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DE102005011988A1 - Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung von Keratin-bindenden Polypeptiden und ihre Herstellung - Google Patents

Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung von Keratin-bindenden Polypeptiden und ihre Herstellung Download PDF

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DE102005011988A1
DE102005011988A1 DE200510011988 DE102005011988A DE102005011988A1 DE 102005011988 A1 DE102005011988 A1 DE 102005011988A1 DE 200510011988 DE200510011988 DE 200510011988 DE 102005011988 A DE102005011988 A DE 102005011988A DE 102005011988 A1 DE102005011988 A1 DE 102005011988A1
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DE
Germany
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keratin
kbd
polypeptide sequence
phase
inci
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Withdrawn
Application number
DE200510011988
Other languages
English (en)
Inventor
Heiko Dr. Barg
Thomas Dr. Subkowski
Hans-Georg Dr. Lemaire
Claus Dr. Bollschweiler
Arne Dr. Ptock
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
BASF SE
Original Assignee
BASF SE
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Filing date
Publication date
Application filed by BASF SE filed Critical BASF SE
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Priority to EP05744792A priority patent/EP1763334B1/de
Priority to BRPI0511421-7A priority patent/BRPI0511421A/pt
Priority to RU2006145670/15A priority patent/RU2411029C9/ru
Priority to CN2005800167278A priority patent/CN1960699B/zh
Priority to AT05744792T priority patent/ATE417595T1/de
Priority to ES05744792T priority patent/ES2317237T3/es
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Priority to NZ551366A priority patent/NZ551366A/en
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Abstract

Gegenstand der Erfindung sind kosmetische Zusammensetzungen zur Behandlung von keratinhaltigen Materialien, enthaltend mindestens eine Keratin-bindende Polypeptidsequenz (i) in einem kosmetisch verträglichen Medium.

Description

  • Vertebratenzellen enthalten Filamente, von denen eine Gruppe aus Keratinen aufgebaut ist. An diese Keratine, die auch in Haaren, Haut und Nägeln vorkommen, binden spezifische Proteine wie beispielsweise Desmoplakin mittels eines speziellen Sequenzmotifs, einer sogenannten Keratin-bindenden Domäne (Fontao L, Favre B, Riou S, Geerts D, Jaunin F, Saurat JH, Green KJ, Sonnenberg A, Borradori L., Interaction of the bullous pemphigoid antigen 1 (BP230) and desmoplakin with intermediate filaments is mediated by distinct sequences within their COOH terminus., Mol Biol Cell. 2003 May; 14(5):1978-92. Epub 2003 Jan 26; Hopkinson SB, Jones JC., The N terminus of the transmembrane protein BP180 interacts with the N-terminal domain of BP230, thereby mediating keratin cytoskeleton anchorage to the cell surface at the site of the hemidesmosome, Mol Biol Cell. 2000 Jan; 11(1):277-86).
  • Aufgabenstellung
    •
  • Aufgabe der vorliegenden Erfindung war es, neue Polypeptide bereitzustellen, die eine hohe Affinität zu Keratin bzw. keratinhaltigen Stoffen wie Haut oder Haare besitzen. Solche Polypeptide eignen sich für die kosmetische und pharmazeutische Behandlung von keratinhaltigen Strukturen, insbesondere von Haaren und Haut.
  • Beschreibung der Erfindung
  • Gegenstand der Erfindung sind kosmetische Zusammensetzungen zur Behandlung von keratinhaltigen Materialien, enthaltend mindestens eine Keratin-bindende Polypeptidsequenz (i) in einem kosmetisch verträglichen Medium.
  • Polypeptidsequenzen (i)
  • Die Polypeptidsequenz (i) besitzt eine Bindungsaffinität zu einem Keratin. Die Bindung der Polypeptidsequenz (i) zu einem Keratin kann unter den in Beispiel 8, 9 und 10 beschriebenen Bedingungen getestet werden.
  • Besonders gut geeignete Keratin-bindende Polypeptide sind solche Sequenzen, die im humanen Desmoplakin enthalten sind oder durch Veränderung der humanen Desmoplakinpolypeptidsequenzen wie Aminosäure-Insertionen, -Substitutionen oder -Deletionen daraus abgeleitet sind.
  • Die Polypeptidsequenz des humanen Desmoplakins ist in SEQ ID NO: 1 dargestellt. Eine geeignete Keratin-bindende Domäne (Domäne B) ist die Polypeptidsequenz SEQ ID NO: 1 Position 2193 bis 2481 sowie deren funktionelle Äquivalente. Eine weitere Keratin-bindende Domäne (Domäne C) ist die Polypeptidsequenz SEQ ID NO: 1 Position 2606 bis 2871 sowie deren funktionelle Äquivalente.
  • Die Keratin-bindende Domänen sind in 1 dargestellt.
  • Bevorzugte Polypeptidsequenzen (i) umfassen eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO: 1.
  • Erfindungsgemäß mit umfasst sind ebenfalls "funktionale Äquivalente" der konkret offenbarten Polypeptidsequenzen (i) und die Verwendung dieser in den erfindungsgemäßen Verfahren.
  • "Funktionale Äquivalente" oder Analoga der konkret offenbarten Polypeptide (i) sind im Rahmen der vorliegenden Erfindung davon verschiedene Polypeptide, welche weiterhin die gewünschte biologische Aktivität, wie z.B. Keratinbindung, besitzen. So versteht man beispielsweise unter "funktionalen Äquivalenten" Polypeptidsequenzen die gemäß einem der in Beispiel 9 oder 10 beschriebenen Bindungstests eine mindestens 10 %ige Bindung zeigen, bevorzugt mindestens 50 %, besonders bevorzugt 75 %, ganz besonders bevorzugt 90 % der Bindung, die ein Polypeptid mit der Domäne B oder der Domäne C von SEQ ID NO: 1 in den Bindungstests gemäß Beispiel 9 oder 10 zeigt.
  • Beispiele für geeignete Aminosäuresubstitutionen sind folgender Tabelle zu entnehmen:
  • Ursprünglicher Rest Beispiele der Substitution
    Ala Ser
    Arg Lys
    Asn Gln; His
    Asp Glu
    Cys Ser
    Gln Asn
    Glu Asp
    Gly Pro
    His Asn; Gln
    Ile Leu; Val
    Leu Ile; Val
    Lys Arg; Gln; Glu
    Met Leu; Ile
    Phe Met; Leu; Tyr
  • Ursprünglicher Rest Beispiele der Substitution
    Ser Thr
    Thr Ser
    Trp Tyr
    Tyr Trp; Phe
    Val Ile; Leu
  • Bekannt ist, dass in SEQ ID NO: 1 das an Position 2849 natürlich vorliegende Serin z.B. gegen Glycin ausgetauscht werden kann, um eine Phosphorylierung an dieser Position zu umgehen (Fontao L, Favre B, Riou S, Geerts D, Jaunin F, Saurat JH, Green KJ, Sonnenberg A, Borradori L., Interaction of the bullous pemphigoid antigen 1 (BP230) and desmoplakin with intermediate filaments is mediated by distinct sequences within their COOH terminus., Mol Biol Cell. 2003 May; 14(5):1978-92. Epub 2003 Jan 26).
  • Unter „funktionalen Äquivalenten" versteht man erfindungsgemäß insbesondere auch Muteine, welche in wenigstens einer Sequenzposition der oben genannten Aminosäuresequenzen eine andere als die konkret genannte Aminosäure aufweisen aber trotzdem eine der oben genannten biologischen Aktivitäten besitzen. „Funktionale Äquivalente" umfassen somit die durch eine oder mehrere Aminosäure-Additionen, -Substitutionen, -Deletionen und/oder -Inversionen erhältlichen Muteine, wobei die genannten Veränderungen in jeglicher Sequenzposition auftreten können, solange sie zu einem Mutein mit dem erfindungsgemäßen Eigenschaftsprofil führen.
  • „Funktionale Äquivalente" im obigen Sinne sind auch „Präkursoren" der beschriebenen Polypeptide sowie „funktionale Derivate" und „Salze" der Polypeptide.
  • „Präkursoren" sind dabei natürliche oder synthetische Vorstufen der Polypeptide mit oder ohne gewünschte biologische Aktivität.
  • Unter dem Ausdruck „Salze" versteht man sowohl Salze von Carboxylgruppen als auch Säureadditionssalze von Aminogruppen der erfindungsgemäßen Proteinmoleküle. Salze von Carboxylgruppen können in an sich bekannter Weise hergestellt werden und umfassen anorganische Salze, wie zum Beispiel Natrium-, Calcium-, Ammonium-, Eisen- und Zinksalze, sowie Salze mit organischen Basen, wie zum Beispiel Aminen, wie Triethanolamin, Arginin, Lysin, Piperidin und dergleichen. Säureadditionssalze, wie zum Beispiel Salze mit Mineralsäuren, wie Salzsäure oder Schwefelsäure und Salze mit organischen Säuren, wie Essigsäure und Oxasäure sind ebenfalls Gegenstand der Erfindung.
  • „Funktionale Derivate" erfindungsgemäßer Polypeptide können an funktionellen Aminosäure-Seitengruppen oder an deren N- oder C-terminalen Ende mit Hilfe bekannter Techniken ebenfalls hergestellt werden. Derartige Derivate umfassen beispielsweise aliphatische Ester von Carbonsäuregruppen, Amide von Carbonsäuregruppen, erhältlich durch Umsetzung mit Ammoniak oder mit einem primären oder sekundären Amin; N-Acylderivate freier Aminogruppen, hergestellt durch Umsetzung mit Acylgruppen; oder O-Acylderivate freier Hydroxygruppen, hergestellt durch Umsetzung mit Acylgruppen.
  • "Funktionale Äquivalente" umfassen natürlich auch Polypeptide, welche aus anderen Organismen zugänglich sind, sowie natürlich vorkommende Varianten. Beispielsweise lassen sich durch Sequenzvergleich Bereiche homologer Sequenzregionen festlegen und in Anlehnung an die konkreten Vorgaben der Erfindung äquivalente Enzyme ermitteln.
  • „Funktionale Äquivalente" umfassen ebenfalls Fragmente, vorzugsweise einzelne Domänen oder Sequenzmotive, der erfindungsgemäßen Polypeptide, welche z.B. die gewünschte biologische Funktion aufweisen.
  • „Funktionale Äquivalente" sind außerdem Fusionsproteine, welche eine der oben genannten Polypeptidsequenzen oder davon abgeleitete funktionale Äquivalente und wenigstens eine weitere, davon funktionell verschiedene, heterologe Sequenz in funktioneller N- oder C-terminaler Verknüpfung (d.h. ohne gegenseitigen wesentliche funktionelle Beeinträchtigung der Fusionsproteinteile) aufweisen. Nichtlimitierende Beispiele für derartige heterologe Sequenzen sind z.B. Signalpeptide oder Enzyme.
  • Erfindungsgemäß mit umfasste „funktionale Äquivalente" sind Homologe zu den konkret offenbarten Proteinen. Diese besitzen wenigstens 50 %, vorzugsweise wenigstens 75 %, insbesondere wenigstens 85 %, wie z.B. 90 %, 95 % oder 99 %, Homologie zu einer der konkret offenbarten Aminosäuresequenzen, berechnet nach dem Algorithmus von Pearson und Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 85 (8), 1988, 2444-2448. Eine prozentuale Homologie eines erfindungsgemäßen homologen Polypeptids bedeutet insbesondere prozentuale Identität der Aminosäurereste bezogen auf die Gesamtlänge einer der hierin konkret beschriebenen Aminosäuresequenzen.
  • Im Falle einer möglichen Proteinglykosylierung umfassen erfindungsgemäße „funktionale Äquivalente" Proteine des oben bezeichneten Typs in deglykosylierter bzw. glykosylierter Form sowie durch Veränderung des Glykosylierungsmusters erhältliche abgewandelte Formen.
  • Homologe der erfindungsgemäßen Polypeptide (i) können durch Mutagenese erzeugt werden, z.B. durch Punktmutation oder Verkürzung des Proteins.
  • Homologe des erfindungsgemäßen Polypeptide können durch Screening kombinatorischer Banken von Mutanten, wie z.B. Verkürzungsmutanten, identifiziert werden. Beispielsweise kann eine Bank von Protein-Varianten durch kombinatorische Mutagenese auf Nukleinsäureebene erzeugt werden, wie z.B. durch enzymatisches Ligieren eines Gemisches synthetischer Oligonukleotide. Es gibt eine Vielzahl von Verfahren, die zur Herstellung von Banken potentieller Homologer aus einer degenerierten Oligonukleotidsequenz verwendet werden können. Die chemische Synthese einer degenerierten Gensequenz kann in einem DNA-Syntheseautomaten durchgeführt werden, und das synthetische Gen kann dann in einen geeigneten Expressionsvektor ligiert werden. Die Verwendung eines degenerierten Gensatzes ermöglicht die Bereitstellung sämtlicher Sequenzen in einem Gemisch, die den gewünschten Satz an potentiellen Proteinsequenzen kodieren. Verfahren zur Synthese degenerierter Oligonukleotide sind dem Fachmann bekannt (z.B. Narang, S.A. (1983) Tetrahedron 39:3; Itakura et al. (1984) Annu. Rev. Biochem. 53:323; Itakura et al., (1984) Science 198:1056; Ike et al. (1983) Nucleic Acids Res. 11:477).
  • Im Stand der Technik sind mehrere Techniken zum Screening von Genprodukten kombinatorischer Banken, die durch Punktmutationen oder Verkürzung hergestellt worden sind, und zum Screening von cDNA-Banken auf Genprodukte mit einer ausgewählten Eigenschaft bekannt. Diese Techniken lassen sich an das schnelle Screening der Genbanken anpassen, die durch kombinatorische Mutagenese erfindungsgemäßer Homologer erzeugt worden sind. Die am häufigsten verwendeten Techniken zum Screening großer Genbanken, die einer Analyse mit hohem Durchsatz unterliegen, umfassen das Klonieren der Genbank in replizierbare Expressionsvektoren, Transformieren der geeigneten Zellen mit der resultierenden Vektorenbank und Exprimieren der kombinatorischen Gene unter Bedingungen, unter denen der Nachweis der gewünschten Aktivität die Isolation des Vektors, der das Gen kodiert, dessen Produkt nachgewiesen wurde, erleichtert. Recursive-Ensemble-Mutagenese (REM), eine Technik, die die Häufigkeit funktioneller Mutanten in den Banken vergrößert, kann in Kombination mit den Screeningtests verwendet werden, um Homologe zu identifizieren (Arkin und Yourvan (1992) PNAS 89:7811-7815; Delgrave et al. (1993) Protein Engineering 6(3):327-331).
  • Eine besonders vorteilhafte Ausgestaltung der Erfindung sind Polypeptidsequenzen (i), die mindestens eine der folgenden Polypeptidsequenzen umfasst,
    • a) die Polypeptidsequenz SEQ ID NO: 1 Position 2193 bis 2481 (Domäne B)
    • b) die Polypeptidsequenz SEQ ID NO: 1 Position 2606 bis 2871 (Domäne C)
    • c) eine Polypeptidsequenz, die gegenüber (a) in bis zu 60 % der Aminosäuren verändert ist,
    • d) eine Polypeptidsequenz, die gegenüber (b) in bis zu 50 % der Aminosäuren verändert ist,
    mit der Massgabe, dass die Keratin-Bindung der Polypeptidsequenz (c) oder (d) mindestens 10 % des Wertes beträgt, den die Polypeptidsequenz (a) oder (b) aufweist, gemessen in dem Test gemäß Beispiel 9 oder 10. Mit Domäne B bzw. C sind hier die oben beschriebenen Keratinbindedomänen des humanen Desmoplakins (SEQ ID NO: 1) gemeint. Mit Veränderung von Aminosäuren sind hiermit Aminosäure-Substitutionen, -Insertionen und -Deletionen oder beliebige Kombinationen aus diesen drei Möglichkeiten gemeint.
  • Bevorzugt werden Polypeptidsequenzen (i) verwendet, die für den gewünschten Organismus eine hochspezifische Affinität besitzen. Für Anwendungen in der Hautkosmetik werden demzufolge Polypeptidsequenzen (i) bevorzugt eingesetzt, die zu dem humanen Hautkeratin eine besonders hohe Affinität haben. Für Anwendungen in der Haarkosmetik werden solche Polypeptidsequenzen bevorzugt, die zu humanem Haarkeratin eine besonders hohe Affinität haben.
  • Für Anwendungen auf dem Haustiergebiet werden, neben den beschriebenen Polypeptidsequenzen (SEQ ID NO: 1), entsprechend solche Polypeptidsequenzen (i) bevorzugt, die zu dem entsprechenden Keratin, beispielsweise Hundekeratin oder Katzenkeratin eine besonders hohe Affinität besitzen.
  • Es können aber auch mehr als eine Polypeptidsequenz (i) in dem erfindungsgemäßen Effektormolekül verwendet werden, beispielsweise eine Sequenz (i), die eine hohe Bindungsaffinität zu humanem Hautkeratin besitzt, in Verbindung mit einer Sequenz (i), die eine hohe Affinität zu humanem Haarkeratin besitzt. Es können auch mehrere Kopien der gleichen Polypeptidsequenz (i) hintereinander geschaltet werden, um beispielsweise eine höhere Bindung zu erzielen.
  • Geeignete Keratin-bindende Polypeptidsequenzen (i) sind bekannt. Beispielsweise enthalten Desmoplakine und Plectine Keratin-bindende Domänen (Fontao L, Favre B, Riou S, Geerts D, Jaunin F, Saurat JH, Green KJ, Sonnenberg A, Borradori L., Interaction of the bullous pemphigoid antigen 1 (BP230) and desmoplakin with intermediate filaments is mediated by distinct sequences within their COOH terminus., Mol Biol Cell. 2003 May; 14(5):1978-92. Epub 2003 Jan 26; Hopkinson SB, Jones JC., The N terminus of the transmembrane protein BP180 interacts with the N-terminal domain of BP230, thereby mediating keratin cytoskeleton anchorage to the cell surface at the site of the hemidesmosome, Mol Biol Cell. 2000 Jan; 11(1):277-86).
  • Durch Alignments solcher bekannter Proteinsequenzen, beispielsweise mit einem Computerprogramm wie Vector NTI 8 (Version vom 25. September 2002) der Firma InforMax Inc. können solche Bereiche kartiert und identifiziert werden.
  • Weitere geeignete Polypeptidsequenzen (i) mit einer guten Bindung zu humanem Keratin sind Sequenzbereiche, die in einem Alignment hohe Homologie bzw. Sequenzidentität aufweisen und als Konsensussequenzen der Keratindindedomänen aufgefasst werden können.
  • Besonders bevorzugt sind unter diesen Sequenzbereichen die folgenden:
    Domäne B (KBD-B): Polypeptidsequenz SEQ ID NO: 1 Position 2193 bis 2448
    Domäne B (KBD-B): Polypeptidsequenz SEQ ID NO: 1 Position 2209 bis 2448
    Domäne C (KBD-C): Polypeptidsequenz SEQ ID NO: 1 Position 2606 bis 2871
    Domäne C (KBD-C): Polypeptidsequenz SEQ ID NO: 1 Position 2616 bis 2871
    Domäne C (KBD-C): Polypeptidsequenz SEQ ID NO: 1 Position 2616 bis 2811
    Domäne C (KBD-C): Polypeptidsequenz SEQ ID NO: 1 Position 2606 bis 2871
  • Bekannt ist, dass in SEQ ID NO: 1 das an Position 2849 natürlich vorliegende Serin z.B. gegen Glycin ausgetauscht werden kann, um eine Phosphorylierung an dieser Position zu umgehen und damit eine Bindung der Domäne C an das entsprechende Keratin zu gewährleisten (Fontao L, Favre B, Riou S, Geerts D, Jaunin F, Saurat JH, Green KJ, Sonnenberg A, Borradori L., Interaction of the bullous pemphigoid antigen 1 (BP230) and desmoplakin with intermediate filaments is mediated by distinct sequences within their COOH terminus., Mol Biol Cell. 2003 May; 14(5):1978-92. Epub 2003 Jan 26).
  • Wenn es gewünscht wird, dass die Polypeptidsequenzen (i) zu einem Keratin aus einem nicht-humanen Organismus eine besonders gute Bindung aufweisen, werden als geeignete Sequenzmotive bevorzugt solche aus dem Keratin-bindenden Protein, z.B. Desmoplakin oder Plectin, des entsprechenden Organismus ausgewählt.
  • 2 zeigt ein Alignment von Keratin-bindenden Molekülen.
  • Die erfindungsgemäßen Keratin-bindenden Polypeptide (i) können auch – falls gewünscht – wieder leicht vom Keratin getrennt werden. Hierzu kann beispielsweise eine Spülung mit Keratin eingesetzt werden, wodurch die Keratin-bindenden Polypeptide (i) aus ihrer bestehenden Bindung zum Keratin verdrängt werden und mit dem Keratin aus der Spülung abgesättigt werden. Alternativ ist auch eine Spülung mit einem hohen Anteil an Detergenz (z.B. SDS) zum Abwaschen möglich.
  • Die erfindungsgemäßen Keratin-bindenden Polypeptide (i) besitzen ein weites Anwendungsgebiet in der Humankosmetik, insbesondere der Haut- und Haarpflege, der Tierpflege, der Lederpflege und Lederbearbeitung.
  • Bevorzugt werden die erfindungsgemäßen Keratin-bindenden Polypeptide (i) für die Hautkosmetik angewendet. Sie erlauben eine hohe Konzentration und lange Wirkdauer von hautpflegenden oder hautschützenden Effektorstoffen.
  • Geeignete Hilfs- und Zusatzstoffe für die Herstellung von haarkosmetischen oder hautkosmetischen Zubereitungen sind dem Fachmann geläufig und können aus Handbüchern der Kosmetik, beispielsweise Schrader, Grundlagen und Rezepturen der Kosmetika, Hüthig Verlag, Heidelberg, 1989, ISBN 3-7785-1491-1, entnommen werden.
  • Bei den erfindungsgemäßen kosmetischen Mitteln kann es sich um hautkosmetische, haarkosmetische, dermatologische, hygienische oder pharmazeutische Mittel handeln.
  • Vorzugsweise liegen die erfindungsgemäßen Mittel in Form eines Gels, Schaums, Sprays, einer Salbe, Creme, Emulsion, Suspension, Lotion, Milch oder Paste vor. Gewünschtenfalls können auch Liposomen oder Mikrosphären eingesetzt werden.
  • Die erfindungsgemäßen kosmetisch oder pharmazeutisch aktiven Mittel können zusätzlich kosmetisch und/oder dermatologisch aktive Wirkstoffe sowie Hilfsstoffe enthalten.
  • Vorzugsweise enthalten die erfindungsgemäßen kosmetischen Mittel wenigstens eine wie vorstehend definierte Keratin-bindende Polypeptidsequenz (i), und wenigstens einen davon verschiedenen Bestandteil, der ausgewählt ist unter kosmetisch aktiven Wirkstoffen, Emulgatoren, Tensiden, Konservierungsmitteln, Parfümölen, Verdickern, Haarpolymeren, Haar-und Hautconditionern, Pfropfpolymeren, wasserlöslichen oder dispergierbaren silikonhaltigen Polymeren, Lichtschutzmitteln, Bleichmitteln, Gelbildnern, Pflegemitteln, Färbemitteln, Tönungsmitteln, Bräunungsmitteln, Farbstoffen, Pigmenten, Konsistenzgebern, Feuchthaltemitteln, Rückfettern, Collagen, Eiweißhydrolysaten, Lipiden, Antioxidantien, Entschäumern, Antistatika, Emollienzien und Weichmachern.
  • Übliche Verdickungsmittel in derartigen Formulierungen sind vernetzte Polyacrylsäuren und deren Derivate, Polysaccharide und deren Derivate, wie Xanthangum, Agar-Agar, Alginate oder Tylosen, Cellulosederivate, z.B. Carboxymethylcellulose oder Hydroxycarboxymethylcellulose, Fettalkohole, Monoglyceride und Fettsäuren, Polyvinylalkohol und Polyvinylpyrrolidon. Bevorzugt werden nichtionische Verdicker eingesetzt.
  • Geeignete kosmetisch und/oder dermatologisch aktive Wirkstoffe sind z.B. färbende Wirkstoffe, Haut-und Haarpigmentierungsmittel, Tönungsmittel, Bräunungsmittel, Bleichmittel, Keratin-härtende Stoffe, antimikrobielle Wirkstoffe, Lichtfilterwirkstoffe, Repellentwirkstoffe, hyperemisierend wirkende Stoffe, keratolytisch und kera toplastisch wirkende Stoffe, Antischuppenwirkstoffe, Antiphlogistika, keratinisierend wirkende Stoffe, antioxidativ bzw. als Radikalfänger aktive Wirkstoffe, hautbefeuchtende oder -feuchthaltende Stoffe, rückfettende Wirkstoffe, antierythimatös oder antiallergisch aktive Wirkstoffe und Mischungen davon.
  • Künstlich hautbräunende Wirkstoffe, die geeignet sind, die Haut ohne natürliche oder künstliche Bestrahlung mit UV-Strahlen zu bräunen, sind z.B. Dihydroxyaceton, alloxan und Walnussschaienextrakt. Geeignete Keratin-härtende Stoffe sind in der Regel Wirkstoffe, wie sie auch in Antitranspirantien eingesetzt werden, wie z.B. Kaliumaluminiumsulfat, Aluminiumhydroxychlorid, Aluminiumlactat, etc.
  • Antimikrobielle Wirkstoffe werden eingesetzt, um Mikroorganismen zu zerstören bzw. ihr Wachstum zu hemmen und dienen somit sowohl als Konservierungsmittel als auch als desodorierend wirkender Stoff, welcher die Entstehung oder die Intensität von Körpergeruch vermindert. Dazu zählen z.B. übliche, dem Fachmann bekannte Konservierungsmittel, wie p-Hydroxybenzoesäureester, Imidazolidinyl-Harnstoff, Formaldehyd, Sorbinsäure, Benzoesäure, Salicylsäure, etc. Derartige desodorierend wirkende Stoffe sind z.B. Zinkricinoleat, Triclosan, Undecylensäurealkylolamide, Citronensäuretriethylester, Chlorhexidin etc.
  • Geeignete Lichtfilterwirkstoffe sind Stoffe, die UV-Strahlen im UV-B- und/oder UV-A-Bereich absorbieren. Geeignete UV-Filter sind z.B. 2,4,6-Triaryl-1,3,5-triazine, bei denen die Arylgruppen jeweils wenigstens einen Substituenten tragen können, der vorzugsweise ausgewählt ist unter Hydroxy, Alkoxy, speziell Methoxy, Alkoxycarbonyl, speziell Methoxycarbonyl und Ethoxycarbonyl und Mischungen davon. Geeignet sind weiterhin p-Aminobenzoesäureester, Zimtsäureester, Benzophenone, Campherderivate sowie UV-Strahlen abhaltende Pigmente, wie Titandioxid, Talkum und Zinkoxid.
  • Geeignete Repellentwirkstoffe sind Verbindungen, die in der Lage sind, bestimmte Tiere, insbesondere Insekten, vom Menschen abzuhalten oder zu vertreiben. Dazu gehört z.B. 2-Ethyl-1, 3-hexandiol, N, N-Diethyl-m-toluamid etc. Geeignete hyperemisierend wirkende Stoffe, welche die Durchblutung der Haut anregen, sind z.B. ätherische Öle, wie Latschenkieferextrakt, Lavendelextrakt, Rosmarinextrakt, Wacholderbeerextrakt, Rosskastanienextrakt, Birkenblätterextrakt, Heublumenextrakt, Ethylacetat, Campher, Menthol, Pfefferminzöl, Rosmarinextrakt, Eukalyptusöl, etc. Geeignete keratolytisch und keratoplastisch wirkende Stoffe sind z.B. Salicylsäure, Kalziumthioglykolat, Thioglykolsäure und ihre Salze, Schwefel, etc. Geeignete Antischuppen-Wirkstoffe sind z.B. Schwefel, Schwefelpolyethylenglykolsorbitanmonooleat, Schwefelricinolpolyethoxylat, Zinkpyrithion, Aluminiumpyrithion, etc. Geeignete Antiphlogistika, die Hautreizungen entgegenwirken, sind z.B. Allantoin, Bisabolol, Dragosantol, Kamillenextrakt, Panthenol, etc.
  • Die erfindungsgemäßen kosmetischen Mittel können als kosmetischen und/oder pharmazeutischen Wirkstoff (wie auch gegebenenfalls als Hilfsstoff) wenigstens ein kosmetisch oder pharmazeutisch akzeptables Polymer enthalten, das sich von den Polymeren unterscheidet, die den erfindungsgemäß eingesetzten Polyelektrolytkomplex bilden. Dazu zählen ganz allgemein kationische, amphotere und neutrale Polymere.
  • Geeignete Polymere sind z.B. kationische Polymere mit der Bezeichnung Polyquaternium nach INCI, z.B. Copolymere aus Vinylpyrrolidon/N-Vinylimidazoliumsalzen (Luviquat FC, Luviquat HM, Luviquat MS, Luviquat&commat, Care), Copolymere aus N-Vinylpyrrolidon/Dimethylaminoethylmethacrylat, quaternisiert mit Diethylsulfat (Luviquat PQ 11), Copolymere aus N-Vinylcaprolactam/N-Vinylpyrrolidon/N-Vinylimidazoliumsalzen (Luviquat E Hold), kationische Cellulosederivate (Polyquaternium-4 und -10), Acrylamidocopolymere (Polyquaternium-7) und Chitosan.
  • Geeignete kationische (quaternisierte) Polymere sind auch Merquat (Polymer auf Basis von Dimethyldiallylammoniumchlorid), Gafquat (quaternäre Polymere, die durch Reaktion von Polyvinylpyrrolidon mit quaternären Ammoniumverbindungen entstehen), Polymer JR (Hydroxyethylcellulose mit kationischen Gruppen) und kationische Polymere auf pflanzlicher Basis, z.B. Guarpolymere, wie die Jaguar-Marken der Firma Rhodia.
  • Weitere geeignete Polymere sind auch neutrale Polymere, wie Polyvinylpyrrolidone, Copolymere aus N-Vinylpyrrolidon und Vinylacetat und/oder Vinylpropionat, Polysiloxane, Polyvinylcaprolactam und andere Copolymere mit N-Vinylpyrrolidon, Polyethylenimine und deren Salze, Polyvinylamine und deren Salze, Cellulosederivate, Polyasparaginsäuresalze und Derivate. Dazu zählt beispielsweise Luviflex 0 Swing (teilverseiftes Copolymerisat von Polyvinylacetat und Polyethylenglykol, Firma BASF).
  • Geeignete Polymere sind auch nichtionische, wasserlösliche bzw. wasserdispergierbare Polymere oder Oligomere, wie Polyvinylcaprolactam, z.B. Luviskol 0 Plus (BASF), oder Polyvinylpyrrolidon und deren Copolymere, insbesondere mit Vinylestern, wie Vinylacetat, z.B. Luviskol 0 VA 37 (BASF), Polyamide, z.B. auf Basis von Itaconsäure und aliphatischen Diaminen, wie sie z.B. in der DE-A-43 33 238 beschrieben sind.
  • Geeignete Polymere sind auch amphotere oder zwitterionische Polymere, wie die unter den Bezeichnungen Amphomer (National Starch) erhältlichen Octylacrylamid/Methylmethacrylat/tert.-Butylaminoethylmethacrylat-Hydroxypropylmethacrylat-Copolymere sowie zwitterionische Polymere, wie sie beispielsweise in den deutschen Patentanmeldungen DE 39 29 973 , DE 21 50 557 , DE 28 17 369 und DE 3708 451 offenbart sind. Acrylamidopropyltrimethylammoniumchlorid/Acrylsäure-bzw. -Methacrylsäure-Copolymerisate und deren Alkali-und Ammoniumsalze sind bevorzugte zwitterionische Polymere. Weiterhin geeignete zwitterionische Polymere sind Methacroylethylbetain/Methacrylat-Copolymere, die unter der Bezeichnung Amersette (AMERCHOL) im Handel erhältlich sind, und Copolymere aus Hydroxyethylmethacrylat, Methylmethacrylat, N, N-Dimethylaminoethylmethacrylat und Acrylsäure (Jordapon (D)).
  • Geeignete Polymere sind auch nichtionische, siloxanhaltige, wasserlösliche oder – dispergierbare Polymere, z.B. Polyethersiloxane, wie Tegopren 0 (Firma Goldschmidt) oder Besi&commat (Firma Wacker).
  • Die Formulierungsgrundlage erfindungsgemäßer pharmazeutischer Mittel enthält bevorzugt pharmazeutisch akzeptable Hilfsstoffe. Pharmazeutisch akzeptabel sind die im Bereich der Pharmazie, der Lebensmitteltechnologie und angrenzenden Gebieten bekanntermassen verwendbaren Hilfsstoffe, insbesondere die in einschlägigen Arzneibüchern (z.B. DAB Ph. Eur. BP NF) gelisteten sowie andere Hilfsstoffe, deren Eigenschaften einer physiologischen Anwendung nicht entgegenstehen.
  • Geeignete Hilfsstoffe können sein: Gleitmittel, Netzmittel, emulgierende und suspendierende Mittel, konservierende Mittel, Antioxidantien, Antireizstoffe, Chelatbildner, Emulsionsstabilisatoren, Filmbildner, Gelbildner, Geruchsmaskierungsmittel, Harze, Hydrokolloide, Lösemittel, Lösungsvermittler, Neutralisierungsmittel, Permeationsbeschleuniger, Pigmente, quaternäre Ammoniumverbindungen, Rückfettungs- und Überfettungsmittel, Salben-, Creme- oder Öl-Grundstoffe, Siliconderivate, Stabilisatoren, Sterilantien, Treibmittel, Trocknungsmittel, Trübungsmittel, Verdickungsmittel, Wachse, Weichmacher, Weissöl. Eine diesbezügliche Ausgestaltung beruht auf fachmännischem Wissen, wie sie beispielsweise in Fiedler, H. P. Lexikon der Hilfsstoffe für Pharmazie, Kosmetik und angrenzende Gebiete, 4. Aufl., Aulendorf: ECV-Editio-Kantor-Verlag, 1996, dargestellt sind.
  • Zur Herstellung der erfindungsgemäßen dermatologischen Mittel können die Wirkstoffe mit einem geeigneten Hilfsstoff (Exzipient) vermischt oder verdünnt werden. Exzipienten können feste, halb feste oder flüssige Materialien sein, die als Vehikel, Träger oder Medium für den Wirkstoff dienen können. Die Zumischung weiterer Hilfsstoffe erfolgt gewünschtenfalls in der dem Fachmann bekannten Weise. Weiterhin sind die Polymere und Dispersionen geeignet als Hilfsmittel in der Pharmazie, bevorzugt als oder in Beschichtungsmittel(n) oder Bindemittel(n) für feste Arzneiformen. Sie können auch in Cremes und als Tablettenüberzugsmittel und Tablettenbindemittel verwendet werden.
  • Nach einer bevorzugten Ausführungsform handelt es sich bei den erfindungsgemäßen Mitteln um ein Hautreinigungsmittel.
  • Bevorzugte Hautreinigungsmittel sind Seifen von flüssiger bis gelförmiger Konsistenz, wie Transparentseifen, Luxusseifen, Deoseifen, Cremeseifen, Babyseifen, Hautschutzseifen, Abrasiveseifen und Syndets, pasteuse Seifen, Schmierseifen und Waschpasten, flüssige Wasch-, Dusch- und Badepräparate, wie Waschlotionen, Duschbäder und -gele, Schaumbäder, Ölbäder und Scrub-Präparate, Rasierschäume, -lotionen und -cremes.
  • Nach einer weiteren bevorzugten Ausführungsform handelt es sich bei den erfindungsgemäßen Mitteln um kosmetische Mittel zur Pflege und zum Schutz der Haut, Nagelpflegemittel oder Zubereitungen für die dekorative Kosmetik.
  • Geeignete hautkosmetische Mittel sind z.B. Gesichtswässer, Gesichtsmasken, Deodorantien und andere kosmetische Lotionen. Mittel für die Verwendung in der dekorativen Kosmetik umfassen beispielsweise Abdeckstifte, Theaterfarben, Mascara und Lidschatten, Lippenstifte, Kajalstifte, Eyeliner, Rouges, Puder und Augenbrauenstifte.
  • Ausserdem können die Polypeptidsequenzen (i) verwendet werden in Nose-Strips zur Porenreinigung, in Antiaknemitteln, Repellents, Rasiermitteln, Haarentfernungsmitteln, Intimpflegemitteln, Fusspflegemitteln sowie in der Babypflege.
  • Bei den erfindungsgemäßen Hautpflegemitteln handelt es sich insbesondere um W/O- oder O/W-Hautcremes, Tag- und Nachtcremes, Augencremes, Gesichtscremes, Antifaltencremes, Feuchthaltecremes, Bleichcremes, Vitamincremes, Hautlotionen, Pflegelotionen und Feuchthaltelotionen.
  • Hautkosmetische und dermatologische Mittel auf Basis der zuvor beschriebenen Polyelektrolytkomplexe zeigen vorteilhafte Wirkungen. Die Polymere können unter anderem zur Feuchthaltung und Konditionierung der Haut und zur Verbesserung des Hautgefühls beitragen. Die Polymere können auch als Verdicker in den Formulierungen wirken. Durch Zusatz der erfindungsgemäßen Polymere kann in bestimmten Formulierungen eine erhebliche Verbesserung der Hautverträglichkeit erreicht werden.
  • Hautkosmetische und dermatologische Mittel enthalten vorzugsweise wenigstens eine Polypeptidsequenz (i) in einem Anteil von etwa 0,001 bis 30 Gew.-%, vorzugsweise 0,01 bis 20 Gew.-%, ganz besonders bevorzugt 0,1 bis 12 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels.
  • Besonders Lichtschutzmittel auf Basis der Polypeptidsequenzen (i) besitzen die Eigenschaft, die Verweilzeit der UV-absorbierenden Inhaltsstoffe im Vergleich zu gängigen Hilfsmitteln wie Polyvinylpyrrolidon zu erhöhen.
  • Je nach Anwendungsgebiet können die erfindungsgemäßen Mittel in einer zur Hautpflege geeigneten Form, wie z.B. als Creme, Schaum, Gel, Stift, Mousse, Milch, Spray (Pumpspray oder treibmittelhaltiger Spray) oder Lotion appliziert werden.
  • Die hautkosmetischen Zubereitungen können neben den Polypeptidsequenzen (i) und geeigneten Trägern noch weitere in der Hautkosmetik übliche Wirkstoffe und Hilfsstoffe, wie zuvor beschrieben, enthalten. Dazu zählen vorzugsweise Emulgatoren, Konservierungsmittel, Parfümöle, kosmetische Wirkstoffe wie Phytantriol, Vitamin A, E und C, Retinol, Bisabolol, Panthenol, Lichtschutzmittel, Bleichmittel, Färbemittel, Tönungsmittel, Bräunungsmittel, Collagen, Eiweisshydrolysate, Stabilisatoren, pH-Wert-Regulatoren, Farbstoffe, Salze, Verdicker, Gelbildner, Konsistenzgeber, Silicone, Feuchthaltemittel, Rückfetter und weitere übliche Additive.
  • Bevorzugte Öl- und Fettkomponenten der hautkosmetischen und dermatologischen Mittel sind die zuvor genannten mineralischen und synthetischen Öle, wie z.B. Paraffine, Siliconöle und aliphatische Kohlenwasserstoffe mit mehr als 8 Kohlenstoffatomen, tierische und pflanzliche Öle, wie z.B. Sonnenblumenöl, Kokosöl, Avocadoöl, Olivenöl, Lanolin, oder Wachse, Fettsäuren, Fettsäureester, wie z.B. Triglyceride von C6-C30-Fettsäuren, Wachsester, wie z.B. Jojobaöl, Fettalkohole, Vaseline, hydriertes Lanolin und acetyliertes Lanolin sowie Mischungen davon.
  • Man kann die erfindungsgemäßen Polypeptidsequenzen (i) auch mit herkömmlichen Polymeren abmischen, falls spezielle Eigenschaften eingestellt werden sollen.
  • Zur Einstellung bestimmter Eigenschaften wie z.B. Verbesserung des Anfassgefühls, des Spreitverhaltens, der Wasserresistenz und/oder der Bindung von Wirk- und Hilfsstoffen, wie Pigmenten, können die hautkosmetischen und dermatologischen Zubereitungen zusätzlich auch konditionierende Substanzen auf Basis von Siliconverbindungen enthalten.
  • Geeignete Siliconverbindungen sind beispielsweise Polyalkylsiloxane, Polyarylsiloxane, Polyarylalkylsiloxane, Polyethersiloxane oder Siliconharze.
  • Die Herstellung der kosmetischen oder dermatologischen Zubereitungen erfolgt nach üblichen, dem Fachmann bekannten Verfahren.
  • Bevorzugt liegen die kosmetischen und dermatologischen Mittel in Form von Emulsionen insbesondere als Wasser-in-Öl (W/O)- oder Öl-in-Wasser (O/W)-Emulsionen vor.
  • Es ist aber auch möglich, andere Formulierungsarten zu wählen, beispielsweise Hydrodispersionen, Gele, Öle, Oleogele, multiple Emulsionen, beispielsweise in Form von W/O/W- oder O/W/O-Emulsionen, wasserfreie Salben bzw. Salbengrundlagen, usw.
  • Die Herstellung von Emulsionen erfolgt nach bekannten Methoden. Die Emulsionen enthalten neben wenigstens einer Polypeptidsequenz (i) in der Regel übliche Bestandteile, wie Fettalkohole, Fettsäureester und insbesondere Fettsäuretriglyceride, Fettsäu ren, Lanolin und Derivate davon, natürliche oder synthetische Öle oder Wachse und Emulgatoren in Anwesenheit von Wasser. Die Auswahl der Emulsionstyp-spezifischen Zusätze und die Herstellung geeigneter Emulsionen ist beispielsweise beschrieben in Schrader, Grundlagen und Rezepturen der Kosmetika, Hüthig Buch Verlag, Heidelberg, 2. Auflage, 1989, dritter Teil, worauf hiermit ausdrücklich Bezug genommen wird.
  • Eine geeignete Emulsion, z.B. für eine Hautcreme etc., enthält im Allgemeinen eine wässrige Phase, die mittels eines geeigneten Emutgatorsystems in einer Öl- oder Fettphase emulgiert ist. Zur Bereitstellung der wässrigen Phase kann ein Polyelektrolytkomplex eingesetzt werden.
  • Bevorzugte Fettkomponenten, welche in der Fettphase der Emulsionen enthalten sein können, sind: Kohlenwasserstofföle, wie Paraffinöl, Purcellinöl, Perhydrosqualen und Lösungen mikrokristalliner Wachse in diesen Ölen; tierische oder pflanzliche Öle, wie Süssmandelöl, Avocadoöl, Calophylumöl, Lanolin und Derivate davon, Ricinusöl, Sesamöl, Olivenöl, Jojobaöl, Karite-Öl, Hoplostethus-Öl, mineralische Öle, deren Destillationsbeginn unter Atmosphärendruck bei ca. 250°C und deren Destillationsendpunkt bei 410°C liegt, wie z.B. Vaselinöl, Ester gesättigter oder ungesättigter Fettsäuren, wie Alkylmyristate, z.B. i-Propyl-, Butyl- oder Cetylmyristat, Hexadecylstearat, Ethyl- oder i-Propylpalmitat, Octan- oder Decansäuretriglyceride und Cetylricinoleat.
  • Die Fettphase kann auch in anderen Ölen lösliche Siliconöle, wie Dimethylpolysiloxan, Methylphenylpolysiloxan und das Siliconglykol-Copolymer, Fettsäuren und Fettalkohole enthalten.
  • Neben den Polypeptidsequenzen (i) können auch Wachse verwendet werden, wie z.B. Carnaubawachs, Candilillawachs, Bienenwachs, mikrokristallines Wachs, Ozokeritwachs und Ca-, Mg- und Al-Oleate, -Myristate, -Linoleate und -Stearate.
  • Weiterhin kann eine erfindungsgemäße Emulsion als O/W-Emulsion vorliegen. Eine derartige Emulsion enthält üblicherweise eine Ölphase, Emulgatoren, die die Ölphase in der Wasserphase stabilisieren, und eine wässrige Phase, die üblicherweise verdickt vorliegt. Als Emulgatoren kommen vorzugsweise O/W-Emulgatoren, wie Polyglycerinester, Sorbitanester oder teilveresterte Glyceride, in Betracht.
  • Nach einer weiteren bevorzugten Ausführungsform handelt es sich bei den erfindungsgemäßen Mitteln um ein Duschgel, eine Shampoo-Formulierung oder ein Badepräparat.
  • Solche Formulierungen enthalten wenigstens einen Polypeptidsequenz (i) sowie üblicherweise anionische Tenside als Basistenside und amphotere und/oder nichtionische Tenside als Cotenside. Weitere geeignete Wirkstoffe und/oder Hilfsstoffe sind im all gemeinen ausgewählt unter Lipiden, Parfümölen, Farbstoffen, organischen Säuren, Konservierungsstoffen und Antioxidantien sowie Verdickern/Gelbildnern, Hautkonditioniermitteln und Feuchthaltemitteln.
  • Diese Formulierungen enthalten vorzugsweise 2 bis 50 Gew.-%, bevorzugt 5 bis 40 Gew.-%, besonders bevorzugt 8 bis 30 Gew.-% Tenside, bezogen auf das Gesamtgewicht der Formulierung.
  • In den Wasch-, Dusch- und Badepräparaten können alle in Körperreinigungsmitteln üblicherweise eingesetzten anionische, neutrale, amphotere oder kationische Tenside verwendet werden.
  • Geeignete anionische Tenside sind beispielsweise Alkylsulfate, Alkylethersulfate, Alkylsulfonate, Alkylarylsulfonate, Alkylsuccinate, Alkylsulfosuccinate, N-Alkoylsarkosinate, Acyltaurate, Acylisothionate, Alkylphosphate, Alkyletherphosphate, Alkylethercarboxylate, Alpha-Olefinsulfonate, insbesondere die Alkali- und Erdalkalimetallsalze, z.B. Natrium, Kalium, Magnesium, Calcium, sowie Ammonium- und Triethanolamin-Salze. Die Alkylethersulfate, Alkyletherphosphate und Alkylethercarboxylate können zwischen 1 bis 10 Ethylenoxid- oder Propylenoxideinheiten, bevorzugt 1 bis 3 Ethylenoxideinheiten im Molekül aufweisen.
  • Dazu zählen z.B. Natriumlaurylsulfat, Ammoniumtaurytsulfat, Natriumlaurylethersulfat, Ammoniumlaurylethersulfat, Natriumlaurylsarkosinat, Natriumoleylsuccinat, Ammoniumlaurylsulfosuccinat, Natriumdodecylbenzolsulfonat, Triethanolamindodecylbenzolsulfonat.
  • Geeignete amphotere Tenside sind z.B. Alkylbetaine, Alkylamidopropylbetaine, Alkylsulfobetaine, Alkylglycinate, Alkylcarboxyglycinate, Alkylamphoacetate oder -propionate, Alkylamphodiacetate oder -dipropionate.
  • Beispielsweise können Cocodimethylsulfopropylbetain, Laurylbetain, Cocamidopropylbetain oder Natriumcocamphopropionat eingesetzt werden.
  • Als nichtionische Tenside sind beispielsweise geeignet die Umsetzungsprodukte von aliphatischen Alkoholen oder Alkylphenolen mit 6 bis 20 C-Atomen in der Alkylkette, die linear oder verzweigt sein kann, mit Ethylenoxid und/oder Propylenoxid. Die Menge Alkylenoxid beträgt ca. 6 bis 60 Mole auf ein Mol Alkohol. Ferner sind Alkylaminoxide, Mono- oder Dialkylalkanolamide, Fettsäureester von Polyethylenglykolen, ethoxylierte Fettsäureamide, Alkylpolyglycoside oder Sorbitanetherester geeignet.
  • Ausserdem können die Wasch-, Dusch- und Badepräparate übliche kationische Tenside enthalten, wie z.B. quaternäre Ammoniumverbindungen, beispielsweise Cetyltrimethylammoniumchlorid.
  • Weiterhin können die Duschgel-/Shampoo-Formulierungen Verdicker, wie z.B. Kochsalz, PEG-55, Propylenglykol-Oleat, PEG-120-Methylglucosedioleat und andere, sowie Konservierungsmittel, weitere Wirk- und Hilfsstoffe und Wasser enthalten.
  • Nach einer weiteren bevorzugten Ausführungsform handelt es sich bei den erfindungsgemäßen Mitteln um ein Haarbehandlungsmittel.
  • Erfindungsgemäße Haarbehandlungsmittel enthalten vorzugsweise wenigstens eine Polypeptidsequenz (i) in einer Menge im Bereich von etwa 0,01 bis 30 Gew.-%, bevorzugt 0,5 bis 20 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels.
  • Vorzugsweise liegen die erfindungsgemäßen Haarbehandlungsmittel in Form eines Schaumfestigers, Haarmousses, Haargels, Shampoos, Haarsprays, Haarschaums, Spitzenfluids, Egalisierungsmittels für Dauerwellen, Haarfärbe- und -bleichmittels oder "Hot-Oil-Treatments" vor. Je nach Anwendungsgebiet können die haarkosmetischen Zubereitungen als (Aerosol-) Spray, (Aerosol-) Schaum, Gel, Gelspray, Creme, Lotion oder Wachs appliziert werden. Haarsprays umfassen dabei sowohl Aerosolsprays als auch Pumpsprays ohne Treibgas. Haarschäume umfassen sowohl Aerosolschäume wie auch Pumpschäume ohne Treibgas. Haarsprays und Haarschäume umfassen vorzugsweise überwiegend oder ausschliesslich wasserlösliche oder wasserdispergierbare Komponenten. Sind die in den erfindungsgemäßen Haarsprays und Haarschäumen eingesetzten Verbindungen wasserdispergierbar, können sie in Form von wässrigen Mikrodispersionen mit Teilchendurchmessern von üblicherweise 1 bis 350 nm, bevorzugt 1 bis 250 nm, zur Anwendung gebracht werden. Die Feststoffgehalte dieser Präparate liegen dabei üblicherweise in einem Bereich von etwa 0,5 bis 20 Gew.-%. Diese Mikrodispersionen benötigen in der Regel keine Emulgatoren oder Tenside zu ihrer Stabilisierung.
  • Die erfindungsgemäßen haarkosmetischen Formulierungen enthalten in einer bevorzugten Ausführungsform a) 0,01 bis 30 Gew.-% wenigstens einer Polypeptidsequenz (i) b) 20 bis 99,95 Gew.-% Wasser und/oder Alkohol, c) 0 bis 50 Gew.-% wenigstens eines Treibgases, d) 0 bis 5 Gew.-% wenigstens eines Emulgators, e) 0 bis 3 Gew.-% wenigstens eines Verdickers, sowie bis zu 25 Gew.-% weitere Bestandteile.
  • Unter Alkohol sind alle in der Kosmetik üblichen Alkohole zu verstehen, z.B. Ethanol, Isopropanol, n-Propanol.
  • Unter weiteren Bestandteilen sind die in der Kosmetik üblichen Zusätze zu verstehen, beispielsweise Treibmittel, Entschäumer, grenzflächenaktive Verbindungen, d.h. Tenside, Emulgatoren, Schaumbildner und Solubilisatoren. Die eingesetzten grenzflächenaktiven Verbindungen können anionisch, kationisch, amphoter oder neutral sein. Weitere übliche Bestandteile können ferner sein z.B. Konservierungsmittel, Parfümöle, Trübungsmittel, Wirkstoffe, UV-Filter, Pflegestoffe wie Panthenol, Collagen, Vitamine, Eiweisshydrolysate, Alpha- und Beta-Hydroxycarbonsäuren, Stabilisatoren, pH-Wert-Regulatoren, Farbstoffe, Viskositätsregulierer, Gelbildner, Salze, Feuchthaltemittel, Rückfetter, Komplexbildner und weitere übliche Additive.
  • Weiterhin zählen hierzu alle in der Kosmetik bekannten Styling- und Conditioner-Polymere, die in Kombination mit den erfindungsgemäßen Polypeptidsequenzen (i) eingesetzt werden können, falls ganz spezielle Eigenschaften eingestellt werden sol len.
  • Als herkömmliche Haarkosmetik-Polymere eignen sich beispielsweise die zuvor genannten kationischen, anionischen, neutralen, nichtionischen und amphoteren Polymere, auf die hier Bezug genommen wird.
  • Zur Einstellung bestimmter Eigenschaften können die Zubereitungen zusätzlich auch konditionierende Substanzen auf Basis von Silikonverbindungen enthalten. Geeignete Silikonverbindungen sind beispielsweise Polyalkylsiloxane, Polyarylsiloxane, Polyanlalkylsiloxane, Polyethersiloxane, Silikonharze oder Dimethicon Copolyole (CTFA) und aminofunktionelle Silikonverbindungen wie Amodimethicone (CTFA).
  • Die erfindungsgemäßen Polymerisate eignen sich insbesondere als Festigungsmittel in Haarstyling-Zubereitungen, insbesondere Haarsprays (Aerosolsprays und Pumpsprays ohne Treibgas) und Haarschäume (Aerosolschäume und Pumpschäume ohne Treibgas).
  • In einer bevorzugten Ausführungsform enthalten Spray-Zubereitungen a) 0,01 bis 30 Gew.-% wenigstens einer Polypeptidsequenz (i), b) 20 bis 99,9 Gew.-% Wasser und/oder Alkohol, c) 0 bis 70 Gew.-% wenigstens eines Treibmittel, d) 0 bis 20 Gew.-% weitere Bestandteile.
  • Treibmittel sind die für Haarsprays oder Aerosolschäume üblich verwendeten Treibmittel. Bevorzugt sind Gemische aus Propan/Butan, Pentan, Dimethylether, 1,1-Difluorethan (HFC-152a), Kohlendioxid, Stickstoff oder Druckluft.
  • Eine erfindungsgemäß bevorzugte Formulierung für Aerosolhaarschäume enthält a) 0,01 bis 30 Gew.-% wenigstens einer Polypeptidsequenz (i), b) 55 bis 99,8 Gew.-% Wasser und/oder Alkohol, c) 5 bis 20 Gew.-% eines Treibmittel, d) 0,1 bis 5 Gew.-% eines Emulgators, e) 0 bis 10 Gew.-% weitere Bestandteile.
  • Als Emulgatoren können alle in Haarschäumen üblicherweise eingesetzten Emulgatoren verwendet werden. Geeignete Emulgatoren können nichtionisch, kationisch bzw. anionisch oder amphoter sein.
  • Beispiele für nichtionische Emulgatoren (INCI-Nomenklatur) sind Laurethe, z.B. Laureth-4 ; Cetethe, z.B. Cetheth-1, Polyethylenglycolcetylether, Cetearethe, z.B. Cetheareth-25, Polyglycolfettsäureglyceride, hydroxyliertes Lecithin, Lactylester von Fettsäuren, Alkylpolyglycoside.
  • Beispiele für kationische Emulgatoren sind Cetyldimethyl-2-hydroxyethylammoniumdihydrogenphosphat, Cetyltrimoniumchlorid, Cetyltrimmoniumbromid, Cocotrimoniummethylsulfat, Quaternium-1 bis × (INCI).
  • Anionische Emulgatoren können beispielsweise ausgewählt werden aus der Gruppe der Alkylsulfate, Alkylethersulfate, Alkylsulfonate, Alkylarylsulfonate, Alkylsuccinate, Alkylsulfosuccinate, N-Alkoylsarkosinate, Acyltaurate, Acylisethionate, Alkylphosphate, Alkyletherphosphate, Alkylethercarboxylate, Alpha-Olefinsulfonate, insbesondere die Alkali- und Erdalkalimetallsalze, z.B. Natrium, Kalium, Magnesium, Calcium, sowie Ammonium- und Triethanolamin-Salze. Die Alkylethersulfate, Alkyletherphosphate und Alkylethercarboxylate können zwischen 1 bis 10 Ethylenoxid oder Propylenoxid-Einheiten, bevorzugt 1 bis 3 Ethylenoxid-Einheiten im Molekül aufweisen.
  • Eine erfindungsgemäß für Styling-Gele geeignete Zubereitung kann beispielsweise wie folgt zusammengesetzt sein: a) 0,01 bis 30 Gew.-% wenigstens eines Polypeptidsequenz (i), b) 80 bis 99,85 Gew.-% Wasser und/oder Alkohol, c) 0 bis 3 Gew.-%, bevorzugt 0,05 bis 2 Gew.-%, eines Gelbildners, d) 0 bis 20 Gew.-% weitere Bestandteile.
  • Im allgemeinen wirken die erfindungsgemäß eingesetzten Polypeptidsequenzen (i) bereits "selbstverdickend", so dass in vielen Fällen bei der Herstellung von Gelen auf den Einsatz von Gelbildnern verzichtet werden kann. Ihr Einsatz kann jedoch von Vorteil sein, um spezielle rheologische oder andere anwendungstechnische Eigenschaften der Gele einzustellen. Als Gelbildner können alle in der Kosmetik üblichen Gelbildner eingesetzt werden. Hierzu zählen leicht vernetzte Polyacrylsäure, beispielsweise Carbomer (INCI), Cellulosederivate, z.B. Hydroxypropylcellulose, Hydroxyethylcellulose, kationisch modifizierte Cellulosen, Polysaccharide, z.B. Xanthangummi, Capryl/Caprin-Triglycerid, Natriumacrylat-Copolymere, Polyquaternium-32 (und) Paraffinum Liquidum (INCI), Natriumacrylat-Copolymere (und) Paraffinum Liquidum (und) PPG-1 Trideceth-6, Acrylamidopropyltrimoniumchlorid/Acrylamid-Copolymere, Steareth-10-Allylether, Acrylat-Copolymere, Polyquaternium-37 (und) Paraffinum Liquidum (und) PPG-1 Tri deceth-6, Polyquaternium 37 (und) Propylenglycoldicapratdicaprylat (und) PPG-1 Trideceth-6, Polyquaternium-7, Polyquaternium-44.
  • Die erfindungsgemäßen Polypeptidsequenzen (i) können in kosmetischen Zubereitungen als Konditioniermittel eingesetzt werden.
  • Eine die erfindungsgemäßen Polypeptidsequenzen (i) enthaltende Zubereitung kann bevorzugt in Shampooformulierungen als Festigungs- und/oder Konditioniermittel eingesetzt werden. Bevorzugte Shampooformulierungen enthalten a) 0,01 bis 30 Gew.-% wenigstens einer Polypeptidsequenz (i), b) 25 bis 94,95 Gew.-% Wasser, c) 5 bis 50 Gew.-% Tenside, c) 0 bis 5 Gew.-% eines weiteren Konditioniermittels, d) 0 bis 10 Gew.-% weitere kosmetische Bestandteile.
  • In den Shampooformulierungen können alle in Shampoos üblicherweise eingesetzte anionische, neutrale, amphotere oder kationische Tenside verwendet werden.
  • Geeignete anionische Tenside sind beispielsweise Alkylsulfate, Alkylethersulfate, Alkylsulfonate, Alkylarylsulfonate, Alkylsuccinate, Alkylsulfosuccinate, N-Alkoylsarkosinate, Acyltaurate, Acylisothionate, Alkylphosphate, Alkyletherphosphate, Alkylethercarboxylate, Alpha-Olefinsulfonate, insbesondere die Alkali- und Erdalkalimetallsalze, z.B. Natrium, Kalium, Magnesium, Calcium, sowie Ammonium- und Triethanolamin-Salze. Die Alkylethersulfate, Alkyletherphosphate und Alkylethercarboxylate können zwischen 1 bis 10 Ethylenoxid- oder Propylenoxid-Einheiten, bevorzugt 1 bis 3 Ethylenoxid-Einheiten im Molekül aufweisen.
  • Geeignet sind zum Beispiel Natriumlaurylsulfat, Ammoniumlaurysulfat, Natriumlaurylethersulfat, Ammoniumlaurylethersulfat, Natriumlauroylsarkosinat, Natriumoleylsuccinat, Ammoniumlaurylsulfosuccinat, Natriumdodecylbenzolsulfonat, Triethanolamindodecylbenzolsulfonat.
  • Geeignete amphotere Tenside sind zum Beispiel Alkylbetaine, Alkylamidopropylbetaine, Alkylsulfobetaine, Alkylglycinate, Alkylcarboxyglycinate, Alkylamphoacetate oder -propionate, Alkylamphodiacetate oder -dipropionate.
  • Beispielsweise können Cocodimethylsulfopropylbetain, Laurylbetain, Cocamidopropylbetain oder Natriumcocamphopropionat eingesetzt werden.
  • Als nichtionische Tenside sind beispielsweise geeignet die Umsetzungsprodukte von aliphatischen Alkoholen oder Alkylphenolen mit 6 bis 20 C-Atomen in der Alkylkette, die linear oder verzweigt sein kann, mit Ethylenoxid und/oder Propylenoxid. Die Menge Alkylenoxid beträgt ca. 6 bis 60 Mole auf ein Mol Alkohol. Ferner sind Alkylaminoxide, Mono- oder Dialkylalkanolamide, Fettsäureester von Polyethylenglykolen, Alkylpolyglykoside oder Sorbitanetherester geeignet.
  • Ausserdem können die Shampooformulierungen übliche kationische Tenside enthalten, wie z.B. quaternäre Ammoniumverbindungen, beispielsweise Cetyltrimethylammoniumchlorid.
  • In den Shampooformulierungen können zur Erzielung bestimmter Effekte übliche Konditioniermittel in Kombination mit den Polypeptidsequenzen (i) eingesetzt werden.
  • Hierzu zählen beispielsweise die zuvor genannten kationischen Polymere mit der Bezeichnung Polyquaternium nach INCI, insbesondere Copolymere aus Vinylpyrrolidon/N-Vinylimidazoliumsalzen (Luviquat FC, Luviquat&commat, HM, Luviquat MS, Luviquat Care), Copolymere aus N-Vinylpyrrolidon/Dimethylaminoethylmethacrylat, quaternisiert mit Diethylsulfat (Luviquat D PQ 11), Copolymere aus N-Vinylcaprolactam/N-Vinylpyrrolidon/N-Vinylimidazoliumsalzen (Luviquat D Hold), kationische Cellulosederivate (Polyquaternium-4 und -10), Acrylamidcopolymere (Polyquaternium-7). Ferner können Eiweißhydrolysate verwendet werden, sowie konditionierende Substanzen auf Basis von Silikonverbindungen, beispielsweise Polyalkylsiloxane, Polyarylsiloxane, Polyarylalkylsiloxane, Polyethersiloxane oder Silikonharze. Weitere geeignete Silikonverbindungen sind Dimethicon Copolyole (CTFA) und aminofunktionelle Silikonverbindungen wie Amodimethicone (CTFA). Ferner können kationische Guarderivate wie Guarhydroxypropyltrimoniumchlorid (INCI) verwendet werden.
    •
  • KBD-Patent: Beispiele
  • Beispiel 1: Expressionsvektoren und Produktionsstämme
  • Es wurden verschiedene Expressionsvektoren für die Expression der Keratinbindenden Domänen (KBD) getestet. Dabei kamen verschiedene Promotoren (z.B. IPTG-induzierbar, Ramnose-induzierbar, Arabindose-induzierbar, Methanolinduzierbar, konstitutive Promotoren, u.a.) zum Einsatz. Ebenso wurden Konstrukte getestet, bei denen die KBD als Fusionsproteine exprimiert wurden (z.B. als Fusion mit Thioredoxin, oder eGFP, oder YaaD [B. subtilis, SWISS-PROT: P37527, PDX1], u.a.). Dabei wurden sowohl die beschriebene KBD-B (Keratin-bindende Domäne B), als auch KBD-C (Keratin-bindende Domäne C), sowie die Kombination aus beiden Domänen KBD-BC mit den verschiedenen Expressionssystemen exprimiert. Die erwähnten Vektor-Konstrukte sind nicht limitierend für die Beanspruchung.
  • Stellvertretend als Beispiel ist die Vektorkarte des IPTG-induzierbaren Vektors pQE30-KBD-B (3), der Methanol-induzierbaren Vektoren pLib15 (4) und pLib16 (5) sowie des induzierbaren Vektors pLib19 (6) angege ben. Analog zu den beschriebenen Vektorkonstruktionen und Expressionen kann auch für KBD-C vorgegangen werden.
  • Für die Expression der KBD wurden verschiedene Produktionswirte genutzt, wie z.B. E. coli-Stämme (siehe Bsp. 2; z.B. XL10-Gold [Firma Stratagene], BL21-CodonPlus [Firma Stratagene], und andere). Es wurden aber auch andere bakterielle Produktionswirte, wie z.B. Bacillus megaterium oder Bacillus subtilis genutzt werden. Bei der KBD-Expression in B. megaterium wurde analog zu: Barg, H., Malten, M. & Jahn, D. (2005). Protein and vitamin production in Bacillus megaterium. In Methods in Biotechnology-Micobial Products and Biotransformations (Barredo, J.-L., ed.) vorgegangen. Als pilzliche Produktionsstämme kamen Pichia pastoris (siehe Bsp. 3; z.B. GS115 und KM71 [beide Firma Invitrogen]; und andere) und Aspergillus nidulans (siehe Bsp. 4; z.B. RMS011 [Stringer, MA, Dean, RA, Sewall, TC, Timberlake, WE (1991) Rodletless, a new Aspergillus developmental mutant induced by direct gene activation. Genes Dev 5:1161-1171] und SRF200 [Karos, M, Fischer, R (1999) Molecular characterization of HymA, an evolutionarily highly conserved and highly expressed protein of Aspergillus nidulans. Mol Genet Genomics 260:510-521], und andere) zum Einsatz. Es könnten aber auch andere pilzliche Produktionswirte, wie z.B. Aspergillus niger (KBD-Expression analog zu EP 0635574A1 und/oder WO 98/46772) zur KBD-Expression genutzt werden.
  • Beispiel 2: KBD-Expression in E. coli-Stämmen mit IPTG induzierbaren Promotoren, z.B. durch das Expressionsplasmid pQE30-KBD-B
  • Für die Expression wurden verschiedene Produktionswirte eingesetzt, wie z.B. verschiedene E. coli-Stämme (z.B. XL10-Gold [Firma Stratagene], BL21-CodonPlus [Firma Stratagene], und andere), Bacillus megaterium, Bacillus subtilis u.a. Hier wird – stellvertretend als Beispiel – die Klonierung und Expression von KBD-B durch E. coli, transformiert mit pQE30-KBD-B beschrieben:
  • Klonierung von pQE30-KBD-B
    • – Lambda-MaxiDNA (DNA-Lambda Maxi Kit, Firma Qiagen) wurde aus einer cDNA-Bank von humanen Keratinozyten hergestellt (Firma BD Bioscience, Clontech, Human Keratinocyte cDNA, foreskin, primary culture in log phase, Vektor: λgt11). Die PCR wurde unter Verwendung der folgenden Oligonukleotide durchgeführt: Bag 43 (5'-GGTCAGTTACGTGCAGCTGAAGG-3') und Bag 44 (5' GCTGAGGCTGCCGGATCG-3')
    • – Das entstandene etwa 1102 bp große PCR-Produkt wurde aus einem Agarosegel ausgeschnitten und aufgereinigt.
    • – Anschließend wurde mit dem gereinigten PCR-Produkt als Templat eine 2. PCR durchgeführt: Verwendete Oligonukleotide: Bag 53: (5'-CGCGCCTCGAGCCACATACTGGTCTGC-3') und Bag 51 (5'-GCTTAGCTGAGGCTGCCGGATCG-3')
    • – Das entstandene etwa 1073 bp große PCR-Produkt wurde aus einem Agarosegel ausgeschnitten, aufgereinigt und in folgenden Vektor kloniert: pCR2.1-TOPO (Firma Invitrogen).
    • – Der entstehende Vektor pCR2.1-TOPO+KBD-B (5027 bp) wurde anschließend transformiert, amplifiziert in E. coli, dann mit XhoI und EcoRI geschnitten und das entstandene KBD-B-Fragment in pBAD/HisA (Firma Invitrogen; ebenfalls geschnitten mit XhoI und EcoRI) kloniert.
    • – Der neu entstandene Vektor pBAD/HisA+KBD-B (5171 bp) wurde erneut geschnitten mit SacI und StuI und das entstandene KBD-B-Fragment in pQE30 (Firma Qiagen; geschnitten mit SacI und SmaI) kloniert. Der daraus entstandene Expressionsvektor pQE30-KBD-B (4321 bp; siehe auch 3) wurde für die folgenden KBD-B-Expressionen verwendet.
  • Die durch den Vektor pQE30-KBD-B in E. coli expremierte KBD-B beinhaltete neben der Polypeptidsequenz SEQ ID NO: 1 Position 2193-2481 zusätzlich am N-Terminus die Aminosäuren MRGSHHHHHHGSACEL sowie am C-Terminus die Aminosäuren GVDLQPSLIS.
  • Expression von KBD-B durch pQE30-KBD-B in E. coli
    • – Vorkulturen wurden von Platte oder Glycerinkultur mit pQE30-KBD-B transformierten E. coli Stämmen (z.B. XL10-Gold [Firma Stratagene]) angeimpft. Je nach Größe der Hauptkultur wurde in einem Röhrchen oder einem kleinen Kolben mit LB-Medium angeimpft (ca. 1:100).
    • – Antibiotika wurden je nach verwendetem Stamm eingesetzt (für pQE30-KBD-B Ampicillin 100 μg/ml).
    • - Es wurde bei 250 rpm und 37°C inkubiert.
    • – Die Hauptkultur wurde ca. 1:100 mit Vorkultur angeimpft, Hauptkultur: LB-Medium oder geeignetes Minimalmedium mit den jeweiligen Antibiotika. Inkubation bei 250 rpm und 37°C.
    • – Die Induktion erfolgte mit 1 mM IPTG ab einer OD(600nm) von 0,5.
    • – Die Zellen wurden nach 4 h Induktion abzentrifugiert.
  • In Fermentern wurde analog vorgegangen, jedoch konnte bei sehr viel höheren OD-Einheiten induziert werden und damit die Zell- und Protein-Ausbeute erheblich gesteigert werden.
  • Beispiel 3: Intrazelluläre und sekretorische Expression von KBD mittels Pichia pastoris-Stämmen unter Verwendung von Methanol-induzierbaren Promotoren, z.B. durch die Expressionsplasmide pLib 15 und pLib 16 (Schüttelkolben)
  • Für die KBD-Expression wurden verschiedene Pichia pastoris-Stämme eingesetzt, wie z.B. GS115 und KM71 (Pichia Expression Kit, Version M; Invitrogen Life Technologies).
  • Hier wird – stellvertretend als Beispiel – die Expression von KBD-B durch P. pastoris, transformiert mit pLib15 (intrazelluläre Expression, Vektor siehe 4) oder pLib16 (sekretorische Expression, Vektor siehe 5) beschrieben.
    • – Zur Konstruktion von pLib15 wurde ein etwa 930 bp großes, KBD-B-kodierendes DNA-Fragment mittels PCR unter Verwendung der Oligonukleotide Lib148 (5'-GCTAAGGAATTCACCATGCATCACCATCACCATCACGAGCCACATACTGGTCTGCT-3') und Lib149 (5'-GCTGGAGAATTCTCAGCTAATTAAGCTTGGCTGCA-3') sowie des Vektors pQE30-KBD-B (Beispiel 2, 3) als Template amplifiziert. Dabei wurden EcoRI-Restriktionsschnittstellen an beiden Enden der PCR-Produkte eingebracht.
    • – Zur Konstruktion von pLib16 wurde ein etwa 930 bp großes, KBD-B-kodierendes DNA-Fragment mittels PCR unter Verwendung der Oligonukleotide Lib149 (5'-GCTGGAGAATTCTCAGCTAATTAAGCTTGGCTGCA-3') und Lib150 (5'-GCTAAGGAATTCCATCACCATCACCATCACGAGCCACATACTGGTCTGCT-3') sowie des Vektors pQE30-KBD-B (Beispiel 2, 3) als Template amplifiziert. Dabei wurden EcoRI-Restriktionsschnittstellen an beiden Enden der PCR-Produkte eingebracht.
    • – Das PCR-Produkt, welches mit den Oligonukleotiden Lib148/Lib149 amplifiziert wurde, wurde mit EcoRI verdaut und in den EcoRI-geschnittenen Vektor pPIC3.5 (Pichia Expression Kit, Version M, Firma Invitrogen) ligiert. Die korrekte KBD-B Amplifizierung wurde durch Sequenzierung des aus der Ligation resultierenden Vektors pLib15 (4) überprüft.
    • – Das PCR-Produkt, welches mit den Oligonukleotiden Lib149/Lib150 amplifiziert wurde, wurde mit EcoRI verdaut und in den EcoRI-geschnittenen Vektor pPIC9 (Pichia Expression Kit, Version M, Firma Invitrogen) ligiert. Die korrekte KBD-B Amplifizierung wurde durch Sequenzierung des aus der Ligation resultierenden Vektors pLib16 (5) überprüft.
    • – Elektrokompetente Zellen und Spheroplasten der P. pastoris-Stämme wurden mit den zirkulären und Stul-linearisierten Vektoren pLib15 bzw. pLib16 transformiert.
    • – Die Analyse der Transformanten erfolgte mittels PCR und Southern Blot unter Verwendung chromosomaler DNA.
    • – Zur Vorkultur wurden KBD-B-expremierende P. pastoris-Transformanten von Platte oder Glycerinkultur angeimpft. Je nach Größe der Hauptkultur wurde ein Röhrchen oder ein kleiner Kolben mit MGY-, BMG- oder BMGY-Medium (Pichia-Expression-Kit, Version M, Firma Invitrogen) angeimpft (ca. 1:100).
    • – Die Kultur wurde bei 250-300 rpm und 30°C bis zur OD600 = 2-6 inkubiert.
    • – Die Zellen wurden mit 1500-3000 × g für 5 min bei Raumtemperatur geerntet.
    • – Zur Hauptkultur wurde das geerntete Zellpellet auf eine OD600 = 1 in Methanolenthaltendem mM-, BMM- oder BMMY-Medium (Pichia-Expression-Kit, Version M, Firma Invitrogen) aufgenommen, um die Expression zu induzieren.
    • – Die Inkubation der Hauptkultur erfolgte bei 250-300 rpm und 30°C für 1-96 h.
    • – Die Aufrechterhaltung der Induktion erfolgte alle 24 h durch Zugabe von 100 % Methanol bei einer Methanol-Endkonzentration von 0,5 %.
    • – Bei intrazellulärer Expression erfolgte die Ernte und der Aufschluss der Zellen nach Ende der Hauptkultur mittels eines Menton-Gaulin.
    • – Bei sekretorischer Expression wurde der Kulturüberstand gesammelt und die KBD-B direkt daraus gereinigt.
    • – Die intrazellulär in P. pastoris expremierte KBD-B (pLib15) beinhaltete neben der Polypeptidsequenz SEQ ID NO: 1 Position 2193-2481 zusätzlich am N-Terminus die Aminosäuren MHHHHHH sowie am C-Terminus die Aminosäuren GVDLQPLIS.
    • – Die sekretorisch in P. pastoris expremierte KBD-B (pLib16) beinhaltete vor der Prozessierung neben der Polypeptidsequenz SEQ ID NO: 1 Position 2193-2481 zusätzlich am N-Terminus die Aminosäuren MRFPSIFTAVLFAASSALAAPVNTTTEDETAQIPAEAVIGYSDLEGDFDVAVLPFSNSTNNGLLFINTTIASIAAKEEGVSLEKREAEAYVEFHHHHHH sowie am C-Terminus die Aminosäuren GVDLQPLIS. Die mittels P. pastoris sekretierte und prozessierte KBD-B (pLib16) beinhaltete neben der Polypeptidsequenz SEQ ID NO: 1 Position 2193-2481 zusätzlich am N-Terminus die Aminosäuren YVEFHHHHHH sowie am C-Terminus die Aminosäuren GVDLQPLIS.
  • Beispiel 4: Expression von KBD mittels Aspergillus nidulans-Stämmen unter Verwendung des induzierbaren alcA-Promotors, z.B. durch das Expressionsplasmid pLib 19 (Schüttelkolben)
  • Für die Expression wurden A. nidulans-Wildtypstämme eingesetzt, wie z.B. RMS011 oder SRF200. Hier wird – stellvertretend als Beispiel – die Expression von KBD-B durch A. nidulans, transformiert mit pLib19 (6) beschrieben.
    • – Zur Konstruktion von pLib19 wurde ein etwa 900 bp großes, KBD-B-kodierendes DNA-Fragment mittels PCR unter Verwendung der Oligonukleotide Lib151 (5'-CACCATGCATCACCATCACCATCACGAGCCACATACTGGTCTGCT-3')und Lib152 (5'-GCTAATTAAGCTTGGCTGCA-3') sowie des Vektors pQE30-KBD-B (Beispiel 2, 3) als Template amplifiziert. Das PCR-Produkt wurde in den Vektor pENTR/D (pENTRTM Directional TOPO® Cloning Kit, Version E, Firma Invitrogen) ligiert. Die korrekte KBD-B Amplifizierung wurde durch Sequenzierung überprüft.
    • – Die Rekombination des KBD-B kodierenden DNA-Fragmentes erfolgte in den Vektor pMT-OvE (Toews MW, Warmbold J, Konzack S, Rischitor P, Veith D, Vienken K, Vinuesa C, Wei H, Fischer R; Establishment of mRFP1 as a fluorescent marker in Aspergillus nidulans and construction of expression vectors for high-throughput protein tagging using recombination in vitro (GATEWAY). (2004) Curr Genet 45: 383-389) unter Verwendung des „Gateway® LR clonaseTM enzyme mix" (Firma Invitrogen). Dabei entstand der Vektor pLib19 (6).
    • – Protoplasten der A. nidulans Wildtyp-Stämme wurden mit dem zirkulären Vektor pLib19 transformiert. Die Analyse der Transformanten erfolgte mittels PCR und Southern Blot unter Verwendung chromosomaler DNA.
    • – Zur Vorkultur von KBD-B-expremierenden A. nidulans-Transformanten wurden 100 ml Minimalmedium (0,6 % NaNO3; 0,152 % KH2PO4; 0,052 % KCl [pH 6,5]; 0,8 % Glukose; 0,05 % MgSO4; 1 ml Spurenelementelösung [1 g/l FeSO4 × 7 H2O; 8,8 g/l ZnSO4 × 7 H2O; 0,4 g/l CuSO4 × 5 H2O; 0,15 g/l MnSO4 × 4 H2O; 0,1 g/l Na2B4O7 × 10 H2O; 0,05 g/l (NH4)6Mo7O24 × 4 H2O], + stammspezifische Supplemente) oder 100 ml Komplettmedium (2 % Malzextrakt; 0,1 % Pepton; 2 % Glukose; + stammspezifische Supplemente) in 500 ml Kolben mit 106-107 Sporen angeimpft und für 16-24 h bei 200-250 rpm und 37°C inkubiert.
    • – Nach der Vorkultur wurde das Pilzmyzel durch Filtration geerntet, mit destilliertem Wasser gewaschen und in Kolben mit 100-500 ml frischem Minimalmedium überführt. In diesem Hauptkulturmedium wurde 0,1 % Fructose statt Glukose als C-Quelle verwendet. Zur Induktion der KBD-Expression wurde dem Medium zusätzlich Ethanol (1 % Endkonzentration) oder Glycerol (50 mM) oder Natriumacetat (50 mM) oder Ethylamin oder Threonin zugegeben. Die erwähnten Zusätze zur Expressionsinduktion sind nicht limitierend für die Beanspruchung. Die Hauptkultur wurde für weitere 5-48 h bei 200-250 rpm und 37°C inkubiert.
    • – Nach Kulturende wurde das Pilzmyzel mit 1500-3000 × g für 5 min bei Raumtemperatur geerntet und mittels eines Menton-Gaulin aufgeschlossen.
    • – Die in A. nidulans expremierte KBD-B (pLib19) beinhaltete neben der Polypeptidsequenz SEQ ID NO: 1 Position 2193-2481 zusätzlich am N-Terminus die Aminosäuren MHHHHHH sowie am C-Terminus die Aminosäuren KGGRADPAFLYKWMIRLLTKPERKLLEGGPGTQLLFPLVRVNCALGVIMVIAVSCVKLLSAHNSTQHTSRKHKV.
  • Beispiel 5: Zell-Aufschluss und Inclusion-Body-Reinigung (pQE30-KBD-B)
  • Löslich exprimierte KBD konnte nach Reinigung direkt verwendet werden. Unlöslich exprimierte KBD (z.B. in Inclusion Bodies) wurde folgendermaßen gereinigt:
    • – Der Fermenter wurde zentrifugiert, das Pellet in 20 mM Phosphatpuffer pH = 7,4 suspendiert und mittels eines Menton-Gaulin aufgeschlossen.
    • – Der Aufschluss wurde erneut zentrifugiert (30000g), das Pellet hiervon mit 20 mM Phosphat, 500 mM NaCl und 8 M Harnstoff versetzt und so gerührt. (Lösen der Inclusion-Bodies)
    • – Der pH-Wert des Überstandes wurde auf 7,5 eingestellt
    • – Danach wurde nochmals zentrifugiert und der Überstandes auf eine Ni-Chelat Sepharose Säule aufgetragen.
  • Beispiel 6: Reinigung von Keratin-Binde-Domäne B über Ni-Chelat-Sepharose
  • Die Reinigung der KBD konnte durch das angehängte His-Tag über eine Ni-Säule chromatographisch gereinigt werden.
    Säulenmaterial: Ni-Sepharose High Performance
    Firma Amersham Biosciences Best.Nr.:17-5268-02
  • Das Material wurde in eine Säule gepackt (z.B. Durchmesser 2,6 cm, Höhe 5 cm) und mit Puffer A + 4 % Puffer B (entspricht 20mM Imidazol) äquilibriert.
  • Der Proteinextrakt (siehe z.B. Zell-Aufschluss und Inclusion-Body-Reinigung) wurde mit pH 7,5 über einen Superloop (ÄKTA-System) auf die Säule auftragen (Flow ca. 5 ml/Min).
  • Nach dem Auftrag wurde mit Puffer A + 20mM Imidazol gewaschen. Elution erfolgte mit Puffer B (=500mM Imidazol in Puffer A).
  • Das Eluat wurde mittels eines Fraktionssammlers fraktioniert aufgefangen.
  • Puffer A: 20 mM Natriumdihydrogenphosphat
    500 mM NaCl
    8M Harnstoff
    pH = 7,40
    Puffer B: 20mM Natriumdihydrogenphosphat
    500mM NaCl
    8M Harnstoff
    500mM Imidazol
    pH = 7,40
  • Beispiel 7: Renaturierung von Keratin-Binde-Domäne B
  • Unlöslich exprimierte Keratin-Binde-Domäne (z.B. aus Inclusion Bodies) kann folgendermaßen renaturiert und damit aktiviert werden:
  • Methode 1: diskontinuierliche Dialyse
  • Zu 6,5 ml KBD-B-Inclusion-Bodies in 8M Harnstoff (Ni-Chelat-Eluat, HiTrap) wurden 6,5 ml Cellytic IB (Firma Sigma, Bestellnr. C5236) und 5 mM DTT gegeben. Danach wurde die zu renaturierende Lösung in einen Dialyseschlauch gefüllt (Firma Spectrum: Spectra Por MWCO:12-14kD).
  • Ca. 12 Stunden gegen 1L 6M Harnstofflsg. bei 4°C unter vorsichtigem Rühren dialysieren.
  • Es wurden 500 ml 25 mM Tris/HCl pH = 7,50 zugegeben und so für 9 Stunden bei 4°C dialysiert. Anschließend Zugabe von weiteren 250 ml des Trispuffers (s.o) und weitere 12 Stunden dialysiert.
  • Anschließend wurden erneut 500 ml 25 mM Tris/HCl pH = 7,50 zugegeben und so für 9 Stunden bei 4°C dialysiert. Anschließend Zugabe von weiteren 250 ml des Trispuffers (s.o.) und weitere 12 Stunden dialysiert.
  • Anschließend wurden erneut 500 ml 25 mM Tris/HCl pH = 7,50 zugegeben und so für 9 Stunden bei 4°C dialysiert. Dann wurde der Dialyseschlauch mit dem Dialysat in 2L: 25 mM Tris + 150 mM NaCl pH = 7,50 gegeben. So wurde erneut bei 4°C für 12 Stunden dialysiert.
  • Anschließend wurde der Inhalt des Dialyseschlauches entnommen.
  • Methode 2: kontinuierliche Dialyse
  • 20 ml KBD-B-Inclusion-Bodies in 8 M Harnstoff (Ni-Chelat-Eluat, HiTrap) wurden mit 10 ml Cellytic IB (Firma Sigma, Bestellnr. C5236) und 5 mM DTT versetzt. Danach wurde die Lösung in eine Dialysekammer: Slide-A-Lyzer Dialyses Cassette Firma PIERCE, MWCO: 10 kD. Bestellnr.: 66830, eingefüllt.
  • Anschließend wurde für ca. 1 Stunde gegen 1 L 6M Harnstofflsg. bei 4°C dialysiert.
  • Danach wurden über einen Zeitraum von 48 h kontinuierlich 2 l des folgenden Puffers mittels einer Schlauchpumpe zudosiert: 25 mM Tris/HCl pH = 7,5.
  • Anschließend wurde der Dialyseschlauch mit dem Dialysat in 2 L des Endpuffers gegeben:
    25 mM Tris + 150 mM NaCl pH = 7,50 und für ca. 12 Stunden bei 4°C dialysiert.
  • Anschließend wurde der Inhalt des Dialyseschlauches entnommen.
  • Beispiel 8: Bindung an Haut 1 (Qualitativ)
  • Es wurde ein visueller qualitativer Test entwickelt, um zu überprüfen, ob KBD an Haut bindet.
  • Verwendete Lösungen:
    • Blockierungslsg: DIG Wash+Bufferset 1585762 Boehringer MA (10xLsg) in TBS verdünnt
    • TBS: 20mM Tris; 150mM NaCl pH 7,5
    • TTBS: TBS + 0,05% Tween20
  • Der erste Schritt ist der Transfer der äußeren Keratinschicht von der Haut auf einen stabilen Träger. Dazu wurde ein Klarsichtklebestreifen fest auf enthaarte menschliche Haut aufgebracht und wieder entfernt. Der Test kann direkt auf dem Klarsichtklebestreifen durchgeführt werden oder die anhaftende Keratinschicht durch erneutes Aufkleben auf einen Glasobjektträger überführt werden. Der Nachweis von Bindung wurde wie folgt vorgenommen:
    • – zur Inkubation mit den verschiedenen Reagentien, Transfer in ein Falcongefäß
    • – ggf. Zugabe von Ethanol zur Entfettung, Entfernung von Ethanol und Trocknung der Objektträger
    • – 1 h bei Raumtemperatur inkubiert mit Blocking Puffer
    • – 2x 5 min gewaschen mit TTBS
    • – 1x 5 min gewaschen mit TBS
    • – Inkubation mit der zu testenden KBD (gekoppelt an tag – z.B. His6, HA etc.) bzw. Kontrollprotein in TBS/0,05% Tween 20 während 2-4 h bei Raumtemperatur
    • – Entfernung des Überstands
    • – 3x Waschen mit TBS
    • – 1 h bei Raumtemperatur Inkubation mit Monoclonal Anti-polyHistidin (oder spezifischen KBD Rabbit) Antikörper, verdünnt 1:2000 in TBS + 0,01 % Blocking
    • – 2x 5min gewaschen mit TTBS
    • – 1x 5 min gewaschen mit TBS
    • – 1h bei Raumtemperatur Inkubation mit Anti-Mouse IgG Alkalische-Phosphatase-Conjugate, verdünnt 1:5000 in TBS + 0,01 % Blocking
    • – 2x 5 min gewaschen mit TTBS
    • – 1x 5 min gewaschen mit TBS
    • – Zugabe von Phosphatasesubstrat (NBT-BCIP; Boehringer MA 1 Tablette/40 ml Wasser 2,5 min; Stopp: mit Wasser)
    • – Optische Detektion des Farbniederschlages mit bloßem Auge oder im Mikroskop. Ein blauer Farbniederschlag zeigt an, dass KBD an die Haut gebunden hat.
  • Beispiel 9: Bindung an Haut 2 (Quantitativ)
  • Es wurde ein quantitativer Test entwickelt, mit dem sich die Haar/Haut-Bindungsstärke der KBD mit unspezifischen Proteinen vergleichen lässt.
  • Aus einem aufgetauten trockenem Stück Haut ohne Haare (human oder Schwein), wurde mit einem 5 mM Korkbohrer ein Stück herausgebohrt (bzw. bei einem Oberflächentest ein Stück Haut in ein Falcondeckel eingepasst). Die Hautprobe wurde dann auf eine Dicke von 2-3 mM gebracht um evt. vorhandenes Gewebe zu entfernen. Die Hautprobe wurde anschließend in ein Eppendorfgefäß (Protein-Lowbind) überführt, um den Bindungsnachweis durchzuführen (siehe auch 7):
    • – 2 x Waschen mit PBS/0,05 % Tween 20
    • – Zugabe von 1 ml 1 % BSA in PBS und Inkubation während 1 h bei Raumtemperatur, leichte Schwenkbewegungen (900 rpm).
    • – Entfernung des Überstands
    • – Zugabe von 100 μg KBD in PBS+0,05 % Tween 20; Inkubation 2 h bei Raumtemperatur und leichten Schwenkbewegungen (900 rpm).
    • - Entfernung des Überstands
    • - 3x Waschen mit PBS/0,05 % Tween 20
    • – Inkubation mit 1 ml monoklonalen Maus anti-tag-(His6 bzw. HA oder spezifischen KBD)-Antikörper mit Peroxidase Conjugate (1:2000 in PBS/0,05 % Tween 20) [Monoclonal AntipolyHistidin Peroxidase Conjugate, produced in mouse, lyophilized powder, Firma Sigma] während 2-4 h bei Raumtemperatur, leichte Schwenkbewegung (900 rpm)
    • – 3x Waschen mit PBS/0,05 % Tween 20
    • – Zugabe von Peroxidasesubstrat (1 ml/Eppendorfgefäß; Zusammensetzung s.u.)
    • – Reaktion bis zur Blaufärbung laufen lassen (ca. 1:30 Minuten).
    • – Mit 100 μl 2 M H2SO4 die Reaktion abstoppen.
    • – Die Absorption wurde bei 405 nm gemessen
  • Peroxidasesubstrat (kurz vorher ansetzten):
    • 0,1 ml TMB-Lösung (42 mM TMB in DMSO)
    • + 10 ml Substratpuffer (0,1 M Natriumacetat pH 4,9)
    • + 14,7 μl H2O2 3%ig
  • Beispiel 10: Bindung an Haar (Quantitativ)
  • Um die Bindungsstärke der KBD an Haar auch im Vergleich zu anderen Proteinen nachweisen zu können, wurde ein quantitativer Assay entwickelt (siehe auch 7). Bei diesem Test wurde zunächst Haar mit KBD inkubiert und überschüssige KBD abgewaschen. Anschließend wurde eine Antikörper-Peroxidase-Konjugat über das His-Tag der KBD gekoppelt. Nicht gebundene Antikörper-Peroxidase-Konjugat wurde erneut abgewaschen. Das gebundene Antikörper-Peroxidase-Konjugat [Monoclonal AntipolyHistidin Peroxidase Conjugate, produced in mouse, lyophilized powder, Firma Sigma] kann ein farbloses Substrat (TMB) in ein farbiges Produkt umsetzen, das photometrisch bei 405 nm vermessen wurde. Die Stärke der Absorption zeigt die Menge an gebundenem KBD bzw. Vergleichsprotein an. Als Vergleichsprotein wurde z.B. YaaD aus B. subtilis gewählt, das ebenfalls – wie es für diesen Test nötig ist – ein His-Tag zur Detektion aufwies. Anstatt des His-Tag können auch andere, spezifische Antikörper konjugiert mit Peroxidase verwendet werden.
  • 5 mg Haare (human) werden in 5 mM lange Stücke geschnitten und in Eppendorfgefäße (Protein-Lowbind) überführt, um den Bindungsnachweis durchzuführen:
    • – Zugabe von 1 ml Ethanol zur Entfettung
    • – Zentrifugation, Entfernung von Ethanol und Waschung der Haare mit H2O
    • – Zugabe von 1 ml 1% BSA in PBS und Inkubation während 1 h bei Raumtemperatur, leichte Schwenkbewegungen.
    • – Zentrifugation, Entfernung des Überstands
    • – Zugabe der zu testenden Keratinbindedomäne (gekoppelt an tag – z.B. His6, HA etc.) bzw. Kontrollprotein in 1 ml PBS/0,05 % Tween 20; Inkubation für 16 h bei 4°C (oder mindestens 2 h bei Raumtemperatur) bei leichten Schwenkbewegungen.
    • – Zentrifugation, Entfernung des Überstands
    • – 3x Waschen mit PBS/0,05 % Tween 20
    • – Inkubation mit 1 ml monoklonalen Maus anti-tag-(His6 bzw. HA)-Antikörper mit Peroxidase-Konjugat (1:2000 in PBS/0,05 % Tween 20) [Monoclonal Antipoly-Histidin Peroxidase Conjugate, produced in mouse, lyophilized powder, Firma Sigma] während 2-4 h bei Raumtemperatur, leichte Schwenkbewegung
    • – 3 x Waschen mit PBS/0,05 % Tween 20
    • – Zugabe von Peroxidasesubstrat (1 ml/Eppendorfgefäß)
    • – Reaktion bis zur Blaufärbung laufen lassen (ca. 2 Minuten).
    • – Mit 100 μl 2 M H2SO4 die Reaktion abstoppen.
    • – Die Absorption wird bei 405 nm gemessen
  • Peroxidasesubstrat (kurz vorher ansetzten):
    • 0,1 ml TMB-Lösung (42 mM TMB in DMSO)
    • + 10 ml Substratpuffer (0,1 M Natriumacetat pH 4,9)
    • + 14,7 μl H2O2 3%ig
    • BSA = Bovine serum albumin
    • PBS = Phosphat gepufferte Salzlösung
    • Tween 20 = Polyoxyethylene sorbitan monolaureate, n ca. 20
    • TMB = 3,5,3,'5' Tetramethylbenzidin
  • Ein beispielhaft für KBD-B durchgeführter Bindungs-Test an Haar zeigte eine deutliche Überlegenheit der Bindung von KBD-B an Haar gegenüber einer wesentlichen schlechteren Bindung des Vergleichsproteins YaaD:
    Figure 00330001
    Tabelle 1.: Quantitativer KBD Aktivitäts-Test Haar: 1) Puffer; 2) Vergleichsprotein YaaD; 3) KBD-B denaturiert; 4) KBD-B renaturiert. Die Tabelle zeigt die gemessenen Absorptionswerte bei 405 nm. Beispiel 11: Verwendung der KBD in einer Emulsion zur Tagespflege – Typ O/W
    WS 1%:
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 1,7 Ceteareth-6, Stearyl Alcohol
    0,7 Ceteareth-25
    2,0 Diethylamino Hydroxybenzoyl Hexyl Benzoate
    2,0 PEG-14 Dimethicone
    3,6 Cetearyl Alcohol
    6,0 Ethylhexyl Methoxycinnamate
    2,0 Dibutyl Adipate
    B 5,0 Glycerin
    0,2 Disodium EDTA
    1,0 Panthenol
    q.s. Konservierungsmittel
    67,8 Aqua dem.
    C 4,0 Caprylic/Capric Triglyceride, Sodium Acrylates Copolymer
    D 0,2 Sodium Ascorbyl Phosphate
    1,0 Tocopheryl Acetate
    0,2 Bisabolol
    1,0 Caprylic/Capric Triglyceride, Sodium Ascorbate, Tocopherol, Retinol
    1,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    E q.s. Sodium Hydroxide
    WS 5%:
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 1,7 Ceteareth-6, Stearyl Alcohol
    0,7 Ceteareth-25
    2,0 Diethylamino Hydroxybenzoyl Hexyl Benzoate
    2,0 PEG-14 Dimethicone
    3,6 Cetearyl Alcohol
    6,0 Ethylhexyl Methoxycinnamate
    2,0 Dibutyl Adipate
    B 5,0 Glycerin
    0,2 Disodium EDTA
    1,0 Panthenol
    q.s. Konservierungsmittel
    63,8 Aqua dem.
    C 4,0 Caprylic/Capric Triglyceride, Sodium Acrylates Copolymer
    D 0,2 Sodium Ascorbyl Phosphate
    1,0 Tocopheryl Acetate
    0,2 Bisabolol
    1,0 Caprylic/Capric Triglyceride, Sodium Ascorbate, Tocopherol, Retinol
    5,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    E q.s. Sodium Hydroxide
  • Herstellung: Die Phasen A und B getrennt voneinander auf ca. 80°C erwärmen. Phase B in Phase A einrühren und homogenisieren. Phase C in die kombinierten Phasen A und B einrühren und nochmals homogenisieren. Unter Rühren auf ca. 40°C abkühlen, Phase D zugeben, den pH-Wert mit Phase E auf etwa 6.5 einstellen, homogenisieren und unter Rühren auf Raumtemperatur abkühlen.
  • Hinweis: Die Formulierung wird ohne Schutzgas hergestellt. Die Abfüllung muß in sauerstoffundurchlässige Verpackungen, z.B. Aluminiumtuben erfolgen. Beispiel 12: Verwendung der KBD in einer schützenden Tagescreme – Typ O/W
    WS 1 %:
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 1,7 Ceteareth-6, Stearyl Alcohol
    0,7 Ceteareth-25
    2,0 Diethylamino Hydroxybenzoyl Hexyl Benzoate
    2,0 PEG-14 Dimethicone
    3,6 Cetearyl Alcohol
    6,0 Ethylhexyl Methoxycinnamate
    2,0 Dibutyl Adipate
    B 5,0 Glycerin
    0,2 Disodium EDTA
    1,0 Panthenol
    q.s. Konservierungsmittel
    68,6 Aqua dem.
    C 4,0 Caprylic/Capric Triglyceride, Sodium Acrylates Copolymer
    D 1,0 Sodium Ascorbyl Phosphate
    1,0 Tocopheryl Acetate
    0,2 Bisabolol
    1,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    E q.s. Sodium Hydroxide
    WS 5%:
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 1,7 Ceteareth-6, Stearyl Alcohol
    0,7 Ceteareth-25
    2,0 Diethylamino Hydroxybenzoyl Hexyl Benzoate
    2,0 PEG-14 Dimethicone
    3,6 Cetearyl Alcohol
    6,0 Ethylhexyl Methoxycinnamate
    2,0 Dibutyl Adipate
    B 5,0 Glycerin
    0,2 Disodium EDTA
    1,0 Panthenol
    q.s. Konservierungsmittel
    64,6 Aqua dem.
    C 4,0 Caprylic/Capric Triglyceride, Sodium Acrylates Copolymer
    D 1,0 Sodium Ascorbyl Phosphate
    1,0 Tocopheryl Acetate
    0,2 Bisabolol
    5,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    E q.s. Sodium Hydroxide
  • Herstellung: Die Phasen A und B getrennt voneinander auf ca. 80°C erwärmen. Phase B in Phase A einrühren und homogenisieren. Phase C in die kombinierten Phasen A und B einarbeiten und homogenisieren. Unter Rühren auf ca. 40°C abkühlen. Phase D hinzugeben, den pH-Wert mit Phase E auf ca. 6.5 einstellen und homogenisieren. Unter Rühren auf Raumtemperatur abkühlen. Beispiel 13: Verwendung der KBD in einer Gesichtsreinigungslotion – Typ O/W
    WS 1 %:
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 10,0 Cetearyl Ethylhexanoate
    10,0 Caprylic/Capric Triglyceride
    1,5 Cyclopentasiloxane, Cyclohexasilosane
    2,0 PEG-40 Hydrogenated Castor Oil
    B 3,5 Caprylic/Capric Triglyceride, Sodium Acrylates Copolymer
    C 1,0 Tocopheryl Acetate
    0,2 Bisabolol
    q.s. Konservierungsmittel
    q.s. Parfümöl
    D 3,0 Polyquaternium-44
    0,5 Cocotrimonium Methosulfate
    0,5 Ceteareth-25
    2,0 Panthenol, Propylene Glycol
    4,0 Propylene Glycol
    0,1 Disodium EDTA
    1,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    60,7 Aqua dem.
    WS 5%:
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 10,0 Cetearyl Ethylhexanoate
    10,0 Caprylic/Capric Triglyceride
    1,5 Cyclopentasiloxane, Cyclohexasilosane
    2,0 PEG-40 Hydrogenated Castor Oil
    B 3,5 Caprylic/Capric Triglyceride, Sodium Acrylates Copolymer
    C 1,0 Tocopheryl Acetate
    0,2 Bisabolol
    q.s. Konservierungsmittel
    q.s. Parfümöl
    D 3,0 Polyquaternium-44
    0,5 Cocotrimonium Methosulfate
    0,5 Ceteareth-25
    2,0 Panthenol, Propylene Glycol
    4,0 Propylene Glycol
    0,1 Disodium EDTA
    5,0 wässrige Lösung mit ca. 5 % Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    56,7 Aqua dem.
  • Herstellung: Phase A lösen. Phase B in Phase A einrühren, Phase C in die kombinierten Phasen A und B einarbeiten. Phase D lösen, in die kombinierten Phasen A, B und C einrühren und homogenisieren. 15min nachrühren. Beispiel 14: Verwendung der KBD in einem Daily Care Body Spray
    WS 1%:
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 3,0 Ethylhexyl Methoxycinnamate
    2,0 Diethylamino Hydroxybenzoyl Hexyl Benzoate
    1,0 Polyquaternium-44
    3,0 Propylene Glycol
    2,0 Panthenol, Propylene Glycol
    1,0 Cyclopentasiloxane, Cyclohexasiloxane
    10,0 Octyldodecanol
    0,5 PVP
    10,0 Caprylic/Capric Triglyceride
    3,0 C12-15 Alkyl Benzoate
    3,0 Glycerin
    1,0 Tocopheryl Acetate
    0,3 Bisabolol
    1,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    59,2 Alcohol
    WS 5%:
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 3,0 Ethylhexyl Methoxycinnamate
    2,0 Diethylamino Hydroxybenzoyl Hexyl Benzoate
    1,0 Polyquaternium-44
    3,0 Propylene Glycol
    2,0 Panthenol, Propylene Glycol
    1,0 Cyclopentasiloxane, Cyclohexasiloxane
    10,0 Octyldodecanol
    0,5 PVP
    10,0 Caprylic/Capric Triglyceride
    3,0 C12-15 Alkyl Benzoate
    3,0 Glycerin
    1,0 Tocopheryl Acetate
    0,3 Bisabolol
    5,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    55,2 Alcohol
  • Herstellung: Die Komponenten der Phase A einwiegen und klar lösen.
  • Beispiel 15: Verwendung der KBD in einem Hautpflegegel
    WS 1 %:
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 3,6 PEG-40 Hydrogenated Castor Oil
    15,0 Alcohol
    0,1 Bisabolol
    0,5 Tocopheryl Acetate
    q.s. Parfümöl
    B 3,0 Panthenol
    0,6 Carbomer
    1,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    75,4 Aqua dem,
    C 0,8 Triethanolamine
    WS 5%:
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 3,6 PEG-40 Hydrogenated Castor Oil
    15,0 Alcohol
    0,1 Bisabolol
    0,5 Tocopheryl Acetate
    q.s. Parfümöl
    B 3,0 Panthenol
    0,6 Carbomer
    5,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    71,4 Aqua dem,
    C 0,8 Triethanolamine
  • Herstellung: Die Phase A klar lösen. Phase B quellen lassen und mit Phase C neutralisieren. Phase A in die homogenisierte Phase B einrühren und homogenisieren. Beispiel 16: Verwendung der KBD in einer After Shave Lotion
    WS 1%:
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 10,0 Cetearyl Ethylhexanoate
    5,0 Tocopheryl Acetate
    1,0 Bisabolol
    0,1 Parfümöl
    0,3 Acrylates/C10-30 Alkyl Acrylate Crosspolymer
    B 15,0 Alcohol
    1,0 Panthenol
    3,0 Glycerin
    1,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    0,1 Triethanolamine
    63,5 Aqua dem.
    WS 5%:
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 10,0 Cetearyl Ethylhexanoate
    5,0 Tocopheryl Acetate
    1,0 Bisabolol
    0,1 Parfümöl
    0,3 Acrylates/C10-30 Alkyl Acrylate Crosspolymer
    B 15,0 Alcohol
    1,0 Panthenol
    3,0 Glycerin
    5,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    0,1 Triethanolamine
    59,5 Aqua dem.
  • Herstellung: Die Komponenten der Phase A mischen. Phase B lösen, in Phase A einarbeiten und homogenisieren. Beispiel 17: Verwendung der KBD in einer After Sun Lotion
    WS 1 %:
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 0,4 Acrylates/C10-30 Alkyl Acrylate Crosspolymer
    15,0 Cetearyl Ethylhexanoate
    0,2 Bisabolol
    1,0 Tocopheryl Acetate
    q.s. Parfümöl
    B 1,0 Panthenol
    15,0 Alcohol
    3,0 Glycerin
    1,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    63,2 Aqua dem,
    C 0,2 Triethanolamine
    WS 5%:
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 0,4 Acrylates/C10-30 Alkyl Acrylate Crosspolymer
    15,0 Cetearyl Ethylhexanoate
    0,2 Bisabolol
    1,0 Tocopheryl Acetate
    q.s. Parfümöl
    B 1,0 Panthenol
    15,0 Alcohol
    3,0 Glycerin
    5,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    59,2 Aqua dem,
    C 0,2 Triethanolamine
  • Herstellung: Die Komponenten der Phase A mischen. Phase B unter Homogenisieren in Phase A einrühren. Mit Phase C neutralisieren und erneut homogenisieren. Beispiel 18: Verwendung der KBD in einer Sonnenschutzlotion
    WS 1%:
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 4,5 Ethylhexyl Methoxycinnamate
    2,0 Diethylamino Hydroxybenzoyl Hexyl Benzoate
    3,0 Octocrylene
    2,5 Di-C12-13 Alkyl Malate
    0,5 Tocopheryl Acetate
    4,0 Polyglyceryl-3 Methyl Glucose Distearate
    B 3,5 Cetearyllsononanoate
    1,0 VP/Eicosene Copolymer
    5,0 Isohexadecane
    2,5 Di-C12-13 Alkyl Malate
    3,0 Titanium Dioxide, Trimethoxycaprylylsilane
    C 5,0 Glycerin
    1,0 Sodium Cetearyl Sulfate
    0,5 Xanthan Gum
    59,7 Aqua dem.
    D 1,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    1,0 Phenoxyethanol, Methylparaben, Ethylparaben, Butylparaben, Propylparaben, Isobutylparaben
    0,3 Bisabolol
    WS 5%:
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 4,5 Ethylhexyl Methoxycinnamate
    2,0 Diethylamino Hydroxybenzoyl Hexyl Benzoate
    3,0 Octocrylene
    2,5 Di-C12-13 Alkyl Malate
    0,5 Tocopheryl Acetate
    4,0 Polyglyceryl-3 Methyl Glucose Distearate
    B 3,5 Cetearyllsononanoate
    1,0 VP/Eicosene Copolymer
    5,0 Isohexadecane
    2,5 Di-C12-13 Alkyl Malate
    3,0 Titanium Dioxide, Trimethoxycaprylylsilane
    C 5,0 Glycerin
    1,0 Sodium Cetearyl Sulfate
    0,5 Xanthan Gum
    55,7 Aqua dem.
    D 5,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    1,0 Phenoxyethanol, Methylparaben, Ethylparaben, Butylparaben, Propylparaben, Isobutylparaben
    0,3 Bisabolol
  • Herstellung: Die Komponenten der Phasen A und B getrennt voneinander auf ca. 80°C erwärmen. Phase B in Phase A einrühren und homogenisieren. Phase C auf ca. 80°C erwärmen und unter Homogenisieren in die kombinierten Phasen A und B einrühren. Unter Rühren auf ca. 40°C abkühlen, Phase D zugeben und nochmals homogenisieren. Beispiel 19: Verwendung der KBD in einer Sonnenschutzlotion – Typ O/W
    WS 1 %:
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 2,0 Ceteareth-6, Stearyl Alcohol
    2,0 Ceteareth-25
    3,0 Tribehenin
    2,0 Cetearyl Alcohol
    2,0 Cetearyl Ethylhexanoate
    5,0 Ethylhexyl Methoxycinnamate
    1,0 Ethylhexyl Triazone
    1,0 VP/Eicosene Copolymer
    7,0 Isopropyl Myristate
    B 5,0 Zinc Oxide, Triethoxycaprylylsilane
    C 0,2 Xanthan Gum
    0,5 Hydroxyethyl Acrylate/Sodium Acryloyldimethyl Taurate Copolymer,
    Squalane, Polysorbate 60
    0,2 Disodium EDTA
    5,0 Propylene Glycol
    0,5 Panthenol
    60,9 Aqua dem.
    D 1,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    0,5 Phenoxyethanol, Methylparaben, Butylparaben, Ethylparaben, Propylparaben, Isopropylparaben
    1,0 Tocopheryl Acetate
    0,2 Bisabolol
    WS 5%:
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 2,0 Ceteareth-6, Stearyl Alcohol
    2,0 Ceteareth-25
    3,0 Tribehenin
    2,0 Cetearyl Alcohol
    2,0 Cetearyl Ethylhexanoate
    5,0 Ethylhexyl Methoxycinnamate
    1,0 Ethylhexyl Triazone
    1,0 VP/Eicosene Copolymer
    7,0 Isopropyl Myristate
    B 5,0 Zinc Oxide, Triethoxycaprylylsilane
    C 0,2 Xanthan Gum
    0,5 Hydroxyethyl Acrylate/Sodium Acryloyldimethyl Taurate Copolymer,
    Squalane, Polysorbate 60
    0,2 Disodium EDTA
    5,0 Propylene Glycol
    0,5 Panthenol
    56,9 Aqua dem.
    D 5,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    0,5 Phenoxyethanol, Methylparaben, Butylparaben, Ethylparaben, Propylparaben, Isopropylparaben
    1,0 Tocopheryl Acetate
    0,2 Bisabolol
  • Herstellung: Phase A auf ca. 80°C erwärmen, Phase B einrühren und 3min homogenisieren. Phase C ebenfalls auf 80°C erwärmen und unter Homogenisieren in die kombinierten Phasen A und B einrühren. Abkühlen auf ca. 40°C, Phase D einrühren und nochmals homogenisieren. Beispiel 20: Verwendung der KBD in einer Sonnenschutlotion – Typ O/W
    WS 1%:
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 3,5 Ceteareth-6, Stearyl Alcohol
    1,5 Ceteareth-25
    7,5 Ethylhexyl Methoxycinnamate
    2,0 Diethylamino Hydroxybenzoyl Hexyl Benzoate
    2,0 Cyclopentasiloxane, Cyclohexasiloxane
    0,5 Bees Wax
    3,0 Cetearyl Alcohol
    10,0 Caprylic/Capric Triglyceride
    B 5,0 Titanium Dioxide, Silica, Methicone, Alumina
    C 3,0 Glycerin
    0,2 Disodium EDTA
    0,3 Xanthan Gum
    1,0 Decyl Glucoside
    2,0 Panthenol, Propylene Glycol
    56,3 Aqua dem.
    D 1,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    1,0 Tocopheryl Acetate
    0,2 Bisabolol
    q.s. Parfümöl
    q.s. Konservierungsmittel
    WS 5%:
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 3,5 Ceteareth-6, Stearyl Alcohol
    1,5 Ceteareth-25
    7,5 Ethylhexyl Methoxycinnamate
    2,0 Diethylamino Hydroxybenzoyl Hexyl Benzoate
    2,0 Cyclopentasiloxane, Cyclohexasiloxane
    0,5 Bees Wax
    3,0 Cetearyl Alcohol
    10,0 Caprylic/Capric Triglyceride
    B 5,0 Titanium Dioxide, Silica, Methicone, Alumina
    C 3,0 Glycerin
    0,2 Disodium EDTA
    0,3 Xanthan Gum
    1,0 Decyl Glucoside
    2,0 Panthenol, Propylene Glycol
    52,3 Aqua dem.
    D 5,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    1,0 Tocopheryl Acetate
    0,2 Bisabolol
    q.s. Parfümöl
    q.s. Konservierungsmittel
  • Herstellung: Phase A auf ca. 80°C erwärmen, Phase B einrühren und 3min homogenisieren. Phase C ebenfalls auf 80°C erwärmen und unter Homogenisieren in die kombinierten Phasen A und B einrühren. Abkühlen auf ca. 40°C, Phase D einrühren und nochmals homogenisieren. Beispiel 21: Verwendung der KBD in einem Fußbalsam
    WS 1%:
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 2,0 Ceteareth-6, Stearyl Alcohol
    2,0 Ceteareth-25
    5,0 Cetearyl Ethylhexanoate
    4,0 Cetyl Alcohol
    4,0 Glyceryl Stearate
    5,0 Mineral Oil
    0,2 Menthol
    0,5 Camphor
    B 69,3 Aqua dem.
    q.s. Konservierungsmittel
    C 1,0 Bisabolol
    1,0 Tocopheryl Acetate
    D 1,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    5,0 Witch Hazel Extract
    WS 5%:
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 2,0 Ceteareth-6, Stearyl Alcohol
    2,0 Ceteareth-25
    5,0 Cetearyl Ethylhexanoate
    4,0 Cetyl Alcohol
    4,0 Glyceryl Stearate
    5,0 Mineral Oil
    0,2 Menthol
    0,5 Camphor
    B 65,3 Aqua dem.
    q.s. Konservierungsmittel
    C 1,0 Bisabolol
    1,0 Tocopheryl Acetate
    D 5,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    5,0 Witch Hazel Extract
  • Herstellung: Die Komponenten der Phasen A und B getrennt voneinander auf ca. 80°C erwqärmen. Phase B in Phase A unter Homogenisieren einrühren. Unter Rühren abkühlen auf ca. 40°C, die Phasen C und D hinzugeben und kurz nachhomogenisieren. Unter Rühren auf Raumtemperatur abkühlen. Beispiel 22: Verwendung der KBD in einer W/O Emulsion mit Bisabolol
    WS 1 %:
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 6,0 PEG-7 Hydrogenated Castor Oil
    8,0 Cetearyl Ethylhexanoate
    5,0 Isopropyl Myristate
    15,0 Mineral Oil
    0,3 Magnesium Stearate
    0,3 Aluminum Stearate
    2,0 PEG-45/Dodecyl Glycol Copolymer
    B 5,0 Glycerin
    0,7 Magnesium Sulfate
    55,6 Aqua dem.
    C 1,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    0,5 Tocopheryl Acetate
    0,6 Bisabolol
    WS 5%:
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 6,0 PEG-7 Hydrogenated Castor Oil
    8,0 Cetearyl Ethylhexanoate
    5,0 Isopropyl Myristate
    15,0 Mineral Oil
    0,3 Magnesium Stearate
    0,3 Aluminum Stearate
    2,0 PEG-45/Dodecyl Glycol Copolymer
    B 5,0 Glycerin
    0,7 Magnesium Sulfate
    51,6 Aqua dem.
    C 5,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    0,5 Tocopheryl Acetate
  • Herstellung: Die Phasen A und B getrennt voneinander auf ca. 85°C erwärmen. Phase B in Phase A einrühren und homogenisieren. Unter Rühren auf ca. 40°C abkühlen, Phase C hinzugeben und nochmals kurz homogenisieren. Unter Rühren auf Raumtemperatur abkühlen.
  • Zusammenstellung Rezepturen für Patent Keratin-Bindedomäne – Haircare Beispiel 23: Schaumconditioner mit Festiger
    WS 1 %
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 10,0 PVP/VA Copolymer
    0,2 Hydroxyethyl Cetyldimonium Phosphate
    0,2 Ceteareth-25
    0,5 Dimethicone Copolyol
    q.s. Parfümöl
    10,0 Alcohol
    1,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    68,1 Aqua dem.
    10,0 Propane/Butane
    WS 5%
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 10,0 PVP/VA Copolymer
    0,2 Hydroxyethyl Cetyldimonium Phosphate
    0,2 Ceteareth-25
    0,5 Dimethicone Copolyol
    q.s. Parfümöl
    10,0 Alcohol
    5,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    64,1 Aqua dem.
    10,0 Propane/Butane
  • Herstellung: Die Komponenten der Phase A zusammenwiegen, rühren bis alles gelöst ist und abfüllen. Beispiel 24: Schaumconditioner
    WS 1%
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 1,0 Polyquaternium-4
    0,5 Hydroxyethyl Cetyldimonium Phosphate
    1,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    q.s. Parfümöl
    q.s. Konservierungsmittel
    91,5 Aqua dem.
    6,0 Propane/Butane
    WS 5%
  • % Inhaltsstoff (INCI)
    A 1,0 Polyquaternium-4
    0,5 Hydroxyethyl Cetyldimonium Phosphate
    5,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    q.s. Parfümöl
    q.s. Konservierungsmittel
    87,5 Aqua dem.
    6,0 Propane/Butane
  • Herstellung: Die Komponenten der Phase A zusammenwiegen, rühren bis alles klar gelöst ist und abfüllen.
  • Beispiel 25: Schaumconditioner
    WS 1 %
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 1,0 Polyquaternium-11
    0,5 Hydroxyethyl Cetyldimonium Phosphate
    1,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    q.s. Parfümöl
    q.s. Konservierungsmittel
    91,5 Aqua dem.
    6,0 Propane/Butane
    WS 5%
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 1,0 Polyquaternium-11
    0,5 Hydroxyethyl Cetyldimonium Phosphate
    5,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    q.s. Parfümöl
    q.s. Konservierungsmittel
    87,5 Aqua dem.
    6,0 Propane/Butane
  • Herstellung: Die Komponenten der Phase A zusammenwiegen, rühren bis alles klar gelöst ist und abfüllen. Beispiel 26: Styling Schaum
    WS 1 %
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 0,5 Laureth-4
    q.s. Parfümöl
    B 77,3 Aqua dem.
    10,0 Polyquaternium-28
    1,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    0,5 Dimethicone Copolyol
    0,2 Ceteareth-25
    0,2 Panthenol
    0,1 PEG-25 PABA
    0,2 Hydroxyethylcellulose
    C 10,0 HFC 152 A
    WS 5%
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 0,5 Laureth-4
    q.s. Parfümöl
    B 73,3 Aqua dem.
    10,0 Polyquaternium-28
    5,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    0,5 Dimethicone Copolyol
    0,2 Ceteareth-25
    0,2 Panthenol
    0,1 PEG-25 PABA
    0,2 Hydroxyethylcellulose
    C 10,0 HFC 152 A
  • Herstellung: Die Komponenten der Phase A mischen. Die Komponenten der Phase B eine nach der anderen zugeben und lösen. Mit Phase C abfüllen. Beispiel 27: Styling Schaum
    WS 1 % % Inhaltsstoff (INCI)
    A 2,0 Cocotrimonium Methosulfate
    q.s. Parfümöl
    B 78,5 Aqua dem.
    6,7 Acrylates Copolymer
    0,6 AMP
    1,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    0,5 Dimethicone Copolyol
    0,2 Ceteareth-25
    0,2 Panthenol
    0,1 PEG-25 PABA
    0,2 Hydroxyethylcellulose
    C 10,0 HFC 152 A
    WS 5%
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 2,0 Cocotrimonium Methosulfate
    q.s. Parfümöl
    B 74,5 Aqua dem.
    6,7 Acrylates Copolymer
    0,6 AMP
    5,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    0,5 Dimethicone Copolyol
    0,2 Ceteareth-25
    0,2 Panthenol
    0,1 PEG-25 PABA
    0,2 Hydroxyethylcellulose
    C 10,0 HFC 152 A
  • Herstellung: Die Komponenten der Phase A mischen. Die Komponenten der Phase B eine nach der anderen zugeben und lösen. Mit Phase C abfüllen. Beispiel 28: Styling Schaum
    WS 1% % Inhaltsstoff (INCI)
    A 2,0 Cocotrimonium Methosulfate
    q.s. Parfümöl
    B 7,70 Polyquaternium-44
    1,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    q.s. Konservierungsmittel
    79,3 Aqua dem.
    C 10,0 Propane/Butane
    WS 5%
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 2,0 Cocotrimonium Methosulfate
    q.s. Parfümöl
    B 7,70 Polyquaternium-44
    5,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    q.s. Konservierungsmittel
    75,3 Aqua dem.
    C 10,0 Propane/Butane
  • Herstellung: Die Komponenten der Phase A mischen. Die Komponenten der Phase B klar lösen, dann Phase B in Phase A einrühren. Den pH-Wert auf 6-7 einstellen, mit Phase C abfüllen. Beispiel 29: Styling Schaum
    WS 1 %
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 2,00 Cocotrimonium Methosulfate
    q.s. Parfümöl
    B 72,32 Aqua dem.
    2,00 VP/Acrylates/Lauryl Methacrylate Copolymer
    0,53 AMP
    1,00 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    0,20 Ceteareth-25
    0,50 Panthenol
    0,05 Benzophenone-4
    0,20 Amodimethicone, Cetrimonium Chloride, Trideceth-12
    15,00 Alcohol
    C 0,20 Hydroxyethylcellulose
    D 6,00 Propane/Butane
    WS 5%
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 2,00 Cocotrimonium Methosulfate
    q.s. Parfümöl
    B 68,32 Aqua dem.
    2,00 VP/Acrylates/Lauryl Methacrylate Copolymer
    0,53 AMP
    5,00 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    0,20 Ceteareth-25
    0,50 Panthenol
    0,05 Benzophenone-4
    0,20 Amodimethicone, Cetrimonium Chloride, Trideceth-12
    15,00 Alcohol
    C 0,20 Hydroxyethylcellulose
    D 6,00 Propane/Butane
  • Herstellung: Die Komponenten der Phase A mischen. Die Komponenten der Phase B eine nach der anderen zugeben und lösen. Phase C in der Mischung aus A und B lösen, dann den pH-Wert auf 6-7 einstellen. Mit Phase D abfüllen Beispiel 30: Styling Schaum
    WS 1%
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 2,00 Cetrimonium Chloride
    q.s. Parfümöl
    B 67,85 Aqua dem.
    7,00 Polyquaternium-46
    1,00 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    0,20 Ceteareth-25
    0,50 Panthenol
    0,05 Benzophenone-4
    0,20 Amodimethicone, Cetrimonium Chloride, Trideceth-12
    15,00 Alcohol
    C 0,20 Hydroxyethylcellulose
    D 6,00 Propane/Butane
    WS 5%
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 2,00 Cetrimonium Chloride
    q.s. Parfümöl
    B 63,85 Aqua dem.
    7,00 Polyquaternium-46
    5,00 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    0,20 Ceteareth-25
    0,50 Panthenol
    0,05 Benzophenone-4
    0,20 Amodimethicone, Cetrimonium Chloride, Trideceth-12
    15,00 Alcohol
    C 0,20 Hydroxyethylcellulose
    D 6,00 Propane/Butane
  • Herstellung: Die Komponenten der Phase A mischen. Die Komponenten der Phase B eine nach der anderen zugeben und lösen. Phase C in der Mischung aus A und B lösen, dann den pH-Wert auf 6-7 einstellen. Mit Phase D abfüllen. Beispiel 31: Styling Schaum
    WS 1 %
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A q.s. PEG-40 Hydrogenated Castor Oil
    q.s. Parfümöl
    85,5 Aqua dem.
    B 7,0 Sodium Polystyrene Sulfonate
    1,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    0,5 Cetrimonium Bromide
    q.s. Konservierungsmittel
    C 6,0 Propane/Butane
    Styling Schaum
    WS 5%
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A q.s. PEG-40 Hydrogenated Castor Oil
    q.s. Parfümöl
    81,5 Aqua dem.
    B 7,0 Sodium Polystyrene Sulfonate
    5,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    0,5 Cetrimonium Bromide
    q.s. Konservierungsmittel
    C 6,0 Propane/Butane
  • Herstellung: Phase A solubilisieren. Phase B in Phase A einwiegen und klar lösen. Den pH-Wert auf 6-7 einstellen, mit Phase C abfüllen. Beispiel 32: Styling Schaum
    WS 1 %
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A q.s. PEG-40 Hydrogenated Castor Oil
    q.s. Parfümöl
    92,0 Aqua dem.
    B 0,5 Polyquaternium-10
    1,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    0,5 Cetrimonium Bromide
    q.s. Konservierungsmittel
    C 6,0 Propane/Butane
    WS 5%
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A q.s. PEG-40 Hydrogenated Castor Oil
    q.s. Parfümöl
    88,0 Aqua dem.
    B 0,5 Polyquaternium-10
    5,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    0,5 Cetrimonium Bromide
    q.s. Konservierungsmittel
    C 6,0 Propane/Butane
  • Herstellung: Phase A solubilisieren. Phase B in Phase A einwiegen und klar lösen. Den pH-Wert auf 6-7 einstellen, mit Phase C abfüllen. Beispiel 32: Styling Schaum
    WS 1%
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A q.s. PEG-40 Hydrogenated Castor Oil
    q.s. Parfümöl
    82,5 Aqua dem.
    B 10,0 Polyquaternium-16
    1,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    0,5 Hydroxyethyl Cetyldimonium Phosphate
    q.s. Konservierungsmittel
    C 6,0 Propane/Butane
    WS 5%
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A q.s. PEG-40 Hydrogenated Castor Oil
    q.s. Parfümöl
    78,5 Aqua dem.
    B 10,0 Polyquaternium-16
    5,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    0,5 Hydroxyethyl Cetyldimonium Phosphate
    q.s. Konservierungsmittel
    C 6,0 Propane/Butane
  • Herstellung: Phase A solubilisieren. Phase B in Phase A einwiegen und klar lösen. Den pH-Wert auf 6-7 einstellen, mit Phase C abfüllen. Beispiel 33: Styling Schaum
    WS 1 %
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 2,0 Cocotrimonium Methosulfate
    q.s. Parfümöl
    B 84,0 Aqua dem.
    2,0 Chitosan
    1,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    0,5 Dimethicone Copolyol
    0,2 Ceteareth-25
    0,2 Panthenol
    0,1 PEG-25 PABA
    C 10,0 HFC 152 A
    WS 5% Inhaltsstoff (INCI)
    A 2,0 Cocotrimonium Methosulfate
    q.s. Parfümöl
    B 80,0 Aqua dem.
  • 2,0 Chitosan
    5,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    0,5 Dimethicone Copolyol
    0,2 Ceteareth-25
    0,2 Panthenol
    0,1 PEG-25 PABA
    C 10,0 HFC 152 A
  • Herstellung: Die Komponenten der Phase A mischen. Die Komponenten der Phase B eine nach der anderen zugeben und lösen. Mit Phase C abfüllen. Beispiel 34: Pflegeshampoo
    WS 1%
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 30,0 Sodium Laureth Sulfate
    6,0 Sodium Cocoamphoacetate
    6,0 Cocamidopropyl Betaine
    3,0 Sodium Laureth Sulfate, Glycol Distearate, Cocamide MEA, Laureth-10
    1,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    7,7 Polyquaternium-44
    2,0 Amodimethicone
    q.s. Parfümöl
    q.s. Konservierungsmittel
    1,0 Sodium Chloride
    43,3 Aqua dem.
    B q.s. Citric Acid
    WS 5%
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 30,0 Sodium Laureth Sulfate
    6,0 Sodium Cocoamphoacetate
    6,0 Cocamidopropyl Betaine
    3,0 Sodium Laureth Sulfate, Glycol Distearate, Cocamide MEA, Laureth-10
    5,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    7,7 Polyquaternium-44
    2,0 Amodimethicone
    q.s. Parfümöl
  • q.s. Konservierungsmittel
    1,0 Sodium Chloride
    39,3 Aqua dem.
    B q.s. Citric Acid
  • Herstellung: Die Komponenten der Phase A mischen und lösen. Den pH-Wert mit Citronensäure auf 6-7 einstellen. Beispiel 35: Duschgel
    WS 1%
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 40,0 Sodium Laureth Sulfate
    5,0 Decyl Glucoside
    5,0 Cocamidopropyl Betaine
    1,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    1,0 Panthenol
    q.s. Parfümöl
    q.s. Konservierungsmittel
    2,0 Sodium Chloride
    46,0 Aqua dem.
    B q.s. Citric Acid
    WS 5%
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 40,0 Sodium Laureth Sulfate
    5,0 Decyl Glucoside
    5,0 Cocamidopropyl Betaine
    5,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    1,0 Panthenol
    q.s. Parfümöl
    q.s. Konservierungsmittel
    2,0 Sodium Chloride
    42,0 Aqua dem.
    B q.s. Citric Acid
  • Herstellung: Die Komponenten der Phase A mischen und lösen. Den pH-Wert mit Citronensäure auf 6-7 einstellen. Beispiel 36: Shampoo
    WS 1%
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 40,0 Sodium Laureth Sulfate
    5,0 Sodium C12-15 Pareth-15 Sulfonate
    5,0 Decyl Glucoside
    q.s. Parfümöl
    0,1 Phytantriol
    44,6 Aqua dem.
    1,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    0,3 Polyquaternium-10
    1,0 Panthenol
    q.s. Konservierungsmittel
    1,0 Laureth-3
    2,0 Sodium Chloride
    WS 5%
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 40,0 Sodium Laureth Sulfate
    5,0 Sodium C12-15 Pareth-15 Sulfonate
    5,0 Decyl Glucoside
    q.s. Parfümöl
    0,1 Phytantriol
    40,6 Aqua dem.
    5,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    0,3 Polyquaternium-10
    1,0 Panthenol
    q.s. Konservierungsmittel
    1,0 Laureth-3
    2,0 Sodium Chloride
  • Herstellung: Die Komponenten der Phase A mischen und lösen. Den pH-Wert mit Citronensäure auf 6-7 einstellen. Beispiel 37: Shampoo
    WS 1%
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 15,00 Cocamidopropyl Betaine
    10,00 Disodium Cocoamphodiacetate
    5,00 Polysorbate 20
    5,00 Decyl Glucoside
    q.s. Parfümöl
    q.s. Konservierungsmittel
    1,00 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    0,15 Guar Hydroxypropyltrimonium Chloride
    2,00 Laureth-3
    58,00 Aqua dem.
    q.s. Citric Acid
    B 3,00 PEG-150 Distearate
    WS 5%
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 15,00 Cocamidopropyl Betaine
    10,00 Disodium Cocoamphodiacetate
    5,00 Polysorbate 20
    5,00 Decyl Glucoside
    q.s. Parfümöl
    q.s. Konservierungsmittel
    5,00 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    0,15 Guar Hydroxypropyltrimonium Chloride
    2,00 Laureth-3
    54,00 Aqua dem.
    q.s. Citric Acid
    B 3,00 PEG-150 Distearate
  • Herstellung: Die Komponenten der Phase A einwiegen und lösen. Den pH-Wert auf 6-7 einstellen. Phase B zugeben und auf ca. 50°C erwärmen. Unter Rühren auf Raumtemperatur abkühlen. Beispiel 38: Feuchtigkeitsspendende Körperpflegecreme
    WS 1%
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 2,0 Ceteareth-25
    2,0 Ceteareth-6, Stearyl Alcohol
    3,0 Cetearyl Ethylhexanoate
    1,0 Dimethicone
    4,0 Cetearyl Alcohol
    3,0 Glyceryl Stearate SE
    5,0 Mineral Oil
    4,0 Simmondsia Chinensis (Jojoba) Seed Oil
    3,0 Mineral Oil, Lanolin Alcohol
    B 5,0 Propylene Glycol
    1,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    1,0 Panthenol
    0,5 Magnesium Aluminum Silicate
    q.s Konservierungsmittel
    65,5 Aqua dem.
    C q.s. Parfümöl
    D q.s. Citric Acid
    WS 5%
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 2,0 Ceteareth-25
    2,0 Ceteareth-6, Stearyl Alcohol
    3,0 Cetearyl Ethylhexanoate
    1,0 Dimethicone
    4,0 Cetearyl Alcohol
    3,0 Glyceryl Stearate SE
    5,0 Mineral Oil
    4,0 Simmondsia Chinensis (Jojoba) Seed Oil
    3,0 Mineral Oil, Lanolin Alcohol
    B 5,0 Propylene Glycol
    5,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    1,0 Panthenol
    0,5 Magnesium Aluminum Silicate
    q.s Konservierungsmittel
    61,5 Aqua dem.
    C q.s. Parfümöl
    D q.s. Citric Acid
  • Herstellung: Die Phasen A und B getrennt auf ca. 80°C erwärmen. Phase B kurz vorhomogenisieren, dann Phase B in Phase A einrühren und erneut homogenisieren. Abkühlen auf ca. 40°C, Phase C zugeben und nochmals gut homogenisieren. Den pH-Wert mit Citronensäure auf 6-7 einstellen. Beispiel 39: Feuchtigkeitsspendende Körperpflegecreme
    WS 1%
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 6,0 PEG-7 Hydrogenated Castor Oil
    10,0 Cetearyl Ethylhexanoate
    5,0 Isopropyl Myristate
    7,0 Mineral Oil
    0,5 Shea Butter (Butyrospermum Parkii)
    0,5 Aluminum Stearate
    0,5 Magnesium Stearate
    0,2 Bisabolol
    0,7 Quaternium-18-Hectorite
    B 5,0 Dipropylene Glycol
    0,7 Magnesium Sulfate
    q.s. Konservierungsmittel
    62,9 Aqua dem.
    C q.s. Parfümöl
    1,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    WS 5%
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 6,0 PEG-7 Hydrogenated Castor Oil
    10,0 Cetearyl Ethylhexanoate
    5,0 Isopropyl Myristate
    7,0 Mineral Oil
    0,5 Shea Butter (Butyrospermum Parkii)
    0,5 Aluminum Stearate
    0,5 Magnesium Stearate
    0,2 Bisabolol
    0,7 Quaternium-18-Hectorite
    B 5,0 Dipropylene Glycol
    0,7 Magnesium Sulfate
    q.s. Konservierungsmittel
    58,9 Aqua dem.
    C q.s. Parfümöl
    5,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
  • Herstellung: Die Phasen A und B getrennt auf ca. 80°C erwärmen. Phase B in Phase A einrühren und homogenisieren. Unter Rühren auf ca. 40°C abkühlen, Phase C zugeben und nochmals homogenisieren. Unter Rühren auf Raumtemperatur abkühlen lassen. Beispiel 40: Flüssiges Make-up – Typ O/W
    WS 1%
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 2,0 Ceteareth-6, Stearyl Alcohol
    2,0 Ceteareth-25
    6,0 Glyceryl Stearate
    1,0 Cetyl Alcohol
    8,0 Mineral Oil
    7,0 Cetearyl Ethylhexanoate
    0,2 Dimethicone
    B 3,0 Propylene Glycol
    1,0 Panthenol
    q.s. Konservierungsmittel
    61,9 Aqua dem.
    C 0,1 Bisabolol
    1,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    q.s. Parfümöl
    D 5,7 C. I. 77 891, Titanium Dioxide
    1,1 Iron Oxides
    WS 5%
    % Inhaltsstoff (INCI)
    A 2,0 Ceteareth-6, Stearyl Alcohol
    2,0 Ceteareth-25
    6,0 Glyceryl Stearate
    1,0 Cetyl Alcohol
    8,0 Mineral Oil
    7,0 Cetearyl Ethylhexanoate
    0,2 Dimethicone
    B 3,0 Propylene Glycol
    1,0 Panthenol
    q.s. Konservierungsmittel
    57,9 Aqua dem.
    C 0,1 Bisabolol
    5,0 wässrige Lösung mit ca. 5% Keratin-Bindedomäne-Wirkstoff
    q.s. Parfümöl
    D 5,7 C. I. 77 891, Titanium Dioxide
    1,1 Iron Oxides
  • Herstellung: Die Phasen A und B getrennt auf ca. 80°C erwärmen. Phase B in Phase A einrühren und homogenisieren. Unter Rühren auf ca. 40°C abkühlen, Phasen C und D zugeben und nochmals gründlich homogenisieren. Unter Rühren auf Raumtemperatur abkühlen lassen.
  • Es folgt ein Sequenzprotokoll nach WIPO St. 25. Dieses kann von der amtlichen Veröffentlichungsplattform des DPMA heruntergeladen werden.

Claims (9)

  1. Kosmetische Zusammensetzung zur Behandlung von keratinhaltigen Materialien, enthaltend mindestens eine Keratin-bindende Polypeptidsequenz (i) in einem kosmetisch verträglichen Medium.
  2. Kosmetische Zusammensetzung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Polypeptidsequenz (i) eine Bindungsaffinität zu menschlichem Haar- oder Hautkeratin besitzt.
  3. Kosmetische Zusammensetzung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Polypeptidsequenz (i) mindestens eine der folgenden Polypeptidsequenzen umfasst, (a) die Polypeptidsequenz SEQ ID NO:1 Position 2193 bis 2481 (b) die Polypeptidsequenz SEQ ID NO:1 Position 2606 bis 2871 (c) eine Polypeptidsequenz, die gegenüber (a) in bis zu 60 % der Aminosäuren verändert ist, (d) eine Polypeptidsequenz, die gegenüber (b) in bis zu 50 % der Aminosäuren verändert ist, mit der Maßgabe, dass die Keratin-Bindung der Polypeptidsequenz (c) oder (d) mindestens 10 % des Wertes beträgt, den die Polypeptidsequenz (a) oder (b) aufweist, gemessen in dem Test gemäß Beispiel 9 oder 10.
  4. Kosmetische Zusammensetzung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass sie die Polypeptidsequenz (i) in einer Menge von 0,01 bis 30 Gew.-% enthält.
  5. Kosmetische Zusammensetzung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass sie neben der Polypeptidsequenz (i) mindestens einen kosmetischen Wirkstoff enthält.
  6. Kosmetische Zusammensetzung gemäß Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass der kosmetische Wirkstoff ausgewählt wird aus der Gruppe der natürlichen oder synthetischen Polymere, Pigmente, Feuchthaltemittel, Öle, Wachse, Enzyme, Mineralien, Vitamine, Sonnenschutzmittel, Farbstoffe, Duftstoffe, Antioxidantien und Konservierungsmittel.
  7. Verwendung von kosmetischen Zusammensetzungen gemäß einem der Ansprüche 1-5 zur Verbesserung der Kämmbarkeit von Haaren.
  8. Verwendung von kosmetischen Zusammensetzungen gemäß einem der Ansprüche 1-5 zur Verbesserung der Festigung von Haaren.
  9. Pharmazeutische Zusammensetzung zur Behandlung von keratinhaltigen Materialien, enthaltend mindestens eine Keratin-bindende Polypeptidsequenz (i) in einem pharmazeutisch verträglichen Medium.
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