WO2024043249A1 - 環状ペプチドまたはその塩、およびｍｄｍｘ阻害剤 - Google Patents
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- WO2024043249A1 WO2024043249A1 PCT/JP2023/030222 JP2023030222W WO2024043249A1 WO 2024043249 A1 WO2024043249 A1 WO 2024043249A1 JP 2023030222 W JP2023030222 W JP 2023030222W WO 2024043249 A1 WO2024043249 A1 WO 2024043249A1
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- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
Definitions
- the present invention relates to a cyclic peptide having cell membrane permeability and MDMX inhibitory action, and an MDMX inhibitor.
- the human transcription factor protein p53 plays an important role in protecting cells from malignant transformation by inducing cell growth arrest or apoptosis in response to DNA damage and cellular stress.
- MDM2 and MDMX are known as oncoproteins that interact with p53, negatively regulate p53 function, and inhibit its transcriptional activity. MDM2 and MDMX are found to be amplified or overexpressed in many cancers and are involved in the development and progression of human cancer. Inhibitors of p53-MDM2 interaction and p53-MDMX interaction are expected to be anticancer agents because they can restore p53 activity.
- MDMX2 inhibitors such as Nutlin-3a, which is a low molecular weight compound, efficiently kill cancer cells having the wild-type p53 gene.
- MDMX inhibitors no effective compound has been reported regarding MDMX inhibitors, and a treatment method for cancer cells overexpressing MDMX has not yet been established.
- peptide compounds (molecular weight 500-2000) can interact with a target called protein-protein interaction (PPI) and have the potential to impart cell membrane permeability. Attention has been paid.
- cyclic peptides have advantages over linear peptides, such as improved target binding with target proteins, specificity, cell membrane permeability, and metabolic stability.
- cyclic peptides derived from natural products such as cyclosporin are commercially available as pharmaceuticals.
- cyclic peptides with 10 amino acid residues or more are preferable, but cyclic peptides with 10 amino acid residues or more generally do not have high cell membrane permeability. I know that.
- Patent Document 1 describes an MDM2/MDMX dual inhibitor that is a cyclic peptide that uses the ⁇ -helical region of p53 as a drug discovery seed and utilizes staple crosslinking.
- Patent Document 2 and Non-Patent Document 1 describe an MDM2/MDMX dual inhibitor that is a cyclic peptide that mimics the TA domain of p53 by combining ⁇ -turn sequences to form a ⁇ -sheet structure through cyclosporine-like molecular design. is listed.
- Non-Patent Document 2 describes an MDMX inhibitor that utilizes a low-molecular compound that can bind to the MDMX pocket instead of the TA domain of p53, in addition to the conformationally controlled cyclic peptide described above.
- Cyclic peptides have high target binding properties, but low cell membrane permeability.
- low molecular weight compounds have a general problem of high cell membrane permeability but low target binding properties.
- cell membrane permeability is improved by designing a cyclic peptide to control the conformation desirable for cell membrane permeation.
- problems still remain, and new designs are required to impart cell membrane permeability.
- MDMX inhibitors are thought to be effective therapeutic agents in various cancer treatments, and various MDMX inhibitors have been developed, from low molecular weight compounds to peptide compounds. However, no inhibitor has been obtained that satisfies both target binding to MDMX and cell membrane permeability.
- An object of the present invention is to provide a cyclic peptide or a salt thereof having excellent cell membrane permeability and excellent target binding ability with MDMX.
- a further object of the present invention is to provide an MDMX inhibitor containing the above-mentioned cyclic peptide or a salt thereof.
- a cyclic peptide or a salt thereof having the characteristics (a) to (d) defined herein has excellent cell membrane permeability and excellent cell membrane permeability. It was found that it has target binding properties with MDMX.
- the present invention was completed based on the above findings. According to the present invention, the following inventions are provided.
- a cyclic peptide or a salt thereof which is represented by the following formula (1) and has the following characteristics (a) to (d).
- n Xaa each independently represent any amino acid residue or any amino acid analog residue
- m Xbb each independently represent any amino acid residue or any amino acid analog residue
- n+m represents an integer from 5 to 50;
- the molecular shape factor r calculated by the following formula (2) is within the range of 0.4 to 0.6;
- the peptide is nonionic in a physiological environment;
- the ratio of the number of N-substituted amino acids to the total number of amino acids in the peptide is 25% or more;
- R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 , Q 1 , Q 2 , Q 3 , Q 4 , Q 5 , Q 6 , Q 7 , Q 8 and Q 9 are each independently a hydrogen atom, an optionally substituted alkyl group, an optionally substituted alkenyl group, and an optionally substituted alkynyl group.
- aromatic carbocyclic group which may have a substituent, non-aromatic carbocyclic group which may have a substituent, aromatic heterocyclic group which may have a substituent , a non-aromatic heterocyclic group which may have a substituent
- P 1 , P 2 , P 3 , P 4 , P 5 , P 6 , P 7 , P 8 and P 9 each independently represent a hydrogen atom, an alkyl group which may have a substituent, a substituent an alkenyl group which may have a substituent, an alkynyl group which may have a substituent, an aromatic carbocyclic group which may have a substituent, a non-aromatic group which may have a substituent
- R 3 , R 4 , R 5 and R 6 or at least two of Q 3 , Q 4 , Q 5 and Q 6 are aromatic carbons which may have a substituent
- P 1 , P 2 , P 4 , P 5 , P 7 and P 9 are an alkyl group which may have a substituent, an alkenyl group which may have a substituent, or an alkenyl group which may have a substituent.
- cyclic peptide or salt thereof which is an aromatic heterocyclic group or a non-aromatic heterocyclic group which may have a substituent.
- R 1 or Q 1 and P 1 form a heterocycle in ⁇ 2> together with the carbon atom to which R 1 or Q 1 is bonded and the nitrogen atom to which P 1 is bonded. Cyclic peptide or salt thereof as described.
- R 4 or Q 4 and R 5 or Q 5 are any L-amino acid residue and D-amino acid residue or any L-amino acid analog residue and D-amino acid analog residue, respectively.
- the cyclic peptide or salt thereof according to ⁇ 2>, which is a combination of ⁇ 7> R 3 or Q 3 and R 6 or Q 6 are an optionally substituted aromatic carbocyclic group or an optionally substituted aromatic heterocyclic group; A certain cyclic peptide or a salt thereof according to ⁇ 2>.
- ⁇ 8> The cyclic peptide or a salt thereof according to ⁇ 2>, wherein n in formula (2) is 1.
- An MDMX inhibitor comprising the cyclic peptide according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 8> or a salt thereof.
- ⁇ A> A method for inhibiting MDMX, which comprises administering to a subject the cyclic peptide or salt thereof according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 8>.
- ⁇ B> The cyclic peptide according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 8> or a salt thereof for use in a treatment that inhibits MDMX.
- ⁇ C> Use of the cyclic peptide or a salt thereof according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 8> for producing an MDMX inhibitor.
- the cyclic peptide or its salt and MDMX inhibitor of the present invention have excellent cell membrane permeability and excellent target binding with MDMX.
- FIG. 1 shows a three-dimensional structure of a two-dimensionally drawn structural formula of a cyclic peptide.
- Figure 2 shows an ellipsoidal approximation of the structure of a cyclic peptide.
- ⁇ indicates a range that includes the numerical values described before and after it as the minimum and maximum values, respectively.
- Amino acid refers to a molecule containing both an amino group and a carboxyl group.
- the amino acid may be either a natural amino acid or a non-natural amino acid, and may be either a D- or L-isomer.
- the amino acid may be an ⁇ -amino acid.
- ⁇ -Amino acid refers to a molecule containing an amino group and a carboxyl group attached to a carbon designated as the ⁇ -carbon.
- Natural amino acids include alanine (A), arginine (R), asparagine (N), cysteine (C), aspartic acid (D), glutamine (Q), glutamic acid (E), glycine (G), histidine (H), Isorosine (I), leucine (L), lysine (K), methionine (M), phenylalanine (F), proline (P), serine (S), threonine (T), tryptophan (W), tyrosine (Y) and Indicates either valine (V).
- Unnatural amino acids refer to amino acids other than the 20 types of natural amino acids mentioned above.
- Amino acid analog means a molecule that is structurally similar to an amino acid and can be used in place of an amino acid in the production of cyclic peptides.
- Amino acid analogs include ⁇ -amino acids and amino acids whose amino or carboxyl groups are substituted with similarly reactive groups (e.g., substitution of a primary amine with a secondary or tertiary amine, or a carboxyl group). substitution with an ester), but is not particularly limited.
- ⁇ -amino acid refers to a molecule containing both an amino group and a carboxyl group in the ⁇ configuration.
- unnatural amino acid residues and amino acid analog residues include the following, but are not particularly limited.
- Amino acid analogs include ⁇ -amino acid analogs.
- ⁇ -amino acid analogs include, but are not limited to: cyclic ⁇ -amino acid analogs; ⁇ -alanine; (R)- ⁇ -phenylalanine; (R)-1,2,3 ,4-tetrahydro-isoquinoline-3-acetic acid; (R)-3-amino-4-(1-naphthyl)-butyric acid; (R)-3-amino-4-(2,4-dichlorophenyl)butyric acid; (R) )-3-amino-4-(2-chlorophenyl)-butyric acid; (R)-3-amino-4-(2-cyanophenyl)-butyric acid; (R)-3-amino-4-(2-fluorophenyl )-butyric acid; (R)-3-amino-4-(2-furyl)-butyric acid; (R)-3-a
- Amino acid analogs include analogs of alanine, valine, glycine or leucine.
- Examples of amino acid analogs of alanine, valine, glycine, and leucine include, but are not limited to: ⁇ -methoxyglycine; ⁇ -allyl-L-alanine; ⁇ -aminoisobutyric acid; ⁇ -methyl -Leucine; ⁇ -(1-naphthyl)-D-alanine; ⁇ -(1-naphthyl)-L-alanine; ⁇ -(2-naphthyl)-D-alanine; ⁇ -(2-naphthyl)-L-alanine ; ⁇ -(2-pyridyl)-D-alanine; ⁇ -(2-pyridyl)-L-alanine; ⁇ -(2-thienyl)-D-alanine; ⁇ -(2-thienyl)-L-alanine;
- Amino acid analogs include phenylalanine and tyrosine analogs.
- amino acid analogs of phenylalanine and tyrosine include: ⁇ -methyl-phenylalanine, ⁇ -hydroxyphenylalanine, ⁇ -methyl-3-methoxy-DL-phenylalanine, ⁇ -methyl-D-phenylalanine, ⁇ -Methyl-L-phenylalanine, 1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-3-carboxylic acid, 2,4-dichloro-phenylalanine, 2-(trifluoromethyl)-D-phenylalanine, 2-(trifluoromethyl) -L-phenylalanine, 2-bromo-D-phenylalanine, 2-bromo-L-phenylalanine, 2-chloro-D-phenylalanine, 2-chloro-L-phenylalanine, 2-cyano-D-phenylalanine, 2-cyano-L -
- Amino acid analogs include proline analogs.
- Examples of amino acid analogs of proline include, but are not limited to: 3,4-dehydro-proline, 4-fluoro-proline, cis-4-hydroxy-proline, thiazolidine-2-carboxylic acid. , and trans-4-fluoro-proline.
- Amino acid analogs include serine and threonine analogs.
- Examples of amino acid analogs of serine and threonine include, but are not limited to: 3-amino-2-hydroxy-5-methylhexanoic acid, 2-amino-3-hydroxy-4-methylpentane. acid, 2-amino-3-ethoxybutanoic acid, 2-amino-3-methoxybutanoic acid, 4-amino-3-hydroxy-6-methylheptanoic acid, 2-amino-3-benzyloxypropionic acid, 2-amino -3-benzyloxypropionic acid, 2-amino-3-ethoxypropionic acid, 4-amino-3-hydroxybutanoic acid, and ⁇ -methylserine.
- Amino acid analogs include tryptophan analogs.
- Examples of amino acid analogs of tryptophan include, but are not limited to: ⁇ -methyl-tryptophan; ⁇ -(3-benzothienyl)-D-alanine; ⁇ -(3-benzothienyl)- L-alanine; 1-methyl-tryptophan; 4-methyl-tryptophan; 5-benzyloxy-tryptophan; 5-bromo-tryptophan; 5-chloro-tryptophan; 5-fluoro-tryptophan; 5-hydroxy-tryptophan; 5-hydroxy -L-tryptophan; 5-methoxy-tryptophan; 5-methoxy-L-tryptophan; 5-methyl-tryptophan; 6-bromo-tryptophan; 6-chloro-D-tryptophan; 6-chloro-tryptophan; 6-fluoro-tryptophan ; 6-Methyl-tryptophan; 7-benzyloxy-tryp
- the amino acid analog is racemic.
- the D isomer of the amino acid analog may be used, or the L isomer of the amino acid analog may be used.
- Amino acid analogs may also contain chiral centers that are in the R or S configuration.
- the amino group(s) of the ⁇ -amino acid analogs may be substituted with protecting groups such as tert-butyloxycarbonyl (BOC group), 9-fluorenylmethyloxycarbonyl (FMOC), tosyl, etc. good.
- protecting groups such as tert-butyloxycarbonyl (BOC group), 9-fluorenylmethyloxycarbonyl (FMOC), tosyl, etc. good.
- the carboxylic acid functionality of the ⁇ -amino acid analog may be protected, for example as an ester derivative thereof.
- salts of amino acid analogs may also be used.
- the alkyl group includes a straight chain or branched hydrocarbon group having 1 to 15 carbon atoms, preferably 1 to 10 carbon atoms, and more preferably 1 to 6 carbon atoms.
- alkyl groups may also have at least one carbon atom substituted with a heteroatom, such as oxygen, nitrogen, sulfur, phosphorus or silicon.
- An alkenyl group is a straight chain or branched chain having 2 to 15 carbon atoms, preferably 2 to 10 carbon atoms, more preferably 2 to 6 carbon atoms, and having one or more carbon-carbon double bonds at any position. It includes a hydrocarbon group of the form.
- at least one carbon atom may be substituted with a heteroatom.
- Alkynyl group refers to a straight chain or branched group having 2 to 10 carbon atoms, preferably 2 to 8 carbon atoms, more preferably 2 to 6 carbon atoms, and having one or more carbon-carbon triple bonds at any position. hydrocarbon groups. Furthermore, it may have a double bond at any position. Examples include, but are not limited to, ethynyl, propynyl, butynyl, pentynyl, hexynyl, heptynyl, octynyl, nonynyl, decynyl, and the like. Further, in these alkynyl groups, at least one carbon atom may be substituted with a heteroatom.
- An aromatic carbocyclic group is a carbocyclic group containing a single aromatic ring or multiple aromatic rings.
- the aromatic carbocyclic group preferably has 5 to 24 carbon atoms, more preferably 5 to 18 carbon atoms, and still more preferably 5 to 14 carbon atoms.
- Aromatic carbocyclic groups include phenyl, naphthyl, and the like.
- a non-aromatic carbocyclic group is a carbocyclic group containing a single non-aromatic ring or multiple non-aromatic rings.
- the number of carbon atoms in the non-aromatic carbocyclic group is preferably 3 to 24, more preferably 3 to 18, and still more preferably 3 to 14.
- Non-aromatic carbocyclic groups include saturated and unsaturated cyclic hydrocarbon groups, such as cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclopentenyl, cyclohexyl, cyclohexenyl, cycloheptyl, and cyclooctyl.
- An aromatic heterocyclic group has 1 to 3 heteroatoms if monocyclic, 1 to 6 heteroatoms if bicyclic, or 1 to 9 heteroatoms if tricyclic. , represents an aromatic 5- to 8-membered monocyclic, 8- to 12-membered bicyclic, or 11- to 14-membered tricyclic ring system. Heteroatoms can be selected from O, N or S.
- aromatic heterocyclic groups include pyridyl group, pyrimidinyl group, pyrrolyl group, furyl group, furanyl group, thiophenyl group, thienyl group, indolyl group, isoindolyl group, indolizinyl group, imidazolyl group, pyridonyl group, pyrimidyl group, and pyrazinyl group.
- oxazolyl group, thiazolyl group, purinyl group, quinolinyl group, isoquinolinyl group, benzimidazolyl group, benzofuranyl group, and benzoxazolyl group but are not limited thereto.
- a non-aromatic heterocyclic group is one having 1 to 3 heteroatoms in the case of a monocyclic type, 1 to 6 heteroatoms in the case of a bicyclic type, or 1 to 9 heteroatoms in the case of a tricyclic type. represents a non-aromatic 5- to 8-membered monocyclic, 8- to 12-membered bicyclic, or 11- to 14-membered tricyclic ring system. Heteroatoms can be selected from O, N or S.
- Non-aromatic heterocyclic groups include, but are not limited to, piperazinyl, pyrrolidinyl, dioxanyl, morpholinyl, tetrahydrofuranyl, and the like.
- the heterocycle includes the above-mentioned aromatic heterocyclic groups and non-aromatic heterocyclic groups.
- substituent means any of the chemical groups listed above (alkyl group, alkenyl group, alkynyl group, aromatic carbocyclic group, non-aromatic carbocyclic group, aromatic heterocyclic group)
- alkyl group, alkenyl group, alkynyl group, aromatic carbocyclic group, non-aromatic carbocyclic group, aromatic heterocyclic group In the formula group and non-aromatic heterocyclic group), one or more hydrogen atoms are substituted with an atom or chemical group other than hydrogen.
- Substituents include halogen (fluorine, chlorine, bromine or iodine, etc.), hydroxy, mercapto, oxo, nitro, haloalkyl having 1 to 10 carbon atoms, alkyl having 1 to 10 carbon atoms, aryl having 6 to 20 carbon atoms, carbon Aralkyl having 7 to 20 carbon atoms, alkoxy having 1 to 10 carbon atoms, thioalkoxy having 1 to 10 carbon atoms, aryloxy having 6 to 20 carbon atoms, amino, alkoxycarbonyl having 2 to 10 carbon atoms, amide, carboxy, carbon number Examples include, but are not limited to, alkanesulfonyl having 1 to 10 carbon atoms, alkylcarbonyl having 2 to 10 carbon atoms, and a cyano group.
- n Xaa each independently represent any amino acid residue or any amino acid analog residue
- m Xbb each independently represent any amino acid residue or any amino acid analog residue
- n+m represents an integer from 5 to 50.
- n+m preferably represents an integer of 5 to 50, more preferably an integer of 5 to 20, and even more preferably an integer of 9 to 11.
- the cyclic peptide of the present invention has high permeability into cells and high target binding to MDMX. Since the cyclic peptide of the present invention can inhibit MDMX-p53 interaction, it is useful in the treatment of cancers such as solid tumors in which MDMX is overexpressed.
- the molecular shape factor r calculated by formula (2) is preferably 0.4 to 0.6, more preferably 0.4 to 0.55.
- Non-ionic under physiological circumstances means that the peptide does not have substituents that are charged under physiological circumstances.
- the ratio of the number of N-substituted amino acids to the total number of amino acids in the peptide is 25% or more.
- An N-substituted amino acid is an amino acid having a substituent on the nitrogen atom of the amino group of the amino acid.
- the ratio of the number of N-substituted amino acids to the total number of amino acids in the peptide is preferably 25% or more, more preferably 40% or more, and still more preferably 50% or more.
- Peptides include amino acid residues and amino acid analog residues having an aromatic carbocyclic group which may have a substituent or an aromatic heterocyclic group which may have a substituent in the side chain. Contains 1 to 3 groups.
- the peptide contains amino acid residues and amino acid analog residues having an optionally substituted aromatic carbocyclic group or an optionally substituted aromatic heterocyclic group in the side chain. Contains two groups. More preferably, the peptide comprises one amino acid residue or amino acid analog residue having an aromatic carbocyclic group in the side chain which may have a substituent, and an aromatic carbocyclic group which may have a substituent. It contains an amino acid residue having a group heterocyclic group in its side chain and one amino acid analog residue.
- the cyclic peptide of the present invention is preferably represented by the following formula (3).
- R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 , Q 1 , Q 2 , Q 3 , Q 4 , Q 5 , Q 6 , Q 7 , Q 8 and Q 9 are each independently a hydrogen atom, an optionally substituted alkyl group, an optionally substituted alkenyl group, and an optionally substituted alkynyl group.
- aromatic carbocyclic group which may have a substituent, non-aromatic carbocyclic group which may have a substituent, aromatic heterocyclic group which may have a substituent group, a non-aromatic heterocyclic group which may have a substituent
- P 1 , P 2 , P 3 , P 4 , P 5 , P 6 , P 7 , P 8 and P 9 each independently represent a hydrogen atom, an alkyl group which may have a substituent, a substituted Alkenyl group which may have a group, alkynyl group which may have a substituent, aromatic carbocyclic group which may have a substituent, non-aromatic which may have a substituent
- At least one of R 3 , R 4 , R 5 and R 6 or at least one of Q 3 , Q 4 , Q 5 and Q 6 is an aromatic carbon which may have a substituent. It is a cyclic group or an aromatic heterocyclic group which may have a substituent.
- P 1 , P 2 , P 4 , P 5 , P 7 and P 9 are an alkyl group which may have a substituent, an alkenyl group which may have a substituent, or an alkenyl group which may have a substituent.
- an alkynyl group that may have a substituent an aromatic carbocyclic group that may have a substituent, a non-aromatic carbocyclic group that may have a substituent, and an alkynyl group that may have a substituent. It is an aromatic heterocyclic group or a non-aromatic heterocyclic group which may have a substituent.
- R 1 or Q 1 and P 1 together with the carbon atom to which R 1 or Q 1 is attached and the nitrogen atom to which P 1 is attached form a heterocycle.
- R 4 or Q 4 and R 5 or Q 5 are any L-amino acid residue and D-amino acid residue or any L-amino acid analog residue and D-amino acid analog residue, respectively. It is a combination of
- R 3 or Q 3 and R 6 or Q 6 are an aromatic carbocyclic group that may have a substituent or an aromatic heterocyclic group that may have a substituent. .
- n in formula (2) is 1.
- the cyclic peptide of the present invention may be modified such as phosphorylation, methylation, acetylation, adenylylation, ADP ribosylation, and glycosylation depending on the purpose.
- the cyclic peptide of the present invention may be a salt. Salts are preferably salts with physiologically acceptable inorganic and organic acids and bases. Examples of suitable acid salts include: acetate, adipate, benzoate, benzenesulfonate, butyrate, citrate, digluconate, dodecyl sulfate, formate, fumarate.
- salts derived from appropriate bases include alkali metal (eg, sodium) salts, alkaline earth metal (eg, magnesium) salts, ammonium salts, and N-(alkyl)4+ salts.
- the method for producing the cyclic peptide of the present invention is not particularly limited.
- the cyclic peptide of the present invention may be produced by a method using a cell-free translation system or by a chemical peptide synthesis method. Chemical synthesis of peptides can generally be performed using an automatic peptide synthesizer.
- Peptides may be synthesized by solid phase synthesis or liquid phase synthesis, but preferably solid phase synthesis.
- Solid-phase synthesis of peptides is known to those skilled in the art, and includes, for example, combining the hydroxyl group of a resin with a hydroxyl group and the first amino acid whose ⁇ -amino group is protected with a protecting group (usually the C-terminus of the desired peptide).
- Carboxy group of amino acid undergoes esterification reaction.
- dehydration condensation agents such as 1-mesitylenesulfonyl-3-nitro-1,2,4-triazole (MSNT), dicyclohexylcarbodiimide (DCC), and diisopropylcarbodiimide (DIPCDI) can be used.
- MSNT 1-mesitylenesulfonyl-3-nitro-1,2,4-triazole
- DCC dicyclohexylcarbodiimide
- DIPCDI diisopropylcarbodiimide
- the ⁇ -amino group of the second amino acid is deprotected, a third amino acid with all functional groups other than the carboxy group of the main chain protected is added, the carboxy group is activated, and the second and Attach a third amino acid.
- resins for solid phase synthesis include Merrifield resin, MBHA resin, Cl-Trt resin, SASRIN resin, Wang resin, Rink amide resin, HMFS resin, Amino-PEGA resin (Merck), HMPA-PEGA resin (Merck), etc. It will be done.
- These resins may be used after being washed with a solvent (dimethylformamide (DMF), 2-propanol, methylene chloride, etc.).
- a solvent dimethylformamide (DMF), 2-propanol, methylene chloride, etc.
- protecting groups for ⁇ -amino groups benzyloxycarbonyl (Cbz or Z) group, tert-butoxycarbonyl (Boc) group, fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc) group, benzyl group, allyl group, allyloxycarbonyl (Alloc) group, ) groups, etc.
- Cbz groups can be deprotected by hydrofluoric acid, hydrogenation, etc.
- Boc groups can be deprotected by trifluoroacetic acid (TFA)
- Fmoc groups can be deprotected by treatment with piperidine.
- the ⁇ -carboxy group can be protected using methyl ester, ethyl ester, benzyl ester, tert-butyl ester, cyclohexyl ester, etc.
- the hydroxyl group of serine and threonine can be protected with a benzyl group or tert-butyl group, and the hydroxyl group of tyrosine can be protected with a 2-bromobenzyloxycarbonyl group or tert-butyl group.
- the amino group of the lysine side chain and the carboxy group of glutamic acid and aspartic acid can be protected in the same way as the ⁇ -amino group and ⁇ -carboxy group.
- Activation of the carboxy group can be performed using a condensing agent.
- Examples of the condensing agent include dicyclohexylcarbodiimide (DCC), diisopropylcarbodiimide (DIPCDI), 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide (EDC or WSC), (1H benzotriazol-1-yloxy)tris( Examples include dimethylamino)phosphonium hexafluorophosphate (BOP), 1-[bis(dimethylamino)methyl]-1H-benzotriazolium-3-oxide hexafluorophosphate (HBTU), and the like.
- the peptide chain can be cleaved from the resin by treatment with an acid such as TFA or hydrogen fluoride (HF).
- Peptide cyclization methods utilize, for example, amide bonds, carbon-carbon bonds, thioether bonds, disulfide bonds, ester bonds, thioester bonds, lactam bonds, bonds via triazole structures, bonds via fluorophore structures, etc. Examples include cyclization.
- the peptide compound synthesis step and the cyclization reaction step may be separated or may proceed continuously. Cyclization can be performed by methods known to those skilled in the art, such as those described in WO2013/100132, WO2008/117833, WO2012/074129, and the like.
- Examples of the cyclization moiety include, but are not limited to, a bond between the N-terminus of the peptide and the C-terminus, a bond between the N-terminus of the peptide and the side chain of another amino acid residue, and a bond between the C-terminus of the peptide and the side chain of another amino acid residue. It may be a bond or a bond between side chains of amino acid residues, and two or more of these may be used in combination.
- an MDMX inhibitor comprising the cyclic peptide of the present invention or a salt thereof.
- the cyclic peptide of the present invention or a salt thereof has an MDMX inhibitory effect.
- MDMX inhibitory effect refers to the effect of inhibiting the binding between MDMX and p53.
- NCBI National Center for Biotechnology Information
- the cyclic peptide of the present invention can be used in a pharmaceutical composition for the treatment of diseases involving MDMX inhibitors.
- the administration form of the pharmaceutical composition is not particularly limited, and may be administered orally or parenterally.
- parenteral administration include injection administration such as intramuscular injection, intravenous injection, and subcutaneous injection, transdermal administration, and transmucosal administration (nasal, oral, ophthalmic, pulmonary, vaginal, and rectal). administration, etc.
- the cyclic peptide in the pharmaceutical composition can be subjected to various modifications in view of its tendency to be easily metabolized and excreted.
- polyethylene glycol (PEG) or a sugar chain can be added to a cyclic polypeptide to increase its residence time in blood and reduce its antigenicity.
- biodegradable polymer compounds such as polylactic acid, polyglycolic acid, and PLGA, porous hydroxyapatite, liposomes, surface-modified liposomes, emulsions prepared with unsaturated fatty acids, nanoparticles, nanospheres, etc. with sustained release groups. It may be used as an agent and encapsulate a cyclic peptide therein.
- a weak electrical current can be applied to the skin surface to penetrate the stratum corneum.
- the pharmaceutical composition may use the active ingredient as it is, or may be formulated by adding a pharmaceutically acceptable carrier, excipient, additive, etc.
- Dosage forms include, for example, liquids (e.g. injections), dispersions, suspensions, tablets, pills, powders, suppositories, powders, fine granules, granules, capsules, syrups, troches, Examples include inhalants, ointments, eye drops, nasal drops, ear drops, poultices, and the like.
- Formulation includes, for example, excipients, binders, disintegrants, lubricants, solubilizers, solubilizers, colorants, flavoring agents, stabilizers, emulsifiers, absorption enhancers, surfactants, and pH adjustment. It can be carried out by a conventional method using appropriate agents, preservatives, antioxidants, etc.
- ingredients used in formulation include purified water, saline, phosphate buffer, dextrose, glycerol, pharmaceutically acceptable organic solvents such as ethanol, animal and vegetable oils, lactose, mannitol, glucose, sorbitol, crystals.
- Absorption enhancers that improve the absorption of cyclic peptides include surfactants such as polyoxyethylene lauryl ethers, sodium lauryl sulfate, and saponin; bile salts such as glycocholic acid, deoxycholic acid, and taurocholic acid; EDTA and salicylic acids.
- Chelating agents such as caproic acid, capric acid, lauric acid, oleic acid, linoleic acid, mixed micelles and other fatty acids; enamine derivatives, N-acyl collagen peptides, N-acyl amino acids, cyclodextrins, chitosan, monoxide A nitrogen donor or the like may also be used.
- Pills or tablets can also be coated with sugar-coated, gastric or enteric substances.
- Injectables can include distilled water for injection, physiological saline, propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil, alcohols, and the like.
- wetting agents, emulsifiers, dispersants, stabilizers, solubilizers, solubilizers, preservatives, etc. can be added.
- the cyclic peptide and MDMX inhibitor of the present invention can be used as pharmaceuticals, cosmetics, DDS (Drug Delivery System) materials, etc., but are not limited thereto.
- the cyclic peptides and MDMX inhibitors of the present invention are useful in competitive binding assays to identify drugs that bind to MDMX.
- labeled cyclic peptides of the invention can be used in MDMX binding assays with small molecules that competitively bind to MDMX.
- Competitive binding assays allow rapid in vitro evaluation and determination of drug candidates specific for the p53/MDMX system. Such binding studies can be performed using the cyclic peptides of the invention.
- the cyclic peptide of the present invention can also be used for producing antibodies against the cyclic peptide of the present invention.
- the cyclic peptides and MDMX inhibitors of the invention can be used to treat subjects with disorders associated with aberrant (eg, insufficient or excessive) expression or activity of p53 or MDMX.
- the disorder is caused by abnormal levels (eg, overexpression or underexpression) of p53 or MDMX, or by the presence of p53 or MDMX that exhibit abnormal activity.
- the cyclic peptides and MDMX inhibitors of the present invention can be used to treat or prevent diseases such as hyperproliferative diseases and inflammatory disorders by interfering with the interaction or binding between p53 and MDMX.
- an effective amount of the cyclic peptide or MDMX inhibitor of the present invention can be administered to mammals including humans.
- the cyclic peptides and MDMX inhibitors of the present invention can be used to treat, prevent, and/or diagnose cancer and neoplastic diseases.
- cancer, hyperproliferative and neoplastic refer to abnormal conditions or diseases characterized by cells with the capacity for autonomous proliferation, ie, rapidly proliferating cell proliferation.
- cancer or neoplastic diseases include, but are not limited to: fibrosarcoma, sarcoma, liposarcoma, chondrosarcoma, osteogenic sarcoma, chordoma, angiosarcoma, endothelial Sarcoma, lymphangiosarcoma, intralymphatic sarcoma, synovial tumor, mesothelioma, Ewing tumor, leiomyosarcoma, rhabdomyosarcoma, gastric cancer, esophageal cancer, rectal cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, prostate cancer, uterine cancer , head and neck cancer, skin cancer, brain cancer, squamous cell carcinoma, sebaceous carcinoma, breast cancer (papillary carcinoma, papillary adenocarcinoma, etc.), cystadenocarcinoma, medullary carcinoma, bronchogenic carcinoma, renal cell carcinoma, Hepatocellular carcinoma, cholangiocarcinoma,
- proliferative disorders include hematopoietic neoplastic disorders.
- Hematopoietic neoplastic disorders include diseases involving hyperplastic/neoplastic cells of hematopoietic origin, eg, originating from the myeloid, lymphoid or erythroid lineages, or their progenitors.
- the disease can be caused by undifferentiated acute leukemias, such as erythroblastic leukemia and acute megakaryoblastic leukemia.
- Step 1 Amino acid support on 2-chlorotrityl chloride resin
- 2-chlorotrityl chloride resin 100 to 200 mesh, 1% DVB, purchased from Watanabe Chemical Co., Ltd., 100 mg, 0.137 mmol
- dehydrated dichloromethane 2 mL
- a mixture of 4 molar equivalents of Fmoc amino acid in dichloromethane 0.5 M
- 5 molar equivalents of diisopropylethylamine was added to the reaction vessel and shaken for 2 hours.
- Step 2 Peptide solid-phase synthesis using an automatic peptide synthesizer
- Peptide solid-phase synthesis was performed using an automatic peptide synthesizer (Syro I manufactured by Biotage). For detailed operating procedures, the manual provided with the synthesizer was followed.
- Step 3 Excision from the resin To excise the linear peptide from the resin, a 20:80 hexafluoroisopropanol:dichloromethane solution (2 mL) was added to the resin, and the mixture was shaken at room temperature for 30 minutes. The reaction solution was collected by filtration. The reaction was repeated two more times using a 20:80 hexafluoroisopropanol:dichloromethane solution (2 mL), and the reaction solution was collected by filtration. All the collected reaction solutions were combined, the solvent was distilled off under reduced pressure, and the mixture was sufficiently dried to obtain a crudely purified linear peptide.
- Step 4 Cyclization reaction Add acetonitrile to the crude purified linear peptide to a concentration of 0.25 mM and dissolve.
- An acetonitrile solution containing 9 molar equivalents of diisopropylethylamine (1 M) and a 1:1 acetonitrile:tetrahydrofuran solution containing 4 molar equivalents of COMU (0.5 M) were added, and the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes to 48 hours.
- the solvent was distilled off under reduced pressure. The residue was separated using ethyl acetate and water, the ethyl acetate layer was collected, and the solvent was distilled off under reduced pressure to obtain a crude cyclic peptide.
- Step 5 Purification of cyclic peptide The obtained crude product was purified by liquid chromatography. Finally, the desired cyclic peptide was obtained as a lyophilized powder.
- N-Methyl-2-pyrrolidone, diylopropylethylamine, 1-[bis(dimethylamino)methylene]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]pyridinium 3-oxide hexafluorophosphate, 1 -Hydroxybenzotriazole, piperidine, and hexafluoroisopropanol were obtained from Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd.
- Fmoc-amino acids were used in the synthesis of the cyclic peptides described herein. Furthermore, in the sequences shown in this specification, the following abbreviations are used. Fmoc-amino acids were purchased from Watanabe Chemical Co., Ltd., CHEM-IMPEX, Acrotein, or Amatek Chemical.
- Fmoc-NMe-Cha-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Tle-OH, Fmoc-Phe(4-F)-OH, Fmoc-NMe-Ala-OH, Fmoc-D-NMe-Ala-OH, Fmoc -Ala(4-Thz)-OH, Fmoc-NMe-Ala-OH, and Fmoc-HomoSer(Me)-OH were condensed in this order. After the extension was completed, the resin was washed with NMP and dichloromethane, and then the solvent was distilled off under reduced pressure.
- Cyclic Peptides 2 to 12 and Comparative Examples 1 and 2 Cyclic Peptides 2 to 12 were synthesized in the same manner as Cyclic Peptide 1.
- Comparative Example 1 was synthesized by the method described in WO2021102322.
- Comparative Example 2 was synthesized by the method described in WO2013123266.
- Table 1 shows the sequences of the cyclic peptides.
- the left side shows the N-terminal amino acid residue
- the right side shows the C-terminal amino acid residue
- the cyclic peptide is formed by amide bonding at both ends of the peptide.
- Retention time was measured using ACQUITY SQD LC/MS System (Waters) and expressed in minutes (min).
- Solvent A solution: 0.1% formic acid - water
- B solution 0.1% formic acid - acetonitrile
- Flow rate 0.5mL/min
- Example 2 Alpha Screen assay for MDMX of the cyclic peptide according to the present invention was performed.
- MDMX was synthesized by solid-phase synthesis (24-108, His-tag at the N-terminus; PDB ID: 2MWY, https://www.rcsb.org/structure/2MWY).
- a p53 fragment peptide [manufactured by AnaSpec, p53(17-26) FITC-labeled] was used as a binding partner for MDMX.
- Anti-FITC AlphaScreen was used as donor beads.
- Anti-His tag AlphaLISA was used as the acceptor beads.
- the composition of the buffer used for the reaction was PBS, 0.1% BSA, and 0.01% Tween 20.
- Example 3 Cell membrane permeability evaluation of the cyclic peptide according to the present invention was carried out. 300 ⁇ L of 1.0 x 106 cells/mL MDCKII cells (ECACC standard cell line) were seeded in an insert (for 24 well plate, pore size 3.0 ⁇ m, manufactured by CORNING) and cultured at 37°C in a 5% CO2 environment. After 3 days, the electrical resistance value (measuring device) of the cell layer was measured and it was confirmed that it had high barrier properties (>100 ⁇ cm2).
- ⁇ Permeation test> After washing the insert by immersing it in HBSS (without phenol red, the same applies below), 200 ⁇ L of the sample prepared at 10 ⁇ M/HBSS was added, and the insert was placed in a low-adsorption 24-well plate containing 900 ⁇ L of HBSS ( 37°C 5% CO2 ). After 2 hours, the upper (apical) and lower (basal) layer solutions (10 ⁇ L for apical and 500 ⁇ L for basal) of the insert were collected. After testing, we confirmed that there was no leakage using Lucifer Yellow, an opaque fluorescent dye.
- V basal volume (0.9 mL)
- C0 initial concentration (10 ⁇ M)
- S Surface area of monolayer film (0.33 cm2)
- dC/dt basal concentration change [ ⁇ M/s]
- Example 4 Calculating the molecular shape factor r value using MD calculation
- the structural formula drawn in two dimensions of a cyclic peptide is input into Chem3D and structured in three dimensions ( Figure 1).
- the structure is optimized using a quantum chemical calculation method (B3LYP/6-31G*, software is Gaussian) to obtain a locally stable structure.
- the electrostatic field generated by the cyclic peptide is determined using a quantum chemical calculation method (B3LYP/6-31G*, software is Gaussian), and a point charge (RESP) is placed on each atom to reproduce the above electrostatic field. charge).
- the state of covalent bonds between each atom is analyzed (Amber) and van der Waals parameters (gaff2) are assigned to each atom.
- the book charge and the book van der Waals parameters together are called a force field.
- a molecular dynamics (MD) simulation is performed in chloroform using the above locally stable structure as the initial structure (software is Gromacs and plumed).
- MD simulations we use the replica exchange MD method, which uses not only room temperature but also higher temperatures during simulation, as an efficient method to efficiently search a wide conformational space. Six temperatures were used (six types of replicas), as shown in the table below. Note that this temperature is applied only to the cyclic peptide, and 298 K is always applied to the chloroform present around the cyclic peptide.
- the three-dimensional coordinates of atoms belonging to the main chain of the above-mentioned most stable cyclic peptide are (X a,1 , X a,2 , X a,3 )
- a is a label that identifies an atom belonging to the main chain, and is an integer from 1 to N.
- N is the total number of atoms belonging to the main chain of the cyclic peptide.
- Calculate the r value for this three-dimensional coordinate Calculation of the r value can be performed using the following steps.
- the r value was determined according to the above. Table 4 summarizes the r values, IC 50 , and P app of the cyclic peptides.
- ⁇ IC 50 evaluation criteria A ⁇ 0.1 ⁇ M; 0.1 ⁇ B ⁇ 0.5 ⁇ M; 0.5 ⁇ M ⁇ C ⁇ 1 ⁇ M; 1 ⁇ M ⁇ D Ratings A, B, and C represent that the target binding property is sufficient, and rating D represents that sufficient target binding property is not obtained.
- the peptide is nonionic under physiological circumstances; (c) Ratio of the number of N-substituted amino acids to the total number of amino acids in the peptide; (d) Amino acid residues and amino acid analog residues having an aromatic carbocyclic group which may have a substituent or an aromatic heterocyclic group which may have a substituent in the side chain in a peptide number of bases
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Abstract
本発明は、優れた細胞膜透過性と優れたＭＤＭＸとの標的結合性とを有する環状ペプチドまたはその塩、並びにＭＤＭＸ阻害剤を提供することを課題とする。本発明によれば、本明細書で定義する式（１）で表され、下記（ａ）～（ｄ）の特徴を有する、環状ペプチドまたはその塩が提供される。 （ａ）環状ペプチドの構造において、主鎖構造の最も長い軸方向の軸長をａとし、ａと直交し、互いに直交する他の２方向の軸長をｂ、ｃとした時に、ａ、ｂ、ｃの各軸長を求める楕円体近似を行う段階を経て、下記式（２）で計算される分子形状因子ｒが０．４～０．６の範囲に含まれる；（ｂ）上記ペプチドが生理環境下において非イオン性である； （ｃ）上記ペプチドの全アミノ酸数に対するＮ置換アミノ酸数の割合が２５％以上である； （ｄ）上記ペプチドが、芳香族炭素環式基または芳香族複素環式基を側鎖に有するアミノ酸残基およびアミノ酸類縁体残基を１～３個含む。
Description
本発明は、細胞膜透過性とＭＤＭＸ阻害作用とを有する環状ペプチド、およびＭＤＭＸ阻害剤に関する。
ヒト転写因子タンパク質ｐ５３は、ＤＮＡ損傷および細胞ストレスに応答して、細胞増殖停止またはアポトーシスを誘導することにより、悪性転換からの細胞の保護に重要な役割を果たす。ＭＤＭ２およびＭＤＭＸは、ｐ５３と相互作用し、ｐ５３の機能を負に制御し、その転写活性を阻害する腫瘍性タンパク質として知られている。ＭＤＭ２およびＭＤＭＸは、多くのがんで増幅または過剰発現していることが認められ、ヒトのがんの発生と進行に関与している。ｐ５３－ＭＤＭ２相互作用およびｐ５３－ＭＤＭＸ相互作用に対する阻害剤は、ｐ５３活性を回復させることができるため、抗がん剤として期待される。近年、ＭＤＭＸ２阻害剤として、低分子化合物であるＮｕｔｌｉｎ－３ａ等が野生型ｐ５３遺伝子を有するがん細胞を効率よく死滅させることが報告されている。一方、ＭＤＭＸ阻害剤に関しては、有効な化合物は報告されておらず、ＭＤＭＸが過剰発現しているがん細胞に対する治療法が未だ確立されていない。
近年、ペプチド化合物（分子量５００～２０００）は、タンパク質－タンパク質相互作用（Ｐｒｏｔｅｉｎ－Ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ：ＰＰＩ）と呼ばれる標的に対して相互作用可能であり、かつ、細胞膜透過性を付与できる可能性があり、注目されている。特に、環状ペプチドは、直鎖ペプチドに比べて、標的タンパク質との標的結合性、特異性、細胞膜透過性、および代謝に対する安定性の向上等のメリットがある。例えば、シクロスポリン等の天然物由来の環状ペプチドが医薬品として上市されている。ＰＰＩの広い相互作用面に対して、高い標的結合性を得るためには、１０アミノ酸残基以上の環状ペプチドが好ましいが、１０アミノ酸残基以上の環状ペプチドは一般的に細胞膜透過性は高くないことが分かっている。
ｐ５３は、トランスアクチベーション（ＴＡ）ドメインのαヘリックス領域の結合残基（Ｐｈｅ１９、Ｌｅｕ２２、Ｔｒｐ２３）を介して、ＭＤＭＸの疎水性ポケットに結合している。特許文献１においては、ｐ５３のαヘリックス領域を創薬シードとして、ステープル架橋を利用した環状ペプチドであるＭＤＭ２／ＭＤＭＸ二重阻害剤が記載されている。特許文献２および非特許文献１においては、βターン配列を組み合わせることで、シクロスポリン様の分子設計によりβシート構造を形成し、ｐ５３のＴＡドメインを模倣した環状ペプチドであるＭＤＭ２／ＭＤＭＸ二重阻害剤が記載されている。
非特許文献２においては、上記のような配座を制御した環状ペプチドの他に、ｐ５３のＴＡドメインの代わりにＭＤＭＸのポケットに結合できる低分子化合物を利用したＭＤＭＸ阻害剤が記載されている。
R. Fasan, R. L. A. Dias, K. Moehle, O. Zerbe, D. Obrecht, P. R. E. Mittl, M. G. Grutter, J. A. Robinson. (2006). Structure-Activity Studies in a Family of β-Hairpin Protein Epitope Mimetic Inhibitors of the p53-HDM2 Protein-Protein Interaction. ChemBioChem, 7, 515-526.
D. H. Yu, Z. Y. Xu, S. Mo, L. Yuan, X. D. Cheng, J. J. Qin. (2020). Targeting MDMX for Cancer Therapy: Rationale, Strategies, and Challenges. Front. Oncol. 10, article 1389.
環状ペプチドは標的との標的結合性は高いが、細胞膜透過性は低い。一方で、低分子化合物は、細胞膜透過性は高いが、標的結合性は低いという一般的な問題がある。特許文献１、特許文献２および非特許文献１においては、環状ペプチドを、細胞膜透過に望ましい配座に制御する設計により、細胞膜透過性の向上を図っている。しかし、いずれの試みを用いてもなお課題は残っており、細胞膜透過性の付与には新しい設計が求められている。
上記の通り、ＭＤＭＸ阻害剤は様々ながん治療において有効な治療薬になり得ると考えられ、低分子化合物からペプチド化合物まで種々のＭＤＭＸ阻害剤が開発されてきた。しかし、ＭＤＭＸへの標的結合性と細胞膜透過性を共に満足した阻害剤は得られていない。本発明は、優れた細胞膜透過性と優れたＭＤＭＸとの標的結合性とを有する環状ペプチドまたはその塩を提供することを解決すべき課題とする。本発明はさらに、上記環状ペプチドまたはその塩を含む、ＭＤＭＸ阻害剤を提供することを解決すべき課題とする。
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、本明細書において規定する（ａ）から（ｄ）の特徴を有する環状ペプチドまたはその塩が、優れた細胞膜透過性と優れたＭＤＭＸとの標的結合性とを有することを見出した。本発明は上記の知見に基づいて完成したものである。本発明によれば、以下の発明が提供される。
＜１＞ 下記式（１）で表され、下記（ａ）～（ｄ）の特徴を有する、環状ペプチドまたはその塩。
式中、ｎ個のＸａａはそれぞれ独立に任意のアミノ酸残基または任意のアミノ酸類縁体残基を示し、
ｍ個のＸｂｂはそれぞれ独立に任意のアミノ酸残基または任意のアミノ酸類縁体残基を示し、
ｎ＋ｍは、５～５０の整数を示し；
（ａ）環状ペプチドの構造において、主鎖構造の最も長い軸方向の軸長をａとし、ａと直交し、互いに直交する他の２方向の軸長をｂ、ｃとした時に、ａ、ｂ、ｃの各軸長を求める楕円体近似を行う段階を経て、下記式（２）で計算される分子形状因子ｒが０．４～０．６の範囲に含まれる；
（ｂ）前記ペプチドが生理環境下において非イオン性である；
（ｃ）前記ペプチドの全アミノ酸数に対するＮ置換アミノ酸数の割合が２５％以上である；
（ｄ）前記ペプチドが、置換基を有していてもよい芳香族炭素環式基または置換基を有していてもよい芳香族複素環式基を側鎖に有するアミノ酸残基およびアミノ酸類縁体残基を１～３個含む。
＜２＞ 下記式（３）で表される、＜１＞に記載の環状ペプチドまたはその塩。
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｑ１、Ｑ２、Ｑ３、Ｑ４、Ｑ５、Ｑ６、Ｑ７、Ｑ８およびＱ９は、それぞれ独立して、水素原子、置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアルケニル基、置換基を有していてもよいアルキニル基、置換基を有していてもよい芳香族炭素環式基、置換基を有していてもよい非芳香族炭素環式基、置換基を有していてもよい芳香族複素環式基、置換基を有していてもよい非芳香族複素環式基であり、
Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８およびＰ９は、それぞれ独立して、水素原子、置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアルケニル基、置換基を有していてもよいアルキニル基、置換基を有していてもよい芳香族炭素環式基、置換基を有していてもよい非芳香族炭素環式基、置換基を有していてもよい芳香族複素環式基、又は置換基を有していてもよい非芳香族複素環式基であり、あるいは、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｑ１、Ｑ２、Ｑ３、Ｑ４、Ｑ５、Ｑ６、Ｑ７、Ｑ８およびＱ９が結合している炭素原子は、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８およびＰ９が結合している窒素原子と一緒になって複素環を形成していてもよく、
ｎ個のＸａａは、それぞれ独立に任意のアミノ酸残基または任意のアミノ酸類縁体残基を示し、
ｎは、０～２の整数である。
＜３＞ Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のうち少なくとも２つ、もしくはＱ３、Ｑ４、Ｑ５およびＱ６のうち少なくとも２つが、置換基を有していてもよい芳香族炭素環式基または置換基を有していてもよい芳香族複素環式基である、＜２＞に記載の環状ペプチドまたはその塩。
＜４＞ Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ７およびＰ９が、置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアルケニル基、置換基を有していてもよいアルキニル基、置換基を有していてもよい芳香族炭素環式基、置換基を有していてもよい非芳香族炭素環式基、置換基を有していてもよい芳香族複素環式基、または置換基を有していてもよい非芳香族複素環式基である、＜２＞に記載の環状ペプチドまたはその塩。
＜５＞ Ｒ１またはＱ１およびＰ１は、Ｒ１またはＱ１が結合している炭素原子およびＰ１が結合している窒素原子と一緒になって複素環を形成する、＜２＞に記載の環状ペプチドまたはその塩。
＜６＞ Ｒ４またはＱ４、およびＲ５またはＱ５は、それぞれ、任意のＬ－アミノ酸残基およびＤ－アミノ酸残基または任意のＬ－アミノ酸類縁体残基およびＤ－アミノ酸類縁体残基の組み合わせである、＜２＞に記載の環状ペプチドまたはその塩。
＜７＞ Ｒ３またはＱ３、およびＲ６またはＱ６が、置換基を有していてもよい芳香族炭素環式基、または置換基を有していてもよい芳香族複素環式基である、＜２＞に記載の環状ペプチドまたはその塩。
＜８＞ 式（２）のｎが１である、＜２＞に記載の環状ペプチドまたはその塩。
＜９＞ ＜１＞から＜８＞の何れか一に記載の環状ペプチドまたはその塩を含む、ＭＤＭＸ阻害剤。
ｍ個のＸｂｂはそれぞれ独立に任意のアミノ酸残基または任意のアミノ酸類縁体残基を示し、
ｎ＋ｍは、５～５０の整数を示し；
（ａ）環状ペプチドの構造において、主鎖構造の最も長い軸方向の軸長をａとし、ａと直交し、互いに直交する他の２方向の軸長をｂ、ｃとした時に、ａ、ｂ、ｃの各軸長を求める楕円体近似を行う段階を経て、下記式（２）で計算される分子形状因子ｒが０．４～０．６の範囲に含まれる；
（ｃ）前記ペプチドの全アミノ酸数に対するＮ置換アミノ酸数の割合が２５％以上である；
（ｄ）前記ペプチドが、置換基を有していてもよい芳香族炭素環式基または置換基を有していてもよい芳香族複素環式基を側鎖に有するアミノ酸残基およびアミノ酸類縁体残基を１～３個含む。
＜２＞ 下記式（３）で表される、＜１＞に記載の環状ペプチドまたはその塩。
Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８およびＰ９は、それぞれ独立して、水素原子、置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアルケニル基、置換基を有していてもよいアルキニル基、置換基を有していてもよい芳香族炭素環式基、置換基を有していてもよい非芳香族炭素環式基、置換基を有していてもよい芳香族複素環式基、又は置換基を有していてもよい非芳香族複素環式基であり、あるいは、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｑ１、Ｑ２、Ｑ３、Ｑ４、Ｑ５、Ｑ６、Ｑ７、Ｑ８およびＱ９が結合している炭素原子は、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８およびＰ９が結合している窒素原子と一緒になって複素環を形成していてもよく、
ｎ個のＸａａは、それぞれ独立に任意のアミノ酸残基または任意のアミノ酸類縁体残基を示し、
ｎは、０～２の整数である。
＜３＞ Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のうち少なくとも２つ、もしくはＱ３、Ｑ４、Ｑ５およびＱ６のうち少なくとも２つが、置換基を有していてもよい芳香族炭素環式基または置換基を有していてもよい芳香族複素環式基である、＜２＞に記載の環状ペプチドまたはその塩。
＜４＞ Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ７およびＰ９が、置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアルケニル基、置換基を有していてもよいアルキニル基、置換基を有していてもよい芳香族炭素環式基、置換基を有していてもよい非芳香族炭素環式基、置換基を有していてもよい芳香族複素環式基、または置換基を有していてもよい非芳香族複素環式基である、＜２＞に記載の環状ペプチドまたはその塩。
＜５＞ Ｒ１またはＱ１およびＰ１は、Ｒ１またはＱ１が結合している炭素原子およびＰ１が結合している窒素原子と一緒になって複素環を形成する、＜２＞に記載の環状ペプチドまたはその塩。
＜６＞ Ｒ４またはＱ４、およびＲ５またはＱ５は、それぞれ、任意のＬ－アミノ酸残基およびＤ－アミノ酸残基または任意のＬ－アミノ酸類縁体残基およびＤ－アミノ酸類縁体残基の組み合わせである、＜２＞に記載の環状ペプチドまたはその塩。
＜７＞ Ｒ３またはＱ３、およびＲ６またはＱ６が、置換基を有していてもよい芳香族炭素環式基、または置換基を有していてもよい芳香族複素環式基である、＜２＞に記載の環状ペプチドまたはその塩。
＜８＞ 式（２）のｎが１である、＜２＞に記載の環状ペプチドまたはその塩。
＜９＞ ＜１＞から＜８＞の何れか一に記載の環状ペプチドまたはその塩を含む、ＭＤＭＸ阻害剤。
＜Ａ＞ ＜１＞から＜８＞の何れか一に記載の環状ペプチドまたはその塩を対象に投与することを含む、ＭＤＭＸを阻害する方法。
＜Ｂ＞ ＭＤＭＸを阻害する処置において使用するための＜１＞から＜８＞の何れか一に記載の環状ペプチドまたはその塩。
＜Ｃ＞ ＭＤＭＸ阻害剤の製造のための、＜１＞から＜８＞の何れか一に記載の環状ペプチドまたはその塩の使用。
＜Ｂ＞ ＭＤＭＸを阻害する処置において使用するための＜１＞から＜８＞の何れか一に記載の環状ペプチドまたはその塩。
＜Ｃ＞ ＭＤＭＸ阻害剤の製造のための、＜１＞から＜８＞の何れか一に記載の環状ペプチドまたはその塩の使用。
本発明の環状ペプチドまたはその塩およびＭＤＭＸ阻害剤は、優れた細胞膜透過性と優れたＭＤＭＸとの標的結合性とを有する。
以下、本発明について詳細に説明する。
本明細書において「～」は、その前後に記載される数値をそれぞれ最小値および最大値として含む範囲を示す。
本明細書において「～」は、その前後に記載される数値をそれぞれ最小値および最大値として含む範囲を示す。
＜用語の説明＞
アミノ酸は、アミノ基およびカルボキシル基の両方を含有する分子を意味する。アミノ酸としては、天然アミノ酸又は非天然アミノ酸のいずれでもよく、Ｄ－およびＬ－異性体のいずれでもよい。アミノ酸としては、α－アミノ酸でもよい。α－アミノ酸は、α－ 炭素として指定される炭素に結合したアミノ基およびカルボキシル基を含有する分子を意味する。
アミノ酸は、アミノ基およびカルボキシル基の両方を含有する分子を意味する。アミノ酸としては、天然アミノ酸又は非天然アミノ酸のいずれでもよく、Ｄ－およびＬ－異性体のいずれでもよい。アミノ酸としては、α－アミノ酸でもよい。α－アミノ酸は、α－ 炭素として指定される炭素に結合したアミノ基およびカルボキシル基を含有する分子を意味する。
天然アミノ酸は、アラニン（Ａ）、アルギニン（Ｒ）、アスパラギン（Ｎ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン（Ｑ）、グルタミン酸（Ｅ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、リジン（Ｋ）、メチオニン（Ｍ）、フェニルアラニン（Ｆ）、プロリン（Ｐ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、トリプトファン（Ｗ）、チロシン（Ｙ）およびバリン（Ｖ）の何れかを示す。
非天然アミノ酸は、上記した２０種類の天然アミノ酸以外のアミノ酸を意味する。
アミノ酸類縁体は、構造的にアミノ酸に類似し、環状ペプチドの製造においてアミノ酸の代わりに使用することができる分子を意味する。
非天然アミノ酸は、上記した２０種類の天然アミノ酸以外のアミノ酸を意味する。
アミノ酸類縁体は、構造的にアミノ酸に類似し、環状ペプチドの製造においてアミノ酸の代わりに使用することができる分子を意味する。
アミノ酸類縁体としては、β － アミノ酸、およびアミノ基またはカルボキシル基が同様に反応性の基により置換されたアミノ酸（例えば、第一級アミンの第二級もしくは第三級アミンによる置換、またはカルボキシ基のエステルによる置換）が挙げられるが、特に限定されない。β－アミノ酸は、アミノ基およびカルボキシル基両方をβ配置で含有する分子を意味する。
非天然アミノ酸残基およびアミノ酸類縁体残基としては、以下を挙げることができるが、特に限定されない。
アミノ酸類縁体にはβ－アミノ酸類縁体が含まれる。β－アミノ酸類縁体の例には下記のものが含まれるが、これらに限定されない：環状β－アミノ酸類縁体；β－アラニン；（Ｒ）－β－フェニルアラニン；（Ｒ）－１，２，３，４－テトラヒドロ－イソキノリン－３－酢酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－（１－ナフチル）－酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－（２，４－ジクロロフェニル）酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－（２－クロロフェニル）－酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－（２－シアノフェニル）－酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－（２－フルオロフェニル）－酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－（２－フリル）－酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－（２－メチルフェニル）－酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－（２－ナフチル）－酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－（２－チエニル）－酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－（２－トリフルオロメチルフェニル）－酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－（３，４－ジクロロフェニル）酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－（３，４－ジフルオロフェニル）酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－（３－ベンゾチエニル）－酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－（３－クロロフェニル）－酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－（３－シアノフェニル）－酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－（３－フルオロフェニル）－酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－（３－メチルフェニル）－酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－（３－ピリジル）－酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－（３－チエニル）－酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－（３－トリフルオロメチルフェニル）－酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－（４－ブロモフェニル）－酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－（４－クロロフェニル）－酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－（４－シアノフェニル）－酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－（４－フルオロフェニル）－酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－（４－ヨードフェニル）－酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－（４－メチルフェニル）－酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－（４－ニトロフェニル）－酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－（４－ピリジル）－酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－（４－トリフルオロメチルフェニル）－酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－４－ペンタフルオロ－フェニル酪酸；（Ｒ）－３－アミノ－５－ヘキセン酸；（Ｒ）－３－アミノ－５－ヘキシン酸；（Ｒ）－３－アミノ－５－フェニルペンタン酸；（Ｒ）－３－アミノ－６－フェニル－５－ヘキセン酸；（Ｓ）－１，２，３，４－テトラヒドロ－イソキノリン－３－酢酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－（１－ナフチル）－酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－（２，４－ジクロロフェニル）酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－（２－クロロフェニル）－酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－（２－シアノフェニル）－酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－（２－フルオロフェニル）－酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－（２－フリル）－酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－（２－メチルフェニル）－酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－（２－ナフチル）－酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－（２－チエニル）－酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－（２－トリフルオロメチルフェニル）－酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－（３，４－ジクロロフェニル）酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－（３，４－ジフルオロフェニル）酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－（３－ベンゾチエニル）－酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－（３－クロロフェニル）－酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－（３－シアノフェニル）－酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－（３－フルオロフェニル）－酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－（３－メチルフェニル）－酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－（３－ピリジル）－酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－（３－チエニル）－酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－（３－トリフルオロメチルフェニル）－酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－（４－ブロモフェニル）－酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－（４－クロロフェニル）－酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－（４－シアノフェニル）－酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－（４－フルオロフェニル）－酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－（４－ヨードフェニル）－酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－（４－メチルフェニル）－酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－（４－ニトロフェニル）－酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－（４－ピリジル）－酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－（４－トリフルオロメチルフェニル）－酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－４－ペンタフルオロ－フェニル酪酸；（Ｓ）－３－アミノ－５－ヘキセン酸；（Ｓ）－３－アミノ－５－ヘキシン酸；（Ｓ）－３－アミノ－５－フェニルペンタン酸；（Ｓ）－３－アミノ－６－フェニル－５－ヘキセン酸；１，２，５，６－テトラヒドロピリジン－３－カルボン酸；１，２，５，６－テトラヒドロピリジン－４－カルボン酸；３－アミノ－３－（２－クロロフェニル）－プロピオン酸；３－アミノ－３－（２－チエニル）－プロピオン酸；３－アミノ－３－（３－ブロモフェニル）－プロピオン酸；３－アミノ－３－（４－クロロフェニル）－プロピオン酸；３－アミノ－３－（４－メトキシフェニル）－プロピオン酸；３－アミノ－４，４，４－トリフルオロ－酪酸；３－アミノアジピン酸；Ｄ－β－フェニルアラニン；β－ロイシン；Ｌ－β－ホモアラニン；Ｌ－β－ホモアスパラギン酸γ－ベンジルエステル；Ｌ－β－ホモグルタミン酸δ－ベンジルエステル；Ｌ－β－ホモイソロイシン；Ｌ－β－ホモロイシン；Ｌ－β－ホモメチオニン；Ｌ－β－ホモフェニルアラニン；Ｌ－β－ホモプロリン；Ｌ－β－ホモトリプトファン；Ｌ－β－ホモバリン；Ｌ－Ｎω－ベンジルオキシカルボニル－β－ホモリジン；Ｎω－Ｌ－β－ホモアルギニン；Ｏ－ベンジル－Ｌ－β－ホモヒドロキシプロリン；Ｏ－ベンジル－Ｌ－β－ホモセリン；Ｏ－ベンジル－Ｌ－β－ホモトレオニン；Ｏ－ベンジル－Ｌ－β－ホモチロシン；γ－トリチル－Ｌ－β－ホモアスパラギン；（Ｒ）－β－フェニルアラニン；Ｌ－β－ホモアスパラギン酸γ－ｔ－ブチルエステル；Ｌ－β－ホモグルタミン酸δ－ｔ－ブチルエステル；Ｌ－Ｎω－β－ホモリジン；Ｎδ－トリチル－Ｌ－β－ホモグルタミン；Ｎω－２，２，４，６，７－ペンタメチル－ジヒドロベンゾフラン－５－スルホニル－Ｌ－β－ホモアルギニン；Ｏ－ｔ－ブチル－Ｌ－β－ホモヒドロキシ－プロリン；Ｏ－ｔ－ブチル－Ｌ－β－ホモセリン；Ｏ－ｔ－ブチル－Ｌ－β－ホモトレオニン；Ｏ－ｔ－ブチル－Ｌ－β－ホモチロシン；２－アミノシクロペンタンカルボン酸；および２－アミノシクロヘキサンカルボン酸。
アミノ酸類縁体には、アラニン、バリン、グリシンまたはロイシンの類縁体が含まれる。アラニン、バリン、グリシン、およびロイシンのアミノ酸類縁体の例には下記のものが含まれるが、これらに限定されない：α－メトキシグリシン；α－アリル－Ｌ－アラニン；α－アミノイソ酪酸；α－メチル－ロイシン；β－（１－ナフチル）－Ｄ－アラニン；β－（１－ナフチル）－Ｌ－アラニン；β－（２－ナフチル）－Ｄ－アラニン；β－（２－ナフチル）－Ｌ－アラニン；β－（２－ピリジル）－Ｄ－アラニン；β－（２－ピリジル）－Ｌ－アラニン；β－（２－チエニル）－Ｄ－アラニン；β－（２－チエニル）－Ｌ－アラニン；β－（３－ベンゾチエニル）－Ｄ－アラニン；β－（３－ベンゾチエニル）－Ｌ－アラニン；β－（３－ピリジル）－Ｄ－アラニン；β－（３－ピリジル）－Ｌ－アラニン；β－（４－ピリジル）－Ｄ－アラニン；β－（４－ピリジル）－Ｌ－アラニン；β－クロロ－Ｌ－アラニン；β－シアノ－Ｌ－アラニン；β－シクロヘキシル－Ｄ－アラニン；β－シクロヘキシル－Ｌ－アラニン；β－シクロペンテン－１－イル－アラニン；β－シクロペンチル－アラニン；β－シクロプロピル－Ｌ－Ａｌａ－ＯＨ・ジシクロヘキシルアンモニウム塩；β－ｔ－ブチル－Ｄ－アラニン；β－ｔ－ブチル－Ｌ－アラニン；γ－アミノ酪酸；Ｌ－α，β－ジアミノプロピオン酸；２，４－ジニトロ－フェニルグリシン；２，５－ジヒドロ－Ｄ－フェニルグリシン；２－アミノ－４，４，４－トリフルオロ酪酸；２－フルオロ－フェニルグリシン；３－アミノ－４，４，４－トリフルオロ－酪酸；３－フルオロ－バリン；４，４，４－トリフルオロ－バリン；４，５－デヒドロ－Ｌ－ｌｅｕ－ＯＨ・ジシクロヘキシルアンモニウム塩；４－フルオロ－Ｄ－フェニルグリシン；４－フルオロ－Ｌ－フェニルグリシン；４－ヒドロキシ－Ｄ－フェニルグリシン；５，５，５－トリフルオロ－ロイシン；６－アミノヘキサン酸；シクロペンチル－Ｄ－Ｇｌｙ－ＯＨ・ジシクロヘキシルアンモニウム塩；シクロペンチル－Ｇｌｙ－ＯＨ・ジシクロヘキシルアンモニウム塩；Ｄ－α，β－ジアミノプロピオン酸；Ｄ－α－アミノ酪酸；Ｄ－α－ｔ－ブチルグリシン；Ｄ－（２－チエニル）グリシン；Ｄ－（３－チエニル）グリシン；Ｄ－２－アミノカプロン酸；Ｄ－２－インダニルグリシン；Ｄ－アリルグリシン・ジシクロヘキシルアンモニウム塩；Ｄ－シクロヘキシルグリシン；Ｄ－ノルバリン；Ｄ－フェニルグリシン；β－アミノ酪酸；β－アミノイソ酪酸；（２－ブロモフェニル）グリシン；（２－メトキシフェニル）グリシン；（２－メチルフェニル）グリシン；（２－チアゾイル）グリシン；（２－チエニル）グリシン；２－アミノ－３－（ジメチルアミノ）－プロピオン酸；Ｌ－α，β－ジアミノプロピオン酸；Ｌ－α－アミノ酪酸；Ｌ－α－ｔ－ブチルグリシン；Ｌ－（３－チエニル）グリシン；Ｌ－２－アミノ－３－（ジメチルアミノ）－プロピオン酸；Ｌ－２－アミノカプロン酸ジシクロヘキシル－アンモニウム塩；Ｌ－２－インダニルグリシン；Ｌ－アリルグリシン・ジシクロヘキシルアンモニウム塩；Ｌ－シクロヘキシルグリシン；Ｌ－フェニルグリシン；Ｌ－プロパルギルグリシン；Ｌ－ノルバリン；Ｎ－α－アミノメチル－Ｌ－アラニン；Ｄ－α，γ－ジアミノ酪酸；Ｌ－α，γ－ジアミノ酪酸；β－シクロプロピル－Ｌ－アラニン；（Ｎ－β－（２，４－ジニトロフェニル））－Ｌ－α，β－ジアミノプロピオン酸；（Ｎ－β－１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキサ－１－イリデン）エチル）－Ｄ－α，β－ジアミノプロピオン酸；（Ｎ－β－１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキサ－１－イリデン）エチル）－Ｌ－α，β－ジアミノプロピオン酸；（Ｎ－β－４－メチルトリチル）－Ｌ－α，β－ジアミノプロピオン酸；（Ｎ－β－アリルオキシカルボニル）－Ｌ－α，β－ジアミノプロピオン酸；（Ｎ－γ－１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキサ－１－イリデン）エチル）－Ｄ－α，γ－ジアミノ酪酸；（Ｎ－γ－１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキサ－１－イリデン）エチル）－Ｌ－α，γ－ジアミノ酪酸；（Ｎ－γ－４－メチルトリチル）－Ｄ－α，γ－ジアミノ酪酸；（Ｎ－γ－４－メチルトリチル）－Ｌ－α，γ－ジアミノ酪酸；（Ｎ－γ－アリルオキシカルボニル）－Ｌ－α，γ－ジアミノ酪酸；Ｄ－α，γ－ジアミノ酪酸；４，５－デヒドロ－Ｌ－ロイシン；シクロペンチル－Ｄ－Ｇｌｙ－ＯＨ；シクロペンチル－Ｇｌｙ－ＯＨ；Ｄ－アリルグリシン；Ｄ－ホモシクロヘキシルアラニン；Ｌ－１－ピレニルアラニン；Ｌ－２－アミノカプロン酸；Ｌ－アリルグリシン；Ｌ－ホモシクロヘキシルアラニン；およびＮ－（２－ヒドロキシ－４－メトキシ－Ｂｚｌ）－Ｇｌｙ－ＯＨ。
アミノ酸類縁体には、フェニルアラニンおよびチロシンの類縁体が含まれる。フェニルアラニンおよびチロシンのアミノ酸類縁体の例には下記のものが含まれる：β－メチル－フェニルアラニン、β－ヒドロキシフェニルアラニン、α－メチル－３－メトキシ－ＤＬ－フェニルアラニン、α－メチル－Ｄ－フェニルアラニン、α－メチル－Ｌ－フェニルアラニン、１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－３－カルボン酸、２，４－ジクロロ－フェニルアラニン、２－（トリフルオロメチル）－Ｄ－フェニルアラニン、２－（トリフルオロメチル）－Ｌ－フェニルアラニン、２－ブロモ－Ｄ－フェニルアラニン、２－ブロモ－Ｌ－フェニルアラニン、２－クロロ－Ｄ－フェニルアラニン、２－クロロ－Ｌ－フェニルアラニン、２－シアノ－Ｄ－フェニルアラニン、２－シアノ－Ｌ－フェニルアラニン、２－フルオロ－Ｄ－フェニルアラニン、２－フルオロ－Ｌ－フェニルアラニン、２－メチル－Ｄ－フェニルアラニン、２－メチル－Ｌ－フェニルアラニン、２－ニトロ－Ｄ－フェニルアラニン、２－ニトロ－Ｌ－フェニルアラニン、２；４；５－トリヒドロキシ－フェニルアラニン、３，４，５－トリフルオロ－Ｄ－フェニルアラニン、３，４，５－トリフルオロ－Ｌ－フェニルアラニン、３，４－ジクロロ－Ｄ－フェニルアラニン、３，４－ジクロロ－Ｌ－フェニルアラニン、３，４－ジフルオロ－Ｄ－フェニルアラニン、３，４－ジフルオロ－Ｌ－フェニルアラニン、３，４－ジヒドロキシ－Ｌ－フェニルアラニン、３，４－ジメトキシ－Ｌ－フェニルアラニン、３，５，３’－トリヨード－Ｌ－チロニン、３，５－ジヨード－Ｄ－チロシン、３，５－ジヨード－Ｌ－チロシン、３，５－ジヨード－Ｌ－チロニン、３－（トリフルオロメチル）－Ｄ－フェニルアラニン、３－（トリフルオロメチル）－Ｌ－フェニルアラニン、３－アミノ－Ｌ－チロシン、３－ブロモ－Ｄ－フェニルアラニン、３－ブロモ－Ｌ－フェニルアラニン、３－クロロ－Ｄ－フェニルアラニン、３－クロロ－Ｌ－フェニルアラニン、３－クロロ－Ｌ－チロシン、３－シアノ－Ｄ－フェニルアラニン、３－シアノ－Ｌ－フェニルアラニン、３－フルオロ－Ｄ－フェニルアラニン、３－フルオロ－Ｌ－フェニルアラニン、３－フルオロ－チロシン、３－ヨード－Ｄ－フェニルアラニン、３－ヨード－Ｌ－フェニルアラニン、３－ヨード－Ｌ－チロシン、３－メトキシ－Ｌ－チロシン、３－メチル－Ｄ－フェニルアラニン、３－メチル－Ｌ－フェニルアラニン、３－ニトロ－Ｄ－フェニルアラニン、３－ニトロ－Ｌ－フェニルアラニン、３－ニトロ－Ｌ－チロシン、４－（トリフルオロメチル）－Ｄ－フェニルアラニン、４－（トリフルオロメチル）－Ｌ－フェニルアラニン、４－アミノ－Ｄ－フェニルアラニン、４－アミノ－Ｌ－フェニルアラニン、４－ベンゾイル－Ｄ－フェニルアラニン、４－ベンゾイル－Ｌ－フェニルアラニン、４－ビス（２－クロロエチル）アミノ－Ｌ－フェニルアラニン、４－ブロモ－Ｄ－フェニルアラニン、４－ブロモ－Ｌ－フェニルアラニン、４－クロロ－Ｄ－フェニルアラニン、４－クロロ－Ｌ－フェニルアラニン、４－シアノ－Ｄ－フェニルアラニン、４－シアノ－Ｌ－フェニルアラニン、４－フルオロ－Ｄ－フェニルアラニン、４－フルオロ－Ｌ－フェニルアラニン、４－ヨード－Ｄ－フェニルアラニン、４－ヨード－Ｌ－フェニルアラニン、ホモフェニルアラニン、チロキシン、３，３－ジフェニルアラニン、チロニン、エチル－チロシン、およびメチル－チロシン。
アミノ酸類縁体には、プロリンの類縁体が含まれる。プロリンのアミノ酸類縁体の例には下記のものが含まれるが、これらに限定されない：３，４－デヒドロ－プロリン、４－フルオロ－プロリン、ｃｉｓ－４－ヒドロキシ－プロリン、チアゾリジン－２－カルボン酸、およびｔｒａｎｓ－４－フルオロ－プロリン。
アミノ酸類縁体には、セリンおよびトレオニンの類縁体が含まれる。セリンおよびトレオニンのアミノ酸類縁体の例には下記のものが含まれるが、これらに限定されない：３－アミノ－２－ヒドロキシ－５－メチルヘキサン酸、２－アミノ－３－ヒドロキシ－４－メチルペンタン酸、２－アミノ－３－エトキシブタン酸、２－アミノ－３－メトキシブタン酸、４－アミノ－３－ヒドロキシ－６－メチルヘプタン酸、２－アミノ－３－ベンジルオキシプロピオン酸、２－アミノ－３－ベンジルオキシプロピオン酸、２－アミノ－３－エトキシプロピオン酸、４－アミノ－３－ヒドロキシブタン酸、およびα－メチルセリン。
アミノ酸類縁体には、トリプトファンの類縁体が含まれる。トリプトファンのアミノ酸類縁体の例には下記のものが含まれるが、これらに限定されない：α－メチル－トリプトファン；β－（３－ベンゾチエニル）－Ｄ－アラニン；β－（３－ベンゾチエニル）－Ｌ－アラニン；１－メチル－トリプトファン；４－メチル－トリプトファン；５－ベンジルオキシ－トリプトファン；５－ブロモ－トリプトファン；５－クロロ－トリプトファン；５－フルオロ－トリプトファン；５－ヒドロキシ－トリプトファン；５－ヒドロキシ－Ｌ－トリプトファン；５－メトキシ－トリプトファン；５－メトキシ－Ｌ－トリプトファン；５－メチル－トリプトファン；６－ブロモ－トリプトファン；６－クロロ－Ｄ－トリプトファン；６－クロロ－トリプトファン；６－フルオロ－トリプトファン；６－メチル－トリプトファン；７－ベンジルオキシ－トリプトファン；７－ブロモ－トリプトファン；７－メチル－トリプトファン；Ｄ－１，２，３，４－テトラヒドロ－ノルハルマン－３－カルボン酸；６－メトキシ－１，２，３，４－テトラヒドロノルハルマン－１－カルボン酸；７－アザトリプトファン；Ｌ－１，２，３，４－テトラヒドロ－ノルハルマン－３－カルボン酸；５－メトキシ－２－メチル－トリプトファン；および６－クロロ－Ｌ－トリプトファン。
一例においては、アミノ酸類縁体はラセミ体である。アミノ酸類縁体のＤ異性体を用いても、アミノ酸類縁体のＬ異性体を用いてもよい。また、アミノ酸類縁体はＲまたはＳ立体配置であるキラル中心を含んでいてもよい。さらに、β－アミノ酸類縁体のアミノ基（単数または複数）を、保護基、例えばｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ基）、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル（ＦＭＯＣ）、トシル等で置換してもよい。さらに、β－アミノ酸類縁体のカルボン酸官能基を、例えばそのエステル誘導体として保護してもよい。また、アミノ酸類縁体の塩を用いてもよい。
アルキル基とは、炭素数１～１５、好ましくは炭素数１～１０、より好ましくは炭素数１～６の直鎖又は分枝状の炭化水素基を包含する。例えば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ－ヘキシル、イソヘキシル、ｎ－へプチル、イソヘプチル、ｎ－オクチル、イソオクチル、ｎ－ノニル、ｎ－デシル等が挙げられるがこれらに限定されない。また、これらのアルキル基は、少なくとも一つの炭素原子がヘテロ原子、例えば、酸素、窒素、硫黄、リンまたはケイ素で置換されていてもよい。アルケニル基とは、任意の位置に１個以上の炭素－炭素二重結合を有する、炭素数２～１５、好ましくは炭素数２～１０、より好ましくは炭素数２～６の直鎖又は分枝状の炭化水素基を包含する。例えば、ビニル、アリル、プロペニル、イソプロペニル、ブテニル、イソブテニル、プレニル、ブタジエニル、ペンテニル、イソペンテニル、ペンタジエニル、ヘキセニル、イソヘキセニル、ヘキサジエニル、ヘプテニル、オクテニル、ノネニル、デセニル、ウンデセニル、ドデセニル、トリデセニル、テトラデセニル、ペンタデセニル等が挙げられるが、これらに限定されない。また、これらのアルケニル基は、少なくとも一つの炭素原子がヘテロ原子で置換されていてもよい。アルキニル基とは、任意の位置に１個以上の炭素－炭素三重結合を有する、炭素数２～１０、好ましくは炭素数２～８、さらに好ましくは炭素数２～６の直鎖又は分枝状の炭化水素基を包含する。さらに任意の位置に二重結合を有していてもよい。例えば、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニル、ヘプチニル、オクチニル、ノニニル、デシニル等が挙げられるが、これらに限定されない。また、これらのアルキニル基は、少なくとも一つの炭素原子がヘテロ原子で置換されていてもよい。
芳香族炭素環式基とは、単一の芳香環または複数の芳香環を含有する炭素環式基である。芳香族炭素環式基の炭素数は、好ましくは５～２４であり、より好ましくは５～１８であり、さらに好ましくは５～１４である。芳香族炭素環式基としては、フェニル、ナフチル等が挙げられる。
非芳香族炭素環式基とは、単一の非芳香環または複数の非芳香環を含有する炭素環式基である。非芳香族炭素環式基の炭素数は、好ましくは３～２４であり、より好ましくは３～１８であり、さらに好ましくは３～１４である。非芳香族炭素環式基としては、飽和および不飽和の環状炭化水素基が挙げられ、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘプチル、およびシクロオクチルが挙げられる。
芳香族複素環式基とは、単環式の場合１～３個のヘテロ原子、二環式の場合１～６個のヘテロ原子、または三環式の場合１～９個のヘテロ原子を有する、芳香族の５～８員単環式、８～１２員二環式、または１１～１４員三環式の環系を示す。ヘテロ原子はＯ、Ｎ またはＳから選択することができる。芳香族複素環式基としては、ピリジル基、ピリミジニル基、ピロリル基、フリル基、フラニル基、チオフェニル基、チエニル基、インドリル基、イソインドリル基、インドリジニル基、イミダゾリル基、ピリドニル基、ピリミジル基、ピラジニル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、プリニル基、キノリニル基、イソキノリニル基、ベンズイミダゾリル基、ベンゾフラニル基およびベンゾオキサゾリル基などが挙げられるが、これらに限定されない。
非芳香族複素環式基とは、単環式の場合１～３個のヘテロ原子、二環式の場合１～６ 個のヘテロ原子、または三環式の場合１～９個のヘテロ原子を有する、非芳香族の５～８ 員単環式、８～１２員二環式、または１１～１４員三環式の環系を示す。ヘテロ原子はＯ、ＮまたはＳから選択することができる。非芳香族複素環式基としては、ピペラジニル、ピロリジニル、ジオキサニル、モルホリニル、テトラヒドロフラニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
複素環としては、上記した芳香族複素環式基および非芳香族複素環式基を包含する。
置換基を有していてもよいとは、上記に挙げたいずれかの化学基（アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、芳香族炭素環式基、非芳香族炭素環式基、芳香族複素環式基、および非芳香族複素環式基）において、１つ以上の水素原子が水素以外の原子または化学基で置換されていることを示す。置換基としては、ハロゲン（フッ素、塩素、臭素又はヨウ素など）、ヒドロキシ、メルカプト、オキソ、ニトロ、炭素数1～１０のハロアルキル、炭素数1～１０のアルキル、炭素数６～２０のアリール、炭素数７～２０のアラルキル、炭素数１～１０のアルコキシ、炭素数1～１０のチオアルコキシ、炭素数６～２０のアリールオキシ、アミノ、炭素数２～１０のアルコキシカルボニル、アミド、カルボキシ、炭素数1～１０のアルカンスルホニル、炭素数２～１０のアルキルカルボニル、およびシアノ基などが挙げられるが、特に限定されない。
＜環状ペプチド＞
本発明の環状ペプチドは、下記式（１）で表され、下記の（ａ）～（ｄ）の特徴を有する。
式中、ｎ個のＸａａはそれぞれ独立に任意のアミノ酸残基または任意のアミノ酸類縁体残基を示し、
ｍ個のＸｂｂはそれぞれ独立に任意のアミノ酸残基または任意のアミノ酸類縁体残基を示し、
ｎ＋ｍは、５～５０の整数を示す。
本発明の環状ペプチドは、下記式（１）で表され、下記の（ａ）～（ｄ）の特徴を有する。
ｍ個のＸｂｂはそれぞれ独立に任意のアミノ酸残基または任意のアミノ酸類縁体残基を示し、
ｎ＋ｍは、５～５０の整数を示す。
ｎ＋ｍは、好ましくは、５～５０の整数を示し、より好ましくは、５～２０の整数を示し、さらに好ましくは、９～１１の整数を示す。
本発明の環状ペプチドは、細胞内への高い透過性とＭＤＭＸへの高い標的結合性を有する。本発明の環状ペプチドは、ＭＤＭＸ－ｐ５３相互作用を阻害することができることから、ＭＤＭＸが過剰発現した固形腫瘍などのがんの治療において有用である。
（ａ）環状ペプチドの構造において、主鎖構造の最も長い軸方向の軸長をａとし、ａと直交し、互いに直交する他の２方向の軸長をｂ、ｃとした時に、ａ、ｂ、ｃの各軸長を求める楕円体近似（図２を参照）を行う段階を経て、下記式（２）で計算される分子形状因子ｒが０．４～０．６の範囲に含まれる；
式（２）で計算される分子形状因子ｒは、好ましくは、０．４～０．６であり、より好ましくは、０．４～０．５５である。
（ｂ）ペプチドが生理環境下において非イオン性である。生理環境下において非イオン性とは、ペプチドが、生理環境下において電荷を帯びた置換基を有さないことを意味する。
（ｃ）ペプチドの全アミノ酸数に対するＮ置換アミノ酸数の割合が２５％以上である。
Ｎ置換アミノ酸とは、アミノ酸のアミノ基の窒素原子に置換基を有するアミノ酸である。
ペプチドの全アミノ酸数に対するＮ置換アミノ酸数の割合は、好ましくは、２５％以上であり、より好ましくは、４０％以上であり、さらに好ましくは、５０％以上である。
Ｎ置換アミノ酸とは、アミノ酸のアミノ基の窒素原子に置換基を有するアミノ酸である。
ペプチドの全アミノ酸数に対するＮ置換アミノ酸数の割合は、好ましくは、２５％以上であり、より好ましくは、４０％以上であり、さらに好ましくは、５０％以上である。
（ｄ）ペプチドは、置換基を有していてもよい芳香族炭素環式基または置換基を有していてもよい芳香族複素環式基を側鎖に有するアミノ酸残基およびアミノ酸類縁体残基を１～３個含む。
好ましくは、ペプチドは、置換基を有していてもよい芳香族炭素環式基または置換基を有していてもよい芳香族複素環式基を側鎖に有するアミノ酸残基およびアミノ酸類縁体残基を２個含む。
より好ましくは、ペプチドは、置換基を有していてもよい芳香族炭素環式基を側鎖に有するアミノ酸残基およびアミノ酸類縁体残基1個と、置換基を有していてもよい芳香族複素環式基を側鎖に有するアミノ酸残基およびアミノ酸類縁体残基１個とを含む。
好ましくは、ペプチドは、置換基を有していてもよい芳香族炭素環式基または置換基を有していてもよい芳香族複素環式基を側鎖に有するアミノ酸残基およびアミノ酸類縁体残基を２個含む。
より好ましくは、ペプチドは、置換基を有していてもよい芳香族炭素環式基を側鎖に有するアミノ酸残基およびアミノ酸類縁体残基1個と、置換基を有していてもよい芳香族複素環式基を側鎖に有するアミノ酸残基およびアミノ酸類縁体残基１個とを含む。
本発明の環状ペプチドは、好ましくは、下記式（３）で表される。
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｑ１、Ｑ２、Ｑ３、Ｑ４、Ｑ５、Ｑ６、Ｑ７、Ｑ８およびＱ９は、それぞれ独立して、水素原子、置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアルケニル基、置換基を有していてもよいアルキニル基、、置換基を有していてもよい芳香族炭素環式基、置換基を有していてもよい非芳香族炭素環式基、置換基を有していてもよい芳香族複素環式基、置換基を有していてもよい非芳香族複素環式基であり、
Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８、およびＰ９は、それぞれ独立して、水素原子、置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアルケニル基、置換基を有していてもよいアルキニル基、置換基を有していてもよい芳香族炭素環式基、置換基を有していてもよい非芳香族炭素環式基、置換基を有していてもよい芳香族複素環式基、又は置換基を有していてもよい非芳香族複素環式基であり、あるいは、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｑ１、Ｑ２、Ｑ３、Ｑ４、Ｑ５、Ｑ６、Ｑ７、Ｑ８およびＱ９が結合している炭素原子は、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８およびＰ９が結合している窒素原子と一緒になって複素環を形成していてもよく、
ｎ個のＸａａは、それぞれ独立に任意のアミノ酸残基または任意のアミノ酸類縁体残基を示し、
ｎは、０～２の整数である。
Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８、およびＰ９は、それぞれ独立して、水素原子、置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアルケニル基、置換基を有していてもよいアルキニル基、置換基を有していてもよい芳香族炭素環式基、置換基を有していてもよい非芳香族炭素環式基、置換基を有していてもよい芳香族複素環式基、又は置換基を有していてもよい非芳香族複素環式基であり、あるいは、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｑ１、Ｑ２、Ｑ３、Ｑ４、Ｑ５、Ｑ６、Ｑ７、Ｑ８およびＱ９が結合している炭素原子は、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８およびＰ９が結合している窒素原子と一緒になって複素環を形成していてもよく、
ｎ個のＸａａは、それぞれ独立に任意のアミノ酸残基または任意のアミノ酸類縁体残基を示し、
ｎは、０～２の整数である。
好ましくは、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のうち少なくとも１つ、もしくはＱ３、Ｑ４、Ｑ５およびＱ６のうち少なくとも１つが、置換基を有していてもよい芳香族炭素環式基または置換基を有していてもよい芳香族複素環式基である。
好ましくは、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ７およびＰ９は、置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアルケニル基、置換基を有していてもよいアルキニル基、置換基を有していてもよい芳香族炭素環式基、置換基を有していてもよい非芳香族炭素環式基、置換基を有していてもよい芳香族複素環式基、または置換基を有していてもよい非芳香族複素環式基である。
好ましくは、Ｒ１またはＱ１およびＰ１は、Ｒ１またはＱ１が結合している炭素原子およびＰ１が結合している窒素原子と一緒になって複素環を形成する。
好ましくは、Ｒ４またはＱ４、およびＲ５またはＱ５は、それぞれ、任意のＬ－アミノ酸残基およびＤ－アミノ酸残基または任意のＬ－アミノ酸類縁体残基およびＤ－アミノ酸類縁体残基の組み合わせである。
好ましくは、Ｒ３またはＱ３およびＲ６またはＱ６が、置換基を有していてもよい芳香族炭素環式基、または置換基を有していてもよい芳香族複素環式基である。
好ましくは、式（２）のｎは１である。
本発明の環状ペプチドは、用途に合わせてリン酸化、メチル化、アセチル化、アデニリル化、ＡＤＰリボシル化、糖鎖付加などの修飾を加えてもよい。また、本発明の環状ペプチドは、塩であってもよい。塩は、好ましくは、生理学的に許容される無機および有機の酸および塩基との塩である。適切な酸塩の例には下記のものが含まれる：酢酸塩、アジピン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グリコール酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素 酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、パモ酸塩（ｐａｌｍｏａｔｅ）、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩、およびウンデカン酸塩。適切な塩基から誘導される塩類には、アルカリ金属（例 えば、ナトリウム）塩、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）塩、アンモニウム塩 、およびＮ－（アルキル）４＋塩が含まれる。
＜環状ペプチドの製造方法＞
本発明の環状ペプチドの製造方法は特に限定されない。本発明の環状ペプチドは、無細胞翻訳系を使用する方法で製造してもよいし、ペプチドの化学合成法により製造してもよい。ペプチドの化学合成は、一般的には自動ペプチド合成装置により行うことができる。
本発明の環状ペプチドの製造方法は特に限定されない。本発明の環状ペプチドは、無細胞翻訳系を使用する方法で製造してもよいし、ペプチドの化学合成法により製造してもよい。ペプチドの化学合成は、一般的には自動ペプチド合成装置により行うことができる。
ペプチドの合成は、固相合成法でも液相合成法でもよいが、好ましくは固相合成法である。ペプチドの固相合成は、当業者には公知であり、例えば、水酸基を有するレジンの水酸基と、α－アミノ基が保護基で保護された第一のアミノ酸（通常、目的とするペプチドのＣ末端アミノ酸）のカルボキシ基をエステル化反応させる。エステル化触媒としては、１－メシチレンスルホニル－３－ニトロ－１，２，４－トリアゾール（ＭＳＮＴ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＤＩ）等の公知の脱水縮合剤を用いることができる。次に、第一アミノ酸のα－アミノ基の保護基を脱離させるとともに、主鎖のカルボキシ基以外のすべての官能基が保護された第二のアミノ酸を加え、上記カルボキシ基を活性化させて、第一および第二のアミノ酸を結合させる。さらに、第二のアミノ酸のα－アミノ基を脱保護し、主鎖のカルボキシ基以外のすべての官能基が保護された第三のアミノ酸を加え、上記カルボキシ基を活性化させて、第二および第三のアミノ酸を結合させる。これを繰り返して、目的とする長さのペプチドが合成されたら、すべての官能基を脱保護する。固相合成のレジンとしては、Merrifield resin、MBHA resin、Cl-Trt resin、SASRIN resin、Wang resin、Rink amide resin、HMFS resin、Amino-PEGA resin（Merck）、HMPA-PEGA resin（Merck）等が挙げられる。これらのレジンは、溶剤（ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、２－プロパノール、塩化メチレン等）で洗浄してから用いてもよい。α－アミノ基の保護基としては、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ又はＺ）基、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基、フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基、ベンジル基 、アリル基、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）基等が挙げられる。Ｃｂｚ基はフッ化水素酸、水素化等によって脱保護でき、Ｂｏｃ基はトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）により脱保護でき、Ｆｍｏｃ基はピペリジンによる処理で脱保護できる。α－カルボキシ基の保護は、メチルエステル、エチルエステル、ベンジルエステル、ｔｅｒｔ－ブチルエステル、シクロヘキシルエステル等を用いて行うことができる。アミノ酸のその他の官能基として、セリンやトレオニンの水酸基はベンジル基や ｔｅｒｔ－ブチル基で保護することができ、チロシンの水酸基は２－ブロモベンジルオキシカルボニル基やｔｅｒｔ－ブチル基で保護する。リジン側鎖のアミノ基、グルタミン酸やアスパラギン酸のカルボキシ基は、α－アミノ基、α－カルボキシ基と同様に保護することができる。カルボキシ基の活性化は、縮合剤を用いて行うことができる。縮合剤としては、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＤＩ）、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣあるいはＷＳＣ）、（１Ｈベンゾトリアゾール－１－イルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＢＯＰ）、１－［ビス（ジメチルアミノ）メチル］－１Ｈ－ベンゾトリアゾリウム－３－オキシドヘキサフルオロホスファート（ＨＢＴＵ）等が挙げられる。レジンからのペプチド鎖の切断は、ＴＦＡ、フッ化水素（ＨＦ）等の酸で処理することによって行うことができる。
ペプチドの環化方法は、例えば、アミド結合、炭素－炭素結合、チオエーテル結合、ジスルフィド結合、エステル結合、チオエステル結合、ラクタム結合、トリアゾール構造を介した結合、フルオロフォア構造を介した結合等を利用した環化が挙げられる。ペプチド化合物の合成工程と環化反応の工程は、分離していても、連続して進行してもよい。環化は、例えばＷＯ２０１３／１００１３２、ＷＯ２００８／１１７８３３、ＷＯ２０１２／０７４１２９等に記載された当業者に公知の方法により行うことができる。環化部としては、限定されないが、ペプチドのＮ末端とＣ末端の結合、ペプチドのＮ末端と他のアミノ酸残基の側鎖の結合、ペプチドのＣ末端と他のアミノ酸残基の側鎖の結合、又はアミノ酸残基の側鎖同士の結合のいずれであってもよく、これらの二つ以上を組み合わせて使用してもよい。
＜ＭＤＭＸ阻害剤＞
本発明によれば、本発明の環状ペプチドまたはその塩を含むＭＤＭＸ阻害剤が提供される。
実施例に示す通り、本発明の環状ペプチドまたはその塩は、ＭＤＭＸ阻害効果を有する。「ＭＤＭＸ阻害効果」とは、ＭＤＭＸとｐ５３の結合を阻害する効果のことを示す。
ヒトＭＤＭＸの遺伝子配列及びアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）にGene ID:4194として登録されている。
本発明によれば、本発明の環状ペプチドまたはその塩を含むＭＤＭＸ阻害剤が提供される。
実施例に示す通り、本発明の環状ペプチドまたはその塩は、ＭＤＭＸ阻害効果を有する。「ＭＤＭＸ阻害効果」とは、ＭＤＭＸとｐ５３の結合を阻害する効果のことを示す。
ヒトＭＤＭＸの遺伝子配列及びアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）にGene ID:4194として登録されている。
本発明の環状ペプチドは、ＭＤＭＸ阻害剤が関与する疾患の治療のための医薬組成物において用いることが可能である。医薬組成物の投与形態は特に限定されず、経口的投与でも非経口的投与でもよい。非経口的投与としては、例えば、筋肉内注射、静脈内注射、皮下注射等の注射投与、経皮投与、経粘膜投与（経鼻、経口腔、経眼、経肺、経腟、経直腸）投与等が挙げられる。医薬組成物中の環状ペプチドは、代謝および排泄されやすい性質に鑑みて、各種の修飾を行うことができる。例えば、環状ポリペプチドにポリエチレングリコール（ＰＥＧ）や糖鎖を付加して血中滞留時間を長くし、抗原性を低下させることができる。また、ポリ乳酸やポリグリコール酸、ＰＬＧＡなどの生体内分解性の高分子化合物、多孔性ヒドロキシアパタイト、リポソーム、表面修飾リポソーム、不飽和脂肪酸で調整したエマルジョン、ナノパーティクル、ナノスフェア等を除放化基剤として用い、これに環状ペプチドを内包させてもよい。経皮投与する場合、弱い電流を皮膚表面に流して角質層を透過させることもできる。
医薬組成物は、有効成分をそのまま用いてもよいし、薬学的に許容できる担体、賦形剤、添加剤等を加えて製剤化してもよい。剤形としては、例えば、液剤（例えば注射剤）、分散剤、懸濁剤、錠剤、丸剤、粉末剤、坐剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤、トローチ剤、吸入剤、軟膏剤、点眼剤、点鼻剤、点耳剤、パップ剤等が挙げられる。
製剤化は、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、溶解剤、溶解補助剤、着色剤、矯味矯臭剤、安定化剤、乳化剤、吸収促進剤、界面活性剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、抗酸化剤などを適宜使用し、常法により行うことができる。
製剤化は、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、溶解剤、溶解補助剤、着色剤、矯味矯臭剤、安定化剤、乳化剤、吸収促進剤、界面活性剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、抗酸化剤などを適宜使用し、常法により行うことができる。
製剤化に用いられる成分の例としては、精製水、食塩水、リン酸緩衝液、デキストロース、グリセロール、エタノール等の薬学的に許容される有機溶剤、動植物油、乳糖、マンニトール、ブドウ糖、ソルビトール、結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、デンプン、コーンスターチ、無水ケイ酸、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、コラーゲン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、アルギン酸ナトリウム、水溶性デキストラン、カルボキシメチルスターチナトリウム、ぺクチン、メチルセルロース、エチルセルロース、キサンタンガム、アラビアゴム、トラガント、カゼイン、寒天、ポリエチレングリコール、ジグリセリン、グリセリン、プロピレングリコール、ワセリン、パラフィン、ミリスチン酸オクチルドデシル、ミリスチン酸イソプロピル、高級アルコール、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ヒト血清アルブミン、等が挙げられるがこれらに限定されない。環状ペプチドの吸収を改善する吸収促進剤として、ポリオキシエチレンラウリルエーテル類、ラウリル硫酸ナトリウム、サポニン等の界面活性剤；グリココール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸等の胆汁酸塩；ＥＤＴＡ、サリチル酸類等のキレート剤；カプロン酸、カプリン酸、ラウリン酸、オレイン酸、リノール酸、混合ミセル等の脂肪酸類；エナミン誘導体、Ｎ－アシルコラーゲンペプチド、Ｎ－アシルアミノ酸、シクロデキストリン類、キトサン類、一酸化窒素供与体等を用いてもよい。丸剤又は錠剤は、糖衣、胃溶性、腸溶性物質で被覆することもできる。注射剤は、注射用蒸留水、生理食塩水、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、アルコール類等を含むことができる。さらに、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、溶解剤、溶解補助剤、防腐剤等を加えることができる。
＜環状ペプチドおよびＭＤＭＸ阻害剤の用途＞
本発明の環状ペプチドおよびＭＤＭＸ阻害剤は、医薬品、化粧品、ＤＤＳ（Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ）材料等として用いることができるが、これらに限定されるものではない。
本発明の環状ペプチドおよびＭＤＭＸ阻害剤は、医薬品、化粧品、ＤＤＳ（Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ）材料等として用いることができるが、これらに限定されるものではない。
本発明の環状ペプチドおよびＭＤＭＸ阻害剤は、ＭＤＭＸに結合する薬剤を同定するための競合結合アッセイにおいて有用である。例えば、ｐ５３／ＭＤＭＸ系において、標識した本発明の環状ペプチドを、ＭＤＭＸに競合結合する小分子と共にＭＤＭＸ結合アッセイにおいて用いることができる。競合結合試験は、ｐ５３／ＭＤＭＸ系に特異的な薬物候補の迅速なインビトロでの評価および決定を可能にする。そのような結合試験は、本発明の環状ペプチドを用いて実施することができる。
本発明の環状ペプチドは、本発明の環状ペプチドに対する抗体の製造のために使用することもできる。
本発明の環状ペプチドおよびＭＤＭＸ阻害剤は、ｐ５３またはＭＤＭＸの異常な（例えば不十分または過剰な）発現または活性と関係する障害を有する対象を処置するために使用することができる。
障害は、ｐ５３もしくはＭＤＭＸの異常なレベル（例えば過剰発現または過小発現） により、または異常な活性を示すｐ５３もしくはＭＤＭＸの存在により引き起こされる。
本発明の環状ペプチドおよびＭＤＭＸ阻害剤は、過剰増殖性疾患および炎症性障害などの疾患を、ｐ５３およびＭＤＭＸの間の相互作用または結合を妨げることによって処置または予防するために使用することができる。
上記においては、有効量の本発明の環状ペプチドまたはＭＤＭＸ阻害剤を、ヒトを含む哺乳動物に投与することができる。
一例としては、本発明の環状ペプチドおよびＭＤＭＸ阻害剤は、がんおよび新生物性の病気を処置、予防、および／または診断するために用いることができる。本明細書において、がん、過剰増殖性および新生物性とは、自律的増殖に関する能力を有する細胞、すなわち急速に増殖する細胞増殖を特徴とする異常な状態または病気を指す。
がんまたは新生物性の病気の例としては、下記のものが含まれるが、これらに限定されない： 線維肉腫、筋肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、胃癌、食道癌、直腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮癌、頭頚部の癌、皮膚癌、脳癌、扁平上皮癌、脂腺癌、乳癌（乳頭状癌、乳頭状腺癌など）、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頚癌、精巣癌、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌など）、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、白血病、リンパ腫、またはカポジ肉腫。
増殖性障害の例には、造血性新生物性障害が含まれる。造血性新生物性障害には、例えば骨髄、リンパもしくは赤血球系列、またはその前駆細胞に起因する、造血系由来の過形成性／新生物性細胞を含む疾患が含まれる。その疾患は、未分化型急性白血病、例えば赤芽球性白血病および急性巨核芽球性白血病に起因し得る。
以下の実施例により本発明を説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
＜実施例１＞環状ペプチドの合成
本発明の環状ペプチドの合成ルートを以下に示す。本発明の環状ペプチドは、例えば下記に示す一般合成法によって製造することができる。
本発明の環状ペプチドの合成ルートを以下に示す。本発明の環状ペプチドは、例えば下記に示す一般合成法によって製造することができる。
＜環状ペプチドの一般合成法＞
（Step１）２－クロロトリチルクロライドレジンへのアミノ酸担持
フィルター付きの反応容器（10 mL）に２－クロロトリチルクロライドレジン（100～200 mesh、1%DVB、渡辺化学工業株式会社から購入、100 mg、0.137 mmol）と脱水ジクロロメタン（2 mL）を入れ、室温にて10 分間振盪した。ろ過によりジクロロメタンを除いた後、レジンに対し4モル当量のFmocアミノ酸のジクロロメタン（0.5 M）溶液、および5モル当量のジイソプロピルエチルアミンを加えた混合液を反応容器に添加し、2時間振盪した。ろ過により反応液を除いた後、ジクロロメタン：メタノール：ジイソプロピルエチルアミン＝17：2：1（2 mL）を加えた混合液を反応容器に添加し、15分間振盪した。ろ過により反応液を除いた後、同じ操作を2回繰り返した。ろ過により反応液を除いた後、ジメチルホルムアミド（2 mL）、ジクロロメタン（2 mL）を用いて、各3回以上レジンの洗浄を行う。減圧下にレジンを終夜乾燥させ、Fmoc-アミノ酸-２－クロロトリチルレジンを得た。得られたレジンのローディング率は、Fmoc脱保護後の吸光度より算出した。
（Step１）２－クロロトリチルクロライドレジンへのアミノ酸担持
フィルター付きの反応容器（10 mL）に２－クロロトリチルクロライドレジン（100～200 mesh、1%DVB、渡辺化学工業株式会社から購入、100 mg、0.137 mmol）と脱水ジクロロメタン（2 mL）を入れ、室温にて10 分間振盪した。ろ過によりジクロロメタンを除いた後、レジンに対し4モル当量のFmocアミノ酸のジクロロメタン（0.5 M）溶液、および5モル当量のジイソプロピルエチルアミンを加えた混合液を反応容器に添加し、2時間振盪した。ろ過により反応液を除いた後、ジクロロメタン：メタノール：ジイソプロピルエチルアミン＝17：2：1（2 mL）を加えた混合液を反応容器に添加し、15分間振盪した。ろ過により反応液を除いた後、同じ操作を2回繰り返した。ろ過により反応液を除いた後、ジメチルホルムアミド（2 mL）、ジクロロメタン（2 mL）を用いて、各3回以上レジンの洗浄を行う。減圧下にレジンを終夜乾燥させ、Fmoc-アミノ酸-２－クロロトリチルレジンを得た。得られたレジンのローディング率は、Fmoc脱保護後の吸光度より算出した。
（Step2）ペプチド自動合成装置によるペプチド固相合成
ペプチド自動合成装置（Biotage社製 Syro I）を用いてペプチド固相合成を行った。操作の詳細な手順については、合成機付属のマニュアルに従った。合成装置に固相合成用レジン（0.05 mmol）、Fmocアミノ酸(0.5 M)のN-メチル-2-ピロリドン (NMP) 溶液、1-[ビス(ジメチルアミノ)メチレン]-1H-1,2,3-トリアゾロ[4,5-b]ピリジニウム3-オキシドヘキサフルオロホスファート(0.5 M)のNMP溶液、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（0.5 M）のNMP溶液、およびジイロプロピルエチルアミン (0.1 M)のNMP溶液、ピペリジン(20 %v/v) のNMP溶液をセットし、合成を行った。Fmoc脱保護（２０分）、NMPによる洗浄、Fmocアミノ酸の縮合（１時間）、NMPによる洗浄を１サイクルとし、このサイクルを繰り返すことで、ペプチド鎖を伸長させた。
ペプチド自動合成装置（Biotage社製 Syro I）を用いてペプチド固相合成を行った。操作の詳細な手順については、合成機付属のマニュアルに従った。合成装置に固相合成用レジン（0.05 mmol）、Fmocアミノ酸(0.5 M)のN-メチル-2-ピロリドン (NMP) 溶液、1-[ビス(ジメチルアミノ)メチレン]-1H-1,2,3-トリアゾロ[4,5-b]ピリジニウム3-オキシドヘキサフルオロホスファート(0.5 M)のNMP溶液、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（0.5 M）のNMP溶液、およびジイロプロピルエチルアミン (0.1 M)のNMP溶液、ピペリジン(20 %v/v) のNMP溶液をセットし、合成を行った。Fmoc脱保護（２０分）、NMPによる洗浄、Fmocアミノ酸の縮合（１時間）、NMPによる洗浄を１サイクルとし、このサイクルを繰り返すことで、ペプチド鎖を伸長させた。
（Step3）レジンからの切り出し
レジンから直鎖ペプチドを切り出すため、ヘキサフルオロイソプロパノール：ジクロロメタン＝20:80溶液（2 mL）をレジンに添加し、室温にて30分振盪した。反応液をろ過により回収した。さらに2回、ヘキサフルオロイソプロパノール：ジクロロメタン＝20:80溶液（2 mL）を用いた反応を繰り返し、反応液をろ過により回収した。回収した反応液を全て合わせて溶媒を減圧留去し、十分乾燥を行い、直鎖ペプチドの粗精製物を得た。
レジンから直鎖ペプチドを切り出すため、ヘキサフルオロイソプロパノール：ジクロロメタン＝20:80溶液（2 mL）をレジンに添加し、室温にて30分振盪した。反応液をろ過により回収した。さらに2回、ヘキサフルオロイソプロパノール：ジクロロメタン＝20:80溶液（2 mL）を用いた反応を繰り返し、反応液をろ過により回収した。回収した反応液を全て合わせて溶媒を減圧留去し、十分乾燥を行い、直鎖ペプチドの粗精製物を得た。
（Step4）環化反応
直鎖ペプチドの粗精製物に対し、0.25 mMの濃度になるようにアセトニトリルを添加し、溶解させる。9モル当量のジイソプロピルエチルアミン（1 M）を含むアセトニトリル溶液、4モル当量のCOMU（0.5 M）を含むアセトニトリル：テトラヒドロフラン＝1:1溶液を加え、室温にて30分～48時間攪拌した。原料の直鎖ペプチドが消失したことをLC/MS質量分析（Waters社製Acquity UPLC /SQD）により確認した後、溶媒を減圧留去した。残渣を酢酸エチルと水を用いて分液を行い、酢酸エチル層を回収し、溶媒を減圧留去して、環状ペプチドの粗精製物を得た。
直鎖ペプチドの粗精製物に対し、0.25 mMの濃度になるようにアセトニトリルを添加し、溶解させる。9モル当量のジイソプロピルエチルアミン（1 M）を含むアセトニトリル溶液、4モル当量のCOMU（0.5 M）を含むアセトニトリル：テトラヒドロフラン＝1:1溶液を加え、室温にて30分～48時間攪拌した。原料の直鎖ペプチドが消失したことをLC/MS質量分析（Waters社製Acquity UPLC /SQD）により確認した後、溶媒を減圧留去した。残渣を酢酸エチルと水を用いて分液を行い、酢酸エチル層を回収し、溶媒を減圧留去して、環状ペプチドの粗精製物を得た。
（Step5）環状ペプチド精製
得られた粗精製物の精製は液体クロマトグラフィーによって行った。最終的に凍結乾燥粉末として目的の環状ペプチドを得た。
カラム：Waters社製 X Select CSH Prep C18 5 μm OBD (19 x 250 mm)
カラム温度：40度
流速：２０ｍｌ／ｍｉｎ
検出波長：２２０ｎｍ、２５４ｎｍ
溶媒：Ａ液：０．１％ギ酸－水
Ｂ液：０．１％ギ酸－アセトニトリル
得られた粗精製物の精製は液体クロマトグラフィーによって行った。最終的に凍結乾燥粉末として目的の環状ペプチドを得た。
カラム：Waters社製 X Select CSH Prep C18 5 μm OBD (19 x 250 mm)
カラム温度：40度
流速：２０ｍｌ／ｍｉｎ
検出波長：２２０ｎｍ、２５４ｎｍ
溶媒：Ａ液：０．１％ギ酸－水
Ｂ液：０．１％ギ酸－アセトニトリル
N-メチル-2-ピロリドン、ジイロプロピルエチルアミン、1-[ビス(ジメチルアミノ)メチレン]-1H-1,2,3-トリアゾロ[4,5-b]ピリジニウム3-オキシドヘキサフルオロホスファート、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール、ピペリジン、ヘキサフルオロイソプロパノールは富士フイルム和光純薬株式会社から入手した。
本明細書内に記載する環状ペプチドの合成には、下記のFmoc-アミノ酸を用いた。また、本明細書中で示される配列において、下記の略語を用いて示す。Fmoc-アミノ酸は、渡辺化学工業株式会社もしくはCHEM-IMPEX社もしくはAcrotein社もしくはAmatek Chemical社から購入した。
Ala：アラニン
Met：メチオニン
Gly：グリシン
Tyr：チロシン
Trp：トリプトファン
Gln：グルタミン
Nle：ノルロイシン
Phe(4-F)：4-Fフェニルアラニン
Ala(4-Thz)：4-チアゾリルアラニン
HSe（Me）：O-メチル-ホモセリン
Tle：tert-ロイシン
Cha：シクロヘキシルアラニン
Ahp(2)：２－アミノヘプタン酸
Aoc(2)：２－アミノ酪酸
Phe(4-CF3)：４－トリフルオロメチルフェニルアラニン
Phe(4-Cl)：４－クロロフェニルアラニン
Phe(4-CN)：４－シアノフェニルアラニン
Phe(3,4-F2)：3,4-ジフルオロフェニルアラニン
Ala(4-Pyri)：４－ピリジルアラニン
MeAla：N-メチルアラニン
MeNle：N-メチルノルロイシン
MeHSe（Me）：N-メチル-O-メチル-ホモセリン
MeCha：N-メチルシクロヘキシルアラニン
MeLeu：N-メチルロイシン
MePhe：N-メチルフェニルアラニン
D-Pro：D-プロリン
D-MeAla：D-N-メチルアラニン
4-EtNle：4-エチル-ノルロイシン
Me4-EtNle：N-メチル-4-エチル-ノルロイシン
N(2-MeOEt)Gly：N-(2-メトキシエチル)-グリシン
Ala：アラニン
Met：メチオニン
Gly：グリシン
Tyr：チロシン
Trp：トリプトファン
Gln：グルタミン
Nle：ノルロイシン
Phe(4-F)：4-Fフェニルアラニン
Ala(4-Thz)：4-チアゾリルアラニン
HSe（Me）：O-メチル-ホモセリン
Tle：tert-ロイシン
Cha：シクロヘキシルアラニン
Ahp(2)：２－アミノヘプタン酸
Aoc(2)：２－アミノ酪酸
Phe(4-CF3)：４－トリフルオロメチルフェニルアラニン
Phe(4-Cl)：４－クロロフェニルアラニン
Phe(4-CN)：４－シアノフェニルアラニン
Phe(3,4-F2)：3,4-ジフルオロフェニルアラニン
Ala(4-Pyri)：４－ピリジルアラニン
MeAla：N-メチルアラニン
MeNle：N-メチルノルロイシン
MeHSe（Me）：N-メチル-O-メチル-ホモセリン
MeCha：N-メチルシクロヘキシルアラニン
MeLeu：N-メチルロイシン
MePhe：N-メチルフェニルアラニン
D-Pro：D-プロリン
D-MeAla：D-N-メチルアラニン
環状ペプチド１の合成
H-D-Pro-2-クロロトリチルレジン（0.59 mmol/g, 0.05 mmol, 85 mg）をNMPに懸濁し、1時間膨潤させ、濾過によりNMPを除去した。Fmoc-NMe-Cha-OH、Fmoc-Nle-OH、Fmoc-Tle-OH、Fmoc-Phe(4-F)-OH、Fmoc-NMe-Ala-OH、Fmoc-D-NMe-Ala-OH、Fmoc-Ala(4-Thz)-OH、Fmoc-NMe-Ala-OH、Fmoc-HomoSer(Me)-OHの順に縮合を行った。伸長終了後、レジンをNMP、ジクロロメタンで洗浄した後、減圧下溶媒を留去した。ヘキサフルオロイソプロパノール：ジクロロメタン＝20:80溶液（2 mL）をレジンに添加し、室温にて30分振盪した。反応液をろ過により回収した。さらに2回、ヘキサフルオロイソプロパノール：ジクロロメタン＝20:80溶液（2 mL）を用いた反応を繰り返し、反応液をろ過により回収した。回収した反応液を全て合わせて溶媒を減圧留去し、十分乾燥を行い、直鎖ペプチドの粗精製物を得た。得られた粗精製物に0.25 mMの濃度になるようにアセトニトリルを添加し、溶解させる。9モル当量のジイソプロピルエチルアミン（1 M）を含むアセトニトリル溶液、4モル当量のCOMU（0.5 M）を含むアセトニトリル：テトラヒドロフラン＝1:1溶液を加え、室温にて48時間攪拌した。その後、溶媒を減圧留去した。残渣を酢酸エチルと水を用いて分液を行い、酢酸エチル層を回収し、溶媒を減圧留去して、環状ペプチドの粗精製物を得た。得られた粗精製物を少量のアセトニトリルに溶解し、逆相HPLC(０．１％ギ酸水溶液／０．１％ギ酸アセトニトリル溶液）にて精製し、凍結乾燥粉末として、環状ペプチド１（13.57 mg、収率23.0%）を得た。
MS(ESI m/z):(M+H)1181.9
RT(min):1.83
H-D-Pro-2-クロロトリチルレジン（0.59 mmol/g, 0.05 mmol, 85 mg）をNMPに懸濁し、1時間膨潤させ、濾過によりNMPを除去した。Fmoc-NMe-Cha-OH、Fmoc-Nle-OH、Fmoc-Tle-OH、Fmoc-Phe(4-F)-OH、Fmoc-NMe-Ala-OH、Fmoc-D-NMe-Ala-OH、Fmoc-Ala(4-Thz)-OH、Fmoc-NMe-Ala-OH、Fmoc-HomoSer(Me)-OHの順に縮合を行った。伸長終了後、レジンをNMP、ジクロロメタンで洗浄した後、減圧下溶媒を留去した。ヘキサフルオロイソプロパノール：ジクロロメタン＝20:80溶液（2 mL）をレジンに添加し、室温にて30分振盪した。反応液をろ過により回収した。さらに2回、ヘキサフルオロイソプロパノール：ジクロロメタン＝20:80溶液（2 mL）を用いた反応を繰り返し、反応液をろ過により回収した。回収した反応液を全て合わせて溶媒を減圧留去し、十分乾燥を行い、直鎖ペプチドの粗精製物を得た。得られた粗精製物に0.25 mMの濃度になるようにアセトニトリルを添加し、溶解させる。9モル当量のジイソプロピルエチルアミン（1 M）を含むアセトニトリル溶液、4モル当量のCOMU（0.5 M）を含むアセトニトリル：テトラヒドロフラン＝1:1溶液を加え、室温にて48時間攪拌した。その後、溶媒を減圧留去した。残渣を酢酸エチルと水を用いて分液を行い、酢酸エチル層を回収し、溶媒を減圧留去して、環状ペプチドの粗精製物を得た。得られた粗精製物を少量のアセトニトリルに溶解し、逆相HPLC(０．１％ギ酸水溶液／０．１％ギ酸アセトニトリル溶液）にて精製し、凍結乾燥粉末として、環状ペプチド１（13.57 mg、収率23.0%）を得た。
MS(ESI m/z):(M+H)1181.9
RT(min):1.83
環状ペプチド２～１２、比較例１および２の合成
環状ペプチド２～１２は、環状ペプチド１と同様の方法で合成した。比較例1は、WO2021102322記載の方法により合成した。比較例2は、WO2013123266記載の方法により合成した。
表１に、環状ペプチドの配列を示す。なお、表中の環状ペプチドおよび比較例1においては、左側がN末端アミノ酸残基、右側がC末端アミノ酸残基を示し、ペプチドの両端がアミド結合することにより環状ペプチドを形成している。比較例２においては、表中の「Ac」はアセチル基を表し、「＄r8」として表されるアミノ酸は、１個の二重結合を含む全炭素クロスリンカーにより連結されたα-MeS8－オクテニル－アラニンオレフィンアミノ酸である。「＄」として表されるアミノ酸は、１個の二重結合を含む全炭素クロスリンカーにより連結されたαMeS5－ペンテニル－アラニンオレフィンアミノ酸である。比較例２は、「＄r8」と「＄」で表されるアミノ酸残基の側鎖が、ステープル化されている。
環状ペプチド２～１２は、環状ペプチド１と同様の方法で合成した。比較例1は、WO2021102322記載の方法により合成した。比較例2は、WO2013123266記載の方法により合成した。
表１に、環状ペプチドの配列を示す。なお、表中の環状ペプチドおよび比較例1においては、左側がN末端アミノ酸残基、右側がC末端アミノ酸残基を示し、ペプチドの両端がアミド結合することにより環状ペプチドを形成している。比較例２においては、表中の「Ac」はアセチル基を表し、「＄r8」として表されるアミノ酸は、１個の二重結合を含む全炭素クロスリンカーにより連結されたα-MeS8－オクテニル－アラニンオレフィンアミノ酸である。「＄」として表されるアミノ酸は、１個の二重結合を含む全炭素クロスリンカーにより連結されたαMeS5－ペンテニル－アラニンオレフィンアミノ酸である。比較例２は、「＄r8」と「＄」で表されるアミノ酸残基の側鎖が、ステープル化されている。
環状ペプチドの構造
環状ペプチド１
環状ペプチド２
環状ペプチド３
環状ペプチド４
環状ペプチド５
環状ペプチド６
環状ペプチド７
環状ペプチド８
環状ペプチド９
環状ペプチド１０
環状ペプチド１１
環状ペプチド１２
比較例１
比較例２
ＬＣ－ＭＳ（液体クロマトグラフィー－質量スペクトル）測定条件および測定結果
合成した環状ペプチドのLC-MS分析条件について、下記に示す。結果を表２にまとめた。
質量スペクトル（ＭＳ）は、ＡＣＱＵＩＴＹ ＳＱＤ ＬＣ／ＭＳ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｗ
ａｔｅｒｓ社、イオン化法：ＥＳＩ（ＥｌｅｃｔｒｏＳｐｒａｙ Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ、エレクトロスプレーイオン化）法を用いて測定した。
合成した環状ペプチドのLC-MS分析条件について、下記に示す。結果を表２にまとめた。
質量スペクトル（ＭＳ）は、ＡＣＱＵＩＴＹ ＳＱＤ ＬＣ／ＭＳ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｗ
ａｔｅｒｓ社、イオン化法：ＥＳＩ（ＥｌｅｃｔｒｏＳｐｒａｙ Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ、エレクトロスプレーイオン化）法を用いて測定した。
保持時間（ＲＴ）は、ＡＣＱＵＩＴＹ ＳＱＤ ＬＣ／ＭＳ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｗａｔｅｒｓ社）を用いて測定し、分（ｍｉｎ）で示した。
カラム：Ｗａｔｅｒｓ社製ＢＥＨＣ １８ １．７μｍ， ２．１ｘ３０ ｍｍ
溶媒：Ａ液：０．１％ギ酸－水
Ｂ液：０．１％ギ酸－アセトニトリル
グラジエントサイクル： ０．００ｍｉｎ（Ａ液／Ｂ液＝９５／５）、２．００ｍｉｎ（Ａ液／Ｂ液＝５／９５）、３．００ｍｉｎ（Ａ液／Ｂ液＝９５／５）
流速：０．５ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度：室温
検出波長：２５４ｎｍ
カラム：Ｗａｔｅｒｓ社製ＢＥＨＣ １８ １．７μｍ， ２．１ｘ３０ ｍｍ
溶媒：Ａ液：０．１％ギ酸－水
Ｂ液：０．１％ギ酸－アセトニトリル
グラジエントサイクル： ０．００ｍｉｎ（Ａ液／Ｂ液＝９５／５）、２．００ｍｉｎ（Ａ液／Ｂ液＝５／９５）、３．００ｍｉｎ（Ａ液／Ｂ液＝９５／５）
流速：０．５ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度：室温
検出波長：２５４ｎｍ
＜実施例２＞Alpha Screenアッセイ
本発明による環状ペプチドのＭＤＭＸに対するAlpha Screenアッセイを実施した。
MDMXは、固相合成により合成したMDMX (24-108, N末端にHis-tag；PDB ID：2MWY, https://www.rcsb.org/structure/2MWY) を用いた。MDMXの結合相手には、p53のフラグメントペプチド[AnaSpec社製, p53(17-26) FITC-labeled]を用いた。ドナービーズは、Anti-FITC AlphaScreenを用いた。アクセプタービーズは、Anti-His tag AlphaLISAを用いた。反応に用いる緩衝液の組成は、PBS、0.1% BSA、0.01% Tween 20とした。
384ウェルプレート (PerkinElmer社 #6007290) の各ウェルに、濃度を調整した化合物5μL (DMSO終濃度1～5%)、MDMX 5μL (終濃度1μM) 、p53ペプチド 5μL (終濃度10 nM) を順に加えた後、抗Hisタグ抗体修飾されたアクセプタービーズと抗FITC抗体修飾されたドナービーズをそれぞれ終濃度20μg/mLとなるように計10μL加え、室温で1時間インキュベートした。最後に蛍光シグナルをEnvisionを用いて測定した。尚、調液の際は光によるシグナルの減衰を防ぐため、緑色のフィルターを備えた光源下で実験を行った。
本発明による環状ペプチドのＭＤＭＸに対するAlpha Screenアッセイを実施した。
MDMXは、固相合成により合成したMDMX (24-108, N末端にHis-tag；PDB ID：2MWY, https://www.rcsb.org/structure/2MWY) を用いた。MDMXの結合相手には、p53のフラグメントペプチド[AnaSpec社製, p53(17-26) FITC-labeled]を用いた。ドナービーズは、Anti-FITC AlphaScreenを用いた。アクセプタービーズは、Anti-His tag AlphaLISAを用いた。反応に用いる緩衝液の組成は、PBS、0.1% BSA、0.01% Tween 20とした。
384ウェルプレート (PerkinElmer社 #6007290) の各ウェルに、濃度を調整した化合物5μL (DMSO終濃度1～5%)、MDMX 5μL (終濃度1μM) 、p53ペプチド 5μL (終濃度10 nM) を順に加えた後、抗Hisタグ抗体修飾されたアクセプタービーズと抗FITC抗体修飾されたドナービーズをそれぞれ終濃度20μg/mLとなるように計10μL加え、室温で1時間インキュベートした。最後に蛍光シグナルをEnvisionを用いて測定した。尚、調液の際は光によるシグナルの減衰を防ぐため、緑色のフィルターを備えた光源下で実験を行った。
IC50の計算式
陽性対照 (化合物を添加せず、代わりにDMSO濃度を揃えた緩衝液を添加したウェル) の蛍光強度を100 %、陰性対照 (MDMX、p53ペプチド、化合物を添加せず、代わりにDMSO濃度を揃えた緩衝液を添加したウェル) の蛍光強度を0 %として各ウェルの蛍光強度を規格化し、下式で表されるシグモイド曲線にフィッティングすることによりIC50を算出した。
陽性対照 (化合物を添加せず、代わりにDMSO濃度を揃えた緩衝液を添加したウェル) の蛍光強度を100 %、陰性対照 (MDMX、p53ペプチド、化合物を添加せず、代わりにDMSO濃度を揃えた緩衝液を添加したウェル) の蛍光強度を0 %として各ウェルの蛍光強度を規格化し、下式で表されるシグモイド曲線にフィッティングすることによりIC50を算出した。
＜実施例３＞細胞膜透過性評価
<準備>
本発明による環状ペプチドの細胞膜透過性評価を実施した。
インサート (24 well plate用, 孔径3.0 μm, CORNING製) に1.0×106 cells/mLのMDCKII細胞（ECACC標準細胞株）を300 μL播種し、37℃ 5%CO2環境下にて培養した。3日後に細胞層の電気抵抗値（測定器）を測定し、高バリア性 (>100 Ω・cm2) であることを確認した。
<準備>
本発明による環状ペプチドの細胞膜透過性評価を実施した。
インサート (24 well plate用, 孔径3.0 μm, CORNING製) に1.0×106 cells/mLのMDCKII細胞（ECACC標準細胞株）を300 μL播種し、37℃ 5%CO2環境下にて培養した。3日後に細胞層の電気抵抗値（測定器）を測定し、高バリア性 (>100 Ω・cm2) であることを確認した。
<透過試験>
インサートをHBSS (フェノールレッド不含、以下同様) に浸して洗浄した後、10 μM/HBSSに調製した試料200 μLを加え、900 μLのHBSSが入った低吸着24 well plate内に静置した (37℃ 5%CO2)。2時間後、インサートの上層 (apical) と下層 (basal) の各液（apicalは10 μL、basalは500 μL）を回収した。試験後、非透過性の蛍光色素であるLucifer Yellowで漏洩がないことを確認した。
インサートをHBSS (フェノールレッド不含、以下同様) に浸して洗浄した後、10 μM/HBSSに調製した試料200 μLを加え、900 μLのHBSSが入った低吸着24 well plate内に静置した (37℃ 5%CO2)。2時間後、インサートの上層 (apical) と下層 (basal) の各液（apicalは10 μL、basalは500 μL）を回収した。試験後、非透過性の蛍光色素であるLucifer Yellowで漏洩がないことを確認した。
<定量>
装置はLC/MS/MS (トリプル四重極タイプ) を用いた。
溶離液: A) 5 mM ギ酸アンモニウム, 0.2%ギ酸/H2O, B) 0.1%ギ酸/MeCN、流速: 0.5 mL/min、注入量: 2 μL、カラム: ACQUITY UPLC BEH C18 Column, 1.7 μm, 2.1 mm× 50 mm (Waters製)、温度: 70℃、gradient (%B): 2% (0-0.5 min)→98% (2-3 min)→2% (3-5 min)、イオン化: ESI、検出モード: MRM (positive)
式 (1) に示した計算式に基づき、各定量値から膜透過性を表す透過係数Pappを算出した。
Papp=V/C0×1/S×dC/dt ・・・(1)
V: basalの体積 (0.9 mL)
C0: 初期濃度 (10 μM)
S: 単層膜の表面積 (0.33 cm2)
dC/dt: basalでの濃度変化 [μM/s]
装置はLC/MS/MS (トリプル四重極タイプ) を用いた。
溶離液: A) 5 mM ギ酸アンモニウム, 0.2%ギ酸/H2O, B) 0.1%ギ酸/MeCN、流速: 0.5 mL/min、注入量: 2 μL、カラム: ACQUITY UPLC BEH C18 Column, 1.7 μm, 2.1 mm× 50 mm (Waters製)、温度: 70℃、gradient (%B): 2% (0-0.5 min)→98% (2-3 min)→2% (3-5 min)、イオン化: ESI、検出モード: MRM (positive)
式 (1) に示した計算式に基づき、各定量値から膜透過性を表す透過係数Pappを算出した。
Papp=V/C0×1/S×dC/dt ・・・(1)
V: basalの体積 (0.9 mL)
C0: 初期濃度 (10 μM)
S: 単層膜の表面積 (0.33 cm2)
dC/dt: basalでの濃度変化 [μM/s]
＜実施例４＞
MD計算を用いた分子形状因子r値の算出
まず、環状ペプチドの二次元で描画した構造式をChem3Dに入力して三次元で構造化する（図１）。本立体構造を初期構造として、量子化学計算手法(B3LYP/6-31G*、ソフトウェアはGaussian)で構造最適化し、局所安定構造を求める。上記局所安定構造で、量子化学計算手法(B3LYP/6-31G*、ソフトウェアはGaussian)で環状ペプチドが発生させる静電場を求め、上記の静電場を再現するように各原子上に点電荷(RESP電荷)をアサインする。次に、各原子間の共有結合の状態を解析し(Amber)、ファンデルワールスパラメータ(gaff2)を各原子にアサインする。本電荷と本ファンデルワールスパラメータを合わせて力場と呼ぶ。
MD計算を用いた分子形状因子r値の算出
まず、環状ペプチドの二次元で描画した構造式をChem3Dに入力して三次元で構造化する（図１）。本立体構造を初期構造として、量子化学計算手法(B3LYP/6-31G*、ソフトウェアはGaussian)で構造最適化し、局所安定構造を求める。上記局所安定構造で、量子化学計算手法(B3LYP/6-31G*、ソフトウェアはGaussian)で環状ペプチドが発生させる静電場を求め、上記の静電場を再現するように各原子上に点電荷(RESP電荷)をアサインする。次に、各原子間の共有結合の状態を解析し(Amber)、ファンデルワールスパラメータ(gaff2)を各原子にアサインする。本電荷と本ファンデルワールスパラメータを合わせて力場と呼ぶ。
次に、本力場の下で、上記局所安定構造を初期構造に、クロロホルム中で分子動力学(MD)シミュレーションを実施する(ソフトウェアはGromacsとplumed)。MDシミュレーションには、効率的に広い配座空間を探索するための効率化の手法として、シミュレーション時の温度に室温に加え、より高温も利用するレプリカ交換MD法を使用する。用いた温度は6種で(レプリカ数が6種)、下表の通りである。なお、環状ペプチドのみに本温度は適用し、環状ペプチドの周りに存在するクロロホルムには常に298Kを適用する。
本レプリカ交換MD法で300nsの計算を実施すると、室温の最安定構造が算出された。
本最安定構造に対し、慣性テンソルを求め、主慣性モーメントを求め、各軸長（a、b、c）を求め、r値を計算する。具体的には、以下の手順でr値を計算する。
本最安定構造に対し、慣性テンソルを求め、主慣性モーメントを求め、各軸長（a、b、c）を求め、r値を計算する。具体的には、以下の手順でr値を計算する。
上記の最安定構造の環状ペプチドの主鎖に属する原子の三次元座標を
(Xa,1、Xa,2、Xa,3)
と表す。ここで、aは主鎖に属する原子を識別するラベルで、1からNの整数をとる。Nは環状ペプチドの主鎖に属する原子の総数である。
(Xa,1、Xa,2、Xa,3)
と表す。ここで、aは主鎖に属する原子を識別するラベルで、1からNの整数をとる。Nは環状ペプチドの主鎖に属する原子の総数である。
この三次元座標に対してr値を計算する。r値の計算は以下の手順で行うことができる。
(1)三次元座標をインプットに、慣性テンソル(3×3の行列)を
に従って計算する。
(2)慣性テンソルの固有値を計算する。得られた3つの固有値は主慣性モーメントと呼ばれ、
（I1, I2, I3）
と表す。
（I1, I2, I3）
と表す。
(3)図２に示すように、一様分布の楕円体の各軸長をa、b、c（a > b > c）とする。
主慣性モーメントをインプットに、一様分布の楕円体の各軸長a,b,c（a > b > c）を以下の式に従って計算する。
主慣性モーメントをインプットに、一様分布の楕円体の各軸長a,b,c（a > b > c）を以下の式に従って計算する。
(4)楕円体の各軸長をインプットに、分子形状因子（r）を以下の式に従って計算する。
上記に従って、r値を求めた。
表４に、環状ペプチドのr値、IC50、Pappについてまとめた。
表４に、環状ペプチドのr値、IC50、Pappについてまとめた。
<IC50の評価基準>
Ａ＜0.1 μM;0.1≦Ｂ＜0.5 μM;0.5 μM≦Ｃ＜1 μM;1 μM＜Ｄ
評価A、BおよびCは、標的結合性が十分であることを表し、評価Dは十分な標的結合性が得られないことを表す。
Ａ＜0.1 μM;0.1≦Ｂ＜0.5 μM;0.5 μM≦Ｃ＜1 μM;1 μM＜Ｄ
評価A、BおよびCは、標的結合性が十分であることを表し、評価Dは十分な標的結合性が得られないことを表す。
<Pappの評価基準>
Ｄ＜0.1×10-6 cm/sec;0.1×10-6 cm/sec≦Ｃ＜0.25×10-6 cm/sec;0.25×10-6cm/sec≦Ｂ＜0.50×10-6cm/sec；0.5×10-6cm/sec≦Ａ
評価A、BおよびCは、細胞膜透過性が十分であることを表し、評価Dは十分な細胞膜透過性が得られないことを表す。
Ｄ＜0.1×10-6 cm/sec;0.1×10-6 cm/sec≦Ｃ＜0.25×10-6 cm/sec;0.25×10-6cm/sec≦Ｂ＜0.50×10-6cm/sec；0.5×10-6cm/sec≦Ａ
評価A、BおよびCは、細胞膜透過性が十分であることを表し、評価Dは十分な細胞膜透過性が得られないことを表す。
（ｂ）ペプチドが生理環境下において非イオン性である；
（ｃ）ペプチドの全アミノ酸数に対するN置換アミノ酸数の割合；
（ｄ）ペプチドにおける、置換基を有していてもよい芳香族炭素環式基または置換基を有していてもよい芳香族複素環式基を側鎖に有するアミノ酸残基およびアミノ酸類縁体残基の個数
（ｃ）ペプチドの全アミノ酸数に対するN置換アミノ酸数の割合；
（ｄ）ペプチドにおける、置換基を有していてもよい芳香族炭素環式基または置換基を有していてもよい芳香族複素環式基を側鎖に有するアミノ酸残基およびアミノ酸類縁体残基の個数
Claims (9)
- 下記式（１）で表され、下記（ａ）～（ｄ）の特徴を有する、環状ペプチドまたはその塩。
ｍ個のＸｂｂはそれぞれ独立に任意のアミノ酸残基または任意のアミノ酸類縁体残基を示し、
ｎ＋ｍは、５～５０の整数を示し；
（ａ）環状ペプチドの構造において、主鎖構造の最も長い軸方向の軸長をａとし、ａと直交し、互いに直交する他の２方向の軸長をｂ、ｃとした時に、ａ、ｂ、ｃの各軸長を求める楕円体近似を行う段階を経て、下記式（２）で計算される分子形状因子ｒが０．４～０．６の範囲に含まれる；
（ｃ）前記ペプチドの全アミノ酸数に対するＮ置換アミノ酸数の割合が２５％以上である；
（ｄ）前記ペプチドが、置換基を有していてもよい芳香族炭素環式基または置換基を有していてもよい芳香族複素環式基を側鎖に有するアミノ酸残基およびアミノ酸類縁体残基を１～３個含む。 - 下記式（３）で表される、請求項１に記載の環状ペプチドまたはその塩。
Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８およびＰ９は、それぞれ独立して、水素原子、置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアルケニル基、置換基を有していてもよいアルキニル基、置換基を有していてもよい芳香族炭素環式基、置換基を有していてもよい非芳香族炭素環式基、置換基を有していてもよい芳香族複素環式基、又は置換基を有していてもよい非芳香族複素環式基であり、あるいは、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｑ１、Ｑ２、Ｑ３、Ｑ４、Ｑ５、Ｑ６、Ｑ７、Ｑ８およびＱ９が結合している炭素原子は、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８およびＰ９が結合している窒素原子と一緒になって複素環を形成していてもよく、
ｎ個のＸａａは、それぞれ独立に任意のアミノ酸残基または任意のアミノ酸類縁体残基を示し、
ｎは、０～２の整数である。 - Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のうち少なくとも２つ、もしくはＱ３、Ｑ４、Ｑ５およびＱ６のうち少なくとも２つが、置換基を有していてもよい芳香族炭素環式基または置換基を有していてもよい芳香族複素環式基である、請求項２に記載の環状ペプチドまたはその塩。
- Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ７およびＰ９が、置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアルケニル基、置換基を有していてもよいアルキニル基、置換基を有していてもよい芳香族炭素環式基、置換基を有していてもよい非芳香族炭素環式基、置換基を有していてもよい芳香族複素環式基、または置換基を有していてもよい非芳香族複素環式基である、請求項２に記載の環状ペプチドまたはその塩。
- Ｒ１またはＱ１およびＰ１は、Ｒ１またはＱ１が結合している炭素原子およびＰ１が結合している窒素原子と一緒になって複素環を形成する、請求項２に記載の環状ペプチドまたはその塩。
- Ｒ４またはＱ４、およびＲ５またはＱ５は、それぞれ、任意のＬ－アミノ酸残基およびＤ－アミノ酸残基または任意のＬ－アミノ酸類縁体残基およびＤ－アミノ酸類縁体残基の組み合わせである、請求項２に記載の環状ペプチドまたはその塩。
- Ｒ３またはＱ３、およびＲ６またはＱ６が、置換基を有していてもよい芳香族炭素環式基、または置換基を有していてもよい芳香族複素環式基である、請求項２に記載の環状ペプチドまたはその塩。
- 式（２）のｎが１である、請求項２に記載の環状ペプチドまたはその塩。
- 請求項１から８の何れか一項に記載の環状ペプチドまたはその塩を含む、ＭＤＭＸ阻害剤。
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