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WO2019025205A1 - Kapillarzelle und verwendung einer kapillarzelle - Google Patents

Kapillarzelle und verwendung einer kapillarzelle Download PDF

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WO2019025205A1
WO2019025205A1 PCT/EP2018/069696 EP2018069696W WO2019025205A1 WO 2019025205 A1 WO2019025205 A1 WO 2019025205A1 EP 2018069696 W EP2018069696 W EP 2018069696W WO 2019025205 A1 WO2019025205 A1 WO 2019025205A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
capillary
capillary cell
cell
support device
sample
Prior art date
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Ceased
Application number
PCT/EP2018/069696
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Thomas Fritzsche
Ulf-Dietrich Braumann
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fraunhofer Gesellschaft zur Foerderung der Angewandten Forschung eV
Original Assignee
Fraunhofer Gesellschaft zur Foerderung der Angewandten Forschung eV
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fraunhofer Gesellschaft zur Foerderung der Angewandten Forschung eV filed Critical Fraunhofer Gesellschaft zur Foerderung der Angewandten Forschung eV
Publication of WO2019025205A1 publication Critical patent/WO2019025205A1/de
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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    • G—PHYSICS
    • G02—OPTICS
    • G02B—OPTICAL ELEMENTS, SYSTEMS OR APPARATUS
    • G02B21/00—Microscopes
    • G02B21/34—Microscope slides, e.g. mounting specimens on microscope slides
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
    • B01L3/508—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes rigid containers not provided for above
    • B01L3/5082—Test tubes per se
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
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    • G01N21/645—Specially adapted constructive features of fluorimeters
    • G01N21/6456—Spatial resolved fluorescence measurements; Imaging
    • G01N21/6458—Fluorescence microscopy
    • G—PHYSICS
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    • G02B21/00—Microscopes
    • G02B21/16—Microscopes adapted for ultraviolet illumination ; Fluorescence microscopes
    • G—PHYSICS
    • G02—OPTICS
    • G02B—OPTICAL ELEMENTS, SYSTEMS OR APPARATUS
    • G02B21/00—Microscopes
    • G02B21/36—Microscopes arranged for photographic purposes or projection purposes or digital imaging or video purposes including associated control and data processing arrangements
    • G02B21/365—Control or image processing arrangements for digital or video microscopes
    • G02B21/367—Control or image processing arrangements for digital or video microscopes providing an output produced by processing a plurality of individual source images, e.g. image tiling, montage, composite images, depth sectioning, image comparison
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/01—Arrangements or apparatus for facilitating the optical investigation
    • G01N21/03—Cuvette constructions
    • G01N2021/0346—Capillary cells; Microcells

Definitions

  • the present application is a capillary cell according to the preamble of claim 1 and a use of a capillary cell in a microscopy method, such as a Lichtblattmikroskopie compiler or a selective piain Illumination microscopy (SPIM) method.
  • a microscopy method such as a Lichtblattmikroskopie compiler or a selective piain Illumination microscopy (SPIM) method.
  • the illumination and detection axes are orthogonal to each other.
  • a capillary cell in which the sample to be examined is introduced.
  • the capillary cell or the sample contained therein can be moved plane-wise along the detection axis so as to see different levels illuminated by the light sheet.
  • An example of such a capillary cell is shown in DE 10 2012 108 158 AI.
  • the capillary cell described therein comprises, in addition to an envelope with a limiting side wall and an upper and a lower lid, a closure and an inflow, by means of which the capillary cell can be flushed through with a solution.
  • the drain is in the first one
  • Document CA 2 684 221 A1 shows a device or a method in which a fluid, in which particles to be examined are located, flows through a capillary. The particles moving with the fluid are measured as they flow through a measuring range. Via porous structures, substances can be added to the fluid inside the capillary, such as, for example, growth-inhibiting substances, poisons or cell-damaging chemicals.
  • the documents DE 10 2014 004 851 AI and US 2016/0 001 285 AI show a vertical reaction vessel in the form of an insert.
  • the insert is adapted to form a receptacle, with at least one top opening located at the top, and a second opening located at the top for pressure equalization and an overflow.
  • the reaction vessel consists of a dimensionally stable base body, wherein the dimensionally stable base body forms at least one non-capillary reaction space as the inner volume with at least one semipermeable membrane as the side wall.
  • the document EP 0 515 883 A2 shows a device for the safe removal of blood from a storage vessel with an aperture holder, in which a
  • Aperture exhibiting part is held and to which a capillary is attached.
  • the storage vessel can be closed by a cover part.
  • the lid part has an area through which the capillary can be inserted into the storage vessel when the lid part is closed.
  • the document US 5 126 238 A shows a hollow fiber bioreactor system and a method for cell proliferation.
  • the use of a hollow fiber membrane or a bioreactor comprising a hollow fiber membrane is suggested as well as a circuit connected to a first inflow and a first outflow and having means for introducing fluids into the circulation, the reagents and Contain nutrient-containing basal medium.
  • the capillary cell comprises an outer shell of a light-permeable material in the visual spectrum (380 nm-800 nm) or near infrared spectrum (800 nm-1500 nm), preferably in the visual spectrum-transmissive region.
  • suitable materials are glass, in particular borosilicate glass, quartz glass, optical glass or special optical glass, and plastics such as fluorinated ethylene propylene (FEP), polymethyl methacrylate (PMMA), polystyrene (PS), cellulose acetate butyrate (CBS).
  • FEP fluorinated ethylene propylene
  • PMMA polymethyl methacrylate
  • PS polystyrene
  • CBS cellulose acetate butyrate
  • the shell comprises at least a side wall and a lower lid.
  • the envelope also has an inflow and an outflow by means of which a nutrient solution can be flushed through the inflow into the envelope and drained off through the outflow.
  • the capillary cell has a support device for a sample to be examined, which is connected to the shell.
  • the support device divides the sheath into a lower chamber extending between the lower lid and the receptacle and an upper part extending between an upper boundary of the sheath and the support device.
  • the support device is designed such that it comprises a permeable structure.
  • the support device is preferably attached to the side wall and allows no further gap between the side wall and the support device. In this way, for example, in the lower one Chamber filled nutrient solution, which is circulated for example by the outflow and the inflow, only pass through the permeable structure of the support device in the upper part of the capillary cell.
  • the support device is suitable for carrying biological samples on top, i. the upper part of the Kapillarzelle facing side of the support device to be arranged.
  • the sample is in a fixed location and can thus be made available for long-term observations.
  • nutrient solution flushed into the lower chamber can be absorbed by the permeable structure of the sample to be examined.
  • the sample to be examined can pull the nutrient solution upwards solely due to the acting capillary forces through the permeable structure.
  • a support device with a permeable structure for example, a filter, for example, a ceramic filter with a pore size of 2 ⁇ .
  • a nutriprimed lower chamber of the capillary cell wets the lower side of the support and the permeable structure, which is so moistened with the nutrient solution and the nutrient solution is sucked through the filter to the top of the support due to osmotic forces. Since the sample to be examined is placed on the upper side of the support device, it absorbs the nutrient solution and is thus either kept alive for long-term observation or ensures the biological functionality of the sample to be examined.
  • the lower cap of the capillary cell may for example be integrally connected to the side wall.
  • the capillary cell has an upper lid, which thus closes the upper part of the capillary cell to an upper chamber.
  • this cover may be integrally connected to the side wall.
  • the top lid is detachably connected to the sample.
  • the sample to be examined in a simple manner can be stored on the support device.
  • the support device is mechanically stable enough to carry the weight of the sample to be examined. Further embodiments can be found in the subordinate claims.
  • the inflow and outflow are directed into the lower chamber so that the lower part of the sheath is a flow chamber.
  • the entire lower chamber may be flushed with a nutrient solution, such as agarose.
  • a nutrient solution such as agarose.
  • openings in the lower lid or openings in the side wall, which limits the lower chamber are introduced.
  • the outflow and the inflow can be equipped with hoses, which enable a simpler connection of the micropump to the inflow and outflow.
  • Such hoses may for example consist of plastics such as polyvinyl chloride (PVC), polyurethanes (PUR), fluorinated ethylene propylene (FEP) or silicone or glass.
  • PVC polyvinyl chloride
  • PUR polyurethanes
  • FEP fluorinated ethylene propylene
  • silicone or glass plastics such as polyvinyl chloride (PVC), polyurethanes (PUR), fluorinated ethylene propylene (FEP) or silicone or glass.
  • PVC polyvinyl chloride
  • PUR polyurethanes
  • FEP fluorinated ethylene propylene
  • silicone or glass such as silicone or glass.
  • the inflow is passed through the lower lid and connected to another capillary. That capillary is inside the capillary cell shell or inside the sidewall and carries the nutrient solution.
  • the capillary preferably protrudes through the support device and extends to the upper limit of the shell or up to an upper lid on which the drain is arranged
  • the further capillary can be interrupted so that a nutrient solution passing through the further capillary can moisten the support device or the permeable structure or the permeable structure can absorb the nutrient solution.
  • the further capillary is formed with a semipermeable membrane, wherein the semipermeable membrane adjoins the lower chamber, so that a fluid exchange between the lower chamber and the further capillary can take place.
  • the further capillary also projects into the upper part and also includes here a semipermeable membrane.
  • the semipermeable membrane of the further capillary is located exclusively in the lower chamber or in the lower chamber and in the region of the support device.
  • the envelope comprises an upper lid which forms the upper boundary (even if this lid were, for example, still surmounted by the side wall).
  • This upper lid may have a gas inlet and a gas outlet system so that the upper chamber bounded by the upper lid and the support means is flushable with a gas.
  • the gas inlet system may have only a common inlet and outlet or have two separate inlet and outlet openings, which are respectively in the upper lid or in the side wall which defines the upper chamber, are introduced.
  • the permeable structure is a filter, in particular a ceramic filter or a microfilter. It is also possible to design the permeable structure in the form of a semipermeable membrane, for example a proton exchange membrane.
  • a typical pore size can be from ⁇ , ⁇ to ⁇ .
  • the capillary cell presented here can be used in various sizes. For example, the height of the capillary cell can be between 3 and 12 cm.
  • the diameter of a round capillary with a substantially circular side wall may be in the range between 500 ⁇ and 4 cm, preferably between 2 mm and 15 mm. For other geometries, an interval of the possible cross-sectional area of the capillary cell can be calculated from the above diameters.
  • the volume of the capillary cell may be, for example, 7 mm 3 to 20 cm 3 in the lower chamber.
  • the upper part can hold a similar volume.
  • the volume of the capillary cell, the lower chamber and the upper part depends inter alia on the diameter of the capillary cell.
  • the support device may have a volume of typically 0.1 mm 3 to 5 cm 3 , and / or the support device may have an area of typically 2 mm 2 to 5 cm 2 .
  • the capillary cell presented here is particularly suitable for use in a light sheet microscopy method.
  • FIG. 1A schematic representation of a capillary cell
  • FIG. 1B Use of such a capillary cell in a light-sheet microscope
  • FIG. 2 shows further embodiments of a capillary cell, which is shown in longitudinal section;
  • FIG. and Fig. 3 further embodiment of a capillary cell, which is also shown in longitudinal section.
  • FIG. 1A shows a capillary cell 1 with an outer shell 3, which is defined by a side wall 5 and a lower cover 7. Furthermore, a support device 9 is shown within the shell 3, which is designed as a permeable structure. Between the lower cover 7 and the supporting device 9 there is a lower chamber 11, wherein in the side wall 5, which delimits the lower chamber 11, an inflow 13 and an outflow 15 are present to supply the lower chamber 11 with a nutrient solution, For example, from agarose, to flow through and so to create a constant flow.
  • the ceramic filter has a disc with a diameter of 2.5 cm.
  • the ceramic filter is glued to the side wall.
  • the nutrient solution is sucked through the support device 9 from the lower side 17 to the upper side 19, and thus can be a sample to be examined located on the upper side 19 of the support device 9 provide with the nutrient solution.
  • the capillary cell 1 shown here is suitable, for example, to deposit a rat hippocampus on the surface 19 and to supply it with nutrients by means of a nutrient solution flushed into the lower chamber 11.
  • the hippocampus prepared in this way can be introduced together with the capillary cell 1 into a light-sheet microscope assembly and examined over a period of days or weeks in order to investigate the activity of the hippocampus in a long-term experiment. It will be explained with reference to FIG. 1B how an examination of the sample in the capillary cell can be carried out by means of light-sheet microscopy.
  • FIG. 1B shows the capillary cell 1 with a sample 30 arranged therein, which is arranged on the support device 9.
  • the light-sheet microscope 40 has a plurality of parts, only a few of which are explicitly shown.
  • a detection objective 42 can be seen and a matrix screen 44, on which the light waves (shown here schematically as reference symbol 46) impinge and, for example, are assembled into images by a computer unit.
  • the sample 30 is transilluminated out of the plane of the drawing with a light sheet 48.
  • This light sheet or the capillary with sample can be pushed back and forth along the direction z, so as to illuminate different levels of the sample 30 to be examined. In this way, different levels can be displayed on the matrix screen 44 and assembled into an overall image or a three-dimensional model of the sample to be examined.
  • the capillary cell 1 is located within a sample chamber 50, which is intended to prevent the objective 42 or the objective for the irradiation of the
  • Light sheets 48 are touched by the capillary cell 1 and thus could be damaged.
  • it can be connected, for example, at its upper end to a holder 60, so that a discharge into the sample chamber 50 is simply possible. If the sample to be examined or the lower chamber of the capillary cell is now flushed with a nutrient medium, the sample to be examined 30 can remain in the experimental setup for several days or even weeks, and images of different levels can be taken continuously.
  • a capillary cell 70 is shown in longitudinal section. Similar to the capillary cell 1 shown in FIG. 1A, the capillary cell of FIG. 2 may have a round, oval, quadrangular or rectangular cross-section.
  • the capillary cell has a sheath 72 having a sidewall 74 and a bottom lid 76 integral with the sidewall connected, and an upper lid 78 which is designed to be removable, so that the sample 80 can be placed on the support device 82.
  • the lower chamber 86 disposed between the lid 76 and the lower surface 84 of the support 82 has an inlet 88 and a drain 90.
  • the inlet 88 projects into the lower chamber 86 as a small capillary 92 that does not protrude over the entire length of the lower chamber 86 and supplies it with a nutrient medium needed for the sample 80.
  • This nutrient medium may be carried out through the drain 90, which also includes a small capillary 94. In this way, a flow chamber is created in the lower chamber 86.
  • the support device 82 is at the edge
  • the upper chamber 100 is connected to a gas purging system 104 via an inlet 102.
  • the gas of the gas purging system 104 is, for example, nitrogen or carbon dioxide or another gas or gas mixture, which requires numerous samples to be examined in order to be permanently functional or suitable for the experiments.
  • a separate outlet may be present in addition to the inlet.
  • the capillary cell 70 In order to access the capillary cell 70 for the light sheet microscopy or SPIM process, it is made of a borosilicate glass.
  • the support device with the solid region 96 and the semipermeable membrane 98 is manufactured in advance and subsequently introduced into the capillary cell 70. In this case, it is glued to the side wall 74. Thus, it is only possible via the semi-permeable membrane 98 to exchange media between the upper and lower chambers.
  • the capillary cell 110 has a shell 112 with a side wall 114 and a bottom cover 116 and an upper cover 118.
  • the upper cover 118 is designed to be detachable again, see FIG that a sample to be examined 120 can be stored on the support device 122.
  • the support device 122 shown here is for example a filter.
  • the jig 122 and the lower lid 116 define a lower chamber 124.
  • the upper lid 118 and the support surface 122 define an upper cell 126.
  • the capillary cell 110 also has a rinsing system for supplying the sample 120 to be examined with a nutrient solution.
  • the nutrient solution is passed through a capillary 128, whose inflow 130 is arranged on the lower lid 116 and whose outflow 132 is on the upper lid 118.
  • the further capillary 128 thus passes over the entire height of the capillary cell.
  • the further capillary 128 is also guided by the bearing surface 122. If a nutrient solution is now flushed into the further capillary 128 by the inflow 130, the nutrient solution can enter the lower chamber 124, since a delimiting wall 134 of the further capillary 128 is a semi-permeable membrane through which the nutrient solution passes, and thus gradually can fill lower chamber.
  • the semi-permeable membrane is located exclusively in the area of the support 122, ie, only along the small portion 136.
  • the further capillary 128 has solid, ie impermeable, walls in the upper chamber 126 which do not allow any nutrient fluid to escape into the upper chamber 126.
  • the top cover 118 also contains a gas inlet 102, which can be connected to a gas flow system 104. In this way, the sample 120 can also be rinsed with the gas.

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Abstract

Gegenstand der Erfindung ist eine Kapillarzelle (1, 70, 110), insbesondere zur Verwendung in einem optischen Mikroskop, insbesondere in einem Lichtblattmikroskop (40), wobei die Kapillarzelle eine äußere Hülle (3, 72, 112) aus einem im visuellen Spektrum lichtdurchlässigen Material umfasst. Ferner besitzt die Hülle eine Seitenwand und einen unteren Deckel. Innerhalb der Hülle ist eine Auflagevorrichtung (9, 82, 122) angeordnet, welche unter anderem eine durchlässige Struktur umfasst.

Description

Kapillarzelle und Verwendung einer Kapillarzelle
Gegenstand der vorliegenden Anmeldung ist eine Kapillarzelle gemäß dem Oberbegriff des Anspruchs 1 sowie eine Verwendung einer Kapillarzelle in einem Mikroskopieverfahren, wie beispielsweise einem Lichtblattmikroskopieverfahren oder einem selective piain Illumination microscopy (SPIM) Verfahren.
Moderne Mikroskopieverfahren, insbesondere im visuellen Bereich bieten zahlreiche Möglichkeiten in der biologischen Forschung. Unter anderem sind bei vielen Mikroskopieverfahren auch Langzeitbeobachtungen von biologischen, insbesondere lebenden, Proben möglich. I nsbesondere die SPI M- Verfahren und die Lichtblattmikroskopie stellen Verfahren dar, welche sich bei der Bildgebung von biologischen Zellvorgängen großer Beliebtheit erfreuen.
Bei einem Lichtblattsystem sind die Beleuchtungs-und die Detektionsachse orthogonal zueinander ausgerichtet. Um die zu untersuchende Probe in den Schnittpunkt der Beleuchtungs- und Detektionsachse zu bewegen wird häufig auf eine Kapillarzelle zurückgegriffen, in welche die zu untersuchende Probe eingebracht wird. Anschließend kann die Kapillarzelle bzw. die sich darin befindliche Probe ebenenweise entlang der Detektionsachse bewegt werden, um so verschiedene Ebenen durch das Lichtblatt beleuchtet zu sehen. Ein Beispiel einer derartigen Kapillarzelle ist in der DE 10 2012 108 158 AI dargestellt. Die dort beschriebene Kapillarzelle umfasst neben einer Hülle mit einer begrenzenden Seitenwand und einem oberen und einem unteren Deckel einen Abschluss und einen Zufluss, mittels welchem die Kapillarzelle mit einer Lösung durchspült werden kann. Dabei ist der Abfluss in dem ersten
Deckel und der Zufluss in dem gegenüberliegenden Deckel angeordnet. Hierdurch kann die zu untersuchende Probe beispielsweise in der Lösung schwimmend untersucht werden. Bei der in der DE 10 2012 108 158 AI gezeigten Kapillarzelle ist es jedoch nachteilig, dass Langzeituntersuchungen nur schwierig durchführbar sind, da die Kapillarzelle dauerhaft durchströmt wird.
Die Druckschrift CA 2 684 221 AI zeigt eine Vorrichtung bzw. ein Verfahren, in der bzw. dem ein Fluid, in dem sich zu untersuchende Partikel befinden, eine Kapillare durchströmt. Die sich mit dem Fluid bewegenden Partikel werden beim Durchfließen eines Messbereichs vermessen. Über poröse Strukturen können dem Fluid im Inneren der Kapillare Stoffe zugeführt werden, wie beispielsweise wachstumshemmende Substanzen, Gifte oder zellschädigende Chemikalien. Die Druckschriften DE 10 2014 004 851 AI und US 2016 / 0 001 285 AI zeigen ein vertikales Reaktionsgefäß in Form eines Inserts. Das Insert ist passfähig zu einem Aufnahmegefäß ausgebildet, mit mindestens einer oben befindlichen ersten Öffnung, sowie einer oben befindlichen zweiten Öffnung für einen Druckausgleich und einen Überlauf. Das Reaktionsgefäß besteht aus einem formstabilen Grundkörper, wobei der formstabile Grundkörper mindestens einen nichtkapillaren Reaktionsraum als Innenvolumen mit mindestens einer semipermeablen Membran als Seitenwand bildet.
Die Druckschrift EP 0 515 883 A2 zeigt eine Einrichtung zur sicheren Entnahme von Blut aus einem Vorratsgefäß mit einem Aperturhalter, in dem ein eine
Apertur aufweisendes Teil gehalten ist und an dem eine Kapillare befestigt ist. Das Vorratsgefäß ist durch ein Deckelteil verschließbar. Das Deckelteil weist einen Bereich auf, durch den hindurch die Kapillare bei geschlossenem Deckelteil in das Vorratsgefäß einführbar ist. Die Druckschrift US 5 126 238 A zeigt ein Hohlfaser-Bioreaktorsystem und ein Verfahren zur Zellvermehrung. Im Zusammenhang mit dem System und dem Verfahren wird die Verwendung einer Hohlfasermembran oder eines eine Hohlfasermembran umfassenden Bioreaktors vorgeschlagen sowie ein Kreislauf, der mit einem ersten Zufluss und einem ersten Abfluss verbunden ist und Mittel aufweist, um Fluide in den Kreislauf einzuführen, die Reagenzien und ein Nährstoffe enthaltendes Basalmedium enthalten.
Es ist die Aufgabe der vorliegenden Erfindung, eine Kapillarzelle zu schaffen, welche unter anderem auch zur Langzeitbeobachtung von Proben einsetzbar ist.
Die Aufgabe wird gelöst durch eine Kapillarzelle mit den Merkmalen des Anspruchs 1. Weiterführende Ausführungsformen finden sich in den untergeordneten Ansprüchen.
Die Kapillarzelle umfasst eine äußere Hülle aus einem im visuellen Spektrum (380 nm - 800 nm) bzw. nahen Infrarotspektrum (800 nm - 1500nm) lichtdurchlässigen Material, vorzugsweise im visuellen Spektrum durchlässigen Bereich. Geeignete Materialien sind beispielsweise Glas, insbesondere Borsilikatglas, Quarzglas, Optisches Glas oder Optisches Spezialglas sowie Kunststoffe wie Fluorethylenpropylen (FEP), Polymethylmethacrylat (PMMA), Polystyrol (PS), Celluloseacetatbutyrat (CBS). Die Hülle umfasst zumindest eine Seitenwand und einen unteren Deckel. Die Hülle besitzt zudem einen Zufluss und eine Abfluss mittels welchen eine Nährlösung durch den Zufluss in die Hülle eingespült und durch den Abfluss abgelassen werden kann.
Ferner besitzt die Kapillarzelle eine Auflagevorrichtung für eine zu untersuchende Probe, welche mit der Hülle verbunden ist. Die Auflagevorrichtung unterteilt die Hülle in eine untere, sich zwischen dem unteren Deckel und der Aufnahme erstreckende Kammer und einen oberen sich zwischen einer oberen Begrenzung der Hülle und der Auflagevorrichtung erstreckenden Teil. Die Auflagevorrichtung ist dabei derart beschaffen, dass diese eine durchlässige Struktur umfasst. Die Auflagevorrichtung ist bevorzugt an der Seitenwand befestigt und lässt keinen weiteren Spalt zwischen der Seitenwand und der Auflagevorrichtung zu. Auf diese Weise kann eine beispielsweise in die untere Kammer eingefüllte Nährstofflösung, welche beispielsweise durch den Abfluss und den Zufluss zirkuliert wird, lediglich durch die durchlässige Struktur der Auflagevorrichtung in den oberen Teil der Kapillarzelle treten.
Ferner ist die Auflagevorrichtung dafür geeignet, biologische Proben auf der Oberseite, d.h. dem oberen Teil der der Kapillarzelle zugewandten Seite der Auflagevorrichtung angeordnet zu werden. Auf diese Weise befindet sich die Probe an einem festgelegten Ort und kann somit für Langzeitbeobachtungen verfügbar gemacht werden. Um eine ausreichende Versorgung der biologischen Probe mit Nährstofflösung zu ermöglichen, kann in die untere Kammer eingespülte Nährstofflösung durch die durchlässige Struktur von der zu untersuchenden Probe aufgesogen werden.
Je nach Beschaffenheit der Auflagevorrichtung kann die zu untersuchende Probe die Nährstofflösung ausschließlich aufgrund der wirkenden Kapillarkräfte durch die durchlässige Struktur nach oben ziehen. Ein Beispiel für eine derartige Auflagevorrichtung mit einer durchlässigen Struktur ist beispielsweise ein Filter, beispielsweise ein Keramikfilter mit einer Porengröße von 2 μιτι. Eine mit Nährstofflösung durchflossene untere Kammer der Kapillarzelle benetzt die untere Seite der Auflagevorrichtung und der durchlässigen Struktur, welche so mit der Nährstofflösung befeuchtet wird und die Nährstofflösung aufgrund von osmotischen Kräften durch den Filter an die Oberseite der Auflagevorrichtung gesogen wird. Da auf der Oberseite der Auflagevorrichtung die zu untersuchende Probe platziert ist, nimmt diese die Nährstofflösung auf und wird somit auch für eine Langzeitbeobachtung entweder am Leben gehalten oder die biologische Funktionsfähigkeit der zu untersuchenden Probe gewährleistet.
Der untere Deckel der Kapillarzelle kann beispielsweise integral mit der Sei- tenwand verbunden sein. In einer Ausführungsform der Kapillarzelle weist diese einen oberen Deckel auf, welcher somit den oberen Teil der Kapillarzelle zu einer oberen Kammer abschließt. Auch dieser Deckel kann integral mit der Seitenwand verbunden sein. In anderen Ausführungsformen ist der obere Deckel jedoch abnehmbar mit der Probe verbunden. Die
Wiederverschließbarkeit der Kapillarzelle durch einen oberen Deckel hat den
Vorteil, dass die Probe, welche zu untersuchen ist, auf einfache Art und Weise auf der Auflagevorrichtung abgelegt werden kann. Dabei ist die Auflagevorrichtung mechanisch stabil genug ausgebildet, um das Gewicht der zu untersuchenden Probe zu tragen. Weitere Ausführungsformen finden sich in den untergeordneten Ansprüchen.
In einer Ausführungsform sind der Zufluss und der Abfluss in die untere Kammer geführt, so dass der untere Teil der Hülle eine Durchflusskammer ist. In dieser Ausführungsform kann die gesamte untere Kammer mit einer Nähr- Stofflösung, wie beispielsweise Agarose durchspült werden. Als Zufluss können beispielsweise Öffnungen im unteren Deckel oder Öffnungen in der Seitenwand, welche die untere Kammer begrenzt, eingebracht werden. Um den Zu- bzw. Abfluss mit einem Mikropumpensystem zu verbinden, können beispielsweise der Abfluss und der Zufluss mit Schläuchen ausgestattet sein, wel- che einen einfacheren Anschluss der Mikropumpe an den Ab- und Zufluss ermöglichen. Derartige Schläuche können beispielsweise aus Kunststoffen, wie Polyvinylchlorid (PVC), Polyurethane (PUR), Fluorethylenpropylen (FEP) oder Silikon oder aus Glas bestehen. In einer weiteren Ausführungsform ist der Zufluss durch den unteren Deckel geführt und mit einem weiteren Kapillar verbunden. Jenes Kapillar befindet sich im Inneren der Hülle der Kapillarzelle oder innerhalb der Seitenwand und führt die Nährstofflösung. Das Kapillar ragt vorzugsweise durch die Auflagevorrichtung hindurch und reicht bis zur oberen Begrenzung der Hülle bzw. bis zu einem oberen Deckel, an welchem der Abfluss angeordnet ist. Im Bereich des Durchflusses durch die Auflagevorrichtung bzw. durch die durchlässige Struktur kann das weitere Kapillar unterbrochen sein, so dass eine durch das weitere Kapillar hindurchtretende Nährstofflösung die Auflagevorrichtung bzw. die durchlässige Struktur befeuchten bzw. die durchlässige Struktur die Nährstofflösung aufnehmen kann.
In einer weiteren Ausführungsform ist das weitere Kapillar mit einer semipermeablen Membran ausgebildet, wobei die semipermeable Membran an die untere Kammer grenzt, so dass ein Flüssigkeitsaustausch zwischen der unteren Kammer und dem weiteren Kapillar stattfinden kann. Besonders bevorzugt ragt das weitere Kapillar auch in den oberen Teil und umfasst auch hier eine semipermeable Membran. In anderen Ausführungsformen befindet sich die semipermeable Membran des weiteren Kapillars jedoch ausschließlich in der unteren Kammer bzw. in der unteren Kammer und im Bereich der Auflagevorrichtung.
Bei den bislang beschriebenen Ausführungsformen ist es möglich, zum einen die zu untersuchende Probe durch die mit Nährstofflösung durchflossene untere Kammer zu versorgen und zum anderen zu verhindern, dass die zu untersuchende Probe auf der Auflagevorrichtung bzw. dem oberen Teil der Kapil- larzelle aufgeschwemmt wird. Manche zu untersuchenden Proben, wie beispielsweise hippocampale Schnitte oder hippocampale Strukturen von Tieren müssen im Wesentlichen unaufgeschwemmt vorliegen, um Langzeituntersuchungen durchführen zu können. In einer weiteren Ausführungsform umfasst die Hülle einen oberen Deckel, welcher die obere Begrenzung bildet (auch wenn dieser Deckel beispielsweise noch durch die Seitenwand überragt würde). Dieser obere Deckel kann ein Gaseinlass- und ein Gasauslasssystem besitzen, so dass die durch den oberen Deckel und die Auflagevorrichtung begrenzte obere Kammer mit einem Gas spülbar ist. Für zahlreiche Untersuchungen ist es notwendig, die Probe nicht nur mit Nährstoffen aus einer Nährstofflösung zu versorgen, sondern auch sicherzustellen, dass die zu untersuchende Probe in einem bestimmten Gasmilieu gehalten wird. So gibt es beispielsweise zahlreiche zu untersuchende Proben, welche bevorzugt in einer Stickstoffatmosphäre überleben können. Um hier bei Laborbedingungen ein einfaches Überleben der Proben zu gewährleisten, ist es notwendig, den oberen Teil der Kammer mit einem Gas zu spülen. Dabei kann das Gaseinlasssystem lediglich einen gemeinsamen Einlass und Auslass besitzen oder zwei getrennte Einlass- und Auslassöffnungen besitzen, welche jeweils im oberen Deckel oder in der Seitenwand, welcher die obere Kammer begrenzt, eingebracht sind.
In einer weiteren Ausführungsform ist die durchlässige Struktur ein Filter, insbesondere ein Keramikfilter oder ein Mikrofilter. Auch ist es möglich, die durchlässige Struktur in Form einer semipermeablen Membran, beispielswei- se einer Protonenaustauschmembran zu gestalten. Eine typische Porengröße kann von Ο,ΐμιτι bis ΙΟΟμιτι betragen. Die hier vorgestellte Kapillarzelle kann in verschiedenen Größen zum Einsatz kommen. Beispielsweise kann die Höhe der Kapillarzelle zwischen 3 und 12 cm betragen. Der Durchmesser eines runden Kapillars mit einer im Wesentlichen kreisrunden Seitenwand kann im Bereich zwischen 500 μιη und 4 cm, vorzugsweise zwischen 2 mm und 15 mm liegen. Bei anderen Geometrien kann ein Intervall der möglichen Querschnittsfläche der Kapillarzelle anhand der obigen Durchmesser berechnet werden. Obgleich bislang lediglich eine runde Ausgestaltung der Seitenwand erläutert wurde ist es auch möglich, beispielsweise eine rechteckige, insbesondere quadratische, oder elliptische Grundstruktur für die Kapillarzelle zu wählen. Die Wahl hängt primär von der Größe der zu untersuchenden Proben und der zur Verfügung stehenden Materialien für die Kapillarzelle ab.
Das Volumen der Kapillarzelle kann in der unteren Kammer beispielsweise 7 mm3 bis 20 cm3 betragen. Der obere Teil kann ein ähnliches Volumen fassen. Das Volumen der Kapillarzelle, der unteren Kammer und des oberen Teils hängt unter anderem auch vom Durchmesser der Kapillarzelle ab. Die Auflagevorrichtung kann ein Volumen von typischerweise 0,1 mm3 bis 5 cm3 besitzen, und/oder die Auflagevorrichtung eine Fläche von typischerweise 2 mm2 bis 5 cm2 besitzen.
Wie bereits eingangs erwähnt, ist die hier vorgestellte Kapillarzelle besonders geeignet, um in einem Lichtblattmikroskopieverfahren eingesetzt zu werden.
Nachfolgend soll die Erfindung anhand einiger konkreter Ausführungsbeispiele näher erläutert werden. Es zeigen:
Fig. 1A schematische Darstellung einer Kapillarzelle;
Fig. 1B Verwendung einer derartigen Kapillarzelle in einem Lichtblattmikroskop;
Fig. 2 weitere Ausführungsformen einer Kapillarzelle, welche im Längsschnitt darstellt ist; und Fig. 3 weitere Ausführungsform einer Kapillarzelle, welche ebenfalls im Längsschnitt dargestellt ist.
Die Fig. 1A zeigt eine Kapillarzelle 1 mit einer äußeren Hülle 3, welche durch eine Seitenwand 5 sowie einen unteren Deckel 7 definiert ist. Ferner ist innerhalb der Hülle 3 eine Auflagevorrichtung 9 dargestellt, welche als durchlässige Struktur ausgebildet ist. Zwischen dem unteren Deckel 7 und der Auflagevorrichtung 9 befindet sich eine untere Kammer 11, wobei in der Seitenwand 5, welche die untere Kammer 11 begrenzt, ein Zufluss 13 und ein Abfluss 15 vor- handen sind, um die untere Kammer 11 mit einer Nährstofflösung, beispielsweise aus Agarose, zu durchfließen und so einen konstanten Durchfluss zu schaffen. Die Seitenwand 5 ist aus einem Glas oder Kunststoff gebildet und ist im Wesentlichen rund. Der Durchmesser der kreisrunden Seitenwand beträgt im Wesentlichen D = 2,5 cm. Die Auflagevorrichtung 9 ist ein keramischer Fil- ter, welcher analog zum Durchmesser D = 2,5 cm ebenfalls eine kreisrunde
Scheibe mit einem Durchmesser von 2,5 cm besitzt. Der keramische Filter ist dabei mit der Seitenwand verklebt.
Wird nun eine Nährstofflösung in den Zufluss 13 eingespült, befüllt diese zu- nächst die untere Kammer 11 und befeuchtet insbesondere eine Unterseite
17 der Auflagevorrichtung 9. Aufgrund der Befeuchtung und der herrschenden Kapillarkräfte wird die Nährstofflösung durch die Auflagevorrichtung 9 hindurch von der unteren Seite 17 bis zur oberen Seite 19 gesogen, und kann so eine sich auf der Oberseite 19 der Auflagevorrichtung 9 befindliche zu un- tersuchende Probe mit der Nährstofflösung versorgen.
An der oberen Begrenzung 21 der Seitenwand 5 befindet sich eine Öffnung, durch welche die zu untersuchende Probe auf der Oberseite 19 der Auflagevorrichtung 9 abgelegt werden kann. Die hier gezeigte Kapillarzelle 1 ist bei- spielsweise geeignet, um einen Rattenhippocampus auf der Oberfläche 19 abzulegen und mittels einer in die untere Kammer 11 eingespülten Nährstofflösung mit Nährstoffen zu versorgen. Der so präparierte Hippocampus kann zusammen mit der Kapillarzelle 1 in einen Lichtblattmikroskopieaufbau eingeführt werden, und so über Tage oder Wochen untersucht werden, um die Ak- tivität des Hippocampus im Langzeitversuch zu untersuchen. Anhand der Fig. 1B soll erläutert werden, wie eine Untersuchung der Probe in der Kapillarzelle mittels Lichtblattmikroskopie durchgeführt werden kann. In der Fig. 1B ist die Kapillarzelle 1 mit einer darin angeordneten Probe 30 gezeigt, welche auf der Auflagevorrichtung 9 angeordnet ist. Der Einfachheit halber sind die Zu- und Abflüsse der unteren Kammer 11, wie in der Fig. 1A dargestellt, nicht eingezeichnet. Das Lichtblattmikroskop 40 besitzt eine Vielzahl von Teilen, von denen lediglich einige explizit dargestellt sind. Unter anderem ist ein Detektionsobjektiv 42 zu sehen und ein Matrixbildschirm 44, auf welchem die Lichtwellen (hier als Bezugszeichen 46 schematisch eingezeich- net) auftreffen und beispielsweise von einer Rechnereinheit zu Bildern zusammengesetzt werden. Die Probe 30 wird aus der Ebene der Zeichnung heraus mit einem Lichtblatt 48 durchleuchtet. Dieses Lichtblatt bzw. die Kapillare mit Probe kann entlang der Richtung z hin- und hergeschoben werden, um so verschiedenen Ebenen der zu untersuchenden Probe 30 zu beleuchten. Auf diese Weise können unterschiedliche Ebenen auf dem Matrixbildschirm 44 dargestellt werden und zu einem Gesamtbild oder einem dreidimensionalen Modell der zu untersuchenden Probe zusammengesetzt werden.
Die Kapillarzelle 1 befindet sich innerhalb einer Probenkammer 50, welche verhindern soll, dass das Objektiv 42 bzw. das Objektiv zum Einstrahlen des
Lichtblatts 48 von der Kapillarzelle 1 berührt werden und somit beschädigt werden könnten. Um die Kapillarzelle 1 in die Probenkammer 50 abzulassen, kann diese beispielsweise an ihrem oberen Ende mit einer Halterung 60 verbunden werden, so dass ein Ablassen in die Probenkammer 50 einfach mög- lieh ist. Wird die zu untersuchende Probe bzw. die untere Kammer der Kapillarzelle nun mit einem Nährstoffmedium durchspült, kann die zu untersuchende Probe 30 mehrere Tage oder auch Wochen in dem Versuchsaufbau verbleiben, und es können fortlaufend Bilder verschiedener Ebenen gemacht werden.
Anhand der Fign. 2 und 3 sollen weitere Ausführungsbeispiele von Kapillarzellen erläutert werden. In der Fig. 2 ist eine Kapillarzelle 70 im Längsschnitt dargestellt. Ähnlich wie die in der Fig. 1A dargestellte Kapillarzelle 1 kann die Kapillarzelle der Fig. 2 einen runden, ovalen, viereckigen oder rechteckigen Querschnitt besitzen. Die Kapillarzelle besitzt eine Hülle 72 mit einer Seitenwand 74 sowie einem unteren Deckel 76, welcher integral mit der Seitenwand verbunden ist, und einen oberen Deckel 78, welcher abnehmbar gestaltet ist, so dass die Probe 80 auf der Auflagevorrichtung 82 abgelegt werden kann. Die zwischen dem Deckel 76 und der unteren Oberfläche 84 der Auflagevorrichtung 82 angeordnete untere Kammer 86 besitzt einen Zufluss 88 und einen Abfluss 90. Der Zufluss 88 ragt als kleines, nicht über die gesamte Länge der unteren Kammer 86 ragendes Kapillar 92 in die untere Kammer 86 und führt dieser ein für die Probe 80 benötigtes Nährstoffmedium zu. Dieses Nährstoffmedium kann durch den Abfluss 90, welcher ebenfalls ein kleines Kapillar 94 umfasst, ausgeführt werden. Auf diese Weise wird eine Durchflusskammer in der unteren Kammer 86 geschaffen. Die Auflagevorrichtung 82 ist am Rand
96 undurchlässig ausgebildet, beispielsweise aus einem PMMA, und in seiner Mitte 98 mit einem durchlässigen Material, wie beispielsweise einer semipermeablen Membran versehen. Durch die semipermeable Membran 98 kann die zu untersuchende Probe 80 die in der unteren Kammer befindliche Nähr- Stofflösung aufgrund von Sogwirkung oder Kapillarwirkung aufnehmen. Die obere Kammer 100 wird über einen Einlass 102 mit einem Gasspülsystem 104 verbunden. Das Gas des Gasspülsystem 104 ist beispielsweise Stickstoff oder Kohlendioxid oder eine anderes Gas oder Gasgemisch, welches zahlreiche zu untersuchenden Proben benötigen, um dauerhaft funktionsfähig bzw. für die Versuche geeignet zu sein. Obgleich in der Fig. 2 nur ein einziger Einlass 102 dargestellt ist, kann neben dem Einlass auch ein separater Auslass vorhanden sein. Die in der Fig. 2 dargestellten Ein- und Auslässe sind in kleiner Kapillarform gehalten. Dies kann die Strömungseigenschaften innerhalb der unteren bzw. oberen Kammer beeinflussen bzw. verbessern. Um die Kapillarzelle 70 für die Lichtblattmikroskopie oder SPIM-Verfahren zugänglich zu machen, ist diese aus einem Borsilikatglas gehalten. Die Auflagevorrichtung mit dem soliden Bereich 96 und der semipermeablen Membran 98 wird vorab gefertigt und nachträglich in die Kapillarzelle 70 eingeführt. Dabei wird diese mit der Seitenwand 74 verklebt. Somit besteht nur die Möglichkeit über die semiper- meable Membran 98 Medien zwischen der oberen und der unteren Kammer auszutauschen.
Die Fig. 3 zeigt eine Variante der in der Fig. 2 dargestellten Kapillarzelle 70. Die Kapillarzelle 110 besitzt eine Hülle 112 mit einer Seitenwand 114 sowie einem unteren Deckel 116 und einem oberen Deckel 118. Der obere Deckel 118 ist hierbei wieder abnehmbar gestaltet, so dass eine zu untersuchende Probe 120 auf der Auflagevorrichtung 122 abgelegt werden kann. Die hier dargestellte Auflagevorrichtung 122 ist beispielsweise ein Filter. Die Auflagevorrichtung 122 und der untere Deckel 116 begrenzen eine untere Kammer 124. Der obere Deckel 118 und die Auflagefläche 122 begrenzen eine obere Zelle 126. Auch die Kapillarzelle 110 weist ein Spülsystem zum Versorgen der zu untersuchenden Probe 120 mit einer Nährstofflösung auf. Anders als in den vorab gezeigten Beispielen wird jedoch die Nährstofflösung durch ein Kapillar 128 geleitet, dessen Zufluss 130 am unteren Deckel 116 und deren Abfluss 132 am oberen Deckel 118 angeordnet ist. Das weitere Kapillar 128 führt also über die gesamte Höhe der Kapillarzelle hindurch. Dabei wird das weitere Kapillar 128 auch durch die Auflagefläche 122 geführt. Wird nun eine Nährstofflösung durch den Zufluss 130 in das weitere Kapillar 128 eingespült, kann die Nährstofflösung in die untere Kammer 124 eintreten, da eine begrenzende Wand 134 des weiteren Kapillars 128 eine semipermeable Membran ist, durch welche die Nährstofflösung hindurchtreten und somit nach und nach die untere Kammer befüllen kann. Alternativ hierzu befindet sich die semipermeable Membran ausschließlich im Bereich der Auflagevorrichtung 122, d.h. ausschließlich entlang des kleinen Abschnitts 136. Das weitere Kapillar 128 besitzt in der oberen Kammer 126 solide, d.h. undurchlässige Wände, welche keine Nährstoffflüssigkeit in die obere Kammer 126 austreten lassen. Wie bereits in der Fig. 2 dargestellt, befindet sich am oberen Deckel 118 auch ein Gaseinlass 102, welcher mit einem Gasflusssystem 104 verbindbar ist. Auf diese Weise kann die Probe 120 ebenfalls mit dem Gas bespült werden.

Claims

Patentansprüche
1. Kapillarzelle (1; 70; 110), insbesondere zur Verwendung in einem optischen Mikroskop, insbesondere in einem Lichtblattmikroskop (40), wobei die Kapillarzelle (1; 70; 110) eine äußere Hülle (3; 72; 112) aus einem im visuellen und/oder Nahen Infrarot Spektrum lichtdurchlässigen Material umfasst; die Hülle (3; 72; 112) eine Seitenwand (5; 74; 114) und einen unteren Deckel (7; 76; 116) besitzt; und die Hülle (3; 72; 112) einen Zufluss (13; 88; 130) und einen Abfluss (15; 90; 132) besitzt,
d a d u r c h g e k e n n z e i c h n e t,
dass eine Auflagevorrichtung (9; 82, 122) für eine zu untersuchende Probe (30; 80) mit der Hülle (3; 72; 112) verbunden ist, wobei die Auflagevorrichtung (9; 82, 122) die Hülle (3; 72; 112) in eine untere, sich zwischen dem unteren Deckel und der Auflagevorrichtung (9; 82, 122) erstreckende Kammer (11; 86; 124) und einen oberen, sich zwischen einer oberen Begrenzung (21) der Hülle (3; 72; 112) und der Auflagevorrichtung (9; 82, 122) erstreckenden Teil (23, 126) kompartimentiert; und die Auflagevorrichtung (9; 82, 122) eine durchlässige Struktur (9; 98; 122) umfasst.
2. Kapillarzelle (1; 70) nach Anspruch 1, wobei der Zufluss (13; 88) und der Abfluss (15; 90) in die untere Kammer (11; 86) geführt sind, so dass die untere Kammer (11; 86) der Hülle (3; 72) eine Durchflusskammer ist.
3. Kapillarzelle (110) nach Anspruch 1, wobei der Zufluss (130) durch den unteren Deckel (116) geführt ist und mit einem durch die Auflagevorrichtung (122) führenden weiteren Kapillar (128) verbunden ist und der Abfluss (132) mit einem, dem Zufluss (130) gegenüberliegenden Ende des weiteren Kapillars (128) verbunden ist.
4. Kapillarzelle (110) nach Anspruch 3, wobei das weitere Kapillar (128) eine zumindest an die untere Kammer (124) grenzende semipermeab- le Membran (134) umfasst, wobei die semipermeable Membran (134) vorzugsweise auch im oberen Teil (126) angeordnet ist.
5. Kapillarzelle (1; 70; 110) nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die obere Begrenzung (21) der Hülle (3; 72; 112) einen oberen Deckel (78; 118) umfasst, welcher den oberen Teil (23, 126) als obere Kammer (23, 126) abschließt und ein Gaseinlasssystem (102) in die obere Kammer (23, 126) geführt ist, so dass die zu untersuchende Probe (30; 80) mit Gas spülbar ist.
6. Kapillarzelle (1; 70; 110) nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die durchlässige Struktur (9, 98, 122) ein Filter oder eine semipermeable Membran (98) ist oder aufweist.
7. Kapillarzelle (1; 70; 110) nach Anspruch 6, wobei der Filter derart beschaffen ist, dass eine Flüssigkeit aufgrund von Kapillarkräften aufsteigen kann.
8. Kapillarzelle (1; 70; 110) nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das lichtdurchlässige Material ein Glas oder ein Kunststoff ist.
9. Kapillarzelle (1; 70; 110) nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die untere Kammer (11; 86; 124) ein Volumen von 7 mm3 bis 20 cm3 besitzt, und/oder die Auflagevorrichtung (9; 82, 122) ein Volumen von 0,1 mm3 bis 5 cm3 besitzt, und/oder die Auflagevorrichtung (9; 82, 122) eine Fläche von 2 mm2 bis 5 cm2 besitzt.
10. Verwendung einer Kapillarzelle (1; 70; 110) nach einem der vorhergehenden Ansprüche in einem Lichtblattmikroskop.
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