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WO2018207562A1 - 試料がセルコスポラ属またはシュードセルコスポラ属の菌を含有しているかどうかを判定する方法 - Google Patents

試料がセルコスポラ属またはシュードセルコスポラ属の菌を含有しているかどうかを判定する方法 Download PDF

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genus
mixture
bacterium
nitrophenyl
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祐輝 串田
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Panasonic Intellectual Property Management Co Ltd
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    • G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
    • G01N21/78—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator producing a change of colour

Definitions

  • the present invention relates to a method for determining whether a sample contains a bacterium of the genus Cercospora or Pseudocell cospora.
  • Non-Patent Document 1 discloses a method for rapidly and immunologically and molecularly detecting Cercospora bacteria in leguminous plants.
  • An object of the present invention is to provide a novel method for determining whether a sample contains a bacterium of the genus Cercospora or Pseudocell cospora.
  • the present invention provides a method for determining whether a sample contains at least one of a bacterium of the genus Cercospora and a bacterium of the genus Pseudocelcospora.
  • the method of the present invention comprises the following steps: (A) N, N, N ′, N′-Tetramethyl-1,4-phenylenediamine and 5- (2,4-disulfophenyl) -3- (2-methoxy-4-nitrophenyl) -2- ( Adding to an aqueous solution containing 4-nitrophenyl) -2H-tetrazolium to obtain a mixture, here,
  • the aqueous solution has a pH of 5.1 or more and 6.5 or less,
  • the method of the present invention comprises: (E) when the mixture is orange, the step of determining that the sample contains at least one of a bacterium of the genus Cercospora and a bacterium of the genus Pseudocelcospora, It comprises.
  • the present invention provides a novel method for determining whether a sample contains a bacterium belonging to the genus Cercospora or Pseudocell cospora.
  • the method according to the first embodiment includes the following four steps (a) to (d).
  • TMPD N, N, N ′, N′-Tetramethyl-1,4-phenylenediamine
  • WST-8 a compound represented by the following chemical formula
  • TMPD is available as N, N, N ′, N′-Tetramethyl-1,4-phenylenediamine® dihydrochloride (CAS number: 637-01-4).
  • WST-8 is 5- (2,4-disulfophenyl) -3- (2-methoxy-4-nitrophenyl) -2- (4-nitrophenyl) -2H-tetrazolium, inner salt, monosodium salt (CAS number: 193149- 74-5).
  • the aqueous solution has a pH of 5.1 or more and 6.5 or less. If the aqueous solution has a pH of less than 5.1, detection of Cercospora and Pseudocell Kospora is impossible. More specifically, although the sample contains at least one of a bacterium of the genus Cercospora and a bacterium of the genus Pseudocelcospora, the sample is a bacterium of the genus Cercospora and a pseudocelco in the step (d) described later. The wrong conclusion is reached that none of the Spora spp. See Comparative Example 2 described below.
  • the aqueous solution has a pH of 5.1 or more and 6.5 or less.
  • the present invention is characterized in that a bacterium belonging to the genus Cercospora or Pseudocell cospora is detected by a combination of TMPD and WST-8 under an appropriate pH condition (ie, not less than 5.1 and not more than 6.5). It is done.
  • TMPD and WST-8 makes it impossible to detect Cercospora or Pseudocell Kospora.
  • the mixture obtained in the step (a) is irradiated with light having a wavelength of 400 nanometers or more and 500 nanometers or less, and the first absorbance Ay of the mixture is measured.
  • the mixture may be irradiated with light having a wavelength of 460 nanometers to measure the first absorbance Ay of the mixture.
  • step (c) the mixture obtained in step (a) is irradiated with light having a wavelength of more than 500 nanometers and not more than 800 nanometers, and the second absorbance Ax of the mixture is measured.
  • light having a wavelength of 610 nanometers can be irradiated, and the second absorbance Ax of the mixture can be measured.
  • step (b) and step (c) are not limited. In other words, step (b) may be performed first, and then step (c) may be performed. Alternatively, step (c) may be performed first, and then step (b) may be performed.
  • the value of Ay / Ax is 1.5 or more.
  • the value of Ay / Ax is less than 1.5.
  • the mixture when the mixture contains all of TMPD, WST-8, and at least one of the genus Cercospora and the pseudocell Cospora, it has a wavelength of not less than 400 nanometers and not more than 500 nanometers. Light is well absorbed by the mixture. Light having a wavelength greater than 500 nanometers and less than or equal to 800 nanometers is likely to pass through the mixture.
  • the mixture does not contain TMPD, WST-8, and at least one of the genus Cercospora and the genus Pseudocelcospora, 400 nanometers or more and 500 nanometers or less
  • Light having a wavelength of is not very absorbed by the mixture.
  • Light having a wavelength greater than 500 nanometers and less than or equal to 800 nanometers is difficult to transmit through the mixture. This difference in absorbance is reflected in the value of Ay / Ax.
  • Step (a) included in the second embodiment is the same as step (a) included in the first embodiment.
  • the mixture turns orange only when the sample contains at least one of the bacteria of the genus Cercospora and the genus Pseudocelcospora. On the other hand, if the sample contains neither Cercospora or Pseudocellosporum, the mixture is purple due to TMPD. Therefore, in the step (e), when the mixture is orange, it is determined that the sample contains at least one of the genus Cercospora and the genus Pseudocelcospora. On the other hand, when the mixture is not orange, it is determined that the sample does not contain any of the genus Cercospora and the genus Pseudocelcospora. The determination can be easily made visually.
  • the present invention includes a device used for carrying out the above-described determination method.
  • the device of the present invention comprises at least WST-8 and TMPD.
  • the device of the present invention further comprises a container for containing a sample, a medium for culturing bacteria, a light source capable of irradiating light having a predetermined wavelength, an absorptiometer for measuring absorbance, a bacteria display
  • a container for containing a sample a medium for culturing bacteria
  • a light source capable of irradiating light having a predetermined wavelength
  • an absorptiometer for measuring absorbance
  • a bacteria display An optical sensor for optically detecting the coloration of the color reagent, a display element for displaying the detection result, and the like can also be provided.
  • Example 1 The inventor cut out an agar medium in which the bacterium Cercospora sorghi was cultured for 3 days or more using a metal sputum. Next, the inventors added the excised medium to a 10% potato dextrose liquid medium (manufactured by Difco Laboratories, hereinafter referred to as “10% PDB”) to obtain a mixture. The mixture was stirred using a micropipette. The mixture was filtered using a cell strainer (purchased under the trade name # 352235 from Corning Inc.). In this way, the agar medium was removed.
  • 10% PDB 10% potato dextrose liquid medium
  • the present inventor calculated the concentration of spores contained in the filtrate by using a blood cell counter (obtained from Sunlead Glass Co., Ltd. as trade name A131). The inventors then diluted the mixture with 10% PDB based on this spore concentration to prepare a sample solution so that the number of contained spores was 100,000. Sample solution (170 microliters) was supplied to each well of a clear flat bottom 96 well microplate. Acetate buffer (0.1 M, pH: 5.5, 20 microliters) was then added to each well. Subsequently, a mixed solution of WST-8 and TMPD (10 microliters) was added to each well. The volume of the mixture contained in one well was 200 microliters.
  • WST-8 solution purchased from Doujin Chemical Laboratory Co., Ltd., included in “Microbial Viability Assay Kit-WST”) (10 mM, Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.).
  • Microbial Viability Assay Kit-WST 10 mM, Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.
  • the transparent flat bottom 96 well microplate was allowed to stand at a temperature of 25 degrees Celsius for 1 day.
  • the inventors measured the absorbance of one well at a wavelength of 400 nanometers or more and 800 nanometers or less using a plate reader (purchased from TECAN, trade name “M1000Pro”) at intervals of 10 nanometers.
  • the inventor calculated the ratio of the absorbance Ay at 460 nanometers to the absorbance Ax at 610 nanometers. The calculated ratio was 3.3.
  • the one well was orange.
  • Example 1 was repeated four times. Detailed experimental results are shown in Table 1.
  • Example 2 In Example 2, the same experiment as in Example 1 was performed except that 10% PDB was used instead of the acetate buffer. The mixed solution had a pH of 5.1. Example 2 was repeated 4 times.
  • Example 3 In Example 3, an experiment similar to Example 1 was performed except that Cercospora zeae-maydis was used instead of Cercospora sorghi.
  • Example 4 In Example 4, (i) Cercospora zeae-maydis was used instead of Cercospora sorghi, and (ii) Bis (2-hydroxyethyl) iminotris (hydroxymethyl) methane (CAS number: 6976- 37-0, hereinafter referred to as “Bis-Tris”), and (iii) the same experiment as in Example 1 except that the buffer had a pH of 6.5. Was done.
  • Example 5 In Example 5, an experiment similar to Example 1 was performed except that Pseudocercospora fuligena was used instead of Cercospora sorghi.
  • Comparative Example 1 In Comparative Example 1, the same experiment as in Example 1 was performed except that the buffer was a HEPES buffer having a pH of 7.5 (purchased from Sigma-Aldrich). The pH of HEPES buffer (concentration: 0.1 M) was adjusted with sodium hydroxide.
  • Comparative Example 2 Comparative Example 2 was the same as Example 1 except that (i) Cercospora zeae-maydis was used in place of Cercospora sorghi and (ii) the acetate buffer had a pH of 4.5. The experiment was conducted.
  • Comparative Examples 3 to 10 In Comparative Examples 3 to 10, in place of Cercospora sorghi, Aspergillus oryzae, Colletotrichum gloeosporioides, Colletotrichum higginsianum, Fusarium avenaceum, Fusarium equiseti, Fusarium oxysporum, Trichoderma harzianum, and Penicium were used. An experiment similar to Example 1 was performed. Comparative Example 4 was repeated 3 times.
  • Comparative Example 11 In Comparative Example 11, the same experiment as in Example 1 was performed except that Cercospora sorghi was not used. Comparative Example 11 was repeated three times.
  • Comparative Examples 12 to 15 In Comparative Examples 12 to 15, (I) Instead of the fungus Cercospora sorghi, Colletotrichum higginsianum, Fusarium equiseti, Fusarium oxysporum, and Trichoderma harzianum were used, The same experiment as in Example 1 was performed except that (ii) 10% PDB was used instead of the acetate buffer, and (iii) the mixed solution had a pH of 5.1. It was.
  • Comparative Example 16 In Comparative Example 16, (I) Cercospora sorghi was not used, The same experiment as in Example 1 was performed except that (ii) 10% PDB was used instead of the acetate buffer, and (iii) the mixed solution had a pH of 5.1. It was. Comparative Example 16 was repeated three times.
  • Comparative Example 17 In Comparative Example 17, (I) Fusarium equiseti was used instead of Cercospora sorghi, (Ii) As in Example 1 except that a buffer containing Bis-Tris was used instead of the acetate buffer, and (iii) the buffer had a pH of 6.5. The experiment was conducted.
  • Comparative Example 18 In Comparative Example 18, (I) Cercospora sorghi was not used, (Ii) As in Example 1 except that a buffer containing Bis-Tris was used instead of the acetate buffer, and (iii) the buffer had a pH of 6.5. The experiment was conducted. Comparative Example 18 was repeated three times.
  • Comparative Example 19 In Comparative Example 19, (I) Fusarium equiseti was used instead of Cercospora sorghi, (Ii) HEPES buffer was used instead of acetate buffer, and (iii) HEPES buffer had a pH of 7.5, Except for this, the same experiment as in Example 1 was performed.
  • Comparative Example 20 In Comparative Example 20, (I) that Cercospora sorghi was not used, (Ii) HEPES buffer was used instead of acetate buffer, and (iii) HEPES buffer had a pH of 7.5, Except for this, the same experiment as in Example 1 was performed.
  • Tables 1 to 5 below show the results of Examples 1 to 5 and Comparative Examples 1 to 20.
  • the sample is selected from among the bacteria of the genus Cercospora and Pseudocell cospora. It is selectively determined that at least one is contained.
  • Condition (I) The aqueous solution contains TMPD.
  • Condition (I) The aqueous solution has a pH of 5.1 or more and 6.5 or less.
  • Condition (II) The value of Ay / Ax is 1.5 or more
  • Example 3 As is clear from comparison of Example 3 with Comparative Example 2, when the aqueous solution has a pH of 4.5, the sample contains Cercospora bacteria and the aqueous solution contains TMPD. , Ay / Ax is less than 1.5.
  • Example 2 and Example 4 when the aqueous solution has a pH of 7.5, whether the sample contains Cercospora bacteria or not.
  • the value of Ay / Ax is 1.5 or more. In other words, when the aqueous solution has a pH of 7.5, the value of Ay / Ax is 1.5 or more even if the sample does not contain a bacterium of the genus Cercospora.
  • the present invention provides a method for determining whether a sample contains at least one of a bacterium belonging to the genus Cercospora and a bacterium belonging to the genus Pseudocell Kospora.

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Abstract

本発明は、試料がセルコスポラ属の菌およびシュードセルコスポラ属の菌のうちの少なくとも一方を含有しているかどうかを判定する方法を提供する。本発明の方法は、前記試料を、N,N,N',N'-Tetramethyl-1,4-phenylenediamineおよび5-(2,4-disulfophenyl)-3-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-2-(4-nitrophenyl)-2H-tetrazoliumを含有する水溶液（ｐＨ：５．１以上６．５以下）に添加して得られた混合物に４００ｎｍ～５００ｎｍの波長を有する光および５００ｎｍ～８００ｎｍの波長を有する光を照射して、それぞれ第１吸光度Ａｙおよび第２吸光度Ａｘを測定し、Ａｙ／Ａｘ≧１．５が充足されるか、または混合物がオレンジ色である場合には、試料が菌を含有していると判定する。

Description

試料がセルコスポラ属またはシュードセルコスポラ属の菌を含有しているかどうかを判定する方法
　本発明は、試料がセルコスポラ属またはシュードセルコスポラ属の菌を含有しているかどうかを判定する方法に関する。
　セルコスポラ属の菌は、斑点病を引き起こす。非特許文献１は、マメ科の植物中のセルコスポラ属の菌を免疫学的かつ分子的に速やかに検出する方法を開示している。
Maria Gabriela Latorre Rapela et. al. "Early Detection of Cercospora Species in Soybean Plants: Immunologic and Molecular Methods", American Journal of Plant Sciences, 2015, 6, 2939-2948
　本発明の目的は、試料がセルコスポラ属またはシュードセルコスポラ属の菌を含有しているかどうかを判定する新規な方法を提供することにある。
　本発明は、試料がセルコスポラ属の菌およびシュードセルコスポラ属の菌のうちの少なくとも一方を含有しているかどうかを判定する方法を提供する。本発明の方法は、以下の工程：
　（ａ）　前記試料を、N,N,N',N'-Tetramethyl-1,4-phenylenediamineおよび5-(2,4-disulfophenyl)-3-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-2-(4-nitrophenyl)-2H-tetrazoliumを含有する水溶液に添加して混合物を得る工程、
　ここで、
　前記水溶液は、５．１以上６．５以下のｐＨを有しており、
　（ｂ）　前記混合物に、４００ナノメートル以上５００ナノメートル以下の波長を有する光を照射し、前記混合物の第１吸光度Ａｙを測定する工程、
　（ｃ）　前記混合物に、５００ナノメートルを超えて８００ナノメートル以下の波長を有する光を照射し、前記混合物の第２吸光度Ａｘを測定する工程、および
　（ｄ）　以下の数式（Ｉ）が充足される場合には、前記試料がセルコスポラ属の菌およびシュードセルコスポラ属の菌のうちの少なくとも一方を含有していると判定する工程、
　Ａｙ／Ａｘ≧１．５　（Ｉ）
を具備する。
　工程（ｂ）～工程（ｄ）に代えて、本発明の方法は、
　（ｅ）　前記混合物がオレンジ色である場合には、前記試料がセルコスポラ属の菌およびシュードセルコスポラ属の菌のうちの少なくとも一方を含有していると判定する工程、
を具備する。
　本発明は、試料がセルコスポラ属またはシュードセルコスポラ属の菌を含有しているかどうかを判定する新規な方法を提供する。
　以下、本発明の実施形態を詳細に説明する。
　（第１実施形態）
　第１実施形態による方法は、以下の４つの工程（ａ）～（ｄ）を具備する。
　（工程（ａ））
　工程（ａ）では、試料を、N,N,N',N'-Tetramethyl-1,4-phenylenediamine（以下、「ＴＭＰＤ」という）および以下の化学式により表される化合物（以下、「ＷＳＴ－８」という）を含有する水溶液に添加して、混合物を得る。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
　ＴＭＰＤは、N,N,N',N'-Tetramethyl-1,4-phenylenediamine Dihydrochloride（ＣＡＳ番号：637-01-4）として入手可能である。ＷＳＴ－８は、5-(2,4-disulfophenyl)-3-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-2-(4-nitrophenyl)-2H-tetrazolium, inner salt, monosodium salt（ＣＡＳ番号：193149-74-5）として入手可能である。
　水溶液は、５．１以上６．５以下のｐＨを有する。水溶液が５．１未満のｐＨを有する場合、セルコスポラ属の菌およびシュードセルコスポラ属の菌の検出は不可能になる。より詳細には、試料がセルコスポラ属の菌およびシュードセルコスポラ属の菌のうちの少なくとも一方を含有しているにも拘わらず、後述される工程（ｄ）において試料がセルコスポラ属の菌およびシュードセルコスポラ属の菌のいずれも含有していないという誤った結論に至る。後述される比較例２を参照せよ。
　水溶液が６．５を超えるｐＨを有する場合にも、セルコスポラ属の菌およびシュードセルコスポラ属の菌の検出は不可能になる。より詳細には、試料がセルコスポラ属の菌およびシュードセルコスポラ属の菌のいずれも含有していないにも拘わらず、後述される工程（ｄ）において試料がセルコスポラ属の菌またはシュードセルコスポラ属の菌を含有しているという誤った結論に至る。後述される比較例１９を参照せよ。
　従って、水溶液は、５．１以上６．５以下のｐＨを有する。
　本発明は、適切なｐＨ条件下（すなわち、５．１以上６．５以下）でのＴＭＰＤおよびＷＳＴ－８の組み合わせによりセルコスポラ属の菌またはシュードセルコスポラ属の菌が検出されることに特徴づけられる。ＴＭＰＤおよびＷＳＴ－８のいずれか一方の欠如は、セルコスポラ属の菌またはシュードセルコスポラ属の菌の検出を不可能にする。
　混合物は、１日以上室温で静置されることが望ましい。
　（工程（ｂ））
　工程（ｂ）では、工程（ａ）において得られた混合物に、４００ナノメートル以上５００ナノメートル以下の波長を有する光を照射し、混合物の第１吸光度Ａｙを測定する。一例として、混合物に、４６０ナノメートルの波長を有する光を照射し、混合物の第１吸光度Ａｙを測定し得る。
　（工程（ｃ））
　工程（ｃ）では、工程（ａ）において得られた混合物に、５００ナノメートルを超えて８００ナノメートル以下の波長を有する光を照射し、混合物の第２吸光度Ａｘを測定する。一例として、６１０ナノメートルの波長を有する光を照射し、混合物の第２吸光度Ａｘを測定し得る。
　工程（ｂ）および工程（ｃ）の順序は限定されない。言い換えれば、工程（ｂ）が先に行われ、次いで工程（ｃ）が行われても良い。あるいは、工程（ｃ）が先に行われ、次いで工程（ｂ）が行われても良い。
　（工程（ｄ））
　工程（ｄ）では、以下の数式（Ｉ）が充足される場合には、前記試料がセルコスポラ属の菌およびシュードセルコスポラ属の菌のうちの少なくとも一方を含有していると判定される。
　Ａｙ／Ａｘ≧１．５　（Ｉ）
　後述される実施例からも明らかなように、混合物がセルコスポラ属の菌およびシュードセルコスポラ属の菌のうちの少なくとも一方を含有している場合、Ａｙ／Ａｘの値は１．５以上である。一方、混合物がセルコスポラ属の菌およびシュードセルコスポラ属の菌のいずれも含有していない場合、Ａｙ／Ａｘの値は１．５未満である。
　言い換えれば、混合物が、ＴＭＰＤと、ＷＳＴ－８と、セルコスポラ属の菌およびシュードセルコスポラ属の菌の少なくとも一方とのすべてを含有している場合、４００ナノメートル以上５００ナノメートル以下の波長を有する光が混合物によく吸収される。５００ナノメートルを超えて８００ナノメートル以下の波長を有する光は混合物を透過しやすい。
　一方、混合物が、ＴＭＰＤと、ＷＳＴ－８と、セルコスポラ属の菌およびシュードセルコスポラ属の菌のうちの少なくとも一方とのいずれか１つを含有していない場合、４００ナノメートル以上５００ナノメートル以下の波長を有する光は混合物にあまり吸収されない。５００ナノメートルを超えて８００ナノメートル以下の波長を有する光は混合物を透過しにくい。この吸収度の差が、Ａｙ／Ａｘの値に反映される。
　（第２実施形態）
　第２実施形態による方法は、工程（ａ）および工程（ｅ）を具備する。第２実施形態に含まれる工程（ａ）は、第１実施形態に含まれる工程（ａ）と同一である。
　（工程（ｅ））
　後述される実施例からも明らかなように、試料がセルコスポラ属の菌およびシュードセルコスポラ属の菌のうちの少なくとも一方を含有している場合に限り、混合物はオレンジ色になる。一方、試料がセルコスポラ属の菌およびシュードセルコスポラ属の菌のいずれも含有していない場合には、混合物はＴＭＰＤが原因で紫色になっている。従って、工程（ｅ）では、混合物がオレンジ色になっている場合、試料がセルコスポラ属の菌およびシュードセルコスポラ属の菌の少なくとも一方を含有していると判定される。一方、混合物がオレンジ色になっていない場合、試料がセルコスポラ属の菌およびシュードセルコスポラ属の菌のいずれも含有していないと判定される。判定は目視により容易になされ得る。
　セルコスポラ属の菌およびシュードセルコスポラ属の菌の少なくとも一方を含有している混合物がオレンジ色となる理由は、透明なＷＳＴ－８がセルコスポラ属の菌またはシュードセルコスポラ属の菌のために還元されてオレンジ色のＷＳＴ－８ホルマザンに変化するためと考えられる。
　本発明には、上述の判定方法の実施に用いられるデバイスも含まれる。本発明のデバイスは、少なくとも、ＷＳＴ－８と、ＴＭＰＤとを備える。
　本発明のデバイスは、さらに、試料を収容するための容器、菌を培養するための培地、所定の波長を有する光を照射することが可能な光源、吸光度を測定するための吸光度計、菌呈色試薬の呈色を光学的に検出するための光学センサ、検出した結果を表示するための表示素子などを備えることもできる。
　（実施例）
　以下の実施例を参照しながら、本発明がさらにより詳細に説明される。
　（実施例１）
　本発明者は、菌Cercospora sorghiが３日以上培養された寒天培地を、金属鉤を用いて切り出した。次いで、本発明者らは、切り出された培地を、１０％ポテトデキストロース液体培地（Ｄｉｆｃｏ研究所製、以下、「１０％ＰＤＢ」という）に添加して、混合物を得た。混合物は、マイクロピペットを用いて撹拌された。混合物は、セルストレーナー（コーニング株式会社から商品名＃３５２２３５として購入）を用いて濾過した。このようにして、寒天培地が除去された。
　本発明者は、血球計数盤（サンリード硝子有限会社より、商品名Ａ１３１として入手）を用いて、濾液に含有される胞子の濃度を計算した。次いで、本発明者らは、この胞子の濃度に基づいて１０％ＰＤＢを用いて混合物を希釈して、含有される胞子の数が１０万個になるように試料溶液を調製した。試料溶液（１７０マイクロリットル）は、透明平底９６ウェルマイクロプレートの各ウェルに供給された。次いで、酢酸緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ：５．５、２０マイクロリットル）が各ウェルに添加された。続いて、ＷＳＴ－８およびＴＭＰＤの混合溶液（１０マイクロリットル）が各ウェルに添加された。１つのウェルに含有される混合物の容量は２００マイクロリットルであった。
　これに先立って、本発明者は、ＷＳＴ－８溶液（株式会社　同人化学研究所から購入、「Microbial Viability Assay Kit-WST」に含まれる）を、ＴＭＰＤ水溶液（１０ｍＭ、東京化成工業株式会社から購入）と、９：１の体積比で混合し、ＷＳＴ－８およびＴＭＰＤの混合溶液を調製した。
　透明平底９６ウェルマイクロプレートは、摂氏２５度の温度で１日間静置された。本発明者らは、プレートリーダー（ＴＥＣＡＮ社から購入、商品名「Ｍ１０００Ｐｒｏ」）を用いて、４００ナノメートル以上８００ナノメートル以下の波長での１つのウェルの吸光度を１０ナノメートル間隔で測定した。本発明者は、４６０ナノメートルでの吸光度Ａｙの６１０ナノメートルでの吸光度Ａｘに対する比を計算した。計算された比は、３．３であった。当該１つのウェルは、オレンジ色であった。実施例１は、４回、繰り返された。詳細な実験結果は、表１に示される。
　（実施例２）
　実施例２では、酢酸緩衝液に代えて１０％ＰＤＢが用いられたこと以外は、実施例１と同様の実験が行われた。混合溶液は、５．１のｐＨを有していた。実施例２は、４回、繰り返された。
　（実施例３）
　実施例３では、Cercospora sorghiに代えてCercospora zeae-maydisが用いられたこと以外は、実施例１と同様の実験が行われた。
　（実施例４）
　実施例４では、（ｉ）　Cercospora sorghiに代えてCercospora zeae-maydisが用いられたこと、および（ｉｉ）　酢酸緩衝液に代えてBis(2-hydroxyethyl)iminotris(hydroxymethyl)methane（ＣＡＳ番号：6976-37-0、以下「Bis-Tris」という）を含有する緩衝液が用いられたこと、（ｉｉｉ）緩衝液が６．５のｐＨを有していたこと以外は、実施例１と同様の実験が行われた。
　（実施例５）
　実施例５では、Cercospora sorghiに代えてPseudocercospora fuligenaが用いられたこと以外は、実施例１と同様の実験が行われた。
　（比較例１）
　比較例１では、緩衝液が、７．５のｐＨを有するＨＥＰＥＳ緩衝液（シグマアルドリッチ社より購入）であったこと以外は、実施例１と同様の実験が行われた。ＨＥＰＥＳ緩衝液（濃度：０．１Ｍ）のｐＨは、水酸化ナトリウムにより調整された。
　（比較例２）
　比較例２では、（ｉ）　Cercospora sorghiに代えてCercospora zeae-maydisが用いられたこと、および（ｉｉ）　酢酸緩衝液が４．５のｐＨを有していたこと以外は、実施例１と同様の実験が行われた。
　（比較例３～比較例１０）
　比較例３～比較例１０では、Cercospora sorghiに代えて、それぞれ、Aspergillus oryzae、Colletotrichum gloeosporioides、Colletotrichum higginsianum、Fusarium avenaceum、Fusarium equiseti、Fusarium oxysporum、Trichoderma harzianum、およびPenicillium chrysogenumが用いられたこと以外は、実施例１と同様の実験が行われた。比較例４は、３回、繰り返された。
　（比較例１１）
　比較例１１では、Cercospora sorghiが用いられなかったこと以外は、実施例１と同様の実験が行われた。比較例１１は、３回、繰り返された。
　（比較例１２～比較例１５）
　比較例１２～比較例１５では、
（ｉ）　菌Cercospora sorghiに代えて、それぞれ、Colletotrichum higginsianum、Fusarium equiseti、Fusarium oxysporum、およびTrichoderma harzianumが用いられたこと、
（ｉｉ）　酢酸緩衝液に代えて１０％ＰＤＢが用いられたこと、および
（ｉｉｉ）　混合溶液が、５．１のｐＨを有していたこと
以外は、実施例１と同様の実験が行われた。
　（比較例１６）
　比較例１６では、
（ｉ）Cercospora sorghiが用いられなかったこと、
（ｉｉ）　酢酸緩衝液に代えて１０％ＰＤＢが用いられたこと、および
（ｉｉｉ）　混合溶液が、５．１のｐＨを有していたこと
以外は、実施例１と同様の実験が行われた。比較例１６は、３回、繰り返された。
　（比較例１７）
　比較例１７では、
（ｉ）Cercospora sorghiに代えて、Fusarium equisetiが用いられたこと、
（ｉｉ）　酢酸緩衝液に代えてBis-Trisを含有する緩衝液が用いられたこと、および
（ｉｉｉ）　緩衝液が、６．５のｐＨを有していたこと
以外は、実施例１と同様の実験が行われた。
　（比較例１８）
　比較例１８では、
（ｉ）Cercospora sorghiが用いられなかったこと、
（ｉｉ）　酢酸緩衝液に代えてBis-Trisを含有する緩衝液が用いられたこと、および
（ｉｉｉ）　緩衝液が、６．５のｐＨを有していたこと
以外は、実施例１と同様の実験が行われた。比較例１８は、３回、繰り返された。
　（比較例１９）
　比較例１９では、
　（ｉ）Cercospora sorghiに代えて、Fusarium equisetiが用いられたこと、
　（ｉｉ）　酢酸緩衝液に代えて、HEPES緩衝液が用いられたこと、および
　（ｉｉｉ）　HEPES緩衝液が、７．５のｐＨを有していたこと、
以外は、実施例１と同様の実験が行われた。
　（比較例２０）
　比較例２０では、
　（ｉ）Cercospora sorghiが用いられなかったことこと、
　（ｉｉ）　酢酸緩衝液に代えて、HEPES緩衝液が用いられたこと、および
　（ｉｉｉ）　HEPES緩衝液が、７．５のｐＨを有していたこと、
以外は、実施例１と同様の実験が行われた。
　以下の表１～表５は、実施例１～実施例５および比較例１～比較例２０の結果を示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
　上記の表から明らかなように、以下の条件（Ｉ）、条件（ＩＩ）、および条件（ＩＩＩ）が充足される場合には、試料がセルコスポラ属の菌およびシュードセルコスポラ属の菌のうちの少なくとも一方を含有していることが選択的に判定される。
　条件（Ｉ）　水溶液がＴＭＰＤを含有すること。
　条件（Ｉ）　水溶液が５．１以上６．５以下のｐＨを有すること。
　条件（ＩＩ）　Ａｙ／Ａｘの値が１．５以上であること
　実施例３を比較例２と比較すれば明らかなように、水溶液が４．５のｐＨを有する場合、試料がセルコスポラ属の菌を含有し、かつ水溶液がＴＭＰＤを含有しているにも拘わらず、Ａｙ／Ａｘの値は１．５未満である。一方、実施例２および実施例４を比較例１および比較例１９と比較すると明らかなように、水溶液が７．５のｐＨを有する場合、試料がセルコスポラ属の菌を含有しているかどうかに拘わらず、Ａｙ／Ａｘの値は１．５以上である。言い換えれば、水溶液が７．５のｐＨを有する場合、試料がセルコスポラ属の菌を含有していなくても、Ａｙ／Ａｘの値は１．５以上である。
　実施例１～実施例５を、比較例２～比較例１８および比較例２０と比較すれば明らかなように、試料がセルコスポラ属の菌またはシュードセルコスポラ属の菌を含有しなければ、Ａｙ／Ａｘの値は１．５未満である。
　本発明は、試料がセルコスポラ属の菌およびシュードセルコスポラ属の菌のうちの少なくとも一方を含有しているかどうかを判定する方法を提供する。

Claims (10)

  1. 　試料がセルコスポラ属の菌およびシュードセルコスポラ属の菌のうちの少なくとも一方を含有しているかどうかを判定する方法であって、以下の工程：
    　（ａ）　前記試料を、N,N,N',N'-Tetramethyl-1,4-phenylenediamineおよび5-(2,4-disulfophenyl)-3-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-2-(4-nitrophenyl)-2H-tetrazoliumを含有する水溶液に添加して混合物を得る工程、
    　ここで、
    　前記水溶液は、５．１以上６．５以下のｐＨを有しており、
    　（ｂ）　前記混合物に、４００ナノメートル以上５００ナノメートル以下の波長を有する光を照射し、前記混合物の第１吸光度Ａｙを測定する工程、
    　（ｃ）　前記混合物に、５００ナノメートルを超えて８００ナノメートル以下の波長を有する光を照射し、前記混合物の第２吸光度Ａｘを測定する工程、および
    　（ｄ）　以下の数式（Ｉ）が充足される場合には、前記試料がセルコスポラ属の菌およびシュードセルコスポラ属の菌のうちの少なくとも一方を含有していると判定する工程、
    　Ａｙ／Ａｘ≧１．５　（Ｉ）
    を具備する、方法。
  2. 　請求項１に記載の方法であって、
    　前記セルコスポラ属の菌が、Cercospora sorghiおよびCercospora zeae-maydisからなる群から選択される少なくとも１種である、
    　方法。
  3. 　請求項１に記載の方法であって、
    　前記シュードセルコスポラ属の菌が、Pseudocercospora fuligenaである、
    　方法。
  4. 　請求項１に記載の方法であって、
    　前記水溶液が緩衝液である、
    方法。
  5. 　請求項１から４のいずれか１項に記載の方法の実施に用いられるデバイスであって、
    　N,N,N',N'-Tetramethyl-1,4-phenylenediamineおよび5-(2,4-disulfophenyl)-3-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-2-(4-nitrophenyl)-2H-tetrazoliumを備えるデバイス。
  6. 　試料がセルコスポラ属の菌およびシュードセルコスポラ属の菌のうちの少なくとも一方を含有しているかどうかを判定する方法であって、以下の工程：
    　（ａ）　前記試料を、N,N,N',N'-Tetramethyl-1,4-phenylenediamineおよび5-(2,4-disulfophenyl)-3-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-2-(4-nitrophenyl)-2H-tetrazoliumを含有する水溶液に添加して混合物を調製する工程、
    　ここで、
    　前記水溶液は、５．１以上６．５以下のｐＨを有しており、および
    　（ｅ）　前記混合物がオレンジ色である場合には、前記試料がセルコスポラ属の菌およびシュードセルコスポラ属の菌のうちの少なくとも一方を含有していると判定する工程、
    を具備する、方法。
  7. 　請求項６に記載の方法であって、
    　前記セルコスポラ属の菌が、Cercospora sorghiおよびCercospora zeae-maydisからなる群から選択される少なくとも１種である、
    　方法。
  8. 　請求項６に記載の方法であって、
    　前記シュードセルコスポラ属の菌が、Pseudocercospora fuligenaである、
    　方法。
  9. 　請求項６に記載の方法であって、
    　前記水溶液が緩衝液である、
    方法。
  10. 　請求項６から９のいずれか１項に記載の方法の実施に用いられるデバイスであって、
    　N,N,N',N'-Tetramethyl-1,4-phenylenediamineおよび5-(2,4-disulfophenyl)-3-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-2-(4-nitrophenyl)-2H-tetrazoliumを備えるデバイス。
     
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH01128798A (ja) * 1987-11-16 1989-05-22 Terumo Corp 細菌検査用器具
JPH11196896A (ja) * 1998-01-06 1999-07-27 Doujin Kagaku Kenkyusho:Kk スーパーオキシドジスムターゼ活性および活性酸素の測定法
JP2004329174A (ja) * 2003-05-12 2004-11-25 Shirou Yamashiyouji 酸化還元色素による微生物検査法
WO2016040595A1 (en) * 2014-09-11 2016-03-17 Agrofresh Inc. Methods for pathogen detection and disease management on meats, plants, or plant parts

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5262306A (en) * 1989-09-26 1993-11-16 Robeson David J Methods for identifying cercosporin-degrading microorganisms
JP4045322B2 (ja) * 1998-11-17 2008-02-13 アークレイ株式会社 酸化還元反応を用いた測定方法
JP6623572B2 (ja) * 2015-06-17 2019-12-25 東洋製罐グループホールディングス株式会社 微生物の検査方法、微生物の検査キット、及び微生物検査用マイクロアレイ

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH01128798A (ja) * 1987-11-16 1989-05-22 Terumo Corp 細菌検査用器具
JPH11196896A (ja) * 1998-01-06 1999-07-27 Doujin Kagaku Kenkyusho:Kk スーパーオキシドジスムターゼ活性および活性酸素の測定法
JP2004329174A (ja) * 2003-05-12 2004-11-25 Shirou Yamashiyouji 酸化還元色素による微生物検査法
WO2016040595A1 (en) * 2014-09-11 2016-03-17 Agrofresh Inc. Methods for pathogen detection and disease management on meats, plants, or plant parts

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ANONYMOUS: "Gonochek II Kit", 1 December 2010 (2010-12-01), XP055627622, Retrieved from the Internet <URL:https://search.cosmobio.co.jp/cosmo_search_p/search-gate2/docs/EY-/1300250.20110107.pdf> *
CHEMICAL ABSTRACTS, Columbus, Ohio, US; abstract no. 6976-37-0
LATORRE RAPELA, M. G. ET AL.: "Early detection of Cercospora species in soybean plants: immunologic and molecular methods", AM. J. PLANT SCI., vol. 6, no. 18, 2015, pages 2939 - 2948, XP055561745 *
M ISHIYAMA ET AL: "Cell Counting Kit-8", 1 January 1997 (1997-01-01), XP055627629, Retrieved from the Internet <URL:http://www.dojindo.co.jp/manual/ck04.pdf?-ga=2.266454670.1827695949.1530842822-1601005549.1530842822> *
MARIA GABRIELA LATORRE RAPELA: "Early Detection of Cercospora Species in Soybean Plants: Immunologic and Molecular Methods", AMERICAN JOURNAL OF PLANT SCIENCES, vol. 6, 2015, pages 2939 - 2948, XP055561745, DOI: 10.4236/ajps.2015.618289
SOLLOD, C. C. ET AL.: "Cell surface redox potential as a mechanism of defense against photosensitizers in fungi", APPL. ENVIRON. MICROBIOL., vol. 58, no. 2, 1992, pages 444 - 449, XP055561750 *

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