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WO2024095964A1 - Ｔｏｌｌ様受容体７／８デュアルアゴニスト化合物を含む抗体薬物複合体 - Google Patents

Ｔｏｌｌ様受容体７／８デュアルアゴニスト化合物を含む抗体薬物複合体 Download PDF

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WO2024095964A1
WO2024095964A1 PCT/JP2023/039102 JP2023039102W WO2024095964A1 WO 2024095964 A1 WO2024095964 A1 WO 2024095964A1 JP 2023039102 W JP2023039102 W JP 2023039102W WO 2024095964 A1 WO2024095964 A1 WO 2024095964A1
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antibody
salt
methyl
formula
amino acid
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English (en)
French (fr)
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路則 赤岩
陽平 関
瀛華 王
ハビエル ラモス ミゲレス
圭 大貫
隆 上久保
亨 浅野
晃雄 神川
貴志 茶圓
里佳 星
真司 曽我
哲源 権
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Astellas Pharma Inc
Original Assignee
Astellas Pharma Inc
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    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
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    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants

Definitions

  • the present invention relates to an antibody-drug conjugate or a salt thereof containing a compound (hereinafter, the compound is also referred to as a drug) having Toll-like receptor 7 and 8 dual agonist (hereinafter, also referred to as a TLR7/8 dual agonist) activity, and the TLR7/8 dual agonist compound or a salt thereof, etc.
  • the present invention also relates to an anti-CLDN6 antibody for use in the antibody-drug conjugate or a salt thereof.
  • TLRs bind to pathogen-associated molecular patterns of bacteria, fungi, protozoa, and viruses, and function as the first line of defense against invading pathogens.
  • TLR7 and 8 which belong to the TLR family, are pattern recognition receptors that are mainly expressed in dendritic cells, macrophages, monocytes, B cells, etc., and it is known that activation of TLR7 and 8 leads to antigen uptake and maturation of dendritic cells, and increased T cell stimulating ability.
  • Patent document 1 describes TM-Ln-AM (wherein TM is a targeting moiety, L is a linker, n is an integer selected from 0 and 1, and AM is an activating moiety capable of activating dendritic cells, NK cells, tumor cells, or a combination thereof) as a compound capable of activating TLR7 and/or TLR8, and discloses, for example, compounds including trastuzumab, which is known to bind to human epidermal growth factor receptor 2 (hereinafter also referred to as Her2), and resiquimod.
  • Her2 human epidermal growth factor receptor 2
  • Patent Documents 2 and 3 report Her2 antibody-drug conjugates containing a TLR7 agonist. (For the symbols in the formula, see Patent Documents 2 and 3.)
  • Patent Documents 4 and 5 report FOLR1 antibody-drug conjugates containing a TLR7 agonist. (For the symbols in the formula, see Patent Documents 4 and 5.)
  • Patent Document 6 reports a TLR7 agonist compound.
  • R 3 is H, -L 2 C( ⁇ O)OR 7 , -C( ⁇ O)OL 6 R 12 , -C( ⁇ O)OL 2 R 12 , -L 2 C( ⁇ O)OL 2 R 12 , -L 4 C( ⁇ O)OL 5 OH, -L 4 R 12 , (omitted), L 4 is -(CH 2 )m-, (omitted)
  • R 12 is a) -N(R 11 ) 2 , b) unsubstituted 5- to 6-membered heterocycloalkyl having 1 to 2 heteroatoms independently selected from N and O, c) 5- to 6-membered heterocycloalkyl substituted with ⁇ O and having 1 to 2 heteroatoms independently selected from N and O, d) C1 to C3 alkyl or -C( ⁇ O)OR 7 , or e) unsubstituted phenyl,
  • Patent Document 4 reports a TLR7 agonist compound.
  • R 3 is independently -N(R 3a ) 2 , -OR 3b , -C(R 3c ) 2 NH 2 , C 1-6 alkyl, heterocycloalkyl, heteroaryl, partially saturated heteroaryl, or two R 3 are bonded to the same carbon atom and together with the bonded carbon atom form a spiroheterocycloalkyl, where the heterocycloalkyl, spiroheterocycloalkyl, heteroaryl, and spiroheterocycloalkyl in R 3 contain 1, 2, 3, or 4 heteroatoms selected from N, S, and O and may be substituted with 1 to 2 C 1-3 alkyl.
  • Claudin 6 is a member of the claudin family of proteins, a four-transmembrane protein consisting of 220 amino acid residues. It is an oncofetal gene expressed in mouse and human stem cells and embryoid bodies involved in epithelial cell fate. While CLDN6 is expressed at very low levels in normal tissues, it is overexpressed in tumors including pediatric brain tumors and germ cell tumors, as well as in cancers such as gastric adenocarcinoma and ovarian cancer, and has been suggested to be a target for cancer therapy (International Journal of Molecular Sciences 2021, vol. 22, p. 13416.).
  • GT512muMAB 64A (Patent Document 7) and AE3-20 (Patent Document 8) have been reported as anti-CLDN6 antibodies. There have been no reports of antibody-drug conjugates containing TLR7 and/or TLR8 agonist compounds targeting CLDN6 as cancer therapeutic agents.
  • the objective of the present invention is to create a compound or a salt thereof having TLR7/8 dual agonist activity, develop an antibody-drug conjugate containing the TLR7/8 dual agonist compound, and provide a pharmaceutical composition for preventing or treating various cancers such as ovarian cancer, testicular cancer, cervical cancer, and lung cancer. It is also to provide an anti-CLDN6 antibody for use in the antibody-drug conjugate or a salt thereof.
  • the drug of formula (II) of the present invention has TLR7/8 dual agonistic activity, that the antibody used in the antibody-drug conjugate of formula (I) exhibits binding activity to the target (human CLDN6), that the antibody-drug conjugate of formula (I) induces TNF- ⁇ production and INF- ⁇ production, and furthermore, that an in vivo antitumor effect is observed, leading to the completion of the present invention.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising the following [1] to [3] and an excipient: [1]
  • a compound of formula (II) or a salt thereof (Wherein, X is S or NH, R 1 is lower alkyl or -CH 2 -isoxazoldiyl-CH 3 ; where R 1 is -CH 2 -isoxazoldiyl-CH 3 , X is S, R2 is halogen or H; R3 is CH3 or H, R 40 is a group represented by formula (a1), formula (b1), or formula (c1): Ring A is a 4- to 6-membered cyclic amine consisting of multiple C and one N atom; Ring B is a 4- to 6-membered cyclic amine composed of multiple C's, one N and one G; G is N or CH; R A is -CH 2 O-, -C(CH 3 ) 2 O-, -O-, or -CH 2 NH-; where R A is -O- or -CH 2 NH-, X is S; R 2 is halogen; or
  • An anti-CLDN6 antibody or an antigen-binding fragment thereof comprising a heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence of amino acid numbers 1 to 117 of SEQ ID NO: 2 and a light chain variable region consisting of amino acid numbers 1 to 108 of SEQ ID NO: 4, or an anti-CLDN6 antibody or an antigen-binding fragment thereof comprising a heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence of amino acid numbers 1 to 117 of SEQ ID NO: 6 and a light chain variable region consisting of amino acid numbers 1 to 108 of SEQ ID NO: 8.
  • the present invention is not limited to the above embodiments [1] to [3], and also includes embodiments in which the contents described in the detailed invention of the specification are appropriately combined.
  • the present invention may be a compound or a salt thereof in which M of the group represented by formula (a1), formula (b1), or formula (c1) of R 40 in the compound of formula (II) or a salt thereof described in the above [2] is H.
  • the present invention may be an antibody-drug conjugate or a salt thereof in which an antibody is bound via a linker to the position of M of the group represented by formula (a1), formula (b1), or formula (c1) of R 40 in the compound of formula (II) or a salt thereof described in the above [2].
  • the binding group to be bound to the antibody in the linker is not limited to the maleimide group contained in the group represented by formula (d) described in the above [2], and various binding groups described below can be appropriately used.
  • the linker portion is not limited to L D contained in the group represented by formula (d) described in the above [2], and various non-cleavable linkers and various cleavable linkers described below can be appropriately used.
  • the present invention also relates to an antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof, and a pharmaceutical composition, particularly a pharmaceutical composition for preventing and/or treating cancer, containing the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof and one or more pharma- ceutically acceptable excipients.
  • the pharmaceutical composition includes an agent for preventing and/or treating cancer, containing the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof.
  • the present invention relates to use of an antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof for the manufacture of a pharmaceutical composition for the prevention and/or treatment of cancer, use of an antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof for the prevention and/or treatment of cancer, an antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof for use in the prevention and/or treatment of cancer, and a method for the prevention and/or treatment of cancer, comprising administering an effective amount of the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof to a subject.
  • the present invention also relates to a compound of formula (II) or a salt thereof, and a pharmaceutical composition, particularly a pharmaceutical composition for preventing and/or treating cancer, containing the compound of formula (II) or a salt thereof and one or more pharma- ceutically acceptable excipients.
  • the pharmaceutical composition includes a cancer prevention and/or treatment agent containing the compound of formula (II) or a salt thereof.
  • the present invention relates to use of a compound of formula (II) or a salt thereof for the manufacture of a pharmaceutical composition for the prevention and/or treatment of cancer, use of a compound of formula (II) or a salt thereof for the prevention and/or treatment of cancer, a compound of formula (II) or a salt thereof for use in the prevention and/or treatment of cancer, and a method for the prevention and/or treatment of cancer, which comprises administering an effective amount of a compound of formula (II) or a salt thereof to a subject.
  • the present invention also relates to a pharmaceutical composition, particularly a pharmaceutical composition for preventing and/or treating cancer, containing an antibody-drug conjugate comprising a compound of formula (II) or a salt thereof or a salt thereof, and one or more pharma- ceutically acceptable excipients.
  • the pharmaceutical composition includes a cancer prevention and/or treatment agent containing an antibody-drug conjugate comprising a compound of formula (II) or a salt thereof or a salt thereof.
  • the present invention relates to use of an antibody-drug conjugate comprising a compound of formula (II) or a salt thereof or a salt thereof for the manufacture of a pharmaceutical composition for the prevention and/or treatment of cancer, use of an antibody-drug conjugate comprising a compound of formula (II) or a salt thereof or a salt thereof for use in the prevention and/or treatment of cancer, an antibody-drug conjugate comprising a compound of formula (II) or a salt thereof or a salt thereof for use in the prevention and/or treatment of cancer, and a method for the prevention and/or treatment of cancer, comprising administering an effective amount of an antibody-drug conjugate comprising a compound of formula (II) or a salt thereof or a salt thereof to a subject.
  • the "subject” refers to a human or other animal in need of the prevention or treatment, and in one embodiment, the subject is a human in need of the prevention or treatment.
  • the type of cancer is not particularly limited, and may be either a solid cancer or a blood cancer.
  • various types of peritoneal dissemination cancer gastric cancer, lung cancer, acute lymphoblastic leukemia, acute myeloid leukemia, Hodgkin's lymphoma, non-Hodgkin's lymphoma, B-cell lymphoma, multiple myeloma, T-cell lymphoma and other blood cancers, myelodysplastic syndrome, adenocarcinoma, squamous cell carcinoma, adenosquamous cell carcinoma, undifferentiated carcinoma, large cell carcinoma, non-small cell lung cancer, small cell lung cancer, mesothelioma, skin cancer, cutaneous T-cell lymphoma, breast cancer, prostate cancer, bladder cancer, vaginal cancer, cervical cancer, head and neck cancer, uterine cancer, cervical cancer, liver cancer, biliary
  • solid cancers such as bladder cancer, bile duct cancer, kidney cancer
  • ovarian cancer, testicular cancer, cervical cancer, and lung cancer can be mentioned.
  • ovarian cancer expressing CLDN6, testicular cancer expressing CLDN6, cervical cancer expressing CLDN6, and lung cancer expressing CLDN6 can be mentioned.
  • the compound of formula (II) or a salt thereof has a TLR7/8 dual agonist effect
  • the compound of formula (II) or a salt thereof, or the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof containing a TLR7/8 dual agonist compound has an effect of producing TNF- ⁇ or INF- ⁇ , binds to a tumor-associated antigen expressed on the tumor surface to kill cancer cells, and also has an in vivo antitumor effect, and therefore can be used as a preventive and/or therapeutic agent for cancer.
  • the anti-CLDN6 antibody of the present invention has binding activity to human CLDN6 and can be used in an antibody-drug conjugate or a salt thereof for use as a preventive and/or therapeutic agent for cancer.
  • FIG. 1 shows the results of flow cytometry evaluation of the binding activity of antibodies Ab0, Ab1, and Ab2 to the human CLDN6-expressing gastric cancer cell line NUGC-3.
  • the vertical axis represents geometric mean fluorescence intensity, and the horizontal axis represents antibody concentration (ng/mL).
  • 2 shows the results of measuring the amount of cytokine produced by antibody-drug conjugates ExL1A1 and ExL1A2, respectively.
  • the vertical axis represents the amount of TNF- ⁇ or INF- ⁇ cytokine produced (pg/mL), and the horizontal axis represents the antibody concentration (nM).
  • Figure 3 shows the in vivo activity evaluation results of antibody-drug conjugates ExL1A1, ExL5A1, and ExL7A1 in a xenograft model.
  • the vertical axis represents tumor volume ( mm3 ), and the horizontal axis represents the number of days (days) after the first antibody administration.
  • the significance probability P value was calculated by comparing the tumor volume of the PBS-administered group with the tumor volume of the ExL1A1, ExL5A1, and ExL7A1-administered groups after 14 days using an unpaired t-test (*: P ⁇ 0.05, **: P ⁇ 0.01).
  • Figure 4 shows the results of measuring the amount of cytokine production by antibody-drug conjugate ExL1A1 when medium was added or when the TLR8 inhibitor CU-CPT9a or the TLR7/8 inhibitor Enpatoran was added.
  • the vertical axis represents the amount of INF- ⁇ cytokine production (pg/mL), and the horizontal axis represents the antibody concentration (nM).
  • “Lower alkyl” refers to a straight or branched alkyl having 1 to 6 carbon atoms (hereinafter abbreviated as C1-6 ), such as methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, n-pentyl, n-hexyl, etc.
  • the lower alkyl is a C1-6 alkyl, in one embodiment, the lower alkyl is a C1-5 alkyl, in one embodiment, the lower alkyl is methyl, and in one embodiment, the lower alkyl is n-pentyl.
  • “Lower alkylene” refers to straight or branched C 1-6 alkylene, such as methylene, ethylene, trimethylene, tetramethylene, pentamethylene, hexamethylene, propylene, methylmethylene, dimethylmethylene, ethylethylene, 1,2-dimethylethylene, 1,1,2,2-tetramethylethylene, etc.
  • the lower alkylene is a C 1-4 alkylene, and in some embodiments, the lower alkylene is ethylene (-CH 2 CH 2 -).
  • Halogen means F, Cl, Br or I.
  • Haloalkyl is lower alkyl substituted with one or more halogens. In some embodiments, haloalkyl is C 1-6 alkyl substituted with one or more halogens. In some embodiments, haloalkyl is lower alkyl substituted with 1 to 5 halogens, in some embodiments, haloalkyl is lower alkyl substituted with 1 to 5 F, in some embodiments, haloalkyl is methyl substituted with 1 to 3 F, and in some embodiments, haloalkyl is monofluoromethyl.
  • C 3-6 cycloalkyl refers to a C 3-6 saturated hydrocarbon ring group. For example, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, etc.
  • C 3-6 cycloalkyl is C 3-4 cycloalkyl, in some embodiments, C 3-6 cycloalkyl is cyclobutyl, and in some embodiments, C 3-6 cycloalkyl is cyclopropyl.
  • Cyclic amine refers to a non-aromatic cyclic amine having at least one nitrogen atom (N) and other elements constituting the ring being carbon atoms (C). Examples include aziridine, azetidine, pyrrolidine, piperidine, piperazine, azepane, diazepane, etc. Divalent groups include aziridinediyl, azetidinediyl, pyrrolidinediyl, piperidinediyl, piperazinediyl, azepanediyl, diazepanediyl, etc.
  • Monovalent groups include aziridinyl, azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidyl, piperazinyl, azepanyl, diazepanyl, etc.
  • it is a 4- to 6-membered cyclic amine composed of multiple C and one N.
  • it is a 4- to 6-membered cyclic amine composed of multiple C, one N, and one G, where G is N or CH.
  • it is a 5-membered cyclic amine composed of four C and one N.
  • the 6-membered cyclic amine is composed of two C, one N, two C, and one G, where G is N or CH.
  • the 6-membered cyclic amine is composed of two C, one N, two C, and one G, where G is N. In one embodiment, the 6-membered cyclic amine is composed of two C, one N, two C, and one G, where G is CH.
  • 4- to 6-membered cyclic amine refers to a cyclic amine having a 4- to 6-membered ring. Examples include azetidine, pyrrolidine, piperidine, and piperazine. Divalent groups include azetidinediyl, pyrrolidinediyl, piperidinediyl, and piperazinediyl. Monovalent groups include azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidyl, and piperazinyl.
  • the 4- to 6-membered cyclic amine is a 6-membered cyclic amine, in one embodiment, the 4- to 6-membered cyclic amine is a 5-membered cyclic amine, in one embodiment, the 4- to 6-membered cyclic amine is piperidinediyl or piperazinediyl, in one embodiment, the 4- to 6-membered cyclic amine is pyrrolidinediyl or piperazinediyl, in one embodiment, the 4- to 6-membered cyclic amine is piperidinediyl, in one embodiment, the 4- to 6-membered cyclic amine is pyrrolidinediyl, and in one embodiment, the 4- to 6-membered cyclic amine is piperidinediyl.
  • the 4- to 6-membered cyclic amine is a 4- to 6-membered cyclic amine composed of multiple carbon atoms and one nitrogen atom. In one embodiment, the 4- to 6-membered cyclic amine is a 4- to 6-membered cyclic amine composed of multiple carbon atoms, one nitrogen atom, and one G, where G is CH or N. In one embodiment, the 4- to 6-membered cyclic amine is a 5-membered cyclic amine composed of four C and one N. In one embodiment, the 4- to 6-membered cyclic amine is a 6-membered cyclic amine composed of five C and one N.
  • the 4- to 6-membered cyclic amine is a 6-membered cyclic amine composed of four C, one N, and one G, where G is CH or N. In one embodiment, the 4- to 6-membered cyclic amine is a 6-membered cyclic amine composed of four C, one N, and one G, where G is N. In one embodiment, the 4- to 6-membered cyclic amine is a 6-membered cyclic amine composed of four C, one N, and one G, where G is CH. In one embodiment, the 4- to 6-membered cyclic amine is a 6-membered cyclic amine composed of four C, one N, and one G, where G is CH or N.
  • the 4- to 6-membered cyclic amine is a 6-membered cyclic amine composed of two C, one N, two C, and one G, where G is CH or N. In one embodiment, the 4- to 6-membered cyclic amine is a 6-membered cyclic amine composed of two C, one N, two C, and one G, where G is N. In one embodiment, the 4- to 6-membered cyclic amine is a 6-membered cyclic amine composed of two C, one N, two C, and one G, where G is CH.
  • an “antibody-drug conjugate” is a conjugate in which an antibody and at least one drug are bound via a linker.
  • the antibody can transport the drug to targeted cells or tissues.
  • the antibody-drug conjugate is a conjugate in which the antibody and drug are bound via a non-cleavable linker.
  • antibody-drug conjugate containing a compound means an antibody-drug conjugate in which the antibody is bound to a compound via a linker.
  • the antibody-drug conjugate has a linker, and in another embodiment, the antibody-drug conjugate does not have a linker.
  • Linker is a chemical group that bonds an antibody and a drug, and is capable of forming at least two covalent bonds. There are non-cleavable linkers and cleavable linkers. Examples of linkers used in antibody-drug conjugates include alkylene, polyethylene glycol (PEG), and peptides, and amide groups, ether groups, carbamate groups, and the like are used to bond or combine linkers together. Examples of binding groups in linkers that are bonded to antibodies include maleimide groups, pyridyldithio groups, and isocyanate groups.
  • a “cleavable linker” is a linker that may be selectively cleaved by the acidic conditions in a lysosome or by endogenous enzymes such as specific intracellular proteases, nucleases, peptidases, etc.
  • Specific examples of such linkers include hydrazone bonds, S-S bonds, peptide bonds, ester bonds, phosphate ester bonds, ester bonds at one or both ends of phosphodiester bonds, carbamate bonds, etc.
  • Val-Cit valine citrulline
  • Val-Ala Ala-Ala
  • Ala-Ala-Ala Gly-Gly-Phe-Gly
  • Val-Cit-PABC valine citrulline-p-benzyl alcohol
  • Val-Ala-PABC or any compatible combination of these forms
  • a “drug-linker conjugate” is a compound in which a drug and a linker are covalently bonded, or a salt thereof.
  • the compound is a compound in which a linker is covalently bonded to the compound of the present invention.
  • An antibody-drug conjugate can be produced by binding a drug-linker conjugate to an antibody or its antibody-binding fragment.
  • the linker of the drug-linker conjugate is covalently bonded to the antibody.
  • the antibody-drug conjugate binds at least one drug-linker conjugate to the antibody or its antibody-binding fragment.
  • At least one drug (anticancer drug or label, etc.) linker conjugate may be further bonded to the antibody portion of the antibody-drug conjugate.
  • anticancer drugs include tubulin polymerization inhibitors such as monomethylauristatin E (MMAE) and monomethylauristatin F (MMAF), and the mitosis inhibitor mertansine (DM1).
  • labels include radioisotopes (RI-labeled antibodies).
  • TLR7/8 dual agonist means a TLR7 agonist and a TLR8 agonist.
  • the compound or its salt has an agonistic effect in which the EC 50 value for TLR7 is more than 150 nM (i.e., the EC 50 value is less than 150 nM) and the EC 50 value for TLR8 is more than 15 ⁇ M (i.e., the EC 50 value is less than 15 ⁇ M) in a reporter assay.
  • the compound or its salt has an agonistic effect in which the EC 50 value for TLR7 is more than 1 ⁇ M (i.e., the EC 50 value is less than 1 ⁇ M) and the EC 50 value for TLR8 is more than 15 ⁇ M (i.e., the EC 50 value is less than 15 ⁇ M) in a reporter assay.
  • TLR7/8 dual agonist compound means a compound or its salt that is a TLR7/8 dual agonist.
  • TLR7/8 dual inhibitor means a compound that is both a TLR7 inhibitor and a TLR8 inhibitor.
  • TLR7/8 dual inhibitor means a compound that is both a TLR7 inhibitor and a TLR8 inhibitor.
  • Enpatoran etc.
  • the antibody portion of an "antibody drug conjugate” is an antibody or antigen-binding fragment that binds to a specific antigen.
  • the basic structure of an antibody molecule is common to all classes and consists of a heavy chain with a molecular weight of 50,000 to 70,000 and a light chain with a molecular weight of 20,000 to 30,000.
  • the heavy chain is usually a polypeptide chain containing about 440 amino acids, and has a characteristic structure for each class, called Ig ⁇ , Ig ⁇ , Ig ⁇ , Ig ⁇ , and Ig ⁇ , corresponding to IgG, IgM, IgA, IgD, and IgE.
  • IgG further has subclasses, IgG1, IgG2, IgG3, and IgG4, and the corresponding heavy chains are called Ig ⁇ 1, Ig ⁇ 2, Ig ⁇ 3, and Ig ⁇ 4.
  • the light chain is usually a polypeptide chain containing about 220 amino acids, and two types, ⁇ type and ⁇ type, are known, called Ig ⁇ and Ig ⁇ , respectively.
  • the peptide structure of the basic structure of an antibody molecule is composed of two homologous heavy chains and two homologous light chains bound by disulfide bonds (SS bonds) and non-covalent bonds, with a molecular weight of 150,000 to 190,000. Two types of light chains can pair with any heavy chain. Each antibody molecule is always made up of two identical light chains and two identical heavy chains.
  • the antigen-determining site is composed of VH and VL, and the specificity of binding depends on the amino acid sequence of this site. Meanwhile, biological activities such as binding to complement and various Fc receptor expressing cells reflect the differences in the structure of the constant region of each class Ig. It is known that the variability of the light chain and heavy chain variable regions is almost limited to three small hypervariable regions present in both chains, and these regions are called complementarity determining regions (CDRs; CDR1, CDR2, and CDR3 from the N-terminus, respectively). The remaining parts of the variable regions are called framework regions (FRs) and are relatively constant.
  • CDRs complementarity determining regions
  • an "antigen-binding fragment” is a fragment that contains VH and VL of an antibody and has binding activity against an antigen.
  • representative antigen-binding fragments include single chain variable region fragments (scFv), Fab, Fab', and F(ab') 2.
  • scFv is a monovalent antibody fragment composed of VH and VL linked by a peptide linker.
  • Fab is a monovalent antibody fragment composed of a light chain and a heavy chain fragment containing VH, CH1 domain, and a part of the hinge region.
  • Fab' is a monovalent antibody fragment composed of a light chain and a heavy chain fragment containing VH, CH1 domain, and a part of the hinge region, and the part of the hinge region contains a cysteine residue that constituted the inter-heavy chain SS bond.
  • F(ab') 2 fragment is a bivalent antibody fragment in which two Fab' fragments are bound by an inter-heavy chain SS bond in the hinge region.
  • the antigen-binding fragment used in the present invention is scFv, Fab, Fab', or F(ab') 2 .
  • Post-translational modification refers to a chemical or biological modification that occurs after translation of mRNA when the antibody is expressed in a cell.
  • Chemical modifications include attachment of a chemical moiety to the amino acid backbone, chemical modifications of N- or O-linked carbohydrate chains, etc.
  • Biological modifications include post-translational modifications (e.g., attachment of a glycosylation moiety to an N- or O-linked linkage, N- or C-terminal processing, deamidation, isomerization of aspartic acid, oxidation of methionine), and addition of a methionine residue to the N-terminus by expression in a prokaryotic host cell. It is known in the art that such post-translational modifications do not affect the activity of the antibody (Anal Biochem., 2006, Vol. 348, p. 24-39).
  • Anti-TAA antibody refers to an antibody that binds to a tumor-associated antigen (TAA) expressed on the surface of a tumor cell.
  • An anti-TAA antibody is an antibody or an antigen-binding fragment thereof that can target tumor cells.
  • anti-TAA antibodies include, but are not limited to, anti-A33 antibody, anti-B7-H3 antibody, anti-CanAg antibody, anti-CD20 antibody, anti-CD22 antibody, anti-CD30 antibody, anti-CD33 antibody, anti-CD56 antibody, anti-CD70 antibody, anti-CEA antibody, anti-CLDN6 antibody, anti-EphA2 antibody, anti-G250 antibody, anti-MUC1 antibody, anti-GPNMB antibody, anti-Integrin antibody, anti-PSMA antibody, anti-Tenascin-C antibody, anti-TROP-2 antibody, and anti-TSPAN8 antibody.
  • Anti-CLDN6 antibody refers to an antibody that binds to CLDN6 or an antigen-binding fragment thereof.
  • the anti-CLDN6 antibody is an anti-CLDN6 antibody or an antigen-binding fragment thereof selected from the group consisting of the following (Ab-A) to (Ab-D).
  • the anti-CLDN6 antibody may further include a heavy chain constant region and a light chain constant region.
  • the constant region may be of any subclass (e.g., Ig ⁇ 1, Ig ⁇ 2, Ig ⁇ 3, or Ig ⁇ 4 as the heavy chain, and Ig ⁇ or Ig ⁇ as the light chain), and the heavy chain constant region may be a human Ig ⁇ 1 constant region, and the light chain constant region may be a human Ig ⁇ constant region.
  • the anti-CLDN6 antibody is Ab1 or Ab2.
  • “Ab1” is an anti-CLDN6 antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO:2 and a light chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO:4,
  • “Ab2” is an anti-CLDN6 antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO:6 and a light chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO:8.
  • the anti-CLDN6 antibody is a post-translationally modified anti-CLDN6 antibody or an antigen-binding fragment thereof.
  • the anti-CLDN6 antibody comprises a heavy chain formed by post-translational modification of a heavy chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO:2 and a light chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO:4, or an anti-CLDN6 antibody comprises a heavy chain formed by post-translational modification of a heavy chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO:6 and a light chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO:8.
  • the anti-CLDN6 antibody is a post-translationally modified Ab1 or Ab2 antibody.
  • the binding activity of an antibody to tumor cells can be confirmed using a known method for measuring binding activity.
  • Methods for measuring binding activity include known methods such as Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay (ELISA).
  • ELISA Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay
  • CLDN6 is immobilized on an ELISA plate, a test antibody is added to it and reacted, and then a secondary antibody such as an anti-IgG antibody labeled with an enzyme such as horseradish peroxidase (HRP) is reacted.
  • HRP horseradish peroxidase
  • the secondary antibody binding is identified by activity measurement using a reagent that detects the activity (for example, in the case of HRP labeling, TMB Microwell Peroxidase Substrate (Kirkegaard & Perry Laboratories, 50-76-03)), etc., and it can be confirmed whether the test antibody binds to CLDN6.
  • a reagent that detects the activity for example, in the case of HRP labeling, TMB Microwell Peroxidase Substrate (Kirkegaard & Perry Laboratories, 50-76-03)
  • formula (I) is formula (IA):
  • the antibody-drug conjugate of formula (I) is represented by formula (IA) or a salt thereof, in which SH of the antibody Ab is bound.
  • TAA anti-tumor associated antigen
  • Ab is an anti-TAA antibody or an antigen-binding fragment thereof selected from the group consisting of anti-A33 antibody, anti-B7-H3 antibody, anti-CanAg antibody, anti-CD20 antibody, anti-CD22 antibody, anti-CD30 antibody, anti-CD33 antibody
  • the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof, wherein Ab is an anti-CLDN6 antibody or an antigen-binding fragment thereof.
  • the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof, wherein Ab is an anti-CLDN6 antibody or an antigen-binding fragment thereof selected from the group consisting of the following (Ab-A) to (Ab-D): (Ab-A) an anti-CLDN6 antibody or an antigen-binding fragment thereof comprising a heavy chain variable region comprising CDR1 consisting of the amino acid sequence of amino acid numbers 31 to 35 of SEQ ID NO: 2, CDR2 consisting of the amino acid sequence of amino acid numbers 50 to 65 of SEQ ID NO: 2, and CDR3 consisting of the amino acid sequence of amino acid numbers 95 to 102 of SEQ ID NO: 2, and a light chain variable region comprising CDR1 consisting of the amino acid sequence of amino acid numbers 24 to 34 of SEQ ID NO: 4, CDR2 consisting of the amino acid sequence of
  • the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof, wherein Ab is an anti-CLDN6 antibody of (Ab-A) or an antigen-binding fragment thereof. In one embodiment, the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof, wherein Ab is an anti-CLDN6 antibody of (Ab-B) or an antigen-binding fragment thereof. In one embodiment, the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof, wherein Ab is an anti-CLDN6 antibody of (Ab-C) or an antigen-binding fragment thereof.
  • the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof, wherein Ab is an anti-CLDN6 antibody of (Ab-D) or an antigen-binding fragment thereof.
  • the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof, wherein Ab is an anti-CLDN6 antibody or an antigen-binding fragment thereof selected from the group consisting of Ab-A and Ab-B, or an antigen-binding fragment thereof.
  • the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof wherein Ab is an anti-CLDN6 antibody selected from the following Ab1 and Ab2: (Ab1) an anti-CLDN6 antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 and a light chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4; and (Ab2) an anti-CLDN6 antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6 and a light chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8.
  • Ab1 and Ab2 Ab1 an anti-CLDN6 antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 and a light chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4
  • Ab2 an anti-CLDN6 antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6 and a light chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8.
  • the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof, wherein Ab is the anti-CLDN6 antibody Ab2.
  • the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof, wherein Ab is an anti-CLDN6 antibody that is post-translationally modified Ab1 or Ab2.
  • the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof wherein Ab is an anti-CLDN6 antibody comprising a heavy chain generated by post-translational modification of a heavy chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 and a light chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, or an anti-CLDN6 antibody comprising a heavy chain generated by post-translational modification of a heavy chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6 and a light chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8.
  • R 4 is a group represented by formula (a), formula (b), or formula (c). In one embodiment, the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof, wherein R 4 is a group represented by formula (a) or formula (b). In one embodiment, the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof, wherein R 4 is a group represented by formula (b) or formula (c).
  • the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof, wherein R 4 is a group represented by formula (c) or formula (a). In one embodiment, the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof, wherein R 4 is a group represented by formula (a). In one embodiment, the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof, wherein R 4 is a group represented by formula (b). In one embodiment, the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof, wherein R 4 is a group represented by formula (c).
  • an antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof, wherein RB is haloalkyl or H, where when RB is H, G is N.
  • an antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof, wherein RB is haloalkyl.
  • an antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof, wherein RB is fluoromethyl.
  • an antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof, wherein RB is monofluoromethyl. (13)
  • the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof, wherein R C is C3-6 cycloalkyl.
  • the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof, wherein R C is -CH2 - C3-6 cycloalkyl. In one embodiment, the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof, wherein R C is cyclopropyl. In one embodiment, the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof, wherein R C is -CH2 -cyclobutyl.
  • the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof wherein L is a non-cleavable linker.
  • an antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof wherein n is 1 to 8.
  • An antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof which is a combination of two or more of the above embodiments (1) to (16), which are embodiments of the antibody-drug conjugate or a salt thereof, an antibody embodiment (2) which is an embodiment in which an antibody of the antibody-drug conjugate or a salt thereof is selected, a drug embodiment (3) to (13) which is an embodiment in which a drug of the antibody-drug conjugate or a salt thereof is selected, and a linker embodiment (14) and (15) which are embodiments in which a linker of the antibody-drug conjugate or a salt thereof is selected.
  • Ab is an anti-TAA antibody or an antigen-binding fragment thereof, such as anti-A33 antibody, anti-B7-H3 antibody, anti-CanAg antibody, anti-CD20 antibody, anti-CD22 antibody, anti-CD30 antibody, anti-CD33 antibody, anti-CD56 antibody, anti-CD70 antibody, anti-CEA antibody, anti-CLDN6 antibody, anti-EphA2 antibody, anti-G250 antibody, anti-MUC1 antibody, anti-GPNMB antibody, anti-Integrin antibody, anti-PSMA antibody, anti-Tenascin-C antibody, anti-TROP-2 antibody, or anti-TSPAN8 antibody,
  • X is S or NH
  • R 1 is lower alkyl or -CH 2 -isoxazolediyl-CH 3 (wherein X is S when R 1 is -CH 2 -isoxazolediyl-CH 3 ), R 2 is halogen or H
  • R 3 is CH 3
  • Ab1a An anti-CLDN6 antibody, wherein Ab is selected from the following Ab1 and Ab2: (Ab1) an anti-CLDN6 antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO:2 and a light chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO:4, and (Ab2) an anti-CLDN6 antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO:6 and a light chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO:8, wherein X is NH, R1 is lower alkyl, R2 is H, R3 is H, R4 is formula (a), formula (b), or formula (c), ring A is a 5-membered cyclic amine consisting of four Cs and one N, ring B is a 6-membered cyclic amine consisting of two Cs, one N, two Cs, and one G, G is N, RA is -CH2 -O-, RB is haloalkyl, Rc is C
  • the antibody-drug conjugate an antibody-drug conjugate in which an Ab is bound to 1- ⁇ 3-[(3S)-4-[(4- ⁇ [2-amino-4-(pentylamino)-5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-5-yl]methyl ⁇ -3-methoxyphenyl)methyl]-3-(fluoromethyl)piperazin-1-yl]-3-oxopropyl ⁇ -1H-pyrrole-2,5-dione; an antibody-drug conjugate comprising an Ab bound to ⁇ (2S)-1-[(4- ⁇ [2-amino-7-chloro-4-(pentylamino)-5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-5-yl]methyl ⁇ -3-methoxyphenyl)methyl]pyrrolidin-2-yl ⁇ methyl [2-(2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl)ethyl]carbamate;
  • Ab-A comprises a heavy chain variable region including CDR1 having the amino acid sequence of amino acid numbers 31 to 35 of SEQ ID NO: 2, CDR2 having the amino acid sequence of amino acid numbers 50 to 65 of SEQ ID NO: 2, and CDR3 having the amino acid sequence of amino acid numbers 95 to 102 of SEQ ID NO: 2, and a light chain variable region including CDR1 having the amino acid sequence of amino acid numbers 24 to 34 of SEQ ID NO: 4, CDR2 having the amino acid sequence of amino acid numbers 50 to 56 of SEQ ID NO: 4, and CDR3 having the amino acid sequence of amino acid numbers 89 to 97 of SEQ ID NO: 4.
  • Ab-B comprises a heavy chain variable region comprising CDR1 consisting of the amino acid sequence of amino acid numbers 31 to 35 of SEQ ID NO: 6, CDR2 consisting of the amino acid sequence of amino acid numbers 50 to 65 of SEQ ID NO: 6, and CDR3 consisting of the amino acid sequence of amino acid numbers 95 to 102 of SEQ ID NO: 6, and a light chain variable region comprising CDR1 consisting of the amino acid sequence of amino acid numbers 24 to 34 of SEQ ID NO: 8, CDR2 consisting of the amino acid sequence of amino acid numbers 50 to 56 of SEQ ID NO: 8, and CDR3 consisting of the amino acid sequence of amino acid numbers 89 to 97 of SEQ ID NO: 8;
  • the antibody-drug conjugate or a salt thereof according to [12], [14]
  • the antibody-drug conjugate or a salt thereof according to [12], [15] The antibody-drug conjugate or salt thereof according to [12], wherein Ab is an anti-CLDN6 antibody or an antigen-binding fragment thereof selected from the group consisting of Ab1 and Ab2; Ab1 is an anti-CLDN6 antibody comprising a heavy chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 and a light chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4; and Ab2 is an anti-CLDN6 antibody comprising a heavy chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6 and a light chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8.
  • An antibody-drug conjugate or a salt thereof according to formula (I), in which Ab is an anti-CLDN6 antibody Ab1, X is NH, R1 is lower alkyl, R2 is halogen, R3 is H, R4 is formula (a), ring A is a 5-membered cyclic amine composed of four Cs and one N, R A is -CH 2 -O-, and L is -C( O)NHCH 2 CH 2 -.
  • antibody-drug conjugate or a salt thereof included in the present invention include the following.
  • antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof included in the present invention include the following.
  • Ab1 is an antibody comprising a heavy chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO:2 and a light chain having the amino acid sequence of SEQ ID NO:4;
  • Ab2 is an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO:6 and a light chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO:8.
  • n is 1 to 16. In one embodiment, n is 2 to 5.
  • a compound of formula (II) or a salt thereof, in which R2 is Br or H. In one embodiment, a compound of formula (II) or a salt thereof, in which R2 is Cl or H. In one embodiment, a compound of formula (II) or a salt thereof, in which R2 is H. (C4) In one embodiment, a compound of formula (II) or a salt thereof, in which R3 is CH3 . In one embodiment, a compound of formula (II) or a salt thereof, in which R3 is H.
  • R 40 is a group represented by formula (a1), formula (b1), or formula (c1): In one embodiment, a compound of formula (II) or a salt thereof, wherein R 40 is a group represented by formula (a1) or formula (b1). In one embodiment, a compound of formula (II) or a salt thereof, wherein R 40 is a group represented by formula (a1). In one embodiment, a compound of formula (II) or a salt thereof, wherein R 40 is a group represented by formula (b1). In one embodiment, a compound of formula (II) or a salt thereof, wherein R 40 is a group represented by formula (c1).
  • C7 a compound of formula (II) or a salt thereof, in which ring B is a 6-membered cyclic amine composed of 4 C, 1 N, and 1 G, and G is N.
  • a compound of formula (II) or a salt thereof, in which ring B is a 6-membered cyclic amine composed of 2 C, 1 N, 2 C, and 1 G, and G is N or CH.
  • a compound of formula (II) or a salt thereof, in which ring B is a 6-membered cyclic amine composed of 2 C, 1 N, 2 C, and 1 G, and G is N.
  • C8 a compound of formula (II) or a salt thereof, in which G is N.
  • C9 a compound of the formula (II) or a salt thereof, in which R A is -CH 2 O- or -C(CH 3 ) 2 O-.
  • a compound of formula (II) or a salt thereof, wherein RB is haloalkyl, CH2OH , or C( CH3 ) 2OH .
  • a compound of formula (II) or a salt thereof, wherein RB is haloalkyl or H, where when RB is H, G is CH.
  • a compound of formula (II) or a salt thereof, wherein RB is haloalkyl.
  • a compound of formula (II) or a salt thereof, wherein RB is monofluoromethyl.
  • a compound of formula (II) or a salt thereof, wherein R C is C3-6cycloalkyl .
  • a compound of formula (II) or a salt thereof, wherein R C is -CH2 - C3-6cycloalkyl .
  • a compound of formula (II) or a salt thereof, wherein R C is cyclopropyl.
  • a compound of formula (II) or a salt thereof, wherein R C is -CH2 -cyclobutyl.
  • the compound of formula (II) or a salt thereof, wherein M is H.
  • M is a compound of formula (d): or a salt thereof.
  • (C15) A compound of formula (II) or a salt thereof for producing an antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof.
  • (C16) A compound of the formula (II) or a salt thereof, which is a non-consistent combination of two or more of the groups described in (C1) to (C15) above.
  • X is S or NH
  • R1 is lower alkyl or -CH2 -isoxazolediyl- CH3 , where when R1 is -CH2 -isoxazolediyl- CH3 , X is S, R2 is halogen or H, R3 is CH3 or H
  • R40 is a group represented by formula (a1), formula (b1), or formula (c1)
  • ring A is a 5-membered cyclic amine composed of four C and one N
  • ring B is a 6-membered cyclic amine composed of four C, one N and one G
  • G is N or CH
  • R A is -CH2O- , -C( CH3 ) 2O- , -O-, or -CH2NH- , where when R A is -O- or -CH2NH- , X is S, R2 is halogen or R3 is CH3 , and
  • [C1a] A compound of formula (II) or a salt thereof, in which ring A is a 5-membered cyclic amine composed of four Cs and one N, ring B is a 6-membered cyclic amine composed of two Cs, one N, two Cs, and one G, and G is N.
  • [C2] A compound of the formula (II) according to [C1] or [C1a] or a salt thereof, wherein RA is -CH2O- or -C( CH3 ) 2O- , and RB is haloalkyl, CH2OH or C( CH3 ) 2OH .
  • a compound of formula (II) or a salt thereof, in which X is NH, R1 is lower alkyl, R2 is halogen, R3 is H, R40 is formula (a1), ring A is a 5-membered cyclic amine composed of 4 C and 1 N, R A is -CH 2 O-, and L D is -C( O)NHCH 2 CH 2 -.
  • a compound of formula (II) or a salt thereof, in which X is NH, R1 is lower alkyl , R2 is H, R3 is H, R40 is formula (c), Rc is C3-6 cycloalkyl, and L D is -C( O) CH2CH2- .
  • X is NH
  • R 1 is lower alkyl
  • R 2 is Cl or H
  • R 3 is H
  • R 40 is formula (a1), formula (b1), or formula (c1)
  • ring A is a 5-membered cyclic amine composed of four C and one N
  • ring B is a 6-membered cyclic amine composed of four C, one N and one G
  • G is N
  • RA is -CH 2 O-
  • RB is haloalkyl
  • Rc is C 3-6 cycloalkyl
  • M is a group represented by formula (d)
  • RA is -CH 2
  • the compounds of formula (II) according to (C16) or salts thereof in which M is H included in the present invention include the following. 5-[(4- ⁇ [(2S)-2-(fluoromethyl)piperazin-1-yl]methyl ⁇ -2-methoxyphenyl)methyl]-N 4 -pentyl-5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidine-2,4-diamine, 5-[(4- ⁇ [(3R)-3-(fluoromethyl)piperazin-1-yl]methyl ⁇ -2-methoxyphenyl)methyl]-N 4 -pentyl-5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidine-2,4-diamine(trifluoroacetic acid) salt; 5-( ⁇ 4-[(cyclopropylamino)methyl]-2-methoxyphenyl ⁇ methyl)-N 4 -pentyl-5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidine-2,4-diamine, (2S)-1-[(4- ⁇ [
  • the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof can be provided by combining a compound of formula (II) or a salt thereof, any anti-TAA antibody, and any non-cleavable linker.
  • the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof, and the compound of formula (II) or a salt thereof may have tautomers or geometric isomers depending on the type of substituent.
  • the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof may be described in only one form of isomer, but the present invention also includes other isomers, and also includes separated isomers or mixtures thereof.
  • the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof, and the compound of formula (II) or a salt thereof may have an asymmetric center or axial asymmetry, and enantiomers (optical isomers) based on this may exist.
  • the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof includes both isolated individual enantiomers such as the (R) form and the (S) form, and mixtures thereof (including racemic and non-racemic mixtures).
  • the enantiomer is "stereochemically pure.” “Stereochemically pure” refers to a purity that can be recognized by a person skilled in the art as being substantially stereochemically pure.
  • the enantiomer is a compound having a stereochemical purity of, for example, 90% ee (enantiomeric excess) or more, 95% ee or more, 98% ee or more, or 99% ee or more.
  • the salt of the antibody-drug conjugate of formula (I) and the salt of the compound of formula (II) are pharma- ceutically acceptable salts of the antibody-drug conjugate of formula (I), and may form acid addition salts depending on the type of substituent.
  • Specific examples include acid addition salts with inorganic acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, sulfuric acid, nitric acid, and phosphoric acid, and acid addition salts with organic acids such as formic acid, acetic acid, propionic acid, oxalic acid, malonic acid, succinic acid, fumaric acid, maleic acid, lactic acid, malic acid, mandelic acid, tartaric acid, dibenzoyltartaric acid, ditoluoyltartaric acid, citric acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, aspartic acid, and glutamic acid.
  • inorganic acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, sulfuric acid, nitric acid, and phosphoric acid
  • organic acids such as formic acid, acetic acid, propionic acid,
  • the present invention also includes various hydrates and solvates of the antibody-drug conjugate of formula (I) and its salts, and the compound of formula (II) and its salts, as well as crystalline polymorphic substances.
  • the present invention also encompasses all of the antibody-drug conjugates of formula (I) or salts thereof, and compounds of formula (II) or salts thereof, labeled with one or more pharma- ceutically acceptable radioactive or non-radioactive isotopes.
  • hydrogen e.g., 2H and 3H
  • carbon e.g., 11C , 13C and 14C
  • nitrogen e.g., 13N and 15N
  • oxygen e.g., 15O , 17O and 18O
  • fluorine e.g., 18F
  • chlorine e.g., 36Cl
  • Isotopically labeled compounds of the present invention, drugs, and/or substrates may be used in tissue distribution studies and other studies.
  • radioisotopes such as tritium ( 3H ) and carbon-14 ( 14C ) may be used for this purpose due to their ease of labeling and ease of detection.
  • Substitution with heavier isotopes, for example, substitution of hydrogen with deuterium ( 2H ), may be therapeutically advantageous due to increased metabolic stability (e.g., increased in vivo half-life, reduced dosage requirements, reduced drug interactions).
  • Substitution with positron-emitting isotopes (such as 11C , 18F , 15O , and 13N ) may be used in positron emission tomography (PET) studies to examine substrate receptor occupancy.
  • PET positron emission tomography
  • Isotopically labeled compounds of the present invention can generally be prepared by conventional methods known to those skilled in the art, or by a similar method to that described in the Examples or Preparations, using appropriate isotopically labeled reagents instead of unlabeled reagents.
  • An anti-CLDN6 antibody or antigen-binding fragment thereof comprising a heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence of amino acid numbers 1 to 117 of SEQ ID NO: 2 and a light chain variable region consisting of amino acid numbers 1 to 108 of SEQ ID NO: 4, or an anti-CLDN6 antibody or antigen-binding fragment thereof comprising a heavy chain variable region consisting of the amino acid sequence of amino acid numbers 1 to 117 of SEQ ID NO: 6 and a light chain variable region consisting of amino acid numbers 1 to 108 of SEQ ID NO: 8.
  • AB2 An anti-CLDN6 antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 and a light chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, or an anti-CLDN6 antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6 and a light chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8.
  • AB3 An anti-CLDN6 antibody according to (AB2) that has been post-translationally modified.
  • an anti-CLDN6 antibody comprising a heavy chain formed by post-translational modification of a heavy chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 and a light chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, or an anti-CLDN6 antibody comprising a heavy chain formed by post-translational modification of a heavy chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6 and a light chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8.
  • An antibody-drug conjugate comprising an anti-CLDN6 antibody or an antigen-binding fragment thereof according to any one of (AB1) to (AB4).
  • drugs and linkers known in the art may be used.
  • the antibody-drug conjugate of formula (I) and its salt, and the compound of formula (II) or its salt can be produced by applying various known synthesis methods utilizing the characteristics based on the basic structure or the type of substituent.
  • it may be effective in terms of production technology to replace the functional group with an appropriate protecting group (a group that can be easily converted to the functional group) at the stage from the raw material to the intermediate.
  • protecting groups include those described in "Greene's Protective Groups in Organic Synthesis (4th Edition, 2006)" by P. G. M. Wuts and T. W. Greene, and may be appropriately selected and used depending on the reaction conditions.
  • the desired compound can be obtained by introducing the protecting group, carrying out the reaction, and then removing the protecting group as necessary.
  • the antibody-drug conjugate encompassed by the present invention can be prepared by the following method.
  • Ab represents an antibody or an antigen-binding fragment thereof.
  • the antibody-drug conjugate (I) of the present invention can be produced by a Michael addition reaction between an antibody or an antigen-binding fragment thereof (1) and a compound (II-L) of the present invention.
  • the antibody-drug conjugate (I) of the present invention can be produced by reducing the disulfide bond between the L chain and the H chain and/or the disulfide bond in the hinge region of the antibody or the antigen-binding fragment thereof (1), and then subjecting the resulting thiol moiety to a Michael addition reaction with a compound (II-L).
  • the antibody is incubated in a neutral to acidic buffer in the presence of a reducing agent at 20 to 37°C for 1 to 24 hours, and then the compound (II-L) is added and incubated.
  • a solution containing a phosphate buffer is used as the solution.
  • disodium hydrogen phosphate is used as the phosphate buffer.
  • a PBS6.2/EDTA solution is used.
  • TCEP is used as the reducing agent.
  • the drug-linker conjugate can be prepared by the following process: A drug-linker conjugate (i.e., a compound of formula (II) in which M is a group represented by formula (d)) is used to prepare an antibody-drug conjugate of formula (I).
  • a drug-linker conjugate i.e., a compound of formula (II) in which M is a group represented by formula (d)
  • R41 is a group in which M in R40 is H.
  • R41' is a divalent group in which the H of M in R40 is substituted.
  • the compound (II-La) of the present invention can be produced by an amidation reaction between the compound (II-1) and the compound (La).
  • the compound (II-1) of the present invention and the compound (La) are used in equal amounts or in excess of one of them, and the mixture is stirred in the presence of a condensing agent in a solvent inert to the reaction under cooling to heating, in one embodiment at -20°C to 60°C, usually for 0.1 hours to 5 days.
  • the solvent examples include aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene, or xylene, halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, 1,2-dichloroethane, or chloroform, ethers such as diethyl ether, THF, 1,4-dioxane, or dimethoxyethane, DMF, DMSO, EtOAc, MeCN, or water, and mixtures thereof.
  • condensing agent examples include, but are not limited to, HATU, 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide, dicyclohexylcarbodiimide, 1,1'-carbonyldiimidazole, diphenylphosphoryl azide, and phosphorus oxychloride.
  • an additive e.g., 1-hydroxybenzotriazole
  • an organic base such as triethylamine, DIPEA, or N-methylmorpholine
  • an inorganic base such as potassium carbonate, sodium carbonate, or potassium hydroxide
  • a method of converting carboxylic acid (La) into a reactive derivative and then reacting it with the amine of compound (II-1) can also be used.
  • reactive derivatives of carboxylic acid include acid halides obtained by reacting with halogenating agents such as phosphorus oxychloride and thionyl chloride, mixed acid anhydrides obtained by reacting with isobutyl chloroformate, and active esters obtained by condensing with 1-hydroxybenzotriazole.
  • the reaction of these reactive derivatives with compound (II-1) can be carried out in a solvent inert to the reaction such as halogenated hydrocarbons, aromatic hydrocarbons, and ethers, under cooling to heating, preferably at -20°C to 60°C.
  • the compound (II-Lb) of the present invention is a compound of the compound (II) of the present invention in which L is -CH2 - L2 .
  • the compound (II-Lb) of the present invention can be produced by a reductive amination reaction between the compound (II-1) of the present invention and the compound (Lb).
  • compound (II-1) and compound (Lb) are used in equal amounts or in excess of one of them, and the mixture is stirred in the presence of a reducing agent in a solvent inert to the reaction at -45°C to reflux, preferably at 0°C to room temperature, usually for 0.1 hours to 5 days.
  • a reducing agent in a solvent inert to the reaction at -45°C to reflux, preferably at 0°C to room temperature, usually for 0.1 hours to 5 days.
  • the solvent include, but are not limited to, alcohols such as methanol and ethanol, ethers such as diethyl ether, THF, 1,4-dioxane, dimethoxyethane, and mixtures thereof.
  • the reducing agent include sodium cyanide borohydride, sodium triacetoxyborohydride, sodium borohydride, and the like.
  • an imine may be produced by condensation of compound (II-1) and compound (Lb), and may be isolated as a stable intermediate. In such a case, compound (II-Lb) can be produced by reduction of this imine intermediate.
  • the reaction can also be carried out using a reducing catalyst (e.g., palladium on carbon, Raney nickel, etc.) in a solvent such as methanol, ethanol, EtOAc, etc., in the presence or absence of an acid such as acetic acid, hydrochloric acid, etc.
  • a reducing catalyst e.g., palladium on carbon, Raney nickel, etc.
  • a solvent such as methanol, ethanol, EtOAc, etc.
  • an acid such as acetic acid, hydrochloric acid, etc.
  • the reaction is preferably carried out under a hydrogen atmosphere at normal pressure to 50 atm, under cooling to heating.
  • R42 is a group obtained by removing -CH2- from the group represented by formula (a1), formula (b1), or formula (c1) in R40 , and M is a bond.
  • G is N.
  • R42' is a divalent group obtained by removing H from NH in R42 .
  • Hal is a leaving group.
  • Pr1 is a protecting group and Pr2 is H, or Pr1 and Pr2 together represent a protecting group.
  • the compound (II-Lc) of the present invention can be produced by deprotecting the compound (II-Lc-Pr) produced by the reaction of compound (2) with compound (Lc-Pr) to obtain compound (II-Lc-NH2), which is then subjected to a cyclization reaction.
  • the leaving group include halogen, methanesulfonyloxy, and p-toluenesulfonyloxy groups.
  • Examples of the protecting group Pr1 include tert-butoxycarbonyl, and examples of Pr1 and Pr2 that are united include phthalimide.
  • compound (2) and compound (Lc-Pr) are used in equal amounts or in excess of one of them, and the mixture is stirred in a solvent inert to the reaction or without a solvent, under cooling to heating under reflux, preferably at 0°C to 80°C, for usually 0.1 hours to 5 days.
  • the solvent examples include aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene, and xylene, ethers such as diethyl ether, THF, 1,4-dioxane, and dimethoxyethane, halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, 1,2-dichloroethane, and chloroform, DMF, DMSO, EtOAc, MeCN, and mixtures thereof.
  • aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene, and xylene
  • ethers such as diethyl ether, THF, 1,4-dioxane, and dimethoxyethane
  • halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, 1,2-dichloroethane, and chloroform
  • DMF dimethyl methoxyethane
  • DMSO 1,2-dichloroethane
  • EtOAc 1,2-dichloroethane
  • MeCN MeCN
  • an organic base such as tri
  • the solvent examples include aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene, and xylene, ethers such as diethyl ether, THF, 1,4-dioxane, and dimethoxyethane, and DMF, and an aqueous solution of sodium bicarbonate can be used as the base.
  • the drug ie, the compound of formula (II) where M is H
  • the compound (II) of the present invention can be produced by the reaction of compound (3) with compound (4).
  • the compound (3) and compound (4) are used in equal amounts or in an excess amount of either one, and the mixture is stirred in a solvent inert to the reaction or without a solvent, under cooling to reflux, under microwave irradiation, at 0°C to 100°C, usually for 0.1 hours to 5 days.
  • the solvent examples include aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene, and xylene, ethers such as diethyl ether, THF, 1,4-dioxane, and dimethoxyethane, halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, 1,2-dichloroethane, and chloroform, DMF, DMSO, EtOAc, MeCN, and mixtures thereof.
  • aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene, and xylene
  • ethers such as diethyl ether, THF, 1,4-dioxane, and dimethoxyethane
  • halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, 1,2-dichloroethane, and chloroform
  • DMF dimethyl methoxyethane
  • DMSO 1,2-dichloroethane
  • EtOAc 1,2-dichloroethane
  • MeCN MeCN
  • an organic base such as tri
  • reaction may be carried out using R 40 having a protecting group bonded thereto instead of R 40 itself, and the protecting group may then be deprotected at the end.
  • R 43 represents a group in R 40 of formula (a1), formula (b1), or formula (c1) excluding —CH 2 —, G is N, and M is a protecting group or H.
  • the compound (II-1) of the present invention can be produced by subjecting a compound (6), which is obtained by an oxidation reaction of a compound (5), to a reductive amination reaction with a compound (7).
  • compound (5) is treated with an equivalent or excess amount of an oxidizing agent in a solvent inert to the reaction under cooling to heating, preferably at -20°C to 80°C, usually for 0.1 hours to 3 days.
  • solvent used here examples include, but are not limited to, ethers such as diethyl ether, THF, 1,4-dioxane, and dimethoxyethane, halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, 1,2-dichloroethane, and chloroform, aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene, and xylene, DMF, DMSO, EtOAc, water, and mixtures thereof.
  • ethers such as diethyl ether, THF, 1,4-dioxane, and dimethoxyethane
  • halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, 1,2-dichloroethane, and chloroform
  • aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene, and xylene
  • DMF DMF
  • DMSO DMSO
  • EtOAc EtOAc
  • water and mixtures thereof.
  • Suitable oxidizing agents include, for example, hydrogen peroxide, cumene hydroperoxide, peracetic acid, perbenzoic acid, m-chloroperbenzoic acid, oxone, activated manganese dioxide, chromic acid, potassium permanganate, and sodium periodate.
  • DMSO oxidation such as Swern oxidation or oxidation using a Dess-Martin reagent is suitable.
  • the compound in the reductive amination reaction for producing the compound (II-1) of the present invention from the compound (6) and the compound (7), the compound can be produced by the same method as that used for producing the compound (II-Lb) of the present invention from the compound (II-1) and the compound (Lb) described in (Second drug-linker complex production method).
  • R 43 in HR 43 of compound (7) may have a protecting group, and in that case, the compound (II-1) of the present invention can be produced by finally deprotecting it. The deprotection can be carried out under conditions that are usually used.
  • ring B' is a 4- to 6-membered cyclic amine composed of multiple Cs, one N, and one G, G is C, and has one unsaturated bond.
  • Ring B" is a saturated ring in which one unsaturated bond of ring B' has been reduced, and G is CH. Pr represents a protecting group.
  • the compound (II-2) of the present invention can be produced by subjecting compound (2) obtained from compound (5) to Suzuki-Miyaura coupling reaction with compound (8), followed by hydrogenation and deprotection.
  • Compound (2) can be produced by halogenating compound (5).
  • This halogenation reaction can be carried out under conditions commonly used for halogenation, in which a halogenating agent is added to a solution of dichloromethane or the like under ice cooling, and the mixture is stirred at room temperature for 1 to 4 hours. Thionyl chloride or the like is used as the halogenating agent.
  • the B(OH) 2 group which is the boronic acid group of compound (8)
  • the B(OH) 2 group may be a boronic acid ester group, a boronic acid pinacol ester group, a triol borate base, or a trifluoroborate base.
  • compound (2) and compound (8) are used in equal amounts or one in excess, and a mixture of these is stirred in a reaction-inert solvent in the presence of a base and a palladium catalyst at room temperature to reflux, preferably at 20°C to 140°C, usually for 0.1 hours to 5 days.
  • the solvent examples include halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, 1,2-dichloroethane, chloroform, etc., aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene, xylene, etc., ethers such as diethyl ether, THF, 1,4-dioxane, dimethoxyethane, etc., alcohols such as MeOH, EtOH, isopropyl alcohol, butanol, amyl alcohol, etc., DMF, DMSO, MeCN, 1,3-dimethylimidazolidin-2-one, water, and mixtures thereof.
  • halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, 1,2-dichloroethane, chloroform, etc.
  • aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene, xylene, etc.
  • ethers such as diethyl ether, THF, 1,4-dioxane, dimethoxyethane, etc
  • Examples of the base include inorganic bases such as tripotassium phosphate, sodium carbonate, potassium carbonate, sodium hydroxide, barium hydroxide, etc.
  • Examples of the palladium catalyst include tetrakis(triphenylphosphine)palladium, bis(triphenylphosphine)palladium(II) dichloride, [1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene]palladium(II) dichloride-dichloromethane adduct, (1E,4E)-1,5-diphenylpenta-1,4-dien-3-one/palladium (3:2), (2-dicyclohexylphosphino-2',6'-diisopropoxy-1,1'-biphenyl)[2-(2'-amino-1,1'-biphenyl)]palladium(II) methanesulfonate, and palladium(II) acetate
  • a ligand such as dicyclohexyl(2',6'-dimethoxybiphenyl-2-yl)phosphine, dicyclohexyl(2',6'-diisopropoxy-[1,1'-biphenyl]-2-yl)phosphine, 1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene, etc.
  • the hydrogenation reaction of the compound obtained in the reaction of step 1) of compound (2) is carried out by stirring the compound in a hydrogen atmosphere in a solvent inert to the reaction in the presence of a metal catalyst for usually 1 hour to 5 days. This reaction is usually carried out under cooling to heating, preferably at room temperature.
  • the solvent include, but are not limited to, alcohols such as methanol, ethanol, and 2-propanol, ethers such as diethyl ether, THF, 1,4-dioxane, and dimethoxyethane, water, EtOAc, DMF, DMSO, and mixtures thereof.
  • palladium catalysts such as palladium carbon, palladium black, and palladium hydroxide
  • platinum catalysts such as platinum plate and platinum oxide
  • nickel catalysts such as reduced nickel and Raney nickel
  • rhodium catalysts such as tetrakistriphenylphosphine chlororhodium
  • iron catalysts such as reduced iron
  • formic acid or ammonium formate in an amount equal to or in excess of the compound can also be used as a hydrogen source.
  • Raw material synthesis 1 (In the formula, Lv represents a leaving group.)
  • Compound (3) can be produced from compound (9) and compound (10).
  • the leaving group include halogen, methanesulfonyloxy, p-toluenesulfonyloxy, etc.
  • the same conditions as those for the alkylation reaction in producing compound (II-Lc-Pr) from compound (2) and compound (Lc-Pr) described in (Drug-Linker Complex Production Method 3) can be used.
  • Compound (5) can be produced by subjecting compound (11) produced from compound (3-1) and compound (4) to a reduction reaction.
  • Compound (3-1) can be produced in the same manner as in the above-mentioned Raw Material Synthesis 1.
  • a compound in which R 40 of compound (10) is COOPr3 is used.
  • the substitution reaction of compound (3-1) and compound (4) to compound (11) can be carried out under the same conditions as those for producing compound (II) of the present invention from compound (3) and compound (4) described in (Drug Production Method 1).
  • the reaction conditions for reducing an ester to an alcohol can be used.
  • compound (11) is treated with an equivalent or excess amount of a reducing agent under cooling to heating, preferably at -20°C to 80°C, usually for 0.1 hours to 3 days.
  • a solvent used here include, but are not limited to, ethers such as diethyl ether, THF, 1,4-dioxane, and dimethoxyethane; alcohols such as methanol, ethanol, and 2-propanol; aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene, and xylene; DMF, DMSO, EtOAc, and mixtures thereof.
  • hydride reducing agents such as LAH, sodium borohydride, and diisobutylaluminum hydride; metal reducing agents such as sodium, zinc, and iron; and other reducing agents described in the following literature are preferably used.
  • the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof, and the compound of formula (II) or a salt thereof are isolated and purified as a free compound, a salt thereof, a hydrate, a solvate, or a crystalline polymorphic substance.
  • the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof, and the compound of formula (II) or a salt thereof can also be produced by subjecting them to a conventional salt-forming reaction. Isolation and purification are carried out by applying extraction, fractional crystallization, various fractionation chromatographies (silica gel chromatography, gel filtration, affinity chromatography, etc.), and conventional operations.
  • optical isomers can be produced by selecting appropriate starting compounds, or can be separated by utilizing the difference in physicochemical properties between isomers.
  • optical isomers can be obtained by a general optical resolution method of a racemate (e.g., fractional crystallization leading to a diastereomeric salt with an optically active base or acid, chromatography using a chiral column, etc.), or can be produced from an appropriate optically active starting compound.
  • Ex Examples (ExL1A1, ExL1A2, ExL5A1, and ExL7A1 are antibody-drug conjugates of examples. However, ExL1-Isotype, ExL5-Isotype, and ExL7-Isotype with -Isotope are antibody-drug conjugates as comparative examples).
  • Ab0 An antibody consisting of a heavy chain aCLDN6-VH-CH1-CH2-CH3 and a light chain aCLDN6-VL-CL described in International Publication No.
  • Ab1 An antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 and a light chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4
  • Ab2 An antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6 and a light chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8.
  • Test Example 1 TLR7/8 reporter assay (1. Obtaining cell lines) HEK293 cells (ATCC, #CRL-1573) were co-transfected with an expression vector carrying a base sequence encoding a TLR (human TLR7, human TLR8, or mouse TLR7) protein and a Nanoluc PEST luciferase reporter vector carrying an NF ⁇ B response element sequence (Genbank: JQ513377 bases 33 to 84).
  • the transfected cells were then cultured in DMEM (Sigma-Aldrich, #D5796-500 mL) containing 800 ⁇ g/mL Geneticin (Gibco, #10131-027), 500 ⁇ g/mL Hygromycin B (Invitrogen, #10687010), 1% penicillin-streptomycin (Gibco, #15070-063), and 10% fetal bovine serum (FBS) (HyClone, #SH30084.03) to obtain stable cell lines.
  • DMEM Sigma-Aldrich, #D5796-500 mL
  • Geneticin Gabco, #10131-027
  • Hygromycin B Invitrogen, #1068701010
  • penicillin-streptomycin Gibco, #15070-063
  • FBS fetal bovine serum
  • DMEM containing 10% FBS was added to the reporter cells, and a suspension of 1 x 105 cells/mL was prepared. 20 ⁇ L was added per well to a 384-well white collagen I-coated plate (hereinafter referred to as "384-well plate", Corning, #356703). The cells were allowed to adhere to the plate by overnight (18 hours) culture at 37°C and 5% CO2 . The test samples were dissolved in DMSO, diluted with DMEM medium containing 10% FBS to a concentration 5 times the final concentration, and added to the 384-well plate at 5 ⁇ L/well.
  • Test Example 2 Evaluation of binding activity to human CLDN6 by flow cytometry Human gastric cancer cell line NUGC-3 (JCRB cell bank) expressing CLDN6 was prepared at a concentration of 1 ⁇ 10 6 cells/mL in 5% FBS-containing PBS (Wako, #045-29795), seeded on a 96-well V-bottom microplate at 100 ⁇ L/well, and the supernatant was removed after centrifugation.
  • Ab0 is an antibody consisting of a heavy chain aCLDN6-VH-CH1-CH2-CH3 and a light chain aCLDN6-VL-CL described in International Publication No. 2022/058298.
  • Ab0, Ab1, and Ab2 were prepared at 1 ng/mL to 25 ⁇ g/mL in 5% FBS-containing PBS (12 dilution points from 25 ⁇ g/mL to 1 ng/mL were prepared by 2.5-fold dilution), added at 100 ⁇ L/well, and left to stand at 4 ° C. for 1 hour.
  • PE-F(ab')2 Goat anti-human IgG JACKSON, #109-116-098
  • Zombie NIR Fixable Viability Kit Biolegend, #423106
  • Test Example 3 Evaluation of TNF- ⁇ and INF- ⁇ production 1.
  • PBMCs peripheral blood mononuclear cells
  • RPMI1640 Medium Thermo Fisher Scientific, #11875-093
  • NUGC-3 (2. Recovery of culture supernatant) NUGC-3 was prepared at 7.5x106 cells/mL in 10% FBS-containing RPMI1640 Medium, and 25 ⁇ L/well was seeded on a 96-well microplate. 50 ⁇ L/well of the PBMC prepared in 1 above was seeded, and 25 ⁇ L/well of ExL1A1 and ExL1A2 prepared at final concentrations of 5.5 pM to 0.97 ⁇ M in 10% FBS-containing RPMI1640 Medium (12 dilution points from 0.97 ⁇ M to 5.5 pM in 3-fold dilutions) were added, and the plates were cultured at 37°C and 5% CO2 for 24 hours, and the supernatant was collected.
  • TNF- ⁇ and INF- ⁇ production levels The supernatant collected in 2 above was used to measure the production levels of TNF- ⁇ and IFN- ⁇ according to standard methods using the TNF ⁇ (human) AlphaLISA Detection Kit (Perkin Elmer, #AL208C) and IFN- ⁇ (human) AlphaLISA Detection Kit (Perkin Elmer, #AL217F). Measurements were performed using an EnVision 2104 plate reader. Graphs were created using GraphPad Prism (GraphPad Software). FIG. 2 shows the results of measuring the amounts of cytokines in ExL1A1 and ExL1A2.
  • ExL1A1, ExL5A1, ExL7A1, ExL1-Isotype, ExL5-Isotype, and ExL7-Isotype were used as test antibody-drug conjugates.
  • ExL1-Isotype is an antibody that uses an anti-KLH antibody (WO 2013/094723) instead of Ab1 of ExL1A1.
  • ExL5-Isotype and ExL7-Isotype were also prepared in the same manner as ExL1-Isotype.
  • the major and minor axes of the transplanted tumors were measured twice a week using an electronic digital caliper (manufactured by Mitutoyo Corporation), and the tumor volume was calculated using the following formula.
  • the antibody-drug conjugate of the present invention containing the TLR7/8 dual agonist compound can be used to prevent or treat the cancer. Furthermore, it is expected that the anti-TAA antibody-drug conjugate of the present invention containing the TLR7/8 dual agonist compound can be used to prevent or treat the cancers expressing the TAA.
  • Test Example 5 Evaluation of INF- ⁇ production when TLR8 and TLR7/8 dual inhibitors were added
  • a cell line obtained by introducing GFP into the human ovarian cancer cell line OVCAR-3 (ATCC, #HTB-161) expressing CLDN6 was prepared at 2x106 cells/mL in RPMI1640 medium containing 10% FBS and seeded at 25 ⁇ L/well on a 96-well microplate.
  • TLR8 inhibitor CU-CPT9a InvivoGen, #inh-cc9a
  • TLR7/8 dual inhibitor Enpatoran MedChemExpress, #HY-134581
  • 10% FBS-containing RPMI1640 Medium 10 ⁇ L/well of TLR8 inhibitor CU-CPT9a (InvivoGen, #inh-cc9a) or TLR7/8 dual inhibitor Enpatoran (MedChemExpress, #HY-134581) or 10% FBS-containing RPMI1640 Medium was added to the wells and cultured for 3 hours at 37°C and 5% CO 2. Then, 25 ⁇ L/well of ExL1A1 was added to the wells and cultured for 70 hours at 37°C and 5% CO 2 in RPMI1640 Medium containing 10% FBS at a final concentration of 23pM to 1.8 ⁇ M (8 dilution series from 1.8 ⁇ M to 23pM in 5-fold dilution).
  • FIG. 4 shows the results of measuring the amount of INF- ⁇ produced by ExL1A1 when medium or CU-CPT9a or Enpatoran was added.
  • a pharmaceutical composition containing one or more of the antibody-drug conjugates of formula (I) or salts thereof as an active ingredient can be prepared by a commonly used method using excipients commonly used in the art, i.e., pharmaceutical excipients and pharmaceutical carriers, etc.
  • the administration may be in the form of any of parenteral administration such as intra-articular, intravenous, intramuscular injections, drip infusions, suppositories, eye drops, eye ointments, transdermal liquids, ointments, transdermal patches, transmucosal liquids, transmucosal patches, inhalants, etc.
  • Injections and drip infusions can be administered by appropriate methods such as intravenous administration, subcutaneous administration, intraperitoneal administration, and intratumoral administration.
  • Injections for parenteral administration contain sterile aqueous or non-aqueous solutions, suspensions, or emulsions.
  • Aqueous solvents include, for example, distilled water for injection or physiological saline.
  • Non-aqueous solvents include, for example, alcohols such as ethanol.
  • Such compositions may further contain an isotonic agent, an antiseptic, a wetting agent, an emulsifier, a dispersant, a stabilizer, or a solubilizing agent. These are sterilized, for example, by filtration through a bacteria-retaining filter, by mixing with a bactericide, or by irradiation. Alternatively, these can be prepared as sterile solid compositions, which are dissolved or suspended in sterile water or a sterile injectable solvent before use.
  • External preparations include ointments, pastes, creams, jellies, poultices, sprays, lotions, eye drops, eye ointments, etc. They contain commonly used ointment bases, lotion bases, aqueous or non-aqueous liquids, suspensions, emulsions, etc.
  • Transmucosal agents such as inhalants and nasal agents may be in solid, liquid or semi-solid form and may be prepared according to known methods. For example, known excipients, pH adjusters, preservatives, surfactants, lubricants, stabilizers, thickeners, etc. may be added as appropriate. Administration may be performed using a suitable device for inhalation or insufflation. For example, known devices such as metered dose inhalation devices or nebulizers may be used to administer the compound alone or as a powder of a formulated mixture, or in combination with a pharma- ceutically acceptable carrier as a solution or suspension. Dry powder inhalers and the like may be for single or multiple administrations and may utilize dry powders or powder-containing capsules. Alternatively, the agent may be in the form of a pressurized aerosol spray using a suitable propellant, for example a suitable gas such as a chlorofluoroalkane or carbon dioxide.
  • a suitable propellant for example a suitable gas such as a
  • the appropriate daily dosage is approximately 0.001-100 mg/kg of body weight, preferably 0.1-30 mg/kg, and more preferably 0.1-10 mg/kg, administered once or in 2-4 divided doses.
  • the appropriate daily dosage is approximately 0.0001-10 mg/kg of body weight, administered once or in multiple divided doses.
  • the appropriate dosage is approximately 0.001-100 mg/kg of body weight, administered once or in multiple divided doses. The dosage is determined appropriately for each individual case, taking into consideration symptoms, age, sex, etc.
  • the pharmaceutical composition of the present invention contains 0.01 to 100% by weight, and in one embodiment, 0.01 to 50% by weight of the active ingredient, one or more types of antibody-drug conjugates of formula (I) or salts thereof.
  • the antibody-drug conjugate of formula (I) can be used in combination with various therapeutic or preventive agents for diseases for which the antibody-drug conjugate of formula (I) is considered to be effective.
  • the combination may be simultaneous administration, or may be administered separately, consecutively, or at a desired time interval.
  • the simultaneous administration preparation may be a combination drug or may be formulated separately.
  • Drugs to be used in combination include therapeutic agents used to treat the target disease.
  • the manufacturing method of the antibody-drug conjugate of formula (I) is explained in more detail below based on the examples. Note that the present invention is not limited to the compounds described in the examples below. Furthermore, the manufacturing method of the raw material compounds is shown in the manufacturing examples, and the manufacturing method of the known compounds is shown in the reference examples. Furthermore, the manufacturing method of the antibody-drug conjugate of formula (I) is not limited to only the manufacturing methods of the specific examples shown below, and the antibody-drug conjugate of formula (I) can also be manufactured by a combination of these manufacturing methods, or by a method that is obvious to a person skilled in the art.
  • Anti-CLDN6 antibody anti-claudin 6 antibody
  • TLR7/8 dual agonist dual agonist of Toll-like receptor 7 and Toll-like receptor 8
  • DAST N,N-diethylaminosulfur trifluoride
  • DEAD diethyl azodicarboxylate
  • DCM dichloromethane
  • DIAD diisopropyl azodicarboxylate
  • DIPEA N,N-diisopropylethylamine
  • DMF dimethylformamide
  • DMP Dess-Martin periodinane
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • D-PBS Dulbecco's Phosphate Buffered Saline
  • EtOAc Ethyl Acetate
  • FA Formic Acid
  • HATU 2-(7-Aza-1H-benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium Hex
  • s singlet
  • d doublet
  • t triplet
  • q quartet
  • m multiplet
  • br broad
  • [ ⁇ ] D20 specific rotation at 20°C
  • c concentration (g/100 mL) when specific rotation was measured, and the measurement solvent is also shown.
  • naming software such as ACD/Name (registered trademark, Advanced Chemistry Development, Inc.) may be used to name compounds.
  • concentration in mol/L is represented as M.
  • 1M sodium hydroxide aqueous solution means 1 mol/L sodium hydroxide aqueous solution.
  • Production Example AB-1 Preparation of expression vector for humanized anti-CLDN6 antibody Based on the sequences of the heavy and light chain variable regions of mouse anti-CLDN6 antibodies GT512muMAB 64A and GT512muMAB 61D described in International Publication No. 2011/057788, sequences for humanization of mouse anti-CLDN6 antibodies were designed according to the method described in the literature (Front Biosci., 2008, Vol. 13, p. 1619-1633). Model structures were constructed and analyzed using the integrated computational chemistry system MOE provided by MOLSIS Inc., and back mutations were introduced into the framework region. The two types of humanized anti-CLDN6 antibodies prepared are referred to as Ab1 and Ab2, respectively.
  • Ab1 is an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 and a light chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4
  • Ab2 is an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6 and a light chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8.
  • the polynucleotides encoding the designed amino acid sequences of Ab1 and Ab2 were inserted into the pcDNA3.4 TOPO vector (Thermo Fisher Scientific).
  • the constructed vectors are referred to as Ab1 expression vector and Ab2 expression vector, respectively.
  • Example AB Preparation of humanized anti-CLDN6 antibodies
  • the Ab1 expression vector or Ab2 expression vector prepared in Preparation Example AB-1 was introduced into ExpiCHO-S cells using ExpiFectamine CHO Transfection Kit (Thermo Fisher Scientific, #A29129) and cultured for several days.
  • Ab1 and Ab2 were purified from the culture supernatant by affinity purification using MabSelect SuRe pcc (GE Healthcare Biosciences, #27-5438-02).
  • Example 1 To a solution of (3S)-4-[(4- ⁇ [2-amino-4-(pentylamino)-5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-5-yl]methyl ⁇ -3-methoxyphenyl)methyl]-3-(fluoromethyl)piperazine-1-carboxylate tert-butyl (0.9 g) in DCM (5 mL) was added HCl/1,4-dioxane (4 M, 12 mL) at 20° C., and the mixture was stirred at the same temperature for 1 hour.
  • Example 2 To a solution of 5-[(4- ⁇ [(3R)-4-[(2,4-dimethoxyphenyl)methyl]-3-(fluoromethyl)piperazin-1-yl]methyl ⁇ -2-methoxyphenyl)methyl]-N 4 -pentyl-5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidine-2,4-diamine (544.55 mg) in DCM (5 mL), TFA (5 mL) was added at 0°C under a nitrogen atmosphere and stirred at 20°C for 1 hour.
  • Example 3 4- ⁇ [2-amino-4-(pentylamino)-5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-5-yl]methyl ⁇ -3-methoxybenzaldehyde (31 mg), cyclopropanamine (0.012 mL), and TEA (0.024 mL) in DCM (1.2 mL) were added with sodium triacetoxyborohydride (36 mg) and stirred at room temperature for 2 hours. Cyclopropanamine (0.012 mL) and sodium triacetoxyborohydride (36 mg) were added and stirred at room temperature overnight.
  • Example 4 To a solution of (4- ⁇ [2-amino-4-(pentylsulfanyl)-5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-5-yl]methyl ⁇ -3-methoxyphenyl)methanol (35 mg) in DCM (2 mL), thionyl chloride (0.066 mL) was added under ice cooling, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour, and the reaction solution was concentrated under reduced pressure. NMP (1 mL), DIPEA (0.078 mL), piperazine (40 mg) and potassium iodide (16 mg) were added to the resulting residue, and the mixture was stirred at 80° C. for 1 hour.
  • Example 5 [(2S)-1-( ⁇ 4-[(2-amino-4-chloro-5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-5-yl)methyl]-3-methoxyphenyl ⁇ methyl)pyrrolidin-2-yl]methanol (70 mg), DMSO (1 mL), DIPEA (0.16 mL) and pentane-1-thiol (0.1 mL) were added to a microwave vial and stirred at 100°C under microwave irradiation for 6 hours. The reaction solution was allowed to cool to room temperature, added to water (20 mL) and extracted three times with ethyl acetate (20 mL).
  • Example 6 7-Chloro-5- ⁇ [4-(chloromethyl)-2-methoxyphenyl]methyl ⁇ -N 4 -pentyl-5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidine-2,4-diamine hydrochloride (60 mg) in DMF (3 mL) was added with DIPEA (0.061 mL) and [(2S)-pyrrolidin-2-yl]methanol (0.024 mL) at room temperature and stirred overnight at the same temperature.
  • reaction mixture was stirred overnight at 110°C, and then allowed to cool to room temperature.
  • a saturated aqueous solution of ammonium chloride (40 mL) and ethyl acetate (100 mL) were added, and the organic layer was washed three times with water (100 mL) and once with saturated saline (100 mL), dried over anhydrous MgSO 4 , and then concentrated under reduced pressure.
  • reaction mixture was concentrated under reduced pressure, and the resulting residue was diluted with MeCN (20 mL), and then concentrated again under reduced pressure to obtain 7-bromo-5- ⁇ [4-(chloromethyl)-2-methoxyphenyl]methyl ⁇ -N 4 -pentyl-5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidine-2,4-diamine hydrochloride (438 mg) as a solid.
  • Example 7 [(2S)-pyrrolidin-2-yl]methanol (0.02 mL), DIPEA (0.1 mL) and TBAI (5 mg) in MeCN (3 mL) were added with 7-bromo-5- ⁇ [4-(chloromethyl)-2-methoxyphenyl]methyl ⁇ -N 4 -pentyl-5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidine-2,4-diamine hydrochloride (80 mg) at room temperature, and the reaction mixture was stirred at 50° C. for 16 hours.
  • Example 8 Using tert-butyl 4-( ⁇ 4-[(2-amino-4-chloro-6-methyl-5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-5-yl)methyl]-3-methoxyphenyl ⁇ methyl)piperazine-1-carboxylate (360 mg), 5-( ⁇ 2-methoxy-4-[(piperazin-1-yl)methyl]phenyl ⁇ methyl)-6-methyl-N 4 -pentyl-5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidine-2,4-diamine hydrochloride (33.5 mg) was obtained as a solid in the same manner as in Preparation Example 1-6 and Example 2.
  • Example 10 A mixture of (3R)-4-[(4- ⁇ [2-amino-4-(pentylamino)-5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-5-yl]methyl ⁇ -3-methoxyphenyl)methyl]-3-(fluoromethyl)piperazine-1-carboxylate tert-butyl (460 mg) and 4M HCl/dioxane (6 mL) in DCM (2 mL) was stirred at 20° C. for 1 hour.
  • Example L3 To a mixture of 2,5-dioxopyrrolidin-1-yl 31-(2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl)-29-oxo-4,7,10,13,16,19,22,25-octaoxa-28-azahentriacontan-1-oate (24 mg), DIPEA (15 ⁇ L) and NMP (1 mL) was added 5-[(4- ⁇ [(2S)-2-(fluoromethyl)piperazin-1-yl]methyl ⁇ -2-methoxyphenyl)methyl]-N 4 -pentyl-5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidine-2,4-diamine (15 mg) under ice cooling and stirred at room temperature for 1 hour.
  • Example L4 DMP (112 mg) was added to a solution of 1-(2-hydroxyethyl)-1H-pyrrole-2,5-dione (38 mg) in DCM (1 mL) and stirred overnight at room temperature.
  • DCM (2 mL) and DMP (112 mg) were added and stirred overnight at room temperature.
  • 10% aqueous sodium sulfite solution, saturated aqueous sodium bicarbonate solution, and chloroform were added, and the mixture was extracted with chloroform using a phase separator and concentrated under reduced pressure.
  • the reaction mixture was concentrated under reduced pressure, and the resulting crude product was dissolved in ethanol (3 mL), and then hydrazine monohydrate (35 mg) was added at 60° C. and stirred at the same temperature for 5 hours.
  • the solid was filtered off using Celite (registered trademark), washed with ethanol (50 mL), and the filtrate was concentrated under reduced pressure.
  • Example L6 To a solution of 5- ⁇ [4-( ⁇ (2S)-2-[(2-aminoethoxy)methyl]pyrrolidin-1-yl ⁇ methyl)-2-methoxyphenyl]methyl ⁇ -7-chloro-N 4 -pentyl-5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidine-2,4-diamine (140 mg) in 1,4-dioxane (2 mL), 0.85M aqueous sodium hydrogen carbonate solution (1.5 mL) and 2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrole-1-methyl carboxylate (30 mg) were added at room temperature and stirred at the same temperature for 30 minutes.
  • Example LA Manufacturing of antibody-drug conjugate Common procedure A: Washing and concentrating aqueous antibody-drug conjugate solution The antibody-drug conjugate solution was placed in an Amicon ultra-15 (10,000 MWCO, Millipore Co.) container, and D-PBS phosphate buffered saline was added to bring the solution volume to 15 mL. The antibody-drug conjugate solution was then washed and concentrated by centrifugation using a centrifuge (centrifugation at 3,000 G for 15 to 90 minutes).
  • Common Procedure B Purification of antibody-drug conjugates
  • One to three PD-10 columns were equilibrated with commercially available D-PBS (Cat. No. 045-29795, Fujifilm Wako).
  • the antibody-drug conjugate reaction solution (approximately 300 ⁇ L to 2.5 mL) was loaded onto each PD-10 column, eluted with approximately 5 mL of D-PBS, and 500 ⁇ L fractions were collected.
  • the fractions containing the antibody were washed and concentrated by repeating Common Procedure A once or twice.
  • the collected solution was filtered through a membrane filter to obtain the antibody-drug conjugates.
  • Example L1A1 A 13.57 mg/mL Ab1 antibody solution (147 ⁇ L) was placed in a 1.5 mL Eppendorf tube, and the antibody concentration was adjusted to 2 mg/mL using PBS6.2/EDTA (853 ⁇ L). Two similar antibody solutions were prepared in total, and 0.2 M disodium hydrogen phosphate aqueous solution (51.5 ⁇ L) and 2 mM TCEP aqueous solution (31.9 ⁇ L) were added to each solution, and incubated at 37°C for 1 hour.
  • a total of two reaction solutions were purified by common procedure B to obtain solutions containing the antibody-drug conjugate.
  • 13.57 mg/mL Ab1 antibody solution (147 ⁇ L) was placed in a 1.5 mL Eppendorf tube, and the antibody concentration was adjusted to 2 mg/mL using PBS6.2/EDTA (853 ⁇ L).
  • Three similar antibody solutions were prepared in total, and 0.2 M disodium hydrogen phosphate aqueous solution (51.5 ⁇ L) and 2 mM TCEP aqueous solution (31.9 ⁇ L) were added to each solution, followed by incubation at 37°C for 1 hour.
  • a total of three reaction solutions were purified by common procedure B to obtain solutions containing antibody-drug conjugates.
  • the two solutions containing the antibody-drug conjugate obtained above were mixed, and then washed and concentrated by repeating the common procedure A twice.
  • the collected solution was filtered through a membrane filter and then diluted with D-PBS until the solution volume became 1.8 mL.
  • the common procedures C and D confirmed that the solution contained the indicated antibody-drug conjugate (DAR 3.44) at 3.88 mg/mL.
  • Example L1A2 A 14.72 mg/mL Ab2 antibody solution (135.9 ⁇ L) was placed in a 1.5 mL Eppendorf tube, and the antibody concentration was adjusted to 2 mg/mL using PBS6.2/EDTA (864.1 ⁇ L). Three similar antibody solutions were prepared in total, and 0.2 M disodium hydrogen phosphate aqueous solution (51.5 ⁇ L) and 2 mM TCEP aqueous solution (31.9 ⁇ L) were added to each solution, followed by incubation at 37°C for 1 hour.
  • reaction solutions were purified by common procedure B to obtain a 1.25 mL solution containing the antibody-drug conjugate. It was confirmed that the solution contained 4.61 mg/mL of the antibody-drug conjugate (DAR 4.02) by common procedures C and D.
  • Example L5A1 A 13.57 mg/mL Ab1 antibody solution (147 ⁇ L) was placed in a 1.5 mL Eppendorf tube, and the antibody concentration was adjusted to 2 mg/mL using PBS6.2/EDTA (853 ⁇ L). A total of five similar antibody solutions were prepared, and 0.2 M disodium hydrogen phosphate aqueous solution (51.5 ⁇ L) and 2 mM TCEP aqueous solution (31.9 ⁇ L) were added to each solution, and the solution was incubated at 37°C for 1 hour.
  • reaction solutions were purified by common procedure B to obtain 1.85 mL of a solution containing the antibody-drug conjugate.
  • Common procedures C and D confirmed that the solution contained the indicated antibody-drug conjugate (DAR 2.95) at 4.55 mg/mL.
  • Example L7A1 A 13.57 mg/mL Ab1 antibody solution (147 ⁇ L) was placed in a 1.5 mL Eppendorf tube, and the antibody concentration was adjusted to 2 mg/mL using PBS6.2/EDTA (853 ⁇ L). Two similar antibody solutions were prepared in total, and 0.2 M disodium hydrogen phosphate aqueous solution (51.5 ⁇ L) and 2 mM TCEP aqueous solution (31.9 ⁇ L) were added to each solution, and incubated at 37°C for 1 hour.
  • a total of two reaction solutions were purified by common procedure B to obtain solutions containing the antibody-drug conjugate. Separately, 13.57 mg/mL Ab1 antibody solution (147 ⁇ L) was taken in a 1.5 mL Eppendorf tube, and the antibody concentration was adjusted to 2 mg/mL using PBS6.2/EDTA (853 ⁇ L). A total of three similar antibody solutions were prepared, and 0.2 M disodium hydrogen phosphate aqueous solution (51.5 ⁇ L) and 2 mM TCEP aqueous solution (31.9 ⁇ L) were added to each solution, and incubated at 37°C for 1 hour.
  • a total of three reaction solutions were purified by common procedure B to obtain solutions containing the antibody-drug conjugate.
  • the two solutions containing the antibody-drug conjugate obtained above were mixed, and then washed and concentrated by repeating the common procedure A twice.
  • the collected solution was filtered through a membrane filter and then diluted with D-PBS until the solution volume became 1.8 mL.
  • the common procedures C and D confirmed that the solution contained the indicated antibody-drug conjugate (DAR 3.28) at 4.52 mg/mL.
  • the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof has excellent TLR7/8 dual agonistic activity, and also exhibits TNF- ⁇ production effect, INF- ⁇ production effect, and in vivo antitumor effect, and is therefore expected to be useful in the prevention and/or treatment of various cancers, such as ovarian cancer, testicular cancer, cervical cancer, and lung cancer.
  • the anti-CLDN6 antibody discovered in the present invention has binding activity against human CLDN6, and is expected to be used in the antibody-drug conjugate of formula (I) or a salt thereof for use as a cancer prevention and/or treatment agent.
  • SEQ ID NO:2 is the amino acid sequence of the heavy chain of humanized anti-CLDN6 antibody Ab1
  • the base sequence shown in SEQ ID NO:1 is a base sequence that codes for the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:2.
  • SEQ ID NO:4 is the amino acid sequence of the light chain of humanized anti-CLDN6 antibody Ab1
  • the base sequence shown in SEQ ID NO:3 is a base sequence that codes for the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:4.
  • SEQ ID NO:6 is the amino acid sequence of the heavy chain of humanized anti-CLDN6 antibody Ab2
  • the base sequence shown in SEQ ID NO:5 is a base sequence that codes for the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:6.
  • SEQ ID NO:8 is the amino acid sequence of the light chain of humanized anti-CLDN6 antibody Ab2
  • the base sequence shown in SEQ ID NO:7 is a base sequence that codes for the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:8.

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Abstract

本発明の課題は、TLR7/8デュアルアゴニスト化合物を含む抗体薬物複合体又はその塩を開発し、様々な癌の予防又は治療に使用するための医薬組成物を提供することである。　本発明者は、TLR7/8デュアルアゴニスト作用を有する化合物又はその塩を見出し、様々な癌の予防又は治療用医薬組成物の有効成分となりうる抗体薬物複合体について検討し、本発明の抗体薬物複合体又はその塩が、TNF-αやINF-γの産生効果や、in vivo抗腫瘍効果を有することを見出し、癌の予防又は治療に使用できることを明らかにした。また、本発明の抗体薬物複合体又はその塩に用いるための抗CLDN6抗体を見出した。本発明のTLR7/8デュアルアゴニスト化合物を含む抗体薬物複合体又はその塩、及び式（II）の本発明化合物又はその塩は、TNF-αやINF-γの産生効果や、in vivo抗腫瘍効果を有し、癌の予防又は治療剤として期待される。

Description

Ｔｏｌｌ様受容体７／８デュアルアゴニスト化合物を含む抗体薬物複合体
　本発明は、Toll様受容体7及び8デュアルアゴニスト（以下、TLR7/8デュアルアゴニストともいう。）作用を有する化合物（以下、化合物は薬物ともいう。）を含む抗体薬物複合体又はその塩、及びそのTLR7/8デュアルアゴニスト化合物又はその塩等に関する。また、本発明は、抗体薬物複合体又はその塩に用いるための抗CLDN6抗体に関する。
　TLRは、細菌、真菌、原生動物、ウイルスの病原体関連分子パターンに結合し、侵入する病原体に対する防御の第一線として機能する。TLRファミリーに含まれるTLR7及び8は、主に樹状細胞、マクロファージ、単球、B細胞などに発現するパターン認識受容体で、TLR7及び8の活性化は、樹状細胞の抗原取り込みや成熟、及びT細胞刺激能力の増加につながることが知られている。
　特許文献1において、TLR7及び/又はTLR8を活性化できる化合物としてTM-Ln-AM（式中、TMは標的部分、Lはリンカー、nは0及び１から選択できる整数、AMは樹状細胞、NK細胞、腫瘍細胞又はその組み合わせを活性化できる活性化部分）が記載されており、例えば、human epidermal growth factor receptor 2（以下、Her2ともいう）に結合することが知られるトラスツズマブ、及びレシキモドを含む化合物として開示されている。
　なお、参考としてレシキモドの構造式を以下に示す。
　また、特許文献2及び3において、TLR7アゴニストを含有するHer2抗体薬物複合体が報告されている。
（式中の記号は、特許文献2及び3を参照。）
　また、特許文献4及び5において、TLR7アゴニストを含有するFOLR1抗体薬物複合体等が報告されている。
（式中の記号は、特許文献4及び5を参照。）
　また、特許文献6において、TLR7アゴニスト化合物が報告されている。
（式中の記号は特許文献6を参照。R3はH、-L2C(=O)OR7、-C(=O)OL6R12、-C(=O)OL2R12、-L2C(=O)OL2R12、-L4C(=O)OL5OH、-L4R12、（中略）、L4は-(CH2)m-であり、（中略）R12はa)-N(R11)2、b)独立してN及びOから選択されるヘテロ原子1～2個を有する非置換5～6員ヘテロシクロアルキル、c)=Oで置換されている、独立してN及びOから選択されるヘテロ原子1～2個を有する5～6員ヘテロシクロアルキル、d)C1～C3アルキル若しくは-C(=O)OR7で置換されている、独立してN及びOから選択されるヘテロ原子1～2個を有する5～6員ヘテロシクロアルキル、又はe)非置換フェニルであり、mはそれぞれ独立して1、2、3及び4から選択される。）
　また、特許文献4において、TLR7アゴニスト化合物も報告されている。
（式中の記号は特許文献4を参照。R3は、独立してそれぞれ、-N(R3a)2、-OR3b、-C(R3c)2NH2、C1-6アルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、部分飽和ヘテロアリール又は二つのR3が同じ炭素原子に結合し、その結合した炭素原子と一体となって、スピロヘテロシクロアルキルを形成し、ここで、R3におけるヘテロシクロアルキル、スピロヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、スピロヘテロシクロアルキルは、N、S及びOから選択される、1、2、3又は4個のヘテロ原子を含み、1～2個のC1-3アルキルで置換されていてもよい。）
　クローディン6（以下、CLDN6ともいう。）は、クローディンファミリータンパクの一種で、220アミノ酸残基からなる4回膜貫通型の膜タンパクであり、マウス及びヒト幹細胞並びに上皮細胞運命に関与する胚様体で発現する癌胎児性遺伝子である。CLDN6は正常組織では非常に発現量が低い一方、小児脳腫瘍、生殖細胞腫瘍などを含む腫瘍、及び胃腺癌、卵巣癌などの癌において過剰発現し、癌治療標的であることが示唆されている（International Journal of Molecular Sciences 2021年, vol.22, p.13416.）。
　抗CLDN6抗体としては、GT512muMAB 64A（特許文献7）及びAE3-20（特許文献8）等が報告されている。癌治療薬として、これまでCLDN6を標的としたTLR7及び／又はTLR8アゴニスト化合物を含む抗体薬物複合体の報告は認められていない。
国際公開第2014/012479号 国際公開第2017/072662号 国際公開第2018/198091号 国際公開第2020/252043号 国際公開第2020/252015号 国際公開第2015/168279号 国際公開第2011/057788号 国際公開第2009/087978号
　本発明の課題は、TLR7/8デュアルアゴニスト作用を有する化合物又はその塩を創出するとともに、TLR7/8デュアルアゴニスト化合物を含む抗体薬物複合体を開発し、卵巣癌、精巣癌、子宮頸癌、肺癌などの様々な癌の予防又は治療のための医薬組成物を提供することである。また、抗体薬物複合体又はその塩に用いるための抗CLDN6抗体を提供することである。
　本発明者らは、式(I)の抗体薬物複合体について鋭意検討した結果、本発明の式(II)の薬物がTLR7/8デュアルアゴニスト作用を有することを知見し、式(I)の抗体薬物複合体に用いる抗体が標的（ヒトCLDN6）への結合活性を示し、式(I)の抗体薬物複合体がTNF-α産生やINF-γ産生を誘導し、さらに、in vivo抗腫瘍効果も認められることを知見し、本発明を完成するに至った。
　すなわち、本発明は、以下の〔１〕～〔３〕、及び賦形剤を含有する医薬組成物に関する。
〔１〕式(I)で示される抗体薬物複合体又はその塩：
（式中、
Abは、抗体又はその抗原結合フラグメント、
Xは、S又はNH、
R1は、低級アルキル又は-CH2-イソキサゾールジイル-CH3、
　　ここでR1が-CH2-イソキサゾールジイル-CH3である場合、XはS、
R2は、ハロゲン又はH、
R3は、CH3又はH、
R4は、式(a)、式(b)又は式(c)で示される基、
環Aは、複数のC及び1つのNで構成される4～6員環状アミン、
環Bは、複数のC、1つのN及び1つのGで構成される4～6員環状アミン、
Gは、N又はCH、
RAは、-CH2O-、-C(CH3)2O-、-O-又は-CH2NH-、
　　ここでRAが-O-又は-CH2NH-の場合、XがS;R2がハロゲン;又はR3がCH3;、
RBは、ハロアルキル、CH2OH、C(CH3)2OH、OH、CH2NH2又はH、
　　ここでRBがOH、CH2NH2又はHの場合、GがCH;XがS;R2がハロゲン;又はR3がCH3;、
RCは、C3-6シクロアルキル、又は、-CH2-C3-6シクロアルキル、
Lは、-低級アルキレン-、-C(=O)低級アルキレン-、-C(=O)NH低級アルキレン-、-C(=O)低級アルキレン-(OCH2CH2)m-NH-C(=O)低級アルキレン-、-(CH2CH2O)m-C(=O)低級アルキレン-、又は-C(=O)-シクロヘキサンジイル-低級アルキレン-、
mは、1～10の整数、
nは、1～16である）。
〔２〕式(II)の化合物又はその塩：
（式中、
Xは、S又はNH、
R1は、低級アルキル又は-CH2-イソキサゾールジイル-CH3、
　　ここでR1が-CH2-イソキサゾールジイル-CH3である場合、XはS、
R2は、ハロゲン又はH、
R3は、CH3又はH、
R40は、式(a1)、式(b1)、又は式(c1)で示される基：
環Aは、複数のC及び1つのN原子で構成される4～6員環状アミン、
環Bは、複数のC、1つのN及び1つのGで構成される4～6員環状アミン、
Gは、N又はCH、
RAは、-CH2O-、-C(CH3)2O-、-O-、又は-CH2NH-、
　　ここでRAが-O-又は-CH2NH-の場合、XがS;R2がハロゲン;又はR3がCH3;、
RBは、ハロアルキル、CH2OH、C(CH3)2OH、OH、CH2NH2、又はH、
　　ここでRBがOH、CH2NH2又はHの場合、GがCH;XがS;R2がハロゲン;、又はR3がCH3;、
RCは、C3-6シクロアルキル又は-CH2-C3-6シクロアルキル、
Mは、H、又は式(d)で示される基：
LDは、-低級アルキレン-、-C(=O)低級アルキレン-、-C(=O)NH低級アルキレン-、-C(=O)低級アルキレン-(OCH2CH2)m-NH-C(=O)低級アルキレン-、-(CH2CH2O)m-C(=O)低級アルキレン-、又は-C(=O)-シクロヘキサンジイル-低級アルキレン-、
mは、1～10の整数である)。
〔３〕配列番号2のアミノ酸番号1から117までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、及び、配列番号4のアミノ酸配列番号1から108からなる軽鎖可変領域を含む抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメント、又は、配列番号6のアミノ酸番号1から117までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、及び、配列番号8のアミノ酸配列番号１から108からなる軽鎖可変領域を含む抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメント。
　また、本発明は上記〔１〕～〔３〕の態様に限定されるものではなく、明細書の詳細な発明に記載された内容を適宜組み合わせた態様も含む。ある態様として、本発明は、上記〔２〕に記載の式(II)の化合物又はその塩におけるR40の式(a1)、式(b1)、又は式(c1)で示される基のMがHである化合物又はその塩であってもよい。また、ある態様として、本発明は、上記〔２〕に記載の式(II)の化合物又はその塩におけるR40の式(a1)、式(b1)、又は式(c1)で示される基のMの位置にリンカーを介して抗体が結合した抗体薬物複合体又はその塩であってもよい。なお、リンカーにおいて抗体と結合させる結合基としては、上記〔２〕に記載の式(d)で示される基に含まれるマレイミド基に限定されず、後述の各種結合基を適宜利用することができる。また、リンカー部分としては、上記〔２〕に記載の式(d)で示される基に含まれるLDに限定されず、後述の各種非切断性リンカーや各種切断性リンカーを適宜利用することができる。
　また、本発明は式(I)の抗体薬物複合体又はその塩、並びに、式(I)の抗体薬物複合体又はその塩、及び１以上の製薬学的に許容される賦形剤を含有する医薬組成物、特に、癌の予防及び／又は治療用医薬組成物に関する。当該医薬組成物は式(I)の抗体薬物複合体又はその塩を含有する癌の予防及び／又は治療剤を包含する。
　本発明は、癌の予防及び／又は治療用医薬組成物の製造のための式(I)の抗体薬物複合体又はその塩の使用、癌の予防及び／又は治療のための式(I)の抗体薬物複合体又はその塩の使用、癌の予防及び／又は治療に使用するための式(I)の抗体薬物複合体又はその塩、及び、式(I)の抗体薬物複合体又はその塩の有効量を対象に投与することからなる癌の予防及び／又は治療方法、に関する。
　また、本発明は式(II)の化合物又はその塩、並びに、式(II)の化合物又はその塩、及び１以上の製薬学的に許容される賦形剤を含有する医薬組成物、特に、癌の予防及び／又は治療用医薬組成物に関する。当該医薬組成物は式(II)の化合物又はその塩を含有する癌の予防及び／又は治療剤を包含する。
　本発明は、癌の予防及び／又は治療用医薬組成物の製造のための式(II)の化合物又はその塩の使用、癌の予防及び／又は治療のための式(II)の化合物又はその塩の使用、癌の予防及び／又は治療に使用するための式(II)の化合物又はその塩、及び、式(II)の化合物又はその塩の有効量を対象に投与することからなる癌の予防及び／又は治療方法、に関する。
　また、本発明は式(II)の化合物又はその塩を含む抗体薬物複合体又はその塩、及び１以上の製薬学的に許容される賦形剤を含有する医薬組成物、特に、癌の予防及び／又は治療用医薬組成物に関する。当該医薬組成物は式(II)の化合物又はその塩を含む抗体薬物複合体又はその塩を含有する癌の予防及び／又は治療剤を包含する。
　本発明は、癌の予防及び／又は治療用医薬組成物の製造のための式(II)の化合物又はその塩を含む抗体薬物複合体又はその塩の使用、癌の予防及び／又は治療に使用するための式(II)の化合物又はその塩を含む抗体薬物複合体又はその塩の使用、癌の予防及び／又は治療に使用するための式(II)の化合物又はその塩を含む抗体薬物複合体又はその塩、及び、式(II)の化合物又はその塩を含む抗体薬物複合体又はその塩の有効量を対象に投与することからなる癌の予防及び／又は治療方法、に関する。
　なお、「対象」とは、その予防又は治療を必要とするヒト又はその他の動物であり、ある態様としては、その予防又は治療を必要とするヒトである。
　上記の本発明において、癌の種類は特に限定されず、固形癌又は血液癌のいずれでもよい。例えば、種々の腹膜播種癌、胃癌、肺癌、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、Ｔ細胞リンパ腫等の血液癌、骨髄異形成症候群、腺癌、扁平上皮癌、腺扁平上皮癌、未分化癌、大細胞癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、中皮腫、皮膚癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、乳癌、前立腺癌、膀胱癌、膣癌、頸部癌、頭頸部癌、子宮癌、子宮頸癌、肝臓癌、胆のう癌、胆管癌、腎臓癌、膵臓癌、結腸癌、大腸癌、直腸癌、小腸癌、胃癌、食道癌、精巣癌、卵巣癌、脳腫瘍等の固形癌、並びに骨組織、軟骨組織、脂肪組織、筋組織、血管組織及び造血組織の癌の他、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性血管内皮腫、悪性シュワン腫、骨肉腫、軟部組織肉腫等の肉腫や、膠芽腫、多形性膠芽腫、肝芽腫、髄芽腫、腎芽腫、神経芽腫、膵芽腫、胸膜肺芽腫、又は網膜芽腫などの芽腫等が挙げられる。ある態様として、卵巣癌、精巣癌、子宮頸癌、又は肺癌を挙げることができる。ある態様として、CLDN6を発現する卵巣癌、CLDN6を発現する精巣癌、CLDN6を発現する子宮頸癌、又はCLDN6を発現する肺癌を挙げることができる。
　本明細書は本願の優先権の基礎となる日本国特許出願番号2022-174538号の開示内容を包含する。
　式(II)の化合物又はその塩はTLR7/8デュアルアゴニスト作用を有し、式(II)の化合物又はその塩、又は、TLR7/8デュアルアゴニスト化合物を含む式(I)の抗体薬物複合体又はその塩は、TNF-αやINF-γの産生効果を有し、腫瘍表面に発現する腫瘍関連抗原に結合してがん細胞を死滅させ、in vivo抗腫瘍効果も有するため、癌の予防及び／又は治療剤として使用できる。
　また、本発明の抗CLDN6抗体はヒトCLDN6に対する結合活性を有し、癌の予防及び／又は治療剤として使用するための抗体薬物複合体又はその塩に使用できる。
図１は、抗体Ab0、Ab1及びAb2のヒトCLDN6発現胃癌細胞株NUGC-3への結合活性をフローサイトメトリー法にて評価した結果を示す。縦軸は幾何学的平均蛍光強度を、横軸は抗体濃度(ng/mL)を表す。 図２は、抗体薬物複合体ExL1A1及びExL1A2のそれぞれのサイトカイン産生量の測定結果を示す。縦軸はTNF-α又はINF-γのサイトカインの産生量(pg/mL)を、横軸は抗体濃度(nM)を表す。 図３は、抗体薬物複合体ExL1A1、ExL5A1及びExL7A1のxenograft modelにおけるin vivo活性評価結果を示す。縦軸は腫瘍体積(mm3)を、横軸は初回抗体投与後の経過日数(日)を表す。有意確率Ｐ値は、unpaired t-testにより14日後にPBS投与群の腫瘍体積とExL1A1、ExL5A1、及びExL7A1投与群の腫瘍体積を比較することにより求めた(*:P<0.05、**:P<0.01)。 図４は、培地添加時またはTLR8阻害剤のCU-CPT9a、TLR7/8阻害剤のEnpatoran添加時の抗体薬物複合体ExL1A1のサイトカイン産生量の測定結果を示す。縦軸はINF-γのサイトカインの産生量(pg/mL)を、横軸は抗体濃度(nM)を表す。
　以下、本発明を詳細に説明する。
　本明細書中では、下記の用語は特段の記載がない限り、以下の意味を有する。下記の定義は、定義された用語を明確にするためのものであり、限定するものではない。ここで使用される用語が具体的に定義されていない場合、当該用語は、当業者に一般的に受け入れられている意味で使用されている。特に記載がない限り、本明細書中のある化学式中の記号が他の化学式においても用いられる場合、同一の記号は同一の意味を示す。
　「低級アルキル」とは、直鎖又は分枝状の炭素数が1～6（以下、C1-6と省略する。）のアルキル、例えばメチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、n-ペンチル、n-ヘキシル等である。ある態様として、低級アルキルはC1-6アルキルであり、ある態様として、低級アルキルはC1-5アルキルであり、ある態様として、低級アルキルはメチルであり、またある態様として、低級アルキルはn-ペンチルである。
　「低級アルキレン」とは、直鎖又は分枝状のC1-6のアルキレン、例えばメチレン、エチレン、トリメチレン、テトラメチレン、ペンタメチレン、ヘキサメチレン、プロピレン、メチルメチレン、ジメチルメチレン、エチルエチレン、1,2-ジメチルエチレン、1,1,2,2-テトラメチルエチレン等である。ある態様として、低級アルキレンはC1-4アルキレンであり、ある態様として、低級アルキレンはエチレン（-CH2CH2-）である。
　「ハロゲン」は、F、Cl、Br又はIを意味する。
　「ハロアルキル」とは、1個以上のハロゲンで置換された低級アルキルである。ある態様として、ハロアルキルは1個以上のハロゲンで置換されたC1-6アルキルである。ある態様として、ハロアルキルは1～5個のハロゲンで置換された低級アルキルであり、ある態様として、ハロアルキルは1～5個のFで置換された低級アルキルであり、ある態様として、ハロアルキルは1～3個のFで置換されたメチルであり、ある態様として、ハロアルキルはモノフルオロメチルである。
　「C3-6シクロアルキル」とは、C3-6の飽和炭化水素環基である。例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、等である。ある態様として、C3-6シクロアルキルはC3-4シクロアルキルである、ある態様として、C3-6シクロアルキルはシクロブチルである、ある態様として、C3-6シクロアルキルはシクロプロピルである。
　「環状アミン」とは、少なくとも1つの窒素原子(N)を有し、環を構成する他の元素が炭素原子(C)である非芳香族環状アミンである。例えば、アジリジン、アゼチジン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、アゼパン、ジアゼパン等である。二価基であれば、アジリジンジイル、アゼチジンジイル、ピロリジンジイル、ピペリジンジイル、ピペラジンジイル、アゼパンジイル、ジアゼパンジイル、等である。一価基であれば、アジリジニル、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジル、ピペラジニル、アゼパニル、ジアゼパニル等である。ある態様としては、複数のC及び1つのNで構成される4～6員環状アミンである。ある態様としては、複数のC、1つのN及び1つのGで構成される4～6員環状アミンであり、GはN又はCHである。ある態様としては、4つのC及び1つのNで構成される5員環状アミンである。ある態様としては、2つのC、1つのN、2つのC及び1つのGから構成される6員環状アミンであり、GはN又はCHである。ある態様としては、2つのC、1つのN、2つのC及び1つのGから構成される6員環状アミンであり、GはNである。ある態様としては、2つのC、1つのN、2つのC及び1つのGから構成される6員環状アミンであり、GはCHである。
　「4～6員環状アミン」とは、4～6員環である環状アミンである。例えば、アゼチジン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン等である。二価基であれば、アゼチジンジイル、ピロリジンジイル、ピペリジンジイル、ピペラジンジイル等である。一価基であれば、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジル、ピペラジニル等である。ある態様として、4～6員環状アミンは6員環状アミンであり、ある態様として、4～6員環状アミンは5員環状アミンであり、ある態様として、4～6員環状アミンはピペリジンジイル又はピペラジンジイルであり、ある態様として、4～6員環状アミンはピロリジンジイル又はピペラジンジイルであり、ある態様として、4～6員環状アミンはピペリジンジイルであり、ある態様として、4～6員環状アミンはピロリジンジイルであり、ある態様として、4～6員環状アミンはピペラジンジイルである。ある態様として、4～6員環状アミンは複数の炭素原子及び1つの窒素原子で構成される4～6員環状アミンである。ある態様として、4～6員環状アミンは複数の炭素原子及び、1つの窒素原子及び1つのGで構成され、GがCH又はNである4～6員環状アミンである。ある態様として、4～6員環状アミンは4つのC及び1つのNで構成される5員環状アミンである。ある態様として、4～6員環状アミンは5つのC及び1つのNで構成される6員環状アミンである。ある態様として、4～6員環状アミンは4つのC、1つのN及び1つのGで構成される6員環状アミンであり、GがCH又はNである。ある態様として、4～6員環状アミンは4つのC、1つのN及び1つのGで構成される6員環状アミンであり、GがNである。ある態様として、4～6員環状アミンは4つのC、1つのN及び1つのGで構成される6員環状アミンであり、GがCHである。ある態様として、4～6員環状アミンは4つのC、1つのN及び1つのGで構成され、GがCH又はNである6員環状アミンである。ある態様として、4～6員環状アミンは2つのC、1つのN、2つのC、及び1つのGで構成される6員環状アミンであり、GがCH又はNである。ある態様として、4～6員環状アミンは2つのC、1つのN、2つのC、及び1つのGで構成される6員環状アミンであり、GがNである。ある態様として、4～6員環状アミンは2つのC、1つのN、2つのC、及び1つのGで構成される6員環状アミンであり、GがCHである。
　「抗体薬物複合体」とは、抗体と少なくとも一つの薬物がリンカーを介して結合した複合体である。抗体が狙った細胞や組織に薬物を輸送できる。ある態様として、抗体薬物複合体は抗体と薬物が非切断性リンカーを介して結合した複合体である。本明細書において「化合物を含む抗体薬物複合体」とは、化合物に抗体がリンカーを介して結合した抗体薬物複合体のことを意味する。ある態様として、リンカーを有する抗体薬物複合体であり、ある態様として、リンカーを有さない抗体薬物複合体である。
　「リンカー」とは、抗体と薬物を結合させる化学基であり、少なくとも２つの共有結合を形成することが可能である。非切断性リンカーと切断可能リンカーが存在する。抗体薬物複合体に使用されるリンカーとしては、例えば、アルキレン、ポリエチレングリコール（PEG）、又はペプチド等が挙げられ、リンカー同士を結合または組み合わせる目的でアミド基、エーテル基、カーバメート基等が用いられる。リンカーにおいて抗体と結合させる結合基としては、例えば、マレイミド基、ピリジルジチオ基、イソシアナート基等が挙げられる。
　「非切断性リンカー」とは、リソソーム内の酸性条件や細胞内の特異的プロテアーゼのいずれによっても分解されないリンカーを意味する。例えば、-低級アルキレン-、-C(=O)低級アルキレン-、-C(=O)NH低級アルキレン-、-C(=O)低級アルキレン-(OCH2CH2)m-NH-C(=O)低級アルキレン-、-(CH2CH2O)m-C(=O)低級アルキレン-、又は-C(=O)-シクロヘキサンジイル-CH2-であり、「m」は1～10の整数であり、並びにそれらの態様の矛盾のない組み合わせである。ある態様として、非切断性リンカーは-CH2CH2-、-C(=O)CH2CH2-、-C(=O)NHCH2CH2-、-C(=O)CH2CH2-(OCH2CH2)m-NH-C(=O)CH2CH2-、-(CH2CH2O)m-C(=O)CH2CH2-、又は-C(=O)-シクロヘキサンジイル-CH2-である。ある態様として、非切断性リンカーは-CH2CH2-、-C(=O)CH2CH2-、-C(=O)NHCH2CH2-である。ある態様として、非切断性リンカーは-C(=O)CH2CH2-、又は-C(=O)NHCH2CH2-である。ある態様として、非切断性リンカーは-C(=O)CH2CH2-である。ある態様として、非切断性リンカーは-C(=O)NHCH2CH2-である場合、リンカーの-C(=O)に化合物又はその塩の酸素原子(O)が結合する。ある態様として、「m」は、1～8の整数、又は4～8の整数であり、ある態様として、「m」は4又は8である。
　「切断性リンカー」とは、リソソーム内の酸性条件や細胞内の特異的プロテアーゼヌクレアーゼ、ぺプチダーゼ等の内在性酵素などにより、選択的に切断されてもよいリンカーである。そのような具体例として、例えば、ヒドラゾン結合、S-S結合、ペプチド結合、エステル結合、リン酸エステル結合、ホスホジエステル結合の一方若しくは両方のエステル結合、カルバメート結合等が挙げられる。例えば、Val-Cit(バリンシトルリン)、Val-Ala、Ala-Ala、Ala-Ala-Ala、Gly-Gly-Phe-Gly、Val-Cit-PABC(バリンシトルリン-p-ベンジルアルコール)、Val-Ala-PABC、又は、並びに、それらの態様の矛盾のない組み合わせが挙げられる（Bioconjugate Chemistry 2002年, vol.13, p.855-869。Protein & Cell, 2018年, vol.9, p.33-46.）
　「薬物リンカー複合体」とは、薬物とリンカーが共有結合した化合物又はその塩である。ある態様として、本発明化合物とリンカーが共有結合した化合物又はその塩である。抗体又はその抗体結合フラグメントに対して、薬物リンカー複合体を結合させて抗体薬物複合体が製造できる。ここで薬物リンカー複合体のリンカーが、抗体に共有結合する。ここで抗体薬物複合体は、抗体又はその抗体結合フラグメントに対して、薬物リンカー複合体を少なくとも一つ結合する。ある態様として、その抗体薬物複合体の抗体部分に、更に、少なくとも一つの薬物(抗癌剤又は標識体等)リンカー複合体を結合させてもよい。抗癌剤としては、チューブリン重合阻害剤であるモノメチルアウリスタチンE(MMAE)やモノメチルアウリスタチンF(MMAF)等、有糸分裂阻害剤メルタンシン(DM1)等が挙げられる。標識体としては放射性同位体(RI標識抗体)等が挙げられる。
　「TLR7/8デュアルアゴニスト」とは、TLR7アゴニストであり、かつTLR8アゴニストであることを意味する。ある態様としては、レポーターアッセイにおいてTLR7に対するEC50値が150 nMより強力であり（すなわちEC50値が150 nMより小さい）、且つTLR8に対するEC50値が15 μMより強力である（すなわちEC50値が15 μMより小さい）アゴニスト作用を有する化合物又はその塩である。ある態様としては、レポーターアッセイにおいてTLR7に対するEC50値が1 μMより強力であり（すなわちEC50値が1 μ Mより小さい）、且つTLR8に対するEC50値が15 μMより強力である（すなわちEC50値が15 μMより小さい）アゴニスト作用を有する化合物又はその塩である。「TLR7/8デュアルアゴニスト化合物」とは、TLR7/8デュアルアゴニストである化合物又はその塩である。
　「TLR7/8デュアル阻害剤」とは、TLR7阻害剤であり、かつTLR8阻害剤であることを意味する。例えば、Enpatoran等である。
　「抗体薬物複合体」における抗体部分は、特定の抗原に結合する抗体又は抗原結合フラグメントである。
　抗体において、IgG、IgM、IgA、IgD及びIgEの5つのクラスが存在する。抗体分子の基本構造は、各クラス共通で、分子量5万～7万の重鎖と2万～3万の軽鎖から構成される。重鎖は、通常約440個のアミノ酸を含むポリペプチド鎖からなり、クラスごとに特徴的な構造をもち、IgG、IgM、IgA、IgD、IgEに対応してIgγ、Igμ、Igα、Igδ、Igεとよばれる。さらにIgGには、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4のサブクラスが存在し、それぞれに対応する重鎖はIgγ1、Igγ2、Igγ3、Igγ4とよばれている。軽鎖は、通常約220個のアミノ酸を含むポリペプチド鎖からなり、λ型とκ型の2種が知られており、それぞれIgλ、Igκとよばれる。抗体分子の基本構造のペプチド構成は、それぞれ相同な2本の重鎖及び2本の軽鎖が、ジスルフィド結合(S-S結合）及び非共有結合によって結合され、分子量15万～19万である。2種の軽鎖は、どの重鎖とも対をなすことができる。個々の抗体分子は、常に同一の軽鎖2本と同一の重鎖2本からできている。
　抗体において、鎖内S-S結合は、重鎖に4つ（Igμ、Igεには5つ）、軽鎖には2つあって、アミノ酸100～110残基ごとに一つのループを成し、この立体構造は各ループ間で類似していて、構造単位又はドメインとよばれる。重鎖、軽鎖ともにN末端に位置するドメインは、同種動物の同一クラス（サブクラス）から産生された抗体であっても、そのアミノ酸配列が一定せず、可変領域とよばれており、各ドメインは、それぞれ、重鎖可変領域(VH)及び軽鎖可変領域(VL)とよばれている。可変領域よりC末端側のアミノ酸配列は、各クラス又はサブクラスごとにほぼ一定で定常領域とよばれている（各ドメインは、それぞれ、CH1、CH2、CH3又はCLと表される）。
　抗体において、抗原決定部位はVH及びVLによって構成され、結合の特異性はこの部位のアミノ酸配列によっている。一方、補体や各種Fc受容体発現細胞との結合といった生物学的活性は各クラスIgの定常領域の構造の差を反映している。軽鎖と重鎖の可変領域の可変性は、どちらの鎖にも存在する3つの小さな超可変領域にほぼ限られることがわかっており、これらの領域を相補性決定領域（CDR;それぞれN末端側からCDR1、CDR2、CDR3)とよんでいる。可変領域の残りの部分はフレームワーク領域(FR)とよばれ、比較的一定である。
　「抗原結合フラグメント」とは、抗体のVH及びVLを含む、抗原に対して結合活性を有するフラグメントである。例えば、このような代表的な抗原結合フラグメントとしては、一本鎖可変領域フラグメント(scFv)、Fab、Fab’、F(ab’)2が挙げられる。scFvは、ペプチドリンカーで連結されたVHとVLから構成される、一価の抗体フラグメントである。Fabは、軽鎖と、VH、CH1ドメインとヒンジ領域の一部とを含む重鎖フラグメントから構成される、一価の抗体フラグメントである。Fab’は、軽鎖と、VH、CH1ドメインとヒンジ領域の一部とを含む重鎖フラグメントから構成される、一価の抗体フラグメントであり、このヒンジ領域の部分には重鎖間S-S結合を構成していたシステイン残基が含まれる。F(ab’)2フラグメントは、2つのFab’フラグメントがヒンジ領域中の重鎖間S-S結合で結合した二価の抗体フラグメントである。ある態様として、本発明で使用される抗原結合フラグメントは、scFv、Fab、Fab’又はF(ab’)2である。
　「翻訳後修飾」とは、抗体を細胞で発現させる場合に、mRNAの翻訳後、化学的又は生物学的な修飾が施されたものを意味する。化学的な修飾体には、アミノ酸骨格への化学部分の結合、N-結合又はO-結合炭水化物鎖の化学修飾体等が含まれる。生物学的な修飾体には、翻訳後修飾（例えば、N-結合又はO-結合への糖鎖付加、N末又はC末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化）されたもの、原核生物宿主細胞を用いて発現させることによってN末にメチオニン残基が付加したもの等が含まれる。このような翻訳後修飾は、抗体の活性に影響を及ぼすものではないことは当該分野で知られている（Anal Biochem.、2006、Vol.348 p.24-39）。
　「抗TAA抗体」とは、腫瘍細胞の表面に発現している腫瘍関連抗原（TAA）に結合する抗体を意味する。抗TAA抗体は腫瘍細胞を標的にできる抗体又はその抗原結合フラグメントである。抗TAA抗体としては、例えば、抗A33抗体、抗B7-H3抗体、抗CanAg抗体、抗CD20抗体、抗CD22抗体、抗CD30抗体、抗CD33抗体、抗CD56抗体、抗CD70抗体、抗CEA体、抗CLDN6抗体、抗EphA2抗体、抗G250抗体、抗MUC1抗体、抗GPNMB抗体、抗Integrin抗体、抗体PSMA抗体、抗Tenascin-C抗体、抗TROP-2抗体、抗TSPAN8抗体等が挙げられるが、これに限定されるものではない。
　「抗CLDN6抗体」とは、CLDN6に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを意味する。ある態様として、抗CLDN6抗体は、以下の(Ab-A)から(Ab-D)からなる群より選択される抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメントである。
　(Ab-A)配列番号2のアミノ酸番号31から35までのアミノ酸配列からなるCDR1、配列番号2のアミノ酸番号50から65までのアミノ酸配列からなるCDR2、及び配列番号2のアミノ酸番号95から102までのアミノ酸配列からなるCDR3とを含む重鎖可変領域、並びに、配列番号4のアミノ酸番号24から34までのアミノ酸配列からなるCDR1、配列番号4のアミノ酸番号50から56までのアミノ酸配列からなるCDR2、及び配列番号4のアミノ酸番号89から97までのアミノ酸配列からなるCDR3を含む軽鎖可変領域を含む、抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメント；
　(Ab-B)配列番号6のアミノ酸番号31から35までのアミノ酸配列からなるCDR1、配列番号6のアミノ酸番号50から65までのアミノ酸配列からなるCDR2、及び配列番号6のアミノ酸番号95から102までのアミノ酸配列からなるCDR3とを含む重鎖可変領域、並びに、配列番号8のアミノ酸番号24から34までのアミノ酸配列からなるCDR1、配列番号8のアミノ酸番号50から56までのアミノ酸配列からなるCDR2、及び配列番号8のアミノ酸番号89から97までのアミノ酸配列からなるCDR3を含む軽鎖可変領域を含む、抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメント;
　(Ab-C)配列番号2のアミノ酸番号1から117までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含み、配列番号4のアミノ酸配列番号１から108までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメント;及び
　(Ab-D)配列番号6のアミノ酸番号1から117までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含み、配列番号8のアミノ酸配列番号１から108までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメント。
　ある態様として、抗CLDN6抗体は、さらに重鎖定常領域及び軽鎖定常領域を含んでいてもよい抗体である。定常領域としては、どのようなサブクラスの定常領域（例えば、重鎖としてIgγ1、Igγ2、Igγ3又はIgγ4、軽鎖としてIgλ又はIgκの定常領域)も選択可能であり、重鎖定常領域がヒトIgγ1定常領域、軽鎖定常領域としてヒトIgκ定常領域であってよい。
　ある態様として、抗CLDN6抗体はAb1又はAb2である。
　「Ab1」とは配列番号2のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号4のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗CLDN6抗体であり、
　「Ab2」とは配列番号6のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号8のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗CLDN6抗体である。
　ある態様として、抗CLDN6抗体は翻訳後修飾を受けた抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメントである。ある態様として、配列番号2のアミノ酸配列からなる重鎖が翻訳後修飾を受けて生じた重鎖及び配列番号4のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗CLDN6抗体、若しくは配列番号6のアミノ酸配列からなる重鎖が翻訳後修飾を受けて生じた重鎖及び配列番号8のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗CLDN6抗体である。ある態様として、抗CLDN6抗体は翻訳後修飾を受けたAb1又はAb2抗体である。
　抗体の腫瘍細胞への結合活性は、公知の結合活性測定方法を用いて確認することができる。結合活性を測定する方法としては、例えば、Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay(ELISA）等の公知の方法が挙げられる。ELISAを用いる場合は、例えば、CLDN6をELISAプレートに固相化し、これに対して被験抗体を添加して反応させた後、ホースラディッシュペルオキシダーゼ(HRP)等の酵素で標識した抗IgG抗体等の二次抗体を反応させる。反応後、洗浄した後、その活性を検出する試薬(例えば、HRP標識の場合、TMB Microwell Peroxidase Substrate(Kirkegaard&Perry Laboratories社、50-76-03))等を用いた活性測定により、二次抗体の結合を同定することで、被験抗体がCLDN6に結合するか否かを確認することができる。
（本発明〔１〕の態様）
　本発明である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩のある態様を以下に示す。なお、全ての態様は自由に組み合わせることができる。組み合わせが具体的に記載されていなくても、1又は2以上の態様は、ある態様に組み合わせることができる。
（1）ある態様として、式(I)が、式(IA)：
の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、式(I)が、抗体AbのSHが結合した式(IA)の抗体薬物複合体又はその塩。
（2）ある態様として、Abが抗腫瘍関連抗原(TAA)抗体又はその抗原結合フラグメントである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、Abが抗A33抗体、抗B7-H3抗体、抗CanAg抗体、抗CD20抗体、抗CD22抗体、抗CD30抗体、抗CD33抗体、抗CD56抗体、抗CD70抗体、抗CEA体、抗CLDN6抗体、抗EphA2抗体、抗G250抗体、抗MUC1抗体、抗GPNMB抗体、抗Integrin抗体、抗体PSMA抗体、抗Tenascin-C抗体、抗TROP-2抗体、及び抗TSPAN8抗体からなる群より選択される抗TAA抗体又はその抗原結合フラグメントである、式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、Abが抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメントである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、Abが以下の(Ab-A)から(Ab-D)からなる群より選択される抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメントである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩：(Ab-A)配列番号2のアミノ酸番号31から35までのアミノ酸配列からなるCDR1、配列番号2のアミノ酸番号50から65までのアミノ酸配列からなるCDR2、及び配列番号2のアミノ酸番号95から102までのアミノ酸配列からなるCDR3とを含む重鎖可変領域、並びに、配列番号4のアミノ酸番号24から34までのアミノ酸配列からなるCDR1、配列番号4のアミノ酸番号50から56までのアミノ酸配列からなるCDR2、及び配列番号4のアミノ酸番号89から97までのアミノ酸配列からなるCDR3とを含む軽鎖可変領域を含む、抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメント；(Ab-B)配列番号6のアミノ酸番号31から35までのアミノ酸配列からなるCDR1、配列番号6のアミノ酸番号50から65までのアミノ酸配列からなるCDR2、及び配列番号6のアミノ酸番号95から102までのアミノ酸配列からなるCDR3を含む重鎖可変領域、並びに、配列番号8のアミノ酸番号24から34までのアミノ酸配列からなるCDR1、配列番号8のアミノ酸番号50から56までのアミノ酸配列からなるCDR2、及び配列番号8のアミノ酸番号89から97までのアミノ酸配列からなるCDR3を含む軽鎖可変領域を含む、抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメント;(Ab-C)配列番号2のアミノ酸番号1から117までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、及び、配列番号4のアミノ酸配列番号1から108までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメント；及び(Ab-D)配列番号6のアミノ酸番号1から117までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、及び、配列番号8のアミノ酸配列番号1から108までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメント。ある態様として、Abが(Ab-A)の抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメントである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、Abが(Ab-B)の抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメントである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、Abが(Ab-C)の抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメントである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、Abが(Ab-D)の抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメントである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、AbがAb-A及びAb-Bからなる群より選択される抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメントである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、AbがAb-C及びAb-Dからなる群より選択される抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメントである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、Abが以下のAb1及びAb2から選択される抗CLDN6抗体である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩：(Ab1)配列番号2のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号4のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗CLDN6抗体;及び(Ab2)配列番号6のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号8のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗CLDN6抗体。Abが抗CLDN6抗体Ab1である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。Abが抗CLDN6抗体Ab2である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、Abが、翻訳後修飾を受けたAb1又はAb2である抗CLDN6抗体である、式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、Abが、配列番号2のアミノ酸配列からなる重鎖が翻訳後修飾を受けて生じた重鎖及び配列番号4のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗CLDN6抗体、又は配列番号6のアミノ酸配列からなる重鎖が翻訳後修飾を受けて生じた重鎖及び配列番号8のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗CLDN6抗体である、式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
（3）ある態様として、XがSである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、XがNHである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
（4）ある態様として、R1が低級アルキルである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、R1がノルマルペンチルである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、R1が-CH2-イソキサゾールジイル-CH3であり、XがS、である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、R1が-CH2-（5-メチルイソキサゾール-3-イル）であり、XがSである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
（5）ある態様として、R2がハロゲンである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、ある態様として、R2がBr、Cl又はHである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、R2がCl又はHである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、R2がHである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
（6）ある態様として、R3がCH3である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様としてR3がHである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
（7）ある態様として、R4が、式(a)、式(b)又は式(c)で示される基
である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、R4が式(a)又は式(b)で示される基である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、R4が式(b)又は式(c)で示される基である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、R4が式(c)又は式(a)で示される基である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、R4が式(a)で示される基である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、R4が式(b)で示される基である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、R4が式(c)で示される基である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
（8）ある態様として、環Aが4つのC及び1つのNで構成される5員環状アミンである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、環Aが5つのC及び1つのNで構成される6員環状アミンである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、環Aがピロリジンである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、環Aがピペラジンである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
（9）ある態様として、環Bが4つのC、1つのN及び1つのGで構成される6員環状アミンである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、環Bが2つのC、1つのN、2つのC、及び1つのGで構成される6員環状アミンである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、環Bがピペラジンである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
（10）ある態様として、GがNである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、GがCHである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
（11）ある態様として、RAが-CH2O-又は-C(CH3)2O-である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、RAが-CH2O-である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
（12）ある態様として、RBがハロアルキル、CH2OH又はC(CH3)2OHである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、RBがハロアルキル又はHであり、ここでRBがHの場合、GがNである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、RBがハロアルキルである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、RBがフルオロメチルである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、RBがモノフルオロメチルである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
（13）ある態様として、RCがC3-6シクロアルキルである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、RCが-CH2-C3-6シクロアルキルである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、RCがシクロプロピルである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様としてRCが-CH2-シクロブチルである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
（14）ある態様として、Lが、-低級アルキレン-、-C(=O)低級アルキレン-、-C(=O)NH低級アルキレン-、-C(=O)低級アルキレン-(OCH2CH2)m-NH-C(=O)低級アルキレン-である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、Lが、-低級アルキレン-、-C(=O)低級アルキレン-、-C(=O)NH低級アルキレン-である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、Lが、-C(=O)低級アルキレン-、又は-C(=O)NH低級アルキレン-である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、Lが-C(=O)低級アルキレン-である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、Lが非切断性リンカーである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、Ｌが-C(=O)CH2CH2-、又は-C(=O)NHCH2CH2-である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、Lが-C(=O)CH2CH2-である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、Lが-C(=O)NHCH2CH2-である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。 (14）に記載の態様において、Lが-C(=O)NH低級アルキレン-（ここで、この下位概念として、例えば-C(=O)NHCH2CH2-等も含まれる）を含む場合、-C(=O)NH低級アルキレン-は、R4の式(a)のRAと結合し、RAは-CH2O-又は-C(CH3)2O-である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。(14）に記載の態様において、Lが-C(=O)NH低級アルキレン-（ここで、この下位概念として、例えば-C(=O)NHCH2CH2-等も含まれる）を含む場合、-C(=O)NH低級アルキレン-は、R4の式(a)のRAと結合し、RAは-CH2O-である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
（15）ある態様として、mが4～8の整数である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、mが4又は8の整数である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
（16）ある態様として、nが1～16である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、nが2～5である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。ある態様として、nが1～8である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
（17）上記（1）～（16）に記載の態様のうち二以上の矛盾しない組み合わせである式（I）の抗体薬物複合体又はその塩。抗体薬物複合体又はその塩のある態様である（1）及び（16）、抗体薬物複合体又はその塩の抗体を選択したある態様である（2）の抗体の態様、抗体薬物複合体又はその塩の薬物を選択したある態様である（3）～（13）の薬物の態様、抗体薬物複合体又はその塩のリンカーを選択したある態様である（14）及び（15）のリンカーの態様、という（1）～（16）に記載の態様のうち二以上の矛盾しない組み合わせである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
　前記（17）に記載の組み合わせの例としては以下が挙げられる。
［1］Abが抗A33抗体、抗B7-H3抗体、抗CanAg抗体、抗CD20抗体、抗CD22抗体、抗CD30抗体、抗CD33抗体、抗CD56抗体、抗CD70抗体、抗CEA体、抗CLDN6抗体、抗EphA2抗体、抗G250抗体、抗MUC1抗体、抗GPNMB抗体、抗Integrin抗体、抗体PSMA抗体、抗Tenascin-C抗体、抗TROP-2抗体、抗TSPAN8抗体のいずれかの抗TAA抗体又はその抗原結合フラグメントであり、XがS又はNHであり、R1が低級アルキル又は-CH2-イソキサゾールジイル-CH3(ここでR1が-CH2-イソキサゾールジイル-CH3である場合XがS)であり、R2がハロゲン又はHであり、R3がCH3又はHであり、R4が式(a)、式(b)又は式(c)で示される基、
であり、環Aが複数のC及び1つのNで構成される4～6員環状アミンであり、環Bが複数のC、1つのN及び1つのGで構成される4～6員環状アミンであり、GがN又はCHであり、RAが-CH2O-、-C(CH3)2O-、-O-又は-CH2NH-であり、ここでRAが-O-又は-CH2NH-の場合、XがS;R2がハロゲン;又はR3がCH3;であり、RBがハロアルキル、CH2OH、C(CH3)2OH、OH、CH2NH2又はHであり、ここでRBがOH、CH2NH2又はHの場合、GがCH、XがS;R2がハロゲン;又はR3がCH3;であり、RCがC3-6シクロアルキル、又は、-CH2-C3-6シクロアルキルであり、Lが-低級アルキレン-、-C(=O)低級アルキレン-、-C(=O)NH低級アルキレン-、-C(=O)低級アルキレン-(OCH2CH2)m-NH-C(=O)低級アルキレン-、-(CH2CH2O)m-C(=O)低級アルキレン-、又は-C(=O)-シクロヘキサンジイル-低級アルキレン-であり、mが1～10の整数であり、nが1～16である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
［1a］Abが以下のAb1及びAb2：(Ab1)配列番号2のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号4のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗CLDN6抗体及び(Ab2)配列番号6のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号8のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗CLDN6抗体から選択される、抗CLDN6抗体であり、XがNHであり、R1が低級アルキルであり、R2がHであり、R3がHであり、R4が式(a)、式(b)、又は式(c)であり、環Aが4つのC及び1つのNで構成される5員環状アミンであり、環Bが2つのC、1つのN、2つのC、及び1つのGから構成される6員環状アミンであり、GがNであり、RAが-CH2-O-であり、RBがハロアルキルであり、RcがC3-6シクロアルキルであり、Ｌが-C(=O)CH2CH2-又は-C(=O)NHCH2CH2-である式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
［2］環Aが4つのC及び1つのNで構成される5員環状アミンであり、環Bが2つのC、1つのN、2つのC及び1つのGから構成される6員環状アミンであり、GがNである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
［3］RAが-CH2O-又は-C(CH3)2O-であり、RBがハロアルキル、CH2OH又はC(CH3)2OHである［2］に記載の式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
［4］XがNHであり、R1が低級アルキルであり、R3がHである［3］に記載の式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
［5］Lが-低級アルキレン-、-C(=O)低級アルキレン-、-C(=O)NH低級アルキレン-、又は-C(=O)低級アルキレン-(OCH2CH2)m-NH-C(=O)低級アルキレン-であり、mが4～8の整数である［4］に記載の式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
［6］Lが-低級アルキレン-、-C(=O)低級アルキレン-、又は-C(=O)NH低級アルキレン-である［5］に記載の式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
［7］XがNHであり、R1が低級アルキルであり、R2がハロゲンであり、R3がHであり、R4が式（a）であり、環Aが4つのC及び1つのNで構成される5員環状アミンであり、RAが-CH2O-であり、Lが-C(=O)NHCH2CH2-である式(I)に記載の式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
［8］XがNHであり、R1が低級アルキルであり、R2がHであり、R3がHであり、R4が式(b)であり、2つのC、1つのN、2つのC、及び1つのGから構成される6員環状アミンであり、GがNであり、RBがハロアルキルであり、Lが-C(=O)CH2CH2-である式(I)に記載の式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
［9］XがNHであり、R1が低級アルキルであり、R2がHであり、R3がHであり、R4が式(c)であり、RcがC3-6シクロアルキルであり、Lが-C(=O)CH2CH2-である式(I)に記載の式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
［10］抗体薬物複合体が、
　1-{3-[(3S)-4-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]-3-オキソプロピル}-1H-ピロール-2,5-ジオンにAbが結合した抗体薬物複合体、
　[2-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)エチル]カルバミン酸{(2S)-1-[(4-{[2-アミノ-7-クロロ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]ピロリジン-2-イル}メチルにAbが結合した抗体薬物複合体、
　N-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-N-シクロプロピル-3-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)プロパンアミドにAbが結合した抗体薬物複合体、及び、
　1-{3-[(3R)-4-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]-3-オキソプロピル}-1H-ピロール-2,5-ジオンにAbが結合した抗体薬物複合体、
からなる群より選択される［1］に記載の式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
［11］Abが抗A33抗体、抗B7-H3抗体、抗CanAg抗体、抗CD20抗体、抗CD22抗体、抗CD30抗体、抗CD33抗体、抗CD56抗体、抗CD70抗体、抗CEA体、抗CLDN6抗体、抗EphA2抗体、抗G250抗体、抗MUC1抗体、抗GPNMB抗体、抗Integrin抗体、抗体PSMA抗体、抗Tenascin-C抗体、抗TROP-2抗体、抗TSPAN8抗体のいずれかの抗TAA抗体又はその抗原結合フラグメントである［2］～［10］に記載の式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
［12］Abが抗CLDN6抗体である［11］に記載の抗体薬物複合体又はその塩。
［13］AbがAb-A及びAb-Bからなる群より選択される抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメントであり；Ab-Aが、配列番号2のアミノ酸番号31から35までのアミノ酸配列からなるCDR1、配列番号2のアミノ酸番号50から65までのアミノ酸配列からなるCDR2、及び配列番号2のアミノ酸番号95から102までのアミノ酸配列からなるCDR3を含む重鎖可変領域、並びに、配列番号4のアミノ酸番号24から34までのアミノ酸配列からなるCDR1、配列番号4のアミノ酸番号50から56までのアミノ酸配列からなるCDR2、及び配列番号4のアミノ酸番号89から97までのアミノ酸配列からなるCDR3を含む軽鎖可変領域を含む、抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメントであり；Ab-Bが、配列番号6のアミノ酸番号31から35までのアミノ酸配列からなるCDR1、配列番号6のアミノ酸番号50から65までのアミノ酸配列からなるCDR2、及び配列番号6のアミノ酸番号95から102までのアミノ酸配列からなるCDR3を含む重鎖可変領域、並びに、配列番号8のアミノ酸番号24から34までのアミノ酸配列からなるCDR1、配列番号8のアミノ酸番号50から56までのアミノ酸配列からなるCDR2、及び配列番号8のアミノ酸番号89から97までのアミノ酸配列からなるCDR3を含む軽鎖可変領域を含む、抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメント、
である［12］に記載の抗体薬物複合体又はその塩。
［14］AbがAb-C及びAb-Dからなる群より選択される抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメントであり；Ab-Cが、配列番号2のアミノ酸番号1から117までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、及び、配列番号4のアミノ酸配列番号１から108までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメントであり；Ab-Dが、配列番号6のアミノ酸番号1から117までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、及び、配列番号8のアミノ酸配列番号1から108までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメント、
である［12］に記載の抗体薬物複合体又はその塩。
［15］AbがAb1及びAb2からなる群より選択される抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメントであり；Ab1が、配列番号2のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号4のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗CLDN6抗体であり；Ab2が、配列番号6のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号8のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗CLDN6抗体、である［12］に記載の抗体薬物複合体又はその塩。
［16］Abが抗CLDN6抗体Ab1であり、XがNHであり、R1が低級アルキルであり、R2がハロゲンであり、R3がHであり、R4が式（a）であり、環Aが4つのC及び1つのNで構成される5員環状アミンであり、RAが-CH2-O-であり、Lが-C(=O)NHCH2CH2-である式(I)に記載の抗体薬物複合体又はその塩。
［17］Abが抗CLDN6抗体Ab1であり、XがNHであり、R1が低級アルキルであり、R2がHであり、R3がHであり、R4が式(b)であり、環Bが2つのC、1つのN、2つのC、及び1つのGから構成される6員環状アミンであり、GがNであり、RBがハロアルキルであり、Lが-C(=O)CH2CH2-である式(I)に記載の式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
［18］Abが抗CLDN6抗体Ab1であり、XがNHであり、R1が低級アルキルであり、R2がHであり、R3がHであり、R4が式(c)であり、RcがC3-6シクロアルキルであり、Lが-C(=O)CH2CH2-又は-C(=O)NHCH2CH2-である式(I)に記載の抗体薬物複合体又はその塩。
　本発明に包含される抗体薬物複合体又はその塩の具体的態様の例として以下が挙げられる。
　1-{3-[(3S)-4-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]-3-オキソプロピル}-1H-ピロール-2,5-ジオンにAb1が結合した抗体薬物複合体又はその塩。
　1-{3-[(3S)-4-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]-3-オキソプロピル}-1H-ピロール-2,5-ジオンにAb2が結合した抗体薬物複合体又はその塩。
　[2-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)エチル]カルバミン酸{(2S)-1-[(4-{[2-アミノ-7-クロロ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]ピロリジン-2-イル}メチルにAb1が結合した抗体薬物複合体又はその塩。
　N-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-N-シクロプロピル-3-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)プロパンアミドにAb1が結合した抗体薬物複合体又はその塩。
　1-{3-[(3R)-4-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]-3-オキソプロピル}-1H-ピロール-2,5-ジオンに Ab1が結合した抗体薬物複合体又はその塩。
　本発明に包含される式(I)の抗体薬物複合体又はその塩の具体例として以下が挙げられる。
　Ab1は配列番号2のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号4のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗体であり、
　Ab2は配列番号6のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号8のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗体である。
　nが1～16である。ある態様として、nが2～5である。
（本発明〔２〕の態様）
　本発明の式（II）の化合物又はその塩のある態様を以下に示す。
（C1）ある態様として、XがSである式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、XがNHである式(II)の化合物又はその塩。
（C2）ある態様として、R1が低級アルキル又は-CH2-イソキサゾールジイル-CH3、ここで、R1が-CH2-イソキサゾールジイル-CH3である場合、XがS、である式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、R1が低級アルキルである式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、R1がノルマルペンチルである式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、R1が-CH2-イソキサゾールジイル-CH3であり、XがS、である式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、R1が-CH2-（5-メチルイソキサゾール-3-イル）であり、XがSである式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
（C3）ある態様として、R2がハロゲンである式(II)の化合物又はその塩。R2がBr又はHである式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、R2がCl又はHである式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、R2がHである式(II)の化合物又はその塩。
（C4）ある態様として、R3がCH3である式(II)の化合物又はその塩。ある態様としてR3がHである式(II)の化合物又はその塩。
（C5）ある態様として、R40が式(a1)、式(b1)、又は式(c1)で示される基：
である式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、R40が式(a1)又は式(b1)で示される基である式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、R40が式(a1)で示される基である式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、R40が式(b1)で示される基である式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、R40が式(c1)で示される基である式(II)の化合物又はその塩。
（C6）ある態様として、環Aが4つのC及び1つのNで構成される5員環状アミンである式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、環Aがピロリジンである式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、環Aが5つのC及び1つのNで構成される6員環状アミンである式(II)の化合物又はその塩。
（C7）ある態様として、環Bが4つのC、1つのN及び1つのGで構成される6員環状アミンであり、GがNである式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、環Bが2つのC、1つのN、2つのC、及び1つのGから構成される6員環状アミンである式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、環Bが2つのC、1つのN、2つのC、及び1つのGから構成される6員環状アミンであり、GがN又はCHである式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、環Bが2つのC、1つのN、2つのC、及び1つのGから構成される6員環状アミンであり、GがNである式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、環Bがピペラジンである式(II)の化合物又はその塩。
（C8）ある態様として、GがNである式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、GがCHである式(II)の化合物又はその塩。
（C9）ある態様として、RAが-CH2O-又は-C(CH3)2O-である式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、RAが-CH2O-である式(II)の化合物又はその塩。
（C10）ある態様として、RBがハロアルキル、CH2OH、又はC(CH3)2OHである式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、RBがハロアルキル又はHであり、ここでRBがHの場合、GがCHである式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、RBがハロアルキルである式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、RBがモノフルオロメチルである式(II)の化合物又はその塩。
（C11）ある態様として、RCがC3-6シクロアルキルである式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、RCが-CH2-C3-6シクロアルキルである式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、RCがシクロプロピルである式(II)の化合物又はその塩。ある態様としてRCが-CH2-シクロブチルである式(II)の化合物又はその塩。
（C12）ある態様として、MがHである式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、Mが式(d):
で示される基である式(II)の化合物又はその塩。
（C13）ある態様として、LDが、-低級アルキレン-、-C(=O)低級アルキレン-、-C(=O)NH低級アルキレン-、-C(=O)低級アルキレン-(OCH2CH2)m-NH-C(=O)低級アルキレン-である式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、LDが、-低級アルキレン-、-C(=O)低級アルキレン-、-C(=O)NH低級アルキレン-である式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、LDが、-C(=O)低級アルキレン-、又は-C(=O)NH低級アルキレン-である式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、LDが-C(=O)低級アルキレン-である式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、LDが非切断性リンカーである式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、LDが-C(=O)NH低級アルキレン-である式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、LDが-C(=O)CH2CH2-である式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、（C13）に記載の態様においてLDが-C(=O)NH低級アルキレン-（ここで、この下位概念として、例えば-C(=O)NHCH2CH2-等も含まれる）の場合、-C(=O)NH低級アルキレン-は、R40の式(a1)においてRAと結合し、RAは-CH2O-又は-C(CH3)2O-である式(II)の化合物又はその塩。（C13）に記載の態様においてLDが-C(=O)NH低級アルキレン-（ここで、この下位概念として、例えば-C(=O)NHCH2CH2-等も含まれる）の場合、-C(=O)NH低級アルキレン-は、R40の式(a1)においてRAと結合し、RAは-CH2O-である式(II)の化合物又はその塩。
（C14）ある態様として、mが4～8の整数である式(II)の化合物又はその塩。ある態様として、mが4又は8の整数である式(II)の化合物又はその塩。
（C15）式(I)の抗体薬物複合体又はその塩を製造するための式(II)の化合物又はその塩。
（C16）上記（C1）～（C15）に記載の基のうち二以上の矛盾しない組み合わせである式(II)の化合物又はその塩。
　前記（C16）に記載の組み合わせの例としては以下が挙げられる。
［C1］Xは、S又はNHであり、R1は、低級アルキル又は-CH2-イソキサゾールジイル-CH3であり、ここでR1が-CH2-イソキサゾールジイル-CH3である場合、XはS、であり、R2は、ハロゲン又はHであり、R3は、CH3又はHであり、R40が式(a1)、式(b1)、又は式(c1)で示される基であり、環Aが4つのC及び1つのNで構成される5員環状アミン、環Bが4つのC、1つのN及び1つのGから構成される6員環状アミンであり、Gは、N又はCHであり、RAは、-CH2O-、-C(CH3)2O-、-O-、又は-CH2NH-であり、ここでRAが-O-又は-CH2NH-の場合、XがS、R2がハロゲン、又はR3がCH3であり、RBは、ハロアルキル、CH2OH、C(CH3)2OH、OH、CH2NH2、又はHであり、ここでRBがOH、CH2NH2又はHの場合、GがCH;XがS;R2がハロゲン;又はR3がCH3;であり、RCは、C3-6シクロアルキル又は-CH2-C3-6シクロアルキルであり、Mは、H、又は式(d)で示される基であり、LDは、-低級アルキレン-、-C(=O)低級アルキレン-、-C(=O)NH低級アルキレン-、-C(=O)低級アルキレン-(OCH2CH2)m-NH-C(=O)低級アルキレン-、-(CH2CH2O)m-C(=O)低級アルキレン-、又は-C(=O)-シクロヘキサンジイル-低級アルキレン-であり、mは、1～10の整数である式(II)の化合物又はその塩。
［C1a］環Aが4つのC及び1つのNで構成される5員環状アミン、環Bが2つのC、1つのN、2つのC、及び1つのGから構成される6員環状アミンであり、GがNである式(II)の化合物又はその塩。
［C2］RAが-CH2O-又は-C(CH3)2O-であり、RBがハロアルキル、CH2OH又はC(CH3)2OHである［C1］又は［C1a］に記載の式(II)の化合物又はその塩。
［C3］LDが-低級アルキレン-、-C(=O)低級アルキレン-、-C(=O)NH低級アルキレン-、又は-C(=O)低級アルキレン-(OCH2CH2)m-NH-C(=O)低級アルキレン-であり、mが4～8の整数である［C2］に記載の式(II)の化合物又はその塩。
［C4］LDが-C(=O)低級アルキレン-、又は-C(=O)NH低級アルキレン-である［C2］に記載の式(II)の化合物又はその塩。
［C5］XがNHであり、R1が低級アルキルであり、R2がハロゲン又はHであり、R3がHである［C3］又は［C4］に記載の式(II)の化合物又はその塩。
［C6］XがNHであり、R1が低級アルキルであり、R2がCl又はHであり、R3がHであり、R40が式(a1)、式(b1)、又は式(c1)であり、環Aが4つのC及び1つのNで構成される5員環状アミンであり、環Bが4つのC、1つのN及び1つのGから構成される6員環状アミンであり、GがNであり、RAが-CH2-O-であり、RBがハロアルキルであり、RcがC3-6シクロアルキルであり、Mが式(d)で示される基であり、LDが-C(=O)CH2CH2-である式(II)の化合物又はその塩。
［C6a］XがNHであり、R1が低級アルキルであり、R2がCl又はHであり、R3がHであり、R40が式(a1)、式(b1)、又は式(c1)であり、環Aが4つのC及び1つのNで構成される5員環状アミンであり、2つのC、1つのN、2つのC、及び1つのGから構成される6員環状アミンであり、GがNであり、RAが-CH2O-であり、RBがハロアルキルであり、RcがC3-6シクロアルキルであり、Mが式(d)で示される基であり、LDが-C(=O)CH2CH2-である［C5］に記載の式(II)の化合物又はその塩。
［C7］XがNHであり、R1が低級アルキルであり、R2がHであり、R3がHであり、R40が式(b1)であり、環Bが2つのC、1つのN、2つのC、及び1つのGから構成される6員環状アミンであり、GがNであり、RBがハロアルキルであり、LDが-C(=O)CH2CH2-である［C6a］に記載の式(II)の化合物又はその塩。
［C8］XがNHであり、R1が低級アルキルであり、R2がハロゲンであり、R3がHであり、R40が式(a1)であり、環Aが4つのC及び1つのNで構成される5員環状アミンであり、RAが-CH2O-であり、LDが-C(=O)NHCH2CH2-である式(II)の化合物又はその塩。
［C9］XがNHであり、R1が低級アルキルであり、R2がHであり、R3がHであり、R40が式(c)であり、RcがC3-6シクロアルキルであり、LDが-C(=O)CH2CH2-である式(II)の化合物又はその塩。
［C10］XがNHであり、R1が低級アルキルであり、R2がCl又はHであり、R3がHであり、R40が式(a1)、式(b1)、又は式(c1)であり、環Aが4つのC及び1つのNで構成される5員環状アミンであり、環Bが4つのC、1つのN及び1つのGから構成される6員環状アミンであり、GがNであり、RAが-CH2O-であり、RBがハロアルキルであり、RcがC3-6シクロアルキルであり、Mが式(d)で示される基であり、LDが-C(=O)CH2CH2-、又は-C(=O)NHCH2CH2-であり、ここでLDが-C(=O)NHCH2CH2-の場合、-C(=O)NHCH2CH2-は、R40の式(a1)においてRAと結合し、RAは-CH2O-である式(II)の化合物又はその塩。
　本発明に包含される具体的化合物又はその塩の例として以下が挙げられる。
　5-[(4-{[(2S)-2-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]メチル}-2-メトキシフェニル)メチル]-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン又はその塩、
　5-[(4-{[(3R)-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]メチル}-2-メトキシフェニル)メチル]-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン又はその塩、
　5-({4-[(シクロプロピルアミノ)メチル]-2-メトキシフェニル}メチル)-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン又はその塩、
　{(2S)-1-[(4-{[2-アミノ-7-クロロ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]ピロリジン-2-イル}メタノール又はその塩、
　5-({2-メトキシ-4-[(ピペリジン-4-イル)メチル]フェニル}メチル)-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン又はその塩、
　5-[(4-{[(2R)-2-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]メチル}-2-メトキシフェニル)メチル]-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン又はその塩、
　5-[(4-{[(シクロブチルメチル)アミノ]メチル}-2-メトキシフェニル)メチル]-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン又はその塩、
　1-{3-[(3S)-4-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]-3-オキソプロピル}-1H-ピロール-2,5-ジオン又はその塩、
　[2-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)エチル]カルバミン酸{(2S)-1-[(4-{[2-アミノ-7-クロロ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]ピロリジン-2-イル}メチル又はその塩、
　N-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-N-シクロプロピル-3-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)プロパンアミド又はその塩、
　1-{3-[(3R)-4-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]-3-オキソプロピル}-1H-ピロール-2,5-ジオン又はその塩。
　本発明に包含される具体的化合物又はその塩の例として以下が挙げられる。
　5-[(4-{[(2S)-2-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]メチル}-2-メトキシフェニル)メチル]-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン、
　5-[(4-{[(3R)-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]メチル}-2-メトキシフェニル)メチル]-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン(トリフルオロ酢酸)塩、
　5-({4-[(シクロプロピルアミノ)メチル]-2-メトキシフェニル}メチル)-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン、
　{(2S)-1-[(4-{[2-アミノ-7-クロロ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]ピロリジン-2-イル}メタノール、
　5-({2-メトキシ-4-[(ピペリジン-4-イル)メチル]フェニル}メチル)-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン、
　5-[(4-{[(2R)-2-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]メチル}-2-メトキシフェニル)メチル]-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン、
　5-[(4-{[(シクロブチルメチル)アミノ]メチル}-2-メトキシフェニル)メチル]-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン、
　1-{3-[(3S)-4-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]-3-オキソプロピル}-1H-ピロール-2,5-ジオン(トリフルオロ酢酸)塩、
　[2-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)エチル]カルバミン酸{(2S)-1-[(4-{[2-アミノ-7-クロロ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]ピロリジン-2-イル}メチル、
　N-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-N-シクロプロピル-3-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)プロパンアミド(トリフルオロ酢酸)塩、
　1-{3-[(3R)-4-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]-3-オキソプロピル}-1H-ピロール-2,5-ジオン(トリフルオロ酢酸)塩。
　本発明に包含されるMがHである（C16）に記載の式(II)の化合物又はその塩としては以下が挙げられる。
　5-[(4-{[(2S)-2-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]メチル}-2-メトキシフェニル)メチル]-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン、
　5-[(4-{[(3R)-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]メチル}-2-メトキシフェニル)メチル]-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン(トリフルオロ酢酸)塩、
　5-({4-[(シクロプロピルアミノ)メチル]-2-メトキシフェニル}メチル)-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン、
　(2S)-1-[(4-{[2-アミノ-7-クロロ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]ピロリジン-2-イル}メタノール、
　5-({2-メトキシ-4-[(ピペリジン-4-イル)メチル]フェニル}メチル)-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン、
　5-[(4-{[(2R)-2-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]メチル}-2-メトキシフェニル)メチル]-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン、
　5-[(4-{[(シクロブチルメチル)アミノ]メチル}-2-メトキシフェニル)メチル]-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン、
　また、本発明の式（II）の化合物又はその塩のある態様を以下に示す。
（C17）式(II)の化合物又はその塩におけるR40の式(a1)、式(b1)、又は式(c1)で示される基のMがHである化合物又はその塩。
（C18）式(II)の化合物又はその塩におけるR40の式(a1)、式(b1)、又は式(c1)で示される基のMの位置にリンカーを介して抗体が結合した抗体薬物複合体又はその塩。
（C19）抗体が抗TAA抗体又はその抗原結合フラグメントである、（C18）に記載の抗体薬物複合体又はその塩。
（C20）抗体が抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメントである、（C18）に記載の抗体薬物複合体又はその塩。
　式(I)の抗体薬物複合体又はその塩は、式(II)の化合物又はその塩、任意の抗TAA抗体、及び任意の非切断性リンカーを組み合わせることにより、抗体薬物複合体を提供することができる。
　式(I)の抗体薬物複合体又はその塩、及び式(II)の化合物又はその塩には、置換基の種類によって、互変異性体や幾何異性体が存在しうる。本明細書中、式(I)の抗体薬物複合体又はその塩が異性体の一形態のみで記載されることがあるが、本発明は、それ以外の異性体も包含し、異性体の分離されたもの、あるいはそれらの混合物も包含する。
　また、式(I)の抗体薬物複合体又はその塩、及び式(II)の化合物又はその塩は、不斉中心又は軸不斉を有する場合があり、これに基づくエナンチオマー（光学異性体)が存在しうる。式(I)の抗体薬物複合体又はその塩は、単離された個々の(R)体、(S)体などのエナンチオマー、それらの混合物（ラセミ混合物又はラセミでない混合物を含む）のいずれも包含する。ある態様では、エナンチオマーは、「立体化学的に純粋」である。「立体化学的に純粋」とは、当業者が、実質的に立体化学的に純粋と認識できる程度に純度をいう。ある態様としては、エナンチオマーは、例えば、90% ee（enantiomeric excess）以上、95% ee以上、98% ee以上、99% ee以上の立体化学的純度を持つ化合物である。
　また、式(I)の抗体薬物複合体の塩、及び式(II)の化合物の塩とは、式(I)の抗体薬物複合体の製薬学的に許容される塩であり、置換基の種類によって、酸付加塩を形成する場合がある。具体的には、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機酸や、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、マンデル酸、酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、ジトルオイル酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸等の有機酸との酸付加塩等が挙げられる。
　さらに、本発明は、式(I)の抗体薬物複合体及びその塩又はその塩、及び式(II)の化合物又はその塩の各種の水和物や溶媒和物、及び結晶多形の物質も包含する。
　また、本発明は、製薬学的に許容される、1以上の放射性又は非放射性の同位体でラベルされた式(I)の抗体薬物複合体又はその塩、及び式(II)の化合物又はその塩を全て包含する。本発明化合物の同位体ラベルに使用される好適な同位体の例としては、水素（2H及び3H等）、炭素（11C、13C及び14C等）、窒素（13N及び15N等）、酸素（15O, 17O 及び18O等）、フッ素（18F等）、塩素（36Cl等）、ヨウ素（123I及び125I等）、リン（32P等）、硫黄（35S等）の同位体が包まれる。同位体でラベルされた本願発明の化合物、薬物及び／又は基質の組織分布研究等の研究等に使用しうる。例えば、トリチウム（3H）、炭素14（14C）等の放射性同位体は、ラベルの容易さ及び検出の簡便さから、本目的で使用しうる。より重い同位体への置換、例えば、水素の重水素（2H）への置換は、代謝安定性が向上することにより治療上有利（例えば、in vivoでの半減期の増加、必要用量の減少、薬物相互作用の減少）な場合がある。陽電子放出同位体（11C, 18F, 15O及び13N等）への置換は、基質受容体占有率を試験するためにポジトロン断層法（PET）試験で使用しうる。本発明の同位体でラベルされた化合物は、一般的に、当業者に知られた従来の手法により、又は、ラベルされていない試薬の代わりに同位体ラベルされた適切な試薬を用いて、実施例又は製造例と同様の製法等により製造することができる。
（本発明〔３〕の態様）
　本発明における〔３〕記載の抗体のある態様を以下に示す。
（AB1）配列番号2のアミノ酸番号1から117までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、及び、配列番号4のアミノ酸配列番号1から108からなる軽鎖可変領域を含む抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメント、又は配列番号6のアミノ酸番号1から117までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、及び、配列番号8のアミノ酸配列番号1から108からなる軽鎖可変領域を含む抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメント。
（AB2）配列番号2のアミノ酸配列からなる重鎖、及び、配列番号4のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗CLDN6抗体、又は配列番号6のアミノ酸配列からなる重鎖、及び、配列番号8のアミノ酸からなる軽鎖を含む抗CLDN6抗体。
（AB3）翻訳後修飾を受けた（AB2）に記載の抗CLDN6抗体。
（AB4）配列番号2のアミノ酸配列からなる重鎖が翻訳後修飾を受けて生じた重鎖及び配列番号4のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗CLDN6抗体、又は配列番号6のアミノ酸配列からなる重鎖が翻訳後修飾を受けて生じた重鎖及び配列番号8のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗CLDN6抗体。
（AB5）(AB1)～（AB4）のいずれかに記載の抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメントを含む、抗体薬物複合体。
　(AB5)に記載の本発明の抗CLDN6抗体を含む抗体薬物複合体において、本発明のTLR7/8デュアルアゴニスト化合物のほか、当該分野で公知の薬物及びリンカーが使用されうる。
（製造法）
　式(I)の抗体薬物複合体及びその塩、及び式(II)の化合物又はその塩は、その基本構造あるいは置換基の種類に基づく特徴を利用し、種々の公知の合成法を適用して製造することができる。その際、官能基の種類によっては、当該官能基を原料から中間体へ至る段階で適当な保護基（容易に当該官能基に転化可能な基）に置き換えておくことが製造技術上効果的な場合がある。このような保護基としては、例えば、ウッツ(P. G. M. Wuts)及びグリーン(T. W. Greene)著、「Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis(第4版、2006年)」に記載の保護基等を挙げることができ、これらの反応条件に応じて適宜選択して用いればよい。このような方法では、当該保護基を導入して反応を行なったあと、必要に応じて保護基を除去することにより、所望の化合物を得ることができる。
　以下、式(I)の抗体薬物複合体又はその塩、及び式(II)の化合物又はその塩の代表的な製造法を説明する。各製法は、当該説明に付した参考文献を参照して行うこともできる。なお、本発明の製造法は以下に示した例には限定されない。
（抗体薬物複合体第１製法）
　本発明に包含される抗体薬物複合体は以下の製法により製造できる。
（式中、Abは抗体又はその抗原結合フラグメントを示す。）
　本発明の抗体薬物複合体(I)は、抗体又はその抗原結合フラグメント(1)及び本発明化合物(II-L）のマイケル付加反応により製造できる。具体的には、本発明の抗体薬物複合体(I)は、抗体又はその抗原結合フラグメント(1)におけるL鎖H鎖間のジスルフィド結合及び/又はヒンジ部のジスルフィド結合を還元させた後、生じたチオール部分が化合物（II-L）にマイケル付加して製造できる。通常、抗体を中性から酸性のバッファー中、還元剤の存在下で20～37℃で1～24時間インキュベートし、次に化合物（II-L）を加えてインキュベーションする。溶液としてはリン酸緩衝液を含む溶液が用いられる。リン酸緩衝液としては例えばリン酸水素二ナトリウムが用いられる。例えばPBS6.2/EDTA溶液が用いられる。還元剤としては例えばTCEP等が用いられる。
（薬物リンカー複合体第１製法）
　薬物リンカー複合体は以下の製法により製造できる。薬物リンカー複合体（すなわち式(II)においてMが式(d)で示される基の化合物）は式(I)の抗体薬物複合体を製造するために用いられる。
（式中、R41は、R40においてMがHの基である。R41’は、R40におけるMのHが置換された二価基である。-(C=O)-L1は、LD中の-C(=O)低級アルキレン-、-C(=O)NH低級アルキレン-、-C(=O)低級アルキレン-(OCH2CH2)m-NH-C(=O)低級アルキレン-、又は-C(=O)-シクロヘキサンジイル-低級アルキレン-を示す。以下同様。）
　本発明化合物(II-La)は、本発明化合物(II)のうちLが-C(=O)L1の化合物である。本発明化合物(II-La)は、化合物(II-1)と化合物(La)とのアミド化反応により製造できる。
　この反応では、本発明化合物(II-1)と化合物(La)とを等量若しくは一方を過剰量用い、これらの混合物を、縮合剤の存在下、反応に不活性な溶媒中、冷却下から加熱下、ある態様としては-20℃～60℃において、通常0.1時間～5日間撹拌する。溶媒の例としては、ベンゼン、トルエン若しくはキシレン等の芳香族炭化水素類、ジクロロメタン、1,2-ジクロロエタン若しくはクロロホルム等のハロゲン化炭化水素類、ジエチルエーテル、THF、1,4-ジオキサン、ジメトキシエタン等のエーテル類、DMF、DMSO、EtOAc、MeCN又は水、及びこれらの混合物が挙げられる。縮合剤の例としては、HATU、1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド、ジシクロヘキシルカルボジイミド、1,1’-カルボニルジイミダゾール、ジフェニルリン酸アジド、オキシ塩化リンが挙げられるが、これらに限定されるものではない。添加剤（例えば1-ヒドロキシベンゾトリアゾール）を用いることが反応に好ましい場合がある。トリエチルアミン、DIPEA若しくはN-メチルモルホリン等の有機塩基、又は炭酸カリウム、炭酸ナトリウム若しくは水酸化カリウム等の無機塩基の存在下で反応を行うことが、反応を円滑に進行させる上で有利な場合がある。
　また、カルボン酸(La)を反応性誘導体へ変換した後に化合物(II-1)のアミンと反応させる方法も用いることができる。カルボン酸の反応性誘導体の例としては、オキシ塩化リン、塩化チオニル等のハロゲン化剤と反応して得られる酸ハロゲン化物、クロロギ酸イソブチル等と反応して得られる混合酸無水物、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール等と縮合して得られる活性エステル等が挙げられる。これらの反応性誘導体と化合物(II-1)との反応は、ハロゲン化炭化水素類、芳香族炭化水素類、エーテル類等の反応に不活性な溶媒中、冷却下～加熱下、好ましくは、-20℃～60℃で行うことができる。
〔文献〕S. R. Sandler及びW. Karo著、「Organic Functional Group Preparations」、第2版、第1巻、Academic Press Inc.、1991年。日本化学会編「実験化学講座(第5版)」16巻(2005年)(丸善)。
（薬物リンカー複合体第2製法）
(式中、L2は、Lから-CH2-を除いた低級アルキレンを示す。以下同様。)
　本発明化合物(II-Lb)は、本発明化合物(II)のうちLが-CH2-L2の化合物である。本発明化合物(II-Lb)は、本発明化合物(II-1)と化合物(Lb)との還元的アミノ化反応により製造できる。
　この反応では、化合物(II-1)と化合物(Lb)とを等量若しくは一方を過剰量用い、これらの混合物を、還元剤の存在下、反応に不活性な溶媒中、-45℃から加熱還流下、好ましくは0℃～室温において、通常0.1時間～5日間撹拌する。溶媒の例としては、特に限定されないが、メタノール、エタノール等のアルコール類、ジエチルエーテル、THF、1,4-ジオキサン、ジメトキシエタン等のエーテル類、及びこれらの混合物が挙げられる。還元剤としては、シアン化水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素ナトリウム等が挙げられる。モレキュラーシーブス等の脱水剤、又は酢酸、塩酸、チタニウム（IV）イソプロポキシド錯体等の酸存在下で反応を行うことが好ましい場合がある。反応によっては、化合物（II-1）と化合物（Lb）との縮合によりイミンが生成し、安定な中間体として単離できる場合がある。そのような場合には、このイミン中間体の還元反応により化合物（II-Lb）を製造できる。また、前記還元剤での処理の代わりに、メタノール、エタノール、EtOAc等の溶媒中、酢酸、塩酸等の酸の存在下又は非存在下で、還元触媒（例えば、パラジウム炭素、ラネーニッケル等）を用いて反応を行うこともできる。この場合、反応を常圧から50気圧の水素雰囲気下で、冷却下から加熱下で行うことが好ましい。
〔文献〕A. R. Katritzky及びR. J. K. Taylor著、「Comprehensive Organic Functional Group Transformations II」、第2巻、Elsevier Pergamon、2005年。日本化学会編「実験化学講座(第5版)」14巻(2005年)(丸善)。
（薬物リンカー複合体第3製法）
（式中、R42はR40において式(a1)、式(b1)、又は式(c1)で示される基の-CH2-を除いた基で、Mは結合を示す。環BにおいてGはNである。R42’はR42においてNHからHを除いた二価基を示す。Halは脱離基を示す。Pr1は保護基でかつPr2がH、又は、Pr1及びPr2は一体となって保護基を示す。以下同様。）
　本発明化合物(II-Lc)は、化合物(2)と化合物(Lc-Pr)との反応により製造した化合物(II-Lc-Pr)を脱保護して得られた化合物(II-Lc-NH2)について環化反応を行い製造できる。ここで、脱離基の例には、ハロゲン、メタンスルホニルオキシ、p-トルエンスルホニルオキシ基等が含まれる。保護基Pr1の例としてはtert-ブトキシカルボニル等が挙げられ、またPr1及びPr2は一体となる例としては、フタルイミド等が挙げられる。化合物(II-Lc-Pr)を得る反応では、化合物(2)と化合物(Lc-Pr)とを等量若しくは一方を過剰量用い、これらの混合物を、反応に不活性な溶媒中、又は無溶媒下、冷却下から加熱還流下、好ましくは0℃から80℃において、通常0.1時間～5日間撹拌する。溶媒の例としては、ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類、ジエチルエーテル、THF、1,4-ジオキサン、ジメトキシエタン等のエーテル類、ジクロロメタン、1,2-ジクロロエタン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素類、DMF、DMSO、EtOAc、MeCN及びこれらの混合物が挙げられる。トリエチルアミン、DIPEA若しくはN-メチルモルホリン等の有機塩基、又は炭酸セシウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム若しくは水酸化カリウム等の無機塩基の存在下で反応を行うのが、反応を円滑に進行させる上で有利な場合がある。
〔文献〕S. R. Sandler及びW. Karo著、「Organic Functional Group Preparations」、第2版、第1巻、Academic Press Inc.、1991年。日本化学会編「実験化学講座(第5版)」14巻(2005年)(丸善)。
　化合物（II-Lc-Pr）から化合物（II-Lc-NH2）への脱保護は通常用いられる条件を用いることができる。
　化合物(II-Lc-NH2)から化合物(II-Lc)を製造する反応では、化合物(II-Lc-NH2)に溶媒中塩基存在下で、N-メトキシカルボニルマレイミドを加え室温で、0.5時間～4時間撹拌させれば製造できる。溶媒の例としては、ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類、ジエチルエーテル、THF、1,4-ジオキサン、ジメトキシエタン等のエーテル類、DMF等が挙げられ、塩基としては炭酸水素ナトリウム水溶液を用いることが挙げられる。
（薬物第１製法）
　薬物（すなわち、式(II)においてMがHの化合物）は以下の製法により製造できる。
　本発明化合物(II)は、化合物(3)と化合物(4)との反応により製造できる。この反応では、化合物(3)と化合物(4)とを等量若しくは一方を過剰量用い、これらの混合物を、反応に不活性な溶媒中、又は無溶媒下、冷却下から加熱還流下、マイクロウェーブ照射下、0℃から100℃において、通常0.1時間～5日間撹拌する。溶媒の例としては、ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類、ジエチルエーテル、THF、1,4-ジオキサン、ジメトキシエタン等のエーテル類、ジクロロメタン、1,2-ジクロロエタン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素類、DMF、DMSO、EtOAc、MeCN及びこれらの混合物が挙げられる。トリエチルアミン、DIPEA若しくはN-メチルモルホリン等の有機塩基、又は炭酸セシウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム若しくは水酸化カリウム等の無機塩基の存在下で反応を行うのが、反応を円滑に進行させる上で有利な場合がある。
〔文献〕S. R. Sandler及びW. Karo著、「Organic Functional Group Preparations」、第2版、第1巻、Academic Press Inc.、1991年。日本化学会編「実験化学講座(第5版)」14巻(2005年)(丸善)。
　なお、上記の工程で、R40ではなく保護基が結合したR40を用いて反応を行い、最後に保護基を脱保護してもよい。
（薬物第２製法）
（式中、R43はR40における式(a1)、式(b1)、又は式(c1)において-CH2-を除いた基を示し、GがNであり、Mは保護基又はHである。）
　本発明化合物(II-1)は、化合物(5)の酸化反応により得られる化合物(6)を、化合物(7)と還元的アミノ化反応することにより製造できる。
　化合物（5）の酸化反応では、反応に不活性な溶媒中、冷却下から加熱下、好ましくは-20℃から80℃で、化合物（5）を等量若しくは過剰量の酸化剤で、通常0.1時間～3日間処理する。ここで用いられる溶媒の例としては、特に限定されないが、ジエチルエーテル、THF、1,4-ジオキサン、ジメトキシエタン等のエーテル類、ジクロロメタン、1,2-ジクロロエタン若しくはクロロホルム等のハロゲン化炭化水素類、ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類、DMF、DMSO、EtOAc、水或いはこれらの混合物が挙げられる。酸化剤としては、例えば、過酸化水素、クメンヒドロペルオキシド、過酢酸、過安息香酸、m-クロロ過安息香酸、オキソン、活性二酸化マンガン、クロム酸、過マンガン酸カリウム、過ヨウ素酸ナトリウムが好適に用いられる。本反応においては、スワン(Swern)酸化等のDMSO酸化又はデスマーチン(Dess-Martin)試薬を用いた酸化が好適に用いられる。
〔文献〕B. M. Trost著、「Comprehensive Organic Synthesis」、第7巻、1991年, M. Hudlicky著。「Oxidation in Organic Chemistry (ACS Monograph :186)」、ACS、1990年, 日本化学会編「実験化学講座(第5版)」17巻(2005年)(丸善)
　化合物(6)及び化合物(7)から本発明化合物(II-1)を製造する還元的アミノ化反応では、(薬物リンカー複合体第2製法)に記載した、化合物(II-1)と化合物(Lb)から本発明化合物(II-Lb)への製造した際に用いた方法と同様の方法を用いて製造できる。
　なお、上記の工程で化合物(7)のH-R43においてR43は保護基を有していてもよく、その場合には最後に脱保護すれば本発明化合物(II-1)は製造できる。脱保護は通常用いられる条件を用いることができる。
（薬物第３製法）
（式中、環B’は複数のC、1つのN及び1つのGで構成される4～6員環状アミンであり、GがCであり、一つの不飽和結合を有する。環B”は環B’の一つの不飽和結合が還元された飽和環であり、GがCHである。Prは保護基を示す。）
以下同様。）
　本発明化合物(II-2)は、化合物(5)から得られた化合物(2)と化合物(8)との鈴木-宮浦カップリング反応により得られる化合物を、続く水素添加反応及び脱保護反応により製造できる。
　化合物(2)は化合物(5)をハロゲン化して製造できる。このハロゲン化反応は、通常のハロゲン化で用いる条件を用いることができ、ジクロロメタン等の溶液に氷冷下で、ハロゲン化剤を添加して、室温で1～4時間撹拌する。ハロゲン化剤としては、塩化チオニルなどが用いられる。
　化合物(2)と化合物(8)との鈴木-宮浦カップリング反応において、化合物(8)のボロン酸基であるB(OH)2基は、ボロン酸エステル基、ボロン酸ピナコールエステル基、トリオールボレート塩基、及びトリフルオロホウ酸塩基であってもよい。本反応は、化合物(2)と化合物(8)とを等量若しくは一方を過剰量用い、これらの混合物を、反応に不活性な溶媒中、塩基及びパラジウム触媒の存在下、室温から加熱還流下、好ましくは、20℃から140℃で、通常0.1時間～5日間撹拌する。溶媒の例としては、ジクロロメタン、1,2-ジクロロエタン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素類、ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類、ジエチルエーテル、THF、1,4-ジオキサン、ジメトキシエタン等のエーテル類、MeOH、EtOH、イソプロピルアルコール、ブタノール、アミルアルコール等のアルコール類、DMF、DMSO、MeCN、1,3-ジメチルイミダゾリジン-2-オン、水及びこれらの混合物が挙げられる。塩基としては、リン酸三カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化バリウム等の無機塩基が挙げられる。パラジウム触媒としては、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム(II)ジクロリド、[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]パラジウム(II)ジクロリド・ジクロロメタン付加物、(1E,4E)-1,5-ジフェニルペンタ-1,4-ジエン-3-オン／パラジウム（3：2）、(2-ジシクロヘキシルホスフィノ-2',6'-ジイソプロポキシ-1,1'-ビフェニル)[2-(2'-アミノ-1,1'-ビフェニル)]パラジウム(II)メタンスルホン酸塩、酢酸パラジウム(II)等が挙げられる。ジシクロヘキシル(2',6'-ジメトキシビフェニル-2-イル)ホスフィン、ジシクロヘキシル(2',6'-ジイソプロポキシ-[1,1'-ビフェニル]-2-イル)ホスフィン、1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン等の配位子の存在下で反応を行うことが、反応を円滑に進行させる上で有利な場合がある。また、混合物をマイクロ波照射により加熱することが、反応を円滑に進行させる上で有利な場合がある。
〔文献〕J. Am. Chem. Soc., 2005, 127, p.4685-4696, Org. Lett. 2011, 13, p.3948-3951; Org. Lett. 2012, 14, p.1278-1281
　化合物(2)の工程1)の反応で得られた化合物に対する水素添加反応は、水素雰囲気下、反応に不活性な溶媒中、化合物を金属触媒存在下で、通常1時間～5日間撹拌する。この反応は、通常、冷却下から加熱下、好ましくは室温で行われる。溶媒の例としては、特に限定されないが、メタノール、エタノール、2-プロパノール等のアルコール類、ジエチルエーテル、THF、1,4-ジオキサン、ジメトキシエタン等のエーテル類、水、EtOAc、DMF、DMSO及びこれらの混合物が挙げられる。金属触媒としては、パラジウム炭素、パラジウム黒、水酸化パラジウム等のパラジウム触媒、白金板、酸化白金等の白金触媒、還元ニッケル、ラネーニッケル等のニッケル触媒、テトラキストリフェニルホスフィンクロロロジウム等のロジウム触媒、還元鉄等の鉄触媒等が好適に用いられる。水素ガスの代わりに、化合物に対し等量～過剰量のギ酸又はギ酸アンモニウムを水素源として用いることもできる。
〔文献〕M. Hudlicky著、「Reductions in Organic Chemistry, 2nd ed (ACS Monograph :188)」、ACS、1996年。日本化学会編「実験化学講座(第5版)」19巻(2005年)(丸善)。
　本発明化合物(II-2)は、保護基Prを脱保護することにより製造できる。アミンの保護基Prは、通常脱保護で用いられる条件により脱保護できる。
（原料合成１）
(式中、Lvは脱離基を示す。)
　化合物(3)は化合物(9)及び化合物(10)から製造できる。ここで、脱離基の例には、ハロゲン、メタンスルホニルオキシ、p-トルエンスルホニルオキシ基等が含まれる。（薬物リンカー複合体第3製法）に記載した化合物(2)と化合物（Lc-Pr）から化合物（II-Lc-Pr）を製造する際のアルキル化反応と同様の条件を用いることができる。
（原料合成２）
(式中、Pr3は保護基を示す。)
　化合物(5)は、化合物(3-1)及び化合物(4)から製造した化合物(11)を還元反応して製造できる。
　化合物(3-1)は、上記原料合成1と同様にして製造できる。その際、化合物(10)のR40がCOOPr3である化合物を用いる。化合物(3-1)及び化合物(4)から化合物(11)の置換反応は、(薬物第1製法)に記載した化合物(3)と化合物(4)から本発明化合物(II)を製造する際と同様の条件を用いることができる。
　化合物(11)から化合物(5)への還元反応では通常エステルからアルコールに還元する際の反応条件を用いることができる。反応に不活性な溶媒中、冷却下から加熱下、好ましくは-20℃から80℃で、化合物(11)を等量若しくは過剰量の還元剤で、通常0.1時間～3日間処理する。ここで用いられる溶媒の例としては、特に限定されないが、ジエチルエーテル、THF、1,4-ジオキサン、ジメトキシエタン等のエーテル類、メタノール、エタノール、2-プロパノール等のアルコール類、ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類、DMF、DMSO、EtOAc及びこれらの混合物が挙げられる。還元剤としては、LAH、水素化ホウ素ナトリウム若しくはジイソブチルアルミウムヒドリド等のヒドリド還元剤、ナトリウム、亜鉛、鉄等の金属還元剤、その他、下記文献中の還元剤が好適に用いられる。
〔文献〕T. J. Donohoe著、「Oxidation and Reduction in Organic Synthesis (Oxford Chemistry Primers 6)」、Oxford Science Publications、2000年。日本化学会編「実験化学講座(第5版)」14巻(2005年)(丸善)。
（原料合成３）
(式中、Pr4は保護基、Lv’は脱離基、R44はR40における式(a1)、式(b1)、又は式(c1)において-CH2-を除いた基を示し、GがNである。)
　化合物(10)は、化合物(12)及び化合物(13)から製造した化合物(14)を還元反応後、水酸基を脱離基に置換して製造できる。ここで、脱離基の例には、ハロゲン、メタンスルホニルオキシ、p-トルエンスルホニルオキシ基等が含まれる。
　化合物(14)は、原料合成1と同様にして製造できる。化合物(15)は、原料合成1の化合物(11)から(5)の製造と同様にして製造できる。
　式(I)の抗体薬物複合体又はその塩、及び式(II)の化合物又はその塩は、遊離化合物、その塩、水和物、溶媒和物、あるいは結晶多形の物質として単離され、精製される。式(I)の抗体薬物複合体又はその塩、及び式(II)の化合物又はその塩は、常法の造塩反応に付すことにより製造することもできる。単離、精製は、抽出、分別結晶化、各種分画クロマトグラフィー（シリカゲルクロマトグラフィー、ゲルろ過、アフィニティークロマトグラフィー等）、通常の操作を適用して行なわれる。
　各種の異性体は、適当な原料化合物を選択することにより製造でき、あるいは異性体間の物理化学的性質の差を利用して分離することができる。例えば、光学異性体は、ラセミ体の一般的な光学分割法（例えば、光学活性な塩基又は酸とのジアステレオマー塩に導く分別結晶化や、キラルカラム等を用いたクロマトグラフィー等）により得られ、また、適当な光学活性な原料化合物から製造することもできる。
　式(I)の抗体薬物複合体又はその塩、式(II)の化合物又はその塩、及び式(I)の抗体薬物複合体に用いる抗CLDN6抗体の薬理活性は以下の試験により確認した。
（略号）
　Ex：実施例（ExL1A1、ExL1A2、ExL5A1、及びExL7A1は実施例抗体薬物複合体である。ただし、ExL1-Isotype、ExL5-Isotype、及びExL7-Isotypeと-Isotopeがついたものは比較例としての抗体薬物複合体である）。Ab0：国際公開番号2022/058298号に記載の重鎖aCLDN6-VH-CH1-CH2-CH3及び軽鎖aCLDN6-VL-CLからなる抗体、Ab1：配列番号2のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号4のアミノ酸配列からなる軽鎖とを含む抗体、Ab2：配列番号6のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号8のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗体である。
試験例１：TLR7/8レポーターアッセイ
（１．細胞株の取得）
　HEK293細胞(ATCC,#CRL-1573)にTLR(ヒトTLR7、ヒトTLR8又はマウスTLR7) タンパクをコードする塩基配列を搭載した発現ベクター及びNFκBレスポンスエレメント配列(Genbank：JQ513377 bases 33 to 84)を搭載したNanoluc PESTルシフェラーゼレポーターベクターを共にトランスフェクトした。その後、トランスフェクトした細胞を、終濃度800μg/mL Geneticin (Gibco,#10131-027)、終濃度500μg/mL Hygromycin B (Invitrogen,#10687010)、終濃度1% ペニシリンストレプトマイシン(Gibco,#15070-063)、10%ウシ胎児血清(FBS)(HyClone,#SH30084.03)含有DMEM(Sigma-Aldrich,#D5796-500 mL)で培養し、安定発現細胞株を取得した。
（２．インビトロでの低分子スクリーニング）
上記のレポーター細胞に10% FBSを含有するDMEMを加え、1×105細胞/mLの懸濁液を調製し、384ウェルホワイトコラーゲンIコートプレート(以下、「384ウェルプレート」、Corning,#356703)に１ウェルあたり20μLずつ添加した。37℃及び5%CO2条件下で一晩（18時間）培養し細胞をプレートに接着させた。DMSOに試験試料を溶解し、終濃度に対して5倍濃度になるように10% FBSを含有するDMEM培地を加えて希釈し、384ウェルプレートに5μL/wellで加えた。さらに37℃及び5%CO2条件下で7時間あるいは24時間インキュベートした後にプレートを取り出し、10分間室温に静置した。その後Nano-Glo Luciferase Assay System (Promega,#N1120)を用いて、化学発光をEnVision 2104(PerkinElmer)プレートリーダーを使用して測定した。各試験試料に対して用量応答曲線を作成し、最大シグナルの50%が得られる濃度としてEC50値を算出した。各化合物のEC50値を以下の表に示す。表中、hTLR7はヒトTLR7を示し、hTLR8はヒトTLR8を示す。mTLR7はマウスTLR7を示す。アスタリスク（*）は7時間インキュベーションの結果を示し、それ以外は24時間インキュベーションの結果を示す。
　上記試験の結果、上記表に示す式（II）の化合物又はその塩のいくつかについてTLR7/8デュアルアゴニスト作用を有することが確認された。
試験例２：フローサイトメトリーによるヒトCLDN6への結合活性評価
　CLDN6を発現しているヒト胃癌発現細胞株NUGC-3(JCRB細胞バンク）を5％FBS含有PBS(Wako、#045-29795)で1×106細胞/mLの濃度に調製し、100μL/wellで96ウェルV底マイクロプレートに播種し、遠心後上清を除去した。Ab0は国際公開番号2022/058298号に記載の重鎖aCLDN6-VH-CH1-CH2-CH3及び軽鎖aCLDN6-VL-CLからなる抗体である。Ab0、Ab1、及びAb2を5%FBS含有PBSで1 ng/mL～25 μg/mLに調製したもの(25 μg/mLから2.5倍希釈で1ng/mLまで12点の希釈系列を調製)し、100 μL/wellずつ添加し、4℃で1時間静置した。5%FBS含有PBSでPE-F(ab')2 Goat anti-human IgG (JACKSON,# 109-116-098)を100倍希釈し、さらにその希釈液でZombie NIR Fixable Viability Kit(Biolegend、#423106)を200倍希釈して2次抗体液を調製した。5%FBS含有PBSで2回洗浄した後、調製した2次抗体液を100μL/well添加し、4℃で1時間静置した。5%FBS含有PBSで2回洗浄した後、5%FBS含有PBSで再懸濁し、CytoFlex S(ベックマンコールター株式会社)で検出を行った。データ解析はFlowjo(Treestar社)で行った。生細胞画分のPE（phycoerythrin）蛍光強度のヒストグラムを作成し、幾何学的平均蛍光強度(Geometric mean fluorescence intensity:gMFI)を算出した。gMFIの数値を用いた作図はGraphPad Prism(GraphPad Software社)で行った。上記試験の結果、Ab0、Ab1、及びAb2がヒトCLDN6に結合することを確認した。図1にAb0、Ab1、及びAb2のヒトCLDN6への結合活性を示す。
　試験例３：TNF-α、INF-γ産生評価
(１．エフェクター細胞の調製)
　健常人の血液からFicoll-Paque PLUS(GE Healthcare Bioscience社）を使用して定法に従い採取したヒト末梢血単核球細胞(PBMC)を10%FBS含有RPMI1640 Medium(Thermo Fisher Scientific、#11875-093)に懸濁し、生細胞数をトリパンブルー色素排除試験にて測定した後、1x107細胞/mLに調製してエフェクター細胞とした。
(２．培養上清の回収)
　NUGC-3を10%FBS含有RPMI1640 Mediumで7.5x106細胞/mLとなるように調製し、96ウェルマイクロプレートに25 μL/wellずつ播種した。上記１で調製したPBMCを50μL/wellずつ播種し、ExL1A1及びExL1A2を10%FBS含有RPMI1640 Mediumで終濃度が5.5pM～0.97 μMに調製したもの(0.97μMから3倍希釈で5.5pMまで12点の希釈系列を調製)を25μL/well添加し、37℃、5%CO2の条件下にて24時間培養し、上清を回収した。
(３．TNF-α、INF-γ産生量測定)
　上記2で回収した上清を使用して、TNFα(human)AlphaLISA Detection Kit(Perkin Elmer、#AL208C)及びIFN-γ(human)AlphaLISA Detection Kit(Perkin Elmer、#AL217F)を用いて定法に従いTNF-α、INF-γの産生量を測定した。測定はEnVision 2104プレートリーダーを用いた。作図はGraphPad Prism(GraphPad Software社)で行った。
　図2がExL1A1及びExL1A2のそれぞれのサイトカイン量の測定結果である。
　上記試験の結果、上記表に示す式(I)の抗体薬物複合体又はその塩のいくつかにおいてサイトカイン産生作用が確認された。
　試験例４：xenograft modelにおけるin vivo活性評価
　5×106個のNUGC-3細胞をCorningマトリゲル基底膜マトリックス フェノールレッドフリー(Corning,#356237)100μLで懸濁し、SCIDマウス(CB17/Icr-Prkdcscid/CrlCrlj,日本チャ－ルスリバー社より購入)の側腹部皮下に100μL/headで移植した。移植の7日後、及び14日後にPBS又は被験抗体又は被験抗体薬物複合体3mg/kgを担癌マウスの尾静脈に投与した(n=6又は9)。被験抗体としてAb0、Ab1、被験抗体薬物複合体としてExL1A1、ExL5A1、ExL7A1、ExL1-Isotype、ExL5-Isotype、ExL7-Isotypeを用いた。ExL1-Isotypeは、ExL1A1のAb1の代わりに抗KLH抗体（国際公開2013/094723号)を用いた抗体である。ExL5-Isotype、ExL7-IsotypeもExL1-Isotypeと同様に作製した。移植腫瘍の長径及び短径を、週2回、電子デジタルノギス（株式会社ミツトヨ製）を用いて測定し、以下に示す計算式により腫瘍体積を算出した。
　　腫瘍体積(mm3)=1/2×短径(mm)×短径(mm)×長径(mm)
　上記試験の結果、Ab0、Ab1及びExL1-Isotype、ExL5-Isotype、ExL7-Isotypeでは抗腫瘍作用が確認されなかったが、ExL1A1、ExL5A1、ExL7A1では有意な抗腫瘍作用が認められた（図3）。この結果より、TLR7/8デュアルアゴニスト化合物を含む抗CLDN6抗体薬物複合体のいくつかはCLDN6を発現する癌の抗腫瘍作用が確認された。TLR7/8デュアルアゴニスト化合物を含む本発明抗体薬物複合体は、当該癌の予防又は治療に使用できることが期待できる。さらに、TLR7/8デュアルアゴニスト化合物を含む本発明抗TAA抗体薬物複合体は、当該TAAを発現する癌の予防又は治療に使用できることが期待できる。
　試験例５：TLR8、TLR7/8デュアル阻害剤添加時のINF-γ産生評価
　CLDN6を発現しているヒト卵巣癌細胞株OVCAR-3(ATCC, #HTB-161）にGFPを導入した細胞株を10%FBS含有RPMI1640 Mediumで2x106細胞/mLとなるように調製し、96ウェルマイクロプレートに25 μL/wellずつ播種し、上記試験例３の(１．エフェクター細胞の調製)に倣って1.25x107細胞/mLに調製したPBMCを40μL/wellずつ播種した。10%FBS含有RPMI1640 Mediumで終濃度10μMに調製したTLR8阻害剤のCU-CPT9a(InvivoGen、#inh-cc9a)またはTLR7/8デュアル阻害剤のEnpatoran(MedChemExpress、#HY-134581)または10%FBS含有RPMI1640 Mediumを10μL/well添加し、37℃、5%CO2の条件下にて3時間培養した。その後、ExL1A1を10%FBS含有RPMI1640 Mediumで終濃度が23pM～1.8μMに調製したもの(1.8μMから5倍希釈で23pMまで8点の希釈系列を調製) を25μL/well添加し、37℃、5%CO2の条件下にて70時間培養し、上清を回収した。回収した上清を使用して、上記試験例３の(３．TNF-α、INF-γ産生量測定)と同様の方法でINF-γの産生量を測定した。作図はGraphPad Prism(GraphPad Software社)で行った。
　図4が培地添加時またはCU-CPT9a、Enpatoran添加時のExL1A1のINF-γ産生量の測定結果である。
　上記試験の結果、本発明抗体薬物複合体に対しTLR8阻害剤を添加するとサイトカイン産生が一部抑制され、TLR7/8デュアル阻害剤を添加するとサイトカイン産生が完全に抑制されたことから、本発明薬物抗体複合体におけるサイトカイン産生量は、TLR7アゴニスト作用に加え、TLR8アゴニスト作用の寄与により増大することが確認された。
　式(I)の抗体薬物複合体又はその塩の1種又は2種以上を有効成分として含有する医薬組成物は、当分野において通常用いられている賦形剤、即ち、薬剤用賦形剤や薬剤用担体等を用いて、通常使用されている方法によって調製することができる。
　投与は関節内、静脈内、筋肉内等の注射剤、点滴用剤、坐剤、点眼剤、眼軟膏、経皮用液剤、軟膏剤、経皮用貼付剤、経粘膜液剤、経粘膜貼付剤、吸入剤等による非経口投与のいずれの形態であってもよい。注射剤、点滴用剤は、例えば、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、腫瘍内投与等の適切な方法により投与することができる。
　非経口投与のための注射剤は、無菌の水性又は非水性の溶液剤、懸濁剤又は乳濁剤を含有する。水性の溶剤としては、例えば注射用蒸留水又は生理食塩液が含まれる。非水性の溶剤としては、例えばエタノールのようなアルコール類がある。このような組成物は、さらに等張化剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、又は溶解補助剤を含んでもよい。これらは例えばバクテリア保留フィルターを通す濾過、殺菌剤の配合又は照射によって無菌化される。また、これらは無菌の固体組成物を製造し、使用前に無菌水又は無菌の注射用溶媒に溶解又は懸濁して使用することもできる。
　外用剤としては、軟膏剤、硬膏剤、クリーム剤、ゼリー剤、パップ剤、噴霧剤、ローション剤、点眼剤、眼軟膏等を包含する。一般に用いられる軟膏基剤、ローション基剤、水性又は非水性の液剤、懸濁剤、乳剤等を含有する。
　吸入剤や経鼻剤等の経粘膜剤は固体、液体又は半固体状のものが用いられ、従来公知の方法に従って製造することができる。例えば公知の賦形剤や、更に、pH調整剤、防腐剤、界面活性剤、滑沢剤、安定剤や増粘剤等が適宜添加されていてもよい。投与は、適当な吸入又は吹送のためのデバイスを使用することができる。例えば、計量投与吸入デバイス等の公知のデバイスや噴霧器を使用して、化合物を単独で又は処方された混合物の粉末として、もしくは医薬的に許容し得る担体と組み合わせて溶液又は懸濁液として投与することができる。乾燥粉末吸入器等は、単回又は多数回の投与用のものであってもよく、乾燥粉末又は粉末含有カプセルを利用することができる。あるいは、適当な駆出剤、例えば、クロロフルオロアルカン又は二酸化炭素等の好適な気体を使用した加圧エアゾールスプレー等の形態であってもよい。
　通常、1日の投与量は、体重当たり約0.001～100 mg/kg、好ましくは0.1～30 mg/kg、更に好ましくは0.1～10 mg/kgが適当であり、これを1回であるいは2回～4回に分けて投与する。静脈内投与される場合は、1日の投与量は、体重当たり約0.0001～10 mg/kgが適当で、1日1回～複数回に分けて投与する。また、経粘膜剤としては、体重当たり約0.001～100 mg/kgを1日1回～複数回に分けて投与する。投与量は症状、年令、性別等を考慮して個々の場合に応じて適宜決定される。
　投与経路、剤形、投与部位、賦形剤や添加剤の種類によって異なるが、本発明の医薬組成物は0.01～100重量%、ある態様としては0.01～50重量%の有効成分である１種又はそれ以上の式(I)の抗体薬物複合体又はその塩を含有する。
　式(I)の抗体薬物複合体は、前述の式(I)の抗体薬物複合体が有効性を示すと考えられる疾患の種々の治療剤又は予防剤と併用することができる。当該併用は、同時投与、或いは別個に連続して、若しくは所望の時間間隔をおいて投与してもよい。同時投与製剤は、配合剤であっても別個に製剤化されていてもよい。併用する薬剤としては、対象疾患を治療するために用いられている治療剤等が挙げられる。
　以下、実施例に基づき、式(I)の抗体薬物複合体の製造法をさらに詳細に説明する。なお、本発明は、下記実施例に記載の化合物に限定されるものではない。また、原料化合物の製法を製造例に、公知化合物の製造を参考例にそれぞれ示す。また、式(I)の抗体薬物複合体の製造法は、以下に示される具体的実施例の製造法のみに限定されるものではなく、式(I)の抗体薬物複合体はこれらの製造法の組み合わせ、あるいは当業者に自明である方法によっても製造されうる。
　また、本明細書、実施例、製造例、及び表中で以下の略号を使用することがある。
　抗CLDN6抗体：抗クロージン6抗体、TLR7/8デュアルアゴニスト：Toll様受容体7及びToll様受容体8のデュアルアゴニスト、DAST：三フッ化N,N-ジエチルアミノ硫黄、DEAD：アゾジカルボン酸ジエチル、DCM：ジクロロメタン、DIAD：アゾジカルボン酸ジイソプロピル、DIPEA：N,N-ジイソプロピルエチルアミン、DMF：ジメチルホルムアミド、DMP：デス-マーチンペルヨージナン、DMSO：ジメチルスルホキシド、D-PBS：ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水、EtOAc：酢酸エチル、FA：ギ酸、HATU：ヘキサフルオロリン酸2-(7-アザ-1H-ベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウム、LAH：水素化リチウムアルミニウム、MeCN：アセトニトリル、MsCl：メタンスルホニルクロリド、NAC：N-アセチル-L-システイン、NMP：N-メチル-2-ピロリドン、PE：石油エーテル、PBS6.2/EDTA：エチレンジアミン四酢酸(EDTA, 5 mM)を含むリン酸緩衝液 (10 mM, 1 M塩酸を用いてpH 6.2に調製)、PdCl2(dppf)_CH2Cl2：[1,1'-ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン]ジクロロパラジウム（II）のジクロロメタン複合体、Palau'Chlor：2-クロロ-1,3-ビス(メトキシカルボニル)グアニジン、prep-HPLC：分取High Performance Liquid Chromatography、SEC：サイズ排除クロマトグラフィー、TBAI テトラブチルアンモニウム=ヨージド、TEA：トリエチルアミン、TCEP：トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン塩酸塩、TFA：トリフルオロ酢酸、THF：テトラヒドロフラン、MWCO:分子量カットオフ（例えば10000MWCOは分子量10000以下の物質がフィルターで除去できる）、nPn：n-ペンチル、Me:メチル、Et:エチル、t-Bu：tert-ブチル、DAR: 抗体薬物複合体における化合物対抗体比（すなわち、１つの抗体に対して結合している化合物数の平均値）、NUM：実施例番号又は製造例番号(/HClは、当該実施例又は製造例が塩酸塩であり、/TFAは、当該実施例又は製造例がトリフルオロ酢酸塩であることを示す)、PEx：製造例番号、Ex：実施例番号、REF：製造方法(当該物質が、この欄に記載された実施例番号又は製造例番号の物質と同様の製造法で製造されたことを表す。例えば、PEx2-2のREFにEx1と記載されている場合には、製造例PEx2-2は実施例Ex1に記載した方法と同様にして製造されたことを表す。また、REFに複数の番号が記載されている場合にはその工程を記載された順番で同様に行うことにより製造したことを示す。例えばEx11にPEx4-1、Ex2と記載している場合にはこれらの工程を記載順に参照して製造したことを示す)、STR：化学構造式、DAT：物理化学的データ、ESI+：ESI-MS+におけるm/z値(特に記載のない場合[M+H]+)、NMRのシグナルは代表的なシグナルを示す。ｓ:一重線、ｄ：二重線、ｔ：三重線、q:四重線、ｍ：多重線、br:ブロード、[α]D 20：20℃における比旋光度、c：比旋光度を測定した際の濃度(g/100 mL)を示し、測定溶媒も示す。なお、本明細書において、化合物の命名にACD/Name（登録商標、Advanced Chemistry Development, Inc.）等の命名ソフトを使用している場合がある。また、便宜上、濃度mol/LをMとして表す。例えば、1M水酸化ナトリウム水溶液は1mol/Lの水酸化ナトリウム水溶液であることを意味する。
製造例及び実施例
（抗体の製造）
製造例AB-1：ヒト化抗CLDN6抗体の発現ベクター作製
　ヒト化抗CLDN6抗体は、国際公開番号2011/057788号に記載のマウス抗CLDN6抗体GT512muMAB 64A及びGT512muMAB 61Dの重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の配列をもとに、文献(Front Biosci.、2008、Vol.13、p.1619-1633)に記載の方法に準じて、それぞれマウス抗CLDN6抗体のヒト化のための配列設計を行った。MOLSIS Inc.社が提供する統合計算化学システムMOEでモデル構造を構築及び解析し、フレームワーク領域内にバックミューテーションを導入した。作製した2種類のヒト化抗CLDN6抗体をそれぞれ、Ab1、Ab2と称する。Ab1は配列番号2のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号4のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗体であり、Ab2は配列番号6のアミノ酸配列である重鎖及び配列番号8のアミノ酸配列である軽鎖を含む抗体である。設計したAb1及びAb2のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドをpcDNA3.4 TOPOベクター(Thermo Fisher scientific社)に搭載した。作製したベクターをそれぞれAb1発現ベクター又はAb2発現ベクターと称する。
実施例AB：ヒト化抗CLDN6抗体の作製
　製造例AB-1で作製したAb1発現ベクター又はAb2発現ベクターをExpiFectamine CHO Transfection Kit(Thermo Fisher Scientific社,#A29129)を用いてExpiCHO-S細胞に導入し、数日間培養した。培養上清からMabSelect SuRe pcc(GEヘルスケアバイオサイエンス社,#27-5438-02)を用いたアフィニティ精製法によりAb1及びAb2を精製した。
（薬物の製造）
製造例1-1
　(3S)-3-(ヒドロキシメチル)ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチル(3 g)のDMF(30 mL)溶液に20℃でDIPEA(4.72 mL)を加え、20℃で30分撹拌したのち、4-(ブロモメチル)-2-メトキシ安息香酸メチル(3.59 g)を加え、20℃で12時間撹拌した。反応溶液を減圧下濃縮し、得られた油状化合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(PE: EtOAc = 50/50-0/100)にて精製することで、(3S)-3-(ヒドロキシメチル)-4-{[3-メトキシ-4-(メトキシカルボニル)フェニル]メチル}ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチル(5.12 g)を油状物として得た。
製造例1-2
　(3S)-3-(ヒドロキシメチル)-4-{[3-メトキシ-4-(メトキシカルボニル)フェニル]メチル}ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチル(4.62 g)のクロロホルム(40 mL)溶液に0℃にてDAST(9.94 g)のクロロホルム(10 mL)溶液を加え、20℃にて3時間撹拌した。炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、pH = 8に調整し、DCM(100 mL)で2回抽出した。合わせた有機層を減圧下濃縮し、得られた残渣をprep-HPLC (カラム: Xtimate C18 150×40mm×10μm、水(0.225%FA)/MeCN = 70/30-40/60)にて精製することで、(3S)-3-(フルオロメチル)-4-{[3-メトキシ-4-(メトキシカルボニル)フェニル]メチル}ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチル(2.01 g)を油状物として得た。
製造例1-3
　(3S)-3-(フルオロメチル)-4-{[3-メトキシ-4-(メトキシカルボニル)フェニル]メチル}ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチル(2.01 g)のTHF(35 mL)溶液に0℃にてLAH(192.43 mg)を加え、20℃にて1時間撹拌した。反応溶液に硫酸ナトリウム十水和物(0.3 g)を加えた後減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(PE/EtOAc = 50/50-20/80)にて精製することで、(3S)-3-(フルオロメチル)-4-{[4-(ヒドロキシメチル)-3-メトキシフェニル]メチル}ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチル(1.71 g)を油状物として得た。
製造例1-4
　(3S)-3-(フルオロメチル)-4-{[4-(ヒドロキシメチル)-3-メトキシフェニル]メチル}ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチル(1.71 g)のDCM(35 mL)溶液に0 ℃にてDIPEA(1.62 mL)を加え、20℃にて30分撹拌した後、0℃にてMsCl(956.97 mg)を加え、20℃にて12時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮することで、(3S)-4-{[4-(クロロメチル)-3-メトキシフェニル]メチル}-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチル(1.8 g)を油状の粗生成物として得た。
製造例1-5
　4-クロロ-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2-アミン(0.5 g)のDMF(20 mL)溶液に20℃にて炭酸セシウム(2.90 g)を加え、同温にて30分撹拌後、(3S)-4-{[4-(クロロメチル)-3-メトキシフェニル]メチル}-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチル(1.03 g)を加え、同温にて12時間撹拌した。反応混合物をろ過し、ろ液に水（100mL）を加えた後、酢酸エチル(150 mL)を用い3回抽出した。合わせた有機層を減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(PE: EtOAc=0:100)にて精製することで(3S)-4-({4-[(2-アミノ-4-クロロ-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル)メチル]-3-メトキシフェニル}メチル)-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチル(1.03 g)を固体として得た。
製造例1-6
　(3S)-4-({4-[(2-アミノ-4-クロロ-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル)メチル]-3-メトキシフェニル}メチル)-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチル(0.93 g)のDMSO(20 mL)溶液に20℃にてDIPEA(936.34 μL)とペンタン-1-アミン(312.37 mg)を加え、80℃にて12時間撹拌した。反応混合物に水(50 mL)を加え、酢酸エチル(100 mL)にて3回抽出した。合わせた有機層を減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(DCM/メタノール=10/1)にて精製することで、(3S)-4-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチル(0.9 g)を固体として得た。
実施例1
　(3S)-4-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチル(0.9 g)のDCM(5 mL)溶液に20℃にてHCl/1,4-ジオキサン(4 M, 12 mL) を加え、同温にて1時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、得られた残渣をprep-HPLC (カラム: Xtimate C18 150x40mmx10μm、水(0.05%NH3/H2O)/MeCN = 90/10-40/60)にて精製することで、5-[(4-{[(2S)-2-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]メチル}-2-メトキシフェニル)メチル]-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン(474 mg)を固体として得た。
製造例2-1
　(2R)-2-(ヒドロキシメチル)ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチル(1.00 g)のDMF(15 mL)溶液に20℃にてDIPEA(1.61 mL)を加え、同温にて30分撹拌した後、4-(ブロモメチル)-2-メトキシ安息香酸メチル(1.2 g)を加え20℃にて12時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、得られた油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(PE: EtOAc = 50/50-0/100)にて精製することで、(2R)-2-(ヒドロキシメチル)-4-{[3-メトキシ-4-(メトキシカルボニル)フェニル]メチル}ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチル(1.83 g)を油状物として得た。
製造例2-2
　(2R)-2-(ヒドロキシメチル)-4-{[3-メトキシ-4-(メトキシカルボニル)フェニル]メチル}ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチル(1.83 g)のDCM(3 mL)溶液に0℃にてHCl/MeOH(4 M, 30 mL)を加え、20℃にて12時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、炭酸水素ナトリウム水溶液(150 mL)を加えたのち、DCM(150 mL)にて3回抽出した。合わせた有機層を減圧下濃縮することで、4-{[(3R)-3-(ヒドロキシメチル)ピペラジン-1-イル]メチル}-2-メトキシ安息香酸メチル(1.22 g)を油状物として得た。
製造例2-3
　4-{[(3R)-3-(ヒドロキシメチル)ピペラジン-1-イル]メチル}-2-メトキシ安息香酸メチル(1.22 g)のDCM(20 mL)溶液に20℃にて2,4-ジメトキシベンズアルデヒド(688.75 mg)を加え、20℃にて4時間撹拌した後、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(1.14 g)を加え、20℃にて12時間撹拌した。反応混合物に炭酸水素ナトリウム水溶液(50 mL)を加え、DCM(100 mL)にて2回抽出した。合わせた有機層を減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(DCM/メタノール=20/1)にて精製することで、4-{[(3R)-4-[(2,4-ジメトキシフェニル)メチル]-3-(ヒドロキシメチル)ピペラジン-1-イル]メチル}-2-メトキシ安息香酸メチル(1.47 g)を油状物として得た。
製造例2-4
　4-{[(3R)-4-[(2,4-ジメトキシフェニル)メチル]-3-(ヒドロキシメチル)ピペラジン-1-イル]メチル}-2-メトキシ安息香酸メチル(1.47 g)を用い、製造例1-2～製造例1-6と同様の手法にて5-[(4-{[(3R)-4-[(2,4-ジメトキシフェニル)メチル]-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]メチル}-2-メトキシフェニル)メチル]-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン(544.55 mg) を固体の粗生成物として得た。
実施例2
　5-[(4-{[(3R)-4-[(2,4-ジメトキシフェニル)メチル]-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]メチル}-2-メトキシフェニル)メチル]-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン(544.55 mg)のDCM(5 mL)溶液に、窒素雰囲気下、0℃にてTFA (5 mL)を加え、20℃にて1時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、得られた粗生成物をprep-HPLC(カラム: Boston Green ODS 150x30mmx5μm、水(TFA)/MeCN=94/6-54/46)にて精製することで5-[(4-{[(3R)-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]メチル}-2-メトキシフェニル)メチル]-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン(トリフルオロ酢酸)塩(240 mg)を固体として得た。
製造例3-1
　{4-[(2-アミノ-4-クロロ-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル)メチル]-3-メトキシフェニル}メタノール(1 g)のDMSO(5 mL)溶液にDIPEA(4.2 mL)とペンタン-1-アミン (1.6 mL)を加え、100℃にて2日間撹拌した。室温まで放冷後、水とクロロホルムを加え、フェーズセパレーターを用い、クロロホルムにて抽出し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール/28%アンモニア水=100/0/0-90/9/1)にて精製することで、(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メタノール(807 mg)を固体として得た。
製造例3-2
　(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メタノール(50 mg)とDCM(2 mL)の混合物に、氷冷下DMP(90 mg)を加え、室温にて2時間撹拌した。氷冷下、10%亜硫酸ナトリウム水溶液と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と混合溶媒(クロロホルム/メタノール=5/1)を加え、フェーズセパレーターを用い、混合溶媒(クロロホルム/メタノール=5/1)にて抽出し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール=100/0-80/20)にて精製することで、4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシベンズアルデヒド(34 mg)を固体として得た。
実施例3
　4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシベンズアルデヒド(31 mg)、シクロプロパンアミン(0.012 mL)及びTEA(0.024 mL)のDCM(1.2 mL)混合物にトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(36 mg)を加え、室温にて2時間撹拌した。シクロプロパンアミン(0.012 mL)とトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(36 mg)を加え、室温にて終夜撹拌した。シクロプロパンアミン(0.012 mL)とトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(36 mg)とDCM(1.2 mL)を加え、40℃にて2時間撹拌した。室温まで放冷後、シクロプロパンアミン(0.012 mL)とトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(36 mg)を加え、40℃にて8時間撹拌した。室温まで放冷後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液とクロロホルムを加え、フェーズセパレーターを用い、クロロホルムにて抽出し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール/28%アンモニア水=100/0/0-90/9/1)にて精製することで、5-({4-[(シクロプロピルアミノ)メチル]-2-メトキシフェニル}メチル)-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン(23 mg)を固体として得た。
製造例4-1
　{4-[(2-アミノ-4-クロロ-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル)メチル]-3-メトキシフェニル}メタノール(200 mg)のDMSO(2 mL)溶液にDIPEA(0.162 mL)とペンタン-1-チオール(0.094 mL)を加え、80℃にて2時間撹拌した。室温まで放冷後、DIPEA (0.162 mL)とペンタン-1-チオール(0.094 mL)を加え、100℃にて終夜撹拌した。室温まで放冷後、DIPEA(0.162 mL)とペンタン-1-チオール(0.094 mL)を加え、100℃にて3日間撹拌した。室温まで放冷後、水と混合溶媒(クロロホルム/メタノール)を加え、フェーズセパレーターを用い、混合溶媒(クロロホルム/メタノール)にて抽出し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール=100/0-90/10)で精製したのち、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=98/2-0/100)にて精製することで、(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルスルファニル)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メタノール(48 mg)を固体として得た。
実施例4
　(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルスルファニル)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メタノール(35 mg)のDCM(2 mL)溶液に氷冷下塩化チオニル(0.066 mL)を加え、室温にて1時間撹拌し、反応溶液を減圧下濃縮した。得られた残渣にNMP(1 mL)、DIPEA(0.078 mL)、ピペラジン(40 mg)及びヨウ化カリウム(16 mg)を加え、80℃にて1時間撹拌した。室温まで放冷後、水と混合溶媒(クロロホルム/メタノール=5/1)を加え、フェーズセパレーターを用い、混合溶媒(クロロホルム/メタノール=5/1)にて抽出し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール/28%アンモニア水=100/0/0-90/9/1)にて精製することで、5-({2-メトキシ-4-[(ピペラジン-1-イル)メチル]フェニル}メチル)-4-(ペンチルスルファニル)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2-アミン(33.9 mg)を固体として得た。
製造例5-1
　4-クロロ-5-{[4-(クロロメチル)-2-メトキシフェニル]メチル}-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2-アミン(200 mg)のMeCN(3 mL)溶液に、室温にてDIPEA(0.08 mL)及び[(2S)-ピロリジン-2-イル]メタノール(0.035 mL)を加え、同温にて18時間撹拌した。反応溶液を水(15 mL)に加え、酢酸エチル(50 mL)にて2回抽出した。合わせた有機層に無水硫酸ナトリウムを加え、ろ過、減圧下濃縮することで[(2S)-1-({4-[(2-アミノ-4-クロロ-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル)メチル]-3-メトキシフェニル}メチル)ピロリジン-2-イル]メタノール(72 mg)を油状物として得た。
実施例5
　[(2S)-1-({4-[(2-アミノ-4-クロロ-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル)メチル]-3-メトキシフェニル}メチル)ピロリジン-2-イル]メタノール(70 mg)、DMSO(1 mL)、DIPEA(0.16 mL)及びペンタン-1-チオール(0.1 mL)をマイクロウェーブバイアルに加え、マイクロウェーブ照射下100℃にて6時間撹拌した。反応液を室温まで放冷し、水(20 mL)に加え、酢酸エチル(20 mL)にて3回抽出した。合わせた有機層を水、飽和食塩水で洗浄したのち、無水MgSO4で乾燥後、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(アミノシリカゲル、酢酸エチル/ヘキサン=50/50-100/0)にて精製することで{(2S)-1-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルスルファニル)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]ピロリジン-2-イル}メタノール(35 mg)を油状物として得た。
製造例6-1
　5-{[4-(クロロメチル)-2-メトキシフェニル]メチル}-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン塩酸塩(0.1 g)のMeCN(3 mL)溶液に室温にてPalau'Chlor（登録商標）（65 mg)を加え、同温にて終夜撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(DCM/メタノール =9/1)にて精製することで7-クロロ-5-{[4-(クロロメチル)-2-メトキシフェニル]メチル}-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン塩酸塩(60 mg)を固体として得た。
実施例6
　7-クロロ-5-{[4-(クロロメチル)-2-メトキシフェニル]メチル}-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン塩酸塩(60 mg)のDMF(3 mL)溶液に室温にてDIPEA(0.061 mL)及び[(2S)-ピロリジン-2-イル]メタノール(0.024 mL)を加え同温にて終夜撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(アミノシリカゲル、メタノール／酢酸エチル=1/99)にて精製することで{(2S)-1-[(4-{[2-アミノ-7-クロロ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]ピロリジン-2-イル}メタノール(33 mg)を固体として得た。
製造例7-1
　7-ブロモ-4-クロロ-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2-アミン(2.68 g)及び炭酸セシウム(1.78 g)のDMF(40 mL)溶液に氷冷下4-(ブロモメチル)-3-メトキシ安息香酸メチル(1.42 g)を加え、室温にて4時間撹拌した。氷冷下、反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液(200 mL)を加え希釈したのち、氷水(600 mL)に注いだ。生じた固体をろ取後、酢酸エチル/ヘキサン(1/4, 500 mL)で洗浄し、4-[(2-アミノ-7-ブロモ-4-クロロ-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル)メチル]-3-メトキシ安息香酸メチル(4.44 g)を固体として得た。
製造例7-2
　LAH(288 mg)のTHF(60 mL)懸濁液に、氷冷下、4-[(2-アミノ-7-ブロモ-4-クロロ-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル)メチル]-3-メトキシ安息香酸メチル(4.4 g)を加え同温にて15分撹拌したのち、氷冷下、硫酸ナトリウム十水和物(15 g)を加えた。懸濁液を室温にて5時間撹拌し、ろ過し固体を除去した。得られたろ液は減圧下濃縮し、粗生成物をDMSO(30 mL)に溶解させ、DIPEA(4 mL)及びペンタン-1-アミン(2 mL)を加えた。反応混合物を110℃にて終夜撹拌後、室温まで放冷した。飽和塩化アンモニウム水溶液(40 mL)と酢酸エチル(100 mL)を加え、有機層を水(100 mL)で3回、飽和食塩水(100 mL)で1回洗浄し、無水MgSO4で乾燥後、減圧下濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(アミノシリカゲル、酢酸エチル／ヘキサン=50/50)にて精製することで(4-{[2-アミノ-7-ブロモ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メタノール(1.4 g)を固体として得た。
製造例7-3
　(4-{[2-アミノ-7-ブロモ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メタノール(0.4 g)のTHF(30 mL)溶液に、40℃にて塩化チオニル(0.13 mL)を加えた。反応混合物を同温にて2時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、得られた残渣をMeCN(20 mL)で希釈したのち、再度減圧下濃縮することで7-ブロモ-5-{[4-(クロロメチル)-2-メトキシフェニル]メチル}-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン塩酸塩(438 mg)を固体として得た。
実施例7
　[(2S)-ピロリジン-2-イル]メタノール (0.02 mL)、DIPEA (0.1 mL)及びTBAI (5 mg) のMeCN(3 mL)溶液に、室温にて7-ブロモ-5-{[4-(クロロメチル)-2-メトキシフェニル]メチル}-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン塩酸塩(80 mg)を加え、反応混合物を50℃にて16時間撹拌した。減圧下濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(アミノシリカゲル、メタノール／クロロホルム=5/95)にて精製することで{(2S)-1-[(4-{[2-アミノ-7-ブロモ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]ピロリジン-2-イル}メタノール(65 mg)を固体として得た。
製造例8-1
　4-(ブロモメチル)-2-メトキシ安息香酸メチル(5 g)から製造例1-1及び1-3と同様の手法を用い4-{[4-(ヒドロキシメチル)-3-メトキシフェニル]メチル}ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチル(2.6 g)を油状物として得た。
製造例8-2
　(6-メチル-4-オキソ-4,5-ジヒドロ-3H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2-イル)カルバミン酸メチル(1 g)のMeCN(20 mL)溶液にオキシ塩化リン(892.86 μL)及びDIPEA(1.57 mL)を加え、反応混合物を70℃にて1時間撹拌した。反応混合物を室温まで放冷し、酢酸ナトリウム(960 mg)を溶解させた水(80 mL)に注いだ。有機層を減圧下濃縮し、残渣混合物を0℃に冷却し、ろ取後、MeCN(40 mL)にて洗浄した。得られた固体を減圧下乾燥後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(メタノール/ DCM＝0/100-5/95)にて精製することで(4-クロロ-6-メチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2-イル)カルバミン酸メチル(300 mg)を固体として得た。
製造例8-3
　(4-クロロ-6-メチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2-イル)カルバミン酸メチル (300 mg)、4-{[4-(ヒドロキシメチル)-3-メトキシフェニル]メチル}ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチル(503.28 mg)及びTHF (10 mL)の混合物にトリフェニルホスフィン(980.93 mg)及びDIAD(484.77 μL)を加え25℃で1時間撹拌した。混合物に水(20 mL)を加えたのちDCM(10 mL)にて3回抽出した。合わせた有機層を飽和食塩水(5 mL)で3回洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(メタノール/DCM＝0/100-5/95)にて精製することで4-{[4-({4-クロロ-2-[(メトキシカルボニル)アミノ]-6-メチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル}メチル)-3-メトキシフェニル]メチル}ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチル(500 mg)を油状物として得た。
製造例8-4
　4-{[4-({4-クロロ-2-[(メトキシカルボニル)アミノ]-6-メチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル}メチル)-3-メトキシフェニル]メチル}ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチル(500 mg)の1,4-ジオキサン(6 mL)溶液に水酸化ナトリウム水溶液(2 M, 2.73 mL)を加え、反応混合物を80℃にて2時間撹拌した。反応混合物に水(10 mL)を加え、DCM(10 mL)にて3回抽出した。合わせた有機層を飽和食塩水(5 mL)にて3回洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、減圧下濃縮することで4-({4-[(2-アミノ-4-クロロ-6-メチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル)メチル]-3-メトキシフェニル}メチル)ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチル(360 mg)を固体として得た。
実施例8
　4-({4-[(2-アミノ-4-クロロ-6-メチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル)メチル]-3-メトキシフェニル}メチル)ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチル(360 mg) を用い、製造例1-6及び実施例2と同様の手法にて5-({2-メトキシ-4-[(ピペラジン-1-イル)メチル]フェニル}メチル)-6-メチル-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン塩酸塩(33.5 mg)を固体として得た。
製造例9-1
　(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メタノール(200 mg)のDCM(4 mL)溶液に氷冷下、塩化チオニル (0.4 mL)を加え、室温にて2時間撹拌した。反応溶液を減圧下濃縮し、得られた残渣に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液とDCMを加え、フェーズセパレーターを用い、DCMにて抽出し、減圧下濃縮した。得られた残渣に4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)-3,6-ジヒドロピリジン-1(2H)-カルボン酸tert-ブチル(168 mg)、PdCl2(dppf)_CH2Cl2(24 mg)、炭酸カリウム(150 mg)、1,4-ジオキサン(2 mL)及び水(0.4 mL)を加え、アルゴン雰囲気下、100℃にて終夜撹拌した。室温まで放冷後、水とクロロホルムを加え、フェーズセパレーターを用い、クロロホルムにて抽出し、減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(アミノシリカゲル、クロロホルム/メタノール=100/0-90/10)とシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール=100/0-80/20)にて精製することで固体(109.3 mg)を得た。その固体(76 mg)のEtOAc (3 mL)溶液に、アルゴン雰囲気下、5％白金担持炭素(約50%含水、38 mg)を加えた後、水素雰囲気下、室温にて2日間撹拌した。セライト（登録商標）濾過後、減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール=100/0-80/20)にて精製することで、4-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチル(65.2 mg)を固体として得た。
実施例9
　4-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチル(62 mg)のDCM(2 mL)溶液に氷冷下4M HCl/ジオキサン (0.6 mL)を加え、室温にて終夜撹拌した。反応溶液を減圧下濃縮し、得られた残渣に混合溶媒(クロロホルム/メタノール=5/1)とアミノシリカゲルを加え、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(アミノシリカゲル、クロロホルム/メタノール=100/0-80/20)にて精製することで5-({2-メトキシ-4-[(ピペリジン-4-イル)メチル]フェニル}メチル)-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン(41.9 mg)を固体として得た。
実施例10
　(3R)-4-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチル(460 mg)と4M HCl/dioxane(6 mL)のDCM(2 mL)混合物を20℃にて1時間攪拌した。混合物を減圧下濃縮し、残渣をprep-HPLC (カラム: Xtimate C18 150x40mmx10μm、水(0.05%NH3/H2O)/MeCN = 90/10-40/60)にて精製することで、5-[(4-{[(2R)-2-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]メチル}-2-メトキシフェニル)メチル]-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン(230 mg)を固体として得た。
（薬物リンカー複合体の製造）
実施例L1
　5-[(4-{[(2S)-2-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]メチル}-2-メトキシフェニル)メチル]-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン (0.18 g)のDMF (5 mL)溶液に3-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)プロパン酸 (64.83 mg)、HATU(291.49 mg)及びDIPEA (0.2 mL)を20℃にて加え同温にて12時間撹拌した。反応溶液に水(50 mL)を加え酢酸エチル(100 mL)で3回抽出した。合わせた有機層を減圧下濃縮し、残渣をprep-HPLC(カラム: Phenomenex Gemini-NX C18 75x30mmx3μm、水(0.1%TFA)-MeCN= 100/0-60/40)にて精製することで、1-{3-[(3S)-4-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]-3-オキソプロピル}-1H-ピロール-2,5-ジオン(トリフルオロ酢酸)塩(108.5 mg) を固体として得た。
実施例L3
　31-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)-29-オキソ-4,7,10,13,16,19,22,25-オクタオキサ-28-アザヘントリアコンタン-1-酸2,5-ジオキソピロリジン-1-イル(24 mg)、DIPEA (15 μL)及びNMP(1 mL)の混合物に氷冷下、5-[(4-{[(2S)-2-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]メチル}-2-メトキシフェニル)メチル]-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン(15 mg)を加え、室温で1時間撹拌した。反応混合物を逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー(ODS, 水(0.1%TFA)/MeCN(0.1%TFA)=100/0-50/50)により精製後、凍結乾燥して、N-{27-[(3S)-4-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]-27-オキソ-3,6,9,12,15,18,21,24-オクタオキサヘプタコサン-1-イル}-3-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)プロパンアミド(トリフルオロ酢酸)塩(25 mg)を固体として得た。
実施例L4
　1-(2-ヒドロキシエチル)-1H-ピロール-2,5-ジオン(38 mg)のDCM(1 mL)溶液にDMP(112 mg)を加え、室温にて終夜撹拌した。DCM(2 mL)とDMP(112 mg)を加え、室温にて終夜撹拌した。氷冷下、10%亜硫酸ナトリウム水溶液と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液とクロロホルムを加え、フェーズセパレーターを用い、クロロホルムにて抽出し、減圧下濃縮した。得られた残渣に5-({2-メトキシ-4-[(ピペラジン-1-イル)メチル]フェニル}メチル)-4-(ペンチルスルファニル)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2-アミン(30 mg)とTHF(2 mL)と酢酸(0.01 mL)とトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(70 mg)を加え、室温にて終夜撹拌した。氷冷下、水と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、混合溶媒(クロロホルム/ MeCN=5/1)にて抽出後、有機層を無水MgSO4で乾燥後、減圧下濃縮した。得られた残渣を逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ODS, 水(0.1%TFA)/MeCN(0.1%TFA)=100/0-0/100)にて精製することで、1-(2-{4-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルスルファニル)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]ピペラジン-1-イル}エチル)-1H-ピロール-2,5-ジオン(トリフルオロ酢酸)塩(13.2 mg)を固体として得た。
製造例L5-1
　(2S)-2-(ヒドロキシメチル)ピロリジン-1-カルボン酸ベンジル(0.94 g)、DCM(6 mL)及びDIPEA(2 mL)の混合溶液に氷冷下にてトリホスゲン(593 mg)のDCM(4 mL)溶液を加え、同温にて3時間撹拌した。その後0℃にて(2-アミノエチル)カルバミン酸tert-ブチル(704 mg)を加え、反応混合物を室温にて終夜撹拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液(10 mL)を加え、DCM(10 mL)にて2回抽出した。合わせた有機層は、無水MgSO4で乾燥後、減圧下濃縮した。 得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(酢酸エチル/ヘキサン=5/95-80/20)にて精製することで(2S)-2-(10,10-ジメチル-3,8-ジオキソ-2,9-ジオキサ-4,7-ジアザウンデカン-1-イル)ピロリジン-1-カルボン酸ベンジル(1.07 g)を油状物として得た。
製造例L5-2
　10％パラジウム担持炭素(50%含水、50 mg)と(2S)-2-(10,10-ジメチル-3,8-ジオキソ-2,9-ジオキサ-4,7-ジアザウンデカン-1-イル)ピロリジン-1-カルボン酸ベンジル(1.05 g)のメタノール(30 mL)溶液を水素雰囲気下室温にて20時間撹拌した。セライト（登録商標）でろ過し、セライト（登録商標）はメタノールで洗浄後、ろ液を減圧下濃縮後、乾燥することでエタン-1,2-ジイルビスカルバミン酸=tert-ブチル=[(2S)-ピロリジン-2-イル]メチル(710 mg)を油状物として得た。
製造例L5-3
　エタン-1,2-ジイルビスカルバミン酸=tert-ブチル=[(2S)-ピロリジン-2-イル]メチル(84 mg)とDIPEA (0.15 mL)のDMF(5 mL)溶液に7-クロロ-5-{[4-(クロロメチル)-2-メトキシフェニル]メチル}-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン塩酸塩(110 mg)を加え、室温にて16時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(アミノシリカゲル、メタノール/クロロホルム=3/97)にて精製することでエタン-1,2-ジイルビスカルバミン酸={(2S)-1-[(4-{[2-アミノ-7-クロロ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]ピロリジン-2-イル}メチル=tert-ブチル(87 mg)を固体として得た。
実施例L5
　エタン-1,2-ジイルビスカルバミン酸={(2S)-1-[(4-{[2-アミノ-7-クロロ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]ピロリジン-2-イル}メチル=tert-ブチル(84 mg)の酢酸エチル(2 mL)溶液に4M HCl/EtOAc (2 mL)を加え、室温で4時間撹拌した。減圧下濃縮後、粗生成物をTHF (2 mL)に溶解し、炭酸水素ナトリウム水溶液(1 mL)を加えた後、2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-カルボン酸メチル(70 mg)を加えた。混合物を室温で4時間撹拌したのち、 反応溶液を直接逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー(ODS, MeCN/水=0/100-100/0)にて精製した。目的物を含むフラクションを回収し、再度シリカゲルカラムクロマトグラフィー(メタノール/クロロホルム=0/100-10/90)にて精製することで[2-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)エチル]カルバミン酸{(2S)-1-[(4-{[2-アミノ-7-クロロ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]ピロリジン-2-イル}メチル(6 mg)を固体として得た。
製造例L6-1
　LAH(535 mg)のTHF(50 mL)溶液に氷冷下にて(2S)-2-[(2-tert-ブトキシ-2-オキソエトキシ)メチル]ピロリジン-1-カルボン酸tert-ブチル(2.95 g)をゆっくり加え、その後室温にて30分撹拌した。反応溶液を氷冷し、水(0.5mL)を加え、その後1M水酸化ナトリウム水溶液(0.5 mL)及び無水MgSO4を加え30 分撹拌した。ろ過後、ろ液を減圧下濃縮することで(2S)-2-[(2-ヒドロキシエトキシ)メチル]ピロリジン-1-カルボン酸tert-ブチル(1.41 g)を油状物として得た。
製造例L6-2
　(2S)-2-[(2-ヒドロキシエトキシ)メチル]ピロリジン-1-カルボン酸tert-ブチル(630 mg)、トリフェニルホスフィン(1.35 g)及びフタルイミド(755 mg)のTHF(10 mL)溶液にDEAD(2.2 mol/L, 2.4 mL)を5-10 分かけて滴下した。反応混合物を16時間撹拌し、沈殿物をろ過した。ろ液を減圧下濃縮し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(酢酸エチル/ヘキサン=20/80)にて精製することで(2S)-2-{[2-(1,3-ジオキソ-1,3-ジヒドロ-2H-イソインドール-2-イル)エトキシ]メチル}ピロリジン-1-カルボン酸tert-ブチル(911 mg)を固体として得た。
製造例L6-3
　窒素雰囲気下(2S)-2-{[2-(1,3-ジオキソ-1,3-ジヒドロ-2H-イソインドール-2-イル)エトキシ]メチル}ピロリジン-1-カルボン酸tert-ブチル(911 mg)の酢酸エチル(20 mL)溶液に氷冷下、4M HCl/EtOAc (4 mL)を加えた。反応混合物を室温で16時間撹拌し、生じた固体をろ取することで2-(2-{[(2S)-ピロリジン-2-イル]メトキシ}エチル)-1H-イソインドール-1,3(2H)-ジオン塩酸塩(751 mg)を固体として得た。
製造例L6-4
　2-(2-{[(2S)-ピロリジン-2-イル]メトキシ}エチル)-1H-イソインドール-1,3(2H)-ジオン塩酸塩(100 mg)のDMF (5 mL)溶液にDIPEA (0.22 mL)、TBAI(6 mg)及び7-クロロ-5-{[4-(クロロメチル)-2-メトキシフェニル]メチル}-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン塩酸塩(148 mg)を加え、室温にて終夜撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、得られた粗生成物をエタノール(3 mL)に溶解後、60℃にてヒドラジン一水和物(35 mg)を加え、同温で5時間撹拌した。セライト（登録商標）を用い固体をろ別、エタノール(50 mL)で洗浄し、ろ液を減圧下濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(アミノシリカゲル、クロロホルム/メタノール=98:2)にて精製することで、5-{[4-({(2S)-2-[(2-アミノエトキシ)メチル]ピロリジン-1-イル}メチル)-2-メトキシフェニル]メチル}-7-クロロ-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン(145 mg)を固体として得た。
実施例L6
　5-{[4-({(2S)-2-[(2-アミノエトキシ)メチル]ピロリジン-1-イル}メチル)-2-メトキシフェニル]メチル}-7-クロロ-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン(140 mg)の1,4-ジオキサン(2 mL)溶液に室温にて0.85M 炭酸水素ナトリウム水溶液(1.5 mL)及び2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-カルボン酸メチル(30 mg)を加え、同温にて30分撹拌した。反応混合物に水(10 mL)を加え、クロロホルム/メタノール(4:1, 10 mL)にて2回抽出した。合わせた有機層を無水MgSO4にて乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(メタノール/クロロホルム=0/100-10/90)にて精製することで1-[2-({(2S)-1-[(4-{[2-アミノ-7-クロロ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]ピロリジン-2-イル}メトキシ)エチル]-1H-ピロール-2,5-ジオン(96 mg)を油状物として得た。
実施例LA：抗体薬物複合体の製造
共通操作A：抗体薬物複合体水溶液の洗浄及び濃縮
　Amicon ultra-15 (10,000 MWCO, Millipore Co.)の容器内に抗体薬物複合体溶液を入れ、溶液量が15 mLとなるようにD-PBSリン酸緩衝生理食塩水を加えた後、遠心機を用いた遠心操作 (3,000Gで15乃至90分間遠心)にて、抗体薬物複合体溶液を洗浄及び濃縮した。
共通操作B：抗体薬物複合体の精製
　市販のD-PBS (Cat. No. 045-29795, Fujifilm Wako)で1～3本のPD-10カラムを平衡化させた。この各PD-10カラムそれぞれに、抗体薬物複合体反応水溶液 (約300 μL乃至2.5 mL)をのせ、約5mLのD-PBSで溶出させ、500 μL毎に分取した。抗体を含む分取画分を共通操作Aを1回又は2回繰り返すことで洗浄及び濃縮した。回収した溶液をメンブレンフィルターで濾過することで、抗体薬物複合体を得た。
共通操作C：抗体薬物複合体の薬物濃度の測定
　抗体薬物複合体における薬物濃度は、Thermo Scientific PierceTM BCA Protein Assay Kitなどを使用するBCA法により算出した。化合物を結合していない抗ヒトCLDN6(hCLDN6)抗体を用いて562nm吸光度の検量線を作成し、抗hCLDN6-TLR7/8デュアルアゴニスト抗体薬物複合体試料の562nmの吸光度より薬物濃度を算出した。
共通操作D：TLR7/8デュアルアゴニストを含む抗hCLDN6抗体薬物複合体のDARの測定
　抗hCLDN6-TLR7/8デュアルアゴニスト抗体薬物複合体のDARはSEC-MS測定により得られるデコンボリューションマススペクトルより算出した。Waters ACQUITY UPLC I-Classシステムを接続したWaters Xevo G2-XSなどのLC/MSに脱グリコシル化した抗体薬物複合体試料を注入した。測定データはWaters UNIFIで解析を行った。解析により得られたデコンボリューションマススペクトルから抗体-TLR7/8デュアルアゴニスト抗体薬物複合体の各MSピークのスペクトル強度を取得し、平均のDARを算出した。
共通操作E：TLR7/8デュアルアゴニストを含む抗hCLDN6抗体薬物複合体のモノマー純度の測定
　抗hCLDN6-TLR7/8デュアルアゴニスト抗体薬物複合体のモノマー純度はSEC測定により得られるクロマトグラムより算出した。YMC-SEC MABカラムを用い100 mMリン酸カリウム、200 mM塩化ナトリウム緩衝液 (pH7.0)/2-プロパノール(85:15)を0.165 mL/分の流速で送液して抗hCLDN6-TLR7/8デュアルアゴニスト抗体薬物複合体を溶出させ、UV 280 nmの吸収を検出した。各ピークの積分値を取得し、モノマー純度を算出した。
実施例L1A1
　13.57 mg/mLのAb1抗体溶液(147 μL)を1.5 mLエッペンドルフチューブに採取し、PBS6.2/EDTA (853 μL)を用いて2 mg/mLに抗体濃度を調整した。同様の抗体溶液を合計2本調製し、各溶液に0.2 Mリン酸水素二ナトリウム水溶液 (51.5 μL)及び2 mM TCEP水溶液(31.9 μL)を加え、37℃で1時間インキュベートした。次に1-{3-[(3S)-4-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]-3-オキソプロピル}-1H-ピロール-2,5-ジオン(トリフルオロ酢酸)塩の2 mM DMSO溶液 (63.8 μL)をそれぞれに加え、室温で40分間静置した。続いて20 mM NAC水溶液(12.3 μL)を加え、室温で20分間静置し、薬物とリンカーの反応を停止させた。合計2本の本反応溶液を共通操作Bにより精製し、抗体薬物複合体を含有する溶液を得た。
　別途、13.57 mg/mLのAb1抗体溶液(147 μL)を1.5 mLエッペンドルフチューブに採取し、PBS6.2/EDTA(853 μL)を用いて2 mg/mLに抗体濃度を調整した。同様の抗体溶液を合計3本調製し、各溶液に0.2 Mリン酸水素二ナトリウム水溶液 (51.5 μL)及び2 mM TCEP水溶液(31.9 μL)を加え、37℃で1時間インキュベートした。次に1-{3-[(3S)-4-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]-3-オキソプロピル}-1H-ピロール-2,5-ジオン(トリフルオロ酢酸)塩の2 mM DMSO溶液(63.8 μL)をそれぞれ加え、室温で40分間静置した。続いて20 mM NAC水溶液(12.3 μL)を加え、室温で20分間静置し、薬物リンカーの反応を停止させた。合計3本の本反応溶液を共通操作Bにより精製し、抗体薬物複合体を含有する溶液を得た。
　上記で得られた抗体薬物複合体を含有する溶液2つを混合させた後、共通操作Aを2回繰り返すことで洗浄及び濃縮した。回収した溶液をメンブレンフィルターで濾過した後、溶液量が1.8 mLとなるまでD-PBSで希釈した。共通操作C及びDにより表記抗体薬物複合体(DAR 3.44)を含有する3.88 mg/mL溶液であることを確認した。
実施例L1A2
　14.72 mg/mLのAb2抗体溶液(135.9 μL)を1.5 mLエッペンドルフチューブに採取し、PBS6.2/EDTA(864.1 μL)を用いて2 mg/mLに抗体濃度を調整した。同様の抗体溶液を合計3本調製し、各溶液に0.2 Mリン酸水素二ナトリウム水溶液 (51.5 μL)及び2 mM TCEP水溶液(31.9 μL)を加え、37℃で1時間インキュベートした。次に1-{3-[(3S)-4-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]-3-オキソプロピル}-1H-ピロール-2,5-ジオン(トリフルオロ酢酸)塩の2 mM DMSO溶液 (63.8 μL)をそれぞれ加え、室温で40分間静置した。続いて20 mM NAC水溶液 (12.3 μL)を加え、室温で20分間静置し、薬物リンカーの反応を停止させた。合計3本の本反応溶液を共通操作Bにより精製し、抗体薬物複合体を含有する1.25 mLの溶液を得た。共通操作C及びDにより表記抗体薬物複合体(DAR 4.02)を含有する4.61 mg/mL溶液であることを確認した。
実施例L5A1
　13.57 mg/mLのAb1抗体溶液 (147 μL)を1.5 mLエッペンドルフチューブに採取し、PBS6.2/EDTA (853 μL)を用いて2 mg/mLに抗体濃度を調整した。同様の抗体溶液を合計5本調製し、各溶液に0.2 Mリン酸水素二ナトリウム水溶液 (51.5 μL)及び2 mM TCEP水溶液 (31.9 μL)を加え、37℃で1時間インキュベートした。次に[2-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)エチル]カルバミン酸{(2S)-1-[(4-{[2-アミノ-7-クロロ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]ピロリジン-2-イル}メチルの2 mM DMSO溶液 (63.8 μL)をそれぞれ加え、室温で40分間静置した。続いて20 mM NAC水溶液 (12.3 μL)を加え、室温で20分間静置し、薬物リンカーの反応を停止させた。合計5本の本反応溶液を共通操作Bにより精製し、抗体薬物複合体を含有する1.85 mLの溶液を得た。共通操作C及びDにより表記抗体薬物複合体(DAR 2.95)を含有する4.55 mg/mL溶液であることを確認した。
実施例L7A1
　13.57 mg/mLのAb1抗体溶液(147 μL)を1.5 mLエッペンドルフチューブに採取し、PBS6.2/EDTA (853 μL)を用いて2 mg/mLに抗体濃度を調整した。同様の抗体溶液を合計2本調製し、各溶液に0.2 Mリン酸水素二ナトリウム水溶液 (51.5 μL)及び2 mM TCEP水溶液(31.9 μL)を加え、37℃で1時間インキュベートした。次にN-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-N-シクロプロピル-3-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)プロパンアミド(トリフルオロ酢酸)塩の2 mM DMSO溶液(63.8 μL)をそれぞれ加え、室温で40分間静置した。続いて20 mM NAC水溶液(12.3 μL)を加え、室温で20分間静置し、薬物リンカーの反応を停止させた。合計2本の本反応溶液を共通操作Bにより精製し、抗体薬物複合体を含有する溶液を得た。
　別途、13.57 mg/mLのAb1抗体溶液(147 μL)を1.5 mLエッペンドルフチューブに採取し、PBS6.2/EDTA (853 μL)を用いて2 mg/mLに抗体濃度を調整した。同様の抗体溶液を合計3本調製し、各溶液に0.2 Mリン酸水素二ナトリウム水溶液 (51.5 μL)及び2 mM TCEP水溶液(31.9 μL)を加え、37℃で1時間インキュベートした。次にN-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-N-シクロプロピル-3-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)プロパンアミド(トリフルオロ酢酸)塩の2 mM DMSO溶液 (63.8 μL)をそれぞれ加え、室温で40分間静置した。続いて20 mM NAC水溶液 (12.3 μL)を加え、室温で20分間静置し、薬物リンカーの反応を停止させた。合計3本の本反応溶液を共通操作Bにより精製し、抗体薬物複合体を含有する溶液を得た。
　上記で得られた抗体薬物複合体を含有する溶液2つを混合させた後、共通操作Aを2回繰り返すことで洗浄及び濃縮した。回収した溶液をメンブレンフィルターで濾過した後、溶液量が1.8 mLとなるまでD-PBSで希釈した。共通操作C及びDにより表記抗体薬物複合体(DAR 3.28)を含有する4.52 mg/mL溶液であることを確認した。
　上記製造例及び実施例に記載された方法、又はその記載された方法と同様にして後期表に示す製造例及び実施例に記載された化合物又はその塩、若しくは抗体薬物複合体又はその塩を製造した。
　式(I)の抗体薬物複合体又はその塩は、優れたTLR7/8デュアルアゴニスト作用をを有し、TNF-α産生効果、INF-γ産生効果及びin vivo抗腫瘍効果も発揮するため、卵巣癌、精巣癌、子宮頸癌、肺癌等の様々な癌の予防及び／又は治療に有用であると期待される。また、本発明で見出された抗CLDN6抗体はヒトCLDN6に対する結合活性を有し、癌の予防及び／又は治療剤として使用するための式(I)抗体薬物複合体又はその塩に用いることが期待される。
　配列番号2はヒト化抗CLDN6抗体Ab1の重鎖のアミノ酸配列であり、配列番号1に示される塩基配列は、配列番号2に示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列である。配列番号4はヒト化抗CLDN6抗体Ab1の軽鎖のアミノ酸配列であり、配列番号3に示される塩基配列は、配列番号4に示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列である。配列番号6はヒト化抗CLDN6抗体Ab2の重鎖のアミノ酸配列であり、配列番号5に示される塩基配列は、配列番号6に示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列である。配列番号8はヒト化抗CLDN6抗体Ab2の軽鎖のアミノ酸配列であり、配列番号7に示される塩基配列は、配列番号8に示されるアミノ酸配列をコードする塩基配列である。

Claims (35)

  1. 　式(I)の抗体薬物複合体又はその塩：
    （式中、
    Abは、抗体又はその抗原結合フラグメント、
    Xは、S又はNH、
    R1は、低級アルキル又は-CH2-イソキサゾールジイル-CH3、
    ここでR1が-CH2-イソキサゾールジイル-CH3である場合、XはS、
    R2は、ハロゲン又はH、
    R3は、CH3又はH、
    R4は、式(a)、式(b)、又は式(c)で示される基、
    環Aは、複数のC及び1つのNで構成される4～6員環状アミン、
    環Bは、複数のC、1つのN及び1つのGで構成される4～6員環状アミン、
    Gは、N又はCH、
    RAは、-CH2O-、C(CH3)2O-、-O-又は-CH2NH-、
    　　ここでRAが-O-又は-CH2NH-の場合、XがS; R2がハロゲン; 又はR3がCH3;、
    RBは、ハロアルキル、CH2OH、C(CH3)2OH、OH、CH2NH2又はH、
    　　ここでRBがOH、CH2NH2又はHの場合、GがCH; XがS; R2がハロゲン; 又はR3がCH3;、
    RCは、C3-6シクロアルキル、又は-CH2-C3-6シクロアルキル、
    Lは、-低級アルキレン-、-C(=O)低級アルキレン-、-C(=O)NH低級アルキレン-、-C(=O)低級アルキレン-(OCH2CH2)m-NH-C(=O)低級アルキレン-、-(CH2CH2O)m-C(=O)低級アルキレン-、又は-C(=O)-シクロヘキサンジイル-低級アルキレン-、
    mは、1～10の整数、
    nは、1～16である）。
  2. 　環Aが4つのC及び1つのNで構成される5員環状アミン、環Bが2つのC、1つのN、2つのC及び1つのGから構成される6員環状アミンであり、GがNである請求項１に記載の抗体薬物複合体又はその塩。
  3. 　RAが-CH2O-又は-C(CH3)2O-であり、RBがハロアルキル、CH2OH又はC(CH3)2OHである請求項２に記載の抗体薬物複合体又はその塩。
  4. 　XがNHであり、R1が低級アルキルであり、R3がHである、請求項３に記載の抗体薬物複合体又はその塩。
  5. 　Lが-低級アルキレン-、-C(=O)低級アルキレン-、-C(=O)NH低級アルキレン-、又は-C(=O)低級アルキレン-(OCH2CH2)m-NH-C(=O)低級アルキレン-であり、mが4～8の整数である請求項４に記載の抗体薬物複合体又はその塩。
  6. 　Lが-低級アルキレン-、-C(=O)低級アルキレン-、又は-C(=O)NH低級アルキレン-である請求項５に記載の抗体薬物複合体又はその塩。
  7. 　XがNHであり、R1が低級アルキルであり、R2がハロゲンであり、R3がHであり、R4が式(a)であり、環Aが4つのC及び1つのNで構成される5員環状アミンであり、RAが-CH2O-であり、Lが-C(=O)NHCH2CH2-である、請求項１に記載の抗体薬物複合体又はその塩。
  8. 　XがNHであり、R1が低級アルキルであり、R2がHであり、R3がHであり、R4が式(b)であり、環Bが2つのC、1つのN、2つのC、及び1つのGから構成される6員環状アミンであり、GがNであり、RBがハロアルキルであり、Lが-C(=O)CH2CH2-である請求項１に記載の抗体薬物複合体又はその塩。
  9. 　XがNHであり、R1が低級アルキルであり、R2がHであり、R3がHであり、R4が式(c)であり、RcがC3-6シクロアルキルであり、Lが-C(=O)CH2CH2-である請求項１に記載の抗体薬物複合体又はその塩。
  10. 　式(I)の抗体薬物複合体が、
    　1-{3-[(3S)-4-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]-3-オキソプロピル}-1H-ピロール-2,5-ジオンにAbが結合した抗体薬物複合体、
    　[2-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)エチル]カルバミン酸{(2S)-1-[(4-{[2-アミノ-7-クロロ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]ピロリジン-2-イル}メチルにAbが結合した抗体薬物複合体、
    　N-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-N-シクロプロピル-3-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)プロパンアミドにAbが結合した抗体薬物複合体、及び、
    　1-{3-[(3R)-4-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]-3-オキソプロピル}-1H-ピロール-2,5-ジオンにAbが結合した抗体薬物複合体からなる群より選択される請求項１に記載の抗体薬物複合体又はその塩。
  11. 　Abが抗A33抗体、抗B7-H3抗体、抗CanAg抗体、抗CD20抗体、抗CD22抗体、抗CD30抗体、抗CD33抗体、抗CD56抗体、抗CD70抗体、抗CEA体、抗CLDN6抗体、抗EphA2抗体、抗G250抗体、抗MUC1抗体、抗GPNMB抗体、抗Integrin抗体、抗体PSMA抗体、抗Tenascin-C抗体、抗TROP-2抗体、抗TSPAN8抗体のいずれかの抗TAA抗体又はその抗原結合フラグメントである、請求項１～１０に記載の式(I)の抗体薬物複合体又はその塩。
  12. 　Abが抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメントである請求項１１に記載の抗体薬物複合体又はその塩。
  13. 　AbがAb-A及びAb-Bからなる群より選択される抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメント、
    　Ab-Aが、配列番号2のアミノ酸番号31から35までのアミノ酸配列からなるCDR1、配列番号2のアミノ酸番号50から65までのアミノ酸配列からなるCDR2、及び配列番号2のアミノ酸番号95から102までのアミノ酸配列からなるCDR3を含む重鎖可変領域、並びに、配列番号4のアミノ酸番号24から34までのアミノ酸配列からなるCDR1、配列番号4のアミノ酸番号50から56までのアミノ酸配列からなるCDR2、及び配列番号4のアミノ酸番号89から97までのアミノ酸配列からなるCDR3を含む軽鎖可変領域を含む、抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメント、
    　Ab-Bが、配列番号6のアミノ酸番号31から35までのアミノ酸配列からなるCDR1、配列番号6のアミノ酸番号50から65までのアミノ酸配列からなるCDR2、及び配列番号6のアミノ酸番号95から102までのアミノ酸配列からなるCDR3を含む重鎖可変領域、並びに、配列番号8のアミノ酸番号24から34までのアミノ酸配列からなるCDR1、配列番号8のアミノ酸番号50から56までのアミノ酸配列からなるCDR2、及び配列番号8のアミノ酸番号89から97までのアミノ酸配列からなるCDR3を含む軽鎖可変領域を含む、抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメント、
    である請求項１２に記載の抗体薬物複合体又はその塩。
  14. 　AbがAb-C及びAb-Dからなる群より選択される抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメント、
    　Ab-Cが、配列番号2のアミノ酸番号1から117までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、及び、配列番号4のアミノ酸配列番号1から108までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメント、
    　Ab-Dが、配列番号6のアミノ酸番号1から117までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、及び、配列番号8のアミノ酸配列番号1から108までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメントからなる群より選択される、抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメント、
    である請求項１２に記載の抗体薬物複合体又はその塩。
  15. 　AbがAb1及びAb2からなる群より選択される抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメント、
    　Ab1が、配列番号2のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号4のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗CLDN6抗体、
    　Ab2が、配列番号6のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号8のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗CLDN6抗体、
    である請求項１２に記載の抗体薬物複合体又はその塩。
  16. 　Abが抗CLDN6抗体Ab1であり、XがNHであり、R1が低級アルキルであり、R2がハロゲンであり、R3がHであり、R4が式(a)であり、環Aが4つのC及び1つのNで構成される5員環状アミンであり、RAが-CH2O-であり、Lが-C(=O)NHCH2CH2-である、請求項１記載の抗体薬物複合体又はその塩。
  17. 　Abが抗CLDN6抗体Ab1であり、XがNHであり、R1が低級アルキルであり、R2がHであり、R3がHであり、R4が式(b)であり、環Bが2つのC、1つのN、2つのC、及び1つのGから構成される6員環状アミンであり、GがNであり、RBがハロアルキルであり、Lが-C(=O)CH2CH2-である請求項１に記載の抗体薬物複合体又はその塩。
  18. 　Abが抗CLDN6抗体Ab1であり、XがNHであり、R1が低級アルキルであり、R2がHであり、R3がHであり、R4が式(c)であり、RcがC3-6シクロアルキルであり、Lが-C(=O)CH2CH2-である請求項１記載の抗体薬物複合体又はその塩。
  19. 　抗体薬物複合体が、
    　1-{3-[(3S)-4-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]-3-オキソプロピル}-1H-ピロール-2,5-ジオンにAb1が結合した抗体薬物複合体、
    　1-{3-[(3S)-4-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]-3-オキソプロピル}-1H-ピロール-2,5-ジオンにAb2が結合した抗体薬物複合体、
    　[2-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)エチル]カルバミン酸{(2S)-1-[(4-{[2-アミノ-7-クロロ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]ピロリジン-2-イル}メチルにAb1が結合した抗体薬物複合体、
    　N-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-N-シクロプロピル-3-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)プロパンアミドにAb1が結合した抗体薬物複合体、及び、
    　1-{3-[(3R)-4-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]-3-オキソプロピル}-1H-ピロール-2,5-ジオンにAb1が結合した抗体薬物複合体、
    からなる群より選択される請求項１記載の抗体薬物複合体又はその塩。
  20. 　抗体薬物複合体が、
    からなる群より選択される、nが1～16である、請求項１９に記載の抗体薬物複合体又はその塩。
  21. 　請求項１に記載の抗体薬物複合体又はその塩、及び製薬学的に許容される賦形剤を含有する医薬組成物。
  22. 　癌の予防若しくは治療用医薬組成物である請求項２１に記載の医薬組成物。
  23. 　癌の予防若しくは治療用医薬組成物の製造のための請求項１に記載の抗体薬物複合体又はその塩の使用。
  24. 　癌の予防若しくは治療のための請求項１に記載の抗体薬物複合体又はその塩の使用。
  25. 　癌の予防若しくは治療に使用するための請求項１に記載の抗体薬物複合体又はその塩。
  26. 　請求項１に記載の抗体薬物複合体又はその塩の有効量を対象に投与することからなる癌の予防若しくは治療方法。
  27. 　式(II)の化合物又はその塩：
    （式中、
    Xは、S又はNH、
    R1は、低級アルキル又は-CH2-イソキサゾールジイル-CH3、
    　　ここでR1が-CH2-イソキサゾールジイル-CH3である場合、XはS、
    R2は、ハロゲン又はH、
    R3は、CH3又はH、
    R40は、式(a1)、式(b1)、又は式(c1)で示される基、
    環Aは、複数のC及び1つのN原子で構成される4～6員環状アミン、
    環Bは、複数のC、1つのN及び1つのGで構成される4～6員環状アミン、
    Gは、N又はCH、
    RAは、-CH2O-、-C(CH3)2O-、-O-、又は-CH2NH-、
    　　ここでRAが-O-又は-CH2NH-の場合、XがS; R2がハロゲン; 又はR3がCH3;、
    RBは、ハロアルキル、CH2OH、C(CH3)2OH、OH、CH2NH2又はH、
    　　ここでRBがOH、CH2NH2又はHの場合、GがCH; XがS; R2がハロゲン; 又はR3がCH3;、
    RCは、C3-6シクロアルキル又は-CH2-C3-6シクロアルキル、
    Mは、H、又は式(d)で示される基：
    LDは、-低級アルキレン-、-C(=O)低級アルキレン-、-C(=O)NH低級アルキレン-、-C(=O)低級アルキレン-(OCH2CH2)m-NH-C(=O)低級アルキレン-、-(CH2CH2O)m-C(=O)低級アルキレン-、又は-C(=O)-シクロヘキサンジイル-低級アルキレン-、
    mは、1～10の整数である)。
  28. 環Aが4つのC及び1つのNで構成される5員環状アミン、
    環Bが2つのC、1つのN、2つのC、及び1つのGから構成される6員環状アミン、
    である請求項２７化合物又はその塩。
  29. 　RAが-CH2O-又は-C(CH3)2O-、
    　RBがハロアルキル、CH2OH又はC(CH3)2OH、
    である請求項２８に記載の化合物又はその塩。
  30. 　LDが-低級アルキレン-、-C(=O)低級アルキレン-、-C(=O)NH低級アルキレン-、又は-C(=O)低級アルキレン-(OCH2CH2)m-NH-C(=O)低級アルキレン-、
    　mが4～8の整数、
    である請求項２９記載の化合物又はその塩。
  31. 　XがNHであり、R1が低級アルキルであり、R2がハロゲン又はHであり、R3がHである、請求項３０に記載の化合物又はその塩。
  32. 　XがNHであり、R1が低級アルキルであり、R2がCl又はHであり、R3がHであり、R40が式(a1)、式(b1)、又は式(c1)であり、環Aが4つのC及び1つのNで構成される5員環状アミンであり、環Bが2つのC、1つのN、2つのC、及び1つのGから構成される6員環状アミンであり、GがNであり、RAが-CH2O-であり、RBがハロアルキルであり、RcがC3-6シクロアルキルであり、Mが式(d)で示される基であり、LDが-C(=O)CH2CH2-又は-C(=O)NHCH2CH2-である、請求項２７に記載の化合物又はその塩。
  33. 　XがNHであり、R1が低級アルキルであり、R2がHであり、R3がHであり、R40が式(b1)であり、環Bが2つのC、1つのN、2つのC、及び1つのGから構成される6員環状アミンであり、GがNであり、RBがハロアルキルであり、LDが-C(=O)CH2CH2-である、請求項２７に記載の化合物又はその塩。
  34. 　5-[(4-{[(2S)-2-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]メチル}-2-メトキシフェニル)メチル]-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン又はその塩、
    　5-[(4-{[(3R)-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]メチル}-2-メトキシフェニル)メチル]-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン又はその塩、
    　5-({4-[(シクロプロピルアミノ)メチル]-2-メトキシフェニル}メチル)-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン又はその塩、
    　{(2S)-1-[(4-{[2-アミノ-7-クロロ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]ピロリジン-2-イル}メタノール又はその塩、
    　5-({2-メトキシ-4-[(ピペリジン-4-イル)メチル]フェニル}メチル)-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン又はその塩、
    　5-[(4-{[(2R)-2-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]メチル}-2-メトキシフェニル)メチル]-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン又はその塩、
    　5-[(4-{[(シクロブチルメチル)アミノ]メチル}-2-メトキシフェニル)メチル]-N4-ペンチル-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4-ジアミン又はその塩、
    　1-{3-[(3S)-4-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]-3-オキソプロピル}-1H-ピロール-2,5-ジオン又はその塩、
    　[2-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)エチル]カルバミン酸{(2S)-1-[(4-{[2-アミノ-7-クロロ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]ピロリジン-2-イル}メチル又はその塩、
    　N-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-N-シクロプロピル-3-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)プロパンアミド又はその塩、及び
    　1-{3-[(3R)-4-[(4-{[2-アミノ-4-(ペンチルアミノ)-5H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル)メチル]-3-(フルオロメチル)ピペラジン-1-イル]-3-オキソプロピル}-1H-ピロール-2,5-ジオン又はその塩、
    からなる群より選択される請求項２７に記載の化合物又はその塩。
  35. 　配列番号2のアミノ酸番号1から117までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、及び、配列番号4のアミノ酸配列番号１から108からなる軽鎖可変領域を含む抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメント、又は、配列番号6のアミノ酸番号1から117までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、及び、配列番号8のアミノ酸配列番号１から108からなる軽鎖可変領域を含む抗CLDN6抗体又はその抗原結合フラグメント。
     
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