[go: up one dir, main page]

WO2017195838A1 - 測定対象物質の比較対象物質に対する割合を求める方法、プログラム、記憶媒体及び装置 - Google Patents

測定対象物質の比較対象物質に対する割合を求める方法、プログラム、記憶媒体及び装置 Download PDF

Info

Publication number
WO2017195838A1
WO2017195838A1 PCT/JP2017/017734 JP2017017734W WO2017195838A1 WO 2017195838 A1 WO2017195838 A1 WO 2017195838A1 JP 2017017734 W JP2017017734 W JP 2017017734W WO 2017195838 A1 WO2017195838 A1 WO 2017195838A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
concentration
absorbance
total
target substance
ratio
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2017/017734
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
沙智子 安藤
学 吉野
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Eiken Chemical Co Ltd
Original Assignee
Eiken Chemical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Eiken Chemical Co Ltd filed Critical Eiken Chemical Co Ltd
Priority to KR1020187032054A priority Critical patent/KR20190006955A/ko
Priority to JP2017563631A priority patent/JP6561144B2/ja
Priority to US16/301,291 priority patent/US20200319167A1/en
Priority to CN201780028173.6A priority patent/CN109073646A/zh
Priority to EP17796197.6A priority patent/EP3457136A4/en
Publication of WO2017195838A1 publication Critical patent/WO2017195838A1/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5002—Partitioning blood components
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/536—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
    • G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
    • G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
    • G01N21/314—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry with comparison of measurements at specific and non-specific wavelengths
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/551—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being inorganic
    • G01N33/553—Metal or metal coated
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/66—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood sugars, e.g. galactose
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
    • G01N33/721—Haemoglobin
    • G01N33/723—Glycosylated haemoglobin
    • G—PHYSICS
    • G06—COMPUTING OR CALCULATING; COUNTING
    • G06F—ELECTRIC DIGITAL DATA PROCESSING
    • G06F17/00—Digital computing or data processing equipment or methods, specially adapted for specific functions
    • G06F17/10—Complex mathematical operations
    • G06F17/18—Complex mathematical operations for evaluating statistical data, e.g. average values, frequency distributions, probability functions, regression analysis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
    • G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
    • G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
    • G01N21/314—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry with comparison of measurements at specific and non-specific wavelengths
    • G01N2021/3155—Measuring in two spectral ranges, e.g. UV and visible
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/76—Assays involving albumins other than in routine use for blocking surfaces or for anchoring haptens during immunisation
    • G01N2333/765—Serum albumin, e.g. HSA

Definitions

  • the present invention relates to a technique for measuring a ratio of a measurement substance to a comparison target substance.
  • Specimen tests performed in clinical tests include proteins, enzymes, electrolytes, metal ions, lipids, carbohydrates, vitamins, etc. in specimens of blood, spinal fluid, urine, stool, tissues and cells collected from patients.
  • chemical substances for example, it is possible to grasp the abnormalities of organs, the state of infection by bacteria or viruses, etc., so it can be used as a means for diagnosing diseases, judging treatment policies, and obtaining treatment effect indicators It is done.
  • the measured value is expressed in terms of concentration, for example, mg / dL or mol / L is used.
  • concentration for example, mg / dL or mol / L is used.
  • activity value is expressed, and the unit of enzyme or international unit, for example, IU / L is used as the unit.
  • Blood glucose that is, glucose, which is one of the objects to be measured, is measured in order to grasp the pathological condition (high blood sugar level) of a diabetic patient, and mg / dL is used as the unit, for example, in Japan.
  • the exact blood glucose level at the time of blood collection can be grasped, but the blood glucose level is constantly fluctuating (the fasting reference value is less than 110 mg / dL, and the reference value after 2 hours after meal is less than 140 mg / dL) ),
  • the fluctuation range of blood sugar (the state of blood sugar) cannot be grasped. That is, the effect of blood glucose control performed as a treatment for diabetic patients cannot be grasped.
  • the degree of protein glycation that reflects the state of blood glucose over a certain period is used as an index.
  • HbA1c or glycoalbumin is used as an index.
  • HbA1c is a chromoprotein in erythrocytes, and is a heterotetramer composed of two ⁇ subunits and two ⁇ subunits. Hb in erythrocytes binds to glucose non-enzymatically, that is, in a blood glucose concentration-dependent manner while erythrocytes circulate in the body. Thus, Hb bound to glucose and glycated Hb are HbA1.
  • HbA1c is the one in which glucose is bound to the N-terminus of the ⁇ subunit. It is used as an index reflecting the state. As a measured value, the ratio of HbA1c to the total Hb, that is, the relative amount, and% as a unit are used.
  • glycoalbumin occupies most of blood proteins, and as it circulates in the body with blood, as with hemoglobin, it binds to sugar, and albumin bound to sugar and glycated albumin are glycoalbumin.
  • Glycoalbumin is used as an index reflecting the state of blood glucose over the past 2-3 weeks from the time of blood collection.
  • a ratio of glycoalbumin to total albumin that is, a relative amount, and% as a unit are used.
  • the ratio (relative amount) of the substance to be measured with respect to the substance to be compared is used as a measurement value.
  • isozyme for example, lactate dehydrogenase. That is, isozymes having different origins.
  • the ratio of the measurement target substance to the comparison target substance is used as the measurement value because the total amount of the comparison target substance varies depending on the individual, sex, age, disease, etc. This is because the pathological condition cannot be accurately grasped even if expressed in terms of mass per unit volume.
  • the total Hb concentration in human blood is in the range of 13.1 to 16.6 g / dL for males and in the range of 12.1 to 14.6 g / dL for females.
  • the reference value of the total Hb concentration includes gender differences, individual differences, and intra-individual differences.
  • the total Hb concentration varies greatly depending on the presence or absence of diseases that cause anemia (iron deficiency anemia, aplastic anemia, etc.), erythrocytosis, and dehydration. Therefore, even if it is expressed by the concentration of HbA1c, Hb is glycated in a blood glucose concentration-dependent manner.
  • the total Hb concentration is not seen, that is, a display value that can simultaneously grasp the relationship between HbA1c and the total Hb concentration. Unless it is used, the state of blood glucose cannot be accurately grasped. In other words, even if the concentration of HbA1c is the same, the ratio of HbA1c to total Hb is low in humans with a high total Hb concentration, and the ratio of HbA1c to total Hb is high in humans with a low total Hb concentration.
  • HbA1c As a method for obtaining the ratio of the measurement target substance to the comparison target substance as a measurement value, HbA1c will be described as an example.
  • a method using HPLC is known, and in this method, the measurement target substance and the comparison target are compared.
  • the ratio of HbA1c to the total Hb is determined directly from the peak area of the target substance.
  • an immunization method (aggregation method or aggregation inhibition method) is known (for example, refer to Patent Documents 1, 2, and 3), and the HbA1c concentration and the total Hb concentration in the sample are respectively obtained. Finally, the ratio of HbA1c to the total Hb is obtained.
  • HbA1c and Hb in the sample are denatured, then an immune reaction is performed, and the HbA1c concentration and the total Hb concentration in the sample due to the change in absorbance caused by the immune reaction are respectively determined, and finally HbA1c. Is calculated for the total Hb.
  • an agglutination method and an aggregation inhibition method are known.
  • HbA1c and Hb in the sample are first denatured, then the total Hb concentration is obtained from the absorbance, and then the glycated dipeptide derived from the ⁇ -subunit N-terminal derived from protease treatment with HbA1c is subjected to fructose.
  • the HbA1c concentration is determined by measuring absorbance using a color development reaction caused by hydrogen peroxide generated by the action of tosyl peptide oxidase and further peroxidase and a color former, and finally the ratio of HbA1c to total Hb is determined. .
  • Japanese Patent No. 2596322 Japanese Patent No. 3550614 Japanese Patent No. 5465008
  • the first method has a problem that the measuring device is large and expensive, and the column of consumable parts is expensive.
  • the reagent should be used at least twice during sample pretreatment (hemolysis treatment, dilution treatment or denaturation treatment) and measurement.
  • sample mixing step the volume of the reagent and the sample is likely to vary, and the reliability of the HbA1c concentration and the total Hb concentration, and hence the ratio of HbA1c to the total Hb, must be reduced.
  • the ratio of HbA1c to the total Hb is obtained directly from the absorbance measurement value without being affected by the volume ratio of the reagent and the sample.
  • the total Hb concentration varies from sample to sample as described above, it is necessary to prepare an infinite number of calibration curves for each total Hb concentration, which is impossible as a practical problem.
  • the present invention is a technique for obtaining a ratio of a measurement target substance to a comparison target substance, and in particular, when the concentration of the comparison target substance varies from sample to specimen, It aims at providing the technique which calculates
  • Ratio of target substance to be compared [X] / (concentration coefficient x concentration of target substance) (1) And a step of obtaining a regression equation representing the relationship between the concentration coefficient for each concentration of the comparison target substance and the concentration of the comparison target substance.
  • the step of obtaining the amount of change in absorbance is a step of obtaining the amount of change in absorbance increase or decrease at a characteristic single wavelength caused by the progress of a reaction caused by the specimen containing the substance to be measured and the measurement reagent, or measurement.
  • the first change in the first wavelength at which the absorbance increases or decreases which is a characteristic change in the increase or decrease in absorbance at two wavelengths caused by the progress of the reaction caused by the analyte containing the target substance and the measurement reagent. Determining the difference or ratio between the second absorbance at the second wavelength at which the absorbance increases or decreases.
  • the measurement reagent is a measurement reagent using any one of an agglutination method, an agglutination inhibition method, and an enzyme method of an immunization method, and the concentration coefficient optimized for each concentration of the above-described formula (1) and a comparison target substance And the concentration of the comparison target substance, and the absorbance change amount obtained by measuring the sample containing the measurement target substance using the measurement reagent, the step of obtaining the ratio of the measurement target substance to the comparison target substance.
  • the present invention may be a program for causing a computer to execute any one of the methods described above.
  • it may be a computer-readable recording medium for recording the program.
  • the present invention is an apparatus for determining a ratio of a measurement target substance to a comparison target substance using a measurement reagent of the measurement target substance, a control unit for executing any one of the methods described above, an absorbance It is preferable that the control unit and the absorbance measurement unit are provided integrally or separately.
  • the present invention may be a device having a control unit that incorporates the program described above, or may be a device having a control unit that reads the program described above.
  • the present invention may be an apparatus having a control unit incorporating a regression equation obtained by executing the method described above.
  • the present invention may be an apparatus having a control unit that reads a regression equation obtained by executing the method described above.
  • the ratio of the measurement target substance to the comparison target substance can be determined more easily.
  • FIG. 3 is a diagram obtained based on the data in FIG.
  • FIG. 6 is a diagram in which the concentration factor Factor is set so that the factor becomes 1.00 when the total Hb concentration is 1.5 mg / mL, and increases when the total Hb concentration decreases and decreases when the total Hb concentration increases. It is a figure which shows the regression curve of FIG. 7A after optimizing a density
  • FIG. 8 is a calibration curve obtained uniformly based on FIG.
  • FIG. 8 is a flowchart figure which shows an example of the process by this Embodiment. It is a figure following FIG. It is a figure following FIG. 11A, and is the flowchart figure which put together the procedure of measurement value calculation.
  • FIG. 11B is a flowchart showing a processing example of step S7 in FIG. 11A for obtaining the density coefficient Factor.
  • FIG. 14 is a flowchart showing a processing example of step S7-4 in FIG. 12 for obtaining a density coefficient Factor.
  • Samples having a total Hb concentration of 0.5, 0.75, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5 mg / mL and a ratio of HbA1c to total Hb of 3.7 to 15.3% are used.
  • 5 is a graph plotting the ratio of HbA1c to the total Hb 5 minutes after the start of the reaction and the ratio of the absorbance at a wavelength of 525 nm to the absorbance at a wavelength of 630 nm, that is, the absorbance ratio (Ratio).
  • FIG. 6 is a diagram in which the concentration factor Factor is set so that the factor becomes 1.00 when the total Hb concentration is 1.5 mg / mL, and increases when the total Hb concentration decreases and decreases when the total Hb concentration increases. It is a figure which shows the regression curve of FIG. 16A after optimizing a density
  • FIG. 5 is a diagram in which a concentration factor Factor is set so that when the Hb concentration is 2.0 mg / mL, the Factor is 1.00, and when the total Hb concentration is low, the factor is high, and when the total Hb concentration is high, the factor is low.
  • concentration coefficient Fract
  • concentration coefficient Fract
  • the immunization method is a method using an antigen-antibody reaction, and the detection principle may be either an aggregation method or an aggregation prevention method, and an antibody or a carrier carrying an antigen may be used. Either a monoclonal antibody or a polyclonal antibody may be used, and the carrier used may be an artificial carrier material or a natural material as long as it is a commonly used material such as latex, colloidal gold, or gelatin particles.
  • the change in absorbance in the agglutination method is that the agglutination reaction occurs and the absorbance increases in the presence of the measurement target substance. In the agglutination inhibition method, the agglutination reaction is inhibited in the presence of the measurement target substance.
  • an increase or decrease in absorbance caused by a reaction utilizing an immunization method can be used as an absorbance change amount.
  • the enzyme method uses an enzyme and a coloring reagent to measure an object to be measured, and detects the reaction by measuring the absorbance specific to the color developed as a result of the enzymatic reaction.
  • the enzyme used is For example, it may be an enzyme (for example, proteinase, fructosyl peptide oxidase and peroxidase) that is usually used in the measurement for determining the ratio of HbA1c or glycoalbumin to total hemoglobin or total albumin, and is generally used as a substrate for peroxidase.
  • Any commonly used color reagent for example, 4-AA, DMA, OPD, ADOS, TBHBA
  • 4-AA, DMA, OPD, ADOS, TBHBA can be used.
  • the absorbance change is an absorbance measurement value at an absorption wavelength specific to a reaction that occurs in an immunization method or an enzyme method used for measuring an object to be measured, for example, a single wavelength change amount ( ⁇ value), two Any of the difference (ratio of the main wavelength and the sub wavelength) and the ratio (absorbance ratio using the main wavelength as the numerator and the sub wavelength as the denominator, hereinafter referred to as the absorbance ratio or Ratio) may be used.
  • the comparison target substance is a group of substances including the measurement target, for example, Hb for HbA1c, albumin for glycoalbumin, and all isozymes that perform the same catalytic reaction for a specific type of isozyme. Point to.
  • the method for measuring the concentration of the comparison target substance may be any method that uses a change in absorbance caused by the reaction for measuring the comparison target substance.
  • the absorbance specific to Hb for example, 420 to 430 nm, 540 nm, an absorption wavelength in the vicinity of 570 nm
  • a method using a change in absorbance caused by a reaction by an immunization method for example, an aggregation method, an aggregation inhibition method
  • Hb for example, a method is used in which a completely oxidized or reduced state is obtained by treatment with a surfactant, sodium azide, a cyanide compound, and the like, and a measured value of absorbance specific to the oxidized or reduced state is used.
  • the classical method is the absorbance (color-specific absorption) using a dye-binding method (or protein error method).
  • a method using a measured value of (wavelength) is used.
  • the dye binding method is a method that utilizes a reaction in which, for example, bromcresol purple, bromcresol green, and pH indicator develop color depending on the presence of a protein regardless of pH change.
  • the regression equation of the concentration coefficient cannot be obtained as a straight line connecting the two points, and the accuracy is low.
  • the accuracy of the regression equation of the concentration coefficient obtained by the present invention is increased, it is not practical because labor is increased in the work for obtaining the amount of change in absorbance accordingly. Therefore, in order to carry out the present invention, it is preferable to prepare at least 3 types, more preferably 5 types or more, of dilution series of measurement target substances having different concentrations of comparison target substances.
  • the concentration of the comparison target substance and the dilution series of the measurement target substance may be set according to the respective measurement ranges depending on the measurement target and the measurement system using the immunization method or the enzyme method.
  • the inventors have conducted intensive studies and have completed the present invention by taking the following steps.
  • dilution series of the measurement target substances were prepared at different concentrations of the comparison target substances, and the change in absorbance caused by the reaction using the immunization method or the enzyme method was determined for each.
  • a calibration curve was prepared in which the x-axis was measured for each concentration of the comparison target substance and the dilution series of the measurement target substance was obtained, and the y-axis was plotted as the amount of change in absorbance.
  • a calibration curve is obtained that takes a sigmoid curve that rises to the right for each concentration of the comparison target substance.
  • each calibration curve tends to converge to one calibration curve. Can do.
  • concentration a coefficient optimized for each calibration curve for each concentration of the comparison concentration target substance (hereinafter referred to as concentration) so that each calibration curve for each concentration of the comparison target substance converges to one calibration curve.
  • concentration concentration of the comparison concentration target substance
  • concentration concentration of the comparison target substance
  • concentration concentration of the comparison target substance
  • concentration concentration of the comparison target substance
  • ratio of the measurement target substance to the comparison target substance concentration of the comparison target substance
  • respective concentration coefficient obtained for each concentration of the comparison target substance.
  • [X2] is the absorbance change amount [X]
  • Ratio of target substance to be compared (%) [X] / (concentration coefficient x concentration of target substance) (1) Therefore, it is directly measured by obtaining the concentration of the comparison target substance, using the regression equation of the concentration coefficient obtained by the present invention and the formula (1), and measuring the change in absorbance of the measurement target substance. The ratio of the target substance to the comparison target substance can be obtained.
  • FIG. 1A is a diagram showing an example of steps from immune reaction to absorbance measurement.
  • an antigen as a sample is added in a state where the antibody is bound to the carrier shown in FIG. 1A (a)
  • an antigen-antibody reaction occurs as shown in FIG. 1A (b).
  • the absorbance measurement is performed as shown in FIG. 1A (c).
  • HbA1c in a state where an immune aggregation reaction has occurred.
  • concentration of HbA1c can be similarly determined.
  • the figure shows an example in which two types of antibodies are carried on a carrier and reacts with one type of antigen, the antigens and antibodies may be reversed.
  • FIG. 1B is a diagram schematically showing a technique for measuring the HbA1c concentration according to the first embodiment of the present invention
  • FIG. 1C is a functional block diagram showing a configuration example of the measuring device for the HbA1c concentration.
  • an HbA1c measurement reagent based on an agglutination reaction using a colloidal gold carrying an anti-HbA1c antibody and an anti-HbA0 antibody as a reagent for determining the ratio of HbA1c to the total Hb can be used.
  • a specimen (blood) 1 containing HbA1c is mixed with an HbA1c measurement reagent 2 for causing a colloidal gold agglutination reaction with anti-HbA1c antibody and anti-HbA0 antibody.
  • the HbA1c measuring reagent 2 includes a gold colloid 3 supporting an anti-HbA1c antibody and a gold colloid 5 supporting an anti-HbA0 antibody.
  • Colloidal gold is known to be colored by surface plasmon resonance of colloidal particles, and the color tone is known to change due to changes in particle size. In agglomeration reactions using colloidal gold, this is used to generate aggregates 7. It can be observed and measured as a change in color tone of the reaction liquid (change from red to blue and finally gold), that is, a change in absorption spectrum with time.
  • the HbA1c concentration measuring apparatus A As shown in FIG. 1C, the HbA1c concentration measuring apparatus A according to the present embodiment shown as an example is configured to control the light emitting unit 11, the reaction cell 15, the light receiving unit 21, the light emitting unit 11, and the light receiving unit 21. Part 23. Light emitted from the light emitting unit 11 is irradiated to the specimen 1, and the transmitted light is received by the light receiving unit 21. Based on the relationship between light emission and light reception controlled by the control unit 23, the optical characteristics of the specimen 1 can be evaluated. In this example, the light emitting unit 11 is provided with two LEDs 11a and 11b having different emission wavelengths. In FIG. 2 and subsequent figures, the spectroscopic analysis is performed, but it is preferable to use a simple apparatus as shown in FIG. 1C as an actual apparatus.
  • the control unit 23 obtains the amount of change in absorbance of each of the dilution series of the measurement target substance having different concentrations of the comparison target substance and the dilution series of the measurement target substance generated by the reaction with the measurement reagent.
  • the first processing unit 23a for obtaining the second processing unit 23b (see FIG. 12, etc.) for obtaining a regression equation representing the relationship between the concentration coefficient for each concentration of the comparison target substance and the concentration of the comparison target substance And have.
  • the measurement apparatus should just be what can perform an absorbance measurement (spectral analysis apparatus), and a light source is not limited to LED or two specific wavelengths.
  • FIG. 2 is a view showing an example of the result of measuring the absorption spectrum of the colloidal gold agglutination reaction carrying the antibody with a spectrophotometer.
  • the horizontal axis represents wavelength and the vertical axis represents absorbance, and the analysis results (measurement results) for each elapsed time are shown.
  • the wavelength around 525 nm is not limited to this wavelength as long as it falls within a wavelength range in which the absorbance decreases with the lapse of time of the colloidal gold agglutination reaction.
  • the wavelength around 630 nm is not limited to this wavelength as long as it is within the wavelength range in which the absorbance rises with the lapse of time of the colloidal gold aggregation reaction.
  • the amount of HbA1c can be determined based on this change in absorbance (at least one of decrease and increase).
  • the change amount (absolute value) of the absorbance with time is very small, for example, the signal can be amplified using an amplifier or the like to accurately determine the absorbance change with time.
  • a method using two wavelengths is also conceivable.
  • FIG. 3 is a diagram obtained based on the data shown in FIG. 2.
  • the ratio of absorbance at a wavelength of 525 nm to absorbance at a wavelength of 630 nm, absorbance 525 nm / absorbance 630 nm (hereinafter referred to as “absorbance ratio (Ratio)”). It is the figure which calculated
  • required and showed the elapsed time dependence from reaction start time (time 0). As shown in FIG. 3, it can be seen that the decrease in absorbance with time (the rate of decrease in absorbance ratio (Ratio)) depends on the HbA1c concentration.
  • the measurement wavelength is not limited to this wavelength as long as the wavelength near 525 nm is within the wavelength range in which the absorbance decreases with time-dependent change in the colloidal gold reaction.
  • the wavelength around 630 nm is not limited to these wavelengths as long as it is within a wavelength range in which the absorbance increases with the lapse of time of the colloidal gold agglutination reaction.
  • the ratio of HbA1c to be measured to the total Hb is defined as the ratio of stable ⁇ -chain monoglycated Hb (Hb in which one molecule of glucose is stably bound to the ⁇ chain of Hb) in the total Hb contained in erythrocytes. . Therefore, in order to calculate the ratio of HbA1c to the total Hb, it is also necessary to calculate the total Hb concentration as the denominator.
  • FIG. 10 is a flowchart showing an example of processing according to this embodiment.
  • step S1 As a pretreatment of the specimen, whole blood is hemolyzed (a process in which red blood cells are disrupted and Hb is eluted out of the blood cells) (step S1).
  • the pretreatment liquid used for hemolysis is used as a diluent, and the absorbance at a wavelength of 405 nm is measured when measuring a calibrator with a known serially diluted Hb concentration (final concentration 0.5 to 2.5 mg / mL) (step) S2).
  • Absorbance at 405 nm which is a characteristic absorption wavelength (near) of Hb, is plotted on the horizontal axis, and the known total Hb concentration is plotted on the vertical axis.
  • FIG. 4 is a diagram showing the relationship between the total Hb concentration y and the absorbance x. From this correlation diagram, a calibration curve for measuring the total Hb concentration can be obtained.
  • step S3 A calibration curve represented by the following formula and illustrated in FIG. 4 is obtained (step S3), and in this example, a cubic regression line is obtained.
  • the total Hb concentration can be obtained from this calibration curve (step S4).
  • the total Hb concentration can be measured by simple absorbance measurement.
  • the quantitative measurement of HbA1c by antigen-antibody reaction is performed in a quantitative balance between the antigen and the antibody.
  • the concentration of HbA1c that is, the absolute amount of HbA1c in the measurement reaction system
  • the concentration of HbA1c also varies depending on the total Hb concentration, which is a variable value.
  • the total Hb concentration is 0.5, 0.75, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5 mg / mL, and the ratio of HbA1c to the total Hb is 3.7 to 15 Measurements were made using 3% specimens.
  • FIG. 5 is a graph plotting the ratio of HbA1c to the total Hb 5 minutes after the start of the reaction and the absorbance change (change amount ⁇ ) at a wavelength of 525 nm.
  • a dependence on the absolute amount of HbA1c in the measurement reaction system is recognized between the ratio of HbA1c to the total Hb and the change in absorbance. Since the change in absorbance depends on the absolute amount of HbA1c in the measurement reaction system, it can be seen that the change in absorbance varies depending on the total Hb concentration even in the ratio of the same HbA1c to the total Hb.
  • the horizontal axis in FIG. 5 is the ratio of HbA1c to the total Hb, but as can be seen from FIG. 5, the change in absorbance (change amount ⁇ ) relative to the ratio of HbA1c to the total Hb is within a predetermined HbA1c range (6 in the figure). From about% to about 12%, it can be seen that it is almost proportional to the total Hb concentration.
  • the ratio of HbA1c to the total Hb is determined (FIG. 10, step S5).
  • the ratio of HbA1c to the total Hb depending on the change in absorbance (change amount ⁇ ) is obtained based on the calibration curve depending on the total Hb concentration as shown in FIG. Can do.
  • step S5 of the first embodiment for solving the above-described problem will be described in detail.
  • FIG. 5 is a graph plotting the HbA1c concentration 5 minutes after the start of the reaction and the absorbance change (change amount ⁇ ) at a wavelength of 525 nm, as described in the first embodiment.
  • a relationship in which the change in absorbance depends on the ratio of HbA1c to total Hb is recognized. Since the change in absorbance (change amount ⁇ ) depends on the concentration of HbA1c (absolute amount of HbA1c in the measurement reaction system), even if the ratio of HbA1c is the same, the absorbance change may vary depending on the total Hb concentration. Recognize.
  • FIG. 11A is a diagram following FIG.
  • the horizontal axis in FIG. 5 is the ratio of HbA1c to the total Hb, but as can be seen in FIG. 5, the change in absorbance (change amount ⁇ ) relative to the ratio of HbA1c to the total Hb is almost proportional to the total Hb concentration.
  • the Factor is 1.00 when the total Hb concentration is 1.50 mg / mL, and increases as the total Hb concentration decreases and decreases as the total Hb concentration increases.
  • a density coefficient Factor was set (step S6).
  • FIG. 7B is a diagram showing a regression curve of the total Hb concentration y and the concentration coefficient z, and can be represented by the following regression equation. In this example, a cubic regression equation is used.
  • FIG. 8 is a diagram showing the relationship between [x 2 ] and absorbance change (change amount ⁇ ) using the concentration coefficient Factor shown in FIG. 7B. As shown in FIG. 8, it is possible to obtain the relationship between all ranges, and not dependent on the total Hb concentration [x 2] and the absorbance change (change amount delta) of [x 2].
  • [X 2 ] is the total Hb concentration ⁇ the ratio of HbA1c to the total Hb ⁇ concentration coefficient (Factor), and can be said to be the ratio of the second HbA1c to the total Hb in consideration of the total Hb concentration and the concentration coefficient. .
  • step S8 when the x axis and the y axis in FIG. 8 are interchanged, as shown in FIG. 9, the relationship between the change in absorbance (change amount ⁇ ) and [x 2 ] is made uniform without depending on the total Hb concentration. It can be obtained (step S8).
  • concentration coefficient Factor depends on the reagent, it is preferable to newly obtain the relationship of FIG. 7B when using a reagent of a different lot.
  • FIGS. 12 and 13 are flowcharts showing a processing example of S7 in FIG. 11A for obtaining the density coefficient Factor.
  • step S7-1 the absorbance is measured for a dilution series (diluted sample) of HbA1c for each different total Hb concentration.
  • step S7-2 the absorbance change (change amount ⁇ ) or the absorbance ratio (Ratio) described later in the third embodiment is obtained from the measured absorbance as the absorbance change for all dilution series.
  • step S7-3 when all the concentration factors Factor of the different total Hb concentrations are fixed to arbitrary integers, [x 2 ] and the absorbance change amount, or R 2 of the absorbance ratio (Ratio) is obtained.
  • step S7-4 the concentration factor Factor is optimized for each different total Hb concentration.
  • step S7-5 an nth order regression equation of the total Hb concentration and the concentration factor Factor is created. This figure is, for example, FIG. 7B.
  • step S7-4 the process of optimizing the concentration factor Factor for each different total Hb concentration in step S7-4 will be described below.
  • Step S21-1 The concentration coefficient Factor at each concentration other than the total Hb concentration to be optimized is fixed to an arbitrary integer, and [x] and absorbance change (change amount ⁇ ) or absorbance at the total Hb concentration to be optimized determine the concentration factor factor which R 2 is maximized ratio (ratio).
  • Step S21-2 Using the density coefficient Factor obtained at the density targeted for optimization in step S21-1, the density coefficient Factor for each remaining density excluding the density newly targeted for optimization is obtained in step S21-1.
  • the value is fixed to an arbitrary integer used, and the concentration coefficient Factor that maximizes [x] and the absorbance change (change amount ⁇ ) or the absorbance ratio (Ratio) R 2 in the total Hb concentration to be optimized is obtained.
  • Step S21-3 Using the Factors obtained at the respective densities to be optimized in Steps S21-1 and S21-2, the Factors at the remaining densities excluding the new density to be optimized are added to the Factors at Step S21-1. fixed to any integer which uses, to determine the concentration factor factor which R 2 becomes a maximum absorbance changes [x] in the total Hb concentration optimized (variation delta) or absorbance ratio (ratio).
  • Step S21-4 and subsequent steps For each remaining concentration, in the same manner, [x] and the absorbance change (change amount ⁇ ) or absorbance ratio (Ratio) at each concentration using the concentration coefficient Factor obtained in the previous step. ) R 2 is to determine the concentration factor factor that maximizes the.
  • Step S22-1 Using each concentration factor Factor obtained in the previous round as the concentration factor Factor at each concentration other than the total Hb concentration to be optimized, [x] and the change in absorbance (x) in the total Hb concentration to be optimized ( A concentration coefficient Factor that maximizes R 2 of the change amount ⁇ ) or the absorbance ratio (Ratio) is obtained.
  • Step S22-2 The density coefficient Factor obtained in step S22-1 is used for the density to be optimized, and the density coefficient Factor for each remaining density excluding the density to be newly optimized is obtained one round before.
  • each reference to a concentration factor factor was to determine the concentration coefficient factor which R 2 becomes a maximum in total Hb concentration optimized [x] and the absorbance change (change amount delta) or absorbance ratio (ratio).
  • Step S22-3 Using the density coefficient Factor obtained at the respective densities targeted in Step S22-1 and Step S22-2, the density coefficient Factor at each remaining density excluding the density to be newly optimized is added. [X] and absorbance change (change amount ⁇ ) or R 2 of absorbance ratio (Ratio) are maximized at the total Hb concentration to be optimized using the respective concentration coefficients Factor at each concentration obtained one round before. A density coefficient Factor is obtained.
  • step S23 as a final step, when the concentration coefficient Factor at each total Hb concentration becomes the same as the previous value, the factor optimization process ends.
  • the optimization process of the concentration factor Factor is performed for each different total Hb concentration, and the relationship in which the concentration factor Factor depends on the Hb concentration as shown in FIG. 7B can be obtained. Note that even methods other than the optimization methods shown in FIGS. 12 and 13 can be used as long as the processing can optimize the concentration factor Factor for each different total Hb concentration.
  • FIG. 11B is a flowchart subsequent to FIG. 11A, and is a flowchart diagram summarizing a procedure for calculating a measurement value.
  • 3) Factor) is calculated from the total Hb concentration obtained in 1) (Step S11) and the regression equation (3) representing the relationship between the total Hb concentration and the concentration coefficient (calibration curve: total Hb concentration vs Factor) (Step S13). ). 4) Substituting each value into the above equation (4), the ratio of HbA1c to the total Hb is calculated (step S14).
  • the ratio of HbA1c to the total Hb can be easily calculated from the absorbance measurement value. Can be sought.
  • the ratio of the HbA1c to the total Hb vs. the amount of change in absorbance draws an independent curve for each total Hb concentration.
  • the coefficient Factor dependent on the total Hb concentration is set, the total Hb Regardless of the concentration, the change in absorbance vs [X] converges to a single curve. Therefore, it is possible to measure the ratio of HbA1c to the total Hb without creating a comprehensive calibration curve for each total Hb concentration.
  • a calibration curve for determining the concentration of HbA1c was determined using the absorbance ratio (absorbance 525 nm / absorbance 630 nm) as a variable as an index of absorbance change.
  • FIG. 14 shows that the total Hb concentration is 0.5, 0.75, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5 mg / mL, and the ratio of HbA1c to the total Hb is 3.7 to 15.3%.
  • 5 is a graph plotting the ratio of HbA1c to the total Hb, and the ratio of absorbance at a wavelength of 525 nm and absorbance at a wavelength of 630 nm, that is, the absorbance ratio (Ratio), 5 minutes after the start of the measurement using the sample.
  • the horizontal axis in FIG. 14 is the ratio of HbA1c to the total Hb, but as can be seen from FIG. 14, the absorbance ratio (Ratio) to the ratio of HbA1c to the total Hb is almost inversely proportional to the total Hb concentration.
  • the factor becomes 1.00 when the total Hb concentration is 1.50 mg / mL, and increases as the total Hb concentration decreases, and decreases as the total Hb concentration increases.
  • the density coefficient Factor was set (FIG. 11A, step S6).
  • FIG. 16B is a diagram showing a regression curve of the total Hb concentration y and the concentration coefficient z, and can be represented by the following regression equation. In this example, a cubic regression equation is used.
  • FIG. 17 is a diagram showing the relationship between [x 2 ] and the absorbance ratio Ratio using the concentration coefficient Factor shown in FIG. 16B. As shown in FIG. 17, it is possible to determine the relationship between the full range of [x 2], is independent on the total Hb concentration [x 2] and the absorbance ratio (Ratio).
  • [X 2 ] is the total Hb concentration ⁇ the ratio of HbA1c to the total Hb ⁇ concentration coefficient (Factor), and can be said to be the ratio of the second HbA1c to the total Hb in consideration of the total Hb concentration and the concentration coefficient. .
  • the absorbance ratio (Ratio) is used as a parameter as the absorbance change amount, even when the absorbance change amount is small, a calibration curve can be created by increasing the change amount. Further, the ratio of HbA1c to the total Hb can be measured with high accuracy. 1) The total Hb concentration is measured (calibration curve: absorbance 405 nm vs total Hb concentration) (FIG. 11B, step S11). 2) The absorbance ratio (Ratio) is measured as the amount of change in absorbance due to the colloidal gold reaction of the sample containing HbA1c (FIG. 11B, step S12). 3) Factor 1 is calculated from the total Hb concentration obtained in 1) (FIG.
  • the ratio of HbA1c to the total Hb can be easily calculated from the absorbance measurement value. Can be sought.
  • the ratio of the HbA1c to the total Hb vs. the amount of change in absorbance draws an independent curve for each total Hb concentration.
  • the coefficient Factor dependent on the total Hb concentration is set, the total Hb Regardless of the concentration, the change in absorbance vs [X] converges to a single curve. Therefore, it is possible to measure the ratio of HbA1c to the total Hb without creating a comprehensive calibration curve for each total Hb concentration.
  • FIG. 19 shows the results of measurement using specimens having total Hb concentrations of 1.0, 2.0, and 2.5 mg / mL and a ratio of HbA1c to total Hb of 5.7 to 15.3%. It is the graph which plotted the ratio with respect to the total Hb of HbA1c 5 minutes after reaction start, and the light absorbency change (change amount (DELTA)) in wavelength 525nm.
  • DELTA change amount
  • the horizontal axis in FIG. 19 is the ratio of HbA1c to the total Hb, but as can be seen in FIG. You can see that
  • the factor becomes 1.00 when the total Hb concentration is 2.00 mg / mL, increases as the total Hb concentration decreases, and decreases as the total Hb concentration increases.
  • the density coefficient Factor was set (FIG. 11A, step S6).
  • FIG. 21B is a diagram showing a regression curve of the total Hb concentration y and the concentration coefficient z, and can be represented by the following regression equation. In this example, a quadratic regression equation is used.
  • FIG. 22 is a diagram showing the relationship between [x 2 ] and absorbance change (change amount ⁇ ) using the concentration coefficient Factor shown in FIG. 21B. As shown in FIG. 22, it is possible to obtain the relationship between all ranges, and does not depend on the total Hb concentration [x 2] and the absorbance change (change amount delta) of [x 2].
  • [X 2 ] is the total Hb concentration ⁇ the ratio of HbA1c to the total Hb ⁇ concentration coefficient (Factor), and can be said to be the ratio of the second HbA1c to the total Hb in consideration of the total Hb concentration and the concentration coefficient. .
  • the ratio of HbA1c to total Hb can be easily determined.
  • the total Hb concentration is measured (calibration curve: absorbance 405 nm vs total Hb concentration) (FIG. 11B, step S11).
  • the change in absorbance of the sample containing HbA1c due to the colloidal gold agglutination reaction is measured (FIG. 11B, step S12).
  • Factor 1 is calculated from the total Hb concentration obtained in 1) (FIG. 11B, step S11) and the regression equation (7) representing the relationship between the total Hb concentration and the concentration coefficient (calibration curve: total Hb concentration vs Factor). (FIG. 11B, step S13). 4) Substituting each value into the above equation (8), the ratio of HbA1c to the total Hb is calculated (FIG. 11B, step S14).
  • the ratio of HbA1c to the total Hb vs. the amount of change in absorbance draws an independent curve for each total Hb concentration.
  • the factor Factor dependent on the total Hb concentration is set, the total Hb Regardless of the concentration, the change in absorbance vs [X] converges to a single curve. Therefore, it is possible to measure the ratio of HbA1c to the total Hb without creating a comprehensive calibration curve for each total Hb concentration.
  • Processing and control can be realized by software processing by CPU (Central Processing Unit) or GPU (Graphics Processing Unit), ASIC (Application Specific Integrated Circuit) or FPGA (Field Programmable Hardware) that can be realized by ProgrammableGardware.
  • CPU Central Processing Unit
  • GPU Graphics Processing Unit
  • ASIC Application Specific Integrated Circuit
  • FPGA Field Programmable Hardware
  • Each component of the present invention can be arbitrarily selected, and an invention having a selected configuration is also included in the present invention.
  • an apparatus in which the absorbance measurement unit and the control unit are integrated may be used.
  • an individual (independent) device may be used.
  • control unit may incorporate a regression equation obtained by a program for executing a method for obtaining a ratio of a measurement target substance to a comparison target substance or a method for obtaining a ratio of the measurement target substance to the comparison target substance.
  • the program may be read from the outside of the apparatus and executed.
  • an inspection terminal (inspection apparatus) having a light emitting unit 11, a reaction cell 15, and a light receiving unit 21 that can be carried in a portable form may be formed separately from the control unit. Then, the measurement value measured by the inspection terminal may be sent to the control unit 23 provided in the management center or the like by a wired or wireless communication unit (not shown), and the inspection result may be obtained on the management center side. Alternatively, the inspection result may be returned to the inspection terminal.
  • the regression equation information changes for each production lot of the reagent built in the measurement (test) chip
  • the regression equation information obtained in advance by the method of the present invention is stored in the measurement (test) chip. You may make it memorize
  • a program for realizing the functions described in the present embodiment is recorded on a computer-readable recording medium, and the program recorded on the recording medium is read into a computer system and executed to execute processing of each unit. May be performed.
  • the “computer system” here includes an OS and hardware such as peripheral devices.
  • the present invention can be used as a method for obtaining a ratio to a comparison target substance such as HbA1c, glycoalbumin, or isozyme.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Data Mining & Analysis (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Mathematical Optimization (AREA)
  • Theoretical Computer Science (AREA)
  • Mathematical Physics (AREA)
  • Computational Mathematics (AREA)
  • Pure & Applied Mathematics (AREA)
  • Mathematical Analysis (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Probability & Statistics with Applications (AREA)
  • Operations Research (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Evolutionary Biology (AREA)
  • Algebra (AREA)
  • Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
  • Databases & Information Systems (AREA)
  • Software Systems (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

測定対象物質の測定試薬を用いた測定対象物質の比較対象物質に対する割合を求める方法であって、比較対象物質の濃度に依存しない単一の検量線（多重検量線）を用いることで、吸光度の測定値から、測定対象物質の比較対象物質に対する割合を簡単に求めることができる。

Description

測定対象物質の比較対象物質に対する割合を求める方法、プログラム、記憶媒体及び装置
　本発明は、測定物質の比較対象物質に対する割合の測定技術に関する。
　臨床検査で行われる検体検査では、患者から採取した血液、髄液、尿、便、組織や細胞等を対象とした検体中の蛋白質、酵素、電解質、金属イオン、脂質、糖質、ビタミン等の化学物質を測定することで、例えば、臓器の異常、細菌やウイルスなどによる感染の状態を把握することができることから、病気の診断、治療方針の判断及び治療効果の指標を得るための手段として用いられる。
　測定対象となる検体中の各種化学物質は、その測定値の基準値に対する多寡がすなわち対象とする臓器の異常を表すため、測定値は濃度で表し、単位として、例えば、ｍｇ／ｄＬやｍｏｌ／Ｌが用いられる。また、酵素やビタミンについては活性値を表し、単位として酵素単位或いは国際単位、例えば、ＩＵ／Ｌが利用される。
　測定対象の一つである血糖すなわちグルコースは、糖尿病患者の病態（血糖値が高い状態）を把握するために測定され、その単位には、例えば日本国内ではｍｇ／ｄＬが用いられる。血糖検査では、採血時点における正確な血糖値は把握できるが、血糖値は、常に変動しているため（空腹時の基準値は１１０ｍｇ／ｄＬ未満、食後２時間後の基準値は１４０ｍｇ／ｄＬ未満）、血糖の変動範囲（血糖の状態）を把握することができない。つまり糖尿病患者の治療として行われる血糖コントロールの効果を把握することができない。
　そこで、血糖コントロールの効果を把握するために、ある一定期間の血糖の状態を反映する蛋白質の糖化の程度を指標として用いる。指標としては、ＨｂＡ１ｃやグリコアルブミンが用いられる。
　まず、ＨｂＡ１ｃについて説明する。Ｈｂ（ヘモグロビン）は赤血球中の色素蛋白質であり、αサブユニット、βサブユニットの各２つからなるヘテロ４量体である。赤血球中のＨｂは、赤血球が体内を循環するうちに、非酵素的、すなわち血糖濃度依存的にグルコースと結合する。こうしてグルコースと結合したＨｂ、糖化ＨｂがすなわちＨｂＡ１である。ＨｂＡ１には、βサブユニットに結合する糖の種類によりいくつかの種類があるが、βサブユニットのＮ末端にグルコースが結合したものがＨｂＡ１ｃであり、採血時点から過去１～２ヶ月の血糖の状態を反映する指標として用いられる。測定値として、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合すなわち相対量、単位として％が用いられる。
　次に、グリコアルブミンについて説明する。アルブミンは、血中蛋白質の大部分を占め、血液と共に体内を循環するうちにヘモグロビンの場合と同様に、糖と結合し、糖と結合したアルブミン、糖化アルブミンがすなわちグリコアルブミンである。グリコアルブミンは、採血時点から過去２～３週間の血糖の状態を反映する指標として用いられる。測定値として、グリコアルブミンの総アルブミンに対する割合つまり相対量、単位として％が用いられる。
　ＨｂＡ１ｃやグリコアルブミンの他に、測定値として測定対象物質の比較対象物質に対する割合（相対量）を用いるものとしては、アイソザイム（例えば、乳酸脱水素酵素。その存在する組織、細胞或いは細胞小器官、すなわち由来が異なるアイソザイム）が挙げられる。
　また、測定値に測定対象物質の比較対象物質に値する割合を用いるのは、比較対象物質の総量が個人、性別、年齢、罹患している疾患等によって幅があるため、測定対象物質の濃度すなわち単位容積あたりの質量等で表記しても、病態を正確に把握することはできないことが理由である。
　ＨｂＡ１ｃを例に説明すると、ヒトの血液中の総Ｈｂ濃度は、男性では１３．１～１６．６ｇ／ｄＬの範囲であり、女性では１２．１～１４．６ｇ／ｄＬの範囲である。このように、総Ｈｂ濃度の基準値には男女差、個人差、個体内差がある。また、総Ｈｂ濃度は、貧血症状を引き起こす疾患（鉄欠乏性貧血、再生不良性貧血など）や赤血球増加症、脱水症状などの有無によっても大きく変動する。したがって、仮にＨｂＡ１ｃの濃度で表したとしても、Ｈｂは血糖濃度依存的に糖化されるため、総Ｈｂ濃度を見ない限り、すなわちＨｂＡ１ｃと総Ｈｂ濃度との関係を同時に把握することのできる表示値を用いない限り、血糖の状態を正確に把握することはできない。言い換えると、ＨｂＡ１ｃの濃度は同じでも、総Ｈｂ濃度が高いヒトでは、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合は低くなり、総Ｈｂ濃度が低いヒトではＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合は高くなるということである。
　測定値として測定対象物質の比較対象物質に対する割合を求める方法として、ＨｂＡ１ｃを例に説明すると、第一の方法としては、ＨＰＬＣを用いる方法が知られており、この方法では、測定対象物質及び比較対象物質のピークの面積から、直接、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合を求める。
　第二の方法としては、免疫法（凝集法或いは凝集阻止法）が知られており（例えば、特許文献１、２、３参照）、試料中のＨｂＡ１ｃ濃度と総Ｈｂ濃度をそれぞれ求めておいてから、最後にＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合を求める。
　具体的には、先ず、試料中のＨｂＡ１ｃとＨｂを変性させ、次に免疫反応を行い、免疫反応により生じる吸光度変化による試料中のＨｂＡ１ｃ濃度と総Ｈｂ濃度をそれぞれ求めておいて、最後にＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合を求める。免疫法としては、凝集法や凝集阻止法が知られている。
　第三の方法としては、酵素法が知られており（非特許文献１、２参照）、試料中のＨｂＡ１ｃ濃度と総Ｈｂ濃度をそれぞれ求めておいてから、最後にＨｂＡ１ｃの割合を求める。
　具体的には、先ず、試料中のＨｂＡ１ｃとＨｂを変性させ、次に、吸光度から総Ｈｂ濃度を求め、次に、ＨｂＡ１ｃをプロテアーゼ処理して生じたβサブユニットＮ末端由来の糖化ジペプチドにフルクトシルペプチドオキシダーゼ、更にペルオキシダーゼを作用させて発生させる過酸化水素と発色剤とにより生じる発色反応を利用して吸光度を測定することでＨｂＡ１ｃ濃度を求めてから、最後にＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合を求める。
特許第２５９６３２２号公報 特許第３５５０６１４号公報 特許第５４６５００８号公報
Ｃｌｉｎ　Ｃｈｅｍ．５１、Ａ２４６、２００５ 生物工学誌　第９２巻、第２号、６２－６８．２０１４
　しかしながら、上記第一の方法では、測定装置が大がかりで高価である、消耗部品のカラムが高価であるといった問題がある。また、第二、三の方法では、いずれも吸光度測定値から、先ず複雑な計算式を用いてＨｂＡ１ｃ濃度を求める必要があり、このことは、すなわち、測定時に試薬と検体の比率（容積比）を一定に保つ必要があり、特にＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合を求める場合の実際の測定では、検体の前処理時（溶血処理、希釈処理或いは変性処理時）と測定時の少なくとも二回以上、試薬と検体を混合する工程が含まれるため、試薬及び検体の容積のバラツキが生じやすく、ＨｂＡ１ｃ濃度と総Ｈｂ濃度、ひいてはＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合の信頼性は低くならざるを得ない。
　仮に、第二、第三のように免疫法や酵素法を用いる反応系で、試薬と検体の容積比の問題に影響されずに、吸光度測定値から、直接、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合を求めようとする場合、上述したように総Ｈｂの濃度は検体毎にバラツキがあるため、総Ｈｂ濃度毎に無数の検量線を用意する必要があり、実際問題として不可能である。
　本発明は、上記の事情を鑑み、測定対象物質の比較対象物質に対する割合を求める技術、特に、比較対象物質の濃度が検体によりバラツキがある場合において、吸光度測定値から、直接、測定対象物質の比較対象物質に対する割合を求める技術を提供することを目的とする。
　本発明の一観点によれば、測定対象物質の測定試薬を用いた測定対象物質の比較対象物質に対する割合を求める方法であって、比較対象物質の濃度が異なる測定対象物質の希釈系列と、前記測定試薬との反応が進行することで生じる前記測定対象物質の希釈系列それぞれの吸光度変化量を求めて得られる複数の検量線が、一つの検量線に収束するような濃度係数を比較対象物質の濃度毎に求める過程において、
　測定対象物質の比較対象物質に対する割合（％）＝［Ｘ］／（濃度係数×比較対象物質の濃度）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（１）
を得るステップと、比較対象物質の濃度毎の濃度係数と比較対象物質の濃度との関係をあらわす回帰式を求めるステップとを有する測定対象物質の比較対象物質に対する割合を求める方法が提供される。
　前記吸光度変化量を求めるステップは、測定対象物質を含む検体と前記測定試薬とによって生じる反応が進行することによって生じる特徴的な単波長における吸光度の増加或いは減少の変化量を求めるステップ、或いは、測定対象物質を含む検体と前記測定試薬とによって生じる反応が進行することによって生じる特徴的な二波長における吸光度の増加或いは減少の変化量であって吸光度が増加する或いは減少する第１の波長における第１の吸光度と吸光度が増加する或いは減少する第２の波長における第２の吸光度との差或いは比を求めるステップを有する。
　前記測定試薬が、免疫法の凝集法や凝集阻止法、或いは酵素法のいずれかを利用する測定試薬であって、前記式（１）、及び、比較対象物質の濃度毎に最適化した濃度係数と比較対象物質の濃度との回帰式と、測定試薬を用いて測定対象物質を含む検体を測定して得る吸光度変化量から、測定対象物質の比較対象物質に対する割合を求めるステップを有する。
　本発明は、コンピュータに、上記のいずれか１に記載の方法を実行させるためのプログラムであっても良い。
　また、上記プログラムを記録するコンピュータ読み取り可能な記録媒体であっても良い。
　また、本発明は、測定対象物質の測定試薬を用いた測定対象物質の比較対象物質に対する割合を求める装置であって、上記のいずれか１に記載の方法を実行させるための制御部と、吸光度測定部と、を有する装置であり、制御部と吸光度測定部とは一体、或いは別体に設けられていることが好ましい。
　また、本発明は、上記に記載のプログラムを内蔵する制御部を有する装置であっても良く、上記に記載のプログラムを読み込む制御部を有する装置であっても良い。
　また、本発明は、上記に記載の方法を実行して得られた回帰式を内蔵する制御部を有する装置であっても良い。
　本発明は、上記に記載の方法を実行して得られた回帰式を読み込む制御部を有する装置であっても良い。
　本明細書は本願の優先権の基礎となる日本国特許出願番号２０１６－０９６６８１号の開示内容を包含する。
　本発明によれば、測定対象物質の比較対象物質に対する割合をより簡単に求めることができる。
免疫反応～吸光度測定までの工程の一例を示す図である。 本発明の第１の実施の形態によるＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合の測定技術を模式的に示す図である。 ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合を測定する測定装置の一構成例を示す機能ブロック図である。 抗原抗体反応による金コロイド凝集の吸収スペクトルを分光光度計で測定した結果の一例を示す図である。横軸が波長、縦軸が吸光度であり、経過時間毎の解析結果（測定結果）が示されている。 図２のデータに基づいて得られる図であり、波長５２５ｎｍにおける吸光度と波長６３０ｎｍにおける吸光度の比率を求め、反応開始時間（時間＝０）からの経過時間依存性を示した図である。 総Ｈｂ濃度ｙと吸光度ｘとの関係を示す図である。 総Ｈｂ濃度が０．５、０．７５、１．０、１．５、２．０、２．５　ｍｇ／ｍＬで、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合が３．７～１５．３％の検体を用いて測定を行った際の反応開始５分後のＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合と波長５２５ｎｍにおける吸光度変化（変化量Δ）をプロットしたグラフである。 横軸を総Ｈｂ濃度×ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合＝[ｘ１]とした図である。 総Ｈｂ濃度が１．５ｍｇ／ｍＬの時にＦａｃｔｏｒが１．００となり、総Ｈｂ濃度が低くなると高くなり総Ｈｂ濃度が高くなると低くなるように、濃度係数Ｆａｃｔｏｒを設定した図である。 総Ｈｂ濃度毎に濃度係数（Ｆａｃｔｏｒ）を最適化した後の図７Ａの回帰曲線を示す図である。 図７Ｂに示す濃度係数を用いて、［ｘ２］と吸光度変化（変化量Δ）との関係を求めた図である。 図８に基づいて、吸光度変化と［ｘ２］との関係を、総Ｈｂ濃度に依存しないようにして一律に求めた検量線である。 本実施の形態による処理の一例を示すフローチャート図である。 図１０に続く図である。 図１１Ａに続く図であり、測定値算出の手順をまとめたフローチャート図である。 濃度係数Ｆａｃｔｏｒを求める、図１１ＡのステップＳ７の処理例を示すフローチャート図である。 濃度係数Ｆａｃｔｏｒを求める、図１２のステップＳ７－４の処理例を示すフローチャート図である。 総Ｈｂ濃度が０．５、０．７５、１．０、１．５、２．０、２．５ｍｇ／ｍＬで、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合が３．７～１５．３％の検体を用いて測定を行った際の反応開始５分後のＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合と波長５２５ｎｍにおける吸光度と波長６３０ｎｍにおける吸光度の比率、すなわち吸光度比（Ｒａｔｉｏ）をプロットしたグラフである。 横軸を総Ｈｂ濃度×ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合＝［ｘ１］とした図である。 総Ｈｂ濃度が１．５ｍｇ／ｍＬの時にＦａｃｔｏｒが１．００となり、総Ｈｂ濃度が低くなると高くなり総Ｈｂ濃度が高くなると低くなるように、濃度係数Ｆａｃｔｏｒを設定した図である。 総Ｈｂ濃度毎に濃度係数（Ｆａｃｔｏｒ）を最適化した後の図１６Ａの回帰曲線を示す図である。 図１６Ｂに示す濃度係数Ｆａｃｔｏｒを用いて、[ｘ２]と吸光度比（Ｒａｔｉｏ）との関係を求めた図である。 図１７の縦軸と横軸とを入れ替えた検量線を示す図である。 本発明の第３の実施の形態による、総Ｈｂ濃度が１．０、２．０、２．５ｍｇ／ｍＬで、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合が５．７～１５．３％の検体を用いて測定を行った際の反応開始５分後のＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合と波長５２５ｎｍにおける吸光度変化（変化量Δ）をプロットしたグラフであり、濃度の異なる測定対象物質の希釈系列を３種類とした例を示す図である。 横軸を総Ｈｂ濃度×ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合＝［ｘ１］とした図である。 Ｈｂ濃度が２．０ｍｇ／ｍＬの時にＦａｃｔｏｒが１．００となり、総Ｈｂ濃度が低くなると高くなり総Ｈｂ濃度が高くなると低くなるように、濃度係数Ｆａｃｔｏｒを設定した図である。 総Ｈｂ濃度毎に濃度係数（Ｆａｃｔｏｒ）を最適化した後の図２１Ａの回帰曲線を示す図である。 図２１Ｂに示す濃度係数を用いて、［ｘ２］と吸光度変化（変化量Δ）との関係を求めた図である。 図２２に基づいて、吸光度変化と［ｘ２］との関係を、総Ｈｂ濃度に依存しないようにして一律に求めた検量線である。
　免疫法とは、抗原抗体反応を利用する方法であり、検出原理は、凝集法、凝集阻止法のいずれでもよく、また、抗体或いは抗原を担持させる担体を用いてもよく、用いる抗体としては、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体のいずれでもよく、用いる担体としては、ラテックス、金コロイド、ゼラチン粒子など一般的に用いられる素材のものであれば人工担体素材、天然素材のいずれでもよい。凝集法における吸光度変化は、測定対象物質が存在する場合には凝集反応が生じ、吸光度が上昇するものであり、凝集阻止法では、測定対象物質が存在する場合には凝集反応が阻害されるため、吸光度の上昇が抑制されるというものである。また、吸光度の変化の速度や程度は反応系内における測定対象物質が量に応じて異なる。したがって、本発明においては、免疫法を利用した反応により生じる吸光度の増加或いは減少を吸光度変化量として利用することができる。
　酵素法とは、測定対象物を測定するために酵素と発色試薬を利用し、酵素反応の結果生じる発色に特異的な吸光度を測定することで反応を検出するものであり、使用する酵素は、例えば、ＨｂＡ１ｃやグリコアルブミンの総ヘモグロビンや総アルブミンに対する割合を求めるための測定で通常用いられている酵素（例えば、プロテイナーゼ、フルクトシルペプチドオキシダーゼ及びペルオキシダーゼ）であればよく、また、ペルオキシダーゼの基質として一般的に用いられる発色試薬（例えば、４－ＡＡ、ＤＭＡ、ＯＰＤ、ＡＤＯＳ、ＴＢＨＢＡ）であれば何でも使用できる。
　吸光度変化量とは、測定対象を測定するために利用する免疫法或いは酵素法において生じる反応に特異的な吸収波長における吸光度測定値であって、例えば、単波長の変化量（Δ値）、二波長（主波長と副波長）の差や比（主波長を分子、副波長を分母とした吸光度比、以下、吸光度比或いはＲａｔｉｏと称す。）のいずれでもよい。二波長を利用する場合の利点としては、電圧の変化による吸光度分析装置のドリフト現象による吸光度測定値への影響を回避できるといったことが挙げられる。
　比較対象物質とは、測定対象物を含む物質群であり、例えば、ＨｂＡ１ｃに対してはＨｂ、グリコアルブミンに対してはアルブミン、特定の型のアイソザイムに対しては同じ触媒反応を行う全てのアイソザイムを指す。
　また、比較対象物質の濃度の測定方法としては、比較対象物質を測定するための反応により生じる吸光度変化を利用する方法であればよく、例えば、Ｈｂの場合は、Ｈｂに特有の吸光度（例えば、４２０～４３０ｎｍ、５４０ｎｍ、５７０ｎｍ近傍の吸収波長）の測定値を利用する方法、免疫法（例えば、凝集法、凝集阻止法）による反応で生じる吸光度変化量を利用する方法、或いは、Ｈｂを、例えば、界面活性剤、アジ化ナトリウムやシアン化合物等で処理することで完全に酸化或いは還元した状態にし、酸化或いは還元状態において特有な吸光度の測定値を利用する方法が用いられている。また、アルブミンの場合は、Ｈｂと同様に、免疫法を利用する方法の他に、古典的な方法として、色素結合法（或いは、蛋白誤差法ともいう）を利用して吸光度（発色特異的吸収波長）の測定値を利用する方法が用いられている。色素結合法とは、例えば、ブロムクレゾールパープル、ブロムクレゾールグリーン、pH指示薬が、pH変化とは無関係に、蛋白質の存在によって発色する反応を利用する方法である。
　比較対象物質の濃度が異なる測定対象物質の希釈系列は、２種類では、濃度係数の回帰式は２点を結んだ直線にしかなり得ず、その精度は低く、逆にその種類が多ければ多い程、本発明により得られる濃度係数の回帰式の精度は高くなるが、その分、吸光度変化量を求める作業において労力が増えるため実際的でない。したがって、本発明を実施するためには、比較対象物質の濃度が異なる測定対象物質の希釈系列を、少なくとも３種類以上、より好ましくは５種類以上用意すると良い。
　また、比較対象物質の濃度や測定対象物質の希釈系列については、測定対象により、また、免疫法や酵素法を利用した測定系により、それぞれの測定範囲に応じて設定すればよい。
　発明者らは鋭意検討を行い、次のような手順を踏んで本発明の完成に至った。
　先ず、異なる比較対象物質の濃度において、測定対象物質の希釈系列を用意し、それぞれについて、免疫法或いは酵素法を利用する反応により生じる吸光度変化量を求めた。
　次に、ｘ軸を比較対象物質の濃度毎に測定して得られた測定対象物質の希釈系列、ｙ軸を吸光度変化量としてプロットした検量線を作成した。例えば、免疫凝集法の場合には、比較対象物質の濃度毎に右肩上がりのシグモイド曲線をとる検量線となる。しかし、そのままでは比較対象物質の濃度毎に測定対象物質の希釈系列と吸光度との関係を示す個々の検量線としてそれぞれ独立して存在するだけで、検量線同士の関係を把握することはできない。
　そこで、ｘ軸を［ｘ１］＝比較対象物質の濃度と測定対象物質の比較対象物質に対する割合との積、ｙ軸を測定対象物質の吸光度変化量との関数とすることで、比較対象物質の濃度によらない測定対象物質の絶対量と吸光度変化量との関係が明確化すること、更に、図５ではそれぞれがバラバラに存在していた複数の検量線が、一つの検量線へと収束する傾向が明らかになった。つまり、比較対象物質の濃度依存の小さい第一の検量線が得られることを見出した。
　このことは、また、比較対象物質の濃度毎の検量線それぞれにおいて係数を任意の整数、例えば１と設定するとき、それぞれの検量線が一つの検量線へと収束する傾向を示したとも言い換えることができる。
　このことから、更に、比較対象物質の濃度毎の検量線それぞれを一つの検量線へと収束させるように、比較濃度対象物質の濃度毎の検量線それぞれに対して最適化した係数（以下、濃度係数、或いは、Ｆａｃｔｏｒと称する）を求めることで、ｘ軸を［ｘ２］＝比較対象物質の濃度と測定対象物質の比較対象物質に対する割合と比較対象物質の濃度毎に求めたそれぞれの濃度係数の積、ｙ軸を吸光度変化量との関数で表したところ、比較対象物質濃度毎の複数の検量線は一本の検量線に収束した。つまり、比較対象物質の濃度への依存が第一の検量線よりも小さい第二の検量線（多重検量線）が得られることを見出した。
　更に、ｙ軸を求めた比較対象物質の濃度毎の濃度係数、ｘ軸を比較対象物質の濃度としてプロットすると、これらのプロットは回帰式で表すことができ、また、この回帰式を用いることで、実測値のないプロット間の（総ヘモグロビン濃度における）濃度係数をも求めることが可能となった。
　また、［ｘ２］は、すなわち吸光度変化量［Ｘ］であり、吸光度変化量［Ｘ］は、［Ｘ］＝（比較対象物質の濃度）×（測定対象物質の比較対象物質に対する割合）×（比較対象物質の濃度毎に求めた濃度係数)の関係式で表すことができることから、さらに、以下の式で表すことができる。
　測定対象物質の比較対象物質に対する割合（％）＝［Ｘ］／（濃度係数×比較対象物質の濃度）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（１）
　したがって、比較対象物質の濃度を得ること、本発明により求めた濃度係数の回帰式と、式（１）とを用いること、及び、測定対象物質の吸光度変化量を測定することで、直接、測定対象物質の比較対象物質に対する割合を求めることができる。
　以下に、本発明のいくつかの実施の形態を、図面を参照しながら、詳細に説明する。但し、本発明はこれらに実施の形態に記載された具体例に限定されない。
　また、総Ｈｂ濃度、ＨｂＡ１ｃ、吸光度変化（変化量Δ）或いは吸光度比（Ｒａｔｉｏ）は、具体例として説明したものであり、これらを上位概念で表現とすると、それぞれ、比較対象物質の濃度、測定対象物質、吸光度変化量である。すなわち、以下の説明（図面を含む）における用語は、本発明を限定するものではない。
（第１の実施の形態）
　図１Ａは、免疫反応～吸光度測定までの工程の一例を示す図である。図１Ａ（ａ）に示す担体に抗体が結合している状態において、試料である抗原を添加すると、図１Ａ（ｂ）に示すように、抗原抗体反応が発生する。図１Ａ（ｃ）に示すように、免疫凝集反応が生じた状態で、図１Ａ（ｄ）に示すように吸光度測定を行う。このような一般的な抗原抗体反応と吸光度測定とを利用して、同様にＨｂＡ１ｃの濃度を求めることもできる。また、図では担体に２種類の抗体を担持させて、一種類の抗原と反応する例を示したが、抗原と抗体が逆であってもよい。
　以下に、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合を求める方法について説明する。
　図１Ｂは、本発明の第１の実施の形態によるＨｂＡ１ｃ濃度の測定技術を模式的に示す図であり、図１Ｃは、ＨｂＡ１ｃ濃度の測定装置の一構成例を示す機能ブロック図である。
　本実施の一つの形態として、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合を求めるための試薬に、抗ＨｂＡ１ｃ抗体および抗ＨｂＡ０抗体を担持させた金コロイドを用いる凝集反応に基づくＨｂＡ１ｃ測定試薬が使用できる。
　図１Ｂに示すように、金コロイドを用いる凝集反応では、例えば、ＨｂＡ１ｃを含む検体（血液）１と、抗ＨｂＡ１ｃ抗体および抗ＨｂＡ０抗体による金コロイド凝集反応を生じさせるためのＨｂＡ１ｃ測定試薬２を混合して反応をさせる。ＨｂＡ１ｃ測定試薬２は、抗ＨｂＡ１ｃ抗体を担持させた金コロイド３と、抗ＨｂＡ０抗体を担持させた金コロイド５とを含む。検体１とＨｂＡ１ｃ測定試薬２とにより、検体１中のＨｂＡ１ｃとの抗原抗体反応による凝集塊７の生成を、例えば光学的手法により検出することができる。
　金コロイドは、コロイド粒子の表面プラズモン共鳴により呈色し、粒径の変化により色調が変化することが知られており、金コロイドを用いる凝集反応では、これを利用し、凝集塊７の生成を反応液の色調変化（赤色から青色、最終的に金色への変化）、すなわち吸収スペクトルの経時変化として観察、測定することができる。
　図１Ｃに示すように、例示的に示す本実施の形態によるＨｂＡ１ｃ濃度の測定装置Ａは、発光部１１と、反応セル１５と、受光部２１と、発光部１１，受光部２１を制御する制御部２３と、を有している。発光部１１からの発光が検体１に照射され、その透過光が受光部２１に受光される。制御部２３により制御される発光と受光との関係に基づいて、検体１の光学的特性を評価することができる。この例では、発光部１１には、発光波長の異なる２つのＬＥＤ１１ａ、１１ｂが設けられている。図２以下では、分光分析を行っているが、実際の装置としては、図１Ｃに示すような簡単な装置を用いることが好ましい。
　制御部２３は、比較対象物質の濃度が異なる測定対象物質の希釈系列と、前記測定試薬との反応が進行することで生じる前記測定対象物質の希釈系列それぞれの吸光度変化量を求めて得られる複数の検量線が、一つの検量線に収束するような濃度係数を比較対象物質の濃度毎に求める過程において、
　測定対象物質の比較対象物質に対する割合（％）＝［Ｘ］／（濃度係数×比較対象物質の濃度）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（１）
を得る第１処理部２３ａ（図１１Ｂ等参照）と、比較対象物質の濃度毎の濃度係数と比較対象物質の濃度との関係をあらわす回帰式を求める第２処理部２３ｂ（図１２等参照）とを有する。
　第１処理部２３ａと第２処理部２３ｂとの処理の詳細については、後述する。
　尚、測定装置は、吸光度測定（分光分析装置）ができるものであればよく、光源は、ＬＥＤや特定の二波長に限定されるものではない。
　図２は、抗体を担持させた金コロイド凝集反応の吸収スペクトルを分光光度計で測定した結果の一例を示す図である。横軸が波長、縦軸が吸光度であり、経過時間毎の解析結果（測定結果）が示されている。
　図２に示すように、検体と試薬とを用いて反応させた試料に照射した光の波長５２５ｎｍ付近の吸光度の減少および試料に照射した光の６３０ｎｍ付近の吸光度の上昇がみられた。この吸光度の変化は、金コロイド凝集反応に起因するものであり、吸光度は、凝集度合いの目安になる。
　波長５２５ｎｍ付近は、金コロイド凝集反応の経時変化において吸光度が低下する波長範囲内であれば、この波長に限定されない。また、波長６３０ｎｍ付近は、金コロイド凝集反応の経時変化において吸光度が上昇する波長範囲内であれば、この波長に限定されない。
　従って、この吸光度の変化（減少、増加の少なくともいずれか一方）に基づいて、ＨｂＡ１ｃの量を求めることができる。但し、吸光度の経時変化の変化量（絶対値）が微少である場合、例えば、アンプなどを用いて信号を増幅し、吸光度の経時変化を精度良く求めることもできる。或いは、２つの波長を利用する方法も考えられる。
　例えば、図３は、図２のデータに基づいて得られる図であり、波長５２５ｎｍにおける吸光度と波長６３０ｎｍにおける吸光度の比率、吸光度５２５ｎｍ／吸光度６３０ｎｍ（以下、「吸光度比（Ｒａｔｉｏ）」と称する。）を求め、反応開始時間（時間＝０）からの経過時間依存性を示した図である。図３に示すように、吸光度の経時的な減少（吸光度比（Ｒａｔｉｏ）の減少速度）は、ＨｂＡ１ｃ濃度に依存することがわかる。
　尚、この場合も、波長５２５ｎｍ付近は、金コロイド凝集反応の経時変化において吸光度が低下する波長範囲内であれば、測定波長はこの波長に限定されない。また、波長６３０ｎｍ付近は、金コロイド凝集反応の経時変化において吸光度が大きくなる波長範囲内であれば、これらの波長に限定されるものではない。
　図３より、吸光度比（Ｒａｔｉｏ）の経時変化が顕著に観測できるため、吸光度比（Ｒａｔｉｏ）を用いることで、測定対象であるＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合を簡単に計測することができる可能性があることが理解できる。
　測定対象であるＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合は、赤血球中に含まれる総Ｈｂに占める安定型β鎖ｍｏｎｏｇｌｙｃａｔｅｄ　Ｈｂ（Ｈｂのβ鎖にグルコースが１分子安定的に結合したＨｂ）の割合で定義される。従って、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合を算出するためには、分母となる総Ｈｂ濃度の算出も必要である。
　そこで、この点も考慮したＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合の測定技術について、以下に詳細に説明する。
（溶血希釈後の総Ｈｂ濃度測定）
　図１０は、本実施の形態による処理の一例を示すフローチャート図である。
　まず、検体の前処理として、全血を溶血（赤血球を崩壊させてＨｂを血球外に溶出させる処理）させる（ステップＳ１）。
　次いで、総Ｈｂ濃度測定用検量線を、以下のようにして作成した。
　溶血に用いた前処理液を希釈液として使用し、段階希釈したＨｂ濃度が既知（終濃度０．５～２．５ｍｇ／ｍＬ）のキャリブレーターを測定した際の波長４０５ｎｍにおける吸光度を測定する（ステップＳ２）。Ｈｂの特徴的な吸収波長（付近）である４０５ｎｍにおける吸光度を横軸、既知の総Ｈｂ濃度を縦軸にとった。
　図４は、総Ｈｂ濃度ｙと吸光度ｘとの関係を示す図であり、この相関図から、総Ｈｂ濃度測定用検量線を求めることができる。
　以下の式で表され図４に例示される検量線が求められ（ステップＳ３）、この例では、３次回帰線となっている。
　ｙ＝２０１．６７ｘ３＋４７．６５ｘ２＋１５．０５９ｘ－０．３４０９、Ｒ２＝０．９９７３　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（２）
　この検量線により、総Ｈｂ濃度を求めることができる（ステップＳ４）。
（ＨｂＡ１ｃの定量測定）
　総Ｈｂ濃度は、単純な吸光度測定により測定することが可能である。しかしながら、抗原抗体反応によるＨｂＡ１ｃ定量測定は、抗原と抗体との量的バランスの中で行われる。また、上記のように、ＨｂＡ１ｃの濃度(すなわち、測定反応系内のＨｂＡ１ｃの絶対量)は可変値である総Ｈｂ濃度によっても変動する。
　そこで、以下のように、総Ｈｂ濃度が０．５、０．７５、１．０、１．５、２．０、２．５ｍｇ／ｍＬで、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合が３．７～１５．３％の検体を用いて測定を行った。
　図５は、反応開始５分後のＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合と波長５２５ｎｍにおける吸光度変化（変化量Δ）をプロットしたグラフである。図５に示すように、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合と吸光度変化との間に測定反応系内のＨｂＡ１ｃの絶対量への依存が認められる。吸光度変化は、測定反応系内のＨｂＡ１ｃの絶対量に依存しているため、同一のＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合でも総Ｈｂ濃度によって異なる吸光度変化を示すことがわかる。
　図５における横軸はＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合であるが、図５をみればわかるように、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合に対する吸光度変化（変化量Δ）は、所定のＨｂＡ１ｃ範囲（図では、６％から１２％程度）で、総Ｈｂ濃度にほぼ比例するようになっていることがわかる。
　図５より、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合を決定する（図１０、ステップＳ５）。
　以上に説明したように、本実施の形態では、図５に示すような総Ｈｂ濃度に依存する検量線に基づいて、吸光度変化（変化量Δ）に依存するＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合を求めることができる。
　尚、このような検量線として、後述する図１４に示す検量線を用いることもできる。
（第２の実施の形態）
　以下、本発明の第２の実施の形態について詳細に説明する。
　第１の実施の形態では、図５のように、総Ｈｂ濃度毎に網羅的に検量線を設定する必要があり、ＨｂＡ１ｃの濃度決定のための処理が煩雑になる。
　以下に、上記のような課題を解決するための第１の実施の形態のステップＳ５に代えて行う処理方法について詳細に説明する。
　本実施の形態では、吸光度変化（変化量Δ）、例えば、波長５２５ｎｍ（図２参照）における吸光度の経時変化に基づく手法について説明する。
　図５は、第１の実施の形態でも説明したように、反応開始５分後のＨｂＡ１ｃ濃度と波長５２５ｎｍにおける吸光度変化（変化量Δ）をプロットしたグラフである。図５に示すように、吸光度変化がＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合に依存する関係が認められる。吸光度変化（変化量Δ）は、ＨｂＡ１ｃの濃度（測定反応系内のＨｂＡ１ｃの絶対量）に依存しているため、同一のＨｂＡ１ｃの割合であっても総Ｈｂ濃度によって異なる吸光度変化を示すことがわかる。
　図１１Ａは、図１０に続く図である。
　まず、図５における横軸はＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合であるが、図５にみられるように、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合に対する吸光度変化（変化量Δ）は、総Ｈｂ濃度にほぼ比例するようになっていることがわかる。
　ここで、図６に示すように、横軸を総Ｈｂ濃度×ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合＝［ｘ１］とすると、図５では総Ｈｂ濃度に大きく依存していた吸光度変化（変化量Δ）とＨｂＡ１ｃの割合の関係が、吸光度変化（変化量Δ）と［ｘ１］とは１つの関係として収束していく傾向を有することがわかった。［ｘ１］は、総Ｈｂ濃度×ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合であり、総Ｈｂ濃度を考慮した第１のＨｂＡ１ｃ濃度と言うことができる。
　但し、図６に示すように、吸光度変化（変化量Δ）が大きい［ｘ１］の範囲においては、総Ｈｂ濃度依存が残っており収束があまり良くないことがわかる。そこで、図６の収束が良くなるように、すなわち、吸光度変化（変化量Δ）と［ｘ１］との関係が総Ｈｂ濃度に依存せずに相関性が高くなるように、総Ｈｂ濃度に依存する補正係数（濃度係数：Ｆａｃｔｏｒ）をもたせた。
　ここでは、例示的に図７Ａに示すように、総Ｈｂ濃度が１．５０ｍｇ／ｍＬの時にＦａｃｔｏｒが１．００となり、総Ｈｂ濃度が低くなると高くなり総Ｈｂ濃度が高くなると低くなるように、濃度係数Ｆａｃｔｏｒを設定した（ステップＳ６）。
　そして、図６に関して、横軸を、［ｘ２］＝総Ｈｂ濃度×Ｆａｃｔｏｒ×ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合＝濃度係数Ｆａｃｔｏｒ×［ｘ１］とする。そして、吸光度変化（変化量Δ）と［ｘ２］との関係が１つに収束するように、総Ｈｂ濃度毎に濃度係数Ｆａｃｔｏｒを求める（ステップＳ７）。
　すると、図７Ｂに示すように、Ｈｂ濃度に関してほぼ単調減少となる濃度係数Ｆａｃｔｏｒを求めることができる。
　図７Ｂは、総Ｈｂ濃度ｙと濃度係数ｚとの回帰曲線を示す図であり、以下の回帰式で表すことができる。この例では、３次回帰式となっている。
　ｙ＝－０．１８９２ｚ３＋１．０１４ｚ２－２．０７２９ｚ＋２．４９２、Ｒ２＝０．９７９２　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（３）
　この回帰式により、総Ｈｂ濃度から、その総Ｈｂ濃度における濃度係数を求めることができる。
　図８は、図７Ｂに示す濃度係数Ｆａｃｔｏｒを用いて、［ｘ２］と吸光度変化（変化量Δ）との関係を求めた図である。図８に示すように、［ｘ２］の全ての範囲において、総Ｈｂ濃度に依存しない［ｘ２］と吸光度変化（変化量Δ）との関係を求めることができる。
　［ｘ２］は、総Ｈｂ濃度×ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合×濃度係数（Ｆａｃｔｏｒ）であり、総Ｈｂ濃度とその濃度係数とを考慮した第２のＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合と言うことができる。
　また、図８のｘ軸とｙ軸とを入れ替えると、図９に示すように、吸光度変化（変化量Δ）と［ｘ２］との関係を、総Ｈｂ濃度に依存しないようにして一律に求めることができる（ステップＳ８）。
　すなわち、図９に示す検量線を用いることで、下記の式（４）より、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合を従来よりも簡単な処理によって求めることができる。［ｘ２］は、すなわち吸光度変化量［Ｘ］である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000001
　以上のように、本実施の形態によれば、検量線を１つとして、ＨｂＡ１ｃの濃度を簡単に求めることができる。
　尚、濃度係数Ｆａｃｔｏｒは、試薬に依存するため、異なるロットの試薬を用いる場合には、図７Ｂの関係を新たに求めることが好ましい。
　図１２、図１３は、濃度係数Ｆａｃｔｏｒを求める、上記図１１ＡのＳ７の処理例を示すフローチャート図である。
　まず、ステップＳ７－１において、異なる総Ｈｂ濃度毎にＨｂＡ１ｃの希釈系列（希釈した試料）について吸光度を測定する。
　ステップＳ７－２において、全ての希釈系列について、測定した吸光度から吸光度変化として吸光度変化（変化量Δ）、或いは、第３の実施の形態において後述する吸光度比（Ｒａｔｉｏ）を求める。
　ステップＳ７－３において、異なる総Ｈｂ濃度それぞれの濃度係数Ｆａｃｔｏｒをすべて任意の整数に固定するとき、［ｘ２］と吸光度変化量、或いは、吸光度比（Ｒａｔｉｏ）のＲ２を求める。
　ステップＳ７－４において、異なる総Ｈｂ濃度毎に濃度係数Ｆａｃｔｏｒを最適化する。
　最適化の手順は、図１３を参照して例示する。
　ステップＳ７－５において、総Ｈｂ濃度と濃度係数Ｆａｃｔｏｒのｎ次回帰式を作成する。この図が、例えば図７Ｂである。
　図１３に示すように、ステップＳ７－４における、異なる総Ｈｂ濃度毎に濃度係数Ｆａｃｔｏｒを最適化する処理について以下に説明する。
　図１３において、一巡目、すなわち、ｎ＝１においては、以下の通りである。
　ステップＳ２１－１：　最適化対象の総Ｈｂ濃度以外のそれぞれの濃度における濃度係数Ｆａｃｔｏｒを任意の整数に固定し、最適化対象の総Ｈｂ濃度において［ｘ］と吸光度変化（変化量Δ）或いは吸光度比（Ｒａｔｉｏ）のＲ２が最大になる濃度係数Ｆａｃｔｏｒを求める。
　ステップＳ２１－２：　ステップＳ２１－１で最適化対象とした濃度において求めた濃度係数Ｆａｃｔｏｒを用い、新たに最適化対象とする濃度を除いた残りの各濃度における濃度係数ＦａｃｔｏｒをステップＳ２１－１で用いた任意の整数に固定し、最適化対象の総Ｈｂ濃度において、［ｘ］と吸光度変化（変化量Δ）或いは吸光度比（Ｒａｔｉｏ）のＲ２が最大になる濃度係数Ｆａｃｔｏｒを求める。
　ステップＳ２１－３：　ステップＳ２１－１、２で最適化対象としたそれぞれの濃度において求めたＦａｃｔｏｒを用い、新たに最適化対象とする濃度を除いた残りの各濃度におけるＦａｃｔｏｒにステップＳ２１－１で用いた任意の整数に固定して、最適化対象の総Ｈｂ濃度において［ｘ］と吸光度変化（変化量Δ）或いは吸光度比（Ｒａｔｉｏ）のＲ２が最大になる濃度係数Ｆａｃｔｏｒを求める。
　ステップＳ２１－４以降：　残りの各濃度についても、順次、同様に、前のステップで求めた濃度係数Ｆａｃｔｏｒを用いて、各濃度において［ｘ］と吸光度変化(変化量Δ)或いは吸光度比（Ｒａｔｉｏ）のＲ２が最大になる濃度係数Ｆａｃｔｏｒを求める。
　二巡目以降、すなわち、ｎ≧２においては、以下の処理を行う。
　ステップＳ２２－１：　最適化対象の総Ｈｂ濃度以外のそれぞれの濃度における濃度係数Ｆａｃｔｏｒに一巡前で求めたそれぞれの濃度係数Ｆａｃｔｏｒを用い、最適化対象の総Ｈｂ濃度において［ｘ］と吸光度変化（変化量Δ）或いは吸光度比（Ｒａｔｉｏ）のＲ２が最大になる濃度係数Ｆａｃｔｏｒを求める。
　ステップＳ２２－２：　ステップＳ２２－１で最適化対象とした濃度においては求めた濃度係数Ｆａｃｔｏｒを用い、新たに最適化対象とする濃度を除いた残りの各濃度における濃度係数Ｆａｃｔｏｒに一巡前で求めたそれぞれの濃度係数Ｆａｃｔｏｒを用い、最適化対象の総Ｈｂ濃度において［ｘ］と吸光度変化（変化量Δ）或いは吸光度比（Ｒａｔｉｏ）のＲ２が最大になる濃度係数Ｆａｃｔｏｒを求める。
　ステップＳ２２－３：　ステップＳ２２－１、ステップＳ２２－２で対象としたそれぞれの濃度において求めた濃度係数Ｆａｃｔｏｒを用い、新たに最適化対象とする濃度を除いた残りの各濃度における濃度係数Ｆａｃｔｏｒに一巡前で求めた各濃度におけるそれぞれの濃度係数Ｆａｃｔｏｒを用いて、最適化対象の総Ｈｂ濃度において、［ｘ］と吸光度変化（変化量Δ）或いは吸光度比（Ｒａｔｉｏ）のＲ２が最大になる濃度係数Ｆａｃｔｏｒを求める。
　ステップＳ２２－４以降：　残りの各濃度についても、順次、同様に、前のステップで求めた濃度係数Ｆａｃｔｏｒを用いて、各濃度において［ｘ］と吸光度変化（変化量Δ）或いは吸光度比（Ｒａｔｉｏ）のＲ２が最大になる濃度係数Ｆａｃｔｏｒを求める。
　ステップＳ２２－１からステップＳ２２－４の処理を繰り返す。
　ステップＳ２３において、最終ステップとして、各総Ｈｂ濃度における濃度係数Ｆａｃｔｏｒが一巡前の値と同じになるとき、Ｆａｃｔｏｒの最適化処理は終了する。
　以上のように、異なる総Ｈｂ濃度毎に濃度係数Ｆａｃｔｏｒの最適化処理を行っていき、図７Ｂに示すような濃度係数ＦａｃｔｏｒがＨｂ濃度に依存する関係を求めることができる。尚、図１２、１３に示した最適化手法以外の手法であっても、異なる総Ｈｂ濃度毎に濃度係数Ｆａｃｔｏｒを最適化できる処理であれば利用できる。
　以下に測定値算出の手順をまとめる。
　図１１Ｂは、図１１Ａに続く図であり、測定値算出の手順をまとめたフローチャート図である。
１）総Ｈｂ濃度を測定する（検量線：吸光度４０５ｎｍ　ｖｓ　総Ｈｂ濃度）（ステップＳ１１）。
２）ＨｂＡ１ｃを含む試料の金コロイド凝集反応による吸光度変化量（本実施の形態では吸光度変化（変化量Δ））を測定する（ステップＳ１２）。
３）１）（ステップＳ１１）で得られた総Ｈｂ濃度と、総Ｈｂ濃度と濃度係数の関係を表す回帰式（３）からＦａｃｔｏｒを算出する（検量線：総Ｈｂ濃度　ｖｓ　Ｆａｃｔｏｒ）（ステップＳ１３）。
４）上記の式（４）に各値を代入し、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合を算出する（ステップＳ１４）。
　以上のようにして、本実施の形態によれば、総Ｈｂ濃度に依存しない単一の検量線（多重検量線）を用いることで、吸光度の測定値から、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合を簡単に求めることができる。
　以上のように、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合　ｖｓ　吸光度変化量は総Ｈｂ濃度毎に独立した曲線を描くが、本実施の形態によれば、総Ｈｂ濃度依存的な係数Ｆａｃｔｏｒを設定すると、総Ｈｂ濃度によらず吸光度変化量ｖｓ［Ｘ］は１本の曲線に収束する。従って、総Ｈｂ濃度毎に何本も網羅的に検量線を作成しなくてもＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合の測定が可能となる。
（第３の実施の形態）
　以下、本発明の第３の実施の形態について詳細に説明する。
　本実施の形態では、吸光度変化の指標として吸光度比（吸光度５２５ｎｍ／吸光度６３０ｎｍ）を変数として、ＨｂＡ１ｃの濃度を求めるための検量線を求めた。
　図１４は、総Ｈｂ濃度が０．５、０．７５、１．０、１．５、２．０、２．５ｍｇ／ｍＬで、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合が３．７～１５．３％の検体を用いて測定を行った際の反応開始５分後のＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合と波長５２５ｎｍにおける吸光度と波長６３０ｎｍにおける吸光度の比率、すなわち吸光度比（Ｒａｔｉｏ）をプロットしたグラフである。
　まず、図１４における横軸はＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合であるが、図１４をみればわかるように、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合に対する吸光度比（Ｒａｔｉｏ）は、総Ｈｂ濃度にほぼ反比例するようになっていることがわかる。
　そこで、図１５に示すように、横軸を総Ｈｂ濃度×ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合＝［ｘ１］とすると、図５では総Ｈｂ濃度に大きく依存していた吸光度比（Ｒａｔｉｏ）とＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合と関係が、吸光度比（Ｒａｔｉｏ）と［ｘ１］とは１つの関係として収束していく傾向を有することがわかった。［ｘ１］は、総Ｈｂ濃度×ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合であり、総Ｈｂ濃度を考慮した第１のＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合と言うことができる。
　但し、図１５に示すように、吸光度比（Ｒａｔｉｏ）の変化が大きい[ｘ１]の範囲においては、総Ｈｂ濃度依存が残っており収束があまり良くないことがわかる。そこで、図１５の収束が良くなるように、すなわち、吸光度比（Ｒａｔｉｏ）と[ｘ１]との関係が総Ｈｂ濃度に依存せずに相関性が高くなるように、第２の実施の形態と同様に総Ｈｂ濃度に依存する補正係数（濃度係数：Ｆａｃｔｏｒ）をもたせた。
　ここでは、例示的に図１６Ａに示すように、総Ｈｂ濃度が１．５０ｍｇ／ｍＬの時にＦａｃｔｏｒが１．００となり、総Ｈｂ濃度が低くなると高くなり、総Ｈｂ濃度が高くなると低くなるように、濃度係数Ｆａｃｔｏｒを設定した（図１１Ａ、ステップＳ６）。
　そして、図１５に関して、横軸を、［ｘ２］＝総Ｈｂ濃度×Ｆａｃｔｏｒ×ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合＝濃度係数Ｆａｃｔｏｒ×［ｘ１］とする。そして、吸光度比（Ｒａｔｉｏ）と［ｘ２］との関係が１つに収束するように、濃度係数Ｆａｃｔｏｒを求める（図１１Ａ、ステップＳ７）。
　すると、図１６Ｂに示すように、Ｈｂ濃度に関して単調減少となる濃度係数Ｆａｃｔｏｒを求めることができる。
　図１６Ｂは、総Ｈｂ濃度ｙと濃度係数ｚとの回帰曲線を示す図であり、以下の回帰式で表すことができる。この例では、３次回帰式となっている。
　ｙ＝－０．０８７１ｚ３＋０．５８１９ｚ２－１．５０８ｚ＋２．２１８５、Ｒ２＝０．９９８４　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（５）
　この回帰式により、総Ｈｂ濃度から、その総Ｈｂ濃度における濃度係数を求めることができる。
　図１７は、図１６Ｂに示す濃度係数Ｆａｃｔｏｒを用いて、［ｘ２］と吸光度比Ｒａｔｉｏとの関係を求めた図である。図１７に示すように、［ｘ２］の全ての範囲において、総Ｈｂ濃度に依存しない［ｘ２］と吸光度比（Ｒａｔｉｏ）との関係を求めることができる。
　［ｘ２］は、総Ｈｂ濃度×ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合×濃度係数（Ｆａｃｔｏｒ）であり、総Ｈｂ濃度とその濃度係数とを考慮した第２のＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合と言うことができる。
　また、図１７のｘ軸とｙ軸とを入れ替えると、図１８に示すように、吸光度比（Ｒａｔｉｏ）と［ｘ２］との関係を、総Ｈｂ濃度に依存しないようにして一律に求めることができる（図１１Ａ、ステップＳ８）。
　すなわち、図１８に示す検量線を用いることで、下記の式（６）より、ＨｂＡ１ｃの濃度を従来よりも簡単な処理によって求めることができる。[ｘ２]は、すなわち吸光度変化量[Ｘ]である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000002
　本実施の形態においては、吸光度変化量として吸光度比（Ｒａｔｉｏ）をパラメータとして用いたため、吸光度の変化量が小さい場合でも、変化量を大きくして検量線を作成することができる。また、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合を精度良く測定することができる。
１）総Ｈｂ濃度を測定する（検量線：吸光度４０５ｎｍ　ｖｓ　総Ｈｂ濃度）（図１１Ｂ、ステップＳ１１）。
２）ＨｂＡ１ｃを含む試料の金コロイド凝集反応による吸光度変化量として吸光度比（Ｒａｔｉｏ）を測定する（図１１Ｂ、ステップＳ１２）。
３）１）（図１１Ｂ、ステップＳ１１）で得られた総Ｈｂ濃度と、総Ｈｂ濃度と濃度係数の関係を表す回帰式（５）からＦａｃｔｏｒを算出する（検量線：総Ｈｂ濃度　ｖｓ　Ｆａｃｔｏｒ）（図１１Ｂ、ステップＳ１３）。
４）上記の式（６）に各値を代入し、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合を算出する（図１１Ｂ、ステップＳ１４）。
　以上のようにして、本実施の形態によれば、総Ｈｂ濃度に依存しない単一の検量線（多重検量線）を用いることで、吸光度の測定値から、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合を簡単に求めることができる。
　以上のように、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合　ｖｓ　吸光度変化量は総Ｈｂ濃度毎に独立した曲線を描くが、本実施の形態によれば、総Ｈｂ濃度依存的な係数Ｆａｃｔｏｒを設定すると、総Ｈｂ濃度によらず吸光度変化量ｖｓ［Ｘ］は１本の曲線に収束する。従って、総Ｈｂ濃度毎に何本も網羅的に検量線を作成しなくてもＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合の測定が可能となる。
（第４の実施の形態）
　第２の実施の形態と同様に、本発明の第４の実施の形態では、吸光度の変化（変化量Δ）、例えば、波長５２５ｎｍ（図２参照）における吸光度の経時変化に基づく手法について説明する。但し、濃度の異なる測定対象物質の希釈系列を３種類とした例を示している。
　図１９は、総Ｈｂ濃度が１．０、２．０、２．５　ｍｇ／ｍＬで、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合が５．７～１５．３％の検体を用いて測定を行った際の反応開始５分後のＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合と波長５２５ｎｍにおける吸光度変化（変化量Δ）をプロットしたグラフである。
　まず、図１９における横軸はＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合であるが、図１９にみられるように、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合に対する吸光度変化（変化量Δ）は、総Ｈｂ濃度にほぼ比例するようになっていることがわかる。
　そこで、図２０に示すように、横軸を総Ｈｂ濃度×ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合＝［ｘ１］とすると、図１９では総Ｈｂ濃度に大きく依存していた吸光度変化（変化量Δ）とＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合との関係が、吸光度変化（変化量Δ）と［ｘ１］とは１つの関係として収束していく傾向を有することがわかった。［ｘ１］は、総Ｈｂ濃度×ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合であり、総Ｈｂ濃度を考慮した第１のＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合と言うことができる。
　但し、図２０に示すように、吸光度変化（変化量Δ）が大きい［ｘ１］の範囲においては、総Ｈｂ濃度依存が残っており収束があまり良くないことがわかる。そこで、図２０の収束が良くなるように、すなわち、吸光度変化（変化量Δ）と［ｘ１］との関係が総Ｈｂ濃度に依存せずに相関性が高くなるように、第２、３の実施の形態と同様に総Ｈｂ濃度に依存する補正係数（濃度係数：Ｆａｃｔｏｒ）をもたせた。
　ここでは、例示的に図２１Ａに示すように、総Ｈｂ濃度が２．００ｍｇ／ｍＬの時にＦａｃｔｏｒが１．００となり、総Ｈｂ濃度が低くなると高くなり、総Ｈｂ濃度が高くなると低くなるように、濃度係数Ｆａｃｔｏｒを設定した（図１１Ａ、ステップＳ６）。
　そして、図２０に関して、横軸を、［ｘ２］＝総Ｈｂ濃度×Ｆａｃｔｏｒ×ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合＝濃度係数Ｆａｃｔｏｒ×［ｘ１］とする。そして、吸光度変化（変化量Δ）と[ｘ２]との関係が１つに収束するように、濃度係数Ｆａｃｔｏｒを求める（図１１Ａ、ステップＳ７）。
　すると、図２１Ｂに示すように、Ｈｂ濃度に関して単調減少となる濃度係数Ｆａｃｔｏｒを求めることができる。
　図２１Ｂは、総Ｈｂ濃度ｙと濃度係数ｚとの回帰曲線を示す図であり、以下の回帰式で表すことができる。この例では、２次回帰式となっている。
　ｙ＝０．１８ｚ２－０．９３ｚ＋２．１８、Ｒ２＝１　　　　　（７）
　この回帰式により、総Ｈｂ濃度から、その総Ｈｂ濃度における濃度係数を求めることができる。
　図２２は、図２１Ｂに示す濃度係数Ｆａｃｔｏｒを用いて、［ｘ２］と吸光度変化（変化量Δ）との関係を求めた図である。図２２に示すように、［ｘ２］の全ての範囲において、総Ｈｂ濃度に依存しない［ｘ２］と吸光度変化（変化量Δ）との関係を求めることができる。
　［ｘ２］は、総Ｈｂ濃度×ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合×濃度係数（Ｆａｃｔｏｒ）であり、総Ｈｂ濃度とその濃度係数とを考慮した第２のＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合と言うことができる。
　また、図２２のｘ軸とｙ軸とを入れ替えると、図２３に示すように、吸光度変化（変化量Δ）と［ｘ２］との関係を、総Ｈｂ濃度に依存しないようにして一律に求めることができる（図１１Ａ、ステップＳ８）。
　すなわち、図２２に示す検量線を用いることで、下記の式（８）より、ＨｂＡ１ｃの濃度を従来よりも簡単な処理によって求めることができる。［ｘ２］は、すなわち吸光度変化（変化量Δ）［Ｘ］である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000003
　以上のようにして、本実施の形態によれば、濃度の異なる測定対象物質の希釈系列を３種類として求めた総Ｈｂ濃度に依存しない単一の検量線（多重検量線）を用いることで、吸光度の測定値から、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合を簡単に求めることができる。
１）総Ｈｂ濃度を測定する（検量線：吸光度４０５ｎｍ　ｖｓ　総Ｈｂ濃度）（図１１Ｂ、ステップＳ１１）。
２）ＨｂＡ１ｃを含む試料の金コロイド凝集反応による吸光度変化量（本実施の形態では吸光度変化（変化量Δ））を測定する（図１１Ｂ、ステップＳ１２）。
３）１）（図１１Ｂ、ステップＳ１１）で得られた総Ｈｂ濃度と、総Ｈｂ濃度と濃度係数の関係を表す回帰式（７）からＦａｃｔｏｒを算出する（検量線：総Ｈｂ濃度　ｖｓ　Ｆａｃｔｏｒ）（図１１Ｂ、ステップＳ１３）。
４）上記の式（８）に各値を代入し、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合を算出する（図１１Ｂ、ステップＳ１４）。
　以上のように、ＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合　ｖｓ　吸光度変化量は総Ｈｂ濃度毎に独立した曲線を描くが、本実施の形態によれば、総Ｈｂ濃度依存的な係数Ｆａｃｔｏｒを設定すると、総Ｈｂ濃度によらず吸光度変化量ｖｓ［Ｘ］は１本の曲線に収束する。従って、総Ｈｂ濃度毎に何本も網羅的に検量線を作成しなくてもＨｂＡ１ｃの総Ｈｂに対する割合の測定が可能となる。
　処理および制御は、ＣＰＵ（Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　Ｕｎｉｔ）やＧＰＵ（Ｇｒａｐｈｉｃｓ　Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　Ｕｎｉｔ）によるソフトウェア処理、ＡＳＩＣ（Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　Ｓｐｅｃｉｆｉｃ　Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ　Ｃｉｒｃｕｉｔ）やＦＰＧＡ（Ｆｉｅｌｄ　Ｐｒｏｇｒａｍｍａｂｌｅ　Ｇａｔｅ　Ａｒｒａｙ）によるハードウェア処理によって実現することができる。
　また、上記の実施の形態において、添付図面に図示されている構成等については、これらに限定されるものではなく、本発明の効果を発揮する範囲内で適宜変更することが可能である。その他、本発明の目的の範囲を逸脱しない限りにおいて適宜変更して実施することが可能である。
　また、本発明の各構成要素は、任意に取捨選択することができ、取捨選択した構成を具備する発明も本発明に含まれるものである。
　例えば、吸光度測定部と制御部とが一体の装置であっても良い。或いは、個別の（独立した）装置でも良い。
　また、制御部は、測定対象物質の比較対象物質に対する割合を求める方法を実行するプログラム或いは測定対象物質の比較対象物質に対する割合を求める方法により得られた回帰式を、内蔵するようにしても良く、装置の外部から読み込んで実行するようにしても良い。
　例えば、図１Ｃのうち、発光部１１と、反応セル１５と、受光部２１と、を有する携帯形態可能な検査用の端末（検査装置）を制御部とは別体に形成しても良い。そして、検査用の端末により測定された測定値を、図示しない有線又は無線通信部により、管理センタなどに設けられる制御部２３に送り、検査結果を管理センタ側で求めるようにしても良い。或いは、検査結果を検査用端末に返信してもらうようにしても良い。
　このようにすれば、検査用の端末（検査装置）のみを用いて、検体の検査を行うことも可能である。
　さらに、回帰式の情報は、測定（試験）用チップに内蔵される試薬の製造ロット毎に変化することから、予め本発明の方法により得られた回帰式の情報を測定（試験）用チップに記憶させるようにしても良い。
　また、本実施の形態で説明した機能を実現するためのプログラムをコンピュータ読み取り可能な記録媒体に記録して、この記録媒体に記録されたプログラムをコンピュータシステムに読み込ませ、実行することにより各部の処理を行ってもよい。尚、ここでいう「コンピュータシステム」とは、ＯＳや周辺機器等のハードウェアを含むものとする。
　本発明は、ＨｂＡ１ｃ、グリコアルブミン或いはアイソザイム等の比較対象物質に対する割合を求める方法として利用可能である。
１…検体、２…ＨｂＡ１ｃ測定試薬、３…抗ＨｂＡ１ｃ抗体感作金コロイド、５…抗ＨｂＡ０抗体感作金コロイド、７…凝集塊、１１…発光部、１５…反応セル、２１…受光部、２３…制御部。
　本明細書で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願はそのまま引用により本明細書に組み入れられるものとする。

Claims (10)

  1. 　測定対象物質の測定試薬を用いた測定対象物質の比較対象物質に対する割合を求める方法であって、
    　比較対象物質の濃度が異なる測定対象物質の希釈系列と、前記測定試薬との反応が進行することで生じる前記測定対象物質の希釈系列それぞれの吸光度変化量を求めて得られる複数の検量線が、一つの検量線に収束するような濃度係数を比較対象物質の濃度毎に求める過程において、
    　測定対象物質の比較対象物質に対する割合（％）＝［Ｘ］／（濃度係数×比較対象物質の濃度）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（１）
    を得るステップと、
    　比較対象物質の濃度毎の濃度係数と比較対象物質の濃度との関係をあらわす回帰式を求めるステップとを有する測定対象物質の比較対象物質に対する割合を求める方法。
  2. 　前記吸光度変化量を求めるステップは、
    　測定対象物質を含む検体と前記測定試薬とによって生じる反応が進行することによって生じる特徴的な単波長における吸光度の増加或いは減少の変化量を求めるステップ、或いは、
    　測定対象物質を含む検体と前記測定試薬とによって生じる反応が進行することによって生じる特徴的な二波長における吸光度の増加或いは減少の変化量であって吸光度が増加する或いは減少する第１の波長における第１の吸光度と吸光度が増加する或いは減少する第２の波長における第２の吸光度との差或いは比を求めるステップを有する請求項１に記載の方法。
  3. 　前記測定試薬が、免疫法の凝集法や凝集阻止法、或いは酵素法のいずれかを利用する測定試薬であって、
    　前記式（１）、及び、比較対象物質の濃度毎に最適化した濃度係数と比較対象物質の濃度との回帰式と、測定試薬を用いて測定対象物質を含む検体を測定して得る吸光度変化量から、測定対象物質の比較対象物質に対する割合を求めるステップを有する請求項１又は２のいずれか１項に記載の方法。
  4. 　コンピュータに、
    　請求項１から３までのいずれか１項に記載の方法を実行させるためのプログラム。
  5. 　請求項４に記載のプログラムを記録するコンピュータ読み取り可能な記録媒体。
  6. 　測定対象物質の測定試薬を用いた測定対象物質の比較対象物質に対する割合を求める装置であって、
    　請求項１から３までのいずれか１項に記載の方法を実行させるための制御部と、
    　吸光度測定部と、を有する装置であり、
    　制御部と吸光度測定部とは一体、或いは別体に設けられている装置。
  7. 　請求項４に記載のプログラムを内蔵する制御部を有する装置。
  8. 　請求項４に記載のプログラムを読み込む制御部を有する装置。
  9. 　請求項１から３までのいずれか１項に記載の方法を実行して得られた回帰式を内蔵する制御部を有する装置。
  10. 　請求項１から３までのいずれか１項に記載の方法を実行して得られた回帰式を読み込む制御部を有する装置。
PCT/JP2017/017734 2016-05-13 2017-05-10 測定対象物質の比較対象物質に対する割合を求める方法、プログラム、記憶媒体及び装置 Ceased WO2017195838A1 (ja)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020187032054A KR20190006955A (ko) 2016-05-13 2017-05-10 측정 대상 물질의 비교 대상 물질에 대한 비율을 구하는 방법, 프로그램, 기억 매체 및 장치
JP2017563631A JP6561144B2 (ja) 2016-05-13 2017-05-10 測定対象物質の比較対象物質に対する割合を求める方法、プログラム、記憶媒体及び装置
US16/301,291 US20200319167A1 (en) 2016-05-13 2017-05-10 Method for determining ratio of measurement object substance to comparison object substance, program, storage medium, and device
CN201780028173.6A CN109073646A (zh) 2016-05-13 2017-05-10 求取待测物在对比物中所占比例的方法、程序、存储介质及装置
EP17796197.6A EP3457136A4 (en) 2016-05-13 2017-05-10 METHOD FOR CALCULATING THE RELATIONSHIP OF MEASURING OBJECT SUBSTANCE TO COMPARATIVE OBJECT SUBSTANCE, PROGRAM, STORAGE MEDIUM AND DEVICE

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2016096681 2016-05-13
JP2016-096681 2016-05-13

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2017195838A1 true WO2017195838A1 (ja) 2017-11-16

Family

ID=60267086

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2017/017734 Ceased WO2017195838A1 (ja) 2016-05-13 2017-05-10 測定対象物質の比較対象物質に対する割合を求める方法、プログラム、記憶媒体及び装置

Country Status (6)

Country Link
US (1) US20200319167A1 (ja)
EP (1) EP3457136A4 (ja)
JP (1) JP6561144B2 (ja)
KR (1) KR20190006955A (ja)
CN (1) CN109073646A (ja)
WO (1) WO2017195838A1 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2023531565A (ja) * 2020-06-15 2023-07-24 ノイオーム ペプチド プライベート リミテッド 分析物検出用ラテラルフローアッセイ装置および分析物検出方法

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111562337A (zh) * 2019-02-13 2020-08-21 中国石油天然气股份有限公司 一种识别聚合物产品的方法以及系统

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH01237453A (ja) * 1988-03-18 1989-09-21 Hitachi Ltd 試料分析方法及びこれを用いた自動分析装置
JP2001204495A (ja) * 2000-01-28 2001-07-31 Asahi Kasei Corp 糖化タンパク質割合測定方法
WO2002006519A1 (en) * 2000-07-14 2002-01-24 Arkray, Inc. Method of selectively determining glycated hemoglobin
JP2005261383A (ja) * 2004-03-22 2005-09-29 Asahi Kasei Pharma Kk キャリブレーション方法
JP2007003410A (ja) * 2005-06-24 2007-01-11 Sekisui Chem Co Ltd ヘモグロビンＡ１ｃの測定方法及びヘモグロビンＡ１ｃ測定用キット
JP2009531700A (ja) * 2006-03-31 2009-09-03 クオシェント ダイアグノスティックス リミテッド 蛍光分析
WO2011126067A1 (ja) * 2010-04-09 2011-10-13 東洋紡績株式会社 糖化ヘモグロビンの測定方法
WO2012173185A1 (ja) * 2011-06-17 2012-12-20 協和メデックス株式会社 糖化ヘモグロビンの測定方法、測定試薬、及び、測定キット
WO2016071887A1 (en) * 2014-11-07 2016-05-12 Alifax S.R.L. Method to measure glycated hemoglobin

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5465008A (en) 1977-11-02 1979-05-25 Hitachi Ltd Television receiver with magnetic video recorder- reproducer
JPS55614A (en) 1978-06-15 1980-01-07 Nippon Columbia Co Ltd Frequency characteristic adjustment circuit
JP2596322B2 (ja) 1992-06-10 1997-04-02 富士レビオ株式会社 総ヘモグロビンに対する糖化ヘモグロビンの割合の測定方法
US6043043A (en) * 1993-04-02 2000-03-28 Bayer Corporation Method for the determination of hemoglobin adducts
CN101299027B (zh) * 2001-12-27 2011-08-10 爱科来株式会社 浓度测定方法
CN101915849B (zh) * 2010-06-30 2013-06-05 深圳市国赛生物技术有限公司 一种方便加样的用于测定糖化血红蛋白百分比的检测试剂
JP5900044B2 (ja) * 2012-03-12 2016-04-06 オムロンヘルスケア株式会社 糖尿病治療支援装置、糖尿病治療支援方法、糖尿病治療支援プログラム
CN102967568B (zh) * 2012-11-23 2015-05-20 四川中自尾气净化有限公司 一种分光光度双波长检测方法
EP3457141B1 (en) * 2013-03-14 2021-09-29 Ascensia Diabetes Care Holdings AG Progressive approximation of sample analyte concentration
JP6305508B2 (ja) * 2013-03-14 2018-04-04 バイエル・ヘルスケア・エルエルシーＢａｙｅｒ ＨｅａｌｔｈＣａｒｅ ＬＬＣ 分析物濃度決定の正規化された較正
JP6253560B2 (ja) * 2014-10-01 2017-12-27 株式会社サインポスト 糖尿病治療薬の有効性を判定する装置、プログラムおよび記録媒体

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH01237453A (ja) * 1988-03-18 1989-09-21 Hitachi Ltd 試料分析方法及びこれを用いた自動分析装置
JP2001204495A (ja) * 2000-01-28 2001-07-31 Asahi Kasei Corp 糖化タンパク質割合測定方法
WO2002006519A1 (en) * 2000-07-14 2002-01-24 Arkray, Inc. Method of selectively determining glycated hemoglobin
JP2005261383A (ja) * 2004-03-22 2005-09-29 Asahi Kasei Pharma Kk キャリブレーション方法
JP2007003410A (ja) * 2005-06-24 2007-01-11 Sekisui Chem Co Ltd ヘモグロビンＡ１ｃの測定方法及びヘモグロビンＡ１ｃ測定用キット
JP2009531700A (ja) * 2006-03-31 2009-09-03 クオシェント ダイアグノスティックス リミテッド 蛍光分析
WO2011126067A1 (ja) * 2010-04-09 2011-10-13 東洋紡績株式会社 糖化ヘモグロビンの測定方法
WO2012173185A1 (ja) * 2011-06-17 2012-12-20 協和メデックス株式会社 糖化ヘモグロビンの測定方法、測定試薬、及び、測定キット
WO2016071887A1 (en) * 2014-11-07 2016-05-12 Alifax S.R.L. Method to measure glycated hemoglobin

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See also references of EP3457136A4 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2023531565A (ja) * 2020-06-15 2023-07-24 ノイオーム ペプチド プライベート リミテッド 分析物検出用ラテラルフローアッセイ装置および分析物検出方法

Also Published As

Publication number Publication date
KR20190006955A (ko) 2019-01-21
US20200319167A1 (en) 2020-10-08
CN109073646A (zh) 2018-12-21
JP6561144B2 (ja) 2019-08-14
EP3457136A1 (en) 2019-03-20
JPWO2017195838A1 (ja) 2018-05-31
EP3457136A4 (en) 2020-02-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5829766B2 (ja) 酵素法を利用したヘモグロビンＡ１ｃ定量分析のための溶血試薬組成物
CN111057150B (zh) 一种乳胶微球及其应用以及糖化血红蛋白检测试剂盒
CN103954776B (zh) Ngal光激发化学发光检测试剂盒、其制备及使用方法
CN101918839A (zh) sFlt-1:血管生成因子络合物的测定
CN101819208B (zh) 一种纳米微球免疫比浊法检测脑钠肽试剂盒
AU2009243090B2 (en) Hemoglobin based bilirubin reference material
JP6561144B2 (ja) 測定対象物質の比較対象物質に対する割合を求める方法、プログラム、記憶媒体及び装置
JP2007514954A (ja) 安定化した基準溶液
US20210208152A1 (en) Reagent composition for measuring glycated albumin and method for measuring glycated albumin using same
Van Lente et al. Evaluation of a nephelometric assay for haptoglobin and its clinical usefulness.
CN109563535B (zh) HbA1c的测定法
CN112014572A (zh) 一种用于检测kl-6的乳胶颗粒制备方法及其应用
JP5395005B2 (ja) 糖化タンパク質の測定方法
US8620590B2 (en) Dose surface method for determination of analyte ratios
US20210389307A1 (en) Methods for detecting hook effect(s) associated with anaylte(s) of interest during or resulting from the conductance of diagnostic assay(s)
JPWO2020059563A1 (ja) 擬似便、およびこれを用いた便潜血検査の精度管理方法
Nechaeva et al. Rapid Automatic Determination of Four Cardiomarkers in the Blood Plasma of Patients with Cardiopathologies
CN113552372A (zh) 一种用于saa检测的磁微粒化学发光免疫试剂盒及其制备方法
US20160313425A1 (en) Micro magnetic resonance relaxometry
EP3923806A1 (en) Calibrators and controls for the determination of percent glycated hemoglobin in a patient's liquid test sample
Tunakhun et al. Development of gold nanoparticle-based lateral-flow strips for NGAL protein detection in urine samples
CN105378483A (zh) 用于直接对全血样品测量分析物的血浆浓度的方法
CN116930105A (zh) 样本分析仪和样本分析方法
Van Lente et al. Evaluationof a NephelometricAssayfor Haptoglobinand ItsClinical Usefulness
CN118932013A (zh) 一种氨基脲敏感性胺氧化酶特异性检测体系及试剂盒和检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2017563631

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 20187032054

Country of ref document: KR

Kind code of ref document: A

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 17796197

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2017796197

Country of ref document: EP

Effective date: 20181213