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WO2023048236A1 - ペプチド - Google Patents

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Publication number
WO2023048236A1
WO2023048236A1 PCT/JP2022/035392 JP2022035392W WO2023048236A1 WO 2023048236 A1 WO2023048236 A1 WO 2023048236A1 JP 2022035392 W JP2022035392 W JP 2022035392W WO 2023048236 A1 WO2023048236 A1 WO 2023048236A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
group
peptide
asp
phe
ala
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2022/035392
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
王明 柏木
隆 岡添
光介 相川
信介 山東
淳平 森本
晃司 門田
愛 木幡
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
University of Tokyo NUC
AGC Inc
Original Assignee
Asahi Glass Co Ltd
University of Tokyo NUC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Asahi Glass Co Ltd, University of Tokyo NUC filed Critical Asahi Glass Co Ltd
Priority to EP22872987.7A priority Critical patent/EP4406961A4/en
Priority to JP2023549749A priority patent/JPWO2023048236A1/ja
Priority to CN202280061928.3A priority patent/CN117999272A/zh
Publication of WO2023048236A1 publication Critical patent/WO2023048236A1/ja
Priority to US18/605,993 priority patent/US20240287131A1/en
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0827—Tripeptides containing heteroatoms different from O, S, or N
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06191—Dipeptides containing heteroatoms different from O, S, or N
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Definitions

  • the present invention relates to peptides containing amino acid residues with fluorine atoms introduced into their side chains.
  • CPP cell penetrating peptides
  • Typical CPPs include peptides derived from the TAT protein of HIV virus (Patent Document 1) and poly-Arg sequence peptides (Patent Document 2). This can be combined with a medicinal peptide to transport the medicinal peptide into cells (eg, Patent Document 3, Non-Patent Document 1).
  • Non-Patent Document 2 Fluorine-containing amino acids and peptides containing them are expected to be used in the pharmaceutical field as physiologically active substances.
  • Non-Patent Document 4 Compounds with a polyfluoro structure are known to be stable in vivo, have low toxicity, and excel in being taken up into cells and escaping from endosomes. Utilizing this property, it has been reported that a peptide dendrimer using lysine in which the side chain amino group is perfluoroacylated as a constituent amino acid can be used for gene delivery (Non-Patent Document 5). However, since it is a dendrimer, it cannot form a hybrid in which it is bound to a therapeutically active peptide, a nucleic acid, or a protein that serves as an antibody drug, unlike CPP.
  • An object of the present invention is to provide a peptide containing an amino acid residue with a fluorine atom introduced into its side chain and a method for producing the same.
  • a peptide in which two or more amino acids are peptide-bonded, At least one side chain of the amino acid residue constituting the peptide has the following general formula (1)
  • Z 1 is a linking group other than a divalent, trivalent, or tetravalent alkylene group;
  • Rf is a C 1-30 alkyl group substituted with at least two fluorine atoms (the C 1-30 alkyl When the group has 2 or more carbon atoms, it may have 1 to 5 etheric oxygen atoms between the carbon atoms), -SF 5 , or -SF 4 -CR 101 R 102 -CR 103 R 104 Cl (R 101 , R 102 , R 103 and R 104 are each independently a hydrogen atom, a fluorine atom or a chlorine atom, but R 101 , R 102 , R 103 and R 104 are fluorine atoms); n3 is 1, 2, or 3, and a black circle means a bond] is a peptide.
  • the Rf is the following general formula (f-1) or (f-2)
  • Rf P is a fully halogenated C 1-10 alkyl group containing at least 2 or more fluorine atoms (the C 1-10 alkyl group is, when the carbon atoms are 2 or more, ether may have a bonding oxygen atom), n1 is an integer of 0 to 10, n2 is an integer of 0 to 9, a black circle means a bond]
  • Z 1 is represented by the following general formula (2)
  • Z 2 is a linking group other than a divalent, trivalent, or tetravalent alkylene group; Rh is a hydrogen atom or a C 1-6 alkyl group, and a black circle means a bond]
  • the amino acid residue in which the group represented by the general formula (1) is a side chain is an amino acid residue in which 1 to 3 of the Rf are directly or indirectly linked to the side chain of a natural amino acid.
  • the peptide according to any one of [1] to [9], wherein the C-terminus or N-terminus may be protected with a protecting group.
  • the following general formula (11) the following general formula (11)
  • Rh is a hydrogen atom or a C 1-6 alkyl group ; an alkyl group or a benzyl group; X is a 9-fluorenylmethyloxycarbonyl group or a tert-butoxycarbonyl group; Z is a C 1-6 alkoxy group, a hydroxyl group, or an amino group]
  • the peptide of [1] or [2], which is a tripeptide represented by [12] The peptide of any one of [1] to [11], which is cell membrane permeable.
  • the peptide according to the present invention has excellent cell membrane permeability because fluorine atoms are introduced into the side chains. Therefore, the peptide is expected to be used in the pharmaceutical field as a physiologically active substance.
  • FIG. 4 shows the results of flow cytometry of HeLa cells treated at 37° C. for 1 hour in a sample solution containing (diethylamide of fluorescent substance Alexa Fluoro 647) (FD-1).
  • FIG. 2 shows the results of measurement of mean fluorescence intensity (MFI) of HeLa cells treated at 37° C. for 1 hour in a sample solution containing (FD-1).
  • MFI mean fluorescence intensity
  • peptide fluorescent conjugate 1 Alexa-Ala-Asp(C 8 F 17 )-Phe-NH 2 ) (PFCJ-1)
  • peptide fluorescent conjugate 2 Alexa-Ala-Asp(bis-C 4 F 9 )-Phe-NH 2 )
  • fluorescent dye 1 diethylamide of fluorescent substance Alexa Fluoro 647) (FD1) or fluorescent conjugate of cell membrane-permeable peptide Cys-TAT (47-57) (TAT -Alexa), showing the results of flow cytometry of HeLa cells treated at 37°C for 1 hour.
  • FIG. 4 shows the results of measurement of mean fluorescence intensity (MFI) of HeLa cells treated at 37° C. for 1 hour in a sample solution containing a gate (TAT-Alexa).
  • peptide fluorescent conjugate 1 Alexa-Ala-Asp(C 8 F 17 )-Phe-NH 2 ) (PFCJ-1)
  • peptide fluorescent conjugate 3 Alexa-Ala- Mean fluorescence intensity ( MFI ) is a diagram showing the results of measurement.
  • peptide fluorescent conjugate 1 Alexa-Ala-Asp (C 8 F 17 )-Phe-NH 2 ) (PFCJ-1)
  • peptide fluorescent conjugate 3 Alexa-Ala-Asp Mean fluorescence intensity (MFI) of HeLa cells treated for 1 hour at 37° C.
  • peptide fluorescent conjugate 1 Alexa-Ala-Asp(C 8 F 17 )-Phe-NH 2 ) (PFCJ-1)
  • peptide fluorescent conjugate 2 Alexa-Ala-Asp(bis-C 4 F 9 )-Phe-NH 2 )
  • peptide fluorescent conjugate 3 Alexa-Ala-Asp(C 12 H 25 )-Phe-NH 2 ) (PFCJ-3)
  • peptide fluorescent conjugate 6 Alexa-Ala-Asp(C 4 F 9 )-Phe-NH 2 ) (PFCJ-6
  • peptide fluorescent conjugate 7 Alexa-Ala-Asp(C 6 F 13 )-Phe-NH 2 ) (PFCJ-7 )
  • peptide fluorescent conjugate 9 Alexa-Ala-Asp (SF 4
  • FIG. 4 shows the results of flow cytometry of HeLa cells treated at 37° C. for 1 hour in a sample solution containing (diethylamide of fluorescent substance Alexa Fluoro 647) (FD-1).
  • FIG. 2 shows the results of measurement of mean fluorescence intensity (MFI) of HeLa cells treated at 37° C. for 1 hour in a sample solution containing (FD-1).
  • MFI mean fluorescence intensity
  • peptide fluorescent conjugate 1 Alexa-Ala-Asp(C 8 F 17 )-Phe-NH 2 ) (PFCJ-1)
  • peptide fluorescent conjugate 12 Alexa-Ala-Asp(CH 2 CH 2 C 6 F 13 )-Phe-NH 2 ) (PFCJ-12) or in a sample solution containing fluorescent dye 1 (FD-1)
  • MFI mean fluorescence intensity
  • C p1-p2 (p1 and p2 are positive integers satisfying p1 ⁇ p2) means a group having p1 or more and p2 or less carbon atoms.
  • a "C 1-30 alkyl group” is an alkyl group having 1 to 30 carbon atoms, and may be linear or branched.
  • a “C 2-30 alkyl group” is an alkyl group having 2 to 30 carbon atoms, and may be linear or branched.
  • C 1-30 alkyl groups include methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, pentyl, isopentyl, neopentyl, tert- pentyl group, hexyl group, heptyl group, octyl group, nonyl group, decyl group, undecyl group, dodecyl group, tridecyl group, tetradecyl group, pentadecyl group, hexadecyl group, heptadecyl group, octadecyl group, nonadecyl group, eicosyl group, heneicosyl group , docosyl group, tricosyl group, tetracosyl group, pentacosyl group, hexacosyl group, heptacosyl group, octacosyl
  • C 1-10 alkyl group is an alkyl group having 1 to 10 carbon atoms and may be linear or branched.
  • a “C 2-10 alkyl group” is an alkyl group having 2 to 10 carbon atoms, and may be linear or branched.
  • C 1-10 alkyl groups include methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, pentyl, isopentyl, neopentyl, tert- pentyl group, hexyl group, heptyl group, octyl group, nonyl group, decyl group and the like.
  • C 1-6 alkyl group is an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, and may be linear or branched.
  • Examples of C 1-6 alkyl groups include methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, pentyl, isopentyl, neopentyl, tert- A pentyl group, a hexyl group, and the like can be mentioned.
  • a "C 6-14 aryl group” is an aromatic hydrocarbon group having 6 to 14 carbon atoms, and a C 6-12 aryl group is particularly preferred.
  • Examples of the C 6-14 aryl group include phenyl group, naphthyl group, anthryl group, 9-fluorenyl group and the like, with phenyl group being particularly preferred.
  • the “optionally substituted C 6-14 aryl group” means one or more, preferably 1 to 1, hydrogen atoms bonded to the carbon atoms of the C 6-14 aryl group. Three are groups substituted with other functional groups. When having two or more substituents, the substituents may be the same or different.
  • the substituents include a nitro group, a halogen atom (fluorine atom, chlorine atom, bromine atom, or iodine atom), a C 1-6 alkyl group, a C 1-6 alkoxy group, and a methylenedioxy group (-O-CH 2 -O-) and the like.
  • optionally substituted C 6-14 aryl group examples include phenyl group, naphthyl group, anthryl group, 4-nitrophenyl group, 4-methoxyphenyl group, 2,4-dimethoxyphenyl group, 3, 4-dimethoxyphenyl group, 4-methylphenyl group, 2,6-dimethylphenyl group, 3-chlorophenyl group, 1,3-benzodioxol-5-yl group and the like.
  • C 6-14 aryl- C 1-6 alkyl group means that one hydrogen atom bonded to a carbon atom of the C 1-6 alkyl group is a C 6-14 aryl group is a group substituted with
  • the C 6-14 aryl group in the C 6-14 aryl-C 1-6 alkyl group can be exemplified by a phenyl group, a naphthyl group, an anthryl group, a 9-fluorenyl group and the like, and a phenyl group or a 9-fluorenyl group is particularly preferred. .
  • the C 1-6 alkyl group in the C 6-14 aryl-C 1-6 alkyl group is preferably a C 1-4 alkyl group.
  • Examples of C 6-14 aryl-C 1-6 alkyl groups include benzyl group, diphenylmethyl group, triphenylmethyl group, 2-phenylethyl group, 9-anthrylmethyl group, 9-fluorenylmethyl group and the like. is mentioned.
  • halogen atom means a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom, or an iodine atom.
  • a "halogen atom other than a fluorine atom” means a chlorine atom, a bromine atom, or an iodine atom.
  • halogen atom other than fluorine atom a chlorine atom or a bromine atom is preferable, and a chlorine atom is particularly preferable.
  • C 1-6 alkoxy group refers to a group in which an oxygen atom is bonded to a C 1-6 alkyl group having 1 to 6 carbon atoms.
  • a C 1-6 alkoxy group may be straight or branched. Examples of C 1-6 alkoxy groups include methoxy, ethoxy, propoxy, butoxy, tert-butoxy, pentyloxy, hexyloxy and the like.
  • an "etheric oxygen atom” is an oxygen atom that connects carbon atoms, and does not include an oxygen atom in which oxygen atoms are connected in series.
  • An alkyl group having Nc carbon atoms (Nc is an integer of 2 or more) can have up to Nc ⁇ 1 oxygen atoms having an ether bond.
  • compound n means a compound represented by formula (n).
  • the peptide according to the present invention is a peptide consisting of two or more amino acids, wherein at least one side chain of the amino acid residues constituting the peptide is a group represented by the following general formula (1).
  • a black circle means a bond.
  • an amino acid in which a group represented by the following general formula (1) is bonded to the ⁇ -carbon may be referred to as a "fluorine-containing amino acid”
  • at least one side of an amino acid residue constituting a peptide A peptide whose chain is a group represented by the following general formula (1) is sometimes referred to as a "fluorine-containing peptide”.
  • Rf is a C 1-30 alkyl group substituted with at least two fluorine atoms, —SF 5 , or —SF 4 —CR 101 R 102 —CR 103 R 104 Cl.
  • Rf is a C 1-30 alkyl group substituted with at least two fluorine atoms
  • the C 1-30 alkyl group has 2 or more carbon atoms (in the case of a C 2-30 alkyl group), It may have 1 to 5 etheric oxygen atoms between carbon atoms.
  • one or more hydrogen atoms bonded to carbon atoms may be further substituted with halogen atoms other than fluorine atoms.
  • the C 1-30 alkyl group for Rf is preferably a C 1-20 alkyl group, more preferably a C 1-10 alkyl group, still more preferably a C 2-10 alkyl group, and a C 2-8 alkyl group. Even more preferable.
  • the C1-30 alkyl group is a C2-30 alkyl group, it may have 1 to 5 etheric oxygen atoms between carbon atoms.
  • the number of hydrogen atoms substituted with fluorine atoms is not particularly limited as long as it is 2 or more, for example, preferably 3 or more, more preferably 6 or more, and further 7 or more. preferable.
  • Rf examples include trifluoromethyl, pentafluoroethyl, heptafluoropropyl, nonafluorobutyl, perfluoropentyl, perfluorohexyl, perfluoroheptyl, perfluorooctyl, perfluorononyl, perfluorodecyl, difluoromethyl group, 1,1-difluoroethyl group, 2,2-difluoroethyl group, 1,1,2,2-tetrafluoroethyl group, 1,1,2,2,3,3-hexafluoropropyl group, 1,1,2,3,3,3-hexafluoropropyl group, 1,1,2,2,3,3-hexafluorohexyl group, 1,1,2,2,3,3-hexafluorooctyl group , 1,1,2,2,3,3-hexafluorodecyl group, 1,1,2,2,3,3-hexafluorooc
  • Rf is a group having 2 carbon atoms
  • Rf is a pentafluoroethyl group rather than a 1,1,1-trifluoroethyl group (CF 3 —CH 2 —)
  • Rf is preferably a linear group, and in the case of a branched group, 1,1,1,3,3,3-hexafluoropropane -2-yl group ((CF 3 ) 2 -CH-) and (CF 3 ) 2 -CF- group are preferred.
  • Rf When Rf is a group having 4 carbon atoms, Rf may be a linear group or a branched group. In the case of a branched group, it is preferably a group in which a hydrogen atom bonded to a carbon atom constituting the alkylene group portion is substituted with a fluorine atom, or a completely fluorinated group.
  • Rf is preferably a group represented by the following general formula (f-1) or (f-2).
  • Rf P represents a fully halogenated C 1-10 alkyl group containing at least 2 or more fluorine atoms.
  • Rf P is a group in which all hydrogen atoms in a C 1-10 alkyl group are substituted with halogen atoms, and at least two or more of these halogen atoms are fluorine atoms.
  • Rf P has 2 or more carbon atoms, that is, when it is a fully halogenated C 2-10 alkyl group, it may have 1 to 5 etheric oxygen atoms between carbon atoms.
  • two Rf P may be the same group or different groups.
  • n1 is an integer of 0-10 and n2 is an integer of 0-9.
  • n1 and n2 are 0, both represent single bonds. That is, when n1 is 0, the group represented by general formula (f-1) is Rf P —, and when n2 is 0, the group represented by general formula (f-2) is (Rf P ) 2 -CH-.
  • Rf P is a trifluoromethyl group, pentafluoroethyl group, heptafluoropropyl group, nonafluorobutyl group, perfluoropentyl group, perfluoro A hexyl group, a perfluoroheptyl group, a perfluorooctyl group, a perfluorononyl group, or a perfluorodecyl group, wherein n1 is an integer of 0 to 4, and Rf P is a trifluoromethyl group, a pentafluoroethyl group, a hepta fluoropropyl group, nonafluorobutyl group, perfluoropentyl group, perfluorohexyl group, perfluoroheptyl group, perfluorooctyl group, perfluorononyl group, or perfluorodecyl
  • Rf P is a trifluoromethyl group, pentafluoroethyl group, heptafluoropropyl group, nonafluorobutyl group, perfluoropentyl group, perfluoro A hexyl group, a perfluoroheptyl group, a perfluorooctyl group, a perfluorononyl group, or a perfluorodecyl group, wherein n2 is an integer of 0 to 4, and Rf P is a trifluoromethyl group, a pentafluoroethyl group, a hepta fluoropropyl group, nonafluorobutyl group, perfluoropentyl group, perfluorohexyl group, perfluoroheptyl group, perfluorooctyl group, perfluorononyl group, or perfluorodecyl
  • Rf examples include difluoromethyl group, 1,1-difluoroethyl group, 2,2-difluoroethyl group, 1,1,2,2-tetrafluoroethyl group, 1,1,2,2,3,3 -hexafluoropropyl group, 1,1,2,3,3,3-hexafluoropropyl group and the like.
  • Rf is a group represented by —SF 4 —CR 101 R 102 —CR 103 R 104 Cl
  • R 101 , R 102 , R 103 and R 104 each independently represent a hydrogen atom, a fluorine atom, or a chlorine atom.
  • two or more of R 101 , R 102 , R 103 and R 104 are fluorine atoms.
  • Specific examples of the group represented by -SF 4 -CR 101 R 102 -CR 103 R 104 Cl include -SF 4 -CF 2 -CF 2 Cl, -SF 4 -CF 2 -CFCl 2 , -SF 4 -CF 2 -CHF-Cl, -SF 4 -CF 2 -CCl 3 , -SF 4 -CF 2 -CHCl 2 , -SF 4 -CF 2 -CH 2 Cl, -SF 4 -CFCl-CFCl 2 , - SF 4 -CFCl-CHF-Cl and -SF 4 -CHF-CHF-Cl are included.
  • Z 1 is a linking group other than a divalent, trivalent, or tetravalent alkylene group, and n3 is 1, 2, or 3.
  • Z 1 is not particularly limited as long as it is a divalent to tetravalent group other than an alkylene group.
  • the aryl group and the heteroaryl group the groups mentioned above can be used. However, groups consisting only of alkylene groups and groups in which the portion connecting to Rf is an alkylene group are excluded.
  • Z 1 is a divalent linking group
  • the group represented by general formula (1) includes one Rf group It becomes a group having When Z 1 has a trivalent nitrogen atom, the nitrogen atom is represented by the general formula (1) by binding two Rf groups directly or via another divalent linking group
  • a group can be a group with two Rf groups.
  • Z 1 may be a linking group having a group (cyclic group) in which a hydrogen atom is removed from the ring, or may be a linking group having no ring group.
  • the group represented by general formula (1) can be a group having 2 or 3 Rf groups.
  • the cyclic group includes a group obtained by removing 2 to 4 hydrogen atoms from a cycloalkane, an aromatic ring, or a heterocyclic ring.
  • the heterocyclic ring is preferably a ring in which 1 to 3 carbon atoms of an aromatic ring are substituted with one or more atoms selected from the group consisting of nitrogen, oxygen and sulfur atoms.
  • the cyclic group may be a group obtained by removing a hydrogen atom from a monocyclic ring, or a group obtained by removing a hydrogen atom from a condensed ring.
  • the cyclic group contained in Z 1 in general formula (1) is preferably a group obtained by removing 2 to 4 hydrogen atoms from cyclohexane, benzene, imidazole, or indole.
  • the ring group is a 1,4-phenylene group, a 1,3-phenylene group, a 1,5 -phenylene group or 1,3,5-substituted phenyl group, preferably 1,4-phenylene group or 1,3,5-substituted phenyl group.
  • a linking group obtained by combining any one of these groups with a C 1-6 alkylene group is also preferred.
  • Z 1 in the general formula (1) preferably has an oxygen atom at the linking portion with Rf
  • Z 1 in general formula (1) is preferably a linking group represented by general formula (2) below.
  • Z2 is a linking group other than a divalent, trivalent, or tetravalent alkylene group.
  • Z 2 is not particularly limited as long as it is a divalent to tetravalent group other than an alkylene group.
  • the aryl group and the heteroaryl group the groups mentioned above can be used. However, groups consisting only of
  • Z 2 in general formula (2) can be the same as those listed for Z 1 .
  • Rh is a hydrogen atom or a C 1-6 alkyl group.
  • Rh is preferably a C 1-3 alkyl group, more preferably a methyl group or an ethyl group.
  • Z 1 is a group represented by general formula (2)
  • Rf is represented by general formula (f-1) or (f-2).
  • a group that is a group can be mentioned.
  • the amino acid residue whose side chain is the group (-Z 1 -(Rf)n3) represented by the general formula (1) is directly or indirectly attached to the side chain of the natural amino acid.
  • Peptides that are amino acid residues with 1-3 Rf groups linked to are preferred.
  • the fluorine-containing peptide according to the present invention includes one or two hydrogen atoms of the side chain amino group of an arginine residue, an asparagine residue, a glutamine residue, or a lysine residue, and -Rf or —Z 3 —(Rf)n4 (Z 3 is a linking group other than a 2-, 3-, or 4-valent alkylene group, excluding groups whose linking portion to Rf is an alkylene group.
  • Z 3 is not particularly limited as long as it is a divalent to tetravalent group other than an alkylene group.
  • the groups mentioned above can be used. However, groups consisting only of alkylene groups and groups in which the portion connecting to Rf is an alkylene group are excluded.
  • Z3 the same linking group as Z1 and Z2 can be used.
  • the fluorine-containing peptides according to the present invention include peptides containing at least one amino acid residue whose side chain is -Z 1 -(Rf)n3. At least one side chain among amino acid residues constituting the peptide may be -Z 1 -(Rf)n3, and side chains of all amino acid residues may be -Z 1 -(Rf)n3.
  • the plurality of -Z 1 -(Rf)n3s may be the same as each other.
  • the amino acid residue having -Z 1 -(Rf)n3 as a side chain may be at the N-terminus, the C-terminus, or other than at the terminal.
  • the fluorine-containing peptide according to the present invention may be a peptide consisting of 2 or more amino acids, and a peptide consisting of 3 or more amino acids is also preferable.
  • the fluorine-containing peptide according to the present invention is preferably a peptide consisting of 2-40 amino acids, more preferably a peptide consisting of 3-20 amino acids.
  • the amino acid sequence of the fluorine-containing peptide according to the present invention is not particularly limited.
  • peptides with a higher proportion of hydrophobic (non-polar) side chains than polar side chains have better cell membrane permeability. Therefore, the fluorine-containing peptide according to the present invention can also have an amino acid sequence containing relatively many amino acid residues having hydrophobic side chains.
  • the fluorine-containing peptide according to the present invention when used by linking it to a hydrophobic substance, the fluorine-containing peptide has an amino acid sequence containing relatively many amino acid residues having polar side chains, so that the entire molecule Hydrophobicity and hydrophilicity can be balanced, and the cell membrane permeability can be further improved.
  • the N-terminus of the fluorine-containing peptide according to the present invention may be protected with an amino-protecting group.
  • the N-terminal protective group is not particularly limited as long as it is an amino group protective group, and for example, an amino group protective group used in peptide synthesis can be used.
  • protective groups for amino groups include tert-butoxycarbonyl (Boc) group, 9-fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc) group, benzyloxycarbonyl (Cbz) group, allyloxycarbonyl (Alloc) group, 2,2, Carbamate-based protecting groups such as 2-trichloroethoxycarbonyl (Troc) group can be mentioned.
  • a tert-butoxycarbonyl (Boc) group or a 9-fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc) group is preferred because it can be deprotected under mild conditions.
  • the C-terminus of the fluorine-containing peptide according to the present invention may be protected with a protecting group.
  • the C-terminal-protecting group is not particularly limited as long as it is a carboxy-protecting group, and for example, a carboxy-protecting group used in peptide synthesis can be used.
  • Specific examples of the carboxy-protecting group include a group represented by the following general formula (p-1), a 2-(9,10-dioxo)anthrylmethyl group, a benzyloxymethyl group, and a phenacyl group. is the protecting group of choice.
  • R 3 is an optionally substituted C 6-14 aryl group
  • R 4 and R 5 are each independently a hydrogen atom or an optionally substituted C 6-14 aryl group.
  • a black circle means a bond.
  • Carboxy-protecting groups include benzyl, diphenylmethyl, triphenylmethyl, 4-nitrobenzyl, 4-methoxybenzyl, 2,4-dimethoxybenzyl, 3,4-dimethoxybenzyl, 4- methylbenzyl group, 2,6-dimethylbenzyl group, 3-chlorobenzyl group, 9-anthrylmethyl group, piperonyl group, 2-(9,10-dioxo)anthrylmethyl group, benzyloxymethyl group, phenacyl group, etc. is mentioned.
  • the C-terminal carboxy-protecting group is preferably a benzyl group or a triphenylmethyl group, more preferably a benzyl group, in that deprotection can be performed under mild conditions.
  • the amino acid residue whose side chain is not -Z 1 -(Rf)n3 is not particularly limited, and may be an amino acid residue of an ⁇ -amino acid, It may be a ⁇ -amino acid residue, a ⁇ -amino acid residue, or a ⁇ -amino acid residue. Moreover, it may be an amino acid residue of an L-amino acid or an amino acid residue of a D-amino acid.
  • Amino acid residues whose side chain is not -Z 1 -(Rf)n3 contained in the fluorine-containing peptide according to the present invention include protein-constituting amino acids, D-forms thereof, and modified side chains thereof. It is preferably an amino acid residue of a modified amino acid.
  • Amino acids that make up proteins include glycine, alanine, valine, leucine, isoleucine, serine, threonine, phenylalanine, tyrosine, tryptophan, asparagine, glutamine, proline, aspartic acid, glutamic acid, lysine, arginine, histidine, and the like.
  • modified amino acids in which protein-constituting amino acids are modified include, for example, hydrogen atoms of amino groups in the side chains of lysine, arginine, and histidine, which are the above-mentioned amino group-protecting groups and Pbf (N- ⁇ - Amino acids substituted with (2,2,4,6,7-Pentamethyldihydrobenzofuran-5-sulfonyl) groups; the hydrogen atoms of the carboxy groups in the side chains of aspartic acid and glutamic acid are the carboxy group-protecting groups listed above. or tert-butyl group substituted with an alkyl group; and amino acids substituted with a benzyl group for the hydrogen atom of the cysteine thiol group.
  • fluorine-containing peptides according to the present invention include tripeptides represented by the following general formula (11).
  • Rf and n3 are the same as Rf and n3 in general formula (1) above
  • Z2 and Rh are the same as Z2 and Rh in general formula (2) above. .
  • R 11 and R 12 are each independently a C 1-6 alkyl group or a benzyl group.
  • R 11 and R 12 are each independently preferably a methyl group or a benzyl group, and R 11 is preferably a methyl group and R 12 is a benzyl group. Especially preferred.
  • X is a 9-fluorenylmethyloxycarbonyl group (Fmoc) or a tert-butoxycarbonyl group (Boc).
  • Z is a C 1-6 alkoxy group, hydroxyl group or amino group. When Z is a C 1-6 alkoxy group, Z is particularly preferably a methoxy group.
  • the fluorine-containing peptide according to the present invention can be produced by a general peptide synthesis method, except that at least an amino acid having -Z 1 -(Rf)n3 as a side chain is used as a starting amino acid.
  • it can be carried out by a peptide solid-phase synthesis method.
  • a fluorine-containing peptide can be easily synthesized using an automatic peptide synthesizer using an amino acid having -Z 1 -(Rf)n3 as a side chain.
  • an amino acid having a side chain of -Z 1 -(Rf)n3 is preferred.
  • a peptide can be produced by sequentially condensing an amino acid whose C-terminus is bound to a solid phase with an amino acid whose amino group is protected, and releasing the peptide from the solid phase. It is preferable to use an amino acid raw material whose amino group is protected with a Boc group or an Fmoc group.
  • the side chain functional group of the amino acid starting material is preferably protected with a protecting group.
  • Protective groups for side chain functional groups include Boc group, triphenylmethyl group, benzyl group, 2,2,5,7,8-pentamethylchroman-6-sulfonyl (Pmc) group and the like.
  • Condensing agents that form peptide bonds include, for example, N,N-dicyclohexylcarbodiimide (DCC), 1-ethyl-3-(3′-dimethylaminopropyl)carbodiimide (WSC), benzotriazol-1-yloxy-trisdimethyl.
  • DCC N,N-dicyclohexylcarbodiimide
  • WSC 1-ethyl-3-(3′-dimethylaminopropyl)carbodiimide
  • benzotriazol-1-yloxy-trisdimethyl benzotriazol-1-yloxy-trisdimethyl.
  • BOP aminophosphonium hexafluorophosphate
  • pyBOP benzotriazol-1-yloxytrispyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate
  • HBTU 2-(1H-benzotriazol-1-yl)-1,1,3, 3-tetramethyluronium hexafluorophosphate
  • 2-(1H-benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium tetrafluoroborate 1-cyano-2- ethoxy-2-oxoethylideneaminooxy)dimethylaminomorpholinocarbenium hexafluorophosphate (COMU);
  • N-hydroxybenzotriazole (HOBt) ethyl (hydroxyimino)cyanoacetate (oxyma) and the condensing agent can be mixed in a preferable ratio and used.
  • a method of activating the carboxy terminus may be used to form a peptide bond, and examples of activating agents include N-hydroxysuccinimide, p-nitrophenyl ester, pentafluorophenyl ester, and the like.
  • Bases used for forming peptide bonds include, for example, triethylamine and diisopropylethylamine (DIPEA).
  • Solvents used in the peptide bond-forming reaction include, for example, chloroform, dichloromethane (DCM), dichloroethane (DCE), acetonitrile (MeCN), N,N-dimethylformamide (DMF), dimethylsulfoxide (DMSO) and the like.
  • the Boc group and Fmoc group which are protective groups for the amino-terminal amino group of peptides or amino acids, can be removed with trifluoroacetic acid (TFA) or piperidine, respectively.
  • TFA trifluoroacetic acid
  • Protective groups for side chain functional groups of amino acid residues of peptides can be removed by, for example, TFA, hydrogen fluoride (HF), trifluoromethanesulfonic acid, and the like.
  • TFA in the solid-phase peptide synthesis method, can be used as a method for removing peptides or peptides having protective groups attached to side chain functional groups of amino acid residues from the peptide solid-phase synthetic resin. Detachment of the peptide from the solid-phase peptide resin and detachment of the protective group of the side chain functional group of the amino acid residue can be carried out simultaneously in the same reaction system. Alternatively, each can be performed independently.
  • Peptide solid-phase synthetic resins for solid-phase peptide synthesis include, for example, 4-hydroxymethyl-3-methoxyphenoxybutyric acid-benzhydrylamine-polystyrene resin, p-benzyloxybenzyl alcohol-polystyrene resin, oxime resin, and the like, which are commercially available. can be used.
  • the target peptide or intermediate thereof is isolated and purified by various methods such as ion chromatography, gel filtration chromatography, reverse phase chromatography, normal phase chromatography, recrystallization, extraction, and fractional crystallization. be able to. Also, the peptides thus obtained can be converted into respective salts by conventional methods.
  • the protective group for the amino group or carboxyl group of the produced fluorine-containing peptide can be deprotected as necessary. Deprotection can be carried out by a conventional method depending on the type of protecting group.
  • the fluorine-containing peptide according to the present invention Since the fluoroalkyl group, —SF5, —SF 4 —CR 101 R 102 —CR 103 R 104 Cl contains many fluorine atoms, the fluorine-containing peptide according to the present invention has excellent cell membrane permeability. In addition, it is difficult to be degraded by peptidases because its structure is significantly different from that of natural peptides. Utilizing these properties, the fluorine-containing peptide according to the present invention is expected to be used as a physiologically active substance in the medical field. For example, the fluorine-containing peptide according to the present invention can be expected to be used as a DDS carrier that delivers medicinal ingredients to target cells.
  • the target cell of the functional ingredient is obtained.
  • the functional component may be a peptide, protein, or low-molecular-weight compound.
  • -Z 1 -(Rf)n3 for some of the side chains of the amino acid residues constituting the functional peptide exhibiting physiological activity to the extent that the function of the functional peptide is not impaired.
  • the functional peptide can improve cell membrane permeability and intracellular retention time.
  • Non-natural amino acids as described in International Publication No. 2021/002407 require stereoselective reaction or optical resolution, and it is very troublesome to synthesize various fluorine-containing amino acid derivatives. .
  • synthesis of peptides as described in WO2021/002408 derived from such non-natural amino acids is also very laborious.
  • the peptides of the present invention can be derived from natural amino acids, and sterically defined amino acids can be synthesized without optical resolution.
  • it is possible to synthesize a fluorine-containing unit by separately preparing it and reacting it with a natural amino acid, and various fluorine-containing amino acids can be synthesized in the same production process, which is advantageous in terms of cost.
  • the NMR apparatus used for the analysis of the examples and comparative examples was JNM-ECZ400S (400 MHz) manufactured by JEOL Ltd. tetramethylsilane was 0 PPM in 1 H NMR, and C 6 F 6 was -162 PPM in 19 F NMR. bottom.
  • Tris(dibenzylideneacetone)dipalladium (0) (10 mol%) and phosphine (20 mol%) were added to a solution of compound (2a) (173 mg, 0.2 mmol) in THF (2 mL) at 0°C and stirred, After adding phenylsilane (2 equivalents), the temperature was raised to room temperature and the mixture was stirred for 2 hours. The reaction mixture was then quenched with HCl (1N) (10 mL) and extracted twice with dichloromethane.
  • compound (9) was prepared using Dalton Trans. , 2012, vol. 41, p. 8368 and NewJ. Chem. , 2017, vol. 41, p. 7729, Electronic Supplementary Information, and synthesized according to the above reaction scheme.
  • Fmoc- A crude product of Asp(tris-t-C 4 F 9 )-OAll (compound (10a)) was obtained.
  • Fmoc-Asp(C 12 H 25 ) was prepared in the same manner as in Production Example 1 using 4-dodecylaniline (compound (11)) (78 mg, 0.3 mmol) instead of 4-(perfluorooctyl)aniline.
  • a crude product of -OAll (compound (12a)) was obtained.
  • Fmoc-Asp was prepared in the same manner as in Production Example 1 using 4-(perfluorohexyl)aniline (Compound (15)) (411 mg, 1.0 mmol) instead of 4-(perfluorooctyl)aniline.
  • a crude product of (C 6 F 13 )-OAll (compound (16a)) was obtained.
  • Fmoc-Asp was prepared in the same manner as in Production Example 1 using 4-(perfluorodecyl)aniline (Compound (15)) (611 mg, 1.0 mmol) instead of 4-(perfluorooctyl)aniline.
  • Compound (15) 611 mg, 1.0 mmol
  • 4-(perfluorooctyl)aniline 611 mg, 1.0 mmol
  • a crude product of (C 10 F 21 )-OAll (compound (21)) was obtained.
  • Rink-amide resin 39 mg, 0.025 ⁇ mol
  • DMF 2 mL
  • a 20% piperidine/DMF solution (2 mL) was then added to the tube, stirred for 3 minutes, and then washed with DMF (2 mL) three times.
  • the Fmoc group was deprotected by adding 20% piperidine/DMF solution (2 mL) again and stirring for 12 minutes.
  • Fmoc-Asp(C 8 F 17 )-OH (84 mg, 0.10 mmol, 4.0 equivalents) synthesized in Preparation Example 1 and Fmoc-Ala-OH (31 mg, 0.10 mmol, 4.0 equivalents) were treated in the same manner. equivalent).
  • Alexa Fluor registered trademark 647 manufactured by ThermoFisher Scientific was bound to the N-terminus of the synthesized tripeptide (H-Ala-Asp(C 8 F 17 )-Phe-NH 2 ) having a heptadecafluorooctyl group.
  • Alexa Fluor 647-NHS ester (0.2 mg) dissolved in dry DMSO (20 ⁇ L), H-Ala-Asp(C 8 F 17 )- dissolved in dry DMSO (200 ⁇ L) in a 1.5 mL black tube.
  • Phe-NH 2 (4.0 eq) and DIPEA (3.0 eq) dissolved in dry DMSO (10 ⁇ L) were added.
  • Conjugate 1 was obtained as a blue solid (33% yield calculated by fluorometer). Fluorescence was measured using a Nano Drop (registered trademark) spectrophotometer ND-1000 at an emission wavelength of 650 nm.
  • H-Ala-Asp(bis-C 4 F 9 )-Phe-NH 2 was bound to Alexa Fluor 647 in the same manner as in Example 1 to obtain H-Ala-Asp(bis-C 4 F 9 ).
  • the fluorescent conjugate 2 of -Phe-NH 2 was obtained as a blue solid (32% yield calculated by fluorometer based on dye).
  • Example 2 the same method as in Example 1 was performed using Fmoc-Asp(C 6 F 13 )-OH synthesized in Production Example 7 instead of Fmoc-Asp(C 8 F 17 )-OH as the amino acid to be condensed. to give H-Ala-Asp(C 6 F 13 )-Phe-NH 2 (2.1 mg, 2.8 ⁇ mol, 11% yield).
  • a tripeptide was synthesized in the same manner as in Example 1 using Fmoc-Asp(C 10 F 21 )-OH instead of Fmoc-Asp(C 8 F 17 )-OH as the amino acid to be condensed.
  • H-Ala-Asp(C 10 F 21 )-Phe-NH 2 (1.8 mg, 1.9 ⁇ mol, 8% yield).
  • Fmoc-Asp(C 10 F 21 )-OH was obtained by subjecting the compound (22a) synthesized in Production Example 7 to a deallylation reaction in the same manner as in Production Example 1. The resulting product was used for tripeptide synthesis without purification.
  • Fmoc-Asp(SF 4 CF 2 CF 2 Cl)-OH synthesized in Production Example 7 was used instead of Fmoc-Asp(C 8 F 17 )-OH, and the same procedure as in Example 1 was performed. to obtain H-Ala-Asp(SF 4 CF 2 CF 2 Cl)-Phe-NH 2 (1.8 mg, 2.7 ⁇ mol, yield 11%).
  • H-Ala-Asp(C 4 F 9 )-Phe-NH 2 was bound to Alexa Fluor 647 in the same manner as in Example 1 to form H-Ala-Asp(C 4 F 9 )-Phe-NH.
  • the fluorescent conjugate 6 of 2 was obtained as a blue solid (54% yield calculated on the fluorometer based on dye).
  • H-Ala-Asp(C 6 F 13 )-Phe-NH 2 was bound to Alexa Fluor 647 in the same manner as in Example 1 to form H-Ala-Asp(C 6 F 13 )-Phe-NH.
  • the fluorescent conjugate 7 of 2 was obtained as a blue solid (50% yield calculated on the fluorometer based on dye).
  • H-Ala-Asp(CH 2 CH 2 C 6 F 13 )-Phe-NH 2 was combined with Alexa Fluor 647 in the same manner as in Example 1 to form H-Ala-Asp(CH 2 CH 2 C
  • the fluorescent conjugate 12 of 6 F 13 )-Phe-NH 2 was obtained as a blue solid (96% yield calculated by fluorometer based on dye).
  • H-Ala-Asp(C 10 F 21 )-Phe-NH 2 was combined with Alexa Fluor 647 in the same manner as in Example 1 to form H-Ala-Asp(C 10 F 21 )-Phe.
  • the fluorescent conjugate 8 of -NH2 was obtained as a blue solid (72% yield calculated by fluorometer based on dye).
  • H-Ala-Asp(SF 4 CF 2 CF 2 Cl)-Phe-NH 2 was bound to Alexa Fluor 647 in the same manner as in Example 1 to obtain H-Ala-Asp(SF 4 CF 2
  • the fluorescent conjugate 9 of CF 2 Cl)-Phe-NH 2 was obtained as a blue solid (42% yield calculated by fluorometer based on dye).
  • H-Ala-Asp(tris-t-C 4 F 9 )-Phe-NH 2 was bound to Alexa Fluor 647 in the same manner as in Example 1, and H-Ala-Asp(tris-t
  • the fluorescent conjugate 10 of -C 4 F 9 )-Phe-NH 2 was obtained as a blue solid (89% yield calculated by fluorometer based on dye).
  • Example 2 The same procedure as in Example 1 was performed using Fmoc-Asp(CH 2 CH 2 C 8 F 17 )-OH synthesized in Production Example 8 instead of Fmoc-Asp(C 8 F 17 )-OH as the amino acid to be condensed.
  • the tripeptide was synthesized by the method to give H-Ala-Asp(CH 2 CH 2 C 8 F 17 )-Phe-NH 2 (5 mg, 6.27 ⁇ mol, 25% yield).
  • H-Ala-Asp(CH 2 CH 2 C 8 F 17 )-Phe-NH 2 was combined with Alexa Fluor 647 in the same manner as in Example 1 to form H-Ala-Asp(CH 2 CH 2 C
  • the fluorescent conjugate 11 of 8 F 17 )-Phe-NH 2 was obtained as a blue solid (80% yield calculated by fluorometer based on dye).
  • a tetrapeptide is synthesized in the same manner as in Example 1 using Fmoc-Asp(C 8 F 17 )-OH as the amino acid to be condensed, and H-Cys-Ala-Asp(C 8 F 17 )- Phe-NH 2 (16 mg, 17 ⁇ mol, 22% yield) was obtained.
  • Example 2 the same method as in Example 1 was performed using Fmoc-Asp(C 6 F 13 )-OH synthesized in Production Example 7 instead of Fmoc-Asp(C 8 F 17 )-OH as the amino acid to be condensed. to synthesize the tetrapeptide to give H-Cys-Ala-Asp(C 6 F 13 )-Phe-NH 2 (12 mg, 15 ⁇ mol, 57% yield).
  • H-Ala-Asp(C 12 H 25 )-Phe-NH 2 was bound to Alexa Fluor 647 in the same manner as in Example 1 to form H-Ala-Asp(C 12 H 25 )-Phe-NH.
  • the fluorescent conjugate 3 of 2 was obtained as a blue solid (23% yield calculated by fluorometer based on dye).
  • the combined organic phase was concentrated under reduced pressure, diluted with ethyl acetate, and washed with HCl (1N), saturated aqueous sodium bicarbonate, and saturated brine.
  • the washed organic phase was dried over sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure to obtain a crude product of Boc-RFAA(C8)-Phe-OMe.
  • the steric structure of RFAA (C8) contained was determined to be the (S) form by X-ray structural analysis.
  • Rigaku VariMax Dual Saturn was used for X-ray structure analysis.
  • the washed organic phase was dried over sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure to obtain crude Boc-Ala-[(R)-RFAA(C8)]-Phe-OMe.
  • the crude product was dissolved in DCM, then reprecipitated with hexane and filtered to give pure Boc-Ala-[(R)-RFAA(C8)]-Phe-OMe (0.20 mmol, yield 85.0 mmol). 4%) was obtained.
  • Boc-Ala-[(S)-RFAA(C8)]-Phe-OMe (diastereomer B) (45.7 ⁇ mol) was deprotected in the same manner to obtain H-Ala-[(S)-RFAA. (C8)]-Phe-OMe (diastereomer B) (21.1 ⁇ mol, 46.2% yield) was obtained.
  • the fluorescent substance Alexa Fluor647 was bound to the N-terminal of the synthesized deprotected tripeptide (H-Ala-[(R)-RFAA(C8)]-Phe-OMe).
  • Alexa Fluor 647-NHS ester (1.75 mg) dissolved in dry DMSO (175 ⁇ L), H-Ala-RFAA(C8)-Phe- dissolved in dry DMSO (50 ⁇ L) OMe (3.0 eq), DIPEA (3.0 eq) dissolved in dry DMSO (71 ⁇ L), and 124 ⁇ L dry DMSO were added.
  • the mixture was kept stirring overnight at room temperature.
  • H-Ala-[(S)-RFAA(C8)]-Phe-OMe (diastereomer B) (1.241 ⁇ mol) was similarly coupled with Alexa Fluor TM 647 to form H-Ala-[ The fluorescent conjugate 5 of (S)-RFAA(C8)]-Phe-OMe (diastereomer B) was obtained as a blue solid (54.3% yield calculated by fluorometer based on dye).
  • Peptide fluorescent conjugate 1 Alexa-Ala-Asp(C 8 F 17 )-Phe-NH 2 synthesized in Example 1
  • Peptide fluorescent conjugate 4 Alexa-Ala-[(R) -RFAA(C8)]-Phe-OMe
  • peptide fluorescent conjugate 5 Alexa-Ala-[(S)-RFAA(C8)]-Phe-OMe
  • the diethylamide form of the fluorescent substance Alexa Fluor647 fluorochrome 1
  • the DMSO solutions of synthesized peptide fluorescent conjugates 1, 4, 5, and fluorescent dye 1 were diluted with DMEM low-glucose culture medium to a concentration of 1.5 ⁇ M, and the DMSO concentration contained was 0.15%.
  • a sample solution for the cell membrane permeability test was prepared by adjusting the
  • HeLa cells were seeded in 96-well cell culture plates (0.5 ⁇ 10 5 cells/well) 24 hours before peptide treatment.
  • the medium of HeLa cells precultured at 37°C for 24 hours was replaced with sample solutions of peptide fluorescent conjugates 1, 4, 5 and fluorescent dye 1, and the cell membrane permeability was evaluated after 1 hour of incubation at 37°C.
  • the cell surface was washed three times with PBS (phosphate saline), and the cells were scraped off with Trypsin-EDTA 0.05% (manufactured by Gibco) and collected.
  • PBS phosphate saline
  • FIG. 1 shows the analysis results by flow cytometry of the cells cultured in the sample solution at 37° C. for 1 hour. The vertical axis is the number of cells (count), and the horizontal axis is the fluorescence intensity of each cell. Also, FIG. 2 shows the results of comparing the mean fluorescence intensity (MFI) of each sample.
  • the fluorescent peptide conjugate is indicated by PFCJ
  • the fluorescent dye is indicated by FD.
  • the fluorescence intensity of Alexa Fluor 647 in cells after incubation at 37°C for 1 hour showed Both were higher than cells treated with fluorescent dye 1.
  • the average fluorescence intensity of Alexa Fluor 647 in cells was significantly higher than that of cells treated with fluorochrome 1, compared to the peptide-fluorescent conjugates with fluoroalkyl groups attached directly to the ⁇ -carbon of the peptide backbone. 4 and the peptide fluorescent conjugate 5 treated with 4 and peptide fluorescent conjugate 5, whereas the peptide fluorescent conjugate in which a fluoroalkyl group was introduced to the carboxyl group of the side chain of aspartic acid via a peptide bond and a phenylene group.
  • Peptide fluorescent conjugate 1 Alexa-Ala-Asp(C 8 F 17 )-Phe-NH 2
  • Peptide fluorescent conjugate 2 Alexa-Ala-Asp(bis- C 4 F 9 )-Phe-NH 2
  • the diethylamide of the fluorescent substance Alexa Fluor 647 fluorescent dye 1
  • the commercially available cell membrane-permeable peptide Cys-TAT 47-57
  • a fluorescent substance, Alexa Fluor 647 C2 Maleimide was added to the terminal Cys (TAT-Alexa), and the uptake efficiency into cells was examined.
  • FIG. 3 shows the analysis results of cells cultured at 37° C. for 1 hour in the sample solution by flow cytometry.
  • FIG. 4 shows the results of comparing the mean fluorescence intensity (MFI) of each sample.
  • MFI mean fluorescence intensity
  • the fluorescence intensity of 647 was higher in cells treated with peptide fluorescent conjugates 1 and 2, in which a fluoroalkyl group was linked to the side chain via a linking group, than in cells treated with fluorescent dye 1 or TAT-Alexa. rice field.
  • the average fluorescence intensity of Alexa Fluor 647 in cells treated with TAT-Alexa was about twice that in cells treated with fluorescent dye 1. It was found that cells treated with peptide-fluorescent conjugates 1 and 2 were tens to hundreds-fold higher.
  • Peptide fluorescent conjugate 1 (Alexa-Ala-Asp(C 8 F 17 )-Phe-NH 2 ) containing a fluorine atom in the side chain synthesized in Example 1, Synthesized in Comparative Example 1 containing a fluorine atom in the side chain Efficiency of uptake into cells was examined for peptide fluorescent conjugate 3 (Alexa-Ala-Asp(C 12 H 25 )-Phe-NH 2 ) without peptide and fluorescent dye 1.
  • FBS fetal bovine serum
  • FIG. 5 shows the results of comparing the mean fluorescence intensity (MFI) of each sample with respect to the analysis results by flow cytometry of the cells cultured in the sample solution at 37° C. for 1 hour.
  • MFI mean fluorescence intensity
  • FIG. 6 shows the results of comparing the mean fluorescence intensity (MFI) of each sample with respect to the analysis results by flow cytometry of cells cultured at 37° C. for 1 hour in a sample solution containing FBS.
  • MFI mean fluorescence intensity
  • the mean fluorescence intensity (MFI) of Alexa Fluor 647 in cells after incubation for 1 hour at 37° C. was as shown in FIG. It was higher in cells treated with peptide fluorescent conjugate 3, which does not contain a fluorine atom in the side chain, than in cells treated with peptide fluorescent conjugate 1.
  • MFI mean fluorescence intensity
  • FIG. 7 shows the results of flow cytometry analysis of cells cultured in the sample solution at 37° C. for 1 hour.
  • FIG. 8 shows the result of comparing the relative fluorescence intensity (RFI) of each sample with the fluorescent dye 1 as a reference.
  • the peptide fluorescent conjugate is indicated by PFCJ
  • the fluorescent dye is indicated by FD.
  • FIG. 9 shows the analysis results of the average particle size (average size of number-based distribution) of each peptide fluorescent conjugate.
  • the peptide fluorescent conjugate is indicated by PFCJ, and the fluorescent dye is indicated by FD.
  • FIG. 10 shows the results of flow cytometry analysis of cells cultured in the sample solution at 37° C. for 1 hour.
  • FIG. 11 shows the results of comparing the mean fluorescence intensity (MFI) of each sample.
  • MFI mean fluorescence intensity
  • FIG. 12 shows the results of comparing the mean fluorescence intensity (MFI) of each sample.
  • MFI mean fluorescence intensity
  • Alexa Fluor of cells after incubation at 37°C for 1 hour.
  • the fluorescence intensity of 647 was higher in cells treated with peptide fluorescent conjugates 1 or 12, which had a fluoroalkyl group attached to the side chain via a linking group, than in cells treated with fluorochrome 1.
  • the average fluorescence intensity of Alexa Fluor 647 in cells treated with peptide fluorescent conjugate 12 was about 14 times higher than in cells treated with fluorochrome 1 . From these results, it was found that peptides with fluoroalkyl groups linked to side chains via linking groups have higher intracellular uptake efficiency and superior cell membrane permeability compared to fluorescent dyes.
  • the present invention provides peptides having amino acid residues containing fluorine atoms in side chains. Since the fluorine-containing peptide according to the present invention has excellent cell membrane permeability, it is expected to be used in the medical field as a physiologically active substance such as a carrier for introducing a medicinal ingredient into target cells.

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Abstract

本発明は、フルオロアルキル基を側鎖に有するペプチドを提供する。本発明は、２個以上のアミノ酸がペプチド結合したペプチドであって、該ペプチドを構成するアミノ酸残基の少なくとも１個の側鎖が、下記一般式（１）［式中、Ｚ１は、２、３、又は４価のアルキレン基以外の連結基であり；Ｒｆは少なくとも２個のフッ素原子で置換されたＣ１－３０アルキル基、－ＳＦ５、又は－ＳＦ４－ＣＲ１０１Ｒ１０２－ＣＲ１０３Ｒ１０４Ｃｌ（Ｒ１０１、Ｒ１０２、Ｒ１０３、及びＲ１０４は、それぞれ独立して水素原子、フッ素原子、又は塩素原子であるが、Ｒ１０１、Ｒ１０２、Ｒ１０３、及びＲ１０４のうちの２個以上はフッ素原子である）であり；ｎ３は１、２、又は３であり、黒丸は結合手を意味する。］である、ペプチドである。

Description

ペプチド
　本発明は、フッ素原子が側鎖に導入されたアミノ酸残基を含むペプチドに関する。
　本願は、２０２１年９月２２日に日本に出願された特願２０２１－１５４６２５号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
　抗体医薬、ペプチド医薬、核酸医薬等は、標的分子に対する特異性が高く、副作用が少ないという優れた点がある。しかし、いずれも細胞内に存在する標的分子に到達させることが困難であるという問題がある。該問題を解決するために、様々な手法が検討されている。なかでも、細胞膜透過性ペプチド（Cell Penetrating Peptides:ＣＰＰ）が有望視されている。ＣＰＰとしては、ＨＩＶウイルスのＴＡＴタンパク質に由来するペプチド（特許文献１）や、ポリＡｒｇ配列のペプチド（特許文献２）が代表的なものとして挙げられる。これを薬効ペプチドと結合させて薬効ペプチドを細胞内に輸送できる（たとえば、特許文献３、非特許文献１）。
　一方、含フッ素アミノ酸は特異な生理活性を示すことが報告され、注目を集めている。例えば、３，３，３－トリフルオロアラニン及びその誘導体は、ピリドキサール酵素の自殺型阻害剤(suicide inhibitor)として作用することが報告されている（非特許文献２）。また、グラム陰性菌Salmonella typhimurium及びグラム陽性菌Bacillus stearothermophilusのアラニンラセマーゼが、３，３，３－トリフルオロアラニンで不活性化されることが報告されている（非特許文献３）。含フッ素アミノ酸及びそれを含有するペプチドは、生理活性物質として、医薬分野での利用が期待される。
　ポリフルオロ構造を有する化合物は、生体内で安定かつ毒性が低く、細胞内への取り込みとエンドソームからの脱出に優れていることが知られている（非特許文献４）。この性質を利用して、構成アミノ酸として側鎖のアミノ基をペルフルオロアシル化したリシンを用いたペプチドデンドリマーを遺伝子のデリバリーに用いることができることが報告されている（非特許文献５）。しかし、デンドリマーであるため、ＣＰＰのように薬効活性ペプチドや核酸や抗体医薬となるタンパク質と結合させたハイブリッドを形成することができない。
米国特許第６，３１６，００３号明細書 米国特許第６，３０６，９９３号明細書 国際公開第２００８／０８９４９１号
Miyaji et. al., Drug Metabolism and Disposition, 2011, vol.39, p.1946-1953. Sakai et al., Tetrahedron, 1996, vol.52(1), p.233-244. Faraci and Walsh, Biochemistry, 1989, vol.28(2), p.431-437. Zhang et al., MRS Communications, 2018, vol.8, p.303-313. Cai et al., ACS Applied Materials and Interfaces, 2016, vol.8, p.5821-5832.
　特許文献１等に記載されているＣＰＰは、細胞内への輸送効率や、生体内でのペプチダーゼによる分解など様々な問題がある。
　本発明は、フッ素原子が側鎖に導入されたアミノ酸残基を含むペプチド及びその製造方法を提供することを目的とする。
　本発明者らは、フッ素原子が側鎖に導入されたアミノ酸残基を含むペプチドを製造したところ、該ペプチドが細胞膜透過性に優れていることを見出し、本発明を完成させた。
　すなわち、本発明は以下の通りである。
［１］　２個以上のアミノ酸がペプチド結合したペプチドであって、
　該ペプチドを構成するアミノ酸残基の少なくとも１個の側鎖が、下記一般式（１）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
［式中、Ｚ１は、２、３、又は４価のアルキレン基以外の連結基であり；Ｒｆは少なくとも２個のフッ素原子で置換されたＣ１－３０アルキル基（該Ｃ１－３０アルキル基は炭素原子が２以上の場合に、炭素原子間に１～５個のエーテル結合性の酸素原子を有していてもよい）、－ＳＦ５、又は－ＳＦ４－ＣＲ１０１Ｒ１０２－ＣＲ１０３Ｒ１０４Ｃｌ（Ｒ１０１、Ｒ１０２、Ｒ１０３、及びＲ１０４は、それぞれ独立して水素原子、フッ素原子、又は塩素原子であるが、Ｒ１０１、Ｒ１０２、Ｒ１０３、及びＲ１０４のうちの２個以上はフッ素原子である）であり；ｎ３は１、２、又は３であり、黒丸は結合手を意味する］
である、ペプチド。
［２］　前記Ｒｆが、下記一般式（ｆ－１）又は（ｆ－２）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
［式中、ＲｆＰは、少なくとも２個以上のフッ素原子を含む完全ハロゲン化Ｃ１－１０アルキル基（該Ｃ１－１０アルキル基は、炭素原子が２以上の場合に、炭素原子間にエーテル結合性の酸素原子を有していてもよい）を表し、ｎ１は、０～１０の整数であり、ｎ２は、０～９の整数であり、黒丸は結合手を意味する］
で表される基である、前記［１］のペプチド。
［３］　前記Ｚ１が、環基を有する連結基である、前記［１］又は［２］のペプチド。
［４］　前記環基が、１，４－フェニレン基又は１，３，５置換フェニル基を有する、前記［３］のペプチド。
［５］　前記Ｚ１が、環基を有していない連結基である、前記［１］又は［２］のペプチド。
［６］　前記Ｚ１が、アルキレン基、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨ－、－Ｎ（ＣＨ３）－、－Ｎ（Ｃ２Ｈ５）－、－Ｎ（Ｃ３Ｈ７）－、３価の窒素原子、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２－、シクロアルカンから２～４個の水素原子を除いた基、芳香環から２～４個の水素原子を除いた基、複素環から２～４個の水素原子を除いた基、又はこれらの組み合わせである（ただし、アルキレン基のみからなる基を除く）、前記［１］又は［２］のペプチド。
［７］　前記Ｚ１が、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｓ－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｓ（＝Ｏ）２－、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－Ｓ（＝Ｏ）２－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－Ｐｈ－（－Ｐｈ－は、１，４－フェニレン基、１，３－フェニレン基、１，５－フェニレン基、又は１，３，５置換フェニル基である）、又はこれらのいずれかの基とＣ１－６アルキレン基の組み合わせである、前記［１］又は［２］のペプチド。
［８］　前記Ｚ１が、下記一般式（２）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
［式中、Ｚ２は、２、３、又は４価のアルキレン基以外の連結基であり；Ｒｈは、水素原子又はＣ１－６アルキル基であり、黒丸は結合手を意味する］
で表される連結基である、前記［１］又は［２］のペプチド。
［９］　前記一般式（１）で表される基が側鎖であるアミノ酸残基が、天然アミノ酸の側鎖に直接又は間接的に１～３個の前記Ｒｆが連結されているアミノ酸残基である、前記［１］～［８］のいずれかのペプチド。
［１０］　Ｃ末端又はＮ末端が保護基で保護されていてもよい、前記［１］～［９］のいずれかのペプチド。
［１１］　下記一般式（１１）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
［式中、Ｚ１、Ｒｆ、及びｎ３は、前記と同じであり；Ｒｈは、水素原子又はＣ１－６アルキル基であり；Ｒ１１及びＲ１２は、それぞれ独立して、Ｃ１－６アルキル基又はベンジル基であり；Ｘは、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル基又はｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基であり；Ｚは、Ｃ１－６アルコキシ基、水酸基、又はアミノ基である］
で表されるトリペプチドである、前記［１］又は［２］のペプチド。
［１２］　細胞膜透過性である、前記［１］～［１１］のいずれかのペプチド。
　本発明に係るペプチドは、フッ素原子が側鎖に導入されているため、細胞膜透過性に優れている。このため、該ペプチドは、生理活性物質として、医薬分野での利用が期待される。
試験例１において、ペプチド蛍光コンジュゲート１（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－１）、ペプチド蛍光コンジュゲート４（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－[（Ｒ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）（ＰＦＣＪ－４）、ペプチド蛍光コンジュゲート５（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－[（Ｓ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）（ＰＦＣＪ－５）、又は蛍光色素１（蛍光物質Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒｏ ６４７のジエチルアミド体）（ＦＤ－１）を含むサンプル溶液中で、３７℃で１時間処理したＨｅＬａ細胞のフローサイトメトリーの結果を示した図である。 試験例１において、ペプチド蛍光コンジュゲート１（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－１）、ペプチド蛍光コンジュゲート４（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－[（Ｒ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）（ＰＦＣＪ－４）、ペプチド蛍光コンジュゲート５（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－[（Ｓ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）（ＰＦＣＪ－５）、又は蛍光色素１（ＦＤ－１）を含むサンプル溶液中で、３７℃で１時間処理したＨｅＬａ細胞の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を測定した結果を示した図である。 試験例２において、ペプチド蛍光コンジュゲート１（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－１）、ペプチド蛍光コンジュゲート２（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ｂｉｓ－Ｃ４Ｆ９）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－２）、蛍光色素１（蛍光物質Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒｏ ６４７のジエチルアミド体）（ＦＤ１）又は細胞膜透過性ペプチドＣｙｓ－ＴＡＴ（４７－５７）の蛍光コンジュゲート（ＴＡＴ－Ａｌｅｘａ）を含むサンプル溶液中で、３７℃で１時間処理したＨｅＬａ細胞のフローサイトメトリーの結果を示した図である。 試験例２において、ペプチド蛍光コンジュゲート１（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－１）、ペプチド蛍光コンジュゲート２（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ｂｉｓ－Ｃ４Ｆ９）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－２）、蛍光色素１（蛍光物質Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒｏ ６４７のジエチルアミド体）（ＦＤ－１）、又は細胞膜透過性ペプチドＣｙｓ－ＴＡＴ（４７－５７）の蛍光コンジュゲート（ＴＡＴ－Ａｌｅｘａ）を含むサンプル溶液中で、３７℃で１時間処理したＨｅＬａ細胞の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を測定した結果を示した図である。 試験例３において、ＦＢＳ非存在下で、ペプチド蛍光コンジュゲート１（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－１）、ペプチド蛍光コンジュゲート３（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ１２Ｈ２５）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－３）、又は蛍光色素１（ＦＤ－１）を含むサンプル溶液中で、３７℃で１時間処理したＨｅＬａ細胞の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を測定した結果を示した図である。 試験例３において、ＦＢＳ存在下で、ペプチド蛍光コンジュゲート１（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－１）、ペプチド蛍光コンジュゲート３（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ１２Ｈ２５）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－３）、又は蛍光色素１（ＦＤ－１）を含むサンプル溶液中で、３７℃で１時間処理したＨｅＬａ細胞の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を測定した結果を示した図である。 試験例４において、ペプチド蛍光コンジュゲート１（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－１）、ペプチド蛍光コンジュゲート２（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ｂｉｓ－Ｃ４Ｆ９）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－２）、ペプチド蛍光コンジュゲート３（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ１２Ｈ２５）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－３）、ペプチド蛍光コンジュゲート６（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ４Ｆ９）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－６）、ペプチド蛍光コンジュゲート７（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ６Ｆ１３）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－７）、ペプチド蛍光コンジュゲート９（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ＳＦ４ＣＦ２ＣＦ２Ｃｌ）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－９）、ペプチド蛍光コンジュゲート１０（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ｔｒｉｓ－ｔ－Ｃ４Ｆ９）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－１０）、又は蛍光色素１（ＦＤ－１）を含むサンプル溶液中で、３７℃で１時間処理したＨｅＬａ細胞のフローサイトメトリーの結果を示した図である。 試験例４において、ペプチド蛍光コンジュゲート１（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－１）、ペプチド蛍光コンジュゲート２（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ｂｉｓ－Ｃ４Ｆ９）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－２）、ペプチド蛍光コンジュゲート３（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ１２Ｈ２５）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－３）、ペプチド蛍光コンジュゲート６（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ４Ｆ９）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－６）、ペプチド蛍光コンジュゲート７（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ６Ｆ１３）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－７）、ペプチド蛍光コンジュゲート９（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ＳＦ４ＣＦ２ＣＦ２Ｃｌ）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－９）、ペプチド蛍光コンジュゲート１０（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ｔｒｉｓ－ｔ－Ｃ４Ｆ９）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－１０）、又は蛍光色素１（ＦＤ－１）を含むサンプル溶液中で、３７℃で１時間処理したＨｅＬａ細胞の蛍光色素１を基準とした各サンプルの相対蛍光強度（ＲＦＩ）を測定した結果を示した図である。 試験例５において、ペプチド蛍光コンジュゲート１（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－１）、ペプチド蛍光コンジュゲート２（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ｂｉｓ－Ｃ４Ｆ９）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－２）、ペプチド蛍光コンジュゲート３（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ１２Ｈ２５）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－３）、ペプチド蛍光コンジュゲート６（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ４Ｆ９）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－６）、ペプチド蛍光コンジュゲート７（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ６Ｆ１３）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－７）、ペプチド蛍光コンジュゲート９（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ＳＦ４ＣＦ２ＣＦ２Ｃｌ）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－９）、及びペプチド蛍光コンジュゲート１０（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ｔｒｉｓ－ｔ－Ｃ４Ｆ９）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－１０）の平均粒子径を測定した結果を示した図である。 試験例６において、ペプチド蛍光コンジュゲート１（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－１）、ペプチド蛍光コンジュゲート８（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ１０Ｆ２１）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－８）、ペプチド蛍光コンジュゲート１１（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－１１）、又は蛍光色素１（蛍光物質Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒｏ ６４７のジエチルアミド体）（ＦＤ－１）を含むサンプル溶液中で、３７℃で１時間処理したＨｅＬａ細胞のフローサイトメトリーの結果を示した図である。 試験例６において、ペプチド蛍光コンジュゲート１（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－１）、ペプチド蛍光コンジュゲート８（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ１０Ｆ２１）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－８）、ペプチド蛍光コンジュゲート１１（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－１１）、又は蛍光色素１（ＦＤ－１）を含むサンプル溶液中で、３７℃で１時間処理したＨｅＬａ細胞の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を測定した結果を示した図である。 試験例７において、ペプチド蛍光コンジュゲート１（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－１）、ペプチド蛍光コンジュゲート１２（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃ６Ｆ１３）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）（ＰＦＣＪ－１２）、又は蛍光色素１（ＦＤ－１）を含むサンプル溶液中で、３７℃で１時間処理したＨｅＬａ細胞の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を測定した結果を示した図である。
　本発明及び本願明細書において、「Ｃｐ１－ｐ２」（ｐ１及びｐ２は、ｐ１＜ｐ２を満たす正の整数である）は、炭素数がｐ１以上ｐ２以下の基であることを意味する。
　本発明及び本願明細書において、「Ｃ１－３０アルキル基」は、炭素数１～３０のアルキル基であり、直鎖であっても分岐鎖であってもよい。「Ｃ２－３０アルキル基」は、炭素数２～３０のアルキル基であり、直鎖であっても分岐鎖であってもよい。Ｃ１－３０アルキル基の例としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ－ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、エイコシル基、ヘンエイコシル基、ドコシル基、トリコシル基、テトラコシル基、ペンタコシル基、ヘキサコシル基、ヘプタコシル基、オクタコシル基、ノナコシル基、トリアコンチル基等が挙げられる。
　本発明及び本願明細書において、「Ｃ１－１０アルキル基」は、炭素数１～１０のアルキル基であり、直鎖であっても分岐鎖であってもよい。「Ｃ２－１０アルキル基」は、炭素数２～１０のアルキル基であり、直鎖であっても分岐鎖であってもよい。Ｃ１－１０アルキル基の例としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ－ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基等が挙げられる。
　本発明及び本願明細書において、「Ｃ１－６アルキル基」は、炭素数１～６のアルキル基であり、直鎖であっても分岐鎖であってもよい。Ｃ１－６アルキル基の例としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ－ペンチル基、ヘキシル基等が挙げられる。
　本発明及び本願明細書において、「Ｃ６－１４アリール基」は、炭素数６～１４の芳香族炭化水素基であり、Ｃ６－１２アリール基が特に好ましい。Ｃ６－１４アリール基の例としては、フェニル基、ナフチル基、アントリル基、９－フルオレニル基等が挙げられ、フェニル基が特に好ましい。
　本発明及び本願明細書において、「置換されていてもよいＣ６－１４アリール基」は、Ｃ６－１４アリール基の炭素原子に結合している水素原子の１又は複数個、好ましくは１～３個が、他の官能基に置換されている基である。２個以上の置換基を有する場合、置換基同士は互いに同種であってもよく、異種であってよい。該置換基としては、ニトロ基、ハロゲン原子（フッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子）、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ１－６アルコキシ基、及びメチレンジオキシ基（－Ｏ－ＣＨ２－Ｏ－）等が挙げられる。「置換されていてもよいＣ６－１４アリール基」の例としては、フェニル基、ナフチル基、アントリル基、４－ニトロフェニル基、４－メトキシフェニル基、２，４－ジメトキシフェニル基、３，４－ジメトキシフェニル基、４－メチルフェニル基、２，６－ジメチルフェニル基、３－クロロフェニル基、１，３－ベンゾジオキソール－５－イル基等が挙げられる。
　本発明及び本願明細書において、「Ｃ６－１４アリール－Ｃ１－６アルキル基」は、Ｃ１－６アルキル基の炭素原子に結合している１個の水素原子がＣ６－１４アリール基に置換された基である。Ｃ６－１４アリール－Ｃ１－６アルキル基におけるＣ６－１４アリール基としては、フェニル基、ナフチル基、アントリル基、９－フルオレニル基等を例示でき、フェニル基又は９－フルオレニル基が特に好ましい。Ｃ６－１４アリール－Ｃ１－６アルキル基におけるＣ１－６アルキル基としては、Ｃ１－４アルキル基が好ましい。Ｃ６－１４アリール－Ｃ１－６アルキル基の例としては、ベンジル基、ジフェニルメチル基、トリフェニルメチル基、２－フェニルエチル基、９－アントリルメチル基、９－フルオレニルメチル基等が挙げられる。
　本発明及び本願明細書において、「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子をいう。「フッ素原子以外のハロゲン原子」とは、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子をいう。「フッ素原子以外のハロゲン原子」の例としては、塩素原子又は臭素原子が好ましく、塩素原子が特に好ましい。
　本発明及び本願明細書において、「Ｃ１－６アルコキシ基」とは、炭素数１～６のＣ１－６アルキル基の結合末端に酸素原子が結合した基をいう。Ｃ１－６アルコキシ基は直鎖であっても分岐鎖であってもよい。Ｃ１－６アルコキシ基の例としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基、ｔｅｒｔ－ブトキシ基、ペンチルオキシ基、ヘキシルオキシ基等が挙げられる。
　本発明及び本願明細書において、「エーテル結合性の酸素原子」とは、炭素原子間を連結する酸素原子であり、酸素原子同士が直列に連結された酸素原子は含まれない。炭素数Ｎｃ（Ｎｃは２以上の整数）のアルキル基が有し得るエーテル結合性の酸素原子は、最大Ｎｃ－１個である。
　また、以降において、「化合物ｎ」は式（ｎ）で表される化合物を意味する。
＜含フッ素ペプチド＞
　本発明に係るペプチドは、２個以上のアミノ酸からなるペプチドであって、該ペプチドを構成するアミノ酸残基の少なくとも１個の側鎖が、下記一般式（１）で表される基であるペプチドである。一般式（１）中、黒丸は結合手を意味する。なお、以降において、下記一般式（１）で表される基がα炭素と結合しているアミノ酸を、「含フッ素アミノ酸」ということがあり、ペプチドを構成するアミノ酸残基の少なくとも１個の側鎖が、下記一般式（１）で表される基であるペプチドを、「含フッ素ペプチド」ということがある。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
　一般式（１）中、Ｒｆは、少なくとも２個のフッ素原子で置換されたＣ１－３０アルキル基、－ＳＦ５、又は－ＳＦ４－ＣＲ１０１Ｒ１０２－ＣＲ１０３Ｒ１０４Ｃｌである。
　Ｒｆが少なくとも２個のフッ素原子で置換されたＣ１－３０アルキル基である場合、該Ｃ１－３０アルキル基は、炭素原子が２以上の場合（Ｃ２－３０アルキル基の場合）に、炭素原子間に１～５個のエーテル結合性の酸素原子を有していてもよい。
　Ｒｆは、炭素原子に結合している１個以上の水素原子が、フッ素原子以外のハロゲン原子でさらに置換されていてもよい。ここで、ＲｆのＣ１－３０アルキル基としては、Ｃ１－２０アルキル基が好ましく、Ｃ１－１０アルキル基がより好ましく、Ｃ２－１０アルキル基がさらに好ましく、Ｃ２－８アルキル基がよりさらに好ましい。該Ｃ１－３０アルキル基がＣ２－３０アルキル基である場合には、炭素原子間に１～５個のエーテル結合性の酸素原子を有していてもよい。Ｒｆにおいて、フッ素原子に置換されている水素原子の数は、２個以上であれば特に限定されるものではなく、例えば、３個以上が好ましく、６個以上がより好ましく、７個以上がさらに好ましい。
　Ｒｆの例としては、トリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基、ヘプタフルオロプロピル基、ノナフルオロブチル基、ペルフルオロペンチル基、ペルフルオロヘキシル基、ペルフルオロヘプチル基、ペルフルオロオクチル基、ペルフルオロノニル基、ペルフルオロデシル基、ジフルオロメチル基、１，１－ジフルオロエチル基、２，２－ジフルオロエチル基、１，１，２，２－テトラフルオロエチル基、１，１，２，２，３，３－ヘキサフルオロプロピル基、１，１，２，３，３，３－ヘキサフルオロプロピル基、１，１，２，２，３，３－ヘキサフルオロヘキシル基、１，１，２，２，３，３－ヘキサフルオロオクチル基、１，１，２，２，３，３－ヘキサフルオロデシル基、１，１，２，２，３，３－ヘキサフルオロオクタデシル基、１，１，２，２，３，３－ヘキサフルオロヘキサコシル基等が挙げられる。
　Ｒｆが炭素数２の基である場合、Ｒｆとしては、１，１，１－トリフルオロエチル基（ＣＦ３－ＣＨ２－）よりも、ペンタフルオロエチル基のように、炭素原子に結合している水素原子の少なくとも４個以上がフッ素原子に置換されている基が好ましい。また、Ｒｆが炭素数３の基である場合、Ｒｆとしては、直鎖状の基が好ましく、分岐鎖状の基の場合には、１，１，１，３，３，３－ヘキサフルオロプロパン－２－イル基（（ＣＦ３）２－ＣＨ－）や（ＣＦ３）２－ＣＦ－基が好ましい。Ｒｆが炭素数４の基である場合、Ｒｆとしては、直鎖状の基であってもよく、分岐鎖状の基であってもよい。分岐鎖状の基の場合には、アルキレン基部分を構成する炭素原子に結合する水素原子がフッ素原子に置換された基、又は完全フッ素化された基であることが好ましい。
　Ｒｆとしては、下記一般式（ｆ－１）又は（ｆ－２）で表される基が好ましい。ここで、ＲｆＰは、少なくとも２個以上のフッ素原子を含む完全ハロゲン化Ｃ１－１０アルキル基を表す。ＲｆＰは、Ｃ１－１０アルキル基の水素原子の全てがハロゲン原子に置換されており、これらのハロゲン原子のうち少なくとも２個以上がフッ素原子である基である。ＲｆＰが炭素数２以上の場合、すなわち、完全ハロゲン化Ｃ２－１０アルキル基の場合、炭素原子間に１～５個のエーテル結合性の酸素原子を有していてもよい。一般式（ｆ－２）において、２個のＲｆＰは、互いに同種の基であってもよく、異種の基であってもよい。
　下記一般式（ｆ－１）又は（ｆ－２）において、ｎ１は、０～１０の整数であり、ｎ２は、０～９の整数である。ｎ１及びｎ２が０の場合、いずれも単結合を表す。すなわち、ｎ１が０の場合、一般式（ｆ－１）で表される基は、ＲｆＰ－であり、ｎ２が０の場合、一般式（ｆ－２）で表される基は、（ＲｆＰ）２－ＣＨ－である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
　Ｒｆが一般式（ｆ－１）で表される基である場合、Ｒｆは、ＲｆＰが、トリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基、ヘプタフルオロプロピル基、ノナフルオロブチル基、ペルフルオロペンチル基、ペルフルオロヘキシル基、ペルフルオロヘプチル基、ペルフルオロオクチル基、ペルフルオロノニル基、又はペルフルオロデシル基であり、ｎ１が０～４の整数である基が好ましく、ＲｆＰが、トリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基、ヘプタフルオロプロピル基、ノナフルオロブチル基、ペルフルオロペンチル基、ペルフルオロヘキシル基、ペルフルオロヘプチル基、ペルフルオロオクチル基、ペルフルオロノニル基、又はペルフルオロデシル基であり、ｎ１が０～２の整数である基がより好ましく、ＲｆＰが、トリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基、ヘプタフルオロプロピル基、ノナフルオロブチル基、ペルフルオロペンチル基、又はペルフルオロヘキシル基であり、ｎ１が０～２の整数である基（ただし、ｎ１が１であり、ＲｆＰがトリフルオロメチル基である基を除く）がさらに好ましい。
　Ｒｆが一般式（ｆ－２）で表される基である場合、Ｒｆは、ＲｆＰが、トリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基、ヘプタフルオロプロピル基、ノナフルオロブチル基、ペルフルオロペンチル基、ペルフルオロヘキシル基、ペルフルオロヘプチル基、ペルフルオロオクチル基、ペルフルオロノニル基、又はペルフルオロデシル基であり、ｎ２が０～４の整数である基が好ましく、ＲｆＰが、トリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基、ヘプタフルオロプロピル基、ノナフルオロブチル基、ペルフルオロペンチル基、ペルフルオロヘキシル基、ペルフルオロヘプチル基、ペルフルオロオクチル基、ペルフルオロノニル基、又はペルフルオロデシル基であり、ｎ２が０～２の整数である基がより好ましく、ＲｆＰが、トリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基、ヘプタフルオロプロピル基、ノナフルオロブチル基、ペルフルオロペンチル基、又はペルフルオロヘキシル基であり、ｎ２が０～２の整数である基（ただし、ｎ２が０又は１であり、ＲｆＰがトリフルオロメチル基である基を除く）がさらに好ましい。
　Ｒｆの例としては、ジフルオロメチル基、１，１－ジフルオロエチル基、２，２－ジフルオロエチル基、１，１，２，２－テトラフルオロエチル基、１，１，２，２，３，３－ヘキサフルオロプロピル基、１，１，２，３，３，３－ヘキサフルオロプロピル基等であってもよい。
　Ｒｆが－ＳＦ４－ＣＲ１０１Ｒ１０２－ＣＲ１０３Ｒ１０４Ｃｌで表される基であった場合、Ｒ１０１、Ｒ１０２、Ｒ１０３、及びＲ１０４は、それぞれ独立して水素原子、フッ素原子、又は塩素原子である。ただし、Ｒ１０１、Ｒ１０２、Ｒ１０３、及びＲ１０４のうちの２個以上はフッ素原子である。－ＳＦ４－ＣＲ１０１Ｒ１０２－ＣＲ１０３Ｒ１０４Ｃｌで表される基としては、具体的には、－ＳＦ４－ＣＦ２－ＣＦ２Ｃｌ、－ＳＦ４－ＣＦ２－ＣＦＣｌ２、－ＳＦ４－ＣＦ２－ＣＨＦ－Ｃｌ、－ＳＦ４－ＣＦ２－ＣＣｌ３、－ＳＦ４－ＣＦ２－ＣＨＣｌ２、－ＳＦ４－ＣＦ２－ＣＨ２Ｃｌ、－ＳＦ４－ＣＦＣｌ－ＣＦＣｌ２、－ＳＦ４－ＣＦＣｌ－ＣＨＦ－Ｃｌ、－ＳＦ４－ＣＨＦ－ＣＨＦ－Ｃｌが挙げられる。
　一般式（１）中、Ｚ１は、２、３、又は４価のアルキレン基以外の連結基であり、ｎ３は１、２、又は３である。Ｚ１としては、アルキレン基以外の２～４価の基であれば特に限定されるものではない。例えば、Ｚ１は、アルキレン基、酸素原子（－Ｏ－）、硫黄原子（－Ｓ－）、－ＮＨ－、－Ｎ（ＣＨ３）－、－Ｎ（Ｃ２Ｈ５）－、－Ｎ（Ｃ３Ｈ７）－、３価の窒素原子、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２－、シクロアルカンから２～４個の水素原子を除いた基、芳香環から２～４個の水素原子を除いた基、複素環から２～４個の水素原子を除いた基、又はこれらの組み合わせが挙げられる。アリール基、ヘテロアリール基としては、前記で挙げられた基を用いることができる。ただし、アルキレン基のみからなる基や、Ｒｆとの連結部分がアルキレン基である基を除く。
　Ｚ１が、アルキレン基、酸素原子（－Ｏ－）、硫黄原子（－Ｓ－）、－ＮＨ－、－Ｎ（ＣＨ３）－、－Ｎ（Ｃ２Ｈ５）－、－Ｎ（Ｃ３Ｈ７）－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２－、シクロアルカンから２個の水素原子を除いた基、芳香環から２個の水素原子を除いた基、複素環から２個の水素原子を除いた基、又はこれらの組み合わせからなる場合には、Ｚ１は２価の連結基であり、一般式（１）で表される基は、１個のＲｆ基を有する基となる。Ｚ１が３価の窒素原子を有する場合には、該窒素原子に、２個のＲｆ基を直接又は他の２価連結基を介して結合させることにより、一般式（１）で表される基を、２個のＲｆ基を有する基とすることができる。
　Ｚ１としては、環から水素原子を除いた基（環基）を有する連結基であってもよく、環基を有していない連結基であってもよい。Ｚ１が環基を有する場合には、一般式（１）で表される基を、２又は３個のＲｆ基を有する基とすることができる。該環基としては、シクロアルカン、芳香環、又は複素環から２～４個の水素原子を除いた基が挙げられる。複素環としては、芳香環の１～３個の炭素原子が、窒素原子、酸素原子、及び硫黄原子からなる群より選択される１種以上の原子に置換されている環が好ましい。また、該環基は、単環から水素原子を除いた基であってもよく、縮合環から水素原子を除いた基であってもよい。一般式（１）中のＺ１が含有している環基としては、シクロヘキサン、ベンゼン、イミダゾール、又はインドールから２～４個の水素原子を除いた基が好ましい。例えば、Ｚ１が、ベンゼンから２～４個の水素原子を除いた環基を有する連結基である場合、該環基は、１，４－フェニレン基、１，３－フェニレン基、１，５－フェニレン基、又は１，３，５置換フェニル基であり、１，４－フェニレン基又は１，３，５置換フェニル基が好ましい。
　具体的には、一般式（１）中のＺ１としては、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｓ－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｓ（＝Ｏ）２－、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－Ｓ（＝Ｏ）２－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－Ｐｈ－（－Ｐｈ－は、１，４－フェニレン基、１，３－フェニレン基、１，５－フェニレン基、又は１，３，５置換フェニル基である）が挙げられる。また、これらのいずれかの基とＣ１－６アルキレン基を組み合わせた連結基であることも好ましい。一般式（１）中のＺ１としては、Ｒｆとの連結部分が酸素原子であるものが好ましい。
　一般式（１）中のＺ１としては、下記一般式（２）で表される連結基であることが好ましい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
　一般式（２）中、Ｚ２は、２、３、又は４価のアルキレン基以外の連結基である。Ｚ２としては、アルキレン基以外の２～４価の基であれば特に限定されるものではない。例えば、Ｚ２は、アルキレン基、酸素原子（－Ｏ－）、硫黄原子（－Ｓ－）、－ＮＨ－、－Ｎ（ＣＨ３）－、－Ｎ（Ｃ２Ｈ５）－、－Ｎ（Ｃ３Ｈ７）－、３価の窒素原子、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２－、シクロアルカンから２～４個の水素原子を除いた基、芳香環から２～４個の水素原子を除いた基、複素環から２～４個の水素原子を除いた基、又はこれらの組み合わせが挙げられる。アリール基、ヘテロアリール基としては、前記で挙げられた基を用いることができる。ただし、アルキレン基のみからなる基や、Ｒｆとの連結部分がアルキレン基である基を除く。
　一般式（２）中のＺ２としては、具体的には、Ｚ１で挙げられたものと同様のものを用いることができる。一般式（２）中のＺ２としては、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｓ－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｓ（＝Ｏ）２－、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－Ｓ（＝Ｏ）２－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－Ｐｈ－（－Ｐｈ－は、１，４－フェニレン基、１，３－フェニレン基、１，５－フェニレン基、又は１，３，５置換フェニル基である）であることが好ましい。
　一般式（２）中、Ｒｈは、水素原子又はＣ１－６アルキル基である。ＲｈがＣ１－６アルキル基の場合、Ｒｈとしては、Ｃ１－３アルキル基が好ましく、メチル基又はエチル基がより好ましい。
　一般式（１）で表される基としては、例えば、Ｚ１が一般式（２）で表される基であり、Ｒｆが一般式（ｆ－１）又は（ｆ－２）で表される基である基が挙げられる。なかでも、一般式（２）中のＺ２が、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｓ－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｓ（＝Ｏ）２－、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－Ｓ（＝Ｏ）２－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－Ｐｈ－（－Ｐｈ－は、１，４－フェニレン基、１，３－フェニレン基、１，５－フェニレン基、又は１，３，５置換フェニル基である）であり、Ｒｈが水素原子又はＣ１－６アルキル基であり、Ｒｆが一般式（ｆ－１）又は（ｆ－２）で表される基である基が好ましい。
　本発明に係る含フッ素ペプチドとしては、側鎖が前記一般式（１）で表わされる基（－Ｚ１－（Ｒｆ）ｎ３）であるアミノ酸残基が、天然アミノ酸の側鎖に直接又は間接的に１～３個のＲｆ基が連結されているアミノ酸残基であるペプチドが好ましい。本発明に係る含フッ素ペプチドとしては、具体的には、アルギニン残基、アスパラギン残基、グルタミン残基、又はリシン残基の側鎖のアミノ基の１個又は２個の水素原子を、－Ｒｆ又は－Ｚ３－（Ｒｆ）ｎ４（Ｚ３は、２、３、又は４価のアルキレン基以外の連結基。ただし、Ｒｆとの連結部分がアルキレン基である基を除く。また、ｎ４は２、３、又は４である。）で置換したアミノ酸残基；アルギニン残基の側鎖のイミノ基の水素原子を－Ｒｆ又は－Ｚ３－（Ｒｆ）ｎ４で置換したアミノ酸残基；アスパラギン酸残基又はグルタミン酸残基の側鎖のカルボキシル基の水素原子を－Ｒｆ又は－Ｚ３－（Ｒｆ）ｎ４で置換したアミノ酸残基；システイン残基又はメチオニン残基の側鎖のチオール基の水素原子を－Ｒｆ又は－Ｚ３－（Ｒｆ）ｎ４で置換したアミノ酸残基；セリン残基、スレオニン残基、又はトリプトファン残基の側鎖のヒドロキシ基の水素原子を－Ｒｆ又は－Ｚ３－（Ｒｆ）ｎ４で置換したアミノ酸残基；チロシン残基又はフェニルアラニン残基の側鎖のベンゼン環の１個～３個の水素原子を－Ｒｆ又は－Ｚ３－（Ｒｆ）ｎ４で置換したアミノ酸残基；ヒスチジン残基の側鎖のイミダゾール環の１個～３個の水素原子を－Ｒｆ又は－Ｚ３－（Ｒｆ）ｎ４で置換したアミノ酸残基；トリプトファン残基の側鎖のインドール環の１個～３個の水素原子を－Ｒｆ又は－Ｚ３－（Ｒｆ）ｎ４で置換したアミノ酸残基；を、少なくとも１個有するペプチドが好ましい。
　Ｚ３としては、アルキレン基以外の２～４価の基であれば特に限定されるものではない。例えば、Ｚ３は、アルキレン基、酸素原子（－Ｏ－）、硫黄原子（－Ｓ－）、－ＮＨ－、－Ｎ（ＣＨ３）－、－Ｎ（Ｃ２Ｈ５）－、－Ｎ（Ｃ３Ｈ７）－、３価の窒素原子、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２－、シクロアルカンから２～４個の水素原子を除いた基、芳香環から２～４個の水素原子を除いた基、複素環から２～４個の水素原子を除いた基、又はこれらの組み合わせが挙げられる。アリール基、ヘテロアリール基としては、前記で挙げられた基を用いることができる。ただし、アルキレン基のみからなる基や、Ｒｆとの連結部分がアルキレン基である基を除く。具体的には、Ｚ３としては、Ｚ１やＺ２と同様の連結基を用いることができる。
　天然アミノ酸の側鎖のアミノ基、イミノ基、カルボキシ基、ヒドロキシ基、チオール基、ベンゼン環、イミダゾール環、インドール環等の水素原子の、－Ｒｆ又は－Ｚ３－（Ｒｆ）ｎ４への置換は、エステル反応等の一般的な合成反応により行うことができる。
　本発明に係る含フッ素ペプチドとしては、側鎖が－Ｚ１－（Ｒｆ）ｎ３であるアミノ酸残基を少なくとも１個含むペプチドが挙げられる。該ペプチドを構成するアミノ酸残基のうち、少なくとも１個の側鎖が－Ｚ１－（Ｒｆ）ｎ３であればよく、全てのアミノ酸残基の側鎖が－Ｚ１－（Ｒｆ）ｎ３であってもよい。一分子のペプチドに側鎖が－Ｚ１－（Ｒｆ）ｎ３であるアミノ酸残基が２個以上ある場合、これ等の複数の－Ｚ１－（Ｒｆ）ｎ３は、互いに同種であってもよく、異種であってもよい。また、ペプチドのうち、側鎖が－Ｚ１－（Ｒｆ）ｎ３であるアミノ酸残基は、Ｎ末端にあってもよく、Ｃ末端にあってもよく、末端以外にあってもよい。
　本発明に係る含フッ素ペプチドは、２個以上のアミノ酸からなるペプチドであればよく、３個以上のアミノ酸からなるペプチドも好ましい。本発明に係る含フッ素ペプチドとしては、好ましくは、２～４０個のアミノ酸からなるペプチドであり、より好ましくは、３～２０個のアミノ酸からなるペプチドである。
　本発明に係る含フッ素ペプチドのアミノ酸配列は、特に限定されるものではない。例えば、極性側鎖よりも疎水性（非極性）側鎖の割合が多いペプチドのほうが、細胞膜透過性が良好である。このため、本発明に係る含フッ素ペプチドも、疎水性側鎖を有するアミノ酸残基を比較的多く含むアミノ酸配列とすることができる。一方で、本発明に係る含フッ素ペプチドを疎水性物質と連結させて用いる場合には、当該含フッ素ペプチドは極性側鎖を有するアミノ酸残基を比較的多く含むアミノ酸配列とすることで、分子全体の疎水性と親水性のバランスをとることができ、より細胞膜透過性を向上させることができる。
　本発明に係る含フッ素ペプチドのＮ末端は、アミノ基の保護基で保護されていてもよい。Ｎ末端の保護基としては、アミノ基の保護基であれば特に限定されるものではなく、例えば、ペプチド合成で使用されるアミノ基の保護基を用いることができる。アミノ基の保護基としては、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）基、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）基、２，２，２－トリクロロエトキシカルボニル（Ｔｒｏｃ）基等のカルバメート系保護基が挙げられる。穏やかな条件で脱保護できる点で、好ましくは、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基又は９－フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基である。
　本発明に係る含フッ素ペプチドのＣ末端は、保護基で保護されていてもよい。Ｃ末端の保護基としては、カルボキシ基の保護基であれば特に限定されるものではなく、例えば、ペプチド合成で使用されるカルボキシ基の保護基を用いることができる。カルボキシ基の保護基としては、具体的には、下記一般式（ｐ－１）で表される基、２－（９，１０－ジオキソ）アントリルメチル基、ベンジルオキシメチル基、及びフェナシル基から選ばれる保護基である。一般式（ｐ－１）中、Ｒ３は、置換されていてもよいＣ６－１４アリール基であり、Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立して、水素原子又は置換されていてもよいＣ６－１４アリール基である。また、黒丸は結合手を意味する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
　カルボキシ基の保護基としては、ベンジル基、ジフェニルメチル基、トリフェニルメチル基、４－ニトロベンジル基、４－メトキシベンジル基、２，４－ジメトキシベンジル基、３，４－ジメトキシベンジル基、４－メチルベンジル基、２，６－ジメチルベンジル基、３－クロロベンジル基、９－アントリルメチル基、ピペロニル基、２－（９，１０－ジオキソ）アントリルメチル基、ベンジルオキシメチル基、フェナシル基等が挙げられる。穏やかな条件で脱保護できる点で、Ｃ末端のカルボキシ基の保護基は、好ましくはベンジル基、トリフェニルメチル基であり、より好ましくはベンジル基である。
　本発明に係る含フッ素ペプチドのうち、側鎖が－Ｚ１－（Ｒｆ）ｎ３ではないアミノ酸残基としては、特に限定されるものではなく、α－アミノ酸のアミノ酸残基であってもよく、β－アミノ酸のアミノ酸残基であってもよく、γ－アミノ酸のアミノ酸残基であってもよく、δ－アミノ酸のアミノ酸残基であってもよい。また、Ｌ－アミノ酸のアミノ酸残基であってもよく、Ｄ－アミノ酸のアミノ酸残基であってもよい。本発明に係る含フッ素ペプチドに含まれている側鎖が－Ｚ１－（Ｒｆ）ｎ３ではないアミノ酸残基としては、タンパク質を構成するアミノ酸やそのＤ体、及びこれらの側鎖が修飾された修飾アミノ酸のアミノ酸残基であることが好ましい。
　タンパク質を構成するアミノ酸としては、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、アスパラギン、グルタミン、プロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン、ヒスチジン等が挙げられる。また、タンパク質を構成するアミノ酸が修飾された修飾アミノ酸としては、例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジンの側鎖のアミノ基の水素原子が、前記で挙げられるアミノ基の保護基やＰｂｆ（N-ω-(2,2,4,6,7-Pentamethyldihydrobenzofuran-5-sulfonyl)基に置換されたアミノ酸；アスパラギン酸、グルタミン酸の側鎖のカルボキシ基の水素原子が、前記で挙げられているカルボキシ基の保護基やｔｅｒｔ－ブチル基のアルキル基に置換されたアミノ酸；システインのチオール基の水素原子がベンジル基に置換されたアミノ酸が挙げられる。
　本発明に係る含フッ素ペプチドとしては、例えば、下記一般式（１１）で表されるトリペプチドが挙げられる。一般式（１１）中、Ｒｆ及びｎ３は、前記一般式（１）中のＲｆ及びｎ３と同じであり、Ｚ２及びＲｈは、前記一般式（２）中のＺ２及びＲｈと同じである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
　一般式（１１）中、Ｒ１１及びＲ１２は、それぞれ独立して、Ｃ１－６アルキル基又はベンジル基である。一般式（１１）のトリペプチドとしては、Ｒ１１及びＲ１２が、それぞれ独立してメチル基又はベンジル基であることが好ましく、Ｒ１１がメチル基であり、Ｒ１２がベンジル基であることが特に好ましい。
　一般式（１１）中、Ｘは、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ）又はｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ）である。
　一般式（１１）中、Ｚは、Ｃ１－６アルコキシ基、水酸基、又はアミノ基である。ＺがＣ１－６アルコキシ基の場合、Ｚとしては、メトキシ基が特に好ましい。
　本発明に係る含フッ素ペプチドは、原料のアミノ酸として、少なくとも側鎖が－Ｚ１－（Ｒｆ）ｎ３であるアミノ酸を用いる以外は、一般的なペプチド合成法により行うことができる。例えば、ペプチド固相合成法により行うことができる。含フッ素ペプチドは、側鎖が－Ｚ１－（Ｒｆ）ｎ３であるアミノ酸を原料として、ペプチド自動合成機を用いて容易に合成できる。含フッ素アミノ酸としては、側鎖が－Ｚ１－（Ｒｆ）ｎ３であるアミノ酸が好ましい。
　Ｃ末端を固相に結合したアミノ酸に、アミノ基を保護したアミノ酸を順次縮合させ、ペプチドを固相から脱離させることにより、ペプチドを製造できる。アミノ酸原料は、アミノ基がＢｏｃ基又はＦｍｏｃ基で保護されたものを使用することが好ましい。アミノ酸原料の側鎖官能基は、保護基で保護されているものを使用することが好ましい。側鎖官能基の保護基としては、Ｂｏｃ基、トリフェニルメチル基、ベンジル基、２，２，５，７，８－ペンタメチルクロマン－６－スルホニル（Ｐｍｃ）基等が挙げられる。
　ペプチド結合を形成する縮合剤としては、例えば、Ｎ，Ｎ－ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１－エチル－３－（３’－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＷＳＣ）、ベンゾトリアゾール－１－イルオキシ－トリスジメチルアミノホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＢＯＰ）、ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリスピロリジノホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩（ｐｙＢＯＰ）、２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＨＢＴＵ）、２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート、１－シアノ－２－エトキシ－２－オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノモルフォリノカルベニウムヘキサフルオロホスファート（ＣＯＭＵ）等が挙げられる。また、Ｎ－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、（ヒドロキシイミノ）シアノ酢酸エチル（ｏｘｙｍａ）と上記縮合剤とを、好ましい割合で混合して用いることもできる。
　ペプチド結合の形成にはカルボキシ末端を活性化する方法を用いてもよく、その活性化剤としては、例えば、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド、ｐ－ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル等が挙げられる。ペプチド結合を形成する際に用いる塩基としては、例えば、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）等が挙げられる。ペプチド結合形成反応に用いる溶媒としては、例えば、クロロホルム、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、ジクロロエタン（ＤＣＥ）、アセトニトリル（ＭｅＣＮ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）等が挙げられる。
　ペプチド又はアミノ酸のアミノ末端アミノ基の保護基であるＢｏｃ基及びＦｍｏｃ基は、それぞれトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）又はピペリジンにより除去できる。ペプチドのアミノ酸残基の側鎖官能基の保護基は、例えば、ＴＦＡ、フッ化水素（ＨＦ）、トリフルオロメタンスルホン酸等により除去できる。
　また、ペプチド固相合成法において、ペプチド又はアミノ酸残基の側鎖官能基に保護基が付いているペプチドをペプチド固相合成樹脂より脱離させる方法としては、例えば、ＴＦＡを用いることができる。ペプチド固相樹脂からのペプチドの脱離と、アミノ酸残基の側鎖官能基の保護基の脱離は、それぞれ同一反応系内で同時に行うこともできる。あるいは、それぞれ独立に行うこともできる。ペプチド固相合成用のペプチド固相合成樹脂としては、例えば、４－ヒドロキシメチル－３－メトキシフェノキシ酪酸－ベンズヒドリルアミン－ポリスチレン樹脂、ｐ－ベンジルオキシベンジルアルコール－ポリスチレン樹脂、オキシム樹脂等の通常市販されているものを用いることができる。
　目的のペプチド又はその中間体は、例えば、イオンクロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、順相クロマトグラフィー、再結晶、抽出、分別結晶化等、種々の方法により単離、精製を行うことができる。また、こうして得られたペプチドは、常法によってそれぞれの塩に変換できる。
　製造された含フッ素ペプチドのアミノ基又はカルボキシ基の保護基は、必要に応じて脱保護することもできる。脱保護は、保護基の種類に応じて常法により行うことができる。
　フルオロアルキル基や－ＳＦ５、－ＳＦ４－ＣＲ１０１Ｒ１０２－ＣＲ１０３Ｒ１０４Ｃｌは、フッ素原子を多く含有しているため、本発明に係る含フッ素ペプチドは、細胞膜透過性に優れている。また、天然ペプチドと構造が大幅に異なるため、ペプチターゼにより分解されにくい。これらの性質を利用して、本発明に係る含フッ素ペプチドは、生理活性物質として、医薬分野での利用が期待される。例えば、本発明に係る含フッ素ペプチドは、薬効成分を標的細胞へ運ぶＤＤＳキャリアとしての利用が期待できる。生体内の標的細胞内に取り込まれることにより何等かの生理活性を示す機能性成分に、その機能を損なわないように本発明に係る含フッ素ペプチドを付加することにより、該機能性成分の標的細胞への取り込み効率を改善できる。該機能性成分は、ペプチドであってもよく、タンパク質であってもよく、低分子化合物であってもよい。また、生理活性を示す機能性ペプチドを構成するアミノ酸残基のうちの一部の側鎖を、該機能性ペプチドの機能を損なわない範囲で、－Ｚ１－（Ｒｆ）ｎ３に置換することにより、該機能性ペプチドの細胞膜透過性や細胞内での滞留時間を改善できる。
　細胞膜透過性を持たせるためにＣＰＰ－活性ペプチド（薬効部分）を連結させる場合でも、自動合成装置を用いて合成できる方が、コスト的に優位であり、実用的である。
　国際公開第２０２１／００２４０７号明細書に記載されているような非天然型アミノ酸は、立体選択的反応又は光学分割を行う必要があり、多様な含フッ素アミノ酸誘導体を合成するには大変手間がかかる。さらに、このような非天然型アミノ酸から誘導された国際公開第２０２１／００２４０８号明細書に記載されているようなペプチドの合成も、大変手間がかかる。
　これに対して、本発明に係るペプチドは天然アミノ酸から誘導可能であり、光学分割を行わなくても、立体の決まったアミノ酸を合成できる。また、含フッ素ユニットを別途用意して天然アミノ酸と反応させることによって合成可能であり、同一の製造プロセスで様々な含フッ素アミノ酸を合成することができ、コスト的にもメリットがある。
　以下、本発明を実施例により説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されない。
　実施例、比較例の分析に使用したＮＭＲ装置は日本電子製ＪＮＭ－ＥＣＺ４００Ｓ（４００ＭＨｚ）であり、１Ｈ ＮＭＲではテトラメチルシランを０ＰＰＭ、１９Ｆ ＮＭＲではＣ６Ｆ６を－１６２ＰＰＭの基準値とした。
　本願明細書において、以下の略号を使用する。
Ｂｎ：ベンジル
Ｂｏｃ：ｔ－ブトキシカルボニル
Ａｌｌ：アリル
Ｐｈｔｈ:フタロイル
Ｅｔ２Ｏ：ジエチルエーテル
Ｆｍｏｃ：９－フルオレニルメチルオキシカルボニル
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＭＳ：トリメチルシリル
Ｃ４Ｆ９：１，１，２，２，３，３，４，４，４－ノナフルオロブチル
Ｃ６Ｆ１３：１，１，２，２，３，３，４，４，５，５，６，６，６－トリデカフルオロヘキシル
Ｃ８Ｆ１７：１，１，２，２，３，３，４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，８－ヘプタデカフルオロオクチル
ＣＯＭＵ：１－シアノ－２－エトキシ－２－オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノモルフォリノカルベニウムヘキサフルオロホスファート（CAS RN：1075198-30-9）
ｏｘｙｍａ：（ヒドロキシイミノ）シアノ酢酸エチル（CAS RN：3849-21-6）
ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
［製造例１］
　ＲＦ（Ｃ８）基含有アミノ酸（Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－ＯＨ：２ｂ）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
　４－（パーフルオロオクチル）アニリン（化合物（１））は、Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．，２０１９，２１，６４８１に記載の方法に従って合成した。
　また、乾燥させた２５ｍＬ容の二つ口なすフラスコ中で、化合物（１）の１５０ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ－ＯＡｌｌの１３０ｍｇ（０．３３ｍｍｏｌ、１．１等量）をジクロロメタン６ｍＬに溶解し、ＣＯＭＵの１４１ｍｇ（０．３３ｍｍｏｌ、１．１等量）、ｏｘｙｍａの４７ｍｇ（０．３３ｍｍｏｌ、１．１等量）及び、ＤＩＰＥＡの８５．３ｍｇ（０．６６ｍｍｏｌ、２．２等量）を加え、室温にて１８時間攪拌した。その後、反応混合物をＨＣｌ（１Ｎ）でクエンチし、ジクロロメタンで３回抽出した。合わせた有機相を減圧濃縮した後、酢酸エチルで希釈し、ＨＣｌ（１Ｎ）、飽和重曹水、及び飽和食塩水で洗浄した。洗浄後の有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した後、減圧濃縮して化合物（２ａ）の粗生成物を得た。粗生成物をアセトンに溶解した後、ヘキサンを用いて再沈殿精製することにより、純粋な化合物（２ａ）（Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－ＯＡｌｌ）の白色固体（１７３ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を得た。（収率６４．９％）
化合物（２ａ）：
１Ｈ　ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－Ｄ６）　δ＝７．８７－７．７７（ｍ，５Ｈ），７．６５－７．５７（ｍ，４Ｈ），７．３７－７．２２（ｍ，４Ｈ），５．８２（ｍ，１Ｈ），５．２６（ｄ，Ｊ＝１７．１Ｈｚ，１Ｈ），５．１２（ｄ，Ｊ＝１７．１Ｈｚ，１Ｈ），４．５４（ｍ，３Ｈ），４．２９－４．１８（ｍ，３Ｈ），２．９４－２．５４（ｍ，２Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－Ｄ６）　δ＝－８０．０（ｓ，３Ｆ），－１０８．８（ｓ，２Ｆ），－１２１．０（ｓ，２Ｆ），－１２１．６（ｓ，６Ｆ），－１２２．３（ｓ，２Ｆ），－１２５．７（ｓ，２Ｆ）．
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
　化合物（２ａ）（１７３ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２ｍＬ）溶液に、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム（０）（１０ｍｏｌ％）とホスフィン（２０ｍｏｌ％）とを０℃で加えて攪拌し、更にフェニルシラン（２当量）を添加した後に室温に昇温して２時間攪拌した。その後、反応混合物をＨＣｌ（１Ｎ）（１０ｍＬ）でクエンチし、ジクロロメタンで２回抽出した。有機相を減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝８：１（容量比））で精製して、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－ＯＨ（化合物（２ｂ））の黄色固体（１３９ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ、収率８２％）として得た。
化合物（２ｂ）：
１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－Ｄ６）　δ＝１０．３７（ｓ，１Ｈ），７．８５－７．２１（ｍ，１２Ｈ），４．４４（ｂｒｓ，１Ｈ），４．５２－４．２２（ｍ，３Ｈ），２．９０－２．６８（ｍ，２Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－Ｄ６）　δ＝－８０．０６（ｓ，３Ｆ），－１０８．８３（ｓ，２Ｆ），－１２２．３６～－１２０．９６（ｍ，１０Ｆ），－１２５．４１（ｓ，２Ｆ）．
［製造例２］
　ＲＦ（Ｃ８）基含有アミノ酸（Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ｂｉｓ－Ｃ８Ｆ１７）－ＯＡｌｌ：４）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
　まず、３，５－ビス（パーフルオロオクチル）アニリン（化合物（３））を、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ．，２００２，ｖｏｌ.５８（２０），ｐ.３９７７に記載の方法に従って合成した。
　次いで、４－（パーフルオロオクチル）アニリンの代わりに化合物（３）（９３０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を用いて、製造例１と同様の手順にてＦｍｏｃ－Ａｓｐ（ｂｉｓ－Ｃ８Ｆ１７）－ＯＡｌｌ（化合物（４））の粗生成物を得た。該粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝１／４（容量比））で精製して、純粋な化合物（４）を得た（９４０ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ、収率７２％）
化合物（４）：
１Ｈ　ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）　δ＝７．７６（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），７．５９（ｍ，３Ｈ），７．３５（ｄｔ，Ｊ＝３４．８，７．５Ｈｚ，６Ｈ），５．９４－５．８２（ｍ，３Ｈ），５．３５－５．２３（ｍ，３Ｈ），４．４３－４．２１（ｍ，３Ｈ），２．９８（ｄｄ，Ｊ＝７４．３，１７．２Ｈｚ，２Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）　δ＝－８０．４４（ｓ，６Ｆ），－１１０．８３（ｓ，４Ｆ），－１２２．５２～－１２１．０３（ｍ，２０Ｆ），－１２５．９７（ｓ，４Ｆ）．
［製造例３］
　ＲＦ（Ｃ４）基含有アミノ酸（Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ｂｉｓ－Ｃ４Ｆ９）－ＯＨ：６ｂ）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000018
　まず、３，５－ビス（パーフルオロブチル）アニリン（化合物（５））を、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ．，２００２，ｖｏｌ．５８（２０），ｐ．３９７７に記載の方法に準じて、Ｃ８Ｆ１７Ｉの代わりにＣ４Ｆ９Ｉを用いて合成した。
　次いで、４－（パーフルオロオクチル）アニリンの代わりに化合物（５）（１．１ｇ、２ｍｍｏｌ）を用いて、製造例１と同様の手順にてＦｍｏｃ－Ａｓｐ（ｂｉｓ－Ｃ４Ｆ９）－ＯＡｌｌ（化合物（６ａ））の粗生成物を得た。該粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝１／１０（容量比））で精製して、純粋な化合物（６ａ）（３７０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ、収率１９．５％）を得た。
化合物（６ａ）：
１Ｈ　ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝９．９２（ｓ，１Ｈ），７．８２－７．６１（ｍ，６Ｈ），７．３０（ｄｔ，J＝４２．２，７．４Ｈｚ，４Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），５．８８（ｄｑ，Ｊ＝２２．８，５．３Ｈｚ，１Ｈ），５．３２－５．１１（ｍ，２Ｈ），４．７５（ｄｄ，Ｊ＝１４．４，６．２Ｈｚ，１Ｈ），４．６２（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），４．３７－４．２１（ｍ，３Ｈ），３．１１（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝－８１．８１（ｓ，６Ｆ），－１１１．４５（ｓ，４），－１２３．１５（ｓ，４Ｆ），－１２６．０９（ｓ，４Ｆ）．
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000019
　続いて、製造例１と同様の方法にて化合物（６ａ）（１８０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）の脱アリル化を行い、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ｂｉｓ－Ｃ４Ｆ９）－ＯＨ（化合物（６ｂ））（９１ｇ、０．１１ｍｍｏｌ、収率５３％）を得た。
化合物（６ｂ）：
１Ｈ　ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝９．８１（１Ｈ），７．８９－６．９１（ｍ，１２Ｈ），４．７１（ｓ，１Ｈ），４．３１－４．２５（ｍ，３Ｈ），３．１１－２．８８（ｍ，２Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝－８１．７５（ｓ，６Ｆ），－１１１．４５（ｓ，４Ｆ），－１２３．１２（ｓ，４Ｆ），－１２６．０７（ｓ，４Ｆ）．
［製造例４］
　ＳＦ５基含有アミノ酸（Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＳＦ５）－ＯＨ：８ｂ）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000020
　４－（パーフルオロオクチル）アニリンの代わりに４－ペンタフルオロスルファニルアニリン（化合物（７））（４３８ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を用いて、製造例１と同様の手順にてＦｍｏｃ－Ａｓｐ（ＳＦ５）－ＯＡｌｌ（化合物（８ａ））（８８２ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ、収率７４％）を得た。本生成物は精製せずに次の脱保護に供した。
化合物（８ａ）：
１Ｈ　ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝９．７５（ｓ，１Ｈ），７．８４－７．２３（ｍ，１２Ｈ），５．９４－５．８４（ｍ，１Ｈ），５．３３－５．１２（ｍ，２Ｈ），４．８４－４．７２（ｍ，３Ｈ），４．３５－４．３１（ｍ，３Ｈ），３．４１－３．２２（ｍ，２Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝８８．１４－８６．６５（ｍ，５Ｆ）．
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000021
　引き続き、製造例１と同様の方法にて化合物（８ａ）（１２０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）の脱アリル化を行い、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＳＦ５）－ＯＨ（化合物（８ｂ））の（０．１０ｍｍｏｌ、５５ｍｇ、収率４９％）を得た。
化合物（８ｂ）
１Ｈ　ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝９．７４（ｓ，１Ｈ），７．７８－６．９０（ｍ，１２Ｈ），４．７３（ｓ，１Ｈ），４．３５－４．２０（ｍ，３Ｈ），　２．９５－２．８１（ｍ，４Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝８６．７－８５．１（ｍ，５Ｆ）．
［製造例５］
　分岐鎖ＲＦ（Ｃ４）基含有アミノ酸（Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ｔｒｉｓ－ｔ－Ｃ４Ｆ９）－ＯＨ：１０ｂ）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000022
　まず、化合物（９）を、Ｄａｌｔｏｎ　Ｔｒａｎｓ．，２０１２，ｖｏｌ．４１，ｐ．８３６８及びＮｅｗＪ．Ｃｈｅｍ．，２０１７，ｖｏｌ．４１，ｐ．７７２９のＥｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ　Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎに記載されている方法に従って、上記反応式の通りにして合成した。
　次いで、４－（パーフルオロオクチル）アニリンの代わりに分岐鎖のＲｆ基を複数有する化合物（化合物（９））（４００ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）を用いて、製造例１と同様の手順にてＦｍｏｃ－Ａｓｐ（ｔｒｉｓ－ｔ－Ｃ４Ｆ９）－ＯＡｌｌ（化合物（１０ａ））の粗生成物を得た。該粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝１／１０（容量比））で精製して、純粋な化合物（１０ａ）（３００ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ、収率５２％）を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000023
化合物（１０ａ）
１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）　δ＝７．７５（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），７．６０－７．２８（ｍ，８Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），６．０９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．９２－５．８６（ｍ，１Ｈ），５．３４－５．２１（ｍ，２Ｈ），４．７０（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，３Ｈ），４．４４（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，７．４Ｈｚ，２Ｈ），４．３６（ｓ，６Ｈ），４．２３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），３．０７（ｄｄ，Ｊ＝１６．５，１２．０Ｈｚ，２Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（４７１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）　δ＝－７０．１２（ｓ，２７Ｆ）．
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000024
　引き続き、製造例１と同様の方法にて化合物（１０ａ）（２４８ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）の脱アリル化を行い、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ｔｒｉｓ－ｔ－Ｃ４Ｆ９）－ＯＨ（化合物（１０ｂ））（１０８ｍｇ、０．０９１ｍｍｏｌ、収率４５％）を得た。
化合物（１０ｂ）：
１Ｈ　ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝７．７４－７．６０（ｍ，８Ｈ），７．３６－７．２４（ｍ，４Ｈ）４．６１（ｓ，６Ｈ），４．３４－４．１６（ｍ，４Ｈ），２．９２－２．８１（ｍ，２Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝－７０．８２（ｓ，２７Ｆ）．
［製造例６］
　Ｄｏｄｅｃｙｌ基含有アミノ酸（Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ１２Ｆ２５）－ＯＨ：１２ｂ）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000025
　４－（パーフルオロオクチル）アニリンの代わりに４－ドデシルアニリン（化合物（１１））（７８ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を用いて、製造例１と同様の手順にてＦｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ１２Ｈ２５）－ＯＡｌｌ（化合物（１２ａ））の粗生成物を得た。該粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝１／１０（容量比））で精製して、純粋な化合物（１２ａ）（１７２ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ、収率９０％）を得た。
化合物（１２ａ）：
１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）　δ＝７．７４（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），７．５９－７．５７（ｍ，２Ｈ），７．３８－７．２６（ｍ，６Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），５．９３－５．８５（ｍ，１Ｈ），５．３４－５．２１（ｍ，２Ｈ），４．８０－４．７２（ｍ，２Ｈ），４．６９（ｓ，１Ｈ），４．２２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），３．０４（ｄｄ，Ｊ＝１１６．７，１５．９Ｈｚ，２Ｈ），１．２８－１．２４（ｍ，２５Ｈ）．
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000026
　引き続き、実施例１と同様の方法にてＦｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ１２Ｈ２５）－ＯＡｌｌ化合物（１２ａ）（１３５ｍｇ、０．２１１ｍｍｏｌ）の脱アリル化を行い、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：１０（容量比））で精製して、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ１２Ｈ２５）－ＯＨ（化合物（１２ｂ））（７１ｍｇ、０．１１９ｍｍｏｌ、収率５６％）を得た。
化合物（１２ｂ）
１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）　δ＝７．７４－７．４９（ｍ，６Ｈ），７．１３－６．９４（ｍ，６Ｈ），４．５５（ｓ，１Ｈ），４．３７－４．２０（ｍ，３Ｈ），３．０９－２．８９（ｍ，２Ｈ），１．２８－１．２１（ｍ，２５Ｈ）．
［製造例７］
　ＲＦ基含有アミノ酸（Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ４Ｆ９）－ＯＨ：１４ｂ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ６Ｆ１３）－ＯＨ：１６ｂ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃ６Ｆ１３）－ＯＨ：１８ｂ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＳＦ４ＣＦ２ＣＦ２Ｃｌ）－ＯＨ：２０ｂ）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000027
　４－（パーフルオロオクチル）アニリンの代わりに４－（パーフルオロブチル）アニリン（化合物（１３））（７３１ｍｇ、４．１ｍｍｏｌ）を用いて、製造例１と同様の手順にてＦｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ４Ｆ９）－ＯＡｌｌ（化合物（１４ａ））の粗生成物を得た。該粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝１／１０（容量比））で精製して、純粋な化合物（１４ａ）（１０７２ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ、収率６１％）を得た。
化合物（１４ａ）：
１Ｈ　ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝７．７５　（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），７．６０－７．５０（ｍ，４Ｈ），７．４５－７．３０（ｍ，４Ｈ），５．９７－５．７３（ｍ，１Ｈ），５．２８（ｍ，２Ｈ），４．７７－４．５７（ｍ，３Ｈ），４．５２－４．２９（ｍ，２Ｈ），４．２２（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ），３．１７－２．９５（ｍ，２Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）　δ＝－８０．８６（ｓ，３Ｆ），－１１０．４６（ｓ，２Ｆ），－１２２．６５（ｓ，２Ｆ），－１２５．４９（ｓ，２Ｆ）．
　また、４－（パーフルオロオクチル）アニリンの代わりに４－（パーフルオロヘキシル）アニリン（化合物（１５））（４１１ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を用いて、製造例１と同様の手順にてＦｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ６Ｆ１３）－ＯＡｌｌ（化合物（１６ａ））の粗生成物を得た。該粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝１／１０（容量比））で精製して、純粋な化合物（１６ａ）（５７５ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ、収率７３％）を得た。
化合物（１６ａ）：
１Ｈ　ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）　δ＝７．７７（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），７．３６（ｄｔ，Ｊ＝３４．３，８．１Ｈｚ，８Ｈ），５．９０（ｍ，Ｊ＝１０．６，４．９Ｈｚ，１Ｈ），５．７９（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），５．３１（ｍ，２Ｈ），４．７４（ｍ，３Ｈ），４．４１（ｓ，２Ｈ），４．２３（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），３．４３－３．２０（ｍ，２Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）　δ＝－８０．６（ｓ，３Ｆ），－１１０．３（ｓ，２Ｆ），－１２５．９～－１２１．７（ｍ，８Ｆ）．
　また、４－（パーフルオロオクチル）アニリンの代わりに４－（３，３，４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，８－トリデカフルオロオクチル）アニリン（化合物（１７））（５００ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）を用いて、製造例１と同様の手順にてＦｍｏｃ－Ａｓｐ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃ６Ｆ１３）－ＯＡｌｌ（化合物（１８ａ））の粗生成物を得た。該粗生成物を再結晶（アセトン／シクロヘキサン＝１／１０）で精製して、純粋な化合物（１８ａ）（７４５ｍｇ、０．９１ｍｍｏｌ、収率８０％）を得た。
化合物（１８ａ）：
１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝９．３１（ｓ，１Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），７．６９（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．３９（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），７．３１－７．２７（ｍ，４Ｈ），６．９１（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），５．９２（ｑｄ，Ｊ＝１１．０，５．３Ｈｚ，１Ｈ），５．３６－５．３２（ｍ，１Ｈ），５．１７（ｄｄ，Ｊ＝１０．９，１．１Ｈｚ，１Ｈ），４．７４－４．７０（ｍ，１Ｈ），４．６４－４．６３（ｍ，２Ｈ），４．３７－４．２３（ｍ，３Ｈ），３．０５－２．９０（ｍ，３Ｈ），２．５８－２．４７（ｍ，２Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（４７１ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝－８０．７０（ｔ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，３Ｆ），－１１３．５８～－１１４．２７（ｍ，２Ｆ），－１２１．４９（ｓ，２Ｆ），－１２２．４６（ｓ，２Ｆ），－１２３．０２（ｓ，２Ｆ），－１２５．８０（ｔｄ，Ｊ＝１５．０，７．１Ｈｚ，２Ｆ）．
　なお、４－（３，３，４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，８－トリデカフルオロオクチル）アニリン（化合物（１７））は、４－ニトロベンゼンジアゾニウム　テトラフルオロボレートを原料として、Ｅｕｒ．　Ｊ．　Ｏｒｇ．　Ｃｈｅｍ．２００１，ｐ.１１２１－１１２８の手法に従い、Ｈｅｃｋ反応によってカップリング体へと誘導した後、水素添加によって合成した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000028
化合物（１７）：
１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ-Ｄ６）　δ＝７．０６－６．９３(ｍ, ２Ｈ)，６．６９－６．５６（ｍ， ２Ｈ），２．８２－２．７４（ｍ，２Ｈ)，２．５３－２．３２（ｍ，２Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（４７１ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ-Ｄ６）　δ－８１．６１（ｓ，３Ｆ），－１１４．９１（ｓ，２Ｆ)，－１２２．４０（ｓ，２Ｆ），－１２３．３７（ｓ，２Ｆ），－１２４．００（ｓ，２Ｆ），－１２６．７１（ｓ，２Ｆ）．
　また、４－（パーフルオロオクチル）アニリンの代わりに４－［（３－クロロ－1，１，２，２，３，３－ヘキサフルオロ－プロピル）－テトラフルオロ－１，６－スルファニル］アニリン（化合物（１９））（３５０ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）を用いて、製造例１と同様の手順にてＦｍｏｃ－Ａｓｐ（ＳＦ４ＣＦ２ＣＦ２Ｃｌ）－ＯＡｌｌ（化合物（２０ａ））の粗生成物を得た。該粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝１／１０（容量比））で精製して、純粋な化合物（２０ａ）（３２１ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ、収率５１％）を得た。
化合物（２０ａ）：
１Ｈ　ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）　δ＝７．７７（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），７．３６（ｄｔ，Ｊ＝３４．３，８．１Ｈｚ，８Ｈ），５．９０（ｍ，Ｊ＝１０．６，４．９Ｈｚ，１Ｈ），５．７９（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），５．３１（ｍ，２Ｈ），４．７４（ｍ，３Ｈ），４．４１（ｓ，２Ｈ），４．２３（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），３．４３－３．２０（ｍ，２Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）　δ＝－８０．６（ｓ，３Ｆ），－１１０．３（ｓ，２Ｆ），－１２５．９～－１２１．７（ｍ，８Ｆ）．
　なお、４－［（３－クロロ－1，１，２，２，３，３－ヘキサフルオロ－プロピル）－テトラフルオロ－１，６－スルファニル］アニリン（化合物（１９））は、以下の通りにして合成した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000029
　窒素雰囲気下、ＤＣＥ（０．１Ｍ）に４－（クロロテトラフルオロ－λ６－スルファニル）ニトロベンゼン（０．２０ｍｍｏｌ）及び２，２’－アゾビス－２－メチルブチロニトリル、２，２’－アゾビス－２，４－ジメチルバレロニトリル（ＡＤＶＮ）（１０ｍｏｌ％）を溶解した溶液を、マイクロ波バイアル（１０ｍＬ）中で撹拌した後、０℃に冷却した。次いで、テトラフルオロエチレン（ＴＦＥ）をバブリングにより当該溶液（１．０気圧）に充填した。油浴上で４０℃、７２時間撹拌した後、不溶性の固体を濾過により除去し、濾液を減圧下で蒸発させた。得られた粗生成物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝９／１（容量比））により精製して、４－（２－クロロテトラフルオロエチルテトラフルオロ－λ６－スルファニル）ニトロベンゼン（０．０４０ｇ、収率５５％）を無色の結晶として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）　δ＝８．３３（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ）．
１３Ｃ　ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）　δ＝１５９．４（ｑｕｉｎｔ，ＪＣ－Ｆ＝２１.９Ｈｚ），１４９．２，１２７．７（ｑｕｉｎｔ，ＪＣ－Ｆ＝４．８Ｈｚ），１２４．２，１２２．１（ｔｔ，ＪＣ－Ｆ＝３０３．４，３５．６Ｈｚ），１２１．３（ｔｔｑｕｉｎｔ，ＪＣ－Ｆ＝３１２．１，３７．６，３６．６Ｈｚ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）　δ＝４８．０（ｍ，４Ｆ），－６８．１（ｔ，Ｊ＝１０．７Ｈｚ，２Ｆ），－９０．７（ｍ，２Ｆ）．
　４－（２－クロロテトラフルオロエチルテトラフルオロ－λ６－スルファニル）ニトロベンゼン（０．９８ｍｍｏｌ）をエタノール（２０ｍＬ）に溶解させた溶液に鉄（１１当量）と飽和塩化アンモニウム水溶液（５ｍＬ）を加え、油浴上８０℃で２時間撹拌した。その後、不溶性の固体をセライト濾過により除去し、濾液を減圧下で蒸発させた。得られた粗生成物を酢酸エチルに溶解させ水で洗浄し、水層を酢酸エチルで２度抽出した後、合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムにより乾燥させ、溶媒を減圧下で蒸発させた。得られた粗生成物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝４／１（容量比））により精製して、所望の化合物（１９）（０．３１１ｇ、収率９５％）を薄い黄色の液体として得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000030
１Ｈ　ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）　δ＝７．５５（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），６．５８（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ），３．９７（ｂｒ，２Ｈ）
１９Ｆ　ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）　δ＝４９．５（ｍ，４Ｆ），－６７．９（ｔ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，２Ｆ），－９０．７（ｍ，２Ｆ）．
　また、４－（パーフルオロオクチル）アニリンの代わりに４－（パーフルオロデシル）アニリン（化合物（１５））（６１１ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を用いて、製造例１と同様の手順にてＦｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ１０Ｆ２１）－ＯＡｌｌ（化合物（２１））の粗生成物を得た。該粗生成物をシゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝１／１０（容量比））で精製して、純粋な化合物（２１）（８１０ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ、収率８２％）を得た。
化合物（２１）：
１Ｈ　ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ７．９０－７．２３（ｍ，１２Ｈ），５．９３－５．８４（ｍ，１Ｈ），５．３１（ｄｄ，Ｊ＝１７．２，１．６Ｈｚ，１Ｈ），５．１３（ｄ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，１Ｈ），４．７３（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），４．６１（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），４．３６－４．１９（ｍ，３Ｈ），３．１１－３．０５（ｍ，２Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ－８１．６（ｓ，３Ｆ），－１１０．２（ｔ，Ｊ＝１４．４Ｈｚ，２Ｆ），－１２１．６－－１２３．１（ｍ，１４Ｆ），－１２６．６（ｓ，２Ｆ）．
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000031
　続いて、製造例１と同様の方法にて化合物（１４ａ）（１０００ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ）の脱アリル化を行い、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ４Ｆ９）－ＯＨ（化合物（１４ｂ））（４３２ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ、収率４６％）を得た。
化合物（１４ｂ）：
１Ｈ　ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝９．８（ｓ，１Ｈ），８．０－７．８（ｍ，２Ｈ），７．６（ｍ，２Ｈ），７．３（ｄｔ，Ｊ＝４２．４，７．１Ｈｚ，８Ｈ），６．８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），４．７－４．６（ｍ，１Ｈ），４．５－４．０（ｍ，３Ｈ），３．０－２．７（ｍ，２Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝－８１．８（ｓ，３Ｆ），－１１０．４（ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，２Ｆ），－１２３．２（ｓ，２Ｆ），－１２６．１（ｓ，２Ｆ）．
　さらに、製造例１と同様の方法にて化合物（１６ａ）（１．８ｇ、２．２８ｍｍｏｌ）の脱アリル化を行い、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ６Ｆ１３）－ＯＨ（化合物（１６ｂ））（９６５ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ、収率５６％）を得た。
化合物（１６ｂ）：
１Ｈ　ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝１０．０（ｓ，１Ｈ），８．０－７．８（ｍ，４Ｈ），７．３（ｄ，Ｊ＝４１．７，８Ｈ），６．９（ｍ，１Ｈ），４．６（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２９－４．２０（ｍ，Ｊ＝２７．４，６．７Ｈｚ，３Ｈ），３．０－２．７（ｍ，２Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝－８１．６（ｓ，３Ｆ），－１１０．２（ｄ，２Ｆ），－１２１．９（ｓ，２Ｆ），－１２２．４（ｓ，２Ｆ），－１２３．３（ｓ，２Ｆ），－１２６．７（ｓ，２Ｆ）．
　さらに、製造例１と同様の方法にて化合物（１８ａ）（６５４ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）の脱アリル化を行い、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃ６Ｆ１３）－ＯＨ（化合物（１８ｂ））（５９７ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ、収率９６％）を得た。
化合物（１８ｂ）：
１Ｈ　ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝１０．０（ｓ，１Ｈ），８．０－７．８（ｍ，４Ｈ），７．３（ｄ，Ｊ＝４１．７，８Ｈ），６．９（ｍ，１Ｈ），４．６（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２９－４．２０（ｍ，Ｊ＝２７．４，６．７Ｈｚ，３Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝－８１．６（ｓ，３Ｆ），－１１０．２（ｄ，２Ｆ），－１２１．９（ｓ，２Ｆ），－１２２．４（ｓ，２Ｆ），－１２３．３（ｓ，２Ｆ），－１２６．７（ｓ，２Ｆ）．
　さらに、製造例１と同様の方法にて化合物（２０ａ）（３１０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）の脱アリル化を行い、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＳＦ４ＣＦ２ＣＦ２Ｃｌ）－ＯＨ（化合物（２０ｂ））（７４．４ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ、収率３２％）を得た。
化合物（２０ｂ）：
１Ｈ　ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝１０．０（ｓ，１Ｈ），８．０－７．８（ｍ，４Ｈ），７．３（ｄ，Ｊ＝４１．７，８Ｈ），６．９（ｍ，１Ｈ），４．６（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２９－４．２０（ｍ，Ｊ＝２７．４，６．７Ｈｚ，３Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝－８１．６（ｓ，３Ｆ），－１１０．２（ｄ，２Ｆ），－１２１．９（ｓ，２Ｆ），－１２２．４（ｓ，２Ｆ），－１２３．３（ｓ，２Ｆ），－１２６．７（ｓ，２Ｆ）．
［製造例８］
　ＲＦ基含有アミノ酸（Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃ８Ｆ１７）－ＯＨ：２４ｂ）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000032
　４－（パーフルオロオクチル）アニリンの代わりに３，３，４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１０－ヘプタデカフルオロ－1－デカンアミン（化合物（２３））（３．７９ｍｇ、８．０８ｍｍｏｌ）を用いて、製造例１と同様の手順にてＦｍｏｃ－Ａｓｐ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃ８Ｆ１７）－ＯＡｌｌ（化合物（２４ａ））の粗生成物を得た。該粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝１／１０（容量比））で精製して、純粋な化合物（２４ａ）（４．８９ｍｇ、５．８１ｍｍｏｌ、収率７２％）を得た。
化合物（２４ａ）：
１Ｈ　ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）　δ＝７．７５（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），７．６０－７．５０（ｍ，４Ｈ），７．４５－７．３０（ｍ，４Ｈ），５．９７－５．７３（ｍ，１Ｈ），５．２８（ｍ，２Ｈ），４．７７－４．５７（ｍ，３Ｈ），４．５２－４．２９（ｍ，２Ｈ），４．２２（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ），３．１７－２．９５（ｍ，２Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）　δ＝－８０．８６（ｓ，３Ｆ），－１１０．４６（ｓ，２Ｆ），－１２２．６５（ｓ，２Ｆ），－１２５．４９（ｓ，２Ｆ）．
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000033
　続いて、製造例１と同様の方法にて化合物（２４ａ）（２．６１ｍｇ、３．１１ｍｍｏｌ）の脱アリル化を行い、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃ８Ｆ１７）－ＯＨ（化合物（２４ｂ））（１．３３ｇ、１．６７ｍｍｏｌ、収率５４％）を得た。
化合物（２４ｂ）：
１Ｈ　ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝７．８３（ｄ，J＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），７．６８（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），７．３８（ｔ，J＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），７．３１－７．２７（ｍ，２Ｈ），６．７３（ｄ，J＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），４．５６（ｄｄ，J＝１４．４，５．７Ｈｚ，１Ｈ），４３４－４．２０（ｍ，３Ｈ），３．５２（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），２．４８（ｔｄ，J＝１９．４，７．２Ｈｚ，２Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝－８１．５（ｔ，J＝１０．１Ｈｚ，３Ｆ），－１１４．５（ｔ，J＝１７．３Ｈｚ，２Ｆ），－１２２．１～－１２４．０（ｍ，１０Ｆ），－１２６．６（ｓ，２Ｆ）．
［実施例１］
　トリペプチドＨ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000034
　固相合成用チューブに、Ｒｉｎｋ－ａｍｉｄｅ　Ｒｅｓｉｎ（３９ｍｇ、０．０２５μｍｏｌ）及びＤＭＦ（２ｍＬ）を加えて、室温で３０分間攪拌してレジンを膨潤させた。次いで、該チューブに、２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液（２ｍＬ）を加えて３分間攪拌した後、ＤＭＦ（２ｍＬ）で３回洗浄した。再度２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液（２ｍＬ）を加えて１２分間攪拌することにより、Ｆｍｏｃ基の脱保護を行った。続いて、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ（３９ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ、４．０当量）、ＣＯＭＵ（４３ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ、４．０当量）、ｏｘｙｍａ（１４ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ、４．０当量）、及びＤＩＰＥＡ（２６ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ、８．０当量）を加えて室温で２時間攪拌し、アミノ酸の縮合反応を行った。次に、反応物をＤＭＦ（２ｍＬ）で３回洗浄した後、前記と同様の方法でＦｍｏｃの脱保護を行った。同様の操作を製造例１で合成したＦｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－ＯＨ(８４ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ、４．０当量)、及びＦｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ（３１ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ、４．０当量）に対して行った。続く後処理として、切り出し用カクテル（ＴＦＡ：トリイソプロピルシラン：水＝９５：２．５：２．５（容量比））（２ｍＬ）を加えて室温で２時間攪拌することにより、レジンからの切り出しを行い、Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２を含む粗生成物を得た。該粗生成物を真空乾燥した後、逆相クロマトグラフィー（アセトニトリル／水／ＴＦＡ＝７５：２５：０．１～９９：１：０．１（容量比））で精製し、Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２（５ｍｇ、５μｍｏｌ、収率２０％）を得た。
Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２：
１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－Ｄ６）　δ＝７．４３－７．３６（ｍ，５Ｈ），７．２０－７．１３（ｍ，４Ｈ），５．２７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），４．４６（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），４．３２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），３．０３－２．９０（ｍ，２Ｈ），２．８１－２．５９（ｍ，２Ｈ），１．０８（ｓ，３Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－Ｄ６）　δ＝－８０．１（ｓ，３Ｆ），－１０８．８（ｓ，２Ｆ），－１２２．４～－１２１．０（ｍ，９Ｆ），－１２５．７（ｓ，２Ｆ）．
　合成したヘプタデカフルオロオクチル基を有するトリペプチド（Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）のＮ末端に、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製の蛍光物質Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標） ６４７を結合させた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000035
　１．５ｍＬ容の黒色チューブに、乾燥ＤＭＳＯ（２０μＬ）に溶解させたＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ６４７－ＮＨＳエステル（０．２ｍｇ）、乾燥ＤＭＳＯ（２００μＬ）に溶解させたＨ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２（４．０当量）、及び乾燥ＤＭＳＯ（１０μＬ）に溶解させたＤＩＰＥＡ（３．０当量）を加えた。該混合物を室温で一晩撹拌し続けた後、逆相クロマトグラフィー（アセトニトリル／水／ＴＦＡ＝２５：７５：０．１～９９：１：０．１）で精製し、凍結乾燥して、蛍光コンジュゲート１を青色固体として得た（蛍光計で計算して収率３３％）。なお、蛍光は、Ｎａｎｏ Ｄｒｏｐ（登録商標）分光光度計ＮＤ－１０００を用い、発光波長＝６５０ｎｍで測定した。
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ　ＭＳ　［Ｍ＋４Ｈ］＋：ｍ／ｚ　ｃａｌｃｄ　ｆｏｒ　Ｃ６６Ｈ７１Ｆ１７Ｎ７Ｏ１７Ｓ４ １＋　１６８４．３５１２，ｆｏｕｎｄ　１６８４．５６１１
［実施例２］
　トリペプチドＨ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ｂｉｓ－Ｃ４Ｆ９）－Ｐｈｅ－ＮＨ２の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000036
　縮合させるアミノ酸に、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－ＯＨの代わりに製造例３で合成したＦｍｏｃ－Ａｓｐ（ｂｉｓ－Ｃ４Ｆ９）－ＯＨを用いて、実施例１と同様の方法にて、トリペプチドを合成し、Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ｂｉｓ－Ｃ４Ｆ９）－Ｐｈｅ－ＮＨ２（１３ｍｇ、１５μｍｏｌ、収率６３％）を得た。
Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ｂｉｓ－Ｃ４Ｆ９）－Ｐｈｅ－ＮＨ２：
ＬＲＭＳ（ＬＣ－ＭＳ）［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ　ｃａｌｃｄ　ｆｏｒ Ｃ３０Ｈ２６Ｆ１８Ｎ５Ｏ４ ＋　８６２．１７，ｆｏｕｎｄ　８６２．２０
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000037
　Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ｂｉｓ－Ｃ４Ｆ９）－Ｐｈｅ－ＮＨ２について、実施例１と同様の方法でＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７との結合を行い、Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ｂｉｓ－Ｃ４Ｆ９）－Ｐｈｅ－ＮＨ２の蛍光コンジュゲート２を青色固体として得た（蛍光計で計算して収率３２％　色素基準）。
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ　ＭＳ［Ｍ＋３Ｈ］：ｍ／ｚ　ｃａｌｃｄ　ｆｏｒ　Ｃ６６Ｈ６９Ｆ１８Ｎ７Ｏ１７Ｓ４　１７０１．３３４５，ｆｏｕｎｄ　１７０１．８４１０
［実施例３］
　トリペプチドＨ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ＳＦ５）－Ｐｈｅ－ＮＨ２の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000038
　縮合させるアミノ酸に、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－ＯＨの代わりに製造例４で合成したＦｍｏｃ－Ａｓｐ（ＳＦ５）－ＯＨを用いて、実施例１と同様の方法にて、トリペプチドを合成し、Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ＳＦ５）－Ｐｈｅ－ＮＨ２（９．６ｍｇ、１７μｍｏｌ、収率７０％）を得た。
Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ＳＦ５）－Ｐｈｅ－ＮＨ２
ＬＲＭＳ（ＬＣ－ＭＳ）［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ　ｃａｌｃｄ　ｆｏｒ　Ｃ２２Ｈ２７Ｆ５Ｎ５Ｏ４Ｓ＋　５５２．１７，ｆｏｕｎｄ　５５２．２３
［実施例４］
　トリペプチドＨ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ｔｒｉｓ－ｔ－Ｃ４Ｆ５）－Ｐｈｅ－ＮＨ２の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000039
　縮合させるアミノ酸に、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－ＯＨの代わりに製造例５で合成したＦｍｏｃ－Ａｓｐ（ｔｒｉｓ－ｔ－Ｃ４Ｆ５）－ＯＨを用いて、実施例１と同様の方法にてトリペプチドを合成し、Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ｔｒｉｓ－ｔ－Ｃ４Ｆ９）－Ｐｈｅ－ＮＨ２（１０ｍｇ、５μｍｏｌ、収率３４％）を得た。
Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ｔｒｉｓ－ｔ－Ｃ４Ｆ９）－Ｐｈｅ－ＮＨ２：
ＬＲＭＳ（ＬＣ－ＭＳ）［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ　ｃａｌｃｄ　ｆｏｒ　Ｃ３８Ｈ３３Ｆ２７Ｎ５Ｏ７ ＋　１１８４．１９，ｆｏｕｎｄ　１１８４．８６
［実施例５］
　トリペプチドＨ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ４Ｆ９）－Ｐｈｅ－ＮＨ２，Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ６Ｆ１３）－Ｐｈｅ－ＮＨ２，Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ１０Ｆ２１）－Ｐｈｅ－ＮＨ２，Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ＳＦ４ＣＦ２ＣＦ２Ｃｌ）－Ｐｈｅ－ＮＨ２の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000040
　縮合させるアミノ酸に、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－ＯＨの代わりに製造例７で合成したＦｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ４Ｆ９）－ＯＨを用いて、実施例１と同様の方法にてトリペプチドを合成し、Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ４Ｆ９）－Ｐｈｅ－ＮＨ２（２ｍｇ、３．１μｍｏｌ、収率１２％）を得た。
Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ４Ｆ９）－Ｐｈｅ－ＮＨ２：
ＬＲＭＳ（ＬＣ－ＭＳ）［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ　ｃａｌｃｄ　ｆｏｒ　Ｃ２６Ｈ３３Ｆ９Ｎ５Ｏ４ ＋　６４４．１９，ｆｏｕｎｄ　６４４．１６
　また、縮合させるアミノ酸に、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－ＯＨの代わりに製造例７で合成したＦｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ６Ｆ１３）－ＯＨを用いて、実施例１と同様の方法にてトリペプチドを合成し、Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ６Ｆ１３）－Ｐｈｅ－ＮＨ２（２．１ｍｇ、２．８μｍｏｌ、収率１１％）を得た。
Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ６Ｆ１３）－Ｐｈｅ－ＮＨ２：
ＬＲＭＳ（ＬＣ－ＭＳ）［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ　ｃａｌｃｄ　ｆｏｒ　Ｃ３８Ｈ２７Ｆ１３Ｎ５Ｏ４ ＋　７４４．１８，ｆｏｕｎｄ　７４４．１６
　また、縮合させるアミノ酸に、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－ＯＨの代わりに製造例７で合成したＦｍｏｃ－Ａｓｐ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃ６Ｆ１３）－ＯＨを用いて、実施例１と同様の方法にてトリペプチドを合成し、Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃ６Ｆ１３）－Ｐｈｅ－ＮＨ２（５ｍｇ、６．４μｍｏｌ、収率２５％）を得た。
Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃ６Ｆ１３）－Ｐｈｅ－ＮＨ２：
ＬＲＭＳ（ＬＣ－ＭＳ）［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ　ｃａｌｃｄ　ｆｏｒ　Ｃ３０Ｈ３１Ｆ１３Ｎ５Ｏ４ ＋　７７２．７２，ｆｏｕｎｄ　７７２．３６
　また、縮合させるアミノ酸に、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－ＯＨの代わりにＦｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ１０Ｆ２１）－ＯＨを用いて、実施例１と同様の方法にてトリペプチドを合成し、Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ１０Ｆ２１）－Ｐｈｅ－ＮＨ２（１．８ｍｇ、１．９μｍｏｌ、収率８％）を得た。なお、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ１０Ｆ２１）－ＯＨは、製造例７で合成した化合物（２２ａ）を製造例１と同様の方法にて、脱アリル化反応を行って得た。得られた生成物は、精製せずにトリペプチド合成に用いた。
Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ１０Ｆ２１）－Ｐｈｅ－ＮＨ２：
ＬＲＭＳ（ＬＣ－ＭＳ）［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ　ｃａｌｃｄ　ｆｏｒ　Ｃ３８Ｈ２７Ｆ１３Ｎ５Ｏ４ ＋　９４３．１６，ｆｏｕｎｄ　９４３．２７
　また、縮合させるアミノ酸に、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－ＯＨの代わりに製造例７で合成したＦｍｏｃ－Ａｓｐ（ＳＦ４ＣＦ２ＣＦ２Ｃｌ）－ＯＨを用いて、実施例１と同様の方法にてトリペプチドを合成し、Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ＳＦ４ＣＦ２ＣＦ２Ｃｌ）－Ｐｈｅ－ＮＨ２（１．８ｍｇ、２．７μｍｏｌ、収率１１％）を得た。
Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ＳＦ４ＣＦ２ＣＦ２Ｃｌ）－Ｐｈｅ－ＮＨ２：
ＬＲＭＳ（ＬＣ－ＭＳ）［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ　ｃａｌｃｄ　ｆｏｒ　Ｃ２４Ｈ２７ＣｌＦ８Ｎ５Ｏ４Ｓ＋　６６８．１３，ｆｏｕｎｄ　６６８．１４
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000041
　Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ４Ｆ９）－Ｐｈｅ－ＮＨ２について、実施例１と同様の方法でＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７との結合を行い、Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ４Ｆ９）－Ｐｈｅ－ＮＨ２の蛍光コンジュゲート６を青色固体として得た（蛍光計で計算して収率５４％　色素基準）。
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ　ＭＳ［Ｍ＋３Ｈ］：ｍ／ｚ　ｃａｌｃｄ　ｆｏｒ　Ｃ６６Ｈ６９Ｆ１８Ｎ７Ｏ１７Ｓ４　１７０１．３３４５，ｆｏｕｎｄ　１７０１．８４１０
　Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ６Ｆ１３）－Ｐｈｅ－ＮＨ２について、実施例１と同様の方法でＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７との結合を行い、Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ６Ｆ１３）－Ｐｈｅ－ＮＨ２の蛍光コンジュゲート７を青色固体として得た（蛍光計で計算して収率５０％　色素基準）。
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ　ＭＳ［Ｍ＋３Ｈ］：ｍ／ｚ　ｃａｌｃｄ　ｆｏｒ　Ｃ６４Ｈ６７Ｆ１３Ｎ７Ｏ１７Ｓ４　１５８３．３５０３，ｆｏｕｎｄ　１５８３．７４５０
　Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃ６Ｆ１３）－Ｐｈｅ－ＮＨ２について、実施例１と同様の方法でＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７との結合を行い、Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃ６Ｆ１３）－Ｐｈｅ－ＮＨ２の蛍光コンジュゲート１２を青色固体として得た（蛍光計で計算して収率９６％　色素基準）。
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ　ＭＳ［Ｍ＋４Ｈ］＋：ｍ／ｚ　ｃａｌｃｄ　ｆｏｒ　Ｃ６６Ｈ７５Ｆ１３Ｎ７Ｏ１７Ｓ４ ＋　１６１２．３８８９，ｆｏｕｎｄ　１６１２．８９９３
　また、Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ１０Ｆ２１）－Ｐｈｅ－ＮＨ２について、実施例１と同様の方法でＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７との結合を行い、Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ１０Ｆ２１）－Ｐｈｅ－ＮＨ２の蛍光コンジュゲート８を青色固体として得た（蛍光計で計算して収率７２％　色素基準）。
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ　ＭＳ［Ｍ＋４Ｈ］：ｍ／ｚ　ｃａｌｃｄ　ｆｏｒ　Ｃ６８Ｈ７１Ｆ２１Ｎ７Ｏ１７Ｓ４　１７８４．３２，ｆｏｕｎｄ　１７８４．５６
　また、Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ＳＦ４ＣＦ２ＣＦ２Ｃｌ）－Ｐｈｅ－ＮＨ２について、実施例１と同様の方法でＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７との結合を行い、Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ＳＦ４ＣＦ２ＣＦ２Ｃｌ）－Ｐｈｅ－ＮＨ２の蛍光コンジュゲート９を青色固体として得た（蛍光計で計算して収率４２％　色素基準）。
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ　ＭＳ［Ｍ＋３Ｈ］：ｍ／ｚ　ｃａｌｃｄ　ｆｏｒ　Ｃ６０Ｈ７１ＣｌＦ８Ｎ７Ｏ１７Ｓ５ ＋　１５０８．３０６５，ｆｏｕｎｄ　１５０８．４７６
　また、Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ｔｒｉｓ－ｔ－Ｃ４Ｆ９）－Ｐｈｅ－ＮＨ２について、実施例１と同様の方法でＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７との結合を行い、Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ｔｒｉｓ－ｔ－Ｃ４Ｆ９）－Ｐｈｅ－ＮＨ２の蛍光コンジュゲート１０を青色固体として得た（蛍光計で計算して収率８９％　色素基準）。
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ　ＭＳ［Ｍ＋３Ｈ］：ｍ／ｚ　ｃａｌｃｄ　ｆｏｒ　Ｃ６０Ｈ７１ＣｌＦ８Ｎ７Ｏ１７Ｓ５ ＋　１５０８．３０６５，ｆｏｕｎｄ　１５０８．４７６
［実施例６］
　トリペプチドＨ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000042
　縮合させるアミノ酸に、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－ＯＨの代わりに製造例８で合成したＦｍｏｃ－Ａｓｐ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃ８Ｆ１７）－ＯＨを用いて、実施例１と同様の方法にて、トリペプチドを合成し、Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２（５ｍｇ、６．２７μｍｏｌ、収率２５％）を得た。
Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２：
ＬＣＭＳ（ＬＣ－ＭＳ）［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ　ｃａｌｃｄ　ｆｏｒ Ｃ３２Ｈ２６Ｆ１８Ｎ５Ｏ４ ＋　８７１．２０，ｆｏｕｎｄ　８７１．３５
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000043
　Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２について、実施例１と同様の方法でＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７との結合を行い、Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２の蛍光コンジュゲート１１を青色固体として得た（蛍光計で計算して収率８０％　色素基準）。
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ　ＭＳ［Ｍ＋３Ｈ］：ｍ／ｚ　ｃａｌｃｄ　ｆｏｒ　Ｃ６６Ｈ６９Ｆ１８Ｎ７Ｏ１７Ｓ４　１７０８．３５，ｆｏｕｎｄ　１７０８．８２
［実施例７］
　テトラペプチドＨ－Ｃｙｓ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２，Ｈ－Ｃｙｓ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ６Ｆ１３）－Ｐｈｅ－ＮＨ２の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000044
　縮合させるアミノ酸に、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－ＯＨを用いて、実施例１と同様の方法にて、テトラペプチドを合成し、Ｈ－Ｃｙｓ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２（１６ｍｇ、１７μｍｏｌ、収率２２％）を得た。
Ｈ－Ｃｙｓ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２：
ＬＲＭＳ（ＬＣ－ＭＳ）［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ　ｃａｌｃｄ　ｆｏｒ Ｃ３３Ｈ３２Ｆ１７Ｎ６Ｏ５Ｓ＋　９４７．６９，ｆｏｕｎｄ　９４７．５４
　また、縮合させるアミノ酸に、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－ＯＨの代わりに製造例７で合成したＦｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ６Ｆ１３）－ＯＨを用いて、実施例１と同様の方法にて、テトラペプチドを合成し、Ｈ－Ｃｙｓ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ６Ｆ１３）－Ｐｈｅ－ＮＨ２（１２ｍｇ、１５μｍｏｌ、収率５７％）を得た。
Ｈ－Ｃｙｓ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ６Ｆ１３）－Ｐｈｅ－ＮＨ２：
ＬＲＭＳ（ＬＣ－ＭＳ）［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ　ｃａｌｃｄ　ｆｏｒ Ｃ３１Ｈ３２Ｆ１３Ｎ６Ｏ５Ｓ＋　８４７．６７，ｆｏｕｎｄ　８４７．５４
［比較例１］
　トリペプチドＨ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ１２Ｈ２５）－Ｐｈｅ－ＮＨ２の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000045
　縮合させるアミノ酸に、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－ＯＨの代わりに製造例６で合成したフッ素原子を含まないＦｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｃ１２Ｈ２５）－ＯＨを用いて、実施例１と同様の方法にてトリペプチドを合成し、Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ１２Ｈ２５）－Ｐｈｅ－ＮＨ２（７．１ｍｇ、１１μｍｏｌ、収率４８％）を得た。
Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ１２Ｈ２５）－Ｐｈｅ－ＮＨ２：
１Ｈ－ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－Ｄ６）δ　９．８６（ｓ，１Ｈ），７．０４（ｍ，４Ｈ），４．５２（ｍ，１Ｈ），４．３４（ｍ，１Ｈ），４．０９（ｍ，１Ｈ），２．８９－３．０５（ｍ，２Ｈ），２．６５－２．８１（ｍ，２Ｈ），１．２３―１．９８（ｍ，２８Ｈ）．
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000046
　Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ１２Ｈ２５）－Ｐｈｅ－ＮＨ２について、実施例１と同様の方法でＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７との結合を行い、Ｈ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ１２Ｈ２５）－Ｐｈｅ－ＮＨ２の蛍光コンジュゲート３を青色固体として得た（蛍光計で計算して収率２３％　色素基準）。
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ　ＭＳ［Ｍ＋４Ｈ］＋：ｍ／ｚ　ｃａｌｃｄ　ｆｏｒ　Ｃ７０Ｈ９６Ｎ７Ｏ１７Ｓ４ ＋　１４３４，５７４０，ｆｏｕｎｄ　１４３４．１３９０
［比較例２］
　ヘプタデカフルオロオクチル基を有するジペプチド（Ｂｏｃ－ＲＦＡＡ（Ｃ８）－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）を合成した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000047
　乾燥させた３００ｍＬ容の三つ口なすフラスコ中で、２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－３，３，４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１０－ヘプタデカフルオロドデカン酸（９９４．４ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ）、ＤＣＭ（９９ｍＬ）、フェニルアラニンメチルエステル塩酸塩（１．８４ｍｍｏｌ）、及びｏｘｙｍａ（１．８４ｍｍｏｌ）を混合して攪拌した。反応混合物を０℃に冷却し、ＣＯＭＵ（１．８４ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（３．６９ｍｍｏｌ）を加え、室温で２０．５時間攪拌した。その後、該反応混合物をＨＣｌ（１Ｎ）でクエンチし、ＤＣＭで３回抽出した。合わせた有機相を減圧濃縮した後、酢酸エチルで希釈し、ＨＣｌ（１Ｎ）、飽和重曹水、及び飽和食塩水で洗浄した。洗浄後の有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した後、減圧濃縮してＢｏｃ－ＲＦＡＡ（Ｃ８）－Ｐｈｅ－ＯＭｅの粗生成物を得た。該粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝１／４（容量比））で精製して、Ｂｏｃ－[（Ｒ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（ジアステレオマーＡ）（３８３．３ｍｇ、０．５０８ｍｍｏｌ）、及びＢｏｃ－[（Ｓ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（ジアステレオマーＢ）（４１７．１ｍｇ、０．５５３ｍｍｏｌ）の合計８０７．３ｍｇ（１．０７ｍｍｏｌ、収率６３．８％）を得た。
　ここで、ジアステレオマーＢの結晶を用いて、Ｘ線構造解析により含まれるＲＦＡＡ（Ｃ８）の立体を（Ｓ）体と決定した。Ｘ線構造解析には、リガク製ＶａｒｉＭａｘ Ｄｕａｌ Ｓａｔｕｒｎを使用した。
Ｂｏｃ－[（Ｒ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（ジアステレオマーＡ）：
１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）　δ＝７．３０－７．２５（ｍ，３Ｈ），７．０７－７．０５（ｍ，２Ｈ），６．４０（ｄ，１Ｈ），５．４６（ｍ，１Ｈ），５．００－４．８７（ｍ，２Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），３．２０－３．１１（ｍ，２Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（４７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）　δ＝－８０．８６（ｔ，３Ｆ），－１１４．８９（ｄ，Ｊ＝２８１Ｈｚ，１Ｆ），－１１９．１１（ｄ，Ｊ＝２７９Ｈｚ，１Ｆ），－１２０．４０～－１２３．１０（ｍ，１０Ｆ），－１２６．２３（ｍ，２Ｆ）．
Ｂｏｃ－ＲＦＡＡ（Ｃ８）－Ｐｈｅ－ＯＭｅ
Ｂｏｃ－[（Ｓ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（ジアステレオマーＢ）：
１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）　δ＝７．２８－７．２６（ｍ，３Ｈ），７．１０－７．０４（ｍ，２Ｈ），６．３５（ｄ，１Ｈ），５．４８（ｍ，１Ｈ），５．００－４．８７（ｍ，２Ｈ），３．７４（ｓ，３Ｈ），３．１５－３．１３（ｍ，２Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（４７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）　－８０．８６（ｔ，３Ｆ），－１１４．２１（ｄ，Ｊ＝２７５Ｈｚ，１Ｆ），－１１８．７８（ｄ，Ｊ＝２７９Ｈｚ，１Ｆ），－１２０．３５～－１２３．００（ｍ，１０Ｆ），－１２６．２３（ｍ，２Ｆ）．
　合成したペプチドのＮ末端側の保護基を脱保護し、Ｈ－ＲＦＡＡ（Ｃ８）－Ｐｈｅ－ＯＭｅを得た。
　５０ｍＬ容の二口フラスコに撹拌子を入れ、Ｂｏｃ－[（Ｒ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（ジアステレオマーＡ）（０．５０８ｍｍｏｌ）とＤＣＭ（１７ｍＬ）を加えた。この反応混合物を０℃に冷却した後、ＴＦＡ（３．４ｍＬ）を添加し、室温まで昇温した。１．５時間攪拌した後、炭酸水素ナトリウム水溶液を添加して反応を終了させた。水相をＤＣＭで抽出し、合わせた有機相を減圧留去して、脱保護体Ｈ－[（Ｒ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅの粗生成物を得た。該粗生成物を、シリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝２／５（容量比））で精製して、Ｈ－[（Ｒ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（ジアステレオマーＡ）（０．３９３ｍｍｏｌ、収率６７．７％）を得た。
Ｈ－［（Ｒ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）］－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（ジアステレオマーＡ）
１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝７．９５（ｂｒ，１Ｈ），７．３０－７．２２（ｍ，５Ｈ），４．８２－４．７７（ｍ，１Ｈ），４．４０－４．２５（ｍ，１Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．２０－３．０７（ｍ，２Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（４７０ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝－８０．８６（ｔ，３Ｆ），－１１５．００（ｄ，Ｊ＝２７７Ｈｚ，１Ｆ），－１１７．２０（ｄ，Ｊ＝２７５Ｈｚ，１Ｆ），－１２０．００～－１２２．７０（ｍ，１０Ｆ），－１２５．９５（ｓ，２Ｆ）．
　Ｂｏｃ－［（Ｓ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）］－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（ジアステレオマーＢ）（９８．７μｍｏｌ）について、同様の方法で脱保護を行い、Ｈ－[（Ｓ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（ジアステレオマーＢ）（６０．１μｍｏｌ、収率６０．８％）を得た。
Ｈ－［（Ｓ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）］－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（ジアステレオマーＢ）：
１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝７．３１－７．１９（ｍ，５Ｈ），４．８２－４．７９（ｍ，１Ｈ），４．７０－４．６４（ｍ，１Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ），３．２２－３．０６（ｍ，２Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（４７０ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝－８０．８６（ｔ，３Ｆ），－１１４．７６（ｄ，Ｊ＝２６７Ｈｚ，１Ｆ），－１１７．３１（ｄ，Ｊ＝２７５Ｈｚ，１Ｆ），－１２０．００～－１２２．７０（ｍ，１０Ｆ），－１２５．９４（ｓ，２Ｆ）．
　続いて、ヘプタデカフルオロオクチル基を有するトリペプチド（Ｂｏｃ－Ａｌａ－ＲＦＡＡ（Ｃ８）－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）を合成した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000048
　２５ｍＬ容の二口丸底フラスコ内で、ジペプチド（Ｈ－[（Ｒ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）（０．２４ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ（１．２当量）、及びｏｘｙｍａ（１．２当量）をＤＣＭ（３．４ｍＬ）に溶解させ、攪拌した。反応混合物を０℃に冷却し、ＣＯＭＵ（１．２当量）及びＤＩＰＥＡ（１．２当量）を加え、室温にして２４時間攪拌した。その後、反応混合物をＨＣｌ（１Ｎ）でクエンチし、ＤＣＭで３回抽出した。合わせた有機相を減圧濃縮した後、酢酸エチルで希釈し、ＨＣｌ（１Ｎ）、飽和重曹水、及び飽和食塩水で洗浄した。洗浄後の有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した後、減圧濃縮してＢｏｃ－Ａｌａ－[（Ｒ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅの粗生成物を得た。粗生成物をＤＣＭに溶解した後、ヘキサンで再沈殿させ、濾過することにより、純粋なＢｏｃ－Ａｌａ－[（Ｒ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（０．２０ｍｍｏｌ、収率８５．４％）を得た。
Ｂｏｃ－Ａｌａ－[（Ｒ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（ジアステレオマーＡ）：
１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝８．２９（ｂｒ，１Ｈ），７．７２（ｂｒ，１Ｈ），７．２８－７．１７（ｍ，５Ｈ），６．３８（ｂｒ，１Ｈ），５．６７－５．６０（ｍ，１Ｈ），４．８０－４．７６（ｍ，１Ｈ），４．２３－４．１８（ｍ，１Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．２０－３．００（ｍ，２Ｈ），１．４３（ｓ，９Ｈ）１．３０（ｔ，３Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（４７０ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝－８０．８６（ｔ，３Ｆ），－１１４．５７（ｄ，Ｊ＝２８２Ｈｚ，１Ｆ），－１１９．３１（ｄ，Ｊ＝２８１Ｈｚ，１Ｆ），－１２０．００～－１２２．７０（ｍ，１０Ｆ），－１２５．９６（ｍ，２Ｆ）．
　Ｈ－[（Ｓ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（ジアステレオマーＢ）（４６．１μｍｏｌ）について、同様の方法でＢｏｃ－Ａｌａ－ＯＨとの縮合を行い、Ｂｏｃ－Ａｌａ－[（Ｓ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（ジアステレオマーＢ）（４５．７μｍｏｌ、収率９９％）を得た。
Ｂｏｃ－Ａｌａ－[（Ｓ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（ジアステレオマーＢ）：
１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝８．３３（ｂｒ，１Ｈ），７．８５（ｂｒ，１Ｈ），７．３０－７．２２（ｍ，５Ｈ），６．３０（ｂｒ，１Ｈ），５．６３－５．５３（ｍ，１Ｈ），４．７２－４．６７（ｍ，１Ｈ），４．３２－４．２５（ｍ，１Ｈ），３．６６（ｓ，３Ｈ），３．１８－３．０２（ｍ，２Ｈ），１．４０（ｓ，９Ｈ）１．３２（ｄ，３Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（４７０ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝－８０．８６（ｔ，３Ｆ），－１１４．５０（ｄ，Ｊ＝２８７Ｈｚ，１Ｆ），－１１８．７７（ｄ，Ｊ＝２７７Ｈｚ，１Ｆ），－１２０．７５～－１２２．５３（ｍ，１０Ｆ），－１２５．９３（ｍ，２Ｆ）．
　合成したペプチドのＮ末端側の保護基を脱保護し、Ｈ－Ａｌａ－[（Ｒ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅを得た。
　２０ｍＬ容の二口フラスコに撹拌子を入れ、一方にＢｏｃ－Ａｌａ－[（Ｒ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（ジアステレオマーＡ）（０．１９４ｍｍｏｌ）とＤＣＭ（５ｍＬ）を加えた。この反応混合物を０℃に冷却した後、ＴＦＡ（１ｍＬ）を添加し、室温まで昇温させて、２時間攪拌した。その後、炭酸水素ナトリウム水溶液を添加して反応を終了させた。該反応混合物の水相をＤＣＭで抽出し、合わせた有機相を減圧留去して、脱保護体Ｈ－Ａｌａ－[（Ｒ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅの粗生成物を得た。該粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール＝１５／１（容量比））で精製して、Ｈ－Ａｌａ－[（Ｒ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（ジアステレオマーＡ）（０．１４７ｍｍｏｌ、収率７５．６％）を得た。
Ｈ－Ａｌａ－[（Ｒ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（ジアステレオマーＡ）：
１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝８．３０，８．２０（ｍ，ＮＨ），７．２８－７．１９（ｍ，５Ｈ），６．３８（ｂｒ，１Ｈ），５．６８－５．５３（ｍ，１Ｈ），４．７９－４．７６（ｍ，１Ｈ），３．９７－３．４７（ｍ，１Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），１．２６，１．１７（ｓ，３Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（４７０ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝－８０．８６（ｔ，３Ｆ），－１１４．５０（ｄ，Ｊ＝２８２Ｈｚ，１Ｆ），－１１９．４８（ｄ，Ｊ＝２８１Ｈｚ，１Ｆ），－１２０．４０～－１２２．６５（ｍ，１０Ｆ），－１２５．９２（ｍ，２Ｆ）．
　Ｂｏｃ－Ａｌａ－[（Ｓ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（ジアステレオマーＢ）（４５．７μｍｏｌ）について、同様の方法で脱保護を行い、Ｈ－Ａｌａ－[（Ｓ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（ジアステレオマーＢ）（２１．１μｍｏｌ、収率４６．２％）を得た。
Ｈ－Ａｌａ－[（Ｓ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（ジアステレオマーＢ）：
１Ｈ　ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝８．３８，８．２１（ｍ，ＮＨ），７．３１－７．２１（ｍ，５Ｈ），５．５９－５．５４（ｍ，１Ｈ），４．７６－４．７２（ｍ，１Ｈ），４．０６－３．９７（ｍ，１Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．２０－３．０４（ｍ，２Ｈ），１．１９，１．１７（ｓ，３Ｈ）．
１９Ｆ　ＮＭＲ（４７０ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）　δ＝－８０．８６（ｔ，３Ｆ），－１１４．８２（ｄ，Ｊ＝２８２Ｈｚ，１Ｆ），－１１８．６８（ｄ，Ｊ＝２８４Ｈｚ，１Ｆ），－１２０．８０～－１２２．７０（ｍ，１０Ｆ），－１２５．９８（ｍ，２Ｆ）．
　合成した脱保護後のトリペプチド（Ｈ－Ａｌａ－[（Ｒ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）のＮ末端に、蛍光物質Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ６４７を結合させた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000049
　１．５ｍＬ容の黒色チューブに、乾燥ＤＭＳＯ（１７５μＬ）に溶解させたＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７－ＮＨＳエステル（１．７５ｍｇ）、乾燥ＤＭＳＯ（５０μＬ）に溶解させたＨ－Ａｌａ－ＲＦＡＡ（Ｃ８）－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（３．０当量）、乾燥ＤＭＳＯ（７１μＬ）に溶解させたＤＩＰＥＡ（３．０当量）、及び乾燥ＤＭＳＯ １２４μＬを加えた。混合物を室温で一晩撹拌し続けた。該混合物を逆相クロマトグラフィー（アセトニトリル／水／ＴＦＡ＝２５：７５：０．１～９９：１：０．１）で精製し、凍結乾燥して蛍光コンジュゲート４を青色固体として得た（蛍光計で計算して収率５２．０％）。なお、蛍光は、Ｎａｎｏ Ｄｒｏｐ（登録商標）分光光度計ＮＤ－１０００を用い、発光波長＝６５０ｎｍで測定した。
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ　ＭＳ
［Ｍ＋２］－：ｍ／ｚ ｃａｌｃｄ　ｆｏｒ Ｃ５９Ｈ６３Ｆ１７Ｎ５Ｏ１７Ｓ４－１５６４．２８２５，ｆｏｕｎｄ　１５６４．３５０１
　Ｈ－Ａｌａ－[（Ｓ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（ジアステレオマーＢ）（１．２４１μｍｏｌ）について、同様の方法でＡｌｅｘａ ＦｌｕｏｒＴＭ ６４７との結合を行い、Ｈ－Ａｌａ－[（Ｓ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（ジアステレオマーＢ）の蛍光コンジュゲート５を青色固体として得た（蛍光計で計算して収率５４．３％　色素基準）。
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ　ＭＳ
［Ｍ＋４］＋：ｍ／ｚ ｃａｌｃｄ　ｆｏｒ　Ｃ５９Ｈ６５Ｆ１７Ｎ５Ｏ１７Ｓ４＋１５６６．３９３５，ｆｏｕｎｄ　１５６６．３６７９
［試験例１］
　ペプチド蛍光コンジュゲート１、４、５及び蛍光色素１の比較
　実施例１で合成したペプチド蛍光コンジュゲート１（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）、比較例２で合成したペプチド蛍光コンジュゲート４（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－[（Ｒ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）及びペプチド蛍光コンジュゲート５（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－[（Ｓ）－ＲＦＡＡ（Ｃ８）]－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）、並びに蛍光物質Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ６４７のジエチルアミド体（蛍光色素１）について、細胞内への取り込み効率を調べた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000050
（サンプル溶液の調整）
　合成したペプチド蛍光コンジュゲート１、４、５、及び蛍光色素１のＤＭＳＯ溶液を、濃度１．５μＭになるようにＤＭＥＭ低グルコース培養液を用いて希釈し、含まれるＤＭＳＯ濃度が０．１５％となるように調整したものを、細胞膜透過性試験用サンプル溶液とした。 
（細胞膜透過性の評価）
　ＨｅＬａ細胞は、ペプチド処理の２４時間前に、９６ウェル細胞培養プレートに播種した（０．５×１０５細胞／ウェル）。
　３７℃で２４時間前培養したＨｅＬａ細胞の培地を、ペプチド蛍光コンジュゲート１、４、５及び蛍光色素１のサンプル溶液に置換し、３７℃で１時間培養した後の細胞膜透過性を評価した。各所定時間の培養後、ＰＢＳ（リン酸生理食塩水）で細胞表面の洗浄を３回行い、Ｔｒｙｐｓｉｎ－ＥＤＴＡ ０．０５％（Ｇｉｂｃｏ社製）で細胞を剥がして回収した。回収した細胞を、フローサイトメトリー（ｇｕａｖａ ｅａｓｙＣｙｔｅ（商標）８）により、ペプチド蛍光コンジュゲートに導入している蛍光色素（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ６４７）を検出する赤色２蛍光（６６１／１５ｎｍ）を測定して分析した。サンプル溶液中、３７℃で１時間培養した細胞のフローサイトメトリーによる分析結果を図１に示した。縦軸が細胞数（ｃｏｕｎｔ）、横軸が各細胞の蛍光強度である。また、各サンプルの平均蛍光強度（ＭＦＩ）を比較した結果を図２に示した。なお各図中では、ペプチド蛍光コンジュゲートをＰＦＣＪ、蛍光色素をＦＤと表記して示した。
　図１に示すように、３７℃、１時間のインキュベート後の細胞のＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７の蛍光強度について、側鎖にフルオロアルキル基を有するペプチド蛍光コンジュゲート１、４、及び５で処理した細胞では、いずれも蛍光色素１で処理した細胞よりも高かった。図２に示すように、細胞のＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７の蛍光強度の平均値は、蛍光色素１で処理した細胞と比較して、ペプチド主鎖のα炭素に直接フルオロアルキル基が結合したペプチド蛍光コンジュゲート４及びペプチド蛍光コンジュゲート５で処理した細胞では数倍程度であったのに対して、アスパラギン酸の側鎖のカルボキシ基に、ペプチド結合とフェニレン基を介してフルオロアルキル基を導入したペプチド蛍光コンジュゲート１で処理した細胞では数十倍～数百倍であった。これらの結果から、側鎖にフルオロアルキル基を有するペプチドは、市販の細胞膜透過性ペプチドや蛍光色素と比較して、細胞内への取り込み効率が高く、細胞膜透過性に優れること、特に、ペプチド主鎖のα炭素に結合する側鎖自身がフルオロアルキル基であるペプチドよりも、α炭素に連結基を介してフルオロアルキル基を連結させたペプチドのほうが、細胞膜透過性に優れることがわかった。
［試験例２］
　ペプチド蛍光コンジュゲート１、２、ＴＡＴ－Ａｌｅｘａ、蛍光色素１の比較
　実施例１で合成したペプチド蛍光コンジュゲート１（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）、実施例２で合成したペプチド蛍光コンジュゲート２（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ｂｉｓ－Ｃ４Ｆ９）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）、蛍光物質Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７のジエチルアミド体（蛍光色素１）、並びに市販の細胞膜透過性ペプチドＡＮＡ Ｓｐｅｃ社製Ｃｙｓ－ＴＡＴ（４７－５７）（Ｈ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｇｌｎ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－ＮＨ２） の末端Ｃｙｓに蛍光物質Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７ Ｃ２ Ｍａｌｅｉｍｉｄｅを付加させたもの（ＴＡＴ－Ａｌｅｘａ）について、細胞内への取り込み効率を調べた。
　試験例１と同様に調整したペプチド蛍光コンジュゲート１、２、ＴＡＴ－Ａｌｅｘａ、蛍光色素１のサンプル溶液を用いて、試験例１と同じ手順にてフローサイトメトリーにより、赤色２蛍光（６６１／１５ｎｍ）を測定して分析した。
　サンプル溶液中、３７℃で１時間培養した細胞のフローサイトメトリーによる分析結果を図３に示した。また、各サンプルの平均蛍光強度（ＭＦＩ）を比較した結果を図４に示した。各図中では、ペプチド蛍光コンジュゲートをＰＦＣＪ、蛍光色素をＦＤと表記して示した。
　図３に示すように、３７℃、１時間のインキュベート後の細胞のＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７の蛍光強度について、側鎖に連結基を介してフルオロアルキル基を連結させたペプチド蛍光コンジュゲート１、２で処理した細胞では、いずれも蛍光色素１やＴＡＴ－Ａｌｅｘａで処理した細胞よりも高かった。図４に示すように、細胞のＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７の蛍光強度の平均値は、蛍光色素１で処理した細胞と比較して、ＴＡＴ－Ａｌｅｘａで処理した細胞はおよそ２倍程度であったのに対して、ペプチド蛍光コンジュゲート１及び２で処理した細胞は数十倍～数百倍に高くなることがわかった。これらの結果から、側鎖に連結基を介してフルオロアルキル基を連結させたペプチドは、市販の細胞膜透過性ペプチドや蛍光色素と比較して、細胞内への取り込み効率が高く、細胞膜透過性に優れることがわかった。
［試験例３］
　ペプチド蛍光コンジュゲート１、３、蛍光色素１の比較（血清非存在下、血清存在下での比較）
　実施例１で合成した側鎖にフッ素原子を含むペプチド蛍光コンジュゲート１（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）、比較例１で合成した側鎖にフッ素原子を含まないペプチド蛍光コンジュゲート３（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ１２Ｈ２５）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）、及び蛍光色素１について、細胞内への取り込み効率を調べた。
　ここでは、より生物体内に近い条件として、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を入れたサンプルも調整して実施した。
（ＦＢＳ非存在下での細胞膜透過試験）
　試験例１と同様に調整したペプチド蛍光コンジュゲート１、ペプチド蛍光コンジュゲート３、蛍光色素１のサンプル溶液を用いて、試験例１と同じ手順にてフローサイトメトリーにより、赤色２蛍光（６６１／１５ｎｍ）を測定して分析した。
　サンプル溶液中、３７℃で１時間培養した細胞のフローサイトメトリーによる分析結果について各サンプルの平均蛍光強度（ＭＦＩ）を比較した結果を図５に示した。各図中では、ペプチド蛍光コンジュゲートをＰＦＣＪ、蛍光色素をＦＤと表記して示した。
（ＦＢＳ入りサンプル溶液の調整）
　合成したペプチド蛍光コンジュゲート１、ペプチド蛍光コンジュゲート３、及び蛍光色素１のＤＭＳＯ溶液を、濃度１．５μＭになるようにＦＢＳ１０％含有ＤＭＥＭ低グルコース培養液（１０％ＦＢＳ及び１％ペニシリン－ストレプトマイシン溶液を含有させたＤＭＥＭ低グルコース培地）を用いて希釈したものを、ＦＢＳ存在下での細胞膜透過性試験用サンプル溶液とした。
（ＦＢＳ存在下での細胞膜透過試験）
　試験例１と同様に調整したペプチド蛍光コンジュゲート１、ペプチド蛍光コンジュゲート３、蛍光色素１のサンプル溶液を用いて、サンプル溶液にＦＢＳ入りのものを用いた以外は試験例１と同じ手順にてフローサイトメトリーにより、赤色２蛍光（６６１／１５ｎｍ）を測定して分析した。
　ＦＢＳ入りサンプル溶液中、３７℃で１時間培養した細胞のフローサイトメトリーによる分析結果について各サンプルの平均蛍光強度（ＭＦＩ）を比較した結果を図６に示した。各図中では、ペプチド蛍光コンジュゲートをＰＦＣＪ、蛍光色素をＦＤと表記して示した。
　３７℃、１時間後のインキュベート後の細胞のＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７の平均蛍光強度（ＭＦＩ）は、図５に示すように、ＦＢＳ非存在下の細胞を用いた試験では、側鎖にフッ素原子を含むペプチド蛍光コンジュゲート１で処理した細胞よりも側鎖にフッ素原子を含まないペプチド蛍光コンジュゲート３で処理した細胞の方が高かった。これに対して、ＦＢＳ存在下の細胞を用いた試験では、図６に示すように、側鎖にフッ素原子を含むペプチド蛍光コンジュゲート１の方がＭＦＩの値が高くなった。
　これらの結果から、本発明に係る含フッ素ペプチドは、より生物体内に近い条件において、高い細胞膜透過性を示すことがわかった。
［試験例４］
　ペプチド蛍光コンジュゲート１～３、６、７、９、１０、及び蛍光色素１の比較
　実施例１で合成したペプチド蛍光コンジュゲート１（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）、実施例２で合成したペプチド蛍光コンジュゲート２（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ｂｉｓ－Ｃ４Ｆ９）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）、実施例５で合成したペプチド蛍光コンジュゲート６（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ４Ｆ９）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）、実施例５で合成したペプチド蛍光コンジュゲート９（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ＳＦ４ＣＦ２ＣＦ２Ｃｌ）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）、実施例５で合成したペプチド蛍光コンジュゲート７（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ６Ｆ１３）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）、実施例５で合成したペプチド蛍光コンジュゲート１０（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ｔｒｉｓ－ｔ－Ｃ４Ｆ９）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）、比較例１で合成した側鎖にフッ素原子を含まないペプチド蛍光コンジュゲート３（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ１２Ｈ２５）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）、蛍光物質Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ６４７のジエチルアミド体（蛍光色素１）について、細胞内への取り込み効率を調べた。
　試験例１と同様に調整したペプチド蛍光コンジュゲート１～３、６、７、９、１０、蛍光色素１のサンプル溶液を用いて、試験例１と同じ手順にてフローサイトメトリーにより、赤色２蛍光（６６１／１５ｎｍ）を測定して分析した。
　サンプル溶液中、３７℃で１時間培養した細胞のフローサイトメトリーによる分析結果を図７に示した。また、蛍光色素１を基準とした各サンプルの相対蛍光強度（ＲＦＩ）を比較した結果を図８に示した。各図中では、ペプチド蛍光コンジュゲートをＰＦＣＪ、蛍光色素をＦＤと表記して示した。
　図７及び８に示すように、ペプチド蛍光コンジュゲートで処理した細胞では、蛍光色素１で処理した細胞よりも、細胞のＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７の蛍光強度の平均値は高かった。また、ペプチドに導入されたフルオロアルキル基の鎖長が長いほど、蛍光強度の平均値は高くなり、細胞膜透過性が高い傾向にあることが明らかとなった。
［試験例５］
　ペプチド蛍光コンジュゲート１～３、６、７、９、及び１０の粒子径の比較
　試験例４と同様に調整したペプチド蛍光コンジュゲート１～３、６、７、９、及び１０のサンプル溶液を用いて、動的光散乱法で粒子径を測定した。
　純水にペプチドコンジュゲートが１．５μＭになるよう調整し、石英セルにペプチドコンジュゲートを１２μＬ入れ、動的光散乱装置ＤＬＳ（Ｚｅｔａ ｓｉｚｅｒ μＶ　６０ｍＷ　８３０ｎｍ ｌａｓｅｒ）を用いて３７℃における粒子径を測定し、粒度分布を求めた。各ペプチド蛍光コンジュゲートの平均粒子径（個数基準分布の平均径）の分析結果を図９に示した。各図中では、ペプチド蛍光コンジュゲートをＰＦＣＪ、蛍光色素をＦＤと表記して示した。
　図８及び図９を比較すると、ペプチドに導入されたフルオロアルキル基の鎖長が長いほど、平均粒子径が小さい傾向にあることが明らかとなった。特に細胞膜透過性に優れていたペプチド蛍光コンジュゲート１は、平均粒子径が６ｎｍ程度と非常に小さかった。フルオロアルキル基の鎖長が平均粒子径に影響を与える理由は明らかではないが、鎖長が長くなるほどフルオロアルキル基同士の凝集力が強くなり、この凝集力によりペプチド蛍光コンジュゲート全体の粒子径が小さくなると推察される。
［試験例６］
　ペプチド蛍光コンジュゲート１、８、１１、及び蛍光色素１の比較
　実施例１で合成したペプチド蛍光コンジュゲート１（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）、実施例５で合成したペプチド蛍光コンジュゲート８（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ１０Ｆ２１）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）、実施例６で合成したペプチド蛍光コンジュゲート１１（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）、及び蛍光物質Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ６４７のジエチルアミド体（蛍光色素１）について、細胞内への取り込み効率を調べた。
　試験例１と同様に調整したペプチド蛍光コンジュゲート１、８、１１、及び蛍光色素１のサンプル溶液を用いて、試験例１と同じ手順にてフローサイトメトリーにより、赤色２蛍光（６６１／１５ｎｍ）を測定して分析した。
　サンプル溶液中、３７℃で１時間培養した細胞のフローサイトメトリーによる分析結果を図１０に示した。また、各サンプルの平均蛍光強度（ＭＦＩ）を比較した結果を図１１に示した。各図中では、ペプチド蛍光コンジュゲートをＰＦＣＪ、蛍光色素をＦＤと表記して示した。
　図１０及び１１に示すように、ペプチド蛍光コンジュゲートで処理した細胞では、蛍光色素１で処理した細胞よりも、細胞のＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７の蛍光強度の平均値は高かった。また、ペプチドに導入されたフルオロアルキル基の鎖長が長いほど、蛍光強度の平均値は高くなり、細胞膜透過性が高い傾向にあることが明らかとなった。
［試験例７］
　ペプチド蛍光コンジュゲート１、１２、及び蛍光色素１の比較
　実施例１で合成したペプチド蛍光コンジュゲート１（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（Ｃ８Ｆ１７）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）、実施例５で合成したペプチド蛍光コンジュゲート１２（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｓｐ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃ６Ｆ１３）－Ｐｈｅ－ＮＨ２）、及び蛍光物質Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７のジエチルアミド体（蛍光色素１）について、細胞内への取り込み効率を調べた。
　試験例１と同様に調整したペプチド蛍光コンジュゲート１、１２、又は蛍光色素１のサンプル溶液を用いて、試験例１と同じ手順にてフローサイトメトリーにより、赤色２蛍光（６６１／１５ｎｍ）を測定して分析した。
　各サンプルの平均蛍光強度（ＭＦＩ）を比較した結果を図１２に示した。各図中では、ペプチド蛍光コンジュゲートをＰＦＣＪ、蛍光色素をＦＤと表記して示した。
　図１２に示すように、３７℃、１時間のインキュベート後の細胞のＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７の蛍光強度について、側鎖に連結基を介してフルオロアルキル基を連結させたペプチド蛍光コンジュゲート１又は１２で処理した細胞では、いずれも蛍光色素１で処理した細胞よりも高かった。具体的には、ペプチド蛍光コンジュゲート１２で処理した細胞のＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７の蛍光強度の平均値は、蛍光色素１で処理した細胞と比較して１４倍程度高くなることがわかった。これらの結果から、側鎖に連結基を介してフルオロアルキル基を連結させたペプチドは、蛍光色素と比較して、細胞内への取り込み効率が高く、細胞膜透過性に優れることがわかった。
　本発明は、側鎖にフッ素原子を含むアミノ酸残基を有するペプチドを提供する。本発明に係る含フッ素ペプチドは、細胞膜透過性に優れているため、例えば、薬効成分を標的細胞へ導入するためのキャリア等、生理活性物質として、医薬分野での利用が期待される。

Claims (12)

  1. 　２個以上のアミノ酸がペプチド結合したペプチドであって、
    　該ペプチドを構成するアミノ酸残基の少なくとも１個の側鎖が、下記一般式（１）
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     ［式中、Ｚ１は、２、３、又は４価のアルキレン基以外の連結基であり；Ｒｆは少なくとも２個のフッ素原子で置換されたＣ１－３０アルキル基（該Ｃ１－３０アルキル基は炭素原子が２以上の場合に、炭素原子間に１～５個のエーテル結合性の酸素原子を有していてもよい）、－ＳＦ５、又は－ＳＦ４－ＣＲ１０１Ｒ１０２－ＣＲ１０３Ｒ１０４Ｃｌ（Ｒ１０１、Ｒ１０２、Ｒ１０３、及びＲ１０４は、それぞれ独立して水素原子、フッ素原子、又は塩素原子であるが、Ｒ１０１、Ｒ１０２、Ｒ１０３、及びＲ１０４のうちの２個以上はフッ素原子である）であり；ｎ３は１、２、又は３であり、黒丸は結合手を意味する］
    である、ペプチド。
  2. 　前記Ｒｆが、下記一般式（ｆ－１）又は（ｆ－２）
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
     ［式中、ＲｆＰは、少なくとも２個以上のフッ素原子を含む完全ハロゲン化Ｃ１－１０アルキル基（該Ｃ１－１０アルキル基は、炭素原子が２以上の場合に、炭素原子間にエーテル結合性の酸素原子を有していてもよい）を表し、ｎ１は、０～１０の整数であり、ｎ２は、０～９の整数であり、黒丸は結合手を意味する］
    で表される基である、請求項１に記載のペプチド。
  3. 　前記Ｚ１が、環基を有する連結基である、請求項１又は２に記載のペプチド。
  4. 　前記環基が、１，４－フェニレン基、又は１，３，５置換フェニル基を有する、請求項３に記載のペプチド。
  5. 　前記Ｚ１が、環基を有していない連結基である、請求項１又は２に記載のペプチド。
  6. 　前記Ｚ１が、アルキレン基、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨ－、－Ｎ（ＣＨ３）－、－Ｎ（Ｃ２Ｈ５）－、－Ｎ（Ｃ３Ｈ７）－、３価の窒素原子、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２－、シクロアルキレン基、２価～４価のアリール基、２価～４価のヘテロアリール基、又はこれらの組み合わせである（ただし、アルキレン基のみからなる基を除く）、請求項１又は２に記載のペプチド。
  7. 　前記Ｚ１が、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｓ－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｓ（＝Ｏ）２－、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－Ｓ（＝Ｏ）２－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－Ｐｈ－（－Ｐｈ－は、１，４－フェニレン基、１，３－フェニレン基、１，５－フェニレン基、又は１，３，５置換フェニル基である）、又はこれらのいずれかの基とＣ１－６アルキレン基の組み合わせである、請求項１又は２に記載のペプチド。
  8. 　前記Ｚ１が、下記一般式（２）
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
     ［式中、Ｚ２は、２、３、又は４価のアルキレン基以外の連結基であり；Ｒｈは、水素原子又はＣ１－６アルキル基であり、黒丸は結合手を意味する］
    で表される連結基である、請求項１又は２に記載のペプチド。
  9. 　前記一般式（１）で表される基が側鎖であるアミノ酸残基が、天然アミノ酸の側鎖に直接又は間接的に１～３個の前記Ｒｆが連結されているアミノ酸残基である、請求項１又は２に記載のペプチド。
  10. 　Ｃ末端又はＮ末端が保護基で保護されていてもよい、請求項１又は２に記載のペプチド。
  11. 　下記一般式（１１）
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
     ［式中、Ｒｆ及びｎ３は、前記一般式（１）中のＲｆ及びｎ３と同じであり；Ｚ２は、２、３、又は４価のアルキレン基以外の連結基であり；Ｒｈは、水素原子又はＣ１－６アルキル基であり；Ｒ１１及びＲ１２は、それぞれ独立して、Ｃ１－６アルキル基又はベンジル基であり；Ｘは、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル基又はｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基であり；Ｚは、Ｃ１－６アルコキシ基、水酸基、又はアミノ基である。］
    で表されるトリペプチドである、請求項１又は２に記載のペプチド。
  12. 　細胞膜透過性である、請求項１又は２に記載のペプチド。
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