[go: up one dir, main page]

WO2023068173A1 - 脳内アミロイドβの蓄積を評価するためのバイオマーカー - Google Patents

脳内アミロイドβの蓄積を評価するためのバイオマーカー Download PDF

Info

Publication number
WO2023068173A1
WO2023068173A1 PCT/JP2022/038295 JP2022038295W WO2023068173A1 WO 2023068173 A1 WO2023068173 A1 WO 2023068173A1 JP 2022038295 W JP2022038295 W JP 2022038295W WO 2023068173 A1 WO2023068173 A1 WO 2023068173A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
tau
nfl
accumulation
amyloid
tau181
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2022/038295
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
義明 佐藤
大介 伊東
將 三村
鍾玉 文
肇 田渕
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Keio University
Eisai R&D Management Co Ltd
Original Assignee
Keio University
Eisai R&D Management Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Keio University, Eisai R&D Management Co Ltd filed Critical Keio University
Publication of WO2023068173A1 publication Critical patent/WO2023068173A1/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids

Definitions

  • the present disclosure relates to biomarkers for evaluating the accumulation of brain amyloid ⁇ .
  • Amyloid ⁇ is a type of protein produced in the brain, and the accumulation of amyloid ⁇ in the brain is believed to be closely related to the development of Alzheimer's disease (AD).
  • Tau protein also simply referred to as "tau” is also a type of protein produced in nerve cells such as the brain. Aberrant phosphorylation is believed to be involved in AD.
  • Accumulation of amyloid- ⁇ and abnormally phosphorylated tau (p-Tau) in the brain is clinically assessed by radiological studies such as positron emission tomography (PET) or by biomarkers of amyloid- ⁇ and tau in cerebrospinal fluid. be done.
  • PET positron emission tomography
  • biomarkers of amyloid- ⁇ and tau in cerebrospinal fluid be done.
  • these detection methods are of limited utility as diagnostic tools due to their high invasiveness and high cost.
  • Non-Patent Document 1 discloses that the plasma p-tau-217/T217 ratio and p-tau-217 value distinguish between the amyloid ⁇ -negative group and the amyloid ⁇ -positive group, regardless of cognitive function. It is Non-Patent Document 2 discloses that plasma P-Tau181 is a non-invasive diagnostic and prognostic biomarker for AD. Non-Patent Document 3 discloses that plasma p-Tau181 is useful for AD screening, and that plasma p-Tau181 can be used to select individuals determined to be amyloid ⁇ -positive by PET.
  • Non-Patent Document 4 discloses that plasma p-Tau181 can distinguish AD from young adults and elderly without cognitive impairment.
  • Non-Patent Document 5 discloses that plasma p-Tau181 sorts AD from non-AD lesions with high accuracy.
  • Non-Patent Document 6 discloses that plasma p-Tau217 can distinguish AD from other neurodegenerative diseases.
  • Non-Patent Document 7 there is also a report on prediction of progression to AD in patients with mild cognitive impairment (MCI) using a combined biomarker of plasma p-Tau181 and neurofilament light chain (NFL) (Non-Patent Document 7).
  • the present disclosure provides a low-cost, high-accuracy biomarker for evaluating brain amyloid ⁇ accumulation and a method for evaluating brain amyloid ⁇ accumulation using the biomarker. intended to provide
  • the present inventors have made intensive studies to solve the above problems, and as a result, the combination of phosphorylated tau 181 (p-Tau181) and neurofilament light chain (NFL) in plasma is useful for evaluating the accumulation of amyloid ⁇ in the brain. They are useful biomarkers, and it was found that the accumulation of brain amyloid ⁇ can be evaluated with high diagnostic accuracy by using these two biomarkers.
  • p-Tau181 phosphorylated tau 181
  • NNL neurofilament light chain
  • the disclosure provides a method for assessing brain amyloid- ⁇ accumulation, comprising phosphorylated Tau (p-Tau) 181, p-Tau217, p-Tau231 in a blood sample obtained from a subject. and a combination thereof, measuring the amount of p-Tau and the amount of neurofilament light chain (NFL), and comparing the measured value obtained in the above step with a control value.
  • a method that includes This method is a low-cost and minimally invasive method, and enables a method of evaluating brain amyloid- ⁇ accumulation with high diagnostic accuracy.
  • a combination of predetermined p-Tau (p-Tau181, p-Tau217, p-Tau231) and NFL enables examination without failure while maintaining high specificity.
  • a method for evaluating the accumulation of brain amyloid ⁇ comprising: The amount of p-Tau selected from the group consisting of phosphorylated Tau (p-Tau) 181, p-Tau217, p-Tau231 and combinations thereof, and neurofilament light chain (NFL ) and and comparing the measured value obtained in the above step with a control value.
  • the cut-off values are the measured values of the p-Tau and the NFL in a blood sample obtained from a control subject, and the p-Tau and the p-Tau in a blood sample obtained from a subject with amyloid ⁇ accumulation in the brain.
  • the method of [2], wherein the method is determined by comparing the measured values of NFL above.
  • the method according to [2] or [3], wherein the cutoff value of the p-Tau and/or the cutoff value of the NFL is one or more.
  • a method of aiding the diagnosis of Alzheimer's disease (AD), mild cognitive impairment in the setting of AD or preclinical AD comprising: The amount of p-Tau selected from the group consisting of phosphorylated Tau (p-Tau) 181, p-Tau217, p-Tau231 and combinations thereof, and neurofilament light chain (NFL ) and and comparing the measured value obtained in the above step with a control value to evaluate the accumulation of brain amyloid ⁇ .
  • the method of [10] wherein the control value is a predetermined cutoff value.
  • the cut-off values are the measured values of the p-Tau and the NFL in a blood sample obtained from a control subject, and the p-Tau and the p-Tau in a blood sample obtained from a subject with amyloid ⁇ accumulation in the brain.
  • the method according to [11] or [12], wherein the cutoff value of the p-Tau and/or the cutoff value of the NFL is one or more.
  • a method for obtaining an index for assisting diagnosis of Alzheimer's disease (AD), mild cognitive impairment in the background of AD, or preclinical AD comprising: measuring the amount of p-Tau selected from the group consisting of p-Tau181, p-Tau217, p-Tau231 and combinations thereof and the amount of NFL in a blood sample obtained from the subject; and comparing the measured value obtained in the above step with a control value to obtain information on the accumulation of brain amyloid ⁇ .
  • a kit for evaluating the accumulation of brain amyloid ⁇ comprising: An antibody that specifically binds to p-Tau selected from the group consisting of phosphorylated Tau (p-Tau) 181, p-Tau217, p-Tau231 and combinations thereof, and specific to neurofilament light chain (NFL) and an antibody that binds to.
  • p-Tau phosphorylated Tau
  • NNL neurofilament light chain
  • a kit for evaluating the accumulation of brain amyloid ⁇ comprising: phosphorylated tau (p-Tau) 181, p-Tau217, p-Tau231, and a neurofilament light chain (NFL) comprising an antibody that specifically binds to p-Tau selected from the group consisting of combinations thereof;
  • a kit for evaluating the accumulation of brain amyloid ⁇ comprising: p-Tau comprising an antibody that specifically binds to a neurofilament light chain (NFL) and is selected from the group consisting of phosphorylated tau (p-Tau) 181, p-Tau217, p-Tau231 and combinations thereof
  • p-Tau phosphorylated tau
  • a method of treating Alzheimer's disease (AD), mild cognitive impairment in the setting of AD or preclinical AD comprising: The amount of p-Tau selected from the group consisting of phosphorylated Tau (p-Tau) 181, p-Tau217, p-Tau231 and combinations thereof, and neurofilament light chain (NFL ) and A step of comparing the measured value obtained in the above step with a control value to evaluate the accumulation of amyloid ⁇ in the brain; administering a therapeutically effective amount of a therapeutic agent for Alzheimer's disease, mild cognitive impairment in the setting of AD, or preclinical AD to a subject assessed for accumulation of brain amyloid beta.
  • AD Alzheimer's disease
  • p-Tau phosphorylated Tau
  • NNL neurofilament light chain
  • a method of diagnosing Alzheimer's disease (AD), mild cognitive impairment in the setting of AD or preclinical AD comprising: The amount of p-Tau selected from the group consisting of phosphorylated Tau (p-Tau) 181, p-Tau217, p-Tau231 and combinations thereof, and neurofilament light chain (NFL ) and and comparing the measured value obtained in the above step with a control value to evaluate the accumulation of brain amyloid ⁇ .
  • AD Alzheimer's disease
  • p-Tau phosphorylated Tau
  • NNL neurofilament light chain
  • the method of evaluating the accumulation of amyloid ⁇ in the brain of the present disclosure not only has high diagnostic accuracy, but also is low cost, so the range of use can be greatly expanded, and large-scale utilization such as initial diagnosis and health checkup is possible. Be expected. Therefore, in particular, as a primary screening for amyloid ⁇ test, a high true positive rate and diagnostic accuracy can be achieved, and it can be a promising evaluation method for drug discovery based on amyloid ⁇ accumulation in the brain.
  • accumulation of brain amyloid ⁇ can be evaluated with high diagnostic accuracy and at low cost.
  • FIG. 3 is a diagram showing the concentration of p-Tau181 in the blood of 60 cases in the negative group and 34 cases in the positive group in an amyloid ⁇ PET test.
  • FIG. 2 is a diagram showing the concentrations of p-Tau181 and NFL in the blood of 60 cases in the negative group and 34 cases in the positive group in an amyloid ⁇ PET test.
  • the method of assessing the accumulation of brain amyloid- ⁇ comprises phosphorylated Tau181 (p-Tau181), phosphorylated Tau217 (p-Tau217), phosphorylated Tau231 ( measuring the amount of p-Tau selected from the group consisting of p-Tau231) and combinations thereof, and the amount of neurofilament light chain (NFL), and comparing the measured value obtained in the above step with a control value. and the step of
  • a subject means mammals including, but not limited to, humans, chimpanzees, orangutans, gorillas, baboons, monkeys, mice, rats, pigs, horses, dogs, and cows.
  • the subject is human in one embodiment.
  • the blood sample may contain the biomarkers to be measured, p-Tau and NFL selected from the group consisting of p-Tau181, p-Tau217, p-Tau231 and combinations thereof.
  • a blood sample may be whole blood, serum, or plasma, and may be a blood sample obtained from a human subject.
  • Amyloid ⁇ (also referred to as “A ⁇ ”) is a type of protein made in the brain known to those skilled in the art. Assessing the accumulation of cerebral amyloid ⁇ means determining whether or not a greater accumulation of cerebral amyloid ⁇ is observed in comparison with control subjects. Accumulation of cerebral amyloid ⁇ means that amyloid ⁇ is not excreted in the brain and accumulates in the brain. A control subject means a brain amyloid ⁇ -negative subject without accumulation of brain amyloid ⁇ . Accumulation of brain amyloid- ⁇ is conventionally assessed clinically by radiological studies such as positron emission tomography (PET) or by biomarkers of amyloid- ⁇ and phosphorylated tau in cerebrospinal fluid.
  • PET positron emission tomography
  • brain amyloid ⁇ if the accumulation of brain amyloid ⁇ is found to be greater than the diagnostic criteria according to the visual judgment criteria of the 18 F-Florbetaben manufacturer, brain amyloid ⁇ If the test is positive and the accumulation of brain amyloid ⁇ is less than the diagnostic criteria, it is determined to be negative for brain amyloid ⁇ .
  • Accumulation of amyloid ⁇ in the brain is considered to be one of the main pathologies mainly seen in Alzheimer's disease (AD) and mild cognitive impairment (MCI due to AD) in the background of AD.
  • AD Alzheimer's disease
  • MCI mild cognitive impairment
  • CBS corticobasal ganglia syndrome
  • FDD frontotemporal dementia
  • PSP progressive supranuclear palsy
  • PD Parkinson's disease or Parkinson's syndrome
  • the evaluation method of the present embodiment is positive, accumulation of brain amyloid ⁇ is considered to be suspected regardless of the clinically diagnosed disease name. Therefore, the evaluation method of this embodiment is useful as a simple primary screening method for the accumulation of brain amyloid ⁇ .
  • the clinical diagnostic criteria for these neurological diseases are known to those skilled in the art, and include, for example, the diagnostic criteria described in the Examples.
  • p-Tau181 is phosphorylated Tau threonine 181
  • p-Tau217 is Tau threonine 217 phosphorylated
  • p-Tau231 is Tau threonine 231 phosphorylated. is.
  • the amount of any two of p-Tau181, p-Tau217, and p-Tau231 may be measured, and all three p-Tau may be measured.
  • Two p-Tau combinations include p-Tau181 and p-Tau217, p-Tau181 and p-Tau231, and p-Tau217 and p-Tau231.
  • the amount of p-Tau, ie, p-Tau181, p-Tau217, and p-Tau231, in a blood sample can be measured according to known protein quantification methods. For example, absorbance measurement and immunological measurement methods using antigen-antibody reaction such as enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), enzyme immunoassay (EIA), radioimmunoassay (RIA), immunofluorescence method, immunoprecipitation method, and , liquid chromatography/mass spectrometry (LC/MS).
  • ELISA enzyme-linked immunosorbent assay
  • EIA enzyme immunoassay
  • RIA radioimmunoassay
  • immunofluorescence method immunoprecipitation method
  • LC/MS liquid chromatography/mass spectrometry
  • SIMOA registered trademark
  • p-Tau181 Advantage V2 Kit manufactured by Quanterix
  • the amount of p-Tau is a measured value (absolute value).
  • the amount of NFL in a blood sample can be measured according to known protein quantification methods, similar to p-Tau. Examples thereof include absorbance measurement, immunological measurement methods using antigen-antibody reactions such as ELISA, EIA, RIA, immunofluorescence, immunoprecipitation, and LC/MS. In addition, it can be easily quantified using a commercially available measurement kit such as SIMOA (registered trademark) NFL Advantage (SR-X) Kit (manufactured by Quanterix).
  • SIMOA registered trademark
  • SR-X NFL Advantage
  • the amount of NFL is a measured value (absolute value).
  • the cutoff value of p-Tau181 and NFL if one cutoff value is 1 and the other cutoff value is 2 or more, for example, the cutoff value is the NFL cutoff value 1 and p-Tau181 cutoff value 1 and p-Tau181 cutoff value 2 (where p-Tau181 cutoff value 1 ⁇ p-Tau181 cutoff value 2), the measured value of p-Tau181 is p-Tau181 If the cutoff value is 2 or more, and the measured value of NFL is less than the NFL cutoff value 1, and the measured value of p-Tau181 is p-Tau181 cutoff value 1 or more p-Tau181 cutoff value If it is less than 2, it may be determined as brain amyloid ⁇ -positive, and otherwise, it may be determined as brain amyloid ⁇ -negative.
  • a method to aid in diagnosing Alzheimer's disease (AD), mild cognitive impairment in the setting of AD, or preclinical AD comprises p-Tau181, p-Tau217, p- A step of measuring the amount of p-Tau selected from the group consisting of Tau231 and combinations thereof and the amount of NFL, and comparing the measured value obtained in the above step with a control value to determine the accumulation of brain amyloid ⁇ and evaluating.
  • the kit for evaluating accumulation of brain amyloid ⁇ comprises p-Tau selected from the group consisting of phosphorylated tau (p-Tau) 181, p-Tau217, p-Tau231, and combinations thereof.
  • p-Tau phosphorylated tau
  • NNL neurofilament light chain
  • the above antibody may be any antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to p-Tau or NFL, and may be a polyclonal antibody or a monoclonal antibody. Also, in one embodiment, the antibody is a detectably labeled antibody, and labeling can be accomplished by methods known to those skilled in the art, depending on the method of measuring antigen-antibody binding.
  • the method of diagnosing Alzheimer's disease, mild cognitive impairment in the setting of AD, or preclinical AD comprises: a step of measuring the amount of p-Tau and the amount of NFL selected from the group consisting of; comparing the measured value obtained in the above step with a control value to evaluate the accumulation of brain amyloid ⁇ ; include.
  • the diagnostic accuracy of the combination of p-Tau181 and NFL was compared with that of p-Tau181 alone.
  • the specificity of diagnosis by the combination of p-Tau181 and NFL obtained when using the above cutoff value is 70%, and the diagnostic accuracy is higher than 47% of the specificity of diagnosis with p-Tau181 alone. increased by 23%. Therefore, when the cut-off value for diagnosing without false negatives is set by the combination marker of p-Tau181 and NFL, the accuracy of diagnosis is greatly increased compared to the case of diagnosis with p-Tau181 alone. was done.
  • the breakdown of the clinical diagnosis of 57 subjects is MCI (14), AD (19), CBS (4 people), FTD (10 people), PD (2 people), PSP (4 people) and senile mental illness (4 people). There were 26 cases in the group.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本開示の課題は、従来技術の課題を鑑みて、低コストかつ診断精度の高い、脳内アミロイドβの蓄積を評価するためのバイオマーカー及び該バイオマーカーを用いた脳内アミロイドβの蓄積の評価方法を提供することである。本開示の脳内アミロイドβの蓄積を評価するための方法は、対象から得られた血液試料中のリン酸化タウ（ｐ－Ｔａｕ）１８１）、ｐ－Ｔａｕ２１７、ｐ－Ｔａｕ２３１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるｐ－Ｔａｕの量、及びニューロフィラメント軽鎖（ＮＦＬ）の量を測定する工程と、上記工程で得られた測定値を対照値と比較する工程とを含む。

Description

脳内アミロイドβの蓄積を評価するためのバイオマーカー
　本開示は、脳内アミロイドβの蓄積を評価するためのバイオマーカーに関する。
　アミロイドβは、脳内で作られるタンパク質の一種であり、アミロイドβの脳内での蓄積はアルツハイマー病（ＡＤ）等の発症に大きく関わっていると考えられている。また、タウ・タンパク質（Ｔａｕ　ｐｒｏｔｅｉｎ；単に「タウ」ともいう）も脳等の神経細胞で作られているタンパク質の一種であり、タウのリン酸化は細胞骨格構造の維持に重要であるものの、そのリン酸化の異常がＡＤに関わっていると考えられている。
　脳内アミロイドβの蓄積及び異常リン酸化タウ（ｐ－Ｔａｕ）の蓄積は、臨床において陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）等の放射線検査、又は、脳脊髄液におけるアミロイドβ及びタウのバイオマーカーによって評価される。しかしながら、これらの検出方法は、高い侵襲性及び高コストのゆえ、診断ツールとしての利用が限定されている。
　より低侵襲性及び低コストの方法として、血液中のバイオマーカーによるＡＤの診断又は脳内アミロイドβの蓄積の評価が提案されている。例えば、非特許文献１には、血漿ｐ－ｔａｕ－２１７／Ｔ２１７比、及びｐ－ｔａｕ－２１７値は、認知機能にかかわらず、アミロイドβ陰性群とアミロイドβ陽性群とを区別することが開示されている。非特許文献２には、血漿Ｐ－Ｔａｕ１８１はＡＤの非侵襲的診断及び予後バイオマーカーであることが開示されている。非特許文献３には、血漿ｐ－Ｔａｕ１８１はＡＤのスクリーニングに有用であること、また、血漿ｐ－Ｔａｕ１８１がＰＥＴによってアミロイドβ陽性と判断された個体を選別できることが開示されている。非特許文献４には、血漿ｐ－Ｔａｕ１８１はＡＤを若年成人及び認知障害のない高齢者と区別できると開示されている。非特許文献５には、血漿ｐ－Ｔａｕ１８１はＡＤを非ＡＤ病変から高い精度で選別することが開示されている。さらに、非特許文献６には、血漿ｐ－Ｔａｕ２１７はＡＤを他の神経変性疾患と区別できることが開示されている。
　これらの血漿中のリン酸化タウによる評価方法は、アルツハイマー病の選別にある程度有用であるものの、脳内アミロイドβの蓄積の評価の精度が必ずしも高くない。したがって、脳内アミロイドβの蓄積を精度よく評価するためのバイオマーカーが大いに必要とされている。
　一方、血漿ｐ－Ｔａｕ１８１とニューロフィラメント軽鎖（ＮＦＬ）の組み合わせバイオマーカーによる軽度認知障害（ＭＣＩ）患者のＡＤへの進行予測に関する報告もされている（非特許文献７）。
Barthelemy et al., "Blood plasma phosphorylated-tau isoforms track CNS change in Alzheimer’s disease", J Exp Med (2020) 217 (11): e20200861 Janelidze et al., "Plasma P-tau181 in Alzheimer's disease: relationship to other biomarkers, differential diagnosis, neuropathology and longitudinal progression to Alzheimer's dementia", Nat Med., 2020;26(3):379-386. Thijssen et al., "Diagnostic value of plasma phosphorylated tau181in Alzheimer's disease and frontotemporal lobar degeneration", Nat Med., 2020;26(3):387-397. Karikari et al., "Blood phosphorylated tau 181 as a biomarker for Alzheimer's disease: a diagnostic performance and prediction modelling study using data from four prospective cohorts", Lancet Neurol., 2020;19(5):422-433. Rodriguez et al., "Plasma p-tau181accurately predicts Alzheimer's disease pathology at least 8 years prior to post-mortem and improves the clinical characterisation of cognitive decline", Acta Neuropathol., 2020;140(3):267-278. Palmqvist et al., "Discriminative Accuracy of Plasma Phospho-tau217 for Alzheimer Disease vs Other Neurodegenerative Disorders" JAMA., 2020;324(8):772-781. Nicholas C. Cullen et al., "Individualized prognosis of cognitive decline and dementia in mild cognitive impairment based on plasma biomarker combinations", Nature Aging (2021) 114 1, p114-123. Folstein MF et al., ""Mini-mental state". A practical method for grading the cognitive state of patients for the clinician.", J Psychiatr Res (1975) 12:189-198 Wechsler D, "Wechsler Memory Scale-Revised" San Antonio, TX Psychological Corporation (1987) Rosen WG et al., "A new rating scale for Alzheimer's disease." Am J Psychiatry (1984) 141:1356-1364 Buttersa N et al., "Episodic and Semantic Memory: A Comparison of Amnesic and Demented Patients." J Clin Exp Neuropsychol (1987) 9:479-497 松岡恵子ら、「日本語版 National Adult Reading Test（JART）の作成」、精神医学 44（5）：239-248, 2002
　本開示は、従来技術の課題を鑑みて、低コストかつ診断精度の高い、脳内アミロイドβの蓄積を評価するためのバイオマーカー及び該バイオマーカーを用いた脳内アミロイドβの蓄積の評価方法を提供することを目的とする。
　本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、血漿中のリン酸化タウ１８１（ｐ－Ｔａｕ１８１）及びニューロフィラメント軽鎖（ＮＦＬ）の組合せは、脳内アミロイドβの蓄積の評価に有用なバイオマーカーであり、この２つのバイオマーカーを用いることで、高い診断精度で脳内アミロイドβの蓄積を評価できることを見出した。
　一態様において、本開示は、脳内アミロイドβの蓄積を評価するための方法であって、対象から得られた血液試料中のリン酸化タウ（ｐ－Ｔａｕ）１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７、ｐ－Ｔａｕ２３１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるｐ－Ｔａｕの量、及びニューロフィラメント軽鎖（ＮＦＬ）の量を測定する工程と、上記工程で得られた測定値を対照値と比較する工程とを含む方法を提供する。本方法は、低コストかつ低侵襲性の方法であり、また、高い診断精度を有する脳内アミロイドβの蓄積の評価方法を可能とする。所定のｐ－Ｔａｕ（ｐ－Ｔａｕ１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７、ｐ－Ｔａｕ２３１）とＮＦＬとの組み合わせにより、高い特異度を保ちつつ、取りこぼしのない検査が可能になる。
　したがって、本開示は、例えば、以下の［１］～［２６］を提供する。
［１］
　脳内アミロイドβの蓄積を評価する方法であって、
　対象から得られた血液試料中のリン酸化タウ（ｐ－Ｔａｕ）１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７、ｐ－Ｔａｕ２３１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるｐ－Ｔａｕの量、及びニューロフィラメント軽鎖（ＮＦＬ）の量を測定する工程と、
　上記工程で得られた測定値を対照値と比較する工程と
を含む、方法。
［２］
　上記対照値が予め定められたカットオフ値である、［１］に記載の方法。
［３］
　上記カットオフ値が、コントロール対象から得られた血液試料中の上記ｐ－Ｔａｕ及び上記ＮＦＬの測定値と、脳内アミロイドβの蓄積を有する対象から得られた血液試料中の上記ｐ－Ｔａｕ及び上記ＮＦＬの測定値とをそれぞれ比較することによって決定される、［２］に記載の方法。
［４］
　上記ｐ－Ｔａｕの上記カットオフ値及び／又は上記ＮＦＬの上記カットオフ値が、１つ又は２つ以上である、［２］又は［３］に記載の方法。
［５］
　上記ｐ－Ｔａｕが、ｐ－Ｔａｕ１８１である、［１］～［４］のいずれかに記載の方法。
［６］
　上記ｐ－Ｔａｕが、ｐ－Ｔａｕ２１７である、［１］～［４］のいずれかに記載の方法。
［７］
　上記ｐ－Ｔａｕが、ｐ－Ｔａｕ２３１である、［１］～［４］のいずれかに記載の方法。
［８］
　上記ｐ－Ｔａｕが、ｐ－Ｔａｕ１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７及びｐ－Ｔａｕ２３１の組み合わせである、［１］～［４］のいずれかに記載の方法。
［９］
　上記血液試料が、全血、血清、又は血漿である、［１］～［８］のいずれかに記載の方法。
［１０］
　アルツハイマー病（ＡＤ）、ＡＤを背景にした軽度認知障害又はプレクリニカルＡＤの診断を補助する方法であって、
　対象から得られた血液試料中のリン酸化タウ（ｐ－Ｔａｕ）１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７、ｐ－Ｔａｕ２３１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるｐ－Ｔａｕの量、及びニューロフィラメント軽鎖（ＮＦＬ）の量を測定する工程と、
　上記工程で得られた測定値を対照値と比較して、脳内アミロイドβの蓄積を評価する工程と
を含む、方法。
［１１］
　上記対照値が予め定められたカットオフ値である、［１０］に記載の方法。
［１２］
　上記カットオフ値が、コントロール対象から得られた血液試料中の上記ｐ－Ｔａｕ及び上記ＮＦＬの測定値と、脳内アミロイドβの蓄積を有する対象から得られた血液試料中の上記ｐ－Ｔａｕ及び上記ＮＦＬの測定値とをそれぞれ比較することによって決定される、［１１］に記載の方法。
［１３］
　上記ｐ－Ｔａｕの上記カットオフ値及び／又は上記ＮＦＬの上記カットオフ値が、１つ又は２つ以上である、［１１］又は［１２］に記載の方法。
［１４］
　上記ｐ－Ｔａｕが、ｐ－Ｔａｕ１８１である、［１０］～［１３］のいずれかに記載の方法。
［１５］
　上記ｐ－Ｔａｕが、ｐ－Ｔａｕ２１７である、［１０］～［１３］のいずれかに記載の方法。
［１６］
　上記ｐ－Ｔａｕが、ｐ－Ｔａｕ２３１である、［１０］～［１３］のいずれかに記載の方法。
［１７］
　上記ｐ－Ｔａｕが、ｐ－Ｔａｕ１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７及びｐ－Ｔａｕ２３１の組み合わせである、［１０］～［１３］のいずれかに記載の方法。
［１８］
　上記血液試料が、全血、血清、又は血漿である、［１０］～［１７］のいずれかに記載の方法。
［１９］
　アルツハイマー病（ＡＤ）、ＡＤを背景にした軽度認知障害又はプレクリニカルＡＤの診断を補助するための指標の取得方法であって、
　対象から得られた血液試料中のｐ－Ｔａｕ１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７、ｐ－Ｔａｕ２３１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるｐ－Ｔａｕの量、及びＮＦＬの量を測定する工程と、
　上記工程で得られた測定値を対照値と比較して、脳内アミロイドβの蓄積の情報を取得する工程と
を含む、方法。
［２０］
　脳内アミロイドβの蓄積を評価するためのキットであって、
　リン酸化タウ（ｐ－Ｔａｕ）１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７、ｐ－Ｔａｕ２３１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるｐ－Ｔａｕと特異的に結合する抗体と、ニューロフィラメント軽鎖（ＮＦＬ）と特異的に結合する抗体とを含む、キット。
［２１］
　脳内アミロイドβの蓄積を評価するためのキットであって、
　リン酸化タウ（ｐ－Ｔａｕ）１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７、ｐ－Ｔａｕ２３１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるｐ－Ｔａｕと特異的に結合する抗体を含み、かつ、ニューロフィラメント軽鎖（ＮＦＬ）と特異的に結合する抗体を含むキットとともに使用される、キット。
［２２］
　脳内アミロイドβの蓄積を評価するためのキットであって、
　ニューロフィラメント軽鎖（ＮＦＬ）と特異的に結合する抗体を含み、かつ、リン酸化タウ（ｐ－Ｔａｕ）１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７、ｐ－Ｔａｕ２３１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるｐ－Ｔａｕと特異的に結合する抗体を含むキットとともに使用される、キット。
［２３］
　上記ｐ－Ｔａｕが、ｐ－Ｔａｕ１８１である、［２０］～［２２］のいずれかに記載のキット。
［２４］
　上記ｐ－Ｔａｕが、ｐ－Ｔａｕ２１７である、［２０］～［２２］のいずれかに記載のキット。
［２５］
　上記ｐ－Ｔａｕが、ｐ－Ｔａｕ２３１である、［２０］～［２２］のいずれかに記載のキット。
［２６］
　上記ｐ－Ｔａｕが、ｐ－Ｔａｕ１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７及びｐ－Ｔａｕ２３１の組み合わせである、［２０］～［２２］のいずれかに記載のキット。
　本開示はまた、例えば、以下の［２７］～［４５］を提供する。
［２７］
　アルツハイマー病（ＡＤ）、ＡＤを背景にした軽度認知障害又はプレクリニカルＡＤの治療方法であって、
　対象から得られた血液試料中のリン酸化タウ（ｐ－Ｔａｕ）１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７、ｐ－Ｔａｕ２３１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるｐ－Ｔａｕの量、及びニューロフィラメント軽鎖（ＮＦＬ）の量を測定する工程と、
　上記工程で得られた測定値を対照値と比較して、脳内アミロイドβの蓄積を評価する工程と、
　脳内アミロイドβが蓄積されていると評価された対象に、治療上有効な量のアルツハイマー病、ＡＤを背景にした軽度認知障害又はプレクリニカルＡＤの治療剤を投与する工程と
を含む、方法。
［２８］
　上記対照値が予め定められたカットオフ値である、［２７］に記載の方法。
［２９］
　上記カットオフ値が、コントロール対象から得られた血液試料中の上記ｐ－Ｔａｕ及び上記ＮＦＬの測定値と、脳内アミロイドβの蓄積を有する対象から得られた血液試料中の上記ｐ－Ｔａｕ及び上記ＮＦＬの測定値とをそれぞれ比較することによって決定される、［２８］に記載の方法。
［３０］
　上記ｐ－Ｔａｕの上記カットオフ値及び／又は上記ＮＦＬの上記カットオフ値が、１つ又は２つ以上である、［２８］又は［２９］に記載の方法。
［３１］
　上記ｐ－Ｔａｕが、ｐ－Ｔａｕ１８１である、［２７］～［３０］のいずれかに記載の方法。
［３２］
　上記ｐ－Ｔａｕが、ｐ－Ｔａｕ２１７である、［２７］～［３０］のいずれかに記載の方法。
［３３］
　上記ｐ－Ｔａｕが、ｐ－Ｔａｕ２３１である、［２７］～［３０］のいずれかに記載の方法。
［３４］
　上記ｐ－Ｔａｕが、ｐ－Ｔａｕ１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７及びｐ－Ｔａｕ２３１の組み合わせである、［２７］～［３０］のいずれかに記載の方法。
［３５］
　上記血液試料が、全血、血清、又は血漿である、［２７］～［３４］のいずれかに記載の方法。
［３６］
　上記脳内アミロイドβが蓄積されていると評価された対象が、上記治療剤を投与する前に、アルツハイマー病、ＡＤを背景にした軽度認知障害又はプレクリニカルＡＤと診断される、［２７］～［３５］のいずれかに記載の方法。
［３７］
　アルツハイマー病（ＡＤ）、ＡＤを背景にした軽度認知障害又はプレクリニカルＡＤを診断する方法であって、
　対象から得られた血液試料中のリン酸化タウ（ｐ－Ｔａｕ）１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７、ｐ－Ｔａｕ２３１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるｐ－Ｔａｕの量、及びニューロフィラメント軽鎖（ＮＦＬ）の量を測定する工程と、
　上記工程で得られた測定値を対照値と比較して、脳内アミロイドβの蓄積を評価する工程と
を含む、方法。
［３８］
　上記対照値が予め定められたカットオフ値である、［３７］に記載の方法。
［３９］
　上記カットオフ値が、コントロール対象から得られた血液試料中の上記ｐ－Ｔａｕ及び上記ＮＦＬの測定値と、脳内アミロイドβの蓄積を有する対象から得られた血液試料中の上記ｐ－Ｔａｕ及び上記ＮＦＬの測定値とをそれぞれ比較することによって決定される、［３８］に記載の方法。
［４０］
　上記ｐ－Ｔａｕの上記カットオフ値及び／又は上記ＮＦＬの上記カットオフ値が、１つ又は２つ以上である、［３８］又は［３９］に記載の方法。
［４１］
　上記ｐ－Ｔａｕが、ｐ－Ｔａｕ１８１である、［３７］～［４０］のいずれかに記載の方法。
［４２］
　上記ｐ－Ｔａｕが、ｐ－Ｔａｕ２１７である、［３７］～［４０］のいずれかに記載の方法。
［４３］
　上記ｐ－Ｔａｕが、ｐ－Ｔａｕ２３１である、［３７］～［４０］のいずれかに記載の方法。
［４４］
　上記ｐ－Ｔａｕが、ｐ－Ｔａｕ１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７及びｐ－Ｔａｕ２３１の組み合わせである、［３７］～［４０］のいずれかに記載の方法。
［４５］
　上記血液試料が、全血、血清、又は血漿である、［３７］～［４４］のいずれかに記載の方法。
　本開示の脳内アミロイドβの蓄積を評価する方法は、高い診断精度を有するだけでなく、低コストであるため、利用範囲を大幅に広げられ、初期診断や健康診断などの大規模な活用が期待される。そのため、特に、アミロイドβ検査の一次スクリーニングとして、高い真陽性率及び診断精度を実現でき、脳内アミロイドβ蓄積に基づく創薬においても期待される評価方法になり得る。
　本開示のキットによれば、高い診断精度、かつ、低コストにて脳内アミロイドβの蓄積を評価することができる。
アミロイドβＰＥＴ検査における、陰性群の６０例及び陽性群の３４例の血液中ｐ－Ｔａｕ１８１の濃度を示す図である。 アミロイドβＰＥＴ検査における、陰性群の６０例及び陽性群の３４例の血液中ｐ－Ｔａｕ１８１及びＮＦＬの濃度を示す図である。
〔脳内アミロイドβの蓄積を評価する方法〕
　一実施形態の脳内アミロイドβの蓄積を評価する方法は、対象から得られた血液試料中のリン酸化タウ１８１（ｐ－Ｔａｕ１８１）、リン酸化タウ２１７（ｐ－Ｔａｕ２１７）、リン酸化タウ２３１（ｐ－Ｔａｕ２３１）及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるｐ－Ｔａｕの量、及びニューロフィラメント軽鎖（ＮＦＬ）の量を測定する工程と、上記工程で得られた測定値を対照値と比較する工程とを含む。
　ここで、対象とは、ヒト、チンパンジー、オランウータン、ゴリラ、ヒヒ、サル、マウス、ラット、ブタ、ウマ、イヌ、及びウシを含むがこれらに限定されない哺乳動物を意味する。対象は、一実施形態においてヒトである。
　血液試料は、測定対象のバイオマーカーである、ｐ－Ｔａｕ１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７、ｐ－Ｔａｕ２３１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるｐ－Ｔａｕ及びＮＦＬを含み得る。血液試料は、全血、血清、又は血漿であってよく、ヒト対象から得られた血液試料であってもよい。
　アミロイドβ（「Ａβ」ともいう）は、当業者にとって既知の脳内で作られるタンパク質の一種である。脳内アミロイドβの蓄積を評価するとは、コントロール対象との比較において、脳内アミロイドβの蓄積がより多く認められるか否かを判断することをいう。脳内アミロイドβの蓄積とは、脳内においてアミロイドβが排出されず、脳に蓄積することを意味する。また、コントロール対象とは、脳内アミロイドβの蓄積を伴わない、脳内アミロイドβ陰性の対象を意味する。脳内アミロイドβの蓄積は、臨床において従来、陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）等の放射線検査、又は、脳脊髄液におけるアミロイドβ及びリン酸化タウのバイオマーカーによって評価される。例えば、ＰＥＴプローブである１８Ｆ－Ｆｌｏｒｂｅｔａｂｅｎを用いたアミロイドβＰＥＴ検査において、１８Ｆ－Ｆｌｏｒｂｅｔａｂｅｎ製造業者による視覚判定基準に従い、脳内アミロイドβの蓄積が診断基準より多く認められる場合は、脳内アミロイドβ陽性と判定され、脳内アミロイドβの蓄積が診断基準より少なく認められる場合は脳内アミロイドβ陰性と判定される。
　脳内アミロイドβの蓄積は、主にアルツハイマー病（ＡＤ）及びＡＤを背景にした軽度認知障害（ＭＣＩ ｄｕｅ ｔｏ ＡＤ）にみられる主病理の一つとされるが、臨床診断にてＡＤと診断された患者において脳内アミロイドβの蓄積を伴わない場合も多く存在し、臨床診断と病理診断の乖離が課題である。また、通常は脳内アミロイドβの蓄積を伴わない、大脳皮質基底核症候群（ＣＢＳ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、パーキンソン病又はパーキンソン症候群（ＰＤ）、又は老年期精神疾患と、臨床上診断された患者においても脳内アミロイドβの蓄積を伴う場合がある。さらに、認知機能は正常であるが脳内アミロイドβの蓄積を伴う場合があり、そのようなアルツハイマー病の前臨床期のことをプレクリニカルＡＤという。本実施形態の評価方法によって、陽性と判定される場合は、臨床診断による疾患名にかかわらず脳内アミロイドβの蓄積の疑いがあると考えられる。したがって、本実施形態の評価方法は、脳内アミロイドβの蓄積の簡便な一次スクリーニング方法として有用である。なお、これらの神経疾患の臨床上の診断基準は、当業者にとって既知のものであり、例えば実施例に記載の診断基準が挙げられる。
　リン酸化タウ（ｐ－Ｔａｕ）は、リン酸化タウ１８１（ｐ－Ｔａｕ１８１）、リン酸化タウ２１７（ｐ－Ｔａｕ２１７）、リン酸化タウ２３１（ｐ－Ｔａｕ２３１）、及びそれらの組合せからなる群から選択され、一実施形態においてはｐ－Ｔａｕ１８１である。これらのｐ－Ｔａｕは、脳内アミロイドβの蓄積を評価するためのバイオマーカーであり、ニューロフィラメント軽鎖（ＮＦＬ）と組み合わせて用いられることで、診断精度を向上させることができる。タウ（Ｔａｕ）は、当業者にとって既知の、中枢神経系及び末梢神経系の神経細胞、グリア細胞に発現しているタンパク質である。タウのリン酸化は脳内にて行われるが、いくつかの異常のリン酸化が知られている。そのうち、ｐ－Ｔａｕ１８１はＴａｕのスレオニン１８１がリン酸化されたものであり、ｐ－Ｔａｕ２１７はＴａｕのスレオニン２１７がリン酸化されたものであり、ｐ－Ｔａｕ２３１はＴａｕのスレオニン２３１がリン酸化されたものである。
　測定対象としてｐ－Ｔａｕを組み合わせて用いる場合、ｐ－Ｔａｕ１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７、及びｐ－Ｔａｕ２３１のうち、任意の２つのｐ－Ｔａｕの量を測定してもよく、３つの全てのｐ－Ｔａｕの量を測定してもよい。２つのｐ－Ｔａｕの組み合わせとしては、ｐ－Ｔａｕ１８１とｐ－Ｔａｕ２１７、ｐ－Ｔａｕ１８１とｐ－Ｔａｕ２３１、及びｐ－Ｔａｕ２１７とｐ－Ｔａｕ２３１がある。
　血液試料中のｐ－Ｔａｕ、すなわち、ｐ－Ｔａｕ１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７、及びｐ－Ｔａｕ２３１の量は、既知のタンパク質の定量方法に従って測定することができる。例えば、吸光度測定、及び、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、免疫蛍光法、免疫沈降法などの抗原抗体反応を利用した免疫学的測定法、並びに、液体クロマトグラフィー/質量分析法（ＬＣ／ＭＳ）が挙げられる。また、市販の測定キット、例えば、ＳＩＭＯＡ（登録商標）ｐ－Ｔａｕ１８１　Ａｄｖａｎｔａｇｅ　Ｖ２　Ｋｉｔ（Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ社製）によって簡単に定量化することができる。ここで、ｐ－Ｔａｕの量とは、測定値（絶対値）である。
　ニューロフィラメント軽鎖（ＮＦＬ）は、神経軸索損傷のバイオマーカーであることが知られており、脳内アミロイドβの蓄積の評価に用いられることは知られていない。ニューロフィラメント（ＮＦ）は、主にＮＦＬ（ｌｏｗ又はｌｉｇｈｔ；軽鎖）、ＮＦＭ（ｍｅｄｉｕｍ；中鎖）、ＮＦＨ（ｈｅａｖｙ又はｈｉｇｈ；重鎖）の３種類のサブユニットから構成され、ＮＦＬはそのうちの軽鎖である。
　血液試料中のＮＦＬの量は、ｐ－Ｔａｕと同様に、既知のタンパク質の定量方法に従って測定することができる。例えば、吸光度測定、及び、ＥＬＩＳＡ、ＥＩＡ、ＲＩＡ、免疫蛍光法、免疫沈降法などの抗原抗体反応を利用した免疫学的測定法、並びに、ＬＣ／ＭＳが挙げられる。また、市販の測定キット、例えば、ＳＩＭＯＡ（登録商標）ＮＦＬ　Ａｄｖａｎｔａｇｅ　（ＳＲ－Ｘ）　Ｋｉｔ（Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ社製）によって簡単に定量化することができる。ここで、ＮＦＬの量とは、測定値（絶対値）である。
　本明細書における「対照値」は、明記しない限り、ｐ－Ｔａｕの対照値及びＮＦＬの対照値の両方を指す。対照値は、脳内アミロイドβの蓄積を予測するための値であり、予め定められたカットオフ値とすることができる。一実施形態において、予め定められたカットオフ値は、ｐ－Ｔａｕ及びＮＦＬの量を測定する測定工程に用いた測定アッセイと同じアッセイによって決定されたカットオフ値である。また、別の実施形態において、予め定められたカットオフ値は、ｐ－Ｔａｕ及びＮＦＬの量を測定する測定工程に用いた測定アッセイとは別のアッセイによって決定されたカットオフ値である。
　本明細書における「カットオフ値」は、明記しない限り、ｐ－Ｔａｕのカットオフ値及びＮＦＬのカットオフ値の両方を指す。カットオフ値は、コントロール対象から得られた血液試料中ｐ－Ｔａｕ及びＮＦＬの測定値と、脳内アミロイドβの蓄積を有する対象から得られた血液試料中ｐ－Ｔａｕ１８１及びＮＦＬの測定値とをそれぞれ比較することによって決定されてもよい。脳内アミロイドβの蓄積を有する対象は、従来の診断方法、例えば、アミロイドβＰＥＴによって脳内アミロイドβ陽性の対象であり、コントロール対象は、脳内アミロイドβ陰性の対象である。
　カットオフ値は、所望の診断の感度によって決定してもよい。診断の感度は、評価の目的によって任意に設定することができ、例えば、７０％、８０％、９０％、９５％又は１００％とすることができる。本開示の評価方法が、脳内アミロイドβ蓄積の確定診断となるアミロイドβＰＥＴ検査の前診断として期待されることから、より多くの被験者の適切な治療を目的として、アミロイドβＰＥＴ前の血液を用いた予備検査では、可能な限り偽陰性の少ない検査が臨床上必要とされると考えられる。そのため、一実施形態において、感度を１００％（すなわち、偽陰性がない感度）としてもよい。
　コントロール対象から得られた血液試料中ｐ－Ｔａｕ及びＮＦＬの測定値と、脳内アミロイドβの蓄積を有する対象から得られた血液試料中ｐ－Ｔａｕ及びＮＦＬの測定値を比較して、所定の感度にしたがって、カットオフ値を決めることができる。また、ｐ－Ｔａｕのカットオフ値及びＮＦＬのカットオフ値は、それぞれ１つであってもよく、２つ以上、例えば２つ、３つ又は４つであってよい。
　カットオフ値の決定は具体的には、例えば図２に示すように、コントロール対象（脳内アミロイドβ陰性の対象）から得られた血液試料中ｐ－Ｔａｕ（図２では、ｐ－Ｔａｕ１８１）及びＮＦＬの測定値、並びに、脳内アミロイドβの蓄積を有する対象（脳内アミロイドβ陽性の対象）から得られた血液試料中ｐ－Ｔａｕ及びＮＦＬの測定値をグラフ化し、所望の感度（例えば、１００％）にしたがって、カットオフ値（図２では、ｐ－Ｔａｕ１８１については２つ、ＮＦＬについては１つ）を導くことができる。なお、ｐ－Ｔａｕ及びＮＦＬの測定値は、測定方法に依存するものであるため、一つの測定方法（アッセイ）について、予めカットオフ値を決定しておけば、毎回測定・決定する必要がない。
　また、一実施形態において、カットオフ値の決定に際して、コントロール対象及び脳内アミロイドβの蓄積を有する対象の母集団は統計的に意義のある数を有する母集団である。例えば、それぞれ１０人以上であればよく、さらなる一例として３０人以上、５０人以上、さらに１００以上であってよい。
　上記測定工程で得られた測定値を対照値と比較して、脳内アミロイドβの蓄積を評価する工程において、上記ｐ－ＴａｕとＮＦＬとの組合せ（コンビネーション）によって評価する。ｐ－Ｔａｕが１つであり（例えば、ｐ－Ｔａｕがｐ－Ｔａｕ１８１である）、かつ、ｐ－Ｔａｕ及びＮＦＬのカットオフ値がそれぞれ１つである場合は、例えば、カットオフ値が、ｐ－Ｔａｕ１８１カットオフ値１及びＮＦＬのカットオフ値１である場合、ｐ－Ｔａｕ１８１の測定値がｐ－Ｔａｕ１８１カットオフ値１以上であり、かつ、ＮＦＬの測定値がＮＦＬカットオフ値１以上である場合は、対象を脳内アミロイドβ陽性と判定し、それ以外は脳内アミロイドβ陰性と判定するとの基準を設けてもよい。
　ｐ－Ｔａｕ１８１及びＮＦＬのカットオフ値のうち、片方のカットオフ値が１つであり、もう片方のカットオフ値が２つ以上である場合は、例えば、カットオフ値が、ＮＦＬカットオフ値１並びにｐ－Ｔａｕ１８１カットオフ値１及びｐ－Ｔａｕ１８１カットオフ値２である（ここで、ｐ－Ｔａｕ１８１カットオフ値１＜ｐ－Ｔａｕ１８１カットオフ値２）場合、ｐ－Ｔａｕ１８１の測定値がｐ－Ｔａｕ１８１カットオフ値２以上である場合、並びに、ＮＦＬの測定値がＮＦＬカットオフ値１未満であり、かつ、ｐ－Ｔａｕ１８１の測定値がｐ－Ｔａｕ１８１カットオフ値１以上でありｐ－Ｔａｕ１８１カットオフ値２未満である場合は、脳内アミロイドβ陽性と判定し、それ以外は脳内アミロイドβ陰性と判定するとの基準を設けてもよい。それぞれのカットオフ値が２以上の場合は、類推する。さらに、ｐ－Ｔａｕを２つ以上組み合わせて用いる場合、上記に準じて、それぞれのｐ－Ｔａｕのカットオフ値を設定し、ＮＦＬのカットオフ値と組み合わせて、又は、それぞれのｐ－Ｔａｕの総量としてカットオフ値を設定し、ＮＦＬのカットオフ値と組み合わせて、判定することができる。
　評価（判定）工程は、人間が上記判断基準に従って行ってもよく、コンピュータシステムを用いて自動的に行われていてもよい。コンピュータシステムを用いる場合、対照値（各バイオマーカーについてそれぞれ１つ又は２つ以上のカットオフ値）を予めシステムに入力してもよく、測定値と同時に入力してもよい。測定値及びカットオフ値が入力されたあと、システムが測定値とカットオフ値とを比較し、アルゴリズムにしたがって、「＋（陽性）」又は「－（陰性）」を出力する。
　本実施形態の評価方法は、ｐ－ＴａｕとＮＦＬの組合せを用いることで、従来の評価方法、特にｐ－Ｔａｕのみによる評価方法に比べて、高い診断精度（特異度）を有する。本評価方法の特異度は、例えば１００％感度において、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上であってよい。これによれば、本実施形態の評価方法は、真陽性を実現できつつ、高い診断精度を提供できるため、一次スクリーニングとして用いることができる。
　本開示の評価方法は臨床上において、予備検査（一次スクリーニング）として用いることができる。本評価方法によって、脳内アミロイドβ陽性と判定された対象については、さらなる精密検査・診断を行い、適切な治療を行うことが好ましい。
〔アルツハイマー病（ＡＤ）、ＡＤを背景にした軽度認知障害又はプレクリニカルＡＤの診断を補助する方法〕
　一実施形態の、アルツハイマー病（ＡＤ）、ＡＤを背景にした軽度認知障害又はプレクリニカルＡＤの診断を補助する方法は、対象から得られた血液試料中のｐ－Ｔａｕ１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７、ｐ－Ｔａｕ２３１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるｐ－Ｔａｕの量、及びＮＦＬの量を測定する工程と、上記工程で得られた測定値を対照値と比較して、脳内アミロイドβの蓄積を評価する工程とを含む。
　脳内アミロイドβの蓄積が陽性と判定（評価）される場合は、アルツハイマー病（ＡＤ）、ＡＤを背景にした軽度認知障害（ＭＣＩｄｕｅ ｔｏ ＡＤ）又はプレクリニカルＡＤの可能性が高いと考えられる。したがって、本開示の上記方法は、ＡＤ又はＭＣＩ ｄｕｅ ｔｏ ＡＤ又はプレクリニカルＡＤの一次スクリーニングに有用である。
　一実施形態の、アルツハイマー病（ＡＤ）、ＡＤを背景にした軽度認知障害又はプレクリニカルＡＤの診断を補助するための指標の取得方法は、対象から得られた血液試料中のｐ－Ｔａｕ１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７、ｐ－Ｔａｕ２３１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるｐ－Ｔａｕの量、及びＮＦＬの量を測定する工程と、上記工程で得られた測定値を対照値と比較して、脳内アミロイドβの蓄積の情報を取得する工程とを含む。一実施形態において、上記指標は、対象の脳内アミロイドβの蓄積の情報である。
〔脳内アミロイドβの蓄積を評価するためのキット〕
　一実施形態の脳内アミロイドβの蓄積を評価するためのキットは、リン酸化タウ（ｐ－Ｔａｕ）１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７、ｐ－Ｔａｕ２３１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるｐ－Ｔａｕと特異的に結合する抗体と、ニューロフィラメント軽鎖（ＮＦＬ）と特異的に結合する抗体とを含む。
　他の実施形態の脳内アミロイドβの蓄積を評価するためのキットは、リン酸化タウ（ｐ－Ｔａｕ）１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７、ｐ－Ｔａｕ２３１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるｐ－Ｔａｕと特異的に結合する抗体を含み、かつ、ニューロフィラメント軽鎖（ＮＦＬ）と特異的に結合する抗体を含むキットとともに使用される。
　さらなる実施形態の脳内アミロイドβの蓄積を評価するためのキットは、ニューロフィラメント軽鎖（ＮＦＬ）と特異的に結合する抗体を含み、かつ、リン酸化タウ（ｐ－Ｔａｕ）１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７、ｐ－Ｔａｕ２３１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるｐ－Ｔａｕと特異的に結合する抗体を含むキットとともに使用される。
　一実施形態において、ｐ－Ｔａｕはｐ－Ｔａｕ１８１である。
　上記抗体は、ｐ－Ｔａｕ又はＮＦＬと特異的に結合する任意の抗体又はその抗原結合断片であってよく、ポリクローナル抗体であってもよくモノクローナル抗体であってもよい。また、一実施形態において、抗体は、検出可能に標識した抗体であり、標識は抗原抗体結合を測定する方法に応じて、当業者が既知の方法によって行うことができる。
　「特異的に結合する」という用語は、当該技術分野において当業者に周知の用語であり、抗体又はその抗原結合断片の、抗原やエピトープに対する特異的な結合を決定するための方法も周知である。一実施形態において、「特異的に結合する」は、例えば、抗ｐ－Ｔａｕ１８１抗体又はその抗原結合断片が、他の標的分子に結合するよりも、より大きな結合親和性、結合活性で、より迅速に、及び／又は、より長時間持続して、ｐ－Ｔａｕ１８１に免疫学的反応により結合可能であると理解される。別の実施形態において、「特異的に結合する」は、例えば、抗ｐ－Ｔａｕ１８１抗体又はその抗原結合断片が、ｐ－Ｔａｕ１８１に対して少なくとも約１０－７Ｍ、又は少なくとも約１０－８Ｍ、又は少なくとも約１０－９Ｍ、又は少なくとも１０－１０Ｍまたはそれ以下のＫＤを持つ抗体又はその抗原結合断片によって示されうる。また、さらに別の実施形態では、「特異的に結合する」は、例えば、抗ｐ－Ｔａｕ１８１抗体又はその抗原結合断片が、ｐ－Ｔａｕ１８１と免疫学的反応により結合するが、他のｐ－Ｔａｕ（例えば、ｐ－Ｔａｕ２１７、ｐ－Ｔａｕ２３１）とは実質的に結合しないと理解される。
　ｐ－Ｔａｕ１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７、ｐ－Ｔａｕ２３１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるｐ－Ｔａｕと特異的に結合する抗体は、抗ｐ－Ｔａｕ１８１抗体、抗ｐ－Ｔａｕ２１７抗体又は抗ｐ－Ｔａｕ２３１抗体のいずれか１つの抗体又はその抗原結合断片であってよく、抗ｐ－Ｔａｕ１８１抗体、抗ｐ－Ｔａｕ２１７抗体及び抗ｐ－Ｔａｕ２３１抗体のうち、任意の２つの抗体（抗ｐ－Ｔａｕ１８１抗体と抗ｐ－Ｔａｕ２１７抗体、抗ｐ－Ｔａｕ１８１抗体と抗ｐ－Ｔａｕ２３１抗体及びｐ－Ｔａｕ２１７とｐ－Ｔａｕ２３１）又はそれらの抗原結合断片であってもよく、抗ｐ－Ｔａｕ１８１抗体、抗ｐ－Ｔａｕ２１７抗体及び抗ｐ－Ｔａｕ２３１抗体の３つの抗体又はそれらの抗原結合断片であってもよい。
　上記キットを用いて、ｐ－Ｔａｕ及びＮＦＬの量を測定し、その測定値と対照値とを比較することで、脳内アミロイドβの蓄積を評価する。ｐ－Ｔａｕ及びＮＦＬの量の測定方法は特に限定されないが、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＥＩＡ、ＲＩＡ、免疫蛍光法、免疫沈降法、放射性免疫測定法、化学発光免疫測定法、電気化学発光免疫測定法、ラテックス比濁免疫測定法、ラテックス測光免疫測定法、免疫クロマトグラフィーアッセイなどの方法が挙げられる。キットは、抗体の他に、ｐ－Ｔａｕ及びＮＦＬの量を測定する際に用い得る任意の試薬、器具又はキットを使用するための指示書を含んでもよい。例えば、検量線を作成する際のコントロールとして使用可能なｐ－Ｔａｕ又はＮＦＬを含んでもよい。
〔アルツハイマー病（ＡＤ）、ＡＤを背景にした軽度認知障害又はプレクリニカルＡＤの診断方法及び治療方法〕
　一実施形態のアルツハイマー病（ＡＤ）、ＡＤを背景にした軽度認知障害又はプレクリニカルＡＤの治療方法は、対象から得られた血液試料中のリン酸化タウ（ｐ－Ｔａｕ）１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７、ｐ－Ｔａｕ２３１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるｐ－Ｔａｕの量、及びニューロフィラメント軽鎖（ＮＦＬ）の量を測定する工程と、上記工程で得られた測定値を対照値と比較して、脳内アミロイドβの蓄積を評価する工程と、脳内アミロイドβが蓄積されていると評価された対象に、治療上有効な量のアルツハイマー病、ＡＤを背景にした軽度認知障害又はプレクリニカルＡＤ治療剤を投与する工程とを含む。
　アルツハイマー病、ＡＤを背景にした軽度認知障害又はプレクリニカルＡＤ治療剤は、特に限定されないが、例えば抗Ａβ抗体、Ａβ産生又は蓄積を阻害する薬剤、抗タウ抗体等などが挙げられる。
　上記脳内アミロイドβが蓄積されていると評価された対象が、上記治療剤を投与する前に、アルツハイマー病、ＡＤを背景にした軽度認知障害又はプレクリニカルＡＤと診断される。ここで、当該診断は、一実施形態において本開示の脳内アミロイドβの蓄積を評価する工程を含む診断であり、別の実施形態において陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）等の放射線検査を含む診断であり、さらなる実施形態において本開示の脳内アミロイドβの蓄積を評価する工程に加えて、陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）等の放射線検査を含む診断である。
　一実施形態のアルツハイマー病、ＡＤを背景にした軽度認知障害又はプレクリニカルＡＤを診断する方法は、対象から得られた血液試料中のｐ－Ｔａｕ１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７、ｐ－Ｔａｕ２３１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるｐ－Ｔａｕの量、及びＮＦＬの量を測定する工程と、上記工程で得られた測定値を対照値と比較して、脳内アミロイドβの蓄積を評価する工程とを含む。
　以下に実施例を挙げて本開示を詳細に説明するが、本開示は何らこれらに限定されるものではない。
＜臨床診断＞
　本研究にてリクルートした計９４名の被験者（男性：５１名、女性：４３名、年齢：６９．７±９．０歳）の脳内ＭＲＩ検査及び各種神経心理検査（Ｍｉｎｉ－Ｍｅｎｔａｌ－Ｓｔａｔｅ　Ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ（ＭＭＳＥ：非特許文献８）、Ｗｅｃｈｓｌｅｒ　Ｍｅｍｏｒｙ　Ｓｃａｌｅ－Ｒｅｖｉｓｅｄ論理的記憶　Ｉ＆ＩＩ　Ｓｔｏｒｙ　Ａ（ＷＭＳ－Ｒ論理的記憶Ｉ＆ＩＩ；非特許文献９）及びＡｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ　Ｄｉｓｅａｓｅ　Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ　Ｓｃａｌｅ－　Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ　ｓｕｂｓｃａｌｅ　（ＡＤＡＳ－ＣＯＧ；非特許文献１０）、言語流暢性（非特許文献１１）、トレイルメイキングテストＡ＆Ｂ、Ｊａｐａｎｅｓｅ　Ａｄｕｌｔ　Ｒｅａｄｉｎｇ　Ｔｅｓｔ（ＪＡＲＴ；非特許文献１２））を実施し、現在の共通見解の診断基準（表１）に従って臨床診断を実施した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　その結果、９４名の被験者の疾患の内訳は、健常者（３７名）、軽度認知障害（ＭＣＩ、１４名）、アルツハイマー病（ＡＤ、１９名）、大脳皮質基底核症候群（ＣＢＳ、４名）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ、１０名）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ、４名）、パーキンソン病又はパーキンソン症候群（ＰＤ、２名）、及び老年期精神疾患（４名）であった。
　次に、脳内におけるアミロイドβ蓄積の有無を検査するために、陽電子放出断層撮影法（ｐｏｓｉｔｒｏｎ　ｅｍｉｓｓｉｏｎ　ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ：ＰＥＴ）プローブである１８Ｆ－Ｆｌｏｒｂｅｔａｂｅｎを被験者に３００ＭＢｑ相当量を静脈内に投与後、アミロイドβＰＥＴ検査装置（Ｔｒｕｅ　Ｐｏｉｎｔ　バイオグラフ　４０／６４（シーメンス旭メディテック株式会社））を用いて撮像した。脳内アミロイドβ蓄積の判定は、１８Ｆ－Ｆｌｏｒｂｅｔａｂｅｎ製造業者による視覚判定基準に従い実施し、計９４名の被験者を、脳内アミロイドβ蓄積陰性群（以下、単に「陰性群」）６０例、脳内アミロイドβ蓄積陽性群（以下、単に「陽性群」）３４例に分割した。
＜バイオマーカーの測定＞
　次に９４名の被験者より血漿検体を採取した。すなわち、朝食抜きで午前中に各被験者より採血したのち、直ちに氷冷した。続いて、採血から２時間以内に１２００ｇ×１０分、２８００ｇ×１０分にて血漿成分を遠心分離したのち、分析に用いるまでに－８０℃の超低温冷凍庫で保存した。
　バイオマーカーの定量化に関して、ｐ－Ｔａｕ１８１及びＮＦＬは、それぞれＳＩＭＯＡ（登録商標）ｐ－Ｔａｕ１８１　Ａｄｖａｎｔａｇｅ　Ｖ２　Ｋｉｔ（Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ社製）又はＳＩＭＯＡ（登録商標）ＮＦＬ　Ａｄｖａｎｔａｇｅ　（ＳＲ－Ｘ）　Ｋｉｔ（Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ社製）を使用し、添付のプロトコルに従い、測定機器として、超高感度オートＥＬＩＳＡ（ＳＩＭＯＡ（登録商標）　ＨＤ－１又はＳＲ－Ｘ）を用い、各検体Ｎ＝２で実施した。得られた各サンプルのＮ＝２の測定値はサンプルごとで平均をとることで測定値とし、希釈倍率（４倍）の補正後、各サンプルの定量値とした。測定値は、絶対値（ｐｇ／ｍｌ）としてそれぞれ示された。
＜バイオマーカーの評価基準の設定＞
　血液による脳内アミロイドβ蓄積の有無の診断は、今後脳内アミロイドβ蓄積に対する創薬が一般化した場合、脳内アミロイドβ蓄積の確定診断となるアミロイドβＰＥＴ検査の前診断で活用されることが予想される。より多くの被験者の適切な治療を目的として、アミロイドβＰＥＴ検査前の血液を用いた予備検査では、可能な限り偽陰性が少ない検査が臨床上必要とされる。現在のところ、高い精度・感度を有する臨床で利用可能な検査法は存在しないため、臨床上の感度のクライテリア（診断基準）設定は難しい。しかし、一人でも多くの脳内アミロイドβ蓄積を伴う患者が陽性と正しく判定され、確定診断となるアミロイドβＰＥＴ検査を実施し適切な薬剤にアクセスする環境を整えることが、患者へのベネフィットの最大化に繋がることから、脳内アミロイドβ蓄積を伴う患者を正しく陽性と判定できるクライテリアを設け各種バイオマーカーを評価することとした。
（ｐ－Ｔａｕによる診断）
　アミロイドβＰＥＴ検査の結果、陰性群の６０例及び陽性群の３４例の血液中のｐ－Ｔａｕ１８１の濃度を図式化し、図１に示した。図１に示すように血液中のｐ－Ｔａｕ１８１はアミロイドβＰＥＴ検査陽性群での増加が確認され、過去の報告を再現した。診断の目標感度である感度１００％を考えたとき、ｐ－Ｔａｕによる診断において、使用するカットオフ値は１．４５ｐｇ／ｍｌ付近であり、この時の特異度は、４７％であることが判明した。
（ｐ－ＴａｕとＮＦＬとのコンビネーション）
　アミロイドβＰＥＴ検査の結果、陰性群の６０例及び陽性群の３４例の血液中ｐ－Ｔａｕ１８１及びＮＦＬの濃度を図式化し、図２に示した。その結果、血液中のｐ－Ｔａｕ１８１を０～１．４５ｐｇ／ｍＬ未満、１．４５～３．５ｐｇ／ｍＬ未満、３．５ｐｇ／ｍＬ以上の３群、血液中のＮＦＬを０～３０ｐｇ／ｍｌ未満、３０ｐｇ／ｍＬ以上の２群に分割したとき、ｐ－Ｔａｕ１８１が１．４５～３．５ｐｇ／ｍＬ未満かつＮＦＬが３０ｐｇ／ｍＬ以上の場合、アミロイドβＰＥＴ検査の結果が陰性の被験者が多く、ｐ－Ｔａｕ１８１が１．４５～３．５ｐｇ／ｍＬ未満かつＮＦＬが０～３０ｐｇ／ｍｌ未満の場合、アミロイドβＰＥＴ検査の結果が陽性の被験者が多いことを新たに見出した。
　このことから、新たな診断基準として、表２に示すマトリクスに基づく診断を実施することで、より精度高い診断が可能であると判断した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　次に、診断の感度を１００％（すなわち、偽陰性がない感度）と設定したとき、ｐ－Ｔａｕ１８１とＮＦＬとのコンビネーションによる診断精度を、ｐ－Ｔａｕ１８１単独での診断の場合と比較した。その結果、上記カットオフ値を用いたときに得られるｐ－Ｔａｕ１８１とＮＦＬとのコンビネーションによる診断の特異度が７０％であり、ｐ－Ｔａｕ１８１単独での診断の特異度の４７％よりも診断精度が２３％上昇した。したがって、偽陰性なく診断するカットオフ値を、ｐ－Ｔａｕ１８１とＮＦＬとのコンビネーションマーカーにて設定したとき、ｐ－Ｔａｕ１８１単独での診断の場合と比較し、診断の精度が大きく上昇することが示された。
＜ｐ－ＴａｕとＮＦＬのコンビネーションによる鑑別診断＞
　臨床において何らかの神経変性疾患として診断された患者に対して、その脳内にアミロイドβ蓄積を有するかを評価することは、脳内アミロイドβ蓄積を治療標的とした薬剤の投与に際し非常に重要な指標となる。そこで、今回エントリーした９４名の被験者のうち、ＰＥＴ前の臨床診断においてなんらかの神経変性疾患として診断された５７名の被検者においても、本開示におけるｐ－ＴａｕとＮＦＬとのコンビネーションを用いて、ｐ－Ｔａｕ１８１単独での評価と比較し、脳内アミロイドβ蓄積を精度よく予測することができるか検討した。なお、５７名の被検者（男性：２９名、女性：２８名、年齢：６９．７±９．０歳）の臨床診断の内訳は、ＭＣＩ（１４名）、ＡＤ（１９名）、ＣＢＳ（４名）、ＦＴＤ（１０名）、ＰＤ（２名）、ＰＳＰ（４名）及び老年期精神疾患（４名）であり、またアミロイドβＰＥＴ検査結果の内訳は、陰性群の３１例及び陽性群の２６例であった。
　上記のカットオフ値で上記５７名の被験者を評価した結果を表３に示す。ｐ－Ｔａｕ１８１の単独での鑑別診断の結果、陰性であった被験者が９名（陰性群で９名、陽性群で０名）であり、陽性であった被験者が４８名（陰性群で２２名、陽性群で２６名）であり、診断の感度及び特異度がそれぞれ１００％及び２９％であった。一方、ｐ－Ｔａｕ１８１とＮＦＬとのコンビネーションによる鑑別診断の結果、陰性であった被験者が２０名（陰性群で２０名、陽性群で０名）であり、陽性であった被験者が３７名（陰性群で１１名、陽性群で２６名）であり、診断の感度及び特異度がそれぞれ１００％及び６５％であった。すなわち、ｐ－Ｔａｕ１８１とＮＦＬとのコンビネーションによる診断は、ｐ－Ｔａｕ１８１単独での診断よりも診断精度が３６％上昇した。このことより、感度を１００％と設定したとき、ｐ－Ｔａｕ１８１とＮＦＬとのコンビネーションによる診断は、ｐ－Ｔａｕ１８１単独での診断と比較し、鑑別診断の精度が上昇することが示され、コンビネーションマーカーの有用性が明らかとなった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
　さらに、被験者のうちの健常者３７名（陰性群の３３例及び陽性群の４例）についても、上記と同様に評価し、その結果を表４に示す。ｐ－Ｔａｕ１８１の単独での鑑別診断の結果、陰性であった被験者が２１名（陰性群で２１名、陽性群で０名）であり、陽性であった被験者が１６名（陰性群で１２名、陽性群で４名）であり、診断の感度及び特異度がそれぞれ１００％及び６４％であった。一方、ｐ－Ｔａｕ１８１とＮＦＬとのコンビネーションによる鑑別診断の結果、陰性であった被験者が２５名（陰性群で２５名、陽性群で０名）であり、陽性であった被験者が１２名（陰性群で８名、陽性群で４名）であり、診断の感度及び特異度がそれぞれ１００％及び７６％であった。すなわち、ｐ－Ｔａｕ１８１とＮＦＬとのコンビネーションによる診断は、ｐ－Ｔａｕ１８１単独での診断よりも診断精度が１２％上昇した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
　アミロイドβＰＥＴ検査が高額でかつ検査できる施設が限られることに加え、脳脊髄液におけるアミロイドβ及びタウのバイオマーカーの測定が侵襲的な方法であることから、本開示は、これらの方法に代わる一次スクリーニングとして有用であり、かつ、高い診断精度を有する、脳内アミロイドβの蓄積の評価方法を提供することができる。現在脳内アミロイドβ蓄積を治療標的とした薬剤の開発が進んでおり、より多くの治療を望んでいる患者にそのような薬剤を提供するための重要な指標となりうることからも、本開示は国民医療費の削減及び医薬品アクセスの向上につながることが予想される。

Claims (16)

  1. 　脳内アミロイドβの蓄積を評価する方法であって、
    　対象から得られた血液試料中のリン酸化タウ（ｐ－Ｔａｕ）１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７、ｐ－Ｔａｕ２３１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるｐ－Ｔａｕの量、及びニューロフィラメント軽鎖（ＮＦＬ）の量を測定する工程と、
    　前記工程で得られた測定値を対照値と比較する工程と
    を含む、方法。
  2. 　前記対照値が予め定められたカットオフ値である、請求項１に記載の方法。
  3. 　前記カットオフ値が、コントロール対象から得られた血液試料中の前記ｐ－Ｔａｕ及び前記ＮＦＬの測定値と、脳内アミロイドβの蓄積を有する対象から得られた血液試料中の前記ｐ－Ｔａｕ及び前記ＮＦＬの測定値とをそれぞれ比較することによって決定される、請求項２に記載の方法。
  4. 　前記ｐ－Ｔａｕの前記カットオフ値及び／又は前記ＮＦＬの前記カットオフ値が、１つ又は２つ以上である、請求項２又は３に記載の方法。
  5. 　前記ｐ－Ｔａｕが、ｐ－Ｔａｕ１８１である、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
  6. 　前記血液試料が、全血、血清、又は血漿である、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
  7. 　アルツハイマー病（ＡＤ）、ＡＤを背景にした軽度認知障害又はプレクリニカルＡＤの診断を補助する方法であって、
    　対象から得られた血液試料中のリン酸化タウ（ｐ－Ｔａｕ）１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７、ｐ－Ｔａｕ２３１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるｐ－Ｔａｕの量、及びニューロフィラメント軽鎖（ＮＦＬ）の量を測定する工程と、
    　前記工程で得られた測定値を対照値と比較して、脳内アミロイドβの蓄積を評価する工程と
    を含む、方法。
  8. 　前記対照値が予め定められたカットオフ値である、請求項７に記載の方法。
  9. 　前記カットオフ値が、コントロール対象から得られた血液試料中の前記ｐ－Ｔａｕ及び前記ＮＦＬの測定値と、脳内アミロイドβの蓄積を有する対象から得られた血液試料中の前記ｐ－Ｔａｕ及び前記ＮＦＬの測定値とをそれぞれ比較することによって決定される、請求項８に記載の方法。
  10. 　前記ｐ－Ｔａｕの前記カットオフ値及び／又は前記ＮＦＬの前記カットオフ値が、１つ又は２つ以上である、請求項８又は９に記載の方法。
  11. 　前記ｐ－Ｔａｕが、ｐ－Ｔａｕ１８１である、請求項７～１０のいずれか一項に記載の方法。
  12. 　前記血液試料が、全血、血清、又は血漿である、請求項７～１１のいずれか一項に記載の方法。
  13. 　脳内アミロイドβの蓄積を評価するためのキットであって、
    　リン酸化タウ（ｐ－Ｔａｕ）１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７、ｐ－Ｔａｕ２３１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるｐ－Ｔａｕと特異的に結合する抗体と、ニューロフィラメント軽鎖（ＮＦＬ）と特異的に結合する抗体とを含む、キット。
  14. 　脳内アミロイドβの蓄積を評価するためのキットであって、
    　リン酸化タウ（ｐ－Ｔａｕ）１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７、ｐ－Ｔａｕ２３１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるｐ－Ｔａｕと特異的に結合する抗体を含み、かつ、ニューロフィラメント軽鎖（ＮＦＬ）と特異的に結合する抗体を含むキットとともに使用される、キット。
  15. 　脳内アミロイドβの蓄積を評価するためのキットであって、
    　ニューロフィラメント軽鎖（ＮＦＬ）と特異的に結合する抗体を含み、かつ、リン酸化タウ（ｐ－Ｔａｕ）１８１、ｐ－Ｔａｕ２１７、ｐ－Ｔａｕ２３１及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるｐ－Ｔａｕと特異的に結合する抗体を含むキットとともに使用される、キット。
  16. 　前記ｐ－Ｔａｕが、ｐ－Ｔａｕ１８１である、請求項１３～１５のいずれか一項に記載のキット。
PCT/JP2022/038295 2021-10-18 2022-10-14 脳内アミロイドβの蓄積を評価するためのバイオマーカー Ceased WO2023068173A1 (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2021170500A JP2025016807A (ja) 2021-10-18 2021-10-18 脳内アミロイドβの蓄積を評価するためのバイオマーカー
JP2021-170500 2021-10-18

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2023068173A1 true WO2023068173A1 (ja) 2023-04-27

Family

ID=86059197

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2022/038295 Ceased WO2023068173A1 (ja) 2021-10-18 2022-10-14 脳内アミロイドβの蓄積を評価するためのバイオマーカー

Country Status (2)

Country Link
JP (1) JP2025016807A (ja)
WO (1) WO2023068173A1 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN119470917A (zh) * 2024-11-14 2025-02-18 苏州智研医康医疗科技有限公司 一种检测人血中阿尔茨海默病相关蛋白的试剂盒及检测方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2016535283A (ja) * 2013-10-24 2016-11-10 ナノソミックス・インコーポレイテッドＮａｎｏＳｏｍｉＸ， Ｉｎｃ． アルツハイマー病および他の神経変性障害のためのバイオマーカーおよび診断方法
JP2020511662A (ja) * 2017-03-23 2020-04-16 ソウル大学校産学協力団Ｓｅｏｕｌ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒ＆Ｄｂ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ 脳のアミロイドベータ蓄積鑑別用血中バイオマーカー
WO2021009074A1 (en) * 2019-07-12 2021-01-21 Adx Neurosciences Nv Novel markers as early predictors of alzheimer's pathology
JP2021012094A (ja) * 2019-07-05 2021-02-04 公立大学法人名古屋市立大学 アルツハイマー病又は発症前アルツハイマー病の診断用マーカー及び診断用キット、脳内へのアミロイドβタンパク質の蓄積量の評価方法、並びに被験者におけるアルツハイマー病又は発症前アルツハイマー病の検出を補助するためのインビトロの方法
JP2021523357A (ja) * 2018-05-03 2021-09-02 ワシントン・ユニバーシティＷａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ 部位特異的タウリン酸化に基づく診断法及び治療方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2016535283A (ja) * 2013-10-24 2016-11-10 ナノソミックス・インコーポレイテッドＮａｎｏＳｏｍｉＸ， Ｉｎｃ． アルツハイマー病および他の神経変性障害のためのバイオマーカーおよび診断方法
JP2020511662A (ja) * 2017-03-23 2020-04-16 ソウル大学校産学協力団Ｓｅｏｕｌ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒ＆Ｄｂ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ 脳のアミロイドベータ蓄積鑑別用血中バイオマーカー
JP2021523357A (ja) * 2018-05-03 2021-09-02 ワシントン・ユニバーシティＷａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ 部位特異的タウリン酸化に基づく診断法及び治療方法
JP2021012094A (ja) * 2019-07-05 2021-02-04 公立大学法人名古屋市立大学 アルツハイマー病又は発症前アルツハイマー病の診断用マーカー及び診断用キット、脳内へのアミロイドβタンパク質の蓄積量の評価方法、並びに被験者におけるアルツハイマー病又は発症前アルツハイマー病の検出を補助するためのインビトロの方法
WO2021009074A1 (en) * 2019-07-12 2021-01-21 Adx Neurosciences Nv Novel markers as early predictors of alzheimer's pathology

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BARTHÉLEMY NICOLAS R., HORIE KANTA, SATO CHIHIRO, BATEMAN RANDALL J.: "Blood plasma phosphorylated-tau isoforms track CNS change in Alzheimer’s disease", JOURNAL OF EXPERIMENTAL MEDICINE, vol. 217, no. 11, 2 November 2020 (2020-11-02), US , XP093058881, ISSN: 0022-1007, DOI: 10.1084/jem.20200861 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN119470917A (zh) * 2024-11-14 2025-02-18 苏州智研医康医疗科技有限公司 一种检测人血中阿尔茨海默病相关蛋白的试剂盒及检测方法

Also Published As

Publication number Publication date
JP2025016807A (ja) 2025-02-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Chatterjee et al. Plasma extracellular vesicle tau and TDP-43 as diagnostic biomarkers in FTD and ALS
Ashton et al. An update on blood-based biomarkers for non-Alzheimer neurodegenerative disorders
Meyer et al. Plasma p‐tau231, p‐tau181, PET biomarkers, and cognitive change in older adults
Blennow et al. Cerebrospinal fluid and plasma biomarkers in Alzheimer disease
Qu et al. Blood biomarkers for the diagnosis of amnestic mild cognitive impairment and Alzheimer’s disease: A systematic review and meta-analysis
Tatebe et al. Quantification of plasma phosphorylated tau to use as a biomarker for brain Alzheimer pathology: pilot case-control studies including patients with Alzheimer’s disease and down syndrome
Lleo et al. Cerebrospinal fluid biomarkers in trials for Alzheimer and Parkinson diseases
Majbour et al. Oligomeric and phosphorylated alpha-synuclein as potential CSF biomarkers for Parkinson’s disease
O’Bryant et al. A blood-based algorithm for the detection of Alzheimer’s disease
Janeiro et al. Biomarkers in Alzheimer’s disease
Park et al. Promising blood biomarkers for clinical use in Alzheimer’s disease: a focused update
Vogelgsang et al. Multiplex immunoassay measurement of amyloid-β42 to amyloid-β40 ratio in plasma discriminates between dementia due to Alzheimer’s disease and dementia not due to Alzheimer’s disease
Schaffrath et al. Patients with isolated REM-sleep behavior disorder have elevated levels of alpha-synuclein aggregates in stool
CN107636468A (zh) 用于预测认知退化的风险的方法
US20040072261A1 (en) Method for the diagnosis and differential diagnosis of neurological diseases
ES2731678T3 (es) Herramientas de diagnóstico para la enfermedad de Alzheimer
Chimthanawala et al. Non-invasive biomarkers for early detection of Alzheimer’s disease: a new-age perspective
Dutta et al. Development of a novel Electrochemiluminescence ELISA for quantification of α-Synuclein phosphorylated at Ser129 in biological samples
Silva‐Spínola et al. Blood biomarkers in mild cognitive impairment patients: Relationship between analytes and progression to Alzheimer disease dementia
Li et al. Alterations of Erythrocytic phosphorylated alpha-Synuclein in different subtypes and stages of Parkinson's disease
Wojdała et al. Analytical and clinical performance of eight Simoa® and Lumipulse® assays for automated measurement of plasma p-tau181 and p-tau217
Choi et al. Endogenous Aβ peptide promote Aβ oligomerization tendency of spiked synthetic Aβ in Alzheimer's disease plasma
Chen et al. Diagnostic value of isolated plasma biomarkers and its combination in neurodegenerative dementias: A multicenter cohort study
Sehrawat et al. Pittsburgh plasma p‐tau217: Classification accuracies for autosomal dominant and sporadic Alzheimer's disease in the community
US20250362311A1 (en) Blood-based screening of subjects for a clinical trial for treatment of tauopathy or amyloidogenic disease

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 22883477

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 22883477

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: JP