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WO2021132550A1 - 術後補助療法剤 - Google Patents

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WO2021132550A1
WO2021132550A1 PCT/JP2020/048667 JP2020048667W WO2021132550A1 WO 2021132550 A1 WO2021132550 A1 WO 2021132550A1 JP 2020048667 W JP2020048667 W JP 2020048667W WO 2021132550 A1 WO2021132550 A1 WO 2021132550A1
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WO
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peptide
seq
epitope
linked
represented
Prior art date
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PCT/JP2020/048667
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English (en)
French (fr)
Inventor
理沙 後藤
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Taiho Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Taiho Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
Application filed by Taiho Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Taiho Pharmaceutical Co Ltd
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Priority to AU2020411439A priority patent/AU2020411439B2/en
Priority to JP2021567660A priority patent/JP7522770B2/ja
Priority to US17/788,847 priority patent/US20230055953A1/en
Priority to KR1020227025408A priority patent/KR20220120627A/ko
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    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
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    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
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    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
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    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Definitions

  • the present invention relates to a postoperative adjuvant therapeutic agent for tumors using a CTL epitope 4-linked peptide formed by linking four peptides having HLA-A restrictive CTL-inducing ability.
  • Cancer is the leading cause of death in Japan, and about 350,000 people die annually, and it is still a serious disease.
  • the main established cancer treatments are surgery, anticancer drug treatment, radiation therapy, and cancer immunotherapy.
  • stage high treatment results are expected by radical surgical treatment that removes all cancer cells.
  • curative surgery for highly advanced cancer has its limits, and it has been reported that local recurrence and distant metastasis occur at a frequency that is not low.
  • There are various possible causes for local recurrence and distant metastasis but mainly surgery left behind small cancer cells that are invisible to the naked eye, and some of the cancer cells have already been hematogenous or lymphatic metastases. It is thought that the cause was that a minute tumor had begun to grow in another organ.
  • cancer cells are considered to be scattered throughout the body, and it is very difficult to remove all cancer cells by surgery. Therefore, various chemotherapy, radiation therapy, and in recent years, cancer immunotherapy have been established as treatment methods for distantly metastasized cancer. Since these treatment methods are provided with a mechanism of action that kills cancer cells at the molecular level and the cellular level, it is theoretically possible to treat all cancer cells distributed throughout the body. However, unfortunately, even with such therapies, in most cases, all the treatment methods eventually become ineffective and death occurs, which has become a major problem in cancer treatment. Therefore, the development of new treatments for recurrent / metastatic cancer is a top priority for cancer control.
  • Postoperative adjuvant therapy is a treatment performed for the purpose of eradicating invisible cancer cells and minute metastatic cancer cells by such surgical treatment and preventing recurrence or metastasis of cancer.
  • a combination drug of tegafur / gimeracil / oteracil potassium has been established as a postoperative adjuvant therapy for stage II (excluding T1), IIIA or IIIB gastric cancer that has undergone curative surgery, and tegafur / gimeracil has been established.
  • stage II excluding T1
  • IIIA or IIIB gastric cancer that has undergone curative surgery
  • tegafur / gimeracil has been established.
  • the oteracil potassium combination drug administration group reduces the risk of death by 32% as compared with the surgery alone group (Non-Patent Document 1).
  • postoperative adjuvant therapy is also performed for cancers such as lung cancer, breast cancer, colon cancer, uterine cancer, and malignant melanoma.
  • cancer immunotherapy induces, transplants, or activates immune cells that can directly kill cancer cells, such as cytotoxic T lymphocytes (CTL) and natural killer (NK) cells. It has a mechanism of action to eradicate. Therefore, cancer immunotherapy can show a systemic antitumor effect on minute tumors and cancer cells that cannot be seen like chemotherapy.
  • CTL cytotoxic T lymphocytes
  • NK natural killer
  • Cancer peptide vaccine therapy which is one of the cancer immunotherapy, is a long-awaited treatment method as a new treatment method for cancer.
  • MHC major histocompatibility complex
  • TCR cell receptor
  • CTL epitope-specific cytotoxic T lymphocytes
  • HLA human leukocyte antigen
  • An object of the present invention is to provide a postoperative adjuvant therapeutic agent for a tumor, which exhibits a remarkably excellent effect of suppressing tumor metastasis and recurrence and has few side effects.
  • the present inventor administered a CTL epitope 4-linked peptide to an animal model of tumor metastasis / recurrence and examined the effect of suppressing tumor metastasis / recurrence.
  • lung metastasis nodules did not cause serious side effects.
  • a postoperative adjuvant therapeutic agent for a tumor which comprises a CTL epitope 4-linked peptide containing four CTL epitope peptides linked via a linker as an active ingredient.
  • the CTL epitope 4-linked peptide The epitope peptide (PEP5) represented by SEQ ID NO: 5 and The epitope peptide represented by SEQ ID NO: 1 (PEP1), the epitope peptide represented by SEQ ID NO: 2 (PEP2), the epitope peptide represented by SEQ ID NO: 4 (PEP4), and the epitope peptide represented by SEQ ID NO: 6 (PEP6).
  • the epitope peptide represented by SEQ ID NO: 7 (PEP7), the epitope peptide represented by SEQ ID NO: 8 (PEP8), the epitope peptide represented by SEQ ID NO: 9 (PEP9), and the epitope peptide represented by SEQ ID NO: 10. (PEP10), the epitope peptide represented by SEQ ID NO: 13 (PEP13), the epitope peptide represented by SEQ ID NO: 15 (PEP15), the epitope peptide represented by SEQ ID NO: 17 (PEP17), and the epitope peptide represented by SEQ ID NO: 18.
  • Three epitope peptides selected from the group consisting of epitope peptides (PEP18)
  • the epitope peptide contained in the CTL epitope 4-linked peptide is PEP5, PEP6, One epitope peptide selected from the group consisting of PEP9 and PEP2, PEP4 and PEP10,
  • the postoperative adjuvant therapeutic agent for a tumor according to [1] or [2], wherein the CTL epitope 4-linked peptide comprises a sequence selected from the following.
  • the linker is an amino acid linker.
  • the amino acid linker is an arginine dimer in which two arginines are linked or an arginine trimmer in which three arginines are linked.
  • the peptide sequence consisting of hydrophilic amino acids is composed of an arginine trimmer in which three arginines are linked and an N-terminal is linked, or an arginine tetramer in which four arginines are linked.
  • the CTL epitope 4-linked peptide The epitope peptide (PEP5) represented by SEQ ID NO: 5 and The epitope peptide represented by SEQ ID NO: 1 (PEP1), the epitope peptide represented by SEQ ID NO: 2 (PEP2), the epitope peptide represented by SEQ ID NO: 4 (PEP4), and the epitope peptide represented by SEQ ID NO: 6 (PEP6).
  • PEP10 the epitope peptide represented by SEQ ID NO: 13 (PEP13), the epitope peptide represented by SEQ ID NO: 15 (PEP15), the epitope peptide represented by SEQ ID NO: 17 (PEP17), and the epitope peptide represented by SEQ ID NO: 18.
  • PEP18 Three epitope peptides selected from the group consisting of epitope peptides (PEP18)
  • the C-terminal is PEP2 (excluding those containing PEP7 and PEP8 at the N-terminal adjacent to each other from the N-terminal side via a linker in this order); (2) The C-terminus is PEP4; (3) The C-terminus is PEP10; The above-mentioned tumor metastasis inhibitor having.
  • An agent for suppressing tumor recurrence which comprises a CTL epitope 4-linked peptide containing four CTL epitope peptides linked via a linker as an active ingredient.
  • the CTL epitope 4-linked peptide The epitope peptide (PEP5) represented by SEQ ID NO: 5 and The epitope peptide represented by SEQ ID NO: 1 (PEP1), the epitope peptide represented by SEQ ID NO: 2 (PEP2), the epitope peptide represented by SEQ ID NO: 4 (PEP4), and the epitope peptide represented by SEQ ID NO: 6 (PEP6).
  • PEP10 the epitope peptide represented by SEQ ID NO: 13 (PEP13), the epitope peptide represented by SEQ ID NO: 15 (PEP15), the epitope peptide represented by SEQ ID NO: 17 (PEP17), and the epitope peptide represented by SEQ ID NO: 18.
  • PEP18 Three epitope peptides selected from the group consisting of epitope peptides (PEP18)
  • the C-terminal is PEP2 (excluding those containing PEP7 and PEP8 at the N-terminal adjacent to each other from the N-terminal side via a linker in this order); (2)
  • the C-terminus is PEP4; (3)
  • the C-terminus is PEP10; An agent for suppressing the recurrence of the above-mentioned tumor.
  • the present invention also relates to the following aspects. -The CTL epitope 4-linked peptide defined in the above [1] to [11] for use in postoperative adjuvant therapy of a tumor.
  • -CTL epitope 4-linked peptide represented by SEQ ID NO: 24 for use in suppressing tumor metastasis.
  • -CTL epitope 4-linked peptide represented by SEQ ID NO: 24 for use in suppressing tumor recurrence.
  • a pharmaceutical composition for postoperative adjuvant therapy of tumors comprising the CTL epitope 4-linked peptide represented by SEQ ID NO: 24.
  • -Postoperative adjuvant therapy for tumors comprising the step of administering to a patient an amount effective for treating recurrence and / or metastasis of a tumor of the CTL epitope 4-linked peptide defined in the above [1] to [11].
  • a method for suppressing tumor metastasis which comprises a step of administering to a patient an amount effective for treating tumor metastasis of the CTL epitope 4-linked peptide defined in the above [1] to [11].
  • a method for suppressing tumor recurrence which comprises a step of administering to a patient an amount effective for treating tumor recurrence of the CTL epitope 4-linked peptide defined in the above [1] to [11].
  • the postoperative adjuvant therapy for tumors of the present invention it is possible to perform cancer treatment that has an effect of suppressing tumor metastasis / recurrence while suppressing the onset of side effects. As a result, it brings about long-term survival of cancer patients.
  • the HPLC chromatogram of the CTL epitope 4-linked peptide TPV07 is shown.
  • the HPLC chromatogram of the CTL epitope 4-linked peptide TPV08 is shown.
  • the mass spectrum of the CTL epitope 4-linked peptide TPV07 is shown.
  • the mass spectrum of the CTL epitope 4-linked peptide TPV08 is shown.
  • B16F10. A24 / SART2 the 93-101 cell lines indicating the inhibitory effect of lung metastatic nodules number of TPV06 in a mouse model that intravenous transplantation.
  • the present invention relates to a postoperative adjuvant therapeutic agent for a tumor containing a CTL epitope 4-linked peptide as an active ingredient.
  • the present invention also relates to a tumor metastasis inhibitor containing a CTL epitope 4-linked peptide as an active ingredient.
  • the present invention also relates to a tumor recurrence inhibitor containing a CTL epitope 4-linked peptide as an active ingredient.
  • the CTL epitope 4-linked peptide means a peptide in which four peptides selected from CTL epitope peptides derived from the same and / or different tumor antigen molecules are linearly linked via a linker to form one molecule. ..
  • KLVERLGAA SEQ ID NO: 1, referred to herein as "PEP1”, eg, WO 200l / 0l1044); ASLDSDPWV (SEQ ID NO: 2, referred to herein as “PEP2”, eg, WO 2002/010369); ALVEFEDVL (SEQ ID NO: 3, referred to herein as “PEP3”, eg, WO 2002/010369); LLQAEAPRL (SEQ ID NO: 4, referred to herein as "PEP4", eg, WO 2000/12701); DYSARWNEI (SEQ ID NO: 5, described herein as "PEP5", eg, JP-A-11-318455); VYDYNCHVDL (SEQ ID NO: 6, referred to herein as "PEP6”, eg, WO 2000/12701); LYAWEPSFL (SEQ ID NO: 7, described herein as
  • Table 1 shows information on the proteins from which the CTL epitope peptides PEP1 to PEP18 are derived. These proteins have been reported to be highly expressed in tumor tissues.
  • the CTL epitope 4-linked peptide of the present invention is represented by 13 specific types (peptide "PEP1" represented by SEQ ID NO: 1, peptide "PEP2” represented by SEQ ID NO: 2 and SEQ ID NO: 4 among the above-mentioned CTL epitope peptides.
  • Peptide "PEP8”, peptide represented by SEQ ID NO: 9 is "PEP9", peptide represented by SEQ ID NO: 10 "PEP10”, peptide represented by SEQ ID NO: 13 "PEP13”, peptide represented by SEQ ID NO: 15.
  • the CTL epitope 4-linked peptide is The peptide "PEP5" represented by SEQ ID NO: 5 and Peptide "PEP1” represented by SEQ ID NO: 1, peptide "PEP2” represented by SEQ ID NO: 2, peptide "PEP4" represented by SEQ ID NO: 4, peptide "PEP6” represented by SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO:
  • the peptide "PEP10” represented by SEQ ID NO: 10 represented by SEQ ID NO: 10
  • SEQ ID NO: 13 Selected from the group consisting of the peptide "PEP13” represented, the peptide "PEP15” represented by SEQ ID NO: 15, the peptide "PEP17” represented by SEQ ID NO: 17, and the peptide "PEP18” represented by SEQ ID NO: 18.
  • one or more amino acids are substituted, inserted, deleted, and in each amino acid sequence of PEP1, PEP2, PEP4, PEP5, PEP6, PEP7, PEP8, PEP9, PEP10, PEP13, PEP15, PEP17, and PEP18.
  • a peptide having / or an added amino acid sequence and having a CTL-inducing ability and / or an immunoglobulin production-inducing ability equal to or higher than that of the original peptide can also be used as a "CTL epitope peptide".
  • “plurality" is 2 to 3, preferably 2.
  • Such peptides include, for example, peptides substituted with amino acids having properties similar to the original amino acids (ie, obtained by conservative amino acid substitutions).
  • the peptide is "a peptide having a CTL-inducing ability and / or an immunoglobulin production-inducing ability equal to or higher than that of the original peptide" is evaluated according to, for example, the method described in International Publication No. 2015/060235 pamphlet. can do.
  • the CTL inducibility is a mouse-derived cell, syngeneic mouse, pre-administered with a test peptide having an amino acid sequence in which one or more amino acids have been substituted, inserted, deleted, and / or added.
  • the determination results of the obtained ⁇ values (positive (10 ⁇ ⁇ ⁇ 100), medium positive (100 ⁇ ⁇ ⁇ 200)) ), Strongly positive (200 ⁇ ⁇ )) is equal to or higher than that, it can be determined that the peptide has a CTL-inducing ability equal to or higher than that of the original peptide.
  • the original peptide is "positive” and the peptide having an amino acid sequence in which one or more amino acids are substituted, inserted, deleted, and / or added is also "positive", it is judged to be equivalent.
  • the ability to induce immunoglobulin production uses the CTL epitope-specific IgG antibody titer in the serum of mice to which the test peptide was administered as an index, and the measurement result (2 ⁇ fold ⁇ 10, of the obtained increase in IgG antibody titer (fold)). If 10 ⁇ fold ⁇ 100, 100 ⁇ fold) is equal to or higher than that, it can be determined that the peptide has an equivalent or higher ability to induce immunoglobulin production. In this case, the measurement result of the original peptide is within the range of "2 ⁇ fold ⁇ 10", and the measurement result of the peptide having an amino acid sequence in which one or more amino acids are substituted, inserted, deleted, and / or added. Is also judged to be equivalent if it is within the range of "2 ⁇ fold ⁇ 10".
  • the linker may be any as long as it is cleaved when the CTL epitope 4-linked peptide is administered to a living body and the linked CTL epitope peptide can be individually separated, for example, an ester bond. , Ether bond, amide bond, sugar chain linker, polyethylene glycol linker, amino acid linker and the like.
  • the amino acid sequences used as the amino acid linker include arginine dimer (RR), arginine trimmer (RRR), arginine tetramer (RRRR), lysine dimer (KK), lysine trimmer (KKK), lysine tetramer (KKKK), and glycine dimer (GG).
  • Glycin trimmer (GGG), Glycintetramer (GGGG), Glycine pentamer (GGGGGG), Glysin hexamer (GGGGGG), Alanine-alanine-tyrosine (AAY), Isoleucine-leucine-alanine (ILA), Arginine-Valin- Examples thereof include lysine-arginine (RVKR), preferably arginine dimer (RR) or arginine trimmer (RRR), and more preferably arginine dimer (RR).
  • Linkers used in epitope-linked peptides are known in the art and can be appropriately selected and used by those skilled in the art.
  • the CTL epitope peptide selected and the ligation order thereof are such that the CTL epitope 4-linked peptide synthesized in a predetermined combination and a predetermined ligation order is administered to human HLA-A expressing transgenic mice. Then, the presence or absence of CTL induction specific to each CTL epitope peptide can be evaluated and determined in vivo.
  • the method for evaluating the presence or absence of CTL induction specific to each CTL epitope peptide in vivo can be evaluated according to, for example, the method described in International Publication No. 2015/060235 pamphlet.
  • the CTL epitope peptides selected and their ligation order were such that CTL induction specific to each CTL epitope peptide was observed for at least 3 or more types, preferably 4 types of CTL epitope peptides, using the method.
  • the epitope peptide and its linking order can be determined.
  • the CTL epitope 4-linked peptide of the present invention preferably has one of the characteristics selected from the following (1) to (3): (1)
  • the C-terminal is PEP2 (excluding those containing PEP7 and PEP8 at the N-terminal adjacent to each other from the N-terminal side via a linker in this order); (2)
  • the C-terminus is PEP4; (3)
  • the C-terminal is PEP10.
  • the CTL epitope 4-linked peptide of the present invention is The peptide "PEP5" represented by SEQ ID NO: 5 and Peptide "PEP1” represented by SEQ ID NO: 1, peptide "PEP2” represented by SEQ ID NO: 2, peptide "PEP4" represented by SEQ ID NO: 4, peptide "PEP6” represented by SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: The peptide “PEP7” represented by 7, the peptide “PEP8” represented by SEQ ID NO: 8, the peptide “PEP9” represented by SEQ ID NO: 9, the peptide "PEP10” represented by SEQ ID NO: 10, and SEQ ID NO: 13 Selected from the group consisting of the peptide "PEP13” represented, the peptide "PEP15” represented by SEQ ID NO: 15, the peptide "PEP17” represented by SEQ ID NO: 17, and the peptide "PEP18” represented by SEQ ID NO: 18.
  • the C-terminal is PEP2 (excluding those containing PEP7 and PEP8 at the N-terminal adjacent to each other from the N-terminal side via a linker in this order); (2) The C-terminus is PEP4; (3) The C-terminal is PEP10.
  • the CTL epitope 4-linked peptide of the present invention includes the peptide "PEP5" represented by SEQ ID NO: 5, the peptide "PEP6” represented by SEQ ID NO: 6, and the peptide "PEP9” represented by SEQ ID NO: 9.
  • One peptide selected from the group consisting of the peptide "PEP2" represented by SEQ ID NO: 2, the peptide "PEP4" represented by SEQ ID NO: 4 and the peptide "PEP10” represented by SEQ ID NO: 10 They are each linked via a linker and have a C-terminus of PEP2, PEP4, or PEP10.
  • the CTL epitope 4-linked peptide of the present invention is a peptide consisting of a sequence selected from the following: -PEP5- (L) -PEP6- (L) -PEP9- (L) -PEP4; -PEP9- (L) -PEP5- (L) -PEP6- (L) -PEP4; -PEP6- (L) -PEP5- (L) -PEP9- (L) -PEP4; -PEP6- (L) -PEP9- (L) -PEP5- (L) -PEP4; -PEP9- (L) -PEP6- (L) -PEP5- (L) -PEP4; -PEP9- (L) -PEP6- (L) -PEP5- (L) -PEP4; -PEP5- (L) -PEP9- (L) -PEP6-
  • the CTL epitope 4-linked peptide of the present invention is a peptide consisting of a sequence selected from the following: -PEP5- (L) -PEP9- (L) -PEP6- (L) -PEP4; -PEP5- (L) -PEP9- (L) -PEP6- (L) -PEP2; or -PEP5- (L) -PEP9- (L) -PEP6- (L) -PEP10.
  • "(L)" indicates a linker.
  • the CTL epitope 4-linked peptide of the present invention is a peptide represented by a sequence selected from the following, wherein the linker is an arginine dimer: PEP5-RR-PEP9-RR-PEP6-RR-PEP4 (SEQ ID NO: 24, referred to herein as TPV06); PEP5-RR-PEP9-RR-PEP6-RR-PEP2 (SEQ ID NO: 25, referred to herein as TPV07); or PEP5-RR-PEP9-RR-PEP6-RR-PEP10 (SEQ ID NO: 26, referred to herein as TPV08).
  • the CTL epitope 4-linked peptide of the present invention is the peptide TPV06 represented by SEQ ID NO: 24.
  • the CTL epitope 4-linked peptide is preferably a peptide represented by a sequence selected from SEQ ID NOs: 19 to 28 shown in Table 2 below.
  • the CTL epitope 4-linked peptide is selected from those listed in Table 2 above, the following peptides: TPV01 (SEQ ID NO: 19); TPV02 (SEQ ID NO: 20); TPV03 (SEQ ID NO: 21); TPV04 (SEQ ID NO: 22); TPV05 (SEQ ID NO: 23); or TPV06 (SEQ ID NO: 24); Is.
  • two or more CTL epitope 4-linked peptides may be used.
  • two, three, four or more CTL epitope 4-linked peptides may be used separately or in combination.
  • the remaining one or more may be the CTL epitope 4-linked peptide of the present invention as long as at least one CTL epitope 4-linked peptide of the present invention is contained.
  • it may be a CTL epitope 4-linked peptide as described in, for example, International Publication No. 2015/060235.
  • the peptide represented by SEQ ID NO: 24 and the peptide represented by SEQ ID NO: 29 (TPV011: PEP15-RR-PEP18-RR-PEP1-RR- It is even more preferable to use a mixture of three types of PEP10) and the peptide represented by SEQ ID NO: 30 (TPV012: RRRR-PEP7-RR-PEP13-RR-PEP8-RR-PEP2).
  • the CTL epitope 4-linked peptide of the present invention can further have a peptide sequence consisting of hydrophilic amino acids.
  • the peptide sequence can be added to the N-terminus and / or C-terminus of the CTL epitope 4-linked peptide, preferably to the N-terminus.
  • the peptide sequence is selected from the group consisting of arginine, histidine, lysine, threonine, tyrosine, serine, aspartic acid, glutamine, aspartic acid, and glutamic acid, with 1 to 15, preferably 2 to 10, and even more preferably 3 to.
  • Those consisting of 5 hydrophilic amino acids can be selected.
  • arginine trimmer RRR
  • RRRR arginine tetramer
  • CTL epitope 4-linked peptide to which such a peptide sequence is added RRR-TPV06, RRRR-TPV06, TPV06 -RRR, TPV06-RRRR, RRR-TPV07, RRR-TPV07, TPV07-RRR, TPV07-RRRR, RRR-TPV08, RRRR-TPV08, TPV08-RRRR, TPV08-RRRK6KKK , TPV06-KKKK, KKK-TPV07, KKK-TPV07, TPV07-KKK, TPV07-KKKK, KKK-TPV08, KKK-TPV08, TPV08-KKK, TPV08-KKKK, HHH-TPV -HHHH, HHH-TPV07, HHHH-TPV07, HHH-TPV07, HHHH-TPV07, HHH-
  • the "CTL epitope 4-linked peptide which may further have a peptide sequence consisting of a hydrophilic amino acid" of the present invention preferably has a peptide sequence consisting of a hydrophilic amino acid at the N-terminal CTL epitope 4. It is a ligating peptide, more preferably a CTL epitope 4-linked peptide which may have a peptide sequence consisting of 3 to 5 hydrophilic amino acids selected from the group consisting of arginine, histidine and lysine at the N-terminal.
  • CTL epitope 4-linked peptide which may have an arginine trimmer (RRR) or arginine tetramer (RRRR) at the N-terminal, and more preferably a CTL epitope 4-linked peptide having no peptide sequence consisting of a hydrophilic amino acid. It is a peptide.
  • the CTL epitope 4-linked peptide of the present invention can be synthesized, for example, according to the method described in International Publication No. 2015/060235 pamphlet.
  • postoperative adjuvant therapy is a method for treating or suppressing tumor recurrence and / or metastasis after surgery.
  • the postoperative adjuvant therapy of the present invention comprises the step of administering the CTL epitope 4-linked peptide described herein to a patient after tumor resection.
  • the patients who are the subjects of the present invention can obtain particularly effective effects in humans, but are not limited to those.
  • the recommended dose of the CTL epitope 4-linked peptide used in the present invention in humans is preferably in the range of 3 to 9 mg / body / day per CTL epitope 4-linked peptide.
  • the "recommended dose” may be a dose determined by clinical trials or the like that brings about the maximum therapeutic effect within a range that can be safely used without causing serious side effects.
  • PMDA Pharmaceuticals and Medical Devices Agency
  • FDA Food and Drug Administration
  • EMA European Medicines Agency
  • the administration schedule of the postoperative adjuvant therapy agent, metastasis inhibitor and recurrence inhibitor of the tumor of the present invention can be appropriately selected according to the type and stage of the tumor.
  • the administration schedule of the CTL epitope 4-linked peptide is preferably a cycle of 21 days in total, in which the step of administering once a week is repeated 3 times (once a day on the 1st, 8th, and 15th days). Further, after the 3rd cycle, the administration is preferably administered on the 1st day and the drug is withdrawn for 20 days (a method of administering once every 3 weeks), with a total of 21 days as one cycle.
  • the number of daily administrations of the CTL epitope 4-linked peptide of the present invention can be appropriately selected according to the type of cancer, the stage of the disease, and the like.
  • the number of daily administrations of the CTL epitope 4-linked peptide is preferably once.
  • the target tumor in the present invention is not particularly limited as long as it exerts an antitumor effect in the postoperative adjuvant therapy of the tumor, but preferably the CTL epitope 4-linked peptide exerts the antitumor effect in the postoperative adjuvant therapy of the tumor. More preferably, it is a malignant tumor positive for Lck, WHSC2, SART2, SART3, MRP3, UBE2V, EGFR, or PTHrP, and more preferably a malignant tumor positive for SART2.
  • cancers to be the subject of the present invention include brain cancer, head and neck cancer, gastrointestinal cancer (esophageal cancer, gastric cancer, duodenal cancer, liver cancer, biliary tract cancer (bile sac / bile duct cancer, etc.), pancreatic cancer, small intestine).
  • gastrointestinal cancer esophageal cancer, gastric cancer, duodenal cancer, liver cancer, biliary tract cancer (bile sac / bile duct cancer, etc.), pancreatic cancer, small intestine).
  • Cancer colorectal cancer (colorectal cancer, colon cancer, rectal cancer, etc.), gastrointestinal stromal tumor, lung cancer (non-small cell lung cancer, small cell lung cancer), breast cancer, ovarian cancer, uterine cancer (cervical cancer, uterus) (Body cancer, etc.), renal cancer, urinary tract epithelial cancer (bladder cancer, renal pelvis cancer, urinary tract cancer), prostate cancer, skin cancer, cancer of unknown primary origin, etc.
  • the cancer includes not only the primary tumor but also cancer that has metastasized to other organs (liver, etc.).
  • head and neck cancer gastrointestinal cancer, lung cancer, kidney cancer, urothelial cancer, and skin cancer are preferable, and gastrointestinal cancer, lung cancer, urothelial cancer, and skin cancer are more preferable, from the viewpoint of antitumor effect.
  • Lung cancer and urothelial cancer are particularly preferable.
  • the administration form of the postoperative adjuvant therapy agent, metastasis inhibitor and recurrence inhibitor of the tumor of the present invention is not particularly limited and may be appropriately selected according to the therapeutic purpose. Specifically, an oral preparation (tablet, coated tablet, powder) , Granules, capsules, liquids, etc.), injections, suppositories, patches, ointments, etc. can be exemplified, and injections are preferable.
  • the postoperative adjuvant therapy agent, metastasis inhibitor and recurrence inhibitor of the tumor in the present invention can be prepared by a commonly known method using a pharmaceutically acceptable carrier.
  • Such carriers include various general-purpose carriers such as excipients, binders, disintegrants, lubricants, diluents, solubilizers, suspending agents, isotonic agents, pH. Examples thereof include regulators, buffers, stabilizers, colorants, flavoring agents, and odorants.
  • the CTL epitope 4-linked peptide which is an active ingredient of the postoperative adjuvant therapy agent, metastasis inhibitor and recurrence inhibitor of the present invention, can specifically target only cells expressing the contained epitope. Therefore, it is effectively used while reducing the burden on the patient without causing serious side effects as compared with the conventional anticancer agents used as postoperative adjuvant therapy agents, metastasis inhibitors and recurrence inhibitors. be able to.
  • the anticancer effect is often confirmed using an animal model, but it is common to use the growth of the transplanted tumor and the survival rate of the transplanted animal as an index.
  • the effects of the postoperative adjuvant therapy agent, metastasis inhibitor and recurrence inhibitor are considered to be more preferable to confirm the effect on metastasis than to resect the tumor once transplanted into the animal model. Therefore, the effects of the postoperative adjuvant therapy agent, metastasis inhibitor, and recurrence inhibitor of the tumor of the present invention should be confirmed using, for example, an animal model in which tumor development occurs at a site different from the tumor transplantation site, that is, metastasis occurs. Can be done.
  • the CTL epitope 4-linked peptide which is an active ingredient of the postoperative adjuvant therapy agent, metastasis inhibitor, and recurrence inhibitor of the present invention, has an HLA-A-binding ability to induce CTL, and thus its effect has been confirmed.
  • the animal model used to do this needs to be one that expresses the HLA-A molecule.
  • Examples of such a model include, but are not limited to, non-immunodeficient non-human animals with HLA-A gene knock-in.
  • the non-immunodeficient non-human animal having the HLA-A gene knock-in may be a non-immunodeficient non-human animal having the ⁇ 1 and ⁇ 2 regions of human HLA-A.
  • the human HLA-A24 gene knock-in mouse (B2m tm2 (HLA-A24 / H-2Db / B2M) Tai mouse) disclosed in Immunol: 198,516-527 (2017) can be preferably used.
  • amino acids in which the ⁇ -amino group is an Fmoc group and the side chain functional group is a general protecting group in Wang-Chemtrix resin are 1- (mesitylen-2-sulfonyl) -3-nitro-1,2, Condensation was completed under the conditions of 4-triazole / N-methylimidazole / dichloromethane to complete the support of the C-terminal amino acid on the resin.
  • a deblocking solution (20% piperidine / N, N-dimethylformamide (DMF)
  • Amino acids protected with 1- [bis (dimethylamino) methylene] -5-chloro-1H-benzo-triazolium 3-oxide hexafluorophosphate (HCTU) / N-methylmorpholin (NMM) / DMF conditions are used to condense the amino acids.
  • a dipeptide was synthesized.
  • a peptide having the desired sequence was synthesized by repeating the deprotection of the Fmoc group with a deblocking solution and the amino acid condensation operation under the HCTU / NMM / DMF conditions.
  • a deprotection solution (2.5% triisopropylsilane, 2.5% water, 2.5% 1,2-ethanedithiol, 92.5% trifluoroacetic acid) is used as the protective peptide resin.
  • the free peptide was excised from the resin along with the removal of the peptide side chain protecting group by reacting for 4 hours. The resin was removed by filtration, and the obtained filtrate was added to cold ether to recover the peptide as a precipitate.
  • the various synthetic peptides obtained were purified on a Proteinavi column (SHISEIDO) using a 0.1% TFA aqueous solution and acetonitrile in a solvent system.
  • the purity of the final purified peptide was confirmed by CAPCELL PAK UG120 column (SHISEIDO) and HPLC system (HITACHI).
  • the molecular weight was confirmed by an ESI-MS system (Synapt HDMS, WATERS), and after freeze-drying, it was stored in a cool, warm and dark place, and used in the examples shown below.
  • Table 3 shows the molecular weights measured by mass spectrometric (MS) analysis of TPV07 and TPV08. Further, HPLC chromatograms and MS of TPV07 and TPV08 are shown in FIGS. 1 to 4.
  • TPV01 to TPV06 and TPV09 to TPV12 can be synthesized, for example, according to the method described in International Publication No. 2015/060235 pamphlet, or synthesized according to the same method as TPV07 and TPV08 shown above. You can also. All peptides had a purity of 90% or higher.
  • B16F10.A24 / SART2 93-101 cell lines PoS One: 13, e0199249 ( 2018)
  • B16F10.A24 / SART2 93-101 cell lines (PLoS One: 13, e0199249 ( 2018)) by using a Dulbecco's Modified Eagle's Medium (Sigma -Aldrich) medium containing 10% FBS, and cultured.
  • B16F10.A24 / SART2 93-101 during 37 ° C., 5% CO 2 incubator, twice a week, 1: 25-1: were passaged 40 ratio.
  • mice Grouping On the same day after mice Grouping (Day0), D-PBS to B16F10.A24 / SART2 93-101 cell suspensions prepared with (Fujifilm Wako Junyaku), 1 ⁇ 10 6 cells into mouse tail vein / 0.1 mL each was transplanted.
  • the epitope 4-linked peptide TPV06 (SEQ ID NO: 24) was dissolved in distilled water (Otsuka Pharmaceutical Factory) to prepare a 6 mg / mL peptide solution, which was filled in a B Braun Injekt syringe (B. Braun Ace scrap). After filling another syringe with an equal amount of Montande ISA 51 VG (SEPPIC), both syringes were connected by a connector, and the peptide solution and Montandide ISA 51 VG were mixed well to prepare an emulsion. In addition, as a control, an emulsion in which distilled water and an equal amount of Montande ISA 51 VG were mixed was prepared.
  • antigen-specific CTL is known to specifically recognize and activate cells in which a cancer antigen-derived CTL epitope peptide is presented via an HLA molecule on the cell surface and kill the cells.
  • the target cell expresses the cancer antigen targeted by the CTL epitope 4-linked peptide
  • the antitumor effect can be exhibited. That is, regarding the tumor metastasis / recurrence-suppressing effect (therapeutic effect) of the CTL epitope 4-linked peptide, if the CTL epitope 4-linked peptide expresses the target cancer antigen, the effect is exerted.
  • the type of target tumor is not limited. All publications, patents and patent applications cited herein are incorporated herein by reference in their entirety.

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Abstract

顕著に優れた腫瘍の転移・再発抑制効果を示し、副作用の少ない腫瘍の術後補助療法剤の提供。　ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドを有効成分として含有する術後補助療法剤を提供する。

Description

術後補助療法剤
　本発明は、ＨＬＡ－Ａ拘束性にＣＴＬ誘導能を有するペプチドを４つ連結してなるＣＴＬエピトープ４連結ペプチドを用いた腫瘍の術後補助療法剤に関する。
　がんは日本人の死亡原因の第１位を占め年間約３５万人が死亡しており、今なお重篤な疾患である。確立されているがん治療法には主に手術療法、抗がん剤治療、放射線療法、およびがん免疫療法がある。進行度（ステージ）の低い早期がんの場合は、全てのがん細胞を取り去る根治的手術療法により高い治療成績が期待される。一方で、進行度の高いがんに対する根治的手術には限界があり、決して低くない頻度で局所再発や遠隔転移が起こることが報告されている。局所再発や遠隔転移が起こる原因は種々考えられているが、主に手術で肉眼には見えない小さな癌細胞を取り残したことや、既にがん細胞の一部が血行性転移やリンパ行性転移を起こしており、微細な腫瘍が別の臓器で増殖を始めていたことが原因と考えられている。
　特に遠隔転移による再発の場合、がん細胞は全身に散らばっていると考えられ、手術により全てのがん細胞を取り去ることが非常に困難である。したがって、遠隔転移したがんの治療法として、種々の化学療法、放射線療法、ならびに近年ではがん免疫療法が確立されてきた。これらの治療法は、分子レベル、細胞レベルでがん細胞を殺傷する作用機序が付与されているため、理論的には全身に分布したがん細胞を全て治療することが可能である。しかし、残念なことにかかる療法をもってしても最終的に全ての治療法が無効となり死に至るケースが大半であり、がん治療の大きな問題となっている。したがって、再発・転移がんの新規治療法の開発はがん制圧のための至上命題である。
　別の見方をすれば、重篤な転帰をもたらす可能性が高い遠隔転移を防げば、根治的手術の成功確率を高め、がん患者の転帰を大幅に改善できると考えられる。このような手術療法による目視できないがん細胞や微小な転移がん細胞を根絶させ、がんの再発や転移を予防する目的で実施される治療を、術後補助療法という。
　たとえば、本邦ではテガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤は治癒手術を受けたＳｔａｇｅＩＩ（ただし、Ｔ１を除く）、ＩＩＩＡ又はＩＩＩＢの胃がんの術後補助療法として治療法が確立されており、テガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤投与群は手術単独群と比較して死亡リスクを３２％低減させることが知られている（非特許文献１）。その他にも、肺癌、乳癌、大腸癌、子宮癌、悪性黒色腫等のがんにおいても、それぞれ術後補助療法が実施される。しかしながら、前述の例のように術後補助療法を行っても再発や遠隔転移を防げないケースは多く、治療成績を改善するための新規術後補助療法薬が求められている。
　近年は術後補助療法として化学療法を行う術後補助化学療法に加え、術後補助療法としてがん免疫療法を行う臨床試験も進められている。がん免疫療法は、がん細胞を直接殺傷できる免疫細胞、たとえば細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）やナチュラルキラー（ＮＫ）細胞等を誘導、移植、または活性化等させることでがん細胞を根絶する作用機序をもつ。従って、がん免疫療法は化学療法同様に目視できない微細な腫瘍やがん細胞に対し、全身で抗腫瘍効果を示しうる。
　がん免疫療法の一つであるがんペプチドワクチン療法は、長い間がんの新たな治療法として待望されている治療法である。がんペプチドワクチン療法では、がん細胞表面において抗原ペプチドを提示する主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）を、エピトープ特異的細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の細胞受容体（ＴＣＲ）が認識し、ＣＴＬががん細胞を傷害することで効果を発揮する。
　ヒトにおけるＭＨＣはヒト白血球抗原（ＨＬＡ）と呼ばれ、ＨＬＡの型は非常に多型性を示すことが知られている。そのため、特定のＨＬＡ型を対象としたがんペプチドワクチンの開発が実施されてきた。しかしながら、がんワクチンの対象となるＨＬＡ型は限定的であり、対象外のＨＬＡ型を有する患者はがんペプチドワクチンの恩恵を受けることができない問題点がある。さらには治療開始前にＨＬＡ型検査を要すことが、治療の開始時期を遅延させ、患者負担を増大させる一因となっている。以上より、ＨＬＡ型検査を必要とせず、全てのがん患者に適応可能ながんペプチドワクチンの開発・研究が望まれていた。
　この課題を解決するために、ＨＬＡ－Ａ２、ＨＬＡ－Ａ２４、ＨＬＡ－Ａ２６若しくはＨＬＡ－Ａ３スーパータイプのいずれか１つ又は複数のＨＬＡ型にＣＴＬ誘導能を示す様々なＣＴＬエピトープペプチドを連結したＣＴＬエピトープ４連結ペプチドが報告されている（特許文献１）。
　しかしながら、ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドが術後補助療法として効果を発揮するか否かについては、これまでには示されていない。
国際公開第２０１５／０６０２３５号公報
N Engl J Med.,357:1810-20(2007)
　本発明は、顕著に優れた腫瘍の転移・再発抑制効果を示し、副作用の少ない腫瘍の術後補助療法剤を提供することを課題とする。
　そこで本発明者は、腫瘍の転移・再発の動物モデルにＣＴＬエピトープ４連結ペプチドを投与し、腫瘍の転移・再発の抑制効果を検討したところ、重篤な副作用を発症させることなく、肺転移結節数が顕著に抑制されることを見出した。
　すなわち、本発明は、以下の発明〔１〕～〔１１〕を提供するものである。
　〔１〕リンカーを介して連結された４個のＣＴＬエピトープペプチドを含むＣＴＬエピトープ４連結ペプチドを有効成分として含有することを特徴とする腫瘍の術後補助療法剤であって、
　該ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドが、
　配列番号５で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ５）と、
　配列番号１で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ１）、配列番号２で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ２）、配列番号４で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ４）、配列番号６で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ６）、配列番号７で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ７）、配列番号８で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ８）、配列番号９で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ９）、配列番号１０で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ１０）、配列番号１３で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ１３）、配列番号１５で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ１５）、配列番号１７で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ１７）及び配列番号１８で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ１８）からなる群より選択される３個のエピトープペプチドが、
リンカーを介してそれぞれ連結されてなり、親水性アミノ酸からなるペプチド配列を更に有してもよい、ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドであって、以下の（１）～（３）より選択されるいずれか一つの特徴：
（１）Ｃ末端がＰＥＰ２である（ただし、Ｎ末端にＰＥＰ７及びＰＥＰ８をＮ末端側からリンカーを介して隣り合ってこの順で含むものを除く）；
（２）Ｃ末端がＰＥＰ４である；
（３）Ｃ末端がＰＥＰ１０である；
を有する、上記腫瘍の術後補助療法剤。
　〔２〕上記ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドに含まれるエピトープペプチドが、
　ＰＥＰ５、
　ＰＥＰ６、
　ＰＥＰ９、及び
　ＰＥＰ２、ＰＥＰ４及びＰＥＰ１０からなる群より選択される１個のエピトープペプチド、
から構成され、上記ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドのＣ末端がＰＥＰ２、ＰＥＰ４又はＰＥＰ１０である、〔１〕に記載の腫瘍の術後補助療法剤。
　〔３〕ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドが、以下より選択される配列からなる、〔１〕又は〔２〕に記載の腫瘍の術後補助療法剤：
・ＰＥＰ５－（Ｌ）－ＰＥＰ９－（Ｌ）－ＰＥＰ６－（Ｌ）－ＰＥＰ４；
・ＰＥＰ５－（Ｌ）－ＰＥＰ９－（Ｌ）－ＰＥＰ６－（Ｌ）－ＰＥＰ２；又は、
・ＰＥＰ５－（Ｌ）－ＰＥＰ９－（Ｌ）－ＰＥＰ６－（Ｌ）－ＰＥＰ１０；
なお、式中「（Ｌ）」はリンカーを示す。
　〔４〕ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドが、以下の配列からなる、〔１〕～〔３〕のいずれかに記載の腫瘍の術後補助療法剤：
・ＰＥＰ５－（Ｌ）－ＰＥＰ９－（Ｌ）－ＰＥＰ６－（Ｌ）－ＰＥＰ４
なお、式中「（Ｌ）」はリンカーを示す。
　〔５〕リンカーがアミノ酸リンカーである、〔１〕～〔４〕のいずれかに記載の腫瘍の術後補助療法剤。
　〔６〕アミノ酸リンカーが、アルギニンを２個連結したアルギニンダイマー、又はアルギニンを３個連結したアルギニントリマーである、〔５〕に記載の腫瘍の術後補助療法剤。
　〔７〕親水性アミノ酸からなるペプチド配列が、Ｎ末端に連結され、かつアルギニンを３個連結したアルギニントリマー、又はアルギニンを４個連結したアルギニンテトラマーからなる、〔１〕～〔６〕のいずれかに記載の腫瘍の術後補助療法剤。
　〔８〕ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドが、配列番号２４、配列番号２５、又は配列番号２６である、〔１〕～〔７〕のいずれかに記載の腫瘍の術後補助療法剤。
　〔９〕ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドが、配列番号２４である、〔１〕～〔８〕のいずれかに記載の腫瘍の術後補助療法剤。
　〔１０〕リンカーを介して連結された４個のＣＴＬエピトープペプチドを含むＣＴＬエピトープ４連結ペプチドを有効成分として含有することを特徴とする腫瘍の転移抑制剤であって、
　該ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドが、
　配列番号５で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ５）と、
　配列番号１で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ１）、配列番号２で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ２）、配列番号４で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ４）、配列番号６で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ６）、配列番号７で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ７）、配列番号８で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ８）、配列番号９で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ９）、配列番号１０で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ１０）、配列番号１３で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ１３）、配列番号１５で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ１５）、配列番号１７で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ１７）及び配列番号１８で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ１８）からなる群より選択される３個のエピトープペプチドが、
リンカーを介してそれぞれ連結されてなり、親水性アミノ酸からなるペプチド配列を更に有してもよい、ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドであって、以下の（１）～（３）より選択されるいずれか一つの特徴：
（１）Ｃ末端がＰＥＰ２である（ただし、Ｎ末端にＰＥＰ７及びＰＥＰ８をＮ末端側からリンカーを介して隣り合ってこの順で含むものを除く）；
（２）Ｃ末端がＰＥＰ４である；
（３）Ｃ末端がＰＥＰ１０である；
を有する、上記腫瘍の転移抑制剤。
〔１１〕リンカーを介して連結された４個のＣＴＬエピトープペプチドを含むＣＴＬエピトープ４連結ペプチドを有効成分として含有することを特徴とする腫瘍の再発抑制剤であって、
　該ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドが、
　配列番号５で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ５）と、
　配列番号１で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ１）、配列番号２で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ２）、配列番号４で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ４）、配列番号６で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ６）、配列番号７で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ７）、配列番号８で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ８）、配列番号９で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ９）、配列番号１０で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ１０）、配列番号１３で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ１３）、配列番号１５で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ１５）、配列番号１７で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ１７）及び配列番号１８で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ１８）からなる群より選択される３個のエピトープペプチドが、
リンカーを介してそれぞれ連結されてなり、親水性アミノ酸からなるペプチド配列を更に有してもよい、ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドであって、以下の（１）～（３）より選択されるいずれか一つの特徴：
（１）Ｃ末端がＰＥＰ２である（ただし、Ｎ末端にＰＥＰ７及びＰＥＰ８をＮ末端側からリンカーを介して隣り合ってこの順で含むものを除く）；
（２）Ｃ末端がＰＥＰ４である；
（３）Ｃ末端がＰＥＰ１０である；
を有する、上記腫瘍の再発抑制剤。
　本発明は、以下の態様にも関する。
・腫瘍の術後補助療法において使用するための上記〔１〕～〔１１〕で規定されるＣＴＬエピトープ４連結ペプチド。
・腫瘍の術後補助療法において使用するための配列番号２４で表されるＣＴＬエピトープ４連結ペプチド。
・腫瘍の転移抑制において使用するための上記〔１〕～〔１１〕で規定されるＣＴＬエピトープ４連結ペプチド。
・腫瘍の転移抑制において使用するための配列番号２４で表されるＣＴＬエピトープ４連結ペプチド。
・腫瘍の再発抑制において使用するための上記〔１〕～〔１１〕で規定されるＣＴＬエピトープ４連結ペプチド。
・腫瘍の再発抑制において使用するための配列番号２４で表されるＣＴＬエピトープ４連結ペプチド。
・上記〔１〕～〔１１〕で規定されるＣＴＬエピトープ４連結ペプチドを含む腫瘍の術後補助療法のための医薬組成物。
・配列番号２４で表されるＣＴＬエピトープ４連結ペプチドを含む腫瘍の術後補助療法のための医薬組成物。
・上記〔１〕～〔１１〕で規定されるＣＴＬエピトープ４連結ペプチドを含む腫瘍の転移抑制のための医薬組成物。
・配列番号２４で表されるＣＴＬエピトープ４連結ペプチドを含む腫瘍の転移抑制のための医薬組成物。
・上記〔１〕～〔１１〕で規定されるＣＴＬエピトープ４連結ペプチドを含む腫瘍の再発抑制のための医薬組成物。
・配列番号２４で表されるＣＴＬエピトープ４連結ペプチドを含む腫瘍の再発抑制のための医薬組成物。
・上記〔１〕～〔１１〕で規定されるＣＴＬエピトープ４連結ペプチドを、腫瘍の再発及び／又は転移治療に有効な量を患者に投与する工程を含む、腫瘍の術後補助療法。
・上記〔１〕～〔１１〕で規定されるＣＴＬエピトープ４連結ペプチドを、腫瘍の転移治療に有効な量を患者に投与する工程を含む、腫瘍の転移抑制方法。
・上記〔１〕～〔１１〕で規定されるＣＴＬエピトープ４連結ペプチドを、腫瘍の再発治療に有効な量を患者に投与する工程を含む、腫瘍の再発抑制方法。
　本明細書は本願の優先権の基礎となる日本国特許出願番号2019-236947号の開示内容を包含する。
　本発明の腫瘍の術後補助療法によれば、副作用の発症を抑えつつ、腫瘍の転移・再発抑制効果を奏する癌治療を行うことが可能である。ひいては、癌患者の長期間の生存をもたらす。
ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドＴＰＶ０７のＨＰＬＣのクロマトグラムを示す。 ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドＴＰＶ０８のＨＰＬＣのクロマトグラムを示す。 ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドＴＰＶ０７のマススペクトルを示す。 ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドＴＰＶ０８のマススペクトルを示す。 Ｂ１６Ｆ１０．Ａ２４／ＳＡＲＴ２９３－１０１細胞株を静脈内移植したマウスモデルにおけるＴＰＶ０６の肺転移結節数の抑制効果を示す。
　本発明は、ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドを有効成分として含有する腫瘍の術後補助療法剤に関する。本発明はまた、ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドを有効成分として含有する腫瘍の転移抑制剤に関する。本発明はまた、ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドを有効成分として含有する腫瘍の再発抑制剤に関する。
　本発明においてＣＴＬエピトープ４連結ペプチドは、同一及び／又は異なる腫瘍抗原分子由来のＣＴＬエピトープペプチドから選ばれる４つのペプチドを、リンカーを介して直鎖状に連結して１分子としたペプチドを意味する。
　腫瘍抗原分子由来のＣＴＬエピトープペプチドとしては、以下のようなものが知られている。
　　ＫＬＶＥＲＬＧＡＡ（配列番号１、本明細書において「ＰＥＰ１」と記載する、例えば国際公開第２００ｌ／０ｌ１０４４号）；
　　ＡＳＬＤＳＤＰＷＶ（配列番号２、本明細書において「ＰＥＰ２」と記載する、例えば国際公開第２００２／０１０３６９号）；
　　ＡＬＶＥＦＥＤＶＬ（配列番号３、本明細書において「ＰＥＰ３」と記載する、例えば国際公開第２００２／０１０３６９号）；
　　ＬＬＱＡＥＡＰＲＬ（配列番号４、本明細書において「ＰＥＰ４」と記載する、例えば国際公開第２０００／１２７０１号）；
　　ＤＹＳＡＲＷＮＥＩ（配列番号５、本明細書において「ＰＥＰ５」と記載する、例えば特開平１１－３１８４５５号）；
　　ＶＹＤＹＮＣＨＶＤＬ（配列番号６、本明細書において「ＰＥＰ６」と記載する、例えば国際公開第２０００／１２７０１号）；
　　ＬＹＡＷＥＰＳＦＬ（配列番号７、本明細書において「ＰＥＰ７」と記載する、例えば特開２００３－０００２７０号）；
　　ＤＹＬＲＳＶＬＥＤＦ（配列番号８、本明細書において「ＰＥＰ８」と記載する、例えば国際公開第２００１／０１１０４４号）；
　　ＱＩＲＰＩＦＳＮＲ（配列番号９、本明細書において「ＰＥＰ９」と記載する、例えば国際公開第２００８／００７７１１号）；
　　ＩＬＥＱＳＧＥＷＷＫ（配列番号１０、本明細書において「ＰＥＰ１０」と記載する、例えば国際公開第２００９／０２２６５２号）；
　　ＶＩＱＮＬＥＲＧＹＲ（配列番号１１、本明細書において「ＰＥＰ１１」と記載する、例えば国際公開第２００９／０２２６５２号）；
　　ＫＬＫＨＹＧＰＧＷＶ（配列番号１２、本明細書において「ＰＥＰ１２」と記載する、例えば国際公開第１９９９／０６７２８８号）；
　　ＲＬＱＥＷＣＳＶＩ（配列番号１３、本明細書において「ＰＥＰ１３」と記載する、例えば国際公開第２００２／０１０３６９号）；
　　ＩＬＧＥＬＲＥＫＶ（配列番号１４、本明細書において「ＰＥＰ１４」と記載する、例えば国際公開第２００２／０１０３６９号；
　　ＤＹＶＲＥＨＫＤＮＩ（配列番号１５、本明細書において「ＰＥＰ１５」と記載する、例えば国際公開第２００５／０７１０７５号）；
　　ＨＹＴＮＡＳＤＧＬ（配列番号１６、本明細書において「ＰＥＰ１６」と記載する、例えば国際公開第２００１／０１１０４４号）；
　　ＮＹＳＶＲＹＲＰＧＬ（配列番号１７、本明細書において「ＰＥＰ１７」と記載する、例えば特開２００３－０００２７０号）；
　　ＲＹＬＴＱＥＴＮＫＶ（配列番号１８、本明細書において「ＰＥＰ１８」と記載する、例えば国際公開第２００５／１１６０５６号）
　下記の表１に、ＣＴＬエピトープペプチドＰＥＰ１～ＰＥＰ１８の由来となるタンパク質の情報を記載する。これらのタンパク質は、腫瘍組織において高発現することが報告されている。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　本発明のＣＴＬエピトープ４連結ペプチドは、上記ＣＴＬエピトープペプチドのうち特定の１３種類（配列番号１で表されるペプチド「ＰＥＰ１」、配列番号２で表されるペプチド「ＰＥＰ２」、配列番号４で表されるペプチド「ＰＥＰ４」、配列番号５で表されるペプチド「ＰＥＰ５」、配列番号６で表されるペプチド「ＰＥＰ６」、配列番号７で表されるペプチド「ＰＥＰ７」、配列番号８で表されるペプチド「ＰＥＰ８」、配列番号９で表されるペプチドを「ＰＥＰ９」、配列番号１０で表されるペプチド「ＰＥＰ１０」、配列番号１３で表されるペプチド「ＰＥＰ１３」、配列番号１５で表されるペプチド「ＰＥＰ１５」、配列番号１７で表されるペプチド「ＰＥＰ１７」及び配列番号１８で表されるペプチド「ＰＥＰ１８」）から選択される４種類のＣＴＬエピトープペプチドがリンカーを介して直鎖状に連結したペプチドであり、各ＣＴＬエピトープペプチドに特異的なＣＴＬを３つ以上誘導、及び／又は、活性化することができる。なお、ＣＴＬエピトープペプチドに特異的な誘導を直接的に評価しなくても、イムノプロテアソームによる切断実験（国際公開第２０１５／０６０２３５号等）により、当該エピトープペプチドに特異的なＣＴＬ誘導の有無について判断することができる。
　本発明において、ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドは、
　配列番号５で表されるペプチド「ＰＥＰ５」と、
　配列番号１で表されるペプチド「ＰＥＰ１」、配列番号２で表されるペプチド「ＰＥＰ２」、配列番号４で表されるペプチド「ＰＥＰ４」、配列番号６で表されるペプチド「ＰＥＰ６」、配列番号７で表されるペプチド「ＰＥＰ７」、配列番号８で表されるペプチド「ＰＥＰ８」、配列番号９で表されるペプチド「ＰＥＰ９」、配列番号１０で表されるペプチド「ＰＥＰ１０」、配列番号１３で表されるペプチド「ＰＥＰ１３」、配列番号１５で表されるペプチド「ＰＥＰ１５」、配列番号１７で表されるペプチド「ＰＥＰ１７」及び配列番号１８で表されるペプチド「ＰＥＰ１８」からなる群より選択される３つのペプチドが、
リンカーを介してそれぞれ連結されてなる、
ペプチドである。
　本発明において、ＰＥＰ１、ＰＥＰ２、ＰＥＰ４、ＰＥＰ５、ＰＥＰ６、ＰＥＰ７、ＰＥＰ８、ＰＥＰ９、ＰＥＰ１０、ＰＥＰ１３、ＰＥＰ１５、ＰＥＰ１７、及びＰＥＰ１８の各アミノ酸配列において、一又は複数のアミノ酸が置換、挿入、欠失、及び／又は付加されたアミノ酸配列を有し、かつ、元のペプチドと同等又はそれ以上のＣＴＬ誘導能及び／又は免疫グロブリン産生誘導能を有するペプチドも、「ＣＴＬエピトープペプチド」として使用することができる。ここで「複数」とは２～３個、好ましくは２個である。このようなペプチドとしては、例えば、元のアミノ酸と類似した特性を有するアミノ酸で置換された（すなわち、保存的アミノ酸置換により得られた）ペプチドが挙げられる。
　「元のペプチドと同等又はそれ以上のＣＴＬ誘導能及び／又は免疫グロブリン産生誘導能を有するペプチド」であるか否かは、例えば、国際公開第２０１５／０６０２３５号パンフレットに記載の方法に準じて評価することができる。前記方法を用いて評価する場合、ＣＴＬ誘導能は、一又は複数のアミノ酸が置換、挿入、欠失、及び／又は付加されたアミノ酸配列を有する試験ペプチドを予め投与したマウス由来の細胞、同系マウス由来の抗原提示細胞及び試験ペプチドを添加したウェルにおけるＩＦＮ－γ産生細胞の数を指標とし、得られたΔ値の判定結果（陽性（１０≦Δ＜１００）、中陽性（１００≦Δ＜２００）、強陽性（２００≦Δ））が同等又はそれ以上であれば、元のペプチドと同等又はそれ以上のＣＴＬ誘導能を有するペプチドであると判断できる。この場合、元のペプチドが「陽性」であり、一又は複数のアミノ酸が置換、挿入、欠失、及び／又は付加されたアミノ酸配列を有するペプチドも「陽性」であれば同等と判断する。また、免疫グロブリン産生誘導能は、試験ペプチドを投与したマウス血清中のＣＴＬエピトープ特異的ＩｇＧ抗体価を指標とし、得られたＩｇＧ抗体価の増加（ｆｏｌｄ）の測定結果（２＜ｆｏｌｄ＜１０、１０≦ｆｏｌｄ＜１００、１００≦ｆｏｌｄ）が同等又はそれ以上であれば、同等又はそれ以上の免疫グロブリン産生誘導能を有するペプチドであると判断できる。この場合、元のペプチドの測定結果が「２＜ｆｏｌｄ＜１０」の範囲内であり、一又は複数のアミノ酸が置換、挿入、欠失、及び／又は付加されたアミノ酸配列を有するペプチドの測定結果も「２＜ｆｏｌｄ＜１０」の範囲内であれば同等と判断する。
　本発明において、リンカーは、ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドが生体に投与された際に切断され、連結されたＣＴＬエピトープペプチドが個々に分離されることを可能とするものであればよく、例えば、エステル結合、エーテル結合、アミド結合、糖鎖リンカー、ポリエチレングリコールリンカー、アミノ酸リンカーなどが挙げられる。アミノ酸リンカーとして用いられるアミノ酸配列としては、アルギニンダイマー（ＲＲ）、アルギニントリマー（ＲＲＲ）、アルギニンテトラマー（ＲＲＲＲ）、リジンダイマー（ＫＫ）、リジントリマー（ＫＫＫ）、リジンテトラマー（ＫＫＫＫ）、グリシンダイマー（ＧＧ）、グリシントリマー（ＧＧＧ）、グリシンテトラマー（ＧＧＧＧ）、グリシンペンタマー（ＧＧＧＧＧ）、グリシンヘキサマー（ＧＧＧＧＧＧ）、アラニン－アラニン－チロシン（ＡＡＹ）、イソロイシン－ロイシン－アラニン（ＩＬＡ）、アルギニン－バリン－リジン－アルギニン（ＲＶＫＲ）等が例示され、好ましくはアルギニンダイマー（ＲＲ）又はアルギニントリマー（ＲＲＲ）であり、より好ましくはアルギニンダイマー（ＲＲ）である。エピトープ連結ペプチドにおいて使用されるリンカーは当分野において知られており、当業者であれば適宜選択して使用することができる。
　本発明のＣＴＬエピトープ４連結ペプチドにおいて、選択されるＣＴＬエピトープペプチド、及びその連結順序は、所定の組合せ及び所定の連結順序で合成したＣＴＬエピトープ４連結ペプチドをヒトＨＬＡ－Ａ発現トランスジェニックマウスに投与し、ｉｎ　ｖｉｖｏにおいて各ＣＴＬエピトープペプチド特異的なＣＴＬ誘導の有無を評価し決定することができる。ｉｎ　ｖｉｖｏにおいて各ＣＴＬエピトープペプチド特異的なＣＴＬ誘導の有無を評価する方法は、例えば、国際公開第２０１５／０６０２３５号パンフレットに記載の方法に準じて評価することができる。選択されるＣＴＬエピトープペプチド、及びその連結順序は、当該方法を用いて、少なくとも３種以上、好ましくは４種のＣＴＬエピトープペプチドについて、各ＣＴＬエピトープペプチドに特異的なＣＴＬの誘導が見られたＣＴＬエピトープペプチド、及びその連結順序に決定することができる。
　本発明のＣＴＬエピトープ４連結ペプチドは、好ましくは、以下の（１）～（３）より選択されるいずれか１つの特徴を有する：
（１）Ｃ末端がＰＥＰ２である（ただし、Ｎ末端にＰＥＰ７及びＰＥＰ８をＮ末端側からリンカーを介して隣り合ってこの順で含むものを除く）；
（２）Ｃ末端がＰＥＰ４である；
（３）Ｃ末端がＰＥＰ１０である。
　従って、好ましくは、本発明のＣＴＬエピトープ４連結ペプチドは、
　配列番号５で表されるペプチド「ＰＥＰ５」と、
　配列番号１で表されるペプチド「ＰＥＰ１」、配列番号２で表されるペプチド「ＰＥＰ２」、配列番号４で表されるペプチド「ＰＥＰ４」、配列番号６で表されるペプチド「ＰＥＰ６」、配列番号７で表されるペプチド「ＰＥＰ７」、配列番号８で表されるペプチド「ＰＥＰ８」、配列番号９で表されるペプチド「ＰＥＰ９」、配列番号１０で表されるペプチド「ＰＥＰ１０」、配列番号１３で表されるペプチド「ＰＥＰ１３」、配列番号１５で表されるペプチド「ＰＥＰ１５」、配列番号１７で表されるペプチド「ＰＥＰ１７」及び配列番号１８で表されるペプチド「ＰＥＰ１８」からなる群より選択される３つのペプチドが、
リンカーを介してそれぞれ連結されてなり、以下の（１）～（３）より選択されるいずれか一つの特徴を有するペプチド：
（１）Ｃ末端がＰＥＰ２である（ただし、Ｎ末端にＰＥＰ７及びＰＥＰ８をＮ末端側からリンカーを介して隣り合ってこの順で含むものを除く）；
（２）Ｃ末端がＰＥＰ４である；
（３）Ｃ末端がＰＥＰ１０である。
　より好ましくは、本発明のＣＴＬエピトープ４連結ペプチドは、配列番号５で表されるペプチド「ＰＥＰ５」、配列番号６で表されるペプチド「ＰＥＰ６」及び配列番号９で表されるペプチド「ＰＥＰ９」と、
　配列番号２で表されるペプチド「ＰＥＰ２」、配列番号４で表されるペプチド「ＰＥＰ４」及び配列番号１０で表されるペプチド「ＰＥＰ１０」からなる群より選択される１つのペプチドが、
リンカーを介してそれぞれ連結されてなり、Ｃ末端がＰＥＰ２、ＰＥＰ４、又はＰＥＰ１０である。
　より好ましくは、本発明のＣＴＬエピトープ４連結ペプチドは、以下より選択される配列からなるペプチドである：
・ＰＥＰ５－（Ｌ）－ＰＥＰ６－（Ｌ）－ＰＥＰ９－（Ｌ）－ＰＥＰ４；
・ＰＥＰ９－（Ｌ）－ＰＥＰ５－（Ｌ）－ＰＥＰ６－（Ｌ）－ＰＥＰ４；
・ＰＥＰ６－（Ｌ）－ＰＥＰ５－（Ｌ）－ＰＥＰ９－（Ｌ）－ＰＥＰ４；
・ＰＥＰ６－（Ｌ）－ＰＥＰ９－（Ｌ）－ＰＥＰ５－（Ｌ）－ＰＥＰ４；
・ＰＥＰ９－（Ｌ）－ＰＥＰ６－（Ｌ）－ＰＥＰ５－（Ｌ）－ＰＥＰ４；
・ＰＥＰ５－（Ｌ）－ＰＥＰ９－（Ｌ）－ＰＥＰ６－（Ｌ）－ＰＥＰ４；
・ＰＥＰ５－（Ｌ）－ＰＥＰ９－（Ｌ）－ＰＥＰ６－（Ｌ）－ＰＥＰ２；又は、
・ＰＥＰ５－（Ｌ）－ＰＥＰ９－（Ｌ）－ＰＥＰ６－（Ｌ）－ＰＥＰ１０。
なお、式中「（Ｌ）」はリンカーを示す。
　より好ましくは、本発明のＣＴＬエピトープ４連結ペプチドは、以下より選択される配列からなるペプチドである：
・ＰＥＰ５－（Ｌ）－ＰＥＰ９－（Ｌ）－ＰＥＰ６－（Ｌ）－ＰＥＰ４；
・ＰＥＰ５－（Ｌ）－ＰＥＰ９－（Ｌ）－ＰＥＰ６－（Ｌ）－ＰＥＰ２；又は、
・ＰＥＰ５－（Ｌ）－ＰＥＰ９－（Ｌ）－ＰＥＰ６－（Ｌ）－ＰＥＰ１０。
なお、式中「（Ｌ）」はリンカーを示す。
　より好ましくは、本発明のＣＴＬエピトープ４連結ペプチドは、リンカーがアルギニンダイマーである、以下より選択される配列で表されるペプチド：
・ＰＥＰ５－ＲＲ－ＰＥＰ９－ＲＲ－ＰＥＰ６－ＲＲ－ＰＥＰ４（配列番号２４、本明細書においてＴＰＶ０６と記載する）；
・ＰＥＰ５－ＲＲ－ＰＥＰ９－ＲＲ－ＰＥＰ６－ＲＲ－ＰＥＰ２（配列番号２５、本明細書においてＴＰＶ０７と記載する）；又は、
・ＰＥＰ５－ＲＲ－ＰＥＰ９－ＲＲ－ＰＥＰ６－ＲＲ－ＰＥＰ１０（配列番号２６、本明細書においてＴＰＶ０８と記載する）
であり、
　より好ましくは、本発明のＣＴＬエピトープ４連結ペプチドは、配列番号２４で表されるペプチドＴＰＶ０６である。
　本発明の態様の１つにおいて、ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドは、好ましくは、以下の表２に示す配列番号１９～２８より選択される配列で表されるペプチドである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　より好ましくは、ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドは、上記表２に挙げたものから選択される、以下のペプチド：
・ＴＰＶ０１（配列番号１９）；
・ＴＰＶ０２（配列番号２０）；
・ＴＰＶ０３（配列番号２１）；
・ＴＰＶ０４（配列番号２２）；
・ＴＰＶ０５（配列番号２３）；又は、
・ＴＰＶ０６（配列番号２４）；
である。
　また、本発明において、ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドは２種以上使用されても良く、例えば、２種、３種、４種又はそれ以上のＣＴＬエピトープ４連結ペプチドを別個に、または混合して使用しても良く、３種のＣＴＬエピトープ４連結ペプチドを混合して使用するのが好ましい。ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドを２種以上使用する場合、本発明のＣＴＬエピトープ４連結ペプチドが少なくとも１種含まれていれば、残りの１種以上は本発明のＣＴＬエピトープ４連結ペプチドであっても良いし、例えば国際公開第２０１５／０６０２３５号に記載のもののようなＣＴＬエピトープ４連結ペプチドであっても良い。配列番号２４で表されるペプチドと国際公開第２０１５／０６０２３５号に記載のＣＴＬエピトープ４連結ペプチドを１種以上使用するのが好ましく、配列番号２４で表されるペプチドと国際公開第２０１５／０６０２３５号に記載のＣＴＬエピトープ４連結ペプチドを２種使用するのがより好ましく、配列番号２４で表されるペプチド、配列番号２９で表されるペプチド（ＴＰＶ０１１：ＰＥＰ１５－ＲＲ－ＰＥＰ１８－ＲＲ－ＰＥＰ１－ＲＲ－ＰＥＰ１０）及び配列番号３０で表されるペプチド（ＴＰＶ０１２：ＲＲＲＲ－ＰＥＰ７－ＲＲ－ＰＥＰ１３－ＲＲ－ＰＥＰ８－ＲＲ－ＰＥＰ２）の３種類を混合して使用するのがさらにより好ましい。
　本発明のＣＴＬエピトープ４連結ペプチドは、さらに親水性アミノ酸からなるペプチド配列を有することができる。当該ペプチド配列は、ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドのＮ末端及び／又はＣ末端に付加することができ、好ましくはＮ末端に付加する。当該ペプチド配列は、アルギニン、ヒスチジン、リジン、トレオニン、チロシン、セリン、アスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸、及びグルタミン酸からなる群から選択される１～１５個、好ましくは２～１０個、さらに好ましくは３～５個の親水性アミノ酸からなるものを選択することができる。例えば当該ペプチド配列として、アルギニントリマー（ＲＲＲ）やアルギニンテトラマー（ＲＲＲＲ）を利用することができ、このようなペプチド配列が付加されたＣＴＬエピトープ４連結ペプチドとしては、ＲＲＲ－ＴＰＶ０６、ＲＲＲＲ－ＴＰＶ０６、ＴＰＶ０６－ＲＲＲ、ＴＰＶ０６－ＲＲＲＲ、ＲＲＲ－ＴＰＶ０７、ＲＲＲＲ－ＴＰＶ０７、ＴＰＶ０７－ＲＲＲ、ＴＰＶ０７－ＲＲＲＲ、ＲＲＲ－ＴＰＶ０８、ＲＲＲＲ－ＴＰＶ０８、ＴＰＶ０８－ＲＲＲ、ＴＰＶ０８－ＲＲＲＲ、ＫＫＫ－ＴＰＶ０６、ＫＫＫＫ－ＴＰＶ０６、ＴＰＶ０６－ＫＫＫ、ＴＰＶ０６－ＫＫＫＫ、ＫＫＫ－ＴＰＶ０７、ＫＫＫＫ－ＴＰＶ０７、ＴＰＶ０７－ＫＫＫ、ＴＰＶ０７－ＫＫＫＫ、ＫＫＫ－ＴＰＶ０８、ＫＫＫＫ－ＴＰＶ０８、ＴＰＶ０８－ＫＫＫ、ＴＰＶ０８－ＫＫＫＫ、ＨＨＨ－ＴＰＶ０６、ＨＨＨＨ－ＴＰＶ０６、ＴＰＶ０６－ＨＨＨ、ＴＰＶ０６－ＨＨＨＨ、ＨＨＨ－ＴＰＶ０７、ＨＨＨＨ－ＴＰＶ０７、ＴＰＶ０７－ＨＨＨ、ＴＰＶ０７－ＨＨＨＨ、ＨＨＨ－ＴＰＶ０８、ＨＨＨＨ－ＴＰＶ０８、ＴＰＶ０８－ＨＨＨ、ＴＰＶ０８－ＨＨＨＨ、ＲＲＫＫ－ＴＰＶ０６、ＲＫＲＫ－ＴＰＶ０６、ＲＨＲＨ－ＴＰＶ０６、ＲＲＨＨ－ＴＰＶ０６、ＫＫＨＨ－ＴＰＶ０６、ＫＨＫＨ－ＴＰＶ０６等が例示され、好ましくはＲＲＲ－ＴＰＶ０６、ＲＲＲＲ－ＴＰＶ０６、ＲＲＲ－ＴＰＶ０７、ＲＲＲＲ－ＴＰＶ０７、ＲＲＲ－ＴＰＶ０８、ＲＲＲＲ－ＴＰＶ０８、ＫＫＫ－ＴＰＶ０６、ＫＫＫＫ－ＴＰＶ０６、ＫＫＫ－ＴＰＶ０７、ＫＫＫＫ－ＴＰＶ０７、ＫＫＫ－ＴＰＶ０８、ＫＫＫＫ－ＴＰＶ０８、ＨＨＨ－ＴＰＶ０６、ＨＨＨＨ－ＴＰＶ０６、ＨＨＨ－ＴＰＶ０７、ＨＨＨＨ－ＴＰＶ０７、ＨＨＨ－ＴＰＶ０８、ＨＨＨＨ－ＴＰＶ０８、ＲＲＫＫ－ＴＰＶ０６、ＲＫＲＫ－ＴＰＶ０６、ＲＨＲＨ－ＴＰＶ０６、ＲＲＨＨ－ＴＰＶ０６、ＫＫＨＨ－ＴＰＶ０６、ＫＨＫＨ－ＴＰＶ０６であり、さらに好ましくはＲＲＲ－ＴＰＶ０６（ＴＰＶ０９）、ＲＲＲＲ－ＴＰＶ０６（ＴＰＶ１０）、ＲＲＲ－ＴＰＶ０７、ＲＲＲＲ－ＴＰＶ０７、ＲＲＲ－ＴＰＶ０８、ＲＲＲＲ－ＴＰＶ０８であり、最も好ましくはＲＲＲ－ＴＰＶ０６（ＴＰＶ０９）、ＲＲＲＲ－ＴＰＶ０６（ＴＰＶ１０）である。
　親水性アミノ酸からなる当該ペプチド配列が付加されたペプチドは、水性溶媒への溶解度が向上することが知られている（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：３８，３０２－３１１（２０１２）、特開２００６－１８８５０７）。本発明のＣＴＬエピトープ４連結ペプチドに当該ペプチド配列を付加することによって、水性溶媒へのＣＴＬエピトープ４連結ペプチドの溶解度を向上することができる。
　本発明の「親水性アミノ酸からなるペプチド配列を更に有していてもよい、ＣＴＬエピトープ４連結ペプチド」は、好ましくはＮ末端に親水性アミノ酸からなるペプチド配列を有していてもよいＣＴＬエピトープ４連結ペプチドであり、より好ましくはＮ末端にアルギニン、ヒスチジン及びリジンからなる群から選択される３～５個の親水性アミノ酸からなるペプチド配列を有していてもよいＣＴＬエピトープ４連結ペプチドであり、より好ましくはＮ末端にアルギニントリマー（ＲＲＲ）又はアルギニンテトラマー（ＲＲＲＲ）を有していてもよいＣＴＬエピトープ４連結ペプチドであり、より好ましくは親水性アミノ酸からなるペプチド配列を有さないＣＴＬエピトープ４連結ペプチドである。
　なお、本発明のＣＴＬエピトープ４連結ペプチドは、例えば、国際公開第２０１５／０６０２３５号パンフレットに記載の方法に準じて合成することができる。
　本発明において「術後補助療法」とは、手術後に腫瘍の再発及び／又は転移を治療あるいは抑制する方法である。本発明の術後補助療法は、本明細書に記載されるＣＴＬエピトープ４連結ペプチドを、腫瘍摘出後の患者に投与するステップを含む。
　本発明の対象となる患者は、限定するものではないが、ヒトで特に有効な効果を得ることができる。
　本発明において使用されるＣＴＬエピトープ４連結ペプチドのヒトにおける推奨用量は、好ましくはＣＴＬエピトープ４連結ペプチド１種あたり３～９ｍｇ／ｂｏｄｙ／ｄａｙの範囲である。
　なお、本発明において「推奨用量」とは、臨床試験などにより決定された、重篤な副作用を発症せずに安全に使用できる範囲で、最大の治療効果をもたらす投与量でありうる。具体的には、日本独立行政法人医薬品医療機器総合機構（ＰＭＤＡ；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ　ａｎｄ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｄｅｖｉｃｅｓ　Ａｇｅｎｃｙ）、米国食品医薬品局（ＦＤＡ；Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ｄｒｕｇ　Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）、欧州医薬品庁（ＥＭＡ；Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ　Ａｇｅｎｃｙ）等の公的機関や団体により承認・推奨・勧告され、添付文書・インタビューフォーム・治療ガイドライン等に記載された投与量が挙げられ、ＰＭＤＡ、ＦＤＡ又はＥＭＡのいずれかの公的機関により承認された投与量が好ましい。
　本発明の腫瘍の術後補助療法剤、転移抑制剤及び再発抑制剤の投与スケジュールは、腫瘍の種類や病期等に応じて適宜選択しうる。
　ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドは、１週間に１回投与する工程を３回（１日目、８日目、１５日目に１日１回）繰り返す計２１日間を１サイクルとした投与スケジュールが好ましい。また、３サイクル目以降は、１日目に投与し２０日間の休薬を行う（３週間に１回投与する方法）計２１日間を１サイクルとした投与スケジュールが好ましい。
　本発明のＣＴＬエピトープ４連結ペプチドの１日の投与回数は、癌種や病期等に応じて適宜選択しうる。ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドの１日の投与回数は、１回が好ましい。
　本発明において対象となる腫瘍は、腫瘍の術後補助療法において抗腫瘍効果を奏する範囲であれば特に制限されないが、好ましくはＣＴＬエピトープ４連結ペプチドが腫瘍の術後補助療法において抗腫瘍効果を発揮する腫瘍であり、より好ましくはＬｃｋ、ＷＨＳＣ２、ＳＡＲＴ２、ＳＡＲＴ３、ＭＲＰ３、ＵＢＥ２Ｖ、ＥＧＦＲ、又はＰＴＨｒＰ陽性の悪性腫瘍であり、より好ましくはＳＡＲＴ２陽性の悪性腫瘍である。
　本発明の対象となる癌としては、具体的には、脳腫瘍、頭頚部癌、消化器癌（食道癌、胃癌、十二指腸癌、肝臓癌、胆道癌（胆嚢・胆管癌など）、膵臓癌、小腸癌、大腸癌（結腸直腸癌、結腸癌、直腸癌など）、消化管間質腫瘍など）、肺癌（非小細胞肺癌、小細胞肺癌）、乳癌、卵巣癌、子宮癌（子宮頚癌、子宮体癌など）、腎癌、尿路上皮癌（膀胱癌、腎盂癌、尿管癌）、前立腺癌、皮膚癌、原発不明癌等が挙げられる。なお、ここで癌には、原発巣のみならず、他の臓器（肝臓など）に転移した癌をも含む。このうち、抗腫瘍効果の観点から、頭頸部癌、消化器癌、肺癌、腎癌、尿路上皮癌、皮膚癌が好ましく、消化器癌、肺癌、尿路上皮癌、皮膚癌がより好ましく、肺癌、尿路上皮癌が特に好ましい。
　本発明の腫瘍の術後補助療法剤、転移抑制剤及び再発抑制剤の投与形態としては特に制限は無く、治療目的に応じて適宜選択でき、具体的には経口剤（錠剤、被覆錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤など）、注射剤、坐剤、貼付剤、軟膏剤等が例示でき、好ましくは注射剤である。
　本発明における腫瘍の術後補助療法剤、転移抑制剤及び再発抑制剤は、薬学的に許容される担体を用いて、通常公知の方法により調製することができる。斯かる担体としては、通常の薬剤に汎用される各種のもの、例えば賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、希釈剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、ｐＨ調整剤、緩衝剤、安定化剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤等を例示できる。
　本発明の術後補助療法剤、転移抑制剤及び再発抑制剤の有効成分であるＣＴＬエピトープ４連結ペプチドは、含まれるエピトープを発現する細胞のみを特異的に標的とすることができる。従って、従来の術後補助療法剤、転移抑制剤及び再発抑制剤として用いられる抗がん剤と比較して、重篤な副作用を生じることなく、患者の負担を軽減しつつ、効果的に用いることができる。
　抗がん効果の確認は、動物モデルを用いて行うことが多いが、移植した腫瘍の増殖や腫瘍を移植された動物の生存率を指標とすることが一般的である。これに対して術後補助療法剤、転移抑制剤及び再発抑制剤の効果は、動物モデルに一旦移植した腫瘍を切除するよりも、転移に対する効果を確認することがより好適であると考えられる。従って、本発明の腫瘍の術後補助療法剤、転移抑制剤及び再発抑制剤の効果は、例えば腫瘍の移植部位とは異なる場所での腫瘍発生、すなわち転移を生じる動物モデルを用いて確認することができる。
　また、本発明の術後補助療法剤、転移抑制剤及び再発抑制剤の有効成分であるＣＴＬエピトープ４連結ペプチドは、ＨＬＡ－Ａ拘束性にＣＴＬ誘導能等を有するものであるため、効果を確認するために使用する動物モデルは、ＨＬＡ－Ａ分子を発現するものであることが必要となる。
　そのようなモデルとして、特に限定するものではないが、例えばＨＬＡ－Ａ遺伝子ノックインの非免疫不全非ヒト動物を挙げることができる。ＨＬＡ－Ａ遺伝子ノックインの非免疫不全非ヒト動物は、ヒトＨＬＡ－Ａのα１及びα２領域を有する非免疫不全非ヒト動物であれば良く、例えば国際公開第２０１５／０５６７７４号並びにＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ：１９８，５１６－５２７（２０１７）で開示されたヒトＨＬＡ－Ａ２４遺伝子ノックインマウス（Ｂ２ｍｔｍ２（ＨＬＡ－Ａ２４／Ｈ－２Ｄｂ／Ｂ２Ｍ）Ｔａｉマウス）を好適に使用することができる。
　次に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例により何ら限定されるものではなく、多くの変形が本発明の技術的思想内で当分野において通常の知識を有する者により可能である。
［実施例１　ペプチドの合成・精製］
　エピトープ４連結ペプチドＴＰＶ０７及びＴＰＶ０８を、自動ペプチド合成機Ｐｒｅｌｕｄｅ（Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を用いて、９－フルオレニルメチル－オキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）法による固相ペプチド合成法にて合成した。すなわち、Ｗａｎｇ－ＣｈｅｍＭａｔｒｉｘ樹脂にα－アミノ基がＦｍｏｃ基で、側鎖官能基が一般的な保護基で保護されたアミノ酸を１－（メシチレン－２－スルホニル）－３－ニトロ－１，２，４－トリアゾール／Ｎ－メチルイミダゾール／ジクロロメタン条件により縮合し、樹脂へのＣ末端アミノ酸の担持を完了した。これにデブロッキング液（２０％　ピペリジン／Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ））を注入してＦｍｏｃ基を除去した後に、α－アミノ基がＦｍｏｃ基で、側鎖官能基が一般的な保護基で保護されたアミノ酸を１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－５－クロロ－１Ｈ－ベンゾ－トリアゾリウム　３－オキシド　ヘキサフルオロホスフェート（ＨＣＴＵ）／Ｎ－メチルモルホリン（ＮＭＭ）／ＤＭＦ条件によって縮合し、ジペプチドを合成した。デブロッキング液によるＦｍｏｃ基の脱保護とＨＣＴＵ／ＮＭＭ／ＤＭＦ条件によるアミノ酸の縮合操作を繰り返すことにより、目的とする配列を有するペプチドを合成した。保護ペプチド樹脂の合成完了後、脱保護溶液（２．５％　トリイソプロピルシラン、２．５％　水、２．５％１，２－エタンジチオール、９２．５％　トリフルオロ酢酸）を保護ペプチド樹脂に加えて、４時間反応することによってペプチド側鎖保護基の除去と共に、樹脂から遊離ペプチドを切り出した。樹脂をろ去し、得られたろ液を冷エーテルに添加することにより、ペプチドを沈澱として回収した。得られた各種合成ペプチドはＰｒｏｔｅｏｎａｖｉカラム（ＳＨＩＳＥＩＤＯ）にて溶媒系に０．１％　ＴＦＡ水溶液及びアセトニトリルを用いて精製した。最終精製ペプチドはＣＡＰＣＥＬＬ　ＰＡＫ　ＵＧ１２０カラム（ＳＨＩＳＥＩＤＯ）及びＨＰＬＣシステム（ＨＩＴＡＣＨＩ）により純度を確認した。また、ＥＳＩ－ＭＳシステム（Ｓｙｎａｐｔ　ＨＤＭＳ、ＷＡＴＥＲＳ）により分子量を確認し、凍結乾燥後冷温暗所にて保存し、以降に示す実施例に供した。
　ＴＰＶ０７及びＴＰＶ０８のマススペクトル（ＭＳ）分析により測定した分子量を表３に示す。さらにＴＰＶ０７及びＴＰＶ０８のＨＰＬＣのクロマトグラム及びＭＳを図１～図４に示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
　ＴＰＶ０１～ＴＰＶ０６、ＴＰＶ０９～ＴＰＶ１２は、例えば、国際公開第２０１５／０６０２３５号パンフレットに記載の方法に準じて合成することもできるし、上記に示したＴＰＶ０７及びＴＰＶ０８と同様の方法に準じて合成することもできる。いずれのペプチドも、純度９０％以上のものが得られた。
［実施例２　Ｂ１６Ｆ１０.Ａ２４／ＳＡＲＴ２９３－１０１細胞株肺転移モデルにおけるＴＰＶ０６の効果］
　１１週齢のＢ２ｍｔｍ２（ＨＬＡ－Ａ２４／Ｈ－２Ｄｂ／Ｂ２Ｍ）Ｔａｉマウス（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ：１９８，５１６－５２７（２０１７））を、ランダムに各群１０匹ずつ割り付けた。群分けを実施した日をＤａｙ０とした。
　Ｂ１６Ｆ１０.Ａ２４／ＳＡＲＴ２９３－１０１細胞株（ＰＬｏＳ　Ｏｎｅ：１３，ｅ０１９９２４９（２０１８））は１０％ ＦＢＳを含むＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ’ｓ　Ｍｅｄｉｕｍ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）培地を用いて、培養した。Ｂ１６Ｆ１０.Ａ２４／ＳＡＲＴ２９３－１０１は、３７℃、５％ＣＯ２インキュベータ中において、週２回、１：２５～１：４０比率で継代した。
　マウス群分け後の同日に（Ｄａｙ０）、Ｄ－ＰＢＳ（富士フイルム和光純薬）を用いて調製したＢ１６Ｆ１０.Ａ２４／ＳＡＲＴ２９３－１０１細胞懸濁液を、マウス尾静脈内に１×１０６細胞／０．１ｍＬずつ移植した。
　本マウスモデルは血中に移植した腫瘍細胞が肺にて再発することが確認されている。従って、ヒトにおけるがんの転移による再発メカニズムを模しているといえ、このモデルにおける効果を確認することで、転移・再発の抑制効果を確認することができる。
　エピトープ４連結ペプチドＴＰＶ０６（配列番号２４）を蒸留水（大塚製薬工場）に溶解して６ｍｇ／ｍＬのペプチド溶液を調製し、Ｂ　Ｂｒａｕｎ Ｉｎｊｅｋｔシリンジ（ビー・ブラウンエースクラップ）に充填した。別のシリンジに等量のＭｏｎｔａｎｉｄｅ　ＩＳＡ　５１　ＶＧ（ＳＥＰＰＩＣ）を充填後、両シリンジをコネクタにて接続し、ペプチド溶液とＭｏｎｔａｎｉｄｅ　ＩＳＡ　５１　ＶＧをよく混合することで、エマルジョンを調製した。また、コントロールとして、蒸留水と等量のＭｏｎｔａｎｉｄｅ　ＩＳＡ　５１　ＶＧを混合したエマルジョンを調製した。これらをＢ２ｍｔｍ２（ＨＬＡ－Ａ２４／Ｈ－２Ｄｂ／Ｂ２Ｍ）Ｔａｉマウスの尾根部周辺の皮下に１００μＬずつ週１回、計３回投与した（Ｄａｙ１，８，１５）。
　Ｂ１６Ｆ１０.Ａ２４／ＳＡＲＴ２９３－１０１細胞株移植後２８日後（Ｄａｙ２８）、肺を摘出し、肺転移結節数を目視で測定した。
　図５に示すように、ＴＰＶ０６投与群はコントロール群に比べ、有意（ｐ＝０．００１４，Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ　ｔ-ｔｅｓｔ）に肺転移結節数が抑制された。
　以上の結果は、ＴＰＶ０６を投与することによりＳＡＲＴ２９３－１０１を発現する腫瘍細胞の転移・再発が顕著に抑制され得ることを示している。したがって、ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドは腫瘍の転移・再発の治療に有用である。
　一般的に抗原特異的ＣＴＬは、がん抗原由来ＣＴＬエピトープペプチドが細胞表面上のＨＬＡ分子を介して抗原提示されている細胞を特異的に認識、活性化し、その細胞を殺傷することが知られている（Ｊａｎｅｗａｙ’ｓ　Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，７ｔｈ　ｅｄｉｔｉｏｎ）。したがって、標的細胞がＣＴＬエピトープ４連結ペプチドの標的とするがん抗原を発現していれば抗腫瘍効果を発現しうる。すなわち、かかるＣＴＬエピトープ４連結ペプチドの腫瘍の転移・再発の抑制効果（治療効果）に関しては、当該ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドが標的とするがん抗原を発現していれば効果を発揮するため、治療標的となる腫瘍の種類は限定されない。
　本明細書で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願はそのまま引用により本明細書に組み入れられるものとする。

Claims (9)

  1. 　リンカーを介して連結された４個のＣＴＬエピトープペプチドを含むＣＴＬエピトープ４連結ペプチドを有効成分として含有することを特徴とする腫瘍の術後補助療法剤であって、
    　該ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドが、
    　配列番号５で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ５）と、
    　配列番号１で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ１）、配列番号２で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ２）、配列番号４で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ４）、配列番号６で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ６）、配列番号７で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ７）、配列番号８で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ８）、配列番号９で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ９）、配列番号１０で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ１０）、配列番号１３で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ１３）、配列番号１５で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ１５）、配列番号１７で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ１７）及び配列番号１８で表されるエピトープペプチド（ＰＥＰ１８）からなる群より選択される３個のエピトープペプチドが、
    リンカーを介してそれぞれ連結されてなり、親水性アミノ酸からなるペプチド配列を更に有してもよい、ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドであって、以下の（１）～（３）より選択されるいずれか一つの特徴：
    （１）Ｃ末端がＰＥＰ２である（ただし、Ｎ末端にＰＥＰ７及びＰＥＰ８をＮ末端側からリンカーを介して隣り合ってこの順で含むものを除く）；
    （２）Ｃ末端がＰＥＰ４である；
    （３）Ｃ末端がＰＥＰ１０である；
    を有する、上記腫瘍の術後補助療法剤。
  2. 　上記ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドに含まれるエピトープペプチドが、
    　ＰＥＰ５、
    　ＰＥＰ６、
    　ＰＥＰ９、及び
    　ＰＥＰ２、ＰＥＰ４及びＰＥＰ１０からなる群より選択される１個のエピトープペプチド、
    から構成され、上記ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドのＣ末端がＰＥＰ２、ＰＥＰ４又はＰＥＰ１０である、請求項１に記載の腫瘍の術後補助療法剤。
  3. 　ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドが、以下より選択される配列からなる、請求項１又は２に記載の腫瘍の術後補助療法剤：
    ・ＰＥＰ５－（Ｌ）－ＰＥＰ９－（Ｌ）－ＰＥＰ６－（Ｌ）－ＰＥＰ４；
    ・ＰＥＰ５－（Ｌ）－ＰＥＰ９－（Ｌ）－ＰＥＰ６－（Ｌ）－ＰＥＰ２；又は、
    ・ＰＥＰ５－（Ｌ）－ＰＥＰ９－（Ｌ）－ＰＥＰ６－（Ｌ）－ＰＥＰ１０；
    なお、式中「（Ｌ）」はリンカーを示す。
  4. 　ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドが、以下の配列からなる、請求項１～３のいずれか１項に記載の腫瘍の術後補助療法剤：
    ・ＰＥＰ５－（Ｌ）－ＰＥＰ９－（Ｌ）－ＰＥＰ６－（Ｌ）－ＰＥＰ４
    なお、式中「（Ｌ）」はリンカーを示す。
  5. 　リンカーがアミノ酸リンカーである、請求項１～４のいずれか１項に記載の腫瘍の術後補助療法剤。
  6. 　アミノ酸リンカーが、アルギニンを２個連結したアルギニンダイマー、又はアルギニンを３個連結したアルギニントリマーである、請求項５に記載の腫瘍の術後補助療法剤。
  7. 　親水性アミノ酸からなるペプチド配列が、Ｎ末端に連結され、かつアルギニンを３個連結したアルギニントリマー、又はアルギニンを４個連結したアルギニンテトラマーからなる、請求項１～６のいずれか１項に記載の腫瘍の術後補助療法剤。
  8. 　ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドが、配列番号２４、配列番号２５、又は配列番号２６である、請求項１～７のいずれか１項に記載の腫瘍の術後補助療法剤。
  9. 　ＣＴＬエピトープ４連結ペプチドが、配列番号２４である、請求項１～８のいずれか１項に記載の腫瘍の術後補助療法剤。
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