/adiciones, cuyas "enmarco" y de las inserciones "fuera de marco". En el caso de inserciones/adiciones, "enmarco", el marco de lectura es retenido y surge un polipéptido aumentado por el número de aminoácidos codificados por los ácidos nucleicos insertados. En el caso de inserciones/adiciones "fuera de marco", el marco de lectura original ser pierde y ya no es posible la formación de un polipéptido completo y funcionando.
Deleciones describe la pérdida de una o más pares de bases, lo cual del mismo modo da origen a desplazamientos "enmarco" o "fuera de marco" en el marco de lectura y las consecuencias asociadas con esto respecto a la formación de una proteina intacta.
Los agentes mutagénicos (mutágenos) que pueden utilizarse para producir mutaciones aleatorias o dirigidas y los métodos aplicables y las técnicas son conocidas para los trabajadores expertos en la técnica. Tales métodos y mutágenos están descritos, por ejemplo, en A. M. van Harten [(1998), "Mutation breeding: theory and practical applications" , Cambridge University Press, Cambridge, RU] , E Friedberg, G Walter, W Siede [(1995), "DNA Repair and Mutagenesis", Blackwell Publishing] , ó K. Sankaranarayanan, J. M. Gentile, L. R. Ferguson [ (2000) "Protocols in Mutagenesis", Elsevier Health Sciences] .
Para introducir mutaciones dirigidas, es posible utilizar los métodos de biología molecular acostumbrados y los procesos como puede ser, por ejemplo, los kits vitro Mutagenese, LA PCR in vitro Mutagenesis Kit (Takara Shuzo, Kyoto) o el Kit QuikChange® de Stratagene o mutagenesis PCR utilizando los cebadores apropiados.
Como ya se describió anteriormente, hay un gran número de mutágenos químicos físicos y biológicos.
Los mutágenos que se enlistan a continuación se dan como un ejemplo, pero no son limitativos.
Los mutágenos químicos pueden ser subdivididos de acuerdo su mecanismo de acción. Así pues, hay análogos de bases (por ejemplo 5-bromouracilo, 2-aminopurina) , agentes alquilantes mono- y bifuncionales (por ejemplo los monofuncionales como puede ser etilmetilsulfonato, dimetilsufonato o bifuncionales como sulfito de dicloroetilo, mitomicina, nitrosoguanidinas-dialquilnitrosaminas , derivados de N-nitrosoguanidinas ) o sustancias intercalantes (por ejemplo acridinas, bromuro de etidio) .
Así pues, por ejemplo, para el método de acuerdo con la invención, también es posible utilizar aquellos polipéptidos que se obtienen como resultado de una mutación de un polipéptido de acuerdo con la invención, por ejemplo, de acuerdo con ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 y/o 170.
Los ejemplos de las sustituciones de aminoácidos apropiadas se dan en la siguiente tabla: 1 original Ejemplos de sustitución Ala Ser Arg Lys Asn Gln; His Asp Glu Cys Ser ó Ala Gln Asn Glu Asp Gly Pro His Asn; Gln lie Leu; Val Leu lie; Val Lys Arg; Gln; Glu Met Leu; lie Phe Met; Leu; Tyr Ser Thr Thr Ser Trp Tyr Tyr Trp; Phe Val lie; Leu Tabla 4 : Sustituciones de aminoácidos apropiadas Se sabe que en la ID SEC No. : 2, la serina naturalmente presente en la posición 2849 puede, por ejemplo, ser sustituida por glicina para evitar una fosforilación en esta posición (Fontao L, Favre B, Riou S, Geerts D, Jaunin F, Saurat JH, Green KJ, Sonnenberg A, Borradori L., Interaction of the bullous pemphigoid antigen 1 (BP 230) ) and desmoplakin with intermedíate filaments is mediated by distinct sequences withing their COOH terminus., Mol. Biol. Cell. 2003 mayo; 14 (5) 1978-92. (Epub 2003 enero 26) .
En el sentido anterior, "equivalentes funcionales" también son "precursores" de los polipéptidos descritos, y "derivados funcionales" y "sales" de los polipéptidos.
En este caso, "precursores" son los precursores naturales o sintéticos de los polipéptidos con o sin la actividad biológica deseada.
La expresión "sales" se entiende como las sales de los grupos carboxilo o sales de adición ácida de los grupos amino de las moléculas proteínas de acuerdo con la invención. Las sales de los grupos carboxilo pueden ser preparadas en una forma conocida por sí misma e incluyen sales inorgánicas, por ejemplo, sales de sodio, calcio, amonio, hierro y zinc, y también sales con bases orgánicas, como puede ser, por ejemplo, aminas como trietilamina , arginina, lisina, piperidina y similares. Las sales de adición ácida como puede ser, por ejemplo, las sales con ácidos minerales, con ácido clorhídrico o ácido sulfúrico, y sales con ácidos orgánicos, como ácido acético y ácido oxálico, del mismo modo se proporcionarán por la invención.
"Equivalentes funcionales" naturalmente también incluyen los polipéptidos que son accesibles a partir de otros organismos y variantes que ocurren en forma natural (alelos) . Por ejemplo, mediante comparaciones de secuencias es posible determinar áreas de regiones de secuencia homologa o regiones preservadas. Mediante el uso de estas secuencias, las bases de datos de DNA (por ejemplo las bases de datos genómicas o de cDNA pueden inspeccionarse para enzimas equivalentes utilizando programas bioinformáticas de comparación. Los programas de cómputo apropiados y bases de datos que son accesibles para el público se conocen suficientemente para los expertos en la técnica.
Estos alineamientos de secuencias de proteínas conocidas pueden llevarse a cabo, por ejemplo, utilizando un programa de cómputo como puede ser Vector NTI 8 (versión del 25 de septiembre 2002) de InforMax Inc.
Además, "equivalentes funcionales" son proteínas de fusión que tienen una de las secuencias polipeptídicas antes mencionadas o equivalentes funcionales derivados de estos y tienen por lo menos otra funcionalidad de secuencia heteróloga diferente de esta en el enlace terminal N ó C (es decir, sin deterioro funcional esencial mutuo de las partes de las proteínas de fusión) . Los ejemplos no limitativos de estas secuencias heterólogas son, por ejemplo, péptidos señal o enzimas.
"Equivalentes funcionales" incluidos de acuerdo con la invención son los homólogos para las proteínas específicamente descritas. Estos tienen por lo menos 40%, 45%, 50%, preferentemente por lo menos 55%, 60%, 65% ó 70%, con particular preferencia por lo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93% ó 94%, muy particularmente de preferencia por lo menos 95% ó 96% de homología para una de las secuencias de aminoácidos específicamente descritas, calculada utilizando los programas de cómputo y algoritmos de cómputo descritos en la definiciones.
En el caso de una glucosilación de proteína posible, "los equivalentes funcionales" de acuerdo con la invención incluyen proteínas del tipo al que se hace referencia en lo anterior en forma deglucosilada o glucosilada, y también las formas modificadas que pueden obtenerse cambiando el patrón de glucosilación. En el caso de una fosforilación de proteína posible, "equivalentes funcionales" de acuerdo con la invención incluye proteínas del tipo al que se hace referencia en lo anterior en forma desfosforilada o fosforilada y también las formas modificadas que pueden obtenerse cambiando el patrón de fosforilación.
Los homólogos de los polipéptidos de acuerdo con la invención pueden ser identificados tamizando bancos de combinación de mutantes como puede ser, por ejemplo, mutantes acortadores ( shortening) . Por ejemplo, un banco de variantes de proteína pueden producirse por mutagénesis combinatoria a nivel de ácido nucleico como puede ser, por ejemplo, por ligación enzimática de una mezcla de oligonucleótidos sintéticos. Hay un gran número de métodos que pueden utilizarse para producir bancos de homólogos potenciales a partir de una secuencia de oligonucleótido degenerada. La síntesis química de una secuencia génica degenerada puede llevarse a cabo en una máquina de síntesis de DNA automática, y el gen sintético puede entonces ser ligado en un vector de expresión apropiado. El uso de una serie de genes degenerados hace posible proporcionar todas las secuencias en una mezcla que codifique la serie deseada de secuencias de proteínas potenciales. Los métodos para sintetizar oligonucleótidos degenerados son conocidos para el experto en la técnica (por ejemplo Narang S. A. (1983) Tetrahedron 39: 3; Itakura y col., (1984) Annu. Rev. Biochem. 53: 323; Itakura y col., (1984) Science 198: 1056; Ike y col., (1983) Nucleic Acids Res. 11: 477).
En la técnica anterior, se conoce una gran cantidad de técnicas para el tamizaje de productos génicos de bancos combinatorios que han sido producidos por mutaciones puntuales o acortamiento, y para el tamizaje de bancos de cDNA para producto génicos con una propiedad seleccionada. Las técnicas más utilizadas para el tamizaje de bancos génicos grandes que son objeto de análisis con un alto rendimiento incluyen la clonación del banco génico en vectores de expresión replicables, transformando las células apropiadas con el banco de vectores resultante y expresando los genes combinatorios bajo condiciones en las cuales la detección de la actividad deseada facilita el aislamiento del vector que codifica el gen cuyo producto ha sido detectado. La Recursive ensemble mutagenesis (REM) , una técnica que aumenta la frecuencia de los mutantes funcionales en los bancos puede utilizarse en combinación con las pruebas de tamizaje para identificar homólogos (Arkin y Yourvan (1992) PNAS 89: 7811-7815; Delgrave y col., (1993) Protein Engineering 6 (3) 327-331) .
La inspección de bibliotecas de cDNA o DNA genómico físicamente disponibles de otros organismos que utilizan secuencias de ácido nucleico descritas bajo ID SEC No.: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 145, 149, 152, 159, 161, 163, 165, 167 y/o 169 particularmente de preferencia 65 y 167, más preferentemente 167, o partes de estos como sonda es un método conocido para el trabajador experto en la técnica para identificar homólogos en otras formas. En este caso, las sondas derivadas de la secuencia de ácido nucleico de acuerdo con la ID SEC No.: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 145, 149, 152, 159, 161, 163, 165, 167 y/o 169, con particular preferencia 165 y 167, más preferentemente 167, tienen una longitud de por lo menos 20 pb, preferentemente por lo menos 50 pb, con particular preferencia por lo menos 100 pb, muy particularmente de preferencia por lo menos 200 pb, más preferentemente por lo menos 400 pb. La sonda también puede ser de una o más kilobases de longitud, por ejemplo, una kb, 1.5 Kb o 3 Kb. Para inspeccionar las bibliotecas también puede ser posible utilizar las secuencias de la hebra DNA complementaria descrita bajo ID SEC No.: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 145, 149, 152, 159, 161, 163, 165, 167 y/o 169, con particular preferencia, 165 y 167, más preferentemente 167, o un fragmento de esta con una longitud entre 20 pb y varias kilobases. Las condiciones de hibridación para ser utilizadas están descritas antes.
En el método de acuerdo con la invención, también es posible utilizar aquellas moléculas de DNA que, en condiciones normales, hibridan con las moléculas de ácido nucleico descritas por ID SEC No.: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 145, 149, 152, 159, 161, 163, 165, 167 y/o 169, con particular preferencia 165 y 167, más preferentemente 167, y que codifican polipéptidos de unión a queratina, y como secuencias completas codifican polipéptidos que tienen las mismas propiedades que los polipéptidos descritos bajo ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170.
Una modalidad particularmente ventajosa de la invención son los polipéptidos de unión a queratina (ii) que contienen por lo menos una de las secuencias polipeptidicas como se muestra en ID SEC No. : 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170 con la condición de que la unión a queratina de los polipéptidos sea por lo menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, preferentemente 60%, 70%, 80% o 90%, con particular preferencia 100% del valor que tienen las secuencias polipeptidicas correspondientes como se muestra en la ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170, medido en la prueba de acuerdo con el Ejemplo 9 ó 10.
Se da preferencia al uso de polipéptidos de unión a queratina (ii) que tenga una afinidad altamente especifica para el organismo deseado. Por consiguiente, para usos en cosméticos para la piel, se da preferencia al uso de polipéptidos de unión a queratina (ii) que tengan una afinidad particularmente alta para la queratina de la piel humana. Para usos en cosméticos para el cabello, se da preferencia a aquellas secuencias polipeptídicas que tengan una afinidad particularmente alta para la queratina del cabello humano.
Para aplicaciones en el campo de las mascotas, además de las secuencias polipeptídicas descritas (ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170, de preferencia en la ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 40, 42, 44 , 46, 48, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 164, 166, 168 ó 170, particularmente de preferencia 166 y 168, más preferentemente 168), aquellos polipéptidos de unión a queratina (ii) son consiguientemente preferidos los cuales tienen una afinidad particularmente alta para la queratina correspondiente, por ejemplo queratina canina o queratina felina.
Sin embargo, también es posible utilizar más de un polipéptido de unión a queratina (ii) acoplado a la molécula (i) de acuerdo con la invención, por ejemplo, un polipéptido de unión a queratina (ii) que tenga una elevada afinidad de unión para la queratina de la piel humana puede combinarse con una molécula efectora en combinación con otro polipéptido de unión a queratina (ii) que tenga una elevada afinidad para la queratina del cabello humano. También es posible utilizar polipéptidos quiméricos que contengan dos o más copias de los mismos (y también diferentes) polipéptidos de unión a queratina (ii) o dominios de unión a queratina de estos. Por ejemplo, de este modo fue posible lograr unión a queratina particularmente eficaz.
Los polipéptidos de unión a queratina (ii) apropiados con conocidos. Por ejemplo, las desmoplaquinas y plectinas contienen dominios de unión a queratina (Fontao L, Favre B, Riou S, Geerts D, Jaunin F, Saurat JH, Green KJ, Sonnenberg A, Borradori L., Interaction of the bullous pemphigoid antigen 1 (BP230) and desmoplakin with intermedíate filaments is mediated by distinct sequences within their COOH terminus. Mol. Biol Cell 2003 Mayo; 14 (5): 1978-92. Epub 2003 enero 26, Hopkinson SB, Jones JC, The N-terminus of the transmembrane protein B180 interacts with the N-terrainal domain of BP230, thereby mediating keratin cytoskeleton anchorage to the cell surface at the site of the hemidesmosome , Mol Biol Cell. 2000 enero; 11 (1): 277-86).
Los polipéptidos de unión a queratina (i) de acuerdo con la invención también pueden, si se desea, ser separados otra vez fácilmente a partir de la queratina. Para esto, por ejemplo, puede utilizarse un enjuague que contenga queratina, como resultado del cual los polipéptidos de unión a queratina (i) se desplaza de su unión existente a la queratina y son saturados con la queratina del enjuague. De otro modo, un enjuague con alto contenido de detergente (por ejemplo SDS) también es posible para el lavado.
Los polipéptidos de unión a queratina (i) de acuerdo con la invención tienen además campo de aplicación cosméticos para humanos, en particular para el cuidado de la piel, para el cuidado de las uñas y el cuidado del cabello, el cuidado de los animales, el cuidado del cuero y el trabajo del cuero.
Preferentemente, los polipéptidos de unión a para cosméticos para la piel y cosméticos para el cabello. Estos permiten una alta concentración y tiempo de acción prolongado para el cuidado y protección de las moléculas efectoras.
En una modalidad particularmente preferida de la presente invención, los polipéptidos de unión a queratina se utilizan los cuales tienen una afinidad de unión para la queratina de la piel, cabello o uñas humanas.
En una modalidad específicamente preferida, la presente invención proporciona un método en el que: i) el polipéptido de unión a queratina utilizado contiene una de las secuencias que se muestran en la ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170, preferentemente en ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 40, 42, 44, 46, 48, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170, particularmente de preferencia 166 y 168, más preferentemente 168, y j) la molécula ligadora (iii) que se utiliza es ácido maleimido capróico, y k) la molécula efectora (i) se elige del grupo que consiste en ácido pantoténico, pantenol, pantolactona , ésteres de pantenol, éteres de pantenol y pantenoles catiónicamente derivados.
En una modalidad, los polipéptidos de unión a queratina (ii) utilizados en el paso (a) del método de acuerdo con la invención y la molécula efectora ácido maleimido capróico-pantenol (iv) se utiliza en cantidades equimolares. Preferentemente, la relación molar del polipéptido de unión a queratina (ii) y la molécula efectora ácido maleimido capróico-pantenol (iv) es entre 1:1 y 1:5, preferentemente 1:1, 1:1.1 o 1:1.2, preferentemente 1:1.3 o 1:1.4, particularmente de preferencia 1:1.5 ó 1:1.6, muy particularmente de preferencia 1:1.7 ó 1:1.8, más preferentemente 1:1.9 ó 1:2, siendo también posible elegir diferencias más grandes de las proporciones dependiendo del número de grupo de unión presentes en el polipéptido y/o accesibles en el polipéptido naturalmente doblado en la superficie.
Cuando se utiliza el dominio de unión a queratina B (ID SEC No.: 166, por ejemplo, también es posible elegir una proporción de 1:4, en cuyo caso esta proporción tiene un efecto sobre, por ejemplo, la actividad de unión al cabello de la molécula efectora de unión a queratina formada (ver el Ejemplo 24).
La presente invención además proporciona moléculas efectoras de unión a queratina en las cuales la molécula efectora (i) se acopla indirectamente al polipéptido de unión a queratina a través de una molécula ligadora (iii) . Se da preferencia a las moléculas efectoras de unión a queratina que contienen por lo menos un polipéptido de unión a queratina (ii) de acuerdo con las secuencias que se muestran en la ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 14.6, 150, 153, 156, 157 ó 158, preferiblemente en ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 40, 42, 44, 46, 48, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170, particularmente de preferencia 166 y 168, más preferentemente 168, y durante cuya producción, la molécula ligadora (iii) que se utilizó fue ácido maleimido capróico. Las moléculas efectoras de unión a queratina particularmente preferidas se enlistan en las Tablas 12 y 12a. Se da preferencia muy particular a las moléculas efectoras de unión a queratina antes mencionadas en las cuales la molécula ligadora (iii) utilizada fue ácido maleimido capróico y la molécula efectora (i) utilizada fue ácido pantoténico, pantenol, pantolactona, ésteres de pantenol, éteres de . pantenol o pantenoles catiónicamente derivados.
La presente invención además proporciona el uso de moléculas efectoras de unión a queratina producidas de acuerdo con la invención en preparaciones dermocosméticas . Preferentemente, las moléculas efectoras de unión a queratina de acuerdo con la invención se utilizan en cosméticos para la piel y el cabello. Estas permiten una alta concentración y tiempo de acción prolongado de las sustancias efectoras de cuidados para la piel o protección de la piel. Además, se prefiere el uso de las moléculas efectoras de unión a queratina en cuidado para las encías y oral.
En una modalidad preferida de la presente invención, una molécula efectora de unión a queratina de acuerdo con la invención y/o producida con el método inventivo se adiciona a los dermocosméticos o composiciones para el cuidado oral, dental y de la dentadura en una concentración desde 0.001 hasta 1% en peso (% en peso), preferentemente 0.01 a 0.9% en peso, particularmente de preferencia 0.01 a 0.8% en peso ó 0.01 a 0.7% en peso, muy particularmente de preferencia 0.1 a 0.6% en peso ó 0.01 a 0.5% en peso, más preferentemente 0.01 a 0.4% en peso ó 0.01 a 0.3% en peso, con base en el peso total de la composición. En otra modalidad, las composiciones contienen una molécula efectora de unión a queratina de acuerdo con la invención y/o producida de acuerdo con el método inventivo, en una concentración desde 1 hasta 10% en peso, preferentemente 2 a 8% en peso, 3 a 7% en peso, 4 a 6% en peso, con base en el peso total de la composición. En una modalidad del mismo modo preferida, las composiciones contienen una molécula efectora de unión a queratina de acuerdo con la invención y/o producida de acuerdo con el método inventivo en una concentración desde 10 hasta 20% en peso, preferentemente 11 a 19% en peso, 12 a 18% en peso, 13 a 17% en peso 14 a 16% en peso, con base en el peso total de la composición. En una modalidad más preferida, las composiciones contienen una molécula efectora de unión a queratina de acuerdo con la invención y/o producida de acuerdo con el método inventivo en una concentración desde 20 hasta 30% en peso, preferentemente 21 a 29% en peso, 22 a 28% en peso, 23 a 27% en peso, 24 a 26% en peso, con base en el peso total de la composición.
En otra modalidad preferida, las moléculas efectoras de unión a queratina antes mencionadas de acuerdo con la invención se utilizan en dermocosméticos y/o composiciones para el cuidado oral, dental y de la dentadura en combinación con: (i) auxiliares cosméticos del campo de cosméticos decorativos, (ii) ingredientes activos dermocosméticos, y (iii) auxiliares y aditivos apropiados. Preferentemente, estos son ingredientes activos y auxiliares y aditivos que se utilizan para proteger la piel, el cabello y/o uñas de las manos o uñas de los pies contra daño, para tratar daño existente a la piel, cabello y/o uñas de las manos o uñas de los pies y para el cuidado de la piel, cabello y/o uñas de las manos o uñas de los pies. Estos ingredientes activos preferentemente se eligen del grupo de polímeros naturales o sintéticos, pigmentos, humectantes, aceites, ceras, enzimas, minerales, vitaminas, filtros solares, colorantes, fragancias, antioxidantes, preservadores y/o ingredientes activos farmacéuticos.
Los auxiliares y aditivos apropiados para producir preparaciones cosméticas para el cabello o cosméticas para la piel son conocidos para el trabajador experto en la técnica y pueden encontrarse en los manuales de cosméticos, por ejemplo Schrader, Grundlagen und Rezepturen der Kosmetika [Fundamentáis and formulations of cosmetics], Hüthig Verlag, Heidelberg, 1989, ISBN 3-7785-1491-1, ó Umbach, Kosmetik: Entwicklung, Herstellung und Anwendung Kosmetischer Mittel [Cosmetics: developement , manufacture and use of cosmetic compositions ] , 2a edición extendida, 1995, Georg Thieme Verlag, ISBN 3 13 712602 9.
Preferentemente, las moléculas efectoras de unión a queratina de acuerdo con la invención se utilizan en dermocosméticos o composiciones para el cuidado oral, cuidado dental y cuidado de la dentadura en combinación con por lo menos un constituyente diferente de estos que se elija de ingredientes cosméticos activos, emulsificadores , agentes tensoactivos, preservadores, aceites esenciales, espesantes, polímeros para el cabello, acondicionadores del cabello y la piel, polímeros injertados, polímeros que contengan silicona solubles en agua o dispersables en agua, agentes fotoprotectores, blanqueadores, formadores de gel, agentes para el cuidado, colorantes, agentes entintadores , agentes bronceadores , colorantes, pigmentos, reguladores de la consistencia, humectantes, agentes reengrasantes , colágeno, hidrolizados de proteina, lipidos, antioxidantes, antiespumantes, antiestáticos, emolientes y suavizantes. Los ingredientes activos también pueden estar presentes en las preparaciones cosméticas en forma encapsulada, como está descrito en las Patentes/Solicitudes de Patente EP 00974775 Bl, DE 2311712, EP 0278878, DE 199 47147, EP 07 06822 Bl y WO 98/16621, las cuales se hace referencia expresamente por este medio.
Ventajosamente, los antioxidantes se eligen del grupo que consiste en aminoácidos (por ejemplo glicina, histidina, tirosina, triptofano) y derivados de éstos, imidazoles (por ejemplo ácido urocánico) y derivados de éstos, péptidos como D, L-carnosina, D-carnosina, L-carnosina y derivados de éstos (por ejemplo anserina), carotenoides , carotenos (por ejemplo ß-caroteno, licopeno) y derivados de éstos, ácido clorogénico y derivados de éste, ácido lipóico y derivados de éste (por ejemplo ácido dihidrolipóico) , aurotioglucosa, propiltiouracilo y otros tioles (por ejemplo tiorodoxina, glutation, cisteina, cistina, cistamina y glucosilo, N-acetil, metil, etil, propil, amil, butil y lauril, palmitoil, oleil, ?-linoleil, colesteril y gliceril ésteres de éstos) y sales de éstos, tiodipriopionato de dilaurilo, tiodipropionato de diestearilo, ácido tiodipropiónico y derivados de éste (ésteres, éteres, péptidos, lipidos, nucleótidos, nucleósidos y sales) y compuestos sulfoximina (por ejemplo butionina sulfoximina, homocisteinas sulfoximinas , butioninas sulfonas, penta-hexa-heptationina sulfoximina) en dosis muy bajas toleradas (por ejemplo p-mol a µt??/kq) , también agentes quelantes (metálico) (por ejemplo ácidos a-hidroxigrasos , ácido palmitico, ácido citico, lactoferrinas ) , ácido ot-hidroxi (por ejemplo ácido cítrico, ácido láctico, ácido mélico) , ácido húmico, ácido biliar, extractos biliares bilirrubina, biliverdina, EDTA y derivados de éstos, ácidos grasos insaturados y derivados de éstos (por ejemplo ácido ?-linolénico, ácido linoléico, ácido oléico) , ácido fólico y derivados de éste, ubiquinona y ubiquinol y derivados de éstos, vitamina C y derivados de ésta (por ejemplo ascorbato de sodio, palmitato de ascorbilo, fosfato MG ascorbilo, acetato de ascorbilo) , tocoferol y derivados (por ejemplo acetato de vitamina E, tocotrienol ) , vitamina A y derivados (palmitato de vitamina A) , y benzoato de coniferilo de resina benzoina, ácido rutinico y derivados de este, a-glicosilrutina, ácido ferúlico, furfuridilenglucitol, carnosina, butilhidroxi tolueno, butilhidroxianisol , ácido nordihidroguaiacico, ácido nordihidroguaiarético, trihidroxi butirofenona , ácido úrico y derivados de éste, mañosa y derivados de ésta, zinc y derivados de éste (por ejemplo ZnO, ZnS04) , selenio y derivados de éste (por ejemplo selenometionina) , estilbenos y derivados de éste (por ejemplo óxido de estilbeno, óxido de tran-estilbeno) .
Las vitaminas, provitaminas o precursores de vitaminas del grupo de la vitamina B o derivados de ésta y los derivados de 2-furanona para ser utilizados con preferencia de acuerdo con la invención incluyen, entre otros : Vitamina Bi, nombre común tiamina, nombre químico cloruro de 3- [ ( 4 ' -amino-2 ' -metil-5 ' -pirimidinil ) metil ] -5-(2-hidroxietil ) -4-metiltiazolio .
Vitamina B2, nombre común riboflavina, nombre químico 7 , 8-dimetil-10- (1-D-ribitil) -benzo [g] pteridin-2,4-(3H, 10H)-diona. En forma libre, la riboflavina se presenta, por ejemplo, en el suero, otros derivados de riboflavina pueden aislarse de bacterias y levaduras. Un estereoisómero de riboflavina que del mismo modo es apropiado de acuerdo con la invención es lixoflavina, la cual puede ser aislada de harina o hígado de pescado y lleva un radical D-arabitilo en lugar del radical D-ribitilo .
Vitamina B3. Los compuestos ácido nicotínico y nicotinamida (niacinamida) muchas veces llevan este nombre. De acuerdo con la invención, se da preferencia a nicotinamida .
Vitamina B5 (ácido pantoténico y pantenol) . Se da preferencia al uso de pantenol. Los derivados de pantenol que pueden utilizarse de acuerdo con la invención son, en particular, los ésteres y éteres de pantenol y los pantenoles catiónicamente derivados. En otra modalidad preferida de la invención, también es posible utilizar 2-furanona además del ácido pantoténico o pantenol. Los derivados particularmente preferidos son también las sustancias disponibles en el comercio dihidro-3-hidroxi-4 , 4-dimetil-2 ( 3H) -furanona con el nombre común pantolactona (Merck) , 4-hidroximetil-y-butirolactona (Merck), 3, 3-dimetil-2-hidroxi-y-butirolactona (Aldrich) y 2 , 5-dihidro-5-metoxi-2-furanona (Merck), estando incluidos se expresamente todos los estereoisómeros.
Estos compuestos ventajosamente imparten propiedades humectantes y calmantes de la piel a los dermocosméticos de acuerdo con la invención.
Vitamina B6, la cual no se entiende en este caso como una sustancia uniforme, pero los derivados de 5-hidroximetil-2-metilpiridin-3-ol conocidos bajo los nombres comunes piridoxina, piridoxamina y piridoxal .
B7 (biotina, también a la que se hace referencia como vitamina H o "vitamina para la piel". La biotina es ácido (3aS, S, 6aR) -2-oxohexahidrotienol [3, -d] imidazol-4-valérico .
Pantenol, pantolactona, nicotinamida y biotina son muy particularmente preferidos de acuerdo con la invención .
Colorantes Los colorantes que pueden utilizarse son las sustancias aprobadas y apropiadas para propósitos cosméticos, como se enlistan, por ejemplo, en la publicación "Kosmetische Farbemittel" [Cosmetics Colorants] from the Farbstoffkommission der Deutschen Forshungsgemeinschaft [Dyes Commission of the Germán Research Society] , publicado por Verlag Chemie, Weinheim, 1984. Estos colorantes normalmente se utilizan en concentraciones desde 0.001 a 0.1% en peso, con base en la mezcla total.
Pigmentos En una modalidad preferida, las composiciones de acuerdo con la invención contienen por lo menos un pigmento. Los pigmentos están presentes en la masa de producto en forma no disuelta y pueden estar presentes en una cantidad desde 0.01 hasta 25% en peso, con particular preferencia desde 5 hasta 15% en peso. El tamaño de partícula preferido es 1 a 200 µ??, en particular 3 a 150 µp?, particularmente de preferencia 10 a 100 Los pigmentos son colorantes que son prácticamente insolubles en el medio de aplicación y pueden ser pigmentos inorgánicos u orgánicos. Los pigmentos mixtos inorgánicos/orgánicos también son posibles. Se da preferencia a los pigmentos inorgánicos. La ventaja de los pigmentos inorgánicos es su excelente fotoestabilidad, estabilidad a la intemperie y estabilidad térmica. Los pigmentos inorgánicos pueden ser de origen natural, por ejemplo, pueden ser preparados a partir de gis, ocre, ocre oscuro, tierra verde, siena quemada o grafito. Los pigmentos pueden ser pigmentos blancos como puede ser, por ejemplo, dióxido de titanio u óxido de zinc, pigmentos negros como puede ser, por ejemplo, negro óxido de hierro, pigmentos de color como puede ser, por ejemplo, ultramarino o rojo óxido de hierro, pigmentos aperlantes, pigmentos de efecto metálico, pigmentos aperlantes y pigmentos fluorescentes o fosforescentes, donde preferentemente por lo menos un pigmento es un pigmento no blanco, de color. Los óxido metálicos, hidróxidos e hidratos óxidos, pigmentos en fase mixta, silicatos que contienen azufre, sulfuros metálicos, cianuros metálicos complejos, sulfatos metálicos, cromatos y molibdatos, y los propios metales (pigmentos de bronce) son apropiados. De interés particular son dióxido de titanio (CI 77891) , óxido de hierro negro (CI 77499), óxido de hierro amarillo (CI 77492), óxido de hierro rojo y café (CI 77491), violeta de manganeso (CI 77742), ultramarino ( sulfosilicatos de sodio y aluminio, CI 77007, pigmento azul 29), hidrato óxido de cromo (CI 77289), azul hierro ( ferrocianuro férrico, CI 77510), carmín (cochineal). Se da particular preferencia a los pigmentos aperlantes y los pigmentos de color basados en mica los cuales están recubiertos con óxido metálico o un oxicloruro metálico, como dióxido de titanio o oxicloruro de bismuto, y si es apropiadas otras sustancias que imparten color, como pueden ser óxidos de hierro, azul hierro, ultramarina, carmín, etcétera y donde el color puede ser determinado modificando el espesor de la capa. Los pigmentos de este tipo se comercializan, por ejemplo, bajo los nombres comerciales Roña®, Colorona®, Dichrona®, y Timiron® (Merck) . Los pigmentos orgánicos son, por ejemplo, los pigmentos naturales sepia, gamboge, café Cassel, índigo, clorofila y otros pigmentos vegetales. Los pigmentos orgánicos sintéticos son, por ejemplo, pigmentos azo, antraquinoides , indigoides, dioxaxina, quinacridona, ftalocianina, isoindolinona, perileno y perinona, complejos metálicos, azul alfa álcali y pigmentos dicetopirrolopirrol .
En una modalidad, las moléculas efectoras de unión a queratina de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método inventivo se utilizan con por lo menos una sustancia particulada que esta presente en la composición en una cantidad desde 0.01 hasta 10, preferentemente desde 0.05 hasta 5% en peso. Las sustancias apropiadas son, por ejemplo, sustancias que son sólidas a temperatura ambiente (25°C) y están en forma de partículas. Son apropiadas, por ejemplo, sílice, silicatos, aluminatos, tierras de arcilla, mica, sales, en particular sales metálicas inorgánicas, óxidos metálicos, por ejemplo, dióxido de titanio, minerales y partículas poliméricas. Las partículas están presentes en la composición en forma no disuelta, preferentemente dispersadas en forma estable y son capaces de, luego de a aplicación a la superficie de aplicación y evaporación del disolvente, ser depositadas en forma sólida. Las sustancias particuladas preferidas son sílice (gel de sílice, dióxido de silicio) y sales metálicas, en particular sales metálicas inorgánicas, donde se prefiere particularmente sílice. Las sales metálicas son, por ejemplo, haluros de metales alcalinos o de metales alcalinotérreos como cloruro de sodio cloruro de potasio; sulfatos de metales alcalinos o de metales alcalinotérreos como sulfato de sodio o sulfato de magnesio.
Agentes aperlantes Los agentes aperlantes apropiados son, por ejemplo, ésteres de alquilenglicol , específicamente diestearato de etilenglicol , alcanolamidas de ácidos grasos, específicamente dietanolamida de ácido graso de coco, glicéridos parciales, específicamente monoglicérido de ácido esteárico; ásteres de ácidos carboxilicos polibásicos, opcionalmente hidroxi-sustituidos con alcoholes grasos que tengan 6 a 22 átomos de carbono, específicamente ésteres de cadenas largas de ácido tartárico; sustancias grasas como puede ser, por ejemplo, alcoholes grasos, cetonas grasas, aldehidos grasos, éteres grasos y carbonatos grasos, los cuales tienen en total por lo menos 24 átomos de carbono, específicamente laurona y diesteariléter ; ácidos grasos como el ácido esteárico, ácido hidroxiesteárico o ácido behénico, productos abridores de anillos de epóxidos de definas que tengan 12 a 22 átomos de carbono con alcoholes grasos que tengan 12 a 22 átomos de carbono y/o polioles que tengan 2 a 15 átomos de carbono y 2 a 10 grupos hidroxilo y mezclas de éstos.
Los espesantes acostumbrados en tales formulaciones son ácidos poliacrílieos reticulados y derivados de éstos, polisacáridos y derivados de éstos como goma de xantano, agar agar, alginatos o tiosas, derivados de celulosa, por ejemplo, carboximetilcelulosa o hidroxicarboximetilcelulosa, alcoholes grasos, monoglicéridos y ácidos grasos, alcohol polivinílico y polivinil pirrolidona. Se da preferencia al uso de espesantes no iónicos.
Los ingredientes cosméticos y/o dermocosméticos activos adecuados son, por ejemplo, ingredientes activos colorantes, agentes para la pigmentación de la piel y el cabello, agentes tintes, agentes bronceadores, blanqueadores, sustancias endurecedoras de la queratina, ingredientes activos antimicrobianos, ingredientes activos fotofiltradores , ingredientes activos repelentes, sustancias hiperémicas, sustancias queratolitica y queratoplásticamente eficaces, ingredientes activos anticaspa, antiflogísticos, sustancias queratinizantes, ingredientes activos o antioxidantes y/o ingredientes activos que actúan como depuradores de radicales libres, sustancias humectantes o hidratantes para la piel, ingredientes activos reengrasantes , ingredientes activos antieritematosos o antialérgicos, ácidos grasos ramificados, como puede ser el ácido 18-metileicosanóico, y mezclas de éstos.
Los ingredientes activos que broncean artificialmente la piel los cuales son apropiados para broncear la piel sin radiación natural o artificial con rayos UV, son por ejemplo dihidroacetona , aloxano y extracto de cáscara de nuez. Las sustancias endurecedoras de la queratina apropiadas normalmente son ingredientes activos, como lo son también los utilizados en antitranspirantes como puede ser, por ejemplo, sulfato de potasio y aluminio, clorhidróxido de aluminio, lactato de aluminio, etcétera.
Lps ingredientes activos antimicrobianos se utilizan para destruir los microorganismos o para inhibir su crecimiento y de este modo sirven como preservadores y como sustancia deodorizante que reduce la formación o la intensidad del olor corporal. Estos incluyen, por ejemplo, los preservadores acostumbrados conocidos para el trabajador experto en la técnica, como puede ser éster p-hidroxibenzóicos , imidazolidinilurea , formaldehido, ácido sórbico, ácido benzoico, ácido salicilico, etcétera. Tales sustancias deodorizantes son, por ejemplo, ricinoleato de zinc, triclosan, alquilolamidas del ácido undecilénico, citrato de trietilo, clorhexidina , etcétera.
Los preservadores apropiados para ser utilizados ventajosamente de acuerdo con la invención son: Tabla 5: Preservadores apropiados. Los números E enlistados en la tabla anterior son las denominaciones que se utilizan en la norma 95/2/EEC.
También convenientes de acuerdo con la invención son los preservadores o auxiliares preservadores acostumbrados en cosméticos dibromodicianobutano (2-bromo-2-bromometilglutarodinitrilo) , butilcarbamato de 3-yodo-2-propinilo, 2-bromo-2-nitripropan-l , 3-diol, imidazolinidilurea, 5-cloro-2-metil-4-isotiazolin-3-ona, 2-cloroacetamida, cloruro de benzalconio y alcohol bencílico. También apropiados como preservadores son los fenil hidroxialquil éteres, en particular el compuesto conocido con el nombre fenoxietanol tomando en cuenta sus efectos bactericidas y fungicidas sobre un número de microorganismos .
Otros agentes antimicrobianos del mismo modo son apropiados para ser incorporados en las preparaciones de acuerdo con la invención. Las sustancias ventajosas son, por ejemplo, 2 , 4 , 4 ' -tricloro-2 ' -hidroxidifeniléter (irgasan) , 1, 6-di ( 4-clorofenildiguanido) hexano (clorhexidina) , 3, 4 , 4 ' -triclorocarbanilida, compuestos de amonio cuaternario, aceite de clavo, aceite de menta, aceite de tomillo, citrato de trietilo, farnesol (3,7,11-trimetil-2 , ß-10-dodecantrien-l-ol ) , y los ingredientes activos o combinaciones de ingredientes activos que se describen en las especificaciones de patentes abiertas al público DE 37 40 186, DE 39 38 140, DE-42 04 321, DE-42 29 707, DE-43 09 372, DE-44 11 664, DE-A 195 41 967, DE-195 43 695, DE-195 43 696, DE-195 47 160, DE-196 02 108, DE-196 02 110, DE-196 02 111, DE-196 31 003, DE-196 31 004 y DE-196 34 019 y las especificaciones de las patentes DE-42 29 737, DE-42 37 081, DE 43 24 219, DE-44 29 467, DE-44 23 410 y DE-195 16 705. También se utiliza ventajosamente hidrógeno carbonato de sodio. Del mismo modo también se utilizan los polipéptidos microbianos.
Aceites esenciales Si es apropiado, las composiciones cosméticas pueden contener aceites esenciales. Los aceites esenciales pueden mencionarse son, por ejemplo, mezclas de aromas naturales y sintéticos. Las aromas naturales son extractos de flores (lila, lavanda, rosa, jazmín, neroli, ylang ylang) tallos y hojas (geranio, pachulí, grano pequeño), frutos (semilla de anís, cilantro, alcaravea, enebro) , cáscaras de frutos (bergamota, limón, naranja) , raíces (macia, angélica, apio, cardamomo, costo, lirio, calmus) , maderas (madera de pino, madera de sándalo, madera de guayaca, madera de cedro, palo de rosa) , hierbas y pastos (tarragon, té limón, salvia, tomillo) , agujas y ramas (abeto, pícea, pino, pino enano), resinas y bálsamos (gálbano, elemí, benzoina, mirra, olíbano, opoponax) . También apropiados son las materias primas animales como puede ser, por ejemplo, civeto y casteorum. Los compuestos fragancias sintéticas comunes son productos del tipo éster, tipo éter, tipo aldehido, tipo cetona, tipo alcohol y tipo hidrocarburo. Los compuestos fragancias del tipo éster son, por ejemplo, acetato de benzilo, isobutirano de fenoxietilo, ciclohexilacetato de 4-terbutilo, acetato de linalilo, acetato de dimetilbencilcardinilo, acetato de feniletilo, benzoato de inalilo, formato de bencilo, glicinato de etilmetilfenilo, ciclohexilpropionato de alilo, propionato de estiralilo y salicilato de bencilo. Los éter incluyen, por ejemplo benciletiléter , los aldehidos incluyen, por ejemplo, los alcanales que tienen 8 a 18 átomos de carbono, citronelal, citroneliloxiacetaldehido, ciclamenaldehido, hidroxicitronelal, lilial y bourgeonal, las cetonas incluyen, por ejemplo, las iononas, isometilionona y metilcedrilcetona, los alcoholes incluyen acetol, citronolenol, eugenol, isoeugenol, geraniol, linalool, alcohol feniletilico y terpenol, los hidrocarburos incluyen principalmente los terpenos y bálsamos. Sin embargo, se da preferencia al uso de mezclas de diferentes fragancias las cuales juntas producen una nota de perfume placentero. Los aceites esenciales de volatilidad relativamente baja, las cuales se utilizan principalmente como componentes aroma, también son apropiados con aceites esenciales, por ejemplo aceite de salvia, aceite de camomila, aceite de clavo, aceite de melisa, aceite de menta, aceite de hoja de canela, aceite de flor de tilo, aceite de enebrina, aceite de vetiver, aceite de olíbano, aceite de gálbano, aceite de lábdano y aceite de lavandina. Preferentemente, se utiliza aceite de bergamota, dihidromircenol, lilial, liral, citrolenol, feniletil alcohol, cc-hexilcinamaldehído, geraniol, bencilacetona, ciclamenaldehído, linalool, Boisambrene® Forte, ambroxan, indol, hedion, sandelice, aceite de limón, aceite de mandarina, aceite de naranja, glicolato de alilamilo, ciclovertal, aceite de lavandina, aceite de salvia, ß-damascona, bourbon aceite de geranio, salicilato de ciclohexilo, Vertofix®Coeur, Iso-E-Super®, Fixolide®NP, evernil, iraldeina gama, ácido fenilacético, acetato de geranilo, acetato de bencilo, óxido rosa, romillate, irotil y floramate, solos o en mezclas.
Aceites, grasas y ceras Preferentemente, las composiciones de acuerdo con la invención contienen aceites, ceras y/o grasas. Los constituyentes de la fase oleosa y/o la fase grasa de las composiciones de acuerdo con la invención se eligen ventajosamente del grupo de lecitinas y triglicéridos de ácidos grasos, a saber, los triglicerol ásteres de ácidos alcancarboxilicos ramificados y/o no ramificados, saturados y/o no saturados de cadena larga desde 8 a 24, en particular 12 a 18 átomos de carbono. Los triglicéridos de ácidos grasos por ejemplo, pueden elegirse ventajosamente del grupo de aceites sintéticos, semisintéticos y naturales como pueden ser, por ejemplo, aceite de oliva, aceite de girasol, aceite de soya, aceite de cacahuate, aceite de colza, aceite de almendra, aceite de palma, aceite de coco, aceite de ricino, aceite de germen de trigo, aceite de semilla de uva, aceite de cardo, aceite de hierba de esparto, aceite de macadamia y similares. Otros componentes aceites polares pueden elegirse del grupo de ésteres de ácidos alcancarboxilicos ramificados y/o no ramificados, saturados y/o insaturados de cadena larga de 3 a 30 átomos de carbono y alcoholes ramificados y/o no ramificados, saturados y/o saturados, de longitud de cadena desde 3 hasta 30 átomos de carbono, y del grupo de los ésteres de ácidos carboxilicos aromáticos y alcoholes ramificados y/o no ramificados, saturados y/o insaturados, de longitud de cadena desde 3 hasta 30 átomos de carbono. Estos aceites éster pueden entonces elegirse ventajosamente del grupo que consiste en miristato de isopropilo, palmitato de isopropilo, estearato de isopropilo, oleato de isopropilo, estearato de N-butilo, laurato de N-hexilo, oleato de -decilo, estearato de isooctilo, estearato de isononilo, isononanoato de isononilo, palmitato de 2-etilhexilo, laurato de 2-etilhexilo, estearato de 2-hexildecilo, palmitado de 2-octildecilo, oleato de oleilo, erucato de oleilo, oleato de erucilo, erucato de erucilo dicaprililcarbonato (cetiol CC) y cocoglicéridos (miritol 331), dicaprilato/dicaprato de butilenglicol y adipato de dibutilo, y mezclas sintéticas, semisintét icas y naturales de éstos ésteres como pueden ser, por ejemplo, aceite de jojoba. Además, uno o más componentes oleosos pueden elegirse ventajosamente del grupo de hidrocarburos ramificados y no ramificados y ceras de hidrocarburos, aceites de silicona, dialquiléteres, el grupo de alcoholes ramificados o no ramificados, saturados o insaturados. Cualquiera de las mezclas de estos componentes oleosos y cerosos también es para ser utilizados ventajosamente para el propósito de la presente invención. Si es apropiado, también puede ser ventajoso utilizar ceras, por ejemplo palmitato de cetilo, como el único componente lipido de la fase oleosa. De acuerdo con la invención, el componente oleoso se elige ventajosamente del grupo que consiste en isoestearato de 2-etilhexilo, octildodecanol , isononanoato de isotridecilo, isoeicosano, cocoato de 2- etilhexilo, benzoato de alquilo de C12-15, triglicérido caprilico/cáprico, dicaprililéter . De acuerdo con la invención, son ventajosas las mezclas de benzoato de alquilo de C12-15 y de isoestearato de 2-etilhexilo, mezclas de benzoato de alquilo de C12-15 e isononanoato de isotridecilo, y mezclas de benzoato de alquilo de C12-15, isoestearato de 2-etilhexilo e isononanoato de isotridecilo. De acuerdo con la invención, los aceites con una polaridad 25 hasta 50 mN/m utilizados con particular preferencia son triglicéridos de ácidos grasos, en particular aceite de soya y/o aceite de almendra. De los hidrocarburos, el aceite de parafina, escualeno y escualano han de utilizarse ventajosamente para el propósito de la presente invención.
Además, la fase oleosa puede elegirse ventajosamente del grupo de alcoholes de Guerbet. Los alcoholes de Guerbet son nombrados después de que más del Guerbet describió su preparación por primera vez. Estos se forman de acuerdo con la ecuación de reacción: R & i R — CH2-CH2 — OH R — CH-CHjr-OH catalizador por oxidación de un alcohol para obtener un aldehido, por condensación aldol del aldehido, la eliminación de agua a partir del aldol y la hidrogenación del aldehido arilico.
Los alcoholes de Guerbet son líquidos incluso a temperaturas bajas y ocasionan prácticamente ninguna irritación a la piel. Estos pueden utilizarse ventajosamente como constituyentes engrasantes, superengrasantes y también reengrasantes en composiciones cosméticas. El uso de los alcoholes de Guerbet en cosméticos es conocido por sí mismo. Estas especies son entonces principalmente caracterizadas por la estructura: en ésta, Ri y R2 son radicales alquilo no ramificados.
De acuerdo con la invención, el alcohol o los alcoholes de Guerbet se eligen ventajosamente del grupo donde : Ri = propilo, butilo, pentilo, hexilo, heptilo u octilo, y R2 = hexilo, heptilo, octilo, nonilo, decilo, undecilo, dodecilo, tridecilo o tetradecilo.
Los alcoholes Guerbet preferidos de acuerdo con la invención son 2-butiloctanol (disponible en el comercio por ejemplo como Isofol® 12. (Cpndea) ) y 2-hexildecanol (disponible en el comercio por ejemplo como Isofol® 16 (Condea) ) . Las mezclas de los alcoholes Guerbet de acuerdo con la invención también se utilizan ventajosamente de acuerdo con la invención como puede ser, por ejemplo, las mezclas de 2-butiloctanol y 2-hexildecanol (disponible en el comercio por ejemplo como Isofol® 14 (Condea) ) .
Cualquiera de las mezclas de tales componentes oleosos y cerosos también ha de utilizarse ventajosamente para el propósito de la presente invención. Entre las poliolefinas, las sustancias preferidas son polideceno's .
El componente oleoso puede también tener ventajosamente un contenido de aceites cíclicos o silicona lineal o consistir principalmente de estos aceites, aunque se prefiere utilizar un contenido adicional de otros componentes en fase oleosa además del aceite de silicona o los aceites de silicona. Las siliconas para aceites de siliconas de peso molecular bajo generalmente se definen por la siguiente fórmula general : R- —O—Si—O—R3 Las siliconas o aceites de silicona molecular superior generalmente se definen siguiente fórmula general: donde los átomos de silicio pueden estar sustituidos por radicales alquilo y/o radicales arilo iguales o diferentes, los cuales se muestran en este caso en términos generales por los radicales Ri a R4. Sin embargo, el número de diferentes radicales no se limita necesariamente hasta . m en este caso puede tomar valores desde 2 hasta 200,0000.
Las siliconas cíclicas para ser utilizadas ventajosamente de acuerdo con la invención se definen en general por la siguiente fórmula: donde los átomos de silicio pueden estar sustituidos por radicales alquilo y/o radicales arilo iguales o diferentes, los cuales se muestran en este caso en términos generales por los radicales Ri a R4. No obstante, el número de radicales diferentes no se limitan necesariamente a 4. "n" en este caso puede tomar valores desde 3/2 hasta 20. Los valores fraccionarios para n toman en consideración que números impares de grupos siloxilo pueden estar presentes en el ciclo.
Ventajosamente, feniltrimeticona se elige como aceite de silicona. Otros aceites de silicona, por ejemplo, dimeticona, hexametilciclotrisiloxano, fenildimeticona, ciclometicona (octametilciclotetrasiloxano) , hexametilciclotrisiloxano, polidimetilsiloxano, poli (metilfenilsiloxano) , cetildimeticona, behenoxidimeticona también se utilizan ventajosamente para el propósito de la presente invención. Asimismo ventajosas son las mezclas de ciclometicona e isononanoato de isotridecilo, y las de ciclometicona e isoestearato de 2-etilhexilo . No obstante, también es ventajoso elegir aceites de silicona de constitución semejante a los compuestos antes mencionados cuyas cadenas laterales orgánicas se derivan, por ejemplo, son polietoxiladas y/o polipropoxiladas .
Estas incluyen, por ejemplo, copolímeros de polisiloxano- polialquil-poliéter , como puede ser, por ejemplo, el copoliol cetildimeticona . La ciclometicona (octametilciclotetrasiloxano) se utiliza ventajosamente como aceite de silicona para ser utilizado de acuerdo con la invención.
Los componentes grasa y/o cera para utilizarse ventajosamente de acuerdo con la invención pueden elegirse del grupo de ceras vegetales, ceras animales, ceras minerales y ceras petroquímicas. Por ejemplo, la cera de candelilla, cera de carnauba, cera de Japón, cera de hierba de esparto, cera de corcho, cera de guaruma, cera de aceite de germen de arroz, cera de caña de azúcar, cera de baya, cera de ouricuri, cera de montana, cera de jojoba, shea butter, cera de abeja, cera de shellac, espermacético, lanolina (cera de madera), grasa uropigial, ceresina, ozoquerita (cera de tierra) , ceras parafínicas y ceras micro son ventajosas. Otros componentes grasa y/o cera ventajosos son ceras químicamente modificadas y ceras sintéticas como puede ser, por ejemplo, Syncrowax® HRC (tribehenato de glicerilo) y Syncrowax® AW 1C (ácido graso de Cie-36) y ceras de éster de montana, ceras sasol, ceras de jojoba ' hidrogenada, ceras de abeja sintéticas o modificadas (por ejemplo cera de abejas copolioldimeticona y/o cera de abejas alquilo de C30-50) ricinoleatos de cetilo como puede ser, por ejemplo, Tegosoft® CR, ceras de polialquileno, ceras de polietilenglicol, pero también grasas químicamente modificadas como pueden ser, por ejemplo, aceites vegetales hidrogenados (por ejemplo aceite de ricino hidrogenado y/o glicéridos grasos de coco hidrogenados), triglicéridos , como pueden ser por ejemplo glicérido de soya hidrogenado, trihidroestearina, ácidos grasos, ésteres de ácidos grasos y ásteres de glicol, como puede ser por ejemplo estearato de alquilo C20-40/ estearato de alquilhidroxiestearoide de C20-C40 y o montanato de glicol. Además, algunos compuestos organosilicio que tienen propiedades físicas semejantes a los componentes grasa y/o ceras especificados, como puede ser, por ejemplo, estearoxitrimetilsilano, también son ventaj osos .
De acuerdo con la invención, los componentes grasa y/o cera pueden utilizarse en las composiciones en forma individual o como mezcla. Cualquiera de las mezclas de éstos componentes aceite y cera también son para utilizarse ventajosamente para los propósitos de la presente invención. Ventajosamente, la fase oleosa se elige del grupo que consiste en isoestearato de 2- 14 etilhexilo, octildodecanol, isononanoato de isotridecilo, dicaprilato/dicaprato de butilenglicol , cocoato de 2-etilhexilo, benzoato de alquilo de C12-15, triglicéridos caprilico/cáprico, dicaprililéter . Las mezclas de octildodecanol, triglicérido caprilico/cáprico, dicaprililéter, carbonato de dicaprililo, cocoglicéridos o mezclas de benzoato de alquilo de C12-15 e isoestearato de 2-etilhexilo, y mezclas de benzoato de alquilo de C12-15 y dicaprilato/dicaprato de butilenglicol, y mezclas de benzoato de alquilo de C12-15, isoestearato de 2-etilhexilo e isononanoato de isotridecilos son particularmente ventajosas. De los hidrocarburos, el aceite de parafina, cicloparafina, escualeno, escualano, poliisobuteno y polideceno hidrogenados son para utilizarse ventajosamente para los propósitos de la presente invención .
El componente aceite también se elige ventajosamente del grupo de fosfolipidos . Los fosfolipidos son ésteres fosfóricos de gliceroles acilados. De gran importancia entre los fosfatidilcolinas son, por ejemplo, las lecitinas, las cuales se caracterizan por la estructura general : donde R' y R' ' son radicales alifáticos normalmente no ramificados que tienen 15 ó 17 átomos de carbono y hasta 4 enlaces dobles cis.
De acuerdo con la invención, Merkur Weissoel Pharma 40 de Merkur Vaseline, Shell Ondina® 917, Shell Ondina® 927, Shell Oil 4222, Shell Ondina® 933 de Shell & DEA oil, Pionier© 6301 S; Pionier® 2071 (Hanse & Rosenthal) pueden utilizarse como aceite de parafina ventajosos de acuerdo con la invención. Los componentes aceite y grasa compatibles para uso cosmético están descritos en Kart-Heinz Schrader, Grundlagen un Rezepturen der Kosmetika [Fundamentáis and formulations of cosmetics], 2a edición, Verlag Hüthig, Heidelberg, pp. 319-355, a todo el alcance de la cual se hace referencia en la presente.
Disolventes Si las moléculas efectoras de unión a queratina de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método inventivo se utilizan en preparaciones cosméticas o dermatológicas las cuales están en solución o emulsión o dispersión, los disolventes que pueden utilizarse son: agua o soluciones acuosas; aceites como triglicéridos de ácido cáprico o ácido caprilico, pero preferentemente aceite de ricino; grasas, ceras y otras sustancias grasas naturales y sintéticas, preferentemente ásteres de ácidos grasos con alcoholes de número de carbonos bajo, por ejemplo con isorpropanol, propilenglicol o glicerol, o ásteres de alcoholes grasos con ácidos alcanóicos de número de carbono bajo o con ácidos grasos; alcoholes, dioles o polioles de número de carbonos bajo, y éteres de éstos, preferentemente etanol, isopropanol, propilen glicol, glicerol, etilenglicol, etilenglicol monoetilo ó monobutil éter, propilenglicol monometil, monoetil o monobutiléter , tietilenglicol monometil o monoetil éter y productos semejantes. En particular, se utilizan mezclas de los disolventes antes mencionados. En el caso de disolventes alcohólicos, el agua puede ser otro constituyente.
Agentes tensoactivos De acuerdo con la invención, además de las moléculas efectoras de unión a queratina de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método inventivo, las composiciones también pueden contener agentes tensoactivos . Tales agentes tensoactivos son, por ej emplo : — ésteres fosfóricos y sales, como puede ser por ejemplo DEA-oleth-10 fosfato y dilaureth-4-fosfato, — alquilsulfonatos, por ejemplo cocomonoglicérido sulfato de sodio, olefinsulfonato de C12-1 de sodio, laurilsulfoacetato de sodio y PEG-3 cocamida sulfato de magnesio, — ácidos carboxilicos y derivados, por ejemplo ácido laúrico, estearato de aluminio, alcanolato de magnesio y undecilenato de zinc, éster ácidos carboxilicos, por ejemplo estearoil lactilato de calcio, laureth-6 citrato y PEG-4 lauramida carboxilato de sodio, — ésteres que se forman por la esterificación de ácidos carboxilicos con óxido de etileno, glicerol, sorbitan u otros alcoholes, — éteres, por ejemplo alcoholes etoxilados, lanolina etoxilada, polisiloxanos etoxilados, POE éteres propoxilados y poliglucósidos de alquilo, como puede ser glucósido de laurilo, glucósido de decilo, y cocoglucósido .
Polisorbatos De acuerdo con la invención, además de las moléculas efectoras de unión a queratina de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método inventivo, las composiciones también pueden contener polisorbatos .
Los polisorbatos ventajosos para los propósitos de la invención en este caso son: — monolaurato de sorbitan polioxietileno (20) (Tween 20, CAS No. 9005-64-5) — monolaurato de sorbitan polioxietileno (4) (Tween 21, CAS No. 9005-64-5) — monoestearato de sorbitan polioxietileno (4) (Tween 61, CAS No. 9005-67-8) — triestearato de sorbitan polioxietileno (20) (Tween 65, CAS No. 9005-71-4) — monooleato de sorbitan polioxietileno (20) (Tween 80, CAS No. 9005-65-6) — monooleato de sorbitan polioxietileno (5) (Tween 81, CAS No. 9005-65-5) — trioleato de sorbitan polioxietileno (20) (Tween 85, CAS No. 9005-70-3) Particularmente ventajosos son, en particular: — monopalmitato de sorbitan polioxietileno (20) (Tween 40, CAS No. 9005-66-7) — monoestearato de sorbitan polioxietileno (20) (Tween 60, CAS No. 9005-67-8) .
De acuerdo con la invención, estos se utilizan ventajosamente en una concentración desde 0.1 hasta 5% en peso, y en particular en una concentración desde 1.5 hasta 2.5% en peso, con base en el peso total de la composición, en forma individual o como mezcla de dos o más polisorbatos .
Agentes acondicionadores En una modalidad preferida de la invención, las composiciones también contienen agentes acondicionadores. Los agentes acondicionadores preferidos de acuerdo con la invención son, por ejemplo, todos los compuestos que se enlistan en el International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook (Volumen 4, editor R. C. Pepe, J. A. Wenninger, G. N. McEwen, The Cosmetic. Toiletry, and Fragance Association, 9a edición 2002) bajo la sección 4 bajo las palabras clave Agentes Acondicionadores para el cabello, humectantes, agentes acondicionadores para la piel, agentes acondicionadores para la piel-emolientes, agentes acondicionadores para la piel-humectantes, agentes acondicionadores para la piel-misceláneos, agentes acondicionadores para la piel-oclusivos y protectores de la piel, y todos los compuestos que se enlistan en EP-A 934 956 (página 11-13) bajo "agente acondicionador soluble en agua" bajo "agente acondicionador soluble en agua" y "agente acondicionador soluble en aceite". Otros agentes acondicionadores ventajosos son, por ejemplo los compuestos a los que se hace referencia de acuerdo con INCI, como Polyquaternium (en particular Polyquaternium-1 a Polyquaternium-56 ) .
Los agentes acondicionadores apropiados y/o incluyen, por ejemplo, compuestos de amonio cuaternario poliméricos, derivados de celulosa catiónica y polisacáridos.
Los agentes acondicionadores ventajosos de acuerdo con la invención pueden en este caso ser elegidos de los compuestos que se muestran en la siguiente tabla: Tabla 6: Agentes acondicionadores que han de utilizarse ventaj osamente Otros agentes acondicionadores ventajosos de acuerdo con la invención son derivados de celulosa y derivados de goma de guar cuaternizados , en particular guar, cloruro de hidroxipropilamino (por ejemplo Jaguar Excel®, Jaguar C 162® (Rhodia), CAS 65497-29-2, CAS 39421-75-5).
También, los copolimeros de poli-N-vinilpirrolidona/acetato de polivinilo no iónicos (por ejemplo LuviskoKDVA 64 (BASD Aktiengellschaft ) ) , copolimeros de acrilato aniónicos (por ejemplo Luviglex® Soft (BASD Aktiengellschaft ) ) , y/o copolimeros anfotéricos de amida/acrilato/metacrilato (por ejemplo Amphomer® (National Startch) ) pueden utilizarse venta osamente de acuerdo con la invención como acondicionadores .
Materias primas en polvo Generalmente, puede ser ventajosa la adición de materias primas en polvo. Se prefiere particularmente el uso de talco.
Esteres de ácidos grasos de glicerol etoxilado De acuerdo con la invención, además de las moléculas efectoras de unión a queratina de acuerdo con la invención y/o producidas por el método inventivo, las composiciones pueden, si es apropiado, también contener aceites etoxilados elegidos del grupo de ésteres de ácidos grasos de glicerol etoxilado, particularmente de preferencia PEG-10 glicéridos de oliva, PEG-11 glicéridos de aguacate, PEG-11 glicéridos de manteca de cacao, PEG-13 glicéridos de girasol, PEG-15 isoestearato de 14 glicerilo, PEG-9 glicéridos de ácidos grasos de coco, PEG-54 aceite de ricino hidrogenado, PEG-7 aceite de ricino hidrogenado, PEG-60 aceite de ricino hidrogenado, aceite de jojoba etoxilato (PEG-26 ácidos grasos de jojoba, PEG-26 alcohol de jojoba) , glicereth-5 cocoato, PEG-9 glicéridos de ácidos grasos de coco, PEG-7 cocoato de glicerilo, PEG-45 glicéridos de aceite de semilla de palma, PEG-35 aceite de ricino, PEG-7 éster de oliva, PEG-6 glicéridos caprilico/cáprico, PEG-10 glicéridos de oliva, PEG-13 glicéridos de girasol, PEG-7 aceite de ricino hidrogenado, éster PEG-6 glicérido de semilla de palma hidrogenado, PEG-20 glicéridos de aceite de maíz, PEG-18 cocoato de oleato de glicerilo, PEG-40 aceite de ricino hidrogenado, PEG-40 aceite de ricino, PEG-60 aceite de ricino hidrogenado, PEG-60 glicéridos de aceite de maíz, PEG-54 aceite de ricino hidrogenado, PEG-45 glicéridos de aceite de semilla de palma, PEG-35 aceite de ricino, PEG-80 cocoato de glicerilo, PEG-60 glicéridos de aceite de almendras, PEG-60 glicéridos de hierba de asno, PEG-200 palmitato de glicerilo hidrogenado y PEG-960 isoestearato de glicerilo.
Los aceites etoxilados preferidos son PEG-7 cocoato de glicerilo, PEG-9 cocoglicéridos , PEG-40 aceite de ricino hidrogenado, PEG-200 palmato de glicérido hidrogenado. Los ésteres de ácidos grasos de glicerol etoxilados se utilizan en formulaciones limpiadoras acuosas para diversos propósitos. Los ésteres de ácidos grasos de glicerol con un bajo grado de etoxilación (3-12 unidades óxido de etileno) normalmente sirven como agentes reengrasantes para mejorar la sensación de la piel después del secado los ésteres del ácido graso de glicerol con un grado de etoxilación de aproximadamente 30-50 sirven como promotores de la solubilidad para sustancias no polares como los aceites esenciales. Los ésteres de ácidos grasos de glicerol con un alto grado de etoxilación se utilizan como espesantes. Una característica de todas estas sustancias tienen en común es que producen una sensación particular sobre la piel cuando se utilizan en la piel en dilución con agua.
Agentes fotoprotectores El uso de las moléculas efectoras de unión a queratina de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método inventivo en combinación con agentes fotoprotectores en preparaciones dermocosméticas del mismo modo es de acuerdo con la invención. Estas composiciones fotoprotectoras cosméticas y/o dermatológicas se utilizan para fotoprotección cosmética y/o dermatológica, y también para el tratamiento y 14 cuidado de la piel y/o del cabello y como producto de maquillaje en cosméticos decorativos. Estos incluyen, por ejemplo, cremas solares, lociones solares, leches solares, aceites solares, bálsamos solares, geles solares, productos para el cuidado de los labios y lápices labiales, cremas y barras cubrientes, cremas humectantes, lociones, emulsiones, cremas para la cara, cuerpo y manos, tratamientos y enjuagues para el cabello, composiciones para fijar el cabello, geles para el peinado, rocíos para el cabello, desodorantes roll-on o cremas contra arrugas para los ojos, preparaciones tropicales, bloqueadores solares, preparaciones para después del sol. Todas las preparaciones contienen por lo menos una molécula efectora de unión a queratina y una de las sustancias filtro UV especificadas.
Los aceites solares son principalmente las mezclas de diferentes aceites con uno o más filtros fotoprotectores y aceites esenciales. Los componentes oleosos se eligen de acuerdo con las diferentes propiedades cosméticas. Los aceites que engrasan bien y llevan una sensación suave a la piel, como los aceites minerales (por ejemplo aceites de parafina) y triglicéridos de ácidos grasos (por ejemplo aceite de cacahuate, aceite de ajonjolí, aceite de aguacate, triglicéridos de cadena media) se mezclan con aceites que mejoran la facilidad de dispersión y la absorción de los aceites solares en la piel, reducen la pegajosidad y hacen la película oleosa permeable para el aire y el vapor de agua (transpiración) . Estos incluyen ásteres de ácidos grasos de cadena ramificada (por ejemplo palmitato de isopropilo) y aceites de silicona (por ejemplo dimetilsilicona) . Cuando se utilizan aceites basados en ácidos grasos insaturados, se adicionan antioxidantes, por ejemplo tocoferol, para evitar que se arrancien. Los aceites solares, siendo formulaciones anhidras, por lo regular no contienen preservadores . La leche solar y cremas solares se preparan como emulsiones aceite en agua (O/ ) y como emulsiones agua en aceite (W/O) . Dependiendo del tipo de emulsión, las propiedades de las preparaciones son muy variables: las emulsiones O/W se dispersan fácilmente sobre la piel, estas se observen rápidamente y casi siempre pueden ser fácilmente lavadas con agua. Las emulsiones W/O son más difíciles de frotar, engrasan la piel en mayor medida y de este modo parecen ser algo más pegajosas, pero por otra parte protegen mejor la piel contra la resequedad. Las emulsiones W/O son principalmente resistentes al agua. En el caso de emulsiones O/W, la base de la emulsión, la selección de sustancias fotoprotectoras apropiadas y, si es apropiado, el uso de auxiliares (polímeros) determinan el grado de resistencia al agua. Las bases de las emulsiones O/W y líquidas y tipo crema se parecen a otras emulsiones acostumbradas en el cuidado de la piel en términos de su composición. La leche solar debe engrasarse suficientemente la piel deshidratada por el sol, el agua y el viento. Estas no deben ser pegajosas puesto que esto es percibido como particularmente desagradable en el calor y en contacto con la arena. Las composiciones filtro solar generalmente se basan en un portador el cual contiene por lo menos una fase oleosa. No obstante, también son posibles composiciones acuosas. Por consiguiente, son convenientes los aceites, emulsiones aceite en agua y agua en aceite, cremas y pastas, composiciones en barra para la protección de los labios o geles libres de grasa. Las emulsiones apropiadas son, entre otros, también macroemulsiones O/W, microemulsiones O/W o emulsiones O/W/O con partículas de dióxido de titanio recubiertas en la superficie, presentes en forma dispersada, pudiendo obtener las emulsiones por tecnología de inmersión de fases, como en DE-A-197 26 121.
Los auxiliares cosméticos acostumbrados que pueden ser considerados como aditivos son, por ejemplo, (co) emulsificadores, grasas y ceras, estabilizadores, espesantes, ingredientes activos biógenos, formadores de película, aromas, colorantes, agentes aperlantes, preservadores , pigmentos, electrolitos, (por ejemplo sulfato de magnesio) y reguladores de pH . Los estabilizadores que pueden utilizarse son sales metálicas de ácidos grasos como puede ser, por ejemplo, estearato de magnesio, estearato de aluminio y/o estearato de zinc. Por ingredientes activos biógenos se entiende, por ejemplo, extractos de plantas, hidrolizados de proteínas y complejos vitamínicos. Los formadores de película acostumbrados son, por ejemplo, hidrocoloides como quitosana, quitosana microcristalina o quitosana cuaternizada, polivinilpirrolidona, copolímeros vinilpirrolidona-acetato de vinilo, polímeros de series de ácido acrílico, derivados de celulosa cuaternaria y compuestos semejantes.
Los ingredientes activos fotofiltro apropiados son sustancias que absorben los rayos UV en la región UV-B y UV-A. Se entiende que éstos son sustancias orgánicas que pueden absorber los rayos ultravioleta y liberar la energía absorbida otra vez en forma de radiación de onda más larga, calor. Las sustancias orgánicas pueden ser solubles en aceite o solubles en agua. Los filtros UV apropiados son, por ejemplo, 2, , 6-triaril-l, 3, 5-triazinas en las cuales los grupos arilo pueden cada uno llevar por lo menos un sustituyente que preferentemente se elija de hidroxi, alcoxi, metoxi, específicamente, alcoxilcarbonilo, específicamente metoxicarbonilo y etoxicarbonilo . También son apropiados los ésteres p-aminobenzóicos , ésteres cinámicos, benzofenonas , derivados de canfor y pigmentos los cuales detienen los rayos UV, como puede ser el dióxido de titanio, talco y óxido de zinc. Los pigmentos basados en dióxido de titanio son particularmente preferidos.
Los filtros UV-B solubles en aceite que pueden utilizarse son, por ejemplo, las siguientes sustancias: 3-bencilidencanfor y derivados de éste, por ejemplo 3- (4-metilbenciliden) canfor; derivados del ácido 4-aminobenzóico, preferentemente 4- (dimetilamino) benzoato de 2-etilhexilo, 4-(dimetilamino) benzoato de 2-octilo y 4-(dimetilamino) benzoato de amilo; ésteres de ácido cinámico, preferentemente 4-metoxicinamato de 2-etilhexilo, 4-metoxicinamato de propilo, 4-metoxicinamato de isoamilo, 4-metoxicinamato de isopentilo, 2-ciano-3-fenilcinamato de 2-etilhexilo (octocrileno) ; ésteres de ácido salicílico, preferentemente, salicilato de 2-etilhexilo, salicilato de 4-isopropilbencilo, salicilato de homomentilo ; derivados de benzofenona, preferentemente 2-hidroxi- 4-metoxibenzofenona, 2-hidroxi-4 -metoxi-4 ' -metilbenzofenona, 2, 2' -dihidroxi- -metoxibenzofenona ; Ésteres de ácido benzalmalónico, preferentemente 4-metoxibenzalmalonato de 3-etilhexilo ; derivados de triazina, como puede ser, por ejemplo, 2, 4, 6-trianilino- (p-carbo-2' -etil-1' -hexiloxi) -1, 3, 5-triazina (octiltriazona) y dioctilbutamidotriazona (Uvasorb® HEB) ; propan-1 , 3-dionas como puede ser, por ejemplo, l-(4-ter-butilfenil ) -3- ( 4 ' -metoxifenil ) propan-1 , 3-diona .
Sustancias solubles en agua apropiadas son: Ácido 2-fenilbencimidazol-5-sulfónico y las sales de metales alcalinos, de metales alcalinotérreos , de amonio, de alquilamonio, alcanolamonio y glucamonio de éstos; derivados del ácido sulfónico de benzofenonas , preferentemente el ácido 2-hidroxi-4-metoxibenzofenona-5-sulfónico y sus sales; derivados del ácido sulfónico de 3-bencilidencanfor, como puede ser, por ejemplo, el ácido 4-(2-oxo-3-bornilidenmetil ) bencensulfónico y ácido 2-metil-5- ( 2-oxo- 3-borniliden) sulfónico y sales de éste.
Se da preferencia particular al uso de ásteres del ácido cinámico, preferentemente 4-metoxicinamato de 2-etilhexilo, 4-metoxicinamato de isopentilo, 2-ciano-3-fenilcinamato de 2-etilhexilo (octocrileno) .
Además, se prefiere el uso de derivados de benzofenona, en particular 2-hidroxi-4-metoxibenzofenona, 2-hidroxi-4 -metoxi-4 ' -metoxibenzofenona, 2, 2' -dihidroxi- 4-metoxibenzofenona, y el uso de propan-1, 3-dionas, como puede ser, por ejemplo, 1- ( 4-terbutilfenil ) -3- ( 4 ' -metoxifenil) propan-1 , 3-diona .
Los filtros UV-A comunes, apropiados son: derivados de benzoilmetano, como puede ser, por ejemplo, 1- (4' -terbutilfenil) -3- (4' -metoxifenil) propan- 1,3-diona, 4-terbutil-4 ' -metoxidibenzoilmetano o 1-fenil- 3 - ( 4 ' -isopropilf enil ) propan-1 , 3-diona ; los derivados aminohidroxi sustituidos benzof enonas, como puede ser, por ejemplo, hexilbenzoato de N, -dietilamino hidroxibenzoilo .
Los filtros UV-A y UV-B pueden, desde luego, también utilizarse en mezclas.
Otras sustancias filtros UV apropiadas se dan en la siguiente tabla.
Tabla 7: Agentes fotoprotectores apropiados Además de los dos grupos antes mencionados de sustancias fotoprotectoras primarias, también es posible utilizar agentes fotoprotectores secundarios del tipo antioxidante los cuales interrumpen la cadena de reacciones fotoquímicas que se activa cuando la radiación UV penetra en la piel. Los ejemplos comunes de estos son superóxido dismutasa, catalasa, tocoferoles, (vitamina E) y ácido ascórbico (vitamina C) .
Otro grupo son los anti-irritantes que tienen une efecto anti-inflamatorio sobre la piel dañada por la luz UV. Sustancias como estas son, por ejemplo, bisabolol, fitol y fitantriol.
Del mismo modo de acuerdo con la invención es el uso de moléculas efectoras de unión a queratina de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método inventivo en combinación con pigmentos inorgánicos los cuales detienen los rayos UV en preparaciones dermocosméticas . Se da preferencia a los pigmentos basados en óxidos metálicos y/u otros compuestos metálicos que sean insolubles o escasamente solubles en agua y elegidos del grupo de óxidos de zinc (ZnO) de titanio (Ti02) , de hierro (por ejemplo Fe203) , de zirconio (Zr02), de silicio (Si02) , de manganeso (por ejemplo MnO) , de aluminio (A1203) , de cerio (por ejemplo CE203) , óxidos mixtos de los metales correspondientes y las mezclas de tales óxidos.
Los pigmentos inorgánicos pueden estar presentes en este caso en forma recubierta, es decir, son tratados superficialmente. Este tratamiento de superficie puede consistir, por ejemplo, en proporcionar a los pigmentos con una capa hidrófoba delgada por un método conocido por si mismo, como esta descrito en DE-A 33 14 742.
Los ingredientes activos repelente apropiados son compuestos que pueden repeler o alejar algunos animales, en particular insectos, de los humanos. Estos incluyen, por ejemplo, 2-etil-l, 3-hexandiol, N, N-dietil-m-toluamida, etcétera. Las sustancias hiperémicas apropiadas, las cuales estimulan el flujo de la sangre a través de la piel, por ejemplo, son aceites esenciales como el extracto de pino enano, extracto de lavanda, extracto de romero, extracto de enebro, extracto de castaño de indias, extracto de hojas de abedul, extracto de heno de montaña, acetato de etilo, canfor, mentol, aceite de menta, extracto de romero, aceite de eucalipto, etcétera. Las sustancias queratoliticas y queratoplásticas apropiadas son, por ejemplo, ácido salicílico, tioglicolato de calcio, ácido tioglicólico y sus sales, azufre, etcétera. Los ingredientes activos anticaspa apropiados son, por ejemplo, azufre, azufre polietilenglicol mono oleato de sorbitan, azufre ricinol polietoxilato, piritiona de zinc, piritiona de aluminio, etcétera. Los antiflogísticos apropiados, los cuales contrarrestan las irritaciones de la piel son, por ejemplo, alantoina, bisabolol, dragosantol, extracto de camomila, pantenol, etcétera.
El uso de las moléculas efectoras de unión a queratina de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método inventivo en combinación con por lo menos un polímero cosmética o farmacéuticamente aceptable del mismo modo es de acuerdo con la invención.
Los polímeros apropiados son, por ejemplo, polímeros catiónicos con el nombre INCI polyquaternium, por ejemplo copolímeros de las sales vinilpirrolidona/N-vinilimidazolio (Luviquat FC, Luviquat HM, Luviquat MS, Luviquat Care) , copolímeros de N-vinilpirrolidona/metacrilato de dimetilaminoetilo, cuaternizado con sulfato de dietilo (Luviquat PQ 11), copolímeros de las sales N-vinilcaprolactama/N-vinilpirrolidona/N-vinilimidazolio (Luviquat E Hold) , derivados catiónicos de celulosa (polyquaternium-4 y -10), copolímeros de acrilamida (polyquaternium-7 ) y quitosana .
Los polímeros catiónicos (cuaternizados) apropiados son también Merquat (polímero basado en cloruro de dimetildialilamonio) , Gafquat (polímeros cuaternarios que se forman mediante la reacción de polivinilpirrolidona con compuestos de amonio cuaternario) , polímero JR (hidroxietilcelulosa con grupos catiónicos) y polímeros catiónicos a base de plantas, por ejemplo polímeros guar, como puede ser los grados Jaguar de Rhodia.
Otros polímeros apropiados también son polímeros neutros, como puede ser polivinilpirrolidonas, copolímeros de N-vinilpirrolidona y acetato de vinilo y/o propionato de vinilo, polisiloxanos, polivinilcaprolactama y otros polímeros con N-vinilpirrolidona, polietileniminas y las sales de éstas, polivinilaminas y las sales de éstas, derivados de celulosa, sales del ácido poliaspártico y derivados, estos incluyen, por ejemplo, Luviflex S ing (copolímero parcialmente hidrolizado de acetato de polivinilo y polietilenglicol , BASF Aktiengenllschaft ) .
Los polímeros apropiados también son polímero u oligómeros no iónicos, solubles en agua o dispersables en agua, como puede ser polivinilcaprolactama, por ejemplo Luviskol 0 Plus (BASF) o polivinil pirrolidona y copolímeros de esta, en particular con ásteres vinilicos, como puede ser acetato de vinilo, por ejemplo Luviskol VA 37 (BASF), poliamidas, por ejemplo basadas en ácido itacónico y diaminas alifáticas, como están descritas, por ejemplo en DE-A 43 33 238.
Los polímeros apropiados también son polímero anfotéricos o zwiteriónicos , como puede ser los copolímeros octilacrilamida/metacrilato de metilo/metacrilato de ter-butilaminoetilo-metacrilato de hidroxipropilo que pueden obtenerse con los nombres Amphomer (National Starch) , y polímeros zwiteriónicos, como están descritos, por ejemplo, en las solicitudes de Patente Alemanas DE 39 29 973, DE 21 50 557, DE 28 17 369 y DE 3708 451. Los copolímeros de cloruro de acrilamidopropiltrimetilamonio/ácido acrílico o ácido metacrílico y las sales de metales alcalinos y de amonio de estos son polímeros zwiteriónicos preferidos. Otros polímero zwiteriónicos adecuados son los copolímeros metacroiletil betaína/metacrilato, los cuales están a la disposición en el comercio con el nombre Amersette ( A ERCHOL ) y copolímeros de metacrilato de hidroxietilo, metacrilato de metilo, metacrilato de N, -dimetilamino etilo y ácido acrilico (Jordapon (D) ) .
Los polímeros adecuados también son polímeros no iónicos que contienen siloxano, solubles o dispersables en agua, por ejemplo, poliéter siloxanos, como puede ser Tegopren (Goldschmidt ) .
Del mismo modo de acuerdo con la invención es el uso de las moléculas efectoras de unión a queratina de acuerdo con la invención es el uso de las moléculas efectoras de unión a queratina de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método inventivo en combinación con ingredientes activos dermocosméticos (uno o más compuestos) venta osamente elegidos del grupo que consiste en ácido acetilsalicílico, atropina, azuleno, hidrocortisona y derivados de ésta, por ejemplo hidrocortisona-17-valerato, vitaminas de las series B y D, en particular vitamina Bi , vitamina Bi2 , vitamina D, vitamina A o derivados de ésta, como puede ser palmitato de retinilo, vitamina E o derivados de ésta, como puede ser por ejemplo acetato de tocoferilo, vitamina C y derivados de ésta, por ejemplo ascorbil glucósido, pero también niacinamida, pantenol, bisabolol, polidocanol, ácidos grasos insaturados, por ejemplo, los ácidos grasos esenciales (normalmente conocidos como vitamina F) , en particular ácido ?-linolénico, ácido oleico, ácido eicosapentaenóico, ácido docosahexaenóico y derivados de éste, cloranfenicol, cafeína, prostaglandinas , timol, canfor, escualeno, extractos u otros productos de origen vegetal y animal, por ejemplo prímula, aceite de borraja o aceite de semilla de algarrobo, aceites de pescado, aceite de hígado de bacalao, o ceramidas y compuestos tipo ceramida, extracto de incienso, extracto de té verde, extracto de lirio acuático, extracto de regaliz, hamamelis, ingredientes activos anticaspa (por ejemplo disulfuro de selenio, piritiona de zinc, (piroctona olamina, climbazol, octopirox, polidocanol y combinaciones de estos) ingredientes activos complejos, por ejemplo, aquellos de ?-orizanol y sales de calcio, como puede ser pantotenato de calcio, cloruro de calcio, acetato de calcio. También es ventajoso elegir los ingredientes activos del grupo de sustancias reengrasantes , por ejemplo aceite de purcelina, Eucerit® y Neocerit®. El ingrediente activo o ingredientes activos también se eligen en una forma particularmente ventajosa del grupo de inhibidores de la síntesis de NO, particularmente si las preparaciones de acuerdo con la invención han de ser utilizadas para el tratamiento y profilaxis de los síntomas de envejecimiento de la piel intrínseco y/o extrínseco, y el tratamiento y profilaxis de los efectos perjudiciales de la radiación ultravioleta sobre la piel y el cabello. Un inhibidor de la síntesis de NO preferido es nitroarginina . El ingrediente activo o los ingredientes activos además se eligen ventajosamente del grupo que consiste en catechinas y ásteres de ácido biliar de catechinas y extractos acuosos u orgánicos de plantas o partes de plantas que tienen un contenido de catechinas o ásteres de ácido biliar de catechinas, por ejemplo, las hojas de la familia de las plantas Theaceae, en particular las especies Camellia sinensis (té verde) . Sus ingredientes comunes (por ejemplo polifenoles o catechinas, cafeína, vitaminas, azúcares, minerales, amino ácidos lípidos) son particularmente ventajosos. Las catechinas son un grupo de compuestos que se entienden como flavonas hidrogenadas o antocianidinas y representan derivados de "catechina" (catechol, 3, 3', 4' ,5, 7-flavanpentaol , 2- (3, 4-dihidroxifenil ) croman-3, 5, 7-triol) . La epicatechina ( (2R, 3R) -3, 3' , ' , 5, 7-flavanpentaol) es un ingrediente activo ventajoso para el propósito de la presente invención. También son ventajosos los extractos de plantas con un contenido de catechina, en particular los extractos del té verde como puede ser, por ejemplo, los extractos de las hojas de las plantas de la especie Camellia spec, muy particularmente los tipos de té Camellia sinenis, C. assamica, C. taliensis, y C. inawadiensis y los híbridos de éstos con, por ejemplo, Camellia japónica. Los ingredientes activos preferidos son también polifenoles y catechinas del grupo (-)-catechina, (+) -catechina, ( - ) -catechina galato, (-) galocatechina galato, ( + ) -epicatechina , ( - ) -epicatechina , (-) -epicatechina galato, (-) -epigalocatechina, (-)-epigalocatechina galato.
Las flavonas y sus derivados (muchas veces también denominados en forma colectiva "flavonas" son ingredientes activos ventajosos para el propósito de la presente invención. Estas se caracterizan por la siguiente estructura básica (se dan las posiciones de sustitución) : Algunas de las flavonas más importantes las cuales también preferentemente pueden utilizarse en las preparaciones de acuerdo con la invención, se enlistan en la Tabla 8 siguiente.
Tabla 8: Flavonas Las flavonas normalmente se presentan en la naturaleza en forma glucosilada.
De acuerdo con la invención, los flavonoides preferentemente se eligen del grupo de sustancias de fórmula general: donde i a Z , independientes entre si, se eligen del grupo H, OH, grupos alcoxi e hidroxialcoxi , donde los grupos alcoxi o hidroxialcoxi pueden ser ramificados o no ramificados y tener 1 a 18 átomos de carbono, y donde Gly se elige del grupo de radicales mono- y oligoclucósido .
Además, los ingredientes activos (uno o más compuestos) también pueden ser ventajosamente elegidos del grupo de ingredientes activos hidrofilicos , en particular del siguiente grupo: a-hidroxiácidos , como puede ser el ácido láctico o ácido salicilico o sales de este, como puede ser, por ejemplo, lactato de Na, lactato de Ca, lactato de TEA, urea, alantoina, serina, sorbitol, glicerol, proteínas de leche, pantenol, quitosana.
La cantidad de tales ingredientes activos (uno o más compuestos) en las preparaciones de acuerdo con la invención preferentemente es 0.001 a 30% en peso, particularmente de preferencia 0.05 a 20% en peso, en particular 1 a 10% en peso, con base en el peso total de la preparación. Los ingredientes activos especificados y otros ingredientes activos que pueden ser utilizados en las preparaciones de acuerdo con la invención se dan DE 103 18 526 Al en las páginas 12 a 17, a todo el alcance de la cual se hace referencia en este punto.
Además, la presente invención se refiere al uso de las preparaciones antes mencionadas para prevenir cambios no deseados en la apariencia o aspecto de la piel, como puede ser por ejemplo acné o piel grasosa, queratosis, rosácea, reacciones fotosensibles, inflamatorias, eritematosas, alérgicas o autoinmunes.
Para su uso, las preparaciones cosméticas de acuerdo con la invención se aplican a la piel, cabello, uñas de las manos o uñas de los pies o encías en la forma acostumbra para los cosméticos o dermocosméticos .
La presente invención además proporciona dermocosméticos que contienen una molécula efectora de unión a queratina, preferentemente una molécula efectora de unión a queratina producida por el método de acuerdo con la invención, particularmente de preferencia moléculas efectoras de unión a queratina para cuya 1 producción se han utilizado moléculas efectoras elegidas del grupo que consiste en colorantes, agentes fotoprotectores , vitaminas, provitaminas, carotenoides, antioxidantes y descomponedores de peróxido antes descritos. Se da preferencia particular a los dermocosméticos que contienen una molécula efectora de unión a queratina como se enlista en la tabla 11.
Se da más preferencia a los dermocosméticos que contienen moléculas efectoras de unión a queratina los cuales contiene por lo menos un polipéptido de unión a queratina (ii) de acuerdo con las secuencias representadas en las ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170, preferentemente en la ID SEC No: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 40, 42, 44, 46, 48, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170, particularmente de preferencia 166 y 168, más preferentemente 168, y para cuya preparación la molécula ligadora (iii) que se utilizó fue ácido maleimido capróico. Se da muy particular preferencia a las moléculas efectoras de unión a queratina antes mencionadas en las cuales la molécula ligadora (iii) utilizada fue ácido maleimido capróico, y ácido pantoténico, pantenol, ésteres de pantenol, éteres de pantenol o pantenoles catiónicamente derivados fueron utilizados como la molécula efectora (i) .
En una modalidad preferida de la presente invención, los dermocosméticos o composiciones para el cuidado oral, cuidado dental y cuidado de la dentadura, preferentemente composiciones para el tratamiento de la piel y el cabello, contienen una molécula efectora de unión a queratina de acuerdo con la invención y/o producida de acuerdo con el método inventivo, en una concentración desde 0.001 hasta 1% en peso (% en peso), preferentemente 0.01 a 0.9% en peso, particularmente de preferencia 0.01 a 0.8% en peso o 0.01 a 0.7% en peso, muy particularmente de preferencia 0.01 a 0.6% en peso, o 0.01 a 0.5% en peso, más preferentemente 0.01 a 0.4% en peso o 0.01 a 0.3% en peso, con base en el peso total de la composición. En otra modalidad, las composiciones contienen una molécula efectora de unión a queratina de acuerdo con la invención y/o producida de acuerdo con el método inventivo en una concentración desde 1 hasta 10% en peso, preferentemente 2 a 8% en peso, 3 a 7% en peso, 4 a 6% en peso, con base en el peso total de la composición. En una modalidad del mismo modo preferida, las composiciones contienen una molécula efectora de unión a queratina de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método inventivo en una concentración desde 10 hasta 20% en peso, preferentemente 11 a 19% en peso, 12 a 18% en peso, 13 a 17% en peso, 14 a 16% en peso, con base en el peso total de la composición. En una modalidad igualmente preferida, las composiciones contienen una molécula efectora de unión a queratina de acuerdo con la invención y/o producida de acuerdo con el método inventivo en una concentración desde 20 hasta 30% en peso, preferentemente 21 a 29% en peso, 22 a 28% en peso, 23 a 27% en peso, 24 a 26% en peso, con base en el peso total de la composición.
Las composiciones de acuerdo con la invención preferentemente son composiciones protectoras de la piel, composiciones para el cuidado de la piel, composiciones limpiadoras de la piel, composiciones para la protección del cabello, composiciones para el cuidado del cabello, composiciones limpiadoras del cabello, colorantes para el cabello, enjuagues bucales y lavados bucales preparación para cosméticos decorativos, los cuales preferentemente se utilizan en forma de ungüentos, cremas, emulsiones, suspensiones, lociones, como leche, pastas, geles, espumas o rocíos, dependiendo del campo de uso.
Además de las moléculas efectoras de unión a queratina de acuerdo con la invención y/o producidas por el método inventivo, los dermocosméticos de acuerdo con la invención pueden contener los polímeros, pigmentos, humectantes, aceites, ceras, enzimas, minerales, vitaminas, agentes filtros solares, colorantes, fragancias, antioxidantes, preservadores y/o ingredientes activos farmacéuticos ya enlistados en lo anterior.
Además, lo siguiente aplica para los dermocosméticos de acuerdo con la invención: La formulación base de las composiciones de acuerdo con la invención preferentemente contienen auxiliares aceptados para uso cosmético o dermocosmético/farmacéutico . Los auxiliares aceptados para uso farmacéutico son los auxiliares que son conocidos para uso en el campo de la farmacia, la tecnología de alimentos y campos relacionados, en particular, los auxiliares enlistados en las farmacopeas pertinentes (por ejemplo DAB, Ph, Eur, BP, NF) , y otros auxiliares cuyas propiedades no impiden una aplicación fisiológica.
Los auxiliares adecuados pueden ser: deslizantes, agentes humectantes, agentes emulsificadores, y de suspensión, preservadores, antioxidantes, anti-irritativos, agentes quelantes, estabilizadores de la emulsión, formadores de película, formadores de gel, agentes enmascaradores del olor, resinas, hidrocoloides, disolventes, favorecedores de la solubilidad, agentes neutralizantes, aceleradores de la permeación, pigmentos, compuestos de amonio cuaternario, agentes reengrasantes y súper engrasantes, sustancias base para ungüento, crema o aceite, derivados de silicona, estabilizadores, agentes esterilizantes, propelentes, agentes colorantes, opacificadores , espesantes, ceras, ablandadores, aceite blanco. Una modalidad en este sentido se basa en el conocimiento especializado, como se muestra, por ejemplo, en Fiedler, H. P. Lexikon der Hilfsstoffe für Pharmazie, Kosmetik und angrenzende Geblete [Lexikon of auxiliarles for pharmacy, cosmetics and related fields]. 4a edición Aulendorf: ECV-Editio-kantor-Verlag, 1996.
Para producir las composiciones dermocosméticas de acuerdo con la invención, los ingredientes activos pueden ser mezclados o diluidos con un auxiliar apropiado (excipiente) . Los excipientes pueden ser materiales sólidos, semisólidos o líquidos, los cuales pueden servir como vehículos, portadores o medio para el ingrediente activo. El mezclado de otros auxiliares se lleva a cabo, si se desea, en forma conocida para el trabajador experto en la técnica. Además, los polímeros y dispersiones son apropiados como auxiliares en farmacia, preferentemente como o en una composición de revestimiento o aglomerante (s) para formas medicinales sólidas. Estas también pueden ser utilizadas en cremas y como recubrimientos de tabletas y aglutinantes de tabletas.
De acuerdo con otra modalidad preferida, las composiciones de acuerdo con la invención son composiciones cosméticas para el cuidado y protección de la piel y el cabello, composiciones para el cuidado de las uñas o preparaciones para cosméticos decorativos.
Las composiciones cosméticas para la piel apropiadas son, por ejemplo, tónicos fáciles, máscaras faciales, desodorantes y otras lociones cosméticas. Las composiciones para uso en cosméticos decorativos incluyen, por ejemplo, barras cubrientes, maquillaje, máscara y sombra de ojos, lápices labiales, lápices kohl, delineadores de ojos, rubores, polvos y lápices para cej as .
Además, las moléculas efectoras de unión a queratina de acuerdo con la invención y/o producidas de acuerdo con el método inventivo se utilizan en tiras para la nariz para limpiar los poros, en composiciones antiacné, repelentes, composiciones para afeitar, composiciones para el cuidado después de afeitar y antes de afeitar, composiciones para el cuidado después del sol, composiciones eliminadoras de vello. Colorantes para el cabello, composiciones para la higiene intima, composiciones para el cuidado de los pies y en el cuidado de los bebés.
Las composiciones para el cuidado de la piel de acuerdo con la invención son, en particular, cremas para la piel W/O o O/W, cremas de día y cremas de noche, cremas para los ojos, cremas para la cara, cremas antiarrugas, cremas filtros solares, cremas humectantes, cremas blanqueadoras, cremas autobronceadoras, cremas de vitaminas, lociones para la piel, lociones para el cuidado y lociones humectantes.
Las composiciones cosméticas y dermatológicas para la piel de acuerdo con la invención también pueden contener un ingrediente activo que descompone los radicales libres como protección contra procesos oxidantes y procesos de enve ecimiento asociados o el daño a la piel y/o cabello, además de la molécula efectora de unión a queratina de acuerdo con la invención y/o producida de acuerdo con el método inventivo.
Estos ingredientes activos preferentemente son sustancias descritas en las solicitudes de Patente WO/0207698 y WO/03059312, al contenido de las cuales se hace referencia expresamente por este medio, preferentemente los compuestos que contienen boro descritos en la presente, los cuales pueden reducir los peróxidos o hidroperóxidos para dar los alcoholes correspondientes sin la formación, de estos subsiguientes de radicales libres. Además, las aminas con impedimento esférico de acuerdo con la fórmula general 3 pueden utilizarse para este propósito.
Fórmula 3 z donde el radical Z tiene el siguiente significado: H, grupo alquilo de C1-C22/ preferentemente grupo alquilo de Ci-Ci2 , como puede ser metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, ter-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, ter-pentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo, decilo, undecilo, dodecilo, grupo alcoxi de C1 -C22 preferentemente grupo alcoxi de C1 -C12 , como puede ser alcoxi metilo, alcoxietilo, alcoxipropilo, alcoxiisopropilo, alcoxibutilo, alcoxiisobutilo, alcoxisecbutilo, alcoxiter-butilo, alcoxipentilo, alcoxiisopentilo, alcoxineopentilo, alcoxiterpentilo, alcoxihexilo, alcoxiheptilo, alcoxioctilo, alcoxinonilo, alcoxidecilo, alcoxiundecilo, alcoxidodecilo, grupo arilo de C6-C10 , como puede ser fenilo y naftilo, donde el radical fenilo puede estar sustituido por radicales alquilo de C 1-C4, grupo O-arilo de C6 a Cío, el cual puede estar sustituido por un grupo alquilo de C 1 -C22 o alcoxi de C1 -C22 Í preferentemente por un grupo alquilo de C 1 -C12 o alcoxi de C 1 - C12 como esta descrito antes, y los radicales R1 a R6, independientes entre si, tienen el siguiente significado: H, OH, O, grupo alquilo de Ci~C22 r preferentemente grupo alquilo de C -C 12 , como puede ser metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, ter-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, ter-pentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo, decilo, undecilo, dodecilo, grupo alcoxi de Ci-C22 f preferentemente grupo alcoxilo de C1 -C 12 , como puede ser alcoximetilo, alcoxietilo, alcoxipropilo, alcoxiisopropilo, alcoxibutilo, alcoxiisobutilo, alcoxisec-butilo, alcoxiter-butilo, alcoxipentilo, alcoxiisopentilo, alcoxineopentilo, alcoxiter-pentilo, alcoxiexilo, alcoxiheptilo, alcoxioctilo, alcoxinonilo, alcoxidecilo, alcoxiundecilo, alcoxidodecilo, grupo arilo de C6 a Cío , como puede ser fenilo y naftilo, donde el radical fenilo puede ser sustituido por radicales alquilo de C1-C4, grupo O-arilo de C6-C10 , el cual puede estar sustituido por un grupo alquilo de C 1 -C22 o alcoxilo de C1 -C22 preferentemente por un grupo alquilo de C 1 -C12 o alcoxilo de C 1 -C 12 , como ya se describió.
Se da preferencia particular al uso de aminas con impedimento estérico 3-dodecil-N- (2, 2, 6, 6-tetrametil-4-piperidinil) succinimida, 3-dodecil-N- (1,2,2,6, 6-pentametil-4-piperidinil ) succinimida, 3-octil-N- (2,2,6, 6-tetrametil-4-piperidinil) succinimida, 3-octil-N- (1,2,2,6, 6-pentametil-4-piperidinil) succinimida, 3-octenil-N- (2, 2, 6, 6-tetrametil-4-piperidinil) succinimida, 3-octenil-N- (1,2,2,6, 6-pentametil-4-piperidinil) succinimida y/o Uvinul® 5050H, en una cantidad desde 0.001 hasta 1% en peso (% en peso), preferentemente 0.01 a 0.1% en peso, 0.1 a 1% en peso, con base en el peso total de la composición.
Además de los compuestos antes mencionados de acuerdo con la invención y los portadores apropiados, las preparaciones cosméticas para la piel también pueden contener otros ingredientes activos y auxiliares acostumbrados en los cosméticos para la piel, como ya se describió. Estos incluyen, preferentemente, emulsificadores , preservadores , aceites esenciales, ingredientes activos cosméticos como fitantriol, vitamina A, E y C, retinol, bisabolol, pantenol, agentes fotoprotectores , blanqueadores, colorantes, agentes tintes, agentes bronceadores, colágeno, hidrolizados de proteínas, estabilizadores, reguladores de pH, colorantes, sales, espesantes, formadores de gel, reguladores de la consistencia, siliconas, humectantes, agentes reengrasantes y/u otros aditivos acostumbrados.
Los componentes aceite y grasa preferidos de las composiciones cosméticas y dermocosméticas para la piel son los aceites minerales y sintéticos antes mencionados como pueden ser, por ejemplo, parafinas, aceites de silicona e hidrocarburos alifáticos que tengan más de 8 átomos de carbono, aceites de origen animal y vegetal como pueden ser, por ejemplo, aceite de girasol, aceite de coco, aceite de aguacate, aceite de oliva, lanolina, o ceras, ácidos grasos, ésteres de ácidos grasos como pueden ser, por ejemplo, triglicéridos de ácidos grasos de C6-C30, ásteres cerosos como pueden ser, por ejemplo, aceite de jojoba, alcoholes grasos, vaselina, lanolina hidrogenada y lanolina acetilada, y mezclas de éstos.
Para establecer algunas propiedades, como puede ser, por ejemplo, el mejoramiento de la sensación al tacto, el comportamiento de dispersión, la resistencia al agua y/o la unión de los ingredientes activos y auxiliares como los pigmentos, las preparaciones cosméticas y dermocosméticas para la piel además también contener sustancias acondicionadoras basadas en compuestos de silicona .
Los compuestos de silicona apropiados son, por ejemplo, polialquisiloxanos , poliarilsiloxanos , poliarilalquilsiloxanos, poliéter siloxanos y resinas de silicona .
Las preparaciones cosméticas o dermocosméticas se producen por los métodos acostumbrados conocidos para el trabajador experto en la técnica.
Preferentemente, las composiciones y dermocosméticas están presentes en forma de emulsiones, en particular como emulsiones agua en aceite (W/0) o aceite en agua (O/W) .
Sin embargo, también es posible elegir otros tipos de formulación, por ejemplo geles, aceites, oleogeles, emulsiones múltiples, por ejemplo en forma de emulsiones /O/W o 0/W/O, ungüentos anhidros y bases de ungüento, etcétera. Las formulaciones libres de emulsificador , como pueden ser las hidrodispersiones, hidrogeles o emulsión Pickering (emulsión estabilizada con sólidos) también son modalidades ventajosas.
Las emulsiones se producen por los métodos conocidos. Además de por lo menos una molécula efectora de unión a queratina, las emulsiones normalmente con los constituyentes acostumbrados, como pueden ser alcoholes grasos, ésteres de ácidos grasos y, en particular, triglicéridos de ácidos grasos, ácidos grasos, lanolina y derivados de ésta, aceites o ceras naturales o sintéticos y emulsificadores en presencia de agua. La elección de los aditivos específicos para el tipo de emulsión y la producción de las emulsiones apropiadas se describe, por ejemplo, en Schrader, Grundlagen un Rezepturen der Kosmetika [Fundamentáis and formulations of cosmetics] , Hüthing Buch Verlag, Heidelberg, 2a edición, 1989, 1 tercera parte, ó Umbach, Kosmetik: Entwicklung, Herstellung und Anwendung Kosmetischer Mittel [Cosmetics: development, manufactured and use of cosmetic compositions ] , 2a edición extendida, 1995, Georg Thieme Verlag, ISBN 3 13 712602 9, páginas 122 ff.,a la cual se hace referencia por este medio expresamente.
Una emulsión apropiada en forma de una emulsión W/O, por ejemplo para una crema para la piel etcétera, generalmente contiene una fase acuosa que se emulsifica en una fase oleosa o grasa utilizando un sistema emulsificador apropiado. Para la disposición de la fase acuosa es posible utilizar un complejo de polielectrolitos .
Los componentes grasos preferidos que pueden estar presentes en la fase grasa de las emulsiones son: aceites de hidrocarburos como aceite de parafina, aceite de Purcelina, perhidroescualeno y soluciones de ceras microcristalinas en estos aceites; aceites de origen animal o vegetal, como puede ser aceite de almendras dulces, aceite de aguacate, aceite de calófilo, lanolina y derivados de ésta, aceite de ricino, aceite de ajonjolí, aceite de oliva, aceite de jojoba, aceite de karita, aceite de hoplostetus, aceites minerales cuyo punto de inicio de la destilación a presión atmosférica es a aproximadamente 250°C y cuyo punto final de la destilación es a 410°C, como puede ser, por ejemplo, aceite de vaselina, ásteres de ácidos grasos saturados o insaturados, como miristatos de alquilo, por ejemplo, miristato de isopropilo, miristato de butilo o miristato de cetilo, estearato de hexadecilo, palmitato de etilo o isopropilo, triglicéridos de ácido octanóico o decanóico y ricinoleato de cetilo.
La fase grasa también puede contener aceites de silicona los cuales son solubles en otros aceites, como puede ser dimetilpolisiloxano, metilfenilpolisiloxano y el copolimero glicolsilicona, ácidos grasos y alcoholes grasos.
Además de los compuestos antes descritos de acuerdo con la invención, las composiciones para el cuidado de la piel también pueden contener ceras, como puede ser, por ejemplo, cera de carnauba, cera de candelilla, cera de abejas, cera microcristalina, cera de ozokerita y oleatos, miristatos, linoleatos y estearatos de Ca, g y Al.
Además, una emulsión de acuerdo con la invención puede estar en forma de una emulsión 0/W. una emulsión como esta normalmente contiene una fase oleosa, emulsificadores que estabilizan la fase oleosa en la fase acuosa, y una fase acuosa, la cual normalmente esta presente en forma espesada. Los emulsificadores apropiados preferentemente son emulsificadores 0/W, como puede ser los ésteres de poliglicerol , ésteres de sorbitan o glicéridos parcialmente esterificados .
De acuerdo con otra modalidad preferida, las composiciones de acuerdo con la invención son una composición fotoprotectora, un gel para ducha, una formulación de champú o una preparación para baño, siendo particularmente preferidas las preparaciones fotoprotectoras .
Formulaciones como estas contienen por lo menos una molécula efectora de unión a queratina de acuerdo con la invención y/o producida de acuerdo con el método inventivo, y normalmente agentes tensoactivos aniónicos como agentes tensoactivos base y agentes tensoactivos anfotéricos y/o no iónicos como co-tensoactivos . Otros ingredientes activos apropiados y/o auxiliares generalmente se eligen de lipidos, aceites esenciales, colorantes, ácidos orgánicos, preservadores y antioxidantes, y espesantes/formadores de gel, agentes acondicionadores para la piel y humectantes.
Estas formulaciones contienen ventajosamente 2 a 50% en peso, preferentemente 5 a 40% en peso, con particular preferencia 8 a 30% en peso de agentes tensoactivos , con base en el peso total de la formulación.
En las preparaciones para lavado, ducha y baño es posible utilizar todos los agentes tensoactivos aniónicos, neutros, anfotéricos o catiónicos normalmente utilizados en las composiciones limpiadoras para el cuerpo.
Los agentes tensoactivos aniónicos apropiados son, por ejemplo, alquilsulfatos, alquiléter sulfatos, alquilsulfonatos, alquilarilsulfonatos , alquilsuccinatos, alquilsulfosuccinatos , N-alcoilsarcosinatos , aciltauratos , acilisotionatos, alquilfosfatos, alquiléter fosfatos, alquiléter carboxilatos , alfa-olefin sulfonatos, en particular las sales de metales alcalinos y de metales alcalinotérreos , por ejemplo, las sales de sodio, potasio, magnesio, calcio y amonio trietanolamina . Los alquilétersulfatos, alquiléter fosfatos y alquiléter carboxilatos pueden tener entre 1 y 10 unidades óxido de etileno u óxido de propileno, preferentemente 1 a 3 unidades óxido de etileno en la molécula.
Estos incluyen, por ejemplo, laurilsulfato de sodio, laurilsulfato de amonio, lauriléter sulfato de sodio, lauriléter sulfato de amonio, laurilsarcosinato de sodio, oleilsuccinato de sodio, laurilsulfosuccinato de amonio, dodecilbencensulfonato de sodio, dodecilbencensulfonato de trietanolamina .
Los agentes tensoactivos anfotéricos apropiados son, por ejemplo, alquilbetainas , alquilamidopropilbetainas, alquilsulfobetainas, :. alquilglicinatos, alquilcarboxiglicinatos , alquilanfoacetatos o -propionatos , alquilanfodiacetatos o -dipropionatos .
Por ejemplo, es posible utilizar cocodimetilsulfopropilbetaina, laurilbetaina, cocamidopropanbetaina o cocanfopropionato de sodio.
Los agentes tensoactivos no iónicos apropiados son, por ejemplo, los productos de reacción de alcoholes alifáticos o alquilfenoles que tengan 6 a 20 átomos de carbono en la cadena alquilo, en la cadena alquilo, los cuales pueden ser lineales o ramificados, con óxido de etileno y/u óxido de propileno. La cantidad de óxido de etileno es aproximadamente 6 a 60 mol por mol de alcohol. Además, los óxidos de alquilamina, mono- o dialquilalcanolamidas , ásteres de ácidos grasos de polietilenglicoles , amidas de ácidos grasos etoxilados, alquilpoliglucósidos y éter ésteres de sorbitan son apropiados .
Además, la preparación para lavado, ducha y baño puede contener agentes tensoactivos catiónicos acostumbrados como pueden ser, por ejemplo, compuestos de amonio cuaternario, por ejemplo, cloruro de cetiltrimetilamonio .
Además, las formulaciones de gel para ducha/shampoo pueden contener espesantes como pueden ser, por ejemplo, cloruro de sodio, PEG-55, oleato de propilenglicol , PEG-120 dioleato de metilglucosa y otros, y también preservadores , otros ingredientes activos y auxiliares y agua.
Composiciones para el tratamiento del cabello. De acuerdo con otra modalidad preferida, los dermocosméticos de acuerdo con la invención son composiciones para el tratamiento del cabello.
Preferentemente, las composiciones para el tratamiento del cabello de acuerdo con la invención están en forma de una espuma fijadora, mousse para el cabello, gel para el cabello, shampoo, rocío para el cabello, espuma para el cabello, fluido extremo, neutralizador para ondas permanentes, colorante y decolorante para el cabello o tratamiento de aceite caliente. Dependiendo del campo de uso, las preparaciones cosméticas para el cabello pueden ser aplicadas como rocío (aerosol) , espuma (aerosol) , gel, rocío, en gel, crema, loción o cera. Los rocíos para el cabello incluyen en este caso rocíos en aerosol y también rocíos con bomba sin gas propelente. Las espumas para el cabello incluyen espumas en aerosol y también espumas de bomba sin gas propelente. Los rocíos para el cabello y las espumas para el cabello preferentemente incluyen principal o exclusivamente componentes solubles en agua o dispersables en agua. Si los compuestos que se utilizan en los rocíos para el cabello y espumas para el cabello de acuerdo con la invención son dispersables en agua, estos pueden ser aplicados en forma de microdispersiones acuosa con diámetros de partícula normalmente de 1 a 350 nm, preferentemente 1 a 250 nm. El contenido de sólidos de estas preparaciones en este caso normalmente es en un intervalo desde aproximadamente 0.5 a 20% en peso. Estas microdispersiones normalmente no requieren emulsificadores ni agentes tensoactivos para su estabilización.
Otros constituyentes debe entenderse con el significado de aditivos acostumbrados en cosméticos, por ejemplo propelentes, antiespumantes , compuestos activos de interfaz, es decir, agentes tensoactivos , emulsificadores , formadores de espuma y solubilizadores . Los compuestos activos de interfaz que se utilizan pueden ser aniónicos, catiónicos, anfotéricos o neutros. Otros constituyentes acostumbrados también pueden ser, por ejemplo, preservadores , aceites esenciales, opacificadores , ingredientes activos, filtros UV, sustancias para el cuidado como pantenol, colágeno, vitaminas, hidrolizados de proteínas, ácidos a- y ß-hidroxicarboxílieos , estabilizadores, reguladores del pH, colorantes, reguladores de la viscosidad, formadores de gel, sales, humectantes, agentes reengrasantes , agentes acomplej antes y otros aditivos acostumbrados .
También se incluyen en este caso todos los polímeros estilizadores y acondicionadores conocidos en cosmética los cuales pueden utilizarse en combinación con las moléculas efectoras de unión a queratina de acuerdo con la invención si han de determinarse propiedades muy específicas .
Los polímeros cosméticos para el cabello tradicionales, apropiados son, por ejemplo, los polímeros catiónicos, aniónicos, neutros, no iónicos y anfotéricos antes mencionados, a los cuales se hace referencia en la presente.
Para establecer ciertas propiedades, las preparaciones pueden contener también sustancias acondicionadoras basadas en compuestos de silicona. Los compuestos de silicona apropiados son, por ejemplo, polialquilsiloxanos, poliarilsiloxanos, poliarilalquilsiloxanos, poliéter siloxanos, resinas de silicona o copolioles de dimeticona (CTFA) y compuestos de silicona amino funcionales como puede ser amodimeticonas (CTFA) .
Los propelentes son los propelentes que se utilizan normalmente para rocíos para el cabello o espumas en aerosol. Se da preferencia a las mezclas de propano/butano, pentano, dimetiléter, 1 , 1-difluoroetano (HFC-152 a) , dióxido de carbono, nitrógeno o aire comprimido .
Los emulsificadores que pueden utilizarse son todos los emulsificadores normalmente utilizados en espumas para el cabello. Los emulsificadores apropiados pueden ser no iónicos, catiónicos o aniónicos o anfotéricos. Los ejemplos de los emulsificadores no iónicos (nomenclatura y NCI) son laureths, por ejemplo laureth-4, ceteth, por ejemplo, ceteth-1, polietilenglicolcetiléter , ceteareths, por ejemplo, ceteareth-25, glicéridos de ácidos grasos de poliglicol, lecitina hidroxilada, ésteres dactilicos de ácidos grasos, alquilpoliglicósidos .
Los ejemplos de los emulsificadores catiónicos son dihidrógeno fosfato de cetildimetil-2-hidroxietilamonio, cloruro de cetiltrimonio, bromuro de cetiltrimonio, metilsulfato de cocotrimonio, quaternium-1 (INCI).
Los emulsificadores aniónicos pueden elegirse, por ejemplo, del grupo de alquilsulfatos, alquiléter sulfatos, alquilsulfonatos, alquilarilsulfonatos , alquilsuccinatos, alquilsulfosuccinatos, N-alcoilsarcocinatos, aciltauratos, acilicetionatos, alquilfosfatos, alquiléter fosfatos, alquiléter carboxilatos, alfa-olefinsulfonatos , en particular las sales de metales alcalinos y de metales alcalino férreos, por ejemplo, las sales de sodio, potasio, magnesio, calcio y amonio y trietanolamina . Los alquiléter sulfatos, alquiléter fosfatos y alquiléter carboxilatos pueden tener entre 1 y 10 unidades óxido de etileno u óxido de propileno, preferentemente 1 a 3 unidades de óxido de etileno, en la molécula.
Los formadores de gel que pueden utilizarse son todos los formadores de gel acostumbrados en cosméticos. Estos incluyen ácido poliacrilico ligeramente reticulado, por ejemplo, carbómero (INCI), derivados de celulosa, por ejemplo hidroxipropilcelulosa, hidroxietilcelulosa , celulosas catiónicamente modificadas, polisacáridos, por ejemplo goma de xantano, triglicérido caprilico/cáprico, copolimeros de acrilato de sodio, poliquaternium-32 (y) parafinum liquidum (INCI), copolimeros de acrilato de sodio (y) parafinum liquidum (y) PPG-1 trideceth-6, copolimeros de cloruro de acrilamido propiltrimonio/acrilamida, steareth-10 aliléter, copolimeros de acrilato, poliquaternium-37 (y) parafinum liquidum (y) PPG-1 trideceth-6, poliquaternium-37 (y) dicaprato dicaprilato de propilenglicol (y) PPG-1 trideceth-6, poliquaternium-7 , poliquaternium- 4.
En las formulaciones de champú, es posible utilizar todos loa agentes tensoactivos aniónicos, neutros, anfotéricos o catiónicos normalmente utilizados en shampoos .
Los agentes tensoactivos aniónicos apropiados son, por ejemplo, alquilsulfatos , alquiléter sulfatos, alquilsulfonatos , alquilarilsulfonatos, alquilsuccinatos , alquilsulfosuccinatos , N-alcorilsarcosinatos , acil tauratos, acilisotionatos , alquilfosfatos , alquiléter fosfatos, alquiléter carboxilatos , alfa-olefinsulfonatos , en particular las sales de metales alcalinos y de metales alcalinotérreos , por ejemplo, las sales de sodio, potasio, magnesio, calcio, y amonio y trietanolamina . Los alquiléter sulfatos, alquiléter sulfatos y alquiléter carboxilatos pueden tener entre 1 y 10 unidades de óxido de etileno u óxido de propileno, preferentemente 1 a 3 unidades óxido de etileno, en la molécula.
Adecuados son, por ejemplo, laurilsulfato de sodio, laurilsulfato de amonio, laurilétersulfato de sodio, lauriléter sulfato de amonio, laurilsarcocinato de sodio, oleilsuccinato de sodio, laurilsulfosuccinató de amonio, dodecilbencensulfonato de sodio, dodecilbencensulfonato de trietanolamina.
Los agentes tensoactivos anfotéricos apropiados son, por ejemplo, alquilbetainas, alquilamidopropilbetainas, alquilsulfobetainas , alquilglicinatos, alquilcarboxiglicinatos , alquilanfoacetatos o -propionatos, alquilanfodiacetatos o-dipropionatos .
Por ej emplo, es posible utilizar cocodimetilsulfopropilbetaina , laurilbetaina, cocamidopropilbetaina o cocanfopropionato de sodio.
Los agentes tensoactivos no iónicos apropiados son, por ejemplo, los productos de reacción de alcoholes alifáticos o alquilfenoles que tengan 6 a 20 átomos de carbono en la cadena alquilo, los cuales pueden ser lineales o ramificados, con óxido de etileno y/u óxido de propileno. La cantidad de óxido de alquileno es aproximadamente 6 a 60 mol por mol de alcohol. Además, son apropiados óxidos de alquilamina, mono- o dialquilalcanolamidas, ésteres de ácidos grasos de polietilenglicoles , alquilpoliglucósidos o éter ésteres de sorbitan.
Las formulaciones de shampoo pueden contener los agentes tensoactivos catiónicos acostumbrados como puede ser, por ejemplo, los compuestos de amonio cuaternario, por ejemplo cloruro de cetiltrimetilamonio .
En las formulaciones de shampoo, para obtener ciertos efectos, los agentes acondicionadores acostumbrados pueden utilizarse en combinación con las moléculas efectoras de unión a queratina de acuerdo con la invención.
Estos incluyen, por ejemplo, los polímeros catiónicos antes mencionados con el nombre INCI policuaternium, en particular copolímeros de vinilpirrolidona/sales de N-vinilimidazolio (Luviquat FC, Luviquat MS, Luviquat Care) , copolímeros de N-vinilpirrolidona/metacrilato de dimetilaminoetilo, cuaternizado con dieltil sulfato (Luviquat D PQ 11) , copolímeros de N-vinilcaprolactama/N-vinilpirrolidona/sal de N-vinilimidazolio (Luviquat D Hold) , derivados de celulosa catiónicos (polyquaternium-4 y -10), copolímeros de acrilamida (polyquaternium-7 ) . Además, es posible utilizar hidrolizados de proteínas, y también sustancias acondicionadoras basadas en compuestos de silicona, por ejemplo, polialquilsiloxanos, poliarilsiloxanos, poliarilalquilsiloxanos , poliétersiloxanos o resinas de silicona. Otros compuestos de silicona apropiados son los dimeticona copolioles (CTFA) y compuestos de silicona amino funcionales, como puede ser amodimeticonas (CTFA) . Además, es posible utilizar derivados de guar catiónicos, como puede ser cloruro de hidroxipropiltrimonio guar (INCI).
De acuerdo con otra modalidad, esta preparación cosmética para el cabello o cosmética para la piel sirve para el cuidado y la protección de la piel o el cabello y esta en forma de una emulsión, una dispersión, una suspensión, una preparación tensoactiva acuosa, una leche, una loción, una crema, un bálsamo, un ungüento, un gel, un granulado, un polvo, una preparación en barra, como puede ser, por ejemplo, un lápiz de labios, una espuma, un aerosol o un rocío. Tales formulaciones son muy convenientes para preparaciones tópicas. Las emulsiones apropiadas son emulsiones aceite en agua y emulsiones agua en aceite o microemulsiones .
Como regla general, la preparación cosmética para el cabello o cosmética para la piel se utiliza para aplicación a la piel (tópica) o al cabello. Las preparaciones tópicas se entienden en este caso con el significado de aquellas preparaciones que son apropiadas para aplicar los ingredientes activos a la piel en una distribución final, y preferentemente en una forma que pueda ser absorbida por la piel. Adecuado para este propósito son, por ejemplo, las soluciones acuosas y acuosas-alcohólicas, rocíos, espumas, aerosoles en espumas, aerosoles en espuma, ungüentos, geles, acuosos, emulsiones del tipo O/W o W/O, microemulsiones o preparaciones cosméticas en barra.
De acuerdo con una modalidad preferida de la composición cosmética de acuerdo con la invención, la composición contiene un portador. Un portador preferido es agua, un gas, un liquido basado en agua, un aceite, un gel, una emulsión o microemulsión, una dispersión o una mezcla de estas. Los portadores específicos presentan buena compatibilidad con la piel. De ventaja particular para las preparaciones tópicas son los geles acuosos, emulsiones o microemulsiones .
Los emulsificadores que pueden utilizarse son agentes tensoactivos no ionógenos, agentes tensoactivos zwiteriónicos , agentes tensoactivos anfolíticos o emulsificadores aniónicos. Los emulsificadores pueden estar presentes en la composición de acuerdo con la invención en cantidades desde 0.1 a 10% en peso, preferentemente 1 a 5% en peso, con base en la composición.
Los agentes tensoactivos no ionógenos que se utilizan pueden, por ejemplo, ser un agente tensoactivo de por lo menos uno de los siguientes grupos: Productos de adición desde 2 hasta 30 moles de óxido de etileno y/o 0 a 5 moles de óxido de propileno sobre alcoholes grasos lineales que tengan 8 a 22 átomos de carbono, sobre ácidos grasos que tengan 12 a 22 átomos de carbono y sobre alquilfenoles que tengan 8 a 15 átomos de carbono en el grupo alquilo.
Mono- y diésteres de ácidos grasos de C12 18 de los productos de adición desde 1 hasta 30 moles de óxido de etileno sobre glicerol; mono- y diésteres de glicerol y mono- y diésteres de sorbitan de ácidos grasos saturados e insaturados que tengan 6 a 22 átomos de carbono y los productos de adición de óxido de etileno de éstos; mono-y oligoglucósidos de alquilo que tengan 8 a 22 átomos de carbono en el radical alquilo y análogos etoxilados de estos; productos de la adición desde 15 hasta 60 moles de óxido de etileno en aceite de ricino y/o aceite de ricino hidrogenado; poliol y, en particular poliglicerolésteres , como puede ser, por ejemplo, poliricinoleato de poliglicerol , poli-12-hidroxiestearato de poliglicerol o dimerato de poliglicerol. Del mismo modo son convenientes las mezclas de los compuestos de dos o más de estas clases de sustancias; Productos de la adición desde 2 hasta 15 moles de óxido de etileno sobre aceite de ricino y/o aceite de ricino hidrogenado.
Esteres parciales basados en ácidos grasos de C6/22 insaturados o saturados, lineales, ramificados, ácido ricinoléico y ácido 12-hidroxiesteárico y glicerol, poliglicerol , pentaeritritol, dipentaeritritol, alcoholes de azúcar (por ejemplo sorbitol), alquilglucósidos (por ejemplo metilglucósido, butilglucósido, laurilglucósido) y poliglucósidos (por ejemplo celulosa) ; fosfatos de mono-, di- y trialquilo y fosfatos de mono-, di- y/o tri-PEG alquilo y sales de éstos; alcoholes de ceras de lana; copolimeros de polisiloxano-polialquiléter y derivados correspondientes; ésteres mixtos de pentaeritritol, ácidos grasos, ácido cítrico y alcohol graso como en la Patente Alemana 1165574 y/o ésteres mixtos de ácidos grasos que tengan 6 a 22 átomos de carbono, metilglucosa y polioles, preferentemente glicerol o poliglicerol, y polialquilenglicoles .
Además, es posible utilizar agentes tensoactivos zwiteriónicos como emulsificadores . Los agentes tensoactivos zwiteriónicos es el término que se utiliza para referirse a aquellos compuestos activos de superficie que llevan por lo menos un grupo amonio cuaternario y por lo menos un grupo carboxilato o un grupo sulfonato en la molécula. Los agentes tensoactivos zwiteriónicos apropiados particularmente son los denominados betainas, como puede ser los glicinatos de N-alquil-N, -dimetilamonio, por ejemplo glicinato de cocoalquildimetilamonio, glicinatos de N-acilaminopropil-N, N-dimetilamonio, por ejemplo, glicinato de cocoacilaminopropildietilamonio, y 2-alquil-3-carboxilmetil-3-hidroxietilimidazolinas que tengan en cada caso 8 a 18 átomos de carbono en el grupo alquilo o acilo, y carboximetilglicinato de cocoacilaminoetilhidroxietilo . Se da preferencia particular al derivado amida de ácidos grasos conocido con el nombre CTFA cocamidopropilbetaina .
Del mismo modo los emulsificadores apropiados son agentes tensoactivos anfoliticos. Los agentes tensoactivos anfoliticos se entiende como aquellos compuestos activos de superficie que, además, del grupo alquilo o acilo de C8/i8 en la molécula, contienen por lo menos un grupo amino libre y por lo menos un grupo -COOH-o -SO3H, y son capaces de formar sales internas. Los ejemplos de los agentes tensoactivos anfoliticos apropiados son N-alquilglicinas , ácidos N- alquilpropiónicos , ácidos N-alquilaminobutíricos , ácidos N-alquilimidipropiónicos , N-hidroxietil-N-alquilamidopropil glicinas, N-alquiltaurinas , N-alquilsarcosinas , ácidos 2-alquilaminopropiónicos y ácidos alquilamino acéticos que tengan en cada caso aproximadamente 8 a 18 átomos de carbono en el grupo alquilo .
Los agentes tensoactivos anfoliticos particularmente preferidos son N-cocoalquilaminopropionato, cocoacilaminoetilaminopropionato y acilsarcosina de Ci2/i8-Además de los emulsificadores anfoliticos, también son apropiados los emulsificadores cuaternarios, siendo particularmente preferidos los del tipo éster quat, preferentemente las sales éster trietanolamina del ácido digraso metilcuaternizado . Además, los emulsificadores aniónicos que pueden ser utilizados son alquiléter sulfatos, monoglicérido sulfatos, sulfatos de ácidos grasos, sulfosuccinatos y/o éter ácidos carboxilicos .
Los cuerpos oleosos apropiados son los alcoholes de Guerbet basados en alcoholes grasos que tengan 6 a 18, preferentemente 8 a 10, átomos de carbono, ésteres de ácidos grasos de C6/C22 lineales con alcoholes grasos de C6/C22 lineales, ésteres de ácidos carboxilicos de C6/C13 ramificados con alcoholes grasos de C6/C22 lineales, ásteres de ácidos grasos de C6/C22 lineales con alcoholes ramificados, en particular 2-etilhexanol , ásteres de ácidos grasos lineales y/o ramificados, con alcoholes polihidricos (como puede ser, por ejemplo, propilenglicol , dimerdiol o trimertiol) y/o alcoholes de Guerbet, triglicéridos basados en ácidos grasos de C6/C10, mezclas mono-/di-, triglicéridos líquidos basados en ácidos grasos de C6/Ci8, ésteres de alcoholes grasos de C6/C22 y/o alcoholes de Guerbet con ácidos carboxílicos aromáticos, en particular ácido benzoico, ésteres de ácidos dicarboxílieos de C2/C12 con alcoholes lineales o ramificados que tengan 1 a 22 átomos de carbono o polioles que tengan 2 a 10 átomos de carbono y 2 a 6 grupos hidroxilo, aceites vegetales, alcoholes primarios ramificados, ciclohexanos sustituidos, carbonatos de alcoholes grasos de C6/C22 lineales, carbonatos de Guerbet, ésteres de ácido benzoico con alcoholes de C6/C22 lineales y/o ramificados (por ejemplo Finsol® TN) , dialquiléteres , productos para la apertura de anillo de ésteres de ácidos grasos epoxidados con polioles, aceites de silicona y/o hidrocarburos alifáticos o nafténicos. Los cuerpos oleosos que pueden utilizarse también son compuestos de silicona, por ejemplo dimetilpolisiloxanos , metilfenilpolisiloxanos, siliconas cíclicas y compuestos de silicona modificados con amino, ácido graso, alcohol, poliéter, epoxi, flúor, alquilo y/o glucósido, los cuales pueden estar en forma de un líquido o en forma de una resina a temperatura ambiente. Los cuerpos oleosos pueden estar presentes en las composiciones de acuerdo con la invención en cantidades desde 1 hasta 90% en peso, preferentemente 5 a 80% en peso, y en particular 10 a 50% en peso, con base en la composición.
La lista de los ingredientes especificados que pueden utilizarse junto con las moléculas efectoras de unión a queratina de acuerdo con la invención y/o producidas por el método inventivo, desde luego, no debe ser considerada como exhaustiva ni limitativa. Los ingredientes pueden utilizarse en forma individual o en cualquier combinación entre sí.
La presente invención además proporciona un método de aplicación de los ingredientes dermocosméticos activos a la piel, cabello y/o uñas de las manos o uñas de los pies, donde: 1) el ingrediente activo dermocosmético se acopla a un polipéptido de unión a queratina, y m) la molécula efectora de unión a queratina de acuerdo con (k) se aplica como constituyente de una preparación dermocosmética a la piel, cabello y/o uñas de las manos o uñas de los pies .
Además, la invención propone un método de aumentar el tiempo de permanencia de un ingrediente activo dermocosmético sobre la piel, cabello y/o uñas de las manos o uñas de los pies, en donde, n) el ingrediente activo dermocosmético se acopla a un polipéptido de unión a queratina, y o) la molécula efectora de unión a queratina de acuerdo con (m) se aplica como constituyente de un preparado dermocosmético a la piel, cabello y/o uñas de las manos o uñas de los pies, p) y el ingrediente activo se une indirectamente a la piel, cabello y/o uñas de las manos o uñas de los pies, mediado por el dominio de unión a queratina , donde el tiempo de permanencia del ingrediente activo unido al polipéptido de unión a queratina comparado con el ingrediente activo libre (no unido al polipéptido de unión a queratina) bajo condiciones de otro modo equivalentes se aumenta por lo menos 20% o 30%, preferentemente por lo menos 40%, 50%, ó 60%, particularmente de preferencia por lo menos 75%, 100% o 125%, muy particularmente de preferencia por lo menos 150%, 200% o 250%, más preferentemente 500%, 750%, ó 1000%.
La invención además proporciona compuestos de las Fórmulas 2, 4 y 5. donde "n" es un entero entre 0 y 20, preferentemente entre 3 y 15, particularmente de preferencia entre 3 y 10, muy particularmente de preferencia entre 3 y 8, más preferentemente 5. Se da particular preferencia en este caso a los compuestos de la fórmula 2.
En otra modal idad de la presente invención , me zclas de los compuestos especi ficados pueden uti l i zarse en el método de acuerdo con la invención . En este caso , también es posible ut il i zar los análogos más altamente esterif icados en los grupos hidroxi restantes , y/o mezclas de éstos .
Secuencias ID SEC Tipo de No. : secuencia Descripción de la secuencia 1 Ácido nucleico Homo sapiens Desmoplakin_Accession No. N _004415 2 Proteina Homo sapiens Desmoplakin_Accession No. NM_004415 3 Ácido nucleico Homo sapiens Desmoplakin_Accession No. NM_004415 domain B 4 Proteina Homo sapiens Desmoplakin_Accession No. NM_004415 domain B 5 Ácido nucleico Homo sapiens Desmoplakin_Accession No. NM_004415 domain B-] 6 Proteina Homo sapiens Desmoplakin_Accession No. NM_004415 domain B-] 7 Ácido nucleico Homo sapiens Desmoplakin_Accession No. NM_004415 domain B-¿ 8 Proteina Homo sapiens Desmoplakin_Accession No. NM_004415 domain B-í 9 Ácido nucleico Homo sapiens Desmoplakin_Accession No. NM_004415 domain C 10 Proteina Homo sapiens Desmoplakin_Accession No . NM_004415 domain C 11 Ácido nucleico Homo sapiens Desmoplakin_Accession No. NM_004415 domain C-] 12 Proteina Homo sapiens Desmoplakin_Accession No. NM_00 15 domain C-] 13 Ácido nucleico Homo sapiens Desmoplakin_Accession No . NM_004415 domain C-. 14 Proteina Homo sapiens Desmoplakin_Accession No. NM_004415 domain C-. 15 Ácido nucleico H. sapiens_Filaggrin_Accession No. CAI19595 16 Proteina H. sapiens_Filaggrin_Accession No. CAI19596 Homo sapiens plakophilin 1 ACCESSION NM_001005337, 17 Ácido nucleico transcript variant la Homo sapiens plakophilin 1 ACCESSION NM_001005337, Proteina transcript variant la Homo sapiens plakophilin 1 ACCESSION NM_000299, Ácido nucleico transcript variant Ib Homo sapiens plakophilin 1 ACCESSION NM_000299, Proteina transcript variant Ib Mus musculus plakophilin 2 ACCESSION NM_026163 Ácido nucleico NM_027894 Mus musculus plakophilin 2 ACCESSION NM_026163 Proteina NM_027895 Ácido nucleico Mus musculus plakophilin 1 ACCESSION NM_019645 Proteina Mus musculus plakophilin 1 ACCESSION NM_019646 Bos taurus plakophilin 1 partial mRNA, ACCESSION Ácido nucleico XM_868348 Bos taurus plakophilin 1 partial mRNA, ACCESSION Proteina XM_8683 9 Canis familiaris similar to plakophilin 1 isoform la, Ácido nucleico ACCESSION XM_851528 Canis familiaris similar to plakophilin 1 isoform la, Proteina ACCESSION XM_851529 Danio rerio similar to Plakophilin 1 ACCESSION Ácido nucleico XM_695832 Danio rerio similar to Plakophilin 1 ACCESSION Proteina XM_695833 Rattus norvegicus similar to plakophilin 1, ACCESSION Ácido nucleico XM_222666 Rattus norvegicus similar to plakophilin 1, ACCESSION Proteina XM_222667 Pan troglodytes similar to Plakophilin 1, ACCESSION Ácido nucleico XM_514091 Pan troglodytes similar to Plakophilin 1, ACCESSION Proteina XM 514092 Gallus gallus similar to plakophilin 1, ACCESSION Ácido nucleico XM_419240 Gallus gallus similar to plakophilin 1, ACCESSION Proteina X J19241 Xenopus laevis similar to plakophilin 4, ACCESSION Ácido nucleico BI390496 Xenopus laevis similar to plakophilin 4, ACCESSION Proteina BI390497 Homo sapiens desmoplakin, transcript variant 2, ACCESSION Ácido nucleico NM_001008844 Homo sapiens desmoplakin, transcript variant 2, ACCESSION Proteina NM_001008845 Ácido nucleico Mus musculus desmoplakin, ACCESSION XM_621314 Proteina Mus musculus desmoplakin, ACCESSION XM_621315 Rattus norvegicus similar to desmoplakin isoform II, Ácido nucleico ACCESSION XM_225259 Rattus norvegicus similar to desmoplakin isoform II, Proteina ACCESSION XM_225260 Ácido nucleico Pan troglodytes desmoplakin, ACCESSION XM_518227 Proteina Pan troglodytes desmoplakin, ACCESSION XM_518228 Gallus gallus similar to Desmoplakin, ACCESSION Ácido nucleico XM_418957 Gallus gallus similar to Desmoplakin, ACCESSION Proteina XM_418958 Homo sapiens junction plakoglobin (JUP) , transcript Ácido nucleico variant 2, ACCESSION NM_021991 Homo sapiens junction plakoglobin (JUP) , transcript Proteina variant 2, ACCESSION NM_021992 Mus musculus, plakoglobin; gamma-catenin, ACCESSION Ácido nucleico NMJD10593 Mus musculus, plakoglobin; gamma-catenin, ACCESSION Proteina NM 010594 Rattus norvegicus gamma-catenin (plakoglobin) , ACCESSION Ácido nucleico NM_031047 Rattus norvegicus gamma-catenin (plakoglobin) , ACCESSION Proteina N _0310 8 Danio rerio armadillo Proteina family; plakoglobin, Ácido nucleico ACCESSION NM_131177 Danio rerio armadillo Proteina family; plakoglobin, Proteina ACCESSION NMJL31178 Xenopus tropicalis junction plakoglobin, ACCESSION Ácido nucleico BC064717 Xenopus tropicalis junction plakoglobin, ACCESSION Proteina BC064718 Canis familiaris similar to junction plakoglobin isoform Ácido nucleico 10, ACCESSION XM_856625 Canis familiaris similar to junction plakoglobin isoform Proteina 10, ACCESSION XM_856626 Ácido nucleico Xenopus laevis Jup Proteina, ACCESSION BC094116 Proteina Xenopus laevis Jup Proteina, ACCESSION BC094117 Ácido nucleico Bos taurus junction plakoglobin, ACCESSION NM_001004024 Proteina Bos taurus junction plakoglobin, ACCESSION NM_001004025 Ácido nucleico Sus scrofa plakoglobin, ACCESSION NM_214323 Proteina Sus scrofa plakoglobin, ACCESSION NM_214324 Ácido nucleico Danio rerio junction plakoglobin, ACCESSION BC058305 Proteina Danio rerio junction plakoglobin, ACCESSION BC058306 Saccharomyces cerevisiae, plakoglobin/armadillo/beta-Ácido nucleico catenin, ACCESSION AF005267 Saccharomyces cerevisiae, plakoglobin/armadillo/beta-Proteina catenin, ACCESSION AF005268 Homo sapiens plectin 1, intermedíate filament binding Ácido nucleico protein, ACCESSION NM_201380 Homo sapiens plectin 1, intermedíate filament binding Proteína protein, ACCESSION NM 201381 Mus musculus plectin 1 (Plecl), transcript variant 11, 73 Ácido nucleico mRNA, ACCESSION NM_201394 XM Mus musculus plectin 1 (Plecl), transcript variant 11, 74 Proteina mRNA, ACCESSION NM_201394 XM Bos taurus similar to plectin 1 isoform 1 (LOC510991) , 75 Ácido nucleico ACCESSION XM_588232 Bos taurus similar to plectin 1 isoform 1 (LOC510991) , 76 Proteina ACCESSION XM_588233 Canis familiaris similar to plectin 1 isoform, ACCESSION 77 Ácido nucleico XM_539204 Canis familiaris similar to plectin 1 isoform, ACCESSION 78 Proteina XM_539205 Trypanosoma cruzi, plectin-like protein, ACCESSION 79 Ácido nucleico XM_809849 Trypanosoma cruzi, plectin-like protein, ACCESSION 80 Proteina XM_809850 81 Ácido nucleico Rattus norvegicus plectin, ACCESSION X59601 82 Proteina Rattus norvegicus plectin, ACCESSION X59602 83 Ácido nucleico Cricetulus griseus plectin, ACCESSION AF260753 84 Proteina Cricetulus griseus plectin, ACCESSION AF260754 85 Ácido nucleico Homo sapiens periplakin, ACCESSION NMJ302705 86 Proteina Homo sapiens periplakin, ACCESSION NM_002706 87 Ácido nucleico Mus musculus periplakin, ACCESSION NM_008909 XM_358905 88 Proteina Mus musculus periplakin, ACCESSION NM_008909 XM_358906 89 Ácido nucleico Homo sapiens envoplakin, ACCESSION NM_001988 90 Proteina Homo sapiens envoplakin, ACCESSION NM_001989 91 Ácido nucleico Mus musculus envoplakin, ACCESSION NM_025276 XM_283024 92 Proteina Mus musculus envoplakin, ACCESSION NM_025276 XM_283025 93 Ácido nucleico Bos taurus similar to Envoplakin, ACCESSION XM_587641 94 Proteina Bos taurus similar to Envoplakin, ACCESSION XM_587642 Canis familiaris similar to Envoplakin, ACCESSION 95 Ácido nucleico XM 540443 Canis familiaris similar to Envoplakin, ACCESSION 96 Proteina XM_540444 97 Ácido nucleico Danio rerio similar to Envoplakin, ACCESSION XM_687958 98 Proteina Danio rerio similar to Envoplakin, ACCESSION XM_687959 Rattus norvegicus, similar to envoplakin, db_xref 99 Ácido nucleico GeneID: 303687 Rattus norvegicus, similar to envoplakin, db_xref 100 Proteina GeneID: 303688 Pan troglodytes similar to Envoplakin, ACCESSION 101 Ácido nucleico XM_511692 Pan troglodytes similar to Envoplakin, ACCESSION 102 Proteina XM_511693 103 Ácido nucleico Human bullous pemphigoid antigen, ACCESSION M63618 104 Proteina Human bullous pemphigoid antigen, ACCESSION M63619 Mus musculus bullous pemphigoid antigen 1 (Bpagl), 105 Ácido nucleico ACCESSION AF396877 Mus musculus bullous pemphigoid antigen 1 (Bpagl) , 106 Proteina ACCESSION AF396878 107 Ácido nucleico Mus musculus trichohyalin-like 1, ACCESSION NM_027762 108 Proteina Mus musculus trichohyalin-like 1, ACCESSION NM_027763 Bos taurus similar to trichohyalin-like 1, ACCESSION 109 Ácido nucleico XM_597026 Bos taurus similar to trichohyalin-like 1, ACCESSION 110 Proteina XM_597027 Homo sapiens trichohyalin-like 1, ACCESSION 111 Ácido nucleico NM_001008536 XM_060104 Homo sapiens trichohyalin-like 1, ACCESSION 112 Proteina NM_001008536 XM_060105 Strongylocentrotus purpuratus similar to Trichohyalin, 113 Ácido nucleico ACCESSION XM_793822 Strongylocentrotus purpuratus similar to Trichohyalin, 114 Proteina ACCESSION XM 793823 Trypanosoma cruzi trichohyalin, putative, ACCESSION 115 Ácido nucleico XM_809758 Trypanosoma cruzi trichohyalin, putative, ACCESSION 116 Proteina XM_809759 Giardia lamblia ATCC 50803 trichohyalin, ACCESSION 117 Ácido nucleico XM_765825 Giardia lamblia ATCC 50803 trichohyalin, ACCESSION 118 Proteina XM_765826 Aspergillus fumigatus Af293, trichohyalin, ACCESSION 119 Ácido· nucleico XM_7 8643 Aspergillus fumigatus Af293, trichohyalin, ACCESSION 120 Proteina XM_748644 121 Ácido nucleico O. cuniculus trichohyalin, ACCESSION Z19092 122 Proteina O. cuniculus trichohyalin, ACCESSION Z19093 Pan troglodytes similar to Trichohyalin, ACCESSION 123 Ácido nucleico XM_526770 Pan troglodytes similar to Trichohyalin, ACCESSION 124 Proteina XM_526771 125 Ácido nucleico Human trichohyalin (TRHY) , ACCESSION L09190 126 Proteina Human trichohyalin (TRHY) , ACCESSION L09191 Mus musculus small proline-rich protein 3, ACCESSION 127 Ácido nucleico NM_011478 Mus musculus small proline-rich protein 3, ACCESSION 128 Proteina NM_011479 Homo sapiens small proline-rich protein 2B (SPRR2B) , 129 Ácido nucleico ACCESSION NM_001017418 Homo sapiens small proline-rich protein 2B (SPRR2B) , 130 Proteina ACCESSION NM_001017419 Mus musculus hair follicle protein AHF, ACCESSION 131 Ácido nucleico XMJ85271 Mus musculus hair follicle protein AHF, ACCESSION 132 Proteina XM 485272 Homo sapiens epiplakin 1 (EPPK1) , ACCESSION NM_031308 133 Ácido nucleico XM_372063 Homo sapiens epiplakin 1 (EPPK1) , ACCESSION NM_031308 134 Proteina XM_372064 135 Ácido nucleico Mus musculus epiplakin 1, ACCESSION NM_144848 NM_173025 136 Proteina Mus musculus epiplakin 1, ACCESSION NM_144848 NM_173026 Mus musculus structural protein FBF1, ACCESSION 137 Ácido nucleico AF241249 Mus musculus structural protein FBF1, ACCESSION 138 Proteina AF241250 Streptococcus mutans spaP gene for antigen I/II, 139 Ácido nucleico ACCESSION X17390 Streptococcus mutans spaP gene for antigen I/II, 140 Proteina ACCESSION X17391 141 Ácido nucleico Sequence of the PCR primer Bag 43 142 Ácido nucleico Sequence of the PCR primer Bag 44 143 Ácido nucleico Sequence of the PCR primer Bag 53 144 Ácido nucleico Sequence of the PCR primer Bag 51 DNA fragment which has been amplified by means of the PCR primer Libl48 (SEQ ID No.: 147) and Libl49 (SEQ ID No.: 145 Ácido nucleico 148) Translation product of the nucleic acid molecule SEQ ID 146 Proteina No.: 145 147 Ácido nucleico Sequence of the PCR primer Libl48 148 Ácido nucleico Sequence of the PCR primer Libl49 DNA fragment which has been amplified by means of the PCR primer Libl49 (ID SEC No.: 148) and Libl50 (ID SEC 149 Ácido nucleico No. :151) . Translation product of the nucleic acid molecule SEQ ID 150 Proteina No.: 149 151 Ácido nucleico Sequence of the PCR primer Libl50 DA fragment which has been amplified by means of the PCR primer Libl51 (SEQ ID No.: 156) and Libl52 (SEQ ID No.: 152 Ácido nucleico 157) Translation product of the nucleic acid molecule SEQ ID 153 Proteina No.: 152 154 Ácido nucleico Sequence of the PCR primer Libl51 155 Ácido nucleico Sequence of the PCR primer Libl52 KBD-B_3_Homo sapiens Desmoplakin_Accession No. NM_004415 156 Proteina domain B-3 KBD-B_4 Homo sapiens Desmoplakin_Accession No. N _004415 157 Proteina domain B-4 KBD-B_5 Homo sapiens Desmoplakin_Accession No. NM_004415 158 Proteína domain B-5 KBD-B_6 Homo sapiens Desmoplakin_Accession No. NM_004415 159 Ácido nucleico domain B-5 KBD-B_6 Homo sapiens Desmoplakin_Accession No. NM_004415 160 Proteína domain B-5 161 Ácido nucleico Homo sapiens trichoplein, BC004285 162 Proteína Homo sapiens trichoplein, BC004285 Homo sapiens Desmoplakin_Accession No. NM_004415 with nucleic acid exchanges at positions around 2715, 8000 and 163 Ácido nucleico 8000 compared to SEQ ID No.: ID 1 Homo sapiens Desmoplakin_Accession No. NM_004415 with amino acid exchanges at positions 905, 2687 and 2688 164 Proteína compared to SEQ ID No.: ID 2 KBD-B_7 Homo sapiens Desmoplakin_Accession No. NM_004415 165 Ácido nucleico domain B-7 BD-B_7 Homo sapiens Desmoplakin_Accession No. NM_004415 166 Proteína domain B-7 KBD-D with N-terminal histidine anchor, H. sapiens 167 Ácido nucleico plakophilin la ACCESSION NM_1005337 168 Proteína KBD-D with N-terminal histidine anchor, H. sapiens plakophilin la ACCESSION NP_001005337 KBD-D amino acids 1-273 with C-terminal histidine anchor, 169 Ácido nucleico H. sapiens plakophilin la ACCESSION NM_001005337 BD-D amino acids 1-273 with C-terminal histidine anchor, 170 Proteina H. sapiens plakophilin la ACCESSION NP_001005337 171 Ácido nucleico Sequence of the PCR primer HRe6 172 Ácido nucleico Sequence of the PCR primer HRe9 173 Ácido nucleico Sequence of the PCR primer HRe7 174 Ácido nucleico Sequence of the PCR primer HRe8 175 Ácido nucleico Sequence of the PCR primer HRe26 176 Ácido nucleico Sequence of the PCR primer HRe27 Ejemplos experimentales Los siguientes ejemplos están descritos para demostrar las modalidades preferidas de la presente invención. Estos ejemplos no deben ser considerados exhaustivos o limitativos del tema de la invención.
En la descripción experimental se utilizan las siguientes abreviaturas: (2-amino-2-metilpropanol) AMP, (grados Celsius) °C, (ácido etilendiaminotetraacético) EDTA, (estabilizador de aminas impedidas) HAS, ( 1 , 1-difluoroetano) HFC 152, (International Nomenclatur of Cosmetic ingredients, Nomenclatura Internacional de Ingredientes Cosméticos) INCI, (mililitros) mL, (minutos) min, (aceite/agua) O/W, 1 (polietilenglicol) PEG-25, (ácido paraaminobenzóico) PABA, (partes por millón) PPM, (quantum satis) es., (vinilpirrolidona) VP, (agua/aceite) W/0, (ingrediente activo) AI, (polivinilpirrolidona) PVP, (dominio de unión a queratina) KBD, (dominio B de unión a queratina de desmoplaquina humana) KBD-B, (dominio C de unión a queratina de desmoplaquina humana) KBD-C, (dominio de unión a queratina de placofilina humana KBD-D.
Ejemplo 1 : Vectores de expresión y cepas de producción Se probaron diversos vectores de expresión para la expresión de los dominios de unión a queratina (KBD) . Para esto, se utilizaron diversos promotores (p. ej . , los promotores constitutivos inducibles por IPTG, inducibles por ramnosa, inducibles por arabinosa, inducibles por metanol, etc.). Del mismo modo, los constructores fueron analizados en los cuales el KBD fue expresado como proteínas de fusión (por ejemplo como fusión con tioredoxina o eGFP o YaaD [B. subtilis, SWISS-PROT: P37527, PDX1] , etc.). En este caso, el KBD-C (dominio de unión a queratina B, ID SEC No.: 4) y el KBD-C (dominio de unión a queratina C, ID SEC No.: 10) descritos, y la combinación de los dos dominios KBD-C fueron expresados utilizando diferentes sistemas de expresión. Los constructores vectores mencionados son no limitativos para reivindicación .
Dado por medio de ejemplo representativo es el mapa vector del vector inducible por IPTG pQE30-KBD-B (Figura 1), de los vectores inducibles por metanol pLib 15 (Figura 2) y pLib 16 (Figura 3), y del vector inducible pLib 19 (Figura 4). El procedimiento para KBD-C también puede ser semejante a las construcciones y expresiones del vector descrito.
Para la expresión del KBD, se utilizaron diversos hospederos de producción como puede ser, por ejemplo, cepas de E. coli (ver el Ejemplo 2, por ejemplo XLIO-Gold [Stratagene] , BL21-Codon Plus [ Stratagene ] , y otros). Sin embargo, también se utilizaron hospederos de producción bacterianos como puede ser, por ejemplo, Bacillus megaterium o Bacillus subtilis. En el caso de la expresión del KBD en B. megaterium, el procedimiento se llevó a cabo del mismo modo que: Brag, H. Malten, M. & Jahn, D: (2005) . Protein and vitamin production in Bacillus Mageterium. In Methods in Biotechnology-Microbial Products and Briotransformations (Barredo, J-L. ed, 205-224) .
Las cepas de producción micóticas utilizadas fueron Pichia pastoris (ver el Ejemplo 3; por ejemplo GS115 y KM 71 [Ambos de Invitrogen] ; y otros) y Aspergillus nidulans (ver el Ejemplo 4; por ejemplo RMSOll [Stringer, MA; Dean, RA, Sewall, TC, Timberlake, WE (1991) Rodletless, a new Aspergillius developemental mutant induced by direct gene activation. Genes Dev 5: 1161-1171] und SRF200 [Karos, M, Fisher, R (1999) Molecular characterization of HymA, an evolutionarily highly conserved and highly expressed protein of Aspergillus nidulans. Mol. Genet Genomics 260: 510-521], y otros sin embargo, también es posible utilizar otros hospederos de producción sicóticos, por ejemplo Aspergillus niger (análogos de expresión de KBD para EP 0635574A1 y/o WO 98/46772) para la expresión de KBD.
Ejemplo 2: Expresión de KBD en cepas de E. coli con promotores inducibles por IPTG, por ejemplo, por ejemplo el plásmido de expresión pQE30-KBD-B Para la expresión se utilizaron diversos hospederos de producción, como puede ser, por ejemplo, diversas cepas de E. coli (por ejemplo XLIO-Gold [Stratagene] , BL21-Codon Plus [Stratagene], y otros) Bacillus megaterium, Bacillus Subtillis, etcétera.
Se describe aquí -por medio de representación como un ejemplo— la clonación y expresión de KBD-B por E. coli, transformado con pQE30-KBD-B: Clonación de pQE30-KBD-B — Se preparó Lambda-MaxiDNA (kit DNA Lambda maxi Quiagen) a partir de un banco de cDNA de queratinocitos humanos (BD Bioscience, Clontech, cDNA de queratinocito humano, prepucio cultivo primario en fase log, vector: gtll) .
Se llevó a cabo la PCR utilizando los siguientes oligonucleótidos : Bag 43 (5' -GGTCAGTTACGTGCAGCTGAAGG-3' ) (ID SEC No.: 141) y Bag 44 ( 5' GCTGAGGCTGCCGGATCG-3' ) (ID SEC No.: 142) 50 i mezcla PCR: lOx búfer PCR Pfu Ultra High Fidelity: 5 pL DNA Lambda (744ng/pL) 1 pL (dil. 1 dNTP's. -Mezcla (lOmM) 1 L Oligo Bag 43 (192ng/pL) 0.5 pL Oligo Bag 44 (181ng/pL) 0.5 L Polimerasa Pfu Ultra High Fidelity 1 pL H20 41 L Programa de temperaturas 30x iente 50°C El producto de la PCR resultante de aproximadamente 1102 pb de tamaño fue cortado de un gel de agarosa y purificado .
— Utilizando el producto de la PCR purificado como modelo, entonces se llevo a cabo una segunda PCR: Oligonucleótidos utilizados: Bag 53: (5'- CGCGCCTCGAGCCACATACTGGTCTGC -3') (ID SEC No.: 143) y Bag 51 (5'- GCTTAGCTGAGGCTGCCGGATCG -3') (ID SEC No.: 144) 50 pL mezcla PCR: búfer PCR TAQ 5 pL Plantilla desde PCR anterior 3.5 pL dNTP's. -Mezcla (lOmM) 1 pL Oligo Bag 53 (345ng/pL) 0.5 pL Oligo Bag 51 (157ng/pL) 0.5 L TAQ Polimer 1 pL H20 39 pL Programa de temperaturas El producto de la PCR resultante de aproximadamente 1073 pb de tamaño fue cortado de un gel de agarosa y purificado y clonado en el siguiente vector: pCR2.1- TOPO (Invitrogen) .
El vector resultante pCR2.1-TOPO+KBD-B (5027 pb) fue luego transformado, amplificado en E. Coli, luego cortado con Xhol y EcoRI) y el fragmento KBD-B resultante fue clonado en pBAD/HisA (Invitrogen; del mismo modo cortado con Xhol y EcoRI) El vector pBAD/HisA+ KBD-B (5171 pb) recién formado de nuevo fue cortado con SacI y Stul y el fragmento KBD-B resultante fue clonado con pQE30 (Quiagen; cortado con SacI y Smal) . El vector de expresión resultante pQE30-KBD-B (4321 pb; ver también figura 1) se utilizó para las siguientes expresión de KBD- B.
El KBD-B (ID SEC No.: 4) expresado por el vector PQE30-KBD-B en E. coli además incluyó, en el N-terminal, los aminoácidos MRGSHHHHHHGSACEL y, en C-terminal, los aminoácidos GVDLQPSLIS (ID SEC No.: 166).
Expresión de KBD-B por pQE30-KBD-B en E. coli — Precultivos fueron inoculados a partir de la placa o cultivo de glicerol con cepas de E. coli Transformadas con pQE30-KBD-B (por ejemplo XLIO-Gold [Stratagene] ) . Dependiendo del tamaño del cultivo principal, la inoculación con medio LB (aproximadamente 1:100) se llevó a cabo en un tubo o un matraz pequeño. — Los antibióticos fueron utilizados de acuerdo con la cepa utilizada (para pQE30-KBD-B ampicilina 100 — La incubación se llevó a cabo a 250 rpm y 37°C. — El cultivo principal fue inoculado a aproximadamente 1:100 con precultivo, cultivo principal: medio LB o medio mínimo apropiado con los antibióticos respectivos. Incubación a 250 rpm y 37°C, — La inducción se llevó a cabo con IPTG 1 mM por encima de una DO (600 nm) de 0.5. — Después de la inducción durante 4 h, las células fueron centrifugadas.
En los fermentadores el procedimiento fue semejante, aunque fue posible llevar a cabo la inducción a unidades de DO mucho mayores y asi aumentar considerablemente el rendimiento de las células y las proteínas.
Ejemplo 3: Expresión intracelular y secretoria de KBD por medio de cepas de Pichia pastoris utilizando promotores inducibles por metanol, por ejemplo, mediante los plásmidos de expresión pLib 15 y pLib 16 (matraz agitador) Para la expresión de KBD, se utilizaron diversas cepas de Pichia pastoris, como puede ser, por ejemplo, GS115 y K 71 (kit Pichia expresión, versión ; Invitrogen Life Technologies) .
Se describe en la presente —por medio de ejemplos representativos- la expresión de KBD-B mediante P. pastoris, transformada por pLib 15 (expresión intracelular, vector ver Figura 2) o pLib 16 (expresión secretora, vector ver Figura 3) .
— Para la construcción de pLib 15, un fragmento de DNA que codifica KBD-B (ID SEC No.: 145) de 948 pb de tamaño, fue amplificado por medio de PCR utilizando los oligonucleótidos Lib 148. (5'- GCTAAGGAATTCACCATGCATCACCATCACCATCACGAGCCACATACTGGTC TGCT-3' (ID SEC No.: 147)) y Lib 149 (5 ' -GCTGGAGAATTCTCAGCTAATTAAGCTTGGCTGCA-3 ' (ID SEC No.: 148)), y el vector pQE30-KBD-B (Ejemplo 2, Figura 1) como modelos. En este caso, los sitios de restricción EcoRI fueron introducidos en ambos extremos de los productos de la PCR.
Para la construcción de pLib 16, un fragmento de DNA que codifica para KBD-B (ID SEC No.: 149), de 942 pb de tamaño, fue amplificado por medio de PCR utilizando los oligonucleótidos Lib 149 (5' GCTGGAGAATTCTCAGCTAATTAAGCTTGGCTGCA-3' (ID SEC No.: 148)) y Lib 150 (5'- GCTAAGGAATTCCATCACCATCACCATCACGAGCCACATÁCTGGTCTGCT-3' (ID SEC No.: 151)) y el vector pQE30-KBD-B (Ejemplo 2, Figura 1), como modelo. En este caso, se introdujeron sitios de restricción EcoRI en ambos extremos de los productos de la PCR.
Se llevó a cabo la PCR en 50 µL de mezclas de reacción las cuales tuvieron la siguiente composición . 1 µL plasmid-DNA pQE30-KBD-B 1 nL dNTP-Mezcla (cada 10 mM; Eppendorf) 5 µ?, 10 x búfer PCR + MgCl2 (Roche) 1 i Libl48 ó Libl50 cebador 5' (corresponde a 50 pmol ) 1 ?? Libl49 cebador 3' (corresponde a 50 pmol) 5 U Pwo polimerasa (Roche) Las reacciones PCR se llevaron a cabo bajo las iguientes condiciones del ciclo: Paso 1: 5 minutos a 95°C (desnaturalización) Paso 2: 45 segundos a 95°C. Paso 3: 45 segundos a 50°C (hibridación) Paso 4: 2 minutos a 72°C (elongación) 30 ciclos de los pasos 2-4 Paso 5: 10 minutos a 72°C (post elongación) Paso 6: 4°C (pausa) El producto de la PCR que fue amplificado con los oligonucleótidos Lib 148/LIb 149 (ID SEC No.: 145) fue digerido con EcoRI y ligado con el vector pPIC3.5 cortado con EcoRI (kits Pichia expresión, versión M, Invitrogen) . La amplificación correcta de KBD-B fue verificada mediante la secuenciación del vector pLib 15 (Figura 2) resultante de la ligación.
El producto de la PCR que fue amplificado con los oligonucleótidos Lib 149/Lib 150 (ID SEC No.: 149) fue digerido con EcoRI y ligado con el vector pPIC9 cortado con EcoRI (kits Pichia expresión, versión M, Invitrogen) . La amplificación correcta de KBD-B fue verificada mediante la secuenciación del vector pLib 16 (Figura 3) resultante de la ligación.
Células electro-competentes y esferoplastos de las cepas P. pastoris fueron transformados con vectores circulares y Stul-linealizados pLib 15 y pLib 16 de acuerdo con las instrucciones del fabricante (Pichia expresión kit, versión M, Invitrogen) . Los transformantes fueron analizados por medio de PCR y Southern Blot utilizando DNA cromosómico. Para el precultivo, los transformantes de P. pastoris que expresan KBD-B fueron inoculados a partir de placa o cultivo de glicerol. Dependiendo del tamaño del cultivo principal, se llevo a cabo la inoculación con medio MGY, BMG o BMGY (Pichia expresión kit, versión M, Invitrogen) (aproximadamente 1:100) en un tubo o un matraz pequeño . El cultivo fue incubado a 250-300 rpm y 30°C hasta DO600 =2-6.
Las células fueron cosechadas con 1500-3000 x g durante 5 min a temperatura ambiente. Para el cultivo principal, el paquete de células cosechado fue tomado a una ??ß?? = 1 en medio mM [sic], BMM o BM Y que contenia metanol (Pichia expresión kit, versión M, Invitrogen) para inducir la expresión. El cultivo principal fue incubado a 250-300 rpm y 30°C durante 1-96 h. La inducción se mantuvo cada 24 h mediante la adición de metanol al 100% a una concentración final de metanol de 0.5%. En el caso de expresión intracelular , la cosecha y disrupción de las células se llevó a cabo después del final del cultivo principal por medio de un enton-Gaulin . En el caso de la expresión secretora, el sobrenadante del cultivo fue recolectado y KBD-B fue purificado a partir de este directamente. El KBD-B expresado intracelularmente en P. pastoris (ID SEC No.: 145) (pLib 15) incluyó, además de la secuencia polilpeptidica ID SEC No.: 4, además, en el N-terminal, los aminoácidos MHHHHHH, y en el C-terminal, los aminoácidos GVDLQPSLIS.
— El KBD-B expresado secretoramente en P. pastoris (ID SEC No.: 149) (pLib 16) incluyó, antes del procesamiento, además de la secuencia polipeptidica ID SEC No. : 4, además en el N-terminal los aminoácidos : MRFPSIFTAVLFAASSALAAPVNTTTEDETAQIPAEAVIGYSDLEGDFDVAV LPFSNSTNNGLLFINTTIASIAAKEEGVSLEKREAEAYVEFHHHHHH, y, en el C-terminal, los aminoácidos GVDLQPSLIS. — El KBD-B procesado y secretado por medio de P. pastoris (ID SEC No. : 149) (pLib 16) incluyó, además de la secuencia polipeptidica ID SEC No.: 4, además en el N-terminal los aminoácidos YCEFHHHHHH, y en el C-terminal los aminoácidos GVDLQPSLIS.
Ejemplo 4: Expresión de KBD-B por medio de cepas aspergillus nidulans utilizando el promotor alcA inducible, por ejemplo, mediante el plásmido de expresión pLib 19 (matraz agitador) .
Para la expresión se utilizaron las cepas tipo nativo A. nidulans como puede ser, por ejemplo, R S011 o SRF200. En este caso se describe, como ejemplo representativo— la expresión de KBD-B por A. nidulans transformada con pLib 19 (Figura 4) .
Para la construcción de pLib 19, un fragmento de DNA que codifica KBD-B de 922 pb de tamaño (ID SEC No.: 152) fue amplificado por medio de PCR utilizando los oligonucleótidos Lib 151 (5'- CACCATGCATCACCATCACCATCACGAGCCACATACTGGTCTGCT-3 ' (ID SEC No.: 154)) y Libl52 ( 5 ' -GCTAATTAAGCTTGGCTGCA-3 ' (ID SEC No.: 155)) y el vector pQE30-KBD-B (Ejemplo 2, Figura 1) como modelo (utilizando las condiciones de la PCR antes mencionadas, con la temperatura de hibridación del programa PCR de 53°C adaptada para los valores Tm de los cebadores Lib 151 y Lib 152) . El producto de la PCR fue ligado en el vector pENTR/D (pENTR™ Directional TOPO® Cloning Kit, versión E, Invitrogen) . La amplificación correcta de KBD-B fue verificada por secuenciación .
La recombinación del fragmento de DNA que codifica KBD-B se llevó a cabo en el vector pMT-OvE (Toews W, Warmbold, J. Konzacks S. Rishcitor P, SEIT D, Vienken K, Vinuesa C, Wei H, Fischer R; Establishment of mRFPl as a fluorescent marker in Aspergillus nidulans and construction of expresión vectors for high-throughput protein tagging using recombination in vitro (GATEWAY). (2004) Curr Genet 45: 383-389) utilizando el "Gateway® LR clonase™ enzyme mix" ( Invitrogen ) . Esto produjo el vector pLib 19 (Figura 4) .
Protoplastos de las cepas tipo nativo A. nidulans fueron transformados con el vector circular pLibl9 (Yelton MM, Hamer JE, Timberlake WE; Transformation of Aspergillus nidulans by using a trpC plasmad (1984) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 81: 1479-1474). Los transformantes fueron analizados por medio de PCR y Southern Blot utilizando DNA cromosomal.
Para el precultivo de los transformantes de A. nidulans que expresan KBD-B, 100 mL de medio mínimo (0.6% NaN03; 0.152% KH2P04; 0.052% KC1 [pH 6.5]; 0.8% glucosa; 0.05% MgS04; 1 mL de solución de oligoelementos [1 g/L de FeS04 x 7 H20; 8.8 g/L de ZnS04 x 7 H20; 0.4 g/L de CuS04 x 5 H20; 0.15 g/L de MnS04 x 4 H20; 0.1 g/L de Na2B407 x 10 H20; 0.05 g/L de (??4)6??7024 x 4 H?0] , más suplementos específicos de la cepa) o 100 mL de medio completo (2% extracto de malta); 0.1% de peptona; 2% de glucosa; más suplementos específicos de la cepa) fueron inoculados en matraces de 500 mL con 106-107 esporas y se incubaron durante 16-24 h a 200-250 rpm y 37°C.
Después del precultivo, se cosechó el micelio micótico, por filtración se lavó con agua destilada y se pasó a los matraces con 100-500 mL de medio mínimo nuevo. En este medio de cultivo principal se utilizó 0.1% de fructuosa en lugar de glucosa como la fuente de C. Para inducir la expresión de KBD, además se adiciono al medio etanol (1% concentración final) o glicerol (50 mM) o acetato de sodio (50 mM) o etilamina o treonina. Los aditivos mencionados para inducir la expresión no son limitativos para la reivindicación. El cultivo principal se incuba durante otros 5-48 h a 200-250 rpm y 37°C.
Después del final del cultivo, el micelio micótico fue cosechado con 1500-3000 x g durante 5 min a temperatura ambiente y se rompió por medio de un aparato Menton-Gaulin.
Además de la secuencia polipeptídica ID SEC No.: 4, el KBD-B expresado en A. nidulans (ID SEC No.: 152) (pLib 19) además incluyó, en el N-terminal, los aminoácidos MHHHHHH, y en el C-terminal, los aminoácidos : GVDLQPSLISKGGRADPAFLYKVVMIRLLTKPERKLLEGGPGTQLLFPLVRV NCALGVIMVIAVSCVKLLSAHNSTQHTSRKHKV.
Ejemplo 5: Disrupción celular y purificación de los cuerpos de inclusión (pQE30-KBD-B) .
KBD expresado de manera soluble puede utilizarse directamente luego de la disrupción celular (por ejemplo por medio de Menton-Gaulin) o puede ser purificado por medio de cromatografía (ver Ejemplo 6) . KBD-B expresado de manera insoluble (por ejemplo en cuerpos de inclusión) se purifico como sigue: — El contenido del termentador fue centrifugado, el paquete fue suspendido en búfer de fosfatos 20 mM, pH 7.5, y se sometió a disrupción por medio de un Menton-Gaulin . — Las células sometidas a disrupción fueron centrifugadas otra vez (15 000 g) , el sedimento de estas fue tratado con fosfato 20 mM, NaCl 500 mM y urea 8 M y se agitó de este modo. (Disolución de los cuerpos de inclusión) . — El pH del sobrenadante fue ajustado a 7.5 — Entonces se llevó a cabo la centrifugación a través y el sobrenadante fue aplicado a una columna de Ni chelate Sepharose y se purificó como se describe en el Ejemplo 6.
Ejemplo 6: Purificación del dominio de unión a queratina B en Ni chelate Sepharose El KBD puede ser purificado por cromatografía a través de la etiqueta His unida sobre una columna de Ni.
Material de la columna: Ni Sepharose High Performance Amersham Biosciences número de orden 17-5268-02 El material fue empacado en una columna (por ejemplo diámetro 2.6 cm, altura 10 cm) y se equilibró con búfer A + 4% búfer B (corresponde a imidazol 20 mM) .
El extracto proteínico (ver por ejemplo disrupción celular y purificación de los cuerpos de inclusión) fue aplicado a la columna pH 7.5 utilizando un Superloop (sistema ÁKTA) (flujo aproximadamente 5 mL/min) .
Luego de la aplicación se llevó a cabo el lavado con búfer A + imidazol 20 mM. Se llevó a cabo la elución con búfer B (imidazol 500 mM en búfer A) . El eluato fue recolectado en fracciones utilizando un recolector de fracciones.
El eluato fue luego liberado de la sal (ventajoso para muestras que han de ser concentradas) . Para esto, el eluato fue liberado de la sal, por ejemplo, sobre una columna de medio Sephadex G25 (Amersham) . Luego, para la concentración, por ejemplo una cámara Amicon (Celda de ultrafiltración con agitación, Millipore) .
Búfer A: Dihidrógeno fosfato de sodio 20 mM NaCl 500 mM (si se desea, también es posible utilizar búfer con menor concentraciones de NaCl) Urea 8M (no es necesario utilizar la urea si el KBD "activo" se somete a cromatografía el cual ya ha sido expresado volublemente. Sin urea no se requiere naturalización ulterior de la proteína pH 7.50 Búfer B: Dihidrógeno fosfato de sodio 20 mM NaCl 500 mM (si se desea, también es posible utilizar búfer con menor concentraciones de NaCl) Urea 8 M Imidazol 500 mM pH 7.50 Ejemplo 7: Renaturalización del dominio de unión a queratina B El dominio de unión a queratina expresado de manera insoluble (por ejemplo a partir de los cuerpos de inclusión) puede ser renaturalizado y de este modo activado como sigue: Método 1: Diálisis discontinua 6.5 mL de Cellytic IB (Sigma, número de orden C5236) y DTT 5 mM fueron adicionados a 6.5 mL de los cuerpos de inclusión KBD-B en urea 8 M (eluato Ni chelate, HiTrap) . La solución para ser renaturalizada fue luego vertida en tubo para diálisis (Spectrum: Spectra por M CO: 12-14 kD) .
Llevar a cabo la diálisis durante aproximadamente 12 horas contra 1 L de solución de urea 6 M a 4°C con agitación cuidadosa. 500 mL de Tris/HCl 25 mM, pH 7.50, fueron adicionados y se llevó a cabo la diálisis durante 9 horas a 4°C. Adición ulterior de otros 250 mL de búfer Tris (ver en lo anterior) y diálisis durante otras 12 horas. 500 mL de Tris/HCl 25 mM, pH 7.50 fueron luego adicionados otra vez y se llevó a cabo la diálisis durante 9 horas a 4°C. La adición ulterior de otros 250 mL de búfer Tris (ver en lo anterior) y la diálisis durante otras 12 horas. 500 mL de Tris/HCl 25 mM, pH 7.50 fueron luego adicionados otra vez y se llevó a cabo la diálisis durante 9 horas a 4°C. El tubo de diálisis que contenia el dializado fue luego colocado entre 2 L: Tris 25 mM + NaCl 150 mM, pH 7.50. Entonces se llevó a cabo la diálisis otra vez a 4°C durante 12 horas.
El contenido del tubo de diálisis fue luego retirado.
Método 2: diálisis continua 20 mL de cuerpos de inclusión KBD-B en urea 8 M (eluato Ni chelate High Trap) fueron tratados con 10 mL de Cellytic IB (Sigma, número de orden C5236) y DTT 5 mM. La solución fue luego vertida en una cámara de diálisis: Slide-A-Lyzer Dialyses Cásete PIERCE MWCO: 10 Kd. Número de orden 66830.
La diálisis se llevó entonces a cabo durante una hora aproximadamente contra 1 L de solución de urea 6M a 4°C.
Entonces, durante un periodo de 48 h, 2 L del siguiente búfer fue medido en forma continua por medio de una bomba peristáltica: Tris/HCl 25 mM, pH 7.5.
El tubo de diálisis que contenia el dializado fue luego adicionado a 2 L del búfer final: Tris 25 mM + NaCl 150 mM pH 7.5 y la diálisis se llevó a cabo durante aproximadamente 12 horas a 4°C.
El contenido del tubo de diálisis fue luego retirado .
Ejemplo 8: Unión a la piel 1 (cualitativa) La prueba cualitativa visual se desarrollo para examinar si KBD se une a la piel.
Soluciones utilizadas: solución de bloqueo: reactivo bloqueador Western 1921673 Roche (solución 10 x) diluida en TBS.
TBS: Tris 20 mM; NaCl 150 mM, pH 7.5 TTBS: TBS + 0.05% Tween 20 El primer paso es la transferencia de la capa de queratina externa de la piel a un soporte estable. Para este propósito, una cinta adhesiva transparente se aplica con firmeza a la piel humana depilada y se retira otra vez. La prueba puede llevarse a cabo directamente sobre la cinta adhesiva transparente, o la capa de queratina adherente puede ser transferida a un portaobjetos de vidrio a través de la adhesión renovada. La unión fue demostrada como sigue: — Para incubación con los diferentes reactivos, transferir a un recipiente Falcon — Si hay una adición apropiada de etanol para desengrasar, retirar el etanol y secar el portaobjetos — Incubación con búfer bloqueador durante 1 hora a temperatura ambiente. Lavado 2 X durante 5 min con TTBS — Lavado IX durante 4 min con TBS — Incubación con el KBD que va a ser analizado (acoplado a la etiqueta -por ejemplo His6, HA, etcétera) o la proteina control en TBS/0.05% en Tween 20 durante 2-4 h a temperatura ambiente — Remoción del sobrenadante — Lavado 3X con TBS — Incubación durante 1 h a temperatura ambiente con anticuerpos monoclonales anti-polihistidina (o KBD especifico conejo) diluido 1:2000 en TBS + 0.01% bloqueo — Lavado 2X durante 5 min con TTBS — Lavado 1 X durante 5 min con TBS — Incubación durante 1 h a temperatura ambiente con conjugado IgG fosfatasa alcalina anti-ratón, diluido 1:5000 en TBS más 0.01% bloqueo — lavado 2 X durante 5 min con TTBS — lavado 1 X durante 5 min con TBS — adición del sustrato fosfatasa (NBT-BCIP; Boehringer A 1 tableta/40 mL de agua 2.5 min; interrupción: con agua) — detección óptica de precipitado colorido a simple vista o utilizando un microscopio. Un precipitado de color azul indica que KBD se ha unido a la piel Ejemplo 9: Unión a la piel 2 (cuantitativo) Se desarrolló una prueba cuantitativa con la cual la fuerza de unión cabello/piel de KBD puede compararse con proteínas no específicas.
Se utilizó un perforador de corcho de 5 mm para perforar una sección de una pieza seca descongelada de piel sin cabello (humana o de cerdo) (o en el caso de una prueba superficial una sección de piel se inserta en una tapa Falcon) . La muestra de piel fue luego convertida a un espesor de 2-3 mm para retirar el tejido presente. La muestra de piel fue luego transferida a un recipiente Eppendorf (unión baja de proteina) para llevar a cabo la demostración de unión (ver también la Figura 6; de otro modo, el sistema Episkin [piel humana reconstruida] de L'Oreal también puede utilizarse): Lavado 2 x con PBS/0.05% Tween 20 Adición de 1 mL de 1% BSA en PBS de incubación durante 1 h a temperatura ambiente, movimientos oscilantes suaves (900 rpm) Retiro del sobrenadante Adición de 100 iq de KBD en PBS con 0.05% de Tween incubación durante 2 h a temperatura ambiente movimientos oscilantes suaves (900 rpm) Remoción del sobrenadante Lavado 3 X con PBS/0.05% Tween 20 Incubación con 1 mL de anticuerpos monoclonales anti-etiqueta (His6 o HA o KBD especifico) de ratón con conjugado de peroxidasa (1:2000 en PBS con Tween 20) [Monoclonal antipolihistidina peroxidasa conjugado, producida en ratón, polvo liofilizado, Sigma] durante 2-4 h a temperatura ambiente, movimiento oscilante suave (900 rpm) Lavado 3 X con PBS/0.05% Tween 20 Adición de sustrato peroxidasa (1 mL/recipiente Eppendorf; comunicaciones ver más adelante) Permitir que la reacción corra hasta una coloración azul (aproximadamente 90 segundos) Detener la reacción con 100 µ?, de H2SO 2 M Se midió la absorción a 405 nm.
Sustrato peroxidasa (preparar poco antes de su uso) 0.1 mL solución T B (TMB 42 mM en DMSO) + 10 mL de búfer sustrato (acetato de sodio pH 4.9) + 14.7 de H2O2 3% concentración Ejemplo 10: Unión al cabello (cuantitativo) Para poder demostrar la fuerza de unión de KBD al cabello también en relación con otras proteínas, se desarrolló un ensayo cuantitativo (ver también la Figura 6). En esta prueba, el cabello fue primero incubado , con KBD y se lavó el exceso de KBD. Un conjugado anticuerpo-peroxidasa se acopló entonces a través de la etiqueta His de KBD el conjugado anticuerpo-peroxidasa no unido se lavó otra vez. El conjugado anticuerpo-peroxidasa unido [conjugado antipolihistidina peroxidasa monoclonal, producido en ratón, polvo liofilizado, Sigma] puede convertir un sustrato incoloro (TMB) en el producto con color, el cual puede ser medido fotométricamente a 405 nm. La intensidad de la absorción indica la cantidad de KBD unido o la proteína comparativa. La proteína comparativa elegida fue, por ejemplo, YaaD de B. subtillis que del mismo modo tenía, como es necesario para esta prueba -una etiqueta His para la detección. En lugar de la etiqueta His, también es posible utilizar otros anticuerpos específicos conjugados con peroxidasa. 5 mg de cabello (humano) se corta en secciones de 5 mm de longitud y se pasan a recipientes Eppendorf (unión baja de proteínas) para llevar a cabo la demostración de la unión: — Adición de 1 mL de etanol para desengrasar — Centrifugación, separación del etanol y lavado del cabello co,n H20 — Adición de lml de 1% BSA en PBS e incubación durante 1 h a temperatura ambiente, movimientos oscilantes suaves — Centrifugación remoción el sobrenadante — Adición de los dominios de unión a queratina que han de ser analizados (acoplado a la etiqueta -por ejemplo His6, HA, etcétera) o la proteina control en 1 mL de PBS/0.05% Tween 20; incubación durante 16 h a 4°C (o por lo menos 2 h a temperatura ambiente) con movimientos oscilantes suaves. — Centrifugación, separación del sobrenadante Lavado 3 X con PBS/0.05% Tween 20 — Incubación con 1 mL de anticuerpos monoclonales anti-TAG (His6 o HA) de ratón con conjugado peroxidasa (1:2000 en PBS/0.05% Tween 20) [conjugado antipolihistidina monoclonal preoxidasa, producido en ratón, polvo liofilizado] durante 2-4 h a temperatura ambiente, movimiento oscilante suave Lavado 3 X con PBS/0.05% Tween 20 — Adición del sustrato peroxidasa (1 mL/recipiente Eppendorf ) — Permitir que la reacción proceda hasta coloración azul (aproximadamente 2 minutos) — Detener la reacción con 100 i de H2S04 2 M — Se mide la absorción a 405 nm Sustrato peroxidasa (preparar poco antes de su uso) : 0.1 mL de solución T B (TMB 42 m en DMSO) + 10 mL de búfer sustrato (acetato de sodio 0.1 M, pH 4.9) + 14.7 µ?, de H202 3% concentración BSA = albúmina sérica bovina PBS = solución salina amortiguada con fosfato Tween 20 = monolaureato de sorbitan polioxietilenado, n aproximadamente 20 TMB = 3, 5, 3' , 5' -tetrametinzidina Una prueba de unión sobre cabello llevada a cabo por medio de ejemplo para KBD-B demostró considerable superioridad de la unión de KBD-B (ID SEC No.: 166) al cabello en comparación con la unión significativamente más deficiente de la proteina comparativa YaaD: Tabla 9: Prueba cuantitativa de la actividad de KBD cabello: 1) búfer; 2) proteina comparativa YaaD; 3) KBD-B desnaturalizada; 4) KBD-B renaturalizada . La tabla muestra los valores medidos de la absorción a 405 nm.
Ejemplo 11: Expresión de KBD-B (ID SEC No.: 167) por medio de cepas de Escherichia coli utilizando el plásmido de expresión pRee024 con un promotor inducible IPTG ( Figura 8 ) .
Para la expresión, se utilizo cepa E. coli XL10 Gold [Stratagene] .
Se describe aquí, por medio de un ejemplo representativo, la clonación de kn (ID SEC No.: 167) y la expresión ulterior de la proteina KBD-B (ID SEC No.: 168) en E. coli transformado con pRee0024 (Figura 8): Clonación de pRee024 - Lambda-MaxiDNA (DNA-lambda Maxi kit, Qiagen) se preparó a partir de un banco de cDNA de queratinocitos humanos (BD Bioscience, Clonatech, Human Keratinocyte cDNA, prepucio, cultivo primario en fase log, vector: ??111) .
La PCR para la amplificación del gen de KBD-B se llevó a cabo en dos pasos. En primer, el extremo 5' y el extremo 3' fueron amplificados en forma independiente. Estos fragmentos fueron la matriz para la amplificación de todo el gen de KBD-D .
La PCR para la amplificación del extremo 5' se llevo a cabo como sigue: Los cebadores tenían la siguiente secuencia: HRe6: 5'- ATGAACCACTCGCCGCTCAAGACCGCCTTG - 3' (ID SEC No.: 171) HRe9: 5' - CGTTCCCGGTTCTCCTCAGGAGGCTGACTG - 3' (ID SEC No.: 172) 100 uL mezcla PCR: lOx búfer PCR Pfu Ultra High Fidelity: 10 \iL Lambda DNA (744 ng/ L) 1 µL (diluión 1:10) dNTP's. -Mezcla (10 mM) 10 HRe6 (196 ng/pL) 1 Polimerasa Pfu Ultra High Fidelity 1 µL H20 bidestilada 76 µL Programa de temperaturas: Un fragmento de aproximadamente 1 kb de tamaño se detecto en el gel de agarosa. La reacción se purificó y se utilizó como el modelo del extremo 5' para la amplificación del gen KBD-D.
La PCR para la amplificación del extremo 3' se llevó a cabo como sigue: Los cebadores tenían la siguiente secuencia: HRe7: 5'- TTAGAATCGGGAGGTGAAGTTCCTGAGGCT - 3' (ID SEC No.: 173) HRe8: 5' - CACCACCAACAAGCTGGAGACCCGGAG - 3' (ID SEC No.: 174) 100 pL mezcla PCR: lOx PCR búfer Pfu Ultra High Fidelity: 10 pL Lambda DNA (744 ng/pL) 1 pL (dilución 1:10) dNTP's. -Mezcla (10 mM) 10 pL HRe7 (201 ng/pL) 1 pL HRe8 (209 ng/pL) 1 pL Polimerasa Pfu Ultra High Fidelity 1 pL H20 bidestilada 76 pL Programa de temperaturas: — Un fragmento de aproximadamente 1.2 kb de tamaño se detectó en el gel de agarosa. La reacción se purificó y utilizó abajo como modelo del extremo 3' para la amplificación del gen KBD-D.
— Para la amplificación del gen KBD-D, el modelo del extremo 5' y el modelo del extremo 3' se utilizaron como matriz. La PCR se llevó a cabo como sigue: 100 pL mezcla PCR : lOx búfer PCR Pfu Ultra High Fidelity: 10 pL dNTP - mezcla (10 mM) 10 pL H20 bidestilada 75 pL Plantilla extremo 5' 1 pL Plantilla extremo 3' 1 pL Polimerasa Pfu Ultra High Fidelity 1 pL H20 76 pL Programa de temperaturas: f 60 seg 94°C lOx L 300 seg 72°C después de 10 ciclos, 1 µ?, de cebador HRe6 (196 iq/mL) y HRe7 (206 iq/mL) y 1 µ?, de polimerasa Pfu Ultra High Fidelity fueron adicionados y se llevó a cabo la reacción con el siguiente programa de temperaturas: Programa de temperaturas: Luego, 1 µ?, de Taq polimerase se adicionó y la mezcla se incubó durante 10 minutos a 72°C.
— El producto de la PCR resultante de aproximadamente 2150 pb de tamaño se cortó de un gel de agarosa, se purificó y clonó en el siguiente vector: pCR2.1-TOPO ( Invitrogen) .
El vector resultante pRee019 (6112 pb) fue luego transformado, se amplificó en E. coli y el gen KBD-D se verificó por secuenciación .
Posteriormente, el gen KBD-D fue clonado en el vector de expresión, Para esto, se llevó a cabo otra PCR con el vector pRee019 como modelo: Oligonucleótidos utilizados: HRe26 : 5 ' - CTCGGTACCAACCACTCGCCGCTCAAGACCGCCTTGGCG (ID SEC No. : 175) HRe27: 5'- ATTAAGCTTTTAGAATCGGGAGGTGAAGTTCCTGAGGCT (ID SEC No. : 176) 100 uL mezcla PCR: lOx búfer PCR Pfu Ultra High Fidelity pRee019 (25 ng/ L) 1 L dNTP's. -Mezcla (10 mM) 10 pL HRe26 (287 ng/pL) 1 yi HRe27 (354 ng/yL) 1 pL Polimerasa Pfu Ultra High Fidelity 1 H20 bidestilada 76 pL Programa de temperaturas: — Un fragmento de aproximadamente 2.2 kb de tamaño fue detectado en el gel de agarosa. La reacción se purificó y luego se cortó con la endonucleasas de restricción Kpnl y HindIII; el fragmento resultante fue clonado en el vector de expresión. Esto dio el vector pRee024, el cual fue utilizado posteriormente para la expresión de KBD-D.
Expresión de KBD-D (ID SEC No.: 167) mediante pRee024 en E. coli — Los precultivos fueron ¦ inoculados de la placa o cultivo de glicerol con cepas de E. coli transformadas con pRee024 (por ejemplo TG10). Dependiendo del tamaño del cultivo principal, la inoculación con medio LB (aproximadamente 1:100) se llevo a cabo en un tubo o matraz pequeño. — Se utilizaron antibióticos de acuerdo con la cepa utilizada (para E. coli transformado con pRee024 TG 10 ampicilina 100 — La incubación se llevó a cabo a 250 rpm y 37°C. — El cultivo principal se inoculó aproximadamente 1:100, con precultivo, cultivo principal: medio LB o medio mínimo apropiado con los antibióticos respectivos. Incubación a 250 rpm y 37°C.
— La inducción se llevó a cabo con IPTG 1 mM sobre una D0578nm de 1. La temperatura de incubación entonces se redujo a la temperatura ambiente (aproximadamente 20°C) . Las células fueron centrifugadas 2 horas después de la inducción. (Ver Figura 9) .
Ejemplo 12: Disrupcion celular y purificación de cuerpos de inclusión (pRee024) KBD-D expresado de manera insoluble (ID SEC No.: 168) (por ejemplo en cuerpos de inclusión) fue purificado como sigue: El sedimento celular del Ejemplo 2 fue resuspendido en búfer de fosfato 20 mM con NaCl 100 mM, pH 7.5 y se sometió a disrupcion por tratamiento de ultrasonido.
Las células sometidas a disrupcion fueron centrifugadas otra vez (4°C, 12 000 g, 20 minutos) . Se desecho el sobrenadante. El sedimento fue disuelto en búfer A (NaH2P04 10 mM, KH2P04 2 mM, NaCl 100 mM, urea 8 M, DTT 5 mM) . La mezcla fue luego centrifugada otra vez y el sobrenadante fue aplicado a una columna Ni chelate Sepharose. Luego de la aplicación, el lavado se llevó a cabo con búfer A e imidazol 20 mM. La elución de la columna se llevó a cabo con búfer B (NaH2P04 10 mM, KH2P04 2 mM, NaCl 100 mM, urea 8 M, DTT 5 mM, imidazol 500 mM) . El eluato fue recolectado en fracciones y analizado por medio de SDS-PAGE. Las fracciones que contenían el KBD-D purificado fueron renaturalizadas como se describe en el Ejemplo 13.
Ejemplo 13: Renaturalización del dominio de unión a queratina D (ID SEC No.: 168) El dominio de unión a queratina D expresado de manera insoluble (por ejemplo a partir de los cuerpos de inclusión) pudo ser renaturalizado por diálisis y así activado. El procedimiento fue como sigue: Las fracciones del Ejemplo 12 que contenían KBD-D purificado fueron vaciadas en un tubo para diálisis (MWCO 12-14 KD) .
La diálisis se llevó a cabo entonces durante aproximadamente una hora contra 1 1 de solución de urea 8 M.
Entonces, durante un periodo de 12 horas, 2 L de agua deionizada fueron medidos en forma continua por medio de una bomba peristáltica.
El contenido del tubo de diálisis fue luego retirado. El KBD-D activado en esta forma fue utilizado para las siguientes pruebas de actividad.
Ejemplo 14: Unión cualitativa a la piel Se utilizó una prueba cualitativa visual para examinar si el KBD-D (ID SEC No.: 168) se une a la piel.
Soluciones utilizadas Solución bloqueadora: reactivo bloqueador Western 1921673 Roche (solución ???) , diluida en TBS.
TBS: Tris 20 mM; NaCl 150 mM, pH 7.5 TTBS: TBS + 0.05% Tween 20 El primer paso es la transferencia de la capa de queratina externa de la piel a un soporte estable. Para este propósito, una cinta adhesiva transparente se aplica firmemente a la piel humana depilada y se retira otra vez. La prueba puede llevarse a cabo directamente sobre la tira adhesiva transparente, o la capa de queratina adherente puede ser transferida a un portaobjetos de vidrio a través de adhesión renovada. La unión se demostró como sigue: — para incubación con diversos reactivos, transferir a un recipiente Falcon — si es apropiado, adición de etanol para desengrasar, eliminación del etanol y secado del porta objetos — incubación con búfer de bloqueo durante 1H a temperatura ambiente. — lavado 2x durante 5 min con TTBS — lavado 1 x durante 5 min con TBS — incubación con el KBD que va a ser analizado (acoplado a la etiqueta, por ejemplo, His6, HA, etcétera) en TBS/0.05% Tween 20 durante 2-4 h a temperatura ambiente — separación del sobrenadante — lavado de 3 x con TBS — incubación durante 1 h a temperatura ambiente con anticuerpos monoclonales anti-etiqueta (His6 o HA) de ratón con conjugado de peroxidasa (1:2000 en YBS + 0.01% bloqueo [conjugado monoclonal antipolihistidina peroxidasa, producido en ratón, polvo liofilizado, Sigma] — lavado 2 x durante 5 min con TTBS — lavado 1 x durante 5 min en TBS — adición de sustrato fosfatasa (NBT-BCIP; Boehringer MA 1 tableta/40 mL de agua 2.5 min; interrumpir: con agua — detección óptica del precipitado del precipitado colorido a simple vista o utilizando un microscopio — un precipitado de color azul, siendo una reacción del conjugado antipolihistidina-AP que interactúa con el KBD-D fue visible en la cinta adhesiva transparente tratada con KBD-F. Como control negativo, una cinta adhesiva transparente fue tratada solo con búfer. Ninguna coloración azul significativa se pudo observar en esta. Estos resultados muestran que KBD-D se había unido a la queratina de la piel en la cinta adhesiva transparente .
Ejemplo 15: Unión cuantitativa a la piel y el cabello Para investigar la fuerza de unión de KBD-D (ID SEC No.: 168) a la piel y el cabello y en comparación con KBD-B (ID SEC No.: 166), se hizo una prueba cuantitativa. En esta prueba, en primer lugar el cabello fue incubado con KBD-B o KBD-D y se lavó el exceso de KBD-B o -D. Un conjugado anticuerpo-peroxidasa entonces fue acoplado a través de His/etiqueta de KBD-B o -D. EL conjugado anticuerpo peroxidas no unido se lavó otra vez. El conjugado anticuerpo-peroxidasa unido puede convertir un sustrato incoloro (TMB) en un producto con color, el cual fue medido fotométricamente a 405 nm. La intensidad de la absorción indica la cantidad de KBD-B o -D unido.
La prueba de unión a la piel se llevó a cabo en queratinocitos humanos en placas de microtitulación como sigue . - lavado 2 x con PBS/0.05% Tween 20 — adición de 1 mL de 1% BSA en PBS e incubación durante 1 h a temperatura ambiente, movimientos oscilantes suaves (900 rpm) — separación del sobrenadante - adición de 100 µ? de KBD en PBS con 0.05% Tween 20; incubación durante 2 h a temperatura ambiente y movimientos oscilantes suaves (900 rpm) — separación del sobrenadante — lavado 3 x con PBS/0.05% Tween 20 — incubación con 1 mL de anticuerpos monoclonales anti-etiqueta-His6 de ratón durante 2-4 h a temperatura ambiente, movimiento oscilante suave (900 rpm) lavado 3 x con PBS/0.05% Tween 20 — adición de sustrato peroxidasa (1 mL/recipiente Eppendorf; ver composición más adelante) reacción hasta una coloración azul (aproximadamente 90 segundos) — reacción interrumpida con 100 µ?, de H2S04 2 M — la absorción se midió a 405 nm.
Sustrato peroxidasa (preparado poco antes de su uso) : 0.1 mL de solución TMB (TMB 42 mM en DMSO) + 10 mL de búfer sustrato (acetato de sodio 0.1 M, pH 4.9) + 14.7 íL de H202 concentración 3% Para determinar las características de la unión al cabello del KBD-D en comparación con KBD-B, se llevó a cabo el siguiente ensayo de unión: 5 mg de cabello (humano) fue cortado en secciones de 5 mm de longitud y se pasó a un recipiente eppendorf (baja unión de proteína) — adición de 1 mL de etanol o desengrasar — centrifugación, eliminación del etanol y lavado del cabello con H20 — centrifugación, separación del sobrenadante — adición de los dominios de unión a queratina para ser analizados (acoplado a la etiqueta -por ejemplo His6/ HA, etcétera) en 1 mL de PBS/0.05% Tween 20; incubación durante 2 h a temperatura ambiente con movimientos oscilantes suaves — centrifugación, separación del sobrenadante - lavado 3 x con PBS/0.05% Tween 20 — incubación con 1 mL con anticuerpos monoclonales anti-etiqueta- (His6 o HA) de ratón con conjugado peroxidasa (1:2000 en PBS/0.05% Tween 20) [conjugado antipolihistidina monoclonal peroxidasa, producido en ratón, polvo liofilizado, Sigma] durante 2-4 h a temperatura ambiente, movimiento oscilante suave — lavado 3 x con PBS/0.05% Tween 20 — adición de sustrato peroxidasa (1 mL/recipiente Eppendorf ) — dejar que la reacción proceda hasta coloración azul (90 segundos) — detener la reacción con 100 i de H2SO4 2 M. La absorción se midió a 405 nm Sustrato peroxidasa (tratada poco antes de su uso) : 0.1 mL de solución TMB (TMV 42 mM en DMSO) + 10 mL búfer sustrato (acetato de sodio 0.1 pH 4.9) + 14.7 iL de H2O2 concentración 3% BSA = albúmina sérica bovina PBS = solución salina amortiguada con fosfato Tween 20 = monolaureato de sorbitan polioxietilenado, n aproximadamente 20 TMB = 3 5, 3', 5' -tetrametilbencidina Dominio de unión a queratina Absorción a 405 nm KBD-D a la piel 3.69 KBD-D a la piel después de tratamiento 3. SDS al 10% de concentración KBD-B a la piel 0.93 KBD-B a la presente invención después de 0.185 tratamiento SDS 10% de concentración Tabla 10: Unión cuantitativa de KBD-D o KBD-B a la piel. Los valores de la absorción enlistados son valores normalizados para la superficie (de la piel o el cabello) .
Dominio de unión a queratina Absorción a 405 nm KBD-D al cabello 0.88 KBD-D al cabello después de tratamiento 0.62 SDS al 10% de concentración Tabla 10b Unión cuantitativa de KBD-D al cabello. Los valores de la absorción enlistados son valores normalizados para la superficie .
Dominio de unión a queratina Pérdida de absorción relativa después de tratamiento con SDS al 10% de concentración en % KBD-D a la piel después de 15 tratamiento SDS al 10% de concentración KBD-B a la presente invención 80 después de tratamiento SDS 10% de concentración KBD-D al cabello después de 30 tratamiento SDS al 10% de concentración KBD-B al cabello después de 86 tratamiento SDS al 10% de concentración Tabla 10c: Unión cuantitativa de KBD-D o KBD-B a la piel y el cabello después del tratamiento SDS al 10% de concentración en por ciento en relación con el cabello o la piel no tratados con KBD-D y KBD-B.
Estos resultados muestran que la proteina KBD-D puede unirse al cabello y más fuertemente a la piel (ver la Tabla 10). Contrario a KBD-B (ID SEC No.: 166), la unión de KBD-D (ID SEC No.: 168) es solo influida más débilmente por un lavado con solución SDS hasta 10% de concentración (ver la Tabla 10a) .
Ejemplo 16: Preparación de ácido maleimido capróico La síntesis de los ácidos maleimido capróicos y análogos de éstos, donde N= 1-4, 7, 10 y 11 se llevó a cabo de acuerdo con el método que se describe en Rich, D. H. y col., (Rich, D. H. y col., J. Med. Chem- 2975 (10), 1004-1010) .
Ejemplo 17: Acoplamiento mediado por carbodiimida de ácido maleimido capróico con pantenol-método A: 1.11 g de ácido maleimido hexanóico y 0.03 g de DMAP fueron adicionados a 3.14 g de D-pantenol en 30 mL de cloruro de metileno. A temperatura ambiente, 1.05 g de EDC en 25 mL de cloruro de metileno fueron adicionados gota a gota durante el curso de una hora y la mezcla fue agitada después durante 2.5 h a temperatura ambiente. La solución resultante fue lavada con 2 x 25 mL de HC1 2 N. La fase orgánica fue secada sobre sulfato de sodio y se concentró por evaporación en evaporador rotatorio a 40°C/4 mbar, dando 1.5 g de residuo viscosos, ligeramente amarillo .
El producto de la reacción fue analizado por medio de HPLC de acuerdo con el siguiente método: Columna: aters Symmetry C18, 5 µp?, 250 * .6 mm Eluyente A: 0.1% en volumen de H3P0 en agua, eluyente B: 0.1% en volumen de CH3P04 en CH3CN Gradiente (basado en el eluyente B) : 0 min (10%) 10 min (100%), 20 min (100%), 22 min (10%). Flujo: 1 mL/min, temperatura 20°C, volumen de inyección volumen 5 i Detección: detector UV a 205 nm, BW = 4 nm.
En este método, los tres pantenoles monoacilados eluyen a 7.0, 7.5 y 7.6 minutos, los pantenoles diacilados a 9.0, 9.2 y 9.6 minutos, y el pantenol triacilado a 1.07 minutos.
El producto obtenido contenia (dado en por ciento de área del pico HPLC) : los monoisómeros a 22.2, 23.1 y 24.7%, isómeros diacilados a 4.4, 8.5 y 5.7%, el compuesto triacilado a 0.9%, componentes residuales no asignados.
Ejemplo 18: Acoplamiento del ácido maleimido-N-hexanóico con pantenol luego de la activación como cloruro ácido -método B: 13.4 g de cloruro de tionilo fueron adicionados a 8.0 g de ácido maleimido hexanóico en 100 mL de tolueno y la mezcla se calentó a 80°C durante 3 h. La solución fue concentrada por evaporación en un evaporador rotatorio a 70°C/3 mbar y 8.7 g de un liquido amarillo se obtuvo el cual solidificó para obtener cristales amarillo pálidos tras el reposo durante la noche (13C NMR (500 MHz, CDC13) : 173.4, 170.7 (2C), 134.1 (2C) , 46.8, 37.3, 28.0, 25.5, 24.5 ppm) .
Una solución de 8.5 g de cloruro de maleimido caproilo en 100 mL de cloruro de metileno se adicionó gota a gota a 36.9 g de D-pantenol y 4.32 de trietilamina, 250 mL de cloruro de metileno durante el curso de una hora a temperatura ambiente, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La solución fue lavada con 3 x 60 mL de HC1 2 N y con 2 x 60 mL de agua, la fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio y se concentró por evaporación en un evaporador rotatorio a 40°C/2 mbar. Se obtuvo 14 g de un aceite anaranjado-café.
Se determinó la siguiente distribución de productos de acuerdo con el método HPLC descrito en el Ejemplo 17: (dado en por ciento de área del pico HPLC) : los monoisómeros a 1.3, 39.5 y 32.8%, isómeros diacilados a 0.5, 0.7 y 9.9%, el compuesto triacilado a 0.1%, componentes restantes no asignados.
Ejemplo 19: Acoplamiento del ácido maleimido apróico con tocoferol Del mismo modo que el Ejemplo 17, 2.2 g de a-tocoferol y 1 g de trietilamina se hicieron reaccionar con 1.5 g de MIC-CL, y se obtuvieron 2 g de maleimido caproilato de oc-tocoferol.
Ejemplo 20: Acoplamiento del ácido maleimido caproico con ácido ascórbico Del mismo que el Ejemplo 18, 0.9 g de a-tocoferol y 1 g de Net3 se hicieron reaccionar con 1.3 g de MIC-C1, y se obtuvo 1.6 g de maleimido caproilato del ácido ascórbico como mezclas de isómeros.
Ejemplo 21: Acoplamiento del ácido maleimido caproico con astaxantina Del mismo modo que el Ejemplo 18, 0.2 g de astaxantina con 0.3 g de EDC y 0.01 g de DMAP se hicieron reaccionar con 0.35 g de ácido maleimido caproico, y se obtuvo 0.2 g de maleimido caproil-astaxantina como mezcla de isómeros.
Las moléculas ligadoras efectoras enlistadas en la Tabla 11 siguiente podrían y pueden ser preparadas de acuerdo con los Ejemplos 17 a 21. Todas las moléculas efectoras enlistadas en la Tabla 11 preferentemente pueden ser acopladas del mismo modo a una molécula ligadora de acuerdo con las fórmulas generales 1, Ib, le, 2, 4 ó 5.
Tabla 11 71 Ejemplo 22: Acoplamiento efector de pantenol a KBD-B (ID SEC No. : 166) Para acoplar pantenol a través del ligador ácido maleimido capróico (ligador MIC), se utilizaron las cisteinas del KBD-B (ID SEC No.: 166). Asi pues, KBD-B (ID SEC No.: 166) tiene cuatro cisteinas. De estas, dos cisteinas están en el interior de la estructura y no son accesibles para el acoplamiento de un efecto (reconocible a partir de la estructura cristalina) . Las dos cisteinas restantes cerca del N-terminal (posiciones de los aminoácidos 14 y 83; ver secuencia KBD-B (ID SEC No. : 166) son accesibles para un acoplamiento efector.
El pantenol-MIC con capacidad de acoplamiento fue acoplado al KBD-B (ID SEC No.: 166) a través de por lo menos uno de los dos grupos SH libres de una cisteina esto da como resultado un ataque nucleofilico de la cisteina sobre el doble enlace de la diimida maléica (Figura 5) .
Después de diferentes lotes de prueba (ver Ejemplo 24), se estableció un método de acoplamiento eficiente el cual se utilizó para 5 g de mezcla de acoplamiento: [sic] para esto, 1 mL de solución MIC-pantenol al 10% de concentración en etanol se adicionó a 250 mL de una solución de 20 mg/mL de KBD-B (también es posible utilizar concentraciones menores de aproximadamente 1 mg/mL) en búfer de fosfatos (pH 7.5) (relación de KBD-B: MIC-pantenol ~1:2), y la mezcla se agitó cuidadosamente a temperatura ambiente durante una hora.
Ejemplo 23: Acoplamiento efector de pantenol a KBD-D (ID SEC No. : 168) Para acoplar pantenol a través del ligador ácido maleimido capróico (ligador MIC), las cisteinas también pueden ser utilizadas en el KBD-D (ID SEC No. : 168) de una manera semejante al KBD-B. Asi pues, KBD-B (168) tiene 24 cisteinas. Además, los radicales cisteina capaces de acoplamiento pueden ser introducidos en una forma dirigida por mutagénesis dirigida.
El pantenol-MIC con capacidad de acoplamiento puede de este modo ser acoplado al KBD-D (ID SEC No.: 168) a través de por lo menos un grupo SH libre de una cisteina. La molécula efectora KBD-D-pantenol obtenida de esta forma puede utilizarse en formulaciones cosméticas como se describe en los Ejemplos 58 a 75.
Las moléculas efectoras de unión a queratina enlistadas en las Tablas 12 y 12a siguientes fueron y pueden ser preparadas de acuerdo con los Ejemplos 17 a 23. Todas las moléculas ligadoras efectoras enlistadas en estas preferentemente pueden ser acopladas en una forma semejante a las proteínas de unión a queratina de acuerdo con ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 40, 42, 44, 46, 48, 146, 150, 153, 156, 157, 160, 162 ó 164, especialmente de preferencia a la proteína KBD-D de acuerdo con la ID SEC No.: 168.
Molécula ligadora Proteina de unión a Molécula efectora de efectora de queratina unión a queratina acuerdo con la Tabla 11 A ID SEC No : 166 1 B ID SEC No : 166 2 C ID SEC No : 166 3 D ID SEC No : 166 4 E ID SEC No : 166 5 F ID SEC No : 166 6 G ID SEC No : 166 7 H ID SEC No : 166 8 I ID SEC No : 166 9 J ID SEC No : 166 10 K ID SEC No : 166 11 L ID SEC No : 166 12 M ID SEC No : 166 13 N ID SEC No : 166 14 0 ID SEC No. 166 15 P ID SEC No. 166 16 Q ID SEC No. 166 17 R ID SEC No. 166 18 S ID SEC No. 166 19 T ID SEC No. 166 20 u ID SEC No. 166 21 V ID SEC No. 166 22 w ID SEC No. 166 23 X ID SEC No. 166 24 Y ID SEC No. 166 25 z ID SEC No. 166 26 AA ID SEC No. 166 27 AB ID SEC No. 166 28 AC ID SEC No. 166 29 AD ID SEC No. 166 30 AE ID SEC No. 166 31 AF ID SEC No. 166 32 AG ID SEC No. 166 33 AH ID SEC No. 166 34 AI ID SEC No. 166 35 AJ ID SEC No. 166 36 AK ID SEC No. 166 37 AL ID SEC No. 166 38 AM ID SEC No. 166 39 AN ID SEC No. 166 40 AO ID SEC No. 166 41 AP ID SEC No. 166 42 AQ ID SEC No. 166 43 AR ID SEC No. 166 44 AS ID SEC No. 166 45 AT ID SEC No. 166 46 AU ID SEC No. 166 47 AV ID SEC No. 166 48 AW ID SEC No. 166 49 AX ID SEC No. 166 50 AY ID SEC No. 166 51 AZ ID SEC No. 166 52 BB ID SEC No. 166 53 BC ID SEC No. 166 54 BD ID SEC No. 166 55 BE ID SEC No. 166 56 BF ID SEC No. 166 57 BG ID SEC No. 166 58 BH ID SEC No. 166 59 BI ID SEC No. 166 60 BJ ID SEC No. 166 61 BK ID SEC No. 166 62 BL ID SEC No. 166 63 B ID SEC No. 166 64 BN ID SEC No. 166 65 BO ID SEC No. 166 66 BP ID SEC No. 166 67 BQ ID SEC No. 166 68 BR ID SEC No. 166 69 BS ID SEC No. 166 70 BT ID SEC No. 166 71 BU ID SEC No. 166 72 BV ID SEC No. 166 73 BW ID SEC No. 166 74 BX ID SEC No. 166 75 BY ID SEC No. 166 76 BZ ID SEC No. 166 77 CC ID SEC No. 166 78 CD ID SEC No. 166 79 CE ID SEC No. 166 80 CF ID SEC No. 166 81 CG ID SEC No. 166 82 CH ID SEC No. 166 83 CI ID SEC No. 166 84 CJ ID SEC No. 166 85 CK ID SEC No. 166 86 CL ID SEC No. 166 87 CM ID SEC No. 166 88 CN ID SEC No. 166 89 CO ID SEC No. 166 90 CP ID SEC No. 166 91 CQ ID SEC No. 166 92 CR ID SEC No. 166 93 CS ID SEC No. 166 94 CT ID SEC No. 166 95 CU ID SEC No. 166 96 CV ID SEC No. 166 97 CW ID SEC No. 166 98 cx ID SEC No. 166 99 CY ID SEC No. 166 100 cz ID SEC No. 166 101 DD ID SEC No. 166 102 DE ID SEC No. 166 103 DF ID SEC No. 166 104 DG ID SEC No. 166 105 DH ID SEC No. 166 106 DI ID SEC No. 166 107 DJ ID SEC No. 166 108 DK ID SEC No. 166 109 DL ID SEC No. 166 110 CM ID SEC No. 166 111 DN ID SEC No. 166 112 DO ID SEC No. 166 113 DP ID SEC No. 166 114 DQ ID SEC No. 166 115 DR ID SEC No. 166 116 DS ID SEC No. 166 117 DT ID SEC No. 166 118 DU ID SEC No. 166 119 DV ID SEC No. 166 120 DW ID SEC No. 166 121 DX ID SEC No. 166 122 DY ID SEC No. 166 123 DZ ID SEC No. 166 124 EE ID SEC No. 166 125 EF ID SEC No. 166 126 EG ID SEC No. 166 127 EH ID SEC No. 166 128 EI ID SEC No. 166 129 EJ ID SEC No. 166 130 EK ID SEC No. 166 131 EL ID SEC No. 166 132 EM ID SEC No. 166 133 EN ID SEC No. 166 134 EO ID SEC No. 166 135 EP ID SEC No. 166 136 EQ ID SEC No. 166 137 ER ID SEC No. 166 138 V ID SEC No. 168 164 w ID SEC No. 168 165 X ID SEC No. 168 166 Y ID SEC No. 168 167 z ID SEC No. 168 168 AA ID SEC No. 168 169 AB ID SEC No. 168 170 AC ID SEC No. 168 171 AD ID SEC No. 168 172 AE ID SEC No. 168 173 AF ID SEC No. 168 174 AG ID SEC No. 168 175 AH ID SEC No. 168 176 AI ID SEC No. 168 177 AJ ID SEC No. 168 178 AK ID SEC No. 168 179 AL ID SEC No. 168 180 AM ID SEC No. 168 181 AN ID SEC No. 168 182 AO ID SEC No. 168 183 AP ID SEC No. 168 184 AQ ID SEC No. 168 185 AR ID SEC No. 168 186 AS ID SEC No. 168 187 AT ID SEC No. 168 188 AU ID SEC No. 168 189 AV ID SEC No. 168 190 AW ID SEC No. 168 191 AX ID SEC No. 168 192 AY ID SEC No. 168 193 AZ ID SEC No. 168 194 CI ID SEC No. : 168 226 CJ ID SEC No. : 168 227 CK ID SEC No. : 168 228 CL ID SEC No. : 168 229 C ID SEC No. : 168 230 CN ID SEC No. : 168 231 CO ID SEC No. : 168 232 CP ID SEC No. : 168 233 CQ ID SEC No. : 168 234 CR ID SEC No. : 168 235 CS ID SEC No. : 168 236 CT ID SEC No. · 168 237 CU ID SEC No. 168 238 CV ID SEC No. 168 239 CW ID SEC No. 168 240 CX ID SEC No. 168 241 CY ID SEC No. 168 242 cz ID SEC No. 168 243 DD ID SEC No. 168 244 DE ID SEC No. 168 245 DF ID SEC No. 168 246 DG ID SEC No. 168 247 DH ID SEC No. 168 248 DI ID SEC No. 168 249 DJ ID SEC No. 168 250 DK ID SEC No. 168 251 DL ID SEC No. 168 252 D ID SEC No. 168 253 DN ID SEC No. 168 254 DO ID SEC No. 168 255 DP ID SEC No. 168 256 DQ ID SEC No. 168 257 DR ID SEC NO. 168 258 DS ID SEC No. 168 259 DT ID SEC No. 168 260 DU ID SEC No. 168 261 DV ID SEC No. 168 262 DW ID SEC No. 168 263 DX ID SEC No. 168 264 DY ID SEC No. 168 265 DZ ID SEC No. 168 266 EE ID SEC No. 168 267 EF ID SEC No. 168 268 EG ID SEC No. 168 269 EH ID SEC No. 168 270 EI ID SEC No. 168 271 EJ ID SEC No. 168 272 EK ID SEC No. 168 273 EL ID SEC No. 168 274 EM ID SEC No. 168 275 EN ID SEC No. 168 276 EO ID SEC No. 168 277 EP ID SEC No. 168 278 EQ ID SEC No. 168 279 ER ID SEC No. 168 280 ES ID SEC No. 168 281 ET ID SEC No. 168 282 EU ID SEC No. 168 283 EV ID SEC No. 168 284 Tabla 12a: Ejemplo 24: Análisis del buen resultado del acoplamiento (Prueba de Ellmann) El buen resultado del acoplamiento efecto fue monitorizado a través de dos pruebas diferentes: (iii) La prueba de Ellmann en la cual es posible determinar el número de grupos Cys-SH de la proteina antes y después del acoplamiento efector. En este caso, una reducción considerable en los grupos SH libres después del acoplamiento indica un avance de la reacción . (iv) Prueba de actividad en la cual se puede medir la unión de KBD-B con y sin pantenol acoplado al cabello. Un buen procedimiento de reacción no debe reducir la actividad de KBD-pantenol en comparación con KBD no acoplado (ver Ej emplo 22 ) .
Para garantizar el acoplamiento eficiente, diversos lotes de prueba fueron corridos en los cuales se analizaron diferentes temperaturas y proporciones de mezclado KBD-B/pantenol MIC. 4 Estos lotes fueron entonces analizados como sigue utilizando la prueba de Ellmann: Materiales necesarios: — Reactivo de Ellmann: 5 , 5' -ditiobis (ácido 2-nitrobenzóico) (DTNB) ; 4 mg/1 mL en búfer de fosfato de Na 0.1 M - búfer de fosfato de Na 0.1 M pH 8.0 — solución de cisteína (26.3 mg de clorhidrato de cisteína monohidratado/100 mL de búfer de fosfatos de Na) Las soluciones fueron y deben solo ser preparadas poco antes de su uso. 1. En cada caso, 25 ?, 50 µ?,, 100 µ?,, 150 µ?>, 200 µ?, y 250 µ? de solución de cisteína fueron pipeteados en los tubos de ensaye (13 x 100 mm) para una curva de calibración. Las muestras de proteína que iban a ser determinadas fueron vaciadas en tubos de ensayo diferentes (volumen <= 250 ^iL) . Del KBD que iba a ser analizado, una cantidad de por lo menos un mg por mezcla de reacción fue dosificada. En el caso de los tubos de ensayo, el volumen total fue luego ajustado en cada caso a 250 µ?, con búfer de fosfato de Na. Si el volumen de 250 µ?, de muestra era excedido (tomando en cuenta el 1 mg requerido de KBD) , esto se tomaba en consideración aún cuando topping up en el punto 2 con 2.5 mL de búfer de fosfato de Na. 2. Adición de, en cada caso, 50 ^iL de reactivo de Ellmann y 2.5 mL de búfer de fosfato de Na. Mezclar brevemente e incubar durante 15 min a temperatura ambiente . 3. Medir la absorción a 412 nm. 4. Elaborar las curvas de calibración, gráficas y leer los valores de las muestras de proteina para ser determinadas.
La evaluación de la prueba de Ellmann, (Tabla 13), muestra que 2/3 de los grupos tiol libres pueden ser acoplados a un MIC-pantenol y la proporción de mezclado de KBD-B : MIC-pantenol es 1:2. Parece ser que la temperatura tiene poca influencia sobre el curso de la reacción .
Tabla 13: Prueba de Ellmann de KBD-B-pantenol de acuerdo con diferentes condiciones de acoplamiento.
Ejemplo 24a: Actividad de unión al cabello de KBD-B- pantenol Para verificar si KBD-B también se une con pantenol acoplado al cabello, se llevó a cabo un ensayo de unión cuantitativo (ver Figura 6) : en esta prueba, el cabello fue en primer lugar incubado con KBD-B-pantenol y se lavó el KBD-B-pantenol no unido. Luego se acopló una peroxidasa a través de la etiqueta His de KBD-B. La peroxidasa no unida se lavó otra vez. La peroxidasa unida puede convertir un sustrato incoloro (TMB) en un producto colorido que fue medido fotométricamente a 405 nm. La intensidad de la absorción indica la cantidad de KBD-B-pantenol unido. Como muestra comparativa, se eligió KBD-B sin pantenol. El resultado de la prueba se muestra en la Figura 7.
La Figura 7 muestra que la temperatura de reacción tampoco tuvo influencia decisiva sobre la actividad de KBD-B acoplado a pantenol. Hasta una proporción de mezclado KBD-B: pantenol de 1:2, la actividad de la proteina acoplada permanece prácticamente constante. Solo por encima de una relación de mezclado de 1:4 disminuye la actividad de unión del cabello. El acoplamiento a las Usinas o cisteinas presentes en la estructura de la proteina que ya no es selectiva puede ser responsable de esto, lo cual podría dar origen a un desdoblamiento y de este modo más deficiente acoplamiento de la proteína al cabello .
En general, los datos de la prueba de actividad y la prueba de Ellmann muestran que un acoplamiento KBD-B-pantenol procede muy fácilmente a una tasa de reacción de KBD-B: MIC-pantenol de 1:2 a temperatura ambiente, y el KBD-B-panteno, puede producirse en cantidades grandes.
Preparaciones dermocosméticas de acuerdo con la invención Preparaciones dermocosméticas de acuerdo con la invención se describen a continuación, que contienen la molécula efectora de unión a queratina producida de acuerdo con el Ejemplo 22 (dominio de unión a queratina de acuerdo con la ID SEC No. : 166) acoplada a través del ligador ácido maleimido capróico con pantenol. La molécula efectora de unión a queratina se menciona en los siguientes ejemplos como el dominio de unión a queratina IC-pantenol . El dominio de unión a queratina MIC-pantenol es especificado en los ejemplos siguientes por medio de representación de todas las demás moléculas efectoras de unión a queratina descritas antes. La persona experta en la técnica se dará cuenta que todas las demás moléculas efectoras de unión a queratina especificadas de acuerdo con el Ejemplo 22 también pueden ser producidas y utilizadas en las preparaciones que se dan a continuación.
Ejemplo 25: Uso de KBD en una emulsión para el cuidado durante el día-tipo O/W AI 1%: % Ingrediente (INCI) A 1.7 Ceteareth-6, Alcohol estearílico 0.7 Ceteareth-25 2.0 Dietilamino Hidroxibenzoil Hexil Benzoato 2.0 PEG-14 Dimeticona 3.6 Alcohol Cetearilico 6.0 Etilhexil Metoxicinamato 2.0 Dibutil Adipato B 5.0 Glicerina 0.2 EDTA Disodio 1.0 Pantenol c.s. Preservador 67.8 Agua desm. C 4.0 Triglicérido caprílico/cáprico, Copolímero acrilato de sodio D 0.2 Ascorbil fosfato de sodio 1.0 Acetato de tocoferilo 0.2 Bisabolol 1.0 Triglicérido caprílico/cáprico, ascorbato de sodio, tocoferol, retinol 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol E c.s. Hidróxido de sodio AI 5%: % Ingrediente (INCI) A 1.7 Ceteareth-6, Alcohol estearílico 0.7 Ceteareth-25 2.0 Dietilamino Hidroxibenzoil Hexil Benzoato 2.0 PEG-14 Dimeticona 3.6 Alcohol cetearílico 6.0 Etilhexil Metoxicinamato 2.0 Dibutil Adipato B 5.0 Glicerina 0.2 EDTA Disodio 1.0 Pantenol c.s. Preservador 63.8 Agua desm. C 4.0 Triglicérido caprilico/cáprico, Copolimero acrilato de sodio D 0.2 Ascorbil fosfato de sodio 1.0 Acetato de tocoferilo 0.2 Bisabolol 1.0 Triglicérido caprilico/cáprico, ascorbato de sodio, tocoferol, retinol 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol E c.s. Hidróxido de sodio Preparación: calentar las fases A y B por separado a aproximadamente 80°C. Agitar la fase B en la fase A y homogeneizar . Agitar la fase C en las fases A y B combinadas y homogeneizar otra vez. Enfriar con agitación a alrededor de 40°C, adicionar la fase D, ajustar el pH a aproximadamente 6.5 utilizando la fase E, homogeneizar y enfriar a temperatura ambiente con agitación.
Nota: la formulación se prepara sin gas protector. El envasado se debe llevar a cabo en envases impermeables al oxigeno, por ejemplo tubos de aluminio.
Ejemplo 26: Uso de KBD en una crema protectora de día -tipo O/W AI 1%: % Ingrediente (INCI) A 1.7 Ceteareth-6, Alcohol estearilico 0.7 Ceteareth-25 2.0 Dietilamino Hidroxibenzoil Hexil Benzoato 2.0 PEG-14 Dimeticona 3.6 Alcohol cetearilico 6.0 Etilhexil Metoxicinamato 2.0 Dibutil Adipato B 5.0 Glicerina 0.2 EDTA disodio 1.0 Pantenol c.s. Preservador 68.6 Agua desm. 4.0 Triglicérido caprilico/cáprico, copolimero acrilatos de sodio 1.0 Ascorbil fosfato de sodio 1.0 Acetato de tocoferilo 0.2 Bisabolol 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol c.s. Hidróxido de sodio % Ingrediente (INCI) 1.7 Ceteareth-ß, Alcohol estearilico 0.7 Ceteareth-25 2.0 Dietilamino Hidroxibenzoil Hexil Benzoato 2.0 PEG-14 Dimeticona 3.6 Alcohol cetearilico 6.0 Etilhexil Metoxicinamato 2.0 Dibutil Adipato 5.0 Glicerina 0.2 EDTA disodio 1.0 Pantenol c.s. Preservador 64.6 Agua desm. 4.0 Triglicérido caprilico/cáprico, copolimero acrilatos de sodio D 1.0 Ascorbil fosfato de sodio 1.0 Acetato de tocoferilo 0.2 Bisabolol 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol E es. Hidróxido de sodio Preparación: Calentar las fases A y B por separado a aproximadamente 80 °C. Agitar la fase B en la fase A y homogeneizar . Incorporar la fase C en las fases A y B combinadas y homogeneizar. Enfriar con agitación a aproximadamente 40°C. Adicionar la fase D, ajusfar el pH a aproximadamente 6.5 utilizando la fase E y homogeneizar. Enfriar a temperatura ambiente con agitación .
Ejemplo 27: Uso de KBD en una loción limpiadora facial -tipo 0/W AI 1%: % Ingrediente (INCI) A 10.0 Etilhexanoato de cetearilo 10.0 Triglicérido caprilico/cáprico 1.5 Ciclopentasiloxano, Ciclohexasiloxano 2.0 PEG-40 Aceite de ricino hidrogenado 3.5 Triglicérido caprilico/cáprico, copolimero acrilatos de sodio 1.0 Acetato de tocoferilo 0.2 Bisabolol c.s. Preservador c.s. Aceite esencial 3.0 Poliquaternium-44 0.5 Metosulfato cocotrimonio 0.5 Ceteareth-25 2.0 Pantenol, propilen glicol 4.0 Propilen glicol 0.1 EDTA disodio 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 60.7 Agua desm.
% Ingrediente (INCI) 10.0 Etilhexanoato de cetearilo 10.0 Triglicérido caprilico/cáprico 1.5 Ciclopentasiloxano, Ciclohexasiloxano 2.0 PEG-40 Aceite de ricino hidrogenado 3.5 Triglicérido caprilico/cáprico, copolimero acrilatos de sodio 1.0 Acetato de tocoferilo 0.2 Bisabolol c . s . Preservador c . s . Aceite esencial D 3.0 Poliquaternium-44 0.5 Metosulfato de cocotrimonio 0.5 Ceteareth-25 2.0 Pantenol, Propilen glicol 4.0 Propilen glicol 0.1 EDTA disodio 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 56.7 Agua desm.
Preparación: Disolver la fase A. Agitar la fase B en la fase A. Incorporar la fase C en las fases A y B combinadas. Disolver la fase D, agitar en las fases A, B y C, combinadas y homogeneizar . Después agitar durante 15 minutos .
Ejemplo 27a: Uso de KBD en un roció corporal para el cuidado diario AI 1%: % Ingrediente (INCI) A 3.0 Etilhexil Metoxicinamato 2.0 Dietilamino Hidroxibenzoil Hexil Benzoato 1.0 Poliquaternium-44 3.0 Propilen glicol 2.0 Pantenol, Propilen glicol 1.0 Ciclopentasiloxano, Ciclohexasiloxano 10.0 Octildodecanol 0.5 PVP 10.0 Triglicérido caprilico/cáprico 3.0 Benzoato de alquilo de C12-15 3.0 Glicerina 1.0 Acetato de tocoferilo 0.3 Bisabolol 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 59.2 Alcohol o, . o . % Ingrediente (INCI) 3.0 Etilhexil Metoxicinamato 2.0 Dietilamino Hidroxibenzoil Hexil Benzoato 1.0 Poliquaternium-44 3.0 Propilen glicol 2.0 Pantenol, Propilen glicol 1.0 Ciclopentasiloxano, Ciclohexasiloxano 10.0 Octildodecanol 0.5 PVP 10.0 Triglicérido caprilico/cáprico 3.0 Benzoato de alquilo de C12-15 3.0 Glicerina 1.0 Acetato de tocoferilo 0.3 Bisabolol 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 55.2 Alcohol Preparación: Pesar los componentes de la fase A y disolver hasta que esté transparente.
Ejemplo 28: Uso de KBD en un gel para el cuidado de la piel AI 1%: % Ingrediente (INCI) A 3.6 PEG-40 Aceite de ricino hidrogenado 15.0 Alcohol 0.1 Bisabolol 0.5 Acetato de tocoferilo c.s. Aceite esencial B 3.0 Pantenol 0.6 Carbómero 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 75.4 Agua desm. 0.8 Trietanolamina % Ingrediente (INCI) 3.6 PEG-40 Aceite de ricino hidrogenado 15.0 Alcohol 0.1 Bisabolol 0.5 Acetato de tocoferilo c.s. Aceite esencial 3.0 Pantenol 0.6 Carbómero 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de queratina MIC-pantenol 71.4 Agua desm. 0.8 Trietanolamina Preparación: Disolver la fase A hasta que esté transparente. Dejar que la fase B se hinche y neutralizar con la fase C. Agitar la fase A en la fase B homgeneizada y homogeneizar . 9 Ejemplo 29: Uso de KBD en una loción para después de afeitar AI 1%: Q. "5 Ingrediente (INCI) A 10.0 Etilhexanoato de cetearilo 5.0 Acetato de tocoferilo 1.0 Bisabolol 0.1 Aceite esencial 0.3 Crospolimero acrilatos/acrilato de alquilo de C10-30 B 15.0 Alcohol 1.0 Pantenol 3.0 Glicerina 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.1 Trietanolamina 63.5 Agua desm.
AI 5%: Ingrediente (INCI) A 10.0 Etilhexanoato de cetearilo 5.0 Acetato de tocoferilo 1.0 Bisabolol 0.1 Aceite esencial 0.3 Crospolímero acrilatos/acrilato de alquilo de C10-30 B 15.0 Alcohol 1.0 Pantenol 3.0 Glicerina 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.1 Trietanolamina 59.5 Agua desm.
Preparación: Mezclar los componentes de la fase A. Disolver la fase B, incorporar en la fase A y homogeneizar .
Ejemplo 30: Uso de KBD en una loción para después del sol AI 1%: % Ingrediente (INCI) A 0.4 Crospolímero acrilatos/acrilato de alquilo de C10-30 15.0 Etilhexanoato de cetearilo 0.2 Bisabolol 1.0 Acetato de tocoferilo c.s. Aceite esencial B 1.0 Pantenol 15.0 Alcohol 3.0 Glicerina 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 63.2 Agua desm. 0.2 Trietanolamina % Ingrediente (INCI) 0.4 Crospolímero acrilatos/acrilato de alquilo de C10-30 15.0 Etilhexanoato de cetearilo 0.2 Bisabolol 1.0 Acetato de tocoferilo c.s. Aceite esencial 1.0 Pantenol 15.0 Alcohol 3.0 Glicerina 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 59.2 Agua desm. 0.2 Trietanolamina Preparación: Mezclar los componentes de la fase A. Agitar la fase B en la fase A con homogeneización . Neutralizar con la fase C y homogeneizar otra vez.
Ejemplo 31: Uso de KBD en una loción filtro solar AI 1%: % Ingrediente (INCI) A 4.5 Etilhexil Metoxicinamato 2.0 Dietilamino Hidroxibenzoil Hexil Benzoato 3.0 Octocrileno 2.5 Malato de dialquilo de C12-13 0.5 Acetato de tocoferilo 4.0 Diestearato de poligliceril-3 metil Glucosa B 3.5 Isononanoato de cetearilo 1.0 Copolimero VP/eicoseno 5.0 Isohexadecano 2.5 Malato de dialquilo de C12-13 3.0 Dióxido de titanio, Trimetoxicaprililsilano C 5.0 Glicerina 1.0 Cetearil sulfato de sodio 0.5 Goma de xantano 59.7 Agua desm. D 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 1.0 Fenoxietanol, metilparabeno, etilparabeno, butilparabeno, propilparabeno, isobutilparabeno 0.3 Bisabolol o. .
% Ingrediente (INCI) 4.5 Etilhexil Metoxicinamato 2.0 Dietilamino Hidroxibenzoil Hexil Benzoato 3.0 Octocrileno 2.5 Malato de dialquilo de C12-13 0.5 Acetato de tocoferilo 4.0 Diestearato de poligliceril-3 metil Glucosa 3.5 Isononanoato de cetearilo 1.0 Copolimero VP/eicoseno 5.0 Isohexadecano 2.5 Malato de dialquilo de C12-13 3.0 Dióxido de titanio, Trimetoxicaprililsilano 5.0 Glicerina 1.0 Cetearil sulfato de sodio 0.5 Goma de xantano 55.7 Agua desm. 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 1.0 Fenoxietanol, metilparabeno, etilparabeno, butilparabeno, propilparabeno, isobutilparabeno 0.3 Bisabolol Preparación: Calentar los componentes de las fases A y B por separado a aproximadamente 80°C. Agitar la fase B en la fase A y homogeneizar . Calentar la fase C a aprox. 80°C y agitar en las fases A y B combinadas con homogeneización . Enfriar a aproximadamente 40°C con agitación, adicionar la fase D y homogeneizar otra vez.
Ejemplo 32: Uso de KBD en una loción filtro solar - tipo O/W AI 1%: Ingrediente (INCI) A 2. , 0 Ceteareth-6, Alcohol estearilico 2. , 0 Ceteareth-25 3. , 0 Tribehenina 2. , 0 Alcohol cetearilico 2. , 0 Etilhexanoato de cetearilo 5. , 0 Etilhexil Metoxicinamato 1. .0 Etilhexil Triazona 1. .0 Copolimero VP/eicoseno 7. .0 Miristato de isopropilo B 5. .0 Óxido de zinc, trietoxicaprililsilano C 0. ,2 Goma de xantano 0.5 Copolímero acrilato de hidroxietilo/ acriloildimetil taurato de sodio, escualano, Polísorbato 60 0.2 EDTA disodio 5.0 Propilen glicol 0.5 Pantenol 60.9 Agua desm. 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina IC-pantenol 0.5 Fenoxíetanol , metilparabeno, butilparabeno, etilparabeno, propilparabeno, isopropilparabeno 1.0 Acetato de tocoferilo 0.2 Bisabolol o . o . % Ingrediente (INCI) 2.0 Ceteareth-6, Alcohol estearílico 2.0 Ceteareth-25 3.0 Tribehenina 2.0 Alcohol cetearílico 2.0 Etilhexanoato de cetearilo 5.0 Etilhexil Metoxicinamato 1.0 Etilhexil Triazona 1.0 Copolímero VP/eicoseno 7.0 Miristato de isopropilo 5.0 Óxido de zinc, Trietoxicaprililsilano 0.2 Goma de xantano 0.5 Copoliraero acrilato de hidroxietilo/ acriloildimetil taurato de sodio, escualano, Polisorbato 60 0.2 EDTA disodio 5.0 Propilen glicol 0.5 Pantenol 56.9 Agua desm. 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.5 Fenoxietanol , metilparabeno, butilparabeno, etilparabeno, propilparabeno, isopropilparabeno 1.0 Acetato de tocoferilo 0.2 Bisabolol Preparación: Calentar la fase A a aproximadamente 80 C, agitar en la fase B y homogeneizar durante 3 min. del mismo modo calentar la fase C a 80°C y agitar en las fases combinadas A y B con homogeneización . Enfriar a aproximadamente 40°C, agitar en la fase D y homogeneizar otra vez.
Ejemplo 33: Uso del KBD en una loción filtro solar - tipo 0/W % Ingrediente (INCI) 3.5 Ceteareth-ß, Alcohol estearilico 1.5 Ceteareth-25 7.5 Etilhexil Metoxicinamato 2.0 Dietilamino Hidroxibenzoil Hexil Benzoato 2.0 Ciclopentasiloxano, Ciclohexasiloxano 0.5 Cera de abejas 3.0 Alcohol cetearilico 10.0 Triglicérido caprilico/cáprico 5.0 Dióxido de titanio, sílice, meticona, alúmina 3.0 Glicerina 0.2 EDTA disodio 0.3 Goma de xantano 1.0 Decil Glucósido 2.0 Pantenol, Propilen glicol 56.3 Agua desm. 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 1.0 Acetato de tocoferilo 0.2 Bisabolol c.s. Aceite esencial c.s. Preservador % Ingrediente (INCI) 3.5 Ceteareth-ß, Alcohol estearilico 1.5 Ceteareth-25 7.5 Etilhexil Metoxicinamato 2.0 Dietilamino Hidroxibenzoil Hexil Benzoato 2.0 Ciclopentasiloxano, Ciclohexasiloxano 0.5 Cera de abejas 3.0 Alcohol cetearilico 10.0 Triglicérido caprilico/cáprico 5.0 Dióxido de titanio, sílice, meticona, alúmina 3.0 Glicerina 0.2 EDTA disodio 0.3 Goma de xantano 1.0 Decil glucósido 2.0 Pantenol, Propilen glicol 52.3 Agua desm. 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina IC-pantenol 1.0 Acetato de tocoferilo 0.2 Bisabolol c.s. Aceite esencial c.s. Preservador Preparación: Calentar la fase A a aproximadamente 80°C, agitar en la fase B y homogeneizar durante 3 min. Del mismo modo calentar la fase C a 80°C y agitar en las fases A y B combinadas con homogeneización . Enfriar a aproximadamente 40°C, agitar en la fase D y homogeneizar otra vez.
Ejemplo 34: Uso del KBD en un bálsamo para pies AI 1%: Ingrediente (INCI) A 2. 0 Ceteareth-ß, Alcohol estearilico 2. 0 Ceteareth-25 5. 0 Etilhexanoato de cetearilo 4. 0 Cetil Alcohol 4. 0 Estearato de glicerilo 5. 0 Aceite mineral 0. 2 Mentol 0. 5 Canfor B 69i.3 Agua desm. c . s . Preservador C 1. 0 Bisabolol 1. 0 Acetato de tocoferilo D 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 5.0 Extracto de hamamelis AI 5%: Ingrediente (INCI) A 2. 0 Ceteareth-6, Alcohol estearilico 2. 0 Ceteareth-25 5. 0 Etilhexanoato de cetearilo 4. 0 Alcohol cetilico 4. 0 Estearato de glicerilo 5. 0 Aceite mineral 0. 2 Mentol 0. 5 Canfor B 65.3 Agua desm. c . s . Preservador C 1. 0 Bisabolol 1. 0 Acetato de tocoferilo D 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 5.0 Extracto de hamamelis Preparación: Calentar los componentes de las fases A y B por separado a aproximadamente 80°C. Agitar la fase B en la fase A hasta homogeneización . Enfriar a aproximadamente 40°C con agitación, adicionar las fases C y D y homogeneizar después. Enfriar a temperatura ambiente con agitación.
Ejemplo 35: Uso del KBD en una emulsión W/0 con bisabolol AI 1%: % Ingrediente (INCI) A 6.0 PEG-7 Aceite de ricino hidrogenado 8.0 Etilhexanoato de cetearilo 5.0 Miristato de isopropilo 15.0 Aceite mineral 0.3 Estearato de magnesio 0.3 Estearato de aluminio 2.0 Copolimero PEG- 5/Dodecil Glicol B 5.0 Glicerina 0.7 Sulfato de magnesio 55.6 Agua desm. C 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.5 Acetato de tocoferilo 0.6 Bisabolol AI 5%: % Ingrediente (INCI) A 6.0 PEG-7 Aceite de ricino hidrogenado 8.0 Etilhexanoato de cetearilo 5.0 Miristato de isopropilo 15.0 Aceite mineral 0.3 Estearato de magnesio 1 0.3 Estearato de aluminio 2.0 Copolimero PEG-45/Dodecil Glicol B 5.0 Glicerina Sulfato de magnesio 51.6 Agua desm. C 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.5 Acetato de tocoferilo Preparación: Calentar las fases A y B por separado a aproximadamente 85°C. Agitar la fase B en la fase A y homogeneizar . Enfriar a aproximadamente 40°C con agitación, adicionar la fase C y homogeneizar otra vez. Enfriar a temperatura ambiente con agitación. Lista de formulaciones para el dominio de unión a queratina patentado - cuidado para el cabello Ejemplo 36: Acondicionar en espuma con agente fijador AI 1% Ingrediente (INCI) A 10.0 Copolimero PVP/VA 0.2 Fosfato de hidroxietil cetildimonio 0.2 Ceteareth-25 0.5 Dimeticona Copoliol c.s. Aceite esencial 10.0 Alcohol 1.0. Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 68.1 Agua desm. 10.0 Propano/Butano AI 5% % Ingrediente (INCI) A 10.0 Copolimero PVP/VA 0.2 Fosfato de hidroxietil cetildimonio 0.2 Ceteareth-25 0.5 Dimeticona Copoliol c.s. Aceite esencial 10.0 Alcohol 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 64.1 Agua desm. 10.0 Propano/Butano Preparación: Pesar los componentes de la fase A, agitar hasta que todo se haya disuelto y envasar.
Ejemplo 37: Acondicionador en espuma AI 1% % Ingrediente (INCI) A 1.0 Poliquaternium-4 0.5 Fosfato de hidroxietil cetildimonio 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol c.s. Aceite esencial c.s. Preservador 91.5 Agua desm. 6.0 Propano/Butano AI 5% % Ingrediente (INCI) A 1.0 Poliquaternium-4 0.5 Fosfato de hidroxietil cetildimonio 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol c.s. Aceite esencial c.s. Preservador 87.5 Agua desm. 6.0 Propano/Butano Preparación: Pesar los componentes de la fase A, agitar hasta que todo se haya disuelto para dar una solución transparente y envasar.
Ejemplo 38: Acondicionador en espuma AI 1% % Ingrediente (INCI) A 1.0 Poliquaternium-11 0.5 Fosfato de hidroxietil cetildimonio 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol c.s. Aceite esencial c.s. Preservador 91.5 Agua desm. 6.0 Propano/Butano AI 5% % Ingrediente (INCI) A 1.0 Poliquaternium-11 0.5 Fosfato de hidroxietil cetildimonio 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol c.s. Aceite esencial c.s. Preservador 87.5 Agua desm. 6.0 Propano/Butano Preparación: Pesar todos los componentes de la fase A, agitar hasta que todo se haya disuelto para obtener una solución transparente y envasar.
Ejemplo 39: Espuma para peinar AI 1% % Ingrediente (INCI) A 0.5 Laureth-4 c.s. Aceite esencial B 77.3 Agua desm. 10.0 Poliquaternium-28 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.5 Dimeticona Copoliol 0.2 Ceteareth-25 0.2 Pantenol 0.1 PEG-25 PABA 0.2 Hidroxietilcelulosa C 10.0 HFC 152 A % Ingrediente (INCI) 0.5 Laureth-4 c.s. Aceite esencial 73.3 Agua desm . 10.0 Poliquaternium-28 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.5 Dimeticona Copoliol 0.2 Ceteareth-25 0.2 Pantenol 0.1 PEG-25 PABA 0.2 Hidroxietilcelulosa C 10.0 HFC 152 A Preparación: Mezclar los componentes de la fase A. Adicionar los componentes de la fase B uno después del otro y disolver. Envasar con la fase C.
Ejemplo 40: Espuma para el peinado AI 1% % Ingrediente (INCI) A 2.0 Metosulfato de cocotrimonio c.s. Aceite esencial 78.5 Agua desm. 6.7 Copolimero de acrilatos 0.6 AMP 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.5 Dimeticona Copoliol 0.2 Ceteareth-25 0.2 Pantenol 0.1 PEG-25 PABA 0.2 Hidroxietilcelulosa 10.0 HFC 152 A o. o % Ingrediente (INCI) 2.0 Metosulfato de cocotrimonio c.s. Aceite esencial 74.5 Agua desm. 6.7 Copolimero de acrilatos 0.6 AMP 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.5 Dimeticona Copoliol 0.2 Ceteareth-25 0.2 Pantenol 0.1 PEG-25 PABA 0.2 Hidroxietilcelulosa C 10.0 HFC 152 A Preparación: Mezclar los componentes de la fase A. Adicionar los componentes de la fase B uno después del otro y disolver. Envasar con la fase C.
Ejemplo 41: Espuma para el peinado AI 1% % Ingrediente (INCI) A 2,0 Metosulfato de cocotrimonio c.s. Aceite esencial B 7.70 Poliquaternium-44 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol c.s. Preservador 79.3 Agua desm . C 10.0 Propano/Butano AI 5% % Ingrediente (INCI) A 2.0 Metosulfato de cocotrimonio c.s. Aceite esencial B 7.70 Poliquaternium-44 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol c . s . Preservador 75.3 Agua desm. C 10.0 Propano/Butano Preparación: Preparación: Mezclar los componentes de la fase A. Disolver los componentes de la fase B hasta que esté transparente, luego agitar la fase B en la fase A. Ajustar el pH a 6-7, envasar con la fase C.
Ejemplo 42: Espuma para el peinado AI 1% % Ingrediente (INCI) A 2.00 Metosulfato de cocotrimonio es. Aceite esencial B 72.32 Agua desm. 2.00 Copolímero VP/Acrilatos/Lauril Metacrilato 0.53 AMP 1.00 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.20 Ceteareth-25 0.50 Pantenol 0.05 Benzofenona-4 0.20 Amodimeticona, Cloruro de cetrimonio, Trideceth-12 15.00 Alcohol 0.20 Hidroxietilcelulosa 6.00 Propano/Butano o. ¾ % Ingrediente (INCI) 2.00 Metosulfato de cocotrimonio c.s. Aceite esencial 68.32 Agua desm. 2.00 Copolímero VP/Acrilatos/Lauril Metacrilato 0.53 AMP 5.00 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.20 Ceteareth-25 0.50 Pantenol 0.05 Benzofenona-4 0.20 Amodimeticona, Cloruro de cetrimonio, Trideceth-12 15.00 Alcohol 0.20 Hidroxietilcelulosa 6.00 Propano/Butano Preparación: Mezclar los componentes de la fase A. Adicionar los componentes de la fase B uno después del otro y disolver. Disolver la fase C en la mezcla de A y B, luego ajustar el pH a 6-7, envasar con la fase D.
Ejemplo 43: Espuma para el peinado AI 1% % Ingrediente (INCI) A 2.00 Cloruro de cetrimonio c.s. Aceite esencial B 67.85 Agua desm. 7.00 Poliquaternium-46 1.00 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.20 Ceteareth-25 0.50 Pantenol 0.05 Benzofenona-4 0.20 Amodimeticona , Cloruro de cetrimonio, Trideceth-12 15.00 Alcohol C 0.20 Hidroxietilcelulosa D 6.00 Propano/Butano AI 5% % Ingrediente (INCI) A 2.00 Cloruro de cetrimonio c.s. Aceite esencial B 63.85 Agua desm. 7.00 Poliquaternium-46 5.00 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.20 Ceteareth-25 0.50 Pantenol 0.05 Benzofenone-4 0.20 Amodimeticona , Cloruro de cetrimonio, Trideceth-12 15.00 Alcohol C 0.20 Hidroxietilcelulosa D 6.00 Propano/Butano Preparación: Mezclar los componentes de la fase A. Adicionar los componentes de la fase B uno después del otro y disolver. Disolver la fase C en la mezcla de A y B, luego ajustar el pH a 6-7, envasar con la fase D.
Ejemplo 44: Espuma para el peinado AI 1% % Ingrediente (INCI) A c.s. PEG-40 Aceite de ricino hidrogenado c.s. Aceite esencial 85.5 Agua desm. B 7.0 Poliestireno sulfonato de sodio 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.5 Bromuro de cetrimonio c.s. Preservador C 6.0 Propano/Butano Espuma para el peinado AI 5% % Ingrediente (INCI) A c.s. PEG-40 Aceite de ricino hidrogenado c.s. Aceite esencial 81.5 Agua desm. B 7.0 Poliestireno sulfonato de sodio 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.5 Bromuro de cetrimonio c.s. Preservador C 6.0 Propano/Butano Preparación: Solubilizar la fase A. Pesar la fase B en la fase A y disolver hasta que esté transparente. Ajusfar el pH a 6-7, envasar con la fase C.
Ejemplo 45: Espuma para el peinado AI 1% % Ingrediente (INCI) A c.s. PEG-40 Aceite de ricino hidrogenado c.s. Aceite esencial 92.0 Agua desm. B 0.5 Poliquaternium-10 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.5 Bromuro de cetrimonio c.s. Preservador C 6.0 Propano/Butano AI 5% % Ingrediente (INCI) A c.s. PEG-40 Aceite de ricino hidrogenado c.s. Aceite esencial 88.0 Agua desm. B 0.5 Poliquaternium-10 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.5 Bromuro de cetrimonio c.s. Preservador C 6.0 Propano/Butano Preparación: Solubilizar la fase A. Pesar la fase B en la fase A y disolver hasta que esté transparente. Ajusfar el pH a 6-7, envasar con la fase C.
Ejemplo 46: Espuma para el peinado AI 1% % Ingrediente (INCI) A c.s. PEG-40 Aceite de ricino hidrogenado c.s. Aceite esencial 82.5 Agua desm.
B 10.0 Polyquaternium-16 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.5 Fosfato de hidroxietil cetildimonio c.s. Preservador C 6.0 Propano/Butano AI 5% Ingrediente (INCI) A c.s. PEG-40 Aceite de ricino hidrogenado c.s. Aceite esencial 78.5 Agua desm.
B 10.0 Polyquaternium-16 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MlC-pantenol 0.5 Fosfato de hidroxietil cetildimonio c.s. Preservador C 6.0 Propano/Butano Preparación: Preparación: Solubilizar la fase A. Pesar la fase B en la fase A y disolver hasta que esté transparente. Ajustar el pH a 6-7, envasar con la fase C.
Ejemplo 47: Espuma para el peinado Ingrediente (INCI) A 2.0 Metosulfato de cocotrimonio c.s. Aceite esencial B 84.0 Agua desm. 2.0 Chitosan 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.5 Dimeticona copoliol 0.2 Ceteareth-25 0.2 Pantenol 0.1 PEG-25 PABA C 10.0 HFC 152 A AI 5% % Ingrediente (INCI) A 2.0 Metosulfato de cocotrimonio c.s. Aceite esencial B 80.0 Agua desm. 2. O Chitosan 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.5 Dimeticona copoliol 0.2 Ceteareth-25 0.2 Pantenol 0.1 PEG-25 PABA C 10.0 HFC 152 A Preparación: Mezclar los componentes de la fase A. Adicionar los componentes de la fase B uno después del otro y disolver. Envasar con la fase C.
Ejemplo 48: Shampoo para el cuidado AI 1% % Ingrediente (INCI) A 30.0 Laureth sulfato de sodio 6.0 Cocoanfoacetato de sodio 6.0 Cocamidopropil betaina 3.0 Laureth sulfato de sodio, glicol diestearato, cocamida MEA, Laureth-10 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 7.7 Polyquaternium- 2.0 Amodimeticona c.s. Aceite esencial c.s. Preservador 1.0 Cloruro de sodio 43.3 Agua desm. c.s. Ácido cítrico % Ingrediente (INCI) 30.0 Laureth sulfato de sodio 6.0 Cocoanfoacetato de sodio 6.0 Cocamidopropil betaína 3.0 Laureth sulfato de sodio, glicol diestearato, cocamida MEA, Laureth-10 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 7.7 Polyquaternium-44 2.0 Amodimeticona c.s. Aceite esencial c.s. Preservador 1.0 Cloruro de sodio 39.3 Agua desm. c.s. Ácido cítrico Preparación: Mezclar los componentes de la fase A y disolver. Ajustar el pH a 6-7 con ácido cítrico.
Ejemplo 49: Gel para el baño AI 1% % Ingrediente (INCI) A 40.0 Laureth sulfato de sodio 5.0 Decil glucósido 5.0 Cocamidopropil betaína 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 1.0 Pantenol c.s. Aceite esencial c.s. Preservador 2.0 Cloruro de sodio 46.0 Agua desm.
B c.s. Ácido cítrico AI 5% % Ingrediente (INCI) A 40.0 Laureth sulfato de sodio 5.0 Decil glucósido 5.0 Cocamidopropil betaina 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 1.0 Pantenol c.s. Aceite esencial c.s. Preservador 2.0 Cloruro de sodio 42.0 Agua desm. B c.s. Ácido cítrico Preparación: Mezclar los componentes de la fase A y disolver. Ajustar el pH a 6-7 con ácido cítrico.
Ejemplo 50: Shampoo AI 1% % Ingrediente (INCI) A 40.0 Laureth sulfato de sodio 5.0 Sulfonato de sodio C12-15 Pareth-15 5.0 Decil glucósido c.s. Aceite esencial 0.1 Fitantriol 44.6 Agua desm. 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.3 Polyquaternium-10 1.0 Pantenol c.s. Preservador 1.0 Laureth-3 2.0 Cloruro de sodio AI 5% % Ingrediente (INCI) A 40.0 Laureth sulfato de sodio 5.0 Sulfonato de sodio C12-15 Pareth-15 5.0 Decil glucósido c.s. Aceite esencial 0.1 FItantriol 40.6 Agua desm. 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.3 Polyquaternium-10 1.0 Pantenol c.s. Preservador 1.0 Laureth-3 2.0 Cloruro de sodio Preparación: Mezclar los componentes de la fase A y disolver. Ajustar el pH a 6-7 con ácido cítrico.
Ejemplo 51: Shampoo AI % Ingrediente (INCI) A 15.00 Cocamidopropil betaina 10.00 Cocoanfodiacetato de disodio 5.00 Polisorbato 20 5.00 Decil glucósido c.s. Aceite esencial c.s. Preservador 1.00 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.15 Cloruro Hidroxipropiltrimonio Guar 2.00 Laureth-3 58.00 Agua desm. c.s. Ácido cítrico B 3.00 Diestearato PEG-150 AI 5% % Ingrediente (INCI) A 15.00 Cocamidopropil betaina 10.00 Cocoanfodiacetato de disodio 5.00 Polisorbato 20 5.00 Decil glucósido c.s. Aceite esencial c.s. Preservador 5.00 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.15 Cloruro Hidroxipropiltrimonio Guar 2.00 Laureth-3 54.00 Agua desm. c.s. Ácido cítrico B 3.00 Diestearato PEG-150 Preparación: Pesar los componentes de la fase A y disolver. Ajustar el pH a 6-7. Adicionar la fase B y calentar a aproximadamente 50 °C. Enfriar a temperatura ambiente con agitación.
Ejemplo 52: Crema humectante para el cuidado corporal AI 1% o o Ingrediente (INCI) A 2.0 Ceteareth-25 2.0 Ceteareth-6, Alcohol estearílico 3.0 Etilhexanoato de cetearilo 1.0 Dimeticona 4.0 Alcohol cetearilico 3.0 Estearato de glicerilo SE 5.0 Aceite mineral 4.0 Aceite de semilla de Simmondsia Chinensis (Jojoba) 3.0 Aceite mineral, Alcohol de lanolina B 5.0 Propilen glicol 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 1.0 Pantenol 0.5 Silicato de magnesio y aluminio q.s Preservador 65.5 Agua desm.
C c.s. Aceite esencial D c.s. Ácido cítrico AI 5% % Ingrediente (INCI) A 2.0 Ceteareth-25 2.0 Ceteareth-ß, Alcohol estearílico 3.0 Etilhexanoato de cetearilo 1.0 Dimeticona 4.0 Alcohol cetearílico 3.0 Estearato de glicerilo SE 5.0 Aceite mineral 4.0 Aceite de semilla de Simmondsia Chinensis (Jojoba) 3.0 Aceite mineral, Alcohol de lanolina 5.0 Propilen glicol 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 1.0 Pantenol 0.5 Silicato de magnesio y aluminio q.s Preservador 61.5 Agua desm. c.s. Aceite esencial D c.s. Ácido cítrico Preparación: Calentar las fases A y B por separado a aproximadamente 80°C. Prehomogeneizar brevemente la fase B, luego agitar la fase B en la fase A y homogeneizar otra vez. Enfriar a aproximadamente 40°C, adicionar la fase C y homogeneizar perfectamente otra vez. Ajusfar el pH a 6-7 con ácido cítrico.
Ejemplo 53: Crema humectante para el cuidado corporal AI 1% % Ingrediente (INCI) A 6.0 PEG-7 Aceite de ricino hidrogenado 10.0 Etilhexanoato de cetearilo 5.0 Miristato de isopropilo 7.0 Aceite mineral 0.5 Shea Butter (Butyrospermum Parkii) 0.5 Estearato de aluminio 0.5 Estearato de magnesio 0.2 Bisabolol 0.7 Quaternium-18-Hectorita B 5.0 Dipropilen glicol 0.7 Sulfato de magnesio c.s. Preservador 62.9 Agua desm.
C c.s. Aceite esencial 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol AI 5% % Ingrediente (INCI) A 6.0 PEG-7 Aceite de ricino hidrogenado 39 10.0 Etilhexanoato de cetearilo 5.0 Miristato de isopropilo 7.0 Aceite mineral 0.5 Shea Butter ( Butyrospermum Parkii] 0.5 Estearato de aluminio 0.5 Estearato de magnesio 0.2 Bisabolol 0.7 Quaternium-18-Hectorita B 5.0 Dipropilen glicol 0.7 Sulfato de magnesio c.s. Preservador 58.9 Agua desm. s. Aceite esencial 0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión queratina MIC-pantenol Preparación: Calentar las fases A y B por separado a aproximadamente 80°C. Agitar la fase B en la fase A y homogeneizar . Enfriar a aproximadamente 40°C con agitación, adicionar la fase C y homogeneizar otra vez. Dejar enfriar a temperatura ambiente con agitación.
Ejemplo 54: Maquillaje líquido tipo O/ AI 1% % Ingrediente (INCI) A 2.0 Ceteareth-6, Alcohol estearílico 2.0 Ceteareth-25 6.0 Estearato de glicerilo 1.0 Alcohol cetílico 8.0 Aceite mineral 7.0 Etilhexanoato de cetearilo 0.2 Dimeticona B 3.0 Propilen glicol 1.0 Pantenol es. Preservador 61.9 Agua desm.
C 0.1 Bisabolol 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol c.s. Aceite esencial D 5.7 C. I. 77 891, Dióxido de titanio 1.1 Óxidos de hierro AI 5% o Ingrediente (INCI) A 2.0 Ceteareth-ß, Alcohol estearílico 2.0 Ceteareth-25 6.0 Estearato de glicerilo 1.0 Alcohol cetílico 8.0 Aceite mineral 7.0 Etilhexanoato de cetearilo 0.2 Dimeticona B 3.0 Propilen glicol 1.0 Pantenol c.s. Preservador 57.9 Agua desm.
C 0.1 Bisabolol 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina IC-pantenol c.s. Aceite esencial D 5.7 C. I. 77 891, Dióxido de titanio 1.1 Óxidos de hierro Preparación: Calentar las fases A y B por separado a aproximadamente 80°C. Agitar la fase B en la fase A y homogeneizar. Enfriar a aproximadamente 40°C con agitación, adicionar las fases C y D y homogeneizar perfectamente otra vez. Dejar enfriar a temperatura ambiente con agitación.
Ejemplo 55 Las preparaciones dermocosméticas de acuerdo con la invención se describen a continuación, las cuales contienen las moléculas efectoras de unión a queratina que se producen de acuerdo con el Ejemplo 23 (dominio de unión a queratina de acuerdo con ID SEC No. 266) acoplada a través del ligador ácido maleimidocapróico con pantenol. En los ejemplos siguientes se hace referencia a la molécula efectora de unión a queratina especificada como dominio de unión a queratina MIC-pantenol.
La molécula efectora de unión a queratina especificada se utiliza como aproximadamente 5% en peso de concentración por peso de la solución acuosa. Los siguientes datos son partes en peso.
Shampoo transparente Shampoo Shampoo acondicionador transparente Emulsiones de espuma O/W Shampoo acondicionador aperlado ajustar pH a 6.0 Shampoo acondicionador transparente ajustar pH a 6.0 Shampoo acondicionador transparente con efecto de volumen Ajustar pH a 6.0 Crema en gel Formulación filtro solar OW Hidrodispersión Emulsión filtro solar WO Barras Emulsión PIT Formulación OW auto- bronceadora Maquillaje OW Hidrodispersión auto-bronceadora Hidrodispersión para después del sol Emulsiones WO Emulsión estabilizada con sólidos (emulsiones pickering) Barras Emulsiones PIT auto- uronceado Gel oleoso Ejemplo 56 100 mg de la emulsión para el cuidado durante el día del Ejemplo 19 se aplicaron con un WS de 5% y como placebo sin dominio de unión a queratina MIC-pantenol (ad 100 con agua) en cada caso al lado interno del antebrazo. De cinco individuos, después de media hora, cuatro indicaron una sensación mucho mejor de la piel en el lado interior del antebrazo que había sido tratado con el dominio de unión a queratina MIC-pantenol. Los cinco individuos percibieron el lado tratado con el ingrediente activo de acuerdo con la invención considerablemente más húmedo, es decir, menos seco.
Ejemplo 57 En las formulaciones siguientes se describen preparaciones cosméticas para filtro solar que contienen una combinación de por lo menos un pigmento inorgánico, preferentemente óxido de zinc y/o dióxido de titanio y filtros orgánicos UV-A y UV-B.
Las formulaciones que se especifican más adelante se rpeparan en las formas acostumbradas que conocen los expertos en la técnica.
El contenido de la molécula efectora de unión a queratina que se prepara con el Ejemplo 23 (dominio de unión a queratina de acuerdo con ID SEC No.: 166) acoplado a través del ligador ácido maleimidocapróico con pantenol se refiere a 100% del ingrediente activo. El ingrediente activo de acuerdo con la invención puede utilizarse en forma pura o incluso en forma de una solución acuosa. En el caso de la solución acuosa debe ajustarse el contenido de agua desmineralizada en la formulación especifica.
A continuación se describen preparaciones dermocosméticas de acuerdo con la invención, que contienen la molécula efectora de unión a queratina de acuerdo con el Ejemplo 23 (dominio de unión a queratina de acuerdo con ID SEC No. 168) acoplada a través del ligador ácido maleimidocapróico con pantenol. En los siguientes ejemplos se hace referencia a la molécula efectora de unión a queratina como el dominio de unión a queratina MIC-pantenol . El dominio de unión a queratina MIC-pantenol se especifica en los ejemplos siguientes por medio de la representación de todas las moléculas efectoras de unión a queratina descritas en lo anterior. El experto en la técnica se dará cuenta que todas las demás moléculas efectoras de unión a queratina especificadas de acuerdo con el Ejemplo 23 también pueden producirse y utilizarse en las preparaciones que se dan a continuación.
Ejemplo 58: Uso del KBD en una emulsión para el cuidado diario - tipo 0/W AI 1%: % Ingrediente (INCI) A 1.7 Ceteareth-6, Alcohol estearilico 0.7 Ceteareth-25 2.0 Dietilamino hidroxibenzoil hexil benzoato 2.0 PEG-14 Dimeticona 3.6 Alcohol cetearilico 6.0 Etilhexil metoxicinamato 2.0 Dibutil adipato B 5.0 Glicerina 0.2 EDTA disodio 1.0 Pantenol c.s. Preservador 67.8 Agua desm. C 4.0 Triglicérido caprilico/cáprico, copolimero acrilatos de sodio D 0.2 Ascorbil fosfato de sodio 1.0 Acetato de tocoferilo 0.2 Bisabolol 1.0 Triglicérido caprilico/cáprico, Ascorbato de sodio, Tocoferol, Retinol 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol E es. Hidróxido de sodio AI 5%: % Ingrediente (INCI) 1 .7 Ceteareth-6, Alcohol estearilico 0 .7 Ceteareth-25 2 .0 Dietilamino hidroxibenzoil hexil benzoato 2 .0 PEG-14 Dimeticona 3 .6 Alcohol cetearilico 6 .0 Etilhexil metoxicinamato ¿. .0 Dibutil adipato 5 .0 Glicerina 0 .2 EDTA disodio 1 .0 Pantenol c . s . Preservador 63.8 Agua desm. C 4.0 Triglicérido caprilico/cáprico, copolimero acrilatos de sodio D 0.2 Ascorbil fosfato de sodio 1.0 Acetato de tocoferilo 0.2 Bisabolol 1.0 Triglicérido caprílico/cáprico, Ascorbato de sodio, Tocoferol, Retinol 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina IC-pantenol E c.s. Hidróxido de sodio Preparación: Calentar las fase A y B por separado a aproximadamente 80°C. Agitar la fase B en la fase A y homogeneizar . Agitar la fase C en las fases A y B combinadas y homogeneizar otra vez. Enfriar con agitación a aproximadamente 40 °C, adicionar la fase D, ajustar el pH a aproximadamente 6.5 utilizando la fase E, homogeneizar y enfriar a temperatura ambiente con agitación.
Nota: la formulación se prepara sin gas protector. El envasado debe llevarse a cabo en envases impermeables al oxígeno, por ejemplo tubos de aluminio.
Ejemplo 59: Uso del KBD en una crema protectora de día -tipo 0/W AI 1%: % Ingrediente (INCI) A 1.7 Ceteareth-6, Alcohol estearílico 0.7 Ceteareth-25 2.0 Dietilamino hidroxibenzoil hexil benzoato 2.0 PEG-14 Dimeticona 3.6 Alcohol cetearílico 6.0 Etilhexil metoxicinamato 2.0 Dibutil adipato B 5.0 Glicerina 0.2 EDTA disodio 1.0 Pantenol es. Preservador 68.6 Agua desm. C 4.0 Triglicérido caprilico/cáprico, copolimero acrilatos de sodio D 1.0 Ascorbil fosfato de sodio 1.0 Acetato de tocoferilo 0.2 Bisabolol .1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol E es. Hidróxido de sodio · AI 5%: %. Ingrediente (INCI) A 1.7 Cetear.eth-6, Alcohol estearilico 0.7 Ceteareth-25 2.0 Dietilamino hidroxibenzoil hexil benzoato 2.0 PEG-14 Dimeticona 3.6 Alcohol cetearilico 6.0 Etilhexil metoxicinamato 2.0 Dibutil adipato B 5.0 Glicerina 0.2 EDTA disodio 1.0 Pantenol c.s. Preservador 64.6 Agua desm. C 4.0 Triglicérido caprilico/cáprico, copolímero acrilatos de sodio D 1.0 Ascorbil fosfato de sodio 1.0 Acetato de tocoferilo 0.2 Bisabolol 5.0 Solución acuosa con aprox. 51 dominio de unión a queratina MIC-pantenol E c.s. Hidróxido de sodio Preparación: Calentar las fases A y B por separado a aproximadamente 80°C. Agitar la fase B en la fase A y homogeneizar . Incorporar la fase C en las fases A y B combinadas y homogeneizar. Enfriar con agitación a aproximadamente 40°C. Adicionar la fase D, ajustar el pH a aproximadamente 6.5 utilizando la fase E y homogeneizar. Enfriar a temperatura ambiente con agitación.
Ejemplo 60: Uso del KBD en una loción para la limpieza de la cara - tipo 0/W AI 1%: % Ingrediente (INCI) A 10.0 Cetearil etilhexanoato 10.0 Triglicérido caprilico/cáprico 1.5 Ciclopenta iloxano, Ciclohexasiloxano 2.0 Aceite de ricino hidrogenado PEG-40 B 3.5 Triglicérido caprilico/cáprico, copolimero acrilatos de sodio C 1.0 Acetato de tocoferilo 0.2 Bisabolol c.s. Preservador c.s. Aceite esencial D 3.0 Polyquaternium-44 0.5 Metosulfato de cocotrimonio 0.5 Ceteareth-25 2.0 Pantenol, Propilen glicol 4.0 Propilen glicol 0.1 EDTA disodic 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 60.7 Agua desm.
AI 5%: % Ingrediente (INCI) A 10.0 Cetearil etilhexanoato 10.0 Triglicérido caprilico/cáprico 1.5 Ciclopentasiloxano, Ciclohexasiloxano 2.0 Aceite de ricino hidrogenado PEG-40 B 3.5 Triglicérido caprilico/cáprico, copolimero acrilatos de sodio C 1.0 Acetato de tocoferilo 0.2 Bisabolol c.s. Preserv dor c.s. Aceite esencial D 3.0 Polyquaternium- 0.5 Metosulfato de cocotrimonio 0.5 Ceteareth-25 2.0 Pantenol, Propilen glicol 4.0 Propilen glicol 0.1 EDTA disodio 5.0 Solución acuosa con aprox. 5 % dominio de unión a queratina MIC-pantenol 56.7 Agua desm.
Preparación: Disolver la fase A. Agitar la fase B en la fase A. Incorporar la fase C en las fases A y B combinadas. Disolver la fase D, agitar en las fases A, B y C combinada y homogeneizar . Agitar después durante 15 minutos .
Ejemplo 60a: Uso del KBD en un rocío corporal para el cuidado diario AI 1%: % Ingrediente (INCI) A 3.0 Etilhexil metoxicinamato 2.0 Dietilamino hidroxibenzoil hexil benzoato 1.0 Polyquaternium-44 3.0 Propilen glicol 2.0 Pantenol, Propilen glicol 1.0 Ciclopentasiloxano, Ciclohexasiloxano 10.0 Octildodecanol 0.5 PVP 10.0 Triglicérido caprilico/cáprico 3.0 Benzoato de alquilo de C12-15 3.0 Glicerina 1.0 Acetato de tocoferilo 0.3 Bisabolol 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 59.2 Alcohol AI 5% % Ingrediente (INCI) A 3.0 Etilhexil metoxicinamato 2.0 Dietilamino hidroxibenzoil hexil benzoato 1.0 Polyquaternium-44 3.0 Propilen glicol 2.0 Pantenol, Propilen glicol 1.0 Ciclopentasiloxano, Ciclohexasiloxano 10.0 Octildodecanol 0.5 PVP 10.0 Triglicérido caprilico/cáprico 3.0 Benzoato de alquilo de C12-15 3.0 Glicerina 1.0 Acetato de tocoferilo 0.3 Bisabolol 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 55.2 Alcohol Preparación: Pesar los componentes de la fase A y disolver hasta que esté transparente.
Ejemplo 61: Uso del KBD en un gel para el cuidado de la piel AI 1%: % Ingrediente (INCI) A 3.6 Aceite de ricino hidrogenado PEG-40 15.0 Alcohol 0.1 Bisabolol 0.5 Acetato de tocoferilo es. Aceite esencial B 3.0 Pantenol 0.6 Carbómero 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 75.4 Agua desm. C 0.8 Trietanolamina AI 5%: % Ingrediente (INCI) A 3.6 Aceite de ricino hidrogenado PEG-40 15.0 Alcohol 0.1 Bisabolol 0.5 Acetato de tocoferilo c.s. Aceite esencial B 3.0 Pantenol O .6 Carbómero 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 71.4 Agua desm. C 0.8 Trietanolamina Preparación: Disolver la fase A hasta que esté transparente. Dejar que la fase B se hinche y neutrazliar con la fase C. Agitar la fase A en la fase B homogeneizada y homogeneizar .
Ejemplo 62: Uso del K3D en una loción para después de afeitar 1%: I Ingrediente (INCI) 10.0 Cetearil etilhexanoato 5.0 Acetato de tocoferilo 1.0 Bisabolol 0.1 Aceite esencial 0.3 Crospolimero acrilatos/acrilato de alquilo de -30 15.0 Alcohol 1.0 Pantenol 3.0 Glicerina 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.1 Trietanolamina 63.5 Agua desm.
AI 5%: % Ingrediente (INCI) A 10.0 Cetearil etilhexanoato 5.0 Acetato de tocoferilo 1.0 Bisabolol 0.1 Aceite esencial 0.3 Crospolímero acrilatos/acrilato de alquilo de C10-30 B 15.0 Alcohol 1.0 Pantenol 3.0 Glicerina 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.1 Trietanolamina 59.5 Agua desm.
Preparación: Mezclar los componentes de la fase A. Disolver la fase B, incorporar en la fase A y homogeneizar .
Ejemplo 63: Uso del KBD en una loción para después del sol AI 1%: % Ingrediente (INCI) A 0.4 Crospolimero acrilatos/acrilato de alquilo de C10-30 15.0 Cetearil etilhexanoato 0.2 Bisabolol 1.0 Acetato de tocoferilo c.s. Aceite esencial B 1.0 Pantenol 15.0 Alcohol 3.0 Glicerina 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 63.2 Agua desm. C 0.2 Trietanolamina AI 5%: % Ingrediente (INCI) A 0.4 Crospolimero acrilatos/acrilato de alquilo de C10-30 15.0 Cetearil etilhexanoato 0.2 Bisabolol 1.0 Acetato de tocoferilo es. Aceite esencial B 1.0 Pantenol 15.0 Alcohol 3.0 Glicerina 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 59.2 Agua desm. C 0.2 Trietanolamina Preparación: Mezclar los componentes de la fase A. Agitar la fase B en la fase A hasta homogeneizar . Neutralizar con la fase C y homogeneizar otra vez.
Ejemplo 64: Uso del KBD en una loción filtro solar AI 1%: 0 Ingrediente (INCI) A 4. 5 Etilhexil metoxicinamato 2. 0 Dietilamino hidroxibenzoil hexil benzoato . 3· 0 Octocrileno 2. 5 Malato de dialquilo de C12-13 . 0. 5 Acetato de tocoferilo 4. 0 Diestearato de poligliceril-3 metil glucosa B 3. 5 Cetearil isononanoato 1.0 Copolimero VP/eicoseno 5.0 Isohexadecano 2.5 Malato de dialquilo de C12-13 3.0 Dióxido de titanio, Trimetoxicaprilsililano C 5.0 Glicerina 1.0 Cetearil sulfato de sodio 0.5 Goma de xantano 59.7 Agua desm. D 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 1.0 Fenoxietanol, Metilparabeno, Etilparabeno, Butilparabeno, Propilparabeno, Isobutilparabeno 0.3 Bisabolol AI 5%: % Ingrediente (INCI) A 4. 5 Etilhexil metoxicinamato 2. 0 Dietilamino hidroxibenzoil hexil benzoato 3. 0 Octocrileno 2. 5 Malato de dialquilo de C12-13 0. 5 Acetato de tocoferilo 4. 0 Diestearato de poligliceril-3 metil glucosa B 3. 5 Cetearil isononanoato 1. 0 Copolimero VP/eicoseno 5. 0 Isohexadecano 2.5 Malato de dialquilo de C12-13 3.0 Dióxido de titanio, Trimetoxicaprilsililano C 5.0 Glicerina 1.0 Cetearil sulfato de sodio 0.5 Goma de xantano 55.7 Agua desm. D 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 1.0 Fenoxietanol, Metilparabeno, Etilparabeno, Butilparabeno, Propilparabeno, Isobutilparabeno 0.3 Bisabolol Preparación:. Calentar los componentes de las fases A y B por separado a aproximadamente 80°C. Agitar la fase B en la fase A y homogeneiza . Calentar la fase C a aproximadamente 80°C y agitar en las fases A y B combinadas con homogeneización . Enfriar a aproximadamente 40°C con agitación, adicionar la fase D y homogeneizar otra vez.
Ejemplo 65: Uso del KBD en una loción filtro solar - tipo O/W AI 1%: % Ingrediente (INCI) A 2.0 Ceteareth-6, Alcohol estearilico 2.0 Ceteareth-25 3.0 Tribehenina 2.0 Alcohol cetearilico 2.0 Cetearil etilhexanoato 5.0 Etilhexil metoxicinamato 1.0 Etilhexil triazona 1.0 Copolímero VP/eicoseno 7.0 Miristato de isopropilo B 5.0 Óxido de zinc, Trietoxicaprililsilano C 0.2 Goma de xantano 0.5 Copolímero hidroxietil acrilato/acriloildimetil taurato de sodio, Escualano, Polisorbato 60 0.2 EDTA disodio 5.0 Propilen glicol 0.5 Pantenol 60.9 Agua desm. D 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.5 Fenoxietanol, Metilparabeno, Butilparabeno, Etilparabeno, Propilparabeno, Isopropilparabeno 1.0 Acetato de tocoferilo 0.2 Bisabolol I 5%: Ingrediente (INCI) A 2.0 Ceteareth-6, Alcohol estearilico 2.0 Ceteareth-25 3.0 Tribehenina 2.0 Alcohol cetearilico 2.0 Cetearil etilhexanoato 5.0 Etilhexil .aetoxicinamato 1.0 Etilhexil triazona 1.0 Copolímero VP/eicoseno 7.0 Miristato de isopropilo B 5.0 Óxido de zinc, Trietoxicaprililsilano C 0.2 Goma de xantano 0.5 Copolímero hidroxietil acrilato/acriloildimetil ¦taurato de sodio, Escualano, Polisorbato 60 0.2 EDTA disodio 5.0 Propilen glicol 0.5 Pantenol 56.9 Agua desm. D 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.5 Fenoxietanol , Metilparabeno, Butilparab Etilparabeno, Propilparabeno, Isopropilparabeno 1.0 Acetato de tocoferilo 0.2 Bisabolol Preparación: Calentar la fase A a aproximadamente 80°C, agitar en la fase B y homogeneizar durante 3 min. del mismo modo calentar la fase C a 80°C y agitar en las fases A y B combinadas hasta homogeneizacion. Enfriar a aproximadamente 40°C, agitar en la fase D y homogeneizar otra vez.
Ejemplo 66: Uso del KBD en una loción filtro solar - tipo O/W AI 1%: % Ingrediente (INCI) A 3.5 Ceteareth-6, Alcohol estearilico 1.5 Ceteareth-25 7.5 Etilhexil metoxicinamato 2.0 Dietilamino hidroxibenzoil hexil benzoato 2.0 Ciclopentasiloxano, Ciclohexasiloxano 0.5 Cera de abejas 3.0 Alcohol cetearilico 10.0 Triglicérido caprilico/cáprico B 5.0 Dióxido de titanio, Sílice, meticona, alúmina C 3.0 Glicerina 0.2 EDTA disodio 0.3 Goma de xantano 1.0 Decil glucósido 2.0 Pantenol, Propilen glicol 56.3 Agua desm. D 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 1. 0 Acetato de tocoferilo 0. 2 Bisabolol c . 5. Aceite esencial c . S . Preservador AI 5%: ¾ Ingrediente (INCI) A 3. 5 Ceteareth-6, Alcohol estearilico 1. 5 Ceteareth-25 7. 5 Etilhexil metoxicinamato 2. 0 Dietilamino hidroxibenzoil hexil benzoato 2. 0 Ciclopentasiloxano, Ciclohexasiloxano 0. 5 Cera de abejas 3. 0 Alcohol cetearilico 10 .0 Triglicérido caprilico/cáprico B 5. 0 Dióxido de titanio, Sílice, meticona, alúmina C . 3. 0 Glicerina 0. 2 EDTA disodio ' ?. 3 . Goma de xantano 1. 0 Decil glucósido 2.0 Pantenol, Propilen glicol .52.3 Agua desm. D 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 1.0 Acetato de tocoferilo 0.2 Bisabolol c.s. Aceite esencial c.s. Preservador Preparación: Calentar la fase A a aproximadamente 80°C, agitar en la fase B y homogeneizar durante 3 min. Del mismo modo calentar la fase C a 80°C y agitar en las fases A y B combinadas hasta homogeneización . Enfriar a aproximadamente 40°C, agitar en la fase D y homogeneizar otra vez.
Ejemplo 67: Uso del KBD en un bálsamo para pies AI 1%: ¦% Ingrediente (INCI) A 2.0 Ceteareth-6, Alcohol estearilico 2.0 Ceteareth-25 5.0 Cetearil etilhexanoato 4.0 Alcohol cetilico 4.0 Estearato de glicerilo 5.0 Aceite mineral 0.2 Mentol 0.5 Canfor B 69.3 Agua desm. c.s. Preservador C 1.0 Bisabolol 1.0 Acetato de tocoferilo D 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 5.0 Extracto de hamamelis AI 5%: % Ingrediente (INCI) A 2.0 Ceteareth-6, Alcohol estearilico 2.0 Ceteareth-25 5.0 Cetearil etilhexanoato 4.0 Alcohol cetilico 4.0 Estearato de glicerilo 5.0 Aceite mineral 0.2 Mentol 0.5 Canfor B 65.3 Agua desm. c.s. Preservador C 1.0 Bisabolol 1.0 Acetato de tocoferilo D 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 5.0 Extracto de hamamelis Preparación: Calentar los componentes de las fases A y B por separado a aproximadamente 80°C. Agitar la fase B en la fase A hasta homogeneización . Enfriar a aproximadamente 40°C con agitación, adicionar las fases C y D y brevemente homogeneizar después. Enfriar a temperatura ambiente con agitación.
Ejemplo 68: Uso del KBD en una emulsión W/O con bisabolol AI 1%: % Ingrediente (INCI) A 6.0 PEG-7 Aceite de ricino hidrogenado 8.0 Cetearil etilhexanoato 5.0 Miristato de isopropilo 15.0 Aceite mineral 0.3 Estearato de magnesio 0.3 Estearato de aluminio 2.0 Copolimero PEG-45/dodecil glicol B 5.0 Glicerina 0.7 Sulfato de magnesio 55.6 Agua desm.
C 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.5 Acetato de tocoferilo 0.6 Bisabolol AI 5%: % Ingrediente (INCI) A 6.0 PEG-7 Aceite de ricino hidrogenado 8.0 Cetearil etilhexanoato 5.0 Miristato de isopropilo 15.0 Aceite mineral 0.3 Estearato de magnesio 0.3 Estearato de aluminio 2.0 Copolimero PEG-45/dodecil glicol B 5.0 Glicerina 0.7 Sulfato de magnesio 51.6 Agua desm. C 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 0.5 Acetato de tocoferilo Preparación: Calentar las fases A y B por separado a aproximadamente 85°C. Agitar la fase B en la fase A y homogeneizar . Enfriar a aproximadamente 40°C con agitación, adicionar la fase C y homogeneizar brevemente otra vez. Enfriar a temperatura ambiente con agitación.
Lista de formulaciones para el dominio de unión a queratina patentado - cuidado del cabello Ejemplo 69: Gel para el baño AI 1% % Ingrediente (INCI) A 40.0 Laureth sulfato de sodio 5.0 Decil glucósido 5.0 Cocamidopropil betaina 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 1.0 Pantenol es. Aceite esencial c.s. Preservador 2.0 Cloruro de sodio 46.0 Agua desm. B c.s. Ácido cítrico AI 5% % Ingrediente (INCI) A 40.0 Laureth sulfato de sodio 5.0 Decil glucósido 5.0 Cocamidopropil betaina 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 1.0 Pantenol .es. Aceite esencial es. Preservador 2.0 Cloruro de sodio 42.0 Agua desm.
B c.s. Ácido cítrico Preparación: Mezclar los componente de la fase A y disolver. Ajustar el pH a 6-7 con ácido cítrico.
Ejemplo 70: Crema humectante para el cuidado corporal AI 1 % % Ingrediente (INCI! A 2.0 Ceteareth-25 2.0 Ceteareth-6, Alcohol estearílico 3.0 Cetearil etilhexanoato 1.0 Dimeticona 4.0 Alcohol cetearílico 3.0 Estearato de glicerilo SE 5.0 Aceite mineral 4.0 Aceite de semilla de Simmondsia Chinensis (Jojoba) " 3.0 Aceite mineral, Alcohol de lanolina B 5.0 Propilen glicol 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 1.0 Pantenol 0.5 Aluminio silicato de magnesio c.s. Preservador 65.5 Agua desm.
C c.s. Aceite esencial D c.s. Ácido cítrico AI 5% % Ingrediente (INCI) A 2.0 Ceteareth-25 2.0 Ceteareth-6, Alcohol estearílico 3.0 Cetearil etilhexanoato 1.0 Dimeticona 4.0 Alcohol cetearilico 3.0 Estearato de glicerilo SE 5.0 Aceite mineral 4.0 Aceite de semilla de Simmondsia Chinensis ; Jojoba) 3.0 Aceite mineral, Alcohol de lanolina B 5.0 Propilen glicol 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol 1.0 Pantenol 0.5 Aluminio silicato de magnesio c.s. Preservador 61.5 Agua desm.
C c.s. Aceite esencial D c.s. Ácido cítrico Preparación: Calentar las fases A y B por separado a aproximadamente 80°C. Prehomogeneizar brevemente la' fase B, luego agitar la fase B en la fase A y homogeneizar otra vez. Enfriar a aproximadamente 40°C, adicionar la fase C y homogeneizar perfectamente otra vez. Ajustar el pH a 6-7 con ácido cítrico.
Ejemplo 71: Crema humectante para el cuidado corporal AI 1% % Ingrediente (INCI) A 6.0 PEG-7.Aceite de ricino hidrogenado 10.0 Cetearil etilhexanoato 5.0 Miristato de isopropilo 7.0 Aceite mineral' 0.5 Shea Butter (Butyrospermum Parkii) 0.5 Estearato de aluminio 0.5 Estearato de magnesio 0.2 Bisabolol 0.7 Quaternium-18-Hectorita B 5.0 Dipropilen glicol 0.7 Sulfato de magnesio es. Preservador 62..9 Agua desm.
C c.s. Aceite esencial 1.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol AI 5% % Ingrediente (INCI) A 6.0 PEG-7 Aceite de ricino hidrogenado 10.0 Cetearil etilhexanoato 5.0 Miristato de isopropilo 7.0 Aceite mineral 0.5 Shea Butter (Butyrospermum Parkii) 0.5 Estearato de aluminio 0.5 Estearato Je magnesio 0.2 Bisabolol 0.7 Quaternium-18-Hectorita B 5.0 Dipropilen glicol 0.7 Sulfato de magnesio c.s. Preservador 58.9 Agua desm.
C c.s. Aceite esencial 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-p ntenol Preparación: Calentar las fases A y B por separado a aproximadamente 80 °C. Agitar la fase B en la fase A y homogeneizar . Enfriar a aproximadamente 40°C con agitación, adicionar la fase C y homogeneizar otra vez. Dejar enfriar a temperatura ambiente con agitación.
Ejemplo 72: Maquillaje liquido tipo - 0/W AI 1% % Ingrediente (INCI) A 2.0 Ceteareth-6, Alcohol estearilico 2.0 Ceteareth-25 6.0 Estearato de glicerilo 1.0 Alcohol cetilico 8.0 Aceite mineral 7.0 Cetearil etilhexanoato 0.2 Dimeticona B 3.0 Propilen gl'icol 1.0 Pantenol c.s. Preservador 61.9 Agua desm.
C 0.1 Bisabolol 1.0 Solución acuosa con apro'x. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol c.s. Aceite esencial D 5.7 C. I. 77 891, Dióxido de titanio 1.1 Óxidos de hierro AI 5% % Ingrediente (INCI) A 2.0 Ceteareth-6, Alcohol estearilico 2.0 Ceteareth-25 6.0 Estearato de glicerilo 1.0 Alcohol cetilico 8.0 Aceite mineral 7.0 Cetearil etilhexanoato 0.2 Dimeticona B 3.0 Propilen glicol 1.0 Pantenol c.s. Preservador 57.9 Agua desm.
C 0.1 Bisabolol 5.0 Solución acuosa con aprox. 5% dominio de unión a queratina MIC-pantenol c.s. Aceite esencial D 5.7 C. I. 77 891, Dióxido de titanio 1.1 Óxidos de hierro Preparación: Calentar las fases A y B por separado aproximadamente 80°C. Agitar la fase B en la fase A homogeneizar . Enfriar a aproximadamente 40°C con agitación, adicionar las fases C y D y homogeneizar perfectamente otra vez. Dejar enfriar a temperatura ambiente con agitación.
Ejemplo 73 A continuación se describen preparaciones dermocosméticas de acuerdo con la invención que contiene las moléculas efectoras de unión a quertina que se producen de acuerdo con el Ejemplo 23 (dominio de unión a queratina de acuerdo con ID SEC No.: 168) acoplada a través del ligador ácido maleimidocapróico con pantenol. En. los siguientes ejemplos se hace referencia a la molécula efectora de unión a queratina especificada como dominio de unión a queratina MlC-pantenol .
La molécula efectora de unión a queratina especificada se utiliza como una solución acuosa a aproximadamente 5% de concentración en peso. Los siguientes datos son partes en peso.
Crema en gel Formulación filtro solar OW Hidrodispersión Barras Emulsión PIT Crema en gel Formulación OW auto- bronceadora Maquillaje OW Hidrodispersión auto-bronceadora Hidrodispersión para después del sol Emulsiones WO Emulsión estabilizada con sólidos (emulsiones pickering) Barras Emulsiones PIT auto- bronceado Gel oleoso Ej emplo74 100 mg de la emulsión para el cuidado durante el día del Ejemplo 19 se aplicaron con' un S de 5% y como placebo sin dominio de unión a queratina MIC-pantenol (ad 100 con agua) a, en cada caso, la parte interna del antebrazo. De cinco individuos, después de media hora, cuatro encontraron una sensación mucho mejor sobre la piel en la parte interna del antebrazo la cual había sido tratada con el dominio de unión a queratina MIC-pantenol. Todos los cinco individuos percibieron el lado tratado con el ingrediente activo de acuerdo con la invención considerablemente más húmedo, menos seco.
Ejemplo 75 En las formulacione siguientes se describen preparaciones filtros solares cosméticos que contienen una combinación de por lo menos un pigmento inorgánico, preferentemente óxido de zinc y/u óxido de titanio y filtros UV-A y UV-B orgánicos.
Las formulaciones que se especifican más adelante se preparan en las formas acostumbradas que conocen las personas con experiencia en la técnica.
El contenido de molécula efectora de unión a queratina preparada de acuerdo con el Ejemplo 23 (dominio de unión a queratina de acuerdo con ID SEC No.: 168) acoplada a través del ligador ácido maleimidocapróico con pantenol, se refiere a 100% del ingrediente activo. El ingrediente activo de acuerdo con la invención puede utilziarse en forma pura o incluso en forma de una solución acuosa. En el . caso de la solución acuosa debe ajustares el contenido de agua desmineralizada en la formulación particular. 49.1 53? Ej emplo74 100 mg de la emulsión para el cuidado durante el día del Ejemplo 19 se aplicaron con un WS de 5% y como placebo sin dominio de unión a queratina MIC-pantenol (ad 100 con agua) a, en cada caso, la parte interna del antebrazo. De cinco individuos, después de media hora, cuatro encontraron una sensación mucho mejor sobre la piel en la parte interna del antebrazo la cual había sido tratada con el dominio de unión a queratina MIC-pantenol. Todos los cinco individuos percibieron el lado tratado con el ingrediente activo de acuerdo con la invención considerablemente más húmedo, menos seco.
Ejemplo 75 En las formulacione siguientes se describen preparaciones filtros solares cosméticos que contienen una combinación de por lo menos un pigmento inorgánico, preferentemente óxido de zinc y/u óxido de titanio y filtros UV-A y UV-B orgánicos.
Las formulaciones que se especifican más adelante se preparan en las formas acostumbradas que conocen las personas con experiencia en la técnica.
El contenido de molécula efectora de unión a queratina preparada de acuerdo con el Ejemplo 23 (dominio de unión a queratina de acuerdo con ID SEC No.: 168) acoplada a través del ligador ácido maleimidocapróico con pantenol, se refiere a 100% del ingrediente activo. El ingrediente activo de acuerdo con la invención puede utilziarse en forma pura . o incluso en forma de una solución acuosa. En el caso de la solución acuosa debe ajustares el contenido de agua desmineralizada en la formulación particular.

Claims (19)

  1. REIVI DICACIONES Un método para producir una molécula efectora de unión a queratina acoplando una molécula efectora (i) que lleva por lo menos una función hidroxi o amino en el polipéptido de unión a queratina (ii) utilizando una molécula ligadora (iii) la cual tiene por lo menos dos funcionalidades de acoplamiento que pueden introducir los enlaces elegidos del grupo que consiste en tioéster, éster, tioéter, éter, y enlaces amida, y (a) en un primer paso de acoplamiento, en primer lugar la molécula efectora (i) se une a la molécula ligadora (iii) a través de un enlace éster o amida, y (b) en otro paso de acoplamiento, el producto de la reacción de (a) se acopla al polipéptido de unión a queratina (ii) a través de una funcionalidad de acoplamiento todavía libre de la molécula ligadora (iii) . El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el acoplamiento de la molécula ligadora (iii) con la molécula efectora (i) descrito en (a) es una reacción de esterificación mediada por carbodiimida, anhídrido o cloruro ácido. El método de conformidad con las reivindicaciones 1 y 2, caracterizado porque la molécula efectora (i) se elige del grupo que consiste en colorantes, agentes fotoprotectores, vitaminas, provitaminas, carotenoides, antioxidantes y descomponedores de peróxido . El método de conformidad con las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque el polipéptido de unión a queratina (ii) tiene afinidad de unión para la queratina de la piel, cabello o uñas humanos. El método de conformidad con las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque el péptido de unión a queratina (ii) utilizado: (a) contiene por lo menos una de las secuencias de conformidad con las ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170, ó corresponde a un polipéptido que es por lo menos 40% idéntico a por lo menos una de las secuencias de conformida con las ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170 y puede unirse a queratina . El método de conformidad con las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque el polipéptido de unión a queratina (ii) que se utiliza es codificado por una molécula de ácido nucleico que contiene por lo menos una molécula de ácido nucleico elegida del grupo que consiste en: a) molécula de ácido que codifica un polipéptido que contiene la secuencia que se muestra en la ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170; molécula de ácido nucleico que comprende por lo menos un polinucleótido de la secuencia que se muestra en ID SEC No.: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 145, 149, 152, 159, 161, 163, 165, 167 ó 169; molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido de conformidad con las secuencias ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170; molécula de ácido nucleico con una secuencia de ácido nucleico correspondiente a por lo menos una de las secuencias de conformidad con la ID SEC No.: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 145, 149, 152, 159, 161, 163, 165, 167 ó 169 o una molécula de ácido nucleico derivada de estos por sustitución, deleción, o inserción. que codifica un polipéptido que es por lo menos 401 idéntico a por lo menos una de las secuencias de conformidad con la ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, -12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, .153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170 y puede unirse a queratina; molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que es reconocido por un anticuerpo monoclonal dirigido hacia un polipéptido que es codificado por las moléculas de ácido nucleico de conformidad con (a) a (c) ; molécula de ácido nucleico que codifica para una proteina de unión a queratina que, en condiciones restrictivas, híbrida con una molécula de ácido nucleico de conformidad con (a) a (c) ; molécula de ácido nucleico que codifica para una proteína de unión a queratina que puede ser aislada a partir de un banco de DNA utilizando una molécula de ácido nucleico de acuerdo con (a) a (c) o fragmentos parte de estos que contienen por lo menos 15 nucleótidos como sonda en condiciones de hibridación restrictivas, y h) molécula de ácido nucleico que puede ser producida por retrotraducción de una de las secuencias de aminoácidos que se muestran en las secuencias ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170. El método de conformidad con una de las reivindicaciones 1 a 6, donde la molécula ligadora (iii) tiene por lo menos dos funcionalidades de acoplamiento diferentes. El método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque la molécula ligadora (iii) tiene un grupo maleimida . El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque una molécula ligadora (iii) que se utiliza es una maleimida portadora de ácido carboxilico de la fórmula I: Fórmula 1 donde "n" corresponde a un entero entre 0 y 40. 10. El método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque la molécula ligadora (iii) es ácido maleimidocapróico . 11. El método de conformidad con una de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizado porque h) el polipéptido de unión a queratina que se utiliza comprende una de las secuencias de conformidad con la ID SEC No.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 146, 150, 153, 156, 157, 158, 160, 162, 164, 166, 168 ó 170, y i) la molécula ligadora (iii) que se utiliza es ácido maleimidocapróico, y j ) la molécula efectora (i) se elige del grupo que consiste en ácido pantoténico, pantenol, ésteres de pantenol, éteres de pantenol y pantenoles catiónicamente derivados. Una molécula efectora de unión a queratina donde la molécula efectora (i) se acopla indirectamente al polipéptido de unión a queratina (ii) a través de una molécula ligadora (iii) , con la condición que durante la producción de la- molécula efectora de unión a queratina, ninguna maleimida haya sido utilizada como molécula ligadora (iii), y ningún polipéptido de acuerdo con la ID SEC No.: 166 haya sido utilizado como polipéptido de unión a queratina (ii) , y ningún colorante fluorescente haya sido utilizado como molécula efectora (ii) . Una molécula efectora de unión a 'queratina producida de acuerdo con la reivindicación 11. El uso de las moléculas efectoras de unión a queratina de conformidad con las rei indicaciones .12 y 13 o producidas de conformidad con las reivindicaciones 1 a 11 en dermocosméticos . El uso de conformidad con la reivindicación 14, donde los dermocosméticos son una composición para la producción de la piel, una composición para el cuidado de la piel, composición limpiadora de la piel, composición protectora del cabello, composición para el cuidado del cabello, composición limpiadora del cabello, colorante para el cabello o cosmético decorativo. Un método de aplicación de las moléculas efectoras dermocosméticas activas a la piel, cabello y/o uñas de las manos o uñas de los pies, donde: „ k) el ingrediente dermocosmético activo se acopla a un polipéptido de unión a queratina, y 1) la molécula efectora de unión a queratina de conformidad con (k) se aplica como constituyente de una preparación dermocosmética a la piel, cabello y/o uñas de las manos o uñas de los pies. Un método para aumentar el tiempo de permanencia de un ingrediente dermocosmético activo sobre la piel, cabello y/o uñas de las manos o uñas de los pies, donde el ingrediente dermocosmético activo se acopla a un polipéptido de unión a queratina, y La molécula efectora de unión a queratina de conformidad con (m) se aplica como constituyente de una preparación dermocosmética a la piel, cabello y/o uñas de las manos o uñas de los pies. y el ingrediente activo se une indirectamente a la piel, cabello y/o uñas de las manos o uñas de los pies, mediado por el dominio de unión a queratina . compuesto de la fórmula 2: Fórmula 2 donde n" es. un entero entre 0 y 40. 19. Un dermocosmético que contiene una molécula efectora de unión a queratina de conformidad con las reivindicaciones 12 y 13 o producida de conformidad con las reivindicaciones 1 a 11.
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Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2008265231B2 (en) * 2007-06-20 2014-05-01 Basf Se Synthetic repetitive proteins, the production and use thereof
EP2042155A1 (de) * 2007-09-28 2009-04-01 Basf Se Verfahren zum Entfernen von wasserunlöslichen Substanzen von Substratoberflächen
WO2009112301A2 (de) * 2008-03-10 2009-09-17 Basf Se Polypeptidwirkstoffe in der form von konjugaten aus keratinbindenden polypeptiden, polymeren und effektormolekülen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
FR2932087B1 (fr) * 2008-06-10 2012-10-12 Oreal Utilisation cosmetique de proteines de type desmoplakine pour le traitement de la secheresse cutanee
WO2010010145A1 (en) * 2008-07-23 2010-01-28 Basf Se Keratin-binding polypeptides and method for their identification
JP5965619B2 (ja) * 2011-11-18 2016-08-10 株式会社ミルボン スプレー
US9672952B2 (en) 2013-08-14 2017-06-06 Industrial Technology Research Institute Polymer and conductive composition
BR112020019944A2 (pt) * 2018-04-13 2021-01-26 Massachusetts Institute Of Technology tratamentos modificados para reparo do cabelo e retenção de cor duradoura

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2657885A1 (fr) * 1990-02-08 1991-08-09 Cird Anticorps capables de reconnaitre specifiquement un antigene du stratum corneum de l'epiderme humain, leur preparation et leur application, notamme comme vecteurs de drogues.
JP2953529B2 (ja) * 1990-05-25 1999-09-27 寶酒造株式会社 新規化粧料
JPH06227955A (ja) * 1992-12-08 1994-08-16 Kanebo Ltd 染毛剤又は化粧料及び前処理剤並びに染毛方法
EP1470824A1 (en) * 2002-12-10 2004-10-27 L-MAbs B.V. Affinity proteins for controlled application of cosmetic substances
DE102005011988A1 (de) * 2005-03-14 2006-11-16 Basf Ag Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung von Keratin-bindenden Polypeptiden und ihre Herstellung
CA2563999A1 (en) * 2004-05-24 2005-12-08 Basf Aktiengesellschaft Keratin-binding polypeptides
DE102005029704A1 (de) * 2005-06-24 2007-01-11 Basf Ag Verwendung von Hydrophobin-Polypeptiden sowie Konjugaten aus Hydrophobin-Polypeptiden mit Wirk-oder Effektstoffen und ihre Herstellung sowie deren Einsatz in der Kosmetik
JP2009521404A (ja) * 2005-11-24 2009-06-04 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア ケラチン結合ポリペプチドとカルボキシル基又はスルホン酸基を有するエフェクター分子とのカップリング方法

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