[go: up one dir, main page]

WO2019188354A1 - 免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定を補助する方法、試薬キット、装置及びコンピュータプログラム - Google Patents

免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定を補助する方法、試薬キット、装置及びコンピュータプログラム Download PDF

Info

Publication number
WO2019188354A1
WO2019188354A1 PCT/JP2019/010601 JP2019010601W WO2019188354A1 WO 2019188354 A1 WO2019188354 A1 WO 2019188354A1 JP 2019010601 W JP2019010601 W JP 2019010601W WO 2019188354 A1 WO2019188354 A1 WO 2019188354A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
free
immune checkpoint
checkpoint inhibitor
subject
ctla
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2019/010601
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
本庶　佑
健司 茶本
秀敏 林
中川　和彦
恵 後藤
均 宇賀
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sysmex Corp
Ono Pharmaceutical Co Ltd
Kindai University
Kyoto University NUC
Original Assignee
Sysmex Corp
Ono Pharmaceutical Co Ltd
Kindai University
Kyoto University NUC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sysmex Corp, Ono Pharmaceutical Co Ltd, Kindai University, Kyoto University NUC filed Critical Sysmex Corp
Priority to CN201980022487.4A priority Critical patent/CN111919119A/zh
Priority to EP19774196.0A priority patent/EP3779450A4/en
Priority to JP2019547535A priority patent/JP6719117B2/ja
Publication of WO2019188354A1 publication Critical patent/WO2019188354A1/ja
Priority to US17/029,361 priority patent/US20210003579A1/en
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G01N33/57585—
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • G01N33/5752—
    • G01N33/5755—
    • G01N33/57557—
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
    • G01N2333/70521—CD28, CD152
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
    • G01N2333/70532—B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
    • G—PHYSICS
    • G16—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR SPECIFIC APPLICATION FIELDS
    • G16H—HEALTHCARE INFORMATICS, i.e. INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR THE HANDLING OR PROCESSING OF MEDICAL OR HEALTHCARE DATA
    • G16H50/00—ICT specially adapted for medical diagnosis, medical simulation or medical data mining; ICT specially adapted for detecting, monitoring or modelling epidemics or pandemics
    • G16H50/20—ICT specially adapted for medical diagnosis, medical simulation or medical data mining; ICT specially adapted for detecting, monitoring or modelling epidemics or pandemics for computer-aided diagnosis, e.g. based on medical expert systems

Definitions

  • the present invention relates to a method for assisting in determining the efficacy of an immune checkpoint inhibitor.
  • the present invention also relates to a reagent kit for use in this method.
  • the present invention relates to an apparatus and a computer program for determining the response of an immune checkpoint inhibitor.
  • a receptor molecule called PD-1 is expressed on the surface of activated T cells (see Non-patent Document 1).
  • PD-1 is known as a molecule that suppresses excessive activation of T cells and negatively regulates the immune response of the living body.
  • CTLA-4 Cytotoxic T lymphocyte antigen-4
  • CTLA-4 also has a function of suppressing the activation of T cells, like PD-1.
  • some cancer local cells express PD-L1 (Programmed cell death-ligand 1), which is a ligand for PD-1, on the cell surface.
  • Such cancer local cells are known to suppress the activation of T cells through the binding of their own PD-L1 and PD-1 of T cells, and avoid T cell attack. .
  • cancer increases in vivo.
  • PD-L1, PD-1 and CTLA-4 are also called immune checkpoint molecules because they are involved in the control of immunity.
  • immune checkpoint inhibitors In recent years, antibodies against immune checkpoint molecules have attracted attention as new therapeutic agents for cancer. Formulations containing these antibodies as active ingredients are also called immune checkpoint inhibitors.
  • the immune checkpoint inhibitor promotes the activation of T cells by inhibiting the above-described molecule that suppresses the activation of T cells, and enhances the antitumor response of the T cells. That is, in the treatment with an immune checkpoint inhibitor, cancer is eliminated by activating the immune state of the living body by administration of the above antibody.
  • An object of the present invention is to provide a novel method capable of predicting the response of an immune checkpoint inhibitor.
  • the present invention includes a step of measuring a free protein marker in a liquid sample collected from a subject, and a step of determining the efficacy of an immune checkpoint inhibitor against the subject based on the measurement result, Provided is a method for determining the efficacy of an immune checkpoint inhibitor, wherein the free protein marker is at least one selected from free CTLA-4, free PD-1 and free PD-L1.
  • the present invention includes a step of measuring a free protein marker in a liquid sample collected from a cancer patient, a step of determining the response of an immune checkpoint inhibitor to the patient based on the measurement result, and immune checkpoint inhibition
  • Administering an immune checkpoint inhibitor to a patient determined to be effective, wherein the free protein marker is at least one selected from free CTLA-4, free PD-1 and free PD-L1 Provide a method for treating cancer.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for cancer treatment containing an immune checkpoint inhibitor, characterized in that the immune checkpoint inhibitor is administered to a cancer patient determined to be effective by the determination method of the present embodiment, And the cancer therapeutic agent containing the immune checkpoint inhibitor characterized by being administered to the cancer patient determined with the immune checkpoint inhibitor being effective by the determination method of this embodiment.
  • the present invention includes a step of obtaining a measurement value of a free protein marker in a liquid sample collected from a subject, and the free protein marker is selected from free CTLA-4, free PD-1 and free PD-L1
  • a free protein marker that is at least one and indicates that the immune checkpoint inhibitor responds to the subject when the obtained measurement of the free protein marker is lower than a predetermined threshold corresponding to each marker. Provides a method for obtaining measurements.
  • the present invention includes a reagent containing a substance that can specifically bind to free CTLA-4, a reagent containing a substance that can specifically bind to free PD-1, and a substance that can specifically bind to free PD-L1.
  • a reagent kit for use in the method for assisting the above determination which comprises at least one reagent selected from the reagents to be contained.
  • the present invention performs immunostaining of tumor tissue collected from a subject, calculates the proportion of PD-L1-positive tumor cells, and measures free protein markers in a liquid sample collected from the subject; And determining the response of the immune checkpoint inhibitor to the subject based on the calculation result and the measurement result, wherein the free protein marker is free CTLA-4, free PD-1 and free PD- Provided is a method for assisting in determining the response of an immune checkpoint inhibitor, which is at least one selected from L1.
  • the present invention comprises a computer including a processor and a memory under the control of the processor, the memory comprising obtaining a measured value of a free protein marker in a liquid sample collected from a subject;
  • a computer program for causing the computer to execute the step of determining the response of the immune checkpoint inhibitor to the subject based on the measured value, and the free protein marker is free CTLA-4
  • An apparatus for determining the efficacy of an immune checkpoint inhibitor which is at least one selected from free PD-1 and free PD-L1.
  • the present invention includes a computer including a processor and a memory under the control of the processor, and the memory executes a step of obtaining a measurement value of a free protein marker in a liquid sample collected from a subject.
  • a free protein marker is at least one selected from free CTLA-4, free PD-1 and free PD-L1, and the measured value of the obtained free protein marker is Provided is a device for acquiring a measurement value of a free protein marker, which indicates that an immune checkpoint inhibitor responds to the subject when lower than a predetermined threshold corresponding to each marker.
  • the present invention is a computer program recorded on a computer-readable medium, the computer program obtaining a measurement value of a free protein marker in a liquid sample collected from a subject, and the marker A computer program for causing the computer to execute a step of determining the response of the immune checkpoint inhibitor to the subject based on the measured value of the subject, wherein the free protein marker is free CTLA-4, free A computer program for determining the response of an immune checkpoint inhibitor that is at least one selected from PD-1 and free PD-L1 is provided.
  • an immune checkpoint inhibitor before an immune checkpoint inhibitor is administered to a subject, it is possible to determine whether or not the immune checkpoint inhibitor is effective for the subject.
  • an immune checkpoint inhibitor which combines determination by immunohistological staining of PD-L1 and determination by a measurement value of a free protein marker. It is a survival rate curve which shows the correlation with the measured value of free PD-1 and total survival (OS) in the esophageal cancer patient which administered the immune checkpoint inhibitor. Survival curve showing correlation between free CTLA-4 measurement and OS in patients with esophageal cancer administered immune checkpoint inhibitor It is a survival rate curve which shows correlation with the measured value of free PD-L1, and OS in the esophageal cancer patient which administered the immune checkpoint inhibitor.
  • [1. Method for determining response of immune checkpoint inhibitor] In the method for determining the efficacy of the immune checkpoint inhibitor of the present embodiment (hereinafter also referred to as “determination method”), first, free PD-1 and free CTLA are used as free protein markers in a liquid sample collected from a subject. -4 and free PD-L1 are measured. In a preferred embodiment, at least two selected from free PD-1, free CTLA-4 and free PD-L1 are measured. In a more preferred embodiment, free PD-1, free CTLA-4 and free PD-L1 are measured.
  • the immune checkpoint inhibitor may be a preparation containing at least one of anti-PD-1 antibody, anti-CTLA-4 antibody and anti-PD-L1 antibody as an active ingredient.
  • Nivolumab, pembrolizumab and the like are known as preparations containing an anti-PD-1 antibody as an active ingredient.
  • preparations containing anti-PD-L1 antibody as an active ingredient atezolizumab, averumab, durvalumab and the like are known.
  • ipilimumab and the like are known.
  • the determination method of the present embodiment is particularly suitable for determining the efficacy of a preparation containing an anti-PD-1 antibody as an active ingredient.
  • cancer patient includes a subject after removal of tumor tissue.
  • An immune checkpoint inhibitor may be administered as adjuvant chemotherapy after removal of the tumor tissue.
  • the determination method of this embodiment can also be used to determine the efficacy of immune checkpoint inhibitors for adjuvant chemotherapy.
  • the cancer patient is preferably a cancer patient before receiving treatment with an immune checkpoint inhibitor.
  • the subject may be receiving treatment other than an immune checkpoint inhibitor.
  • Such treatment includes surgery, radiation, chemotherapy and combinations thereof.
  • the kind of cancer is not specifically limited, For example, various cancers, such as solid cancer and blood cancer, are mentioned.
  • Examples of solid cancer include lung cancer, esophageal cancer, endometrial cancer, kidney cancer, ovarian cancer, melanoma, stomach cancer, colon cancer and the like.
  • Examples of blood cancer include leukemia, malignant lymphoma, multiple myeloma, and the like.
  • lung cancer particularly non-small cell lung cancer
  • esophageal cancer and endometrial cancer are suitable for the determination method of the present embodiment.
  • a method for predicting the effectiveness of an immune checkpoint inhibitor by immunostaining a tumor tissue collected from a cancer patient and confirming the proportion of PD-L1-positive tumor cells is known.
  • a tumor tissue is used in this method, it cannot be applied to a subject who cannot collect a tumor tissue for reasons such as physical burden.
  • a sample collected by a less invasive method such as a blood sample can be used. That is, the determination method of the present embodiment can be applied to a subject who is difficult to collect a tumor tissue.
  • immunostaining is not suitable for automation because the inspection procedure is complicated.
  • the measurement of the free protein marker in the liquid sample is suitable for automation, and the determination method of this embodiment is suitable from the viewpoint of promoting the efficiency of the pathological examination.
  • the determination method of the present embodiment is to extract patients who respond to an immune checkpoint inhibitor from patients whose ratio of PD-L1-positive tumor cells is lower than a predetermined value.
  • the subject is a cancer patient whose ratio of PD-L1-positive tumor cells is determined to be lower than a predetermined value by immunostaining of tumor tissue.
  • the immunostaining of tumor tissue can be performed by an immunohistochemical staining method known in the art.
  • Immunohistochemical staining may be performed using a commercially available staining kit.
  • PD-L1 IHC 22C3 pharmDx ⁇ Daco '' (Agilent Technologies, Inc.)
  • PD-L1 IHC 28-8 pharmDx ⁇ Dako '' (Agilent Technologies, Inc.) as kits for PD-L1 immunostaining of tumor tissue Etc. are known.
  • PD-L1 immunostaining of tumor tissue can be performed, for example, as follows. First, a tumor tissue is collected from a subject, and the obtained tumor tissue is fixed with 10% neutral buffered formalin within 1 hour. The fixed time is between 12 hours and 72 hours. The fixed tumor tissue is dehydrated with ethanol. The dehydrated tumor tissue is soaked in xylene and subjected to penetration. The treated tumor tissue is immersed in molten paraffin (60 ° C. or lower) and cooled to obtain a formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) tissue specimen. The obtained FFPE tissue specimen is sliced at a thickness of 4 to 5 ⁇ m and attached to a glass slide. Xylene is added to the sliced slices obtained to deparaffinize them.
  • FFPE formalin-fixed paraffin-embedded
  • the deparaffinized sliced section is immersed in ethanol for hydrophilic treatment.
  • An antigen activation treatment is carried out by placing a glass slide on which a sliced slice that has been subjected to a hydrophilic treatment is attached in a commercially available antigen activation solution and heating it.
  • the tissue slice is obtained by performing immunohistochemical staining with the anti-PD-L1 antibody on the sliced sections after the treatment.
  • the ratio of PD-L1-positive tumor cells is the ratio of tumor cells that exhibit partial or complete cell membrane staining to the total tumor cells in the tissue specimen obtained by immunostaining of the tumor tissue.
  • TPS Tumor Proportion Score
  • TPS can be calculated by the following equation. In the formula, the “total number of tumor cells” is the number of all tumor cells in the tissue specimen obtained by HE staining of the tumor tissue, and is required to be at least 100.
  • PD-L1-positive tumor cell number is the number of tumor cells presenting a partial or complete cell membrane PD-L1 immunostaining in a tissue specimen. PD-L1-positive tumor cells do not include tumor-related immune cells such as macrophages and lymphocytes. The number of each cell is counted by observation with an optical microscope.
  • the above predetermined value is a cut-off value of the proportion of PD-L1-positive tumor cells.
  • the predetermined value itself is not particularly limited, and is appropriately determined according to the antibody (or staining kit) used for immunostaining, the target cancer type, and the like. For example, when immunostaining a tumor tissue of non-small cell lung cancer using PD-L1LIHC 22C3 pharmDx “Dako”, the target of primary treatment with pembrolizumab is determined with 50% TPS as a predetermined value. Further, the target of secondary treatment with pembrolizumab is determined with 1% TPS as a predetermined value.
  • TPS when TPS is 50% or higher, it is determined as PD-L1 positive (high expression), and when TPS is 1% or higher and lower than 50%, it is determined as PD-L1 positive (low expression) and TPS is 1. When it is lower than%, it is judged as PD-L1 negative (non-expression).
  • Subjects who are determined to be PD-L1 positive (high expression) are subject to primary treatment with pembrolizumab.
  • Subjects who are determined to be PD-L1 positive (low expression) are excluded from primary therapy, but are subject to secondary therapy with pembrolizumab.
  • Subjects with a negative PD-L1 status are excluded from treatment with pembrolizumab.
  • the subject in the present embodiment may be a cancer patient who has been determined that the proportion of PD-L1-positive tumor cells is lower than a predetermined value.
  • a cancer patient for which the proportion of PD-L1-positive tumor cells is determined to be lower than a predetermined value may be a patient who is excluded from the primary treatment with an immune checkpoint inhibitor.
  • the liquid sample is not particularly limited as long as it is a liquid sample collected from the subject and can contain free protein.
  • a liquid sample examples include a blood sample, cerebrospinal fluid, pleural effusion, ascites, lymph and urine.
  • a blood sample is preferable as the liquid sample.
  • blood samples include whole blood, plasma and serum, with plasma and serum being particularly preferred.
  • the impurities may be removed from the liquid sample by known means such as centrifugation or filtration. Further, the liquid sample may be diluted with an appropriate aqueous medium as necessary.
  • an aqueous medium is not particularly limited as long as the measurement described later is not hindered, and examples thereof include water, physiological saline, and buffer solution.
  • the buffer solution is not particularly limited as long as it has a buffering action at a neutral pH (for example, a pH of 6 or more and 8 or less). Examples of such a buffer include Good buffers such as HEPES, MES, Tris, and PIPES, and phosphate buffered saline (PBS).
  • Free PD-1, free CTLA-4 and free PD-L1 are all free proteins.
  • free PD-1, free CTLA-4 and free PD-L1 are also referred to as “sPD-1”, “sCTLA-4” and “sPD-L1”, respectively.
  • free protein refers to a protein that is detached from the surface of a cell and is present outside the cell (in a liquid sample). Such free protein may be any of a protein solubilized in a liquid component (liquid phase) of a liquid sample, a protein encapsulated in a vesicle, and a protein present on the surface of the vesicle.
  • the vesicle is not particularly limited as long as it is a vesicle composed of a membrane.
  • the vesicle may contain a liquid phase inside.
  • Preferred vesicles are extracellular vesicles such as exosomes, microvesicles, apoptotic bodies and the like.
  • the means for measuring the free protein marker is not particularly limited as long as a value reflecting the amount or concentration of the free protein marker contained in the liquid sample (hereinafter also referred to as “marker measurement value”) can be obtained.
  • a method of capturing the marker using a substance that can specifically bind to the free protein marker is preferable.
  • the free protein marker contained in the liquid sample can be measured by detecting the free protein marker captured by such a substance by a method known in the art.
  • Examples of substances that can specifically bind to a free protein marker include antibodies and aptamers, among which antibodies are particularly preferable.
  • Antibodies against the PD-1, CTLA-4 and PD-L1 proteins themselves are known in the art and are generally available.
  • the antibody against the free protein marker is not particularly limited as long as the antibody can specifically bind to the free protein marker.
  • Such an antibody may be any of a monoclonal antibody, a polyclonal antibody, and a fragment thereof (for example, Fab, F (ab ′) 2, etc.). Commercially available antibodies may also be used.
  • the method for measuring a free protein marker using an antibody is not particularly limited, and can be appropriately selected from known immunological measurement methods.
  • the enzyme-linked immunosorbent method (ELISA method) is preferable, and the sandwich ELISA method is particularly preferable.
  • ELISA method enzyme-linked immunosorbent method
  • sandwich ELISA method is particularly preferable.
  • a free protein marker, an antibody for capturing the free protein marker (hereinafter also referred to as “capture antibody”), and an antibody for detecting the free protein marker (hereinafter also referred to as “detection antibody”) Is formed on the solid phase.
  • the complex can be formed by mixing a liquid sample that may contain a free protein marker, a capture antibody, and a detection antibody. Then, by bringing the solution containing the complex into contact with a solid phase on which the capture antibody can be immobilized, the complex can be formed on the solid phase. Alternatively, a solid phase on which a capture antibody is immobilized in advance may be used.
  • the above complex can be formed on the solid phase by contacting the solid phase on which the capture antibody is immobilized, the liquid sample, and the detection antibody.
  • both the capture antibody and the detection antibody are monoclonal antibodies, it is preferable that the epitopes are different from each other.
  • the mode of immobilizing the capture antibody on the solid phase is not particularly limited.
  • the capture antibody and the solid phase may be directly bound, or the capture antibody and the solid phase may be indirectly bound via another substance.
  • Examples of the direct bond include physical adsorption.
  • Examples of indirect binding include binding through a combination of biotin and avidin or streptavidin (hereinafter also referred to as “avidins”).
  • the capture antibody is modified with biotin in advance, and avidin is bound to the solid phase in advance, so that the capture antibody and the solid phase are indirectly bound via the binding between biotin and avidin. Can be made.
  • the material for the solid phase is not particularly limited, and can be selected from organic polymer compounds, inorganic compounds, biopolymers, and the like.
  • organic polymer compound include latex, polystyrene, and polypropylene.
  • inorganic compounds include magnetic materials (such as iron oxide, chromium oxide, and ferrite), silica, alumina, and glass.
  • examples of the biopolymer include insoluble agarose, insoluble dextran, gelatin, and cellulose. Two or more of these may be used in combination.
  • the shape of the solid phase is not particularly limited, and examples thereof include particles, membranes, microplates, microtubes, test tubes and the like. Among these, particles are preferable, and magnetic particles are particularly preferable.
  • B / F (Bound / Free) separation that removes unreacted free components that have not formed a complex may be performed between the complex formation step and the complex detection step.
  • An unreacted free component refers to a component that does not constitute a complex. Examples thereof include a capture antibody and a detection antibody that have not been bound to a free protein marker.
  • the means for B / F separation is not particularly limited. If the solid phase is a particle, B / F separation can be performed by collecting only the solid phase capturing the complex by centrifugation. If the solid phase is a container such as a microplate or microtube, B / F separation can be performed by removing the liquid containing unreacted free components.
  • B / F separation can be performed by sucking and removing the liquid containing unreacted free components with a nozzle while the magnetic particles are magnetically constrained by a magnet. preferable.
  • the solid phase on which the complex has been captured may be washed with a suitable aqueous medium such as PBS.
  • Measured values of the free protein marker contained in the liquid sample can be obtained by detecting the complex formed on the solid phase by a method known in the art.
  • the detection antibody when an antibody labeled with a labeling substance is used as the detection antibody, the measurement value of the marker in the liquid sample can be obtained by detecting a signal generated by the labeling substance.
  • the measurement value of the marker in the liquid sample can be obtained in the same manner.
  • the immune complex transfer method described in JP-A-1-254868 can also be used.
  • detecting a signal includes qualitatively detecting the presence or absence of a signal, quantifying the signal intensity, and semi-quantitatively detecting the intensity of the signal.
  • Semi-quantitative detection refers to showing the intensity of a signal in stages, such as “no signal generated”, “weak”, “medium”, “strong”, and the like. In this embodiment, it is preferable to detect the intensity of the signal quantitatively or semi-quantitatively.
  • the labeling substance is not particularly limited.
  • the labeling substance may be, for example, a substance that itself generates a signal (hereinafter also referred to as a “signal generating substance”) or a substance that generates a signal by catalyzing the reaction of another substance.
  • signal generating substances include fluorescent substances and radioisotopes.
  • the substance that generates a detectable signal by catalyzing the reaction of another substance include an enzyme. Examples of the enzyme include alkaline phosphatase, peroxidase, ⁇ -galactosidase, luciferase and the like.
  • fluorescent substance examples include fluorescent dyes such as fluorescein isothiocyanate (FITC), rhodamine, Alexa Fluor (registered trademark), and fluorescent proteins such as GFP.
  • fluorescent dyes such as fluorescein isothiocyanate (FITC), rhodamine, Alexa Fluor (registered trademark), and fluorescent proteins such as GFP.
  • radioisotope examples include 125 I, 14 C, and 32 P.
  • an enzyme is preferable, and alkaline phosphatase and peroxidase are particularly preferable.
  • the method for detecting the signal itself is known in the art.
  • a measurement method corresponding to the type of signal derived from the labeling substance may be selected as appropriate.
  • the labeling substance is an enzyme
  • it can be performed by measuring signals such as light and color generated by reacting a substrate for the enzyme with a known device such as a spectrophotometer.
  • the enzyme substrate can be appropriately selected from known substrates according to the type of the enzyme.
  • the substrate is CDP-Star® (4-chloro-3- (methoxyspiro [1, 2-dioxetane-3, 2 ′-(5′-chloro) trixiro [ 3. 3. 1. 13, 7] decan] -4-yl) phenyl phosphate disodium), CSPD (registered trademark) (3- (4-methoxyspiro [1, 2-dioxetane-3, 2- (5 Chemiluminescent substrates such as' -chloro) tricyclo [3. 3. 1.
  • the substrate may be a chemiluminescent substrate such as luminol and its derivatives, 2, 2'-azinobis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonate ammonium) (ABTS), 1, 2- Examples include chromogenic substrates such as phenylenediamine (OPD) and 3,, 3 ', 5, 5'-tetramethylbenzidine (TMB).
  • chemiluminescent substrate such as luminol and its derivatives, 2, 2'-azinobis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonate ammonium) (ABTS), 1, 2- Examples include chromogenic substrates such as phenylenediamine (OPD) and 3,, 3 ', 5, 5'-tetramethylbenzidine (TMB).
  • OPD phenylenediamine
  • TMB 5'-tetramethylbenzidine
  • the labeling substance is a radioisotope
  • radiation as a signal can be measured using a known device such as a scintillation counter.
  • fluorescence as a signal can be measured using a known device such as a fluorescent microplate reader.
  • an excitation wavelength and a fluorescence wavelength can be suitably determined according to the kind of used fluorescent substance.
  • the signal detection result can be used as a marker measurement value.
  • the measured value of the signal intensity itself or a value obtained from the measured value can be used as the measured value of the marker.
  • the value obtained from the measured value of the signal intensity include a value obtained by subtracting the measured value or background value of the negative control sample from the measured value, a value obtained by applying the measured value to a calibration curve, and the like. It is done.
  • the negative control sample can be appropriately selected, and examples thereof include a liquid sample obtained from a healthy person.
  • a free protein marker contained in a liquid sample by a sandwich ELISA method using a capture antibody immobilized on magnetic particles and a detection antibody labeled with a labeling substance.
  • the measurement may be performed using a commercially available fully automatic immunoassay device such as HISCL series (manufactured by Sysmex Corporation).
  • the response of the immune checkpoint inhibitor to the subject is determined based on the measurement result.
  • the measured value of sPD-1 when the measured value of sPD-1 is acquired, the measured value of sPD-1 is compared with the threshold value corresponding to sPD-1. When the measured value of sPD-1 is lower than the threshold value, it may be determined that the immune checkpoint inhibitor is effective in the subject. Further, when the measured value of sPD-1 is not less than the threshold value, it may be determined that the immune checkpoint inhibitor does not respond to the subject.
  • the measured value of sCTLA-4 when the measured value of sCTLA-4 is acquired, the measured value of sCTLA-4 is compared with the threshold value corresponding to sCTLA-4. When the measured value of sCTLA-4 is lower than the threshold value, it may be determined that the immune checkpoint inhibitor is effective in the subject. Further, when the measured value of sCTLA-4 is not less than the threshold value, it may be determined that the immune checkpoint inhibitor does not respond to the subject.
  • the measured value of sPD-L1 when the measured value of sPD-L1 is acquired, the measured value of sPD-L1 is compared with the threshold value corresponding to sPD-L1. When the measured value of sPD-L1 is lower than the threshold value, it may be determined that the immune checkpoint inhibitor is effective in the subject. Moreover, when the measured value of sPD-L1 is equal to or greater than a threshold value, it may be determined that the immune checkpoint inhibitor does not respond to the subject.
  • the immune checkpoint inhibitor may be determined to be effective for the subject. Further, when at least one of the measured values of the acquired marker is equal to or greater than a predetermined threshold corresponding to the marker, it may be determined that the immune checkpoint inhibitor does not respond to the subject. Specifically, it is as follows.
  • the measured value of sPD-1 is compared with the first threshold value, and the measured value of sCTLA-4 and the second threshold value are compared.
  • the first threshold value is a threshold value corresponding to sPD-1
  • the second threshold value is a threshold value corresponding to sCTLA-4.
  • the measured value of sPD-1 is compared with the first threshold value, and the measured value of sPD-L1 and the second threshold value are compared. And compare.
  • the first threshold value is a threshold value corresponding to sPD-1
  • the second threshold value is a threshold value corresponding to sPD-L1.
  • the immune checkpoint inhibitor does not respond to the subject. May be.
  • the measured value of sCTLA-4 is compared with the first threshold value, and the measured value of sPD-L1 and the second threshold value are compared. And compare.
  • the first threshold is a threshold corresponding to sCTLA-4
  • the second threshold is a threshold corresponding to sPD-L1.
  • the measured value of sPD-1 is compared with the first threshold value, and the measured value of sCTLA-4
  • the second threshold value is compared, and the measured value of sPD-L1 is compared with the third threshold value.
  • the first threshold is a threshold corresponding to sPD-1
  • the second threshold is a threshold corresponding to sCTLA-4
  • the third threshold is a threshold corresponding to sPD-L1. is there.
  • the immune checkpoint inhibitor When the measured value of sPD-1 is lower than the first threshold value, the measured value of sCTLA-4 is lower than the second threshold value, and the measured value of sPD-L1 is lower than the third threshold value, the immune checkpoint inhibitor is It may be determined that the subject is effective. When the measured value of sPD-1 is greater than or equal to the first threshold, the measured value of sCTLA-4 is greater than or equal to the second threshold, or the measured value of sPD-L1 is greater than or equal to the third threshold The immune checkpoint inhibitor may be determined not to respond to the subject.
  • a comparison result between the measured value of the acquired free protein marker and the threshold value corresponding to each marker may be used as a score. For example, when the measured value of the acquired free protein marker is lower than the threshold corresponding to the marker, the score is set to zero. Moreover, when the measured value of the acquired free protein marker is not less than the threshold corresponding to the marker, the score is 1. If measurements of two or more free protein markers are obtained, the scores for each marker are summed. For example, when the measured values of sPD-1 and sCTLA-4 are acquired, when both the measured value of sPD-1 and the measured value of sCTLA-4 are lower than the corresponding threshold values, the score is 0. Become.
  • the score is 1 when one of the measured value of sPD-1 and the measured value of sCTLA-4 is equal to or greater than the corresponding threshold value.
  • the score is 2.
  • the score can be calculated in the same manner.
  • the score is 0.
  • the score is 1 when any one of the measured value of sPD-1, the measured value of sCTLA-4, and the measured value of sPD-L1 is equal to or higher than the corresponding threshold value.
  • the score is 2 when any two of the measured value of sPD-1, the measured value of sCTLA-4, and the measured value of sPD-L1 are equal to or greater than the corresponding threshold values.
  • the score when the score is 0, it may be determined that the immune checkpoint inhibitor is effective for the subject. Further, when the score is 1 or more, it may be determined that the immune checkpoint inhibitor does not respond to the subject.
  • the predetermined threshold value corresponding to each of the above markers can be set as appropriate.
  • the predetermined threshold can be set, for example, based on free protein marker data in a liquid sample collected from a cancer patient.
  • a predetermined threshold value may be set as follows. First, liquid samples are collected from a plurality of cancer patients who have not been administered an immune checkpoint inhibitor. After collecting the liquid sample, an immune checkpoint inhibitor is administered to the cancer patient and the course is observed. The efficacy of immune checkpoint inhibitors is confirmed based on known evaluation indices such as changes in tumor size, progression-free survival (PFS), and overall survival (OS). Then, the liquid sample is classified into a patient sample in which the immune checkpoint inhibitor was effective and a patient sample in which the immune checkpoint inhibitor was not effective.
  • PFS progression-free survival
  • OS overall survival
  • the free protein marker is measured to obtain the measured value.
  • the value which can distinguish the patient who responded with the immune checkpoint inhibitor and the patient who did not respond with the immune checkpoint inhibitor is calculated
  • the predetermined threshold it is preferable to consider the sensitivity, specificity, positive predictive value, and negative predictive value of determination.
  • the determination method of the present embodiment makes it possible to determine whether or not an immune checkpoint inhibitor is effective for a subject before administration of the immune checkpoint inhibitor. Thereby, information that assists the determination of the efficacy of the immune checkpoint inhibitor is provided to doctors and the like. Moreover, the determination method of this embodiment can be paraphrased as the prediction method of the effect of an immune checkpoint inhibitor.
  • the scope of the present invention includes a method for acquiring a measurement value of a free protein marker (hereinafter also referred to as “acquisition method”).
  • a free protein marker in a liquid sample collected from a subject is measured.
  • the free protein marker is at least one selected from sPD-1, sCTLA-4 and sPD-L1.
  • the free protein marker is at least two selected from sPD-1, sCTLA-4 and sPD-L1. More preferably, the free protein markers are sPD-1, sCTLA-4 and sPD-L1.
  • the measurement means for the subject, the liquid sample, and the free protein marker is the same as that described in the above determination method.
  • the subject is a patient with lung cancer (particularly non-small cell lung cancer), an esophageal cancer patient, and an endometrial cancer patient.
  • the subject may be a cancer patient after removing the tumor.
  • the subject may be a cancer patient whose ratio of PD-L1-positive tumor cells is determined to be lower than a predetermined value by immunostaining of tumor tissue.
  • the immunostaining of the tumor tissue, the proportion of PD-L1-positive tumor cells, the predetermined value, and the type of cancer of the subject are the same as described in the above determination method.
  • the subject may be a patient who is excluded from the target of primary treatment with an immune checkpoint inhibitor containing an anti-PD-1 antibody as an active ingredient based on the result of immunostaining of tumor tissue. Good.
  • the measured value of the free protein marker obtained by the acquisition method of the present embodiment is information suggesting the response of the immune checkpoint inhibitor to the subject by comparison with a predetermined threshold corresponding to each marker. For example, when all the measured values of the acquired free protein marker are lower than a predetermined threshold corresponding to each marker, the measured value of the acquired free protein marker indicates that the immune checkpoint inhibitor responds to the subject. Suggest.
  • the measured value when the obtained measured value of sPD-1 is lower than the threshold value corresponding to sPD-1, the measured value suggests that the immune checkpoint inhibitor is effective in the subject. In another embodiment, when the obtained measurement of sCTLA-4 is lower than the threshold corresponding to sCTLA-4, the measurement suggests that the immune checkpoint inhibitor is responsive to the subject. In another embodiment, when the obtained measured value of sPD-L1 is lower than the threshold corresponding to sPD-L1, the measured value indicates that the immune checkpoint inhibitor responds to the subject.
  • these measurements are immune checkpoints Suggests that the inhibitor responds to the subject.
  • these measurements are immune check This suggests that the point inhibitor is effective in the subject.
  • these measurements are immune check This suggests that the point inhibitor is effective in the subject.
  • the acquired measured value of sPD-1 is lower than the first threshold
  • the acquired measured value of sCTLA-4 is lower than the second threshold
  • the acquired measured value of sPD-L1 is When lower than the third threshold, these measurements suggest that the immune checkpoint inhibitor is effective in the subject.
  • the predetermined threshold is the same as that described in the above determination method.
  • the immune checkpoint inhibitor may be a preparation containing at least one of anti-PD-1 antibody, anti-CTLA-4 antibody and anti-PD-L1 antibody as an active ingredient.
  • anti-PD-1 antibody anti-CTLA-4 antibody
  • anti-PD-L1 antibody anti-PD-1 antibody
  • preparations containing anti-PD-L1 antibody as an active ingredient atezolizumab, averumab, durvalumab and the like are known.
  • preparation ipilimumab and the like are known.
  • the scope of the present invention also includes a reagent kit for use in the above determination method.
  • the reagent kit of this embodiment includes a reagent containing a substance that can specifically bind to sPD-1, a reagent containing a substance that can specifically bind to sCTLA-4, and a reagent that can specifically bind to free PD-L1.
  • the reagent kit comprises a reagent containing a substance that can specifically bind to sPD-1, a reagent containing a substance that can specifically bind to sCTLA-4, and a substance that can specifically bind to sPD-L1.
  • a reagent containing a substance that can specifically bind to sPD-1 a reagent containing a substance that can specifically bind to sCTLA-4, and a reagent containing a substance that can specifically bind to sPD-L1 Including.
  • substances that can specifically bind to each free protein marker include antibodies and aptamers. Of these, antibodies are particularly preferred.
  • FIG. 1A An example of the reagent kit of this embodiment is shown in FIG. 1A.
  • 11 indicates a reagent kit
  • 12 indicates a first container containing a reagent containing a substance that can specifically bind to free PD-1
  • 13 indicates specifically with free CTLA-4.
  • a second container containing a reagent containing a substance capable of binding is shown
  • 14 is a packing box
  • 15 is a package insert.
  • the reagent kit of this example may include a third container containing a reagent containing a substance that can specifically bind to free PD-L1.
  • the reagent kit of this embodiment includes an antibody for capturing each free protein marker and an antibody for detection.
  • the detection antibody may be labeled with a labeling substance.
  • the capture antibody, detection antibody, and labeling substance are the same as those described in the determination method of the present embodiment.
  • the reagent kit may include a solid phase and a substrate. The solid phase and the substrate are the same as those described in the determination method of the present embodiment.
  • FIG. 1B An example of a reagent kit of a further embodiment is shown in FIG. 1B.
  • 21 indicates a reagent kit
  • 22 indicates a first container containing a reagent containing an antibody for capturing free PD-1
  • 23 indicates a reagent containing a labeled antibody for detection of free PD-1
  • 24 indicates a third container containing a reagent containing an antibody for capturing free CTLA-4
  • 25 contains a reagent containing a labeled antibody for detection of free CTLA-4.
  • 4 shows a fourth container
  • 26 shows a package insert
  • 27 shows a packaging box.
  • the reagent kit of this example includes a fifth container containing a reagent containing an antibody for capturing free PD-L1, and a sixth container containing a reagent containing a labeled antibody for detecting free PD-L1. But you can.
  • any of the above reagent kits preferably includes a calibrator.
  • calibrators include a calibrator for quantification of free PD-1 (calibrator for PD-1), a calibrator for quantification of free CTLA-4 (calibrator for CTLA-4), and a quantification of free PD-L1.
  • the PD-1 calibrator may include, for example, a buffer solution that does not contain PD-1 (negative control) and a buffer solution that contains PD-1 at a known concentration.
  • the CTLA-4 calibrator may include, for example, a buffer solution that does not contain CTLA-4 (negative control) and a buffer solution that contains CTLA-4 at a known concentration.
  • the PD-L1 calibrator may include, for example, a buffer solution that does not contain PD-L1 (negative control) and a buffer solution that contains PD-L1 at a known concentration.
  • a calibrator is a buffer containing no PD-1, CTLA-4 or PD-L1 (negative control), a buffer containing PD-1 at a known concentration, and CTLA-4 at a known concentration.
  • a buffer solution containing PD-L1 at a known concentration is a buffer solution that does not contain any of PD-1, CTLA-4, and PD-L1 (negative control) and two selected from PD-1, CTLA-4, and PD-L1, respectively.
  • a buffer containing a known concentration is a buffer containing no PD-1, CTLA-4 or PD-L1 (negative control), a buffer containing PD-1 at a known concentration, and CTLA-4 at a known concentration.
  • calibrators include a buffer solution that does not contain any of PD-1, CTLA-4, and PD-L1 (negative control), and a buffer that contains PD-1, CTLA-4, and PD-L1 at known concentrations, respectively. Liquid.
  • FIG. 1C An example of a reagent kit of a further embodiment is shown in FIG. 1C.
  • 31 indicates a reagent kit
  • 32 indicates a first container containing a reagent containing an antibody for capturing free PD-1
  • 33 indicates a reagent containing a labeled antibody for detection of free PD-1.
  • 34 indicates a third container containing a reagent containing an antibody for capturing free CTLA-4
  • 35 contains a reagent containing a labeled antibody for detection of free CTLA-4
  • a fourth container is shown
  • 36 is a fifth container containing a buffer solution that does not contain any of PD-1, CTLA-4, and PD-L1
  • 37 is a PD-1 and CTLA-4 respectively.
  • concentration is shown, 38 shows a packaging box and 39 shows a package insert.
  • Buffers that do not contain any of PD-1, CTLA-4, and PD-L1, and buffers that contain PD-1 and CTLA-4 at their respective concentrations are used for quantification of PD-1 and CTLA-4. It can be used as a calibrator.
  • the reagent kit of this example includes a seventh container containing a reagent containing an antibody for capturing free PD-L1, an eighth container containing a reagent containing a labeled antibody for detecting free PD-L1, and a PD.
  • a ninth container containing a buffer solution (PD-L1 quantification calibrator) containing -L1 at a predetermined concentration may be included.
  • the scope of the present invention includes an apparatus for carrying out the above-described determination method of the present embodiment.
  • Such an apparatus is an apparatus for determining the efficacy of an immune checkpoint inhibitor (hereinafter also simply referred to as “determination apparatus”).
  • the scope of the present invention includes a computer program for causing a computer to execute the determination method of the present embodiment.
  • Such a computer program is a computer program for determining the efficacy of an immune checkpoint inhibitor.
  • the scope of the present invention includes an apparatus for performing the acquisition method of the present embodiment described above.
  • Such an apparatus is an apparatus for obtaining a measurement value of a free protein marker.
  • FIG. 2 is a schematic diagram of the determination apparatus.
  • the determination device 10 shown in FIG. 2 includes an immunoassay device 20 and a computer system 30 connected to the immunoassay device 20.
  • the hardware configuration of the apparatus for acquiring the measurement value of the free protein marker is the same as that of the determination apparatus 10.
  • the type of immunoassay device is not particularly limited, and can be appropriately selected according to the method for measuring the free protein marker.
  • the immunoassay device 20 is a commercially available automatic immunoassay device capable of detecting a chemiluminescent signal generated by sandwich ELISA using a magnetic particle to which a capture antibody is immobilized and an enzyme-labeled detection antibody. It is.
  • the immunoassay device 20 is not particularly limited as long as it can detect a signal based on the labeling substance used, and can be appropriately selected according to the type of labeling substance.
  • a reagent containing magnetic particles to which a capture antibody is immobilized When a reagent containing magnetic particles to which a capture antibody is immobilized, a reagent containing an enzyme-labeled detection antibody, and a liquid sample collected from a subject are set in the immunoassay device 20, the immunoassay device 20 The antigen-antibody reaction is performed, a chemiluminescence signal is acquired as optical information based on the enzyme-labeled antibody specifically bound to the free protein marker, and the obtained optical information is transmitted to the computer system 30.
  • the computer system 30 includes a computer main body 300, an input unit 301, and a display unit 302 that displays sample information and determination results.
  • the computer system 30 receives optical information from the immunoassay device 20.
  • the processor of the computer system 30 executes a computer program installed on the hard disk 313 for determining the efficacy of the immune checkpoint inhibitor based on the optical information.
  • the computer system 30 may be a device separate from the immunoassay device 20 or may be a device that includes the immunoassay device 20. In the latter case, the computer system 30 may itself become the determination device 10.
  • a commercially available automatic immunoassay apparatus may be equipped with a computer program for determining the response of an immune checkpoint inhibitor.
  • the computer main body 300 includes a CPU (Central Processing Unit) 310, a ROM (Read Only Memory) 311, a RAM (Random Access Memory) 312, a hard disk 313, an input / output interface 314, and a reading.
  • a device 315, a communication interface 316, and an image output interface 317 are provided.
  • the CPU 310, the ROM 311, the RAM 312, the hard disk 313, the input / output interface 314, the reading device 315, the communication interface 316, and the image output interface 317 are connected via a bus 318 so that data communication is possible.
  • the immunoassay device 20 is connected to the computer system 30 through a communication interface 316 so as to be communicable.
  • the CPU 310 can execute a program stored in the ROM 311 or the hard disk 313 and a program loaded in the RAM 312.
  • CPU310 calculates the measured value of a free protein marker, reads the predetermined threshold value corresponding to each marker memorize
  • the CPU 310 outputs the determination result and causes the display unit 302 to display the determination result.
  • the ROM 311 is configured by a mask ROM, PROM, EPROM, EEPROM, or the like.
  • the ROM 311 stores a computer program executed by the CPU 310 and data used for executing the computer program as described above.
  • data used for a determination flow described later such as a predetermined threshold value corresponding to each free protein marker, may be recorded.
  • the RAM 312 is configured by SRAM, DRAM, or the like.
  • the RAM 312 is used for reading programs recorded in the ROM 311 and the hard disk 313.
  • the RAM 312 is also used as a work area for the CPU 310 when executing these programs.
  • the hard disk 313 is installed with an operating system to be executed by the CPU 310, a computer program such as an application program (the above-described computer program for cancer determination), and data used for executing the computer program.
  • the hard disk 313 may store data used in a determination flow described later, such as a predetermined threshold value corresponding to each free protein marker.
  • the reading device 315 includes a flexible disk drive, a CD-ROM drive, a DVD-ROM drive, and the like.
  • the reading device 315 can read a program or data recorded on the portable recording medium 40.
  • the input / output interface 314 includes, for example, a serial interface such as USB, IEEE 1394, RS-232C, a parallel interface such as SCSI, IDE, IEEE 1284, and an analog interface including a D / A converter, an A / D converter, and the like. It is configured.
  • An input unit 301 such as a keyboard and a mouse is connected to the input / output interface 314. An operator can input various commands to the computer main body 300 through the input unit 301.
  • the communication interface 316 is, for example, an Ethernet (registered trademark) interface.
  • the computer main body 300 can also transmit print data to a printer or the like via the communication interface 316.
  • the image output interface 317 is connected to a display unit 302 configured with an LCD, a CRT, or the like. Accordingly, the display unit 302 can output a video signal corresponding to the image data given from the CPU 310.
  • the display unit 302 displays an image (screen) according to the input video signal.
  • the measured value of sPD-1 is obtained from the chemiluminescence signal generated by the sandwich ELISA method using the magnetic particles to which the capture antibody is immobilized and the detection antibody labeled with the enzyme, and the determination is made using the obtained measured value.
  • the first threshold is a threshold corresponding to sPD-1.
  • the present embodiment is not limited to this example.
  • a measured value of sCTLA-4 or a measured value of sPD-L1 may be acquired.
  • step S101 the CPU 310 acquires optical information (chemiluminescence signal) from the immunoassay device 20, calculates a measured value of sPD-1 from the acquired optical information, and stores it in the hard disk 313.
  • step S ⁇ b> 102 the CPU 310 compares the calculated measured value of sPD-1 with the first threshold value stored in the hard disk 313. When the measured value of sPD-1 is lower than the first threshold value, the process proceeds to step S103.
  • step S ⁇ b> 103 the CPU 310 stores a determination result that the immune checkpoint inhibitor is effective for the subject in the hard disk 313.
  • step S104 the CPU 310 stores a determination result that the immune checkpoint inhibitor does not respond to the subject in the hard disk 313.
  • step S ⁇ b> 105 the CPU 310 outputs the determination result and causes the display unit 302 to display the print result, or causes the printer to print. Thereby, the information which assists determination of the efficacy of an immune checkpoint inhibitor can be provided to a doctor or the like.
  • the measured values of sPD-1 and sCTLA-4 are obtained from the chemiluminescence signal generated by the sandwich ELISA method using the magnetic particles to which the capture antibody is immobilized and the enzyme-labeled detection antibody.
  • the first threshold value is a threshold value corresponding to sPD-1
  • the second threshold value is a threshold value corresponding to sCTLA-4.
  • the present embodiment is not limited to this example. Instead of one of the measured values of sPD-1 and sCTLA-4, the measured value of sPD-L1 may be acquired.
  • step S201 the CPU 310 acquires optical information (chemiluminescence signal) from the immunoassay device 20, calculates the measured values of sPD-1 and sCTLA-4 from the acquired optical information, and stores them in the hard disk 313.
  • step S202 the CPU 310 compares the calculated measurement value of sPD-1 with the first threshold value stored in the hard disk 313. When the measured value of sPD-1 is lower than the first threshold value, the process proceeds to step S203.
  • step S ⁇ b> 203 the CPU 310 compares the calculated measured value of sCTLA-4 with the second threshold value stored in the hard disk 313. When the measured value of sCTLA-4 is lower than the second threshold value, the process proceeds to step S204.
  • step S ⁇ b> 204 the CPU 310 stores a determination result that the immune checkpoint inhibitor is effective for the subject in the hard disk 313.
  • step S205 when the measured value of sPD-1 is greater than or equal to the first threshold value in step S202, the process proceeds to step S205.
  • step S203 when the measured value of sCTLA-4 is greater than or equal to the second threshold value, the process proceeds to step S205.
  • step S ⁇ b> 205 the CPU 310 stores a determination result that the immune checkpoint inhibitor does not respond to the subject in the hard disk 313.
  • step S ⁇ b> 206 the CPU 310 outputs the determination result and causes the display unit 302 to display the print result, or causes the printer to print. Thereby, the information which assists determination of the efficacy of an immune checkpoint inhibitor can be provided to a doctor or the like. In this example, the order of steps S202 and S203 can be changed.
  • the determination flow of the efficacy of the immune checkpoint inhibitor executed by the determination apparatus 10 will be described.
  • the first threshold is a threshold corresponding to sPD-1
  • the second threshold is a threshold corresponding to sCTLA-4
  • the third threshold is a threshold corresponding to sPD-L1. is there.
  • the present embodiment is not limited to this example.
  • step S301 the CPU 310 acquires optical information (chemiluminescence signal) from the immunoassay device 20, calculates measured values of sPD-1, sCTLA-4, and sPD-L1 from the acquired optical information, and calculates the hard disk 313.
  • step S ⁇ b> 302 the CPU 310 compares the calculated measured value of sPD-1 with the first threshold value stored in the hard disk 313. When the measured value of sPD-1 is lower than the first threshold value, the process proceeds to step S203.
  • step S ⁇ b> 303 the CPU 310 compares the calculated measured value of sCTLA-4 with the second threshold value stored in the hard disk 313.
  • step S304 the CPU 310 compares the calculated measurement value of sPD-L ⁇ b> 1 with the third threshold value stored in the hard disk 313.
  • step S305 the CPU 310 stores a determination result that the immune checkpoint inhibitor is effective for the subject in the hard disk 313.
  • step S306 when the measured value of sPD-1 is greater than or equal to the first threshold value in step S302, the process proceeds to step S306.
  • step S303 when the measured value of sCTLA-4 is greater than or equal to the second threshold value, the process proceeds to step S306.
  • step S304 when the measured value of sPD-L1 is greater than or equal to the third threshold value, the process proceeds to step S306.
  • step S306 the CPU 310 stores a determination result that the immune checkpoint inhibitor does not respond to the subject in the hard disk 313.
  • step S307 the CPU 310 outputs the determination result and causes the display unit 302 to display the print result, or causes the printer to print.
  • the order of steps S302, S303, and S304 can be changed.
  • the processing procedure executed by the free protein marker measurement value acquisition apparatus 10 will be described.
  • the measured value of sPD-1 is obtained from the chemiluminescence signal generated by the sandwich ELISA method using the magnetic particles to which the capture antibody is immobilized and the detection antibody labeled with the enzyme, and the determination is made using the obtained measured value.
  • An example of performing this will be described.
  • the present embodiment is not limited to this example.
  • a measured value of sCTLA-4 or a measured value of sPD-L1 may be acquired.
  • measurements of two free protein markers selected from sPD-1, sCTLA-4 and sPD-L1 may be obtained.
  • measured values of sPD-1, sCTLA-4, and sPD-L1 may be acquired.
  • step S401 the CPU 310 acquires optical information (chemiluminescence signal) from the immunoassay device 20, calculates a measured value of sPD-1 from the acquired optical information, and stores it in the hard disk 313.
  • step S402 the CPU 310 outputs the acquired measurement value of sPD-1 and displays it on the display unit 302 or causes the printer to print it.
  • a predetermined threshold value corresponding to the marker may be output together with the measured value of the acquired free protein marker.
  • the measured value of the free protein marker obtained by the acquisition device is information indicating the response of the immune checkpoint inhibitor to the subject by comparison with a predetermined threshold corresponding to each marker. Specifically, it is the same as that described for the acquisition method of the present embodiment.
  • the phrase “immune checkpoint inhibitor responds to a subject” means that “immune checkpoint inhibitor is highly likely to respond to a subject”, and “the subject is In other words, it is selected as an administration subject of an immune checkpoint inhibitor.
  • the immune checkpoint inhibitor does not respond to the subject means “the possibility that the immune checkpoint inhibitor does not respond to the subject is low”, and “the subject does not respond to the immune checkpoint” In other words, it is not selected as an inhibitor administration target.
  • the cancer treatment method of this embodiment includes a step of administering an immune checkpoint inhibitor to a cancer patient based on the measurement result of a free protein marker in a liquid sample collected from the cancer patient.
  • the free protein marker is at least one selected from free PD-1, free CTLA-4 and free PD-L1.
  • the free protein marker is at least two selected from sPD-1, sCTLA-4 and sPD-L1. More preferably, the free protein markers are sPD-1, sCTLA-4 and sPD-L1.
  • the immune checkpoint inhibitor may be a preparation containing at least one of anti-PD-1 antibody, anti-CTLA-4 antibody and anti-PD-L1 antibody as an active ingredient.
  • it is a preparation comprising an anti-PD-1 antibody as an active ingredient, and in one embodiment, nivolumab or pembrolizumab.
  • the above administration step can be performed on a patient who is determined to be effective from an immune checkpoint inhibitor based on the measurement result of the free protein marker.
  • the determination of the efficacy of the immune checkpoint inhibitor in this method is the same as that described in the above determination method.
  • the type of cancer, the liquid sample, the means for measuring the free protein marker, and the determination are the same as those described in the above determination method.
  • the treatment method of the present embodiment is suitable for lung cancer patients, esophageal cancer patients, and endometrial cancer patients.
  • the therapeutically effective amount is appropriately determined according to the type of cancer, the degree of cancer progression, the type of immune checkpoint inhibitor, treatment guidelines, and the like.
  • One embodiment of the present invention is a pharmaceutical for cancer treatment containing an immune checkpoint inhibitor, characterized in that the pharmaceutical is administered to a cancer patient determined to be effective by the above-described determination method. Relates to the composition.
  • the pharmaceutical composition for cancer treatment may be an immune checkpoint inhibitor itself. Details of the immune checkpoint inhibitor are as described above.
  • the pharmaceutical composition for cancer treatment may contain a pharmaceutically acceptable ingredient. Such components can be appropriately selected from pharmaceutical additives known in the art.
  • the pharmaceutical composition for cancer treatment may further comprise a cancer therapeutic agent different from the immune checkpoint inhibitor. Examples of such cancer therapeutic agents include chemotherapeutic agents and molecular targeted drugs.
  • the form of the pharmaceutical composition for cancer treatment is not particularly limited, and may be a solid such as a crystal or a powder, or may be a liquid such as a solution, an emulsion, or a suspension.
  • Example 1 For patients with non-small cell lung cancer, the relationship between the concentration of free protein marker in the blood sample before administration of the immune checkpoint inhibitor and the therapeutic effect after administration of the immune checkpoint inhibitor was examined.
  • Non-small cell lung cancer patients (50 patients) who were not administered immune checkpoint inhibitors were subjects.
  • nivolumab (Ono Pharmaceutical Co., Ltd.), an immune checkpoint inhibitor, was administered to all patients (50 cases), and progress was observed using progression-free survival (PFS) as an evaluation index.
  • PFS progression-free survival
  • PD-L1 immunostaining of tumor tissue Before administration of an immune checkpoint inhibitor, tumor tissues were collected from the above patients (50 cases) by surgery or biopsy, and FFPE tissue specimens were prepared by a conventional method. The obtained FFPE tissue specimen was sliced, and the obtained sliced sections were subjected to deparaffinization treatment, hydrophilization treatment, and antigen activation treatment by conventional methods. The tissue slice was obtained by performing immunohistochemical staining on the sliced slices after treatment using an anti-PD-L1 antibody (28-8 antibody). The obtained tissue specimen was observed with an optical microscope, and tumor cells in which the cell membrane was partially or completely stained were counted as “PD-L1-positive tumor cells”.
  • TPS was calculated as a percentage of PD-L1-positive tumor cells by the above formula. As a result, TPS was 50% or more in 13 cases out of 50 cases. The remaining 37 cases had a TPS of less than 50%.
  • patients whose TPS is less than 50% are also referred to as “PD-L1 negative cases”.
  • Second reagent (streptavidin-binding particle-containing solution) Magnetic particles (average particle size 2 ⁇ m. Streptavidin amount per gram of magnetic particles is 2.9-3.5 mg, hereinafter also referred to as “STA-coupled magnetic particles”) in 10 mM HEPES buffer ( Washed 3 times with pH 7.5). After washing, add the STA-bound magnetic particles to 10 mM HEPES (pH 7.5) so that the streptavidin concentration is 18-22 ⁇ g / ml (STA-bound magnetic particle concentration is 0.48-0.52 mg / ml). A binding particle-containing liquid was obtained.
  • Anti-CTLA-4 antibody (clone No. 14D3) was used as a detection antibody. This antibody was labeled with alkaline phosphatase and purified as described above. The obtained alkaline phosphatase-labeled anti-CTLA-4 antibody was added to 100 mM MES (pH 6.5) at a 75-fold dilution to prepare a third reagent for CTLA-4 detection.
  • the third reagent for PD-1 detection is 100 ⁇ L
  • the third reagent for CTLA-4 detection is 100 ⁇ L
  • the third reagent for PD-L1 detection is 80 ⁇ L.
  • the magnetic particles in the obtained mixture were collected to remove the supernatant, and the HISCL cleaning solution (300 ⁇ L) was added to wash the magnetic particles.
  • the supernatant was removed, the fourth reagent (50 ⁇ L) and the fifth reagent (100 ⁇ L) were added to the magnetic particles, mixed well, and the chemiluminescence intensity was measured.
  • the reaction time was 17 minutes throughout the entire process.
  • the chemiluminescence intensity obtained was applied to a calibration curve, and the concentration of each free protein marker was calculated.
  • Example 1 results in Example 1, patients whose PFS was 6 months or more were classified into a group in which nivolumab responded, and patients whose PFS was less than 6 months were classified into a group in which nivolumab did not respond. Of all patients (50 patients), 21 patients had a PFS of 6 months or more, and 29 patients had a PFS of less than 6 months. Of the PD-L1 negative cases (37 cases), 10 patients had a PFS of 6 months or more, and 27 patients had a PFS of less than 6 months. 6A to 6C show the distribution of measured values (pg / mL) of each free protein marker in plasma before administration of nivolumab in PD-L1 negative cases.
  • response indicates a group in which nivolumab has responded
  • non-response indicates a group in which nivolumab has not responded
  • the broken line in the figure indicates the median value of the measured values. As shown in FIGS. 6A to 6C, it was found that the measured values of free PD-1, free CTLA-4 and free PD-L1 in blood samples tended to be low in patients who responded to nivolumab.
  • PD-L1 negative cases 37 cases were classified according to the measured values of each free protein marker and 6-month PFS. Moreover, the sensitivity and specificity when the response of nivolumab was determined based on the measured value of the marker were calculated. The results are shown in Tables 1 to 3.
  • “6-month PFS” classifies subjects whose PFS is 6 months or more as “+”, and subjects whose PFS is less than 6 months as “ ⁇ ”.
  • sPD-1”, “sCTLA-4” and “sPD-L1” classify subjects whose measured values were lower than the threshold as “+”, and subjects whose measured values were higher than the threshold. Was classified as "-”.
  • Example 1 the threshold corresponding to sPD-1 was 150 ⁇ pg / mL, the threshold corresponding to sCTLA-4 was 0.5 ⁇ pg / mL, and the threshold corresponding to sPD-L1 was 219 ⁇ pg / mL.
  • the 37 patients classified as PD-L1-negative cases were patients who were judged to be unresponsive to nivolumab by the conventional prediction method based on immunohistochemical staining. However, in this example, it was possible to further extract six patients from PD-L1 negative cases as patients who responded to nivolumab by the determination using the measured value of sPD-1. In addition, nine patients were determined by the determination using the measured value of sCTLA-4, and seven patients were determined by the determination using the measured value of sPD-L1 as patients who responded to nivolumab.
  • Example 2 Based on the results of Example 1, the determination accuracy when the response of the immune checkpoint inhibitor was determined was confirmed.
  • the determination based on the PD-L1 expression rate in the tumor tissue shows that the specificity is high but the sensitivity is low. That is, in this determination, a patient who originally responds to an immune checkpoint inhibitor is overlooked. Therefore, in the following, determination based on the measured value of the free marker protein was further performed on subjects who were determined to be negative by the determination by immunohistochemical staining (TPS ⁇ 50%).
  • Example 2 Evaluation of response by immunohistochemical staining and free protein marker (2.1) Scoring of measured values of free protein markers For the PD-L1 negative cases (37 cases) of Example 1, the measured values of free protein markers (sPD-1 and sCTLA-4) in blood samples were used as threshold values. Based on the score. In Example 2, the median value of the measured values was used as the threshold value. As shown in Table 5, when both the measured value of sPD-1 and the measured value of sCTLA-4 were lower than the corresponding threshold values, the score was 0. When either one of the measured value of sPD-1 and the measured value of sCTLA-4 was lower than the corresponding threshold value, the score was 1. When both the measured value of sPD-1 and the measured value of sCTLA-4 were higher than the corresponding threshold values, the score was 2.
  • the efficacy of nivolumab was determined by combining the determination based on the immunohistochemical staining described in (2.1) above and the determination based on the measured value of the free protein marker.
  • FIG. 7 shows a determination flow based on this combination. The sensitivity and specificity of the determination were calculated. The results are shown in Table 7.
  • PD-L1 and sPD-1 and sCTLA-4 subjects with TPS of 50% or more and TPS of less than 50% and score of 0 Were classified as “+”, and the remaining subjects were classified as “ ⁇ ”.
  • the immune checkpoint inhibitor is effective by making a determination based on the measured value of the free protein marker in the blood sample with respect to the subject who showed a negative result in immunohistochemical staining. It has been shown that potential patients can be extracted.
  • Example 3 For the same subjects (50 cases) as in Example 1, the efficacy of nivolumab was determined based on the measured values of the three markers sPD-1, sCTLA-4, and sPD-L1. In addition, the efficacy of nivolumab was determined by combining the determination based on the measurement values of the three markers and the determination based on the immunohistochemical staining of Example 2.
  • the score was 2.
  • the score was 3.
  • the determination based on the measurement value of the marker in the blood sample had the same sensitivity and specificity as the determination based on the immunostaining of the tumor tissue. Since blood collection is less invasive than tumor tissue collection, it was found that the determination method of the present embodiment can be applied to patients who cannot excise tumor tissue.
  • Example 4 For esophageal cancer patients and endometrial cancer patients, the relationship between the concentration of the free protein marker in the blood sample before administration of the immune checkpoint inhibitor and the therapeutic effect after administration of the immune checkpoint inhibitor was examined.
  • Subjects The subjects were esophageal cancer patients (64 patients) and endometrial cancer patients (22 patients) who were not administered immune checkpoint inhibitors. All patients were administered nivolumab (Ono Pharmaceutical Co., Ltd.) and the course was observed using overall survival (OS) as an evaluation index.
  • OS overall survival
  • a Kaplan-Meier method survival curve was prepared by comparing a group with a high measured value and a group with a low measured value. The results are shown in FIGS.
  • the horizontal line indicates a line with a survival rate of 50%.
  • the numerical value of each group shown below the horizontal axis is the number of survivors at each time point on the horizontal axis.
  • the group with a low measured value is compared to the group with a high measured value (indicated by a broken line in the figure). It was found that OS tends to be prolonged by administration of immune checkpoint inhibitors. From these results, it was suggested that the determination method of the present embodiment can be applied to esophageal cancer patients and endometrial cancer patients.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)

Abstract

本発明は、免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定を補助する方法に関する。また、本発明は、この方法に用いるための試薬キットに関する。さらに、本発明は、免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定のための装置及びコンピュータプログラムに関する。

Description

免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定を補助する方法、試薬キット、装置及びコンピュータプログラム
　本発明は、免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定を補助する方法に関する。また、本発明は、この方法に用いるための試薬キットに関する。さらに、本発明は、免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定のための装置及びコンピュータプログラムに関する。
　活性化したＴ細胞の表面には、PD-1(Programmed cell death-1)と呼ばれる受容体分子が発現している(非特許文献１参照)。PD-1は、Ｔ細胞の過剰な活性化を抑制して、生体の免疫応答を負に制御する分子として知られている。また、活性化したＴ細胞の表面には、CTLA-4(Cytotoxic T lymphocyte antigen-4)と呼ばれる分子も発現している。CTLA-4も、PD-1と同様に、Ｔ細胞の活性化を抑制する機能を有する。一方、がん局所の細胞には、PD-1のリガンドであるPD-L1(Programmed cell death-ligand 1)を細胞表面に発現するものがある。そのようながん局所の細胞は、自らのPD-L1とＴ細胞のPD-1との結合を介してＴ細胞の活性化を抑制し、Ｔ細胞の攻撃を回避することが知られている。その結果、がんは生体内で増大する。実際、がん局所のPD-L1発現量とがん患者の予後不良率には相関関係がある。このように、PD-L1、PD-1及びCTLA-4は、免疫の制御に関与することから、免疫チェックポイント分子とも呼ばれる。
　近年、新たながんの治療薬として、免疫チェックポイント分子に対する抗体が注目されている。これらの抗体を有効成分として含む製剤は、免疫チェックポイント阻害剤とも呼ばれる。免疫チェックポイント阻害剤は、Ｔ細胞の活性化を抑制する上記の分子を阻害することによりＴ細胞の活性化を促進して、このＴ細胞の抗腫瘍応答性を増強させる。すなわち、免疫チェックポイント阻害剤による治療では、上記の抗体の投与によって生体の免疫状態を活性化させることにより、がんを排除する。
Agata Y.ら, Expression of the PD-1 antigen on the surface of stimulated mouse T and B lymphocytes. Int. Immunol., 1996, vol.8, p.765-772
　免疫チェックポイント阻害剤の奏効性予測を高い精度で判定可能な検査の開発が望まれる。これまでに、がん患者から採取した腫瘍組織を免疫染色し、PD-L1陽性腫瘍細胞の割合を確認することによって抗PD-1抗体薬や抗PD-L1抗体薬の有効性を予測する方法が知られている。本発明の課題は、免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の予測を行うことのできる新規方法を提供することである。
　本発明は、被検者から採取した液体試料中の遊離タンパク質マーカーを測定する工程と、測定結果に基づいて、該被検者に対する免疫チェックポイント阻害剤の奏効性を判定する工程とを含み、該遊離タンパク質マーカーが、遊離CTLA-4、遊離PD-1及び遊離PD-L1から選択される少なくとも１つである、免疫チェックポイント阻害剤の奏効性を判定する方法を提供する。
　本発明は、がん患者から採取した液体試料中の遊離タンパク質マーカーを測定する工程と、測定結果に基づいて、該患者に対する免疫チェックポイント阻害剤の奏効性を判定する工程と、免疫チェックポイント阻害剤が奏効すると判定された患者に免疫チェックポイント阻害剤を投与する工程とを含み、該遊離タンパク質マーカーが、遊離CTLA-4、遊離PD-1及び遊離PD-L1から選択される少なくとも１つである、がんの治療方法を提供する。
　本発明は、本実施形態の判定方法により免疫チェックポイント阻害剤が奏効すると判定されたがん患者に投与されることを特徴とする免疫チェックポイント阻害剤を含有するがん治療用医薬組成物、及び本実施形態の判定方法により免疫チェックポイント阻害剤が奏効すると判定されたがん患者に投与されることを特徴とする免疫チェックポイント阻害剤を含有するがん治療剤を提供する。
　本発明は、被検者から採取した液体試料中の遊離タンパク質マーカーの測定値を取得する工程を含み、該遊離タンパク質マーカーが遊離CTLA-4、遊離PD-1及び遊離PD-L1から選択される少なくとも１つであり、取得した遊離タンパク質マーカーの測定値が、各マーカーに対応する所定の閾値より低いとき、免疫チェックポイント阻害剤が該被検者に奏効することを示唆する、遊離タンパク質マーカーの測定値の取得方法を提供する。
　本発明は、遊離CTLA-4に特異的に結合可能な物質を含む試薬、遊離PD-1に特異的に結合可能な物質を含む試薬、及び遊離PD-L1と特異的に結合可能な物質を含む試薬から選択される少なくとも１つの試薬を含む、上記の判定を補助する方法に用いるための試薬キットを提供する。
　本発明は、被検者から採取した腫瘍組織の免疫染色を行い、PD-L1陽性腫瘍細胞の割合を算出する工程と、被検者から採取した液体試料中の遊離タンパク質マーカーを測定する工程と、算出結果と測定結果とに基づいて、被検者に対する免疫チェックポイント阻害剤の奏効性を判定する工程とを含み、該遊離タンパク質マーカーが、遊離CTLA-4、遊離PD-1及び遊離PD-L1から選択される少なくとも１つである、免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定を補助する方法を提供する。
　本発明は、プロセッサ及び該プロセッサの制御下にあるメモリを含むコンピュータを備え、該メモリには、被検者から採取した液体試料中の遊離タンパク質マーカーの測定値を取得するステップと、該マーカーの測定値に基づいて、該被検者に対する免疫チェックポイント阻害剤の奏効性を判定するステップとを上記コンピュータに実行させるためのコンピュータプログラムが記録されており、該遊離タンパク質マーカーが、遊離CTLA-4、遊離PD-1及び遊離PD-L1から選択される少なくとも１つである、免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定装置を提供する。
　本発明は、プロセッサ及び該プロセッサの制御下にあるメモリを含むコンピュータを備え、該メモリには、被検者から採取した液体試料中の遊離タンパク質マーカーの測定値を取得するステップを上記コンピュータに実行させるためのコンピュータプログラムが記録されており、該遊離タンパク質マーカーが、遊離CTLA-4、遊離PD-1及び遊離PD-L1から選択される少なくとも１つであり、取得した遊離タンパク質マーカーの測定値が、各マーカーに対応する所定の閾値より低いとき、免疫チェックポイント阻害剤が該被検者に奏効することを示唆する、遊離タンパク質マーカーの測定値の取得装置を提供する。
　本発明は、コンピュータが読み取り可能な媒体に記録されているコンピュータプログラムであって、該コンピュータプログラムが、被検者から採取した液体試料中の遊離タンパク質マーカーの測定値を取得するステップと、該マーカーの測定値に基づいて、該被検者に対する免疫チェックポイント阻害剤の奏効性を判定するステップとを該コンピュータに実行させるためのコンピュータプログラムであり、該遊離タンパク質マーカーが、遊離CTLA-4、遊離PD-1及び遊離PD-L1から選択される少なくとも１つである、免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定のためのコンピュータプログラムを提供する。
　本発明によれば、被検者に免疫チェックポイント阻害剤を投与する前に、該被検者に対して免疫チェックポイント阻害剤が奏効するか否かを判定することを可能にする。
本実施形態の試薬キットの一例を示す概略図である。 本実施形態の試薬キットの一例を示す概略図である。 本実施形態の試薬キットの一例を示す概略図である。 免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定装置の一例を示す概略図である。 上記の判定装置のハードウェア構成を示すブロック図である。 上記の判定装置を用いた免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定のフローチャートである。 上記の判定装置を用いた免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定のフローチャートである。 上記の判定装置を用いた免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定のフローチャートである。 遊離タンパク質マーカーの測定値の取得装置による処理手順を示すフローチャートである。 PD-L1陰性症例に分類された肺がん患者における、免疫チェックポイント阻害剤の投与前の血漿中の遊離PD-1の測定値(pg/mL)の分布を示すグラフである。 PD-L1陰性症例に分類された肺がん患者における、免疫チェックポイント阻害剤の投与前の血漿中の遊離CTLA-4の測定値(pg/mL)の分布を示すグラフである。 PD-L1陰性症例に分類された肺がん患者における、免疫チェックポイント阻害剤の投与前の血漿中の遊離PD-L1の測定値(pg/mL)の分布を示すグラフである。 PD-L1の免疫組織染色による判定と、遊離タンパク質マーカーの測定値による判定とを組み合わせた、免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定フローである。 免疫チェックポイント阻害剤を投与した食道がん患者における、遊離PD-1の測定値と全生存期間(OS)との相関を示す生存率曲線である。 免疫チェックポイント阻害剤を投与した食道がん患者における、遊離CTLA-4の測定値とOSとの相関を示す生存率曲線である 免疫チェックポイント阻害剤を投与した食道がん患者における、遊離PD-L1の測定値とOSとの相関を示す生存率曲線である。 免疫チェックポイント阻害剤を投与した子宮体がん患者における、遊離PD-1の測定値とOSとの相関を示す生存率曲線である。 免疫チェックポイント阻害剤を投与した子宮体がん患者における、遊離CTLA-4の測定値とOSとの相関を示す生存率曲線である 免疫チェックポイント阻害剤を投与した子宮体がん患者における、遊離PD-L1の測定値とOSとの相関を示す生存率曲線である。
［１．免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定方法］
　本実施形態の免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定方法(以下、「判定方法」ともいう)では、まず、被検者から採取した液体試料中の遊離タンパク質マーカーとして遊離PD-1、遊離CTLA-4及び遊離PD-L1から選択される少なくとも１つを測定する。好ましい実施形態では、遊離PD-1、遊離CTLA-4及び遊離PD-L1から選択される少なくとも２つを測定する。より好ましい実施形態では、遊離PD-1、遊離CTLA-4及び遊離PD-L1を測定する。
　免疫チェックポイント阻害剤は、有効成分として、抗PD-1抗体、抗CTLA-4抗体及び抗PD-L1抗体の少なくとも１種を含む製剤であればよい。有効成分として抗PD-1抗体を含む製剤としては、ニボルマブ、ペムブロリズマブなどが公知である。有効成分として抗PD-L1抗体を含む製剤としては、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブなどが公知である。有効成分として抗CTLA-4抗体を含む製剤としては、イピリムマブなどが公知である。本実施形態の判定方法は、特に、有効成分として抗PD-1抗体を含む製剤の奏効性の判定に適する。
　本実施形態の方法における被検者としては、例えば、がんの罹患が疑われる者及びがん患者が挙げられる。本明細書において「がん患者」は、腫瘍組織の除去後の被検者を含む。腫瘍組織の除去後に、補助化学療法として免疫チェックポイント阻害剤が投与される場合がある。本実施形態の判定方法は、補助化学療法のための免疫チェックポイント阻害剤の奏効性判定にも用いられ得る。がん患者としては、免疫チェックポイント阻害剤による治療を受ける前のがん患者が好ましい。被検者は、免疫チェックポイント阻害剤以外の治療を受けていてもよい。そのような治療としては、手術、放射線照射、化学療法及びこれらの組み合わせなどが挙げられる。がんの種類は特に限定されず、例えば、固形がん及び血液がんなどの種々のがんが挙げられる。固形がんとしては、例えば、肺がん、食道がん、子宮体がん、腎臓がん、卵巣がん、メラノーマ、胃がん、大腸がんなどが挙げられる。血液がんとしては、例えば、白血病、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫などが挙げられる。これらの中でも、肺がん(特に非小細胞肺がん)、食道がん及び子宮体がんが本実施形態の判定方法に適している。
　上述のように、がん患者から採取した腫瘍組織を免疫染色し、PD-L1陽性腫瘍細胞の割合を確認することにより、免疫チェックポイント阻害剤の有効性を予測する方法が知られている。しかし、この方法には腫瘍組織が用いられるので、例えば身体的負担等の理由により腫瘍組織を採取することができない被検者には適用できない。一方、本実施形態の判定方法では、血液試料など、侵襲性の低い方法で採取された試料を用いることができる。すなわち、本実施形態の判定方法は、腫瘍組織の採取が難しい被検者にも適用できる。また、免疫染色は、検査手技が煩雑であるので自動化に適していない。これに対して、液体試料中の遊離タンパク質マーカーの測定は自動化に適しており、本実施形態の判定方法は、病理検査の効率化を推進するという観点から好適である。
　上記の免疫染色と、本実施形態の判定方法とを組み合わせて用いることも可能である。これにより、判定精度が向上し得る。例えば、後述の実施例に示されるように、本実施形態の判定方法は、PD-L1陽性腫瘍細胞の割合が所定の値より低い患者から、免疫チェックポイント阻害剤が奏効する患者を抽出することができる。この場合、被検者は、腫瘍組織の免疫染色により、PD-L1陽性腫瘍細胞の割合が所定の値より低いと判定されたがん患者である。
　腫瘍組織の免疫染色は、当該技術分野において公知の免疫組織染色法により行うことができる。特に、病理診断のガイドラインなどに従って、免疫チェックポイント分子を特異的に認識する抗体を用いて免疫組織染色を行うことが好ましい。免疫組織染色は、市販の染色用キットを用いて行ってもよい。腫瘍組織のPD-L1免疫染色を行うためのキットとして、PD-L1 IHC 22C3 pharmDx「ダコ」(Agilent Technologies, Inc.)、PD-L1 IHC 28-8 pharmDx「ダコ」(Agilent Technologies, Inc.)などが公知である。
　腫瘍組織のPD-L1免疫染色は、例えば、次のようにして行うことができる。まず、被検者から腫瘍組織を採取し、得られた腫瘍組織を１時間以内に10%中性緩衝ホルマリンで固定する。固定時間は、12時間以上72時間以内とする。固定した腫瘍組織をエタノールにより脱水する。脱水した腫瘍組織をキシレンに浸して透徹処理を行う。処理後の腫瘍組織を、融解したパラフィン(60℃以下)に浸漬して冷却し、ホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE)組織標本を得る。得られたFFPE組織標本を厚さ4～5μmで薄切し、スライドガラスに貼り付ける。得られた薄切切片にキシレンを添加して、脱パラフィン処理をする。脱パラフィン処理した薄切切片をエタノールに浸して親水化処理をする。親水化処理した薄切切片を貼り付けたスライドガラスを、市販の抗原賦活化液に入れて加熱することにより、抗原賦活化処理をする。処理後の薄切切片に、抗PD-L1抗体を用いて免疫組織染色を行って、組織標本を得る。
　PD-L1陽性腫瘍細胞の割合は、腫瘍組織の免疫染色により得られた組織標本中の全腫瘍細胞に対する、部分的又は完全な細胞膜染色を呈する腫瘍細胞の割合である。PD-L1陽性腫瘍細胞の割合として、PD-L1 IHC 22C3 pharmDx「ダコ」の染色結果判定マニュアルに定義されるTumor Proportion Score(TPS)を用いてもよい。TPSは、下記の式により算出できる。式中、「全腫瘍細胞数」は、腫瘍組織のHE染色により得られた組織標本中の全ての腫瘍細胞の数であり、少なくとも100個であることが必要である。「PD-L1陽性腫瘍細胞数」は、組織標本中の部分的又は完全な細胞膜PD-L1免疫染色を呈する腫瘍細胞の数である。PD-L1陽性腫瘍細胞には、マクロファージ、リンパ球などの腫瘍関連免疫細胞は含まれない。各細胞数は、光学顕微鏡での観察により計数される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000001
　上記の所定の値は、PD-L1陽性腫瘍細胞の割合のカットオフ値である。所定の値自体は、特に限定されず、免疫染色に用いた抗体(又は染色用キット)、及び対象となる癌種などに応じて適宜決定される。例えば、PD-L1 IHC 22C3 pharmDx「ダコ」を用いて非小細胞肺がんの腫瘍組織を免疫染色した場合では、50%のTPSを所定の値として、ペムブロリズマブによる一次治療の対象が決定される。また、１%のTPSを所定の値として、ペムブロリズマブによる二次治療の対象が決定される。具体的には、TPSが50%以上のときはPD-L1陽性(高発現)と判定し、TPS１%以上且つ50%より低いときはPD-L1陽性(低発現)と判定し、TPSが１%より低いときはPD-L1陰性(非発現)と判定する。PD-L1陽性(高発現)と判定された被検者は、ペムブロリズマブによる一次治療の対象となる。PD-L1陽性(低発現)と判定された被検者は、一次治療の対象から除外されるが、ペムブロリズマブによる二次治療の対象となる。PD-L1陰性と判定された被検者は、ペムブロリズマブによる治療の対象から除外される。
　本実施形態における被検者は、PD-L1陽性腫瘍細胞の割合が所定の値より低いと判定されたがん患者であり得る。PD-L1陽性腫瘍細胞の割合が所定の値より低いと判定されたがん患者は、免疫チェックポイント阻害剤による一次治療の対象から除外される患者であってもよい。
　液体試料は、被検者から採取され、遊離タンパク質が含まれ得る液状の試料であれば特に限定されない。そのような液体試料としては、例えば、血液試料、脳脊髄液、胸水、腹水、リンパ液、尿などが挙げられる。本実施形態では、液体試料としては血液試料が好ましい。血液試料としては、全血、血漿及び血清が挙げられ、特に血漿及び血清が好ましい。
　液体試料に細胞などの不溶性の夾雑物が含まれる場合は、例えば、遠心分離、ろ過などの公知の手段により、液体試料から夾雑物を除去してもよい。また、液体試料は、必要に応じて適切な水性媒体で希釈してもよい。そのような水性媒体は、後述の測定を妨げないかぎり特に限定されず、例えば、水、生理食塩水、緩衝液などが挙げられる。緩衝液は、中性付近のpH(例えば６以上８以下のpH)で緩衝作用を有するかぎり、特に限定されない。そのような緩衝液は、例えば、HEPES、MES、Tris、PIPESなどのグッド緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水(PBS)などが挙げられる。
　遊離PD-1、遊離CTLA-4及び遊離PD-L1は、いずれも遊離タンパク質である。以下、遊離PD-1、遊離CTLA-4及び遊離PD-L1をそれぞれ「sPD-1」、「sCTLA-4」及び「sPD-L1」とも呼ぶ。本明細書において「遊離タンパク質」とは、細胞の表面から脱離して、該細胞の外部(液体試料中)に存在するタンパク質をいう。そのような遊離タンパク質は、液体試料の液体成分(液相)に可溶化したタンパク質、ベシクルに内包されたタンパク質、及びベシクルの表面に存在するタンパク質のいずれであってもよい。ベシクルは、膜で構成された小胞であれば特に限定されない。ベシクルは、内部に液相を含んでいてもよい。好ましいベシクルは細胞外小胞であり、例えば、エクソソーム、マイクロベシクル、アポトーシス小体などが挙げられる。
　遊離タンパク質マーカーを測定する手段は、液体試料に含まれる遊離タンパク質マーカーの量又は濃度を反映する値(以下、「マーカーの測定値」ともいう)を取得できるかぎり、特に限定されない。本実施形態では、遊離タンパク質マーカーと特異的に結合可能な物質を用いて、該マーカーを捕捉する方法が好ましい。このような物質により捕捉された遊離タンパク質マーカーを、当該技術において公知の方法で検出することにより、液体試料に含まれる遊離タンパク質マーカーを測定できる。
　遊離タンパク質マーカーと特異的に結合可能な物質としては、例えば、抗体、アプタマーなどが挙げられるが、それらの中でも抗体が特に好ましい。PD-1、CTLA-4及びPD-L1の各タンパク質に対する抗体自体は、当該技術において公知であり、一般に入手可能である。遊離タンパク質マーカーに対する抗体は、遊離タンパク質マーカーと特異的に結合できる抗体であれば、特に限定されない。そのような抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、及びそれらの断片(例えば、Fab、F(ab')2など)のいずれであってもよい。また、市販の抗体を用いてもよい。
　抗体を用いて遊離タンパク質マーカーを測定する方法は、特に限定されず、公知の免疫学的測定法から適宜選択できる。本実施形態においては、酵素結合免疫吸着法(ELISA法)が好ましく、サンドイッチELISA法が特に好ましい。測定工程の一例として、サンドイッチELISA法により、液体試料中の遊離タンパク質マーカーを測定する場合について、以下に説明する。
　まず、遊離タンパク質マーカーと、遊離タンパク質マーカーを捕捉するための抗体(以下、「捕捉用抗体」ともいう)と、遊離タンパク質マーカーを検出するための抗体(以下、「検出用抗体」ともいう)とを含む複合体を固相上に形成させる。該複合体は、遊離タンパク質マーカーを含み得る液体試料と、捕捉用抗体と、検出用抗体とを混合することにより形成できる。そして、複合体を含む溶液を、捕捉用抗体を固定できる固相と接触させることにより、上記の複合体を固相上に形成させることができる。あるいは、捕捉用抗体をあらかじめ固定させた固相を用いてもよい。すなわち、捕捉用抗体を固定させた固相と、液体試料と、検出用抗体とを接触することにより、上記の複合体を固相上に形成させることができる。なお、捕捉用抗体及び検出用抗体がいずれもモノクローナル抗体の場合は、互いのエピトープが異なっていることが好ましい。
　捕捉用抗体の固相への固定の態様は、特に限定されない。例えば、捕捉用抗体と固相とを直接結合させてもよいし、捕捉用抗体と固相とを別の物質を介して間接的に結合させてもよい。直接の結合としては、例えば、物理的吸着などが挙げられる。間接的な結合としては、例えば、ビオチンと、アビジン又はストレプトアビジン(以下、「アビジン類」ともいう)との組み合わせを介した結合が挙げられる。この場合、捕捉用抗体をあらかじめビオチンで修飾し、固相にアビジン類をあらかじめ結合させておくことにより、ビオチンとアビジン類との結合を介して、捕捉用抗体と固相とを間接的に結合させることができる。
　固相の素材は特に限定されず、例えば、有機高分子化合物、無機化合物、生体高分子などから選択できる。有機高分子化合物としては、ラテックス、ポリスチレン、ポリプロピレンなどが挙げられる。無機化合物としては、磁性体(酸化鉄、酸化クロム及びフェライトなど)、シリカ、アルミナ、ガラスなどが挙げられる。生体高分子としては、不溶性アガロース、不溶性デキストラン、ゼラチン、セルロースなどが挙げられる。これらのうちの２種以上を組み合わせて用いてもよい。固相の形状は特に限定されず、例えば、粒子、膜、マイクロプレート、マイクロチューブ、試験管などが挙げられる。それらの中でも粒子が好ましく、磁性粒子が特に好ましい。
　本実施形態においては、複合体の形成工程と複合体の検出工程との間に、複合体を形成していない未反応の遊離成分を除去するB/F(Bound/Free)分離を行ってもよい。未反応の遊離成分とは、複合体を構成しない成分をいう。例えば、遊離タンパク質マーカーと結合しなかった捕捉用抗体及び検出用抗体などが挙げられる。B/F分離の手段は特に限定されないが、固相が粒子であれば、遠心分離により、複合体を捕捉した固相だけを回収することによりB/F分離ができる。固相がマイクロプレートやマイクロチューブなどの容器であれば、未反応の遊離成分を含む液を除去することによりB/F分離ができる。また、固相が磁性粒子の場合は、磁石で磁性粒子を磁気的に拘束した状態でノズルによって未反応の遊離成分を含む液を吸引除去することによりB/F分離ができ、自動化の観点で好ましい。未反応の遊離成分を除去した後、複合体を捕捉した固相をPBSなどの適切な水性媒体で洗浄してもよい。
　そして、固相上に形成された複合体を、当該技術において公知の方法で検出することにより、液体試料に含まれる遊離タンパク質マーカーの測定値を取得できる。例えば、検出用抗体として、標識物質で標識した抗体を用いた場合は、その標識物質により生じるシグナルを検出することにより、液体試料におけるマーカーの測定値を取得できる。あるいは、検出用抗体に対する標識二次抗体を用いた場合も、同様にして液体試料におけるマーカーの測定値を取得できる。
　また、抗体を用いて遊離タンパク質マーカーを測定する方法の例として、特開平１－２５４８６８号公報に記載の免疫複合体転移法を用いることもできる。
　本明細書において、「シグナルを検出する」とは、シグナルの有無を定性的に検出すること、シグナル強度を定量すること、及び、シグナルの強度を半定量的に検出することを含む。半定量的な検出とは、シグナルの強度を、「シグナル発生せず」、「弱」、「中」、「強」などのように段階的に示すことをいう。本実施形態では、シグナルの強度を定量的又は半定量的に検出することが好ましい。
　標識物質は、特に限定されない。標識物質は、例えば、それ自体がシグナルを発生する物質(以下、「シグナル発生物質」ともいう)であってもよいし、他の物質の反応を触媒してシグナルを発生させる物質であってもよい。シグナル発生物質としては、例えば、蛍光物質、放射性同位元素などが挙げられる。他の物質の反応を触媒して検出可能なシグナルを発生させる物質としては、例えば、酵素が挙げられる。酵素としては、アルカリホスファターゼ、ペルオキシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼなどが挙げられる。蛍光物質としては、フルオレセインイソチオシアネート(FITC)、ローダミン、Alexa Fluor(登録商標)などの蛍光色素、GFPなどの蛍光タンパク質などが挙げられる。放射性同位元素としては、125Ｉ、14Ｃ、32Ｐなどが挙げられる。それらの中でも、標識物質として、酵素が好ましく、アルカリホスファターゼ及びペルオキシダーゼが特に好ましい。
　シグナルを検出する方法自体は、当該技術において公知である。本実施形態では、上記の標識物質に由来するシグナルの種類に応じた測定方法を適宜選択すればよい。例えば、標識物質が酵素である場合、該酵素に対する基質を反応させることによって発生する光、色などのシグナルを、分光光度計などの公知の装置を用いて測定することにより行うことができる。
　酵素の基質は、該酵素の種類に応じて公知の基質から適宜選択できる。例えば、酵素としてアルカリホスファターゼを用いる場合、基質として、CDP-Star(登録商標)(4-クロロ-3-(メトキシスピロ[1, 2-ジオキセタン-3, 2'-(5'-クロロ)トリクシロ[3. 3. 1. 13, 7]デカン]-4-イル)フェニルリン酸２ナトリウム)、CSPD(登録商標)(3-(4-メトキシスピロ[1, 2-ジオキセタン-3, 2-(5'-クロロ)トリシクロ[3. 3. 1. 13, 7]デカン]-4-イル)フェニルリン酸２ナトリウム)などの化学発光基質、5-ブロモ-4-クロロ-3-インドリルリン酸(BCIP)、5-ブロモ-6-クロロ－インドリルリン酸２ナトリウム、p-ニトロフェニルリン酸などの発色基質が挙げられる。また、酵素としてペルオキシダーゼを用いる場合、基質としては、ルミノール及びその誘導体などの化学発光基質、2, 2'-アジノビス(3-エチルベンゾチアゾリン-6-スルホン酸アンモニウム)(ABTS)、1, 2-フェニレンジアミン(OPD)、3, 3',5, 5'-テトラメチルベンジジン(TMB)などの発色基質が挙げられる。
　標識物質が放射性同位体である場合は、シグナルとしての放射線を、シンチレーションカウンターなどの公知の装置を用いて測定できる。また、標識物質が蛍光物質である場合は、シグナルとしての蛍光を、蛍光マイクロプレートリーダーなどの公知の装置を用いて測定できる。なお、励起波長及び蛍光波長は、用いた蛍光物質の種類に応じて適宜決定できる。
　シグナルの検出結果は、マーカーの測定値として用いることができる。例えば、シグナルの強度を定量的に検出する場合は、シグナル強度の測定値自体又は該測定値から取得される値を、マーカーの測定値として用いることができる。シグナル強度の測定値から取得される値としては、例えば、該測定値から陰性対照試料の測定値又はバックグラウンドの値を差し引いた値、該測定値を検量線に当てはめて取得した値などが挙げられる。陰性対照試料は、適宜選択できるが、例えば、健常人から得た液体試料などが挙げられる。
　本実施形態では、磁性粒子に固定された捕捉用抗体と、標識物質で標識された検出用抗体とを用いるサンドイッチELISA法により、液体試料に含まれる遊離タンパク質マーカーを測定することが好ましい。この場合、測定は、HISCLシリーズ(シスメックス株式会社製)などの市販の全自動免疫測定装置を用いて行ってもよい。
　次いで、本実施形態の判定方法では、測定結果に基づいて、被検者に対する免疫チェックポイント阻害剤の奏効性を判定する。本実施形態では、測定により取得した遊離タンパク質マーカーの測定値と、各マーカーに対応する所定の閾値とを比較し、比較結果に基づいて判定を行うことが好ましい。具体的には、該測定値が該所定の閾値より低いとき、免疫チェックポイント阻害剤が被検者に奏効すると判定してもよい。また、該測定値が該所定の閾値以上であるとき、免疫チェックポイント阻害剤が被検者に奏効しないと判定してもよい。
　sPD-1、sCTLA-4及びsPD-L1のうち、いずれか１つの測定値を取得している場合、下記のように判定を行うことができる。
　一実施形態において、sPD-1の測定値を取得している場合、sPD-1の測定値と、sPD-1に対応する閾値とを比較する。sPD-1の測定値が閾値より低いとき、免疫チェックポイント阻害剤は被検者に奏効すると判定してもよい。また、sPD-1の測定値が閾値以上であるとき、免疫チェックポイント阻害剤は被検者に奏効しないと判定してもよい。
　別の実施形態において、sCTLA-4の測定値を取得している場合、sCTLA-4の測定値と、sCTLA-4に対応する閾値とを比較する。sCTLA-4の測定値が閾値より低いとき、免疫チェックポイント阻害剤は被検者に奏効すると判定してもよい。また、sCTLA-4の測定値が閾値以上であるとき、免疫チェックポイント阻害剤は被検者に奏効しないと判定してもよい。
　別の実施形態において、sPD-L1の測定値を取得している場合、sPD-L1の測定値と、sPD-L1に対応する閾値とを比較する。sPD-L1の測定値が閾値より低いとき、免疫チェックポイント阻害剤は被検者に奏効すると判定してもよい。また、sPD-L1の測定値が閾値以上であるとき、免疫チェックポイント阻害剤は被検者に奏効しないと判定してもよい。
　sPD-1、sCTLA-4及びsPD-L1のうち、２つ又は３つの測定値を取得している場合、取得したマーカーの測定値の全てが、各マーカーに対応する所定の閾値より低いとき、免疫チェックポイント阻害剤は被検者に奏効すると判定してもよい。また、取得したマーカーの測定値の少なくとも１つが、該マーカーに対応する所定の閾値以上であるとき、免疫チェックポイント阻害剤は被検者に奏効しないと判定してもよい。具体的には、下記のとおりである。
　一実施形態において、sPD-1及びsCTLA-4の測定値を取得している場合、sPD-1の測定値と第１の閾値とを比較し、sCTLA-4の測定値と第２の閾値とを比較する。この例において、第１の閾値は、sPD-1に対応する閾値であり、第２の閾値は、sCTLA-4に対応する閾値である。sPD-1の測定値が第１の閾値より低く、且つsCTLA-4の測定値が第２の閾値より低いとき、免疫チェックポイント阻害剤は被検者に奏効すると判定してもよい。また、sPD-1の測定値が第１の閾値以上であるか、又はsCTLA-4の測定値が第２の閾値以上であるとき、免疫チェックポイント阻害剤は被検者に奏効しないと判定してもよい。
　別の実施形態において、sPD-1及びsPD-L1の測定値を取得している場合、sPD-1の測定値と第１の閾値とを比較し、sPD-L1の測定値と第２の閾値とを比較する。この例において、第１の閾値は、sPD-1に対応する閾値であり、第２の閾値は、sPD-L1に対応する閾値である。sPD-1の測定値が第１の閾値より低く、且つsPD-L1の測定値が第２の閾値より低いとき、免疫チェックポイント阻害剤は被検者に奏効すると判定してもよい。また、sPD-1の測定値が第１の閾値以上であるか、又はsPD-L1の測定値が第２の閾値以上であるとき、免疫チェックポイント阻害剤は被検者に奏効しないと判定してもよい。
　別の実施形態において、sCTLA-4及びsPD-L1の測定値を取得している場合、sCTLA-4の測定値と第１の閾値とを比較し、sPD-L1の測定値と第２の閾値とを比較する。この例において、第１の閾値は、sCTLA-4に対応する閾値であり、第２の閾値は、sPD-L1に対応する閾値である。sCTLA-4の測定値が第１の閾値より低く、且つsPD-L1の測定値が第２の閾値より低いとき、免疫チェックポイント阻害剤は被検者に奏効すると判定してもよい。また、sCTLA-4の測定値が第１の閾値以上であるか、又はsPD-L1の測定値が第２の閾値以上であるとき、免疫チェックポイント阻害剤は被検者に奏効しないと判定してもよい。
　別の実施形態において、sPD-1、sCTLA-4及びsPD-L1の測定値を取得している場合、sPD-1の測定値と第１の閾値とを比較し、sCTLA-4の測定値と第２の閾値とを比較し、sPD-L1の測定値と第３の閾値とを比較する。この例において、第１の閾値は、sPD-1に対応する閾値であり、第２の閾値は、sCTLA-4に対応する閾値であり、第３の閾値は、sPD-L1に対応する閾値である。sPD-1の測定値が第１の閾値より低く、sCTLA-4の測定値が第２の閾値より低く、且つsPD-L1の測定値が第３の閾値より低いとき、免疫チェックポイント阻害剤は被検者に奏効すると判定してもよい。また、sPD-1の測定値が第１の閾値以上であるか、sCTLA-4の測定値が第２の閾値以上であるか、又はsPD-L1の測定値が第３の閾値以上であるとき、免疫チェックポイント阻害剤は被検者に奏効しないと判定してもよい。
　本実施形態では、取得した遊離タンパク質マーカーの測定値と、各マーカーに対応する閾値との比較結果をスコアにしてもよい。例えば、取得した遊離タンパク質マーカーの測定値が、該マーカーに対応する閾値よりも低いとき、スコアを０とする。また、取得した遊離タンパク質マーカーの測定値が、該マーカーに対応する閾値以上であるとき、スコアを１とする。２つ以上の遊離タンパク質マーカーの測定値を取得している場合は、各マーカーのスコアを合計する。例えば、sPD-1及びsCTLA-4の測定値を取得している場合、sPD-1の測定値及びsCTLA-4の測定値の両方が、それぞれに対応する閾値よりも低いとき、スコアは０となる。sPD-1の測定値及びsCTLA-4の測定値のいずれか一方が、それに対応する閾値以上であるとき、スコアは１となる。sPD-1の測定値及びsCTLA-4の測定値の両方が、それぞれに対応する閾値以上であるとき、スコアは２となる。sPD-1の測定値及びsCTLA-4の測定値のいずれか一方に代えてsPD-L1の測定値を取得している場合も、同様にしてスコアを算出できる。
　sPD-1、sCTLA-4及びsPD-L1の測定値を取得している場合、sPD-1の測定値、sCTLA-4の測定値及びsPD-L1の測定値の全てが、それぞれに対応する閾値よりも低いとき、スコアは０となる。sPD-1の測定値、sCTLA-4の測定値及びsPD-L1の測定値のいずれか１つが、それに対応する閾値以上であるとき、スコアは１となる。sPD-1の測定値、sCTLA-4の測定値及びsPD-L1の測定値のいずれか２つが、それぞれに対応する閾値以上であるとき、スコアは２となる。sPD-1の測定値、sCTLA-4の測定値及びsPD-L1の測定値の全てが、それぞれに対応する閾値以上であるとき、スコアは３となる。
　本実施形態では、スコアが０のとき、免疫チェックポイント阻害剤は被検者に奏効すると判定してもよい。また、スコアが１以上であるとき、免疫チェックポイント阻害剤は被検者に奏効しないと判定してもよい。
　上記の各マーカーに対応する所定の閾値は、適宜設定することができる。所定の閾値は、例えば、がん患者から採取した液体試料における遊離タンパク質マーカーのデータに基づいて設定することができる。例えば、次のようにして所定の閾値を設定してもよい。まず、免疫チェックポイント阻害剤を投与されていない複数のがん患者から液体試料を採取する。液体試料の採取後、がん患者に免疫チェックポイント阻害剤を投与して、経過を観察する。腫瘍の大きさの変化、無増悪生存期間(PFS)、全生存期間(OS)などの公知の評価指標に基づいて、免疫チェックポイント阻害剤の奏効性を確認する。そして、液体試料を、免疫チェックポイント阻害剤が奏効した患者の試料と、免疫チェックポイント阻害剤が奏効しなかった患者の試料とに分類する。それぞれの試料について、遊離タンパク質マーカーを測定して測定値を取得する。そして、取得した測定値から、免疫チェックポイント阻害剤が奏効した患者と、免疫チェックポイント阻害剤が奏効しなかった患者とを区別可能な値を求め、その値を所定の閾値として設定する。所定の閾値の設定に際しては、判定の感度、特異度、陽性的中率及び陰性的中率も考慮することが好ましい。
　本実施形態の判定方法は、免疫チェックポイント阻害剤が被検者に奏効するか否かを、免疫チェックポイント阻害剤の投与前に判定することを可能にする。これにより、医師などに、免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定を補助する情報が提供される。また、本実施形態の判定方法は、免疫チェックポイント阻害剤の効果の予測方法と言い換えることができる。
［２．遊離タンパク質マーカーの測定値の取得方法］
　上記の判定方法で得られる遊離タンパク質マーカーの測定値は、被検者に対する免疫チェックポイント阻害剤の奏効性に関する情報ともいえる。よって、本発明の範囲には、遊離タンパク質マーカーの測定値の取得方法(以下、「取得方法」ともいう)も含まれる。
　本実施形態の取得方法では、まず、被検者から採取した液体試料中の遊離タンパク質マーカーを測定する。遊離タンパク質マーカーは、sPD-1、sCTLA-4及びsPD-L1から選択される少なくとも１つである。好ましくは、遊離タンパク質マーカーは、sPD-1、sCTLA-4及びsPD-L1から選択される少なくとも２つである。より好ましくは、遊離タンパク質マーカーは、sPD-1、sCTLA-4及びsPD-L1である。被検者、液体試料、遊離タンパク質マーカーの測定手段については、上記の判定方法において述べたことと同じである。好ましい実施形態では、被検者は、肺がん(特に非小細胞肺がん)の患者、食道がん患者及び子宮体がん患者である。また、被検者は、腫瘍除去後のがん患者であってもよい。
　本実施形態の取得方法において、被検者は、腫瘍組織の免疫染色により、PD-L1陽性腫瘍細胞の割合が所定の値より低いと判定されたがん患者であってもよい。腫瘍組織の免疫染色、PD-L1陽性腫瘍細胞の割合、所定の値、及び被検者のがんの種類については、上記の判定方法において述べたことと同じである。本実施形態では、被検者は、腫瘍組織の免疫染色の結果に基づいて、有効成分として抗PD-1抗体を含む免疫チェックポイント阻害剤による一次治療の対象から除外される患者であってもよい。
　本実施形態の取得方法で得られる遊離タンパク質マーカーの測定値は、各マーカーに対応する所定の閾値との比較により、被検者に対する免疫チェックポイント阻害剤の奏効性を示唆する情報となる。例えば、取得した遊離タンパク質マーカーの測定値がいずれも、各マーカーに対応する所定の閾値より低いとき、取得した遊離タンパク質マーカーの測定値は、免疫チェックポイント阻害剤が被検者に奏効することを示唆する。
　一実施形態において、取得したsPD-1の測定値が、sPD-1に対応する閾値より低いとき、その測定値は、免疫チェックポイント阻害剤が被検者に奏効することを示唆する。別の実施形態において、取得したsCTLA-4の測定値が、sCTLA-4に対応する閾値より低いとき、その測定値は、免疫チェックポイント阻害剤が被検者に奏効することを示唆する。別の実施形態において、取得したsPD-L1の測定値が、sPD-L1に対応する閾値より低いとき、その測定値は、免疫チェックポイント阻害剤が被検者に奏効することを示唆する。
　一実施形態において、取得したsPD-1の測定値が第１の閾値よりも低く、且つ取得したsCTLA-4の測定値が第２の閾値よりも低いとき、これらの測定値は、免疫チェックポイント阻害剤が被検者に奏効することを示唆する。別の実施形態において、取得したsPD-1の測定値が第１の閾値よりも低く、且つ取得したsPD-L1の測定値が第２の閾値よりも低いとき、これらの測定値は、免疫チェックポイント阻害剤が被検者に奏効することを示唆する。別の実施形態において、取得したsCTLA-4の測定値が第１の閾値よりも低く、且つ取得したsPD-L1の測定値が第２の閾値よりも低いとき、これらの測定値は、免疫チェックポイント阻害剤が被検者に奏効することを示唆する。
　一実施形態において、取得したsPD-1の測定値が第１の閾値よりも低く、且つ取得したsCTLA-4の測定値が第２の閾値よりも低く、且つ取得したsPD-L1の測定値が第３の閾値より低いとき、これらの測定値は、免疫チェックポイント阻害剤が被検者に奏効することを示唆する。なお、所定の閾値については、上記の判定方法において述べたことと同じである。
　本実施形態の取得方法において、免疫チェックポイント阻害剤は、有効成分として、抗PD-1抗体、抗CTLA-4抗体及び抗PD-L1抗体の少なくとも１種を含む製剤であり得る。有効成分として抗PD-1抗体を含む製剤としては、ニボルマブ、ペムブロリズマブなどが公知である。有効成分として抗PD-L1抗体を含む製剤としては、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブなどが公知である。有効成分として抗CTLA-4抗体を含む製剤としては、イピリムマブなどが公知である。
［３．試薬キット］
　本発明の範囲には、上記の判定方法に用いるための試薬キットも含まれる。本実施形態の試薬キットは、sPD-1と特異的に結合可能な物質を含む試薬、sCTLA-4と特異的に結合可能な物質を含む試薬、及び遊離PD-L1と特異的に結合可能な物質を含む試薬から選択される少なくとも１つの試薬を含む。好ましくは、試薬キットは、sPD-1と特異的に結合可能な物質を含む試薬、sCTLA-4と特異的に結合可能な物質を含む試薬、及びsPD-L1と特異的に結合可能な物質を含む試薬から選択される少なくとも２つの試薬を含む。より好ましくは、sPD-1と特異的に結合可能な物質を含む試薬、sCTLA-4と特異的に結合可能な物質を含む試薬、及びsPD-L1と特異的に結合可能な物質を含む試薬を含む。各遊離タンパク質マーカーと特異的に結合可能な物質としては、例えば、抗体、アプタマーなどが挙げられる。それらの中でも抗体が特に好ましい。
　本実施形態の試薬キットの一例を、図１Ａに示す。図１Ａにおいて、１１は、試薬キットを示し、１２は、遊離PD-1と特異的に結合可能な物質を含む試薬を収容した第１容器を示し、１３は、遊離CTLA-4と特異的に結合可能な物質を含む試薬を収容した第２容器を示し、１４は、梱包箱を示し、１５は、添付文書を示す。図示しないが、この例の試薬キットは、遊離PD-L1と特異的に結合可能な物質を含む試薬を収容した第３容器を含んでもよい。
　好ましい実施形態では、本実施形態の試薬キットは、各遊離タンパク質マーカーの捕捉用抗体及び検出用抗体を含む。検出用抗体は、標識物質で標識されていてもよい。捕捉用抗体、検出用抗体及び標識物質については、上記の本実施形態の判定方法において述べたことと同じである。また、試薬キットは、固相と、基質とを含んでもよい。固相及び基質については、上記の本実施形態の判定方法において述べたことと同じである。
　さらなる実施形態の試薬キットの一例を、図１Ｂに示す。図１Ｂにおいて、２１は、試薬キットを示し、２２は、遊離PD-1の捕捉用抗体を含む試薬を収容した第１容器を示し、２３は、遊離PD-1の検出用標識抗体を含む試薬を収容した第２容器を示し、２４は、遊離CTLA-4の捕捉用抗体を含む試薬を収容した第３容器を示し、２５は、遊離CTLA-4の検出用標識抗体を含む試薬を収容した第４容器を示し、２６は、添付文書を示し、２７は、梱包箱を示す。図示しないが、この例の試薬キットは、遊離PD-L1の捕捉用抗体を含む試薬を収容した第５容器、及び遊離PD-L1の検出用標識抗体を含む試薬を収容した第６容器を含んでもよい。
　上記のいずれの試薬キットにおいても、キャリブレータを含むことが好ましい。キャリブレータの一例としては、遊離PD-1の定量のためのキャリブレータ(PD-1用キャリブレータ)、遊離CTLA-4の定量のためのキャリブレータ(CTLA-4用キャリブレータ)及び遊離PD-L1の定量のためのキャリブレータ(PD-L1用キャリブレータ)が挙げられる。PD-1用キャリブレータは、例えば、PD-1を含まない緩衝液(ネガティブコントロール)と、PD-1を既知濃度で含む緩衝液とを備えていてもよい。CTLA-4用キャリブレータは、例えば、CTLA-4を含まない緩衝液(ネガティブコントロール)と、CTLA-4を既知濃度で含む緩衝液とを備えていてもよい。PD-L1用キャリブレータは、例えば、PD-L1を含まない緩衝液(ネガティブコントロール)と、PD-L1を既知濃度で含む緩衝液とを備えていてもよい。
　別のキャリブレータの例は、PD-1、CTLA-4及びPD-L1のいずれも含まない緩衝液(ネガティブコントロール)と、PD-1を既知濃度で含む緩衝液と、CTLA-4を既知濃度で含む緩衝液と、PD-L1を既知濃度で含む緩衝液とを備える。別のキャリブレータの例は、PD-1、CTLA-4及びPD-L1のいずれも含まない緩衝液(ネガティブコントロール)と、PD-1、CTLA-4及びPD-L1から選択される２つをそれぞれ既知濃度で含む緩衝液とを備える。さらに別のキャリブレータの例は、PD-1、CTLA-4及びPD-L1のいずれも含まない緩衝液(ネガティブコントロール)と、PD-1、CTLA-4及びPD-L1をそれぞれ既知濃度で含む緩衝液とを備える。
　さらなる実施形態の試薬キットの一例を、図１Ｃに示す。図１Ｃにおいて、３１は、試薬キットを示し、３２は、遊離PD-1の捕捉用抗体を含む試薬を収容した第１容器を示し、３３は、遊離PD-1の検出用標識抗体を含む試薬を収容した第２容器を示し、３４は、遊離CTLA-4の捕捉用抗体を含む試薬を収容した第３容器を示し、３５は、遊離CTLA-4の検出用標識抗体を含む試薬を収容した第４容器を示し、３６は、PD-1、CTLA-4及びPD-L1のいずれも含まない緩衝液を収容した第５容器を示し、３７は、PD-1及びCTLA-4をそれぞれ所定の濃度で含有する緩衝液を収容した第６容器を示し、３８は、梱包箱を示し、３９は、添付文書を示す。PD-1、CTLA-4及びPD-L1のいずれも含まない緩衝液と、PD-1及びCTLA-4をそれぞれ所定の濃度で含有する緩衝液は、PD-1及びCTLA-4の定量のためのキャリブレータとして用いることができる。図示しないが、この例の試薬キットは、遊離PD-L1の捕捉用抗体を含む試薬を収容した第７容器、遊離PD-L1の検出用標識抗体を含む試薬を収容した第８容器、及びPD-L1を所定の濃度で含有する緩衝液(PD-L1定量用キャリブレータ)を収容した第９容器を含んでもよい。
［４．装置及びコンピュータプログラム］
　本発明の範囲には、上記の本実施形態の判定方法を実施するための装置も含まれる。そのような装置は、免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定装置(以下、単に「判定装置」ともいう)である。また、本発明の範囲には、上記の本実施形態の判定方法をコンピュータに実行させるためのコンピュータプログラムも含まれる。そのようなコンピュータプログラムは、免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定のためのコンピュータプログラムである。さらに、本発明の範囲には、上記の本実施形態の取得方法を実施するための装置も含まれる。そのような装置は、遊離タンパク質マーカーの測定値の取得装置である。
　以下に、上記の本実施形態の方法を実施するための装置の一例を、図面を参照して説明する。しかし、本実施形態は、この例に示される形態のみに限定されない。図２は、判定装置の概略図である。図２に示された判定装置１０は、免疫測定装置２０と、該免疫測定装置２０と接続されたコンピュータシステム３０とを含む。遊離タンパク質マーカーの測定値の取得装置のハードウェア構成も、判定装置１０と同様である。
　本実施形態において、免疫測定装置の種類は特に限定されず、遊離タンパク質マーカーの測定方法に応じて適宜選択できる。図２に示される例では、免疫測定装置２０は、捕捉用抗体を固定した磁性粒子及び酵素標識された検出用抗体を用いるサンドイッチELISA法により生じる化学発光シグナルを検出可能な市販の自動免疫測定装置である。免疫測定装置２０は、用いた標識物質に基づくシグナルの検出が可能であれば特に限定されず、標識物質の種類に応じて適宜選択できる。
　捕捉用抗体を固定した磁性粒子を含む試薬、酵素標識された検出用抗体を含む試薬及び被検者から採取した液体試料を免疫測定装置２０にセットすると、該免疫測定装置２０は、各試薬を用いて抗原抗体反応を実行し、遊離タンパク質マーカーと特異的に結合した酵素標識抗体に基づく光学的情報として化学発光シグナルを取得し、得られた光学的情報をコンピュータシステム３０に送信する。
　コンピュータシステム３０は、コンピュータ本体３００と、入力部３０１と、検体情報や判定結果などを表示する表示部３０２とを含む。コンピュータシステム３０は、免疫測定装置２０から光学的情報を受信する。そして、コンピュータシステム３０のプロセッサは、光学的情報に基づいて、ハードディスク３１３にインストールされた、免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定のためのコンピュータプログラムを実行する。なお、コンピュータシステム３０は、図２に示されるように、免疫測定装置２０とは別個の機器であってもよいし、免疫測定装置２０を内包する機器であってもよい。後者の場合、コンピュータシステム３０は、それ自体で判定装置１０となってもよい。市販の自動免疫測定装置に、免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定のためのコンピュータプログラムを搭載してもよい。
　図３を参照して、コンピュータ本体３００は、ＣＰＵ(Central Processing Unit)３１０と、ＲＯＭ(Read Only Memory)３１１と、ＲＡＭ(Random Access Memory)３１２と、ハードディスク３１３と、入出力インターフェイス３１４と、読取装置３１５と、通信インターフェイス３１６と、画像出力インターフェイス３１７とを備えている。ＣＰＵ３１０、ＲＯＭ３１１、ＲＡＭ３１２、ハードディスク３１３、入出力インターフェイス３１４、読取装置３１５、通信インターフェイス３１６及び画像出力インターフェイス３１７は、バス３１８によってデータ通信可能に接続されている。また、免疫測定装置２０は、通信インターフェイス３１６により、コンピュータシステム３０と通信可能に接続されている。
　ＣＰＵ３１０は、ＲＯＭ３１１又はハードディスク３１３に記憶されているプログラム及びＲＡＭ３１２にロードされたプログラムを実行することが可能である。ＣＰＵ３１０は、遊離タンパク質マーカーの測定値を算出し、ＲＯＭ３１１又はハードディスク３１３に記憶されている各マーカーに対応する所定の閾値を読み出し、免疫チェックポイント阻害剤が被検者に奏効するか否かを判定する。ＣＰＵ３１０は、判定結果を出力して表示部３０２に表示させる。
　ＲＯＭ３１１は、マスクＲＯＭ、ＰＲＯＭ、ＥＰＲＯＭ、ＥＥＰＲＯＭなどによって構成されている。ＲＯＭ３１１には、前述のようにＣＰＵ３１０によって実行されるコンピュータプログラム及び当該コンピュータプログラムの実行に用いるデータが記録されている。ＲＯＭ３１１には、各遊離タンパク質マーカーに対応する所定の閾値など、後述の判定フローに用いられるデータが記録されていてもよい。
　ＲＡＭ３１２は、ＳＲＡＭ、ＤＲＡＭなどによって構成されている。ＲＡＭ３１２は、ＲＯＭ３１１及びハードディスク３１３に記録されているプログラムの読み出しに用いられる。ＲＡＭ３１２はまた、これらのプログラムを実行するときに、ＣＰＵ３１０の作業領域として利用される。
　ハードディスク３１３は、ＣＰＵ３１０に実行させるためのオペレーティングシステム、アプリケーションプログラム(上記のがんの判定のためのコンピュータプログラム)などのコンピュータプログラム及び当該コンピュータプログラムの実行に用いるデータがインストールされている。ハードディスク３１３には、各遊離タンパク質マーカーに対応する所定の閾値など、後述の判定フローに用いられるデータが記録されていてもよい。
　読取装置３１５は、フレキシブルディスクドライブ、ＣＤ－ＲＯＭドライブ、ＤＶＤ－ＲＯＭドライブなどによって構成されている。読取装置３１５は、可搬型記録媒体４０に記録されたプログラム又はデータを読み取ることができる。
　入出力インターフェイス３１４は、例えば、ＵＳＢ、ＩＥＥＥ１３９４、ＲＳ－２３２Ｃなどのシリアルインターフェイスと、ＳＣＳＩ、ＩＤＥ、ＩＥＥＥ１２８４などのパラレルインターフェイスと、Ｄ／Ａ変換器、Ａ／Ｄ変換器などからなるアナログインターフェイスとから構成されている。入出力インターフェイス３１４には、キーボード、マウスなどの入力部３０１が接続されている。操作者は、該入力部３０１により、コンピュータ本体３００に各種の指令を入力することが可能である。
　通信インターフェイス３１６は、例えば、Ethernet(登録商標)インターフェイスなどである。コンピュータ本体３００は、通信インターフェイス３１６により、プリンタなどへの印刷データの送信も可能である。
　画像出力インターフェイス３１７は、ＬＣＤ、ＣＲＴなどで構成される表示部３０２に接続されている。これにより、表示部３０２は、ＣＰＵ３１０から与えられた画像データに応じた映像信号を出力できる。表示部３０２は、入力された映像信号にしたがって画像(画面)を表示する。
　図４Ａを参照して、判定装置１０により実行される、免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定フローについて説明する。ここでは、捕捉用抗体を固定した磁性粒子及び酵素標識された検出用抗体を用いるサンドイッチELISA法により生じる化学発光シグナルから、sPD-1の測定値を取得し、取得した測定値を用いて判定を行なう場合を例として説明する。この例において、第１の閾値は、sPD-1に対応する閾値である。しかし、本実施形態は、この例のみに限定されない。sPD-1の測定値に代えて、sCTLA-4の測定値又はsPD-L1の測定値を取得してもよい。
　ステップＳ１０１において、ＣＰＵ３１０は、免疫測定装置２０から光学的情報(化学発光シグナル)を取得し、取得した光学的情報からsPD-1の測定値を算出してハードディスク３１３に記憶する。ステップＳ１０２において、ＣＰＵ３１０は、算出したsPD-1の測定値と、ハードディスク３１３に記憶された第１の閾値とを比較する。sPD-1の測定値が第１の閾値より低いとき、処理はステップＳ１０３に進行する。ステップＳ１０３において、ＣＰＵ３１０は、免疫チェックポイント阻害剤が被検者に奏効するとの判定結果をハードディスク３１３に記憶する。
　一方、ステップＳ１０２において、sPD-1の測定値が第１の閾値以上であるとき、処理はステップＳ１０４に進行する。ステップＳ１０４において、ＣＰＵ３１０は、免疫チェックポイント阻害剤が被検者に奏効しないとの判定結果をハードディスク３１３に記憶する。ステップＳ１０５において、ＣＰＵ３１０は、判定結果を出力し、表示部３０２に表示させたり、プリンタに印刷させたりする。これにより、免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定を補助する情報を医師などに提供することができる。
　図４Ｂを参照して、判定装置１０により実行される、免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定フローについて説明する。ここでは、捕捉用抗体を固定した磁性粒子及び酵素標識された検出用抗体を用いるサンドイッチELISA法により生じる化学発光シグナルから、sPD-1及びsCTLA-4の測定値を取得し、取得した測定値を用いて判定を行なう場合を例として説明する。この例において、第１の閾値は、sPD-1に対応する閾値であり、第２の閾値は、sCTLA-4に対応する閾値である。しかし、本実施形態は、この例のみに限定されない。sPD-1及びsCTLA-4の測定値のいずれか一方に代えて、sPD-L1の測定値を取得してもよい。
　ステップＳ２０１において、ＣＰＵ３１０は、免疫測定装置２０から光学的情報(化学発光シグナル)を取得し、取得した光学的情報からsPD-1及びsCTLA-4の測定値を算出してハードディスク３１３に記憶する。ステップＳ２０２において、ＣＰＵ３１０は、算出したsPD-1の測定値と、ハードディスク３１３に記憶された第１の閾値とを比較する。sPD-1の測定値が第１の閾値より低いとき、処理はステップＳ２０３に進行する。ステップＳ２０３において、ＣＰＵ３１０は、算出したsCTLA-4の測定値と、ハードディスク３１３に記憶された第２の閾値とを比較する。sCTLA-4の測定値が第２の閾値より低いとき、処理はステップＳ２０４に進行する。ステップＳ２０４において、ＣＰＵ３１０は、免疫チェックポイント阻害剤が被検者に奏効するとの判定結果をハードディスク３１３に記憶する。
　一方、ステップＳ２０２において、sPD-1の測定値が第１の閾値以上であるとき、処理はステップＳ２０５に進行する。ステップＳ２０３において、sCTLA-4の測定値が第２の閾値以上であるとき、処理はステップＳ２０５に進行する。ステップＳ２０５において、ＣＰＵ３１０は、免疫チェックポイント阻害剤が被検者に奏効しないとの判定結果をハードディスク３１３に記憶する。ステップＳ２０６において、ＣＰＵ３１０は、判定結果を出力し、表示部３０２に表示させたり、プリンタに印刷させたりする。これにより、免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定を補助する情報を医師などに提供することができる。なお、この例において、ステップＳ２０２及びステップＳ２０３の処理は順序を入れ替えることができる。
　図４Ｃを参照して、判定装置１０により実行される、免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定フローについて説明する。ここでは、sPD-1及びsCTLA-4の測定値に加えて、さらにsPD-L1の測定値を取得し、取得した測定値を用いて判定を行なう場合を例として説明する。この例において、第１の閾値は、sPD-1に対応する閾値であり、第２の閾値は、sCTLA-4に対応する閾値であり、第３の閾値は、sPD-L1に対応する閾値である。しかし、本実施形態は、この例のみに限定されない。
　ステップＳ３０１において、ＣＰＵ３１０は、免疫測定装置２０から光学的情報(化学発光シグナル)を取得し、取得した光学的情報からsPD-1、sCTLA-4及びsPD-L1の測定値を算出してハードディスク３１３に記憶する。ステップＳ３０２において、ＣＰＵ３１０は、算出したsPD-1の測定値と、ハードディスク３１３に記憶された第１の閾値とを比較する。sPD-1の測定値が第１の閾値より低いとき、処理はステップＳ２０３に進行する。ステップＳ３０３において、ＣＰＵ３１０は、算出したsCTLA-4の測定値と、ハードディスク３１３に記憶された第２の閾値とを比較する。sCTLA-4の測定値が第２の閾値より低いとき、処理はステップＳ３０４に進行する。ステップＳ３０４において、ＣＰＵ３１０は、算出したsPD-L1の測定値と、ハードディスク３１３に記憶された第３の閾値とを比較する。sPD-L1の測定値が第３の閾値より低いとき、処理はステップＳ３０５に進行する。ステップＳ３０５において、ＣＰＵ３１０は、免疫チェックポイント阻害剤が被検者に奏効するとの判定結果をハードディスク３１３に記憶する。
　一方、ステップＳ３０２において、sPD-1の測定値が第１の閾値以上であるとき、処理はステップＳ３０６に進行する。ステップＳ３０３において、sCTLA-4の測定値が第２の閾値以上であるとき、処理はステップＳ３０６に進行する。ステップＳ３０４において、sPD-L1の測定値が第３の閾値以上であるとき、処理はステップＳ３０６に進行する。ステップＳ３０６において、ＣＰＵ３１０は、免疫チェックポイント阻害剤が被検者に奏効しないとの判定結果をハードディスク３１３に記憶する。ステップＳ３０７において、ＣＰＵ３１０は、判定結果を出力し、表示部３０２に表示させたり、プリンタに印刷させたりする。なお、この例において、ステップＳ３０２、ステップＳ３０３及びステップＳ３０４の処理は順序を入れ替えることができる。
　図５を参照して、遊離タンパク質マーカーの測定値の取得装置１０により実行される処理手順について説明する。ここでは、捕捉用抗体を固定した磁性粒子及び酵素標識された検出用抗体を用いるサンドイッチELISA法により生じる化学発光シグナルから、sPD-1の測定値を取得し、取得した測定値を用いて判定を行なう場合を例として説明する。しかし、本実施形態は、この例のみに限定されない。sPD-1の測定値に代えて、sCTLA-4の測定値又はsPD-L1の測定値を取得してもよい。さらなる実施形態では、sPD-1、sCTLA-4及びsPD-L1から選択される２つの遊離タンパク質マーカーの測定値を取得してもよい。あるいは、sPD-1、sCTLA-4及びsPD-L1の測定値を取得してもよい。
　ステップＳ４０１において、ＣＰＵ３１０は、免疫測定装置２０から光学的情報(化学発光シグナル)を取得し、取得した光学的情報からsPD-1の測定値を算出してハードディスク３１３に記憶する。ステップＳ４０２において、ＣＰＵ３１０は、取得したsPD-1の測定値を出力し、表示部３０２に表示させたり、プリンタに印刷させたりする。なお、この例において、取得した遊離タンパク質マーカーの測定値と共に、該マーカーに対応する所定の閾値を出力してもよい。
　取得装置により得られた遊離タンパク質マーカーの測定値は、各マーカーに対応する所定の閾値との比較により、被検者に対する免疫チェックポイント阻害剤の奏効性を示唆する情報となる。具体的には、本実施形態の取得方法について述べたことと同様である。
　本発明において、「免疫チェックポイント阻害剤が被検者に奏効する」とは、「免疫チェックポイント阻害剤が被検者に奏効する可能性が高い」ことを意味し、また「被検者は免疫チェックポイント阻害剤の投与対象として選択される」と言い換えることができる。また、「免疫チェックポイント阻害剤が被検者に奏効しない」は、「免疫チェックポイント阻害剤が被検者に奏効する可能性が低い」ことを意味し、また「被検者は免疫チェックポイント阻害剤の投与対象として選択されない」と言い換えることができる。
［４．がんの治療方法及び医薬組成物］
　本発明の一実施形態は、がんの治療方法に関する。本実施形態のがんの治療方法は、がん患者から採取した液体試料中の遊離タンパク質マーカーの測定結果に基づいて、がん患者に免疫チェックポイント阻害剤を投与する工程を含む。この治療方法において、遊離タンパク質マーカーは、遊離PD-1、遊離CTLA-4及び遊離PD-L1から選択される少なくとも１つである。好ましくは、遊離タンパク質マーカーは、sPD-1、sCTLA-4及びsPD-L1から選択される少なくとも２つである。より好ましくは、遊離タンパク質マーカーは、sPD-1、sCTLA-4及びsPD-L1である。免疫チェックポイント阻害剤は、有効成分として、抗PD-1抗体、抗CTLA-4抗体及び抗PD-L1抗体の少なくとも１種を含む製剤であり得る。好ましくは、有効成分として抗PD-1抗体を含む製剤であり、一実施形態においてニボルマブであり、またはペムブロリズマブである。
　本実施形態の治療方法において、遊離タンパク質マーカーの測定結果から免疫チェックポイント阻害剤が奏効すると判定された患者に対して、上記の投与工程を実施し得る。この方法における免疫チェックポイント阻害剤の奏効性判定については、上記の判定方法において述べたことと同様である。また、がんの種類、液体試料、遊離タンパク質マーカーの測定手段、判定等については、上記の判定方法において述べたことと同じである。
　本実施形態の治療方法は、肺がんの患者、食道がんの患者及び子宮体がん患者に適している。投与工程では、治療上の有効量の免疫チェックポイント阻害剤をがん患者に投与することが好ましい。治療上の有効量は、がんの種類、がんの進行度、免疫チェックポイント阻害剤の種類、治療ガイドラインなどに応じて適宜決定される。
　本発明の一実施形態は、上記の判定方法により免疫チェックポイント阻害剤が奏効すると判定されたがん患者に投与されることを特徴とする、免疫チェックポイント阻害剤を含有するがん治療用医薬組成物に関する。本実施形態では、がん治療用医薬組成物は、免疫チェックポイント阻害剤そのものであってもよい。免疫チェックポイント阻害剤の詳細は上述のとおりである。がん治療用医薬組成物は、医薬的に許容される成分を含んでいてもよい。そのような成分は、当該技術分野において公知の医薬品添加物から適宜選択できる。がん治療用医薬組成物は、免疫チェックポイント阻害剤とは異なるがん治療用薬剤をさらに含んでもよい。そのようながん治療用薬剤としては、例えば化学療法剤、分子標的薬などが挙げられる。がん治療用医薬組成物の形態は特に限定されず、結晶、粉末などの固体であってもよいし、溶液、乳化液、懸濁液などの液体であってもよい。
　以下に、本発明を実施例により詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
実施例１
　非小細胞肺がん患者について、免疫チェックポイント阻害剤の投与前の血液試料中の遊離タンパク質マーカーの濃度と、免疫チェックポイント阻害剤の投与後の治療効果との関連を検討した。
１．被検者
　免疫チェックポイント阻害剤を投与されていない非小細胞肺がんの患者(50例)を被検者とした。実施例１では、全ての患者(50例)に、免疫チェックポイント阻害剤であるニボルマブ(小野薬品工業株式会社)を投与し、無増悪生存期間(PFS)を評価指標として経過を観察した。
２．液体試料
　免疫チェックポイント阻害剤の投与前に、上記の患者(50例)から血液を採取した。得られた血液を常法により分離して、血漿を得た。得られた血漿(50検体)を、液体試料として用いた。
３．腫瘍組織のPD-L1免疫染色
　免疫チェックポイント阻害剤の投与前に、上記の患者(50例)から腫瘍組織を手術又は生検により採取して、常法によりFFPE組織標本を作製した。得られたFFPE組織標本を薄切し、得られた薄切切片に、常法により脱パラフィン処理、親水化処理及び抗原賦活化処理を行った。処理後の薄切切片に、抗PD-L1抗体(28-8抗体)を用いて免疫組織染色を行って、組織標本を得た。得られた組織標本を光学顕微鏡で観察し、細胞膜が部分的又は完全に染色されている腫瘍細胞を「PD-L1陽性腫瘍細胞」として計数した。上記の式により、PD-L1陽性腫瘍細胞の割合としてTPSを算出した。その結果、50例のうち13例では、TPSが50％以上であった。残りの37例では、TPSが50％未満であった。以下、TPSが50％未満であった患者を「PD-L1陰性症例」とも呼ぶ。
４．遊離タンパク質マーカーの測定
(4.1) 試薬の調製
(4.1.1) 第１試薬(ビオチン標識抗体溶液)
・PD-1捕捉用第１試薬
　捕捉用抗体として、抗PD-1抗体(クローンNo.MIH4)を用いた。この抗体を、Biotin Labeling Kit-SH (Catalog No. LK10、同仁化学社製)を用いてビオチンで標識した。具体的な操作は、該キットに添付のマニュアルに従って行った。得られたビオチン標識抗PD-1抗体を100 mM HEPES(pH 7.5)に添加して、PD-1捕捉用第１試薬(抗体濃度５μg/ml)を調製した。
・CTLA-4捕捉用第１試薬
　捕捉用抗体として、抗CTLA-4抗体(クローンNo.BNI3)を用いた。この抗体を、上記と同様にしてビオチンで標識した。得られたビオチン標識抗CTLA-4抗体を100 mM MES(pH 6.5)に添加して、CTLA-4捕捉用第１試薬(抗体濃度５μg/ml)を調製した。
・PD-L1捕捉用第１試薬
　捕捉用抗体として、抗PD-L1抗体(クローンNo.27A2)を用いた。この抗体を、上記と同様にしてビオチンで標識した。得られたビオチン標識抗PD-L1抗体を100 mM MES(pH 6.5)に添加して、PD-L1捕捉用第１試薬(抗体濃度５μg/ml)を調製した。
(4.1.2) 第２試薬(ストレプトアビジン結合粒子含有液)
　表面にストレプトアビジンが固定された磁性粒子(平均粒子径２μm。磁性粒子１gあたりのストレプトアビジンの量は2.9～3.5 mg。以下、「STA結合磁性粒子」ともいう)を、10 mM HEPES緩衝液(pH 7.5)で３回洗浄した。洗浄後のSTA結合磁性粒子を、ストレプトアビジン濃度が18～22μg/ml(STA結合磁性粒子の濃度が0.48～0.52 mg/ml)となるように、10 mM HEPES(pH 7.5)に添加し、STA結合粒子含有液を得た。
(4.1.3) 第３試薬(アルカリホスファターゼ標識抗体溶液)
・PD-1検出用第３試薬
　検出用抗体として、抗PD-1抗体(クローンNo. PD1.3.1.3)を用いた。この抗体を、Alkaline Phosphatase Labeling Kit-SH (Catalog No. LK13、同仁化学社製)を用いてアルカリホスファターゼで標識した。具体的な操作は、該キットに添付のマニュアルに従って行った。得られたアルカリホスファターゼ標識抗PD-1抗体をゲルろ過にて精製した。このアルカリホスファターゼ標識抗PD-1抗体を、100 mM HEPES(pH 7.5)に75倍希釈となるように添加して、PD-1検出用第３試薬を調製した。
・CTLA-4検出用第３試薬
　検出用抗体として、抗CTLA-4抗体(クローンNo.14D3)を用いた。この抗体を、上記と同様にしてアルカリホスファターゼで標識し、精製した。得られたアルカリホスファターゼ標識抗CTLA-4抗体を、100 mM MES(pH 6.5)に75倍希釈となるように添加して、CTLA-4検出用第３試薬を調製した。
・PD-L1検出用第３試薬
　検出用抗体として、抗PD-L1抗体(クローンNo. 9L814)を用いた。この抗体を、上記と同様にしてアルカリホスファターゼで標識し、精製した。得られたアルカリホスファターゼ標識抗PD-L1抗体を、100 mM MES(pH 6.5)に75倍希釈となるように添加して、PD-L1検出用第３試薬を調製した。
(4.1.4) 第４試薬(測定用緩衝液)
　HISCL R4試薬(シスメックス株式会社製)を第４試薬として使用した。
(4.1.5) 第５試薬(基質溶液)
　アルカリホスファターゼの化学発光基質としてCDP-Star(登録商標)(アプライドバイオシステムズ社)を含むHISCL R5試薬(シスメックス株式会社製)を、第５試薬として使用した。
(4.2) 測定
　各遊離タンパク質マーカーの測定は、上記の第１～第５試薬を用いて全自動免疫測定装置HISCL-800(シスメックス株式会社製)により行った。なお、この測定は、磁性粒子上でのサンドイッチELISAをベースとしている。具体的な操作は、次のとおりである。第１試薬(50μL)に血漿(20μL)を加えて混合した後、第２試薬(30μL)を加えて混合した。得られた混合液中の磁性粒子を集磁して上清を除き、HISCL洗浄液(300μL)を加えて磁性粒子を洗浄した。上清を除き、磁性粒子に第３試薬を添加して混合した。各第３試薬の添加量は、次のとおりであった。PD-1検出用第３試薬が100μL、CTLA-4検出用第３試薬が100μL、PD-L1検出用第３試薬が80μL。得られた混合液中の磁性粒子を集磁して上清を除き、HISCL洗浄液(300μL)を加えて磁性粒子を洗浄した。上清を除き、磁性粒子に第４試薬(50μL)及び第５試薬(100μL)を添加し、よく混合して、化学発光強度を測定した。反応時間は全工程を通して17分間であった。得られた化学発光強度を検量線に当てはめて、各遊離タンパク質マーカーの濃度を算出した。
５．結果
　実施例１では、PFSが６ヶ月以上であった患者を、ニボルマブが奏効した群に分類し、PFSが６ヶ月未満であった患者を、ニボルマブが奏効しなかった群に分類した。全ての患者(50例)のうち、PFSが６ヶ月以上であった患者は21例であり、PFSが６ヶ月未満であった患者は29例であった。また、PD-L1陰性症例(37例)のうち、PFSが６ヶ月以上であった患者は10例であり、PFSが６ヶ月未満であった患者は27例であった。図６Ａ～６Ｃに、PD-L1陰性症例における、ニボルマブ投与前の血漿中の各遊離タンパク質マーカーの測定値(pg/mL)の分布を示す。図中、「奏効」は、ニボルマブが奏効した群を示し、「非奏効」は、ニボルマブが奏効しなかった群を示す。また、図中、破線は、測定値の中央値を示す。図６Ａ～６Ｃに示されるように、ニボルマブが奏効した患者では、血液試料中の遊離PD-1、遊離CTLA-4及び遊離PD-L1の測定値が低い傾向にあることが分かった。
　PD-L1陰性症例(37例)を、各遊離タンパク質マーカーの測定値及び６ヶ月PFSにより分類した。また、マーカーの測定値に基づいてニボルマブの奏効性を判定した場合の感度及び特異度を算出した。結果を表１～３に示す。表中、「６ヶ月PFS」では、PFSが６ヶ月以上の被検者を「＋」に分類し、PFSが６ヶ月未満の被検者を「－」に分類した。表中、「sPD-1」、「sCTLA-4」及び「sPD-L1」では、測定値が閾値より低かった被検者を「＋」に分類し、測定値が閾値より高かった被検者を「－」に分類した。実施例１では、sPD-1に対応する閾値を150 pg/mLとし、sCTLA-4に対応する閾値を0.5 pg/mLとし、sPD-L1に対応する閾値を219 pg/mLとした。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
　PD-L1陰性症例に分類された37名の患者は、免疫組織染色に基づく従来の予測法では、ニボルマブが奏効しないと判断された患者であった。しかし、本実施例では、sPD-1の測定値を用いる判定により、PD-L1陰性症例から６名をニボルマブが奏効する患者としてさらに抽出することができた。また、sCTLA-4の測定値を用いる判定により９名を、sPD-L1の測定値を用いる判定により７名を、ニボルマブが奏効する患者としてさらに抽出することができた。
実施例２
　実施例１の結果に基づいて、免疫チェックポイント阻害剤の奏効性を判定したときの判定精度を確認した。
１．免疫組織染色による奏効性の判定
　実施例１で算出したTPSにより、ニボルマブの奏効性を判定した場合の感度及び特異度、を算出した。結果を表４に示す。表中、「６ヶ月PFS」では、PFSが６ヶ月以上の被検者を「＋」に分類し、PFSが６ヶ月未満の被検者を「－」に分類した。「免疫組織染色(PD-L1)」では、TPSが50％以上であった被検者を「＋」に分類し、TPSが50％未満の被検者を「－」に分類した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
　表１に示されるように、腫瘍組織におけるPD-L1発現率に基づく判定では、特異度は高いが、感度が低いことが分かる。すなわち、当該判定では、本来は免疫チェックポイント阻害剤が奏効する患者を見落としている。そこで、以下では、免疫組織染色による判定で陰性と判断された被検者(TPS＜50%)に対して、遊離マーカータンパク質の測定値に基づく判定をさらに行った。
２．免疫組織染色及び遊離タンパク質マーカーによる奏効性の判定
(2.1) 遊離タンパク質マーカーの測定値のスコア化
　実施例１のPD-L1陰性症例(37例)について、血液試料中の遊離タンパク質マーカー(sPD-1及びsCTLA-4)の測定値を、閾値に基づいてスコア化した。実施例２では、閾値として、測定値の中央値を用いた。表５に示すように、sPD-1の測定値及びsCTLA-4の測定値の両方が、それぞれに対応する閾値よりも低い場合、スコアを０とした。sPD-1の測定値及びsCTLA-4の測定値のいずれか一方が、それに対応する閾値よりも低い場合、スコアを１とした。sPD-1の測定値及びsCTLA-4の測定値の両方が、それぞれに対応する閾値よりも高い場合、スコアを２とした。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
(2.2) 奏効性の判定
　PD-L1陰性症例(37例)を、遊離タンパク質マーカーのスコアと６ヶ月PFSにより分類した。また、スコアに基づいてニボルマブの奏効性を判定した場合の感度及び特異度を算出した。結果を表６に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
　表６に示されるように、遊離タンパク質マーカーの測定値による判定では、スコアを０と１以上とに分けた場合、ニボルマブが奏効する患者を感度よく選択できることを見出した。したがって、遊離タンパク質マーカーの測定値による判定では、スコアが０である場合、免疫チェックポイント阻害剤が奏効する可能性が高いと判定され、被検者は免疫チェックポイント阻害剤の投与対象に選択される。一方、スコアが１以上の場合、免疫チェックポイント阻害剤が奏効する可能性が低いと判定され、被検者は免疫チェックポイント阻害剤の投与対象に選択されない。
　また、上記(2.1)の免疫組織染色による判定と、遊離タンパク質マーカーの測定値による判定とを組み合わせて、ニボルマブの奏効性を判定した。この組み合わせによる判定のフローを図７に示す。当該判定の感度及び特異度を算出した。結果を表７に示す。表中、「免疫組織染色(PD-L1)及び血中マーカー検査(sPD-1及びsCTLA-4)」では、TPSが50％以上であった被検者及びTPSが50%未満且つスコアが０であった被検者を「＋」に分類し、残りの被検者を「－」に分類した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000008
　表７に示されるように、免疫組織染色による判定と、遊離タンパク質マーカーの測定値による判定とを組み合わせてニボルマブの奏効性を判定した場合、感度が顕著に向上した。図７に示すフローのように、免疫組織染色で陰性を示した被検者に対して、血液試料中の遊離タンパク質マーカーの測定値に基づく判定を行うことで、免疫チェックポイント阻害剤が奏効する可能性のある患者を抽出できることが示された。
実施例３
　実施例１と同じ被検者(50例)について、sPD-1、sCTLA-4及びsPD-L1の３つのマーカーの測定値に基づいて、ニボルマブの奏効性を判定した。また、３つのマーカーの測定値による判定と、実施例２の免疫組織染色による判定とを組み合わせて、ニボルマブの奏効性を判定した。
１．マーカーの測定値による判定
(1.1) 測定値のスコア化
　各マーカーの測定値を、閾値に基づいてスコア化した。実施例３では、各マーカーに対応する閾値として、実施例１と同じ閾値を用いた。表８に示すように、sPD-1の測定値、sCTLA-4の測定値及びsPD-L1の測定値の全てが、それぞれに対応する閾値よりも低い場合、スコアを０とした。sPD-1の測定値、sCTLA-4の測定値及びsPD-L1の測定値のいずれか１つが、それに対応する閾値よりも高い場合、スコアを１とした。sPD-1の測定値、sCTLA-4の測定値及びsPD-L1の測定値のいずれか２つが、それに対応する閾値よりも高い場合、スコアを２とした。sPD-1の測定値、sCTLA-4の測定値及びsPD-L1の測定値の全てが、それぞれに対応する閾値よりも高い場合、スコアを３とした。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000009
(1.2) 奏効性の判定
　被検者(50例)を、遊離タンパク質マーカーのスコアと６ヶ月PFSにより分類した。また、スコアに基づいてニボルマブの奏効性を判定した場合の感度及び特異度を算出した。結果を表９に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000010
　表９及び表４に示されるように、血液試料中のマーカーの測定値に基づく判定は、腫瘍組織の免疫染色に基づく判定と同程度の感度及び特異度を有していた。血液の採取は、腫瘍組織の採取に比べて侵襲性が低いので、本実施形態の判定方法は、腫瘍組織の切除ができない患者にも適用し得ることが分かった。
２．マーカーの測定値による判定と免疫組織染色による判定との組み合わせ
　上記(1.2)の３つのマーカーの測定値による判定と、実施例２の免疫組織染色による判定とを組み合わせて、ニボルマブの奏効性を判定した。結果を表10に示す。表中、「免疫組織染色及び血中マーカー検査」では、TPSが50％以上であった被検者及びTPSが50%未満且つスコアが０であった被検者を「＋」に分類し、残りの被検者を「－」に分類した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000011
　表10に示されるように、免疫組織染色による判定と、３つの遊離タンパク質マーカーの測定値による判定とを組み合わせることにより、感度及び特異度の両方が高い判定が可能となり、判定精度が向上したと言える。
実施例４
　食道がん患者及び子宮体がん患者について、免疫チェックポイント阻害剤の投与前の血液試料中の遊離タンパク質マーカーの濃度と、免疫チェックポイント阻害剤の投与後の治療効果との関連を検討した。
１．被検者
　免疫チェックポイント阻害剤を投与されていない食道がんの患者(64例)及び子宮体がんの患者(22例)を被検者とした。全ての患者にニボルマブ(小野薬品工業株式会社)を投与し、全生存期間(OS)を評価指標として経過を観察した。
２．液体試料及び測定
　免疫チェックポイント阻害剤の投与前に、上記の患者から血液を採取し、血漿を調製した。これらの血漿を用いて実施例１と同様にして、遊離タンパク質マーカーの濃度を算出した。
３．結果
　各遊離タンパク質マーカーについて、測定値が高い群と測定値が低い群とを比較したカプラン・マイヤー法による生存率曲線を作成した。結果を図８及び９に示す。図中、横線は、生存率が50％のラインを示す。また、図中、横軸の下に示した各群の数値は、横軸の各時点における生存者の数である。これらの図に示されるように、いずれの遊離タンパク質マーカーについても、測定値が低い群(図中、実線で示される)は、測定値が高い群(図中、破線で示される)に比べて、免疫チェックポイント阻害剤の投与によりOSが長期化する傾向にあることが分かった。これらの結果より、本実施形態の判定方法は、食道がん患者及び子宮体がん患者にも適用できることが示唆された。
１１、２１、３１：　試薬キット
１２、２２、３２：　第１容器
１３、２３、３３：　第２容器
２４、３４：　第３容器
２５、３５：　第４容器
３６：　第５容器
３７：　第６容器
１４、２７、３８：　梱包箱
１５、２６、３９：　添付文書
１０：　判定装置
２０：　免疫測定装置
３０：　コンピュータシステム
４０：　記録媒体
３００：　コンピュータ本体
３０１：　入力部
３０２：　表示部
３１０：　ＣＰＵ
３１１：　ＲＯＭ
３１２：　ＲＡＭ
３１３：　ハードディスク
３１４：　入出力インターフェイス
３１５：　読取装置
３１６：　通信インターフェイス
３１７：　画像出力インターフェイス
３１８：　バス

Claims (31)

  1. 　被検者から採取した液体試料中の遊離タンパク質マーカーを測定する工程と、
    　測定結果に基づいて、前記被検者に対する免疫チェックポイント阻害剤の奏効性を判定する工程と
    を含み、前記遊離タンパク質マーカーが、遊離CTLA-4(Cytotoxic T lymphocyte antigen-4)、遊離PD-1(Programmed cell death-1)及び遊離PD-L1(Programmed cell death-ligand 1)から選択される少なくとも１つである、
    免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定を補助する方法。
  2. 　前記遊離タンパク質マーカーが、遊離CTLA-4、遊離PD-1及び遊離PD-L1から選択される少なくとも２つである、請求項１に記載の方法。
  3. 　前記遊離タンパク質マーカーが、遊離CTLA-4、遊離PD-1及び遊離PD-L1である、請求項１に記載の方法。
  4. 　前記判定工程において、前記測定工程で取得した遊離タンパク質マーカーの測定値が、各マーカーに対応する所定の閾値より低いとき、免疫チェックポイント阻害剤が前記被検者に奏効すると判定する、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
  5. 　前記遊離タンパク質マーカーが、遊離CTLA-4、遊離PD-1及び遊離PD-L1から選択される２つであり、
    　一方の遊離タンパク質マーカーの測定値が、このマーカーに対応する閾値より低く、且つ他方の遊離タンパク質マーカーの測定値が、このマーカーに対応する閾値より低いとき、免疫チェックポイント阻害剤が前記被検者に奏効すると判定する、請求項１に記載の方法。
  6. 　前記遊離タンパク質マーカーが、遊離CTLA-4、遊離PD-1及び遊離PD-L1であり、
    　遊離CTLA-4の測定値が、遊離CTLA-4に対応する閾値より低く、遊離PD-1の測定値が、遊離PD-1に対応する閾値より低く、且つ遊離PD-L1の測定値が、遊離PD-L1に対応する閾値より低いとき、免疫チェックポイント阻害剤が前記被検者に奏効すると判定する、請求項１に記載の方法。
  7. 　前記被検者が、腫瘍組織の免疫染色により、PD-L1陽性腫瘍細胞の割合が所定の値より低いと判定されたがん患者である、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。
  8. 　前記被検者が、肺がん患者、食道がん患者又は子宮体がん患者である、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
  9. 　前記免疫チェックポイント阻害剤が、有効成分として抗PD-1抗体を含む製剤である、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。
  10. 　前記液体試料が、血液試料である請求項１～９のいずれか１項に記載の方法。
  11. 　被検者から採取した液体試料中の遊離タンパク質マーカーの測定値を取得する工程を含み、
    　前記遊離タンパク質マーカーが、遊離CTLA-4(Cytotoxic T lymphocyte antigen-4)、遊離PD-1(Programmed cell death-1)及び遊離PD-L1(Programmed cell death-ligand 1)から選択される少なくとも１つであり、
    　取得した遊離タンパク質マーカーの測定値が、各マーカーに対応する所定の閾値より低いとき、免疫チェックポイント阻害剤が前記被検者に奏効することを示唆する、
    遊離タンパク質マーカーの測定値の取得方法。
  12. 　前記遊離タンパク質マーカーが、遊離CTLA-4、遊離PD-1及び遊離PD-L1から選択される少なくとも２つである、請求項１１に記載の方法。
  13. 　前記遊離タンパク質マーカーが、遊離CTLA-4、遊離PD-1及び遊離PD-L1である、請求項１１に記載の方法。
  14. 　前記免疫チェックポイント阻害剤が、有効成分として抗PD-1抗体を含む製剤である、請求項１１～１３のいずれか１項に記載の方法。
  15. 　前記被検者が、肺がん患者、食道がん患者又は子宮体がん患者である、請求項１１～１４のいずれか１項に記載の方法。
  16. 　前記液体試料が、血液試料である請求項１１～１５のいずれか１項に記載の方法。
  17. 　被検者から採取した腫瘍組織の免疫染色を行い、PD-L1陽性腫瘍細胞の割合を算出する工程と、
    　前記被検者から採取した液体試料中の遊離タンパク質マーカーを測定する工程と、
    　算出結果と測定結果とに基づいて、前記被検者に対する免疫チェックポイント阻害剤の奏効性を判定する工程と
    を含み、前記遊離タンパク質マーカーが、遊離CTLA-4(Cytotoxic T lymphocyte antigen-4)、遊離PD-1(Programmed cell death-1)、及び遊離PD-L1(Programmed cell death-ligand 1)から選択される少なくとも１つである、
    免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定を補助する方法。
  18. 　前記判定工程において、前記算出工程で取得したPD-L1陽性腫瘍細胞の割合が所定の値より低く、且つ前記測定工程で取得した遊離タンパク質マーカーの測定値が、各マーカーに対応する所定の閾値より低いとき、免疫チェックポイント阻害剤が前記被検者に奏効すると判定する、請求項１７に記載の方法。
  19. 　遊離CTLA-4(Cytotoxic T lymphocyte antigen-4)と特異的に結合可能な物質を含む試薬、遊離PD-1(Programmed cell death-1)と特異的に結合可能な物質を含む試薬、及び遊離PD-L1(Programmed cell death-ligand 1)と特異的に結合可能な物質を含む試薬から選択される少なくとも１つの試薬を含む、請求項１～１８のいずれか１項に記載の方法に用いるための試薬キット。
  20. 　遊離CTLA-4と特異的に結合可能な物質を含む試薬、遊離PD-1と特異的に結合可能な物質を含む試薬、及び遊離PD-L1と特異的に結合可能な物質を含む試薬から選択される少なくとも２つの試薬を含む請求項１９に記載の試薬キット。
  21. 　遊離CTLA-4と特異的に結合可能な物質を含む試薬、遊離PD-1と特異的に結合可能な物質を含む試薬、及び遊離PD-L1と特異的に結合可能な物質を含む試薬を含む請求項１９に記載の試薬キット。
  22. 　プロセッサ及び前記プロセッサの制御下にあるメモリを含むコンピュータを備え、
    前記メモリには、下記のステップ：
    　被検者から採取した液体試料中の遊離タンパク質マーカーの測定値を取得するステップと、
    　前記マーカーの測定値に基づいて、前記被検者に対する免疫チェックポイント阻害剤の奏効性を判定するステップと
    を前記コンピュータに実行させるためのコンピュータプログラムが記録されており、
    　前記遊離タンパク質マーカーが、遊離CTLA-4(Cytotoxic T lymphocyte antigen-4)、遊離PD-1(Programmed cell death-1)及び遊離PD-L1(Programmed cell death-ligand 1)から選択される少なくとも１つである、
    免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定装置。
  23. 　前記遊離タンパク質マーカーが、遊離CTLA-4、遊離PD-1及び遊離PD-L1から選択される少なくとも２つである、請求項２２に記載の装置。
  24. 　前記遊離タンパク質マーカーが、遊離CTLA-4、遊離PD-1及び遊離PD-L1である、請求項２２に記載の装置。
  25. 　プロセッサ及び前記プロセッサの制御下にあるメモリを含むコンピュータを備え、
    前記メモリには、下記のステップ：
    　被検者から採取した液体試料中の遊離タンパク質マーカーの測定値を取得するステップを前記コンピュータに実行させるためのコンピュータプログラムが記録されており、
    　前記遊離タンパク質マーカーが、遊離CTLA-4(Cytotoxic T lymphocyte antigen-4)、遊離PD-1(Programmed cell death-1)及び遊離PD-L1(Programmed cell death-ligand 1)から選択される少なくとも１つであり、
    　取得した遊離タンパク質マーカーの測定値が、各マーカーに対応する所定の閾値より低いとき、免疫チェックポイント阻害剤が該被検者に奏効することを示唆する、
    遊離タンパク質マーカーの測定値の取得装置。
  26. 　前記遊離タンパク質マーカーが、遊離CTLA-4、遊離PD-1及び遊離PD-L1から選択される少なくとも２つである、請求項２５に記載の装置。
  27. 　前記遊離タンパク質マーカーが、遊離CTLA-4、遊離PD-1及び遊離PD-L1である、請求項２５に記載の装置。
  28. 　コンピュータが読み取り可能な媒体に記録されているコンピュータプログラムであって、
    前記コンピュータプログラムが、下記のステップ：
    　被検者から採取した液体試料中の遊離タンパク質マーカーの測定値を取得するステップと、
    　前記マーカーの測定値に基づいて、前記被検者に対する免疫チェックポイント阻害剤の奏効性を判定するステップと
    を前記コンピュータに実行させるためのコンピュータプログラムであり、
    　前記遊離タンパク質マーカーが、遊離CTLA-4(Cytotoxic T lymphocyte antigen-4)、遊離PD-1(Programmed cell death-1)及び遊離PD-L1(Programmed cell death-ligand 1)から選択される少なくとも１つである、
    免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定のためのコンピュータプログラム。
  29. 　前記遊離タンパク質マーカーが、遊離CTLA-4、遊離PD-1及び遊離PD-L1から選択される少なくとも２つである、請求項２８に記載のコンピュータプログラム。
  30. 　前記遊離タンパク質マーカーが、遊離CTLA-4、遊離PD-1及び遊離PD-L1である、請求項２８に記載のコンピュータプログラム。
  31. 　請求項１～１０、１７及び１８のいずれか１項に記載の方法により免疫チェックポイント阻害剤が奏効すると判定されたがん患者に投与されることを特徴とする、免疫チェックポイント阻害剤を含有するがん治療用医薬組成物。
PCT/JP2019/010601 2018-03-27 2019-03-14 免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定を補助する方法、試薬キット、装置及びコンピュータプログラム Ceased WO2019188354A1 (ja)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201980022487.4A CN111919119A (zh) 2018-03-27 2019-03-14 辅助免疫检查点抑制剂的奏效性的判定的方法、试剂盒、装置及计算机程序
EP19774196.0A EP3779450A4 (en) 2018-03-27 2019-03-14 METHODS TO ASSIST IN DETERMINING THE EFFICACY OF AN IMMUNECHECKPOINT INHIBITOR, REAGENT KIT, DEVICE AND COMPUTER PROGRAM
JP2019547535A JP6719117B2 (ja) 2018-03-27 2019-03-14 免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定を補助する方法、試薬キット、装置及びコンピュータプログラム
US17/029,361 US20210003579A1 (en) 2018-03-27 2020-09-23 Method for assisting determination of efficacy of immune checkpoint inhibitor

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2018059834 2018-03-27
JP2018-059834 2018-03-27

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US17/029,361 Continuation-In-Part US20210003579A1 (en) 2018-03-27 2020-09-23 Method for assisting determination of efficacy of immune checkpoint inhibitor

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2019188354A1 true WO2019188354A1 (ja) 2019-10-03

Family

ID=68061613

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2019/010601 Ceased WO2019188354A1 (ja) 2018-03-27 2019-03-14 免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定を補助する方法、試薬キット、装置及びコンピュータプログラム

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20210003579A1 (ja)
EP (1) EP3779450A4 (ja)
JP (3) JP6719117B2 (ja)
CN (1) CN111919119A (ja)
WO (1) WO2019188354A1 (ja)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020032231A1 (ja) * 2018-08-10 2020-02-13 国立大学法人岐阜大学 免疫チェックポイント阻害薬の有効性を予測するためのバイオマーカー
JP2020148631A (ja) * 2019-03-13 2020-09-17 学校法人日本医科大学 免疫チェックポイント阻害剤の血中モニタリングおよび患者層別化方法
WO2021090941A1 (ja) * 2019-11-08 2021-05-14 味の素株式会社 免疫チェックポイント阻害剤の薬理作用の評価方法、算出方法、評価装置、算出装置、評価プログラム、算出プログラム、記録媒体、評価システムおよび端末装置
JPWO2021193802A1 (ja) * 2020-03-26 2021-09-30

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2006244885B2 (en) * 2005-05-09 2011-03-31 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Human monoclonal antibodies to programmed death 1(PD-1) and methods for treating cancer using anti-PD-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
EP3906113A4 (en) 2018-12-31 2022-09-21 B.G. Negev Technologies and Applications Ltd., at Ben-Gurion University Capture flow assay device and methods
WO2025088618A1 (en) * 2023-10-26 2025-05-01 B. G. Negev Technologies And Applications Ltd. Capture flow assay device and methods

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH01254868A (ja) 1988-04-05 1989-10-11 Eiji Ishikawa 超高感度抗原物質の測定法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3004877A4 (en) * 2013-06-06 2017-04-19 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Compositions and methods for identification, assessment prevention, and treatment of cancer using pd-l1 isoforms
CN106415269B (zh) * 2014-05-08 2020-11-27 贵州美鑫达医疗科技有限公司 直接免疫组织化学测定
JP6893639B2 (ja) * 2015-12-28 2021-06-23 国立大学法人京都大学 がんの判定方法、がんの判定のための装置及びコンピュータプログラム

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH01254868A (ja) 1988-04-05 1989-10-11 Eiji Ishikawa 超高感度抗原物質の測定法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AGATA: "Expression of the PD-1 antigen on the surface of stimulated mouse T and B lymphocytes", INT. IMMUNOL., vol. 8, no. 5, 1996, pages 765 - 772, XP000971773
KAGAMU, HIROSHI: "Biomarkers to predict antitumor reactivity of immune checkpoint inhibitors", RESPIRATORY MEDICINE, vol. 32, no. 6, 28 December 2017 (2017-12-28), pages 589 - 595, XP009524018, ISSN: 1884-2887 *
KITANO; SHIGEHISA: "Biomarker in immune checkpoint inhibitor therapy", CURRENT THERAPY , vol. 35, no. 2, 1 February 2017 (2017-02-01), pages 156 - 160, XP009524165, ISSN: 0287-8445 *
OTSUKA, ATSUSHI: "PD-1 inhibitor cancer immunotherapy for malignant melanoma, and biomarker for predicting therapeutic effect thereof", HEMATOLOGY FRONTIER, vol. 27, no. 11, 30 October 2017 (2017-10-30), pages 1547 - 1554, XP009524025, ISSN: 1344-6940 *
YUASA, TAKESHI ET AL.: "Biomarkers to predict prognosis and response to checkpoint inhibitors", INT. J. CLIN. ONCOL., vol. 22, no. 4, August 2017 (2017-08-01), pages 629 - 634, XP036285354, DOI: 10.1007/s10147-017-1122-1 *

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020032231A1 (ja) * 2018-08-10 2020-02-13 国立大学法人岐阜大学 免疫チェックポイント阻害薬の有効性を予測するためのバイオマーカー
JP2020148631A (ja) * 2019-03-13 2020-09-17 学校法人日本医科大学 免疫チェックポイント阻害剤の血中モニタリングおよび患者層別化方法
WO2021090941A1 (ja) * 2019-11-08 2021-05-14 味の素株式会社 免疫チェックポイント阻害剤の薬理作用の評価方法、算出方法、評価装置、算出装置、評価プログラム、算出プログラム、記録媒体、評価システムおよび端末装置
JPWO2021090941A1 (ja) * 2019-11-08 2021-05-14
JP7619275B2 (ja) 2019-11-08 2025-01-22 味の素株式会社 免疫チェックポイント阻害剤の薬理作用の評価方法、算出方法、評価装置、算出装置、評価プログラム、算出プログラム、記録媒体、評価システムおよび端末装置
JPWO2021193802A1 (ja) * 2020-03-26 2021-09-30
WO2021193802A1 (ja) * 2020-03-26 2021-09-30 Jsr株式会社 肺がん患者に対する免疫チェックポイント阻害剤による治療の有効性を予測するための方法
CN115066617A (zh) * 2020-03-26 2022-09-16 Jsr株式会社 用于预测对肺癌患者采用免疫检查点抑制剂进行的治疗的有效性的方法
JP7602766B2 (ja) 2020-03-26 2024-12-19 Jsr株式会社 肺がん患者に対する免疫チェックポイント阻害剤による治療の有効性を予測するための方法

Also Published As

Publication number Publication date
JP2020160076A (ja) 2020-10-01
JP7251738B2 (ja) 2023-04-04
CN111919119A (zh) 2020-11-10
EP3779450A1 (en) 2021-02-17
EP3779450A4 (en) 2022-01-12
JP6719117B2 (ja) 2020-07-08
US20210003579A1 (en) 2021-01-07
JP7515812B2 (ja) 2024-07-16
JPWO2019188354A1 (ja) 2020-05-28
JP2023082015A (ja) 2023-06-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7515812B2 (ja) 免疫チェックポイント阻害剤の奏効性の判定を補助する方法、試薬キット、装置及びコンピュータプログラム
EP3425406B1 (en) Method for measuring lipoprotein's capacity to accept cholesterol and reagent kit
Ardalan et al. Anti-phospholipase A2 receptor antibody in idiopathic membranous nephropathy: A report from Iranian population
CA2800371C (en) Methods of renal cancer detection
Tian et al. Circulating antibodies against M-type phospholipase A2 receptor and thrombospondin type-1 domain-containing 7A in Chinese patients with membranous nephropathy
CA2623653C (en) Use of n-myristoyltransferase on non-tumor tissue for cancer diagnosis
JP6629658B2 (ja) 腎症への進行リスクの診断を補助する方法及び診断用試薬キット
WO2023234422A1 (ja) 三次リンパ組織の検査方法、及び三次リンパ組織の検査用キット
JP6893639B2 (ja) がんの判定方法、がんの判定のための装置及びコンピュータプログラム
CN110954698A (zh) 获取有关糖尿病信息的方法及其利用
Yun et al. A noninvasive method of diagnosing membranous nephropathy using exosomes derived from urine
EP3299819B1 (en) Method and apparatus for assisting diagnosis of risk of progression to stage 2 or higher diabetic nephropathy
Fouad et al. Anti-PLA2R and anti-THSD7A as diagnostic serological markers of idiopathic membranous nephropathy: a single centre study
JP2024179174A (ja) 膜性腎症患者に対する化学療法の奏効性に関する情報を取得する方法、膜性腎症患者に対する化学療法の奏効性の判定を補助する方法及び試薬キット
JP6799226B2 (ja) 骨髄線維症の状態の診断を補助する方法、予後の予測を補助する方法、及び治療効果のモニター方法、並びにそれらの方法に用いるマーカー及び装置
AU2017232049A1 (en) Method and apparatus for assisting diagnosis of risk of progression of diabetic nephropathy
JP2020162420A (ja) サイクリン依存性キナーゼ４／６阻害剤の感受性を判定するための方法、試薬キット、装置及びコンピュータプログラム

Legal Events

Date Code Title Description
ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2019547535

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 19774196

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2019774196

Country of ref document: EP

Effective date: 20201027