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WO2017052033A1 - 들쭉 추출물을 유효성분으로 함유하는 황반변성증 치료용 조성물 - Google Patents

들쭉 추출물을 유효성분으로 함유하는 황반변성증 치료용 조성물 Download PDF

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Publication number
WO2017052033A1
WO2017052033A1 PCT/KR2016/006084 KR2016006084W WO2017052033A1 WO 2017052033 A1 WO2017052033 A1 WO 2017052033A1 KR 2016006084 W KR2016006084 W KR 2016006084W WO 2017052033 A1 WO2017052033 A1 WO 2017052033A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
blueberry
extract
macular degeneration
fraction extract
enzyme
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/KR2016/006084
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
손미원
이태호
백남준
권용삼
이상진
이봉경
정세영
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kyung Hee University
Dong-A ST Co Ltd
Original Assignee
Kyung Hee University
Dong-A ST Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kyung Hee University, Dong-A ST Co Ltd filed Critical Kyung Hee University
Publication of WO2017052033A1 publication Critical patent/WO2017052033A1/ko
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/45—Ericaceae or Vacciniaceae (Heath or Blueberry family), e.g. blueberry, cranberry or bilberry

Definitions

  • the present invention relates to a method for producing a novel blueberry extract or fraction extract, and to a composition for preventing, treating or improving macular degeneration comprising a blueberry extract and / or fraction extract prepared therefrom.
  • Nervous tissue located in the center of the inner retina of the eye is called the macula
  • the image of the object is also the center of the macula plays a very important role in vision.
  • Vision is the ability to recognize the existence and shape of an object, which is most sensitive when the image of the object is in the fovea of the macula (central vision) and deteriorates toward the periphery of the retina (peripheral vision).
  • central vision central vision
  • peripheral vision peripheral vision
  • vision central vision
  • the macular can cause visual impairment due to various causes such as aging, genetic factors, toxicity, and inflammation, which is called macular degeneration.
  • This macular degeneration affects central vision, causing blurred vision in the field of vision, making it difficult to perform sophisticated activities such as reading and driving through central dark spots, schizophrenia, or loss of vision in the local area. It is a very serious disease that leads to.
  • Macular degeneration is largely divided into non-exudative (dry) and exudative (wet).
  • non-exudative macular degeneration accounts for 80-90% of all macular degeneration and does not result in rapid visual loss, but it can be progressed to exudative macular degeneration.
  • Exudative macular degeneration accounts for about 10-20% of all macular degeneration, but if left untreated, the macular degeneration is rapidly reduced, leading to blindness within two years after diagnosis.
  • Age-related macular degeneration a type of macular degeneration, is characterized by the loss of central vision due to the death of photoreceptor cells and is thought to have a multifactorial pathogenesis.
  • various factors eg smoking, obesity, eating habits, increased cholesterol in the blood, irradiation with blue light, etc.
  • senile macular degeneration causes the promotion of senile macular degeneration, which is due to damage of photoreceptor cells and subsequent cell death.
  • N-retinyl-N-retinylidene ethanolamine (A2E) is a major chromophore of lipofucin and causes the production of reactive oxygen species when exposed to blue light.
  • Blue light is light with a relatively high energy content of about 440 nm, and when exposed to it for a short time, damage to cells increases, which increases with short wavelength light. That is, continuous light exposure further promotes the death of retinal pigment epithelial cells of senile macular degeneration, which is one of the main causes of degeneration of photoreceptor cells.
  • decreased visual acuity due to retinal cell dysfunction is closely related to oxidation of A2E and thus may be a major cause of age-related macular degeneration.
  • blueberry (Bog bilberry, Vaccinium uliginosum ) is a deciduous broad-leaved shrub ( Ecciaceae ), the stem is about 1 meter high and dark brown. Fruits are round berry and ripen in autumn. Blueberries are edible. It is common in cold regions of high mountains and plateaus, and is distributed in Korea, Manchuria, Mongolia, Japan, Europe, and North America. Blueberry components include flavonoids and anthocyanins.
  • Korean Unexamined Patent Publication No. 2011-0102246 discloses a therapeutic effect of macular degeneration of blueberry extract.
  • the method of fractionation of the patent is a method of fractionating by solid phase extraction (SPE), so it is not suitable as a food material because it uses an organic solvent such as ethyl acetate, using a C18 Sep-Pak cartridge, etc. in the manufacturing process
  • the fractionation method is not suitable for the mass production process.
  • the present invention comprises the steps of treating and heating the enzyme in a blueberry under any one solvent selected from water, anhydrous lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms and a hydrous lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms, the method of producing a blueberry extract To provide.
  • the present invention comprises the steps of: (a) treating the enzyme in a blueberry under any one solvent selected from water, anhydrous lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms and a hydrous lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms;
  • step (b) it provides a method for producing a blueberry fraction extract, comprising the step of passing the extract of step (a) to the resin.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating macular degeneration comprising the blueberry extract and / or blueberry fraction extract prepared according to the blueberry extract and / or blueberry fraction extract method as an active ingredient.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating macular degeneration comprising an enzyme-treated blueberry extract, an enzyme-treated blueberry fraction extract, or a mixture thereof as an active ingredient.
  • the present invention provides a food composition for preventing or improving macular degeneration comprising blueberry extract and / or blueberry fraction extract prepared according to the blueberry extract and / or blueberry fraction extract manufacturing method as an active ingredient.
  • the present invention provides a food composition for preventing or improving macular degeneration comprising an enzyme-treated blueberry extract, an enzyme-treated blueberry fraction extract, or a mixture thereof as an active ingredient.
  • the present invention provides a blueberry extract and / or a blueberry fraction extract prepared according to the method of the blueberry extract and / or blueberry fraction extract for use in the prevention or treatment of macular degeneration.
  • the present invention provides a use of the blueberry extract and / or blueberry fraction extract to prevent or treat macular degeneration of the blueberry extract and / or blueberry fraction extract prepared according to the method.
  • the present invention provides the use of an enzyme treated blueberry extract, an enzyme treated blueberry fraction extract, or a mixture thereof in the manufacture of a medicament for the prevention or treatment of macular degeneration.
  • the present invention provides a method for preventing or treating macular degeneration by administering to the subject a pharmaceutical composition comprising a blueberry extract and / or a blueberry fraction extract prepared according to the blueberry extract and / or blueberry fraction extract.
  • the present inventors have made efforts to commercially mass-produce the blueberry extract and the blueberry fraction extract in a human-friendly manner, and as a result of efforts to increase the efficacy, the blueberry extract and the blueberry fraction extract prepared according to the manufacturing method of the present invention are the active ingredient and the indicator component.
  • the content of polyphenols (Total Polyphenol) was greatly increased to confirm that there is a significant effect on the prevention and treatment of macular degeneration complete the present invention.
  • the present invention comprises the steps of treating and heating the enzyme in a blueberry under any one solvent selected from water, anhydrous lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms and a hydrous lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms, the method of producing a blueberry extract To provide.
  • the method for preparing a blueberry extract according to the present invention it is possible to provide a blueberry extract in which the sugar component is removed and the total polyphenol content is greatly increased.
  • the blueberry extract according to the preparation method of the present invention may contain 2 to 60% by weight of polyphenol, preferably 3 to 15% by weight, more preferably 4 to 12% by weight, based on the total weight of the composition.
  • the blueberry ( Vaccinium uliginosum ) is extracted from the flowers, fruits, leaves or bark of the blueberry, preferably from the fruit of the blueberry. Moreover, what was harvested, what was cultivated, or what is marketed can be used without limitation.
  • Anhydrous lower alcohols having 1 to 4 carbon atoms are lower alcohols that do not contain water, such as, but not limited to, methanol, ethanol, propanol, butanol, isobutanol.
  • the lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms is a lower alcohol mixed with water, for example, a mixed solvent of methanol, ethanol, propanol, butanol, isobutanol and water, but is not limited thereto.
  • the solvent may be water.
  • the enzyme may be treated in the blueberry to enhance the polyphenol content of the blueberry.
  • the enzyme is amylase, glugoamylase, protease, oxidase, polymethylgalacturonase, polygalacturonase, glucosidase, cellulose, and cellulose.
  • pectinase and more preferably, pectinase may be used.
  • the extraction method it is preferable to use shaking extraction, Soxhelt extraction or reflux extraction, but is not limited thereto.
  • Heating after the enzyme treatment may be carried out for 1 hour to 10 hours, preferably 1 hour to 4 hours, the reaction temperature may be carried out at 40 to 65 °C, preferably 45 to 60 °C.
  • the method of preparing a blueberry extract of the present invention may further include filtering, concentrating and drying the extract after the step of extracting the blueberry by treating the enzyme with the blueberry.
  • the filtration can obtain a filtrate or supernatant by filtering the solution or by centrifugation according to conventional methods in the art.
  • the concentration is reduced pressure concentration
  • the reduced pressure concentration is preferably a vacuum reduced pressure concentrator or a vacuum rotary evaporator, but is not limited thereto.
  • the drying is preferably reduced pressure drying, vacuum drying, boiling drying, spray drying or freeze drying, but is not limited thereto.
  • the present invention comprises the steps of: (a) treating the enzyme in a blueberry under any one solvent selected from water, anhydrous lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms and a hydrous lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms;
  • step (b) it provides a method for producing a blueberry fraction extract, comprising the step of passing the extract of step (a) to the resin.
  • the preparation method of the blueberry extract according to the present invention it is possible to industrially produce and provide a blueberry fraction extract suitable for human application by eliminating sugar components, greatly increasing the total polyphenol content, and using organic solvents that are harmful to human body. .
  • the blueberry fraction extract according to the production method of the present invention may contain 2 to 60% by weight of polyphenol, preferably 3 to 15% by weight, more preferably 4 to 12% by weight, based on the total weight of the composition.
  • the step (a) is the same as the salping bar, and after the step (a) may further comprise the step of filtering, concentrating and drying the extract.
  • step (b) the step of passing through the resin of the extract of step (a).
  • Passing the extract through the resin is preferably a resin filtration method or a resin column using the adsorption resin.
  • the resin is from the group consisting of XRD resin, XDA resin, Amberlite XAD resin, Dow X resin, Superlite, DAX resin, Diaion HP-10, HP-20, HP-30, HP-40 and HP-50 resin It may be any one or more selected, preferably XDA resin, XRD resin, HP-20 resin or mixed resins thereof.
  • the resin is loaded with the extract of step (a), and anhydrous lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms or a hydrous lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms, preferably 20 to 99
  • the blueberry fraction extract can be prepared by filtration 1 to 3 times with% methanol or 20 to 99% ethanol.
  • the anhydrous lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms or the hydrous lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms may further include 0.01% to 1% acetic acid.
  • the lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms may be filtered with water before filtration to remove various impurities including sugars.
  • the extract of the step (a) is loaded on the resin in the column tube and anhydrous lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms or a hydrous lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms, preferably A blueberry fraction extract can be prepared by eluting 1 to 3 times with 20 to 99% methanol or 20 to 99% ethanol.
  • the anhydrous lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms or the hydrous lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms may further include 0.01% to 1% acetic acid.
  • impurities may be removed by filtration with water before filtration with the lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms.
  • the fraction extract filtered or eluted with the anhydrous lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms or the hydrous lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms may be concentrated and dried.
  • the concentration may be concentrated under reduced pressure, and the concentration under reduced pressure may be a vacuum reduced pressure concentrator or a vacuum rotary evaporator, but is not limited thereto.
  • the drying is preferably reduced pressure drying, vacuum drying, boiling drying, spray drying or freeze drying, but is not limited thereto.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating macular degeneration comprising the blueberry extract and / or blueberry fraction extract prepared according to the blueberry extract and / or blueberry fraction extract method as an active ingredient.
  • the pharmaceutical composition for preventing or treating macular degeneration according to the present invention contains a higher total polyphenol content than the extract prepared by a known extraction method, thereby remarkably inhibiting lipofuscin accumulation and inhibiting retinal pigment epithelial cell death by A2E photooxidation. And by having a protective effect on the cell extracellular nucleus layer shows an excellent effect on the prevention or treatment of macular degeneration including wet macular degeneration and dry macular degeneration.
  • the blueberry extract and / or blueberry fraction extract according to the present invention is prepared according to the method of preparing the blueberry extract and / or blueberry fraction extract described above to have a high total polyphenol content.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may comprise a pharmaceutically acceptable carrier in addition to the blueberry extract or the blueberry fraction extract.
  • pharmaceutically acceptable carriers are those commonly used in the art, such as lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, Calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil, and the like.
  • the pharmaceutical compositions of the present invention may include diluents or excipients, such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, surfactants, and other pharmaceutically acceptable additives.
  • compositions of the present invention may be oral or parenteral (eg, applied or intravenous, subcutaneous, intraperitoneal), but oral administration is preferred.
  • Solid form preparations for oral administration include powders, granules, tablets, capsules, soft capsules, pills and the like.
  • Oral liquid preparations include suspensions, solvents, emulsions, syrups, and aerosols.In addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin, various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives may be included. Can be.
  • Formulations for parenteral administration may be formulated in the form of sterile aqueous solutions, solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, eye drops, ophthalmic ointments, syrups, suppositories, aerosols and the like, and sterile injectables, respectively, according to conventional methods. It can be used, preferably a pharmaceutical composition of creams, gels, patches, sprays, ointments, warnings, lotions, linings, eye ointments, eye drops, pasta or cataplasma may be prepared and used. It is not limited to this. Compositions of topical administration may be anhydrous or aqueous, depending on the clinical prescription.
  • non-aqueous solvent and suspending agent propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate and the like can be used.
  • base of the suppository witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerogelatin and the like can be used.
  • the pharmaceutically acceptable additive according to the present invention is preferably included 0.1 to 99.9 parts by weight based on the composition.
  • Preferred dosages of the compositions of the present invention vary depending on the degree of absorption of the active ingredient in the body, the age, sex and obesity of the patient, but may be appropriately selected by those skilled in the art. However, for the desired effect, oral dosages are generally administered to adults in an amount of 0.0001 to 100 mg / kg, preferably 0.001 to 100 mg / kg, per day of body weight per kilogram of body weight per day. It is good. Administration may be administered once a day or may be divided several times. The dosage does not limit the scope of the invention in any aspect.
  • Macular degeneration prevention or treatment composition of the present invention may contain at least one active ingredient exhibiting the same or similar function in addition to the blueberry extract or blueberry fraction extract.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating macular degeneration comprising an enzyme-treated blueberry extract, an enzyme-treated blueberry fraction extract, or a mixture thereof as an active ingredient.
  • the enzyme can be treated with blueberries to enhance the polyphenol content of the blueberry amylase (amylase), glugo amylase, protease, oxidase, polymethylgalacturonase (polymethylgalacturonase), polygalacturonaa It may be any one selected from the group consisting of polygalacturonase, glucosidase, cellulose, and pectinase, and preferably pectinase may be used.
  • Treatment of enzymes on the blueberry extract and / or blueberry fraction extract is as described above for salping in the preparation method of the blueberry extract and the preparation of the blueberry fraction, and the same as for the pharmaceutical composition.
  • the present invention provides a food composition for preventing or improving macular degeneration comprising blueberry extract and / or blueberry fraction extract prepared according to the blueberry extract and / or blueberry fraction extract manufacturing method as an active ingredient.
  • the food composition according to the present invention may be a functional food or a health functional food depending on its purpose of use.
  • Macular degeneration prevention or improvement of the food composition according to the present invention contains a high total polyphenol content, has a significant inhibition of lipofucin accumulation, inhibition of retinal pigment epithelial cell death by A2E photooxidation and prevention of macular degeneration Or excellent effect on improvement.
  • the blueberry extract or the blueberry fraction extract of the present invention is used as a food composition (such as a functional food, a nutraceutical food or a nutraceutical beverage additive), the blueberry extract or the blueberry fraction extract is added as it is or used together with other food or food ingredients, It can be suitably used according to a conventional method.
  • the amount of the blueberry extract or the blueberry fraction extract may be suitably determined according to the purpose of use (prevention, health or improvement, therapeutic treatment). In the case of long-term intake for health and hygiene or for health control, the blueberry extract or the blueberry fraction extract can be taken for a long time because there is no problem in terms of safety.
  • the liquid component added in addition to the blueberry when formulated into a beverage may include, but is not limited to, various flavors, natural carbohydrates, and the like as additional ingredients.
  • natural carbohydrates include monosaccharides (e.g. glucose, fructose, etc.), disaccharides (e.g. maltose, sucrose, etc.) and polysaccharides (e.g.
  • sweeteners such as taumarin, stevia extract (e.g., rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.)
  • synthetic sweeteners e.g., saccharin, aspartame, etc.
  • the food composition of the present invention may be formulated with various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), flavors such as synthetic and natural flavors, colorants and enhancers (such as cheese, chocolate), pectic acid and salts thereof, Organic acids, protective colloid thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonation agents used in carbonated drinks, and the like.
  • the food composition of the present invention may also contain pulp for the production of fruit and vegetable drinks. These components may be used alone or in combination, and the proportion of such additives is generally selected in the range of 0.001 to 50 parts by weight per total weight of the composition.
  • the blueberry extract or blueberry fraction extract of the present invention may be a powder, granule, tablet, capsule, syrup or beverage.
  • the present invention provides a food composition for preventing or improving macular degeneration comprising an enzyme-treated blueberry extract, an enzyme-treated blueberry fraction extract, or a mixture thereof as an active ingredient.
  • the enzyme can be treated with blueberries to enhance the polyphenol content of the blueberry amylase (amylase), glugo amylase, protease, oxidase, polymethylgalacturonase (polymethylgalacturonase), polygalacturonaa It may be any one selected from the group consisting of polygalacturonase, glucosidase, cellulose, and pectinase, and preferably pectinase may be used.
  • the treatment of enzymes on the blueberry extract and / or blueberry fraction extract is the same as the salping in the method of preparing the blueberry extract and the method of preparing the blueberry fraction, and the same as above for the food composition.
  • the present invention provides a blueberry extract and / or a blueberry fraction extract prepared according to the method of the blueberry extract and / or blueberry fraction extract for use in the prevention or treatment of macular degeneration.
  • the present invention provides a use of the blueberry extract and / or blueberry fraction extract to prevent or treat macular degeneration of the blueberry extract and / or blueberry fraction extract prepared according to the method.
  • the present invention provides the use of an enzyme treated blueberry extract, an enzyme treated blueberry fraction extract, or a mixture thereof in the manufacture of a medicament for the prevention or treatment of macular degeneration.
  • the present invention provides a method for preventing or treating macular degeneration by administering to the subject a pharmaceutical composition comprising a blueberry extract and / or a blueberry fraction extract prepared according to the blueberry extract and / or the blueberry fraction extract method.
  • the blueberry extract and / or blueberry fraction extract, their preparation method, and pharmaceutical composition are as described above.
  • the novel method of preparing blueberry extract or fraction extract of the present invention provides a commercially available blueberry extract or a blueberry fraction extract that is commercially available in mass production while increasing the total polyphenol content and does not use an organic solvent.
  • the blueberry extract or fraction extract prepared according to the preparation method of the present invention is a novel blueberry extract or fraction extract, in which the sugar component is significantly removed and the content of polyphenol compounds is greatly increased as an active ingredient, inhibiting A2E accumulation in retinal pigment epithelial cells. Inhibition of photooxidation, damage to the extracellular nucleus layer, etc. have a significant effect on the prevention, treatment or improvement of macular degeneration.
  • Figure 1 shows the results of confirming the inhibitory effect of A2E accumulation on the retinal epithelial cells by extracting blueberry extract and blueberry fraction extract through lipofuscin (AofE).
  • Figure 2 shows the results confirmed the inhibition of the retinal cell layer damage of the retina according to the administration of blueberry extract and blueberry fraction extract in the macular degeneration animal model induced by blue light.
  • 600kg of frozen blueberry raw material (origin: Heilongjiang, China) was dissolved at room temperature. 1,200 L of water was added, 0.6 kg of pectinase was added, and the mixture was heated and stirred at 50 to 55 ° C. for 2 hours. The stirred solution was filtered and the supernatant was separated by centrifugation at 3300 to 3600 rpm. Then, 600 kg of resin (HP-20 resin) was placed in a column tube, and the separated supernatant was added, followed by flowing down at a flow rate of 10-12 L / min. Thereafter, 600 L of water was added thereto and flowed down at a flow rate of 10 to 12 L / min.
  • resin HP-20 resin
  • Tannin acid standard solution was prepared as a standard material (solution) for the AOAC analysis.
  • the standard solution was precisely measured about 100 mg of tannic acid, put into a 1000 ml volumetric flask, and mixed well by adding distilled water. Then, the standard solution was diluted to an appropriate concentration to prepare a standard solution of 0.1 to 0.5 mg / ml.
  • blueberry extract and blueberry fraction extract samples were precisely measured as a test solution for AOAC analysis, and the resulting mixture was placed in a 10 ml volumetric flask and ultrasonically shaken for 20 minutes. The solution was lined with distilled water, shaken well, and used as a test solution.
  • a calibration curve of the standard was prepared by using the difference between the absorbance of each standard and the absorbance of each blank test. The difference between the absorbance of the sample and the blank test absorbance of the sample was applied to the calibration curve. The concentration of phenol (total polyphenol) was obtained.
  • the blueberry extract and blueberry fraction extract obtained in the above ⁇ Example 1> and ⁇ Example 3> were treated to human retinal epithelial cells (ARPE-19 cells) at a predetermined concentration and then labeled with A2E (A2E-BDP).
  • A2E-BDP A2E-BDP
  • the blueberry extract and fraction extract prepared according to the production method of Example 1 and Example 3 showed a significant effect on the inhibition of A2E accumulation.
  • the blueberry fraction extract showed more significant A2E accumulation inhibitory effect by the high total polyphenol content according to the preparation.
  • A2E accumulated in human retinal pigment epithelial cells is known to cause cytotoxicity upon irradiation with blue light (BL), cell protection and cell viability analysis against blue light induced photooxidation was performed.
  • Human retinal pigment epithelial cells were aliquoted into 96-well tissue culture plates at 4 ⁇ 10 3 cells / well density and incubated for 24 hours.
  • Blueberry (BL, 430 nm, 6000 lux) was irradiated with blue light (BL, 430 nm, 6000 lux) for 15 minutes after the blueberry extract, the blueberry fraction extract, and DW of the ⁇ Example 1> and ⁇ Example 2> were treated for each group and A2E at a concentration of 20 ⁇ M, respectively. The cell death was observed under a microscope.
  • MTT MTT (3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide) solution to formazan by dehydrogenases of mitochondria in living cells. It is a method to confirm the survival of the cells by measuring the. 20 ⁇ L of MTT solution (5 mg / mL) was added to the human retinal pigment epithelial cells irradiated with blue light and incubated for 3 hours. After removing the medium, 100 ⁇ L DMSO (Dimethyl sulfoxide) was added and the absorbance was measured at 570 nm (BioTeK Instrument, USA).
  • MTT 3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide
  • the cell death by irradiation with blue light was reduced by the administration of blueberry extract or blueberry fraction extract.
  • the blueberry fraction extract showed a more significant cell death inhibitory effect by the high total polyphenol content according to the manufacturing method.
  • Balb / C mouse (purchased: Potec) was purified for one week, and then the blueberry fraction extract prepared in Example 2 was administered once a day for 5 days, and after 1 hour of dark adaptation, the blue light was 10000lux for 2 weeks. Irradiated at 1 hour per day, the test substance was administered once a day, and after 7 days, the eye was taken out including the optic nerve. The extracted eye tissues were fixed in Davidson solution for 10 days, and then fixed in formalin for 1-2 days, and then paraffin blocks were prepared and H & E stained.
  • the above ingredients were mixed and made into 2 ml by a conventional method, and then filled into 2 ml ampoules and sterilized to prepare an injection.
  • the tablets were prepared by mixing the above components and tableting according to a conventional method for producing tablets.
  • the capsules were prepared by mixing the above components and filling the gelatin capsules according to a conventional method for preparing capsules.
  • the above-mentioned components were mixed according to a conventional method for preparing a liquid solution, filled into a 100 ml brown bottle, and sterilized to prepare a liquid solution.

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Abstract

본 발명은 신규한 들쭉 추출물 또는 분획 추출물의 제조 방법, 및 이로부터 제조된 들쭉 추출물 및/또는 분획추출물을 포함하는 황반 변성증의 예방, 치료 또는 개선용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 신규한 들쭉 추출물 또는 분획 추출물의 제조 방법은 총폴리페놀 함량을 증가시키면서도 상업적으로 대량생산이 가능하고, 유기용매를 사용하지 않아 식품 소재로 적합한 들쭉 추출물 또는 들쭉 분획 추출물을 제공한다. 또한 제조된 들쭉 추출물 또는 분획 추출물은 유효 성분으로 폴리페놀류 화합물의 함량이 증가된 신규한 들쭉 추출물 또는 분획 추출물로써 망막 색소 상피 세포 내 A2E 축적 억제, 광산화 억제, 시세포 외핵층 손상 억제 등을 통해 황반 변성증의 예방, 치료 또는 개선에 현저한 효과를 보인다.

Description

들쭉 추출물을 유효성분으로 함유하는 황반변성증 치료용 조성물
본 발명은 신규한 들쭉 추출물 또는 분획 추출물의 제조 방법, 및 이로부터 제조된 들쭉 추출물 및/또는 분획추출물을 포함하는 황반 변성증의 예방, 치료 또는 개선용 조성물에 관한 것이다.
눈의 안쪽 망막의 중심부에 위치한 신경조직을 황반이라고 하는데, 시세포의 대부분이 이곳에 모여 있고 물체의 상이 맺히는 곳도 황반의 중심이므로 시력에 대단히 중요한 역할을 담당하고 있다. 시력이란 대상의 존재와 형태를 인식하는 능력을 말하는데, 물체의 상이 황반의 중심와에 맺어질 때 가장 예민하고 (중심시력), 망막 주변으로 갈수록 저하된다(주변시력). 어떤 물체를 볼 때는 망막의 중심부인 황반부를 통해서 보게 되는 것으로 일반적으로 중심 시력을 시력이라고 말한다. 이러한 황반은 노화, 유전적인 요인, 독성, 염증 등 여러 가지 원인에 의해 시력장애를 일으킬 수 있는데, 이를 황반변성증이라고 한다.
이러한 황반변성증은 중심 시력에 영향을 주어 시야 가운데가 흐릿하게 보이게 하고, 중심 암점, 변시증 또는 국소 부분의 시력 상실 등을 통해 독서, 운전 등의 정교한 활동 수행을 곤란하게 할 수 있으며, 심할 경우 실명으로까지 이어지는 매우 심각한 질병이다.
황반변성증은 크게 비삼출성(건성)과 삼출성(습식)으로 구분하게 된다. 망막하 출혈이나 망막하액, 색소상피박리 등이 나타나는 삼출성의 경우, 병변의 위치가 황반 아래 또는 황반에 바로 연하여 있어 초기부터 시력저하가 나타난다. 반면, 비삼출성 황반변성증은 전체 황반변성증의 80-90%를 차지하고 있으며 급격한 시력상실의 결과를 초래하지는 않지만 삼출성 황반변성증으로 진행할 수 있어 주의가 필요하다. 삼출성 황반변성증의 경우 전체 황반변성증의 10-20% 정도를 차지하지만, 만일 삼출성 황반변성증을 치료하지 않고 그대로 방치해두면, 시력이 빠르게 저하되어 많은 환자들이 진단 후 2년 내에 실명에 이르게 된다.
이러한 황반변성증의 근원적인 메커니즘은 여전히 알려져 있지 않다. 황반변성증의 일종인 노인성 황반 변성증은 광수용체 세포의 사멸에 따른 중심시력의 상실로 특징 지어지며, 다인성의 병인기전을 가지고 있을 것으로 여겨지고 있다. 최근에 다양한 요소들(예를 들면, 흡연, 비만, 식습관, 혈중 내 콜레스테롤 증가, 청색광 조사 등)이 노인성 황반 변성증의 촉진을 야기한다고 보고되고 있고, 이는 광수용체 세포의 손상과 그에 따른 세포사멸이 망막색소상피의 퇴화(변성)를 야기한다.
또한, 눈 망막 중심부에 지방갈색소(리포푸신)의 축적이 망막 중심부 아래에 있는 망막색소상피세포에서 가장 크다고 알려져 있다. 이는 이 부분이 간상세포 광수용체가 많이 밀집되어 있다는 사실을 반영한다. N-retinyl-N-retinylidene ethanolamine (A2E)는 리포푸신의 주요 발색단이며, 청색광에 노출되었을 때 활성산소종의 생성을 야기한다. 청색광은 440nm정도의 상대적으로 고에너지량을 가진 빛으로 이에 단시간 노출되었을 때, 세포의 손상은 증가하며 이는 단파장의 빛일수록 더 증가한다. 즉, 계속적인 빛의 노출이 노인성 황반 변성증의 망막색소상피세포의 사멸을 더욱 촉진시키며, 이는 결국 광수용체 세포의 변성을 야기하는 주된 원인 중 하나가 된다.
또한, 망막세포 기능장애에 의한 시력저하는 A2E의 산화와 밀접한 관련이 있고 따라서 노화 관련 황반변성증의 주된 원인이 될 수 있다.
그런데, 현재까지 이러한 황반변성증에 대해 이용 가능한 치료제가 매우 드물다. 더욱이 습식 황반변성증에 대해서는 anti-VEGF 등 일부 치료법이 있으나, 건성 황반변성증에 대해서는 알려진 치료제는 없는 상황이다.
한편, 들쭉(Bog bilberry, Vaccinium uliginosum)은 진달래과(Ericaceae)의 낙엽 활엽 작은 관목(Vaccinium uliginosum),줄기는 높이가 1미터 정도이고 암갈색이다. 열매는 둥근장과로 가을에 검게 익으며, 들쭉이라고 하여 식용한다. 높은 산과 고원의 추운 지역에 흔히 나며, 한국, 만주, 몽고, 일본, 유럽, 북미 등지에 분포한다. 들쭉의 성분으로는 플라보노이드류, 안토시아닌류를 함유하고 있다.
대한민국 공개특허 제2011-0102246호에는 들쭉 추출물의 황반변성증의 치료 효과를 개시하고 있다. 그러나, 상기 특허의 분획방법은 고체상 추출법(Solid Phase Extrcation:SPE)으로 분획하는 방법으로써 에틸아세테이트와 같은 유기용매를 사용하므로 식품 소재로서 적합하지 못하며, C18 Sep-Pak 카트리지 등을 제조 공정에 사용하여 대량생산공정에 적합하지 않는 분획방법을 사용하고 있다.
이러한 배경 하에, 상업적으로 대량생산이 가능하고, 유기용매를 사용하지 않으면서 일반적인 들쭉 추출 방법에 의해 추출된 추출물보다 들쭉의 유효성분 및 지표성분의 함량을 크게 증가시킨 신규한 들쭉 추출물 내지 분획 추출물에 대한 연구 개발이 필요하며, 이를 통해 근본적으로 황반변성증을 치료 또는 예방할 수 있는 치료제 개발될 필요가 있다.
본 발명은 물, 탄소수 1 내지 4의 무수 저급 알코올 및 탄소수 1 내지 4의 함수 저급 알코올로부터 선택되는 어느 하나의 용매 하의 들쭉에 효소를 처리하고 가열하여 추출하는 단계를 포함하는, 들쭉 추출물의 제조 방법을 제공한다.
본 발명은 (a) 물, 탄소수 1 내지 4의 무수 저급 알코올 및 탄소수 1 내지 4의 함수 저급 알코올로부터 선택되는 어느 하나의 용매 하의 들쭉에 효소를 처리하고 가열하여 추출하는 단계;
(b) 상기 (a) 단계의 추출물을 레진에 통과시키는 단계를 포함하는, 들쭉 분획 추출물의 제조 방법을 제공한다.
본 발명은 상기 들쭉 추출물 및/또는 들쭉 분획 추출물 제조방법에 따라 제조된 들쭉 추출물 및/또는 들쭉 분획 추출물을 유효성분으로 포함하는 황반변성증 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공한다.
본 발명은 효소 처리 들쭉 추출물, 효소 처리 들쭉 분획 추출물, 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 황반 변성증 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공한다.
본 발명은 상기 들쭉 추출물 및/또는 들쭉 분획 추출물 제조방법에 따라 제조된 들쭉 추출물 및/또는 들쭉 분획 추출물을 유효성분으로 포함하는 황반변성증 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명은 효소 처리 들쭉 추출물, 효소 처리 들쭉 분획 추출물, 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 황반 변성증 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명은 황반 변성증 예방 또는 치료에 사용하기 위한 상기 들쭉 추출물 및/또는 들쭉 분획 추출물 제조방법에 따라 제조된 들쭉 추출물 및/또는 들쭉 분획 추출물을 제공한다.
본 발명은 상기 들쭉 추출물 및/또는 들쭉 분획 추출물 제조방법에 따라 제조된 들쭉 추출물 및/또는 들쭉 분획 추출물의 황반 변성증 예방 또는 치료 용도를 제공한다.
본 발명은 황반 변성증 예방 또는 치료를 위한 약제의 제조에서 효소 처리 들쭉 추출물, 효소 처리 들쭉 분획 추출물, 또는 이들의 혼합물의 용도를 제공한다.
본 발명은 상기 들쭉 추출물 및/또는 들쭉 분획 추출물 제조방법에 따라 제조된 들쭉 추출물 및/또는 들쭉 분획 추출물을 포함하는 약제학적 조성물을 대상체에 투여하여 황반 변성증을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명자들은 들쭉 추출물 및 들쭉 분획 추출물을 인체 적합하게 상업적으로 대량생산하며 그 효능을 높이고자 예의 노력한 결과, 본 발명의 제조 방법에 따라 제조된 들쭉 추출물 및 들쭉 분획 추출물이 유효성분 및 지표성분인 총폴리페놀(Total Polyphenol)의 함량이 크게 증가하여 황반 변성증의 예방 및 치료에 현저한 효과가 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 물, 탄소수 1 내지 4의 무수 저급 알코올 및 탄소수 1 내지 4의 함수 저급 알코올로부터 선택되는 어느 하나의 용매 하의 들쭉에 효소를 처리하고 가열하여 추출하는 단계를 포함하는, 들쭉 추출물의 제조 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 들쭉 추출물의 제조 방법에 의하면 당성분이 제거되고 총 폴리페놀 함량이 크게 증가한 들쭉 추출물을 제공할 수 있다.
본 발명의 제조 방법에 따른 들쭉 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 폴리페놀을 2 내지 60 중량%, 바람직하게 3 내지 15 중량%, 보다 바람직하게 4 내지 12 중량%로 함유할 수 있다.
본 발명에 있어서 들쭉 (Vaccinium uliginosum)은 들쭉나무의 꽃, 열매, 잎 또는 수피 등으로부터 추출될 있으며, 바람직하게는 들쭉나무의 열매로부터 추출될 수 있다. 또한, 채취한 것이나 재배한 것 또는 시판되는 것을 제한 없이 사용할 수 있다.
탄소수 1 내지 4의 무수 저급 알코올은 물을 함유하지 않은 저급 알코올로써 예컨대 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 이소부탄올을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 탄소수 1 내지 4의 함수 저급 알코올은 물과 혼합된 저급 알코올로 예컨대 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 이소부탄올과 물의 혼합용매이며, 이에 제한되지 않는다. 바람직하게, 상기 용매는 물일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 효소는 들쭉의 폴리페놀 함량 증진을 위해 들쭉에 처리될 수 있다. 바람직하게, 상기 효소는 아밀라아제(amylase), 글루고아밀라제, 프로테아제, 옥시다아제, 폴리메틸갈락투로나아제(polymethylgalacturonase), 폴리갈락투로나아제(polygalacturonase), 글루코시다아제(glucosidase), 셀룰라아제(cellulose) 및 펙티나아제(pectinase)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나일 수 있으며, 보다 바람직하게 펙티나아제가 사용될 수 있다.
추출방법으로는 진탕추출, Soxhelt 추출 또는 환류 추출을 이용하는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
상기 효소 처리 후 가열은 1시간 내지 10시간, 바람직하게는 1시간 내지 4시간 동안 수행될 수 있으며, 반응 온도는 40 내지 65 ℃, 바람직하게 45 내지 60 ℃로 반응이 수행될 수 있다.
본 발명의 들쭉 추출물의 제조 방법은 상기 들쭉에 효소를 처리하고 가열하여 추출하는 단계 후에 추출물을 여과, 농축 및 건조하는 단계를 더 포함할 수 있다.
상기 여과는 당업계의 통상의 방법에 따라 용액을 여과하거나 원심분리를 통해 여액 또는 상등액을 수득할 수 있다.
상기 농축은 바람직하게 감압 농축이며, 감압농축은 진공 감압 농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명은 (a) 물, 탄소수 1 내지 4의 무수 저급 알코올 및 탄소수 1 내지 4의 함수 저급 알코올로부터 선택되는 어느 하나의 용매 하의 들쭉에 효소를 처리하고 가열하여 추출하는 단계;
(b) 상기 (a) 단계의 추출물을 레진에 통과시키는 단계를 포함하는, 들쭉 분획 추출물의 제조 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 들쭉 추출물의 제조 방법에 의하면 당성분이 제거되고 총 폴리페놀 함량이 크게 증가하며 인체에 유해한 유기용매를 사용하지 않아 인체 적용에 적합한 들쭉 분획 추출물을 산업적으로 대량 생산 및 제공할 수 있다.
본 발명의 제조 방법에 따른 들쭉 분획 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 폴리페놀을 2 내지 60 중량%, 바람직하게 3 내지 15 중량%, 보다 바람직하게 4 내지 12 중량%로 함유할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 (a) 단계는 앞서 살핀바와 같으며, 상기 (a) 단계 후에 추출물을 여과, 농축 및 건조하는 단계를 더 포함할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 (b) 상기 (a) 단계의 추출물을 레진에 통과시키는 단계를 포함한다.
상기 추출물을 레진에 통과시키는 단계는 흡착수지를 이용하여 레진 여과 방식 또는 레진 컬럼 이용 방식이 바람직하다. 상기 레진은 XRD 레진, XDA 레진, 엠버라이트 XAD 레진, 다우엑스 레진, 수페라이트, DAX 레진, 다이아이온 HP-10, HP-20, HP-30, HP-40 및 HP-50 레진으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있으며, 바람직하게 XDA 레진, XRD 레진, HP-20 레진 또는 이의 혼합 레진을 사용할 수 있다.
본 발명의 일실시양태에 따른 레진 여과 방식에 따르면, 레진에 상기 (a) 단계의 추출물을 loading하고, 탄소수 1 내지 4의 무수 저급 알코올 또는 탄소수 1 내지 4의 함수 저급 알코올, 바람직하게 20 내지 99% 메탄올 또는 20 내지 99% 에탄올로 1 내지 3회 여과하여 들쭉 분획 추출물을 제조할 수 있다. 상기 탄소수 1 내지 4의 무수 저급 알코올 또는 탄소수 1 내지 4의 함수 저급 알코올은 0.01 % 내지 1 % 아세트산을 더 포함할 수 있다. 또한, 상기 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올로 여과 전 물로 여과하여 당을 비롯한 다양한 불순물을 제거할 수 있다.
본 발명의 일실시양태에 따른 레진 컬럼 이용 방식에 따르면, 컬럼관 내 레진에 상기 (a) 단계의 추출물을 loading하고 탄소수 1 내지 4의 무수 저급 알코올 또는 탄소수 1 내지 4의 함수 저급 알코올, 바람직하게 20 내지 99% 메탄올 또는 20 내지 99% 에탄올로 1 내지 3회 용출하여 들쭉 분획 추출물을 제조할 수 있다. 상기 탄소수 1 내지 4의 무수 저급 알코올 또는 탄소수 1 내지 4의 함수 저급 알코올은 0.01 % 내지 1 % 아세트산을 더 포함할 수 있다. 또한, 상기 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올로 여과 전 물로 여과하여 불순물을 제거할 수 있다.
상기 탄소수 1 내지 4의 무수 저급 알코올 또는 탄소수 1 내지 4의 함수 저급 알코올로 여과 또는 용출된 분획 추출물은 농축 및 건조될 수 있다. 바람직하게 감압 농축될 수 있으며, 감압농축은 진공 감압 농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명은 상기 들쭉 추출물 및/또는 들쭉 분획 추출물 제조방법에 따라 제조된 들쭉 추출물 및/또는 들쭉 분획 추출물을 유효성분으로 포함하는 황반변성증 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 황반변성증 예방 또는 치료용 약제학적 조성물은 기존에 알려진 추출방식에 의해 제조된 추출물보다 높은 총폴리페놀 함량을 함유하여, 현저한 리포푸신 축적 억제, A2E 광산화에 의한 망막색소상피세포 사멸 억제 및 시세포 외핵층 보호 효과를 가짐으로써 습식 황반변성증 및 건조 황반변성증을 포함하는 황반변성증 예방 또는 치료에 우수한 효과를 보인다.
본 발명에 따른 들쭉 추출물 및/또는 들쭉 분획 추출물은 앞서 기재된 들쭉 추출물 및/또는 들쭉 분획 추출물 제조방법에 따라 제조되어 높은 총 폴리페놀 함량을 가진다.
본 발명의 약제학적 조성물은 들쭉 추출물 또는 들쭉 분획 추출물에 추가로 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함할 수 있다. 상기 약제학적으로 허용가능한 담체는 당업계에서 통상적으로 사용되는 것들, 예컨대 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 포함하나 이에 국한되지 않는다. 또한, 본 발명의 약제학적 조성물은 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제, 기타 약제학적으로 허용가능한 첨가제를 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 경구 또는 비경구 투여(예를 들어, 도포 또는 정맥 내, 피하, 복강 내 주사)할 수 있으나 경구 투여가 바람직하다. 경구 투여를 위한 고형제제에는 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 연질캡슐제, 환제 등이 포함된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 에어로졸 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제로는 각각 통상의 방법에 따라 멸균된 수용액, 액제, 비수성용제, 현탁제, 에멀젼, 점안제, 안연고제, 시럽, 좌제, 에어로졸 등의 외용제 및 멸균 주사제제의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 바람직하게는 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 안연고제, 점안제, 파스타제 또는 카타플 라스마제의 약제학적 조성물을 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 국소 투여의 조성물은 임상적 처방에 따라 무수형 또는 수성형일 수 있다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 약제학적으로 허용가능한 첨가제는 상기 조성물에 대해 0.1~99.9 중량부 포함되는 것이 바람직하다.
본 발명의 조성물의 바람직한 투여량은 체내에서 활성성분의 흡수도, 환자의 연령, 성별 및 비만의 정도에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 경구 투여제의 경우 일반적으로 성인에게 1일에 체중 1 ㎏당 본 발명의 조성물을 1일 0.0001 내지 100 ㎎/㎏으로, 바람직하게는 0.001 내지 100 ㎎/㎏으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 황반변성증 예방 또는 치료용 조성물은 들쭉 추출물 또는 들쭉 분획 추출물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.
본 발명은 효소 처리 들쭉 추출물, 효소 처리 들쭉 분획 추출물, 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 황반 변성증 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공한다.
본 발명에서 상기 효소는 들쭉의 폴리페놀 함량 증진을 위해 들쭉에 처리될 수 있는 것으로 아밀라아제(amylase), 글루고아밀라제, 프로테아제, 옥시다아제, 폴리메틸갈락투로나아제(polymethylgalacturonase), 폴리갈락투로나아제(polygalacturonase), 글루코시다아제(glucosidase), 셀룰라아제(cellulose) 및 펙티나아제(pectinase)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나일 수 있으며, 바람직하게 펙티나아제가 사용될 수 있다.
상기 들쭉 추출물 및/또는 들쭉 분획 추출물에 효소의 처리는 상기 들쭉 추출물의 제조 방법 및 들쭉 분획물의 제조방법에서 살핀 바와 같으며, 약제학적 조성물에 대하여도 상기와 같다.
본 발명은 상기 들쭉 추출물 및/또는 들쭉 분획 추출물 제조방법에 따라 제조된 들쭉 추출물 및/또는 들쭉 분획 추출물을 유효성분으로 포함하는 황반변성증 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 식품 조성물은 그 사용 목적에 따라 기능성 식품 또는 건강기능식품일 수 있다.
본 발명에 따른 황반변성증 예방 또는 개선용 식품 조성물은 높은 총폴리페놀 함량을 함유하여, 현저한 리포푸신 축적 억제, A2E 광산화에 의한 망막색소상피세포 사멸 억제 및 시세포 외핵층 보호 효과를 가짐으로써 황반변성증 예방 또는 개선에 우수한 효과를 보인다.
본 발명의 들쭉 추출물 또는 들쭉 분획 추출물을 식품 조성물 (예컨대 기능성 식품, 건강 기능 식품 또는 건강 기능 음료 첨가물)로 사용할 경우, 상기 들쭉 추출물 또는 들쭉 분획 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용되고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 상기 들쭉 추출물 또는 들쭉 분획 추출물의 혼합량은 그의 사용목적(예방, 건강 또는 개선, 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우, 상기 들쭉 추출물 또는 들쭉 분획 추출물은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에, 장기간 복용이 가능하다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 들쭉 추출물 또는 들쭉 분획 추출물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 초콜릿류, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있다. 음료수로 제형화할 경우에 들쭉 이외에 첨가되는 액체 성분으로는 이에 한정되지는 않으나, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드(예, 포도당, 과당 등), 디사카라이드(예, 말토오스, 수크로오스 등) 및 폴리사카라이드(예, 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당), 및 자일리톨, 소르비톨, 에리스리톨 등의 당 알코올이다. 이외에도 감미제로서 천연 감미제[타우마린, 스테비아 추출물(예, 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등)] 및 합성 감미제(예, 사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다.
다른 실시양태로서, 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 증진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 점증제, pH 조절제, 안정화제, 보존제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 또한 본 발명의 식품 조성물은 과일 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 단독으로 또는 조합으로 사용될 수 있으며, 이러한 첨가제의 비율은 조성물 전체 중량당 0.001 내지 50 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
다른 실시양태로서, 본 발명의 들쭉 추출물 또는 들쭉 분획 추출물은 분말, 과립, 정제, 캡슐, 시럽제 또는 음료일 수 있다.
본 발명은 효소 처리 들쭉 추출물, 효소 처리 들쭉 분획 추출물, 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 황반 변성증 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에서 상기 효소는 들쭉의 폴리페놀 함량 증진을 위해 들쭉에 처리될 수 있는 것으로 아밀라아제(amylase), 글루고아밀라제, 프로테아제, 옥시다아제, 폴리메틸갈락투로나아제(polymethylgalacturonase), 폴리갈락투로나아제(polygalacturonase), 글루코시다아제(glucosidase), 셀룰라아제(cellulose) 및 펙티나아제(pectinase)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나일 수 있으며, 바람직하게 펙티나아제가 사용될 수 있다.
상기 들쭉 추출물 및/또는 들쭉 분획 추출물에 효소의 처리는 상기 들쭉 추출물의 제조 방법 및 들쭉 분획물의 제조방법에서 살핀 바와 같으며, 식품 조성물에 대하여도 상기와 같다.
본 발명은 황반 변성증 예방 또는 치료에 사용하기 위한 상기 들쭉 추출물 및/또는 들쭉 분획 추출물 제조방법에 따라 제조된 들쭉 추출물 및/또는 들쭉 분획 추출물을 제공한다.
본 발명은 상기 들쭉 추출물 및/또는 들쭉 분획 추출물 제조방법에 따라 제조된 들쭉 추출물 및/또는 들쭉 분획 추출물의 황반 변성증 예방 또는 치료 용도를 제공한다.
본 발명은 황반 변성증 예방 또는 치료를 위한 약제의 제조에서 효소 처리 들쭉 추출물, 효소 처리 들쭉 분획 추출물, 또는 이들의 혼합물의 용도를 제공한다.
본 발명은 상기 들쭉 추출물 및/또는 들쭉 분획 추출물 제조방법에 따라 제조된 들쭉 추출물 및/또는 들쭉 분획 추출물을 포함하는 약제학적 조성물을 대상체에 투여하여 황반 변성증 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명의 용도 및 방법에 있어서, 상기 들쭉 추출물 및/또는 들쭉 분획 추출물, 이들의 제조방법, 및 약제학적 조성물은 앞서 설명한 바와 같다.
본 발명의 신규한 들쭉 추출물 또는 분획 추출물의 제조 방법은 총폴리페놀 함량을 증가시키면서 상업적으로 대량생산이 가능하고 유기용매를 사용하지 않아 식품 소재로 적합한 들쭉 추출물 또는 들쭉 분획 추출물을 제공한다. 또한 본 발명의 제조 방법에 따라 제조된 들쭉 추출물 또는 분획 추출물은 당성분이 현저히 제거되고 유효 성분으로 폴리페놀류 화합물의 함량이 크게 증가된 신규한 들쭉 추출물 또는 분획 추출물로써 망막 색소 상피 세포 내 A2E 축적 억제, 광산화 억제, 시세포 외핵층 손상 억제 등을 통해 황반 변성증의 예방, 치료 또는 개선에 현저한 효과를 보인다.
도 1은 들쭉추출물 및 들쭉 분획 추출물을 망막상피세포에 처리시 A2E 축적 억제 효과를 형광표지된 리포푸신(lipofuscin(A2E))을 통해 확인한 결과를 나타낸다.
도 2는 청색광에 의해 유발된 황반 변성증 동물 모델에 들쭉추출물 및 들쭉 분획 추출물 투여에 따른 망막의 시세포층 손상 억제를 확인한 결과를 나타낸다.
이하, 하기 실시예 및 실험예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 그러나, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로 이들 실시예 및 실험예에 의하여 본 발명의 범위가 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 들쭉추출물의 제조
냉동된 들쭉 원재료 (열매, 원산지: 중국 흑룡강성) 600 kg를 상온에서 녹였다. 물 1,200 L를 넣고, 펙티나아제 (Nanning Longbo (China, No.15030506)) 0.6 kg를 넣은 후, 50~55 ℃에서 2시간 동안 가열 교반하였다. 그리고 나서, 여과하고, 여과액을 65 brix까지 농축하여 들쭉 추출물을 45 kg을 수득하였다.
<실시예 2> 레진 컬럼을 이용한 들쭉 분획 추출물의 제조
에탄올 10L로 레진 (HP-20 레진) 10 kg을 세척하고, 컬럼관에 넣었다. 물 10 L로 레진을 다시 세척하고, 실시예1에서 얻은 들쭉 추출물 1 kg를 loading하였다. 물 10 L를 elution하고, 50% 에탄올 (0.1% Acetic acid 용액) 25L를 elution한 후. 에탄올 10 L를 elution하였다, 50% 에탄올(0.1% Acetic acid 용액) 분획에 해당하는 들쭉 분획 추출물 용액을 45~60 ℃로 감압 농축한 후, 말토덱스트린를 첨가하고 분무건조하여, 들쭉 분획 추출물 180 g을 얻었다.
<실시예 3> 레진 여과를 이용한 들쭉 분획 추출물의 제조
레진 (HP-20 레진) 10 kg를 여과기에 넣고 물로 세척하고, 실시예 1에서 얻은 들쭉 추출물 4kg를 loading 한 후. 물 35 L로 여과하여 폐기하였다. 50% 에탄올 (0.1% Acetic acid 용액) 50 L를 가하여 여과하고, 여과액을 45~60 ℃로 감압농축한 후, 말토덱스트린를 첨가하고 분무건조하여, 들쭉 분획 추출물 790 g을 얻었다.
<실시예 4> 들쭉 분획 추출물의 대량 제조
냉동된 들쭉 원재료(원산지: 중국 흑룡강성) 600kg를 상온에서 녹였다. 물 1,200 L를 넣고, 펙티나아제 0.6 kg를 넣은 후, 50~55 ℃에서 2시간 동안 가열 교반한다. 교반액을 여과하고, 3300 내지 3600 rpm에서 원심분리하여 상층액을 분리하였다. 그리고 나서, 레진 (HP-20 레진) 600 kg을 컬럼관에 넣고 상기 분리된 상층액을 넣은 후, 10~12L/min의 유속으로 흘러내렸다. 그 후, 물 600 L를 넣고 10~12 L/min의 유속으로 흘러내렸다. 마지막으로 50~55% 에탄올 (0.1% Acetic acid 용액) 1,800 L를 넣고 5~6 L/min의 유속으로 흘러내리며 상기 분획액을 수득하였다. 또한 90~95% 에탄올를 넣고, 5~6 L/min의 유속으로 흘러내리며 95% 에탄올 분획을을 수득하였다, 상기에 수득된 50 % 에탄올 분획액과 95 % 에탄올 분획액을 모아 45~55 ℃로 감압농축한 후, 말토덱스트린를 첨가하고 분무건조하여 들쭉 분획 추출물 30 kg을 얻었다.
<실시예 5> 들쭉추출물의 총폴리페놀(Total polyphenol) 농도 분석
상기 <실시예 1> 내지 <실시예 4>에서 제조된 들쭉 추출물 및 들쭉 분획 추출물의 총폴리페놀(Total polyphenol) 농도를 분석하기 위하여 자외선분광광도계(UV/visible Spectrophotometer) 분석을 수행하였으며, 표준 물질로는 탄닌산(Tannic acid)을 사용하는 Association of Official Analytical Chemists (AOAC)법을 따라 분석을 진행하였다.
상기 AOAC 분석을 위하여 표준 물질(용액)으로 탄닌산 표준용액을 제조하였다. 상기 표준 용액은 탄닌산 약 100 ㎎을 정밀하게 측정하여 1,000 ㎖의 용량플라스크에 넣고 증류수를 가하여 잘 섞은 후 정용하였다. 그리고 나서, 상기 표준용액을 적정농도로 희석하여 0.1 ~ 0.5 ㎎/㎖의 표준용액을 조제하였다.
또한, AOAC 분석을 위하여 시험용액으로 들쭉추출물 및 들쭉 분획 추출물 시료 약 30 mg을 정밀하게 측정하여 10 ㎖ 용량플라스크에 넣고 증류수를 넣어 20분간 초음파 진탕하였다. 상기 용액에 증류수로 표선을 맞추고 잘 흔들어 시험용액으로 사용하였다.
분석을 위해 증류수 75 ml를 용량플라스크에 넣고, 상기에서 제조된 표준용액 및 시험용액을 각각 1 ml씩 가하였다. 상기 시험관에 Folin-denis 시약 5 ml와 35% 탄산나트륨 10 ml를 가하여 혼합하고 증류수로 정용하였다. 그리고 나서, 실온에서 30분간 방치 후 760 nm에서 흡광도를 SPWCTRAmax PLUS (Molecular Devices)를 이용하여 측정하였다.
함량 농도 계산을 위하여, 표준물질의 농도별 흡광도와 각 공시험의 흡광도의 차를 이용하여 표준물질의 검량선을 작성하였고, 시료의 흡광도와 시료의 공시험 흡광도의 차를 검량선에 적용시켜 시험용액의 총폴리페놀(total polyphenol)의 농도를 구하였다.
그 결과를 표 1에 나타내었다.
[표 1] 들쭉추출물 및 분획 추출물의 총폴리페놀의 함량
Figure PCTKR2016006084-appb-I000001
상기 표 1에서 확인되는 바와 같이, 실시예 1 내지 4의 제조방법에 따라 제조된 들쭉 추출물 및 들쭉 분획 추출물에서 총 폴리페놀 함량이 크게 증가된 것이 확인되었고, 특히 들쭉 분획 추출물에서 보다더 현저한 총 폴리페놀 함량 증가가 확인되었다.
<실시예 6> 들쭉 분획 추출물의 A2E의 축적에 대한 억제 효과
상기 상기 <실시예 1> 및 <실시예 3>에서 수득한 들쭉 추출물 및 들쭉 분획 추출물을 이용하여 인간망막상피세포(ARPE-19 세포)에 정해진 농도로 처리한 다음 형광표지된 A2E (A2E-BDP)를 각각 20 μM 농도로 인간망막색소상피세포(ARPE-19 세포)에 축적시킨 후 형광현미경(Nikon NIS-Elements, AR, Japan)으로 관찰하고 형광도를 분석하였다.
그 결과를 하기 표 2 및 도 1에 나타내었다.
[표 2] 들쭉추출물 및 분획 추출물의 A2E축적에 대한 억제효과 (음성대조군 100%기준)
Figure PCTKR2016006084-appb-I000002
상기 표 2 및 도 1에서 확인되는 바와 같이, 상기 실시예 1 및 실시예 3의 제조방법에 따라 제조된 들쭉 추출물 및 분획 추출물은 A2E 축적 억제에 현저한 효과를 보였다. 특히, 들쭉 분획 추출물은 제법에 따른 높은 총폴리페놀 함량에 의해 더욱 현저한 A2E 축적 억제 효과를 보였다.
<실시예 7> 청색광 유발 광산화에 대한 세포보호능 및 세포생존율 측정
인간망막색소상피세포(ARPE-19 세포)에 축적된 A2E는 청색광(BL) 조사시 세포독성을 유발하는 것으로 알려져 있는바, 청색광 유발 광산화에 대한 세포 보호능 및 세포 생존율 분석을 수행하였다. 인간 망막색소 상피세포(ARPE-19 세포)를 4×103세포/웰 밀도로 96-웰 조직 배양 플레이트에 분주하고 24시간 동안 배양하였다. 상기 <실시예 1> 및 <실시예 2>의 들쭉 추출물 및 들쭉 분획 추출물 및 D.W를 각각 군별로 처리하고 A2E를 20 μM 농도로 처리한 후에 청색광(BL, 430 nm, 6000 lux)을 15분간 조사하여 세포사멸 여부를 현미경으로 관찰하였다.
또한, 세포생존율을 MTT 검정법을 이용하여 측정하였다. MTT 검정은 MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 용액이 살아있는 세포의 미토콘드리아의 디하이드로게나아제(dehydrogenases)에 의해서 포르마잔(formazan)으로 변화하는 것을 측정함으로써 세포의 생존여부를 확인하는 방법이다. 상기 청색광을 조사한 인간망막색소상피세포에 MTT 용액(5 mg/mL)을 20 μL씩 넣고 3시간 동안 배양하였다. 배지를 제거한 뒤 100 μL DMSO (Dimethyl sulfoxide)를 넣고 570 nm 에서 흡광도를 측정하였다(BioTeK Instrument, USA)
상기 결과를 표 3에 나타내었다.
[표 3] 들쭉추출물 및 분획 추출물의 청색광 유발 광산화 보호능
Figure PCTKR2016006084-appb-I000003
상기 표 3에서 확인되는 바와 같이, 청색광 조사에 따른 세포 사멸은 들쭉 추출물 또는 들쭉 분획 추출물 투여에 따라 감소되었다. 특히, 들쭉 분획 추출물은 제법에 따른 높은 총폴리페놀 함량에 의해 더욱 현저한 세포 사멸 억제 효과를 보였다.
<실시예 8> 청색광 유발 황반변성증 동물모델에서 치료 효과 확인
Balb/C 마우스(구입처: 포텍)를 일주일간 순화사육 후 상기 실시예 2에서 제조된 들쭉 분획 추출물을 5일간 1일 1회 주기로 투여하였고, 24시간 암순응을 거친 후 2주 동안 청색광을 10000lux로 1일 1시간으로 조사하였고, 시험물질을 1일 1회 투여한 다음 7일 후 부검하여 안구를 시신경을 포함하여 적출하였다. 적출한 안구조직은 데이빗슨 고정액 (Davidson solution)에 10일간 고정 후 포르말린으로 1~2일간 고정 한 다음 파라핀 블록을 제작하고 H&E 염색을 진행하였다.
염색이 수행된 안구 조직을 관찰하여 시세포 외핵층 두께 및 외핵층의 핵수를 확인하여 그 결과를 표 4 및 도 2에 나타내었다.
[표 4] 들쭉 분획 추출물의 청색광 유발 시세포 외핵층 보호효과
Figure PCTKR2016006084-appb-I000004
상기 표 4 및 도 2에서 확인된 바와 같이, 들쭉 분획 추출물 처리에 따라 시세포의 외핵층 두께 및 외핵층 핵수가 현저히 회복되는 것이 확인되었다.
<제조예 1> 주사제제의 제조
본 발명의 들쭉 추출물 또는 분획 추출물 100 mg
일염기인산나트륨 6.0 mg
벤질알콜 00.02 mL
염화나트륨 15 mg
주사용 멸균증류수 적량
상기의 성분을 혼합하고 통상의 방법으로 2 ㎖로 한 후, 2 ㎖ 용량의 앰플에 충전하고 멸균하여 주사제를 제조하였다
<제조예 2> 정제의 제조
본 발명의 들쭉 추출물 또는 분획 추출물 200 mg
유당수화물 100 mg
미결정셀룰로오스 50 mg
크로스포비돈 15 mg
스테아린산 마그네슘 적량
상기의 성분을 혼합하고 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
<제조예 3> 캡슐제의 제조
본 발명의 들쭉 추출물 또는 분획 추출물 100 mg
유당 50 mg
치환도히드록시프로필셀룰로오스 20 mg
이산화규소 5 mg
탈크 2 mg
스테아린산 마그네슘 적량
상기의 성분을 혼합하고 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<제조예 4> 액상제의 제조
본 발명의 들쭉 추출물 또는 분획 추출물 1000 mg
백당 20 g
무수구연산 3 g
과당 20 g
체리향 적량
정제수를 가하여 전체 100 ㎖
상기의 성분을 통상의 액제의 제조방법에 따라서 혼합하고 100 ㎖의 갈색병에 충전하고 멸균시켜서 액제를 제조하였다.

Claims (24)

  1. 물, 탄소수 1 내지 4의 무수 저급 알코올 및 탄소수 1 내지 4의 함수 저급 알코올로부터 선택되는 어느 하나의 용매 하의 들쭉에 효소를 처리하고 가열하여 추출하는 단계를 포함하는, 들쭉 추출물의 제조 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 용매는 물, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 이소부탄올 및 이들의 혼합 용매로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 들쭉 추출물의 제조 방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 효소는 아밀라아제(amylase), 글루고아밀라제, 프로테아제, 옥시다아제, 폴리메틸갈락투로나아제(polymethylgalacturonase), 폴리갈락투로나아제(polygalacturonase)글루코시다아제(glucosidase), 셀룰라아제(cellulose) 및 펙티나아제(pectinase)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 들쭉 추출물의 제조 방법.
  4. 제1항에 있어서, 상기 추출은 40 내지 65 ℃에서 1시간 내지 10시간 동안 수행되는 들쭉 추출물의 제조 방법.
  5. (a) 물, 탄소수 1 내지 4의 무수 저급 알코올 및 탄소수 1 내지 4의 함수 저급 알코올로부터 선택되는 어느 하나의 용매 하의 들쭉에 효소를 처리하고 가열하여 추출하는 단계;
    (b) 상기 (a) 단계의 추출물을 레진에 통과시키는 단계를 포함하는, 들쭉 분획 추출물의 제조 방법.
  6. 제5항에 있어서, 상기 (a) 단계의 용매는 물, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 이소부탄올 및 이들의 혼합 용매로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 들쭉 분획 추출물의 제조 방법.
  7. 제5항에 있어서, 상기 (a) 단계의 효소는 아밀라아제(amylase), 글루고아밀라제, 프로테아제, 옥시다아제, 폴리메틸갈락투로나아제(polymethylgalacturonase), 폴리갈락투로나아제(polygalacturonase), 글루코시다아제(glucosidase), 셀룰라아제(cellulose) 및 펙티나아제(pectinase)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 들쭉 분획 추출물의 제조 방법.
  8. 제5항에 있어서, 상기 (a) 단계의 추출은 40 내지 65 ℃에서 1시간 내지 10시간 동안 수행되는 들쭉 분획 추출물의 제조 방법.
  9. 제5항에 있어서, 상기 (b) 단계의 레진은 XRD 레진, XDA 레진, 엠버라이트 XAD 레진, 다우엑스 레진, 수페라이트, DAX 레진, 다이아이온 HP-10, HP-20, HP-30, HP-40 및 HP-50 레진으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 들쭉 분획 추출물의 제조 방법.
  10. 제5항에 있어서, 상기 (b) 단계의 레진에 통과시키는 단계는 탄소수 1 내지 4의 무수 저급 알코올 또는 탄소수 1 내지 4의 함수 저급 알코올로 용출 또는 여과하는 것인 들쭉 분획 추출물의 제조 방법.
  11. 제1항 내지 제4항에 따라 제조된 들쭉 추출물, 제5항 내지 제10항에 따라 제조된 들쭉 분획 추출물, 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 황반변성증 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
  12. 제11항에 있어서, 상기 황반변성증은 습식 황반변성증 또는 건성황반변성증인 황반변성증 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
  13. 제11항에 있어서, 상기 황반변성증의 예방 또는 치료는 리포푸신의 축적 억제, 망막색소상피세포의 사멸 억제 및 시세포 외핵층 손상 억제에 의한 것인 황반변성증 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
  14. 제11항에 있어서, 상기 들쭉 추출물, 들쭉 분획 추출물, 또는 이들의 혼합물은 폴리페놀을 조성물 총 중량에 대하여 2 내지 60 중량%로 포함하는 것인 황반변성증 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
  15. 효소 처리 들쭉 추출물, 효소 처리 들쭉 분획 추출물, 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 황반 변성증 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
  16. 제1항 내지 제4항에 따라 제조된 들쭉 추출물, 제5항 내지 제10항에 따라 제조된 들쭉 분획 추출물, 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 황반변성증 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  17. 제16항에 있어서, 상기 황반변성증은 습식 황반변성증 또는 건성황반변성증인 황반변성증 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  18. 제16항에 있어서, 상기 황반변성증의 예방 또는 개선은 리포푸신의 축적 억제, 망막색소상피세포의 사멸 억제 및 시세포 외핵층 손상 억제에 의한 것인 황반변성증 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  19. 제16항에 있어서, 상기 들쭉 추출물, 들쭉 분획 추출물, 또는 이들의 혼합물은 폴리페놀을 조성물 총 중량에 대하여 2내지 60중량%로 포함하는 것인 황반변성증 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  20. 효소 처리 들쭉 추출물, 효소 처리 들쭉 분획 추출물, 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 황반 변성증 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  21. 제1항 내지 제4항에 따라 제조된 들쭉 추출물, 제5항 내지 제10항에 따라 제조된 들쭉 분획 추출물, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 약제학적 조성물을 대상체에 투여하여 황반 변성증을 예방 또는 치료하는 방법.
  22. 황반 변성증 예방 또는 치료에 사용하기 위한 제1항 내지 제4항에 따라 제조된 들쭉 추출물, 제5항 내지 제10항에 따라 제조된 들쭉 분획 추출물, 또는 이들의 혼합물.
  23. 제1항 내지 제4항에 따라 제조된 들쭉 추출물, 제5항 내지 제10항에 따라 제조된 들쭉 분획 추출물, 또는 이들의 혼합물의 황반 변성증 예방 또는 치료 용도.
  24. 황반 변성증 예방 또는 치료를 위한 약제의 제조에서 효소 처리 들쭉 추출물, 효소 처리 들쭉 분획 추출물, 또는 이들의 혼합물의 용도.
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