[go: up one dir, main page]

WO2018048322A1 - Композиция для лечения или профилактики вирусных инфекций - Google Patents

Композиция для лечения или профилактики вирусных инфекций Download PDF

Info

Publication number
WO2018048322A1
WO2018048322A1 PCT/RU2016/000623 RU2016000623W WO2018048322A1 WO 2018048322 A1 WO2018048322 A1 WO 2018048322A1 RU 2016000623 W RU2016000623 W RU 2016000623W WO 2018048322 A1 WO2018048322 A1 WO 2018048322A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
composition
activity
amount
enzymes
magnesium sulfate
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/RU2016/000623
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Леонид Валерьевич КЕЛИН
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to EP16915835.9A priority Critical patent/EP3511408A1/en
Priority to PCT/RU2016/000623 priority patent/WO2018048322A1/ru
Publication of WO2018048322A1 publication Critical patent/WO2018048322A1/ru
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
    • A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/189—Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/195—Antibiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/10—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for ruminants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/60—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for weanlings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/70—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds
    • A23K50/75—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds for poultry
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/465—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1), e.g. lipases, ribonucleases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/54—Mixtures of enzymes or proenzymes covered by more than a single one of groups A61K38/44 - A61K38/46 or A61K38/51 - A61K38/53
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0043—Nose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/12—Aerosols; Foams
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
    • C12N9/20—Triglyceride splitting, e.g. by means of lipase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/22—Ribonucleases [RNase]; Deoxyribonucleases [DNase]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/52—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
    • C12Y301/01—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/425—Serratia
    • C12R2001/43—Serratia marcescens

Definitions

  • the invention relates to veterinary medicine, agriculture, pharmaceuticals and biotechnology, and more specifically, to a tool for the prevention and treatment of viral diseases of farm animals and bees.
  • the intensification of livestock and poultry, its transfer to an industrial basis is often accompanied by the spread of viral diseases of animals.
  • the causative agents of respiratory diseases are mainly influenza viruses, parainfluenza, infectious rhinotracheitis virus, adenoviruses, enteroviruses, herpes viruses and others, while the bacterial infection is secondary in this case.
  • Respiratory viral diseases cause great economic damage to livestock and poultry farming, reduce the economic efficiency of farms to 30- ⁇ 40% or more.
  • the objective of the present invention is to develop another antiviral means of contact action, which can be used as an alternative to known means of similar purpose (see, for example, RF patents for the invention N ° Ne 2423136 and 2038776) and may have advantages due to differences in the nature of the enzymes , and in the source of their origin, such as the elimination of allergic reactions and intolerance reactions in relation to known agents, the presence of activity or a more pronounced effect against certain types of viruses, overcoming the resistance of viruses to known drugs, more prolonged action, enhancing the action of known agents when used in combination.
  • the above enzymes may include, in particular:
  • the aforementioned enzymes can be isolated from the culture fluid and / or from the cell homogenizate in various ways, in particular by size exclusion chromatography.
  • composition for treating or preventing viral infections characterized in that it comprises an effective amount of the endonuclease of claim 3 or an endonuclease having an amino acid residue sequence homologous to it by at least 95%.
  • composition characterized in general categories, is illustrated by the example of some particularly preferred forms of execution, providing additional benefits.
  • the aforementioned effective amount is 150 + 300 mg of endonuclease with an activity of 150 + 400 thousand units of activity (e. A.) per 1 g.
  • the composition further comprises a ribonuclease (RNase) with an activity of 500 + 4,500 e.
  • RNase ribonuclease
  • A. Preferably isolated from the above bacterial strain, in an amount of 2 + 4 mg per 1 g.
  • the composition further includes a deoxyribonuclease (DNase) with an activity of 1000 + 8100 e. A., Preferably isolated from the aforementioned bacterial strain, in an amount of 2 + 5 mg per 1 g.
  • the composition further includes a protease with an activity of O.01 + 0.06 e. A., Preferably isolated from the above bacterial strain, in an amount of 0.1 + 0.3 mg per 1 g.
  • DNase deoxyribonuclease
  • composition further includes a lipase with an activity of 0.5 + 4.0 NIe a., Preferably isolated from
  • the composition further includes magnesium sulfate in an amount of 300 + 620 mg per 1 g.
  • the composition further includes dextran in an amount of about 100 + 500 mg, preferably about 180 mg per 1 g.
  • the composition includes enzymes according to any one of items 2-7 in an amount of 150 + 350 mg per 1 g, as well as magnesium sulfate in an amount of 0.3 + 0.62 g and, optionally, excipients such as dextran - the rest.
  • the composition has the following composition, based on 1 g:
  • endonuclease bacterial activity 150-400 thousand e. a. 150 + 350 mg
  • the composition is obtained by freeze drying an optionally buffered solution.
  • cryoprotectants selected from the group consisting of dextrose, sorbitol, mannitol, mannose, sucrose and a mixture thereof are added to it.
  • a composition according to any one of paragraphs 9-20 in the form of a solution for the prevention or treatment of viral diseases of animals.
  • the aforementioned solution of the composition is prepared by dissolving a dry composition not containing magnesium sulfate in a solution containing magnesium sulfate, or by adding magnesium sulfate to a solution of the above composition not containing magnesium sulfate.
  • said solution of the composition is introduced into animal feed as a feed additive.
  • compositions are used topically, intranasally or sprayed as an aerosol.
  • viral diseases are bronchopneumonia of calves and foals of viral etiology, preferably selected from the group comprising rhinotracheitis, infection with respiratory syncytial virus, infection with parainfluenza virus 3, and infection with type 1 and 2 adenoviruses.
  • viral diseases are viral diseases of birds, preferably selected from the group comprising infectious laryngotracheitis of birds, Newcastle disease, enterovirus infections.
  • prophylaxis is carried out to reduce the viral load in chicks when they are cold.
  • viral diseases are viral diseases of bees, preferably selected from the group consisting of acute and chronic paralysis, filamentovirus, saccular brood and
  • prophylaxis is carried out for spring-summer stimulation of the development of bee colonies.
  • composition according to the invention contains, per 1 g of dry matter, as an active substance, a complex of enzymes isolated from a strain of Serratia marcescens M-10, deposited in the All-Russian collection of microorganisms under N ° VICM B-2931D, including endonuclease, RNase, DNase, protease and lipase, in an amount of 150-350 mg, magnesium sulfate in an amount of 0.3-0.62 g, as well as excipients — dextran in an amount of 180 mg.
  • the most active antiviral component of the composition is endonuclease, while other enzymes enhance its action, in particular, by participating in the destruction of the lipid membrane of the virus and / or capsid proteins and / or accelerate further degradation of nucleic acids.
  • this endonuclease is an extracellular DNA / RNA nonspecific enzyme, and therefore it is active against both DNA and RNA viruses.
  • the enzyme complex for the manufacture of the test sample of the composition is obtained by culturing the aforementioned strain of Serratia marcescens M-10, followed by precipitation of the enzymes from the culture fluid and drying.
  • the aforementioned endonuclease is distinguished by a group of similar enzymes with extremely high hydrolytic activity toward DNA and RNA.
  • Endonuclease a catalyzes the hydrolytic cleavage of DNA and RNA between 5'-phosphate and 3'-oxygen of Sugars in the presence of Mg 2+ ions .
  • This enzyme is capable of cleaving both single- and double-stranded substrates with the same efficiency.
  • the antiviral activity of the enzyme is due to the fact that bacterial endonuclease hydrolyzes nucleic acids by the endonucleolytic mechanism to mono-, di-, tri-, tetra- and oligonucleotides. Viral RNA and DNA exposed to the enzyme lose their ability to serve as templates for the synthesis of nucleic acids and proteins.
  • Mentioned endonuclease is synthesized in the form of a precursor protein with a length of 266 amino acid residues and a signal peptide consisting of the first 21 amino acid residues.
  • Two main isoforms of the enzyme with similar biological properties — Sml and Sm2 — have been identified.
  • Sml lacks the first three ⁇ -terminal amino acid residues.
  • Sm2 molecular weight 26.7 kilo-Daltons
  • the active center of the enzyme includes four amino acid residues, namely Arg57, His89, Asnl l9 and Glul27, which are located in the immediate proximity to each other.
  • His89 is involved in the binding of the substrate and, since it is in the deprotonated form, acts as a base.
  • Arg57 and Arg87 are involved in catalysis.
  • Arg5757 participates in the positioning and polarization of the phosphator-cleaving phosphodiester bond and stabilization of the transition state.
  • Asnl l9 is involved in the binding of metal ions.
  • Glul27 is involved in hydrolysis.
  • the binding site of magnesium ions is located between the helix (amino acid residues 116-135) and a loop of 50 to 114 residues.
  • a mutation in any of the amino acid residues, especially in His89, leads to a sharp decrease in enzyme activity.
  • the replacement of amino acids A8p119 and Arg57 also reduces the activity of the enzyme.
  • RNase ribonuclease
  • RNA Mentioned ribonuclease
  • RNase H is a non-specific endonuclease and catalyzes the cleavage of RNA by the hydrolysis mechanism in the presence of a bound divalent metal ion.
  • ribonuclease H a 5'-phosphorylated product is formed.
  • DNase deoxeribonuclease
  • protease is an enzyme from the class of hydrolases, which breaks down the peptide bond between amino acids.
  • the neutral protease content in the studied sample of the composition was 0.01-0.06 e.a./ g, alkaline 0.015-0.04 e.a./ g.
  • a unit of total proteolytic activity is taken to be such an amount of an enzyme that, in 1 min at 30 ° C, leads the protein to a non-precipitated trichloroacetic acid state in an amount corresponding to 1 micromole of tyrosine.
  • Determination of the proteolytic activity of neutral proteases is carried out at a pH of the reaction mixture of 7.0; alkaline proteases — 9.0.
  • the lipase of the aforementioned strain catalyzes the hydrolysis of insoluble lipid substrates.
  • the lipase content in 1 g of the investigated composition was 0.5-4 TE.
  • One unit of lipase activity is the amount of enzyme that is produced after processing the sample with standard TNB buffer for one minute at 37 ° C.
  • Magnesium sulfate in the composition of the studied sample of the composition increases the activity of enzymes that break down the phosphodiester bond.
  • Dextran serves as a stabilizer and filler, its amount in the composition can vary within wide limits. It is preferable to use dextran with a molecular weight of 40-80 kiloDaltons in the composition.
  • composition may also contain cryoprotectants and buffering agents.
  • a specific composition a sample of which was used for testing in examples 1-7, had the following quantitative composition per 1 g of dry weight:
  • endonuclease bacterial activity 150-400 thousand e. a. 150 + 350 mg
  • the sample was a powder from white to light brown in color, readily soluble in water, practically insoluble in organic solvents.
  • the unit of endonuclease activity (e. A.) is taken as the amount of the enzyme, causing an increase in the optical density of acid-soluble products of RNA or DNA hydrolysis by 1 optical unit at a wavelength of 260 nm for 20 min at 37 ° C.
  • composition shows the antiviral activity of invitro and invivo, in particular, inhibits the propagation of viruses of vesicular stomatitis and smallpox vaccine in chicken fibroblast cell culture.
  • composition is non-toxic to humans, animals and plants in virtually any reasonable dose range and spontaneously inactivated in the environment.
  • Infectious activity of the control virus was 9.9 lg LD5 0 / CM .
  • composition at a concentration of 100 e. reduces the infectious activity of the virus 2.5 times, at a concentration of 50 e. A. - 8 times.
  • Example 2
  • the processing of chickens is carried out in an aerosol chamber with a volume of 2 m according to the following scheme:
  • Treatment with the preparation protects the bird from death: in the subgroup treated with the composition according to the invention, no mortality is observed, in the untreated subgroup is the death of 25% of the livestock.
  • a working solution at the rate of 15 ml per 1 m 2 of the house.
  • the composition is applied in the form of a fine aerosol using a cold fog generator.
  • the height of the sprayed layer is at least 40 cm from the floor, the particle size is 5- ⁇ 15 microns.
  • Infectious activity of the IRT-cattle virus cultivated in the presence of the drug at a concentration of 50 e. amounted to 6.25 lg TCD5 0 CM 3 , at a concentration of 100 ea - 6.0 lg TCD 50 / CM 3 .
  • Infectious activity of the control virus was 6.75 lg TCD 5 o / CM 3 .
  • the drug at a concentration of 100 e. reduces the infectious activity of the IRT-cattle virus by 5 6 times, at a concentration of 50 e. A. - 3 times.
  • the drug with the introduction of its solution into the nasal cavity, has prophylactic and therapeutic efficacy in the acute course of the disease.
  • no dead animals were observed (in the control group, the number of dead calves averaged 5%), the number of recovered calves was 98%, and in the control, 12%.
  • the preventive effect of the drug was studied on 49 foals. Of these, 25 were administered intranasally once at a dose of 2000 ea., 24 foals were given the same dose twice with an interval of 10 days. After the introduction of this dose of the drug, the general condition of the animals did not change: body temperature, pulse, respiration rate remained within normal limits.
  • Group 2 the drug is dissolved in sugar syrup and fed to bees on one day, 3 times with an interval of 7 days;
  • Group 4 control, without treatments.
  • the proposed drug based on a complex of enzymes has prophylactic and therapeutic efficacy in viral diseases of bee colonies.
  • the drug is used aerosol and with sugar syrup in the spring to prevent and treat viral diseases of bee colonies and to stimulate the development of bee colonies contributes to a more rapid increase in family strength and more brood, which ultimately contributes to more honey and wax.
  • ID is an infectious dose.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Birds (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)

Abstract

Изобретение относится к противовирусным препаратам. Предлагается композиция для лечения животных на основе ферментов, выделенных из бактериального штамма Serratiamarcescens М-10, депонированного во Всероссийской коллекции микроорганизмов под № VKM-2931D.

Description

16 000623
КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИЛИ ПРОФИЛАКТИКИ ВИРУСНЬК
ИНФЕКЦИЙ
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ
ИЗОБРЕТЕНИЕ
Изобретение относится к ветеринарии, сельскому хозяйству, к фармацевтике и биотехнологии, а точнее— к средству для профилактики и лечения вирусных болезней сельскохозяйственных животных и пчел.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Интенсификация животноводства и птицеводства, перевод его на промышленную основу нередко сопровождается распространением вирусных заболеваний животных. Известно, что возбудителями респираторных заболеваний являются, главным образом, вирусы гриппа, парагриппа, вирус инфекционного ринотрахеита, аденовирусы, энтеровирусы, герпесвирусы и другие, бактериальная инфекция при этом носит вторичный характер. Респираторные вирусные заболевания наносят животноводству и птицеводству большой экономический ущерб, снижают экономическую эффективность хозяйств до 30-^40% и более.
В пчеловодстве потери из-за вирусных болезней (острый и хронический паралич, филаментовироз, мешотчатый расплод, египтовироз) составляет 20^-80%.
При этом набор средств для профилактики и лечения заболеваний вирусной этиологии весьма ограничен. Разработка средств профилактики вирусных заболеваний в животноводстве и птицеводстве является весьма актуальной задачей.
РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Задача настоящего изобретения состоит в разработке еще одного противовирусного средства контактного действия, которое может применяться в качестве альтернативы известным средствам сходного назначения (см., например, патенты РФ на изобретение N°Ne 2423136 и 2038776) и может обладать преимуществами, обусловленными отличиями в природе ферментов, и в источнике их происхождения, такими как, устранение аллергических реакций и реакций непереносимости в отношении известных средств, наличие активности или более выраженное действие против некоторых видов вирусов, преодоление резистентности вирусов в отношении известных препаратов, более длительное действие, усиление действия известных средств при использовании в комбинации.
Таким образом, в соответствии с первым аспектом настоящего изобретения предлагается бактериальный штамм Serratia marcescens М- 10, депонированный во
Всероссийской коллекции микроорганизмов под N° VKM B-2931D.
В соответствии со вторым аспектом настоящего изобретения предлагаются ферменты, выделенные из вышеупомянутого бактериального штамма.
Вышеупомянутые ферменты могут включать в себя, в частности:
- эндонуклеазу и/или
- РНКазу, и/или
- ДНК азу, и/или
- липазу, и/или
- протеазу.
Вышеупомянутые ферменты могут быть выделены из культуральной жидкости и/или из клеточного гомогенизата различными способами, в частности посредством эксклюзионной хроматографии.
В соответствии с третьим аспектом настоящего изобретения предлагается композиция для лечения или профилактики вирусных инфекций, характеризующаяся тем, что она содержит в себе эффективное количество эндонуклеазы по пункту 3 или эндонуклеазу, имеющую последовательность аминокислотных остатков гомологичную ей, по меньшей мере, на 95 %.
Далее вышеупомянутая композиция, охарактеризованная в общих категориях, поясняется на примере некоторых особенно предпочтительных форм выполнения, обеспечивающих получение дополнительных преимуществ.
В частной форме осуществления композиции, вышеупомянутым эффективным количеством является 150+300 мг эндонуклеазы с активностью 150+400 тысяч единиц активности (е. а.) в расчете на 1 г.
В еще одной частной форме осуществления композиция дополнительно содержит в себе рибонуклеазу (РНКазу) активностью 500+4500 е. а., предпочтительно выделенную из вышеуказанного бактериального штамма, в количестве 2+4 мг в расчете на 1 г.
В другой частной форме осуществления композиция дополнительно включает в себя дезоксирибонуклеазу (ДНКазу) активностью 1000+8100 е. а., предпочтительно выделенную из вышеуказанного бактериального штамма, в количестве 2+5 мг в расчете на 1 г. В частной форме осуществления композиция дополнительно включает в себя протеазу активностьюО.01+0,06 е. а., предпочтительно выделенную из вышеуказанного бактериального штамма, в количестве 0,1+0,3 мг в расчете на 1 г.
В еще одной частной форме осуществления композиция дополнительно включает в себя липазу активностью 0,5+4,0 шЕ е. а., предпочтительно выделенную из
вышеуказанного бактериального штамма, в количестве 0,05+0,2 мг в расчете на 1 г.
В другой частной форме осуществления композиция дополнительно включает в себя магния сульфат в количестве 300+620 мг в расчете на 1 г.
В частной форме осуществления композиция дополнительно включает в себя декстран в количестве примерно 100+500 мг, предпочтительно примерно, 180 мг в расчете на 1 г.
В еще одной частной форме осуществления композиция включает в себя ферменты по любому из пунктов 2-7 в количестве 150+350 мг в расчете на 1 г, а также сульфат магния в количестве 0,3+0,62 г и, необязательно, вспомогательные вещества, такие как декстран— остальное.
В другой частной форме осуществления композиция имеет следующий состав, в расчете на 1 г:
эндонуклеаза бактериальная активность 150-400 тыс. е. а. 150+350 мг,
РНКаза активность 500+4500 е. а. 2+4 мг,
ДНКаза активность 1000+8100 е. а. 2+5 мг,
протеаза активностью 0,01+0,06 е. а. 0,1+0,3 мг,
липаза активностью0,5+4 тЕ 0,05+0,2 мг,
магния сульфат 300+620 мг,
декстран остальное.
В частной форме осуществления композиция получена посредством лиофильной сушки необязательно забуференного раствора.
В еще одной частной форме осуществления композиции, перед лиофильной сушкой в нее добавляют криопротекторы, выбранные из группы, включающей декстрозу, сорбитол, маннитол, маннозу, сахарозу и их смесь.
В соответствии с четвертым аспектом настоящего изобретения предлагается применение композиции по любому из пунктов 9-20 в виде раствора для профилактики или лечения вирусных заболеваний животных.
В частной форме применения композиции, вышеупомянутый раствор композиции готовят путем растворения сухой композиции, не содержащей сульфата магния, в растворе, содержащем сульфат магния, или путем добавления сульфата магния к раствору вышеупомянутой композиции, не содержащему сульфата магния.
В еще одной частной форме применения композиции, упомянутый раствор композиции вводят в корм животных в качестве кормовой добавки.
В другой частной форме применения композиции, упомянутый раствор
композиции используют местно, интраназально или распыляют в виде аэрозоля.
В частной форме применения композиции, вирусные заболевания представляют собой бронхопневмонию телят и жеребят вирусной этиологии, предпочтительно, выбранную из группы, включающей ринотрахеит, инфекцию респираторно- синтициальным вирусом, инфекцию вирусом парагриппа-3, и инфекцию аденовирусами 1 и 2 типа.
В еще одной частной форме применения композиции, вирусные заболевания представляют собой вирусные заболевания птиц, предпочтительно, выбранные из группы, включающей инфекционный ларинготрахеит птиц, болезнь Ньюкасла, энтеровирусные инфекции.
В другой частной форме применения композиции, профилактику осуществляют для снижения вирусной нагрузки у цыплят на наклеве.
В частной форме применения композиции, вирусные заболевания представляют собой вирусные заболевания пчел, предпочтительно, выбранные из группы включающей в себя острый и хронический паралич, филаментовироз, мешотчатый расплод и
египтовироз.
В еще одной частной форме применения композиции, профилактику осуществляют для весенне-летней стимуляции развития пчелиных семей.
Осуществление настоящего изобретения ниже поясняется на примере частных и конкретных вариантов воплощения, которые не следует понимать, как ограничивающие объем правовой охраны.
ОСУЩЕСТВЛЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Композиция по изобретению, выбранная для испытания, содержит в расчете на 1 г сухого вещества в качестве действующего вещества комплекс ферментов, выделенных из штамма Serratia marcescens М-10, депонированного во Всероссийской коллекции микроорганизмов под N° VICM B-2931D, включающий эндонуклеазу, РНКазу, ДНКазу, протеазу и липазу, в количестве 150- 350 мг, магния сульфат в количестве 0,3-0,62 г, а также вспомогательные вещества— декстран в количестве 180 мг. Наиболее активным противовирусным компонентом композиции является эндонуклеаза, в то время как остальные ферменты усиливают ее действие, в частности, принимая участие в разрушении липидной оболочки вируса и/или белков капсида и/или ускоряют дальнейшую деградацию нуклеиновых кислот.
По своим свойствам данная эндонуклеаза, является внеклеточным ДНК/РНК неспецифическим ферментом в связи с чем она активна как против ДНК-, так и против РНК-содержащих вирусов.
Комплекс ферментов для изготовления исследуемого образца композиции получают посредством культивирования вышеупомянутого штамма Serratia marcescens М-10, с последующим осаждением ферментов из культуральной жидкости и сушкой.
Упомянутая эндонуклеаза отличается отряда аналогичных ферментов чрезвычайновысокойгидролитическойактивностьюпоотношениюкДНКиРНК.Эндонуклеаз а катализирует гидролитическое расщепление ДНК и РНК между 5'-фосфатом и 3'- кислородом Сахаров в присутствии ионов Mg2+. Данный фермент способен расщеплять как одно- так и двухцепочечные субстраты с одинаковой эффективностью. Противовирусная активность фермента связана с тем, что эндонуклеаза бактериальная гидролизует нуклеиновые кислоты по эндонуклеолитическому механизму до моно-, ди-, три-, тетра- и олигонуклеотидов. Вирусные РНК и ДНК, подвергнутые действию фермента, теряют способность служить матрицами для синтеза нуклеиновых кислот и белков.
Упомянутая эндонуклеаза синтезируется в виде белка-предшественника длиной 266 аминокислотных остатков и сигнального пептида, состоящего из первых 21 аминокислотных остатков. Выявлены две основные изоформы фермента с близкими биологическими свойствами— Sml и Sm2. У Sml отсутствуют первые три Ν-концевых аминокислотных остатка. Sm2 (молекулярная масса 26,7килоДальтон) состоит из 245 аминокислотных остатков и является результатом процессинга — отщепления сигнального пептида.
При секвенировании, установлено, что упомянутая эндонуклеаза, содержит в своем составе последовательности, гомологичные последовательностям следующих локусов секвенированного генома Serratia marcescens subsp. marcescens Dbllvi их частям: SMDB1 1_RS07495, SMDB11_RS05280, SMDB11_RS07940, SMDB11_RS07935, SMDB 1 I RS 11830(БД Gene, http://ncbi.nlm.nih.gov).
Активный центр фермента включает в себя четыре аминокислотных остатка, а именно Arg57, His89, Asnl l9 и Glul27, которые расположены в непосредственной близости друг от друга. His89 участвует в связывании субстрата и, так как он находится в депротонированной форме, выполняет роль основания. Arg57 и Arg87 участвуют в катализе. Аг§57участвует в позиционировании и поляризации фосфаторасщепляющейся фосфодиэфирной связи и стабилизации переходного состояния. Asnl l9 участвует в связывании ионов металла. Glul27 участвует в гидролизе. Сайт связывания ионов магния расположен между спиралью (аминокислотные остатки 116-135) и петлей от 50 до 114 остатков. Мутация по любому из аминокислотных остатков, особенно по His89 приводит к резкому снижению активности фермента. Замена аминокислотА8п119 и Arg57 также снижает активность фермента.
Упомянутая рибонуклеаза (РНКаза) является нуклеазой Н, катализирующей деградацию РЖ. РНКаза Н является неспецифической эндонуклеазой и катализирует расщепление РНК по механизму гидролиза в присутствии связанного двухвалентного иона металла. В результате воздействия рибонуклеазы Н образуется 5'- фосфорилированный продукт.
Упомянутая дезоксерибонуклеаза (ДНКаза)является нуклеазой, катализирующей гидролитическое расщепление полинуклеотидной одноцепочечной или двуцепочечной ДНК с образованием отдельных нуклеотидов и олигонуклеотидов с концевым 5'- фосфатом и свободной гидроксильной группой на З'-конце.
Упомянутая протеаза является ферментом из класса гидролаз, который расщепляет пептидную связь между аминокислотами. Содержание нейтральной протеазы в исследуемом образце композиции составляло 0,01-0,06 е. а./г, щелочной— 0,015-0,04 е. а./г. За единицу общей протеолитической активности принимают такое количество фермента, которое за 1 мин при 30 °С приводит белок в неосаждаемое трихлоруксусной кислотой состояние в количестве, соответствующем 1 микромолю тирозина. Определение протеолитической активности нейтральных протеаз осуществляется при рН реакционной смеси 7,0; щелочных протеаз— 9,0.
Липаза вышеупомянутого штамма катализирует гидролиз нерастворимых липидных субстратов. Содержание липазы в 1 г исследуемой композиции составляло 0,5-4 тЕ. Одна единица активности липазы представляет собой количество фермента, которое продуцируется после обработки пробы стандартным буфером TNB в течение минуты при 37°С.
Сульфат магния в составе исследуемого образца композиции увеличивает активность ферментов, расщепляющих фосфодиэф ирную связь. Декстран выполняет функцию стабилизатора и наполнителя, его количество в композиции может варьировать в широких пределах. Предпочтительно в композиции использовать декстран с молекулярной массой 40-80 килоДальтон.
Также композиция может содержать в себе криопротекторы и буферные вещества. Конкретная композиция, образец которой использовали для испытаний в примерах 1-7, имела следующий количественный состав в расчете на 1 г сухой массы:
эндонуклеаза бактериальная активность 150-400 тыс. е. а. 150+350 мг,
РНКаза активность 500+4500 е. а. 2 4 мг,
ДНКаза активность 1000+8100 е. а. 2+5 мг, протеаза активностью 0,01+0,06 е. а. 0,1+0,3 мг, липаза активностью 0,5+4 гпЕ 0,05+0,2 мг, магния сульфат 300+620 мг, декстран остальное. По внешнему виду образец представлял собой порошок от белого до светло- коричневого цвета, хорошо растворимый в воде, практически нерастворимый в органических растворителях.
В настоящем тексте за единицу активности эндонуклеазы (е. а.) принимают количество фермента, вызывающее увеличение оптической плотности кислоторастворимых продуктов гидролиза РНК или ДНК на 1 оптическую единицу при длине волны 260 нм за 20 мин при 37 °С.
Как было установлено, композиция показывает противовируснуюактивность invitro и invivo, в частности, тормозит размножениевирусов везикулярного стоматита и осповакцины в культуре клеток куриных фибробластов.
Композиция нетоксична для человека, животных и растений практически в любом разумном диапазоне доз и самопроизвольно инактивируетсяв окружающей среде.
Пример 1.
Влияние на репродукцию вируса Ньюкаслской болезни invitro Инфекционная активность вируса Ньюкаслской болезни, культивируемого в присутствии образца композициив концентрации 50 е.а. составила 9,0 lg ЛД5о/См3 , в концентрации 100 е.а.— 9,5 lg ЛД50/СМ .
Инфекционная активность контрольного вируса составила 9,9 lg ЛД50/СМ .
Таким образом, композиция в концентрации 100 е. а. снижает инфекционную активность вируса в 2,5 раза, в концентрации 50 е. а.— в 8 раз. Пример 2.
Оценка на цыплятах противовирусной активности в отношении вируса инфекционного ларинготрахеита (ИЛТ) птиц
Сухой образец по изобретению без сульфата магния в количестве 50000 е. а. растворяют в 300 мл кипяченой воды при комнатной температуре и в этот раствор добавляют 0,62 г сульфата магния.
Обработку цыплят проводят в аэрозольной камере объемом 2 м по следующей схеме:
- обработка препаратом за 1 час до заражения,
- через 1 час после заражения,
- через 24 часа после заражения,
- через 48 часов после заражения.
Цыплят заражали аэрозольно. Экспозиция— 20 минут.
Динамика заболевания птицы и падежа представлена в таблице 1.
Полученные результаты показывают, что аэрозольная обработка цыплят препаратом на основе комплекса ферментов в рекомендованной дозе и по предлагаемой схеме защищает от заражения вирусом ИЛТ в количестве 10 инфекционных доз на см (ИД/см3).У птицы обработанной препаратом заболевание не отмечено, у необработанной птицы заболеваемость составила 20 %. При заражении цыплят вирусом ИЛТ в дозе 100 ИД/см3 заболеваемость птицы, обработанной препаратом, была в 2 раза ниже в сравнении с контрольной подгруппой— 40% и 80%, соответственно.
Обработка препаратом предохраняет птицу от гибели: в подгруппе, обработанной композицией по изобретению, падеж не наблюдают, в необработанной подгруппе— падеж 25% поголовья.
Пример 3.
Профилактика ИЛТ птиц
Проведение промышленных испытаний препарата в отношении вируса, вызывающего ИЛТ птиц проводили на площади 1650 м2, результаты приведены в таблице 2.
Готовят рабочий раствор из расчета 15 мл на 1 м2 птичника. Композицию применяют в форме мелкодисперсного аэрозоля, используя генератор холодного тумана. Высота распыляемого слоя не менее 40 см от пола, размер частиц— 5-^15 микрон. При применении препарата в профилактических целях в птичниках наблюдают снижение падежа в 2,2 раза, увеличение сохранности поголовья на 2,95%. Также наблюдают увеличение среднесуточного привеса и выхода товарной продукции.
Пример 4.
Активность в отношении инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота (ИРТ-КРС) (относится к семейству
герпесвирусов) invitro
Инфекционная активность вируса ИРТ-КРС, культивируемого в присутствии препарата в концентрации 50 е. а. составила 6,25 lg TCD50 CM 3, в концентрации 100 е. а.— 6,0 lg TCD50/CM 3.
Инфекционная активность контрольного вируса составила 6,75 lg TCD5o/CM 3.
Таким образом, препарат в концентрации 100 е. а. снижает инфекционную активность вируса ИРТ-КРС в 5 6 раз, в концентрации 50 е. а.— в 3 раза.
Пример 5.
Активность в отношении ИРТ-КРС/л vivo
В опыте телят 0,5+2 месячного возраста обрабатывали интраназально 2 раза через 7+10 дней.
Препарат, при введении его раствора в носовую полость, обладает профилактической и лечебной эффективностью при остром течении болезни. В опытных группах не наблюдалось павших животных (в контрольной группе количество павших телят составило в среднем 5 %), количество выздоровевших телят составило 98%, в контроле— 12%.
Таким образом, показана высокая эффективность препарата в отношении вируса ИРТ-КРС.
Пример 6.
Исследование возможности профилактики и лечения
респираторных вирусных заболеваний жеребят
Исследования проводили на промышленном комплексе по выращиванию нетелей ОАО Племзавод «Учхоз Тулинское» на жеребятах породы «Советский тяжеловоз» 20+60 дневного возраста.
Профилактическое действие препарата исследовали на 49 жеребятах. Из них 25 вводили препарат интраназально один раз в дозе 2000 е. а., 24 жеребятам вводили такую же дозу дважды с интервалом в 10 дней. После введения этой дозы препарата общее состояние животных не изменилось: температура тела, пульс, частота дыхания оставались в пределах нормы.
Животные контрольной группы (23 жеребенка) препарат не получали. Жеребят в течение 2-х месяцев.
В течение этого срока из 49 жеребят, получавших эндонуклеазу, респираторные заболевания возникли у 7 животных (14,3 %). Заболевание у этих животных протекало в относительно легкой форме и после обычного лечения все животные выздоровели. В контрольной группе переболело бронхопневмонией 17 жеребят из 23 (74 %). Из них у 2 жеребят заболевание протекало в тяжелой форме, они были выбракованы и отправлены на мясокомбинат (таблица 3).
Таким образом, однократное интраназальное введение 2(Н60-дневным жеребятам препарата в дозе 2000 е. а. снижает частоту респираторных заболеваний у жеребят более чем в 5 раза, уменьшает тяжесть заболеваний, что исключает вынужденный убой.
Пример 7.
Исследование возможности профилактики и лечения вирусных
болезней пчел
Пчелиные семьи содержались в 16-ти рамочных лежаках Дадана-Блата. В эксперименте используют4 группы пчелиных семей-аналогов, по 10 семей в каждой группе:
1 группа— обрабатывают композицией аэрозольно, каждая улочка, 3-х кратно с интервалом в 7 дней;
2 группа— препарат растворяют в сахарном сиропе и скармливали пчелам в один день, 3-х кратно с интервалом в 7 дней;
3 группа— обрабатывают аэрозолем воды, 3-х кратно с интервалом в 7 дней;
4 группа— контрольная, без обработок.
Результаты испытаний профилактического и лечебного действия препарата представлены в таблице 2.
Предлагаемый препарат на основе комплекса ферментов обладает профилактической и лечебной эффективностью при вирусных заболеваниях пчелиных семей.
Препарат применяемый аэрозольно и с сахарным сиропом в весеннее время для профилактики и лечения вирусных заболеваний пчелиных семей и для стимуляции развития пчелиных семей способствует более стремительному наращиванию силы семьи и большему количеству расплода, что в конечном итоге способствует получению большего количества меда и воска.
Таблица 1.
Динамика заболевания и падежа цыплят после заражения вирулентным вирусом ИЛТ
Figure imgf000013_0001
Примечания: в числителе: п— павшие, б— больные; в знаменателе: 10 (всего цыплят в группе); ИД— инфекционная доза.
Таблица 2. нительная таблица результатов в контрольном и птичниках при выращивании бройлеров
Figure imgf000014_0001
Таблица 3.
Результаты испытаний профилактического действия препарата на основе комплекса ферментов при респираторных
заболеваниях молодняка лошадей
Figure imgf000015_0001
Таблица 4.
Результаты применения препарата на основе комплекса ферментов против вирусных болезней пчел и для стимуляции пчелиных семей
Figure imgf000016_0001

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Бактериальный штамм Serratiamarcescens М- 10, депонированный во Всероссийской коллекции микроорганизмов под N°VKM B-2931D.
2. Ферменты, выделенные из бактериального штамма по п.1.
3. Ферменты по п.2, характеризующиеся тем, что они включают в себя эндонуклеазу.
4. Ферменты по п.2, характеризующиеся тем, что они включают в себя РНКазу.
5. Ферменты по п.2, характеризующиеся тем, что они включают в себя ДНКазу.
6. Ферменты по п.2, характеризующиеся тем, что они включают в себя липазу.
7. Ферменты по п.2, характеризующиеся тем, что они включают в себя протеазу.
8. Ферменты по п.2, характеризующиеся тем, что они выделены в индивидуальном состоянии посредством эксклюзионной хроматографии.
9. Композиция для лечения или профилактики вирусных инфекций, характеризующаяся тем, что она содержит в себе эффективное количество эндонуклеазы по пункту 3 или эндонуклеазу, имеющую последовательность аминокислотных остатков гомологичную ей, по меньшей мере, на 95 %.
10. Композиция по п.9, характеризующаяся тем, что вышеупомянутым эффективным количеством является 150+300 мг эндонуклеазы с активностью 150+400 тысяч единиц активности (е. а.) в расчете на 1 г.
11. Композиция по п.9, характеризующаяся тем, что она дополнительно содержит в себе рибонуклеазу (РНКазу) активностью 500+4500 е. а., предпочтительно по пункту 4,в количестве 2+4 мг в расчете на 1 г.
12. Композиция по п.9, характеризующаяся тем, что она дополнительно включает в себя дезоксирибонуклеазу (ДНКазу) активностью 1000+8 ЮОе. а., предпочтительно по пункту 5, в количестве 2+5 мг в расчете на 1 г.
13. Композиция по п.9, характеризующаяся тем, что она дополнительно включает в себя протеазу активностью 0,01+0,06 е. а., предпочтительно по пункту 6, в количестве 0,1+0,3 мг в расчете на 1 г.
14. Композиция по п.9, характеризующаяся тем, что она дополнительно включает в себя липазу активностью 0,5+4,0 тЕ е. а., предпочтительно по пункту 7,в количестве 0,05+0,2 мг в расчете на 1 г.
15. Композиция по п.9, характеризующаяся тем, что она дополнительно включает в себя магния сульфат в количестве 300+620 мг в расчете на 1 г.
16. Композиция по п.9, характеризующаяся тем, что она дополнительно включает в себя декстран в количестве примерно 100+500 мг, предпочтительно примерно, 180 мг в расчете на 1 г.
17. Композиция по п.9, характеризующаяся тем, что она включает в себя ферменты по любому из пунктов 2-7 в количестве 150+350 мг в расчете на 1 г, а также сульфат магния в количестве 0,3 0,62 г и, необязательно, вспомогательные вещества, такие как декстран— остальное.
18. Композиция по п.9, характеризующаяся тем, что она имеет следующий состав, в расчете на 1 г:
эндонуклеаза бактериальная активность 150-400 тыс. е. а. 150+350 мг,
РНКаза активность 500+4500 е. а. 2+4 мг,
ДНКаза активность 1000+8100 е. а. 2+5 мг, протеаза активностью 0,01+0,06 е. а. 0,1+0,3 мг, липаза активностью0,5+4 тЕ 0,05+0,2 мг, магния сульфат 300+620 мг, декстран остальное.
19. Композиция по п.9, характеризующаяся тем, что она получена посредством лиофильной сушки необязательно забуференного раствора.
20. Композиция по п.18, характеризующаяся тем, что перед лиофильной сушкой в нее добавили криопротекторы, выбранные из группы, включающей декстрозу, сорбитол, маннитол, маннозу, сахарозу и их смесь.
21. Применение композиции по любому из пунктов 9-20 в виде раствора для профилактики или лечения вирусных заболеваний животных.
22. Применение по п.21, характеризующееся тем, что в нем вышеупомянутый раствор композиции готовят путем растворения сухой композиции, не содержащей сульфата магния, в растворе, содержащем сульфат магния, или путем добавления сульфата магния к раствору вышеупомянутой композиции, не содержащему сульфата магния.
23. Применение по п.21, характеризующееся тем, что в нем упомянутый раствор композиции вводят в корм животных в качестве кормовой добавки.
24. Применение по п.21, характеризующееся тем, что в нем упомянутый раствор композиции используют местно, интраназально или распыляют в виде аэрозоля.
25. Применение по п.21, характеризующееся тем, что в нем вирусные заболевания представляют собой бронхопневмонию телят и жеребят вирусной этиологии, предпочтительно, выбранную из группы, включающей ринотрахеит, инфекцию респираторно-синтициальным вирусом, инфекцию вирусом парагриппа-3, и инфекцию аденовирусами 1 и 2 типа.
26. Применение по п.21, характеризующееся тем, что в нем вирусные заболевания представляют собой вирусные заболевания птиц, предпочтительно, выбранные из группы, включающей инфекционный ларинготрахеит птиц, болезнь Ньюкасла, энтеровирусные инфекции.
27. Применение по п.21, характеризующееся тем, что в нем профилактику осуществляют для снижения вирусной нагрузки у цыплят на наклеве.
28. Применение по п.21, характеризующееся тем, что в нем вирусные заболевания представляют собой вирусные заболевания пчел, предпочтительно, выбранные из группы включающей в себя острый и хронический паралич, филаментовироз, мешотчатый расплод и египтовироз.
29. Применение по п.21 , характеризующееся тем, что в нем профилактику осуществляют для весенне-летней стимуляции развития пчелиных семей.
PCT/RU2016/000623 2016-09-12 2016-09-12 Композиция для лечения или профилактики вирусных инфекций Ceased WO2018048322A1 (ru)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP16915835.9A EP3511408A1 (en) 2016-09-12 2016-09-12 Composition for the treatment or prophylaxis of viral infections
PCT/RU2016/000623 WO2018048322A1 (ru) 2016-09-12 2016-09-12 Композиция для лечения или профилактики вирусных инфекций

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/RU2016/000623 WO2018048322A1 (ru) 2016-09-12 2016-09-12 Композиция для лечения или профилактики вирусных инфекций

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2018048322A1 true WO2018048322A1 (ru) 2018-03-15

Family

ID=61562830

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2016/000623 Ceased WO2018048322A1 (ru) 2016-09-12 2016-09-12 Композиция для лечения или профилактики вирусных инфекций

Country Status (2)

Country Link
EP (1) EP3511408A1 (ru)
WO (1) WO2018048322A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111929439A (zh) * 2020-10-10 2020-11-13 中国农业科学院蜜蜂研究所 一种快速诊断蜜蜂丝状病毒试纸及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2038776C1 (ru) * 1993-01-22 1995-07-09 Людмила Дмитриевна Детиненко Средство "эндоглюкин" для профилактики и лечения вирусных заболеваний пчел и стимуляции развития пчелиных семей
US5484589A (en) * 1992-04-20 1996-01-16 Rufeld, Inc. Anti-viral methods using RNAse and DNAse
RU2558064C2 (ru) * 2009-08-13 2015-07-27 Сейкагаку Корпорейшн Фармацевтическая композиция для ослабления боли

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1661214A1 (ru) * 1989-07-19 1991-07-07 Казанский государственный университет им.В.И.Ульянова-Ленина Штамм бактерий SеRRатIа маRсеSсеNS - продуцент эндонуклеазы
CN102604856B (zh) * 2011-12-22 2014-06-18 中国农业科学院烟草研究所 一株烟草普通花叶病毒生防粘质沙雷氏菌菌株

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5484589A (en) * 1992-04-20 1996-01-16 Rufeld, Inc. Anti-viral methods using RNAse and DNAse
RU2038776C1 (ru) * 1993-01-22 1995-07-09 Людмила Дмитриевна Детиненко Средство "эндоглюкин" для профилактики и лечения вирусных заболеваний пчел и стимуляции развития пчелиных семей
RU2558064C2 (ru) * 2009-08-13 2015-07-27 Сейкагаку Корпорейшн Фармацевтическая композиция для ослабления боли

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Otsenka effektivnosti preparata na osnove endonukleazy bakterialnoi v otnoshenii virusa infektsionnogo laringotrakheita ptits", TSENOVIK WEBPAGE, 7 September 2015 (2015-09-07), pages 1 - 5, XP009517009, Retrieved from the Internet <URL:https://www.tsenovik.ru/articles/veterinariya/otsenka-effektivnosti-preparata-na-osnove-endonukleazy-bakterialnoy-v-otnoshenii-virusa-infektsionno/> *
BILOKUR S. N.: "Lechenie i profilaktika bronkhopnevmonii teliat virusno-bakterialnoi etiologii [Treatment and prevention of bronchopneumonia calves viral bacterial ethiology]", AVTOREFERAT DISSERTATSII NA SOISKANIE UCHENOISTEPENI KANDIDATA VETERINARNYKH NAUK, OMSK, 2013, Russia, pages 1 - 16, XP009516651, Retrieved from the Internet <URL:https://www.dissercat.com/content/lechenie-i-profilaktika-bronkhopnevmonii-telyat-virusno-bakterialnoi-etiologii> *
HABERLAND B.: "Die extrazellulare Endonuklease aus Serratia marcescens: Untersuchungen zur Substratbindung und zur Katalyse", INAUGURALDISSERTATION , GIEBEN, 2001, pages I - X,1-119, XP055499572 *
HENRIETTE S. ET AL.: "Protease and lipase production by a strain of Serratia marcescens (532 S)", JOURNAL OF INDUSTRIAL MICROBIOLOGY, vol. 12, no. 2, 1993, pages 129 - 135, XP009514308 *
See also references of EP3511408A4 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111929439A (zh) * 2020-10-10 2020-11-13 中国农业科学院蜜蜂研究所 一种快速诊断蜜蜂丝状病毒试纸及其应用
CN111929439B (zh) * 2020-10-10 2021-01-05 中国农业科学院蜜蜂研究所 一种快速诊断蜜蜂丝状病毒试纸及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
EP3511408A4 (en) 2019-07-17
EP3511408A1 (en) 2019-07-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2020257097B2 (en) Compositions and methods for controlling arthropod parasite and pest infestations
AU2022201685B2 (en) Compositions and methods for controlling arthropod parasite and pest infestations
JP4105535B2 (ja) 抗ウイルス性物質
TWI425915B (zh) New Pseudomonas bacteria
CN103865933B (zh) 一种wap基因在果蝇转基因中的应用
WO2018048322A1 (ru) Композиция для лечения или профилактики вирусных инфекций
US12016334B2 (en) Composition comprising sulphated galactose, and implementations thereof
CN113521261B (zh) 一种抗冠状病毒和细菌双重纳米免洗消毒凝胶及其制备方法和应用
US8354391B2 (en) Anti-WSSV and/or TSV nucleic acid drug
US20180127439A1 (en) Antiviral and antibacteria agents based on quaternary ammonium compound complexed with boric acid and its derivatives
JP4052535B2 (ja) 動物用薬剤及び動物用飼料
CN115120726B (zh) 抑制长角血蜱天冬氨酸蛋白酶基因表达的siRNA及其应用
EP4577041A1 (en) Genetically engineered eukaryotic organisms, systems and methods for in vivo biasing sex-ratio of populations
RU2509801C2 (ru) СПОСОБ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ РИБОНУКЛЕАЗЫ Bacillus intermedius
RU2093177C1 (ru) Препарат &#34;дина&#34; для лечения и профилактики заболеваний млекопитающих, птиц и рептилий
KR101600983B1 (ko) 꿀벌의 낭충봉아부패병 예방 및 치료제
RU2808576C1 (ru) Способ лечения пчелосемей, пораженных ассоциативной инфекцией варроозом, американским и европейским гнильцом
US20070218036A1 (en) Method For The Prevention Of Infection With Nodavirus And Method For The Treatment Thereof
TWI744983B (zh) 針對多巴脫羧酵素之雙股rna的用途
KR102449133B1 (ko) 항바이러스 조성물 및 그의 제조방법
US20070207130A1 (en) Stem cell therapy to treat symptoms of avian flu and other diseases
JP2007137888A (ja) 植物用薬剤
RU2083101C1 (ru) Средство для повышения сохранности молодняка крупного рогатого скота
CN120131698A (zh) 黄麻纳米纤维素或其衍生物在制备蜜蜂病毒感染防治药物或饲料中的应用
KR20190005576A (ko) 이탄(泥炭)과 70%인 아탄(亞炭) 사이의 탄소분 65%정도의 물질에서 추출한 물질을 이용한 구제역, 조류독감등 가축 호흡기 질환 예방용 다기능성 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 16915835

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2016915835

Country of ref document: EP

Effective date: 20190412