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WO2022009873A1 - Ｒｎａ安定化剤 - Google Patents

Ｒｎａ安定化剤 Download PDF

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Publication number
WO2022009873A1
WO2022009873A1 PCT/JP2021/025441 JP2021025441W WO2022009873A1 WO 2022009873 A1 WO2022009873 A1 WO 2022009873A1 JP 2021025441 W JP2021025441 W JP 2021025441W WO 2022009873 A1 WO2022009873 A1 WO 2022009873A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
rna
rnase
fatty acid
target rna
squalene
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2021/025441
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
哲矢 桑野
高良 井上
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kao Corp
Original Assignee
Kao Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kao Corp filed Critical Kao Corp
Publication of WO2022009873A1 publication Critical patent/WO2022009873A1/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/22—Ribonucleases [RNase]; Deoxyribonucleases [DNase]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/99—Enzyme inactivation by chemical treatment

Definitions

  • the present invention relates to an RNA stabilizer.
  • RNA is contained in skin surface lipids (SSL), and the SSL-derived RNA can be used for analysis of a living body.
  • SSL skin surface lipids
  • RNA is more unstable and more easily degraded than DNA.
  • RNase ribonuclease
  • ribonuclease is widely present not only in cells and tissues, but also in body fluids such as sweat and saliva, and in the environment. In the operation of RNA extraction and analysis, it is important to protect RNA from RNase activity.
  • RNase inhibitors are commonly used to suppress RNA degradation by RNases.
  • a chaotropic salt such as a guanidine salt, a protein having an RNase inhibitory activity derived from a living body, or a recombinant thereof is known.
  • Patent Document 1 International Publication No. 2018/0083319
  • the present invention provides an RNA stabilizer containing at least one selected from the group consisting of free fatty acids, squalene, cholesterol esters, and triacylglycerols as an active ingredient.
  • the invention provides an RNA stabilizing method comprising applying to a subject RNA at least one selected from the group consisting of free fatty acids, squalene, cholesterol esters, and triacylglycerols. ..
  • the invention provides the use of at least one selected from the group consisting of free fatty acids, squalene, cholesterol esters, and triacylglycerols for RNA stabilization.
  • the invention provides the use of at least one selected from the group consisting of free fatty acids, squalene, cholesterol esters, and triacylglycerols in the production of RNA stabilizers.
  • RNA stabilization by sebum A: RNA stabilization with sebum extract in the presence of RNase A.
  • CE cholesterol ester
  • WE wax ester
  • TAG triacylglycerol
  • FA free fatty acid
  • Chol cholesterol.
  • Ctrl Control (without sebum extract fraction and RNase), AD: Sebum extract fractions AD added,-: No sebum extract fraction. RNA stabilization by sebum constituent lipid components.
  • Ctrl Control (RNA only),-: No sebum-constituting lipid component (RNA + RNAase only).
  • RNA refers to single-stranded RNA and double-stranded RNA, such as mRNA, tRNA, rRNA, small RNA (for example, microRNA (miRNA), small interfering RNA (siRNA), PIWI-interacting RNA (piRNA). ) Etc.), long intergenic non-coding (link) RNA, and the like.
  • miRNA microRNA
  • siRNA small interfering RNA
  • piRNA PIWI-interacting RNA
  • Etc. long intergenic non-coding (link) RNA, and the like.
  • Ribonuclease is an RNA-degrading enzyme present in living organisms. RNase is contained not only in cells and tissues but also in body fluids such as sweat and saliva, and as a result, it is widely present in the environment including water, dust in the air, and experimental equipment. Various types of RNase have been found. Among them, RNase A (EC 3.1.2.5) is an endoribonuclease that has been often used in research for a long time and is a very stable enzyme. RNase A was first identified in bovine pancreas, and then sequence-homologous RNases have been found in a variety of organisms, which are classified as RNase A superfamily.
  • Human RNase A superfamily includes eight types consisting of RNase 1 to 8, and each type of enzyme has a different expression tissue in the living body.
  • RNA7 is known to be expressed in epithelial tissues including skin (Int J Mol Sci. 2016 Aug; 17 (8): 1278), and was in contact with the skin of the subject or operator, or in contact with it. Through experimental equipment, it can cause RNase contamination of biological RNA.
  • tissue is a general term for regions including tissues such as the stratum corneum, epidermis, dermis, hair follicles, and sweat glands, sebaceous glands, and other glands, unless otherwise specified.
  • SSL skin surface lipids
  • the present invention provides an RNA stabilizer effective for stabilizing RNA in the presence of RNase.
  • the RNA stabilizer of the present invention inhibits RNase, suppresses RNA degradation by RNase, and stabilizes RNA in the presence of RNase.
  • the RNA stabilizer of the present invention also stabilizes RNA in a biological sample (eg, SSL).
  • SSL contains various lipid components such as triacylglycerol (TAG), squalene, cholesterol, cholesterol ester (CE), free fatty acid (FA), and fatty acid ester.
  • TAG triacylglycerol
  • CE cholesterol ester
  • FA free fatty acid
  • SSL contains a component effective for stabilizing RNA. As shown in Examples described later, among the lipid components in SSL, squalene, CE, TAG, and FA suppressed RNA degradation by RNase.
  • the present invention relates to using at least one selected from the group consisting of FA, squalene, CE, and TAG for RNA stabilization.
  • the term "stabilization" of RNA means maintaining RNA in a state in which degradation by RNase or the like is suppressed.
  • FA, squalene, CE, and TAG inhibit RNA activity against RNA, thereby suppressing RNA degradation and stabilizing RNA in the presence of RNase, such as biological samples (eg, SSL). .. Therefore, one aspect of RNA stabilization according to the present invention may be RNase inhibition or RNA degradation inhibition.
  • the FA used for RNA stabilization in the present invention is not particularly limited, but is preferably a linear fatty acid, preferably an unsaturated fatty acid, and more preferably a linear unsaturated fatty acid.
  • the chain length (number of carbon atoms) of the FA is not particularly limited, but is preferably 12 to 22, and more preferably 14 to 18.
  • Preferred examples of FA include myristoleic acid, palmitoleic acid, oleic acid and the like.
  • the FA used in the present invention may be any one of the above-mentioned free fatty acids having different chain lengths and degrees of unsaturation, or a combination of any two or more of them.
  • the FA may be extracted from sebum or chemically synthesized. Alternatively, a commercially available free fatty acid (for example, palmitoleic acid (Sigma Aldrich)) can also be used.
  • the FA may be in the form of a salt. Examples of the salt include sodium salts and the like.
  • the amount of FA used in the present invention is preferably 0.005 mg or more, more preferably 0.5 mg or more, and preferably 100 mg or less, more preferably 100 mg or less, per 1 ⁇ g of the target RNA. Is 50 mg or less. For example, it is preferably 0.005 to 100 mg, more preferably 0.05 mg to 50 mg or 5 mg to 100 mg, and further preferably 0.5 to 50 mg per 1 ⁇ g of the target RNA.
  • the squalene used for RNA stabilization in the present invention may be extracted from sebum or chemically synthesized. Alternatively, commercially available squalene (for example, squalene (Sigma Aldrich)) can also be used.
  • the amount of squalene used in the present invention is preferably 0.05 mg or more, more preferably 5 mg or more, and preferably 100 mg or less, more preferably 50 mg per 1 ⁇ g of the target RNA. It is as follows. For example, it is preferably 0.005 to 100 mg, more preferably 0.05 mg to 50 mg or 5 mg to 100 mg, and further preferably 0.5 to 50 mg per 1 ⁇ g of the target RNA.
  • the CE used for RNA stabilization in the present invention is an ester of cholesterol and fatty acid.
  • the fatty acid moiety constituting the CE is not particularly limited, but is preferably a linear fatty acid, preferably an unsaturated fatty acid, and more preferably a linear unsaturated fatty acid.
  • the chain length (number of carbon atoms) of the fatty acid is not particularly limited, but is preferably 12 to 22, and more preferably 14 to 18.
  • Preferred examples of fatty acids include myristoleic acid, palmitoleic acid, oleic acid and the like.
  • the CE may be extracted from sebum or chemically synthesized. Alternatively, a commercially available CE (for example, Collestryl palmilate; D-161 (Olbracht Battery Research Laboratories)) can also be used.
  • the amount of CE used in the present invention is preferably 0.05 mg or more, more preferably 5 mg or more, and preferably 100 mg or less, more preferably 50 mg per 1 ⁇ g of the target RNA. It is as follows. For example, it is preferably 0.005 to 100 mg, more preferably 0.05 mg to 50 mg or 5 mg to 100 mg, and further preferably 0.5 to 50 mg per 1 ⁇ g of the target RNA.
  • the TAG used for RNA stabilization in the present invention may be one extracted from sebum or one chemically synthesized. Alternatively, a commercially available TAG (for example, triolein (Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)) can be used.
  • the TAG may be in the form of a salt. Examples of the salt include sodium salts and the like.
  • the acyl group contained in the TAG is not particularly limited, but is preferably a linear fatty acid group, preferably an unsaturated fatty acid group, and more preferably a linear unsaturated fatty acid group.
  • the chain length (number of carbon atoms) of the acyl group is not particularly limited, but is preferably 12 to 22, and more preferably 14 to 18.
  • acyl group examples include a 9-tetradecenoyl group, a 9-hexadecenoyl group, an oleoyl group and the like.
  • the individual acyl groups contained in the TAG may be the same or different from each other. Further, the TAG used in the present invention may be a combination of TAGs having different acyl group compositions.
  • the amount of TAG used in the present invention is preferably 0.05 mg or more, more preferably 5 mg or more, and preferably 100 mg or less, more preferably 50 mg per 1 ⁇ g of the target RNA. It is as follows. For example, it is preferably 0.005 to 100 mg, more preferably 0.05 mg to 50 mg or 5 mg to 100 mg, and further preferably 0.5 to 50 mg per 1 ⁇ g of the target RNA.
  • At least one selected from the group consisting of FA, squalene, CE, and TAG preferably at least one selected from the group consisting of FA, squalene, and CE, more preferably FA and /.
  • squalene more preferably FA
  • the amount of each component used in the above may be appropriately adjusted within the range of the amount of each component used described above.
  • the present invention provides an RNA stabilizer containing at least one selected from the group consisting of FA, squalene, CE, and TAG as an active ingredient.
  • the invention provides the use of at least one selected from the group consisting of FA, squalene, CE, and TAG in the production of RNA stabilizers.
  • the invention provides an RNA stabilizing method comprising applying the RNA stabilizer of the invention to a subject RNA.
  • the RNA stabilizer of the present invention may consist of at least one selected from the group consisting of FA, squalene, CE, and TAG.
  • the RNA stabilizer of the present invention can be a composition comprising at least one selected from the group consisting of FA, squalene, CE, and TAG.
  • Specific examples of the composition include oil and fat compositions containing at least one of FA, squalene, CE, or TAG, for example, oil and fat compositions derived from plants, animals, microorganisms, and the like, preferably plants. Examples include edible oils and fats of origin.
  • the content of FA, squalene, CE, and TAG in the composition may be any amount as long as the amount used for the above-mentioned target RNA can be achieved.
  • the means for applying the RNA stabilizer of the present invention to the target RNA is not particularly limited, and any means may be used, for example, any means capable of adding or mixing the RNA stabilizer to the sample containing the target RNA.
  • the target RNA to be stabilized is RNA in a biological sample
  • the RNA stabilizer of the present invention is a stabilizer for RNA in a biological sample.
  • the biological sample may be a sample containing RNA separated, secreted or released from the living body, for example, cells, tissues, body fluids (blood, etc.), feces and urine, secretions (saliva, etc.), horns collected from the living body. Layers, skin and secretions on the skin of living organisms (sweat, SSL, etc.), and the like.
  • the RNA stabilizer of the present invention may be applied to the biological sample.
  • the biological sample when the biological sample is a liquid (for example, body fluid or secretion), it is preferable to mix the sample with the RNA stabilizer of the present invention.
  • the biological sample when the biological sample is a solid (for example, cell or tissue), the disrupted sample may be mixed with the RNA stabilizer of the present invention, or the sample may be disrupted together with the stabilizer of the present invention. preferable.
  • the biological sample is SSL.
  • SSL can be taken from a subject having SSL on the skin, such as a human or non-human mammal.
  • the skin part from which SSL is collected include skin of any part of the body such as the head, face, neck, trunk, and limbs.
  • any means used to recover or remove SSL from the skin can be employed.
  • an SSL absorbent material, an SSL adhesive material, or an instrument that scrapes SSL from the skin can be used.
  • the SSL absorbent material or the SSL adhesive material is not particularly limited as long as it is a material having an affinity for SSL, and examples thereof include polypropylene and pulp.
  • More detailed examples of the procedure for collecting SSL from the skin include a method of absorbing SSL into a sheet-like material such as oil blotting paper and oil blotting film, a method of adhering SSL to a glass plate, tape, etc., a spatula, a scraper, etc. There is a method of scraping off the SSL and collecting the SSL.
  • an SSL-absorbing material pre-impregnated with a highly lipophilic solvent may be used.
  • the SSL-absorbent material contains a highly water-soluble solvent or water, the adsorption of SSL is hindered, which is not preferable.
  • the SSL absorbent material is preferably used in a dry state.
  • the RNA stabilizer of the present invention is added to SSL separated from the subject. In one example, the RNA stabilizer of the present invention is added to an SSL-absorbing material or an SSL-adhesive material from which SSL has been recovered. In another embodiment, the RNA stabilizer of the present invention is added to the supraventricular lipid on the skin of a subject. In one example, the RNA stabilizer of the invention is applied externally (eg, applied or sprayed) onto the skin of a subject and mixed with SSL, after which the SSL is recovered with the RNA stabilizer. In another example, an SSL-absorbing material or an SSL-adhesive material containing the RNA stabilizer of the present invention is brought into contact with the skin of a subject to recover the SSL and add the RNA stabilizer to the SSL.
  • an SSL-absorbing material or an SSL-adhesive material containing the RNA stabilizer of the present invention is brought into contact with the skin of a subject to recover the SSL and add the RNA stabilizer to the SSL.
  • RNA from a biological sample to which the RNA stabilizer of the present invention is applied may be carried out according to a normal procedure for recovering RNA from a biological sample.
  • a commercially available RNA purification reagent suitable for a biological sample can be used.
  • RNA stabilizer containing at least one selected from the group consisting of free fatty acids, squalene, cholesterol esters, and triacylglycerols as an active ingredient.
  • the fatty acid moiety constituting the cholesterol ester is preferably a linear fatty acid or an unsaturated fatty acid, more preferably a linear unsaturated fatty acid.
  • the chain length of the fatty acid portion constituting the cholesterol ester is preferably 12 to 22, more preferably 14 to 18.
  • acyl group contained in the triacylglycerol is preferably a linear fatty acid group or an unsaturated fatty acid group, and more preferably a linear unsaturated fatty acid group.
  • RNA stabilizer according to any one of [1] to [6], wherein the free fatty acid has a chain length of preferably 12 to 22, more preferably 14 to 18.
  • the RNase is It is preferably an RNase belonging to RNase A superfamily, and is preferably an RNase.
  • the RNA stabilizer according to any one of [8] to [10].
  • the RNA is It is preferably RNA in a biological sample, and is preferable. More preferably, it is RNA in lipids on the surface of the skin.
  • the RNA stabilizer according to [12] which is preferably added to the skin surface lipid separated from the subject or added to the skin surface lipid on the subject's skin.
  • RNA stabilizer according to any one of [1] to [13], wherein the squalene is applied to the target RNA in the following amounts: Per 1 ⁇ g of the target RNA, preferably 0.05 mg or more, more preferably 5 mg or more, and preferably 100 mg or less, more preferably 50 mg or less, or Per 1 ⁇ g of the target RNA, preferably 0.05 to 100 mg, more preferably 0.05 mg to 50 mg or 5 mg to 100 mg, still more preferably 5 to 50 mg.
  • the cholesterol ester is applied to the target RNA in the following amount.
  • Per 1 ⁇ g of the target RNA preferably 0.05 mg or more, more preferably 5 mg or more, and preferably 100 mg or less, more preferably 50 mg or less, or Per 1 ⁇ g of the target RNA, preferably 0.05 to 100 mg, more preferably 0.05 mg to 50 mg or 5 mg to 100 mg, still more preferably 5 to 50 mg.
  • RNA stabilizer according to any one of [1] to [15], wherein the triacylglycerol is applied to the target RNA in the following amount: Per 1 ⁇ g of the target RNA, preferably 0.05 mg or more, more preferably 5 mg or more, and preferably 100 mg or less, more preferably 50 mg or less, or Per 1 ⁇ g of the target RNA, preferably 0.05 to 100 mg, more preferably 0.05 mg to 50 mg or 5 mg to 100 mg, still more preferably 5 to 50 mg.
  • the free fatty acid is applied to the target RNA in the following amount.
  • Per ⁇ g of the target RNA preferably 0.005 mg or more, more preferably 0.5 mg or more, and preferably 100 mg or less, more preferably 50 mg or less, or Per ⁇ g of the target RNA, preferably 0.005 to 100 mg, more preferably 0.05 mg to 50 mg or 5 mg to 100 mg, still more preferably 0.5 to 50 mg.
  • RNA stabilizer preferably contains an oil / fat composition containing at least one selected from the group consisting of the free fatty acid, squalene, cholesterol ester and triacylglycerol.
  • RNA stabilizing method comprising applying the RNA stabilizer according to any one of [1] to [18] to the target RNA.
  • the RNA stabilization preferably comprises inhibition of RNase or inhibition of RNA degradation in the presence of RNase.
  • RNA stabilizers Use of at least one selected from the group consisting of free fatty acids, squalene, cholesterol esters, and triacylglycerols in the production of RNA stabilizers.
  • the use according to [21] or [22], wherein the fatty acid moiety constituting the cholesterol ester is preferably a linear fatty acid or an unsaturated fatty acid, more preferably a linear unsaturated fatty acid.
  • the free fatty acid is preferably a linear fatty acid or an unsaturated fatty acid, more preferably a linear unsaturated fatty acid.
  • the free fatty acid has a chain length of preferably 12 to 22, more preferably 14 to 18.
  • the RNA stabilization is preferably RNA stabilization by suppressing RNA degradation in an environment in which RNase is present.
  • the RNA stabilization is preferably RNA stabilization by RNase inhibition.
  • RNA stabilization preferably comprises inhibition of RNase or inhibition of RNA degradation in the presence of RNase.
  • the RNase is It is preferably an RNase belonging to RNase A superfamily, and is preferably an RNase. More preferably, it is RNase A or RNase 7. Use according to any one of [29] to [31].
  • the RNA is It is preferably RNA in a biological sample, and is preferable. More preferably, it is RNA in lipids on the surface of the skin. Use according to any one of [21] to [32].
  • At least one selected from the group consisting of the free fatty acid, squalene, cholesterol ester, and triacylglycerol is added to or subject to the superficial lipid on the skin separated from the subject.
  • [36] The use according to any one of [21] to [35], wherein the cholesterol ester is applied to the target RNA in the following amounts: Per 1 ⁇ g of the target RNA, preferably 0.05 mg or more, more preferably 5 mg or more, and preferably 100 mg or less, more preferably 50 mg or less, or Per 1 ⁇ g of the target RNA, preferably 0.05 to 100 mg, more preferably 0.05 mg to 50 mg or 5 mg to 100 mg, still more preferably 5 to 50 mg.
  • RNA stabilizing activity of sebum 1 Preparation of sebum extract Sebum was collected from the faces of four human subjects with an oil-removing film (5.0 cm ⁇ 8.0 cm, oil clear film, Hakugen Earth). The oil-removing film from which sebum was collected was shredded with scissors, mixed in a DDW / t-Butyl Methyl Ether (1: 4 v / v) solution (Wako) with a test tube mixer, and centrifuged at 3,000 rpm for 10 minutes. .. The upper layer (t-Butyl Methyl Ether layer) was recovered and the solvent was removed under a nitrogen gas stream at 50 ° C. to obtain a sebum extract.
  • oil-removing film 5.0 cm ⁇ 8.0 cm, oil clear film, Hakugen Earth
  • the oil-removing film from which sebum was collected was shredded with scissors, mixed in a DDW / t-Butyl Methyl Ether (1: 4 v / v) solution (W
  • RNA stabilization activity of sebum extract RNA extracted from Human Epidermal Keratinocytes, neonal (HEKn) (Cascade Biologicals) using RNeasy mini kit (QIAGEN) was used as a test RNA.
  • RNase bovine RNase A (Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) or human RNase 7 (Recombinant human RNASE 7 protein; NOVUS) was used.
  • the test RNA solution final concentration 20 ⁇ g / mL
  • 10 mM Tris-HCl (pH 8.0) as a solvent was mixed with 1 ⁇ L of the sebum extract prepared in 1) (sebum extract final concentration 2% v / v).
  • RNA was recovered by the same method as other samples.
  • the recovered RNA is subjected to the Agilent 4200 TapeStation system (Agilent technologies), using the High Sensitivity RNA Screen Tape (Agilent Technologies) and the High Sensitivity Fibers (Agilent Technologies).
  • RNA degradation by RNase A or RNase 7 The electrophoretic image of RNA is shown in FIG.
  • the addition of sebum extract suppressed RNA degradation by RNase A or RNase 7, indicating that sebum has the effect of inhibiting RNase activity and stabilizing RNA.
  • Example 2 Evaluation of RNA Stabilization Activity of Sebum Component 1 Fractionation of Sebum Extract by Thin Layer Chromatography (TLC) 5 mg of sebum extract prepared in 1) of Example 1 was added to Chloroform / methanol (2: 1 v). / V) Dissolved in 50 ⁇ L. The obtained solution was applied to an HPTLC plate (Glass HPTLC silica gel 60 plates; 10 ⁇ 20 cm, Merck). Appropriate amounts of sebum extract and lipid preparations were applied to the same HPTLC plate for reference. Separation was performed in a horizontal developing tank using a developing solvent Hexane / diethyl ether / acetic acid (70: 30: 1 v / v / v).
  • TLC Thin Layer Chromatography
  • the plates were cut into reference and extraction using a glass cutter. A 10% copper sulfate / 8% phosphoric acid solution was sprayed on a reference plate and then heated at 180 ° C. for 3 minutes to detect spots.
  • cholesterol ester (sigma, C6072) as cholesterol ester [CE]
  • Lauryl palmitoleate (santa cruz biotechnology, sc-280908) as wax ester [WE]
  • Palmetric acid sigma, P9417
  • squalene [SQ] sigma, S3626
  • cholesterol [Chol] sigma, C8667
  • TLC TLC
  • Spots such as squalene (SQ), cholesterol ester (CE), triacylglycerol (TAG), free fatty acid (FA), and cholesterol (Chol) were detected. It was also confirmed that the wax ester (WE) was separated, although no clear spot was detected.
  • SQL squalene
  • CE cholesterol ester
  • TAG triacylglycerol
  • FA free fatty acid
  • Chol cholesterol
  • the extraction plate contains fraction (A) containing SQ, CE and WE, fraction (B) containing TAG, and FA.
  • fraction (C) and fraction (D) containing Chol were scraped, dissolved in 8 mL of chloroform / methanol (2: 1 v / v), and sonicated. The obtained solution was centrifuged at 3,000 rpm for 5 minutes, the supernatant was collected, and dried with nitrogen at 50 ° C. to obtain a sebum extract fraction.
  • RNA stabilizing activity of the sebum extract fraction was evaluated by the same procedure as in 2) of Example 1.
  • the sebum extract fraction to be mixed with the test RNA solution final concentration 20 ⁇ g / mL
  • the redissolved solution and a diluted solution obtained by diluting it 3 times in 2 steps were used, and each solution had a final concentration of 4%. It was added at (v / v).
  • RNase human RNase 7 (Recombinant human RNASE 7 protein; NOVUS) was used.
  • the final concentration of RNase was 1 ⁇ g / mL and the treatment time was 30 minutes.
  • FIG. 3 shows an electrophoretic image of RNA treated with RNase in the presence of a sebum extract fraction. RNA degradation was suppressed in the fraction (A) containing SQ, CE and WE, the fraction (B) containing TAG, and the fraction (C) containing FA.
  • RNA stabilizing activity of sebum-constituting lipid components was examined by the same procedure as in Example 1.
  • the sebum-constituting lipid component include squalene [SQ] (Squarene; sigma, S3626), cholesterol ester [CE] (Cholesteryl platinum; Olbracht Sardy Research Labelories, D-161), and wax ester [WE] Bleh.
  • each lipid was 1 or 100 mg / mL (CE, WE and Chol were only 1 mg / mL).
  • the test RNA the RNA extracted in Example 1 (final concentration 20 ⁇ g / mL) was used.
  • RNase human RNase 7 (Recombinant human RNASE 7 protein; NOVUS) was used.
  • the final concentration of RNase was 1 ⁇ g / mL and the treatment time was 30 minutes.
  • the ratio of RNA of 200 bases or more to the total RNA which is known as an index of the degree of RNA degradation, was calculated from an electrophoretic image using an Agilent 4200 TapeStation system.
  • TAG and FA include triacylglycerol [TAG 16: 1] (Glyceryl tripalmitolate; sigma, T5888), triacylglycerol [TAG 18: 1] (Glyceryl trioleate; sima, T7140), C14 free fatty acid [FA 14: 1]. ] (Myristoleic acid; sigma, M3525), C16 free fatty acid [FA 16: 1] (Palmitoleic acid; sima, P9417), and C18 free fatty acid [FA 18: 1] (Oleic acid; sigma, O1008).
  • each lipid was 100 mg / mL.
  • human RNase 7 Recombinant human RNASE 7 protein; NOVUS
  • the final concentration of RNase was 1 ⁇ g / mL and the treatment time was 30 minutes.
  • RNA degradation was suppressed by SQ, CE, TAG, and FA.
  • all of the monounsaturated free fatty acids C14 (myristoleic acid), C16 (palmitoleic acid), and C18 (oleic acid), which are abundant in sebum, have RNA degradation inhibitory activity.
  • any of the TAGs having a monounsaturated acyl group of C16 (palmitrail group) or C18 (oleyl group) had RNA degradation inhibitory activity.

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Abstract

遊離脂肪酸、スクアレン、コレステロールエステル、及びトリアシルグリセロールからなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする、ＲＮＡ安定化剤。

Description

ＲＮＡ安定化剤
　本発明は、ＲＮＡ安定化剤に関する。
　ＤＮＡ、ＲＮＡなどの生体由来の核酸の解析により、生体の生理状態を含む様々な情報を獲得することができる。生体由来の核酸は、細胞、組織、体液、分泌物などの生体由来の試料から抽出することができる。特許文献１には、皮膚表上脂質（ｓｋｉｎ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｌｉｐｉｄｓ；ＳＳＬ）にＲＮＡが含まれており、該ＳＳＬ由来ＲＮＡを生体の解析に用いることができることが記載されている。
　生体由来の核酸の中でも、ＲＮＡは、ＤＮＡと比較して不安定であり分解されやすい。さらに、ＲＮＡ分解酵素であるリボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ）は、細胞及び組織中だけでなく、汗、唾液などの体液、及び環境中にも広く存在する。ＲＮＡの抽出や解析の操作においては、ＲＮａｓｅ活性からＲＮＡを保護することが重要である。ＲＮａｓｅによるＲＮＡの分解を抑えるためには、一般に、ＲＮａｓｅ阻害剤が用いられる。ＲＮａｓｅ阻害剤としては、グアニジン塩などのカオトロピック塩、生体由来のＲＮａｓｅ阻害活性を有するタンパク質、又はその組換え体などが知られている。
（特許文献１）国際公開公報第２０１８／００８３１９号
　一実施形態において、本発明は、遊離脂肪酸、スクアレン、コレステロールエステル、及びトリアシルグリセロールからなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする、ＲＮＡ安定化剤を提供する。
　別の実施形態において、本発明は、対象ＲＮＡに、遊離脂肪酸、スクアレン、コレステロールエステル、及びトリアシルグリセロールからなる群より選択される少なくとも１種を適用することを含む、ＲＮＡ安定化方法を提供する。
　別の実施形態において、本発明は、ＲＮＡ安定化のための、遊離脂肪酸、スクアレン、コレステロールエステル、及びトリアシルグリセロールからなる群より選択される少なくとも１種の使用を提供する。
　別の実施形態において、本発明は、ＲＮＡ安定化剤の製造における、遊離脂肪酸、スクアレン、コレステロールエステル、及びトリアシルグリセロールからなる群より選択される少なくとも１種の使用を提供する。
皮脂によるＲＮＡ安定化。Ａ：ＲＮａｓｅ Ａ存在下での皮脂抽出物によるＲＮＡ安定化。Ｂ：ＲＮａｓｅ ７存在下での皮脂抽出物によるＲＮＡ安定化、４名の被験者からの皮脂抽出物についてのデータ（皮脂＋）を示す。Ｃｔｒｌ：コントロール（皮脂抽出物及びＲＮａｓｅなし）、＋／－：皮脂抽出物あり／なし。 ＴＬＣ分離により検出された皮脂抽出物画分。ＳＱ：スクアレン、ＣＥ：コレステロールエステル、ＷＥ：ワックスエステル、ＴＡＧ：トリアシルグリセロール、ＦＡ：遊離脂肪酸、Ｃｈｏｌ：コレステロール。 ＲＮａｓｅ存在下での皮脂抽出物画分によるＲＮＡ安定化。Ｃｔｒｌ：コントロール（皮脂抽出物画分及びＲＮａｓｅなし）、Ａ～Ｄ：皮脂抽出物画分Ａ～Ｄ添加、－：皮脂抽出物画分なし。 皮脂構成脂質成分によるＲＮＡ安定化。Ｃｔｒｌ：コントロール（ＲＮＡのみ）、－：皮脂構成脂質成分なし（ＲＮＡ＋ＲＮＡａｓｅのみ）。
発明の詳細な説明
　本明細書中で引用された全ての特許文献、非特許文献、及びその他の刊行物は、その全体が本明細書中において参考として援用される。
　本明細書における「ＲＮＡ」は、１本鎖ＲＮＡ及び２本鎖ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｍａｌｌ　ＲＮＡ（例えば、ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ｓｍａｌｌ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ　ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ＰＩＷＩ－ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ　ＲＮＡ（ｐｉＲＮＡ）等）、ｌｏｎｇ　ｉｎｔｅｒｇｅｎｉｃ　ｎｏｎ－ｃｏｄｉｎｇ（ｌｉｎｃ）ＲＮＡ、などを包含する。
　リボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ）は、生体に存在するＲＮＡ分解酵素である。ＲＮａｓｅは、細胞及び組織中だけでなく汗、唾液などの体液にも含まれており、結果、水、空気中の埃、実験機材を含む環境中に広く存在する。多様な種類のＲＮａｓｅが見出されている。中でも、ＲＮａｓｅ Ａ（ＥＣ　３．１．２７．５）は、古くから研究によく利用されてきたエンドリボヌクレアーゼであり、非常に安定な酵素である。ＲＮａｓｅ Ａは最初にウシ膵臓から同定され、その後、多様な生物種から配列相同なＲＮａｓｅが見出されており、それらはＲＮａｓｅ Ａ　ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙとして分類されている。ヒトＲＮａｓｅ Ａ　ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙは、ＲＮａｓｅ １～８からなる８つのタイプを含み、各タイプの酵素は生体内での発現組織が異なる。このうち、ＲＮａｓｅ ７は、皮膚を含む上皮系組織において発現することが知られており（Ｉｎｔ　Ｊ　Ｍｏｌ　Ｓｃｉ．　２０１６　Ａｕｇ；１７（８）：１２７８）、被験者や操作者の皮膚、又はそれと接触した実験機器を介して、生体由来ＲＮＡのＲＮａｓｅ汚染の原因となり得る。
　本明細書において、「皮膚」とは、特に限定しない限り、角層、表皮、真皮、毛包、ならびに汗腺、皮脂腺及びその他の腺などの組織を含む領域の総称である。
　本明細書において、「皮膚表上脂質（ｓｋｉｎ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｌｉｐｉｄｓ；ＳＳＬ）」とは、皮膚の表上に存在する脂溶性画分をいい、皮脂と呼ばれることもある。一般に、ＳＳＬは、皮膚にある皮脂腺等の外分泌腺から分泌された分泌物を主に含み、皮膚表面を覆う薄い層の形で皮膚表上に存在している。
　本発明は、ＲＮａｓｅ存在下でのＲＮＡの安定化に有効なＲＮＡ安定化剤を提供する。本発明のＲＮＡ安定化剤は、ＲＮａｓｅを阻害し、ＲＮａｓｅによるＲＮＡ分解を抑制し、ＲＮａｓｅ存在下でＲＮＡを安定化させる。また本発明のＲＮＡ安定化剤は、生体由来の試料（例えばＳＳＬ）中のＲＮＡを安定化させる。
　ＳＳＬには、トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、スクアレン、コレステロール、コレステロールエステル（ＣＥ）、遊離脂肪酸（ＦＡ）、脂肪酸エステルなどの様々な脂質成分が含まれる。本発明者は、ＳＳＬ中に、ＲＮＡの安定化に有効な成分が含まれていることを見出した。後述の実施例に示すとおり、ＳＳＬ中の脂質成分の中でスクアレン、ＣＥ、ＴＡＧ、及びＦＡは、ＲＮａｓｅによるＲＮＡ分解を抑制した。
　したがって、本発明は、ＦＡ、スクアレン、ＣＥ、及びＴＡＧからなる群より選択される少なくとも１種をＲＮＡ安定化のために使用することに関する。本明細書において、ＲＮＡの「安定化」とは、ＲＮａｓｅ等による分解が抑制された状態でＲＮＡを維持することをいう。ＦＡ、スクアレン、ＣＥ、及びＴＡＧは、ＲＮＡに対するＲＮａｓｅの活性を阻害することで、生体由来の試料（例えばＳＳＬ）などのＲＮａｓｅが存在する環境下でＲＮＡの分解を抑制し、ＲＮＡを安定化させる。したがって、本発明によるＲＮＡ安定化の一態様は、ＲＮａｓｅ阻害、又はＲＮＡ分解抑制であり得る。
　本発明でＲＮＡ安定化のために用いられるＦＡは、特に限定されないが、好ましくは直鎖脂肪酸であり、また好ましくは不飽和脂肪酸であり、より好ましくは直鎖不飽和脂肪酸である。該ＦＡの鎖長（炭素数）は、特に限定されないが、好ましくは１２～２２、より好ましくは１４～１８である。ＦＡの好ましい例としては、ミリストレイン酸、パルミトレイン酸、オレイン酸等が挙げられる。本発明で用いられるＦＡは、上記に挙げた異なる鎖長や不飽和度を有する遊離脂肪酸のいずれか１種又はいずれか２種以上の組み合わせであればよい。該ＦＡは、皮脂から抽出されたものであってもよく、又は化学的に合成されたものであってもよい。あるいは、市販の遊離脂肪酸（例えば、パルミトレイン酸（Ｓｉｇｍａ　Ａｌｄｒｉｃｈ））を使用することもできる。該ＦＡは、塩の形態であってもよい。該塩の例としては、ナトリウム塩などが挙げられる。
　本発明で用いられるＦＡの量は、ＲＮＡ安定化の観点からは、対象ＲＮＡの１μｇあたり、好ましくは０．００５ｍｇ以上、より好ましくは０．５ｍｇ以上であり、かつ、好ましくは１００ｍｇ以下、より好ましくは５０ｍｇ以下である。例えば、対象ＲＮＡの１μｇあたり、好ましくは０．００５～１００ｍｇ、より好ましくは０．０５ｍｇ～５０ｍｇ又は５ｍｇ～１００ｍｇ、さらに好ましくは０．５～５０ｍｇである。
　本発明でＲＮＡ安定化のために用いられるスクアレンは、皮脂から抽出されたものであってもよく、又は化学的に合成されたものであってもよい。あるいは、市販のスクアレン（例えば、スクアレン（Ｓｉｇｍａ　Ａｌｄｒｉｃｈ））を使用することもできる。
　本発明で用いられるスクアレンの量は、ＲＮＡ安定化の観点からは、対象ＲＮＡの１μｇあたり、好ましくは０．０５ｍｇ以上、より好ましくは５ｍｇ以上であり、かつ、好ましくは１００ｍｇ以下、より好ましくは５０ｍｇ以下である。例えば、対象ＲＮＡの１μｇあたり、好ましくは０．００５～１００ｍｇ、より好ましくは０．０５ｍｇ～５０ｍｇ又は５ｍｇ～１００ｍｇ、さらに好ましくは０．５～５０ｍｇである。
　本発明でＲＮＡ安定化のために用いられるＣＥは、コレステロールと脂肪酸のエステルである。ＣＥを構成する脂肪酸部分は、特に限定されないが、好ましくは直鎖脂肪酸であり、また好ましくは不飽和脂肪酸であり、より好ましくは直鎖不飽和脂肪酸である。脂肪酸の鎖長（炭素数）は、特に限定されないが、好ましくは１２～２２、より好ましくは１４～１８である。脂肪酸の好ましい例としては、ミリストレイン酸、パルミトレイン酸、オレイン酸等が挙げられる。該ＣＥは、皮脂から抽出されたものであってもよく、又は化学的に合成されたものであってもよい。あるいは、市販のＣＥ（例えば、Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｙｌ　ｐａｌｍｉｔｏｌｅａｔｅ；Ｄ－１６１（Ｏｌｂｒａｃｈｔ　Ｓｅｒｄａｒｙ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ））を使用することもできる。
　本発明で用いられるＣＥの量は、ＲＮＡ安定化の観点からは、対象ＲＮＡの１μｇあたり、好ましくは０．０５ｍｇ以上、より好ましくは５ｍｇ以上であり、かつ、好ましくは１００ｍｇ以下、より好ましくは５０ｍｇ以下である。例えば、対象ＲＮＡの１μｇあたり、好ましくは０．００５～１００ｍｇ、より好ましくは０．０５ｍｇ～５０ｍｇ又は５ｍｇ～１００ｍｇ、さらに好ましくは０．５～５０ｍｇである。
　本発明でＲＮＡ安定化のために用いられるＴＡＧは、皮脂から抽出されたものであってもよく、又は化学的に合成されたものであってもよい。あるいは、市販のＴＡＧ（例えば、トリオレイン（富士フイルム和光純薬））を使用することもできる。該ＴＡＧは、塩の形態であってもよい。該塩の例としては、ナトリウム塩などが挙げられる。該ＴＡＧに含まれるアシル基は、特に限定されないが、好ましくは直鎖脂肪酸基であり、また好ましくは不飽和脂肪酸基であり、より好ましくは直鎖不飽和脂肪酸基である。該アシル基の鎖長（炭素数）は、特に限定されないが、好ましくは１２～２２、より好ましくは１４～１８である。アシル基の好ましい例としては、９－テトラデセノイル基、９－ヘキサデセノイル基、オレオイル基等が挙げられる。該ＴＡＧに含まれる個々のアシル基は、互いに同じであっても異なっていてもよい。また本発明で用いられるＴＡＧは、異なるアシル基組成を有するＴＡＧの組み合わせであってもよい。
　本発明で用いられるＴＡＧの量は、ＲＮＡ安定化の観点からは、対象ＲＮＡの１μｇあたり、好ましくは０．０５ｍｇ以上、より好ましくは５ｍｇ以上であり、かつ、好ましくは１００ｍｇ以下、より好ましくは５０ｍｇ以下である。例えば、対象ＲＮＡの１μｇあたり、好ましくは０．００５～１００ｍｇ、より好ましくは０．０５ｍｇ～５０ｍｇ又は５ｍｇ～１００ｍｇ、さらに好ましくは０．５～５０ｍｇである。
　本発明では、ＦＡ、スクアレン、ＣＥ、及びＴＡＧからなる群より選択される少なくとも１種を、好ましくはＦＡ、スクアレン、及びＣＥからなる群より選択される少なくとも１種を、より好ましくはＦＡ及び／又はスクアレンを、さらに好ましくはＦＡを使用する。また、本発明において、ＦＡ、スクアレン、ＣＥ、及びＴＡＧのうちの２種以上を組み合わせる場合、好ましくはＦＡ及び／又はスクアレンを、より好ましくはＦＡを少なくとも使用するのがよい。上記において使用する各成分の量は、上述した各成分の使用量の範囲内で適宜調整すればよい。
　一態様において、本発明は、ＦＡ、スクアレン、ＣＥ、及びＴＡＧからなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする、ＲＮＡ安定化剤を提供する。別の一態様において、本発明は、ＲＮＡ安定化剤の製造における、ＦＡ、スクアレン、ＣＥ、及びＴＡＧからなる群より選択される少なくとも１種の使用を提供する。別の一態様において、本発明は、対象ＲＮＡに本発明のＲＮＡ安定化剤を適用することを含む、ＲＮＡ安定化方法を提供する。
　一実施形態において、本発明のＲＮＡ安定化剤は、ＦＡ、スクアレン、ＣＥ、及びＴＡＧからなる群より選択される少なくとも１種からなるものであり得る。別の一実施形態において、本発明のＲＮＡ安定化剤は、ＦＡ、スクアレン、ＣＥ、及びＴＡＧからなる群より選択される少なくとも１種を含む組成物であり得る。該組成物の具体的な例としては、ＦＡ、スクアレン、ＣＥ、又はＴＡＧのいずれかを少なくとも含有する油脂組成物、例えば植物、動物、微生物等に由来する油脂組成物が挙げられ、好ましくは植物由来の食用油脂が挙げられる。該組成物中のＦＡ、スクアレン、ＣＥ、及びＴＡＧの含有量は、上述した対象ＲＮＡに対する使用量が達成できる量であればよい。対象ＲＮＡに本発明のＲＮＡ安定化剤を適用する手段は特に限定されず、例えば対象ＲＮＡを含む試料にＲＮＡ安定化剤を添加又は混合できる手段であればよい。
　好ましい実施形態において、安定化すべき対象ＲＮＡは、生体由来試料中のＲＮＡであり、本発明のＲＮＡ安定化剤は、生体由来試料中のＲＮＡの安定化剤である。該生体由来試料は、生体から分離、分泌又は放出されたＲＮＡを含む試料であればよく、例えば、生体から採取した細胞、組織、体液（血液等）、糞尿、分泌物（唾液等）、角層、皮膚及び生体の皮膚上の分泌物（汗、ＳＳＬ等）、などが挙げられる。該生体由来試料に本発明のＲＮＡ安定化剤を適用すればよい。例えば、該生体由来試料が液体（例えば体液又は分泌物）の場合、該試料と本発明のＲＮＡ安定化剤を混合することが好ましい。また例えば、該生体由来試料が固体（例えば細胞又は組織）の場合、破砕した該試料と本発明のＲＮＡ安定化剤を混合すること、又は該試料を本発明の安定化剤と共に破砕することが好ましい。
　好ましい実施形態において、該生体由来試料はＳＳＬである。ＳＳＬは、皮膚上にＳＳＬを有する被験体、例えばヒト又は非ヒト哺乳動物から採取され得る。ＳＳＬが採取される皮膚の部位としては、頭、顔、首、体幹、手足等の身体の任意の部位の皮膚が挙げられる。被験体の皮膚からのＳＳＬの採取には、皮膚からのＳＳＬの回収又は除去に用いられているあらゆる手段を採用することができる。好ましくは、ＳＳＬ吸収性素材、ＳＳＬ接着性素材、又は皮膚からＳＳＬをこすり落とす器具を使用することができる。ＳＳＬ吸収性素材又はＳＳＬ接着性素材としては、ＳＳＬに親和性を有する素材であれば特に限定されず、例えばポリプロピレン、パルプ等が挙げられる。皮膚からのＳＳＬの採取手順のより詳細な例としては、あぶら取り紙、あぶら取りフィルム等のシート状素材へＳＳＬを吸収させる方法、ガラス板、テープ等へＳＳＬを接着させる方法、スパーテル、スクレイパー等によりＳＳＬをこすり落として回収する方法、などが挙げられる。ＳＳＬの吸着性を向上させるため、脂溶性の高い溶媒を予め含ませたＳＳＬ吸収性素材を用いてもよい。一方、ＳＳＬ吸収性素材が水溶性の高い溶媒や水分を含んでいると、ＳＳＬの吸着が阻害されるため好ましくない。ＳＳＬ吸収性素材は、乾燥した状態で用いることが好ましい。
　一実施形態においては、被験体から分離したＳＳＬに本発明のＲＮＡ安定化剤を添加する。一例では、ＳＳＬを回収したＳＳＬ吸収性素材又はＳＳＬ接着性素材に本発明のＲＮＡ安定化剤を添加する。別の一実施形態においては、本発明のＲＮＡ安定化剤は、被験体の皮膚上の前記皮膚表上脂質に添加される。一例では、被験体の皮膚上に本発明のＲＮＡ安定化剤を外用（例えば塗布又はスプレー）してＳＳＬと混合し、その後、ＲＮＡ安定化剤とともにＳＳＬを回収する。別の一例では、本発明のＲＮＡ安定化剤を含むＳＳＬ吸収性素材又はＳＳＬ接着性素材を被験体の皮膚上に接触させ、ＳＳＬを回収するとともに該ＳＳＬにＲＮＡ安定化剤を添加する。
　本発明のＲＮＡ安定化剤を適用した生体由来試料からのＲＮＡの回収は、通常の生体由来試料からのＲＮＡの回収手順に従って実施すればよい。例えば、生体由来試料に適した市販のＲＮＡ精製試薬を用いることができる。
　本発明の例示的実施形態として、以下の物質、製造方法、用途、方法等をさらに本明細書に開示する。但し、本発明はこれらの実施形態に限定されない。
〔１〕遊離脂肪酸、スクアレン、コレステロールエステル、及びトリアシルグリセロールからなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする、ＲＮＡ安定化剤。
〔２〕前記コレステロールエステルを構成する脂肪酸部分が、好ましくは直鎖脂肪酸又は不飽和脂肪酸、より好ましくは直鎖不飽和脂肪酸である、〔１〕記載のＲＮＡ安定化剤。
〔３〕前記コレステロールエステルを構成する脂肪酸部分の鎖長が、好ましくは１２～２２、より好ましくは１４～１８である、〔１〕又は〔２〕記載のＲＮＡ安定化剤。
〔４〕前記トリアシルグリセロールに含まれるアシル基が、好ましくは直鎖脂肪酸基又は不飽和脂肪酸基、より好ましくは直鎖不飽和脂肪酸基である、〔１〕～〔３〕のいずれか１項記載のＲＮＡ安定化剤。
〔５〕前記トリアシルグリセロールに含まれるアシル基の鎖長が、好ましくは１２～２２、より好ましくは１４～１８である、〔１〕～〔４〕のいずれか１項記載のＲＮＡ安定化剤。
〔６〕前記遊離脂肪酸が、好ましくは直鎖脂肪酸又は不飽和脂肪酸、より好ましくは直鎖不飽和脂肪酸である、〔１〕～〔５〕のいずれか１項記載のＲＮＡ安定化剤。
〔７〕前記遊離脂肪酸の鎖長が、好ましくは１２～２２、より好ましくは１４～１８である、〔１〕～〔６〕のいずれか１項記載のＲＮＡ安定化剤。
〔８〕好ましくは、ＲＮａｓｅが存在する環境下でのＲＮＡ分解抑制のために使用される、〔１〕～〔７〕のいずれか１項記載のＲＮＡ安定化剤。
〔９〕好ましくは、ＲＮａｓｅの活性を阻害するために使用される、〔１〕～〔７〕のいずれか１項記載のＲＮＡ安定化剤。
〔１０〕好ましくは、ＲＮａｓｅ阻害剤又はＲＮＡ分解抑制剤である、〔１〕～〔７〕のいずれか１項記載のＲＮＡ安定化剤。
〔１１〕前記ＲＮａｓｅが、
　好ましくはＲＮａｓｅ Ａ　ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙに属するＲＮａｓｅであり、
　より好ましくはＲＮａｓｅ Ａ又はＲＮａｓｅ ７である、
〔８〕～〔１０〕のいずれか１項記載のＲＮＡ安定化剤。
〔１２〕前記ＲＮＡが、
　好ましくは生体由来試料中のＲＮＡであり、
　より好ましくは皮膚表上脂質中のＲＮＡである、
〔１〕～〔１１〕のいずれか１項記載のＲＮＡ安定化剤。
〔１３〕好ましくは、被験体から分離した前記皮膚表上脂質に添加されるか、又は被験体の皮膚上の前記皮膚表上脂質に添加される、〔１２〕記載のＲＮＡ安定化剤。
〔１４〕前記スクアレンが対象ＲＮＡに対して以下の量で適用される、〔１〕～〔１３〕のいずれか１項記載のＲＮＡ安定化剤：
　対象ＲＮＡの１μｇあたり、好ましくは０．０５ｍｇ以上、より好ましくは５ｍｇ以上、かつ好ましくは１００ｍｇ以下、より好ましくは５０ｍｇ以下、又は、
　対象ＲＮＡの１μｇあたり、好ましくは０．０５～１００ｍｇ、より好ましくは０．０５ｍｇ～５０ｍｇ又は５ｍｇ～１００ｍｇ、さらに好ましくは５～５０ｍｇ。
〔１５〕前記コレステロールエステルが対象ＲＮＡに対して以下の量で適用される、〔１〕～〔１４〕のいずれか１項記載のＲＮＡ安定化剤：
　対象ＲＮＡの１μｇあたり、好ましくは０．０５ｍｇ以上、より好ましくは５ｍｇ以上、かつ好ましくは１００ｍｇ以下、より好ましくは５０ｍｇ以下、又は、
　対象ＲＮＡの１μｇあたり、好ましくは０．０５～１００ｍｇ、より好ましくは０．０５ｍｇ～５０ｍｇ又は５ｍｇ～１００ｍｇ、さらに好ましくは５～５０ｍｇ。
〔１６〕前記トリアシルグリセロールが対象ＲＮＡに対して以下の量で適用される、〔１〕～〔１５〕のいずれか１項記載のＲＮＡ安定化剤：
　対象ＲＮＡの１μｇあたり、好ましくは０．０５ｍｇ以上、より好ましくは５ｍｇ以上、かつ好ましくは１００ｍｇ以下、より好ましくは５０ｍｇ以下、又は、
　対象ＲＮＡの１μｇあたり、好ましくは０．０５～１００ｍｇ、より好ましくは０．０５ｍｇ～５０ｍｇ又は５ｍｇ～１００ｍｇ、さらに好ましくは５～５０ｍｇ。
〔１７〕前記遊離脂肪酸が対象ＲＮＡに対して以下の量で適用される、〔１〕～〔１６〕のいずれか１項記載のＲＮＡ安定化剤：
　対象ＲＮＡの１μｇあたり、好ましくは０．００５ｍｇ以上、より好ましくは０．５ｍｇ以上、かつ好ましくは１００ｍｇ以下、より好ましくは５０ｍｇ以下、又は、
　対象ＲＮＡの１μｇあたり、好ましくは０．００５～１００ｍｇ、より好ましくは０．０５ｍｇ～５０ｍｇ又は５ｍｇ～１００ｍｇ、さらに好ましくは０．５～５０ｍｇ。
〔１８〕好ましくは、前記遊離脂肪酸、スクアレン、コレステロールエステル、トリアシルグリセロールからなる群より選択される少なくとも１種を含む油脂組成物を含有する、〔１〕～〔１７〕のいずれか１項記載のＲＮＡ安定化剤。
〔１９〕対象ＲＮＡに、〔１〕～〔１８〕のいずれか１項記載のＲＮＡ安定化剤を適用することを含む、ＲＮＡ安定化方法。
〔２０〕好ましくは、前記ＲＮＡ安定化が、ＲＮａｓｅ阻害、又はＲＮａｓｅが存在する環境下でのＲＮＡ分解抑制を含む、〔１９〕記載の方法。
〔２１〕ＲＮＡ安定化剤の製造における、遊離脂肪酸、スクアレン、コレステロールエステル、及びトリアシルグリセロールからなる群より選択される少なくとも１種の使用。
〔２２〕ＲＮＡ安定化のための、遊離脂肪酸、スクアレン、コレステロールエステル、及びトリアシルグリセロールからなる群より選択される少なくとも１種の使用。
〔２３〕前記コレステロールエステルを構成する脂肪酸部分が、好ましくは直鎖脂肪酸又は不飽和脂肪酸、より好ましくは直鎖不飽和脂肪酸である、〔２１〕又は〔２２〕記載の使用。
〔２４〕前記コレステロールエステルを構成する脂肪酸部分の鎖長が、好ましくは１２～２２、より好ましくは１４～１８である、〔２１〕～〔２３〕のいずれか１項記載の使用。
〔２５〕前記トリアシルグリセロールに含まれるアシル基が、好ましくは直鎖脂肪酸基又は不飽和脂肪酸基、より好ましくは直鎖不飽和脂肪酸基である、〔２１〕～〔２４〕のいずれか１項記載の使用。
〔２６〕前記トリアシルグリセロールに含まれるアシル基の鎖長が、好ましくは１２～２２、より好ましくは１４～１８である、〔２１〕～〔２５〕のいずれか１項記載の使用。
〔２７〕前記遊離脂肪酸が、好ましくは直鎖脂肪酸又は不飽和脂肪酸、より好ましくは直鎖不飽和脂肪酸である、〔２１〕～〔２６〕のいずれか１項記載の使用。
〔２８〕前記遊離脂肪酸の鎖長が、好ましくは１２～２２、より好ましくは１４～１８である、〔２１〕～〔２７〕のいずれか１項記載の使用。
〔２９〕好ましくは、前記ＲＮＡ安定化が、ＲＮａｓｅが存在する環境下でのＲＮＡ分解抑制によるＲＮＡ安定化である、〔２１〕～〔２８〕のいずれか１項記載の使用。
〔３０〕好ましくは、前記ＲＮＡ安定化が、ＲＮａｓｅ阻害によるＲＮＡ安定化である、〔２１〕～〔２８〕のいずれか１項記載の使用。
〔３１〕好ましくは、前記ＲＮＡ安定化が、ＲＮａｓｅ阻害、又はＲＮａｓｅが存在する環境下でのＲＮＡ分解抑制を含む、〔２１〕～〔２８〕のいずれか１項記載の使用。
〔３２〕前記ＲＮａｓｅが、
　好ましくはＲＮａｓｅ Ａ　ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙに属するＲＮａｓｅであり、
　より好ましくはＲＮａｓｅ Ａ又はＲＮａｓｅ ７である、
〔２９〕～〔３１〕のいずれか１項記載の使用。
〔３３〕前記ＲＮＡが、
　好ましくは生体由来試料中のＲＮＡであり、
　より好ましくは皮膚表上脂質中のＲＮＡである、
〔２１〕～〔３２〕のいずれか１項記載の使用。
〔３４〕好ましくは、前記遊離脂肪酸、スクアレン、コレステロールエステル、及びトリアシルグリセロールからなる群より選択される少なくとも１種が、被験体から分離した前記皮膚表上脂質に添加されるか、又は被験体の皮膚上の前記皮膚表上脂質に添加される、〔３３〕記載の使用。
〔３５〕前記スクアレンが対象ＲＮＡに対して以下の量で適用される、〔２１〕～〔３４〕のいずれか１項記載の使用：
　対象ＲＮＡの１μｇあたり、好ましくは０．０５ｍｇ以上、より好ましくは５ｍｇ以上、かつ好ましくは１００ｍｇ以下、より好ましくは５０ｍｇ以下、又は、
　対象ＲＮＡの１μｇあたり、好ましくは０．０５～１００ｍｇ、より好ましくは０．０５ｍｇ～５０ｍｇ又は５ｍｇ～１００ｍｇ、さらに好ましくは５～５０ｍｇ。
〔３６〕前記コレステロールエステルが対象ＲＮＡに対して以下の量で適用される、〔２１〕～〔３５〕のいずれか１項記載の使用：
　対象ＲＮＡの１μｇあたり、好ましくは０．０５ｍｇ以上、より好ましくは５ｍｇ以上、かつ好ましくは１００ｍｇ以下、より好ましくは５０ｍｇ以下、又は、
　対象ＲＮＡの１μｇあたり、好ましくは０．０５～１００ｍｇ、より好ましくは０．０５ｍｇ～５０ｍｇ又は５ｍｇ～１００ｍｇ、さらに好ましくは５～５０ｍｇ。
〔３７〕前記トリアシルグリセロールが対象ＲＮＡに対して以下の量で適用される、〔２１〕～〔３６〕のいずれか１項記載の使用：
　対象ＲＮＡの１μｇあたり、好ましくは０．０５ｍｇ以上、より好ましくは５ｍｇ以上、かつ好ましくは１００ｍｇ以下、より好ましくは５０ｍｇ以下、又は、
　対象ＲＮＡの１μｇあたり、好ましくは０．０５～１００ｍｇ、より好ましくは０．０５ｍｇ～５０ｍｇ又は５ｍｇ～１００ｍｇ、さらに好ましくは５～５０ｍｇ。
〔３８〕前記遊離脂肪酸が対象ＲＮＡに対して以下の量で適用される、〔２１〕～〔３７〕のいずれか１項記載の使用：
　対象ＲＮＡの１μｇあたり、好ましくは０．００５ｍｇ以上、より好ましくは０．５ｍｇ以上、かつ好ましくは１００ｍｇ以下、より好ましくは５０ｍｇ以下、又は、
　対象ＲＮＡの１μｇあたり、好ましくは０．００５～１００ｍｇ、より好ましくは０．０５ｍｇ～５０ｍｇ又は５ｍｇ～１００ｍｇ、さらに好ましくは０．５～５０ｍｇ。
〔３９〕好ましくは、前記遊離脂肪酸、スクアレン、コレステロールエステル、及びトリアシルグリセロールからなる群より選択される少なくとも１種を含む油脂組成物が使用される、〔２１〕～〔３８〕のいずれか１項記載の使用。
　以下、実施例に基づき本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
実施例１　皮脂のＲＮＡ安定化活性
１）皮脂抽出物の調製
　ヒト被験者４名の顔面からあぶら取りフィルム（５．０ｃｍ×８．０ｃｍ、オイルクリアフィルム、白元アース）で皮脂を採取した。皮脂を採取したあぶら取りフィルムをハサミで細断し、ＤＤＷ／ｔ－Ｂｕｔｙｌ　Ｍｅｔｈｙｌ　Ｅｔｈｅｒ（１：４　ｖ／ｖ）溶液（Ｗａｋｏ）内で試験管ミキサーにより混合し、３，０００ｒｐｍで１０分間遠心した。上層（ｔ－Ｂｕｔｙｌ　Ｍｅｔｈｙｌ　Ｅｔｈｅｒ層）を回収して５０℃、窒素ガス気流下で溶媒を除去し、皮脂抽出物を得た。
２）皮脂抽出物のＲＮＡ安定化活性評価
　Ｈｕｍａｎ　Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ　Ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｓ，ｎｅｏｎａｔａｌ（ＨＥＫｎ）（Ｃａｓｃａｄｅ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）からＲＮｅａｓｙ　ｍｉｎｉ　ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を用いて付属のプロトコルに従って抽出したＲＮＡを被験ＲＮＡとして用いた。ＲＮａｓｅには、ウシＲＮａｓｅ Ａ（富士フイルム和光純薬）又はヒトＲＮａｓｅ ７（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｈｕｍａｎ　ＲＮＡＳＥ　７　ｐｒｏｔｅｉｎ；ＮＯＶＵＳ）を用いた。１０ｍＭ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．０）を溶媒として調製した被験ＲＮＡ溶液（最終濃度２０μｇ／ｍＬ）と、１）で調製した皮脂抽出物１μＬとを混合し（皮脂抽出物最終濃度２％ｖ／ｖ）、室温で１分間ソニケーションした。一方、皮脂抽出物非添加の被験ＲＮＡ溶液には、皮脂抽出物と同量の１０ｍＭ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．０）を混合した。得られた皮脂抽出物添加又は非添加の被験ＲＮＡ溶液に、ＲＮａｓｅ Ａ又はＲＮａｓｅ ７を最終濃度１μｇ／ｍＬで添加し（反応液５０μＬ）、室温で１５分又は３０分間（ＲＮａｓｅ ７を添加した場合は全て３０分間）静置した。反応液にＴｒｉｚｏｌ　ＬＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）／Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍを加えてキットのプロトコルに従いＲＮＡを分離し、イソプロパノール沈殿によりＲＮＡを回収した。コントロールとして、皮脂抽出物及びＲＮａｓｅ非添加のサンプルを用意し、他のサンプルと同様の方法でＲＮＡを回収した。回収したＲＮＡを、Ａｇｉｌｅｎｔ　４２００　ＴａｐｅＳｔａｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ（Ａｇｉｌｅｎｔ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）にて、Ｈｉｇｈ　Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ＲＮＡ　Ｓｃｒｅｅｎ　Ｔａｐｅ（Ａｇｉｌｅｎｔ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）及びＨｉｇｈ　Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ＲＮＡ　ＳｃｒｅｅｎＴａｐｅ　Ｓａｍｐｌｅ　ｂｕｆｆｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて電気泳動した。
　ＲＮＡの電気泳動像を図１に示す。皮脂抽出物の添加によりＲＮａｓｅ Ａ又はＲＮａｓｅ ７によるＲＮＡ分解が抑制されたことから、皮脂がＲＮａｓｅ活性を阻害し、ＲＮＡを安定化する作用を有することが示された。
実施例２　皮脂成分のＲＮＡ安定化活性評価
１）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）による皮脂抽出物の分画
　実施例１の１）で調製した皮脂抽出物５ｍｇを、Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ／ｍｅｔｈａｎｏｌ（２：１　ｖ／ｖ）５０μＬに溶解した。得られた溶液をＨＰＴＬＣプレート（Ｇｌａｓｓ　ＨＰＴＬＣ　Ｓｉｌｉｃａ　ｇｅｌ　６０ｐｌａｔｅｓ；１０×２０ｃｍ，Ｍｅｒｃｋ）にアプライした。リファレンス用として、適量の皮脂抽出物及び脂質標品を同じＨＰＴＬＣプレートにアプライした。水平展開槽にて展開溶媒Ｈｅｘａｎｅ／ｄｉｅｔｈｙｌ　ｅｔｈｅｒ／ａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ（７０：３０：１　ｖ／ｖ／ｖ）を用いて分離した。プレートを、ガラスカッターを用いてリファレンス用と抽出用とに切り分けた。リファレンス用のプレートに１０％硫酸銅／８％リン酸溶液をスプレー後、１８０℃で３分間加熱してスポットを検出した。脂質標品としては、コレステロールエステル［ＣＥ］としてＣｈｏｌｅｓｔｅｒｙｌ　ｐａｌｍｉｔａｔｅ（ｓｉｇｍａ，Ｃ６０７２）、ワックスエステル［ＷＥ］としてＬａｕｒｙｌ　ｐａｌｍｉｔｏｌｅａｔｅ（ｓａｎｔａ　ｃｒｕｚ　ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｓｃ－２８０９０８）、トリアシルグリセロール［ＴＡＧ］としてＴｒｉｏｌｅｉｎ（ｓｉｇｍａ，Ｔ７１４０）、遊離脂肪酸［ＦＡ］としてＰａｌｍｉｔｏｌｅｉｃ　ａｃｉｄ（ｓｉｇｍａ，Ｐ９４１７）、スクアレン［ＳＱ］（ｓｉｇｍａ，Ｓ３６２６）、及びコレステロール［Ｃｈｏｌ］（ｓｉｇｍａ，Ｃ８６６７）を用いた。
　ＴＬＣの結果を図２に示す。スクアレン（ＳＱ）、コレステロールエステル（ＣＥ）、トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、遊離脂肪酸（ＦＡ）、コレステロール（Ｃｈｏｌ）などのスポットが検出された。また明確なスポットは検出されなかったが、ワックスエステル（ＷＥ）が分離されたことも確認された。
２）皮脂抽出物画分の分離
　リファレンス用プレートのスポットを参照して、抽出用のプレートから、ＳＱ、ＣＥ及びＷＥを含む画分（Ａ）、ＴＡＧを含む画分（Ｂ）、ＦＡを含む画分（Ｃ）、及びＣｈｏｌを含む画分（Ｄ）の領域（図２参照）をかきとり、Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ／ｍｅｔｈａｎｏｌ（２：１　ｖ／ｖ）８ｍＬに溶解し、ソニケーションした。得られた溶液を３，０００ｒｐｍで５分間遠心し、上清を回収し、５０℃で窒素乾固し、皮脂抽出物画分を得た。
３）皮脂抽出物画分のＲＮＡ安定化活性評価
　２）で得た皮脂抽出物画分の全量をＤＭＳＯ（１５μＬ）に再溶解した。実施例１の２）と同様の手順で、該皮脂抽出物画分のＲＮＡ安定化活性を評価した。被験ＲＮＡ溶液（最終濃度２０μｇ／ｍＬ）と混合する皮脂抽出物画分としては、前記再溶解液及びそれを２段階で３倍ずつ希釈した希釈溶液を使用し、各々の溶液を最終濃度４％（ｖ／ｖ）で添加した。ＲＮａｓｅには、ヒトＲＮａｓｅ ７（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｈｕｍａｎ　ＲＮＡＳＥ　７　ｐｒｏｔｅｉｎ；ＮＯＶＵＳ）を用いた。ＲＮａｓｅの最終濃度は１μｇ／ｍＬ、処理時間は３０分間とした。
　皮脂抽出物画分存在下でＲＮａｓｅ処理したＲＮＡの電気泳動像を図３に示す。ＳＱ、ＣＥ及びＷＥを含む画分（Ａ）、ＴＡＧを含む画分（Ｂ）、及びＦＡを含む画分（Ｃ）でＲＮＡ分解が抑制された。
実施例３　脂質のＲＮＡ安定化活性評価
　実施例１と同様の手順で、皮脂構成脂質成分のＲＮＡ安定化活性を調べた。皮脂構成脂質成分としては、スクアレン［ＳＱ］（Ｓｑｕａｌｅｎｅ；ｓｉｇｍａ，Ｓ３６２６）、コレステロールエステル［ＣＥ］（Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｙｌ　ｐａｌｍｉｔｏｌｅａｔｅ；Ｏｌｂｒａｃｈｔ　Ｓｅｒｄａｒｙ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｄ－１６１）、ワックスエステル［ＷＥ］（Ｂｅｈｅｎｙｌ　ｐａｌｍｉｔｏｌｅａｔｅ；Ｎｕ　Ｃｈｅｋ　Ｐｒｅｐ，ＷＥ－１３６８）、トリアシルグリセロール［ＴＡＧ］（Ｇｌｙｃｅｒｙｌ　ｔｒｉｐａｌｍｉｔｏｌａｔｅ；ｓｉｇｍａ，Ｔ５８８８）、遊離脂肪酸［ＦＡ］（Ｐａｌｍｉｔｏｌｅｉｃ　ａｃｉｄ；ｓｉｇｍａ，Ｐ９４１７）、及びコレステロール［Ｃｈｏｌ］（Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ；ｓｉｇｍａ，Ｃ８６６７）を用いた。各脂質の最終濃度は１又は１００ｍｇ／ｍＬ（ＣＥ、ＷＥ及びＣｈｏｌは１ｍｇ／ｍＬのみ）とした。被験ＲＮＡは、実施例１で抽出したＲＮＡ（最終濃度２０μｇ／ｍＬ）を用いた。ＲＮａｓｅには、ヒトＲＮａｓｅ ７（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｈｕｍａｎ　ＲＮＡＳＥ　７　ｐｒｏｔｅｉｎ；ＮＯＶＵＳ）を用いた。ＲＮａｓｅの最終濃度は１μｇ／ｍＬ、処理時間は３０分間とした。また、ＲＮＡ分解度の指標として知られる、ＲＮＡ全体に占める２００塩基以上のＲＮＡの割合を、Ａｇｉｌｅｎｔ　４２００　ＴａｐｅＳｔａｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍを用いて電気泳動像から算出した。
　次いで、脂肪酸鎖長の異なるＴＡＧ及びＦＡのＲＮＡ安定化活性を調べた。ＴＡＧ及びＦＡには、トリアシルグリセロール［ＴＡＧ　１６：１］（Ｇｌｙｃｅｒｙｌ　ｔｒｉｐａｌｍｉｔｏｌａｔｅ；ｓｉｇｍａ，Ｔ５８８８）、トリアシルグリセロール［ＴＡＧ　１８：１］（Ｇｌｙｃｅｒｙｌ　ｔｒｉｏｌｅａｔｅ；ｓｉｇｍａ，Ｔ７１４０）、Ｃ１４遊離脂肪酸［ＦＡ　１４：１］（Ｍｙｒｉｓｔｏｌｅｉｃ　ａｃｉｄ；ｓｉｇｍａ，Ｍ３５２５）、Ｃ１６遊離脂肪酸［ＦＡ　１６：１］（Ｐａｌｍｉｔｏｌｅｉｃ　ａｃｉｄ；ｓｉｇｍａ，Ｐ９４１７）、及びＣ１８遊離脂肪酸［ＦＡ　１８：１］（Ｏｌｅｉｃ　ａｃｉｄ；ｓｉｇｍａ，Ｏ１００８）を用いた。各脂質の最終濃度は１００ｍｇ／ｍＬとした。ＲＮａｓｅには、ヒトＲＮａｓｅ ７（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｈｕｍａｎ　ＲＮＡＳＥ　７　ｐｒｏｔｅｉｎ；ＮＯＶＵＳ）を用いた。ＲＮａｓｅの最終濃度は１μｇ／ｍＬ、処理時間は３０分間とした。
　図４Ａに示すとおり、ＳＱ、ＣＥ、ＴＡＧ、及びＦＡによりＲＮＡ分解が抑制された。また図４Ｂに示すとおり、皮脂中に多く存在する一価不飽和遊離脂肪酸であるＣ１４（ミリストレイン酸）、Ｃ１６（パルミトレイン酸）、及びＣ１８（オレイン酸）のいずれもＲＮＡ分解抑制活性を有していた。また、Ｃ１６（パルミトレイル基）又はＣ１８（オレイル基）の一価不飽和のアシル基を有するＴＡＧのいずれもＲＮＡ分解抑制活性を有していた。 

Claims (27)

  1. 　対象ＲＮＡに、遊離脂肪酸、スクアレン、コレステロールエステル、及びトリアシルグリセロールからなる群より選択される少なくとも１種を適用することを含む、ＲＮＡ安定化方法。
  2. 　前記遊離脂肪酸の鎖長が１２～２２である、請求項１記載の方法。
  3. 　前記コレステロールエステルを構成する脂肪酸の鎖長が１２～２２である、請求項１又は２記載の方法。
  4. 　前記トリアシルグリセロールに含まれるアシル基の鎖長が１２～２２である、請求項１～３のいずれか１項記載の方法。
  5. 　ＲＮａｓｅが存在する環境下での前記対象ＲＮＡの分解を抑制する、請求項１～４のいずれか１項記載の方法。
  6. 　前記ＲＮａｓｅがＲＮａｓｅ Ａ　ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙに属するＲＮａｓｅである、請求項５記載の方法。
  7. 　前記対象ＲＮＡが生体由来試料中のＲＮＡである、請求項１～６のいずれか１項記載の方法。
  8. 　前記遊離脂肪酸、スクアレン、コレステロールエステル、及びトリアシルグリセロールからなる群より選択される少なくとも１種が、被験体から分離した前記皮膚表上脂質に添加されるか、又は被験体の皮膚上の前記皮膚表上脂質に添加される、請求項１～７のいずれか１項記載の方法。
  9. 　前記スクアレンが前記対象ＲＮＡに対して、該対象ＲＮＡの１μｇあたり０．０５～１００ｍｇ以下の量で適用されるか、
    　前記コレステロールエステルが前記対象ＲＮＡに対して、該対象ＲＮＡの１μｇあたり０．０５～１００ｍｇ以下の量で適用されるか、
    　前記トリアシルグリセロールが前記対象ＲＮＡに対して、該対象ＲＮＡの１μｇあたり０．０５～１００ｍｇ以下の量で適用されるか、又は、
    　前記遊離脂肪酸が前記対象ＲＮＡに対して、該対象ＲＮＡの１μｇあたり０．００５～１００ｍｇ以下の量で適用される、
    請求項１～８のいずれか１項記載の方法。
  10. 　前記対象ＲＮＡに対して、遊離脂肪酸、スクアレン、コレステロールエステル、及びトリアシルグリセロールからなる群より選択される少なくとも１種を含む油脂組成物を適用することを含む、請求項１～９のいずれか１項記載の方法。
  11. 　ＲＮＡ安定化剤の製造における、遊離脂肪酸、スクアレン、コレステロールエステル、及びトリアシルグリセロールからなる群より選択される少なくとも１種の使用。
  12. 　ＲＮＡ安定化のための、遊離脂肪酸、スクアレン、コレステロールエステル、及びトリアシルグリセロールからなる群より選択される少なくとも１種の使用。
  13. 　前記遊離脂肪酸の鎖長が１２～２２である、請求項１１又１２記載の使用。
  14. 　前記コレステロールエステルを構成する脂肪酸の鎖長が１２～２２である、請求項１１～１３のいずれか１項記載の使用。
  15. 　前記トリアシルグリセロールに含まれるアシル基の鎖長が１２～２２である、請求項１１～１４のいずれか１項記載の使用。
  16. 　前記ＲＮＡ安定化が、ＲＮａｓｅが存在する環境下でのＲＮＡの分解抑制によるＲＮＡ安定化である、請求項１１～１５のいずれか１項記載の使用。
  17. 　前記ＲＮａｓｅがＲＮａｓｅ Ａ　ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙに属するＲＮａｓｅである、請求項１６記載の使用。
  18. 　前記ＲＮＡが生体由来試料中のＲＮＡである、請求項１１～１７のいずれか１項記載の使用。
  19. 　前記遊離脂肪酸、スクアレン、コレステロールエステル、及びトリアシルグリセロールからなる群より選択される少なくとも１種が、被験体から分離した前記皮膚表上脂質に添加されるか、又は被験体の皮膚上の前記皮膚表上脂質に添加される、請求項１１～１８のいずれか１項記載の使用。
  20. 　前記スクアレンが前記対象ＲＮＡに対して、該対象ＲＮＡの１μｇあたり０．０５～１００ｍｇ以下の量で適用されるか、
    　前記コレステロールエステルが前記対象ＲＮＡに対して、該対象ＲＮＡの１μｇあたり０．０５～１００ｍｇ以下の量で適用されるか、
    　前記トリアシルグリセロールが前記対象ＲＮＡに対して、該対象ＲＮＡの１μｇあたり０．０５～１００ｍｇ以下の量で適用されるか、又は、
    　前記遊離脂肪酸が前記対象ＲＮＡに対して、該対象ＲＮＡの１μｇあたり０．００５～１００ｍｇ以下の量で適用される、
    請求項１１～１９のいずれか１項記載の使用。
  21. 　好ましくは、前記遊離脂肪酸、スクアレン、コレステロールエステル、及びトリアシルグリセロールからなる群より選択される少なくとも１種を含む油脂組成物が使用される、請求項１１～２０のいずれか１項記載の使用。
  22. 　遊離脂肪酸、スクアレン、コレステロールエステル、及びトリアシルグリセロールからなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする、ＲＮＡ安定化剤。
  23. 　前記遊離脂肪酸の鎖長が１２～２２である、請求項２２記載のＲＮＡ安定化剤。
  24. 　前記コレステロールエステルを構成する脂肪酸の鎖長が１２～２２である、請求項２２又は２３記載のＲＮＡ安定化剤。
  25. 　前記トリアシルグリセロールに含まれるアシル基の鎖長が１２～２２である、請求項２２～２４のいずれか１項記載のＲＮＡ安定化剤。
  26. 　前記ＲＮＡが生体由来試料中のＲＮＡである、請求項２２～２５のいずれか１項記載のＲＮＡ安定化剤。
  27. 　ＲＮａｓｅが存在する環境下でのＲＮＡ分解抑制のために使用される、請求項２２～２６のいずれか１項記載のＲＮＡ安定化剤。
     
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