[go: up one dir, main page]

WO2025153054A1 - Camptothecin analogues, conjugates and methods of use - Google Patents

Camptothecin analogues, conjugates and methods of use

Info

Publication number
WO2025153054A1
WO2025153054A1 PCT/CN2025/072977 CN2025072977W WO2025153054A1 WO 2025153054 A1 WO2025153054 A1 WO 2025153054A1 CN 2025072977 W CN2025072977 W CN 2025072977W WO 2025153054 A1 WO2025153054 A1 WO 2025153054A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
alkyl
alkylene
nhc
halogen
compound
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
PCT/CN2025/072977
Other languages
French (fr)
Inventor
Mu Lin
Wei Zhang
Meihong ZHANG
Jun Wu
Qi Sun
Bowen Zhang
Xiaoxiao Wang
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nona Biosciences Suzhou Co Ltd
Original Assignee
Nona Biosciences Suzhou Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nona Biosciences Suzhou Co Ltd filed Critical Nona Biosciences Suzhou Co Ltd
Publication of WO2025153054A1 publication Critical patent/WO2025153054A1/en
Pending legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68037—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a camptothecin [CPT] or derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment

Definitions

  • Camptothecin is a natural product that inhibits topoisomerase I and has broad spectrum anti-tumor activity. Camptothecin, however, is poorly soluble making it unsuitable for clinical development. As such, considerable effort has been directed towards identifying analogues or derivatives of camptothecin with properties more suitable for therapeutic use.
  • Two derivatives, irinotecan and topotecan, have been approved for treatment of cancer.
  • Irinotecan is a prodrug, which is converted in vivo into SN-38, a more potent analogue.
  • a third derivative, belotecan has been approved in Korea.
  • camptothecin analogues and derivatives as well as ADCs comprising them have been described. See, for example, International (PCT) Publication Nos. WO 2019/195665; WO 2019/236954 and WO 2020/219287.
  • a compound of formula (II) or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof: wherein, R 4 and R 5 is independently selected from H, halogen, OH, NH 2 , N (C 1-6 alkyl) 2 , NH-C 1-6 alkyl, C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 alkoxyl and C 1-6 haloalkoxyl; or, preferably, R 4 , R 5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C 3-10 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclyl, C 6-10 aryl or 5-12 membered heteroaryl, wherein, the C 3-10 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclyl, C 6-10 aryl and 5-12 membered heteroaryl are optionally
  • the present disclosure provides the compound described herein, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, or the composition described herein, for use in treating and/or preventing a disease.
  • the method further comprises administering to the subject a second therapeutic agent, preferably wherein the second therapeutic agent is selected from an antibody, a chemotherapeutic agent and a small molecule drug.
  • the disease is selected from a cancer, an infectious disease, an inflammatory disease, an autoimmune disease and an immunodeficiency disease.
  • C 1-6 alkyl refers to a radical of a straight or branched, saturated hydrocarbon group having 1 to 6 carbon atoms. In some embodiments, C 1-4 alkyl is preferred. Examples of C 1-6 alkyl include methyl (C 1 ) , ethyl (C 2 ) , n-propyl (C 3 ) , iso-propyl (C 3 ) , n-butyl (C 4 ) , tert-butyl (C 4 ) , sec-butyl (C 4 ) , iso-butyl (C 4 ) , n-pentyl (C 5 ) , 3-pentyl (C 5 ) , pentyl (C 5 ) , neopentyl (C 5 ) , 3-methyl-2-butyl (C 5 ) , tert-pentyl (C 5 ) and n-hexyl (C 6 ) .
  • C 1-6 alkyl also includes heteroalkyl, wherein one or more (e.g., 1, 2, 3 or 4) carbon atoms are subsituted with heteroatoms (e.g., oxygen, sulfur, nitrogen, boron, silicon, phosphorus) .
  • Alkyl groups can be optionally substituted with one or more substituents, for example, with 1 to 5 substituents, 1 to 3 substituents or 1 substituent.
  • alkyl examples include Me (-CH 3 ) , Et (-CH 2 CH 3 ) , iPr (-CH (CH 3 ) 2 ) , nPr (-CH 2 CH 2 CH 3 ) , n-Bu (-CH 2 CH 2 CH 2 CH 3 ) or i-Bu (-CH 2 CH (CH 3 ) 2 ) .
  • C 2-6 alkenyl refers to a radical of a straight or branched hydrocarbon group having 2 to 6 carbon atoms and at least one carbon-carbon double bond. In some embodiments, C 2-4 alkenyl is preferred. Examples of C 2-6 alkenyl include vinyl (C 2 ) , 1-propenyl (C 3 ) , 2-propenyl (C 3 ) , 1-butenyl (C 4 ) , 2-butenyl (C 4 ) , butadienyl (C 4 ) , pentenyl (C 5 ) , pentadienyl (C 5 ) , hexenyl (C 6 ) , etc.
  • C 2-6 alkenyl also includes heteroalkenyl, wherein one or more (e.g., 1, 2, 3 or 4) carbon atoms are replaced by heteroatoms (e.g., oxygen, sulfur, nitrogen, boron, silicon, phosphorus) .
  • the alkenyl groups can be optionally substituted with one or more substituents, for example, with 1 to 5 substituents, 1 to 3 substituents or 1 substituent.
  • C 2-6 alkynyl refers to a radical of a straight or branched hydrocarbon group having 2 to 6 carbon atoms, at least one carbon-carbon triple bond, and optionally one or more carbon-carbon double bonds. In some embodiments, C 2-4 alkynyl is preferred. Examples of C 2-6 alkynyl include, but are not limited to, ethynyl (C 2 ) , 1-propynyl (C 3 ) , 2-propynyl (C 3 ) , 1-butynyl (C 4 ) , 2-butynyl (C 4 ) , pentynyl (C 5 ) , hexynyl (C 6 ) , etc.
  • C 0-6 alkylene refers to a bond or a divalent group formed by removing another hydrogen of the C 1-6 alkyl, and can be a substituted or unsubstituted alkylene. In some embodiments, C 1-4 alkylene is preferred.
  • the unsubstituted alkylene groups include, but are not limited to, methylene (-CH 2 -) , ethylene (-CH 2 CH 2 -) , propylene (-CH 2 CH 2 CH 2 -) , butylene (-CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 -) , pentylene (-CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 -) , hexylene (-CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 -) , etc.
  • substituted alkylene groups such as those substituted with one or more alkyl (methyl) groups, include, but are not limited to, substituted methylene (-CH (CH 3 ) -, -C (CH 3 ) 2 -) , substituted ethylene (-CH (CH 3 ) CH 2 -, -CH 2 CH (CH 3 ) -, -C (CH 3 ) 2 CH 2 -, -CH 2 C (CH 3 ) 2 -) , substituted propylene (-CH (CH 3 ) CH 2 CH 2 -, -CH 2 CH (CH 3 ) CH 2 -, -CH 2 CH 2 CH (CH 3 ) -, -C (CH 3 ) 2 CH 2 CH 2 -, -CH 2 C (CH 3 ) 2 CH 2 -, -CH 2 CH 2 C (CH 3 ) 2 -) , etc.
  • C 2-6 alkynylene refers to a divalent group formed by removing another hydrogen of the C 2-6 alkynyl and can be substituted or unsubstituted alkynylene. In some embodiments, C 2-4 alkynylene is preferred. Exemplary alkynylene groups include, but are not limited to, ethynylene (-C ⁇ C-) , substituted or unsubstituted propynylene (-C ⁇ CCH 2 -) , and the like.
  • haloalkyl groups include monofluoromethyl, difluoromethyl, trifluoromethyl, chloromethyl, dichloromethyl, trichloromethyl, pentafluoroethyl, heptafluoropropyl, difluorochloromethyl, dichlorofluoromethyl, difluoroethyl, difluoropropyl, dichloroethyl and dichloropropyl.
  • the haloalkyl group can be substituted at any available point of attachment, for example, with 1 to 5 substituents, 1 to 3 substituents or 1 substituent.
  • C 3-10 cycloalkyl refers to a radical of a non-aromatic cyclic hydrocarbon group having from 3 to 10 ring carbon atoms and zero heteroatom. In some embodiments, C 3-7 cycloalkyl is especially preferred, C 4-6 cycloalkyl is more preferred, and C 3-5 cycloalkyl is even more preferred. Cycloalkyl also includes ring systems wherein the cycloalkyl ring, as defined above, is fused with one or more aryl or heteroaryl groups wherein the point of attachment is on the cycloalkyl ring, and in such instances, the number of carbons continues to designate the number of carbons in the cycloalkyl ring system.
  • the 3-to 12-membered heterocyclyl also includes a spiroheterocyclic group, that is, a group in which two rings (e.g., a heterocyclyl and a carbocyclyl) share one carbon atom, wherein at least one ring is a heterocyclyl as defined above.
  • a spiroheterocyclic group that is, a group in which two rings (e.g., a heterocyclyl and a carbocyclyl) share one carbon atom, wherein at least one ring is a heterocyclyl as defined above.
  • C 6-10 aryl refers to a radical of a monocyclic or polycyclic (e.g., bicyclic) 4n+2 aromatic ring system (e.g., having 6 or 10 ⁇ electrons shared in a cyclic array) having 6-10 ring carbon atoms and zero heteroatom.
  • an aryl group has six ring carbon atoms ( “C 6 aryl” ; e.g., phenyl) .
  • an aryl group has ten ring carbon atoms ( “C 10 aryl” ; e.g., naphthyl such as 1-naphthyl and 2-naphthyl) .
  • “5-to 12-membered heteroaryl” refers to a radical of a 5-12 membered monocyclic or bicyclic 4n+2 aromatic ring system (e.g., having 6 or 10 ⁇ electrons shared in a cyclic array) having ring carbon atoms and 1-6 ring heteroatoms, wherein each heteroatom is independently selected from nitrogen, oxygen and sulfur.
  • the point of attachment can be a carbon or nitrogen atom, as long as valency permits.
  • Heteroaryl bicyclic ring systems can include one or more heteroatoms in one or both rings.
  • Heteroaryl further includes ring systems wherein the heteroaryl ring, as defined above, is fused with one or more cycloalkyl, or heterocyclyl groups and the point of attachment is on the heteroaryl ring, and in such instances, the number of ring members continues to designate the number of ring members in the heteroaryl ring system.
  • 5-to 10-membered heteroaryl is especially preferred, which is a radical of a 5-10 membered monocyclic or bicyclic 4n+2 aromatic ring system having ring carbon atoms and 1-6 ring heteroatoms.
  • 5-to 6-membered heteroaryl is especially preferred, which is a radical of a 5-6 membered monocyclic or bicyclic 4n+2 aromatic ring system having ring carbon atoms and 1-4 ring heteroatoms.
  • Exemplary 5-membered heteroaryl groups containing one heteroatom include, but are not limited to, pyrrolyl, furanyl and thiophenyl.
  • Exemplary 5-membered heteroaryl groups containing two heteroatoms include, but are not limited to, imidazolyl, pyrazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, thiazolyl, and isothiazolyl.
  • Exemplary 5-membered heteroaryl groups containing three heteroatoms include, but are not limited to, triazolyl, oxadiazolyl (e.g., 1, 2, 4-oxadiazolyl) , and thiadiazolyl.
  • Exemplary 5-membered heteroaryl groups containing four heteroatoms include, but are not limited to, tetrazolyl.
  • Exemplary 6-membered heteroaryl groups containing one heteroatom include, but are not limited to, pyridinyl.
  • Exemplary 6-membered heteroaryl groups containing two heteroatoms include, but are not limited to, pyridazinyl, pyrimidinyl, and pyrazinyl.
  • Exemplary 6, 6-bicyclic heteroaryl groups include, but are not limited to, naphthyridinyl, pteridinyl, quinolinyl, isoquinolinyl, cinnolinyl, quinoxalinyl, phthalazinyl, and quinazolinyl.
  • any alkyl, alkoxyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, aryl, heteroaryl, heterocyclyl, or the like, described herein can also be a divalent or multivalent group when used as a linkage to connect two or more groups or substituents, which can be at the same or different atom (s) .
  • One of skill in the art can readily determine the valence of any such group from the context in which it occurs.
  • the term “optionally substituted” means that the referenced group may be substituted or unsubstituted. In one embodiment, the referenced group is optionally substituted with zero substituents, i.e., the referenced group is unsubstituted. In another embodiment, the referenced group is optionally substituted with one or more additional group (s) individually and independently selected from groups described herein.
  • hydrox includes hydrogen and deuterium.
  • recitation of an atom includes other isotopes of that atom so long as the resulting compound is pharmaceutically acceptable.
  • Alkyl, alkoxy, alkenyl, alkynyl, alkylene, alkenylene, alkynylene, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, and heteroaryl groups, as defined herein, are optionally substituted groups.
  • substituted whether preceded by the term “optionally” or not, means that at least one hydrogen present on a group (e.g., a carbon or nitrogen atom) is replaced with a permissible substituent, e.g., a substituent which upon substitution results in a stable compound, e.g., a compound which does not spontaneously undergo transformation such as by rearrangement, cyclization, elimination, or other reaction.
  • a “substituted” group has a substituent at one or more substitutable positions of the group, and when more than one position in any given structure is substituted, the substituent is either the same or different at each position.
  • substituted is contemplated to include substitution with all permissible substituents of organic compounds, any of the substituents described herein that results in the formation of a stable compound.
  • heteroatoms such as nitrogen may have hydrogen substituents and/or any suitable substituent as described herein which satisfy the valencies of the heteroatoms and results in the formation of a stable moiety.
  • the compounds of each formula herein are defined to include isotopically labelled compounds.
  • An “isotopically labelled compound” is a compound in which at least one atomic position is enriched in a specific isotope of the designated element to a level which is significantly greater than the natural abundance of that isotope.
  • one or more hydrogen atom positions in a compound can be enriched with deuterium to a level which is significantly greater than the natural abundance of deuterium, for example, enrichment to a level of at least 1%, preferably at least 20%or at least 50%.
  • Such a deuterated compound may, for example, be metabolized more slowly than its non-deuterated analog, and therefore exhibit a longer half-life when administered to a subject.
  • Such compounds can synthesize using methods known in the art, for example by employing deuterated starting materials.
  • isotopically labelled compounds are pharmaceutically acceptable.
  • cancer refers to any disease that is caused by or results in inappropriately high levels of cell division, inappropriately low levels of apoptosis, or both.
  • examples of cancer include, but are not limited to, leukemias (e.g., acute leukemia, acute lymphocytic leukemia, acute myelocytic leukemia, acute myeloblasts leukemia, acute promyelocytic leukemia, acute myelomonocytic leukemia, acute monocytic leukemia, acute erythroleukemia, chronic leukemia, chronic myelocytic leukemia, chronic lymphocytic leukemia) , polycythemia vera, lymphoma (Hodgkin's disease, non-Hodgkin's disease) , Waldenstrom's macroglobulinemia, heavy chain disease, and solid tumors.
  • leukemias e.g., acute leukemia, acute lymphocytic leukemia, acute myelocytic leukemia, acute
  • treatment includes the effect on a subject who is suffering from a particular disease, disorder, or condition, which reduces the severity of the disease, disorder, or condition, or delays or slows the progression of the disease, disorder or condition ( “therapeutic treatment” ) .
  • therapeutic treatment includes the effect that occurs before the subject begins to suffer from a specific disease, disorder or condition.
  • prophylactic treatment includes the effect that occurs before the subject begins to suffer from a specific disease, disorder or condition.
  • treating/treatment relates to reversing, alleviating, inhibiting the progression or prophylaxis of a disorder or condition to which the term applies, or one or more symptoms of such disorder or condition.
  • the noun “treating/treatment” as used herein relates to the action of treat, which is a verb, and the latter is as just defined.
  • the “effective amount” of a compound refers to an amount sufficient to elicit a target biological response.
  • the effective amount of the compound of the disclosure can vary depending on the following factors, such as the desired biological endpoint, the pharmacokinetics of the compound, the diseases being treated, the mode of administration, and the age, health status and symptoms of the subjects.
  • the effective amount includes therapeutically effective amount and prophylactically effective amount.
  • the “therapeutically effective amount” of the compound as used herein is an amount sufficient to provide therapeutic benefits in the course of treating a disease, disorder or condition, or to delay or minimize one or more symptoms associated with the disease, disorder or condition.
  • the therapeutically effective amount of a compound refers to the amount of the therapeutic agent that, when used alone or in combination with other therapies, provides a therapeutic benefit in the treatment of a disease, disorder or condition.
  • the term “therapeutically effective amount” can include an amount that improves the overall treatment, reduces or avoids the symptoms or causes of the disease or condition, or enhances the therapeutic effect of other therapeutic agents.
  • “Combination” and related terms refer to the simultaneous or sequential administration of the compounds of the present disclosure and other therapeutic agents.
  • the compounds of the present disclosure can be administered simultaneously or sequentially in separate unit dosage with other therapeutic agents, or simultaneously in a single unit dosage with other therapeutic agents.
  • salt denotes relatively non-toxic, inorganic and organic acid addition salts of the compounds disclosed herein. These salts can be prepared in situ during the final isolation and purification of the compound, or by isolating salts produced by separately reacting the purified compound in the free base form with a suitable organic or inorganic acid.
  • the pharmaceutically acceptable base addition salts are formed with metals or amines, such as alkali metal and alkaline earth metal hydroxides or organic amines.
  • metals or amines such as alkali metal and alkaline earth metal hydroxides or organic amines.
  • metals used as cations include sodium, potassium, magnesium, calcium, etc.
  • suitable amines are N, N'-dibenzylethylenediamine, chloroprocaine, choline, diethanolamine, ethylenediamine, N-methylglucamine and procaine.
  • the salts can be prepared from the inorganic acids, which include sulfates, pyrosulfates, bisulfates, sulfites, bisulfites, nitrates, phosphates, monohydrogen phosphates, dihydrogen phosphates, metaphosphates, pyrophosphates, chlorides, bromides and iodides.
  • the acids include hydrochloric acid, nitric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, phosphoric acid, etc.
  • the representative salts include hydrobromide, hydrochloride, sulfate, bisulfate, nitrate, acetate, oxalate, valerate, oleate, palmitate, stearate, laurate, borate, benzoate, lactate, phosphate, tosylate, citrate, maleate, fumarate, succinate, tartrate, naphthalate, methanesulfonate, glucoheptanate, lactobionate, lauryl sulfonate, isethionate, etc.
  • the salts can also be prepared from the organic acids, which include aliphatic monocarboxylic and dicarboxylic acids, phenyl-substituted alkanoic acids, hydroxyalkanoic acids, alkanedioic acid, aromatic acids, aliphatic and aromatic sulfonic acids, etc.
  • the representative salts include acetate, propionate, octanoate, isobutyrate, oxalate, malonate, succinate, suberate, sebacate, fumarate, maleate, mandelate, benzoate, chlorobenzoate, methyl benzoate, dinitrobenzoate, naphthoate, besylate, tosylate, phenylacetate, citrate, lactate, maleate, tartrate, methanesulfonate, etc.
  • the pharmaceutically acceptable salts can include cations based on alkali metals and alkaline earth metals, such as sodium, lithium, potassium, calcium, magnesium, etc., as well as non-toxic ammonium, quaternary ammonium, and amine cations including, but not limited to, ammonium, tetramethylammonium, tetraethylammonium, methylamine, dimethylamine, trimethylamine, triethylamine, ethylamine, etc.
  • Salts of amino acids are also included, such as arginine salts, gluconates, galacturonates, etc. (for example, see Berge S.M. et al., “Pharmaceutical Salts, ” J. Pharm. Sci., 1977; 66: 1-19, which is incorporated herein byreference) .
  • the term “pharmaceutically acceptable salt” refers to those salts which are, within the scope of sound medical judgment, suitable for use in contact with the tissues of humans and lower animals without undue toxicity, irritation, allergic response and the like, and are commensurate with a reasonable benefit/risk ratio.
  • Pharmaceutically acceptable salts are well known in the art. For example, S.M. Berge, et al. describes pharmaceutically acceptable salts in detail in J. Pharmaceutical Sciences, 66: 1-19 (1977) .
  • the salts can be prepared in situ during the final isolation and purification of the compounds of the invention, or separately by reacting the free base function with a suitable organic acid.
  • nontoxic acid addition salts are salts of an amino group formed with inorganic acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, phosphoric acid, sulfuric acid and perchloric acid or with organic acids such as acetic acid, maleic acid, tartaric acid, citric acid, succinic acid or malonic acid or by using other methods used in the art such as ion exchange.
  • salts include, but are not limited to, adipate, alginate, ascorbate, aspartate, benzenesulfonate, benzoate, bisulfate, borate, butyrate, camphorate, camphorsulfonate, citrate, cyclopentane-propionate, digluconate, dodecylsulfate, ethanesulfonate, formate, fumarate, glucoheptonate, glycerophosphate, gluconate, hemisulfate, heptanoate, hexanoate, hydroiodide, 2-hydroxy-ethanesulfonate, lactobionate, lactate, laurate, lauryl sulfate, malate, maleate, malonate, methanesulfonate, 2-naphthalenesulfonate, nicotinate, nitrate, oleate, oxalate, palmitate, pam
  • alkali or alkaline earth metal salts include sodium, lithium, potassium, calcium, magnesium, and the like.
  • Further pharmaceutically acceptable salts include, when appropriate, nontoxic ammonium, quaternary ammonium, and amine cations formed using counterions such as halide, hydroxide, carboxylate, sulfate, phosphate, nitrate, alkyl having from 1 to 6 carbon atoms, sulfonate and aryl sulfonate.
  • the synthesized compounds can be separated from a reaction mixture and further purified by a method such as column chromatography, high pressure liquid chromatography, or recrystallization.
  • a method such as column chromatography, high pressure liquid chromatography, or recrystallization.
  • further methods of synthesizing the compounds of the Formula herein will be evident to those of ordinary skill in the art. Additionally, the various synthetic steps may be performed in an alternate sequence or order to give the desired compounds.
  • Synthetic chemistry transformations and protecting group methodologies (protection and deprotection) useful in synthesizing the compounds described herein are known in the art and include, for example, those such as described in R. Larock, Comprehensive Organic Transformations , 2 nd Ed. Wiley-VCH (1999) ; T.W. Greene and P.G.M.
  • subject refers to an animal.
  • the animal is a mammal. More preferably, the mammal is a human.
  • a subject also refers to, for example, dogs, cats, horses, cows, pigs, guinea pigs, fish, birds and the like.
  • the compounds of this invention may be modified by appending appropriate functionalities to enhance selective biological properties.
  • modifications are known in the art and may include those which increase biological penetration into a given biological system (e.g., blood, lymphatic system, central nervous system) , increase oral availability, increase solubility to allow administration by injection, alter metabolism and alter rate of excretion.
  • the compounds described herein contain one or more asymmetric centers and thus give rise to enantiomers, diastereomers, and other stereoisomeric forms that may be defined, in terms of absolute stereochemistry, as (R) -or (S) -, or as (D) -or (L) -.
  • the present invention is meant to include all such possible isomers, as well as their racemic and optically pure forms.
  • Optical isomers may be prepared from their respective optically active precursors by the procedures described above, or by resolving the racemic mixtures. The resolution can be carried out in the presence of a resolving agent, by chromatography or by repeated crystallization or by some combination of these techniques which are known to those skilled in the art.
  • an antibody refers to an immunoglobulin molecule which has the ability to specifically bind to an antigen.
  • An antibody often comprises a variable region and a constant region in each of a heavy chain and a light chain.
  • the variable regions of the heavy and light chains of antibodies contain a binding domain that interacts with an antigen.
  • the constant regions of antibodies may mediate the binding of the immunoglobulin to host tissues or factors, including various cells of the immune system (such as effector cells) and components of the complement system such as C1q, the first component in the classical pathway of complement activation.
  • Most antibodies have a heavy chain variable region (VH) and a light chain variable region (VL) that together form the portion of the antibody that binds to the antigen.
  • a “light chain variable region” (VL) or “heavy chain variable region” (VH) consists of four “framework” regions interrupted by three “complementarity determining regions” or “CDRs” .
  • the framework regions serve to align the CDRs for specific binding to an epitope of an antigen.
  • the CDRs include the amino acid residues of an antibody that are primarily responsible for antigen binding. From amino-terminus to carboxyl-terminus, both VL and VH domains comprise the following framework (FR) and CDR regions: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, and FR4.
  • CDRs 1, 2, and 3 of a VL domain are also referred to herein, respectively, as LCDR1, LCDR2, and LCDR3;
  • CDRs 1, 2, and 3 of a VH domain are also referred to herein, respectively, as HCDR1, HCDR2, and HCDR3.
  • antibody as used herein should be understood in its broadest meaning, and includes monoclonal antibodies (including full-length monoclonal antibodies) , polyclonal antibodies, antibody fragments, and multi-specific antibodies containing at least two different antigen binding regions (e.g., bispecific antibodies) .
  • the antibody may contain additional modifications, such as non-naturally occurring amino acids, mutations in Fc regions, and mutations in glycosylation sites.
  • Antibodies also include post-translation modified antibodies, fusion proteins containing the antigenic determinants of the antibody, and immunoglobulin molecules containing any other modifications to antigen recognition sites, as long as these antibodies exhibit desired biological activity.
  • antigen binding fragment of an antibody examples include (i) a Fab fragment, a monovalent fragment consisting of the VL, VH, CL and CH1 domains; (ii) a F (ab') 2 fragment, a bivalent fragment comprising two Fab fragments linked by a disulfide bridge at the hinge region; (iii) a Fab' fragment, which is essentially an Fab with part of the hinge region (see, FUNDAMENTALIMMUNOLOGY (Paul ed., 3. sup. rd ed.
  • the two domains of the Fv fragment, V Land VH are coded for by separate genes, they can be joined, using recombinant methods, by a synthetic linker that enables them to be made as a single protein chain in which the VL and VH regions pair to form monovalent molecules (known as single chain Fv (scFv) ; see e.g., Bird et al. (1988) Science 242: 423-426; and Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883) .
  • Such single chain antibodies are also intended to be encompassed within the term "antigen binding fragment" of an antibody.
  • the term also includes a "linear antibody” comprising a pair of tandem Fd segments (VH-CH1-VH-CH1) , which forms an antigen binding region together with a complementary light chain polypeptide, and a modified version of any of the foregoing fragments, which retains antigen binding activity.
  • the term “monoclonal antibody” refers to an antibody obtained from a substantially homogeneous antibody population. That is, each antibody constituting the population are the same, except for possible naturally occurring mutations in small amount. Monoclonal antibodies are highly specific and are directed against a single antigen.
  • the term “monoclonal antibody” herein is not limited to antibodies produced by hybridoma technology, and should not be interpreted as requiring production of antibodies by any specific method.
  • bispecific antibody is in the context of the present invention to be understood as an antibody having two different antigen-binding regions defined by different antibody sequences. This can be understood as different target binding but includes as well binding to different epitopes in one target.
  • Certain compounds of the present invention may also exist in different stable conformational forms which may be separable. Torsional asymmetry due to restricted rotation about an asymmetric single bond, for example because of steric hindrance or ring strain, may permit separation of different conformers.
  • the present invention includes each conformational isomer of these compounds and mixtures thereof. It will be yet appreciated that the compounds of the present invention may contain one or more asymmetric carbon atoms and may exist in racemic, diastereoisomeric, and optically active forms. It will still be appreciated that certain compounds of the present invention may exist in different tautomeric forms. All tautomers are contemplated to be within the scope of the present invention. ABBREVIATIONS
  • TBS for tert-butyl dimethylsilyl
  • TMS for trimethylsilyl
  • TMSCl trimethylsilyl chloride
  • Zn for zinc (powder)
  • ZnBr 2 for zinc bromide
  • Zn (CN) 2 for zinc cyanide
  • Xphos for 2-Dicyclohexylphosphino-2', 4', 6'-triisopropylbiphenyl.
  • Fig. 1 shows a) tumor volume change and b) body weight change of the A431 cells mouse tumor model after the administration of ADCs of RP007T2-LP2-1-c, RP007T2-LP2-1-d and RP007T2-MC-GGFG-DXd.
  • Fig. 2 shows the body weight change of the female and male BALB/c mice after the administration of ADC of RP007T2-LP2-1-c or RP007T2-LP2-1-d.
  • Fig. 3 shows the hematology test results of the female and male BALB/c mice after the administration of ADC of RP007T2-LP2-1-c or RP007T2-LP2-1-d.
  • the term “compound disclosed herein” refers to the following compounds of formulae (I) , (II) , (III) , or a pharmaceutically acceptable salt, prodrug, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof.
  • the present disclosure refers to camptothecin analogue compounds of formula (I) , (II) , (III) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof:
  • X is CR x , such as CH; in another specific embodiment, X is N.
  • R x is selected from H, halogen, C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 alkoxyl and C 1-6 haloalkoxyl.
  • R 1 is halogen, such as F; in another specific embodiment, R 1 is C 1-6 alkyl; in another specific embodiment, R 1 is C 1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R 1 is C 1-6 alkoxyl, such as OMe; in another specific embodiment, R 1 is C 1-6 haloalkoxyl.
  • R 2 is NR 2b R 2c ; in another specific embodiment, R 2 is - (CH 2 ) m -C (O) R 2a , such as C (O) R 2a ; in another specific embodiment, R 2 is - (CH 2 ) m -C (O) OR 2a ; in another specific embodiment, R 2 is - (CH 2 ) m -OC (O) R 2a ; in another specific embodiment, R 2 is - (CH 2 ) m -S (O) 2 -R 2a ; in another specific embodiment, R 2 is - (CH 2 ) m -S (O) -R 2a ; in another specific embodiment, R 2 is - (CH 2 ) m -NHC (O) -R 2a , such as NHC (O) -R 2a ; in another specific embodiment, R 2 is - (CH 2 ) m -C (O) NR 2b R 2c , such as C (CH 2 )
  • R 2 is in another specific embodiment, R 2 is in anotherspecific embodiment, R 2 is in another specific embodiment, R 2 is in another specific embodiment, R 2 is in another specific embodiment, R 2 is in another specific embodiment, R 2 is in another specific embodiment, R 2 is in another specific embodiment, R 2 is
  • R 2 is in another more specific embodiment, R 2 is in another more specific embodiment, R 2 is in another more specific embodiment, R 2 is in another more specific embodiment, R 2 is in another more specific embodiment, R 2 is in another more specific embodiment, R 2 is in another more specific embodiment, R 2 is in another more specific embodiment, R 2 is in another more specific embodiment, R 2 is in another more specific embodiment, R 2 is in another more specific embodiment, R 2 is in another more specific embodiment, R 2 is in another more specific embodiment, R 2 is
  • R 2 is unsubstituted; in another specific embodiment, R 2 is substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R group (s) .
  • R 2a is H; in another specific embodiment, R 2a is C 1-6 alkyl; in another specific embodiment, R 2a is C 1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R 2a is C 1-6 alkylene-OH; in another specific embodiment, R 2a is C 1-6 alkylene-NH 2 .
  • R 3c is H; in another specific embodiment, R 3c is C 1-6 alkyl; in another specific embodiment, R 3c is C 1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R 3c is C 1-6 alkylene-OH; in another specific embodiment, R 3c is C 1-6 alkylene-OC 1-6 alkyl; in another specific embodiment, R 3c is C 1-6 alkylene-NH 2 ; in another specific embodiment, R 3c is C 1-6 alkylene-NH (C 1-6 alkyl) ; in another specific embodiment, R 3c is C 1-6 alkylene-N (C 1-6 alkyl) 2 .
  • R 2 ’ is -NR 2b R 2c ’-; in another specific embodiment, R 2 ’ is - (CH 2 ) m -C (O) R 2a ’-, such as -C (O) R 2a ’; in another specific embodiment, R 2 ’ is - (CH 2 ) m -C (O) OR 2a ’-; in another specific embodiment, R 2 ’ is - (CH 2 ) m -OC (O) R 2a ’; in another specific embodiment, R 2 ’ is - (CH 2 ) m -S (O) 2 -R 2a ’-; in another specific embodiment, R 2 ’ is - (CH 2 ) m -S (O) -R 2a ’-; in another specific embodiment, R 2 ’ is - (CH 2 ) m -S (O) -R 2a ’-; in another specific embodiment, R 2 ’ is - (CH 2 ) m -NHC (O
  • R 2 ’ is in another specific embodiment, R 2 ’ is in another specific embodiment, R 2 ’ is in another specific embodiment, R 2 ’ is in another specific embodiment, R 2 ’ is in another specific embodiment, R 2 ’ is in another specific embodiment, R 2 ’ is in another specific embodiment, R 2 ’ is in another specific embodiment, R 2 ’ is
  • R 2 ’ is in another more specific embodiment, R 2 ’ is in another more specific embodiment, R 2 ’ is in another more specific embodiment, R 2 ’ is in another more specific embodiment, R 2 ’ is in another more specific embodiment, R 2 ’ is in another more specific embodiment, R 2 ’ is in another more specific embodiment, R 2 ’ is in another more specific embodiment, R 2 ’ is in another more specific embodiment, R 2 ’ is in another more specific embodiment, R 2 ’ is in another more specific embodiment, R 2 ’ is
  • R 3 ’ is a divalent group formed by the connection between R 3 and the rest of the compound.
  • R 3b is as defined in the context.
  • R 3b , R 3c ’ are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form C 3-10 cycloalkylene; in another specific embodiment, R 3b , R 3c ’ are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 3-12 membered heterocyclylene, such as 3-10 membered heterocyclylene or 5-10 membered heterocyclylene; in another specific embodiment, R 3b , R 3c ’ are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form C 6-10 arylene; in another specific embodiment, R 3b , R 3c ’ are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 5-12 membered heteroarylene.
  • each m is independently selected from 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8.
  • R 4 is H; in another specific embodiment, R 4 is halogen, such as F; in another specific embodiment, R 4 is OH; in another specific embodiment, R 4 is NH 2 ; in another specific embodiment, R 4 is N (C 1-6 alkyl) 2 ; in another specific embodiment, R 4 is NH-C 1-6 alkyl; in another specific embodiment, R 4 is C 1-6 alkyl; in another specific embodiment, R 4 is C 1-4 alkyl, such as Me; in another specific embodiment, R 4 is C 1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R 4 is C 1-6 alkoxyl; in another specific embodiment, R 4 is C 1-4 alkoxyl, such as OMe; in another specific embodiment, R 4 is C 1-6 haloalkoxyl.
  • R 5 is H; in another specific embodiment, R 5 is halogen, such as F; in another specific embodiment, R 5 is OH; in another specific embodiment, R 5 is NH 2 ; in another specific embodiment, R 5 is N (C 1-6 alkyl) 2 ; in another specific embodiment, R 5 is NH-C 1-6 alkyl; in another specific embodiment, R 5 is C 1-6 alkyl; in another specific embodiment, R 5 is C 1-4 alkyl, such as Me; in another specific embodiment, R 5 is C 1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R 5 is C 1-6 alkoxyl; in another specific embodiment, R 5 is C 1-4 alkoxyl, such as OMe; in another specific embodiment, R 5 is C 1-6 haloalkoxyl.
  • R 4 , R 5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C 3-10 cycloalkyl; in another specific embodiment, R 4 , R 5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form 3-12 membered heterocyclyl, such as 3-12 membered heterocyclyl or 5-10 membered heterocyclyl, 5-6 membered heterocyclyl is preferred; in another specific embodiment, R 4 , R 5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C 6-10 aryl; in another specific embodiment, R 4 , R 5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form 5-12 membered heteroaryl; in another specific embodiment, the above mentioned cycloalkyl, heterocyclyl, aryl and heteroaryl are unsubstituted; in another specific embodiment, the above mentioned cycloalkyl, heterocyclyl, aryl and heteroaryl are substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 substituents selected
  • R 6b is H; in another specific embodiment, R 6b is C 1-6 alkyl, such as CH 3 ; in another specific embodiment, R 6b is C 1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R 6b is C 3-7 cycloalkyl; in another specific embodiment, R 6b is 3-7 membered heterocyclyl; in another specific embodiment, R 6b is C 1-6 alkylene-OH, such as CH 2 OH and CH 2 CH 2 OH; in another specific embodiment, R 6b is C 1-6 alkylene-OC 1-6 alkyl; in another specific embodiment, R 6b is C 1-6 alkylene-NH 2 ; in another specific embodiment, R 6b is C 1-6 alkylene-NH (C 1-6 alkyl) ; in another specific embodiment, R 6b is C 1-6 alkylene-N (C 1-6 alkyl) 2 .
  • R 6c is H; in another specific embodiment, R 6c is C 1-6 alkyl, such as CH 3 ; in another specific embodiment, R 6c is C 1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R 6c is C 3-7 cycloalkyl, such as C 3-5 cycloalkyl, such as cyclopropyl; in another specific embodiment, R 6c is 3-7 membered heterocyclyl; in another specific embodiment, R 6c is C 1-6 alkylene-OH, such as CH 2 OH and CH 2 CH 2 OH; in another specific embodiment, R 6c is C 1-6 alkylene-OC 1-6 alkyl; in another specific embodiment, R 6c is C 1-6 alkylene-NH 2 ; in another specific embodiment, R 6c is C 1-6 alkylene-NH (C 1-6 alkyl) ; in another specific embodiment, R 6c is C 1-6 alkylene-N (C 1-6 alkyl) 2 .
  • R 6 ’ is a divalent group formed by the connection between R 6 and the rest of the compound.
  • R 6 ’ is bond; in another specific embodiment, R 6 ’ is - (CH 2 ) n -OR 6a ’-; in another specific embodiment, R 6 ’ is - (CH 2 ) n -C (O) OR 6a ’-; in another specific embodiment, R 6 ’ is - (CH 2 ) n -OC (O) R 6a ’-; in another specific embodiment, R 6 ’ is - (CH 2 ) n -C (O) R 6a ’-; in another specific embodiment, R 6 ’ is - (CH 2 ) n -S (O) 2 -R 6a ’-; in another specific embodiment, R 6 ’ is - (CH 2 ) n -S (O) -R 6a ’-; in another specific embodiment, R 6 ’ is - (CH 2 ) n -S (O) -R 6a ’-; in another specific embodiment, R 6 ’ is - (CH 2 ) n
  • R 6 ’ is in another specific embodiment, R 6 ’ is in another specific embodiment, R 6 ’ is in another specific embodiment, R 6 ’ is in another specific embodiment, R 6 ’ is in another specific embodiment, R 6 ’ is in another specific embodiment, R 6 ’ is in another specific embodiment, R 6 ’ is in another specific embodiment, R 6 ’ is
  • R 6 ’ is in another more specific embodiment, R 6 ’ is in another more specific embodiment, R 6 ’ is in another more specific embodiment, R 6 ’ is in another more specific embodiment, R 6 ’ is in another more specific embodiment, R 6 ’ is in another more specific embodiment, R 6 ’ is in another more specific embodiment, R 6 ’ is in another more specific embodiment, R 6 ’ is in another more specific embodiment, R 6 ’ is in another more specific embodiment, R 6 ’ is in another more specific embodiment, R 6 ’ is in another more specific embodiment, R 6 is in another more specific embodiment, R 6 is in another more specific embodiment, R 6 is in anothermore specific embodiment, R 6 is in another more specific embodiment, R 6 is in another more specific embodiment, R 6 is in another more specific embodiment, R 6 is in another more specific embodiment, R 6 is in another more specific embodiment, R 6 is in another more specific embodiment, R 6 is in another more specific embodiment, R 6 is in another more specific embodiment, R 6 is in another more specific embodiment, R 6 is in another more specific embodiment, R 6 is in another
  • R 6 ’ is unsubstituted; in another specific embodiment, R 6 ’ is substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R*group (s) .
  • R 6c ’ is bond; in another specific embodiment, R 6c ’ is C 1-6 alkylene; in another specific embodiment, R 6c ’ is -CH 2 -; in another specific embodiment, R 6c ’ is C 1-6 haloalkylene; in another specific embodiment, R 6c ’ is C 3-7 cycloalkylene, such as C 3-5 cycloalkylene, e.g.
  • R 6c ’ is 3-7 membered heterocyclylene; in another specific embodiment, R 6c ’ is -C 1-6 alkylene-O-, such as -CH 2 O-and -CH 2 CH 2 O-; in another specific embodiment, R 6c ’ is -C 1-6 alkylene-OC 1-6 alkylene-; in another specific embodiment, R 6c ’ is -C 1-6 alkylene-NH-, such as -CH 2 CH 2 NH-; in another specific embodiment, R 6c ’ is -C 1-6 alkylene-N (C 1-6 alkyl) -or -C 1-6 alkylene-NH-C 1-6 alkylene-; in another specific embodiment, R 6c ’ is -C 1-6 alkylene-N (C 1-6 alkyl) -C 1-6 alkylene-.
  • R 7 is C 1-6 alkyl; in another specific embodiment, R 7 is C 1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R 7 is C 1-6 alkenyl; in another specific embodiment, R 7 is C 1-6 alkynyl; in another specific embodiment, R 7 is - (CH 2 ) k -OR 7a ; in another specific embodiment, R 7 is - (CH 2 ) k -NR 7b R 7c ; in another specific embodiment, R 7 is - (CH 2 ) k -C (O) R 7a ; in another specific embodiment, R 7 is - (CH 2 ) k -C (O) OR 7a ; in another specific embodiment, R 7 is - (CH 2 ) k -OC (O) -R 7a ; in another specific embodiment, R 7 is - (CH 2 ) k -NHC (O) -R 7a ; in another specific embodiment, R 7 is - (CH 2 ) k -NHC (O)
  • R 8 is C 1-6 alkyl, such as C 1-4 alkyl; in another specific embodiment, R 8 is C 1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R 8 is C 1-6 alkenyl, such as C 1-4 alkenyl; in another specific embodiment, R 8 is C 1-6 alkynyl, such as C 1-4 alkynyl; in another specific embodiment, R 8 is - (CH 2 ) k -OR 7a , such as C 1-4 alkylene-OH; in another specific embodiment, R 8 is - (CH 2 ) k -NR 7b R 7c , such as C 1-4 alkylene-NH 2 ; in another specific embodiment, R 8 is - (CH 2 ) k -C (O) R 7a ; in another specific embodiment, R 8 is - (CH 2 ) k -C (O) OR 7a ; in another specific embodiment, R 8 is - (CH 2 ) k -OC (O) -R 7
  • R 10a is H; in another specific embodiment, R 10a is C 1-6 alkyl; in another specific embodiment, R 10a is C 1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R 10a is C 1-6 alkylene-OH; in another specific embodiment, R 10a is C 1-6 alkylene-OC 1-6 alkyl; in another specific embodiment, R 10a is C 1-6 alkylene-NH 2 ; in another specific embodiment, R 10a is C 1-6 alkylene-NH (C 1-6 alkyl) ; in another specific embodiment, R 10a is C 1-6 alkylene-N (C 1-6 alkyl) 2 .
  • each k is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8.
  • each q is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8.
  • R 7 ’ is in another specific embodiment, R 7 ’ is in another specific embodiment, R 7 ’ is in another specific embodiment, R 7 ’ is in another specific embodiment, R 7 ’ is in another specific embodiment, R 7 ’ is in another specific embodiment, R 7 ’ is
  • R 7 ’ is in another more specific embodiment, R 7 ’ is in another more specific embodiment, R 7 ’ is in another more specific embodiment, R 7 ’ is in another more specific embodiment, R 7 ’ is in another more specific embodiment, R 7 ’ is in another more specific embodiment, R 7 ’ is in another more specific embodiment, R 7 ’ is in another more specific embodiment, R 7 ’ is in another more specific embodiment, R 7 ’ is in another more specific embodiment, R 7 ’ is in another more specific embodiment, R 7 ’ is in another more specific embodiment, R 7 ’ is in another more specific embodiment, R 7 ’ is in another more specific embodiment, R 7 ’ is in another more specific embodiment, R 7 ’ is in another more specific embodiment, R 7 ’ is in another more specific embodiment, R 7 ’ is in another more specific embodiment, R 7 ’ is in another more specific embodiment, R 7 ’ is in another more specific embodiment, R 7 ’ is in another more specific embodiment, R 7 ’ is in another more specific embodiment, R 7 ’ is in another more specific embodiment,
  • R 7 ’ is unsubstituted; in another specific embodiment, R 7 ’ is substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R# group (s) .
  • R 7a ’ is bond; in another specific embodiment, R 7a ’ is C 1-6 alkylene; in another specific embodiment, R 7a ’ is C 1-6 alkenylene; in another specific embodiment, R 7a ’ is -C 1-6 alkylene-O-; in another specific embodiment, R 7a ’ is -C 1-6 alkylene-NH-.
  • R 7c ’ is bond; in another specific embodiment, R 7c ’ is C 1-6 alkylene; in another specific embodiment, R 7c ’ is C 1-6 alkenylene; in another specific embodiment, R 7c ’ is -C 1-6 alkylene-O-; in another specific embodiment, R 7c ’ is -C 1-6 alkylene-NH-.
  • R 10a ’ is bond; in another specific embodiment, R 10a ’ is C 1-6 alkylene; in another specific embodiment, R 10a ’ is -C 1-6 alkylene-O-; in another specific embodiment, R 10a ’ is -C 1-6 alkylene-NH-.
  • the targeting moiety binds to a tumor associated antigen.
  • the targeting moiety is an antibody or antigen-binding antibody fragment.
  • the antibody is a bispecific or multispecific antibody.
  • L 1 , L 2 and L 3 are independently a linker.
  • the linker comprises a dipeptide, tripeptide or tetrapeptide.
  • x is an integer between 1 and 10, such as 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10, preferably is 1.
  • z is an integer between 1 and 10, such as 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10, preferably is 1.
  • w is an integer between 1 and 10, such as 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10; in another specific embodiment, w is an integer between 2 and 8, preferably is 3, 4, 5, 6, 7 or 8.
  • u is an integer between 1 and 10, such as 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10; in another specific embodiment, u is an integer between 2 and 8, preferably is 3, 4, 5, 6, 7 or 8.
  • r is an integer between 1 and 10, such as 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10; in another specific embodiment, r is an integer between 2 and 8, preferably is 3, 4, 5, 6, 7 or 8.
  • the present disclosure refers to the compound of formula (I) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein: X is CH or N; R 1 is selected from halogen and C 1-6 alkoxyl; R 2 is selected from NR 2b R 2c , C (O) R 2a , NHC (O) -R 2a , C (O) NR 2b R 2c , NHC (O) OR 2a and OC (O) NR 2b R 2c ; R 2a , R 2b and R 2c are independently selected from H, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkylene-OH and C 1-6 alkylene-NH 2 ; R 3 is selected from H, - (CH 2 ) p OR 3a , - (CH 2 ) p C (O) R 3a , - (CH
  • the present disclosure refers to the compound of formula (II) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein: R 4 is C 1-6 alkyl or C 1-6 alkoxyl; R 5 is halogen; or, preferably, R 4 and R 5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form 5-6 membered heterocyclyl, which is optionally substituted with 1, 2 or 3 substituents selected from H, D, halogen and C 1-6 alkyl; R 6 is selected from - (CH 2 ) n -OR 6a , - (CH 2 ) n -C (O) OR 6a , - (CH 2 ) n -NHC (O) -R 6a and - (CH 2 ) n -CH 2 NR 6b R 6c ; R 6 is preferably
  • the present disclosure refers to a compound of formula (II-a) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, R 6 is selected from
  • the present disclosure refers to a compound of formula (II-a) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof: wherein, R 6 is as defined in the context.
  • the present disclosure refers to a compound of formula (II) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof: wherein, R 4 is selected from H, C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 alkoxyl and C 1-6 haloalkoxyl, alternatively is selected from C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 alkoxyl and C 1-6 haloalkoxyl; R 5 is selected from H, halogen, C 1-6 haloalkyl and C 1-6 haloalkoxyl, alternatively is selected from halogen, C 1-6 haloalkyl and C 1-6 haloalkoxyl; or, preferably, R 4 , R 5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C 3-10 cycloalky
  • the present disclosure refers to a compound of formula (II-d) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof: wherein, R 6 is - (CH 2 ) n -OR 6a ; R 6a is selected from H, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkylene-OH and C 1-6 alkylene -NH 2 , such as H, CH 3 , CH 2 OH and CH 2 CH 2 OH; each n is independently 0, 1, 2, 3, or 4, preferably 1, 2, 3, or 4; wherein, R 6 is optionally substituted with 1, 2 or 3 R*group (s) , R*is selected from H, halogen, C 1-6 alkyl and C 1-6 haloalkyl;alternatively, R 6 is - (CH 2 ) n -OR 6a ; R 6a is selected from H, and C
  • the present disclosure refers to a compound of formula (II) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, the compound is selected from: 1.4 Embodiments -Compound of formula (III)
  • the present disclosure refers to a compound of formula (III) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof: wherein, R 7 and R 8 are independently selected from C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 alkenyl, C 1-6 alkynyl, - (CH 2 ) k -OR 7a , - (CH 2 ) k - NR 7b R 7c , - (CH 2 ) k -C (O) R 7a , - (CH 2 ) k -C (O) OR 7a , - (CH 2 ) k -OC (O) -R 7a , - (CH 2 ) k -NHC (O) -R 7a , - (CH 2 ) k -NHC (O) O-R
  • the present disclosure refers to the compound of formula (III) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein: R 7 is selected from - (CH 2 ) k -OR 7a , - (CH 2 ) k -NR 7b R 7c , - (CH 2 ) k -C (O) OR 7a , - (CH 2 ) k -OC (O) -R 7a , - (CH 2 ) k -NHC (O) -R 7a and - (CH 2 ) k -C (O) NR 7b R 7c ; R 7a , R 7b and R 7c are independently selected from H, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkenyl, C 1-6 alkynyl, C 1-6 alkylene-OH and C 1-6 al
  • the present disclosure refers to a compound of formula (III-a) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof: wherein, R 7 and R 8 are independently selected from C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 alkenyl, C 1-6 alkynyl, - (CH 2 ) k -OR 7a , - (CH 2 ) k - NR 7b R 7c , - (CH 2 ) k -C (O) R 7a , - (CH 2 ) k -C (O) OR 7a , - (CH 2 ) k -OC (O) -R 7a , - (CH 2 ) k -NHC (O) -R 7a , - (CH 2 ) k -C (O)
  • the present disclosure refers to the compound of formula (III-a) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein: R 7 is selected from R 7a , R 7b and R 7c are independently selected from H and C 1-6 alkyl, such as H and CH 3 , k is 0, 1, 2 or 3; R 8 is selected from C 1-6 alkyl, C 1-6 alkenyl, C 1-6 alkynyl, C 0-6 alkylene-OH and C 0-6 alkylene-NH 2 ; alternatively, R 7 is selected from R 8 is selected from C 1-4 alkyl, C 1-4 alkenyl, C 1-4 alkynyl, C 1-4 alkylene-OH and C 1-4 alkylene-NH 2 , such as CH 3 ,
  • the present disclosure refers to the compound of formula (III) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, R 10a is preferably not H.
  • the present disclosure refers to a compound of formula (III) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, the compound is selected from: II. Conjugate
  • the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (I-1c) or (I-1d) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein: wherein, X is CR x or N, such as CH or N; R x is selected from halogen, C 1-6 alkyl, and C 1-6 alkoxyl; R 1 is selected from halogen and C 1-6 alkoxyl; R 2 ’ is -NR 2b R 2c ’-; R 2b is selected from H, and C 1-6 alkyl; R 2c ’ is selected from bond, and C 1-6 alkylene; yet alternatively, X is CR x , such as CH; R x is selected from H, halogen, C 1-6 alkyl and C 1-6 alkoxyl; R 1 is selected from halogen and C 1-4 alk
  • the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (II-1a) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein: wherein, R 6 ’ is as defined in the context.
  • the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (II-1) , (II-1b) or (II-1c) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein: wherein, represents the attachment point of formula (II-1) , (II-1b) , or (II-1c) and the rest of the compound; R 4 is selected from C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 alkoxyl and C 1-6 haloalkoxyl; R 5 is selected from halogen, C 1-6 haloalkyl and C 1-6 haloalkoxyl; or, preferably, R 4 , R 5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C 3-10 cycloalkyl or 5- 10 membered heterocyclyl, wherein, the C 3
  • the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (II-1) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein: wherein, represents the attachment point of formula (II) and the rest of the compound; R 4 is selected from H, C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 alkoxyl and C 1-6 haloalkoxyl, alternatively is selected from C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 alkoxyl and C 1-6 haloalkoxyl; R 5 is selected from H, halogen, C 1-6 haloalkyl and C 1-6 haloalkoxyl, alternatively is selected from halogen, C 1-6 haloalkyl and C 1-6 haloalkoxyl; or, preferably, R 4 , R 5
  • the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (II-1) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, the structure of formula (II-1) is selected from the following:
  • the present disclosure refers to a conjugate represented by L 2 - (D 2 ) y , preferably, represented by T 2 - [L 2 ’- (D 2 ) y ] u ; wherein, T 2 is a targeting moiety; L 2 is a linker, and L 2 ’ is a divalent group formed by the connection between L 2 and T 2 ; D 2 is a drug moiety, which is selected from the compound of formula (II) (such as formula (II-1) ) as defined in the context; y is an integer between 1 and 10, alternatively is 1; u is an integer between 1 and 10.
  • the present disclosure refers to a conjugate, wherein the conjugate represented by L 2 - (D 2 ) y is selected from:
  • the present disclosure refers to a conjugate, wherein the conjugate represented by T 2 - [L 2 ’- (D 2 ) y ] u is selected from: wherein, T 2 and u are as defined in the context.
  • the conjugate represented by T 2 - [L 2 ’- (D 2 ) y ] u is selected from: wherein, T 2 and u are as defined in the context.
  • the present disclosure refers to a compound, which comprises the structure of formula (III-1) or (III-2) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof: wherein, represents the attachment point of formula (III-1) or (III-2) and the rest of the compound; R 7 ’ is a divalent group formed by the connection between R 7 and the rest of the compound; R 10 ’ is a divalent group formed by the connection between R 10 and the rest of the compound; R 7 , R 8, R 9 and R 10 are as defined in the context.
  • the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (III-1) or (III-2) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein: R 7 and R 8 are independently selected from C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 alkenyl, C 1-6 alkynyl, - (CH 2 ) k -OR 7a , - (CH 2 ) k - NR 7b R 7c , - (CH 2 ) k -C (O) R 7a , - (CH 2 ) k -C (O) OR 7a , - (CH 2 ) k -OC (O) -R 7a , - (CH 2 ) k -NHC (O) -R 7a , - (CH 2 ) k
  • the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (III-1) or (III-2) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein: R 7 ’ is selected from C 1-6 alkylene, C 1-6 haloalkylene, C 1-6 alkenylene, C 1-6 alkynylene, - (CH 2 ) k -OR 7a ’-, - (CH 2 ) k - NR 7b R 7c ’-, - (CH 2 ) k -C (O) R 7a ’-, - (CH 2 ) k -C (O) OR 7a ’-, - (CH 2 ) k -OC (O) -R 7a ’-, - (CH 2 ) k -NHC (O) -R 7a ’-, - (
  • R 7 ’ is selected from - (CH 2 ) k -OR 7a ’-, - (CH 2 ) k -NR 7b R 7c ’-, - (CH 2 ) k -C (O) OR 7a ’-, - (CH 2 ) k -OC (O) -R 7a ’-, - (CH 2 ) k -NHC (O) - R 7a ’-and - (CH 2 ) k -C (O) NR 7b R 7c ’-; R 7a ’ and R 7c ’ are selected from bond, C 1-6 alkylene, C 1-6 alkynylene, -C 1-6 alkylene-O-and -C 1-6 alkylene-NH-; R 7b is selected from H, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkynyl, C 1-6 alkylene-OH and C 1-6 alkylene-NH 2 ; each k is independently 0, 1, 2 or
  • the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (III-1) or (III-2) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein: R 9 is selected from H, OH, CN, NH 2 , NH (C 1-6 alkyl) and N (C 1-6 alkyl) 2 , such as H or NH 2 ; R 10 is selected from H, - (CH 2 ) q -OR 10a , - (CH 2 ) q -NR 10b R 10c , - (CH 2 ) q -C (O) R 10a , - (CH 2 ) q -C (O) OR 10a , - (CH 2 ) q -OC (O) R 10a , - (CH 2 ) q -S (O) 2 -R 10a
  • the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (III-1) or (III-2) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein: R 10 ’ is selected from bond, - (CH 2 ) q -OR 10a ’-, - (CH 2 ) q -NR 10b R 10c ’-, - (CH 2 ) q -C (O) R 10a ’-, - (CH 2 ) q -C (O) OR 10a ’-, - (CH 2 ) q - OC (O) R 10a ’-, - (CH 2 ) q -S (O) 2 -R 10a ’-, - (CH 2 ) q -S (O) -R 10a ’-, - (CH 2 ) q -S (
  • the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (III-1a) , (III-1b) or (III-2b) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein: wherein, R 7 ’, R 8 , R 10 and R 10 ’ are as defined in the context; alternatively, wherein, the compound comprises the structure of formula (III-1a) : wherein, R 7 ’ is selected from C 1-6 alkylene, C 1-6 haloalkylene, C 1-6 alkenylene, C 1-6 alkynylene, - (CH 2 ) k -OR 7a ’-, and - (CH 2 ) k - NR 7b R 7c ’-; R 8 is selected from C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 alkenyl, C 1-6
  • the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (III-1) or (III-2) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, the structure of formula (III-1) or (III-2) is selected from the following:
  • the present disclosure refers to a conjugate represented by L 3 - (D 3 ) z , preferably, represented by T 3 - [L 3 ’- (D 3 ) z ] r , wherein, T 3 is a targeting moiety; L 3 is a linker, and L 3 ’ is a divalent group formed by the connection between T 3 and L 3 ; D 3 is a drug moiety, which is selected from the compound of formula (III) (such as formula (III-1) or (III-2) ) as defined in the context; z is an integer between 1 and 10, alternatively is 1; r is an integer between 1 and 10.
  • the present disclosure refers to a conjugate, wherein the conjugate represented by L 3 -(D 3 ) z is selected from:
  • the present disclosure refers to a conjugate, wherein the conjugate represented by T 3 - [L 3 - (D 3 ) z ] r is selected from: wherein, T 3 and r are as defined in the context. III. Targeting moiety
  • the targeting moiety, T comprised by the conjugates is a molecule that binds, reactively associates or complexes with a receptor, antigen or other receptive moiety associated with a given target cell population.
  • the targeting moiety, T functions to deliver the camptothecin analogue, D, to the particular target cell population with which the targeting moiety, T, reacts.
  • targeting moieties include, but are not limited to, proteins (such as antibodies, antibody fragments and growth factors) , glycoproteins, peptides (such as bombesin and gastrin-releasing peptide) , lectins, vitamins (such as folic acid) and nutrient-transport molecules (such as transferrin) .
  • the antibody included as the targeting moiety, T may be a full-size polyclonal or monoclonal antibody, an antigen-binding antibody fragment (such as Fab, scFab, Fab', F (ab') 2 , Fv or scFv) , a domain antibody (dAb) or an antibody mimetic (such as an affibody, a DARPin, an anticalin, a versabody, a duocalin, a lipocalin or an avimer) .
  • the antibody is typically directed to a particular antigen, for example, a disease-associated antigen such as a tumor-associated antigen, an antigen associated with an autoimmune disease or a viral antigen.
  • monoclonal antibodies may be produced by methods including, but not limited to, the hybridoma technique originally described by Kohler and Milstein (1975, Nature 256: 495-497) , the human B cell hybridoma technique (Kozbor et al., 1983, Immunology Today 4: 72) , the EBV-hybridoma technique (Cole et al., 1985, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp.
  • targeting moiety, T may be a monoclonal antibody.
  • the monoclonal antibody may be, for example, a non-human monoclonal antibody (such as a mouse antibody) , a human monoclonal antibody, a humanized monoclonal antibody or a chimeric antibody (for example, a human-mouse antibody) .
  • Human monoclonal antibodies may be made by any of numerous techniques known in the art (see, for example, Teng et al., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80: 7308-7312; Kozbor et al., 1983, Immunology Today 4: 72-79; Olsson et al., 1983, Meth. Enzymol.
  • Chimeric and humanized monoclonal antibodies can be produced by recombinant DNA techniques known in the art, for example using methods described in International Patent Publication Nos. WO 87/02671 and WO 86/01533; European Patent Publication Nos. 0184187; 0171496 and 0173494; U.S. Patent Nos. 4,816,567 and 5,225,539; Berter et al., 1988, Science 240: 1041-1043; Liu et al., 1987, J.
  • targeting moiety, T, comprised by the conjugate is an antibody or antigen-binding antibody fragment that binds to a tumor-associated antigen (TAA) .
  • TAA tumor-associated antigen
  • tumor-associated antigens include, but are not limited to, 5T4, ADAM-9, ALK, AMHRII, ASCT2, Axl, B7-H 3 , BCMA, C4.4a, CA6, CA9, CanAg, CD123, CD138, CD142, CD166, CD184, CD19, CD20, CD205, CD22, CD248, CD25, CD3, CD30, CD33, CD352, CD37, CD38, CD40L, CD44v6, CD45, CD46, CD48, CD51, CD56, CD7, CD70, CD71, CD74, CD79b, CDH6, CEACAM5, CEACAM6, cKIT, CLDN18.2, CLDN6, CLL-1, c-MET, Cripto, CSP-1, CXCR5, DLK-1, DLL3, DP
  • Ab is an antibody or an antigen binding fragment thereof which binds to a tumor associated antigen;
  • the tumor associated antigen includes , but are not limited to HER2, TROP2, EGFR, FLOR2, MUC16, CEACAM, nectin4, CD19, CD33, MSLN, EpCAM, NaPi2b, ROR1, CLDN6, CLDN18.2, ROR2, LY6G6D, fibronectin, B7H3, B7H4, BCMA, TF, MET and others.
  • the Trop2 antibody comprises a heavy chain (HC) and a light chain (LC) , and wherein: the HC comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%, or 100%sequence identity to SEQ ID NO: 1, and the LC comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%, or 100%sequence identity to SEQ ID NO: 2.
  • the HC comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%, or 100%sequence identity to SEQ ID NO: 1
  • the LC comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%, or 100%sequence identity to SEQ ID NO: 2.
  • the conjugates include a linker, L, which is a bifunctional or multifunctional moiety capable of linking one or more camptothecin analogues, D, to targeting moiety, T.
  • a bifunctional (or monovalent) linker, L links a single compound D to a single site on targeting moiety, T, whereas a multifunctional (or polyvalent) linker, L, links more than one compound, D, to a single site on targeting moiety, T.
  • a linker that links one compound, D, to more than one site on targeting moiety, T may also be considered to be multifunctional in certain embodiments.
  • Non-limiting examples of functional groups capable of reacting with thiols include maleimide, haloacetamide, haloacetyl, activated esters (such as succinimide esters, 4-nitrophenyl esters, pentafluorophenyl esters and tetrafluorophenyl esters) , anhydrides, acid chlorides, sulfonyl chlorides, isocyanates and isothiocyanates. Also useful in this context are “self-stabilizing” maleimides as described in Lyon et al., 2014, Nat. Biotechnol., 32: 1059-1062.
  • linker, L may include a functional group that allows for bridging of two interchain cysteines on the antibody, such as a ThioBridge TM linker (Badescu et al., 2014, Bioconjug. Chem. 25: 1124–1136) , a dithiomaleimide (DTM) linker (Behrens et al., 2015, Mol. Pharm. 12: 3986–3998) , a dithioaryl (TCEP) pyridazinedione-based linker (Lee et al., 2016, Chem. Sci., 7: 799-802) or a dibromopyridazinedione-based linker (Maruani et al., 2015, Nat. Commun., 6: 6645) .
  • a functional group that allows for bridging of two interchain cysteines on the antibody such as a ThioBridge TM linker (Badescu et al., 2014, Biocon
  • the AAC reaction may be a copper-catalyzed AAC (CuAAC) reaction, which involves coupling of an azide with a linear alkyne, or a strain-promoted AAC (SPAAC) reaction, which involves coupling of an azide with a cyclooctyne.
  • CuAAC copper-catalyzed AAC
  • SPAAC strain-promoted AAC
  • cleavable linkers include, for example, linkers comprising an amino acid sequence that is a cleavage recognition sequence for a protease. Many such cleavage recognition sequences are known in the art.
  • an amino acid sequence that is recognized and cleaved by a protease present in the extracellular matrix in the vicinity of a target cell, such as a cancer cell may be employed.
  • extracellular tumor-associated proteases include, for example, plasmin, matrix metalloproteases (MMPs) , elastase and kallikrein-related peptidases.
  • tri-and tetrapeptide cleavage sequences include, but are not limited to, Ala-Ala-Asn, Ala-Val-Cit, (D) Ala-Phe-Lys, Asp-Val-Ala, Asp-Val-Cit, Gly-Cit-Val, Lys-Val-Ala, Lys-Val-Cit, Met-Cit-Val, (D) Phe-Phe-Lys, Asn-Pro-Val, Ala-Leu-Ala-Leu, Gly-Phe-Leu-Gly, Gly-Gly-Phe-Gly and Gly-Phe-Gly-Gly.
  • cleavable linkers include disulfide-containing linkers such as N-succinimydyl-4- (2-pyridyldithio) butanoate (SPDB) and N-succinimydyl-4- (2-pyridyldithio) -2-sulfo butanoate (sulfo-SPDB) .
  • Disulfide-containing linkers may optionally include additional groups to provide steric hindrance adjacent to the disulfide bond in order to improve the extracellular stability of the linker, for example, inclusion of a geminal dimethyl group.
  • Other cleavable linkers include linkers hydrolyzable at a specific pH or within a pH range, such as hydrazone linkers. Linkers comprising combinations of these functionalities may also be useful, for example, linkers comprising both a hydrazone and a disulfide are known in the art.
  • a further example of a cleavable linker is a linker comprising a ⁇ -glucuronide, which is cleavable by ⁇ -glucuronidase, an enzyme present in lysosomes and tumor interstitium (see, for example, De Graaf et al., 2002, Curr. Pharm. Des. 8: 1391–1403, and International Patent Publication No. WO 2007/011968) .
  • ⁇ -glucuronide may also function to improve the hydrophilicity of linker, L.
  • linker that is cleaved internally within a cell and improves hydrophilicity is a linker comprising a pyrophosphate diester moiety (see, for example, Kern et al., 2016, J Am Chem Soc., 138: 2430-1445) .
  • the linker, L, comprised by the conjugate is a cleavable linker.
  • linker, L comprises a cleavage recognition sequence.
  • linker, L may comprise an amino acid sequence that is recognized and cleaved by a lysosomal protease.
  • compositions can be administered with medical devices known in the art.
  • a therapeutic composition of the disclosure can be administered with a needleless hypodermic injection device, such as the devices disclosed in US 5399163, US 5383851, US 5312335, US 5064413, US 4941880, US 4790824, and US 4596556.
  • Examples of well-known implants and modules useful in the present disclosure include those described in US 4487603, US 4486194, US 4447233, US 4447224, US 4439196, and US 4475196. These patents are incorporated herein by reference. Many other such implants, delivery systems, and modules are known to those skilled in the art. IX. Treatment Methods
  • the compounds of Formula II may be prepared via several different synthetic routes using the chemical transformations that are known to those skilled in the art.
  • One of the general synthetic strategies is shown in Scheme 4.
  • the compounds of Formula II can also be afforded from compound G and compound F by a ring-closing reaction.
  • the compounds of Formula II-a may be prepared via several different synthetic routes using the chemical transformations that are known to those skilled in the art.
  • One of the general synthetic strategies is shown in Scheme 5.
  • the compounds of Formula II-acan also be afforded from compound N and compound F by a ring-closing reaction.
  • the compounds of Formula II-c may be prepared via several different synthetic routes using the chemical transformations that are known to those skilled in the art.
  • One of the general synthetic strategies is shown in Scheme 7-1.
  • the compounds of Formula II-c can also be afforded from compound R and compound F by a ring-closing reaction.
  • the compound Q can react with various amine S using the chemical transformations that are known to those skilled in the art, to provide the compounds of Formula II-c, as shown in Scheme 7-2.
  • Scheme 7-1 Scheme 7-2
  • Step 1-1c A mixture of the compound from Step 1-1b (150 mg, 0.46 mmol) , diphenylmethanimine (175.15 mg, 0.97 mmol) , [5- (diphenylphosphanyl) -9, 9-dimethyl-9H-xanthen-4-yl] diphenylphosphane (26.63 mg, 0.05 mmol) , palladium bis (acetate) (10.33 mg, 0.05 mmol) and potassium tert-butoxide (132.67 mg, 1.38 mmol) in toluene (10 mL) was stirred at 80 °C for 16 hours. The organic solvents were removed at reduced pressure.
  • Step 1-1 A mixture of the compound from Step 1-1c (100 mg, 0.19 mmol) , (4S) -4-ethyl-4-hydroxy-3, 4, 6, 7, 8, 10-hexahydro-1H-pyrano [3, 4-f] indolizine-3, 6, 10-trione (CAS 110351-94-5) (44.99 mg, 0.17 mmol) and HCl (0.5 mL, 6.00 mmol) in EtOH (5 mL) was stirred at 80°C for 16 hours. The organic solvents were removed at reduced pressure.
  • Step 1-6a A mixture of the compound from Step 1-1b (5.0 g, 15.339 mmol) ) and diphenylmethanimine (3.06 g, 16.873 mmol) , [5- (diphenylphosphanyl) -9, 9-dimethyl-9H-xanthen-4-yl] diphenylphosphane (0.89 g, 1.534 mmol) , Pd (OAc) 2 (0.34 g, 1.534 mmol) and sodium 2-methylpropan-2-olate (4.42 g, 46.018 mmol) in toluene (50 mL) was stirred at 100°C for 16 h. The mixture was concentrated in vacuo.
  • Step 1-6b A mixture of the compound from Step 1-6a (500 mg, 1.173 mmol) , 2-aminoethan-1-ol (14.33 mg, 0.235 mmol) and copper powder (74.54 mg, 1.173 mmol) in DMSO (15 mL) was stirred at 100°C for 18 h. The mixture was filtrated and extracted with EA (20 mL*3) . The mixture was concentrated in vacuo. The residue was purified by column chromatography (PE/EA with EA from 0 ⁇ 50%) to give the desired compound (90 mg, 18%) as a yellow solid. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 363.2.
  • Step 1-6c A mixture of the compound from Step 1-6b (90 mg, 0.221 mmol) and (4S) -4-ethyl-4-hydroxy-3, 4, 6, 7, 8, 10-hexahydro-1H-pyrano [3, 4-f] indolizine-3, 6, 10-trione (CAS 110351-94-5) (58.29 mg, 0.221 mmol) and 4-methylbenzenesulfonic acid (38.13 mg, 0.221 mmol) in toluene (10 mL) was stirred at 120°C for 18 h. The mixture was concentrated in vacuo.
  • Step 1-7a A mixture of the compound from Step 1-6a (300 mg, 0.704 mmol) , 2-methylpropan-2-yl [ (2-aminoethyl) amino] methanoate (563.77 mg, 3.519 mmol) and Cu (44.74 mg, 0.704 mmol) in DMSO (10 mL) was stirred at 100 °C for 18 hr. The mixture was filtrated and extracted with EA (20 mL*3) . The mixture was concentrated in vacuo. The residue was purified by column chromatography (PE/EA with EA from 0 ⁇ 30%) to give the title compound (50 mg, 14%) as a yellow solid. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 506.2.
  • Step 1-7 A mixture of the compound from Step 1-7a (50 mg, 0.099 mmol) and (4S) -4-ethyl-4-hydroxy-3, 4, 6, 7, 8, 10-hexahydro-1H-pyrano [3, 4-f] indolizine-3, 6, 10-trione (26.03 mg, 0.099 mmol) and 4-methylbenzenesulfonic acid (17.03 mg, 0.099 mmol) in toluene (10 mL) was stirred at 120 °C for 18 hr. The mixture was concentrated in vacuo.
  • Step 1-9a A mixture of 1-1 (30 mg, 0.08 mmol) , N- ⁇ [ (2-methylprop-2-yl) oxy] carbonyl ⁇ glycine (41.34 mg, 0.24 mmol) , HOAt (32.12 mg, 0.24 mmol) , 1- ⁇ [3- (dimethylamino) propyl] azanylidene ⁇ -N-ethylmethanimine hydrochloride (51.59 mg, 0.24 mmol) and cupric chloride (42.31 mg, 0.32 mmol) in DMF (0.3 mL) and DCM (2.7 mL) was stirred at 25 °C for 18 hours. The resulting mixture was concentrated to afford the desired compound (crude 30 mg) as a yellow solid.
  • Step 2-1d A mixture of the compound from Step 2-1c (450 mg, 1.06 mmol) , 5-bromobenzo [d] [1, 3] dioxole (235 mg, 1.17 mmol) and n-BuLi (177 mg, 2.76 mmol) in THF (10 mL) was stirred at -65 °C for 2 hours. It was concentrated and the residue was purified by FC (PE/EA with EA from 0 ⁇ 15%) to afford the desired compound (45 mg, 0.089 mmol 15.5 %yield) as a yellow oil.
  • Step 2-1 A mixture of the compound from Step 2-1g (10 mg, 0.014 mmol) and 4N HCl (50 mg, 0.27 mmol) in 1, 4-dioxane (2 mL) was stirred at 0 °C for 2 hours. The solvent was removed under vacuum and the residue was purified by prep-HPLC (C18, 20-60 %acetonitrile in H 2 O with 0.1 %TFA) to afford the desired compound 2-1 (1.7 mg, 0.003 mmol, 25.3%yield) as a yellow solid.
  • Example 2-7 (S) -N- ( (3- (7-ethyl-7-hydroxy-8, 11-dioxo-7, 8, 11, 13-tetrahydro-10H- [1, 3] dioxolo [4, 5- g] pyrano [3', 4': 6, 7] indolizino [1, 2-b] quinolin-14-yl) bicyclo [1.1.1] pentan-1-yl) methyl) -2-hydroxyacetamide
  • Step 2-7 To a stirred stirred mixture of 2-hydroxyacetic acid (15 mg, 0.2 mmol) and HATU (78 mg, 0.2 mmol) in DMF (4 mL) were added the compound 2-6 and DIPEA (66 mg, 0.5 mmol) at 25 °C under nitrogen atmosphere. The resulting mixture was stirred at 25 °C for 1.5 h. The resulting mixture was concentrated under vacuum.
  • Example 2-8 (S) -3- (7-ethyl-7-hydroxy-8, 11-dioxo-7, 8, 11, 13-tetrahydro-10H- [1, 3] dioxolo [4, 5-g] pyrano [3', 4': 6, 7] indolizino [1, 2- b] quinolin-14-yl) bicyclo [1.1.1] pentane-1-carboxylic
  • Step 2-8 To a solution of the compound 2-1 (30 mg, 61 ⁇ mol) in DMSO (2 mL) was added IBX (34 mg, 123 ⁇ mol) at 25 °C under nitrogen atmosphere. The resulting mixture was stirred at 80 °C for 3 h. The residue was purified by Prep-HPLC (Chromatographic column: Xtimate-18C 250 ⁇ 21.2 mm, 10 ⁇ m; Mobile Phase: CH 3 CN/H 2 O (0.1%FA) ; Gradient: 32%to 42%in 10 min) to give the desired compound 2-8 (2.3 mg, 7%yield) as a white solid.
  • ESI-MS m/z 503.1 [M+H] + .
  • Step 2-13a To a solution of compound 2-1 (25 mg, 0.05 mmol) and [ (2-iodoethoxy) methyl] benzene (16.1 mg, 0.0614 mmol) in DCM (10 mL) was added AgOTf (26 mg, 0.1 mmol) , the resulting mixture was stirred at 20°C under N 2 atmosphere for 12 h. The mixture was filtrated and concentrated to get crude, the residue was purified by flash column chromatography (4 g silica gel column, petroleum ether/ethyl acetate with ethyl acetate from 10%to 50%in 20 min) to give the desired compound (30 mg, 75%yield) as a white solid.
  • LC-MS: ESI-MS m/z 623.2 [M+H] + .
  • Step 2-13 To a solution of the compound from Step 2-13a (25 mg, 0.04 mmol) in EtOAc (10 mL) was added Pd/C (10 mg, 10%) , the resulting mixture was stirred at 20°C for 12 h under H 2 atmosphere. The mixture was filtrated and purified by Prep-HPLC (Chromatographic column: Xbridge-C18 150 ⁇ 19 mm, 5 um; Mobile Phase: CH 3 CN/H 2 O (0.1%FA) ; Gradient: 35%to 45%in 8 min, 20 mL/min) to give the desired compound 2-13 (2.2 mg, 9%yield) as a white solid.
  • LC-MS: ESI-MS m/z 533.2 [M+H] + .
  • Example 2-14 (S) - (3- (7-ethyl-7-hydroxy-8, 11-dioxo-7, 8, 11, 13-tetrahydro-10H- [1, 3] dioxolo [4, 5-g] pyrano [3', 4': 6, 7] indolizino [1, 2- b] quinolin-14-yl) bicyclo [1.1.1] pentan-1-yl) methyl dihydrogen phosphate
  • Step 2-14 To a solution of compound 2-1 (410 mg, 0.8 mmol) in DMF (5 mL) was added P 2 O 5 (215 mg, 1.5 mmol) . The reaction mixture was stirred at 80°C for 12 h. The reaction mixture was purified by Prep-HPLC (Chromatographic column: Welch-18C 250 ⁇ 21.2 mm, 10 ⁇ m; Mobile Phase: CH 3 CN/H 2 O (0.1%TFA) ; Gradient: 25%to 40%in 10 min) to give the desired compound 2-14 (114 mg, 24%yield) as a yellow solid.
  • LC-MS: ESI-MS m/z 569.1 [M+H] + .
  • Step 2-15 A mixture of the compound from Step 2-6a (20 mg, 41 ⁇ mol) , 3-aminopropan-1-ol (15 mg, 0.2 mmol) and AcOH (3 mg, 41 ⁇ mol) in MeOH (5 mL) was stirred for 2 h at 25 °C under nitrogen atmosphere. To the above mixture was added NaBH 3 CN (5 mg, 82 ⁇ mol) at 25 °C. The resulting mixture was stirred at 25 °C for an additional 2 h. The resulting mixture was concentrated under vacuum.
  • Step 2-18a A mixture of N- (2-bromophenyl) acetamide (227 mg, 1.0 mmol) in THF (5 mL) was treated with n-BuLi (2.5 mol/L in hexanes) (1.0 mL) for 1.5 h at -78 °C under nitrogen atmosphere followed by the addition a solution of the compound from Step 2-1c in THF (5 mL) at -78 °C. The resulting mixture was stirred at -78 °C for an additional 1.5 h. The reaction was quenched with sat. NH 4 Cl (10 mL, aq. ) at 0 °C. The resulting mixture was extracted with EtOAc (50 mL ⁇ 2) .
  • Step 2-18b To a stirred mixture of the compound from Step 2-18a (170 mg, 341 ⁇ mol) in MeOH (2.0 mL) and THF (2.0 mL) was added HCl (4.0 N) (2 mL) at 25 °C under nitrogen atmosphere. The resulting mixture was stirred at 50 °C for 16 h. The reaction was quenched with sat. NaHCO 3 (10 mL, aq. ) at 0 °C. The resulting mixture was extracted with Dichloromethane (30 mL ⁇ 2) . The combined organic layers were dried over anhydrous sodium sulfate. After filtration, the filtrate was concentrated under reduced pressure.
  • Step 2-18 To a stirred mixture of the compound from Step 2-18b (93 mg, 354 ⁇ mol) and (4S) -4-ethyl-4-hydroxy-3, 4, 6, 7, 8, 10-hexahydro-1H-pyrano [3, 4-f] indolizine-3, 6, 10-trione (CAS110351-94-5) (93 mg, 354 ⁇ mol) in toluene (10 mL) was added PPTS (89 mg, 354 ⁇ mol) at 25 °C under nitrogen atmosphere. The resulting mixture was stirred at 110 °C for 10 h. The resulting mixture was concentrated under vacuum.
  • Step 2-30a To a stirred mixture of the compound 2-28 (30 mg, 61 ⁇ mol) and HATU (28 mg, 73 ⁇ mol) in DMF (2 mL) were added 2- ( (tert-butyldimethylsilyl) oxy) ethan-1-amine (12 mg, 73 ⁇ mol) and DIPEA (24 mg, 0.2 mmol) at 25°C under nitrogen atmosphere. The resulting mixture was stirred at 25°C for 2 h. The resulting mixture was diluted with water (60 mL) . The resulting mixture was extracted with EtOAc (20 mL ⁇ 2) . The combined organic layers were washed with brine (20 mL) , and dried over anhydrous sodium sulfate.
  • 2- (tert-butyldimethylsilyl) oxy) ethan-1-amine (12 mg, 73 ⁇ mol)
  • DIPEA 24 mg, 0.2 mmol
  • Step 3-1b A mixture of Step 3-1a (0.40 g, 1.25 mmol) , Fe (2.80 g, 50.11 mmol) and NH 4 Cl (4.42 g, 82.68mmol) in EA (20 mL) and H 2 O (12 mL) was stirred at 25 °C for 18 hours. The mixture was filtrated and extracted with EA (20 mL*3) . The mixture was concentrated and the residue was purified by silica-gel column chromatography (PE/EA with EA from 0 ⁇ 10%) to afford the desired compound (101 mg, 0.34 mmol, 27.5%) as a yellow solid. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 294.2.
  • Step 3-1 A mixture of Step 3-1b (101 mg, 0.34 mmol) , (4S) -4-ethyl-4-hydroxy-3, 4, 6, 7, 8, 10-hexahydro-1H-pyrano [3, 4-f] indolizine-3, 6, 10-trione (118 mg, 0.45 mmol) and pyridin-1-ium 4-methylbenzenesulfonate (112.5 mg, 0.45 mmol) in toluene (7 mL) was stirred at 120 °C for 18 hours. The mixture was concentrated and the residue was purified by Prep-HPLC (C18, 20-50 %acetonitrile in H 2 O with 0.01 %TFA) to afford the desired two compounds:
  • Step 3-20-1 A mixture of Step 3-1-1 (5 mg, 0.011 mmol) , FeSO 4 (5 mg, 0.033 mmol) , H 2 SO 4 (10 uL) , H 2 O 2 (0.1 mL, 30%) in H 2 O (0.1 mL) and MeOH (5 mL) was stired at 65 °C for 0.5 hours.
  • the reaction solution was cooled to 25 °C and purified by Prep-HPLC (C18, 20-50 %acetonitrile in H 2 O with 0.01 %TFA) to afford the desired compound 3-20-1 (0.8 mg, 0.002 mmol, 15.59%) as a yellow solid, that of chiral centers/relative configurations is the same as the compound 3-1-1.
  • Step 3-20-2 A mixture of Step 3-1-2 (13 mg, 0.029 mmol) , FeSO 4 (13 mg, 0.087 mmol) , H 2 SO 4 (25 uL) , H 2 O 2 (0.3 mL, 30%) in H 2 O (0.2 mL) and MeOH (10 mL) was stired at 65 °C for 0.5 hours.
  • the reaction solution was cooled to 25 °C and purified by Prep-HPLC (C18, 20-50 %acetonitrile in H 2 O with 0.01 %TFA) to afford the desired compound 3-20-2 (4.4 mg, 0.009 mmol, 32.52%) as a yellow solid, that of chiral centers/relative configurations is the same as the compound 3-1-2.
  • Step 1-1-a2 A mixture of Step 1-1-a1 (30 mg, 0.033 mmol) and diethylamine (47 uL, 0.62 mmol) in DMF (2 mL) was stirred at 0 °C for 2 hours. The solution was filtered and concentrated in vacuo to obtain the desired compound (crude 25 mg) as a brown solid, used in the next step without further purification.
  • Step 2-1-c3 A mixture of the compound from Step 2-1-c2 (100 mg, 0.114 mmol) (6- (2-(methylsulfonyl) pyrimidin-5-yl) hex-5-ynoyl) -L-serylglycine (47.19 mg, 0.114 mmol) , DIPEA (0.057 mL, 0.343 mmol) , HATU (65.26 mg, 0.172 mmol) in DMF (5 mL) was stirred at 15 °C for 2 hr. The mixture was concentrated in vacuo and the residue was purified to afford the desired product (30 mg, 20.7%yield) as a yellow solid.
  • Step 2-1-c A mixture of the compound from Step 2-1-c3 (25 mg, 0.020 mmol) , ZnBr 2 (44.38 mg, 0.197 mmol) in DCM (5 mL) was stirred at 15 °C for 18 hr. The mixture was concentrated in vacuo and the residue was purified by prep-HPLC (C18, 20-60 %acetonitrile in H 2 O with 0.1 %TFA) to afford the title compound (5.4 mg, 25%yield) as a yellow solid.
  • Step 2-1-d A mixture of the compound from Step 36a (25 mg, 0.018 mmol) , ZnBr 2 (12.29 mg, 0.055 mmol) in DCM (5 mL) was stirred at 15 °C for 18 hr. The mixture was concentrated in vacuo and the residue was purified by prep-HPLC (C18, 20-60 %acetonitrile in H2O with 0.1 %TFA) to afford the title compound (5.9 mg, 27%yield) as a yellow solid.
  • the conjugation was performed as follows. The sample buffer containing the antibodies was adjusted to the needed pH by dialysis at 4°C for 16 hours and adjusted to a concentration of 5 mg/ml. ⁇ 10 of TCEP (vs protein) was added to the sample buffer, shaken and incubated at 25 °C for 3 hours. Then relative equivalent (vs protein) drug-linkers dissolved in DMSO were added to the reaction sample directly, and incubated at 25 °C for 2 hours. Then 20 equivalent cysteine (vs protein) was added to the reaction sample to quench the reaction. Excess small molecules were removed by dialysis, and ADCs conjugated to drug-linkers were obtained.
  • ADCs were deglycosylated by using PNGase F (0.5 ⁇ L PNGase F enzyme was added into the sample and incubated at 37°C for 3hrs) .
  • the deglycosylated ADCs were reduced by DTT (DTT was added into the sample to 50mM and incubated at 37°C for 10min) , and injected into an Agilent 1290 UPLC (Agilent technologies, INC., Santa Clara, CA) coupled to a Time of Flight mass spectrometer (TOF-MS, X500B, AB Sceix) .
  • A431 cells mouse tumor model was used to study the anti-tumor activity of ADCs.
  • the pharmacodynamics of RP007T2-LP2-1-c and RP007T2-LP2-1-d and Control ADC RP007T2-MC-GGFG-DXd administered with 5mg/kg BIW 3 doses in A431 cells mouse model were studied, and the experimental design of ADCs in vivo pharmacodynamics is shown in Table 4.
  • A431 cells were subcutaneously inoculated into female Balb/c nude mice.
  • the ADCs group treatment method was as follows: on the 7 days after the tumor cell inoculation, the mice of each group were intraperitoneally injected with the corresponding ADC.
  • TGI% (RTV) of RP007T2-LP2-1-c and RP007T2-LP2-1-d 5 mg/kg
  • Control ADC RP007T2-MC-GGFG-DXd 5 mg/kg
  • RP007T2-LP2-1-c and RP007T2-LP2-1-d were administered to female and male BALB/c mice (9-10 weeks old, body weights ranging from 18.2 to 23.3 g of female mice, and 24.4 to 30.7 g of male mice at the initiation of dosing, sourced from GemPharmatech via 20 mL/kg tail intravenous injection at dose levels of 40, 80 and 140 mg/kg (12 animals/dose level) . Mice were observed for up to 22 days following dosing. Mice were euthanized if body weight reduced by ⁇ 20%for 72 hours from predose levels. Body weight change was monitored. Blood samples were collected for hematology tests, specifically detect the following items: WBC, NEUT, LYM, RBC, HGB, ALT, UREA.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Abstract

Camptothecin analogues of formula (I), (II), (III) and conjugates comprising the camptothecin analogues are described. The camptothecin analogues and conjugates may be used as therapeutic agents, particularly in the treatment of cancer, infectious disease, inflammatory disease, autoimmune disease and immunodeficiency disease.

Description

CAMPTOTHECIN ANALOGUES, CONJUGATES AND METHODS OF USE
CROSS-REFERENCE TO RELATED APPLICATION
This application claims priority to PCT Application PCT/CN2024/073046, filed on January 18, 2024, and PCT Application PCT/CN2024/143223, filed on December 27, 2024, the content of which is incorporated by reference in its entirety for all purposes.
FIELD OF THE INVENTION
The present disclosure relates to the field of therapeutics and, in particular, to camptothecin analogues, conjugates comprising the camptothecin analogues, and their use in therapy.
BACKGROUND OF THE INVENTION
Camptothecin is a natural product that inhibits topoisomerase I and has broad spectrum anti-tumor activity. Camptothecin, however, is poorly soluble making it unsuitable for clinical development. As such, considerable effort has been directed towards identifying analogues or derivatives of camptothecin with properties more suitable for therapeutic use. Two derivatives, irinotecan and topotecan, have been approved for treatment of cancer. Irinotecan is a prodrug, which is converted in vivo into SN-38, a more potent analogue. A third derivative, belotecan, has been approved in Korea.
Camptothecin analogues have also been developed as payloads for antibody-drug conjugates (ADCs) . Two such ADCs have been approved for treatment of cancer. Trastuzumab deruxtecan (EnhertuTM) in which the camptothecin analogue, deruxtecan (Dxd) , is conjugated to the anti-HER2 antibody, trastuzumab, via a cleavable tetrapeptide-based linker, and sacituzumab govitecan (TrodelvyTM) in which the camptothecin analogue, SN-38, is conjugated to the anti-Trop-2 antibody, sacituzumab, via a hydrolysable, pH-sensitive linker.
Other camptothecin analogues and derivatives, as well as ADCs comprising them have been described. See, for example, International (PCT) Publication Nos. WO 2019/195665; WO 2019/236954 and WO 2020/219287.
This background information is provided for the purpose of making known information believed by the applicant to be of possible relevance to the present disclosure. No admission is necessarily intended, nor should be construed, that any of the preceding information constitutes prior art against the claimed invention.
SUMMARY OF THE INVENTION
Described herein are camptothecin analogue compounds, conjugates comprising the compounds and methods of treatment using the compounds and conjugates. Specifically, we present the development of novel Camptothecin compounds, which have been designed for their application as an ADC payload. The novel Camptothecin compounds focuses on the structure-activity relationship, and the scope of preclinical ADC studies, in order to improve potency without increasing toxicity. The compounds of the present disclosure were elaborated into drug-linkers, conjugated to form ADCs, and evaluated in vitro and in vivo. The novel Camptothecin compounds of the present disclosure demonstrate excellent inhibitory activity, impressive efficacy in multiple cell line–derived xenograft models and noteworthy tolerability in healthy mice and other animals, paving the way for potential therapeutic advancements in cancers.
In a first aspect, provided is a compound of formula (I) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof:

wherein,
X is CRx or N, such as CH or N;
Rx is selected from H, halogen, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
R1 is selected from halogen, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
R2 is selected from NR2bR2c, - (CH2) m-C (O) R2a, - (CH2) m-C (O) OR2a, - (CH2) m-OC (O) R2a, - (CH2) m-S (O) 2-R2a, - (CH2) m-
S (O) -R2a, - (CH2) m-NHC (O) -R2a, - (CH2) m-C (O) NR2bR2c, - (CH2) m-NHC (O) OR2a and - (CH2) m-OC (O) NR2bR2c and - (CH2) m-NHC (O) NR2bR2c;
R2a, R2b and R2c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2; 
each m is independently selected from 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
R3 is selected from H, - (CH2) pOR3a, - (CH2) pC (O) R3a, - (CH2) pC (O) OR3a, - (CH2) pOC (O) R3a, - (CH2) p-S (O) 2-R3a, - (CH2) p-
S (O) -R3a, - (CH2) p-NR3bR3c, - (CH2) p-NHC (O) -R3a, - (CH2) p-C (O) NR3bR3c, - (CH2) p-NHC (O) OR3a, - (CH2) p-OC (O) NR3bR3c and - (CH2) p-NHC (O) NR3bR3c;
R3a, R3b and R3c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkylene-OH, C1-6 alkylene-OC1-6 
alkyl, C1-6 alkylene-NH2, C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) and C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2;
or, R3b, R3c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl, 3-12 
membered heterocyclyl, C6-10 aryl or 5-12 membered heteroaryl;
each p is independently selected from 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
wherein, R2 and R3 are optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R group (s) , R is selected from H, NH2, OH, CN, 
halogen, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl.
In another aspect, the present disclosure provides a conjugate disclosed herein, the conjugate may be represented by L1- (D1) x, preferably, the conjugate may be represented by T1- [L1’- (D1) x] w;
wherein, T1 is a targeting moiety;
L1 is a linker, and L1’ is a divalent group formed by the connection between T1 and L1;
D1 is a drug moiety, which is selected from the compound of formula (I) ;
x is an integer between 1 and 10;
w is an integer between 1 and 10.
In another aspect, provided is a compound of formula (II) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof:

wherein,
R4 and R5 is independently selected from H, halogen, OH, NH2, N (C1-6 alkyl) 2, NH-C1-6 alkyl, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, 
C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
or, preferably, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl, 3-12 
membered heterocyclyl, C6-10 aryl or 5-12 membered heteroaryl, wherein, the C3-10 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclyl, C6-10 aryl and 5-12 membered heteroaryl are optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
R6 is selected from H, - (CH2) n-OR6a, - (CH2) n-C (O) OR6a, - (CH2) n-OC (O) R6a, - (CH2) n-C (O) R6a, - (CH2) n-S (O) 2-R6a, - 
(CH2) n-S (O) -R6a, - (CH2) n-OP (O) (OH) -OR6a, - (CH2) n-OP (S) (OH) -OR6a, - (CH2) n-NHC (O) -R6a, - (CH2) n-NHC (O) NR6bR6c, - (CH2) n-NHC (O) OR6a, - (CH2) n-OC (O) NR6bR6c, - (CH2) n-C (O) NR6bR6c, - (CH2) n-CH2NR6bR6c, - (CH2) n-3-7 membered heterocyclylene- (CH2) n-OR6a, and - (CH2) n-3-7 membered heterocyclylene- (CH2) n-R6a;
R6a, R6b and R6c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C3-7 cycloalkyl, 3-7 membered heterocyclyl, 
C1-6 alkylene-OH, C1-6 alkylene-OC1-6 alkyl, C1-6 alkylene-NH2, C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) and C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2;
each n is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
wherein, R6 is optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R*group (s) , R*is selected from H, NH2, OH, CN, halogen, C1-
6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl.
In another aspect, the present disclosure provides a conjugate disclosed herein, the conjugate may be represented by L2- (D2) y, preferably, the conjugate may be represented by T2- [L2’- (D2) y] u;
wherein, T2 is a targeting moiety;
L2 is a linker, and L2’ is a divalent group formed by the connection between L2 and T2;
D2 is a drug moiety, which is selected from the compound of formula (II) ;
y is an integer between 1 and 10;
u is an integer between 1 and 10.
In another aspect, provided is a compound of formula (III) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof:

wherein,
R7 and R8 are independently selected from C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkenyl, C1-6 alkynyl, - (CH2) k-OR7a, - (CH2) k-
NR7bR7c, - (CH2) k-C (O) R7a, - (CH2) k-C (O) OR7a, - (CH2) k-OC (O) -R7a, - (CH2) k-NHC (O) -R7a, - (CH2) k-NHC (O) O-R7a, - (CH2) k-OC (O) NH-R7a and - (CH2) k-C (O) NR7bR7c;
R7a, R7b and R7c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkenyl, C1-6 alkynyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkylene-
OH, C1-6 alkylene-OC1-6 alkyl, C1-6 alkylene-NH2, C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) and C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2;
each k is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
R9 is selected from H, OH, CN, NH2, NH (C1-6 alkyl) and N (C1-6 alkyl) 2, such as H or NH2;
R10 is selected from H, - (CH2) q-OR10a, - (CH2) q-NR10bR10c, - (CH2) q-C (O) R10a, - (CH2) q-C (O) OR10a, - (CH2) q-OC (O) R10a, 
- (CH2) q-S (O) 2-R10a, - (CH2) q-S (O) -R10a, - (CH2) q-NHC (O) -R10a, - (CH2) q-C (O) NR10bR10c, - (CH2) q-NHC (O) -OR10a and - (CH2) q-OC (O) NR10bR10c;
R10a, R10b and R10c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkylene-OH, C1-6 alkylene-OC1-6 
alkyl, C1-6 alkylene-NH2, C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) and C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2;
or, R10b, R10c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl, 3-12 
membered heterocyclyl, C6-10 aryl or 5-12 membered heteroaryl, wherein, the C3-10 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclyl, C6-10 aryl and 5-12 membered heteroaryl are optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
each q is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
wherein, R7, R8, R9 and R10 are optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R# group (s) , R# is selected from H, NH2, OH, 
CN, halogen, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl.
In another aspect, the present disclosure provides a conjugate disclosed herein, the conjugate may be represented by L3- (D3) z, preferably, the conjugate may be represented by T3- [L3’- (D3) z] r;
wherein, T3 is a targeting moiety;
L3 is a linker, and L3’ is a divalent group formed by the connection between T3 and L3;
D3 is a drug moiety, which is selected from the compound of formula (III) ;
z is an integer between 1 and 10;
r is an integer between 1 and 10.
In another aspect, the present disclosure provides a conjugate disclosed herein, the conjugate may be an ADC or a LDC, preferabaly, the conjugate is an ADC.
In another aspect, the present disclosure provides a composition comprising the compound described herein, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof and optionally a pharmaceutically acceptable carrier or excipient.
In another aspect, the present disclosure provides a use of the compound described herein, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof or the composition described herein in the manufacture of a medicament for treating and/or preventing a disease.
In another aspect, the present disclosure provides the compound described herein, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, or the composition described herein, for use in treating and/or preventing a disease.
In another aspect, the present disclosure provides a method for preventing and/or treating a disease in a subject in need thereof, comprising administrating to the subject the compound, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof described herein, or the composition described herein.
In a specific embodiment, the method further comprises administering to the subject a second therapeutic agent, preferably wherein the second therapeutic agent is selected from an antibody, a chemotherapeutic agent and a small molecule drug.
In a specific embodiment, the disease is selected from a cancer, an infectious disease, an inflammatory disease, an autoimmune disease and an immunodeficiency disease.
In a specific embodiment, the cancer is selected from head and neck cancer, esophageal cancer, lung cancer, colon cancer, rectal cancer, stomach cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, prostate cancer, breast cancer, leukemia, myeloma, epithelial squamous cell cancer, melanoma, brain cancer, cervical cancer, liver cancer, bladder cancer, breast cancer, renal cancer, testicular cancer, and thyroid cancer;
In a specific embodiment, the autoimmune disease is selected from systemic sclerosis and atherosclerosis.
It is to be understood that one, some, or all of the properties of the various embodiments described herein may be combined to form other embodiments of the present disclosure. These and other aspects of the disclosure will become apparent to one of skill in the art. These and other embodiments of the disclosure are further described by the detailed description that follows.
DEFINITIONS
Listed below are definitions of various terms used to describe this invention. These definitions apply to the terms as they are used throughout this specification and claims, unless otherwise limited in specific instances, either individually or as part of a larger group.
Chemical definitions
When a range of values is listed, it is intended to encompass each value and sub-range within the range. For example “C1-6 alkyl” is intended to include C1, C2, C3, C4, C5, C6, C1-6, C1-5, C1-4, C1-3, C1-2, C2-6, C2-5, C2-4, C2-3, C3-6, C3- 5, C3-4, C4-6, C4-5 and C5-6 alkyl.
“C1-6 alkyl” refers to a radical of a straight or branched, saturated hydrocarbon group having 1 to 6 carbon atoms. In some embodiments, C1-4 alkyl is preferred. Examples of C1-6 alkyl include methyl (C1) , ethyl (C2) , n-propyl (C3) , iso-propyl (C3) , n-butyl (C4) , tert-butyl (C4) , sec-butyl (C4) , iso-butyl (C4) , n-pentyl (C5) , 3-pentyl (C5) , pentyl (C5) , neopentyl (C5) , 3-methyl-2-butyl (C5) , tert-pentyl (C5) and n-hexyl (C6) . The term “C1-6 alkyl” also includes heteroalkyl, wherein one or more (e.g., 1, 2, 3 or 4) carbon atoms are subsituted with heteroatoms (e.g., oxygen, sulfur, nitrogen, boron, silicon, phosphorus) . Alkyl groups can be optionally substituted with one or more substituents, for example, with 1 to 5 substituents, 1 to 3 substituents or 1 substituent. Conventional abbreviations of alkyl include Me (-CH3) , Et (-CH2CH3) , iPr (-CH (CH3) 2) , nPr (-CH2CH2CH3) , n-Bu (-CH2CH2CH2CH3) or i-Bu (-CH2CH (CH3) 2) .
“C1-6 alkoxy” employed alone or in combination with other terms means, unless otherwise stated, an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms connected to the rest of the molecule via an oxygen atom, such as, for example, methoxy, ethoxy, 1-propoxy, 2-propoxy (isopropoxy) and the higher homologs and isomers. In some embodiments, C1-4 alkoxy is preferred.
“C2-6 alkenyl” refers to a radical of a straight or branched hydrocarbon group having 2 to 6 carbon atoms and at least one carbon-carbon double bond. In some embodiments, C2-4 alkenyl is preferred. Examples of C2-6 alkenyl include vinyl (C2) , 1-propenyl (C3) , 2-propenyl (C3) , 1-butenyl (C4) , 2-butenyl (C4) , butadienyl (C4) , pentenyl (C5) , pentadienyl (C5) , hexenyl (C6) , etc. The term “C2-6 alkenyl” also includes heteroalkenyl, wherein one or more (e.g., 1, 2, 3 or 4) carbon atoms are replaced by heteroatoms (e.g., oxygen, sulfur, nitrogen, boron, silicon, phosphorus) . The alkenyl groups can be optionally substituted with one or more substituents, for example, with 1 to 5 substituents, 1 to 3 substituents or 1 substituent.
“C2-6 alkynyl” refers to a radical of a straight or branched hydrocarbon group having 2 to 6 carbon atoms, at least one carbon-carbon triple bond, and optionally one or more carbon-carbon double bonds. In some embodiments, C2-4 alkynyl is preferred. Examples of C2-6 alkynyl include, but are not limited to, ethynyl (C2) , 1-propynyl (C3) , 2-propynyl (C3) , 1-butynyl (C4) , 2-butynyl (C4) , pentynyl (C5) , hexynyl (C6) , etc. The term “C2-6 alkynyl” also includes heteroalkynyl, wherein one or more (e.g., 1, 2, 3 or 4) carbon atoms are replaced by heteroatoms (e.g., oxygen, sulfur, nitrogen, boron, silicon, phosphorus) . The alkynyl groups can be substituted with one or more substituents, for example, with 1 to 5 substituents, 1 to 3 substituents or 1 substituent.
“C0-6 alkylene” refers to a bond or a divalent group formed by removing another hydrogen of the C1-6 alkyl, and can be a substituted or unsubstituted alkylene. In some embodiments, C1-4 alkylene is preferred. The unsubstituted alkylene groups include, but are not limited to, methylene (-CH2-) , ethylene (-CH2CH2-) , propylene (-CH2CH2CH2-) , butylene (-CH2CH2CH2CH2-) , pentylene (-CH2CH2CH2CH2CH2-) , hexylene (-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-) , etc. Examples of substituted alkylene groups, such as those substituted with one or more alkyl (methyl) groups, include, but are not limited to, substituted methylene (-CH (CH3) -, -C (CH3) 2-) , substituted ethylene (-CH (CH3) CH2-, -CH2CH (CH3) -, -C (CH3) 2CH2-, -CH2C (CH3) 2-) , substituted propylene (-CH (CH3) CH2CH2-, -CH2CH (CH3) CH2-, -CH2CH2CH (CH3) -, -C (CH3) 2CH2CH2-, -CH2C (CH3) 2CH2-, -CH2CH2C (CH3) 2-) , etc.
“C2-6 alkenylene” refers to a divalent group formed by removing another hydrogen of the C2-6 alkenyl and can be substituted or unsubstituted alkenylene. In some embodiments, C2-4 alkenylene is preferred. Exemplary unsubstituted alkenylene groups include, but are not limited to, ethenylene (-CH=CH-) and propenylene (e.g., -CH=CHCH2-, -CH2-CH=CH-) . Exemplary substituted alkenylene groups, e.g., substituted with one or more alkyl (methyl) groups, include but are not limited to, substituted ethenylene (-C (CH3) =CH-, -CH=C (CH3) -) , substituted propenylene (e.g., -C (CH3) =CHCH2-, -CH=C (CH3) CH2-, -CH=CHCH (CH3) -, -CH=CHC (CH3) 2-, -CH (CH3) -CH=CH-, -C (CH3) 2-CH=CH-, -CH2-C (CH3) =CH-, -CH2-CH=C (CH3) -) , and the like.
“C2-6 alkynylene” refers to a divalent group formed by removing another hydrogen of the C2-6 alkynyl and can be substituted or unsubstituted alkynylene. In some embodiments, C2-4 alkynylene is preferred. Exemplary alkynylene groups include, but are not limited to, ethynylene (-C≡C-) , substituted or unsubstituted propynylene (-C≡CCH2-) , and the like.
“Halo” or “halogen” refers to fluorine (F) , chlorine (Cl) , bromine (Br) and iodine (I) .
“C1-6 haloalkyl” means the above “C1-6 alkyl” which is substituted with one or more halogen groups. “C1-6 haloalkoxyl” means the above “C1-6 alkoxyl” which is substituted with one or more halogen groups. Examples include mono-, di-, and poly-halogenated, including perhalogenated, alkyl. A monohalogen substituent in the group may be an iodine, bromine, chlorine or fluorine atom; dihalogen substituents and polyhalogen substituents may be two or more identical halogen atoms or a combination of different halogens. Examples of preferred haloalkyl groups include monofluoromethyl, difluoromethyl, trifluoromethyl, chloromethyl, dichloromethyl, trichloromethyl, pentafluoroethyl, heptafluoropropyl, difluorochloromethyl, dichlorofluoromethyl, difluoroethyl, difluoropropyl, dichloroethyl and dichloropropyl. The haloalkyl group can be substituted at any available point of attachment, for example, with 1 to 5 substituents, 1 to 3 substituents or 1 substituent.
“C3-10 cycloalkyl” refers to a radical of a non-aromatic cyclic hydrocarbon group having from 3 to 10 ring carbon atoms and zero heteroatom. In some embodiments, C3-7 cycloalkyl is especially preferred, C4-6 cycloalkyl is more preferred, and C3-5 cycloalkyl is even more preferred. Cycloalkyl also includes ring systems wherein the cycloalkyl ring, as defined above, is fused with one or more aryl or heteroaryl groups wherein the point of attachment is on the cycloalkyl ring, and in such instances, the number of carbons continues to designate the number of carbons in the cycloalkyl ring system. Exemplary cycloalkyl groups include, but is not limited to, cyclopropyl (C3) , cyclopropenyl (C3) , cyclobutyl (C4) , cyclobutenyl (C4) , cyclopentyl (C5) , cyclopentenyl (C5) , cyclohexyl (C6) , cyclohexenyl (C6) , cyclohexadienyl (C6) , cycloheptyl (C7) , cycloheptenyl (C7) , cycloheptadienyl (C7) , cycloheptatrienyl (C7) , and the like.
The terms “heterocyclic” , “heterocyclyl” or “heterocycloalkyl” can be used interchangeably and referred to a non-aromatic ring or a bi-or tri-cyclic group fused, bridged or spiro system, where (i) each ring system contains at least one heteroatom independently selected from oxygen, sulfur and nitrogen, (ii) each ring system can be saturated or unsaturated (iii) the nitrogen and sulfur heteroatoms may optionally be oxidized, (iv) the nitrogen heteroatom may optionally be quaternized, (v) any of the above rings may be fused to an aromatic ring, and (vi) the remaining ring atoms are carbon atoms which may be optionally oxo-substituted or optionally substituted with exocyclic olefinic, iminic or oximic double bond.
“3-12 membered heterocyclyl” refers to a radical of a 3-to 12-membered non-aromatic ring system having ring carbon atoms and 1 to 6 ring heteroatoms, wherein each heteroatom is independently selected from nitrogen, oxygen, sulfur, boron, phosphorus, and silicon. In heterocyclyl groups that contain one or more nitrogen atoms, the point of attachment can be a carbon or nitrogen atom, as long as valency permits. In some embodiments, 5-to 10-membered heterocyclyl is preferred, which is a radical of a 5-to 10-membered non-aromatic ring system having ring carbon atoms and 1 to 5 ring heteroatoms; in some embodiments, 5-to 6-membered heterocyclyl is preferred, which is a radical of a 5-to 6-membered non-aromatic ring system having ring carbon atoms and 1 to 4 ring heteroatoms. Heterocyclyl also includes ring systems wherein the heterocyclyl ring, as defined above, is fused with one or more cycloalkyl groups, and the point of attachment is on the cycloalkyl ring; or wherein the heterocyclyl ring, as defined above, is fused with one or more aryl or heteroaryl groups, and the point of attachment is on the heterocyclyl ring; and in such instances, the number of ring members continues to designate the number of ring members in the heterocyclyl ring system. Exemplary 3-membered heterocyclyl groups containing one heteroatom include, but are not limited to, azirdinyl, oxiranyl, and thiorenyl. Exemplary 4-membered heterocyclyl groups containing one heteroatom include, but are not limited to, azetidinyl, oxetanyl and thietanyl. Exemplary 5-membered heterocyclyl groups containing one heteroatom include, but are not limited to, tetrahydrofuranyl, dihydrofuranyl, tetrahydrothiophenyl, dihydrothiophenyl, pyrrolidinyl, dihydropyrrolyl and pyrrolyl-2, 5-dione. Exemplary 5-membered heterocyclyl groups containing two heteroatoms include, but are not limited to, dioxolanyl, oxasulfuranyl, disulfuranyl, and oxazolidin-2-one. Exemplary 5-membered heterocyclyl groups containing three heteroatoms include, but are not limited to, triazolinyl, oxadiazolinyl, and thiadiazolinyl. Exemplary 6-membered heterocyclyl groups containing one heteroatom include, but are not limited to, piperidinyl, tetrahydropyranyl, dihydropyridinyl, and thianyl. Exemplary 6-membered heterocyclyl groups containing two heteroatoms include, but are not limited to, piperazinyl, morpholinyl, dithianyl, and dioxanyl. Exemplary 6-membered heterocyclyl groups containing three heteroatoms include, but are not limited to, triazinanyl. Exemplary 7-membered heterocyclyl groups containing one heteroatom include, but are not limited to, azepanyl, oxepanyl and thiepanyl. Exemplary 5-membered heterocyclyl groups fused to a C6 aryl ring (also referred to herein as a 5, 6-bicyclic heterocyclic ring) include, but are not limited to, indolinyl, isoindolinyl, dihydrobenzofuranyl, dihydrobenzothienyl, benzoxazolinonyl, and the like. Exemplary 6-membered heterocyclyl groups fused to a C6 aryl ring (also referred to herein as a 6, 6-bicyclic heterocyclic ring) include, but are not limited to, tetrahydroquinolinyl, tetrahydroisoquinolinyl, and the like.
The 3-to 12-membered heterocyclyl also includes a spiroheterocyclic group, that is, a group in which two rings (e.g., a heterocyclyl and a carbocyclyl) share one carbon atom, wherein at least one ring is a heterocyclyl as defined above. More specifically, the spiroheterocyclyl is a spiro ring formed by two 4-membered rings, two 5-membered rings, two 6-membered rings, one 4-membered ring and one 5-membered ring, one 4-membered ring and one 6-membered ring, or one 5-membered ring and one 6-membered ring, wherein at least one ring is a 4-to 6-membered heterocyclyl as defined above, a 4-to 6-membered heterocyclyl containing 1, 2 or 3 O, N or S heteroatoms is preferred, and a 4-to 6-membered heterocyclyl containing 1 N heteroatom is more preferred. Specific spiroheterocyclyl groups include, but are not limited to:
“C6-10 aryl” refers to a radical of a monocyclic or polycyclic (e.g., bicyclic) 4n+2 aromatic ring system (e.g., having 6 or 10 π electrons shared in a cyclic array) having 6-10 ring carbon atoms and zero heteroatom. In some embodiments, an aryl group has six ring carbon atoms ( “C6 aryl” ; e.g., phenyl) . In some embodiments, an aryl group has ten ring carbon atoms ( “C10 aryl” ; e.g., naphthyl such as 1-naphthyl and 2-naphthyl) . Aryl also includes ring systems wherein the aryl ring, as defined above, is fused with one or more cycloalkyl, or heterocyclyl groups and the point of attachment is on the aryl ring, and in such instances, the number of carbon atoms continues to designate the number of carbon atoms in the aryl ring system.
“5-to 12-membered heteroaryl” refers to a radical of a 5-12 membered monocyclic or bicyclic 4n+2 aromatic ring system (e.g., having 6 or 10 π electrons shared in a cyclic array) having ring carbon atoms and 1-6 ring heteroatoms, wherein each heteroatom is independently selected from nitrogen, oxygen and sulfur. In heteroaryl groups that contain one or more nitrogen atoms, the point of attachment can be a carbon or nitrogen atom, as long as valency permits. Heteroaryl bicyclic ring systems can include one or more heteroatoms in one or both rings. Heteroaryl further includes ring systems wherein the heteroaryl ring, as defined above, is fused with one or more cycloalkyl, or heterocyclyl groups and the point of attachment is on the heteroaryl ring, and in such instances, the number of ring members continues to designate the number of ring members in the heteroaryl ring system. In some embodiments, 5-to 10-membered heteroaryl is especially preferred, which is a radical of a 5-10 membered monocyclic or bicyclic 4n+2 aromatic ring system having ring carbon atoms and 1-6 ring heteroatoms. In some embodiments, 5-to 6-membered heteroaryl is especially preferred, which is a radical of a 5-6 membered monocyclic or bicyclic 4n+2 aromatic ring system having ring carbon atoms and 1-4 ring heteroatoms. Exemplary 5-membered heteroaryl groups containing one heteroatom include, but are not limited to, pyrrolyl, furanyl and thiophenyl. Exemplary 5-membered heteroaryl groups containing two heteroatoms include, but are not limited to, imidazolyl, pyrazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, thiazolyl, and isothiazolyl. Exemplary 5-membered heteroaryl groups containing three heteroatoms include, but are not limited to, triazolyl, oxadiazolyl (e.g., 1, 2, 4-oxadiazolyl) , and thiadiazolyl. Exemplary 5-membered heteroaryl groups containing four heteroatoms include, but are not limited to, tetrazolyl. Exemplary 6-membered heteroaryl groups containing one heteroatom include, but are not limited to, pyridinyl. Exemplary 6-membered heteroaryl groups containing two heteroatoms include, but are not limited to, pyridazinyl, pyrimidinyl, and pyrazinyl. Exemplary 6-membered heteroaryl groups containing three or four heteroatoms include, but are not limited to, triazinyl and tetrazinyl, respectively. Exemplary 7-membered heteroaryl groups containing one heteroatom include, but are not limited to, azepinyl, oxepinyl, and thiepinyl. Exemplary 5, 6-bicyclic heteroaryl groups include, but are not limited to, indolyl, isoindolyl, indazolyl, benzotriazolyl, benzothiophenyl, isobenzothiophenyl, benzofuranyl, benzoisofuranyl, benzimidazolyl, benzoxazolyl, benzisoxazolyl, benzoxadiazolyl, benzthiazolyl, benzisothiazolyl, benzthiadiazolyl, indolizinyl, and purinyl. Exemplary 6, 6-bicyclic heteroaryl groups include, but are not limited to, naphthyridinyl, pteridinyl, quinolinyl, isoquinolinyl, cinnolinyl, quinoxalinyl, phthalazinyl, and quinazolinyl.
It is understood that any alkyl, alkoxyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, aryl, heteroaryl, heterocyclyl, or the like, described herein can also be a divalent or multivalent group when used as a linkage to connect two or more groups or substituents, which can be at the same or different atom (s) . One of skill in the art can readily determine the valence of any such group from the context in which it occurs.
The term “optionally substituted” , as used herein, means that the referenced group may be substituted or unsubstituted. In one embodiment, the referenced group is optionally substituted with zero substituents, i.e., the referenced group is unsubstituted. In another embodiment, the referenced group is optionally substituted with one or more additional group (s) individually and independently selected from groups described herein.
The term “hydrogen” includes hydrogen and deuterium. In addition, the recitation of an atom includes other isotopes of that atom so long as the resulting compound is pharmaceutically acceptable.
Alkyl, alkoxy, alkenyl, alkynyl, alkylene, alkenylene, alkynylene, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, and heteroaryl groups, as defined herein, are optionally substituted groups. In general, the term “substituted” , whether preceded by the term “optionally” or not, means that at least one hydrogen present on a group (e.g., a carbon or nitrogen atom) is replaced with a permissible substituent, e.g., a substituent which upon substitution results in a stable compound, e.g., a compound which does not spontaneously undergo transformation such as by rearrangement, cyclization, elimination, or other reaction. Unless otherwise indicated, a “substituted” group has a substituent at one or more substitutable positions of the group, and when more than one position in any given structure is substituted, the substituent is either the same or different at each position. The term “substituted” is contemplated to include substitution with all permissible substituents of organic compounds, any of the substituents described herein that results in the formation of a stable compound. For purposes of this invention, heteroatoms such as nitrogen may have hydrogen substituents and/or any suitable substituent as described herein which satisfy the valencies of the heteroatoms and results in the formation of a stable moiety.
Exemplary substituents on a carbon atom include, but are not limited to, halogen, -CN, -NO2, -N3, -SO2H, -SO3H, -OH, -ORaa, -ON (Rbb) 2, -N (Rbb) 2, -N (Rbb) 3 +X-, -N (ORcc) Rbb, -SH, -SRaa, -SSRcc, -C (=O) Raa, -CO2H, -CHO, -C (ORcc) 2, -CO2Raa, -OC (=O) Raa, -OCO2Raa, -C (=O) N (Rbb) 2, -OC (=O) N (Rbb) 2, -NRbbC (=O) Raa, -NRbbCO2Raa, -NRbbC (=O) N (Rbb) 2, -C (=NRbb) Raa, -C (=NRbb) ORaa, -OC (=NRbb) Raa, -OC (=NRbb) ORaa, -C (=NRbb) N (Rbb) 2, -OC (=NRbb) N (Rbb) 2, -NRbbC (=NRbb) N (Rbb) 2, -C (=O) NRbbSO2Raa, -NRbbSO2Raa, -SO2N (Rbb) 2, -SO2Raa, -SO2ORaa, -OSO2Raa, -S (=O) Raa, -OS (=O) Raa, -Si (Raa) 3, -OSi (Raa) 3, -C (=S) N (Rbb) 2, -C (=O) SRaa, -C (=S) SRaa, -SC (=S) SRaa, -SC (=O) SRaa, -OC (=O) SRaa, -SC (=O) ORaa, -SC (=O) Raa, -P (=O) 2Raa, -OP (=O) 2Raa, -P (=O) (Raa) 2, -OP (=O) (Raa) 2, -OP (=O) (ORcc) 2, -P (=O) 2N (Rbb) 2, -OP (=O) 2N (Rbb) 2, -P (=O) (NRbb) 2, -OP (=O) (NRbb) 2, -NRbbP (=O) (ORcc) 2, -NRbbP (=O) (NRbb) 2, -P (Rcc) 2, -P (Rcc) 3, -OP (Rcc) 2, -OP (Rcc) 3, -B (Raa) 2, -B (ORcc) 2, -BRaa (ORcc) , alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, carbocyclyl, heterocyclyl, aryl, and heteroaryl, wherein each alkyl, alkenyl, alkynyl, carbocyclyl, heterocyclyl, aryl, and heteroaryl is independently substituted with 0, 1, 2, 3, 4, or 5 Rdd groups;
or two geminal hydrogens on a carbon atom are replaced with the group =O, =S, =NN (Rbb) 2, =NNRbbC (=O) Raa, 
=NNRbbC (=O) ORaa, =NNRbbS (=O) 2Raa, =NRbb, or =NORcc;
each instance of Raa is, independently, selected from alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, carbocyclyl, heterocyclyl, aryl, 
and heteroaryl, or two Raa groups are joined to form a heterocyclyl or heteroaryl ring, wherein each alkyl, alkenyl, alkynyl, carbocyclyl, heterocyclyl, aryl, and heteroaryl is independently substituted with 0, 1, 2, 3, 4, or 5 Rdd groups;
each instance of Rbb is, independently, selected from hydrogen, -OH, -ORaa, -N (Rcc) 2, -CN, -C (=O) Raa, -C (=O) N (Rcc) 2, 
-CO2Raa, -SO2Raa, -C (=NRcc) ORaa, -C (=NRcc) N (Rcc) 2, -SO2N (Rcc) 2, -SO2Rcc, -SO2ORcc, -SORaa, -C (=S) N (Rcc) 2, -C (=O) SRcc, -C (=S) SRcc, -P (=O) 2Raa, -P (=O) (Raa) 2, -P (=O) 2N (Rcc) 2, -P (=O) (NRcc) 2, alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, carbocyclyl, heterocyclyl, aryl, and heteroaryl, or two Rbb groups are joined to form a heterocyclyl or heteroaryl ring, wherein each alkyl, alkenyl, alkynyl, carbocyclyl, heterocyclyl, aryl, and heteroaryl is independently substituted with 0, 1, 2, 3, 4, or 5 Rdd groups;
each instance of Rcc is, independently, selected from hydrogen, alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, carbocyclyl, 
heterocyclyl, aryl, and heteroaryl, or two Rcc groups are joined to form a heterocyclyl or heteroaryl ring, wherein each alkyl, alkenyl, alkynyl, carbocyclyl, heterocyclyl, aryl, and heteroaryl is independently substituted with 0, 1, 2, 3, 4, or 5 Rdd groups;
each instance of Rdd is, independently, selected from halogen, -CN, -NO2, -N3, -SO2H, -SO3H, -OH, -ORee, -ON (Rff) 2, -
N (Rff) 2, -N (Rff) 3 +X-, -N (ORee) Rff, -SH, -SRee, -SSRee, -C (=O) Ree, -CO2H, -CO2Ree, -OC (=O) Ree, -OCO2Ree, -C (=O) N (Rff) 2, -OC (=O) N (Rff) 2, -NRffC (=O) Ree, -NRffCO2Ree, -NRffC (=O) N (Rff) 2, -C (=NRff) ORee, -OC (=NRff) Ree, -OC (=NRff) ORee, -C (=NRff) N (Rff) 2, -OC (=NRff) N (Rff) 2, -NRffC (=NRff) N (Rff) 2, -NRffSO2Ree, -SO2N (Rff) 2, -SO2Ree, -SO2ORee, -OSO2Ree, -S (=O) Ree, -Si (Ree) 3, -OSi (Ree) 3, -C (=S) N (Rff) 2, -C (=O) SRee, -C (=S) SRee, -SC (=S) SRee, -P (=O) 2Ree, -P (=O) (Ree) 2, -OP (=O) (Ree) 2, -OP (=O) (ORee) 2, alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, carbocyclyl, heterocyclyl, aryl, and heteroaryl, wherein each alkyl, alkenyl, alkynyl, carbocyclyl, heterocyclyl, aryl, and heteroaryl is independently substituted with 0, 1, 2, 3, 4, or 5 Rgg groups, or two geminal Rdd substituents can be joined to form =O or =S;
each instance of Ree is, independently, selected from alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, carbocyclyl, aryl, heterocyclyl, 
and heteroaryl, wherein each alkyl, alkenyl, alkynyl, carbocyclyl, heterocyclyl, aryl, and heteroaryl is independently substituted with 0, 1, 2, 3, 4, or 5 Rgg groups;
each instance of Rff is, independently, selected from hydrogen, alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, carbocyclyl, 
heterocyclyl, aryl and heteroaryl, or two Rff groups are joined to form a heterocyclyl or heteroaryl ring, wherein each alkyl, alkenyl, alkynyl, carbocyclyl, heterocyclyl, aryl, and heteroaryl is independently substituted with 0, 1, 2, 3, 4, or 5 Rgg groups; and
each instance of Rgg is, independently, halogen, -CN, -NO2, -N3, -SO2H, -SO3H, -OH, -OC1-6 alkyl, -ON (C1-6 alkyl) 2, -
N (C1-6 alkyl) 2, -N (C1-6 alkyl) 3 +X-, -NH (C1-6 alkyl) 2 +X-, -NH2 (C1-6 alkyl) +X-, -NH3 +X-, -N (OC1-6 alkyl) (C1-6 alkyl) , -N (OH) (C1-6 alkyl) , -NH (OH) , -SH, -SC1-6 alkyl, -SS (C1-6 alkyl) , -C (=O) (C1-6 alkyl) , -CO2H, -CO2 (C1-6 alkyl) , -OC (=O) (C1-6 alkyl) , -OCO2 (C1-6 alkyl) , -C (=O) NH2, -C (=O) N (C1-6 alkyl) 2, -OC (=O) NH (C1-6 alkyl) , -NHC (=O) (C1-6 alkyl) , -N (C1-6 alkyl) C (=O) (C1-6 alkyl) , -NHCO2 (C1-6 alkyl) , -NHC (=O) N (C1-6 alkyl) 2, -NHC (=O) NH (C1-6 alkyl) , -NHC (=O) NH2, -C (=NH) O (C1-6 alkyl) , -OC (=NH) (C1-6 alkyl) , -OC (=NH) OC1-6 alkyl, -C (=NH) N (C1-6 alkyl) 2, -C (=NH) NH (C1-6 alkyl) , -C (=NH) NH2, -OC (=NH) N (C1-6 alkyl) 2, -OC (NH) NH (C1-6 alkyl) , -OC (NH) NH2, -NHC (NH) N (C1-6 alkyl) 2, -NHC (=NH) NH2, -NHSO2 (C1-6 alkyl) , -SO2N (C1-6 alkyl) 2, -SO2NH (C1-6 alkyl) , -SO2NH2, -SO2C1-6 alkyl, -SO2OC1-6 alkyl, -OSO2C1-6 alkyl, -SOC1-6 alkyl, -Si (C1-6 alkyl) 3, -OSi (C1-6 alkyl) 3 -C (=S) N (C1-6 alkyl) 2, C (=S) NH (C1-6 alkyl) , C (=S) NH2, -C (=O) S (C1-6 alkyl) , -C (=S) SC1-6 alkyl, -SC (=S) SC1-6 alkyl, -P (=O) 2 (C1-6 alkyl) , -P (=O) (C1-6 alkyl) 2, -OP (=O) (C1-6 alkyl) 2, -OP (=O) (OC1-6 alkyl) 2, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C2-C6 alkenyl, C2-C6 alkynyl, C3-C7 carbocyclyl, C6-C10 aryl, C3-C7 heterocyclyl, C5-C10 heteroaryl; or two geminal Rgg substituents can be joined to form =O or =S; wherein X-is a counterion.
Exemplary substituents on a nitrogen atom include, but are not limited to, hydrogen, -OH, -ORaa, -N (Rcc) 2, -CN, -C (=O) Raa, -C (=O) N (Rcc) 2, -CO2Raa, -SO2Raa, -C (=NRbb) Raa, -C (=NRcc) ORaa, -C (=NRcc) N (Rcc) 2, -SO2N (Rcc) 2, -SO2Rcc, -SO2ORcc, -SORaa, -C (=S) N (Rcc) 2, -C (=O) SRcc, -C (=S) SRcc, -P (=O) 2Raa, -P (=O) (Raa) 2, -P (=O) 2N (Rcc) 2, -P (=O) (NRcc) 2, alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, carbocyclyl, heterocyclyl, aryl, and heteroaryl, or two Rcc groups attached to a nitrogen atom are joined to form a heterocyclyl or heteroaryl ring, wherein each alkyl, alkenyl, alkynyl, carbocyclyl, heterocyclyl, aryl, and heteroaryl is independently substituted with 0, 1, 2, 3, 4, or 5 Rdd groups, and wherein Raa, Rbb, Rcc and Rdd are as defined above.
Other definitions
In certain embodiments, the compounds of each formula herein are defined to include isotopically labelled compounds. An “isotopically labelled compound” is a compound in which at least one atomic position is enriched in a specific isotope of the designated element to a level which is significantly greater than the natural abundance of that isotope. For example, one or more hydrogen atom positions in a compound can be enriched with deuterium to a level which is significantly greater than the natural abundance of deuterium, for example, enrichment to a level of at least 1%, preferably at least 20%or at least 50%. Such a deuterated compound may, for example, be metabolized more slowly than its non-deuterated analog, and therefore exhibit a longer half-life when administered to a subject. Such compounds can synthesize using methods known in the art, for example by employing deuterated starting materials. Unless stated to the contrary, isotopically labelled compounds are pharmaceutically acceptable.
As used herein, “cancer” refers to any disease that is caused by or results in inappropriately high levels of cell division, inappropriately low levels of apoptosis, or both. Examples of cancer include, but are not limited to, leukemias (e.g., acute leukemia, acute lymphocytic leukemia, acute myelocytic leukemia, acute myeloblasts leukemia, acute promyelocytic leukemia, acute myelomonocytic leukemia, acute monocytic leukemia, acute erythroleukemia, chronic leukemia, chronic myelocytic leukemia, chronic lymphocytic leukemia) , polycythemia vera, lymphoma (Hodgkin's disease, non-Hodgkin's disease) , Waldenstrom's macroglobulinemia, heavy chain disease, and solid tumors.
Unless indicated, otherwise the term “treatment” as used herein includes the effect on a subject who is suffering from a particular disease, disorder, or condition, which reduces the severity of the disease, disorder, or condition, or delays or slows the progression of the disease, disorder or condition ( “therapeutic treatment” ) . The term also includes the effect that occurs before the subject begins to suffer from a specific disease, disorder or condition ( “prophylactic treatment” ) .
The term “treating/treatment” as used herein relates to reversing, alleviating, inhibiting the progression or prophylaxis of a disorder or condition to which the term applies, or one or more symptoms of such disorder or condition. The noun “treating/treatment” as used herein relates to the action of treat, which is a verb, and the latter is as just defined.
“Disease, ” “disorder, ” and “condition” can be used interchangeably herein.
Generally, the “effective amount” of a compound refers to an amount sufficient to elicit a target biological response. As understood by those skilled in the art, the effective amount of the compound of the disclosure can vary depending on the following factors, such as the desired biological endpoint, the pharmacokinetics of the compound, the diseases being treated, the mode of administration, and the age, health status and symptoms of the subjects. The effective amount includes therapeutically effective amount and prophylactically effective amount.
Unless indicated, otherwise the “therapeutically effective amount” of the compound as used herein is an amount sufficient to provide therapeutic benefits in the course of treating a disease, disorder or condition, or to delay or minimize one or more symptoms associated with the disease, disorder or condition. The therapeutically effective amount of a compound refers to the amount of the therapeutic agent that, when used alone or in combination with other therapies, provides a therapeutic benefit in the treatment of a disease, disorder or condition. The term “therapeutically effective amount” can include an amount that improves the overall treatment, reduces or avoids the symptoms or causes of the disease or condition, or enhances the therapeutic effect of other therapeutic agents.
“Combination” and related terms refer to the simultaneous or sequential administration of the compounds of the present disclosure and other therapeutic agents. For example, the compounds of the present disclosure can be administered simultaneously or sequentially in separate unit dosage with other therapeutic agents, or simultaneously in a single unit dosage with other therapeutic agents.
The term “pharmaceutically acceptable” as used herein denotes within the scope of sound medical judgment, the substances are suitable for use in contact with the patient's tissue without undue toxicity, irritation, allergic response and the like, and are commensurate with a reasonable benefit/risk ratio, and are effective for their intended use, including, if possible, the zwitterionic form of the compounds disclosed herein.
The term “salt” denotes relatively non-toxic, inorganic and organic acid addition salts of the compounds disclosed herein. These salts can be prepared in situ during the final isolation and purification of the compound, or by isolating salts produced by separately reacting the purified compound in the free base form with a suitable organic or inorganic acid.
The pharmaceutically acceptable base addition salts are formed with metals or amines, such as alkali metal and alkaline earth metal hydroxides or organic amines. Examples of the metals used as cations include sodium, potassium, magnesium, calcium, etc. Examples of suitable amines are N, N'-dibenzylethylenediamine, chloroprocaine, choline, diethanolamine, ethylenediamine, N-methylglucamine and procaine.
The salts can be prepared from the inorganic acids, which include sulfates, pyrosulfates, bisulfates, sulfites, bisulfites, nitrates, phosphates, monohydrogen phosphates, dihydrogen phosphates, metaphosphates, pyrophosphates, chlorides, bromides and iodides. Examples of the acids include hydrochloric acid, nitric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, phosphoric acid, etc. The representative salts include hydrobromide, hydrochloride, sulfate, bisulfate, nitrate, acetate, oxalate, valerate, oleate, palmitate, stearate, laurate, borate, benzoate, lactate, phosphate, tosylate, citrate, maleate, fumarate, succinate, tartrate, naphthalate, methanesulfonate, glucoheptanate, lactobionate, lauryl sulfonate, isethionate, etc. The salts can also be prepared from the organic acids, which include aliphatic monocarboxylic and dicarboxylic acids, phenyl-substituted alkanoic acids, hydroxyalkanoic acids, alkanedioic acid, aromatic acids, aliphatic and aromatic sulfonic acids, etc. The representative salts include acetate, propionate, octanoate, isobutyrate, oxalate, malonate, succinate, suberate, sebacate, fumarate, maleate, mandelate, benzoate, chlorobenzoate, methyl benzoate, dinitrobenzoate, naphthoate, besylate, tosylate, phenylacetate, citrate, lactate, maleate, tartrate, methanesulfonate, etc. The pharmaceutically acceptable salts can include cations based on alkali metals and alkaline earth metals, such as sodium, lithium, potassium, calcium, magnesium, etc., as well as non-toxic ammonium, quaternary ammonium, and amine cations including, but not limited to, ammonium, tetramethylammonium, tetraethylammonium, methylamine, dimethylamine, trimethylamine, triethylamine, ethylamine, etc. Salts of amino acids are also included, such as arginine salts, gluconates, galacturonates, etc. (for example, see Berge S.M. et al., “Pharmaceutical Salts, ” J. Pharm. Sci., 1977; 66: 1-19, which is incorporated herein byreference) .
As used herein, the term “pharmaceutically acceptable salt” refers to those salts which are, within the scope of sound medical judgment, suitable for use in contact with the tissues of humans and lower animals without undue toxicity, irritation, allergic response and the like, and are commensurate with a reasonable benefit/risk ratio. Pharmaceutically acceptable salts are well known in the art. For example, S.M. Berge, et al. describes pharmaceutically acceptable salts in detail in J. Pharmaceutical Sciences, 66: 1-19 (1977) . The salts can be prepared in situ during the final isolation and purification of the compounds of the invention, or separately by reacting the free base function with a suitable organic acid. Examples of pharmaceutically acceptable salts include, but are not limited to, nontoxic acid addition salts are salts of an amino group formed with inorganic acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, phosphoric acid, sulfuric acid and perchloric acid or with organic acids such as acetic acid, maleic acid, tartaric acid, citric acid, succinic acid or malonic acid or by using other methods used in the art such as ion exchange. Other pharmaceutically acceptable salts include, but are not limited to, adipate, alginate, ascorbate, aspartate, benzenesulfonate, benzoate, bisulfate, borate, butyrate, camphorate, camphorsulfonate, citrate, cyclopentane-propionate, digluconate, dodecylsulfate, ethanesulfonate, formate, fumarate, glucoheptonate, glycerophosphate, gluconate, hemisulfate, heptanoate, hexanoate, hydroiodide, 2-hydroxy-ethanesulfonate, lactobionate, lactate, laurate, lauryl sulfate, malate, maleate, malonate, methanesulfonate, 2-naphthalenesulfonate, nicotinate, nitrate, oleate, oxalate, palmitate, pamoate, pectinate, persulfate, 3-phenylpropionate, phosphate, picrate, pivalate, propionate, stearate, succinate, sulfate, tartrate, thiocyanate, p-toluenesulfonate, undecanoate, valerate salts, and the like. Representative alkali or alkaline earth metal salts include sodium, lithium, potassium, calcium, magnesium, and the like. Further pharmaceutically acceptable salts include, when appropriate, nontoxic ammonium, quaternary ammonium, and amine cations formed using counterions such as halide, hydroxide, carboxylate, sulfate, phosphate, nitrate, alkyl having from 1 to 6 carbon atoms, sulfonate and aryl sulfonate.
In certain embodiments, the compounds of each formula herein are defined to include isotopically labelled compounds. An “isotopically labelled compound” is a compound in which at least one atomic position is enriched in a specific isotope of the designated element to a level which is significantly greater than the natural abundance of that isotope. For example, one or more hydrogen atom positions in a compound can be enriched with deuterium to a level which is significantly greater than the natural abundance of deuterium, for example, enrichment to a level of at least 1%, preferably at least 20%or at least 50%. Such a deuterated compound may, for example, be metabolized more slowly than its non-deuterated analog, and therefore exhibit a longer half-life when administered to a subject. Such compounds can synthesize using methods known in the art, for example by employing deuterated starting materials. Unless stated to the contrary, isotopically labelled compounds are pharmaceutically acceptable.
Combinations of substituents and variables envisioned by this invention are only those that result in the formation of stable compounds. The term “stable” , as used herein, refers to compounds which possess stability sufficient to allow manufacture and which maintains the integrity of the compound for a sufficient period of time to be useful for the purposes detailed herein (e.g., therapeutic or prophylactic administration to a subject) .
The synthesized compounds can be separated from a reaction mixture and further purified by a method such as column chromatography, high pressure liquid chromatography, or recrystallization. As can be appreciated by the skilled artisan, further methods of synthesizing the compounds of the Formula herein will be evident to those of ordinary skill in the art. Additionally, the various synthetic steps may be performed in an alternate sequence or order to give the desired compounds. Synthetic chemistry transformations and protecting group methodologies (protection and deprotection) useful in synthesizing the compounds described herein are known in the art and include, for example, those such as described in R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, 2nd Ed. Wiley-VCH (1999) ; T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Ed., John Wiley and Sons (1999) ; L. Fieser and M. Fieser, Fieser and  Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994) ; and L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents  for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995) , and subsequent editions thereof.
The term “subject” , as used herein, refers to an animal. Preferably, the animal is a mammal. More preferably, the mammal is a human. A subject also refers to, for example, dogs, cats, horses, cows, pigs, guinea pigs, fish, birds and the like.
The compounds of this invention may be modified by appending appropriate functionalities to enhance selective biological properties. Such modifications are known in the art and may include those which increase biological penetration into a given biological system (e.g., blood, lymphatic system, central nervous system) , increase oral availability, increase solubility to allow administration by injection, alter metabolism and alter rate of excretion.
The compounds described herein contain one or more asymmetric centers and thus give rise to enantiomers, diastereomers, and other stereoisomeric forms that may be defined, in terms of absolute stereochemistry, as (R) -or (S) -, or as (D) -or (L) -. The present invention is meant to include all such possible isomers, as well as their racemic and optically pure forms. Optical isomers may be prepared from their respective optically active precursors by the procedures described above, or by resolving the racemic mixtures. The resolution can be carried out in the presence of a resolving agent, by chromatography or by repeated crystallization or by some combination of these techniques which are known to those skilled in the art. Further details regarding resolutions can be found in Jacques, et al., Enantiomers, Racemates,  and Resolutions (John Wiley & Sons, 1981) . When the compounds described herein contain olefinic double bonds, other unsaturation, or other centers of geometric asymmetry, and unless specified otherwise, it is intended that the compounds include both E and Z geometric isomers or cis-and trans-isomers. Likewise, all tautomeric forms are also intended to be included. Tautomers may be in cyclic or acyclic. The configuration of any carbon-carbon double bond appearing herein is selected for convenience only and is not intended to designate a particular configuration unless the text so states; thus, a carbon-carbon double bond or carbon-heteroatom double bond depicted arbitrarily herein as trans may be cis, trans, or a mixture of the two in any proportion.
As used herein, the term “antibody” refers to an immunoglobulin molecule which has the ability to specifically bind to an antigen. An antibody often comprises a variable region and a constant region in each of a heavy chain and a light chain. The variable regions of the heavy and light chains of antibodies contain a binding domain that interacts with an antigen. The constant regions of antibodies may mediate the binding of the immunoglobulin to host tissues or factors, including various cells of the immune system (such as effector cells) and components of the complement system such as C1q, the first component in the classical pathway of complement activation. Most antibodies have a heavy chain variable region (VH) and a light chain variable region (VL) that together form the portion of the antibody that binds to the antigen.
A “light chain variable region” (VL) or “heavy chain variable region” (VH) consists of four “framework” regions interrupted by three “complementarity determining regions” or “CDRs” . The framework regions serve to align the CDRs for specific binding to an epitope of an antigen. The CDRs include the amino acid residues of an antibody that are primarily responsible for antigen binding. From amino-terminus to carboxyl-terminus, both VL and VH domains comprise the following framework (FR) and CDR regions: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, and FR4. CDRs 1, 2, and 3 of a VL domain are also referred to herein, respectively, as LCDR1, LCDR2, and LCDR3; CDRs 1, 2, and 3 of a VH domain are also referred to herein, respectively, as HCDR1, HCDR2, and HCDR3.
The term “antibody” as used herein should be understood in its broadest meaning, and includes monoclonal antibodies (including full-length monoclonal antibodies) , polyclonal antibodies, antibody fragments, and multi-specific antibodies containing at least two different antigen binding regions (e.g., bispecific antibodies) . The antibody may contain additional modifications, such as non-naturally occurring amino acids, mutations in Fc regions, and mutations in glycosylation sites. Antibodies also include post-translation modified antibodies, fusion proteins containing the antigenic determinants of the antibody, and immunoglobulin molecules containing any other modifications to antigen recognition sites, as long as these antibodies exhibit desired biological activity.
As used herein, the term “antigen binding fragment” of an antibody refers to one or more fragments of an antibody that retain the ability to specifically bind to an antigen. It has been shown that the antigen binding function of an antibody can be performed by fragments of a full-length antibody.
Examples of antigen binding fragment of an antibody include (i) a Fab fragment, a monovalent fragment consisting of the VL, VH, CL and CH1 domains; (ii) a F (ab') 2 fragment, a bivalent fragment comprising two Fab fragments linked by a disulfide bridge at the hinge region; (iii) a Fab' fragment, which is essentially an Fab with part of the hinge region (see, FUNDAMENTALIMMUNOLOGY (Paul ed., 3. sup. rd ed. 1993) ) ; (iv) a Fd fragment consisting of the VH and CH1 domains; (v) a Fd' fragment having VH and CH1 domains and one or more cysteine residues at the C-terminus of the CH1 domain; (vi) a Fv fragment consisting of the VL and VH domains of a single arm of an antibody, (vii) a dAb fragment (Ward et al., (1989) Nature 341: 544-546) , which consists of a VH domain; (viii) an isolated complementarity determining region (CDR) ; and (ix) a nanobody, a heavy chain variable region containing a single variable domain and two constant domains. Furthermore, although the two domains of the Fv fragment, V Land VH are coded for by separate genes, they can be joined, using recombinant methods, by a synthetic linker that enables them to be made as a single protein chain in which the VL and VH regions pair to form monovalent molecules (known as single chain Fv (scFv) ; see e.g., Bird et al. (1988) Science 242: 423-426; and Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883) . Such single chain antibodies are also intended to be encompassed within the term "antigen binding fragment" of an antibody. Furthermore, the term also includes a "linear antibody" comprising a pair of tandem Fd segments (VH-CH1-VH-CH1) , which forms an antigen binding region together with a complementary light chain polypeptide, and a modified version of any of the foregoing fragments, which retains antigen binding activity.
As used herein, the term “monoclonal antibody” refers to an antibody obtained from a substantially homogeneous antibody population. That is, each antibody constituting the population are the same, except for possible naturally occurring mutations in small amount. Monoclonal antibodies are highly specific and are directed against a single antigen. The term "monoclonal antibody" herein is not limited to antibodies produced by hybridoma technology, and should not be interpreted as requiring production of antibodies by any specific method.
The term “bispecific antibody” is in the context of the present invention to be understood as an antibody having two different antigen-binding regions defined by different antibody sequences. This can be understood as different target binding but includes as well binding to different epitopes in one target.
Certain compounds of the present invention may also exist in different stable conformational forms which may be separable. Torsional asymmetry due to restricted rotation about an asymmetric single bond, for example because of steric hindrance or ring strain, may permit separation of different conformers. The present invention includes each conformational isomer of these compounds and mixtures thereof. It will be yet appreciated that the compounds of the present invention may contain one or more asymmetric carbon atoms and may exist in racemic, diastereoisomeric, and optically active forms. It will still be appreciated that certain compounds of the present invention may exist in different tautomeric forms. All tautomers are contemplated to be within the scope of the present invention.
ABBREVIATIONS
Abbreviations which may be used in the descriptions of the scheme and the examples that follow are: Ac for acetyl; AcOH for acetic acid; AIBN for azobisisobutyronitrile; aq. for aqueous; BINAP for 2, 2’-bis (diphenylphosphino) -1, 1’-binaphthyl; Boc2O for di-tert-butyl-dicarbonate; Boc for t-butoxycarbonyl; Bpoc for 1-methyl-1- (4-biphenylyl) ethyl carbonyl; Bz for benzoyl; Bn for benzyl; BocNHOH for tert-butyl N-hydroxycarbamate; t-BuOK for potassium tert-butoxide; Bu3SnH for tributyltin hydride; BOP for (benzotriazol-1-yloxy) tris (dimethylamino) phospho-nium Hexafluorophosphate; Brine for sodium chloride solution in water; BSA for N, O-bis- (trimethylsilyl) acetamide; Bz for benzoyl; CDI for carbonyldiimidazole; CH2Cl2 (DCM) for dichloromethane; CH3 for methyl; CH3CN for acetonitrile; CO2 for carbon dioxide; COMU for (1-cyano-2-ethoxy-2-oxoethylidenaminooxy) dimethylamino-morpholino-carbenium hexafluorophosphate; Cs2CO3 for cesium carbonate; CuCl for copper (I) chloride; CuI for copper (I) iodide; dba for dibenzylidene acetone; dppb for diphenylphos-phinobutane; DBU for 1, 8-diazabicyclo [5.4.0] -undec-7-ene; DCC for N, N’-dicyclohexyl-carbodiimide; DCDMH for 1, 3-dichloro-5, 5-dimethylhydantoin; DCE for 1, 1-dichloroethane; DEAD for diethylazodicarboxylate; DIAD for diisopropyl azodicarboxylate; DIPEA (DIEA) or (i-Pr) 2EtN for N, N, -diisopropylethyl amine; Dess-Martin periodinane for 1, 1, 1-tris (acetyloxy) -1, 1-dihydro-1, 2-benziodoxol-3- (1H) -one; DMAP for 4-dimethylamino-pyridine; DME for 1, 2-dimethoxyethane; DMF for N, N-dimethylformamide; DMSO for dimethyl sulfoxide; DMT for di (p-methoxyphenyl) -phenylmethyl or dimethoxytrityl; DMTMM for 4- (4, 6-dimethoxy-1, 3, 5-triazin-2-yl) -4-methylmorpholin-4-ium chloride; DPPA for diphenylphosphoryl azide; EDC for N- (3-dimethylaminopropyl) -N’-ethylcarbodiimide; EDC●HCl for N- (3-dimethylaminopropyl) -N’-ethylcarbodiimide hydrochloride; EDTA for ethylenediamine tetraacetic acid; EtOAc for ethyl acetate; EtOH for ethanol; Et2O for diethyl ether; Fmoc for 9-fluorenylmethoxycarbonyl; HATU for O- (7-azabenzotriazol-1-yl) -N, N, N’, N’, -tetramethyluronium Hexafluoro-phosphate; HCl for hydrogen chloride; HOBT (HOBt) for 1-hydroxybenzotriazole; hr for hour (s) ; K2CO3 for potassium carbonate; K4 [Fe (CN) 6] for tetrapotassium hexacyanoferrate trihydrate; n-BuLi for n-butyl lithium; i-BuLi for i-butyl lithium; t-BuLi for t-butyl lithium; PhLi for phenyl lithium; LDA for lithium diisopropylamide; LiTMP for lithium 2, 2, 6, 6-tetramethyl-piperidinate; MeOH for methanol; Mg for magnesium; min for minute (s) ; MOM for methoxymethyl; Ms for mesyl or -SO2-CH3; Ms2O for methanesulfonic anhydride or mesyl-anhydride; MTBE for t-butyl methyl ether; NaN (TMS) 2 for sodium bis (trimethylsilyl) amide; NaCl for sodium chloride; NaH for sodium hydride; NaHCO3 for sodium bicarbonate or sodium hydrogen carbonate; Na2CO3 for sodium carbonate; NaOH for sodium hydroxide; Na2SO4 for sodium sulfate; NaHSO3 for sodium bisulfite or sodium hydrogen sulfite; Na2S2O3 for sodium thiosulfate; NBS for N-bromosuccinimide; NH2NH2 for hydrazine; NH4HCO3 for ammonium bicarbonate; NH4Cl for ammonium chloride; NMO for N-methyl-morpholine N-oxide; NaIO4 for sodium periodate; Ni for nickel; NSFI for N-fluorobenzene-sulfonimide; OH for hydroxyl; o/n for overnight; OsO4 for osmium tetroxide; PE for petroleum ether; PTSA for p-toluenesulfonic acid; PPTS for pyridinium p-toluenesulfonate; TBAF for tetrabutyl-ammonium fluoride; TBDMS (TBS) for t-butyldimethylsilyl; TBDPS for t-butyldiphenylsilyl; TCFH for N, N, N', N'-Tetramethylchloroformamidinium hexafluorophosphate; TEA or Et3N for triethylamine; TES for triethylsilyl; TESCl for triethylsilyl chloride; TESOTf for triethylsilyl trifluoro-methanesulfonate; TFA for trifluoroacetic acid; THF for tetrahydro-furan; TMEDA for N, N, N’, N’-tetramethylethylene-diamine; TPP or PPh3 for triphenyl-phosphine; Troc for 2, 2, 2-trichloroethyl carbonyl; Ts for tosyl or –SO2-C6H4CH3; Ts2O for tolylsulfonic anhydride or tosyl-anhydride; TsOH for p-tolylsulfonic acid; Pb (OAc) 4 for Lead (IV) acetate; Pd for palladium; Ph for phenyl; PdOH for palladium hydroxide; ; Pd2 (dba) 3 for tris (dibenzylideneacetone) dipalladium (0) ; Pd (PPh3) 4 for tetrakis (triphenyl-phosphine) palladium (0) ; PdCl2 (PPh3) 2 for trans-dichlorobis- (triphenylphosphine) palladium (II) ; Pt for platinum; Rh for rhodium; rt for room temperature; Ru for ruthenium; satd. For saturated; SFC for supercritical fluid chromatography; TBS for tert-butyl dimethylsilyl; TMS for trimethylsilyl; or TMSCl for trimethylsilyl chloride; Zn for zinc (powder) ; ZnBr2 for zinc bromide; Zn (CN) 2 for zinc cyanide; Xphos for 2-Dicyclohexylphosphino-2', 4', 6'-triisopropylbiphenyl.
BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS
Fig. 1 shows a) tumor volume change and b) body weight change of the A431 cells mouse tumor model after the administration of ADCs of RP007T2-LP2-1-c, RP007T2-LP2-1-d and RP007T2-MC-GGFG-DXd.
Fig. 2 shows the body weight change of the female and male BALB/c mice after the administration of ADC of RP007T2-LP2-1-c or RP007T2-LP2-1-d.
Fig. 3 shows the hematology test results of the female and male BALB/c mice after the administration of ADC of RP007T2-LP2-1-c or RP007T2-LP2-1-d.
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
As used herein, the term “compound disclosed herein” refers to the following compounds of formulae (I) , (II) , (III) , or a pharmaceutically acceptable salt, prodrug, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof.
In the present disclosure, compounds are named generally described herein using standard nomenclature. For compounds having an asymmetric center, it should be understood, unless otherwise stated, that all optical isomers and mixtures thereof are included. Furthermore, unless otherwise specified, all isomer compounds and carbon-carbon double bonds included in the present disclosure may occur in the form of Z and E, or in the form of (R) -or (S) -. Compounds that exist in different tautomeric forms, one of which is not limited to any particular tautomer but is intended to cover all tautomeric forms.
I. Camptothecin Analogues
In one embodiment, the present disclosure refers to camptothecin analogue compounds of formula (I) , (II) , (III) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof:
wherein, the variables are as defined in the context.
1.1 Variables
X
In a specific embodiment, X is CRx, such as CH; in another specific embodiment, X is N. In the above embodiments, Rx is selected from H, halogen, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl.
R1
In a specific embodiment, R1 is halogen, such as F; in another specific embodiment, R1 is C1-6 alkyl; in another specific embodiment, R1 is C1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R1 is C1-6 alkoxyl, such as OMe; in another specific embodiment, R1 is C1-6 haloalkoxyl.
R2
In a specific embodiment, R2 is NR2bR2c; in another specific embodiment, R2 is - (CH2) m-C (O) R2a, such as C (O) R2a; in another specific embodiment, R2 is - (CH2) m-C (O) OR2a; in another specific embodiment, R2 is - (CH2) m-OC (O) R2a; in another specific embodiment, R2 is - (CH2) m-S (O) 2-R2a; in another specific embodiment, R2 is - (CH2) m-S (O) -R2a; in another specific embodiment, R2 is - (CH2) m-NHC (O) -R2a, such as NHC (O) -R2a; in another specific embodiment, R2 is - (CH2) m-C (O) NR2bR2c, such as C (O) NR2bR2c; in another specific embodiment, R2 is - (CH2) m-NHC (O) OR2a, such as NHC (O) OR2a; in another specific embodiment, R2 is - (CH2) m-OC (O) NR2bR2c, such as OC (O) NR2bR2c; in another specific embodiment, R2 is - (CH2) m-NHC (O) NR2bR2c.
In a specific embodiment, R2 isin another specific embodiment, R2 isin anotherspecific embodiment, R2 isin another specific embodiment, R2 isin another specific embodiment, R2 isin another specific embodiment, R2 is
In a more specific embodiment, R2 isin another more specific embodiment, R2 isin another more specific embodiment, R2 isin another more specific embodiment, R2 isin another more specific embodiment, R2 isin another more specific embodiment, R2 isin another more specific embodiment, R2 is
In a specific embodiment, R2 is unsubstituted; in another specific embodiment, R2 is substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R group (s) .
R2a, R2b and R2c
In a specific embodiment, R2a is H; in another specific embodiment, R2a is C1-6 alkyl; in another specific embodiment, R2a is C1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R2a is C1-6 alkylene-OH; in another specific embodiment, R2a is C1-6 alkylene-NH2.
In a specific embodiment, R2b is H; in another specific embodiment, R2b is C1-6 alkyl; in another specific embodiment, R2b is C1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R2b is C1-6 alkylene-OH; in another specific embodiment, R2b is C1-6 alkylene-NH2.
In a specific embodiment, R2c is H; in another specific embodiment, R2c is C1-6 alkyl; in another specific embodiment, R2c is C1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R2c is C1-6 alkylene-OH; in another specific embodiment, R2c is C1-6 alkylene-NH2.
R3
In a specific embodiment, R3 is H; in another specific embodiment, R3 is - (CH2) pOR3a; in another specific embodiment, R3 is - (CH2) pC (O) R3a; in another specific embodiment, R3 is - (CH2) pC (O) OR3a; in another specific embodiment, R3 is - (CH2) pOC (O) R3a; in another specific embodiment, R3 is - (CH2) p-S (O) 2-R3a; in another specific embodiment, R3 is - (CH2) p-S (O) -R3a; in another specific embodiment, R3 is - (CH2) p-NR3bR3c; in another specific embodiment, R3 is - (CH2) p-NHC (O) -R3a; in another specific embodiment, R3 is - (CH2) p-C (O) NR3bR3c; in another specific embodiment, R3 is - (CH2) p-NHC (O) OR3a; in another specific embodiment, R3 is - (CH2) p-OC (O) NR3bR3c; in another specific embodiment, R3 is - (CH2) p-NHC (O) NR3bR3c.
In a specific embodiment, R3 is H; in another specific embodiment, R3 isin another specific embodiment, R3 isin another specific embodiment, R3 isin another specific embodiment, R3 isin another specific embodiment, R3 isin another specific embodiment, R3 is
In a more specific embodiment, R3 is H; in another more specific embodiment, R3 isin another more specific embodiment, R3 isin another more specific embodiment, R3 isin another more specific embodiment, R3 isin another more specific embodiment, R3 isin another more specific embodiment, R3 isin another more specific embodiment, R3 isin another more specific embodiment, R3 isin another more specific embodiment, R3 isin another more specific embodiment, R3 isin another more specific embodiment, R3 isin another more specific embodiment, R3 isin another more specific embodiment, R3 is
In a specific embodiment, R3 is unsubstituted; in another specific embodiment, R3 is substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R group (s) .
R3a, R3b and R3c
In a specific embodiment, R3a is H; in another specific embodiment, R3a is C1-6 alkyl; in another specific embodiment, R3a is C1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R3a is C1-6 alkylene-OH; in another specific embodiment, R3a is C1-6 alkylene-OC1-6 alkyl; in another specific embodiment, R3a is C1-6 alkylene-NH2; in another specific embodiment, R3a is C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) ; in another specific embodiment, R3a is C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2.
In a specific embodiment, R3b is H; in another specific embodiment, R3b is C1-6 alkyl; in another specific embodiment, R3b is C1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R3b is C1-6 alkylene-OH; in another specific embodiment, R3b is C1-6 alkylene-OC1-6 alkyl; in another specific embodiment, R3b is C1-6 alkylene-NH2; in another specific embodiment, R3b is C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) ; in another specific embodiment, R3b is C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2.
In a specific embodiment, R3c is H; in another specific embodiment, R3c is C1-6 alkyl; in another specific embodiment, R3c is C1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R3c is C1-6 alkylene-OH; in another specific embodiment, R3c is C1-6 alkylene-OC1-6 alkyl; in another specific embodiment, R3c is C1-6 alkylene-NH2; in another specific embodiment, R3c is C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) ; in another specific embodiment, R3c is C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2.
In a specific embodiment, R3b, R3c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl; in another specific embodiment, R3b, R3c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 3-12 membered heterocyclyl, such as 5-12 membered heterocyclyl or 5-10 membered heterocyclyl, preferred 5-6 membered heterocyclyl C6-10 aryl; in another specific embodiment, R3b, R3c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 5-12 membered heteroaryl.
R2’
In a specific embodiment, R2’ is a divalent group formed by the connection between R2 and the rest of the compound.
In a specific embodiment, R2’ is -NR2bR2c’-; in another specific embodiment, R2’ is - (CH2) m-C (O) R2a’-, such as -C (O) R2a’; in another specific embodiment, R2’ is - (CH2) m-C (O) OR2a’-; in another specific embodiment, R2’ is - (CH2) m-OC (O) R2a’; in another specific embodiment, R2’ is - (CH2) m-S (O) 2-R2a’-; in another specific embodiment, R2’ is - (CH2) m-S (O) -R2a’-; in another specific embodiment, R2’ is - (CH2) m-NHC (O) -R2a’-, such as -NHC (O) -R2a’-; in another specific embodiment, R2’ is - (CH2) m-C (O) NR2bR2c’-, such as -C (O) NR2bR2c’-; in another specific embodiment, R2’ is - (CH2) m-NHC (O) OR2a’-, such as -NHC (O) OR2a’; in another specific embodiment, R2’ is - (CH2) m-OC (O) NR2bR2c’-, such as -OC (O) NR2bR2c’-; in another specific embodiment, R2’ is - (CH2) m-NHC (O) NR2bR2c’-.
In a specific embodiment, R2’ isin another specific embodiment, R2’ isin another specific embodiment, R2’ isin another specific embodiment, R2’ isin another specific embodiment, R2’ isin another specific embodiment, R2’ is
In a more specific embodiment, R2’ isin another more specific embodiment, R2’ isin another more specific embodiment, R2’ isin another more specific embodiment, R2’ isin another more specific embodiment, R2’ isin another more specific embodiment, R2’ isin another more specific embodiment, R2’ is
In a specific embodiment, R2’ is unsubstituted; in another specific embodiment, R2’ is substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R group (s) .
R2a’ and R2c’
In a specific embodiment, R2a’ is bond; in another specific embodiment, R2a’ is C1-6 alkylene; in another specific embodiment, R2a’ is C1-6 haloalkylene; in another specific embodiment, R2a’ is C1-6 alkylene-O-; in another specific embodiment, R2a’ is C1-6 alkylene-NH-.
In a specific embodiment, R2c’ is bond; in another specific embodiment, R2c’ is C1-6 alkylene; in another specific embodiment, R2c’ is C1-6 haloalkylene; in another specific embodiment, R2c’ is C1-6 alkylene-O-; in another specific embodiment, R2c’ is C1-6 alkylene-NH-.
R3’
In a specific embodiment, R3’ is a divalent group formed by the connection between R3 and the rest of the compound.
In a specific embodiment, R3’ is bond; in another specific embodiment, R3’ is - (CH2) pOR3a’-; in another specific embodiment, R3’ is - (CH2) pC (O) R3a’-; in another specific embodiment, R3’ is - (CH2) pC (O) OR3a’-; in another specific embodiment, R3’ is - (CH2) pOC (O) R3a’-; in another specific embodiment, R3’ is - (CH2) p-S (O) 2-R3a’-; in another specific embodiment, R3’ is - (CH2) p-S (O) -R3a’-; in another specific embodiment, R3’ is - (CH2) p-NR3bR3c’-; in another specific embodiment, R3’ is - (CH2) p-NHC (O) -R3a’-; in another specific embodiment, R3’ is - (CH2) p-C (O) NR3bR3c’-; in another specific embodiment, R3’ is - (CH2) p-NHC (O) OR3a’-; in another specific embodiment, R3’ is - (CH2) p-OC (O) NR3bR3c’-; in another specific embodiment, R3’ is - (CH2) p-NHC (O) NR3bR3c’-.
In a specific embodiment, R3’ is bond; in another specific embodiment, R3’ isin another specific embodiment, R3’ isin another specific embodiment, R3’ isin another specific embodiment, R3’ isin another specific embodiment, R3’ isin another specific embodiment, R3’ is
In a specific embodiment, R3’ is bond; in another specific embodiment, R3’ isin another specific embodiment, R3’ isin another specific embodiment, R3’ isin another specific embodiment, R3’ isin another specific embodiment, R3’ isin another specific embodiment, R3’ isin another specific embodiment, R3’ isin another specific embodiment, R3’ isin another specific embodiment, R3’ isin another specific embodiment, R3’ isin another specific embodiment, R3’ isin another specific embodiment, R3’ isin another specific embodiment, R3’ is
In a specific embodiment, R3’ is unsubstituted; in another specific embodiment, R3’ is substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R group (s) .
R3a’, R3b and R3c’
In a specific embodiment, R3a’ is bond; in another specific embodiment, R3’ is C1-6 alkylene; in another specific embodiment, R3’ is C1-6 haloalkylene; in another specific embodiment, R3’ is -C1-6 alkylene-O-; in another specific embodiment, R3’ is -C1-6 alkylene-OC1-6 alkylene-; in another specific embodiment, R3’ is -C1-6 alkylene-NH-; in another specific embodiment, R3’ is -C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) -or -C1-6 alkylene-NH-C1-6 alkylene-; in another specific embodiment, R3’ is -C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) -C1-6 alkylene-.
R3b is as defined in the context.
In a specific embodiment, R3b, R3c’ are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form C3-10 cycloalkylene; in another specific embodiment, R3b, R3c’ are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 3-12 membered heterocyclylene, such as 3-10 membered heterocyclylene or 5-10 membered heterocyclylene; in another specific embodiment, R3b, R3c’ are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form C6-10 arylene; in another specific embodiment, R3b, R3c’ are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 5-12 membered heteroarylene.
m and p
In a specific embodiment, each m is independently selected from 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8.
In a specific embodiment, each p is independently selected from 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8.
R
In a specific embodiment, R is H; in another specific embodiment, R is NH2; in another specific embodiment, R is OH; in another specific embodiment, R is CN, halogen; in another specific embodiment, R is C1-6 alkyl; in another specific embodiment, R is C1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R is C1-6 alkoxyl; in another specific embodiment, R is C1-6 haloalkoxyl.
R4 and R5
In a specific embodiment, R4 is H; in another specific embodiment, R4 is halogen, such as F; in another specific embodiment, R4 is OH; in another specific embodiment, R4 is NH2; in another specific embodiment, R4 is N (C1-6 alkyl) 2; in another specific embodiment, R4 is NH-C1-6 alkyl; in another specific embodiment, R4 is C1-6 alkyl; in another specific embodiment, R4 is C1-4 alkyl, such as Me; in another specific embodiment, R4 is C1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R4 is C1-6 alkoxyl; in another specific embodiment, R4 is C1-4 alkoxyl, such as OMe; in another specific embodiment, R4 is C1-6 haloalkoxyl.
In a specific embodiment, R5 is H; in another specific embodiment, R5 is halogen, such as F; in another specific embodiment, R5 is OH; in another specific embodiment, R5 is NH2; in another specific embodiment, R5 is N (C1-6 alkyl) 2; in another specific embodiment, R5 is NH-C1-6 alkyl; in another specific embodiment, R5 is C1-6 alkyl; in another specific embodiment, R5 is C1-4 alkyl, such as Me; in another specific embodiment, R5 is C1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R5 is C1-6 alkoxyl; in another specific embodiment, R5 is C1-4 alkoxyl, such as OMe; in another specific embodiment, R5 is C1-6 haloalkoxyl.
In a specific embodiment, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl; in another specific embodiment, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form 3-12 membered heterocyclyl, such as 3-12 membered heterocyclyl or 5-10 membered heterocyclyl, 5-6 membered heterocyclyl is preferred; in another specific embodiment, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C6-10 aryl; in another specific embodiment, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form 5-12 membered heteroaryl; in another specific embodiment, the above mentioned cycloalkyl, heterocyclyl, aryl and heteroaryl are unsubstituted; in another specific embodiment, the above mentioned cycloalkyl, heterocyclyl, aryl and heteroaryl are substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl.
In a more specific embodiment, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to formIn another more specific embodiment, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to formIn another more specific embodiment, R4, R5 are taken together with the carbon atoms towhich they are attached to form
R6
In a specific embodiment, R6 is H; in another specific embodiment, R6 is - (CH2) n-OR6a; in another specific embodiment, R6 is - (CH2) n-C (O) OR6a; in another specific embodiment, R6 is - (CH2) n-OC (O) R6a; in another specific embodiment, R6 is - (CH2) n-C (O) R6a; in another specific embodiment, R6 is - (CH2) n-S (O) 2-R6a; in another specific embodiment, R6 is - (CH2) n-S (O) -R6a; in another specific embodiment, R6 is - (CH2) n-NHC (O) -R6a; in another specific embodiment, R6 is - (CH2) n-NHC (O) NR6bR6c; in another specific embodiment, R6 is - (CH2) n-NHC (O) OR6a; in another specific embodiment, R6 is - (CH2) n-OC (O) NR6bR6c; in another specific embodiment, R6 is - (CH2) n-C (O) NR6bR6c; in another specific embodiment, R6 is - (CH2) n-CH2NR6bR6c; in another specific embodiment, R6 is - (CH2) n-OP (O) (OH) -OR6a, such as -CH2-OP (O) (OH) -OH; in another specific embodiment, R6 is - (CH2) n-OP (S) (OH) -OR6a, such as -CH2-OP (S) (OH) -OH; in another specific embodiment, R6 is - (CH2) n-3-7 membered heterocyclylene- (CH2) n-OR6a; in another specific embodiment, R6 is - (CH2) n-3-7 membered heterocyclylene- (CH2) n-R6a.
In a specific embodiment, R6 isin another specific embodiment, R6 isin another specific embodiment, R6 isin another specific embodiment, R6 isin another specific embodiment, R6 isin another specific embodiment, R6 is
In a more specific embodiment, R6 isin another more specific embodiment, R6 isin another more specific embodiment, R6 isin another more specific embodiment, R6 isin another more specific embodiment, R6 isin another more specific embodiment, R6 isin another more specific embodiment, R6 isin another more specific embodiment, R6 isin another more specific embodiment, R6 is in another more specific embodiment, R6 isin another more specific embodiment, R6 is in another more specific embodiment, R6 isin another more specific embodiment, R6 isin another more specific embodiment, R6 isin another more specific embodiment, R6 is in another more specific embodiment, R6 isin another more specific embodiment, R6 is in another more specific embodiment, R6 isin another more specific embodiment, R6 is in another more specific embodiment, R6 is
In a specific embodiment, R6 is unsubstituted; in another specific embodiment, R6 is substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R*group (s) .
R6a, R6b and R6c
In a specific embodiment, R6a is H; in another specific embodiment, R6a is C1-6 alkyl, such as CH3; in another specific embodiment, R6a is C1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R6a is C3-7 cycloalkyl; in another specific embodiment, R6a is 3-7 membered heterocyclyl; in another specific embodiment, R6a is C1-6 alkylene-OH, such as CH2OH and CH2CH2OH; in another specific embodiment, R6a is C1-6 alkylene-OC1-6 alkyl; in another specific embodiment, R6a is C1-6 alkylene-NH2; in another specific embodiment, R6a is C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) ; in another specific embodiment, R6a is C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2.
In a specific embodiment, R6b is H; in another specific embodiment, R6b is C1-6 alkyl, such as CH3; in another specific embodiment, R6b is C1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R6b is C3-7 cycloalkyl; in another specific embodiment, R6b is 3-7 membered heterocyclyl; in another specific embodiment, R6b is C1-6 alkylene-OH, such as CH2OH and CH2CH2OH; in another specific embodiment, R6b is C1-6 alkylene-OC1-6 alkyl; in another specific embodiment, R6b is C1-6 alkylene-NH2; in another specific embodiment, R6b is C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) ; in another specific embodiment, R6b is C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2.
In a specific embodiment, R6c is H; in another specific embodiment, R6c is C1-6 alkyl, such as CH3; in another specific embodiment, R6c is C1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R6c is C3-7 cycloalkyl, such as C3-5 cycloalkyl, such as cyclopropyl; in another specific embodiment, R6c is 3-7 membered heterocyclyl; in another specific embodiment, R6c is C1-6 alkylene-OH, such as CH2OH and CH2CH2OH; in another specific embodiment, R6c is C1-6 alkylene-OC1-6 alkyl; in another specific embodiment, R6c is C1-6 alkylene-NH2; in another specific embodiment, R6c is C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) ; in another specific embodiment, R6c is C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2.
R6’
In a specific embodiment, R6’ is a divalent group formed by the connection between R6 and the rest of the compound.
In a specific embodiment, R6’ is bond; in another specific embodiment, R6’ is - (CH2) n-OR6a’-; in another specific embodiment, R6’ is - (CH2) n-C (O) OR6a’-; in another specific embodiment, R6’ is - (CH2) n-OC (O) R6a’-; in another specific embodiment, R6’ is - (CH2) n-C (O) R6a’-; in another specific embodiment, R6’ is - (CH2) n-S (O) 2-R6a’-; in another specific embodiment, R6’ is - (CH2) n-S (O) -R6a’-; in another specific embodiment, R6’ is - (CH2) n-OP (O) (OH) -OR6a’-, such as -CH2-OP (O) (OH) -O-; in another specific embodiment, R6’ is - (CH2) n-OP (S) (OH) -OR6a’-, such as -CH2-OP (S) (OH) -O-; in another specific embodiment, R6’ is - (CH2) n-NHC (O) -R6a’-; in another specific embodiment, R6’ is - (CH2) n-NHC (O) NR6bR6c’-; in another specific embodiment, R6’ is - (CH2) n-NHC (O) OR6a’-; in another specific embodiment, R6’ is - (CH2) n-OC (O) NR6bR6c’-; in another specific embodiment, R6’ is - (CH2) n-C (O) NR6bR6c’-; in another specific embodiment, R6’ is - (CH2) n-CH2NR6bR6c’-; in another specific embodiment, R6’ is - (CH2) n-3-7 membered heterocyclylene- (CH2) n-OR6a’-; in another specific embodiment, R6’ is - (CH2) n-3-7 membered heterocyclylene- (CH2) n-R6a’-.
In a specific embodiment, R6’ isin another specific embodiment, R6’ isin another specific embodiment, R6’ isin another specific embodiment, R6’ isin another specific embodiment, R6’ isin another specific embodiment, R6’ is
In a more specific embodiment, R6’ isin another more specific embodiment, R6’ isin another more specific embodiment, R6’ isin another more specific embodiment, R6’ isin another more specific embodiment, R6’ isin another more specific embodiment, R6’ isin another more specific embodiment, R6’ isin another more specific embodiment, R6’ isin another more specific embodiment, R6’ isin another more specific embodiment, R6’ isin another more specific embodiment, R6 isin another more specific embodiment, R6 isin another more specific embodiment, R6 isin another more specific embodiment, R6 isin anothermore specific embodiment, R6 isin another more specific embodiment, R6 isin another more specific embodiment, R6 isin another more specific embodiment, R6 isin another more specific embodiment, R6 isin another more specific embodiment, R6 is
In a specific embodiment, R6’ is unsubstituted; in another specific embodiment, R6’ is substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R*group (s) .
R6a’ and R6c’
In a specific embodiment, R6a’ is bond; in another specific embodiment, R6a’ is C1-6 alkylene; in another specific embodiment, R6a’ is -CH2-; in another specific embodiment, R6a’ is C1-6 haloalkylene; in another specific embodiment, R6a’ is C3-7 cycloalkylene; in another specific embodiment, R6a’ is 3-7 membered heterocyclylene; in another specific embodiment, R6a’ is -C1-6 alkylene-O-, such as -CH2O-and -CH2CH2O-; in another specific embodiment, R6a’ is -C1-6 alkylene-OC1-6 alkylene-; in another specific embodiment, R6a’ is -C1-6 alkylene-NH-, such as -CH2CH2NH-; in another specific embodiment, R6a’ is -C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) -or -C1-6 alkylene-NH-C1-6 alkylene-; in another specific embodiment, R6a’ is -C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) -C1-6 alkylene-.
In a specific embodiment, R6c’ is bond; in another specific embodiment, R6c’ is C1-6 alkylene; in another specific embodiment, R6c’ is -CH2-; in another specific embodiment, R6c’ is C1-6 haloalkylene; in another specific embodiment, R6c’ is C3-7 cycloalkylene, such as C3-5 cycloalkylene, e.g. cyclopropylene; in another specific embodiment, R6c’ is 3-7 membered heterocyclylene; in another specific embodiment, R6c’ is -C1-6 alkylene-O-, such as -CH2O-and -CH2CH2O-; in another specific embodiment, R6c’ is -C1-6 alkylene-OC1-6 alkylene-; in another specific embodiment, R6c’ is -C1-6 alkylene-NH-, such as -CH2CH2NH-; in another specific embodiment, R6c’ is -C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) -or -C1-6 alkylene-NH-C1-6 alkylene-; in another specific embodiment, R6c’ is -C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) -C1-6 alkylene-.
n
In a specific embodiment, each n is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8.
R*
In a specific embodiment, R*is H; in another specific embodiment, R*is NH2; in another specific embodiment, R*is OH; in another specific embodiment, R*is CN; in another specific embodiment, R*is halogen; in another specific embodiment, R*is C1-6 alkyl; in another specific embodiment, R*is C1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R*is C1-6 alkoxyl; in another specific embodiment, R*is C1-6 haloalkoxyl.
R7
In a specific embodiment, R7 is C1-6 alkyl; in another specific embodiment, R7 is C1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R7 is C1-6 alkenyl; in another specific embodiment, R7 is C1-6 alkynyl; in another specific embodiment, R7 is - (CH2) k-OR7a; in another specific embodiment, R7 is - (CH2) k-NR7bR7c; in another specific embodiment, R7 is - (CH2) k-C (O) R7a; in another specific embodiment, R7 is - (CH2) k-C (O) OR7a; in another specific embodiment, R7 is - (CH2) k-OC (O) -R7a; in another specific embodiment, R7 is - (CH2) k-NHC (O) -R7a; in another specific embodiment, R7 is - (CH2) k-NHC (O) O-R7a; in another specific embodiment, R7 is - (CH2) k-OC (O) NH-R7a; in another specific embodiment, R7 is - (CH2) k-C (O) NR7bR7c.
In a specific embodiment, R7 isin another specific embodiment, R7 isin another specific embodiment, R7 isin another specific embodiment, R7 isin another specific embodiment, R7 is
In a more specific embodiment, R7 isin another more specific embodiment, R7 isinanother more specific embodiment, R7 isin another more specific embodiment, R7 isin another more specific embodiment, R7 isin another more specific embodiment, R7 isin another more specific embodiment, R7 isin another more specific embodiment, R7 isin another more specific embodiment, R7 is
In a specific embodiment, R7 is unsubstituted; in another specific embodiment, R7 is substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R# group (s) .
R7a, R7b and R7c
In a specific embodiment, R7a is H; in another specific embodiment, R7a is C1-6 alkyl, such as CH3; in another specific embodiment, R7a is C1-6 alkenyl; in another specific embodiment, R7a is C1-6 alkynyl; in another specific embodiment, R7a is C1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R7a is C1-6 alkylene-OH; in another specific embodiment, R7a is C1-6 alkylene-OC1-6 alkyl; in another specific embodiment, R7a is C1-6 alkylene-NH2; in another specific embodiment, R7a is C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) ; in another specific embodiment, R7a is C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2.
R8
In a specific embodiment, R8 is C1-6 alkyl, such as C1-4 alkyl; in another specific embodiment, R8 is C1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R8 is C1-6 alkenyl, such as C1-4 alkenyl; in another specific embodiment, R8 is C1-6 alkynyl, such as C1-4 alkynyl; in another specific embodiment, R8 is - (CH2) k-OR7a, such as C1-4 alkylene-OH; in another specific embodiment, R8 is - (CH2) k-NR7bR7c, such as C1-4 alkylene-NH2; in another specific embodiment, R8 is - (CH2) k-C (O) R7a; in another specific embodiment, R8 is - (CH2) k-C (O) OR7a; in another specific embodiment, R8 is - (CH2) k-OC (O) -R7a; in another specific embodiment, R8 is - (CH2) k-NHC (O) -R7a; in another specific embodiment, R8 is - (CH2) k-NHC (O) O-R7a; in another specific embodiment, R8 is - (CH2) k-OC (O) NH-R7a; in another specific embodiment, R8 is - (CH2) k-C (O) NR7bR7c.
In a more specific embodiment, R8 is CH3; in another specific embodiment, R8 isin another specific embodiment, R8 isin another specific embodiment, R8 is
In a specific embodiment, R8 is unsubstituted; in another specific embodiment, R8 is substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R# group (s) .
R9
In a specific embodiment, R9 is H; in another specific embodiment, R9 is OH; in another specific embodiment, R9 is CN; in another specific embodiment, R9 is NH2; in another specific embodiment, R9 is NH (C1-6 alkyl) ; in another specific embodiment, R9 is N (C1-6 alkyl) 2.
In a specific embodiment, R9 is unsubstituted; in another specific embodiment, R9 is substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R# group (s) .
R10
In a specific embodiment, R10 is H; in another specific embodiment, R10 is - (CH2) q-OR10a; in another specific embodiment, R10 is - (CH2) q-NR10bR10c; in another specific embodiment, R10 is - (CH2) q-C (O) R10a; in another specific embodiment, R10 is - (CH2) q-C (O) OR10a; in another specific embodiment, R10 is - (CH2) q-OC (O) R10a; in another specific embodiment, R10 is - (CH2) q-S (O) 2-R10a; in another specific embodiment, R10 is - (CH2) q-S (O) -R10a; in another specific embodiment, R10 is - (CH2) q-NHC (O) -R10a; in another specific embodiment, R10 is - (CH2) q-C (O) NR10bR10c; in another specific embodiment, R10 is - (CH2) q-NHC (O) -OR10a; in another specific embodiment, R10 is - (CH2) q-OC (O) NR10bR10c.
In a specific embodiment, R10 is H; in another specific embodiment, R10 isin another specificembodiment, R10 isin another specific embodiment, R10 isin another specific embodiment, R10 isin another specific embodiment, R10 isin another specific embodiment, R10 is
In a more specific embodiment, R10 is H; in another more specific embodiment, R10 isin another more specific embodiment, R10 isin another more specific embodiment, R10 isin another more specific embodiment, R10 isin another more specific embodiment, R10 isin another more specific embodiment, R10 isin another more specific embodiment, R10 isin another more specific embodiment, R10 isin another more specific embodiment, R10 isin another more specific embodiment, R10 is
In a specific embodiment, R10 is unsubstituted; in another specific embodiment, R10 is substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R# group (s) .
R10a, R10b and R10c
In a specific embodiment, R10a is H; in another specific embodiment, R10a is C1-6 alkyl; in another specific embodiment, R10a is C1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R10a is C1-6 alkylene-OH; in another specific embodiment, R10a is C1-6 alkylene-OC1-6 alkyl; in another specific embodiment, R10a is C1-6 alkylene-NH2; in another specific embodiment, R10a is C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) ; in another specific embodiment, R10a is C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2.
In a specific embodiment, R10b is H; in another specific embodiment, R10b is C1-6 alkyl; in another specific embodiment, R10b is C1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R10b is C1-6 alkylene-OH; in another specific embodiment, R10b is C1-6 alkylene-OC1-6 alkyl; in another specific embodiment, R10b is C1-6 alkylene-NH2; in another specific embodiment, R10b is C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) ; in another specific embodiment, R10b is C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2.
In a specific embodiment, R10c is H; in another specific embodiment, R10c is C1-6 alkyl; in another specific embodiment, R10c is C1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R10c is C1-6 alkylene-OH; in another specific embodiment, R10c is C1-6 alkylene-OC1-6 alkyl; in another specific embodiment, R10c is C1-6 alkylene-NH2; in another specific embodiment, R10c is C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) ; in another specific embodiment, R10c is C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2.
In a specific embodiment, R10b, R10c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl; in another specific embodiment, R10b, R10c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 3-12 membered heterocyclyl; in another specific embodiment, R10b, R10c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 5-12 membered heterocyclyl or 5-10 membered heterocyclyl, such as 5-6 membered heterocyclyl; in another specific embodiment, R10b, R10c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form C6-10 aryl; in another specific embodiment, R10b, R10c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 5-12 membered heteroaryl; in another specific embodiment, the above mentioned cycloalkyl, heterocyclyl, aryl and heteroaryl are unsubstituted; in another specific embodiment, the above mentioned cycloalkyl, heterocyclyl, aryl and heteroaryl are substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl.
k and q
In a specific embodiment, each k is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8.
In a specific embodiment, each q is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8.
R7’
In a specific embodiment, R7’ is selected from C1-6 alkylene; in another specific embodiment, R7’ is C1-6 haloalkylene; in another specific embodiment, R7’ is C1-6 alkenylene; in another specific embodiment, R7’ is C1-6 alkynylene; in another specific embodiment, R7’ is - (CH2) k-OR7a’-; in another specific embodiment, R7’ is - (CH2) k-NR7bR7c’-; in another specific embodiment, R7’ is - (CH2) k-C (O) R7a’-; in another specific embodiment, R7’ is - (CH2) k-C (O) OR7a’-; in another specific embodiment, R7’ is - (CH2) k-OC (O) -R7a’-; in another specific embodiment, R7’ is - (CH2) k-NHC (O) -R7a’-; in another specific embodiment, R7’ is - (CH2) k-C (O) NR7bR7c’-; in another specific embodiment, R7’ is - (CH2) k-NHC (O) O-R7a’-; in another specific embodiment, R7’ is - (CH2) k-OC (O) NH-R7a’-.
In a specific embodiment, R7’ isin another specific embodiment, R7’ isin another specific embodiment, R7’ isin another specific embodiment, R7’ isin another specific embodiment, R7’ is
In a more specific embodiment, R7’ isin another more specific embodiment, R7’ is in another more specific embodiment, R7’ isin another more specific embodiment, R7’ is in another more specific embodiment, R7’ isin another more specific embodiment, R7’ isin another more specific embodiment, R7’ isin another more specific embodiment, R7’ isin another more specific embodiment, R7’ is
In a specific embodiment, R7’ is unsubstituted; in another specific embodiment, R7’ is substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R# group (s) .
R7a’ and R7c’
In a specific embodiment, R7a’ is bond; in another specific embodiment, R7a’ is C1-6 alkylene; in another specific embodiment, R7a’ is C1-6 alkenylene; in another specific embodiment, R7a’ is -C1-6 alkylene-O-; in another specific embodiment, R7a’ is -C1-6 alkylene-NH-.
In a specific embodiment, R7c’ is bond; in another specific embodiment, R7c’ is C1-6 alkylene; in another specific embodiment, R7c’ is C1-6 alkenylene; in another specific embodiment, R7c’ is -C1-6 alkylene-O-; in another specific embodiment, R7c’ is -C1-6 alkylene-NH-.
R10’
In a specific embodiment, R10’ is bond; in another specific embodiment, R10’ is - (CH2) q-OR10a’-; in another specific embodiment, R10’ is - (CH2) q-NR10bR10c’-; in another specific embodiment, R10’ is - (CH2) q-C (O) R10a’-; in another specific embodiment, R10’ is - (CH2) q-C (O) OR10a’-; in another specific embodiment, R10’ is - (CH2) q-OC (O) R10a’-; in another specific embodiment, R10’ is - (CH2) q-S (O) 2-R10a’-; in another specific embodiment, R10’ is -(CH2) q-S (O) -R10a’-; in another specific embodiment, R10’ is - (CH2) q-NHC (O) -R10a’-; in another specific embodiment, R10’ is - (CH2) q-C (O) NR10bR10c’-; in another specific embodiment, R10’ is - (CH2) q-NHC (O) -OR10a’-; in another specific embodiment, R10’ is - (CH2) q-OC (O) NR10bR10c’-.
In a specific embodiment, R10’ is bond; in another specific embodiment, R10’ isin another specific embodiment, R10’ isin another specific embodiment, R10’ isin another specific embodiment, R10’ isin another specific embodiment, R10’ is in another specific embodiment, R10’ is
In a specific embodiment, R10’ is bond; in another specific embodiment, R10’ isin another specific embodiment, R10’ isin another specific embodiment, R10’ isin another specific embodiment, R10’ isin another specific embodiment, R10’ isin another specific embodiment, R10’ isin another specific embodiment, R10’ isin another specific embodiment, R10’ isin another specific embodiment, R10’ isin another specific embodiment, R10’ is
In a specific embodiment, R10’ is unsubstituted; in another specific embodiment, R10’ is substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R# group (s) .
R10a’, R10b and R10c’
In a specific embodiment, R10a’ is bond; in another specific embodiment, R10a’ is C1-6 alkylene; in another specific embodiment, R10a’ is -C1-6 alkylene-O-; in another specific embodiment, R10a’ is -C1-6 alkylene-NH-.
In a specific embodiment, R10c’ is bond; in another specific embodiment, R10c’ is C1-6 alkylene; in another specific embodiment, R10c’ is -C1-6 alkylene-O-; in another specific embodiment, R10c’ is -C1-6 alkylene-NH-.
R10b is as defined in the context.
In a specific embodiment, R10b, R10c’ are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form C3-10 cycloalkylene, 3-12 membered (such as 5-10 membered or 5-6 membered) heterocyclylene, C6-10 arylene or 5-12 membered heteroarylene (such as 5-10 membered or 5-6 membered) ; in another specific embodiment, the above mentioned cycloalkylene, heterocyclylene, arylene or heteroarylene are optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl.
R#
In a specific embodiment, R# is H; in another specific embodiment, R# is NH2; in another specific embodiment, R# is OH; in another specific embodiment, R# is CN; in another specific embodiment, R# is halogen, C1-6 alkyl; in another specific embodiment, R# is C1-6 haloalkyl; in another specific embodiment, R# is C1-6 alkoxyl; in another specific embodiment, R# is C1-6 haloalkoxyl.
T1, T2 and T3
In a specific embodiment, T1, T2 and T3 are independently a targeting moiety.
In a specific embodiment, the targeting moiety binds to a tumor associated antigen.
In a specific embodiment, the targeting moiety is an antibody or antigen-binding antibody fragment.
In a specific embodiment, the antibody is a bispecific or multispecific antibody.
L1, L2 and L3
In a specific embodiment, L1, L2 and L3 are independently a linker.
In a specific embodiment, the linker is a cleavable linker.
In a specific embodiment, the linker is a protease cleavable linker.
In a specific embodiment, the linker comprises a dipeptide, tripeptide or tetrapeptide.
D1, D2 and D3
In a specific embodiment, D1, D2 and D3 are independently a drug moiety.
In a specific embodiment, the drug moiety is as defined in the context.
x, y and z
In a specific embodiment, x is an integer between 1 and 10, such as 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10, preferably is 1.
In a specific embodiment, y is an integer between 1 and 10, such as 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10, preferably is 1.
In a specific embodiment, z is an integer between 1 and 10, such as 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10, preferably is 1.
w, u and r
In a specific embodiment, w is an integer between 1 and 10, such as 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10; in another specific embodiment, w is an integer between 2 and 8, preferably is 3, 4, 5, 6, 7 or 8.
In a specific embodiment, u is an integer between 1 and 10, such as 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10; in another specific embodiment, u is an integer between 2 and 8, preferably is 3, 4, 5, 6, 7 or 8.
In a specific embodiment, r is an integer between 1 and 10, such as 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10; in another specific embodiment, r is an integer between 2 and 8, preferably is 3, 4, 5, 6, 7 or 8.
Any technical solution in any one of the above specific embodiments, or any combination thereof, may be combined with any technical solution in other specific embodiments or any combination thereof. For example, any technical solution of R1 or any combination thereof may be combined with any technical solution of R1-R10, R2’, R3’, R6’, R7’, R10’, R, R#, R*, L1-L3, D1-D3, x, y, z, w, u, r or any combination thereof. The present disclosure is intended to include all combination of such technical solutions, which are not exhaustively listed here to save space.
1.2 Embodiments -Compound of formula (I)
In one embodiment, the present disclosure refers to a compound of formula (I) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof:

wherein,
X is CRx or N, such as CH or N;
Rx is selected from H, halogen, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
R1 is selected from halogen, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
R2 is selected from NR2bR2c, - (CH2) m-C (O) R2a, - (CH2) m-C (O) OR2a, - (CH2) m-OC (O) R2a, - (CH2) m-S (O) 2-R2a, - (CH2) m-
S (O) -R2a, - (CH2) m-NHC (O) -R2a, - (CH2) m-C (O) NR2bR2c, - (CH2) m-NHC (O) OR2a and - (CH2) m-OC (O) NR2bR2c and - (CH2) m-NHC (O) NR2bR2c;
R2a, R2b and R2c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2; 
each m is independently selected from 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
R3 is selected from H, - (CH2) pOR3a, - (CH2) pC (O) R3a, - (CH2) pC (O) OR3a, - (CH2) pOC (O) R3a, - (CH2) p-S (O) 2-R3a, - (CH2) p-
S (O) -R3a, - (CH2) p-NR3bR3c, - (CH2) p-NHC (O) -R3a, - (CH2) p-C (O) NR3bR3c, - (CH2) p-NHC (O) OR3a, - (CH2) p-OC (O) NR3bR3c and - (CH2) p-NHC (O) NR3bR3c;
R3a, R3b and R3c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkylene-OH, C1-6 alkylene-OC1-6 
alkyl, C1-6 alkylene-NH2, C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) and C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2;
or, R3b, R3c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl, 3-12 membered 
heterocyclyl, C6-10 aryl or 5-12 membered heteroaryl;
each p is independently selected from 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
wherein, R2 and R3 are optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R group (s) , R is selected from H, NH2, OH, CN, halogen, 
C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl.
In some embodiments, the present disclosure refers to the compound of formula (I) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein:
X is CH or N;
R1 is selected from halogen and C1-6 alkoxyl;
R2 is selected from NR2bR2c, C (O) R2a, NHC (O) -R2a, C (O) NR2bR2c, NHC (O) OR2a and OC (O) NR2bR2c;
R2a, R2b and R2c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
R3 is selected from H, - (CH2) pOR3a, - (CH2) pC (O) R3a, - (CH2) pC (O) OR3a, - (CH2) p-NR3bR3c, - (CH2) p-NHC (O) -R3a, - 
(CH2) p-C (O) NR3bR3c, - (CH2) p-NHC (O) OR3a and - (CH2) p-OC (O) NR3bR3c; preferably, R3 is not H;
R3a, R3b and R3c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
or, R3b, R3c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl or 5-10 
membered heterocyclyl;
each p is independently selected from 0, 1, 2, 3 and 4.
In some embodiments, the present disclosure refers to the compound of formula (I) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein:
X is CH or N, preferably, X is CH;
R1 is selected from halogen and C1-6 alkoxyl, preferably, R1 is halogen;
R2 is selected frompreferably, R2 is
R2a, R2b and R2c are independently selected from H and C1-6 alkyl;
each m is independently 1, 2 or 3;
R3 is selected from H, 
preferably, R3 is H;
R3a, R3b and R3c are independently selected from H and C1-6 alkyl;
or, R3b, R3c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 5-6 membered heterocyclyl;
each p is independently 0, 1, 2 or 3;
alternatively,
R3 is selected from H, 
In some embodiments, the present disclosure refers to the compound of formula (I) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein:
X is CH or N;
R1 is F or OMe;
R2 is
R3 is selected from H,  R3 is preferably not H.
In some embodiments, the present disclosure refers to a compound of formula (I-a) or (I-b) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof:

wherein,
X, R2, R2b, R2c and R3 are as defined in the context.
In some embodiments, the present disclosure refers to a compound of formula (I-c) or (I-d) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof:

wherein,
X is CRx or N, such as CH or N;
Rx is selected from halogen, C1-6 alkyl, and C1-6 alkoxyl;
R1 is selected from halogen and C1-6 alkoxyl;
R2 is NR2bR2c;
R2b and R2c are independently selected from H, and C1-6 alkyl;
yet alternatively,
X is CRx, such as CH;
Rx is selected from H, halogen, C1-6 alkyl and C1-6 alkoxyl;
R1 is selected from halogen and C1-4 alkoxyl, preferably is halogen, such as F;
R2 is NR2bR2c, preferably is NH2;
R2b and R2c are independently selected from H and C1-4 alkyl, such as H or CH3.
In some embodiments, the present disclosure refers to a compound of formula (I) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, the compound is selected from:


1.3 Embodiments -Compound of formula (II)
In one embodiment, the present disclosure refers to a compound of formula (II) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof:

wherein,
R4 and R5 is independently selected from H, halogen, OH, NH2, N (C1-6 alkyl) 2, NH-C1-6 alkyl, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, 
C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
or, preferably, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl, 3-12 
membered heterocyclyl, C6-10 aryl or 5-12 membered heteroaryl, wherein, the C3-10 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclyl, C6-10 aryl and 5-12 membered heteroaryl are optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
R6 is selected from H, - (CH2) n-OR6a, - (CH2) n-C (O) OR6a, - (CH2) n-OC (O) R6a, - (CH2) n-C (O) R6a, - (CH2) n-S (O) 2-R6a, - 
(CH2) n-S (O) -R6a, - (CH2) n-OP (O) (OH) -OR6a, - (CH2) n-OP (S) (OH) -OR6a, - (CH2) n-NHC (O) -R6a, - (CH2) n-NHC (O) NR6bR6c, - (CH2) n-NHC (O) OR6a, - (CH2) n-OC (O) NR6bR6c, - (CH2) n-C (O) NR6bR6c, - (CH2) n-CH2NR6bR6c, - (CH2) n-3-7 membered heterocyclylene- (CH2) n-OR6a, and - (CH2) n-3-7 membered heterocyclylene- (CH2) n-R6a;
R6a, R6b and R6c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C3-7 cycloalkyl, 3-7 membered heterocyclyl, 
C1-6 alkylene-OH, C1-6 alkylene-OC1-6 alkyl, C1-6 alkylene-NH2, C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) and C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2;
each n is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
wherein, R6 is optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R*group (s) , R*is selected from H, NH2, OH, CN, halogen, C1-
6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
alternatively,
R4 and R5 is independently selected from halogen, OH, NH2, N (C1-6 alkyl) 2, NH-C1-6 alkyl, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-
6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
or, preferably, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl, 3-12 
membered heterocyclyl, C6-10 aryl or 5-12 membered heteroaryl, wherein, the C3-10 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclyl, C6-10 aryl and 5-12 membered heteroaryl are optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
R6 is selected from H, - (CH2) n-OR6a, - (CH2) n-C (O) OR6a, - (CH2) n-OC (O) R6a, - (CH2) n-C (O) R6a, - (CH2) n-S (O) 2-R6a, - 
(CH2) n-S (O) -R6a, - (CH2) n-NHC (O) -R6a, - (CH2) n-NHC (O) NR6bR6c, - (CH2) n-NHC (O) OR6a, - (CH2) n-OC (O) NR6bR6c, - (CH2) n-C (O) NR6bR6c and - (CH2) n-CH2NR6bR6c;
R6a, R6b and R6c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkylene-OH, C1-6 alkylene-OC1-6 
alkyl, C1-6 alkylene-NH2, C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) and C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2;
wherein, R6 is optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R*group (s) , R*is selected from H, NH2, OH, CN, halogen, C1-
6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
each n is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8.
In some embodiments, the present disclosure refers to the compound of formula (II) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein:
R4 is selected from C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
R5 is selected from halogen, C1-6 haloalkyl and C1-6 haloalkoxyl;
or, preferably, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl or 5-
10 membered heterocyclyl, wherein, the C3-10 cycloalkyl and 5-10 membered heterocyclyl are optionally substituted with 1, 2 or 3 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
R6 is selected from - (CH2) n-OR6a, - (CH2) n-C (O) OR6a, - (CH2) n-OC (O) R6a, - (CH2) n-C (O) R6a, - (CH2) n-S (O) 2-R6a, - (CH2) n-
S (O) -R6a, - (CH2) n-NHC (O) -R6a, - (CH2) n-NHC (O) NR6bR6c and - (CH2) n-C (O) NR6bR6c;
R6a is selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene -NH2, such as H, CH3, CH2OH and CH2CH2OH;
R6b and R6c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2, such as H and CH3;
wherein, R6 is optionally substituted with 1, 2 or 3 R*group (s) , R*is selected from H, halogen, C1-6 alkyl and C1-6 
haloalkyl;
each n is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
alternatively,
R6 is selected from - (CH2) n-OR6a, - (CH2) n-C (O) OR6a, - (CH2) n-OC (O) R6a, - (CH2) n-C (O) R6a, - (CH2) n-NHC (O) -R6a, - 
(CH2) n-C (O) NR6bR6c and - (CH2) n-CH2NR6bR6c;
still alternatively,
R6 is selected from - (CH2) n-OR6a, - (CH2) n-C (O) OR6a, - (CH2) n-OC (O) R6a, - (CH2) n-C (O) R6a, - (CH2) n-NHC (O) -R6a and - 
(CH2) n-C (O) NR6bR6c.
In some embodiments, the present disclosure refers to the compound of formula (II) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein:
R4 is C1-6 alkyl or C1-6 alkoxyl;
R5 is halogen;
or, preferably, R4 and R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form 5-6 membered 
heterocyclyl, which is optionally substituted with 1, 2 or 3 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
R6 is selected from - (CH2) n-OR6a, - (CH2) n-C (O) OR6a, - (CH2) n-NHC (O) -R6a and - (CH2) n-CH2NR6bR6c;
R6 is preferably selected from - (CH2) n-OR6a, - (CH2) n-C (O) OR6a and - (CH2) n-NHC (O) -R6a;
R6a is selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH, C1-6 alkylene-NH2, such as H, CH3, CH2OH, CH2CH2OH and 
CH2CH2NH2;
R6b and R6c are independently selected from H and C1-6 alkyl, such as H and CH3;
each n is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6.
In some embodiments, the present disclosure refers to the compound of formula (II) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof:
R4 is C1-6 alkyl or C1-6 alkoxyl;
R5 is halogen;
or, preferably, R4 and R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form 5-6 membered 
heterocyclyl;
R6 is selected from
preferably, R6 is
R6a, R6b and R6c are independently selected from H and C1-6 alkyl;
each n is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6;
alternatively,
R4 is C1-4 alkyl or C1-4 alkoxyl, such as Me or OMe;
R5 is halogen, such as F;
or, preferably, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form
R6 is selected from
In some embodiments, the present disclosure refers to a compound of formula (II-a) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, R6 is selected from
In some embodiments, the present disclosure refers to a compound of formula (II-a) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, R6 is selected from
In some embodiments, the present disclosure refers to a compound of formula (II-a) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof:

wherein, R6 is as defined in the context.
In some embodiments, the present disclosure refers to a compound of formula (II) , wherein, the compound has the structure of formula (II) , (II-b) or (II-c) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof:

wherein,
R4 is selected from C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
R5 is selected from halogen, C1-6 haloalkyl and C1-6 haloalkoxyl;
or, preferably, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl or 5-
10 membered heterocyclyl, wherein, the C3-10 cycloalkyl and 5-10 membered heterocyclyl are optionally substituted with 1, 2 or 3 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
R6 is selected from - (CH2) n-OR6a and - (CH2) n-CH2NR6bR6c;
R6a is selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene -NH2;
R6b is H;
R6c is selected from C1-6 alkyl and C1-6 haloalkyl;
each n is independently 0, 1, 2, 3, or 4, preferably 1, 2, 3, or 4;
wherein, R6 is optionally substituted with 1, 2 or 3 R*group (s) , R*is selected from H, halogen, C1-6 alkyl and C1-6 
haloalkyl;
alternatively,
R4 is C1-6 alkyl or C1-6 alkoxyl, alternatively is C1-6 alkyl or C1-6 alkoxyl, such as Me or OMe;
R5 is halogen, alternatively is halogen, such as F;
or, R4 and R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form 5-6 membered heterocyclyl; 
R6 is - (CH2) n-OR6a or - (CH2) n-CH2NR6bR6c;
R6a is selected from H, C1-6 alkyl, and C2-6 alkylene-OH, such as H, CH3, CH2CH2OH or CH2CH2CH2OH;
R6b is H;
R6c is C1-6 alkyl, such as CH3, CH2CH3, or isopropyl;
each n is independently 0, 1, 2, or 3, preferably 0, 1 or 2.
In some embodiments, the present disclosure refers to a compound of formula (II) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof:

wherein,
R4 is selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl, alternatively is selected from C1-6 
alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
R5 is selected from H, halogen, C1-6 haloalkyl and C1-6 haloalkoxyl, alternatively is selected from halogen, C1-6 haloalkyl 
and C1-6 haloalkoxyl;
or, preferably, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl or 5-
10 membered heterocyclyl, wherein, the C3-10 cycloalkyl and 5-10 membered heterocyclyl are optionally substituted with 1, 2 or 3 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
R6 is selected from - (CH2) n-OP (O) (OH) -OR6a, - (CH2) n-OP (S) (OH) -OR6a, and - (CH2) n-CH2NR6bR6c;
R6a is selected from H, C1-6 alkyl and C1-6 haloalkyl;
R6b is selected from H, C1-6 alkyl, and C1-6 haloalkyl;
R6c is selected from C3-7 cycloalkyl, and 3-7 membered heterocyclyl;
each n is independently 0, 1, 2, 3 or 4;
alternatively,
R4 is H, C1-6 alkyl or C1-6 alkoxyl, alternatively is C1-6 alkyl or C1-6 alkoxyl, such as Me or OMe;
R5 is H, halogen, alternatively is halogen, such as F;
or, R4 and R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form 5-6 membered heterocyclyl;
R6 is selected from - (CH2) n-OP (O) (OH) -OR6a, and - (CH2) n-CH2NR6bR6c;
R6a is selected from H and C1-6 alkyl, preferably is H;
R6b is selected from H and C1-6 alkyl, preferably is H;
R6c is selected from C3-5 cycloalkyl, such as cyclopropyl;
each n is independently 0, 1, 2, or 3, preferably is 0, or 1.
In some embodiments, the present disclosure refers to a compound of formula (II-d) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof:

wherein,
R6 is - (CH2) n-OR6a;
R6a is selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene -NH2, such as H, CH3, CH2OH and CH2CH2OH;
each n is independently 0, 1, 2, 3, or 4, preferably 1, 2, 3, or 4;
wherein, R6 is optionally substituted with 1, 2 or 3 R*group (s) , R*is selected from H, halogen, C1-6 alkyl and C1-6 
haloalkyl;alternatively,
R6 is - (CH2) n-OR6a;
R6a is selected from H, and C1-6 alkyl, such as H, or CH3, preferably is H;
each n is independently 0, 1, 2, or 3, preferably 1 or 2.
In some embodiments, the present disclosure refers to a compound of formula (II) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, the compound is selected from:


1.4 Embodiments -Compound of formula (III)
In one embodiment, the present disclosure refers to a compound of formula (III) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof:

wherein,
R7 and R8 are independently selected from C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkenyl, C1-6 alkynyl, - (CH2) k-OR7a, - (CH2) k-
NR7bR7c, - (CH2) k-C (O) R7a, - (CH2) k-C (O) OR7a, - (CH2) k-OC (O) -R7a, - (CH2) k-NHC (O) -R7a, - (CH2) k-NHC (O) O-R7a, - (CH2) k-OC (O) NH-R7a and - (CH2) k-C (O) NR7bR7c;
R7a, R7b and R7c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkenyl, C1-6 alkynyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkylene-
OH, C1-6 alkylene-OC1-6 alkyl, C1-6 alkylene-NH2, C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) and C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2;
each k is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
R9 is selected from H, OH, CN, NH2, NH (C1-6 alkyl) and N (C1-6 alkyl) 2, such as H or NH2;
R10 is selected from H, - (CH2) q-OR10a, - (CH2) q-NR10bR10c, - (CH2) q-C (O) R10a, - (CH2) q-C (O) OR10a, - (CH2) q-OC (O) R10a, 
- (CH2) q-S (O) 2-R10a, - (CH2) q-S (O) -R10a, - (CH2) q-NHC (O) -R10a, - (CH2) q-C (O) NR10bR10c, - (CH2) q-NHC (O) -OR10a and - (CH2) q-OC (O) NR10bR10c;
R10a, R10b and R10c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkylene-OH, C1-6 alkylene-OC1-6 
alkyl, C1-6 alkylene-NH2, C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) and C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2;
or, R10b, R10c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl, 3-12 
membered heterocyclyl, C6-10 aryl or 5-12 membered heteroaryl, wherein, the C3-10 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclyl, C6-10 aryl and 5-12 membered heteroaryl are optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
each q is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
wherein, R7, R8, R9 and R10 are optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R# group (s) , R# is selected from H, NH2, OH, 
CN, halogen, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl.
In some embodiments, the present disclosure refers to the compound of formula (III) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein:
R7 is selected from - (CH2) k-OR7a, - (CH2) k-NR7bR7c, - (CH2) k-C (O) OR7a, - (CH2) k-OC (O) -R7a, - (CH2) k-NHC (O) -R7a and 
- (CH2) k-C (O) NR7bR7c;
R7a, R7b and R7c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkenyl, C1-6 alkynyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 
alkylene-NH2;
each k is independently 0, 1, 2 or 3;
R8 is selected from C1-6 alkyl, C1-6 alkenyl, C0-6 alkylene-OH and C0-6 alkylene-NH2;
R9 is selected from H, NH2, NH (C1-6 alkyl) and N (C1-6 alkyl) 2, such as H or NH2;
R10 is selected from H, - (CH2) q-OR10a, - (CH2) q-NR10bR10c, - (CH2) q-C (O) R10a, - (CH2) q-C (O) OR10a, - (CH2) q-OC (O) R10a, 
- (CH2) q-NHC (O) -R10a, - (CH2) q-C (O) NR10bR10c, - (CH2) q-NHC (O) -OR10a, and - (CH2) q-OC (O) NR10bR10c;
R10a, R10b and R10c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
or, R10b, R10c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl or 5-10 
membered heterocyclyl, wherein, the C3-10 cycloalkyl and 5-10 membered heterocyclyl are optionally substituted with 1, 2 or 3 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
each q is independently 0, 1, 2, 3 or 4;
wherein, R7, R8, R9 and R10 is optionally substituted with 1, 2 or 3 R# group (s) , R# is selected from H, halogen, C1-6 
alkyl and C1-6 haloalkyl.
In some embodiments, the present disclosure refers to a compound of formula (III-a) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof:

wherein,
R7 and R8 are independently selected from C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkenyl, C1-6 alkynyl, - (CH2) k-OR7a, - (CH2) k-
NR7bR7c, - (CH2) k-C (O) R7a, - (CH2) k-C (O) OR7a, - (CH2) k-OC (O) -R7a, - (CH2) k-NHC (O) -R7a, - (CH2) k-C (O) NR7bR7c, - (CH2) k-NHC (O) O-R7a and - (CH2) k-OC (O) NH-R7a;
R7a, R7b and R7c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkenyl, C1-6 alkynyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 
alkylene-NH2;
each k is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6;
wherein, R7 and R8 are optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R# group (s) , R# is selected from H, NH2, OH, CN, 
halogen, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
alternatively,
R7 is selected from - (CH2) k-OR7a, - (CH2) k-NR7bR7c, - (CH2) k-C (O) OR7a, - (CH2) k-OC (O) -R7a, - (CH2) k-NHC (O) -R7a and 
- (CH2) k-C (O) NR7bR7c;
R7a, R7b and R7c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkenyl, C1-6 alkynyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 
alkylene-NH2;
each k is independently 0, 1, 2 or 3;
R8 is selected from C1-6 alkyl, C1-6 alkenyl, C0-6 alkylene-OH and C0-6 alkylene-NH2.
In some embodiments, the present disclosure refers to the compound of formula (III-a) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein:
R7 is selected from
R7a, R7b and R7c are independently selected from H and C1-6 alkyl, such as H and CH3,
k is 0, 1, 2 or 3;
R8 is selected from C1-6 alkyl, C1-6 alkenyl, C1-6 alkynyl, C0-6 alkylene-OH and C0-6 alkylene-NH2;
alternatively,
R7 is selected from
R8 is selected from C1-4 alkyl, C1-4 alkenyl, C1-4 alkynyl, C1-4 alkylene-OH and C1-4 alkylene-NH2, such as CH3, 
In some embodiments, the present disclosure refers to a compound of formula (III-b) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof:

wherein,
R10 is selected from H, - (CH2) q-OR10a, - (CH2) q-NR10bR10c, - (CH2) q-C (O) R10a, - (CH2) q-C (O) OR10a, - (CH2) q-OC (O) R10a, 
- (CH2) q-S (O) 2-R10a, - (CH2) q-S (O) -R10a, - (CH2) q-NHC (O) -R10a, - (CH2) q-C (O) NR10bR10c, - (CH2) q-NHC (O) -OR10a and - (CH2) q-OC (O) NR10bR10c;
R10a, R10b and R10c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
or, R10b, R10c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl, 3-12 
membered heterocyclyl, C6-10 aryl or 5-12 membered heteroaryl, wherein, the C3-10 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclyl, C6-10 aryl and 5-12 membered heteroaryl are optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
each q is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6;
wherein, R10 is optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R# group (s) , R# is selected from H, NH2, OH, CN, halogen, 
C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
alternatively,
R10 is selected from H, - (CH2) q-OR10a, - (CH2) q-NR10bR10c, - (CH2) q-C (O) R10a, - (CH2) q-C (O) OR10a, - (CH2) q-OC (O) R10a, 
- (CH2) q-NHC (O) -R10a, - (CH2) q-C (O) NR10bR10c, - (CH2) q-NHC (O) -OR10a and - (CH2) q-OC (O) NR10bR10c;
R10a, R10b and R10c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
or, R10b, R10c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl or 5-10 
membered heterocyclyl, wherein, the C3-10 cycloalkyl and 5-10 membered heterocyclyl are optionally substituted with 1, 2 or 3 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
each q is independently 0, 1, 2, 3 or 4;
wherein, R10 is optionally substituted with 1, 2 or 3 R# group (s) , R# is selected from H, halogen, C1-6 alkyl and C1-6 
haloalkyl.
In some embodiments, the present disclosure refers to the compound of formula (III-b) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein:
R10 is selected from H, 
R10a, R10b and R10c are independently selected from H and C1-6 alkyl;
or, R10b, R10c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 5-6 membered heterocyclyl, 
which is optionally substituted with 1, 2 or 3 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
each q is independently is independently 0, 1, 2 or 3;
alternatively,
R10 is selected from H, 
In some embodiments, the present disclosure refers to the compound of formula (III) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, R10a is preferably not H.
In some embodiments, the present disclosure refers to a compound of formula (III) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, the compound is selected from:


II. Conjugate
Certain embodiments of the present disclosure relate to conjugates of compounds of Formula (I) , (II) or (III) comprising one or more compounds of Formula (I) conjugated to a targeting moiety via one or more linkers.
The conjugates of the present disclosure may comprise one or multiple compounds of Formula (I) , (II) or (III) conjugated to the targeting moiety. For example, multiple compounds of Formula (I) may be conjugated to the targeting moiety by attaching the compound at multiple different sites on the targeting moiety. Alternatively, or in addition, multiple compounds of Formula (I) may be conjugated to the targeting moiety by employing one or more multivalent linkers each allowing for attachment of multiple compounds to a single site on the targeting moiety.
Accordingly, certain embodiments of the present disclosure relate to conjugates of compound of formula (I) represented by L1- (D1) x, preferably represented by T1- [L1’- (D1) x] w,
wherein, T1 is a targeting moiety;
L1 is a linker, and L1’ is a divalent group formed by the connection between T1 and L1;
D1 is a drug moiety, which is a camptothecin analogue as described herein and selected from the compound of formula 
(I) (such as formula (I-1) or (I-2) ) ;
x is an integer between 1 and 10;
w is an integer between 1 and 10.
In certain embodiments, x is between 1 and 2. In some embodiments, x is 1.
In some embodiments, w is between 1 and 8, for example, between 2 and 8, or between 2 and 6. In some embodiments, w is between 2 and 4.
As noted above, a targeting moiety, “T, ” can be conjugated to more than one compound of Formula (I) , “D. ” Those skilled in the art will appreciate that, while any particular targeting moiety T is conjugated to an integer number of compounds D, analysis of a preparation of the conjugate to determine the ratio of compound D to targeting moiety T may give a non-integer result, reflecting a statistical average. This ratio of compound D to targeting moiety T may generally be referred to as the drug-to-antibody ratio, or “DAR. ” Accordingly, conjugate preparations having non-integer DARs are intended to be encompassed. One skilled in the art will appreciate that the term “DAR” may be employed to define conjugates comprising targeting moieties other than antibodies.
2.1 Camptothecin Analogue, D
In accordance with the present disclosure, conjugates comprise a camptothecin analogue as the drug moiety, D, where the camptothecin analogue is a compound of Formula (I) , (II) or (III) .
2.2 Embodiments -Compound of formula (I)
In an embodiment, the present disclosure refers to a compound, which comprises the structure of formula (I-1) or (I-2) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof:

wherein,
represents the attachment point of formula (I-1) or (I-2) and the rest of the compound;
R2’ is a divalent group formed by the connection between R2 and the rest of the compound;
R3’ is a divalent group formed by the connection between R3 and the rest of the compound;
X, R1, R2 and R3 are as defined in the context;
alternatively,
X is CH or N;
R1 is selected from halogen, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl, alternatively selected from 
halogen and C1-6 alkoxyl, such as F and OMe;
R2 and R3 are as defined in the context the context.
In some embodiments, the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (I-1) or (I-2) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein:
R2 is selected from NR2bR2c, - (CH2) m-C (O) R2a, - (CH2) m-C (O) OR2a, - (CH2) m-OC (O) R2a, - (CH2) m-S (O) 2-R2a, - (CH2) m-
S (O) -R2a, - (CH2) m-NHC (O) -R2a, - (CH2) m-C (O) NR2bR2c, - (CH2) m-NHC (O) OR2a and - (CH2) m-OC (O) NR2bR2c and - (CH2) m-NHC (O) NR2bR2c;
R2a, R2b and R2c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2; 
alternatively,
R2 is selected from NR2bR2c, C (O) R2a, NHC (O) -R2a, C (O) NR2bR2c, NHC (O) OR2a and OC (O) NR2bR2c;
R2a, R2b and R2c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
alternatively,
R2 is selected from
R2a, R2b and R2c are independently selected from H and C1-6 alkyl;
yet alternatively,
R2 is
In some embodiments, the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (I-1) or (I-2) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein:
R2’ is selected from -NR2bR2c’-, - (CH2) m-C (O) R2a’-, - (CH2) m-C (O) OR2a’-, - (CH2) m-OC (O) R2a’, - (CH2) m-S (O) 2-R2a’-, - 
(CH2) m-S (O) -R2a’-, - (CH2) m-NHC (O) -R2a’-, - (CH2) m-C (O) NR2bR2c’-, - (CH2) m-NHC (O) OR2a’-and - (CH2) m-OC (O) NR2bR2c’-and - (CH2) m-NHC (O) NR2bR2c’-;
R2a’ and R2c’ are independently selected from bond, C1-6 alkylene, C1-6 haloalkylene, C1-6 alkylene-O-and C1-6 
alkylene-NH-;
R2b is selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
each m is independently selected from 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
R2’ is optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R group (s) , R is selected from H, NH2, OH, CN, halogen, C1-6 alkyl, C1-
6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
alternatively,
R2’ is selected from -NR2bR2c’, -C (O) R2a’-, -NHC (O) -R2a’-, -C (O) NR2bR2c’-, -NHC (O) OR2a’-and -OC (O) NR2bR2c’-;
R2a’ and R2c’ are independently selected from bond, C1-6 alkylene, -C1-6 alkylene-O-and -C1-6 alkylene-NH-;
R2b is selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
R2’ is selected from
R2a’ and R2c’ are independently selected from bond and C1-6 alkylene;
R2b is selected from H and C1-6 alkyl;
each m is independently 1, 2 or 3;
yet alternatively,
R2’ is
In some embodiments, the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (I-1) or (I-2) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein:
R3 is selected from H, - (CH2) pOR3a, - (CH2) pC (O) R3a, - (CH2) pC (O) OR3a, - (CH2) pOC (O) R3a, - (CH2) p-S (O) 2-R3a, - (CH2) p-
S (O) -R3a, - (CH2) p-NR3bR3c, - (CH2) p-NHC (O) -R3a, - (CH2) p-C (O) NR3bR3c, - (CH2) p-NHC (O) OR3a, - (CH2) p-OC (O) NR3bR3c and - (CH2) p-NHC (O) NR3bR3c;
R3a, R3b and R3c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkylene-OH, C1-6 alkylene-OC1-6 
alkyl, C1-6 alkylene-NH2, C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) and C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2;
or, R3b, R3c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl, 3-12 membered 
heterocyclyl, C6-10 aryl or 5-12 membered heteroaryl;
alternatively,
R3 is selected from H, - (CH2) pOR3a, - (CH2) pC (O) R3a, - (CH2) pC (O) OR3a, - (CH2) p-NR3bR3c, - (CH2) p-NHC (O) -R3a, - 
(CH2) p-C (O) NR3bR3c, - (CH2) p-NHC (O) OR3a and - (CH2) p-OC (O) NR3bR3c; preferably, R3 is not H;
R3a, R3b and R3c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
still alternatively,
R3 is selected from H, 
R3a, R3b and R3c are independently selected from H and C1-6 alkyl;
yet alternatively,
R3 is selected from H, 
In some embodiments, the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (I-1) or (I-2) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein:
R3’ is selected from bond, - (CH2) pOR3a’-, - (CH2) pC (O) R3a’-, - (CH2) pC (O) OR3a’-, - (CH2) pOC (O) R3a’-, - (CH2) p-S (O) 2-
R3a’-, - (CH2) p-S (O) -R3a’-, - (CH2) p-NR3bR3c’-, - (CH2) p-NHC (O) -R3a’-, - (CH2) p-C (O) NR3bR3c’-, - (CH2) p-NHC (O) OR3a’-, - (CH2) p-OC (O) NR3bR3c’-and - (CH2) p-NHC (O) NR3bR3c’-;
R3a’ and R3c’ are independently selected from bond, C1-6 alkylene, C1-6 haloalkylene, -C1-6 alkylene-O-, -C1-6 alkylene-
OC1-6 alkylene-, -C1-6 alkylene-NH-, -C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) -, -C1-6 alkylene-NH-C1-6 alkylene-and -C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) -C1-6 alkylene-;
R3b is selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkylene-OH, C1-6 alkylene-OC1-6 alkyl, C1-6 alkylene-NH2, C1-6 
alkylene-NH (C1-6 alkyl) and C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2;
or, R3b, R3c’ are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form C3-10 cycloalkylene, 5-12 
membered heterocyclylene, C6-10 arylene or 5-12 membered heteroarylene;
each p is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
R3’ is optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R group (s) , R is selected from H, NH2, OH, CN, halogen, C1-6 alkyl, C1-
6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
alternatively,
R3’ is selected from bond, - (CH2) pOR3a’-, - (CH2) pC (O) R3a’-, - (CH2) pC (O) OR3a’-, - (CH2) p-NR3bR3c’-, - (CH2) p-NHC (O) -
R3a’-, - (CH2) p-C (O) NR3bR3c’-, - (CH2) p-NHC (O) OR3a’-and - (CH2) p-OC (O) NR3bR3c’-;
R3a’ and R3c’ are independently selected from bond, C1-6 alkylene, -C1-6 alkylene-O-and -C1-6 alkylene-NH-;
R3b is selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
or, R3b, R3c’ are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form C3-10 cycloalkylene or 5-10 
membered heterocyclylene;
each p is independently selected from 0, 1, 2, 3 and 4;
still alternatively,
R3’ is selected from bond, 
R3a’ and R3c’ are independently selected from bond and C1-6 alkylene;
R3b is selected from H and C1-6 alkyl;
or, R3b, R3c’ are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 5-6 membered 
heterocyclylene;
each p is independently 0, 1, 2 or 3;
yet alternatively,
R3’ is selected from bond,  R3’ is preferably not bond.
In some embodiments, the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (I-1a) , (I-2a) , (I-1b) , or (I-2b) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein:

wherein,
X, R2, R2’, R2b, R2c, R2c’, R3 and R3’ are as defined in the context;
In some embodiments, the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (I-1c) or (I-1d) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein:

wherein,
X is CRx or N, such as CH or N;
Rx is selected from halogen, C1-6 alkyl, and C1-6 alkoxyl;
R1 is selected from halogen and C1-6 alkoxyl;
R2’ is -NR2bR2c’-;
R2b is selected from H, and C1-6 alkyl;
R2c’ is selected from bond, and C1-6 alkylene;
yet alternatively,
X is CRx, such as CH;
Rx is selected from H, halogen, C1-6 alkyl and C1-6 alkoxyl;
R1 is selected from halogen and C1-4 alkoxyl, preferably is halogen, such as F;
R2’ is -NR2bR2c’-, and R2’ preferably is -NH-;
R2b is independently selected from H and C1-4 alkyl;
R2c’ is independently selected from bond and C1-4 alkylene.
In some embodiments, the present disclosure refers to a compound, a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein the compound comprises a structure selected from the following:

In some embodiments, the present disclosure refers to a conjugate represented by L1- (D1) x, preferably, represented by T1- [L1’- (D1) x] w;
wherein, T1 is a targeting moiety;
L1 is a linker, and L1’ is a divalent group formed by the connection between T1 and L1;
D1 is a drug moiety, which is selected from the compound of formula (I) (such as formula (I-1) or (I-2) ) as defined in 
the context;
x is an integer between 1 and 10, alternatively is 1;
w is an integer between 1 and 10.
In some embodiments, the present disclosure refers to a conjugate, wherein the conjugate represented by L1- (D1) x is selected from:





In some embodiments, the present disclosure refers to a conjugate, wherein the conjugate represented by T1- [L1’- (D1) x] w is selected from:



wherein, T1 and w are as defined in the context.
2.3 Embodiments -Compound of formula (II)
In one embodiment, the present disclosure refers to a compound, which comprises the structure of formula (II-1) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof:

wherein,
represents the attachment point of formula (II-1) and the rest of the compound;
R6’ is a divalent group formed by the connection between R6 and the rest of the compound;
R4, R5 and R6 are as defined in the context;
alternatively,
R4 and R5 is independently selected from H, halogen, OH, NH2, N (C1-6 alkyl) 2, NH-C1-6 alkyl, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, 
C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
or, preferably, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl, 3-12 
membered heterocyclyl, C6-10 aryl or 5-12 membered heteroaryl, wherein, the C3-10 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclyl, C6-10 aryl and 5-12 membered heteroaryl are optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
R6’ is selected from bond, - (CH2) n-OR6a’-, - (CH2) n-C (O) OR6a’-, - (CH2) n-OC (O) R6a’-, - (CH2) n-C (O) R6a’-, - (CH2) n-
S (O) 2-R6a’-, - (CH2) n-S (O) -R6a’-, - (CH2) n-OP (O) (OH) -OR6a’-, - (CH2) n-OP (S) (OH) -OR6a’-, - (CH2) n-NHC (O) -R6a’-, - (CH2) n-NHC (O) NR6bR6c’-, - (CH2) n-NHC (O) OR6a’-, - (CH2) n-OC (O) NR6bR6c’-, - (CH2) n-C (O) NR6bR6c’-, - (CH2) n-CH2NR6bR6c’-, - (CH2) n-3-7 membered heterocyclylene- (CH2) n-OR6a’-and - (CH2) n-3-7 membered heterocyclylene- (CH2) n-R6a’-;
R6a’ and R6c’ are independently selected from bond, C1-6 alkylene, C1-6 haloalkylene, C3-7 cycloalkylene, 3-7 membered 
heterocyclylene, -C1-6 alkylene-O-, -C1-6 alkylene-OC1-6 alkylene-, -C1-6 alkylene-NH-, -C1-6 alkylene-NH-C1-6 alkylene-and -C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) -C1-6 alkylene-;
R6b is selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C3-7 cycloalkyl, 3-7 membered heterocyclyl, C1-6 alkylene-OH, C1-6 
alkylene-OC1-6 alkyl, C1-6 alkylene-NH2, C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) and C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2;
each n is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
wherein, R6 is optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R*group (s) , R*is selected from H, NH2, OH, CN, halogen, C1-
6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl.
alternatively,
R4 and R5 is independently selected from halogen, OH, NH2, N (C1-6 alkyl) 2, NH-C1-6 alkyl, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, 
C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
or, preferably, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl, 3-12 
membered heterocyclyl, C6-10 aryl or 5-12 membered heteroaryl, wherein, the C3-10 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclyl, C6-10 aryl and 5-12 membered heteroaryl are optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
R6’ is selected from bond, - (CH2) n-OR6a’, - (CH2) n-C (O) OR6a’, - (CH2) n-OC (O) R6a’, - (CH2) n-C (O) R6a’, - (CH2) n-S (O) 2-
R6a’, - (CH2) n-S (O) -R6a’, - (CH2) n-NHC (O) -R6a’, - (CH2) n-NHC (O) NR6bR6c’, - (CH2) n-NHC (O) OR6a’, - (CH2) n-OC (O) NR6bR6c’, - (CH2) n-C (O) NR6bR6c’ and - (CH2) n-CH2NR6bR6c’;
R6a’ and R6c’ are independently selected from bond, C1-6 alkylene, C1-6 haloalkylene, -C1-6 alkylene-O-, C1-6 alkylene-
OC1-6 alkylene, -C1-6 alkylene-NH-, -C1-6 alkylene-NH-C1-6 alkylene-and -C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) -C1-6 alkylene-; R6b is selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkylene-OH, C1-6 alkylene-OC1-6 alkyl, C1-6 alkylene-NH2, C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) and C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2;
each n is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
wherein, R6 is optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R*group (s) , R*is selected from H, NH2, OH, CN, halogen, C1-
6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl.
In some embodiments, the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (II-1) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein:
R4 and R5 is independently selected from selected from halogen, OH, NH2, N (C1-6 alkyl) 2, NH-C1-6 alkyl, C1-6 alkyl, C1-
6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
or, preferably, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl, 3-12 
membered heterocyclyl, C6-10 aryl or 5-12 membered heteroaryl, wherein, the C3-10 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclyl, C6-10 aryl and 5-12 membered heteroaryl are optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
alternatively,
R4 is selected from C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
R5 is selected from halogen, C1-6 haloalkyl and C1-6 haloalkoxyl;
or, preferably, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl or 5-
10 membered heterocyclyl, wherein, the C3-10 cycloalkyl and 5-10 membered heterocyclyl are optionally substituted with 1, 2 or 3 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
yet alternatively,
R4 is C1-6 alkyl or C1-6 alkoxyl;
R5 is halogen;
or, preferably, R4 and R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form 5-6 membered 
heterocyclyl.
In some embodiments, the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (II-1) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein:
R6’ is selected from bond, - (CH2) n-OR6a’-, - (CH2) n-C (O) OR6a’-, - (CH2) n-OC (O) R6a’-, - (CH2) n-C (O) R6a’-, - (CH2) n-
S (O) 2-R6a’-, - (CH2) n-S (O) -R6a’-, - (CH2) n-NHC (O) -R6a’-, - (CH2) n-NHC (O) NR6bR6c’-, - (CH2) n-NHC (O) OR6a’-, - (CH2) n-OC (O) NR6bR6c’-, - (CH2) n-C (O) NR6bR6c’-and - (CH2) n-CH2NR6bR6c’-;
R6a’ and R6c’ are independently selected from bond, C1-6 alkylene, C1-6 haloalkylene, -C1-6 alkylene-O-, -C1-6 alkylene-
OC1-6 alkylene-, -C1-6 alkylene-NH-, -C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) -, -C1-6 alkylene-NH-C1-6 alkylene-and -C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) -C1-6 alkylene-;
R6b is selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkylene-OH, C1-6 alkylene-OC1-6 alkyl, C1-6 alkylene-NH2, C1-6 
alkylene-NH (C1-6 alkyl) and C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2;
wherein, R6’ is optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R*group (s) , R*is selected from H, NH2, OH, CN, halogen, 
C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
each n is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
alternatively,
R6’ is selected from - (CH2) n-OR6a’-, - (CH2) n-C (O) OR6a’-, - (CH2) n-OC (O) R6a’-, - (CH2) n-C (O) R6a’-, - (CH2) n-NHC (O) -
R6a’-, - (CH2) n-C (O) NR6bR6c’-and - (CH2) n-CH2NR6bR6c’-;
R6a’ and R6c’ are independently selected from bond, C1-6 alkylene, -C1-6 alkylene-O-and -C1-6 alkylene-NH-;
R6b is selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
each n is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
still alternatively,
R6’ is selected from - (CH2) n-OR6a’-, - (CH2) n-C (O) OR6a’-, - (CH2) n-NHC (O) -R6a’-and - (CH2) n-CH2NR6bR6c’-;
R6’ is preferably selected from - (CH2) n-OR6a’-, - (CH2) n-C (O) OR6a’-and - (CH2) n-NHC (O) -R6a’-;
R6a’ is selected from bond, C1-6 alkylene, -C1-6 alkylene-O-and -C1-6 alkylene-NH-, such as bond, -CH2-, -CH2O-, -
CH2CH2O-and -CH2CH2NH-;
R6b is selected from H and C1-6 alkyl, such as H and CH3;
R6c’ is selected from bond and C1-6 alkylene, such as bond and -CH2-;
each n is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6;
yet alternatively,
R6’ is selected from such as, 
R6a’ and R6c’ are independently selected from bond and C1-6 alkylene;
R6b is selected from H and C1-6 alkyl;
each n is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6.
In some embodiments, the present disclosure refers to a compound of formula (II-a) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, R6’ is selected from
In some embodiments, the present disclosure refers to a compound of formula (II-a) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, R6’ is selected from
In some embodiments, the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (II-1a) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein:

wherein, R6’ is as defined in the context.
In some embodiments, the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (II-1) , (II-1b) or (II-1c) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein:

wherein,
represents the attachment point of formula (II-1) , (II-1b) , or (II-1c) and the rest of the compound;
R4 is selected from C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
R5 is selected from halogen, C1-6 haloalkyl and C1-6 haloalkoxyl;
or, preferably, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl or 5-
10 membered heterocyclyl, wherein, the C3-10 cycloalkyl and 5-10 membered heterocyclyl are optionally substituted with 1, 2 or 3 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
R6’ is selected from - (CH2) n-OR6a’-and - (CH2) n-CH2NR6bR6c’-;
R6a’ is selected from bond, C1-6 alkylene, -C1-6 alkylene-O-and -C1-6 alkylene-NH-;
R6b is H;
R6c’ is selected from C1-6 alkylene and C1-6 haloalkylene;
each n is independently 0, 1, 2, 3, or 4;
wherein, R6’ is optionally substituted with 1, 2 or 3 R*group (s) , R*is selected from H, halogen, C1-6 alkyl and C1-6 
haloalkyl;
alternatively,
R4 is C1-6 alkyl or C1-6 alkoxyl, alternatively is C1-6 alkyl or C1-6 alkoxyl, such as Me or OMe;
R5 is halogen, alternatively is halogen, such as F;
or, R4 and R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form 5-6 membered heterocyclyl;
R6’ is - (CH2) n-OR6a’-or - (CH2) n-CH2NR6bR6c’-;
R6a’ is selected from bond, C1-6 alkylene, and -C2-6 alkylene-O-, such as bond, -CH2-, -CH2CH2O-or -CH2CH2CH2O-
R6b is H;
R6c’ is C1-6 alkylene, such as -CH2-or -CH2CH2-or -CH (CH3) CH2-;
each n is independently 0, 1, 2, or 3, preferably 1 or 2.
In some embodiments, the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (II-1) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein:

wherein,
represents the attachment point of formula (II) and the rest of the compound;
R4 is selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl, alternatively is selected from C1-6 
alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
R5 is selected from H, halogen, C1-6 haloalkyl and C1-6 haloalkoxyl, alternatively is selected from halogen, C1-6 haloalkyl 
and C1-6 haloalkoxyl;
or, preferably, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl or 5-
10 membered heterocyclyl, wherein, the C3-10 cycloalkyl and 5-10 membered heterocyclyl are optionally substituted with 1, 2 or 3 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
R6’ is selected from - (CH2) n-OP (O) (OH) -OR6a’-, - (CH2) n-OP (S) (OH) -OR6a’-, and - (CH2) n-CH2NR6bR6c’-;
R6a’ is selected from bond, C1-6 alkylene and C1-6 haloalkylene;
R6b is selected from H, C1-6 alkyl, and C1-6 haloalkyl;
R6c’ is selected from C3-7 cycloalkylene, and 3-7 membered heterocyclylene;
each n is independently 0, 1, 2, 3 or 4;
alternatively,
R4 is H, C1-6 alkyl or C1-6 alkoxyl, alternatively is C1-6 alkyl or C1-6 alkoxyl, such as Me or OMe;
R5 is H, halogen, alternatively is halogen, such as F;
or, R4 and R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form 5-6 membered heterocyclyl;
R6’ is selected from - (CH2) n-OP (O) (OH) -OR6a’-, and - (CH2) n-CH2NR6bR6c’-;
R6a’ is selected from bond and C1-6 alkyl, preferably is bond;
R6b is selected from H and C1-6 alkyl, preferably is H;
R6c’ is C3-5 cycloalkylene, such as cyclopropylene;
each n is independently 0, 1, 2, or 3, preferably 0, or 1.
In some embodiments, the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (II-1d) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein:

wherein,
represents the attachment point of formula (II-1d) and the rest of the compound;
R6’ is - (CH2) n-OR6a’-;
R6a’ is selected from bond, C1-6 alkylene, -C1-6 alkylene-O-and -C1-6 alkylene-NH-, such as bond, -CH2-, -CH2O-and -
CH2CH2O-;
each n is independently 0, 1, 2, 3, or 4;
wherein, R6 is optionally substituted with 1, 2 or 3 R*group (s) , R*is selected from H, halogen, C1-6 alkyl and C1-6 
haloalkyl;
alternatively,
R6’ is - (CH2) n-OR6a’-;
R6a’ is selected from bond and C1-6 alkylene, such as bond or -CH2-;
each n is independently 0, 1, 2, or 3, preferably is 1 or 2.
In some embodiments, the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (II-1) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, the structure of formula (II-1) is selected from the following:

In some embodiments, the present disclosure refers to a conjugate represented by L2- (D2) y, preferably, represented by T2- [L2’- (D2) y] u;
wherein, T2 is a targeting moiety;
L2 is a linker, and L2’ is a divalent group formed by the connection between L2 and T2;
D2 is a drug moiety, which is selected from the compound of formula (II) (such as formula (II-1) ) as defined in the 
context;
y is an integer between 1 and 10, alternatively is 1;
u is an integer between 1 and 10.
In some embodiments, the present disclosure refers to a conjugate, wherein the conjugate represented by L2- (D2) y is selected from:


In some embodiments, the present disclosure refers to a conjugate, wherein the conjugate represented by T2- [L2’- (D2) y] u is selected from:


wherein, T2 and u are as defined in the context.
2.4 Embodiments -Compound of formula (III)
In one embodiment, the present disclosure refers to a compound, which comprises the structure of formula (III-1) or (III-2) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof:

wherein,
represents the attachment point of formula (III-1) or (III-2) and the rest of the compound;
R7’ is a divalent group formed by the connection between R7 and the rest of the compound;
R10’ is a divalent group formed by the connection between R10 and the rest of the compound;
R7, R8, R9 and R10 are as defined in the context.
In some embodiments, the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (III-1) or (III-2) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein:
R7 and R8 are independently selected from C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkenyl, C1-6 alkynyl, - (CH2) k-OR7a, - (CH2) k-
NR7bR7c, - (CH2) k-C (O) R7a, - (CH2) k-C (O) OR7a, - (CH2) k-OC (O) -R7a, - (CH2) k-NHC (O) -R7a, - (CH2) k-NHC (O) O-R7a, - (CH2) k-OC (O) NH-R7a and - (CH2) k-C (O) NR7bR7c;
each k is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
R7a, R7b and R7c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
alternatively,
R7 is selected from - (CH2) k-OR7a, - (CH2) k-NR7bR7c, - (CH2) k-C (O) OR7a, - (CH2) k-OC (O) -R7a, - (CH2) k-NHC (O) -R7a and - 
(CH2) k-C (O) NR7bR7c;
R8 is selected from C1-6 alkyl, C1-6 alkenyl, C0-6 alkylene-OH and C0-6 alkylene-NH2;
R7a, R7b and R7c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkenyl, C1-6 alkynyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 
alkylene-NH2;
still alternatively,
R7 is selected from
R7a, R7b and R7c are independently selected from H and C1-6 alkyl, such as H and CH3,
R8 is selected from C1-6 alkyl, C1-6 alkenyl, C1-6 alkynyl, C0-6 alkylene-OH and C0-6 alkylene-NH2;
yet alternatively,
R7 is selected from
R8 is selected from C1-4 alkyl, C1-4 alkenyl, C1-4 alkynyl, C1-4 alkylene-OH and C1-4 alkylene-NH2, such as CH3, 
In some embodiments, the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (III-1) or (III-2) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein:
R7’ is selected from C1-6 alkylene, C1-6 haloalkylene, C1-6 alkenylene, C1-6 alkynylene, - (CH2) k-OR7a’-, - (CH2) k-
NR7bR7c’-, - (CH2) k-C (O) R7a’-, - (CH2) k-C (O) OR7a’-, - (CH2) k-OC (O) -R7a’-, - (CH2) k-NHC (O) -R7a’-, - (CH2) k-C (O) NR7bR7c’-, - (CH2) k-NHC (O) O-R7a’-and - (CH2) k-OC (O) NH-R7a’-;
R7a’ and R7c’ are independently selected from bond, C1-6 alkylene, C1-6 alkenylene, -C1-6 alkylene-O-and -C1-6 
alkylene-NH-;
R7b is selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
each k is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6;
wherein, R7’ is optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R# group (s) , R# is selected from H, NH2, OH, CN, halogen, 
C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl.
alternatively,
R7’ is selected from - (CH2) k-OR7a’-, - (CH2) k-NR7bR7c’-, - (CH2) k-C (O) OR7a’-, - (CH2) k-OC (O) -R7a’-, - (CH2) k-NHC (O) -
R7a’-and - (CH2) k-C (O) NR7bR7c’-;
R7a’ and R7c’ are selected from bond, C1-6 alkylene, C1-6 alkynylene, -C1-6 alkylene-O-and -C1-6 alkylene-NH-;
R7b is selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkynyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
each k is independently 0, 1, 2 or 3;
still alternatively,
R7’ is selected from
R7a’ and R7c’ are selected from bond and C1-6 alkylene, such as bond and CH2,
R7b is selected from H and C1-6 alkyl, such as H and CH3,
k is 0, 1, 2 or 3;
yet alternatively,
R7’ is selected from
In some embodiments, the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (III-1) or (III-2) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein:
R9 is selected from H, OH, CN, NH2, NH (C1-6 alkyl) and N (C1-6 alkyl) 2, such as H or NH2;
R10 is selected from H, - (CH2) q-OR10a, - (CH2) q-NR10bR10c, - (CH2) q-C (O) R10a, - (CH2) q-C (O) OR10a, - (CH2) q-OC (O) R10a, - 
(CH2) q-S (O) 2-R10a, - (CH2) q-S (O) -R10a, - (CH2) q-NHC (O) -R10a, - (CH2) q-C (O) NR10bR10c, - (CH2) q-NHC (O) -OR10a and - (CH2) q-OC (O) NR10bR10c;
R10a, R10b and R10c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
R10a is preferably not H;
or, R10b, R10c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl, 3-12 membered 
heterocyclyl, C6-10 aryl or 5-12 membered heteroaryl, wherein, the C3-10 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclyl, C6-10 aryl and 5-12 membered heteroaryl are optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
alternatively,
R9 is selected from H, OH, CN, NH2, NH (C1-6 alkyl) and N (C1-6 alkyl) 2, such as H or NH2;
R10 is selected from H, - (CH2) q-OR10a, - (CH2) q-NR10bR10c, - (CH2) q-C (O) R10a, - (CH2) q-C (O) OR10a, - (CH2) q-OC (O) R10a, - 
(CH2) q-NHC (O) -R10a, - (CH2) q-C (O) NR10bR10c, - (CH2) q-NHC (O) -OR10a and - (CH2) q-OC (O) NR10bR10c;
R10a, R10b and R10c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
R10a is preferably not H;
or, R10b, R10c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl or 5-10 
membered heterocyclyl, wherein, the C3-10 cycloalkyl and 5-10 membered heterocyclyl are optionally substituted with 1, 2 or 3 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
still alternatively,
R9 is selected from H, NH2, NH (C1-6 alkyl) and N (C1-6 alkyl) 2, such as H or NH2;
R10 is selected from H, 
R10a, R10b and R10c are independently selected from H and C1-6 alkyl;
R10a is preferably not H;
or, R10b, R10c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 5-6 membered heterocyclyl, 
which is optionally substituted with 1, 2 or 3 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
yet alternatively,
R9 is selected from H, NH2, NH (C1-6 alkyl) and N (C1-6 alkyl) 2, such as H or NH2;
R10 is selected from H, 
In some embodiments, the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (III-1) or (III-2) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein:
R10’ is selected from bond, - (CH2) q-OR10a’-, - (CH2) q-NR10bR10c’-, - (CH2) q-C (O) R10a’-, - (CH2) q-C (O) OR10a’-, - (CH2) q-
OC (O) R10a’-, - (CH2) q-S (O) 2-R10a’-, - (CH2) q-S (O) -R10a’-, - (CH2) q-NHC (O) -R10a’-, - (CH2) q-C (O) NR10bR10c’-, - (CH2) q-NHC (O) -OR10a’-, and - (CH2) q-OC (O) NR10bR10c’-;
R10a’ and R10c’ are independently selected from bond, C1-6 alkylene, -C1-6 alkylene-O-and -C1-6 alkylene-NH-;
R10b is selected from C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH, C1-6 alkylene-NH2;
or, R10b, R10c’ are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form C3-10 cycloalkylene, 5-12 
membered heterocyclylene, C6-10 arylene or 5-12 membered heteroarylene, wherein, the C3-10 cycloalkylene, 5-12 membered heterocyclylene, C6-10 arylene and 5-12 membered heteroarylene are optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
each q is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6;
wherein, R10’ is optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R# group (s) , R# is selected from H, NH2, OH, CN, halogen, 
C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
alternatively,
R10’ is selected from bond, - (CH2) q-OR10a’-, - (CH2) q-NR10bR10c’-, - (CH2) q-C (O) R10a’-, - (CH2) q-C (O) OR10a’-, - (CH2) q-
OC (O) R10a’-, - (CH2) q-NHC (O) -R10a’-, - (CH2) q-C (O) NR10bR10c’-, - (CH2) q-NHC (O) -OR10a’-, and - (CH2) q-OC (O) NR10bR10c’-;
R10a’ and R10c’ are independently selected from bond, C1-6 alkylene, -C1-6 alkylene-O-and -C1-6 alkylene-NH-;
R10b is selected from H, C1-6 alkyl, -C1-6 alkylene-OH and -C1-6 alkylene-NH2;
or, R10b, R10c’ are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form C3-10 cycloalkylene or 5-10 
membered heterocyclylene, wherein, the C3-10 cycloalkylene and 5-10 membered heterocyclylene are optionally substituted with 1, 2 or 3 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
each q is independently 0, 1, 2, 3 or 4;
still alternatively,
R10’ is selected from bond, 
R10a’, R10b and R10c’ are independently selected from H and C1-6 alkylene;
or, R10b, R10c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 5-6 membered heterocyclyl, 
which is optionally substituted with 1, 2 or 3 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
each q is independently is independently 0, 1, 2 or 3;
yet alternatively,
R10’ is selected from bond, 
In some embodiments, the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (III-1a) , (III-1b) or (III-2b) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein:

wherein, R7’, R8, R10 and R10’ are as defined in the context;
alternatively,
wherein, the compound comprises the structure of formula (III-1a) :

wherein,
R7’ is selected from C1-6 alkylene, C1-6 haloalkylene, C1-6 alkenylene, C1-6 alkynylene, - (CH2) k-OR7a’-, and - (CH2) k-
NR7bR7c’-;
R8 is selected from C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkenyl, C1-6 alkynyl, - (CH2) k-OR7a, and - (CH2) k-NR7bR7c;
R7a’ and R7c’ are independently selected from bond, C1-6 alkylene, C1-6 alkenylene, and C1-6 alkynylene;
R7b is independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkenyl, and C1-6 alkynyl;
each k is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6;
alternatively,
R7’ is selected from - (CH2) k-OR7a’-, and - (CH2) k-NR7bR7c’-;
R7a’ amd R7c’ are independently selected from bond and C1-6 alkylene, such as bond and CH2;
R7b is independently selected from H and C1-6 alkyl, such as H and CH3;
each k is independently 0, 1, 2 or 3;
R8 is C1-6 alkyl or C1-6 haloalkyl;
yet alternatively,
R7’ is selected fromalternatively is
R8 is C1-6 alkyl, such as CH3.
In some embodiments, the present disclosure refers to the compound, which comprises the structure of formula (III-1) or (III-2) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, the structure of formula (III-1) or (III-2) is selected from the following:


In some embodiments, the present disclosure refers to a conjugate represented by L3- (D3) z, preferably, represented by T3- [L3’- (D3) z] r,
wherein, T3 is a targeting moiety;
L3 is a linker, and L3’ is a divalent group formed by the connection between T3 and L3;
D3 is a drug moiety, which is selected from the compound of formula (III) (such as formula (III-1) or (III-2) ) as defined 
in the context;
z is an integer between 1 and 10, alternatively is 1;
r is an integer between 1 and 10.
In some embodiments, the present disclosure refers to a conjugate, wherein the conjugate represented by L3-(D3) z is selected from:



In some embodiments, the present disclosure refers to a conjugate, wherein the conjugate represented by T3- [L3- (D3) z] r is selected from:



wherein, T3 and r are as defined in the context.
III. Targeting moiety
The targeting moiety, T, comprised by the conjugates is a molecule that binds, reactively associates or complexes with a receptor, antigen or other receptive moiety associated with a given target cell population. Typically, the targeting moiety, T, functions to deliver the camptothecin analogue, D, to the particular target cell population with which the targeting moiety, T, reacts. Examples of targeting moieties include, but are not limited to, proteins (such as antibodies, antibody fragments and growth factors) , glycoproteins, peptides (such as bombesin and gastrin-releasing peptide) , lectins, vitamins (such as folic acid) and nutrient-transport molecules (such as transferrin) .
Typically, the targeting moiety, T, will be bonded to linker, L, via a heteroatom of targeting moiety, T, such as a sulfur (for example, from a sulfhydryl group) , oxygen (for example, from a carbonyl, carboxyl or hydroxyl group) or nitrogen (for example, from a primary or secondary amino group) . These heteroatoms may be naturally present on targeting moiety, T, or may be introduced through engineering and/or expression, or may be introduced via chemical or enzymatic modification using techniques known in the art.
In some embodiments, targeting moiety, T, is an antibody. Accordingly, certain embodiments of the present disclosure relate to antibody-drug conjugates (ADCs) in which the targeting moiety, T, is an antibody.
When the conjugate is an ADC, the antibody included as the targeting moiety, T, may be a full-size polyclonal or monoclonal antibody, an antigen-binding antibody fragment (such as Fab, scFab, Fab', F (ab') 2 , Fv or scFv) , a domain antibody (dAb) or an antibody mimetic (such as an affibody, a DARPin, an anticalin, a versabody, a duocalin, a lipocalin or an avimer) . The antibody is typically directed to a particular antigen, for example, a disease-associated antigen such as a tumor-associated antigen, an antigen associated with an autoimmune disease or a viral antigen.
In certain embodiments in which the conjugate is an ADC, the targeting moiety, T, is a monoclonal antibody, an antigen-binding antibody fragment (such as Fab, scFab, Fab', F (ab') 2, Fv or scFv) or a domain antibody (dAb) .
Methods of producing polyclonal and monoclonal antibodies are known in the art. By way of example, monoclonal antibodies may be produced by methods including, but not limited to, the hybridoma technique originally described by Kohler and Milstein (1975, Nature 256: 495-497) , the human B cell hybridoma technique (Kozbor et al., 1983, Immunology Today 4: 72) , the EBV-hybridoma technique (Cole et al., 1985, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96) , and the Selected Lymphocyte Antibody Method (SLAM) (Babcook, et al., 1996, Proc Natl Acad Sci USA, 93 (15) : 7843-8; McLean et al., 2005, J Immunol., 174 (8) : 4768-4778) . Antibodies of various immunoglobulin classes including IgG, IgM, IgE, IgA, and IgD and subclasses thereof, may find application as targeting moieties in various embodiments. In some embodiments, the targeting moiety is an antibody of the IgG class.
In certain embodiments, targeting moiety, T, may be a monoclonal antibody. The monoclonal antibody may be, for example, a non-human monoclonal antibody (such as a mouse antibody) , a human monoclonal antibody, a humanized monoclonal antibody or a chimeric antibody (for example, a human-mouse antibody) . Human monoclonal antibodies may be made by any of numerous techniques known in the art (see, for example, Teng et al., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80: 7308-7312; Kozbor et al., 1983, Immunology Today 4: 72-79; Olsson et al., 1983, Meth. Enzymol. 92: 3-16; Huse et al., 1989, Science 246: 1275-1281, and U.S. Patent No. 8,012,714) . Chimeric and humanized monoclonal antibodies can be produced by recombinant DNA techniques known in the art, for example using methods described in International Patent Publication Nos. WO 87/02671 and WO 86/01533; European Patent Publication Nos. 0184187; 0171496 and 0173494; U.S. Patent Nos. 4,816,567 and 5,225,539; Berter et al., 1988, Science 240: 1041-1043; Liu et al., 1987, J. Immunol., 139: 3521-3526; Sun et al., 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84: 214-218; Wood et al., 1985, Nature, 314: 446-449; Shaw et al., 1988, J. Natl. Cancer Inst., 80: 1553-1559; Oi et al., 1986, BioTechniques, 4: 214; Jones et al., 1986, Nature, 321: 552-525, and Beidler et al., 1988, J. Immunol., 141: 4053-4060) . Antibodies immunospecific for a given target antigen may also be obtained commercially.
In certain embodiments, the antibody included in the conjugate may be a bispecific or multispecific antibody. Methods for making bispecific and multispecific antibodies are known in the art (see, for example, Milstein et al., 1983, Nature, 305: 537-539; Traunecker et al., 1991, EMBO J., 10: 3655-3659; Suresh et al., 1986, Meth. Enzymol., 121: 210; Rodrigues et al., 1993, J. Immunol., 151: 6954-6961; Carter et al., 1992, Bio/Technology, 10: 163-167; Carter et al., 1995, J. Hematotherapy, 4: 463-470; Merchant et al., 1998, Nature Biotechnology, 16: 677-681, and International (PCT) Publication Nos. WO 94/04690, WO 2012/032080, WO 2012/058768 and WO 2013/063702) .
In certain embodiments, targeting moiety, T, comprised by the conjugate is an antibody or antigen-binding antibody fragment that binds to a tumor-associated antigen (TAA) . Examples of tumor-associated antigens include, but are not limited to, 5T4, ADAM-9, ALK, AMHRII, ASCT2, Axl, B7-H 3 , BCMA, C4.4a, CA6, CA9, CanAg, CD123, CD138, CD142, CD166, CD184, CD19, CD20, CD205, CD22, CD248, CD25, CD3, CD30, CD33, CD352, CD37, CD38, CD40L, CD44v6, CD45, CD46, CD48, CD51, CD56, CD7, CD70, CD71, CD74, CD79b, CDH6, CEACAM5, CEACAM6, cKIT, CLDN18.2, CLDN6, CLL-1, c-MET, Cripto, CSP-1, CXCR5, DLK-1, DLL3, DPEP3, Dysadherin, EFNA4 , EGFR, EGFRviii, ENPP3, EpCAM, EphA2, EphA3, ETBR, FGFR2, FGFR3, FLT3, FRα, FSH, GCC, GD2, GD3, Globo H, GPC-1, GPC 3 , gpNMB, HER-2, HER-3, HLA-DR, HSP90, IGF-1R, IL-13R, IL1RAP, IL7R, IL4R, KAAG-1, LAMP-1, Lewis Y antigen, LGALS3BP, LGR5, LH/hCG, LHRH, LIV-1, LRP-1, LRRC 1 5, Ly6E, MAGE, MSLN, MET, MICA, MICB, MT1-MMP, MTX3, MTX5, MUC 1 , MUC 1 6, NaPi2b, Nectin-4, NOTCH 3 , OAcGD2, OX001L, p-cadherin, PD-1, PD-L1, phosphatidylserine (PS) , polymorphic epithelial mucin (PEM) , prolactin receptor (PRLR) , PSMA, PTK7, RNF43, ROR1, ROR2, SAIL, SLAMF7, SLC44A4, SLITRK6, SSTR2, STEAP-1, STING, sialyl-Tn, TIM-1, TM4SF1, TNFα, TRA, TROP-2, TAG-72, TA-MUC 1 , TIM-3, UPK2 and UPK1b.
In some embodiments of any of the above conjugates, Ab is an antibody or an antigen binding fragment thereof which binds to a tumor antigen, a tumor associated antigen, or an immune cell antigen or a T cell antigen.
In some embodiments of any of the above conjugates, Ab is an antibody or an antigen binding fragment thereof which binds to a tumor associated antigen; the tumor associated antigen (TAA) includes , but are not limited to HER2, TROP2, EGFR, FLOR2, MUC16, CEACAM, nectin4, CD19, CD33, MSLN, EpCAM, NaPi2b, ROR1, CLDN6, CLDN18.2, ROR2, LY6G6D, fibronectin, B7H3, B7H4, BCMA, TF, MET and others.
In some embodiments of any of the above conjugates, Ab is a TROP2 antibody.
In some embodiments, the Trop2 antibody comprises a heavy chain (HC) and a light chain (LC) , and wherein: the HC comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%, or 100%sequence identity to SEQ ID NO: 1, and the LC comprises an amino acid sequence having at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%, or 100%sequence identity to SEQ ID NO: 2.
IV. Linker
The conjugates include a linker, L, which is a bifunctional or multifunctional moiety capable of linking one or more camptothecin analogues, D, to targeting moiety, T. A bifunctional (or monovalent) linker, L, links a single compound D to a single site on targeting moiety, T, whereas a multifunctional (or polyvalent) linker, L, links more than one compound, D, to a single site on targeting moiety, T. A linker that links one compound, D, to more than one site on targeting moiety, T, may also be considered to be multifunctional in certain embodiments.
Linker, L, includes a functional group capable of reacting with the target group or groups on targeting moiety, T, and at least one functional group capable of reacting with a target group on the camptothecin analogue, D. Suitable functional groups are known in the art and include those described, for example, in Bioconjugate Techniques (G. T. Hermanson, 2013, Academic Press) . Groups on targeting moiety, T, and the camptothecin analogue, D, that may serve as target groups for linker attachment include, but are not limited to, thiol, hydroxyl, carboxyl, amine, aldehyde and ketone groups.
Non-limiting examples of functional groups capable of reacting with thiols include maleimide, haloacetamide, haloacetyl, activated esters (such as succinimide esters, 4-nitrophenyl esters, pentafluorophenyl esters and tetrafluorophenyl esters) , anhydrides, acid chlorides, sulfonyl chlorides, isocyanates and isothiocyanates. Also useful in this context are “self-stabilizing” maleimides as described in Lyon et al., 2014, Nat. Biotechnol., 32: 1059-1062.
Non-limiting examples of functional groups capable of reacting with amines include activated esters (such as N-hydroxysuccinamide (NHS) esters, sulfo-NHS esters, imido esters such as Traut’s reagent, tetrafluorophenyl (TFP) esters and sulfodichlorophenyl esters) , isothiocyanates, aldehydes and acid anhydrides (such as diethylenetriaminepentaacetic anhydride (DTPA) ) . Other examples include succinimido-1, 1, 3, 3-tetra-methyluronium tetrafluoroborate (TSTU) and benzotriazol-1-yl-oxytripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate (PyBOP) .
Non-limiting examples of functional groups capable of reacting with an electrophilic group such as an aldehyde or ketone carbonyl group include hydrazide, oxime, amino, hydrazine, thiosemicarbazone, hydrazine carboxylate and arylhydrazide.
In certain embodiments in which targeting moiety, T, is an antibody, linker, L, may include a functional group that allows for bridging of two interchain cysteines on the antibody, such as a ThioBridge TM linker (Badescu et al., 2014, Bioconjug. Chem. 25: 1124–1136) , a dithiomaleimide (DTM) linker (Behrens et al., 2015, Mol. Pharm. 12: 3986–3998) , a dithioaryl (TCEP) pyridazinedione-based linker (Lee et al., 2016, Chem. Sci., 7: 799-802) or a dibromopyridazinedione-based linker (Maruani et al., 2015, Nat. Commun., 6: 6645) .
Alternatively, targeting moiety, T, may be modified to include a non-natural reactive group, such as an azide, that allows for conjugation to the linker via a complementary reactive group on the linker. For example, conjugation of the linker to the targeting moiety may make use of click chemistry reactions (see, for example, Chio & Bane, 2020, Methods Mol. Biol., 2078: 83-97) , such as the azide-alkyne cycloaddition (AAC) reaction, which has been used successfully in the development of antibody-drug conjugates. The AAC reaction may be a copper-catalyzed AAC (CuAAC) reaction, which involves coupling of an azide with a linear alkyne, or a strain-promoted AAC (SPAAC) reaction, which involves coupling of an azide with a cyclooctyne.
Linker, L, may be a cleavable or a non-cleavable linker. A cleavable linker is a linker that is susceptible to cleavage under specific conditions, for example, intracellular conditions (such as in an endosome or lysosome) or within the vicinity of a target cell (such as in the tumor microenvironment) . Examples include linkers that are protease-sensitive, acid-sensitive or reduction-sensitive. Non-cleavable linkers by contrast, rely on the degradation of the antibody in the cell, which typically results in the release of an amino acid-linker-drug moiety. In some embodiments, the linker comprise MC (maleimidocaproyl, ) or MsP
Examples of cleavable linkers include, for example, linkers comprising an amino acid sequence that is a cleavage recognition sequence for a protease. Many such cleavage recognition sequences are known in the art. For conjugates that are not intended to be internalized by a cell, for example, an amino acid sequence that is recognized and cleaved by a protease present in the extracellular matrix in the vicinity of a target cell, such as a cancer cell, may be employed. Examples of extracellular tumor-associated proteases include, for example, plasmin, matrix metalloproteases (MMPs) , elastase and kallikrein-related peptidases.
For conjugates intended to be internalized by a cell, linker, L, may comprise an amino acid sequence that is recognized and cleaved by an endosomal or lysosomal protease. Examples of such proteases include, for example, cathepsins B, C, D, H, L and S, and legumain.
Cleavage recognition sequences may be, for example, dipeptides, tripeptides or tetrapeptides. Non-limiting examples of dipeptide recognition sequences that may be included in cleavable linkers include, but are not limited to, Ala- (D) Asp, Ala-Lys, Ala-Phe, Asn-Lys, Asn- (D) Lys, Asp-Val, His-Val, Ile-Cit, Ile-Pro, Ile-Val, Leu-Cit, Me3Lys-Pro, Met-Lys, Met- (D) Lys, NorVal- (D) Asp, Phe-Arg, Phe-Cit, Phe-Lys, PhenylGly- (D) Lys, Pro- (D) Lys, Trp-Cit, Val-Ala, Val- (D) Asp, Val-Cit, Val-Gly, Val-Gln and Val-Lys. Examples of tri-and tetrapeptide cleavage sequences include, but are not limited to, Ala-Ala-Asn, Ala-Val-Cit, (D) Ala-Phe-Lys, Asp-Val-Ala, Asp-Val-Cit, Gly-Cit-Val, Lys-Val-Ala, Lys-Val-Cit, Met-Cit-Val, (D) Phe-Phe-Lys, Asn-Pro-Val, Ala-Leu-Ala-Leu, Gly-Phe-Leu-Gly, Gly-Gly-Phe-Gly and Gly-Phe-Gly-Gly.
Additional examples of cleavable linkers include disulfide-containing linkers such as N-succinimydyl-4- (2-pyridyldithio) butanoate (SPDB) and N-succinimydyl-4- (2-pyridyldithio) -2-sulfo butanoate (sulfo-SPDB) . Disulfide-containing linkers may optionally include additional groups to provide steric hindrance adjacent to the disulfide bond in order to improve the extracellular stability of the linker, for example, inclusion of a geminal dimethyl group. Other cleavable linkers include linkers hydrolyzable at a specific pH or within a pH range, such as hydrazone linkers. Linkers comprising combinations of these functionalities may also be useful, for example, linkers comprising both a hydrazone and a disulfide are known in the art.
A further example of a cleavable linker is a linker comprising a β-glucuronide, which is cleavable by β-glucuronidase, an enzyme present in lysosomes and tumor interstitium (see, for example, De Graaf et al., 2002, Curr. Pharm. Des. 8: 1391–1403, and International Patent Publication No. WO 2007/011968) . β-glucuronide may also function to improve the hydrophilicity of linker, L.
Another example of a linker that is cleaved internally within a cell and improves hydrophilicity is a linker comprising a pyrophosphate diester moiety (see, for example, Kern et al., 2016, J Am Chem Soc., 138: 2430-1445) .
In certain embodiments, the linker, L, comprised by the conjugate is a cleavable linker. In some embodiments, linker, L, comprises a cleavage recognition sequence. In some embodiments, linker, L, may comprise an amino acid sequence that is recognized and cleaved by a lysosomal protease.
Cleavable linkers may optionally further comprise one or more additional functionalities such as self-immolative and self-elimination groups, stretchers or hydrophilic moieties.
Self-immolative and self-elimination groups that find use in linkers include, for example, p-aminobenzyl (PAB) and p-aminobenzyloxycarbonyl (PABC) groups, and methylated ethylene diamine (MED) . Other examples of self-immolative groups include, but are not limited to, aromatic compounds that are electronically similar to the PAB or PABC group such as heterocyclic derivatives, for example 2-aminoimidazol-5-methanol derivatives as described in U.S. Patent No. 7,375,078. Other examples include groups that undergo cyclization upon amide bond hydrolysis, such as substituted and unsubstituted 4-aminobutyric acid amides (Rodrigues et al., 1995, Chemistry Biology 2: 223-227) and 2-aminophenylpropionic acid amides (Amsberry, et al., 1990, J. Org. Chem. 55: 5867-5877) . Self-immolative/self-elimination groups are typically attached to an amino or hydroxyl group on the compound, D. Self-immolative/self-elimination groups, alone or in combination are often included in peptide-based linkers, but may also be included in other types of linkers.
Stretchers that find use in linkers for drug conjugates include, for example, alkylene groups and stretchers based on aliphatic acids, diacids, amines or diamines, such as diglycolate, malonate, caproate and caproamide. Other stretchers include, for example, glycine-based stretchers and polyethylene glycol (PEG) or monomethoxy polyethylene glycol (mPEG) stretchers.
PEG and mPEG stretchers can also function as hydrophilic moieties within a linker. For example, PEG or mPEG may be included in a linker either “in-line” or as pendant groups to increase the hydrophilicity of the linker (see, for example, U.S. Patent Application Publication No. US 2016/0310612) . Various PEG-containing linkers are commercially available from companies such as Quanta BioDesign, Ltd (Plain City, OH) . Other hydrophilic groups that may optionally be incorporated into linker, L, include, for example, β-glucuronide, sulfonate groups, carboxylate groups and pyrophosphate diesters.
In certain embodiments, conjugates may comprise a cleavable linker. In some embodiments, conjugates may comprise a peptide-containing linker. In some embodiments, conjugates may comprise a protease-cleavable linker.
Various non-cleavable linkers are known in the art for linking drugs to targeting moieties and may be useful in the conjugate compositions of the present disclosure in certain embodiments. Examples of non-cleavable linkers include linkers having an N-succinimidyl ester or N-sulfosuccinimidyl ester moiety for reaction with the cell binding agent, as well as a maleimido-or haloacetyl-based moiety for reaction with the drug, or vice versa. An example of such a non-cleavable linker is based on sulfosuccinimidyl-4- [N-maleimidomethyl] cyclohexane-1-carboxylate (sulfo-SMCC) . Sulfo-SMCC conjugation typically occurs via a maleimide group which reacts with sulfhydryls (thiols, -SH) on compound D, while the sulfo-NHS ester is reactive toward primary amines (as found in lysine and at the N-terminus of proteins or peptides) on targeting moiety T. Other non-limiting examples of such linkers include those based on N-succinimidyl 4- (maleimidomethyl) cyclohexanecarboxylate (SMCC) , N-succinimidyl-4- (N-maleimidomethyl) -cyclohexane-1-carboxy- (6-amidocaproate) ( “long chain” SMCC or LC-SMCC) , K-maleimidoundecanoic acid N-succinimidyl ester (KMUA) , γ-maleimidobutyric acid N-succinimidyl ester (GMBS) , ε -maleimidocaproic acid N-hydroxysuccinimide ester (EMCS) , m-maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester (MBS) , N- (α -maleimidoacetoxy) -succinimide ester (AMAS) , succinimidyl-6- (β-maleimidopropionamido) hexanoate (SMPH) , N-succinimidyl 4- (p-maleimidophenyl) -butyrate (SMPB) and N- (p-maleimidophenyl) isocyanate (PMPI) . Other examples include those comprising a haloacetyl-based functional group such as N-succinimidyl-4- (iodoacetyl) -aminobenzoate (SIAB) , N-succinimidyl iodoacetate (SIA) , N-succinimidyl bromoacetate (SBA) and N-succinimidyl 3- (bromoacetamido) propionate (SBAP) .
V. Drug
The terms “drug moiety, ” “drug payload, ” “cytotoxic payload, ” “therapeutic molecule, ” “therapeutic payload, ” “therapeutic agents, ” and “therapeutic moieties, ” as used interchangeably herein, refers to a chemical or biological moiety that is conjugated to an antibody that binds to α6β4 integrin, or an antigen binding fragment thereof.
In some aspects, the drug moiety is the camptothecin analogues as defined in the context.
VI. Pharmaceutical compositions
The present disclosure also provides a composition, e.g., a pharmaceutical composition, containing the conjugate of the present disclosure, formulated together with a pharmaceutically acceptable carrier.
Therapeutic formulations of this disclosure can be prepared by mixing the conjugate having the desired degree of purity with optional physiologically acceptable carriers, excipients or stabilizers in the form of lyophilized formulations or aqueous solutions. Acceptable carriers, excipients, or stabilizers are nontoxic to recipients at the dosages and concentrations employed, and include buffers such as phosphate, citrate, and other organic acids; antioxidants including ascorbic acid and methionine; preservatives (such as octadecyldimethylbenzyl ammonium chloride; hexamethonium chloride; benzalkonium chloride; benzethonium chloride; phenol, butyl or benzyl alcohol; alkyl parabens such as methyl or propyl paraben; catechol; resorcinol; cyclohexanol; 3-pentanol; and m-cresol) ; low molecular weight (less than about 10 amino acid residues) proteins, such as serum albumin, gelatin, or immunoglobulins; hydrophilic polymers such as polyvinylpyrrolidone; amino acids such as glycine, glutamine, asparagine, histidine, arginine, or lysine; monosaccharides, disaccharides, and other carbohydrates; chelating agents such as EDTA; sugars such as sucrose, mannitol, trehalose or sorbitol; salt-forming counter-ions such as sodium; metal complexes (e.g., Zn-protein complexes) ; and/or non-ionic surfactants such as Tween, Pluronics, or PEG.
The formulation may also contain more than one active compound as necessary for the particular indication being treated, preferably those with complementary activities that do not adversely affect each other. For instance, the formulation may further comprise another antibody or bispecific antibody, cytotoxic agent, chemotherapeutic agent or ADC. Such molecules are suitably present in combination in amounts that are effective for the purpose intended.
The active ingredients may also be entrapped in microcapsule prepared, for example, by coacervation techniques or by interfacial polymerization, for example, hydroxymethylcellulose or gelatin-microcapsule and poly- (methylmethacylate) microcapsule, respectively, in colloidal drug delivery systems (for example, liposomes, albumin microspheres, microemulsions, nano-particles and nanocapsules) or in macroemulsions. Such techniques are disclosed in Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980) .
Pharmaceutical compositions of the disclosure can be administered in combination therapy, i.e., combined with other agents. Examples of therapeutic agents that can be used in combination therapy are described in greater detail below.
The formulations to be used for in vivo administration must be sterile. This can be readily accomplished by filtration through sterile filtration membranes. Sterile injectable solutions can be prepared by incorporating the active compound in the required amount in an appropriate solvent with one or a combination of ingredients enumerated above, as required, followed by sterilization microfiltration. Generally, dispersions are prepared by incorporating the active compound into a sterile vehicle that contains a basic dispersion medium and the required other ingredients from those enumerated above. In the case of sterile powders for the preparation of sterile injectable solutions, the preferred methods of preparation are vacuum drying and freeze-drying (lyophilization) that yield a powder of the active ingredient plus any additional desired ingredient from a previously sterile-filtered solution thereof.
VII. Dosage
The amount of active ingredient which can be combined with a carrier material to produce a single dosage form will vary depending upon the subject being treated, and the particular mode of administration. The amount of active ingredient which can be combined with a carrier material to produce a single dosage form will generally be that amount of the composition which produces a therapeutic effect. Generally, out of one hundred percent, this amount will range from about 0.01%to about 99%of active ingredient, preferably from about 0.1%to about 70%, most preferably from about 1%to about 30%of active ingredient in combination with a pharmaceutically acceptable carrier.
Dosage regimens are adjusted to provide the optimum desired response (e.g., a therapeutic response) . For example, a single bolus may be administered, several divided doses may be administered over time or the dose may be proportionally reduced or increased as indicated by the exigencies of the therapeutic situation. It is especially advantageous to formulate parenteral compositions in dosage unit form for ease of administration and uniformity of dosage. Dosage unit form as used herein refers to physically discrete units suited as unitary dosages for the subjects to be treated; each unit contains a predetermined quantity of active compound calculated to produce the desired therapeutic effect in association with the required pharmaceutical carrier. The specification for the dosage unit forms of the disclosure are dictated by and directly dependent on (a) the unique characteristics of the active compound and the particular therapeutic effect to be achieved, and (b) the limitations inherent in the art of compounding such an active compound for the treatment of sensitivity in individuals.
For administration of the conjugate of this disclosure, the dosage ranges from about 0.0001 to 100 mg/kg, and more usually 0.01 to 50 mg/kg, of the host body weight. For example, dosages can be 0.3 mg/kg body weight, 1 mg/kg body weight, 3 mg/kg body weight, 5 mg/kg body weight or 10 mg/kg body weight or within the range of 1-10 mg/kg. An exemplary treatment regime entails administration daily, twice per week, once per week, once every two weeks, once every three weeks, once every four weeks, once a month, once every 3 months or once every three to 6 months. Preferred dosage regimens for conjugate of the disclosure include 1 mg/kg body weight or 3 mg/kg body weight via intravenous administration, with the conjugate being given using one of the following dosing schedules: (i) every four weeks for six dosages, then every three months; (ii) every three weeks; (iii) 3 mg/kg body weight once followed by 1 mg/kg body weight every three weeks.
Alternatively, conjugate can be administered as a sustained release formulation, in which case less frequent administration is required. Dosage and frequency vary depending on the half-life of the conjugate in the patient. In general, human antibodies show the longest half-life, followed by humanized antibodies, chimeric antibodies, and nonhuman antibodies. The dosage and frequency of administration can vary depending on whether the treatment is prophylactic or therapeutic. In prophylactic applications, a relatively low dosage is administered at relatively infrequent intervals over a long period of time. Some patients continue to receive treatment for the rest of their lives. In therapeutic applications, a relatively high dosage at relatively short intervals is sometimes required until progression of the disease is reduced or terminated, and preferably until the patient shows partial or complete amelioration of symptoms of disease. Thereafter, the patient can be administered a prophylactic regime.
Actual dosage levels of the active ingredients in the pharmaceutical compositions of the present disclosure may be varied so as to obtain an amount of the active ingredient which is effective to achieve the desired therapeutic response for a particular patient, composition, and mode of administration, without being toxic to the patient. The selected dosage level will depend upon a variety of pharmacokinetic factors including the activity of the particular compositions of the present disclosure employed, the route of administration, the time of administration, the rate of excretion of the particular compound being employed, the duration of the treatment, other drugs, compounds and/or materials used in combination with the particular compositions employed, the age, sex, weight, condition, general health and prior medical history of the patient being treated, and like factors well known in the medical arts.
A “therapeutically effective dosage” of a conjugate of the disclosure preferably results in a decrease in severity of disease symptoms, an increase in frequency and duration of disease symptom-free periods, or a prevention of impairment or disability due to the disease affliction. For example, for the treatment of tumors, a “therapeutically effective dosage” preferably inhibits cell growth or tumor growth or metastasis by at least about 20%, more preferably by at least about 40%, even more preferably by at least about 60%, and still more preferably by at least about 80%relative to untreated subjects. The ability of an agent or compound to inhibit tumor growth can be evaluated in an animal model system predictive of efficacy in human tumors. Alternatively, this property of a composition can be evaluated by examining the ability of the compound to inhibit, such inhibition in vitro by assays known to the skilled practitioner. A therapeutically effective amount of a therapeutic compound can decrease tumor size, metastasis, or otherwise ameliorate symptoms in a subject. One of ordinary skill in the art would be able to determine such amounts based on such factors as the subject’s size, the severity of the subject’s symptoms, and the particular composition or route of administration selected.
VIII. Administration
A composition of the disclosure can be administered via one or more routes of administration using one or more of a variety of methods known in the art. As will be appreciated by the skilled artisan, the route and/or mode of administration will vary depending upon the desired results. Preferred routes of administration for conjugate of the disclosure include intravenous, intramuscular, intradermal, intraperitoneal, subcutaneous, spinal or other parenteral routes of administration, for example by injection or infusion. The phrase “parenteral administration” as used herein means modes of administration other than enteral and topical administration, usually by injection, and includes, without limitation, intravenous, intramuscular, intraarterial, intrathecal, intracapsular, intraorbital, intracardiac, intradermal, intraperitoneal, transtracheal, subcutaneous, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subarachnoid, intraspinal, epidural and intrasternal injection and infusion. Alternatively, a conjugate of the disclosure can be administered via a non-parenteral route, such as a topical, epidermal or mucosal route of administration, for example, intranasally, orally, vaginally, rectally, sublingually or topically.
The active compounds can be prepared with carriers that will protect the compound against rapid release, such as a controlled release formulation, including implants, transdermal patches, and microencapsulated delivery systems. Biodegradable, biocompatible polymers can be used, such as ethylene vinyl acetate, polyanhydrides, polyglycolic acid, collagen, polyorthoesters, and polylactic acid. Many methods for the preparation of such formulations are patented or generally known to those skilled in the art. See, e.g., Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978.
Therapeutic compositions can be administered with medical devices known in the art. For example, a therapeutic composition of the disclosure can be administered with a needleless hypodermic injection device, such as the devices disclosed in US 5399163, US 5383851, US 5312335, US 5064413, US 4941880, US 4790824, and US 4596556. Examples of well-known implants and modules useful in the present disclosure include those described in US 4487603, US 4486194, US 4447233, US 4447224, US 4439196, and US 4475196. These patents are incorporated herein by reference. Many other such implants, delivery systems, and modules are known to those skilled in the art.
IX. Treatment Methods
In one aspect, the present disclosure relates to treatment a disease of a subject in vivo using the above-described conjugate. In one embodiment, the disclosure provides a method of preventing and/or treating a disease in a subject in need, comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of a conjugate or the composition comprising the conjugate.
In some embodiments, the disease is selected from a cancer, an infectious disease, an inflammatory disease, an autoimmune disease and an immunodeficiency disease.
In one specific embodiment, the disease is a cancer.
Non-limiting examples of preferred cancers for treatment include head and neck cancer, esophageal cancer, lung cancer, colon cancer, rectal cancer, stomach cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, prostate cancer, breast cancer, leukemia, myeloma, epithelial squamous cell cancer, melanoma, brain cancer, cervical cancer, liver cancer, bladder cancer, breast cancer, renal cancer, testicular cancer, and thyroid cancer.
Non-limiting examples of preferred autoimmune diseases to be treated include systemic sclerosis and atherosclerosis.
In another aspect, the present disclosure relates to treatment of a subject in vivo using the above-described conjugate such that growth and/or metastasis of cancerous tumors is inhibited. In one embodiment, the disclosure provides a method of inhibiting growth and/or restricting metastatic spread of tumor cells in a subject, comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of a conjugate.
As used herein, the term “subject” is intended to include human and non-human animals. Non-human animals include all vertebrates, e.g., mammals and non-mammals, such as non-human primates, sheep, dogs, cats, cows, horses, chickens, amphibians, and reptiles, although mammals are preferred, such as non-human primates, sheep, dogs, cats, cows and horses. Preferred subjects include human patients in need of enhancement of an immune response. The methods are particularly suitable for treating human patients having a disorder that can be treated by augmenting the immune response.
The above treatment may also be combined with standard cancer treatments. For example, it may be effectively combined with chemotherapeutic regimes. In these instances, it may be possible to reduce the dose of chemotherapeutic reagent administered (Mokyr, M. et al. Cancer Res., 1998, 58, 5301–5304) .
Other antibodies which may be used to activate host immune responsiveness can be used in or with the bispecific molecule drug conjugate of this disclosure. These include molecules targeting on the surface of dendritic cells which activate DC function and antigen presentation. For example, anti-CD40 antibodies are able to substitute effectively for T cell helper activity (Ridge, J. et al. Nature, 1998, 393, 474–478) and can be used in conjunction with the bispecific molecule drug conjugate of this disclosure (Ito, N. et al. Immunobiology, 2000, 201, 527–540) . Similarly, antibodies targeting T cell costimulatory molecules such as CTLA-4 (US 5811097) , CD28 (Haan, J. et al. Immunol. Lett., 2014, 162, 103–112) , OX-40 (Weinberg, A. et al. J. Immunol., 2000, 164, 2160–2169) , 4-1BB (Melero, I. et al. Nature Med., 1997, 3, 682–685) , and ICOS (Hutloff, A. et al. Nature, 1999, 397, 262–266) or antibodies targeting PD-1 (US 8008449) and PD-L1 (US 7943743; US 8168179) may also provide for increased levels of T cell activation. In another example, the bispecific molecule drug conjugate of this disclosure can be used in conjunction with anti-neoplastic antibodies, such as RITUXAN (rituximab) , HERCEPTIN (trastuzumab) , BEXXAR (tositumomab) , ZEVALIN (ibritumomab) , CAMPATH (alemtuzumab) , LYMPHOCIDE (eprtuzumab) , AVASTIN (bevacizumab) , and TARCEVA (erlotinib) , and the like.
SYNTHETIC METHODS
The compounds and processes of the present invention will be better understood in connection with the following synthetic schemes that illustrate the methods by which the compounds of the invention may be prepared. These schemes are of illustrative purpose and are not meant to limit the scope of the invention. Equivalent, similar, or suitable solvents, reagents or reaction conditions may be substituted for those particular solvents, reagents, or reaction conditions described herein without departing from the general scope of the method of synthesis.
The compounds of Formula I may be prepared via several different synthetic routes using the chemical transformations that are known to those skilled in the art. One of the general synthetic strategies is shown in Scheme 1. The compounds of Formula I are obtained by alkylation reaction of compound A with compound B catalyzed by iron catalyst or other related Minisci reactions.
Scheme 1
Alternatively, compound C is synthesized by N-oxidation reaction of compound A, and then compound C is treated with phosphorus oxyhalide to afford compound D, the halogenated product of compound A. The compounds of Formula I can be obtained from compound D by various reactions, such as Heck reaction, Suzuki reaction, Buchwald reaction, Nigishi reaction, Stille reaction, etc, as shown in Scheme 2.
Scheme 2
Different or more complex molecules can be synthesized by various chemical transformations of R3 in compounds of Formula I, such as oxidation, reduction, substitution and other methods commonly found in textbooks.
Alternatively, the compounds of Formula I can also be afforded from compound E and compound F by a ring-closing reaction as shown in Scheme 3.
Scheme 3
The compounds of Formula II may be prepared via several different synthetic routes using the chemical transformations that are known to those skilled in the art. One of the general synthetic strategies is shown in Scheme 4. The compounds of Formula II can also be afforded from compound G and compound F by a ring-closing reaction.
Scheme 4
The compounds of Formula II-a may be prepared via several different synthetic routes using the chemical transformations that are known to those skilled in the art. One of the general synthetic strategies is shown in Scheme 5. The compounds of Formula II-acan also be afforded from compound N and compound F by a ring-closing reaction.
Scheme 5
The compounds of Formula II-b may be prepared via several different synthetic routes using the chemical transformations that are known to those skilled in the art. One of the general synthetic strategies is shown in Scheme 6-1. The compounds of Formula II-b can also be afforded from compound O and compound F by a ring-closing reaction. Alternatively, in certain aspects, using chemistry similar to that described above, the compounds Q can also be afforded from compound P and compound F by a ring-closing reaction, which could be readily converted to Formula II-b via the nucleophilic substitution, as shown in Scheme 6-2.
Scheme 6-1

Scheme 6-2
The compounds of Formula II-c may be prepared via several different synthetic routes using the chemical transformations that are known to those skilled in the art. One of the general synthetic strategies is shown in Scheme 7-1. The compounds of Formula II-c can also be afforded from compound R and compound F by a ring-closing reaction. Alternatively, in certain aspects, the compound Q can react with various amine S using the chemical transformations that are known to those skilled in the art, to provide the compounds of Formula II-c, as shown in Scheme 7-2.
Scheme 7-1

Scheme 7-2
The compounds of Formula II-d may be prepared via several different synthetic routes using the chemical transformations that are known to those skilled in the art. One of the general synthetic strategies is shown in Scheme 8. The compounds of Formula II-d can also be afforded from compound T and compound F by a ring-closing reaction.
Scheme 8
The compounds of Formula III may be prepared via several different synthetic routes using the chemical transformations that are known to those skilled in the art. One of the general synthetic strategies is shown in Scheme 9. The compounds of Formula III are obtained by alkylation reaction of compound H with compound J catalyzed by iron catalyst or other related Minisci reactions.
Scheme 9
Alternatively, compound K is synthesized by N-oxidation reaction of compound H, and then compound K is treated with phosphorus oxyhalide to afford compound L, the halogenated product of compound H. The compounds of Formula III can be obtained from compound L by various reactions, such as Heck reaction, Suzuki reaction, Buchwald reaction, Nigishi reaction, Stille reaction, etc, as shown in Scheme 10.
Scheme 10
Different or more complex molecules can be synthesized by various chemical transformations of R10 in compounds of Formula III, such as oxidation, reduction, substitution and other methods commonly found in textbooks.
Alternatively, the compounds of Formula III can also be afforded from compound M and compound F by a ring-closing reaction as shown in Scheme 11.
Scheme 11
It will be appreciated that, with appropriate manipulation and protection of any chemical functionality, synthesis of compounds of Formula I, II, III is accomplished by methods analogous to those above and those described in the Experimental section. Suitable protecting groups can be found, but are not restricted to, those found in T W Greene and P G M Wuts “Protective Groups in Organic Synthesis” , 3rd Ed (1999) , J Wiley and Sons.
All references cited herein, whether in print, electronic, computer readable storage media or other form, are expressly incorporated by reference in their entirety, including but not limited to, abstracts, articles, journals, publications, texts, treatises, internet websites, databases, patents, and patent publications.
Various changes and modifications to the disclosed embodiments will be apparent to those skilled in the art and such changes and modifications including, without limitation, those relating to the chemical structures, substituents, derivatives, formulations and/or methods of the invention may be made without departing from the spirit of the invention and the scope of the appended claims.
Although the invention has been described with respect to various preferred embodiments, it is not intended to be limited thereto, but rather those skilled in the art will recognize that variations and modifications may be made therein which are within the spirit of the invention and the scope of the appended claims.
EXAMPLES
The compounds and processes of the present invention will be better understood in connection with the following examples, which are intended as an illustration only and not limiting of the scope of the invention. Various changes and modifications to the disclosed embodiments will be apparent to those skilled in the art and such changes and modifications including, without limitation, those relating to the chemical structures, substituents, derivatives, formulations and/or methods of the invention may be made without departing from the spirit of the invention and the scope of the appended claims.
Example 1-1
(S) -10-amino-4-ethyl-8-fluoro-4-hydroxy-1, 12-dihydro-14H-pyrano [3', 4': 6, 7] indolizino [1, 2-b] quinoline-
3, 14 (4H) -dione
Step 1-1a. A mixture of 1, 3-dibromo-5-fluoro-2-iodobenzene (CAS: 62720-29-0) (5000 mg, 17.74 mmol) in toluene (100 mL) , cooled to -35 ℃, was added to a the solution of chloro (prop-2-yl) magnesium (7.9 mL, 15.80 mmol) over 30 minutes, while maintaining the internal temperature below -25 ℃, obtaining a clear brown solution, and was stirred for 1.5 hours. Then anhydrous N, N-dimethylmethanamide (3.4 mL, 44.10 mmol) was added into the mixture over a period of 30 minutes and the temperature of the reaction mixture was raised to -19 ℃, and then to 10℃ over 1 hour. The reaction mixture was stirred at 10 ℃ for 1.5 hours. After then, the mixture was quenched with saturated aqueous NH4Cl solution, filtered, and then concentrated at reduced pressure. The residue was purified by silica-gel column chromatography (eluting with petroleum ether/ethyl acetate from 50: 1 to 20: 1 ratio) to afford the desired compound (3000 mg, 10.6 mmol, 81%yield) as a white solid.
Step 1-1b. A mixture of the compound from Step 1-1a (500 mg, 1.77 mmol) , ethylene glycol (0.5 mL, 8.87 mmol) , 4-methylbenzenesulfonic acid (30.55 mg, 0.18 mmol) and triethoxymethane (226.05 mg, 1.56 mmol) in DCE (10 mL) was stirred at 80 ℃ for 16 hours. It was quenched with water (0.5 mL) and extracted by DCM (3× 10 mL) . The combined organics were dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated in vacuo. The residue was purified by silica-gel column chromatography (PE/EA with EA from 0～25%) to afford the desired compound (550 mg, 1.69 mmol, 95%yield) as a yellow solid.
Step 1-1c. A mixture of the compound from Step 1-1b (150 mg, 0.46 mmol) , diphenylmethanimine (175.15 mg, 0.97 mmol) , [5- (diphenylphosphanyl) -9, 9-dimethyl-9H-xanthen-4-yl] diphenylphosphane (26.63 mg, 0.05 mmol) , palladium bis (acetate) (10.33 mg, 0.05 mmol) and potassium tert-butoxide (132.67 mg, 1.38 mmol) in toluene (10 mL) was stirred at 80 ℃ for 16 hours. The organic solvents were removed at reduced pressure. The residue was concentrated in vacuo and purified by flash chromatography (PE/EA with EA from 0～40%) to afford the desired compound (150 mg, 0.285 mmol, 62%yield) as a white solid. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 527.6.
Step 1-1. A mixture of the compound from Step 1-1c (100 mg, 0.19 mmol) , (4S) -4-ethyl-4-hydroxy-3, 4, 6, 7, 8, 10-hexahydro-1H-pyrano [3, 4-f] indolizine-3, 6, 10-trione (CAS 110351-94-5) (44.99 mg, 0.17 mmol) and HCl (0.5 mL, 6.00 mmol) in EtOH (5 mL) was stirred at 80℃ for 16 hours. The organic solvents were removed at reduced pressure. The residue was purified by prep-HPLC (C18, 18-48%acetonitrile in H2O with 0.1 %formic acid) to afford the desired compound 1-1 (7 mg, 0.018 mmol, 9.7%yield) as a brown solid. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 382.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.85 (s, 1H) , 7.29 (s, 1H) , 7.01 (dd, J = 10.4, 2.4 Hz, 1H) , 6.68 –6.53 (m, 3H) , 6.51 (s, 1H) , 5.43 (s, 2H) , 5.26 (s, 2H) , 1.93 –1.79 (m, 2H) , 0.88 (t, J = 7.3 Hz, 3H) .
Example 1-6
(S) -4-ethyl-8-fluoro-4-hydroxy-10- ( (2-hydroxyethyl) amino) -1, 12-dihydro-14H-pyrano [3', 4': 6, 7] indolizino [1, 2-
b] quinoline-3, 14 (4H) -dione
Step 1-6a. A mixture of the compound from Step 1-1b (5.0 g, 15.339 mmol) ) and diphenylmethanimine (3.06 g, 16.873 mmol) , [5- (diphenylphosphanyl) -9, 9-dimethyl-9H-xanthen-4-yl] diphenylphosphane (0.89 g, 1.534 mmol) , Pd (OAc) 2 (0.34 g, 1.534 mmol) and sodium 2-methylpropan-2-olate (4.42 g, 46.018 mmol) in toluene (50 mL) was stirred at 100℃ for 16 h. The mixture was concentrated in vacuo. The residue was purified by column chromatography (PE/EA with EA from 0～30%) to afford the desired compound (3.2 g, 49%) as a yellow solid. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 428.0.
Step 1-6b. A mixture of the compound from Step 1-6a (500 mg, 1.173 mmol) , 2-aminoethan-1-ol (14.33 mg, 0.235 mmol) and copper powder (74.54 mg, 1.173 mmol) in DMSO (15 mL) was stirred at 100℃ for 18 h. The mixture was filtrated and extracted with EA (20 mL*3) . The mixture was concentrated in vacuo. The residue was purified by column chromatography (PE/EA with EA from 0～50%) to give the desired compound (90 mg, 18%) as a yellow solid. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 363.2.
Step 1-6c. A mixture of the compound from Step 1-6b (90 mg, 0.221 mmol) and (4S) -4-ethyl-4-hydroxy-3, 4, 6, 7, 8, 10-hexahydro-1H-pyrano [3, 4-f] indolizine-3, 6, 10-trione (CAS 110351-94-5) (58.29 mg, 0.221 mmol) and 4-methylbenzenesulfonic acid (38.13 mg, 0.221 mmol) in toluene (10 mL) was stirred at 120℃ for 18 h. The mixture was concentrated in vacuo. The residue was purified by prep-HPLC (C18, 20-50 %acetonitrile in H2O with 0.01 %TFA) to afford the desired compound 1-6 (2.9 mg, 3.08%) as a yellow solid. (LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 426.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.95 (s, 1H) , 7.32 (s, 1H) , 7.02 (dd, J = 10.4, 2.4 Hz, 1H) , 6.93 (s, 1H) , 6.53 (dd, J = 12.4, 2.4 Hz, 2H) , 5.43 (s, 2H) , 5.27 (s, 2H) , 4.83 (s, 1H) , 3.71 (t, J = 6.0 Hz, 2H) , 3.40 (s, 2H) , 1.92-1.81 (m, 2H) , 0.88 (t, J = 7.2 Hz, 3H) .
Example 1-7
(S) -10- ( (2-aminoethyl) amino) -4-ethyl-8-fluoro-4-hydroxy-1, 12-dihydro-14H-pyrano [3', 4': 6, 7] indolizino [1, 2-
b] quinoline-3, 14 (4H) -dione
Step 1-7a. A mixture of the compound from Step 1-6a (300 mg, 0.704 mmol) , 2-methylpropan-2-yl [ (2-aminoethyl) amino] methanoate (563.77 mg, 3.519 mmol) and Cu (44.74 mg, 0.704 mmol) in DMSO (10 mL) was stirred at 100 ℃ for 18 hr. The mixture was filtrated and extracted with EA (20 mL*3) . The mixture was concentrated in vacuo. The residue was purified by column chromatography (PE/EA with EA from 0～30%) to give the title compound (50 mg, 14%) as a yellow solid. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 506.2.
Step 1-7. A mixture of the compound from Step 1-7a (50 mg, 0.099 mmol) and (4S) -4-ethyl-4-hydroxy-3, 4, 6, 7, 8, 10-hexahydro-1H-pyrano [3, 4-f] indolizine-3, 6, 10-trione (26.03 mg, 0.099 mmol) and 4-methylbenzenesulfonic acid (17.03 mg, 0.099 mmol) in toluene (10 mL) was stirred at 120 ℃ for 18 hr. The mixture was concentrated in vacuo. The residue was purified by Prep-HPLC (C18, 20-50%acetonitrile in H2O with 0.01 %TFA) to afford the title compound (6.7 mg, 16%) as a brown solid. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 436.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.87 (s, 1H) , 7.86 (s, 3H) , 7.31 (s, 1H) , 7.14 -7.05 (m, 2H) , 6.64 (dd, J = 12.4, 2.3 Hz, 1H) , 6.53 (s, 1H) , 5.43 (s, 2H) , 5.29 (s, 2H) , 3.54-3.50 (m, 2H) , 3.14-3.12 (m, 2H) , 1.93 -1.81 (m, 2H) , 0.88 (t, J = 7.2 Hz, 3H) .
Example 1-9
(S) -2-amino-N- (4-ethyl-8-fluoro-4-hydroxy-3, 14-dioxo-3, 4, 12, 14-tetrahydro-1H-pyrano [3', 4': 6, 7] indolizino [1, 2-
b] quinolin-10-yl) acetamide
Step 1-9a. A mixture of 1-1 (30 mg, 0.08 mmol) , N- { [ (2-methylprop-2-yl) oxy] carbonyl} glycine (41.34 mg, 0.24 mmol) , HOAt (32.12 mg, 0.24 mmol) , 1- { [3- (dimethylamino) propyl] azanylidene} -N-ethylmethanimine hydrochloride (51.59 mg, 0.24 mmol) and cupric chloride (42.31 mg, 0.32 mmol) in DMF (0.3 mL) and DCM (2.7 mL) was stirred at 25 ℃ for 18 hours. The resulting mixture was concentrated to afford the desired compound (crude 30 mg) as a yellow solid. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 539.3.
Step 1-9. A mixture of Step 1-9b (30mg, 0.028 mmol) and TFA (0.25 mL, 3.265 mmol) in DCM (1 mL) was stirred at 25 ℃ for 16 hours. The resulting mixture was concentrated and the residue was purified by Prep-HPLC (C18, 20-50 %acetonitrile in H2O with 0.01 %TFA) to afford the desired compound 1-9 (3 mg, 0.007 mmol, 12.2 %yield) as an off -white solid. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 439.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.85 (s, 1H) , 8.93 (s, 1H) , 8.21 (s, 2H) , 7.94 (dd, J = 10.4, 2.4 Hz, 1H) , 7.85 (dd, J = 9.6, 2.4 Hz, 1H) , 7.37 (s, 1H) , 6.56 (s, 1H) , 5.44 (s, 2H) , 5.32 (s, 2H) , 4.02 (s, 2H) , 1.93-1.82 (m, 2H) , 0.88 (t, J = 7.2 Hz, 3H) .
Example 2-1
(S) -7-ethyl-7-hydroxy-14- (3- (hydroxymethyl) bicyclo [1.1.1] pentan-1-yl) -10, 13-dihydro-11H- [1, 3] dioxolo [4, 5-
g] pyrano [3', 4': 6, 7] indolizino [1, 2-b] quinoline-8, 11 (7H) -dione

Step 2-1a. A mixture of methyl 1- (hydroxymethyl) bicyclo [1.1.1] pentane-3-carboxylate (CAS 180464-87-3) (3.0 g, 19.20 mmol) , chloro (2-methylprop-2-yl) diphenylsilane (5.54 g, 20.16 mmol) and 1H-imidazole (2.62 g, 38.41 mmol) in DCM (50 mL) was stirred at 25 ℃ for 18 hours. The solution was concentrated and the residue was purified by FC (PE/DCM with DCM from 0～45%) to afford the desired product (3.0 g, 7.59 mmol, 39.6%yield) as a colorless oil. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 395.2.
Step 2-1b. A mixture of the compound from Step 2-1a (1.8 g, 4.56 mmol) and lithium hydroxide (0.22 g, 9.12 mmol) in THF (40 mL) and water (10 mL) was stirred at 0 ℃ for 18 hours. It was concentrated and the residue was purified by RP-FC (H2O/CH3CN with CH3CN from 0～60%) to give the desired compound as a white solid (0.87 g, 2.16 mmol, 50%yield) . LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 403.2.
Step 2-1c. A mixture of the compound from Step 2-1b (0.7 g, 1.84 mmol) , N, O-Dimethylhydroxylamine hydrochloride (179 mg, 1.84 mmol) , HATU (1.4 g, 3.68mmol) and DIPEA (713 mg, 5.52 mmol) in DCM (20 mL) was stirred at 25 ℃ for 2 hours. The mixture was concentrated at reduced pressure and the residue partitioned between DCM (20 mL) and water (20 mL) . The aqueous layer was extracted with DCM (20 mL*2) , and the combined organic layers were dried over sodium sulfate, and filtered. The filtrate was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by flash chromatography (10 g silica gel column, PE/DCM with DCM from 0～50%) to afford the desired compound (0.4 g, 0.94 mmol, 51.3 %yield) as a yellow oil. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 424.4.
Step 2-1d. A mixture of the compound from Step 2-1c (450 mg, 1.06 mmol) , 5-bromobenzo [d] [1, 3] dioxole (235 mg, 1.17 mmol) and n-BuLi (177 mg, 2.76 mmol) in THF (10 mL) was stirred at -65 ℃ for 2 hours. It was concentrated and the residue was purified by FC (PE/EA with EA from 0～15%) to afford the desired compound (45 mg, 0.089 mmol 15.5 %yield) as a yellow oil. LC-MS: (ESI) m/z (M+Na) , 507.2.
Step 2-1e. A mixture of the compound from Step 2-1d (45 mg, 0.09 mmol) and cupric nitrate (35 mg, 0.19 mmol) in acetic anhydride (0.25 mL) was stirred at 0℃ for 2 hours. It was concentrated and the residue was purified to afford the desired product (15 mg, 0.028 mmol, 31 %yield) as a white solid. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 530.4.
Step 2-1f. A mixture of the compound from Step 2-1e (15 mg, 0.03 mmol) , iron (0) (6 mg, 0.11 mmol) and NH4Cl (15 mg, 0.28 mmol) in EtOH (2 mL) and water (0.5 mL) was stirred at 0℃ for 2 hours. The solution was diluted with EA (2 mL) and washed with water (2 mL) and the phases were separated. The aqueous layer was extracted four times with EA (2 mL) , the combined organic phases were dried over sodium sulfate and the solvent was removed under reduced pressure to to afford the desired compound (crude 15 mg) as a colorless oil. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 500.4.
Step 2-1g. A mixture of the compound from Step 2-1f (10 mg, 0.02 mmol) , (4S) -4-ethyl-4-hydroxy-3, 4, 6, 7, 8, 10-hexahydro-1H-pyrano [3, 4-f] indolizine-3, 6, 10-trione (CAS110351-94-5) (7 mg, 0.02 mmol) and PPTS (6 mg, 0.02 mmol) in toluene (2 mL) was stirred at 110℃ for 18 hours. It was concentrated to afford the desired compound (crude 10 mg) as a brown solid, used in the next step without further purification. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 727.2.
Step 2-1. A mixture of the compound from Step 2-1g (10 mg, 0.014 mmol) and 4N HCl (50 mg, 0.27 mmol) in 1, 4-dioxane (2 mL) was stirred at 0 ℃ for 2 hours. The solvent was removed under vacuum and the residue was purified by prep-HPLC (C18, 20-60 %acetonitrile in H2O with 0.1 %TFA) to afford the desired compound 2-1 (1.7 mg, 0.003 mmol, 25.3%yield) as a yellow solid. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 489.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.74 (s, 1H) , 7.52 (s, 1H) , 7.23 (s, 1H) , 6.48 (s, 1H) , 6.30 (s, 2H) , 5.40 –5.45 (m, 4H) , 4.75 –4.51 (m, 1H) , 3.53 (s, 2H) , 2.42 (s, 6H) , 1.90 –1.84 (m, 2H) , 0.87 (t, J = 7.2 Hz, 3H) .
Example 2-4
(S) -7-ethyl-7-hydroxy-14- (3- (methoxymethyl) bicyclo [1.1.1] pentan-1-yl) -10, 13-dihydro-11H- [1, 3] dioxolo [4, 5-
g] pyrano [3', 4': 6, 7] indolizino [1, 2-b] quinoline-8, 11 (7H) -dione
Step 2-4. To a solution of the compound 2-1 in DCM (15 mL) was added MeI (15 mg, 0.1 mmol) and AgOTf (79 mg, 0.3 mmol) , and stirred at 20℃ for 12h. The mixture was concentrated and purified by Prep-HPLC (Chromatographic column: WELCH Xtimate 250 × 21.2 mm, 10 um; Mobile Phase: CH3CN/H2O (0.1%FA) ; Gradient: 40%to 70%in 10 min, 30 mL/min) to give the desired compound 2-4 (6.4 mg, 12%yield) as a white solid. LC-MS: ESI-MS m/z = 503.1 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.73 (s, 1H) , 7.51 (s, 1H) , 7.23 (s, 1H) , 6.50 (s, 1H) , 6.29 (s, 2H) , 5.41 (s, 2H) , 5.37 (s, 2H) , 3.48 (s, 2H) , 3.34 (s, 3H) , 2.48 –2.44 (m, 6H) , 1.88 –1.84 (m, 2H) , 0.87 (t, J= 8.0 Hz, 3H) .
The following examples were prepared using procedures similar to those described above:


Example 2-6
(S) -14- (3- (aminomethyl) bicyclo [1.1.1] pentan-1-yl) -7-ethyl-7-hydroxy-10, 13-dihydro-11H- [1, 3] dioxolo [4, 5-
g] pyrano [3', 4': 6, 7] indolizino [1, 2-b] quinoline-8, 11 (7H) -dione
Step 2-6a. To a stirred mixture of the compound 2-1 (200 mg, 0.4 mmol) in DCM (3 mL) and DMF (3 mL) was added Dess-Martin periodinane (260 mg, 0.6 mmol) at 25 ℃ under nitrogen atmosphere. The resulting mixture was stirred at 25 ℃ for 2 h. The precipitated solids were collected by filtration and washed with DCM (2 mL × 2) . The resulting mixture was concentrated under vacuum. This resulted in the desired compound 2-6a (200 mg, ～90%purity, 90%yield) as a yellow solid. ESI-MS m/z = 487.1 [M+H] +, 505.2 [M+H2O+H] +.
Step 2-6. A mixture of the compound from Step 2-6a (200 mg, 0.4 mmol) in MeOH (5 mL) was treated with NH4OAc (1423 mg, 1.9 mmol) and AcOH (23 mg, 0.4 mmol) for 2 h at 25 ℃ under nitrogen atmosphere followed by the addition of NaBH3CN (46 mg, 0.7 mmol) at 25 ℃. The resulting mixture was stirred at 25 ℃ for an additional 3 h. The resulting mixture was concentrated under vacuum. The residue was purified by flash column chromatography (12 g silica gel column, Dichloromethane/CH3OH with CH3OH from 0%to 20%in 15 min) to give the desired compound 2-6 (70 mg, 35%yield) as a yellow solid. ESI-MS m/z = 488.2 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ7.84 (s, 2H) , 7.70 (s, 1H) , 7.55 (s, 1H) , 7.25 (s, 1H) , 6.50 (s, 1H) , 6.32 (s, 2H) , 5.46 –5.40 (m, 4H) , 3.14 –3.10 (m, 2H) , 2.57 (s, 6H) , 1.93 –1.81 (m, 2H) , 0.87 (t, J = 7.2 Hz, 3H) .
Example 2-7
(S) -N- ( (3- (7-ethyl-7-hydroxy-8, 11-dioxo-7, 8, 11, 13-tetrahydro-10H- [1, 3] dioxolo [4, 5-
g] pyrano [3', 4': 6, 7] indolizino [1, 2-b] quinolin-14-yl) bicyclo [1.1.1] pentan-1-yl) methyl) -2-hydroxyacetamide
Step 2-7. To a stirred stirred mixture of 2-hydroxyacetic acid (15 mg, 0.2 mmol) and HATU (78 mg, 0.2 mmol) in DMF (4 mL) were added the compound 2-6 and DIPEA (66 mg, 0.5 mmol) at 25 ℃ under nitrogen atmosphere. The resulting mixture was stirred at 25 ℃ for 1.5 h. The resulting mixture was concentrated under vacuum. The residue was purified by Prep-HPLC (Chromatographic column: Xtimate-18C 250 × 21.2 mm, 10 μm; Mobile Phase: CH3CN/H2O (0.1%FA) ; Gradient: 20%to 50%in 9 min) to give the desired compound 2-7 (4.7 mg, 7%yield) as a light-yellow solid. ESI-MS m/z = 546.2 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.89 (t, J = 6.0 Hz, 1H) , 7.70 (s, 1H) , 7.51 (s, 1H) , 7.22 (s, 1H) , 6.29 (s, 2H) , 5.42 (s, 2H) , 5.34 (s, 2H) , 3.91 (s, 1H) , 3.88 (s, 2H) , 3.36 (d, J = 6.1 Hz, 2H) , 2.67 (s, 1H) , 2.41 (s, 6H) , 1.95 –1.78 (m, 2H) , 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 3H) .
Example 2-8
(S) -3- (7-ethyl-7-hydroxy-8, 11-dioxo-7, 8, 11, 13-tetrahydro-10H- [1, 3] dioxolo [4, 5-g] pyrano [3', 4': 6, 7] indolizino [1, 2-
b] quinolin-14-yl) bicyclo [1.1.1] pentane-1-carboxylic
Step 2-8. To a solution of the compound 2-1 (30 mg, 61 μmol) in DMSO (2 mL) was added IBX (34 mg, 123 μmol) at 25 ℃ under nitrogen atmosphere. The resulting mixture was stirred at 80 ℃ for 3 h. The residue was purified by Prep-HPLC (Chromatographic column: Xtimate-18C 250 × 21.2 mm, 10 μm; Mobile Phase: CH3CN/H2O (0.1%FA) ; Gradient: 32%to 42%in 10 min) to give the desired compound 2-8 (2.3 mg, 7%yield) as a white solid. ESI-MS m/z = 503.1 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.72 (s, 1H) , 7.51 (s, 1H) , 7.23 (s, 1H) , 6.50 (s, 1H) , 6.29 (s, 2H) , 5.41 (s, 2H) , 5.38 (s, 2H) , 2.70 (s, 6H) , 1.94 –1.78 (m, 2H) , 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 3H) .
Example 2-13
(S) -7-ethyl-7-hydroxy-14- (3- ( (2-hydroxyethoxy) methyl) bicyclo [1.1.1] pentan-1-yl) -10, 13-dihydro-11H- 
[1, 3] dioxolo [4, 5-g] pyrano [3', 4': 6, 7] indolizino [1, 2-b] quinoline-8, 11 (7H) -dione
Step 2-13a. To a solution of compound 2-1 (25 mg, 0.05 mmol) and [ (2-iodoethoxy) methyl] benzene (16.1 mg, 0.0614 mmol) in DCM (10 mL) was added AgOTf (26 mg, 0.1 mmol) , the resulting mixture was stirred at 20℃ under N2 atmosphere for 12 h. The mixture was filtrated and concentrated to get crude, the residue was purified by flash column chromatography (4 g silica gel column, petroleum ether/ethyl acetate with ethyl acetate from 10%to 50%in 20 min) to give the desired compound (30 mg, 75%yield) as a white solid. LC-MS: ESI-MS m/z = 623.2 [M+H] +.
Step 2-13. To a solution of the compound from Step 2-13a (25 mg, 0.04 mmol) in EtOAc (10 mL) was added Pd/C (10 mg, 10%) , the resulting mixture was stirred at 20℃ for 12 h under H2 atmosphere. The mixture was filtrated and purified by Prep-HPLC (Chromatographic column: Xbridge-C18 150 × 19 mm, 5 um; Mobile Phase: CH3CN/H2O (0.1%FA) ; Gradient: 35%to 45%in 8 min, 20 mL/min) to give the desired compound 2-13 (2.2 mg, 9%yield) as a white solid. LC-MS: ESI-MS m/z = 533.2 [M+H] +. 1HNMR (400 MHz, DMSO) δ 7.74 (s, 1H) , 7.51 (s, 1H) , 7.23 (s, 1H) , 6.48 (s, 1H) , 6.29 (s, 2H) , 5.41 (s, 2H) , 5.38 (s, 2H) , 3.57 –3.51 (m, 6H) , 2.48 –2.44 (m, 6H) , 1.88 –1.84 (m, 2H) , 0.87 (t, J= 8.0 Hz, 3H) .
Example 2-14
(S) - (3- (7-ethyl-7-hydroxy-8, 11-dioxo-7, 8, 11, 13-tetrahydro-10H- [1, 3] dioxolo [4, 5-g] pyrano [3', 4': 6, 7] indolizino [1, 2-
b] quinolin-14-yl) bicyclo [1.1.1] pentan-1-yl) methyl dihydrogen phosphate
Step 2-14. To a solution of compound 2-1 (410 mg, 0.8 mmol) in DMF (5 mL) was added P2O5 (215 mg, 1.5 mmol) . The reaction mixture was stirred at 80℃ for 12 h. The reaction mixture was purified by Prep-HPLC (Chromatographic column: Welch-18C 250 × 21.2 mm, 10 μm; Mobile Phase: CH3CN/H2O (0.1%TFA) ; Gradient: 25%to 40%in 10 min) to give the desired compound 2-14 (114 mg, 24%yield) as a yellow solid. LC-MS: ESI-MS m/z = 569.1 [M+H] +. 1HNMR (400 MHz, DMSO) δ 7.71 (s, 1H) , 7.50 (s, 1H) , 7.23 (s, 1H) , 6.47 (s, 1H) , 6.28 (s, 2H) , 5.41 (s, 2H) , 5.36 (s, 2H) , 3.97 (d, J = 4.0 Hz, 2H) , 2.47 –2.40 (m, 6H) , 1.89 –1.81 (m, 2H) , 0.87 (t, J = 4.0 Hz, 3H) . 31P NMR (162 MHz, DMSO) δ -0.84.
Example 2-15
(S) -7-ethyl-7-hydroxy-14- (3- ( ( (3-hydroxypropyl) amino) methyl) bicyclo [1.1.1] pentan-1-yl) -10, 13-dihydro-11H- 
[1, 3] dioxolo [4, 5-g] pyrano [3', 4': 6, 7] indolizino [1, 2-b] quinoline-8, 11 (7H) -dione
Step 2-15. A mixture of the compound from Step 2-6a (20 mg, 41 μmol) , 3-aminopropan-1-ol (15 mg, 0.2 mmol) and AcOH (3 mg, 41 μmol) in MeOH (5 mL) was stirred for 2 h at 25 ℃ under nitrogen atmosphere. To the above mixture was added NaBH3CN (5 mg, 82 μmol) at 25 ℃. The resulting mixture was stirred at 25 ℃ for an additional 2 h. The resulting mixture was concentrated under vacuum. The residue was purified by Prep-HPLC (Chromatographic column: Xtimate-18C 250 × 21.2 mm, 10 μm; Mobile Phase: CH3CN/H2O (0.1%FA) ; Gradient: 20%to 40%in 10 min) to give the desired compound 2-15 as a white solid. ESI-MS m/z = 546.2 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ7.70 (s, 1H) , 7.49 (s, 1H) , 7.21 (s, 1H) , 6.49 (s, 1H) , 6.27 (s, 2H) , 5.39 (s, 2H) , 5.34 (s, 2H) , 3.54 (s, 1H) , 3.50 –3.46 (m, 2H) , 2.82 (s, 2H) , 2.73 (t, J = 7.0 Hz, 2H) , 2.46 (s, 6H) , 1.92 –1.75 (m, 2H) , 1.69 –1.59 (m, 2H) , 0.84 (t, J = 7.3 Hz, 3H) .
The following examples were prepared using procedures similar to those described above:


Example 2-18
(S) -4-ethyl-4-hydroxy-11- (3- (hydroxymethyl) bicyclo [1.1.1] pentan-1-yl) -1, 12-dihydro-14H-
pyrano [3', 4': 6, 7] indolizino [1, 2-b] quinoline-3, 14 (4H) -dione
Step 2-18a. A mixture of N- (2-bromophenyl) acetamide (227 mg, 1.0 mmol) in THF (5 mL) was treated with n-BuLi (2.5 mol/L in hexanes) (1.0 mL) for 1.5 h at -78 ℃ under nitrogen atmosphere followed by the addition a solution of the compound from Step 2-1c in THF (5 mL) at -78 ℃. The resulting mixture was stirred at -78 ℃ for an additional 1.5 h. The reaction was quenched with sat. NH4Cl (10 mL, aq. ) at 0 ℃. The resulting mixture was extracted with EtOAc (50 mL × 2) . The combined organic layers were washed with brine (50 mL) , and dried over anhydrous sodium sulfate. After filtration, the filtrate was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by flash column chromatography (25 g silica gel column, petroleum ether/ethyl acetate with ethyl acetate from 0%to 10%in 16 min) to give the desired compound 2-18a (170 mg, 46%yield) as a white solid. ESI-MS m/z = 498 [M+H] +.
Step 2-18b. To a stirred mixture of the compound from Step 2-18a (170 mg, 341 μmol) in MeOH (2.0 mL) and THF (2.0 mL) was added HCl (4.0 N) (2 mL) at 25 ℃ under nitrogen atmosphere. The resulting mixture was stirred at 50 ℃ for 16 h. The reaction was quenched with sat. NaHCO3 (10 mL, aq. ) at 0 ℃. The resulting mixture was extracted with Dichloromethane (30 mL × 2) . The combined organic layers were dried over anhydrous sodium sulfate. After filtration, the filtrate was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by flash column chromatography (12 g silica gel column, dichloromethane/ethyl acetate with ethyl acetate from 15%to 40%in 16 min) to give the desired compound 2-18b (70 g, 92%yield) as a white solid. ESI-MS m/z = 218.1 [M+H] +.
Step 2-18. To a stirred mixture of the compound from Step 2-18b (93 mg, 354 μmol) and (4S) -4-ethyl-4-hydroxy-3, 4, 6, 7, 8, 10-hexahydro-1H-pyrano [3, 4-f] indolizine-3, 6, 10-trione (CAS110351-94-5) (93 mg, 354 μmol) in toluene (10 mL) was added PPTS (89 mg, 354 μmol) at 25 ℃ under nitrogen atmosphere. The resulting mixture was stirred at 110 ℃ for 10 h. The resulting mixture was concentrated under vacuum. The residue was purified by Prep-MPLC (Chromatographic column: Agela-18C 40 g; Mobile Phase: CH3CN/H2O (0.1%FA) ; Gradient: 20%to 40%in 18 min) to the desired compound 2-18 (120 mg, 84%yield) as a light-yellow solid. ESI-MS m/z = 445.2 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.53 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 8.17 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.85 (t, J = 7.6 Hz, 1H) , 7.71 (t, J = 7.6 Hz, 1H) , 7.33 (s, 1H) , 6.54 (s, 1H) , 5.51 –5.35 (m, 4H) , 4.71 (s, 1H) , 3.55 (d, J = 3.7 Hz, 2H) , 2.47 (s, 6H) , 1.97 –1.79 (m, 2H) , 0.88 (t, J = 7.2 Hz, 3H) .
Example 2-19
(S) -3- (4-ethyl-4-hydroxy-3, 14-dioxo-3, 4, 12, 14-tetrahydro-1H-pyrano [3', 4': 6, 7] indolizino [1, 2-b] quinolin-11-
yl) bicyclo [1.1.1] pentane-1-carboxylic acid
Step 2-19. To a stirred mixture of the compound 2-18 (40 mg, 90 μmol) in DMSO (4 mL) was added IBX (75 mg, 270 μmol) at 25 ℃ under nitrogen atmosphere. The resulting mixture was stirred at 80 ℃ for 3 h. The residue was purified by Prep-HPLC (Chromatographic column: Xtimate-18C 250 × 21.2 mm, 10 μm; Mobile Phase: CH3CN/H2O (0.1%FA) ; Gradient: 30%to 50%in 10 min) to give the desired compound 2-19 (22.7 mg, 55%yield) as a white solid. ESI-MS m/z = 459.1 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.71 (s, 1H) , 8.52 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 8.18 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 7.86 (t, J = 7.6 Hz, 1H) , 7.72 (t, J = 7.6 Hz, 1H) , 7.33 (s, 1H) , 6.54 (s, 1H) , 5.47 (s, 2H) , 5.44 (s, 2H) , 2.81 (s, 6H) , 1.95 –1.80 (m, 2H) , 0.88 (t, J = 7.2 Hz, 3H) .
The following examples were prepared using procedures similar to those described above:


Example 2-28
(S) -3- (4-ethyl-8-fluoro-4-hydroxy-9-methyl-3, 14-dioxo-3, 4, 12, 14-tetrahydro-1H-pyrano [3', 4': 6, 7] indolizino [1, 2-
b] quinolin-11-yl) bicyclo [1.1.1] pentane-1-carboxylic acid
Step 2-28. To a stirred mixture of compound 2-2 (260 mg, 546 μmol) in DMSO (4 mL) was added IBX (458 mg, 1.6 mmol) at 25℃ under nitrogen atmosphere. The resulting mixture was stirred at 80℃ for 3 h. The residue was purified by Prep-MPLC (Chromatographic column: Agela-18C 40 g; Mobile Phase: CH3CN/H2O (0.1%FA) ; Gradient: 20%to 50%in 18 min) to give the compound 2-28 (120 mg, 44%yield) as a light-yellow solid. ESI-MS m/z = 491.2 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.66 (s, 1H) , 8.36 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.89 (d, J = 10.7 Hz, 1H) , 7.30 (s, 1H) , 6.53 (s, 1H) , 5.48 –5.37 (m, 4H) , 2.83 (s, 6H) , 2.54 (s, 3H) , 1.93 –1.79 (m, 2H) , 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 3H) . 19F NMR (400 MHz, DMSO-d6) -112.73.
Example 2-30
(S) -3- (4-ethyl-8-fluoro-4-hydroxy-9-methyl-3, 14-dioxo-3, 4, 12, 14-tetrahydro-1H-pyrano [3', 4': 6, 7] indolizino [1, 2-
b] quinolin-11-yl) -N- (2-hydroxyethyl) bicyclo [1.1.1] pentane-1-carboxamide
Step 2-30a. To a stirred mixture of the compound 2-28 (30 mg, 61 μmol) and HATU (28 mg, 73 μmol) in DMF (2 mL) were added 2- ( (tert-butyldimethylsilyl) oxy) ethan-1-amine (12 mg, 73 μmol) and DIPEA (24 mg, 0.2 mmol) at 25℃ under nitrogen atmosphere. The resulting mixture was stirred at 25℃ for 2 h. The resulting mixture was diluted with water (60 mL) . The resulting mixture was extracted with EtOAc (20 mL × 2) . The combined organic layers were washed with brine (20 mL) , and dried over anhydrous sodium sulfate. After filtration, the filtrate was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by flash column chromatography (12 g silica gel column, Dichloromethane /CH3OH with CH3OH from 0%to 10%in 16 min) to give the desired compound (70 mg, 88%yield, ～50%purity) as a light-yellow oil. ESI-MS m/z = 648.3 [M+H] +.
Step 2-30. To a stirred mixture of the compound from Step 2-30a (70 mg, ～50%purity, 54 μmol) in THF (3 mL) was added HCl (4.0 N) (0.3 mL) at 25℃ under nitrogen atmosphere. The resulting mixture was stirred at 25 ℃ for 40 min. The resulting mixture was concentrated under vacuum. The residue was purified by Prep-HPLC (Chromatographic column: Xtimate-18C 250 × 21.2 mm, 10 μm; Mobile Phase: CH3CN/H2O (0.1%FA) ; Gradient: 32%to 42%in 10 min) to give the desired compound 2-30 (11 mg, 38%yield) as a light-yellow solid. ESI-MS m/z = 534.2 [M+H] +. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.36 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.96 (t, J = 5.7 Hz, 1H) , 7.88 (d, J = 10.7 Hz, 1H) , 7.30 (s, 1H) , 6.53 (s, 1H) , 5.43 (s, 2H) , 5.41 (s, 2H) , 4.73 (s, 1H) , 3.45 (d, J = 3.8 Hz, 2H) , 3.19 (q, J = 6.1 Hz, 2H) , 2.78 (s, 6H) , 2.53 (s, 3H) , 1.97 –1.73 (m, 2H) , 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 3H) . 19F NMR (400 MHz, DMSO-d6) -112.82.
The following examples were prepared using procedures similar to those described above:

Example 3-1 (3-1-1 & 3-1-2)
(2S, 7S) -7-ethyl-7-hydroxy-2- (hydroxymethyl) -2-methyl-10, 13-dihydro-11H- [1, 3] dioxolo [4, 5-
g] pyrano [3', 4': 6, 7] indolizino [1, 2-b] quinoline-8, 11 (7H) -dione

(2R, 7S) -7-ethyl-7-hydroxy-2- (hydroxymethyl) -2-methyl-10, 13-dihydro-11H- [1, 3] dioxolo [4, 5-
g] pyrano [3', 4': 6, 7] indolizino [1, 2-b] quinoline-8, 11 (7H) -dione

Example 3-20 (3-20-1 & 3-20-2)
(2S, 7S) -7-ethyl-7-hydroxy-2, 14-bis (hydroxymethyl) -2-methyl-10, 13-dihydro-11H- [1, 3] dioxolo [4, 5-
g] pyrano [3', 4': 6, 7] indolizino [1, 2-b] quinoline-8, 11 (7H) -dione

(2R, 7S) -7-ethyl-7-hydroxy-2, 14-bis (hydroxymethyl) -2-methyl-10, 13-dihydro-11H- [1, 3] dioxolo [4, 5-
g] pyrano [3', 4': 6, 7] indolizino [1, 2-b] quinoline-8, 11 (7H) -dione
Step 3-1a. A mixture of 4, 5-dihydroxy-2-nitrobenzene-1-carbaldehyde (500 mg, 2.73 mmol) , 2- (prop-2-ynyloxy) tetrahydropyran (1.15 mL, 8.19 mmol) , PPh3 (72 mg, 0.27 mmol) and triruthenium dodecacarbonyl (87 mg, 0.14 mmol) in toluene (40 mL) was stirred at 120℃ for 18 hours. The mixture was concentrated and the residue was purified by silica-gel column chromatography (PE/EA with EA from 0～10%) to afford the desired compound (405 mg, 1.25 mmol, 45.9%) as a brown solid. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 324.2.
Step 3-1b. A mixture of Step 3-1a (0.40 g, 1.25 mmol) , Fe (2.80 g, 50.11 mmol) and NH4Cl (4.42 g, 82.68mmol) in EA (20 mL) and H2O (12 mL) was stirred at 25 ℃ for 18 hours. The mixture was filtrated and extracted with EA (20 mL*3) . The mixture was concentrated and the residue was purified by silica-gel column chromatography (PE/EA with EA from 0～10%) to afford the desired compound (101 mg, 0.34 mmol, 27.5%) as a yellow solid. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 294.2.
Step 3-1. A mixture of Step 3-1b (101 mg, 0.34 mmol) , (4S) -4-ethyl-4-hydroxy-3, 4, 6, 7, 8, 10-hexahydro-1H-pyrano [3, 4-f] indolizine-3, 6, 10-trione (118 mg, 0.45 mmol) and pyridin-1-ium 4-methylbenzenesulfonate (112.5 mg, 0.45 mmol) in toluene (7 mL) was stirred at 120 ℃ for 18 hours. The mixture was concentrated and the residue was purified by Prep-HPLC (C18, 20-50 %acetonitrile in H2O with 0.01 %TFA) to afford the desired two compounds:
3-1-1 (17.9 mg, 0.041 mmol, 11.9%yield) as a yellow solid. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 437.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.43 (s, 1H) , 7.40 (s, 1H) , 7.39 (s, 1H) , 7.24 (s, 1H) , 5.41 (s, 2H) , 5.21 (s, 2H) , 3.71 (s, 2H) , 1.90 -1.81 (m, 2H) , 1.70 (s, 3H) , 0.88 (t, J = 7.2 Hz, 3H) .
3-1-2 (18.7 mg, 0.043 mmol, 12.46%yield) as an off-white solid. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 437.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.44 (s, 1H) , 7.40 (s, 1H) , 7.39 (s, 1H) , 7.24 (s, 1H) , 6.47 (s, 1H) , 5.48 (s, 1H) , 5.41 (s, 2H) , 5.21 (s, 2H) , 3.70 (s, 2H) , 1.90-1.81 (m, 2H) , 1.70 (s, 3H) , 0.87 (t, J = 7.6 Hz, 3H) .
Step 3-20-1. A mixture of Step 3-1-1 (5 mg, 0.011 mmol) , FeSO4 (5 mg, 0.033 mmol) , H2SO4 (10 uL) , H2O2 (0.1 mL, 30%) in H2O (0.1 mL) and MeOH (5 mL) was stired at 65 ℃ for 0.5 hours. The reaction solution was cooled to 25 ℃ and purified by Prep-HPLC (C18, 20-50 %acetonitrile in H2O with 0.01 %TFA) to afford the desired compound 3-20-1 (0.8 mg, 0.002 mmol, 15.59%) as a yellow solid, that of chiral centers/relative configurations is the same as the compound 3-1-1. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 467.4. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.41 (d, J = 1.0 Hz, 2H) , 7.24 (s, 1H) , 6.46 (s, 1H) , 5.72 (t, J = 5.6 Hz, 1H) , 5.48 (t, J = 6.0 Hz, 1H) , 5.41 (s, 2H) , 5.35 (s, 2H) , 5.12 (d, J = 5.6 Hz, 2H) , 3.71 (d, J = 6.0 Hz, 2H) , 1.89-1.81 (m, 2H) , 1.70 (s, 3H) , 0.88 (t, J = 7.2 Hz, 3H) .
Step 3-20-2. A mixture of Step 3-1-2 (13 mg, 0.029 mmol) , FeSO4 (13 mg, 0.087 mmol) , H2SO4 (25 uL) , H2O2 (0.3 mL, 30%) in H2O (0.2 mL) and MeOH (10 mL) was stired at 65 ℃ for 0.5 hours. The reaction solution was cooled to 25 ℃ and purified by Prep-HPLC (C18, 20-50 %acetonitrile in H2O with 0.01 %TFA) to afford the desired compound 3-20-2 (4.4 mg, 0.009 mmol, 32.52%) as a yellow solid, that of chiral centers/relative configurations is the same as the compound 3-1-2. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 467.0. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.41 -7.40 (m, 2H) , 7.24 (s, 1H) , 6.46 (s, 1H) , 5.72 (s, 1H) , 5.48 (s, 1H) , 5.41 (s, 2H) , 5.35 (s, 2H) , 5.12-5.11 (m, 2H) , 3.71 -3.70 (m, 2H) , 1.89 -1.82 (m, 2H) , 1.70 (s, 3H) , 0.87 (t, J = 7.2 Hz, 3H) .
The following examples were prepared using procedures similar to those described above:


Example LD 1-1-a
N- (2- ( (2- ( ( (S) -1- ( (2- ( ( (S) -4-ethyl-8-fluoro-4-hydroxy-3, 14-dioxo-3, 4, 12, 14-tetrahydro-1H-
pyrano [3', 4': 6, 7] indolizino [1, 2-b] quinolin-10-yl) amino) -2-oxoethyl) amino) -1-oxo-3-phenylpropan-2-yl) amino) -2-oxoethyl) amino) -2-oxoethyl) -6- (2- (methylsulfonyl) pyrimidin-5-yl) hex-5-ynamide
Step 1-1-a1 A mixture of N- [ (11S) -11-benzyl-1- (9H-fluoren-9-yl) -3, 6, 9, 12-tetraoxo-2-oxa-4, 7, 10-triazadodec-12-yl] glycine CAS (1817857-75-2) (117 mg, 0.21 mmol) and HOAt (42 mg, 0.31 mmol) in 10% (v/v) mixture of DMF(0.1 mL) in DCM (1 mL) , EDCI (60 mg, 0.31 mmol) was stirred at 25 ℃ for 5 min. Then compound 1-1 (40 mg, 0.11 mmol) in 10% (v/v) mixture of DMF (0.2 mL) in DCM (2 mL) was added, followed immediately by the addition of CuCl2 (56 mg, 0.42 mmol) . The mixture was concentrated and the residue was purified by Prep-HPLC (TFA) to afford the desired product (30 mg, 0.03 mmol, 31%yield) as a yellow solid. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 922.4.
Step 1-1-a2 A mixture of Step 1-1-a1 (30 mg, 0.033 mmol) and diethylamine (47 uL, 0.62 mmol) in DMF (2 mL) was stirred at 0 ℃ for 2 hours. The solution was filtered and concentrated in vacuo to obtain the desired compound (crude 25 mg) as a brown solid, used in the next step without further purification. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 701.2.
Step 1-1-aA mixture of Step 1-1-a2 (25 mg, 0.04 mmol) , 6- (2- (methylsulfonyl) pyrimidin-5-yl) hex-5-ynoic acid (12 mg, 0.04 mmol) , HATU (27 mg, 0.07 mmol) and DIEA (14 mg, 0.11 mmol) in DMF (3 mL) was stirred at 25 ℃ for 2 hours. The mixture was concentrated and the residue was purified by Prep-HPLC (C18, 20-60 %acetonitrile in H2O with 0.1 %TFA) to afford the desired compound LD 1-1-a (8.5 mg, 0.009 mmol, 28%yield) as a yellow solid. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 950.4 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.36 (s, 1H) , 9.09 (s, 2H) , 8.91 (s, 1H) , 8.52 –8.49 (m, 1H) , 8.23 –8.18 (m, 2H) , 8.11 –8.08 (m, 1H) , 7.96 –7.94 (m, 1H) , 7.81 –7.78 (m, 1H) , 7.37 (s, 1H) , 7.32 –7.27 (m, 4H) , 7.22 –7.19 (m, 1H) , 6.55 (s, 1H) , 5.44 (s, 2H) , 5.32 (s, 2H) , 4.63 –4.60 (m, 1H) , 4.19 –4.14 (m, 2H) , 3.85 –3.72 (m, 4H) , 3.40 (s, 3H) , 3.15 –3.13 (m, 1H) , 2.91 –2.88 (m, 1H) , 2.60 –2.55 (m, 2H) , 2.35 –2.32 (m, 2H) , 1.91 –1.77 (m, 4H) , 0.89 (t, J = 7.2 Hz, 3H) .
Example LD 2-1-c
N- ( (6S, 12S) -1- (3- ( (S) -7-ethyl-7-hydroxy-8, 11-dioxo-7, 8, 11, 13-tetrahydro-10H- [1, 3] dioxolo [4, 5-
g] pyrano [3', 4': 6, 7] indolizino [1, 2-b] quinolin-14-yl) bicyclo [1.1.1] pentan-1-yl) -6- (3-guanidinopropyl) -13-hydroxy-5, 8, 11-trioxo-2-oxa-4, 7, 10-triazatridecan-12-yl) -6- (2- (methylsulfonyl) pyrimidin-5-yl) hex-5-ynamide
Step 2-1-c1. A mixture of (S, Z) -4- ( ( ( (9H-fluoren-9-yl) methoxy) carbonyl) amino) -9- ( (tert-butoxycarbonyl) amino) -13, 13-dimethyl-3, 11-dioxo-12-oxa-2, 8, 10-triazatetradec-9-en-1-yl acetate (200 mg, 0.300 mmol) , the compound 2-1, TsOH (25.79 mg, 0.150 mmol in THF (50 mL) was stirred at 25℃ for 16 hr. The mixture was concentrated in vacuo. The residue was purified by silica-gel column chromatography (DCM/MeOH with EA from 0～15%) to afford the desired compound (65 mg, 20%) as a yellow solid. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 1092.2.
Step 2-1-c2. A mixture of the compound from Step 2-1-c1 (130 mg, 0.119 mmol) and DEA (53.10 mg, 0.356 mmol) in DMF (2 mL) was stirred at 25℃ for 1 hr. The solution was filtered and concentrated in vacuo to obtain the desired compound (120 mg) as a brown solid which was used in the next step without purification. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 873.5.
Step 2-1-c3. A mixture of the compound from Step 2-1-c2 (100 mg, 0.114 mmol) (6- (2-(methylsulfonyl) pyrimidin-5-yl) hex-5-ynoyl) -L-serylglycine (47.19 mg, 0.114 mmol) , DIPEA (0.057 mL, 0.343 mmol) , HATU (65.26 mg, 0.172 mmol) in DMF (5 mL) was stirred at 15 ℃ for 2 hr. The mixture was concentrated in vacuo and the residue was purified to afford the desired product (30 mg, 20.7%yield) as a yellow solid. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 1267.2.
Step 2-1-c. A mixture of the compound from Step 2-1-c3 (25 mg, 0.020 mmol) , ZnBr2 (44.38 mg, 0.197 mmol) in DCM (5 mL) was stirred at 15 ℃ for 18 hr. The mixture was concentrated in vacuo and the residue was purified by prep-HPLC (C18, 20-60 %acetonitrile in H2O with 0.1 %TFA) to afford the title compound (5.4 mg, 25%yield) as a yellow solid. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 1068.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.10 (s, 2H) , 8.72 (t, J = 6.8 Hz, 1H) , 8.24 (t, J = 5.6 Hz, 1H) , 8.08 (d, J = 7.2 Hz, 1H) , 8.01 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.73 (s, 1H) , 7.52 (s, 1H) , 7.47-7.44 (m, 1H) , 7.25 (s, 1H) , 6.50 (s, 1H) , 6.30 (s, 2H) , 5.40 (d, J = 16.0 Hz, 4H) , 5.02 (s, 1H) , 4.68 -4.58 (m, 2H) , 4.27-4.24 (m, 2H) , 3.79-3.76 (m, 2H) , 3.63-3.58 (m, 2H) , 3.54-3.53 (m, 2H) , 3.41 (s, 3H) , 3.11-3.11 (m, 2H) , 2.58-2.54 (m, 2H) , 2.47 (s, 6H) , 2.38-2.33 (m, 3H) , 1.89-1.74 (m, 6H) , 1.57 –1.46 (m, 4H) , 0.87 (t, J = 7.2 Hz, 3H) .
Example LD 2-1-d
N- ( (6S, 9S, 12S) -1- (3- ( (S) -7-ethyl-7-hydroxy-8, 11-dioxo-7, 8, 11, 13-tetrahydro-10H- [1, 3] dioxolo [4, 5-
g] pyrano [3', 4': 6, 7] indolizino [1, 2-b] quinolin-14-yl) bicyclo [1.1.1] pentan-1-yl) -6- (3-guanidinopropyl) -9- (hydroxymethyl) -13- (4-hydroxyphenyl) -5, 8, 11-trioxo-2-oxa-4, 7, 10-triazatridecan-12-yl) -6- (2- (methylsulfonyl) pyrimidin-5-yl) hex-5-ynamide

Step 2-1-d1. A mixture of the compound from Step 2-1-c1 (120 mg, 0.137 mmol) and (6- (2- (methylsulfonyl) pyrimidin-5-yl) hex-5-ynoyl) -L-tyrosyl-L-serine (106.80 mg, 0.206 mmol) , DIEA (ethyldiisopropylamine, 0.068 mL, 0.412 mmol) , HATU (78.31 mg, 0.206 mmol) in DMF (5 mL) was stirred at 15 ℃ for 2 hr. The mixture was concentrated in vacuo and the residue was purified to afford the desired product (25 mg, 13.25%yield) as a yellow solid. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 1373.0.
Step 2-1-d. A mixture of the compound from Step 36a (25 mg, 0.018 mmol) , ZnBr2 (12.29 mg, 0.055 mmol) in DCM (5 mL) was stirred at 15 ℃ for 18 hr. The mixture was concentrated in vacuo and the residue was purified by prep-HPLC (C18, 20-60 %acetonitrile in H2O with 0.1 %TFA) to afford the title compound (5.9 mg, 27%yield) as a yellow solid. LC-MS: (ESI) m/z (M+H) , 1173.4. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.14 (d, J = 9.2 Hz, 1H) , 9.10 (s, 1H) , 9.08 (s, 1H) , 8.71-8.58 (m, 1H) , 8.19-8.05 (m, 3H) , 7.72 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 7.53 (d, J = 3.0 Hz, 1H) , 7.53-7.52 (m, 1H) , 7.25 (s, 1H) , 7.05-7.03 (m, 2H) , 6.62-6.60 (m, 2H) , 6.50 (s, 1H) , 6.30 (s, 2H) , 5.42 (s, 2H) , 5.37 (s, 2H) , 4.63-4.61 (m, 2H) , 4.56 -4.46 (m, 1H) , 4.36-4.32 (m, 2H) , 3.60 (s, 1H) , 3.52 (s, 2H) , 3.41 (d, J = 2.8 Hz, 3H) , 3.13-3.11 (m, 2H) , 2.68-2.67 (m, 1H) , 2.46 (s, 6H) , 2.34-2.22 (m, 4H) , 2.24-2.20 (m, 2H) , 2.03-1.97 (m, 1H) , 1.88-1.82 (m, 3H) , 1.71-1.67 (m, 2H) , 1.60-1.44 (m, 4H) , 1.24 (s, 4H) , 0.87 (t, J = 7.2 Hz, 3H) .
ADC Conjugation
Method:
The antibodies were conjugated to drug-linkers (Examples as above) to form antibody-drug conjugates at DAR = ～8. The conjugation was performed as follows. The sample buffer containing the antibodies was adjusted to the needed pH by dialysis at 4℃ for 16 hours and adjusted to a concentration of 5 mg/ml. ～10 of TCEP (vs protein) was added to the sample buffer, shaken and incubated at 25 ℃ for 3 hours. Then relative equivalent (vs protein) drug-linkers dissolved in DMSO were added to the reaction sample directly, and incubated at 25 ℃ for 2 hours. Then 20 equivalent cysteine (vs protein) was added to the reaction sample to quench the reaction. Excess small molecules were removed by dialysis, and ADCs conjugated to drug-linkers were obtained.
Characterization of ADCs
DAR Determination by LC-MS
ADCs were deglycosylated by using PNGase F (0.5μL PNGase F enzyme was added into the sample and incubated at 37℃ for 3hrs) . The deglycosylated ADCs were reduced by DTT (DTT was added into the sample to 50mM and incubated at 37℃ for 10min) , and injected into an Agilent 1290 UPLC (Agilent technologies, INC., Santa Clara, CA) coupled to a Time of Flight mass spectrometer (TOF-MS, X500B, AB Sceix) . Heavy and light chains were separated using the column (Waters ACQUITY UPLC Protein BEH C4 Column 1.7 μm, 2.1 mm*100 mm) at a flow rate of 0.3 mL/min. Mass qualitative analysis was used for deconvolution and data analysis.
Size exclusion chromatography (SEC-HPLC) Analysis
Analytical SEC was performed using an Agilent Infinity II 1260 HPLC (Agilent technologies, INC., Santa Clara, CA) with BioCore column (B213-050030-07830S, BioCore SEC-300) equilibrated with the buffer ( (60 mM Na2HPO4, 20 mM NaH2PO4, 100 mM Arginine, pH 7.0 ) : ACN = 90 : 10 (v/v) ) . In general, 20 μg for samples at 2-3 mg/mL concentration was eluted isostatically for 15 or 20 mins at 1 mL/min with absorbance monitoring at A280.
ADCs were prepared by cysteine-based conjugation and characterized by LC-MS (or HIC) for DAR determination and SEC-HPLC for purity and aggregation. The RP007T2 antibody is an anti-Trop-2 antibody with heavy chain sequence shown in SEQ ID NO: 1 and light chain sequence shown in SEQ ID NO: 2.
Experiment 1 Cytotoxicity of novel drugs with A431/A549/PC-3/HT29/SKOV3 cells
Cancer cells were seeded in a 96-wellplate at 2000 cells/well. After overnight incubation, a serially diluted solution of each novel drug was added. Cell viability was evaluated after 6 days using a Cell Titer-Glo luminescent cell viability assay from Promega (G7572) according to the manufacturer’s instructions. The results indicated that all the novel drugs showed good cell killing effects. The results are shown in Table 1.
Table 1


Note: “-” means “not tested.
Experiment 2. Cytotoxicity of novel drugs with A431/HT29 cells
Cancer cells were seeded in a 96-wellplate at 2000 cells/well. After overnight incubation, a serially diluted solution of each novel drug was added. Cell viability was evaluated after 6 days using a Cell Titer-Glo luminescent cell viability assay from Promega (G7572) according to the manufacturer’s instructions. The results indicated that all the novel drugs showed good cell killing effects. The results are shown in Table 2.
Table 2
Experiment 3: ADC Conjugation: preparation of antibody-drug conjugates with novel payload
Novel Camptothecin payload 2-1 was conjugated with linkers to generate ADCs RP007T2-LP2-1-c, RP007T2-LP2-1-d, and RP007T2-MC-GGFG-DXd as control ADC (MC-GGFG-DXd purchased from MedChemExpress, CAS: 1599440-13-7) , respectively. ADCs were prepared by cysteine-based conjugation and characterized by LC-MS for DAR determination and SEC-HPLC for purity and aggregation, as shown in Table 3.
Table 3. Preparation and characterization of ADCs using novel payload

Experiment 4. Efficacy assay of ADCs on A431 xenografts model
In this experiment, the A431 cells mouse tumor model was used to study the anti-tumor activity of ADCs. The pharmacodynamics of RP007T2-LP2-1-c and RP007T2-LP2-1-d and Control ADC RP007T2-MC-GGFG-DXd administered with 5mg/kg BIW 3 doses in A431 cells mouse model were studied, and the experimental design of ADCs in vivo pharmacodynamics is shown in Table 4. A431 cells were subcutaneously inoculated into female Balb/c nude mice. The ADCs group treatment method was as follows: on the 7 days after the tumor cell inoculation, the mice of each group were intraperitoneally injected with the corresponding ADC. After tumor cell inoculation on the 7th day, the 11th day, the 14th day, the 18th day, the 21st day and the 25th days, the tumor volume was measured, and then the mice were euthanized. The results are shown in Fig. 1. Compared to vehicle control group, TGI% (RTV) of RP007T2-LP2-1-c and RP007T2-LP2-1-d (5 mg/kg) , and Control ADC RP007T2-MC-GGFG-DXd (5 mg/kg) is 76%, 86%, 34%respectively. There were no animal deaths or drug related abnormalities in each treatment group, and the treatments were all well-tolerated.
Table 4. Experimental design of ADCs in vivo pharmacodynamics
Discussion: The conjugations of LP2-1-c and LP2-1-d to the antibody are highly effective in preclinical tumor models, with superior in vivo efficacy compared with that of Control MC-GGFG-DXD, paving the way for potential therapeutic advancements in cancers.
Experiment 5. Tolerability of ADCs in non-tumor-bearing BALB/c mice
RP007T2-LP2-1-c and RP007T2-LP2-1-d were administered to female and male BALB/c mice (9-10 weeks old, body weights ranging from 18.2 to 23.3 g of female mice, and 24.4 to 30.7 g of male mice at the initiation of dosing, sourced from GemPharmatech via 20 mL/kg tail intravenous injection at dose levels of 40, 80 and 140 mg/kg (12 animals/dose level) . Mice were observed for up to 22 days following dosing. Mice were euthanized if body weight reduced by ≥20%for 72 hours from predose levels. Body weight change was monitored. Blood samples were collected for hematology tests, specifically detect the following items: WBC, NEUT, LYM, RBC, HGB, ALT, UREA.
Discussion: Single dose toxicity assessment with BALB/c mice and comparing with MC-GGFG-DXd (the linker-payload used in DS8201 of Daiichi) , and the results are shown in Fig. 2 and Fig. 3. The results indicate that the ADCs with new payload 2-1 were tolerant in mice up to 140 mg/kg and show comparable safety with MC-GGFG-DXd. No significant body weight loss could be observed in 40mpk and 80mpk dose level comparing with Vehicle group. A decrease of body weight of could be observed in high dose group (140 mpk) of two ADCs, and started to recover gradually since D7. No dose related change could be observed for hematology tests, as shown in Fig. 3. No other abnormalities were observed for all test groups.

Claims (50)

  1. A compound of formula (II) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof:
    wherein,
    R4 and R5 is independently selected from H, halogen, OH, NH2, N (C1-6 alkyl) 2, NH-C1-6 alkyl, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
    or, preferably, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclyl, C6-10 aryl or 5-12 membered heteroaryl, wherein, the C3-10 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclyl, C6-10 aryl and 5-12 membered heteroaryl are optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
    R6 is selected from H, - (CH2) n-OR6a, - (CH2) n-C (O) OR6a, - (CH2) n-OC (O) R6a, - (CH2) n-C (O) R6a, - (CH2) n-S (O) 2-R6a, - (CH2) n-S (O) -R6a, - (CH2) n-OP (O) (OH) -OR6a, - (CH2) n-OP (S) (OH) -OR6a, - (CH2) n-NHC (O) -R6a, - (CH2) n-NHC (O) NR6bR6c, - (CH2) n-NHC (O) OR6a, - (CH2) n-OC (O) NR6bR6c, - (CH2) n-C (O) NR6bR6c, - (CH2) n-CH2NR6bR6c, - (CH2) n-3-7 membered heterocyclylene- (CH2) n-OR6a, and - (CH2) n-3-7 membered heterocyclylene- (CH2) n-R6a;
    R6a, R6b and R6c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C3-7 cycloalkyl, 3-7 membered heterocyclyl, C1-6 alkylene-OH, C1-6 alkylene-OC1-6 alkyl, C1-6 alkylene-NH2, C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) and C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2;
    each n is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
    wherein, R6 is optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R*group (s) , R*is selected from H, NH2, OH, CN, halogen, C1- 6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
    alternatively,
    R4 and R5 is independently selected from halogen, OH, NH2, N (C1-6 alkyl) 2, NH-C1-6 alkyl, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1- 6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
    or, preferably, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclyl, C6-10 aryl or 5-12 membered heteroaryl, wherein, the C3-10 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclyl, C6-10 aryl and 5-12 membered heteroaryl are optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
    R6 is selected from H, - (CH2) n-OR6a, - (CH2) n-C (O) OR6a, - (CH2) n-OC (O) R6a, - (CH2) n-C (O) R6a, - (CH2) n-S (O) 2-R6a, - (CH2) n-S (O) -R6a, - (CH2) n-NHC (O) -R6a, - (CH2) n-NHC (O) NR6bR6c, - (CH2) n-NHC (O) OR6a, - (CH2) n-OC (O) NR6bR6c, - (CH2) n-C (O) NR6bR6c and - (CH2) n-CH2NR6bR6c;
    R6a, R6b and R6c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkylene-OH, C1-6 alkylene-OC1-6 alkyl, C1-6 alkylene-NH2, C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) and C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2;
    each n is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
    wherein, R6 is optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R*group (s) , R*is selected from H, NH2, OH, CN, halogen, C1- 6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl.
  2. The compound according to claim 1, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein,
    R4 is selected from C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
    R5 is selected from halogen, C1-6 haloalkyl and C1-6 haloalkoxyl;
    or, preferably, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl or 5-10 membered heterocyclyl, wherein, the C3-10 cycloalkyl and 5-10 membered heterocyclyl are optionally substituted with 1, 2 or 3 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
    R6 is selected from - (CH2) n-OR6a, - (CH2) n-C (O) OR6a, - (CH2) n-OC (O) R6a, - (CH2) n-C (O) R6a, - (CH2) n-S (O) 2-R6a, - (CH2) n-S (O) -R6a, - (CH2) n-NHC (O) -R6a, - (CH2) n-NHC (O) NR6bR6c and - (CH2) n-C (O) NR6bR6c;
    R6a is selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene -NH2, such as H, CH3, CH2OH and CH2CH2OH;
    R6b and R6c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2, such as H and CH3;
    each n is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
    wherein, R6 is optionally substituted with 1, 2 or 3 R*group (s) , R*is selected from H, halogen, C1-6 alkyl and C1-6 haloalkyl;
    alternatively,
    R6 is selected from - (CH2) n-OR6a, - (CH2) n-C (O) OR6a, - (CH2) n-OC (O) R6a, - (CH2) n-C (O) R6a, - (CH2) n-NHC (O) -R6a, - (CH2) n-C (O) NR6bR6c and - (CH2) n-CH2NR6bR6c;
    still alternatively,
    R6 is selected from - (CH2) n-OR6a, - (CH2) n-C (O) OR6a, - (CH2) n-OC (O) R6a, - (CH2) n-C (O) R6a, - (CH2) n-NHC (O) -R6a and - (CH2) n-C (O) NR6bR6c.
  3. The compound according to claim 1 or 2, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein,
    R4 is C1-6 alkyl or C1-6 alkoxyl;
    R5 is halogen;
    or, preferably, R4 and R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form 5-6 membered heterocyclyl, which is optionally substituted with 1, 2 or 3 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
    R6 is selected from - (CH2) n-OR6a, - (CH2) n-C (O) OR6a, - (CH2) n-NHC (O) -R6a and - (CH2) n-CH2NR6bR6c;
    R6 is preferably selected from - (CH2) n-OR6a, - (CH2) n-C (O) OR6a and - (CH2) n-NHC (O) -R6a;
    R6a is selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH, C1-6 alkylene-NH2, such as H, CH3, CH2OH, CH2CH2OH and CH2CH2NH2;
    R6b and R6c are independently selected from H and C1-6 alkyl, such as H and CH3;
    each n is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6.
  4. The compound according to any one of claims 1-3, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein,
    R4 is C1-6 alkyl or C1-6 alkoxyl;
    R5 is halogen;
    or, preferably, R4 and R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form 5-6 membered heterocyclyl;
    R6 is selected from
    R6a, R6b and R6c are independently selected from H and C1-6 alkyl;
    each n is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6;
    alternatively,
    R4 is C1-4 alkyl or C1-4 alkoxyl, such as Me or OMe;
    R5 is halogen, such as F;
    or, preferably, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form
    R6 is selected from
  5. The compound according to any one of claims 1-4, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, the compound has the structure of formula (II-a) :
    wherein, R6 is as defined in any one of claims 1-4.
  6. The compound according to any one of claims 1-4, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, the compound has the structure of formula (II) , (II-b) or (II-c) :
    wherein,
    R4 is selected from C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
    R5 is selected from halogen, C1-6 haloalkyl and C1-6 haloalkoxyl;
    or, preferably, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl or 5-10 membered heterocyclyl, wherein, the C3-10 cycloalkyl and 5-10 membered heterocyclyl are optionally substituted with 1, 2 or 3 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
    R6 is selected from - (CH2) n-OR6a and - (CH2) n-CH2NR6bR6c;
    R6a is selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene -NH2;
    R6b is H;
    R6c is selected from C1-6 alkyl and C1-6 haloalkyl;
    each n is independently 0, 1, 2, 3, or 4, preferably 1, 2, 3, or 4;
    wherein, R6 is optionally substituted with 1, 2 or 3 R*group (s) , R*is selected from H, halogen, C1-6 alkyl and C1-6 haloalkyl;
    alternatively,
    R4 is C1-6 alkyl or C1-6 alkoxyl, alternatively is C1-6 alkyl or C1-6 alkoxyl, such as Me or OMe;
    R5 is halogen, alternatively is halogen, such as F;
    or, R4 and R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form 5-6 membered heterocyclyl;
    R6 is - (CH2) n-OR6a or - (CH2) n-CH2NR6bR6c;
    R6a is selected from H, C1-6 alkyl, and C2-6 alkylene-OH, such as H, CH3, CH2CH2OH or CH2CH2CH2OH;
    R6b is H;
    R6c is C1-6 alkyl, such as CH3, CH2CH3, or isopropyl;
    each n is independently 0, 1, 2, or 3, preferably 0, 1 or 2.
  7. The compound according to any one of claims 1-4, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, the compound has the structure of formula (II) :
    wherein,
    R4 is selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl, alternatively is selected from C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
    R5 is selected from H, halogen, C1-6 haloalkyl and C1-6 haloalkoxyl, alternatively is selected from halogen, C1-6 haloalkyl and C1-6 haloalkoxyl;
    or, preferably, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl or 5-10 membered heterocyclyl, wherein, the C3-10 cycloalkyl and 5-10 membered heterocyclyl are optionally substituted with 1, 2 or 3 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
    R6 is selected from - (CH2) n-OP (O) (OH) -OR6a, - (CH2) n-OP (S) (OH) -OR6a, and - (CH2) n-CH2NR6bR6c;
    R6a is selected from H, C1-6 alkyl and C1-6 haloalkyl;
    R6b is selected from H, C1-6 alkyl, and C1-6 haloalkyl;
    R6c is selected from C3-7 cycloalkyl, and 3-7 membered heterocyclyl;
    each n is independently 0, 1, 2, 3 or 4;
    alternatively,
    R4 is H, C1-6 alkyl or C1-6 alkoxyl, alternatively is C1-6 alkyl or C1-6 alkoxyl, such as Me or OMe;
    R5 is H, halogen, alternatively is halogen, such as F;
    or, R4 and R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form 5-6 membered heterocyclyl;
    R6 is selected from - (CH2) n-OP (O) (OH) -OR6a, and - (CH2) n-CH2NR6bR6c;
    R6a is selected from H and C1-6 alkyl, preferably is H;
    R6b is selected from H and C1-6 alkyl, preferably is H;
    R6c is selected from C3-5 cycloalkyl, such as cyclopropyl;
    each n is independently 0, 1, 2, or 3, preferably is 0, or 1.
  8. The compound according to claim 1, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, the compound has the structure of formula (II-d) :
    wherein,
    R6 is - (CH2) n-OR6a;
    R6a is selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene -NH2, such as H, CH3, CH2OH and CH2CH2OH; each n is independently 0, 1, 2, 3, or 4, preferably 1, 2, 3, or 4;
    wherein, R6 is optionally substituted with 1, 2 or 3 R*group (s) , R*is selected from H, halogen, C1-6 alkyl and C1-6 haloalkyl;
    alternatively,
    R6 is - (CH2) n-OR6a;
    R6a is selected from H, and C1-6 alkyl, such as H, or CH3, preferably is H;
    each n is independently 0, 1, 2, or 3, preferably 1 or 2.
  9. The compound according to any one of claims 1-8, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, the compound is selected from:


  10. A compound, which comprises the structure of formula (II-1) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof:
    wherein,
    represents the attachment point of formula (II-1) and the rest of the compound;
    R6’ is a divalent group formed by the connection between R6 and the rest of the compound;
    R4, R5 and R6 are as defined in any one of claims 1-9;
    alternatively,
    R4 and R5 is independently selected from H, halogen, OH, NH2, N (C1-6 alkyl) 2, NH-C1-6 alkyl, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
    or, preferably, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclyl, C6-10 aryl or 5-12 membered heteroaryl, wherein, the C3-10 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclyl, C6-10 aryl and 5-12 membered heteroaryl are optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
    R6’ is selected from bond, - (CH2) n-OR6a’-, - (CH2) n-C (O) OR6a’-, - (CH2) n-OC (O) R6a’-, - (CH2) n-C (O) R6a’-, - (CH2) n-S (O) 2-R6a’-, - (CH2) n-S (O) -R6a’-, - (CH2) n-OP (O) (OH) -OR6a’-, - (CH2) n-OP (S) (OH) -OR6a’-, - (CH2) n-NHC (O) -R6a’-, - (CH2) n-NHC (O) NR6bR6c’-, - (CH2) n-NHC (O) OR6a’-, - (CH2) n-OC (O) NR6bR6c’-, - (CH2) n-C (O) NR6bR6c’-, - (CH2) n-CH2NR6bR6c’-, - (CH2) n-3-7 membered heterocyclylene- (CH2) n-OR6a’-and - (CH2) n-3-7 membered heterocyclylene- (CH2) n-R6a’-;
    R6a’ and R6c’ are independently selected from bond, C1-6 alkylene, C1-6 haloalkylene, C3-7 cycloalkylene, 3-7 membered heterocyclylene, -C1-6 alkylene-O-, -C1-6 alkylene-OC1-6 alkylene-, -C1-6 alkylene-NH-, -C1-6 alkylene-NH-C1-6 alkylene-and -C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) -C1-6 alkylene-;
    R6b is selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C3-7 cycloalkyl, 3-7 membered heterocyclyl, C1-6 alkylene-OH, C1-6 alkylene-OC1-6 alkyl, C1-6 alkylene-NH2, C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) and C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2;
    each n is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
    wherein, R6 is optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R*group (s) , R*is selected from H, NH2, OH, CN, halogen, C1- 6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
    alternatively,
    R4 and R5 is independently selected from halogen, OH, NH2, N (C1-6 alkyl) 2, NH-C1-6 alkyl, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1- 6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
    or, preferably, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclyl, C6-10 aryl or 5-12 membered heteroaryl, wherein, the C3-10 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclyl, C6-10 aryl and 5-12 membered heteroaryl are optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
    R6’ is selected from bond, - (CH2) n-OR6a’, - (CH2) n-C (O) OR6a’, - (CH2) n-OC (O) R6a’, - (CH2) n-C (O) R6a’, - (CH2) n-S (O) 2-R6a’, - (CH2) n-S (O) -R6a’, - (CH2) n-NHC (O) -R6a’, - (CH2) n-NHC (O) NR6bR6c’, - (CH2) n-NHC (O) OR6a’, - (CH2) n-OC (O) NR6bR6c’, - (CH2) n-C (O) NR6bR6c’ and - (CH2) n-CH2NR6bR6c’;
    R6a’ and R6c’ are independently selected from bond, C1-6 alkylene, C1-6 haloalkylene, -C1-6 alkylene-O-, C1-6 alkylene-OC1-6 alkylene, -C1-6 alkylene-NH-, -C1-6 alkylene-NH-C1-6 alkylene-and -C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) -C1-6 alkylene-;
    R6b is selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkylene-OH, C1-6 alkylene-OC1-6 alkyl, C1-6 alkylene-NH2, C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) and C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2;
    each n is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
    wherein, R6 is optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R*group (s) , R*is selected from H, NH2, OH, CN, halogen, C1- 6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl.
  11. The compound of claim 10, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein,
    R4 and R5 is independently selected from selected from halogen, OH, NH2, N (C1-6 alkyl) 2, NH-C1-6 alkyl, C1-6 alkyl, C1- 6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
    or, preferably, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclyl, C6-10 aryl or 5-12 membered heteroaryl, wherein, the C3-10 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclyl, C6-10 aryl and 5-12 membered heteroaryl are optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
    R6’ is selected from bond, - (CH2) n-OR6a’-, - (CH2) n-C (O) OR6a’-, - (CH2) n-OC (O) R6a’-, - (CH2) n-C (O) R6a’-, - (CH2) n-S (O) 2-R6a’-, - (CH2) n-S (O) -R6a’-, - (CH2) n-NHC (O) -R6a’-, - (CH2) n-NHC (O) NR6bR6c’-, - (CH2) n-NHC (O) OR6a’-, - (CH2) n-OC (O) NR6bR6c’-, - (CH2) n-C (O) NR6bR6c’-and - (CH2) n-CH2NR6bR6c’-;
    R6a’ and R6c’ are independently selected from bond, C1-6 alkylene, C1-6 haloalkylene, -C1-6 alkylene-O-, -C1-6 alkylene-OC1-6 alkylene-, -C1-6 alkylene-NH-, -C1-6 alkylene-NH-C1-6 alkylene-and -C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) -C1-6 alkylene-;
    R6b is selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkylene-OH, C1-6 alkylene-OC1-6 alkyl, C1-6 alkylene-NH2, C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) and C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2;
    each n is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
    wherein, R6’ is optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R*group (s) , R*is selected from H, NH2, OH, CN, halogen, C1- 6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
    alternatively,
    R6’ is selected from - (CH2) n-OR6a’-, - (CH2) n-C (O) OR6a’-, - (CH2) n-OC (O) R6a’-, - (CH2) n-C (O) R6a’-, - (CH2) n-NHC (O) -R6a’-, - (CH2) n-C (O) NR6bR6c’-and - (CH2) n-CH2NR6bR6c’-;
    R6a’ and R6c’ are independently selected from bond, C1-6 alkylene, -C1-6 alkylene-O-and -C1-6 alkylene-NH-;
    R6b is selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
    each n is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
    still alternatively,
    R4 is selected from C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
    R5 is selected from halogen, C1-6 haloalkyl and C1-6 haloalkoxyl;
    or, preferably, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl or 5-10 membered heterocyclyl, wherein, the C3-10 cycloalkyl and 5-10 membered heterocyclyl are optionally substituted with 1, 2 or 3 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
    R6’ is selected from - (CH2) n-OR6a’-, - (CH2) n-C (O) OR6a’-, - (CH2) n-NHC (O) -R6a’-and - (CH2) n-CH2NR6bR6c’-;
    R6’ is preferably selected from - (CH2) n-OR6a’-, - (CH2) n-C (O) OR6a’-and - (CH2) n-NHC (O) -R6a’-;
    R6a’ is selected from bond, C1-6 alkylene, -C1-6 alkylene-O-and -C1-6 alkylene-NH-, such as bond, -CH2-, -CH2O-, -CH2CH2O-and -CH2CH2NH-;
    R6b is selected from H and C1-6 alkyl, such as H and CH3;
    R6c’ is selected from bond and C1-6 alkylene, such as bond and -CH2-;
    each n is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6;
    yet alternatively,
    R4 is C1-6 alkyl or C1-6 alkoxyl;
    R5 is halogen;
    or, preferably, R4 and R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form 5-6 membered heterocyclyl;
    R6’ is selected from such as, 
    R6a’ and R6c’ are independently selected from bond and C1-6 alkylene;
    R6b is selected from H and C1-6 alkyl;
    each n is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6.
  12. The compound according to claim 10 or 11, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, the compound has the structure of formula (II-1a) :
    wherein, R6’ is as defined in claim 11.
  13. The compound according to any one of claims 10-12, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, the compound has the structure of formula (II-1) , (II-1b) , or (II-1c) :
    wherein,
    represents the attachment point of formula (II-1) , (II-1b) , or (II-1c) and the rest of the compound;
    R4 is selected from C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
    R5 is selected from halogen, C1-6 haloalkyl and C1-6 haloalkoxyl;
    or, preferably, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl or 5-10 membered heterocyclyl, wherein, the C3-10 cycloalkyl and 5-10 membered heterocyclyl are optionally substituted with 1, 2 or 3 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
    R6’ is selected from - (CH2) n-OR6a’-and - (CH2) n-CH2NR6bR6c’-;
    R6a’ is selected from bond, C1-6 alkylene, -C1-6 alkylene-O-and -C1-6 alkylene-NH-;
    R6b is H;
    R6c’ is selected from C1-6 alkylene and C1-6 haloalkylene;
    each n is independently 0, 1, 2, 3, or 4;
    wherein, R6’ is optionally substituted with 1, 2 or 3 R*group (s) , R*is selected from H, halogen, C1-6 alkyl and C1-6 haloalkyl;
    alternatively,
    R4 is C1-6 alkyl or C1-6 alkoxyl, alternatively is C1-6 alkyl or C1-6 alkoxyl, such as Me or OMe;
    R5 is halogen, alternatively is halogen, such as F;
    or, R4 and R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form 5-6 membered heterocyclyl; R6’ is - (CH2) n-OR6a’-or - (CH2) n-CH2NR6bR6c’-;
    R6a’ is selected from bond, C1-6 alkylene, and -C2-6 alkylene-O-, such as bond, -CH2-, -CH2CH2O-or -CH2CH2CH2O-; R6b is H;
    R6c’ is C1-6 alkylene, such as -CH2-or -CH2CH2-or -CH (CH3) CH2-;
    each n is independently 0, 1, 2, or 3, preferably 1 or 2.
  14. The compound according to claim 10 or 11, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, the compound is the compound has the structure of formula (II-1) :
    wherein,
    represents the attachment point of formula (II) and the rest of the compound;
    R4 is selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl, alternatively is selected from C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
    R5 is selected from H, halogen, C1-6 haloalkyl and C1-6 haloalkoxyl, alternatively is selected from halogen, C1-6 haloalkyl and C1-6 haloalkoxyl;
    or, preferably, R4, R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form C3-10 cycloalkyl or 5-10 membered heterocyclyl, wherein, the C3-10 cycloalkyl and 5-10 membered heterocyclyl are optionally substituted with 1, 2 or 3 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
    R6’ is selected from - (CH2) n-OP (O) (OH) -OR6a’-, - (CH2) n-OP (S) (OH) -OR6a’-, and - (CH2) n-CH2NR6bR6c’-;
    R6a’ is selected from bond, C1-6 alkylene and C1-6 haloalkylene;
    R6b is selected from H, C1-6 alkyl, and C1-6 haloalkyl;
    R6c’ is selected from C3-7 cycloalkylene, and 3-7 membered heterocyclylene;
    each n is independently 0, 1, 2, 3 or 4;
    alternatively,
    R4 is H, C1-6 alkyl or C1-6 alkoxyl, alternatively is C1-6 alkyl or C1-6 alkoxyl, such as Me or OMe;
    R5 is H, halogen, alternatively is halogen, such as F;
    or, R4 and R5 are taken together with the carbon atoms to which they are attached to form 5-6 membered heterocyclyl;
    R6’ is selected from - (CH2) n-OP (O) (OH) -OR6a’-, and - (CH2) n-CH2NR6bR6c’-;
    R6a’ is selected from bond and C1-6 alkyl, preferably is bond;
    R6b is selected from H and C1-6 alkyl, preferably is H;
    R6c’ is C3-5 cycloalkylene, such as cyclopropylene;
    each n is independently 0, 1, 2, or 3, preferably 0, or 1.
  15. The compound according to claim 10 or 11, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, the compound has the structure of formula (II-1d) :
    wherein,
    represents the attachment point of formula (II-1d) and the rest of the compound;
    R6’ is - (CH2) n-OR6a’-;
    R6a’ is selected from bond, C1-6 alkylene, -C1-6 alkylene-O-and -C1-6 alkylene-NH-, such as bond, -CH2-, -CH2O-and -CH2CH2O-;
    each n is independently 0, 1, 2, 3, or 4;
    wherein, R6 is optionally substituted with 1, 2 or 3 R*group (s) , R*is selected from H, halogen, C1-6 alkyl and C1-6 haloalkyl;
    alternatively,
    R6’ is - (CH2) n-OR6a’-;
    R6a’ is selected from bond and C1-6 alkylene, such as bond or -CH2-;
    each n is independently 0, 1, 2, or 3, preferably is 1 or 2.
  16. The compound of any one of claims 10-15, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein the compound comprises a structure selected from the following:

  17. The compound of any one of claims 10-16, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein the compound is a conjugate represented by L2- (D2) y, preferably, the compound is a conjugate represented by T2- [L2’- (D2) y] u;
    wherein, T2 is a targeting moiety;
    L2 is a linker, and L2’ is a divalent group formed by the connection between L2 and T2;
    D2 is a drug moiety, which is selected from the compound defined as any one of claims 10-16;
    y is an integer between 1 and 10, alternatively is 1;
    u is an integer between 1 and 10.
  18. The compound of any one of claims 10-17, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein the compound represented by L2- (D2) y is selected from:

    wherein, the compound represented by T2- [L2’- (D2) y] u is selected from:

    wherein, T2 and u are as defined in claim 17.
  19. A compound of formula (I) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof:
    wherein,
    X is CRx or N, such as CH or N;
    Rx is selected from H, halogen, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
    R1 is selected from halogen, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
    R2 is selected from NR2bR2c, - (CH2) m-C (O) R2a, - (CH2) m-C (O) OR2a, - (CH2) m-OC (O) R2a, - (CH2) m-S (O) 2-R2a, - (CH2) m-S (O) -R2a, - (CH2) m-NHC (O) -R2a, - (CH2) m-C (O) NR2bR2c, - (CH2) m-NHC (O) OR2a and - (CH2) m-OC (O) NR2bR2c and - (CH2) m-NHC (O) NR2bR2c;
    R2a, R2b and R2c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2; each m is independently selected from 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
    R3 is selected from H, - (CH2) pOR3a, - (CH2) pC (O) R3a, - (CH2) pC (O) OR3a, - (CH2) pOC (O) R3a, - (CH2) p-S (O) 2-R3a, - (CH2) p-S (O) -R3a, - (CH2) p-NR3bR3c, - (CH2) p-NHC (O) -R3a, - (CH2) p-C (O) NR3bR3c, - (CH2) p-NHC (O) OR3a, - (CH2) p-OC (O) NR3bR3c and - (CH2) p-NHC (O) NR3bR3c;
    R3a, R3b and R3c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkylene-OH, C1-6 alkylene-OC1-6 alkyl, C1-6 alkylene-NH2, C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) and C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2;
    or, R3b, R3c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 3-12 membered heterocyclyl or 5-12 membered heteroaryl;
    each p is independently selected from 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
    wherein, R2 and R3 are optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R group (s) , R is selected from H, NH2, OH, CN, halogen, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl.
  20. The compound according to claim 19, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein:
    X is CH or N;
    R1 is selected from halogen and C1-6 alkoxyl;
    R2 is selected from NR2bR2c, C (O) R2a, NHC (O) -R2a, C (O) NR2bR2c, NHC (O) OR2a and OC (O) NR2bR2c;
    R2a, R2b and R2c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
    R3 is selected from H, - (CH2) pOR3a, - (CH2) pC (O) R3a, - (CH2) pC (O) OR3a, - (CH2) p-NR3bR3c, - (CH2) p-NHC (O) -R3a, - (CH2) p-C (O) NR3bR3c, - (CH2) p-NHC (O) OR3a and - (CH2) p-OC (O) NR3bR3c; preferably, R3 is not H;
    R3a, R3b and R3c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
    or, R3b, R3c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 5-10 membered heterocyclyl; each p is independently selected from 0, 1, 2, 3 and 4.
  21. The compound according to claim 19 or 20, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein,
    X is CH or N;
    R1 is selected from halogen and C1-6 alkoxyl;
    R2 is selected from
    R2a, R2b and R2c are independently selected from H and C1-6 alkyl;
    each m is independently 1, 2 or 3;
    R3 is selected from H, 
    R3a, R3b and R3c are independently selected from H and C1-6 alkyl;
    or, R3b, R3c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 5-6 membered heterocyclyl;
    each p is independently 0, 1, 2 or 3;
    alternatively,
    R3 is selected from H, 
  22. The compound according to any one of claims 19-21, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein,
    X is CH or N;
    R1 is F or OMe;
    R2 is
    R3 is selected from H,  R3 is preferably not H.
  23. The compound according to any one of claims 19-22, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, the compound has the structure of formula (I-a) or (I-b) :
    wherein,
    X, R2, R2b, R2c and R3 are as defined in any one of claims 19-22;
    alternatively, the compound has the structure of formula (I-c) or (I-d) :
    wherein,
    X is CRx or N, such as CH or N;
    Rx is selected from halogen, C1-6 alkyl, and C1-6 alkoxyl;
    R1 is selected from halogen and C1-6 alkoxyl;
    R2 is NR2bR2c;
    R2b and R2c are independently selected from H, and C1-6 alkyl;
    yet alternatively, wherein,
    X is CRx, such as CH;
    Rx is selected from H, halogen, C1-6 alkyl and C1-6 alkoxyl;
    R1 is selected from halogen and C1-4 alkoxyl, preferably is halogen, such as F;
    R2 is NR2bR2c, preferably is NH2;
    R2b and R2c are independently selected from H and C1-4 alkyl, such as H or CH3.
  24. The compound according to any one of claims 19-23, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, the compound is selected from:

  25. A compound, which comprises the structure of formula (I-1) or (I-2) , a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof:
    wherein,
    represents the attachment point of formula (I-1) or (I-2) and the rest of the compound;
    R2’ is a divalent group formed by the connection between R2 and the rest of the compound;
    R3’ is a divalent group formed by the connection between R3 and the rest of the compound;
    X, R1, R2 and R3 are as defined in any one of claims 19-23;
    alternatively,
    X is CH or N;
    R1 is selected from halogen, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl, alternatively selected from halogen and C1-6 alkoxyl, such as F and OMe;
    R2 and R3 are as defined in any one of claims 19-23.
  26. The compound of claim 25, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein,
    R2 is selected from NR2bR2c, - (CH2) m-C (O) R2a, - (CH2) m-C (O) OR2a, - (CH2) m-OC (O) R2a, - (CH2) m-S (O) 2-R2a, - (CH2) m-S (O) -R2a, - (CH2) m-NHC (O) -R2a, - (CH2) m-C (O) NR2bR2c, - (CH2) m-NHC (O) OR2a and - (CH2) m-OC (O) NR2bR2c and - (CH2) m-NHC (O) NR2bR2c;
    R2’ is selected from -NR2bR2c’-, - (CH2) m-C (O) R2a’-, - (CH2) m-C (O) OR2a’-, - (CH2) m-OC (O) R2a’, - (CH2) m-S (O) 2-R2a’-, - (CH2) m-S (O) -R2a’-, - (CH2) m-NHC (O) -R2a’-, - (CH2) m-C (O) NR2bR2c’-, - (CH2) m-NHC (O) OR2a’-and - (CH2) m-OC (O) NR2bR2c’-and - (CH2) m-NHC (O) NR2bR2c’-;
    R2a, R2b and R2c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2; R2a’ and R2c’ are independently selected from bond, C1-6 alkylene, C1-6 haloalkylene, C1-6 alkylene-O-and C1-6 alkylene-NH-;
    each m is independently selected from 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
    R2’ is optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R group (s) , R is selected from H, NH2, OH, CN, halogen, C1-6 alkyl, C1- 6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
    alternatively,
    R2 is selected from NR2bR2c, C (O) R2a, NHC (O) -R2a, C (O) NR2bR2c, NHC (O) OR2a and OC (O) NR2bR2c;
    R2’ is selected from -NR2bR2c’-, -C (O) R2a’-, -NHC (O) -R2a’-, -C (O) NR2bR2c’-, -NHC (O) OR2a’-and -OC (O) NR2bR2c’-;
    R2a, R2b and R2c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
    R2a’ and R2c’ are independently selected from bond, C1-6 alkylene, -C1-6 alkylene-O-and -C1-6 alkylene-NH-;
    alternatively,
    R2 is selected from
    R2’ is selected from
    R2a, R2b and R2c are independently selected from H and C1-6 alkyl;
    R2a’ and R2c’ are independently selected from bond and C1-6 alkylene;
    each m is independently 1, 2 or 3;
    yet alternatively,
    R2 is
    R2’ is
  27. The compound of claim 25 or 26, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein,
    R3 is selected from H, - (CH2) pOR3a, - (CH2) pC (O) R3a, - (CH2) pC (O) OR3a, - (CH2) pOC (O) R3a, - (CH2) p-S (O) 2-R3a, - (CH2) p-S (O) -R3a, - (CH2) p-NR3bR3c, - (CH2) p-NHC (O) -R3a, - (CH2) p-C (O) NR3bR3c, - (CH2) p-NHC (O) OR3a, - (CH2) p-OC (O) NR3bR3c and - (CH2) p-NHC (O) NR3bR3c;
    R3’ is selected from bond, - (CH2) pOR3a’-, - (CH2) pC (O) R3a’-, - (CH2) pC (O) OR3a’-, - (CH2) pOC (O) R3a’-, - (CH2) p-S (O) 2-R3a’-, - (CH2) p-S (O) -R3a’-, - (CH2) p-NR3bR3c’-, - (CH2) p-NHC (O) -R3a’-, - (CH2) p-C (O) NR3bR3c’-, - (CH2) p-NHC (O) OR3a’-, - (CH2) p-OC (O) NR3bR3c’-and - (CH2) p-NHC (O) NR3bR3c’-;
    R3a, R3b and R3c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkylene-OH, C1-6 alkylene-OC1-6 alkyl, C1-6 alkylene-NH2, C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) and C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2;
    or, R3b, R3c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 3-12 membered heterocyclyl or 5-12 membered heteroaryl;
    R3a’ and R3c’ are independently selected from bond, C1-6 alkylene, C1-6 haloalkylene, -C1-6 alkylene-O-, -C1-6 alkylene-OC1-6 alkylene-, -C1-6 alkylene-NH-, , -C1-6 alkylene-NH-C1-6 alkylene-and -C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) -C1-6 alkylene-;
    or, R3b, R3c’ are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 3-12 membered heterocyclylene or 5-12 membered heteroarylene;
    each p is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
    R3’ is optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R group (s) , R is selected from H, NH2, OH, CN, halogen, C1-6 alkyl, C1- 6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
    alternatively,
    R3 is selected from H, - (CH2) pOR3a, - (CH2) pC (O) R3a, - (CH2) pC (O) OR3a, - (CH2) p-NR3bR3c, - (CH2) p-NHC (O) -R3a, - (CH2) p-C (O) NR3bR3c, - (CH2) p-NHC (O) OR3a and - (CH2) p-OC (O) NR3bR3c; preferably, R3 is not H;
    R3’ is selected from bond, - (CH2) pOR3a’-, - (CH2) pC (O) R3a’-, - (CH2) pC (O) OR3a’-, - (CH2) p-NR3bR3c’-, - (CH2) p-NHC (O) -R3a’-, - (CH2) p-C (O) NR3bR3c’-, - (CH2) p-NHC (O) OR3a’-and - (CH2) p-OC (O) NR3bR3c’-;
    R3a, R3b and R3c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
    R3a’ and R3c’ are independently selected from bond, C1-6 alkylene, -C1-6 alkylene-O-, and -C1-6 alkylene-NH-;
    or, R3b, R3c’ are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 5-10 membered heterocyclylene; each p is independently selected from 0, 1, 2, 3 and 4;
    still alternatively,
    R3 is selected from H, 
    R3’ is selected from bond, 
    R3a, R3b and R3c are independently selected from H and C1-6 alkyl;
    R3a’ and R3c’ are independently selected from bond and C1-6 alkylene;
    or, R3b, R3c’ are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 5-6 membered heterocyclylene; each p is independently 0, 1, 2 or 3;
    yet alternatively,
    R3 is selected from H, 
    R3’ is selected from bond,  R3’ is preferably not bond.
  28. The compound of any one of claims 25-27, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein the compound comprises the structure of formula (I-1a) , (I-2a) , (I-1bI-1b) or (I-2b) :

    wherein,
    X, R2, R2’, R2b, R2c, R2c’, R3 and R3’ are as defined in any one of claims 25-27;
    alternatively, the compound comprises the structure of formula (I-1c) or (I-1d) :
    wherein,
    X is CRx or N, such as CH or N;
    Rx is selected from halogen, C1-6 alkyl, and C1-6 alkoxyl;
    R1 is selected from halogen and C1-6 alkoxyl;
    R2’ is -NR2bR2c’-;
    R2b is selected from H, and C1-6 alkyl;
    R2c’ is selected from bond, and C1-6 alkylene;
    yet alternatively,
    X is CRx, such as CH;
    Rx is selected from H, halogen, C1-6 alkyl and C1-6 alkoxyl;
    R1 is selected from halogen and C1-4 alkoxyl, preferably is halogen, such as F;
    R2’ is -NR2bR2c’-, and R2’ preferably is -NH-;
    R2b is independently selected from H and C1-4 alkyl;
    R2c’ is independently selected from bond and C1-4 alkylene.
  29. The compound of any one of claims 25-28, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein the compound comprises a structure selected from the following:

  30. The compound of any one of claims 25-29, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein the compound is a conjugate represented by L1- (D1) x, preferably, the compound is a conjugate represented by T1- [L1’- (D1) x] w;
    wherein, T1 is a targeting moiety;
    L1 is a linker, and L1’ is a divalent group formed by the connection between T1 and L1;
    D1 is a drug moiety, which is selected from the compound defined as any one of claims 25-29;
    x is an integer between 1 and 10, alternatively is 1;
    w is an integer between 1 and 10.
  31. The compound of any one of claims 25-30, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein the compound represented by L1-(D1) x is selected from:



    alternatively, wherein the compound represented by T1- [L1’- (D1) x] w is selected from:



    wherein, T1 and w are as defined in claim 30.
  32. A compound of formula (III) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof:
    wherein,
    R7 and R8 are independently selected from C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkenyl, C1-6 alkynyl, - (CH2) k-OR7a, - (CH2) k-NR7bR7c, - (CH2) k-C (O) R7a, - (CH2) k-C (O) OR7a, - (CH2) k-OC (O) -R7a, - (CH2) k-NHC (O) -R7a, - (CH2) k-NHC (O) O-R7a, - (CH2) k-OC (O) NH-R7a and - (CH2) k-C (O) NR7bR7c;
    R7a, R7b and R7c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkenyl, C1-6 alkynyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkylene-OH, C1-6 alkylene-OC1-6 alkyl, C1-6 alkylene-NH2, C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) and C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2; each k is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
    R9 is selected from H, OH, CN, NH2, NH (C1-6 alkyl) and N (C1-6 alkyl) 2, such as H or NH2;
    R10 is selected from H, - (CH2) q-OR10a, - (CH2) q-NR10bR10c, - (CH2) q-C (O) R10a, - (CH2) q-C (O) OR10a, - (CH2) q-OC (O) R10a, - (CH2) q-S (O) 2-R10a, - (CH2) q-S (O) -R10a, - (CH2) q-NHC (O) -R10a, - (CH2) q-C (O) NR10bR10c, - (CH2) q-NHC (O) -OR10a and - (CH2) q-OC (O) NR10bR10c;
    R10a, R10b and R10c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkylene-OH, C1-6 alkylene-OC1-6 alkyl, C1-6 alkylene-NH2, C1-6 alkylene-NH (C1-6 alkyl) and C1-6 alkylene-N (C1-6 alkyl) 2;
    or, R10b, R10c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 3-12 membered heterocyclyl or 5-12 membered heteroaryl, wherein, the 3-12 membered heterocyclyl and 5-12 membered heteroaryl are optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
    each q is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
    wherein, R7, R8, R9 and R10 are optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R#group (s) , R#is selected from H, NH2, OH, CN, halogen, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl.
  33. The compound according to claim 32, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein,
    R7 is selected from - (CH2) k-OR7a, - (CH2) k-NR7bR7c, - (CH2) k-C (O) OR7a, - (CH2) k-OC (O) -R7a, - (CH2) k-NHC (O) -R7a and - (CH2) k-C (O) NR7bR7c;
    R7a, R7b and R7c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkenyl, C1-6 alkynyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
    each k is independently 0, 1, 2 or 3;
    R8 is selected from C1-6 alkyl, C1-6 alkenyl, C0-6 alkylene-OH and C0-6 alkylene-NH2;
    R9 is selected from H, NH2, NH (C1-6 alkyl) and N (C1-6 alkyl) 2, such as H or NH2;
    R10 is selected from H, - (CH2) q-OR10a, - (CH2) q-NR10bR10c, - (CH2) q-C (O) R10a, - (CH2) q-C (O) OR10a, - (CH2) q-OC (O) R10a, - (CH2) q-NHC (O) -R10a, - (CH2) q-C (O) NR10bR10c, - (CH2) q-NHC (O) -OR10a, and - (CH2) q-OC (O) NR10bR10c;
    R10a, R10b and R10c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
    or, R10b, R10c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 5-10 membered heterocyclyl, wherein, the 5-10 membered heterocyclyl are optionally substituted with 1, 2 or 3 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
    each q is independently 0, 1, 2, 3 or 4;
    wherein, R7, R8, R9 and R10 is optionally substituted with 1, 2 or 3 R#group (s) , R#is selected from H, halogen, C1-6 alkyl and C1-6 haloalkyl.
  34. The compound according to claim 32 or 33, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, the compound has the structure of formula (III-a) :
    wherein,
    R7 and R8 are independently selected from C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkenyl, C1-6 alkynyl, - (CH2) k-OR7a, - (CH2) k-NR7bR7c, - (CH2) k-C (O) R7a, - (CH2) k-C (O) OR7a, - (CH2) k-OC (O) -R7a, - (CH2) k-NHC (O) -R7a, - (CH2) k-C (O) NR7bR7c, - (CH2) k-NHC (O) O-R7a and - (CH2) k-OC (O) NH-R7a;
    R7a, R7b and R7c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkenyl, C1-6 alkynyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
    each k is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6;
    wherein, R7 and R8 are optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R#group (s) , R#is selected from H, NH2, OH, CN, halogen, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
    alternatively,
    R7 is selected from - (CH2) k-OR7a, - (CH2) k-NR7bR7c, - (CH2) k-C (O) OR7a, - (CH2) k-OC (O) -R7a, - (CH2) k-NHC (O) -R7a and - (CH2) k-C (O) NR7bR7c;
    R7a, R7b and R7c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkenyl, C1-6 alkynyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
    each k is independently 0, 1, 2 or 3;
    R8 is selected from C1-6 alkyl, C1-6 alkenyl, C0-6 alkylene-OH and C0-6 alkylene-NH2;
    alternatively,
    R7 is selected from
    R7a, R7b and R7c are independently selected from H and C1-6 alkyl, such as H and CH3,
    k is 0, 1, 2 or 3;
    R8 is selected from C1-6 alkyl, C1-6 alkenyl, C1-6 alkynyl, C0-6 alkylene-OH and C0-6 alkylene-NH2;
    alternatively,
    R7 is selected from
    R8 is selected from C1-4 alkyl, C1-4 alkenyl, C1-4 alkynyl, C1-4 alkylene-OH and C1-4 alkylene-NH2, such as CH3, 
  35. The compound according to claim 32 or 33, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, the compound has the structure of formula (III-b) :
    wherein,
    R10 is selected from H, - (CH2) q-OR10a, - (CH2) q-NR10bR10c, - (CH2) q-C (O) R10a, - (CH2) q-C (O) OR10a, - (CH2) q-OC (O) R10a, - (CH2) q-S (O) 2-R10a, - (CH2) q-S (O) -R10a, - (CH2) q-NHC (O) -R10a, - (CH2) q-C (O) NR10bR10c, - (CH2) q-NHC (O) -OR10a and - (CH2) q-OC (O) NR10bR10c;
    R10a, R10b and R10c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
    R10a is preferably not H;
    or, R10b, R10c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 3-12 membered heterocycly or 5-12 membered heteroaryl, wherein, the C3-10 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclyl, C6-10 aryl and 5-12 membered heteroaryl are optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
    each q is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6;
    wherein, R10 is optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R#group (s) , R#is selected from H, NH2, OH, CN, halogen, C1- 6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
    alternatively,
    R10 is selected from H, - (CH2) q-OR10a, - (CH2) q-NR10bR10c, - (CH2) q-C (O) R10a, - (CH2) q-C (O) OR10a, - (CH2) q-OC (O) R10a, - (CH2) q-NHC (O) -R10a, - (CH2) q-C (O) NR10bR10c, - (CH2) q-NHC (O) -OR10a and - (CH2) q-OC (O) NR10bR10c;
    R10a, R10b and R10c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
    R10a is preferably not H;
    or, R10b, R10c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 5-10 membered heterocyclyl, wherein, the 5-10 membered heterocyclyl are optionally substituted with 1, 2 or 3 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
    each q is independently 0, 1, 2, 3 or 4;
    wherein, R10 is optionally substituted with 1, 2 or 3 R#group (s) , R#is selected from H, halogen, C1-6 alkyl and C1-6 haloalkyl.
  36. The compound according to claim 35, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein,
    R10 is selected from H, 
    R10a, R10b and R10c are independently selected from H and C1-6 alkyl;
    R10a is preferably not H;
    or, R10b, R10c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 5-6 membered heterocyclyl, which is optionally substituted with 1, 2 or 3 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
    each q is independently is independently 0, 1, 2 or 3;
    alternatively,
    R10 is selected from H, 
  37. The compound according to any one of claims 32-36, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, the compound is selected from:

  38. A compound, which comprises the structure of formula (III-1) or (III-2) , or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof:
    wherein,
    represents the attachment point of formula (III-1) or (III-2) and the rest of the compound;
    R7’ is a divalent group formed by the connection between R7 and the rest of the compound;
    R10’ is a divalent group formed by the connection between R10 and the rest of the compound;
    R7, R8, R9 and R10 are as defined in any one of claims 32-36.
  39. The compound according to claim 38, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein,
    R7 and R8 are independently selected from C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkenyl, C1-6 alkynyl, - (CH2) k-OR7a, - (CH2) k-NR7bR7c, - (CH2) k-C (O) R7a, - (CH2) k-C (O) OR7a, - (CH2) k-OC (O) -R7a, - (CH2) k-NHC (O) -R7a, - (CH2) k-NHC (O) O-R7a, - (CH2) k-OC (O) NH-R7a and - (CH2) k-C (O) NR7bR7c;
    each k is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8;
    R7’ is selected from C1-6 alkylene, C1-6 haloalkylene, C1-6 alkenylene, C1-6 alkynylene, - (CH2) k-OR7a’-, - (CH2) k-NR7bR7c’-, - (CH2) k-C (O) R7a’-, - (CH2) k-C (O) OR7a’-, - (CH2) k-OC (O) -R7a’-, - (CH2) k-NHC (O) -R7a’-, - (CH2) k-C (O) NR7bR7c’-, - (CH2) k-NHC (O) O-R7a’-and - (CH2) k-OC (O) NH-R7a’-;
    R7a, R7b and R7c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
    R7a’ and R7c’ are independently selected from bond, C1-6 alkylene, C1-6 alkenylene, -C1-6 alkylene-O-and -C1-6 alkylene-NH-;
    each k is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6;
    wherein, R7’ is optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R#group (s) , R#is selected from H, NH2, OH, CN, halogen, C1- 6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
    alternatively,
    R7 is selected from - (CH2) k-OR7a, - (CH2) k-NR7bR7c, - (CH2) k-C (O) OR7a, - (CH2) k-OC (O) -R7a, - (CH2) k-NHC (O) -R7a and - (CH2) k-C (O) NR7bR7c;
    R7’ is selected from - (CH2) k-OR7a’-, - (CH2) k-NR7bR7c’-, - (CH2) k-C (O) OR7a’-, - (CH2) k-OC (O) -R7a’-, - (CH2) k-NHC (O) -R7a’-and - (CH2) k-C (O) NR7bR7c’-;
    R8 is selected from C1-6 alkyl, C1-6 alkenyl, C0-6 alkylene-OH and C0-6 alkylene-NH2;
    R7a, R7b and R7c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkenyl, C1-6 alkynyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
    R7a’ and R7c’ are selected from bond, C1-6 alkylene, C1-6 alkynylene, -C1-6 alkylene-O-and -C1-6 alkylene-NH-;
    each k is independently 0, 1, 2 or 3;
    still alternatively,
    R7 is selected from
    R7’ is selected from
    R7a, R7b and R7c are independently selected from H and C1-6 alkyl, such as H and CH3,
    R7a’ and R7c’ are selected from bond and C1-6 alkylene, such as bond and CH2;
    R8 is selected from C1-6 alkyl, C1-6 alkenyl, C1-6 alkynyl, C0-6 alkylene-OH and C0-6 alkylene-NH2;
    k is 0, 1, 2 or 3;
    yet alternatively,
    R7 is selected from
    R7’ is selected from
    R8 is selected from C1-4 alkyl, C1-4 alkenyl, C1-4 alkynyl, C1-4 alkylene-OH and C1-4 alkylene-NH2, such as CH3, 
  40. The compound according to claim 38 or 39, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein,
    R9 is selected from H, OH, CN, NH2, NH (C1-6 alkyl) and N (C1-6 alkyl) 2, such as H or NH2;
    R10 is selected from H, - (CH2) q-OR10a, - (CH2) q-NR10bR10c, - (CH2) q-C (O) R10a, - (CH2) q-C (O) OR10a, - (CH2) q-OC (O) R10a, - (CH2) q-S (O) 2-R10a, - (CH2) q-S (O) -R10a, - (CH2) q-NHC (O) -R10a, - (CH2) q-C (O) NR10bR10c, - (CH2) q-NHC (O) -OR10a and - (CH2) q-OC (O) NR10bR10c;
    R10’ is selected from bond, - (CH2) q-OR10a’-, - (CH2) q-NR10bR10c’-, - (CH2) q-C (O) R10a’-, - (CH2) q-C (O) OR10a’-, - (CH2) q-OC (O) R10a’-, - (CH2) q-S (O) 2-R10a’-, - (CH2) q-S (O) -R10a’-, - (CH2) q-NHC (O) -R10a’-, - (CH2) q-C (O) NR10bR10c’-, - (CH2) q-NHC (O) -OR10a’-, and - (CH2) q-OC (O) NR10bR10c’-;
    R10a, R10b and R10c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
    R10a is preferably not H;
    or, R10b, R10c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 3-12 membered heterocyclyl or 5-12 membered heteroaryl, wherein, the 3-12 membered heterocyclyl and 5-12 membered heteroaryl are optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
    R10a’ and R10c’ are independently selected from bond, C1-6 alkylene, -C1-6 alkylene-O-and -C1-6 alkylene-NH-;
    or, R10b, R10c’ are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 5-12 membered heterocyclylene or 5-12 membered heteroarylene, wherein, the 5-12 membered heterocyclylene and 5-12 membered heteroarylene are optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
    each q is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6;
    wherein, R10’ is optionally substituted with 1, 2, 3, 4 or 5 R#group (s) , R#is selected from H, NH2, OH, CN, halogen, C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkoxyl and C1-6 haloalkoxyl;
    alternatively,
    R9 is selected from H, OH, CN, NH2, NH (C1-6 alkyl) and N (C1-6 alkyl) 2, such as H or NH2;
    R10 is selected from H, - (CH2) q-OR10a, - (CH2) q-NR10bR10c, - (CH2) q-C (O) R10a, - (CH2) q-C (O) OR10a, - (CH2) q-OC (O) R10a, - (CH2) q-NHC (O) -R10a, - (CH2) q-C (O) NR10bR10c, - (CH2) q-NHC (O) -OR10a and - (CH2) q-OC (O) NR10bR10c;
    R10’ is selected from bond, - (CH2) q-OR10a’-, - (CH2) q-NR10bR10c’-, - (CH2) q-C (O) R10a’-, - (CH2) q-C (O) OR10a’-, - (CH2) q-OC (O) R10a’-, - (CH2) q-NHC (O) -R10a’-, - (CH2) q-C (O) NR10bR10c’-, - (CH2) q-NHC (O) -OR10a’-, and - (CH2) q-OC (O) NR10bR10c’-;
    R10a, R10b and R10c are independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkylene-OH and C1-6 alkylene-NH2;
    R10a is preferably not H;
    or, R10b, R10c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 5-10 membered heterocyclyl, wherein, the 5-10 membered heterocyclyl are optionally substituted with 1, 2 or 3 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
    R10a’ and R10c’ are independently selected from bond, C1-6 alkylene, -C1-6 alkylene-O-and -C1-6 alkylene-NH-;
    or, R10b, R10c’ are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 5-10 membered heterocyclylene, wherein, the 5-10 membered heterocyclylene are optionally substituted with 1, 2 or 3 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
    each q is independently 0, 1, 2, 3 or 4;
    still alternatively,
    R9 is selected from H, NH2, NH (C1-6 alkyl) and N (C1-6 alkyl) 2, such as H or NH2;
    R10 is selected from H, 
    R10’ is selected from bond, 
    R10a, R10b and R10c are independently selected from H and C1-6 alkyl;
    R10a is preferably not H;
    or, R10b, R10c are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 5-6 membered heterocyclyl, which is optionally substituted with 1, 2 or 3 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
    R10a’ and R10c’ are independently selected from bond and C1-6 alkylene;
    or, R10b, R10c’ are taken together with the nitrogen atom to which they are attached to form 5-6 membered heterocyclylene, which is optionally substituted with 1, 2 or 3 substituents selected from H, D, halogen and C1-6 alkyl;
    each q is independently is independently 0, 1, 2 or 3;
    yet alternatively,
    R9 is selected from H, NH2, NH (C1-6 alkyl) and N (C1-6 alkyl) 2, such as H or NH2;
    R10 is selected from H, 
    R10’ is selected from bond, 
  41. The compound according to any one of claims 38-40, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein, the compound comprises the structure of formula (III-1a) , (III-1b) or (III-2b) :
    wherein, R7’, R8, R10 and R10’ are as defined in any one of claims 38-40;
    alternatively,
    wherein, the compound comprises the structure of formula (III-1a) :
    wherein,
    R7’ is selected from C1-6 alkylene, C1-6 haloalkylene, C1-6 alkenylene, C1-6 alkynylene, - (CH2) k-OR7a’-, and - (CH2) k-NR7bR7c’-;
    R8 is selected from C1-6 alkyl, C1-6 haloalkyl, C1-6 alkenyl, C1-6 alkynyl, - (CH2) k-OR7a, and - (CH2) k-NR7bR7c;
    R7a’ and R7c’ are independently selected from bond, C1-6 alkylene, C1-6 alkenylene, and C1-6 alkynylene;
    R7b is independently selected from H, C1-6 alkyl, C1-6 alkenyl, and C1-6 alkynyl;
    each k is independently 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6;
    alternatively,
    R7’ is selected from - (CH2) k-OR7a’-, and - (CH2) k-NR7bR7c’-;
    R7a’ and R7c’ are independently selected from bond and C1-6 alkylene, such as bond and CH2;
    R7b is independently selected from H and C1-6 alkyl, such as H and CH3;
    each k is independently 0, 1, 2 or 3;
    R8 is C1-6 alkyl or C1-6 haloalkyl;
    yet alternatively,
    R7’ is selected fromalternatively is
    R8 is C1-6 alkyl, such as CH3.
  42. The compound according to any one of claims 38-41, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein the compound comprises a structure selected from the following:


  43. The compound of any one of claims 38-42, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein the compound is a conjugate represented by L3- (D3) z, preferably, the compound is a conjugate represented by T3- [L3’- (D3) z] r;
    wherein, T3 is a targeting moiety;
    L3 is a linker, and L3’ is a divalent group formed by the connection between T3 and L3;
    D3 is a drug moiety, which is selected from the compound defined as any one of claims 38-42;
    z is an integer between 1 and 10, alternatively is 1;
    r is an integer between 1 and 10.
  44. The compound of any one of claims 38-43, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof, wherein the compound represented by L3- (D3) z is selected from:


    alternatively, wherein the compound represented by T3- [L3- (D3) z] r is selected from:


    wherein, T3 and r are as defined in claim 43.
  45. A composition comprising the compound any one of claims 1-44, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof and optionally a pharmaceutically acceptable carrier or excipient.
  46. Use of the compound, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof of the compound any one of claims 1-44 or the composition of claim 45 in the manufacture of a medicament for treating and/or preventing a disease.
  47. The compound, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof of any one of claims 1-44, or the composition of claim 45, for use in treating and/or preventing a disease.
  48. A method for preventing and/or treating a disease in a subject in need thereof, comprising administrating to the subject the compound, or a pharmaceutically acceptable salt, isotope labeled analogue, crystalline form, hydrate, solvate, enantiomer, diastereomer thereof, or a mixture thereof of any one of claims 1-44, or the composition of claim 45.
  49. The method of claim 48, wherein the method further comprises administering to the subject a second therapeutic agent, preferably wherein the second therapeutic agent is selected from an antibody, a chemotherapeutic agent and a small molecule drug.
  50. The use of claim 46, or the compound or composition for use of claim 47, or the method of claim 48, wherein the disease is selected from a cancer, an infectious disease, an inflammatory disease, an autoimmune disease and an immunodeficiency disease;
    preferably, wherein the cancer is selected from head and neck cancer, esophageal cancer, lung cancer, colon cancer, rectal cancer, stomach cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, prostate cancer, breast cancer, leukemia, myeloma, epithelial squamous cell cancer, melanoma, brain cancer, cervical cancer, liver cancer, bladder cancer, breast cancer, renal cancer, testicular cancer, and thyroid cancer;
    preferably, wherein the autoimmune disease is selected from systemic sclerosis and atherosclerosis.
PCT/CN2025/072977 2024-01-18 2025-01-17 Camptothecin analogues, conjugates and methods of use Pending WO2025153054A1 (en)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2024073046 2024-01-18
CNPCT/CN2024/073046 2024-01-18
CN2024143223 2024-12-27
CNPCT/CN2024/143223 2024-12-27

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2025153054A1 true WO2025153054A1 (en) 2025-07-24

Family

ID=96470799

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/CN2025/072977 Pending WO2025153054A1 (en) 2024-01-18 2025-01-17 Camptothecin analogues, conjugates and methods of use

Country Status (2)

Country Link
TW (1) TW202535391A (en)
WO (1) WO2025153054A1 (en)

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6268375B1 (en) * 1999-12-29 2001-07-31 Research Triangle Institute 10, 11-difluoromethylenedioxycamptothecin compounds with topoisomerase I inhibition
US20220378935A1 (en) * 2021-04-29 2022-12-01 Abbvie Inc. Anti-c-met antibody drug conjugates
CN115443134A (en) * 2020-06-19 2022-12-06 杭州多禧生物科技有限公司 Conjugates of cell binding molecules and camptothecin analogs
CN115551552A (en) * 2020-02-25 2022-12-30 祐方有限公司 Camptothecin derivatives and conjugates thereof
US20230381321A1 (en) * 2022-03-17 2023-11-30 Seagan Inc., Camptothecin conjugates
CN117320757A (en) * 2021-02-25 2023-12-29 祐方有限公司 Anti-HER2 antibody-drug conjugates and their uses
CN117398474A (en) * 2022-07-14 2024-01-16 苏州宜联生物医药有限公司 Bioactive conjugate, preparation method and application thereof
US20240091374A1 (en) * 2022-08-26 2024-03-21 Abbvie Inc. Anti-sez6 antibody drug conjugates
WO2024243450A1 (en) * 2023-05-23 2024-11-28 Abbvie Inc. Methods of treatment using anti-c-met antibody drug conjugates

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6268375B1 (en) * 1999-12-29 2001-07-31 Research Triangle Institute 10, 11-difluoromethylenedioxycamptothecin compounds with topoisomerase I inhibition
CN115551552A (en) * 2020-02-25 2022-12-30 祐方有限公司 Camptothecin derivatives and conjugates thereof
CN115443134A (en) * 2020-06-19 2022-12-06 杭州多禧生物科技有限公司 Conjugates of cell binding molecules and camptothecin analogs
CN117320757A (en) * 2021-02-25 2023-12-29 祐方有限公司 Anti-HER2 antibody-drug conjugates and their uses
US20220378935A1 (en) * 2021-04-29 2022-12-01 Abbvie Inc. Anti-c-met antibody drug conjugates
US20230381321A1 (en) * 2022-03-17 2023-11-30 Seagan Inc., Camptothecin conjugates
CN117398474A (en) * 2022-07-14 2024-01-16 苏州宜联生物医药有限公司 Bioactive conjugate, preparation method and application thereof
US20240091374A1 (en) * 2022-08-26 2024-03-21 Abbvie Inc. Anti-sez6 antibody drug conjugates
WO2024243450A1 (en) * 2023-05-23 2024-11-28 Abbvie Inc. Methods of treatment using anti-c-met antibody drug conjugates

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SUN SHULEI, LIU XINXIN, HU ZHIWEI, WANG ZIMING: "Research progress in structural modification of Camptothecins", BIOMEDICAL TRANSFORMATION, vol. 5, no. 1, 1 March 2024 (2024-03-01), pages 53 - 65, XP093338137, ISSN: 2096-8965, DOI: 10.12287/j.issn.2096-8965.20240106 *

Also Published As

Publication number Publication date
TW202535391A (en) 2025-09-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11229639B2 (en) Camptothecin derivatives
JP2024038168A (en) Bioactive molecule conjugates, their preparation and uses
TWI814024B (en) Self-stabilizing linker conjugates
JP2024045283A (en) Hydrophilic Linkers for Antibody Drug Conjugates
KR102433686B1 (en) Self-stabilizing linker conjugates
AU2012272930B2 (en) Novel maytansinoid derivatives with peptide linker and conjugates thereof
CN110366431B (en) Maytansinoid derivatives with self-decomposing peptide linkers and conjugates thereof
KR20170054430A (en) Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
CA3038588A1 (en) Medical use of anti-c met antibody-cytotoxic drug conjugate
WO2025098391A1 (en) Selective drug release from conjugates of biologically active compounds
CA3198230A1 (en) Conjugate and use thereof
WO2025153054A1 (en) Camptothecin analogues, conjugates and methods of use
TW202434223A (en) Linkers, drug linkers and conjugates thereof and methods of using the same
JP7816796B2 (en) Conjugates and uses thereof
RU2844846C2 (en) Camptothecin derivatives
US20240269308A1 (en) Prodrugs of topoisomerase i inhibitor for adc conjugations and methods of use thereof
AU2020263231B2 (en) Camptothecin derivatives
HK40104845A (en) Camptothecin derivatives
WO2026018064A1 (en) Multispecific multi-drug antibody-drug conjugates
HK40069519B (en) Camptothecin derivatives
HK40069519A (en) Camptothecin derivatives
AU2015224535A1 (en) Novel maytansinoid derivatives with peptide linker and conjugates thereof

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 25741617

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1