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WO2022191309A1 - プラセンタ抽出物の使用方法 - Google Patents

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WO2022191309A1
WO2022191309A1 PCT/JP2022/010803 JP2022010803W WO2022191309A1 WO 2022191309 A1 WO2022191309 A1 WO 2022191309A1 JP 2022010803 W JP2022010803 W JP 2022010803W WO 2022191309 A1 WO2022191309 A1 WO 2022191309A1
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WO
WIPO (PCT)
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placenta
cancer cells
extract
cells
aqueous
Prior art date
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Application number
PCT/JP2022/010803
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English (en)
French (fr)
Inventor
朋恵 西尾
邦義 清水
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
DrProlabo Japan Co Ltd
Kyushu University NUC
Original Assignee
DrProlabo Japan Co Ltd
Kyushu University NUC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by DrProlabo Japan Co Ltd, Kyushu University NUC filed Critical DrProlabo Japan Co Ltd
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Ceased legal-status Critical Current

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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/48—Reproductive organs
    • A61K35/50—Placenta; Placental stem cells; Amniotic fluid; Amnion; Amniotic stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Definitions

  • the present invention relates to a method of using placenta extract.
  • it relates to methods of using placenta extracts for the purpose of inhibiting cancer cell growth.
  • placenta placenta
  • its extracts are attracting attention from a wide range of age groups, regardless of gender, as new materials that promote both health and beauty (see, for example, Patent Document 1).
  • Patent Document 1 50 to 70% by mass of placenta extract powder extracted from porcine placenta, 20 to 30% by mass of brewer's yeast, 5 to 10% by mass of hen egg thin skin powder and 5 to 10% by mass of mango powder A food containing powdered placenta extract is disclosed.
  • placenta has excellent effects in both health and beauty. Placenta has also been reported to be effective in reducing side effects caused by other treatments.
  • one example of the well-known effect of the placenta is the effect of reducing the side effects of radiation-based cancer treatment. It is presumed that this effect is caused by the synergistic action of multiple substances contained in the placenta to repair radiation-damaged genes.
  • placenta extract has the effect of suppressing the proliferation of cancer cells.
  • the present invention provides a new method of using placenta extracts that focuses on suppressing the growth of cancer cells.
  • (1) placenta extract is used to suppress the proliferation of cancer cells.
  • placenta extract is used as an active ingredient in a formulation that suppresses the proliferation of cancer cells while allowing normal cells to proliferate.
  • the placenta extract is an extract extracted with an aqueous solvent containing water as a main component, and the cancer cells cultured in vitro have a concentration of more than 0 ⁇ g/mL and 400 ⁇ g/mL. It is also characterized by containing an amount in a single dose of the preparation that can exhibit an effect equivalent to the growth inhibitory effect when exposed to the extract at the following concentration in vivo.
  • the placenta extract is an extract extracted with an aqueous solvent containing water as a main component, and the cancer cells cultured in vitro have a concentration exceeding 400 ⁇ g/mL. It is also characterized by containing an amount in one dose of the preparation that can exhibit an effect equivalent to the growth inhibitory effect upon exposure to the extract in vivo.
  • the present invention is also characterized by (5) using the placenta extract for colon cancer cells, human liver cancer cells, or human pancreatic cancer cells.
  • the present invention is characterized by (6) using the placenta extract for cervical cancer cells, neuroblastoma cells, human astrocytoma cells, human breast cancer cells, or ovarian cancer cells.
  • the placenta extract is used for suppressing the growth of cancer cells, so a new method of using the placenta extract can be provided. Also, the option of employing a placenta extract as a means of inhibiting cancer cell proliferation can be presented.
  • placenta extract is used as an active ingredient in a formulation that suppresses the proliferation of cancer cells while allowing normal cells to proliferate.
  • a new method of using the placenta extract can be provided.
  • a use can be provided in which the placenta extract produces opposing effects on normal and cancer cells.
  • the placenta extract is an extract extracted with an aqueous solvent containing water as a main component, and the extract is added to the cancer cells cultured in vitro at a concentration of more than 0 ⁇ g/mL and 400 ⁇ g/mL or less. Since the dose of one dose of the above formulation contains an amount that can express an effect equivalent to the growth inhibitory effect when exposed to a substance in vivo, by adjusting the concentration of the placenta extract and using it, A method of using a placenta extract that inhibits cancer cell proliferation while promoting normal cell proliferation can be provided.
  • the placenta extract is an extract extracted with an aqueous solvent containing water as a main component, and when the cancer cells cultured in vitro are exposed to the extract at a concentration exceeding 400 ⁇ g/mL, Since it was decided to contain an amount that can express in vivo an effect equivalent to the growth inhibitory effect on the growth of normal cells, by adjusting the concentration of the placenta extract and using it, it is possible to suppress the growth of normal cells. It is possible to provide a method of using a placenta extract that inhibits cancer cell growth without affecting it.
  • placenta extract was used for colorectal cancer cells, human liver cancer cells or human pancreatic cancer cells
  • the proliferation of colorectal cancer cells, human liver cancer cells or human pancreatic cancer cells was It is possible to provide a method of using a placenta extract that strongly inhibits depending on. That is, in the use of placenta, the influence on the proliferation of colon cancer cells, human liver cancer cells or human pancreatic cancer cells can be adjusted according to the concentration of the placenta extract.
  • placenta extract was used for cervical cancer cells, neuroblastoma, human astrocytoma cells, human breast cancer cells or ovarian cancer cells, cervical cancer cells, neuroblastoma, It is possible to provide a method for using a placenta extract that exhibits substantially constant inhibitory effects on human astrocytoma cells, human breast cancer cells, or ovarian cancer cells at a predetermined concentration or higher.
  • FIG. 3 is an explanatory diagram showing test results of a normal cell (CCD841) proliferation test.
  • FIG. 2 is an explanatory diagram showing test results of colon cancer cell (HCT-116) proliferation test.
  • FIG. 2 is an explanatory diagram showing test results of a cervical cancer cell (HeLa) proliferation test.
  • FIG. 2 is an explanatory diagram showing test results of a neuroblastoma (SH-SY5Y) proliferation test.
  • FIG. 3 is an explanatory diagram showing the test results of a human astrocytoma cell (1321N1) proliferation test.
  • FIG. 2 is an explanatory diagram showing test results of a human breast cancer cell (MDA-MB-453) proliferation test.
  • FIG. 4 is an explanatory diagram showing the test results of a human liver cancer cell (HuH-7) proliferation test.
  • FIG. 4 is an explanatory diagram showing test results of human ovarian cancer cell (OVK18) proliferation test.
  • FIG. 3 is an explanatory diagram showing test results of human pancreatic cancer cell (KLM-1) proliferation test.
  • the present invention relates to a method of using placenta extract, and more particularly, to provide a new method of using placenta extract for suppressing cancer cell growth by pharmaceuticals and functional foods.
  • a placenta extract is an extract of the placenta (placenta) of a mammal.
  • placenta when extracted using a solvent, the placenta extract contains the extract or the dried product of the extract.
  • placenta which is the raw material to be extracted for the placenta extract
  • placenta of various mammals including pigs, horses, and humans can be used.
  • use in this embodiment means use as a raw material for preparations that are used for the purpose of suppressing the proliferation of cancer cells.
  • formulations include, for example, pharmaceuticals and functional foods.
  • OTC drugs are included.
  • the form of the placenta extract to be used as a drug is not particularly limited, but for example, an internal preparation that acts by oral administration, an external preparation that acts from the outside of the body, or an injection that acts by directly subcutaneously or into a blood vessel is adopted. be able to.
  • functional food is a concept that includes all foods that are said to contribute to the maintenance and promotion of health that do not contain pharmaceutical ingredients.
  • Foods, foods with health claims such as foods for specified health uses, foods with nutrient claims, and foods with function claims are also included.
  • placenta extracts to inhibit cancer cell proliferation by pharmaceuticals and functional foods presents the option of adopting placenta extracts as a means of inhibiting cancer cell proliferation. be able to.
  • the present invention also provides a method of using a placenta extract as an active ingredient in a formulation that suppresses the proliferation of cancer cells while allowing normal cells to proliferate.
  • Cancer cells are cells that have acquired the ability to continue to grow (abnormal proliferation) due to DNA mutation.
  • colon cancer cells cervical cancer cells, neuroblastoma, human astrocytoma cells, human breast cancer cells, human liver cancer cells, human ovarian cancer cells, and human pancreatic cancer cells used in the experiments described later. cells and the like.
  • Normal cells refer to healthy cells that make up the body or have been cultured in vitro and have not become cancerous. For example, colon normal cells used in experiments described later can be used.
  • An active ingredient is an ingredient that exhibits the effect of suppressing the growth of cancer cells.
  • the formulation is a drug, it is the active ingredient, and if the formulation is a functional food, it is the functional ingredient.
  • the active ingredient may be the placenta extract as it is, or the ingredient purified from the placenta extract.
  • the placenta extract may consist of a group of components that are soluble in an aqueous solvent containing water as the main component. That is, the placenta extract can be an extract extracted with an aqueous solvent.
  • the water-based solvent is a solvent whose main component is water, and includes, in addition to water itself, a solvent containing water at a ratio of, for example, 50 w/w% or more.
  • Components other than water constituting the aqueous solvent may be, for example, solid (powder, etc.) components that are soluble in water, or liquids such as alcohol that are miscible with water.
  • the placenta extract is composed of a group of components that are soluble in a specific non-aqueous solvent consisting of any one or a mixture of two or more selected from dimethylsulfoxide, ethanol, methanol, and hexane. good too.
  • the placenta extract can be an extract extracted with a non-aqueous specific solvent.
  • the solvent may be a mixed solvent of an aqueous solvent and a non-aqueous specific solvent. That is, it contains water at a rate of less than 50w/w%, and the remainder is a non-aqueous specific solvent, a solid (powder, etc.) component that exhibits solubility in the mixed solvent to be adjusted, or water such as alcohol It can be a liquid that exhibits miscibility with
  • the component purified from the placenta extract can be a component that exhibits the effect of suppressing the proliferation of cancer cells. In addition, it can be a component that suppresses the growth of cancer cells and at the same time promotes the growth of normal cells.
  • placenta extract as an active ingredient in a preparation that suppresses the proliferation of cancer cells while allowing normal cells to proliferate produces contradictory effects on normal cells and cancer cells. can provide the law.
  • the placenta extract is an extract extracted with an aqueous solvent containing water as a main component, and the cancer cells cultured in vitro have a concentration of 0 ⁇ g/mL. and an amount equivalent to the growth inhibitory effect when exposed to the extract at a concentration of more than 400 ⁇ g / mL or less is contained in the dosage of the preparation once. can.
  • the method of using the placenta extract suppresses the proliferation of cancer cells while promoting the proliferation of normal cells. can be provided.
  • the placenta extract is an extract extracted with an aqueous solvent containing water as a main component, and the cancer cells cultured in vitro have a concentration exceeding 400 ⁇ g / mL.
  • the cancer cells cultured in vitro have a concentration exceeding 400 ⁇ g / mL.
  • the placenta extract suppresses the proliferation of cancer cells without affecting the proliferation of normal cells.
  • the method of using the placenta extract can be characterized by using the placenta extract for colon cancer cells, human liver cancer cells, or human pancreatic cancer cells.
  • the proliferation of colon cancer cells, human liver cancer cells, or human pancreatic cancer cells can be strongly suppressed in a concentration-dependent manner.
  • the method of using the placenta extract is characterized by using the placenta extract for cervical cancer cells, neuroblastoma cells, human astrocytoma cells, human breast cancer cells or ovarian cancer cells. can.
  • the growth of cervical cancer cells, neuroblastoma cells, human astrocytoma cells, human breast cancer cells, or ovarian cancer cells is inhibited in substantially the same manner regardless of concentration.
  • a method of using the placenta extract can be provided.
  • a placenta extract extracted from a horse-derived placenta (hereinafter referred to as a horse placenta extract) will be described below, but the origin of the placenta is not limited to horses.
  • placenta extract Due to the recent increase in cancer morbidity, a component that suppresses the growth of cancer cells is desired as a component (or raw material) contained in pharmaceuticals and functional foods. Placenta is attracting attention as a new material that can improve both human health and beauty, but its direct effect on cancer cells has remained unclear.
  • Horse placenta powder was used as the placenta extract.
  • Horse placenta powder is a freeze-dried powder of horse placenta.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • a 100 mg/ml sample was prepared by adding 1 mL of extraction solvent to 100 mg of placenta powder, and was therefore referred to as a 100 mg/ml sample.
  • a 100-fold diluted sample is a 1 mg/ml sample
  • a 10000-fold diluted sample is a 10 ⁇ g/ml sample.
  • colon normal cells CCD841
  • colon cancer cells HCT-116
  • cervical cancer cells HeLa
  • neuroblastoma cells SH-SY5Y
  • human astrocytoma cells 1321N1
  • D-MEM Dulbecco's Modified Eagle Medium
  • human astrocytoma cells and neuroblastoma cells and E-MEM (Eagle's Minimal Essential Medium) was used for normal cells.
  • Colorectal cancer cells were precultured using McCoy's 5A Modified Medium. Each cell was cultured in the appropriate medium supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS) and 1% streptomycin-penicillin (SP).
  • FBS fetal bovine serum
  • SP streptomycin-penicillin
  • Measurement of cell viability was performed by the MTT method.
  • the medium was removed from the plate after 72 hours of culture, and 100 ⁇ L of MTT staining solution (5 mg/mL in medium) was added to each well and allowed to stand at 37°C in 5% CO 2 for 4 hours. cultured.
  • the absorbance at 570 nm was measured with a microplate reader and used as an indicator of cell viability.
  • FIG. 1 is a graph showing the cell viability of normal cells relative to the control
  • FIG. 1(a) shows the cell viability of a placenta extract extracted with an aqueous solvent (hereinafter also referred to as placenta aqueous extract).
  • FIG. 1(b) shows the cell viability of a placenta extract extracted with a specific non-aqueous solvent (hereinafter referred to as placenta non-aqueous extract).
  • Fig. 1(a) regarding the placenta aqueous extract, confirmation was performed on 10 ⁇ g/mL samples, 100 ⁇ g/mL samples, and 400 ⁇ g/mL samples. Approximately 15% cell growth promotion effect was observed in the sample. In contrast, the 400 ⁇ g/mL sample showed no significant cell growth-promoting effect compared to the control.
  • the placenta aqueous extract promotes the proliferation of normal cells at relatively low concentrations (10 ⁇ g/mL, 100 ⁇ g/mL), and has no effect on normal cell proliferation at relatively high concentrations (400 ⁇ g/mL). It turned out not to give.
  • the aqueous placenta extract exerted a growth-promoting effect when exposed to normal cells at a concentration of more than 0 ⁇ g/L and 400 ⁇ g/mL or less, and when exposed to a concentration of 400 ⁇ g/mL or more. It was thought that it did not affect the growth in practice.
  • the non-aqueous placenta extract promoted the proliferation of normal cells equally at all sample concentrations, whereas the aqueous placenta extract promoted the proliferation of normal cells at lower sample concentrations. It is quite interesting to note that the proliferation of normal cells was strongly promoted.
  • FIG. 2 is a graph showing the cell viability of colorectal cancer cells relative to the control
  • FIG. 2(a) shows the cell viability of the placenta aqueous extract
  • FIG. 2(b) shows the cell viability of the placenta non-aqueous extract. Viability is shown.
  • aqueous placenta extract confirmation was performed on 10 ⁇ g/mL samples, 100 ⁇ g/mL samples, and 400 ⁇ g/mL samples. About 70% of the cell proliferation inhibitory effect was recognized in the sample.
  • both the aqueous placenta extract and the non-aqueous placenta extract exhibit a strong inhibitory effect on colon cancer cell proliferation in a concentration-dependent manner. I can say.
  • the placenta aqueous solvent promoted the proliferation of normal cells and suppressed the proliferation of colon cancer cells in the 100 ⁇ g/mL sample.
  • the 400 ⁇ g/mL sample it appears to inhibit colon cancer cell proliferation without affecting normal cell proliferation.
  • FIG. 3 is a graph showing the cell viability of cervical cancer cells relative to the control, FIG. 3(a) showing the cell viability by placenta aqueous extract, and FIG. 3(b) by placenta non-aqueous extract. Cell viability is shown.
  • the aqueous placenta extract exhibits a substantially constant inhibitory effect on the proliferation of cervical cancer cells at a predetermined concentration or higher.
  • both the aqueous placenta extract and the non-aqueous placenta extract inhibited the growth of cervical cancer cells at a concentration of 100 ⁇ g/mL or more. , respectively exhibit a substantially constant suppressing effect.
  • the placenta aqueous solvent inhibited the proliferation of cervical cancer cells while promoting the proliferation of normal cells in the 100 ⁇ g/mL sample. , appears to inhibit the proliferation of cervical cancer cells without affecting the proliferation of normal cells in the 400 ⁇ g/mL sample.
  • FIG. 4 is a graph showing cell viability relative to neuroblastoma control
  • FIG. 4(a) shows cell viability by placenta aqueous extract
  • FIG. 4(b) shows cell viability by placenta non-aqueous extract. Viability is shown.
  • the placenta aqueous extract exhibits a substantially constant inhibitory effect on the growth of neuroblastoma at a predetermined concentration or higher.
  • both the aqueous placenta extract and the non-aqueous placenta extract exhibit a certain inhibitory effect on the growth of neuroblastoma.
  • 400 ⁇ g/mL of placenta non-aqueous extract was confirmed to have a remarkably strong cell growth inhibitory effect.
  • the aqueous placenta solvent increased normal cell proliferation and neuroblastoma growth in the 10 ⁇ g/mL and 100 ⁇ g/mL samples. It appears to inhibit neuroblastoma growth without affecting normal cell growth in the 400 ⁇ g/mL sample.
  • placenta non-aqueous extracts when comparing the results of placenta non-aqueous extracts on normal cells and neuroblastoma, it is considered that all sample concentrations tested promote the growth of normal cells and suppress the growth of neuroblastoma cells. be done. In particular, 400 ⁇ g/mL of placenta non-aqueous extract is considered to have a strong inhibitory effect on neuroblastoma proliferation, although there is no difference in proliferation of normal cells compared to other sample concentrations.
  • FIG. 5 is a graph showing the cell viability of human astrocytoma cells relative to the control, FIG. 5(a) shows the cell viability by placenta aqueous extract, and FIG. 5(b) shows the cell viability by placenta non-aqueous extract. Cell viability is shown.
  • the placenta aqueous extract exhibits a substantially constant inhibitory effect on the proliferation of human astrocytoma cells at a predetermined concentration or higher.
  • the aqueous placenta solvent inhibited the growth of neuroblastoma as well as the proliferation of normal cells in the 100 ⁇ g/mL sample. It appears to inhibit neuroblastoma growth without affecting normal cell growth in the 400 ⁇ g/mL sample.
  • the aqueous placenta extract exceeded 0 ⁇ g/mL and exceeded 400 ⁇ g/mL in in vitro cultured colon cancer cells, cervical cancer cells, neuroblastoma cells, or human astrocytoma cells.
  • normal cells can grow and colorectal cancer cells and cervical cancer cells can grow.
  • An active ingredient in a formulation that inhibits proliferation of cells, neuroblastoma or human astrocytoma cells can be provided.
  • the placenta non-aqueous extract was added to colon cancer cells, cervical cancer cells, neuroblastoma or human astrocytoma cells cultured in vitro at concentrations exceeding 0 ⁇ g/mL. If it is used in an amount that can express an effect equivalent to the growth inhibitory effect on exposure in vivo, it will proliferate normal cells while colon cancer cells, cervical cancer cells, neuroblastoma or human An active ingredient in a formulation that inhibits astrocytoma cell proliferation can be provided.
  • the placenta extract can inhibit the growth of colon cancer cells in a concentration-dependent manner by being used.
  • cervical cancer cells, neuroblastoma cells or human astrocytoma cells it is possible to inhibit the cells almost constantly at a predetermined concentration or higher.
  • the cancer cells used in this study were human breast cancer cells (MDA-MB-453), human liver cancer cells (HuH-7), human ovarian cancer cells (OVK18), and human pancreatic cancer cells (KLM-1). It was adopted.
  • RPMI-1640 (containing 1% SP and 10% FBS) was used for human breast cancer cells, human liver cancer cells, and human pancreatic cancer cells, and MEM ⁇ (containing 1% SP and 10% FBS) was used for pre-culture.
  • sample solutions were added to both aqueous and non-aqueous systems at final concentrations of 5, 50, 100 and 500 ⁇ g/mL.
  • Measurement of cell viability was performed by the MTT method.
  • the medium was removed from the plate after culturing for 24 hours, and 100 ⁇ L of serum-free medium (containing 1% SP) containing no sample solution was added to each well. Then, 20 ⁇ L of MTT staining solution (5 mg/mL in Phosphate-buffered saline (hereinafter also referred to as PBS)) was added to each well, and static culture was performed in a CO 2 incubator for 4 hours. Human breast cancer cells were also subjected to the same operation and statically cultured at 37°C and 0% CO 2 for 4 hours.
  • PBS Phosphate-buffered saline
  • the serum-free medium was removed, 100 ⁇ L of hydrochloric acid-isopropanol solution was added to each well, and formazan was completely dissolved by pipetting. Then, the absorbance at 570 nm was measured with a microplate reader to calculate the cell viability.
  • FIG. 6 is a graph showing the cell viability of human breast cancer cells relative to the control, FIG. 6(a) shows the cell viability with placenta aqueous solvent, and FIG. 6(b) shows the cell viability with placenta non-aqueous extract. is shown.
  • the placenta aqueous extract exhibits a substantially constant inhibitory effect on the proliferation of human breast cancer cells at a predetermined concentration or higher.
  • both the aqueous placenta extract and the non-aqueous placenta extract inhibited the growth of human breast cancer cells, especially at concentrations of 50 ⁇ g / mL or more. If there is, it can be said that a substantially constant inhibitory effect is exhibited.
  • the placenta aqueous extract in the human breast cancer cells in this test had a low concentration (10 ⁇ g / mL sample). It is thought that it suppresses the proliferation of human breast cancer cells as well as the proliferation of normal cells, and suppresses the proliferation of human breast cancer cells without affecting the proliferation of normal cells at concentrations of 400 ⁇ g/mL or higher.
  • the placenta non-aqueous extract had a concentration of 10 ⁇ g/mL or more. It is thought that it suppresses the proliferation of breast cancer cells and proliferates normal cells. In particular, at a concentration of 50 ⁇ g/mL or more, it is thought that the proliferation of human breast cancer cells is inhibited by about 60% and the proliferation of normal cells is promoted by about 20%.
  • FIG. 7 is a graph showing the cell viability of human liver cancer cells relative to the control, FIG. 7(a) shows the cell viability with placenta aqueous solvent, and FIG. 7(b) shows cells with placenta non-aqueous extract. Viability is shown.
  • Fig. 7(a) 5 ⁇ g/mL sample, 50 ⁇ g/mL sample, 100 ⁇ g/mL sample, and 500 ⁇ g/mL sample were confirmed for placenta aqueous extract. A growth inhibitory effect was observed. In particular, the effect of strongly suppressing the proliferation of human hepatoma cells was observed depending on the sample concentration.
  • both the aqueous placenta extract and the non-aqueous placenta extract exhibit the effect of suppressing the proliferation of human liver cancer cells.
  • the suppression effect increases depending on the sample concentration.
  • the placenta aqueous extract in the human hepatoma cells in this test was at a low concentration (10 ⁇ g/mL sample). If there is, it suppresses the proliferation of human hepatoma cells and also proliferates normal cells. .
  • the placenta non-aqueous extract was found to be at a concentration of 10 ⁇ g/mL or more. In this case, it is thought that it suppresses the proliferation of human hepatoma cells and promotes the proliferation of normal cells. In particular, at a concentration of 50 ⁇ g/mL or more, it is thought that the proliferation of human breast cancer cells is inhibited by about 60% and the proliferation of normal cells is promoted by about 20%.
  • FIG. 8 is a graph showing the cell viability of human ovarian cancer cells relative to the control, FIG. 8(a) shows the cell viability in placenta aqueous solvent, and FIG. 8(b) shows cells from placenta non-aqueous extract. Viability is shown.
  • the aqueous placenta extract exhibits a substantially constant inhibitory effect on the cell proliferation of human ovarian cancer cells if the sample is 5 ⁇ g/mL or more.
  • both the aqueous placenta extract and the non-aqueous placenta extract exhibit the effect of suppressing the proliferation of human ovarian cancer cells.
  • a substantially constant cell growth inhibitory effect can be obtained if the sample concentration is equal to or higher than a predetermined sample concentration.
  • the placenta aqueous extract in the human ovarian cancer cells in this test was at a low concentration (10 ⁇ g/mL sample). If there is, it suppresses the proliferation of human ovarian cancer cells and also increases the proliferation of normal cells. .
  • the placenta non-aqueous extract was found to be at a concentration of 10 ⁇ g/mL or more. It is thought that the growth of human ovarian cancer cells is inhibited and that normal cells grow. In particular, concentrations of 50 ⁇ g/mL or higher are thought to inhibit human ovarian cancer cell proliferation by about 20% and promote normal cell proliferation by about 20%.
  • FIG. 9 is a graph showing the cell viability of human pancreatic cancer cells relative to the control, FIG. 9(a) shows the cell viability with placenta aqueous solvent, and FIG. 9(b) shows cells with placenta non-aqueous extract. Viability is shown.
  • each diluted sample was confirmed, and as shown in FIG. .
  • about 60% cell proliferation inhibitory effect was observed under conditions of concentrations of 50 ⁇ g/mL or higher samples.
  • both the aqueous placenta extract and the non-aqueous placenta extract exhibit an inhibitory effect on human pancreatic cancer cells at all sample concentrations tested. It was confirmed.
  • the placenta aqueous extract in the human pancreatic cancer cells in this test was at a low concentration (10 ⁇ g/mL sample). If there is, it is thought to suppress the proliferation of human pancreatic cancer cells and to proliferate normal cells, and at concentrations of 400 ⁇ g/mL or higher, it suppresses the proliferation of human pancreatic cancer cells without affecting the proliferation of normal cells. .
  • the placenta non-aqueous extract had a concentration of 10 ⁇ g/mL or higher. In this case, it is thought that it suppresses the proliferation of human pancreatic cancer cells and promotes the proliferation of normal cells. In particular, at a concentration of 50 ⁇ g/mL or more, it is thought that the proliferation of human breast cancer cells is inhibited by about 60% and the proliferation of normal cells is promoted by about 20%.
  • the aqueous placenta extract and the non-aqueous placenta extract can be applied to human breast cancer cells, human liver cancer cells, human ovarian cancer cells, or human pancreatic cancer cells cultured in vitro. Proliferation of human breast cancer cells, human liver cancer cells, human ovarian cancer cells, or human pancreatic cancer cells, provided that the amount used is such that an effect equivalent to the growth inhibitory effect on exposure to the substance can be expressed in vivo. It is possible to provide an active ingredient in a formulation that inhibits
  • the placenta aqueous extract is in vitro cultured human breast cancer cells, human liver cancer cells, human ovarian cancer cells or If human pancreatic cancer cells are exposed to placenta aqueous extract at a concentration of more than 0 ⁇ g/L and 500 ⁇ g/L or less, the same effect as suppressing proliferation of normal cells can be expressed in vivo. It can also be said that it is possible to provide an active ingredient in a preparation that suppresses the proliferation of human breast cancer cells, human liver cancer cells, human ovarian cancer cells, or human pancreatic cancer cells while allowing the proliferation of human cancer cells.
  • human breast cancer cells, human liver cancer cells, human ovarian cancer cells or human pancreatic cancer cells cultured in vitro were exposed to an aqueous placenta extract at a concentration exceeding 500 ⁇ g/L.
  • the placenta non-aqueous extract was added to in vitro cultured human breast cancer cells, human liver cancer cells, human ovarian cancer cells, or human pancreatic cancer cells at concentrations exceeding 0 ⁇ g/L.
  • human breast cancer cells human liver cancer cells
  • human ovarian cancer cells human pancreatic cancer cells
  • an active ingredient in a formulation that suppresses the proliferation of pancreatic cancer cells.
  • the placenta extract can inhibit the growth of colon cancer cells in a concentration-dependent manner by being used.
  • cervical cancer cells, neuroblastoma cells or human astrocytoma cells it is possible to inhibit the cells almost constantly at a predetermined concentration or higher.
  • the placenta extract suppresses the proliferation of colon cancer cells, cervical cancer cells, neuroblastoma cells, and human astrocytoma cells. It has the effect of In addition, as shown in the results of Cell Proliferation Test 2 (Figs. 6 to 9), it has the effect of suppressing the growth of human breast cancer cells, human liver cancer cells, human ovarian cancer cells, and human pancreatic cancer. ing.
  • placenta extract has the effect of suppressing the proliferation of cancer cells.
  • the placenta extract can be used for the purpose of suppressing the growth of cancer cells.
  • placenta extract has the effect of promoting proliferation of normal cells, as shown in the results of cell proliferation test 1 (Fig. 1).
  • the placenta extract has the effect of suppressing the proliferation of cancer cells while allowing normal cells to proliferate.
  • the placenta extract can be used as an active ingredient in a preparation that suppresses the proliferation of cancer cells while allowing normal cells to proliferate.
  • the placenta aqueous extract has a cell growth promoting effect of about 20% in the 10 ⁇ g/mL sample and about 15% in the 100 ⁇ g/mL sample. No significant stimulatory effect was observed in the 400 ⁇ g/mL sample compared to controls. That is, the aqueous placenta extract tends to promote cell proliferation at lower concentrations than normal cells, and to have less effect on cell proliferation at higher concentrations.
  • the use of the aqueous placenta extract provides a method of use that suppresses the proliferation of cancer cells while exerting different effects on normal cells by adjusting the concentration of the aqueous placenta extract exposed to normal cells. can do.
  • the use of the placenta extract is an extract extracted with an aqueous solvent containing water as the main component, and the cancer cells cultured in vitro exceed 0 ⁇ g/mL and 400 ⁇ g /mL or less concentration of the extract is characterized by containing an amount that can express in vivo an effect equivalent to the growth inhibitory effect when exposed to the above-mentioned extract at a concentration of 1 dose of normal cells. It is possible to suppress the proliferation of cancer cells while promoting proliferation.
  • the placenta extract is an extract extracted with an aqueous solvent containing water as a main component, and the concentration of the extract exceeds 400 ⁇ g/mL in cancer cells cultured in vitro.
  • a single dose of the preparation contains an amount that can exhibit an effect equivalent to the growth inhibitory effect when exposed to a substance in vivo, without affecting the growth of normal cells. , can suppress the proliferation of cancer cells.
  • placenta extract particularly, placenta water-based extract
  • colon cancer cells human liver cancer cells
  • cell proliferation test 1 Fig. 2
  • cell proliferation test 2 Fig. 7, Fig. 9
  • the use of the placenta extract is characterized in that it is used for colon cancer cells, human liver cancer cells or human pancreatic cancer cells. Effects on proliferation of liver cancer cells or human pancreatic cancer cells can be modulated.
  • placenta extracts (particularly, placenta aqueous extracts) were used in cervical cancer cells, nerve It has the effect of exhibiting a substantially constant inhibitory effect on blastoma, human astrocytoma cells, human breast cancer cells, and human ovarian cancer cells, regardless of concentration.
  • the use of the placenta extract is characterized in that it is used for cervical cancer cells, neuroblastoma cells, human astrocytoma cells, human breast cancer cells, and human ovarian cancer cells. If the concentration is equal to or higher than the predetermined concentration, a substantially constant inhibitory effect can be obtained.

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Abstract

がん細胞の増殖抑制に焦点を当てたプラセンタ抽出物の新たな使用方法を提供する。 プラセンタ抽出物の使用は、がん細胞の増殖抑制を目的とすることに特徴を有する。また、プラセンタ抽出部の使用は、正常細胞を増殖させつつ、がん細胞の増殖を抑制する製剤における作用成分とする特徴を有する。

Description

プラセンタ抽出物の使用方法
　本発明は、プラセンタ抽出物の使用方法に関する。特に、がん細胞の増殖を抑制することを目的としてプラセンタ抽出物を使用する方法に関する。
　近年の医療技術の発達および栄養価の高い食事の普及によって、ヒトは長い寿命を得ることに成功している。しかし、ヒトが長い寿命を得たことにより、がん罹患率が増加の傾向にある。それゆえに、医薬品又は日々の食事から摂取可能であって、がん細胞の増殖を抑制する作用を備えた成分（又は素材）が所望されている。
　ところで、哺乳類の胎盤（プラセンタ）やその抽出物は、健康と美容の両側面において増進をもたらす新たな素材として、男女問わず幅広い年代層から注目されている（例えば、特許文献１参照）。
　特許文献１には、ブタ由来の胎盤より抽出されたプラセンタエキスの粉末50～70質量％、ビール酵母20～30質量％、鶏卵における薄皮粉末5～10質量％および真菰粉末5～10質量％からなることを特徴とするプラセンタエキス粉末配合食品が開示されている。
　特許文献１に開示のプラセンタエキス粉末配合食品によれば、プラセンタエキス粉末の固化性を抑制して保存性に優れると共に、プラセンエキス粉末による作用（例えば、更年期障害における体調調整作用や美白作用）を期待できる食品を提供することができる。
特開２００６－１５８２１４号公報
　上述のようにプラセンタは、健康と美容の両側面において優れた効果を備えている。また、プラセンタには、他の治療によって生起される副作用を軽減する効果が報告されている。
　このような報告の一例としては、「放射線障害の回復に胎盤エキスが効果（賀田恒夫氏、朝日新聞1982年9月25日）」が挙げられる。この記事では、20日以内に死ぬ放射線量を浴びたネズミに、胎盤エキスを注射しておくだけで、200日は生存するということを報告している。
　このように、公知となっているプラセンタの効果の一例として、放射線によるがん治療の副作用を軽減する効果が挙げられる。この効果は、プラセンタに含有される複数の物質が相乗的にはたらき、放射線により損傷した遺伝子を修復することで生起されるものと推測されている。
　しかしながら、既にがん化した細胞に対するプラセンタの直接的な効果は不明のままであった。本発明者らは、鋭意研究により、プラセンタ抽出物はがん細胞の増殖を抑制する効果を備えていることを明らかとした。
　本発明は、がん細胞の増殖抑制に焦点を当てたプラセンタ抽出物の新たな使用方法を提供する。
　本発明では、（１）がん細胞の増殖抑制のために、プラセンタ抽出物を使用することとした。
　また本発明では、（２）正常細胞を増殖させつつ、がん細胞の増殖を抑制する製剤における作用成分として、プラセンタ抽出物を使用することとした。
　また本発明では、（３）前記プラセンタ抽出物は水を主成分とする水系溶媒により抽出された抽出物であって、in vitroで培養された前記がん細胞に0μg/mLを超え400μg/mL以下の濃度の前記抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量を前記製剤１回分の用量中に含有させることにも特徴を有する。
　また本発明では、（４）前記プラセンタ抽出物は水を主成分とする水系溶媒により抽出された抽出物であって、in vitroで培養された前記がん細胞に400μg/mLを超える濃度の前記抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量を前記製剤１回分の用量中に含有させることにも特徴を有する。
　また本発明では、（５）前記プラセンタ抽出物を大腸がん細胞、ヒト肝がん細胞又はヒト膵臓がん細胞に使用することを特徴を有する。
　また本発明では、（６）前記プラセンタ抽出物を子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫、ヒトアストロサイトーマ細胞、ヒト乳がん細胞又は卵巣がん細胞に使用することを特徴を有する。
　本発明によれば、がん細胞の増殖抑制のためのプラセンタ抽出物の使用をすることとしたため、プラセンタ抽出物の新たな使用方法を提供することができる。また、がん細胞の増殖を抑制する手段としてプラセンタ抽出物を採用するという選択肢を提示することができる。
　また、正常細胞を増殖させつつ、がん細胞の増殖を抑制する製剤における作用成分としてのプラセンタ抽出物を使用することとしたため、プラセンタ抽出物の新たな使用方法を提供することができる。特に、プラセンタ抽出物が正常細胞とがん細胞とに対して相反する効果を生起する使用法を提供することができる。
　また、前記プラセンタ抽出物は水を主成分とする水系溶媒により抽出された抽出物であって、in vitroで培養された前記がん細胞に0μg/mLを超え400μg/mL以下の濃度の前記抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量を前記製剤１回分の用量中に含有させることとしたため、プラセンタ抽出物の濃度を調整して使用することにより、正常細胞の増殖を促進させながら、がん細胞の増殖を抑制するプラセンタ抽出物の使用方法を提供することができる。
　また、前記プラセンタ抽出物は水を主成分とする水系溶媒により抽出された抽出物であって、in vitroで培養された前記がん細胞に400μg/mLを超える濃度の前記抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量を前記製剤１回分の用量中に含有させることとしたため、プラセンタ抽出物の濃度を調整して使用することにより、正常細胞の増殖に影響を与えることなく、がん細胞の増殖を抑制するプラセンタ抽出物の使用方法を提供することができる。
　また、前記プラセンタ抽出物を大腸がん細胞、ヒト肝がん細胞又はヒト膵臓がん細胞に使用することとしたため、大腸がん細胞、ヒト肝がん細胞又はヒト膵臓がん細胞の増殖を濃度に依存して強く抑制するプラセンタ抽出物の使用法を提供することができる。すなわち、プラセンタの使用では、プラセンタ抽出物の濃度に応じて大腸がん細胞、ヒト肝がん細胞又はヒト膵臓がん細胞の増殖への影響を調整することができる。
　また、前記プラセンタ抽出物を子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫、ヒトアストロサイトーマ細胞、ヒト乳がん細胞又は卵巣がん細胞に使用することとしたため、子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫、ヒトアストロサイトーマ細胞、ヒト乳がん細胞又は卵巣がん細胞に対して、所定濃度以上であれば略一定の抑制効果をそれぞれ示すプラセンタ抽出物の使用方法を提供することができる。
正常細胞(CCD841)増殖試験の試験結果を示す説明図である。 大腸がん細胞(HCT-116)増殖試験の試験結果を示す説明図である。 子宮頸がん細胞(HeLa)増殖試験の試験結果を示す説明図である。 神経芽細胞腫(SH-SY5Y)増殖試験の試験結果を示す説明図である。 ヒトアストロサイトーマ細胞(1321Ｎ1)増殖試験の試験結果を示す説明図である。 ヒト乳がん細胞(MDA-MB-453)増殖試験の試験結果を示す説明図である。 ヒト肝がん細胞(HuH-7)増殖試験の試験結果を示す説明図である。 ヒト卵巣がん細胞(OVK18)増殖試験の試験結果を示す説明図である。 ヒト膵臓がん細胞(KLM-1)増殖試験の試験結果を示す説明図である。
本発明は、プラセンタ抽出物の使用方法に関し、より詳細には、医薬品や機能性食品によってがん細胞の増殖を抑制するためのプラセンタ抽出物の新たな使用方法を提供するものである。
　プラセンタ抽出物は、哺乳類の胎盤（プラセンタ）の抽出物であり、例えば溶媒を用いて抽出した場合は、その抽出液であったり、抽出液の乾燥物がプラセンタ抽出物に含まれる。
　プラセンタ抽出物の抽出対象原料であるプラセンタは、特に限定されるものではなく、ブタ、ウマ、ヒトをはじめ種々の哺乳類のプラセンタを採用することができる。
　また、本実施形態における使用とは、がん細胞の増殖を抑制することを目的として利用される製剤の原料として使用されることである。ここで製剤とは、例えば、医薬品または機能性食品が挙げられる。
　医薬品は、病気の診断、治療または予防に使用されることを目的とされているものであり、例えば、病院で医師が処方する医療用医薬品であったり、薬局またはドラッグストア等で市販されているＯＴＣ医薬品が挙げられる。
　医薬品として使用するプラセンタ抽出物の形状は、特に限定されないが、例えば経口投与によって作用させる内服剤、からだの外側から作用させる外用剤又は皮下若しくは血管内に直接いれることにより作用させる注射剤を採用することができる。
　また機能性食品は、医薬品成分を含まない健康の保持増進に寄与するとされる食品全般を包含する概念であり、例えば、栄養補助食品や健康補助食品、栄養調整食品のほか、所謂サプリメントなどの一般食品であったり、特定保健用食品や栄養機能食品、機能性表示食品の如き保健機能食品も含まれる。
　なお、上述した医薬品や機能性食品についての説明は、本発明の理解に供すべくこれらに相当する物品等の一例を列挙したものであり、各語句の解釈はこれら列挙された物品等に限定されるものではない。ただし、本出願人が本願を権利化するにあたり、本発明をこれら物品等に限定することを妨げない。
　このように、医薬品や機能性食品によってがん細胞の増殖を抑制するためのプラセンタ抽出物を使用することにより、がん細胞の増殖を抑制する手段としてプラセンタ抽出物を採用するという選択肢を提示することができる。
　また本発明は、正常細胞を増殖させつつ、がん細胞の増殖を抑制する製剤における作用成分としてプラセンタ抽出物を使用する方法を提供するものでもある。
　がん細胞は、ＤＮＡの変異によって増殖を続ける能力（異常増殖能）を獲得した細胞を意味する。例えば、後述する実験で採用する大腸がん細胞、子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫、ヒトアストロサイトーマ細胞、ヒト乳がん細胞、ヒト肝がん細胞、ヒト卵巣がん細胞、ヒト膵臓がん細胞等が挙げられる。
　正常細胞は、生体を構成し、またはin vitroで培養された健常な細胞であってがん化していないものをいう。例えば、後述する実験で採用する大腸正常細胞が挙げられる。
　作用成分とは、がん細胞の増殖を抑制する作用を呈する成分であり、例えば、製剤が医薬品であれば有効成分であって、機能性食品であれば機能成分である。
　また作用成分は、プラセンタ抽出物をそのまま利用したものでも良いし、プラセンタ抽出物から精製した成分であってもよい。
　プラセンタ抽出物は、水を主成分とする水系溶媒に対して溶解性を示す成分群よりなることとしても良い。すなわち、プラセンタ抽出物は水系溶媒によって抽出された抽出物とすることができる。
　ここで水系溶媒は水を主成分とした溶媒であり、水そのものの他に、例えば50w/w％以上の割合で水を含有する溶媒が含まれる。水系溶媒を構成する水以外の成分としては、例えば、水に対して溶解性を示す固体（粉末等）の成分であったり、アルコールの如き水と混和性を示す液体としたりすることができる。
　また、プラセンタ抽出物は、ジメチルスルホキシド、エタノール、メタノール、ヘキサンから選ばれるいずれか１つ若しくはいずれか２つ以上の混合液からなる非水系特定溶媒に対して溶解性を示す成分群よりなることとしてもよい。換言すれば、プラセンタ抽出物は、非水系特定溶媒によって抽出された抽出物とすることができる。
　また溶媒は、水系溶媒と非水系特定溶媒との混合溶媒としても良い。すわなち、50w/w％未満の割合で水を含み、残余を非水系特定溶媒や、調整する混合溶媒に対して溶解性を示す固体（粉末等）の成分であったり、アルコールの如き水との混和性を示す液体とすることができる。
　プラセンタ抽出物から精製した成分は、がん細胞の増殖を抑制する効果を呈する成分とすることができる。また、がん細胞の増殖抑制と同時に正常細胞の増殖を促進する効果とを呈する成分とすることもできる。
　このように、正常細胞を増殖させつつ、がん細胞の増殖を抑制する製剤における作用成分としてプラセンタ抽出物を使用することにより、正常細胞とがん細胞とに対して相反する効果を生起する使用法を提供することができる。
　また本願に係るプラセンタ抽出物の使用方法は、発明者らがin vitro実験によって明らかとしたものであり、プラセンタ抽出物の濃度およびプラセンタ抽出物に曝されるがん細胞の種類に応じて異なる効果を呈するものである。
　具体的には、プラセンタ抽出物の使用方法では、前記プラセンタ抽出物は水を主成分とする水系溶媒により抽出された抽出物であって、in vitroで培養された前記がん細胞に0μg/mLを超え400μg/mL以下の濃度の前記抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量を前記製剤１回分の用量中に含有させることを特徴とすることができる。
　このようなプラセンタ抽出物の使用方法によれば、プラセンタ抽出物の濃度を調整して使用することにより、正常細胞の増殖を促進させながら、がん細胞の増殖を抑制するプラセンタ抽出物の使用方法を提供することができる。
　また、プラセンタ抽出物の使用方法では、前記プラセンタ抽出物は水を主成分とする水系溶媒により抽出された抽出物であって、in vitroで培養された前記がん細胞に400μg/mLを超える濃度の前記抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量を前記製剤１回分の用量中に含有させることを特徴とすることができる。
　このようなプラセンタ抽出物の使用方法によれば、プラセンタ抽出物の濃度を調整して使用することにより、正常細胞の増殖に影響を与えることなく、がん細胞の増殖を抑制するプラセンタ抽出物の使用方法を提供することができる。
　また、プラセンタ抽出物の使用方法では、前記プラセンタ抽出物を大腸がん細胞、ヒト肝がん細胞又はヒト膵臓がん細胞に使用することを特徴とすることができる。
　このようなプラセンタ抽出物の使用方法によれば、大腸がん細胞、ヒト肝がん細胞又はヒト膵臓がん細胞の増殖を濃度に依存して強く抑制することができる。
　また、プラセンタ抽出物の使用方法では、前記プラセンタ抽出物を子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫、ヒトアストロサイトーマ細胞、ヒト乳がん細胞又は卵巣がん細胞に使用することを特徴とすることができる。
　このようなプラセンタ抽出物の使用方法によれば、子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫、ヒトアストロサイトーマ細胞、ヒト乳がん細胞又は卵巣がん細胞の増殖を濃度に関係なく略同じに抑制するプラセンタ抽出物の使用方法を提供することができる。
　以下、本実施形態に係る使用方法について、実験結果を参照しながら更に説明する。なお、以下ではウマ由来のプラセンタ（胎盤）より抽出したプラセンタ抽出物（以下、ウマプラセンタ抽出物という。）を用いた例について説明するが、プラセンタの由来はウマに限定されるものではない。
〔１．プラセンタ抽出物の調整〕
　近年のがん罹患率の増加により、医薬品および機能性食品に含まれる成分（又は素材）としてがん細胞の増殖を抑制する成分が所望されている。プラセンタは、ヒトの健康と美容との両側面において増進をもたらす新たな素材として注目されているが、がん細胞に対する直接的な作用は不明のままであった。
　本実験ではプラセンタ抽出物として、ウマプラセンタ粉末を使用した。ウマプラセンタ粉末は、ウマ胎盤の凍結乾燥粉末である。
　まず、100mgのウマプラセンタ粉末を1.5mlチューブに量り取り、1mlの抽出溶媒を添加して、室温にて30分間攪拌を行った。抽出溶媒は、水系溶媒として滅菌超純水、非水系特定溶媒としてジメチルスルホキシド（Dimethyl sulfoxide:以下、DMSOともいう。）をそれぞれ使用した。
　攪拌後、チューブを室温に静置し、得られた上清をウマプラセンタ抽出物とした。なお、このウマプラセンタ抽出物は、100mgのプラセンタ粉末に1mLの抽出溶媒を添加して調製したことに由来し、100mg/mlサンプルと称することとした。また、以下の各試験において、100mg/mlサンプルを適宜希釈して調製した希釈サンプルに関し、例えば100倍希釈されたサンプルであれば1mg/mlサンプル、10000倍希釈されたサンプルであれば10μg/mlサンプルのように表現する。
〔２．細胞増殖試験１〕
　本試験では、正常細胞又はがん細胞とサンプルとを共培養し、細胞生存率を測定した。
　本試験において、正常細胞は大腸正常細胞（CCD841）を採用し、がん細胞は、大腸がん細胞（HCT-116）、子宮頸がん細胞（HeLa）、神経芽腫細胞（SH-SY5Y）、ヒトアストロサイトーマ細胞（1321N1）を採用した。
　細胞培養の方法としては、子宮頸がん細胞、ヒトアストロサイトーマ細胞および神経芽細胞腫はD-MEM(Dulbecco’s Modified Eagle Medium)を、正常細胞にはE-MEM(Eagle’s Minimal Essential Medium)を、大腸がん細胞にはMccoy’s 5A Modified Mediumを用いて前培養した。また、各細胞の培養には、適切な培地に10％ウシ胎児血清（FBS）と1％ストレプトマイシン－ペニシリン（SP）を添加している。
　その後、96穴プレートに1.0×105cells/mLの濃度で100μLを播種し、CO2インキュベータ（37℃、5％ CO2）にてオーバーナイト培養した。
　オーバーナイト後、培地を除去し、0.5％FBSと1％SPを添加した液体培地100μLを添加した。また、液体培地には0.5μL/wellとなるようにサンプル溶液をそれぞれ添加し、CO2インキュベータ（37℃、5％CO2）にて72時間静置培養を行った。
　細胞生存率の測定は、MTT法により行った。
　MTT法では、72時間の培養が行われたプレートから培地を除去し、各ウェルにMTT染色液（5mg/mL in medium）を100μLずつ添加し、5％CO2、37℃で4時間静置培養を行った。
　4時間の静置培養後、MTT染色液を除去し、各ウェルに塩酸－イソプロパノール溶液を100μLずつ加え、遮光し、4時間室温で放置した。
　その後、マイクロプレートリーダーで570nmにおける吸光度を測定し、細胞生存率の指標とした。
　図１は正常細胞のコントロールに対する細胞生存率を示したグラフであり、図１（ａ）は水系溶媒にて抽出したプラセンタ抽出物（以下、プラセンタ水系抽出物ともいう。）による細胞生存率を示し、図１（ｂ）は非水系特定溶媒にて抽出したプラセンタ抽出物（以下、プラセンタ非水系抽出物）による細胞生存率を示している。
　図１（ａ）に示すように、プラセンタ水系抽出物に関し、10μg/mLサンプル、100μg/mLサンプル、400μg/mLサンプルについて確認を行ったところ、10μg/mLサンプルにおいては約20％、100μg/mLサンプルにおいては約15％の細胞増殖促進効果が認められた。これらに対し、400μg/mLサンプルにおいてはコントロールと比して有意な細胞増殖促進効果が認められなかった。
　このことより、プラセンタ水系抽出物には、比較的低濃度（10μg/mL、100μg/mL）では正常細胞の増殖を促進させ、比較的高濃度（400μg/mL）では正常細胞の増殖に影響を与えないことが明らかとなった。
　換言すれば、プラセンタ水系抽出物は、0μg/Lを超え400μg/mL以下の濃度を正常細胞に曝した際には増殖を促進させる効果をおよぼし、400μg/mL以上の濃度を正常細胞に曝した際には増殖に影響を与えないことが考えられた。
　またこれに対し、プラセンタ非水系抽出物に関し各希釈サンプルについて確認を行ったところ、図１（ｂ）に示すように、検討された全ての濃度において約20％の細胞増殖促進効果が認められた。
　このことより、プラセンタ非水系抽出物は、正常細胞の細胞増殖に対して濃度に関係なく略一定に促進させる効果があるものと考えられた。
　また、これら水系、非水系のプラセンタ抽出物についての結果を踏まえると、プラセンタ非水系抽出物は全てのサンプル濃度で等しく正常細胞の増殖を促進したのに対し、プラセンタ水系抽出物は低いサンプル濃度ほど正常細胞の増殖が強く促進されたことは、実に興味深い点であると言える。
　図２は大腸がん細胞のコントロールに対する細胞生存率を示したグラフであり、図２（ａ）はプラセンタ水系抽出物による細胞生存率を示し、図２（ｂ）はプラセンタ非水系抽出物による細胞生存率を示している。
　図２（ａ）に示すように、プラセンタ水系抽出物に関し、10μg/mLサンプル、100μg/mLサンプル、400μg/mLサンプルについて確認を行ったところ、100μg/mLサンプルにおいては約20％、400μg/mLサンプルにおいては約70％の細胞増殖抑制効果が認められた。
　このことより、プラセンタ水系抽出物には、大腸がん細胞の増殖に対して濃度依存的に強い抑制効果を呈することが明らかとなった。
　またこれに対し、プラセンタ非水系抽出物に関し各希釈サンプルについて確認を行ったところ、図２（ｂ）に示すように、100μg/mLサンプルにおいては約40％、400μg/mLサンプルにおいては約60％程度の細胞増殖抑制効果が認められた。
　また、これら水系、非水系のプラセンタ抽出物についての結果を踏まえると、プラセンタ水系抽出物とプラセンタ非水系抽出物とでは、大腸がん細胞の増殖に対して共に濃度依存的に強い抑制効果を示すと言える。
　ここで、正常細胞と大腸がん細胞とにおけるプラセンタ水系抽出物についての結果を比較検討すると、プラセンタ水系溶媒は、100μg/mLサンプルにおいて正常細胞の増殖を促進すると共に大腸がん細胞の増殖を抑制し、400μg/mLサンプルにおいて正常細胞の増殖に影響を与えることなく大腸がん細胞の増殖を抑制するものと考えられる。
　また、正常細胞と大腸がん細胞とにおけるプラセンタ非水系抽出物についての結果を比較検討すると、100μg/mL以上の濃度であれば、正常細胞の増殖を略一定に促進し、大腸がん細胞の増殖を略一定に抑制するものと考えられる。
　図３は子宮頸がん細胞のコントロールに対する細胞生存率を示したグラフであり、図３（ａ）はプラセンタ水系抽出物による細胞生存率を示し、図３（ｂ）はプラセンタ非水系抽出物による細胞生存率を示している。
　図３（ａ）に示すように、プラセンタ水系抽出物に関し、10μg/mLサンプル、100μg/mLサンプル、400μg/mLサンプルについて確認を行ったところ、100μg/mLおよび400μg/mLサンプルにおいて約30％の細胞増殖抑制効果が認められた。
　このことより、プラセンタ水系抽出物には、子宮頸がん細胞の増殖に対して所定濃度以上であれば略一定に抑制効果を呈することが明らかとなった。
　またこれに対し、プラセンタ非水系抽出物に関し各希釈サンプルについて確認を行ったところ、図３（ｂ）に示すように、100μg/mLおよび400μg/mLサンプルにおいて約30％の細胞増殖抑制効果が認められた。
　また、これら水系、非水系のプラセンタ抽出物についての結果を踏まえると、プラセンタ水系抽出物とプラセンタ非水系抽出物とでは、子宮頸がん細胞の増殖に対し共に100μg/mL以上の濃度であれば、略一定の抑制効果をそれぞれ示すと言える。
　ここで、正常細胞と子宮頸がん細胞とにおけるプラセンタ水系抽出物についての結果を比較すると、プラセンタ水系溶媒は、100μg/mLサンプルにおいて正常細胞を増殖させると共に子宮頸がん細胞の増殖を抑制し、400μg/mLサンプルにおいて正常細胞の増殖に影響を与えることなく子宮頸がん細胞の増殖を抑制するものと考えられる。
　また、正常細胞と子宮頸がん細胞とにおけるプラセンタ非水系抽出物についての結果を比較検討すると、100μg/mL以上の濃度であれば、正常細胞の増殖を略一定に促進させ、子宮頸がん細胞の増殖を略一定に抑制するものと考えられる。
　図４は神経芽細胞腫のコントロールに対する細胞生存率を示したグラフであり、図４（ａ）はプラセンタ水系抽出物による細胞生存率を示し、図４（ｂ）はプラセンタ非水系抽出物による細胞生存率を示している。
　図４（ａ）に示すように、プラセンタ水系抽出物に関し、10μg/mLサンプル、100μg/mLサンプル、400μg/mLサンプルについて確認を行ったところ、検討された全ての濃度において約20％の細胞増殖抑制効果が認められた。
　このことより、プラセンタ水系抽出物は、神経芽細胞腫の増殖に対して所定濃度以上であれば略一定に抑制する効果を呈することが明らかとなった。
　またこれに対し、プラセンタ非水系抽出物に関し各希釈サンプルについて確認を行ったところ、図４（ｂ）に示すように、10μg/mLおよび100μg/mLにおいて約10％、400μg/mLにおいて約90％の細胞増殖抑制効果が認められた。
　また、これら水系、非水系のプラセンタ抽出物についての結果を踏まえると、プラセンタ水系抽出物とプラセンタ非水系抽出物とでは、神経芽細胞腫の増殖に対し共に所定の抑制効果を示すと言える。特に、プラセンタ非水系抽出物400μg/mLにおいては、著しく強い細胞増殖抑制効果が確認された。
　ここで、正常細胞と神経芽種細胞とにおけるプラセンタ水系抽出物についての結果を比較すると、プラセンタ水系溶媒は、10μg/mLおよび100μg/mLサンプルにおいて正常細胞を増殖させると共に神経芽細胞腫の増殖を抑制し、400μg/mLサンプルにおいて正常細胞の増殖に影響を与えることなく神経芽細胞腫の増殖を抑制するものと考えられる。
　また、正常細胞と神経芽細胞腫とにおけるプラセンタ非水系抽出物についての結果を比較すると、検討した全てのサンプル濃度において正常細胞の増殖を促進させ、神経芽種細胞の増殖を抑制するものと考えられる。特に、プラセンタ非水系抽出物400μg/mLにおいては、正常細胞の増殖は他のサンプル濃度と比して差異はないが、神経芽細胞腫の増殖を強く抑制する効果を呈するものと考えられる。
　図５はヒトアストロサイトーマ細胞のコントロールに対する細胞生存率を示したグラフであり、図５（ａ）はプラセンタ水系抽出物による細胞生存率を示し、図５（ｂ）はプラセンタ非水系抽出物による細胞生存率を示している。
　図５（ａ）に示すように、プラセンタ水系抽出物に関し、10μg/mLサンプル、100μg/mLサンプル、400μg/mLサンプルについて確認を行ったところ、100μg/mLおよび400μg/mLサンプルにおいては約20％の細胞増殖抑制効果が認められた。
　このことより、プラセンタ水系抽出物には、ヒトアストロサイトーマ細胞の増殖に対して所定濃度以上であれば略一定の抑制効果を呈することが明らかとなった。
　またこれに対し、プラセンタ非水系抽出物に関し各希釈サンプルについて確認を行ったところ、図５（ｂ）に示すように、検討された全ての濃度において約10％の細胞増殖抑制効果が認められた。
　このことより、プラセンタ非水系抽出物は、ヒトアストロサイトーマ細胞の増殖に対してサンプル濃度に関わらず略同じ程度に抑制する効果を呈することが認められた。
　また、これら水系、非水系のプラセンタ抽出物についての結果を踏まえると、プラセンタ水系抽出物とプラセンタ非水系抽出物とでは、ヒトアストロサイトーマ細胞の増殖に対し100μg/mL以上のサンプル濃度であれば、略一定の抑制効果を示すことが確認された。
　ここで、正常細胞とヒトアストロサイトーマ細胞とにおけるプラセンタ水系抽出物についての結果を比較すると、プラセンタ水系溶媒は、100μg/mLサンプルにおいて正常細胞を増殖させると共に神経芽細胞腫の増殖を抑制し、400μg/mLサンプルにおいて正常細胞の増殖に影響を与えることなく神経芽細胞腫の増殖を抑制するものと考えられる。
　また、正常細胞とヒトアストロサイトーマ細胞とにおけるプラセンタ非水系抽出物についての結果を比較すると、検討した全てのサンプル濃度において正常細胞の増殖を促進させた。特に、各サンプル濃度の細胞増殖抑制は、ヒトアストロサイトーマ細胞に対して略一定の効果を示した。
　本試験の結果を踏まえると、プラセンタ水系抽出物は、in vitroで培養された大腸がん細胞、子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫又はヒトアストロサイトーマ細胞に0μg/mLを超え400μg/mL以下の濃度のプラセンタ水系抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量で使用されれば、正常細胞を増殖させつつ、大腸がん細胞、子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫又はヒトアストロサイトーマ細胞の増殖を抑制する製剤における作用成分を提供することができる。
　また、プラセンタ水系抽出物は、in vitroで培養された大腸がん細胞、子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫又はヒトアストロサイトーマ細胞に400μg/mLを超える濃度のプラセンタ水系抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量で使用されれば、正常細胞の増殖に影響を与えることなく、大腸がん細胞、子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫又はヒトアストロサイトーマ細胞の増殖を抑制する製剤における作用成分を提供することができる。
　一方で、プラセンタ非水系抽出物は、in vitroで培養された大腸がん細胞、子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫又はヒトアストロサイトーマ細胞に0μg/mLを超える濃度のプラセンタ非水系抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量で使用されれば、正常細胞を増殖させつつ、大腸がん細胞、子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫又はヒトアストロサイトーマ細胞の増殖を抑制する製剤における作用成分を提供することができる。
　しかも、プラセンタ抽出物は、大腸がん細胞に使用されることにより、濃度依存的に増殖を抑制することができる。また、子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫又はヒトアストロサイトーマ細胞に使用されることにより、所定の濃度以上で略一定に抑制することができる。
〔３．細胞増殖試験２〕
　本試験では、がん細胞とサンプルとを共培養し、細胞生存率を測定した。
　本試験において、がん細胞は、ヒト乳がん細胞（MDA-MB-453）、ヒト肝がん細胞（HuH-7）、ヒト卵巣がん細胞（OVK18）、ヒト膵臓がん細胞（KLM-1）を採用した。
　細胞培養の方法としては、ヒト乳がん細胞、ヒト肝がん細胞およびヒト膵臓がん細胞にはRPMI-1640（含1％SP、および10％FBS）を、ヒト卵巣がん細胞にはMEMα（含1％SP、および10％FBS）を用いて前培養を行った。
　その後、96穴プレートに0.5×104cells/wellの濃度で播種し、CO2インキュベータ(37℃、5％ CO2)にてオーバーナイト培養した。なお、ヒト乳がん細胞(MDA-MB-453)は、プレートをシールで密閉し37℃、0％CO2の環境下でオーバーナイト培養した。
　オーバーナイト後、培地を除去し、サンプル溶液を含む血清培地（含む1％SP）に交換し、37℃、5％CO2（MDA-MB-453：37℃、0％CO2）で24時間培養した。なお、サンプル溶液は、水系および非水系ともに終濃度が5、50、100、500μg/mLとなるように添加した。
　細胞生存率の測定は、MTT法により行った。MTT法では、24時間の培養が行われたプレートから培地を除去し、各ウェルにサンプル溶液を含まない無血清培地（含む1％SP）を100μL加えた。次いで、各ウェルにMTT染色液（5mg/mL in Phosphate-buffered saline（以下、PBSともいう。）)を20μLずつ添加し、CO2インキュベーターにて4時間静置培養した。ヒト乳がん細胞も、同様の操作を行い37℃、0％CO2の環境下で4時間静置培養した。
　4時間の静置培養後、無血清培地を除去し、各ウェルに塩酸－イソプロパノール溶液を100μLずつ加え、ピペッティングにてホルマザンを完全に溶解させた。そして、マイクロプレートリーダーで570nmにおける吸光度を測定し、細胞生存率を算出した。
　図６はヒト乳がん細胞のコントロールに対する細胞生存率を示したグラフであり、図６（ａ）はプラセンタ水系溶媒による細胞生存率を示し、図６（ｂ）はプラセンタ非水系抽出物による細胞生存率を示している。
　図６（ａ）に示すように、プラセンタ水系抽出物に関し、5μg/mLサンプル、50μg/mLサンプル、100μg/mLサンプル、500μg/mLサンプルについて確認を行ったところ、検討された全ての濃度において細胞増殖抑制効果が認められた。特に、50μg/mLサンプル以上の濃度条件下では約60％の細胞増殖抑制効果が認められた。
　このことより、プラセンタ水系抽出物には、ヒト乳がん細胞の増殖に対して所定濃度以上であれば略一定の抑制効果を呈することが明らかとなった。
　またこれに対し、プラセンタ非水系抽出物に関し各希釈サンプルについて確認を行ったところ、図６（ｂ）に示すように、検討された全ての濃度において細胞増殖を抑制する効果が認められた。特に、50μg/mLサンプル以上の濃度条件下では約60％の細胞増殖抑制効果が認められた。
　また、これら水系、非水系のプラセンタ抽出物についての結果を踏まえると、プラセンタ水系抽出物とプラセンタ非水系抽出物とでは、ヒト乳がん細胞の増殖に対し共に抑制し、特に50μg/mL以上の濃度であれば、略一定の抑制効果をそれぞれ示すと言える。
　ここで、本試験におけるヒト乳がん細胞と、細胞増殖試験１で試験した正常細胞とにおけるプラセンタ水系抽出物についての結果を比較検討すると、プラセンタ水系抽出物は低い濃度（10μg/mLサンプル）であればヒト乳がん細胞の増殖を抑制すると共に正常細胞を増殖させ、400μg/mL以上の濃度において正常細胞の増殖に影響を与えることなくヒト乳がん細胞の増殖を抑制するものと考えられる。
　また、本試験におけるヒト乳がん細胞と、細胞増殖試験１で試験した正常細胞とにおけるプラセンタ非水系抽出物についての結果を比較検討すると、プラセンタ非水系抽出物は10μg/mL以上の濃度であればヒト乳がん細胞の増殖を抑制すると共に正常細胞を増殖させるものと考えられる。特に50μg/mL以上の濃度であれば、ヒト乳がん細胞の増殖を約60％抑制し、正常細胞の増殖を約20％促進させるものと考えられる。
　図７はヒト肝がん細胞のコントロールに対する細胞生存率を示したグラフであり、図７（ａ）はプラセンタ水系溶媒による細胞生存率を示し、図７（ｂ）はプラセンタ非水系抽出物による細胞生存率を示している。
　図７（ａ）に示すように、プラセンタ水系抽出物に関し、5μg/mLサンプル、50μg/mLサンプル、100μg/mLサンプル、500μg/mLサンプルについて確認を行ったところ、検討された全ての濃度において細胞増殖抑制効果が認められた。特に、サンプル濃度に依存してヒト肝がん細胞の増殖を強く抑制する効果が認められた。
　このことより、プラセンタ水系抽出物には、ヒト肝がん細胞の増殖に対して濃度依存的に強い抑制効果を呈することが明らかとなった。
　またこれに対し、プラセンタ非水系抽出物に関し各希釈サンプルについて確認を行ったところ、図７（ｂ）に示すように、検討された全ての濃度において細胞の増殖を抑制する効果が認められた。特に、50μg/mLサンプル以上の濃度条件下では約60％の細胞増殖抑制効果が認められた。
　また、これら水系、非水系のプラセンタ抽出物についての結果を踏まえると、プラセンタ水系抽出物とプラセンタ非水系抽出物とでは、ヒト肝がん細胞の増殖に対し共に抑制する効果を呈すると言える。特に、サンプル濃度に依存してその抑制効果が高くなると言える。
　ここで、本試験におけるヒト肝がん細胞と、細胞増殖試験１で試験した正常細胞とにおけるプラセンタ水系抽出物についての結果を比較検討すると、プラセンタ水系抽出物は低い濃度（10μg/mLサンプル）であればヒト肝がん細胞の増殖を抑制すると共に正常細胞を増殖させ、400μg/mL以上の濃度において正常細胞の増殖に影響を与えることなくヒト肝がん細胞の増殖を抑制するものと考えられる。
　また、本試験におけるヒト肝がん細胞と、細胞増殖試験１で試験した正常細胞とにおけるプラセンタ非水系抽出物についての結果を比較検討すると、プラセンタ非水系抽出物は10μg/mL以上の濃度であればヒト肝がん細胞の増殖を抑制すると共に正常細胞を増殖させるものと考えられる。特に50μg/mL以上の濃度であれば、ヒト乳がん細胞の増殖を約60％抑制し、正常細胞の増殖を約20％促進させるものと考えられる。
　図８はヒト卵巣がん細胞のコントロールに対する細胞生存率を示したグラフであり、図８（ａ）はプラセンタ水系溶媒における細胞生存率を示し、図８（ｂ）はプラセンタ非水系抽出物による細胞生存率を示している。
　図８（ａ）に示すように、プラセンタ水系抽出物に関し、5μg/mLサンプル、50μg/mLサンプル、100μg/mLサンプル、500μg/mLサンプルについて確認を行ったところ、検討された全ての濃度において約20％の細胞増殖抑制効果が認められた。
　このことより、プラセンタ水系抽出物には、ヒト卵巣がん細胞の細胞増殖に対して5μg/mLサンプル以上であれば略一定の抑制効果を呈することが明らかとなった。
　またこれに対し、プラセンタ非水系抽出物に関し各希釈サンプルについて確認を行ったところ、図８（ｂ）に示すように、検討された全ての濃度において細胞の増殖を抑制する効果が認められた。特に、50μg/mLサンプル以上の濃度条件下では約30％の細胞増殖抑制効果が認められた。
　また、これら水系、非水系のプラセンタ抽出物についての結果を踏まえると、プラセンタ水系抽出物とプラセンタ非水系抽出物とでは、ヒト卵巣がん細胞の増殖に対し共に抑制する効果を呈すると言える。特に、所定サンプル濃度以上であれば略一定の細胞増殖抑制効果をそれぞれ得ることができると言える。
　ここで、本試験におけるヒト卵巣がん細胞と、細胞増殖試験１で試験した正常細胞とにおけるプラセンタ水系抽出物についての結果を比較検討すると、プラセンタ水系抽出物は低い濃度（10μg/mLサンプル）であればヒト卵巣がん細胞の増殖を抑制すると共に正常細胞を増殖させ、400μg/mL以上の濃度において正常細胞の増殖に影響を与えることなくヒト卵巣がん細胞の増殖を抑制するものと考えられる。
　また、本試験におけるヒト卵巣がん細胞と、細胞増殖試験１で試験した正常細胞とにおけるプラセンタ非水系抽出物についての結果を比較検討すると、プラセンタ非水系抽出物は10μg/mL以上の濃度であればヒト卵巣がん細胞の増殖を抑制すると共に正常細胞を増殖させるものと考えられる。特に50μg/mL以上の濃度であれば、ヒト卵巣がん細胞の増殖を約20％抑制し、正常細胞の増殖を約20％促進させるものと考えられる。
　図９はヒト膵臓がん細胞のコントロールに対する細胞生存率を示したグラフであり、図９（ａ）はプラセンタ水系溶媒による細胞生存率を示し、図９（ｂ）はプラセンタ非水系抽出物による細胞生存率を示している。
　図９（ａ）に示すように、プラセンタ水系抽出物に関し、5μg/mLサンプル、50μg/mLサンプル、100μg/mLサンプル、500μg/mLサンプルについて確認を行ったところ、5μg/mLサンプルでは約30％、500μg/mLサンプルでは約60％の細胞増殖抑制効果が認められた。
　このことより、プラセンタ水系抽出物には、ヒト膵臓がん細胞の増殖に対して濃度依存的に強く抑制効果を呈することが明らかとなった。
　またこれに対し、プラセンタ非水系抽出物に関し、各希釈サンプルについて確認を行ったところ、図９（ｂ）に示すように、検討された全ての濃度において細胞の増殖を抑制する効果が認められた。特に、50μg/mLサンプル以上の濃度条件下では約60％の細胞増殖抑制効果が認められた。
　また、これら水系、非水系のプラセンタ抽出物についての結果を踏まえると、プラセンタ水系抽出物とプラセンタ非水系抽出物とでは、ヒト膵臓がん細胞に対し検討された全てのサンプル濃度で抑制効果を示すことが確認された。
　ここで、本試験におけるヒト膵臓がん細胞と、細胞増殖試験１で試験した正常細胞とにおけるプラセンタ水系抽出物についての結果を比較検討すると、プラセンタ水系抽出物は低い濃度（10μg/mLサンプル）であればヒト膵臓がん細胞の増殖を抑制すると共に正常細胞を増殖させ、400μg/mL以上の濃度において正常細胞の増殖に影響を与えることなくヒト膵臓がん細胞の増殖を抑制するものと考えられる。
　また、本試験におけるヒト膵臓がん細胞と、細胞増殖試験１で試験した正常細胞とにおけるプラセンタ非水系抽出物についての結果を比較検討すると、プラセンタ非水系抽出物は10μg/mL以上の濃度であればヒト膵臓がん細胞の増殖を抑制すると共に正常細胞を増殖させるものと考えられる。特に50μg/mL以上の濃度であれば、ヒト乳がん細胞の増殖を約60％抑制し、正常細胞の増殖を約20％促進させるものと考えられる。
　本試験の結果を踏まえると、プラセンタ水系抽出物および非水系抽出物は、in vitroで培養されたヒト乳がん細胞、ヒト肝がん細胞、ヒト卵巣がん細胞又はヒト膵臓がん細胞にプラセンタ水系抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量で使用されれば、ヒト乳がん細胞、ヒト肝がん細胞、ヒト卵巣がん細胞又はヒト膵臓がん細胞の増殖を抑制する製剤における作用成分を提供することができる。
　さらに、細胞増殖試験１で示した正常細胞の増殖を促進する結果を考慮すれば、プラセンタ水系抽出物は、in vitroで培養されたヒト乳がん細胞、ヒト肝がん細胞、ヒト卵巣がん細胞又はヒト膵臓がん細胞に0μg/Lを超え500μg/L以下の濃度のプラセンタ水系抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量で使用されれば、正常細胞を増殖させつつ、ヒト乳がん細胞、ヒト肝がん細胞、ヒト卵巣がん細胞又はヒト膵臓がん細胞の増殖を抑制する製剤における作用成分を提供することができるとも言える。
　また、プラセンタ水系抽出物は、in vitroで培養されたヒト乳がん細胞、ヒト肝がん細胞、ヒト卵巣がん細胞又はヒト膵臓がん細胞に500μg/Lを超える濃度のプラセンタ水系抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量で使用されれば、正常細胞の増殖に影響を与えることなく、ヒト乳がん細胞、ヒト肝がん細胞、ヒト卵巣がん細胞又はヒト膵臓がん細胞の増殖を抑制する製剤における作用成分を提供することができるとも言える。
　一方で、プラセンタ非水系抽出物は、in vitroで培養されたヒト乳がん細胞、ヒト肝がん細胞、ヒト卵巣がん細胞又はヒト膵臓がん細胞に0μg/Lを超える濃度のプラセンタ非水系抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量で使用されれば、正常細胞を増殖させつつ、ヒト乳がん細胞、ヒト肝がん細胞、ヒト卵巣がん細胞又はヒト膵臓がん細胞の増殖を抑制する製剤における作用成分を提供することができる。
　しかも、プラセンタ抽出物は、大腸がん細胞に使用されることにより、濃度依存的に増殖を抑制することができる。また、子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫又はヒトアストロサイトーマ細胞に使用されることにより、所定の濃度以上で略一定に抑制することができる。
〔４．総括〕
　プラセンタ抽出物は、細胞増殖試験１の結果（図２から図５）に示すように、大腸がん細胞、子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫、ヒトアストロサイトーマ細胞に対して増殖抑制をする効果を備えている。また、細胞増殖試験２の結果（図６から図９）に示すように、ヒト乳がん細胞、ヒト肝がん細胞、ヒト卵巣がん細胞、ヒト膵臓がんに対して増殖抑制をする効果を備えている。
　したがって、プラセンタ抽出物は、がん細胞の増殖抑制をする効果を備えている。換言すれば、がん細胞の増殖抑制を目的としてプラセンタ抽出物を使用することができると言える。
　また、プラセンタ抽出物は、細胞増殖試験１の結果（図１）に示すように、正常細胞に対して増殖を促進させる効果を備えている。
　したがって、プラセンタ抽出物は、正常細胞を増殖させつつ、がん細胞の増殖を抑制する効果を備えている。換言すれば、正常細胞を増殖させつつ、がん細胞の増殖を抑制する製剤における作用成分としてプラセンタ抽出物を使用することができると言える。
　また、プラセンタ水系抽出物は、細胞試験１の結果（図１）に示すように、10μg/mLサンプルにおいては約20％、100μg/mLサンプルにおいては約15％の細胞増殖促進効果が認められ、400μg/mLサンプルにおいてはコントロールと比して有意な促進効果が認められなかった。すなわち、プラセンタ水系抽出物は、正常細胞に対して低濃度であるほど細胞の増殖を促進させ、高濃度であるほど細胞の増殖に影響を与えない傾向を備えている。
　したがって、プラセンタ水系抽出物の使用は、正常細胞に曝すプラセンタ水系抽出物の濃度を調整することにより、がん細胞の増殖を抑制させながらも、正常細胞への影響を異とする使用方法を提供することができる。
　具体的には、プラセンタ抽出物の使用は、プラセンタ抽出物は水を主成分とする水系溶媒により抽出された抽出物であって、in vitroで培養されたがん細胞に0μg/mLを超え400μg/mL以下の濃度の前記抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量を製剤１回分の用量中に含有させることを特徴とすることにより、正常細胞の増殖を促進させながら、がん細胞の増殖を抑制することができる。
　また、プラセンタ抽出物の使用は、プラセンタ抽出物は水を主成分とする水系溶媒により抽出された抽出物であって、in vitroで培養されたがん細胞に400μg/mLを超える濃度の前記抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量を前記製剤１回分の用量中に含有させることを特徴とすることにより、正常細胞の増殖に影響を与えることなく、がん細胞の増殖を抑制することができる。
　また、プラセンタ抽出物（特に、プラセンタ水系抽出物）は、細胞増殖試験１（図２）および細胞増殖試験２（図７、図９）に示すように、大腸がん細胞、ヒト肝がん細胞又はヒト膵臓がん細胞に対して濃度依存的に強く増殖を抑制する効果を備えている。
　したがって、プラセンタ抽出物の使用は、大腸がん細胞、ヒト肝がん細胞又はヒト膵臓がん細胞に使用することを特徴とすることにより、プラセンタ抽出物の濃度に応じて大腸がん細胞、ヒト肝がん細胞又はヒト膵臓がん細胞の増殖への影響を調整することができる。
　また、プラセンタ抽出物（特に、プラセンタ水系抽出物）は、細胞増殖試験１（図３から図５）および細胞増殖試験２（図６、図８）に示すように、子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫、ヒトアストロサイトーマ細胞、ヒト乳がん細胞、ヒト卵巣がん細胞に対して濃度に関係なく略一定の抑制効果をそれぞれ示す効果を備えている。
　したがって、プラセンタ抽出物の使用は、子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫、ヒトアストロサイトーマ細胞、ヒト乳がん細胞、ヒト卵巣がん細胞に使用することを特徴とすることにより、プラセンタ抽出物が所定濃度以上であれば略一定の抑制効果をそれぞれ得ることができる。

Claims (6)

  1. 　がん細胞の増殖抑制のためのプラセンタ抽出物の使用。
  2. 　正常細胞を増殖させつつ、がん細胞の増殖を抑制する製剤における作用成分としてのプラセンタ抽出物の使用。
  3. 　前記プラセンタ抽出物は水を主成分とする水系溶媒により抽出された抽出物であって、in vitroで培養された前記がん細胞に0μg/mLを超え400μg/mL以下の濃度の前記抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量を前記製剤１回分の用量中に含有させることを特徴とする請求項２に記載のプラセンタ抽出物の使用。
  4. 　前記プラセンタ抽出物は水を主成分とする水系溶媒により抽出された抽出物であって、in vitroで培養された前記がん細胞に400μg/mLを超える濃度の前記抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量を前記製剤１回分の用量中に含有させることを特徴とする請求項１に記載のプラセンタ抽出物の使用。
  5. 　前記プラセンタ抽出物を大腸がん細胞、ヒト肝がん細胞又はヒト膵臓がん細胞に使用することを特徴とする請求項１から４のいずれかに記載のプラセンタ抽出物の使用。
  6. 前記プラセンタ抽出物を子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫、ヒトアストロサイトーマ細胞、ヒト乳がん細胞又は卵巣がん細胞に使用することを特徴とする請求項１から４のいずれかに記載のプラセンタ抽出物の使用。
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