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WO2017088080A1 - Método para la obtención de saponinas a partir de plantas - Google Patents

Método para la obtención de saponinas a partir de plantas Download PDF

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WO2017088080A1
WO2017088080A1 PCT/CL2015/000062 CL2015000062W WO2017088080A1 WO 2017088080 A1 WO2017088080 A1 WO 2017088080A1 CL 2015000062 W CL2015000062 W CL 2015000062W WO 2017088080 A1 WO2017088080 A1 WO 2017088080A1
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WO
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extract
solution
saponins
plant
biomass
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PCT/CL2015/000062
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French (fr)
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Leandro PADILLA IGLESIAS
Andres VALENCIA MICHAUD
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NATURAL RESPONSE SA
Original Assignee
NATURAL RESPONSE SA
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Priority to MX2018006435A priority patent/MX378734B/es
Priority to PCT/US2016/060023 priority patent/WO2017091333A1/en
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    • A61K2236/53—Liquid-solid separation, e.g. centrifugation, sedimentation or crystallization

Definitions

  • the present invention relates to the technical field of obtaining compounds from plants, in particular it provides a method for obtaining and purifying plant saponins, by removing impurities by precipitation with salts and filtration.
  • Saponins are compounds present in a wide variety of plants, present in grains and leaves, etc., whose basic chemical structure is composed of a spheroidal or triterpenoid portion, attached to one or more chains of sugars.
  • the great variety of chemical structures of saponins allows them to have diverse physicochemical and biological characteristics, and therefore multiple industrial applications, such as in the areas of food, cosmetics, mining, agriculture and pharmaceuticals.
  • patent application CL 200202573 discloses a process for the production of high purity saponins based on the removal of impurities by adding an adsorbent in the plant extract, followed by filtration and discarding of said adsorbent bound to impurities.
  • Another example of processes for purification of saponins is disclosed in US Patent 6,355,249, which indicates that after the extraction of saponins from quinoa, it is purified by techniques such as ultrafiltration, high performance liquid chromatography or chromatography. Reverse phase
  • the present invention relates to a method for obtaining saponins from plants comprising the steps of: providing a plant extract containing saponins, mixing said extract with a salt that is selected from the group of alkaline earth metal salts for form a solution with ion-polysaccharide complexes, adjust the pH of the above mixture between 6 and 7, add sodium phosphates and sodium hydroxide to form a mixture from which a precipitate of ion-polysaccharide complexes is obtained, filter the precipitates to obtain a solution, and clarify the solution to generate a purified saponin extract.
  • obtaining the plant extract containing saponins comprises the steps of: providing a plant biomass, drying and milling said biomass, and adding a suitable solvent to said biomass to obtain the extract.
  • Said suitable solvent is preferably water at a temperature between 50 and 80 degrees Celsius.
  • biomass is obtained from plants that are selected from the group of families of Quillajaceae, Asparagaceae, Araliaceae, Fabaceae, and Sapindaceae.
  • the biomass is obtained from the species Quillaja saponaria Molina.
  • the mixture from which the precipitate of ion-polysaccharide complexes is obtained is subjected to a heat treatment, where it is heated at a temperature between 70 and 90 degrees Celsius.
  • the salt used to obtain the ion-polysaccharide complexes is calcium chloride salt.
  • the sodium phosphates used to precipitate said complexes are preferably disodium phosphates.
  • filtering of the precipitates of ion-polysaccharide complexes and other impurities is preferably carried out by a diatomaceous earth filter.
  • the step to clarify the solution further comprises the steps of: bringing the solution to acidic pH, preferably adding hydrochloric acid, adding polymeric adsorbents and a clay material to said solution to trap residual impurities, and removing the polymeric adsorbents and the clay material containing said impurities by filtration, preferably by a diatomaceous earth filter.
  • said polymeric adsorbents are selected from the group of bovine gelatin, fish gelatin, plant-based proteins, albumin, milk proteins, polyvinylpyrrolidone (PVP), and polyvinylpolypyrrolidone (PVPP).
  • the clay material used in the present invention is preferably bentonite.
  • the purified saponin extract obtained by the method of the present invention is concentrated by filtration techniques selected from the group consisting of nanofiltration, ultrafiltration and diafiltration, or combinations thereof.
  • Another object of the present invention relates to a purified saponin extract that is obtained by the process described above.
  • Figure 1 is a schematic representation of a preferred embodiment of the saponin purification process from the Quillaja saponaria Molina bark.
  • Figure 2 is a schematic representation of another preferred embodiment of the saponin purification process from the Quillaja saponaria Molina biomass.
  • Figure 3 is a schematic representation of another preferred embodiment of the saponin purification process from a product containing saponins which is obtained by conventional processes.
  • the present invention relates to a process for obtaining and purifying saponins from plant extracts, which comprises the extraction of saponins and subsequent removal of impurities by the addition of calcium salts that form complexes with the polysaccharides present in the solution, and addition of sodium phosphates to precipitate said complexes, which are removed along with the rest of impurities with suitable adsorbents and filters.
  • the present invention is based on the addition of a salt that is selected from the group of alkaline earth metal salts to a plant extract containing saponins, which forms ion-polysaccharide complexes with those free molecules, but does not form complexes with the sugar chains of saponins. This allows that by adding sodium phosphates and sodium hydroxide to the mixture, only ion-polysaccharide complexes can precipitate, while saponins are kept in suspension.
  • the present invention allows the removal of impurities from plant extracts to obtain purified saponins quickly and reproducibly.
  • a product containing more than 70% saponins (based on dry solids) can be obtained in a time between 8 to 12 days, much less than the conventional methods described in The state of the art.
  • saccharin should be understood as any glycoside characterized in that it comprises an insoluble portion that can be steroidal or triterpenoid, and a soluble portion of one or more saccharide chains. Said saccharides can be any sugar, such as glucose, arabinose, galactose, rhamnose, xylose, fucose, glucuronic acid, and galacturonic acid, without being restricted to those mentioned herein.
  • plant extract means any substance or derivative product that is obtained by extraction from a part of the plant, by any method known in the state of the art, such as solvent extraction, adsorption , maceration, distillation, among others. Any product based on plant extracts that were previously subjected to a first extractive process will also be considered as "plant extract” and can be found for sale to the general public, both in liquid and powder form.
  • biomass should be understood as any biological matter from the Plantae kingdom.
  • biomass can be the bark, trunk, leaves, stems, roots, seeds, fruits or a combination of any of them.
  • impurity should be understood as any other substance in a solution other than the main chemical compound or of interest.
  • the main compound are saponins, and therefore any other substance present as organic and inorganic ions, phenolic compounds (such as tannins, quercitin, leucocyanidin, kaemferol, among others), organic acids (such as caffeic acid, gallic acid, cumaric acid, among others), saccharides and polysaccharides, lipids and nitrogen compounds, among others, are considered impurities.
  • alkaline earth metals salts should be understood as those salts that are formed with elements belonging to the HA group of the periodic table, which includes beryllium (Be), magnesium (Mg), calcium (Ca), strontium (Sr) , barium (Ba) and radio (Ra). All these elements have as property the ability to form positive ions with 2+ charge.
  • the term "clarify” in the context of the present invention should be understood as the removal of soluble solids that react with other non-soluble components by complexing, electrical charges, entrainment or chemical reaction.
  • the clarification can be carried out by different techniques known in the state of the art, such as filtration by diatoms, by flocculation, or through the use of coagulants, among others.
  • an object of the present invention relates to a method or process for obtaining saponins from plants comprising at least the steps of: providing a plant extract containing saponins, mixing said extract with a salt which is selected from the group of alkaline earth metal salts to form a solution containing among other ion-polysaccharide complex compounds, adjust the pH of the above mixture in a range between 6 and 7, add sodium phosphates to form a mixture from of the which obtains a precipitate of ion-polysaccharide complexes, filtering the precipitates to obtain a solution, and clarifying the solution to generate a purified saponin extract.
  • obtaining the plant extract containing saponins is carried out by a conventional solvent extraction method, however any method for saponin extraction known in the state of the art can be used.
  • the plant extract used for the present invention comprises the steps of: providing a plant biomass, drying and milling said biomass, and adding a suitable solvent to said biomass to obtain the extract.
  • Said suitable solvent preferably refers to water at a temperature between 50 and 80 degrees Celsius, but it should be understood to determine the scope of this invention, that the solvent to be used can be any, both organic and inorganic.
  • the biomass used in the present invention is obtained from any plant that contains saponins.
  • Saponins are found in more than 100 plant families among which the most relevant are mentioned as Quillajaceae, Asparagaceae, Dioscoreaceae, Liliaceae, Caryophyllaceae, Araliaceae, Leguminosae, Sapindaceae, Amaranthaceae, Aceraceae, Rhamnaceae, Hippocastanaceae, Cucurbitaceae, Araliaceae, Dennstaediaceae, Dennstaediaceae, Dennstaediaceae, Dennstaediaceae among others.
  • the amount of saponins that the plant contains and the type of chemical structure present depends on the species, origin of the plant, agronomic and environmental factors. For example, steroidal saponins are found mainly in monocotyledonous plants, while triterpenoid saponins are found mainly in dicotyledonous plants.
  • the main vegetable sources of saponins used for medicinal and industrial applications are alfalfa (Medicago sativa), horse chestnut (Aesculushippocastanum), licorice (Glycyrrhiza glabra), yucca (Yuccaschidigera), gingseng (Panaxgenus) and quillay [Quillaja saponaria).
  • the biomass is obtained from plants selected from the group of Quillajaceae, Asparagaceae, Araliaceae, Fabaceae, and Sapindaceae, however it is not restricted to those mentioned.
  • the plant used corresponds to the species Quillaja saponaria Molina. This plant contains mainly triterpenoid saponins, however, it contains about 60 different types of saponins differing among themselves by the composition of their saccharide chains.
  • the salt added to the plant extract to form the solution with ion-polysaccharide complexes is a salt that is formed with any of the group of alkaline earth metals, preferably calcium chloride (CaCte) or magnesium chloride (MgCl2), mainly due to its low cost due to its abundance, and its safety for use in the food and pharmaceutical industry, although any inorganic calcium or magnesium salt, soluble in water or calcium or magnesium grade salts can be used food
  • calcium hydroxide (Ca (OH) 2) is preferably added, but can be added any other hydroxide, such as sodium hydroxide (NaOH).
  • the sodium phosphates added are preferably disodium phosphates (a2HP04), but it can be any of the sodium phosphates, such as monosodium phosphate (NaH2 04), trisodium phosphate (Na 3 P0 4 ) or bisphosphate sodium (NaH (P0 4 ) 2).
  • the mixture from which a precipitate of ion-polysaccharide complexes is obtained is subjected to a heat treatment, which consists in heating said mixture at a temperature between 70 and 90 degrees Celsius in order to increase efficiency and ensure the precipitation of all complexes. This process is preferably carried out for 1 hour.
  • the filtration of the ion-polysaccharide complex precipitates is carried out by a diatomaceous earth filter, such as Hyflo, Perlite or 535. Any diatomaceous earth filter known in the state of the art can also be used.
  • clarification of the solution to generate a purified saponin extract includes the steps of: bringing the solution to acidic pH, preferably in a range of pH 4-5, preferably adding hydrochloric acid (HCI) to the solution; then add polymeric adsorbents and a clay material to said acidified solution to trap residual impurities; and remove polymeric adsorbents and clay material containing said impurities by filtration.
  • HCI hydrochloric acid
  • the polymeric adsorbents that can be used are bovine gelatin, fish gelatin, plant-based proteins, albumin, milk proteins, polyvinylpyrrolidone (PVP), and polyvinylpolypyrrolidone (PVPP), without being restricted to this group of adsorbents, which can also be used any other suitable polymeric adsorbent.
  • the clay material preferably used in the present invention is bentonite, which may encompass sodium or calcium bentonite.
  • the filtering of the polymeric adsorbents and the clay material with the impurities is carried out by a diatomaceous earth filter, such as Celite Hyflo®, Perlite Mineral or Celite 535®, depending on the desired level, being able Land with different filtration rates (Darcys) and particle size should be used.
  • a diatomaceous earth filter such as Celite Hyflo®, Perlite Mineral or Celite 535®, depending on the desired level, being able Land with different filtration rates (Darcys) and particle size should be used.
  • Any diatomaceous earth filter known in the state of the art can also be used.
  • liquid solid separation devices include, but are not limited to: Candle filters, recessive plate filters, frames and plates, cartridge filters, deep filters, decanters, disc filters, cellulose plate filters, industrial centrifuges, rotary drum filter etc. After this filtering, a purified saponin extract is obtained.
  • said extract can be concentrated by any filtration technique known in the state of the art.
  • concentration of the purified saponin extract is carried out by nanofiltration, ultrafiltration and diafiltration, or any combination of these techniques.
  • a pasteurization process of the extract of Purified saponins by any standard pasteurization method known in the state of the art, such as VAT, HTST or UHT pasteurization.
  • a product which comprises the purified, concentrated and pasteurized saponin extract in a liquid format.
  • said liquid product can be transformed into a powdered product, by any technique already known in the state of the art.
  • the process by which a powder product is generated is through spray drying or spraying.
  • the steps or steps of the present invention should not be considered sequential and therefore can be performed in a different order from those described.
  • the plant extract can be clarified prior to the step of adding calcium salts, finally obtaining the same purified saponin extract compared to the process performed in the order already mentioned.
  • Another object of the present invention is a product comprising a purified saponin extract that is obtained from the aforementioned process.
  • Said product contains more than 70% saponins based on dry solids, and a percentage less than 5% polysaccharides and polyphenols based on dry solids as impurities. This allows the purified saponin extract obtained through this method in aqueous solution to be more stable (in terms of precipitate formation) compared to the addition of ethanol, a test commonly used in the food industry to qualitatively measure the presence of polysaccharides in the products.
  • Example 1 Obtaining saponins from Quillaja saponaria bark
  • FIG. 1 A schematic representation of a preferred embodiment of the complete process of obtaining saponins from the biomass of Quillaja saponaria Molina 1 to liquid purified saponins product 30 and purified powder saponins products 32 is shown in Figure 1.
  • a plant 2 extract 210 kg of Quillaja saponaria Molina 1 bark was previously dried and ground, with 1000 L of soft water 3, which were loaded into different tanks as follows: a) It was added 70 kg of crust 1 in each of the extraction tanks 4, 5, 6, then 250 L of soft water 3 was added in tank 4, the contents of said tank 4 were heated to 60 degrees Celsius for 3 hours, and an extract was obtained, which was pumped into the tank 5, through the transfer line 7.
  • the plant 2 extract obtained in tank 10 was transferred through transfer line 11 to a stirring tank 12. Said extract 2 was cooled to 15 degrees Celsius and 2.8 kg of CaC 13 was added and 0.46 kg of Ca (OH) 2 1 to neutralize the pH and stirred for 30 minutes. To the mixture obtained, 60 L of a solution containing 3.2 kg of Na2HP0 4 15 and 0.5 kg of NaOH 16 was added and stirred for 30 minutes. The mixture obtained was heated at 80 degrees Celsius for 1.5 hours to ensure precipitation of the calcium-polysaccharide complexes, and to remove them the mixture was filtered with diatomaceous earth 17. The solution 18 obtained was transferred to a tank of Stirring 19.
  • Said solution 18 was cooled to 15 degrees Celsius and HCI 20 was added to adjust the pH between a range of 4.3 and 4.5.
  • 20 kg of PVPP 21 and 53L of an aqueous suspension of bentonite 22 (75 g / L) was added and stirred.
  • the resulting mixture was filtered with diatomaceous earth 23 and a clarified extract 24 or purified saponin extract containing between 35 to 65 g of solutes extracted per liter was obtained.
  • Liquid precursor 28 was pasteurized by heating it at 86 degrees Celsius for 30 to 120 minutes in a heating tank 29, and a product of purified liquid saponins 30 was obtained.
  • a portion of product 30 was subjected to a spray drying process in a Two nozzle kit 31 (air inlet temperature, 200 degrees Celsius, air outlet temperature, 105-110 degrees Celsius) and 8-10 occurred kg of powder saponins product 32, with a purity in the range of 83-91% w / w over dry solids.
  • FIG 2 a schematic representation of another preferred embodiment of the purification process of saponins from the Quillaja saponaria Molina 1 biomass is shown, in which, prior to the addition of calcium salts, the extract clarification process was performed of plant 2. That is, the plant 2 extract obtained in tank 10 was transferred to a stirring tank 19. Said extract 2 was cooled to 15 degrees Celsius and HCI 20 was added to adjust the pH between a range of 4.3 and 4.5. PVPP 21 and an aqueous suspension of bentonite 22 (75 g / L) were added and stirred. The resulting mixture was filtered with diatomaceous earth 23 and a clarified extract 24 was obtained.
  • Said clarified extract 24 was cooled to 15 degrees Celsius and CaC 13 and Ca (OH) 2l4 were added to neutralize the pH and stirred for 30 minutes
  • a solution of 2 HP0 4 15 and NaOH 16 was added and stirred for a further 30 minutes.
  • the mixture obtained was heated to 80 degrees Celsius to ensure the precipitation of the calcium-polysaccharide complexes, and to eliminate them the mixture was filtered with diatomaceous earth 17. The inversion of these stages did not affect the final result, since an extract was obtained of saponins with a purity in a range between 83-91% w / w over dry solids, similar to the product obtained by following the steps described in Figure 1.
  • Example 2 Obtaining saponins from Quillaja saponaria biomass
  • Table 1 shows the volume, pH and composition of the plant 2 extract that was obtained from the Quillaja saponaria Molina biomass. Table 1. Characterization of plant extract 2
  • the plant 2 extract obtained in tank 10 was transferred to a stirring tank 12 through transfer line 11. Said extract 2 was cooled to 15 degrees Celsius and 7.4 kg of CaCI 2 13 was added. Then of the complete dissolution of this calcium salt, 1.8 kg of Ca (OH) 2 14 powder was added to increase the pH to 7.0. After homogenization of this mixture, 154 L of solution containing 8.2 kg of Na 2 HP04 15 and 1.3 kg of NaOH 16 was added and stirred for 30 minutes. This mixture was heated at 80 degrees Celsius for 1.5 hours and filtered through diatomaceous earth 17 to produce a solution 18, which is transferred to a stirring tank 19. That solution 18 was cooled to 15 degrees Celsius and HCI 20 was added to adjust the pH between a range of 4.3 and 4.5.
  • Liquid precursor 28 was pasteurized by heating it to 86 degrees Celsius for 30 to 120 minutes in a heating tank 29, and a liquid purified saponin product 30 was obtained.
  • a part of the product 30 was subjected to a spray drying process in a two nozzle equipment 31 (temperature of air inlet, 200 degrees Celsius, air outlet temperature, 105-110 degrees Celsius) and 33-38 kg of purified powder saponins product 32 was produced, with a purity in a range between 86-94% w / w based on dry solids.
  • Table 2 shows a detail of the characteristics of the product that was obtained.
  • Example 3 Obtaining saponins from a powder product derived from Quillaja saponaria

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Abstract

La presente invención se refiere a un proceso para la obtención y purificación de saponinas a partir de extractos de plantas, que comprende la extracción de saponinas y posterior eliminación de impurezas por la adición de una sal que se selecciona del grupo de las sales de metales alcalinotérreos que forman complejos con los polisacáridos presentes en la solución, y adición de fosfatos de sodio para precipitar dichos complejos, los que se remueven junto al resto de impurezas con adsorbentes y filtros adecuados.

Description

MÉTODO PARA LA OBTENCIÓN DE SAPONINAS A PARTIR DE PLANTAS
Campo Técnico
La presente invención se relaciona con el campo técnico de la obtención de compuestos a partir de plantas, en particular proporciona un método para la obtención y purificación de saponinas de plantas, mediante la eliminación de impurezas por precipitación con sales y filtración.
Antecedentes
Las saponinas son compuestos presentes en una amplia variedad de plantas, presentes en granos y hojas, etc., cuya estructura química básica se compone de una porción esferoidal o triterpenoide, unida a una o más cadenas de azúcares. La gran variedad de estructuras químicas de las saponinas permite que tengan características fisicoquímicas y biológicas diversas, y por tanto múltiples aplicaciones industriales, como por ejemplo en áreas de la alimentación, cosmética, minería, agricultura y farmacéutica.
Para la producción de productos que contienen saponinas, se requiere de la extracción y purificación de este compuesto a partir de material vegetal, para lo cual se deben eliminar impurezas indeseadas tales como iones orgánicos e inorgánicos, compuestos fenólicos, proteínas, carbohidratos y polisacáridos, entre otros. El contenido de impurezas indeseadas en el extracto influye directamente en su aplicación industrial. Por ejemplo, el uso de saponinas en aplicaciones inmunológicas requiere una saponina altamente purificada, es decir, que no contenga impurezas que puedan afectar negativamente su uso farmacéutico.
En el estado de la técnica, existen diversos métodos descritos para la purificación de saponinas, entre los que se destacan la purificación por solventes, por adsorción, ultrafiltración, o cromatografía (Güclü-Üstündag Ó, azza G. Crit. Rev. Food. Sci. Nutr. 2007. 47: 231 -58). Por ejemplo, la solicitud de patente US 2014/0030318 enseña un método para la purificación de saponinas en el cual a un extracto de planta se adiciona un primer compuesto solubilizante, preferentemente acetonitrilo, y luego se reemplaza una porción de dicho compuesto con un solvente de intercambio, proceso que puede realizarse mediante diafiltración, ultrafiltración seguido de dilución, o diálisis. Por otra parte, la solicitud de patente CL 200202573 divulga un proceso para la producción de saponinas de alta pureza basado en la eliminación de impurezas al agregar un adsorbente en el extracto de planta, seguido por la filtración y descarte de dicho adsorbente unido a las impurezas. Otro ejemplo de procesos para la purificación de saponinas se divulga en la patente US 6,355,249, en la cual se indica que posterior a la extracción de las saponinas provenientes de quínoa, se purifica mediante técnicas tales como la ultrafiltración, cromatografía líquida de alto rendimiento o cromatografía de fase reversa.
Sin embargo, estos métodos de purificación no son eficientes pues a nivel industrial significan un alto costo de producción, o comprenden tiempos excesivamente largos para la obtención de dichas saponinas purificadas. Por ejemplo, el tiempo de producción de un lote de productos basados en 90% de saponinas (en base a sólidos sólidos secos) puede tomar alrededor de 2 meses mediante estos métodos convencionales. Adicionalmente, estos procesos no son capaces de eliminar en su totalidad las impurezas, particularmente los polisacáridos presentes en los extractos de plantas, debido a que su gran tamaño impide su paso a través de las membranas de ultrafiltración. Estos residuos de polisacáridos en los extractos líquidos de saponinas purificadas, generalmente forman precipitados indeseados durante el periodo de almacenamiento o al momento de ser utilizado por el usuario final, y por tanto son considerados atributos negativos en el producto comercializable de saponinas purificadas.
En consecuencia, se requiere de nuevos procesos para la obtención de saponinas altamente purificadas, que eliminen adecuadamente los polisacáridos, y que sean eficientes tanto en tiempo como en costos de producción.
Sumario de la invención
La presente invención se refiere a un método para la obtención de saponinas a partir de plantas que comprende las etapas de: proporcionar un extracto de planta que contiene saponinas, mezclar dicho extracto con una sal que se selecciona del grupo de las sales de metales alcalinotérreos para formar una solución con complejos ión-polisacáridos, ajustar el pH de la mezcla anterior entre 6 y 7, agregar fosfatos de sodio e hidróxido de sodio para formar una mezcla a partir de la cual se obtiene un precipitado de complejos ión-polisacáridos, filtrar los precipitados para obtener una solución, y clarificar la solución para generar un extracto de saponinas purificado.
En una modalidad preferida de la invención, ia obtención del extracto de planta que contiene saponinas comprende las etapas de: proporcionar una biomasa de la planta, secar y moler dicha biomasa, y agregar un solvente adecuado a dicha biomasa para obtener el extracto. Dicho solvente adecuado es preferentemente agua a una temperatura entre 50 y 80 grados Celsius.
En una modalidad preferida de la invención, la biomasa se obtiene de plantas que se seleccionan del grupo de las familias de Quillajaceae, Asparagaceae, Araliaceae, Fabaceae, y Sapindaceae. Preferentemente, la biomasa se obtiene de la especie Quillaja saponaria Molina. En otra modalidad preferida, la mezcla a partir de la cual se obtiene el precipitado de complejos ión-polisacáridos se somete a un tratamiento térmico, donde se calienta a una temperatura entre 70 y 90 grados Celsius. Preferentemente, la sal utilizada para obtener los complejos ión-polisacáridos es sal de cloruro de calcio. Por otra parte, los fosfatos de sodio utilizados para precipitar dichos complejos son preferentemente fosfatos disódicos.
En otra modalidad preferida, el filtrado de los precipitados de complejos ión- polisacáridos y otras impurezas se realiza preferentemente mediante un filtro de tierras diatomeas.
En una modalidad preferida de la invención, la etapa para clarificar la solución comprende adicionalmente las etapas de: llevar la solución a pH ácido, preferentemente adicionando ácido clorhídrico, agregar adsorbentes poliméricos y un material arcilloso a dicha solución para atrapar impurezas residuales, y remover los adsorbentes poliméricos y el material arcilloso que contiene dichas impurezas mediante filtración, preferentemente mediante un filtro de tierras diatomeas. En una modalidad preferida, dichos adsorbentes poliméricos se seleccionan del grupo de gelatina bovina, gelatina de pescado, proteínas de origen vegetal, albúmina, proteínas de leche, polivinilpirrolidona (PVP), y polivinilpolipirrolidona (PVPP). Adicionalmente, el material arcilloso utilizado en la presente invención es preferentemente bentonita.
En otra modalidad preferida, el extracto de saponinas purificado obtenido mediante el método de la presente invención se concentra mediante técnicas de filtración seleccionadas del grupo que consiste de nanofiltración, ultrafiltracion y diafiltración, o combinaciones de las mismas. Otro objeto de la presente invención se refiere a un extracto de saponinas purificado que se obtiene mediante el proceso descrito anteriormente.
Breve descripción de las figuras
La Figura 1 es una representación esquemática de una modalidad preferida del proceso de purificación de saponinas a partir de la corteza de Quillaja saponaria Molina.
La Figura 2 es una representación esquemática de otra modalidad preferida del proceso de purificación de saponinas a partir de la biomasa de Quillaja saponaria Molina.
La Figura 3 es una representación esquemática de otra modalidad preferida del proceso de purificación de saponinas a partir de un producto que contiene saponinas el cual se obtiene mediante procesos convencionales.
Descripción detallada de la invención
Como se ha descrito, la presente invención se refiere a un proceso para la obtención y purificación de saponinas a partir de extractos de plantas, que comprende la extracción de saponinas y posterior eliminación de impurezas por la adición de sales de calcio que forman complejos con los polisacáridos presentes en la solución, y adición de fosfatos de sodio para precipitar dichos complejos, los que se remueven junto al resto de impurezas con adsorbentes y filtros adecuados. Sorprendentemente, la presente invención se basa en la adición de una sal que se selecciona del grupo de las sales de metales alcalinotérreos a un extracto de planta que contiene saponinas, el cual forma complejos ión-polisacárido con aquellas moléculas libres, pero no forma complejos con las cadenas de azúcares de las saponinas. Esto permite que al añadir fosfatos de sodio e hidróxido de sodio a la mezcla, puedan precipitar sólo los complejos ión-polisacáridos, mientras que las saponinas se mantienen en suspensión.
En consecuencia, la presente invención permite la eliminación de impurezas de extractos de planta para la obtención de saponinas purificadas de forma rápida y reproducible. Con el método de obtención de saponinas divulgado en esta invención, se puede obtener un producto que contiene más de un 70% de saponinas (en base a sólidos secos) en un tiempo entre 8 a 12 días, mucho menor que los métodos convencionales descritos en el estado de la técnica.
Todos los términos técnicos utilizados para describir la presente invención tienen el mismo significado entendido para una persona con conocimientos básicos en el campo técnico en cuestión. No obstante, para definir con más claridad el alcance de la invención, a continuación se incluye una lista de la terminología utilizada en esta descripción.
Se debe entender por el término "saponina" como cualquier glucósido caracterizado porque comprende una porción insoluble que puede ser esteroidal o triterpenoide, y una porción soluble de una o más cadenas de sacáridos. Dichos sacáridos pueden ser cualquier azúcar, como glucosa, arabinosa, galactosa, ramnosa, xilosa, fucosa, ácido glucurónico, y ácido galacturónico, sin restringirse a los aquí mencionados. Se debe entender por el término "extracto de planta" cualquier sustancia o producto derivado que se obtenga mediante extracción a partir de una parte de la planta, a través de cualquier método conocido en el estado de la técnica, tales como extracción por solventes, adsorción, maceración, destilación, entre otros. También se considerará como "extracto de planta" cualquier producto basado en extractos de planta que se sometió a previamente a un primer proceso extractivo y puede encontrarse a la venta al público general, tanto en forma líquida como en polvo.
Se debe entender por el término "biomasa" cualquier materia biológica proveniente del reino Plantae. Por ejemplo, biomasa puede ser la corteza, tronco, hojas, tallos, raíces, semillas, frutos o una combinación de cualquiera de ellas.
Se debe entender por el término "impureza" cualquier otra sustancia en una solución diferente al compuesto químico principal o de interés. Para la presente invención, el compuesto principal son saponinas, y por tanto cualquier otra sustancia presente como iones orgánicos e inorgánicos, compuestos fenólicos (como taninos, quercitina, leucocianidina, kaemferol, entro otros), ácidos orgánicos (como ácido caféico, ácido gálico, ácido cumárico, entre otros), sacáridos y polisacáridos, lípidos y compuestos nitrogenados, entre otros, se consideran impurezas.
Se debe entender por el término sales de "metales alcalinotérreos" como aquellas sales que se forman con elementos pertenecientes al grupo HA de la tabla periódica, que comprende berilio (Be), magnesio (Mg), calcio (Ca), estroncio (Sr), bario (Ba) y radio (Ra). Todos estos elementos tienen como propiedad la capacidad de formar iones positivos con carga 2+.
Se debe entender por el término "clarificar" en el contexto de la presente invención la eliminación de sólidos solubles que reaccionan con otros componentes no solubles mediante complejamiento, cargas eléctricas, arrastre o reacción química. La clarificación se puede llevar a cabo mediante diferentes técnicas conocidas en el estado de la técnica, tales como filtración mediante diatomeas, mediante floculación, o a través del uso de coagulantes, entre otros. Como se ha descrito, un objeto de la presente invención se refiere a un método o proceso para la obtención de saponinas a partir de plantas que comprende al menos las etapas de: proporcionar un extracto de planta que contiene saponinas, mezclar dicho extracto con una sal que se selecciona del grupo de las sales de metales alcalinotérreos para formar una solución que contiene entre otros compuestos complejos ión-polisacáridos, ajusfar el pH de la mezcla anterior en un rango entre 6 y 7, agregar fosfatos de sodio para formar una mezcla a partir de la cual se obtiene un precipitado de complejos ión-polisacáridos, filtrar los precipitados para obtener una solución, y clarificar la solución para generar un extracto de saponinas purificado.
En una realización preferida, la obtención del extracto de planta que contiene saponinas se realiza mediante un método convencional de extracción por solvente, sin embargo puede utilizarse cualquier método para la extracción de saponinas conocido en el estado de la técnica. Preferentemente, el extracto de planta utilizado para la presente invención comprende las etapas de: proporcionar una biomasa de una planta, secar y moler dicha biomasa, y agregar un solvente adecuado a dicha biomasa para obtener el extracto. Dicho solvente adecuado se refiere preferentemente a agua a temperatura entre 50 y 80 grados Celsius, pero debe entenderse para determinar el alcance de esta invención, que el solvente a utilizarse puede ser cualquiera, tanto orgánico como inorgánico.
La biomasa que se utiliza en la presente invención se obtiene de cualquier planta que contiene saponinas. Las saponinas se encuentran en más de 100 familias de plantas entre las cuales se mencionan las más relevantes como Quillajaceae, Asparagaceae, Dioscoreaceae, Liliaceae, Caryophyllaceae, Araliaceae, Leguminosae, Sapindaceae, Amaranthaceae, Aceraceae, Rhamnaceae, Hippocastanaceae, Cucurbitaceae, Araliaceae, Dennstaedtiaceae, entre otros. La cantidad de saponinas que contiene la planta y el tipo de estructura química presente depende de la especie, origen de la planta, factores agronómicos y medioambientales. Por ejemplo, las saponinas esteroidales se encuentran principalmente en plantas monocotiledóneas, mientras que las saponinas triterpenoides se encuentran principalmente en plantas dicotiledóneas. Las principales fuentes vegetales de saponinas utilizadas para aplicaciones medicinales e industriales son alfalfa (Medicago sativa), castaño de indias (Aesculushippocastanum), regaliz (Glycyrrhiza glabra), yuca (Yuccaschidigera), gingseng (Panaxgenus) y quillay [Quillaja saponaria).
En una modalidad preferida, la biomasa se obtiene de plantas seleccionadas del grupo de Quillajaceae, Asparagaceae, Araliaceae, Fabaceae, y Sapindaceae, sin embargo no se restringe a las mencionadas. Preferentemente, la planta utilizada corresponde a la especie Quillaja saponaria Molina. Esta planta, contiene principalmente saponinas triterpenoides, sin embargo, contiene alrededor de 60 tipos de saponinas diferentes difiriendo entre ellas por la composición de sus cadenas de sacáridos.
En otra modalidad preferida de la invención, la sal adicionada al extracto de planta para formar la solución con complejos ión-polisacáridos es una sal que se forma con cualquiera del grupo de los metales alcalinotérreos, preferentemente cloruro de calcio (CaCte) o cloruro de magnesio (MgCl2),principalmente por su bajo costo debido a su abundancia, y por su inocuidad para el empleo en la industria alimenticia y farmacéutica, aunque puede utilizarse cualquier sal de calcio o magnesio inorgánica, soluble en agua o sales de calcio o magnesio de grado alimenticio.
En una modalidad preferida, para ajustar el pH de la mezcla de extracto de planta con las sales de metales alcalino tórreos a un rango entre 6 y 7, se agrega de modo preferente hidróxido de calcio (Ca(OH)2), pero puede agregarse cualquier otro hidróxido, como hidróxido de sodio (NaOH).
En otra modalidad preferida de la invención, los fosfatos de sodio agregados son preferentemente fosfatos disódicos ( a2HP04), pero puede ser cualquiera de los fosfatos sódicos, tales como fosfato monosódico (NaH2 04), fosfato trisódico (Na3P04) o bifosfato de sodio (NaH(P04)2). En otra modalidad preferida de la invención, la mezcla a partir de la cual se obtiene un precipitado de complejos ión-polisacáridos, se somete a un tratamiento térmico, que consiste en calentar dicha mezcla a una temperatura entre 70 y 90 grados Celsius con el fin de aumentar la eficiencia y asegurar la precipitación de todos los complejos. Este proceso se lleva a cabo preferentemente durante 1 hora.
En una modalidad preferida de la invención, el filtrado de los precipitados de complejos ión-polisacáridos se realiza mediante un filtro de tierras diatomeas, tales como Hyflo, Perlita o 535. Puede utilizarse también cualquier filtro de tierras diatomeas conocido en el estado de la técnica. En otra modalidad preferida, la clarificación de la solución para generar un extracto de saponinas purificado incluye las etapas de: llevar la solución a pH ácido, preferentemente en un rango de pH 4 - 5, preferentemente agregando ácido clorhídrico (HCI) a la solución; luego agregar adsorbentes poliméricos y un material arcilloso a dicha solución acidificada para atrapar impurezas residuales; y remover los adsorbentes poliméricos y el material arcilloso conteniendo dichas impurezas mediante filtración.
Preferentemente, los adsorbentes poliméricos que se pueden utilizar son gelatina bovina, gelatina de pescado, proteínas de origen vegetal, albúmina, proteínas de leche, polivinilpirrolidona (PVP), y poiivinilpolipirrolidona (PVPP), sin restringirse a este grupo de adsorbentes, pudiéndose utilizar también cualquier otro adsorbente polimérico adecuado. Adicionalmente, el material arcilloso preferentemente utilizado en la presente invención es bentonita, la cual puede abarcar bentonita sódica o calcica. En una modalidad preferida de la invención, el filtrado de los adsorbentes poliméricos y el material arcilloso con las impurezas se realiza mediante un filtro de tierras diatomeas, tales como Celite Hyflo ®, Mineral de Perlita o Celite 535 ®, dependiendo del nivel deseado, pudiendo utilizarse tierras con distintas velocidades de filtración (Darcys) y tamaño de partícula. Puede utilizarse además cualquier filtro de tierras diatomeas conocido en el estado de la técnica. Ejemplos de dispositivos de separación sólido líquido incluyen, pero no se limitan a: Filtros de Vela, Filtros de placas recesivas, marcos y placas, filtros de cartuchos, filtros profundos, decantadores, filtros de disco, filtros de placas de celulosa, centrifugas industriales, filtro de tambor rotativo etc. Luego de este filtrado, se obtiene un extracto de saponinas purificado. Opcionalmente, dicho extracto puede concentrarse mediante cualquier técnica de filtración conocido en el estado de la técnica. Preferentemente, la concentración del extracto de saponinas purificado se lleva a cabo mediante nanofiltración, ultrafiltración y diafiltración, o cualquier combinación de estas técnicas. Con el fin de que el extracto de saponinas dure más en las estanterías de venta, opcionalmente se puede realizar un proceso de pasteurización del extracto de saponinas purificado, mediante cualquier método estándar de pasteurización conocido en el estado de la técnica, tales como pasteurización VAT, HTST o UHT.
Luego de este proceso, se obtiene un producto que comprende el extracto de saponinas purificado, concentrado y pasteurizado en un formato líquido. Opcionalmente, dicho producto líquido puede transformarse a un producto en polvo, mediante cualquier técnica ya conocida en el estado de la técnica. Preferentemente, el proceso mediante el cual se genera un producto en polvo es a través de secado por aspersión o pulverización.
Los pasos o etapas de la presente invención no deben considerarse como secuenciales y por tanto pueden realizarse en distinto orden a los descritos. Por ejemplo, el extracto de plantas puede clarificarse previo a la etapa de adición de sales de calcio, obteniendo finalmente el mismo extracto de saponinas purificado en comparación con el proceso realizado en el orden ya mencionado.
Otro objeto de la presente invención, es un producto que comprende un extracto de saponinas purificado que se obtiene del proceso mencionado anteriormente. Dicho producto contiene más de 70% de saponinas en base a sólidos secos, y un porcentaje menor al 5% de polisacáridos y polifenoles en base a sólidos secos como impurezas. Esto permite que el extracto de saponinas purificado obtenido a través de este método en solución acuosa sea más estable (en términos de formación de precipitados) frente a la adición de etanol, prueba comúnmente utilizada en la industria alimenticia para medir cualitativamente la presencia de polisacáridos en los productos.
EJEMPLOS DE REALIZACIÓN
Ejemplo 1 : Obtención de saponinas a partir de corteza de Quillaja saponaria
En la Figura 1 , se muestra una representación esquemática de una modalidad preferida del proceso completo de obtención de saponinas desde la biomasa de Quillaja saponaria Molina 1 hasta producto de saponinas purificado líquido 30 y productos de saponinas purificado en polvo 32. Para la generación de un extracto de planta 2, se utilizaron 210 kg de corteza de Quillaja saponaria Molina 1 previamente seca y molida, con 1000 L de agua blanda 3, los cuales se cargaron en diferentes tanques de la siguiente forma: a) Se agregó 70 kg de corteza 1 en cada uno de los tanques de extracción 4, 5, 6, luego se agregó 250 L de agua blanda 3 en el tanque 4, se calentó el contenido de dicho tanque 4 a 60 grados Celsius por 3 horas, y se obtuvo un extracto, el cual se bombeó hacia el tanque 5, a través de la línea de transferencia 7.
b) Se agregó nuevamente 250 L de agua blanda 3 en el tanque 4, luego se calentó el contenido de los tanques 4 y 5 a 60 grados Celsius durante 3 horas, y se obtuvo un extracto de cada uno de estos tanques. El extracto del tanque 5 se bombeó hacia el tanque 6, a través de la línea de transferencia 8, y el extracto del tanque 4 se bombeó hacia el tanque 5, a través de la línea de transferencia 7. c) Se agregó nuevamente 250 L de agua blanda 3 en el tanque 4, luego se calentó el contenido de los tanques 4, 5, 6 a 60 grados Celsius durante 3 horas, y se obtuvo un extracto de cada uno de estos tanques. El extracto del tanque 6 se bombeó a través de la línea de transferencia 9 hacia el tanque final 10, el extracto del tanque 5 se bombeó hacia el tanque 6, a través de la línea de transferencia 8, y el extracto del tanque 4 se bombeó hacia el tanque 5, a través de la línea de transferencia 7.
d) Se agregó nuevamente 250 L de agua blanda 3 en el tanque 4, luego se calentó el contenido de los tanques 4, 5, 6 a 60 grados Celsius durante 3 horas, y se obtuvo un extracto de cada uno de estos tanques. El extracto del tanque 6 se bombeó hacia el tanque 10, a través de la línea de transferencia 9, el extracto del tanque 5 se bombeó hacia el tanque 6, a través de la línea de transferencia 8, y el extracto del tanque 4 se bombeó hacia el tanque 5, a través de la línea de transferencia 7.
e) Luego, se calentó el contenido de los tanques 5 y 6 a 60 grados Celsius durante 3 horas, y se obtuvo un extracto de cada uno de estos tanques. El extracto del tanque 6se bombeó hacia el tanque 10, a través de la línea de transferencia 9, y el extracto del tanque 5se bombeó hacia el tanque 6, a través de la línea de transferencia 8. f) Finalmente, se calentó el contenido del tanque 6 a 60 grados Celsius por 3 horas, y se obtuvo un extracto el cual se bombeó hacia el tanque 10, a través de la línea de transferencia 9.
El extracto de planta 2 que se obtuvo en el tanque 10 se transfirió a través de la línea de transferencia 11 a un tanque de agitación 12. Se enfrió dicho extracto 2 hasta los 15 grados Celsius y se agregó 2,8 kg de CaC 13 y 0,46 kg de Ca(OH)2 1 para neutralizar el pH y se agitó durante 30 minutos. A la mezcla obtenida, se agregó 60 L de una solución que contenía 3,2 kg de Na2HP04 15 y 0,5 kg de NaOH 16 y se agitó durante 30 minutos. Se calentó la mezcla obtenida a 80 grados Celsius por 1 ,5 horas para asegurar la precipitación de los complejos calcio-polisacáridos, y para eliminarlos se filtró la mezcla con de tierra de diatomeas 17. La solución 18 obtenida, se transfirió a un tanque de agitación 19. Se enfrió dicha solución 18 hasta los 15 grados Celsius y se agregó HCI 20 para ajustar el pH entre un rango de 4,3 y 4,5. Se agregó 20 kg de PVPP 21 y 53L de una suspensión acuosa de bentonita 22(75 g/L) y se agitó. Se filtró la mezcla resultante con de tierra de diatomeas 23 y se obtuvo un extracto clarificado 24 o extracto de saponinas purificado que contenía entre 35 a 65 g de solutos extraídos por litro.
Al extracto clarificado 24 se eliminó el agua por nano-filtración 25 para producir un extracto concentrado que contenía entre 85-100 g de solutos extraídos por litro. Luego, del extracto concentrado se removió aún más agua e impurezas de bajo peso molecular mediante ultra-filtración 26 (membrana de 10.000 - 75.000 Da). Cuando la concentración de solutos en el extracto concentrado alcanzó los 200- 250 g de solutos extraídos por litro, se cambió a modo diafiltración 27 para producir un precursor líquido 28 que contenía 130-150 g de solutos extraídos por litro. La pureza de saponinas en el precursor líquido 28 estuvo en el rango de los 83-91 % p/p sobre sólidos secos. Se pasteurizó el precursor líquido 28 calentándolo a 86 grados Celsius por 30 a 120 minutos en un tanque de calentamiento 29, y se obtuvo un producto de saponinas purificadas líquido 30. Una parte del producto 30 se sometió a un proceso de secado por pulverización en un equipo de dos boquillas 31 (temperatura de entrada de aire, 200 grados Celsius, temperatura de salida de aire, 105-110 grados Celsius) y se produjo 8-10 kg de producto de saponinas purificadas en polvo 32, con una pureza en un rango entre 83-91% p/p sobre sólidos secos.
En la Figura 2, se muestra representación esquemática de otra modalidad preferida del proceso de purificación de saponinas a partir de la biomasa de Quillaja saponaria Molina 1 , en el cual, previo a la adición de sales de calcio se realizó el proceso de clarificación del extracto de planta 2. Es decir, el extracto de planta 2 que se obtuvo en el tanque 10, se transfirió a un tanque de agitación 19. Se enfrió dicho extracto 2 hasta los 15 grados Celsius y se agregó HCI 20 para ajustar el pH entre un rango de 4,3 y 4,5. Se agregó PVPP 21 y una suspensión acuosa de bentonita 22 (75 g/L) y se agitó. Se filtró la mezcla resultante con de tierra de diatomeas 23 y se obtuvo un extracto clarificado 24. Se enfrió dicho extracto clarificado 24 hasta los 15 grados Celsius y se agregó CaC 13 y Ca(OH)2l4 para neutralizar el pH y se agitó durante 30 minutos. A la mezcla obtenida, se agregó una solución de a2HP04 15 y NaOH 16 y se agitó durante 30 minutos más. Se calentó la mezcla obtenida a 80 grados Celsius para asegurar la precipitación de los complejos calcio-polisacáridos, y para eliminarlos se filtró la mezcla con de tierra de diatomeas 17. La inversión de estas etapas no afectó el resultado final, pues se obtuvo un extracto de saponinas con una pureza en un rango entre 83-91% p/p sobre sólidos secos, similar al producto que se obtuvo al seguir los pasos descritos en la Figura 1.
Ejemplo 2: Obtención de saponinas a partir de biomasa de Quillaja saponaria
En este ejemplo, se utilizó biomasa completa de Quillaja saponaria Molina 1 a diferencia del ejemplo anterior donde se utilizó sólo la corteza de dicha planta. Para la generación de un extracto de planta 2, se utilizó 3.500 kg de biomasa completa de Quillaja saponaria Molina 1 previamente seca y molida, con 6.300 L de agua blanda 3, los cuales se cargaron en diferentes tanques siguiendo el proceso descrito anteriormente.
En la Tabla 1 , se muestra el volumen, pH y composición del extracto de planta 2 que se obtuvo a partir de la biomasa de Quillaja saponaria Molina. Tabla 1. Caracterización del extracto de planta 2
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El extracto de planta 2 obtenido en el tanque 10 se transfirió a un tanque de agitación 12 a través de la línea de transferencia 11. Se enfrió dicho extracto 2 hasta los 15 grados Celsius y se agregó 7,4 kg de CaCI2 13. Luego de la disolución completa de esta sal de calcio, se agregó 1 ,8 kg de Ca(OH)214 en polvo para aumentar el pH a 7,0. Luego de la homogenización de esta mezcla, se agregó 154 L de solución que contenía 8,2 kg de Na2HP04 15 y 1 ,3 kg de NaOH 16 y se agitó durante 30 minutos. Se calentó esta mezcla a 80 grados Celsius por 1 ,5 horas y se filtró a través de tierra de díatomeas 17 para producir una solución 18, la cual es transferida a un tanque de agitación 19. Se enfrió dicha solución 18 hasta los 15 grados Celsius y se agregó HCI 20 para ajustar el pH entre un rango de 4,3 y 4,5. Se agregó 45 kg de PVPP 21 y 120 L de una suspensión acuosa de bentonita 22 (75 g/L) y se agitó. Se filtró la mezcla resultante con de tierra de diatomeas 23 y se obtuvo un extracto clarificado 24 o extracto de saponinas purificado que contenía entre 25 a 35 g de solutos extraídos por litro.
Al extracto clarificado 24 se eliminó el agua por nano-filtración 25 para producir un extracto concentrado que contenía entre 85-100 g de solutos extraídos por litro. Luego, del extracto concentrado se removió aún más agua e impurezas de bajo peso molecular mediante ultra-filtración 26 (membrana de 10.000 - 75.000 Da). Cuando la concentración de solutos en el extracto alcanzó los 200-250 g de solutos extraídos por litro, se cambió a modo diafiltración 27 para producir un precursor líquido 28 que contenía 130-150 g de solutos extraídos por litro. La pureza de saponinas en el precursor líquido 28 estuvo en el rango de los 86-94% p/p en base a sólidos secos. Se pasteurizó el precursor líquido 28 calentándolo a 86 grados Celsius por 30 a 120 minutos en un tanque de calentamiento 29, y se obtuvo un producto de saponinas purificadas líquido 30. Una parte del producto 30 se sometió a un proceso de secado por pulverización en un equipo de dos boquillas 31 (temperatura de entrada de aire, 200 grados Celsius, temperatura de salida de aire, 105-110 grados Celsius) y se produjo 33-38 kg de producto de saponinas purificadas en polvo 32, con una pureza en un rango entre 86-94% p/p en base a sólidos secos. En la Tabla 2 se muestra un detalle de las características del producto que se obtuvo.
Tabla 2. Caracterización del producto en polvo 32 del Ejemplo 2.
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Ejemplo 3: Obtención de saponinas a partir de un producto en polvo derivado de Quillaja saponaria
En este ejempio, se utilizó 60 kg de producto polvo 33 de saponinas de Quillaja saponaria Molina, extraídas y purificadas mediante un método convencional estándar, el cual se disolvió en agua blanda 3 para producir una solución de producto convencional 34. En la Tabla 3 se caracteriza el producto convencional 34 y en la Figura 3 se muestra un esquema de esta modalidad de la invención.
Se enfrió dicha solución de producto convencional 34 hasta los 15 grados Celsius EN un tanque de agitación 12 y se agregó 2,5 kg de CaCb 13. Luego de la disolución completa de esta sal de calcio, se agregó entre 0,5-1 ,5 kg de Ca(OH)2 14 en polvo para neutralizar el pH. Luego de la homogenización de esta mezcla, se agregó 60 L de solución que contenía 3,0 kg de a2HP04 15 y 0,5 kg de NaOH 16 y se agitó durante 30minutos. Se calentó esta mezcla a 80 grados Celsius y se filtró a través de tierra de diatomeas 17 para producir una solución 18. Se enfrió dicha solución 18 hasta los 15 grados Celsius en un tanque de agitación 19 y se agregó 25 kg de PVPP 20 y se agitó. Se filtró la mezcla resultante con de tierra de diatomeas 23 y se obtuvo un extracto clarificado 24 o extracto de saponinas purificado. Este extracto 24 se sometió a un proceso de nanofiltración 25, a ultrafiltración 26 y diafiltración 27 para producir un precursor líquido 28, caracterizado en la Tabla 3.
Tabla 3. Caracterización de la solución de producto convencional 34 y del precursor líquido 28.
Solución de producto Precursor convencional 34 líquido 28
Concentración de sólidos 230 g/kg 145,5 g/kg
Fracción de masa de saponinas
43,5% p/p 55,5% p/p en base a sólidos secos
Fracción de masa de polisacáridos
12,0% p/p 1 ,8% p/p en base a sólidos secos
Fracción de masa de polifenoles
7,4% p/p 1 ,2% p/p en base a sólidos secos

Claims

REIVINDICACIONES
1. Un método para la obtención de saponinas a partir de plantas, CARACTERIZADO porque comprende las etapas de: - proporcionar un extracto de planta que contiene saponinas;
- mezclar dicho extracto con una sal que se selecciona del grupo de las sales de metales alcalino tórreos para formar una solución con complejos ión-polisacáridos;
- ajustar pH de la mezcla anterior entre 6 y 7; - agregar fosfato de sodio e hidróxido de sodio para formar una mezcla a partir de la cual se obtiene un precipitado de complejos ión-polisacáridos;
- filtrar el precipitado para obtener una solución; y
- clarificar la solución para generar un extracto de saponinas purificado.
2. El método de la reivindicación 1 , CARACTERIZADO porque para la obtención del extracto de planta que contiene saponinas dicho método comprende las etapas de:
- proporcionar una biomasa de la planta;
- secar y moler dicha biomasa; y
- agregar un solvente adecuado a dicha biomasa para obtener el extracto.
3. El método de la reivindicación 2, CARACTERIZADO porque la biomasa se obtiene de plantas que se seleccionan de la familia de Quillajaceae, Asparagaceae, Araliaceae, Fabaceae, y Sapindaceae..
4. El método de la reivindicación 3, CARACTERIZADO porque la biomasa se obtiene de la especie Quillaja saponaria Molina.
5. El método de la reivindicación 2, CARACTERIZADO porque el solvente adecuado es agua a temperatura entre 50 y 80 grados Celsius.
6. El método de la reivindicación 1 , CARACTERIZADO porque la sal de un metal alcalino térreo utilizada para formar una solución con complejos ión- polisacáridoses cloruro de calcio.
7. El método de la reivindicación 1 , CARACTERIZADO porque para ajustar el pH de la mezcla del extracto de planta con la sal del metal alcalino térreo en un rango entre 6 y 7 se utiliza hidróxido de calcio.
8. El método de la reivindicación 1 , CARACTERIZADO porque los fosfatos de sodio son fosfatos disódicos.
9. El método de la reivindicación 1 , CARACTERIZADO porque la mezcla a partir de la cual se obtiene un precipitado de complejos ión-polisacáridos se calienta a una temperatura entre 70 y 90 grados Celsius.
10. El método de la reivindicación 1 , CARACTERIZADO porque el filtrado de los precipitados se realiza mediante un filtro de tierras diatomeas.
11. El método de la reivindicación 1 , CARACTERIZADO porque la etapa de clarificar la solución comprende adicionalmente las etapas de:
- llevar la solución a pH ácido
- agregar adsorbentes poliméricos y un material arcilloso a dicha solución para atrapar impurezas residuales; y
- remover los adsorbentes poliméricos y el material arcilloso conteniendo dichas impurezas mediante filtración.
12. El método de la reivindicación 11 , CARACTERIZADO porque para llevar la solución a pH ácido se adiciona ácido clorhídrico.
13. El método de la reivindicación 11 , CARACTERIZADO porque los adsorbentes poliméricos se seleccionan del grupo de gelatina bovina, gelatina de pescado, proteínas de origen vegetal, albúmina, proteínas de leche, polivinilpirrolidona (PVP), y polivinilpolipirrolidona (PVPP).
14. El método de la reivindicación 1 1 , CARACTERIZADO porque el material arcilloso es bentonita.
15. El método de la reivindicación 11 , CARACTERIZADO porque para remover los adsorbentes poliméricos y el material arcilloso con las impurezas se utiliza un filtro de tierras diatomeas.
16. El método de la reivindicación 1 , CARACTERIZADO porque el extracto de saponinas purificado se concentra adicionalmente mediante técnicas de filtración seleccionadas del grupo que consiste de nanofiltración, ultrafiltración y diafiltración o combinaciones de las mismas.
17. Un extracto de saponinas purificado, CARACTERIZADO porque se obtiene mediante el proceso de las reivindicaciones 1 a 16.
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Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10568948B2 (en) 2015-05-13 2020-02-25 Agenus Inc. Vaccines for treatment and prevention of cancer
WO2017088080A1 (es) 2015-11-25 2017-06-01 Natural Response S.A. Método para la obtención de saponinas a partir de plantas
JP2021522239A (ja) 2018-04-26 2021-08-30 アジェナス インコーポレイテッド 熱ショックタンパク質結合ペプチド組成物およびその使用方法
CA3152560A1 (en) 2019-04-17 2020-10-22 Virentia Innovation Inc. Compositions comprising fabaceae family plant components, processes of preparation and uses thereof
AU2021292755A1 (en) * 2020-06-19 2023-02-09 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Processes for the removal and recovery of hesperaloe extractives
MX2023001586A (es) 2020-08-07 2023-05-03 Access To Advanced Health Inst Saponinas purificadas y proceso cromatografico para purificacion de las mismas.
KR20230110270A (ko) 2020-10-21 2023-07-21 비렌시아 이노베이션 인코포레이티드 콩과 식물 성분을 포함하는 조성물, 이의 제조 공정 및 용도
CN115177977B (zh) * 2022-08-01 2023-07-18 湖南凯耀生物科技有限公司 一种绞股蓝全草批量化提取绞股蓝皂苷的方法及其装置
USPP36823P3 (en) 2022-12-02 2025-07-15 Desert King Chile S.A. Quillaja saponaria plant named ‘DK-QSCB1348’
USPP36487P3 (en) 2022-12-02 2025-02-25 Desert King Chile, S.A. Quillaja saponaria plant named ‘DK-QSCB1326’
CN115744850B (zh) * 2022-12-15 2024-02-02 昆明川金诺化工股份有限公司 一种高品质磷酸二氢锂的制备方法
WO2025038359A1 (en) * 2023-08-11 2025-02-20 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Multistage processes for the enriching saponin concentration in hesperaloe extracts
WO2024261351A2 (en) 2024-05-08 2024-12-26 Vaccine Formulation Institute Ch Ltd. Immunologically active saponin fractions and adjuvant formulations

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7884195B2 (en) * 2005-04-26 2011-02-08 Long Yun Li Method of extracting ginsengnoside Rg2m, pharmaceutical composition including ginsengnoside Rg2, and uses thereof
CN101747401B (zh) * 2009-12-23 2012-03-28 中华全国供销合作总社杭州茶叶研究所 一种高纯度茶皂苷的制备方法

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2301787A (en) * 1941-08-06 1942-11-10 Nord Gustav Jean Recovery of saponin
GB799047A (en) 1955-12-07 1958-07-30 Glaxo Lab Ltd Improvements in or relating to the extraction and purification of sapogenins
US5057540A (en) 1987-05-29 1991-10-15 Cambridge Biotech Corporation Saponin adjuvant
US6231859B1 (en) 1996-12-02 2001-05-15 Aquila Biopharmaceuticals, Inc. Saponin adjuvant compositions
AU3589899A (en) 1998-04-17 1999-11-08 Her Majesty The Queen In Right Of Canada As Represented By The Department Of Agriculture And Agri-Food Canada Process for recovery and purification of saponins and sapogenins from quinoa ((chenopodium quinoa))
IL143767A0 (en) 1998-12-19 2002-04-21 Janssen Pharmaceutica Nv Antihistaminic spiro compounds
CN100536863C (zh) 2002-03-14 2009-09-09 不二制油株式会社 含大豆皂角苷物质及其生产方法
DK200200207U3 (da) 2002-06-28 2003-10-24 Ole Kaae Hansen Holding Aps Saponin- og/eller sapogeninholdig planteekstrakt
CN1895313A (zh) 2005-07-12 2007-01-17 中辰国际集团有限公司 由人参或西洋参茎/叶提取总皂甙的方法及其产品
CN101366721B (zh) 2008-08-25 2010-12-15 马仁强 一种治疗骨科疾病的原料药及其制备方法
CN101961427B (zh) * 2010-09-21 2012-01-04 江南大学 一种同时提取油茶蒲多糖和多酚的方法
CN102443072A (zh) 2010-10-12 2012-05-09 沈阳药科大学 从黄芪中同时提取多糖和皂苷的方法
CN102697839B (zh) 2012-06-01 2014-04-09 武汉工程大学 双水相萃取分离黄芪黄酮、皂苷和多糖的方法
GB201213364D0 (en) 2012-07-27 2012-09-12 Glaxosmithkline Biolog Sa Purification process
WO2014086853A1 (en) 2012-12-04 2014-06-12 Basf Agro B.V., Arnhem (Nl) Compositions comprising a quillay extract and a fungicidal compound
WO2017088080A1 (es) 2015-11-25 2017-06-01 Natural Response S.A. Método para la obtención de saponinas a partir de plantas

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7884195B2 (en) * 2005-04-26 2011-02-08 Long Yun Li Method of extracting ginsengnoside Rg2m, pharmaceutical composition including ginsengnoside Rg2, and uses thereof
CN101747401B (zh) * 2009-12-23 2012-03-28 中华全国供销合作总社杭州茶叶研究所 一种高纯度茶皂苷的制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHEOK, C.Y. ET AL.: "Extraction and quantification of saponins: A review.", FOOD RESEARCH INTERNATIONAL, vol. 59, 2014, pages 16 - 40, XP028838115 *
XIANG, LI ET AL.: "A study on the extraction and purification technology of tea sapogenin.", AFRICAN JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY, vol. 9, no. 18, 2010, pages 2691 - 2696, XP055385662 *

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